KR20210102204A - 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 컨쥬게이트 및 사용 방법 - Google Patents

면역 조절 폴리뉴클레오타이드 컨쥬게이트 및 사용 방법 Download PDF

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Abstract

표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하기 위한 컨쥬게이트가 본 출원에서 제공된다. 표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 컨쥬게이트 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하기 위한 약제학적 조성물이 또한 본 출원에서 제공된다. 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하고 증식성 질환을 치료하기 위한 이들의 사용 방법이 추가로 본 출원에서 제공된다.

Description

면역 조절 폴리뉴클레오타이드 컨쥬게이트 및 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 10월 17일자로 출원된 미국 가특허출원 62/747,070 및 2018년 10월 18일자로 출원된 미국 가특허출원 62/747,611의 우선권 이익을 주장하며, 이들 각각은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다.
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기술분야
표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하기 위한 컨쥬게이트가 본 출원에서 제공된다. 표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 컨쥬게이트 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하기 위한 약제학적 조성물이 또한 본 출원에서 제공된다. 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하고 증식성 질환을 치료하기 위한 이들의 사용 방법이 추가로 본 출원에서 제공된다.
자연 살해 세포 (NK 세포)는 선천성 면역계에 중요한 세포독성 림프구이며, 여기서, NK 세포는 항체와 MHC의 부재하에 바이러스 감염 세포와 종양 형성에 신속히 반응한다. NK 세포는 또한 적응성 면역 반응에 대한 인터페이스로서의 기능을 하며, 항체에 의한 종양-항원 표적화를 포함하는 암 면역 요법에서 중요한 역할을 할 수 있다. 적응성 면역 반응에서, NK 세포는 면역계의 이펙터 세포로서의 기능하며, 특정 항체에 의해 표시된 막 표면 항원을 갖는 표적 세포를 적극적으로 용해시킨다. 이러한 세포 매개성 면역 방어 메커니즘은 항체 의존적 세포 매개성 세포독성 (antibody-dependent-cell-mediated-cytotoxicity: ADCC)으로 공지되어 있다. 문헌 [Hashimoto et al., J. Infect. Dis. 1983, 148, 785-794]. NK 세포에 의해 매개되는 ADCC는 신경 모세포종, 유방암 및 B 세포 림프종과 같은 특유의 항원을 과발현하는 다양한 암을 치료하는데 사용되는 다수의 항암 항체의 치료학적 효능의 주요 메커니즘이다. 문헌 [Wang et al., Front. Immunol. 2015, 6 , 368]; [Zahavi et al., Antibody Therapeut. 2018, 1¸7-12]. NK 세포 활성을 증진시키기 위한 접근법은 ADCC를 증가시키고 이러한 항암 치료제의 효능을 증진시킬 수 있다. 또한, NK 세포는 종양 세포 표면 상에서 리간드의 변경된 발현을 감지하는 천연 세포독성 수용체를 가지고 있으며, 이는 궁극적으로 NK 세포 활성화 및 종양 세포의 용해를 촉발한다. NK 세포는 장기간 발달하고 다양한 항원에 대한 특정 기억을 강조하는 것으로 보고되었다 (문헌 [Paust et al., Nat. Immunol. 2011, 12, 500-508]). 연구에 따르면, NK 세포는 악성 종양 환자에서 빈번하게 결핍되고 기능 장애를 일으키는데, 이는 이것이 암 면역 회피 및 진행에서 핵심 요인일 수 있다는 것을 나타낸다. 또한, 낮은 암 세포 기능은 암 발병 위험 증가를 예측하는 것으로 밝혀졌다. 문헌 [Berrien-Elliot et al., Curr. Opin. Organ Transplant. 2015, 20, 671-680]; [Imai et al., Lancet 2000, 356, 1795-1799]. 본질적으로, NK 세포를 활성화하고 확장하는 전략의 개발은 악성 종양을 치료하는데 유리할 것이다.
NK 세포는 B 및 T 림프구를 생성하는 일반적인 림프구 선조 세포로부터 유래한다. 이들은 순환에 들어가기 전에 골수, 림프절, 비장, 편도선 및 흉선에서 분화하고 성숙한다. NK 세포는 일반적으로 CD16 및 CD56 표면 마커를 발현하는 고전적 및 비고전적 하위 세트로 존재한다. CD56 (신경 세포 접착 분자 (neural-cell adhesion molecule: NCAM)으로도 또한 공지됨)은 세포-세포 접착, 신경 돌기 성장, 시냅스 가소성, 학습 및 기억에 연루된 특이항체 (homophilic) 결합 당단백질이다. CD56에 대해 양성으로 염색되는 정상 세포로는 NK 세포, 활성화된 T 세포, 뇌 및 소뇌, 신경 내분비 조직이 포함된다. CD56 양성 종양으로는 골수종, 골수성 백혈병, 신경 내분비 종양, 윌름 종양, 성인 신경 모세포종, NK/T 세포 림프종, 췌장 세엽 세포 암종, 크롬친화 세포종 및 소세포 폐 암종이 포함된다. 문헌 [Van Acker et al., Front. Immunol. 2017, 8, 892].
골수 세포는 골수의 조혈 줄기 세포 (hematopoietic stem cell: HSC)로부터 기원하는 순차적 골수 세포 선조 세포로부터 유래한다. 골수 세포는 호중구, 단핵구, 대식 세포, 수지상 세포 (dendritic cell: DC), 호산구 및 비만 세포를 비롯한 여러 유형의 세포로 이루어진 체내에서 가장 풍부한 유핵 조혈 세포이다. 병원체가 침입하면, 골수 세포는 다양한 케모카인 수용체를 통해 국부 조직으로 신속히 동원되는데, 여기서, 이들은 식세포 작용 뿐만 아니라 염증성 사이토카인의 분비를 위해 활성화되어 선천성 면역에 중요한 역할을 한다. 대식 세포는 항체 의존적 세포성 식세포 작용 (antibody-dependent cellular phagocytosis: ADCP)을 통해 종양 세포를 직접 사멸시킬 수 있다. 골수 세포는 또한 주로 DC 및 대식 세포에 의한 항원 제시 및 적응성 면역 세포의 동원을 통해 선천성 면역과 적응성 면역을 연결하는데 중요한 역할을 한다. 골수 세포의 하위 세트로는 또한 종양 관련 대식 세포 (tumor-associated macrophage: TAM) 및 골수 유래 억제 세포 (myeloid-derived suppressor cell: MDSC)가 포함된다. TAM은 고형 종양의 미세 환경에서 다수 존재하는 이질적인 기능과 표현형을 갖는 조직 대식 세포이다. TAM은 종양 세포의 개시 및 전이를 촉진하고, T 세포에 의해 매개되는 항종양 면역 반응을 억제하고, 종양 혈관 신생 및 후속 종양 진행을 자극할 수 있다. 문헌 [Yang and Zhang, J. Hematol. Oncol. 2017, 10, 58]. 또한, TAM은 진행성 암에서 적응성 면역의 억제에 기여한다. 단핵구 및 과립구 하위 집단을 포함하는 MDSC는 T 세포 적응성 면역을 무력화시킴으로써 암 탈출을 구동시키는 면역 억제 네트워크에 기여한다. MDSC는 암 진행 전체에 걸쳐 축적되며, 쥐과 동물 종양 시스템에서 화학 요법, 방사선 및 면역 요법에 대한 내성 뿐만 아니라 불량한 임상 결과와 관련된다. 문헌 [Waight et al., J. Clin. Investig. 2013, 123, 4464-4478]; [Alizadeh et al., Cancer Res. 2014, 74, 104-118]. 대식 세포에 의한 ADCP 증가, 수지상 세포에 의한 APC 기능 증진, TAM 및 MDSC의 면역 억제 활성 감소와 같은 골수 세포 활성 조절은 항종양 선천성 및 적응성 면역을 촉진하고, 체크포인트 억제제, 백신 및 T 세포 유도 면역 요법과 같은 다른 항암제의 효능을 증진시킬 수 있다.
SIRPα, SIRPβ 및 SIRPγ를 비롯한 신호 조절 단백질 (signal regulatory protein: SIRP)은 주로 면역 세포에 의해 발현되는 여러 막 당단백질로 구성된다. SIRPα는 주로 골수 세포에 의해 발현된다. SIRPα는 이의 세포질 면역 수용체 타이로신 기반 억제 모티프 (ITIM) 도메인을 통해 억제 수용체로서의 역할을 하며, 광범위하게 발현된 막 관통 단백질 CD47과 상호 작용한다. 이러한 상호 작용은 선천성 면역 세포의 이펙터 기능을 음성적으로 제어한다. SIRPα는 대식 세포 막 상에서 측면으로 확산되고, 식세포 시냅스에 축적되어 CD47에 결합하고 '자기'에게 신호를 보내 대식 세포에 의한 식세포 작용의 세포 골격 집약 과정을 억제한다. 이것은 MHC 클래스 I 분자가 Ig 유사 또는 Ly49 수용체를 통해 NK 세포에 제공하는 자기 신호와 유사하다. SIRPα는 또한 호중구, 수지상 세포 및 MDSC와 같은 다른 골수 세포에서 발현되며; 이러한 세포 집단의 활성화 및 성숙을 조절하는 억제 수용체로서의 역할을 할 수 있다. SIRPα와 비교하여, SIRPβ는 골수 세포에서 중복 발현을 나타내지만 상이한 세포질 도메인을 가지며, CD47 이외의 다른 리간드와 상호 작용할 수 있다. SIRPγ는 T 세포 및 MK 세포와 같은 림프계 세포에서 발현된다. SIRPγ는 또한 CD47과 상호 작용하지만 SIRPα와 유사한 신호 전달 특성을 갖지 않을 것 같은 짧은 세포질 도메인을 갖고 있다. 문헌 [Barclay and Brown, Nat. Rev. Immunol. 2006, 6, 457-64].
톨 유사 수용체 (toll-like receptor: TLR)는 세균, 바이러스, 진균 및 원생 동물로부터 유래된 병원체 관련 분자 패턴 (pathogen-associated molecular pattern: PAMP)을 감지하여 병원체를 인식하는 선천성 면역의 중요한 패턴 인식 수용체이다. 문헌 [Akira et al., Nat. Rev. Immunol. 2004, 4, 499-511]; [Zhang et al., Science 2004, 303, 1522-1526]. 각각의 TLR은 막 관통 도메인, 류신 풍부 반복체 모티프를 갖는 세포외 PAMP 결합 도메인, 및 신호 전달 캐스케이드 (cascade)를 개시하는 세포내 Toll-IL-1 수용체 도메인을 포함한다. 문헌 [Gay and Gangloff, Annu. Rev. Biochem. 2007, 76, 141-165]. TLR에 의한 미생물 침입자의 인식은 사이토카인과 케모카인을 분비하기 위해 다운스트림 신호 전달 캐스케이드의 활성화를 유도하고, 최종적으로 병원체를 청소하기 위해 선천성 및 적응성 면역 반응 모두의 활성화를 초래한다. 문헌 [Takeda and Akira, Semin. Immunol. 2004, 16, 3-9]; [Shi et al., J. Biol. Chem. 2016, 291, 1243-1250]. 사람에서, TLR-1, TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7/8, TLR-9 및 TLR-10을 비롯한 10개의 TLR이 확인되었다. 문헌 [D'Arpa and Leung, Adv. Wound Care 2017, 6, 330-343].
CD289로도 또한 명명되는 톨 유사 수용체 9 (TLR9)는 수지상 세포 (DC), B 림프구, 대식 세포, 자연 살해 세포 및 기타 항원 제시 세포를 비롯한 면역계 세포에서 발현되는 중요한 수용체이다. TLR9 활성화는 세포내 신호 전달 캐스케이드를 촉발하여 이러한 면역 세포에서 활성화, 성숙, 증식 및 사이토카인 생산을 유도하여 선천성 면역 및 적응성 면역을 가교한다. 문헌 [Martinez-Campos et al., Viral Immunol. 2016, 30, 98-105]; [Notley et al., Sci. Rep. 2017, 7, 42204]. 천연 TLR-9 작용제는 메틸화되지 않은 사이토신-구아닌 디뉴클레오타이드 (CpG) 함유 올리고데옥시뉴클레오타이드 (CpG ODN)를 포함한다.
CpG ODN은 일반적으로 클래스 A, 클래스 B 및 클래스 C의 3가지 클래스로 나누어진다. 클래스 A CpG ODN은 전형적으로 3'- 및 5'-말단에 포스포로티오에이트 백본을 갖는 폴리-G 테일 (tail)과 포스페이트 백본을 포함하는 중앙 회문 서열을 함유한다. 클래스 A CpG ODN은 전형적으로 중앙 회문 서열 내에 CpG를 함유한다. 클래스 B CpG ODN은 전형적으로 완전한 포스포로티오에이트 백본을 포함하며, 5' 말단에서 이의 서열은 종종 TLR9 활성화에 중요하다. 클래스 C CpG ODN은 이중 가닥의 형성을 가능하게 하는 3'-말단 서열을 갖는 완전한 포스포로티오에이트 백본을 포함한다. 그러나, CpG ODN은 종종 혈청에서 분해되기 쉬우므로, CpG ODN의 약동학은 치료제로서 이의 개발에서 제한 요소 중 하나일 수 있다. 또한, CpG ODN은 종종 생체내에서 불균일한 조직 분포를 나타내며, 주요 축적 부위는 간, 신장 및 비장에 있다. 이러한 분포는 PAMP와 관련된 오프 표적 (off-target) 활성 및 국부 독성을 유발할 수 있다.
따라서, 치료학적 적용을 위한 CpG ODN을 안정화하고 전달하는 효과적인 방법에 대한 필요성이 존재한다.
발명의 개요
표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하기 위한 컨쥬게이트가 본 출원에서 제공된다.
표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 컨쥬게이트 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하기 위한 약제학적 조성물이 또한 본 출원에서 제공된다.
표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 컨쥬게이트와 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는, 자연 살해 세포 또는 골수 세포를 조절하는 방법이 본 출원에서 추가로 제공된다.
표적화 모이어티 및 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 컨쥬게이트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 증식성 질환을 치료하는 방법이 본 출원에서 추가로 제공된다.
하기 화학식 C의 컨쥬게이트, 또는 이의 입체 이성질체, 둘 이상의 부분 입체 이성질체의 혼합물, 호변 이성질체 또는 둘 이상의 호변 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 본 출원에서 제공된다:
[화학식 C]
Figure pct00001
상기 화학식 C에서,
Ab는 항-CD56 또는 항-SIRP 항체이고;
LN은 각각 독립적으로 링커이고;
Q는 각각 독립적으로 면역 조절 폴리뉴클레오타이드이고;
e는 각각 독립적으로 약 1, 약 2, 약 3 또는 약 4의 정수이고;
f는 약 1, 약 2, 약 3 또는 약 4의 정수이다.
도 1은 CpG 뉴클레오타이드 (p425) 단독, 항-CD56 항체 (항-CD56) 단독 및 배지 (수평 파선)의 대조군과 비교하여 항-CD56-CpG 뉴클레오타이드 (서열 번호 425) 컨쥬게이트 (항-CD56-CpG)에 의한 말초 혈액 단핵 세포 (peripheral blood mononuclear cell: PBMC)의 24 시간 처리시에 CD69 발현의 증가에 의해 측정된 NK 세포의 활성화를 도시한 것이다.
도 2은 CpG 뉴클레오타이드 (p425) 단독, 항-CD56 항체 (항-CD56) 단독 및 배지 (수평 파선)의 대조군과 비교하여 항-CD56-CpG 뉴클레오타이드 (서열 번호 425) 컨쥬게이트 (항-CD56-CpG)에 의한 PBMC의 48 시간 처리시에 CD69 발현의 증가에 의해 측정된 NK 세포의 활성화를 도시한 것이다.
도 3은 CpG 뉴클레오타이드 (p425) 단독, 항-SIRPα 항체 (항-Sirpα 1 및 항-Sirpα 2) 단독 및 배지 (수평 파선)의 대조군과 비교하여 차단 항-SIRPα 항체 (항-Sirpα 1) 또는 비차단 항-SIRPα 항체 (항-Sirpα 2)와 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 (서열 번호 425) 컨쥬게이트 (항-Sirpα 1-CpG 및 항-Sirpα 2-CpG)에 의한 PBMC의 처리시에 CD14+ 세포의 증가를 도시한 것이다.
도 4은 CpG 뉴클레오타이드 (p425) 단독, 항-SIRPα 항체 (항-Sirpα 1 및 항-Sirpα 2) 단독 및 배지 (수평 파선)의 대조군과 비교하여 차단 항-SIRPα 항체 (항-Sirpα 1) 또는 비차단 항-SIRPα 항체 (항-Sirpα 2)와 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 (서열 번호 425) 컨쥬게이트 (항-Sirpα 1-CpG 및 항-Sirpα 2-CpG)에 의한 정제된 CD14+ 세포의 처리시에 CD14+ 세포의 증가를 도시한 것이다.
도 5는 상응하는 구조와 함께 약어를 보여주는 일련의 구조를 도시한 것이다. 약어는 표 2에 사용된 것들이다.
도 6는 상응하는 구조와 함께 약어를 보여주는 일련의 구조를 도시한 것이다. 약어는 표 2에 사용된 것들이다.
도 7a~7d는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트에 의한 종양 성장의 생체내 억제를 도시한 것이다. 도 7a: PBS 대조군과 비교하여 10 mg/kg의 3일 간격으로 2회 투여된 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 (차단 항체) 또는 3일 간격으로 2회 투여된 컨쥬게이션되지 않은 항-SIRPα 항체에 의한 처리 후 시간 경과에 따른 평균 CT26 종양 크기의 측정. 도 7b: PBS 대조군과 비교하여 모두 3 mg/kg의 2q3으로 투여된 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 (차단 항체) 또는 항-SIRPα 2 컨쥬게이트 (비차단 항체)에 의한 처리 후 시간 경과에 따른 평균 CT26 종양 크기의 측정. 도 7c: PBS 대조군과 비교하여 모두 2q3으로 투여된 1 mg/kg, 0.3 mg/kg 또는 0.1 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 (차단 항체)에 의한 처리 후 시간 경과에 따른 평균 CT26 종양 크기의 측정. 도 7d: PBS 대조군과 비교하여 2q3으로 투여된 10 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 (차단 항체)에 의한 처리 후 시간 경과에 따른 평균 MC38 종양 크기의 측정. mpk = mg/kg. 2q3 = 2회 투여, 3일 간격. 화살표는 컨쥬게이트 또는 대조군의 투여를 나타낸다.
도 8a 및 8b는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트에 의한 종양 성장의 생체내 억제를 도시한 것이다. 도 8a: PBS 대조군과 비교하여 3일 간격으로 2회 투여되거나 7일 간격으로 2회 투여된 1 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 (차단 항체)에 의한 처리 후 시간 경과에 따른 평균 CT26 종양 크기의 측정. 도 8b: 도 8a에 기재된 바와 같이 투여된 CT26 종양 모델에서 마우스의 생존 곡선. mpk = mg/kg. 2q3 = 2회 투여, 3일 간격. 2q7 = 2회 투여, 7일 간격. 화살표는 컨쥬게이트 또는 대조군의 투여를 나타낸다.
정의
본 출원에서 제시된 개시 내용의 이해를 용이하게 하기 위해, 다수의 용어가 하기에서 정의된다.
일반적으로, 본 출원에서 사용된 명명법 및 본 출원에서 기재된 생물학, 생화학, 의약 화학, 유기 화학 및 약리학에서의 실험실 절차는 당해 분야에 널리 공지되고 일반적으로 사용되는 것들이다. 달리 정의되지 않는다면, 본 출원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 일반적으로 본 기재 내용이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
"대상체"라는 용어는 영장류 (예를 들어, 사람), 소, 돼지, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 래빗, 래트 및 마우스를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 동물을 지칭한다. "대상체" 및 "환자"라는 용어는, 예를 들어, 사람 대상체와 같은 포유 동물 대상체, 한 실시 형태에서 사람을 지칭하여 본 출원에서 상호 교환적으로 사용된다.
본 출원에서 사용되는 "무염기성 스페이서"라는 용어는 하기 구조의 2가 기를 나타낸다:
[화학식 I]
R1-L1-[-L2-(L1)n1-]n2-R2
상기 화학식 I에서,
n1은 약 0 또는 약 1의 정수이고,
n2는 약 1 내지 약 6의 정수이다.
R1은 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고,
R2는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드 또는 캡핑 (capping) 기에 대한 결합이고,
L1은 각각 독립적으로 포스포디에스테르 또는 포스포트리에스테르이고,
L2는 각각 당 유사체이고,
단,
무염기성 스페이서가 뉴클레오사이드간 무염기성 스페이서인 경우, n1은 각각 1이고, R2는 뉴클레오사이드에 대한 결합이고,
무염기성 스페이서가 말단 무염기성 스페이서인 경우, n1은 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고, R2는 캡핑 기에 대한 결합이다.
"약" 또는 "대략"이라는 용어는, 값이 측정되거나 결정되는 방법에 부분적으로 의존하는 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 결정된 특정 값에 대해 허용 가능한 오차를 의미한다. 특정 실시 형태에서, "약" 또는 "대략"이라는 용어는 1, 2, 3 또는 4의 표준 편차 이내를 의미한다. 특정 실시 형태에서, "약" 또는 "대략"이라는 용어는 주어진 값 또는 범위의 50%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.05% 이내를 의미한다.
본 출원에서 사용되는 "알칸-테트라일"이라는 용어는 달리 명시되지 않는다면 1 내지 16개의 탄소를 갖는 4가, 어사이클릭 (acyclic), 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소기를 나타낸다. 알칸-테트라일은 알킬에 대해 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알칸-트리일"이라는 용어는 달리 명시되지 않는다면 1 내지 16개의 탄소를 갖는 3가, 어사이클릭, 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소기를 나타낸다. 알칸-트리일은 알킬에 대해 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알카노일"이라는 용어는 카보닐기를 통해 모 분자 기에 부착되는 수소 또는 알킬기를 나타내며, 포르밀 (즉, 카복시 알데하이드 기), 아세틸, 프로피오닐, 부티릴 및 이소-부티릴로 예시된다. 비치환된 알카노일 기는 1 내지 7개의 탄소를 함유한다. 알카노일 기는 알킬기에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 C1-7 알카노일)될 수 있다. 말단의 "-오일"은 "아릴로일", "사이클로알카노일" 및 "(헤테로사이클릴)오일"을 정의하기 위해 본 출원에서 정의된 또 다른 기, 예를 들어, 아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴에 부가될 수 있다. 이러한 기는 각각 아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴에 부착된 카보닐 기를 나타낸다. "아릴로일", "사이클로알카노일" 및 "(헤테로사이클릴)오일"의 각각은 각각 "아릴", "사이클로알킬" 또는 "헤테로사이클릴"에 대해 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알케닐"이라는 용어는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 어사이클릭 1가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소기를 나타낸다. 상기 알케닐 기의 비제한적인 예로는 에테닐, 프로프-1-에닐, 프로프-2-에닐, 1-메틸에테닐, 부트-1-에닐, 부트-2-에닐, 부트-3-에닐, 1-메틸프로프-1-에닐, 2-메틸프로프-1-에닐 및 1-메틸프로프-2-에닐이 포함된다. 알케닐기는 알킬에 대해 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알케닐렌"이라는 용어는 하나의 수소가 제거되어 이러한 기가 2가로 된 직쇄 또는 분지쇄 알케닐기를 지칭한다. 알카닐렌 기의 비제한적인 예로는 에텐-1,1-디일; 에텐-1,2-디일; 프로프-1-엔-1,1-디일, 프로프-2-엔-1,1-디일; 프로프-1-엔-1,2-디일, 프로프-1-엔-1,3-디일; 프로프-2-엔-1,1-디일; 프로프-2-엔-1,2-디일; 부트-1-엔-1,1-디일; 부트-1-엔-1,2-디일; 부트-1-엔-1,3-디일; 부트-1-엔-1,4-디일; 부트-2-엔-1,1-디일; 부트-2-엔-1,2-디일; 부트-2-엔-1,3-디일; 부트-2-엔-1,4-디일; 부트-2-엔-2,3-디일; 부트-3-엔-1,1-디일; 부트-3-엔-1,2-디일; 부트-3-엔-1,3-디일; 부트-3-엔-2,3-디일; 부타-1,2-디엔-1,1-디일; 부타-1,2-디엔-1,3-디일; 부타-1,2-디엔-1,4-디일; 부타-1,3-디엔-1,1-디일; 부타-1,3-디엔-1,2-디일; 부타-1,3-디엔-1,3-디일; 부타-1,3-디엔-1,4-디일; 부타-1,3-디엔-2,3-디일; 부타-2,3-디엔-1,1-디일; 및 부타-2,3-디엔-1,2-디일이 포함된다. 상기 알케닐렌 기는 알킬에 대해 기재된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 알케닐렌)될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알콕시"라는 용어는 화학식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서, R은 달리 명시되지 않는다면 C1-6 알킬기이다. 일부 실시 형태에서, 상기 알킬기는 본 출원에서 정의된 바와 같이 추가로 치환될 수 있다. "알콕시"라는 용어는 "아릴 알콕시", "사이클로알킬 알콕시" 및 "(헤테로사이클릴)알콕시" 기를 정의하기 위해 본 출원에서 정의된 다른 용어, 예를 들어, 아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴과 결합될 수 있다. 이러한 기는 각각 아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴에 의해 치환되는 알콕시를 나타낸다. "아릴 알콕시", "사이클로알킬 알콕시" 및 "(헤테로사이클릴)알콕시"의 각각은 각각의 개별 부분에 대해 본 출원에서 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알킬"이라는 용어는 달리 명시되지 않는다면 치환될 때 1 내지 12개의 탄소를 갖는 어사이클릭 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소기를 지칭한다. 특정한 바람직한 실시 형태에서, 비치환된 알킬은 1 내지 6개의 탄소를 갖는다. 알킬기는 메틸; 에틸; n- 및 이소-프로필; n-, 2차-, 이소- 및 3차-부틸; 네오펜틸 등으로 예시되며, 원자가가 허용하는 한, 아미노; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; 시아노; =O; =S; =NR' (여기서, R'는 H, 알킬, 아릴 또는 헤테로사이클릴이다)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1개, 2개, 3개, 또는, 2개 이상의 탄소의 알킬기인 경우, 4개 이상의 치환기에 의해 임의로 치환될 수 있다. 상기 치환기의 각각은 그 자체로 비치환되거나, 원자가가 허용하는 한, 각각의 각 그룹에 대해 본 출원에서 정의된 비치환된 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알킬아미노"라는 용어는 화학식 -N(RN1)2 또는 -NHRN1 (여기서, RN1은 본 출원에서 정의된 바와 같이 알킬이다)을 갖는 기를 지칭한다. 알킬아미노의 알킬 부분은 알킬에 대해 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 상기 치환된 알킬아미노 상의 각각의 임의의 치환기는 그 자체로 비치환되거나, 원자가가 허용하는 한, 각각의 각 그룹에 대해 본 출원에서 정의된 비치환된 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알킬 사이클로알킬렌"이라는 용어는 2개의 원자가가 2개의 수소 원자를 대체하는 알킬 사이클로알칸인 포화 2가 탄화수소기를 지칭한다. 바람직하게는, 두 원자가 중 적어도 하나는 사이클로알칸 부분 상에 존재한다. 상기 알칸 및 사이클로알칸 부분은 본 출원에서 기재된 바와 같이 각각의 기로서 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알킬렌"이라는 용어는 2개의 원자가가 2개의 수소 원자를 대체하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소인 포화 2가 탄화수소기를 지칭한다. 본 출원에서 정의된 알킬렌의 원자가는 임의의 치환기를 포함하지 않는다. 상기 알킬렌 기의 비제한적인 예로는 메틸렌, 에탄-1,2-디일, 에탄-1,1-디일, 프로판-1,3-디일, 프로판-1,2-디일, 프로판-1,1-디일, 프로판-2,2-디일, 부탄-1,4-디일, 부탄-1,3-디일, 부탄-1,2-디일, 부탄-1,1-디일, 부탄-2,2-디일 및 부탄-2,3-디일이 포함된다. "Cx-y 알킬렌"이라는 용어는 x 내지 y개의 탄소를 갖는 알킬렌 기를 나타낸다. x에 대한 예시적인 값은 1, 2, 3, 4, 5 및 6이며, y에 대한 예시적인 값은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12이다. 알킬렌은 알킬에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알킬설페닐"이라는 용어는 화학식 -S-(알킬)을 나타낸다. 알킬설페닐은 알킬에 대해 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알킬설피닐"이라는 용어는 화학식 -S(O)-(알킬)을 나타낸다. 알킬설피닐은 알킬에 대해 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알킬설포닐"이라는 용어는 화학식 -S(O)2-(알킬)을 나타낸다. 알킬설포닐은 알킬에 대해 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "알키닐"이라는 용어는 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 2 내지 6개의 탄소 원자의 1가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소기를 나타내며, 에티닐, 1-프로피닐 등으로 예시된다. 상기 알키닐 기는 알킬에 대해 정의된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 알키닐)될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "5-알키닐우리딘"이라는 용어는 뉴클레오사이드를 나타내며, 여기서, 핵 염기는 하기 구조의 5-알키닐우라실이다:
Figure pct00002
, 여기서, R은 뉴클레오사이드의 펜타푸라노오스의 아노머 탄소에 대한 결합이며, X는 알키닐이다. 일부 실시 형태에서, X는 에티닐 또는 프로피닐이다 (예를 들어, X는 에티닐이다).
본 출원에서 사용되는 "알키닐렌"이라는 용어는 1개 또는 2개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하고 비치환될 때 C 및 H만을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 2가 치환기를 지칭한다. 상기 알키닐렌 기의 예시적인 예로는 에틴-1,2-디일; 프로프-1-인-1,3-디일; 프로프-2-인-1,1-디일; 부트-1-인-1,3-디일; 부트-1-인-1,4-디일; 부트-2-인-1,1-디일; 부트-2-인-1,4-디일; 부트-3-인-1,1-디일; 부트-3-인-1,2-디일; 부트-3-인-2,2-디일; 및 부타-1,3-디인-1,4-디일이 포함된다. 상기 알키닐렌 기는 알키닐에 대해 기재된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 알키닐렌)될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "아미노"라는 용어는 -N(RN1)2이며, 여기서, 아미노가 비치환되는 경우, 2개의 RN1은 모두 H이거나; 아미노가 치환되는 경우, RN1은 각각 독립적으로 H, -OH, -NO2, -N(RN2)2, -SO2ORN2, -SO2RN2, -SORN2, -COORN2, N-보호기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴, 아릴알킬, 아릴옥시, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로알킬 또는 헤테로사이클릴이고, 단, 적어도 하나의 RN1은 H가 아니며, RN2는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 아릴이다. 상기 치환기의 각각은 그 자체로 비치환되거나, 각각의 각 그룹에 대해 본 출원에서 정의된 비치환된 치환기(들)로 치환될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 아미노는 비치환된 아미노 (즉, -NH2) 또는 치환된 아미노 (예를 들어, -NHRN1)이고, 여기서, RN1은 독립적으로 -OH, -SO2ORN2, -SO2RN2, -SORN2, -COORN2, 임의로 치환된 알킬 또는 임의로 치환된 아릴이고, RN2는 각각 임의로 치환된 알킬 또는 임의로 치환된 아릴일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 치환된 아미노는 알킬아미노일 수 있으며, 여기서, 상기 알킬기는 알킬에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 특정 실시 형태에서, 아미노기는 -NHRN1이며, 여기서, RN1은 임의로 치환된 알킬이다. -NHRN1 (여기서, RN1은 임의로 치환된 알킬이다)의 비제한적인 예로는 임의로 치환된 알킬아미노, 단백질 생성 아미노산, 비-단백질 생성 아미노산, 단백질 생성 아미노산의 C1-6 알킬 에스테르, 및 비-단백질 생성 아미노산의 C1-6 알킬 에스테르가 포함된다.
본 출원에서 사용되는 "아미노알킬"이라는 용어는 본 출원에서 정의된 바와 같이 1, 2 또는 3개의 아미노기로 치환된 알킬을 나타낸다. 아미노알킬은 알킬에 대해 기재된 바와 같이 임의로 추가로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "아렌-테트라일"이라는 용어는 3개의 수소 원자가 원자가로 대체된 아릴기인 4가 기를 나타낸다. 아렌-테트라일은 아릴에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "아릴"이라는 용어는 1개 또는 2개의 방향족 환을 갖는 모노사이클릭, 바이사이클릭 또는 멀티사이클릭 카보사이클릭 환 시스템을 나타낸다. 아릴기는 6 내지 10개의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 비치환된 카보사이클릭 아릴기 내의 모든 원자는 탄소 원자이다. 카보사이클릭 아릴기의 비제한적인 예로는 페닐, 나프틸, 1,2-디하이드로나프틸, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 플루오레닐, 인다닐, 인데닐 등이 포함된다. 상기 아릴기는 비치환되거나, 알킬; 알케닐; 알키닐; 알콕시; 알킬설피닐; 알킬설페닐; 알킬설포닐; 아미노; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로알킬; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; 및 시아노로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 치환될 수 있다. 상기 치환기의 각각은 그 자체로 비치환되거나, 각각의 각 그룹에 대해 본 출원에서 정의된 비치환된 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "아릴 알킬"이라는 용어는 아릴기로 치환된 알킬기를 나타낸다. 상기 아릴 및 알킬 부분은 본 출원에서 기재된 바와 같이 각각의 기로서 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "아릴 알킬렌"이라는 용어는 하나의 수소 원자가 원자가로 대체되는 아릴 알킬기를 나타낸다. 아릴 알킬렌은 아릴 알킬에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "아릴렌"이라는 용어는 하나의 수소 원자가 원자가로 대체되는 아릴기를 나타낸다. 아릴렌은 아릴에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "아릴옥시"라는 용어는 화학식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서, R은 달리 명시되지 않는다면 아릴기이다. 임의로 치환된 아릴옥시에서, 아릴기는 아릴에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환된다.
본 출원에서 사용되는 "보조 모이어티"라는 용어는 친수성 중합체, 양으로 하전된 중합체 또는 당 알코올을 함유하는 1가 기를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "임의로 치환된 N"이라는 용어는 2가 -N(RN1)- 기 또는 3가 -N= 기를 나타낸다. 상기 아자 기는 비치환되거나 (RN1이 H 또는 부재한 경우) 치환될 수 있다 (RN1이 "아미노"에 대해 정의한 바와 같으나, RN1이 H가 아닌 경우). 2개의 아자기는 연결되어 "디아자"를 형성할 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "임의로 치환된 N-보호된 아미노"라는 용어는 본 출원에서 정의된 바와 같이 치환된 아미노를 나타내며, 여기서, 적어도 하나의 치환기는 N-보호기이고, N-보호된 아미노가 비치환되는 경우, 다른 치환기는 H이이거나, N-보호된 아미노가 치환되는 경우, H 이외의 다른 치환기이다.
본 출원에서 사용되는 "아지도"라는 용어는 -N3 기를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "벌키 (bulky) 기"라는 용어는 본 출원에서 정의된 바와 같은 임의의 치환기 또는 치환기의 그룹을 나타내며, 여기서, 다이설파이드에 결합하는 라디칼은, 당해 라디칼이 sp 3-혼성화된 탄소인 경우, 하나 이하의 수소 원자를 보유하거나, 당해 라디칼이 sp 2-혼성화된 탄소인 경우, 수소 원자를 보유하지 않는다. 상기 라디칼은 sp-혼성화된 탄소가 아니다. 상기 벌키 기는 탄소 원자를 통해서만 다이설파이드에 결합한다.
본 출원에서 사용되는 "5'-5' 캡"이라는 용어는 화학식 R'-Nuc1-O-(LP)n- 기를 나타내며, 여기서, R'는 포스페이트, 포스포로티오에이트, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 포스포디에스테르, 하이드록실 또는 수소이고; Nuc1은 뉴클레오사이드이고; LP는 각각 독립적으로 -P(=XE1)(-XE2-RE2A)-O-이고; n은 1, 2 또는 3이고;
여기서, 각각의 XE1 및 각각의 XE2는 독립적으로 O 또는 S이고, RE2A는 각각 독립적으로 수소, 생물 가역성 기 (bioreversible group), 비-생물 가역성 기, 보조 모이어티, 컨쥬게이트 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커, 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
여기서, R'는 뉴클레오사이드의 3'-탄소에 결합하고, -O-는 뉴클레오사이드의 5'-탄소에 결합한다.
본 출원에서 사용되는 "캡핑 기"라는 용어는 폴리뉴클레오타이드의 5'- 또는 3'-말단에 위치하는 1가 또는 2가 기를 나타낸다. 상기 캡핑 기는 말단 포스포에스테르; 디포스페이트; 트리포스페이트; 보조 모이어티; 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 5' 캡 (예를 들어, 5'-5' 캡); 고체 지지체; 표적화 모이어티 및 임의로 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커; 또는 -OR' 기이며, 여기서, R'는 수소, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 고체 지지체 및 O-보호기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. -OR' 기, 디포스페이트, 트리포스페이트, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 고체 지지체 및 보조 모이어티는 1가 캡핑 기의 예이다. 말단 포스포에스테르는, 당해 말단 포스포에스테르가 표적화 모이어티에 링커를 포함하지 않는 경우, 1가이거나, 당해 말단 포스포에스테르가 표적화 잔기에 링커를 포함하는 경우, 2가일 수 있는 캡핑 기의 예이다. 표적화 모이어티에 결합된 링커 (보조 모이어티 포함 또는 불포함)는 2가 캡핑 기의 예이다.
본 출원에서 사용되는 "카보사이클릭"이라는 용어는 임의로 치환된 C3-16 모노사이클릭, 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 구조를 나타내며, 여기서, 방향족 또는 비방향족일 수 있는 환은 탄소 원자에 의해 형성된다. 카보사이클릭 구조로는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐 및 특정 아릴가 포함된다.
본 출원에서 사용되는 "카보닐"이라는 용어는 -C(O)- 기를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "Cx-y"라는 표현은, 당해 표현 바로 뒤에 오는 명칭인 기가 비치환될 때 x 내지 y개의 탄소 원자를 함유한다는 것을 나타낸다. 상기 기가 복합 기 (예를 들어, 아릴 알킬)인 경우, Cx-y는 당해 표현 바로 뒤에 오는 명칭인 부분이 비치환될 때 x 내지 y개의 탄소 원자를 함유한다는 것을 나타낸다. 예를 들어, (C6-10-아릴)-C1-6-알킬은 상기 아릴 부분이 비치환될 때 총 6 내지 10개의 탄소 원자를 함유하고 상기 알킬 부분이 비치환될 때 총 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 기이다.
본 출원에서 사용되는 "시아노"라는 용어는 -CN 기를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "첨가 사이클화 반응"이라는 용어는, 활성화, 화학 촉매에 의한 활성화 또는 열 에너지 이용 활성화가 없을 때, 총 [4n +2] π 전자가 결합 형성에 관여하는 두 성분의 반응을 나타내며, 여기서, n은 1, 2 또는 3이다. 첨가 사이클화 반응은 또한 광화학 활성화가 있을 때 [4n] π 전자가 관여하는 두 성분의 반응이며, 여기서, n은 1, 2 또는 3이다. 바람직하게는, [4n +2] π 전자는 결합 형성에 관여하며, 여기서, n = 1이다. 대표적인 첨가 사이클화 반응으로는 알켄과 1,3-디엔의 반응 (Diels-Alder 반응), 알켄과 α,β-불포화 카보닐의 반응 (헤테로 Diels-Alder 반응), 및 알킨과 아지도 화합물의 반응 (예를 들어, 휘스겐 첨가 사이클화)이 포함된다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알케닐"이라는 용어는 달리 명시되지 않는다면 환 중의 적어도 하나의 이중 결합 및 3 내지 10개의 탄소를 갖는 비방향족 카보사이클릭 기 (예를 들어, C3-C10 사이클로알케닐)를 지칭한다. 사이클로알케닐의 비제한적인 예로는 사이클로프로프-1-에닐, 사이클로프로프-2-에닐, 사이클로부트-1-에닐, 사이클로부트-1-에닐, 사이클로부트-2-에닐, 사이클로펜트-1-에닐, 사이클로펜트-2-에닐, 사이클로펜트-3-에닐, 노르보르넨-1-일, 노르보르넨-2-일, 노르보르넨-5-일 및 노르보르넨-7-일이 포함된다. 상기 사이클로알케닐 기는 사이클로알킬에 대해 기재된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 사이클로알케닐)될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알케닐 알킬"이라는 용어는 사이클로알케닐 기로 치환된 알킬기를 나타내며, 각각은 본 출원에서 정의된 바와 같다. 상기 사이클로알케닐 및 알킬 부분은 본 출원에서 기재된 각각의 기로서 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알케닐렌"이라는 용어는 하나의 수소 원자가 원자가로 대체되는 사이클로알케닐 기인 2가 기를 나타낸다. 사이클로알케닐렌은 사이클로알킬에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 사이클로알케닐렌의 비제한적인 예는 사이클로알켄-1,3-디일이다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알콕시"라는 용어는 화학식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서, R은 달리 명시되지 않는다면 사이클로알킬 기이다. 일부 실시 형태에서, 상기 사이클로알킬 기는 본 출원에서 정의된 바와 같이 추가로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알킬"이라는 용어는 달리 명시되지 않는다면 3 내지 10개의 탄소를 갖는 사이클릭 알킬기 (예를 들어, C3-C10 사이클로알킬)를 지칭한다. 사이클로알킬기는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭일 수 있다. 바이사이클릭 사이클로알킬기의 예는 바이사이클로[p.q.0]알킬 유형일 수 있으며, 여기서, p 및 q는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7이고, 단, p와 q의 합계는 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. 대안으로, 바이사이클릭 사이클로알킬로는 가교된 사이클로알킬 구조, 예를 들어, 바이사이클로[p.q.r]알킬이 포함될 수 있으며, 여기서, r은 1, 2 또는 3이고, p 및 q는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고, 단, p, q 및 r의 합계는 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. 상기 사이클로알킬기는 스피로사이클릭 기, 예를 들어, 스피로[p.q]알킬일 수 있으며, 여기서, p 및 q는 각각 독립적으로 2, 3, 4, 5, 6 또는 7이고, 단, p와 q의 합계는 4, 5, 6, 7, 8 또는 9이다. 사이클로알킬의 비제한적인 예로는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 1-바이사이클로[2.2.1.]헵틸, 2-바이사이클로[2.2.1.]헵틸, 5-바이사이클로[2.2.1.]헵틸, 7-바이사이클로[2.2.1.]헵틸 및 데칼리닐이 포함된다. 상기 사이클로알킬기는 비치환되거나, 알킬; 알케닐; 알키닐; 알콕시; 알킬설피닐; 알킬설페닐; 알킬설포닐; 아미노; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로알킬; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; 시아노; O; =S; =NR' (여기서, R'는 H, 알킬, 아릴 또는 헤테로사이클릴이다)로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 사이클로알킬)될 수 있다. 상기 치환기의 각각은 그 자체로 비치환되거나, 각각의 각 그룹에 대해 본 출원에서 정의된 비치환된 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알킬 알킬"이라는 용어는 사이클로알킬 기로 치환된 알킬기를 나타내며, 각각은 본 출원에서 정의된 바와 같다. 상기 사이클로알킬 및 알킬 부분은 본 출원에서 기재된 각각의 기로서 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알킬렌"이라는 용어는 하나의 수소 원자가 원자가로 대체되는 사이클로알킬 기인 2가 기를 나타낸다. 사이클로알킬렌의 비제한적인 예는 사이클로알칸-1,3-디일이다. 사이클로알킬렌은 사이클로알킬에 대해 본 출원에서 기재된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "사이클로알키닐"이라는 용어는 달리 명시되지 않는다면 1개 또는 2개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖고 8 내지 12개의 탄소를 갖는 1가 카보사이클릭 기를 지칭한다. 사이클로알키닐은 하나의 트랜스 환형 결합 또는 가교를 포함할 수 있다. 사이클로알키닐의 비제한적인 예로는 사이클로옥티닐, 사이클로노니닐, 사이클로데시닐 및 사이클로데카디닐이 포함된다. 상기 사이클로알키닐 기는 사이클로알킬에 대해 정의된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 사이클로알키닐)될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "디하이드로피리다진 기"라는 용어는 1,2,4,5-테트라진 기와 변형된 사이클로알케닐 사이의 첨가 사이클화를 통해 수득 가능한 2가 기를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "할로"라는 용어는 브롬, 염소, 요오드 및 불소로부터 선택된 할로겐을 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "5-할로우리딘"이라는 용어는 뉴클레오사이드를 나타내며, 여기서, 핵 염기는 하기 구조의 5-할로우라실이다:
Figure pct00003
여기서, R은 뉴클레오사이드의 펜타푸라노오스의 아노머 탄소에 대한 결합이며, X는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도이다. 일부 실시 형태에서, X는 브로모 또는 요오도이다.
본 출원에서 사용되는 "헤테로알칸-테트라일"이라는 용어는 하나의 헤테로 원자에 의해 1회; 하나의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 2회; 하나의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 3회; 또는 하나의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 3회 개입되는 알칸-테트라일 기를 지칭한다. 헤테로 원자는 각각 독립적으로 O, N 또는 S이다. 일부 실시 형태에서, 상기 헤테로 원자는 O 또는 N이다. 비치환된 CX-Y 헤테로알칸-테트라일은 X 내지 Y개의 탄소 원자 뿐만 아니라 본 출원에서 정의된 바와 같은 헤테로 원자를 함유한다. 상기 헤테로알칸-테트라일 기는 헤테로알킬에 대해 기재된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 헤테로알칸-테트라일)될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "헤테로알칸-트리일"이라는 용어는 하나의 헤테로 원자에 의해 1회; 하나의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 2회; 하나의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 3회; 또는 하나의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 3회 개입되는 알칸-트리일 기를 지칭한다. 헤테로 원자는 각각 독립적으로 O, N 또는 S이다. 일부 실시 형태에서, 상기 헤테로 원자는 O 또는 N이다. 비치환된 CX-Y 헤테로알칸-트리일은 X 내지 Y개의 탄소 원자 뿐만 아니라 본 출원에서 정의된 바와 같은 헤테로 원자를 함유한다. 상기 헤테로알칸-트리일 기는 헤테로알킬에 대해 기재된 바와 같이 비치환되거나 치환 (예를 들어, 임의로 치환된 헤테로알칸-트리일)될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "헤테로알킬"이라는 용어는 1개 또는 2개의 헤테로 원자에 의해 1회; 1개 또는 2개의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 2회; 1개 또는 2개의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 3회; 또는 1개 또는 2개의 헤테로 원자에 의해 매번 독립적으로 3회 개입되는 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기를 지칭한다. 헤테로 원자는 각각 독립적으로 O, N 또는 S이다. 일부 실시 형태에서, 상기 헤테로 원자는 O 또는 N이다. 헤테로알킬 기 중 어느 것도 2개의 인접한 산소 또는 황 원자를 포함하지 않는다. 상기 헤테로알킬 기는 비치환되거나 치환될 수 있다 (예를 들어, 임의로 치환된 헤테로알킬). 헤테로알킬이 치환되고 치환기가 헤테로 원자에 결합될 때, 치환기는 헤테로 원자의 성질 및 원자가에 따라 선택된다. 따라서, 헤테로 원자에 결합된 치환기는 원자가가 허용하는 한 =O, -N(RN2)2, -SO2ORN3, -SO2RN2, -SORN3, -COORN3, N-보호기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 헤테로사이클릴 또는 시아노로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서, RN2는 각각 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴이고, RN3은 각각 독립적으로 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴이다. 이들 치환기의 각각은 그 자체로 비치환되거나, 각각의 각 그룹에 대해 본 출원에서 정의된 비치환된 치환기(들)로 치환될 수 있다. 헤테로알킬이 치환되고 치환기가 탄소에 결합될 때, 치환기는 알킬에 대해 기재된 것들로부터 선택되며, 단, 헤테로 원자에 결합된 탄소 원자 상의 치환기는 Cl, Br 또는 I이 아니다. 탄소 원자는 헤테로알킬 기의 말단에서 발견되는 것으로 이해된다.
본 출원에서 사용되는 "헤테로아릴옥시"라는 용어는 -OR의 구조를 지칭하며, 여기서, R은 헤테로아릴이다. 헤테로아릴옥시는 헤테로사이클릴에 대해 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "헤테로사이클릴"이라는 용어는, 달리 명시되지 않는다면, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로 원자를 함유하는, 융합 또는 가교성 5원, 6원, 7원 또는 8원 환을 갖는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 트리사이클릭 또는 테트라사이클릭 환 시스템을 나타낸다. 헤테로사이클릴은 방향족 또는 비방향족일 수 있다. 비방향족 5원 헤테로사이클릴은 0 또는 1개의 이중 결합을 갖고, 비방향족 6원 및 7원 헤테로사이클릴 기는 0 내지 2개의 이중 결합을 갖고, 비방향족 8원 헤테로사이클릴 기는 0 내지 2개의 이중 결합 및/또는 0 또는 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는다. 헤테로사이클릴 기는 달리 명시되지 않는다면 1 내지 16개의 탄소 원자를 포함한다. 특정 헤테로사이클릴 기는 9개 이하의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 비방향족 헤테로사이클릴 기로는 피롤리닐, 피롤리디닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피페리디닐, 호모피페리디닐, 피페라지닐, 피리다지닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 티아졸리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 디하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에닐, 디하이드로티에닐, 디하이드로인돌릴, 테트라하이드로퀴놀릴, 테트라하이드로이소퀴놀릴, 피라닐, 디하이드로피라닐, 디티아졸릴 등이 포함된다. 헤테로사이클릭 환 시스템이 적어도 하나의 방향족 공명 구조 또는 적어도 하나의 방향족 호변 이성질체를 갖는 경우, 이러한 구조는 방향족 헤테로사이클릴 (즉, 헤테로아릴)이다. 헤테로아릴 기의 비제한적인 예로는 벤즈이미다졸릴, 벤조푸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티에닐, 벤즈옥사졸릴, 푸릴, 이미다졸릴, 인돌릴, 이소인다졸릴, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 퓨리닐, 피롤릴, 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 티아디아졸릴 (예를 들어, 1,3,4-티아디아졸), 티아졸릴, 티에닐, 트리아졸릴, 테트라졸릴 등이 포함된다. "헤테로사이클릴"이라는 용어는 또한 하나 이상의 탄소 및/또는 헤테로 원자가 모노사이클릭 환 중 2개의 비인접 구성원을 가교하는 가교된 멀티사이클릭 구조를 갖는 헤테로사이클릭 화합물, 예를 들어, 퀴누클리딘, 트로판 또는 디아자-바이사이클로[2.2.2]옥탄을 나타낸다. "헤테로사이클릴"이라는 용어는, 상기 헤테로사이클릭 환 중 임의의 것이 1, 2 또는 3개의 카보사이클릭 환, 예를 들어, 아릴 환, 사이클로헥산 환, 사이클로헥센 환, 사이클로펜탄 환, 사이클로펜텐 환 또는 또 다른 모노사이클릭 헤테로사이클릭 환에 융합되는 바이사이클릭, 트리사이클릭 및 테트라사이클릭 기를 포함한다. 융합된 헤테로사이클릴의 예로는 1,2,3,5,8,8a-헥사하이드로인돌리진; 2,3-디하이드로벤조푸란; 2,3-디하이드로인돌; 및 2,3-디하이드로벤조티오펜이 포함된다. 상기 헤테로사이클릴 기는 비치환되거나, 알킬; 알케닐; 알키닐; 알콕시; 알킬설피닐; 알킬설페닐; 알킬설포닐; 아미노; 아릴; 아릴옥시; 아지도; 사이클로알킬; 사이클로알콕시; 사이클로알케닐; 사이클로알키닐; 할로; 헤테로알킬; 헤테로사이클릴; (헤테로사이클릴)옥시; 하이드록시; 니트로; 티올; 실릴; 시아노; O; =S; =NR' (여기서, R'는 H, 알킬, 아릴 또는 헤테로사이클릴이다)로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 치환될 수 있다. 상기 치환기의 각각은 그 자체로 비치환되거나, 각각의 각 그룹에 대해 본 출원에서 정의된 비치환된 치환기(들)로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "헤테로사이클릴 알킬"이라는 용어는 헤테로사이클릴 기로 치환된 알킬기를 나타내며, 각각은 본 출원에서 정의된 바와 같다. 상기 헤테로사이클릴 및 알킬 부분은 본 출원에서 기재된 각각의 기로서 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "(헤테로사이클릴)아자"라는 용어는 화학식 -N(RN1)(RN2)의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서, RN1은 헤테로사이클릴 기이고, RN2는 H, -OH, -NO2, -N(RN2)2, -SO2ORN2, -SO2RN2, -SORN2, -COORN2, N-보호기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴, 아릴알킬, 아릴옥시, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로알킬 또는 헤테로사이클릴이다. 바람직하게는, RN2는 H이다.
본 출원에서 사용되는 "헤테로사이클릴렌"이라는 용어는 하나의 수소 원자가 원자가로 대체되는 헤테로사이클릴 기를 나타낸다. 상기 헤테로사이클릴렌은 헤테로사이클릴에 대해 기재된 방식으로 임의로 치환될 수 있다. 헤테로사이클릴렌의 비제한적인 예는 헤테로사이클-1,3-디일이다.
본 출원에서 사용되는 "(헤테로사이클릴)옥시"라는 용어는 화학식 -OR의 화학적 치환기를 나타내며, 여기서, R은 달리 명시되지 않는다면 헤테로사이클릴 기이다. 상기 (헤테로사이클릴)옥시는 헤테로사이클릴에 대해 기재된 방식으로 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 상호 교환적으로 사용되는 "하이드록실" 및 "하이드록시"라는 용어는 -OH 기를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "면역 조절 폴리뉴클레오타이드"라는 용어는 뉴클레오사이드간 포스포에스테르 및 임의로 뉴클레오사이드간 무염기성 스페이서로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 뉴클레오사이드간 가교기에 의해 함께 공유 결합된 총 6 내지 50개의 인접 뉴클레오사이드를 함유하는 폴리뉴클레오타이드 작제물을 나타낸다. 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 각각 5'- 및 3'-캡핑 기로 5'- 및 3'-말단에서 캡핑된다. 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 전달된 항원 제시 세포에서 (예를 들어, 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 전달되지 않은 또 다른 항원 제시 세포와 비교하여) NFκB 활성화의 변화 또는 적어도 하나의 염증성 사이토카인 또는 적어도 하나의 I 형 인터페론 분비의 변화에 의해 결정될 때 선천성 면역 반응을 조절할 수 있다. 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 컨쥬게이트 기, 또는, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 컨쥬게이트의 일부인 경우, 표적화 모이어티 및 임의로 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜)에 결합된 링커를 함유할 수 있다. 상기 컨쥬게이트 기 또는 링커는 포스포트리에스테르 또는 말단 캡핑 기의 일부일 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "면역 자극 폴리뉴클레오타이드"라는 용어는, 예를 들어, 면역 자극 폴리뉴클레오타이드가 전달된 항원 제시 세포에서 (예를 들어, 면역 자극 폴리뉴클레오타이드가 전달되지 않은 또 다른 항원 제시 세포와 비교하여) NFκB 활성화의 증가 또는 적어도 하나의 염증성 사이토카인 또는 적어도 하나의 I 형 인터페론 분비의 증가에 의해 결정될 때 선천성 면역 반응을 활성화시킬 수 있는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 적어도 하나의 사이티딘-p-구아노신 (CpG) 서열을 함유하며, 여기서, p는 뉴클레오사이드간 포스포디에스테르 (예를 들어, 포스페이트 또는 포스포로티오에이트) 또는 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르 또는 포스포티오트리에스테르이다. 본 출원에서 사용되는 바와 같이, 세균 또는 바이러스 기원의 CpG ODN과 같은 CpG 함유 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 자연적으로 존재하거나 합성일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드의 CpG 서열은 2'-데옥시리보오스를 함유한다. 일부 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드의 CpG 서열은 메틸화되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 본 출원에서 제공되는 바와 같은 화학식 A의 폴리뉴클레오타이드이다. 일부 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 본 출원에서 제공되는 바와 같은 화학식 B의 화합물이다.
본 출원에서 사용되는 "면역 억제 폴리뉴클레오타이드"라는 용어는, 예를 들어, 면역 억제 폴리뉴클레오타이드가 전달된 항원 제시 세포에서 (예를 들어, 면역 억제 폴리뉴클레오타이드가 전달되지 않은 또 다른 항원 제시 세포와 비교하여) NFκB 활성화의 감소 또는 적어도 하나의 염증성 사이토카인 또는 적어도 하나의 I 형 인터페론 분비의 감소에 의해 결정될 때 선천성 면역 반응을 길항시킬 수 있는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "뉴클레오사이드간 가교 기"는 뉴클레오사이드간 포스포에스테르 또는 뉴클레오사이드간 무염기성 스페이서를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "5-변형된 사이티딘"이라는 용어는 뉴클레오사이드를 나타내며, 여기서, 핵 염기는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00004
, 여기서, R은 뉴클레오사이드의 펜타푸라노오스의 아노머 탄소에 대한 결합이며, X는 할로겐, 알키닐, 알케닐, 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 또는 아릴이다. 일부 실시 형태에서, 5- 변형된 사이티딘은 5-할로 사이티딘 (예를 들어, 5-요오도 사이티딘 또는 5-브로모 사이티딘)이다. 다른 실시 형태에서, 5-변형된 사이티딘은 5-알키닐 사이티딘이다.
본 출원에서 사용되는 "5-변형된 우리딘"이라는 용어는 뉴클레오사이드를 나타내며, 여기서, 핵 염기는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00005
, 여기서, R은 뉴클레오사이드의 펜타푸라노오스의 아노머 탄소에 대한 결합이며, X는 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 또는 아릴이고, 단, 상기 5-변형된 우리딘은 티미딘이 아니다. 일부 실시 형태에서, 5-변형된 우리딘은 5-할로우리딘 (예를 들어, 5-요오도우리딘 또는 5-브로모우리딘)이다. 다른 실시 형태에서, 5-변형된 우리딘은 5-알키닐 우리딘이다. 일부 실시 형태에서, 5-변형된 우리딘은 2-데옥시리보오스를 함유하는 뉴클레오사이드이다.
본 출원에서 사용되는 "비-생물 가역성"이라는 용어는 엔도솜 내부에 존재하는 조건하에 분해에 저항하는 화학 기를 지칭한다. 비-생물 가역성 기는 티오에스테르 및/또는 다이설파이드를 함유하지 않는다.
본 출원에서 사용되는 "핵 염기"라는 용어는 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오사이드의 당 모이어티의 1' 위치에 결합된 질소 함유 헤테로 사이클릭 환을 나타낸다. 핵 염기는 비변형되거나 변형될 수 있다. 본 출원에서 사용되는 "비변형된" 또는 "천연" 핵 염기는 퓨린 염기인 아데닌 (A) 및 구아닌 (G), 및 피리미딘 염기인 티민 (T), 사이토신 (C) 및 우라실 (U)을 포함한다. 변형된 핵 염기는 5-메틸사이토신 (5-me-C 또는 m5c), 5-하이드록시메틸 사이토신, 크산틴, 하이포크산틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오사이토신, 5-할로우라실 및 사이토신, 5-프로피닐 우라실 및 사이토신, 6-아조 우라실, 사이토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히, 5-요오도, 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 사이토신, 5-알키닐 (예를 들어, 5-에티닐) 우라실, 5-아세트아미도-우라실, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌과 같은 기타 합성 및 천연 핵염기를 포함한다. 추가의 핵염기는 미국 특허 3,687,808에 개시된 것들; 문헌 [The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. l, ed. John Wiley & Sons, 1990]에 개시된 것들; 문헌 [Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613]에 개시된 것들; 및 문헌 [Sanghvi, Y. S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, pages 289 302, (Crooke et al., ed., CRC Press, 1993]에 개시된 것들을 포함한다. 특정 핵 염기는 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐사이토신을 비롯하여 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린을 포함하는 본 발명의 혼성화된 폴리뉴클레오타이드의 결합 친화성을 증가시키는데 특히 유용하다. 5-메틸사이토신 치환은 핵산 이중 가닥 안정성을 0.6~1.2℃까지 증가시키는 것으로 나타났다. (문헌 [Sanghvi et al., eds., Antisense Research and Applications 1993, CRC Press, Boca Raton, pages 276-278]). 이들은 특정 실시 형태에서 2'-O-메톡시에틸 당 변형과 조합될 수 있다. 이러한 변형된 핵 염기 뿐만 아니라 다른 변형된 핵 염기 중 일부의 제조를 교시하는 미국 특허로는 상기에서 언급된 미국 특허 US 3,687,808; US 4,845,205; US 5,130,302; US 5,134,066; US 5,175,273; US 5,367,066; US 5,432,272; US 5,457,187; US 5,459,255; US 5,484,908; US 5,502,177; US 5,525,711; US 5,552,540; US 5,587,469; US 5,594,121; US 5,596,091; US 5,614,617; 및 US 5,681,941가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 개시 내용의 목적을 위해, 본 출원에서 사용되는 "변형된 핵 염기"는 본 출원에서 기재된 바와 같은 하나 이상의 보호기를 포함하는 천연 또는 비천연 핵 염기를 추가로 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "뉴클레오사이드"라는 용어는 펜타푸라노오스-핵 염기 조합을 나타낸다. 상기 펜타푸라노오스는 2-데옥시리보오스 또는 이의 변형된 버전이며, 여기서, 2번 위치는 OR, R, 할로 (예를 들어, F), SH, SR, NH2, NHR, NR2 또는 CN로 치환되고, R은 임의로 치환된 C1-6 알킬 (예를 들어, C1-6 알킬 또는 (C1-6 알콕시)-C1-6-알킬) 또는 임의로 치환된 (C6-14 아릴)-C1-4-알킬이다. 특정 실시 형태에서, 2번 위치는 OR 또는 F로 치환되며, 여기서, R은 C1-6 알킬 또는 (C1-6-알콕시)-C1-6-알킬이다. 상기 펜타푸라노오스는 아노머 탄소에서 핵 염기에 결합된다. 일부 실시 형태에서, "뉴클레오사이드"라는 용어는 하기 구조를 갖는 2가 그룹을 지칭한다:
Figure pct00006
, 여기서, B1은 핵 염기이고; Y는 H, 할로겐 (예를 들어, F), 하이드록실, 임의로 치환된 C1-6 알콕시 (예를 들어, 메톡시 또는 메톡시에톡시) 또는 보호된 하이드록실 기이고; Y1은 H 또는 C1-6 알킬 (예를 들어, 메틸)이고; 3'와 5'는 각각 또 다른 기에 대한 결합의 위치를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "뉴클레오타이드"라는 용어는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트에 결합되는 뉴클레오사이드를 지칭한다.
본 출원에서 사용되는 "포스포에스테르"라는 용어는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오 에이트를 함유하는 기를 나타내며, 여기서, 적어도 하나의 원자가는 비-수소 치환기에 공유 결합되며, 단, 적어도 하나의 비-수소 치환기는 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 함유하는 기이다. 하나의 원자가만이 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 공유 결합되는 포스포에스테르는 말단 포스포에스테르이다. 2개의 원자가가 뉴클레오사이드 함유 기에 공유 결합되는 포스포에스테르는 뉴클레오사이드간 포스포에스테르이다. 포스포에스테르는 하기 구조의 기일 수 있다:
Figure pct00007
,
여기서,
XE1 및 XE2는 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
RE1 및 RE3은 각각 독립적으로 수소 또는 뉴클레오사이드에 대한 결합; 무염기성 스페이서의 당 유사체; 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 표적화 모이어티에 결합된 링커; 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커; 또는 화학식 -P(=XE1)(-XE2-RE2A)-O-의 기 중의 인 원자이고,
여기서, RE2A는 수소, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 보조 모이어티, 컨쥬게이트 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커, 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
RE2는 수소, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 보조 모이어티, 컨쥬게이트 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커, 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
단, RE1과 RE3 중 적어도 하나는 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합이다.
RE1 및 RE3이 각각 독립적으로 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합인 경우, 포스포에스테르는 뉴클레오사이드간 포스포에스테르이다. RE1과 RE3 중 하나가 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합인 경우, 포스포에스테르는 말단 포스포에스테르이다.
본 출원에서 사용되는 "포스포디에스테르"라는 용어는, 3개의 원자가 중 2개가 비-수소 치환기로 치환되고 나머지 원자가가 수소로 치환되는 포스포에스테르를 지칭한다. 상기 포스포디에스테르는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트; 뉴클레오사이드(들), 무염기성 스페이서(들) 및/또는 포스포릴 기(들)에 대한 1개 또는 2개의 결합; 및 포스포디에스테르가 뉴클레오사이드, 무염기성 스페이서 또는 포스포릴 기에 대한 1개의 결합만을 포함하는 경우, 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 표적화 모이어티에 결합된 링커; 및 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1개의 기로 이루어진다. 말단 포스포디에스테르는 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 1개의 결합, 및 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 포스포릴 기; 및 표적화 모이어티와 임으로 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1개의 기를 포함한다. 뉴클레오사이드간 포스포디에스테르는 뉴클레오사이드 함유 기에 대한 2개의 결합을 포함한다. 포스포디에스테르는 하기 구조의 기일 수 있다:
Figure pct00008
,
여기서,
XE1 및 XE2는 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
RE1 및 RE3은 각각 독립적으로 수소 또는 뉴클레오사이드에 대한 결합; 무염기성 스페이서의 당 유사체; 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 표적화 모이어티에 결합된 링커; 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커; 또는 화학식 -P(=XE1)(-XE2-RE2A)-O-의 기 중의 인 원자이고,
여기서, RE2A는 수소, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 보조 모이어티, 컨쥬게이트 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커, 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
RE2는 수소, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 보조 모이어티, 컨쥬게이트 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커, 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
단, RE1, RE2 및 RE3 중 하나 및 하나만이 수소이고;
단, RE1과 RE3 중 적어도 하나는 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합이다.
RE1과 RE3 둘 다가 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합인 경우, 포스포디에스테르는 뉴클레오사이드간 포스포디에스테르이다. RE1과 RE3 중 하나 및 하나만이 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합인 경우, 포스포디에스테르는 말단 포스포디에스테르이다.
본 출원에서 사용되는 "포스포릴"이라는 용어는 하기 화학식의 치환기를 지칭한다:
-P(=XE1)(-XE2-RE2A)-O-RE3A,
여기서,
XE1 및 XE2는 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
RE2A는 수소, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 보조 모이어티, 컨쥬게이트 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커, 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
RE3A는 수소 또는 개방 원자가 (open valency)이다.
기가 포스포릴에 결합되어 있는 것으로 확인될 때, 기는 포스포릴의 인 원자에 결합된다.
본 출원에서 사용되는 "포스포트리에스테르"라는 용어는, 3개의 모든 원자가가 비-수소 치환기로 치환되는 포스포에스테르를 지칭한다. 상기 포스포트리에스테르는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트; 뉴클레오사이드(들) 또는 무염기성 스페이서(들) 및/또는 포스포릴 기(들)에 대한 1개 또는 2개의 결합; 및 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 및 표적화 모이어티와 임의로 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 기로 이루어진다. 말단 포스포트리에스테르는 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 1개의 결합, 및 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 포스포릴 기; 및 표적화 모이어티와 임으로 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 2개의 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 말단 포스포트리에스테르는 표적화 모이어티 및 임의로 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 1개 또는 0개의 링커를 함유한다. 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르는 뉴클레오사이드 함유 기에 대한 2개의 결합을 포함한다. 포스포트리에스테르는 하기 구조의 기일 수 있다:
Figure pct00009
여기서,
XE1 및 XE2는 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
RE1 및 RE3은 각각 독립적으로 뉴클레오사이드에 대한 결합; 무염기성 스페이서의 당 유사체; 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 표적화 모이어티에 결합된 링커; 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커; 또는 화학식 -P(=XE1)(-XE2-RE2A)-O-의 기 중의 인 원자이고,
여기서, RE2A는 수소; 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 표적화 모이어티에 결합된 링커; 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
RE2는 생물 가역성 기; 비-생물 가역성 기; 보조 모이어티; 컨쥬게이트 기; 표적화 모이어티에 결합된 링커; 또는 표적화 모이어티와 하나 이상 (예를 들어, 1 내지 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커이고;
단, RE1과 RE3 중 적어도 하나는 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합이다.
RE1과 RE3 둘 다가 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합인 경우, 포스포트리에스테르는 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르이다. RE1과 RE3 중 하나 및 하나만이 뉴클레오사이드를 함유하는 기에 대한 결합인 경우, 포스포트리에스테르는 말단 포스포트리에스테르이다.
본 출원에서 사용되는 "피리드-2-일 하이드라존"이라는 용어는 하기 구조의 기를 나타낸다:
Figure pct00010
여기서, R'는 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이다. 피리드-2-일 하이드라존은 비치환될 수 있다 (즉, R'은 각각 H이다).
본 출원에서 사용되는 "입체 화학적으로 풍부한"이라는 용어는 동일한 기의 반대 입체 이성질체 배열에 비해 언급된 기의 하나의 입체 이성질체 배열에 대한 국부 입체 화학적 선호도를 지칭한다. 따라서, 입체 화학적으로 풍부한 포스포로티오에이트를 함유하는 폴리뉴클레오타이드는 미리 결정된 입체 화학의 포스포로티오에이트가 반대 입체 화학의 포스포로티오에이트 보다 우선적으로 존재하는 가닥이다. 이러한 선호도는 미리 결정된 입체 화학의 포스포로티오에이트에 대한 부분 입체 이성질체 비율을 사용하여 수치적으로 표현될 수 있다. 미리 결정된 입체 화학의 포스포로티오에이트에 대한 부분 입체 이성질체 비율은 반대 입체 화학을 갖는 확인된 포스포로티오에이트를 갖는 부분 입체 이성질체에 대한 미리 결정된 입체 화학을 갖는 확인된 포스포로티오에이트를 갖는 부분 입체 이성질체의 몰비이다. 미리 결정된 입체 화학의 포스포로티오에이트에 대한 부분 입체 이성질체 비율은 1.1 이상 (예를 들어, 4 이상, 9 이상, 19 이상 또는 39 이상)일 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "Q-태그"라는 용어는, -NH2 아민을 함유하는 화합물과의 트랜스글루타미나아제 매개 반응시, 글루타민 잔기가 화합물에 결합된 아미드를 포함하도록 변형된 측쇄를 포함하는 폴리펩타이드의 부분을 함유하는 컨쥬게이트를 제공하는 글루타민 잔기를 함유하는 폴리펩타이드의 부분을 지칭한다. Q-태그는 당해 분야에 공지되어 있다. Q-태그의 비제한적인 예로는 LLQGG (서열 번호 582) 및 GGGLLQGG (서열 번호 583)가 있다.
본 출원에서 사용되는 "변형된 (strained) 사이클로알케닐"이라는 용어는, 개방 원자가가 H로 치환된 경우, 적어도 16 kcal/mol의 환 변형 에너지를 갖는 사이클로알케닐 기를 지칭한다.
본 출원에서 사용되는 "당 유사체"라는 용어는 2개의 하이드록실 기를 포스페이트, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 또는 캡핑 기 내의 산소 원자에 대한 결합으로 대체하도록 변형되는 C3-6 단당류 또는 C3-6 알디톨 (예를 들어, 글리세롤)인 2가 또는 3가 기를 나타낸다. 당 유사체는 상보적 가닥에서 핵 염기와 수소 결합에 관여할 수 있는 핵 염기를 함유하지 않는다. 당 유사체는 사이클릭 또는 어사이클릭이다. 당 유사체에 포함된 추가의 선택적 변형은 다음과 같다: H; 임의로 치환된 C1-6 알킬; 본 출원에서 정의된 바와 같은 -LinkA(-T)p; 컨쥬게이트 기; -(CH2)t1-ORZ (여기서, t1은 1 내지 6의 정수이고, RZ는 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C6-14 아릴, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 (C1-9 헤테로사이클릴)-C1-6-알킬, 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬 또는 임의로 치환된 (C3-8 사이클로알킬)-C1-6-알킬이다)에 의한 나머지 하이드록실 기 또는 탄소-결합된 수소 원자 중 1, 2 또는 3개의 대체; 1개 또는 2개의 불포화(들) (예를 들어, 1개 또는 2개의 이중 결합)의 도입; 및 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 또는 헤테로사이클릴에 의한 1, 2 또는 3개의 수소 원자 또는 하이드록실 기의 대체. 당 유사체의 비제한적인 예로는 임의로 치환된 C2-6　알킬렌, 임의로 치환된 C2-6　알케닐렌, 임의로 치환된 C5 사이클로알칸-1,3-디일, 임의로 치환된 C5 사이클로알켄-1,3-디일, 임의로 치환된 헤테로사이클-1,3-디일 (예를 들어, 임의로 치환된 피롤리딘-2,5-디일, 임의로 치환된 테트라하이드로푸란-2,5-디일 또는 임의로 치환된 테트라하이드로티오펜-2,5-디일) 또는 임의로 치환된 (C1-4 알킬)-(C3-8 사이클로알킬렌) (예를 들어, 임의로 치환된 (C1 알킬)-(C3 사이클로알킬렌))이 있다.
본 출원에서 사용되는 "설파이드"라는 용어는 2가 -S- 또는 =S 기를 나타낸다. 다이설파이드는 -S-S-이다.
본 출원에서 사용되는 "표적화 모이어티"라는 용어는 주어진 표적 세포 집단 (예를 들어, 특정 표적 세포 집단 (예를 들어, 항원 제시 세포 (antigen-presenting cell: APC; 예를 들어, 전문 APC (예를 들어, B 세포, pDC 또는 대식 세포)))과 연관된 수용체 또는 다른 수용 모이어티와 특이적으로 결합하거나 반응성으로 결합하거나 복합체를 형성하는 모이어티 (예를 들어, 소분자, 예를 들어, 탄수화물))을 나타낸다. 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 표적화 모이어티를 포함한다. 상기 표적화 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 조작된 유도체 (예를 들어, Fcab 또는 융합 단백질 (예를 들어, scFv))일 수 있다. 상기 표적화 모이어티는 폴리펩타이드일 수 있다. 대안으로, 상기 표적화 모이어티는 소분자 (예를 들어, 만노오스) 또는 소분자의 클러스터 (예를 들어, 만노오스의 클러스터)일 수 있다. 상기 표적화 모이어티를 포함하는 본 발명의 컨쥬게이트는, 표적화 모이어티가 결합하는 표적에 대해 100 nM 미만의 Kd를 나타낼 수 있다. Kd는 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어, 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance: SPR)을 사용하여, 예를 들어, BIACORETM 시스템 (GE Healthcare, Little Chalfont, the United Kingdom)을 사용하여 측정된다.
본 출원에서 사용되는 "1,2,4,5-테트라진 기"라는 용어는 하기 화학식의 기를 나타낸다:
Figure pct00011
, 여기서, R'는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 헤테로사이클릴이고; R''는 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌 또는 -Ra-Rb-의 기이고, 여기서, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 사이클로알킬렌 또는 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌이다.
"치료학적 효과"라는 용어는 약리학적 활성 물질에 기인하는 대상체, 특히, 포유 동물, 보다 특히, 사람에서의 국부 또는 전신 효과를 지칭한다. 따라서, 이러한 용어는 질병의 진단, 치유, 완화, 치료 또는 예방 또는 동물 또는 사람의 바람직한 신체적 또는 정신적 발달 및 상태의 증진에 사용하기 위해 의도된 임의의 물질을 의미한다. 본 출원에서 사용되는 "치료학적 유효량" 또는 "치료학적 유효 용량"이라는 용어는 치료되는 질병의 증상을 개선, 치료 또는 적어도 부분적으로 정지시키 데 필요한 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 또는 컨쥬게이트의 양을 나타낸다. 이러한 사용에 효과적인 양은 질병의 중증도와 대상체의 체중 및 일반적인 상태에 좌우된다. 전형적으로, 시험관내에서 사용된 투약량은 약제학적 조성물의 생체내 투여에 유용한 양에서 유용한 지침을 제공할 수 있으며, 동물 모델은 특정 질환의 치료에 효과적인 투약량을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "티오카보닐"이라는 용어는 C(=S) 기를 나타낸다.
본 출원에서 사용되는 "티오헤테로사이클릴렌"이라는 용어는 -S-R- 기를 나타내며, 여기서, R은 헤테로사이클릴렌이다. 티오헤테로사이클릴렌은 헤테로사이클릴에 대해 기재된 방식으로 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "티올"이라는 용어는 -SH 기를 나타낸다.
환자의 질병 또는 병태와 관련하여 사용되는 "치료하는"이라는 용어는 환자에게 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 또는 컨쥬게이트를 투여함으로써 환자에서 유익하거나 목적하는 결과, 예를 들어, 임상 결과를 수득하는 것을 지칭하는 것으로 의도된다. 유익하거나 목적하는 결과는 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상의 완화 또는 개선; 질병 또는 병태의 정도 감소; 질병 또는 병태의 안정화 (즉, 악화되지 않음); 질병 또는 병태의 확산 방지; 질병 또는 병태의 진행의 지연 또는 둔화; 질병 또는 병태의 완화; 및 관해 (부분적이든 전체적이든)를 포함할 수 있다. 질병 또는 병태를 "완화시키는"은 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 또는 컨쥬게이트에 의한 치료의 부재하의 정도 또는 시간 경과와 비교하여 질병 또는 병태의 정도 및/또는 바람직하지 않은 임상 징후가 감소되고/되거나 진행 시간 경과가 둔화되는 것을 의미한다.
본 출원에서 사용되는 "트리아졸로사이클로알케닐렌"이라는 용어는 8원 환에 융합된 1,2,3-트리아졸 환을 함유하는 헤테로사이클릴렌을 지칭하며, 여기서, 모든 엔도사이클릭 원자는 탄소 원자이고, 교두보 원자는 sp2-혼성화된 탄소 원자이다. 트리아조사이클로알케닐렌은 헤테로사이클릴에 대해 기재된 방식으로 임의로 치환될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "트리아졸로헤테로사이클릴렌"이라는 용어는 적어도 하나의 헤테로 원자를 함유하는 8원 환에 융합된 1,2,3-트리아졸을 함유하는 헤테로사이클릴렌을 지칭한다. 트리아졸로헤테로사이클릴렌 중 교두보 원자는 탄소 원자이다. 트리아졸로헤테로사이클릴렌은 헤테로사이클릴에 대해 기재된 방식으로 임의로 치환될 수 있다.
"면역 조절 폴리뉴클레오타이드", "면역 자극 폴리뉴클레오타이드", "면역 억제 폴리뉴클레오타이드" 및 "컨쥬게이트"라는 용어는 각각 면역 조절 폴리뉴클레오타이드, 면역 자극 폴리뉴클레오타이드, 면역 억제 폴리뉴클레오타이드 및 컨쥬게이트의 염을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, "면역 조절 폴리뉴클레오타이드", "면역 자극 폴리뉴클레오타이드", "면역 억제 폴리뉴클레오타이드" 및 "컨쥬게이트"라는 용어는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트의 양성자화된 중성 형태 (P-XH 모이어티, 여기서, X는 O 또는 S이다)와 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트의 탈양성자화된 이온 형태 (P-X- 모이어티, 여기서, X는 O 또는 S이다) 둘 다를 포괄한다. 따라서, 수소로서 E1, RE2 및 RE3 중 하나 이상을 갖는 것으로 기재된 포스포에스테르 및 포스포디에스테르는, 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트가 탈양성자화된 이온 형태로 존재하는 염을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다.
"선천성 면역 반응" 및 "선천성 면역"이라는 용어는 당해 분야에서 인식되어 있으며, 신체의 면역계가 병원체 관련 분자 패턴의 인식시에 개시하는 비특이적 방어 메커니즘을 지칭하고, 다양한 경로를 통한 사이토카인 생산 및 세포 사멸을 비롯한 다양한 형태의 세포 활동을 포함한다. 본 출원에서 사용되는 바와 같이, 선천성 면역 반응은 톨 유사 수용체 9 (TLR9)에 의해 매개되는 CpG 함유 면역 자극 폴리뉴클레오타이드에 대한 세포 반응을 포함하며, 염증 사이토카인 생산 (예를 들어, I형 인터페론 또는 IL-10 생산)의 증가, NFκB 경로의 활성화, 면역 세포의 증식, 성숙, 분화 및/또는 생존의 증가, 일부 경우에서, 세포 아폽토시스의 유도를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 선천성 면역의 활성화는 (NF)-κB 활성화의 측정과 같은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 감지될 수 있다.
"적응성 면역 반응" 및 "적응성 면역"이라는 용어는 당해 분야에서 인식되어 있으며, 신체의 면역계가 특정 항원의 인식시에 개시하는 항원-특이적 방어 메커니즘을 지칭하고, 체액성 반응과 세포 매개성 반응 둘 다를 포함한다. 본 출원에서 사용되는 바와 같이, 적응성 면역 반응은 CpG 함유 면역 자극 폴리뉴클레오타이드에 의해 촉발 및/또는 증대되는 세포 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 일부는 항원 특이적 적응성 면역 반응의 항원 표적이다. 다른 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 항원 특이적 적응성 면역 반응의 항원 표적이 아니지만, 그럼에도 불구하고 적응성 면역 반응을 증대시킨다. 적응성 면역 반응의 활성화는 항원 특이적 항체 생산 또는 항원 특이적 세포 매개성 세포독성의 수준의 측정과 같은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 감지될 수 있다.
"톨 유사 수용체" (또는 "TLR")라는 용어는 당해 분야에서 인식되어 있으며, 미생물 병원체를 인식하는 선천성 면역계의 센서로서 처음에 확인된 패턴 인식 수용체 계열을 지칭한다. TLR은 "병원체 관련 분자 패턴 (pathogen associated molecular pattern: PAMP)"으로서 종종 지칭되는 미생물의 특유의 구조를 인식한다. TLR에 대한 리간드 결합은 선천성 면역 반응 및/또는 적응성 면역 반응을 유도하는 세포내 신호 전달 경로의 캐스케이드를 발동한다. 본 출원에서 사용되는 "톨 유사 수용체" 또는 "TLR"이라는 용어는 또한 세포에 의해 발현되는 톨 유사 수용체 단백질의 기능적 단편을 지칭한다. 사람에서, TLR-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7/8, -9 및 -10을 비롯한 10개의 TLR가 확인되었다. 문헌 [D'Arpa and Leung, Adv. Wound Care, 2017, 6, 330-343]. TLR을 인코딩하는 사람 유전자는 공지되어 있다.
CD289 (분화 클러스터 289)로도 또한 명명된 톨 유사 수용체 9 (TLR9)는 톨 유사 수용체 (TLR) 계열의 구성원이다. 문헌 [Du et al., Eur. Cytokine Netw., 11:362-371 (2000)]. TLR9는 수지상 세포 (DC), B 림프구, 대식 세포, 자연 살해 세포 및 기타 항원 제시 세포를 비롯한 면역계 세포에서 발현되는 중요한 수용체이다. TLR9 활성화는 선천성 면역 및 적응성 면역을 가교하는 신호 전달 캐스케이드를 촉발한다. 문헌 [Martinez-Campos et al., Viral Immunol., 30:98-105 (2016)]; [Notley et al., Sci. Rep., 7:42204 (2017)]. 천연 TLR-9 작용제는 메틸화되지 않은 사이토신-구아닌 디뉴클레오타이드 (CpG) 함유 올리고데옥시뉴클레오타이드 (CpG ODN)를 포함한다. 본 개시 내용에서 사용되는 TLR-9 리간드는 자연 존재 또는 합성 CpG ODN, 및 본 출원에서 제공되는 바와 같은 다른 CpG 함유 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 및/또는 면역 컨쥬게이트를 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. TLR9 신호 전달 경로의 활성화는 골수 분화 항원 88 (MyD88)의 동원, 핵 인자 (NF)-κB, c-Jun N-말단 키나아제 (JNK) 및 p38 미토겐 활성화 단백질 키나아제 (MAPK) 신호 전달 경로의 활성화, 인터페론 조절 인자-7의 활성화, I형 인터페론 (IFN), 인터루킨 (IL)-6, IL-10 및 IL-12와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 수준. NK 세포, 자연 살해 T 세포, 단핵구와 같은 하나 이상의 면역 세포 집단의 활성화, 및 세포독성 림프구 (CTL) 및 T 헬퍼-1 (Th1) 반응의 수준, 면역글로불린 분비의 수준의 측정과 같은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 검지될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "TLR 발현 세포"라는 용어는, 톨 유사 수용체를 발현하고 작용제에 대한 톨 유사 수용체의 결합시에 톨 유사 수용체 신호 전달 경로를 활성화할 수 있는 세포를 지칭한다. 상기 톨 유사 수용체는 세포 표면 상에서 및/또는 세포의 하나 이상의 세포내 구획, 예를 들어, 엔도솜 또는 파고솜의 막 상에서 발현될 수 있다. TLR 발현 세포는 톨 유사 수용체 이외의 다른 하나 이상의 세포 표면 항원을 추가로 발현할 수 있다. 특정 면역 세포는 TLR을 발현하고, 면역 세포내 TLR 신호 전달 경로의 활성화는 선천성 면역 반응 및/또는 적응성 면역 반응을 유도한다. TLR 신호 전달 경로에 의해 활성화된 면역 세포는 신체로부터 다른 질병 세포를 제거하는데 도움이 될 수 있다. 특정 질병 세포 (예를 들어, 암 세포 또는 바이러스 감염 세포)는 TLR을 발현하고, 질병 세포내 TLR 신호 전달 경로의 활성화는, 예를 들어, 유도된 아폽토시스을 통해 질병 세포의 사망을 초래할 수 있다. TLR9 발현 세포의 예로는 수지상 세포 (DC), B 세포, T 세포, 랑게르한스 세포, 각질 형성 세포, 비만 세포, 내피 세포, 근섬유 모세포 세포 및 일차 섬유 아세포가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 세포가 임의의 톨 유사 수용체 (예를 들어, TLR9)를 발현하는지 여부를 결정하는 것은 세포에서 톨 유사 수용체의 mRNA를 검출하는 것과 같은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "면역 세포"라는 용어는 숙주 방어 메커니즘에 관련된 임의의 세포, 예를 들어, 전염증성 사이토카인을 생산하는 세포, 및 조직 손상 및/또는 질병 발병 기전에 참여하는 세포를 지칭한다. 면역 세포의 예로는 T 세포, B 세포, 자연 살해 세포, 호중구, 비만 세포, 대식 세포, 항원 제시 세포 (APC), 호염구 및 호산구가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
"항원 제시 세포" 또는 "APC"라는 용어는 당해 분야에서 인식되어 있으며, T 세포와 같은 특정 림프구에 의한 인식을 위해 항원을 처리하고 제시함으로써 세포성 면역 반응을 매개하는 면역 세포의 불균질 집단을 지칭한다. 예시적인 유형의 항원 제시 세포로는, 예를 들어, B 세포, 단핵구, 수지상 세포 및 랑게르한스 세포를 비롯한 전문 항원 제시 세포 뿐만 아니라, 예를 들어, 각질 형성 세포, 내피 세포, 성상 교세포, 섬유 아세포 및 희소 돌기 아교 세포를 비롯한 다른 항원 제시 세포가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 출원에서 사용되는 "항원 제시 세포"라는 용어는 생체내에서 발견되는 항원 제시 세포 및 생체내 세포로부터 유래된 시험관내 세포 배양물에서 발견되는 것들을 포함한다. 본 출원에서 사용되는 바와 같이, 항원 제시 세포는 또한 톨 유사 수용체 (예를 들어, TLR9)를 발현하거나 톨 유사 수용체 (예를 들어, TLR9)의 발현 수준을 조절하도록 유전적으로 변형된 것과 같은 인공적으로 변형된 APC를 포함한다.
"수지상 세포" 또는 "DC"라는 용어는 당해 분야에서 인식되어 있으며, 특화된 항원 감지 및 항원 제시 세포 (APC)의 불균질 집단을 지칭한다. 사람 DC는 형질 세포성 DC (pDC), 골수성 DC (mDC) 및 단핵구 유래 DC (MDDC)의 3가지 주요 하위 세트로 나누어진다. 문헌 [Schraml et al., Curr. Opin. Immunol., 32:13-20 (2015)]. DC의 하위 세트는 특유의 TLR 발현 패턴을 기반으로 식별될 수 있다. 예로서, DC (mDC)의 골수성 또는 "전통적" 서브 세트는 자극될 때 TLR 1~8을 발현하며, 활성화 마커 (예를 들어, CD80, CD86, MHC 클래스 I 및 II, CCR7), 전염증성 사이토카인 및 케모카인의 캐스케이드가 생성된다. 이러한 자극 및 생성된 발현의 결과는 항원 특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포 프라이밍이다. 이러한 DC는, 항원을 흡수하고 적절한 형태로 T 세포에 제시하는 증진된 능력을 획득한다. DC (pDC)의 형질 세포성 하위 세트는 활성화시 TLR7 및 TLR9를 발현하며, NK 세포 뿐만 아니라 T 세포의 활성화가 생성된다.
본 출원에서 사용되는 "항원"이라는 용어는 선천성 면역 반응과 적응성 면역 반응 둘 다를 포함하는 면역 반응을 유도할 수 있는 분자 또는 이의 항원성 단편을 지칭한다. 본 출원에서 사용되는 바와 같이, 항원은 단백질, 펩타이드, 다당류, 지질, 핵산, 특히, RNA 및 DNA, 뉴클레오타이드 및 기타 생물학적 또는 생화학적 물질일 수 있다. "면역 반응을 유도한다"라는 용어는 항원과 같은 자극에 반응하는 생체내 면역 세포의 자극을 지칭한다. 면역 반응은 세포성 면역 반응, 예를 들어, T 세포 및 대식 세포 자극과 체액성 면역 반응, 예를 들어, B 세포 및 보체 자극 및 항체 생산으로 이루어진다. 면역 반응은 항체 면역 검정, 증식 검정 등을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 당해 분야에서 널리 공지된 기술을 사용하여 측정될 수 있다.
"항원 단편" 및 "항체 결합 단편"이라는 용어는 본 출원에서 상호 교환적으로 사용된다. 본 출원에서 사용되는 항원성 단편은 특이적 반응에서 항원 결합 분자, 예를 들어, 항체와 복합체를 형성할 수 있다. 본 출원에서 언급된 특이적 반응은 항원 또는 항원성 단편이 다른 항원에 의해 유발될 수 있는 다수의 다른 항체가 아니라 이의 상응하는 항체와 고도로 선택적인 방식으로 반응할 것이다는 것을 나타낸다. 이러한 반응의 특이성은 항원내 하나 이상의 에피토프 (면역원성 결정 인자)의 존재에 의해 결정된다. 본 출원에서 사용되는 항원 또는 이의 항원성 단편은 하나의 에피토프를 가질 수 있거나, 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "T 세포 에피토프"라는 용어는 T 세포에 의해 생산된 항원의 임의의 에피토프를 지칭한다.
본 출원에서 사용되는 "종양 관련 항원" 또는 "TAA"라는 용어는 본 출원에서 제공되는 바와 같은 치료 또는 예방 치료를 받고 있는 (예를 들어, 치료학적 용량의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 또는 CpG-Ab 면역 컨쥬게이트를 투여 받고 있는) 암 환자에서 암 세포에 의해 또는 고형 종양의 기질에서 발현된 항원을 지칭한다. TAA는 본 출원에서 제공되는 치료 또는 예방 치료에서 표적화되거나 표적화되지 않을 수 있다. TAA는 암 세포 상에서 과발현, 돌연변이 또는 잘못 조절될 필요는 없지만, TAA가 정상 세포에서 갖는 것과 동일한 특징을 가질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 상기 TAA는 암 세포에서 과발현, 돌연변이 또는 잘못 조절될 수 있다. 상기 TAA는 단백질, 핵산, 지질 또는 기타 항원일 수 있다. 상기 TAA는 세포 표면 발현된 TAA, 세포내 TAA 또는 핵내 TAA일 수 있다. 고형 종양의 문맥에서, 상기 TAA는 고형 종양 덩어리의 기질에서 발현될 수 있다. 본 출원에서 사용되는 "기질"이라는 용어는 암 세포 이외의 다른 고형 종양 덩어리의 성분을 지칭한다. 예를 들어, 상기 기질은 섬유 아세포, 상피 세포, 기타 혈관 성분 또는 세포외 기질 성분을 포함할 수 있다. 본 출원에서 사용되는 "기질"이라는 용어는 면역 세포 (예를 들어, B 세포, T 세포, 수지상 세포, 대식 세포, 자연 살해 세포 등)와 같은 면역계의 성분을 포함하지 않는다. 다양한 TAA는 당해 분야에 공지되어 있다. TAA의 확인은 문헌 [Zhang et al., Methods Mol. Biol., 520:1-10 (2009)]에 기재된 바와 같은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
"항체", "면역글로불린" 및 "Ig"라는 용어는 본 출원에서 상호 교환적으로 사용되며, 광의의 의미로 사용되고, 구체적으로, 예를 들어, 개별 단클론 항체 (작용제, 길항제, 중화 항체 포함, 전장 또는 온전한 단클론 항체 포함), 다중 에피토프 또는 단일 에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 적어도 2개의 온전한 항체로부터 형성된, 다클론 또는 1가 항체, 다가 항체, 다중 특이적 항체 (예를 들어, 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이중 특이적 항체), 단일 쇄 항체 및 항체 단편을 포함한다. 항체는 사람, 사람화, 키메라 및/또는 친화성 성숙된 항체일 수 있을 뿐만 아니라 다른 종, 예를 들어, 마우스 및 래빗 유래의 항체일 수 있다.
"항체"라는 용어는, 특정 항원에 결합할 수 있고 2개의 동일한 폴리펩타이드 쇄 쌍으로 구성된 폴리펩타이드의 면역글로불린 클래스 내의 B 세포의 폴리펩타이드 생성물을 포함하도록 의도되며, 여기서, 각각의 쌍은 하나의 중쇄 (약 50~70 kDa) 및 하나의 경쇄 (약 25 kDa)을 갖고, 각각의 쇄의 각각의 아미노 말단 부분은 약 100 내지 약 130개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 각각의 쇄의 각각의 카복실 말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 문헌 [Borrebaeck (ed.) (1995) Antibody Engineering, Second Ed., Oxford University Press.]; [Kuby (1997) Immunology, Third Ed., W.H. Freeman and Company, New York]을 참조한다. 항체로는 또한 합성 항체, 단클론 항체, 재조합 항체, 다중 특이적 항체 (이중 특이적 항체 포함), 사람 항체, 사람화 항체, 낙타화 (camelized) 항체, 키메라 항체, 인트라바디, 항-이디오타입 (항-Id) 항체, 및 단편이 유래되는 항체의 결합 활성의 일부 또는 전부를 보유하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드의 일부를 지칭하는 이의 기능적 단편이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 항체의 기능적 단편의 비제한적인 예로는 단일 쇄 Fv (scFv) (예를 들어, 단일 특이적 또는 이중 특이적 포함), Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, 다이설파이드 결합된 Fv (sdFv), Fd 단편, Fv 단편, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 미니바디가 포함된다. 특히, 본 출원에서 제공되는 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 예를 들어, 항원에 결합하는 항원 결합 부위 (예를 들어, 항-CD56 항체 또는 항-SIRPα 항체의 하나 이상의 상보성 결정 영역 (complementarity determining region: CDR))를 함유하는 항원 결합 도메인 또는 분자를 포함한다. 이러한 항체 단편은, 예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989)]; [Myers (ed.), Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.]; [Huston et al., Cell Biophysics 1993, 22, 189-224]; [Pluckthun and Skerra, Meth. Enzymol. 1989, 178, 497-515]; 및 [Day, Advanced Immunochemistry, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990)]에 기재되어 있다. 본 출원에서 제공되는 항체는 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 임의의 하위 클래스 (예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)의 면역글로불린 분자일 수 있다.
"항원"이라는 용어는, 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 미리 결정된 항원을 지칭한다. 표적 항원은 폴리펩타이드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐 또는 기타 자연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 하나의 실시 형태에서, 상기 표적 항원은 폴리펩타이드이다.
"항원 결합 단편", "항원 결합 도메인" 및 "항원 결합 영역"이라는 용어는, 항원과 상호 작용하고 항원에 대한 이의 특이성 및 친화성을 결합제에 부여하는 아미노산 잔기 (예를 들어, 상보성 결정 영역 (CDR))를 포함하는 항체의 부분을 지칭한다.
특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프 "에 대한 특이적 결합", "에 특이적으로 결합하는" 또는 "에 대해 특이적인"이라는 용어는, 예를 들어, 적어도 약 10-4 M, 적어도 약 10-5 M, 적어도 약 10-6 M, 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M 또는 적어도 약 10-12 M의 표적에 대한 해리 상수 (Kd)를 갖는 분자 (예를 들어, 항체)에 의해 나타낼 수 있다. 하나의 실시 형태에서, "특이적 결합"이라는 용어는, 분자가 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않고 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다.
4 쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된 이종 사량체성 당단백질이다. IgG의 경우, 상기 4 쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 하나의 공유 다이설파이드 결합에 의해 H 쇄에 연결되는 반면, 2개의 H 쇄는 H 쇄 이소타입에 따라 하나 이상의 다이설파이드 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L 쇄는 또한 규칙적으로 간격을 이룬 쇄내 브릿지를 가지고 있다. 각각의 H 쇄는 N-말단에 가변 도메인 (VH)에 이어서 α 및 γ 쇄 각각에 대한 3개의 불변 도메인 (CH) 및 μ 및 ε 이소타입에 대한 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N-말단에 가변 도메인 (VL)에 이어서 이의 다른 말단에 불변 도메인 (CL)을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄 (CH1)의 제1 불변 도메인과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이의 인터페이스를 형성하는 것으로 생각된다. VH와 VL의 쌍은 함께 단일 항원 결합 부위를 형성한다. 다양한 클래스의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Stites et al. (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6]을 참조한다.
"가변 영역" 또는 "가변 도메인"이라는 용어는, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 아미노 말단에 위치하고 중쇄에서 약 120 내지 130개 아미노산 및 경쇄에서 약 100 내지 110개 아미노산의 길이를 갖고 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용되는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 부분을 지칭한다. 중쇄의 가변 영역은 "VH"로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 "VL"로서 지칭될 수 있다. "가변"이라는 용어는, 가변 영역의 특정 분절이 항체들 사이의 서열에서 광범위하게 상이하다는 사실을 나타낸다. V 영역은 항원 결합을 매개하며, 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정의한다. 그러나, 가변성은 가변 영역의 110개 아미노산 범위 (span)에 걸쳐 고르게 분포되어 있지 않다. 대신에, V 영역은 각각 약 9~12개 아미노산 길이인 "초가변 영역"이라 불리는 보다 큰 가변성 (예를 들어, 극한 가변성)의 보다 짧은 영역에 의해 분리된 약 15~30개 아미노산의 프레임워크 영역 (framework region: FR)으로 불리는 보다 적은 가변 (예를 들어, 비교적 불변) 스트레치 (stretch)로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 각각은, 3개의 초가변 영역에 의해 연결되어 β 시트 구조를 연결하는 루프를 형성하고 일부 경우에는 β 시트 구조의 일부를 형성하는, β 시트 배열 형태를 주로 채택하는 4개의 FR을 포함한다. 각각의 쇄의 초가변 영역은 FR에 근접하여 함께 유지되며, 다른 쇄로부터의 초가변 영역과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다 (예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)] 참조). 불변 영역은 항체를 항원에 결합시키는데 직접 관여하지 않지만, 항체 의존적 세포독성 (ADCC) 및 보체 의존적 세포독성 (complement dependent cytotoxicity: CDC)에서 항체의 참여와 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체들 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다. 서열의 가변성은 CDR에 집중되는 반면, 가변 영역의 보다 적은 가변 부분은 프레임워크 영역 (FR)으로서 지칭된다. 경쇄 및 중쇄의 CDR은 항원과 항체의 상호 작용을 주로 담당한다. 구체적인 실시 형태에서, 상기 가변 영역은 사람 가변 영역이다.
"Kabat에서와 같은 가변 영역 잔기 넘버링" 또는 "Kabat에서와 같은 아미노산 위치 넘버링"이라는 용어 및 이의 변형은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에서 항체 편집물 (compilation)의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 사용되는 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 삽입에 상응하는 보다 적거나 추가의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 52번 잔기 이후의 단일 아미노산 삽입물 (Kabat에 따른 52a번 잔기) 및 82번 중쇄 FR 잔기 이후의 삽입된 잔기 (예를 들어, Kabat에 따른 82a번, 82b번 및 82c번 잔기 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 넘버링은 항체 서열과 "표준" Kabat 넘버링된 서열의 상동성 영역에서 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. Kabat 넘버링 시스템은 일반적으로 가변 도메인내 잔기 (대략 경쇄의 1~107번 잔기 및 중쇄의 1~113번 잔기)를 지칭할 때 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]). "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 인덱스"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기를 지칭할 때 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., 상기와 동일]에 보고된 EU 인덱스). "Kabat에서와 같은 EU 인덱스"는 사람 IgG 1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 예를 들어, AbM, Chothia, Contact, IMGT 및 AHon을 비롯한 다른 넘버링 시스템이 기술되어 있다.
"온전한" 항체는 CL 및 적어도 중쇄 불변 영역 CH1, CH2 및 CH3 뿐만 아니라 항원 결합 부위를 포함하는 항체이다. 상기 불변 영역은 사람 불변 영역 또는 이의 아미노산 서열 변이체를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 온전한 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 갖는다.
"항체 단편"이라는 용어는 온전한 항체의 일부, 바람직하게는 온전한 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 지칭한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디 및 디-디아바디 (예를 들어, 문헌 [Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1993, 90, 6444-8]; [Lu et al., J. Biol. Chem. 2005, 280, 19665-72]; [Hudson et al., Nat. Med. 2003, 9, 129-134]; 국제공개공보 WO 93/11161; 및 미국 특허 US 5,837,242 및 US 6,492,123 참조); 단일 쇄 항체 분자 (예를 들어, 미국 특허 US 4,946,778; US 5,260,203; US 5,482,858 및 US 5,476,786 참조); 이중 가변 도메인 항체 (예를 들어, 미국 특허 US 7,612,181 참조); 단일 가변 도메인 항체 (SdAb) (예를 들어, 문헌 [Woolven et al., Immunogenetics 1999, 50, 98-101]; [Streltsov et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2004, 101, 12444-12449] 참조); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이적 항체가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
항체의 "기능적 단편", "결합 단편"또는 "항원 결합 단편"이라는 용어는 온전한 항체에 기인하는 생물학적 기능 중 적어도 하나를 나타내는 분자를 지칭하며, 이러한 기능은 표적 항원에 대한 결합을 적어도 포함한다.
항체와 관련하여 사용될 때 "중쇄"라는 용어는 약 50~70 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서, 아미노-말단 부분은 약 120 내지 130개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역, 및 불변 영역을 포함하는 카복실 말단 부분을 포함한다. 상기 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 기준으로 하여 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ) 및 뮤 (μ)로서 지칭되는 5개의 특유의 유형 (예를 들어, 이소 타입) 중 하나일 수 있다. 특유의 중쇄는 크기가 상이하다: α, δ 및 γ는 약 450개의 아미노산을 포함하는 반면, μ 및 ε은 약 550개의 아미노산을 포함한다. 경쇄와 조합될 때, 이러한 특유의 유형의 중쇄는 IgG의 4개의 하위 클래스, 즉, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 비롯하여 각각 5개의 널리 공지된 항체의 클래스 (예를 들어, 이소타입), 즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 생성한다. 중쇄는 사람 중쇄일 수 있다.
항체와 관련하여 사용될 때 "경쇄"라는 용어는 약 25 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서, 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역, 및 불변 영역을 포함하는 카복실 말단 부분을 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217개의 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 하여 람다 (λ)와 카파 (κ)로서 지칭되는 2개의 특유의 유형이 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 경쇄는 사람 경쇄일 수 있다.
본 출원에서 사용되는 "단클론 항체"라는 용어는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 예를 들어, 상기 집단을 구성하는 각각의 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하고, 각각의 단클론 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 구체적인 실시 형태에서, 본 출원에서 사용되는 "단클론 항체"는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포에 의해 생산된 항체이며, 여기서, 상기 항체는, 예를 들어, 당해 분야에서 공지된 ELISA 또는 다른 항원 결합 또는 경쟁적 결합 검정에 의해 결정될 때 베타 클로토 (klotho) 에피토프에만 결합한다. "단클론"이라는 용어는 항체를 제조하기 위한 임의의 특정 방법에 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 본 개시 내용에 유용한 단클론 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature 1975, 256, 495]에 처음 기재된 하이브리도마 방법론에 의해 제조될 수 있거나; 세균, 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 US 4,816,567 참조). 상기 "단클론 항체"는 또한, 예를 들어, 문헌 [Clackson et al., Nature 1991, 352, 624-628] 및 [Marks et al., J. Mol. Biol. 1991, 222, 581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클론 세포주 및 이에 의해 발현된 단클론 항체의 다른 제조 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참조). 단클론 항체를 생산하는 예시적인 방법은 본 출원의 실시예에서 제공된다.
비-사람 (예를 들어, 쥐과 동물) 항체의 "사람화" 형태는, 본래의 CDR 잔기가 묵적하는 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 마우스, 래트, 래빗 또는 비-사람 영장류와 같은 비-사람 종의 상응하는 CDR 유래의 잔기 (예를 들어, 공여자 항체)로 대체되는 사람 면역글로불린 (예를 들어, 수여자 항체)을 포함하는 키메라 항체이다. 일부 경우에서, 상기 사람 면역글로불린의 하나 이상의 FR 영역 잔기는 상응하는 비-사람 잔기로 대체된다. 또한, 사람화 항체는 수여자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 추가로 개선하기 위해 수행된다. 사람화 항체 중쇄 또는 경쇄는 실질적으로 적어도 하나 이상의 가변 영역 전부를 포함할 수 있으며, 여기서, CDR의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-사람 면역글로불린의 것들에 상응하고, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 사람 면역글로불린 서열의 것들이다. 특정 실시 형태에서, 상기 사람화 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 일부, 전형적으로는 사람 면역글로불린의 일부를 적어도 포함할 것이다. 추가의 세부 사항에 대해서는 문헌 [Jones et al., Nature 1986, 321, 522-525]; [Riechmann et al., Nature 1988, 332, 323-329]; [Presta, Curr. Opin. Biotechnol. 1992, 3, 394-398]; [Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1992, 89, 4285-4289]; 및 미국 특허 US 6,800,738, US 6,719,971, US 6,639,055, US 6,407,213 및 US 6,054,297을 참조한다.
"사람 항체"는, 사람에 의해 생산된 항체의 것에 상응하고/하거나 본 출원에서 개시된 바와 같은 사람 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 사람 항체의 이러한 정의는 비-사람 항원 결합 잔기를 포함하는 사람화 항체를 구체적으로 배제한다. 파지 디스플레이 라이브러리 (문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 1991, 227, 381]; [Marks et al., J. Mol. Biol. 1991, 222, 581] 및 효모 디스플레이 라이브러리 (문헌 [Chao et al., Nature Protocols 2006, 1, 755-768])를 비롯한 사람 항체는 당해 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)]; [Boerner et al., J. Immunol. 1991, 147, 86-95]에 기재된 방법이 또한 사람 단클론 항체의 제조에 이용 가능하다. 또한, 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 2001, 5, 368-374]을 참조한다. 사람 항체는, 항원 시험 감염 (challenge)에 반응하여 이러한 항체를 생산하도록 변형되었지만 내인성 유전자좌가 무력화된 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)에게 항원을 투여하여 제조될 수 있다 (예를 들어, XENOMOUSETM 기술에 관한 문헌 [Jakobovits, Curr. Opin. Biotechnol. 1995, 6, 561-566]; [Bruggemann and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8, 455-458]; 및 미국 특허 US 6,075,181 및 US 6,150,584] 참조). 또한, 예를 들어, 사람 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 사람 항체에 관한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2006, 103, 3557-3562]을 참조한다.
"CDR"은 면역글로불린 (Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역내 3개의 초가변 영역 (H1, H2 또는 H3) 중 하나, 또는 상기 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역 (L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다. CDR 영역은 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, Kabat에 의해 항체 가변 (V) 도메인 내에서 대부분의 초가변성의 영역으로서 정의되었다. 문헌 [Kabat et al., J. Biol. Chem. 1977, 252, 6609-6616]; [Kabat, Adv. Protein Chem. 1978, 32, 1-75]. CDR 영역 서열은 또한 보존된 β-시트 프레임워크의 일부가 아닌 잔기로서 Chothia에 의해 구조적으로 정의되었으므로, 다른 형태에 맞게 조정될 수 있다. 문헌 [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 1987, 196, 901-917]. 두 용어 모두 당해 분야에서 잘 공지되어 있다. CDR 영역 서열은 또한 AbM, Contact 및 IMGT에 의해 정의되었다. 표준 항체 가변 영역 내의 CDR의 위치는 수많은 구조의 비교에 의해 결정되었다. 문헌 [Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 1997, 273, 927-948]; [Morea et al., Methods. 2000, 20, 267-279]. 초가변 영역 내의 잔기 수는 상이한 항체에서 달라지기 때문에, 표준 위치에 상대적인 추가의 잔기는 통상적으로 표준 가변 영역 넘버링 방식의 잔기 번호 바로 옆에 a, b, c 등으로 넘버링된다. 문헌 [Al-Lazikani et al., 상기와 동일 (1997)]. 이러한 명명법은 유사하게 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
"초가변 영역", "HVR" 또는 "HV"라는 용어는 본 출원에서 사용될 때 서열에서 초가변이고/거나 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체 가변 영역의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 초가변 영역을 포함하며; VH (H1, H2, H3)에 3개, VL (L1, L2, L3)에 3개가 있다. 다수의 초가변 영역 묘사가 사용되고 있으며, 본 출원에 포함된다. Kabat 상보성 결정 영역 (CDR)은 서열 가변성을 기반으로 하며, 가장 일반적으로 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 참조). Chothia는 대신 구조 루프의 위치를 나타낸다. 예를 들어, 문헌 [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 1987, 196, 901-917]을 참조한다. Kabat 넘버링 규칙을 사용하여 넘버링할 때, Chothia CDR-H1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34 사이에서 달라진다 (이는 Kabat 넘버링 체계가 삽입물을 H35A 및 H35B에 위치시키기 때문이고; 35A 또는 35B가 존재하지 않는 경우, 루프는 32에서 종결하고; 35A만이 존재하는 경우, 루프는 33에서 종결하고, 35A와 35B 둘 다가 존재하는 경우, 루프는 34에서 종결한다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 사이의 절충 (compromise)을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Martin, in Antibody Engineering, Vol. 2, Chapter 3, Springer Verlag] 참조). "Contact" 초가변 영역은 이용 가능한 복잡한 결정 구조의 분석에 기초한다. 이러한 각각의 초가변 영역 또는 CDR로부터의 잔기는 하기에서 언급된다.
최근, ImMunoGeneTics (IMGT) Information System이라는 범용 넘버링 시스템이 개발되어 널리 채택되었다. 문헌 [Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol. 2003, 27, 55-77]. IMGT는 사람 및 기타 척추 동물의 면역글로불린 (IG), T 세포 수용체 (TR) 및 주요 조직 적합성 복합체 (major histocompatibility complex: MHC)를 전문으로 하는 통합 정보 시스템이다. 여기서, CDR은 아미노산 서열과 경쇄 또는 중쇄 내의 위치 둘 다의 관점에서 지칭된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내에서 CDR의 "위치"는 구조적 특징, CDR 및 프레임워크 잔기에 따라 가변 도메인 서열을 정렬하는 넘버링 시스템을 사용하여 종들 사이에 보존되고 루프라고 하는 구조에 존재하며 용이하게 식별된다. 이러한 정보는 한 종의 면역글로불린 유래의 CDR 잔기를 전형적으로 사람 항체 유래의 수용체 프레임워크로 이식하고 대체하는데 사용할 수 있다. 추가의 넘버링 시스템 (AHon)이 문헌 [Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 2001, 309, 657-670]에 의해 개발되었다. 예를 들어, Kabat 넘버링 및 IMGT 고유 넘버링 시스템을 비롯한 넘버링 시스템 사이의 관련성은 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다 (예를 들어, [Kabat, 상기와 동일]; [Chothia and Lesk, 상기와 동일]; [Martin, 상기와 동일]; [Lefranc et al., 상기와 동일] 참조). 본 출원에서 제시된 예시적인 시스템은 Kabat와 Chothia를 조합한다.
초가변 영역은 다음과 같이 "확장 초가변 영역"을 포함할 수 있다: VL 중의 24~36 또는 24~34 (L1), 46~56 또는 50~56 (L2), 및 89~97 또는 89~96 (L3), 및 VH 중의 26~35 또는 26~35A (H1), 50~65 또는 49~65 (H2), 및 93~102, 94~102, 또는 95~102 (H3). 본 출원에서 사용되는 "HVR" 및 "CDR"이라는 용어는 상호 교환적으로 사용된다.
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"불변 영역" 또는 "불변 도메인"이라는 용어는, 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만 Fc 수용체와의 상호 작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타내는 경쇄 또는 중쇄의 카복실 말단 부분이다. 상기 용어들은, 항원 결합 부위를 함유하는 면역글로불린의 다른 부분, 즉, 가변 도메인에 비해 더욱 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 영역과 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기라는 용어는 CDR을 플랭킹 (flanking)하는 이러한 가변 영역 잔기이다. FR 잔기는, 예를 들어, 키메라, 사람화, 사람, 도메인 항체, 디아바디, 선형 항체 및 이중 특이적 항체에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 다른 이러한 가변 도메인 잔기이다.
"친화성 성숙" 항체는 이러한 변경(들)을 갖지 않는 모 항체와 비교하여 항원에 대한 항체의 친화성 개선을 초래하는 하나 이상의 HVR에서 하나 이상의 변경 (예를 들어, 변화, 부가 및/또는 결실을 비롯한 아미노산 서열 변형)을 갖는 항체이다. 바람직한 친화성 성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노 몰 또는 심지어 피코 몰 친화성을 가질 것이다. 친화성 성숙 항체는 당해 분야에 공지에 공지된 절차에 의해 생산된다. 검토를 위해, 문헌 [Hudson and Souriau, Nat. Med. 2003, 9, 129-134]; [Hoogenboom, Nat. Biotechnol. 2005, 23, 1105-1116]; [Quiroz and Sinclair, Revista Ingenieria Biomedica 2010, 4, 39-51]을 참조한다.
"차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 항원의 결합을 억제하거나 감소시키는 항체이다. 특정 실시 형태에서, 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 결합을 실질적으로 또는 완전히 차단한다. 특정 실시 형태에서, "차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 항체이다. 다른 실시 형태에서, 상기 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제한다. 예를 들어, 차단 항-SIRP 항체는 SIPRα와 CD47 사이의 상호 작용을 실질적으로 또는 완전히 방지한다.
"비차단" 항체는 항원의 결합을 억제하거나 감소시키지 않는 항체이다. 특정 실시 형태에서, "비차단" 항체는 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키지 않는 항체이다. 다른 실시 형태에서, 비차단 항체는, 항원이 결합하는 특유의 비중첩 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 비차단 항체는 작용제 항체이다.
"작용제 항체"는 반응을 촉발하는 항체, 예를 들어, 관심 대상 폴리펩타이드의 기능적 활성 중 적어도 하나를 모방하는 항체이다. 작용제 항체는 리간드 모방체인 항체를 포함하며, 예를 들어, 여기서, 리간드는 세포 표면 수용체에 결합하고, 이러한 결합은 세포간 세포 신호 전달 경로를 통해 세포 신호 전달 또는 활성을 유도하고, 상기 항체는 유사한 세포 신호 전달 또는 활성화를 유도한다.
항체 "이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역 (예를 들어, 본래의 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 지칭하며, 항체 이소타입에 따라 다양하다. 항체 이펙터 기능 기능의 예는 다음과 같다: C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체 의존적 세포 매개성 세포독성 (ADCC); 식세포 작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화.
본 출원의 "Fc 영역"이라는 용어는, 예를 들어, 본래의 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양할 수 있지만, 사람 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 Cys226 위치의 아미노산 잔기로부터 또는 Pro230으로부터 이의 카복실 말단으로 신장되는 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신 (EU 넘버링 시스템에 따른 447번 잔기)은, 예를 들어, 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써, 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447번 잔기가 제거된 항체 집단, K447번 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447번 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다.
"치료하다", "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 병태, 장애 또는 질병, 또는 병태, 장애 또는 질병과 관련된 증상 중 하나 이상을 완화 또는 제거하거나; 또는 병태, 장애 또는 질병 자체의 원인(들)을 완화 또는 근절시키는 것을 포함하는 것을 의미한다.
"예방하다", "예방하는" 및 "예방"이라는 용어는 병태, 장애 또는 질병, 및/또는 이에 수반되는 증상의 발병을 지연시키고/거나 방지하거나; 대상체가 병태, 장애 또는 질병을 획득하는 것을 차단하거나; 병태, 장애 또는 질병을 획득할 대상체의 위험을 감소시키는 방법을 포함한다.
"접촉하는" 또는 "접촉"이라는 용어는, 생리학적 및/또는 화학적 효과가 이러한 접촉의 결과로 발생하도록 치료제와 세포 또는 조직을 함께 있게 하는 것을 지칭한다. 접촉은 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 발생할 수 있다. 하나의 실시 형태에서, 치료제는 세포에 대한 치료제의 효과를 결정하기 위해 세포 배양에서 (시험관내에서) 세포와 접촉된다. 또 다른 실시 형태에서, 치료제와 세포 또는 조직의 접촉은 접촉되는 세포 또는 조직을 갖는 대상체에 대한 치료제의 투여를 포함한다.
"치료학적 유효량"이라는 용어는 투여될 때 치료되는 병태, 장애 또는 질병의 증상 중 하나 이상의 발병을 예방하거나, 이를 어느 정도까지 완화하기에 충분한 화합물의 양을 포함하는 것을 의미한다. "치료학적 유효량"이라는 용어는, 연구원, 수의사, 의사 또는 임상의가 추구하고 있는 생물학적 분자 (예를 들어, 단백질, 효소, RNA 또는 DNA), 세포, 조직, 시스템, 동물 또는 사람의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하기에 충분한 화합물의 양을 또한 지칭한다.
"약제학적으로 허용되는 담체", "약제학적으로 허용되는 부형제", "생리학적으로 허용되는 담체" 또는 "생리학적으로 허용되는 부형제"라는 용어는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 용매 또는 캡슐화 물질과 같은 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 지칭한다. 하나의 실시 형태에서, 각각의 성분은 약제학적 제형의 다른 성분과 상용 가능하다는 의미에서 "약제학적으로 허용"되며, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응, 면역원성, 또는 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 기타 문제 또는 합병증 없이 사람 및 동물의 조직 또는 장기와 접촉하여 사용하기에 적합하다. 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd ed.]; [Allen Ed.: Philadelphia, PA, 2012; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7th ed.]; [Rowe et al., Eds.; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2012; Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.]; [Ash and Ash Eds.; Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.]; [Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009]을 참조한다.
본 출원에서 사용되는 "CpG-Ab 면역 컨쥬게이트" 또는 "CpG-Ab"라는 용어는 본 출원에 기재된 바와 같은 항체 (Ab) 또는 이의 항원 결합 단편과 CpG 함유 면역 자극 폴리뉴클레오타이드의 연결을 지칭한다.
본 출원에서 사용되는 "T 세포 작용제"라는 용어는 혼합된 출발 세포 집단으로부터 T 세포의 증식, 분화 및/또는 생존을 선택적으로 자극하는 임의의 제제를 지칭한다. 따라서, 생성된 세포 집단은 출발 세포 집단과 비교하여 증가된 수의 T 세포로 인해 풍부하다. 본 개시 내용에서 사용되는 T 세포 작용제는 T 세포 수용체 (T cell receptor: TCR)에 특이적으로 결합하는 항원 분자 뿐만 아니라 T 세포 공동 자극 분자를 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. T 세포 공동 자극 분자의 예로는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 및 CD83 리간드가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 특별한 실시 형태에서, 상기 T 세포 작용제는 T 세포 공동 자극 분자에 대한 항체이다. 특별한 실시 형태에서, 상기 T 세포 작용제는 종양 관련 항원 (tumor associated antigen: TAA)이다. 특별한 실시 형태에서, 상기 T 세포 작용제는 병원성 항원이다.
본 출원에서 사용되는 "면역 체크포인트" 또는 "면역 체크포인트 분자"는 신호를 조절하는 면역계의 분자이다. 면역 체크포인트 분자는 자극 체크포인트 분자 (즉, 신호 켜기) 또는 억제 체크포인트 분자 (즉, 신호 끄기)일 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 면역 체크포인트는 T 세포에 의해 또는 항원 제시 세포 (APC)에 의해 발현되는 단백질이다. 특정 유형의 암 세포는 면역 제거를 회피하기 위해 면역 체크포인트 단백질을 발현한다. 암 세포에 의해 발현되는 면역 체크포인트 단백질과 T 세포에 의해 발현되는 면역 체크포인트 단백질 사이의 상호 작용을 억제하기 위한 면역 체크포인트 조절제의 사용은 특정 암 치료에 효과적인 것으로 입증되었다.
본 출원에서 사용되는 "면역 체크포인트 조절제"는 대상체에서 면역 체크포인트의 활성을 변경할 수 있는 제제이다. 특정 실시 형태에서, 면역 체크포인트 조절제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, LAG-3, CEACAM-1, CEACAM-5, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, CD47, 2B4 및 TGFR을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 하나 이상의 면역 체크포인트 분자의 기능을 변경한다. 상기 면역 체크포인트 조절제는 면역 체크포인트의 작용제 또는 길항제일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 면역 체크포인트 결합 단백질 (예를 들어, 항체, 항체 Fab 단편, 2가 항체, 항체 약물 컨쥬게이트, scFv, 융합 단백질, 2가 항체 또는 4가 항체)이다. 다른 실시 형태에서, 상기 면역 체크 포인트 조절제는 소분자이다. 특별한 실시 형태에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체이다.
본 출원에서 사용되는 "표적화 전달"이라는 용어 또는 "표적화하다"라는 동사 형태는, 전달된 제제 (예를 들어, 면역 자극 폴리뉴클레오타이드)가 임의의 다른 장기, 조직, 세포 또는 세포내 구획 (비표적화 위치로서 언급) 보다 더 많이 특정 장기, 조직, 세포 및/또는 세포내 구획 (표적화 위치로서 언급)에 도달하도록 촉진하는 과정을 지칭한다. 표적화 전달은, 예를 들어, 표적화 세포 집단의 전달된 제제의 농도를 전신 투여 후 비표적 세포 집단의 전달된 제제의 농도와 비교함으로써 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 본 출원에서 제공되는 바와 같이, 표적화 전달은 비표적 위치와 비교하여 표적화 위치에서 적어도 2배 더 높은 농도를 초래한다. 표적화된 전달은 표적화된 세포와 연관된 수용 모이어티에 대한 표적화 모이어티의 특이적 결합에 의해 달성될 수 있다. 본 출원에서 사용되는 바와 같이, 표적화된 세포와 관련된 수용 모이어티는 표적화된 세포의 표면 상에 또는 세포질 내에 위치할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 상기 수용 모이어티는 표적화 세포와 관련된 항원이다.
"DAR"이라는 용어는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 항체 컨쥬게이트의 약물-항체 비율, 보다 구체적으로는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드-항체 비율을 지칭한다.
면역 조절 폴리뉴클레오타이드
하나의 실시 형태에서, 면역 조절 (예를 들어, 면역 자극) 폴리뉴클레오타이드가 본 출원에서 제공된다.
특정 실시 형태에서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 5-변형된 우리딘 또는 5-변형된 사이티딘을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 5'-말단에서 (예를 들어, 2개의 5'-말단 뉴클레오사이드 사이에서) 5-변형된 우리딘 (예를 들어, 5-에티닐-우리딘)의 함유는 폴리뉴클레오타이드의 면역 조절 특성을 증진시킨다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 18 내지 28개의 뉴클레오타이드 길이인 대표적인 CpG ODN 보다 더 짧다 (예를 들어, 총 약 6 내지 약 16개의 뉴클레오타이드 또는 약 12 내지 약 14개의 뉴클레오타이드 포함). 특정 실시 형태에서, 상기 보다 짧은 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, 총 약 6 내지 약 16개의 뉴클레오타이드 또는 약 12 내지 약 14개의 뉴클레오타이드를 포함하는 것들)는 보다 긴 대표적인 CpG ODN의 면역 조절 활성을 보유하거나; 보다 긴 CpG ODN과 비교하여, 보다 높은 면역 조절 활성 (예를 들어, NFκB 활성화에 의해 또는 적어도 하나의 사이토카인 (예를 들어, IL-6 또는 IL-10)의 발현 수준 변화에 의해 측정될 때). 특정 실시 형태에서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 무염기성 스페이서를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르를 포함한다. 면역 조절 폴리펩타이드의 예시적인 기재 내용은 국제공개공보 WO 2018/189382에서 발견될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 이의 면역 자극 활성을 실질적으로 희생시키지 않으면서도 대부분 뉴클레오사이드간 포스페이트 (예를 들어, 50% 초과의 뉴클레오사이드간 포스페이트)를 함유하는 CpG ODN의 것 보다 우수한 안정성 (예를 들어, 뉴클레아제에 대한 안정성)을 나타낸다. 상기 효과는, 예를 들어, 적어도 50% (예를 들어, 적어도 70%) 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트를 도입하거나 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르 및/또는 뉴클레오사이드간 무염기성 스페이서의 함유를 통해 달성될 수 있다. 포스포트리에스테르 및 무염기성 스페이서는 또한 표적화 모이어티와의 컨쥬게이션에 간편하다. 포스페이트계 포스포트리에스테르 및 무염기성 스페이서는 또한 완전한 포스포로티오에이트 백본을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 비해 오프 표적 활성의 감소에 사용될 수 있다. 이론에 구속시키고자 하는 것은 아니지만, 이러한 효과는 표적 세포로의 표적화 잔기 매개성 전달을 방해하지 않으면서도 자기 전달을 감소시킴으로써 달성될 수 있다. 따라서, 본 출원에서 제공되는 폴리뉴클레오타이드는 약 15개 이하, 약 14개 이하, 약 13개 이하, 약 12개 이하, 약 11개 이하 또는 약 10개 이하의 인접 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 총 약 12 내지 약 16개의 뉴클레오사이드를 포함하는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 약 10개 이하의 인접 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 함유할 수 있다.
본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 총 약 50개 이하, 약 30개 이하, 약 28개 이하 또는 약 16개 이하의 뉴클레오사이드를 함유할 수 있다. 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 총 적어도 6개, 약 10개 이상 또는 약 12개 이상의 뉴클레오사이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 총 약 6 내지 약 30개, 약 6 내지 약 28개, 약 6 내지 약 20개, 약 6 내지 약 16개, 약 10 내지 약 20개, 약 10 내지 약 16개, 약 12 내지 약 28개, 약 12 내지 약 20개 또는 약 12 내지 약 16개의 뉴클레오사이드를 함유할 수 있다.
특정 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 포스포트리에스테르 (예를 들어, 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르) 및/또는 포스포로티오에이트 (예를 들어, 약 1 내지 약 6개 또는 약 1 내지 약 4개)를, 예를 들어, 하나 또는 두 개의 말단에 (예를 들어, 6개의 5'-말단 뉴클레오사이드 또는 6개의 3'-말단 뉴클레오사이드 내에) 포함한다. 하나 이상의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르 및/또는 포스포로티오에이트의 함유는 엑소뉴클레아제 매개성 분해 속도를 감소시킴으로써 폴리뉴클레오타이드의 안정성을 증진시킬 수 있다.
특정 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 포스포트리에스테르 또는 말단 포스포디에스테르를 포함하며, 여기서, 상기 포스포트리에스테르 또는 말단 포스포디에스테르는 표적화 모이어티 또는 컨쥬게이트 기 및 임의로 하나 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 6개)의 보조 모이어티에 결합된 링커를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 하나의 링커만을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 하나의 컨쥬게이트 기만을 포함한다.
본 출원에서 제공되는 폴리뉴클레오타이드는 가닥 및 이의 부분 또는 온전한 보체를 포함하는 하이브리드화된 폴리뉴클레오타이드일 수 있다. 상기 하이브리드화된 폴리뉴클레오타이드는 적어도 6개 (예를 들어, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22 또는 약 23개)의 상보성 염기 짝짓기를 함유된 보다 ?裏? 가닥에 존재하는 뉴클레오타이드의 총 수 이하로 가질 수 있다. 예를 들어, 하이브리드화된 폴리뉴클레오타이드의 하이브리드화 부분은 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22 또는 약 23개의 염기 쌍을 함유할 수 있다.
하나의 실시 형태에서, 하기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 입체 이성질체, 둘 이상의 부분 입체 이성질체의 혼합물, 호변 이성질체 또는 둘 이상의 호변 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 본 출원에서 제공된다:
[화학식 A]
Figure pct00013
상기 화학식 A에서,
XN은 각각 독립적으로 뉴클레오타이드이고;
X3'는 3' 말단 뉴클레오타이드이고;
X5'는 5' 말단 뉴클레오타이드이고;
YP는 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르이고;
b 및 c는 각각 약 0 내지 약 25의 범위의 정수이고; 단, 이들의 합은 5 이상이다.
특정 실시 형태에서, 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 변형된 핵 염기를 갖는 뉴클레오타이드를 포함한다.
특정 실시 형태에서, b는 약 1 내지 약 15의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 3, 약 4, 약 11 또는 약 14의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 3의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 4의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 11의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 14의 정수이다.
특정 실시 형태에서, c는 약 0 내지 약 10의 정수이다. 특정 실시 형태에서, c는 약 0, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9 또는 약 10의 정수이다. 특정 실시 형태에서, c는 약 0 또는 약 8의 정수이다. 특정 실시 형태에서, c는 약 0의 정수이다. 특정 실시 형태에서, c는 약 8의 정수이다.
특정 실시 형태에서, b는 약 3의 정수이고, c는 약 8의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 4의 정수이고, c는 약 8의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 11의 정수이고, c는 약 0의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b는 약 14의 정수이고, c는 약 0의 정수이다.
특정 실시 형태에서, b와 c는 함께 총 약 5 내지 약 20의 범위이다. 특정 실시 형태에서, b와 c는 함께 총 약 5 내지 약 15의 범위이다. 특정 실시 형태에서, b와 c는 함께 총 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b와 c는 함께 총 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13 또는 약 14의 정수이다. 특정 실시 형태에서, b와 c는 함께 총 약 11이다. 특정 실시 형태에서, b와 c는 함께 총 약 12이다. 특정 실시 형태에서, b와 c는 함께 총 약 14이다.
특정 실시 형태에서, XN은 각각 독립적으로 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 또는 2'-변형된 리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, XN은 각각 독립적으로 2'-데옥시아데노신 (A), 2'-데옥시구아노신 (G), 2'-데옥시사이티딘 (C), 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘 (T), 2'-데옥시우리딘 (U), 5-할로-2'-데옥시우리딘, 2'-플루오로리보뉴클레오타이드, 2'-메톡시리보뉴클레오타이드 또는 2'-(2-메톡시에톡시)리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, XN은 각각 독립적으로 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, XN은 각각 독립적으로 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, XN은 각각 독립적으로 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다.
특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 또는 2'-변형된 리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘, 5-할로-2'-데옥시우리딘, 2'-플루오로리보뉴클레오타이드, 2'-메톡시리보뉴클레오타이드 또는 2'-(2-메톡시에톡시)리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시티미딘이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 5-치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시티미딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시사이티딘, 5-요오도-2'-데옥시사이티딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X3'는 3' 캡핑 기를 포함하는 말단 뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, 상기 3' 캡핑 기는 말단 포스포에스테르이다. 특정 실시 형태에서, 상기 3' 캡핑 기는 3-하이드록실-프로필포스포릴 (즉, -P(O2)-OCH2CH2CH2OH)이다.
특정 실시 형태에서, X5'는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드 또는 2'-변형된 리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘, 5-할로-2'-데옥시우리딘, 2'-플루오로리보뉴클레오타이드, 2'-메톡시리보뉴클레오타이드 또는 2'-(2-메톡시에톡시)리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 5-치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 2'-데옥시티미딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 5-할로-2'-데옥시사이티딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 5-할로-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시사이티딘, 5-요오도-2'-데옥시사이티딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 5-브로모-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, X5'는 3'-포스포로티오에이트 기를 갖는다. 특정 실시 형태에서, X5'는 Rp의 키랄성을 갖는 3'-포스포로티오에이트 기를 갖는다. 특정 실시 형태에서, X5'는 Sp의 키랄성을 갖는 3'-포스포로티오에이트 기를 갖는다.
특정 실시 형태에서, YP는 뉴클레오사이드간 포스포티오트리에스테르이다.
특정 실시 형태에서, YP는
Figure pct00014
이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고; d는 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이다. 특정 실시 형태에서, Z는 O이다. 특정 실시 형태에서, Z는 S이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0 내지 약 10의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0 내지 약 5의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4 또는 약 5의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0, 약 1 또는 약 3의 정수이다.
특정 실시 형태에서, YP는
Figure pct00015
이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고; d는 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이다. 특정 실시 형태에서, YP는
Figure pct00016
이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고; d는 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이다. 특정 실시 형태에서, YP는
Figure pct00017
이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고; d는 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이다. 특정 실시 형태에서, Z는 O이다. 특정 실시 형태에서, Z는 S이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0 내지 약 10의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0 내지 약 5의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4 또는 약 5의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0, 약 1 또는 약 3의 정수이다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 하나의 추가의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르를 포함한다. 하나의 실시 형태에서, 상기 추가의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르는 C1-6 알킬포스포트리에스테르이다. 또 다른 실시 형태에서, 상기 추가의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르 에틸포스포트리에스테르이다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 자극 조절 폴리뉴클레오타이드는 하나의 5-할로-2'-데옥시우리딘을 포함한다. 하나의 실시 형태에서, 상기 5-할로-2'-데옥시우리딘은 5-플루오로-2'-데옥시우리딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다. 또 다른 실시 형태에서, 상기 5-할로-2'-데옥시우리딘은 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다. 더 또 다른 실시 형태에서, 상기 5-할로-2'-데옥시우리딘은 5-플루오로-2'-데옥시우리딘이다. 더 또 다른 실시 형태에서, 상기 5-할로-2'-데옥시우리딘은 5-브로모-2'-데옥시우리딘이다. 더 또 다른 실시 형태에서, 상기 5-할로-2'-데옥시우리딘은 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 3개 이상의 2'-데옥시사이티딘을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 3개의 2'-데옥시사이티딘을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 4개 이상의 2'-데옥시구아노신을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 4개의 2'-데옥시구아노신을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 2'-데옥시사이티딘 및 4개의 2'-데옥시구아노신을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 1, 2 또는 3개의 CG 디뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 3개의 CG 디뉴클레오타이드를 포함한다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 3개 이상의 2'-데옥시티미딘을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 2'-데옥시티미딘을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 3, 4, 5 또는 8개의 2'-데옥시티미딘을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 2'-데옥시아데노신을 포함하지 않는다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 1 또는 2개의 2'-데옥시아데노신을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 약 5 내지 20 또는 약 6 내지 약 15의 범위의 길이를 갖는다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15의 길이를 갖는다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14 또는 약 15의 길이를 갖는다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 추가의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 중의 모든 뉴클레오사이드간 포스포에스테르는 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트이다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 자극 조절 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 키랄성 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 포함한다.
특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 p275, p276, p313 또는 p347이다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 p236, p238, p243, p246, p308, p361, p362 또는 p425이다. 특정 실시 형태에서, 상기 화학식 A의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 p236, p238, p243, p246, p275, p276, p308, p313, p347, p361, p362, p425, p433, p434, p435, p436, p437, p438, p477, p478, p479, p480, p481, p482, p483, p484, p485, p486, p487, p488 또는 p489이다.
하나의 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)의 서열을 갖는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 입체 이성질체, 둘 이상의 부분 입체 이성질체의 혼합물, 호변 이성질체 또는 둘 이상의 호변 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 본 출원에서 제공되며; 여기서,
x는 약 1 내지 약 4의 정수이고;
N1은 부재하거나 2'-데옥시티미딘이고;
N2는 변형된 핵 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이고;
N3은 3'-포스포트리에스테르를 각각 임의로 로함하는 2'-데옥시아데노신 또는 2'-데옥시티미딘이고;
N4는 2'-데옥시아데노신 또는 2'-데옥시티미딘이고;
N5는 3'-포스포트리에스테르를 임의로 포함하는 2'-데옥시티미딘이고;
C는 2'-데옥시사이티딘이고, G는 2'-데옥시구아노신이다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, x는 약 1, 약 2, 약 3 또는 약 4의 정수이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, x는 약 1의 정수이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, x는 약 4의 정수이다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N1은 부재한다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N1은 2'-데옥시티미딘이다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N2는 치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N2는 5-치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N2는 5-할로-2'-데옥시사이티딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N2는 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘이다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N3은 3'-포스포트리에스테르를 포함하는 2'-데옥시아데노신이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N3은 2'-데옥시티미딘이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N3은 3'-포스포트리에스테르를 포함하는 2'-데옥시티미딘이다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N4는 2'-데옥시아데노신이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N4는 2'-데옥시티미딘이다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N5는 2'-데옥시티미딘이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)에서, N5는 3'-포스포트리에스테르를 포함하는 2'-데옥시티미딘이다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 포함한다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 적어도 하나의 키랄성 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 포함한다.
특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 p275, p276 또는 p313이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T (서열 번호 586)의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 p236, p238, p243, p246, p308, p361, p362 또는 p425이다. 특정 실시 형태에서, N1N2CGN3CG(T)xGN4CGN5T의 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 p236, p238, p243, p246, p275, p276, p308, p313, p347, p361, p362, p425, p433, p434, p435, p436, p437, p438, p477, p478, p479, p480, p481, p482, p483, p484, p485, p486, p487, p488 또는 p489이다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 PAMS로서의 기능을 한다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 TLR9 신호 전달을 촉발시킴으로써 선천성 면역 반응을 활성화시키거나 적응성 면역 반응을 자극한다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 TLR9 작용제이다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 클래스 B CpG 폴리뉴클레오타이드, 또는 5-할로우리딘 또는 5-알키닐우리딘 또는 이의 절단된 버전 (예를 들어, 총 약 6 내지 약 16개의 뉴클레오사이드를 포함하는 것들)을 포함하는 이의 변형이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 절단된 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 절단된 클래스 B CpG 폴리뉴클레오타이드 서열 (예를 들어, 하나 이상의 3'-말단 뉴클레오타이드가 제거되거나 서열내 뉴클레오타이드 중 하나 이상이 삭제되는 클래스 B CpG 폴리뉴클레오타이드 서열)을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 적어도 하나의 면역 자극 서열 (ISS)을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 약 1, 약 2, 약 3 또는 약 4개의 ISS를 포함한다. 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 중의 ISS는 표적화 유기체에 의존적이다. 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드에 사용되는 ISS의 일반적인 특징은 사이티딘-p-구아노신 서열이며, 여기서, p는 뉴클레오사이드간 포스포디에스테르 (예를 들어, 포스페이트 또는 포스포로티오에이트) 또는 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르이다. 특정 실시 형태에서, ISS 중의 사이티딘 및 구아노신은 각각 독립적으로 2'-데옥시리보오스를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 약 1, 약 2 또는 약 3개의 ISS를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 사람 ISS는 C G 또는 N C G 이며, 여기서, N 은 우리딘, 사이티딘 또는 티미딘, 또는 변형된 우리딘 또는 사이티딘이고; G 는 구아노신 또는 변형된 구아노신이다. 특정 실시 형태에서, 상기 변형된 우리딘 또는 사이티딘은 5-할로우리딘 (예를 들어, 5-요오도우리딘 또는 5-브로모우리딘), 5-알키닐우리딘 (예를 들어, 5-에티닐우리딘 또는 5-프로피닐우리딘), 5-헤테로아릴우리딘 또는 5-할로사이티딘이다. 특정 실시 형태에서, 상기 변형된 구아노신 7-데아자구아노신이다. 특정 실시 형태에서, 상기 사람 ISS는 N C G 이고, 하나의 실시 형태에서, N 은 5-할로우리딘이다. 특정 실시 형태에서, 상기 사람 ISS는 U C G 이고, 하나의 실시 형태에서, U 는 5-알키닐우리딘이고, 또 다른 실시 형태에서, U 는 5-에티닐우리딘이다. 특정 실시 형태에서, 사람을 표적화하는 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 5'-말단 뉴클레오타이드를 포함하는 4개의 인접 뉴클레오타이드 내에 ISS를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 사람을 표적화하는 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 5'-말단 ISS를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 쥐과 동물 ISS를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 쥐과 동물 ISS는 Pu-Pu-CG-Py-Py의 6량체 뉴클레오타이드 서열이며, 여기서, Pu는 각각 독립적으로 퓨린 뉴클레오타이드이고, Py는 각각 독립적으로 피리미딘 뉴클레오타이드이다.
특정 실시 형태에서, 상기 5'-플랭킹 뉴클레오타이드는 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 중의 CpG에 비해 2'-알콕시리보오스를 함유하지 않는다. 특정 실시 형태에서, 상기 5'-플랭킹 뉴클레오타이드는 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 중의 CpG에 비해 당으로서 2'-데옥시리보오스만을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 (1) 포스포로티오에이트의 함량이 높고 (예를 들어, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% 또는 적어도 80%의 뉴클레오사이드가 포스포로티오에이트에 의해 연결될 수 있다); (2) 폴리-G 테일이 부재하고; (3) 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드가 2'-데옥시리보오스 또는 2'-변형된 리보오스 (예를 들어, 2'-할로 (예를 들어, 2'-플루오로) 또는 임의로 치환된 2'-알콕시 (예를 들어, 2'-메톡시))를 포함하고/하거나; (4) N C G 인 5'-말단 ISS이고, 여기서, N 은 우리딘, 사이티딘 또는 티미딘 또는 변형된 우리딘 또는 사이티딘이고, G 는 구아노신 또는 변형된 구아노신이다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 (예를 들어, TLR9 길항 작용을 통해) TLR9 신호 전달의 활성화를 감소시킴으로써 적응성 면역 반응을 억제한다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 억제 폴리뉴클레오타이드는 화학식 N1-N2-CG에 의해 기재되는 바와 같이 CpG에 비해 적어도 2개의 5'-플랭킹인 2'-알콕시뉴클레오타이드를 포함하며, 여기서, N1 및 N2는 각각 독립적으로 2'-알콕시리보오스 (예를 들어, 2'-메톡시리보오스)를 함유하는 뉴클레오타이드이다.
면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 구조적 특징
무염기성 스페이서
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상, 하나의 실시 형태에서, 하나 또는 두 개의 무염기성 스페이서를 포함하며, 여기서, 이들은 각각 독립적으로 뉴클레오사이드간 무염기성 스페이서 또는 말단 무염기성 스페이서이다. 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 2개 이상의 무염기성 스페이서를 포함할 때, 상기 무염기성 스페이서의 구조는 동일하거나 상이할 수 있다.
하나의 실시 형태에서, 상기 무염기성 스페이서는 하기 화학식 I을 갖는다:
[화학식 I]
R1-L1-[-L2-(L1)n1-]n2-R2
상기 화학식 I에서,
n1은 약 0 또는 약 1의 정수이고,
n2는 약 1 내지 약 6의 정수이다.
R1은 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고,
R2는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드 또는 캡핑 (capping) 기에 대한 결합이고,
L1은 각각 독립적으로 포스포디에스테르 또는 포스포트리에스테르이고,
L2는 각각 당 유사체이고,
특정 실시 형태에서, 상기 무염기성 스페이서가 뉴클레오사이드간 무염기성 스페이서인 경우, n1은 약 1이고, R2는 뉴클레오사이드에 대한 결합이고; 상기 무염기성 스페이서가 말단 무염기성 스페이서인 경우, n1은 약 0 또는 약 1이고, R2는 캡핑 기에 대한 결합이다.
특정 실시 형태에서, 상기 무염기성 스페이서는 뉴클레오사이드간 무염기성 스페이서이다. 특정 실시 형태에서, 상기 무염기성 스페이서는 3'-말단 무염기성 스페이서이다. 특정 실시 형태에서, 2개의 인접한 L2 기는 각각 L1 기에 의해 분리된다 (예를 들어, n1은 2개의 인접 L2 기들 사이에 배치된 L1에 대해 1이다).
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 자극 폴리뉴클레오타이드는 상기 면역 자극 폴리뉴클레오타이드의 5'-말단 뉴클레오타이드를 포함하는 4개의 인접 뉴클레오타이드 내에 배치된 ISS를 포함하며, 여기서, 상기 ISS는 N C G 이고, 여기서, N 은 우리딘, 사이티딘 또는 티미딘, 또는 변형된 우리딘 또는 사이티딘, 하나의 실시 형태에서, 5-할로우리딘 (예를 들어, 5-요오도우리딘 또는 5-브로모우리딘), 5-알키닐우리딘 (예를 들어, 5-에티닐우리딘 또는 5-프로피닐우리딘), 5-헤테로아릴우리딘 또는 5-할로사이티딘이고; N 과 C는 포스포디에스테르 또는 포스포트리에스테르를 통해 서로 연결된다.
당 유사체
하나의 실시 형태에서, 당 유사체는 2개의 하이드록실 기를 (i) 하나의 포스포에스테르 중의 산소 원자에 및 (ii) 또 다른 포스포에스테르 중의 산소 원자에 또는 캡핑 기에 대한 결합으로 대체하도록 변형되는 C3-6 단당류 또는 C3-6 알디톨 (예를 들어, 글리세롤)인 2가 또는 3가 기이다. 당 유사체는 사이클릭 또는 어사이클릭이다. 당 유사체에 포함된 추가의 선택적 변형은 다음과 같다: H; 임의로 치환된 C1-6 알킬; 본 출원에서 정의된 바와 같은 -LinkA(-T)p; 컨쥬게이트 기; -(CH2)t1-ORZ (여기서, t1은 약 1 내지 약 6의 정수이고, RZ는 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C6-14 아릴, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 (C1-9 헤테로사이클릴)-C1-6-알킬, 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬 또는 임의로 치환된 (C3-8 사이클로알킬)-C1-6-알킬이다)에 의한 나머지 하이드록실 기 또는 탄소-결합된 수소 원자 중 1, 2 또는 3개의 대체; 1개 또는 2개의 불포화(들) (예를 들어, 1개 또는 2개의 이중 결합)의 도입; 및 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 또는 헤테로사이클릴에 의한 1, 2 또는 3개의 수소 원자 또는 하이드록실 기의 대체. 일부 실시 형태에서, RZ는 임의로 치환된 C1-6 아미노알킬 (예를 들어, -NH2를 함유하는 임의로 치환된 C1-6 아미노 알킬)이다.
당 유사체의 비제한적인 예로는 임의로 치환된 C2-6　알킬렌, 임의로 치환된 C2-6　알케닐렌, 임의로 치환된 C5 사이클로알칸-1,3-디일, 임의로 치환된 C5 사이클로알켄-1,3-디일, 임의로 치환된 헤테로사이클-1,3-디일 (예를 들어, 임의로 치환된 피롤리딘-2,5-디일, 임의로 치환된 테트라하이드로푸란-2,5-디일 또는 임의로 치환된 테트라하이드로티오펜-2,5-디일) 또는 임의로 치환된 (C1-4 알킬)-(C3-8 사이클로알킬렌) (예를 들어, 임의로 치환된 (C1 알킬)-(C3 사이클로알킬렌))이 있다. 당 유사체의 비제한적인 예는
Figure pct00018
이며,
여기서,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 포스포에스테르 중의 산소 원자에 대한 결합이고;
R3 및 R4는 각각 독립적으로 H; 임의로 치환된 C1-6 알킬; -(CH2)t1-ORZ; 또는 -LinkA-RT이고;
여기서, t1은 약 1 내지 약 6의 정수이다.
RZ는 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C6-14 아릴, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 (C1-9 헤테로사이클릴)-C1-6-알킬, 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬, 또는 임의로 치환된 (C3-8 사이클로알킬)-C1-6-알킬이고;
LinkA는 링커이고;
RT는 표적화 모이어티에 대한 결합; 표적화 모이어티; 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C6-14 아릴, 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬, 임의로 치환된 (C1-9 헤테로사이클릴)-C1-6-알킬, 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬, 또는 임의로 치환된 (C3-8 사이클로알킬)-C1-6-알킬이다.
특정 실시 형태에서, RZ는 임의로 치환된 C1-6 아미노알킬 (예를 들어, -NH2를 함유하는 임의로 치환된 C1-6 아미노 알킬)이다.
포스포에스테르
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르 및/또는 하나 또는 두 개의 말단 포스포디에스테르 및/또는 포스포트리에스테르를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 포스포트리에스테르는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트를 포함하며, 여기서, 1개 또는 2개의 원자가는 뉴클레오사이드 및/또는 무염기성 스페이서로 치환되고, 나머지 원자가는 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커 또는 컨쥬게이트 기에 결합된다. 특정 실시 형태에서, 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르는 2개의 뉴클레오사이드 및/또는 무염기성 스페이서에 결합되며, 나머지 원자가는 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커 또는 컨쥬게이트 기에 결합된다. 특정 실시 형태에서, 뉴클레오사이드간 포스포디에스테르는 2개의 뉴클레오사이드 및/또는 무염기성 스페이서에 결합된다. 특정 실시 형태에서, 말단 포스포디에스테르는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트를 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 5'- 또는 3'-말단에 포함하며, 여기서, 나머지 2개의 원자가 중 하나는 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 표적화 모이어티에 결합된 링커 또는 컨쥬게이트 기에 결합된다.
링커 및 컨쥬게이션 모이어티
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 표적화 모이어티 및 임의로 하나 이상의 보조 모이어티에 결합된 링커를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 링커는 다가 기이며, 여기서, 제1 원자가는 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스페이트, 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스포로티오에이트, 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스포로디티오에이트, 무염기성 스페이서, 캡핑 기 또는 핵 염기에 결합되고, 제2 원자가는 표적화 모이어티에 결합된다. 특정 실시 형태에서, 상기 링커는 하나 이상의 원자가를 추가로 포함하며, 이들은 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합된다. 특정 실시 형태에서 (예를 들어, 상기 표적화 모이어티가 소분자일 때), 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 다중 표적화 모이어티에 다중 링커를 포함한다. 특정 실시 형태에서 (예를 들어, 상기 표적화 모이어티가 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 때), 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 표적화 모이어티에 하나의 링커를 포함한다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는 컨쥬게이트 기를 포함한다. 컨쥬게이트 기는 공액 반응, 예를 들어, 사이클화 첨가 반응 (예를 들어, 쌍극자 첨가 사이클화), 아미드화 반응 또는 친핵성 방향족 치환을 겪을 수 있는 작용기이다. 상보성 반응기와의 반응시, 컨쥬게이트 기는 본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드에서 링커를 생성한다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티에 결합된 링커는 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르의 부분이다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티에 결합된 링커는 무염기성 스페이서의 부분이다.
특정 실시 형태에서, 상기 링커 또는 컨쥬게이트 기는 하기 화학식 II를 갖는다:
[화학식 II]
-Z1-QA1-Z2-(-QA2-Z3-)k-RT
상기 화학식 II에서,
Z1은 3가 기, 4가 기 또는 5가 기이고, 여기서, 원자가 중 하나는 QA1에 결합되고, 제2 원자가는 개방되거나, 화학식 II가 링커에 대한 것인 경우, RT에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
Z2는 부재하거나 3가 기, 4가 기 또는 5가 기이고, 여기서, 원자가 중 하나는 QA1에 결합되고, 제2 원자가는 QA2 또는 RT에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
Z3은 부재하거나 3가 기, 4가 기 또는 5가 기이고, 여기서, 원자가 중 하나는 QA2에 결합되고, 제2 원자가는 RT에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
RT는 부재하거나 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
k는 약 0 또는 약 1의 정수이다.
화학식 II가 링커에 대한 것인 경우,
QA1 및 QA2는 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌 (예를 들어, -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-를 함유하는 헤테로알킬렌), 임의로 치환된 C1-12 티오헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00019
Figure pct00020
임의로 치환된 C1-12 헤테로사이클릴렌 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸-1,4-디일 또는
Figure pct00021
), 사이클로부트-3-엔-1,2-디온-3,4-디일, 피리드-2-일 하이드라존, 임의로 치환된 C6-16 트리아졸로헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00022
), 임의로 치환된 C8-16 트리아졸로사이클로알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00023
) 또는 디하이드로피리다진 기 (예를 들어, 트랜스-
Figure pct00024
, 트랜스-
Figure pct00025
또는
Figure pct00026
)이고;
RT는 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
단, QA1과 QA2 중 적어도 하나는 존재한다.
화학식 II가 컨쥬게이트 기에 대한 것인 경우,
(i) QA2는 부재하고, QA1은 표적화 모이어티, 예를 들어, 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00027
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00028
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00029
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00030
또는
Figure pct00031
), 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00032
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
k는 약 0의 정수이거나;
(ii) QA1는 링커에 대해 정의된 바와 같고, QA2은 표적화 모이어티, 예를 들어, 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00033
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00034
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00035
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00036
또는
Figure pct00037
), 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00038
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
k는 약 1의 정수이고;
여기서,
RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R13은 할로겐 또는 F이고;
Z3 및 RT는 부재한다.
특정 실시 형태에서, Z1은 분지성 기 (branching group) 및 2개의 2가 분절을 가지며, 여기서, 상기 분지성 기는 상기 2개의 2가 분절 각각에 결합되고,
여기서,
상기 2가 분절 중 하나는 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스페이트, 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스포로티오에이트, 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스포로디티오에이트, 무염기성 스페이서 또는 핵 염기이고, 나머지 2가 분절은 QA1에 결합되고;
상기 분지성 기는 임의로 치환된 C1-12 알칸-트리일 또는 임의로 치환된 C2-12 헤테로알칸-트리일이고, 여기서, 2개의 원자가는 상기 2가 분절로 치환되고, 나머지 원자가는
Figure pct00039
로 치환되고,
여기서,
p1은 약 1, 약 2 또는 약 3의 정수이고,
s2는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10의 정수이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌, 또는 -P(Z)(OH)-이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고;
QG는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일, 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고;
QH는 각각 독립적으로 RM1 또는 -QG[(-QB-QC-QD)s2-RM1]p1이며, 여기서, RM1은 각각 독립적으로 보조 모이어티에 대한 결합이다.
특정 실시 형태에서, Z2은 분지성 기 및 2개의 2가 분절을 가지며, 여기서, 상기 분지성 기는 상기 2개의 2가 분절 각각에 결합되고,
여기서,
상기 2가 분절 중 하나는 표적화 모이어티 또는 QA2에 결합되고, 나머지 2가 분절은 QA1에 결합되고;
상기 분지성 기는 임의로 치환된 C1-12 알칸-트리일 또는 임의로 치환된 C2-12 헤테로알칸-트리일이고, 여기서, 2개의 원자가는 상기 2가 분절로 치환되고, 나머지 원자가는
Figure pct00040
로 치환되고,
여기서,
p1은 약 1, 약 2 또는 약 3의 정수이고,
s2는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10의 정수이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌, 또는 -P(Z)(OH)-이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고;
QG는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일, 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고;
QH는 각각 독립적으로 RM1 또는 -QG[(-QB-QC-QD)s2-RM1]p1이며, 여기서, RM1은 각각 독립적으로 보조 모이어티에 대한 결합이다.
특정 실시 형태에서, Z3은 분지성 기 및 2개의 2가 분절을 가지며, 여기서, 상기 분지성 기는 상기 2개의 2가 분절 각각에 결합되고,
여기서,
상기 2가 분절 중 하나는 표적화 모이어티에 결합되고, 나머지 2가 분절은 QA2에 결합되고;
상기 분지성 기는 임의로 치환된 C1-12 알칸-트리일 또는 임의로 치환된 C2-12 헤테로알칸-트리일이고, 여기서, 2개의 원자가는 상기 2가 분절로 치환되고, 나머지 원자가는
Figure pct00041
로 치환되고,
여기서,
p1은 약 1, 약 2 또는 약 3의 정수이고,
s2는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10의 정수이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌, 또는 -P(Z)(OH)-이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고;
QG는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일, 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고;
QH는 각각 독립적으로 RM1 또는 -QG[(-QB-QC-QD)s2-RM1]p1이며, 여기서, RM1은 각각 독립적으로 보조 모이어티에 대한 결합이다.
특정 실시 형태에서, Z1, Z2 또는 Z3 중의 2가 분절은 -(-QB-QC-QD-)s1-이고,
여기서,
s1은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 50 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌이고;
단, QB, QC 및 QD 중 적어도 하나는 존재한다.
특정 실시 형태에서, 적어도 하나의 QC는 상기 2가 분절에 존재한다. 특정 실시 형태에서, QC는 상기 2가 분절의 각각의 단량체 단위에 존재한다. 특정 실시 형태에서, Z1은 존재하는 QC를 통해 결합된다. 특정 실시 형태에서, QB 및 QD 중 적어도 하나는 Z1의 각각의 단량체 단위에 존재한다. 특정 실시 형태에서, QB 및 QD 중 적어도 하나는 Z2의 각각의 단량체 단위에 존재한다. 특정 실시 형태에서, Z1, Z2 및 Z3 중 하나만은 존재할 때 분지성 기를 함유한다.
특정 실시 형태에서, Z1, Z2 및 Z3 중 1, 2 또는 3개는 독립적으로 하기 화학식 III이다:
[화학식 III]
-(-QB-QC-QD-)s1-QE-(-QB-QC-QD-)s1-
상기 화학식 III에서,
s1은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 50 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌, 또는 -P(Z)(OH)-이고, 여기서, Z는 O 또는 S이고;
QE는 부재하거나 하기 화학식 IV의 분지성 기이다:
[화학식 IV]
Figure pct00042
상기 화학식 IV에서,
p1은 약 1, 약 2 또는 약 3의 정수이고,
s2는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10의 정수이고;
QF는 임의로 치환된 C1-12 알칸-트리일 또는 임의로 치환된 C2-12 헤테로알칸-트리일이고;
QG는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일, 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고;
QH는 각각 독립적으로 RM1 또는 -QG[(-QB-QC-QD)s2-RM1]p1이며, 여기서, RM1은 각각 독립적으로 보조 모이어티에 대한 결합이다.
화학식 IV에서, p1이 약 1인 경우, QG는 부재하고; p1가 2 또는 3인 경우, 적어도 하나의 QG는 존재한다.
특정 실시 형태에서, Z1은 존재하는 QC를 통해 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스페이트, 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스포로티오에이트, 뉴클레오사이드간 또는 말단 포스포로디티오에이트, 무염기성 스페이서, 캡핑 기 또는 핵 염기에 결합된다.
특정 실시 형태에서, QB, QC, QD 및 QE 중 적어도 하나는 상기 2가 분절에 존재한다 (예를 들어, 적어도 하나의 QC는 존재하거나, QE는 존재하거나, QE는 부재한다). 특정 실시 형태에서, QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-,-NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이다.
특정 실시 형태에서, -(-QB-QC-QD-)s1-는 결합하여 -QB-(CH2)g1-(CH2OCH2)g2-(CH2)g3-QD- 의 기를 형성하고, 여기서,
g2는 약 1 내지 약 50의 정수이고;
g1은 약 1의 정수이고, QB는 -NHCO-, -CONH- 또는 -O-이거나; g1은 약 0의 정수이고, QD는 -NHCO-이고;
g3은 약 1의 정수이고, QB는 -NHCO-, -CONH- 또는 -O-이거나; g3은 약 0의 정수이고, QD는 -CONH-이다.
상기 표적화 모이어티는 보조 모이어티가 상기 폴리뉴클레오타이드에 컨쥬게이트될 때까지 보호될 수 있다. 예를 들어, 보호되는 표적화 모이어티는 -COORPGO 또는 -NHRPGN을 포함할 수 있으며, 여기서, RPGO는 O-보호기 (예를 들어, 카복실 보호기)이고, RPGN은 N-보호기이다.
특정 실시 형태에서, LinkA는 하기 화학식 V이다:
[화학식 V]
Figure pct00043
상기 화학식 V에서,
QA1 및 QA2는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌 (예를 들어, -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-를 함유하는 헤테로알킬렌), 임의로 치환된 C1-12 티오헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00044
Figure pct00045
), 임의로 치환된 C1-12 헤테로사이클릴렌 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸-1,4-디일 또는
Figure pct00046
), 사이클로부트-3-엔-1,2-디온-3,4-디일, 피리드-2-일 하이드라존, 임의로 치환된 C6-16 트리아졸로헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00047
), 임의로 치환된 C8-16 트리아졸로사이클로알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00048
) 또는 디하이드로피리다진 기 (예를 들어, 트랜스-
Figure pct00049
)이고, 단, QA1 및 QA2 중 적어도 하나는 존재하고;
RT는 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
RP는 뉴클레오사이드간 가교성 기 (bridging group), 핵 염기, 캡핑 기 또는 무염기성 스페이서에 결합되고;
QT는 각각 독립적으로 -CO-, -NH-, -NH-CH2- 또는 -CO-CH2-이고;
QS는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 또는 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬렌이고;
RM은 각각 독립적으로 H, 보조 모이어티, -(CH2)q7-CO-N(RM1)2 또는 -C[-CH2O-(CH2)q7-CO-N(RM1)2]3이며, 여기서, q7은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 5의 정수이고, RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
X1, X3 및 X5는 각각 독립적으로 부재하거나, -O-, -NH-, -CH2-NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -NH-C(O)-O-, -CH2-NH-C(O)-NH-, -CH2-O-C(O)-NH- 또는 -CH2-NH-C(O)-O-이고;
X7은 부재하거나, -O-, -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -NH-, -CH2-NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -NH-C(O)-O-, -CH2-NH-C(O)-NH-, -CH2-O-C(O)-NH- 또는 -CH2-NH-C(O)-O-이고;
X2, X4 및 X6은 각각 독립적으로 부재하거나, -O-, -NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 또는 -NH-C(O)-O-이고;
x1 및 x5는 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고;
x2는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
x3은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 11의 정수이고;
x4는 약 0, 약 1 또는 약 2의 정수이고,
x6은 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10 또는 약 1 내지 약 6의 정수이고, 단, 두 x6의 합계는 약 12 이하이다.
특정 실시 형태에서, LinkA는 하기 화학식 VI, 화학식 VII, 화학식 VIII, 화학식 IX 또는 화학식 X이다:
[화학식 VI]
Figure pct00050
[화학식 VII]
Figure pct00051
[화학식 VIII]
Figure pct00052
[화학식 IX]
Figure pct00053
[화학식 X]
Figure pct00054
상기 화학식들에서,
QA1은 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌 (예를 들어, -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-를 함유하는 헤테로알킬렌), 임의로 치환된 C1-12 티오헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00055
또는
Figure pct00056
), 임의로 치환된 C1-12 헤테로사이클릴렌 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸-1,4-디일 또는
Figure pct00057
), 사이클로부트-3-엔-1,2-디온-3,4-디일, 피리드-2-일 하이드라존, 임의로 치환된 C6-16 트리아졸로헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00058
), 임의로 치환된 C8-16 트리아졸로사이클로알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00059
) 또는 디하이드로피리다진 기 (예를 들어, 트랜스-
Figure pct00060
)이고;
RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
RT는 각각 독립적으로 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
RP는 각각 독립적으로 뉴클레오사이드간 가교성 기, 핵 염기, 캡핑 기 또는 무염기성 스페이서에 결합되고;
QT는 각각 독립적으로 -CO-, -NH-, -NH-CH2- 또는 -CO-CH2-이고;
QP는 각각 독립적으로 -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-이고;
QS는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 또는 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬렌이고;
q1, q3 및 q7은 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고;
q2 및 q8은 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
q4는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10의 정수이고;
q5 및 q6은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10 또는 약 1 내지 약 6의 정수이고;
q9는 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10의 정수이다.
특정 실시 형태에서, LinkA는 하기 화학식 XI, 화학식 XII, 화학식 XIII, 화학식 XIV 또는 화학식 XV이다:
[화학식 XI]
Figure pct00061
[화학식 XII]
Figure pct00062
[화학식 XIII]
Figure pct00063
[화학식 XIV]
Figure pct00064
[화학식 XV]
Figure pct00065
상기 화학식들에서,
각각의 구조식에서, 한
Figure pct00066
는 단일 결합을 나타내고, 다른
Figure pct00067
는 이중 결합을 나타내고;
RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
RT는 각각 독립적으로 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
RP는 각각 독립적으로 뉴클레오사이드간 가교성 기, 핵 염기, 캡핑 기 또는 무염기성 스페이서에 결합되고;
QT는 각각 독립적으로 -CO-, -CO-CH2-, -NH- 또는 -NH-CH2-이고;
QP는 각각 독립적으로 -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-이고;
QS는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 또는 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬렌이고;
q1, q3 및 q7은 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고;
q2 및 q8은 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
q4는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10의 정수이고;
q5 및 q6은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10 또는 약 1 내지 약 6의 정수이고;
q9는 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10의 정수이다.
특정 실시 형태에서, q5는 0이다. 특정 실시 형태에서, q5는 약 2 내지 약 6의 정수이다.
특정 실시 형태에서, 컨쥬게이트 기는 하기 화학식 XVI이다:
[화학식 XVI]
Figure pct00068
상기 화학식 XVI에서,
QA1은 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌 (예를 들어, -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-를 함유하는 헤테로알킬렌), 임의로 치환된 C1-12 티오헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00069
또는
Figure pct00070
), 임의로 치환된 C1-12 헤테로사이클릴렌 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸-1,4-디일 또는
Figure pct00071
), 사이클로부트-3-엔-1,2-디온-3,4-디일, 피리드-2-일 하이드라존, 임의로 치환된 C6-16 트리아졸로헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00072
), 임의로 치환된 C8-16 트리아졸로사이클로알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00073
) 또는 디하이드로피리다진 기 (예를 들어, 트랜스-
Figure pct00074
)이고;
QA2는 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00075
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00076
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00077
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00078
또는
Figure pct00079
), 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00080
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R13은 할로겐 또는 F이고;
RP는 뉴클레오사이드간 가교성 기, 핵 염기, 캡핑 기 또는 무염기성 스페이서에 결합되고;
QS는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 또는 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬렌이고;
RM은 각각 독립적으로 H, 보조 모이어티, -(CH2)q7-CO-N(RM1)2 또는 -C[-CH2O-(CH2)q7-CO-N(RM1)2]3이며, 여기서, q7은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 5의 정수이고, RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
X3 및 X5는 각각 독립적으로 부재하거나, -O-, -NH-, -CH2-NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -NH-C(O)-O-, -CH2-NH-C(O)-NH-, -CH2-O-C(O)-NH- 또는 -CH2-NH-C(O)-O-이고;
X7은 부재하거나, -O-, -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -NH-, -CH2-NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -NH-C(O)-O-, -CH2-NH-C(O)-NH-, -CH2-O-C(O)-NH- 또는 -CH2-NH-C(O)-O-이고;
X2, X4 및 X6은 각각 독립적으로 부재하거나, -O-, -NH-, -O-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 또는 -NH-C(O)-O-이고;
x1 및 x5는 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고;
x2는 각각 독립적으로 0 내지 50 (예를 들어, 1 내지 40 또는 1 내지 30)의 정수이고;
x3은 각각 독립적으로 1 내지 11의 정수이고;
x4는 0, 1 또는 2이고;
x6은 각각 독립적으로 0 내지 10 (예를 들어, 1 내지 6)의 정수이고, 단, 두 x6의 합계는 12 이하이다.
일부 실시 형태에서, 컨쥬게이트 기는 하기 화학식 XVII이다:
[화학식 XVII]
Figure pct00081
상기 화학식 XVII에서,
QA1은 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00082
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00083
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00084
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00085
또는
Figure pct00086
), 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00087
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R13은 할로겐 (예를 들어, F)이고;
RP는 뉴클레오사이드간 가교성 기, 핵 염기, 캡핑 기 또는 무염기성 스페이서에 결합되고;
QS는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 또는 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬렌이고;
X7은 부재하거나, -O-, -NH-, -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -CH2-NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -NH-C(O)-O-, -CH2-NH-C(O)-NH-, -CH2-O-C(O)-NH- 또는 -CH2-NH-C(O)-O-이고;
X6은 부재하거나, -O-, -NH-, -O-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 또는 -NH-C(O)-O-이고;
x1은 독립적으로 0 또는 1이고;
x2는 각각 독립적으로 0 내지 50, 1 내지 40, 또는 1 내지 30의 정수이고;
x3은 각각 독립적으로 1 내지 11의 정수이고;
x4는 0, 1 또는 2이다.
특정 실시 형태에서, 컨쥬게이트 기는 하기 화학식 XVIII 또는 화학식 XIX이다:
[화학식 XVIII]
Figure pct00088
[화학식 XIX]
Figure pct00089
상기 화학식들에서,
QA1은 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00090
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00091
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00092
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00093
또는
Figure pct00094
), 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00095
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R13은 할로겐 (예를 들어, F)이고;
RP는 뉴클레오사이드간 가교성 기, 핵 염기, 캡핑 기 또는 무염기성 스페이서에 결합되고;
QP는 -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-이고;
QS는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 또는 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬렌이고;
q1 및 q3은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
q2는 0 내지 50, 1 내지 40, 또는 1 내지 30의 정수이고;
q4는 0 내지 10 의 정수이고;
q5는 1 내지 10 또는 1 내지 6의 정수이다.
더 추가의 실시 형태에서, 상기 컨쥬게이트 기는 하기 화학식 XX 또는 화학식 XXI이다:
[화학식 XX]
Figure pct00096
[화학식 XXI]
Figure pct00097
상기 화학식들에서,
RP는 뉴클레오사이드간 가교성 기, 핵 염기, 캡핑 기 또는 무염기성 스페이서에 결합되고;
QP는 -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-이고;
QS는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 또는 임의로 치환된 (C6-10 아릴)-C1-6-알킬렌이고;
q1 및 q3은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
q2는 0 내지 50, 1 내지 40, 또는 1 내지 30의 정수이고;
q4는 0 내지 10 의 정수이고;
q5는 1 내지 10 또는 1 내지 6의 정수이다.
특정한 예시적인 실시 형태에서, 컨쥬게이트 기는
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
이고,
여기서, q2는 약 1 내지 약 50 (예를 들어, 약 1 내지 약 24 또는 약 1 내지 약 8 (예를 들어, 약 2 또는 약 3))의 정수이고, q4는 약 0 내지 약 10 (예를 들어, 약 0, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7 또는 약 8)의 정수이고, q10은 약 0 내지 약 8 (예를 들어, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5 또는 약 6)의 정수이고, q11은 약 0 또는 약 1이고, Z는 O 또는 S이고, RM은 각각 독립적으로 H, 보조 모이어티, -(CH2)q7-CO-N(RM1)2 또는 -C[-CH2O-(CH2)q7-CO-N(RM1)2]3이고, 여기서, q7은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 5의 정수이고, RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이다.
특정 실시 형태에서, 금속 촉매된 첨가 사이클화를 통한 표적화 모이어티에 컨쥬게이션하기 위한 상기 컨쥬게이트 기는
Figure pct00103
이고;
여기서, q2는 약 1 내지 약 50 (예를 들어, 약 1 내지 약 24 또는 약 1 내지 약 8 (예를 들어, 약 2 또는 약 3))의 정수이고, q4는 약 0 내지 약 10 (예를 들어, 약 0, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7 또는 약 8)의 정수이고, q10은 약 0 내지 약 8 (예를 들어, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5 또는 약 6)의 정수이고, q11은 약 0 또는 약 1이고, Z는 O 또는 S이다.
특정 실시 형태에서, 무금속 첨가 사이클화를 통한 표적화 모이어티에 컨쥬게이션하기 위한 상기 컨쥬게이트 기는 하기 화합물들이다:
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
이고;
여기서, q2는 약 1 내지 약 50 (예를 들어, 약 1 내지 약 24 또는 약 1 내지 약 8 (예를 들어, 약 2 또는 약 3))의 정수이고, q4는 약 0 내지 약 10 (예를 들어, 약 0, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7 또는 약 8)의 정수이고, q10은 약 0 내지 약 8 (예를 들어, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5 또는 약 6)의 정수이고, q11은 약 0 또는 약 1이고, Z는 O 또는 S이고, RM은 각각 독립적으로 H, 보조 모이어티, -(CH2)q7-CO-N(RM1)2 또는 -C[-CH2O-(CH2)q7-CO-N(RM1)2]3이고, 여기서, q7은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 5의 정수이고, RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이다.
특정 실시 형태에서, 아미드 형성을 통한 표적화 모이어티에 컨쥬게이션하기 위한 상기 컨쥬게이트 기는
Figure pct00107
이며, 여기서, q2는 약 0 내지 약 50의 정수 (예를 들어, 약 1 내지 약 8 (예를 들어, 약 2 또는 약 3)의 정수)이고, q12는 약 1 내지 약 11의 정수 (예를 들어, 약 1 내지 약 5 (예를 들어, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4 또는 약 5)의 정수)이다.
생물 가역성 기
특정 실시 형태에서, 생물 가역성 기는 다이설파이드 (-S-S-)를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 생물 가역성 기는 생리학적 조건하에 세포내에서 절단 가능하다.
특정 실시 형태에서, 생물 가역성 기는 하기 화학식 XXII이다:
[화학식 XXII]
R5-S-S-(LinkB)-,
상기 화학식 XXII에서,
LinkB는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트에 결합된 sp 3-혼성화 탄소 원자 및 -S-S-에 결합된 탄소 원자를 함유하는 2가 기이고, R5는 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C6-10 아릴 또는 -LinkC(-RM)r이거나, LinkB는 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트에 결합된 sp 3-혼성화 탄소 원자 및 -S-S-에 결합된 탄소 원자를 함유하는 3가 링커이고, 여기서, LinkB의 제3 원자가는 -S-S- 및 R5와 결합하여 임의로 치환된 C3-9 헤테로사이클릴렌을 형성하고;
LinkC는 다가 기이고;
RM은 각각 독립적으로 H, 보조 모이어티 또는 -QG[(-QB-QC-QD)s2-RM1]p1이고,
여기서,
RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고,
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌이고,
QG는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일, 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고,
s2는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이고;
p1은 2 또는 3이고;
r은 1 내지 6 (예를 들어, 1, 2 또는 3)의 정수이다.
특정 실시 형태에서, LinkB 및/또는 R5는 -S-S-에 부착된 벌키 기를 포함한다. -S-S-에 부착된 벌키 기의 포함은, 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드 합성 동안 황-황 결합의안정성을 증진시킬 수 있다.
추가의 실시 형태에서, LinkB는 1, 2 또는 3개의 기로 이루어지며, 상기 기는 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C6-10 아릴렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 및 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌으로 이루어진 그룹으로부터 각각 독립적으로 선택된다.
특별한 실시 형태에서, LinkB 및 -S-S-는 결합하여
Figure pct00108
로 이루어진 그룹으로부터 선택된 구조를 형성하고,
여기서,
R6은 각각 독립적으로 C2-7 알카노일; C1-6 알킬; C2-6 알케닐; C2-6 알키닐; C1-6 알킬설피닐; C6-10 아릴; 아미노; (C6-10 아릴)-C1-4-알킬; C3-8 사이클로알킬; (C3-8 사이클로알킬)-C1-4-알킬; C3-8 사이클로알케닐; (C3-8 사이클로알케닐)-C1-4-알킬; 할로; C1-9 헤테로사이클릴; C1-9 헤테로아릴; (C1-9 헤테로사이클릴)옥시; (C1-9 헤테로사이클릴)아자; 하이드록시; C1-6 티오알콕시; -(CH2)qCO2RA (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RA는 C1-6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬; -(CH2)qCONRBRC (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RB 및 RC는 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된다); -(CH2)qSO2RD (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RD는 C1-6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); -(CH2)qSO2NRERF (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RE 및 RF는 수소, 알킬, 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 각각 독립적으로 선택된다); 티올; 아릴옥시; 사이클로알콕시; 아릴알콕시; (C1-9 헤테로사이클릴)-C1-4-알킬; (C1-9 헤테로아릴)-C1-4-알킬; C3-12 실릴; 시아노; 또는 -S(O)RH (여기서, RH는 수소, C1-C6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다)로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; 2개의 인접 R6 기는 상기 R6 기 각각이 부착되어 있는 원자와 함께 결합하여 C6 아릴, C2-5 헤테로사이클릴 또는 C2-5 헤테로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택된 사이클릭 기를 형성하고, 여기서, 상기 사이클릭 기는 C2-7 알카노일; C1-6 알킬; C2-6 알케닐; C2-6 알키닐; C1-6 알킬설피닐; C6-10 아릴; 아미노; (C6-10 아릴)-C1-4-알킬; C3-8 사이클로알킬; (C3-8 사이클로알킬)-C1-4-알킬; C3-8 사이클로알케닐; (C3-8 사이클로알케닐)-C1-4-알킬; 할로; C1-9 헤테로사이클릴; C1-9 헤테로아릴; (C1-9 헤테로사이클릴)옥시; (C1-9 헤테로사이클릴)아자; 하이드록시; C1-6 티오알콕시; -(CH2)qCO2RA (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RA는 C1-6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); -(CH2)qCONRBRC (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RB 및 RC는 수소, C1-6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된다); -(CH2)qSO2RD (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RD는 C1-6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); -(CH2)qSO2NRERF (여기서, q는 0 내지 4의 정수이고, RE 및 RF는 수소, 알킬, 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 각각 독립적으로 선택된다); 티올; 아릴옥시; 사이클로알콕시; 아릴알콕시; (C1-9 헤테로사이클릴)-C1-4-알킬; (C1-9 헤테로아릴)-C1-4-알킬; C3-12 실릴; 시아노; 및 -S(O)RH (여기서, RH는 수소, C1-C6 알킬, C6-10 아릴 및 (C6-10 아릴)-C1-4-알킬로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된다)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 임의로 치환되고;
m1은 0, 1 또는 2이고;
m2은 0, 1, 2, 3 또는 4이거나;
LinkB, -S-S- 및 R5는 결합하여
Figure pct00109
(xx)을 함유하는 기를 형성한다.
더 추가의 실시 형태에서, LinkC는 0 내지 3개의 다가 단량체 (예를 들어, 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일 또는 3가 질소 원자) 및 하나 이상의 2가 단량체 (예를 들어, 1 내지 40개)를 포함할 수 있으며, 여기서, 2가 단량체는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알킬렌; 임의로 치환된 C2-6 알케닐렌; 임의로 치환된 C2-6 알키닐렌; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬렌; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알케닐렌; 임의로 치환된 C6-14 아릴렌; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C1-9 헤테로아릴렌; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌; 이미노; 임의로 치환된 N; O; 또는 S(O)m (여기서, m은 0, 1 또는 2이다)이다. 일부 실시 형태에서, 단량체는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알킬렌; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬렌; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알케닐렌; 임의로 치환된 C6-14 아릴렌; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C1-9 헤테로아릴렌; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌; 이미노; 임의로 치환된 N; O; 또는 S(O)m (여기서, m은 0, 1 또는 2이다 (예를 들어, m은 2이다))이다. 특정 실시 형태에서, 단량체는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알킬렌; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬렌; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알케닐렌; 임의로 치환된 C6-14 아릴렌; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C1-9 헤테로아릴렌; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌; 임의로 치환된 N; O; 또는 S(O)m (여기서, m은 0, 1 또는 2이다 (예를 들어, m은 2이다))이다. 보조 모이어티를 표적화 모이어티 또는 이의 반응 생성물에 연결하는 비-생물 가역성 링커는 2 내지 500개 (예를 들어, 2 내지 300개, 2 내지 200개, 2 내지 100개 또는 2 내지 50개)의 상기 단량체를 포함할 수 있다. LinkC는 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다 (예를 들어, 상기 폴리에틸렌 글리콜은 88 Da 내지 1 kDa (예를 들어, 88 Da 내지 500 Da)의 분자량을 가질 수 있다).
화학식 IIa 중의 -LinkC(-RM)r 기의 제조에 사용될 수 있는 화합물은 본 출원 뿐만 아니라 국제공개공보 WO 2015/188197에 기재되어 있다. -LinkC(-RM)r의 비제한적인 예로는
Figure pct00110
이 포함되며,
여기서,
R14는 -S-S-에 대한 결합이고,
RM은 보조 모이어티 또는 -QG[(-QB-QC-QD)s2-RM1]p1이고,
여기서,
RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고,
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌이고;
QG는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일, 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고,
s2는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이고;
p1은 2 또는 3이고;
r4는 각각 독립적으로 1 내지 6의 정수이고;
r5는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이다.
특정 실시 형태에서, RM은 보조 모이어티이다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 RM1은 보조 모이어티이다.
특정 실시 형태에서, 상기 생물 가역성 링커는
Figure pct00111
이며, 여기서, 상기 기의 한 말단은 폴리뉴클레오타이드에 연결되고, 다른 말단은 표적화 모이어티 (하나의 실시 형태에서, 항체)에 연결된다.
비-생물 가역성 기
비-생물 가역성 기는 혈청 또는 엔도솜에서 생리학적 조건하에 절단 가능한 결합 (예를 들어, 에스테르, 티오에스테르 또는 다이설파이드)을 함유하지 않는 1가 치환기이다. 상기 비-생물 가역성 기는 임의로 치환된 C2-16 알킬; 임의로 치환된 C3-16 알케닐; 임의로 치환된 C3-16 알키닐; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알케닐; 임의로 치환된 (C3-8 사이클로알킬)-C1-4-알킬; 임의로 치환된 (C3-8 사이클로알케닐)-C1-4-알킬; 임의로 치환된 C6-14 아릴; 임의로 치환된 (C6-14 아릴)-C1-4-알킬; 임의로 치환된 C1-9 헤테로아릴 having N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 (C1-9 헤테로아릴)-C1-4-알킬; N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 (여기서, 상기 헤테로사이클릴은 S-S 결합을 함유하지 않는다); N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 (C2-9 헤테로사이클릴)-C1-4-알킬 (여기서, 상기 헤테로사이클릴은 S-S 결합을 함유하지 않는다); 또는 하기 화학식 XXIII의 기일 수 있다:
[화학식 XXIII]
Figure pct00112
상기 화학식 XXIII에서,
L3은 C2-6 알킬렌이고;
R7은 임의로 치환된 C2-6 알킬; 임의로 치환된 C6-14 아릴; 임의로 치환된 (C6-14 아릴)-C1-4-알킬; 임의로 치환된 C3-8 사이클로알킬; 임의로 치환된 (C3-8 사이클로알킬)-C1-4-알킬; N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C1-9 헤테로아릴; N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 (C1-9 헤테로아릴)-C1-4-알킬; N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴 (여기서, 상기 헤테로사이클릴은 헤테로사이클릴 S-S 결합을 함유하지 않는다); N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 임의로 치환된 (C2-9 헤테로사이클릴)-C1-4-알킬 (여기서, 상기 헤테로사이클릴은 S-S 결합을 함유하지 않는다); 및 -OH, C1-6 알콕시 또는 -COOH로 말단화된 폴리(에틸렌 글리콜)이고;
R8은 H 또는 C1-6 알킬이다.
비-생물 가역성 포스포트리에스테르는
컨쥬게이트 기, C2-16 알킬,
Figure pct00113
Figure pct00114
, 또는
Figure pct00115
와 아지도 함유 기질의 사이클화 첨가 반응에 의해 형성된 기인 치환기로 치환된 포스페이트 또는 포스포로티오에이트일 수 있으며,
여기서,
n은 1 내지 6 의 정수이고;
R9는 임의로 치환된 C6 아릴; 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 6원 환인 임의로 치환된 C4-5 헤테로아릴; 또는 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 6원 환인 임의로 치환된 C4-5 헤테로사이클릴이고;
R10은 H 또는 C1-6 알킬이고;
R11은 할로겐, -COOR11A 또는 -CON(R11B)2 (여기서, R11A 및 R11B은 각각 독립적으로 H, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C6-14 아릴, 임의로 치환된 C1-9 헤테로아릴 또는 임의로 치환된 C2-9 헤테로사이클릴이고;
상기 아지도 함유 기질은
Figure pct00116
이다.
일부 실시 형태에서, 비-생물 가역성 기는 -LinkD(-RM1)r1 (여기서, LinkD는 다가 링커이고, RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고, r1은 1 내지 6의 정수이다)이다.
일부 경우에서, -LinkD(-RM1)r1은 하기 화학식 XXIV이다:
[화학식 XXIV]
-QR-Q3([-Q4-Q5-Q6]r2-Q7-RM1)r1
상기 화학식 XXIV에서,
r1은 1 내지 6 의 정수이고;
r2는 각각 독립적으로 0 내지 50 (예를 들어, 0 내지 30)의 정수이며, 여기서, 반복 단위는 동일하거나 상이하고;
QR은 [-Q4-Q5-Q6]r2-QL-이며, 여기서, QL은 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌 (예를 들어, -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-를 함유하는 헤테로알킬렌), 임의로 치환된 C1-12 티오헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00117
Figure pct00118
), 임의로 치환된 C1-12 헤테로사이클릴렌 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸-1,4-디일 또는
Figure pct00119
), 사이클로부트-3-엔-1,2-디온-3,4-디일, 피리드-2-일 하이드라존, 임의로 치환된 C6-16 트리아졸로헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00120
), 임의로 치환된 C8-16 트리아졸로사이클로알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00121
) 또는 디하이드로피리다진 기 (예를 들어, 트랜스-
Figure pct00122
)이고;
Q3은 선형 기 (예를 들어, r1이 1인 경우, [-Q4-Q5-Q6]r2-), 또는 r1이 2 내지 6의 정수인 경우, 분지성 기 (예를 들어, [-Q4-Q5-Q6]s-Q8([-Q4-Q5-Q6]r2-(Q8)r3)r4, 여기서, r3은 0 또는 1이고, r4는 0, 1, 2 또는 3이다)이고; r2는 각각 독립적으로 0 내지 50 (예를 들어, 0 내지 30)의 정수이고, 여기서, 상기 반복 단위는 동일하거나 상이하고;
Q4 및 Q6은 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
Q5는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌이고;
Q7은 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -CH2-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)NH-, -NH-C(O)-, -NH-CH(Ra)-C(O)- 또는 -C(O)-CH(Ra)-NH-이고;
Q8은 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고;
Ra는 각각 독립적으로 H 또는 아미노산 측쇄이고;
RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이다.
화학식 XXIV에서, Q4, Q5 및 Q6 중 적어도 하나는 존재한다. 화학식 XXIV)에서, LinkD는 r3이 각각 0인 경우에는 단일 분지점, 또는 적어도 하나의 r3이 1인 경우에는 다중 분지점을 포함할 수 있다. 화학식 XXIV에서, QR은 -Q5-Q4-QL-일 수 있으며, 여기서, Q5는 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌 또는 임의로 치환된 C1-12 알킬렌이고, Q4는 -CO-, -NH- 또는 -O-이다. 화학식 XXIV에서, QL은
Figure pct00123
트랜스-
Figure pct00124
일 수 있다.
화학식 XXIV에서, Q3은 화학식 [-Q4-Q5-Q6]r2-의 선형 기일 수 있으며, 여기서, Q4, Q5 및 Q6은 화학식 XXIV에 대해 정의된 바와 같다. 대안으로, Q3은 분지된 기 [-Q4-Q5-Q6]r2-Q8([-Q4-Q5-Q6]r2-(Q8)r3)r4일 수 있으며, 여기서, Q8은 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-6 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-6 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-트리일 또는 임의로 치환된 C2-6 헤테로알칸-테트라일이고;
여기서,
r2는 각각 독립적으로 0 내지 50 (예를 들어, 0 내지 30)의 정수이며, 여기서, 반복 단위는 동일하거나 상이하고;
r3은 0 또는 1이고;
r4는 0, 1, 2 또는 3이고;
여기서,
r3이 0일 때, LinkD는 3가 또는 4가 기이고,
r3이 1일 때, LinkD는 4가, 5가 또는 6가 기이다.
특정 실시 형태에서, r3은 0이다.
일부 실시 형태에서, Q8은
Figure pct00125
이다.
화학식 I 중의 -LinkD(-RM1)p 기의 제조에 사용될 수 있는 화합물은 본 출원 뿐만 아니라 국제공개공보 WO 2015/188197에 기재되어 있다.
특정 실시 형태에서, 상기 비-생물 가역성 링커는
Figure pct00126
이며, 여기서, 상기 기의 한 말단은 폴리뉴클레오타이드에 연결되고, 다른 말단은 표적화 모이어티 (하나의 실시 형태에서, 항체)에 연결된다.
보조 모이어티
보조 모이어티는 염료 또는 친수성 기 또는 이들의 조합을 함유하는 1가 기 (예를 들어, 친수성 중합체 (예를 들어, 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG)), 양으로 하전된 중합체 (예를 들어, 폴리(에틸렌 이민)) 또는 당 알코올 (예를 들어, 글루시톨))이다. 보조 모이어티는 100 Da 내지 2.5 kDa (예를 들어, 350 Da 내지 2.5 kDa, 100 Da 내지 1,200 Da, 또는 1 kDa 내지 2.5 kDa)의 이론적 분자량을 가질 수 있다.
(예를 들어, 형광 회복 측정법 (Fluorescence Recovery After Photobleaching: FRAP)을 사용하여) 세포 내부에 본 발명의 컨쥬게이트의 흡수를 시각화하거나 이의 이동을 모니터링할 목적으로, 염료가 포스포에스테르 기에 포함될 수 있다. 당해 분야에 공지된 염료는 2개의 인접 뉴클레오사이드에 함께 결합하는 포스페이트 또는 포스포로티오에이트를 통해 또는 5'- 또는 3'-말단에서 포스페이트 또는 포스포로티오에이트를 통해 폴리뉴클레오타이드에 연결된 보조 모이어티로서 포함될 수 있다. 염료로서 사용될 수 있는 유용한 구조의 비제한적인 예로는 FITC, RD1, 알로피코시아닌 (APC), aCFTM 염료 (Biotium, Hayward, CA), BODIPY (Life Technologies의 InvitrogenTM 10, Carlsbad, CA), AlexaFluor® (Life Technologies의 InvitrogenTM, Carlsbad, CA), DyLight Fluor (Thermo Scientific Pierce Protein Biology Products, Rockford, IL), ATTO (ATTO-TEC GmbH, Siegen, Germany), FluoProbe (Interchim SA, Motlucon, France) 및 Abberior Probes ( Abberior GmbH, Gottingen, Germany)가 포함된다.
본 발명의 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 및 본 발명의 컨쥬게이트에서 보조 모이어티로서 사용될 수 있는 친수성 중합체 및 양으로 하전된 중합체는 당해 분야에 공지되어 있다. 친수성 중합체의 비제한적인 예로는 폴리(에틸렌 글리콜)이 있다. 양으로 하전된 중합체의 비제한적인 예로는 폴리(에틸렌 이민)이 있다.
당 알코올계 보조 모이어티는, 예를 들어, 아미노-말단화 글루시톨 또는 글루시톨 클러스터이다. 상기 아미노-말단화 글루시톨 보조 모이어티는
Figure pct00127
이다.
글루시톨 클러스터의 비제한적인 예로는
Figure pct00128
이 있다.
하나의 실시 형태에서, 하기 화학식 B의 화합물, 또는 입체 이성질체, 둘 이상의 부분 입체 이성질체의 혼합물, 호변 이성질체 또는 둘 이상의 호변 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 본 출원에서 제공된다:
[화학식 B]
Figure pct00129
상기 화학식 B에서,
Rx는 컨쥬게이트 기이고;
LN은 링커이고;
Q는 각각 독립적으로 포스포트리에스테르를 포함하는 폴리뉴클레오타이드이고;
e는 1, 2, 3 또는 4의 정수이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 B에서, Rx는
Figure pct00130
이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 B에서, LN은 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 링커이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 B에서, LN은
Figure pct00131
이며, 여기서, d는 약 0 내지 약 50 범위의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0 내지 약 10의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0 내지 약 5의 정수이다. 특정 실시 형태에서, d는 약 0, 약 1 또는 약 3의 정수이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 B에서, e는 1의 정수이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 B에서, Q는 각각 독립적으로 하기 화학식 D의 구조를 갖는다:
[화학식 D]
Figure pct00132
상기 화학식 D에서, XN, X3', X5', YP, b 및 c는 각각 본 출원에서 정의된 바와 같다.
표적화 모이어티
본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 사용되는 표적화 모이어티는 컨쥬게이트된 페이로드 폴리뉴클레오타이드의 표적화된 전달을 위해 체내의 표적 특이적 세포 및 조직에 대한 것이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 자연 살해 세포이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 골수 세포이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 호중구이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 단핵구이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 대식 세포이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 수지상 세포 (DC)이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 비만 세포이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 종양 관련 대식 세포 (TAM)이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화된 세포는 골수 유래 억제 세포 (MDSC)이다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 항원 결합 모이어티이다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 항원 또는 이의 항원 결합 단편이다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트 중의 항원 결합 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예를 들어, F(ab)2 또는 Fab) 또는 이의 조작된 유도체 (예를 들어, Fcab 또는 융합 단백질 (예를 들어, scFv))이다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트 중의 항원 결합 모이어티는 사람 또는 키메라 (예를 들어, 사람화) 항체이다.
상기 항원 결합 모이어티는 항원 결합 모이어티에 의해 인식되는 표면 항원을 갖는 세포를 표적화한다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 NK 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체이다. NK 세포에 의해 발현되고 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화될 수 있는 항원의 예로는 CD11b, CD11c, CD16/32, CD49b, CD56 (NCAM), CD57, CD69, CD94, CD122, CD158 (Kir), CD161 (NK-1.1), CD244 (2B4), CD314 (NKG2D), CD319 (CRACC), CD328 (Siglec-7), CD335 (NKp46), Ly49, Ly108, Vα24-Jα18 TCR (iNKT), 그라눌리신, 그랜자임, 퍼포린, SIRP-α, LAIR1, SIGLEC-3 (CD33), SIGLEC-7, SIGLEC-9, LIR1 (ILT2, LILRB1), NKR-P1A (KLRB1), CD94-NKG2A, KLRG1, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1, KIR2DS1, CD94-NKG2C/E, NKG2D, CD160 (BY55), CD16 (FcγRIIIA), NKp46 (NCR1), NKp30 (NCR3), NKp44 (NCR2), DNAM1(CD226), CRTAM, CD2, CD7, CD11a, CD18, CD25, CD27, CD28, NTB-A (SLAMF6), PSGL1, CD96 (Tactile), CD100 (SEMA4D), NKp80 (KLRF1, CLEC5C), SLAMF7 (CRACC, CS1, CD319) 및 CD244 (2B4, SLAMF4)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 골수 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체이다. 골수 세포에 의해 발현되고 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화될 수 있는 항원의 예로는 siglec-3, siglec 7, siglec 9, siglec 15, CD200, CD200R, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, M-CSF, CSF-1R, GM-CSF R, IL4 R, 아르기나아제, IDO, TDO, MPO, EP2, COX-2, CCR2, CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, c-키트, CD244, L-셀렉틴/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, CD163, CD204, DEC205, IL-1R, CD31, SIRPα, SIRPβ, PD-L1, CEACAM-8/CD66b, CD103, BDCA-1, BDCA2, BDCA-4, CD123 및 ILT-7이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 MDSC에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체이다. MDSC에 의해 발현되고 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화될 수 있는 항원의 예로는 siglec-3, Siglec 7, siglec 9, siglec 15, CD200, CD200R, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, M-CSF, CSF-1R, GM-CSF R, IL4 R, 아르기나아제, IDO, TDO, MPO, EP2, COX-2, CCR2, CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, c-Kit, CD244, L-셀렉틴/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, CD163, CD204, DEC205, IL-1R, CD31, SIRPα, SIRPβ, PD-L1, CEACAM-8/CD66b, CD103, BDCA-1, BDCA2, BDCA-4, CD123 및 ILT-7이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 TAM에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체이다. TAM에 의해 발현되고 본 출원에서 제공된 컨쥬게이트에 의해 표적화될 수 있는 항원의 예로는 siglec-3, Siglec 7, siglec 9, siglec 15, CD200, CD200R, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, M-CSF, CSF-1R, GM-CSF R, IL4 R, 아르기나아제, IDO, TDO, MPO, EP2, COX-2, CCR2, CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, c-Kit, CD244, L-셀렉틴/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, CD163, CD204, DEC205, IL-1R, CD31, SIRPα, SIRPβ, PD-L1, CEACAM-8/CD66b, CD103, BDCA-1, BDCA2, BDCA-4, CD123 및 ILT-7이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 NK 세포에 대해 특이적인 항원에 결합하는 항체이다. 특정 실시 형태에서, NK 세포는 항-CD56 항체에 의해 표적화된다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 항-CD56 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 단클론 항-CD56 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 쥐과 동물 항-CD56 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 쥐과 동물 항-CD56 항체는 클론 5.1H11 (BioLegend, 카탈로그 번호: 362502)이다. 특정 실시 형태에서, 상기 쥐과 동물 항-CD56 항체는 클론 MEM-188 (BioLegend, 304601)이다. 특정 실시 형태에서, 상기 쥐과 동물 항-CD56 항체는 클론 QA17A16 (BioLegend, 카탈로그 번호: 392402)이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 사람화 항-CD56 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 사람 항-CD56 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 사람화 항-CD56 항체이다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 골수 세포에 대해 특이적인 항원에 결합하는 항체이다. 특정 실시 형태에서, 골수 세포는 항-SIRPα 항체에 의해 표적화된다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 항-SIRPα 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 단클론 항-SIRPα 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 쥐과 동물 항-SIRPα 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 사람화 항-SIRPα 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 사람 항-SIRPα 항체이다.
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (119 또는 119 생식 세포 돌연변이체)는 VH 및 VL을 포함하는 사람 항체이며, 여기서, 상기 VH는 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택되고:
Figure pct00133
, 상기 VL은 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00134
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (119 또는 119 생식 세포 돌연변이체)는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 사람 항체이며, 이들은 각각 독립적으로 하기 표로부터 선택된다:
Figure pct00135
119 사람 항체는 WO 2018/057669 A1의 표 P에 기재되어 있는 CD47 차단제이며, 이의 기재 내용은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다.
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (135 또는 135 생식 세포 돌연변이체)는 VH 및 VL을 포함하는 사람 항체이며, 여기서, 상기 VH는 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택되고:
Figure pct00136
, 상기 VL은 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00137
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (135 또는 135 생식 세포 돌연변이체)는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 사람 항체이며, 이들은 각각 독립적으로 하기 표로부터 선택된다:
Figure pct00138
135 사람 항체는 WO 2018/057669 A1의 표 P에 기재되어 있는 CD47 차단제이며, 이의 기재 내용은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다.
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (AB21, AB21 생식 세포 돌연변이체 또는 AB21의 사람화 버전)는 VH 및 VL을 포함하는 항체이며, 여기서, 상기 VH는 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택되고:
Figure pct00139
, 상기 VL은 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00140
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (AB21, AB21 생식 세포 돌연변이체 또는 AB21의 사람화 버전)는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 사람 항체이며, 이들은 각각 독립적으로 하기 표로부터 선택된다:
Figure pct00141
AB21 사람화 항체는 WO 2018/057669 A1의 표 P에 기재되어 있는 CD47 차단제이며, 이의 기재 내용은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다.
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (136 또는 136 생식 세포 돌연변이체)는 VH 및 VL을 포함하는 사람 항체이며, 여기서, 상기 VH는 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택되고:
Figure pct00142
, 상기 VL은 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00143
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (136 또는 136 생식 세포 돌연변이체)는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 사람 항체이며, 이들은 각각 독립적으로 하기 표로부터 선택된다:
Figure pct00144
136 사람 항체는 WO 2018/057669 A1의 표 P에 기재되어 있는 비차단제이며, 이의 기재 내용은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다.
특정 실시 형태에서, 상기 항-SIRPα 항체 (218 또는 사람화 218)는 VH 및 VL을 포함하는 항체이며, 여기서, 상기 VH는 DVQLVESGGGVVRPGESLTLSCTASGFTFTSSTMNWVRQAPGEGLDWVSSISTSGVITYYADSVKGRATISRDNSKNTLYLRLFSLRADDTAIYYCATDTFDHWGPGTLVTVSS (서열 번호 584)의 서열을 갖고; 상기 VL은 하기에서 열거된 서열로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00145
218 사람 항체는 WO 2018/057669 A1의 표 P에 기재되어 있는 비차단제이며, 이의 기재 내용은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 498~500으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 501의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 502의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 503의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 504의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 505의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 498의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 501의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 502의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 503의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 504의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 505의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 499의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 501의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 502의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 503의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 504의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 505의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 500의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 501의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 502의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 503의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 504의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 505의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 490~495로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 496 또는 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 490의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 496의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 491의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 496의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 492의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 496의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 493의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 496의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 494의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 496의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 495의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 496의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 490의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 491의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 492의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 493의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 494의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 495의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 512~514로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 515의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 516의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 517의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 518의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 519의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 512의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 515의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 516의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 517의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 518의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 519의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 513의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 515의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 516의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 517의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 518의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 519의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 514의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 515의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 516의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 517의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 518의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 519의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 506~509로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 510 또는 511의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 506의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 510의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 507의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 510의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 508의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 510의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 509의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 510의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 506의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 511의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 507의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 511의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 508의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 511의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 509의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 511의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 533~535로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 536의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 537의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 538~542로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 543의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 544~546으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 534의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 536의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 537의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 539의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 543의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 545의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 533의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 536의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 537의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 542의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 543의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 546의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 498의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 501의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 502의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 503의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 504의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 505의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 554의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 557의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 558의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 559의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 560의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 561의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 520~523으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 525~532로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 554~556으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 557의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 558의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 559의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 560의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 561의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 554의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 557의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 558의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 559의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 560의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 561의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 555의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 557의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 558의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 559의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 560의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 561의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 556의 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 557의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 558의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및/또는 서열 번호 559의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 560의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 561의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 547~550으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 551~553으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 547의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 551의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 548의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 551의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 549의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 551의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 550의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 551의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 547의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 552의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 548의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 552의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 549의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 552의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 550의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 552의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 547의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 553의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 548의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 553의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 549의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 553의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 550의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 553의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 584의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 585, 562 및 563으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 584의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 585의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 584의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 562의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 584의 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 563의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 584의 서열의 3개의 HVR을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 585의 서열의 3개의 HVR을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 584의 서열의 3개의 HVR을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 562의 서열의 3개의 HVR을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-SIRPα 항체는 서열 번호 584의 서열의 3개의 HVR을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열 번호 563의 서열의 3개의 HVR을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
추가의 항-SIRP 항체는 미국 출원공개 US 2018/0037652 A1; 국제공개공보 WO 2016/205042 A1; WO 2017/178653 A2; WO 2018/107058 A1; 및 WO 2018/057669 A1에 개시되어 있으며; 이들의 개시 내용은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다.
일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 사람 Fc 영역, 예를 들어, 사람 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체의 Fc 영역은 안정성, 글리코실화 또는 다른 변형의 패턴, 이펙터 세포 기능, 약동학 등과 같은 하나 이상의 항체 특성에 영향을 미치는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 감소된 또는 최소의 글리코실화를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 제거되거나 감소된 이펙터 기능을 갖는다. Fc 돌연변이의 예로는 (i) 사람 IgG1 Fc 영역 돌연변이 L234A, L235A, G237A 및 N297A; (ii) 사람 IgG2 Fc 영역 돌연변이 A330S, P331S 및 N297A; 및 (iii) 사람 IgG4 Fc 영역 돌연변이 S228P, E233P, F234V, L235A, delG236 및 N297A (EU 넘버링)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 일부 실시 형태에서, 상기 사람 IgG2 Fc 영역은 A330S 및 P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 사람 IgG4 Fc 영역은 S288P 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 사람 IgG4 Fc 영역은 S288P 및 L235E 돌연변이를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 L234A, L235A 및 G237A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 D265A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 D265A 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 A330S 및 P331S 돌연변이를 포함하는 사람 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 A330S, P331S 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 S228P 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 S228P 및 D265A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 S228P 및 L235E 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 S228P 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 EU 넘버링에 따른 S228P, E233P, F234V, L235A, delG236 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 서열 번호 564~578로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 사람 카파 경쇄 불변 도메인, 예를 들어, 서열 번호 579의 서열을 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 항체는 사람 람다 경쇄 불변 도메인, 예를 들어, IGLC1 또는 IGLC2 (예를 들어, 각각 서열 번호 580 및 581에서 나타낸 바와 같은 예시적인 Fc 영역 서열)를 포함한다.
세포 표면 항원을 표적화하는 항체는 면역 세포에 대한 Fc 수용체 (FcR) 결합과 관련된 면역 자극 및 이펙터 기능을 촉발시킬 수 있다. IgG (감마 수용체), IgE (에타 수용체), IgA (알파 수용체) 및 IgM (뮤 수용체)을 비롯한 특정 클래스의 항체에 대해 특이적인 다수의 Fc 수용체가 있다. 세포 표면 상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합은 항체 코팅된 입자의 식세포 작용 (항체 의존적 세포 매개성 식세포 작용 또는 ADCP), 면역 복합체의 제거, 살해 세포 (항체 의존적 세포 매개성 세포독성 또는 ADCC)에 의한 항체 코팅된 세포의 용해, 염증성 매개체의 방출, 태반 이동, 및 면역글로불린 생산의 조절을 비롯한 다수의 생물학적 반응을 촉발시킬 수 있다. 또한, 항체에 대한 보체의 C1 성분의 결합은 보체계를 활성화시킬 수 있다. 보체의 활성화는 세포 병원체의 용해에 중요할 수 있다. 그러나, 보체의 활성화는 또한 염증 반응을 자극할 수 있으며, 자가 면역 과민증 또는 기타 면역학적 장애에 또한 관련될 수 있다. 특정 Fc 수용체에 결합하는 능력이 감소 또는 제거된 변이체 Fc 영역은, 국부 세포 또는 조직을 손상시키거나 파괴하지 않으면서 리간드 기능을 표적화, 활성화 또는 중화시킴으로써 작용하는 치료학적 항체 및 Fc-융합 폴리펩타이드 작제물을 개발하는데 유용하다.
일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 제2 및 제3 항체 불변 도메인 (예를 들어, CH2 및 CH3)을 포함하는 폴리펩타이드 쇄를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 또한 힌지 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 Fc 도메인 단량체는 IgG, IgE, IgM, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 면역글로불린 항체 이소타입을 갖는다. 또한, 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 임의의 IgG 서브 타입 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG2a, IgG2b, IgG2c, IgG3 및 IgG4)을 갖는다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 Fc 도메인과 Fc 수용체 사이의 상호 작용을 변경시키는 야생형 Fc 도메인 단량체 서열에서 10개까지의 변화 (예를 들어, 1~10개, 1~8개, 1~6개, 1~4개의 아미노산 치환, 부가 또는 삽입, 결실 또는 이들의 조합)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 면역글로불린의 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인 단량체의 단편은 또 다른 Fc 도메인 단량체와 Fc 도메인을 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 면역글로불린의 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인 단량체의 단편은 또 다른 Fc 도메인 단량체와 Fc 도메인을 형성할 수 없다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인의 단편은 본 개시 내용의 폴리펩타이드에 융합되어 당해 폴리펩타이드의 혈청 반감기를 증가시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 개시 내용의 폴리펩타이드에 융합된 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인 단량체의 단편은 제2 Fc 도메인 단량체와 이량체를 형성하여, Fc 수용체 또는 대안으로 Fc 도메인 단량체에 결합하여 Fc 수용체에 결합하는 Fc 도메인을 형성한다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩타이드에 융합되어 당해 폴리펩타이드의 혈청 반감기를 증가시키는 Fc 도메인 또는 Fc 도메인의 단편은 임의의 면역계 관련 반응을 포함하지 않는다. Fc 도메인은 CH3 항체 불변 도메인들 사이의 상호 작용에 의해 이량체화되는 2개의 Fc 도메인 단량체를 포함한다.
야생형 Fc 도메인은 Fc 수용체, 예를 들어, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIIb 및 FcγRIV에 결합하는 최소 구조를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 본 개시 내용의 항체내 Fc 도메인은 감소된 항체 의존적 세포 매개성 세포독성 (ADCC), 감소된 보체 의존적 세포 용해 (CDC), 감소된 항체 의존적 세포 매개성 식세포 작용 (ADCP) 또는 이들의 임의의 조합과 같은 감소된 이펙터 기능을 초래하는 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 삽입, 결실 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 예를 들어, 본 개시 내용의 항체는 사람 Fc 수용체에 대한 감소된 결합 (예를 들어, 최소 결합 또는 결합 부재) 및 보체 단백질 C1q에 대한 감소된 결합 (예를 들어, 최소 결합 또는 결합 부재); 사람 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIB, FcγRIIIB 또는 이들의 임의의 조합 및 및 C1q에 대한 감소된 결합 (예를 들어, 최소 결합 또는 결합 부재); ADCC, CDC, ADCP 또는 이들의 임의의 조합과 같은 변경되거나 감소된 항체 의존적 이펙터 기능; 및 기타 등등을 나타낼 수 있다. 예시적인 돌연변이로는 E233, L234, L235, G236, G237, D265, D270, N297, E318, K320, K322, A327, A330, P331 또는 P329 (Kabat의 EU 인덱스에 따른 넘버링 (문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]))에서의 하나 이상의 아미노산 치환이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
일부 실시 형태에서, 본 개시 내용의 항체는 CD16a, CD32a, CD32b, CD32c 및 CD64 Fcγ 수용체에 대한 감소 또는 제거된 결합을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 기재된 비-본래의 Fc 영역을 갖는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 항체와 비교하여 C1q 결합에서 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 감소를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 비-본래의 Fc 영역을 갖는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 항체와 비교하여 CDC에서 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 감소를 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 본 출원의 Fc 변이체는 야생형 서열에 비해 최소로 글리코실화되거나 감소된 글리코실화를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 탈글리코실화는 N297A의 돌연변이로 또는 N297을 N이 아닌 임의의 아미노산으로 돌연변이시킴으로써 달성된다.
일부 실시 형태에서, 항체 IgG 불변 영역의 변이체 (예를 들어, Fc 변이체)는 Fcγ 수용체에 특이적으로 결합하는 감소된 능력을 보유하거나, 식세포 작용을 유도하는 감소된 능력을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 항체 IgG 불변 영역의 변이체 (예를 들어, Fc 변이체)는 Fcγ 수용체에 특이적으로 결합하는 감소된 능력을 보유하고, 식세포 작용을 유도하는 감소된 능력을 갖는다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, Fc 도메인은 "사망 (dead)" Fc 도메인을 대표하는, 이펙터 기능을 결여하도록 돌연변이된다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, Fc 도메인은 Fc 도메인와 Fcγ 수용체 사이의 상호 작용을 최소화하는 것으로 공지된 특정 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 IgG1 항체로부터 유래하며, L234A, L235A, G237A 및 N297A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)의 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 IgG1 항체로부터 유래하며, L234A, L235A 및 G237A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)의 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 IgG1 항체로부터 유래하며, N297A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 IgG1 항체로부터 유래하며, D265A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 IgG1 항체로부터 유래하며, D265A 및 N297A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)의 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 추가의 돌연변이가 이러한 IgG1 Fc 변이체에 포함된다. 사람 IgG1 Fc 변이체에 대한 이러한 추가의 돌연변이의 비제한적인 예로는 E318A 및 K322A가 포함된다. 일부 경우에서, 사람 IgG1 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG1 서열과 비교하여 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 또는 4개 이하의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 추가의 결실이 이러한 IgG1 Fc 변이체에 포함된다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, Fc IgG1 중쇄 불변 영역의 C-말단 라이신이, 예를 들어, 폴리펩타이드가 세균 또는 포유 동물 세포에서 생산될 때 폴리펩타이드의 균질성을 증가시키도록 결실된다. 일부 경우에서, 사람 IgG1 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG1 서열과 비교하여 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 또는 4개 이하의 결실을 갖는다.
일부 실시 형태에서, Fc 도메인 단량체는 IgG2 항체로부터 유래하며, A330S, P331S, 또는 A330S와 P331S 둘 다의 아미노산 치환을 포함한다. 상기에서 언급된 아미노산 위치는 문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따라 정의된다. 아미노산 잔기의 Kabat 넘버링은 항체 서열과 "표준" Kabat 넘버링된 서열의 상동성 영역에서 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 상기 Fc 변이체는 A330S, P331S 및 N297A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)의 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함하는 사람 IgG2 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 Fc 변이체는 D265A 및 N297A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)의 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함하는 사람 IgG2 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 Fc 변이체는 N297A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨) 아미노산 치환을 포함하는 사람 IgG2 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 추가의 돌연변이가 이러한 IgG2 Fc 변이체에 포함된다. 사람 IgG2 Fc 변이체에 대한 이러한 추가의 돌연변이의 비제한적인 예로는 V234A, G237A, P238S, V309L 및 H268A (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따른 EU 넘버링 시스템에 따라 명명됨)가 포함된다. 일부 경우에서, 사람 IgG2 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG2 서열과 비교하여 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 또는 3개 이하의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 추가의 결실이 이러한 IgG2 Fc 변이체에 포함된다.
상기 Fc 변이체가 IgG4 Fc 변이체일 때, 일부 실시 형태에서, 이러한 Fc 변이체는 S228P, E233P, F234V, L235A, L235E 또는 delG236 (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따라 명명됨)의 돌연변이를 포함한다. 다른 경우에서, 이러한 Fc 변이체는 S228P 및 L235E (문헌 [Kabat, et al. (1991)]에 따라 명명됨)의 돌연변이를 포함한다. 일부 경우에서, 사람 IgG4 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG4 서열과 비교하여 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 돌연변이(들)를 갖는다.
일부 실시 형태에서, 상기 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 대상체의 Fc 수용체에 대한 감소된 결합을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 상기 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 대상체의 Fc 수용체에 대한 제거된 결합을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 상기 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 식세포 작용의 감소를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 상기 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 제거된 식세포 작용을 나타낸다.
본 출원에서 ADCC로도 또한 지칭되는 항체 의존적 세포 매개성 세포독성은, 분비된 Ig가 특정 세포독성 세포 (예를 들어, 자연 살해 (NK) 세포 및 호중구) 상에 존재하는 Fc 수용체 (FcR)에 결합하고 이러한 세포독성 이펙터 세포가 항원 보유 표적 세포에 특이적으로 결합한 후 표적 세포를 사멸시킬 수 있도록 하는 세포독성의 한 형태를 지칭한다. 본 출원에서 ADCP로도 또한 지칭되는 항체 의존적 세포 매개성 식세포 작용은, 분비된 Ig가 특정 식세포 (예를 들어, 대식 세포) 상에 존재하는 Fc 수용체 (FcR)에 결합하고 이러한 식세포성 이펙터 세포가 항원 보유 표적 세포에 특이적으로 결합한 후 표적 세포를 에워싸서 분해시킬 수 있도록 하는 세포독성의 한 형태를 지칭한다. 표적 세포의 표면에 지시된 리간드 특이적 고친화성 IgG 항체는 세포독성 또는 식세포를 자극할 수 있으며 이러한 사멸에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 작제물은 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 작제물과 비교하여 감소된 ADCC 또는 ADCP를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 작제물은 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 작제물과 비교하여 ADCC 또는 ADCP에서 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 감소를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 작제물과 비교하여 제거된 ADCC 또는 ADCP를 나타낸다.
본 출원에서 CDC로도 또한 지칭되는 보체 지시된 세포독성은, 보체 캐스케이드가 항체 Fc에 결합하는 보체 성분 C1q에 의해 활성화되는 세포독성의 한 형태를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 작제물은 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 작제물과 비교하여 C1q 결합에서 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 감소를 나타낸다. 일부 경우에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 작제물은 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 작제물과 비교하여 감소된 CDC를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 작제물은 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 작제물과 비교하여 CDC에서 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 감소를 나타낸다. 일부 경우에서, 본 출원에서 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 작제물과 비교하여 무시해도 될 정도의 CDC를 나타낸다.
본 출원의 Fc 변이체는 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 Fcγ 수용체에 대한 감소된 결합을 나타내는 것들을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, Fc 변이체는 Fcγ 수용체에 대해 야생형 사람 IgG Fc 영역에 의해 나타나는 결합보다 적은 Fcγ 수용체에 대한 결합을 나타낸다. 일부 경우에서, Fc 변이체는 10%, 20% 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% (완전히 제거된 이펙터 기능) 만큼 Fcγ 수용체에 대한 감소된 결합을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 상기 감소된 결합은 임의의 하나 이상의 Fcγ 수용체, 예를 들어, CD16a, CD32a, CD32b, CD32c 또는 CD64에 대한 것이다.
일부 경우에서, 본 출원에서 개시된 Fc 변이체는 이의 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 식세포 작용의 감소를 나타낸다. 이러한 Fc 변이체는 이의 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 식세포 작용의 감소를 나타내며, 여기서, 상기 식세포 작용 활성의 감소는, 예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 만큼이다. 일부 경우에서, Fc 변이체는 이의 야생형 사람 IgG Fc 영역과 비교하여 제거된 식세포 작용을 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 본 출원에서 개시된 Fc 변이체는 하나 이상의 융합 파트너에 커플링된다. 일부 경우에서, 상기 융합 파트너는 본 개시 내용의 세포독성제와 같은 치료학적 모이어티이다. 일부 경우에서, 상기 융합 파트너는 발현된 단백질의 표적화, 정제, 스크리닝, 디스플레이 등을 가능하게 하도록 선택된다. 일부 실시 형태에서, 상기 융합 파트너는 또한 Fc 수용체에 대한 결합의 정도 또는 식세포 작용 감소의 정도에 영향을 미친다.
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 이중 특이적 항체이다. 특정 실시 형태에서, 상기 이중 특이적 항체는 사람 CD56 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 암 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 이중 특이적 항체는 사람 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 암 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 암 세포에 의해 발현된 항원은 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PD-L1, PTK7, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라아제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 폴레이트 수용체 α, GD2, GD3, 및 NY-ESO-1/LAGE 유래의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3,　gp100/pmel17,　멜란-A/MART-1,　gp75/TRP1,　타이로시나아제,　TRP2, CEA, PSA,　TAG-72,　미성숙 라미닌 수용체,　 MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1,　BING-4,　EpCAM,　MUC1, PRAME, 서바이빈,　BRCA1, BRCA2, CDK4,　CML66,　MART-2, p53, Ras, β-카테닌,　TGF-βRII, HPV E6 또는 HPV E7로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 사람 CD56 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 면역 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 항체는 사람 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 면역 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 면역 세포에 의해 발현된 항원은 BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, IDO, TDO,　41BB,　CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, PVRIG, DNAM 및 ICOS로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, 상기 항체는 하기 표로부터 선택된 불변 영역 서열을 포함한다.
Figure pct00146
Figure pct00147
Figure pct00148
특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 폴리펩타이드이다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 RGD 펩타이드, 광견병 바이러스 당단백질 (rabies virus glycoprotein: RVG) 또는 DC3 펩타이드이다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 압타머이다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 소분자를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 폴레이트, 만노오스 또는 PSMA 리간드를 포함한다.
컨쥬게이트
하나의 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 표적화 모이어티 및 하나 이상의 면역 조절 폴리뉴클레오타이드, 특정 실시 형태에서는 약 1 내지 약 6개 또는 약 1 내지 약 4개, 약 1개 또는 약 2개의 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 컨쥬게이트는 상기 표적화 모이어티를 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드에 공유적으로 연결하는 링커를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 상기 링커는 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 중의 핵 염기, 무염기성 스페이서, 포스페이트, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트에 결합된다.
하나의 실시 형태에서, 하기 화학식 C의 컨쥬게이트, 또는 이의 입체 이성질체, 둘 이상의 부분 입체 이성질체의 혼합물, 호변 이성질체 또는 둘 이상의 호변 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물이 본 출원에서 제공된다:
[화학식 C]
Figure pct00149
상기 화학식 C에서, Ab는 표적화 모이어티이고; f는 1, 2, 3 또는 4의 정수이고; LN, Q 및 e는 본 출원에서 정의된 바와 같다.
특정 실시 형태에서, 화학식 C에서, Ab는 항체이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 C에서, Ab는 단클론 항체이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 C에서, f는 1 또는 2의 정수이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 C에서, f는 1의 정수이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 C에서, e와 f 둘 다는 각각 1의 정수이다.
하나의 실시 형태에서, 상기 CpG 항체 컨쥬게이트는 약 1 내지 약 20, 약 1 내지 약 10, 약 1 내지 약 8, 약 1 내지 약 4 또는 약 1 내지 약 2의 범위의 DAR을 갖는다. 또 다른 실시 형태에서, 상기 CpG 항체 컨쥬게이트는 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7 또는 약 8의 DAR을 갖는다.
컨쥬게이트의 제조
컨쥬게이션
표적화 모이어티를 면역 조절 폴리뉴클레오타이드에 컨쥬게이션하기에 유용한 반응은 트리아졸 모이어티를 형성하기 위한 아지도와 알킨계 컨쥬게이트 기 사이의 휘스겐 첨가 사이클화 (금속 촉매화 또는 무금속) (예를 들어, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴렌 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐); 친디엔체와 디엔/헤테로-디엔 사이의 Diels-Alder 반응; 엔 반응과 같은 페리사이클릭 반응을 통한 결합 형성; 아미드 또는 티오아미드 결합 형성; (예를 들어, 아지도 화합물과의) 설폰아미드 결합 형성; 알코올 또는 페놀 알킬화 (예를 들어, Williamson 알킬화), 옥심, 하이드라존 또는 세미카바지드 기를 형성하기 위한 축합 반응; 친핵체 (예를 들어, 아민 및 티올)에 의한 컨쥬게이트 첨가 반응; 다이설파이드 결합 형성; 및 카보닐에서 (예를 들어, 펜타플루오로페닐 (PFP) 에스테르 또는 테트라플루오로페닐 (TFP) 에스테르와 같은 활성화 카복실산 에스테르에서) 또는 친전자성 아렌 (예를 들어, 올리고플루오르화 아렌, 플루오로벤조니트릴 기 또는 플루오로니트로벤젠 기에서의 SNAr)에서 (예를 들어, 아민, 티올 또는 하이드록실 친핵체에 의한) 친핵성 치환을 비롯하여 당해 분야에 공지되어 있다.
특정 실시 형태에서, 상기 컨쥬게이션 반응은 쌍극자 첨가 사이클화이며, 상기 표적화 모이어티는 아지도, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴렌, 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐을 포함한다. 상기 상보성 반응기 및 상기 컨쥬게이트 기는 상호 보완성을 위해 선택된다. 예를 들어, 아지드는 상기 컨쥬게이트 기와 상기 상보성 반응기 중 하나에 사용되는 반면, 알킨은 상기 컨쥬게이트 기와 상기 상보성 반응기 중 다른 하나에 사용된다.
면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 제조
본 출원에서 제공되는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 뉴클레오사이드 포스포르아미다이트로부터 폴리뉴클레오타이드의 화학 합성 분야에 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 포스포르아미다이트는 포스포르아미다이트의 인 원자에 공유 결합된 컨쥬게이트 기를 포함할 수 있다.
표적화 모이어티 부분의 제조
표적화 모이어티는 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 중의 컨쥬게이트 기와 표적화 모이어티에 결합된 상보성 반응기 사이에 결합을 형성함으로써 면역 조절 폴리뉴클레오타이드에 컨쥬게이트될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 본질적으로 상보성 반응기 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 조작된 유도체 중의 Q-tag (예를 들어, LLQGG (서열 번호 582) 또는 GGGLLQGG (서열 번호 583)))를 보유한다. 특정 실시 형태에서, 상기 표적화 모이어티는 (예를 들어, 상보성 반응기를 Q-tag에 부착시킴으로써) 상보성 반응기를 포함하도록 변형된다. 이러한 상보성 반응기를 표적화 모이어티에 도입하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다.
특정 실시 형태에서, 상기 상보성 반응기는 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00150
또는 이의 N-보호된 모이어티,
Figure pct00151
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합 (예를 들어,
Figure pct00152
)을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴, 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00153
), 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00154
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
여기서,
RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H, 임의로 치환된 C1-6 알킬 또는 O-보호기 (예를 들어, 카복실 보호기)이고;
R13은 할로겐 (예를 들어, F)이다.
특정 실시 형태에서, 상보성 반응기는 공액 반응까지 보호된다. 예를 들어, 보호되는 상보성 반응기로는 -COORPGO 또는 -NHRPGN이 포함될 수 있으며, 여기서, RPGO는 O-보호기 (예를 들어, 카복실 보호기)이고, RPGN은 N-보호기이다.
특정 실시 형태에서, 상보성 반응기는 -Z3-QA3이며,
여기서,
Z3은 2가, 3가, 4가 또는 5가 이며, 여기서, 원자가 중 하나는 QA3으로 치환되고, 원자가 중 하나는 개방되고, 나머지 원자가는 존재하는 경우 각각 독립적으로 보조 모이어티로 치환되고;
QA3은 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00155
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00156
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00157
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00158
), 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00159
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
여기서,
RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H, 임의로 치환된 C1-6 알킬, O-보호기 또는 카복실 보호기이고;
R13은 할로겐 또는 F이다.
특정 실시 형태에서, Z3은 분지성 기 및 2개의 2가 분절을 포함하며, 여기서, 상기 분지성 기는 상기 2가 분절의 각각에 결합되고, 상기 2가 분절 중 하나는 개방 원자가를 가지고, 상기 나머지 2가 분절은 QA3에 결합되고; 상기 분지성 기는 임의로 치환된 C1-12 알칸-트리일, 임의로 치환된 C1-12 알칸-테트라일, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알칸-트리일 및 임의로 치환된 C2-12 헤테로알칸-테트라일로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 단량체를 포함하고, 여기서, 상기 분지성 기 중 2개의 원자가는 상기 2개의 2가 분절에 결합되고, 나머지 원자가는 각각 독립적으로 보조 모이어티로 치환된다.
특정 실시 형태에서, Z3 중 상기 2가 분절은 -(-QB-QC-QD-)s1-이고,
여기서,
s1은 약 1 내지 약 50 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌이다.
특정 실시 형태에서, QB 및 QD 중 적어도 하나는 Z3의 각각의 단량체 단위에 존재한다.
특정 실시 형태에서, -Z3-QA3은 하기 화학식 Vb이다:
[화학식 Vb]
-(-QB-QC-QD-)s1-QE-(-QB-QC-QD-)s1-QA3
상기 화학식 Vb에서,
s1은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 50 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
QA3은 본 출원에서 기재된 바와 같고;
QB 및 QD는 각각 독립적으로 부재하거나, -CO-, -NH-, -O-, -S-, -SO2-, -OC(O)-, -COO-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -CH2-, -CH2NH-, -NHCH2-, -CH2O- 또는 -OCH2-이고;
QC는 각각 독립적으로 부재하거나, 임의로 치환된 C1-12 알킬렌, 임의로 치환된 C2-12 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-12 알키닐렌, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 C1-9 헤테로사이클릴렌이고;
QE는 부재하거나 본 출원에서 기재된 바와 같은 화학식 IV의 분지성 기이다.
특정 실시 형태에서, -(-QB-QC-QD-)s1-는
-QB-(CH2)g1-(CH2OCH2)g2-(CH2)g3-QD-의 기이며,
여기서,
(i) g2는 약 1 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
(ii) g1은 1이고, QB는 -NHCO-, -CONH- 또는 -O-이거나; g1은 0이고, QD는 -NHCO-이고;
(iii) g3은 1이고, QB는 -NHCO-, -CONH- 또는 -O-이거나; g3은 0이고, QD는 -CONH-이다.
특정 실시 형태에서, 상기 상보성 반응기는 하기 화학식 XXIX 또는 화학식 XXX이다:
[화학식 XXIX]
Figure pct00160
[화학식 XXX]
Figure pct00161
상기 화학식들에서,
QA2은 부재하거나, 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌 (예를 들어, -C(O)-N(H)-, -N(H)-C(O)-, -S(O)2-N(H)- 또는 -N(H)-S(O)2-를 함유하는 헤테로알킬렌), 임의로 치환된 C1-12 티오헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00162
또는
Figure pct00163
), 임의로 치환된 C1-12 헤테로사이클릴렌 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸-1,4-디일 또는
Figure pct00164
), 사이클로부트-3-엔-1,2-디온-3,4-디일, 또는 피리드-2-일 하이드라존, 임의로 치환된 C6-16 트리아졸로헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00165
), 임의로 치환된 C8-16 트리아졸로사이클로알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00166
) 또는 디하이드로피리다진 기 (예를 들어, 트랜스-
Figure pct00167
)이고;
QA3은 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00168
Figure pct00169
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00170
Figure pct00171
엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00172
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00173
또는
Figure pct00174
), 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00175
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R13은 할로겐 또는 F이고;
RT는 각각 독립적으로 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
QT는 각각 독립적으로 -CO-, -NH-, -NH-CH2- 또는 -CO-CH2-이고;
X1, X3 및 X5는 각각 독립적으로 부재하거나, -O-, -NH-, -CH2-NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH-, -NH-C(O)-O-, -CH2-NH-C(O)-NH-, -CH2-O-C(O)-NH- 또는 -CH2-NH-C(O)-O-이고;
X2 및 X4는 각각 독립적으로 부재하거나, -O-, -NH-, -C(O)-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-, -NH-C(O)-NH-, -O-C(O)-NH- 또는 -NH-C(O)-O-이고;
x2는 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
x3은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 11의 정수이고;
x5는 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고;
x6은 각각 독립적으로 약 0 내지 약 10 또는 약 1 내지 약 6의 정수이고, 단, 두 x6의 합계는 약 12 이하이다.
특정 실시 형태에서, 상기 상보성 반응기는 하기 화학식 XXXI, 화학식 XXXII, 화학식 XXXIII, 화학식 XXXIV, 화학식 XXXV, 화학식 XXXVI 또는 화학식 XXXVII이다:
[화학식 XXXI]
Figure pct00176
[화학식 XXXII]
Figure pct00177
[화학식 XXXIII]
Figure pct00178
[화학식 XXXIV]
Figure pct00179
[화학식 XXXV]
Figure pct00180
[화학식 XXXVI]
Figure pct00181
[화학식 XXXVII]
Figure pct00182
상기 화학식들에서,
QA3은 각각 독립적으로 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 임의로 치환된 N-보호된 아미노, 아지도, N-말레이미도, S-보호된 티올,
Figure pct00183
Figure pct00184
또는 이의 N-보호된 버전,
Figure pct00185
Figure pct00186
, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00187
), 1,2,4,5-테트라진 기 (예를 들어,
Figure pct00188
또는
Figure pct00189
), 또는 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00190
), -NHRN1, 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐 또는 노르보네닐), 또는 -COOR12 또는 -CHO를 함유하는 임의로 치환된 C1-16 알킬이고;
RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
RN1은 각각 독립적으로 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R12는 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R13은 각각 독립적으로 할로겐 또는 F이고;
QT는 각각 독립적으로 -CO-, -NH-, -NH-CH2- 또는 -CO-CH2-이고;
RT는 각각 독립적으로 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
q5 및 q6은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10 또는 약 1 내지 약 6의 정수이고;
q7은 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고;
q8은 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
q9는 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10의 정수이다.
특정 실시 형태에서, 상기 상보성 반응기는 하기 화학식 XXXVIII, 화학식 XXXIX, 화학식 XL, 화학식 XLI, 화학식 XLII, 화학식 XLIII 또는 화학식 XLIV이다:
[화학식 XXXVIII]
Figure pct00191
[화학식 XXXIX]
Figure pct00192
[화학식 XL]
Figure pct00193
[화학식 XLI]
Figure pct00194
[화학식 XLII]
Figure pct00195
[화학식 XLIII]
Figure pct00196
[화학식 XLIV]
Figure pct00197
상기 화학식들에서,
RM1은 각각 독립적으로 H 또는 보조 모이어티이고;
QT는 각각 독립적으로 -CO-, -NH-, -NH-CH2- 또는 -CO-CH2-이고;
RT는 각각 독립적으로 표적화 모이어티에 대한 결합이고;
q5 및 q6은 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10 또는 약 1 내지 약 6의 정수이고;
q7은 각각 독립적으로 약 0 또는 약 1의 정수이고;
q8은 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 또는 약 1 내지 약 30의 정수이고;
q9는 각각 독립적으로 약 1 내지 약 10의 정수이다.
약제학적 조성물
본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 전달은 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방법을 사용하여 세포를 컨쥬게이트와 접촉시킴으로써 달성될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물로 제형화된다. 특정 실시 형태에서, 상기 약제학적 조성물은 액체 또는 고체 (예를 들어, 감압 동결 건조 (lyophilized))이다.
본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 단독으로 또는 의도된 투여 경로 및 표준 약제학적 실무와 관련하여 선택된 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합하여 투여될 수 있다. 이렇게 사용하기 위한 약제학적 조성물은 컨쥬게이트를 약제학적으로 사용될 수 있는 제제로 가공하는 것을 용이하게 하는 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 보조제를 사용하여 통상적인 방법으로 제형화될 수 있다.
자주 사용되는 담체 또는 부형제로는 당류 (예를 들어, 락토오스, 만니톨), 우유 단백질, 젤라틴, 전분, 비타민, 셀룰로오스 및 이의 유도체, 폴리(에틸렌 글리콜) 및 용매, 예를 들어, 멸균수, 알코올, 글리세롤 및 다가 알코올이 포함된다. 정맥내 비히클로는 유체 및 영양 보충제가 포함될 수 있다. 다른 약제학적으로 허용되는 담체로는, 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005)] 및 2013년에 공개된 미국 약전: 국가 처방집 (USP 36 NF31)에 기재된 바와 같이 염, 보존제, 완충제 등을 비롯하여 수용액, 무독성 부형제가 포함된다. 약제학적 조성물 중 다양한 성분의 pH 및 정확한 농도는 당해 분야의 일상적인 실무에 따라 조정될 수 있다. 문헌 [Goodman and Gilman's, the Pharmacological Basis for Therapeutics]을 참조한다.
약제학적 조성물을 제조할 때, 활성 성분은 전형적으로 부형제 (예를 들어, 감압 동결 건조된 제형 중에서)와 혼합되거나 부형제에 의해 희석된다. 부형제가 희석제로서의 역할을 할 때, 이것은 활성 성분을 위한 비히클, 담체 또는 매질로서의 역할을 하는 고체, 반고체 또는 액체 물질 (예를 들어, 포스페이트 완충 식염수)일 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 정제, 분말, 엘릭시르, 현탁액, 에멀젼, 용액 및 시럽의 형태일 수 있다. 당해 분야에 공지된 바와 같이, 희석제의 유형은 의도된 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 생성된 조성물은 추가의 제제, 예를 들어, 보존제를 포함할 수 있다. 상기 제형은 추가로 다음을 포함할 수 있다: 윤활제, 예를 들어, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 미네랄 오일; 습윤제; 유화제 및 현탁 제; 보존제, 예를 들어, 메틸- 및 프로필하이드록시-벤조에이트; 감미료; 및 향미제. 다른 예시적인 부형제는 문헌 [Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th Edition, Rowe et al., Eds., Pharmaceutical Press (2009)]에 기재되어 있다. 보존제로는 항균제, 산화 방지제, 킬레이트화제 및 불활성 가스가 포함될 수 있다.
이러한 약제학적 조성물은 통상적인 방식으로, 예를 들어, 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 분말화, 유화, 캡슐화, 포획 또는 감압 동결 건조 공정에 의해 제조될 수 있다. 당해 분야에 널리 공지된 제형의 제조 방법은, 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005)] 및 [Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York]에서 발견된다. 적절한 제형은 선택되는 투여 경로에 따라 좌우된다. 이러한 조성물의 제형화 및 제조는 약제학적 제형 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 제형을 제조할 때, 컨쥬게이트는 다른 성분과 배합하기 전에 적절한 입자 크기를 제공하기 위해 분쇄될 수 있다.
투여 경로
상기 약제학적 조성물은 국부로 또는 전신으로 투여될 수 있다. 치료학적 유효량은 대상체의 질병 진행 정도, 개인의 연령, 성별 및 체중과 같은 요인에 따라 달라질 것이다. 투약량 용법은 최적의 치료학적 반응을 제공하기 위해 조정될 수 있다. 예를 들어, 여러 분할 용량을 매일 투여할 수 있거나, 용량을 치료학적 상황의 긴급성에 따라 비례적으로 감소시킬 수 있다.
약제학적 조성물은 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이 선택된 투여 경로에 따라 다양한 형태로 환자에게 투여될 수 있다. 본 출원에서 기재된 방법에 사용된 컨쥬게이트는, 예를 들어, 비경구 투여에 의해 투여될 수 있다. 비경구 투여로는 근육내, 정맥내, 동맥내, 두개내, 피하, 안와내, 뇌실내, 척수내, 척수강내, 복강내, 직장 및 국소 투여 경로가 포함된다. 국소 투여 경로로는 경피, 진피내, 협측 및 설하 투여 경로가 포함된다. 약제학적 조성물은 선택된 투여 경로에 따라 제형화된다. 비경구 투여는 선택된 기간에 걸쳐 연속 주입에 의해 이루어질 수 있다.
비경구 투여용 제형
본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 본 출원에서 기재된 바와 같은 약제학적으로 허용되는 비경구 (예를 들어, 정맥내, 근육내 또는 피하) 제형으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 약제학적 제형은 또한 통상적인 무독성의 약제학적으로 허용되는 담체 및 아쥬반트를 함유하는 제형 또는 투여 형태 (dosage form)로 비경구로 (예를 들어, 정맥내로, 근육내로 또는 피하로)로 투여될 수 있다. 특히, 비경구 투여에 적절한 제형으로는 산화 방지제, 완충제, 정균제 및 제형을 환자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 예를 들어, 이러한 조성물을 제조하기 위해, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 비경구적으로 허용되는 액체 비히클 중에 용해되거나 현탁될 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매는 물, 적절한 양의 염산, 수산화 나트륨 또는 적합한 완충액 (예를 들어, 포스페이트 완충 식염수)의 첨가에 의해 적합한 pH로 조정된 물, 1,3-부탄디올, 링거액 및 등장성 염화 나트륨 용액이다. 상기 수성 제형은 또한 하나 이상의 보존제, 예를 들어, 메틸, 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시벤조에이트를 함유할 수 있다. 비경구 제형에 관한 추가 정보는, 예를 들어, 본 출원에 참조로 포함되는 미국 약전 - 국가 처방집 (USP-NF)에서 별견될 수 있다.
본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 비경구 제형은 비경구 투여에 적합한 것으로 USP-NF에 의해 확인된 하기 4 가지의 일반적인 유형의 제형 중 어느 하나일 수 있다:
(1) "주사용 약물": 약물 주사로서의 비경구 투여를 위해 적절한 멸균 비히클과 배합될 건조 (예를 들어, 감압 동결 건조) 고체로서의 원료 의약품 (예를 들어, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트);
(2) "약물 주사 가능한 에멀젼": 적합한 에멀젼 매질 중에 용해되거나 분산되는 원료 의약품 (예를 들어, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트)의 액상 제제;
(3) "약물 주사 가능한 현탁액": 적합한 액체 매질 중에 현탁된 원료 의약품 (예를 들어, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트)의 액상 제제; 및
(4) "주사 가능한 현탁액용 약물": 약물 주사 가능한 현탁액으로서의 비경구 투여를 위해 적절한 멸균 비히클과 배합될 건조 고체로서의 원료 의약품 (예를 들어, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트).
예시적인 비경구 투여용 제형으로는 계면 활성제, 예를 들어, 하이드록시프로필셀룰로오스와 적합하게 혼합된 물로 제조된 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 용액이 포함된다. 분산액은 또한 알코올 존재 유무하의 글리세롤, 액체 폴리(에틸렌 글리콜), DMSO 및 이들의 혼합물로 및 오일로 제조될 수 있다. 통상적인 보관 및 사용 조건하에, 이러한 제제는 미생물의 성장을 방지하기 위해 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 제형의 선택 및 제조를 위한 통상적인 절차 및 성분은 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005)] 및 2013년에 공개된 미국 약전: 국가 처방집 (USP 36 NF31)에 기재되어 있다.
생체 적합성, 생물 분해성 락티드 중합체, 락티드/글리콜리드 공중합체, 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체를 사용하여 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 방출을 조절할 수 있다. 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트를 위한 잠재적으로 유용한 다른 비경구 전달 시스템으로는 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투압 펌프 또는 이식 가능한 주입 시스템이 포함된다. 비경구 제형은 폴리뉴클레오타이드 및/또는 컨쥬게이트의 신속 방출 또는 지연/연장 방출을 위해 제형화될 수 있다. 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 비경구 방출을 위한 예시적인 제형으로는 다음이 포함된다: 수용액, 재구성용 분말, 공용매 용액, 유/수 에멀젼, 현탁액, 미소 구체 및 중합체성 겔.
사용 방법
하나의 실시 형태에서, 치료학적 유효량의 본 출원에서 개시된 컨쥬게이트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 증식성 질환의 하나 이상의 증상을 치료, 예방 또는 개선하는 방법이 본 출원에서 제공된다.
특정 실시 형태에서, 상기 대상체는 포유 동물이다. 특정 실시 형태에서, 상기 대상체는 사람이다. 특정 실시 형태에서, 상기 대상체는 사람 이외의 다른 영장류, 소와 같은 농장 동물, 스포츠 동물, 또는 말, 개 또는 고양이와 같은 애완 동물이다.
특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 종양이다. 특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 액상 또는 혈액학적 종양이다. 특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 고형 종양이다. 특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 신생물 질환이다.
특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 암이다. 특정 실시 형태에서, 상기 암은 재발 암이다. 특정 실시 형태에서, 상기 암은 내약성 암이다. 특정 실시 형태에서, 상기 암은 재발 내약성 암이다. 특정 실시 형태에서, 상기 암은 다제내성 암이다. 특정 실시 형태에서, 상기 암은 재발 다제내성 암이다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트로 치료 가능한 암으로는 (1) 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 예를 들어, 골수 아구성, 전골수구성, 골수 단구성, 단핵구성, 적백혈병 백혈병 및 골수 이형성 증후군 또는 이의 증상 (예를 들어, 빈혈, 혈소판 감소증, 호중구 감소증, 이중 혈구 감소증 또는 범 혈구 감소증 등), 불응성 빈혈 (refractory anemia: RA), 환상 철아구를 갖는 RA (RA with ringed sideroblast: RARS), 과다 아구를 갖는 RA (RA with excess blast: RAEB), 형질 전환 중인 RAEB (RAEB-T), 전백혈병 및 만성 골수 단구성 백혈병 (CMML)을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 백혈병, (2) 만성 골수구성 (과립구성) 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 및 모발상 세포 백혈병을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 만성 백혈병; (3) 진성 적혈구 증가증; (4) 호지킨 병 및 비호지킨 병을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 림프종; (5) 무증상 다발성 골수종, 비분비성 골수종, 골 경화성 골수종, 형질 세포 백혈병, 고립성 형질 세포종 및 골수외 형질 세포종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다발성 골수종; (6) 발덴스트룀 거대 글로불린 혈증; (7) 의미 불명의 단클론 감마병증; (8) 양성 단클론 감마병증; (9) 중쇄 질환; (10) 뼈 육종, 골육종, 연골 육종, 유잉 육종, 악성 거대 세포 종양, 뼈 섬유 육종, 척삭종, 골막 육종, 연조직 육종, 맥관 육종 (혈관 육종), 섬유 육종, 카포시 육종, 평활근 육종, 지방 육종, 림프관 육종, 전이성 암, 신경 집종, 횡문근 육종 및 윤활막 육종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 뼈 및 결합 조직 육종; (11) 신경 교종, 성상 세포종, 뇌간 신경 교종, 뇌실막 세포종, 희소 돌기 아교 세포종, 비-신경교 종양, 청각 신경 집종, 두개 인두종, 수모세포종, 수막종, 송과체종, 송과체 모세포종 및 원발성 뇌 림프종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 뇌 종양; (12) 선암종, 소엽 (소세포) 암종, 관내 암종, 수질 유방암, 점액성 유방암, 관상 유방암, 유두 유방암, 원발성 암, 파제트 병 및 염증성 유방암을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 유방암; (13) 크롬 친화 세포종 및 부신 피질 암종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 부신암; (14) 유두 또는 여포성 갑상선암, 갑상선 수질암 및 역형성 갑상선암을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 갑상선암; (15) 인슐린종, 가스트린종, 글루카곤종, 비포마, 소마토스타틴 분비 종양, 및 카르시노이드 또는 섬 세포 종양을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 췌장암; (16) 쿠싱 병, 프로락틴 분비 종양, 말단 비대증 및 요붕증을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 뇌하수체암; (17) 홍채 흑색종, 맥락막 흑색종, 섬모체 흑색종 및 망막 모세포종과 같은 안구 흑색종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 안암; (18) 편평 세포 암종, 선암종 및 흑색종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 질암; (19) 편평 세포 암종, 흑색종, 선암종, 기저 세포 암종, 육종 및 파제트 병을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 외음부암; (20) 편평 세포 암종 및 선암종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 자궁경부암; (21) 자궁 내막 암종 및 자궁 육종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 자궁암; (22) 난소 상피 암종, 경계성 종양, 생식 세포 종양 및 간질 종양을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 난소암; (23) 편평 세포암, 선암종, 선양 낭성 암종, 점막 표피양 암종, 선편평 암종, 육종, 흑색종, 형질 세포종, 사마귀양 암종 및 귀리 세포 (소세포) 암종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 식도암; (24) 선암종, 균상 (폴립성), 궤양성, 표재 확산성, 산만 확산성 (diffusely spreading), 악성 림프종, 지방 육종, 섬유 육종 및 암 육종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 위암; (25) 결장암; (26) 직장암; (27) 간세포 암종 및 간 모세포종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 간암; (28) 선암을 포함하지만 이에 한정되지 않는 담낭암; (29) 유두성, 결절성 및 미만성을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 담관 암종; (30) 비소세포 폐암, 편평 세포 암종 (표피양 암종), 선암종, 대세포 암종 및 소세포 폐암을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 폐암; (31) 배세포 종양 (germinal tumor), 정상피종, 역형성, 고전적 (전형적), 정모 세포성, 비정상피종, 배아 암종, 기형종 암종 및 융모막 암종 (난황낭 종양)을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 고환암; (32) 선암종, 평활근 육종 및 횡문근 육종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 전립선암; (33) 음경암 (penal cancer); (34) 편평 세포 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않는 구강암; (35) 기저암; (36) 선암종, 점막 표피양 암종 및 선양 낭성 암종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 타액선암; (37) 편평 세포암 및 사마귀양 암을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 인두암; (38) 기저 세포 암종, 편평 세포 암종 및 흑색종, 표재 확산성 흑색종, 결절성 흑색종, 흑색점 악성 흑색종 및 말단 흑색점 흑색종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 피부암; (39) 신장 세포암, 선암종, 부신종, 섬유 육종 및 이행 세포암 (신우 및/또는 자궁)을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 신장암; (40) 윌름스 종양; (41) 이행 세포 암종, 편평 세포암, 선암종 및 암 육종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 방광암; 및 점액 육종, 골원성 육종, 내피 육종, 림프관-내피 육종, 중피종, 윤활막종, 혈관 모세포종, 상피 암종, 낭 선암종, 기관지원성 암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종 및 유두상 선암종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 기타 암이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다 (문헌 [Fishman et al., 1985, Medicine, 2d Ed., J.B. Lippincott Co., Philadelphia] 및 [Murphy et al., 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books U.S.A., Inc., United States of America] 참조).
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트로 치료 가능한 암으로는 B 세포암, 예를 들어, 다발성 골수종, 발덴스트룀 거대 글로불린 혈증, 중쇄 질환, 예를 들어, 알파 쇄 질환, 감마 쇄 질환 및 뮤 쇄 질환, 양성 단클론 감마글로불린병증 및 면역 세포 아밀로이드증, 흑색종, 유방암, 폐암, 기관지암, 대장암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌암 또는 중추 신경계암 , 말초 신경계암, 식도암, 자궁경부암, 자궁암 또는 자궁내막암, 구강암 또는 인두암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장암 또는 충수암, 타액선암, 갑상선암, 부신암, 골육종, 연골 육종 및 혈액 조직암이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트로 치료 가능한 암으로는 사람 육종 및 암종, 예를 들어, 섬유 육종, 점액 육종, 지방 육종, 연골 육종, 골원성 육종, 척삭종, 맥관 육종, 내피 육종, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근 육종, 횡문근 육종, 결장 암종, 대장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두상 선암종, 낭선 암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간 세포 암종, 담관 암종, 간암, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 골암, 뇌 종양, 고환암, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경 교종, 성상 세포종, 수모세포종, 두개 인두종, 뇌실막 세포종, 송과체종, 혈관 모세포종, 청신경종, 희소 돌기 아교 세포종, 수막종, 흑색종, 신경 모세포종, 망막 모세포종; 백혈병, 예를 들어, 급성 림프구성 백혈병 및 급성 골수구성 백혈병 (골수 아구성, 전골수구성, 골수 단구성, 단핵구성 및 적백혈병); 만성 백혈병 (만성 골수구성 (과립구성) 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병); 및 진성 적혈구 증가증, 림프종 (호지킨 병 및 비호지킨 병), 다발성 골수종, 발덴스트룀 거대 글로불린 혈증 및 중쇄 질환이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 상기 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 부인과 암, 신장암, 후두암, 폐암, 구강암, 두경부암, 난소암, 췌장암, 전립선암 및 피부암을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 사실상 상피암이다. 특정 실시 형태에서, 상기 암은 유방암, 전립선암, 폐암 또는 결장암이다. 특정 실시 형태에서, 상기 상피암은 비소세포 폐암, 비유두성 신장 세포 암종, 자궁 경부 암종, 난소 암종 (예를 들어, 장액성 난소 암종) 또는 유방 암종이다.
특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 염증성 질환이다. 특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 면역 장애이다. 특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 감염 질환이다. 특정 실시 형태에서, 상기 증식성 질환은 바이러스 감염이다.
또 다른 실시 형태에서, 유효량의 본 출원에서 개시된 컨쥬게이트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 자연 살해 세포를 조절하는 방법이 본 출원에서 제공된다.
더 또 다른 실시 형태에서, 유효량의 본 출원에서 개시된 컨쥬게이트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 골수 세포를 조절하는 방법이 본 출원에서 제공된다.
치료되는 장애, 질병 또는 병태 및 대상체의 상태에 따라, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트 또는 약제학적 조성물은 경구, 비경구 (예를 들어, 근육내, 복강내, 정맥내, ICV, 수조내 주사 또는 주입, 피하 주사 또는 이식), 흡입, 비강, 질, 직장, 설하 또는 국소 (예를 들어, 경피 또는 국부) 투여 경로에 의해 투여될 수 있으며, 단독으로 또는 함께 각각의 투여 경로에 적절한 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 아쥬반트 및 비히클을 함유하는 적합한 투여 단위로 제형화될 수 있다. 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트 또는 약제학적 조성물의 데포 제형 투여가 또한 제공되며, 여기서, 활성 성분은 미리 정의된 시간 동안 방출된다.
본 출원에서 기재된 장애, 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 개선에서, 적절한 투약량 수준은 일반적으로 하루에 대상체 체중 kg 당 약 0.001 내지 100 mg (mg/kg/일), 약 0.01 내지 약 75 mg/kg/일, 약 0.1 내지 약 50 mg/kg/일, 약 0.5 내지 약 25 mg/kg/일 또는 약 1 내지 약 20 mg/kg/일의 범위이며, 이는 단일 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 이러한 범위 내에서, 상기 투약량은 약 0.005 내지 약 0.05, 약 0.05 내지 약 0.5, 약 0.5 내지 약 5.0, 약 1 내지 약 15, 약 1 내지 약 20 또는 약 1 내지 약 50 mg/kg/일의 범위일 수 있다.
그러나, 임의의 특정 환자에 대한 구체적인 용량 수준 및 투여 빈도는 다양할 수 있으며, 사용된 구체적인 화합물의 활성, 대사 안정성 및 해당 화합물의 작용 기간, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 방식 및 시간, 배설 속도, 약물 조합, 특정 병태의 중증도, 치료 중인 숙주를 비롯한 다양한 요인에 좌우될 것이다는 것을 이해해야 할 것이다.
본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 또한, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트가 유용한 병태, 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 개선에 유용한 다른 제제 또는 요법과 조합되거나 조합하여 사용될 수 있다.
적합한 다른 치료제로는 또한 (1) 알파-아드레날린제; (2) 항부정맥제; (3) ACAT 억제제와 같은 항죽상 동맥 경화제; (4) 안트라사이클린, 블레오마이신, 미토마이신, 닥티노마이신 및 플리카마이신과 같은 항생제; (5) 항암제 및 세포독성제, 예를 들어, 질소 머스타드, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아, 에틸렌이민 및 트리아젠과 같은 알킬화제; (6) 아세노쿠마롤, 아르가트로반, 비발리루딘, 레피루딘, 폰다파리눅스, 헤파린, 페닌디온, 와파린 및 자이멜라가트란과 같은 항응고제; (7) 비구아나이드 (예를 들어, 메트포르민), 글루코시다아제 억제제 (예를 들어, 아카보스), 인슐린, 메글리티나이드 (예를 들어, 레파글리나이드), 설포닐우레아 (예를 들어, 글리메피리드, 글리부라이드 및 글리피지드), 티오졸리딘디온 (예를 들어, 트로글리타존, 로시글리타존 및 피오글리타존) 및 PPAR-감마 작용제; (8) 항진균제, 예를 들어, 아모롤핀, 암포테리신 B, 아니둘라펀진, 비포나졸, 부테나핀, 부토코나졸, 카스포펀진, 시클로피록스, 클로트리마졸, 에코나졸, 펜티코나졸, 필리핀, 플루코나졸, 이소코나졸, 이트라코나졸, 케토코나졸, 미카펀진, 미코나졸, 나프티핀, 나타마이신, 니스타틴, 옥시코나졸, 라부코나졸, 포사코나졸, 리모시딘, 세르타코나졸, 설코나졸, 테르비나핀, 테르코나졸, 티오코나졸 및 보리코나졸; (9) 항염증제, 예를 들어, 아세클로페낙, 아세메타신, 아목시프린, 아스피린, 아자프로파존, 베노릴레이트, 브롬페낙, 카프로펜, 셀레콕시브, 콜린 마그네슘 살리실레이트, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 에토리콕시브, 파이슬아민, 펜부펜, 페노프로펜, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 로녹시캄, 록소프로펜, 루미라콕시브, 메클로페남산, 메페남산, 멜록시캄, 메타미졸, 메틸 살리실레이트, 마그네슘 살리실레이트, 나부메톤, 나프록센, 니메술리드, 옥시펜부타존, 파레콕시브, 페닐부타존, 피록시캄, 살리실 살리실레이트, 설린닥, 설핀피라존, 수프로펜, 테녹시캄, 티아프로펜산 및 톨메틴; (10) 항대사 물질, 예를 들어, 폴레이트 길항제, 퓨린 유사체 및 피리미딘 유사체; (11) 항혈소판제, 예를 들어, GPIIb/IIIa 차단제 (예를 들어, 압식시맙, 엡티피바타이드 및 티로피반), P2Y(AC) 길항제 (예를 들어, 클로피도그렐, 티클로피딘 및 CS-747), 실로스타졸, 디피리다몰 및 아스피린; (12) 항증식제, 예를 들어, 메토트렉세이트, FK506 (타크롤리무스) 및 미코페놀레이트 모페틸; (13) 항-TNF 항체 또는 가용성 TNF 수용체, 예를 들어, 에타너셉트, 라파마이신 및 레플루니미드; (14) aP2 억제제; (15) 베타-아드레날린제, 예를 들어, 카르베딜롤 및 메토프롤롤; (16) 담즙산 격리제, 예를 들어, 퀘스트란; (17) 칼슘 채널 차단제, 예를 들어, 암로디핀 베실레이트; (18) 화학 요법제; (19) 사이클로옥시게나아제-2 (COX-2) 억제제, 예를 들어, 셀레콕시브 및 로페콕시브; (20) 사이클로스포린; (21) 세포독성 약물, 예를 들어, 아자티오프린 및 사이클로포스파마이드; (22) 이뇨제, 예를 들어, 클로로티아지드, 하이드로클로로티아지드, 플루메티아지드, 하이드로플루메티아지드, 벤드로플루메티아지드, 메틸클로로티아지드, 트리클로로메티아지드, 폴리티아지드, 벤조티아지드, 에타크린산, 티크리나펜, 클로르탈리돈, 푸로세니드, 무졸리민, 부메타니드, 트리암테렌, 아밀로라이드 및 스피로놀락톤; (23) 엔도텔린 전환 효소 (endothelin converting enzyme: ECE) 억제제, 예를 들어, 포스포라미돈; (24) 효소, 예를 들어, L-아스파라기나아제; (25) 인자 VIIa 억제제 및 인자 Xa 억제제; (26) 파르네실-단백질 전이 효소 억제제; (27) 피브레이트; (28) 성장 인자 억제제, 예를 들어, PDGF 활성 조절제; (29) 성장 호르몬 분비 촉진제; (30) HMG CoA 리덕타아제 억제제, 예를 들어, 프라바스타틴, 로바스타틴, 아토르바스타틴, 심바스타틴, NK-104 (일명 이타바스타틴, 니스바스타틴 또는 니스바스타틴) 및 ZD-4522 (로수바스타틴, 아타바스타틴 또는 비사스타틴으로도 또한 공지됨); 중성 엔도펩티다아제 (NEP) 억제제; (31) 호르몬제, 예를 들어, 글루코코르티코이드 (예를 들어, 코르티손), 에스트로겐/항에스트로겐, 안드로겐/항안드로겐, 프로게스틴 및 황체 형성 호르몬 방출 호르몬 길항제 및 옥트레오타이드 아세테이트; (32) 면역 억제제; (33) 미네랄로코르티코이드 수용체 길항제, 예를 들어, 스피로놀락톤 및 에플레레논; (34) 미세 소관 파괴제, 예를 들어, 엑테이나시딘; (35) 미세 소관 안정화제, 예를 들어, 파시탁셀, 도세탁셀 및 에포틸론 A~F; (36) MTP 억제제; (37) 니아신; (38) 포스포디에스테라아제 억제제, 예를 들어, PDE III 억제제 (예를 들어, 실로스타졸) 및 PDE V 억제제 (예를 들어, 실데나필, 타달라필 및 바르데나필); (39) 식물 유래 제품, 예를 들어, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신 및 탁산; (40) 혈소판 활성화 인자 (platelet activating factor: PAF) 길항제; (41) 백금 배위 착물, 예를 들어, 시스플라틴, 사트라플라틴 및 카보플라틴; (42) 칼륨 채널 오프너; (43) 프레닐-단백질 트랜스퍼라아제 억제제; (44) 단백질 타이로신 키나아제 억제제; (45) 레닌 억제제; (46) 스쿠알렌 신타아제 억제제; (47) 스테로이드, 예를 들어, 알도스테론, 베클로메타손, 베타메타손, 데옥시코르티코스테론 아세테이트, 플루드로코르티손, 하이드로코르티손 (코르티솔), 프레드니솔론, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 덱사메타손 및 트리암시놀론; (48) TNF-알파 억제제, 예를 들어, 테니답; (49) 트롬빈 억제제, 예를 들어, 히루딘; (50) 혈전 용해제, 예를 들어, 아니스트레플라제, 레테플라제, 테넥테플라제, 조직 플라스미노겐 활성화제 (tPA), 재조합 tPA, 스트렙토키나아제, 우로키나아제, 프로우로키나아제 및 아니소일레이트화 플라스미노겐 스트렙토키나아제 활성화제 복합체 (anisoylated plasminogen streptokinase activator complex: APSAC); (51) 트롬복산 수용체 길항제, 예를 들어, 이페트로반; (52) 토포아이소머라아제 억제제; (53) 바소펩티다아제 억제제 (이중 NEP-ACE 억제제), 예를 들어, 오마파트릴라트 및 게모파트릴라트; 및 (54) 기타 제제, 예를 들어, 하이드록시우레아, 프로카바진, 미토탄, 헥사메틸멜라민 및 금 화합물이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트와 조합하여 사용될 수 있는 다른 치료제로는 항암제 및 세포독성제, 예를 들어, 질소 머스타드, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아, 에틸렌이민 및 트리아젠과 같은 알킬화제; 예를 들어, 질소 머스타드, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아, 에틸렌이민 및 트리아젠과 같은 알킬화제가 포함된다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트와 조합하여 사용될 수 있는 다른 치료제로는 면역 체크포인트 조절제가 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 PD-1 억제제이다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 PD-L1 억제제이다. 특정 실시 형태에서, 상기 PD-1 억제제는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 특정 실시 형태에서, 상기 PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 PD-1과 PD-L1 사이의 상호 작용을 차단한다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트와 조합하여 사용될 수 있는 다른 치료제로는 T 세포 공동 자극 분자 및 면역 체크포인트 조절제가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 특정 실시 형태에서, 상기 T 세포 공동 자극 분자는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1/CD11a/CD18, ICOS/CD278, 4-1BB/CD137, GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 또는 CD83 또는 이의 리간드이다. 특정 실시 형태에서, 상기 T 세포 공동 자극 분자는 항-OX40 항체, 항-ICOS/CD278 항체 또는 항-4-1BB/CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, LAG-3, CEACAM-1, CEACAM-5, CLTA-4, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD47, CD160, 2B4, CD172a 및 TGFR로부터 선택된 면역 체크포인트 분자의 억제제이다. 특정 실시 형태에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 항-CD47 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트와 조합하여 사용될 수 있는 다른 요법으로는 수술, 내분비 요법, 생물학적 반응 조절제 (예를 들어, 인터페론, 인터루킨 및 종양 괴사 인자 (tumor necrosis factor: TNF)), 고열 및 냉동 요법, 및 임의의 부작용을 완화하기 위한 제제 (예를 들어, 구토 방지제)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
이러한 다른 제제 또는 약물은 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트와 동시에 또는 순차적으로 이를 위해 통상적으로 사용되는 경로 및 양으로 투여될 수 있다. 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트가 하나 이상의 다른 약물과 동시에 사용될 때, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트에 추가하여 이러한 다른 약물을 함유하는 약제학적 조성물이 사용될 수 있지만 필수는 아니다. 따라서, 본 출원에서 제공되는 약제학적 조성물은 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트에 추가하여 하나 이상의 다른 활성 성분 또는 치료제를 또한 함유하는 것들을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 제2 항체, 예를 들어, 암에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 (예를 들어, 유효량의 제2 항체)와 조합하여 투여된다. 암에 의해 발현된 예시적인 항원은 당해 분야에 공지되어 있으며, 다음을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다: CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PTK7, PD-L1, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라아제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 폴레이트 수용체 α, GD2, GD3, 및 NY-ESO-1/LAGE 유래의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3,　gp100/pmel17,　멜란-A/MART-1,　gp75/TRP1,　타이로시나아제,　TRP2, CEA, PSA,　TAG-72,　미성숙 라미닌 수용체,　MOK/RAGE-1, WT-1,　SAP-1,　BING-4,　EpCAM,　MUC1, PRAME, 서바이빈,　BRCA1, BRCA2, CDK4,　CML66,　MART-2, p53, Ras, β-카테닌, TGF-βRII, HPV E6 또는 HPV E7. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 CD123 (IL-3 수용체 알파로도 또한 공지됨)에 결합하는 단클론 항체, 예를 들어, 탈라코투주맙 (CSL362 및 JNJ-56022473)과 조합하여 투여된다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 EGFR에 결합하는 단클론 항체 (예를 들어, 세툭시맙)와 조합하여 투여된다. 특정 실시 형태에서, 상기 제2 항체는 하나 이상의 이펙터 기능, 예를 들어, ADCC 또는 ADCP 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 면역 세포 상의 Fc 수용체 (FcR) 결합과 관련된 이펙터 기능을 포함한다. 이론에 구속시키고자 하는 것은 아니지만, 이러한 항체와 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 조합은, 예를 들어, NK 또는 골수 세포의 활성을 조절하면서 FcR 발현 백혈구가 제2 항체와 결합되는 종양 세포를 표적화하는데 특히 유리한 것으로 생각된다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 면역 치료제 (예를 들어, 유효량의 면역 치료제)와 조합하여 투여된다. 면역 치료제는 면역계를 표적화하고 면역계의 치료학적 재지시를 촉진하는 임의의 치료제, 예를 들어, 공동 자극 경로의 조절제, 암 백신, 재조합적으로 변형된 면역 세포 등을 지칭할 수 있다. 예시적이고 비제한적인 면역 치료제는 하기에서 기재된다. 이론에 구속시키고자 하는 것은 아니지만, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는, 예를 들어, 대식 세포 및 다른 면역 세포, 예를 들어, T이펙터 세포를 모두 활성화시켜 종양 세포를 표적화하는데 있어서 상보적인 작용 기전으로 인해 면역 치료제와 함께 사용하기에 적합한 것으로 생각된다.
특정 실시 형태에서, 상기 면역 치료제는 항체를 포함한다. 면역 치료 항체의 예시적인 항원은 당해 분야에 공지되어 있으며, BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, IDO, TDO,　41BB,　CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, PVRIG, DNAM 및 ICOS가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 승인되거나 후기 단계의 임상 시험에 있는 면역 치료제로는 이필리무맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 등이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 특정 실시 형태에서, 본 개시 내용의 항체는 PD-L1/PD-1 경로의 억제제, 예를 들어, 항-PD-L1 또는 항-PD-1 항체와 조합하여 투여된다. 본 출원에서 입증되는 바와 같이, 본 개시 내용의 항-SIRP-α 항체와 PD-L1/PD-1 경로의 억제제의 조합 투여는 상승 작용적 항종양 활성을 초래할 수 있다.
특정 실시 형태에서, 상기 면역 치료제는 백신, 종양 용해성 바이러스, 입양 세포 요법, 사이토카인 또는 소분자 면역 치료제를 포함한다. 이러한 면역 치료제의 예는 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 입양 세포 요법 및 치료제로는 키메라 항원 수용체 T 세포 요법 (chimeric antigen receptor T-cell: CAR-T), 종양 침윤 림프구 (tumor infiltrating lymphocyte: TIL), TCR 조작된 NK 세포 및 대식 세포 제품이 포함될 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 백신으로는 폴리뉴클레오타이드 백신, 폴리펩타이드 백신, 또는 세포 기반 (예를 들어, 종양 또는 수지상 세포 기반) 백신이 포함될 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 암 치료에 유용한 다양한 사이토카인은 공지되어 있으며, IL-2, IL-15, IL-7, IL-10 및 IFN이 포함되지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 소분자 면역 치료제로는 IDO/TDO 억제제, 아르기나아제 억제제, A2a R 억제제, TLR 작용제, STING 작용제 및 Rig-1 작용제가 포함될 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 메토트렉세이트 (RHEUMATREX®), 아메토프테린, 사이클로포스파마이드 (CYTOXAN®), 탈리도마이드 (THALIDOMID®), 아크리딘 카복사미드, 액티미드®, 악티노마이신, 17-N-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 아미노프테린, 암사크린, 안트라사이클린, 항신생물제, 안티네오플라스톤, 5-아자시티딘, 아자티오프린, BL22, 벤다무스틴, 비리코다르, 블레오마이신, 보르테조밉, b 오스타틴, 부설판, 칼리쿨린, 캄프토테신, 카페시타빈, 카보플라틴, 세툭시맙, 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 사이타라빈, 다카바진, 다사티닙, 다우노루비신, 데시타빈, 디클로로아세트산, 디스코드 올라이드, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에포틸론, 에리불린, 에스트라무스틴, 에토포사이드, 엑사테칸, 엑시술린드, 페루기놀, 플록슈리딘, 플루다라빈, 플루오로우라실, 포스페스트롤, 포테무스틴, 간시클로비르, 젬시타빈, 하이드록시우레아, IT-101, 이다루비신, 이포스파마이드, 이미퀴모드, 이리노테칸, 이로풀벤, 익사베필론, 라니퀴다르, 라파티닙, 레날리도마이드, 로무스틴, 루르토테칸, 마포스파미드, 마소프로콜, 메클로레타민, 멜팔란, 머캅토퓨린, 미토마이신, 미토탄, 미톡산트론, 넬라라빈, 닐로티닙, 오블리메르센, 옥살리플라틴, PAC-1, 파클리탁셀, 페메트렉시드, 펜토스타틴, 피포브로만, 픽산트론, 플리카마이신, 프로카바진, 프로테아좀 억제제 (예를 들어, 보르테조밉), 랄티트렉시드, 레베카마이신, 레블리미드®, 루비테칸, SN-38, 살리노스포라미드 A, 사트라플라틴, 스트렙토조토신, 스와인소닌, 타리퀴다르, 탁산, 테가푸르-우라실, 테모졸로마이드, 테스토락톤, 티오TEPA, 티오구아닌, 토포테칸, 트라벡테딘, 트레티노인, 트리플라틴 테트라니트레이트, 트리스(2-클로로에틸)아민, 트록사시타빈, 우라실 머스타드, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 보리노스타트 또는 조수퀴다르를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 치료제와 조합하여 투여된다.
특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 3F8, 8H9, 아바고보맙, 압식시맙, 아비투주맙, 아브릴루맙, 악톡주맙, 아달리무맙, 아데카투무맙, 아두카누맙, 아펠리모맙, 아푸투주맙, 알라시주맙 페골, ALD518, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 알투모맙 펜테테이트, 아마툭시맙, 아나투모맙 마페나톡스, 아네투맙 라브탄신, 아니프롤루맙, 킨주맙 (IMA-638), 아폴리주맙, 아르시투모맙, 아스크린바쿠맙, 아셀리주맙, 아테졸리주맙, 아티누맙, 아틀리주맙 (토실리주맙), 아토롤리무맙, 바피네우주맙, 바실릭시맙, 바비툭시맙, 벡투모맙, 베겔로맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베르틸리무맙, 베실레소맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 비시로마밥, 비마그루맙, 비메키주맙, 비바투주맙 메르탄신, 블리나투모맙, 블로소주맙, 보코시주맙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리아키누맙, 브로달루맙, 브롤루시주맙, 브론틱투주맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카플라시주맙, 카프로맙 펜데타이드, 카를루맙, 카투막소맙, cBR96-독소루비신 면역 컨쥬게이트, CC49, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, Ch.14.18, 시타투주맙 보가톡스, 식수투무맙, 클라자키주맙, 클레놀릭시맙, 클리바투주맙 테트락세탄, 코드리투주맙, 콜툭시맙 라브탄신, 코나투무맙, 콘시주맙, 크레네주맙, CR6261, 다세투주맙, 다클리주맙, 달로투주맙, 다피롤리주맙 페골, 다라투무맙, 덱트레쿠맙, 뎀시주맙, 데닌투주맙 마포도틴, 데노수맙, 데를로툭시맙 비오틴, 데투모맙, 디누툭시맙, 디리다부맙, 도를리모맙 아리톡스, 드로지투맙, 둘리고투맙, 두필루맙, 더발루맙, 두시기투맙, 에크로멕시맙, 에쿨리주맙, 에도바코맙, 에드레콜로맙, 에팔리주맙, 엔구맙, 엘델루맙, 엘젬투맙, 엘로투주맙, 엘실리모맙, 에막투주맙, 에미베투주맙, 에나바투주맙, 엔포투맙 베도틴, 엔리모맙 페골, 에노블리투주맙, 에노키주맙, 에노티쿠맙, 엔시툭시맙, 에피투모맙 시툭세탄, 에프라투주맙, 에를리주맙, 에르투막소맙, 에타라시주맙, 에트롤리주맙, 에비나쿠맙, 에볼로쿠맙, 엑스비비루맙, 파놀레소맙, 파랄리모맙, 파를레투주맙, 파시누맙, FBTA05, 펠비주맙, 페자키누맙, 피클라투주맙, 피기투무맙, 피리부맙, 플란보투맙, 플레티쿠맙, 폰톨리주맙, 포랄루맙, 포라비루맙, 프레솔리무맙, 풀라누맙, 푸툭시맙, 갈릭시맙, 가니투맙, 간테네루맙, 가빌리모맙, 젬투주맙 오조가마이신, 게보키주맙, 기렌툭시맙, 글렘바투무맙 베도틴, 골리무맙, 고밀릭시맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이크루쿠맙, 이다루시주맙, 이고보맙, IMAB362, 이말루맙, 임시로맙, 임가투주맙, 인클라쿠맙, 인다툭시맙 라브탄신, 인두사투맙 베도틴, 인플릭시맙, 인테투무맙, 이놀리모맙, 이노투주맙, 오조가마이신, 이필리무맙, 이라투무맙, 이사툭시맙, 이톨리주맙, 익세키주맙, 켈릭시맙, 라베투주맙, 람브롤리주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 레말레소맙, 렌질루맙, 레르델리무맙, 렉사투무맙, 리비비루맙, 리파스투주맙 베도틴, 리겔리주맙, 릴로토맙 사테트락세탄, 린투주맙, 리리루맙, 로델시주맙, 로키베트맙, 로르보투주맙 메르탄신, 루카투무맙, 룰리주맙 페골, 루밀릭시맙, 룸레투주맙, 마파투무맙, 마르게툭시맙, 마슬리모맙, 마브릴리무맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 메텔리무맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미투모맙, 모가물리주맙, 모롤리무맙, 모타비주맙, 목세투모맙 파수도톡스, 무로모납-CD3, 나콜로맙 타페나톡스, 나밀루맙, 나프투모맙 에스타페나톡스, 나마투맙, 나탈리주맙, 네바쿠맙, 네시투무맙, 네몰리주맙, 네렐리모맙, 네스바쿠맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 노페투모맙 메르펜탄, 오빌톡삭시맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오둘리모맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 올로키주맙, 오말리주맙, 오나르투주맙, 온툭시주맙, 오피시누맙, 오포르투주맙 모나톡스, 오레고보맙, 오르티쿠맙, 오텔릭시주맙, 오틀레르투주맙, 옥셀루맙, 오자네주맙, 오조랄리주맙, 파기박시맙, 팔리비주맙, 파니투무맙, 판코맙, 파노바쿠맙, 파르사투주맙, 파스콜리주맙, 파소툭시주맙, 파테클리주맙, 파트리투맙, 펨브롤리주맙, 펨투모맙, 페라키주맙, 페르투주맙, 펙셀리주맙, 피딜리주맙, 피나투주맙 베도틴, 핀투모맙, 플라쿨루맙, 폴라투주맙 베도틴, 포네주맙, 프릴릭시맙, 프리톡삭시맙, 프리투무맙, PRO 140, 퀼리주맙, 라코투모맙, 라드레투맙, 라비루맙, 랄판시주맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 레파네주맙, 레가비루맙, 레슬리주맙, 릴로투무맙, 리누쿠맙, 리툭시맙, 로바투무맙, 롤레두맙, 로모소주맙, 론탈리주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 사말리주맙, 사릴루맙, 사투모맙 펜데타이드, 세쿠키누맙, 세리반투맙, 세톡삭시맙, 세비루맙, 시브로투주맙, SGN-CD19A, SGN-CD33A, 시팔리무맙, 실툭시맙, 심투주맙, 시플리주맙, 시루쿠맙, 소투주맙 베도틴, 솔라네주맙, 솔리토맙, 소네프시주맙, 손투주맙, 스타물루맙, 술레소맙, 수비주맙, 타발루맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 타네주맙, 타플리투모맙 파프톡스, 타렉스투맙, 테피바주맙, 텔리모맙 아리톡스, 테나투모맙, 테넬릭시맙, 테플리주맙, 테프로투무맙, 테시돌루맙, TGN1412, 티실리무맙 (트레멜리무맙), 틸드라키주맙, 티가투주맙, TNX650, 토실리주맙 (아틀리주맙), 토랄리주맙, 토사톡수맙, 토시투모맙, 토베투맙, 트랄로키누맙, 트라스투주맙, TRBS07, 트레갈리주맙, 트레멜리무맙, 투코투주맙 셀몰레우킨, 투비루맙, 우블리툭시맙, 울로쿠플루맙, 우렐루맙, 우르톡사주맙, 우스테키누맙, 반도르투주맙 베도틴, 반틱투맙, 바누시주맙, 바팔릭시맙, 바를릴루맙,
바텔리주맙, 베돌리주맙, 벨투주맙, 베팔리모맙, 베센쿠맙, 비실리주맙, 볼로식시맙, 보르세투주맙 마포도틴, 보투무맙, 잘루투무맙, 자놀리무맙, 자툭시맙, 지랄리무맙 또는 졸리모맙 아리톡스를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 치료제와 조합하여 투여된다.
당해 분야에 공지된 임의의 암 유형으로는, 예를 들어, 암종, 육종, 림프종, 백혈병, 림프종 및 모세포종이 포함될 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이러한 암의 보다 특정한 예로는 폐암, 편평 세포암, 뇌 종양, 교모세포종, 두경부암, 간 세포암, 대장암 (예를 들어, 결장암 또는 직장암), 간암, 방광암, 위암 또는 위장암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 요로암, 유방암, 복막암, 자궁암, 타액선암, 신장암 또는 신암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 항문암 , 음경 암종, 흑색종, 다발성 골수종 및 B 세포 림프종 (비호지킨 림프종 (non-Hodgkin's lymphoma: NHL) 포함); 급성 림프 아구성 백혈병 (acute lymphoblastic leukemia: ALL); 만성 림프구성 백혈병 (chronic lymphocytic leukemia: CLL); 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia: AML); 메르켈 세포 암종; 모발상 세포 백혈병; 만성 골수 아구성 백혈병 (chronic myeloblastic leukemia: CML); 및 관련 전이가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트는 또한 당해 분야의 통상의 기술자에게 널리 동지된 포장재를 사용하여 제조 물품으로서 제공될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 US 5,323,907; US 5,052,558; 및 US 5,033,252를 참조한다. 약제학적 포장재의 예로는 블리스터 팩, 병, 튜브, 흡입기, 펌프, 백, 바이알, 용기, 주사기, 및 선택된 제형 및 의도된 투여 및 치료 방식에 적합한 임의의 포장재가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
진료 의사에 의해 사용될 때 대상체에 대한 적절한 양의 활성 성분의 투여를 단순화할 수 있는 키트가 또한 본 출원에서 제공된다. 특정 실시 형태에서, 본 출원에서 제공되는 키트는 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 용기 및 투여 형태를 포함한다.
특정 실시 형태에서, 상기 키트는 본 출원에서 기재된 하나 이상의 다른 치료제(들)를 포함하는 용기에 본 출원에서 제공되는 컨쥬게이트의 투여 형태를 포함하는 용기를 포함한다.
본 출원에서 제공되는 키트는 활성 성분을 투여하는데 사용되는 장치를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 장치의 예로는 주사기, 무바늘 주입기 드립 백, 패치 및 흡입기가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 출원에서 제공되는 키트는 또한 활성 성분의 투여를 위한 콘돔을 포함할 수 있다.
본 출원에서 제공되는 키트는 하나 이상의 활성 성분을 투여하는데 사용될 수 있는 약제학적으로 허용되는 비히클을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 활성 성분이 비경구 투여를 위해 재구성되어야 하는 고체 형태로 제공되는 경우, 상기 키트는 활성 성분이 비경구 투여에 적합한 무입자 멸균 용액을 형성하도록 용해될 수 있는 적합한 비히클의 밀봉 용기를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 비히클의 예로는 다음이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다: 주사용수 USP, 염화 나트륨 주사제, 링거 주사제, 덱스트로오스 주사제, 덱스트로오스 및 염화 나트륨 주사제 및 락테이트화 링거 주사제를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 수성 비히클; 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 수혼화성 비히클; 및 옥수수유, 면실유, 땅콩유, 참기름, 에틸 올리에이트, 이소프로필 미리스테이트 및 벤질 벤조에이트를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 비수성 비히클.
본 개시 내용은 하기의 비제한적인 실시예에 의해 보다 더 이해될 것이다.
실시예
실시예 1. 뉴클레오타이드 및 폴리뉴클레오타이드의 합성 및 정제
면역 조절 폴리뉴클레오타이드 및 이의 전구체의 예시적인 합성은 하기에서 기재된다.
전구체
본 발명의 폴리뉴클레오타이드의 제조에 유용한 전구체는 국제공개공보 WO 2015/188197 (예를 들어, 포스포르아미다이트, 표적화 모이어티, 및 PEG 쇄를 함유하는 생물 가역성 기)에서 제공된다.
포스포르아미다이트 및 기타 단량체
본 발명의 폴리뉴클레오타이드의 합성에 유용한 뉴클레오사이드 함유 중간체는 국제공개공보 WO 2015/188197 (예를 들어, 국제공개공보 WO 2015/188197의 화합물 U1-U54, A1-A15, C1-9 및 G1-G12)에서 개시되어 있다.
상업적으로 이용 가능한 포스포르아미다이트를 Glen Research (Sterling, VA) 또는 ChemGenes (Wilmington, MA)로부터 구입하였다. 필요한 경우, 여기에서 설명된 표준 반응 조건을 사용하여 적절하게 보호된 뉴클레오사이드로부터 다른 포스포르아미다이트를 제조하였다.
화합물 S61B
Figure pct00198
DCM (5.0 mL) 중 S61 (0.48 g, 2.0 mmol)의 용액에, S61A (0.60 g, 2.0 mmol) 및 ETT (아세토니트릴 중의 0.25 M, 4.8 mL, 1.2 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 2시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질의 증발로 잔류물을 수득하고, 에틸아세테이트/헥산 (Combi Flash Rf 기구 상에서 0~30% 농도 구배)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼 정제를 실시하여 화합물 S61B를 무색 오일 (0.49 g, 55%)로서 수득하였다. 31P NMR (202MHz, CDCl3; ppm): δ147.83 (s).
화합물 S108
Figure pct00199
디옥산 (100 mL) 중 2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에탄올 (S108A, 25.0 g, 167 mmol) 및 N-메틸 모르폴린 (21.0 mL, 191 mmol) 중의 교반 혼합물에, 디옥산 (50 mL) 중 Fmoc-OSu (62.2 g, 184 mmol)의 용액을 적가하였다. 밤새 교반한 후, 반응물을 진공하에 농축하여 밝은 황색 오일을 수득하였다. 조물질을 EtOAc 중에 재용해시키고, 포화 NaHCO3 (수성) 및 염수로 세척하였다. 유기층을 진공하에 제거하여 오일을 수득하고, SiO2 크로마토그래피로 정제하여 FmocNH-PEG2-OH (S108, 55 g, 수율 88%)를 수득하였다. ESI+ m/z 계산치 371.4, 실측치 372.2 [M+H]+.
X1 및 X2 무염기성 스페이서 합성 - 일반 반응식:
Figure pct00200
화합물 S110
Figure pct00201
0℃에서 아르곤하의 THF (40 mL) 중 NaH (13.2 g, 미네랄 오일 중의 60%, 230.0 mmol)의 현탁액에, THF (20 mL) 중의 디올 (S109, 4.92 g, 22.0 mmol)을 적가하고; 생성된 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, THF (25 mL) 중 프로파길 브로마이드 (18.6 g, 158.4 mmol)의 용액을 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 40℃에서 밤새 교반하였다. 생성물이 TLC로 관찰될 때 소비된 후, 반응물을 0℃의 물의 적가로 ??칭시키고 (quench), 생성된 혼합물을 디클로로메탄 (50 mL × 2)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하고, ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 0~30%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼으로 정제하여 5.92 g (89.5%)의 화합물 S110을 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.49-7.47 (dd, J 8.0, 1.5 Hz, 2H), 7.38-7.34 (m, 3H), 5.43 (s, 1H), 4.21 (d, J 2.5 Hz, 2H), 4.12 (t, J 2.5 Hz, 4H), 4.10 (s, 1H), 3.91 (s, 1H), 3.89 (s, 1H), 3.37 (s, 2H); C18H20O4에 대한 ESI MS 계산치 300.34, 관찰치 [M+H]+ 301.
화합물 S111
Figure pct00202
비스-프로파길 화합물 S110 (5.9 g, 19.64 mmol)을 아세트산/물 혼합물 (60 mL, 75:25) 중에 용해시키고, 반응을 50℃에서 2 시간 동안 계속하였다. 반응 종료 후, 용액을 증발시키고, 톨루엔 (2 × 20 mL)으로 공증발시켰다. ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 20~80%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼을 사용하여 잔류물을 임의의 후처리 없이 직접 정제하여 3.02 g (72.5%)의 화합물 S111을 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ4.15 (d, J 2.5 Hz, 4H), 3.68 (s, 4H), 3.59 (s, 4H), 2.44 (t, J 2.5 Hz, 2H), 2.30-2.40 (br, 2H); C11H16O4에 대한 ESI MS 계산치 212.24, 관찰치 [M+H]+ 213.2.
화합물 S112
Figure pct00203
0℃의 디클로로메탄 (25 mL) 중 디올 S111 (3.0 g, 14.2 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (3.15 mL, 17.0 mmol) 및 DMAP (0.36 g, 2.83 mmol)의 용액에, 디클로로메탄 (40 mL) 중 디메톡시트리틸 클로라이드 (4.8 g, 14.2 mmol)의 용액을 적가하고, 반응을 실온에서 밤새 계속하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 물에 이어서 염수로 세척하고, 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 0~40%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼에 의해 생성된 잔류물을 정제하여 5.29 g (73%)의 모노 DMT-보호된 화합물 S112을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.4-7.42 (m, 2H), 7.32-7.31 (m, 4H), 7.28-7.25 (m, 2H), 6.84-6.81 (m, 4H), 4.09 (d, J 2.5 Hz, 4H), 3.79 (s, 6H), 3.67 (d, J 6.0 Hz, 2H), 3.64-3.56 (m, 4H), 3.13 (s, 2H), 2.39 (t, J 2.5 Hz, 2H); C32H34O6에 대한 ESI MS 계산치 514.6, 관찰치 [M+Na]+ 537.4,
화합물 S113
Figure pct00204
디클로로메탄 (4 mL) 중 DMT-보호된 화합물 S112 (0.5 g, 0.98 mmol)의 용액에, 실온의 디클로로메탄 (3 mL) 중의 2'-시아노에틸-N,N,N',N'-테트라이소프로필 포스포르아미다이트 (0.58 g, 1.95 mmol)의 용액에 이어서 아르곤 대기하의 5-벤질티오-1H-테트라졸 (BTT; 아세토니트릴 중의 0.25 M 용액, 0.78 mL, 0.18 mmol)을 적가하였다. 출발 물질이 사라질 때까지 반응을 계속하고 (2 시간), 조혼합물을 20 mL의 디클로로메탄으로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 순차적으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 진공하에 증발시키고, 공용매로서 3% 트리에틸아민을 함유하는 에틸 아세테이트/헥산 (Combi Flash Rf Instrument 상의 0~30% 농도 구배)을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 조혼합물을 정제하여 0.53 g의 화합물 S113 (75%)을 오일로서 수득하였다. C41H51N2O7P에 대한 ESI MS 계산치 714.82, 관찰치 715.6 [M+H]+; 31P NMR (202MHz, CDCl3): δ147.89.
화합물 S114
Figure pct00205
아르곤 대기하의 8.0 mL의 건조 디클로로메탄 중 DMT-보호된 화합물 S112 (0.98 g, 1.9 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.39 mL, 2.09 mmol)의 -78℃ 용액에, 비스-(N,N-디이소프로필아미노)-클로로포스핀 (0.56 g, 2.09 mmol)의 디클로로메탄 (4.0 mL) 용액을 적가하였다. 1 시간 동안 교반을 유지하면서 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 2.0 mL의 건조 디클로로메탄 중 3-부틴-1-올 (0.14 g, 1.9 mmol)의 용액을 실온에서 첨가하고; 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하고, 이때 아세토니트릴 (4.6 mL, 1.15 mmol) 중 ETT의 0.25M 용액을 첨가하고, 3 시간 동안 추가로 교반을 계속하였다. TLC에 의한 출발 물질의 소멸에 의해 관찰된 바와 같이 반응 종료 후, 조혼합물을 20 mL의 디클로로메탄으로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 순차적으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 휘발성 물질을 진공하에 증발시키고, 용매계로서 3% 트리에틸아민을 함유하는 에틸 아세테이트/헥산 (Combi Flash Rf Instrument 상의 0~40% 농도 구배)을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 조혼합물을 정제하여 0.33 g의 화합물 S114 (25%)를 오일로서 수득하였다. C42H52NO7P에 대한 ESI MS 계산치 713.83, 관찰치 714.7 [M+H]+; 31P NMR (202MHz, CDCl3): δ146.89.
X3 및 X4 무염기성 스페이서 합성 - 일반 반응식:
Figure pct00206
화합물 S116
Figure pct00207
화합물 S110에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S116 (수율 91%)을 오일로서 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.51 (d, J 7.5 Hz, 2H), 7.37-7.32 (m, 3H), 5.56 (s, 1H), 3.37-3.35 (m, 4H), 4.10-4.07 (dd, J 13.0 Hz, J 2.5 Hz, 2H), 3.65-3.64 (m, 1H), 2.43-2.42 (t, J 6.5 Hz, 1H); C13H14O3에 대한 ESI MS 계산치 218.24, 관찰치 [M+H]+ 219.2.
화합물 S117
Figure pct00208
화합물 S111에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S117 (수율 91%)을 오일로서 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ4.33 (s, 2H), 3.83-3.70 (m, 5H), 2.48 (s, 1H), 2.04 (br, 2H); C6H10O3에 대한 ESI MS 계산치 130.14, 관찰치 [M+Na]+ 153.0.
화합물 S118
Figure pct00209
화합물 S112에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S118 (수율 54%)을 백색 고체로서 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.43 (d, J 7.5 Hz, 2H), 7.37-7.27 (m, 5H), 7.23-7.16 (m, 2H), 6.83 (d, J 9.0 Hz, 3H), 6.78-6.76 (dd J 8.5 Hz, 1H), 4.35-4.22 (m, 2H), 3.77 (s, 6H) 3.76-3.72 (m, 2H), 3.71-3.64 (m, 1H), 3.27-3.19 (m, 2H), 2.48 (t, J 4.5 Hz, 1H), 2.03-1.96 (m, 1H); C27H28O5에 대한 ESI MS 계산치 432.50, 관찰치 [M+Na]+ 455.4.
화합물 S119
Figure pct00210
화합물 S113에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S119 (수율 86%)를 오일로서 제조하였다. C36H45N2O6P에 대한 ESI MS 계산치 432.72, 관찰치 433.5 [M+H]+; 31P NMR (202MHz, CDCl3): δ149.05, 148.96.
화합물 S120
Figure pct00211
화합물 S114에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S120 (수율 47%)를 오일로서 제조하였다. C37H46NO6P에 대한 ESI MS 계산치 431.73, 관찰치 432.5 [M+H]+; 31P NMR (202MHz, CDCl3): δ147.80, 147.71.
X5 및 X6 무염기성 스페이서 합성 - 일반 반응식:
Figure pct00212
화합물 S121
Figure pct00213
디옥산 (25 mL) 중 S116 (4.0 g, 22.2 mmol)의 용액에, 최소량의 물 중에 용해된 KOH (0.12 g, 2.2 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 적어도 30분 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 디옥산 (15 mL) 중 아크릴로니트릴 (2.35 g, 44.4 mmol)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 반응하도록 하였다. 휘발성 물질을 진공하에 증발시키고, 잔류물을 물로 희석시키고, pH를 거의 중성으로 조정하였다. 조생성물을 에틸 아세테이트 (2 × 50 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하고, ISCO Companion (디클로로메탄/메탄올, 0~5%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼으로 정제하여 3.1 g (60%)의 화합물 S121을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.49 (d, J 7.0 Hz, 2H), 7.36-7.34 (m, 3H), 5.56 (s, 1H), 3.36 (d, J 13.0 Hz 2H), 4.10-4.07 (dd, J 13.0 Hz, J 2.0 Hz, 2H), 3.84 (t, J 6.5 Hz, 2H), 3.42 (m, 1H), 3.69 (t, J 6.5 Hz, 2H); C13H15NO3에 대한 ESI MS 계산치 233.2, 관찰치 [M+Na]+ 256.3.
화합물 S122
Figure pct00214
0℃의 THF (10 mL) 중 리튬 알루미늄 하이드라이드 (0.83 g, 4.0 mmol)이 현탁액에, THF (15 mL) 중 화합물 S121 (1.28 g, 5.5 mmol)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 실온으로 가온시키고, 3 시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 종료 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 필요에 따라 물 (약 2~3 mL)의 적가에 의해 ??칭시켰다. 8 mL의 물을 추가로 첨가하고, 조생성물을 에틸 아세테이트 (2 × 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 화합물 S122를 수득하고, 추가의 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.49 (d, J 7.0 Hz, 2H), 7.40-7.32 (m, 3H), 5.55 (d, J 5.0 Hz, 1H), 4.34 (d, J 13.0 Hz, 1H), 4.20-4.11 (dd, J 12.0 Hz 4H), 4.05-4.03 (d, J 13.0 Hz, J 2.0 Hz, 1H), 3.66-3.62 (m, 2H), 3.27 (m, 1H), 2.86 (t, J 6.5 Hz, 1H), 2.16 (br, 2H); C13H19NO3에 대한 ESI MS 계산치 237.2, 관찰치 [M+H]+ 238.2.
화합물 S123
Figure pct00215
0℃의 디클로로메탄 (8 mL) 중의 화합물 S122 (1.0 g, 4.2 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.3 mL, 12.6 mmol)에, Fmoc-OSu (1.7 g, 5.0 mmol)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 3 시간 동안 실온에서 반응하도록 하였다. 종료 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄 (10 mL)으로 희석시키고, 물에 이어서 염수로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 0~50%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼에 의해 잔류물을 정제하여 0.65 g (35%)의 화합물 S123을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.75 (d, J 7.5 Hz, 2H), 7.58 (d, J 7.5 Hz, 2H), 7.51 (d, J 7.5 Hz, 2H), 7.37 (t, J 7.5 Hz, 2H), 7.31-7.26 (m, 5H), 5.57 (s, 1H), 5.48 (br, 1H), 4.46-4.32 (m, 4H), 4.15 (d, J 7.0 Hz, 1H), 4.06 (t, J 12.5 Hz 2H), 3.67 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.41 (s, 1H), 1.88 (t, J 6.0 Hz, 2H); C28H29NO5에 대한 ESI MS 계산치 459.5, 관찰치 [M+Na]+ 482.5.
화합물 S124
Figure pct00216
화합물 S111에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S124 (정량적 수율)를 오일로서 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.76 (d, J 7.5 Hz, 2H), 7.58 (d, J 7.5 Hz, 2H), 7.39 (t, J 7.5 Hz, 2H), 7.32 (t, J 7.5 Hz, 2H), 5.18 (br, 1H), 4.44 (d, J 6.5 Hz, 2H), 4.21 (t, J 6.5 Hz, 1H), 4.76-4.73 (dd, J 11.5, 3.5 Hz 2H), 3.67-60 (m, 4H), 3.42 (m, 1H), 3.37 (br, 2H), 2.07 (m, 2H), 1.75 (br, 2H); C21H25NO5에 대한 ESI MS 계산치 371.4, 관찰치 [M+Na]+ 394.3.
화합물 S125
Figure pct00217
화합물 S112에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S125 (생성물 (S125)의 48% 수율)을 백색 고체로서 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.75 (t, J 7.5 Hz, 2H), 7.58 (t, J 7.5 Hz, 2H), 7.40-7.38 (m, 3H), 7.32-27 (m, 7H), 7.18-7.16 (m, 3H), 6.83 (t, J 7.0 Hz, 4H), 5.16 (br, 1H), 4.44 (d, J 6.5 Hz, 2H), 4.20 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.74 (m, 2H), 3.66-3.62 (m, 4H), 3.43-3.37 (m, 2H), 2.31 (br, 1H), 1.76 (br, 2H); C42H43NO7에 대한 ESI MS 계산치 673.7, 관찰치 [M+Na]+ 696.7.
화합물 S126
Figure pct00218
화합물 S113에 대해 기재된 프로토콜을 사용하여 화합물 S126 (생성물 (S126)의 78% 수율)을 오일로서 제조하였다. C51H60N3O8P에 대한 ESI MS 계산치 874.0, 관찰치 896.9 [M+Na]+, 913.0 [M+K]+; 31P NMR (202MHz, CDCl3; ppm): δ148.90, 148.76.
무염기성 스페이서 S131 의 합성 - 일반 반응식:
Figure pct00219
화합물 S127
Figure pct00220
아르곤하의 디클로로메탄 (50 mL) 중 S109 (2.56 g, 11.4 mmol)의 용액에, 브로모아세토니트릴 (3.01 g, 25.1 mmol), 은(I) 산화물 (5.28g, 22.8 mmol) 및 테트라부틸암모늄 요오드화물 (0.84 g, 2.28 mmol)을 첨가하고, 생성된 반응물을 밤새 교반하였다. 혼합물을 셀라이트®로 여과하고, 여과물을 증발시켜 흑색 잔류물을 수득하고, ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 15~90%) 상의 플래시 실리카겔 컬럼 정제를 실시하여 1.34 g (39%)의 목적하는 화합물 S127을 점성 오일로서 수득하였다. C16H18N2O4에 대한 ESI MS 계산치 302.3, 관찰치 [M+H]+ 303.3.
화합물 S128
Figure pct00221
THF (30 mL) 중 화합물 S127 (1.34g, 4.43 mmol)의 용액에, THF (2M, 8.9 mL, 17.7 mmol) 중 LiAlH4의 용액을 아르곤하에 첨가하고, 혼합물을 4 시간 동안 55℃로 가열시켰다. THF (2M, 4 mL, 8.0 mmol) 중 LiAlH4의 또 다른 부분을 첨가하고, 교반을 4 시간 동안 계속하였다. 반응 종료 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, Na2SO4.10H2O로 ??칭시켰다. 고체를 여과하여 제거하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 혼합물을 여과하고, 증발시켜 잔류물을 수득하고, 디클로로메탄 (20mL) 중에 용해시켰다. 이러한 용액에 Fmoc-OSu (1.5g, 4.43 mmol) 및 DIEA (0.87 mL, 5.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 교반한 다음, 증발시켜 잔류물을 수득하고, ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 20~90%) 상의 플래시 실리카겔 컬럼 정제를 실시하여 1.04 g (31%)의 화합물 S128을 백색 발포체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.75 (4H, dd, J 7.5, 4.5 Hz), 7.58 (4H, t, J 7.0 Hz), 7.48 (2H, d, J 7.0 Hz), 7.41-7.34 (7H, m), 7.32-7.26 (4H, m), 5.44 (1H, s), 5.15-5.05 (2H, m), 4.44 (2H, d, J 5.5 Hz), 4.38 (2H, d, J 6.0 Hz), 4.25-4.15 (2H, m), 4.10 (2H, d, J 11.5 Hz), 3.82 (2H, d, J 11.5 Hz), 3.78 (2H, s), 3.53 (2H, s), 3.42 (2H, s), 3.36-3.27 (4H, m), 3.25 (2H, s); C46H46N2O8에 대한 ESI MS 계산치 754.9, 관찰치 [M+H]+ 755.3.
화합물 S129
Figure pct00222
화합물 S128 (1.1 g, 1.51 mmol)을 AcOH/H2O 혼합물 (10 mL, 3:1) 중에 용해시키고, 반응을 55℃에서 5 시간 동안 계속하였다. 반응 종료 후, 휘발성 물질을 증류시키고, 톨루엔 (2× 20 mL)으로 공증발시키고, 잔류물을 ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 30~100%) 상의 플래시 실리카겔 컬럼 정제에 적용하여 0.54 g (54%)의 화합물 S129을 백색 발포체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.75 (4H, d, J 7.5 Hz), 7.58 (4H, d, J 7.5 Hz), 7.39 (4H, t, J 7.5 Hz), 7.30 (4H, t, J 7.5Hz), 5.20-5.05 (2H, m), 4.41 (4H, d, J 6.5 Hz), 4.21 (4H, t, J 6.5 Hz), 3.64 (4H, s), 3.48 (8H, s), 3.36 (4H, s); C39H42N2O8에 대한 ESI MS 계산치 666.7, 관찰치 [M+H]+ 667.3.
화합물 S130
Figure pct00223
0℃의 디클로로메탄 (6 mL) 중 디올 S129 (0.73g, 1.1 mmol), DIPEA (0.19 mL, 1.1 mmol) 및 DMAP (0.013 g, 0.11 mmol)의 용액에, 디클로로메탄 (1mL) 중 DMTrCl (0.34 g, 0.99 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 증발시켜 잔류물을 수득하고, ISCO (헥산/에틸 아세테이트, 20~100%) 상의 플래시 실리카겔 컬럼 정제를 실시하여 0.47 g (44%)의 모노 디메톡시트리틸 보호된 화합물 S130을 백색 발포체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3; ppm): δ7.75 (4H, d, J 7.5 Hz), 7.58 (4H, d, J 7.5 Hz), 7.39 (4H, t, J 7.5 Hz), 7.32-7.25 (8H, m), 7.17 (4H, d, J 6.5 Hz), 6.83 (4H, d, J 6.5 Hz), 5.20-5.05 (2H, m), 4.41 (4H, d, J 6.5 Hz), 4.21 (4H, t, J 6.5 Hz), 3.82 (6H, s), 3.64 (4H, s), 3.48 (8H, s), 3.36 (4H, s); C60H60N2O10에 대한 ESI MS 계산치 969.1, 관찰치 [M+Na]+ 991.3.
화합물 S131
Figure pct00224
건조 CH2Cl2 (1.0 mL) 중 비스-(N,N-디이소프로필아미노)-클로로포스핀 (0.085 g, 0.32 mmol)의 용액을 건조 CH2Cl2 (3.0mL) 중 3-Fmoc-아미노-프로판-1-올 (0.090 g, 0.30 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.18 mL, 1.05 mmol)의 용액에 -78℃에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1.5 시간 동안 교반하였다. 1.0 mL의 건조 CH2Cl2 중 화합물 S130 (0.30 g, 0.30 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하였다. ETT (0.72 mL, 아세토니트릴 중의 0.25 M, 0.18 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2 (20mL)로 희석시키고, 포화 수성 중탄산 나트륨 (20mL) 및 염수 (20mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과물을 진공하에 증발시켜 잔류물을 수득하고, 공용매계 (0~30% 농도 구배)로서 3% 트리에틸아민을 함유하는 에틸 아세테이트/헥산을 사용하는 ISCO Companion 상의 플래시 실리카겔 컴럼 정제를 실시하여 0.12 g의 생성물 S131 (32%)을 백색 발포체로서 수득하였다. C84H91N4O13P에 대한 ESI MS 계산치 1395.6, 관찰치 1395.7[M]+; 31P NMR (202MHz, CDCl3): δ146.41.
화합물 dT4
Figure pct00225
FmocNH-PEG2-하이드록실-디이소프로필아미노-dT(5'-DMT) 포스포르아미다이트 (dT4)의 합성. CH2Cl2 (40 mL) 중 5'-DMT-데옥시티미딘 (4.30 g, 7.89 mmol) 및 DIEA (1.51 mL, 8.68 mmol)의 교반 현탁액을 아르곤하에 -78℃로 냉각시켰다. CH2Cl2 (10 mL) 중 비스(디이소프로필아미노)클로로포스핀 (2.32 g, 8.68 mmol)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 냉각 수조로부터 제거하고, 1 시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (15 mL) 중의 FmocNH-PGE2-OH (S108, 2.93 g, 7.89 mmol)를 반응 혼합물에 이어서 ETT (0.25 M in 아세토니트릴, 18.9 mL)의 용액에 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 혼합물을 진공하에 농축시키고, EtOAc 중에 재용해시키고, 포화 NaHCO3 (수성) 및 염수로 세척하였다. 유기층을 진공하에 제거하여 백색 발포체를 수득하였다. 이러한 조물질을 SiO2 크로마토그래피로 정제하여 표제 포스포르아미다이트 (dT4, 4.1 g, 수율 50%)를 수득하였다.
상기에서 기재된 합성 프로토콜을 다양한 트리에스테르의 다른 포스포르아미다이트 전구체의 합성에 사용하였다.
화합물 dU6
Figure pct00226
실온에서 Ar (g)하의 THF (10 mL) 중 dU1 (3.3 g, 5.0 mmol), 1-메틸이미다졸 (1.2 mL, 15.0 mmol) 및 오오드 (1.9 g, 15.0 mmol)의 용액에, THF (5 mL) 중 3차-부틸디메틸실릴 클로라이드 (0.8 g, 5.5 mmol)의 용액을 교반하면서 적가하였다. 반응물을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. TLC로 반응의 종료를 확인하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 조물질을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 수성 Na2S2O3 (진한)으로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 액체를 증발시켰다. ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 0~50%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼에 의해 조물질을 정제하여 dU2 (정량적 수율)를 고체로서 수득하였다. NMR은 공개된 문헌 [Nucleic Acids Research, 2011, Vol. 39, No. 9, 3962-3971]과 일치한다.
트리이소프로필실란 (1.0 mL, 5.0 mmol)을 함유하는 80% 아세트산 수용액 (40 mL) 중에 용해시킨 dU2 (3.9 g, 5.0 mmol)의 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. TLC로 반응의 종료를 확인하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 0~60%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼에 의해 조물질을 정제하여 1 g (43%)의 목적하는 화합물 dU3을 고체로서 수득하였다. C15H25IN2O5Si에 대한 ESI MS 계산치 468.4, 관찰치 [M+Na]+ 491.0.
Ar (g)하에 빙욕에서 0℃로 냉각시킨 THF (20 mL) 중 dU3 (1.0 g, 2.2 mmol)의 용액에, 수산화 나트륨 (60% dispersion, 0.2 g, 4.7 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 30℃에서 30분 동안 교반하였다. 요오도메탄 (0.7 mL, 10.8 mmol)을 적가하고, 반응물을 0℃에서 3 시간 동안 교반하였다. RP-HPLC/MS로 반응의 종료를 확인하였다. 반응을 0℃의 20 mL의 메탄올로 ??칭시키고, 실온으로 가온하였다. 수성 NaHCO3 (포화)을 첨가하고, 혼합물을 CH2Cl2로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 액체를 진공하에 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마노그래피 (헥산/에틸 아세테이트, 0-50%)에 의한 정제로 고체 dU4 (0.6 g, 수율 58%)를 수득하였다. C16H27IN2O5Si에 대한 ESI MS 계산치 482.4, 관찰치 [M+H]+ 483.1.
3차-부틸암모늄 플루오라이드 (1 M THF, 3 mL, 3.0 mmol)를 교반하면서 Ar (g)하에 THF (20 mL) 중에 용해된 dU4 (0.6 g, 1.3 mmol)의 냉각 (0℃) 용액에 적가하였다. 냉각 용액을 30분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온시켰다. 3.5 시간 후, RP-HPLC/MS로 반응의 종료를 확인하였다. 조생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올, 0~10%)에 의해 정제하여 고체 dU5 (0.4 g, 수율 92%)를 수득하였다. C10H13IN2O5에 대한 ESI MS 계산치 368.1, 관찰치 [M+H]+ 369.0.
실온에서 Ar (g)하의 디클로로메탄 (5 mL) 중 dU5 (0.4 g, 1.2 mmol)의 용액에, 디클로로메탄 (5 mL) 중 2'-시아노에틸-N, N, N', N'-테트라이소프로필 포스포르아미다이트 (0.4 mL, 1.3 mmol)의 용액을 교반하면서 적가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 에틸티오테트라졸 (ACN 중의 0.25 M 용액, 2.9 mL, 0.7 mmol)을 첨가하고, 반응을 밤새 계속하였다. TLC로 반응의 종료를 확인하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 조혼합물을 20 mL의 디클로로메탄으로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 액체를 증발시켰다. 조혼합물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, ISCO Companion (헥산/에틸 아세테이트, 0~100%)을 사용하는 플래시 실리카겔 컬럼에 의해 정제하여 0.3 g (49.9%)의 목적하는 화합물 dU6을 고체로서 수득하였다. C19H30N4O6P에 대한 ESI MS 계산치 568.3, 관찰치 567.3 [M-H]-; 31P NMR (202MHz, CDCl3, ppm): δ149.25.
화합물 dU9
dU3을 하기에 나타낸 표준 반응 조건하에 반응시켜 표제 화합물을 제조하였다. 31P-NMR (202 mHz, CDCl3, ppm): δ149.42, 149.31; MS ESI- m/z found 667.1 [M-H]. MS ESI+ m/z found 669.2 [M+H], 691.3 [M+Na].
Figure pct00227
보조 모이어티에 결합된 링커의 제조:
화합물 PP2, PP3 및 PP4
Figure pct00228
(5-아지도발레릴)-ε-N-Boc 라이신 ( PP1 )의 제조. ε-N-Boc 라이신 (9.46 g, 38.4 mmol) 및 K2CO3 (2.67 g, 19.3 mmol)을 1:1 THF:H2O (60 mL) 중에 용해시켰다. THF (10 mL) 중의 펜타플루오로페닐-5-아지도발레레이트 (10.8 g, 34.9 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 목적하는 생성물을 RP-HPLC-MS,394.2 [M+Na]에 의해 관찰하였다. 반응물을 1N HCl (수성)에 의한 적정에 의해 pH 5로 산성화시키고, 생성물을 EtOAc (3 × 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 H2O (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 진공하에 걸쭉한 시럽으로 농축시켰다. 조생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 생성물 PP2를 백색 침상 결정 (8.1 g, 수율 62%)으로서 수득하였다. ESI MS+ 질량 계산치 C16H29N5O5: 371.4, 실측치: 394.2 [M+Na] +.
PP1 의 페길화를 위한 일반적인 프로토콜: (5-아지도발레릴)-ε-N- (NH-Boc PEG24) 라이신 ( PP4 )의 제조. PP1 (0.74 g, 2.0 mmol)을 HCl (2 mL, 디옥산 중의 4 N)로 4 시간 동안 처리하였다. HPLC-MS는 272.2 [M+H]+로 완전한 탈보호를 나타냈다. 반응물을 1:1 H2O:아세토니트릴 (10 mL)로 희석시키고, 냉동시키고, 밤새 감압 동결 건조시켜 PP2 (정량적 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. DMF (3 mL) 중의 NHBoc-PEG24 산 (1.1 g, 0.88 mmol)을 HATU (0.34 g, 0.88 mmol), HOBt (0.14 g, 0.88 mmol) 및 DIEA (0.7 mL, 4.0 mmol)로 활성화시킨 다음, PP2 (0.24 g, 0.8 mmol)로 2 시간 동안 처리하였다. RP-HPLCMS는 목적하는 PP4의 형성을 나타냈다. 조물질을 RP-HPLC에 의해 정제하여 PP4를 백색 고체 (0.55 g, 수율 46%)로서 수득하였다. ESI MS+ 질량 계산치 C67H130N6O30: 1499.77, 실측치: 1499.9 [M+H] +, 1400.8 [M-Boc]+.
Figure pct00229
국제공개공보 WO 2015/188197에서 기재된 절차를 사용하여 상업적으로 이용 가능한 출발 물질로부터 BisPegX-NH2 및 TrisPegX-NH2 (여기서, X = 다양한 PEG 길이)를 제조하였다.
PP2 , PP3 및 PP4 의 페길화를 위한 일반적인 프로토콜: DMF (1 mL) 중에 용해된 라이신 PP1 (38 mg, 0.1 mmol)을 HATU (37 mg, 0.1 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (49 mL, 0.3 mmol) 및 mPEG48-NH2 (200 mg, 0.09 mmol)로 처리하였다. RP-HPLC-MS는 PP1에 대한 완전한 PEG48 첨가를 나타냈다. 조물질을 RP-HPLC에 의해 정제하여 NHBoc PP7을 백색 고체 (97 mg, 수율 42%)로서 수득하였다. ESI MS+ 질량 계산치 C113H224N6O52: 2499.03, 실측치: 833.7 [M+3H]3+, 625.6 [M+4H]4+. PP7을 HCl (2 mL, 디옥산 중의 4 N)로 4 시간 동안 탈보호하였다. HPLC-MS는 출발 물질의 질량을 갖는 피크의 소멸로 관찰된 바와 같이 완전한 탈보호를 나타냈다. 반응물을 1:1 H2O:아세토니트릴 (10 mL)로 희석시키고, 냉동시키고, 밤새 감압 동결 건조시켜 백색 고체 PP8을 정량적으로 수득하였다. ESI MS+ 질량 계산치 C108H216N6O50: 2398.88, 실측치: 1199.8 [M+2H]2+, 800.3 [M+3H]3+, 600.5 [M+4H]4+, 480.6 [M+5H]5+.
Figure pct00230
본 반응식에서, 조건은 다음과 같다:
A) 6-메틸테트라진-OSu, HATU, 휘니그 염기, DMF; 및
B) DBCO-CpG, 아세토니트릴/H2O;
여기서, 6-메틸 테트라진-OSu는
Figure pct00231
의 화학식을 가지며, DBCO-CpG는
Figure pct00232
화학식을 갖는다.
폴리뉴클레오타이드로 로딩된 링커 ( PP28 및 PP30 )의 제조를 위한 일반적인 프로토콜.
PP12 및 PP16 의 테트라진-컨쥬게이션 처리: PP12 (43 mg, 0.12 mmol)를 DMF (0.5 mL) 중에 용해시키고, HATU (4.6 mg, 0.12 mmol), DIEA (12.7 μL, 0.73 mmol) 및 5분 후에 6-메틸-테트라진-OSu (19.9 mg, 0.61 mmol)로 처리하였다. 조반응물을 30분 동안 실온에서 교반하고, RP-HPLCMS는 6-메틸-테트라진 카복실레이트와 PP12의 완전한 커플링을 나타냈다. 조물질을 RP-HPLC에 의해 정제하고, 풀링된 분획을 감압 동결 건조시켜 PP27을 자주색 고체 (39 mg, 수율 85%)로서 수득하였다. ESI MS+ 질량 계산치 C170H325N11O76: 3739.47, 실측치: 833.7 [M+3H]3+, 625.6 [M+4H]4. 순수한 PP27을 아세토니트릴:물 (1:1) 중의 DBCO-CpG로 처리하고, 37℃에서 1~2 시간 동안 및 실온에서 추가의 1 시간 동안 인큐베이션하여 PP28을 수득하였다. PP28을 제조용 AEX (20 mM 포스페이트 및 20 mM 포스페이트-1 M 브롬화 나트륨)로 정제하였다.
CpG 로딩된 링커 PP28 및 PP30 에 대한 대체 원 포트 경로. PP12 (400 nmol)를 아세토니트릴:물 (1:1) 중의 DBCO-CpG (420 nmol)로 처리하고, 37℃에서 1~2 시간 동안에 이어서 실온에서 추가의 1 시간 동안 인큐베이션한다. DMSO 저장 용액 중의 테트라진-OSu (4000 nmol)을 PP12-DBCO-CpG 조용액에 첨가하고, 자주색 용액을 실온에서 3 시간 동안 1~2 시간 동안 반응시켜 PP28을 수득하였다. 조질 PP28을 제조용 RP-HPLC (물 중의 50 mM TEAA 및 10% 아세토니트릴:물) 또는 제조용 AEX (20 mM 포스페이트 및 20 mM 포스페이트-1 M 브롬화 나트륨)로 정제하였다.
Figure pct00233
테트라진-PEG24-OPFP ( PP32 )의 제조. Ar (g)하의 DMF/물 (1:1, 12 mL) 중의 아미노-PEG24-카복실산 (1.0 g, 0.9 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.8 mL, 4.4 mmol)의 용액에, DMF (3 mL) 중의 메틸테트라진페닐아세틸 석신이미딜 에스테르 (370 mg, 1.1 mmol)를 교반하면서 적가하였다. 반응물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. RP-HPLC/MS는 생성물의 형성을 나타냈다. 용매를 진공하에 제거하고, 조물질을 RP-HPLC (TFA 개질제)에 의해 정제하여 PP31, 1.1 g (80%)을 수득하였다. C62H111N5O27에 대한 ESI MS 계산치 1358.56, 관찰치 [M+H]+ 1358.8. Ar (g)하의 디클로로메탄 (3 mL) 중 PP31 (109 mg, 0.08 mmol)의 용액에, 무수 피리딘 (32 mg, 0.4 mmol) 및 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트 (67 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 조생성물을 EtOAc 중에 재용해시키고, 수성 NaHCO3 (5% w/v) (3×) 및 염수 (1×)로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켜 PP32를 정량적으로 수득하였다. 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. C68H110F5N5O27에 대한 ESI MS 계산치 1524.61, 관찰치 [M+2H]2+ 763.0.
Figure pct00234
PP34 의 제조. Ar (g)하의 DMF/물 (1:1, 10 mL) 중 mPEG48-아민 (2.15 g, 1.00 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.87 mL, 5.00 mmol)의 용액에, DMF (5 mL) 중의 Nα-Cbz-Nε-Boc-L-라이신 석신이미딜 에스테르 (570mg, 1.2 mmol)를 교반하면서 적가하였다. 반응물 혼합물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. RP-HPLC/MS는 생성물 PP33의 형성을 나타냈다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH 0~10%)로 정제하였다. 회수된 PP33을 다음 반응에 직접 사용하였다. C116H223N3O53에 대한 ESI MS 계산치 2508.0, 관찰치 [M+3H]3+ 836.7, [M+4H]4+ 627.9. MeOH 중 PP33 (1.00 mmol)의 용액을 질소 (g)로 플러싱하고, 활성 탄소 상의 팔라듐 (10% wt, 촉매)을 첨가하였다. 용액을 교대로 진공시키고, 수소 (g) (3×)로 퍼징하였다. 2 시간 후의 RP-HPLC/MS는 PP34의 형성을 나타냈다. 불균일 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, 다량의 메탄올로 세척하였다. 용매를 진공하에 제거하여 PP34 (2.0 g, 수율 84%, 2 단계에 걸쳐)를 수득하였다. C108H217N3O51에 대한 ESI MS 계산치 2373.87, 관찰치 [M+3H]3+ 792.0.
Figure pct00235
PP37 의 제조. Ar (g)하의 DMF/물 (1:1, 10 mL) 중의 PP32 (124 mg, 0.08 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (31 mg, 0.24 mmol)의 용액에, DMF/물 (1:1, 10 mL) 중의 PP34 (230 mg, 0.1 mmol)를 교반하면서 적가하였다. 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, RP-HPLC/MS는 생성물 PP35의 형성을 나타냈다. 용매를 진공하에 제거하고, PP35를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. C170H326N8O77에 대한 ESI MS 계산치 3714.4, 관찰치 [M+4H]4+ 929.5, [M+5H]5+ 743.8. 조질 PP35 (0.08 mmol)를 HCl (디옥산 중의 4 N, 5 mL)로 Ar (g)하에 처리하였다. 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, RP-HPLC/MS는 Boc 보호기의 완전한 제거를 나타냈다. 용매를 진공하에 제거하고, 아민을 DMF (5 mL) 및 디이소프로필에틸아민 (140 uL, 0.8 mmol) 중 비스-Peg3-PFP 에스테르 (230 mg, 0.4 mmol)의 용액으로 아실화하였다. 2 시간 후, RP-HPLC/MS는 생성물 PP37의 형성을 나타냈다. 용매를 진공하에 제거하고, 조물질을 RP-HPLC (TFA 개질제)에 의해 정제하여 PP37을 테트라-TFA 염 (31 mg, 수율 8.7%)을 수득하였다. C181H333F5N8O81에 대한 ESI MS 계산치 4012.56, 관찰치 [M+3H]3+ 1338.3, [M+4H]4+ 1004.0, [M+5H]5+ 803.4, [M+6H]6+ 669.
보조 모이어티를 함유하는 링커의 목록:
Figure pct00236
Figure pct00237
상기 표에서, Y 또는 Z로 식별된 기는 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00238
상기 표에서, "p313 + N3-발레르아미드"로서 식벽된 Z 기는 Z로서 N3-발레르아미드를 갖는 링커와 p313 사이의 사이클화 첨가 반응의 생성물을 지칭한다.
본 출원에서 기재된 표준 합성 절차 및 국제공개공보 WO 2015/188197을 사용하여 표 1에 나타낸 포스포르아미다이트 단량체를 합성하였다.
키랄성 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오타이드 합성에서 사용된 바이사이클릭 옥사자포스폴리딘 단량체를 문헌 [Wada, J. Am. Chem. Soc. 130:16031-16037, 2008]에 의해 보고된 바와 같은 문헌 프로토콜을 사용하여 제조하였다.
Figure pct00239
Figure pct00240
Figure pct00241
Figure pct00242
Figure pct00243
Figure pct00244
Figure pct00245
Figure pct00246
키랄성 무염기성 스페이서 - 화합물 X7, X8, X9 및 X10:
Figure pct00247
X7 및 X8 합성:
Figure pct00248
X9 및 X10 합성:
Figure pct00249
하기 화합물은 당해 분야에 공지된 방법 및 본 출원에서 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있는 추가의 친수성 뉴클레오사이드 포스포르아미다이트이다:
Figure pct00250
여기서, R은 OH, 임의로 치환된 아미노 또는 -CO2R1 (R1은 H 또는 반대 이온이다)이고, n은 1 내지 4의 정수이다;
Figure pct00251
여기서, R은 OH, OAc, OMe, 임의로 치환된 아미노 또는 -CO2R1 (R1은 H 또는 반대 이온이다)이고, n은 1 내지 51의 정수이다.
하기 화합물은 당해 분야에 공지된 방법 및 본 출원에서 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있는 추가의 치환된 뉴클레오사이드 포스포르아미다이트이다:
Figure pct00252
여기서, R 및 R1은 각각 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬 (예를 들어, Me, Et, i-Pr 또는 n-Bu)이다.
하기 포스포르아미다이트는 Glen Research (Sterling, VA) 또는 ChemGenes (Wilmington, MA)로부터 구입되거나, 본 출원에서 기재된 표준 프로토콜을 사용하여 제조된다:
Figure pct00253
이들 중간체는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, 5'-말단 변형된 뉴클레오사이드를 함유하는 폴리뉴클레오타이드)의 제조에 사용될 수 있다. 5'-말단 변형된 뉴클레오사이드의 비제한적인 예로는 5-할로우리딘, 5-알키닐우리딘, 5-헤테로아릴우리딘 및 5-할로사이티딘이 있다.
5'-캡핑:
a) 5'-5'-캡핑:
Figure pct00254
b) 5'-포스페이트 또는 포스포로티오에이트 캡핑:
Figure pct00255
소분자 기반 표적화 모이어티의 합성
소분자 기반 표적화 모이어티의 제조에 유용한 예시적인 화합물은 국제공개공보 WO 2015/188197 (예를 들어, 국제공개공보 WO 2015/188197에 기재된 화합물 M1~M30)에 기재되어 있다.
글루시톨 보조 모이어티의 합성
글루시톨 기반 보조 모이어티의 제조에 유용한 예시적인 화합물은 국제공개공보 WO 2015/188197 (예를 들어, 국제공개공보 WO 2015/188197에 기재된 화합물 POH1~POH10)에 기재되어 있다.
일반적인 폴리뉴클레오타이드 합성:
일반 반응식:
Figure pct00256
실험 세부 사항:
하기 시약 및 용매에 의해 MerMade 6 또는 12 상에서 자동화 폴리뉴클레오타이드 합성 (1 μmol 규모)을 수행하였다:
산화제 - THF/피리딘/H2O 중의 0.02M I2 (사이클 당 60 s 산화),
황화 시약 II - 디티아졸 유도체/피리딘/아세토니트릴 (6:4 피리딘:아세토니트릴 중의 0.05 M) (사이클 당 60 s)
탈블록 - 3% 트리클로로아세트산 (사이클 당 2× 40 s 탈블록),
Cap Mix A - THF/2,6-루티딘/Ac2O (사이클 당 60 s 캡핑), 및
Cap Mix B - THF 중의 16% 메틸 이미다졸 (사이클 당 60 s 캡핑)
표준 폴리뉴클레오타이드 합성 조건에 대한 예외는 하기와 같았다:
- Uny-링커라고 불리는 비-뉴클레오사이드 링커를 갖는 CPG 지지체를 사용하였다.
- 출발 물질의 용해도에 따라 상기 변형된 2'-데옥시-포스포르아미다이트 일부를 THF/아세토니트릴 혼합물 (1:4) 중에 100 mM까지 용해시킨 것을 제외하고는, 합성 전에 모든 2'-데옥시리보오스-포스포르아미다이트를 100% 무수 아세토니트릴 중에 100 mM까지 재현탁시켰다.
- 포스포르아미다이트 활성화를 2.5배 몰 과량의 5-벤질티오-1H-테트라졸 (BTT) 수행하였다. 활성화된 2'-데옥시리보오스-포스포르아미다이트를 삽입 당 2× 1분 커플링 동안 커플링하고, 개질된 포스포르아미다이트를 삽입 당 2× 3분 커플링 동안 커플링하였다.
- 백본의 황화를 피리딘/아세토니트릴 (6:4) 중의 0.05M 황화 시약 II로 1분 동안 수행하였다.
폴리뉴클레오타이드 탈보호 및 정제 프로토콜:
자동화 폴리뉴클레오타이드 합성에 따라, 고체 지지체 및 염기 보호기 (예를 들어, A-Bz, C-Ac, G-iBu 등) 및 포스포트리에스테르의 메틸 에스테르를 절단하고, 1 mL의 AMA (36% 수성 암모니아와 메탄올 중의 40% 메틸아민의 1:1 비) 중에서 실온에서 2 시간 이상 동안 탈보호한 후 원심 분리 증발을 수행하였다.
조질 폴리뉴클레오타이드 펠렛을 100 μL의 50% 아세토니트릴 중에 재현탁시키고, 간단히 65℃로 가열시키고, 철저히 와동시켰다.
폴리뉴클레오타이드 정제를 위해, 100 μL의 조질 폴리뉴클레오타이드를 하기 완충액/구배 농도로 RP-HPLC 상에 주입하였다:
- 완충액 A = 물 중의 50 mM TEAA;
- 완충액 B = 90% 아세토니트릴; 및
- 유속 = 1 mL/분;
- 농도 구배:
o 0~2분 (100% 완충액 A / 0% 완충액 B),
o 2~42분 (0% 내지 60% 완충액 B), 및
o 42~55분 (60% 내지 100% 완충액 B).
DBCO 컨쥬게이션 및 정제 프로토콜:
DBCO NHS 에스테르를 본 출원에서 기재된 바와 같이 조질 2'-데옥시 DMT-폴리뉴클레오타이드에 컨쥬게이트시켰다. 조질 폴리뉴클레오타이드 펠렛을 45 μL의 DMSO 중에 현탁시키고, 간단히 65℃로 가열시키고, 철저히 와동시켰다. 5 μL의 DIPEA에 이어서 DBCO-NHS 에스테르 (30 당량)를 첨가하고, DMSO (1M) 중에 예비 용해시켰다. 생성물 형성이 MALDI에 의해 확인될 때까지 반응물을 10분 동안 정치시켰다. 총 80 μL의 조질 폴리뉴클레오타이드 샘플을 하기 완충액/구배 농도로 RP-HPLC 상에 주입하였다:
- 완충액 A = 물 중의 50 mM TEAA
- 완충액 B = 90% 아세토니트릴
- 유속 = 1 mL/분
- 농도 구배:
ㅇ 0~2분 (90% 완충액 A / 10% 완충액 B)
ㅇ 2~42분 (0% 내지 60% 완충액 B)
ㅇ 42~55분 (60% 내지 100% 완충액 B).
우세한 RP-HPLC 피크에 걸쳐, 0.5 mL의 분획을 수집하고, MALDI-TOF 질량 분광법으로 분석하여 목적하는 질량의 존재를 확인하였다. 질량 선택된 정제된 분획을 동결시키고 감압 동결 건조시켰다. 건조되면, 분획을 재현탁시키고, 상응하는 분획과 합하고, 동결시키고, 감압 동결 건조시켰다.
DMT 절단: 감압 동결 건조된 펠렛을 20 μL의 50 % 아세토니트릴 중에 현탁시키고, 80 μL의 아세트산을 첨가하고, 샘플을 실온에서 1 시간 동안 방치하고, 동결시키고, 감압 동결 건조하였다. 건조된 샘플을 20% 아세토니트릴 중에 재용해시키고, NAP 10 (Sephadex™-G25 DNA Grade) 컬럼을 통해 탈염하였다. 수집된 순수한 분획을 최종 제품을 위해 동결시키고 감압 동결 건조시켰다.
무염기성 스페이서를 사용하는 일반적인 컨쥬게이션 반응식:
클릭 반응 - 일반 반응식:
Figure pct00257
여기서,
q는 각각 0 또는 1이고;
m은 각각 0 내지 5의 정수이고;
Z는 O 또는 S이고;
RO는 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고;
R은 H, 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드, 고체 지지체 또는 캡핑 기 (예를 들어, -(CH2)3-OH)에 대한 결합이고;
R'는 각각 독립적으로 H, -Q1-QA1, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
R"는 각각 독립적으로 H, -Q1-QA-Q2-T, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
RA는 각각 독립적으로 H 또는 -ORC이며, 여기서, RC는 -Q1-QA1, 생물 가역성 기, 비-생물 가역성 기, 또는 고체 지지체에 대한 결합이고;
RB는 각각 독립적으로 H 또는 -ORD이며, 여기서, RD는 -Q1-QA-Q2-T, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
여기서,
Q1은 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 QA 또는 QA1에 결합되고; 제2 원자가는 개방되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
Q2는 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 QA에 결합되고; 제2 원자가는 T에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
QA는 1,2,3-트리아졸-1,4-디일, 임의로 치환된 C6-16 트리아졸로헤테로사이클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00258
), 임의로 치환된 C8-16 트리아졸로사이클로알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00259
) 또는 디하이드로피리다진 기 (예를 들어, 트랜스-
Figure pct00260
또는 트랜스-
Figure pct00261
)이고;
QA1은 임의로 치환된 C2-12 알키닐, 엔도사이클릭 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 임의로 치환된 C6-16 헤테로사이클릴 (예를 들어,
Figure pct00262
), 임의로 치환된 C8-16 사이클로알키닐 (예를 들어,
Figure pct00263
) 또는 임의로 치환된 C4-8 변형된 사이클로알케닐 (예를 들어, 트랜스-사이클로옥테닐)이고;
T는 표적화 모이어티이고,
단, 출발 물질은 적어도 하나의 -Q1-QA1을 함유하고 생성물은 -Q1-QA-Q2-T를 함유하고;
단, 출발 물질 및 생성물은 고체 지지체에 대한 0 또는 1개의 결합을 함유한다.
컨쥬게이션 방법
Cu 촉매된 클릭 반응
구리-THPTA 복합체 제조
황산 구리 5수화물 (CuSO4-5H2O)의 5 mM 수용액 및 트리스(3-하이드록시프로필트리아졸릴메틸)아민 (THPTA)의 10 mM 수용액을 1:1 (v/v) (1:2 몰비) 혼합하고, 실온에서 1 시간 동안 정치시켰다. 예를 들어, 하기의 일반적인 컨쥬게이션 반응식에서 나타낸 바와 같이, 이러한 복합체를 사용하여 휘스겐 첨가 사이클화를 촉매한다.
일반적인 절차 (100 nM 규모):
1.7 mL의 에펜도르프 튜브 중의 710 μL의 물 및 100 μL의 3차-부탄올 (최종 부피의 10%)의 용액에, 60 μL의 구리-THPTA 복합체에 이어서 50 μL의 올리고의 2 mM 용액, 60 μL의 20 mM 나트륨 아스코르베이트 수용액 및 20 μL의 표적화 모이어티-아지드의 10 mM 용액을 첨가하였다. 완전히 혼합시킨 후, 용액을 실온에서 1 시간 동안 정치시켰다. 반응은 종료를 겔 분석으로 확인하였다. 반응 혼합물을 5~10배 몰 과량의 SiliaMetS® TAAcONa (수지 결합된 EDTA 나트륨 염)를 함유하는 스크류 캡 바이알에 첨가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 교반한다. 그 다음, 이러한 혼합물을 illustra™Nap™-10 컬럼 Sephadex™를 통해 용출시킨다. 그 다음, 생성된 용액을 동결시키고, 밤새 감압 동결 건조시킨다.
아미드 연결을 통한 컨쥬게이션:
아미드화를 통한 컨쥬게이션을 당해 분야에 공지된 아미드화 반응 조건하에 수행할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Aaronson et al., Bioconjugate Chem. 22:1723-1728, 2011]을 참조한다.
Figure pct00264
여기서,
q는 각각 0 또는 1이고;
m은 각각 0 내지 5의 정수이고;
Z는 O 또는 S이고;
RO는 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고;
R은 H, 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드, 고체 지지체 또는 캡핑 기 (예를 들어, -(CH2)3-OH)에 대한 결합이고;
R'는 각각 독립적으로 H, -Q1-QA1, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
R"는 각각 독립적으로 H, -Q1-QA-Q1-T, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
RA는 각각 독립적으로 H 또는 -ORC이며, 여기서, RC는 -Q1-QA1, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
RB는 각각 독립적으로 H 또는 -ORD이며, 여기서, RD는 -Q1-QA-Q2-T, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
여기서,
Q1은 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 QA 또는 QA1에 결합되고, 제2 원자가는 개방되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
Q2는 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 QA에 결합되고, 제2 원자가는 T에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
QA는 -C(O)-N(H)- 또는 -N(H)-C(O)-를 함유하는 임의로 치환된 C2-12 헤테로알킬렌이고;
QA1은 -NHRN1 또는 -COOR12이며, 여기서, RN1은 H, N-보호기 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬이고, R12는 H, 임의로 치환된 C1-6 알킬 또는 O-보호기이고;
T는 표적화 모이어티이고,
단, 출발 물질은 적어도 하나의 -Q1-QA1을 함유하고 생성물은 -Q1-QA-Q2-T를 함유한다.
용액상 컨쥬게이션:
Figure pct00265
여기서,
m은 0 내지 5의 정수이고;
Z는 O 또는 S이고;
RO는 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고;
R은 H, 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드, 또는 캡핑 기에 대한 결합이고;
R'는 각각 독립적으로 H, -Q1-NH2, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
R''는 각각 독립적으로 H, -Q1-NH-CO-Q2-T, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
RA는 각각 독립적으로 H 또는 -ORC이며, 여기서, RC는 -Q1-NH2, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
RB는 각각 독립적으로 H 또는 -ORD이며, 여기서, RD는 -Q1-NH-CO-Q2-T, 생물 가역성 기 또는 비-생물 가역성 기이고;
여기서,
Q1은 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 -NH-CO- 또는 -NH2에 결합되고, 제2 원자가는 개방되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
Q2는 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 -NH-CO-에 결합되고, 제2 원자가는 T에 대한 결합이고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
T는 표적화 모이어티이고,
단, 출발 물질은 -Q1-NH2를 함유하고 생성물은 -Q1-NH-CO-Q2-T를 함유한다.
지지체상 컨쥬게이션:
Figure pct00266
여기서,
Z는 O 또는 S이고;
RO는 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고;
Q2는 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 -NH-CO-에 결합되고, 제2 원자가는 T에 대한 결합이고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
T는 표적화 모이어티이다.
Figure pct00267
여기서,
n은 1 내지 8 의 정수이고;
A는 O 또는 -CH2-이고;
Z는 O 또는 S이고;
RO는 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고;
Q2는 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 아지드 또는 트리아졸에 결합되고, 제2 원자가는 T에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
T는 표적화 모이어티이다.
Figure pct00268
여기서,
n은 1 내지 8 의 정수이고;
A는 O 또는 -CH2-이고;
Z는 O 또는 S이고;
RO는 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고;
Q2는 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 아지드 또는 트리아졸에 결합되고, 제2 원자가는 T에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
T는 표적화 모이어티이다.
Figure pct00269
여기서,
n은 1 내지 8 의 정수이고;
A는 O 또는 -CH2-이고;
Z는 O 또는 S이고;
RO는 폴리뉴클레오타이드 중의 뉴클레오사이드에 대한 결합이고;
Q2는 각각 독립적으로 2가, 3가, 4가 또는 5가 기이며, 여기서, 하나의 원자가는 아지드 또는 트리아졸에 결합되고, 제2 원자가는 T에 결합되고, 나머지 원자가는 존재할 때 각각 독립적으로 보조 모이어티에 결합되고;
T는 각각 독립적으로 표적화 모이어티이다.
포스포트리에스테르의 Fmoc 탈보호에 대한 대표적인 예:
Fmoc-보호된 아민을 갖는 포스포트리에스테르를 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 탈보호 조건을 수행하여, 포스포트리에스테르의 포스포디에스테르로의 관찰 가능한 전환이 없는 Fmoc 탈보호를 초래하였다.
TCCATGACGT T CCTGACGTT (p68; 표 2 참조; 서열 번호 68)
Figure pct00270
p68에 대한 DBCO-NHS 컨쥬게이션 - 대표적인 예:
포스포트리에스테르 중의 아미노 기에 대한 DBCO-NHS 컨쥬게이션은 질량 질량 분광 분석에 의해 입증된 바와 같이 실온에서 10분 내에 종료되었다.
Figure pct00271
DBCO 컨쥬게이트 기를 함유하는 p68 (표 2 참조)의 RP-HPLC 정제를 하기 조건을 사용하여 수행하였다:
- 완충액 A = 물 중의 50 mM TEAA;
- 완충액 B = 90% 아세토니트릴; 및
- 유속 = 1 mL/분;
- 농도 구배:
ㅇ 0~2분 (100% 완충액 A / 0% 완충액 B),
ㅇ 2~22분 (0% 내지 100% 완충액 B), 및
ㅇ 22~25분 (100% 완충액 B)
유사한 절차를 사용하고, 예를 들어, 본 출원에서 기재된 것들과 같은 2'-변형된 뉴클레오사이드 포스포르아미다이트를 사용하여 폴리뉴클레오타이드를 제조할 수 있다. 이러한 절차는 국제출원 PCT/US2015/034749에서 제공되어 있으며; 국제출원 PCT/US2015/034749의 다이설파이드 포스포트리에스테르 올리고뉴클레오타이드 합성의 개시 내용은 본 출원에 참조로 포함된다.
본 출원에서 기재된 일반적인 절차에 따라 표 2에 열거된 면역 조절 폴리뉴클레오타이드를 제조하였다.
Figure pct00272
Figure pct00273
Figure pct00274
Figure pct00275
Figure pct00276
Figure pct00277
Figure pct00278
Figure pct00279
Figure pct00280
Figure pct00281
Figure pct00282
Figure pct00283
Figure pct00284
Figure pct00285
Figure pct00286
Figure pct00287
Figure pct00288
Figure pct00289
Figure pct00290
Figure pct00291
Figure pct00292
Figure pct00293
Figure pct00294
Figure pct00295
Figure pct00296
Figure pct00297
표 2에서, 컬럼 A는 DB 세포에서 IL-6 발현 (EC50, nM)을 제공하고; 컬럼 B는 DB 세포에서 IL-10 발현 (EC50, nM)을 제공하고; 컬럼 C는 라모스 청색 세포에서 NFκB 활성화 (EC50, nM)를 제공하고; 컬럼 D는 Hela-hTLR9-NFκB-luc 세포에서 NFκB 활성화 (EC50, nM)를 제공하고; 컬럼 E는 Hela-mTLR9-NFκB-luc 세포에서 NFκB 활성화 (EC50, nM)를 제공하고; 컬럼 F는 마우스 비장 세포에서 IL-6 분비 (EC50, nM)를 제공하고; 컬럼 G는 95% 마우스 혈장에서 24시간 예비 인큐베이션 후 마우스 비장 세포에서 IL-6 분비 (EC50, nM)를 제공하고; 컬럼 H는 마우스 골수 분화된 DC에서 IL-6 분비 (EC50, nM)를 제공하고; 컬럼 I는 RNAiMax에 의한 2 시간 형질 감염 후 마우스 HEK-청색 세포에서 NFκB 활성화 (EC50, nM)를 제공하고; 컬럼 J는 RNAiMax에 의한 2 시간 형질 감염 후 사람 HEK-청색 세포에서 NFκB 활성화 (EC50, nM)를 제공한다.
본 출원에서 포함된 표 전체에 걸쳐 제공되는 서열에 대한 핵심 기술어는 다음과 같다: 소문자 = 뉴클레오사이드-3'-포스포로티오에이트; 대문자 = 뉴클레오사이드-3'-포스페이트; 이탤릭체 소문자 = 3' tBuDS-Ph (오르토) 트리에스테르 (PS)를 갖는 뉴클레오사이드; 이탤릭체 대문자 = 3' tBuDS-Ph (오르토) 트리에스테르 (PO)를 갖는 뉴클레오사이드; dt = dT(DBCO); 굵은 이중 밑줄 t = DBCO-C6-dT; 굵은 소문자 = 3' n-부틸 트리에스테르 (PS)를 갖는 뉴클레오사이드; 굵은 대문자 = 3' n-부틸 트리에스테르 (PO)를 갖는 뉴클레오사이드; 이탤릭체 굵은 소문자 = 3' 호모프로파길 트리에스테르 (hPro) (PS)를 갖는 뉴클레오사이드; 이탤릭체 밑줄 소문자 = 3' DBCO-NH-PEG2 트리에스테르 (N1) (PS)를 갖는 뉴클레오사이드; 이탤랙체 밑줄 대문자 = 3' DBCO-NH-PEG2 트리에스테르 (N1) (PO)를 갖는 뉴클레오사이드; 이중 밑줄 t = dT PEG2-NH2 트리에스테르 (PS); 이중 밑줄 T = dT PEG2-NH2 트리에스테르 (PO); 이탤릭체 이중 밑줄 소문자 = 3' PEG2-NH2 트리에스테르 (N1) (PS)를 갖는 뉴클레오사이드; 이탤릭체 이중 밑줄 대문자 = 3' PEG2-NH2 트리에스테르 (N1) (PO)를 갖는 뉴클레오사이드; 굵은 이탤릭체 밑줄 대문자 U = 5-요오도-2'-데옥시우리딘 (PO); 굵은 이탤릭체 밑줄 소문자 u = 5-요오도-2'-데옥시우리딘 (PS); 굵은 밑줄 = 2'-플루오로뉴클레오타이드 (PO); 아포스트로피는 아포스트로피 좌측 문자에 의해 식별된 뉴클레오타이드가 2'-OMe-변형된 리보오스를 포함한다는 것을 나타내고; 밑줄 ng = 7-데아자-2'-데옥시구아노신 (PS); 밑줄 pT = PEG4 dT 트리에스테르 (PO); 밑줄 pt = PEG4 dT 트리에스테르 (PS); fT = 5-트리플루오로메틸-티미딘 (PO); fU = 5-플루오로-2'-데옥시우리딘 (PO); bU = 5-브로모-2'-데옥시우리딘 (PO); ft = 5-트리플루오로메틸-티미딘 (PS); fu = 5-플루오로-2'-데옥시우리딘 (PS); bu = 5-브로모-2'-데옥시우리딘 (PS); C3 = C3 스페이서 (-(CH2)3-OH) (PO); c3 = C3 스페이서 (-(CH2)3-OH) (PS); C6 = 헥산-1,6-디일; NH2C6 = 6-아미노헥스-1-일; Te = 3' 에틸 트리에스테르 (PO)를 갖는 티미딘; Ge = 3' 에틸 트리에스테르 (PO)를 갖는 구아노신; Ce = 3' 에틸 트리에스테르 (PO)를 갖는 사이티딘; Ue = 3' 에틸 트리에스테르 (PO)를 갖는 5-요오도우리딘; ue = 3' 에틸 트리에스테르 (PS)를 갖는 5-요오도우리딘; iu = 5-요오도-2'-데옥시우리딘 (PS)에 기반한 5'-5' 캡; iU = 5-요오도-2'-데옥시우리딘 (PO)에 기반한 5'-5' 캡; X5 = X5-DBCO (PO); x5 = x5-DBCO (PS); X3 = X3 무염기성 스페이서 (PO); 및 IR700은 염료이다. 본 출원에서, 기술어 (PO)는 3'-포스페이트를 의미하고; (PS)는 3'-포스포로티오에이트를 의미하고; od = 5'-오르토다이설파이드 포스포디에스테르; o = 5'-포스페이트 (PO); ods = 5'-오르토다이설파이드 포스포로티오에이트; s = 5'-포스포로티오에이트 (PS); 위첨자 "r" = Rp PS; 위첨자 "s" = Sp PS; Af = 2'-플루오로-아데노신 (PO) ; Csi = dC O-실릴트리에스테르 (PO); Tsi = dT O-실릴트리에스테르 (PO); tm = 2'-OMe 티미딘 (PS); t(m) = 2'-OMOE 티미딘 (PS). 구조는 도 5 및 6에 도시되어 있다.
이중 가닥 CpG:
어닐링 및 겔 분석:
DPBS (24.7 mL)를 갖는 p144 (3.3 mL, 2 mM 스톡)에 폴리뉴클레오타이드 p88 (1 mL, 5 mM 스톡)을 첨가하였다. 폴리뉴클레오타이드 p88을 유사한 방식으로 p145로 처리하였다. 혼합물을 10분 동안 65℃로 가열시켰다. TBE 우레아 겔에 의한 분석은 p88의 완전한 어닐링을 나타냈다 (도 2 참조). 각각의 샘플 1 μL를 제거하고, 5 μL의 포름아미드 로딩 완충액에 첨가하고, 웰 당 15% TBE-우레아 겔 상에 로딩하고, 40분 동안 200 볼트에 이어서 에티듐 브로마이드 (EtBr) 염색을 수행하였다. p88, p144 및 p145의 구조에 대해 표 2를 참조한다.
p88/p144를 사용하는 이중 가닥 CpG - 대표적인 예 (1):
TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCG T T (서열 번호 234)
AGCAGCAAAACAGCAAAACAGCAA (서열 번호 468)
p88/p145p88/p145를 사용하는 이중 가닥 CpG - 대표적인 예 (2):
TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCG T T (서열 번호 467)
AGCAGCAAAACAGCAAAACAGCAA (서열 번호 468)
실시예 2: 항체-CpG 컨쥬게이트의 제조
A. 항-SIRPα 항체-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트의 제조
2개의 항-SIRPα 항체를 선택하였다. 상기 항-SIRPα 항체 중 하나는 CD47의 결합을 차단하고, 이의 에피토프는 CD47의 결합 부위와 중첩한다 (차단). 다른 항-SIRPα 항체는 CD47의 결합 부외와는 완전히 다른 에피토프에 결합한다 (비차단). 국제공개공보 WO 2018/057669를 참조하며, 이의 개시 내용은 그 전문이 본 출원에 참조로 포함된다. 트랜스글루타미나아제 ("mTG아제") 반응을 통해 상기 항-SIRPα 항체를 컨쥬게이션시킨다.
컨쥬게이션을 위해 선택된 차단 항체 항-SIRPα 1의 VH 및 VL은 각각EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 521) 및 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYTNPFGGGTKLTVL (서열 번호 525)이다.
컨쥬게이션을 위해 선택된 비차단 항체 항-SIRPα 2의 VH 및 VL은 각각EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDVNWVRQAPGKGLEWVSLISGSGEIIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKENNRYRFFDDWGQGTLVTVSS (서열 번호 548) 및 ETVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVYTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYYDRPPLTFGGGTKVEIK (서열 번호 553)이다.
탈염 컬럼을 사용하여 사람 IgG1에서 N297A 돌연변이를 갖는 항-SIRPα 항체를 25 mM Tris, 150 mM NaCl, pH 8로 완충액 교환하였다. SIRPα 항체 용액에 mTG아제 및 N3-CH2CH2(OCH2CH2)23-NH2의 구조를 갖는 N3-PEG23-NH2 링커를 첨가하였다. N297A 돌연변이를 고려해 볼 때, 컨쥬게이션은 글루타민 295 (EU 넘버링)의 측쇄를 통해 일어날 수 있다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 방치하였다. mTG아제 반응 혼합물에서, 최종 항체 농도는 50 μM이고; mTG아제에 대한 항체의 비는 약 10이고, 항체에 대한 링커의 비는 약 5이었다. mTG아제 및 유리 PEG 링커를 단백질 A 정제로 제거하였다. 탈염 컬럼을 사용하여 상기 변형된 항체를 1×PBS로 완충액 교환하였다. 서열 번호 425의 CpG 뉴클레오타이드 중의 알킨과 상기 변형된 항체 중의 아지도 기의 후속 휘스겐 첨가 사이클화는 하기 화학식 D 또는 E의 구조를 갖는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트를 제공하였다:
[화학식 D]
Figure pct00298
[화학식 E]
Figure pct00299
상기 화학식 들에서, Ab는 차단 또는 비차단 항-SIRPα 항체이고; c는 2'-데옥시사이티딘이고; g는 2'-데옥시구아노신이고; t는 티미딘이고; X는 5-브로모-2'-데옥시우리딘이고; Z는
Figure pct00300
이다.
B. 항-CD56 항체-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트의 제조
쥐과 동물 단클론 항-CD56 항체 (클론 5.1H11)를 상업적으로 입수하였다. 상기 항-CD56 항체를 활성화 펜타플루오로페닐 (PFP) 에스테르를 통해 컨쥬게션시켰다. Dulbecco 포스페이트 완충 식염수 (DPBS) 완충액 중의 항-CD56 항체 (약 2.5 μg/μL)의 용액에, N3-CH2CH2(OCH2CH2)8-CH2CO-PFP의 구조를 갖는 아지도-PEG8-PFP 에스테르를 20의 항체에 대한 링커의 비로 첨가하였다. 아지도 함유 항체를 형성하기 위해 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 방치하였다. 그 다음, 용리액으로서 DPBS를 사용하는 Amicon 30kD 회전 농축기를 통한 완충액 교환에 의해 과량의 아지도-PEG8-PFP를 제거하였다. 서열 번호 425의 CpG 뉴클레오타이드 중의 알킨과 상기 변형된 항체 중의 아지도 기의 후속 휘스겐 첨가 사이클화는 하기 화학식 F 또는 G의 구조를 갖는 항-CD56-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트를 제공하였다:
[화학식 F]
Figure pct00301
[화학식 G]
Figure pct00302
상기 화학식들에서, Ab는 항-CD56 항체이고; s는 약 3 또는 약 4의 정수이고; c는 2'-데옥시사이티딘이고; g는 2'-데옥시구아노신이고; t는 티미딘이고; X는 5-브로모-2'-데옥시우리딘이고; Z는
Figure pct00303
이다.
실시예 3. 항체-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트의 생물학적 평가
트리마 잔류물 (Trima residual)을 태평양 혈액 센터 (Blood Centers of the Pacific)로부터 수령하고, 포스페이트 완충 식염수 (PBS)로 1:4로 희석시켰다. 희석된 혈액을 4개의 튜브에 분할하고, 15 mL Ficoll® Paque 밀도 구배 배지 (GE Healthcare Life Sciences)로 언더플레이하였다 (underplayed). 튜브를 400 × g로 30분 동안 원심 분리하였다. 계면으로부터 PBMC를 수집하고, FACS 완충액 (0.5% 소 혈청 알부민을 함유하는 PBS) 중에 재현탁시켰다. 제조업자의 프로토콜에 따라 단핵구 단리 키트 II (Miltenyi Biotec) 및 LS 컬럼 (Miltenyi Biotec)을 사용하여 CD14+ 단핵구를 음성 선택에 의해 정제하였다.
PBMC 또는 CD14+ 세포를 완전한 Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 배지에서 96웰 형식 (500 K/웰)에 즉시 플레이팅하였다. 100 nM 내지 6.4 pM의 항체 및 항체-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트 및 1 μM 내지 64 pM의 서열 번호 425의 CpG 폴리뉴클레오타이드의 5배 연속 희석물을 37℃에서 5% CO2하에 24 시간 또는 48 시간 동안 세포에 첨가하였다. 세포를 400 × g로 5분 동안 원심 분리하여 펠렛화하고, PBS 중에서 1:2000 희석된 100 μL의 Fixable Viability Dye eFluor 780 (Thermo Fisher)으로 4℃에서 염색하였다. 세포를 원심 분리하고, 2 μL FcγR 차단 시약, 항-SIRPα 검정을 위한 1.25 μL의 항-CD14, 항-CD3, 항-CD19 및 항-CD56 검정을 위한 항-CD56, 항-CD16, 항-CD69, 항-CD14, 항-CD3 및 항-CD19를 함유하는 100 μL의 FACS 완충액으로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 세포를 원심 분리하고, 200 μL의 FACS 완충액으로 2회 세척하고, 100 μL의 0.5% 파라포름알데하이드으로 고정시켰다. CountBright 절대 계수 비드를 각각의 웰에 첨가하여 세포수를 계수하였다. Flowjo 10.7에 의한 후속 데이터 분석과 함께 Attune NxT 유세포 측정기에서 세포를 분석하였다. eFluor 780 음성 집단에 게이팅하여 사망 세포를 제외하였다. 먼저 CD14+ 세포를 게이팅하기 전에 계통 특이적 세포 (CD19, CD3), 및 CD56+CD16+ 세포를 게이팅하기 전에 (CD19, CD3, CD14)를 제외하였다.
도 1 및 2에서 도시된 바와 같이, 항-CD56-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트는 각각 24 시간 및 48 시간에 CpG 뉴클레오타이드 및 항-CD56 단독과 비교하여 NK 세포의 활성화를 증진시켰다. CD69 발현에 의해 결정된 바와 같이, 항-CD56-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트는 NK 세포 활성화를 유도할 수 있었다.
도 3 및 4에서 도시된 바와 같이, 차단 항체 (항-SIRPα 1) 또는 비차단 항체 (항-SIRPα 2)를 갖는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트는 온전한 PBMC 및 정제된 CD14+ 집단 내에서 CD14+ 단핵구의 증식을 유도하였다. CD14+ 단핵구의 절대 수를 결정하기 위해 계수 비드를 사용하면, 차단 항체 (항-SIRPα 1) 또는 비차단 항체 (항-SIRPα 2)를 갖는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트는 CpG 뉴클레오타이드 및 항-SIRPα 항체 단독과 비교하여 증식을 유도하였다. 정제된 CD14+ 단핵구를 사용하는 실험은 세포 수의 증가가 CpG 뉴클레오타이드를 세포에 항-SIRP 항체에 의해 전달한 결과이다는 것을 나타낸다. 이러한 데이터는 상이한 에피토프에 결합하는 항-SIRPα 항체 (차단 및 비차단)가 CpG 뉴클레오타이드를 CD14+ 단핵구에 전달하고 세포 수의 확장을 초래한다는 것을 종합적으로 나타낸다.
실시예 4: K D 의 결정
항-SIRPα 항체와 다양한 종 (사람 v1, 사람 v2, 시노몰구스 (cynomolgus) 유래의 SIPRα, 마우스 129, BL6, BALBc, NOD), SIRPβ및 SIRPγ의 상호 작용을 2가지 방법, 즉, 하기 프로토콜에 따른 (GLC 칩을 통한) 항체의 직접 고정화를 사용하여 분석하였다. GLC 또는 NLC 센서 칩이 장착된 SPR 기반 ProteOn XPR36 바이오 센서 (BioRad, Inc., Hercules, CA)를 사용하여 25℃에서 모든 실험을 수행하였다. FREESTYLE™ 293-FS 세포 (Thermo Fisher)를 사용하여 항체를 발현시켰다. 표준 단백질 A 친화성 컬럼 크로마토그래피로 정제를 수행하고, 용출된 항체를 PBS 완충액에 보관하였다.
실행 완충액은 0.01% TWEEN-20 (PBST+)을 함유하는 PBS, pH 7.4이었다. A280 흡광도에 의해 결정되고 몰 계산된 흡광 계수를 사용하여 모든 분석물을 공칭 농도로 사용하였다. 분석물을 기재된 바와 같은 "원샷" 동력학 방식으로 주사하였다 (예를 들어, 문헌 [Bravman et al., Anal. Biochem. 2006, 358, 281-288] 참조).
GLC 칩을 사용하는 방법의 경우, 프로테온 아민 커플링 키트를 사용하여 분석물을 GLC 칩 상에 고정된 항-SIRPα 항체 (약 1000 RU)에 주입하고 흐르게 하였다. 고정화 단계의 경우, 1/100 희석된 EDAC/Sulpho-NHS 1:1 (Biorad)로 GLC 칩을 25 μL/분으로 300초 동안 활성화시켰다. 항-SIRPα항체를 10 mM 나트륨 아세테이트 완충액 pH 4.5로 80 nM 농도까지 희석하고, 50초 동안 30 μL/분으로 칩에 고정시켰다. 칩을 에탄올아민으로 300초 동안 25 μL/분으로 불활성화시켰다. 분석물 (예를 들어, 상이한 종 유래의 SIRP-α, SIRP-β, SIRP-γ)을 100, 33, 11, 3.7, 1.2 및 0 nM의 공칭 농도로 "원샷" 동력학 방식으로 주입하였다. 결합 시간을 90초 동안 100 uL/분으로 모니터링하고, 해리 시간을 1200초 동안 모니터링하였다. 표면을 Pierce IgG 용출 완충액/4 M NaCl의 2:1 v/v 블렌드로 재생하였다.
반응 스팟 데이터 (고정화된 단백질)로부터 인터스팟 (interspot) 데이터 (고정화된 단백질을 포함하지 않음)를 공제한 다음, 분석물 주입의 반응으로부터 완충액 "블랭크" 분석물 주입의 반응을 공제함으로써, 바이오 센서 데이터를 이중 참조하였다. 이중 참조 데이터를 전체적으로 간단한 Langmuir 모델에 피팅 (fit)하였으며, KD 값을 겉보기 운동 속도 상수 (apparent kinetic rate constant)의 비로부터 계산하였다 (KD = kd/ka).
상이한 종 유래의 다양한 SIRP-α, SIRP-β, SIRP-γ에 대한 차단제 119, 135 및 비차단제 136 사람 항체의 결합 동력학을 결정하였다. 이러한 항체는 사람 v1, 사람 v2 및 시노몰구스 원숭이 유래의 SIRP-α와 높은 친화성으로 결합한다. 이들은 다양한 마우스 SIRP-α에 결합하지 않는다. 그러나, 이들은 사람 SIRP-β 및 사람 SIRP-γ에 결합하는 높은 친화성을 나타냈다. 그러므로, 이러한 항체는 다양한 골수 세포 집단의 활성을 조절하기 위해 CpG 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 컨쥬게이션 및 전달에 유용한 범 항-SIRP일 것이다. 결과는 표 3에 요약되어 있다.
상이한 종 유래의 다양한 SIRP-α, SIRP-β, SIRP-γ에 대한 사람화 AB21 차단 항체의 결합 동력학을 결정하였다. AB21 항체는 사람 v1, 사람 v2, 시노몰구스 원숭이 유래의 SIRP-α, 다양한 마우스 SIRP-α(NOD, BL6 및 BALBc), 사람 SIRP-β 및 사람 SIRP-γ와 높은 친화성으로 결합한다. 그러므로, AB21 차단 항체는 다양한 골수 세포 집단의 활성을 조절하기 위해 CpG 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 컨쥬게이션 및 전달에 유용한 범 항-SIRP일 것이다. 결과는 표 4에 요약되어 있다.
Figure pct00304
Figure pct00305
Figure pct00306
실시예 5: 항체-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트의 생체내 평가
CT26 및 MC38 세포를 각각 BALB/c 및 C57BL/6 암컷 마우스의 우측 옆구리에 RPMI 1640 (CT26의 경우) 또는 DMEM (MC38의 경우) 중의 마우스 당 2 × 106개 세포의 농도로 주사하였다. 종양의 평균 크기가 연구에 따라 75~300 mm3에 도달할 때까지, 종양을 모니터링하였다. 연구에 따라 코호트 당 5~7 마리의 마우스로 PBS 대조군, 차단 항체 (항-SIRPα 1)를 함유하는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트, 및 비차단 항체 (항-SIRPα 2) 그룹을 함유하는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트에 마우스를 무작위로 배정하였다. 항-SIRPα 항체의 서열은 실시예 2에 기재되어 있으며; CpG는 p313에 상응하였다. 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트 처리된 마우스에게 0.1~10 mg/kg으로 3일 간격으로 총 2회 투여하였다. 두 약물을 모두 복강내 투여하였다. 종양은 캘리퍼에 의해 2 차원으로 측정되었으며, 종양 부피는 길이 × 폭 × 폭 × 0.5로서 계산되었으며, 여기서, 길이는 2개의 측정값 중 더 컸다.
CT26 종양 보유 마우스를 종양 체적에 따라 측정하고 무작위로 배정하였다. 4 일째, 5 마리 마우스의 각각의 코호트는 75 mm3의 평균 종양 크기를 가졌다. 3일 간격으로 2회 투여한 10 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 처리된 마우스는 종양 근절 (4/5 마우스)을 나타내는 반면, 3일 간격으로 2회 투여한 10 mg/kg의 컨쥬게이션되지 않은 대조군 항-SIRPa 항체 처리된 마우스는 PBS와 비교하여 최적 미만의 종양 억제를 나타냈다 (도 7a). CT26 종양 보유 마우스를 종양 체적에 따라 측정하고 무작위로 배정하였다. 8 일째에, 종양은 그룹 당 7 마리의 마우스에 100 mm3의 평균 종양 크기를 가지며, 3일 간격의 3 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 및 항-SIRPα 2 컨쥬게이트에 의한 2회 처리는 완전한 종양 근절을 나타냈다 (도 7b). 24 일째에, 항-SIRPα 1 컨쥬게이트 (항-SIRPα 차단 항체 컨쥬게이트)로 처리된 7 마리의 마우스 중 7 마리 및 항-SIRPα 2 컨쥬게이트 (항-SIRPα 비차단 항체 컨쥬게이트)로 처리된 7 마리의 마우스 중 6 마리는 완전한 종양 근절을 나타냈다. 도 7c에서 도시된 바와 같이, 300 mm3의 평균 종양 크기를 갖는 CT26 종양 보유 마우스 및 5 마리 마우스의 코호트를 0.1, 0.3 및 1 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트로 3일 간격으로 2회 처리하였다. 용량 반응이 종양 억제에서 관찰되었으며, 1 mg/kg이 가장 강력하였다. 5 마리의 마우스 중 4 마리는 1 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트로 처리된 그룹에 대해 21 일째에 종양 근절을 나타냈다. 도 7d에서 도시된 바와 같이, 3일 간격으로 2회 용량의 10 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트로 처리된 155 mm3의 평균 종양 체적을 갖는 MC38 종양 보유 마우스는 21 일째에 종양의 완전한 근절을 나타냈다. 종합적으로, 이러한 데이터는 다중 종양 모델의 종양 근절, 컨쥬게이션되지 않은 SIRPa 항체와 비교한 SIRPa-CpG의 비활성 (specific activity), SIRPa 차단 및 비차단 항체 CpG 컨쥬게이트 모두에 의한 종양 근절, 및 마우스가 1 mg/kg 만큼 낮은 항-SIRPα 1 컨쥬게이트로 처리될 때의 종양 근절을 나타냈다.
종양의 평균 크기가 300 mm3에 도달할 때까지, 종양을 모니터링하였다. 코호트 당 5 마리의 마우스로 PBS 대조군 및 차단 항체 (항-SIRPα 1)를 함유하는 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트에 마우스를 무작위로 배정하였다. 항-SIRPα 항체의 서열은 실시예 2에 기재되어 있으며; CpG는 p313에 상응하였다. 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트 처리된 마우스에게 CT26 모델에 대해 1 mg/kg으로 3일 또는 7일 간격으로 총 2회 투여하였다. 항-SIRPα-CpG 뉴클레오타이드 컨쥬게이트를 복강내 투여하였다. 종양은 캘리퍼에 의해 2 차원으로 측정되었으며, 종양 부피는 길이 × 폭 × 폭 × 0.5로서 계산되었으며, 여기서, 길이는 2개의 측정값 중 더 컸다.
CT26 종양 보유 마우스를 종양 체적에 따라 측정하고 무작위로 배정하였다. 10 일째에, 종양은 300 mm3의 평균 종양 크기를 가지며, 3일 또는 7일 간격으로 2회 투여된 1 mg/kg의 항-SIRPα 1 컨쥬게이트에 의한 처리는 종양 근절을 나타냈다 (도 8a). 25 일째, 5 마리의 마우스 중 4 마리는 두 그룹 모두에서 종양이 없었다. 63 일째에, 3일 간격으로 처리된 4 마리의 생존 마우스는 모두 종양이 없는 반면, 7일 간격으로 처리된 마우스도 또한 4 마리의 생존 마우스를 가졌지만, 2 마리만은 여전히 종양이 없었다 (도 8b).
* * * * *
상기에서 제시된 실시예들은, 청구된 실시 형태를 제조하고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 기재를 당해 분야의 통상의 기술자들에게 제공하기 위해 제공되며, 본 출원에서 개시된 것의 범위를 한정하는 것으로 의도되지 않는다. 당해 분야의 통상의 기술자들에게 명백한 변형들은 하기 청구항의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다. 본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은, 각각의 이러한 간행물, 특허 또는 특허 출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 본 출원에 참조로 포함되는 것으로 명시된 것처럼, 참조로 본 출원에 포함된다.
<110> TOLLNINE, INC. <120> IMMUNOMODULATING POLYNUCLEOTIDE CONJUGATES AND METHODS OF USE <130> 18649-20003.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/747,611 <151> 2018-10-18 <150> US 62/747,070 <151> 2018-10-17 <160> 586 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <400> 1 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by NH2-C6 as described in Table 2 of the specification <400> 2 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by NH2-C6-S-S-C6 as described in Table 2 of the specification <400> 3 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by DBCO <400> 4 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by DBCO-C6-S-S-C6 as described in Table 2 of the specification <400> 5 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphate <400> 6 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by DBCO-C6-S-S-C6 as described in Table 2 of the specification <400> 7 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 8 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <400> 8 tgctgctttt gtgcttttgt gctt 24 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by DBCO-C6-S-S-C6 as described in Table 2 of the specification <400> 9 tgctgctttt gtgcttttgt gctt 24 <210> 10 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1, 23 <223> nucleoside having a 3' tBuDS-Ph (ortho) triester <400> 10 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 11 <211> 24 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having a 3' tBuDS-Ph (ortho) triester <400> 13 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 14 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by DBCO <220> <221> misc_feature <222> 1, 23 <223> nucleoside having a 3' tBuDS-Ph (ortho) triester <400> 14 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 15 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(24) <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by DBCO <220> <221> misc_feature <222> 1, 23 <223> nucleoside having a 3' tBuDS-Ph (ortho) triester <400> 15 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by DBCO <220> 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(1)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 3 <223> 7-deaza-2'-deoxyguanosine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 279 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 280 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 6 <223> 7-deaza-2'-deoxyguanosine <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 280 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 281 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 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Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' n-butyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 355 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 356 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' n-butyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 356 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 357 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' n-butyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 357 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 358 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' n-butyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 358 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 359 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' n-butyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 359 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 360 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' n-butyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' DBCO-NH-PEG2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 360 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 361 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 361 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 362 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 362 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 363 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 11 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 11 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 363 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 364 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 10 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 364 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 365 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 9 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 9 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 365 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 366 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 8 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 8 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 366 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 367 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 7 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 7 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 367 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 368 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 6 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 6 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 368 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 369 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 5 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 5 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 369 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 370 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 3, 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 3 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 370 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 371 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 371 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 372 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 372 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 373 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by X5-C3 as described in Table 2 of the specification <400> 373 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 374 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 13,14 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 374 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 375 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 12, 13 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 375 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 376 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 11, 12 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 376 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 377 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 10, 11 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 377 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 378 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 9, 10 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 378 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 379 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 8, 9 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 379 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 380 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 7, 8 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 380 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 381 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 6, 7 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 381 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 382 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 5, 6 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 382 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 383 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 5 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 383 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 384 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 3, 4 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 384 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 385 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 3 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 385 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 386 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1, 2 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 386 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 387 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 387 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 388 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4,5 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 388 tucgcgtgac gtt 13 <210> 389 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4,5 <223> linked by X5-DBCO as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 389 tucgcgtgac gtt 13 <210> 390 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodouridine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 2,3 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> (5)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 390 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 391 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodouridine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 391 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 392 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodouridine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 3 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> (5)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 392 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 393 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 11 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12,13 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 393 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 394 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,4,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> (5)..(9) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodouridine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 2,10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 3,11 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12,13 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 394 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 395 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodouridine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 2,5,10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 3,6,8,11 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 7,9,12,13 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 395 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 396 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,6,7,8,9,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2,4,5,10 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2,5,10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 396 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 397 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,7,9,10,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4,6,8,11 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 6,8,11 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 397 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 398 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,8,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4,7,9,12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 7,9,12 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 398 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 399 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,8,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2,4,7,9,12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 7,9,12 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 399 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 400 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,8,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4, 7, 9, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 7, 9 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 400 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 401 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1, 3, 5, 6, 8, 10, 11, 13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 9, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4, 7, 9 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 401 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 402 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 11 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 11 <223> guanosine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 402 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 403 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 10 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2, 10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 403 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 404 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,12,14 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 13 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 404 ucgtcgttgt cgtt 14 <210> 405 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,9,10,11,12,14 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 8, 13 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 8, 13 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 405 ucgtcgttgt cgtt 14 <210> 406 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,8,9,10,11,12,14 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 13 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 7, 13 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 406 ucgtcgttgt cgtt 14 <210> 407 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 7,8 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 407 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 408 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 6,7 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 408 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 409 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,9,10,11,12,14 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 8, 13 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 8, 13 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 409 ucgtcgttgt cgtt 14 <210> 410 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 7,8 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 410 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 411 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> modified by X3 abasic spacer described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 411 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 412 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 1,2 <223> linked by X3 abasic spacer described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 412 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 413 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2,3 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 413 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 414 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 3,4 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 414 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 415 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4,5 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 415 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 416 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 5,6 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 416 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 417 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 6,7 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 417 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 418 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 7,8 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 418 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 419 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 8,9 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 419 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 420 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 9,10 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 420 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 421 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 10,11 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 421 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 422 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 11,12 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 422 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 423 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 12,13 <223> linked by X3 abasic spacer as described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 423 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 424 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by X3 abasic spacer described in Table 2 of the specification <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 424 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 425 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 425 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 426 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 426 ccgtcgtgtc gtt 13 <210> 427 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5'-5' cap based on 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 427 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 428 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5'-5' cap based on 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 428 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 429 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5'-orthodisulfide phosphodiester <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'- phosphorothioate) <400> 429 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 430 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine (3'-phosphorothioate) <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'- phosphorothioate) <400> 430 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 431 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5'-orthodisulfide phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'- phosphorothioate) <400> 431 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 432 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'- phosphorothioate) <400> 432 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 433 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> Rp conformation <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 433 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 434 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> Sp conformation <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 434 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 435 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> Rp conformation <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 435 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 436 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> Sp conformation <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 436 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 437 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> Sp conformation <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> Rp conformation <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 437 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 438 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 1,2 <223> Sp conformation <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> nucleoside having a 3' PEG2-NH2 triester (N1) <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 438 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 439 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 439 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 440 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 10 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2, 10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 440 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 441 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,6,7,8,9,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 10 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2, 5, 10 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 441 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 442 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 442 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 443 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> cytidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 7, 12 <223> thymidine having a 3' ethyl triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphate) <400> 443 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 444 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> biotinylated <220> <221> misc_feature <222> 1,2,5,7,10,13 <223> 2'-fluoro-adenosine <220> <221> misc_feature <222> 3,6,8,11 <223> 2'-fluoro-cytosine <220> <221> misc_feature <222> 4,9,12 <223> 2'-fluoro-guanine <400> 444 aacgacacga cga 13 <210> 445 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> dC O-silyltriester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 445 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 446 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> dT O-silyltriester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 446 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 447 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,6,7,8,9,11,12,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 10 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2, 5, 10 <223> dC O-silyltriester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 447 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 448 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,7,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> dC O-silyltriester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 12 <223> dT O-silyltriester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 448 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 449 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1,3,5,6,8,9,10,11,13 <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> 5-bromo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 12 <223> nucleoside-3'-phosphate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> dC O-silyltriester <220> <221> misc_feature <222> 4 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 7, 12 <223> dT O-silyltriester <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 449 ucgtcgtgtc gtt 13 <210> 450 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 450 tucgtcgtga cgtt 14 <210> 451 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 14 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 451 tucgacgtga cgtt 14 <210> 452 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 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<223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(6) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 6 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 6 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 455 tucgtt 6 <210> 456 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 5 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 5 <223> modified by C3 spacer (-(CH2)3-OH) (3'-phosphorothioate) <400> 456 tacgt 5 <210> 457 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> nucleoside-3'-phosphorothioate <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> 5-iodo-2'-deoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> 5 <223> dT PEG2-NH2 triester <220> <221> misc_feature <222> 5 <223> 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Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 575 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 575 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 576 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 576 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Ala Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 577 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 577 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 578 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 578 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 579 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 579 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 580 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 580 Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 20 25 30 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro 35 40 45 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 65 70 75 80 Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 581 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 581 Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 20 25 30 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 35 40 45 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 65 70 75 80 Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 582 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 582 Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 583 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 583 Gly Gly Gly Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 584 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 584 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Thr Ser Gly Val Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Arg Leu Phe Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asp Thr Phe Asp His Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 585 <211> 102 <212> PRT <213> Gallus gallus domesticus <400> 585 Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val 1 5 10 15 Lys Ile Thr Cys Phe Gly Ser Ser Gly Asn Tyr Gly Trp Phe Gln Gln 20 25 30 Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Tyr Asn Asn Lys 35 40 45 Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser 50 55 60 Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp Glu Ala Val 65 70 75 80 Tyr Phe Cys Gly Ala Trp Glu Thr Gly Ser Ala Thr Phe Gly Ala Gly 85 90 95 Thr Thr Leu Thr Val Leu 100 <210> 586 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 1 <223> absent or 2'-deoxythymidine <220> <221> misc_feature <222> 2 <223> a 2'-deoxyribonucleotide with a modified nucleobase <220> <221> misc_feature <222> 3, 6, 11 <223> 2'-deoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> 4, 7, 9, 12 <223> 2'-deoxyguanosine <220> <221> misc_feature <222> 5 <223> 2'-deoxyadenosine or 2'-deoxythymidine, each optionally comprising a 3'-phosphotriester <220> <221> misc_feature <222> 8 <223> Can be in repeats of about 1 to about 4 <220> <221> misc_feature <222> 10 <223> 2'-deoxyadenosine or 2'-deoxythymidine <220> <221> misc_feature <222> 13 <223> 2'-deoxythymidine optionally comprising a 3'-phosphotriester <400> 586 nncgncgtgn cgnt 14

Claims (126)

  1. 표적화 모이어티 (moiety), 면역 조절 폴리뉴클레오타이드 및 링커를 포함하는 컨쥬게이트로서, 상기 표적화 모이어티가 NK 세포 또는 골수 세포에 의해 발현된 항원에 결합하고, 상기 링커가 상기 표적화 모이어티를 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드에 공유적으로 연결하는, 컨쥬게이트.
  2. 제1항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르를 포함하는, 컨쥬게이트.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 변형된 핵 염기를 갖는 뉴클레오타이드를 포함하는, 컨쥬게이트.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 컨쥬게이트가 하기 화학식 C의 구조를 갖는 컨쥬게이트, 또는 이의 입체 이성질체, 둘 이상의 부분 입체 이성질체의 혼합물, 호변 이성질체 또는 둘 이상의 호변 이성질체의 혼합물; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물:
    [화학식 C]
    Figure pct00307

    상기 화학식 C에서,
    Ab는 표적화 모이어티이고;
    LN은 각각 독립적으로 링커이고;
    Q는 각각 독립적으로 면역 조절 폴리뉴클레오타이드이고;
    e는 각각 독립적으로 약 1, 약 2, 약 3 또는 약 4의 정수이고;
    f는 약 1, 약 2, 약 3 또는 약 4의 정수이다.
  5. 제4항에 있어서, f가 약 1의 정수인, 컨쥬게이트.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, LN이 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 링커인, 컨쥬게이트.
  7. 제6항에 있어서, LN이
    Figure pct00308
    이고, 여기서, d가 약 0 내지 약 50의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  8. 제6항에 있어서, LN이
    Figure pct00309
    이고, 여기서, d가 약 0 내지 약 50의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, d가 약 0 내지 약 10의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  10. 제7항 또는 제8항에 있어서, d가 약 0 내지 약 5의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  11. 제7항 또는 제8항에 있어서, d가 약 0, 약 1 또는 약 3의 정수인, 컨쥬게이트.
  12. 제4항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, e가 약 1의 정수인, 컨쥬게이트.
  13. 제4항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Q가 각각 독립적으로 하기 화학식 D의 구조를 갖는, 컨쥬게이트:
    [화학식 D]
    Figure pct00310

    상기 화학식 D에서,
    XN은 각각 독립적으로 뉴클레오타이드이고;
    X3'는 3' 말단 뉴클레오타이드이고;
    X5'는 5' 말단 뉴클레오타이드이고;
    YP는 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르의 잔기이고;
    b 및 c는 각각 약 0 내지 약 25의 범위의 정수이고; 단, 이들의 합은 5 이상이다.
  14. 제13항에 있어서, b가 약 1 내지 약 15의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  15. 제13항에 있어서, b가 약 3, 약 4, 약 11 또는 약 14의 정수인, 컨쥬게이트.
  16. 제13항에 있어서, b가 약 3의 정수인, 컨쥬게이트.
  17. 제13항에 있어서, b가 약 4의 정수인, 컨쥬게이트.
  18. 제13항에 있어서, b가 약 11의 정수인, 컨쥬게이트.
  19. 제13항에 있어서, b가 약 14의 정수인, 컨쥬게이트.
  20. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, c가 약 0 내지 약 10의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  21. 제20항에 있어서, c가 약 0 또는 약 8의 정수인, 컨쥬게이트.
  22. 제20항에 있어서, c가 약 0의 정수인, 컨쥬게이트.
  23. 제20항에 있어서, c가 약 8의 정수인, 컨쥬게이트.
  24. 제13항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, b와 c의 합계가 약 5 내지 약 20의 범위인, 컨쥬게이트.
  25. 제24항에 있어서, b와 c의 합계가 약 5 내지 약 15의 범위인, 컨쥬게이트.
  26. 제24항에 있어서, b와 c의 합계가 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13 또는 약 14인, 컨쥬게이트.
  27. 제13항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, XN이 각각 독립적으로 2'-데옥시리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  28. 제27항에 있어서, XN이 각각 독립적으로 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  29. 제27항에 있어서, XN이 각각 독립적으로 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  30. 제13항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, X3'가 2'-데옥시리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  31. 제30항에 있어서, X3'가 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  32. 제30항에 있어서, X3'가 2'-데옥시티미딘인, 컨쥬게이트.
  33. 제30항에 있어서, X3'가 2'-변형된 리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  34. 제30항에 있어서, X3'가 2'-메톡시 리보뉴클레오타이드 또는 2'-에톡시메톡시 리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  35. 제13항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, X5'가 2'-데옥시리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  36. 제35항에 있어서, X5'가 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시구아노신, 2'-데옥시사이티딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘, 2'-데옥시티미딘, 2'-데옥시우리딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  37. 제35항에 있어서, X5'가 치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  38. 제35항에 있어서, X5'가 5-치환된 피리미딘 염기를 갖는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  39. 제35항에 있어서, X5'가 2'-데옥시티미딘, 5-할로-2'-데옥시사이티딘 또는 5-할로-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  40. 제35항에 있어서, X5'가 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시사이티딘, 5-요오도-2'-데옥시사이티딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  41. 제35항에 있어서, X5'가 2'-데옥시티미딘, 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  42. 제13항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, X5'가 3'-포스포로티오에이트 기를 갖는, 컨쥬게이트.
  43. 제42항에 있어서, 상기 3'-포스포로티오에이트가 키랄성인, 컨쥬게이트.
  44. 제43항에 있어서, 상기 3'-포스포로티오에이트가 Rp의 키랄성을 갖는, 컨쥬게이트.
  45. 제43항에 있어서, 상기 3'-포스포로티오에이트가 Sp의 키랄성을 갖는, 컨쥬게이트.
  46. 제13항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, X5'가 Rp의 키랄성을 갖는 3'-포스포로티오에이트 기를 가지며, X3'가 2'-메톡시 리보뉴클레오타이드 또는 2'-에톡시메톡시 리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  47. 제13항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, X5'가 Sp의 키랄성을 갖는 3'-포스포로티오에이트 기를 가지며, X3'가 2'-메톡시 리보뉴클레오타이드 또는 2'-에톡시메톡시 리보뉴클레오타이드인, 컨쥬게이트.
  48. 제13항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, YP가
    Figure pct00311

    이고, 여기서, Z가 O 또는 S이고; d가 약 0 내지 약 50의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  49. 제48항에 있어서, YP가
    Figure pct00312

    이고, 여기서, Z가 O 또는 S이고; d가 약 0 내지 약 50의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, Z가 O인, 컨쥬게이트.
  51. 제48항 또는 제49항에 있어서, Z가 S인, 컨쥬게이트.
  52. 제48항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, d가 약 0 내지 약 10의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  53. 제52항에 있어서, d가 약 0 내지 약 5의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  54. 제52항에 있어서, d가 약 0, 약 1 또는 약 3의 정수인, 컨쥬게이트.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 추가의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르를 포함하는, 컨쥬게이트.
  56. 제55항에 있어서, 상기 추가의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르가 알킬포스포트리에스테르인, 컨쥬게이트.
  57. 제55항에 있어서, 상기 추가의 뉴클레오사이드간 포스포트리에스테르가 에틸포스포트리에스테르인, 컨쥬게이트.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 하나의 5-할로-2'-데옥시우리딘을 포함하는, 컨쥬게이트.
  59. 제58항에 있어서, 상기 5-할로-2'-데옥시우리딘이 5-브로모-2'-데옥시우리딘 또는 5-요오도-2'-데옥시우리딘인, 컨쥬게이트.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 3개 이상의 2'-데옥시사이티딘을 포함하는, 컨쥬게이트.
  61. 제60항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 3개의 2'-데옥시사이티딘을 포함하는, 컨쥬게이트.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 4개 이상의 2'-데옥시구아노신을 포함하는, 컨쥬게이트.
  63. 제62항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 4개의 2'-데옥시구아노신을 포함하는, 컨쥬게이트.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 3개의 2'-데옥시사이티딘 및 4개의 2'-데옥시사이티딘을 포함하는, 컨쥬게이트.
  65. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 3개 이상의 2'-데옥시티미딘을 포함하는, 컨쥬게이트.
  66. 제65항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 2'-데옥시티미딘을 포함하는, 컨쥬게이트.
  67. 제65항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 3, 4, 5 또는 8개의 2'-데옥시티미딘을 포함하는, 컨쥬게이트.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 0, 1 또는 2개의 2'-데옥시아데노신을 포함하는, 컨쥬게이트.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 하나 이상의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 포함하는, 컨쥬게이트.
  70. 제69항에 있어서, 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드가 약 12개의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트를 포함하는, 컨쥬게이트.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 NK 세포 상에 발현된 항원에 대한 항체인, 컨쥬게이트.
  72. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 골수 세포 상에 발현된 항원에 대한 항체인, 컨쥬게이트.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 사람 항체인, 컨쥬게이트.
  74. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 사람 항-CD56 항체인, 컨쥬게이트.
  75. 제74항에 있어서, 상기 항체가 클론 5.1H11로부터 유래된 사람 항-CD56 항체인, 컨쥬게이트.
  76. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 항-SIRPα 항체인, 컨쥬게이트.
  77. 제76항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 차단 항-SIRPα 항체인, 컨쥬게이트.
  78. 제77항에 있어서, 상기 차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 498~500으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 501의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 502의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및 서열 번호 503의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 504의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 505의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  79. 제78항에 있어서, 상기 차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 490~495로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 496 또는 497의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  80. 제77항에 있어서, 상기 차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 512~514으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 515의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 516의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및 서열 번호 517의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 518의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 519의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  81. 제80항에 있어서, 상기 차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 506~509로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 510 또는 511의 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  82. 제77항에 있어서, 상기 차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 533~535로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 536의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 537의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및 서열 번호 538~542로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 543의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 544~546으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  83. 제82항에 있어서, 상기 차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 520~523으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 525~532로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  84. 제76항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 비차단 항-SIRPα 항체인, 컨쥬게이트.
  85. 제84항에 있어서, 상기 비차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 554~556으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호 557의 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호 558의 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인; 및 서열 번호 559의 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호 560의 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호 561의 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  86. 제85항에 있어서, 상기 비차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 547~550으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 551~553으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  87. 제84항에 있어서, 상기 비차단 항-SIRPα 항체가 서열 번호 584의 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 585, 562 및 563으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  88. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 항-SIRPβ 항체인, 컨쥬게이트.
  89. 제88항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 차단 항-SIRPβ 항체인, 컨쥬게이트.
  90. 제88항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 비차단 항-SIRPβ 항체인, 컨쥬게이트.
  91. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 항-SIRPγ 항체인, 컨쥬게이트.
  92. 제91항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 차단 항-SIRPγ 항체인, 컨쥬게이트.
  93. 제91항에 있어서, 상기 표적화 모이어티가 비차단 항-SIRPγ 항체인, 컨쥬게이트.
  94. 제71항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 사람 Fc 영역을 포함하는, 컨쥬게이트.
  95. 제94항에 있어서, 상기 Fc 영역이 사람 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역인, 컨쥬게이트.
  96. 제94항에 있어서, 상기 Fc 영역이,
    (i) EU 넘버링에 따라 L234A, L235A 및 G237A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역;
    (ii) EU 넘버링에 따라 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역;
    (iii) EU 넘버링에 따라 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역;
    (iv) EU 넘버링에 따라 D265A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역;
    (v) EU 넘버링에 따라 D265A 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1 Fc 영역;
    (vi) EU 넘버링에 따라 A330S 및 P331S 돌연변이를 포함하는 사람 IgG2 Fc 영역;
    (vii) EU 넘버링에 따라 A330S, P331S 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG2 Fc 영역;
    (viii) EU 넘버링에 따라 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG2 Fc 영역;
    (ix) EU 넘버링에 따라 S228P 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역;
    (x) EU 넘버링에 따라 S228P 및 D265A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역;
    (xi) EU 넘버링에 따라 S228P 및 L235E 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역;
    (xii) EU 넘버링에 따라 S228P 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역; 또는
    (xiii) EU 넘버링에 따라 S228P, E233P, F234V, L235A, delG236 및 N297A 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4 Fc 영역인, 컨쥬게이트.
  97. 제94항에 있어서, 상기 Fc 영역이 서열 번호 564~578로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는, 컨쥬게이트.
  98. 제71항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 사람 카파 경쇄 불변 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  99. 제98항에 있어서, 상기 항체가 서열 번호 579의 서열을 포함하는 경쇄 불변 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  100. 제71항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 사람 람다 경쇄 불변 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  101. 제100항에 있어서, 상기 항체가 서열 번호 580 또는 581의 서열을 포함하는 경쇄 불변 도메인을 포함하는, 컨쥬게이트.
  102. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가
    Figure pct00313
    의 구조를 가지며; 여기서, q가 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; r이 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; 상기 아미노기가 상기 표적화 모이어티 상의 아미노산 잔기에 연결되고; 상기 하이드록실기가 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트에 연결되는, 컨쥬게이트.
  103. 제102항에 있어서, q가 각각 독립적으로 0 내지 약 25의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  104. 제102항에 있어서, q가 각각 독립적으로 약 20 내지 약 25의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  105. 제102항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, r이 각각 독립적으로 약 0 내지 약 5의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  106. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가
    Figure pct00314
    의 구조를 가지며; 여기서, q가 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; r이 각각 독립적으로 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; 상기 카보닐 기가 상기 표적화 모이어티 상의 아미노산 잔기에 연결되고; 상기 하이드록실기가 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트에 연결되는, 컨쥬게이트.
  107. 제106항에 있어서, q가 각각 독립적으로 0 내지 약 25의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  108. 제106항에 있어서, q가 각각 독립적으로 약 5 내지 약 10의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  109. 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, r이 각각 독립적으로 약 0 내지 약 5의 범위의 정수인, 컨쥬게이트.
  110. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가
    Figure pct00315
    의 구조를 가지며; 여기서, q가 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; r이 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; 상기 아미노기가 상기 표적화 모이어티 상의 아미노산 잔기에 연결되고; 상기 하이드록실기가 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트에 연결되는, 컨쥬게이트.
  111. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가
    Figure pct00316
    의 구조를 가지며; 여기서, q가 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; r이 약 0 내지 약 50의 범위의 정수이고; 상기 카보닐 기가 상기 표적화 모이어티 상의 아미노산 잔기에 연결되고; 상기 하이드록실기가 상기 면역 조절 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 포스포로티오에이트에 연결되는, 컨쥬게이트.
  112. 제1항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-뉴클레오타이드 컨쥬게이트가 약 1 내지 약 8의 범위인 DAR을 갖는, 컨쥬게이트.
  113. 제112항에 있어서, 상기 항체-뉴클레오타이드 컨쥬게이트가 약 1의 DAR을 갖는, 컨쥬게이트.
  114. 제112항에 있어서, 상기 항체-뉴클레오타이드 컨쥬게이트가 약 3 내지 약 4의 범위인 DAR을 갖는, 컨쥬게이트.
  115. 제1항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00317

    또는
    Figure pct00318
    의 구조를 가지며; 여기서, c가 2'-데옥시사이티딘이고; g가 2'-데옥시구아노신이고; t가 티미딘이고; X가 5-브로모-2'-데옥시우리딘이고; Z가
    Figure pct00319
    인, 컨쥬게이트.
  116. 제1항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00320

    또는
    Figure pct00321
    의 구조를 가지며, 여기서, s가 약 3 또는 약 4의 정수이고; c가 2'-데옥시사이티딘이고; g가 2'-데옥시구아노신이고; t가 티미딘이고; X가 5-브로모-2'-데옥시우리딘이고; Z가
    Figure pct00322
    인, 컨쥬게이트.
  117. 제1항 내지 제116항 중 어느 한 항의 컨쥬게이트 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  118. 제117항에 있어서, 상기 조성물이 비경구 투여용으로 제형화되는, 약제학적 조성물.
  119. 제117항 또는 제118항에 있어서, 상기 조성물이 단일 투여 형태 (dosage form)로서 제형화되는, 약제학적 조성물.
  120. 제117항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 정맥내 투여 형태로서 제형화되는, 약제학적 조성물.
  121. 제117항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  122. 제1항 내지 제116항 중 어느 한 항의 컨쥬게이트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 증식성 질환의 하나 이상의 증상을 치료, 예방 또는 개선하는 방법.
  123. 제122항에 있어서, 상기 증식성 질환이 암인, 방법.
  124. 제1항 내지 제116항 중 어느 한 항의 컨쥬게이트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 자연 살해 세포를 조절하는 방법.
  125. 제1항 내지 제116항 중 어느 한 항의 컨쥬게이트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 골수 세포를 조절하는 방법.
  126. 제125항에 있어서, 상기 골수 세포가 단핵구인, 방법.
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