KR20220051988A - 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물의 제조방법 - Google Patents

두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 천연물 추출물 및 갈조류 유래의 저분자량 알긴산 올리고당을 유효성분으로 포함하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물은 천연물 추출물 및 갈조류 유래의 저분자량 알긴산 올리고당을 유효성분으로 함유함으로써 인체에 부작용이 없고, 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 매우 우수하다. 이러한 조성물은 탈모를 예방하고 모발의 성장을 촉진하는 식품, 화장품 및 피부외용 제품 등의 제조에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물의 제조방법{MANUFACTURING METHOD OF COMPOSITION FOR SCALP PROTECTION AND HAIR GROWTH ACCELERATION}
본 발명은 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
해양생물 자원 중 해조류는 전 세계적으로 약 8,000종, 한국 근해에는 약 500여 종이 서식하며, 그 중 약 50종이 식용으로 이용되고 있다. 해조류는 먹이사슬의 하위에 위치하고 있어 바다생물의 존재에 필수 불가결한 자원으로 우리나라는 옛날부터 해조류를 식용, 약용, 사료 등으로 이용하고 있다. 현재 대부분의 해조류는 단순가공을 거쳐 식용으로 활용되고 있으나 앞으로는 바이오에너지원으로서 또는 기능성 식품 및 의약 원료로서 활용이 기대된다.
알긴산은 해조류 유래의 대표적인 기능성 소재로서 우론산(uronic acid)의 일종인 만누론산(β-D-mannuronic acid, M block)과 글루론산(α-L-guluronic acid, G block)이 다양한 비율로 1,4 글리코시드(glycoside) 결합을 이루고 있는 폴리우론산(polyuronide)이다. 알긴산 중 만누론산과 글루론산의 비율은 해조류의 종류, 계절, 조체부위 등에 따라 다르다.
한편, 여러 연구자들에 의해 분자량이 약 15,000 정도의 거대분자인 알긴산을 가수분해하여 알긴산 올리고당으로 저분자화하면, 그 기능성이 월등히 높아지는 것이 보고되고 있다.
본 발명자들은 알긴산의 다양한 생리 활성을 효과적으로 이용할 수 있는 방법에 대한 연구를 수행하는 과정에서, 검은콩, 은행 및 녹차잎 등의 천연물의 추출물 및 전복 내장 분쇄물을 이용하여 저분자량 알긴산 올리고당을 제조하는 경우 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 현저히 증대되는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
KR 10-2018-0110939 A KR 10-2014-0128135 A
본 발명의 목적은 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 우수한 화장료 조성물의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 (1) 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물의 추출물을 제조하는 단계; (2) (1) 단계의 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지를 제조하는 단계; (3) 균질화한 전복 내장 분쇄물을 상기 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지에 혼합한 후 배양하는 단계; (4) 상기 (3) 단계에서 얻은 배양액을 원심분리하여 배양 상등액을 얻는 단계; (5) 다시마 및 미역 중에서 선택되는 1종 이상의 갈조류의 추출물을 제조하는 단계; (6) (5) 단계의 갈조류 추출물 및 (4) 단계의 배양 상등액을 혼합한 후 반응시키는 단계;를 포함하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 따라 제조되는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물은 천연물 추출물 및 갈조류 유래의 저분자량 알긴산 올리고당을 유효성분으로 함유함으로써 인체에 부작용이 없고, 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 매우 우수하다. 이러한 조성물은 탈모를 예방하고 모발의 성장을 촉진하는 식품, 화장품 및 피부외용 제품 등의 제조에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물의 제조방법을 간단히 나타내는 모식도이다.
도 2는 본 발명의 비교예 4에 따른 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물을 HPLC-GPC 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 실시예 및 비교예 1에 따른 조성물을 분석하기 위한 스탠다드 표준물질인 시스테인(Cystein), 카테킨(Catechin) 및 징코라이드(Ginkolide)의 HPLC 분석결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 비교예 1에 따른 조성물의 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 조성물의 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 샴푸 제형의 시제품 사진이다.
도 7 및 도 8은 본 발명의 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 샴푸 제형의 시제품 검사 성적서이다.
본 발명의 명세서 및 청구범위에 사용된 용어 또는 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정 해석되지 아니하며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
본 명세서에서 "알긴산"은 β(1→4)-D-만누론산과 α(1→4)-L-글루론산 잔기로 구성된 직쇄형의 우론산 중합체로 화학식은 (C6H8O)n이며 대표적 분자량은 20,000-240,000인 다당류를 의미한다.
본 명세서에서 "알긴산 올리고당"은 고분자의 알긴산을 분해하여 저분자량화하거나 (C6H8O)의 반복 단위의 갯수가 10개 이하로 감소된 알긴산을 의미한다.
본 명세서에서 "저분자량 알긴산 올리고당"은 분자량이 10 kDa 이하, 바람직하게는 1 kDa 초과 10 kDa 미만의 분자량을 갖는 알긴산 올리고당을 의미한다. 알긴산 자체는 고분자 다당류로서 인체에서 이용될 수 없으며, 알긴산의 생체 이용을 위해서는 저분자화가 요구된다.
본 명세서에서 "두피 보호 효과"는 두피를 건강하게 유지시켜 탈모를 지연시키는 효과, 두피 트러블 예방 또는 개선 효과 등을 의미한다.
본 명세서에서 "모발 생장 촉진 효과"는 3단계의 모발 성장 주기인 성장기, 퇴화기, 휴지기 중에서 성장기 모발의 비율을 증가시키고, 모근 세포들이 신속하게 분화되어 다른 세포들을 모낭 밖으로 밀어냄으로써 개개의 모발이 형성되는 것을 촉진하는 효과를 의미한다.
상기 "모발"은 신체의 털을 의미하며, 케라틴 단백질로 구성된 실 모양의 형태를 말한다. 구체적으로, 두발, 눈썹, 속눈썹, 코털 또는 체모일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
이하에서 본 발명을 구체적으로 설명하였으나, 본 발명이 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면은 (1) 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물의 추출물을 제조하는 단계; (2) (1) 단계의 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지를 제조하는 단계; (3) 균질화한 전복 내장 분쇄물을 상기 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지에 혼합한 후 배양하는 단계; (4) 상기 (3) 단계에서 얻은 배양액을 원심분리하여 배양 상등액을 얻는 단계; (5) 다시마 및 미역 중에서 선택되는 1종 이상의 갈조류의 추출물을 제조하는 단계; (6) (5) 단계의 갈조류 추출물 및 (4) 단계의 배양 상등액을 혼합한 후 반응시키는 단계;를 포함하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 제조방법에 따르면, 기존의 알긴산 분해 조효소의 제조방법에 비해 공정이 매우 단순하며, 특히 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물의 추출물 및 갈조류 추출물 유래의 고분자 알긴산을 전복내장에서 서식하는 균주가 생산한 조효소액으로 저분자화함으로써, 인체에 부작용이 없고, 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 매우 우수한 조성물을 제공할 수 있게 된다.
본 명세서에서 "천연물 추출물"은 천연물로부터 분리된 유효(활성) 성분을 의미한다. 이때, 추출 용매를 사용하여 천연물로부터 유효성분을 추출할 수 있다. 추출 용매를 사용하여 천연물 추출물을 얻을 경우, 천연물 추출물은 천연물로부터 분리된 유효성분과 함께 용매를 모두 포함하는 의미로 해석될 수 있다. 또한, 천연물 추출물은 액상, 이의 건조 분말 및 이를 이용하여 제형화된 상태의 가공물 중 어느 하나를 지칭할 수도 있다. 또한, 천연물 추출물은 당업계에서 일반적으로 통용되고 있는 조추출물(crude extract)뿐만 아니라, 조추출물을 추가적으로 분획(fraction)하여 얻어진 분획물, 여과과정을 거친 여과물 및 정제과정을 거친 정제물을 포함할 수 있다.
상기 (1) 단계에서는 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물의 추출물을 제조한다.
상기 검은콩은 흑태, 서목태, 서리태 등과 같이 검은 빛을 띠는 콩을 말한다. 검은콩은 안토시아닌과 이소플라본을 포함하며, 혈액순환 개선, 발모 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
상기 은행은 은행나무의 열매를 의미한다. 은행은 동맥경화증, 심장병, 고콜레스테롤혈증, 이질, 복통, 설사를 다스리는데 효과가 있으며, 특히 모근세포의 혈행 촉진에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
상기 녹차잎은 차나무의 잎으로, 녹차잎을 고온으로 가열한 후 건조시킨 것을 녹차, 녹차잎을 50% 발효시킨 것을 우롱차, 녹차잎을 90% 이상 발효시킨 것을 홍차로 구분한다. 녹차잎은 카테킨, 데아닌, 비타민 등의 무기질을 함유하며, 항산화, 항균, 항염증 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
상기 천연물은 검은콩, 은행 및 녹차잎을 1~3 : 1~3 : 1의 중량비, 바람직하게는 1~2 : 1~2 : 1의 중량비, 더욱 바람직하게는 1~2 : 1 : 1의 중량비로 혼합한 혼합물일 수 있다.
상기 천연물의 혼합비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 떨어지는 문제점이 발생할 수 있다.
상기 추출물 제조 단계는 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획하여 제조하는 방법으로 수행할 수 있다.
상기 추출용매는 물, 유기용매 및 이들의 혼합물 중에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매; 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성 용매; 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 5의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소프로판올 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 추출용매로서 물 및 알코올의 혼합물은 50%(v/v) 내지 99.9%(v/v) 농도의 알코올 수용액일 수 있다.
상기 추출용매는 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 및 이들의 혼합물 중에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 더욱 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 3의 알코올 및 이들의 혼합물 중에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 90 ℃ 이상의 물, 또는 30% 에탄올 수용액일 수 있다.
상기 추출시간은 특별히 한정되지 않으나, 1 시간 이상 추출할 수 있고, 바람직하게는 1 내지 6 시간, 더욱 바람직하게는 1.5 내지 5 시간 동안 추출할 수 있다.
상기 추출온도는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 식물 추출 시 통상적으로 이루어지는 추출온도에서 행해질 수 있다.
상기 추출방법은 통상의 식물 추출물, 구체적으로 갈조류의 추출방법에 따라 수행될 수 있고, 일예로 냉침 추출법, 온침 추출법, 열 추출법, 초음파 추출법 등일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니고, 통상의 추출기기, 초음파 분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.
상기 (2) 단계에서는 (1) 단계의 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지를 제조한다. 상기 액체 배지는 MRS broth 배지 또는 Marine broth 배지일 수 있고, 바람직하게는 Marine broth 배지일 수 있다.
상기 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지는 상기 액체 배지 100 중량부에 대하여 (1) 단계에서 얻은 천연물 추출물을 건조중량으로 2 내지 10 중량부, 바람직하게는 4 내지 6 중량부, 및 증류수 100 내지 2000 중량부, 바람직하게는 100 내지 1000 중량부를 혼합한 후 균질화하여 제조될 수 있다. 상기 액체 배지 내에 포함되는 천연물 추출물의 함량이 상기 하한치 미만인 경우에는 최종 조성물의 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 미미해질 수 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 함량이 증가함에 따른 효과의 증가치가 미미하여 경제적이지 않다.
상기 (3) 단계에서는 균질화한 전복 내장 분쇄물을 상기 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지에 혼합한 후 배양한다.
상기 전복 내장 분쇄물은 상기 액체 배지 100 중량부에 대하여 0.5 내지 5 중량부, 바람직하게는 0.5 내지 2 중량부, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 1.5 중량부로 혼합될 수 있다.
상기 배양은 pH 6.5 내지 7.5, 온도 20 내지 30 ℃ 조건에서 40 내지 55 시간 동안 수행될 수 있다.
상기 배양은 바람직하게는 pH가 6.6 내지 7.4, 더욱 바람직하게는 pH 6.8 내지 7.2, 더욱 바람직하게는 pH 6.9 내지 7.1, 가장 바람직하게는 pH 7.0 조건에서 수행될 수 있다. 또한, 배양 온도는 바람직하게는 22 내지 28 ℃, 더욱 바람직하게는 24 내지 26 ℃, 가장 바람직하게는 25 ℃ 조건에서 수행될 수 있다.
전복 내장 분쇄물을 상기 조건에서 배양하는 경우에 전복 내장에 함유되어 있던 알긴산 분해능이 있는 다양한 균주들이 활발히 성장하며 알긴산 분해 조효소를 대량 생산할 수 있게 된다.
본 발명의 방법에 따르면, 특정 균주의 순수분리 및 순수배양의 번거롭고 비용 발생이 많은 단점을 해소하고, 다양한 균주가 갈조류 유래의 고분자 알긴산을 분해하는 효과가 있어 경제적이다.
상기 (4) 단계에서는 (3) 단계에서 얻은 배양액을 원심분리하여 배양 상등액을 얻는다.
상기 배양액은 1 내지 10 ℃에서 10,000 내지 20,000×g, 바람직하게는 12,000 내지 16,000×g, 더욱 바람직하게는 13,000 내지 15,000×g의 강도로 1 내지 10 분 동안 원심분리하여 배양 상등액을 얻을 수 있다.
상기 배양 상등액에는 상기 천연물 추출물과 함께 전복 내장 분쇄물에 존재하는 알긴산 분해능이 있는 다양한 균주들(예를 들어, 에로모나스속 균주 등)로부터 생성된 알긴산 분해 조효소가 더욱 많은 함량으로 존재하며, 상기 배양 상등액을 갈조류 추출물과 반응시키는 경우 저분자량 알긴산 올리고당을 더욱 높은 수율로 얻을 수 있게 된다. 또한, 상기 배양 상등액에는 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물 추출물이 함유되어 있어 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효능이 있다.
상기 (5) 단계에서는 다시마 및 미역 중에서 선택되는 1종 이상의 갈조류의 추출물을 제조한다.
상기 갈조류 추출물은 갈조류를 산가수 열처리법, 알칼리 추출법, 산/알칼리 열수 추출법, 및 고온가압처리법 중 어느 하나의 방법으로 추출한 것일 수 있고, 바람직하게는 알칼리 추출법으로 추출한 것일 수 있다.
상기 알칼리 추출법은 세절된 미역 또는 다시마를 준비하는 단계; 상기 미역 또는 다시마에 염기성 용액을 가하는 단계; 상기 혼합물을 여과하여 얻은 여과액에 에탄올을 첨가하는 단계; 및 상기 혼합물을 여과하여 얻은 침전물을 건조하는 단계;를 포함하는 방법일 수 있다.
구체적인 예시로서, 분쇄한 다시마에 0.1~2.0%(w/v) 탄산수소나트륨 용액 4 내지 10배수(w/v)를 첨가한 후 0.5 내지 2일 동안 교반한다. 상기 혼합 용액을 원심분리하여 얻은 상등액에 동량의 에탄올을 첨가한다. 상기 혼합용액을 여과하여 얻은 침전물을 건조하여 갈조류 추출물을 얻을 수 있다.
상기 (6) 단계에서는 (5) 단계의 갈조류 추출물 및 (4) 단계의 배양 상등액을 혼합한 후 반응시킨다.
상기 갈조류 추출물은 (4) 단계의 배양 상등액 100 중량부에 대하여 건조중량으로 1 내지 10 중량부, 바람직하게는 1 내지 6 중량부, 더욱 바람직하게는 1 내지 5 중량부로 혼합될 수 있다.
상기 혼합물의 반응은 상온에서 65 내지 80 시간 동안 이루어질 수 있다.
상기 혼합 반응물에는 갈조류 유래의 분자량 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당의 함량이 알긴산 올리고당 전체 중량에 대하여 약 40 중량% 이상 함유된 것을 구체적인 실험을 통해 확인하였다.
상기 혼합물을 반응시킨 후에는 멸균 및 효소 불활성화 단계를 수행한다. 상기 멸균 및 효소 불활성화 단계는 특별히 제한되지 않고 통상의 방법에 따라 수행될 수 있으며, 예를 들어 110 내지 130 ℃에서 10 내지 30분 동안 열처리하는 것일 수 있다.
상기 방법으로 제조되는 본 발명의 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물은 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액; 및 갈조류 유래의 분자량이 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당을 유효성분으로 포함한다.
상기 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물은 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액 및 상기 저분자량 알긴산 올리고당를 유효성분으로 함유함으로써 더욱 우수한 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과를 나타낼 수 있다.
상기 방법으로 제조되는 본 발명의 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 건조중량으로 0.01 내지 5.0 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 2.0 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 1.0 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 0.05 중량%로 포함될 수 있다.
이와 같이 제조된 본 발명의 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물은 샴푸, 린스, 트리트먼트, 헤어팩, 헤어젤, 앰플, 헤어토닉, 에센스, 헤어크림, 미스트 및 비누 중에서 선택된 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 다른 측면은 상기의 방법에 따라 제조되는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 화장료 조성물은 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액; 및 갈조류 유래의 분자량이 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당;을 유효성분으로 포함한다.
본 명세서에서 용어, "천연물 추출물", "저분자량 알긴산 올리고당", "두피 보호 및 모발 생장 촉진용" 및 "화장료 조성물"은 상기에서 기재한 바와 같다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 천연물 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 건조중량으로 0.01 내지 2.0 중량%, 바람직하게는 0.02 내지 1.0 중량%, 더욱 바람직하게는 0.02 내지 0.05 중량%로 포함될 수 있다.
상기 천연물 추출물의 함량이 상기 하한치 미만인 경우에는 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과가 미미해질 수 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 함량이 증가함에 따른 효과의 증가치가 미미하여 경제적이지 않다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 저분자량 알긴산 올리고당은 조성물 총 중량에 대하여 건조중량으로 0.01 내지 2.0 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 1.0 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 0.05 중량%로 포함될 수 있다.
상기 저분자량 알긴산 올리고당의 함량이 상기 하한치 미만인 경우에는 상기 천연물 추출물과의 시너지 효과가 미미해질 수 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 함량이 증가함에 따른 효과의 증가치가 미미하므로 경제적이지 않다.
본 발명의 화장료 조성물은 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액; 및갈조류 유래의 분자량이 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당;을 유효성분으로 포함함으로써 상기 천연물 추출물 및 상기 알긴산 올리고당을 단독으로 사용하는 경우에 비해 현저히 우수한 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명 일 실시예에서는 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액; 및갈조류 유래의 분자량이 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당;을 포함하는 조성물을 처리하는 경우, 현저히 우수한 모발 성장 촉진 효과, 모유두세포 활성 효과 등이 나타남을 확인하였으며, 이로부터 탈모에 대한 예방 및 치료효과와 모발 성장 촉진 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
본 발명의 화장료 조성물은 샴푸, 린스, 트리트먼트, 헤어팩, 헤어젤, 앰플, 헤어토닉, 에센스, 헤어크림, 미스트 및 비누 중에서 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 다른 측면은 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 피부외용제 조성물에 관한 것이다. 상기 피부외용제 조성물은 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액; 및 갈조류 유래의 분자량이 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당을 유효성분으로 포함한다.
본 명세서에서의 용어, "천연물 추출물", "알긴산 올리고당", "두피 보호", "모발 생장 촉진"은 상기에서 기재한 바와 같다.
본 발명에 따른 피부외용제 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 팩 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
또한, 본 발명에 의한 피부외용제 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.
본 발명의 또 다른 측면은 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다. 상기 건강기능식품 조성물은 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액; 및 갈조류 유래의 분자량이 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당을 유효성분으로 포함한다.
본 명세서에서의 용어, "천연물 추출물", "알긴산 올리고당", "두피 보호", "모발 생장 촉진"은 상기에서 기재한 바와 같다.
본 명세서에서 용어 "건강기능식품 조성물"은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품 조성물을 말한다. 여기서 '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당 업계 에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품 조성물의 제형은 건강 기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 상기 천연물 추출물 및 저분자량 알긴산 올리고당 이외에 본 발명이 목적으로 하는 주효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 예를 들면, 비타민 C와 같은 항산화용 화합물 또는 어성초 추출물, 감초 추출물, 상백피 추출물, 홍경천 추출물, 황금 추출물, 산삼 추출물, 구기자 추출물, 하수오뿌리 추출물, 뽕나무껍질 추출물, 알로에베라잎 추출물, 소엽잎 추출물, 귤껍질 추출물, 참당귀 추출물 등의 천연물을 함유하는 것도 무방하다.
상기와 같은 형태로 제형화된 건강기능식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농 제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품은 모두 포함한다.
또한 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에도 본 발명의 본 발명의 건강기능식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 천연물 추출물 또는 저분자량 알긴산 올리고당 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.
본 발명의 유효성분의 투여량은 당업자의 수준 내의 범위에서 한정될 수 있으며, 본 발명의 건강기능식품 조성물의 1일 투여 용량은 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강상태 등의 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 성인을 기준으로 할 때 일반적으로는 1 ~ 1000 mg/kg, 바람직하게는 1 내지 500 mg/kg, 더욱 바람직하게는 10 내지 300 mg/kg을 1일 1 내지 2회 분할하여 투여할 수 있으며, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.
본 발명의 건강기능식품 조성물에서, 상기 천연물 추출물을 함유하는 전복 내장 분쇄물의 배양 상등액; 및 갈조류 유래의 분자량이 10 kDa 이하인 저분자량 알긴산 올리고당으로 이루어진 유효성분은 조성물 총 중량에 대하여 건조중량으로 0.01 내지 5.0 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 2.0 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 1.0 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 0.05 중량%로 포함될 수 있다.
이하에서 실시예 등을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 하며, 다만 이하에 실시예 등에 의해 본 발명의 범위와 내용이 축소되거나 제한되어 해석될 수 없다. 또한, 이하의 실시예를 포함한 본 발명의 개시 내용에 기초한다면, 구체적으로 실험 결과가 제시되지 않은 본 발명을 통상의 기술자가 용이하게 실시할 수 있음은 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허 청구범위에 속하는 것도 당연하다.
<실시예>
실시예. 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물의 제조
(1) 천연물 추출물 제조
검은콩 및 녹차잎은 전남 화순의 한약재 도매상으로부터 구입하였고, 은행은 껍질이 분리된 냉동 은행을 구입하였다.
검은콩, 은행 및 녹차잎을 2 : 1 : 1의 중량비로 혼합한 천연물 혼합물에 10 배 부피의 물을 첨가한 후 100 ℃에서 2 시간 동안 열수추출하였다. 상기 열수추출물을 55 ㎛ 여과기(bag filter)를 통과시켜 여과하였고, 80 ℃에서 농축시킨 후 동결건조하여 분말화하였다.
(2) 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지 제조
Marine broth 배지(미국, Difco사; Marine broth 2216 배지) 100 중량부에 상기 (1) 단계에서 제조한 천연물 추출물을 5 중량부 및 증류수 1000 중량부를 첨가하고 균질화한 후 멸균함으로써, 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지를 제조하였다.
(3) 전복 내장 분쇄물의 배양
전라남도 완도에서 구입한 전복(abalone Haliotis discus hannai)을 세척하고 내장을 분리하였다. 그리고, 상기 내장을 분쇄기를 이용하여 분쇄한 후 균질처리하였다.
상기 균질화한 전복 내장 분쇄물을 상기 (2) 단계에서 제조한 액체 배지 100 중량부에 대하여 1 중량부로 첨가하고, pH 7.0, 120rpm, 25 ℃ 조건에서 48 시간 동안 배양하였다.
(4) 배양 상등액의 제조
상기 배양액을 4 ℃에서 원심분리한 후(14,000×g, 10분), 배양 상등액을 분리하였다.
(5) 갈조류 추출물 제조
다시마 분쇄물 100 g에 600 mL의 0.5%(w/v) 탄산수소나트륨 용액을 가한 후 150 rpm에서 24 시간 동안 용매추출하였다. 상기 혼합 용액을 원심분리하여 얻은 상등액에 동량의 에탄올을 첨가하고 150 rpm에서 12 시간 동안 용매추출하였다. 상기 혼합 용액을 원심분리하여 침전물을 회수한 후 동결건조하여 분말화하였다.
(6) 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조
상기 (4) 단계에서 얻은 배양 상등액 100 중량부에 대하여 (5) 단계에서 얻은 갈조류 추출물 5 중량부를 혼합한 후 상온에서 72 시간 동안 반응시킴으로써 본 발명의 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물을 제조하였다.
비교예 1. 천연물 추출물 only
실시예와 동일하게 실시하되, (1) 단계의 천연물 추출물만을 제조한 후((2)~(7) 단계 생략), 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물로 이용하였다.
비교예 2. 저분자량 알긴산 올리고당 only
분자량이 10 kDa인 저분자량 알긴산 올리고당 분말을 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물로 이용하였다.
비교예 3. 천연물 추출물 및 저분자량 알긴산 올리고당의 혼합물
실시예의 (1) 단계에서 얻은 천연물 추출물, 및 분자량이 10 kDa인 저분자량 알긴산 올리고당 분말을 건조중량으로 1 : 1의 중량비로 혼합한 혼합물을 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물로 이용하였다.
비교예 4. 저분자량 알긴산 올리고당 제조
Marine broth 배지를 이용하여 실시예 (3) 및 (4) 단계와 동일한 방법으로 전복 내장 배양 상등액을 제조하였다. 그리고, 상기 배양 상등액 100 중량부에 대하여 실시예의 (5) 단계와 동일한 방법으로 제조한 갈조류 추출물 5 중량부를 혼합한 후 상온에서 72 시간 동안 반응시켜 제조한 조성물을 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 조성물로 이용하였다.
<시험예>
예비시험예 1: 저분자량 알긴산 올리고당의 수율
비교예 4의 조성물에 함유된 저분자량 알긴산 올리고당을 HPLC-GPC를 이용하여 분석하였다. 비교예 4의 조성물은 갈조류 추출물 및 전복 내장 배양 상등액을 반응시켜 갈조류에 함유된 고분자 알긴산을 분해하여 얻은 저분자 알긴산 올리고당을 함유하는 조성물이다.
[HPLC-GPC 분석조건]
■ 장비 및 조건
-Shimazu HPLC-GPC Prominence(Japan, Shimazu co., Ltd.)
■ 실험방법
-pululan standard 0.05 g 및 증류수 10 mL을 혼합하여 표준용액을 제조함
-비교예 4에서 제조된 조성물을 HPLC-GPC를 이용하여 분석
■ 분석조건
-이동상 용매 : D.I water
-유속 : 0.7 mL/min
-오븐온도 : 40 ℃
-Cell 온도 : 40 ℃
-주입량 : 20 ㎕
-컬럼 : GF-7M HQ 및 GF-310 HQ(Japan, Shodex co., Ltd.)를 직렬로 연결하여 사용함
도 2는 본 발명의 비교예 4에서 제조한 조성물을 HPLC-GPC 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 2를 살펴보면, 상기 HPLC-GPC 분석 결과로부터 검출된 2 개의 피크 중에서 13.933 min에 나타난 피크는 다시마 유래의 알긴산을 나타내는 것이고, 21.383 min에 나타난 피크는 상기 알긴산이 저분자화된 것임을 확인할 수 있다.
또한 상기 HPLC-GPC 분석 결과로부터, 본 발명의 제조방법에 따른 10 kDa 이하의 저분자량 알긴산 올리고당은 알긴산 올리고당 전체 중량에 대하여 약 20%인 것을 알 수 있다.
예비시험예 2: 알긴산 분해활성 측정
천연물 추출물 첨가 배지 및 천연물 추출물 무첨가 배지를 이용하여 전복 내장 분쇄물을 배양하여 얻은 배양 상등액의 알긴산 분해활성을 비교하고자 하였다.
Marine broth 배지(미국, Difco사; Marine broth 2216 배지) 40 g에 상기 (1) 단계에서 제조한 천연물 추출물 2 g 및 증류수 400 g을 첨가하고 균질화한 후 멸균함으로써, 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지를 제조하였다(실시예 참조). 그리고, 별도로 천연물 추출물을 첨가하지 않은 액체 배지를 제조하였다.
여기에, 균질화한 전복 내장 분쇄물을 상기 액체 배지 100 중량부에 대하여 1 중량부로 첨가하고, pH 7.0, 120rpm, 25 ℃ 조건에서 48 시간 동안 배양하였다.
상기 배양액을 6000xg, 30분간 원심분리를 하여 얻은 상등액을 40% 황산암모늄으로 침전시킨 후 밤새 정치배양하였다. 상기 정치배양액을 10000xg, 20분간 원심분리를 하여 얻은 상등액을 phenyl-Sepharose Fast Flow 컬럼을 이용하여 50mM phosphate 완충용액(pH 7.0)으로 용출하였다(1 mL/분). 알긴산 분해 활성을 갖는 분획을 20 mM의 phosphate 완충용액(pH 7.0)으로 투석하였고, 투석용액을 DEAE-Sepharose 이용 이온교환 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 정제된 용액을 동결건조하여 J. Biol. Chem. 2013, 288:23021-23037에 기재된 방법에 따라 효소활성을 측정하고 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
구분 천연물 추출물 첨가 배지를 이용한 경우 천연물 추출물 무첨가 배지를 이용한 경우
효소활성(unit/g) 25,100 6,500
상기 표 1을 살펴보면, 본 발명에 따른 천연물 추출물을 함유하는 배지를 이용하여 전복 내장 분쇄물을 배양하여 얻은 배양 상등액의 알긴산 분해효소 활성이 천연물 추출물 무첨가 배지를 이용한 경우에 비해 4배 이상 높은 것을 확인할 수 있다.
시험예 1. 섬유아세포 및 모유두세포에 대한 세포 증식 촉진 효과
인간 섬유아세포(fibroblast(표피세포), NIH-3T3)는 한국 세포주 은행(Korean Cell Line Bank)에서, 인간 모유두 세포(human hair follicle dermal papilla cells , HFDPC-c)는 프로모셀(PromoCell)사에서 구입하였다.
상기 섬유아세포는 10% CS(calf serum)이 들어간 DMEM 배양액에서 37℃ 및 5% CO2 조건하에 배양하였다.
상기 모유두 세포를 배양액 첨가제 (Supplement Mix; PromoCell, Heidelberg, Germany), 페니실린100 unit/mL 및 스트렙토마이신 100 ㎍/mL이 포함된 HFDPC-c 전용 배양액(Follicle Dermal Papilla Cell Growth Medium; PromoCell, Heidelberg, Germany)에서 37℃ 및 5% CO2 조건하에 배양하였다.
상기 각각의 배양한 세포들을 3.0×104 cells/well을 96-well 플레이트에 분주한 뒤, 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 배양한 세포들은 실시예 및 비교예에 따른 조성물을 농도별(0.01 중량%, 0.02 중량%, 0.05 중량%, 0.1 중량%, 0.2 중량%)로 처리한 후 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다.
상기 세포들의 증식 여부는 MTT assay를 이용하여 다음과 같은 방법으로 측정하였다. 각각의 시료를 PBS로 2회 세척하고, 200 ㎕/well의 MTT(Sigma, MO, USA)을 첨가하고 3시간 동안 반응시켰다. 이후, 상층액을 제거하고, DMSO 용액을 200 ㎕/well을 가하고 30분 동안 교반하여 침전물을 용해시킨 후, 마이크로플레이트 리더기(VERSAmax microplate reader, Molecular Devices, CA, USA)를 사용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도는 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 증식율을 조사하여 하기 표 2에 나타내었다. 세포 증식율(생존율)이 시료 무첨가군(control)의 70% 미만으로 감소되는 경우에는 잠재적으로 세포독성이 있는 것으로 판정하였다. 실험 결과, 실시예 및 비교예에 따른 시료 모두 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 및 2.0 건조중량% 농도에서 세포 증식율(생존율)이 70% 미만으로 감소되지 않아 독성이 없는 것으로 나타났다. 한편, 실시예의 시료 농도 4.0 건조중량% 이상부터는 세포증식율이 현저히 떨어져 독성이 있는 것으로 판단되어 사용할 수 없는 것으로 나타났다.
구분 처리농도(건조중량%) 섬유아세포 증식율(%) 모유두세포 증식율(%)
대조군(무처리군) - 100 100
실시예 0.01 109.57 127.15
0.03 112.20 150.50
0.05 115.35 163.84
0.1 118.05 189.35
비교예 1 0.01 106.77 113.23
0.03 109.88 115.27
0.05 109.10 136.13
0.1 107.48 141.48
비교예 2 0.01 90.61 99.49
0.03 89.74 100.25
0.05 84.60 101.27
0.1 81.96 102.03
비교예 3 0.01 108.52 119.35
0.03 110.25 132.24
0.05 111.42 140.38
0.1 111.50 155.40
상기 표 2를 살펴보면, 실시예의 조성물은 비교예 1 내지 3에 비하여 현저히 높은 세포 증식 촉진 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다. 한편, 저분자량 알긴산 올리고당만을 유효성분으로 포함하는 비교예 2의 경우에는 섬유아세포 및 모유두세포에 대하여 유의한 증식 촉진 효과를 나타내지 않는 것을 알 수 있다.
Purba 등은 인체 모낭 모유두세포(HFDPC)와 인간 표피세포(HaCaT cell)의 증식을 촉진시킴으로써 모발 성장을 촉진시킨다고 보고한 바 있다(Purba, T. S. et al., Characterisation of cell cycle arrest and terminal differentiation in a maximally proliferative human epithelial tissue: Lessons from the human hair follicle matrix. Eur. J. Cell Biol. 96, 632-641. 2017).
상기의 실험 결과로부터 본 발명의 조성물이 NIH-3T3(섬유아세포; 표피세포) 및 HFDPC(모유두세포)의 세포 증식을 촉진시키는 효과가 있음을 확인하였고, 이로 인해 모발 생장을 촉진시키는 효과를 나타낼 것으로 판단된다.
시험예 2. 경피흡수도 평가
경피흡수시스템(Dry Heat Franz Diffusion Cell System)을 적용하여 실시예 및 비교예에 따른 시료의 피부흡수도를 평가하고자 하였다.
경피흡수시스템은 시료가 피부를 통과하여 용액 저장소로 이동한 양을 측정하는 방법으로, 인체 피부 또는 다른 종의 피부를 사용할 수 있고 시험물질에 대하여 반복 측정이 가능하며 실험동물을 사용하지 않고도 노출 조건에 대한 연구가 가능하다. 또한 사용할 수 있는 시험물질의 범위가 넓고, 윤리적 이유로 평가하기 어려운 피부 손상과 피부 흡수에 대한 관계에 대하여 연구할 수 있는 장점이 있다.
실험은 권 등의 방법(화장품 적용을 위한 피커링 에멀젼 특성 연구, 권육영, 2019, 아주대학교대학원, 석사학위논문)을 수정하여 실시하였고, 피부를 대신하여 인공피부 멤브레인인 3M Membrane (Strat-M Membrane for Transdermal Diffusion Testing, Merck)을 사용하였다.
스탠다드 표준물질은 검은콩의 유효성분인 시스테인(Cystein), 녹차의 유효성분인 카테킨(Catechin), 은행의 유효성분인 징코라이드(Ginkolide)로 선정하였다.
스탠다드 표준물질, 실시예 및 비교예 1에 따른 시료를 상기 인공피부 멤브레인에 도포한 후 각각 8 시간 동안 흡수시킨 샘플을 LC로 분석한 후 도 3 내지 도 5에 나타내었다.
[LC - 기기분석 조건]
-기기 : Shimadzu HPLC
-이동상 용매 : 메탄올 70%, 3차증류수 30% 1 mL/min
-오븐온도 : 50 ℃
-주입량 : 20 ㎕
-컬럼 : Eclipse Plus C18
도 3은 본 발명의 실시예 및 비교예 1에 따른 조성물을 분석하기 위한 스탠다드 표준물질인 시스테인(Cystein), 카테킨(Catechin) 및 징코라이드(Ginkolide)의 HPLC 분석결과를 나타낸 것이다. 도 3을 살펴보면, 상기 표준물질들의 HPLC 머무름시간(Retention Time, R.T)은 시스테인은 1.52분, 카테킨은 1.16분 및 징코라이드는 1.32분으로 나타났다.
도 4는 본 발명의 비교예 1에 따른 조성물의 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다. 도 4를 살펴보면, 머무름시간 1.52분, 1.16분 및 1.32분에서 검출된 물질은 각각 시스테인, 카테킨 및 징코라이드임을 확인할 수 있다.
상기 HPLC 분석 결과를 검량선을 이용하여 계산한 결과, 비교예 1에 따른 조성물을 인공피부에 투과한 샘플에서 시스테인은 0.023 ppm, 카테킨은 0.040 ppm, 징코라이드는 0.018 ppm의 양으로 검출되었다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 조성물의 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다.
상기 HPLC 분석 결과를 검량선을 이용하여 계산한 결과, 상기 실시예에 따른 조성물을 인공피부에 투과한 샘플에서 시스테인은 0.036 ppm, 카테킨은 0.032 ppm, 징코라이드는 0.022 ppm의 양으로 검출되었다.
구체적으로, 실시예의 조성물은 인공피부 투과도가 천연물 추출물만을 포함하는 비교예 1의 조성물에 비해 시스테인은 56.5%, 징코라이드는 22.2% 증가하였다.
이러한 결과를 통해, 본 발명의 실시예에 따른 조성물은 비교예 1에 비해 유효성분들의 흡수율이 현저히 증가하는 것을 구체적으로 확인하였다.
제조예 및 비교제조예 : 샴푸의 제조
하기 시험예에서 사용하기 위하여 실시예 및 비교예의 조성물을 유효성분으로 함유하는 샴푸를 하기 표 3의 조성으로 통상적인 방법에 따라 제조하였다.
성분명 제조예(중량%) 비교제조예 1
(중량%)		 비교제조예 2
(중량%)		 비교제조예 3
(중량%)
건조중량 실시예 0.05 - - -
비교예 1 - 0.05 - -
비교예 2 - - 0.05 -
비교예 3 - - - 0.05
라우릴황산암모늄 10.00 10.00 10.00 10.00
폴리옥시에틸렌라우릴황산암모늄 5.00 5.00 5.00 5.00
코코아미도프로필베타인 2.00 2.00 2.00 2.00
에틸렌글리콜디스테아레이트 1.50 1.50 1.50 1.50
코코일 모노에탄올아미드 0.80 0.80 0.80 0.80
폴리쿼터늄-10 0.20 0.20 0.20 0.20
청색1호 0.0002 0.0002 0.0002 0.0002
황색4호 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001
메틸파라벤 0.10 0.10 0.10 0.10
향료 0.80 0.80 0.80 0.80
구연산 0.10 0.10 0.10 0.10
디메치콘 1.00 1.00 1.00 1.00
정제수 To 100 To 100 To 100 To 100
시험예 3. 탈모 방지 효과 실험
본 발명의 조성물이 탈모방지에 효과가 있는지를 확인하기 위해 임상적으로 탈모방지효과를 시험하였다. 시험 방법으로서는 다음 기준을 모두 만족시키는 환자만을 연구대상으로 등록하였다.
[시험대상 조건]
1) 20세 이상의 신체적 및 정신적 건강상태가 양호한 남성으로서 탈모가 진행되는 자
2) 연구기간 동안 동일한 머리모양을 유지할 환자
3) 연구기간 동안 염색하지 않을 환자
4) 연구기간 동안 특별한 모발용품이나 모발관리 및 조작을 하지 않을 환자
상기의 조건에 해당하는 자발적 피험자 20명을 엄선하여 대상으로 실험하였으며 구체적인 환자 개인별 현황을 파악해 가면서 평가시트에 기록하고 시험하였다.
탈모 방지 효과 평가 방법으로 머리 감을 때 빠지는 모발 개수를 측정하였다. 상기 제조예 및 비교제조예의 샴푸 사용 전과 샴푸 사용 3개월 후를 비교하였다. 머리감을 때 빠지는 모발 개수를 매일 1일 1회 기록하였으며, 탈모 수량을 1개월 단위로 평균화하여 하기 표 4에 나타내었다.
구분 제조예 비교제조예 1 비교제조예 2 비교제조예 3
사용 전 20.24 21.50 19.70 21.05
1개월 사용 후 11.05 15.20 18.15 13.85
2개월 사용 후 7.50 13.33 17.50 11.30
3개월 사용 후 4.12 12.80 17.20 9.23
상기 표 4를 살펴보면, 제조예에 해당하는 샴푸를 사용한 후 개월 수가 지남에 따라 탈모 수량이 비교제조예의 샴푸를 사용하는 경우에 비해 현저히 감소하는 것을 확인할 수 있다.
이상의 시험 결과들로부터 본 발명의 조성물이 생체에 안전하면서 두피 보호 및 모발 생장 촉진 효과를 부여하는 것을 구체적으로 확인하였다.
<제조예>
제조예 2. 화장품의 제조
제조예 2-1. 샴푸(시제품)의 제조
실시예의 조성물을 유효성분으로 포함하는 시제품 샴푸를 하기 표 5의 성분 및 함량과 같이 통상적인 방법에 따라 제조하였다(도 6 내지 8 참조).
성분명 함량(중량%) 조성비(%) 전체함량(중량%)
실시예의 조성물(건조중량) 0.05 100 0.05000
정제수 5.65 100 5.65000
청피엑스산 0.60 100 0.60000
구기자추출물 0.10 100 0.10000
하수오뿌리추출물 0.30 100 0.30000
콘민트추출물 9.60 100 9.60000
뽕나무껍질추출물 9.00 100 9.00000
스페인감초뿌리추출물 0.20 100 0.20000
알로에베라잎추출물 2.00 100 2.00000
소엽잎추출물 5.55 100 5.55000
귤껍질추출물 5.00 100 5.00000
약모밀추출물 10.00 100 10.00000
참당귀추출물 5.00 100 5.00000
글리세린 0.40 100 0.40000
다이소듐이디티에이 0.10 100 0.10000
나이아신아마이드 0.06 100 0.06000
잔탄검 0.25 100 0.25000
폴리쿼터늄-10 0.90 91 0.81900
정제수 6 0.05400
소듐클로라이드 3 0.02700
카보머 0.30 100 0.30000
다이소듐라우레스설포석시네이트 28.00 30 8.40000
정제수 70 19.60000
코코-베타인 14.00 31 4.34000
소듐클로라이드 6 0.84000
정제수 63 8.82000
살리실릭애씨드 0.20 100 0.20000
바이오틴 0.02 10 0.00200
덱스트린 90 0.01800
판테놀 0.20 100 0.20000
라반딘오일 0.08 100 0.08000
달맞이꽃오일 0.24 100 0.24000
오렌지껍질오일 1.50 100 1.50000
동백나무씨오일 0.50 100 0.50000
합계 100 - 100.00000
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

Claims (8)

  1. (1) 검은콩, 은행 및 녹차잎 중에서 선택되는 1종 이상의 천연물의 추출물을 제조하는 단계;
    (2) (1) 단계의 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지를 제조하는 단계;
    (3) 균질화한 전복 내장 분쇄물을 상기 천연물 추출물을 포함하는 액체 배지에 혼합한 후 배양하는 단계;
    (4) 상기 (3) 단계에서 얻은 배양액을 원심분리하여 배양 상등액을 얻는 단계;
    (5) 다시마 및 미역 중에서 선택되는 1종 이상의 갈조류의 추출물을 제조하는 단계;
    (6) (5) 단계의 갈조류 추출물 및 (4) 단계의 배양 상등액을 혼합한 후 반응시키는 단계;를 포함하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    (1) 단계의 상기 천연물은 검은콩, 은행 및 녹차잎을 1~3 : 1~3 : 1 의 중량비로 혼합한 혼합물인 것을 특징으로 하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    (2) 단계의 상기 천연물 추출물은 액체 배지 100 중량부에 대하여 5 내지 20 중량부로 혼합되는 것을 특징으로 하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    (3) 단계의 균질화한 전복 내장 분쇄물은 상기 액체 배지 100 중량부에 대하여 0.5 내지 5 중량부로 혼합되는 것을 특징으로 하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    (3) 단계의 배양은 pH 6.5 내지 7.5, 온도 20 내지 30 ℃ 조건에서 40 내지 55 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    (6) 단계에서의 갈조류 추출물은 (4) 단계의 배양 상등액 100 중량부에 대하여 건조중량으로 1 내지 10 중량부로 혼합되는 것을 특징으로 하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 샴푸, 린스, 트리트먼트, 헤어팩, 헤어젤, 앰플, 헤어토닉, 에센스, 헤어크림, 미스트 및 비누 중에서 선택된 제형인 것을 특징으로 하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물의 제조방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조되는 것을 특징으로 하는 두피 보호 및 모발 생장 촉진용 화장료 조성물.
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