KR20220081457A - 고소애 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법 - Google Patents

고소애 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 동충하초에 가수분해효소를 처리하여 분해시키는 전처리 단계; 상기 전처리된 동충하초에 수용성 인산을 첨가하고 가열한 후 분리막을 이용하여 코디세핀 성분이 분리된 분리물을 얻는 분리 단계; 및 상기 분리물에 맥아 추출물을 처리한 후 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분이 정제된 정제물을 얻는 정제 단계;를 포함하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법에 관한 것으로, 동충하초로부터 높은 수율로 코디세핀을 추출할 수 있고, 비교적 단시간에 대량으로 추출이 가능한 코디세핀 추출방법을 제공하며, 코디세핀의 추출량을 더욱 높이기 위하여 코디세핀 자체의 함량이 증가된 고소애 동충하초를 재배하는 방법을 제공할 수 있다.

Description

고소애 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법 {Method for extracting cordycepine from Cordyceps cultivated as edible insects}
본 발명은 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로 고소애를 이용하여 배양된 동충하초로부터 코디세핀을 높은 수율로 대량 추출할 수 있는 방법에 관한 것이다.
여기서는, 본 개시에 관한 배경기술이 제공되며, 이들이 반드시 공지기술을 의미하는 것은 아니다.
동충하초는 자낭균강의 맥각균목 동충하초균에 속하는 소형의 버섯류로서 겨울에는 곤충에 기생하다가 여름에는 숙주가 되는 곤충의 시체에서 버섯을 형성한다고 해서 그 명칭이 유래되었다. 동충하초의 형성과정을 좀 더 자세히 살펴보면 동충하초균이 자낭포자나 분생포자를 형성하여 살아있는 곤충의 호흡기, 소화기, 관절 등 부드러운 부위체 부착 침입한 뒤, 곤충체내의 영양분을 섭취하면서 균사를 형성하여 곤충을 죽게 한 다음, 여름에 그 기주인 곤충의 양분을 이용하여 자실체를 형성하게 한다.
이러한 동충하초는 박쥐나방유충에서 기생하는 동충하초(cordyceps sinensis), 번데기 동충하초(cordyceps militalis), 풍뎅이 동충하초(cordyceps scarabaeiccola), 노린재 동충하초(cordyceps mutans), 벌 동충하초(cordyceps sphecocephala) 등이 있다.
이 중에서 고대로부터 그 약효가 인정되어 온 것은 박쥐나방 동충하초(cordyceps sinensis)이나 이 동충하초는 해발 4000m 이상의 설상 고지대에서만 채집되므로 인공재배가 곤란하다고 알려져 있다. 따라서 인공재배는 누에 또는 누에번데기를 기주로 한 번데기 동충하초(cordyceps militalis)와 눈꽃 동충하초(paecilomyces japonica)에 대해서만 그 연구가 이루어지고 있다.
지금까지 알려진 동충하초 재배방법은 동충하초가 곤충을 기주로 하여 자실체를 형성한다는 사실에 근거한 것으로 번데기 동충하초(cordyceps militalis)균과 눈꽃 동충하초(paecilomyces japonica)균을 누에 유충이나 누에 번데기에 접종하여 자실체를 생산하는 것에 관한 것이다.
그러나, 동충하초의 경우 버섯의 한 종류이기는 하지만 일반 버섯의 생육조건과 비슷한 조건하에서 발생하리라는 기대와는 달리 상당히 까다로운 생육조건에서 생산된다. 따라서 지금까지 알려진 기존의 기술로 동충하초를 재배하게 되면 동충하초를 수확할 수는 있지만, 그 수율과 성분이 의문시되고 대량생산이 어렵다는 데 큰 문제가 있다.
이러한 어려움으로 인하여 국내 동충하초는 대부분 곤충이 아닌 현미나 귀리 등 곡물류에 동충하초균을 접종시켜 대량생산하고 있으나 동충하초의 주요성분인 코디세핀 함량이 매우 의문시되고 있다.
한편, 동충하초는 수분 10.84%, 지방 8.4%(포화 지방산이 13%, 불포화 지방산이 82.2%), 조단백 25.3%, 탄수화물 28.9%, 코디세핀 7.6% 포함하는 것으로 알려져 있는데, 이 중 코디세핀(Cordycepin: 3'-deoxyadenosine)은 핵산 물질로서 세포의 유전정보에 관여하면서 저하된 면역기능을 활성화하여 정상세포가 암세포로 되는 것을 방지하는 작용을 한다.
식품안전처(KFDA)에 코디세핀은 면역기능 증진에 도움을 줄 수 있는 기능성 식품으로 지정되어 있다(2014). 항암작용으로 널리 알려져 있는 동충하초의 지표성분인 코디세핀(Cordycepin)은 천연 항생물질이면서 면역증강 물질로 알려져 있다. 코디세핀 성분을 분리 정제하는 방법으로는, 한국공개특허 제2001-0054264호에 동충하초로부터 분리 추출된 항암제용 코디세핀과 그 제조방법이 개시되어 있다.
본 발명은 코디세핀 성분을 고함량 함유하는 동충하초로부터 고순도의 코디세핀을 대량으로 추출하는 방법을 제공하고자 한다. 또한 식용 곤충인 고소애(갈색거저리 유충)에 번데기 동충하초균을 접종하여 자실체를 생산하되 원균과 재배조건을 정확히 조절하여 대량생산을 할 수 있고 재배된 동충하초의 취급을 용이하게 할 수 있는 동충하초의 재배방법을 제공하고자 한다.
그러나 본 발명의 목적들은 상기에 언급된 목적으로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 목적들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 동충하초에 가수분해효소를 처리하여 분해시키는 전처리 단계; 상기 전처리된 동충하초에 수용성 인산을 첨가하고 가열한 후 분리막을 이용하여 코디세핀 성분이 분리된 분리물을 얻는 분리 단계; 및 상기 분리물에 맥아 추출물을 처리한 후 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분이 정제된 정제물을 얻는 정제 단계;를 포함하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법을 제공한다.
또한 상기 전처리 단계는 상기 동충하초 100 중량부에 대하여 상기 가수분해효소를 5 내지 10 중량부 첨가하여 30 내지 40℃에서 1 내지 2시간 동안 처리하는 단계인 것을 특징으로 한다.
또한 상기 전처리 단계는 상기 가수분해효소로서 프로테아제(Protease), 리파아제(lipase) 및 카르보히드라아제(carbohydrase)를 2~3 : 2.5~3.5 : 1 비율로 혼합하여 사용하는 것을 특징으로 한다.
또한 상기 분리 단계는 상기 전처리 단계에서 얻어지는 전처리된 동충하초 100 중량부에 대하여 정제수 80 내지 120 중량부 및 수용성 인산 40 내지 50 중량부 첨가하고 70 내지 80℃로 20 내지 30분 동안 가열하여 얻어지는 용액을 15 내지 25℃로 냉각시킨 후 분리막을 통과시키는 단계인 것을 특징으로 한다.
또한 상기 정제 단계는 상기 분리물 100 중량부에 대하여 맥아 추출물 50 내지 60 중량부를 첨가하여 20 내지 30분간 진탕 교반한 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분을 정제하는 단계인 것을 특징으로 한다.
또한 상기 동충하초는 배양된 밀리타리스 동충하초 종균을 고소애 배지에 접종하고 재배하는 동충하초 재배방법으로 제조된 고소애 동충하초를 사용하는 것을 특징으로 한다.
또한 상기 동충하초 재배방법은 밀리타리스 동충하초(cordyceps militalis) 종균을 평판배지에 접종하는 접종단계; 평판배지에서 광 조사가 완료된 종균을 분리한 후 액체 배지에서 암배양 및 광배양하는 제1 배양단계; 및 액체배지에서 배양된 동충하초 종균을 고소애로 준비된 배지에 이식하고 배양실에서 배양하는 제2 배양단계;를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한 상기 제2 배양단계는 고소애 60 내지 80 중량부에 대하여 정제수 0 내지 5 중량부 투여하여 제작된 배지를 이용하는 단계인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 동충하초로부터 높은 수율로 코디세핀을 추출할 수 있고, 비교적 단시간에 대량으로 추출이 가능한 코디세핀 추출방법을 제공하며, 코디세핀의 추출량을 더욱 높이기 위하여 코디세핀 자체의 함량이 증가된 고소애 동충하초를 재배하는 방법을 제공한다.
도 1 내지 4는 본 발명의 실시예 및 비교예에 따라 재배된 동충하초의 이미지를 나타낸 것이다.
도 5 및 6은 본 발명의 실시예 및 비교예에 따라 재배된 동충하초의 코디세핀 함량 측정 시험 성적서를 나타낸 것이다.
본 명세서에 사용되는 모든 기술용어 및 과학용어는 다른 언급이 없는 한은 기술적으로 통상의 기술을 가진 자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 또한 본 명세서 및 청구범위의 전반에 걸쳐, 다른 언급이 없는 한 포함(comprise, comprises, comprising)이라는 용어는 언급된 물건, 단계 또는 일군의 물건, 및 단계를 포함하는 것을 의미하고, 임의의 어떤 다른 물건, 단계 또는 일군의 물건 또는 일군의 단계를 배제하는 의미로 사용된 것은 아니다.
이하에 본 발명을 상세하게 설명하기에 앞서, 본 명세서에 사용된 용어는 특정의 실시예를 기술하기 위한 것일 뿐 첨부하는 특허청구의 범위에 의해서만 한정되는 본 발명의 범위를 한정하려는 것은 아님을 이해하여야 한다.
한편, 본 발명의 여러 가지 실시예들은 명확한 반대의 지적이 없는 한 그 외의 어떤 다른 실시예들과 결합될 수 있다. 특히 바람직하거나 유리하다고 지시하는 어떤 특징도 바람직하거나 유리하다고 지시한 그 외의 어떤 특징 및 특징들과 결합될 수 있다. 이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예 및 이에 따른 효과를 설명하기로 한다.
본 발명의 일실시예에 따른 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법은 코디세핀은 크게, 이외의 성분은 작게 화학적 처리한 후 분리막을 이용한 물리적 분리방법으로서, 동충하초에 가수분해효소를 처리하여 분해시키는 전처리 단계; 상기 전처리된 동충하초에 수용성 인산을 첨가하고 가열한 후 분리막을 이용하여 코디세핀 성분이 분리된 분리물을 얻는 분리 단계; 및 상기 분리물에 맥아 추출물을 처리한 후 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분이 정제된 정제물을 얻는 정제 단계;를 포함한다.
상기 전처리 단계는 동충하초에 가수분해효소를 처리하여 분해물을 얻는 단계로서, 지방, 조단백, 탄수화물 성분을 분해하여 코디세핀이 분리되기 용이한 상태로 만드는 단계이다.
상기 동충하초는 고소애(갈색거저리 유충)에 번데기 동충하초(cordyceps militalis)균을 접종하여 배양한 동충하초의 자실체로서 코디세핀의 함량이 높은 것을 일 특징으로 한다. 구체적인 배양 방법은 후술한다.
상기 가수분해효소는 코디세핀 이외의 성분인 지방, 조단백, 탄수화물 성분을 분해하는 효소로서, 프로테아제(Protease), 리파아제(lipase) 및 카르보히드라아제(carbohydrase)로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 포함한다. 바람직하게는 프로테아제(Protease), 리파아제(lipase) 및 카르보히드라아제(carbohydrase)를 2~3 : 2.5~3.5 : 1 비율로 혼합하여 사용하는 것이 좋다.
상기 전처리 단계는 상기 동충하초 100 중량부에 대하여 상기 가수분해효소를 5 내지 10 중량부 첨가하여 30 내지 40℃에서 1 내지 2시간 동안 처리한다.
상기 분리 단계는 상기 전처리된 동충하초에 수용성 인산을 첨가하고 가열한 후 분리막을 이용하여 코디세핀 성분이 분리된 분리물을 얻는 단계로서, 코디세핀 성분을 인산과 에스테르 결합하여 인산화시킴으로써 고에너지의 화합물로 전환하는 단계이다.
상기 분리 단계는 상기 전처리된 동충하초 100 중량부에 대하여 정제수 80 내지 120 중량부 및 수용성 인산 40 내지 50 중량부 첨가하고 70 내지 80℃로 20 내지 30분 동안 가열하여 얻어지는 용액을 15 내지 25℃로 냉각시킨 후 분리막을 통과시키는 단계로서, 상기 분리막은 코디세핀을 분리할 수 있는 분리막이라면 제한없이 사용할 수 있다.
상기 정제 단계는 상기 분리 단계에서 얻어지는 코디세핀을 포함하는 분리물에 맥아 추출물을 처리한 후 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분이 정제된 정제물을 얻는 단계로서, 코디세핀을 탈인산화시키고 고순도로 정제하는 단계이다.
상기 정제 단계는 상기 코디세핀을 포함하는 분리물 100 중량부에 대하여 맥아 추출물 50 내지 60 중량부를 첨가하여 20 내지 30분간 진탕 교반한 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분을 정제한다. 크로마토그래피 시 용매는 에탄올을 사용한다.
한편, 본 발명은 고소애(갈색거저리 유충)에 번데기 동충하초(cordyceps militalis)균을 접종하여 자실체를 생산하되 원균과 재배조건을 정확히 조절하여 대량생산을 할 수 있고 재배된 동충하초의 취급을 용이하게 할 수 있는 동충하초의 재배방법을 제공한다.
고소애는 우리나라 식품의약안전처에서 식용원료로 인정한 식용 곤충으로서, 갈색 저거리 유충으로 단백질과 불포화지방산이 많아 영양 가치가 높다. 특히, 지방은 심혈관질환 예방에 효과가 있는 불포화지방산이 75%로 높은 비중을 차지한다. 무기질 중 인과 철이 풍부하고, 비타민 B₃와 B5를 많이 함유한다. 또한 간 기능 회복과 관련이 있는 아미노산인 알라닌(alanine)이 풍부하다.
종래 연구에 따르면 고소애는 당뇨, 비만 등 대사성 질환의 예방과 치료에 효과가 있으며, 간 보호와 발모 촉진에도 좋은 식품이다. 항염증 및 암 예방 효과도 갖고 있다. 고소애 추출물은 알츠하이머 치료, 기억력 증진제, 항산화 원료로 사용되고 있다.
상기 고소애 동충하초의 재배방법은 밀리타리스 동충하초(cordyceps militalis) 종균을 평판배지에 접종하는 접종단계; 평판배지에서 광 조사가 완료된 종균을 분리한 후 액체 배지에서 암배양 및 광배양하는 제1 배양단계; 및 액체배지에서 배양된 동충하초 종균을 고소애(갈색거저리 유충)로 준비된 배지에 이식하고 배양실에서 배양하는 제2 배양단계;를 포함한다.
상기 접종단계는 밀리타리스 동충하초(cordyceps militalis) 종균을 평판배지에 접종하는 단계로서, 동충하초 종균의 자실체를 형성하기 위한 준비단계이다. 이때 사용하는 평판배지는 통상 미생물이나 버섯 등을 배양할 때 사용하는 YM 배지로서 배지조성의 함량은 배지 1리터당 효모추출물(Yeast extract) 3g, 맥아추출물(Malt extract) 5g, 펩톤(Peptone) 5g, 덱스트로스(Dextrose) 10g으로 조성하여 밀리타리스 동충하초 (cordyceps militalis) 종균을 접종하고 광을 조사한다. 광의 조명도는 200 내지 300 lux로 하고 광 조사를 수행하기 이전에 4~5일동안 암배양을 선행하고 광을 조사하여 자실체의 발아효율을 향상시킨다.
상기 제1 배양단계는 평판배지에서 광 조사가 완료된 종균을 분리한 후 액체 배지에서 암배양 및 광배양하는 단계로서, 고소애에 대량 접종하기 위한 준비 단계이다. 상기 준비단계에서 YM 배지로 구성된 패트리디쉬에 밀리타리스 동충하초 (cordyceps militalis) 종균을 접종한 뒤, 25℃에서 4~5일동안 암배양 후 균사의 직경이 20ㅁ2㎜가 되었을 때 조명도 200 내지 300 lux의 광을 조사한 후 균사의 직경이 약 40ㅁ2㎜까지 성장하였을 때 종균을 분리한다. 그 다음 균질기(Homogenizer)를 이용해 4,500rpm에서 30초간 분쇄하여 액체배지에 접종한다. 액체배지는 유리 배양병에 물 20리터, 설탕 540g, 펩톤(Peptone) 40g, 맥아추출물(Malt extract) 40g, 식용유 5㏄를 넣은 뒤, 121℃에서 60분간 고압살균하고 냉각하여 준비한다. 분쇄한 밀리타리스 동충하초 종균을 무균조건에서 액체배지에 접종하고 72시간 동안 광 조사 및 통기배양을 하여 액체종균을 준비한다.
상기 제2 배양단계는 액체배지에서 배양된 동충하초 종균을 고소애(갈색거저리 유충)로 준비된 배지에 이식하고 배양실에서 배양하는 단계이다. 더욱 구체적으로 850㏄ 폴리프로필렌(PP) 병에 고소애를 60~80g, 정제수 0~5㏄를 투입하여 배지를 제작하고 상압살균 한다. 배지를 서서히 냉각시켜 25℃ 이하가 되었을 때, 준비된 액체종균을 접종하고 25℃에서 5일동안 암배양한 뒤 20℃에서 300 lux의 조건으로 40일 이상 재배하여 관찰한다.
고소애와 정제수의 함량을 달리함에 따른 재배효율(균사가 퍼지는 형태, 자실체의 길이, 생육일 등)을 관찰한 결과를 도 1 내지 4에 나타내었다. (정제수 0cc(도 1), 10cc(도 2), 20cc(도 3) 및 30cc(도 4)) 도 1 내지 4에 나타낸 것과 같이 동일조건에서 종균을 접종한 상태에서 재배효율은 정제수 5cc 이하(0㏄)의 조건으로 한 경우가 발아일수의 단축과 함께 발아개수를 증가시켜 전체적인 생산성을 향상시킬 수 있으며, 자실체의 길이와 상대중량이 우량한 동충하초를 재배할 수 있음을 확인할 수 있었다.
또한 도 5에 본 발명에 따라 재배된 고소애 동충하초의 코디세핀 함량 측정 시험 성적서를 나타내었다. 도 6은 비교예로서 귀리를 이용하여 재배된 동충하초의 코디세핀 함량 측정 시험 성적서를 나타내었다. 도 5 및 6에 나타난 것과 같이 귀리를 이용하여 재배된 동충하초의 코디세핀 함량은 546.35㎎/㎏ 데 반해, 본 발명에 따라 재배된 고소애 동충하초의 코디세핀 함량은 3,299.2㎎/㎏ 로서, 코디세핀 함량이 약 6배 높은 것을 확인할 수 있다.
본 발명에 따라 재배된 고소애 동충하초를 이용하여 하기 표 1의 조건에 따른 추출방법으로 추출된 코디세핀의 추출량 및 수율을 측정하여 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 대조군은 귀리를 이용하여 재배된 동충하초를 이용하여 실시예 1과 동일한 방법으로 코디세핀을 추출하였다. 수율은 상기 측정된 코디세핀 함량을 기준으로 계산하였다.
전처리 분리(분리막) 정제
실시예 1 P:L:C=2.5:3:1 수용성 인산 O / 가열 75℃ 맥아 추출물 O
실시예 2 P 100% 수용성 인산 O / 가열 75℃ 맥아 추출물 O
실시예 3 L 100% 수용성 인산 O / 가열 75℃ 맥아 추출물 O
실시예 4 C 100% 수용성 인산 O / 가열 75℃ 맥아 추출물 O
비교예 1 X 수용성 인산 O / 가열 75℃ 맥아 추출물 O
비교예 2 P:L:C=2.5:3:1 수용성 인산 X / 가열 X 맥아 추출물 O
비교예 3 P:L:C=2.5:3:1 수용성 인산 O / 가열 75℃ 맥아 추출물 X
코디세핀 추출량(㎎/㎏) 수율(%)
실시예 1 3002.3 91.0
실시예 2 2908.9 88.2
실시예 3 2847.1 86.3
실시예 4 2861.4 86.7
비교예 1 1358.7 41.2
비교예 2 2002.5 60.7
비교예 3 2504.4 75.9
대조군 490.7 89.8
상기 표 2에 나타나는 것과 같이 본 발명에 따른 추출방법으로 코디세핀을 추출한 경우 수율이 85% 이상이며, 특히 전처리 단계에서 프로테아제(Protease), 리파아제(lipase) 및 카르보히드라아제(carbohydrase)를 2~3 : 2.5~3.5 : 1 비율로 혼합하여 사용한 실시예 1에 따라 코디세핀을 추출한 경우 수율이 90% 이상으로 가장 우수한 것을 확인할 수 있다.
전술한 각 실시예에서 예시된 특징, 구조, 효과 등은 실시예들이 속하는 분야의 통상의 지식을 가지는 자에 의하여 다른 실시예들에 대해서도 조합 또는 변형되어 실시 가능하다. 따라서 이러한 조합과 변형에 관계된 내용들은 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (8)

  1. 동충하초에 가수분해효소를 처리하여 분해시키는 전처리 단계;
    상기 전처리된 동충하초에 수용성 인산을 첨가하고 가열한 후 분리막을 이용하여 코디세핀 성분이 분리된 분리물을 얻는 분리 단계; 및
    상기 분리물에 맥아 추출물을 처리한 후 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분이 정제된 정제물을 얻는 정제 단계;를 포함하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 전처리 단계는 상기 동충하초 100 중량부에 대하여 상기 가수분해효소를 5 내지 10 중량부 첨가하여 30 내지 40℃에서 1 내지 2시간 동안 처리하는 단계인 것을 특징으로 하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 전처리 단계는 상기 가수분해효소로서 프로테아제(Protease), 리파아제(lipase) 및 카르보히드라아제(carbohydrase)를 2~3 : 2.5~3.5 : 1 비율로 혼합하여 사용하는 것을 특징으로 하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 분리 단계는 상기 전처리 단계에서 얻어지는 전처리된 동충하초 100 중량부에 대하여 정제수 80 내지 120 중량부 및 수용성 인산 40 내지 50 중량부 첨가하고 70 내지 80℃로 20 내지 30분 동안 가열하여 얻어지는 용액을 15 내지 25℃로 냉각시킨 후 분리막을 통과시키는 단계인 것을 특징으로 하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 정제 단계는 상기 분리물 100 중량부에 대하여 맥아 추출물 50 내지 60 중량부를 첨가하여 20 내지 30분간 진탕 교반한 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 코디세핀 성분을 정제하는 단계인 것을 특징으로 하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 동충하초는 밀리타리스 동충하초 종균을 고소애 배지에 접종하고 재배하는 동충하초 재배방법으로 제조된 고소애 동충하초를 사용하는 것을 특징으로 하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 동충하초 재배방법은 밀리타리스 동충하초(cordyceps militalis) 종균을 평판배지에 접종하고 광을 조사하는 접종단계; 평판배지에서 광 조사가 완료된 종균을 분리한 후 액체 배지에서 암배양 및 광배양하는 제1 배양단계; 및 액체배지에서 배양된 동충하초 종균을 고소애로 준비된 배지에 이식하고 배양실에서 배양하는 제2 배양단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 제2 배양단계는 고소애 60 내지 80 중량부에 대하여 정제수 0 내지 5 중량부 투여하여 제작된 배지를 이용하는 단계인 것을 특징으로 하는 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법.

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2024117733A1 (ko) * 2022-11-28 2024-06-06 주식회사 바이오로지텍 고함량의 콜라겐 및 코디세핀을 함유하는 동충하초의 재배 방법 및 고순도의 콜라겐 및 코디세핀 추출 방법

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