KR20220002972A - 변형 항 pd-l1 항체 및 신경변성 질환 치료 방법 및 용도 - Google Patents

변형 항 pd-l1 항체 및 신경변성 질환 치료 방법 및 용도 Download PDF

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Abstract

본 명세서는 신경변성 질환 변형에 대한 치료 효능을 유지하면서 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하고 청소율을 향상시키는 변형 항 PD-L1 항체를 개시한다. 본 명세서는 또한 이러한 변형 항 PD-L1 항체를 암호화하는 핵산 서열 및 발현 컨스트럭트 뿐만 아니라 이러한 변형 항 PD-L1 항체를 제조하는 방법을 개시한다. 또한, 본 명세서는 항체가 특정 기간 동안만 존재한 다음 치료 효능이 유지되도록 보장하기 위해 신체에서 충분히 제거되도록 하는 개시된 항 PD-L1 항체의 투여 요법을 사용하는 치료 방법 및 용도를 개시한다.

Description

변형 항 PD-L1 항체 및 신경변성 질환 치료 방법 및 용도
[001] 본 출원은 35 U.S.C. 119(e)에 따라 2019년 4월 19일에 출원된 미국특허 가출원번호 62/836,247의 우선권 및 출원일자를 주장하고, 그리고 본 출원은 35 U.S.C. 119(a)에 따라 2019년 4월 19일에 출원된 유럽특허 출원번호 19170438.6의 우선권 및 출원일자를 주장하며, 상기 출원들의 내용은 각각 참조로서 본 출원에 포함된다.
[002] 신경변성은 신경세포의 구조 또는 기능의 점진적 손실이며, 신경세포 사멸을 포함한다. 많은 신경변성 질환은 신경변성 과정의 결과로서 발생하고, 행동, 사회성, 인지 또는 운동 기능의 점진적 저하를 야기한다. 현재로서는 신경변성 질환을 치유하거나 그의 진행을 변형 또는 중단시킬 수 있는 효과적인 치료법이 없으며, 승인된 약물 요법은 오직 약간의 그리고 일과성의 증상 완화만을 제공한다.
[003] 많은 신경변성 병리는 공통적인 신경 염증성 요소를 공유하는데, 이는 질환 진행의 일부분이고, 그리고 질환 악화에 일조한다. 이러한 병리 중에는 알츠하이머병(AD) 및 나이 관련 치매, 근위축성 측삭경화증, 파킨슨병, 및 헌팅턴병, 점진적 인지 및/또는 기능 저하를 특징으로 하는 약화 신경변성 질환이 있다. 그러나 신경변성 질환 병리의 만성 신경 염증성 요소에도 불구하고, 지난 십 년간 소염제가 포함된 임상 치료가 모두 성공하지 못한 것으로 입증되었거나 또는 현재 유해하기까지 하다.
[004] 본 명세서는 전신(systemic) 소염제를 사용하여 신경변성 병리의 염증 요소를 표적하는 것이 성공적이지 못했던 이유에 대해 독특한 통찰을 제공한다. 본 명세서는 종래의 신경변성 병리의 치료법의 문제점을 극복하는 이 이해를 기반으로 치료법(therapeutic), 방법 및 용도를 제공한다.
[005] 본 명세서는 인간 PD-L1에 대한 높은 친화력 및 특이성, 향상된 혈액에서의 청소율(clearance rate), 폐지된(abolished) Fc 관련 작동체 기능, 및 불변의 항체에 비해 향상된 안전성 프로파일(safety profile)을 보이면서, 신경변성 질환 변형에 대한 치료 효능은 유지하는 변형 항 세포 예정사 리간드 1(anti-Programmed Death-Ligand 1: anti-PD-L1) 항체를 개시한다. 한 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능이 결여되어 있고 그리고 동일한 아미노산 서열 변종을 함유하지 않은 항 PD-L1 항체보다 더 빠르게 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 아미노산 서열 변종을 함유하는 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 예를 들어 한 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인의 하부 경첩 영역(lower hinge region) 및/또는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하는 N-말단 절반에 있는 아미노산 서열 변종 및 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 서열 변종을 함유하지 않은 항 PD-L1 항체보다 더 빠르게 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 있는 아미노산 서열 변종을 함유하는 중쇄 불변 도메인을 포함한다. Fc 관련 작동체 기능이 결여된 한 개시된 변형 인간 항 PD-L1 항체는 항체 의존 세포매개 세포독성(antibody dependent cellular cytotoxicity: ADCC), 보체 의존적 세포독성(complement-dependent cytotoxic: CDC) 활성 및/또는 항체 의존 세포매개 식균 작용(antibody dependent cellular phagocytosis: ADCP)이 결여되어 있다.
[006] 본 명세서는 본 명세서에 개시된 변형 인간 항 PD-L1 항체를 포함하는 약학적 조성물에 더하여 본 명세서에 개시된 변형 인간 항 PD-L1 항체를 포함하는 약제 또한 개시한다.
[007] 본 명세서는 본 명세서에 개시된 변형 인간 항 PD-L1 항체, 본 명세서에 개시된 약학적 조성물, 또는 본 명세서에 개시된 약제를 포함하는 약학적 키트(pharmaceutical kits) 또한 개시한다.
[008] 본 명세서는 항체가 구체적인 시간동안만 존재하고 그리고 치료 효능이 유지되도록 보장하기 위해 신체로부터 충분히 청소되는 것을 보장하는 변형 항 PD-L1 항체를 사용하는 투여 요법(administration regime)을 사용하는 치료 방법 및 용도 또한 개시한다.
[009] 도 1a 내지 도 1e는 CCR2 차단이 DM-hTAU에 있는 항 PD-L1 항체의 유익한 효과를 폐기하는 것을 도시한다. 도 1a는 실험 설계를 도시하고, 도 1b는 DM-hTAU 및 야생형 동물의 인지 행동의 사전검사(pre-test) 결과를 도시하고, 도 1c는 치료 후 T형 미로(T-maze)를 사용한 인지 행동의 결과를 도시하고, 도 1d는 치료 후 Y형 미로(Y-maze)를 사용한 인지 행동의 결과를 도시하고, 그리고 도 1e는 치료 후 새로운 사물 인식(Novel Object recognition: NOR)을 사용한 인지 행동의 결과를 도시한다.
[010] 도 2a 내지 도 2d는 CCR2 차단이 T 세포 레벨에는 영향을 미치지 않으면서 혈액순환에서 선택적으로 단핵구에만 영향을 미치는 것을 도시한다. 도 2a는 혈액의 골수세포 레벨을 도시하고, 도 2b는 비장에 있는 골수세포를 도시하고, 도 2c는 혈액의 CD4+ 기억 T 세포(CD4+ memory T cells) 레벨을 도시하고, 그리고 도 2d는 비장에 있는 CD4+ 기억 T 세포를 도시한다.
[011] 도 3a 및 도 3b는 CD45low/CD11bhigh 골수세포에 대해 분석된 항 PD-L1 항체 또는 IgG 항체로 치료한 DM-hTAU 생쥐의 뇌의 유세포 분석을 도시한다. 도 3a는 CD45low/CD11bhigh 및 CD45high/CD11bhigh 골수세포에 대해 개폐된(gated) 뇌세포의 유세포 분석을 도시하고, 그리고 도 3b는 항 PD-L1 치료 생쥐 및 IgG 치료 생쥐에서의 CD45low/CD11bhigh 골수세포의 양적 분포를 도시한다.
[012] 도 4a 및 도 4b는 CD45low/CD11bhigh 골수세포에 대해 항 PD-L1 항체 또는 IgG 항체로 치료한 GFP-BM-키메라(chimeric) DM-hTAU 생쥐의 뇌의 유세포 분석을 도시한다. 도 4a는 Ly6C를 발현하고, CD45low/CD11bhigh 및 CD45high/CD11bhigh 골수세포에 대해 개폐된 GFP 표지(labeled) 뇌세포의 유세포 분석을 도시하고, 그리고 도 4b는 항 PD-L1 치료 생쥐 및 IgG 치료 생쥐에서의 CD45low/CD11bhigh 골수세포의 양적 분포를 도시한다.
[013] 도 5a 및 도 5b는 면역조직화학으로 분석된 항 PD-L1 항체 또는 IgG 항체로 치료한 GFP-BM-키메라 DM-hTAU 생쥐의 뇌의 동일초점 이미지를 도시한다. 도 5a는 항 PD-L1으로 치료한 DM-hTAUGFP/+ 생쥐의 피질에서 검출된, 골수성 마커(myeloid marker) IBA-1(청색)으로 GFP+ 세포(녹색)의 공존(co-localization)을 나타내는 동일초점 z축 스택(stacks)의 대표적인 투사를 도시하고(화살표 참조, 스케일바: 100μm), 그리고 도 5b는 항 PD-L1으로 치료한 DM-hTAUGFP/+ 생쥐의 뇌에서 GFP+ 세포(녹색), IBA-1(청색), 및 IL-10(적색)의 공존을 나타내는 동일초점 z축 스택의 대표적인 투사를 도시한다(스케일바: 50μm).
[014] 도 6a 내지 도 6c는 5XFAD 생쥐에서 공간 학습 및 기억력에 영향을 미치는 항 PD-L1의 용량 반응 의존 효과(dose response-dependent effect)를 도시한다. 도 6a는 검은색 화살표가 치료 시점을 표시하는 실험 설계를 도시하고, 그리고 도해가 방사상 수중 미로(Radial Arm Water Maze: RAWM) 분석법을 사용한 인식 점수(cognitive scoring)의 시점을 나타내고, 도 6b는 FXFAD 생쥐의 치료로부터 한 달 후의 RAWM 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들(littermates)과 함께 각 군은 상이한 용량의 항 PD-L1 항체로 치료되었고(*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001), 그리고 도 6c는 세 군의 FXFAD 생쥐의 치료로부터 두 달 후의 RAWM 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들과 함께 각 군은 상이한 용량의 항 PD-L1 항체로 치료되었다(*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[015] 도 7a 내지 도 7c는 5XFAD 생쥐의 해마 성상교세포증(hippocampal astrogliosis)에 영향을 미치는 항 PD-L1의 용량 의존 효과를 도시한다. 도 7a는 치아이랑의 총 선택 면적으로 나눠진 총 검출된 GFAP+ 세포의 면적(*P<0.05, **P<0.01)을 도시하고, 도 7b는 전체 치아이랑의 평균 형광성에 대해 보정된(corrected)(CTCF) 검출된 GFAP+ 세포의 평균 형광(**P<0.01)을 도시하고, 그리도 도 7c는 1000픽셀 이상의 형광성을 보이는 검출된 GFAP+ 세포의 수(**P<0.01)를 도시한다.
[016] 도 8a 및 도 8b는 DM-hTAU 생쥐에서 공간 학습 및 기억력에 영향을 미치는 항 PD-L1의 용량 반응 의존 효과를 도시한다. 도 8a는 검은색 화살표가 치료 시점(time points of treatment)을 표시하는 실험 설계를 도시하고, 그리고 도해가 T형 미로 분석법을 사용한 인식 점수의 시점을 나타내고, 그리고 도 8b는 DM-hTAU 생쥐의 치료로부터 한 달 후의 T형 미로 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들 및 항 IgG2 치료 생쥐와 함께 각 군은 상이한 용량의 항 PD-L1 항체로 치료되었다(*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[017] 도 9a 및 도 9b는 DM-hTAU 생쥐에서 공간 학습 및 기억력에 영향을 미치는 항 PD-L1의 용량 반응 의존 및 시간 의존(time-dependent) 효과를 도시한다. 도 9a는 세 군의 DM-hTAU 생쥐의 치료로부터 한 달 후의 T형 미로 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들 및 항 IgG2 치료 생쥐와 함께 각 군은 상이한 용량의 항 PD-L1 항체로 치료되었고(*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001), 그리고 도 9b는 세 군의 DM-hTAU 생쥐의 치료로부터 두 달 후의 T형 미로 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들 및 항 IgG2 치료 생쥐와 함께 각 군은 상이한 용량의 항 PD-L1 항체로 치료되었다(*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[018] 도 10은 야생형 생쥐 및 쥐(rat) 항 PD-L1 항체 또는 대조군으로서 쥐 항-KLH(둘 다 IgG2b Fc 포함)로 치료한 DM-hTAU 쥐의 뇌에서 AT-180 면역반응력(포스포-타우(Phospho-Tau)(Thr231))의 양적 분포를 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05).
[019] 도 11a 내지 도 11i는 DM-hTAU 생쥐에서 염증 사이토카인 프로파일에 영향을 미치는 항 PD-L1의 용량 의존 효과를 도시한다. 도 11a는 항 IgG 항체 대조군으로 치료한 생쥐에서의 IL-1β 면역반응력의 대표적인 이미지를 도시하고, 도 11b는 항 PD-L1 항체로 치료한 생쥐에서의 IL-1β 면역반응력의 대표적인 이미지를 도시하고, 도 11c는 DAPI(청색)으로 세포핵이 착색된 치아이랑에서 IL-1β(녹색)과 GFAP+ 성상세포(적색)는 공존하지만, IBA-1+ 미세아교세포/대식세포(백색)와는 공존하지 않는다는 것을 나타내는 동일초점 z축 스택의 대표적인 정투영을 도시하고(스케일바, 100μm), 도 11d는 FRET 기반 ELISA로 측정된, 치료하지 않은 그리고 항 IgG 항체로 치료한 야생형 한배 새끼들과 비교하여 항 PD-L1 항체로 치료한 생쥐에서의 해마 IL-1β 단백질 레벨의 정량적 측정을 도시하고(데이터는 평균±평균의 표준 오차로 나타냄; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001), 도 11e는 T형 미로에서 DM-hTAU 생쥐의 인지 수행과 그의 뇌의 IL-1β 단백질 레벨 사이의 상관 관계를 나타내는 선형 회귀 분석을 도시하고, 도 11f는 유전자 tnf-a를 위해 RT-qPCR로 시험된 mRNA 발현 레벨의 정량적 측정을 도시하고, 도 11g는 유전자 il-6을 위해 RT-qPCR로 시험된 mRNA 발현 레벨의 정량적 측정을 도시하고, 도 11h는 유전자 il-12p40을 위해 RT-qPCR로 시험된 mRNA 발현 레벨의 정량적 측정을 도시하고, 그리고 도 11i는 유전자 Il-1β를 위해 RT-qPCR로 시험된 mRNA 발현 레벨의 정량적 측정을 도시한다.
[020] 도 12는 C57BL/6J 생쥐로부터 채취된 혈청에 있고 그리고 효소 결합 면역흡착 검사(enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)를 사용하여 정량화된 항 PD-L1 항체의 PK 프로파일을 도시한다.
[021] 도 13은 상이한 투여량의 쥐 항-생쥐(anti-mouse) PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell) 대 쥐 IgGb2 항 KLH 항체로 치료한 대조군의 단일 주사 후에 5XFAD 및 C57BL/6J 야생형 생쥐의 혈액에 있는 T 세포의 PD-L1 수용체 점유(occupancy)의 동역학(kinetics)을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; * P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[022] 도 14는 쥐 항 KLH 항체로 치료된 생쥐에 비해 다중 투여량(multi-dosages)의 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)의 단일 주사 후에 5XFAD 및 C57BL/6J 야생형(WT) 생쥐에서 PD-1+를 발현하는 작동체 기억 T 세포(CD4+CD44+ 세포군)의 레벨을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[0023] 도 15는 ELISA를 사용하여 정량화된 생쥐에서의 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)의 PK 프로파일을 도시한다.
[024] 도 16은 치료에 지속적으로 노출된 것과 비교했을 때 일과성인 것을 나타내는, 5XFAD 생쥐에서 항 PD-L1의 반복된 주사에 비해 단일 주사의 각자 첫 주사후 한 달 그리고 두 달 후에 시험된 인지 수행에 미치는 치료 효과의 비교를 도시한다. 5XFAD 생쥐의 인지 수행은 방사상 수중 미로를 사용하여 시험되었고 그리고 상이한 치료군에서 치료 후 효과는 긍정적인 학습 행동(positive learning behavior)을 보인 생쥐의 퍼센트로 나타냈다(긍정적인 학습 행동은 인지 과제의 마지막 두 개의 트레일(trails)에서 평균 오류가 3개 이하인 것으로 정의되었다).
[025] 도 17은 각각 대조군의 역할로 야생형 생쥐, 치료하지 않은 DM-hTAU 생쥐, 및 IgG1 동형(isotype) 대조군으로서 인간 항 B12 항체로 치료한 생쥐와 함께, 쥐 항 PD-L1 항체, 인간화(humanized) 항 PD-L1 항체 아테졸리주맙(ATZ: 인간 IgG1 Fc 포함) 또는 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 항체를 사용한 항 PD-L1 항체 치료로부터 한 달 후 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[026] 도 18은 평균 형광성에 대해 보정된(CTCF) 검출된 GFAP+ 세포의 평균 형광에 근거하여 DM-hTAU 생쥐의 해마 성상교세포증에 영향을 미치는 항 PD-L1 항체 효과(쥐 IgG2b 항 KLH 항체와 함께 쥐 항-생쥐 PD-L1, 인간 IgG1 골격(backbone)과 함께 항 PD-L1 아테졸리주맙, 및 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null))의 비교를 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[027] 도 19는 야생형 C57BL/6J 생쥐로부터 채취된 혈청에 있고 그리고 역(reverse) ELISA를 사용하여 정량화된 항-인간(anti-human) PD-L1 아테졸리주맙(ATZ) 및 네 개의 ATZ 변종의 PK 프로파일을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함).
[028] 도 20a 내지 도 20d는 DM-hTAU 생쥐의 공간 학습 및 기억력에 영향을 미치는 변형 항 PD-L1 항체 변종의 효과를 도시한다. 도 20a는 검은색 화살표가 치료 시점을 표시하는 실험 설계를 도시하고, 그리고 도해가 T형 미로 또는 Y형 미로 분석법을 사용한 인식 점수의 시점을 나타내고, 도 20b는 DM-hTAU 생쥐의 치료로부터 4주 후의 T형 미로 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들과 변종 1-B12로 치료한 생쥐와 함께 각 군은 상이한 항 PD-L1 변종으로 치료되었고(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001), 도 20c는 DM-hTAU 생쥐의 치료로부터 6주 후의 Y형 미로 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들과 변종 1-B12로 치료한 생쥐와 함께 각 군은 상이한 항 PD-L1 변종으로 치료되었고(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001), 그리고 도 20d는 DM-hTAU 생쥐의 치료로부터 8주 후의 T형 미로 수행을 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들과 항 B12로 치료한 생쥐와 함께 각 군은 상이한 항 PD-L1 항체 변종으로 치료되었다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[029] 도 21은 치료로부터 한 달 후에 RAWN 인지 과제를 사용하여 5XFAD 생쥐에서 공간 학습 및 기억력에 영향을 미치는 변형 항 PD-L1 항체 변종의 효과를 도시하고, 대조군의 역할을 한 야생형 한배 새끼들 및 항 B12로 치료한 생쥐와 함께 각 군은 상이한 변형 항 PD-L1 항체 변종, 또는 쥐 항-생쥐 PD-L1 항체로 치료되었다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[030] 도 22a 및 도 22b는 C57BL/6J 생쥐로부터 채취된 혈청에 있고 그리고 ELISA를 사용하여 정량화된 두 가지 상이한 변형 항 PD-L1 항체 변종의 다중 투여량을 사용한 PK 프로파일을 도시한다. 도 22a는 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체로 획득한 결과를 도시하고(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함), 그리고 도 22b는 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체로 획득한 결과를 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함).
[031] 도 23a 및 도 23b는 두 가지 상이한 변형 항 PD-L1 항체 변종의 단일 주사 후에 C57BL/6J 야생형 생쥐의 혈액에 있는 T 세포의 PD-L1 수용체 점유의 동역학을 도시한다. 도 23a는 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체로 획득한 결과를 도시하고(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함), 그리고 도 23b는 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체로 획득한 결과를 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함).
[032] 도 24a 및 도 24b는 두 가지 상이한 변형 항 PD-L1 항체 변종의 단일 주사 후에 C57BL/6J 야생형 생쥐의 혈액에 있는 PD-1+CD4+CD44+ T 세포의 혈액 레벨의 동역학을 도시한다. 도 24a는 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체로 획득한 결과를 도시하고(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함), 그리고 도 24b는 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체로 획득한 결과를 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함).
[033] 도 25는 치료로부터 4주 후에 DM-hTAU 생쥐에서 공간 학습 및 기억력에 영향을 미치는 두 가지 상이한 변형 항 PD-L1 항체 변종의 용량 의존 효과를 도시한다(데이터는 평균±평균의 표준 오차로 나타냄; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[034] 도 26a 내지 도 26c는 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 또는 변종 2-B12(인간 IgG1 Fc 작동체 null 그리고 변종 2-ATZ의 동일한 치환과 일치하는 Fc 부분에 H311A 치환을 함유하는 항 B12 항체)의 1.5mg/mouse 항 PD-L1 투여로부터 2 내지 4주 후에 인지 수행의 종적 측정(longitudinal measures)을 도시한다. 도 26a는 치료로부터 2주 그리고 4주 후에 T형 미로의 새로운 통로(arm)에서 각각의 개별 생쥐가 보낸 시간을 표시하고 그리고 선으로 연결된 것을 도시한다. 도 26b는 도 26a와 동일한 데이터지만 치료로부터 2주 후 상이한 치료군 사이의 T형 미로에서의 수행을 비교한 것을 도시한다. 도 26c는 도 26a와 동일한 데이터지만 치료로부터 4주 후 상이한 치료군 사이의 T형 미로에서의 수행을 비교한 것을 도시한다. 일원배치 ANOVA 및 피셔의 정확 검정(Fisher exact-test) 사후 분석(post hoc analysis). 데이터는 평균±평균의 표준 오차로 나타냄.
[035] 도 27은 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 또는 동형 대조군 변종 2-B12(인간 IgG1 Fc 작동체 null 및 H311A 치환을 함유하는 항 B12 항체)의 단일 주사로부터 3일 후에 C57BL/6J 야생형 생쥐의 혈액, 경부 림프절, 서혜 림프절, 및 맥락얼기(CP)로부터 분리된 CD3+ T 세포의 PD-L1 수용체 점유의 동역학을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함).
[036] 도 28a 내지 도 28h는 DM-hTAU 생쥐에서 공간 학습 및 기억력에 영향을 미치는 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 변종 2-B12(인간 IgG1 Fc 작동체 null 및 H311A 치환을 함유하는 항 B12 항체)의 효과를 도시한다. 도 28a는 검은색 화살표는 치료 시점을 표시하고, 적색 화살표는 혈액 및 조직 채취 시점을 표시하고, 그리고 도해는 T형 미로를 사용한 인식 점수의 시점을 도시한다. 도 28b는 야생형 한배 새끼들과 함께 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 항체를 사용한 제1 치료로부터 2주 후의 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; n.s. 유의미하지 않음, ***P<0.001). 도 28c는 야생형 한배 새끼들과 함께 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 항체를 사용한 제1 치료로부터 4주 후의 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; ***P<0.001). 도 28d는 야생형 한배 새끼들과 함께 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 항체를 사용한 제2 치료로부터 4주 후의 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; ***P<0.001). 도 28e는 야생형 한배 새끼들과 함께 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 항체를 사용한 제3 치료로부터 2주 후의 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; ***P<0.001). 도 28f는 야생형 한배 새끼들과 함께 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 항체를 사용한 제3 치료로부터 4주 후의 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; ***P<0.001). 도 28g는 야생형 한배 새끼들과 함께 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 항체를 사용한 제3 치료로부터 6주 후의 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; ***P<0.001). 도 28h는 야생형 한배 새끼들과 함께 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 동형 대조군 항체를 사용한 제3 치료로부터 8주 후의 DM-hTAU 생쥐의 T형 미로 수행을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; ***P<0.001).
[037] 도 29는 상이한 용량의 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 또는 동형 대조군 변종 2-B12(인간 IgG1 Fc 작동체 null 그리고 변종 2-ATZ의 동일한 치환과 일치하는 Fc 부분에 H311A 치환을 함유하는 항 B12 항체)를 사용한 치료 후에 다양한 시점에서 DM-hTAU 생쥐의 혈액, 경부 림프절, 서혜 림프절, 및 맥락얼기(CP) 조직으로부터 분리된 CD3+ T 세포의 PD-L1 수용체 점유의 동역학을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함).
[038] 도 30은 PD-1을 발현하는 CD4+ 기억 T 림프구의 레벨(총 CD4+/CD44+ 집단 중 PD-1+ 세포의 퍼센트)을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[039] 도 31a 및 도 31b는 DM-hTau 생쥐에서의 상대적 해마 무리 타우(hippocampal aggregated tau)(제조사의 음성 대조군에 대해 일반화(normalized)됨; 임의 단위)를 도시한다. 도 31a는 단일 주사로부터 3일 그리고 48일에 잘라낸 해마에서 FRET 기반 ELISA로 측정된 무리의 정략 측정을 도시한다(오차 막대는 평균±평균의 표준 오차를 의미함; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001). 도 31b는 인지 수행 시험으로부터 2주 후에 잘라낸 해마의 해마 타우 무리와의 상관 관계를 도시한다(연구 4주 차).
[040] 도 32는 시노몰구스 원숭이로부터 채취되었고 그리고 역 ELISA를 사용하여 정량화된 혈청에 있는 84G09를 기반으로 한 변형 항 PD-L1 항체 변종의 PK 프로파일을 도시한다.
[041] 도 33a 내지 도 33d는 시노몰구스 원숭이의 84G09를 기반으로 한 변형 항 PD-L1 항체의 PD-L1 수용체 점유 및 혈청 농도 사이의 상관 관계를 도시한다. 도 33a는 변종 1-G09(Fc 작동체 null) 항체의 PD-L1 수용체 점유 및 혈청 농도 사이의 상관 관계를 도시한다. 도 33b는 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A) 항체의 PD-L1 수용체 점유 및 혈청 농도 사이의 상관 관계를 도시한다. 도 33c는 변종 3-G09(Fc 작동체 null-H440Q) 항체의 PD-L1 수용체 점유 및 혈청 농도 사이의 상관 관계를 도시한다. 도 33d는 변종 4-G09(Fc 작동체 null-H315A + H440Q) 항체의 PD-L1 수용체 점유 및 혈청 농도 사이의 상관 관계를 도시한다.
[042] 도 34는 84G09를 기반으로 한 상이한 변형 항 PD-L1 항체 변종으로 치료한 시노몰구스 원숭이에서 PD-1 고발현 작동체 기억 CD4 T 세포 빈도(frequencies)의 약력학(pharmacodynamics) 변화를 도시한다. 도시된 값은 기준선에 일반화된 PD-1 고발형 작동체 기억 CD4 T 세포의 퍼센트 배수 차이(fold change)를 나타낸다(데이터는 평균±평균의 표준 오차로 나타냄; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001).
[043] 도 35a 및 도 35b는 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A)를 사용한 치료 후에 상이한 T 세포 부분모집단(subpopulation)에서의 약력학 변화를 도시한다. 도 35a는 중심 기억 T 세포를 도시한다. 도 35b는 작동체 기억(EM), 중심 기억(CM) 및 나이브(naive) CD4- T 세포를 도시한다. 데이터는 평균±평균의 표준 오차로 나타냄; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001.
[044] 도 36a 내지 도 36e는 ADCC 용량 반응 분석법을 도시한다. 도 36a는 양성 대조군 항체인 Rituxan과 Raji/CD-20 세포의 용량 반응 ADCC 분석을 도시한다. 도 36b는 음성 대조군 항체인 인간 IgG1과 CHO-K1/PD-L1 세포의 용량 반응 ADCC 분석을 도시한다. 도 36c는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 변종인 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A)와 CHO-K1/PD-L1 세포의 용량 반응 ADCC 분석을 도시한다. 도 36d는 양성 대조군 항체인 Rituxan과 Raji/CD-20 세포의 용량 반응 ADCC 분석을 도시한다. 도 36e는 ADCC Fc 활성이 결여된 것으로 알려진 시중에서 구할 수 있는 인간화 항 PD-L1 단클론 항체인 아테졸리주맙의 바이오시밀러(biosimilar)와 CHO-K1/PD-L1 세포의 용량 반응 곡선을 도시한다.
[045] 도 37a 내지 도 37d는 CDC 용량 반응 분석을 도시한다. 도 36a는 양성 대조군 항체인 Rituxan과 Raji/CD-20 세포의 용량 반응 CDC 분석을 도시한다. 도 36b는 음성 대조군 항체인 인간 IgG1과 CHO-K1/PD-L1 세포의 용량 반응 CDC 분석을 도시한다. 도 36c는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 변종인 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A)와 CHO-K1/PD-L1 세포의 용량 반응 CDC 분석을 도시한다. 도 36d는 ADCC Fc 활성이 결여된 것으로 알려진 시중에서 구할 수 있는 인간화 항 PD-L1 단클론 항체인 아테졸리주맙의 바이오시밀러와 CHO-K1/PD-L1 세포의 용량 반응 CDC 분석을 도시한다.
[046] 도 38은 9주된 암컷 NOD 생쥐에게 1.5mg/mouse 용량의 단일 주사 후 당뇨병 없는 생존(diabetes-free survival)에 대해 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 및 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 두 가지 변형 항 PD-L1 항체 변종, 그리고 동형 대조군 변종 2-B12(인간 IgG1 Fc 작동체 null 및 변종 2-ATZ의 동일한 치환과 일치하는 Fc 부분에 H311A 치환을 함유하는 항 B12 항체) 사이의 비교를 도시한다(P값=0.0030).
[047] 도 39는 9주된 암컷 NOD 생쥐에게 1.5mg/mouse 용량의 단일 주사 후 체중 변화에 대해 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 및 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 두 가지 변형 항 PD-L1 항체 변종, 그리고 동형 대조군 변종 2-B12(인간 IgG1 Fc 작동체 null 및 변종 2-ATZ의 동일한 치환과 일치하는 Fc 부분에 H311A 치환을 함유하는 항 B12 항체) 사이의 비교를 도시한다.
[048] 면역세포의 CNS로의 생리적 진입은 뇌의 맥락얼기(CP) 상피에 의해 세심하게 조율된다. CP를 통한 수송은 CP 간질(stroma) 내를 포함하는 주변부(periphery)에 위치한 T 세포로부터 유래되는 인터페론-감마(IFN-γ) 신호에 의존한다. 병적 상태(pathologic conditions) 하에서 CP를 통해 수송되는 백혈구는 부족하거나 또는 심지어는 손상되어 있다. 수송을 증가시키는 한 방법은 CP를 향한 IFN-γ 신호의 레벨을 증가시키는 것이다.
[049] 면역 체크포인트는 전신 면역 항상성 및 내성을 유지하기 위한 조절 경로이다. 어느 이론에 제한하려는 의도 없이, 면역 체크포인트의 선택적 차단(selective blockade)은 병적 상태에 의해 억제된 면역 반응의 전신 IFN-γ 의존 연쇄반응(cascade)을 재활성화 시킨다. 증가된 IFN-γ 신호는 CP에 의해 발현되는 백혈구 수송 분자의 레벨 증가를 야기하고 그리고 결과적으로 맥락얼기 상피를 지나 CNS 영역 내로 백혈구의 이동과 뇌 내의 병든 부위(diseased sites)로의 단핵구 유래 대식세포 및 다른 면역조절 세포(T 세포)의 동원(recruitment)이 증가된다. 중요한 것은, 이 동원이 결과적으로 전체적으로 신경세포 보호 및/또는 인지 저하 완화로 이어지는 아밀로이드 플라크 부담(amyloid plaque burden) 감소, 뇌 실질 내의 면역 균형 복구, 신경세포 염증 감소, 교증(gliosis) 감소, 시냅스 손실 감소, 해마 신경발생 증가, 신경 보호 증가 및 신경세포 생존 향상을 포함하여 기능에 포괄적 영향을 미친다는 것이다. 따라서 면역 체크포인트의 차단은 뇌 유지(maintenance) 및 병적 상태의 치유를 가능하게 하는 IFN-γ 신호 증가를 통해 건강한 뇌-면역 대화(dialogue)를 복구한다.
[050] 전신 면역 반응은 예를 들어 세포 예정사 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 T 세포 면역글로불린 및 뮤신 도메인 함유-3(TIM-3)과 같은 면역 체크포인트를 위한 중화항체를 사용하는 것으로 유발된다. 신경변성 질환을 가진 것으로 확인된 동물에서 유도되었을 때, 이 중화항체들을 사용한 치료는 결과적으로 뇌 아밀로이드-β(Aβ) 플라크를 제거하고 그리고 인지 수행을 향상시켰다. 따라서 면역 체크포인트 구성원에 대한 중화항체 사용은 질환 상태를 역전(reversed)시키는 IFN-γ 의존 면역 반응을 야기했다.
[051] 또한 이 면역 반응은 IFN-γ 의존적인 것으로 나타난 방식으로 면역세포를 CNS로 동원시키기 위해 필요했다. 본 명세서는 만성 신경변성 질환의 조건 하에서 면역 체크포인트의 차단제(예: 항체)의 전신 단일 투여가 병든 뇌로 말초 단핵구 유래 대식세포의 진입에 의존하는 인지 수행을 향상시키는 것을 입증한 실험을 개시한다(실시예 1 참조). 이 실험은 병든 뇌 실질에 단핵구 유래 대식세포가 국소 염증의 해소, 그리고 국소 포식세포 활성의 촉진을 위해 필요하고, 그리고 세포 조직 파편 제거 및 잘못 접힌(misfolded) 무리 단백질의 병적 입체형태(pathological conformations)의 제거를 위해 필요하다는 것을 더 나타낸다(실시예 1 참조).
[052] 또한 본 명세서는 면역 체크포인트 구성원에 대한 중화항체의 지속적인 노출이 유익한 효과를 유지하기 위해 불필요했을 뿐만 아니라, 그러한 항체에 대한 연장된 노출 시간이 치료적으로 덜 효과적이라는 것을 보여주는 실험 또한 개시한다(실시예 3 참조). 이 결과는 신경변성 질환을 위한 더 큰 치료 효능이 면역 체크포인트 경로가 오직 일시적으로만 차단되었을 때 달성된다는 것을 나타낸다. 이 발견은 최적의 치료 효능을 위해서 면역 체크포인트에 대한 중화항체의 지속적인 노출이 필수적인 암 치료와는 반대이다.
[053] 면역 체크포인트 경로의 일시적인 차단은 신경변성 질환을 치료하는 데에 더 큰 효능을 보였을 뿐만 아니라, 그러한 일시적인 노출은 자가면역 질환과 같은 면역 관련 역효과를 발생시킬 위험을 감소하는 데에도 도움이 될 것이다. 본 명세서는 고령에 당뇨병이 자연발생된 비-비만성 당뇨병(non-obese diabetic: NOD) 생쥐에 있어서, 유년에 면역 체크포인트 구성원에 대한 중화항체의 노출이 당뇨병의 발병을 가속시킨다는 것을 밝힌다. 당뇨병 발병의 가속은 항체 노출 시간이 짧을수록 유년에 당뇨병 발병률이 더 낮은 항체 노출과의 상관관계가 있다(실시예 9 참조).
[054] 혈액 뇌척수액 관문을 거쳐 뇌 내로 말초 면역세포의 동원 및 중화항체에 일시적인 노출이 뇌의 병든 상태를 역전시키는 데에 필수적이며 핵심적이란 발견은 신경변성 질환을 위한 가장 안전하고 그리고 가장 효과적인 결과를 달성하기 위해 필요한 면역 체크포인트 항체가 암을 치료하는 데에 필요한 면역 체크포인트 항체 특성과 상이하고 게다가 반대이기까지 한 특정한 세트의 특성을 필요로 하는 것을 밝힌다.
[055] 예를 들어 신경변성 질환을 위한 최적의 치료 효능을 가진 면역 체크포인트를 위한 항체는 세포독성 활성이 결여된 항체여야 한다. 일반적인 전장(full-length) 항체는 결정가능 단편(Fragment crystallizable: Fc) 영역을 포함한다. 특히 상기 Fc 영역은 막-표면 항원이 항체에 의해 결합되는 표적 세포의 용해를 포함하는 여러 생리적 효과를 개시하는 적합한 Fc 수용체에 대해 항체의 올바른 결합을 매개한다. 항체 의존 세포매개 세포독성(antibody dependent cellular cytotoxicity: ADCC), 보체 의존 세포독성 활성(complement-dependent cytotoxic activity: CDC) 또는 항체 의존 세포 식세포작용(antibody dependent cellular phagocytosis: ADCP)으로 불리는 이 용해 메커니즘은 감염을 제한하고 확산을 방지하는 데에 필요한 체액 면역 반응의 일부이다. 그러나 면역 반응의 전신 IFN-γ 의존 연쇄반응의 재활성화를 개시하기 위해 말초 면역세포의 동원이 필요하기 때문에, 말초 면역 세포를 파괴하고, 맥락얼기의 활성화에 필요한 세포 집단과 뇌로의 동원에 필요한 세포 또한 고갈시키는 용해 활성 때문에 Fc 작동체 활성이 있는 면역 체크포인트 항체는 바람직하지 않다. 따라서 Fc 작동체 기능이 결여된 면역 체크포인트 구성원을 위한 항체가 신경변성 질환을 치료하기 위한 치료에 사용되었을 때 유익한 특징일 것이다. 그러나 암 치료의 맥락에 있어서는 암 면역요법의 목표가 암세포의 박멸이기 때문에 표적 암세포의 용해가 굉장히 바람직하고, 그에 따라 세포독성 활성이 유익할 수 있다.
[056] 다른 예시로서 신경변성 질환을 위한 최적의 치료 효능을 가진 면역 체크포인트를 위한 항체는 신체로부터 빠르게 청소될 수 있는, 즉 향상된 청소율을 가진 항체여야 한다. 앞서 언근된 바와 같이, 본 명세서는 항체의 지속적인 노출에 비해 면역 체크포인트 경로의 일시적인 차단이 신경변성 질환을 치료하는 데에 더 큰 효능을 보인다는 것을 개시한다. 또한 항체의 지속적인 노출은 자가면역 변응을 유도할 위험을 증가시킨다. 따라서 효과적인 반응을 매개할 수 있지만 그 항체에 대한 지속적인 노출의 유해한 효과를 피하는 방식으로 신체로부터 제거될 수 있는 면역 체크포인트 멤버를 위한 항체가 신경변성 질환을 치료하기 위한 요법에서 사용될 때 유익한 특징일 것이다.
[057] 본 명세서는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하고 그리고 신경변성 질환 변형을 위한 치료 효능을 유지하면서 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키는 변형 항 PD-L1 단클론 항체를 개시한다(실시예 4-8). 또한 본 명세서는 항체가 특정한 시간동안만 있고 그런 다음에는 치료 효능 유지를 보장하기 위해 신체로부터 충분히 청소되는 개시된 항 PD-L1 항체의 투여 요법을 사용하는 치료 방법 및 용도를 개시한다(실시예 1-9).
[058] 본 발명의 관점은 부분적으로는 변형 항 PD-L1 항체를 포함한다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 두 개의 면역글로불린(Ig) 중쇄 및 두 개의 Ig 경쇄로 구성된 일반적인 전장 면역글로불린 분자일 수 있다. 그러한 항체는 항원 결합 단편(Fab) 및 결정가능 단편(Fc) 영역을 포함한다. 바람직한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 인간화 항 PD-L1 항체 또는 인간 항 PD-L1 항체이고; 더 바람직한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 인간화 IgG 항 PD-L1 항체 또는 인간 IgG 항 PD-L1 항체이고; 더욱더 바람직한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 인간화 IgG1 항 PD-L1 항체 또는 인간 IgG1 항 PD-L1 항체이다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 길항성 또는 비활성 활성, 바람직하게는 중화 활성을 갖는다.
[059] 본 명세서에 개시된 항 PD-L1 항체는 변종이 본 명세서에 개시된 바람직한 생물학적 활성, 즉 Fc 관련 작동체 기능 폐지 및 신경변성 질환 변형을 위한 치료 효능을 유지하면서 변형 항 PD-L1 항체의 청소율 향상을 보이는 한 전장 항체의 변종일 수도 있다. 예를 들어 본 명세서에 개시된 항 PD-L1 항체 단편은 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄 및 CH2 및 CH3 도메인만 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다. 적합한 본 명세서에 개시된 항 PD-L1 항체 단편은, 예를 들어, Holliger, P., and Hudson, P.J., Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nat. Biotechnol. 23: 1126-1136 (2005); Cuesta, A.M., Sainz-Pastor, N., Bonet, J., Oliva, B., and Alvarez-Vallina, L., Multivalent antibodies: when design surpasses evolution. Trends Biotechnol. 28: 355-362 (2010); and Nelson, A.L., Antibody fragments: hope and hype. MAbs 2, 77-83 (2010)에 기술되고, 이들의 내용은 각각 참조로서 본 명세서에 포함된다. 항체 및 그의 항원 화합물 결합 단편의 구조에 대한 보편적인 내용은, 예를 들어, Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); Borrabeck, Antibody Engineering, 2d ed. (Oxford University Press 1995)에서 참조할 수 있고, 이들의 내용은 각각 참조로서 본 명세서에 포함된다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 변종의 예시는 변형 항 PD-L1 항체의 단편, 변형 항 PD-L1 항체의 단쇄 변종을 포함할 수 있지만 이들에 제한되지는 않는다. 본 명세서에 개신된 항 PD-L1 항체는 예를 들어 이합체, 다합체, 다중특이적 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 키메라 항체, 이작용기성 항체, 또는 3작용기성(tri-functional) 항체와 같은 분자를 조작한(molecularly engineered) 항체 또한 포함한다.
[060] 전장 항 PD-L1 항체는 약 150,000달톤의 이종사합체(heterotetrameric) 당단백질이고, 두 개의 동일한 면역글로불린 중쇄(H) 및 두 개의 동일한 면역글로불린 경쇄(L)로 구성된다. 각 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 이황화 연결의 수는 상이한 면역글로불린 동형의 중쇄에 따라 차이가 있다. 각 중쇄 및 경쇄는 일정한 간격을 둔 쇄내 이황화 결합 또한 갖고, 각 경쇄는 아미노말단에 있는 단일 불변 도메인에 이어 단일 불변 도메인을 갖는다.
[061] 포유류의 면역글로불린 중쇄에는 다섯 가지 유형인 감마(γ), 델타(δ), 알파(α), 뮤(μ) 및 엡실론(ε)이 있고, 이는 각자 면역글로불린 종류(class)를 정의한다: IgG, IgD, IgA, IgM 및 IgE. 중쇄 IgG 및 IgA는 약 450 아미노산을 갖는다. 중쇄 IgM 및 IgE는 약 550 아미노산을 갖는다. 각 중쇄는 불변 영역 및 가변 영역을 포함한다. 불변 영역은 동일한 종류의 모든 면역글로불린에서 동일하지만 다른 종류에서는 다르다. 각 중쇄는 아미노말단에 있는 가변 도메인(VH)에 이어 여러 개의 불변 도메인을 포함하는 불변 영역을 포함한다. 중쇄 IgG, IgD, 및 IgA는 세 개의 탠덤(tandem) 면역글로불린 도메인(CH1, CH2 및 CH3)으로 구성된 불변 영역을 갖고 그리고 추가적인 유연성을 위해 경첩 영역(hinge region)을 갖는다. 중쇄 IgM 및 IgE는 네 개의 탠덤 면역글로불린 도메인(CH1, CH2, CH3 및 CH4)으로 구성된 불변 영역을 갖는다. 중쇄의 가변 영역은 상이한 B 세포마다 다르지만, 동일한 B 세포 또는 B 세포 클론에 의해 생산된 모든 면역글로불린에서는 동일하다. 가변 도메인은 단일 면연글로불린 도메인으로 구성된다.
[062] 포유류의 면역글로불린 경쇄에는 두 가지 유형인 카파(κ) 사슬 및 람다(λ) 사슬이 있다. 람다 종류에는 네 가지 아형으로 λ1, λ2, λ3, 및 λ4가 있다. 일반적인 항체는 오직 한 유형의 경쇄만이 존재하고, 따라서 각각의 항체의 두 개의 경쇄는 동일하다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217 아미노산이다. 각 경쇄는 두 개의 탠덤 도메인, 아미노말단에 있는 가변 도메인(VL)에 이어 불변 도메인으로 구성된다. 상기 가변 도메인은 항원을 결합하는 데에 중요하고 그리고 상기 불변 도메인은 경쇄 유형(즉 카파 또는 람다)을 결정한다. 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 그리고 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이에 계면(interface)을 형성하는 것으로 생각된다.
[063] 완전한 항원 인식 및 항원 결합 부위는 항체의 가변 도메인 내에 수용된다. 이 부위는 강한 비공유 연관(tight, non-covalent association)의 하나의 중쇄 가변 도메인(VH) 및 하나의 경쇄 가변 도메인(VL)의 이합체를 포함한다. 각 도메인은 네 개의 골격 영역(framework regions: FR)을 포함하고, 이들은 대체로 β 시트(β-sheet) 구조를 취하고, β 시트 구조를 연결하는, 일부 경우에는 그의 일부분을 형성하는, 고리(loops)를 형성하는 세 개의 고변이 영역에 의해 연결된다. 각 고변이 영역은 상보성 결정 영역(CDR)에 상응하는 아미노산 서열을 포함한다. 전체적으로 여섯 개의 CDR 영역의 입체 구조가 항원 결합 특이성을 부여하는 VH-VL 이합체의 표면상에 항원 결합 부위를 정의한다. 예를 들어 Cyrus Chothia, et al., Conformations of Immunoglobulin Hypervariable Regions, Nature 342(6252): 877-883 (1989); Elvin A. Kabat, et al Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991) 참조할 수 있고, 이들의 내용은 각각 참조로서 본 명세서에 포함된다. 항체의 불변 도메인은 항원에 항체를 결합시키는 데에 직접적으로 관여되지는 않지만, 항체 의존 세포매개 세포독성에서 항체의 참여와 같은 다양한 작동체 기능을 보인다.
[064] 일반적으로 표적 항원은 에피토프로도 지칭되는 하나 이상의 결합 부위를 갖고, 이는 CDR로 형성된 항원 결합 부위에 의해 인식된다. "에피토프"는 "항원 결정인자(antigenic determinant)"와 동의어이고 그리고 예를 들어 펩티드, 다당류 또는 액체 함유 분자와 같이 면역글로불린 또는 T 세포 수용체에 대한 특이적인 결합 또는 그 외에는 분자와 상호작용하는 것이 가능한 표적 항원상의 부위를 지칭한다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서 한 항원이 하나 이상의 항체에 의해 인식될 수도 있다.
[065] 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 다클론 항체 또는 단클론 항체일 수 있다. 다클론 항체는 특정 항원에 결합할 수 있는 적어도 두 종의 항체를 함유하는 항체 분자의 이종 집단을 지칭한다. 정의상 다클론 항체는 적어도 두 개의 상이한 에피토프에 결합하는 적어도 두 개의 상이한 항체를 포함한다. 단클론 항체는 특정 항원에 결합할 수 있는 오직 한 종의 항체를 함유하는 항체 분자의 실질적으로 동종의 집단을 지칭하고, 즉 상기 집단을 포함하는 개별적인 항체는 소량으로 존재할 수 있는 자연적으로 발생할 가능성이 있는 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 정의상 단클론 항체는 단일 에피토프에 결합한다. 단클론 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원 부위의 반대로 유도된다(directed against). 그의 특이성에 더하여 상기 단클론 항체는 다른 항체에 의해 오염되지 않고 합성될 수 있다는 장점을 갖는다. "단클론"이란 수식어는 항체의 특징이 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 획득된 것을 나타내고, 그리고 어느 특정한 방법을 사용한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어 본 명세서에 따라 사용될 단클론 항체는 먼저 Kohler et al (1975) Nature 256:495에 기술된 하이브리도마(hybridoma) 방법으로 만들거나, 또는 재조합 DNA 방법으로 만들 수 있다(예를 들어 미국 특허번호 제4,816,567호; 미국 특허번호 제5,807,715호 참조). 상기 단클론 항체는 Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597에 기술된 기법을 사용하여 파지 항체 라이브러리(phage antibody libraries)로부터 분리될 수도 있다.
[066] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 PD-L1 또는 그의 단편에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여, 예를 들어 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성(amino acid identity)을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여, 예를 들어 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 또는 최소 4개의 인접(contiguous) 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖거나, 또는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 약 1 내지 약 2, 약 1 내지 약 3, 약 1 내지 약 4, 약 2 내지 약 3, 약 2 내지 약 4, 또는 약 3 내지 약 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함할 수 있다.
[067] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2를 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2에 관하여, 예를 들어 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 2에 관하여, 예를 들어 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다.
[068] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 최소 10, 최소 11, 또는 최소 12개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이거나, 또는 SEQ ID NO: 2에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 최대 10, 최대 11, 또는 최대 12개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 2 내지 11, 2 내지 12, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 3 내지 11, 3 내지 12, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 4 내지 11, 4 내지 12, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 5 내지 11, 5 내지 12, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 6 내지 11, 6 내지 12, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 7 내지 11, 7 내지 12, 8 내지 9, 8 내지 10, 8 내지 11, 8 내지 12, 9 내지 10, 9 내지 11, 9 내지 12, 10 내지 11, 10 내지 12, 또는 11 내지 12개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다.
[069] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 최소 10, 최소 11, 또는 최소 12개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이거나, 또는 SEQ ID NO: 2에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 최대 10, 최대 11, 또는 최대 12개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 2 내지 11, 2 내지 12, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 3 내지 11, 3 내지 12, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 4 내지 11, 4 내지 12, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 5 내지 11, 5 내지 12, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 6 내지 11, 6 내지 12, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 7 내지 11, 7 내지 12, 8 내지 9, 8 내지 10, 8 내지 11, 8 내지 12, 9 내지 10, 9 내지 11, 9 내지 12, 10 내지 11, 10 내지 12, 또는 11 내지 12개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다.
[070] 다른 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 또는 최소 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열, 또는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 또는 최대 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 약 1 내지 약 2, 약 1 내지 약 3, 약 1 내지 약 4, 약 2 내지 약 3, 약 2 내지 약 4, 또는 약 3 내지 약 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.
[071] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 4(Kabat)를 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 4(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.
[072] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 5(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 6(Kabat)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR2 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 5(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 6(Kabat)에 관하여 1 또는 2개의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR2 영역을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.
[073] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 7(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 8(Kabat)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 7(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 8(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.
[074] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 4(Kabat)를 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, SEQ ID NO: 5(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 6(Kabat)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR2 영역, 및 SEQ ID NO: 7(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 8(Kabat)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 4(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, SEQ ID NO: 5(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 6(Kabat)에 관하여 1 또는 2개의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR2 영역, 및 SEQ ID NO: 7(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 8(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.
[075] 다른 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 본 명세서에 개시된 에피토프를 특이적으로 결합시키는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 있는 에피토프를 특이적으로 결합시키는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함한다.
[076] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 9를 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 9에 관하여 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프를 특이적으로 결합시키는 기능 항체이다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 9에 관하여, 예를 들어 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프를 특이적으로 결합시키는 기능 항체이다.
[077] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 9에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 또는 최소 10개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이거나, 또는 SEQ ID NO: 9에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 또는 최대 10개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 9에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 8 내지 9, 8 내지 10, 또는 9 내지 10개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다.
[078] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 9에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 또는 최소 10개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이거나, 또는 SEQ ID NO: 9에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 또는 최대 10개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 9에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 8 내지 9, 8 내지 10, 또는 9 내지 10개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고 그리고 SEQ ID NO: 1의 PD-L1과 같은 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 기능 항체이다.
[079] 다른 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 또는 최소 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열, 또는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 약 1 내지 약 2, 약 1 내지 약 3, 약 1 내지 약 4, 약 2 내지 약 3, 약 2 내지 약 4, 또는 약 3 내지 약 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[080] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 10(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 11(Kabat)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 10(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 11(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[081] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 12(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 13(Kabat)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR2 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 13(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[082] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 14(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 15(Kabat)를 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 14(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 15(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[083] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 10(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 11(Kabat)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, SEQ ID NO: 12(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 13(Kabat)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR2 영역, 및 SEQ ID NO: 14(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 15(Kabat)를 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 10(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 11(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역, SEQ ID NO: 13(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역, 및 SEQ ID NO: 14(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 15(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[084] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2를 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 SEQ ID NO: 9를 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 예를 들어 SEQ ID NO: 9에 관하여 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 예를 들어 SEQ ID NO: 9에 관하여 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[085] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 최소 10, 최소 11, 또는 최소 12개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환, 또는 SEQ ID NO: 2에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 최대 10, 최대 11, 또는 최대 12개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 SEQ ID NO: 9에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 또는 최소 10개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환, 또는 SEQ ID NO: 9에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 또는 최대 10개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 2 내지 11, 2 내지 12, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 3 내지 11, 3 내지 12, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 4 내지 11, 4 내지 12, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 5 내지 11, 5 내지 12, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 6 내지 11, 6 내지 12, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 7 내지 11, 7 내지 12, 8 내지 9, 8 내지 10, 8 내지 11, 8 내지 12, 9 내지 10, 9 내지 11, 9 내지 12, 10 내지 11, 10 내지 12, 또는 11 내지 12개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 SEQ ID NO: 9에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 8 내지 9, 8 내지 10, 또는 9 내지 10개의 인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[086] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 최소 10, 최소 11, 또는 최소 12개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환, 또는 SEQ ID NO: 2에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 최대 10, 최대 11, 또는 최대 12개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 SEQ ID NO: 9에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 최소 4, 최소 5, 최소 6, 최소 7, 최소 8, 최소 9, 또는 최소 10개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환, 또는 SEQ ID NO: 9에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 최대 4, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 또는 최대 10개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 2에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 2 내지 11, 2 내지 12, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 3 내지 11, 3 내지 12, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 4 내지 11, 4 내지 12, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 5 내지 11, 5 내지 12, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 6 내지 11, 6 내지 12, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 7 내지 11, 7 내지 12, 8 내지 9, 8 내지 10, 8 내지 11, 8 내지 12, 9 내지 10, 9 내지 11, 9 내지 12, 10 내지 11, 10 내지 12, 또는 11 내지 12개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 SEQ ID NO: 9에 관하여 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 2 내지 6, 2 내지 7, 2 내지 8, 2 내지 9, 2 내지 10, 3 내지 4, 3 내지 5, 3 내지 6, 3 내지 7, 3 내지 8, 3 내지 9, 3 내지 10, 4 내지 5, 4 내지 6, 4 내지 7, 4 내지 8, 4 내지 9, 4 내지 10, 5 내지 6, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 6 내지 7, 6 내지 8, 6 내지 9, 6 내지 10, 7 내지 8, 7 내지 9, 7 내지 10, 8 내지 9, 8 내지 10, 또는 9 내지 10개의 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[087] 다른 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 있는 에피토프에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최소 약 90%, 최소 약 91%, 최소 약 92%, 최소 약 93%, 최소 약 94%, 최소 약 95%, 최소 약 96%, 최소 약 97%, 최소 약 98%, 또는 최소 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99%의 범위 내의 아미노산 동일성을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최소 1, 최소 2, 최소 3, 또는 최소 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열, 또는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 최대 1, 최대 2, 최대 3, 또는 최대 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 관하여 약 1 내지 약 2, 약 1 내지 약 3, 약 1 내지 약 4, 약 2 내지 약 3, 약 2 내지 약 4, 또는 약 3 내지 약 4개의 인접 및/또는 비인접 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 서열에 있는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, CDR2 영역, 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다.
[088] 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 4(Kabat)를 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, SEQ ID NO: 5(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 6(Kabat)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR2 영역, 및 SEQ ID NO: 7(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 8(Kabat)을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 SEQ ID NO: 10(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 11(Kabat)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR1 영역, SEQ ID NO: 12(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 13(Kabat)을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR2 영역, 및 SEQ ID NO: 14(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 15(Kabat)를 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL) CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 4(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR1 영역, SEQ ID NO: 5(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 6(Kabat)에 관하여 1 또는 2개의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR2 영역, 및 SEQ ID NO: 7(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 8(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역을 포함할 수 있는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 SEQ ID NO: 10(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 11(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역, SEQ ID NO: 13(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역, 및 SEQ ID NO: 14(IMGT) 또는 SEQ ID NO: 15(Kabat)에 관하여 하나의 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인(VH) CDR3 영역을 포함할 수 있는 경쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.
[089] 다른 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 본 명세서에 개시된 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 본 명세서에 개시된 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 본 명세서에 개시된 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 경쇄 불변 영역을 포함하는 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, 또는 SEQ ID NO: 25의 카파 경쇄를 포함한다.
[090] 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 본 명세서에 개시된 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는 람다 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 본 명세서에 개시된 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 람다 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37의 람다 경쇄를 포함한다.
[091] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 Fc 작동체 기능이 결여된 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 다른 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성이 결여된 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 항체 의존 세포매개 세포독성(ADCC), 보체 의존적 세포독성(CDC) 활성 및/또는 항체 의존 세포매개 식균 작용(ADCP)이 결여된 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 Fc 작동체 기능이 결여된 중쇄 불변 도메인(CH)은 IgG 면역글로불린이다. 이 구체예의 다른 관점에서는 IgG 면역글로불린인 Fc 작동체 기능이 결여된 중쇄 불변 도메인(CH)이 IgG1 면역글로불린, IgG2 면역글로불린, IgG3 면역글로불린, 또는 IgG4 면역글로불린이다.
[092] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 CH2 도메인의 하부 경첩 영역 및/또는 N-말단 절반에 위치한 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하는, 세포독성이 결여된 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 세포독성을 감소시키거나 제거하는 CH2 도메인의 하부 경첩 영역 및/또는 N-말단 절반에 위치한 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 L239, L240, K327, 또는 이들의 어느 조합에서의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 L239에서의 A, C, D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S, T, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 L240에서의 A, C, D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S, T, W, 또는 Y의 치환, 위치 K327에서의 A, C, D, F, G, H, I, L, M, N, P, S, T, V, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 L239에서의 A, C, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 L240에서의 A, C, W, 또는 Y의 치환, 위치 K327에서의 A, D, G, H, M, N, P, S, 또는 T의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 L239에 있는 A(L239A)의 아미노산 치환, 위치 L240에 있는 A(L240A)의 아미노산 치환, 위치 K327에 있는 A(K327A)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성이 결여되었거나 감소된 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[093] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 CH2 도메인의 하부 경첩 영역 및/또는 N-말단 절반에 위치한 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는, 세포독성이 결여된 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 세포독성을 감소시키거나 제거하는 CH2 도메인의 하부 경첩 영역 및/또는 N-말단 절반에 위치한 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236, A237, K323, 또는 이들의 어느 조합에서의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236에서의 A, C, D, E, F, G, H, K, N, P, Q, R, S, T, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 V237에서의 C, D, E, F, H, I, K, M, N, L, P, Q, R, V, Y, 또는 W의 치환, 위치 K323에서의 A, C, D, F, G, H, I, L, M, N, P, S, T, V, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236에서의 A, C, F, T, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 A237에서의 C, E, I, K, M, L, P, Q, R, 또는 V의 치환, 위치 K323에서의 A, D, G, H, M, N, P, S, 또는 T의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236에 있는 A(V236A)의 아미노산 치환, 위치 A237에 있는 L(A237L)의 아미노산 치환, 위치 K323에 있는 A(K323A)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236에 있는 A(V236A)의 아미노산 치환, 위치 K323에 있는 A(K323A)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[094] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 CH2 도메인의 하부 경첩 영역 및/또는 N-말단 절반에 위치한 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는, 세포독성이 결여된 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 세포독성을 감소시키거나 제거하는 CH2 도메인의 하부 경첩 영역 및/또는 N-말단 절반에 위치한 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 F/V236, L/A/E237, K324, 또는 이들의 어느 조합에서의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236에서의 A, C, D, E, F, G, H, K, N, P, Q, R, S, T, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 F236에서의 A, C, D, E, G, H, I, K, N, P, Q, R, S, T, 또는 V의 아미노산 치환, 위치 L237에서의 A, C, D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S, T, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 A237에서의 C, D, E, F, H, I, K, M, N, L, P, Q, R, V, Y, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 E237에서의 A, C, F, G, H, I, L, M, N, P, R, S, T, V, W, 또는 Y의 아미노산 치환, K324에서의 A, C, D, F, G, H, I, L, M, N, P, S, T, V, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236에서의 A, C, F, T, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 F236에서의 C, I, 또는 V의 아미노산 치환, 위치 L237에서의 A, C, W, 또는 Y의 아미노산 치환, 위치 A237에서의 C, E, I, K, M, L, P, Q, R, 또는 V의 아미노산 치환, 위치 E237에서의 A, H, N, P, R, S, 또는 T의 아미노산 치환, K324에서의 A, D, G, H, M, N, P, S, 또는 T의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 세포독성을 감소시키거나 제거하는 위치 V236에 있는 A(V236A)의 아미노산 치환, 위치 F236에 있는 I(F236I)의 아미노산 치환, 위치 L237에 있는 A(L237A)의 아미노산 치환, 위치 A237에 있는 L(A237L)의 아미노산 치환, 위치 E237에 있는 A(E237A)의 아미노산 치환, 위치 K324에 있는 A(K324A)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[095] 한 구체예에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않은 항 PD-L1 항체(미변형 항 PD-L1 참조 항체)에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 청소가 더 빠르게 촉진시키는 아미노산 변종을 함유하는 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 모든 구체예에 관하여 더 빠른 청소(faster clearance)란 (i) 미변형 항 PD-L1 참조 항체에 관하여 동일한 주어진 시간 동안 증가한 양의 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 청소 및 (ii) 미변형 항 PD-L1 참조 항체에 관하여 감소된 시간 동안 실질적으로 전체의 양의 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 청소 중 하나 또는 둘 다 의미한다. 바람직하게는 주어진 기간 동안 청소율(주어진 기간 동안 청소된 항체의 양)이 미변형 항 PD-L1 참조 항체에 비해 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 증가한다. 더 바람직하게는 주어진 기간이 항체 투여와 동시에 또는 그 직후에 시작되고, 그리고 30시간, 36시간 또는 42시간 동안 지속된다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 미변형 항 PD-L1 참조 항체를 실질적으로 전부 청소하는 데에 소요되는 기간에 비해 감소된 기간 동안 실질적으로 전부 청소될 수 있고, 바람직하게는 상기 기간이 미변형 항 PD-L1 참조 항체에 비해 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 감소된다. 이 구체예의 관점에서 동일한 기간 동안 동일한 아미노산 서열 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 아미노산 서열 변종을 함유하는 중쇄 불변 도메인(CH)은 IgG 면역글로불린이다. 이 구체예의 다른 관점에서 동일한 기간 동안 동일한 아미노산 서열 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 아미노산 서열 변종을 함유하는 IgG 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)은 IgG1 면역글로불린, IgG2 면역글로불린, IgG3 면역글로불린, 또는 IgG4 면역글로불린이다.
[096] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[097] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H315 및 H440 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315, H440에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간 동안 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315에 있는 A(H315A)의 아미노산 치환, 위치 H440에 있는 Q(H440Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[098] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 최대 10%, 최대 25%, 최대 50%, 최대 75%, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간 동안 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 100%, 약 25% 내지 약 150%, 약 25% 내지 약 200%, 약 25% 내지 약 250%, 약 25% 내지 약 300%, 약 25% 내지 약 350%, 약 25% 내지 약 400%, 약 25% 내지 약 450%, 약 25% 내지 약 500%, 약 50% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 150%, 약 50% 내지 약 200%, 약 50% 내지 약 250%, 약 50% 내지 약 300%, 약 50% 내지 약 350%, 약 50% 내지 약 400%, 약 50% 내지 약 450%, 약 50% 내지 약 500%, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[099] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 1일, 최소 2일, 최소 3일, 최소 4일, 최소 5일, 최소 6일, 또는 최소 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 1일, 최대 2일, 최대 3일, 최대 4일, 최대 5일, 최대 6일, 또는 최대 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[100] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함하는 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[101] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간동안 동일한 H315 및 H440 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315, H440에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간동안 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간동안 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간 동안 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H315에 있는 A(H315A)의 아미노산 치환, 위치 H440에 있는 Q(H440Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[102] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 최대 25%, 최대 50%, 최대 75%, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간 동안 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 100%, 약 25% 내지 약 150%, 약 25% 내지 약 200%, 약 25% 내지 약 250%, 약 25% 내지 약 300%, 약 25% 내지 약 350%, 약 25% 내지 약 400%, 약 25% 내지 약 450%, 약 25% 내지 약 500%, 약 50% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 150%, 약 50% 내지 약 200%, 약 50% 내지 약 250%, 약 50% 내지 약 300%, 약 50% 내지 약 350%, 약 50% 내지 약 400%, 약 50% 내지 약 450%, 약 50% 내지 약 500%, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[103] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 1일, 최소 2일, 최소 3일, 최소 4일, 최소 5일, 최소 6일, 또는 최소 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 1일, 최대 2일, 최대 3일, 최대 4일, 최대 5일, 최대 6일, 또는 최대 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[104] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함하는 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[105] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 동일한 H312 및 H437 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H312, H437에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H312에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H437에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간 동안 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H312에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H437에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간 동안 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를 촉진하는 위치 H312에 있는 A(H312A)의 아미노산 치환, 위치 H437에 있는 Q(H437Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[106] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 촉진하는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 기간 동안 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 최대 25%, 최대 50%, 최대 75%, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 촉진하는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 기간 동안 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 더 빠른 청소를, 예를 들어, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 100%, 약 25% 내지 약 150%, 약 25% 내지 약 200%, 약 25% 내지 약 250%, 약 25% 내지 약 300%, 약 25% 내지 약 350%, 약 25% 내지 약 400%, 약 25% 내지 약 450%, 약 25% 내지 약 500%, 약 50% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 150%, 약 50% 내지 약 200%, 약 50% 내지 약 250%, 약 50% 내지 약 300%, 약 50% 내지 약 350%, 약 50% 내지 약 400%, 약 50% 내지 약 450%, 약 50% 내지 약 500%, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 촉진하는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[107] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 1일, 최소 2일, 최소 3일, 최소 4일, 최소 5일, 최소 6일, 또는 최소 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 1일, 최대 2일, 최대 3일, 최대 4일, 최대 5일, 최대 6일, 또는 최대 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일 내로 변형 항 PD-L1 항체의 청소를 촉진하는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[108] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 아미노산 서열 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 포함하는 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 관점에서 동일한 아미노산 서열 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 포함하는 중쇄 불변 도메인(CH)은 IgG 면역글로불린이다. 이 구체예의 다른 관점에서 동일한 아미노산 서열 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 포함하는 IgG 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)은 IgG1 면역글로불린, IgG2 면역글로불린, IgG3 면역글로불린, 또는 IgG4 면역글로불린이다.
[109] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[110] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H315 및 H440 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H315, H440에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H315에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H315에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H315에 있는 A(H315A)의 아미노산 치환, 위치 H440에 있는 Q(H440Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[111] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 최대 25%, 최대 50%, 최대 75%, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 100%, 약 25% 내지 약 150%, 약 25% 내지 약 200%, 약 25% 내지 약 250%, 약 25% 내지 약 300%, 약 25% 내지 약 350%, 약 25% 내지 약 400%, 약 25% 내지 약 450%, 약 25% 내지 약 500%, 약 50% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 150%, 약 50% 내지 약 200%, 약 50% 내지 약 250%, 약 50% 내지 약 300%, 약 50% 내지 약 350%, 약 50% 내지 약 400%, 약 50% 내지 약 450%, 약 50% 내지 약 500%, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[112] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 1일, 최소 2일, 최소 3일, 최소 4일, 최소 5일, 최소 6일, 또는 최소 7일의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 1일, 최대 2일, 최대 3일, 최대 4일, 최대 5일, 최대 6일, 또는 최대 7일의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[113] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 30시간, 약 32시간, 약 34시간, 약 36시간, 약 38시간, 약 40시간, 약 42시간, 약 44시간, 약 46시간, 또는 약 48시간의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 30시간, 최소 32시간, 최소 34시간, 최소 36시간, 최소 38시간, 최소 40시간, 최소 42시간, 최소 44시간, 최소 46시간, 또는 최소 48시간의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 30시간, 최대 32시간, 최대 34시간, 최대 36시간, 최대 38시간, 최대 40시간, 최대 42시간, 최대 44시간, 최대 46시간, 또는 최대 48시간의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 30시간 내지 약 36시간, 약 30시간 내지 약 42시간, 약 30시간 내지 약 48시간, 약 32시간 내지 약 36시간, 약 32시간 내지 약 42시간, 약 32시간 내지 약 48시간, 약 34시간 내지 약 36시간, 약 34시간 내지 약 42시간, 약 34시간 내지 약 48시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 36시간 내지 약 48시간, 또는 약 42시간 내지 약 48시간의 반감기를 갖는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[114] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[115] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H311 및 H436 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H311, H436에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H311 및 H436 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H311에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H436에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H311 및 H436 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H311에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H436에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H311 및 H436 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H311에 있는 A(H311A)의 아미노산 치환, 위치 H436에 있는 Q(H436Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[116] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 최대 25%, 최대 50%, 최대 75%, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동안 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 100%, 약 25% 내지 약 150%, 약 25% 내지 약 200%, 약 25% 내지 약 250%, 약 25% 내지 약 300%, 약 25% 내지 약 350%, 약 25% 내지 약 400%, 약 25% 내지 약 450%, 약 25% 내지 약 500%, 약 50% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 150%, 약 50% 내지 약 200%, 약 50% 내지 약 250%, 약 50% 내지 약 300%, 약 50% 내지 약 350%, 약 50% 내지 약 400%, 약 50% 내지 약 450%, 약 50% 내지 약 500%, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[117] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 1일, 최소 2일, 최소 3일, 최소 4일, 최소 5일, 최소 6일, 또는 최소 7일의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 1일, 최대 2일, 최대 3일, 최대 4일, 최대 5일, 최대 6일, 또는 최대 7일의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[118] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 30시간, 약 32시간, 약 34시간, 약 36시간, 약 38시간, 약 40시간, 약 42시간, 약 44시간, 약 46시간, 또는 약 48시간의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 or SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 30시간, 최소 32시간, 최소 34시간, 최소 36시간, 최소 38시간, 최소 40시간, 최소 42시간, 최소 44시간, 최소 46시간, 또는 최소 48시간의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 30시간, 최대 32시간, 최대 34시간, 최대 36시간, 최대 38시간, 최대 40시간, 최대 42시간, 최대 44시간, 최대 46시간, 또는 최대 48시간의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 30시간 내지 약 36시간, 약 30시간 내지 약 42시간, 약 30시간 내지 약 48시간, 약 32시간 내지 약 36시간, 약 32시간 내지 약 42시간, 약 32시간 내지 약 48시간, 약 34시간 내지 약 36시간, 약 34시간 내지 약 42시간, 약 34시간 내지 약 48시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 36시간 내지 약 48시간, 또는 약 42시간 내지 약 48시간의 반감기를 갖는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[119] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[120] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H312 및 H437 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H312, H437에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H312에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H437에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H312에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H437에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를 더 감소시키는 위치 H312에 있는 A(H312A)의 아미노산 치환, 위치 H437에 있는 Q(H437Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[121] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 최소 25%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 최대 25%, 최대 50%, 최대 75%, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체의 반감기를, 예를 들어, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 100%, 약 25% 내지 약 150%, 약 25% 내지 약 200%, 약 25% 내지 약 250%, 약 25% 내지 약 300%, 약 25% 내지 약 350%, 약 25% 내지 약 400%, 약 25% 내지 약 450%, 약 25% 내지 약 500%, 약 50% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 150%, 약 50% 내지 약 200%, 약 50% 내지 약 250%, 약 50% 내지 약 300%, 약 50% 내지 약 350%, 약 50% 내지 약 400%, 약 50% 내지 약 450%, 약 50% 내지 약 500%, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[122] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 1일, 최소 2일, 최소 3일, 최소 4일, 최소 5일, 최소 6일, 또는 최소 7일의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 1일, 최대 2일, 최대 3일, 최대 4일, 최대 5일, 최대 6일, 또는 최대 7일의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[123] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 30시간, 약 32시간, 약 34시간, 약 36시간, 약 38시간, 약 40시간, 약 42시간, 약 44시간, 약 46시간, 또는 약 48시간의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 30시간, 최소 32시간, 최소 34시간, 최소 36시간, 최소 38시간, 최소 40시간, 최소 42시간, 최소 44시간, 최소 46시간, 또는 최소 48시간의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 30시간, 최대 32시간, 최대 34시간, 최대 36시간, 최대 38시간, 최대 40시간, 최대 42시간, 최대 44시간, 최대 46시간, 또는 최대 48시간의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 30시간 내지 약 36시간, 약 30시간 내지 약 42시간, 약 30시간 내지 약 48시간, 약 32시간 내지 약 36시간, 약 32시간 내지 약 42시간, 약 32시간 내지 약 48시간, 약 34시간 내지 약 36시간, 약 34시간 내지 약 42시간, 약 34시간 내지 약 48시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 36시간 내지 약 48시간, 또는 약 42시간 내지 약 48시간의 반감기를 갖는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[124] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 아미노산 서열 변종을 함유하지 않은 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체(cognate) FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 함유하는 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 관점에서 동일한 아미노산 서열 변종을 함유하지 않은 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 함유하는 중쇄 불변 도메인(CH)은 IgG 면역글로불린이다. 이 구체예의 다른 관점에서 동일한 아미노산 서열 변종을 함유하지 않은 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 함유하는 IgG 중쇄 불변 도메인(CH)은 IgG2 면역글로불린, IgG3 면역글로불린, 또는 IgG4 면역글로불린이다.
[125] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[126] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H315 및 H440 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H315, H440에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H315에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H315에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H440에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H315 및 H440 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H315에 있는 A(H315A)의 아미노산 치환, 위치 H440에 있는 Q(H440Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함한다.
[127] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최소 10%, 최소 20%, 최소 30%, 최소 40%, 최소 50%, 최소 60%, 최소 70%, 최소 80%, 또는 최소 90% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최대 10%, 최대 20%, 최대 30%, 최대 40%, 최대 50%, 최대 60%, 최대 70%, 최대 80%, 또는 최대 90% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 또는 약 80% 내지 약 90% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[128] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H315A 변종 및 H440Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 감소시키는 H315A 변종, H440Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40의 IgG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[129] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[130] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H311 및 H436 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H311, H436에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H311 및 H436 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H311에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H436에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H311 및 H436 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H311에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H436에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H311 및 H436 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H311에 있는 A(H311A)의 아미노산 치환, 위치 H436에 있는 Q(H436Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[131] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최소 10%, 최소 20%, 최소 30%, 최소 40%, 최소 50%, 최소 60%, 최소 70%, 최소 80%, 또는 최소 90% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최대 10%, 최대 20%, 최대 30%, 최대 40%, 최대 50%, 최대 60%, 최대 70%, 최대 80%, 또는 최대 90% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 또는 약 80% 내지 약 90% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[132] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H311A 변종 및 H436Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 감소시키는 H311A 변종, H436Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함하는 SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 또는 SEQ ID NO: 48의 IgG2 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[133] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 변종을 함유하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 아미노산 서열 변종을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 함유하는 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[134] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 위치한 동일한 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H312 및 H437 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H312, H437에, 또는 이들 위치 둘 다에 아미노산 결손, 추가 또는 치환을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H312에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H437에서의 A, C, D, E, F, G, I, K, L, M, P. Q, R, S, T, V, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H312에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 아미노산 치환, 위치 H437에서의 C, D, E, K, Q, R, S, T, 또는 W의 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 동일한 H312 및 H437 아미노산 치환을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체 보다 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을 더 감소시키는 위치 H312에 있는 A(H312A)의 아미노산 치환, 위치 H437에 있는 Q(H437Q)의 아미노산 치환, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[135] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최소 10%, 최소 20%, 최소 30%, 최소 40%, 최소 50%, 최소 60%, 최소 70%, 최소 80%, 또는 최소 90% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최대 10%, 최대 20%, 최대 30%, 최대 40%, 최대 50%, 최대 60%, 최대 70%, 최대 80%, 또는 최대 90% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 또는 약 80% 내지 약 90% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[136] 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최소 100%, 최소 125%, 최소 150%, 최소 175%, 최소 200%, 최소 250%, 최소 300%, 최소 350%, 최소 400%, 최소 450%, 최소 500% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 250%, 최대 300%, 최대 350%, 최대 400%, 최대 450%, 최대 500% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 H312A 변종 및 H437Q 변종을 포함하지 않는 항 PD-L1 항체에 비해 변형 항 PD-L1 항체와 그의 인지체 FcRn 수용체의 상호작용을, 예를 들어, 약 100% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 250%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 500%, 약 150% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 150% 내지 약 300%, 약 150% 내지 약 350%, 약 150% 내지 약 400%, 약 150% 내지 약 450%, 약 150% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 500%, 약 250% 내지 약 300%, 약 250% 내지 약 350%, 약 250% 내지 약 400%, 약 250% 내지 약 450%, 또는 약 250% 내지 약 500% 감소시키는 H312A 변종, H437Q 변종, 또는 이들의 어느 조합을 포함할 수 있는 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 또는 SEQ ID NO: 53의 IgG4 면역글로불린 중쇄 불변 도메인(CH)을 포함할 수 있다.
[137] 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일의 반감기를 갖는다. 이 구체예의 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최소 1일, 최소 2일, 최소 3일, 최소 4일, 최소 5일, 최소 6일, 또는 최소 7일의 반감기를 갖는다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가, 예를 들어, 최대 1일, 최대 2일, 최대 3일, 최대 4일, 최대 5일, 최대 6일, 또는 최대 7일의 반감기를 갖는다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일의 반감기를 갖는다.
[138] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37의 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, 또는 SEQ ID NO: 25의 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21의 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37의 람다 경쇄를 포함한다.
[139] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[140] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[141] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[142] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 44의 IgG1 면역글로불린 중쇄 그리고 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[143] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37의 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, 또는 SEQ ID NO: 25의 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21의 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37의 람다 경쇄를 포함한다.
[144] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[145] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[146] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[147] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[148] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37의 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, 또는 SEQ ID NO: 25의 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 21의 카파 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37의 람다 경쇄를 포함한다.
[149] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[150] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 또 다른 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[151] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[152] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[153] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[154] 한 구체예에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 한 관점에서는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체가 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 또는 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이 구체예의 관점에서 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 IgG1 면역글로불린 중쇄, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO: 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31의 람다 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.
[155] 두 개의 서열이 동일성(또는 상동성(homology))을 갖는지의 여부는 당업계에 잘 알려진 용어들인 퍼센트 유사성 또는 동일성을 사용하여 정례적으로 계산된다. PD-L1 항원에 대한 서열이 SEQ ID NO: 1에 비교될 수 있다. 항 PD-L1 항체에 대한 서열이 SEQ ID NOs: 2-15에 비교될 수 있다. SEQ ID NOs: 1-15 중 어느 것에 관하여 용어 "퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성"은 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해, 필요할 경우, 서열을 정렬시키고 그리고 갭을 삽입(introducing gaps)한 뒤에, 어느 보존성 치환도 서열 동일성의 일부로 고려하지 않고, SEQ ID NOS: 1-15 아미노산 서열 중 어느 하나의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 퍼센트로 정의된다. 퍼센트 동일성을 구하기 위해 글로벌 방법, 로컬 방법 그리고, 예를 들어, 세그먼트 접근법(segment approach methods)과 같은 하이브리드 방법을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는 다양한 서열 정렬 방법중 어느 것이라도 사용될 수 있다. 퍼센트 동일성을 구하기 위한 프로토콜은 당업계의 숙련자 및 본 명세서의 교시의 범위 내에 있는 정례적인 절차이다.
[156] 글로벌 방법은 서열을 분자의 시작부터 끝까지 정렬하고 그리고 개별적인 잔기 쌍(residue pairs)의 점수를 더하고 그리고 갭 패널티(gap penalties)를 도입하는 것으로 최적의 정렬을 결정한다. 비제한적인 방법들은, 예를 들어, CLUSTAL W(예를 들어 Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position-Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994) 참조), 그리고 반복적 보정(iterative refinement)(예를 들어 Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996) 참조)을 포함한다.
[157] 로컬 방법은 모든 입력 서열이 공유하는 하나 이상의 보존 모티프(conserved motifs)를 식별하는 것으로 서열을 정렬한다. 비제한적인 방법들은, 예를 들어, 매치-박스(Match-box)(예를 들어 Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501-509 (1992) 참조), 및 Align-M(예를 들어 Ivo Van Walle et al., Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics,:1428-1435 (2004) 참조)을 포함한다.
[158] 하이브리드 방법은 글로벌 및 로컬 정렬 방법 둘 다의 기능적 관점을 결합한다. 비제한적인 방법들은, 예를 들어, 세그먼트 대 세그먼트 비교(segment-to-segment comparison)(예를 들어 Burkhard Morgenstern et al., Multiple DNA and Protein Sequence Alignment Based 0n Segment-To-Segment Comparison, 93(22) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 12098-12103 (1996); T-Coffee, see, e.g., Cedric Notredame et al., T-Coffee: A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment, 302(1) J. Mol. Biol. 205-217 (2000) 참조), MUSCLE(예를 들어 Robert C. Edgar, MUSCLE: Multiple Sequence Alignment With High Score Accuracy and High Throughput, 32(5) Nucleic Acids Res. 1792-1797 (2004) 참조), 및 DIALIGN-T(예를 들어 Amarendran R Subramanian et al., DIALIGN-T: An Improved Algorithm for Segment-Based Multiple Sequence Alignment, 6(1) BMC Bioinformatics 66 (2005) 참조)를 포함한다.
[159] 본 명세서는 한 아미노산이 다른 것, 예를 들어 PD-L1 항원, 중쇄 가변 도메인(VH), 경쇄 가변 도메인(VL), 및 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역과 같은 것으로 치환된 다양한 폴리펩티드 변종을 기술한다. 치환은, 예를 들어, 치환되는 아미노산의 물리적인 성질(표 1) 또는 본래의 아미노산이 치환을 어떻게 견디는지(tolerate)(표 2)와 같은 다양한 요인들로 분석될 수 있다. 폴리펩티드에서 다른 아미노산으로 치환될 수 있는 아미노산의 선별은 당업계의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다.
표 1. 아미노산 특성
특성 아미노산
지방족(Aliphatic) G, A, I, L, M, P, V
방향족(Aromatic) F, H, W, Y
C-베타 분지(C-beta branched) I, V, T
소수성(Hydrophobic) C, F, I, L, M, V, W
작은 극성(Small polar) D, N, P
작은 비극성(Small non-polar) A, C, G, S, T
큰 극성(Large polar) E, H, K, Q, R, W, Y
큰 비극성(Large non-polar) F, I, L, M, V
하전된(Charged) D, E, H, K, R
비하전된(Uncharged) C, S, T
음성(Negative) D, E
양성(Positive) H, K, R
산성(Acidic) D, E
염기성(Basic) K, R
아미드(Amide) N, Q
표 2. 아미노산 치환
아미노산 Favored Substitution Neutral Substitutions Disfavored substitution
A G, S, T C, E, I, K, M, L, P, Q, R, V D, F, H, N, Y, W
C F, S, Y, W A, H, I, M, L, T, V D, E, G, K, N, P, Q, R
D E, N G, H, K, P, Q, R, S, T A, C, I, L,
E D, K, Q A, H, N, P, R, S, T C, F, G, I, L, M, V, W, Y
F M, L, W, Y C, I, V A, D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S, T
G A, S D, K, N, P, Q, R C, E, F, H, I, L, M, T, V, W, Y
H N, Y C, D, E, K, Q, R, S, T, W A, F, G, I, L, M, P, V
I V, L, M A, C, T, F, Y D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S, W
K Q, E, R A, D, G, H, M, N, P, S, T C, F, I, L, V, W, Y
L F, I, M, V A, C, W, Y D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S, T
M F, I, L, V A, C, R, Q, K, T, W, Y D, E, G, H, N, P, S
N D, H, S E, G, K, Q, R, T A, C, F, I, L, M, P, V, W, Y
P ― A, D, E, G, K, Q, R, S, T C, F, H, I, L, M, N, V, W, Y
Q E, K, R A, D, G, H, M, N, P, S, T C, F, I, L, V, W, Y
R K, Q A, D, E, G, H, M, N, P, S, T C, F, I, L, V, W, Y
S A, N, T C, D, E, G, H, K, P, Q, R, T F, I, L, M, V, W, Y
T S A, C, D, E, H, I, K, M, N, P, Q, R, V F, G, L, W, Y
V I, L, M A, C, F, T, Y D, E, G, H, K, N, P, Q, R, S, W
W F, Y H, L, M A, C, D, E, G, I, K, N, P, Q, R, S, T, V
Y F, H, W C, I, L, M, V A, D, E, G, K, N, P, Q, R, S, T
Matthew J. Betts and Robert, B. Russell, Amino Acid Properties and Consequences of Substitutions, pp. 289-316, In Bioinformatics for Geneticists, (eds Michael R. Barnes, Ian C. Gray, Wiley, 2003).
[160] 본 발명의 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 한 특정 위치에 있는 소수성 아미노산은 다른 소수성 아미노산으로 치환될 수 있다. 친수성 아미노산의 예는 예를 들어 C, F, I, L, M, V, 및 W를 포함한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 특정 위치에 있는 지방족 아미노산은 또 다른 지방족 아미노산으로 치환될 수 있다. 지방족 아미노산의 예는 예를 들어 A, I, L, P, 및 V를 포함한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 특정 위치에 있는 방향족 아미노산은 또 다른 방향족 아미노산으로 치환될 수 있다. 방향족 아미노산의 예는 예를 들어, F, H, W, 및 Y를 포함한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 특정 위치에 있는 스태킹(stacking) 아미노산은 또 다른 스태킹 아미노산으로 치환될 수 있다. 스태킹 아미노산의 예는 예를 들어 F, H, W 및 Y를 포함한다. 이 실시예의 추가 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 한 특정 위치에 있는 극성 아미노산은 또 다른 극성 아미노산으로 치환될 수 있다. 극성 아미노산의 예는 예를 들어 D, E, K, N, Q, 및 R을 포함한다. 이 실시예의 추가 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 한 특정 위치에서 덜 극성 또는 중성(indifferent) 아미노산은 또 다른 덜 극성 또는 중성 아미노산으로 치환된다. 덜 극성 또는 중성 아미노산의 예는 예를 들어 A, H, G, P, S, T, 및 Y를 포함한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 한 특정 위치에서 양전하를 띤 아미노산은 또 다른 양전하를 띤 아미노산으로 치환될 수 있다. 양으로 하전된 아미노산의 예는 예를 들어, K, R, 및 H를 포함한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 한 특정 위치에 있는 음으로 하전된 아미노산은 또 다른 음으로 하전된 아미노산으로 치환될 수 있다. 음으로 하전된 아미노산의 예는 예를 들어 D 및 E를 포함한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 한 특정 위치에 있는 작은 아미노산은 또 다른 작은 아미노산으로 치환될 수 있다. 작은 아미노산의 예는 예를 들어 A, D, G, N, P, S, 및 T를 포함한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 인슐린-유사 단백질의 한 특정 위치에 있는 C-베타 분지(branching) 아미노산은 또 다른 C-베타 분지형 아미노산으로 치환될 수 있다. C-베타 분지 아미노산의 예에는 예를 들어 I, T, 및 V가 포함된다.
[161] 본 발명의 실시예에서, 본 명세서에 기재된 변형 항 PD-L1 항체는 본 명세서에 기재된 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 존재하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 비해, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해, 예를 들어 약 75% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 85% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 75% 내지 약 99%, 약 80% 내지 약 99%, 약 85% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 75% 내지 약 97%, 약 80% 내지 약 97%, 약 85% 내지 약 97%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99% 범위의 아미노산 동일성을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 또는 적어도 4개의 연속 및/또는 비-연속 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환; 또는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 연속 및/또는 비-연속 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해 예를 들어, 약 1 내지 약 2, 약 1 내지 약 3, 약 1 내지 약 4, 약 2 내지 약 3, 약 2 내지 약 4, 또는 약 3 내지 약 4개의 연속 및/또는 비-연속 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
[162] 본 명세서에 사용된 용어 "선택적으로 결합한다(selectively binds)" 또는 "선택적 결합(selective binding)"은, 항체와 관련하여 만들어질 때, 항체가 비-표적 에피토프와 실질적으로 교차 반응하지 않도록 지시된 표적 에피토프에 대한 항체의 차별적 결합을 지칭한다. 본 명세서에 정의된 펩티드 에피토프의 최소 크기는 약 5개의 아미노산이고, 펩티드 에피토프는 전형적으로 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 또는 적어도 20개의 아미노산을 포함한다. 펩티드 에피토프는 불연속적일 수 있고, 즉, 이는 펩티드의 1차 구조에서 인접하지 않지만 펩티드의 2차, 3차, 또는 4차 구조를 통해 에피토프로 결합되는 아미노산 잔기를 포함한다. 또한, 에피토프는 아미노산 서열 이외의 분자의 일부, 예를 들어 탄수화물 모이어티, 지질 모이어티(예: 지단백질 또는 당지질), 또는 화학적으로-변형 아미노산 모이어티(예: 인산화 아미노산)를 포함할 수 있음에 유의하여야 한다.
[163] 본 발명의 한 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 PD-L1 상에 존재하는 에피토프에 선택적으로 결합할 수 있다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 존재하는 에피토프에 선택적으로 결합한다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 선택적으로, SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 비해, 예를 들어, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 아미노산 동일성을 갖는 에피토프에 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서의 변형 항 PD-L1 항체는, SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해, 예를 들어, 약 75% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 85% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 75% 내지 약 99%, 약 80% 내지 약 99%, 약 85% 내지 약 99%, 약 90% 내지 약 99%, 약 95% 내지 약 99%, 약 75% 내지 약 97%, 약 80% 내지 약 97%, 약 85% 내지 약 97%, 약 90% 내지 약 97%, 약 95% 내지 약 97%, 또는 약 97% 내지 약 99% 범위의 아미노산 동일성을 갖는 에피토프에 선택적으로 결합한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 또는 적어도 4개의 연속 및/또는 비-연속 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환; 또는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개, 연속 및/또는 비-연속 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 1의 PD-L1에 대해 예를 들어, 약 1 내지 약 2, 약 1 내지 약 3, 약 1 내지 약 4, 약 2 내지 약 3, 약 2 내지 약 4, 또는 약 3 내지 약 4개의 연속 및/또는 비-연속 아미노산 결손, 추가, 및/또는 치환을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
[164] 본 발명의 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 또는 적어도 20개의 아미노산을 포함하는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, 최대 5, 최대 6, 최대 7, 최대 8, 최대 9, 최대 10, 최대 11, 최대 12, 최대 13, 최대 14, 최대 15, 또는 최대 20개의 아미노산을 포함하는 에티토프에 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 약 5 내지 약 7, 약 5 내지 약 8, 약 7 내지 약 9, 약 5 내지 약 10, 약 5 내지 약 12, 약 5 내지 약 15, 약 5 내지 약 18, 약 5 내지 약 20, 약 6 내지 약 7, 약 6 내지 약 8, 약 6 내지 약 9, 약 6 내지 약 10, 약 6 내지 약 12, 약 6 내지 약 15, 약 6 내지 약 18, 약 6 내지 약 20, 약 7 내지 약 8, 약 7 내지 약 9, 약 7 내지 약 10, 약 7 내지 약 12, 약 7 내지 약 15, 약 7 내지 약 18, 약 7 내지 약 20, 약 8 내지 약 9, 약 8 내지 약 10, 약 8 내지 약 12, 약 8 내지 약 15, 약 8 내지 약 18, 약 8 내지 약 20, 약 9 내지 약 10, 약 9 내지 약 12, 약 9 내지 약 15, 약 9 내지 약 18, 약 9 내지 약 20, 약 10 내지 약 12, 약 10 내지 약 15, 약 10 내지 약 18, or 약 10 내지 약 20을 포함하는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 결합한다.
[165] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 PD-L1로부터의 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 또는 적어도 20개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 PD-L1로부터의 최대 5개, 최대 6개, 최대 7개, 최대 8개, 최대 9개, 최대 10개, 최대 11개, 최대 12개, 최대 13개, 최대 14개, 최대 15개, 또는 최대 20개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 PD-L1으로부터 약 5 내지 약 7, 약 5 내지 약 8, 약 7 내지 약 9, 약 5 내지 약 10, 약 5 내지 약 12, 약 5 내지 약 15, 약 5 내지 약 18, 약 5 내지 약 20, 약 6 내지 약 7, 약 6 내지 약 8, 약 6 내지 약 9, 약 6 내지 약 10, 약 6 내지 약 12, 약 6 내지 약 15, 약 6 내지 약 18, 약 6 내지 약 20, 약 7 내지 약 8, 약 7 내지 약 9, 약 7 내지 약 10, 약 7 내지 약 12, 약 7 내지 약 15, 약 7 내지 약 18, 약 7 내지 약 20, 약 8 내지 약 9, 약 8 내지 약 10, 약 8 내지 약 12, 약 8 내지 약 15, 약 8 내지 약 18, 약 8 내지 약 20, 약 9 내지 약 10, 약 9 내지 약 12, 약 9 내지 약 15, 약 9 내지 약 18, 약 9 내지 약 20, 약 10 내지 약 12, 약 10 내지 약 15, 약 10 내지 약 18, 또는 약 10 내지 약 20을 포함하는 에피토프에 결합한다.
[166] 선택적 결합은 결합 특성, 예를 들어 결합 친화도, 결합 특이성, 및 결합 활성을 포함한다. 결합 친화도는 항체가 에피토프 결합 부위에 머무는 시간의 길이를 말하고, 항체가 에피토프에 결합하는 강도로 볼 수 있다. 결합 친화도는 평형에서 Kd/Ka 비율로 정의되는 항체의 평형 해리 상수(KD)로 설명될 수 있다. 여기서 Ka는 항체의 결합 속도 상수이고 kd는 항체의 해리 속도 상수이다. 결합 친화도는 결합 및 해리 모두에 의해 결정되고 높은 결합 또는 낮은 해리 단독으로 높은 친화도를 보장할 수는 없다. 결합 속도 상수(Ka) 또는 속도 상수(Kon)는 단위 시간당 결합 이벤트 수 또는 항체와 항원이 항체-항원 복합체에 가역적으로 결합하는 경향을 측정한다. 결합 속도 상수는 M-1 s-1로 표시되고, 다음과 같이 기호화된다: [Ab] x [Ag] x Kon. 결합 속도 상수가 클수록 항체가 항원에 더 빨리 결합하거나 항체와 항원 사이의 결합 친화도가 높아진다. 해리 속도 상수(Kd) 또는 오프-레이트(off-rate) 상수(Koff)는 항체-항원 복합체가 구성 분자, 즉 항체와 항원으로 가역적으로 분리(해리)되는 경향의 단위 시간당 해리 이벤트 수를 측정한다. 해리 속도 상수는 s-1로 표시되고, 다음과 같이 기호화된다: [Ab + Ag] x Koff. 해리 속도 상수가 작을수록, 항체가 항원에 더 밀접하게 결합되거나, 항체와 항원 사이의 결합 친화도가 높아진다. 평형 해리 상수(KD)는 새로운 항체-항원 복합체가 형성되는 속도와 항체-항원 복합체가 평형에서 해리되는 속도를 측정한다. 평형 해리 상수는 M으로 표시되고, Koff/Kon=[Ab] x [Ag]/[Ab + Ag]로 정의되며. 여기서 [Ab]는 항체의 몰 농도이고, [Ag]는 항원의 몰 농도이고, [Ab + Ag]는 항체-항원 복합체의 몰 농도이며, 시스템이 평형 상태일 때 모든 농도는 이러한 성분의 농도이다. 평형 해리 상수가 작을수록, 항체가 항원에 더 단단히 결합되거나, 항체와 항원 사이의 결합 친화도가 높아진다.
[167] 따라서, 한 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 결합 속도 상수가, 예를 들어 1x105 M-1s-1 미만, 1x106 M-1s-1 미만, 1x107 M-1s-1 미만, 또는 1x108 M-1s-1 미만일 수 있다. 다른 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 결합 속도 상수가, 예를 들어, 1x105 M-1s-1 초과, 1x106 M-1s-1 초과, 1x107 M-1s-1 초과, 또는 1x108 M-1s-1 초과일 수 있다. 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 1x105 M-1s-1 내지 1x108 M-1s-1, 1x106 M-1s-1 내지 1x108 M-1s-1, 1x105 M-1s-1 내지 1x107 M-1s-1, 내지 1x106 M-1s-1 내지 1x107 M-1s-1의 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 결합 속도 상수를 가질 수 있다.
[168] 본 발명의 또 다른 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프 이외의 에피토프에 대한 결합 속도 상수가, 예를 들어 1x100 M-1s-1 미만, 1x101 M-1s-1 미만, 1x102 M-1s-1 미만, 1x103 M-1s-1 미만, 또는 1x104 M-1s-1 미만일 수 있다. 또 다른 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프 이외의 에피토프에 대해, 예를 들어 최대 1x100 M-1s-1, 최대 1x101 M-1s-1, 최대 1x102 M-1s-1, 최대 1x103 M-1s-1, 또는 최대 1x104 M-1s-1의 결합 속도 상수를 가질 수 있다.
[169] 본 발명의 또 다른 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 해리 속도 상수가, 예를 들어 1x10-3 s-1 미만, 1x10-4 s-1 미만, 또는 1x10-5 s-1 미만일 수 있다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는, 예를 들어 1.0x10-4 s-1 미만, 2.0x10-4 s-1 미만, 3.0x10-4 s-1 미만, 4.0x10-4 s-1 미만, 5.0x10-4 s-1 미만, 6.0x10-4 s-1 미만, 7.0x10-4 s-1 미만, 8.0x10-4 s-1 미만, 또는 9.0x10-4 s-1 미만의 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 해리 속도 상수를 가질 수 있다. 또 다른 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 해리 속도 상수가, 예를 들어 1x10-3 s-1 초과, 1x10-4 s-1 초과, 또는 1x10-5 s-1 초과일 수 있다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 해리 속도 상수가, 예를 들어 1.0x10-4 s-1 초과, 2.0x10-4 s-1 초과, 3.0x10-4 s-1 초과, 4.0x10-4 s-1 초과, 5.0x10-4 s-1 초과, 6.0x10-4 s-1 초과, 7.0x10-4 s-1 초과, 8.0x10-4 s-1 초과, 또는 9.0x10-4 s-1 초과일 수 있다. 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 해리 속도 상수가, 예를 들어 1x10-3 s-1 내지 1x10-5 s-1, 1x10-3 s-1 내지 1x10-4 s-1, 또는 1x10-4 s-1 내지 1x10-5 s-1일 수 있다.
[170] 본 발명의 또 다른 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 0.500nM 미만의 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 평형 해리 상수를 가질 수 있다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 평형 해리 상수가, 예를 들어 0.500nM 미만, 0.450nM 미만, 0.400nM 미만, 0.350nM 미만, 0.300nM 미만, 0.250nM 미만, 0.200nM 미만, 0.150nM 미만, 0.100nM 미만, 또는 0.050nM 미만을 가질 수 있다. 또 다른 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 0.500nM 초과의 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 평형 해리 상수를 가질 수 있다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 친화도는 PD-L1에 존재하는 에피토프에 대한 평형 해리 상수가, 예를 들어 0.500nM 초과, 0.450nM 초과, 0.400nM 초과, 0.350nM 초과, 0.300nM 초과, 0.250nM 초과, 0.200nM 초과, 0.150nM 초과, 0.100nM 초과, 또는 0.050nM 초과를 가질 수 있다.
[171] 결합 특이성은 에피토프를 함유하는 분자와 에피토프를 함유하지 않는 분자를 구별하는 항체의 능력이다. 결합 특이성을 측정하는 한 가지 방법은 에피토프를 함유하지 않는 분자에 대한 항체의 Kon 결합 속도에 대해 에피토프를 함유하는 분자에 대한 항체의 Kon 결합 속도를 비교하는 것이다. 예를 들어, PD-L1에 존재하는 에피토프에 선택적으로 결합하는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 속도 상수(Ka)를 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프와 비교하는 것이다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어 1x100 M-1s-1 미만, 1x101 M-1s-1 미만, 1x102 M-1s-1 미만, 1x103 M-1s-1 미만, 또는 1x104 M-1s-1 미만의 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대한 결합 속도 상수(Ka)를 가질 수 있다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는, 예를 들어 최대 1x100 M-1s-1, 최대 1x101 M-1s-1, 최대 1x102 M-1s-1, 최대 1x103 M-1s-1, 또는 최대 1x104 M-1s-1의 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대한 결합 속도 상수(Ka)를 가질 수 있다.
[172] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대해 그의 에피토프에 대한 결합 속도 상수(Ka)가 예를 들어 적어도 2배 이상, 적어도 3배 이상, 적어도 4배 이상, 적어도 5배 이상, 적어도 6배 이상, 적어도 7배 이상, 적어도 8배 이상, 또는 적어도 9배 이상일 수 있다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대해 그의 에피토프에 대한 결합 속도 상수(Ka)가 예를 들어 적어도 10배 이상, 적어도 100배 이상, 적어도 1000배 이상, 또는 적어도 10000배 이상일 수 있다.
[173] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대해 그의 에피토프에 대한 결합 속도 상수(Ka)가 예를 들어 최대 1배 이상, 최대 2배 이상, 최대 3배 이상, 최대 4배 이상, 최대 5배 이상, 최대 6배 이상, 최대 7배 이상, 최대 8배 이상, 또는 최대 9배 이상일 수 있다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 항 PD-L1 항체는 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대해 그의 에피토프에 대한 결합 속도 상수(Ka)가 예를 들어 최대 10배 이상, 최대 100배 이상, 최대 1,000배 이상, 또는 최대 10,000배 이상일 수 있다.
[174] 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 결합 특이성은 또한 본 명세서에 개시된 이러한 변형 항 PD-L1 항체가 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대한 에피토프를 구별할 수 있는 비율로서 특징화될 수 있다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 PD-L1에 존재하지 않는 에피토프에 대해 그의 에피토프에 대한 결합 특이성 비가 예를 들어, 적어도 2:1, 적어도 3:1, 적어도 4:1, 적어도 5:1, 적어도 64:1, 적어도 7:1, 적어도 8:1, 적어도 9:1, 적어도 10:1, 적어도 15:1, 적어도 20:1, 적어도 25:1, 적어도 30:1, 적어도 35:1, 또는 적어도 40:1일 수 있다.
[175] 기능적 친화성으로도 알려진 결합력은 다가 항체와 그 항원 사이의 기능적 결합력의 총합을 의미한다. 항체 분자는 하나 이상의 결합 부위(예: IgG의 경우 2개)를 가질 수 있고, 많은 항원은 하나 이상의 항원 부위를 함유한다. 항체의 결합력은 개별 항체 결합 부위의 결합 친화도에 의존하지만, 항체가 완전히 해리되기 위해서는 모든 항체-항원 상호작용이 동시에 끊어져야 하기 때문에 결합력이 결합 친화도보다 더 크다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 그 항체에 대한 임의의 및 모든 에피토프에 선택적으로 결합할 수 있는 것으로 구상된다.
[176] 본 명세서의 양태는, 부분적으로 치료 조성물을 개시한다. 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 본 명세서에 개시된 하나 이상의 항 PD-L1 항체를 포함할 수 있고, 임의로 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 "약학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)"은 개인에게 투여될 때 유해한, 알레르기성, 또는 기타 바람직하지 않거나 원치 않는 반응을 일으키지 않는 임의의 분자 물질 또는 조성물을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 용어 "치료 조성물(therapeutic composition)"은 "약학적으로 허용가능한 치료 조성물(pharmaceutically acceptable therapeutic composition)"과 동의어이고, 예를 들어 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체와 같은 활성 성분의 치료학적 유효 농도를 의미한다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체를 포함하는 치료 조성물은 의료 및 수의학적 적용에 유용하다. 치료 조성물은 단독으로, 또는 다른 보충 활성 성분, 제제, 약물, 또는 호르몬과 조합하여 개체에게 투여될 수 있다. 치료 조성물은 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당제-제조, 빻기(levigating), 유화, 캡슐화, 포집, 및 동결건조를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 다양한 공정을 사용하여 제조될 수 있다. 치료 조성물은, 제한 없이, 멸균 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결건조물, 정제, 환제, 펠렛, 캡슐, 분말, 시럽, 엘릭시르, 또는 투여에 적합한 임의의 다른 투여 형태를 포함하는 다양한 형태를 취할 수 있다.
[177] 치료 조성물에 포함된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 양은 개체에서 적절한 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 양이다. 일반적으로, 이 양은 심각한 부작용을 일으키지 않는 양이기도 하다. 따라서, 치료 조성물에 포함된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 양은 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 유효하고 안전한 양이다. 이러한 양은 사용되는 특정 항 PD-L1 항체 또는 항체들에 따라 달라질 것이다. 특정 치료 조성물에 대한 최적량은 항체 역가 및 개체의 기타 반응의 관찰을 포함하는 표준 및 보통의 연구를 하여 당업자에 의해 확인될 수 있다.
[178] 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 활성 성분의 치료 조성물로의 가공을 용이하게 하는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 임의로 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "약리학적으로 허용가능한 담체(pharmacologically acceptable carriers)"는 "약리학적 담체(pharmacological carriers)"와 동의어이고 투여될 때 실질적으로 장기간 또는 영구적인 유해 효과가 없는 임의의 화합물을 의미하고 "약리학적으로 허용가능한 비히클, 안정화제, 희석제, 첨가제, 보조제, 또는 부형제(pharmacologically acceptable vehicle, stabilizer, diluent, additive, auxiliary or excipient)"와 같은 용어를 포함한다. 이러한 담체는 일반적으로 활성 화합물과 혼합되거나, 활성 화합물을 희석하거나 둘러싸도록 허용되며 고체, 반고체, 또는 액체 제제일 수 있다. 활성 성분은 가용성일 수 있거나 원하는 담체에서 현탁액으로 전달될 수 있는 것으로 이해된다. 제한 없이, 예를 들어, 물, 식염수, 글리신, 히알루론산 등과 같은 수성 매질; 예를 들어, 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 사카린, 활석, 셀룰로오스, 글루코스, 수크로스, 탄산마그네슘 등과 같은 고체 담체; 용매; 분산매; 코팅; 항균제 및 항진균제; 등장제 및 흡수 지연제; 또는 기타 비활성 성분을 포함하는 다양한 약학적으로 허용가능한 담체가 사용될 수 있다. 약리학적으로 허용가능한 담체의 선택은 투여 방식에 따라 달라질 수 있다. 임의의 약리학적으로 허용가능한 담체가 활성 성분과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 약학적으로 허용가능한 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 이러한 약학적 담체의 특정 용도의 비제한적 예는 Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20th ed. 2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001); 및 Handbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4th edition 2003)에서 찾을 수 있다. 이러한 프로토콜은 보통의 절차이고 임의의 변형은 당업자의 범위 및 본 명세서의 교시로부터 충분히 가능하다.
[179] 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 완충제, 보존제, 장성 조절제(tonicity adjusters), 염, 항산화제, 삼투압 조절제, 생리학적 물질, 약리학적 물질, 벌킹제(bulking agents), 유화제, 습윤제, 감미제, 또는 향미제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 다른 약학적으로 허용가능한 성분(또는 약학적 성분)을 선택적으로 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 생성된 제제가 약학적으로 허용된다면, 다양한 완충제 및 pH 조정 수단을 사용하여 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 제조할 수 있다. 이러한 완충제에는 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 인산염 완충액, 중성 완충 식염수, 인산염 완충 식염수, 및 붕산염 완충액이 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 필요에 따라 조성물의 pH를 조정하기 위해 산 또는 염기가 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 약학적으로 허용가능한 항산화제는 메타중아황산나트륨, 티오황산나트륨, 아세틸시스테인, 부틸화 히드록시아니솔 및 부틸화 히드록시톨루엔을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 유익한 방부제는 염화벤잘코늄, 클로로부탄올, 티메로살, 페닐수은 아세테이트, 페닐수은 니트레이트, 안정화된 옥시 클로로 조성물 및 킬레이트제, 예를 들어 DTPA 또는 DTPA-비스아미드, 칼슘 DTPA, 및 CaNaDTPA-비스아미드를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 약학 조성물에 유익한 장성 조절제는 염, 예를 들어 염화나트륨, 염화칼륨, 만니톨, 또는 글리세린 및 기타 약학적으로 허용가능한 장성 조절제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 활성 성분, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체는 염으로서 제공될 수 있고 염산, 황산, 아세트산, 젖산, 타르타르산, 말산, 숙신산 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 많은 산으로 형성될 수 있다. 염은 해당 유리 염기 형태보다 수성 또는 기타 양성자 용매에 더 잘 용해되는 경향이 있다. 약리학 분야에 공지된 이들 및 기타 물질은 치료 조성물에 포함될 수 있는 것으로 여겨진다.
[180] 본 명세서의 양태는 부분적으로 약학적 키트를 개시한다. 본 명세서에 개시된 키트는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 또는 치료 조성물을 포함하는 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 키트는 본 명세서에 기재된 변형 항 PD-L1 항체 또는 치료 조성물에 대한 세부사항, 본 명세서에 개시된 신경변성 질환을 치료 및/또는 예방하기 위해 본 명세서에 기재된 변형 항 PD-L1 항체 또는 치료 조성물을 제조하고 사용하는 방법에 대한 설명, 본 명세서에 기재된 변형 항 PD-L1 항체 또는 치료 조성물의 투여 후 개체의 본 명세서에 기재된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 수준을 검출하는 방법에 대한 설명, 및/또는 판매 허가 번호(예를 들어, FDA 또는 EMA 허가 번호)를 포함하나 이에 제한되지 않는 유익한 정보를 제공하는 라벨 또는 설명서를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 키트는 변형 항 PD-L1 항체 또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물, 예를 들어 주사 장치를 투여하는데 유익한 전달 시스템을 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 키트는 변형 항 PD-L1 항체 또는 본 명세서에 기재된 치료 조성물과 함께 부가 요법으로서 사용되는 또 다른 약학 조성물을 포함하는 하나 이상의 용기를 추가로 포함할 수 있다. 키트의 내용물은 외부 케이스에 넣을 수 있다. 외부 케이싱은 상자, 밀봉된 백, 호일 파우치 등일 수 있다. 특정 실시예에서, 본 명세서에 기재된 키트의 내용물은 상자에 동봉되어 있다.
[181] 본 명세서의 양태는 부분적으로 신경변성 질환을 치료하는 방법을 개시한다. 또 다른 양태에서, 본 명세서는 부분적으로 알츠하이머 질환으로 진단된 개체에서 Aβ-플라크 부담(plaque burden)을 감소시키는 방법을 개시한다. 또 다른 양태에서, 본 명세서는 부분적으로 알츠하이머 질환으로 진단된 환자에서 해마 신경교증(hippocampal gliosis)을 감소시키는 방법을 개시한다.
[182] 이러한 방법에는 치료(질환 발병 후) 및 예방(질환 발병 또는 병리 전)이 포함된다. 예를 들어, 신경변성 질환에 대해 개체를 치료하는 치료 및 예방 방법에는 신경변성 질환 또는 병리를 갖거나 가질 위험이 있는 개체의 치료, 신경변성 질환이 있는 개체의 치료, 및 신경변성 질환으로부터 개체를 보호하여, 개체에서 신경변성 질환의 가능성을 줄이거나 감소시키거나, 신경변성 질환에 대한 개체의 감수성을 줄이거나 감소시키거나, 또는 개체의 신경변성 질환을 억제 또는 예방하는 방법이 포함된다. 이러한 방법은 신경변성 질환 또는 병리를 갖거나 가질 위험이 있는 개체를 치료적 또는 예방학적으로 치료하기 위해 본 명세서에 개시된 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 따라서, 상기 방법은 신경변성 질환 또는 병리를 치료하거나 개체에게 신경변성 질환으로부터의 보호(예를 들어, 예방적 보호)를 제공할 수 있다.
[183] 본 발명의 한 실시예에서, 신경변성 질환을 치료하는 방법은 이를 필요로 하는 개체에게 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 감소시키기에 충분한 양으로 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 투여하여, 신경변성 질환을 치료하는 것을 포함한다. 이 실시예의 양태에서, 치료 조성물은 본 명세서에 개시된 하나 이상의 항 PD-L1 항체를 포함한다.
[184] 본 발명의 한 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 신경변성 질환을 치료하는데 사용된다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 또는 본 명세서에 개시된 치료학적 조성물의 사용은 신경변성 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 감소시킴으로써 신경변성 질환을 치료한다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 항 PD-L1 또는 치료 조성물의 투여는 신경변성 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 감소시켜 신경변성 질환을 치료하기에 충분한 양이다.
[185] 신경변성 질환은 병태생리학적 효과가 뉴런의 사멸을 포함하는 뉴런의 구조 또는 기능의 점진적 손실로 인한 임의의 상태, 질병, 또는 장애를 지칭한다. 신경변성 질환에는 노화-관련 치매, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증, 치매, 파킨슨병 헌팅턴병, 원발성 진행성 다발성 경화증; 2차 진행성 다발성 경화증, 피질기저핵 변성, 레트(Rett) 증후군, 타우병증, 망막 변성 장애; 전방 허혈성 시신경병증; 녹내장; 포도막염; 우울증; 외상-관련 스트레스 또는 외상-후 스트레스 장애, 전두측두엽 치매, 루이소체 치매, 경도 인지 장애, 후두 피질 위축, 원발성 진행성 실어증, 진행성 핵상 마비, 또는 중추신경계 손상을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
[186] 타우병증은 임상적으로, 형태학적으로, 및 생화학적으로 이질적인 신경변성 질환 부류로, 인간 뇌에서 신경원섬유 또는 교원섬유(gliofibrillary) 엉킴에서 타우 단백질의 병리학적 응집을 특징으로 한다. 타우(Tau)는 미세소관에 결합하고 중합을 촉진하는 미세소관-관련 단백질(MAP)이다. 이는 축삭 수송과 신경 통합을 유지하는 데 중요한 역할을 하지만 수상돌기에서는 생리학적 역할을 하고, 신경교 세포에서는 낮은 수준으로 발현된다. 타우병증에서는, 타우가 과인산화되어 엉킴이 형성되어 불용성 형태로 응집된다. 타우병증의 비-제한적 예는 알츠하이머병, 은친화과립 질환(argyrophilic grain disease), 만성 외상성 뇌병증, 피질기저핵변성, 권투선수 치매(dementia pugilistica), 전두측두엽 치매, 전두측두엽 변성, 할러포르덴-스파츠병(Hallervorden-Spatz disease), 헌팅턴병, 신경절교종, 신경절세포종, 구상 신경교 타우병증(globular glial tauopathy), 납중독뇌병, 리포푸신증, 리티코-보딕병(괌(Guam)의 파킨슨-치매 복합체), 수막 혈관 주위 세포종, 17번 염색체와 연관된 파킨슨병, 피크병(Pick's disease), PART(primary age-related tauopathy), 이전에는 신경원섬유 매듭만 있는 치매(NFT-치매)로 알려짐, 뇌염 후 파킨슨병, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화성 범뇌염, 및 결절성 경화증을 포함한다.
[187] 망막 변성 장애는 광수용체 세포의 사멸로 인해 망막이 악화되는 질환이다. 동맥 또는 정맥 폐색, 당뇨병성 망막병증, 수정체 후 섬유증식증/미숙아 망막병증, 또는 질병(대개 유전성)을 포함하여 망막 변성의 여러 원인이 있다. 증상에는 시력 저하, 야맹증, 망막 박리, 빛 감도, 눈부심 감도, 터널 시야, 깊이 지각 상실, 명암 상실, 야맹증, 중심 시력 상실, 주변 시력 상실, 및 전체 시력 상실이 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 망막 변성 장애에는 연령-관련 황반 변성(습성 및 건성), 색소성 망막염, 맥락막결손, 원뿔-막대세포 망막 이상증, 망막 위축, 연소망막층간분리, 난황형 황반부 이영양증(베스트병), 무베타지방질단백질혈증(바센-코른즈웨이그병), 바르데-비들(Bardet-Biedl) 증후군, BCM(Blue Cone Monochromatism) 질환, 우성 드루젠(Drusen), 골드만-파브르(Goldman-Favre) 유리체 망막 영양 장애(강화 S-cone 증후군), 컨스-세이어(Kearns-Sayre) 증후군, 로렌스-문(Laurence-Moon) 증후군, 레버(Leber) 선천 흑암시, 레버의 레프숨(Leber's Refsum)병, 오구치병(Oguchi Disease), 유두 주위(중심 주위) 맥락막 이영양증, 색소 패턴 이영양증, 소르즈비 황반 이영양증, 스타가르트병, 스티클러 증후군, 어셔 증후군 및 바그너 유리체 망막 이영양증이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.
[188] CNS의 손상은 척수 손상, 폐쇄성 뇌손상, 둔상, 관통성 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 뇌허혈, 시신경 손상, 심근경색, 유기인산염 중독 및 종양 절제로 인한 손상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
[189] 본 명세서의 양태는 부분적으로 개체를 제공한다. 개체는 인간을 포함하는 임의의 포유동물을 포함하고, 인간은 환자일 수 있다.
[190] 본 명세서에 개시된 방법은 신경변성 질환의 치료를 포함한다. 치료는 특정 개체에게 제공되는 임의의 객관적이거나 개별적으로 측정가능하거나 검출가능한 개선 또는 편의를 포함하는 임의의 치료적 또는 유익한 효과를 포함한다. 치료적 또는 유익한 효과는 신경변성 질환 또는 병리로 인해 야기되거나 이와 관련된 모든 또는 임의의 특정 해로운 상태, 증상, 장애, 질병, 질환, 또는 합병증의 완전한 제거일 수 있지만 반드시 그럴 필요는 없다. 따라서, 만족스러운 임상적 종점은 신경변성 질환이나 병리로 인한 또는 이와 관련된 해로운 상태, 증상, 장애, 질병, 질환, 또는 합병증의 점진적인 개선 또는 부분적인 감소가 있거나 단기간 또는 장기간에 걸쳐 신경변성 질환 또는 병리로 인한 또는 이와 관련된 하나 이상의 상태, 유해 증상, 장애, 질병, 질환, 또는 합병증의 악화 또는 진행의 방해, 감소, 하락, 억제, 예방, 제한, 또는 제어가 있을 때 달성된다.
[191] 본 발명의 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 치료 또는 사용 방법은 신경변성 질환 또는 병리를 감소, 축소, 억제, 제한, 지연, 또는 예방할 수 있다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 치료 또는 사용 방법은 신경변성 질환 또는 병리에 의해 야기되거나 이와 관련된 하나 이상의 해로운 상태, 증상, 장애, 질병, 질환, 또는 합병증을 감소, 축소, 억제, 저해, 예방, 제어, 또는 제한할 수 있다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 치료 또는 사용 방법은 신경변성 질환 또는 병리, 또는 신경변성 질환 또는 병리로 인해 유발되거나 이와 관련된 하나 이상의 부작용, 장애, 질병, 질환, 또는 합병증으로부터 개체의 회복을 개선, 가속화, 촉진, 향상, 증대, 또는 조장할 수 있다.
[192] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 치료 또는 사용 방법은 신경변성 질환, 병리, 또는 신경변성 질환 또는 병리로 인해 야기되거나 이와 관련된 해로운 상태, 증상, 장애, 질병, 질환, 또는 합병증을 안정화시킬 수 있다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 치료 또는 사용 방법은 신경변성 질환 또는 병리를 갖거나 가질 위험이 있는 개체를 치료하기 위해 사용되는 또 다른 약물 또는 기타 제제와 같은 동시 또는 후속 치료의 필요성, 투여 빈도, 또는 양을 감소 또는 제거할 수 있다. 예를 들어, 부가 요법의 양을 줄이는 것, 예를 들어 신경변성 질환 또는 병리에 대한 치료의 감소 또는 축소.
[193] 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상은 본 명세서에 개시된 치료 방법에 반응할 것이다. 신경변성 질환 또는 병리의 증상은 질환의 단계에 따라 다르지만, CNS 기능, 인지, 학습, 기억, 가소성의 개선을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
[194] 본 명세서에 사용된 용어 "CNS 기능(CNS function)"은 특히 감각 정보의 수신 및 처리, 사고, 학습, 암기, 인지, 언어 생성 및 이해, 운동 기능 및 청각 및 시각 반응 제어, 균형 및 평형 유지, 운동 조정, 감각 정보 전달 및 호흡, 심박수, 및 소화와 같은 자율 기능 제어를 의미한다.
[195] "인지(cognition)", "인지 기능(cognitive function)", 및 "인지 수행(cognitive performance)"이라는 용어는 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용되고 학습, 기억, 이미지 생성, 사고, 인식, 추론, 공간 능력, 말하기 및 언어 기술, 언어 습득 및 판단 주의력을 포함하지만 이에 국한되지 않는 모든 정신적 과정 또는 상태와 관련된다. 인지는 해마, 피질, 및 기타 뇌 구조와 같은 뇌의 여러 영역에서 형성된다. 그러나, 장기 기억은 적어도 부분적으로 피질에 저장되고 감각 정보는 섬 피질 내에 상주하는 특정 피질 구조인 미각 피질에 의해 획득, 통합, 및 검색되는 것으로 알려져 있다.
[196] 인간에서, 인지 기능은, 예를 들어 비제한적으로, 전반적 임상 인상 변화 척도(CIBIC-plus 척도); 간이 정신 상태 평가(MMSE); 신경정신 행동 검사(NPI); 임상 치매 평가 척도(CDR); CANTAB(Cambridge Neuropsychological Test Automated Battery) 또는 SCAG(Sandoz Clinical Assessment-Geriatric)에 의해 임의의 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 인지 기능은 또한 양전자 방출 단층 촬영(PET), 기능적 자기 공명 영상(fMRI), 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영(SPECT), 또는 뇌 기능을 측정할 수 있는 기타 영상 기술과 같은 영상 기술을 사용하여 간접적으로 측정할 수 있다.
[197] 환자의 인지에 영향을 미치는 하나 이상의 프로세스의 개선은 상기 환자의 인지 기능의 개선을 의미할 것이고, 따라서 특정 실시예에서 인지 개선은 학습, 가소성, 및/또는 장기-기억의 개선을 포함한다. "개선(improving)"과 "향상(enhancing)"이라는 용어는 같은 의미로 사용할 수 있다. "학습(learning)"이라는 용어는 새로운 지식을 얻거나 습득하거나 기존 지식, 행동, 기술, 가치, 또는 선호도를 변경하고 강화하는 것과 관련된다. "기억(memory)"이라는 용어는 정보가 인코딩, 저장, 및 검색되는 프로세스와 관련된다. 기억에는 감각 기억, 단기 기억, 장기 기억의 세 가지 범주가 있다.
[198] "장기 기억(long term memory)"이라는 용어는 정보를 장기간 또는 무제한으로 유지하는 능력이다. 장기 기억은 크게 외현 기억(서술 기억)과 암묵 기억(비서술 기억)으로 나뉜다. 장기 기억은 초기 획득 후 기억 흔적을 안정화하는 프로세스 범주인 기억 응고화(memory consolidation)에 의해 달성된다. 응고화는 학습 후 처음 몇 시간 내에 발생하는 시냅스 공고화와 해마 의존 기억이 몇 주에서 몇 년에 걸쳐 해마로부터 독립하는 시스템 통합이라는 두 가지 특정 과정으로 구분된다.
[199] "가소성(plasticity)"이라는 용어는 학습에 따라 변화하고 이미 획득된 기억을 변화시키는 뇌의 능력과 관련된 시냅스 가소성, 뇌 가소성, 또는 신경 가소성에 관한 것이다. 가소성을 반영하는 측정 가능한 매개변수 중 하나는 기억 소거(memory extinction)이다.
[200] 본 명세서의 양태는 부분적으로 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 투여하는 것을 제공한다. 본 명세서에 사용된 용어 "투여하는(administering)"은 임상적으로, 치료학적으로, 또는 실험적으로 유익한 잠재적 결과를 초래할 수 있는 본 명세서에 개시된 면역원성 조성물 또는 치료 조성물을 개체에게 제공하는 임의의 전달 메커니즘을 지칭한다. 본 명세서에 개시된 조성물을 개체에게 투여하기 위해 사용되는 실제 전달 메커니즘은 신경변성 질환의 유형, 신경변성 질환의 위치, 신경변성 질환의 원인, 신경변성 질환의 중증도, 신경변성 질환에 대해 원하는 완화 정도, 신경변성 질환에 대해 원하는 완화 기간, 사용된 특정 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물, 사용된 특정 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물의 분비, 사용된 특정 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물의 약력학, 치료 조성물에 포함될 다른 화합물의 성질, 특정 투여 경로, 특정 특성, 개체의 병력 및 위험 인자(예: 연령, 체중, 일반적인 건강 등), 또는 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 인자를 고려함으로써 당업자에 의해 결정될 수 있다.
[201] 본 명세서에 개시된 조성물은 세포 흡수 접근법을 사용하여 개체에게 투여될 수 있다. 세포 흡수 접근법을 사용한 본 명세서에 개시된 조성물의 투여는 예를 들어 정제, 액체, 캡슐, 분말 등과 같은 임의의 허용 가능한 형태의 경구 투여; 예를 들어, 점적제, 스프레이, 크림, 젤, 또는 연고와 같은 허용 가능한 형태의 국소 투여; 임의의 허용 가능한 형태의 혈관 내 투여, 예를 들어 정맥 내 주사, 정맥 내 주입, 동맥-내 주사, 동맥-내 주입, 및 혈관계로의 카테터 주입; 예를 들어, 복강 내 주사, 근육 내 주사, 피하 주사, 피하 주입, 안 내 주사, 망막 주사, 또는 망막-하 주사 또는 경막외 주사와 같은 임의의 허용 가능한 형태의 조직 주위 및 조직-내 투여; 예를 들어, 카테터 주입과 같은 임의의 허용 가능한 형태의 방광 내 투여; 및 예를 들어 임플란트, 패치, 펠렛, 카테터, 삼투 펌프, 좌약, 생분해성 전달 시스템, 비-생분해성 전달 시스템 또는 또 다른 이식된 연장 또는 서방성 시스템과 같은 배치 장치에 의한 것을 포함한다. 생분해성 폴리머 및 사용 방법의 예시적인 목록은 예를 들어, Handbook of Biodegradable Polymers (Abraham J. Domb et al., eds., Overseas Publishers Association, 1997)에 설명되어 있다.
[202] 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 신경변성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 투여된다. 이 실시예의 양태에서, 투여되는 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물의 양은 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 감소시키기에 충분한 양 또는 신경변성 질환 또는 병리로부터 개체를 보호하기에 충분한 양이다. 본 명세서에 사용된 용어 "충분한 양(amount sufficient)"은 "유효량(effective amount)", "유효 용량(effective dose)", "치료 유효량(therapeutically effective amount)", 또는 "치료 유효 용량(therapeutically effective dose)"을 포함하고 원하는 치료 효과를 달성하는 데 필요한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 최소량 및/또는 치료 조성물을 의미하고 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 감소 또는 억제하기에 충분한 양을 포함한다.
[203] 본 발명의 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은, 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 100% 만큼 감소시키거나 억제한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 예를 들어, 최대 10%, 최대 20%, 최대 30%, 최대 40%, 최대 50%, 최대 60%, 최대 70%, 최대 80%, 최대 90%, 또는 최대 100% 까지 감소시키거나 억제한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은, 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 60%, 또는 약 30% 내지 약 50% 감소시키거나 억제한다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물의 유효량은 예를 들어 적어도 일주일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 또는 적어도 12개월 동안 신경변성 질환 또는 병리와 관련된 하나 이상의 생리학적 상태 또는 증상을 감소 또는 억제한다.
[204] 개체에게 투여되는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료학적 조성물의 실제 유효량은 신경변성 질환의 유형, 신경변성 질환의 위치, 신경변성 질환의 원인, 신경변성 질환의 중증도, 신경변성 질환에 대해 원하는 완화 정도, 신경변성 질환에 대해 원하는 완화 기간, 사용된 특정 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물, 사용된 특정 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물의 분비율, 사용된 특정 항 PD-L1 항체 및/또는 치료 조성물의 약력학, 면역원성 또는 치료 조성물에 포함될 다른 화합물의 성질, 사용된 특정 투여 경로, 특정 특성, 개체의 병력 및 위험 인자(예: 연령, 체중, 일반적인 건강 등), 또는 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 인자를 고려함으로써 당업자에 의해 결정될 수 있다. 추가로, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료학적 조성물의 반복 투여가 사용되는 경우, 실제 치료학적 유효량은 투여 빈도, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료학적 조성물의 반감기, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 인자에 추가로 의존할 것이다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 인간에게 투여하기 전에 동물 모델을 사용한 시험관 내 분석 및 생체 내 투여 연구로부터 외삽될 수 있다는 것이 당업자에게 알려져 있다. 다양한 투여 경로의 상이한 효율성의 관점에서 필요한 유효량의 광범위한 변동이 예상된다. 예를 들어, 경구 투여는 일반적으로 정맥 내 또는 유리체 내 주사에 의한 투여보다 더 높은 투여량 수준을 요구할 것으로 예상된다. 이러한 투여량 수준의 변화는 당업자에게 잘 알려진 최적화의 표준 경험적 루틴을 사용하여 조정될 수 있다. 정확한 치료적 유효 투여량 수준 및 패턴은 바람직하게는 상기-확인된 요인을 고려하여 주치의가 결정한다.
[205] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 일반적으로 약 0.001mg/kg/day 내지 약 100mg/kg/day 범위이다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은, 예를 들어, 적어도 0.001mg/kg/day, 적어도 0.01mg/kg/day, 적어도 0.1mg/kg/day, 적어도 1.0mg/kg/day, 또는 적어도 5.0mg/kg/day일 수 있다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 예를 들어, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 0.01mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 0.1mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 1.0mg/kg/day, 약 0.001mg/kg/day 내지 약 5.0mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 0.1mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 1.0mg/kg/day, 약 0.01mg/kg/day 내지 약 5.0mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 1.0mg/kg/day, 약 0.1mg/kg/day 내지 약 5.0mg/kg/day, 또는 약 1.0mg/kg/day 내지 약 5.0mg/kg/day의 범위일 수 있다.
[206] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 일반적으로 약 0.001mg/day 내지 약 100mg/day의 범위이다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 예를 들어, 적어도 0.001mg/day, 적어도 0.01mg/day, 적어도 0.1mg/day, 적어도 1.0mg/day, 적어도 5.0mg/day, 적어도 10mg/day, 적어도 15mg/day, 적어도 20mg/day, 적어도 25mg/day, 적어도 30mg/day, 적어도 35mg/day, 적어도 40mg/day, 적어도 45mg/day, 또는 적어도 50mg/day일 수 있다.
[207] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 0.001mg/day 내지 약 10mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 15mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 20mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 25mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 30mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 35mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 40mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 45mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 50mg/day, 약 0.001mg/day 내지 약 75mg/day, 또는 약 0.001mg/day 내지 약 100mg/day의 범위일 수 있다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 예를 들어, 약 0.01mg/day 내지 약 10mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 15mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 20mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 25mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 30mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 35mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 40mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 45mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 50mg/day, 약 0.01mg/day 내지 약 75mg/day, 또는 0.01mg/day 내지 약 100mg/day의 범위일 수 있다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 0.1mg/day 내지 약 10mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 15mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 20mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 25mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 30mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 35mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 40mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 45mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 50mg/day, 약 0.1mg/day 내지 약 75mg/day, 또는 약 0.1mg/day 내지 약 100mg/day의 범위일 수 있다.
[208] 본 발명의 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은 예를 들어, 약 1mg/day 내지 약 10mg/day, 약 1mg/day 내지 약 15mg/day, 약 1mg/day 내지 약 20mg/day, 약 1mg/day 내지 약 25mg/day, 약 1mg/day 내지 약 30mg/day, 약 1mg/day 내지 약 35mg/day, 약 1mg/day 내지 약 40mg/day, 약 1mg/day 내지 약 45mg/day, 약 1mg/day 내지 약 50mg/day, 약 1mg/day 내지 약 75mg/day, 또는 약 1mg/day 내지 약 100mg/day의 범위일 수 있다. 이 실시예의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 5mg/day 내지 약 10mg/day, 약 5mg/day 내지 약 15mg/day, 약 5mg/day 내지 약 20mg/day, 약 5mg/day 내지 약 25mg/day, 약 5mg/day 내지 약 30mg/day, 약 5mg/day 내지 약 35mg/day, 약 5mg/day 내지 약 40mg/day, 약 5mg/day 내지 약 45mg/day, 약 5mg/day 내지 약 50mg/day, 약 5mg/day 내지 약 75mg/day, 또는 약 5mg/day 내지 약 100mg/day의 범위일 수 있다.
[209] 투여량은 단일 투여량 또는 누적 투여량(연속 투여량)일 수 있고, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 신경변성 질환의 치료는 유효량의 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 1회 투여를 포함할 수 있다. 비-제한적 예로서, 유효량의 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 예를 들어 단일 주사 또는 침착으로서 개체에게 1회 투여될 수 있다. 대안적으로, 신경변성 질환의 치료는 유효량의 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 예를 들어, 매일, 며칠에 한 번, 매주, 매월, 또는 매년과 같은 기간 범위에 걸쳐 수행하는 것을 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 개체에게 1년에 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6회 투여될 수 있다. 투여 시기는 개체의 증상의 중증도와 같은 요인에 따라 개체마다 다를 수 있다. 예를 들어, 유효량의 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 무기한 기간 동안 또는 개체가 더 이상 치료를 필요로 하지 않을 때까지 3개월마다 1회 개체에게 투여될 수 있다. 당업자는 개체의 상태가 치료 과정 전반에 걸쳐 모니터링될 수 있고 그에 따라 투여되는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 유효량이 조정될 수 있음을 인식할 것이다.
[210] 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체를 포함하는 조성물 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 또한 치료의 전반적인 치료 효과를 증가시키기 위해 다른 치료 화합물과 조합하여 개체에게 투여될 수 있다. 증상을 치료하기 위해 여러 화합물을 사용하면 부작용의 존재를 줄이는 동시에 이로운 효과를 높일 수 있다.
[211] 본 발명의 한 실시예에서, 신경변성 질환을 치료하는 방법 또는 용도는 적어도 2개의 요법 코스를 포함하는 투여 요법을 포함하고, 각각의 요법 코스는 순차적으로 치료 세션에 이어 비-치료의 간격 세션을 포함한다. 개시된 방법 또는 용도는 이를 필요로 하는 개체에게 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 적어도 2개의 요법 코스를 포함하는 투여 요법에 의해 투여되고, 각각의 요법 코스는 순차적으로 치료 세션에 이어 비-치료의 간격 세션을 포함한다.
[212] 용어 "치료 세션(treatment session)"은 본 명세서에서 "치료 기간(treatment period)" 또는 "치료의 기간(period of treatment)"이라는 용어와 상호교환적으로 사용되며, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물이 치료받는 개체에게 투여되는 기간을 의미한다. 치료 세션은 치료 세션 내내 일관되게 유지되는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 치료 유효량을 초래하지 않는다. 하기에 더 상세히 논의되는 바와 같이, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 준-치료 수준은 치료 세션 동안 발생한다. 치료 세션은 단일 투여 이벤트일 수 있거나, 일정 기간 동안 발생하는 다중 투여 요법일 수 있다.
[213] "비-치료 세션(non-treatment session)"이라는 용어는 본 명세서에서 "비치료 기간(non-treatment period)", "치료하지 않는 기간(period of no treatment)", "휴지 기간(interval session)" 또는 "비-치료 휴지 기간(interval session of non-treatment)"이라는 용어와 상호교환적으로 사용되고, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물이 치료되는 개체에게 투여되지 않는 기간을 의미한다. 비-치료 세션 동안, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 수준은 치료되는 개체에서 치료 수준 이하이다. 본 명세서에 개시된 바와 같이, "비-치료 세션(non-treatment session)"은 치료 세션 동안 일정 기간 동안 발생하는 다중 투여 요법을 구성하는 투여 이벤트 사이에 개입하는 시간의 기간과 동일한 이벤트가 아니다. 치료 세션 동안 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 투여가 반복 투여인 경우, 비-치료 세션은 치료 세션 동안 이러한 반복 투여 사이의 기간보다 더 길다.
[214] 투여 요법은 다양한 방식으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 자극에 대한 반응에 대한 IFN-γ 생성 백혈구의 수준 또는 활성 또는 백혈구의 증식 속도를 개별적으로 모니터링하고, 모니터링 결과로부터 결정된 바와 같이 경험적으로 그리고 개인적으로 치료 세션, 투여 빈도, 및 간격 세션을 조정하여, 면역 억제 수준을 치료받는 각 환자에 대해 원하는 수준으로 보정할 수 있다(맞춤 의학).
[215] 본 발명의 특정 실시예에서, 치료 세션은 최대 유효 농도의 절반(EC50)을 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 이 EC50은 지정된 기간 동안 치료 세션 동안 유지되며, 이 시점에서 투여는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 수준을 치료 수준 이하로 감소시키기 위해 중단된다. 비-치료 기간은 지정된 기간 동안 및/또는 인지에 대한 유익한 효과가 치료 시작 전 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로 유지되는 한 유지된다. 이 실시예의 양태에서, 인지에 대한 유익한 효과가 유지되는 것은 치료 시작 전 인지 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로, 예를 들어 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%의 개선을 나타내는 것이다.
[216] 본 발명의 특정 실시예에서, 상기 치료 세션은 최소 유효 농도(MEC) 이상을 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 이 MEC는 지정된 기간에 대해 치료 세션 동안 유지되며, 이 시점에서 투여는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 수준을 치료 수준 이하로 감소시키기 위해 중단된다. 비-치료 기간은 지정된 기간 동안 및/또는 인지에 대한 유익한 효과가 치료 시작 전 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로 유지되는 한 유지된다. 이 실시예의 양태에서, 인지에 대한 유익한 효과가 유지되는 것은 치료 시작 전 인지 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로, 예를 들어 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%의 개선을 나타내는 것이다.
[217] 본 발명의 특정 실시예에서, 상기 치료 세션은 최대 억제 농도의 절반(IC50)을 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 이 IC50은 지정된 기간에 대해 치료 세션 동안 유지되며, 이 시점에서 투여는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 수준을 치료 수준 이하로 감소시키기 위해 중단된다. 비-치료 기간은 지정된 기간 동안 및/또는 인지에 대한 유익한 효과가 치료 시작 전 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로 유지되는 한 유지된다. 이 실시예의 양태에서, 인지에 대한 유익한 효과가 유지되는 것은 치료 시작 전 인지 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로, 예를 들어 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%의 개선을 나타내는 것이다.
[218] 본 발명의 특정 실시예에서, 상기 치료 세션은 50% 이상의 표적 점유율을 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하고 이 표적 점유율은 지정된 기간에 대해 치료 세션 동안 유지되며, 이 시점에서 투여는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 표적 점유율을 치료 수준 이하로 감소시키기 위해 중단된다. 비-치료 기간은 지정된 기간 동안 및/또는 인지에 대한 유익한 효과가 치료 시작 전 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로 유지되는 한 유지된다. 이 실시예의 양태에서, 인지에 대한 유익한 효과가 유지되는 것은 치료 시작 전 인지 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로, 예를 들어 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%의 개선을 나타내는 것이다.
[219] 본 발명의 특정 실시예에서, 상기 치료 세션은 1x10-9 M 이상의 혈청 농도를 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 이 혈청 농도는 지정된 기간에 대해 치료 세션 동안 유지되며, 이 시점에서 투여는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 혈청 농도를 치료 수준 이하로 감소시키기 위해 중단된다. 비-치료 기간은 지정된 기간 동안 및/또는 인지에 대한 유익한 효과가 치료 시작 전 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로 유지되는 한 유지된다. 이 실시예의 양태에서, 인지에 대한 유익한 효과가 유지되는 것은 치료 시작 전 인지 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로, 예를 들어 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%의 개선을 나타내는 것이다.
[220] 본 발명의 특정 실시예에서, 상기 치료 세션은 0.15㎍/mL 이상의 혈청 농도를 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 이 혈청 농도는 지정된 기간에 대해 치료 세션 동안 유지되며, 이 시점에서 투여는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 혈청 농도를 치료 수준 이하로 감소시키기 위해 중단된다. 비-치료 기간은 지정된 기간 동안 및/또는 인지에 대한 유익한 효과가 치료 시작 전 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로 유지되는 한 유지된다. 이 실시예의 양태에서, 인지에 대한 유익한 효과가 유지되는 것은 치료 시작 전 인지 수준 이상 또는 마지막 치료 세션 전 인지 수준 이상으로, 예를 들어 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%의 개선을 나타내는 것이다.
[221] 본 발명의 특정 실시예에서, 상기 치료 세션은 단일 투여일 수 있거나 정해진 기간 동안 제공된 다중 투여를 포함할 수 있다. 이 실시예의 양태에서, 치료 세션은 예를 들어 1일 내지 1주, 1일 내지 2주, 2일 내지 2주, 3일 내지 2주, 4일 내지 2주, 5일 내지 2주, 6일 내지 2주, 1주 및 2주, 10일 및 2주 사이의 과정에서 제공되는 다중 투여일 수 있다. 예를 들어, 치료 세션은 1주 이내에 제공되는 2회의 투여, 예를 들어 첫 번째 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일에 제공되는 두 번째 투여를 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 치료 세션은 예를 들어 선행 투여 후 1, 2, 또는 3일에 제공되는 것과 같이 1주 이내에 모두 제공되는 3회의 투여를 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 치료 세션은 예를 들어 선행 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일에 제공되는 것과 같이 2주 이내에 모두 제공되는 3회의 투여를 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 치료 세션은 예를 들어 선행 투여 후 1, 2, 3, 또는 4일에 제공되는 것과 같이 모두 2주 이내에 제공되는 4회의 투여를 포함할 수 있다.
[222] 본 발명의 특정 실시예에서, 비-치료의 간격 세션은 1주 내지 6개월, 예를 들어 2주 내지 4주, 3주 내지 4주, 2주 내지 5주, 3주 내지 5주, 4주 내지 5주, 2주 내지 6주, 3주 내지 6주, 4주 내지 6주, 5주 내지 6주, 2주 내지 2개월, 3주 내지 2개월, 4주 내지 2개월, 5주 내지 2개월, 6주 내지 2개월, 7주 내지 2개월, 2개월 내지 3개월, 2개월 내지 4개월, 3개월 내지 4개월, 3개월 내지 5개월, 3개월 내지 5개월, 4개월 내지 5개월, 1주 내지 6개월, 2주 내지 6개월, 3주 내지 6개월, 4주 내지 6개월, 6주 내지 6개월, 2개월 내지 6개월, 3개월 내지 6개월, 4개월 내지 6개월, 또는 5개월 내지 6개월일 수 있다. 특정 실시예에서, 비-치료의 간격 세션은 1 내지 2개월 길이, 1 내지 3개월 길이, 또는 2 내지 3개월 길이일 수 있다.
[223] 본 발명의 치료 세션에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 투여는 단일 투여 또는 반복 투여일 수 있고, 예를 들어 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물은 1회만 투여된 후 즉시 비-치료 세션이 뒤따를 수 있거나, 또는 매일, 또는 2, 3, 4, 5, 또는 6일마다 1회, 또는 2주 동안 매주 1회 투여될 수 있다. 이러한 빈도는 당업계에서 일반적으로 사용되는 관행을 기반으로 할 수 있고, 최종적으로 임상 시험에서 의사에 의해 결정될 수 있다. 대안적으로, 치료 세션에서 반복 투여의 빈도는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 성질에 따라 조정될 수 있다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물이 비교적 낮은 빈도로, 예를 들어 2주 동안 매주 1회, 치료 세션 동안 투여되는 경우, 이 치료 세션 후에 비-치료 간격 세션이 이어지고, 그 길이는 치료 세션 동안 반복 투여 사이의 기간보다 더 길다(즉, 이 예에서 1주 이상). 이 예에서 치료 세션 동안 투여 사이에 1주일의 일시 중지는 간격 세션으로 간주되지 않는다.
[224] 본 발명의 치료 세션이 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여로 이루어진 경우, 투여 요법은 비-치료 간격의 길이에 의해 결정되어, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여 후에 다음 단일-투여 치료 세션 전에 7, 8, 9, 10, 12, 14, 18, 21, 24, 28, 또는 30일 이상의 비-치료 간격이 뒤따른다. 특히, 투여 요법은 2, 3, 또는 4주의 비-치료의 비-치료 간격이 배치된 단일 투여로 구성된다. 또한, 투여 요법은 2 내지 4주, 2 내지 3주, 또는 3 내지 4주의 비-치료의 비-치료 간격이 배치된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여로 이루어질 수 있다.
[225] 본 발명의 치료 세션이 다중 투여로 이루어진 경우, 투여 요법은 비-치료 간격의 길이에 의해 결정되어, 1주 이내에 제공된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여는 다음 다중-투여 치료 세션 전에 7, 10, 12, 14, 18, 21, 24, 28, 또는 30일 이상의 비-치료 간격이 뒤따른다. 특히, 투여 요법은 2 또는 3 또는 4주의 비-치료의 비-치료 간격을 배치하여 1주 이내에 제공된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여로 이루어질 수 있다. 또한, 투여 요법은 2 내지 4주, 2 내지 3주, 또는 3 내지 4주의 비-치료 간격이 배치된 1주 이내에 제공된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여로 이루어질 수 있다.
[226] 또 다른 예로서, 투여 요법은 다음 다중-투여 치료 세션 전에 2주, 3주 또는 1, 2, 3, 또는 4개월 이상의 비-치료 간격이 뒤따르는 2주 이내에 제공된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있다. 특히, 투여 요법은 1, 2, 3 또는 4개월의 비-치료 간격을 두고 배치된 2주 이내에 제공된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있다. 또한, 투여 요법은 1 내지 2개월, 1 내지 3개월, 1 내지 4개월, 2 내지 3개월, 2 내지 4개월, 또는 3 내지 4개월의 비-치료 간격과 함께 배치된 2주 이내에 제공된 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있다.
[227] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 1x10-9 M 이상의 혈청 농도를 달성하기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 혈청 농도는 항 PD-L1 항체 수준이 치료 수준 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 치료 세션 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10일에서 약 30일 동안 비-치료 기간이 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. 치료 세션 동안 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[228] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 0.15㎍/mL 이상의 항 PD-L1 혈청 농도를 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 혈청 농도는 항 PD-L1 항체 수준이 치료 수준 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 치료 세션 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10일에서 약 30일 동안 비-치료 기간이 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[229] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 항 PD-L1 항체 수준이 치료 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일의 기간 동안 EC50, MEC, 또는 IC50을 달성하기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있다. 이 치료 세션 후에는 다음 치료 세션이 수행되기 전 약 10일에서 약 30일 동안 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 수준이 치료 수준 이하인 비-치료 세션이 이어진다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[230] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 항 PD-L1 수준이 치료 수준 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일의 기간 동안 항 PD-L1 항체에 대해 50% 이상의 표적 점유율을 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있다. 이 치료 세션 후에는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 표적 점유율이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10 내지 약 30일의 기간 동안 치료 수준 이하인 비-치료 세션이 이어진다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 표적 점유율의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[231] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 IFN-γ의 혈청 농도를 기저 수준보다 1배 이상으로 증가시키기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 IFN-γ 혈청 농도는 IFN-γ의 혈청 농도가 치료 수준 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 치료 세션 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 IFN-γ의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10 내지 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. IFN-γ 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[232] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 CXCL10의 혈청 농도를 기저 수준보다 1배 이상으로 증가시키기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 CXCL10 혈청 농도는 CXCL10의 혈청 농도가 치료 이하인 시점에서 치료 세션 동안 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 CXCL10의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10일에서 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. CXCL10 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[233] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 기억 T 세포 집단을 기저 수준보다 50% 이상 증가시키기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 단일 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 기억 T 세포 집단 수준은 기억 T 세포 집단 수준이 치료 이하인 시점에서 치료 세션 동안 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 기억 T 세포 집단 수준이 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10일 내지 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. 기억 T 세포 집단 수준의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[234] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 1x10-9 M 이상의 항 PD-L1 항체의 혈청 농도를 달성하기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 혈청 농도는 항 PD-L1 항체 수준이 치료 이하인 시점에서 치료 세션 동안 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션이 수행되기 전 약 10 내지 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[235] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 0.15㎍/mL 이상의 PD-L1 항체의 혈청 농도를 달성하기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 혈청 농도는 항 PD-L1 항체 수준이 치료 이하인 시점에서 치료 세션 동안 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션을 수행하기 전 약 10 내지 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[236] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 항 PD-L1 항체의 수준이 치료 수준 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일의 기간 동안 EC50, MEC 또는 IC50을 달성하기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있다. 이 치료 세션 후에는 항 PD-L1 항체의 수준이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10 내지 약 30일의 기간 동안 치료 수준 이하인 비-치료 세션이 이어진다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[237] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 항 PD-L1 항체 수준이 치료 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일의 기간 동안 항 PD-L1 항체에 대한 타겟 점유율을 달성하기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있다. 이 치료 세션 후에는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 표적 점유율이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10 내지 약 30일의 기간 동안 치료 수준 이하인 비-치료 세션이 이어진다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 표적 점유율의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[238] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 IFN-γ의 혈청 농도를 기저 수준보다 1배 이상으로 증가시키기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 IFN-γ 혈청 농도는 IFN-γ의 혈청 농도가 치료 수준 이하인 시점에서 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 치료 세션 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 IFN-γ의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10 내지 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. IFN-γ 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[239] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 CXCL10의 혈청 농도를 기저 수준보다 1배 이상으로 증가시키기 위해 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 CXCL10 혈청 농도는 CXCL10의 혈청 농도가 치료 이하인 시점에서 치료 세션 동안 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 CXCL10의 혈청 농도가 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10일에서 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. CXCL10 혈청 농도의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[240] 또 다른 예로서, 상기 투여 요법은 기억 T 세포 집단을 기저 수준보다 50% 이상 증가시키기 위한 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체 및/또는 본 명세서에 개시된 치료 조성물의 다중 투여를 포함하는 치료 세션을 포함할 수 있고 이 기억 T 세포 집단 수준은 기억 T 세포 집단 수준이 치료 이하인 시점에서 치료 세션 동안 약 4 내지 약 7일, 약 5 내지 약 10일, 약 7 내지 약 10일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안 유지된다. 이 치료 세션 후에는 기억 T 세포 집단 수준이 치료 수준 이하이고 비-치료 기간이 다음 치료 세션이 수행되기 전에 약 10일 내지 약 30일 동안 유지되는 비-치료 세션이 이어진다. 기억 T 세포 집단 수준의 감소는 능동적으로 또는 수동적으로 달성될 수 있다.
[241] 본 명세서의 양태는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 부분적으로 개시한다. 한 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 코돈-최적화될 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 세포-케이스(cell-cased) 발현 시스템에서 발현될 때 암호화된 폴리펩티드를 효과적으로 처리하는데 유익한 신호 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, 또는 SEQ ID NO: 65를 포함한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, 또는 SEQ ID NO: 81을 포함한다.
[242] 본 발명의 한 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 코돈-최적화될 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 세포-케이스 발현 시스템에서 발현될 때 암호화된 폴리펩티드를 효과적으로 처리하는데 유익한 신호 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 이 실시예의 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 82, 또는 SEQ ID NO: 83을 포함한다. 이 실시예의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄는 SEQ ID NO: 86, 또는 SEQ ID NO: 87을 포함한다.
[243] 본 명세서의 양태는 부분적으로 발현 컨스트럭트(expression construct)를 개시한다. 발현 컨스트럭트는 세포 또는 무세포 추출물에서 본 명세서에 개시된 핵산 서열에 의해 암호화되는 폴리펩티드를 발현하는데 유익한 발현 벡터에 작동가능하게 연결된 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 바이러스 발현 벡터; 원핵생물 발현 벡터; 진핵생물 발현 벡터, 예를 들어, 효모 발현 벡터, 곤충 발현 벡터, 및 포유동물 발현 벡터; 및 무세포 추출물 발현 벡터를 포함하나 이에 제한되지 않는 변형 클로스트리듐 독소를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 분자를 발현시키기 위해 매우 다양한 발현 벡터가 사용될 수 있다. 발현 벡터는 예를 들어, 구성적, 조직-특이적, 세포-특이적, 또는 유도성 프로모터 요소, 인핸서 요소, 또는 둘 모두와 같은 제어 요소를 포함할 수 있음이 추가로 이해된다.
[244] 일반적으로, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 발현 벡터 내로 서브클로닝되어(subcloned) 발현 컨스트럭트를 생성한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 하나의 발현 컨스트럭트 및 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 또 다른 발현 컨스트럭트로 별개의 발현 컨스트럭트가 생성된다. 일부 실시예에서, 단일 발현 컨스트럭트는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄 및 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄 둘 다를 암호화한다. 이러한 단일 발현 컨스트럭트는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열과 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열 사이에 내부 리보솜 도입 서열(IRES)을 포함할 수 있다. 특정 실시예에서, 뉴클레오티드 서열 자체 또는 벡터의 핵산 분자는 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열과 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열 사이에 바이러스 자가-절단 2A 펩티드를 포함한다. 특히, 바이러스 자가-절단 2A 펩티드는 테사 아시그나 바이러스(TaV)로부터의 T2A, 구제역 바이러스(FMDV)로부터의 F2A, 말 비염 A 바이러스(ERAV)로부터의 E2A, 및 돼지 테스코바이러스-1(PTV1)로부터의 P2A로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
[245] 본 명세서에 개시된 발현 컨스트럭트는 본 명세서에 개시된 변형 항 PD-L1 항체의 발현 및 적절한 조립을 위해, 예를 들어 형질감염 또는 형질도입에 의해 적절한 숙주 세포 내로 일시적으로 또는 안정적으로 도입되고 유지될 수 있다. 안정적으로 유지되는 발현 컨스트럭트는 염색체-외일 수 있고 자율적으로 복제할 수 있거나, 세포의 염색체 물질에 통합되어 비-자율적으로 복제할 수 있다. 이어서 발현된 변형 항 PD-L1 항체를 정제하고, 단리하고, 활성에 대해 시험을 실시할 수 있다. 항체의 재조합 생산을 위한 절차 및 방법 뿐만 아니라 활성에 대한 스크리닝 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
[246] 본 명세서의 양태는 또한 다음과 같이 기술될 수 있다:
1. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-Fc 관련화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 변형 항 PD-L1 항체.
2. 실시예 1에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
3. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 하나 이상의 아미노산 변형을 갖고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 항 PD-L1 항체.
4. 실시예 1 또는 3에 있어서, SEQ ID NO: 38의 중쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
5. 실시예 2-4 중 어느 한 실시예에 있어서, SEQ ID NO: 38의 중쇄를 추가로 포함하고, 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
6. 실시예 5에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44인 변형 항 PD-L1 항체.
7. 실시예 1-6 중 어느 한 실시예에 있어서, SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
8. 실시예 7에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
9. 실시예 7 또는 8에 있어서, 상기 경쇄는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
10. 실시예 1 또는 3 중 어느 한 실시예에 있어서, SEQ ID NO: 108의 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 있는 변형 항 PD-L1 항체.
11. 실시예 2-4 중 어느 한 실시예에 있어서, SEQ ID NO: 108의 중쇄 불변 도메인을 추가로 포함하고, 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 있는 변형 항 PD-L1 항체.
12. 실시예 11에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57인 변형 항 PD-L1 항체.
13. 실시예 10-12 중 어느 한 실시예에 있어서, SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
14. 실시예 13에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 변형 항 PD-L1 항체.
15. 실시예 13 또는 14에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
16. 실시예 15에 있어서, 상기 경쇄는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
17. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 중쇄에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 변형 항 PD-L1 항체.
18. 실시예 17에 있어서, 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 중쇄에서 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
19. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 중쇄에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 중쇄에 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
20. 실시예 17 또는 19에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
21. 실시예 18-20 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
22. 실시예 21에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44인 변형 항 PD-L1 항체.
23. 실시예 17-22 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
24. 실시예 23에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
25. 실시예 23 또는 24에 있어서, 상기 경쇄는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
26. 실시예 17 또는 19에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 108의 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
27. 실시예 18-20 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 108의 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
28. 실시예 27에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57인 변형 항 PD-L1 항체.
29. 실시예 26-28 중 어느 한 실시예에 있어서, SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2; SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
30. 실시예 29에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 변형 항 PD-L1 항체.
31. 실시예 29 또는 30에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
32. 실시예 31에 있어서, 상기 경쇄는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
33. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 가변 도메인 및 중쇄 불변 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 및 경쇄 불변 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 중쇄 불변 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 변형 항 PD-L1 항체.
34. 실시예 7에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 중쇄 불변 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
35. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 가변 도메인 및 중쇄 불변 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 및 경쇄 불변 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 중쇄 불변 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 중쇄 불변 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 변형 항 PD-L1 항체.
36. 실시예 33 또는 35에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
37. 실시예 34-36 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
38. 실시예 37에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44인 변형 항 PD-L1 항체.
39. 실시예 33-38 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3인 변형 항 PD-L1 항체.
40. 실시예 39에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
41. 실시예 33 또는 35에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 108이고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
42. 실시예 34-36 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 108이고, 그리고 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
43. 실시예 42에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57인 변형 항 PD-L1 항체.
44. 실시예 41-43 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
45. 실시예 44에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 변형 항 PD-L1 항체.
46. 실시예 44 또는 45에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
47. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 가변 도메인 및 하부 경첩 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 및 경쇄 불변 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형이 있어 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키는 변형 항 PD-L1 항체.
48. 실시예 47에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 하부 경첩 영역 및/또는 CH2 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
49. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 가변 도메인 및 하부 경첩 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 및 경쇄 불변 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형이 있어 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 하부 경첩 영역 및/또는 CH2 도메인에서 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 변형 항 PD-L1 항체.
50. 실시예 47 또는 49에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
51. 실시예 48-50 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체,
52. 실시예 51에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44인 변형 항 PD-L1 항체.
53. 실시예 47-52 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
54. 실시예 53에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
55. 실시예 47 또는 49에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 108이고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
56. 실시예 48-50 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 108이고, 그리고 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 변형 항 PD-L1 항체.
57. 실시예 56에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57인 변형 항 PD-L1 항체.
58. 실시예 55-57 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
59. 실시예 58에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 변형 항 PD-L1 항체.
60. 실시예 58 또는 59에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
61. SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1)로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 비변형 항 PD-L1 항체에 비해 향상된 혈액으로부터의 청소율을 갖고; 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능이 결여되어 있는 변형 항 PD-L1 항체.
62. 실시예 61에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 변형 항 PD-L1 항체.
63. 실시예 61 또는 62에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 54인 변형 항 PD-L1 항체.
64. 실시예 63에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41인 변형 항 PD-L1 항체.
65. 실시예 61 또는 62에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 55인 변형 항 PD-L1 항체.
66. 실시예 65에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 42인 변형 항 PD-L1 항체.
67. 실시예 61 또는 62에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 56인 변형 항 PD-L1 항체.
68. 실시예 67에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 43인 변형 항 PD-L1 항체.
69. 실시예 61 또는 62에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 57인 변형 항 PD-L1 항체.
70. 실시예 69에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 44인 변형 항 PD-L1 항체.
71. 실시예 61-70 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 경쇄는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
72. 실시예 71에 있어서, 상기 경쇄 불변 영역은 카파(kappa) 경쇄 불변 영역 또는 람다(lambda) 경쇄 불변 영역인 항 PD-L1 항체.
73. 실시예 72에 있어서, 상기 카파 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20인 변형 항 PD-L1 항체.
74. 실시예 72에 있어서, 상기 람다 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 31인 변형 항 PD-L1 항체.
75. 실시예 61-74 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
76. 실시예 61-75 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37인 변형 항 PD-L1 항체.
77. SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 중쇄; 및 SEQ ID NO 21의 경쇄를 포함하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1).
78. SEQ ID NO: 42의 중쇄; 및 SEQ ID NO 21의 경쇄를 포함하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
79. SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
80. SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 55의 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
81. 약 30시간 내지 약 36시간, 약 30시간 내지 약 42시간, 약 30시간 내지 약 48시간, 약 32시간 내지 약 36시간, 약 32시간 내지 약 42시간, 약 32시간 내지 약 48시간, 약 34시간 내지 약 36시간, 약 34시간 내지 약 42시간, 약 34시간 내지 약 48시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 36시간 내지 약 48시간, 약 42시간 내지 약 48시간, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일의 반감기를 갖는, 실시예 1-80 중 어느 한 실시예에 따른 변형 항 PD-L1 항체.
82. 실시예 1-81 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 약 30시간 내지 약 36시간, 약 30시간 내지 약 42시간, 약 30시간 내지 약 48시간, 약 32시간 내지 약 36시간, 약 32시간 내지 약 42시간, 약 32시간 내지 약 48시간, 약 34시간 내지 약 36시간, 약 34시간 내지 약 42시간, 약 34시간 내지 약 48시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 36시간 내지 약 48시간, 약 42시간 내지 약 48시간, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 내지 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일 내에 혈액에서 제거되는 변형 항 PD-L1 항체.
83. 실시예 1-82 중 어느 한 실시예에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 그의 동족 PD-1 수용체를 약 30시간 내지 약 36시간, 약 30시간 내지 약 42시간, 약 30시간 내지 약 48시간, 약 32시간 내지 약 36시간, 약 32시간 내지 약 42시간, 약 32시간 내지 약 48시간, 약 34시간 내지 약 36시간, 약 34시간 내지 약 42시간, 약 34시간 내지 약 48시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 36시간 내지 약 48시간, 약 42시간 내지 약 48시간, 약 1일 내지 약 2일, 약 1일 내지 약 3일, 약 1일 내지 약 4일, 약 1일 내지 약 5일, 약 1일 내지 약 6일, 약 1일 약 7일, 약 2일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 4일, 약 2일 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 6일, 약 2일 내지 약 7일, 약 3일 내지 약 4일, 약 3일 내지 약 5일, 약 3일 내지 약 6일, 약 3일 내지 약 7일, 약 4일 내지 약 5일, 약 4일 내지 약 6일, 약 4일 내지 약 7일, 약 5일 내지 약 6일, 약 5일 내지 약 7일, 또는 약 6일 내지 약 7일 동안 점유하는 것인 변형 항 PD-L1 항체.
84. 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체를 포함하는 약학 조성물.
85. 신경변성 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 실시예 1-83 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체의 용도.
86. 실시예 85에 있어서, 상기 신경변성 질환은 노화-관련 치매, 알츠하이머병, 근위축성 축삭 경화증, 치매, 파킨슨병 헌팅턴병, 원발성 진행성 다발성 경화증; 이차 진행성 다발성 경화증, 피질기저핵 변성, 레트 증후군, 타우병증, 망막 변성 장애; 전방 허혈성 시신경병증; 녹내장; 포도막염; 우울증; 외상-관련 스트레스 또는 외상-후 스트레스 장애, 전두측두엽 치매, 루이소체 치매, 경도 인지 장애, 후두 피질 위축, 원발성 진행성 실어증, 진행성 핵상 마비, 또는 중추신경계 손상을 포함하는 용도.
87. 알츠하이머병을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 실시예 1-83 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체의 용도.
88. 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체를 포함하는 약학적 키트.
89. 실시예 84에 정의된 바와 같은 약학 조성물을 포함하는 약학적 키트.
90. 실시예 85에서 정의된 바와 같은 약제를 포함하는 약학적 키트.
91. 신경변성 질환을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 개체에게 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하는 방법.
92. 신경변성 질환을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 개체에게 실시예 84에 정의된 바와 같은 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
93. 신경변성 질환을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 개체에게 실시예 85에 정의된 약제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
94. 실시예 91-93 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신경변성 질환은 노화-관련 치매, 알츠하이머병, 근위축성 축삭 경화증, 치매, 파킨슨병 헌팅턴병, 원발성 진행성 다발성 경화증; 이차 진행성 다발성 경화증, 피질기저핵 변성, 레트 증후군, 타우병증, 망막 변성 장애; 전방 허혈성 시신경병증; 녹내장; 포도막염; 우울증; 외상-관련 스트레스 또는 외상-후 스트레스 장애, 전두측두엽 치매, 루이소체 치매, 경도 인지 장애, 후두 피질 위축, 원발성 진행성 실어증, 진행성 핵상 마비, 또는 중추신경계 손상을 포함하는 용도.
95. 신경변성 질환을 치료하는데 사용하기 위한 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체.
96. 실시예 95에 따른 변형 항 PD-L1 항체에 있어서, 상기 신경변성 질환은 노화-관련 치매, 알츠하이머병, 근위축성 축삭 경화증, 치매, 파킨슨병 헌팅턴병, 원발성 진행성 다발성 경화증; 이차 진행성 다발성 경화증, 피질기저핵 변성, 레트 증후군, 타우병증, 망막 변성 장애; 전방 허혈성 시신경병증; 녹내장; 포도막염; 우울증; 외상-관련 스트레스 또는 외상-후 스트레스 장애, 전두측두엽 치매, 루이소체 치매, 경도 인지 장애, 후두 피질 위축, 원발성 진행성 실어증, 진행성 핵상 마비, 또는 중추신경계 손상을 포함하는 용도.
97. 알츠하이머병을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 개체에게 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하는 방법.
98. 알츠하이머병을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 개체에게 실시예 84에 정의된 바와 같은 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
99. 알츠하이머병을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 개체에게 실시예 85에 정의된 바와 같은 약제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
100. 알츠하이머병 치료에 사용하기 위한, 실시예 1-83 중 어느 한 구체예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체.
101. 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열 또는 실시예 1-83 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
102. 실시예 101에 있어서, 상기 중쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, 또는 SEQ ID NO: 65인 폴리뉴클레오티드.
103. 실시예 101에 따른 폴리뉴클레오티드에서, 상기 경쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 82 또는 SEQ ID NO: 83인 폴리뉴클레오티드.
104. SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 86, 또는 SEQ ID NO: 87의 폴리뉴클레오티드.
105. 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 발현 컨스트럭트.
106. 실시예 105에 따른 발현 컨스트럭트로서, 상기 중쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, 또는 SEQ ID NO: 65인 발현 컨스트럭트.
107. 실시예 1-83 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 발현 컨스트럭트.
108. 실시예 107에 있어서, 상기 경쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 82 또는 SEQ ID NO: 83인 발현 컨스트럭트.
109. SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 86, 또는 SEQ ID NO: 87을 포함하는 발현 컨스트럭트.
110. 숙주 세포에서 제1 및 제2 발현 컨스트럭트를 발현시키는 것을 포함하는 변형 항 PD-L1 항체를 제조하는 방법으로서, 상기 제1 발현 컨스트럭트는 실시예 105 또는 106에 의해 정의되고, 제2 발현 컨스트럭트는 실시예 107 또는 108에 의해 정의되는 방법.
111. 숙주 세포에서 제1 및 제2 발현 컨스트럭트를 발현시키는 것을 포함하는 변형 항 PD-L1 항체의 제조 방법으로서, 상기 제1 발현 컨스트럭트는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, 또는 SEQ ID NO: 81을 포함하고, 제2 발현 컨스트럭트는 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 86, 또는 SEQ ID NO: 87을 포함하는 방법.
112. 실시예 110 또는 111에 있어서, 변형 항 PD-L1 항체를 정제하는 것을 추가로 포함하는 방법.
113. 실시예 110-112에 있어서, 상기 생산된 변형 항 PD-L1 항체는 실시예 1-83 중 어느 하나에 의해 정의되는 것인 방법.
114. SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2; SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는, 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
115. 실시예 114에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 변형 항 PD-L1 항체.
116. 실시예 115에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44인 변형 항 PD-L1 항체.
117. 실시예 114-116 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 변형 항 PD-L1 항체.
118. 실시예 114-117 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄는 카파 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 변형 항 PD-L1 항체.
118. 실시예 118에 있어서, 상기 카파 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 16인 변형 항 PD-L1 항체.
120. 실시예 114-119 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 21인 변형 항 PD-L1 항체.
121. SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
122. 실시예 114-121 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체를 포함하는 약학 조성물.
123. 실시예 114-121 중 어느 한 실시예에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체 또는 실시예 122에서 정의된 바와 같은 약학 조성물을 포함하는 약학적 키트.
124. 알츠하이머병을 치료하기 위한, 실시예 114-121 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체, 실시예 122에 정의된 약학 조성물, 또는 실시예 123에 정의된 바와 같은 약학적 키트.
125. 알츠하이머병 치료용 의약 제조에서의 실시예 114-121 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체 또는 실시예 122에 정의된 약학 조성물의 용도.
126. 알츠하이머병을 치료하기 위한, 실시예 114-121 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체, 실시예 122에 정의된 바와 같은 약학 조성물, 또는 실시예 123에 정의된 바와 같은 약학적 키트의 용도.
127. 실시예 114-121 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체, 실시예 122에 정의된 바와 같은 약학 조성물, 실시예 123에서 정의된 약학적 키트, 또는 실시예 125에서 정의된 의약을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 알츠하이머병을 치료하는 방법.
128. 실시예 114-121 중 어느 한 실시예에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열 또는 실시예 114-121 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
129. 실시예 128에 있어서, 상기 중쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, 또는 SEQ ID NO: 65를 포함하는 폴리뉴클레오티드.
130. 실시예 128 또는 129에 있어서, 상기 경쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 82 또는 SEQ ID NO: 83을 포함하는 것인 폴리뉴클레오티드.
131. 실시예 128 또는 129에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 발현 컨스트럭트.
132. 실시예 128 또는 130에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체로부터의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 발현 컨스트럭트.
133. 숙주 세포에서 제1 및 제2 발현 컨스트럭트를 발현시키는 것을 포함하는 변형 항 PD-L1 항체의 제조 방법으로서, 상기 제1 발현 컨스트럭트는 실시예 131에 의해 정의되고, 제2 발현 컨스트럭트는 실시예 132에 의해 정의되는 방법.
134. 실시예 133에 있어서, 상기 생산된 변형 항 PD-L1 항체는 실시예 114-121 중 어느 하나에 의해 정의되는 것인 방법.
실시예
[247] 다음의 비-제한적인 실시예는 현재 고려되는 대표적인 실시예의 보다 완전한 이해를 용이하게 하기 위해 단지 설명의 목적으로 제공된다. 이들 실시예는 본 명세서에 개시된 항체, 치료 조성물, 또는 방법 및 용도에 관한 것을 포함하여, 본 명세서에 기재된 임의의 실시예를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
[248] 본 명세서에 기술된 모든 연구에서 두 개의 상이한 동물 모델, 즉 알츠하이머병(AD)에 대한 5XFAD 생쥐 모델 및 치매에 대한 DM-hTAU 생쥐 모델을 사용하였다. 5XFAD 형질전환 생쥐는 스웨덴(K670N, M671L), 플로리다(I716V), 런던(V717I) 가족성 알츠하이머병(FAD) 돌연변이가 있는 돌연변이 인간 APP(695)와 두 개의 FAD 돌연변이: M146L 및 L286V를 보유한 인간 PS1을 발현한다. 5XFAD 생쥐는 알츠하이머병의 주요 특징, 즉 아밀로이드 이상, 뇌 염증 및 신경 세포 손실을 재연한다(Oakley et al, 2006). 5XFAD 생쥐에서, RAWM(radial arm water maze)을 사용하여 동일-연령 야생형(WT) 생쥐에 비해 감소된 해마-의존 공간 학습/기억 성능을 감지할 수 있다(Puzzo et al, 2014),
[249] DM-hTAU 모델은 인간의 전두측두엽-치매의 심각한 표현형과 관련된 2개의 돌연변이, K257T/P301S(이중 돌연변이, DM)를 갖는 인간-타우(htau) 유전자를 발현하는 형질전환 생쥐이다. 이 생쥐는 알츠하이머병 및 기타 신경변성 질환을 포함한 광범위한 타우병증의 특징인 신경섬유-엉킴(NFT)을 발생시킨다. 이 생쥐의 병리학적 특징에는 인지 결함, 신경 염증, 신경교 세포 활성화, 및 타우 단백질 인산화, 및 뇌 내 응집된 타우 축적이 포함된다(Rosenmann et al, 2008). DM-hTAU 생쥐에서 학습 능력 감소는 T-미로 자발적 변형 테스트를 사용하여 행동 성능을 테스트하여 측정된다. 학습 능력의 감소는 일반적으로 생후 7~8개월부터 감지된다. 분석은 한쪽 암(arm)이 접혀 있는(새로운) 3개의 팔이 있는 T-미로에서 동물의 습관화를 포함한다. 건강한 생쥐는 낯선 공간을 선호하기 때문에, 접힌 암을 열었을 때, 야생형(WT) 동물은 새로운 암으로 들어가는 것을 선호하므로, 새로운 암에서 전체 시간의 60% 이상(120초 중 평균 80초)을 보낸다. 대조적으로, DM-hTAU 생쥐는 새로운 암에 대한 선호도를 나타내지 않았다(각 암당 총 시간의 약 30%).
실시예 1
항 PD-L1 항체 활성은 신경성 병리를 해결하기 위해 병에 걸린 뇌 조직에 단핵구-유래 대식세포 진입을 촉진한다
[250] 단핵구는 병리학적 조건하에 조직에 모집되어, 대식세포 또는 수지상 세포(DC)로 분화한다. 그들은 병원체, 종양 세포에 대한 면역학적 방어에 필수 불가결한 것으로 나타났고, 지난 10년 동안 나타난 바와 같이, 신경변성 질환을 해결하는 데에도 사용된다. 항 PD-L1 치료의 유익한 효과가 뇌로의 단핵구 귀소(monocyte homing)에 의존하는지 테스트하기 위해, 뇌를 포함한 조직으로의 단핵구 이동이 골수에서 조직으로의 Ly6Chi 단핵구 이동을 촉진하는 CC-케모카인 리간드 2(CCL2; MCP1이라고도 함)에 의존한다는 사실을 이용하였다. CCR2에 대한 중화 항체는 CNS로의 단핵구-유래 대식세포 귀소를 손상시키고, 척수 손상 후 복구하는 것으로 알려져 있다.
[251] 항 PD-L1에 의해 유도된 복구 과정에서 단핵구-유래 대식세포의 역할을 평가하기 위해, DM-hTAU 생쥐에 PD-L1 항체 투여 3일 전부터 시작하여, PD-L1 항체 치료 후 12일까지, 3일마다 항-CCR2 항체(클론 MC21)를 주사하였다(도 1a). 항-PD-1 치료 후 뇌의 본거지인 단핵구 및 그 수는 치료 후 1주에 비해 2주에서 더 높다. 이 실험에서, 동물의 5개 그룹이 포함되었다: 1) 윌 타입(Will type) 생쥐; 2) 1.5mg 쥐(rat) IgG2b 항-KLH 항체 대조군으로 치료된 DM-hTAU; 3) 1.5mg 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)로 치료된 DM-hTAU; 4) 항-CCR2 항체(MC21)만으로 반복적으로 치료된 DM-hTAU; 및 5) 항-CCR2(MC21) 및 항 PD-L1 항체 둘 모두로 치료된 DM-hTAU. 치료 1개월 후, 모든 생쥐는 T-Maze(도 1c), Y-Maze(도 1d), 및 신물질탐색시험(NOR)(도 1e)의 3가지 독립적 패러다임에서 인지 수행에 대해 점수를 매겼다. 행동 데이터를 분석하기 위해 3개의 일원 ANOVA를 수행하였다. 첫 번째 투여 1주일 전에, 동물을 T-미로를 사용하여 사전-테스트를 실시하여 임의의 치료적 개입 이전에 인지 성능을 평가하였다(도 1b).
[252] 항 PD-L1 항체 치료의 유의한 주요 효과는 인지 테스트 각각에 대해 검출되었다(Y-maze: F(4,52)=12.48, p>0.0001; T-maze: F(4,56)=9.068, p<0.0001; NOR: F(4,52)=12.48, p<0.0001). 실험 그룹 간의 유의한 차이를 평가하기 위해, 각 행동 테스트에 대해 다중 비교를 위한 Tukey의 테스트를 수행하였다. 유의한 차이는 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001로 표시된다. 데이터는 항-CCR2 항체가 PD-L1 요법의 효과를 제거했음을 보여주었다. 또한, 항-CCR2 항체 치료는 단핵구 수준만을 선택적으로 감소시켰고, 혈액 및 비장에서 다른 T 세포/백혈구 집단은 감소시키지 않았다(도 2a-d). 이러한 결과는 항-CCR2 항체가 단핵구 수준을 선택적으로 감소시킴으로써 PD-L1 요법의 효과를 제거한다는 것을 나타낸다.
[253] 항 PD-L1 치료 후 뇌로의 면역 세포의 강화된 트래피킹(trafficking) 여부를 테스트하기 위해, DM-hTAU 생쥐의 뇌 실질 조직을 유세포 분석에 의해 CD45high/CD11bhigh 침윤 골수 세포의 존재에 대해 분석하였다. 이 집단은 상주 미세아교세포를 나타내는 CD45lowCD11blow 또는 중간 집단과 달리 주로 침윤 세포로 구성된다. 동일한 생쥐의 뇌를 대조군으로 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)(n=10) 또는 쥐 IgG2b 항-KLH 항체(n=16)로 치료한 후 2주 동안 절제하였다. 세포를 이들 뇌에서 채취하고 형광색소-표지된 단클론 항체 Brilliant-violet 421-접합된 항-CD45 항체, PE-접합된 항-CD11b 항체, FITC-접합된 항-CD11b 항체, 및 APC-접합된 항-Ly6C 항체를 사용하여 면역조직화학으로 염색하였다. FlowJo 소프트웨어를 사용하여 LSRII 세포측정기(BD Biosciences)에서 세포를 분석하였다(도 3a). 각 실험에서, 각 조직에 대한 관련 음성 대조군, 양성 대조군, 및 단일-염색 샘플을 사용하여 관심 집단을 식별하고 다른 집단을 배제하였다. 결과는 두 개의 독립적인 실험에서 채취된다. 데이터는 평균 ±s.e.m.; *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001으로 표시된다. 뇌 CD45high/CD11bhigh 세포의 정량적 분석은 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군으로 치료된 생쥐에 비해 항 PD-L1 항체로 치료된 DM-hTAU 생쥐의 뇌에서 침윤성 CD45high/CD11bhigh 세포의 유의한 증가를 입증하였다(도 3b). 결과는 항 PD-L1 치료가 단핵구-유래 대식세포(CD45high/CD11bhigh)의 뇌 실질로의 모집을 촉진했음을 나타낸다.
[254] 세포 계통 및 CD45 및 CD11b의 고발현을 기반으로 한 관찰을 확인하기 위해, 골수(BM)-키메라 생쥐를 사용하여 위의 실험을 반복했는데, 여기서 공여자 BM 세포는 GFP-표지된 조혈모 세포가 있는 생쥐로부터 채취되었다. 이러한 키메라를 생성하기 위해, 수용자 DM-hTAU 생쥐는, BM 이식 전에, 머리는 피하면서 신체의 하부를 표적으로 하는 방사선 빔으로, 치사량 조사로 조절되었다. 키메라 현상이 확립된 후, 동물을 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)(n=4) 또는 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군(n=6)으로 치료하였다. 항체 투여 2주 후에 뇌를 분석하였다. 유세포 분석에 의한 분석은 CD45highCD11bhigh 세포 중 약 50%의 세포가 GFP+인 것으로 밝혀졌으며, 이는 키메라 현상의 정도와 일치하고, 활성화된 상주 미세아교세포가 아닌 침윤 단핵구로서의 정체성을 확인하였다(도 4a). CD45lowCD11b+ 세포에서는 GFP+ 세포가 보이지 않는다. 특히, GFP+CD45+CD11b+ 골수 세포만 문이 닫혀있고; GFP+CD45+CD11b-인 BM-유래 세포는 분석하지 않았다. 항 PD-L1 항체로 치료하면, IgG-치료된 대조군에 비해, 동물에서 GFP+CD45highCD11bhigh 세포의 빈도가 대략 3배 증가하였다(도 4b). 특히, 이 숫자는 키메라 현상이 불완전하고 따라서 침윤 세포의 약 50%가 GFP-표지되지 않았기 때문에 귀소 대식세포의 수를 과소평가하였다.
[255] 면역조직화학을 위해 같은 실험에서 다른 쥐의 뇌를 절제하고 치료했는데, 이는 항 PD-L1-치료된 뇌의 뇌 실질(주로 피질)에서 GFP+IBA-1+ 골수 세포의 존재를 밝혀냈다. 동일한 동물의 뇌 절편도 항-염증성 사이토카인, IL-10에 대해 염색하고, 침윤 단핵구-유래 대식세포와의 공-국지성을 관찰했지만, IBA-1+GFP- 미세아교세포와는 그렇지 않았다(도 5b).
[256] 종합하면, 이러한 결과는, 만성 신경변성 질환의 조건에서, 전신 면역 활성화가 병든 뇌로의 말초 단핵구-유래 대식세포의 진입을 촉진함을 시사한다. 이러한 실험은 병든 뇌 조직에서 단핵구-유래 대식세포가 국소 염증의 해결에 기여할 수 있고, 세포 파편의 제거 및 잘못 접히고 응집된 단백질의 병리학적 형태의 제거에 필요한 국소 식세포 활성을 촉진할 수 있음을 나타낸다.
실시예 2
항 PD-L1 항체 치료는 인지 능력을 향상시키고 뇌 병리를 감소시킨다
[257] 이 실시예는 항 PD-L1 치료가 치매에 대한 AD의 5XFAD 생쥐 모델 및 DM-h-Tau 생쥐 모델에서 인지 능력 및 뇌 병리를 개선하는 데 효과적임을 입증하는 실험을 설명한다.
[258] 일련의 실험에서, 5XFAD 생쥐 모델을 사용하여 항 PD-L1 항체 치료가 인지 능력을 향상시켰는지 여부를 평가하였다. 5XFAD 생쥐에서, RAWM(radial arm water maze)을 사용하여, 동일-연령 야생형(WT) 생쥐에 비해 감소된 해마-의존 공간 학습/기억 성능은 5~6개월령부터 감지할 수 있다. 수컷 및 암컷 5XFAD 생쥐(평균 6개월령 코호트)는 0.1mg/mouse(n=8), 0.5mg/mouse(n=9), 또는 1.5mg/mouse(n=9), 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)의 단일 용량 주사, 또는 1.5mg/mouse(n=9) 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군(LTF-2 클론; BioXcell)으로 치료하였다(도 6a). 동일 연령 야생형(WT) 생쥐를 추가 대조군으로 사용하였다(n=10). 다중 비교를 위한 Dunnett의 사후 검정에 이어 양-방향 반복-측정 ANOVA를 사용하여 유의성을 계산하였다. 항 PD-L1 항체 0.1mg은 동형 대조군 항체(대조군 동물)를 사용한 치료와 비교하여 인지 능력에 어떠한 영향도 미치지 않았지만, 항 PD-L1 항체의 0.5mg 및 1.5mg 용량 모두 대조군 동물에 비해 5XFAD 생쥐에서 유의미한 유익한 효과를 나타냈다(도 6b). 치료 효과는 항체 투여 후 1개월에 유의미했고 치료 후 2개월에 감소하였다(도 6c). 0.5mg/mouse로 치료된 생쥐에 비해 1.5mg/mouse로 치료된 5XFAD 생쥐에서 약간 더 나은 성능이 나타났다(도 6b-c).
[259] 뇌 병리에 대한 항 PD-L1 항체 치료의 효과를 조사하기 위해, 면역조직화학에 의한 치료 2개월 후, 연구 기간이 끝날 때 5XFAD 생쥐의 뇌를 분석하였다. 관류 후 뇌를 제거하고, 6μm 관상 조각을 채취하고, 생쥐당 5개의 섹션을 관심 영역(치상회 또는 대뇌 피질) 전체에 걸쳐 미리 결정된 4-5개의 서로 다른 깊이에서 GFAP(glial fibrillary acidic protein)에 대해 면역-염색하였다. Image-Pro Plus 소프트웨어(Media Cybernetics, Bethesda, MD, USA)를 사용하여 양성으로 염색된 픽셀의 히스토그램-기반 분할(Histogram-based segmentation)을 수행하였다. 분할 알고리즘을 수동으로 각 이미지에 적용하여, 수동으로 선택한 치상회 영역의 크기를 계산하고, 그 안에서 GFAP 형광을 발현하는 모든 세포를 찾는다. 그 다음 알고리즘은 검출된 세포의 총 면적(도 7a), 이들의 형광 강도(도 7b), 및 1000픽셀보다 큰 세포의 수(도 7c)를 측정한다. 계산은 다음과 같다: "면적/면적"은 검출된 모든 GFAP+ 세포의 면적을 치상회의 전체 선택된 면적으로 나눈 값이고; "CTCF"는 전체 치상회의 평균 형광으로 보정된 검출된 세포의 평균 형광이다. 정량화는 치료 그룹의 본질에 대해 맹검 방식으로 수행되었다. 성상교세포증 및 신경염증에 대한 마커를 사용한 GFAP 면역염색 분석은 단일 항체 투여 후 8주 늦게 관찰된 성상교세포증 감소에 대한 명확한 치료 효과를 보여주었다(도 7a-c).
[260] 또 다른 일련의 실험에서, DM-hTAU 생쥐 모델을 사용하여 항 PD-L1 항체 치료가 인지 능력을 개선했는지 여부를 평가하였다. 수컷 및 암컷 DM-hTAU 생쥐(평균 9개월령 코호트)는 0.1mg/mouse(n=7), 0.5mg/mouse(n=9), 또는 1.5mg/mouse(n=9), 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)의 단일 용량 주사, 또는 1.5mg/mouse(n=10) 쥐 IgG2b 항-KLH 항체(클론 LTF-2; BioXcell)로 치료하였다(도 8a). 동일 연령 야생형(WT) 생쥐를 추가 대조군으로 사용하였다(n=10). 인지 성능은 T-미로 분석을 사용하여 평가되었다. 다중 비교를 위한 Fisher의 사후 검정에 이어 일원 ANOVA를 사용하여 유의성을 계산하였다. 5xFAD 생쥐에서와 같이, 항 PD-L1 치료는 1.5mg/mouse 또는 0.5mg/mouse의 단일 투여 후 DM-hTAU 생쥐에서 효과적인 것으로 밝혀졌지만 0.1mg/mouse의 투여 후에는 그렇지 않았다(도 8b).
[261] 단일 항체 투여 후 행동에 대한 치료 효과의 지속 기간을 조사하기 위해, DM-hTAU 생쥐에 두 가지 유효 용량(0.5 또는 1.5mg/mouse) 또는 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군을 치료하고, 단일 항체 투여 1개월 및 2개월 후 T-미로 분석으로 평가하였다. DM-hTAU 생쥐를 0.5mg/mouse(n=6) 또는 1.5mg/mouse(n=5)로 치료하고, 단일 용량 주사 및 동일 연령 야생형(WT) 생쥐를 대조군으로 사용하였다(n=10). 일원 ANOVA에 이어 Fisher의 사후 검정을 사용하여 유의성을 계산하였다. 치료 효과는 0.5mg/mouse 또는 1.5mg/mouse 투여량의 주사-후 1개월에서 관찰되었다(도 9a). 치료 1개월 후 관찰된 행동에 대한 효과는 일시적이었고, 주사 후 2개월째에는, 항 PD-L1과 동형-대조군 치료 동물 사이에서 행동 성능의 유의한 차이가 관찰되지 않았다(도 9b).
[262] 또한, 항 PD-L1 항체 치료가 동일한 DM-hTAU 생쥐를 대상으로 실험 기간 종료(주사 후 2개월) 시점에 인산화된 타우에 대한 면역조직화학염색을 통해 뇌 병리에 미치는 영향을 조사하였다. 항 PD-L1 항체(각각 0.1, 0.5, 또는 1.5mg/mouse)의 효과 또는 비-효과적 용량을 갖는 DM-hTAU 생쥐를 안락사시키고 해마 C1 및 CA3 영역에서 AT-180(포스포-타우 Thr231) 면역반응성에 대한 면역조직화학 염색에 의해 뇌를 처리 및 분석하였다. 일원 ANOVA에 이어 Fisher의 정확한 검정을 사용하여 유의성을 계산하였다. DM-hTAU 생쥐로부터의 뇌 절편의 면역조직화학 분석은 IgG 동형 대조군과 비교하여 항 PD-L1 차단 후, 해마 CA1 및 CA3 영역에서 AT-180 에피토프에 대한 염색에서 감소된 면역반응성을 나타내었다(도 10). 이러한 결과는 DM-hTAU 생쥐에서 해마 타우 인산화에 대한 항 PD-L1의 용량 반응-의존적 효과를 드러냈다.
[263] IL-1β 수준의 뇌-실질의 증가가 이전에 치매의 쥐 모델에서 인지 저하와 관련이 있었기 때문에 전-염증성 사이토카인 IL-1β의 수준을 DM-hTAU 생쥐에서 조사하였다. 각 균질액에서 측정된 mg 단백질로 정규화된 평균 해마 IL-1β 단백질 수준의 FRET-기반 면역분석 변화를 사용하여, 치료되지 않은 DM-hTAU 생쥐(n=3), 1.5 mg/mouse의 항 PD-L1 항체(n=6) 또는 1.5 mg/mouse의 쥐 IgG2b 항-KLH 항체(n=6) 및 야생형(WT) 한배 새끼(littermates)(평균 9개월령 코호트)로 치료된 DM-hTAU 생쥐에서 측정되었다. 일원 ANOVA 및 Fisher 정확-검정을 사용하여 유의성을 계산하였다.
[264] 항 PD-L1 항체 또는 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군으로 치료된 DM-hTAU 생쥐의 뇌 절편을 분석한 결과, 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군과 비교하여 항 PD-L1 항체 치료 후 사망한 뇌 실질에서 IL-1β 수준이 나타났다(도 11a-b). 더욱이, IL-1β 면역반응성은 성상교세포의 마커인 GFAP 발현 세포와 주로 공동-국소화되지만, 미세아교세포 및 단핵구-유래 대식세포를 포함하는 골수 세포 마커 IBA-1과는 공동-국소화되지 않는 것으로 밝혀졌다(도 11c).
[265] 항 PD-L1 항체 치료가 DM-hTAU 생쥐의 뇌에서 IL-1β 수준을 감소시키는 능력을 정량화하기 위해, 실험은 IgG 대조군 항체로 치료되거나 항 PD-L1 항체로 치료된 DM-hTAU와 비교하여, 치료되지 않은 채로 남겨진 DM-hTAU 및 야생형(WT) 한배 새끼를 포함한 4개의 생쥐 그룹을 사용하여 반복되었다. 치료 시작 1개월 후 테스트한 행동에 대한 효과를 확인한 후, 생쥐를 관류시키고 뇌를 절제하여, 각 뇌의 절반을 해마와 피질에서 분리된 단백질 추출물을 준비하는 데 사용하고, 각 뇌의 다른 반구는 조직화학을 위해 처리하였다. 결과는 동일-연령 야생형 한배 새끼에 비해 DM-hTAU 생쥐의 해마에서 유의하게 더 높은 수준의 IL-1β가 발견되었고, IL-1β 수준의 유의한 감소는 치료되지 않은, 또는 IgGb-치료된 DM-hTAU 생쥐에 비해 항 PD-L1 항체 치료 후 발생함을 나타낸다(도 11d). 더욱이, 선형 회귀 분석은 행동 결과와 IL-1β 수준 사이의 이들 동물의 상관관계를 밝혀내었다(도 11e).
[266] 항체를 사용한 PD-1/PD-L1 차단의 유익한 효과는 또한 뇌의 염증성 사이토카인 프로파일의 변화를 검토함으로써 평가되었다. IgG 대조군(n=6), 항-PD-1(n=6), 또는 항 PD-L1(n=4) 치료 1개월 후 DM-hTAU 생쥐로부터 분리된 해마에서, RT-qPCR에 의해 측정된, 유전자 tnf-a; il-6, il-12p40, 및 Il-1β에 대한 mRNA 발현 수준의 정량적 결정. 일원 ANOVA 및 Fisher 정확-검정을 사용하여 유의성을 계산하였다. 정량적 RT-qPCR은 항-PD-1 및 항 PD-L1 치료 둘 모두가 IgG-치료된 대조군에 비해 염증성 사이토카인 유전자 tnf-a(도 11f), il-6(도 11g), il-12p40(도 11h), 및 Il-1β(도 11i)의 발현 수준의 감소를 유도함을 나타내었다.
[267] 종합하면, 이들 결과는, AD 및 치매의 생쥐 모델에서, 항 PD-L1 항체를 0.5 또는 1.5mg/mouse의 단일 투여량으로 투여한 후 인지 결과 및 뇌 병리 측면에서 효능이 나타났으나 0.1mg/mouse에서는 그렇지 않음을 입증한다.
실시예 3
항 PD-L1 항체 약동학 및 약력학
[268] 항 PD-L1 항체의 약동학에 대해 알아보기 위해 야생형 생쥐에 항 PD-L1 항체의 다른 투여량을 주사하여 항체의 반감기를 결정하였다. 수컷 C57BL/6J 생쥐에 0.1mg/mouse(n=3), 0.5mg/mouse(n=3), 또는 1.5mg/mouse(n=3), 단일 용량 주사로 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)를 복강 내 1회 주사하였다. 주사 후 상이한 시점에서 혈청을 채취하고 ELISA를 사용하여 항 PD-L1 항체의 혈청 수준을 정량화하였다. PK 연구의 결과는 각각의 치료된 투여량에서 항 PD-L1 항체에 대해 약 24시간의 반감기를 입증한다(표 3; 도 12).
표 3. 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체의 반감기
항체 투여량 C max t 1/2 (h) AUC total
(μg/mL·h) 		AUC 0-7
(μg/mL·h)
0.1mg/mouse 22.02 17.34 339 123
0.5mg/mouse 828.13 22.09 11,948 3,558
1.5mg/mouse 1886.04 21.55 60,987 10,979
[269] PD-L1을 발현하는 세포에서 항 PD-L1 항체에 의한 수용체 점유는 PD-1이 리간드의 상호작용을 차단하여, 억제 활성을 중화시켜, 더 높은 수준의 PD-1+ 작동체 기억 T 세포를 유도한다. 따라서, 항체 투여에 대한 반응으로 0.1, 0.5, 또는 1.5mg/mouse의 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체를 단일 주사한 후 다양한 시점에서 혈액 CD3+ T 림프구에 대한 수용체 점유 및 PD-1+ 작동체 기억 T-세포(PD-1+ 기억 T 세포)의 백분율을 조사하였다. 혈청 내 항체의 최소 유효 농도를 확인하기 위해, 혈청 내 항 PD-L1 항체의 농도를 혈액 T 림프구의 수용체 점유와 상관시켰다. 혈액 내 PD-1+ 기억 T-세포 수준에 대한 치료 효과의 약력학도 조사되었다. 수컷 및 암컷 5XFAD 및 야생형(WT) 생쥐(평균 6개월 코호트)는 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2; BioXcell) 또는 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군(클론 LTF-2; BioXcell)의 다른 투여량으로 치료되었다. 주사-후 다른 시점(1일, 5일, 7일, 또는 10일)에 생쥐로부터 혈액을 추출하고 유세포 분석을 위해 준비하였다. 각 샘플을 2개의 튜브로 균등하게 나누었고, 하나는 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체로 얼음 위에서 30분 동안 시험관 내에서 포화시키고(따라서, 모든 PD-L1 분자를 항 PD-L1 항체로 포화) 다른 하나는 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군으로 포화시켰다. 그런 다음 세포를 유세포 분석을 위해 염색하여 CD3+ 세포(T 세포) 및 항 PD-L1(항-쥐 IgG2b 항체 사용)과 결합된 PD-L1 수용체를 검출하였다. 수용체 점유는 CD3 T 세포에 결합된 쥐 IgG2b 항-KLH 항체의 평균 형광 강도의 차이의 비율로 평가되었고, 이에 의해 각 샘플은 항 PD-L1 포화 샘플에서 최대 수용체 점유의 자체 대조군과 비교되었다. 그래프의 각 점은 다른 생쥐의 혈액 샘플을 나타낸다. 1일째 및 10일째 데이터는 야생형(WT) 생쥐와 5XFAD 생쥐의 5일 및 10일째로 구성된다. 다중 비교를 위해 일원 ANOVA에 이어 Fisher 테스트를 사용하여 유의성을 계산하였다.
[270] CD3+ T 림프구에 대한 항 PD-L1 항체의 완전한 표적 점유는 24시간에 관찰되었고 항체의 모든 용량으로 투여 후 5일까지 지속되었으며 0.15㎍/mL(10-9M) 이상의 모든 혈청 농도에서 달성되었다. 수용체 점유 수준은 점차적으로 감소하여, 혈청 내 항체 농도가 약 1nM으로 감소함과 동시에 치료-전 수준으로 되돌아갔다. 이에 따라, 0.1 및 0.5 mg/mouse 치료 그룹의 동물은 각각 치료 후 7일 및 10일에 수용체 점유의 기준선 수준으로 복귀하였다. 1.5mg/mouse가 투여된 동물 그룹은 투여 후 10일째에 60% 초과의 수용체 점유율 및 0.5㎍/mL(약 3x10-8M)의 혈청 항체 농도를 나타내었다(도 13).
[271] 다른 일련의 실험에서, 수컷 및 암컷 5XFAD 및 야생형(WT) 생쥐(평균 6개월령 코호트)는 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2; BioXcell)의 상이한 투여량(X-축에 기술됨), 또는 쥐 IgG2b 항-KLH 항체 대조군(클론 LTF-2; BioXcell)으로 치료되었다. 주사-후 다른 시점(1일, 5일, 7일, 또는 10일)에 생쥐로부터 혈액을 추출하고 유세포 분석을 위해 준비하였다. 세포를 표면 마커 CD3, CD4, CD44, 및 PD-1에 대해 염색하고 유세포 분석으로 분석하였다. 1일째 및 10일째 데이터는 야생형(WT) 생쥐와 5XFAD 생쥐의 5일 및 10일째로 구성된다. 다중 비교를 위해 일원 ANOVA에 이어 Fisher 테스트를 사용하여 유의성을 계산하였다.
[272] PD-1+ 기억 T 세포의 증가된 수준은 모든 시험된 치료 용량을 사용하여 관찰되었지만, 다른 동역학을 사용하여 관찰되었다: 주사-후 1일째, 높은 항체 혈청 농도 및 전체 수용체 점유율의 시점에서, 치료-전 수준과 비교하여 이들 세포의 백분율에서 어떠한 변화도 관찰되지 않았다(도 14). 치료-후 5일째에, 모든 용량을 사용하여 PD-1+ 기억 T-세포 수준의 유의한 증가가 관찰되었다. PD-1+ 기억 T-세포 수준에 대한 효과는 수용체 점유에 대한 관찰된 효과의 동역학을 따랐다. 이는 말초에서 수용체 점유로 시작하여 림프절에서 억제 조절하에 있는 최근에 활성화된 T-세포의 방출로 계속되는 일련의 이벤트의 제시된 작용 기전과 일치하며, 차례로 단핵구의 뇌로의 귀환을 위한 관문으로서 맥락얼기를 활성화한다. 특히, 인지 및 뇌 병리에 대한 CNS의 유익한 효과는 1~2개월 동안 지속되었지만(위에서 설명한 체내 연구), 말초, 수용체 점유, 및 PD-1+ 기억 T-세포 수준에 대한 치료 효과의 효과는 항체 투여 후 각각 7일에서 10일 사이에 지속되었다.
[273] 이는 알츠하이머병에서 유익한 효과를 얻기 위해서는 최적의 유익한 효과를 얻기 위해 지속적으로 높은 수용체 점유율이 요구되는 암 치료와 달리 PD-1/PD-L1 경로의 일시적인 차단이 필요함을 시사한다.
[274] 항체에 대한 장기간 노출이 더 효과적인지 또는 더 오래 지속되는지 여부에 대한 질문을 해결하기 위해, 항 PD-L1 항체의 노출 시간은 항체의 반복 투여에 의해 인위적으로 연장되어 혈청 내 항체 농도를 1nM 이상으로 유지함으로써, 장기간 동안 높은 수용체 점유율을 유지하였다. 항체의 PK 프로파일에 기초하여, 1.5mg/mouse의 농도를 초기에 투여한 후, 매 72시간마다 1mg/mouse를 5회 연속 주사하였다. 야생형 생쥐의 위성 그룹(satellite group)을 사용하여 이 반복 투여 설정에서 PK 프로파일을 결정하였다. 수컷 C57BL/6J 생쥐에 0.1mg/mouse(n=3), 0.5mg/mouse(n=3), 또는 1.5 mg/mouse(n=3), 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell)의 단일 용량 주사, 또는 0시에 1.5mg/mouse를 복강 내 주사한 다음, 72시간마다 1mg/mouse를 주사하였다(도 15의 그래프 상단에 검은색 화살표로 표시). 주사 후 상이한 시점에서 혈청을 채취하고 ELISA를 사용하여 항 PD-L1 항체의 혈청 수준을 정량화하였다. 이 실험을 위해 측정된 항 PD-L1 항체의 혈청 수준을 도 15에 나타내었다.
[275] 항 PD-L1 항체 치료 시작 1개월 및 2개월 후 등이 방사상 수중 미로에서 인지 능력에 대한 치료 효과의 평가 결과, 반복 투여에 의해 혈청 내 항체의 노출 시간을 약 17일로 연장하는 것은 인지 능력에 대한 효과 측면에서 더 짧은 노출에 대해 이점을 나타내지 않는 것으로 나타났다. 반대로, 장기간 노출은 짧은 노출보다 치료 개시 후 1개월에서 덜 유익하였다(도 16). 연장된 노출 시간은 이점이 없을 뿐만 아니라, 짧은 노출보다 다소 덜 효과적이었다. 따라서 알츠하이머병에서 항체의 작용 기전의 일부로 일시적인 노출과 상대적으로 장기간 "항체가 없는" 기간이 필요하다는 결론이 내려졌다. 따라서, PD-L1에 대한 높은 친화성 및 독점성 및 빠른 청소율을 포함한 항체의 물리적 특성은 유익한 활성에 중요하고, 즉 느린 청소율은 치료 효능에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.
[276] 많은 인자가 혈청으로부터 항체의 제거에 영향을 미칠 수 있고, 1차 결정인자는 FcRn-매개 재순환이다. Fc 가공(Fc engineering)에 의해, IgG-FcRn 상호작용은 순환으로부터 상당히 향상된 제거를 갖는 다양한 치료 항체를 생성하는데 사용될 수 있다. 효능의 이점 외에도, 항체에 대한 노출 기간이 노출되지 않은 기간에 비해 짧을수록, 면역-관련 부작용을 유발할 가능성이 낮아질 것으로 예상된다. 항 PD-L1 항체로 치료를 받고 면역 관련 이상 반응을 경험한 암 환자에서, 대부분의 이상 반응은 치료 중단으로 해결된다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 항체에 대한 짧은 기간의 노출 후 상대적으로 장기간의 노출 없음을 포함하는 간헐적 치료는 연속 노출을 기반으로 하는 요법보다 더 나은 안전성 프로파일이 있을 것으로 예상된다.
실시예 4
변형 항-인간 PD-L1 항체 아테졸리주맙 분석
[277] 신경변성 질환 변형에 대한 치료 효능을 유지하면서, 혈액으로부터 청소율이 향상되고, Fc 관련 작동체 기능이 폐지되고, 안전성 프로파일이 개선된 항 PD-L1 항체를 생성하기 위해, 항 PD-L1의 아미노산 변종을 항체 청소율을 증가시키고 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하도록 설계된 Fc 중쇄에 동일한 가변 영역을 갖지만 아미노산 변경을 보유하도록 개발되었다. 이러한 변종은 알츠하이머 및 치매의 생쥐 모델에서 유익한 효과에 대해 조사되었다.
[278] 인간화 항 PD-L1 단클론 항체 아테졸리주맙(ATZ; Genentech)의 가변 영역 및 중쇄에서 하기 아미노산 치환을 포함하는 인간 IgG1 골격의 가변 영역을 포함하는 재조합 인간 항 PD-L1 항체의 4개의 변종이 생성되었다: 1) 변종 1-ATZ, 인간 IgG1 Fc 작동체 null(effector null)(L235A, L236A, 및 K323A 치환; 모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 L234A, L235A, 및 K322A; 변종 2-ATZ, 인간 IgG1 Fc 작동체 null 치환 플러스 H311A 치환(모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 H310A); 3) 변종 3-ATZ, 인간 IgG1 Fc 작동체 null 치환 플러스 H436Q 치환(모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 H335Q); 및 4) 변종 4-ATZ, 인간 IgG1 Fc 작동체 null 치환 플러스 H311A 및 H436Q 치환(모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 H310A 및 H435Q).
[279] 이들 항 PD-L1 변종 항체는 아미노산 치환을 포함하는 인간 카파1 경쇄 및 인간 IgG1 중쇄로부터의 중쇄 불변 영역에서 인간 항 PD-L1 항체 아테졸리주맙의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 및 IgG1 골격을 포함하도록 설계되었다. 첫 번째 그룹은 L235A, L236A, 및 K323A를 포함하는 치환으로, Fc 작동체 기능 활성을 감소/폐지함으로써 항체 의존성 세포성 세포독성(ADCC)을 감소/제거하기 위해 구성되었다. H311A 및/또는 H436Q를 포함하는 치환의 두 번째 그룹은 FcRn 수용체와의 항체 상호작용을 감소시킴으로써 순환으로부터 항체 제거를 가속화하기 위해 구성되었다. 중쇄 및 경쇄 발현 컨스트럭트는 표준 유전자 합성 및 클로닝 방법에 의해 생성되었다(표 4). 변형되지 않은 아테졸리주맙 항체는 중쇄 가변 영역 SEQ ID NO: 94 및 중쇄 불변영역 SEQ ID NO: 99를 포함하는 SEQ ID NO: 98의 중쇄 아미노산 서열 및 경쇄 가변 영역 SEQ ID NO: 95 및 경쇄 불변 영역 SEQ ID NO: 96을 포함하는 SEQ ID NO: 97의 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null)는 중쇄 가변 영역 SEQ ID NO: 104를 포함하는 SEQ ID NO: 100의 중쇄 아미노산 서열을 갖고, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A)는 중쇄 가변 영역 SEQ ID NO: 105를 포함하는 SEQ ID NO: 101의 중쇄 아미노산 서열을 갖고, 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q)는 중쇄 가변 영역 SEQ ID NO: 106을 포함하는 SEQ ID NO:102의 중쇄 아미노산 서열을 갖고, 그리고 변종 4-ATZ(Fc 작동체 null-H311A + H436Q)는 중쇄 가변 영역 SEQ ID NO: 107을 포함하는 SEQ ID NO: 103의 중쇄 아미노산 서열을 갖는다.
표 4. 인간화 항 PD-L1 단클론 항체 변종(ATZ)
ATZ 변종 경쇄 서열 중쇄 서열
아미노산 아미노산
변형되지 않은 아테졸리주맙 항체 97 98
변종 1-ATZ (Fc 작동체 null) 97 100
변종 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 97 101
변종 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 97 102
변종 4-ATZ (Fc 작동체 null-H311A + H436Q) 97 103
[280] 항체는 HC 및 LC 발현 플라스미드의 일반적인 공동-형질감염에 의해 일시적인 HEK293 시스템에서 발현되었다. 항체를 표준 단백질 A 포획 및 크기-배제 크로마토그래피에 의해 발현 배양 상청액으로부터 정제하였다. 항체 순도는 분석 SEC-HPLC 및 SDS-PAGE에 의해 결정되었고 농도는 계산된 몰 흡광 계수를 사용하여 UV280 흡수에 의해 측정되었다.
[281] 인간 항-B12 항체는 인간 IgG1 동형 대조군으로 사용되었다. 인간 IgG1 항-B12로 명명된 변형되지 않은 버전 외에, 다음 동형 변종이 구축되었다: 변종 1-B12(변종 1-ATZ의 동일한 치환에 상응하는 Fc 부분에서 Fc 작동체 null 치환을 갖는 인간 IgG1 골격을 함유하는 항-B12 항체), 변종 2-B12(변종 2-ATZ의 동일한 치환에 상응하는 Fc 부분에서 Fc 작동체 null 및 H311A 치환을 갖는 인간 IgG1 골격을 함유하는 항-B12 항체), 및 변종 3-B12(변종 3-ATZ의 동일한 치환에 상응하는 Fc 부분에서 Fc 작동체 null 및 H436Q 치환을 갖는 인간 IgG1 골격을 함유하는 항-B12 항체). 이들 항-B12 항체 변종은 상기 논의된 바와 같은 통상적인 방법을 사용하여 생성되었다.
[282] 본원발명의 일련의 실험에서, DM-hTAU 생쥐 모델을 사용하여 변종 1-ATZ(Fc 작동체-null) 항체를 사용한 치료가 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체를 사용하여 관찰된 개선된 인지 성능을 유지했는지 여부를 평가하였다. 8-9개월 된 수컷 및 암컷 DM-hTAU 생쥐를 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체(클론 10F.9G2, BioXCell), 아테졸리주맙, 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 또는 1.5mg/mouse(n=10) 항-B12 인간 IgG1 동형 항체 대조군으로 치료하였다. 동일 연령 야생형 생쥐와 치료되지 않은 DM-hTAU 생쥐를 추가 대조군으로 사용하였다. 일원 ANOVA에 이어 Fisher의 사후-검정을 사용하여 유의성을 계산하였다. 결과는 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null)가 유효 용량의 단일 IP 주사 후 4주에 측정된 T-미로 분석에서 DM-hTAU 생쥐 모델 성능에서 아테졸리주맙과 동일한 통계적으로 유의한 유익한 효과를 유도했음을 나타내었다(도 17). 또한, 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 항체 및 아테졸리주맙 둘 모두는 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체보다 DM-hTAU에서 인지 성능을 더 개선시켰다(도 17).
[283] 뇌 병리에 대한 항 PD-L1 항체 치료의 효과를 조사하기 위해, 면역조직화학에 의한 T-미로 분석에서 인지 평가의 마지막에 DM-hTAU 생쥐의 뇌를 분석하였다. 관류 후 뇌를 제거하고, 6μm 관상 조각을 채취하고, 생쥐당 5개 섹션을 관심 영역(치상회 또는 대뇌 피질) 전체에 걸쳐 4-5개의 서로 다른 미리-결정된 깊이에서 신경교 섬유질 산성 단백질(GFAP)에 대해 면역-염색하였다. Image-Pro Plus 소프트웨어(Media Cybernetics, Bethesda, MD, USA)를 사용하여 양성으로 염색된 픽셀의 히스토그램-기반 분할(Histogram-based segmentation)을 수행하였다. 분할 알고리즘을 수동으로 각 이미지에 적용하여, 수동으로 선택한 치상회 영역의 크기를 계산하고, 그 안에서 GFAP 형광을 발현하는 모든 세포를 찾는다. 그 다음 알고리즘은 세포의 형광 강도를 측정하고, 검출된 세포의 평균 형광으로 계산된 "CTCF"를 전체 치상회(dentate gyrus)의 평균 형광으로 보정한다. 성상교세포증 및 신경염증에 대한 마커를 사용한 GFAP 면역염색 분석은 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 항체가 아테졸리주맙 및 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체와 동일한 유익한 효과를 유도함을 보여주었다(도 18). 이들 실험은 Fc 작동체 기능이 인지 능력 및 뇌 병리에 대한 효과에 의해 나타나는 신경변성 질환 모델에서 항 PD-L1 항체를 사용한 치료의 치료 활성에 기여하지 않는다는 것을 보여준다.
[284] 혈청으로부터 항 PD-L1 항체의 제거에 대한 Fc 부분의 아미노산 치환의 효과를 이해하기 위해, 항체의 반감기 및 청소율을 결정하기 위한 약동학 실험을 수행하였다. 수컷 C57BL/6J 생쥐에 1.5mg/mouse(n=3), 아테졸리주맙 또는 하기 변형 항 PD-L1 항체 중 하나의 단일 용량 투여를 복강 내 주사하였다: 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null), 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A), 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q), 또는 변종 4-ATZ(Fc 작동체 null-H311A + H436Q). 주사 후 상이한 시점에서 혈청을 채취하고 역-샌드위치(reverse-sandwich) ELISA를 사용하여 항 PD-L1 항체의 혈청 수준을 정량화하였다.
[285] PK 연구의 결과는 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 항체가 아테졸리주맙과 유사한 PK 프로파일을 보인 반면, 다른 치환은 감소된 반감기(t1/2) 값에 의해 입증된 바와 같이 항체의 제거를 유의하게 가속화했음을 보여준다(표 5; 도 19). 가장 빠른 제거는 변종 4-ATZ(Fc 작동체 null-H311A + H436Q) 항체에서 얻어졌고, 이는 약 10시간의 반감기를 나타냈다. 이는 아테졸리주맙에 비해 청소율이 4배 이상 감소했음을 나타낸다(10시간 대 44시간). 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A)도 아테졸리주맙에 비해 더 빠른 청소율을 보였고(11시간 대 44시간), 그 다음으로 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q)가 뒤를 이었다(19시간 대 44시간).
표 5. 인간 항 PD-L1 단클론 항체 변종(아테졸리주맙)의 반감기
항체 투여 C max t 1/2 (h) AUC total
(μg/mL·h) 		AUC 0-7
(μg/mL·h)
변형되지 않은 아테졸리주맙 항체 1260.52 44.85 110,434 6,168
변종 1-ATZ (Fc 작동체 null) 2519.15 44.57 141,104 11,315
변종 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 1625.79 11.46 30,506 7,410
변종 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 1973.55 19.27 55,992 8,834
변종 4-ATZ (Fc 작동체 null- H311A + H436Q) 2004.69 10.22 38,927 10,089
[286] 질병 진행을 약화시키는 항체의 유익한 효과에 대한 청소율의 효과를 평가하기 위해, 4가지 변이 항체를 사용한 치료가 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체 또는 아테졸리주맙을 사용하여 관찰된 개선된 인지 성능을 유지하는지 평가하기 위해 DM-hTAU 생쥐 모델을 사용하였다. 수컷 및 암컷 DM-hTAU 생쥐를 1.5mg/mouse의 1) 인간화 항 PD-L1 단클론 항체 아테졸리주맙(Genentech) 또는 4가지 아테졸리주맙 변종 중 하나, 또는 2) 1.5 mg/mouse 변종 1-B12(Fc 작동체 null) 인간 IgG1 동형 항체 대조군으로 치료하였다. 치료되지 않은 동일 연령 야생형 생쥐를 추가 대조군으로 사용하였다. 항체 투여 후 4주 및 8주에 T-미로를 사용하고 항체 투여 후 6주에 Y-미로 인지 과제를 사용하여 생쥐를 테스트하여 인지 성능을 평가하였다. 마지막 인지 점수화(치료 개시 후 8주) 후, 뇌 병리 평가(양 반구의 피질 및 해마)를 위해 동물을 희생시켰다. 일원 ANOVA에 이어 Fisher의 사후 검정을 사용하여 유의성을 계산하였다.
[287] 주사-후 1개월에 조사했을 때, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체의 효과가 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체에 비해 훨씬 더 뚜렷했지만, 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null), 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 또는 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체로 치료된 DM-hTAU 생쥐에서 치료 효과가 관찰되었다(도 20b). 주사 후 2개월 후, T-미로 과제로 다시 평가했을 때, 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 및 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 모두 인지 성능에 대한 효과를 유지했지만, 이 시점에서 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체로 치료된 생쥐에서는 효능이 관찰되지 않았다(도 20d). 동물은 또한, 주사 후 6주에, Y-미로 인지 과제를 사용하여 테스트되었고, 항체의 모든 변종이 이 테스트에서 효과적이었고, 여기서 측정되는 매개변수는 분석 기간 동안 생쥐에 의해 수행되는 암(arm)-사이의 자발적 변형(spontaneous alternations) 빈도이다(도 20c). 생쥐에 의한 자발적 변형이 많을수록(T-미로와 달리, Y-미로에서는 미로의 모든 암이 동일함), 정상적인 탐색 행동이 더 커진다.
[288] 특히, 혈청 내 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체의 농도는 치료-후 5일에 1nM 미만에 도달하는 반면, null 변종은 치료-후 약 12일에 1nM 미만으로 제거된다(도 19). 그러나, T-미로 시스템을 사용하여 치료 후 4주에 측정된 바와 같이, 두 변종 항체 모두 인지 성능을 동일한 수준으로 유의하게 향상시켰다. 더욱이, 치료 후 8주에 더 짧고 더 긴 노출 시간을 갖는 항체 둘 모두는 여전히 동형 대조군 항체로 치료된 동물과 비교하여 작지만 유의한 유익한 효과를 유지하였다.
[289] 질병 진행을 약화시키는 항체의 유익한 효과에 대한 청소율의 효과를 추가로 평가하기 위해, 5XFAD 생쥐 모델을 사용하여 4개의 변이 항체를 사용한 치료가 쥐 항-생쥐 PD-L1 단클론 항체 또는 아테졸리주맙을 사용하여 관찰된 개선된 인지 성능을 유지했는지 평가하였다. 수컷 및 암컷 5XFAD 생쥐를 1.5mg/mouse의 1) 인간화 항 PD-L1 단클론 항체(Genentech) 또는 4가지 아테졸리주맙 변종 중 하나, 또는 2) 1.5 mg/mouse 항-B12 인간 IgG1 동형 항체 대조군으로 치료하였다. 치료되지 않은 동일 연령 야생형(WT) 생쥐를 추가 대조군으로 사용하였다. RAWM(Radial Arm Water Maze)을 사용하여 단일 주사 후 1개월째 인지 성능에 대해 동물의 점수를 매겼다. 다중 비교를 위한 Dunnett의 사후 검정에 이어 양방향 반복-측정 ANOVA를 사용하여 유의성을 계산하였다.
[290] RAWM 인지 과제를 사용하여, 5XFAD 생쥐를 사용하여 인지 수행에 대한 개선된 효과의 측면에서 유사한 결과를 얻었다(도 21). 가속화된 제거 특성을 갖는 변형 항 PD-L1 항체 변종은 효능을 잃지 않고, 아테졸리주맙과 유사한 인지 능력 효과를 나타낸다(표 6).
표 6. 통계 분석
비교 p-value
5XFAD + B12 (hlgG1 동형 대조군) v. WT (미치료 대조군) <0.0001
5XFAD + B12 (hlgG1 동형 대조군) v. 5XFAD + 10F.9G2 (양성 대조군) 0.0512
5XFAD + B12 (hlgG1 동형 대조군) v. 5XFAD + Variant 1-ATZ (Fc 작동체 null) 0.0005
5XFAD + B12 (hlgG1 동형 대조군) v. 5XFAD + Variant 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 0.0203
5XFAD + B12 (hlgG1 동형 대조군) v. 5XFAD + Variant 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 0.00001
[291] 또 다른 일련의 실험에서, 효능과 PK/PD 프로파일 사이의 상관관계를 확인하기 위해 2개의 항체 변종을 사용하여 다중-용량 연구를 수행하였다. 수컷 C57BL/6J 생쥐에 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 또는 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체를 복강 내(그룹당 n=3) 주사하였다. 주사 후 상이한 시점에서 혈청을 채취하고 ELISA를 사용하여 항체의 혈청 수준을 정량화하였다. 주사 후 다른 시점에서 혈액을 채취하고 유세포 분석을 위해 준비하였다. 각 샘플을 2개의 튜브로 균등하게 나누었고, 하나는 주입된 항 PD-L1 항체로 얼음 위에서 30분 동안 체외 포화되었고 다른 하나는 IgG 대조군으로 포화되었다. 그런 다음 세포를 표면 마커 CD3, CD4, CD44, 및 PD-1에 대해 염색하고 유세포 분석으로 분석하여 CD3+ 세포(T 세포) 및 항 PD-L1과 결합된 PD-L1 수용체를 검출하였다(항 인간 Fc 사용). 수용체 점유는 CD3 T 세포의 평균 형광 강도 차이의 비율로 평가되었고, 이에 의해 각 샘플은 항 PD-L1 포화 샘플에서 최대 수용체 점유의 자체 대조군과 비교되었다. 효능 연구는 상기 개시된 DM-hTAU 동물을 사용하여 수행되었고 일원 ANOVA 및 Fisher 정확-테스트 사후 분석을 사용하여 유의성을 계산하였다.
[292] PK/PD 연구의 결과는 표 7 및 도 22, 도 23, 및 도 24에 제시되어 있다. 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A)는 약 7.5시간 내지 11.6시간의 용량-의존적 반감기 범위에 근접한 반면, 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q)는 약 13.6시간 내지 23.5시간의 용량-의존적 반감기 범위를 나타냈다(표 6; 도 22a-b). 혈청 내 항체 변종의 농도는 림프구 상의 수용체 점유 및 혈액 내 PD-1+ 기억 T-세포의 상승된 수준과 상관관계가 있었다(도 22a-b를 도 23a-b와 비교).
[293] 이러한 결과는 짧은 노출 기간 동안 0.5mg/mouse를 주사하여 얻은 Cmax 범위의 평균 농도가 질병 진행을 약화시키는 일련의 이벤트를 촉발하기에 충분하다는 것을 의미한다. 결론적으로, DM-hTAU 및 5XFAD 신경변성 질환 생쥐 모델 모두에서 입증된, 가속화된 제거 특성을 갖는 항 PD-L1 항체는, 인지에 대한 효과로 평가되는 효능을 잃지 않았다.
표 7. 인간 항 PD-L1 단클론 항체 변종(아테졸리주맙)의 반감기
항체 투여 투여량
(mg/mouse) 		C max t 1/2 (h) AUC total
(μg/mLh) 		AUC 0-7
(μg/mLh)
변종 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 1.5 2974.67 7.76 11,593 10,660
변종 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 0.5 909.33 9.3 3,610 3,284
변종 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 0.2 54.89 7.18 256 208
변종 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 0.1 7.95 11.61 37 29
변종 2-ATZ (Fc 작동체 null-H311A) 0.025 3.96 7.51 19 14
변종 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 1.5 853.67 21.69 19162.93 4555.83
변종 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 0.5 173.50 23.49 6457.87 1095.74
변종 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 0.2 102.10 21.35 3055.76 547.26
변종 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 0.1 30.03 19.96 1214.37 194.85
변종 3-ATZ (Fc 작동체 null-H436Q) 0.025 10.99 13.61 119.99 50.76
[294] 더 빠른 청소율을 갖는 변형 항 PD-L1 변종을 사용한 치료가 변형되지 않은 항 PD-L1 항체를 사용하여 관찰된 개선된 인지 성능을 유지하는지 여부를 평가하기 위해, 인지 수행을 조사하였다. 8-9개월 된 수컷 및 암컷 DM-hTAU 생쥐를 1.5mg/mouse로 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체, 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 항체, 또는 변종 1-B12(Fc 작동체 null) 인간 IgG1 동형 항체 대조군으로 치료하였다. 동일 연령 야생형 생쥐를 추가 대조군으로 사용하였다. 항체 투여 후 2주 및 4주에 T-미로를 사용하여 생쥐를 테스트하여 인지 성능을 평가하였다. 일원 ANOVA에 이어 Fisher의 정확-검정 사후 분석을 사용하여 유의성을 계산하였다. 결과는, 치료-후 2주에 인지 성능의 유의미한 개선이 관찰되지 않았지만, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체와 변종 3-ATZ(Fc 작동체 null-H436Q) 모두 유효량의 단일 투여 후 4주에 DM-hTAU 생쥐의 인지 수행에서 통계적으로 유의미한 개선을 이끌어내었음을 나타내었다(도 25).
[295] 흥미롭게도, 주변부의 수용체 점유에 대한 효과와 인지 수행에 대한 효과 사이에는 지연이 있었다. 혈청 내 항체 농도(도 22a-b) 및 혈액 T-림프구 상의 수용체 점유(도 23-ab)는 첫날에 정점을 이루었고, 항체 투여 후 약 7일째에 검출 불가능한 수준으로 감소한 반면(도 22-a-b; 도 23-a-b), 치료 2주 후에는 인지에 대한 효과가 발견되지 않았지만 치료 4주 후에 동일한 동물에서 상당한 개선이 관찰되었다(도 25).
[296] 이 연구에서, 주사-후 2주 및 4주에 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 1.5mg/mouse를 주사한 후 동일한 생쥐의 인지 점수를 평가하였다. 주사-후 2주에는 유의미한 변화가 관찰되지 않았지만, 주사-후 4주에는 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A)-치료된 생쥐가 대조군 치료된 생쥐와 비교하여 유의미하게 더 나은 인지 성능을 나타내었다(도 26).
[297] 또 다른 일련의 실험에서, 다른 말초 조직의 면역 세포에 의한 수용체 점유를 유세포 분석으로 검사하여 이들 조직의 세포가 혈액과 다른 약력학 패턴을 보이는지 여부를 결정하였다. 수컷 C57BL/6J 생쥐에 1.5mg/mouse의 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체를 복강 내 주사하였다. 주사 후 상이한 시점에서 혈청을 채취하고 ELISA를 사용하여 항체의 혈청 수준을 정량화하였다. 서혜 림프절, 경부 림프절, 맥락얼기 및 혈액에서 세포를 분리하고 항 PD-L1(항-쥐 IgG2b 사용)과 결합된 CD3+ 세포(T 세포) 및 PD-L1 수용체를 검출하기 위해 염색하여 유세포 분석을 위해 준비하였다. CP는 뇌의 측뇌실(lateral ventricles)에서 분리되었고 이 조직의 낮은 수의 면역 세포로 인해 유세포 분석을 위해 n=6 생쥐에서 함께 풀링되었다(pooled). 수용체 점유는 CD3+ T 세포에서 IgG2b 발현의 평균 형광 강도 차이의 비율에 의해 평가되었고, 이에 의해 각 샘플은 항 PD-L1 포화 샘플에서 최대 수용체 점유의 자체 대조군과 비교되었다. 그래프의 각 점은 다른 생쥐의 혈액 샘플을 나타낸다. 다중 비교를 위해 일원 ANOVA에 이어 Fisher 테스트를 사용하여 유의성을 계산하였다. 결과는 혈액에서 얻은 세포와 비교할 때 서혜 림프절, 경부 림프절, 및 맥락얼기에서 얻은 세포에서 유사한 약력학 패턴이 관찰되었음을 나타낸다(도 27).
실시예 5
다중-용량 투여를 사용한 인지 성능
[298] 1.5mg/mouse의 용량으로 생쥐에 항 PD-L1 항체를 단일 투여하면 DM-hTau 생쥐의 뇌에서 인지 결함 및 응집된 타우 수준을 감소시키는 데 효과적인 것으로 나타났다. 짧은 반감기 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A)를 사용한 치료 시 인지 능력에 대한 유익한 효과가 치료-후 4주 및 6주에 관찰되었지만, 8주에는 관찰되지 않았다. 인지 성능 및 병리에 대한 유익한 효과가 단일 주사 후 관찰된 6주 이상으로 연장될 수 있는지 여부를 테스트하기 위해, 생쥐에 변형 항 PD-L1 항체 변종을 여러 번 투여하는 실험을 수행하였다.
[299] 6-7개월령의 수컷 및 암컷 DM-hTau 생쥐에 1.5mg/mouse의 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null- H311A) 항체 또는 변종 2-B12(Fc 작동체 null-H311A) 인간 IgG1 동형 항체 대조군 중 하나를 생쥐에 주사하여 6주마다 3회의 연속 항 PD-L1 치료를 제공하였다. 치료되지 않은 동일 연령 야생형(WT) 생쥐를 추가 대조군으로 사용하였다. 인지 수행, 뇌 병리학, 및 약동학, 및 약력학 파라미터에 대한 효과는 연구에 따라 상이한 시점에서 수행되었다(도 28a). 각 주사 후 4주에, T-미로 인지 테스트를 사용하여 생쥐를 테스트하였다. 또한, 각 주사 후 3일에, 각 치료군에서 5마리의 생쥐 코호트를 취하여 안락사시키고 PBMC 및 혈청/혈장, CSF 및 뇌 조직(피질 및 해마를 별도로 절제함) 분리를 위한 혈액을 채취하였다(도 28a). 혈청/혈장 및 뇌 조직은 분석할 때까지 동결된 상태로 유지되었다. PBMC는 수용체 점유 및 PD1+ 기억 CD4 T 세포 빈도에 대해 새로 평가되었다. 단일 투여 후 얻은 PK/PD 데이터에 기초하여, 주사 후 3일째에 혈액 내 PD1+ CD4 기억 T 세포의 상승된 수준 뿐만 아니라 높은 수용체 점유율을 볼 것으로 예상한다. 또한, 첫 번째 주사 후 2주에, 치료군당 5-6마리의 동물을 T-미로 테스트를 사용하여 평가하였고, 동일한 동물도 연구 시작 후 4주째에 평가하고 연구 시작 후 6주째(두 번째 주사 후 3일째)에 종족화하였다. 따라서, 이 동물 그룹의 경우 T-미로 성능 및 6주에 집계된 타우 수준에 대한 단일-투여 효과의 신체 앞뒤 축선에 따른 판독(longitudinal readouts)이 가능하다. 또한, 3차 주사 후, 동물은 주사 후 8주까지 매 2주마다 T-미로에서 인지 성능에 대해 검사되었고 일부 동물은 PK/PD 및 병리학적 측정을 위해 주사 후 4주에 안락사되었다. 혈청 내 항체 노출, 마지막 항체 투여 4시간 및 3일 후 말초 면역 반응을 측정하기 위해 3차 주사 후 8주에 추가 4차 주사를 하였다. 일원 ANOVA에 이어 Fisher의 사후 검정을 사용하여 유의성을 계산하였다.
[300] 인지 수행에 대한 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체의 효과를 평가하기 위해 생쥐는 첫 번째 항체 투여 후 2주 및 4주, 두 번째 항체 투여 후 4주, 세 번째 항체 투여 후 2주 및 4주, 네 번째 항체 투여 후 2주 및 4주에 T-미로 인지 과제 분석을 사용하여 테스트되었다(도 28a). 결과는 개선된 인지 수행이 제1 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체 투여(도 28b)의 치료-후 2주에 관찰되지 않았지만, 인지 수행의 통계적으로 유의한 개선이 다른 모든 치료-후 시간에 DM-hTau 생쥐에서 측정되었음을 나타내었다(도 28c-h).
[301] 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체가 약동학 및 약력학 매개변수에 미치는 영향을 평가하기 위해 다양한 말초 조직의 면역 세포에 의한 수용체 점유를 유세포 분석에 의해 조사하였다. 5마리의 생쥐 코호트를 실험 과정에 따라 5개의 상이한 시점에서 각 치료군으로부터 취하였다: 1) 1차 주사 후 72시간; 2) 2차 주사 후 72시간; 3) 3차 주사 후 72시간; 4) 4차 주사 후 4시간; 및 1) 4차 주사 후 72시간(도 28a). 이 생쥐에서 혈청을 채취한 다음 이 동물을 안락사시키고 조직을 채취하였다. 서혜 림프절, 경부 림프절, 맥락얼기 및 혈액에서 세포를 분리하고 항 PD-L1(항-쥐 IgG2b 사용)과 결합된 CD3+ 세포(T 세포) 및 PD-L1 수용체를 검출하기 위해 염색하여 유세포 분석을 위해 준비하였다. CP는 뇌의 측뇌실에서 분리되었고 이 조직의 낮은 수의 면역 세포로 인해 유세포 분석을 위해 n=6 생쥐에서 함께 풀링되었다. 일원 ANOVA에 이어 Fisher의 사후 검정을 사용하여 유의성을 계산하였다.
[302] 결과는, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체의 첫 번째 및 두 번째 주사(6주 간격) 후 72시간에, 전체 PD-L1 수용체 점유가 혈액, 경부 림프절(cLN), 서혜 림프절(iLN), 및 맥락얼기(CP)를 비롯한 다양한 조직의 T 세포에서 관찰되었다(도 29). PD-L1 3차 주사 후 72시간(추가 6주 간격)에, 검사한 조직에서 PD-L1 수용체 점유는 관찰되지 않았으나, 그럼에도 불구하고 활성화된 T 세포의 상승이 관찰되어, 반복 주사 후 더 빠른 제거를 암시하지만, 명백히 면역 반응을 불러일으키기에 충분하다(도 29). 따라서, 항체 주입 후 혈청 내 항체 농도가 최대 수준일 것으로 예상되는 초기 시점에서 유세포 분석을 사용하여 수용체 점유율을 평가하기 위해 생쥐에 4회 주입하였다. 실제로, 주사 후 4시간에 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체의 완전한 수용체 점유가 혈액 T-세포에서 관찰된 반면, 주사-후 72시간에는 수용체 점유가 검출되지 않았으며, 이는 첫 번째 항체 투여 후보다 더 빠른 제거를 시사한다(도 29).
[303] 또한, PD1+ 기억 T-세포의 일시적인 상승이 1차, 2차, 및 3차 용량 투여 후 72시간에 관찰되었다(집단 #3, 도 30 참조). 이러한 결과는, 각 주사 후, PD-1을 발현(표면 분자는 활성화된 면역 세포에서 발현됨)하는 더 높은 빈도의 기억 CD4 T 세포 형태의 면역 세포 활성화가 검출될 수 있음을 입증한다.
[304] 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체가 뇌 병리에 미치는 영향을 평가하기 위해, 해마 뇌 조직 샘플에서 응집된 타우 단백질 수준을 측정하였다. 뇌 조직 샘플을 연구 3일 및 48일에 채취하고(도 28a), 제조 지침에 따라, 인간 타우 응집체(CysBio Kit)를 검출하는 FRET-기반 면역검정을 사용하여 타우 응집을 결정하였다. 응집된 타우의 감소된 수준은 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체의 첫 번째 주사 후 48일에 관찰되었지만, IgG 치료된 대조군에 비해, 치료 후 3일에는 관찰되지 않았다(도 31a). IgG 치료된 대조군에서, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H311A) 항체-치료군에서 관찰된 유의미한 감소와 대조적으로, 치료 개시 후 3일에서 48일 사이에 낮지만 유의미한 응집된 타우 수준 상승이 관찰되었다. 연구 4주차에 생쥐의 인지 점수와 2주 후에 뇌 타우 응집 단백질 수준 사이에서 통계적으로 유의미한 음의 상관관계에 대한 경향이 관찰되었다(도 31b).
실시예 6
변형 항-인간 PD-L1 단클론 항체 84G09의 분석
[305] PD-L1에 대한 높은 친화도(Kd<nM)를 나타내는 가변 영역에 대한 84G09 클론을 사용하여 변형 인간 항 PD-L1 항체를 생성하고, 질병 개선에 대한 효능을 유지하면서 청소율을 향상시키고 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하였다. 인간 IgG1 골격을 갖는 인간 항 PD-L1 항체(84G09 클론)의 4개의 재조합 변종을 생산하고 1) 변종 1-G09, 인간 IgG1 Fc 작동체 null(L239A, L240A, 및 K327A 치환; 모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 L234A, L235A, 및 K322A); 변종 2-G09, 인간 IgG1 Fc 작동체 null 치환 플러스 H315A 치환(모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 H310A); 3) 변종 3-G09, 인간 IgG1 Fc 작동체 null 치환 플러스 H440Q 치환(모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 H335Q); 및 4) 변종 4-G09, 인간 IgG1 Fc 작동체 null 치환 플러스 H315A 및 H440Q 치환(모든 항체에 대해 일반화된 Kabat 넘버링 시스템하의 H310A 및 H335Q)로 지정하였다. 이러한 항 PD-L1 변종 항체는 아미노산 치환을 포함하는 인간 카파1 경쇄 및 인간 IgG1 중쇄로부터의 인간 항 PD-L1 항체 84G09 및 중쇄 불변 영역에서 인간 IgG1 골격의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하도록 설계되었다. 인간 항 PD-L1 항체 84G09는 예를 들어 그 전체가 참조로 본 명세서에 포함되는 미국 특허 9,617,338에 기재되어 있다. 첫 번째 그룹은 L239A, L240A, 및 K327A를 포함하는 치환으로, Fc 작동체 기능 활성을 감소/폐지함으로써 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)을 감소/제거하기 위해 만들어졌다. H315A 및/또는 H440Q를 포함하는 치환의 두 번째 그룹은 FcRn 수용체와의 항체 상호작용을 감소시켜 순환계로부터 항체 제거를 가속화하기 위해 만들어졌다. 항체의 적절한 분비를 보장하기 위해 신호 펩티드를 선택하고 아미노-말단에 포함시켰다.
[306] 이들 항 PD-L1 변종 항체는 각각의 변종을 암호화하는 중국 햄스터(Cricetulus griseus)에 최적화된 DNA 서열 코돈을 합성하여 생산하였다(표 8). 경쇄 아미노산 서열은 신호 펩티드 SEQ ID NO: 88을 갖는 SEQ ID NO: 84 및 신호 펩티드 SEQ ID NO: 89를 갖는 SEQ ID NO: 85와 함께 사용된 신호 펩티드에서 상이하다. 유사하게, 중쇄 아미노산 서열은 신호 펩티드 SEQ ID NO: 88을 갖는 SEQ ID NOs: 66-69 및 신호 펩티드 SEQ ID NO: 90을 갖는 SEQ ID NOs: 70-73과 함께 사용된 신호 펩티드에서 상이하다. 따라서, DNA 서열 SEQ ID NO: 86은 경쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 82 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 74를 포함하고; DNA 서열 SEQ ID NO: 87은 경쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 83 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 92를 포함한다. 유사하게, DNA 서열 SEQ ID NO: 74는 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 58 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 92를 포함하고; DNA 서열 SEQ ID NO: 75는 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 59 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 92를 포함하고; DNA 서열 SEQ ID NO: 76은 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 60 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 92를 포함하고; DNA 서열 SEQ ID NO: 77은 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 61 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 92를 포함하고; DNA 서열 SEQ ID NO: 78은 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 62 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 93을 포함하고; DNA 서열 SEQ ID NO: 79는 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 63 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 93을 포함하고; DNA 서열 SEQ ID NO: 80은 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 64 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 93을 포함하고; 그리고 DNA 서열 SEQ ID NO: 81은 중쇄를 암호화하는 SEQ ID NO: 65 및 신호 펩티드를 암호화하는 SEQ ID NO: 93을 포함한다.
[307] 합성 DNA 서열을 발현 컨스트럭트 내로 서브클로닝하고, 예를 들어 형질감염 또는 형질도입에 의한 발현을 위해 CHO 또는 HEK 숙주 세포 내로 도입하였다. 후속적으로 발현된 변형 항 PD-L1 항체를 분리하고 활성에 대해 조사하였다.
표 8. 인간 항 PD-L1 단클론 항체 변종(G09)
G09 변종 경쇄 서열 중쇄 서열
DNA 아미노산 DNA 아미노산
변종 1-G09 (Fc 작동체 null) 86, 87 84, 85 74, 78 66, 70
변종 2-G09 (Fc 작동체 null-H315A) 86, 87 84, 85 75, 79 67, 71
변종 3-G09 (Fc 작동체 null-H440Q) 86, 87 84, 85 76, 80 68, 72
변종 4-G09 (Fc 작동체 null-H315A + H440Q) 86, 87 84, 85 77, 81 69, 73
[308] 4가지 항체 변종을 포함하는 항체의 물리적 및 생물학적 활성을 체외에서 검사하고 시판되는 항-인간 PD-L1 항체(아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, BMS-936559) 및 항-인간 PD-L1 항체(클론 84G09)와 비교했는데, 이는 인간 IgG1 Fc 골격의 특정 변형이 체외 효능을 변경하는지 여부를 결정하기 위해 벤치마크 역할을 하였고 테스트되었다. 항체의 리간드 PD-L1에 대한 친화도는 표면 플라스몬 공명(SPR) 방법으로 측정하였고, 생물학적 활성은 MLR의 동종 및 자가 설정, 구성(면역 활성화 테스트), 및 PD-1/PD-L1 상호작용 중화 분석에 의해 결정되었다. PD-L1 결합 친화도, PD-1과 PD-L1 결합 중화, 인간 1차 세포 분석에서 T-세포 반응 증가 측면에서 항체 간에 유의한 차이는 없다.
표 9. 벤치마크 항 PD-L1 항체의 프로파일
mAb Name hPD-L1
KD (nM) Kinetics 		mPD-L1
KD (nM) Kinetics
아테졸리주맙 0.2 3
더발루맙 0.1 n.a.
아벨루맙 0.3 l
BMS-936559 0.3 n.a.
84G09 0.4 n.a.
[309] 인간 항 PD-L1 단클론 항체 84G09는 인간 PD-L1(KD=0.43nM) 및 사이노몰구스 원숭이 PD-L1(KD=0.52nM)에 대해 높은 친화성을 나타낸다(표 9). 신경변성 질환 생쥐 모델에서, 제거 특성이 다른 항 PD-L1 항체는 인지 및 뇌 병리에 대한 유익한 효과의 강도 및 지속 기간 측면에서 유사한 결과를 보였다. 유익한 효과는 Cmax 의존적이고 항체의 청소율과 관계없이 약 6주간 지속되는 것으로 나타났다. 따라서 빠른 제거 특성을 갖는 항체가 내약성 측면에서 유리하다. PK 프로파일에 대한 이러한 Fc 돌연변이의 효과를 조사하기 위해, 4개의 Fc 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 불변 영역과 함께, 84G09의 가변 영역을 사용하여 4개의 G09 변종의 PK를 비-인간 영장류(NHP)에서 테스트하였다.
[310] 나이브 시노몰구스 원숭이에게 4개의 G09 변종 항체 중 하나의 13mg/kg을 30분 미만의 단일 IV 주입으로 투여하였다. 기술적인 제약으로 인해, 이 연구는 두 단계로 나누어졌다(표 10). 형질감염된 CHO 세포를 사용하여 발현 시스템에서 생성된 3개의 변종, 변종 1, 2, 및 4가 첫 번째 연구에서 테스트되었다. PBMC 분리를 위한 혈액(8mL)은 투여 최소 하루 전과 주사-후 5, 14, 21, 및 30일에 채취되었다. 혈청 분리(1mL)를 주사-후 0.5, 8, 24, 48, 96, 및 168시간, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 및 56일에 채취하였다. 채취된 모든 혈액 및 혈청 샘플은 후속 분석을 위해 동결되었다. 두 번째 연구에는 두 가지 변종의 PK 테스트가 포함되었다; 첫 번째 실험에서 누락된 변종 3과 참조로서 변종 1. 이러한 항체는 형질감염된 HEK 세포를 사용하는 다른 발현 시스템에서 유래하였다. PBMC 분리를 위한 혈액(8mL)은 투여 최소 하루 전과 주사-후 5, 14, 21, 30, 및 45일에 채취되었다. 혈청 분리(1mL)를 주사-후 0.5, 8, 24, 48, 96, 및 168시간, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 및 56일에 채취하였다. 채취된 모든 혈액 및 혈청 샘플은 후속 분석을 위해 동결되었다. 역 ELISA 분석을 사용하여 혈청 내 항체 농도에 대해 혈청 알리코트(Serum aliquots)를 분석하였다.
표 10. NHP 연구
항체 변종 1단계 2단계
N N
수컷 암컷 수컷 암컷
변종 1-G09 (Fc 작동체 null) 0 3 2 0
변종 2-G09 (Fc 작동체 null-H315A) 0 4 ― ―
변종 3-G09 (Fc 작동체 null-H440Q) ― ― 2 0
변종 4-G09 (Fc 작동체 null-H315A + H440Q) 0 3 ― ―
치료되지 않음 6 0 ― ―
[311] PK 연구의 결과는 변종 1-G09(Fc 작동체 null) 항체가 항체가 CHO 또는 HEK 세포에 의해 발현되었는지 여부에 관계없이 유사한 PK 프로파일을 나타낸다는 것을 입증한다(도 32). 변종 4-G09(Fc 작동체 null-H315A + H440Q) 항체가 가장 빠른 청소율을 보인 반면, 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A)와 변종 3-G09(Fc 작동체 null-H440Q) 항체 간의 차이는 생쥐에서보다 덜 뚜렷하다(표 11).
표 11. 인간 항 PD-L1 단클론 항체 변종(G09)의 반감기
피분석물(Analyte) 단계 C max
(μg/mL) 		T max
(h) 		T last
(h) 		AUC 0-1344
(h·μg/mL) 		t 1/2
(h)
변종 1-G09 (Fc 변종 null) 1 611 0.50 1180 77700 60.5
변종 2-G09 (Fc 변종 null-H315A) 1 622 8.00 336 35100 54.1
변종 4-G09 (Fc 변종 null-H315A + H440Q) 1 289 8.00 168 22400 177
변종 1-G09 (Fc 변종 null) 2 813 0.50 840 81400 64.7
변종 3-G09 (Fc 변종 null-H440Q) 2 719 0.50 420 65900 29.2
참고: 중간 값은 Tmax에 대해 표시됨.
[312] 투여 1일 전(기준선), 및 치료 후 5, 14, 21, 및 30일에 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 분리 및 동결보존을 위해 8mL의 전혈을 채취하였다. 두 번째 연구에서는, 치료 후 45일에도 전혈을 채취하였다. 혈액 T 림프구의 PD-L1 수용체 점유 및 다양한 면역 세포 부분모집단의 면역표현형에 대해 샘플을 분석하였다. 항체에 의한 혈액 T-림프구 상의 PD-L1 수용체 점유율은 생쥐의 수용체 점유에 대해 위에서 설명한 것과 동일한 방법을 사용하여 평가되었다. 항체의 혈청 농도와 수용체 점유 사이에 밀접한 상관관계가 발견되었다(도 33a-d). 항체 농도가, 테스트된 모든 변종에 대해, 10-8M 아래로 떨어지면 수용체 점유가 크게 감소하였다. 이중 돌연변이체를 제외한 모든 변종에 대해 투여 후 12일까지 80% 이상의 수용체 점유율이 검출되었다. null 돌연변이를 제외한 모든 변종에 대해 투여 후 20일까지 20% 미만의 점유율이 검출되었다. 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A) 및 변종 3-G09(Fc 작동체 null-H440Q)는 유사한 PD-L1 수용체 점유 프로파일을 나타냈다(도 33b와 도 33c 비교).
[313] 특정 면역 부분모집단의 분포에 대한 상이한 항체의 체내 효과를 조사하기 위해 혈액 면역표현형을 수행하였다. 세포는 나이브(naive) T 세포, 기억 T 세포, Treg, 골수(mDC)/형질세포양(pDC), 단핵구, 및 기억 T 세포를 발현하는 PD-L1을 인식하는 형광 표지된 항체의 8개의 상이한 패널로 염색되었고(표 12), 유세포 분석에 의해 조사되었다. 면역 집단의 수준은 각 동물에 대한 기준선(항체 투여 전 수준)으로 정규화되었고 기준선으로부터의 % 변화로 표시된다. 유효성은 Paired Student's t-test를 사용하여 계산되었다.
표 12. 유세포 분석 면역표현형 패널의 요약
패널 이름(Panel name) 마커 조합(Marker combination)
나이브 T 세포 CD3/CD4/CD8/CD95/PD-1
기억 T 세포 CD3/CD4/CD95/CD28/PD-1
Treg CD3/CD4/CD25/CD127/PD-1
mDC/pDC CD14/CD16/CD3/CD123/BDCA-1
단핵구 CD14/CD16/CD20/HLA-DR/PD-L1
Foxp3 Tregs CD3/CD4/Foxp3/Ki-67/PD-1
증식(Proliferation) CD3/ CD95/CD28/Ki-67/PD-1
IFN-γ-생성 T 세포 CD3/CD4/CD8/PD-1/IFNγ
[314] 얻어진 결과를 분석한 결과, 혈액 내 여러 면역-세포 부분모집단에서 상당한 약력학적 변화가 확인되었다. 구체적으로, CD4 기억 T 세포를 발현하는 PD-1의 상향조절(도 34)은 84G09에 기초한 변형 항 PD-L1 항체로 치료한 후 검출되었다. 아테졸리주맙을 기반으로 하는 항 PD-L1 항체 변종의 주사 후 생쥐에서 유사한 변화가 관찰되었고(도 30), 이는 생쥐 및 영장류 둘 모두에서 유사한 면역-관련 기전의 관련을 나타낸다.
[315] 84G09의 항 PD-L1 변종으로 치료한 후 혈액 내 면역-세포 부분모집단 분포의 약력학적 변화에 대한 추가 예를 도 35에 나타내었다. 이러한 변화는, 증식하는 기억 T 세포의 서브세트를 나타내는, PD-1 및 Ki-67 발현 중심 기억(CM) T 세포(CD3+CD95+CD28+; 도 35a)의 다량 증가를 포함한다. CD8 T 세포에 대한 PD-1 및 Ki-67의 발현은 이전에 암 환자에서 항-PD-1 치료에 대한 반응과 상관관계가 있는 것으로 나타났다(Kamphorst et al, 2017). 또한, CD4-작동체 기억(EM) T 세포의 증가된 빈도가 치료 후 검출되었고, 감소된 수준의 CD4-나이브 T 세포가 검출되었다(도 35b).
[316] 종합하면, 이러한 결과는 생쥐에서 PK 연구로부터 얻은 데이터와 일치한다. 항 PD-L1 항체 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A), 변종 3-G09(Fc 작동체 null-H440Q), 및 변종 4-G09(Fc 작동체 null-H315A + H440Q)는 변종 1-G09(Fc 작동체 null)에 비해 청소율이 크게 증가하였다. 또한, 항체 혈청 농도와 수용체 점유 사이의 긴밀한 상관 관계가 입증되었다. 또한, 말초 면역 세포의 면역표현형 결과는, 모든 항체 변종을 주입한 후 여러 면역 부분모집단의 빈도 및 활성화 상태에서 상당한 변화를 확인하였다. 특히, PD-1 발현 기억 T 세포 및 고전 단핵구(classical monocytes)의 높은 빈도가 검출되었고, 이는 대리 항체를 사용한 생쥐 PD 데이터에서 검출된 것과 유사하다.
실시예 7
항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC) 분석을 사용한 항체 특성화
[317] 이들 실험은 시험관 내 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC) 분석을 사용하여 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A) 항체의 항체-의존적 세포 사멸 효능을 기능적으로 특성화하였다. ADCC는 면역 작동체 세포에 의한 항체-코팅(옵소닌화) 표적 세포의 용해를 유도하는 세포-매개 면역 반응이다. ADCC는 항체의 Fc 부분과 면역 세포에서 발현되는 Fcγ 수용체 사이의 상호작용에 의해 촉발되어, 궁극적으로 표적 세포를 용해하는 방출 세포독성 과립을 초래한다.
[318] 2개의 표적 세포주가 1) 안정적인 CD-20 발현을 갖는 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포; 및 2) 안정적인 PD-L1 발현을 갖는 CHO-K1-유래 표적 세포 분석에서 사용되었다. 이들 표적 세포는 5% CO2와 함께 37℃에서 배양된 상응하는 완전 배지에서 유지되었고 적절한 배지로 정기적으로 2차-배양되었다. 면역 작동체 세포는 20명 이상의 건강한 인간 지원자의 혈액을 모으고, 밀도 구배 원심분리에 의해 혈액으로부터 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 분리하고, RPMI 1640 완전 배양 배지에서 PBMC를 배양함으로써 제조되었다.
[319] ADCC 분석은, 원심분리에 의해 표적 세포를 채취하고, 완충 용액에 세포를 재-현탁하고, 세포 밀도를 조정한 다음, 세포 현탁액의 알리코트를 분석 마이크로플레이트의 웰로 옮기는 방식으로 수행되었다. ADCC 용량 반응 실험에서, 양성 대조군은, 표적 세포로 Raji, 작동체 세포로 PBMC, 양성 대조군 항체로 Rituxan을 25:1의 E/T 비율로 사용하였다. 실험군은, E/T 최적화 분석 결과에 따라 E/T 비율이 25:1인 항체 샘플의 ADCC 효과를 평가하기 위해 CHO-K1/PD-L1을 표적 세포로, PBMC를 작동체 세포로 사용하였다. 시험 항체, 양성 대조군 항체, 또는 음성 대조군 항체를 포함하는 항체 샘플을 세포 현탁액 알리코트를 함유하는 웰에 첨가하고 실온(약 20℃)에서 30분 동안 배양하였다. 표적 세포/항체 혼합물을 함유하는 각 웰에 PBMC를 첨가하고 분석 마이크로플레이트를 37℃, 5% CO2와 함께 세포 인큐베이터에서 약 6시간 동안 배양함으로써 세포 용해를 유도하였다. 배양 후, 분석 마이크로플레이트를 원심분리하고 각 웰의 상등액을 또 다른 분석 마이크로플레이트의 웰로 옮겼다. 세포 사멸은 손상된 세포의 세포질에서 방출된 젖산 탈수소효소(LDH) 활성의 분광광도 측정을 기반으로 상업적으로-이용가능한 비색 분석을 사용하여 정량화되었다(Cytotoxicity Detection Kit Plus; Roche, Mannheim, Germany).
[320] 요약하면, 치료된 표적 세포로부터의 상등액을 함유하는 웰에 동량의 LDH 기질 분석 용액을 첨가하여 시험 샘플을 제조하고 실온에서 15분 동안 배양하였다. 대조군 샘플은 1) PMBC 작동체 세포와 함께 배양된 미치료 표적 세포로부터의 LDH 기질 분석 용액 및 상등액을 함유하는 자발적 용해 대조군; 2) 미치료 표적 세포로부터의 LDH 기질 분석 용액 및 상등액을 함유하는 최소 용해 대조군; 및 3) 미치료 표적 세포로부터의 LDH 기질 분석 용액, 2% TRITON® X-100(폴리옥시에틸렌 옥틸 페닐 에테르), 및 상등액을 함유하는 최대 용해 대조군을 포함하였다. 생성된 발색 반응(color reaction)을 OD492nm 및 OD650nm에서 분광광도법으로 판독하였다. 모든 절차는 이중으로(in duplicate) 수행되었다. 특정 세포 용해의 백분율은 다음 공식을 사용하여 제조업체의 지침에 따라 계산되었다: 100×[(A-B)/(C-D)], 여기서 A는 테스트 샘플(실험적 용해)로 얻은 흡광도 값을 나타내고, B는 미치료 표적 세포를 모두 작동체 세포로 용해(자발적 용해)시켜 얻은 흡광도를 나타내고, C는 모든 미치료 표적 세포를 2% TRITON® X-100으로 용해(최대 용해)시켜 얻은 흡광도를 나타내고, D는 분석 용액에서 배양된 미치료 표적 세포와 함께 얻어진(최소 용해) 흡광도를 나타낸다. 이 계산이 음수 값을 제공하면, 결과로 0.0%가 할당되었다.
[321] 첫 번째 일련의 실험에서, 작동체 세포/표적 세포(E/T) 비율은 ADCC 분석을 위해 최적화되었다. 키메라 항-CD20 단클론 항체(Rituximab)를 양성 대조군으로 사용하고 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포로 시험하였다. 이 항체는 25:1의 E/T 비율에서 표적 세포 용해의 가장 높은 백분율로 48.8%를 달성하였다. 10mg/mL 농도의 인간 IgG를 음성 대조군으로 사용하고 CHO-K1-유래 표적 세포로 테스트하였다. 이 항체는 25:1 또는 50:1의 E/T 비율에서 감지할 수 있는 세포 용해가 감지되지 않고 E/T 비율 10:1에서 18.1%의 가장 높은 표적 세포 용해 비율을 달성하였다. 이러한 이유로, 추가 실험을 위해 25:1의 E/T 비율이 선택되었다.
[322] 두 번째 일련의 실험에서, 25:1의 E/T 비율을 사용하여 ADCC 분석에 대한 항체 용량 반응을 결정하였다. 변종 2-G09는 다음 농도에서 7배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 80μg/mL, 8μg/mL, 0.8μg/mL, 0.08μg/mL, 0.008μg/mL, 0.0008μg/mL, 및 0.00008μg/mL. 아테졸리주맙의 바이오시밀러인 아테졸리주맙은 ADCC Fc 활성이 결여된 것으로 알려진 상업용 인간화 항 PD-L1 단클론 항체(Genentech)로, 다음 농도에서 7배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 40μg/mL, 4μg/mL, 0.4μg/mL, 0.04μg/mL, 0.004μg/mL, 0.0004μg/mL, 및 0.00004μg/mL. 양성 대조군 항체 리툭시맙은 다음 농도에서 7배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 40㎍/mL, 4㎍/mL, 0.4㎍/mL, 0.04㎍/mL, 0.004㎍/mL, 0.0004㎍/mL, 및 0.00004μg/mL. 음성 대조군 항체 인간 IgG는 다음 농도에서 7배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 40㎍/mL, 4㎍/mL, 0.4㎍/mL, 0.04㎍/mL, 0.004㎍/mL, 0.0004㎍/mL, 및 0.00004㎍/mL. 변종 2-G09, 아테졸리주맙 바이오시밀러, 및 인간 IgG를 검사하는 용량 반응 실험은 CHO-K1-유래 표적 세포를 사용하는 반면, 리툭시맙 시험 실험은 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포를 사용하였다.
[323] 그 결과는 변종 2-G09가 유의미한 세포-매개 세포독성 활성을 갖지 않음을 보여준다. 예를 들어, 25:1의 E/T 비율에서 변종 2-G09는 테스트된 전체 7배 희석 시리즈에 대한 용량 반응 곡선을 나타내지 않았고 이는 이 항체가 임의의 농도에서 CHO-K1/PD-L1 표적 세포에 대한 ADCC 효과를 매개할 수 없음을 나타낸다(도 36c). 변종 2-G09는 대략 7㎍/mL의 EC50을 보여주었고 뚜렷한 표적 세포 용해는 관찰되지 않았다(표 13). 다른 한편으로, 양성 대조군 항체는 시험된 전체 7배 희석 시리즈에 걸쳐 확실한 용량 반응 곡선을 나타내었고, 이는 이 항체가 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포에 대해 상당한 ADCC 효과를 매개한다는 것을 나타낸다(도 36a). 양성 대조군 항체는 대략 2.1x10-3㎍/mL의 EC50을 나타내었고 53.5%가 이 항체에 대해 관찰된 표적 세포 용해의 가장 높은 백분율이었다(표 13). 예상대로, 음성 대조군은 전체 7배 희석 시리즈에 걸쳐 용량 반응 곡선을 나타내지 않았고(도 36b), 검출 가능한 세포 용해가 없었고, 2.2x105㎍/mL 초과의 EC50을 가졌다(표 13). 종합하면, 이들 결과는 변종 2-G09가 유의미한 세포-매개 세포독성 활성을 갖지 않음을 입증한다.
표 13. 변종 2-G09에 대한 ADCC 분석
매개변수(Parameter) 리툭산(Rituxan) 변종 2-G09 인간 IgG
표적 세포 용해 53.5% 0.0% 0.0%
LogEC50 -2.7 0.8 5.3
HillSlope 1.3 -65.7 1.5
EC50, μg/ml 2.1 x 10-3 7.0 2.2 x 105
[324] 유사한 결과는, 예상대로, 아테졸리주맙 바이오시밀러도 유의미한 ADCC 활성이 없음을 보여준다. 예를 들어, 25:1의 E/T 비율에서 아테졸리주맙 바이오시밀러는, 이 항체가 어떤 농도에서도 CHO-K1/PD-L1 표적 세포에 대한 ADCC 효과를 매개할 수 없고(도 36e) 약 1.4%가 관찰된 표적 세포 용해의 가장 높은 백분율임(표 14)을 나타내는 테스트된 전체 7배 희석 시리즈에 대한 용량 반응 곡선을 나타내지 않았다. 대조적으로, 양성 대조군 항체는 테스트된 전체 7배 희석 시리즈에 걸쳐 현저한 용량 반응 곡선을 나타내었고(도 36a 및 36d) 43.6%가 이 항체에 대해 관찰된 표적 세포 용해의 가장 높은 백분율이었다(표 14).
표 14. 아테졸리주맙 바이오시밀러에 대한 ADCC 분석
매개변수(Parameter) 리툭산(Rituxan) 아테졸리주맙 바이오시밀러(Atezolizumab Biosimilar)
표적 세포 용해 43.6% 1.4%
LogEC50 -2.7 -2.0
HillSlope 1.4 -6.4
EC50, μg/ml 1.9 x 10-3 9.5 x 10-3
실시예 8
보체-의존성 세포독성(CDC) 분석을 사용한 항체 특성화
[325] 실험은 시험관 내 보체-의존성 세포독성(CDC) 분석을 사용하여 변종 2-G09(Fc 작동체 null-H315A) 항체의 항체-의존성 세포 사멸 효능을 기능적으로 특성화하였다. CDC는 막 공격 복합체(Membrane Attack Complex, MAC)에 의한 항체-코팅(옵소닌화) 표적 세포의 용해를 유도하는 세포-매개 면역 반응이다. CDC는 항체의 Fc 부분과 혈청 보체 성분, 특히 C1q 간의 상호작용에 의해 촉발되고, 보체 캐스케이드를 개시하여 궁극적으로 MAC을 세포막에 삽입하여 세포 무결성의 손상 및 손실을 유발하여 항원을 발현하는 표적 세포의 용해를 유도한다.
[326] 2개의 표적 세포주가 분석 1) 안정적인 CD20 발현을 갖는 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포; 및 2) 안정적인 PD-L1 발현을 갖는 CHO-K1-유래 표적 세포에 사용되었다. 이들 표적 세포는 5% CO2와 함께 37℃에서 배양된 상응하는 완전 배지에서 유지되었고 적절한 배지로 정기적으로 2차 배양되었다. 보체 성분은 20명 이상의 건강한 인간 지원자의 혈액을 모아서, PNHS(Pooled Normal Human Serum)라고 하는 혈청을 분리하여 준비되었다.
[327] CDC 분석은 원심분리에 의해 표적 세포를 채취하고, 완충 용액에 세포를 재현탁시키고, 세포 밀도를 조정한 다음, 세포 현탁액의 알리코트를 분석 마이크로플레이트의 웰로 이동시켜 수행하였다. 시험 항체, 양성 대조군 항체, 또는 음성 대조군 항체를 포함하는 항체 샘플을 세포 현탁액 알리코트를 함유하는 웰에 첨가하고 실온(약 20℃)에서 30분 동안 배양하였다. 세포 용해는 표적 세포/항체 혼합물을 함유하는 각 웰에 PNHS를 첨가하고 약 4시간 동안 5% CO2와 함께 37℃에서 세포 배양기에서 분석 마이크로플레이트를 배양함으로써 유도되었다. 배양 후, 분석 마이크로플레이트를 원심분리하고 각 웰의 상등액을 다른 분석 마이크로플레이트의 웰로 옮겼다. 세포 사멸은 손상된 세포의 세포질에서 방출된 ATP의 분광광도 측정을 기반으로 하는 상업적으로-이용가능한 발광 분석을 사용하여 정량화되었다(CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay; Promega, Wisconsin, United States).
[328] 간략하게, 치료된 표적 세포로부터의 상청액을 함유하는 웰에 동량의 루시페라제/루시페린 분석 용액을 첨가하여 시험 샘플을 제조하고 실온에서 10-30분 동안 배양하였다. 대조군 샘플은 1) PMBC 작동체 세포와 함께 배양된 미치료 표적 세포의 루시페라제/루시페린 분석 용액과 상등액을 함유하는 자발적 용해 대조군; 2) 미치료 표적 세포의 루시페라제/루시페린 분석 용액 및 상청액을 함유하는 최소 용해 대조군; 및 3) 미치료 표적 세포 및 PNHS의 루시페라제/루시페린 분석 용액, 2% TRITON® X-100(폴리옥시에틸렌 옥틸 페닐 에테르) 및 상등액을 함유하는 최대 용해 대조군을 포함한다. 생성된 발광을 발광측정기로 판독하였다. 모든 절차는 이중으로 수행되었다. 특정 세포 용해의 백분율은 다음 공식을 사용하여 제조업체의 지침에 따라 계산되었다: 100×[(A-C)/(B-C)], 여기서 A는 테스트 샘플로 얻은(실험적 용해) 흡광도 값을 나타내고, B는 미치료 표적 세포를 모두 2% TRITON® X-100으로 용해하여(최대 용해) 얻은 흡광도 값을 나타내고, C는 분석 용액에서 배양한 미치료 표적 세포에서 얻은(최소 용해) 발광 값을 나타낸다. 이 계산이 음수 값을 제공하면, 결과로 0.0%가 할당되었다.
[329] 첫 번째 일련의 실험에서, PNHS의 양은 CDC 분석을 위해 최적화되었다. 키메라 항-CD20 단클론 항체(Rituximab)를 양성 대조군으로 사용하고 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포로 시험하였다. 이 항체는 10%의 PNHS 농도를 사용하여 표적 세포 용해의 가장 높은 백분율로 98.5%를 달성하였다. 인간 IgG를 음성 대조군으로 사용하고 CHO-K1-유래 표적 세포로 테스트하였다. 이 항체는 50%의 PNHS 농도를 사용하여 19.1%의 가장 높은 표적 세포 용해 백분율을 달성하였고 10% 및 20%의 PNHS 농도에서 감지할 수 있는 세포 용해는 감지되지 않았다. 이러한 이유로, 10% PNHS 농도가 추가 실험에 사용되었다.
[330] 두 번째 일련의 실험에서, 10%의 PNHS 농도를 사용하여 CDC 분석에 대한 항체 용량 반응을 결정하였다. 변종 2-G09는 다음 농도에서 8배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 20μg/mL, 2μg/mL, 0.2μg/mL, 0.02μg/mL, 0.002μg/mL, 0.0002μg/mL, 0.00002μg/mL, 및 0.000002μg/mL. 아테졸리주맙의 바이오시밀러인 아테졸리주맙은 ADCC Fc 활성이 결여된 것으로 알려진 상업용 인간화 항 PD-L1 단클론 항체(Genentech)로, 다음 농도에서 8배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 10μg/mL, 1μg/mL, 0.1μg/mL, 0.01μg/mL, 0.001μg/mL, 0.0001μg/mL, 0.00001μg/mL, 및 0.000001μg/mL. 양성 대조군 항체 리툭시맙은 다음 농도에서 8배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 10μg/mL, 2μg/mL, 0.4μg/mL, 0.08μg/mL, 0.016μg/mL, 0.0032μg/mL, 0.00064μg/mL, 및 0.000128μg/mL. 음성 대조군 항체 인간 IgG는 다음 농도에서 8배 희석 범위에 걸쳐 분석되었다: 10μg/mL, 1μg/mL, 0.1μg/mL, 0.01μg/mL, 0.001μg/mL, 0.0001μg/mL, 0.00001μg/mL, 및 0.000001μg/mL. 변종 2-G09, 아테졸리주맙 바이오시밀러, 및 인간 IgG를 검사하는 용량 반응 실험은 CHO-K1-유래 표적 세포를 사용하는 반면, 리툭시맙 시험 실험은 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포를 사용하였다.
[331] 그 결과는 변종 2-G09가 유의미한 세포-매개 세포독성 활성을 갖지 않음을 보여준다. 예를 들어, 10% PNHS 농도에서 변종 2-G09는 테스트된 전체 8배 희석 시리즈에 대한 용량 반응 곡선을 나타내지 않았고, 이는 이 항체가 어떤 농도에서도 CHO-K1/PD-L1 표적 세포에 대한 CDC 효과를 매개할 수 없음을 나타낸다(도 37c). 변종 2-G09는 약 2.8x10-2μg/mL의 EC50을 보여주었고 뚜렷한 표적 세포 용해는 관찰되지 않았다(표 15). 유사한 결과는, 예상대로, 아테졸리주맙 바이오시밀러도 유의미한 세포-매개 세포독성 활성이 없음을 보여준다. 예를 들어, 10%의 PNHS 농도에서 아테졸리주맙 바이오시밀러는, 이 항체가 어떤 농도에서도 CHO-K1/PD-L1 표적 세포에 대한 CDC 효과를 매개할 수 없고(도 37d) 약 4.7%가 관찰된 표적 세포 용해의 가장 높은 백분율임(표 15)을 나타내는 테스트된 전체 8배 희석 시리즈에 대한 용량 반응 곡선을 나타내지 않았다. 대조적으로, 양성 대조군 항체는 테스트된 전체 8배 희석 시리즈에 걸쳐 현저한 용량 반응 곡선을 보여 이 항체가 Raji 림프아구-유사-유래 표적 세포에 대해 상당한 CDC 효과를 매개한다는 것을 보여준다(도 37a). 양성 대조군 항체는 약 0.2μg/mL의 EC50을 나타내었고 104.7%가 이 항체에 대해 관찰된 표적 세포 용해의 가장 높은 백분율이었다(표 15). 예상대로, 음성 대조군은 전체 8배 희석 시리즈에 걸쳐 용량 반응 곡선을 나타내지 않았고(도 37b), 검출 가능한 세포 용해가 없었고, 8.4x10-4μg/mL의 EC50을 가졌다(표 15). 종합하면, 이들 결과는 변종 2-G09가 유의미한 세포-매개 세포독성 활성을 갖지 않음을 입증한다.
표 15. 변종 2-G09에 대한 CDC 분석
매개변수(Parameter) 리툭산(Rituxan) 인간 IgG 변종 2-G09 아테졸리주맙 바이오시밀러
표적 세포 용해 104.7% 7.9% 0.0% 4.7%
LogEC50 -0.7 -3.1 -1.6 -3.7
HillSlope 1.7 5.7 -9.1 73.8
EC50, μg/mL 0.2 8.4 x 10-4 2.8 x 10-2 1.8 x 10-4
실시예 9
변형 인간 항 PD-L1 84G09 항체는 면역-관련 부작용의 감소된 비율을 나타냄
[332] 암 징후를 치료하기 위해 시판되는 면역 체크포인트 억제제는 면역-관련 부작용(irAE)에 대한 상당한 위험과 관련이 있다(Tocut et al, 2018). 이 중, 인슐린 의존성 당뇨병(DM)의 새로운 발병은 환자의 0.2%~1.0%에서 발생한다(Stamatouli et al, 2018; Barroso-Sousa et al, 2018). 정확한 기전은 아직 완전히 이해되지는 않았지만, 췌장 β-세포에 대한 자가면역 반응과 관련되어, 인슐린 생산이 불충분하다. 이 합병증은 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제 요법에서 일반적이고, 일반적으로, 항체에 대한 높은 노출을 유지하는 데 필요한, 반복 투여 주기의 비교적 장기간 치료 후에 발생한다(Orlov et al, 2015; de Filette et al, 2016).
[333] 비-비만성 당뇨병(NOD) 생쥐는, 췌도(pancreatic islets) 내로의 백혈구 침윤의 결과로, 췌도염이 발생하는, 제1형 당뇨병에 대한 일반적인 동물 모델이다. 당뇨병 전증 암컷 NOD 생쥐에 항-PD-1 또는 항 PD-L1 항체를 투여하면 당뇨병이 빠르게 발병하고(Ansari et al, 2003) 항-CD3 및 관용성 펩티드 주입과 같은 관용성 요법의 역전이 발생한다(Fife et al, 2006). 비교적 광범위한 연령(4주 및 10주)의 NOD 생쥐에 항 PD-L1을 1회 주사하면 당뇨병을 유발할 수 있는 것으로 나타났다. 이 모델에서, 당뇨병은 연속 3일 동안 >250mg/dL의 무작위 혈당 수치가 감지될 때 명백히 나타난다. 10주령에 항 PD-L1을 주사하면, 80~100%의 생쥐에서, 이미 치료 후 5일째에 발병이 예상된다. 중요하게도, 당뇨병 유도를 위해서는, 0일째에 500μg, 이후 10일째까지 2일마다 추가로 250μg의 요법에서 항 PD-L1에 장기간 노출이 필요하다는 것이 밝혀졌다(Ansari et al, 2003).
[334] 따라서, 민감성 NOD 생쥐에서 당뇨병의 유도는 청소율이 다른 동일한 항 PD-L1 항체의 변종을 사용하여 항체 청소율과 자가면역 질환 유발 위험 간의 관계를 조사하는 데 사용할 수 있다. 9주령에, 암컷 NOD 생쥐는 다음 그룹에 따라 시험된 항 PD-L1 항체 변종의 단일 복강 내 주사를 받았거나 치료되지 않은 채로 두었다: 1) 1.5mg/mouse의 항-B12 인간 IgG1 동형 항체 대조군(n=2); 2) 1.5mg/mouse의 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null) 항체(n=10); 및 3) 1.5 mg/mouse의 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H315A) 항체(n=10). 단일 주사 전, 및 주사-후 1일 1회, 생쥐를 매일 아침 혈당 측정기를 사용하여 혈당 수준에 대해 모니터링하였다(프리스타일 혈당 모니터링 시스템). 유의성은 변종 1 대 변종 2의 로그-순위(Mantel-Cox) 검정을 사용하여 계산되었다. 생쥐는 연속 3일 동안 혈당 수치가 >250mg/dL일 때 당뇨병으로 정의된다.
[335] 상기 생쥐에서, 이 두 변종의 PK 프로파일의 차이는 상당했는데, 즉 2.22mL/hr/kg의 변종 2-ATZ 항체(Fc 작동체 null-H315A)에 대해 0.44mL/hr/kg의 변종 1-ATZ의 청소율이었다. 동물 AD 및 치매 모델에서 인지 결함 및 뇌 병리 감소 측면에서, 두 항체 변종의 유효 용량은 0.5~1.5mg/mouse 범위로 동일하였다. 이 실험에서 NOD 생쥐에서의 당뇨병 발병은 2개의 항 PD-L1 항체 변종의 1.5mg/mouse의 단일 투여 후에 측정되었다.
[336] 매일 오전 8시에서 오전 11시 사이에 혈당 수치를 측정하였다. 일일 혈당 수치의 결과는 Kaplan-Meier 생존 곡선으로 표시된다. 표 16 및 도 38에 도시된 바와 같이, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H315A)로 치료된 NOD 생쥐에서 실험 동안 혈당 중량 수준의 유의한 변화가 관찰되지 않았다. 이는 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null)로 치료된 NOD 생쥐와 대조되고; 이 그룹의 동물은 혈당 수치가 당뇨병 발병을 나타내는 수준으로 유의하게 증가하였다.
표 16. NOD 생쥐의 일일 혈당 수준
그룹(Group) 동물(Animal) 주사-후 혈당 수치(일)
0 1 2 3 4 5 6 7 8
항-B12 hIgG1
(n=2)		 1689 73 85 88 86 80 82 97 82 101
1690 111 97 65 95 89 93 92 78 101
변종 1-ATZ
Fc 작동체 null
(n=10)		 1168 81 88 97 104 61 70 120 110 90
1670 113 81 83 100 62 65 139 144 215
1671 69 76 101 285 336 354 496 >500 >500
1672 77 93 87 136 273 294 468 >500 >500
1673 89 89 77 96 238 273 374 >500 >500
1674 73 101 390 412 454 455 320 >500 >500
1675 66 90 402 485 436 421 220 Died ―
1676 75 71 83 321 338 342 416 >500 >500
1677 78 67 79 196 332 378 441 >500 >500
1691 90 106 180 345 486 472 500 >500 >500
변종 2-ATZ
Fc 작동체 null-H315A
(n=10)		 1678 69 84 64 80 84 88 129 109 93
1679 87 88 72 91 58 64 109 72 87
1680 114 72 88 95 78 71 94 101 91
1681 75 70 76 74 91 82 105 122 78
1682 66 98 94 93 64 73 98 119 85
1684 131 158 316 424 417 422 470 500 500
1685 92 107 100 68 76 69 107 75 77
1686 55 87 94 98 83 81 101 116 98
1687 80 87 101 82 69 73 117 89 111
1688 89 79 73 78 71 68 120 113 101
굵게 표시된 값은 당뇨병 동물을 나타냄.
[337] 체중 감소도 NOD 생쥐에서 모니터링되었다. 표 17 및 도 39에 도시된 바와 같이, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H315A)로 치료된 NOD 생쥐에서 실험 동안 체중의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. 이는 변종 1-ATZ(Fc 작동체 null)로 치료된 NOD 생쥐와 대조되고; 이 그룹의 동물은 상당한 정도의 체중 감소를 보였다.
표 17. NOD 생쥐의 기준선으로부터의 체중 감소율
그룹(Group) 주사-후 체중 감소율(일)
동물 1 2 3 7 8 9 10 13 17
항-B12 hIgG1
(n=2)		 1689 0 -1.2 1.2 3.5 2.8 4.7 0.8 0.8 0.8
1690 0 0.0 -0.4 3.2 2.4 5.6 4.0 2.4 2.0
변종 1-ATZ
Fc 작동체 null
(n=10)		 1168 0 0.8 2.7 5.5 0.8 0.4 1.6 -5.5 -3.5
1670 0 -0.4 -2.8 -2.1 -5.0 -7.1 -8.5 -7.4 -1.8
1671 0 0.0 -6.4 -17.5 -17.9 <20% -16.7 <20% <20%
1672 0 3.4 3.0 0.4 0.9 -1.7 1.7 -11.9 -11.9
1673 0 -0.4 -2.8 -13.1 -11.3 -12.1 -16.7 Died ―
1674 0 -2.8 -4.0 <20% <20% <20% <20% Died ―
1675 0 -2.8 -4.0 Died ― ― ― ― ―
1676 0 -2.6 -2.2 <20% <20% <20% <20% Died ―
1677 0 -4.8 0.0 <20% -15.5 -16.7 -16.7 Died ―
1691 0 -0.8 -5.2 -9.6 -5.6 -9.2 -9.2 <20% <20%
변종 2-ATZ
Fc 작동체 null-H315A
(N=10)		 1678 0 1.6 1.6 3.7 2.1 3.3 1.6 4.1 3.3
1679 0 1.3 2.6 2.6 3.9 4.3 7.4 6.1 5.7
1680 0 -0.8 0.4 -1.5 -1.5 -6.0 -.4 -1.1 -4.5
1681 0 -4.8 -6.0 -8.3 -10.3 -8.7 -3.6 -0.8 -1.6
1682 0 0.4 0.8 -2.3 -2.0 -3.9 -0.8 -4.3 -4.3
1684 0 -4.1 -2.3 -3.8 -0.8 -1.5 -6.4 -6.0 -6.4
1685 0 -0.4 -0.4 2.9 0.8 -0.8 -0.8 1.7 -0.8
1686 0 -0.4 0.0 0.8 0.4 0.8 -1.2 4.0 0.0
1687 0 0.9 3.4 3.4 -0.9 -2.2 -1.7 -0.4 -2.6
1688 0 -2.1 -0.8 -1.7 -1.7 -2.9 -3.3 -2.9 -5.0
[338] 이 연구에서 테스트된 2개의 항 PD-L1 항체 변종 간의 유일한 차이점은, 순환에서 항체 제거를 가속화하는, 항체의 Fc 부분에 대한 H315A 단일-점(single-point) 돌연변이이다. 두 항체 변종은 알츠하이머병 및 치매 생쥐 모델에서 동일한 유효 용량 범위를 나타내고, 혈액에서 PD-1 발현 기억 T 세포의 높은 빈도에 의해 반영되는 말초 면역 활성에 대한 유사한 효과를 나타낸다. 따라서, 변종 2-ATZ(Fc 작동체 null-H315A) 항체의 짧은 노출 시간은, 알츠하이머병 및 치매 생쥐 모델에서 유익한 효과를 일으키기에 충분하지만, 민감성 NOD 생쥐에서 자가면역 당뇨병을 유도하기에 충분하지 않은 반면 NOD 생쥐의 80%는 훨씬 더 느린 청소율을 나타내는 오직 null 변종으로 치료할 때 당뇨병이 발병하였다. 암을 치료하는 동안, 목적은 치료 기간 동안 항체에 대한 일정한 노출을 유지하는 것이고, 알츠하이머병 및 치매의 경우 단일 투여는 개시 후 말초의 항체 수준에 의존하지 않는 일련의 영속가능한 이벤트를 말초 및 뇌에서 유발한다. 따라서, 알츠하이머병에서의 투여 요법은 항체의 노출 시간에 관계없이 다운스트림 이벤트의 동역학에 의해 결정된다. 알츠하이머병 및 치매 병리를 감소시키는 항 PD-L1 항체의 작용 기전은 빠른 제거 특성을 가진 항체의 사용을 가능하게 하여 면역-관련 부작용 측면에서 더 안전하지만 효능을 방해하지 않는다.
[339] 끝으로, 비록 본 명세서의 양태가 특정 실시예를 참조함으로써 강조되지만, 당업자는 이러한 개시된 실시예가 본 명세서에 개시된 특허 대상의 원리를 단지 예시한다는 것을 쉽게 이해할 것이다. 특정 실시예는 완전하거나 개시된 정확한 형태로 본 발명을 제한하도록 의도되지 않는다. 따라서, 그와 같이 명시적으로 언급되지 않는 한, 개시된 특허 대상은 본 명세서에 기재된 특정 화합물, 조성물, 물건, 장치, 방법론, 프로토콜, 및/또는 시약 등으로 결코 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 또한, 당업자는 본 명세서의 사상을 벗어나지 않고 본 명세서의 교시에 따라 이들의 특정 변형, 수정, 치환, 변경, 추가, 빼기, 및 하위-조합이 이루어질 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 본 발명의 범위는 이러한 상세한 설명에 의해 제한되지 않도록 의도된다. 또한, 하기에 첨부된 청구범위 및 하기에 소개되는 청구범위는 본질적인 사상 및 범위 내에서 그러한 모든 변형, 수정, 치환, 변경, 추가, 빼기, 및 하위-조합을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
[340] 본 발명을 수행하기 위해 본 발명자들에게 알려진 최상의 모드를 포함하는 본 발명의 특정 실시예가 본 명세서에 설명되어 있다. 물론, 이들 설명된 실시예에 대한 변형은 전술한 설명을 읽을 때 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명자는 숙련된 기술자가 이러한 변형을 적절하게 사용할 것으로 기대하고, 본 발명자는 본 명세서에 구체적으로 기술된 것과는 다르게 본 발명이 실시되기를 의도한다. 따라서, 본 발명은 관련 법률이 허용하는 바에 따라 본 명세서에 첨부된 청구범위에 인용된 특허 대상의 모든 수정 및 등가물을 포함한다. 더욱이, 본 명세서에서 달리 나타내지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 모든 가능한 변형에서 전술한 실시예의 임의의 조합은 본 발명에 포함된다.
[341] 본 발명의 대안적인 실시예, 요소, 또는 단계의 그룹화는 제한으로 해석되어서는 안 된다. 각 그룹 구성원은 개별적으로 또는 본 명세서에 개시된 다른 그룹 구성원과의 조합으로 참조 및 청구될 수 있다. 그룹의 하나 이상의 구성원이 편의 및/또는 특허성을 이유로 그룹에 포함되거나 그룹에서 삭제될 수 있다. 이러한 포함 또는 삭제가 발생하는 경우, 본 명세서는 변형 그룹을 함유하는 것으로 간주되어 첨부된 청구범위에 사용된 모든 Markush 그룹의 서면 기재요건(written description)을 충족한다.
[342] 현재 알려져 있거나 나중에 고안된, 당업자에 의한 본 청구된 특허 대상으로부터의 실질적인 변형은, 청구범위의 범위 내에 동등하게 있는 것으로 명시적으로 고려된다. 따라서, 본 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 현재 또는 추후에 공지될 명백한 치환은 정의된 구성요소의 범위 내에서 정의된다.
[343] 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서 및 특허청구범위에 사용된 특성, 항목, 수량, 매개변수, 속성, 용어 등을 표현하는 모든 숫자는 모든 경우에 용어 "약"에 의해 변형되는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 특성, 항목, 수량, 매개변수, 속성, 또는 한정된 기간이 명시된 특성, 항목, 수량, 매개변수, 속성, 또는 기간 값의 위아래 10% 범위를 포함함을 의미한다. 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 명세서 및 첨부된 청구범위에 기재된 수치 매개변수는 변경될 수 있는 근사치이다. 예를 들어, 질량 분석 장비는 주어진 분석물의 질량을 결정할 때 약간 다를 수 있으므로, 이온의 질량 또는 이온의 질량/전하 비율과 관련하여 용어 "약"은 +/-0.50 원자 질량 단위를 나타낸다. 최소한, 청구 범위에 대한 균등론의 적용을 제한하려는 시도가 아니라, 각 수치 표시는 적어도 보고된 유효 자릿수에 비추어 그리고 일반적인 반올림 기술을 적용하여 해석되어야 한다.
[344] 본 발명의 넓은 범위를 설명하는 수치 범위 및 값이 근사치임에도 불구하고, 특정 실시예에 기재된 수치 범위 및 값은 가능한 한 정확하게 보고된다. 그러나, 임의의 수치 범위 또는 값에는 본질적으로 해당 테스트 측정에서 발견된 표준 편차에서 필연적으로 발생하는 특정 오차가 포함된다. 본 명세서에서 값의 수치 범위의 언급은 단지 범위 내에 속하는 각각의 개별 수치를 개별적으로 참조하는 간단한 전달법으로서 역할을 하도록 의도된다. 본 명세서에서 달리 나타내지 않는 한, 수치 범위의 각각의 개별 값은 본 명세서에 개별적으로 열거된 것처럼 본 명세서에 포함된다.
[345] 실시예 또는 실시예의 양태와 관련하여 "할 것이다(may)" 또는 "할 수 있다(can)"라는 용어의 사용은 "않을 것이다(may not)" 또는 "할 수 없다(cannot)"의 대안적인 의미도 수반한다. 이와 같이, 본 명세서가 실시예 또는 실시예의 양태가 본 발명의 특허 대상의 일부로서 포함될 것이거나 포함될 수 있다고 개시하는 경우, 부정적 한정 또는 배제 단서 또한 명시적으로 의미되고, 이는 실시예 또는 실시예의 양태가 본 발명의 특허 대상의 일부로서 포함되지 않을 것이거나 포함되지 않을 수 있다는 것을 의미한다. 유사한 방식으로, 실시예 또는 실시예의 양태와 관련하여 "선택적으로(optionally)"라는 용어의 사용은 그러한 실시예 또는 실시예의 양태가 본 발명의 특허 대상의 일부로서 포함될 수 있거나 또는 본 발명의 특허 대상의 일부로서 포함되지 않을 수 있음을 의미한다. 그러한 부정적 한정 또는 배제 단서가 적용되는지 여부는 부정적 한정 또는 배제 단서가 청구된 특허 대상에 기술되었는지 여부를 기반으로 한다.
[346] 본 명세서에 달리 명시되지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 용어 "하나의(a)", "하나의(an)", "상기(the)", 및 본 발명을 설명하는 맥락에서(특히 하기 청구범위의 맥락에서) 사용되는 유사한 참조는 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 또한, 식별된 요소에 대한 "첫 번째", "두 번째", "세 번째" 등과 같은 서수 지표는 요소를 구별하는 데 사용되고, 이러한 요소의 필수 또는 제한된 수를 나타내거나 암시하지 않고, 달리 명시되지 않는 한 그러한 요소의 특정 위치나 순서를 나타내지 않는다. 본 명세서에 기재된 모든 방법은 본 명세서에 달리 나타내지 않거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어(예: "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이고 달리 청구된 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 본 명세서의 어떤 언어도 본 발명의 실행에 필수적인 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.
[347] 본 명세서의 청구범위에서 사용되는 경우, 보정 사항에 따라 제출 또는 추가되었는지 여부에 관계없이, 개구형 용어 "포함하는(comprising)", 예를 들어 "포함하다(comprise)" 및 "포함하다(comprises)"와 같은 변형, 및 이들의 동등한 개구형 구 "포함하는(including)", "함유하는(containing)", 및 "갖는(having)"은 모든 명시적으로 기술된 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치 단독으로 또는 기술되지 않은 특허 대상과 조합하여 포함하고; 명명된 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치는 필수적이지만, 다른 명명되지 않은 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치가 추가될 수 있으며 여전히 청구범위 내에서 구성을 형성할 수 있다. 본 명세서에 개시된 특정 실시예는 "포함하는(comprising)" 대신에 또는 "포함하는(comprising)"에 대한 보정으로서 "~로 구성되는(consisting of)" 또는 "~로 본질적으로 구성되는(consisting essentially of)"(또는 예를 들어, "구성되는", "구성되는", "본질적으로 구성되는", 및 "본질적으로 구성되는"과 같은 변형)이라는 폐쇄형 전환부 구를 사용하는 청구범위에서 추가로 제한될 수 있다. 청구범위에서 사용될 때, 출원 또는 보정에 따라 추가되었는지 여부에 관계없이, 폐쇄형 전환부 구 "구성되는(consisting of)"은 청구범위에 명시적으로 언급되지 않은 요소, 제한, 단계, 정수, 또는 수치를 배제한다. "본질적으로 구성되는(consisting essentially of)"이라는 폐쇄형 전환부 구는 청구범위를 명시적으로 기술된 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치 및 청구된 특허 대상의 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 기타 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치로 제한한다. 따라서, 개구형 전환부 구 "포함하는(comprising)"의 의미는 구체적으로 기술된 모든 요소, 제한, 단계, 및/또는 수치뿐만 아니라 임의의 선택적, 추가의 명시되지 않은 것들을 포괄하는 것으로 정의된다. 폐쇄형 전환부 구 "구성되는(consisting of)"의 의미는 청구범위에 구체적으로 기술된 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치만을 포함하는 것으로 정의되는 반면, 폐쇄형 전환부 구 "본질적으로 구성되는(consisting essentially of)"은 청구범위에 구체적으로 기술된 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치 및 청구된 특허 대상의 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 기타 요소, 제한, 단계, 정수, 및/또는 수치만을 포함하는 것으로 정의된다. 따라서, "포함하는(comprising)"(및 이에 상응하는 개구형 전환부 구)이라는 개구형 전환부 구는, 제한적인 경우로서, "~로 구성되는(consisting of)" 또는 "~로 본질적으로 구성되는(consisting essentially of)"이라는 폐쇄형 전환부 구에 의해 기술된 청구된 특허 대상을 그 의미 내에 포함한다. 이와 같이, "포함하는(comprising)"이라는 구로 본 명세서에 설명되거나 그렇게 청구된 실시예는 "본질적으로 구성되는(consisting essentially of)" 및 "구성되는(consisting of)" 구에 대한 설명, 구현, 및 지지를 명시적이고 모호하지 않게 제공한다.
[348] 본 명세서에서 인용되고 확인된 모든 특허, 특허 간행물, 및 기타 참조문헌은, 예를 들어 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 그러한 간행물에 기재된 조성물 및 방법론을 기술하고 개시하기 위한 목적으로 그 전체가 개별적으로 그리고 명시적으로 본 명세서에 참조로 포함된다. 이러한 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 공개를 위해서만 제공된다. 이와 관련하여 그 어떤 것도 발명자가 선행 발명으로 인해 또는 다른 이유로 그러한 개시보다 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 이 문헌의 내용에 대한 날짜 또는 표현에 대한 모든 진술은 출원인이 사용할 수 있는 정보를 기반으로 하고 이러한 문헌의 날짜 또는 내용이 정확하다는 것을 인정하지 않는다.
[349] 마지막으로, 본 명세서에서 사용된 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명이 특허청구범위에 의해 정의되는 범위를 한정하려는 의도가 아니다. 따라서, 본 발명은 도시되고 설명된 것으로 바로 제한되지 않는다.
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Sequence <220> <223> anti-PD-L1 heacy chain constant region with L239A, L240A, H315A, and K327A variants <400> 55 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 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acaccctcat gatctcccgg 780 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgag agaggagcag 900 tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tggctcagga ctggctgaat 960 ggcaaggagt acaagtgcgc cgtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080 gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctattcta agctcaccgt ggacaagagc 1260 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccc gggtga 1356 <210> 60 <211> 1356 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon optimized nucleic acid sequence encoding anti-PD-L1 antibody heavy chain with L239A, L240A, K327A and H440Q variants <400> 60 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccgccagact 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcagga attagttgga aaagtaacat cattggatac 180 gcggactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 cttcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctttgt attactgtgc aagagatatt 300 accggatccg gctcttacgg ctggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctctag caagagcacc 420 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagcgggtt 660 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgcc 720 gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgag agaggagcag 900 tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960 ggcaaggagt acaagtgcgc cgtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080 gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctattcta agctcaccgt ggacaagagc 1260 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccag 1320 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccc gggtga 1356 <210> 61 <211> 1356 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon optimized nucleic acid sequence encoding anti-PD-L1 antibody heavy chain with L239A, L240A, H315A, K327A and H440 variants <400> 61 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccgccagact 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcagga attagttgga aaagtaacat cattggatac 180 gcggactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 cttcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctttgt attactgtgc aagagatatt 300 accggatccg gctcttacgg ctggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctctag caagagcacc 420 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagcgggtt 660 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgcc 720 gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgag agaggagcag 900 tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tggctcagga ctggctgaat 960 ggcaaggagt acaagtgcgc cgtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080 gaggagatga 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encoding anti-PD-L1 antibody heavy chain with L239A, L240A, K327A and H440Q variants <400> 64 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcagatc cctgagactg 60 tcttgtgccg cctctggctt caccttcgac gactacgcta tgcactgggt ccgacagacc 120 cctggcaaag gactggaatg ggtgtccggc atctcctgga agtccaacat catcggctac 180 gccgactccg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgctctgt actactgcgc cagagacatc 300 accggctccg gctcttacgg atggttcgat ccttggggcc agggcacact ggtcacagtg 360 tcctctgctt ccaccaaggg acccagcgtt ttccctctgg ctccatcctc caagtctacc 420 tctggcggaa cagctgctct gggctgcctg gtcaaggact actttcctga gcctgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc tctgacatct ggcgtgcaca cctttccagc tgtgctgcag 540 tcctccggcc tgtactctct gtcctctgtc gtgaccgtgc cttccagctc tctgggaacc 600 cagacctaca tctgcaatgt gaaccacaag ccttccaaca ccaaggtgga caagagagtg 660 gaacccaagt cctgcgacaa gacccacacc tgtcctccat gtcctgctcc agaagctgct 720 ggcggccctt ccgtgtttct gttccctcca aagcctaagg acaccctgat gatctctcgg 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gccaagacaa agccgagaga ggagcagtac 960 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgg ctcaggactg gctgaatggc 1020 aaggagtaca agtgcgccgt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1080 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1200 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1260 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tattctaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1380 acgcagaaga gcctctccct gtctcccggg tga 1413 <210> 76 <211> 1413 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon optimized nucleic acid sequence encoding anti-PD-L1 antibody heavy chain with L239A, L240A, K327A and H440Q variants and signal peptide C <400> 76 atgatgtcct ttgtctctct gctcctggtt ggcatcctat tccatgccac ccaggccgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac ctttgatgat tatgccatgc actgggtccg 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aaggagtaca agtgcgccgt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1080 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1200 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1260 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tattctaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccagtac 1380 acgcagaaga gcctctccct gtctcccggg tga 1413 <210> 77 <211> 1413 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon optimized nucleic acid sequence encoding anti-PD-L1 antibody heavy chain with L239A, L240A, H315A, K327A and H440 variants and signal peptide C <400> 77 atgatgtcct ttgtctctct gctcctggtt ggcatcctat tccatgccac ccaggccgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac ctttgatgat tatgccatgc actgggtccg ccagactcca 180 gggaagggcc tggagtgggt ctcaggaatt agttggaaaa gtaacatcat tggatacgcg 240 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc cctgtatctt 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctttgtatt actgtgcaag agatattacc 360 ggatccggct cttacggctg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 420 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctctagcaa gagcacctct 480 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 540 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 600 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 660 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gcgggttgag 720 cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgccggg 780 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 840 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 900 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgagaga ggagcagtac 960 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgg ctcaggactg gctgaatggc 1020 aaggagtaca agtgcgccgt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1080 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1200 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1260 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tattctaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccagtac 1380 acgcagaaga gcctctccct gtctcccggg tga 1413 <210> 78 <211> 1413 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon optimized nucleic acid sequence encoding anti-PD-L1 antibody heavy chain with L239A, L240A and K327A variants and signal peptide LHC <400> 78 atggactgga cttggagaat cctgttcctg gtggccgctg ctaccggcgc tcattctgaa 60 gtgcagctgg tggaatctgg cggcggattg gttcagcctg gcagatccct gagactgtct 120 tgtgccgcct ctggcttcac cttcgacgac tacgctatgc actgggtccg acagacccct 180 ggcaaaggac tggaatgggt gtccggcatc tcctggaagt ccaacatcat cggctacgcc 240 gactccgtga agggcagatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc cctgtacctg 300 cagatgaaca gcctgagagc cgaggacacc gctctgtact actgcgccag agacatcacc 360 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<223> anti-PD-L1 atezolizumab antibody heavy chain with L235A, L236A, and K323A variants <400> 100 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 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L311A, and K323A variants <400> 105 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser 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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Gln Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 107 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-PD-L1 atezolizumab antibody heavy chain constant region with L235A, L236A, L311A, K323A, and H436Q variants <400> 107 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Gln Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 108 <211> 329 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325

Claims (72)

  1. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  3. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 하나 이상의 아미노산 변형을 갖고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  4. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 중쇄에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 중쇄에서 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  6. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 중쇄에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 중쇄에 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  7. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 가변 도메인 및 중쇄 불변 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 및 경쇄 불변 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위해 중쇄 불변 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 중쇄 불변 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 108의 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및/또는 H440에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 108의 중쇄 불변 도메인을 포함하고, 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및/또는 K327에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  13. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 38의 중쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항 또는 제13항에 있어서, SEQ ID NO: 38의 중쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및/또는 H440에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  17. 제16항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 불변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  19. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 가변 도메인 및 하부 경첩 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 및 경쇄 불변 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형이 있어 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  20. 제19항에 있어서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 하부 경첩 영역 및/또는 CH2 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  21. 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체로서, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 중쇄 가변 도메인 및 하부 경첩 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 및 경쇄 불변 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하고, 상기 변형 항 PD-L1 항체는 CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에 하나 이상의 아미노산 변형이 있어 하나 이상의 아미노산 변형이 없는 항 PD-L1 항체에 비해 혈액으로부터 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체는 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위해 하부 경첩 영역 및/또는 CH2 도메인에서 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 38이고, 그리고 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  25. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  26. 제25항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  27. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 108이고, 그리고 상기 변형 항 PD-L1 항체의 청소율을 향상시키기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 H315 및 H440에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  28. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 108이고, 그리고 상기 Fc 관련 작동체 기능을 폐지하기 위한 하나 이상의 아미노산 변형은 L239, L240, 및 K327에 위치하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서, 상기 중쇄 불변 도메인은 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  30. 제19항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  31. 제30항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 것을 특징으로 하는 변형 항 PD-L1 항체.
  33. SEQ ID NO: 3 또는 SEQ ID NO: 4의 CDR1, SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 6의 CDR2, SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 8의 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11의 CDR1, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 13의 CDR2, 및 SEQ ID NO: 14 또는 SEQ ID NO 15의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
  34. 제33항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 54인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  36. 제35항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 41인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  37. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 55인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  38. 제37항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 42인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  39. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 56인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  40. 제39항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 43인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  41. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 57인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  42. 제41항에 있어서, 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 44인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  43. 제33항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  44. 제43항에 있어서, 상기 경쇄 불변 영역은 카파(kappa) 경쇄 불변 영역 또는 람다(lambda) 경쇄 불변 영역인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  45. 제33항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 9인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  46. 제33항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, 또는 SEQ ID NO: 37인 것을 특징으로 하는 항 PD-L1 항체.
  47. SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, 또는 SEQ ID NO: 44의 중쇄; 및 SEQ ID NO 21의 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
  48. SEQ ID NO: 42의 중쇄; 및 SEQ ID NO 21의 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
  49. SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, 또는 SEQ ID NO: 57의 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 20의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
  50. SEQ ID NO: 2의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 55의 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 변형 항-프로그램화된 사멸 리간드 1(PD-L1) 항체.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  52. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체 또는 제51항에서 정의된 바와 같은 약학 조성물을 포함하는 약학적 키트.
  53. 신경변성 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체의 용도.
  54. 신경변성 질환을 치료하는데 사용하기 위한 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체, 제51항에 정의된 바와 같은 약학 조성물, 제52항에 정의된 바와 같은 약학적 키트, 또는 제53항에 정의된 바와 같은 약제.
  55. 신경변성 질환을 치료하기 위한 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 변형 항 PD-L1 항체, 제51항에 정의된 바와 같은 약학 조성물, 제52항에 정의된 바와 같은 약학적 키트, 또는 제53항에 정의된 바와 같은 약제의 용도.
  56. 신경변성 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 신경변성 질환의 치료가 필요한 개체에게 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체, 제51항에 정의된 약학 조성물, 제52항에 정의된 약학적 키트, 또는 제53항에 정의된 약제를 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제52항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신경변성 질환은 노화-관련 치매, 알츠하이머병, 근위축성 축삭 경화증, 치매, 파킨슨병 헌팅턴병, 원발성 진행성 다발성 경화증; 이차 진행성 다발성 경화증, 피질기저핵 변성, 레트 증후군, 타우병증, 망막 변성 장애; 전방 허혈성 시신경병증; 녹내장; 포도막염; 우울증; 외상-관련 스트레스 또는 외상-후 스트레스 장애, 전두측두엽 치매, 루이소체 치매, 경도 인지 장애, 후두 피질 위축, 원발성 진행성 실어증, 진행성 핵상 마비, 또는 중추신경계 손상을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  58. 알츠하이머병 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체, 제51항에 정의된 약학 조성물, 또는 제52항에 정의된 약학적 키트.
  59. 알츠하이머병을 치료하기 위한, 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체, 제51항에 정의된 약학 조성물, 제52항에 정의된 약학적 키트의 용도.
  60. 알츠하이머병을 치료하기 위한 약제 제조에서의 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체 또는 제51항에 정의된 약학 조성물의 용도.
  61. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체, 제51항에 정의된 약학 조성물, 제52항에 정의된 약학적 키트, 또는 제59항에 정의된 약제를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병을 치료하는 방법.
  62. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체로부터의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열 또는 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체로부터의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
  63. 제62항에 있어서, 상기 중쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, 또는 SEQ ID NO: 65인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
  64. 제62항 또는 제63항에 있어서, 상기 경쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 82 또는 SEQ ID NO: 83인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
  65. SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 86, 또는 SEQ ID NO: 87의 폴리뉴클레오티드.
  66. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체로부터의 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 컨스트럭트(expression construct).
  67. 제66항에 있어서, 상기 중쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, 또는 SEQ ID NO: 65인 것을 특징으로 하는 발현 컨스트럭트(construct).
  68. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 정의된 변형 항 PD-L1 항체로부터의 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 컨스트럭트.
  69. 제68항에 있어서, 상기 경쇄를 암호화하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 82 또는 SEQ ID NO: 83인 것을 특징으로 하는 발현 컨스트럭트.
  70. SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 86, 또는 SEQ ID NO: 87을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 컨스트럭트.
  71. 숙주 세포에서 제1 및 제2 발현 컨스트럭트를 발현시키는 것을 포함하는 변형 항 PD-L1 항체를 제조하는 방법으로서, 상기 제1 발현 컨스트럭트는 제66항 또는 제67항에 의해 정의되고, 제2 발현 컨스트럭트는 제68항 또는 제69항에 의해 정의되는 특징으로 하는 방법.
  72. 숙주 세포에서 제1 및 제2 발현 컨스트럭트를 발현시키는 것을 포함하는 변형 항 PD-L1 항체의 제조 방법으로서, 상기 제1 발현 컨스트럭트는 SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, 또는 SEQ ID NO: 81을 포함하고, 제2 발현 컨스트럭트는 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 86, 또는 SEQ ID NO: 87을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
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