KR20220041119A - 노화의 진행 억제제, 및 이를 포함하는 음식품 - Google Patents

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Abstract

노화의 진행 억제제는, Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유한다.

Description

노화의 진행 억제제, 및 이를 포함하는 음식품
본 발명은 노화의 진행 억제제, 및 이를 포함하는 음식품에 관한 것이다.
노화의 원인의 하나로서, 활성산소종, 과산화물 등이 각종의 세포에게 주는 산화 스트레스를 들 수 있다. 예를 들어, 하기 비특허문헌 1에서는, 상기 활성산소종 또는 과산화물이 모낭을 구성하는 세포들에 축적하는 것에 의해서, 두발의 백발화(graying)(이하, 「탈색소화(depigmentation)」이라고도 칭함)가 진행하는 것이 보고되고 있다. 또한, 노화에 수반하는 두발의 탈모 및 탈색소화는, 17형 콜라겐의 감소에 의해서 촉진하는 것이 하기 비특허문헌 2 및 하기 비특허문헌 3에서 보고되고 있다. 일본국 특허공개 2009-161509호 공보(특허문헌 1)는, 17형 콜라겐이 두발의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 기능을 가지는 것을 개시하고 있다.
일본국 특허공개 2009-161509호 공보
J M Wood et al., FASEB J, 2009년, Vol 23, No.7, pp.2065-2075 Matsumura H et al., Science, 2016년, Vol 351, pp.575, add4395-1,2 Tanimura S et al., Cell Stem Cell, 2011년, Vol 8, pp.177-187
한편, 콜라겐 또는 젤라틴에 대해, 공지의 단백질 분해효소를 이용하여 가수분해하는 것으로써 얻을 수 있는 콜라겐 펩티드 혼합물이 공지되어 있다. 이 콜라겐 펩티드 혼합물은, 생체 내의 관절, 뼈, 연골, 피부 등에 있어 여러가지 생리 활성을 가지는 것이 보고되고 있다. 그러나, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물에 있어서, 두발의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 작용을 가지는 것은, 지금까지 보고되어 있지 않다. 활성산소종, 과산화물을 생체로부터 제거하는 소위 항산화 작용을 나타내는 펩티드로서 글루타티온이 알려져있지만, 이 글루타티온의 합성에 상기 콜라겐 펩티드 혼합물이 관여한다고 하는 보고도 되어 있지 않다. 이 때문에, 콜라겐 펩티드 혼합물, 및 콜라겐 펩티드 혼합물에 포함되는 콜라겐에서 유래한 펩티드가 가지는 신규한 생리 활성으로서 노화의 진행을 억제하는 작용, 구체적으로는, 상술의 두발에 있어서의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 작용, 글루타티온의 합성을 촉진하는 작용 등을 탐색하는 연구가 열심히 진행되고 있다.
상기 실정을 감안하여, 본 발명은, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 또는 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용 중 적어도 하나를 나타내는 펩티드 등을 포함하는 것으로, 두발의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 효과, 혹은 항산화 작용의 증강 효과를 얻는 것이 가능해지는 노화의 진행 억제제, 및 노화의 진행 억제제를 포함하는 음식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자 등은, 콜라겐 펩티드 혼합물이 가지는 신규한 생리 활성을 탐색하는 중에, 콜라겐 펩티드 혼합물 중에 포함되는 소정의 펩티드에 있어서, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 혹은 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용의 적어도 어느 하나를 나타내는 것을 지견하였다. 이 지견에 근거하여, 상기 펩티드를 포함하는 것에 의해서 두발에서의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 효과, 혹은 항산화 작용의 증강 효과를 얻을 수 있는 노화의 진행 억제제에 도달하였고, 이에 따라 본 발명을 완성시켰다.
본 발명은, 구체적으로는 하기와 같다.
본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제는, Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유한다.
상기 펩티드는, 콜라겐에서 유래한 것이 바람직하다.
상기 노화의 진행 억제제는, 상기 펩티드를 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물인 것이 바람직하다.
상기 콜라겐 펩티드 혼합물은, 그 중량 평균 분자량이 100 Da 이상 5000 Da 이하인 것이 바람직하다.
상기 노화의 진행 억제제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현 촉진제, 또는 글루타티온 합성효소의 유전자 발현 촉진제인 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 음식품은, 상기 노화의 진행 억제제를 포함한다.
본 발명에 따르면, 두발의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 효과, 혹은 항산화 작용의 증강 효과를 얻는 것이 가능해지는 노화의 진행 억제제, 및 노화의 진행 억제제를 포함하는 음식품을 제공할 수 있다.
발명을 실시하기 위한 형태
이하, 본 발명과 관련되는 실시 형태에 대해서, 더욱 상세하게 설명한다. 여기서, 본 명세서에 있어서「A 내지 B」라고 하는 형식의 표기는, 범위의 상한 및 하한(즉, A 이상 B 이하)을 의미하고, A에 있어서 단위의 기재가 없고, B에 있어서만 단위가 기재되어 있는 경우, A의 단위와 B의 단위는 동일하다.
[노화의 진행 억제제]
본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제는, Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유한다. 이러한 특징을 구비하는 노화의 진행 억제제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 혹은 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용의 적어도 어느 하나를 나타낼 수 있으므로, 두발에서의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 효과, 혹은 항산화 작용의 증강 효과를 얻는 것이 가능해진다.
[Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체]
상술한 대로, 노화의 진행 억제제는, Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유한다. 본 명세서에 있어서,「아미노산」은, 특별한 표기가 없는 한, 3-문자 표기의 약호로 나타낸다. 또한, 「아미노산」은, 특별한 표기가 없는 한, L-형 아미노산을 의미한다. 본 명세서에 있어서「펩티드」는, 예를 들어「Gly-Pro」이면, N-말단 측으로부터 글리신 및 프롤린의 순서로 C-말단 측을 향하여 배열된 펩티드(디펩티드)를 의미하고,「Glu-Hyp-Gly」이면, N-말단 측으로부터 글루탐산, 히드록시프롤린, 글리신의 순서로 C-말단 측을 향하여 배열된 펩티드(트리펩티드)를 의미한다. 이것은, 「Gly-Pro」 및 「Glu-Hyp-Gly」이외의 펩티드의 기재에 대해서도 마찬가지이다.
노화의 진행 억제제는, Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유하는 것이 바람직하다. 이 경우, 노화의 진행 억제제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 혹은 글루타티온 합성효소의 유전자 발현 촉진하는 작용을 보다 현저하게 나타내 보일 수 있다.
상기 펩티드의「염」은, 예를 들어 상기 펩티드의 염산염, 황산염, 인산염 등의 무기산염, 메탄술폰산염, 벤젠술폰산염, 숙신산염, 옥살산염 등의 유기산염, 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염 등의 무기 염기염, 트리에틸암모늄염 등의 유기 염기염 등으로 형성된다.
상기 펩티드의 「화학 수식체」란, 구성 단위인 아미노산 잔기가 가지는 유리 관능기가 화학 수식된 화합물을 의미한다. 화학 수식은, 예를 들어 히드록시프롤린의 수산기, N-말단(아미노 말단) 측의 아미노산의 아미노기 및 C-말단(카르복실 말단) 측의 아미노산의 카르복실기에 대해 실행할 수 있다. 화학 수식의 구체적 수단 및 그 처리 조건은, 종래 공지의 아미노산 및 펩티드를 대상으로 한 화학 수식 기술이 적용된다. 이러한 화학 수식에 의해서 얻어진, 각각의 아미노산 및 펩티드의 화학 수식체는, 약산성으로부터 중성으로 용해성이 향상하는 효과, 다른 유효 성분과의 상용성이 향상하는 효과 등을 제공할 수 있다.
예를 들어, Glu-Hyp-Gly의 트리펩티드에 대해, 히드록시프롤린에서의 수산기의 화학 수식으로서 O-아세틸화 등을 실시할 수 있다. 이 O-아세틸화는, 예를 들어 수용매 중 또는 비-수용매 중에서 펩티드에 무수 아세트산을 적용시키는 것에 의해서 실시할 수 있다. 글리신에서의 카르복실기의 화학 수식으로서 에스테르화, 아미드화 등을 실시할 수 있다. 상기 에스테르화는, 상기 펩티드를 메탄올 중에 현탁시킨 다음, 얻어진 현탁액을 건조 염화수소 가스가 통과하도록 함으로써 실시될 수 있다. 상기 아미드화는, 상기 펩티드에 카르보디이미드 등을 적용시키는 것에 의해서 실시할 수 있다.
펩티드 중의 유리 아미노기의 화학 수식으로서 메틸화를 실시할 수 있다. 펩티드 중의 유리 수산기의 화학 수식으로서 인산화 및 황산화 중 적어도 어느 하나를 실시할 수 있다.
상기 펩티드는, 콜라겐에서 유래한 것이 바람직하다. 이 경우, 원료로서의 콜라겐은, 예를 들어 소, 돼지, 양, 닭 또는 타조 등에 대표되는 동물의 가죽, 피부, 뼈, 연골, 힘줄 등, 혹은 어류의 뼈, 가죽, 비늘 등에 대해 종래 공지의 탈지 또는 탈회 처리, 추출 처리 등을 실시하는 것으로써 얻을 수 있다. 또한, 상기 펩티드의 원료로서 젤라틴을 이용할 수도 있다. 젤라틴은, 상기에서 설명한 바와 같이 하여 얻은 콜라겐을 열수 추출 등의 종래의 공지 방법으로 처리하는 것으로써 얻을 수 있다. 콜라겐 및 젤라틴은, 시판의 것을 원료로서 이용할 수도 있다.
상기 펩티드는, 상기 콜라겐 및 젤라틴 양쪽 또는 어느 한쪽에 대해, 엔도형 프로테아제 및 엑소형 프로테아제의 2종 이상을 조합하여 가수분해함으로써 얻을 수 있다. 상기 펩티드는, 상기의 가수분해에 의해서 다른 콜라겐 펩티드와 함께 혼재하는 콜라겐 펩티드 혼합물로서 얻을 수 있지만, 이 콜라겐 펩티드 혼합물 그 자체, 및 콜라겐 펩티드 혼합물을 부분 정제한 혼합물을 본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제로서 이용할 수 있다. 즉, 노화의 진행 억제제는, 콜라겐 펩티드 혼합물인 것이 바람직하다. 또한, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물을 더욱 정제하는 것으로써, 상술한 펩티드를 포함하는 정제물을 고순도로 얻을 수 있다. 상기 펩티드는, 콜라겐에서 유래한 경우, 후술하는 콜라겐 또는 젤라틴을 2단계에서 효소 처리하는 방법을 이용하는 것으로 얻는 것이 바람직하다.
또한, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물은, 그 중량 평균 분자량이 100 Da 이상 5000 Da 이하인 것이 바람직하다. 상기 콜라겐 펩티드 혼합물의 중량 평균 분자량은, 보다 바람직하게는 120 Da 이상 3500 Da 이하이며, 더욱 더 바람직하게는 150 Da 이상 3000 Da 이하이다. 상기 콜라겐 펩티드 혼합물의 중량 평균 분자량이 상술한 범위 내인 경우, 노화의 진행 억제제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 혹은 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용을 보다 충분히 얻을 수 있다. 상기 중량 평균 분자량이 5000 Da를 넘는 경우, 노화의 진행 억제제는, 상술한 효과가 불충분하게 될 우려가 있다.
상기 콜라겐 펩티드 혼합물의 중량 평균 분자량은, 이하의 측정 조건 하에서 사이즈 배제 크로마토그래피(SEC)를 실시하는 것으로써 구할 수 있다.
기기：고속 액체 크로마토그래피 (HPLC)(TOSOH CORPORATION 제)
컬럼：TSKGel (등록 상표) G2000SWXL
컬럼 온도: 40℃
컬럼 사이즈: 7.8 mm (I.D.)×30 cm, 5 ㎛
용리액: 45 질량% 아세토니트릴 (0.1 질량% 트리플루오로아세트산을 포함함)
유속: 1.0 mL/min
주입량: 10 μL
검출: UV 214 nm
분자량 마커: 이하의 5종을 사용함
Cytochrome C Mw: 12,000
Aprotinin Mw: 6,500
Bacitracin Mw: 1,450
Gly-Gly-Tyr-Arg Mw: 451
Gly-Gly-Gly Mw: 189
구체적으로는, 약 0.2 g의 상기 콜라겐 펩티드 혼합물을 포함하는 시료를 약 100 ml의 증류수에 첨가하여, 상기 혼합물을 교반한 다음, 0.2 ㎛ 필터를 사용하여 여과하는 것으로써, 중량 평균 분자량을 측정하는 시료(피측정물)를 제조한다. 이 피측정물을 상술한 사이즈 배제 크로마토그래피에 제공하는 것으로서, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물의 중량 평균 분자량을 구할 수 있다.
[노화의 진행 억제제의 제조 방법]
노화의 진행 억제제에 포함되는 상기 펩티드는, 종래 공지의 방법에 의해 얻을 수 있다. 예를 들어, 상기 펩티드는, 시판의 아미노산을 구입하는 것으로 얻을 수 있다. 상기 펩티드는, 콜라겐 또는 젤라틴을 가수분해하는 방법을 이용함으로써 얻을 수도 있다.
상기 펩티드(Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽)는, 종래 공지의 액상 또는 고상의 펩티드 합성 방법, 혹은 콜라겐 또는 젤라틴을 가수분해하는 방법을 이용하는 것으로 각각 얻을 수 있다. 상기 펩티드는, 효율성의 관점으로부터 후술하는 아미노산을 이용한 화학 합성 방법, 혹은 후술하는 콜라겐 또는 젤라틴을 2 단계에서 효소 처리하는 방법을 이용하는 것으로 제조하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 펩티드는, 콜라겐 또는 젤라틴을 2 단계에서 효소 처리하는 방법으로 대신하고, 1차 효소를 생략하고 2차 효소만 효소 처리하는 방법, 또는 1차 효소 및 2차 효소에 의한 효소 처리를 동시에 실시하는 방법을 이용하는 것으로 제조하는 것도 가능하다. 이하에서, 노화의 진행 억제제에 포함되는 펩티드 중에서「Glu-Hyp-Gly」에 주목하여, 이것을 제조하는 방법을 노화의 진행 억제제에 포함되는 펩티드의 제조 방법의 예시로서 설명할 것이다.
<화학 합성 방법>
상기 펩티드는, 일반적인 펩티드 합성법을 이용하여 얻을 수 있다. 이 펩티드 합성법으로서는, 고상 합성법 및 액상 합성법이 공지되어 있다. 고상 합성법에는, Fmoc법과 Boc법이 공지되어 있다. 상기 펩티드는, Fmoc법 및 Boc법 중 어느 방법을 이용해도 얻을 수 있다. 펩티드의 고상 합성법으로서, Glu-Hyp-Gly로 나타내어지는 트리펩티드의 합성 방법은, 다음과 같이 실시할 수 있다.
우선, 표면을 아미노기로 수식한 직경이 약 0.1 mm 정도의 폴리스티렌 고분자 겔의 비드를 고상으로서 준비한다. 축합제로서 디이소프로필카르보디이미드를 별도로 준비한다. 다음에, 상기 아미노산 서열에 있어서 C-말단(카르복실 말단) 측의 아미노기인 글리신의 아미노기를 Fmoc (fluorenyl-methoxy-carbonyl)기로 보호하는 것과 동시에, 상기 축합제를 이용한 탈수 반응에 의해 상기 글리신의 카르복실기와 상기 고상의 상기 아미노기를 펩티드 결합시킨다. 또한, 상기 고상을 용매로 세정하는 것으로써, 잔존하는 축합제 및 아미노산을 제거한 후, 상기 고상에 펩티드 결합하고 있는 글리신의 아미노기의 보호기를 제거(탈보호)한다.
계속해서, Fmoc 기로 아미노기를 보호한 히드록시프롤린을 준비하고, 이 히드록시프롤린의 카르복실기가 상기 글리신의 탈보호한 아미노기에 상기 축합제를 이용하는 것으로 펩티드 결합시킨다. 이 후, 전술된 것과 같은 방식으로 상기 히드록시프롤린의 아미노기의 탈보호, Fmoc 기로 보호한 글루탐산의 준비, 및 이 글루탐산과 상기 히드록시프롤린을 펩티드 결합시키는 반응을 실행하는 것으로써, 상기 고상으로서 Glu-Hyp-Gly로 나타내어지는 트리펩티드를 합성한다. 마지막으로, 상기 글루탐산의 아미노기의 탈보호를 실시하고, 가열 하에 상기 고상으로부터 상기 트리펩티드를 트리플루오로아세트산 중에 침지시켜 분리함으로써, 상기 트리펩티드를 제조할 수 있다.
<콜라겐 또는 젤라틴을 이용하는 제조 방법>
또한, 콜라겐 또는 젤라틴을 2 단계에서 효소 처리하는 것으로써, Glu-Hyp-Gly로 나타내어지는 트리펩티드를 제조하는 방법은, 하기와 같이 실시할 수 있다.
여기서, 콜라겐 또는 젤라틴을 「2 단계에서 효소 처리한다」라는 것은, 하기를 의미한다. 즉, 콜라겐 또는 젤라틴의 펩티드 결합을 절단하는 종래의 공지 방법에 의해 1차 효소 처리를 실행한 후에, 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소, 아미노펩티다아제 N 활성 및 프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제 활성을 동시에 가지는 효소, 또는 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소 및 프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제 활성을 가지는 효소의 조합에 의해 2차 효소 처리를 실행하는 것을 말한다. 1차 효소 처리를 실행하는 것으로써, 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체를 얻을 수 있다. 게다가 2차 효소 처리를 실행하는 것으로써, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체로부터 상기 Glu-Hyp-Gly를 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물을 얻을 수 있다. 콜라겐 또는 젤라틴을 2 단계에서 효소 처리하는 방법으로 대해서, 이하에서 더욱 더 상술한다.
(1차 효소 처리)
1차 효소 처리로 이용하는 효소로서는, 콜라겐 또는 젤라틴의 펩티드 결합을 절단하는 것이 가능한 효소이면, 특히 한정되어야 하는 것이 아니고, 임의의 단백질 분해 효소를 이용할 수 있다. 구체적으로는, 콜라게나아제, 티올 프로테아제, 세린 프로테아제, 산성 프로테아제, 알칼리성 프로테아제, 메탈 프로테아제 등을 들 수 있다. 이들 효소들로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종을 단독으로 이용할 수 있거나, 또는 이들 2종 이상을 조합하여 이용할 수 있다. 상기 티올 프로테아제로서는, 식물 유래의 키모파파인, 파파인, 브로멜린 및 피신, 동물 유래의 카텝신, 및 칼슘 의존성 프로테아제 등을 이용할 수 있다. 세린 프로테아제로서는, 트립신, 카텝신 D 등을 이용할 수 있다. 산성 프로테아제로서는, 펩신, 키모트립신 등을 이용할 수 있다. 1차 효소 처리로 이용하는 효소로서는, 본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제를 의약, 특정 보건용 식품 등에 이용하는 것을 고려할 경우, 병원성 미생물 유래의 효소를 이용하는 일 없이, 그 이외의 효소를 이용하는 것이 바람직하다.
1차 효소 처리에 있어서의 효소량으로서는, 예를 들어 콜라겐 또는 젤라틴 100 질량부에 대하여 상술한 효소를 0.1 내지 5 질량부로 하는 것이 바람직하다. 1차 효소 처리에 있어서의 처리 온도는 30 내지 65℃로 하고, 처리 시간은 10분 내지 72시간으로 하는 것이 바람직하다. 상기 1차 효소 처리에 의해 얻을 수 있는 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체의 중량 평균 분자량은, 바람직하게는 500 내지 20000 Da, 보다 바람직하게는 500 내지 10000 Da, 더욱 더 바람직하게는 500 내지 8000 Da이다. 중량 평균 분자량이 상술한 범위에 있으면, 분자량이 적절한 펩티드가 충분히 생성되어 있다고 말할 수 있다. 1차 효소 처리의 후에, 필요에 따라서 효소를 실활시킬 수 있다. 이 경우에, 실활 온도로서는, 예를 들어 70 내지 100℃로 하는 것이 바람직하다. 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체의 중량 평균 분자량은, 상술한 SEC를 이용하는 방법에 따라 구할 수 있다.
(2차 효소 처리)
2차 효소 처리로 이용하는 효소의 예로서는, 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소, 아미노펩티다아제 N 활성 및 프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제 활성을 동시에 가지는 효소, 또는 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소 및 프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제 활성을 가지는 효소의 조합을 들 수 있다. 여기서 본 명세서에 있어서「아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소」란, 펩티드 사슬의 N-말단 측으로부터 아미노산을 유리시키는 기능을 가지는 펩티다아제이며, N-말단 측으로부터 2번째 위치에서 프롤린 혹은 히드록시프롤린 이외의 아미노산이 존재하는 경우에 작용하는 효소를 말한다. 본 명세서에 있어서 「프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제 활성을 가지는 효소」란, N-말단 측으로부터 3번째 위치가 프롤린 혹은 히드록시프롤린인 펩티드로부터, N-말단 측의 3개의 아미노산 잔기 만을 유리시키는 펩티다아제를 말한다. 2차 효소 처리로 이용하는 효소도, 본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제를 의약, 특정 보건용 식품 등에 이용하는 것을 고려했을 경우, 병원성 미생물 유래의 효소를 이용하는 일 없이, 그 이외의 효소를 이용하는 것이 바람직하다.
아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소로서는, 예를 들어 아미노펩티다아제 N(EC 3.4.11.2.; T. Yoshimoto et al., Agric. Biol. Chem., 52: 217-225 (1988)) 등을 들 수 있고, 예를 들어, 아스페르길루스(Aspergillus)속 유래의 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소를 들 수 있다. 프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제 활성을 가지는 효소로서는, 예를 들어 프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제(EC 3.4.14.; A. Banbula et al., J. Biol. Chem., 274: 9246-9252 (1999)) 등을 들 수 있다.
2차 효소 처리를 실행하는 것으로써, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체에 포함되지 않았던 펩티드를 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물을 얻을 수 있다. 구체적으로는, 상기 Glu-Hyp-Gly를 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물을 얻을 수 있다.
2차 효소 처리에 있어서의 효소량으로서는, 예를 들어 상기 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체 100 질량부에 대해서 상술한 효소를 0.01 내지 5 질량부로 하는 것이 바람직하다. 2차 효소 처리에 있어서의 처리 온도는 30 내지 65℃로 하고, 처리 시간은 10분 내지 72시간으로 하는 것이 바람직하다. 상기 2차 효소 처리에 의해 얻을 수 있는 콜라겐 펩티드 혼합물의 중량 평균 분자량은, 바람직하게는 100 내지 5,000 Da, 보다 바람직하게는 120 내지 3,500 Da, 더욱 더 바람직하게는 150 내지 3,000 Da이다. 콜라겐 펩티드 혼합물의 중량 평균 분자량도, 상술한 SEC를 이용하는 방법에 따라 구할 수 있다.
2차 효소 처리는, 상술한 Glu-Hyp-Gly의 트리펩티드를 생성하는 것을 주된 목적으로 하여 실행된다. 이로 인해, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체에 포함되는 펩티드가 과잉으로 가수분해되어 버리지 않도록, 2차 효소 처리에 있어서의 효소량, 처리 온도, 처리 시간 및 pH를 조정하는 것이 바람직하다. 이에 따라, 콜라겐 펩티드 혼합물을 상술한 중량 평균 분자량의 범위 내로 하는 것이 바람직하다. 2차 효소 처리의 후에, 효소를 실활시킬 필요가 있다. 이 경우에, 실활 온도로서는, 예를 들어 70 내지 100℃로 하는 것이 바람직하다. 게다가 120℃로 몇 초 이상의 살균 처리를 실시하는 것이 바람직하다. 또한, 콜라겐 펩티드 혼합물에 200℃ 이상의 열을 가하여 분무 건조시키는 것도 가능하다.
2차 효소 처리에서는, 상기 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소, 프롤릴 트리펩티딜 아미노펩티다아제 활성을 가지는 효소 뿐만 아니라, 다른 활성을 동시에 가지는 효소를 이용할 수 있고, 한편 다른 활성을 가지는 효소를 2종 이상 조합할 수도 있다. 이것에 의해, 부생성물을 분해하여 제거하는 것이 가능하다. 이 경우에 있어서 이용하는 효소로서는, 원료가 되는 콜라겐의 종류, 1차 효소 처리에 이용하는 효소의 종류에 따라 적절하게 선택하는 것이 바람직하다. 상술한 다른 활성으로서는, 예를 들어 프롤리다아제 활성, 히드록시프롤리다아제 활성 등의 디펩티다아제 활성을 들 수 있다. 이것에 의해, 부생성물이 되는 디펩티드 등을 분해하여 제거하는 것이 가능하다.
또한, 아미노펩티다아제 N 활성은, 기본적으로 N-말단 측의 아미노산을 1개씩 유리시키는 활성이다. 이 때문에, 1차 효소 처리에 의해서 얻을 수 있는 콜라겐 펩티드 혼합물 전구체에 분자량이 지극히 큰 펩티드가 포함되는 경우, 2차 효소 처리를 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소만으로 실행했을 때, 2차 효소 처리 시간이 현저하게 장기화된다. 이러한 경우에 대응하기 위하여, 2차 효소 처리에서는, 예를 들어 프롤린의 카르복실기 측을 가수분해하는 활성(프롤리다아제 활성)을 가지는 엔도펩티다아제인 프롤릴 올리고펩티다아제를 이용할 수 있다. 이것에 의해, 2차 효소 처리를 효율적으로 실시할 수 있다.
콜라겐 또는 젤라틴을 2 단계에서 효소 처리하는 방법에서는, 1차 효소 처리에 의해서 비교적 분자량의 큰 펩티드를 생성할 수 있다. 이 펩티드는, 예를 들어 [X1-Gly-X2-Glu-Hyp-Gly] (X1 및 X2 ≠ Hyp)로 나타내어지는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 연속되는 2차 효소 처리에서는, 상기 [X1-Gly-X2-Glu-Hyp-Gly]로 나타내어지는 펩티드에 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소가 작용하여, N-말단에서의 X1이 유리하는 것으로써 [Gly-X2-Glu-Hyp-Gly]로 나타내어지는 아미노산 서열을 가지는 펩티드를 얻을 수 있다. 그 다음에, 상기 [Gly-X2-Glu-Hyp-Gly]로 나타내어지는 펩티드에, 아미노펩티다아제 N 활성을 가지는 효소가 2번 작용하여, 글리신 및 X2가 유리하는 것으로써, [Glu-Hyp-Gly]로 나타내어지는 펩티드를 얻을 수 있다.
(콜라겐 펩티드 혼합물의 정제)
상술한 2 단계에서의 효소 처리를 실행하는 것으로써, Glu-Hyp-Gly를 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물을 제조할 수 있다. 상기 콜라겐 펩티드 혼합물에는, Glu-Hyp-Gly로 나타내어지는 트리펩티드 이외의 펩티드도 포함되어 있기 때문에, 필요에 따라서 콜라겐 펩티드 혼합물을 정제하는 것이 바람직하다. 이 경우의 정제 방법으로서는, 종래 공지의 방법을 이용할 수 있는데, 예를 들어 한외 여과, 사이즈 배제 크로마토그래피, 이온-교환 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 어피니티 크로마토그래피 등의 각종 액체 크로마토그래피 등을 이용할 수 있다.
구체적으로는, 콜라겐 펩티드 혼합물을 이하의 조작에 의해 정제할 수 있다.즉, 상기 콜라겐 펩티드 혼합물의 약 2 g/10 mL를 이온-교환 컬럼(예를 들어, 상품명：「TOYOPEARL(등록상표) DEAE－650」, TOSOH CORPORATION제)에 로딩한 후, 증류수로 용출하는 제1 보이드 볼륨 분획(first void volume fraction)을 회수한다. 그 다음에, 제1 보이드 볼륨 분획을 상기 이온-교환 컬럼과는 반대의 이온 교환기를 가지는 컬럼(예를 들어, 상품명：「TOYOPEARL(등록상표) SP－650」, TOSOH CORPORATION제)에 로딩한 후, 증류수로 용출하는 제2 보이드 볼륨 분획을 회수한다.
그 다음, 제2 보이드 볼륨 분획을 겔 여과 컬럼(예를 들어, 상품명：「SEPHADEX LH-20」, GE Healthcare Japan Corporation제)에 로딩하고, 30 질량%의 메탄올 수용액으로 용출하는 것으로써, Glu-Hyp-Gly의 트리펩티드가 포함되는 분획을 회수한다. 마지막으로, 이 분획에 대해서 역상 컬럼(예를 들어 상품명：「μBondasphere 5μC18 300Å 컬럼」, Waters Corporation제)을 로딩한 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여, 0.1 질량%의 트리플루오로아세트산을 포함하는 32 질량% 이하의 아세토니트릴 수용액의 직선 농도 그래디언트로 분획하였다. 이러한 방법으로, Glu-Hyp-Gly를 고순도로 얻을 수 있었다.
[17형 콜라겐의 유전자 발현 촉진제, 또는 글루타티온 합성효소의 유전자 발현 촉진제]
본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현 촉진제, 또는 글루타티온 합성효소의 유전자 발현 촉진제인 것이 바람직하다. 노화의 진행 억제제는, 상기에서 설명한 바와 같이, Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유한다. 이것에 의해, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용을 나타낼 수 있다. 따라서, 노화의 진행 억제제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현 촉진제로서 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하고, 이에 따라 두발에서의 탈모 및 탈색소화를 억제할 수 있다. 17형 콜라겐의 유전자 발현 촉진제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 것부터, 가령성 박모(age-related hair thinning), 탈모 및 백발화의 진행을 억제하는 효과, 및 아름다운 피부의 촉진 효과 등을 기대할 수 있다.
또한, 노화의 진행 억제제는, 상기 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유하는 것으로부터, 이에 따라 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용을 나타낼 수 있다. 따라서, 노화의 진행 억제제는, 글루타티온 합성효소의 유전자 발현 촉진제로서 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하고, 이에 따라 생체 내로부터 활성산소종, 과산화물등을 제거할 수 있다. 글루타티온 합성효소의 유전자 발현 촉진제는, 생체 내로부터 활성산소종, 과산화물 등을 제거할 수 있으므로, 염증에 의한 색소 침착을 억제하는 것에 기초한 미백, 습진(eczema)의 억제 등에 기초한 아름다운 피부, 각막 손상의 치유 촉진, 간 기능의 개선 및 파킨슨병 개선 등의 효과를 나타내는 것도 또한 기대할 수 있다.
노화의 진행 억제제는, 경구적으로 또는 비경구적으로 여러 가지의 형태로 투여할 수 있다. 그 형태로서는, 경구적으로 투여하는 경우, 예를 들어 정제, 과립제, 캡슐제, 분제, 액제, 현탁제제 및 유화제제 등의 제형으로 할 수 있다. 또한, 상술한 제형의 노화의 진행 억제제를, 음식품에 혼합할 수도 있다. 노화의 진행 억제제는, 예를 들어 상술한 펩티드를 포함하지만, 이것들은 장관으로 신속히 흡수되기 위해, 경구 투여에 의한 섭취가 가능하다.
노화의 진행 억제제는, 비경구적으로 투여하는 경우, 예를 들어 연고, 크림, 로션 등의 외용제, 경피제 등의 제형으로 할 수 있다. 또한, 노화의 진행 억제제는 두피에 직접 바르기 위한 액제 또는 도포제로 할 수도 있다. 노화의 진행 억제제를 도포제로 하는 경우, 도포제로 포함되는 상기 펩티드 등의 농도는, 0.001 내지 5 질량%인 것이 바람직하다.
노화의 진행 억제제의 투여량은, 대상자의 연령, 성별, 체중, 감수성 차이, 투여 방법, 투여 간격, 제재의 종류 등에 따라서 다르다. 상기 노화의 진행 억제제를 경구적으로 투여하는 경우, 투여량은, 예를 들어 성인 1일 당 0.0001 내지 2500 mg/kg인 것이 바람직하고, 0.0001 내지 500 mg/kg인 것이 보다 바람직하다. 노화의 진행 억제제의 제형이, 예를 들어 정제인 경우, 정제는 노화의 진행 억제제를 정제 당 0.001 내지 80 질량%의 양으로 함유할 수 있고, 노화의 진행 억제제의 제형이, 예를 들어, 분제인 경우, 분제는 노화의 진행 억제제를 0.001 내지 100 질량%의 양으로 함유할 수 있다. 상기 투여량은, 노화의 진행 억제제를 비경구적으로 투여하는 경우, 그 외의 형태의 제재에 의해서 투여하는 경우 등에 있고, 경구 투여의 경우의 투여량을 참고로 하여 적절하게 결정할 수 있다. 노화의 진행 억제제는, 1일 1회 또는 수회 분할 투여하거나, 혹은 1일 1회 또는 수일에 1회 투여할 수도 있다.
노화의 진행 억제제는, 본 발명의 효과에 악영향을 미치지 않는 범위에서, 다른 유효 성분, 제재용의 담체 등을 적절하게 함유시킬 수 있다. 다른 유효 성분의 예로서 이눌린(inulin), 카페익산(caffeic acid), 퀸산(quinic acid) 및 이들의 유도체, 마조람(marjoram)으로부터의 추출물, 금불환(Kinfukan), 애기풀(milkwort)(원지: polygalae radix) 및 백미초(Hakubiso), 가응조(Desmos chinensis Lour) 등의 각종의 생약, 로얄 젤리, 에키네시아(echinacea)로부터의 추출물, 아사이(acai)로부터의 추출물, 쿠프아쿠(Cupuacu)로부터의 추출물 등을 들 수 있다. 또한, 의약 제제에 제제화할 때에 이용하는 약제학적으로 허용 가능한 담체로서는, 희석제, 결합제(시럽, 아라비아 고무, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트(tragacanth) 및 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone)), 부형제(락토오스, 수크로오스, 옥수수 전분, 인산 칼륨, 소르비톨 및 글리신), 활택제(스테아린산 마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌 글리콜 및 실리카), 붕괴제(감자 전분) 및 습윤제(라우릴 황산 나트륨)등을 들 수 있다.
[용도 발명]
본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제는, 상기에서 설명한 바와 같이 Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유한다. 노화의 진행 억제제는, 상술한 펩티드의 속성으로서 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 혹은 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용의 적어도 어느 하나를 나타낼 수 있다. 다시 말하면, 본 발명은 상기의 속성에 근거하여 신규하게 노화의 진행을 억제하는 용도를 발견한 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 말한다.
[음식품]
본 발명과 관련되는 음식품은, 상기 노화의 진행 억제제를 포함한다. 예를 들어, 노화의 진행 억제제로 포함되는 것이 바람직한 상기의 펩티드는, 상술한 대로 장관으로 신속하게 흡수되기 위하여, 경구 투여에 의한 섭취가 가능하다. 따라서, 본 발명은, 상기 노화의 진행 억제제를 포함하는 음식품으로서 식사 또는 음료에 혼합하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명과 관련되는 노화의 진행 억제제는, 특정 보건용 식품, 또는 기능성 표시 식품으로서 이용할 수도 있다. 음식품에 포함되는 노화의 진행 억제제의 농도로서는, 0.001 내지 100 질량%인 것이 바람직하다.
실시예
이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이것들로 한정되는 것은 아니다.
［실시예 1］
［시료의 준비]
<펩티드 및 콜라겐 펩티드 혼합물의 준비>
이하의 표 1 내지 표 4에 나타내는 펩티드 및 콜라겐 펩티드 혼합물을, 상술한 방법을 사용하여 제조하거나, 또는 후술하는 제조업자로부터 입수하는 것으로써 준비하였다. 상기 펩티드 및 콜라겐 펩티드 혼합물은, 후술하는 표피 세포에 있어서의 17형 콜라겐 유전자의 메신저 RNA량(mRNA량), 및 글루타티온 합성효소 유전자의 mRNA량에 영향을 주는지 여부를 평가하기 위한 검체가 되는 것이다.
여기서, 표 1 및 표 2 중에 나타내어지는 펩티드는, 이것을 구성하는 아미노산을 한글자로 표기하는 약호를 이용한다. 표 1 중에,「EO」는, 글루탐산-히드록시프롤린으로 나타내어지는 디펩티드(PH Japan Co., Ltd.제)이다. 「GP」는, 글리신-프롤린으로 나타내어지는 디펩티드(상품명：「G-3015」, BACHEM Co.제)이다. 「EOG」는, 글루탐산-히드록시프롤린-글리신으로 나타내어지는 트리펩티드(PH Japan Co., Ltd.제)이다.
또한, 표 3 중에 나타내어지는 콜라겐 펩티드 혼합물 A(상품명：「COLLAPEP PU」, Nitta Gelatin Inc.제, 중량 평균 분자량(Mw)：약 630 Da)는, 후술하는 조건 하에서 실행한 LC-MS/MS에 의한 정량 해석에 있어서, 「EOG」 및 「GP」를 이하의 양으로 포함하고 있었다.
Glu-Hyp-Gly: 4 ppm, Gly-Pro: 2,379 ppm, 합계: 2,383 ppm.
다음에, 표 4 중에 나타내어지는 콜라겐 펩티드 혼합물 B(상품명：「TYPE-S」, Nitta Gelatin Inc.제, 중량 평균 분자량(Mw)：약 750 Da)는, 후술하는 조건 하에서 실행한 LC-MS/MS에 의한 정량 해석에 있어서, 「EOG」 및 「GP」를 이하의 양으로 포함하고 있었다.
Glu-Hyp-Gly: 9 ppm, Gly-Pro: 1,159 ppm, 합계: 1,168 ppm.
표 4 중에 나타내어지는 콜라겐 펩티드 혼합물 C는, Nitta Gelatin Inc.가 개발 중인 콜라겐 펩티드 혼합물(중량 평균 분자량(Mw)：약 450 Da)은, 후술하는 조건 하에서 실행한 LC-MS/MS에 의한 정량 해석에 있어서, 「EOG」 및 「GP」를 이하의 양으로 포함하고 있었다.
Glu-Hyp-Gly: 24 ppm, Gly-Pro: 26,387 ppm, 합계: 26,411 ppm.
LC-MS/MS에 의한 정량 해석은, 다음의 조건으로 실행하였다.
HPLC 장치：「ACQUITY UPLC H-Class Bio」, Waters Corporation제
컬럼: 「Hypersil GOLD PFP 2.1 × 150 mm, 5 ㎛ (Thermo Fisher Scientific. Inc.제)
컬럼 온도: 40℃(리니어 그래디언트)
이동상: (A) 0.2% 포름산 및 2 mM 아세트산 암모늄 함유 수용액
(B) 100% 메탄올
Figure pct00001
MS/MS 장치: 「Xevo TQ-XS」 Waters Corporation제
이온화법: Positive ESI
모세관(Capilary) (kV): 1
탈용매화 온도(Desolvation temperature) (℃): 500
소스 온도(Source temperature) (℃): 150
MRM 조건:
Figure pct00002
<표피 세포의 준비>
우선, 표피 세포로서 인간 정상 표피 각화 세포 NHEK(NB)(KURABO INDUSTRIES LTD.제)를 입수했다. 상기 세포를 필요수의 시판의 Φ60 mm 샬레에 샬레 당 1.25×104개(0.25×104 세포/mL의 농도를 가지는 세포 분산액의 5 mL)로 시딩하였고, 무혈청 배지(상품명：「HuMedia KG-2」, KURABO INDUSTRIES LTD.제)에 의해 2일 간, 배양하였다. 그 다음에, 상기 세포가 상기 샬레 내에서 서브컨플루언트(subconfluent)가 된 것을 확인한 후, 상기 샬레 내의 배지를 기본 배지(상품명：「HuMedia KB-2」, KURABO INDUSTRIES LTD.제)에 옮겨 놓았다. 이것에 의해, 17형 콜라겐 유전자의 mRNA량, 및 글루타티온 합성효소 유전자의 mRNA량을 평가하기 위한 표피 세포를 준비하였다.
<유전자 발현 시험>
각각의 샬레 중의 기본 배지에 대하여, 상기 펩티드 또는 콜라겐 펩티드 혼합물을 표 1 내지 표 4와 같은 농도가 되도록 각각 첨가하는 것과 동시에, 37℃에서, 이산화탄소의 농도 5 vol%의 분위기 하에서 72시간 배양하는 것으로써, 유전자 발현 시험에 제공하는 각 시료를 준비하였다. 또한, 상기 샬레 중의 기본 배지에 대하여, 이온 교환수 만을 첨가한 대조 시료(이하, 「Blank」라고도 칭한다)를 준비하였다. 이 대조 시료에 대해서도 37℃에서, 이산화탄소의 농도 5 vol%의 분위기 하에서 72시간 배양하였다.
그 다음에, RNA 추출 키트(상품명：「TRIzol(등록상표) Reagent」, Life Technologies Japan Ltd.제)를 상기 키트에 부속된 프로토콜에 따라서 이용하는 것으로서, 상기 샬레 중의 표피 세포로부터 전체 RNA를 추출하였고, 따라서 전체 RNA를 포함한 추출물을 상기 시료마다 얻었다. 계속하여, 이 추출물 중의 RNA에 대하여, cDNA 제작 키트(상품명(품번)：「High Capacity RNA-to-cDNA Kit (4387406)」, Life Technologies Japan Ltd.제)를 상기 키트에 부속된 프로토콜에 따라서 이용하는 것으로서, 역전사를 실행하였고, 따라서 상기 추출물 중의 RNA로부터 cDNA를 얻었다. 또한, 상기 cDNA에 대하여, 리얼타임(RT)-PCR을 DNA 증폭 장치(상품명：「Step One Plus (TM) Real-Time PCR System」, Applied Biosystems Inc.제)에 의해 실행하였다.
상기 RT-PCR에서는, 표적 유전자로서 17형 콜라겐(Life Technologies Japan Ltd.제, 프라이머：Hs009900361_ml), 및 글루타티온 합성효소(GSS, Life Technologies Japan Ltd.제, 프라이머：Hs01547656_ml)의 mRNA량을 측정하였다. 내부 표준(보정 유전자)으로서 GAPDH를 선택하였다. mRNA량의 계산에는, 검량선법을 이용하였다. 상기 RT-PCR에 이용하는 프라이머 및 프로브는, 시약 키트(상품명：「TaqMan(등록상표) Gene Expression Assays」, Applied Biosystems Inc.제)에 부속하는 것을 이용하였다.
상기 RT-PCR로부터 얻을 수 있던 데이터는, 이하와 같이 해석하였다. 우선, 각 시료 및 대조 시료에 있어서, 상술한 2종의 표적 유전자(17형 콜라겐 및 글루타티온 합성효소)의 mRNA량(유전자 발현량)을 각각 산출하였다. 그 다음에, 2종의 표적 유전자의 mRNA량을, 보정 유전자로 한 GAPDH의 mRNA량으로 보정하는 것으로써 각 시료 및 대조 시료에 있어서의 보정값을 얻었다. 구체적으로는, 2종의 표적 유전자의 mRNA량을 GAPDH의 mRNA량으로 나눈 값(상대값)을 각각 구하였다.
그 다음에, 대조 시료의 보정값을 100으로 하여, 상기 대조 시료의 보정값에 대한 각 시료에 있어서 얻을 수 있던 보정값의 비율(유전자 발현 상승률(%))을 구하였다. 이것에 의해 상기 표피 세포에 있어서, 상기 펩티드 및 콜라겐 펩티드 혼합물을 첨가했던 것에 기초한 17형 콜라겐 유전자의 mRNA량, 및 글루타티온 합성효소 유전자의 mRNA량의 영향(유전자 발현 촉진 작용을 나타내는지 여부)을 평가하였다.
또한, 상기 유전자 발현 상승률(%)을 통계 처리하는 것으로써, 각 시료에 있어서의 17형 콜라겐 유전자 및 글루타티온 합성효소 유전자의 유전자 발현 촉진 작용의 유의성을 평가하였다. 이 유의성의 평가는, 통계 처리로서 소프트웨어(상품명：「엑셀 통계(Ver 2.1)」, Social Survey Research Information Co., Ltd.제」를 이용하여 Smirnov-Grubbs(양측 검정)를 실행하고, 또한 유의 수준(P 값)으로서 0.01을 임계값으로 설정하였다. 그 후, Student's t-test(t-검정)를 실행함으로써 유의성 평가를 실행하였다. 결과를 표 1 내지 표 4에 나타내었다. 표 1 내지 표 4 중에서,「++」가 붙은 시료에 있어서, 상기 유전자의 발현 촉진 작용에 유의성이 있다고 판단되었다.「+」가 붙은 시료에서는, 유전자 발현 상승률(%)이 100을 넘었다. 「-」가 붙은 시료에서는, 상기 유전자의 발현 촉진 작용에 유의성이 없다고 판단되었다.
여기서, 표 1은, 「EO」, 「GP」 및 「EOG」의 각 펩티드를 각각 표피 세포에 첨가했을 경우에 있어서의 17형 콜라겐 유전자의 유전자 발현 상승률을 나타낸다. 표 2는, 「GP」 및 「EOG」의 각 펩티드를 각각 표피 세포에 첨가했을 경우에 있어서의 글루타티온 합성효소 유전자의 유전자 발현 상승률을 나타낸다. 표 3은, 상술한 「콜라겐 펩티드 혼합물 A」를 각각 표피 세포에 첨가했을 경우에 있어서의 17형 콜라겐 유전자의 유전자 발현 상승률을 나타낸다. 표 4는, 상술한 「콜라겐 펩티드 혼합물 B」 및 「콜라겐 펩티드 혼합물 C」를 각각 표피 세포에 첨가했을 경우에 있어서의 글루타티온 합성효소 유전자의 유전자 발현 상승률의 증가량을 나타낸다.
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
[고찰]
표 1 내지 표 4에 의하면, Gly-Pro (GP) 및 Glu-Hyp-Gly (EOG) 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드를 함유하는 시료에서는, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 또는 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용 중 적어도 하나를 가지는 것이 이해된다. 이러한 펩티드를 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물 A 내지 C도, 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용, 또는 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 작용 중 적어도 하나를 가지고 있었다. 한편, Glu-Hyp (EO)로 나타내는 펩티드를 함유하는 시료는, 명확한 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 작용을 나타내지 않았다. 이것에 의해, 상기 Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly의 펩티드, 및 이들 펩티드들을 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물은, 노화의 진행 억제제로서 17형 콜라겐의 유전자 발현을 촉진하는 것으로써, 두발에 있어서의 탈모 및 탈색소화를 억제하는 효과가 있는 것이 시사되었다. 또한, 상기 펩티드, 및 이들 펩티드를 포함하는 콜라겐 펩티드 혼합물은, 노화의 진행 억제제로서 글루타티온 합성효소의 유전자 발현을 촉진하는 것으로써, 글루타티온 합성을 촉진하여, 이에 따라 생체 내로부터 활성산소종, 과산화물 등을 제거하는 항산화 효과가 있는 것이 시사되었다.
［실시예 2］
［시료의 준비]
<콜라겐 펩티드 혼합물의 준비>
Gly-Pro (GP) 및 Glu-Hyp-Gly (EOG) 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드를 함유하는 콜라겐 펩티드 혼합물로서, 콜라겐 펩티드 혼합물 D(상품명：「COLLAGENAID」, Nitta Gelatin Inc.제, 중량 평균 분자량(Mw)：약 4000 Da)를 준비하였다. 콜라겐 펩티드 혼합물 D는, 상술한［실시예 1]에서와 동일한 조건으로 실행한 LC-MS/MS에 의한 정량 해석에 있어서, 「EOG」 및 「GP」를 합계로 132 ppm 포함하고 있었다.
［인간에 대한 노화의 진행 억제 시험]
콜라겐 펩티드 혼합물 D를, 연령층이 10 내지 70대인 합계 95명의 피험자(남성 2명, 여성 92명)에게 섭취시켰을 경우, 상기 피험자가 노화의 진행 억제 효과를 느끼는지 여부에 관하여 조사하였다. 구체적으로는, 상기 95명의 피험자에게 1일당 4 내지 6 g의 콜라겐 펩티드 혼합물 D를, 섭취 시간을 지정하지 않고 10 내지 20일간(평균 14일간) 경구 섭취시켰다. 그 후, 피험자에 대하여 노화의 진행 억제 효과를 느꼈을 경우에, 그 부위와 함께, 상기 효과의 상세(구체적인 내용)에 대해 청취 조사(앙케이트 조사)를 실행하였다.
결과를 표 5 내지 표 10에 나타내었다. 표 5는, 노화의 진행 억제 효과를 느낀 부위, 및 당해 부위에서 노화의 진행 억제 효과를 느낀 인원수(복수 회답 가능)를 나타낸다. 표 6은, 피부에 있어서 노화의 진행 억제 효과를 느꼈을 경우의 구체적인 내용, 및 당해 내용을 회답한 인원수(복수 회답 가능)를 나타낸다. 표 7은, 머리카락에 있어서 노화의 진행 억제 효과를 느꼈을 경우의 구체적인 내용, 및 당해 내용을 회답한 인원수(복수 회답 가능)를 나타낸다. 표 8은, 손발톱에 있어서 노화의 진행 억제 효과를 느꼈을 경우의 구체적인 내용, 및 당해 내용을 회답한 인원수(복수 회답 가능)를 나타낸다. 표 9는, 관절에 있어서 노화의 진행 억제 효과를 느꼈을 경우의 구체적인 내용, 및 당해 내용을 회답한 인원수(복수 회답 가능)를 나타낸다. 표 10은, 그 외의 부위에 있어서 노화의 진행 억제 효과를 느꼈을 경우의 구체적인 내용, 및 당해 내용을 회답한 인원수(복수 회답 가능)를 나타낸다.
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
[고찰]
표 5 내지 표 10에 의하면, Gly-Pro (GP) 및 Glu-Hyp-Gly (EOG)의 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드를 함유하는 콜라겐 펩티드 혼합물 D(노화의 진행 억제제)는, 피부, 머리카락, 손발톱, 관절 및 그 외의 부위에 있어서 노화의 진행 억제 효과를 나타내는 것으로 이해된다.
이상과 같이 본 발명의 실시 형태 및 실시예에 대하여 설명을 했지만, 상술의 각 실시 형태 및 실시예의 구성을 적절하게 조합하는 것도 당초부터 예정하고 있다.
본원에 개시된 실시 형태 및 실시예는 모든 점으로 예시이며 제한적인 것은 아니라고 생각할 수 있어야 한다. 본 발명의 범위는 상술한 설명이 아니라 청구범위에 의해서 나타나며, 청구범위와 균등물의 의미 및 범위 내에서의 모든 변경이 포함되도록 의도된다.

Claims (6)

  1. Gly-Pro 및 Glu-Hyp-Gly 양쪽 또는 어느 한쪽의 펩티드, 또는 그 염, 혹은 그 화학 수식체를 함유하는, 노화의 진행 억제제.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 펩티드는, 콜라겐에서 유래한, 노화의 진행 억제제.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 노화의 진행 억제제는, 콜라겐 펩티드 혼합물인, 노화의 진행 억제제.
  4. 청구항 3에 있어서,
    상기 콜라겐 펩티드 혼합물은, 그 중량 평균 분자량이 100 Da 이상 5000 Da 이하인, 노화의 진행 억제제.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 노화의 진행 억제제는, 17형 콜라겐의 유전자 발현 촉진제, 또는 글루타티온 합성효소의 유전자 발현 촉진제인, 노화의 진행 억제제.
  6. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 기재된 노화의 진행 억제제를 포함하는, 음식품.
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