KR20220131258A - 항tigit항체 및 사용 방법 - Google Patents

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밍 양
원펑 쉬
웨이-둥 장
제 쉐
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상하이 헨리우스 바이오테크, 인크.
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Abstract

본 발명은 “Ig 및 ITIM도메인을 갖는 T세포 면역 수용체(TIGIT)”에 결합하는 항TIGIT항체를 제공하고, 이러한 항체는 TIGIT 및 하나 또는 다수 별도의 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 다중 특이적 항TIGIT항체; 및 그 사용 방법을 포함한다. 이러한 항TIGIT항체는 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함한다.

Description

항TIGIT항체 및 사용 방법
관련 출원의 상호참조
본 출원은 2020년 1월 10일에 출원된 출원번호가 CN 202010024565.9인 중국특허출원의 우선권을 주장하고, 그 전체 내용은 본문에 참조로 통합되어 우선권을 주장한다.
기술분야
본 발명은 Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T세포 면역 수용체(TIGIT)에 결합하되 TIGIT 및 하나 또는 다수 별도의 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 다중 특이적 항TIGIT항체를 포함하는 항체; 및 그 사용 방법에 관한 것이다.
Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T세포 면역 수용체(TIGIT)는 면역 세포(예를 들어 활성화된 T세포 및 자연 살해 세포(NK세포))에 의해 발현되는 면역 체크포인트 수용체이고, 면역 억제를 매개한다. TIGIT의 리간드는 수지상 세포(DC), 대식세포 및 많은 인간 암세포에서 검증된 PVR(CD155)을 포함하고, TIGIT에 결합한 후 T세포 활성화 및 사이토카인 분비를 하향 조절할 수 있는 것으로 나타났다. TIGIT/PVR의 상호 작용의 억제는 면역 세포의 효과적인 항종양 활성을 매개할 수 있다. 면역 체크포인트 조절에서 TIGIT의 중요한 작용을 고려하여, 본 분야에 여전히 면역 요법 및 암 치료용 면역 세포의 TIGIT매개 조절을 조절하기 위한 치료적 분자 및 방법을 개발할 필요가 있다.
본 개시는 TIGIT 및 하나 또는 다수 별도의 타겟에 결합하는 다중 특이적 항체를 포함하는 고친화력으로 TIGIT에 특이적으로 결합하는 단리된 모노클로날 항체를 제공하였다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함한다. 본 개시는 항체, 면역접합체 및 이러한 항체를 포함하는 약물 조성물을 제조하는 방법, 및 항체, 면역접합체 및 이러한 항체를 포함하는 약물 조성물을 사용하여 예컨대 질환 및 병증(예를 들어 암)의 치료에 사용되는 방법을 추가로 제공하였다. 본 발명은 부분적으로 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항TIGIT항체의 발견에 기초하고, 이러한 항체는 면역 세포에서의 면역 응답을 증가시키고 개선된 항종양 효능을 제공할 수 있다.
일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약1 x 10-7 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약 1 x 10-8 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약5 x 10-9 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약 2 x 10-9 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 94로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 95로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 96으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 99로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 102로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 103으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 104로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 106으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 107로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 108로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 110으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 111로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 112로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 114로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 115로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 116으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 118로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 119로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 122로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 123으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 124로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 126으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 127로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 128로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 130으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 131로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 132로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 134로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 135로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 136으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 138로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 139로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 140으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 142로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 143으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 144로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 146으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 147로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 148로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 150으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 151로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 152로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 154로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 155로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 156으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 158로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 159로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 160으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 162로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 163으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 164로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 166으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 167로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 168로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 170으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 171로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 172로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 174로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 175로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 176으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 178로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 179로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 180으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 182로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 183으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 184로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 186으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 187로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 188로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 190으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 191로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 192로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, a) SEQ ID NO: 94, 98, 102, 106, 110, 114, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, 162, 166, 170, 174, 178, 182, 186 및 190 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 갖는 중쇄 가변영역CDR1; b) SEQ ID NO: 95, 99, 103, 107, 111, 115, 119, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147, 151, 155, 159, 163, 167, 171, 175, 179, 183, 187 및 191중 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 c) SEQ ID NO: 96, 100, 104, 108, 112, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188 및 192 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 갖는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인을 포함하며, 여기서 상기 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인은 각각 중쇄 가변영역에 포함된 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인을 함유하고, 상기 기준 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189 및 193으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 94로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 95로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 96으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 99로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 102로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 103으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 104로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 106으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 107로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 108로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 110으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 111로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 112로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 114로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 115로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 116으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 118로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 119로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 122로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 123으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 124로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 126으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 127로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 128로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 130으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 131로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 132로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 134로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 135로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 136으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 138로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 139로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 140으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 142로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 143으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 144로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 146으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 147로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 148로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 150으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 151로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 152로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 154로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 155로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 156으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 158로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 159로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 160으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 162로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 163으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 164로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 166으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 167로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 168로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 170으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 171로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 172로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 174로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 175로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 176으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 178로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 179로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 180으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 182로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 183으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 184로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 186으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 187로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 188로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 190으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 191로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 192로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189 및 193으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 97로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 101로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 117로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 129로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 133으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 137로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 145로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 149로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 153으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 157로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 161로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 165로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 169로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 173으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 177로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 181로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 185로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 189로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 193으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 1로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 2로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 5로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 6으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 7로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 9로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 10으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 11로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 13으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 14로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 15로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 17로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 18로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 19로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 21로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 22로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 25로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 26으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 27로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 29로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 30으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 31로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 33으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 34로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 35로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 37로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 38로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 39로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 41로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 42로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 45로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 46으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 47로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 65로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 66으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 67로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 69로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 70으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 71로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 73으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 74로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 75로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 77로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 78로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 79로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 81로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 82로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 83으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 1로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 2로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 5로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 6으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 7로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 9로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 10으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 11로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 13으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 14로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 15로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 17로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 18로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 19로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 21로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 22로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 25로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 26으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 27로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 29로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 30으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 31로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 33으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 34로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 35로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 37로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 38로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 39로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 41로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 42로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 45로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 46으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 47로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 65로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 66으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 67로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 69로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 70으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 71로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 73으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 74로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 75로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 77로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 78로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 79로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 81로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 82로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 83으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80 및 84로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80 및 84로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 인간화 프레임워크를 포함한다.
일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 인간Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM의 Fc영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 Fc영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 IgG1 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, IgG1 Fc영역은 항체 의존성 세포에 의해 매개된 세포 독성(ADCC)을 증강시키는 하나 또는 다수의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, IgG1 Fc영역은 L235V, F243L, R292P, Y300L 및 P396L의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, IgG1 Fc영역은 S239D, A330L 및 I332E의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 SEQ ID NO: 194로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 중쇄 가변영역은 링커에 의해 Fc영역에 연결된다. 일부 실시예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 실시예에서, 펩티드 링커는 약 4 내지 약 30개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시예에서, 펩티드 링커는 약 4 내지 약 15개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시예에서, 펩티드 링커는 SEQ ID NO: 195-220으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항TIGIT항체는 이중 특이성 항체, 전장 면역글로불린, 단일쇄Fv(scFv)단편, Fab단편, Fab'단편, F(ab’)2, Fv단편, 이황화 결합이 안정적인 Fv단편(dsFv), (dsFv)2, VHH, Fv-Fc융합물, scFv-Fc융합물, scFv-Fv융합물, 트리바디, 테트라바디 또는 임의의 이들의 조합과 같은 다중 특이적 항체를 포함한다.
일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 항체 부분을 포함하는 다중 특이적 항체(예를 들어 이중 특이성 항체)를 포함한다. 일부 실시예에서, 제2 항원은 종양 관련 항원이다. 일부 실시예에서, 종양 관련 항원은, Her-2, EGFR, PD-L1, c-Met, B세포 성숙 항원(BCMA), 탄산무수화효소IX(CA1X), 암배아항원(CEA), CD5, CD7, CD10, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD34, CD38, CD41, CD44, CD49f, CD56, CD74, CD123, CD133, CD138, CD276(B7H3), 상피 당단백질(EGP2), 영약막 세포 표면 항원2(TROP-2), 상피 당단백질-40(EGP-40), 상피세포 부착분자(EpCAM), 수용체 티로신-단백질 키나제erb-B2, 3, 4,엽산 결합 단백질(FBP), 태아 아세틸콜린 수용체(AChR), 엽산 수용체-a, 강글리오시드G2(GD2), 강글리오시드G3(GD3), 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT), 키나제 삽입 도메인 수용체(KDR), Lewis A(CA 1.9.9), Lewis Y(LeY), 글리피칸-3 (GPC3), L1 세포 부착 분자(L1CAM), 뮤신16(Muc-16), 뮤신1(Muc-1), NG2D리간드, 암배아항원(h5T4), 전립선 줄기세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 막항원(PSMA), 종양 관련 당단백질72(TAG-72), 클라우딘18.2(CLDN18.2), 혈관 내피 성장 인자R2(VEGF-R2), 윌름즈종양 단백질(WT-1), 1형 티로신 단백질 키나제 막관통 수용체(ROR1) 및 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시예에서, 제2 항원은 면역 체크포인트 조절제이다. 일부 실시예에서, 면역 체크포인트 조절제는 PD1, CTLA4, LAG-3, 2B4, BTLA 및 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 치료제 또는 표지에 접합된다. 일부 실시예에서, 표지는 방사성 동위원소, 형광 염료 및 효소로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시는 치료제에 연결되는, 본문에 개시된 임의의 항체를 포함하는 면역접합체를 추가로 제공하였다. 일부 실시예에서, 치료제는 세포독소이다. 일부 실시예에서, 치료제는 방사성 동위원소이다.
본 개시는 약물 조성물을 추가로 제공하였다. 일부 실시예에서, 약물 조성물은 a) 본문에 개시된 항체 또는 면역접합체, 및 b) 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.
본 개시는 본문에 개시된 임의의 항체를 코딩하는 핵산을 추가로 제공하였다. 본 개시는 본문에 개시된 임의의 핵산을 포함하는 벡터를 추가로 제공하였다. 본 개시는 본문에 개시된 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 추가로 제공하였다.
본 개시는 본문에 개시된 항체를 제조하는 방법을 추가로 제공하였다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 본문에 개시된 숙주 세포에서 항체를 발현하고, 숙주 세포로부터 항체를 단리하는 단계를 포함한다.
본 개시는 대상체의 종양 부하를 경감시키는 방법을 추가로 제공하였다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본문에 개시된 항체, 면역접합체 또는 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 방법은 종양 세포의 수를 감소시킨다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 종양 크기를 감소시킨다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 대상체의 종양을 근절시킨다. 일부 실시예에서, 종양은 중피종, 폐암, 췌장암, 난소암, 유방암, 결장암, 흉막 종양, 겔화 형질세포종, 식도암, 위암, 활액 육종, 흉선암, 자궁내막암, 위종양, 담관암, 두경부암, 혈액암및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시는 대상체의 신생물을 치료 및/또는 예방하는 방법을 추가로 제공하였다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본문에 개시된 항체, 면역접합체 또는 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시는 신생물을 앓고 있는 대상체의 생존 기간을 연장하는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본문에 개시된 항체, 면역접합체 또는 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시예에서, 신생물은 중피종, 폐암, 췌장암, 난소암, 유방암, 결장암, 흉막 종양, 겔화 형질세포종, 식도암, 위암, 활액 육종, 흉선암, 자궁내막암, 위종양, 담관암, 두경부암, 혈액암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시는 약물로서 사용되는 본문에 개시된 임의의 항체를 추가로 제공하였다. 본 개시는 암을 치료하기 위한 본문에 개시된 임의의 항체를 추가로 제공하였다. 본 개시는 약물로서 사용되는 본문에 개시된 약물 조성물을 추가로 제공하였다. 본 개시는 암을 치료하기 위한 본문에 개시된 약물 조성물을 추가로 제공하였다. 일부 실시예에서, 암은 중피종, 폐암, 췌장암, 난소암, 유방암, 결장암, 흉막 종양, 겔화 형질세포종, 식도암, 위암, 활액 육종, 흉선암, 자궁내막암, 위종양, 담관암, 두경부암, 혈액암및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시는 본문에 개시된 항체, 면역접합체, 약물 조성물, 핵산, 벡터 또는 숙주 세포를 포함하는 키트를 추가로 제공하였다. 일부 실시예에서, 키트는 신생물을 치료 및/또는 예방하기 위한 서면 지침을 추가로 포함한다.
도 1A-1C는 유속세포 분석에 의해 결정된 대표적인 VHH 2가 항체와 인간TIGIT의 전체 세포 결합을 도시하였다. 도 1A는 기준 항인간TIGIT항체(기준 Ab 1)와 비교한 측정을 도시하였다. 도 1B는 다른 VHH항체를 사용한 상이한 측정을 도시하였다. Y축은 AlexaFlour 488의 평균 형광 강도를 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다. 2B7, 1G1, 1C12, 3G6, 2B10, 3G7, 3G10, 13H11 및 15A5는 항인간TIGIT의 VHH클론을 나타낸다. Prism의 비선형 회귀 방법을 사용하여 EC50값을 획득하고, 표에서 나노몰로 이러한 값을 나타낸다. 도 1C는 TIGIT VHH 2가 항체의 구조 모식도이다.
도 2A-2B는 TIGIT 활성을 차단하는 대표적인 2가 항체의 효능을 도시하고, 상기 활성은 루시퍼라제 리포터 유전자 분석에 의해 결정된다. 대표적인 항TIGIT 2가 항체 및 저농도 포도상구균 장독소의 존재 하에, 인간TIGIT 및 NFAT리포터 유전자가 안정적으로 형질감염된 Jurkat세포를 PVR(CD155)이 형질감염된 Raji세포와 공동 배양한다. Y축은 상대 발광 단위로 NFAT루시퍼라제 활성을 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다. 기준 Ab 1은 기준 항h-TIGIT항체이다. 2B7, 1G1, 1C12, 3G6, 2B10, 3G7 및 3F10은 항h-TIGIT의 대표적인 클론이다. Prism의 비선형 회귀 방법을 사용하여 EC50값을 획득하고, 표에서 나노몰로 이러한 값을 나타낸다.
도 3A 및 3B는 유속세포 분석에 의해 결정된 인간화1C12 및 1G1클론과 인간TIGIT의 전체 세포 결합을 도시하였다. 1C12인간화 형태의 대표적인 결과는 도 3A에 도시된 바와 같다. 1C12키메라 항체는 1C12클론의 Llama VHH서열 및 인간IgG1의 CH2 및 CH3도메인을 갖는 항체이고, 1C12(F-EREF), 1C12(F-EREW) 및 1C12(F-GLEW)는 1C12클론의 인간화 형태이며, 차이점은 프레임워크2의 돌연변이이다. 1G1인간화 형태의 대표적인 결과는 도 3B에 도시된 바와 같다. 1G1키메라 항체는 1G1클론의 Llama VHH서열 및 인간IgG1의 CH2 및 CH3도메인을 갖는 항체이다. 1G1(F-G-ERES), 1G1(F-A-ERES), 1G1(F-A-EREW) 및 1G1(F-A-GLEW)은 프레임워크2에서 상이한 돌연변이를 갖는 인간화1G1클론의 4가지 상이한 형태이다. Y축은 AlexaFlour 488의 평균 형광 강도값이다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도의 값이다.
도 4A 및 4B는 TIGIT 활성을 차단하는 인간화1C12 및 1G1클론의 효능을 도시하였고, 상기 활성은 루시퍼라제 리포터 유전자 측정에 의해 결정된다. TIGIT 차단 루시퍼라제 리포터 유전자 측정에서 1C12인간화 형태의 대표적인 결과는 도 4A에 도시된 바와 같다. 기준 항h-TIGIT항체 기준 Ab 1에 비해, 모든 클론은 보다 효과적이다. 1G1인간화 형태의 대표적인 결과는 도 4B에 도시된 바와 같다. Y축은 NFAT루시퍼라제 활성(RLU, 상대 발광 단위)을 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다.
도 5는 대표적인 클론에 대한 ELISA 차단에 따른 IC50값(나노몰 단위) 및 전체 세포 결합에 따른 EC50값(나노몰 단위) 사이의 상관성을 도시하였다. 클론 명칭은 도면에 표지되었다. GraphPad Prism을 사용하여 상관성을 분석한다.
도 6A 및 6B는 대표적인 클론 분석에 대한 열안정성을 도시하였다. VHH항체 샘플을 25에서 70°C까지 지속적으로 60분 동안 가열한다. ELISA 또는 전체 세포 결합을 사용하여 가열된 샘플과 인간TIGIT의 결합을 검사한다. 도 6A는 ELISA 분석법에서 대표적인 클론의 가열 샘플과 h-TIGIT ECD의 결합을 도시하였고, 여기서 도면에 클론 명칭을 표지하였다. Y축은 ELISA 분석법으로 얻은 OD450을 나타낸다. X축은 처리 온도를 나타낸다. 도 6B는 대표적인 클론의 가열 샘플과 유속세포 분석에 의해 결정된 Jurkat세포에서 안정적으로 발현된 h-TIGIT의 결합을 도시하였다. Y축은 h-TIGIT에 결합하는 백분율을 나타낸다. X축은 처리 온도를 나타낸다.
도 7A-7C는 ForteBio의 Octet 결합 분석을 사용하여 결정된 2A3-Fc가 인간TIGIT에 결합하는 에피토프를 도시하였다. his 태그를 포함하는 인간TIGIT ECD(200 nM)의 재조합 단백질을 센서에 로딩한다. 3가지 상이한 농도의 2A3-Fc를 주사하여 결합을 검출한다. 도 7A에 도시된 2A3-Fc를 두번째 주사하여 추가 결합은 검출되지 않았지만, 3가지 상이한 농도의 기준 Ab 2, 기준 항TIGIT항체(도 7B에 도시된 바와 같음), 또는 기준 Ab 1(도 7C에 도시된 바와 같음)을 주사하여, 강한 결합을 검출하였다. 결과는, 기준 Ab 2 및 기준 Ab 1에 비해, 2A3클론은 상이한 결합 에피토프를 갖는 것을 나타낸다.
도 8A-8C는 ELISA 분석법에 의해 결정된 인간-, 사이노몰구스 원숭이- 및 마우스-TIGIT에 대한 2A3-Fc의 교차 결합 활성을 도시하였다. 도 8A는 2A3-Fc와 재조합 인간TIGIT ECD의 결합을 도시하였다. 기준 Ab 2는 항인간TIGIT기준 항체이다. 2A3-Fc 및 기준 Ab 2는 모두 유사한 친화력으로 h-TIGIT에 결합한다. 항PDL1은 h-TIGIT에 결합하지 않는다. 도 8B는 2A3-Fc와 재조합 cyno-TIGIT의 결합을 도시하였다. 2A3-Fc 및 기준 Ab 2는 모두 유사한 친화력으로 cyno-TIGIT에 결합한다. 항PDL1은 cyno-TIGIT에 결합하지 않는다. 도 8C는 2A3-Fc와 재조합 마우스TIGIT의 결합을 도시하였다. 2A3-Fc 및 기준 Ab 2는 모두 마우스TIGIT에 결합하지 않았지만, 항마우스TIGIT기준 항체(붜치 회사(Biolegend)＃142101)는 마우스TIGIT에 고친화력으로 결합한다. Y축은 OD450을 나타내고, X축은 μg/ml 기준의 항체 농도를 나타낸다.
도 9는 전체 세포 결합 분석 및 인간TIGIT 차단 리포터 유전자 측정에서 대표적인 클론2A3-Fc 및 핫스팟 수정 형태 2A3-LT-Fc의 효능에 대한 비교를 도시하였다. Y축은 상기 도면에서 평균 형광 강도를 나타내고, 하기 도면에서 상대 발광 단위 기준의 NFAT루시퍼라제 리포터 유전자 활성을 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다. 핫스팟 수정 형태 2A3-LT-Fc는 모 클론2A3-Fc와 유사한 효능을 갖는다.
도 10A 및 10B는 핫스팟 수정 형태 2A3-LT-Fc와 기준 항-h-TIGIT항체 기준 Ab 2의 친화력의 비교를 도시하였다. 도 10A는 전체 세포 결합에서 핫스팟 수정 형태 2A3-LT-Fc와 기준 Ab 2의 효능의 비교를 도시하였다. Y축은 CytoFlex를 사용한 유속세포 분석에 의해 결정된 AlexaFlour 488의 평균 형광 강도를 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다. 도시된 데이터는 3개의 상이한 실험실의 대표적인 결과이다. 2A3-LT-Fc와 h-TIGIT의 친화력은 기준 Ab 2와의 친화력보다 약간 높다. 도 10B는 TIGIT 차단 NFAT 리포터 유전자 측정에서, 핫스팟 수정 형태 2A3-LT-Fc와 기준 Ab 2의 효능의 비교를 도시하였다. Y축은 상대 발광 단위 기준의 NFAT루시퍼라제 리포터 유전자 활성을 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다. 2A3-LT-Fc는 기준 Ab 2와 유사한 효능을 갖는다.
도 11은 2A3-LT-Fc체외 항종양 효력을 도시하였다. 혼합 림프구 반응 분석에서 TIGIT+ T세포 및 PVR+ 수지상 세포(DCs)를 사용하였다. 48시간 혼합 배양한 후 배양 상층액에서 T세포IL-2의 분비를 검출하였다. 항PD1항체는 양성 대조로 사용된다. 항HER2항체는 음성 대조로 사용된다.
도 12는 Octet 결합 분석을 사용하여 결정된 2A3-LT-Fc야생형(wt) 및 Fc돌연변이(DLE 및 VLPLL)와 인간FcγRIIIA, 인간FcγRIIB 및 마우스FcγRIV의 결합을 도시하였다. 센서에는 FcγRIIIA, 인간FcγRIIB 및 마우스FcγRIV의 ECD재조합 단백질이 로딩되어 있고, ForteBio를 사용하여 5가지 상이한 농도의 2A3-LT-Fc wt, DLE 또는 VLPLL돌연변이체의 결합 및 해리를 검출하였다. Y축은 결합, 해리 및 Rmax를 나타낸다. X축은 초 단위 기준의 시간을 나타낸다. 야생형에 비해, DLE 및 VLPLL돌연변이체는 모두 향상된 인간FcγRIIIA와의 결합 친화력을 갖고, DLE돌연변이체도 향상된 인간FcγRIIB와의 결합 친화력을 갖지만, VLPLL돌연변이체는 인간FcγRIIB와의 결합 친화력을 저하시켰다. 모든 형태는 모두 마우스FcγRIV와 유사한 친화력을 갖는다.
도 13A 및 13B는 각각 TIGIT활성 및 인간FcγRIIIA에 의해 매개된 활성에 대한 TIGIT mAb 2A3-LT-Fc wt, DLE돌연변이체의 영향을 도시하였다. 도 13A는 TIGIT활성 차단에 대한 NFAT루시퍼라제 리포터 유전자 측정법을 사용하여 결정된 TIGIT mAb 2A3-LT-Fc wt, DLE돌연변이체의 영향을 도시하였다. 인간TIGIT 및 NFAT리포터 유전자가 안정적으로 형질감염된Jurkat세포를 PVR이 안정적으로 형질감염된 Raji세포와 공동 배양한다. 2A3-LT-Fc wt 및 돌연변이체를 첨가하고 5시간 동안 공동 배양한다. 루시퍼라제 활성으로 TCR에 의해 매개된 활성을 측정한다. Y축은 상대 발광 단위로 NFAT루시퍼라제 활성을 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다. 도 13B는 인간FcγRIIIA에 의해 매개된 활성에 대한 TIGIT mAb 2A3-LT-Fc wt, DLE돌연변이체의 영향을 도시하였고, 상기 활성은 FcγRIIIA에 의해 매개된 NFAT루시퍼라제 리포터 유전자 활성에 의해 결정된다. 상이한 농도의 2A3-LT-Fc wt, DLE돌연변이체 존재 하에, 인간FcγRIIIA 및 NFAT가 안정적으로 형질감염된 Jurkat세포를 인간TIGIT가 안정적으로 형질감염된 293T세포와 5시간 동안 공동 배양한다. 루시퍼라제 활성을 측정하고, Y축에서 상대 발광 단위로 나타낸다. X축은 나노몰 단위 기준의 항체 농도를 나타낸다.
도 14A-14C는 항TIGIT항체의 체내 유효성 분석을 도시하였다. 인간TIGIT 녹인 C57BL/6마우스 및 MC38마우스 결장암 모델을 사용하였다. 치료 1주일 전에 마우스에 MC38종양 세포를 접종하였다. 평균 종양 크기가 약 51 mm3에 도달하면 치료를 시작하고, 복막 내에 2.5주 동안 1주 2회 투여하였다. 1회 6 mg/kg의 2A3-LT-Fc항체 또는 1회 11 mg/kg의 기준 Ab 2(mole/kg에서 2A3-LT-Fc항체와 동일)이다. 도 14A는 블랭크 대조, 2A3-Fc-wt, DLE 돌연변이가 존재하는 2A3-Fc 및 기준 Ab 2를 투여한 종양 마우스의 종양 성장 그래프를 보여준다. 단일 종양 부피의 결과는 도 14B에 도시된다. 도 14C는 연구에서 각 실험군의 체중 변화가 유의하지 않음을 도시하였다.
본 개시는 TIGIT 및 하나 또는 다수 별도의 타겟에 결합하는 다중 특이적 항체를 포함하는 고친화력으로 TIGIT에 특이적으로 결합하는 단리된 모노클로날 항체를 제공하였다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함한다. 본 개시는 항체, 면역접합체 및 이러한 항체를 포함하는 약물 조성물을 제조하는 방법, 및 항체, 면역접합체 및 이러한 항체를 포함하는 약물 조성물을 사용하여 예컨대 질환 및 병증(예를 들어 암)의 치료에 사용되는 방법을 추가로 제공하였다. 본 발명은 부분적으로 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항TIGIT항체의 발견에 기초하고, 이러한 항체는 면역 세포에서의 면역 응답을 증가시키고 개선된 항종양 효능을 제공할 수 있다.
제한이 아닌 명확성을 위해, 현재 개시된 주제의 구체적인 실시형태는 이하 섹션으로 구분된다.
1. 정의;
2. 항체;
3. 사용 방법;
4. 약물 조제품; 및
5. 제품.
1. 정의
본문에서 용어 “항체”는 가장 넓은 의미로 사용되고, 다양한 항체 구조를 포함하며, 이러한 항체 구조는 이들이 원하는 항원 결합 활성을 나타내는 한, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중 특이적 항체(예를 들어, 이중 특이성 항체), 단일 도메인 항체 및 항체 단편을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
“항체 단편”은 온전한 전장 항체를 포함하는 항원 결합 부분의 분자를 지칭하고, 상기 온전한 전장 항체는 온전한 항체에 결합하는 항원을 결합한다. 항체 단편의 구현예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 디아바디, 선형 항체, 단일쇄 항체 분자(예를 들어, scFv), 항체 단편으로 형성된 다중 특이적 항체, 단일 도메인 항체, VHH나노항체, 도메인 항체, 2가 도메인 항체 또는 항원에 결합하는 항체의 임의의 다른 단편을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. “VHH”는 낙타과 동물에서 단리된 단일 도메인 항체를 지칭한다. 일부 실시예에서, VHH는 낙타과 중쇄항체의 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, VHH의 크기는 25 kDa를 초과하지 않는다. 일부 실시예에서, VHH의 크기는 20 kDa를 초과하지 않는다. 일부 실시예에서, VHH의 크기는 15 kDa를 초과하지 않는다.
“전장 항체”는 두 가닥의 중쇄 및 두 가닥의 경쇄를 포함하는 항체를 지칭한다. 경쇄 및 중쇄의 가변영역은 항원 결합을 담당한다. 중쇄 및 경쇄의 가변영역은 각각 “VH” 및 “VL”로 지칭될 수 있다. 두 가닥의 사슬의 가변영역은 일반적으로 3개의 초가변 루프를 포함하고, 상보적 결정 영역(CDR)(LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는 경쇄(LC)CDR, HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하는 중쇄(HC)CDR)이라고 지칭된다. 본문에 개시된 항체 및 항원 결합 단편의 CDR 경계는 공지된 범례를 통해 정의 또는 검증될 수 있고, 예를 들어, Kabat, Chothia 또는 Al-Lazikani의 범례(Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991)이다. 중쇄 또는 경쇄의 3개의 CDR은 프레임워크 영역(FR)이라고 지칭되는 측면 세그먼트 사이에 삽입되고, 이들은 CDR보다 더 보존되고, 초가변 루프를 지원하는 스캐폴드를 형성하였다. 중쇄 및 경쇄의 불변영역은 항원 결합에 참여하지 않지만, 다양한 이펙트 기능을 나타낸다. 항체중쇄 불변영역의 아미노산 서열에 따라 항체를 분류한다. 항체의 5가지 주요 클래스 또는 동종형은 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이고, α, δ, ε, γ 및 μ중쇄의 존재를 특징으로 한다. 여러 가지 주요 항체 클래스는 lgG1(γ1중쇄), lgG2(γ2중쇄), lgG3(γ3중쇄), lgG4(γ4중쇄), lgA1(α1중쇄) 또는 lgA2(α2중쇄)와 같은 하위 클래스로 구분된다.
기준 항체와 “교차 경쟁하여 결합하는 항체”는 경쟁 분석에서 기준 항체와 항원의 결합이 50% 이상에 도달한 항체를 지칭하고, 반대로, 경쟁 분석에서 기준 항체가 항체와 그 항원의 결합에 대한 차단은 50%이상에 도달한다. Antibodies [항체], Harlow 및 Lane(콜드스프링하버 출판사, 콜드스프링하버, 뉴욕 (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY))에서 예시적 경쟁 분석법을 설명하였다.
“Fv”는 전체 항원 인식 부위와 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 상기 단편은 긴밀한 비공유 결합에서 하나의 중쇄 가변영역 및 하나의 경쇄 가변영역의 이량체로 구성된다. 이 2개의 도메인의 접힘으로부터 항원 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프(중쇄 및 경쇄 각각에 3개의 루프)가 나타난다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 3개의 항원 특이적 CDR만 포함하는 Fv의 절반)도 항원을 인식하고 결합할 수 있지만, ??로는 온전한 결합 부위보다 더 낮은 친화력으로 수행된다.
“단일쇄Fv”(또한 “sFv” 또는 “scFv”로 약칭)는 단일 폴리펩티드 사슬에 연결된 VH 및 VL항체도메인을 포함하는 항체 단편이다. 일부 실시예에서, scFv폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성하도록 하는 VH와 VL도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv에 대한 요약에 관하여, Plueckthun의 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies [모노클로날 항체의 약리학], 제113권, Rosenburg 및 Moore편집 Springer-Verlag [스프링거 출판사], 뉴욕, 제269-315페이지 (1994)을 참조바란다.
본문의 목적을 위해, “수용체 인간 프레임워크” 또는 “인간 프레임워크”는 인간 면역 글로불린 프레임워크 또는 인간 공유 프레임워크로부터 유래된 경쇄 가변 도메인(VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인(VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역 글로불린 프레임워크 또는 인간 공유 프레임워크으로부터 “유래된” 수용체 인간 프레임워크는 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 아미노산 서열 변화를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 실시예에서, VL수용체 인간 프레임워크와 VL인간 면역 글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 공유 프레임워크 서열은 서열 측면에서 동일하다.
“친화력”은 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호 작용의 합계의 강도를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 본문에 사용된 바와 같이, “결합 친화력”은 결합 쌍(예를 들어, 항체와 항원)의 구성원 사이의 1 : 1 상호 작용을 반영하는 내부 결합 친화력을 지칭한다. 파트너Y에 대한 분자X의 친화력은 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화력은 본 분야에 공지된 통상적인 방법(본문에 기재된)으로 측정할 수 있다. 이하 결합 친화력을 측정하기 위한 구체적인 설명적 및 예시적 실시예를 서술하였다.
“친화력 성숙된” 항체는 이러한 변화가 없는 모 항체와 비교하여, 하나 또는 다수의 CDR 또는 초가변 영역(HVR)에 하나 또는 다수의 변화가 있는 항체를 의미하고, 상기 변화는 항원에 대한 항체의 개선된 친화력을 제공하였다.
본문에 사용된 바와 같이, “Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T세포 면역 수용체” 또는 “TIGIT”는 임의의 척주 동물 유래(포유 동물(예를 들어 영장류 동물(예를 들어 인간 및 사이노몰구스 원숭이)) 포함)된 임의의 천연 TIGIT폴리펩티드, 또는 이의 임의의 단편을 지칭하고, 임의로 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개, 최대 9개 또는 최대 10개의 아미노산 치환, 추가 및/또는 결실을 포함한다. 상기 용어는 전장에서 처리되지 않은 TIGIT 및 세포에서 처리하여 발생하는 임의의 형태의 TIGIT를 포함한다. 상기 용어는 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체와 같은 TIGIT의 자연 발생의 변이체를 더 포함한다. 본 개시의 항TIGIT항체에 의해 표적화된 인간TIGIT아미노산 서열의 비제한적인 구현예는 다음과 같다.
Figure pct00001
용어 “TIGIT의 ECD”는 TIGIT의 세포외 도메인을 지칭한다. 예를 들어, SEQ ID NO: 221로 표시되는 예시적 TIGIT단백질의 ECD는 이하 아미노산 서열을 포함한다.
Figure pct00002
용어 “항TIGIT항체” 및 “TIGIT에 결합하는 항체”는 항체가 TIGIT를 표적으로 하는 진단제 및/또는 치료제로서 사용 가능하도록 충분한 친화력으로 TIGIT에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일 실시예에서, 관련되지 않은 바, 비TIGIT단백질에 대한 항TIGIT항체의 결합 정도는 예를 들어 BIACORE®표면 플라즈몬 공명 측정법에 의해 측정된 바와 같이 TIGIT에 대한 상기 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 일부 실시예에서, TIGIT에 결합하는 항체는 이하 해리 상수(KD) < 약 1 μM, < 약 100 nM, < 약 10 nM, < 약 1 nM, < 약 0.1 nM, < 약 0.01 nM 또는 < 약 0.001 nM(예를 들어 10-8 M이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-12 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-10 M)를 갖는다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 상이한 종의 TIGIT 중에서 보존되는 TIGIT에피토프에 결합한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 단백질의 ECD에서 TIGIT 상의 에피토프에 결합한다.
용어 “키메라” 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 종으로부터 유래되나, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지 부분은 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 일부 실시예에서, 본 개시의 키메라 항체는 낙타과 동물 중쇄 가변영역 및 인간Fc영역을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “CDR” 또는 “상보적 결정 영역”은 중쇄 및/또는 경쇄의 가변영역 내의 비인접 항원 결합 부위를 지칭한다. 이러한 특정 영역은 이미 Kabat et al., J. Biol. Chem.[생화학저널], 252: 6609-6616 (1977); Kabat et al., Department of Health and Human Services, “Sequences of proteins of immunological interest [면역학적 의미를 갖는 단백질 서열]”(1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. [분자 생물학 저널] 196: 901-917 (1987); Al-Lazikani B. et al., J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널], 273: 927-948 (1997); MacCallum et al., J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널] 262: 732-745 (1996); Abhinandan 및 Martin, Mol. Immunol.[분자 면역학], 45: 3832-3839 (2008); Lefranc M.P. et al., Dev. Comp.Immunol.[개발 및 비교 면역학], 27: 55-77 (2003); 및 Honegger 및 Pl
Figure pct00003
ckthun, J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널], 309: 657-670 (2001)에서 설명되었고, 여기서 정의는 서로 비교할 때 아미노산 잔기의 중복 또는 서브 집합을 포함한다. 그러나, 항체 또는 이식된 항체 또는 이의 변이체의 CDR을 지칭하기 위한 정의의 적용은 본문에서 정의되고 사용되는 용어의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다. 상기 각각의 참고문헌에 정의된 CDR을 포함하는 아미노산 잔기는 하기 표 1에 비교로서 나열되었다. CDR 예측 알고리즘 및 인터페이스는 본 분야에서 공지된 것이고, 예를 들어 Abhinandan 및 Martin, Mol. Immunol.[분자 면역학], 45: 3832-3839 (2008); Ehrenmann F. et al., Nucleic Acids Res.[핵산 연구], 38: D301-D307 (2010); 및 Adolf-Bryfogle J. et al., Nucleic Acids Res.[핵산 연구], 43: D432-D438 (2015)을 포함한다. 본 단락에 인용된 참조문헌의 내용은 인용을 통해 그 전체가 본문에 통합되어, 본 출원에 사용되고 본문의 하나 이상의 청구범위에 포함될 수 있다.
표1: CDR정의
Figure pct00004
1잔기의 넘버링은 Kabat et al.,의 명명법(위와 동일)을 따른다.
2잔기의 넘버링은 Chothia et al.,의 명명법(위와 동일)을 따른다.
3잔기의 넘버링은 MacCallum et al.,의 명명법(위와 동일)을 따른다.
4잔기의 넘버링은 Lefranc et al.,의 명명법(위와 동일)을 따른다.
5잔기의 넘버링은 Honegger 및 Pl
Figure pct00005
ckthun의 명명법(위와 동일)을 따른다.
“Kabat에서와 같은 가변 도메인 잔기의 넘버링” 또는 “Kabat에서와 같은 아미노산 위치 넘버링” 및 이의 변이체는 상술한 Kabat et al.,의 의 항체 편집에 사용된 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인의 넘버링 시스템을 지칭한다. 이 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 직쇄 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 삽입에 대응되는 더 적거나 또는 별도의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후의 단일 아미노산 삽입(Kabat에 따른 잔기 52a) 및 중쇄FR의잔기 82 이후에 삽입된 잔기(예를 들어, Kabat에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 항체 서열에서 “표준” Kabat넘버링 서열의 상동성 영역과 정렬함으로써 주어진 항체의 잔기의 Kabat넘버링을 결정할 수 있다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체(예를 들어, 본문에 기시된 단일 도메인 항TIGIT항체)의 CDR을 포함하는 아미노산 잔기는 상기 Lefranc et al.,의 IMGT 명명법에 따라 정의된 것이다. 일부 실시예에서, 전장 항체의 CDR을 함유하는 아미노산 잔기는 상술한 Kabat et al.,의 Kabat명명법에 의해 정의된 것이다. 일부 실시예에서, 면역글로불린 중쇄, 예를 들어 Fc영역 내의 잔기의 넘버링은 상술한 Kabat et al.,에 서술된 EU 인덱스의 넘버링을 지칭한다. “Kabat에 서술된 EU 인텍스”는 인간IgG1 EU항체의 잔기의 넘버링을 지칭한다.
“프레임워크” 또는 “FR”는 본문에 정의된 CDR잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다.
“인간화”항체는 비인간CDR/HVR로부터 유래된 아미노산 잔기 및 인간FR로부터 유래된 아미노산 잔기의 키메라 항체를 지칭한다. 일부 실시예에서, 인간화 항체는 실질적으로 적어도 하나, 전형적으로 2개의 가변 도메인의 전부를 포함하고, 여기서 HVR/CDR의 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 항체에 대응되며, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 항체에 대응된다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체(예를 들어 비인간 항체)의 “인간화 형태”는 인간화된 항체를 지칭한다.
“인간 항체”는 아미노산 서열을 갖는 항체이고, 상기 아미노산 서열은 인간에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 대응되거나 및/또는 본문에 개시된 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 사용하여 제조된 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 특별히 배제하였다. 본 분야에 공지된 다양한 기술(파지 디스플레이 라이브러리 포함)을 사용하여 인간 항체를 생성할 수 있다. Hoogenboom 및 Winter, J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널], 227: 381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널], 222: 581 (1991). 또한 인간 모노클로날 항체를 제조하는 Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy [모노클로날 항체 및 암 요법, Alan R. Liss, 제77페이지 (1985); Boerner et al., J. Immunol.[면역학 저널], 147(1): 86-95 (1991)에 설명된 방법에 사용될 수도 있다. 또한 van Dijk 및 van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol.[약리학 커런트 오피니언], 5: 368-74 (2001)을 참조바란다. 인간 항체는 항원 공격(예를 들어 면역화된 xenomice)에 응답하여 이러한 항체를 생성하도록 변형되었지만 내인성 유전자좌가 실효된 유전자 변형 동물로 제조할 수 있다(예를 들어, XENOMOUSE™기술에 대한 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 참조). 인간B세포 하이브리도마 기술에 의해 생성된 인간 항체에 대해서는, 예를 들어Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 103: 3557-3562 (2006)를 더 참조바란다.
“본문에서 검증된 폴리펩티드 및 항체 서열에 대한 아미노산 서열 동일성 백분율(%)” 또는 “상동성”은 서열(임의의 보존적 치환을 서열 동일성의 일부로 고려)을 정렬한 후, 후보 서열에서 비교된 폴리펩티드의 아미노산 잔기와 동일한 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 목적으로, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR) 또는 MUSCLE소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 본 분야의 기술의 다양한 방식으로 정렬을 달성할 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본문의 목적을 위해, 서열 정렬 컴퓨터 프로그램 MUSCLE을 사용하여 아미노산 서열 동일성%값(Edgar, R.C., Nucleic Acids Research [핵산 연구] 32(5):1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics [BMC생물정보학] 5(1):113, 2004)을 생성할 수 있다.
“상동성”은 2개의 폴리펩티드 사이 또는 2개의 핵산 분자 사이의 서열 유사성 또는 서열 동일성을 지칭한다. 2개의 비교된 서열 중 하나의 위치가 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 서브 유닛에 의해 점유될 때, 예를 들어, 만약 2개의 DNA분자 중 각각의 위치가 아데닌에 의해 점유되면, 상기 분자는 상기 위치에서 상동적이다. 2개의 서열 사이의 상동성 백분율은 2개의 서열이 공유하는 일치하거나 상동인 위치의 수를 비교된 위치의 수로 나눈 값에 100을 곱한 함수이다. 예를 들어, 만약 2개의 서열 중 10개의 위치 중의 6개가 일치하거나 상동이면, 2개의 서열은 60% 상동적이다. 예를 들어, DNA서열ATTGCC 및 TATGGC는 50%의 상동성을 갖는다. 일반적으로, 2개의 서열이 최대 상동성을 제공하도록 정렬될 때 비교가 이루어진다.
용어 “불변 도메인”은 항원 결합 부위를 포함하는 가변 도메인인 면역글로불린의 다른 일부에 비해, 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3도메인(총체적으로 CH로 지칭됨) 및 경쇄의 CL도메인을 포함한다.
임의의 포유 동물 종의 항체(예를 들어 면역글로불린)의 “경쇄”는 모두 그 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 두 가지 유의하게 상이한 유형 중 하나로 지정될 수 있고, 각각 kappa(“κ”) 및 lambda(“λ”)라고 지칭된다.
“CH1도메인”(“H1”도메인의 “C1”로도 지칭됨)은 일반적으로 약 아미노산 118 내지 약 아미노산 215(EU넘버링 시스템)의 범위이다.
“힌지 영역”은 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216 내지 Pro230에 대응되는 IgG의 영역으로 정의된다(Burton, Molec. Immunol.[분자 면역학] 22: 161-206 (1985)). 다른 IgG동종형의 힌지 영역은 중쇄 사이에 S-S결합을 형성하는 첫번째 및 마지막 시스테인 잔기를 동일한 위치에 배치함으로써 IgG1서열에 정렬될 수 있다.
인간IgG Fc영역(“C2”도메인으로도 지칭됨)의 “CH2도메인”은 약 아미노산 231 내지 약 아미노산 340에 대응된다. CH2도메인은 다른 도메인과 밀접하게 매칭되지 않는다는 점에서 독특하다. 오히려, 2개의 N연결된 분지형 탄수화물 사슬이 온전한 천연 IgG분자의 2개의 CH2도메인 사이에 삽입된다. 탄수화물은 도메인-도메인 매칭에 대한 대안을 제공하고 CH2 도메인을 안정화하는데 도움이 될 수 있다고 추측된다. Burton, Molec Immunol.[분자 면역학], 22: 161-206 (1985).
“CH3도메인”(“C2”도메인으로도 지칭됨)은 CH2도메인과 Fc영역의 C말단 사이의 잔기(즉, 약 아미노산 잔기 341에서 항체 서열의 C말단까지), 일반적으로 IgG의 아미노산 잔기 446 또는 447에 있음)를 포함한다.
분문의 용어 “Fc영역” 또는 “단편 결정화 가능한 영역”은 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C말단 영역을 정의하기 위한 것이다. 면역글로불린 중쇄의 Fc영역의 경계는 변화될 수 있지만, 인간IgG중쇄의 Fc영역을 Cys226위치의 아미노산 잔기 또는 Pro230에서 이의 카르복시 말단까지 연장되는 것으로 정의된다. 예를 들어 항체의 생산 또는 정제 동안 또는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 Fc영역의 C말단 라이신(EU넘버링 시스템에 따른 잔기 447)을 제거할 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조합물은 모든 K447잔기를 제거한 항체 집단, K447잔기를 제거하지 않은 항체 집단 및 K447잔기가 있거나 없는 항체 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본문에 기재된 항체에 적합한 천연 서열Fc영역은 인간IgG1, IgG2(IgG2A, IgG2B), IgG3 및 IgG4를 포함한다.
“Fc수용체” 또는 “FcR”은 항체의 Fc영역에 결합하는 수용체를 설명한다. 바람직한 FcR은 천연 인간FcR이다. 이 외에, 바람직하게는 FcR은 IgG항체(γ수용체)에 결합하고 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 서브 클래스의 수용체를 포함하는 FcR이며, 대립유전자 변이체 및 이러한 수용체의 스플라이스 형태를 포함하고, FcγRII수용체는 FcγRIIA(“활성화 수용체”) 및 FcγRIIB(“억제 수용체”)를 포함하며, 이들은 유사하느 아미노산 서열을 갖고, 주요한 구별점은 세포질 도메인이다. 활성화 수용체FcγRIIA는 세포질 도메인에 면역 수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함한다. 억제성 수용체FcγRIIB는 세포질 도메인에 면역 수용체 티로신 기반 억제 모티프(ITIM)를 포함한다. (M. Daeron, Annu. Rev. Immunol.[면역학 연간 리뷰] 15: 203-234 (1997)를 참조바란다. FcR은 Ravetch 및 Kinet, Annu. Rev. Immunol.[면역학 연간 리뷰], 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods [면역 방법] 4: 25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med.[실험 및 임상 의학 저널] 126: 330-41 (1995)에 종합 서술되었다. 본문의 용어 “FcR”은 미래에 검증될 FcR을 포함하는 다른 FcR을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “에피토프”는 항체 또는 항원 결합 부분이 결합하는 항원 상의 특정 원자 또는 아미노산 그룹을 지칭한다. 만약 2개의 항체 또는 항원 결합 부분이 항원에 경쟁적으로 결합하면, 이들은 항원 내의 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “특이적 결합”, “특이적 인식” 및 “……에 대해 특이적”은 예를 들어 타겟과 항체 또는 항체 부분 사이의 결합과 같은 측정 가능하고 재현 가능한 상호 작용을 지칭하고, 이질적인 분자(생체 분자 포함) 집단이 존재 시 타겟의 존재를 결정한다. 예를 들어, 특이적 인식 타겟(에피토프일 수 있음)의 항체 또는 항체 부분은 상기 타겟에 결합하는 항체 또는 항체 부분이고, 친화력, 결합력, 준비성 및/또는 지속 시간은 다른 타겟과의 결합보다 길다. 일부 실시예에서, 항체와 관련되지 않는 타겟의 결합 정도는, 예를 들어 방사성면역검정(RIA)에 의해 측정된 항체와 타겟의 결합 정도의 약 10% 미만이다. 일부 실시예에서, 타겟에 특이적으로 결합하는 항체의 해리 상수 (KD) ≤ 10-5 M, ≤ 10-6 M, ≤ 10-7 M, ≤ 10-8 M, ≤ 10-9 M, ≤ 10-10 M, ≤ 10-11 M, 또는 ≤ 10-12 M이다. 일부 실시예에서, 항체는 상이한 종의 단백질로부터 보존된 단백질의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함할 수 있지만 이를 필요로 하지는 않는다. 항체 또는 항원 결합 도메인의 결합 특이성은 본 분야에 공지된 방법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 이러한 방법은 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIACORETM-검사 및 펩티드 스캐닝을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
“단리된” 항체(또는 작제물)는 이의 생산 환경의 구성요소(예를 들어 천연 또는 재조합)로부터 검증, 단리 및/또는 회수된 항체이다. 일부 실시예에서, 단리된 폴리펩티드는 이의 생산 환경에서 모든 다른 성분과의 결합이 없거나 실질적으로 없다.
본문에 기재된 작제물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 “단리된”핵산 분자는 이의 생산 환경에서 일반적으로 이와 관련된 적어도 하나의 오염물 핵산 분자로부터 검증 및 단리된 핵산 분자이다. 일부 실시예에서, 단리된 핵산은 이의 생산 환경에서 모든 다른 성분과의 결합이 없거나 실질적으로 없다. 본문에 기재된 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자의 형태는 자연적으로 존재하는 형태 또는 배경과 상이하다. 따라서, 단리된 핵산 분자는 세포에 자연적으로 존재하는 본문에 기재된 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 핵산과 상이하다. 단리된 핵산은 일반적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 상기 핵산 분자는 염색체 외 또는 이의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
용어 “제어 서열”은 특정 숙주 생체에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA서열을 지칭한다. 예를 들어, 원핵 생물에 사용하기에 적합한 제에 서열은 프로모터, 선택적 오퍼레이터 서열, 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용하는 것으로 알려져 있다.
핵산이 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 있을 때, 상기 핵산은 “작동 가능하게 연결”된다. 예를 들어, 만약 프리서열 또는 분비 리더 서열의 DNA가 폴리펩티드의 분비에 참여하는 프리프로테인으로 발현되면, 프리서열 또는 분비 리더 서열의 DNA는 상기 폴리펩티드의 DNA에 작동 가능하게 연결되고; 만약 프로모터 또는 인핸서가 코딩 서열의 전사에 영향을 미치면, 상기 프로모터 또는 인핸서는 상기 서열에 작동 가능하게 연결되거나; 또는 만약 리보솜 결합 부위가 번역을 용이하게 하도록 위치하면, 상기 리포솜 결합측은 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, “작동 가능하게 연결된”은 연결되는 DNA서열이 연속적이고, 분비 리더 서열의 경우 연속적이며 판독 프레임에 있음을 의미한다. 그러나, 인핸서는 연속적일 필요가 없다. 편리한 제한 부위에서 연결하여 연결을 달성한다. 만약 이러한 부위가 존재하지 않으면, 일상적인 실천에 따라 합성된 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커를 사용한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “벡터”는 연결된 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가 복제 핵산 구조인 벡터, 및 이들이 도입된 숙주 세포의 게놈에 통합된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본문에서 “발현 벡터”로 지칭된다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “형질감염된” 또는 “형질전환된” 또는 “형질도입된”은 외인성 핵산을 숙주 세포 내로 전달 또는 도입하는 과정을 지칭한다. “형질감염된” 또는 “형질전환된” 또는 “형질도입된” 세포는 외인성 핵산을 사용하여 형질감염, 형질전환 또는 형질도입된 세포이고, 상기 세포는 1차 타겟 세포 및 이의 자손을 포함한다.
용어 “숙주 세포”, “숙주 세포주” 및 “숙주 세포 배양물”은 상호교환적으로 사용되고, 이러한 세포의 자손을 포함하는 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 계대 수에 관계없이 1차 형질전환된 세포 및 이로부터 유래된 자손을 포함하는 “형질전환체” 및 “형질 전환된 세포”를 포함한다. 자손의 핵산 함량은 모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있고, 돌연변이를 함유할 수 있다. 1차 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손은 본문에 포함된다.
용어 “대상체”, “개체” 및 “환자”는 본문에서 상호 교환 가능하게 사용되고, 인간, 소, 말, 고양이, 개, 설치류 동물 또는 영장류 동물을 포함하지만 이에 한정되지 않는 포유 동물을 지칭한다. 일부 실시예에서, 대상체는 인간이다.
약제의 “유효량”은 필요한 조제량 및 시간 동안 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하는데 효과적인 양을 지칭한다. 상기 특정 조제량은 선택한 특정 제제, 후속 투여 요법(다른 화합물과 병용 여부에 관계없이), 투여 시간, 영상화된 조직, 및 물리적 전달 시스템 중의 하나 또는 다수에 따라 변경될 수 있다.
본 출원의 물질/분자, 작용제 또는 길항제의 “치료 유효량”은 예를 들어 질환 상태, 연령, 성별 및 개인의 체중 및 물질/분자, 작용제 또는 길항제가 개체에서 원하는 응답을 유발하는 능력과 같은 요인에 따라 변화될 수 있다. 치료 유효량은 또한 상기 물질/분자, 작용제 또는 길항제의 임의의 독성 또는 유해한 작용은 모두 치료학적으로 유익한 작용에 의해 상쇄된 양이다. 치료 유효량은 1회 또는 수회의 투여로 전달될 수 있다.
“예방 유효량”은 원하는 예방 결과를 달성하기 위한 조제량 및 원하는 기간 동안 지속되는 양을 지칭한다. 전형적으로, 그러나 반드시 그런 것은 아니지만, 예방 조제량은 질환의 전 또는 초기 단계에서 대상체에게 투여되기 때문에, 이러한 예방 유효량은 치료 유효량보다 적다.
본문에 사용된 바와 같이, “치료(treatment 또는 treating)”는 유익하거나 원하는 결과(임상 결과 포함)를 얻기 위한 방법이다. 본 출원의 목적으로, 유익하거나 바람직한 임상 결과는, 질환으로 인한 하나 또는 다수 증상 완화, 질환의 정도 감소, 질환의 안정화(예를 들어, 질환의 악화를 예방 또는 지연), 질환의 확산을 예방 또는 지연(예를 들어, 전이), 질환의 재발을 예방 또는 지연, 질환의 진행을 지연 또는 완화, 질환 상태 개선, 질환의 완화(부분적으로 또는 전체적으로) 제공, 질환 치료에 필요한 하나 또는 다수의 다른 약물의 조제량 감소, 질환의 진행 지연, 삶의 질 증가 또는 개선, 체중 증가 및/또는 생존 연장 중 하나 또는 다수를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. “치료”는 또한 암의 병리학적 결과(예를 들어, 종양 부피)를 감소시키는 것을 포함한다. 본 출원의 방법은 이러한 치료 측면 중의 임의의 하나 또는 다수를 고려하였다. “치료”는 반드시 치료 중인 질환이 완치된다는 것을 의미하지 않는다.
본문에 서술된 출원의 실시예는 “……로 구성되는” 및/또는 “실질적으로 ……로 구성되는”을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “약(about)” 또는 “약(approximately)”은 당업자에 의해 결정된 특정값이 허용 가능한 오차 범위 내에 있음을 의미하고, 이는 상기 값이 어떻게 측정되거나 결정되는지, 즉 측정 시스템에 의해 제한되는 방식에 부분적으로 의존한다. 일부 실시예에서, “약”은 본 분야의 실천에 따라 3개 이상의 표준 편차 초과를 의미할 수 있다. 일부 실시예에서, “약”은 주어진 값의 최대20%(예를 들어, 최대10%, 최대5% 또는 최대1%)의 범위를 나타낼 수 있다. 일부 실시예에서, 특히 생물학적 시스템 및 방법에 대해, 상기 용어는 5배 이내 또는 2배 이내와 같은 값의 한 자릿수 이내를 의미할 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “조절”은 긍정적 또는 부정적 변화를 지칭한다. 예시적 조절은 약 1%, 약 2%, 약 5%, 약 10%, 약 25%, 약 50%, 약 75% 또는 약 100%의 변화를 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “증가”는 적어도 약 5%의 긍정적인 변화를 지칭한다. 변화는 약 5%, 약 10%, 약 25%, 약 30%, 약 50%, 약 75%, 약 100% 또는 이상일 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “감소”는 적어도 약 5%의 부정적인 변화를 지칭한다. 변화는 약 5%, 약 10%, 약 25%, 약 30%, 약 50%, 약 75% 또는 심지어 약 100%일 수 있다.
본문에 사용된 용어 “약 X-Y”는 “약 X 내지 약 Y”과 동일한 의미를 갖는다.
본문 및 첨부된 청구범위에서 사용될 경우, 단수 형태 “하나/하나(a)”, “또는 (or)” 및 “이러한/상기(the)”는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 지시 대상을 포함한다.
“이펙터 기능”은 항체 동종형에 따라 변화되는 항체의 Fc영역에 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 구현예는 C1q 결합 및 보체-의존성 세포 독성(CDC), Fc수용체 결합, 항체 의존성 세포에 의해 매개된 세포 독성(ADCC), 식세포 작용, 세포 표면 수용체(예를 들어 B세포 수용체)의 하향조절 및 B세포 활성화를 포함한다.
“면역접합체”는 하나 또는 다수의 이종 분자(세포 독성제를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 접합된 항체를 지칭한다.
용어 “약물 제형”은 그 중에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이게 하고 제형이 투여되는 대상에게 허용할 수 없을 정도로 독성이 있는 다른 성분이 없는 형태의 제제를 의미한다.
본문에 사용된 바와 같이, “약학적으로 허용 가능한 담체”는 대상체에 독성이 없는 활성 성분 이외의 약물 제형의 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 방부제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
용어 “가변영역” 또는 “가변 도메인”은 항체와 항원의 결합에 참여하는 항체중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 일부 실시예에서, 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 CDR을 포함한다. (예를 들어 Kindt et al., Kuby Immunology [쿠비면역학], 제61버전, W. H.푸리만회사(W. H. Freeman and Co.), 제91페이지 (2007). 참조) 단일 VH 또는 VL도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, VH 또는 VL도메인을 사용하여 항원에 결합하는 항체에서 특정 항원에 결합하는 항체를 단리하여, 상보적인 VL 또는 VH도메인의 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. 예를 들어 Portolano et al., J. Immunol.[면역학 저널] 150: 880-887 (1993); Clarkson et al., Nature [자연] 352: 624-628 (1991)을 참조바란다.
2. 항체
일부 실시예에서, 본 발명은 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항체의 발견에 부분적으로 기반한 것으로, 항종양 치료에 사용할 수 있고, 여기서, 상기 항체는 TIGIT수용체를 선택적으로 억제하며 면역 세포(예를 들어, T세포)의 유익한 면역 응답을 유도한다. 따라서, 본 개시는 항TIGIT항체를 제공하였다. 일부 실시예에서, 본문에 개시된 항TIGIT항체는 TIGIT수용체 기능을 억제하는 길항제 항체이다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT수용체와 리간드 사이의 상호 작용을 차단한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT수용체로부터 유래되는 면역 억제 신호를 차단한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 낙타과 동물 항체 또는 VHH항체와 같은 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 IgG, Fab 및/또는 scFv형태의 기존 항체보다 크기가 작으므로, 개선된 조직 침윤 능력을 갖는다.
일부 실시예에서, 본 개시의 항체는 모노클로날 항체(키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체를 포함)일 수 있거나 이를 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 개시된 항체는 인간화 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 인간 면역 글로불린 프레임워크 또는 인간 공유 프레임워크와 같은 수용체 인간 프레임워크를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 개시의 항체는 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디 또는 F(ab')2단편과 같은 항체 단편일 수 있다. 일부 실시예에서, 항체는 완전한 IgG 1항체, 또는 본문에 정의된 기타 항체 클래스 또는 동종형와 같은 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 본 개시의 항체는 임의의 (본 출원에서 서술된 바와 같은(예를 들어, 본문에 상세히 기재된 제2.1-2.11절)) 특징을 포함할 수 있다.
본 개시의 항체는 예를 들어 신생물 또는 암을 진단 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시예에서, 본 개시의 항체를 사용하여 성장이 억제될 수 있는 종양 형성 및 암은 면역 치료법에 영향을 미치는 종양의 형성 및 암을 포함한다. 일부 실시예에서, 종양 형성 및 암은 유방암(예를 들어, 유방세포암종), 난소암(예를 들어, 난소세포암종) 및 신세포암종(RCC)을 포함한다. 본 개시의 방법을 사용하여 치료될 수 있는 기타 암의 구현예로, 흑색종(예를 들어, 전이성 악성 흑색종), 전립선암, 결장암, 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 뇌종양, 만성 또는 급성 백혈병(급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병,만성 림프성 백혈병을 포함), 림프종(예를 들어, 호지킨 림프종 및 비호지킨 림프종, 림프구성 림프종, 원발 중추신경계(CNS)림프종, T세포림프종), 비인두암, 두 또는 경부암, 피부암 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 직장암, 항문주위암, 위암, 고환암, 자궁암, 수란관암, 자궁내막암, 자궁경부암, 질암,외음, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 유방선암(cancer of the adbreast gland), 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아 고형종양, 방광암, 신장암 또는 요관암, 유방골반암, 중추신경계(CNS)신생물, 종양혈관신생, 척추 종양, 뇌간신경교종, 뇌하수체선종, 카포시육종, 포피모양암종, 편평세포암, 석면 (예를 들어, 중피종)으로 인한 암을 포함하는 환경유발성암 및 상기 암의 조합을 포함한다.
2.1 예시적 항TIGIT항체
본 개시에서 TIGIT단백질에 결합하는 단리된 항체를 제공하였다. 일부 실시예에서, 본 개시의 항TIGIT항체는 TIGIT의 ECD에 결합한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 SEQ ID NO: 222로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 TIGIT의 ECD에 결합한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 본문에 따른 항TIGIT항체(예를 들어, 2A3)와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시예에서, 본문에 개시된 항TIGIT항체는 TIGIT수용체의 길항제로 사용될 수 있다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT수용체의 활성을 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 99% 또는 약 99.9% 감소시킬 수 있다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT수용체의 다운스트림 면역 억제 신호 전달을 차단할 수 있다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 면역 세포(예를 들어 T세포 및/또는 NK세포)의 면역 응답 및/또는 항종양 작용을 증가시킨다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체를 사용한 치료는 대상체에서 항종양 효능을 나타내어 종양 성장을 감소 및/또는 대상체의 생존 기간을 연장시킨다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체(예를 들어, VHH)를 포함하는 항TIGIT항체는 전장 항체의 Fab도메인에 비해 단일 도메인 항체의 더 작은 크기로 인해 전장 항체보다 작은 분자 크기를 가지며, 이로써 전장 항체에 비해, (예를 들어, 종양 부위에서) 우수한 조직 침윤을 유발할 수 있다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체를 사용한 치료는 전장 항TIGIT항체(예를 들어, 기준 Ab 1 및 기준Ab 2)를 사용한 치료보다 더 우수한 항종양 효능을 나타낸다. 기준 Ab 1는 U.S. 2016/0176963 A1에 개시된 BMS 22G2와 동일한 아미노산 서열을 갖고, 기준 Ab 2는 Tiragolumab와 동일한 아미노산 서열을 가지며, 서열은 U.S. 2017/0088613 A1에 개시되었다.
일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 VHH를 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역(VH)을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 Fc영역에 연결된다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 Fc영역에 연결되지 않는다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약1 x 10-7 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약 1 x 10-8 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약5 x 10-9 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약1 x 10-9 M이하의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약 1 x 10-9 M 내지 약 1 x 10-7 M 사이의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약1 x 10-9 M 내지 약 1 x 10-8 M 사이의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약 2 x 10-9 M내지 약 1 x 10-8 M 사이의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약2 x 10-9 M내지 약 5 x 10-8 M 사이의 KD로 TIGIT에 결합한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 약 1 x 10-9 M 내지 약 5 x 10-9 M 사이의 KD로 TIGIT에 결합한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 94로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 95로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 96으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 99로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 102로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 103으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 104로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 106으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 107로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 108로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 110으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 111로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 112로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 114로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 115로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 116으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 118로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 119로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 122로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 123으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 124로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 126으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 127로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 128로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 130으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 131로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 132로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 134로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 135로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 136으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 138로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 139로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 140으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 142로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 143으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 144로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 146으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 147로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 148로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 150으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 151로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 152로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 154로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 155로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 156으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 158로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 159로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 160으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 162로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 163으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 164로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 166으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 167로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 168로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 170으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 171로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 172로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 174로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 175로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 176으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 178로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 179로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 180으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 182로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 183으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 184로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 186으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 187로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 188로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 190으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 191로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 192로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, a) SEQ ID NO: 94, 98, 102, 106, 110, 114, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, 162, 166, 170, 174, 178, 182, 186 및 190 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 갖는 중쇄 가변영역CDR1; b) SEQ ID NO: 95, 99, 103, 107, 111, 115, 119, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147, 151, 155, 159, 163, 167, 171, 175, 179, 183, 187 및 191중 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 c) SEQ ID NO: 96, 100, 104, 108, 112, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188 및 192 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 갖는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인을 포함하며, 여기서 상기 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인은 각각 중쇄 가변영역에 포함된 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인을 함유하고, 상기 기준 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189 및 193으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 94로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 95로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 96으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 99로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 102로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 103으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 104로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 106으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 107로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 108로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 110으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 111로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 112로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 114로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 115로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 116으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 118로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 119로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 122로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 123으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 124로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 126으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 127로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 128로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 130으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 131로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 132로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 134로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 135로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 136으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 138로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 139로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 140으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 142로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 143으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 144로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 146으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 147로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 148로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 150으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 151로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 152로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 154로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 155로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 156으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 158로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 159로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 160으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 162로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 163으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 164로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 166으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 167로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 168로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 170으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 171로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 172로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 174로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 175로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 176으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 178로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 179로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 180으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 182로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 183으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 184로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 186으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 187로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 188로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 190으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 191로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 192로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189 및 193으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189 및 193으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 97로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 101로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 117로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 129로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 133으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 137로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 145로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 149로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 153으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 157로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 161로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 165로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 169로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 173으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 177로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 181로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 185로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 189로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 193으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시예에서, 중쇄 가변영역에 포함된 임의의 아미노산 서열은 최대 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9 또는 약 10개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 추가를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 아미노산 치환은 보존적 치환이다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 1로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 2로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 5로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 6으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 7로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 9로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 10으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 11로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 13으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 14로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 15로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 17로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 18로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 19로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 21로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 22로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 25로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 26으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 27로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 29로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 30으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 31로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 33으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 34로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 35로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 37로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 38로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 39로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 41로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 42로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 45로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 46으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 47로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 65로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 66으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 67로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 69로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 70으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 71로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 73으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 74로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 75로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 77로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 78로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 79로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 기준 항TIGIT단일 도메인 항체는, SEQ ID NO: 81로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 82로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 83으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 1로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 2로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 5로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 6으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 7로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 9로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 10으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 11로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 13으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 14로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 15로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 17로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 18로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 19로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 21로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 22로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 25로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 26으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 27로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 29로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 30으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 31로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 33으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 34로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 35로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 37로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 38로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 39로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 41로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 42로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 45로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 46으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 47로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 65로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 66으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 67로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 69로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 70으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 71로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 73으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 74로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 75로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 77로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 78로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 79로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은, SEQ ID NO: 81로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 82로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 83으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80 및 84로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80 및 84로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 중쇄 가변영역에 포함된 임의의 아미노산 서열은 최대 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9 또는 약 10개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 추가를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 아미노산 치환은 보존적 치환이다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 48로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 52로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 56으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 60으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 64로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 68로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 72로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 76으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 80으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 84로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 인간화 프레임워크를 포함한다. 일부 실시예에서, 인간화 프레임워크는 SEQ ID NO: 85-93으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변영역 서열의 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 인간화 프레임워크는 SEQ ID NO: 85-93으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변영역 서열의 FR2서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 Fc영역을 포함하지 않는다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 인간Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM의 Fc영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 Fc영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc영역은 IgG1 Fc영역을 포함한다. 일부 실시예에서, IgG1 Fc영역은 항체 의존성 세포에 의해 매개된 세포 독성(ADCC)을 증강시키는 하나 또는 다수의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, IgG1 Fc영역은 L235V, F243L, R292P, Y300L 및 P396L의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, IgG1 Fc영역은 S239D, A330L 및 I332E의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 SEQ ID NO: 194로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 중쇄 가변영역은 링커에 의해 Fc영역에 연결된다. 일부 실시예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 실시예에서, 펩티드 링커는 약 4 내지 약 30개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시예에서, 펩티드 링커는 약 4 내지 약 15개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시예에서, 펩티드 링커는 SEQ ID NO: 195-220으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항TIGIT항체는 이중 특이성 항체, 전장 면역글로불린, 단일쇄Fv(scFv)단편, Fab단편, Fab'단편, F(ab’)2, Fv단편, 이황화 결합이 안정적인 Fv단편(dsFv), (dsFv)2, VHH, Fv-Fc융합물, scFv-Fc융합물, scFv-Fv융합물, 디아바디, 트리바디, 테트라바디 또는 임의의 이들의 조합과 같은 다중 특이적 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 항체 부분을 포함하는 다중 특이적 항체(예를 들어, 이중 특이성 항체)를 포함한다.
일부 실시예에서, 제2 항원은 종양 관련 항원이다. 일부 실시예에서, 종양 관련 항원은, Her-2, EGFR, PD-L1, c-Met, B세포 성숙 항원(BCMA), 탄산무수화효소IX(CA1X), 암배아항원(CEA), CD5, CD7, CD10, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD34, CD38, CD41, CD44, CD49f, CD56, CD74, CD123, CD133, CD138, CD276(B7H3), 상피 당단백질(EGP2), 영약막 세포 표면 항원2(TROP-2), 상피 당단백질-40(EGP-40), 상피세포 부착분자(EpCAM), 수용체 티로신-단백질 키나제erb-B2, 3, 4,엽산 결합 단백질(FBP), 태아 아세틸콜린 수용체(AChR), 엽산 수용체-a, 강글리오시드G2(GD2), 강글리오시드G3(GD3), 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT), 키나제 삽입 도메인 수용체(KDR), Lewis A(CA 1.9.9), Lewis Y(LeY), 글리피칸-3 (GPC3), L1 세포 부착 분자(L1CAM), 뮤신16(Muc-16), 뮤신1(Muc-1), NG2D리간드, 암배아항원(h5T4), 전립선 줄기세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 막항원(PSMA), 종양 관련 당단백질72(TAG-72), 클라우딘18.2(CLDN18.2), 혈관 내피 성장 인자R2(VEGF-R2), 윌름즈종양 단백질(WT-1), 1형 티로신 단백질 키나제 막관통 수용체(ROR1) 및 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시예에서, 제2 항원은 면역 체크포인트 조절제이다. 일부 실시예에서, 면역 체크포인트 조절제는 PD1, CTLA4, LAG-3, 2B4, BTLA 및 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시예에서, 항TIGIT항체는 치료제 또는 표지에 접합된다. 일부 실시예에서, 표지는 방사성 동위원소, 형광 염료 및 효소로 이루어진 군으로부터 선택된다.
2.2 항체 친화력
일부 실시예에서, 본문에 개시된 항체 또는 다중 특이적 항체의 항원 결합 부분은 타켓 항원에 대해 높은 결합 친화력을 갖는다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 1 x 10-7 M 이하의 KD로 타겟에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 1 x 10-8 M 이하의 KD로 타겟에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 5 x 10-9 M 이하의 KD로 타겟에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 1 x 10-9 M 이하의 KD로 타겟에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 1 x 10-9 M 내지 약 1 x 10-7 M 사이의 KD로 타겟에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 KD로 약 1 x 10-9 M 내지 약 1x10-8 M 사이를 타겟으로 하는 항체에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 2 x 10-9 M 및 약 1x10-8 M 사이의 KD로 타겟에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 2 x 10-9 M 내지 약 5 x 10-8 M 사이의 KD로 타겟에 결합한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 약 1 x 10-9 M 내지 약 5 x 10-9 M 사이의 KD로 타겟에 결합한다.
항체 또는 항원 결합 부분의 KD는 본 분야에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다. 이러한 방법은 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, Octet- BIACORE®-검증 및 펩티드 스캔을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서, BIACORE®표면 플라즈몬 공명 측정법으로 KD를 측정할 수 있다. 예를 들어,고정된 항원 CMS 칩(NJ)에서 약 10개의 응답 단위(RU)로 25°C의 온도 하에서, BIACORE®-2000 또는 BIACORE® 3000(Biacore회사, 피스카타웨이(Piscataway), 뉴저지주(NJ))를 사용하여 측정하였으나, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시예에서, 공급업체의 설명서에 따라, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩(CMS, Biacore회사)을 N-에틸-N′-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 염산염(EDC) 및N-히드록시숙신이미드(NHS) 로 활성화한다. 항원을 pH 4.8인 10 mM의 아세트산 나트륨으로 5 μg/ml(약 0.2 μM)로 희석한 다음, 5 μl/분의 유속으로 주입하여, 결합 단백질의 약 10개의 응답 단위(RU)를 구현한다. 항원 주입 후, 1 M의 에탄올아민을 주입하여 미반응 라디칼을 차단한다. 동역학 측정의 경우, 25°C에서, 0.05%의 폴리소르베이트20(TWEEN-20TM) 계면활성제(PBST) 가 포함된 PBS에서의 Fab의 연속 희석물(0.78 nM 내지 500 nM)을 약 25 μl/분의 유속으로 주입한다. 결합 속도 (kon) 및 해리 속도(koff)는 간단한 일대일 랭뮤어(Langmuir) 결합 모델 (BIACORE® 평가 소프트웨어 버전3.2)을 사용하여, 결합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅하여 계산한다. 평형 해리 상수(KD)는 비율k0fffkon로 계산될 수 있다. 예를 들어, Chen et al,. J. Mol. Biol. [분자생물학저널] 293: 865-881(1999)을 참조 바란다. 상기 표면 플라즈몬 공명 측정법에 의한 결합 속도(on-rate)가 106 M-l s-1을 초과하는 경우, 결합 속도는 형광 퀀칭 기술로 확정할 수 있고, 이 기술은 증가된 항원 농도(예컨대, 컷오프 구성의 분광 광도계(아비브 기기(Aviv Instruments)) 또는 교반 셀이 있는 8000 시리즈 SLM-AMINCO™ 분광 광도계(ThermoSpectronic회사)와 같은 분광기로 측정됨)의 존재 하에서, 25°C에서 PBS(pH 7.2)에서의 20 nM의 항-항원 항체(Fab형태) 의 형광 방출 강도(여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm대역)의 증가 또는 감소를 측정하였다.
2.3 항체 단편
일부 실시예에서, 본 개시의 항체는 항원 결합 단편 또는 항체 단편을 포함한다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 및 scFv단편, 및 하기에서 서술되는 기타 단편을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 항체 단편의 종합 서술에 관하여, Hudson et al., Nat. Med.[자연 의학] 9: 129-134 (2003)를 참조바란다. scFv단편의 종합 서술에 관하여, 예를 들어, Pluckthtin, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies[모노클로날 항체의 약리학], 제113권, Rosenburg 및 Moore편집, (스프링거 출판사(Springer-Verlag), 뉴욕), 제269-315페이지 (1994)를 참조하고; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조바란다. 샐비지 수용체(salvage receptor) 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab)2단편에 관한 토론은 미국 특허 번호 5,869,046을 참조바란다.
일부 실시예에서, 본 개시의 항체는 디아바디일 수 있다. 디아바디는 2가 또는 이중 특이적일 수 있는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med.[자연 의학] 9: 129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 90: 6444-6448 (1993)을 참조바란다. 트리바디 및 테트라바디는 또한 Hudson et al., Nat. Med.[자연 의학] 9: 129-134 (2003)에 서술되어 있다.
일부 실시예에서, 본 개시의 항체는 단일 도메인 항체를 포함할 수 있다. 단일 도메인 항체는 항체의 전부 또는 부분 중쇄 가변 도메인 또는 전부 또는 부분 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다 (Domantis회사, 월섬(Waltham), 매사추세츠(MA); 예를 들어, 미국 특허 번호 6,248,516 Bl 참조). 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 낙타과 동물 단일 도메인 항체이다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 VHH이다. 일부 실시예에서, 단일 도메인 항체는 인간화된 것이다.
본문에 기재된 바와 같이, 항체 단편은 다양한 기술에 의해 제조될 수 있고, 이러한 기술은 온전한 항체의 단백질 가수분해 소화 및 재조합 숙주 세포(예를 들어, 대장균 또는 박테리오파지)의 생산을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
2.4 키메라 항체 및 인간화 항체
일부 실시예에서, 본 개시의 다중 특이적 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 항체는 키메라 항체이다. 일부 키메라 항체에 관하여, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보], 81: 6851-6855 (1984))에 설명되어 있다. 일부 실시예에서, 키메라 항체는 비인간 가변영역(예를 들어, 마우스의 가변영역으로부터 유래됨) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 키메라 항체는 클래스 또는 하위 클래스가 모 항체의 클래스 또는 하위 클래에서 변경된 “클래서 전환” 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 실시예에서, 본 개시의 다중 특이적 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 항체는 인간화 항체일 수 있다. 일반적으로, 비인간 항체를 인간화하여 인간에 대한 면역원성을 감소시키는 동시에, 모 비인간 항체의 특이성과 친화력을 유지한다. 일반적으로, 인간화 항체는 하나 또는 다수의 가변 도메인을 포함하고, 여기서, HVR, 예를 들어CDR (또는 이의 일부)은 비인간 항체로부터 유래되며, FR(또는 이의 임의의 일부)은 인간 항체 서열로부터 유래된다. 인간화 항체는 인간 불변 영역의 적어도 일부를 선택적으로 포함할 수도 있다. 일부 실시예에서, 인간화 항체에서의 일부 FR 잔기는 예를 들어 항체 특이성 또는 친화력을 회복하거나 개선하기 위해 비인간 항체(예를 들어, HVR 잔기로부터 유래된 항체)의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화 항체 및 그 제조 방법은, 예를 들어Almagro 및 Fransson, Front. Biosci.[생물과학선구] 13: 1619-1633 (2008)에 설명되어 있고, 예를 들어Riechmann et al., Nature [자연] 332: 323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 86: 10029-10033 (1989); 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321 및 7,087,409; Kashmiri et al., Methods [방법] 36: 25-34 (2005)(SDR (a-CDR)이식 설명); Padlan, Mol. Immunol.[분자 면역학] 28: 489-498 (1991)(“재생표면” 설명); Dall’Acqua et al., Methods [방법] 36: 43-60 (2005)(“FR셔플링” 설명); 및 Osbourn et al., Methods [방법] 36: 61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer [영국암저널], 83: 252-260 (2000) (FR셔플링에 대한 “지도 선택” 방법 설명)에 추가로 설명되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은, “최적의 피팅” 방법을 사용하여 선택한 프레임워크 영역(예를 들어, Sims et al., J. Immunol.[면역학 저널] 151: 2296 (1993) 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변영역의 특정 하위 그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보], 89:4285 (1992); 및 Presta et al., J. Immunol.[면역학 저널], 151: 2623 (1993) 참조); 인간 성숙(체세포 돌연변이) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계 프레임워크 영역(예를 들어Almagro 및 Fransson, Front. Biosci.[생물과학선구] 13: 1619-1633 (2008) 참조); 및 FR 라이브러리를 스크리닝하여 얻은 프레임워크 영역(예를 들어 Baca et al., J. Biol. Chem.[생화학저널] 272: 10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem.[생화학저널] 271: 22611-22618 (1996) 참조)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
2.5 인간 항체
일부 실시예에서, 본 개시의 항체는 인간 항체(예를 들어, 인간 도메인 항체 또는 인간 DAb)일 수 있다. 인간 항체는 본 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 van Dijk 및 van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol.[약리학 커런트 오피니언] 5: 368-74 (2001), Lonberg, Curr.Opin. Immunol.[면역학 커런트 오피니언] 20: 450-459 (2008), 및 Chen, Mol. Immunol.[분자 면역학] 47(4): 912-21 (2010)에 설명되어 있다. 완전한 인간 단일 도메인 항체(또는 DAb)를 생산할 수 있는 유전자 변형 마우스 또는 래트는 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, US 20090307787 A1, 미국 특허 번호 8,754,287, US 20150289489 A1, US 20100122358 A1, 및 WO 2004049794를 참조바란다.
유전자 변형 동물에 면역원을 투여하여 인간 항체(예를 들어 인간DAb)를 제조할 수 있고, 상기 유전자 변형 동물은 항원 공격에 반응하여 완전한 인간 항체 또는 인간 가변영역을 갖는 완전한 항체를 생성하도록 변형된 것이다. 이러한 동물은 일반적으로 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 포함하고, 이들은 내인성 면역글로불린 유전자좌를 치환하거나, 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체에 무작위로 통합된다. 이러한 유전자 변형 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화되었다. 유전자 변형 동물에서 인간 항체를 얻는 방법에 대한 종합 서술은 Lonberg, Nat. Biotech.[자연생물기술] 23: 1117-1125 (2005)을 참조바란다. 예를 들어, XENOMOUSETM기술을 설명한 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; HuMab®기술을 설명한 미국 특허 번호 5,770,429; K-M MOUSE®기술을 설명한 미국 특허 번호 7,041,870, 및 VelociMouse®기술을 설명한 미국 특허 출원 공개 번호US 2007/0061900)를 더 참조바란다. 이러한 동물에 의해 생성된 온전한 항체로부터의 인간 가변영역(예를 들어, 상이한 인간 불변 영역에 결합)은 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체(예를 들어, 인간 DAb)는 또한 하이브리도마 기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체를 생산하기 위한 인간 골수종 및 마우스인 간 이종 골수종 세포주에 대해 설명하였다(예를 들어, Kozbor J. Immunol.[면역학 저널], 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications [모노클로날 항체 생산 기술 및 응용], 제51-63페이지 마셜데커 회사(Marcel Dekker, Inc.), 뉴욕, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol.[면역학 저널], 147: 86 (1991) 참조). Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보], 103: 3557-3562 (2006)에는 인간B세포 하이브리도마 기술에 의해 생산된 인간 항체에 대해 추가로 설명되어 있다. 이 외의 방법은, 예를 들어, 미국 특허 번호 7,189,826(하이브리도마 세포주로부터 단일클론 인간IgM항체의 생산을 설명) 및 Ni, Xiandai Mianyixue [현대 면역학], 26(4): 265-268 (2006)(인간-인간 하이브리도마 설명)에 설명된 그러한 방법들을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(Trioma기술)은 또한 Vollmers 및 Brandlein, Histology and Histopathology [조직학 및 조직병리학], 20(3): 927-937 (2005) 및 Vollmers 및 Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology [실험 및 임상 약리학의 방법 및 발견], 27(3): 185-91 (2005)에 설명되어 있다.
인간 항체(예를 들어 인간DAb)는 인간 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로써 생성될 수도 있다. 이 후, 이러한 가변 도메인 서열은 원하는 인간 불변 도메인에 결합될 수 있다. 항체 라이브러리에서 인간 항체를 선택하는 기술은 아래에 설명되어 있다.
2.6 라이브러리에서 유도된 항체
항체 부분은 조합 라이브러리에서 원하는 활성 또는 다양한 활성을 갖는 항체를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고 이러한 라이브러리에서 원하는 결합 특성을 갖는 항체를 스크리닝하기 위한 다양한 방법은 본 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology [분자생물학적 방법] 178: 1-37(O’Brien et al., 편집, 휴먼 출판사(Human Press), 토토와(Totowa), 뉴저지주(NJ), 2001)에 설명되어 있고, McCafferty et al., Nature [자연] 348: 552-554; Clackson et al., Nature [자연] 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널] 222: 581-597 (1992); Marks 및 Bradbury, Methods in Molecular Biology [분자생물학적 방법] 248:161-175(Lo편집, 휴먼 출판사(Human Press), 토토와(Totowa), 뉴저지주(NJ), 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널] 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널] 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods [면역학방법 저널] 284(1-2): 119-132(2004)과 같은 문헌에 추가로 설명되어 있다. 단일 도메인 항체 라이브러리를 구축하는 방법은 이미 설명하였고, 예를 들어, 미국 특허 번호 7371849를 참조바란다.
일부 파지 디스플레이 방법에서, 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 통해VH 및 VL유전자 라이브러리를 각각 클론하고, 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합한 후, Winter et al., Ann.Rev. Immunol.[면역학 연간 리뷰], 12: 433-455 (1994)에 설명에 따라 항원 결합 파지를 스크리닝할 수 있다. 파지는 일반적으로 항체 단편을 scFv단편 또는 Fab단편으로 디스플레이한다. 면역원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요 없이 면역원에 대한 높은 친화력의 항체를 제공한다. 대안적으로, Griffiths et al., EMBO J [유럽분자생물학회저널], 12: 725-734 (1993)에 설명된 바와 같이, 어떠한 면역도 필요없이, 천연 라이브러리(예를 들어, 인간에서 획득)를 클론하여 광범위한 비자가 및 자가 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 마지막으로, Hoogenboom 및 Winter, J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널], 227: 381-388 (1992)에 설명된 바와 같이, 줄기 세포에서 재배열되지 않은 V유전자 단편을 클론하고, 무작위 서열을 포함하는 PCR프라이머를 사용하여 고도로 가변적인 CDR3 영역을 코딩하여 체외에서 재배열을 완성함으로써, 천연 라이브러리를 합성할 수도 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 설명하는 특허 간행물은, 미국 특허 번호 5,750,373 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리에서 단리된 항체 또는 항체 단편은 본문에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
2.7 항체 변이체
현재 개시된 주제는 또한 개시된 항체의 아미노산 서열 변이체를 제공하였다. 예를 들어, 상기 항체의 결합 친화력 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선하여야 할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하거나 펩티드 합성에 의헤 제조될 수 있다. 이러한 변형은 항체의 아미노산 서열 내의 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 최종적인(즉, 변형된) 항체가 원하는 특성(예를 들어, 항원 결합)을 갖는 조건이면, 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합으로 최종 작제물을 얻을 수 있다.
2.7.1 치환, 삽입 및 결실 변이체
일부 실시예에서, 하나 또는 다수의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체를 제공하였다. 치환 돌연변이 유발을 위한 표적 부위는 HVR(또는 CDR) 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 표 2에서 “바람직한 치환”이라는 표제로 나타내었다. 표 2에서 “예시적 치환” 이라는 표제로 더 실질적인 변경을 제공하였고, 하기에서와 같이 아미노산 측쇄 클래스를 참조하여 추가로 설명된다. 아미노산 치환을 목적 항체에 도입하고, 원하는 활성(예를 들어, 유지/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC)에 대해 생성물을 스크리닝할 수 있다
표 2. 아미노산 치환
Figure pct00006
아미노산은 일반적인 측쇄 특성에 따라, (1) 소수성: 노르루신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 사슬 방향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe 그룹으로 나뉠 수 있다. 일부 실시예에서, 비보존적 치환은 이러한 클래스 중 하나의 구성원을 다른 하나의 클래스로 교환하여하 한다.일부 실시예에서, 한가지 유형의 치환 변이체는 모 항체(예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 또는 다수의 고도의 가변영역 잔기에 관련된다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택된 얻은 변이체는 모 항체에 비해 일부 생물학적 특성(예를 들어, 증가된 친화력, 감소된 면역원성)에서 변형(예를 들어, 개선)을 구비 및/또는 모 항체의 일부 생물학적 특성을 기본적으로 유지하였다. 예시적 치환 변이체는, 예를 들어 파지 디스플레이 기반 친화력 성숙 기술(예를 들어, 본문에 개시된 것)을 사용하여 편리하게 생성될 수 있는 친화력이 성숙된 항체이다. 간략하게, 하나 또는 다수의 HVR(또는 CDR) 잔기가 돌연변이되고, 변이체 항체가 파지에 디스플레이되며, 특정 생물학 활성 (예를 들어, 결합 친화력)에 대해 스크리닝된다.
예를 들어, 항체 친화력을 개선하기 위해 HVR(또는 CDR)에서 변경(예를 들어, 치환)이 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR(또는 CDR)“핫스팟”(즉, 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이되는 코돈에 의해 코팅된 잔기)에서 이루어지고(예를 들어, Chowdhury, Methods Mol. Biol.[분자생물학적 방법] 207: 179-196 (2008)) 및/또는 SDR(a-CDR)에서 이루어지며, 얻은 변이체 VH 또는 VL의 결합 친화력을 테스트할 수 있다. 구축 및 2차 라이브러리로부터의 재선택에 의한 친화력 성숙은, 예를 들어, Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology [분자생물학적 방법] 178: 1-37(O’Brien et al., 편집, 휴먼 출판사(Human Press), 토토와(Totowa), 뉴저지주(NJ), (2001))에 설명되어 있다. 친화력 성숙의 일부 실시예에서, 다양한 방법(예를 들어, 오류빈발 PCR, 가닥 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드지정 돌연변이 유발) 중 임의의 하나의 방법에 의해 다양성을 성숙을 위한 가변 유전자에 도입한다. 다음 2차 라이브러리를 생성한다. 다음 라이브러리를 스크리닝하여 희망하는 친화력을 갖는 임의의 항체 변이체를 감별한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 여러 HVR(또는 CDR) 잔기(예를 들어,한 번에 4-6개 잔기)가 무작위화되는 HVR(또는 CDR) 지정 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발 또는 모델링을 사용하여 항원 결합에 관여하는 HVR(또는 CDR) 잔기를 특이적으로 감별할 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3는 자주 타겟으로 된다.
일부 실시예에서, 치환, 삽입 또는 결실은 그 변경이 실질적으로 항원에 결합하는 항체의 능력을 감소시키지 않는 한, 하나 또는 다수의 HVR(또는 CDR) 내에서 발생될 수 있다. 예를 들어, 실질적으로 결합 친화력을 감소시키지 않는 보존적 변경(예를 들어, 본문에 제공된 보존적 치환)은 HVR(또는 CDR)에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR(또는 CDR)“핫스팟” 또는 CDR 외에 있을 수 있다. 상기에 제공된 변이체VHH서열의 일부 실시예에서, 각각의 HVR(또는 CDR)은 변경되지 않거나, 1개, 2개, 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 포함한다.
Cunningham 및 Wells (1989) Science [과학], 244: 1081-1085에 설명된 바와 같이, 돌연변이 유발을 타켓팅할 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 검증하기 위한 유용한 방법을 “알라닌 스캐닝 돌연변이 유발”이라고 한다. 이러한 방법에서, 표적 잔기의 잔기 또는 잔기 그룹(예를 들어, Arg, Asp, His, Lys 및 Glu와 같은 전하를 띈 잔기)을 감정하고,중성 또는 음전하를 띈 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 치환하여, 항체와 항원의 상호 작용이 영향을 받는지 여부를 확인한다. 아미노산 위치에 별도의 치환을 도입하여, 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 증명할 수 있다. 대안적으로 또는 별도로, 항원-항체 복합물의 결정 구조는 항체와 항원 사이의 접점 감정에 사용된다. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 치환 후보로서 타겟팅되거나 제거될 수 있다. 변이체를 스크리닝하여 원하는 속성이 포함되어 있는지를 확인할 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1개 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드의 길이 범위 내의 아미노기 말단 및/또는 카르복실기 말단 융합, 및 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열 내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 구현예로 N-말단 메티오닐기 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 기타 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소(예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 폴리펩티드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합을 포함한다.
2.7.2 글리코실화 변이체
일부 실시예에서, 항체 부분을 변경하여 작제물의 클리코실화 정도를 증가 또는 감소시킨다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 추가 또는 결실은 아미노산 서열을 변경하여 하나 또는 다수의 글리코실화 부위를 생성 또는 제거함으로써 편리하게 구현될 수 있다.
항체 부분이 Fc영역(예를 들어, scFv-Fc)을 포함할 경우, 이에 연결된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유 동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 일반적으로 N-결합에 의해 Fc영역CH2 도메인의 Asn297에 연결된 분지형 바이안테너리 올리고당(biantennary oligosaccharide)을 포함한다. 예를 들어Wright et al., TIBTECH 15: 26-32 (1997)를 참조바란다. 올리고당은 만노오스, N-아세틸글루코사민(GlcNAc), 갈락토오스 및 시알산과 같은 다양한 탄수화물뿐만 아니라 바이안테너리 올리고당 구조의 “줄기”에서 GlcNAc에 부착된 푸코스(fucose)를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 항체 부분의 올리고당은 일부 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하도록 변형될 수 있다.
일부 실시예에서, 항체 부분은 Fc영역에 부착된 푸코스가 (직접적으로 또는 간접적으로) 결여된 탄수화물 구조를 갖는다. 예를 들어, 이러한 항체에서의 푸코스 함량은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. WO 2008/077546에 설명된 바와 같이, 푸코스의 량은 MALDI-TOF 질량 분석에 의해 측정된 Asn 297에 부착된 모든 당구조(예를 들어,복합, 하이브리드 및 높은 만노오스 구조)의 합과 비교하여, Asn297의 당 사슬 내 푸코스의 평균 량을 계산하여 결정된다. Asn297은 Fc영역의 약 297번 위치에 위치한 아스파라긴 잔기(Fc영역 잔기의 EU 넘버링)를 지칭하고; 그러나, 항체의 미세한 서열 변화로 인해, Asn297 또한 297의 업스트림 또는 다운스트림 약 ± 3개의 아미노산, 즉 위치 294와 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화된 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621(교와발효공업 주식회사(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조바란다. “탈푸코실화 ” 또는 “푸코오스 결핍형”항체 변이체와 관련된 출판물의 구현예는, US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al., J. Mol. Biol.[분자 생물학 저널] 336: 1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng.[생물기술 및 생물공학] 87: 614 (2004)를 포함한다. 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 구현예로, 단백질 푸코실화 작용 결핍형의 Lec13 CHO세포(Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. [생화학 및 생물물리학 컬렉션] 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al.,), 및 및 α-1,6-푸코실트랜스퍼라제(α-1,6-fucosyltransferase gene) 유전자FUT8, 녹아웃 CHO세포와 같은 녹아웃 세포주(예를 들어, Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng.[생물기술 및 생물공학] 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng.[생물기술 및 생물공학], 94(4):680-688 (2006); 및 WO 2003/085107 참조)를 포함한다.
일부 실시예에서, 항체 부분은 항체의 Fc영역에 부착된 바이안테너리 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된 이등분된 올리고당을 갖는다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 글리코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 구현예는, 예를 들어WO 2003/011878(Jean-Mairet et al.,); 미국 특허 번호 6,602,684(Umana et al.,); 및 US 2005/0123546(Umana et al.,)에 설명되어 있다. Fc영역에 연결된 올리고당 상에 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체를 더 제공하였다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 갖는다. 이러한 항체 변이체는, 예를 들어WO 1997/30087 (Patel et al.,); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 설명되어 있다.
2.7.3 Fc영역 변이체
일부 실시예에서, 하나 또는 다수의 아미노산 변형을 항체 부분의 Fc영역(예를 들어scFv-Fc) 내로 도입하여, Fc영역 변이체를 생성할 수 있다. Fc영역 변이체는 하나 또는 다수의 아미노산 위치에서의 아미노산 변형(예를 들어, 치환)을 포함하는 하나의 인간 Fc영역 서열(예를 들어, 인간IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc영역)을 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 일부(그러나 전부가 아닌) 이펙터 기능이 있는 Fc단편에서, 이러한 기능은 상기 단편을 생체 내 항체 부분의 반감기가 중요하지만 일부 이펙터 기능(예: 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 응용 분야에 이상적인 후보로 만든다. 체외 및/또는 체내 세포 독성 측정을 수행하여 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인할 수 있다. 예를 들어, Fc수용체(FcR) 결합 측정을 수행하여 항체가 FcγR결합 능력을 갖지 않도록 확보할 수 있지만(따라서 ADCC 활성이 결여될 수 있음), FcRn 결합 능력을 유지할 수 있다. ADCC 매개용 1차 세포 NK세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포에서의 FcR발현은 Ravetch 및 Kinet에 요약되어 있고, Annu. Rev. Immunol.[면역학 연간 리뷰] 9: 457-492 (1991)의 제464페이지의 표 2에 있다. 미국 특허 번호 5,500,362에는, 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 체외 측정의 비제한적인 구현예(예를 들어, Hellstrom, I. et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보], 83: 7059-7063 (1986) 참조) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보], 82: 1499-1502 (1985); 5,821,337(Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med.[실험의학저널], 166: 1351-1361 (1987) 참조)가 설명되어 있다. 대안적으로, 비방사성 측정 방법(예를 들어, 유속세포분석용 ACTI™비방사성 세포 독성 측정(세포기술회사(CellTechnology, Inc.)마운틴뷰(Mountain View),캘리포니아주; 및CytoTox 96®비방사성 세포 독성 측정(프로메가사(Promega), 을 참조)을 사용할 수 있다. 이러한 측저에 유용한 이펙터 세포는 말초 단핵구(PBMC) 및 자연 살해(NK)세포를 포함한다. 대안적으로 또는 별도로, 예를 들어 동물 모델에서, Clynes et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 95: 652-656 (1998)에 개시된 것과 같이, 체내에서 목적 분자의 ADCC 활성을 평가할 수 있다. C1q 결합 측정을 수행하여 항체가 C1q에 결합할 수 없고, 또한 이로 인해 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인할 수도 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조바란다. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 측정을 수행할 수 있다(예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods [면역학방법 저널] 202: 163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood [혈액] 101: 1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. 및 M.J. Glennie, Blood [혈액] 103: 2738-2743 (2004) 참조). 본 분야에 공지된 방법을 사용하여 FcRn결합 및 체내 제거/반감기 측정을 수행할 수도 있다(예를 들어, Petkova, S.B. et al., Int’l. Immunol.[국제면역학] 18(12): 1759-1769 (2006) 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체에는(미국 특허 번호 6,737,056), Fc영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 또는 다수를 갖는 치환된 항체가 포함된다. 이러한 Fc 돌연변이체에는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상을 갖는 치환된 Fc돌변이체가 포함되고, 잔기 265 및 297이 알라닌에 치환된 소위 “DANA”Fc돌변이체(미국 특허 번호 7,332,581)가 포함된다.
본문에는 FcR에 대한 결합이 향상되거나 감소된 특정 항체 변이체가 설명되어 있다. (예를 들어 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem.[생화학저널] 9(2): 6591-6604 (2001) 참조)
일부 실시예에서, Fc단편은 IgG1 Fc단편이다. 일부 실시예에서, IgG1 Fc단편은 L234A돌연변이 및/또는 L235A돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, Fc단편은 IgG2 또는 IgG4 Fc단편이다. 일부 실시예에서, Fc단편은 S228P, F234A 및/또는 L235A돌연변이를 포함하는 IgG4 Fc단편이다.
일부 실시예에서, 항체 부분은 하나 또는 다수의 아미노산 치환을 갖는 Fc영역을 포함하고, 이러한 치환(예를 들어, Fc영역 내의 298, 333 및/또는 334번의 치환(잔기의 EU넘버링))은 ADCC를 개선한다.
일부 실시예에서, Fc영역 내의 변경은 C1q결합 및/또는 보체 의존성 세포 독성(CDC) 변경을 초래하고(즉, 향상 또는 감소), 예를 들어, 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642 및 Idusogie et al., J. Immunol.[면역학 저널], 164: 4178-4184 (2000)에 설명되어 있다.
일부 실시예에서, 항체 부분(예를 들어, scFv-Fc) 변이체는 변이체Fc영역을 포함하고, 상기 변이체Fc영역은 반감기 변경 및/또는신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합을 변경하는 하나 또는 다수의 아미노산 치환을 포함한다. 연장된 반감기 및 신생아 Fc수용체(FcRn)와의 개선된 결합을 갖는 항체는 모IgG를 태아로 전달하는 역할을 한다(Guyer et al., J. Immunol.[면역학 저널] 117: 587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol.[면역학 저널] 24: 249 (1994)), US 2005/0014934 A1에 설명된 바와 같다(Hinton et al.,). 이러한 항체는 하나 또는 다수의 아미노산 치환을 갖는 Fc영역을 포함하고, 여기서, 이러한 치환은 Fc영역과 FcRn의 결합을 변경시켰다. 이러한 Fc 변이체는 하나 또는 다수의 Fc영역 잔기에서 치환(예를 들어 Fc영역 잔기434의 치환)을 갖는 변이체(미국 특허 번호 7,371,826)를 포함한다.
또한, Duncan 및 Winter, Nature [자연] 322: 738-40 (1988); 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 Fc영역 변이체에 관한 기타 구현예의 WO 94/29351을 참조바란다.
2.7.4 시스테인 조작된 항체 변이체
일부 실시예에서, 항체의 하나 또는 다수의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 “thioMAb”와 같은 시스테인 조작된 항체 부분을 생성하여야 할 수 있다. 일부 실시예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근 가능한 부위에 나타난다. 본문에 추가로 설명된 바와 같이, 이러한 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올기는 항체의 접근 가능한 부위에 위치하고,항체를 약물 부분 또는 링커-약물 부분과 같은 다른 부분에 결합하여 면역접합체 생성에 사용할 수 있다. 일부 실시예에서, 중쇄의 A118(EU넘버링); 및 중쇄Fc영역의 S400(EU넘버링) 중 어느 하나 또는 다수의 잔기는 시스테인으로 치환될 수 있다. 시스테인 조작된 항체 부분은 미국 특허 번호 7,521,541에 설명된 바와 같다.
2.8 항체 유도체
일부 실시예에서, 본문에 따른 항체 부분은 본 분야에 공지되어 있고 용이하게 획득 가능한 다른 비-단백질 부분을 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체 유도체화에 적합한 부분은 수용성 중합체가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적인 구현예로, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜, 카르복시메틸셀룰로오스(carboxymethylcellulose), 덱스트란(dextran), 폴리비닐 알코올(polyvinyl alcohol), 폴리비닐 피롤리돈(polyvinyl pyrrolidone), 폴리-1,3-디옥솔란(poly-1, 3-dioxolane),폴리-1,3,6-트리옥산(poly-1,3,6-trioxane), 에틸렌/무수말레산 공중합체(ethylene/maleic anhydride copolymer), 폴리아미노산(polyaminoacids)(단독중합체(homopolymers) 또는 랜덤 공중합체(random copolymers)) 및 덱스트란(dextran) 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜(poly(n-vinyl pyrrolidone)polyethylene glycol),프로프로필렌 글리콜 단독중합체(propropylene glycol homopolymers), 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체(prolypropylene oxide/ethylene oxide co-polymers), 리옥시에틸화 폴리올(polyoxyethylated polyols)(예를 들어, 글리세롤(glycerol)), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드(Polyethylene glycol propionaldehyde)는 물에 대한 안정성으로 인해 제조상 이점이 있을 수 있다. 상기 중합체는 임의의 분자량일 수 있으며, 분지쇄 또는 비분지쇄일 수 있다. 항체에 연결된 중합체의 수는 변경될 수 있고, 연결된 중합체가 하나를 초과하는 경우, 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체 수 및/또는 유형은 하기 요소를 고려하여 결정될 수 있고, 이러한 요소로 개선될 항체의 특정 성질 또는 기능, 항체 유도체를 진단 조건에 대해 사용될지 여부 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서,항체 부분은 하나 또는 다수의 생물학적 활성 단백질, 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 본문에서 상호 교환적으로 사용되는 “생물학적 활성의” 또는 “생물학적 활성을 갖는”은 체내에서 특정 기능을 수행하는 생물학적 활성을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들어, 이는 특정 생체 분자(예를 들어, 단백질, DNA 등)에 결합한 후, 이러한 생체 분자의 활성을 촉진하거나 억제하는 것을 의미할 수 있다. 일부 실시예에서, 생물학적 활성 단백질 또는 이의 단편은, 활성 약물 물질로서 환자에게 투여되는 단백질 및 폴리펩티드; 질환 또는 병증 예방 또는 치료용, 및 진단 목적용 단백질 ?? 폴리펩티드(예를 들어, 진단 테스트 또는 체외 측정에 사용되는 효소); 및 질환 예방을 위해 환자에게 투여되는 단백질 및 폴리펩티드(예를 들어, 백신)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
2.9 항체의 생산 방법
본문에 개시된 항체는 본 분야에 이용 가능하거나 공지된 임의의 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 항체는 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같은 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생성될 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 항체 생산을 위한 자세한 절차는 아래 실시예에 설명되어 있다.
본 개시의 주제는 본문에 개시된 항체를 코딩하는 단리된 핵산을 더 제공하였다. 예를 들어, 단리된 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩할 수 있고, 예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 코딩할 수 있다.
일부 실시예에서, 핵산 하나 또는 다수의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)에 존재할 수 있다. 본문에 사용된 바와 같이, 용어 “벡터”는 이에 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 한가지 유형의 벡터는 “플라스미드”이고, 이는 별도의 DNA세그먼트가 연결될 수 있는 환상 이중 가닥DNA고리를 의미한다. 다른 유형의 벡터는 별도의 DNA세그먼트가 바이러스 게놈에 연결될 수 있는 바이러스 벡터이다. 일부 벡터는 이들이 도입된 숙주 세포에서 자율 복제할 수 있다(예를 들어, 박테리아 복제 기점이 있는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유 동물 벡터). 기타 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유 동물 벡터)는 숙주 세포 내로 도입된 후 숙주 세포의 게놈으로 통합되고, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 이 외에, 일부 벡터, 발현 벡터는 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 일반적으로,재조합 DNA 기술에 사용되는 발현 벡터는 종종 플라스미드(벡터)의 형태이다. 그러나, 개시된 주제는 동등한 기능을 갖는 바이러스 벡터(예를 들어, 복제-결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노 관련 바이러스)와 같은 발현 벡터의 기타 형태를 포함하도록 의도된다.
본문에 개시된 항체의 상이한 부분은 단일 폴리시스트론 발현 키트,단일 벡터의 다중 발현 키트 또는 다수의 벡터에서 구축될 수 있다. 폴리시스트론 발현 키트를 생성하는 구성요소의 구현예로,다양한 바이러스 및 비바이러스 내부 리보솜 진입 부위(IRES, 예를 들어, FGF-l IRES, FGF-2 IRES, VEGF IRES, IGF-II IRES, NF-kB IRES, RUNX1 IRES, p53 IRES, A형 간염IRES, C형 간염IRES, 페스티바이러스IRES, 아프타바이러스IRES, 피코르나바이러스IRES, 폴리오바이러스IRES 및뇌근육염 바이러스IRES) 및 용해 가능한 링커(예를 들어, 2A펩티드, 예를 들어P2A, T2A, E2A 및 F2A펩티드)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 레트로바이러스 벡터와 적절한 패키징 라인의 조합도 적합하고, 여기서, 캡시드 단백질은 인간 세포를 감염시키는 기능이 있다. 다양한 양쪽성 바이러스 생산 세포주를 알고 있고, PA12(Miller et al., (1985) Mol. Cell. Biol.[분자세포생물학] 5: 431-437); PA317(Miller et al., (1986) Mol. Cell. Biol.[분자세포생물학] 6: 2895-2902); 및 CRIP(Danos et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 85: 6460-6464)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. VSVG, RD114 또는 GALV로 피막된 것과 본 분야에 공지된 임의의 다른 유사형 입자와 같은 비양친매성 입자도 적합하다.
일부 실시예에서, 본 개시의 항체를 코딩하는 핵산 및/또는 상기 핵산을 포함하는 하나 또는 다수의 벡터를 숙주 세포에 도입할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 분야에 공지된 임의의 방법으로 핵산을 세포 내로 도입할 수 있고, 이러한 방법은, 형질감염, 전기천공, 미세주입, 핵산 서열을 함유하는 바이러스 또는 파지 벡터로의 감염, 세포 융합, 염색체-매개 유전자 전달, 미세세포-매개 유전자 전달, 스페로플라스트 융합 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시예에서, 숙주 세포는 단일 도메인 항체 및/또는 단일 도메인 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 숙주 세포는, 예를 들어 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2)항체의 VL의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터, 및 항체의 VH의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO)세포 또는 림프성 세포(예를 들어, YO, NSO, Sp20세포)와 같은 진핵이다.
일부 실시예에서, 본문에 개시된 항체를 제조하는 방법은 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 항체를 코딩하는 핵산이 도입된 숙주 세포를 배양하는 단계, 임의로 숙주 세포 및/또는 숙주 세포 배지로부터 항체를 회수하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 크로마토그래피 기술에 의해 숙주 세포에서 항체를 회수한다.
본 개시의 항체의 항체의 재조합 생산을 위해, 상술된 항체를 코딩하는 핵산을 단리하여, 하나 또는 여러가지 벡터에 삽입하여, 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현될 수 있다. 이러한 핵산은 통상적인 절차(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써)를 사용하여 용이하게 단리되고 시퀀싱될 수 있다. 항체-암호화 벡터를 클로닝하거나 발현하기에 적합한 숙주 세포는 본문에 기재된 바와 같은 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우, 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편 및 폴리펩티드 발현에 관하여, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199 및 5,840,523을 참조바란다. (또한 Charlton, Methods in Molecular Biology [분자생물학적 방법], 제248권 (B.K.C.Lo,편집, 휴먼 출판사(Human Press), 토토와(Totowa), 뉴저지주(NJ), 2003), 제245-254페이지, 대장간균에서 항체 단편의 발현 설명을 참조바람) 발현 후, 가용성 분획의 항체는 세균 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고, 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물 외에도, 진핵 미생물(예를 들어, 사상성진균 또는 효모균)도 항체-암호화 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이고, 글리코실화 경로가 “인간화”된 진균 및 효모균주를 포함하여, 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 양상을 갖는 항체를 생산한다. Gemgross, Nat. Biotech.[자연생물기술] 22: 1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech.[자연생물기술] 24: 210-215 (2006)를 참조바란다. 글리코실화 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수도 있다. 무척추동물 세포의 구현예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 다수의 베큘로바이러스(baculovirus)가 감정되었고, 이들은 곤충 세포와 결합하여 사용할 수 있으며, 특히 열대거세미나방(Spodoptera frugiperda)세포의 형질감염에 사용된다. 일부 실시예에서, 식물 세포 배양물을 숙주 세포로 사용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978 및 6,417,429(유전자 조작된 식물에서 항체를 생산하는 PLANTIBODIES™기술을 설명함)를 참조할 수 있다.
일부 실시예에서,척추동물 세포도 숙주로 사용할 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하기에 적합한 포유 동물 세포주가 유용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 유용한 포유 동물 숙주 세포주의 비제한적인 구현예로, SY40(COS-7)에 의해 형질전환된 원숭이 신장CV1세포주; 인간 배아 신장 세포주(293 또는 293세포, 예를 들어, Graham et al., J Gen Viral.,[일반바이러스학 저널] 36: 59 (1977)에 설명됨); 베이비 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리(sertoli)세포(TM4세포, 예를 들어, Mather, Biol. Reprod.[생식생물학] 23: 243-251 (1980)에 설명됨); 원숭이 신장 세포(CV 1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁 경부암 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK; 버팔로 래트(buffalo rat) 간세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간세포(Hep 02); 마우스 유방 종양(MMT 060562); TRI세포, 예를 들어Mather et al., Annals N. Y. Acad. Sci. [뉴욕과학연간] 383: 44-68 (1982)에 설명됨); MRC 5세포; 및 FS4세포가 있다. 기타 유용한 포유 동물 숙주 세포주는 DHFK CHO세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 77: 42 I6 (1980)); 및 골수종세포주(예를 들어 YO, NSO 및 Sp2/0)를 포함하는 중국 햄스터 난소(CHO)세포를 포함한다. 항체 생산에 적합한 일부 포유 동물 숙주 세포주의 종합 서술에 관하여, 예를 들어, Yazaki 및 Wu, Methods in Molecular Biology [분자생물학적 방법], 제248권 (B.K.C. Lo편집, 휴먼 출판사(Human Press), 토토와(Totowa), 뉴저지주(NJ)), 제255-268페이지 (2003)를 참조바란다.
일부 실시예에서, 이중 특이성 및/또는 다중 특이적 항체를 제조하기 위한 기술에는 동일한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄 경쇄쌍의 재조합 발현이 포함되나 이에 제한되지는 않고, 여기서 1개 또는 2개의 중쇄 또는 경쇄가 상이한 특이성을 갖는 항원 결합 부분(예를 들어, VHH와 같은 단일 도메인 항체)에 융합되며, 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역 글로불린 중쇄경쇄쌍의 재조합이 공동 발현된다(Milstei n 및 Cuello, Nature [자연] 305: 537 (1983)), PCT 특허 출원번호 WO 93/08829 및 Traunecker et al., EMBO J [유럽분자생물학회저널] 10: 3655 (l991) 참조) 및 “노브홀(knob-in-hole)” 조작(예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 참조). 이중 특이성 항체는 또한 엔지니어링 정전기 조종 효과를 통해 제조되어, 항체Fc-이종이량체 분자를 제조할 수 있고(WO 2009/089004A 1); 2개 이상의 항체 또는 단편의 가교하며(예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980 및 Brennan et al., Science [과학], 229: 81 (1985) 참조); 류신 지퍼를 사용하여 이중 특이성 항체를 생산하고(예를 들어, Kostelny et al., J Immunol.[면역학 저널], 148(5): 1547-1553 (1992) 참조); “디아바이” 기술을 사용하여 이중 특이성 항체 단편을 제조하며(예를 들어, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보], 90: 6444-6448 (1993)); 및 단일쇄Fv(sFv) 이량체의 사용(예를 들어, Gruber et al., J. Immunol.[면역학 저널], 152: 5368 (1994)) 참조; 예를 들어 Tutt et al., J Immunol.[면역학 저널] 147: 60 (1991)에서와 같이 삼중 특이적 항체를 제조하였다.
본 개시의 이중 특이성 및 다중 특이적 분자는 또한 화학적 기술(예를 들어, Kranz (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 78: 5807 참조), “폴리도마” 기술(예를 들어, 미국 특허 4,474,893) 또는 재조합DNA기술을 사용하여 제조할 수 있다. 현재 개시된 주제의 이중 특이성 및 다중 특이적 분자는 또한 본 분야에 공지되고 본문에 따른 방법으로, 제1 에피토프 및 제2 에피토프 결합 특이성과 같은 구성적 결합 특이성을 접합함으로써 제조될 수 있다. 예를 들어, 이중 특이성 및 다중 특이적 분자의 각각의 결합 특이성은 재조합 융합 단백질 기술에 의해 함께 생성될 수 있거나, 개별적으로 생성된 후 서로 접합될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 결합 특이성이 단백질 또는 펩티드인 경우,다양한 커플링제 또는 가교제를 사용하여 결합할 수 있다. 가교제의 비제한적 구현예로 단백질A, 카르보디이미드, N-숙신이미딜-S-아세틸-티오아세테이트(SATA), N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP) 및 설포숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카복실레이트(설포-SMCC)를 포함한다(예를 들어 Karpovsky (1984) J. Exp. Med.[실험의학저널] 160: 1686; Liu (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 82: 8648 참조). 기타 방법으로는 Paulus(Behring Ins. Mitt.[베링연구소통보](1985) 제78기, 118-132; Brennan (1985) Science [과학] 229:81-83), Glennie (1987) J Immunol.[면역학 저널] 139: 2367-2375)에 설명된 방법들을 포함한다. 결합 특이성이 항체(예를 들어, 2가지 인간화 항체)인 경우, 2가닥의 C말단 힌지 영역의 설프히드릴기 결합에 의해 접합될 수 있다. 일부 실시예에서, 접합 전에, 힌지 영역은 여러 개(예를 들어, 1개)의 설프히드릴기 잔기를 포함하도록 변형될 수 있다.
일부 실시예에서, 이중 특이성 항체의 2가지 결합 특이성은 동일한 벡터에서 코딩될 수 있고, 동일한 숙주 세포에서 발현 및 조립될 수 있다. 이중 특이성 및 다중 특이적 분자가 MAb x MAb, MAb x Fab, Fab x F(ab’)2 또는 리간드x Fab 융합 단백질인 경우,이 방법이 특히 유용하다. 일부 실시예에서, 본 개시의 이중 특이성 항체는 1개의 단일쇄 항체 및 결합 결정자를 포함하는 단일쇄 이중 특이성 분자 또는 2개의 결합 결정자를 포함하는 단일쇄 이중 특이성 분자와 같은 단일쇄 분자이다. 이중 특이성 및 다중 특이적 분자는 또한 단일쇄 분자일 수 있거나 적어도 2개의 단일쇄 분자를 포함할 수 있다. 이중 특이성 분자 및 다중 특이적 분자의 제조 방법은, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,260,203; 미국 특허 번호 5,455,030; 미국 특허 번호 4,881,175; 미국 특허 번호 5,132,405; 미국 특허 번호 5,091,513; 미국 특허 번호 5,476,786; 미국 특허 번호 5,013,653; 미국 특허 번호 5,258,498; 및 미국 특허 번호 5,482,858에 설명되어 있다. 본문에는 “문어 항체”(예를 들어US 2006/0025576 A1 참조)를 포함하는 3개 이상의 기능성 항원 결합 부위(예를 들어, 에피토프 결합 부위)를 갖는 조작된 항체를 더 포함한다.
일부 실시예에서,동물 시스템은 본 개시의 항체의 생산에 사용될 수 있다. 하이브리도마를 제조하기 위한 하나의 동물 시스템은 뮤린 시스템이다.
마우스에서 하이브리도마의 생성은 아주 완벽하게 확립된 절차이다. 융합을 위해 면역화된 비장세포를 단리하기 위한 면역화 방안 및 기술은 당업계에 공지되어 있다. 융합 파트너(예를 들어, 뮤린 골수종세포) 및 융합 절차도 공지된 것이다(예를 들어Harlow 및 Lane (1988), Antibodies, A Laboratory Manual [항체실험실매뉴얼], 뉴욕 콜드스프링하버실험실출판사(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor New York) 참조).
2.10 측정
본문에 제공된 본 개시의 항체는 본 분야에 공지되고 본문에 제공된 다양한 측정법에 의해 이의 물리적/화학적 성질 및/또는 생물학적 활성에 대해 감정, 스크리닝 또는 특성화할 수 있다.
일부 실시예에서, 공지된 방법(예를 들어, 효소결합면역흡착 측정(ELISA), 방사 면역 측정법(RIA) 또는 웨스턴 블롯 측정)으로 본 개시의 항체의 항원 결합 활성을 테스트할 수 있다. 이러한 측정 각각은 일반적으로 관심 복합체에 특이적인 표지된 시약(예를 들어, 항체)을 사용하여 특정 관심 단백질-항체 복합물의 존재를 검출한다. 예를 들어, 항체는 예를 들어 항체를 식별하고 특이적으로 결합하는 효소 결합 항체 또는 항체 단편을 사용하여 검출될 수 있다. 대안적으로, 항체는 다양한 기타 면역분석법을 사용하여 검출될 수 있다. 예를 들어, 상기 항체를 방사성 표지화하여 방사성면역 측정(RIA)에서 사용될 수 있다(예를 들어, Weintraub, B., Principles of Radioimmunoassays [방사성면역 측정의 원칙], Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques [방사성 리간드 측정기술의 제7차 교육 과정], The Endocrine Society [내분비 학회], 1986년 3월, 참조로서 본문에 포함). 가이거(Geiger) 계수기 또는 신틸레이션 계수기 사용과 같은 수단이나 자동방사선촬영으로 방사성 동위원소를 검출할 수 있다.
일부 실시예에서, 경쟁 측정법은TIGIT결합에 대한 본 개시의 항체(예를 들어1C12, 2A3 또는 1G1)와 경쟁하는 항체를 검증하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시예에서,이러한 경쟁 항체는 1C12, 2A3 또는 1G1에 의해 결합된 동일한 에피토프(예를 들어, 선형 또는 구상 에피토프)에 결합한다. Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols [에피토프 매핑 방안],” Methods in Molecular Biology [분자생물학적 방법], 제66권(휴먼 출판사(Human Press), 토토와(Totowa), 뉴저지주(NJ))에서 항체에 의해 결합된 에피토프를 매핑하기 위한 상세한 예시적인 방법을 제공하였다.
경쟁 측정의 비제한적인 구현예에서, TIGIT에 결합하는 제1 표지 항체(예를 들어1C12, 2A3 또는 1G1) 및 제2 미표지 항체를 포함하는 용액에서 고정된 TIGIT를 인큐베이션함으로써, TIGIT에 대한 제2 미표지 항체와 제1 항체의 결합 능력 경쟁을 테스트할 수 있다. 제2 항체는 하이브리도마 상등액에 존재할 수 있다. 대조로서, 고정된 TIGIT를 제1 표지 항체를 포함하지만 제2 미표지 항체를 포함하지 않는 용액에서 인큐베이션한다. TIGIT에 대한 1차 항체의 결합을 허용하는 조건 하에 인큐베이션한 후, 과량의 결합되지 않은 항체를 제거하여, 고정된 TIGIT와 관련된 표지의 양을 측정한다. 고정된 TIGIT와 관련된 표지의 양이 대조 샘플에 비해 테스트 샘플에서 크게 감소되면, 제2 항체가 TIGIT에 결합하기 위해 1차 항체와 경쟁하고 있음을 나타낸다. Harlow 및 Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual [항체실험실 매뉴얼] 제14장 뉴욕 콜드스프링하버실험실(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)를 참조바란다.
본 개시에서 생물학적 활성을 갖는 항TIGIT항체의 측정법을 제공하였다. 생물학적 활성은 예를 들어 면역 세포 활성화 또는 면역 활성화 리포터 유전자(예를 들어, NFAT 리포터 유전자)를 포함할 수 있다. 체내 및/또는 체외에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체를 더 제공하였다.
2.11 면역접합체
본 개시의 주제는 하나 또는 다수의 검출 프로브 및/또는 세포 독성제(예를 들어, 화학 치료제 또는 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 유래 효소 활성 독소, 또는 이의 단편)) 또는 방사성 동위원소에 접합된 본문에 개시된 항체를 포함하는 면역접합체를 더 제공하였다. 예를 들어, 개시된 주제의 항체 또는 항원 결합 부분은 하나 또는 다수의 기타 결합 분자(예를 들어, 다른 항체, 항체 단편, 펩티드 또는 결합 모방체)에 기능적으로 연결(예를 들어, 화학적 커플링,유전적 융합, 비공유 결합 또는 기타 방식)될 수 있다.
일부 실시예에서, 면역접합체는 항체 약물 접합체(ADC)이고, 여기서 항체는 하나 또는 다수의 약물에 접합되며, 메이탄시노이드(maytansinoid)(미국 특허 번호 5,208,020, 5,416,064 및 유럽 특허EP 0 425 235 참조); 아우리스타틴(auristatin), 예를 들어, 모노메틸 아우리스타틴 약물 부분 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(미국 특허 번호 5,635,483 및 5,780,588, 및 7,498,298 참조); 돌라스타틴(dolastatin); 칼리케아미신(calicheamicin) 또는 이의 유도체(미국 특허 번호 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001 및 5,877,296; Hinman et al., Cancer Res.[암 연구] 53: 3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res.[암 연구] 58: 2925-2928 (1998) 참조); 다우노마이신(daunomycin) 또는 독소루비신(doxorubicin) 과 같은 안트라사이클린(Kratz et al., Current Med Chem.[현대약물화학] 13: 477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters [생물유기화학 및 의약화학통신] 16: 358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem.[생체접합체 화학] 16: 717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA [미국국립과학원회보] 97: 829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters [생물유기화학 및 의약화학통신] 12: 1529-1532 (2002); King et al., J Med. Chem.[의약화학저널] 45: 4336-4343 (2002); 및 미국 특허 번호 6,630,579 참조); 메토트렉세이트, 빈데신, 탁산, 예를 들어,도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세트탁셀 및 오탁셀; 트리코테센(trichothecenes); 및 CC1065을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서, 면역접합체는 효소 활성 독소 또는 이의 단편에 접합된 본문에 따른 항체를 포함하고, 효소 활성 독소 또는 이의 단편은, 디프테리아 A 사슬,디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 사슬(녹농균 유래(Pseudomonas aeruginosa), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, α-사르신, 유동단백질(Aleurites fordii proteins), 디안틴 단백질,피톨라카 아메리카나 (Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 (momordica charantia) 억제제, 커신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 젤로닌, 미토겔린(mitogellin), 제한토신(restrictocin), 페노마이신(phenomycin), 에노마이신(enomycin) 및 트리코테센(tricothecenes)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서, 면역접합체는 방사성 원자에 접합되어 방사성 접합체를 형성하는 본문에 따른 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소는 방사성 접합체 생성에 사용될 수 있다. 비제한적인 구현예로, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성 접합체를 검출에 사용하는 경우, 신티그래픽(scintigraphic) 연구를 위한 tc99m 또는 1123과 같은 방사성 원자, 또는 요오드 123, 요오드 131, 인듐 11, 불소 19, 탄소 13, 질소 15, 산소 17, 가돌리늄, 망간 또는 철과 같은 핵 자기 공명(NMR) 영상(자기 공명 영상, MRI라고도 함)을 위한 스핀 표지를 포함할 수 있다.
다양한 이중 기능적 단백질 커플링제(예를 들어, N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이중 기능성 유도체(예를 들어, 디메틸 아디피미데이트HCl), 활성 에스테르(예를 들어, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드(예를 들어, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물(예를 들어, 비스(p-아지도벤조일)헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예를 들어, 비스-(p-디아조늄벤조일)에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예를 들어, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 2-활성 불소 화합물(예를 들어, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠))을 사용하여 항체 및 세포 독성제의 접합체를 제조할 수 있다. 예를 들어, Vitetta et al., Science [과학], 238: 1098 (1987)에서와 같이 리신 면역독소를 제조할 수 있다. 탄소 4-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌트리아민-펜타아세트산(MX-DTPA) 은 방사성뉴클레오타이드를 항체에 접합하기 위한 예시적인 킬레이트제이다. WO 94/11026을 참조바란다. 링커는 세포에서 세포독성 약물의 방출을 촉진하는 “절단 가능 링커”일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-민감성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸 링커 또는 이황화물 함유 링커가 사용될 수 있다(Chari et al., Cancer Res.[암증 연구] 52:127-131 (1992); 미국 특허 번호 5,208,020).
본문에서 면역접합체 또는 ADC는 가교제 제조용 접합체를 명확히 포함하지만, 이에 한정되지 않고, 상업적으로 구입 가능한 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 SVSB(숙신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)(예를 들어,미국 일리노이주 록퍼드 의피어스 바이오테크놀로지 회사(Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A))를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
3. 사용 방법
본 개시의 주제는 개시에 따른 항체(예를 들어 항TIGIT항체)를 사용한 방법을 제공하였다. 일부 실시예에서, 이러한 방법은 현재 개시된 항체의 치료 용도에 관한 것이다. 일부 실시예에서,이러한 방법은 현재 개시된 항체의 진단 용도에 관한 것이다.
3.1 치료 방법
본 개시는 질환 및 병증을 치료하거나 면역 응답을 증가시키기 위한 본문에 개시된 임의의 항체(예를 들어, 항TIGIT항체)의 방법 및 용도를 제공하였다. 일부 실시예에서, 질환 및 병증을 치료하거나 면역 반응을 증가시키기 위해 대상체(예를 들어, 포유 동물(예를 들어, 인간))에 항체 및/또는 본문에 개시된 항체를 포함하는 약물 조성물을 투여할 수 있다. 일부 실시예에서, 이러한 질환 및 병증은 면역 체크포인트 억제 및/또는 비정상적인 TIGIT 활성에 관한 것이다. 일부 실시예에서,본문에 개시된 항체에 의해 치료될 수 있는 질환 및 병증으로 종양 형성(예를 들어, 암)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서, 본 개시는 약물 제조용 본문에 따른 항TIGIT항체(또는 이의 단편)를 제공하였다. 일부 실시예에서, 본 개시는 암 치료용 약물 제조에 사용하기 위한 본문에 따른 항TIGIT항체(또는 이의 단편)를 제공하였다. 일부 실시예에서, 본 개시는 대상체에서 암 치료에 사용하기 위한 본문에 따른 항TIGIT항체(또는 이의 단편)를 제공하였다. 일부 실시예에서, 본 개시는 대상체에서 암 치료에 사용하기 위한 본문에 따른 항TIGIT항체(또는 이의 단편)를 포함하는 약물 조성물을 제공하였다. 일부 실시예에서, 암은 혈액암(예를 들어, 백혈병, 림프종 및 골수종), 난소암, 유방암, 방광암, 뇌암, 결장암, 대장암, 간암, 폐암, 췌장암, 전립선암, 피부암, 위암, 교모세포종, 후두암, 흑색종, 신경모세포종, 선암, 신경교종, 연조직 육종 및 각종 암(전립선암 및 소세포폐암 포함)일 수 있다. 적합한 암은 종양학 분야에서 알려진 임의의 암을 더 포함하되, 성상세포종, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 희소돌기아교종,뇌실세포종, 수모세포종, 원시신경외배엽종양(PNET), 연골육종, 골육종, 췌관 선암종, 소세포 및 대세포 폐 선암종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 편평세포암, 기관지폐포암종, 상피 선암종 및 이들의 간 전이, 림프관육종, 림프관내피종, 간암,담관암, 활막종, 중피종,유잉 종양, 횡문근육종, 결장암, 기저 세포 암종, 한선종, 유두 암종, 피지 암종, 유두 선암종, 낭선암종, 수질 암종, 기관지 암종, 신세포 암종, 담관암종, 융모막암종, 정액종, 배아 암종, 윌름스 종양, 고환 종양, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막종, 송과종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교종, 수막종, 신경모세포종, 망막모세포종, 백혈병, 다발성 골수종, 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom’s macroglobulinemia), 유선 종양(예를 들어, 관 선암종 및 소엽 선암종), 자궁경부 편평 및 선암종, 자궁 및 난소 암종, 전립선 선암종, 방광 이행 편평 세포 암종, B 및 T 세포 림프종(결절 및 미만성), 형질세포종, 급성 및 만성 백혈병, 악성 육종, 연조직 및 평활근육종을 더 포함한다.
일부 실시예에서, 암은 흑색종, NSCLC, 두경부암, 요로상피암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암, TNBC), 위암, 담관암, 고전적 호지킨 림프종(cHL), 비호지킨 림프종 원발성 종격동 B-세포 림프종(NHL PMBCL), 중피종, 난소암, 폐암(예를 들어, 소세포폐암), 식도암, 비인두암(NPC), 담도암, 결장직장암, 자궁 경부암 또는 갑상선암일 수 있다.
일부 실시예에서, 치료될 대상체는 포유 동물이다(예를 들어, 인간, 비인간 영장류, 래트, 마우스, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이 등). 일부 실시예에서, 대상체는 인간이다. 일부 실시예에서, 대상체는 암이 의심되거나 암 발병 위험이 있거나, 암 또는 비정상적인 TIGIT 발현 또는 활성을 갖는 암 또는 기타 질환으로 진단받은 적이 있다.
비정상적인 TIGIT활성을 나타내는 많은 암 또는 임의의 다른 질환의 진단 방법 및 이러한 질환의 임상 설명은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 면역조직화학, PCR, 형광동소교잡(FISH)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 비정상적인 TIGIT활성 또는 발현에 대한 진단 방법의 기타 세부사항은 예를 들어 Gupta et al., (2009) Mod Pathol.[현대병리학] 22(1): 128-133; Lopez-Rios et al., (2013) J Clin Pathol.[임상병리학저널] 66(5): 381-385; Ellison et al., (2013) J Clin Pathol [임상병리학저널] 66(2): 79-89; And 및 Guha et al., (2013) PLoS ONE [공공과학도서관 종합] 8(6): e67782에 설명되어 있다
정맥내, 근육내 또는 피하를 비롯한 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시예에서, 본문에 제공된 항TIGIT항체(또는 이의 단편) 및/또는 조성물은 비정상적인 TIGIT활성에 관한 질환 또는 실조를 치료하기 위해 제2, 제3 또는 제4 약제(예를 들어 항종양 약물, 성장 억제제, 세포독성제 또는 화학적 치료제 포함)와 조합하여 투여된다. 이러한 약제는, 예를 들어, 도세탁셀, 제피티닙, FOLFIRI(이리노테칸, 5-플루오로우라실 및 류코보린), 이리노테칸, 시스플라틴, 카보플라틴, 파클리탁셀, 베바시주맙(항-VEGF 항체), FOLFOX-4, 주입 플루오로우라실, 류코보린, 옥살리플라틴, 아파티닙, 젬시타빈, 카페시타빈, 페메트렉세드, 티반티닙, 에베롤리무스, CpG-ODN, 라파마이신, 레날리도마이드, 베무라페닙, 엔도스타틴, 라파티닙, PX-866, Imprime PGG 및 이로티닙을 포함한다. 일부 실시예에서, 항TIGIT항체(또는 이의 단편)를 별도의 약제에 접합한다.
일부 실시예에서, 본문에 제공된 항TIGIT항체(또는 이의 단편) 및/또는 조성물은 하나 또는 다수의 기타 요법(예를 들어 방사선 요법, 수술, 화학요법, 및/또는 타겟팅 요법)과 조합하여 투여된다. 일부 실시예에서, 본문에 제공된 항TIGIT항체(또는 이의 단편) 및/또는 조성물은 방사선 요법과 조합하여 투여된다. 일부 실시예에서, 본문에 제공된 항TIGIT항체(또는 이의 단편) 및/또는 조성물은 방사선 요법과 조합하여 본문에 개시된 신생물 또는 암 치료에 사용된다.
치료할 적응증 및 당업자에게 익숙한 투여와 관련된 요인에 따라, 본문에 제공된 항TIGIT항체 또는 이의 단편은 독성 및 부작용을 최소화하면서 이 적응증을 치료하기에 효과적인 조제량으로 투여될 것이다. 암 치료에 관하여, 전형적인 조제량은 예를 들어 0.001 내지 1000 μg의 범위일 수 있지만, 이러한 예시적인 범위 미만 또는 초과의 투여량은 본 발명의 범위 내에 있다. 1일 조제량은 총 체중의 약 0.1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg, 총 체중의 약 0.1 μg/kg 내지 약 100 μg/kg 또는 총 체중의 약 1 μg/kg 내지 약 100 μg/kg일 수 있다. 상기에서 언급된 바와 같이, 치료받는 환자를 주기적으로 평가함으로써 치료 또는 예방적 효능을 모니터링할 수 있다. 수일 이상 반복 투여하는 경우에는 병증에 따라 원하는 질환 증상의 억제가 나타날 때까지 반복 투여한다. 그러나, 기타 조제량 방안이 유용할 수 있고 본 발명의 범위 내에 있다. 원하는 조제량은 단일 일시 주사에 의해 조성물을 투여, 다중 일시 주사에 의해 조성물을 투여, 또는 연속 주입에 의해 조성물을 투여함으로써 전달될 수 있다.
항TIGIT항체 또는 이의 단편을 포함하는 약물 조성물은 1일 1회, 2회, 3회 또는 4회 투여될 수 있다. 조성물은 또한 주 6회, 주 5회, 주 4회, 주 3회, 주 2회, 주 1회, 2주당 1회, 3주당 1회, 매월, 2개월당 1회, 3개월당 또는 6개월당 1회 같이 매일보다 낮은 빈도로 투여될 수 있다. 조성물은 또한 예를 들어 삽입물에서 서방형 조제품으로 투여될 수 있고, 상기 삽입물은 일정 시간 내에 사용되도록 상기 조성물을 점차적으로 방출하며,상기 조성물이 한 달에 한 번, 2-6개월에 한 번, 1년에 한 번, 또는 단일 투여와 같이 낮은 빈도로 투여되도록 허용된다. 서방장치(예를 들어, 펠렛(pellet), 나노입자, 마이크로입자, 나노스피어, 마이크로스피어)는 주사에 의해 투여될 수 있다.
항체(또는 이의 단편)는 단일 1일 조제량으로 투여될 수 있거나, 총 1일 조제량은 2회, 3회 또는 4회의 분할 조제량으로 투여될 수 있다. 조성물은 또한 주 6회, 주 5회, 주 4회, 주 3회, 주 2회, 주 1회, 2주당 1회, 3주당 1회, 매월, 2개월당 1회, 3개월당 또는 6개월당 1회 같이 매일보다 낮은 빈도로 투여될 수 있다. 항체(또는 이의 단편)는 또한 예를 들어 삽입물에서 서방형 조제품으로 투여될 수 있고, 상기 삽입물은 일정 시간 내에 사용되도록 상기 조성물을 점차적으로 방출하며, 상기 조성물이 한 달에 한 번, 2-6개월에 한 번, 1년에 한 번, 또는 단일 투여와 같이 낮은 빈도로 투여되도록 허용된다. 서방장치(예를 들어, 펠렛(pellet), 나노입자, 마이크로입자, 나노스피어, 마이크로스피어)는 주사 또는 수술 이식에 의해 다양한 위치에 투여된다.
예를 들어, 종양 퇴행, 종양 무게 또는 크기 감소, 진행 시간, 생존 기간, 무진행 생존, 전체 반응률, 응답 지속 시간, 삶의 질, 단백질 표현 및/또는 활동으로 암 치료를 평가할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 방사선 영상화에 의한 반응 측정을 비롯한 요법의 효능을 결정하는 방법이 사용될 수 있다.
일부 실시예에서, 치료 효능을 종양 성장 억제 백분율(% TGI)로 측정하고, 등식 100-(T/C x 100)으로 계산하며, 여기서, T는 치료된 종양의 평균 상대적 종양 부피이고, C는 치료되지 않은 평균 상대적 종양 부피이다. 일부 실시예에서, %TGI는 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%), 약 94%), 약 95%, 또는 95% 초과이다.
3.2 진단 및 영상화 방법
표지된 항TIGIT항체, 이의 단편, 및 이의 유도체 및 유사체는 진단 목적으로 사용될 수 있고, TIGIT의 발현, 비정상적인 발현 및/또는 활성과 관련된 질환 및/또는 장애를 검출, 진단 또는 모니터링한다. 예를 들어, 본문에 제공된 항TIGIT항체(또는 이의 단편)는 제자리, 체내, 생체외 및 체외 진단 측정 또는 영상화 측정에 사용될 수 있다. TIGIT폴리펩티드 발현을 검출하기 위한 방법으로, (a) 본 발명의 하나 또는 다수의 항체를 사용하여 개체의 세포(예를 들어, 조직) 또는 체액에서 폴리펩티드의 발현을 측정하는 단계, 및 (b) 측정된 유전자 수준이 표준 발현 수준보다 증가 또는 감소로 이상발현을 나타내는 유전자 발현 수준과 표준 유전자 발현 수준을 비교하는 단계를 포함한다.
본문에 제공된 별도의 실시예는 동물(예를 들어 인간과 같은 포유 동물)에서 TIGIT의 발현 또는 비정상적인 발현과 관련된 질환 또는 장애를 진단하는 방법을 포함한다. 이러한 방법은 포유 동물에서 TIGIT분자를 검출한다. 일부 실시예에서, 진단은, (a) 유효량의 표지된 항PD-1항체(또는 이의 단편)를 포유 동물에게 투여하는 단계; (b) 표지된 항TIGIT항체(또는 이의 단편)가 TIGIT분자를 발현하는 대상체의 부위에 우선적으로 농축되도록 투여 후 일정 시간 대기하는 단계(및 결합되지 않은 표지된 분자를 배경 수준으로 제거); (c) 배경 수준 결정; 및 (d) 배경 수준 이상으로 표지된 분자의 검출이 대상체에게 TIGIT 발현 또는 비정상적인 발현과 관련된 특정 질환 또는 장애가 있음을 나타내도록 대상체에게 표지된 분자를 검출하는 단계를 포함한다. 배경 수준은 다양한 방법에 의해 결정될 수 있고, 이러한 방법은 표지된 분자의 검출된 양을 특정 시스템에 대해 이전에 결정된 표준 값과 비교하는 것을 포함한다.
본문에 제공된 항TIGIT항체(또는 이의 단편)는 당업자에게 공지된 고전적 면역조직학적 방법을 사용하여 생물학적 샘플에서 단백질 수준을 결정하는데 사용될 수 있다(예를 들어, Jalkanen et al., J. Cell. Biol.[세포생물학 저널] 101: 976-985 (1985); Jalkanen et al., J. Cell. Biol.[세포생물학 저널] 105: 3087-3096 (1987) 참조). 단백질 유전자 발현을 검출하기 위한 기타 항체 기반 방법에는 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA) 및 방사선 면역분석법(RIA)과 같은 면역분석법이 있다. 적합한 항체 측정 표지는 본 분야에서 공지의 표지이고, 효소 표지(예를 들어 글루코스산화효소); 방사선 동위 원소, 예를 들어 요오드(131I, 125I, 123I, 121I), 탄소(14C), 유황(35S), 트리튬(3H), 인듐(115mIn, 113mIn, 112In, 111In), 및 태크네튬(99Tc, 99mTc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga, 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브덴(99Mo), 크세논(133Xe), 불소(18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru; 루미놀; 및 형광 표지(예를 들어 플루오레세인, 로다민 및 비오틴)를 포함한다.
당업계에 공지된 기술은 본문에 제공된 표지된 항체(또는 이의 단편)에 적용될 수 있다. 이러한 기술에는 이중 기능성 접합제의 사용이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다(예를 들어, 미국 특허 번호 5,756,065; 5,714,631; 5,696,239; 5,652,361; 5,505,931; 5,489,425; 5,435,990; 5,428,139; 5,342,604; 5,274,119; 4,994,560; 및 5,808,003참조).
대안적으로, 또는 별도로,세포에서 TIGIT폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 mRNA의 수준은, 예를 들어 EGFR을 코딩하는 핵산 또는 이의 상보적 서열에 대응되는 핵산 기반 프로브를 사용하는 형광 원위치 혼성화; (FISH; 1998년 10월 개시된 WO 98/45479), DNA블로팅, RNA블로팅 또는 실시간 정량 PCR(RT-PCR)과 같은 중합효소 연쇄 반응(PCR) 기술을 통해 측정할 수 있다. TIGIT과발현은 또한 예를 들어 항체 기반 측정을 사용하여 생물학적 유체(예를 들어, 혈청)에서 배출 항원을 측정하여 연구할 수도 있다(또한, 예를 들어, 1990년 6월 12일에 발표된 미국 특허 번호 4,933,294; 1991년 4월 18일에 발표된 WO 91/05264; 1995년 3월 28일에 발표된 미국 특허 번호 5,401,638; 및 Sias et al., J. Immunol. Methods [면역방법저널] 132: 73-80 (1990) 참조). 상기 측정 외에, 당업자는 다양한 체내 및 생체외 측정을 획득할 수 있다. 예를 들어, 포유 동물 체내의 세포를 항체에 노출시킬 수 있고, 상기 항체는 선택적으로 표지(예를 들어 방사성 동위원소)를 검출하여 표지하고, 예를 들어, 체세포에 대한 항체의 결합은 예를 들어 방사능에 대한 외부 스캐닝 또는 상기 항체에 이전에 노출된 포유 동물로부터 채취한 샘플(예를 들어, 생검 또는 기타 생물학적 샘플)을 분석함으로써 평가될 수 있다.
4. 약물 조제품
본 개시의 주제는 본문에 개시된 하나 또는 다수의 본 개시의 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약물 조제품을 더 제공하였다. 일부 실시예에서, 약물 조성물은 현재 개시된 주제의 다중(예를 들어, 2개 이상) 항체 및/또는 이의 항원 결합 부분의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 개시의 약물 조성물은 하나 또는 다수의 항TIGIT항체를 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 개시된 약물 조제품은 원하는 순도의 항체를 하나 또는 다수의 임의의 약학적으로 허용 가능한 담체 (Remington's Pharmaceutical Sciences [레미스톤 약물과학], 제16판, Osol, A.편집 (1980)) 와 조합함으로써 동결건조된 조제품 또는 수성의 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 동결건조된 항체 조제품은 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있으나, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시예에서, 수성 항체 조제품은 미국 특허 제6,171,586호 및 WO 2006/044908에 기재된 것들을 포함할 수 있으며, 후자의 조제품은 히스티딘-아세테이트 완충액을 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 약 80% 초과, 약 90% 초과, 약 91% 초과, 약 92% 초과, 약 93% 초과, 약 94% 초과, 95% 초과, 약 96% 초과, 약 97% 초과, 약 98% 초과, 약 99% 초과, 약 99.1% 초과, 약 99.2% 초과, 약 99.3% 초과, 약 99.4% 초과, 약 99.5% 초과, 약 99.6% 초과, 약 99.7% 초과, 약 99.8% 초과, 또는 약 99.9% 초과하는 순도를 가질 수 있다.
약제학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 완충액(예: 인산염, 구연산염 및 기타 유기산), 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제, 방부제(예: 염화옥타데실디메틸벤질암모늄, 염화헥사메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 염화페네틸암모늄, 페놀, 부탄올 또는 벤질 알코올, 알킬 파라벤(메틸 등) 또는 프로필 파라벤), 카테콜, m-페닐렌 디페놀, 시클로헥산올, 3-펜탄올, m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 포도당, 만노오스 또는 덱스트린을 포함한 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염 형성 계수 이온;금속 착물(예: Zn-단백질 착물) 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 본문에서의 예시적인 약학적으로 허용 가능한 담체는 또한 간질 약물 분산제, 예컨대 가용성 중성 활성 히알루로니다제 당단백질(sHASEGP), 예컨대 rHuPH20(HYLENEX®, Baxter International 회사)과 같은 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질을 포함한다. rHuPH20을 포함하는 특정 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 설명되어 있다. 일부 실시예에서, sHASEGP는 하나 또는 다수의 추가 글리코사미노글리카나제(예를 들어, 콘드로이티나제)와 조합된다.
담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척수 또는 표피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입)에 적합할 수 있다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물(즉 항TIGIT항체)을 하나의 물질에 코팅하여, 산 및 화합물을 불활성화시킬 수 있는 기타 자연 조건의 영향을 받지 않도록 상기 화합물을 보호할 수 있다.
본 개시의 약물 조성물은 또한 조합 요법으로, 즉, 다른 약제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시예에서, 본문에 개시된 약물 조성물은 또한 치료되는 특정 적응증에 필요한 하나 또는 다수의 활성 성분, 예를 들어 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 약물 조제품은 제1 치료제에 의해 치료되는 동일한 질환의 치료를 위한 제2 활성 성분을 함유할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 적절히 조합되어 존재한다. 예를 들어, 본 개시의 조제품은 또한 치료되는 특정 적응증에 필요한 하나 또는 다수의 활성 성분을 포할 할 수 있고, 바람직하게는 상보적 활성을 갖고 서로 불리한 영향을 미치지 않는 활성 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어,동일한 질환을 치료하는데 사용될 수 있는 제2 치료제를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 적절히 조합되어 존재한다.
본 개시의 조성물은 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 다르다 이러한 활성 화합물은 이식체, 경피 패치 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 서방형 조제품과 같이 빠른 방출로부터 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체 적합성 중합체를 사용할 수 있다. 이러한 조제품을 제조하는 많은 방법은 예를 들어Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems [서방 및 방출 제어 약물 전달 시스템], J.R.Robinson,편집, 마셜데커 회사, 뉴욕, 1978에 설명되어 있다. 일부 실시예에서, 약물 조성물은 미국 식품의약국(U.S. Food and Drug Administration) 의 우수제조관리규제(Good Manufacturing Practice(GMP)) 조건에 따라 제조된다.
개시된 항체를 함유하는 서방형을 제조할 수도 있다. 지속 방출 제형의 적합한 구현예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품 형태이다(예: 필름 또는 마이크로캡슐). 일부 실시예에서,활성 성분은 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐에 포매될 수 있고, 예를 들어 콜로이드성 약물 전달 시스템(예: 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼, 히드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸) 메틸 아크릴레이트) 마이크로캡슐에 포매될 수 있다. 이러한 기술은 Remington's Pharmaceutical Sciences [레이밍톤 약물과학], 제16판, Osol, A.편집 (1980)에 개시되어 있다.
특정 투여 경로에 의해 본 개시의 항체를 투여하기 위해, 이의 비활성화를 방지하는 물질로 화합물을 코팅하거나 공동-투여하는 것이 필요할 수 있다. 예를 들어, 화합물은 적합한 담체(예를 들어, 리포솜) 또는 희석제로 대상체에게 투여될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 희석제는 식염수 및 완충 수용액을 포함한다. 리포좀은 수중유중수 CGF 에멀젼 및 통상적인 리포좀을 포함한다(Strejan et al., (1984) J Neuroimmunol.[신경면역학 저널] 7: 27).
약학적으로 허용 가능한 담체는 멸균 주사 용액 또는 분산액 및 즉석 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 약학적 활성 물질에 대한 이러한 매질 및 시약의 용도는 당업계에 공지되어 있다.
임의의 통상적인 매질 또는 약제가 활성 화합물과 상용될 수 없는 경우를 제외하고, 이는 본 개시의 약물 조성물에 사용하기 위해 고려된다. 보충 활성 화합물이 또한 조성물에 포함될 수 있다.
치료 조성물은 일반적으로 무균이어야 하고, 실질적으로 등장성이어야 하며, 제조 및 보관 조건 하에서 안정해야 한다. 상기 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 리포솜, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로 제형화될 수 있다. 상기 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 (예를 들어) 코팅(예를 들어, 레시틴)에 의해 유지되고, 분산체의 경우 원하는 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우에, 조성물에 당, 폴리올(예를 들어, 만니톨, 소르비톨) 또는 염화나트륨과 같은 등장제를 포함하는 것이 바람직하다. 상기 조성물에 모노스테아레이트 염 및 젤라틴과 같은 조성물에 흡수를 지연시키는 약제를 포함시킴으로써 이러한 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수를 구현할 수 있다.
멸균 주사 용액은 위에 열거된 하나 또는 다수의 성분과 조합하여 필요에 따라 적절한 용매에 필요한 양의 개시된 항체 중 하나 또는 다수를 혼입한 후 멸균 정밀 여과(예를 들어, 멸균 정밀여과를 통해)함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로 분산액은 다음과 같이 제조된다:
활성 화합물은 염기성 분산 매질 및 위에 열거된 것들로부터의 기타 필요한 성분을 함유하는 멸균 비히클에 혼입된다. 멸균 주사 용액 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조(동결 건조)이고, 상기 방법은 활성 성분의 분말 및 이의 미리 멸균 여과된 용액으로부터 임의의 다른 원하는 성분을 생성한다.
치료 조성물은 또한 당업계에 공지된 의료 장치를 사용하여 투여될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 치료 조성물은 미국 특허 제5,399,163호, 제5,383,851호, 제5,312,335호, 제5,064,413호, 제4,941,880호, 제4,790,824호 또는 제4,596,556호에 개시된 것과 같은 무바늘 피하 주사 장치와 함께 투여될 수 있다. 본 개시에서 사용될 수 있는 이식체 및 모듈의 구현예로, 제어된 속도로 약물을 분배하기 위한 이식형 미세주입 펌프를 개시한 미국 특허 번호 4,487,603; 피부를 통해 약물을 투여하는 치료 장치를 개시한 미국 특허 번호 4,486,194; 정확한 주입 속도로 약물을 전달하기 위한 약물 주입 펌프를 개시한 미국 특허 번호 4,447,233; 연속 약물 전달을 위한 가변 흐름 이식형 주입 장치를 개시한 미국 특허 번호 4,447,224; 다중 구획을 갖는 삼투성 약물 전달 시스템을 개시한 미국 특허 번호 4,439,196; 및 삼투성 약물 전달 시스템을 개시한 미국 특허 번호 4,475,196을 포함한다. 많은 다른 이러한 이식체, 전달 시스템 및 모듈이 알려져 있다.
치료 조성물의 경우, 본 개시의 조제품은 경구, 비강, 국소(협측 및 설하 포함), 직장, 질 및/또는 비경구 투여에 적합한 그러한 조제품을 포함한다. 이러한 조제품은 단위 조제량 형태로 편리하게 존재할 수 있고 약학 분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 담체 재료와 조합되어 단일 제형 형태로 생성될 수 있는 항체의 양은 치료되는 대상 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 담체 재료와 결합되어 단일 제형 형태로 생성될 수 있는 항체의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 백분율로 계산하여, 이러한 양의 범위는 약 0.01% 내지 약 99%의 활성 성분, 약 0.1% 내지 약 70%, 또는 약 1% 내지 약 30% 범위이다.
국소 또는 경피 투여를 위한 본 개시의 조성물의 제형은 산제, 스프레이, 연고제, 페이스트, 연고제, 세제, 겔제, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 활성 화합물은 멸균 조건 하에 약학적으로 허용 가능한 담체 및 필요할 수 있는 임의의 방부제, 완충제 또는 추진제와 혼합될 수 있다.
문구 “비경구 투여” 및 “비경구 투여를 거쳐”는 일반적으로 장 투여 및 국소 투여 이외의 주사에 의한 투여 방식을 지칭하고, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내, 안와내, 심장내, 진피내, 복막내, 기관내, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
이러한 약물 조성물은 또한 방부제, 윤활제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 미생물의 존재 예방은 파라벤(paraben), 클로로부탄올(chlorobutanol), 페놀 소르브산(phenol sorbic acid) 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 포함할 뿐만 아니라 위에서 언급한 멸균 절차에 의해 확보될 수 있다. 이러한 조성물에 당, 염화나트륨 등과 같은 등장화제를 포함하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 이 외에, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 제제를 포함하여, 주사 가능한 약물 형태의 연장된 흡수를 야기시킬 수 있다.
일부 실시예에서, 본 개시의 항체가 약물로서 인간 및 동물에 투여되는 경우, 이들은 단독으로 또는 약학적으로 허용 가능한 단체와의 조합을 약물 조성물로서 투여될 수 있고, 상기 약물 조성물은 예를 들어 약 0.01% 내지 약 99.5%(또는 약 0.1% 내지 90%)의 본문에 따른 항체를 포함한다.
5. 제품
현재 개시된 주제는 상기 질환을 치료, 예방 및/또는 진단하기 위한 재료를 포함하는 제품을 더 제공하였다.
일부 실시예에서, 제품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기의 비제한적인 구현예는 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 재료(예를 들어, 유리 또는 플라스틱)로 형성될 수 있다. 용기는 병증 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 조성물을 (그 자체로 또는 다른 조성물과 조합하여) 수용할 수 있고, 무균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있다).
일부 실시예에서, 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 현재 개시된 주제의 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 상기 조성물이 선택된 병증 치료에 사용됨을 나타낼 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 제품은, (a) 본 발명의 항체를 포함하는 조성물이 담긴 제1 용기; 및 (b) 기타 세포독성제 또는 치료제를 포함하는 조성물을 함유하는 제2 용기를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 제품은 조성물이 특정 병증 치료에 사용될 수 있음을 나타내는 패키징 삽입물을 추가로 포함할 수 있다.
대안적으로 또는 별도로, 제품은 제2 용기 또는 제3 용기와 같은 별도의 용기를 더 포함할 수 있고, 이는 주사용 정균수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거 용액 및 포도당 용액을 포함하지만 이에 한정되지 않는 약학적으로 허용 가능한 완충제를 포함한다. 상기 제품은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 비롯한 상업적 및 사용자 관점에서 희망하는 기타 재료를 포함할 수 있다.
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이하 구현예는 단지 현재 개시된 주제의 설명일 뿐, 어떠한 형식이로든 제한하는 것으로 간주되어서는 아니된다.
구현예
구현예 1.면역, 항인간TIGIT VHH항체의 발생 및 항체 징후 발견
재조합 인간TIGIT세포외 도메인(ECD) 단백질의 항원은 Arco Bio회사에서 구입하였다. 본 분야에 공지된 해결수단에 따라, 미국 라마를 사용하여 TIGIT의 면역화를 수행하였다. ELISA 측정법에 의해 혈청 항체의 역가를 측정하였다. 3차 면역화 후, 높은 역가(1 : 100,000)가 관찰되었다. 다음 전혈을 수집하고, PBMC를 분리하였다. 다음 PBMC에서 RNA를 단리하였다.
본 분야에 공지된 해결수단 하에, PCR에 의해 VHH항체 유전자를 증폭시키고, DNA 아가로스 겔에 의해 정제하며, 파지 벡터pADL-23c(항체 설계 실험실(Antibody Design Labs))에 구축하고, TG1 전기천공 컴피턴트 세포(Lucigen으로부터)로 형질전환시켰다. 형질전환된 TG1세포를 Y2T배지에서 배양하였다. 헬퍼 파지를 첨가하고 하룻밤 공동 배양하여, 타겟 VHH를 갖는 파지를 생성할 수 있다. 원심분리에 의해 배양 상층액의 파지를 수집하고, 비오틴화된 h-TIGIT 또는 cyno-TIGIT ECD로 코팅된 스트렙트아비딘 결합된 Dynabeads를 사용하여 인간-TIGIT(h-TIGIT) 또는 사이노몰구스 원숭이-TIGIT(cyno-TIGIT) 항원의 바인더를 패닝하였다. 3회의 패닝 후, h-TIGIT 또는 cyno-TIGIT의 결합물이 용출되어, SS320세포를 감염시키는데 사용하였다. SS320세포의 콜로니를 선택하고 Y2T 배지에서 배양하며, IPTG를 첨가하여 VHH항체를 분비하였다. h-TIGIT ECD 코팅된 플레이트를 사용하여 ELISA분석에 의해 VHH항체를 갖는 상층액을 스크리닝하였다. 양성 h-TIGIT바인더를 선택하여 시퀀싱하였다. 상이한 서열을 갖는 29개의 클론을 선택하였다. 또한 ELISA로 cyno-TIGIT에 대한 VHH항체의 결합 능력을 검사하였다. 서열표(SEQ ID NO: 1-84)에서 상위 21개의 바인더 및 이들의 CDR 및 VH를 나타냈다.
차단 ELISA 분석법을 사용하여 TIGIT에 결합하는 폴리오바이러스 수용체(PVR, 일명 CD155)를 차단하는 VHH 항체 클론의 영향을 결정하였다. h-TIGIT에 대한 PVR 결합을 90% 이상 억제하는 9개 클론(클론 명칭: 2B7, 1G1, 1C12, 3G6, 2B10, 3G7, 3F10, 13H11 및 15A5)을 추가로 선택하였다.
구현예2 - TIGIT VHH항체의 특성화 및 선택
도 1C에 도시된 인간 불변중쇄2(CH2) 및 불변중쇄3(CH3) 도메인을 추가하여, 구현예1에서 검증된 항체 클론을 구축하여, 2가 항체를 제조하였다. 구축된 2가 VHH항체는 ExpiCHO세포에서 발현되고, 상층액의 단백질을 수집하고 단백질A로 정제하였다.
유속세포 분석에 의해 인간TIGIT 형질감염된 Jurkat세포에 대한 2가 클론의 결합 친화력을 입증하였다. 인간TIGIT 및 NFAT리포터 유전자를 안정적으로 발현하는 Jurkat세포를 구축하였다. 구체적으로, 전기천공법에 의해 인간TIGIT 발현 벡터로 Jurkat세포를 형질감염시키고, 세포 배양 동안 1 ug/ml의 퓨로마이신으로 인간TIGIT를 안정적으로 발현하는 세포를 선택하였다. 대표적인 항체 클론을 96-웰 플레이트에서 100 ul/웰의 FACS 완충액(1.5% FBS를 함유하는 PBS)에서 상이한 농도로 Jurkat세포(0.2 x 106/ml)를 안정적으로 발현하는 h-TIGIT와 함께 30분 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, Alexaflour 488접합된 항인간IgG Fc 2차 항체(Alexa Fluor® 488 AffiniPure 염소 항인간IgG, Fcγ단편 특이성, 잭슨 랩(Jackson labs), 1 : 500 희석)를 첨가하고, 30분 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, CytoFlex(벡크만쿨러회사(Beckman Coulter))를 사용하여 살아있는 세포 집단을 게이팅하여 평균 형광 강도를 측정하였다. GraphPad Prism을 사용하여 결합 친화력을 계산하였다. 대표적인 결과는 도 1A 및 1B에 나타냈다. 기준 Ab 1(US 2016/0176963 A1에 개시된 기준 항인간TIGIT항체는, 개시된 서열에 따라 합성됨)에 비해, 시험된 모든 항체는 모두 인간TIGIT를 발현하는 세포에 대해 높은 결합 친화력을 나타냈다.
또한, 전기천공법을 사용하여 NFAT리포터 유전자로 인간TIGIT를 안정적으로 발현하는 Jurkat세포를 형질감염시켰다. NFAT리포터 유전자를 발현하는 세포는 배지에서 300 ug/ml 하이그로마이신에 의해 선택되었다. 또한, 인간PVR로 Raji세포를 안정적으로 형질감염시키고, 배지에서 125 ug/ml의 하이그로마이신으로 형질감염된 세포를 선택하였다. 다음 포도상구균 장독소(SEE, 0.01 ng/ml)의 존재 하에 인간PVR을 발현하는 Raji세포 및 인간TIGIT 및 NFAT리포터 유전자를 발현하는 Jurkat세포를 5시간 동안 공동 인큐베이션하여, PVR에 의해 매개된 TCR-유도를 억제하는 NFAT 리포터 활성에 대한 항체의 영향을 측정하였다. 기질(프로메가회사(Promega))을 갖는 Bright-Glo루시퍼라제 분석 완충액을 첨가하고, 플레이트 리더를 사용하여 화학발광 활성에 의해 루시퍼라제 활성을 측정하였다. GraphPad Prims의 비선형 회귀 방법을 사용하여 TIGIT활성을 차단하는 항체의 능력을 계산하였다. 대표적인 결과는 도 2에 나타낸 바와 같다. 기준 Ab 1에 비해, 3F10을 제외한 모든 시험 클론은 모두 유사한 TIGIT 차단 작용을 나타냈다.
구현예3 - 항TIGIT항체의 인간화
2개의 대표적인 클론1G1 및 1C12를 선택하여 프레임워크를 인간화하였다. 간단히 말해서, 2개의 클론의 서열을 사용하여 Igblast를 수행하여 인간 생식계열 유전자 데이터베이스를 검색하였다. 이상적인 생식계열 서열을 선택하고, 프레임워크 서열을 돌연변이시켜 프레임워크 서열을 라마에서 인간으로 변경하였다. 1C12클론에 있어서, 인간 생식계열 IGHV-3-30*10을 사용하고, 3가지 형태의 인간화1C12(1C12-EREF, 1C12-EREW 및 1C12-GLEW)를 제조하였다. 1G1에 있어서, 인간 생식계열 IGHV-3-30*01을 사용하고, 6가지 형태의 인간화1G1(1G1-F-G-ERES, 1G1-F-A-ERES, 1G1-F-A-EREW, 1G1-F-A-GLEW, 1G1-F-A-GREL 및 1G1-F-A-GRES)르 제조하였다. 작제물을 발현 벡터에 클로닝하고, ExpiCHO의 일시적 형질감염에 의해 항체 단백질을 생성하며, 단백질A를 통해 정제하였다.
인간TIGIT에 대한 인간화 2가 항체의 결합 친화력은 Jurkat세포에서 안정적으로 발현되는 h-TIGIT에 대한 전체 세포 결합에 의해 결정되었다. 다시 말해서, 항체를 h-TIGIT형질감염된 Jurkat세포(100 μl의 0.2 x 106/웰)와 함께 FACS완충액에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 한번 세척한 후, 항인간IgG Fc AlexaFluor488(1 : 500)과 함께 인큐베이션하였다. CytoFlex를 통해 평균 형광 강도를 결정하고, GraphPad Prism 8.0을 사용하여 비선형 회귀를 수행하며, 항체와 h-TIGIT의 결합 친화력을 계산하였고, 도 3A에 도시된 바와 같다. 키메라 모 클론에 비해, 모든 3개의 형태의1C12클론에서 모두 유사한 결합 친화력을 관찰하였다. 1G1에 있어서, 키메라 클론에 비해, 2개의 인간화 형태F-G-ERES 및 F-A-ERES는 h-TIGIT에 대해 유사한 친화력을 나타낸 반면, 2개의 형태(F-A-EREW 및 F-A-GLEW)은 h-TIGIT에 대한 결합 친화력을 잃었고, 도 3B에 나타낸 바와 같다.
TCR에 의해 매개된 NFAT 리포터 활성의 PVR에 의해 매개된 억제를 차단하는 인간화 항체의 활성은 이전에 기재된 방법을 사용하여 결정한다. 간단히 말해서, 인간 TIGIT 및 NFAT 리포터 유전자로 형질감염된 Jurkat 세포를 PVR-형질감염된 Raji 세포 및 저농도의 포도상구균 장독소(SEE, 0.01 ng/ml)의 존재 하에 다양한 농도의 항체와 함께 5시간 동안 인큐베이션하였다. 기질(프로메가회사(Promega))을 갖는 Bright-Glo루시퍼라제 분석 완충액을 첨가하고, 루시퍼라제 활성을 측정하였다. 대표적인 결과는 도 4A 및 4B에 나타냈다. 키메라 모 클론 및 기준 항h-TIGIT항체 기준 Ab 1에 비해, 1C12클론의 모든 인간화 형태는 TIGIT를 차단하는데 유사한 효능을 갖는다. 2개의 형태1G1-(F-A-EREW) 및 1G1-(F-A-GLEW)이 차단 작용을 상실했다는 점을 제외하고는, 1G1의 모든 인간화 형태는 TIGIT를차단하는 측면에서 모두 키메라 모 클론과 유사한 효능을 갖는다.
구현예4 - 친화력 성숙, 선택 및 수정
1G1-F-A-ERES에 대해 친화력 성숙을 수행하였다. 각 CDR영역의 아미노산을 단일 돌연변이시키는 프라이머를 설계하였다. 조립 PCR을 사용하여 돌연변이 라이브러리를 제조하고, 이를 파지 벡터에 클로닝하였다. 형질전환된 TG1세포 및 클론의 DNA시퀀싱을 통해 라이브러리 품질을 측정하였다. 헬퍼 파지를 사용하여 파지 생산을 수행하고, 비오틴화된 h-TIGIT ECD 또는 cyno-TIGIT ECD로 코팅된 스트렙트아비딘 결합된 Dynabeads를 사용하여 파지를 패닝하였다. 2회의 패닝 후, 용출된 패닝 생성물은 SS320세포를 감염시키고, 콜로니를 선택하며 IPTG가 포함된 Y2T배지에서 배양하였다. ELISA측정법에 의해 상층액의 VHH항체를 검사하였다. h- 및 cyno-TIGIT에 대한 양성 클론은 h- 및 cyno-TIGIT를 안정적으로 발현하는 세포를 선택하여 전체 세포 결합을 수행하였다. 또한 선정된 클론에 대해 PVR 차단 ELISA 및 인간TIGIT 차단 NFAT리포터 유전자를 검출하였다. GraphPad Prism을 사용하여 EC50 또는 IC50값을 계산하였다. 서열표(SEQ ID NO: 94-177)에 상위 25개의 바인더 및 이들의 CDR 및 VHH를 도시하였다.
GraphPad Prism를 사용하여 EC50/IC50를 전체 세포 결합 및 차단 ELISA 분석의 관련성 플로팅하고, 대표적인 데이터는 도 5A-5C에 도시된 바와 같다. 2A3이 가장 높은 친화력 및 효능을 갖는 것으로 검증되었다.
25 내지 70°C의 온도 하에서 60분 동안 열처리하여 12개의 대표적인 클론의 열안정성을 시험한 후, ELISA 및 전체 세포 결합 유속세포 분석 검출에 의해 처리된 샘플을 인간TIGIT에 대한 결합에 대해 분석하고, 그 결과는 도 6A 및 6B에 도시된 바와 같다. 다른 클론에 비해, 클론2A3은 더 높은 열안정성을 갖는다.
인간IgG1 CH2 및 CH3도메인을 사용하여 2가2A3항체(2A3-Fc)를 구축하였다. 항체는 ExpiCHO세포에서 발현되고, 단백질A 컬럼으로 정제되었다. 항TIGIT기준 항체 기준 Ab 1 및 기준 Ab 2(Tiragolumab과 동일한 아미노산 서열의 기준 항인간TIGIT항체를 갖고, U.S. 2017/0088613 A1에 개시된 Tiragolumab서열에 따라 합성)에 비해, Octet 결합 시험을 사용하여 인간TIGIT에 결합하는 2A3-Fc에피토프를 연구하였다. 도 7A-7C에 도시된 바와 같이, 기준 Ab 1 및 기준 Ab 2에 비해, 2A3 클론은 상이한 에피토프에 결합한다.
인간, 사이노몰구스 원숭이 및 마우스TIGIT에 대한 2A3-Fc의 종간 결합 활성을 ELISA 측정법에 의해 측정하였고, 그 결과는 도 8A-8C에 도시되었다. 2A3-Fc는 인간 및 시노몰구스 원숭이에 결합하지만 마우스 TIGIT에는 결합하지 않는다.
2A3의 CDR 영역의 분석은 2개의 핫스팟, CDR2의 메티오닌 및 CDR3의 아스파르테이트, 다음 세린을 결정하였다. 메티오닌을 류신 및 이소류신으로 돌연변이시키고, 아스파르트산을 트레오닌 및 글루타민산으로 돌연변이시킨다. 변형된 항체(2A3 ML, 2A3 MI, 2A3 ML_DT(일명 2A3 LT) 및 2A3 ML_DE)의 CDR 및 VHH는 서열표에 (SEQ ID NO: 178-193)을 나타냈다. 변형된 형태는 전체 세포 결합 및 NFAT 루시퍼라제 리포터 분석에서 테스트되었고, 이러한 모든 변형된 항체는 모 2A3 클론과 비교하여 유사한 특성을 나타냈다. 도 9는 2A3-LT-Fc(2A3 ML DT)에 대한 대표적인 데이터를 나타내고, 여기서 M은 L로, D는 T(2A3 ML DT)로 변경되었으며, 여기서 모 2A3-Fc에 비해, 전체 세포 결합 측정에서 유사한 인간TIGIT결합 친화력을 관찰하였고, NFAT리포터 유전자 측정에서 유사한 효력을 관찰하였다.
2A3-Fc의 친화력 및 효능은 기준 항TIGIT항체 기준 Ab 2와 비교하였다. 2A3-Fc는 기준 Ab 2보다 유의하게 높은 친화력을 나타냈다. 전체 세포 결합 측정에서, 2A3-Fc의 EC50값은 0.32 ± 0.06 nM이나, 기준 Ab 2(n = 3)는 0.61 ± 10.13 nM(도 10A)이다. 기준 Ab 2에 비해, 2A3-Fc는 NFAT루시퍼라제 리포터 유전자 검출에서 TIGIT를 차단하는 데 유사한 효능을 나타냈다. 2A3-Fc의 EC50값은 0.48 ± 10.18 nM이나, 기준 Ab 2(n = 3)는 0.72 ± 0.42 nM(도 10B)이다.
구현예5 - 체외 유효성 연구
항TIGIT항체의 항종양 능력은 체외 실험에서 계속하여 연구되었다. 종양 미세 환경에서, TIGIT의 T세포가 PVR을 발현하는 수지상 세포(DC)와 접촉할 경우, DC에서 발현된 PVR은 T세포 상의 TIGIT에 결합하고, 이로써 항종양 사이토카인 분비와 같은 T세포의 항종양 활성을 억제한다. 효과적인 항TIGIT항체의 치료는 TIGIT와 PVR의 결합을 차단함으로써, 항종양에 대한 T세포의 사멸 능력을 향상시킬 수 있다.
수지상 세포-T세포 혼합 림프구 반응(MLR assay)은 종양 미세 환경에서 이러한 현상을 모델링하기 위한 것이다. 건강한 기증자의 PBMC에서 단리된 CD14의 단핵구(monocyte)는 50 ng/ml GM-CSF 및 50 ng/ml IL-4를 함유하는 RPMI1640 배지에서 7일 동안(4일째에 배지 교체) 배양하여 DC로 분화시켰다. 다음 DC를 다시 100 ng/ml LPS를 함유하는 RPMI배지를 옮기고 1일 동안 배양하여, 성숙한 DC를 얻었다. 이 방법으로 얻은 수지상 세포는 CD11c(성숙한 DC 바이오마커), MHC class II(주요 조직적합성 복합체II), CD80(CD28의 리간드), 및 PVR(TIGIT의 리간드)을 안정적으로 발현하였다. ThermoFisher T세포 분리 키트를 사용하여 설명 방법에 따라 다른 건강한 기증자의 PBMC에서 CD3+ T세포를 단리하였다. 10,000개의 성숙한 DC 및 200,000개의 CD3+ T세포를 10% FBS-HI를 함유하는 RPMI1640배지에서 배양하고, 각 웰에 상이한 농도의 항TIGIT항체 및 대조 항체를 첨가하였다. 37°C, 5.0% CO2의 환경에서 48시간 동안 혼합 배양한 후, PerkinElmer 의 IL-2 AlphaLisa 검출 키트(AlphaLisa human IL-2 kit: Cat#AL221C)를 사용하여 상층의 IL-2의 수준을 검출하였다. 항PD1항체는 양성 대조이고, 항HER2항체는 음성 대조이다.
도 11에 도시된 바와 같이, 2A3-LT-Fc항체는 조제량 의존적으로 T세포에 의해 분비되는 IL-2의 수준을 향상시켰고, 이는 양성 대조 항PD1항체에 해당된다. 반대로, Tiragolumab 유사체는 T세포에 의해 분비되는 IL-2의 수준을 향상시키지 않았다. IL-2는 중요한 항종양 사이토카인이기 때문에, 이 결과는 항TIGIT항체2A3-LT-Fc가 종양 미세 환경에서 T세포의 항종양 능력을 유의하게 향상시킬 수 있음을 입증하고, Tiragolumab 유사체에 비해 우수한 항종양 능력을 나타냈다.
구현예 6 - Fc조작
항TIGIT항체가 면역 기능 및 항종양 활성을 향상시키는 작용기전은 TIGIT의 차단 작용 뿐만 아니라, 항원 제시 세포(APC)와 유효 T세포(CD8 + T세포) 사이의 결합 작용에 관한 것이고, APC 상의 FcγRIIIA 결합 항체Fc영역, 및 유효 T세포 상의 VHH도메인을 통해 TIGIT의 결합에 결합한다. 이 메커니즘을 활용하기 위해 2가지 상이한 Fc향상 형태를 제조하였고, 하나는 DLE돌연변이(S239D, A330L 및 I332E)를 가지며, 하나는 VPVLL돌연변이(L235V, F243L, R292P, Y300L 및 P396L)를 갖는다. 인간 FcγRIIIA 및 FcγRIIB에 대한 Fc 돌연변이체의 결합은 FcγRIIIA 및 FcγRIIB의 ECD의 재조합 단백질을 사용하는 Octet 결합 분석에 의해 검사하였고, 그 결과는 도 12에 도시된 바와 같다. DLE 및 VPVLL돌연변이체는 모두 인간 FcγRIIIA에 대한 향상된 결합 친화력을 갖는다. DLE돌연변이체는 또한 인간 FcγRIIB에 대한 결합 친화력이 강화되지만, VPVLL돌연변이체는 인간FcγRIIB에 대한 감소된 결합 친화력을 갖는다.
또한 Fc돌연변이체의 TIGIT 차단 활성을 검사하였고, 여기서 DLE돌연변이체는 감소된 TIGIT차단 기능을 나타내며, 도 13A에 도시된 바와 같다.
또한, 항체 가변영역이 특이적 항원에 결합하면, Fc영역은 FcγRIIIA에 교차 연결되고 다운스트림 신호 전달을 유발할 수 있다. 이러한 작용 방식을 사용하여, 인간FcγRIIIA 및 NFAT리포터 유전자로 형질감염된 Jurkat세포 및 TIGIT를 과발현하는 293T세포를 사용하여 FcγRIIIA에 의해 매개된 활성에 대한 Fc돌연변이체의 영향을 검사하였다. 상기 측정 시스템에서, 도 13B에 도시된 바와 같이, 야생형Fc형태에 비해, DLE돌연변이체는 인간FcγRIIIA에 의해 매개된 NFAT리포터 유전자 활성을 유의하게 증가시켰다.
표 3은 도 13A의 측정 데이터에 대응
Figure pct00014
표 4는 도 13B의 측정 데이터에 대응
Figure pct00015
구현예7 - 체내 유효성 연구
인간TIGIT 녹인 C57BL/6마우스 및 MC38마우스 결장암 모델을 사용하여, 2A3-LT-Fc wt, 2A3-LT-Fc-DLE의 유효성 평가하고 기준 Ab 2와 비교하였다. 치료 1주일 전에 마우스에 MC38종양 세포를 접종하였다. 평균 종양 크기가 약 51 mm3에 도달하면 치료를 시작하고, 복막 내에 2.5주 동안 1주 2회 투여하였다. 1회 6 mg/kg의 2A3-LT-Fc항체 또는 1회 11 mg/kg의 기준 Ab 2(mole/kg에서 2A3-LT-Fc항체와 동일)이다. 치료 후 16일째에, 여러 대조군 마우스에서 종양 크기가 상한(2000 mm3)에 도달하였다. 따라서 치료 후 16일째에 분석의 데이터 종료점이 되었다. 대조군에서, 치료 후 16일째에 평균 종양 크기는 1548.76±191 mm3 (평균치±표준 오차)이다. 대조군에 비해, 2A3-LT-Fc wt, 2A3-LT-Fc-DLE의 치료는 종양 성장을 유의하게 감소시켜, 순차적으로 38% 및 50%의 TGI(종양 억제) 및 순차적으로 985.05±123 mm3 및 802.20±126 mm3의 종양 부피(블랭크 대조군에 비해 Mann-Whitney를 통해 검증된 P값은 순차적으로 0.037 및 0.007임)를 초래하였다. 기준 항체를 사용한 치료도 종양 성장을 감소시켰지만, 이로써 항체로 인한 감소는 대조군에 비해 통계적으로 유의하지 않고, TGI는 26%이고, 종양 부피는 1156.16±195 mm3 (도 14A, 표 5)이다. 단일 종양 부피의 결과는 도 14B에 도시된다. 이러한 결과는 2A3-LT-Fc 및 2A3-LT-Fc-DLE 모두 기준 Ab 2보다 더 효과적인 것을 나타낸다. 연구에서 각 실험군의 체중 변화는 유의하지 않았고(도 14C), 치료하여 양호한 내성을 얻었음을 나타낸다.
표 5. MC38 동질유전자 인간TIGIT마우스 모델에서 16일째의 평균 종양 부피
Figure pct00016
a 평균치 ± 표준 오차
b 치료 후 16일째에 Mann-Whitney 검증을 통해 블랭크 대조와 비교
도시되고 보호받고자 하는 다양한 실시예 외에, 개시된 주제는 또한 본문에 개시되고 보호받고자 하는 특징의 다른 조합의 다른 실시예에 관한 것이다. 이러한 방식으로, 본문에 제시된 특정 특징은 개시된 주제의 범위 내에서 다른 방식으로 서로 조합되어, 개시된 주제에 본문에 개시된 특징의 임의의 적합한 조합을 포함하도록 할 수 있다. 예시 및 설명의 목적으로 개시된 주제의 구체적인 실시예에 대한 전술한 설명을 제출하였다. 이상 설명은 개시된 주제를 개시된 실시예로 완전하게 제한하거나 제한하려는 의도가 아니다.
본 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 개시된 주제의 정신 또는 범위를 벗어나지 않는 경우, 개시된 주제의 조성 및 방법에 다양한 수정 및 변형이 이루어질 수 있는 것은 명백하다. 따라서, 개시된 주제는 첨부된 청구범위 및 그 균등물의 범위 내에서 수정 및 변형을 포함하도록 의도된다.
본문은 다양한 간행물, 특허 및 특허 출원을 인용하였고, 그 전체 내용은 인용을 통해 본문에 통합된다.
SEQUENCE LISTING <110> SHANGHAI HENLIUS BIOTECH, INC. <120> ANTI-TIGIT ANTIBODIES AND USAGE METHOD <130> SH1903-20P450229 <160> 222 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4A11 CDR1 <400> 1 Gly Arg Pro Phe Ser Asn Tyr Thr 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4A11 CDR2 <400> 2 Ala Trp Pro Ser Pro Ser Thr 1 5 <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4A11 CDR3 <400> 3 Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Leu Thr Gln Ser Trp Leu Asn Ala Ala Leu 1 5 10 15 Asp Tyr <210> 4 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4A11 VHH <400> 4 Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Ala Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Pro Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Thr Met Gly Trp Phe Arg Arg Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45 Gly Leu Ala Trp Pro Ser Pro Ser Thr Tyr Val Val Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ile Tyr Leu 65 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Ala Ala Pro Ala 195 200 205 Gly Leu Cys Gly Glu Gln Arg Gly Glu Asp Cys Ala Glu Leu His Asp 210 215 220 Tyr Phe Asn Val Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Phe Phe 225 230 235 240 Thr Glu Thr Gly <210> 222 <211> 138 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> 훙TIGIT뜩奫돨ECD <222> (1)..(138) <400> 222 Met Arg Trp Cys Leu Leu Leu Ile Trp Ala Gln Gly Leu Arg Gln Ala 1 5 10 15 Pro Leu Ala Ser Gly Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn 20 25 30 Ile Ser Ala Glu Lys Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser 35 40 45 Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln 50 55 60 Leu Leu Ala Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser 65 70 75 80 Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln 85 90 95 Ser Leu Thr Val Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr 100 105 110 Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu 115 120 125 Ser Ser Val Ala Glu His Gly Ala Arg Phe 130 135

Claims (107)

  1. TIGIT에 결합하는 항체에 있어서, 상기 항체는 1 x 10-7 M이하의 KD로 TIGIT에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 TIGIT에 결합하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 1 x 10-8 M이하의 KD로 TIGIT에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 5 x 10-9 M이하의 KD로 TIGIT에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 2 x 10-9 M이하의 KD로 TIGIT에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 VHH를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체 또는 VHH는 중쇄 가변영역(VH)을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 중쇄 가변영역은,
    a) SEQ ID NO: 94로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 95로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 96으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    b) SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 99로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    c) SEQ ID NO: 102로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 103으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 104로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    d) SEQ ID NO: 106으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 107로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 108로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    e) SEQ ID NO: 110으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 111로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 112로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    f) SEQ ID NO: 114로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 115로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 116으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    g) SEQ ID NO: 118로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 119로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    h) SEQ ID NO: 122로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 123으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 124로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    i) SEQ ID NO: 126으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 127로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 128로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    j) SEQ ID NO: 130으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 131로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 132로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    k) SEQ ID NO: 134로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 135로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 136으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    l) SEQ ID NO: 138로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 139로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 140으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    m) SEQ ID NO: 142로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 143으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 144로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    n) SEQ ID NO: 146으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 147로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 148로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    o) SEQ ID NO: 150으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 151로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 152로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    p) SEQ ID NO: 154로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 155로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 156으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    q) SEQ ID NO: 158로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 159로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 160으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    r) SEQ ID NO: 162로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 163으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 164로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    s) SEQ ID NO: 166으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 167로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 168로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    t) SEQ ID NO: 170으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 171로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 172로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    u) SEQ ID NO: 174로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 175로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 176으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    v) SEQ ID NO: 178로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 179로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 180으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    w) SEQ ID NO: 182로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 183으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 184로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    x) SEQ ID NO: 186으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 187로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 188로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3, 또는
    y) SEQ ID NO: 190으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 191로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 192로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는,
    a) SEQ ID NO: 94, 98, 102, 106, 110, 114, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, 162, 166, 170, 174, 178, 182, 186 및 190 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 갖는 중쇄 가변영역CDR1;
    b) SEQ ID NO: 95, 99, 103, 107, 111, 115, 119, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147, 151, 155, 159, 163, 167, 171, 175, 179, 183, 187 및 191 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 갖는 중쇄 가변영역CDR2; 및
    c) SEQ ID NO: 96, 100, 104, 108, 112, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188 및 192 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 약 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 변이체를 갖는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인을 포함하며, 상기 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인은 각각 기준 중쇄 가변영역에 포함된 CDR1도메인, CDR2도메인 및 CDR3도메인을 함유하고, 상기 기준 중쇄 가변영역은 SEQ ID NO: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189 및 193으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 94로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 95로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 96으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 98로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 99로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 100으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 102로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 103으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 104로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 106으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 107로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 108로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  14. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 110으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 111로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 112로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 114로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 115로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 116으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  16. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 118로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 119로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 122로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 123으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 124로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  18. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 126으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 127로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 128로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  19. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 130으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 131로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 132로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  20. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 134로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 135로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 136으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  21. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 138로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 139로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 140으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  22. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 142로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 143으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 144로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  23. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 146으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 147로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 148로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  24. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 150으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 151로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 152로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  25. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 154로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 155로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 156으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  26. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 158로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 159로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 160으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  27. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 162로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 163으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 164로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  28. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 166으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 167로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 168로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  29. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 170으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 171로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 172로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  30. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 174로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 175로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 176으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  31. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 178로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 179로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 180으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  32. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 182로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 183으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 184로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  33. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 186으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 187로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 188로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  34. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 190으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 191로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 192로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 97, 101, 105, 109, 113, 117, 121, 125, 129, 133, 137, 141, 145, 149, 153, 157, 161, 165, 169, 173, 177, 181, 185, 189 및 193으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 97로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  37. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 101로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  38. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  39. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  40. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  41. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 117로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  42. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  43. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  44. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 129로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  45. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 133으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  46. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 137로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  47. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  48. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 145로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  49. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 149로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  50. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 153으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  51. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 157로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  52. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 161로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  53. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 165로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  54. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 169로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  55. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 173으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  56. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 177로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  57. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 181로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  58. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 185로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  59. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 189로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  60. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 193으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하는 기준 항TIGIT단일 도메인 항체와 교차 경쟁하여 TIGIT에 결합하고, 상기 중쇄 가변영역은,
    (a) SEQ ID NO: 1로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 2로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (b) SEQ ID NO: 5로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 6으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 7로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (c) SEQ ID NO: 9로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 10으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 11로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (d) SEQ ID NO: 13으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 14로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 15로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (e) SEQ ID NO: 17로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 18로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 19로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (f) SEQ ID NO: 21로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 22로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (g) SEQ ID NO: 25로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 26으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 27로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (h) SEQ ID NO: 29로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 30으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 31로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (i) SEQ ID NO: 33으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 34로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 35로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (j) SEQ ID NO: 37로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 38로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 39로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (k) SEQ ID NO: 41로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 42로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (l) SEQ ID NO: 45로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 46으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 47로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (m) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (n) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (o) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (p) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (q) SEQ ID NO: 65로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 66으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 67로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (r) SEQ ID NO: 69로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 70으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 71로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (s) SEQ ID NO: 73으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 74로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 75로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (t) SEQ ID NO: 77로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 78로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 79로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3, 또는
    (u) SEQ ID NO: 81로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 82로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 83으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 중쇄 가변영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변영역은,
    (a) SEQ ID NO: 1로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 2로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 3으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (b) SEQ ID NO: 5로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 6으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 7로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (c) SEQ ID NO: 9로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 10으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 11로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (d) SEQ ID NO: 13으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 14로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 15로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (e) SEQ ID NO: 17로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 18로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 19로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (f) SEQ ID NO: 21로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 22로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 23으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (g) SEQ ID NO: 25로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 26으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 27로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (h) SEQ ID NO: 29로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 30으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 31로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (i) SEQ ID NO: 33으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 34로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 35로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (j) SEQ ID NO: 37로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 38로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 39로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (k) SEQ ID NO: 41로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 42로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (l) SEQ ID NO: 45로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 46으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 47로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (m) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (n) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (o) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (p) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (q) SEQ ID NO: 65로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 66으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 67로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (r) SEQ ID NO: 69로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 70으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 71로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (s) SEQ ID NO: 73으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 74로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 75로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3,
    (t) SEQ ID NO: 77로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 78로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 79로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3, 또는
    (u) SEQ ID NO: 81로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR1; SEQ ID NO: 82로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR2; 및 SEQ ID NO: 83으로 표시되는 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 중쇄 가변영역CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80 및 84로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일 도메인 항체는 인간화 프레임을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 Fc영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc영역은 인간Fc영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc영역은 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM의 Fc영역으로 이루어진 군으로부터 선택되는 Fc영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 Fc영역으로 이루어진 군으로부터 선택되는 Fc영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc영역은 IgG1 Fc영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  70. 제69항에 있어서, 상기 IgG1 Fc영역은 항체 의존성 세포에 의해 매개된 세포 독성(ADCC)을 증강시키는 하나 또는 다수의 돌연변이를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  71. 제70항에 있어서, 상기 IgG1 Fc영역은 L235V, F243L, R292P, Y300L 및 P396L의 돌연변이를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  72. 제70항에 있어서, 상기 IgG1 Fc영역은 S239D, A330L 및 I332E의 돌연변이를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 가변영역은 링커를 통해 Fc영역에 연결되는 것을 특징으로 하는 항체.
  74. 제73항에 있어서, 상기 링커는 펩티드 링커인 것을 특징으로 하는 항체.
  75. 제74항에 있어서, 상기 펩티드 링커는 약 4 내지 약 30개의 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  76. 제74항 또는 제75항에 있어서, 상기 펩티드 링커는 SEQ ID NO: 195-220으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  77. 제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이중 특이성 항체, 전장 면역글로불린, 단일쇄Fv(scFv)단편, Fab단편, Fab'단편, F(ab’)2, Fv단편, 이황화 결합이 안정적인 Fv단편(dsFv), (dsFv)2, VHH, Fv-Fc융합물, scFv-Fc융합물, scFv-Fv융합물, 디아바디, 트리바디, 테트라바디 또는 임의의 이들의 조합과 같은 다중 특이적 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  78. 제1항 내제 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 항체 부분을 포함하는 이중 특이성 항체와 같은 다중 특이적 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  79. 제78항에 있어서, 상기 제2 항원은 종양 관련 항원인 것을 특징으로 하는 항체.
  80. 제79항에 있어서, 상기 종양 관련 항원은, Her-2, EGFR, PDL1, c-Met, B세포 성숙 항원(BCMA), 탄산무수화효소IX(CA1X), 암배아항원(CEA), CD5, CD7, CD10, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD34, CD38, CD41, CD44, CD49f, CD56, CD74, CD123, CD133, CD138, CD276(B7H3), 상피 당단백질(EGP2), 영약막 세포 표면 항원2(TROP-2), 상피 당단백질-40(EGP-40), 상피세포 부착분자(EpCAM), 수용체 티로신-단백질 키나제erb-B2, 3, 4, 엽산 결합 단백질(FBP), 태아 아세틸콜린 수용체(AChR), 엽산 수용체-a, 강글리오시드G2(GD2), 강글리오시드G3(GD3), 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT), 키나제 삽입 도메인 수용체(KDR), Lewis A(CA 1.9.9), Lewis Y(LeY), 글리피칸-3(GPC3), L1세포 부착 분자(L1CAM), 뮤신16(Muc-16), 뮤신1(Muc-1), NG2D리간드, 암배아항원(h5T4), 전립선 줄기세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 막항원(PSMA), 종양 관련 당단백질72(TAG-72), 클라우딘18.2(CLDN18.2), 혈관 내피 성장 인자R2(VEGF-R2), 윌름즈종양 단백질(WT-1), 1형 티로신 단백질 키나제 막관통 수용체(ROR1) 및 임의의 조합으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항체.
  81. 제80항에 있어서, 상기 제2 항원은 면역 체크포인트 조절제인 것을 특징으로 하는 항체.
  82. 제81항에 있어서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 PD1, CTLA4, LAG-3, 2B4, BTLA 및 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항체.
  83. 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 치료제 또는 표지에 접합되는 것을 특징으로 하는 항체.
  84. 제83항에 있어서, 상기 표지는 방사성 동위원소, 형광 염료 및 효소로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항체.
  85. 치료제에 연결되는, 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역접합체.
  86. 제85항에 있어서, 상기 치료제는 세포독소인 것을 특징으로 하는 항체.
  87. 제85항에 있어서, 상기 치료제는 방사성 동위원소인 것을 특징으로 하는 항체.
  88. a) 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 제85항 중 제87항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체, 및 b) 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약물 조성물.
  89. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체를 코딩하는 것을 특징으로 하는 핵산.
  90. 제89항에 따른 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 벡터.
  91. 제89항에 따른 핵산 또는 제90항에 따른 벡터를 포함하는 것을 특징으로 하는 숙주 세포.
  92. 제91항에 따른 숙주 세포에서 상기 항체를 발현하고 상기 숙주 세포로부터 상기 항체를 단리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체를 제조하는 방법.
  93. 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체, 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체 또는 제88항에 따른 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 대상체의 종양 부하를 경감시키는 방법.
  94. 제93항에 있어서, 상기 방법은 종양 세포의 수를 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  95. 제93항 또는 제94항에 있어서, 상기 방법은 종양 크기를 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  96. 제93항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체의 종양을 근절시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  97. 제93항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양은 중피종, 폐암, 췌장암, 난소암, 유방암, 결장암, 흉막 종양, 겔화 형질세포종, 식도암, 위암, 활액 육종, 흉선암, 자궁내막암, 위종양, 담관암, 두경부암, 혈액암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  98. 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체, 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체 또는 제88항에 따른 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 신생물을 치료 및/또는 예방하는 방법.
  99. 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체, 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체 또는 제88항에 따른 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 신생물을 앓고 있는 대상체의 생존 기간을 연장하는 방법.
  100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 상기 신생물은 중피종, 폐암, 췌장암, 난소암, 유방암, 결장암, 흉막 종양, 겔화 형질세포종, 식도암, 위암, 활액 육종, 흉선암, 자궁내막암, 위종양, 담관암, 두경부암, 혈액암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  101. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 약물로서 사용되는 것을 특징으로 하는 항체.
  102. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 치료하기 위한 것을 특징으로 하는 항체.
  103. 제88항에 있어서, 약물로서 사용되는 것을 특징으로 하는 약물 조성물.
  104. 제88항에 있어서, 암을 치료하기 위한 것을 특징으로 하는 약물 조성물.
  105. 제102항에 따른 항체 또는 제104항에 따른 약물 조성물에 있어서, 상기 암은 중피종, 폐암, 췌장암, 난소암, 유방암, 결장암, 흉막 종양, 겔화 형질세포종, 식도암, 위암, 활액 육종, 흉선암, 자궁내막암, 위종양, 담관암, 두경부암, 혈액암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항체 또는 약물 조성물.
  106. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 따른 항체, 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 제88항에 따른 약물 조성물, 제89항에 따른 핵산, 제90항에 따른 벡터, 또는 제91항에 따른 숙주 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  107. 제106항에 있어서, 상기 키트는 신생물을 치료 및/또는 예방하기 위한 서면 지침을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
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