KR101223464B1 - 비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물 - Google Patents

비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 비타민나무 분말을 포함한 배지에서 버섯을 배양하여 비타민나무의 유용한 성분을 함유하는 버섯의 배양기간을 단축하고 비용을 절감할 수 있는 효과가 있다. 이를 위해 평판배지에 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 조정한 다음 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S110,S210,S310,S410); 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S120,S220,S320,S420); MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 조정한 다음 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130,S230,S330,S430); MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 조정한 다음 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140,S240,S340,S440); 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 조정한 다음 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150,S250,S350,S450);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물이 개시된다.

Description

비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물{Method of culturing mushroom using Hippophae rhamniodes and culture material of culturing thereof}
본 발명은 비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 노루궁뎅이 버섯, 영지 버섯, 상황 버섯 및 동충하초의 종균을 평판배지에서 배양하여 균사체를 수득하고, 수득된 균사체를 액체배양하여 제 1차 접종원 및 제 2차 접종원을 수득한 후, 마지막으로 비타민나무 분말이 포함되어 있는 배지에서 배양하는 비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물에 관한 것이다.
노루궁뎅이 버섯은 일반적으로 졸참나무나 떡갈나무에 자생하는 버섯으로 학명으로는 Hericium erinaceum으로 알려져 있으며, 민주름 버섯목(Aphyophorales), 턱수염 버섯과(Hydnaecase), 산호침 버섯속(Hericiaceae)에 속한다. 최근 노루궁뎅이 버섯은 사람의 면역기능을 활성화시키는 헤테로 β-D-글루칸을 100g 당 34.4g 정도 다량 함유하고 항암효과가 뛰어나며 치매예방을 할 수 있다고 알려져 있다. 또한, 헬라셀(hella cell) 증식저해물질, 신경성장인자(nerve growth factor) 합성유도촉진 물질, 면역기능조절 성분, 항종양 다당류, 렉틴(Lectin), 식이섬유(β-glucan, chitin질, hetero 다당)등의 약리활성 성분이 있으며, 이들에 대응하는 각종의 생리활성이 보고되고 있다.
영지버섯은 대부분 활엽수에 기생하며, 일부는 침엽수에서 발생한다. 영지버섯의 재배종은 가노더마 루시덤(Ganoderma lucidum), G. 트수가(tsugae)이다. 영지버섯은 한방에서 강장, 진해 및 소종(消腫)등의 효능이 있어 신경쇠약, 심장병, 고혈압 등의 각종 질환에 사용되고 있다. 영지버섯의 재배방법은 크게 원목재배와 병재배로 나누어진다. 원목재배는 원목을 짧게 절단하여 단목 사이에 종균을 접종하여 3∼4개월 배양시킨 후 당년부터 1년 2회 정도 버섯을 발생시키는 방법이다. 병재배는 톱밥을 이용한 방법으로 참나무를 주된 재료로 사용하며, 기계화 재배 및 연중재배가 가능한 방법이다.
상황버섯은 민주름버섯목(Aphylloporales), 소나무비늘버섯과(Hymenochaeta ceae), 진흙버섯속(Phellinus)에 속하며, 학술명은 목질진흙버섯(Phellinuslinteu s)이다. 상황버섯은 동북아시아에 주로 분포하고 있으며, 한국에서도 야생은 그리 흔하지 않아 강원도 일부 지역에서 야생하고 있고, 주로 뽕나무와 활엽수의 줄기에 자생한다. 상황버섯은 소화기계통의 질환인 위암, 식도암, 십이지장암, 결장암 및 직장암에 탁월한 효능을 가지며, 면역기능을 항진시키는 것으로 알려져 있다. 상황버섯 재배방법은 원목재배방법이 일반적이나, 균사체를 액체 배양하는 방법 및 배지들이 개발되고 있다. 그 중 대한민국 공개특허 제2001-113057호에서는 상황버섯 균사체의 유가식 배양방법인 배양중에 간헐적 또는 지속적으로 글루코스 또는 글루코스와 효모추출물을 공급하는 방법을 개시하고 있다.
동충하초는 겨울에는 곤충의 몸에 있다가 여름에는 풀처럼 나오는 모습에서 연유되어 명명된 일종의 버섯이다. 이렇게 곤충에 침입하여 이를 기주로 충체 위에 자실체를 형성하는 동충하초 중 일부 종들은 고대로부터 중국에서 불로장생의 비약으로 결핵, 천식, 황달의 치료 및 아편중독의 해독제, 병후의 보양 및 강장제,면역 기능 강화제로서 이용되어 온 고가의 한방약재이다. 현재 박쥐나방의 유충을 기주로 자실체를 형성하는 약 7종의 중국산 동충하초가 현재 약용으로 이용되고 있다. 이런 동충하초는 주로 결핵, 황달의 치료와 강장제로서 이용되어 왔고, 아편 중독제로서도 효과가 인정되었으며 자실체의 주성분이기도 한 퀸산(quinic acid)의 이성체(異性體)인 코디세핀(cordycepin)이 항암작용이 있는 것으로 밝혀졌다. 그리고 자실체는 중국의 궁중요리로도 중요시되고 있으며, 일본에서도 동충하초가 약용으로 사용되었다.
비타민나무(hippophae rhamnoides, Sea buckthorn)는 보리수과의 작은 키 낙엽관목으로, 사극 나무, 가는 버드나무, 까만 가시나무, 갈매 보리수나무, 보리수 아재비 등으로도 불린다. 중국, 러시아, 몽골지역이 자생지로서 척박하거나 염기가 있거나 습도가 높은 지역, 극도의 저온지대와 같이 열악한 환경에서도 생장할 수 있고, 추위나 더위에도 강해 다양한 지역에서 재배될 수 있다. 중국에서는 산지 복원식물로 이용되고 있다. 비타민나무는 비타민 C 함량이 사과보다 200배 이상 많아 '비타민의 보고'로 알려져 있고, 그 밖에도 탄닌, 각종 비타민과 18종의 아미노산을 함유하고 있다. 특히, 비타민나무의 잎은 탄닌 함량이 높고, 항산화 효과가 우수한 티에로사이드 등 플라보노이드 계열의 화합물을 다량 함유하고 있으며, 비타민 C, 지방, 섬유질, 아미노산, 미네랄 등이 풍부하다고 알려져 있다. 최근 국내에서는 비타민나무를 고랭지 대체 소득작목으로 육성하고자 재배기술 등을 개발하고 있으며, 이와 함께 비타민나무의 잎, 줄기, 열매를 이용한 가공식품개발에 관심을 기울이고 있다.
그러나, 아직까지 비타민나무는 국내에서는 생소한 작목에 해당하고, 비타민나무를 이용한 식품도 거의 찾아보기 어려운 실정이다.
따라서, 비타민나무 분말을 포함한 배지에서 버섯을 액체배양하여 비타민나무의 유용한 성분을 함유하는 버섯의 배양방법에 대한 필요성이 대두된다.
또한, 버섯 배양물을 산업화하는 과정에서 비타민나무의 유용한 성분을 함유한 버섯을 최적의 조건하에서 액체배양하여 배양기간을 단축하고 비용을 절감할 수 있는 버섯의 배양방법에 대한 필요성이 대두된다.
본 발명은 상기와 같은 필요에 의해 창출된 것으로서, 본 발명의 제 1목적은 비타민나무 분말을 포함한 배지에서 버섯을 배양하여 비타민나무의 유용한 성분을 함유하는 비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물을 제공하는 것이다.
또한, 제 2목적은 버섯 배양물을 산업화하는 과정에서 버섯의 배양기간을 단축할 수 있는 비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물을 제공하는 것이다.
그리고, 제 3목적은 비타민나무의 유용한 성분을 함유한 버섯을 액체배양함으로써 배양기간을 단축하여 비용을 절감할 수 있는 효과가 있다.
상기와 같은 본 발명의 목적은 평판배지에 노루궁뎅이 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S110); 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S120); MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 7 내지 12일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130); MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 5일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140); 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 배양하는 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 배양방법을 제공함으로써 달성될 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지에 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서 수득된 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지는 PH가 5.0 내지 6.0이고, 진탕속도는 100 내지 140rpm인 것을 특징으로 할 수 있다.
그리고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 할 수 있다.
한편, 본 발명의 목적은 다른 카테고리로서 상기의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯 배양물을 제공함으로써 달성될 수 있다.
상기와 같은 본 발명의 목적은 평판배지에 영지 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S210); 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S220); MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 5 내지 9일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230); MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240); 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 배양하는 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 배양방법을 제공함으로써 달성될 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서 MCM 배지에 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서 수득된 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서, MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서 MCM 배지는 PH가 3.0 내지 6.0이고, 진탕속도는 100 내지 160rpm인 것을 특징으로 할 수 있다.
그리고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 할 수 있다.
한편, 본 발명의 목적은 다른 카테고리로서 상기의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 영지 버섯 배양물을 제공함으로써 달성될 수 있다.
상기와 같은 본 발명의 목적은 평판배지에 상황 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S310); 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S320); MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 7 내지 12일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330); MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340); 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 배양하는 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 배양방법을 제공함으로써 달성될 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서 MCM 배지에 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서 수득된 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서 MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서 MCM 배지는 PH가 4.0 내지 10.0이고, 진탕속도는 100 내지 250rpm인 것을 특징으로 할 수 있다.
그리고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 할 수 있다.
한편 본 발명의 목적은 다른 카테고리로서 상기의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 상황 버섯 배양물을 제공함으로써 달성될 수 있다.
상기와 같은 본 발명의 목적은 평판배지에 동충하초 종균을 접종하여 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S410); 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S420); MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 3 내지 7일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S430); MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 1일 내지 5일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440); 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 상기 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 배양하는 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 동충하초의 배양방법을 제공함으로써 달성될 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S430)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서 MCM 배지에 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서 수득된 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서 MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S430), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서 MCM 배지는 PH가 4.0 내지 8.0이고, 진탕속도는 100 내지 140rpm인 것을 특징으로 할 수 있다.
그리고, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 할 수 있다.
한편, 본 발명의 목적은 다른 카테고리로서 상기의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 동충하초 배양물을 제공함으로써 달성될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 비타민나무 분말을 포함한 배지에서 버섯을 배양하여 비타민나무의 유용한 성분을 함유하는 버섯을 배양할 수 있는 효과가 있다.
또한, 버섯 배양물을 산업화하는 과정에서 비타민나무의 유용한 성분을 함유한 버섯의 배양기간을 단축할 수 있는 효과가 있다.
그리고, 배양기간의 단축으로 인하여 비용을 절감할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 제 1실시예에 따라 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도,
도 2는 본 발명의 제 1실시예에 따라 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도,
도 3은 본 발명의 제 1실시예에 따라 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도,
도 4는 본 발명의 제 1실시예에 따라 비타민나무를 이용한 동충하초의 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도이다.
버섯의 배양방법은 배양온도, 배지의 PH, 진탕속도 및 배양기간에 따라 균사체 수율에 영향을 받는다. 버섯 배양방법 중 최적의 액체배양조건은 "버섯 배양물을 포함하는 배지 및 상기 배지를 이용한 버섯재배방법(등록특허 10-0523263)"에 상세히 기술되어 있다. 따라서, 본 발명에서의 배양온도, MCM 배지의 PH, 진탕속도 및 배양기간은 배양물을 최대로 수득하기 위한 범위이다.
표 1은 대표적인 버섯 배지의 종류별 성분표를 나타낸 것이다. 일반적으로 버섯은 질소원과 무기질원이 풍부한 배지에서 활발한 생육을 보이는 바, MCM 배지 또는 YMPG 배지에서 배양할 수 있다. 본 발명에서는 노루궁뎅이 버섯, 영지버섯, 상황버섯 및 동충하초의 제 1차 접종원을 수득하는 각 단계(S130,S230,S330,S430), 제 2차 접종원을 수득하는 각 단계(S140,S240,S340,S440) 및 제 2차 접종원을 배양하는 각 단계(S150,S250,S350,S450)에서의 배지로 MCM 배지를 사용하는 것이 바람직하다. 표 1에 나타난 바와 같이 MCM 배지는 K2HPO4 1.0 g/L, KH2PO4 0.46 g/L, MgSO4·7H2O 0.5 g/L, 글루코스 20.0 g/L, 펩톤 2.0 g/L, 효모 추출물 2.0 g/L, 한천 20.0 g/L으로 구성되어 있다.
영양원 배지종류(g/L)
MCM MYPA PDA ME YM YMPG YMG PYG GP GPY
감자 250.0
K2HO4 1.0 10
KH2PO4 0.46 2.0
MgSO4·7H2O 0.5 1.0 0.7 0.5
FeSO4·7H2O
글루코스 20.0 20.0 10.0 10.0 4.0 14 30 20
티아민-HCL 1.0-3
DL-아스파라진 1.0
펩톤 2.0 1.0 5.0 5.0 2.0 1.25 3 2
말트 추출물 30.0 20.0 3.0 10.0 10.0
효모 추출물 2.0 2.0 3.0 2.0 4.0 1.25 2
한천 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0
또한, 노루궁뎅이 버섯, 영지 버섯, 상황 버섯 및 동충하초의 제 2차 접종원의 수득하는 각 단계(S140,S240,S340,S440)에서의 MCM 배지의 부피와 접종되는 제 1차 접종원의 부피 비율을 한정하는 이유는 그 한정된 범위내에서 균사체의 생육이 가장 활발하기 때문이다. 즉, 한정범위를 벗어난 경우에는 균사체의 생육이 저하된다. 그리고, 제 2차 접종원을 배양하는 각 단계(S150,S250,S350,S450)에서의 MCM 배지의 부피와 접종되는 제 2차 접종원의 부피 비율을 한정하는 이유도 그 한정된 범위내에서 균사체의 생육이 가장 활발하기 때문이며, 그 범위를 벗어난 경우에는 균사체의 생육이 저하된다.
한편, 이하의 비타민나무을 이용한 버섯의 배양방법은 일실시예에 불과하며 이하의 기술된 배양방법에 한정되는 것은 아니다.
< 노루궁뎅이 버섯의 배양방법>
도 1은 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 액체 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도이다. 이하, 도 1을 참조하여 노루궁뎅이 버섯의 액체 배양방법을 상세히 설명한다.
우선, 평판배지에 노루궁뎅이 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득한다(S110). 여기서 평판배지는 PDA 평판배지인 것이 바람직하며, 배양온도는 23℃ 내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하다. 또한, 배양일수는 13일 내지 17일간 배양할 수 있으나 15일간 배양하는 것이 바람직하다.
다음으로, 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조한다(S120). 이때 균사체 디스크는 코르크볼러로 절취할 수 있으며, 코르크 볼러의 직경은 4mm 내지 8mm일 수 있으나 8mm인 것이 바람직하다. 제조되는 균사체 디스크는 적어도 2개일 수 있다.
다음으로, MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 7 내지 12일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득한다(S130). 여기서 접종되는 균사체 디스크는 적어도 2개이며 8개인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 23℃내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 140rpm으로 할 수 있으나 140rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 7일 내지 12일간 배양할 수 있으나 10일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한, 수득된 제 1차 접종원은 제 2차 접종원으로 배양하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
다음으로 MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 5일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득한다(S140). 여기서 배양온도는 23℃ 내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 140rpm으로 할 수 있으나 140rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 5일 내지 7일간 배양할 수 있으나 5일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 그리고 제 2차 접종원은 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 접종하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
마지막으로 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 진탕배양한다(S150). 여기서 MCM 배지에 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서 수득된 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 또한 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 23℃ 내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하다. 진탕속도는 100rpm 내지 140rpm으로 할 수 있으나 140rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 8일 내지 10일간 배양할 수 있으나 8일간 배양하는 것이 바람직하다. 한편 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것이 바람직하다.
한편, 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 액체배양을 위한 제1차 접종원을 수득하는 단계(S130), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지의 PH는 5.0 내지 6.0인 것이 바람직하다.
<영지 버섯의 배양방법>
도 2는 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 액체 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도이다. 이하, 도 2를 참조하여 영지 버섯의 액체 배양방법을 상세히 설명한다.
우선, 평판배지에 영지 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 배양하여 균사체를 수득한다(S210). 여기서 평판배지는 PDA 평판배지인 것이 바람직하며, 배양온도는 28℃ 내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하다. 또한, 배양일수는 3일 내지 7일간 배양할 수 있으나 5일간 배양하는 것이 바람직하다.
다음으로, 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조한다(S220). 이때 균사체 디스크는 코르크볼러로 절취할 수 있으며, 코르크 볼러의 직경은 4mm 내지 8mm일 수 있으나 8mm인 것이 바람직하다. 제조되는 균사체 디스크는 적어도 2개일 수 있다.
다음으로, MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 5 내지 9일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득한다(S230). 여기서 접종되는 균사체 디스크는 적어도 2개이며 8개인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 28℃ 내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 160rpm으로 할 수 있으나 100rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 5일 내지 9일간 배양할 수 있으나 7일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한, 수득된 제 1차 접종원은 제 2차 접종원으로 배양하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
다음으로 MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득한다(S240). 여기서 배양온도는 28℃ 내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 160rpm으로 할 수 있으나 100rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 3일 내지 7일간 배양할 수 있으나 5일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 그리고 제 2차 접종원은 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 접종하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
마지막으로 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 진탕배양한다(S250). 여기서 MCM 배지에 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서 수득된 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 또한 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서 MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 28℃ 내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하다. 진탕속도는 100rpm 내지 160rpm으로 할 수 있으나 100rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 8일 내지 10일간 배양할 수 있으나 8일간 배양하는 것이 바람직하다. 한편, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것이 바람직하다.
한편, 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 액체배양을 위한 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서 MCM 배지의 PH는 3.0 내지 6.0인 것이 바람직하다.
<상황 버섯의 배양방법>
도 3은 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 액체 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도이다. 이하, 도 3을 참조하여 상황 버섯의 액체 배양방법을 상세히 설명한다.
우선, 평판배지에 상황 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득한다(S310). 여기서 평판배지는 PDA 평판배지인 것이 바람직하며, 배양온도는 28℃ 내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하다. 또한, 배양일수는 13일 내지 17일간 배양할 수 있으나 15일간 배양하는 것이 바람직하다.
다음으로 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조한다(S320). 이때 균사체 디스크는 코르크볼러로 절취할 수 있으며, 코르크 볼러의 직경은 4mm 내지 8mm일 수 있으나 8mm인 것이 바람직하다. 제조되는 균사체 디스크는 적어도 2개일 수 있다.
다음으로 MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 7 내지 12일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득한다(S330). 여기서 접종되는 균사체 디스크는 적어도 2개이며 8개인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 28℃내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 250rpm으로 할 수 있으나 100rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 7일 내지 12일간 배양할 수 있으나 10일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한, 수득된 제 1차 접종원은 제 2차 접종원으로 배양하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
다음으로 MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득한다(S340). 여기서 배양온도는 28℃ 내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 250rpm으로 할 수 있으나 100rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 3일 내지 7일간 배양할 수 있으나 5일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 그리고 제 2차 접종원은 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 접종하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
다음으로 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 진탕배양한다(S350). 여기서 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 또한 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서 MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 28℃ 내지 32℃일 수 있으나 30℃인 것이 바람직하다. 진탕속도는 100rpm 내지 250rpm으로 할 수 있으나 100rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 8일 내지 10일간 배양할 수 있으나 8일간 배양하는 것이 바람직하다. 한편, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것이 바람직하다.
한편, 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 액체배양을 위한 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서 MCM 배지의 PH는 4.0 내지 10.0인 것이 바람직하다.
<동충하초의 배양방법>
도 4는 비타민나무를 이용한 동충하초의 액체 배양방법을 순차적으로 나타낸 순서도이다. 이하, 도 4를 참조하여 동충하초의 액체 배양방법을 상세히 설명한다.
우선, 평판배지에 노루궁뎅이 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득한다(S410). 여기서 평판배지는 PDA 평판배지인 것이 바람직하며, 배양온도는 23℃ 내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하다. 또한, 배양일수는 13일 내지 17일간 배양할 수 있으나 15일간 배양하는 것이 바람직하다.
다음으로 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조한다(S420). 이때 균사체 디스크는 코르크볼러로 절취할 수 있으며, 코르크 볼러의 직경은 4mm 내지 8mm일 수 있으나 8mm인 것이 바람직하다. 제조되는 균사체 디스크는 적어도 2개일 수 있다.
다음으로 MCM 배지에 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 3 내지 7일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득한다(S430). 여기서 접종되는 균사체 디스크는 적어도 2개이며 8개인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 23℃내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 140rpm으로 할 수 있으나 120rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 3일 내지 7일간 배양할 수 있으나 5일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한, 수득된 제 1차 접종원은 제 2차 접종원으로 배양하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
다음으로 MCM 배지에 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 1일 내지 5일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득한다(S440). 여기서 배양온도는 23℃ 내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하며, 진탕속도는 100rpm 내지 140rpm으로 할 수 있으나 120rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 1일 내지 5일간 배양할 수 있으나 3일간 배양하는 것이 바람직하다. 또한 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제1차 접종원을 수득하는 단계(S430)에서 수득된 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서 MCM 배지와 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 그리고 제 2차 접종원은 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 접종하기 전에 균질화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
마지막으로 비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 진탕배양한다(S450). 여기서 MCM 배지에 접종되는 제 1차 접종원의 부피는 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서 수득된 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%일 수 있으나 10부피%인 것이 바람직하다. 또한 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서 MCM 배지와 접종되는 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것이 바람직하다. 또한, 배양온도는 23℃ 내지 26℃일 수 있으나 25℃인 것이 바람직하다. 진탕속도는 100rpm 내지 140rpm으로 할 수 있으나 120rpm인 것이 바람직하다. 또한 배양일수는 8일 내지 10일간 배양할 수 있으나 8일간 배양하는 것이 바람직하다. 한편, 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서 MCM 배지와 비타민나무 분말 사이의 비율이 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것이 바람직하다.
한편, 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 액체배양을 위한 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S430), 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440) 및 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서 MCM 배지의 PH는 4.0 내지 8.0인 것이 바람직하다.
<배양물>
담자균류에 속하는 버섯(mushroom)은 각종 유기물을 분해하여 성장하는 중요한 식품 자원이면서 약용식물이다. 버섯은 그 종류에 따라 맛과 향이 독특하며 단백질, 비타민, 및 기타 무기영양소를 많이 함유하고 있다. 특히 최근 연구에 의하면 버섯류에 함유되어 있는 다당류인 글루칸(glucan)유도체들에 의한 항암 및 항바이러스 효과 등이 보고되어 건강식품으로 전세계적인 각광을 받고 있다. 최근 버섯에 존재하는 식이성분이 특정 암에 대하여 항암성을 나타내는 것으로 확인되고 있으며, 동물에 버섯을 식이하였을 때 암형성이 현저히 감소됨이 보고되었다. 이러한 항암 활성을 가지는 버섯유래 저해인자들의 기작중의 하나는 간에서의 사이크롬 P450-의존적 모노옥시게나제(cytochrome P450-dependent monooxygenase: CYP450) 활성을 저해하여 발암성 전구체 물질이 발암성 물질로 전이되는 것을 감소시키는데 관여하는 것이다.
동충하초는 주로 결핵, 황달의 치료와 강장제로서 이용되어 왔고, 아편 중독제로서도 효과가 인정되었으며 자실체의 주성분이기도 한 퀸산(quinic acid)의 이성체(異性體)인 코디세핀(cordycepin)이 항암작용이 있는 것으로 밝혀졌다. 자실체는 중국의 궁중요리로도 중요시되고 있으며, 일본에서도 동충하초가 약용으로 사용되었다.
비타민나무는 탄닌, 각종 비타민과 18종의 아미노산을 함유하고 있다. 특 히, 비타민나무의 잎은 탄닌 함량이 높고, 항산화 효과가 우수한 티에로사이드 등 플라보노이드 계열의 화합물을 다량 함유하고 있으며, 비타민 C, 지방, 섬유질, 아미노산, 미네랄 등이 풍부하다고 알려져 있다
상기의 방법으로 배양된 노루궁뎅이 버섯, 영지 버섯, 상황 버섯 및 동충하초의 배양물은 비타민나무에 함유되어 있는 유용한 성분들 뿐만 아니라 버섯 자체에 함유되어 있는 생리활성 물질들도 함께 포함되어 있다. 따라서 상기의 방법으로 배양된 배양물은 건강보조식품이나 음료를 만드는 원료로써 사용될 수 있다. 여기서 건강보조식품이나 음료를 만들 때의 버섯 추출물은 버섯 균사체 또는 자실체에 증류수, 알콜, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 클로로포름으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 용매를 가하여 열 또는 상온 추출하는 방법으로 제조할 수 있다. 그러나 버섯 추출물 제조방법은 추출하고자 하는 유효성분에 따라 적절한 방법을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알콜은 바람직하게는 에탄올, 메탄올, 부탄올 또는 이소프로판올이다.
< 실험예 1>
(1) PDA 평판배지에 노루궁뎅이 버섯 종균을 접종하여 25℃에서 15일간 배양한다.
(2) (1)에서 배양된 균사체를 지름이 8mm인 코르크볼러로 절취하여 8개의 균사체 디스크를 만든다.
(3) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 8개의 균사체 디스크를 넣어 25℃에서 10일간 배양하여 제 1차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(4) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 (3)에서 수득된 제 1차 접종원 10㎖를 취해서 넣고 25℃에서 5일간 배양하여 제 2차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(5) 5개의 250㎖ 삼각플라스크 각각에 MCM 배지 100㎖, (4)에서 수득된 제 2차 접종원 10㎖ 및 비타민나무 분말 5g을 넣은 후 PH를 0.1N Hcl 과 0.1N Nacl로 적정하여 5.5로 만든 다음 25℃에서 8일간 진탕배양한다.
실험예 1의 방법으로 배양된 노루궁뎅이 버섯 배양물을 80%의 에탄올로 50g 추출하여 건조시켰을 때의 중량은 4.1g이었다. 따라서 실험예 1의 노루궁뎅이 버섯 추출물의 수율은 8.2%로 나타났다.
< 실험예 2>
(1) PDA 평판배지에 영지 버섯 종균을 접종하여 30℃에서 5일간 배양한다.
(2) (1)에서 배양된 균사체를 지름이 8mm인 코르크볼러로 절취하여 8개의 균사체 디스크를 만든다.
(3) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 8개의 균사체 디스크를 넣어 30℃에서 7일간 배양하여 제 1차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(4) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 (3)에서 수득된 제 1차 접종원 10㎖를 취해서 넣고 30℃에서 5일간 배양하여 제 2차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(5) 5개의 250㎖ 삼각플라스크 각각에 MCM 배지 100㎖, (4)에서 수득된 제 2차 접종원 10㎖ 및 비타민나무 분말 5g을 넣은 후 PH를 0.1N Hcl 과 0.1N Nacl로 적정하여 4.0으로 만든 다음 30℃에서 8일간 진탕배양한다.
실험예 2의 방법으로 배양된 영지 버섯 배양물을 80%의 에탄올로 50g 추출하여 건조시켰을 때의 중량은 5.2g이었다. 따라서 실험예 2의 영지 버섯 추출물의 수율은 10.4를 %로 나타났다.
< 실험예 3>
(1) PDA 평판배지에 상황 버섯 종균을 접종하여 30℃에서 15일간 배양한다.
(2) (1)에서 배양된 균사체를 지름이 8mm인 코르크볼러로 절취하여 8개의 균사체 디스크를 만든다.
(3) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 8개의 균사체 디스크를 넣어 30℃에서 10일간 배양하여 제 1차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(4) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 (3)에서 수득된 제 1차 접종원 10㎖를 취해서 넣고 30℃에서 5일간 배양하여 제 2차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(5) 5개의 250㎖ 삼각플라스크 각각에 MCM 배지 100㎖, (4)에서 수득된 제 2차 접종원 10㎖ 및 비타민나무 분말 5g을 넣은 후 PH를 0.1N Hcl 과 0.1N Nacl로 적정하여 6.0으로 만든 다음 30℃에서 8일간 진탕배양한다.
실험예 3의 방법으로 배양된 상황 버섯 배양물을 80%의 에탄올로 50g 추출하여 건조시켰을 때의 중량은 4.6g이었다. 따라서 실험예 3의 상황 버섯 추출물의 수율은 9.2%로 나타났다.
< 실험예 4>
(1) PDA 평판배지에 동충하초 종균을 접종하여 25℃에서 15일간 배양한다.
(2) (1)에서 배양된 균사체를 지름이 8mm인 코르크볼러로 절취하여 8개의 균사체 디스크를 만든다.
(3) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 8개의 균사체 디스크를 넣어 25℃에서 5일간 배양하여 제 1차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(4) 250㎖ 삼각플라스크에 MCM 배지 100㎖와 (3)에서 수득된 제 1차 접종원 10㎖를 취해서 넣고 25℃에서 3일간 배양하여 제 2차 접종원을 수득한 후 균질화시킨다.
(5) 5개의 250㎖ 삼각플라스크 각각에 MCM 배지 100㎖, (4)에서 수득된 제 2차 접종원 10㎖ 및 비타민나무 분말 5g을 넣은 후 PH를 0.1N Hcl 과 0.1N Nacl로 적정하여 6.0로 만든 다음 25℃에서 8일간 진탕배양한다.
실험예 4의 방법으로 배양된 동충하초 배양물을 80%의 에탄올로 50g 추출하여 건조시켰을 때의 중량은 4.4g이었다. 따라서 실험예 4의 동충하초 추출물의 수율은 8.8%로 나타났다.

Claims (24)

  1. 평판배지에 노루궁뎅이 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S110);
    상기 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S120);
    MCM 배지에 상기 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 7 내지 12일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130);
    MCM 배지에 상기 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 5일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140);
    비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 상기 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 진탕배양하는 단계(S150);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 배양방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130)에서 수득된 상기 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서 수득된 상기 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 배양방법.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 배양방법.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S130), 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S140) 및 상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서,
    상기 MCM 배지는 PH가 5.0 내지 6.0이고, 진탕속도는 100 내지 140rpm인 것을 특징으로 하는 비타민 나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 배양방법.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S150)에서,
    상기 MCM 배지와 상기 비타민나무 분말 사이의 비율이 상기 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 상기 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯의 배양방법.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 하나의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 노루궁뎅이 버섯 배양물.
  7. 평판배지에 영지 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S210);
    상기 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S220);
    MCM 배지에 상기 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 5 내지 9일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230);
    MCM 배지에 상기 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240);
    비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 상기 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 배양하는 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 배양방법.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230)에서 수득된 상기 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서 수득된 상기 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 배양방법.
  9. 제 7항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 배양방법.
  10. 제 7항에 있어서,
    상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S230), 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S240) 및 상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서,
    상기 MCM 배지는 PH가 3.0 내지 6.0이고, 진탕속도는 100 내지 160rpm인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 배양방법.
  11. 제 7항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S250)에서,
    상기 MCM 배지와 상기 비타민나무 분말 사이의 비율이 상기 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 영지 버섯의 배양방법.
  12. 제 7항 내지 제 11항 중 어느 하나의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 영지 버섯 배양물.
  13. 평판배지에 상황 버섯 종균을 접종하여 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S310);
    상기 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S320);
    MCM 배지에 상기 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 7 내지 12일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330);
    MCM 배지에 상기 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 3일 내지 7일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340);
    비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 상기 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 28℃ 내지 32℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 배양하는 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 배양방법.
  14. 제 13항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330)에서 수득된 상기 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서 수득된 상기 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 배양방법.
  15. 제 13항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 배양방법.
  16. 제 13항에 있어서,
    상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S330), 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S340) 및 상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서,
    상기 MCM 배지는 PH가 4.0 내지 10.0이고, 진탕속도는 100 내지 250rpm인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 배양방법.
  17. 제 13항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S350)에서,
    상기 MCM 배지와 상기 비타민나무 분말 사이의 비율이 상기 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 상황 버섯의 배양방법.
  18. 제 13항 내지 제 17항 중 어느 하나의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 상황 버섯 배양물.
  19. 평판배지에 동충하초 종균을 접종하여 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 13일 내지 17일간 배양하여 균사체를 수득하는 단계(S410);
    상기 수득한 균사체를 절취하여 복수개의 균사체 디스크를 제조하는 단계(S420);
    MCM 배지에 상기 균사체 디스크를 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 3 내지 7일간 진탕배양하여 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S430);
    MCM 배지에 상기 제 1차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 1일 내지 5일간 진탕배양하여 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440);
    비타민나무 분말이 포함된 MCM 배지에 상기 제 2차 접종원을 접종하고 배양온도를 23℃ 내지 26℃로 조정한 다음 8일 내지 10일간 배양하는 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450);를 포함하는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 동충하초의 배양방법.
  20. 제 19항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S430)에서 수득된 상기 제 1차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서,
    상기 MCM 배지에 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서 수득된 상기 제 2차 접종원의 총부피 기준으로 10부피% 내지 15부피%인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 동충하초의 배양방법.
  21. 제 19항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 1차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2이고,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서,
    상기 MCM 배지와 접종되는 상기 제 2차 접종원의 부피는 비율이 10:0.8 내지 10:1.2인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 동충하초의 배양방법.
  22. 제 19항에 있어서,
    상기 제 1차 접종원을 수득하는 단계(S430), 상기 제 2차 접종원을 수득하는 단계(S440) 및 상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서,
    상기 MCM 배지는 PH가 4.0 내지 8.0이고, 진탕속도는 100 내지 140rpm인 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 동충하초의 배양방법.
  23. 제 19항에 있어서,
    상기 제 2차 접종원을 진탕배양하는 단계(S450)에서,
    상기 MCM 배지와 상기 비타민나무 분말 사이의 비율이 상기 MCM 배지 100㎖당 1g 내지 10g의 비타민나무 분말이 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 비타민나무를 이용한 동충하초의 배양방법.
  24. 제 19항 내지 제 23항 중 어느 하나의 방법으로 배양된 비타민나무를 이용한 동충하초 배양물.
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