JP2024518843A - 抗ｉｃｏｓ抗体の使用 - Google Patents

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Abstract

単剤療法、または併用療法、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合性断片との併用療法としての、調節性Ｔ細胞とエフェクターＴ細胞との間の比をモジュレートするため、患者の免疫系を刺激するため、および／または腫瘍もしくはがんを処置するための抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片の治療的使用および投薬レジメン。

Description

本出願は、２０２１年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６３／１９０，０１６号の利益を主張し、その全開示は、ここに、参照によって本明細書に組み入れられる。
ＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：７２８４６６－ＳＡ９－６４２ＰＣ＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：２９０．６ＫＢ；作成日：２０２２年５月１７日）における電子的に提出された配列表の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
１．２．発明の分野
本発明は、哺乳動物の免疫応答、特に、Ｔ細胞応答を刺激するための、抗ＩＣＯＳ抗体（全長抗体またはその抗原結合性断片を含む）を含む組成物に関する。本発明は、患者における抗腫瘍Ｔ細胞応答の促進による抗腫瘍療法を含むイムノオンコロジーにおけるそのような組成物の医学的使用、ならびに例えば、エフェクターＴ細胞の刺激によりおよび／または調節性Ｔ細胞の枯渇により、エフェクターＴ細胞活性に有利になるようにエフェクターＴ細胞と調節性Ｔ細胞との間のバランスをモジュレートすることが治療的利益である他の疾患および状態における組成物の使用にも関する。一部の実施形態において、本発明は、単剤療法としての抗ＩＣＯＳ抗体に関する。他の実施形態において、本発明は、併用療法、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（全長抗体またはその抗原結合性断片を含む）をさらに含む併用療法の一部としての抗ＩＣＯＳ抗体に関する。本発明は、対象における哺乳動物の免疫応答、例えば、抗腫瘍Ｔ細胞応答を刺激する際に驚くべきことに有効である、抗ＩＣＯＳ抗体（単剤療法として、または併用療法の一部として）の投薬量および／または頻度にも関する。
１．３．背景
ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激因子）は、１９９９年に最初に特定された、免疫応答、特に、体液性免疫応答の調節に関与するＣＤ２８遺伝子ファミリーのメンバーである［１］。これは、５５ｋＤａの膜貫通タンパク質であり、２つの異なってグリコシル化されたサブユニットを有するジスルフィド連結されたホモ二量体として存在する。ＩＣＯＳは、Ｔリンパ球上で独占的に発現され、各種のＴ細胞サブユニット上において見出される。これは、ナイーブＴリンパ球上において低レベルで存在するが、その発現は、免疫活性化の際に迅速に誘導され、ＴＣＲの関与およびＣＤ２８による共刺激などの炎症促進性刺激に応答して上方調節される［２、３］。ＩＣＯＳは、Ｔ細胞活性化の後期段階、メモリーＴ細胞形成、および重要なことには、Ｔ細胞依存性Ｂ細胞応答による液性応答の調節において役割を果たす［４、５］。細胞内で、ＩＣＯＳは、ＰＩ３Ｋに結合し、キナーゼのホスホイノシチド依存性キナーゼ１（ＰＤＫ１）およびプロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）を活性化する。ＩＣＯＳの活性化は、細胞死を防止し、細胞代謝を上方調節する。ＩＣＯＳの非存在下（ＩＣＯＳノックアウト）または抗ＩＣＯＳ中和抗体の存在下で、炎症促進性応答の抑制が存在するであろう。
ＩＣＯＳは、Ｂ細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で発現したＩＣＯＳリガンドに結合する［６、７］。共刺激分子として、これは、抗原に対するＴＣＲ媒介免疫応答および抗体応答を調節する働きをする。Ｔ調節性細胞上におけるＩＣＯＳの発現は、この細胞型ががん細胞の免疫監視において負の役割を果たす－卵巣がんにおいてこれについての新たな証拠が存在する［８］－ことを示唆しているので、重要である。重要なことには、ＩＣＯＳ発現は、腫瘍微小環境に存在するＣＤ４＋およびＣＤ８＋エフェクター細胞と比較して、腫瘍内調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上においてより高いことが報告されている。Ｆｃ媒介細胞エフェクター機能を有する抗体を使用するＴｒｅｇの枯渇は、前臨床モデルにおいて、強い抗腫瘍有効性を実証している［９］。動物モデルおよび免疫チェックポイント阻害剤で処置された患者の両方において、抗腫瘍効果におけるＩＣＯＳを関係付ける証拠が増えている。ＩＣＯＳまたはＩＣＯＳＬ枯渇のマウスにおいて、抗ＣＴＬＡ４療法の抗腫瘍効果は、減少するが［１０］、正常なマウスにおいて、ＩＣＯＳリガンドは、黒色腫および前立腺がんにおける抗ＣＴＬＡ４処置の有効性を増加させる［１１］。さらにまた、ヒトにおいて、進行性黒色腫患者のレトロスペクティブ研究は、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ４）処置後に、ＩＣＯＳのレベルの増加を示した［１２］。加えて、ＩＣＯＳ発現は、抗ＣＴＬＡ４で処置された膀胱がん患者において上方調節される［１３］。抗ＣＴＬＡ４療法で処置されたがん患者において、腫瘍特異的ＩＦＮγ産生ＣＤ４ Ｔ細胞のバルクは、ＩＣＯＳ陽性であるが、ＩＣＯＳ陽性ＣＤ４ Ｔ細胞の持続的な上昇は、生存と相関することも観察されている［１２、１３、１４］。
ＷＯ２０１６／１２０７８９号は、抗ＩＣＯＳ抗体を記載し、Ｔ細胞を活性化するため、ならびにがん、感染性疾患および／または敗血症を処置するためのそれらの使用を提案した。いくつかのマウス抗ＩＣＯＳ抗体が作成され、そのサブセットは、ヒトＩＣＯＳ受容体のアゴニストであることが報告された。抗体「４２２．２」は、リード抗ＩＣＯＳ抗体として選択され、ヒト化されて、「Ｈ２Ｌ５」と指定されるヒト「ＩｇＧ４ＰＥ」抗体が生成された。Ｈ２Ｌ５は、ヒトＩＣＯＳに対して１．３４ｎＭおよびカニクイザルＩＣＯＳに対して０．９５ｎＭの親和性を有すること、Ｔ細胞におけるサイトカイン産生を誘導すること、ならびにＣＤ３刺激と併せてＴ細胞活性化マーカーを上方調節することが報告された。しかしながら、移植されたヒト黒色腫細胞を保持するマウスは、対照処置群と比較して、最小限の腫瘍成長の遅延のみを示すか、またはＨ２Ｌ５ ｈＩｇＧ４ＰＥで処置された場合に生存を増加させることが報告された。抗体はまた、イピリムマブまたはペムブロリズマブ単剤療法と比較して、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４）またはペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１）との併用実験において、腫瘍成長のさらなる阻害を有意に生じなかった。最後に、移植された結腸がん細胞（ＣＴ２６）を保持するマウスにおいて、イピリムマブまたはペムブロリズマブのマウス代替物と組み合わせた低用量のＨ２Ｌ５のマウス交差反応性代替物は、抗ＣＴＬＡ４および抗ＰＤ１療法単独と比較して、全生存期間はわずかに改善したのみであった。強い治療的利益の類似する欠如は、移植されたＥＭＴ６細胞を保持するマウスにおいて示された。
ＷＯ２０１６／１５４１７７号は、抗ＩＣＯＳ抗体のさらなる例を記載した。これらの抗体は、エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞（ＴＥｆｆ）を含むＣＤ４＋ Ｔ細胞のアゴニストであること、およびＴ調節性細胞（ＴＲｅｇ）を枯渇させることが報告された。ＴＥｆｆ対ＴＲｅｇ細胞に対する抗体の選択的効果が記載され、それによって、抗体は、より低いレベルのＩＣＯＳを発現するＴＥｆｆに対する最小限の効果を有しながら、ＴＲｅｇを優先的に枯渇させることができた。抗ＩＣＯＳ抗体は、がんの処置における使用について提案され、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用療法が記載された。
Ｈｕｔｌｏｆｆ Ａら ＩＣＯＳ ｉｓ ａｎ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ＣＤ２８．Ｎａｔｕｒｅ．１９９９年１月２１日；３９７（６７１６）：２６３～６頁。 Ｂｅｉｅｒ Ｋ Ｃら Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩＣＯＳ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００年１２月；３０（１２）：３７０７～１７頁。 Ｃｏｙｌｅ Ａ Ｊら Ｔｈｅ ＣＤ２８－ｒｅｌａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＩＣＯＳ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０００年７月；１３（１）：９５～１０５頁。 Ｄｏｎｇ Ｃら ＩＣＯＳ ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ．２００１年１月４日；４０９（６８１６）：９７～１０１頁。 Ｍａｋ Ｔ Ｗら Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｌｉｇａｎｄ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｂｏｔｈ Ｔ ｈｅｌｐｅｒ ａｎｄ Ｂ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３年８月；４（８）：７６５～７２頁。 Ｓｗａｌｌｏｗ Ｍ Ｍ、Ｗａｌｌｉｎ Ｊ Ｊ、Ｓｈａ Ｗ Ｃ． Ｂ７ｈ、ａ ｎｏｖｅｌ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｈｏｍｏｌｏｇ ｏｆ Ｂ７．１ ａｎｄ Ｂ７．２，ｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＴＮＦａｌｐｈａ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９９９年１０月；１１（４）：４２３～３２頁。 Ｗａｎｇ Ｓら Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｂ７－Ｈ２，ａ Ｂ７－ｌｉｋｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｔｈａｔ ｂｉｎｄｓ ＩＣＯＳ．Ｂｌｏｏｄ．２０００年１０月１５日；９６（８）：２８０８～１３頁。 Ｃｏｎｒａｄ Ｃ、Ｇｉｌｌｉｅｔ Ｍ．Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：Ａ ｄａｎｇｅｒｏｕｓ ｌｉａｉｓｏｎ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１３年５月１日；２（５）：ｅ２３８８。 Ｓｉｍｐｓｏｎら、Ｆｃ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｃｏ－ｄｅｆｉｎｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎｔｉ－ＣＴＬＡ－４ ｔｈｅｒａｐｙ ａｇａｉｎｓｔ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１０（９）：１６９５～１７１０頁 ２０１３ Ｆｕ Ｔ、Ｈｅ Ｑ、Ｓｈａｒｍａ Ｐ．Ｔｈｅ ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍａｌ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ａｎｔｉ－ＣＴＬＡ－４ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１年８月１５日；７１（１６）：５４４５～５４頁。 Ｆａｎ Ｘ、Ｑｕｅｚａｄａ Ｓ Ａ、Ｓｅｐｕｌｖｅｄａ Ｍ Ａ、Ｓｈａｒｍａ Ｐ、Ａｌｌｉｓｏｎ Ｊ Ｐ．Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＩＣＯＳ ｐａｔｈｗａｙ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＣＴＬＡ－４ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０１４年４月７日；２１１（４）：７１５～２５頁。 Ｃａｒｔｈｏｎ，Ｂ．Ｃ．ら Ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ ＣＴＬＡ－４ ｂｌｏｃｋａｄｅ：Ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｔｔｉｎｇ ｏｆ ａ ｐｒｅｓｕｒｇｉｃａｌ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６：２８６１～２８７１頁。 Ｌｉａｋｏｕ Ｃ Ｉら ＣＴＬＡ－４ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ＩＦＮｇａｍｍａ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ＣＤ４＋ＩＣＯＳｈｉ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｓｈｉｆｔ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００８年９月３０日；１０５（３９）：１４９８７～９２頁。 Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ，Ｒ．Ｈ．ら ２０１０．Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｐａｔｉｅｎｔ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１６：３４８５～３４９４頁。
１．４．発明の概要
エフェクターＴ細胞活性を増加させるように作用するＩＣＯＳに対する抗体は、イムノオンコロジーにおける、ならびにさまざまな疾患および状態およびワクチン接種レジメンを含むＣＤ８＋ Ｔ細胞応答が有益である他の医学的状況における、治療的アプローチを示す。免疫構成要素が関与する多くの疾患および状態において、ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫応答を示すエフェクターＴ細胞（ＴＥｆｆ）と、ＴＥｆｆを下方調節することにより免疫応答を抑制する調節性Ｔ細胞（ＴＲｅｇ）との間にバランスが存在する。本発明は、エフェクターＴ細胞活性に有利になるようにこのＴＥｆｆ／ＴＲｅｇバランスをモジュレートする抗体に関する。ＩＣＯＳの高度に陽性の調節性Ｔ細胞の枯渇の引き金を引く抗体は、ＴＥｆｆの抑制を軽減し、したがって、エフェクターＴ細胞応答を促進する正味の効果を有する。抗ＩＣＯＳ抗体についての追加または補完メカニズムは、ＩＣＯＳ受容体レベルでのアゴニスト活性を介して、エフェクターＴ細胞応答を刺激することである。
調節性Ｔ細胞（ＴＲｅｇ）と比較したエフェクターＴ細胞（ＴＥｆｆ）上におけるＩＣＯＳの相対的発現、およびこれらの細胞集団の相対的活性は、インビボでの抗ＩＣＯＳ抗体の全体的な効果に影響を及ぼす。想定される作用機序は、エフェクターＴ細胞のアゴニズムをＩＣＯＳ陽性調節性Ｔ細胞の枯渇と組み合わせる。これらの２つの異なるＴ細胞集団に対する異なる効果およびさらに逆の効果は、ＩＣＯＳ発現のそれらの異なるレベルに起因して達成可能である。抗ＩＣＯＳ抗体のそれぞれの可変領域および定常領域の二重操作は、ＣＤ８／ＴＲｅｇ比に影響を及ぼすことによって、エフェクターＴ細胞応答に対する正味の正の効果を示す分子を提供することができる。ＩＣＯＳ受容体を活性化するアゴニスト抗体の抗原結合ドメインは、抗体が結合する高度に発現する細胞の下方調節および／またはクリアランスを促進する抗体の定常（Ｆｃ）領域と組み合わされる。エフェクター陽性定常領域は、標的細胞（ＴＲｅｇ）に対して細胞のエフェクター機能を補充するため、例えば、抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）または抗体依存性細胞捕食（ＡＤＣＰ）を促進するために使用される。そのため、抗体は、エフェクターＴ細胞活性化を促進するように、および免疫抑制性Ｔ調節性細胞を下方調節するように作用する。ＩＣＯＳは、ＴＥｆｆ上よりもＴＲｅｇ上でより高度に発現されるので、治療バランスは、ＴＲｅｇが枯渇されながら、Ｔｅｆｆ機能が促進されることによって達成され、Ｔ細胞免疫応答（例えば、抗腫瘍応答または他の治療的に有益なＴ細胞応答）の正味の増加をもたらす。
いくつかの前臨床研究および臨床研究は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における高いエフェクターＴ細胞とＴｒｅｇ細胞の比と全生存期間との間の強い正の相関を示している。卵巣がん患者において、ＣＤ８：Ｔ－ｒｅｇ細胞の比は、良好な臨床転帰の指標であることが報告されている［１５］。類似の観察は、イピリムマブを受けた後の転移性黒色腫患者において行われた［１６］。前臨床研究において、ＴＭＥにおける高いエフェクター細胞：Ｔ－ｒｅｇ比が抗腫瘍応答に関連することも示されている［４３］。
本発明は、驚くべきことに低用量で有効性を有するものを含む、ヒトＩＣＯＳに結合する抗体を提供する。抗体は、ＩＣＯＳの細胞外ドメインを標的にし、それによってＩＣＯＳを発現するＴ細胞に結合する。ＩＦＮγ発現および分泌を増加させる能力によって示されるように、ＩＣＯＳに対するアゴニスト効果を有するように設計され、このようにして、エフェクターＴ細胞の機能を増強する抗体の例が提供される。述べたように、抗ＩＣＯＳ抗体はまた、それらが結合する細胞を枯渇するように操作され、これは、調節性Ｔ細胞を優先的に下方調節し、エフェクターＴ細胞応答に対するこれらの細胞の抑制効果を押し上げ、およびこのようにしてエフェクターＴ細胞応答全体を促進する効果を有するはずである。それらの作用メカニズムにもかかわらず、本発明による抗ＩＣＯＳ抗体が、実施例において示されるように、Ｔ細胞応答を刺激し、インビボでの抗腫瘍効果を有することが経験的に実証される。所望のレベルのＦｃエフェクター機能を有する定常領域を含むもの、または適切な場合にそのようなエフェクター機能が存在しないものなどの適切な抗体フォーマットの選択により、抗ＩＣＯＳ抗体は、エフェクターＴ細胞応答が有益である、および／または調節性Ｔ細胞の抑制が所望される、疾患および状態の処置を含む各種の医学的状況における使用のために合わされる。
例示的な抗体としては、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８およびＳＴＩＭ００９が挙げられ、それらの配列は、本明細書に示される。
一部の実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法であって、ヒトおよび／またはマウスＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含み、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約０．８ｍｇ～２４０ｍｇの用量で対象に投与される、方法を提供する。
一部の実施形態において、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法において使用される抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３、ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで、（ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号３６３、配列番号３６４および配列番号３６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号３７０、配列番号３７１、配列番号３７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｂ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号３７７、配列番号３７８および配列番号３７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号３８４、配列番号３８５、配列番号３８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｃ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号３９１、配列番号３９２および配列番号３９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号３９８、配列番号３９９、配列番号４００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｄ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４０５、配列番号４０６および配列番号４０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４１２、配列番号４１３、配列番号４１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｅ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４１９、配列番号４２０および配列番号４２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４２６、配列番号４２７、配列番号４２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｆ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４３５、配列番号４３６および配列番号４３７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｇ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４４９、配列番号４５０および配列番号４５１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４５６、配列番号４５７、配列番号４５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｈ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４６３、配列番号４６４および配列番号４６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４７０、配列番号４７１、配列番号４７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４７７、配列番号４７８および配列番号４７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４８４、配列番号４８５、配列番号４８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、または（ｊ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４９１、配列番号４９２および配列番号４９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、（ａ）ＨＣＤＲ１は、配列番号３６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３６４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３６５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３７０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３７１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３７２のアミノ酸配列を含み；（ｂ）ＨＣＤＲ１は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３７８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３７９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３８５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３８６のアミノ酸配列を含み；（ｃ）ＨＣＤＲ１は、配列番号３９１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３９２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３９３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３９８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３９９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４００のアミノ酸配列を含み；（ｄ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４０５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４０６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４０７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４１２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４１４のアミノ酸配列を含み；（ｅ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４１９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４２０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４２１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４２８のアミノ酸配列を含み；（ｆ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４３５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４３６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４３７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４４２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４４３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４４４のアミノ酸配列を含み；（ｇ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４４９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４５０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４５１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４５６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４５７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４５８のアミノ酸配列を含み；（ｈ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４６４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４６５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４７０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４７１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４７２のアミノ酸配列を含み；（ｉ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４７７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４７８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４７９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４８５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４８６のアミノ酸配列を含み；または（ｊ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４９１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４９２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４９３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４９８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４９９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号５００のアミノ酸配列を含む。
別の実施形態において、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法は、配列番号４０５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４０６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４０７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含む。
別の実施形態において、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含み、ここで、（ａ）ＶＨドメインは、配列番号３６６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｂ）ＶＨドメインは、配列番号３８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｃ）ＶＨドメインは、配列番号３９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｄ）ＶＨドメインは、配列番号４０８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｅ）ＶＨドメインは、配列番号４２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｆ）ＶＨドメインは、配列番号４３８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４４５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｇ）ＶＨドメインは、配列番号４５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｈ）ＶＨドメインは、配列番号４６７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｉ）ＶＨドメインは、配列番号４８１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４８８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；または（ｊ）ＶＨドメインは、配列番号４９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号５０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、（ａ）ＶＨドメインは、配列番号３６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３７３のアミノ酸配列を含み；（ｂ）ＶＨドメインは、配列番号３８０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列を含み；（ｃ）ＶＨドメインは、配列番号３９４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４０１のアミノ酸配列を含み；（ｄ）ＶＨドメインは、配列番号４０８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１５のアミノ酸配列を含み；（ｅ）ＶＨドメインは、配列番号４２２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含み；（ｆ）ＶＨドメインは、配列番号４３８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４４５のアミノ酸配列を含み；（ｇ）ＶＨドメインは、配列番号４５２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列を含み；（ｈ）ＶＨドメインは、配列番号４６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４７３のアミノ酸配列を含み；（ｉ）ＶＨドメインは、配列番号４８０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４８７のアミノ酸配列を含み；または（ｊ）ＶＨドメインは、配列番号４９４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号５０１のアミノ酸配列を含む。
別の実施形態において、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法は、配列番号４０８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＶＨドメインおよび配列番号４１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むＶＬドメインを含む抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号４０８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１５のアミノ酸配列を含む。
別の実施形態において、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法は、重鎖および軽鎖を含む抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含み、ここで、（ａ）重鎖は、配列番号３６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号３７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｂ）重鎖は、配列番号３８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号３８９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｃ）重鎖は、配列番号３９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｄ）重鎖は、配列番号４１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｅ）重鎖は、配列番号４２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｆ）重鎖は、配列番号４４０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｇ）重鎖は、配列番号４５４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｈ）重鎖は、配列番号４６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；（ｉ）重鎖は、配列番号４８２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４８９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；または（ｊ）重鎖は、配列番号４９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号５０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、（ａ）重鎖は、配列番号３６８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３７５のアミノ酸配列を含み；（ｂ）重鎖は、配列番号３８２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３８９のアミノ酸配列を含み；（ｃ）重鎖は、配列番号３９６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４０３のアミノ酸配列を含み；（ｄ）重鎖は、配列番号４１０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４１７のアミノ酸配列を含み；（ｅ）重鎖は、配列番号４２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４３２のアミノ酸配列を含み；（ｆ）重鎖は、配列番号４４０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４４７のアミノ酸配列を含み；（ｇ）重鎖は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４６１のアミノ酸配列を含み；（ｈ）重鎖は、配列番号４６８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４７５のアミノ酸配列を含み；（ｉ）重鎖は、配列番号４８２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４８９のアミノ酸配列を含み；または（ｊ）重鎖は、配列番号４９６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５０３のアミノ酸配列を含む。
別の実施形態において、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法は、配列番号４１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖および配列番号４１７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、重鎖は、配列番号４１０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４１７のアミノ酸配列を含む。
別の実施形態において、方法は、ヒトＩｇＧ１抗体である抗ＩＣＯＳ抗体を投与することを含む。
別の実施形態において、方法は、ＫＹ１０４４を投与することを含む。
別の実施形態において、方法は、約０．５ｍｇ～約１０ｍｇの用量で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、方法は、約０．８ｍｇ～約８ｍｇの用量で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、方法は、約８ｍｇ未満の用量（例えば、７．５ｍｇ以下の用量、７ｍｇ以下の用量）で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、方法は、約０．８ｍｇ～約２．４ｍｇの用量で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、方法は、約２．４ｍｇ～約８ｍｇの用量で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。
別の実施形態において、方法は、約０．８ｍｇの用量で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、方法は、約２．４ｍｇの用量で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、方法は、約８ｍｇの用量で抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）を対象に投与することを含む。
別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、２～６週間ごと、例えば、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごとまたは６週間ごとに対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、３週間ごとに投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、６週間ごとに投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、毎月投与される。
別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、１回投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、１回よりも多く投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、少なくとも６か月間、例えば、６か月間、１２か月間または１２か月よりも長く投与される。
別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、単剤療法として投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）は、併用療法において投与される。例えば、一部の実施形態において、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法は、第２の治療剤を対象に投与することをさらに含む。
別の実施形態において、第２の治療薬は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、約１２００ｍｇの用量で対象に投与される。
別の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、２～６週間ごと、例えば、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごとまたは６週間ごとに対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、３週間ごとに投与される。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、６週間ごとに投与される。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、毎月投与される。
別の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、１回投与される。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、１回よりも多く投与される。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、少なくとも６か月間、例えば、６か月間、１２か月間または１２か月よりも長く投与される。別の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、３週間ごとに抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片とともに対象に共投与される。
別の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片（例えば、アテゾリズマブ）は、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＫＹ１０４４）との交互用量で対象に投与され、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、３週間ごとに投与され、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、６週間ごとに投与される。
別の実施形態において、方法は、腫瘍を処置することを含む。一部の実施形態において、方法は、がんを処置することを含む。一部の実施形態において、がんは、進行性および／または転移性がんを含む。一部の実施形態において、がんは、トリプルネガティブ乳がん、頭頸部扁平上皮細胞癌、陰茎がん、膵臓がん、非小細胞肺がん、肝細胞癌、食道がん、胃がん、黒色腫、腎細胞癌および／または子宮頸がんを含む。
抗体を含む医薬組成物も提供される。
ＩＣＯＳノックアウト動物を、交差反応性抗体を作成するために使用した。とりわけ、強い力価が、ＩＣＯＳノックアウトマウスにおいて得られ、非常に機能的な抗体が、所望の交差反応性抗体を含む、抗体レパートリーの中から単離された。ＷＯ２０１８／０２９４７４Ａ２号を参照されたい（ここに、その全体が参照によって組み入れられる）。
本発明の例示的な実施形態は、図面、下記の記載、および添付の特許請求の範囲に示される。
１．５．図面の簡単な説明
本発明のある特定の態様および実施形態を、ここに、添付の図面を参照してより詳細に記載する。
実施例１に記載される研究についてのマウスにおける経時的なＡ２０腫瘍の体積を示すグラフ。それぞれの処置群は、群あたりｎ＝８の個々の動物における腫瘍サイズを示すスパイダープロットによって示される。それぞれの群について、腫瘍の徴候なし（疾患の治癒を示す）の動物の数を、グラフの左下に示す。投薬を、腫瘍細胞移植後８、１１、１５、１８、２２、２５および２９日目に行い、投薬回数を、灰色の影付き領域によって示す。対照群（図１）および抗ＰＤ－Ｌ１処置群（図２）と比較して、ＳＴＩＭ００１ ｍＩｇＧ２ａ（図３）およびＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ（図４）処置群は、Ａ２０腫瘍成長の有意な阻害を示した。 実施例１に記載される研究についてのマウスにおける経時的なＡ２０腫瘍の体積を示すグラフ。それぞれの処置群は、群あたりｎ＝８の個々の動物における腫瘍サイズを示すスパイダープロットによって示される。それぞれの群について、腫瘍の徴候なし（疾患の治癒を示す）の動物の数を、グラフの左下に示す。投薬を、腫瘍細胞移植後８、１１、１５、１８、２２、２５および２９日目に行い、投薬回数を、灰色の影付き領域によって示す。対照群（図１）および抗ＰＤ－Ｌ１処置群（図２）と比較して、ＳＴＩＭ００１ ｍＩｇＧ２ａ（図３）およびＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ（図４）処置群は、Ａ２０腫瘍成長の有意な阻害を示した。 実施例１に記載される研究についてのマウスにおける経時的なＡ２０腫瘍の体積を示すグラフ。それぞれの処置群は、群あたりｎ＝８の個々の動物における腫瘍サイズを示すスパイダープロットによって示される。それぞれの群について、腫瘍の徴候なし（疾患の治癒を示す）の動物の数を、グラフの左下に示す。投薬を、腫瘍細胞移植後８、１１、１５、１８、２２、２５および２９日目に行い、投薬回数を、灰色の影付き領域によって示す。対照群（図１）および抗ＰＤ－Ｌ１処置群（図２）と比較して、ＳＴＩＭ００１ ｍＩｇＧ２ａ（図３）およびＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ（図４）処置群は、Ａ２０腫瘍成長の有意な阻害を示した。 実施例１に記載される研究についてのマウスにおける経時的なＡ２０腫瘍の体積を示すグラフ。それぞれの処置群は、群あたりｎ＝８の個々の動物における腫瘍サイズを示すスパイダープロットによって示される。それぞれの群について、腫瘍の徴候なし（疾患の治癒を示す）の動物の数を、グラフの左下に示す。投薬を、腫瘍細胞移植後８、１１、１５、１８、２２、２５および２９日目に行い、投薬回数を、灰色の影付き領域によって示す。対照群（図１）および抗ＰＤ－Ｌ１処置群（図２）と比較して、ＳＴＩＭ００１ ｍＩｇＧ２ａ（図３）およびＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ（図４）処置群は、Ａ２０腫瘍成長の有意な阻害を示した。 ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２Ｂならびに関連抗体ＣＬ－６１０９１、ＣＬ－６４５３６、ＣＬ－６４８３７、ＣＬ－６４８４１およびＣＬ－６４９１２の対応する配列においてならびに／またはヒト生殖細胞系列において異なる残基を示す、ＳＴＩＭ００２のＶＨ（上）およびＶＬ（下）ドメインのアミノ酸配列。配列の番号付けは、ＩＭＧＴに従う。 関連抗体ＣＬ－７１６４２およびＣＬ－７４５７０の対応する配列においてならびに／またはヒト生殖細胞系列において異なる残基を示す、ＳＴＩＭ００３のＶＨ（上）およびＶＬ（下）ドメインのアミノ酸配列。配列の番号付けは、ＩＭＧＴに従う。シークエンシングから得られた抗体ＣＬ－７１６４２のＶＬドメインは、ここで、Ｎ末端残基なしで示される。アライメントから、全ＶＨドメイン配列がＮ末端グルタミン酸を含むことを見ることができる。 ＳＴＩＭ００８の対応する配列においておよび／またはヒト生殖細胞系列において異なる残基を示す、ＳＴＩＭ００７のＶＨ（上）およびＶＬ（下）ドメインのアミノ酸配列。配列の番号付けは、ＩＭＧＴに従う。 Ｊ５５８同系モデルにおけるＳＴＩＭ００３（抗ＩＣＯＳ）およびＡｂＷ（抗ＰＤ－Ｌ１）ｍＩｇＧ２ａ抗体の効果。それぞれの処置群は、個々の動物（群あたりｎ＝１０またはｎ＝８）の腫瘍サイズを示す「スパイダープロット」によって示される。ＳＴＩＭ００３単剤療法は、８頭のうち３頭の動物がそれらの疾患から治癒して、一部の有効性を実証した。同様に、抗ＰＤＬ１は、３７日目までに８頭のうち６頭の動物がそれらの疾患から治癒して、このモデルにおいて有効であった。抗ＰＤＬ１抗体と組み合わされた場合、ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２は、腫瘍成長を完全に阻害し、処置された動物の生存を改善した。それぞれの群について、それらの疾患が治癒した動物の数を、個々のグラフの右下に示す。投薬日は、点線によって示す（１１、１５、１８、２２、２５および２９日目）。 腫瘍組織中の異なるＴＩＬＳ細胞サブタイプにおけるＩＣＯＳ発現の定量化（陽性細胞のパーセンテージおよび相対発現／ｄＭＦＩ）。（Ａ）ＩＣＯＳ発現に陽性である免疫細胞サブタイプの％、および（Ｂ）生理食塩水または抗ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１代替抗体で処置された動物の免疫細胞サブタイプのＩＣＯＳ ｄＭＦＩ（ＩＣＯＳ陽性細胞における相対ＩＣＯＳ発現）。マウスに、０日目に、１００μｌの１×１０６個生存細胞／ｍｌで移植した（ｎ＝７またはｎ＝８）。動物に、１３日目および１５日目に、１３０ｕｇの抗体をｉ．ｐ．投薬した。組織試料を、１６日目に、単離および分析した。ＣＤ４＋／ＦＯＸＰ３＋細胞は、ＴＲｅｇ集団についてのみ含まれ（グラフの右端）、すべてＦｏｘｐ３陰性である「エフェクター」ＣＤ４細胞（グラフの左端）から排除された。実施例３を参照されたい。 腫瘍組織中の異なるＴＩＬＳ細胞サブタイプにおけるＩＣＯＳ発現の定量化（陽性細胞のパーセンテージおよび相対発現／ｄＭＦＩ）。（Ａ）ＩＣＯＳ発現に陽性である免疫細胞サブタイプの％、および（Ｂ）生理食塩水または抗ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１代替抗体で処置された動物の免疫細胞サブタイプのＩＣＯＳ ｄＭＦＩ（ＩＣＯＳ陽性細胞における相対ＩＣＯＳ発現）。マウスに、０日目に、１００μｌの１×１０６個生存細胞／ｍｌで移植した（ｎ＝７またはｎ＝８）。動物に、１３日目および１５日目に、１３０ｕｇの抗体をｉ．ｐ．投薬した。組織試料を、１６日目に、単離および分析した。ＣＤ４＋／ＦＯＸＰ３＋細胞は、ＴＲｅｇ集団についてのみ含まれ（グラフの右端）、すべてＦｏｘｐ３陰性である「エフェクター」ＣＤ４細胞（グラフの左端）から排除された。実施例３を参照されたい。 Ａ２０インビボ有効性研究からのデータ。それぞれの処置群は、個々の動物（群あたりｎ＝１０）の腫瘍サイズを示す「スパイダープロット」によって示される。それぞれの群について、それらの疾患が治癒した動物の数を、個々のグラフに示す。複数回用量について、投薬は、８、１１、１５、１８、２２および２５日目であり、点線によって示した。単回用量について、動物は、８日目にのみＩＰ注射を受けた。（Ａ）生理食塩水；（Ｂ）ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ複数回用量；（Ｃ）ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ単回用量。実施例４を参照されたい。 図１０－１の続き。 ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａの６０μｇ固定用量を用いる実施例４において報告された研究についてのカプラン－マイヤー曲線。ＳＤ＝単回用量、８日目。ＭＤ＝８日目からＢＩＷの複数回用量。 生理食塩水を投薬されたＣＴ２６腫瘍保持動物（時点あたりｎ＝４）からの主なＴ細胞サブセット（Ｔ－ｒｅｇ［ＣＤ４＋／ＦｏｘＰ３＋］、ＣＤ４ Ｅｆｆ［ＣＤ４＋／ＦｏｘＰ３－］細胞およびＣＤ８＋）におけるＩＣＯＳ発現。免疫細胞の表現型決定を、処置後１、２、３、４および８日目に実施し、すべての時点で、すべての組織においてＩＣＯＳ発現について染色した。Ａ～Ｄは、４つの異なる組織におけるすべての時点でのＩＣＯＳ陽性細胞のパーセンテージを示す。Ｅ～Ｈは、４つの異なる組織におけるすべての時点でのＩＣＯＳ ｄＭＦＩ（相対発現）を示す。実施例５を参照されたい。 図１２－１の続き。 図１２－２の続き。 図１２－３の続き。 ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ抗体に応答したＴＭＥにおけるＴ－ｒｅｇ枯渇を実証するＦＡＣＳ分析。ＣＴ－２６腫瘍保持動物を、腫瘍細胞移植後１２日目に、単回用量（６、６０または２００μｇ）のＳＴＩＭ００３で処置した。処置後１、２、３、４および８日目においてＦＡＣＳ分析のために採取された組織（時点あたりｎ＝４）。総腫瘍におけるＴ－ｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋）のパーセンテージ（Ａ）、および血液におけるＴ－ｒｅｇ細胞のパーセンテージ（Ｂ）を異なる時点で示す。実施例５を参照されたい。 ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａに応答したＣＤ８：Ｔ－ｒｅｇおよびＣＤ４ ｅｆｆ：Ｔ－ｒｅｇ比の増加。ＣＴ－２６腫瘍保持動物は、腫瘍細胞移植後１２日目に、単回用量（６、６０または２００μｇ）のＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａを受けた。組織（時点あたりｎ＝４）を、処置後１、２、３、４および８日目においてＦＡＣＳ分析のために採取し、Ｔ ｅｆｆとＴ－ｒｅｇの比を計算した。（Ａ）および（Ｂ）腫瘍および血液におけるＣＤ８：Ｔ－ｒｅｇ比、（Ｃ）および（Ｄ）腫瘍および血液におけるＣＤ４－ｅｆｆ：Ｔ－ｒｅｇ比。実施例５を参照されたい。 図１４－１の続き。 ＳＴＩＭ００３処置は、ＴＩＬによる脱顆粒およびＴｈ１サイトカイン産生の増加と相関する。処置後８日目に、ＴＩＬを単離し、ＦＡＣＳ分析を行って、ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａ発現を検出した（Ａ～Ｂ）。並行して、解離した腫瘍由来の細胞を、ブレフェルジン－Ａの存在下で４時間休ませ、細胞を、Ｔ細胞マーカーについて染色し、細胞内染色のために透過処理して、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－αを検出した（Ｃ～Ｈ）。実施例５を参照されたい。 図１５－１の続き。 図１５－２の続き。 図１５－３の続き。 ＩＣＯＳ陽性ＣＤ４メモリー細胞（ＩＣＯＳ＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－ＣＤ４５ＲＡ－として定義される）におけるＫＹ１０４４標的関与の証拠。Ｙ軸は、試料収集日の関数として、ＣＤ４メモリー細胞における占有パーセンテージを測定する。血液試料は、サイクル１の１日目（Ｃ１Ｄ１）、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）、サイクル２の１日目（Ｃ２Ｄ１）およびサイクル２の８日目（Ｃ２Ｄ８）に収集した。用量レベル１＝０．８ｍｇ。用量レベル２＝２．４ｍｇ。線は、同じ患者についてのデータポイントを接続する。 ＩＣＯＳ陽性ＣＤ４メモリー細胞（ＩＣＯＳ＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－ＣＤ４５ＲＡ－として定義される）におけるＫＹ１０４４標的関与の証拠。Ｙ軸は、試料収集日の関数として、ＣＤ４メモリー細胞における占有パーセンテージを測定する。血液試料は、サイクル１の１日目（Ｃ１Ｄ１）、サイクル１の８日目（Ｃ１Ｄ８）、サイクル２の１日目（Ｃ２Ｄ１）およびサイクル２の８日目（Ｃ２Ｄ８）に収集した。用量レベル３＝８ｍｇ。用量レベル４＝２４ｍｇ。用量レベル５＝８０ｍｇ。用量レベル６＝２４０ｍｇ。線は、同じ患者についてのデータポイントを接続する。 循環サイトカインレベルを測定することによって評価されたＫＹ１０４４依存性アゴニズム。実線プロットは、平均を表し、影付き領域は、ＫＹ１０４４で処置された患者についてのＧＭ－ＣＳＦの来診とベースライン測定との間の比の９５％信頼区間を示す。明灰色のデータポイントは、より低いＫＹ１０４４用量レベル（０．８ｍｇおよび２．４ｍｇ）を受けている患者（ｎ＝２７）からであり、これは、不完全な受容体占有をもたらした。暗灰色のデータポイントは、より高いＫＹ１０４４用量レベル（８ｍｇ以上）を受けている患者（ｎ＝１４）からであり、これは、完全な受容体占有をもたらした。 循環サイトカインレベルを測定することによって評価されたＫＹ１０４４依存性アゴニズム。実線プロットは、平均を表し、影付き領域は、ＫＹ１０４４で処置された患者についてのＴＮＦαの来診とベースライン測定との間の比の９５％信頼区間を示す。明灰色のデータポイントは、より低いＫＹ１０４４用量レベル（０．８ｍｇおよび２．４ｍｇ）を受けている患者（ｎ＝２７）からであり、これは、不完全な受容体占有をもたらした。暗灰色のデータポイントは、より高いＫＹ１０４４用量レベル（８ｍｇ以上）を受けている患者（ｎ＝１４）からであり、これは、完全な受容体占有をもたらした。 処置期間に関するフェーズＩ／ＩＩ臨床試験の中間結果。すべての登録患者についての処置の期間の中央値は９週間であった。 療法レジメンおよび部分的または完全な受容体占有に関して処置期間を示すフェーズＩ／ＩＩ臨床試験の中間結果。 ＩＣＯＳ受容体占有に関して処置期間を示す、フェーズＩ／ＩＩ臨床試験の中間結果。
１．６．詳細な説明
１．６．１．ＩＣＯＳ
本発明による抗体は、ヒトＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する。そのため、抗体は、ＩＣＯＳ発現Ｔリンパ球に結合する。「ＩＣＯＳ」または「ＩＣＯＳ受容体」は、本明細書において、文脈が他を指示しない限り、ヒトＩＣＯＳを指す。ヒト、カニクイザルおよびマウスＩＣＯＳの配列は、添付の配列表において示され、ＮＣＢＩから、ヒトＮＣＢＩ ＩＤ：ＮＰ＿０３６２２４．１、マウスＮＣＢＩ ＩＤ：ＮＰ＿０５９５０８．２およびカニクイザルＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ：ＥＨＨ５５０９８．１として利用可能である。
１．６．２．交差反応性
本発明による抗体は、好ましくは、交差反応性であり、例えば、マウスＩＣＯＳおよびヒトＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する。抗体は、カニクイザルなどの霊長類のＩＣＯＳを含む他の非ヒトＩＣＯＳに結合することができる。ヒトにおける治療的使用について意図される抗ＩＣＯＳ抗体は、ヒトＩＣＯＳに結合しなければならないが、他の種のＩＣＯＳへの結合は、ヒト臨床の状況において直接的な治療関連性を有さない。それにもかかわらず、本明細書におけるデータは、ヒトおよびマウスＩＣＯＳの両方に結合する抗体が、それらをアゴニストおよび枯渇させる分子として特に好適にする性質を有することを示す。これは、交差反応性抗体によって標的にされる１つまたはそれ以上の特定のエピトープから生じる。しかしながら、根本的な理論にもかかわらず、交差反応性抗体は、高い価値があり、前臨床研究および臨床研究のための治療用分子としての優れた候補である。
実験例において説明されるように、本明細書において記載されるＳＴＩＭ抗体は、マウスがマウスＩＣＯＳの発現を欠如するように操作された（ＩＣＯＳノックアウト）Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）技術を使用して作成した。ＩＣＯＳノックアウトトランスジェニック動物および交差反応性抗体を作成するためのそれらの使用は、本発明のさらなる態様である。
抗体の種交差反応性の程度を定量化するための１つの方法は、別の種の抗原と比較した抗原またはある種に対するその親和性の倍数の相違、例えば、ヒトＩＣＯＳ対マウスＩＣＯＳに対する親和性の倍数の相違としてである。親和性は、本明細書の他の場所において記載されるＦａｂフォーマットの抗体を用いるＳＰＲによって決定される抗体－抗原反応の平衡解離定数を指すＫＤとして定量化される。種交差反応性抗ＩＣＯＳ抗体は、３０倍以下、２５倍以下、２０倍以下、１５倍以下、１０倍以下または５倍以下であるヒトおよびマウスＩＣＯＳの結合に対する親和性の倍数の相違を有する。別の言い方をすれば、ヒトＩＣＯＳの細胞外ドメインの結合のＫＤは、マウスＩＣＯＳの細胞外ドメインの結合のＫＤの３０倍、２５倍、２０倍、１５倍、１０倍または５倍以内である。抗体は、両方の種の抗原の結合についてのＫＤが閾値を満たす場合、例えば、ヒトＩＣＯＳの結合のＫＤおよびマウスＩＣＯＳの結合のＫＤが、両方とも１０ｍＭ以下、好ましくは、５ｍＭ以下、より好ましくは、１ｍＭ以下である場合、交差反応性と考えることもできる。ＫＤは、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２ｎＭ以下または１ｎＭ以下である。ＫＤは、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下または０．１ｎＭ以下である。
ヒトＩＣＯＳおよびマウスＩＣＯＳの結合についての交差反応性の代替の測定値は、例えば、ＨＴＲＦアッセイにおいて、ＩＣＯＳ受容体へのＩＣＯＳリガンド結合を中和する抗体の能力である（米国特許第９，９５７，３２３号の実施例８を参照されたい）。種交差反応性抗体の例は、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００５およびＳＴＩＭ００６を含んで、本明細書において提供され、そのそれぞれは、ＨＴＲＦアッセイにおいて、ヒトＢ７－Ｈ２（ＩＣＯＳリガンド）とヒトＩＣＯＳの結合を中和する、およびマウスＢ７－Ｈ２とマウスＩＣＯＳの結合を中和するとして確認された。これらの抗体またはそれらのバリアントのいずれかは、ヒトおよびマウスＩＣＯＳに対して抗体交差反応性が所望される場合に、選択される。種交差反応性抗ＩＣＯＳ抗体は、ＨＴＲＦアッセイにおいて決定される、マウスＩＣＯＳとマウスＩＣＯＳ受容体の阻害についてのＩＣ５０の、２５倍、２０倍、１５倍、１０倍または５倍以内のヒトＩＣＯＳとヒトＩＣＯＳ受容体の結合の阻害についてのＩＣ５０を有する。抗体は、ヒトＩＣＯＳとヒトＩＣＯＳ受容体の結合の阻害についてのＩＣ５０およびマウスＩＣＯＳとマウスＩＣＯＳ受容体の結合の阻害についてのＩＣ５０が両方とも、１ｍＭ以下、好ましくは、０．５ｍＭ以下、例えば、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下である場合、交差反応性と考えることもできる。ＩＣ５０は、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下または２ｎＭ以下である。一部の場合において、ＩＣ５０は、少なくとも０．１ｎＭ、少なくとも０．５ｎＭまたは少なくとも１ｎＭである。
１．６．３．特異性
本発明による抗体は、好ましくは、ＩＣＯＳに特異的である。すなわち、抗体は、標的タンパク質のＩＣＯＳ（ヒトＩＣＯＳ、好ましくは、上記で述べたようにマウスおよび／またはカニクイザルＩＣＯＳ）におけるそのエピトープに結合するが、ＣＤ２８遺伝子ファミリー中の他の分子を含む、そのエピトープを提示しない分子への有意な結合を示さない。本発明による抗体は、好ましくは、ヒトＣＤ２８に結合しない。抗体は、好ましくは、マウスまたはカニクイザルＣＤ２８にも結合しない。
ＣＤ２８は、ＴＣＲを介した抗原認識の状況において、プロフェッショナル抗原提示細胞上においてそのリガンドＣＤ８０およびＣＤ８６によって関与した場合に、Ｔ細胞応答を共刺激する。本明細書において記載される抗体のさまざまなインビボ使用のために、ＣＤ２８への結合の回避は、有利と考えられる。抗ＩＣＯＳ抗体のＣＤ２８への結合がないことで、ＣＤ２８がそのネイティブリガンドと相互作用すること、およびＴ細胞活性化のための適切な共刺激シグナルが生じることを可能にするはずである。加えて、抗ＩＣＯＳ抗体のＣＤ２８への結合がないことで、スーパーアゴニズムのリスクを回避する。ＣＤ２８の過剰刺激は、ＴＣＲを介した同族抗原の認識のための通常の要求なしで、静止期Ｔ細胞の増殖を誘導することができ、特にヒト対象において、Ｔ細胞の暴走活性化および結果として生じるサイトカイン放出症候群をもたらす可能性がある。本発明による抗体によるＣＤ２８の非認識は、したがって、ヒトにおけるそれらの安全な臨床使用の観点で利点を示す。
本明細書の他の場所において議論されるように、本発明は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性）に拡張される。多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、（ｉ）ＩＣＯＳに対する抗体の抗原結合部位、および（ｉｉ）別の抗原（例えば、ＰＤ－Ｌ１）を認識するさらなる抗原結合部位（場合により、本明細書において記載されるように、抗体抗原結合部位）を含むことができる。個々の抗原結合部位の特異的結合を決定することができる。そのため、ＩＣＯＳに特異的に結合する抗体は、ＩＣＯＳに特異的に結合する抗原結合部位を含む抗体を含み、ここで場合により、ＩＣＯＳに対する抗原結合部位は、１つまたはそれ以上の他の抗原に対する１つまたはそれ以上の追加の結合部位をさらに含む抗原結合性分子内、例えば、ＩＣＯＳおよびＰＤ－Ｌ１に結合する二重特異性抗体内に含まれる。
１．６．４．親和性
抗体のＩＣＯＳへの結合の親和性を決定することができる。その抗原に対する抗体の親和性は、平衡解離定数ＫＤ、抗体－抗原相互作用の会合またはオンレート（Ｋａ）および解離またはオフレート（ｋｄ）の比Ｋａ／Ｋｄの観点で定量化することができる。抗体－抗原結合についてのＫｄ、ＫａおよびＫｄは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定することができる。
本発明による抗体は、ヒトＩＣＯＳのＥＣドメインに、１０ｍＭ以下、好ましくは、５ｍＭ以下、より好ましくは、１ｍＭ以下のＫＤで結合する。ＫＤは、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２ｎＭ以下または１ｎＭ以下である。ＫＤは、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下または０．１ｎＭ以下である。ＫＤは、少なくとも０．００１ｎＭ、例えば、少なくとも０．０１ｎＭまたは少なくとも０．１ｎＭである。
親和性の定量化は、Ｆａｂフォーマットの抗体を用いて、ＳＰＲを使用して行うことができる。好適なプロトコールは以下の通りである：
１．例えば、第１級アミンカップリングによって、抗ヒト（または他の種が一致した抗体定常領域）ＩｇＧをバイオセンサーチップ（例えば、ＧＬＭ ｃｈｉｐ）にカップリングする；
２．抗ヒトＩｇＧ（または他の一致した種の抗体）を、試験抗体、例えば、Ｆａｂフォーマットの試験抗体に曝露して、試験抗体をチップ上に捕捉する；
３．試験抗体を、ある濃度範囲、例えば、５０００ｎＭ、１０００ｎＭ、２００ｎＭ、４０ｎＭ、８ｎＭおよび２ｎＭ、ならびに０ｎＭ（すなわち、緩衝液単独）で、チップの捕捉表面上を通過させる；ならびに
４．２５℃で、ＳＰＲを使用して、試験抗体の試験抗原への結合の親和性を決定する。緩衝液は、ｐＨ７．６、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％の界面活性剤（例えば、Ｐ２０）および３ｍＭのＥＤＴＡである。緩衝液は、場合により、１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有することができる。ＨＢＳ－ＥＰは、ランニング緩衝液として使用することができる。ＨＢＳ－ＥＰは、Ｔｅｋｎｏｖａ Ｉｎｃ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ；カタログ番号Ｈ８０２２）から入手可能である。
捕捉表面の再生は、ｐＨ１．７の１０ｍＭのグリシンを用いて行うことができる。これは、捕捉された抗体を除去し、表面を別の相互作用のために使用することを可能にする。結合データは、標準的な技法を使用して、例えば、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６ＴＭ分析ソフトウェアに固有のモデルを使用して、固有の１：１モデルにフィットさせることができる。
各種のＳＰＲ装置、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６（商標）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ（登録商標））およびＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ）が公知である。
記載されるように、親和性は、単量体抗体－抗原相互作用の親和性を決定するために、チップ表面にカップリングされた抗原、および溶液中でＦａｂフォーマットのチップ上を通過する試験抗体を用いて、Ｆａｂフォーマットの抗体を用いるＳＰＲによって決定することができる。親和性は、任意の所望のｐＨ、例えば、ｐＨ５．５またはｐＨ７．６、および任意の所望の温度、例えば、２５℃または３７℃で決定することができる。
抗体のＩＣＯＳへの結合を測定するための他の方法は、例えば、ＩＣＯＳの外因性表面発現を有する細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）または内因性レベルのＩＣＯＳを発現する活性化された初代Ｔ細胞を使用する、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。ＦＡＣＳによって測定されるＩＣＯＳ発現細胞への抗体結合は抗体がＩＣＯＳの細胞外（ＥＣ）ドメインに結合できることを示す。
１．６．５．ＩＣＯＳ受容体アゴニズム
ＩＣＯＳリガンド（ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ２としても公知）は、ＩＣＯＳ受容体に結合する細胞表面で発現される分子である［１７］。この細胞間リガンド－受容体相互作用は、Ｔ細胞表面上でのＩＣＯＳの多量体化を促進し、Ｔ細胞において、受容体を活性化し、下流のシグナル伝達を刺激する。エフェクターＴ細胞において、この受容体の活性化は、エフェクターＴ細胞応答を刺激する。
抗ＩＣＯＳ抗体は、ＩＣＯＳのアゴニストとして作用し、受容体上のネイティブＩＣＯＳリガンドのこの刺激効果を模倣し、さらにそれを上回る。そのようなアゴニズムは、抗体がＴ細胞上でのＩＣＯＳの多量体化を促進する能力から生じる。これについての１つのメカニズムは、抗体がＴ細胞表面上のＩＣＯＳと隣接する細胞（例えば、Ｂ細胞、抗原提示細胞または他の免疫細胞）上の受容体、例えば、Ｆｃ受容体との間の細胞間架橋を形成する場合である。別のメカニズムは、複数（例えば、２つ）の抗原結合部位（例えば、２つのＶＨ－ＶＬドメイン対）を有する抗体が、複数のＩＣＯＳ受容体分子を架橋し、そのようにして多量体化を促進する場合である。これらのメカニズムの組み合わせが起こり得る。
アゴニズムは、架橋剤を含むか、またはそれを除くかのいずれかで、可溶性形態（例えば、免疫グロブリンフォーマット、または２つの空間的に分離した抗原結合部位、例えば、２つのＶＨ－ＶＬ対を含む他の抗体フォーマット）の抗体を使用して、または抗原結合部位の繋ぎ止められたアレイを提供する固体表面に結合した抗体を使用して、インビトロＴ細胞活性化アッセイにおいて試験することができる。アゴニズムアッセイは、そのようなアッセイにおける活性化のための標的Ｔ細胞として、ヒトＩＣＯＳ陽性Ｔリンパ球細胞株、例えば、ＭＪ細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－８２９４）を使用することができる。Ｔ細胞活性化の１つまたはそれ以上の測定は、試験抗体について決定し、参照分子または陰性対照と比較して、参照分子または対照と比較して、試験抗体によって生じたＴ細胞活性化に統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）差が存在するかどうかを決定することができる。Ｔ細胞活性化の１つの好適な測定は、サイトカイン、例えば、ＩＦＮγ、ＴＮＦαまたはＩＬ－２の産生である。当業者は、必要に応じて好適な対照を含めて、試験抗体と対照との間のアッセイ条件を標準化する。好適な陰性対照は、ＩＣＯＳに結合しない同じフォーマットの抗体（例えば、アイソタイプ対照）、例えば、アッセイ系に存在しない抗原に特異的な抗体である。アッセイのダイナミックレンジ内で同族アイソタイプ対照と比べて試験抗体について観察される有意差は、抗体が、そのアッセイにおいてＩＣＯＳ受容体のアゴニストとして作用することを示す。
アゴニスト抗体は、Ｔ細胞活性化アッセイにおいて試験される場合、以下の１つとして定義される：
対照抗体と比較して、ＩＦＮγ産生の誘導について有意に低いＥＣ５０を有する；
対照抗体と比較して、有意に高い最大ＩＦＮγ産生を誘導する；
ＩＣＯＳＬ－Ｆｃと比較して、ＩＦＮγ産生の誘導について有意に低いＥＣ５０を有する；
ＩＣＯＳＬ－Ｆｃと比較して、有意に高い最大ＩＦＮγ産生を誘導する；
参照抗体Ｃ３９８．４Ａと比較して、ＩＦＮγ産生の誘導について有意に低いＥＣ５０を有する；および／または
参照抗体Ｃ３９８．４Ａと比較して、有意に高い最大ＩＦＮγ産生を誘導する。
例示的なインビトロＴ細胞アッセイは、米国特許第９，９５７，３２３号の実施例１３～１５に開示されるように、ビーズ結合アッセイ、プレート結合アッセイ、および可溶性形態アッセイを含む。
有意に低い値または有意に高い値は、例えば、参照値または対照値と比較して、最大で０．５倍差、最大で０．７５倍差、最大で２倍差、最大で３倍差、最大で４倍差または最大で５倍差である。
そのため、一例において、本発明による抗体は、対照と比較して、ビーズ結合フォーマットの抗体を使用するＭＪ細胞活性化アッセイにおいて、ＩＦＮγの誘導について、有意に低い、例えば、少なくとも２倍低いＥＣ５０を有する。
ビーズ結合アッセイは、ビーズの表面に結合した抗体（および対照または参照実験のために、対照抗体、参照抗体またはＩＣＯＳＬ－Ｆｃ）を使用する。磁気ビーズを使用することができ、さまざまな種類、例えば、トシル活性化ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ Ｍ－４５０（ＤＹＮＡＬ Ｉｎｃ、５ Ｄｅｌａｗａｒｅ Ｄｒｉｖｅ、Ｌａｋｅ Ｓｕｃｃｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．１１０４２ 製品番号１４０．０３、１４０．０４）が市販されている。ビーズは、コーティングすることができるか、または一般に、炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６、０．２Ｍ）中のコーティング材料に溶解すること、もしくは他の当技術分野において公知の方法によって、コーティングすることができる。ビーズの使用は、好都合には、良好な精度で決定されるビーズ表面に結合したタンパク質の定量化を可能にする。標準的なＦｃタンパク質定量化法を、ビーズ上のカップリングしたタンパク質の定量化のために使用することができる。ＤＥＬＦＩＡ、ＥＬＩＳＡ、または他の方法を含む、任意の好適な方法を、アッセイのダイナミックレンジ内で関連する標準を参照して使用することができる。
抗体のアゴニズム活性は、エクスビボで初代ヒトＴリンパ球において測定することもできる。そのようなＴ細胞においてＩＦＮγの発現を誘導する抗体の能力は、ＩＣＯＳアゴニズムを示す。好ましくは、抗体は、Ｔ細胞活性化アッセイ１および／またはＴ細胞活性化アッセイ２において、対照抗体と比較して、５μｇ／ｍｌでＩＦＮγの有意な（ｐ＜０．０５）誘導を示す。上記で述べたように、抗ＩＣＯＳ抗体は、そのようなアッセイにおいて、ＩＣＯＳ－ＬまたはＣ３９８．４よりも高い度合いまで、Ｔ細胞活性化を刺激することができる。そのため、抗体は、Ｔ細胞活性化アッセイ１または２において、対照または参照抗体と比較して、５μｇ／ｍｌでＩＦＮγの有意に（ｐ＜０．０５）高い誘導を示すことができる。ＴＮＦαまたはＩＬ－２誘導は、代替アッセイの読み取りとして測定することができる。
抗ＩＣＯＳ抗体のアゴニズムは、ＴＥｆｆ細胞に有利になるように、腫瘍微小環境などの病理部位において、インビボで、ＴＲｅｇ細胞およびＴＥｆｆ細胞の集団間のバランスを変化させるその能力に寄与する。活性化ＩＣＯＳ陽性エフェクターＴ細胞による腫瘍細胞死滅を増強する抗体の能力は、本明細書の他の場所において議論されるようにして決定することができる。
ＩＣＯＳ受容体アゴニズムおよびより低い用量での治療有効性
本発明は、一部分では、対象へのより低い用量の投与から生じるより低い抗ＩＣＯＳ抗体濃度が、より高い用量から生じるより高い抗ＩＣＯＳ濃度と比較して、臨床有効性を改善することができるという発見に基づく。驚くべきことに、本明細書において提示されるデータによって示されるように、部分的な受容体／一過性占有のみをもたらす抗ＩＣＯＳ抗体は、完全受容体占有をもたらす抗ＩＣＯＳ抗体用量と比較して、処置後により強いＧＭ－ＣＳＦおよびＴＮＦαシグナルを誘導する。
理論に限定されないが、ＫＹ１０４４などの抗ＩＣＯＳ抗体は、Ｔ細胞上のＩＣＯＳの多量体化を促進することによって、ＩＣＯＳのアゴニストとして作用する。ＩＣＯＳ受容体は、ホモ二量体として構成される傾向を有する。そのため、ＩＣＯＳへの複数の抗原結合部位を有する抗体は、複数のＩＣＯＳ受容体分子を架橋し、リガンド誘導クラスタリングまたは多量体化をもたらすことができる。そのようなリガンド架橋は、リガンド－受容体相互作用の増加した安定性により、アビディティー効果を媒介すると提案される。
ＩＣＯＳ受容体の多量体化は、一部分では、抗体濃度および受容体の化学量論比に依存する。例えば、理論に限定されないが、抗体の濃度が利用可能な受容体の数よりも有意に高い場合、これは、２つの異なる抗体に結合した単離された受容体の形成を支持し、ＦｃγＲ依存性刺激が低減するが、受容体の数が存在する抗体の数を大幅に超える場合、リガンド架橋は、生じる可能性が低く、その結果としてＦｃγＲ依存性刺激の低減ももたらす。一部の実施形態において、等濃度の抗体および受容体は、存在し、多量体複合体の形成を促進し、ＦｃγＲ依存性刺激を最大に誘導し、炎症促進性サイトカインのより多くの放出をもたらす。理論に限定されないが、高い抗ＩＣＯＳ抗体オプソニン化は、クラスタリングなしおよび／または少ない免疫シナプス、ならびに共刺激なしをもたらすが、低い抗ＩＣＯＳ抗体オプソニン化は、クラスタリングを改善し、ＦｃγＲ依存性共刺激をもたらす。
一部の実施形態において、部分的なＩＣＯＳ受容体／一過性占有を生じ、クラスタリングを改善し、および／または共刺激を改善するのに有効な用量で投与される抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４のＣＤＲを含む。別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖可変ドメインに対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。一部のそのような実施形態において、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖可変ドメインに対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変ドメインは、ＫＹ１０４４のＣＤＲを含む。別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体の約８ｍｇの用量は、完全なＩＣＯＳ受容体占有を生じる。そのため、一部の実施形態において、部分的なＩＣＯＳ受容体／一過性占有を生じる、クラスタリングを改善する、および／または共刺激を改善するのに有効な抗ＩＣＯＳ抗体の用量は、約８ｍｇ未満であり、例えば、約７ｍｇ、約６ｍｇ、約５ｍｇ、約４ｍｇ、約３ｍｇ、約２ｍｇ、約１ｍｇ、または約１ｍｇ未満である。一実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体の用量は、約２．４ｍｇである。別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体の用量は、約０．８ｍｇである。
別の実施形態において、部分的なＩＣＯＳ受容体／一過性占有を生じ、クラスタリングを改善し、および／または共刺激を改善するのに有効な用量で投与される抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖を含む。一部のそのような実施形態において、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する重鎖および軽鎖は、ＫＹ１０４４のＣＤＲを含む。別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖を含む。別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４である。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体の約８ｍｇの用量は、完全なＩＣＯＳ受容体占有を生じる。そのため、一部の実施形態において、部分的なＩＣＯＳ受容体／一過性占有を生じる、クラスタリングを改善する、および／または共刺激を改善するのに有効な抗ＩＣＯＳ抗体の用量は、約８ｍｇ未満であり、例えば、約７ｍｇ、約６ｍｇ、約５ｍｇ、約４ｍｇ、約３ｍｇ、約２ｍｇ、約１ｍｇ、または約１ｍｇ未満である。一実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体の用量は、約２．４ｍｇである。別の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体の用量は、約０．８ｍｇである。
一部の実施形態において、腫瘍内のＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇ枯渇（ＩＣＯＳ＋ＦＯＸＰ３＋細胞の減少）は、約８ｍｇの抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）で最も高い。一部の実施形態において、腫瘍微小環境におけるＣＤ８／ＩＣＯＳ＋ＦＯＸＰ３＋ Ｔｒｅｇ比の改善は、約８ｍｇ以上の抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）の用量で、抗ＩＣＯＳ抗体のプラトーによって生じた。
一部の実施形態において、ＩＣＯＳアゴニズムは、約８ｍｇよりも低い抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）の用量で最も明白である。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）のアゴニスト活性は、約２．４～８ｍｇで有効である。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）のアゴニスト活性は、約０．８～２．４ｍｇで有効である。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）のアゴニスト活性は、約２．４ｍｇで有効である。他の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）のアゴニスト活性は、約０．８ｍｇで有効である。
１．６．６．Ｔ細胞依存性死滅
エフェクターＴ細胞機能は、生物学的に関連する状況において、腫瘍細胞が関連する免疫細胞とともにインキュベートされて、免疫細胞依存性死滅の引き金を引くインビトロ共培養アッセイを使用して決定することができ、ここで、ＴＥｆｆによる腫瘍細胞死滅に対する抗ＩＣＯＳ抗体の効果が観察される。
活性化ＩＣＯＳ陽性エフェクターＴ細胞による腫瘍細胞死滅を増強する抗体の能力を決定することができる。抗ＩＣＯＳ抗体は、対照抗体と比較して、有意に高い（ｐ＜０．０５）腫瘍細胞死滅を刺激する。抗ＩＣＯＳ抗体は、ＩＣＯＳリガンドまたはＣ３９８．４抗体などの参照分子と比較されるアッセイなどにおいて、類似のまたはより高い腫瘍細胞死滅を刺激することができる。腫瘍細胞死滅の類似の度合いは、参照分子のものから２倍未満の差である試験抗体についてのアッセイ読み取りとして示すことができる。
１．６．７．ＩＣＯＳリガンド－受容体中和効力
本発明による抗体は、ＩＣＯＳのそのリガンドＩＣＯＳＬへの結合を阻害するものである。
抗体がＩＣＯＳ受容体のそのリガンドへの結合を阻害する度合いは、そのリガンド－受容体中和効力と称される。効力は、通常、他に述べられない限り、ｐＭのＩＣ５０値として表される。リガンド結合研究において、ＩＣ５０は、受容体結合を最大特異的結合レベルの５０％低減する濃度である。ＩＣ５０は、特異的受容体結合％を抗体濃度の対数の関数としてプロットすること、およびＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）などのソフトウェアプログラムを使用して、シグモイド関数をデータにフィットさせて、ＩＣ５０値を作成することによって計算することができる。中和効力は、米国特許第９，９５７，３２３号の実施例８に開示されるように、ＨＴＲＦアッセイにおいて決定することができる。
ＩＣ５０値は、複数の測定の平均を示す。そのため、例えば、ＩＣ５０値は、三反復の実験の結果から得ることができ、次いで、平均ＩＣ５０値を計算することができる。
抗体は、リガンド－受容体中和アッセイにおいて、１ｍＭ以下、例えば、０．５ｍＭ以下のＩＣ５０を有する。ＩＣ５０は、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下または２ｎＭ以下である。ＩＣ５０は、少なくとも０．１ｎＭ、少なくとも０．５ｎＭまたは少なくとも１ｎＭである。
１．６．８．抗体
米国特許第９，９５７，３２３号の実施例において記載されたようにして、我々は、特定の目的の抗体を単離し、特徴付け、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８およびＳＴＩＭ００９と指定した。本発明のさまざまな態様において、文脈が他を指示しない限り、抗体は、これらの抗体のいずれかから、またはＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４およびＳＴＩＭ００５のサブセットから選択される。これらの抗体のそれぞれの配列は、添付の配列表において提供され、ここで、それぞれの抗体について、それぞれ、以下の配列が示される：ＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列；ＶＨドメインのアミノ酸配列；ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列；ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列；ＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列；ＶＬドメインのアミノ酸配列；ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列；ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列；およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列。本発明は、添付の配列表および／または図面に示されるすべての抗体のＶＨおよび／またはＶＬドメイン配列を有する抗ＩＣＯＳ抗体だけでなく、これらの抗体のＨＣＤＲおよび／もしくはＬＣＤＲを含む抗体、ならびに場合により、全重鎖および／または全軽鎖軽鎖アミノ酸配列を有する抗体を包含する。
ＳＴＩＭ００１は、配列番号３６３のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３６４のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号３６５のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３６６の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３６７である。ＳＴＩＭ００１は、配列番号３７０のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３７１のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３７２のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号３７３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号３７４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３６８である（重鎖核酸配列 配列番号３６９）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号３７５である（軽鎖核酸配列 配列番号３７６）。
ＳＴＩＭ００２は、配列番号３７７のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３７８のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号３７９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３８０の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３８１である。ＳＴＩＭ００２は、配列番号３８４のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８５のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３８６のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号３８７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号３８８または配列番号５１９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３８２である（重鎖核酸配列 配列番号３８３）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号３８９である（軽鎖核酸配列 配列番号３９０または配列番号５２０）。
ＳＴＩＭ００２－Ｂは、配列番号３９１のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３９２のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号３９３のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３９４の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３９５である。ＳＴＩＭ００２－Ｂは、配列番号３９８のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３９９のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号４００のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４０１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４０２である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３９６である（重鎖核酸配列 配列番号３９７）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４０３である（軽鎖核酸配列 配列番号４０４）。
本明細書において互換的にＫＹ１０４４と称されるＳＴＩＭ００３は、配列番号４０５のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４０６のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号４０７のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４０８の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４０９または配列番号５２１である。ＳＴＩＭ００３は、配列番号４１２のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４１３のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号４１４のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４１５の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４１６である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４１０である（重鎖核酸配列 配列番号４１１または配列番号５２２）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４１７である（軽鎖核酸配列 配列番号４１８）。
ＳＴＩＭ００４は、配列番号４１９のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４２０のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号４２１のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４２２の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４２３である。ＳＴＩＭ００４は、配列番号４２６のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４２７のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号４２８のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４２９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４３０または配列番号４３１である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４２４である（重鎖核酸配列 配列番号４２５）。全長軽鎖アミノ酸配列は配列番号４３２である（軽鎖核酸配列 配列番号４３３または配列番号４３４）。
ＳＴＩＭ００５は、配列番号４３５のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４３６のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号４３７のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３８の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４３９である。ＳＴＩＭ００５は、配列番号４４２のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４４３のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号４４４のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４４５の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４６である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４４０である（重鎖核酸配列 配列番号４４１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４４７である（軽鎖核酸配列 配列番号４４８）。
ＳＴＩＭ００６は、配列番号４４９のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４５０のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号４５１のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４５２の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４５３である。ＳＴＩＭ００６は、配列番号４５６のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４５７のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号４５８のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４５９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４６０である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４５４である（重鎖核酸配列 配列番号４５５）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４６１である（軽鎖核酸配列 配列番号４６２）。
ＳＴＩＭ００７は、配列番号４６３のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４６４のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号４６５のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４６６の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４６７である。ＳＴＩＭ００７は、配列番号４７０のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４７１のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号４７２のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４７３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４７４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４６８である（重鎖核酸配列 配列番号４６９）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４７５である（軽鎖核酸配列 配列番号４７６）。
ＳＴＩＭ００８は、配列番号４７７のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４７８のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号４７９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４８０の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４８１である。ＳＴＩＭ００８は、配列番号４８４のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４８５のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号４８６のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４８７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４８８である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４８２である（重鎖核酸配列 配列番号４８３）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４８９である（軽鎖核酸配列 配列番号４９０）。
ＳＴＩＭ００９は、配列番号４９１のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４９２のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号４９３のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４９４の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４９５である。ＳＴＩＭ００９は、配列番号４９８のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４９９のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号５００のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号５０１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号５０２である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４９６である（重鎖核酸配列 配列番号４９７）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号５０３である（軽鎖核酸配列 配列番号５０４）。
追加の例示的な抗ＩＣＯＳ抗体としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：３７Ａ１０Ｓ７１３（ボプラテリマブまたはＪＴＸ－２０１１とも称される）（例えば、米国特許第１００２３６３５号および同第１１，２９２，８４０号；ＷＯ２０１７０７０４２３号；ＷＯ２０１６１５４１７７号を参照されたい）；ＸＭＡｂ２３１０４（ＸｍＡｂ１０４とも称される）（米国特許第１０９８１９９２号を参照されたい）；３１４．８ ｍＡｂ（Ｉｃｏｓ ３１４－８とも称される）（ＷＯ２０１４０３３３２７Ａ１号、ＷＯ２０１２１３１００４Ａ２号；米国特許第１１１８０５５６号）、ＪＭａｂ－１３６（ＩＣ００９とも称される）（例えば、ＷＯ２００８１３７９１５号；米国特許第９１９３７８９号、ＵＳ２０１１０２４３９２９Ａ１号を参照されたい）およびＩＣＯＳ．３３ ＩｇＧｌｆ Ｓ２６７Ｅ（米国特許第１０８９８５５６号）。ＩＣＯＳに対する抗体および疾患の処置における使用の方法は、ＷＯ２０１９２２２１８８Ａ１号および米国特許第１１２９２８４０号にも記載されている。ＩＣＯＳに対する抗体は、ＥＰ１３７４９０２号、ＥＰ１３７４９０１号およびＥＰ１１２５５８５号にも開示されている。ＩＣＯＳに対するアゴニスト抗体は、ＵＳ２０２１０３４０２５０Ａ１号；ＷＯ２０１８２２２７１１Ａ２号；ＷＯ２０２１２０９３５６Ａ１号；ＷＯ２０１６１２０７８９号；ＵＳ２０１６０２１５０５９Ａ１号；およびＷＯ２０１２１３１００４Ａ２号にも開示されている。
３７Ａ１０Ｓ７１３の重鎖および軽鎖の配列は、配列番号６１１～６１２として開示される。
３７Ａ１０Ｓ７１３重鎖：（配列番号６１１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＷＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＶＷＶＳＮＩＤＥＤＧＳＩＴＥＹＳＰＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＧＲＦＧＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
３７Ａ１０Ｓ７１３軽鎖：（配列番号６１２）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＳＧＳＦＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦＹＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＨＨＨＹＮＡＰＰＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
一実施形態において、ＩＣＯＳ結合タンパク質は、ボプラテリマブである。一実施形態において、ＩＣＯＳ結合タンパク質は、ＪＴＸ－２０１１である。
ＸＭＡｂ２３１０４の重鎖および軽鎖の配列は、配列番号６１３～６１４として開示される。
ＸｍＡｂ２３１０４重鎖：（配列番号６１３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＨＳＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＹＹＹＤＴＳＧＹＹＨＤＡＦＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＩＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＤＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＫＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＥＹＮＳＴＹＲＷＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＤＶＳＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＤＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＥＱＧＤＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＸｍＡｂ２３１０４軽鎖：（配列番号６１４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＲＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＶＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ／ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
３１４．８ ｍＡｂの重鎖および軽鎖可変領域の配列は、配列番号６１５～６１６として開示される。
３１４．８ ｍＡｂ重鎖可変領域：（配列番号６１５）
ＭＧＷＲＣＩＩＬＦＬＶＳＴＡＴＧＶＨＳＱＶＱＬＱＱＰＧＴＥＬＭＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＥＩＤＰＳＤＳＹＶＮＹＮＱＮＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＩＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＰＤＹＹＧＴＳＬＡＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＴ
３１４．８ ｍＡｂ軽鎖可変領域：（配列番号６１６）
ＭＲＣＬＡＥＦＬＧＬＬＶＬＷＩＰＧＶＩＧＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＶＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＲＳＳＫＳＰＬＨＳＮＧＮＩＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＴＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＪＭａｂ－１３６の重鎖および軽鎖可変領域の配列は、配列番号６１７～６１８として開示される。
ＪＭａｂ－１３６重鎖可変領域：（配列番号６１７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＨＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＹＹＹＤＳＳＧＹＹＨＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
ＪＭａｂ－１３６軽鎖可変領域：（配列番号６１８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＲＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＶＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＩＣＯＳ．３３ ＩｇＧｌｆ Ｓ２６７Ｅの重鎖および軽鎖の配列は、配列番号６１９～６２０として開示される。
ＩＣＯＳ．３３ ＩｇＧｌｆ Ｓ２６７Ｅ重鎖：配列番号６１９。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＦＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＤＴＫＳＦＮＹＡＴＹＹＳＤＬＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＡＴＩＡＶＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＩＣＯＳ．３３ ＩｇＧｌｆ Ｓ２６７Ｅ軽鎖：配列番号６２０。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＮＬＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＹＮＹＲＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ。
「抗体」という用語は、（全長）抗体、およびその抗原結合性断片を指す。本発明による抗体は、天然、または部分的もしくは全体的に合成で生成したかにかかわらず、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンドメインを含む分子である。抗体は、抗体を天然に生成する任意の種に由来するか、または組換えＤＮＡ技術によって作出されたかにかかわらず；血清、Ｂ細胞、ハイブリドーマ、トランスフェクトーマ、酵母または細菌から単離されたかにかかわらず、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤもしくはＩｇＥ分子、またはその抗原特異的（抗原結合性）抗体断片（限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体、閉鎖コンフォメーションの多重特異性抗体、ジスルフィド連結ｓｃｆｖ、ダイアボディを含む）である。抗体は、ルーチン技術を使用して、ヒト化することができる。抗体という用語は、抗体の抗原結合部位を含む任意のポリペプチドまたはタンパク質を包含する。抗原結合部位（パラトープ）は、その標的抗原（ＩＣＯＳ）に結合し、そのエピトープに相補的である、抗体の一部である。
「エピトープ」という用語は、抗体に結合する抗原の領域を指す。エピトープは、構造的または機能的として定義される。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に寄与する残基を有する。エピトープは、立体構造的であることもでき、すなわち、非線状アミノ酸から構成される。ある特定の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面グループ分けである決定基を含むことができ、ある特定の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴および／または特異的な電荷特徴を有することができる。
抗原結合部位は、抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲを含み、抗原に結合することができる、ポリペプチドまたはドメインである。例えば、ポリペプチドは、ＣＤＲ３（例えば、ＨＣＤＲ３）を含む。例えば、ポリペプチドは、抗体の可変ドメインのＣＤＲ１およびＣＤＲ２（例えば、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２）またはＣＤＲ１～ＣＤＲ３（例えば、ＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）を含む。
抗体の抗原結合部位は、１つまたはそれ以上の抗体可変ドメインによって提供される。ある例において、抗体結合部位は、単一可変ドメイン、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）または軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）によって提供される。別の例において、結合部位は、ＶＨ／ＶＬ対、またはそのような対の２つ以上を含む。そのため、抗体の抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＬを含むことができる。
抗体は、定常領域を含む全免疫グロブリンであるか、または抗体断片、例えば、抗体の抗原結合性断片である。抗体断片は、インタクト抗体の一部分であり、例えば、インタクト抗体の抗原結合領域および／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、以下が挙げられる：
（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；
（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；
（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、
（ｖ）ＶＨまたはＶＬドメインからなる、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４～５４６頁；これは、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる）；ならびに
（ｖｉ）特異的な抗原結合機能性を保持する単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）。
抗体のさらなる例は、重鎖の二量体（５’－ＶＨ－（場合によりヒンジ）－ＣＨ２－ＣＨ３－３’）を含み、軽鎖を欠いている、Ｈ２抗体である。
一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、一般に使用される断片である。多重特異性抗体は、抗体断片から形成される。本発明の抗体は、必要に応じて、任意のそのようなフォーマットを用いることができる。
場合により、抗体の免疫グロブリンドメインは、追加のポリペプチド配列および／または標識、タグ、毒素もしくは他の分子に融合またはコンジュゲートされる。抗体の免疫グロブリンドメインは、１つまたはそれ以上の異なる抗原結合領域に融合またはコンジュゲートされ、ＩＣＯＳに加えて第２の抗原に結合することができる分子を提供することができる。本発明の抗体は、（ｉ）ＩＣＯＳに対する抗体の抗原結合部位、および（ｉｉ）別の抗原（例えば、ＰＤ－Ｌ１）を認識するさらなる抗原結合部位（場合により、本明細書において記載されるように、抗体の抗原結合部位）を含む、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。
抗体は、通常、抗体のＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。抗体の単離されたＶＨおよびＶＬドメインは、本発明の一部でもある。抗体の可変ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体の軽鎖および重鎖の一部分である。そのため、ＶＨおよびＶＬドメインのそれぞれ内に、ＣＤＲおよびＦＲがある。ＶＨドメインは、ＨＣＤＲのセットを含み、ＶＬドメインは、ＬＣＤＲのセットを含む。ＶＨは、重鎖の可変ドメインを指す。ＶＬは、軽鎖の可変ドメインを指す。それぞれのＶＨおよびＶＬは、典型的には、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に、以下の順序で配列される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明において使用される方法によれば、ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられるアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７および１９９１））に従ってまたはＩＭＧＴ命名法に従って定義される。抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにフレームワークを含む、抗体のＶＨドメインを含むことができる。これは、代替的にまたはさらに、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにフレームワークを含む抗体のＶＬドメインを含むことができる。本発明による抗体のＶＨおよびＶＬドメイン、ならびにＣＤＲの例は、本開示の一部を形成する添付の配列表にリストされる通りである。配列表において示されるＣＤＲは、ＩＭＧＴシステムに従って定義される［１８］。本明細書において開示されるＶＨおよびＶＬ配列、ＣＤＲ配列、ＣＤＲのセット、ならびにＨＣＤＲのセットおよびＬＣＤＲのセットはすべて、本発明の態様および実施形態を示す。本明細書において記載される場合、「ＣＤＲのセット」は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。そのため、ＨＣＤＲのセットは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を指し、ＬＣＤＲのセットは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を指す。他に述べられない限り、「ＣＤＲのセット」は、ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲを含む。
本発明の抗体は、本明細書において記載される１つまたはそれ以上のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ３、ならびに場合により、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２も含んで、ＣＤＲのセットを形成することができる。ＣＤＲまたはＣＤＲのセットは、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８およびＳＴＩＭ００９のいずれかのＣＤＲまたはＣＤＲのセットであるか、または本明細書において記載されるそのバリアントである。
本発明は、抗体ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８およびＳＴＩＭ００９のいずれかのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／もしくはＨＣＤＲ３、ならびに／またはこれらの抗体のいずれかのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／もしくはＬＣＤＲ３、例えば、ＣＤＲのセットを含む抗体を提供する。抗体は、これらの抗体の１つのＶＨ ＣＤＲのセットを含むことができる。場合により、これは、これらの抗体の１つのＶＬ ＣＤＲのセットを含むこともでき、ＶＬ ＣＤＲは、ＶＨ ＣＤＲと同じまたは異なる抗体由来である。
ＨＣＤＲの開示されるセットを含むＶＨドメインおよび／またはＬＣＤＲの開示されるセットを含むＶＬドメインも、本発明によって提供される。
典型的には、ＶＨドメインは、ＶＬドメインと対形成して、抗体の抗原結合部位を提供するが、下記でさらに議論されるように、ＶＨまたはＶＬドメイン単独で使用されて、抗原に結合することができる。ＳＴＩＭ００３のＶＨドメインは、ＳＴＩＭ００３のＶＬドメインと対形成することができ、その結果、ＳＴＩＭ００３のＶＨおよびＶＬドメインの両方を含む抗体の抗原結合部位が形成される。類似の実施形態は、本明細書において開示される他のＶＨおよびＶＬドメインについて提供される。他の実施形態において、ＳＴＩＭ００３のＶＨは、ＳＴＩＭ００３のＶＬ以外のＶＬドメインと対形成する。軽鎖の乱交性は、当技術分野において十分に確立されている。再び、類似の実施形態は、本明細書において開示される他のＶＨおよびＶＬドメインについて、本発明によって提供される。
そのため、抗体ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４およびＳＴＩＭ００５のいずれかのＶＨは、抗体ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４およびＳＴＩＭ００５のいずれかのＶＬと対形成することができる。さらに、抗体ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８およびＳＴＩＭ００９のいずれかのＶＨは、抗体ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８またはＳＴＩＭ００９のいずれかのＶＬと対形成することができる。
抗体は、抗体フレームワーク内に、１つまたはそれ以上のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲのセットを含むことができる。フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系列遺伝子セグメント配列のものである。そのため、抗体は、ヒト生殖細胞系列のフレームワークにおけるＨＣＤＲのセットを含むＶＨドメインを有するヒト抗体である。通常、抗体は、ＬＣＤＲのセット、例えば、ヒト生殖細胞系列のフレームワークを含むＶＬドメインも有する。抗体「遺伝子セグメント」、例えば、ＶＨ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメントまたはＪＨ遺伝子セグメントは、抗体の一部分が由来する核酸配列を有するオリゴヌクレオチドを指し、例えば、ＶＨ遺伝子セグメントは、ＦＲ１からＣＤＲ３の一部由来のＶＨドメインのポリペプチドに対応する核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。ヒトＶ、ＤおよびＪ遺伝子セグメントは、組み換えて、ＶＨドメインを生じ、ヒトＶおよびＪセグメントは、組み換えて、ＶＬドメインを生じる。ＤドメインまたはＤ領域は、抗体鎖の多様なドメインまたは領域を指す。ＪドメインまたはＪ領域は、抗体鎖の接続ドメインまたは領域を指す。体細胞突然変異は、対応する遺伝子配列と正確に一致しないまたは整列しないフレームワーク領域を有する抗体のＶＨまたはＶＬドメインをもたらすが、配列アライメントを使用して、最も近い遺伝子セグメントを特定することができ、したがって、遺伝子セグメントの特定の組み合わせ、特に、ＶＨまたはＶＬドメインが由来するものから特定することができる。抗体配列を遺伝子配列と整列させる場合、抗体のアミノ酸配列を、遺伝子セグメントによってコードされるアミノ酸配列と整列させることができ、または抗体のヌクレオチド配列を、遺伝子セグメントのヌクレオチド配列と直接的に整列させることができる。
関連する抗体に対するおよびヒト生殖細胞系列配列に対するＳＴＩＭ抗体のＶＨおよびＶＬドメイン配列のアライメントは、図５、図６および図７に示される。
本発明の抗体は、ヒト抗体、またはヒト可変領域および非ヒト（例えば、マウス）定常領域を含むキメラ抗体であることができる。本発明の抗体は、例えば、ヒト可変領域を有し、および場合により、ヒト定常領域も有する。
そのため、抗体は、場合により、定常領域またはその部分、例えば、ヒト抗体の定常領域またはその部分を含む。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端で、抗体の軽鎖カッパまたはラムダ定常ドメインに結合することができる。同様に、抗体のＶＨドメインは、そのＣ末端で、任意の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＭ、およびＩｇＧ１またはＩｇＧ４などのアイソタイプのサブクラスのいずれかに由来する免疫グロブリン重鎖定常領域の全部または一部（例えば、ＣＨ１ドメインまたはＦｃ領域）に結合することができる。
ヒト重鎖定常領域の例を表Ｓ１に示す。
あるいは、本発明の抗体の定常領域は、非ヒト定常領域である。例えば、抗体がトランスジェニック動物（その例は、本明細書の他の場所において記載される）において作成される場合、ヒト可変領域および非ヒト（宿主動物）定常領域を含むキメラ抗体が生成する。一部のトランスジェニック動物は、完全なヒト抗体を生じる。他のものは、キメラ重鎖および完全なヒト軽鎖を含む抗体が作成されるように操作されている。抗体が、１つまたはそれ以上の非ヒト定常領域を含む場合、それらの免疫原性がそれによって低減されるので、これらは、ヒト定常領域と置き換えられて、治療用組成物としてヒトへの投与により好適な抗体を提供することができる。
酵素のパパインによる抗体の消化は、「Ｆａｂ」断片としても公知の２つの同一の抗原結合性断片をもたらし、「Ｆｃ」断片は、抗原結合活性を有さないが、結晶化する能力を有する。「Ｆａｂ」は、本明細書において使用される場合、重鎖および軽鎖のそれぞれの１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメインを含む抗体の断片を指す。「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において、ネイティブ配列のＦｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む免疫グロブリンの重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。「Ｆｃ断片」は、ジスルフィドによって一緒に保持される両Ｈ鎖のカルボキシ末端部分を指す。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域中の配列によって決定され、その領域は、細胞のある特定の種類において見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される。酵素のペプシンによる抗体の消化は、抗体分子の２つのアームが、連結されたままであり、２つの抗原結合部位を含む、Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらす。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原を架橋する能力を有する。
「Ｆｖ」は、本明細書において使用される場合、抗原認識および抗原結合部位の両方を保持する抗体の最小断片を指す。この領域は、密接な非共有結合性または共有結合性の会合の、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この構成において、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位が規定される。まとめると、６つのＣＤＲは、抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、さらに単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）は、結合部位全体よりも低い親和性であるが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
本明細書において開示される抗体は、血清半減期を増加または減少させるように改変することができる。一実施形態において、以下の変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４ＳまたはＴ２５６Ｆの１つまたはそれ以上が導入されて、抗体の生物学的半減期が増加する。生物学的半減期は、そこに記載される改変が参照によって本明細書に組み入れられる米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号において記載されるように、重鎖定常領域のＣＨ１ドメインまたはＣＬ領域を変更して、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含有することによっても増加する。別の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片のＦｃヒンジ領域は、抗体または断片の生物学的半減期を減少するように変異される。１つまたはそれ以上のアミノ酸の変異は、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面領域に導入され、その結果、抗体または断片は、ネイティブＦｃ－ヒンジドメインのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌプロテインＡ（ＳｐＡ）結合と比べて、損なわれたＳｐＡ結合を有する。血清半減期を増加させる他の方法は、当業者に公知である。そのため、一実施形態において、抗体または断は、ＰＥＧ化される。別の実施形態において、抗体または断片は、アルブミン結合ドメイン、例えば、アルブミン結合シングルドメイン抗体（ｄＡｂ）に融合される。別の実施形態において、抗体または断片は、ＰＡＳ化される（すなわち、大きな流体力学的容積を有する非荷電ランダムコイル構造を形成するＰＡＳ（ＸＬ－Ｐｒｏｔｅｉｎ ＧｍｂＨ）から構成されるポリペプチド配列の遺伝子融合）。別の実施形態において、抗体または断片は、ＸＴＥＮｙｌａｔｅｄ（登録商標）／ｒＰＥＧ化される（すなわち、治療用ペプチドへの不正確なリピートペプチド配列（Ａｍｕｎｉｘ、Ｖｅｒｓａｒｔｉｓ）の遺伝子融合）。別の実施形態において、抗体または断片は、ＥＬＰ化される（すなわち、ＥＬＰリピート配列（ＰｈａｓｅＢｉｏ）への遺伝子融合）。これらのさまざまな半減期を延長する融合は、Ｓｔｒｏｈｌ、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５～２３９頁においてより詳細に記載されており、その融合、例えば、表２および６における融合は、参照によって本明細書に組み入れられる。
抗体は、安定性が増加する改変定常領域を有することができる。そのため、一実施形態において、重鎖定常領域は、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ変異を含む。別の実施形態において、本明細書において開示される抗体および断片は、システイン残基の数を変更するように改変された重鎖ヒンジ領域を含む。この改変を使用して、軽鎖および重鎖のアセンブリーを容易にするか、または抗体の安定性を増加または減少させることができる。
１．６．９．Ｆｃエフェクター機能、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよびＣＤＣ
上記で議論されたように、抗ＩＣＯＳ抗体は、さまざまなアイソタイプで、異なる定常領域を有して提供される。ヒトＩｇＧ抗体の重鎖定常領域配列の例を表Ｓ１に示す。抗体のＦｃ領域は、主に、Ｆｃ結合、抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性および抗体依存性細胞捕食（ＡＤＣＰ）活性の観点で、そのエフェクター機能を決定する。これらの「細胞エフェクター機能」は、エフェクターＴ細胞機能とは異なって、Ｆｃ受容体を保持する細胞の標的細胞の部位への動員を含み、抗体に結合した細胞の死滅をもたらす。ＡＤＣＣおよびＣＤＣに加えて、ＡＤＣＰのメカニズム［１９］は、抗体が結合したＴ細胞を枯渇させる手段、およびしたがって、枯渇のために高ＩＣＯＳ発現ＴＲｅｇを標的化する手段を示す。
細胞のエフェクター機能のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣは、Ｆｃ領域を欠く抗体によっても示される。抗体は、複数の異なる抗原結合部位を含むことができ、１つはＩＣＯＳに向けられ、別のものは、その標的分子の関与がＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣを誘導する標的分子、例えば、リンカーによって接合された２つのｓｃＦｖ領域を含む抗体に向けられ、ここで、１つのｓｃＦｖが、エフェクター細胞に関与することができる。
本発明による抗体は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣを示すものである。あるいは、本発明による抗体は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣ活性を欠く。いずれかの場合において、本発明による抗体は、Ｆｃ受容体の１つまたはそれ以上の種類に結合するＦｃ領域を含むか、または場合により、それを欠く。異なる抗体フォーマットの使用、ならびにＦｃＲ結合および細胞のエフェクター機能の存在または非存在は、抗体を、使用のために、特に、本明細書の他の場所において議論される治療目的のために合わせることを可能にする。
一部の治療適用のための好適な抗体フォーマットは、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域を用いる。定常領域は、場合によりＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣおよび／またはＡＤＣＰ活性を有する、エフェクターが可能なＩｇＧ１定常領域である。好適な野生型ヒトＩｇＧ１定常領域配列は、配列番号３４０（ＩＧＨＧ１＊０１）である。ヒトＩｇＧ１定常領域のさらなる例を表Ｓ１に示す。
ヒト疾患のマウスモデルにおける候補治療用抗体を試験するために、エフェクター陽性マウス定常領域、例えば、マウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）は、エフェクター陽性ヒト定常領域の代わりに含まれる。
定常領域は、増強されたＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣおよび／またはＡＤＣＰのために操作することができる。
Ｆｃ媒介効果の効力は、さまざまな確立された技法によって、Ｆｃドメインを操作することによって増強することができる。そのような方法は、ある特定のＦｃ受容体に対する親和性を増加させ、このようにして、活性化増強の可能性のある多様なプロファイルを作出する。これは、１つまたはいくつかのアミノ酸残基の改変によって達成することができる［２０］。残基Ａｓｎ２９７における特異的な変異または変更されたグリコシル化（例えば、Ｎ２９７Ｑ、ＥＵインデックス番号付け）を含有するヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ受容体への結合を増強することが示されている。変異の例は、ヒトＩｇＧ１定常領域について２３９、３３２および３３０（または他のＩｇＧアイソタイプにおける同等の位置）から選択される残基の１つまたはそれ以上である。抗体は、したがって、Ｎ２９７Ｑ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌ（ＥＵインデックス番号付け）から独立して選択される１つまたはそれ以上の変異を有するヒトＩｇＧ１定常領域を含むことができる。三重変異（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を使用して、ＦｃＲｎへの結合を増強することができ、ＦｃＲｎ結合に影響を及ぼす他の変異は、［２１］の表２において議論されており、そのいずれかを、本発明において用いることができる。
Ｆｃ受容体に対する増加した親和性は、例えば、フコシル化または脱フコシル化バリアント下で作成することによる、Ｆｃドメインの天然のグリコシル化プロファイルを変更することによって達成することもできる［２２］。非フコシル化抗体は、フコース残基なしで、Ｆｃの複合体型Ｎグリカンのトリマンノシルコア構造を保有する。Ｆｃ Ｎグリカンからコアフコース残基を欠くこれらの糖操作抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合能の増強に起因して、フコシル化等価体よりも強いＡＤＣＣを示す。例えば、ＡＤＣＣを増加させるために、ヒンジ領域中の残基を変更して、Ｆｃ－ガンマＲＩＩＩへの結合を増加させることができる［２３］。そのため、抗体は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のバリアントであるヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含むことができ、ここで、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域がヒトＦｃγ受容体に結合するよりも高い親和性で、ＦｃｙＲＩＩＢおよびＦｃｙＲＩＩＡからなる群から選択されるヒトＦｃγ受容体に結合する。抗体は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のバリアントであるヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含むことができ、ここで、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域がヒトＦｃγＲＩＩＢに結合するよりも高い親和性で、ヒトＦｃγＲＩＩＢに結合する。バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、バリアントヒトＩｇＧ１、バリアントヒトＩｇＧ２、またはバリアントヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域である。一実施形態において、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｇ２３６Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８ＦおよびＬ３２８Ｅ（ＥＵインデックス番号付けシステム）から選択される１つまたはそれ以上のアミノ酸変異を含む。別の実施形態において、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ；Ｐ２３８ＤおよびＬ３２８Ｅ；Ｐ２３８Ｄ、ならびにＥ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１ＧおよびＡ３３０Ｒからなる群から選択される１つまたはそれ以上の置換；Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１ＧおよびＡ３３０Ｒ；Ｇ２３６ＤおよびＳ２６７Ｅ； Ｓ２３９ＤおよびＳ２６７Ｅ；Ｖ２６２Ｅ、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ；ならびにＶ２６４Ｅ、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ（ＥＵインデックス番号付けシステム）からなる群から選択されるアミノ酸変異のセットを含む。ＣＤＣの増強は、古典的補体活性化カスケードの第１の構成要素であるＣ１ｑに対する親和性を増加させるアミノ酸変化によって達成することができる［２４］。別のアプローチは、Ｃ１ｑに対するＩｇＧ３のより高い親和性を活用するヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ３セグメントから作出されるキメラＦｃドメインを作出することである［２５］。本発明の抗体は、残基３２９、３３１および／または３２２に変異したアミノ酸を含めて、Ｃ１ｑ結合および／または低減もしくは無効化されたＣＤＣ活性を変更することができる。別の実施形態において、本明細書において開示される抗体または抗体断片は、残基２３１および２３９に変異を有するＦｃ領域を含有することができ、それによって、アミノ酸は、補体を固定する抗体の能力を変更するために置き換えられる。一実施形態において、抗体または断片は、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ４３０Ｇ、Ｒ３４４ＤおよびＤ３５６Ｒから選択される１つまたはそれ以上の変異、特に、Ｒ３４４ＤおよびＤ３５６Ｒを含む二重変異を含む定常領域を有する（ＥＵインデックス番号付けシステム）。
ＷＯ２００８／１３７９１５号は、増強されたエフェクター機能を有する改変Ｆｃ領域を有する抗ＩＣＯＳ抗体を記載した。この抗体は、ＶＨおよびＶＬドメインならびに野生型Ｆｃ領域を含む親抗体によって媒介されるＡＤＣＣ活性のレベルと比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を媒介することが報告された。本発明による抗体は、そこに記載されるエフェクター機能を有するそのようなバリアントＦｃ領域を用いることができる。
抗体のＡＤＣＣ活性は、ＷＯ２００８／１３７９１５号において開示されるアッセイなどのアッセイにおいて決定することができる。抗ＩＣＯＳ抗体のＡＤＣＣ活性は、米国特許第９，９５７，３２３号の実施例１０に記載されるように、ＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞株を使用して、インビトロで決定することができる。抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＡＤＣＣ活性は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞を使用するＡＤＣＣアッセイにおいて、インビトロで決定することができる。
ある特定の適用のために（ワクチン接種の状況においてなど）、Ｆｃエフェクター機能なしの抗体を使用することが好ましい。抗体は、定常領域なしまたはＦｃ領域なしで提供され、そのような抗体フォーマットの例は、本明細書の他の場所において記載される。あるいは、抗体は、エフェクターがゼロである定常領域を有することができる。抗体は、Ｆｃγ受容体に結合しない重鎖定常領域を有することができ、例えば、定常領域は、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ変異（すなわち、野生型ロイシン残基が、グルタミン酸残基に変異する）を含む。重鎖定常領域についての別の場合による変異は、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏであり、これは、安定性を増加させる。重鎖定常領域は、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ変異およびＳｅｒ２２８Ｐｒｏ変異の両方を含むＩｇＧ４であり得る。この「ＩｇＧ４－ＰＥ」重鎖定常領域は、エフェクターがゼロである。
代替的なエフェクターがゼロのヒト定常領域は、機能しないＩｇＧ１である。機能しないＩｇＧ１重鎖定常領域は、２３５および／または２３７位にアラニンを含有することができ（ＥＵインデックス番号付け）、例えば、これは、Ｌ２３５Ａおよび／またはＧ２３７Ａ変異（「ＬＡＧＡ」）を含むＩｇＧ１＊０１配列である。
バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＡまたはヒトＦｃγＲＩに対するＩｇＧの親和性を低減する１つまたはそれ以上のアミノ酸変異を含むことができる。一実施形態において、ＦｃγＲＩＩＢは、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、樹状細胞、内皮細胞および活性化Ｔ細胞からなる群から選択される細胞上で発現される。一実施形態において、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、以下のアミノ酸変異Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ２５６Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９ＴおよびＰ３９６Ｌ（ＥＵインデックス番号付けシステム）の１つまたはそれ以上を含む。一実施形態において、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９Ｄ；Ｔ２５６Ａ；Ｋ２９０Ａ；Ｓ２９８Ａ；Ｉ３３２Ｅ；Ｅ３３３Ａ；Ｋ３３４Ａ；Ａ３３９Ｔ；Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３ＡおよびＫ３３４Ａ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ；ならびにＦ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５ＩおよびＰ３９６Ｌ（ＥＵインデックス番号付けシステム）からなる群から選択されるアミノ酸変異のセットを含む。一実施形態において、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬまたはＩ３３２Ｅアミノ酸変異（ＥＵインデックス番号付けシステム）を含む。一実施形態において、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅアミノ酸変異（ＥＵインデックス番号付けシステム）を含む。一実施形態において、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅアミノ酸変異（ＥＵインデックス番号付けシステム）を含むバリアントヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である。一実施形態において、抗体または断片は、アフコシル化Ｆｃ領域を含む。別の実施形態において、抗体またはその断片は、脱フコシル化される。別の実施形態において、抗体または断片は、フコシル化下にある。
抗体は、細胞のエフェクター機能を誘導しない、すなわち、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたはＡＤＣＰ活性を媒介しないが、１つまたはそれ以上の種類のＦｃ受容体に結合する重鎖定常領域を有することができる。そのような定常領域は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたはＡＤＣＰ活性の引き金を引く原因となる特定のＦｃ受容体に結合することができない。
１．６．１０．抗体の作成および改変
抗体を特定および調製するための方法は周知である。抗体は、ＩＣＯＳもしくははその断片、または目的のＩＣＯＳ配列モチーフを含む合成ペプチドで免疫された、トランスジェニックマウス（例えば、Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）、Ｖｅｌｏｃｉｍｏｕｓｅ（登録商標）、Ｏｍｎｉｍｏｕｓｅ（登録商標）、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）、ＨｕＭａｂ Ｍｏｕｓｅ（登録商標）またはＭｅＭｏ Ｍｏｕｓｅ（登録商標））、ラット（例えば、Ｏｍｎｉｒａｔ（登録商標））、ラクダ、サメ、ウサギ、ニワトリまたは他の非ヒト動物を使用して作成され、それに続いて場合により、ヒト抗体またはヒト化抗体を生成するために定常領域および／または可変領域のヒト化を行う。ある例において、当業者に明らかであるように、酵母、ファージまたはリボソームディスプレイなどのディスプレイ技術を使用することができる。例えば、ディスプレイ技術を使用する、標準的な親和性成熟は、トランスジェニック動物、ファージディスプレイライブラリーまたは他のライブラリー由来の抗体リードの単離後に、さらなる工程において行うことができる。好適な技術の代表例は、ＵＳ２０１２００９３８１８号（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ）に記載されており、これは、その全体、例えば、段落［０３０９］～［０３４６］に示される方法が、参照によって本明細書に組み入れられる。
ヒトＩＣＯＳ抗原を有するＩＣＯＳノックアウト非ヒト動物の免疫化は、ヒトおよび非ヒトＩＣＯＳ両方を認識する抗体の作成を容易にする。本明細書において記載され、実施例において説明されるように、ＩＣＯＳノックアウトマウスは、ヒトＩＣＯＳを発現する細胞で免疫して、マウスにおいてヒトおよびマウスＩＣＯＳに対する抗体の生成を刺激することができ、これは、回収され、ヒトＩＣＯＳおよびマウスＩＣＯＳへの結合について試験される。このようにして、交差反応性抗体を選択することができ、これは、本明細書において記載される他の所望の性質についてスクリーニングすることができる。内因性抗原（例えば、内因性マウス抗原）の発現が動物においてノックアウトされている抗原を用いる動物の免疫化による、抗原（例えば、ヒト抗原）に対する抗体を作成する方法は、ヒト可変ドメインを含む抗体を作成することができる動物において行うことができる。そのような動物のゲノムは、ヒト可変領域遺伝子セグメント、および場合により内因性定常領域またはヒト定常領域をコードするヒトまたはヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含むように操作することができる。ヒト可変領域遺伝子セグメントの組み換えは、ヒト抗体を生じ、これは、非ヒトまたはヒト定常領域のいずれかを有する。抗体がヒトにおけるインビボ使用のために意図される場合、非ヒト定常領域は、その後、ヒト定常領域によって置き換えられる。そのような方法およびノックアウトトランスジェニック動物は、ＷＯ２０１３／０６１０７８号に記載されている。
一般に、Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）または他のマウスもしくはラット（場合により、述べられたＩＣＯＳノックアウトマウスまたはラット）を、目的の抗原で負荷することができ、リンパ細胞（Ｂ細胞など）は、抗体を発現するマウスから回収される。リンパ細胞は、骨髄腫細胞株と融合されて、不死化ハイブリドーマ細胞株を調製することができ、そのようなハイブリドーマ細胞株は、目的の抗原に特異的な抗体を生成するハイブリドーマ細胞株を特定するためにスクリーニングおよび選択される。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを、単離し、重鎖および軽鎖の所望のアイソタイプの定常領域に連結することができる。そのような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞などの細胞中で生成させることができる。あるいは、軽鎖および重鎖の抗原特異的キメラ抗体または可変ドメインをコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
最初に、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高親和性のキメラ抗体が単離される。抗体は、親和性、選択性、アゴニズム、Ｔ細胞依存性死滅、中和効力、エピトープなどを含む所望の特徴について特徴付けされ、選択される。マウス定常領域は、場合により所望のヒト定常領域と置き換えられて、本発明の完全なヒト抗体、例えば、野生型または改変ＩｇＧ１またはＩｇＧ４（例えば、ＵＳ２０１１／００６５９０２号（その全体が参照によって本明細書に組み入れられる）の配列番号７５１、７５２、７５３）が作成される。選択された定常領域は特定の使用に従って変わるので、高親和性の抗原結合および標的特異性は、可変領域における残基を特徴付ける。
そのため、さらなる態様において、本発明は、ヒトまたはヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、哺乳動物がＩＣＯＳを発現しない、トランスジェニック非ヒト哺乳動物を提供する。哺乳動物は、例えば、ノックアウトマウスもしくはラット、または他の実験動物種である。Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）などのトランスジェニックマウスは、対応する内因性マウス免疫グロブリン遺伝子座で挿入されたヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含有する。本発明によるトランスジェニック哺乳動物は、そのような標的化挿入を含有するものであり、あるいはそのゲノムにランダムに挿入されるか、内因性Ｉｇ遺伝子座以外の遺伝子座で挿入されるか、または追加の染色体もしくは染色体断片上に提供される、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子座または免疫グロブリン遺伝子を含有することができる。
本発明のさらなる態様は、ＩＣＯＳに対する抗体を生成するためのそのような非ヒト哺乳動物の使用、ならびにそのような哺乳動物における抗体、または抗体の重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメインを生成する方法である。
ヒトおよび非ヒトＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する抗体を生成する方法は、哺乳動物がＩＣＯＳを発現しないヒトまたはヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物を準備すること、ならびに
（ａ）哺乳動物を、ヒトＩＣＯＳ抗原で（例えば、ヒトＩＣＯＳを発現する細胞で、または精製組換えＩＣＯＳタンパク質で）免疫化すること；
（ｂ）哺乳動物によって作成された抗体を単離すること；
（ｃ）ヒトＩＣＯＳおよび非ヒトＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験すること；ならびに
（ｄ）ヒトおよび非ヒトＩＣＯＳの両方に結合する１つまたはそれ以上の抗体を選択することを含むことができる。
ヒトＩＣＯＳおよび非ヒトＩＣＯＳに結合する能力についての試験は、表面プラズモン共鳴、ＨＴＲＦ、ＦＡＣＳまたは本明細書において記載される任意の他の方法を使用して行うことができる。場合により、ヒトおよびマウスＩＣＯＳに対する結合親和性が決定される。ヒトＩＣＯＳおよびマウスＩＣＯＳへの結合の親和性、または親和性の倍数の差を決定することができ、交差反応性の種を提示する抗体はこのようにして選択される（選択基準として使用される親和性の閾値および倍数の差は本明細書の他の場所において例示される）。それぞれヒトおよびマウスＩＣＯＳ受容体へのヒトおよびマウスＩＣＯＳリガンド結合を阻害するための抗体の中和効力、または中和効力の倍数の差は、例えば、ＨＴＲＦアッセイにおいて、交差反応性抗体についてスクリーニングする方法として、代替的に決定することもできる。再び、選択基準として使用される可能性がある閾値および倍数の差は、本明細書の他の場所において例示される。
方法は、免疫された哺乳動物と同じ種由来または異なる種由来の非ヒトＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験することを含むことができる。そのため、トランスジェニック哺乳動物がマウス（例えば、Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標））である場合、抗体は、マウスＩＣＯＳに結合する能力について試験される。トランスジェニック哺乳動物がラットである場合、抗体は、ラットＩＣＯＳに結合する能力について試験される。しかしながら、これは、別の種の非ヒトＩＣＯＳに対する単離された抗体の交差反応性を決定するために同様に有用である。そのため、ヤギにおいて作成された抗体は、ラットまたはマウスＩＣＯＳへの結合について試験することができる。場合により、ヤギＩＣＯＳへの結合は、代わりにまたはそれに加えて、決定することができる。
他の実施形態において、トランスジェニック非ヒト哺乳動物は、ヒトＩＣＯＳの代わりに、非ヒトＩＣＯＳ、場合により同じ哺乳動物種のＩＣＯＳで免疫される（例えば、ＩＣＯＳノックアウトマウスは、マウスＩＣＯＳで免疫される）。次いで、ヒトＩＣＯＳおよび非ヒトＩＣＯＳへの結合に対する単離された抗体の親和性は、同じ方法で決定され、ヒトおよび非ヒトＩＣＯＳの両方に結合する抗体が選択される。
選択された抗体の抗体重鎖可変ドメインおよび／または抗体軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、単離することができる。そのような核酸は、全抗体重鎖および／もしくは軽鎖、または関連する定常領域なしの可変ドメインをコードする。述べたように、コードヌクレオチド配列は、マウスの抗体生成細胞から直接得ることができ、またはＢ細胞は、不死化または融合されて、抗体を発現するハイブリドーマ、およびそのような細胞から得られるコード核酸を作成することができる。場合により、可変領域をコードする核酸は、次いで、ヒト重鎖定常領域および／またはヒト軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列にコンジュゲートされて、ヒト抗体重鎖および／またはヒト抗体軽鎖をコードする核酸、例えば、重鎖および軽鎖の両方を含む抗体をコードする核酸を提供する。本明細書の他の場所において記載されるように、この工程は、免疫された哺乳動物が非ヒト定常領域を有するキメラ抗体を生成する場合に特に有用であり、これは、好ましくは、ヒト定常領域と置き換えられて、医薬としてヒトに投与された場合に、より少ない免疫原性である抗体を生じる。特定のヒトアイソタイプ定常領域の提供も、抗体のエフェクター機能を決定するために重要であり、好適な重鎖定常領域の数が本明細書において議論される。
本明細書において記載されるように、抗体の重鎖および／または軽鎖可変ドメインをコードする核酸に対する他の変更、例えば、残基の変異およびバリアントの作成を行うことができる。
単離された（場合により、変異された）核酸は、議論されたように、宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞に導入される。次いで、宿主細胞は、任意の所望の抗体フォーマットの抗体または抗体の重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメインの発現のための条件下で培養される。一部の可能な抗体フォーマット、例えば、免疫グロブリン全体、抗原結合性断片および他の設計は、本明細書において記載される。
その配列が本明細書において具体的に開示されるＶＨおよびＶＬドメインまたはＣＤＲのいずれかの可変ドメインのアミノ酸配列バリアントは、議論されるように、本発明に従って用いることができる。
バリアントを作出することがなぜ望ましいかの多くの理由が存在し、これは、大スケール製造のために抗体配列を改善すること、精製を容易にすること、安定性を増強すること、または所望の医薬製剤における包含のために好適性を改善することを含む。タンパク質を操作する作業は、例えば、あるアミノ酸を代替のアミノ酸で置換するため（場合により、ＣｙｓおよびＭｅｔの可能な排除とともに、この位置にすべての天然に存在するアミノ酸を含有するバリアントを作成する）、ならびに機能および発現に対する影響をモニターして、最良の置換を決定するために、抗体配列中の１つまたはそれ以上の標的残基で行うことができる。一部の例において、例えば、新たな分子内または分子間のシステイン－システイン結合の形成により、製造に困難が生じるので、ＣｙｓもしくはＭｅｔで残基を置換すること、またはこれらの残基を配列に導入することは望ましくない。リード候補が選択され、製造および臨床開発のために変更される場合、一般に、その抗原結合性質の変化を可能な限り少なくすること、または少なくとも親分子の親和性および効力を保持することが望ましい。しかしながら、バリアントはまた、親和性、交差反応性または中和効力などの重要な抗体の特徴をモジュレートするために、作成される。
抗体は、Ｈおよび／またはＬ ＣＤＲの開示されるセット内に１つまたはそれ以上のアミノ酸変異を有する開示される抗体のいずれかのＨおよび／またはＬ ＣＤＲのセットを含むことができる。変異は、アミノ酸の置換、欠失または挿入である。そのため、例えば、Ｈおよび／またはＬ ＣＤＲの開示されるセット内に１つまたはそれ以上のアミノ酸置換が存在する。例えば、Ｈおよび／またはＬ ＣＤＲのセット内に最大で１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３または２つの変異、例えば、置換が存在する。例えば、ＨＣＤＲ３中に最大で６、５、４、３もしくは２つの変異、例えば、置換が存在し、および／またはＬＣＤＲ３中に最大で６、５、４、３もしくは２つの変異、例えば、置換が存在する。抗体は、本明細書における任意のＳＴＩＭ抗体について示される、ＨＣＤＲ、ＬＣＤＲのセット、もしくは６つの（ＨおよびＬ）ＣＤＲのセットを含むことができ、または１つもしくは２つの保存的置換を伴うＣＤＲのセットを含むことができる。
１つまたはそれ以上のアミノ酸変異は、場合により、本明細書において開示される抗体のＶＨまたはＶＬドメインのフレームワーク領域において行われる。例えば、対応するヒト生殖細胞系列セグメント配列とは異なる１つまたはそれ以上の残基が、生殖細胞系列に復帰される。抗ＩＣＯＳ抗体の例のＶＨおよびＶＬドメインに対応するヒト生殖細胞系列遺伝子セグメント配列を、表Ｅ１２－１、表Ｅ１２－２および表Ｅ１２－３に示し、抗体のＶＨおよびＶＬドメインの対応する生殖細胞系列配列とのアライメントを図面に示す。
抗体は、添付の配列表に示される抗体のいずれかのＶＨドメインと少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、９５、９８もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＨドメインを含むことができ、および／またはその抗体のいずれかのＶＬドメインと少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、９５、９８もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＬドメインを含む。２つのアミノ酸配列の同一性％を計算するために使用することができるアルゴリズムとしては、例えば、デフォルトパラメーターを用いる、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡまたはＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムが挙げられる。特定のバリアントは、１つまたはそれ以上のアミノ酸の変更（アミノ酸残基の付加、欠失、置換および／または挿入）を含むことができる。
変更は、１つもしくはそれ以上のフレームワーク領域および／または１つもしくはそれ以上のＣＤＲにおいて行うことができる。バリアントは、場合により、ＣＤＲ変異誘発によって提供される。変更は、通常、機能消失をもたらさず、その結果、このように変更されたアミノ酸配列を含む抗体は、ＩＣＯＳに結合する能力を保持する。これは、例えば、本明細書において記載されるアッセイにおいて測定されるように、変更が行われていない抗体と同じ量的結合能力を保持する。このように変更されたアミノ酸を含む抗体は、ＩＣＯＳに結合する改善された能力を有する。
変更は、１つもしくはそれ以上のアミノ酸残基を天然に存在しないもしくは非標準アミノ酸で置き換えること、１つもしくはそれ以上のアミノ酸残基を天然に存在しないもしくは非標準形態に改変すること、または１つもしくはそれ以上の天然に存在しないもしくは非標準アミノ酸を配列に挿入することを含む。本発明の配列における変更の数および場所の例は、本明細書の他の場所において記載される。天然に存在するアミノ酸としては、それらの標準的な１文字コードによって、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｃ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、Ｅと特定される、２０の「標準」Ｌ－アミノ酸が挙げられる。非標準アミノ酸としては、ポリペプチド骨格に導入されるか、または既存のアミノ酸残基の改変から生じる、任意の他の残基が挙げられる。非標準アミノ酸は、天然に存在するか、または天然に存在しない。
「バリアント」という用語は、本明細書において使用される場合、１つまたはそれ以上のアミノ酸または核酸の欠失、置換または付加によって親ポリペプチドまたは核酸と異なるが、親分子の１つまたはそれ以上の特異的機能または生物学的活性を依然として保持する、ペプチドまたは核酸を指す。アミノ酸置換は、アミノ酸が異なる天然に存在するアミノ酸残基で置き換えられる変更を含む。そのような置換は、「保存的」として分類され、その場合において、ポリペプチドに含有されるアミノ酸残基は、極性、側鎖官能性またはサイズに関してのいずれかで、類似の特徴の別の天然に存在するアミノ酸で置き換えられる。そのような保存的置換は、当技術分野において周知である。本発明に包含される置換は、「非保存的」でもあり、ここで、ペプチドに存在するアミノ酸残基は、異なる性質を有するアミノ酸、例えば、異なる群由来の天然に存在するアミノ酸で置換されるか（例えば、荷電アミノ酸または疎水性アミノ酸をアラニンで置換する）、または代替的に、天然に存在するアミノ酸は、非従来型アミノ酸で置換される。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、保存的である。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに関して使用される場合、それぞれ、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと比較して（例えば、野生型ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと比較して）、一次、二次または三次構造において変化することができるポリヌクレオチドまたはポリペプチドを指すものもバリアントという用語内に包含される。
一部の態様において、当技術分野において周知の方法を使用して単離または作成された、「合成バリアント」、「組換えバリアント」または「化学的に改変された」ポリヌクレオチドバリアントもしくはポリペプチドバリアントを使用することができる。「改変バリアント」は、下記に記載されるように、保存的または非保存的アミノ酸変化を含むことができる。ポリヌクレオチドの変化は、参照配列によってコードされるポリペプチドにおいて、アミノ酸の置換、付加、欠失、融合およびトランケーションをもたらす。一部の態様の使用は、挿入バリアント、欠失バリアント、またはアミノ酸の置換を有する置換バリアントを含み、バリアントの基礎であるペプチド配列中に通常存在しないアミノ酸および他の分子の挿入および置換、例えば、限定されるものではないが、ヒトタンパク質中に通常存在しないオルニチンの挿入を含む。「保存的置換」という用語は、ポリペプチドを記載する場合、ポリペプチドの活性を実質的に変更しないポリペプチドのアミノ酸組成の変化を指す。例えば、保存的置換は、アミノ酸残基を、類似する化学的性質（例えば、酸性、塩基性、正もしくは負に荷電、極性または非極性など）を有する異なるアミノ酸残基と置換することを指す。保存的アミノ酸置換としては、ロイシンとイソロイシンまたはバリン、アスパラギン酸とグルタミン酸、またはトレオニンとセリンの置き換えが挙げられる。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野において周知である。例えば、以下の６つの群は、互いについて保存的置換であるアミノ酸をそれぞれ含有する：１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；および６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）（その全体が参照によって組み入れられるＣｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８４）も参照されたい）。一部の実施形態において、単一のアミノ酸または小パーセンテージのアミノ酸を変更、付加または欠失する個々の置換、欠失または付加も、その変化がペプチドの活性を低減しない場合、「保存的置換」と考えることができる。挿入または欠失は、典型的には、約１～５アミノ酸の範囲である。保存アミノ酸の選択は、ペプチド中の置換されるアミノ酸の場所、例えば、アミノ酸がペプチドの外側にあり、溶媒に露出しているか、または内側にあり、溶媒に露出していないかに基づいて選択することができる。
溶媒へのその露出を含む、存在するアミノ酸の場所（すなわち、アミノ酸が、溶媒に露出しているか、溶媒に露出していない内部に局在化したアミノ酸と比較して、ペプチドまたはポリペプチドの外面上に存在するか）に基づいて、存在するアミノ酸を置換するアミノ酸を選択することができる。そのような保存的アミノ酸置換の選択は、例えば、Ｄｏｒｄｏら、Ｊ．ＭｏＩ Ｂｉｏｌ、１９９９、２１７、７２１～７３９頁ならびにＴａｙｌｏｒら、Ｊ．Ｔｈｅｏｒ．Ｂｉｏｌ．１１９（１９８６）；２０５～２１８頁ならびにＳ．ＦｒｅｎｃｈおよびＢ．Ｒｏｂｓｏｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．１９（１９８３）１７１頁において開示されるように、当技術分野において周知である。したがって、タンパク質またはペプチドの外側におけるアミノ酸（すなわち、溶媒に露出するアミノ酸）に好適な保存的アミノ酸置換を選択することができ、例えば、限定されるものではないが、以下の置換を使用することができる：ＹとＦ、ＴとＳまたはＫ、ＰとＡ、ＥとＤまたはＱ、ＮとＤまたはＧ、ＲとＫ、ＧとＮまたはＡ、ＴとＳまたはＫ、ＤとＮまたはＥ、ＩとＬまたはＶ、ＦとＹ、ＳとＴまたはＡ、ＲとＫ、ＧとＮまたはＡ、ＫとＲ、ＡとＳ、ＫまたはＰの置換。
代替の実施形態において、タンパク質またはペプチドの内側におけるアミノ酸に好適に包含される保存的アミノ酸置換を選択することもでき、例えば、タンパク質またはペプチドの内側にある（すなわち、アミノ酸は溶媒に露出されない）アミノ酸に好適な保存的置換を使用することができ、例えば、限定されるものではないが、以下の保存的置換を使用することができる：ＹがＦと、ＴがＡまたはＳと、ＩがＬまたはＶと、ＷがＹと、ＭがＬと、ＮがＤと、ＧがＡと、ＴがＡまたはＳと、ＤがＮと、ＩがＬまたはＶと、ＦがＹまたはＬと、ＳがＡまたはＴと、およびＡがＳ、Ｇ、ＴまたはＶと置換される場合。一部の実施形態において、非保存的アミノ酸置換はまた、バリアントの用語内に包含される。
本発明は、添付の配列表に示される抗体のＶＨおよび／またはＶＬドメインのＶＨおよび／またはＶＬドメインバリアントを含有する抗体を生成する方法を含む。そのような抗体は、
（ｉ）親抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つまたはそれ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換または挿入を経由して、親抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列バリアントである抗体のＶＨドメインを準備することであって、
ここで、親抗体のＶＨドメインが、抗体ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８およびＳＴＩＭ００９のいずれかのＶＨドメイン、またはそれらの抗体のいずれかの重鎖相補性決定領域を含むＶＨドメインであること、
（ｉｉ）場合により、このようにして提供されたＶＨドメインをＶＬドメインと組み合わせて、ＶＨ／ＶＬの組み合わせを提供すること、ならびに
（ｉｉｉ）このようにして提供されたＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬドメインの組み合わせを試験して、１つまたはそれ以上の所望の特徴を有する抗体を特定すること
を含む方法によって生成される。
所望の特徴としては、ヒトＩＣＯＳへの結合、マウスＩＣＯＳへの結合、およびカニクイザルＩＣＯＳなどの他の非ヒトＩＣＯＳへの結合が挙げられる。ヒトおよび／またはマウスＩＣＯＳに対する同等のまたはより高い親和性を有する抗体を特定することができる。他の所望の特徴としては、エフェクターＴ細胞機能を、免疫抑制性Ｔｒｅｇの枯渇を介して間接的に、またはＴエフェクター細胞におけるＩＣＯＳシグナル伝達の活性化を介して直接的に増加させることが挙げられる。所望の特徴を有する抗体を特定することには、その親和性、交差反応性、特異性、ＩＣＯＳ受容体アゴニズム、中和効力および／またはＴ細胞依存性死滅の促進などの本明細書において記載される機能的特質を有する抗体を特定することを含み、そのいずれかは、本明細書において記載されるアッセイにおいて決定することができる。
ＶＬドメインが方法に含まれる場合、ＶＬドメインは、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８もしくはＳＴＩＭ００９のいずれかのＶＬドメインであるか、または親ＶＬドメインのアミノ酸配列中の１つまたはそれ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換または挿入を経由して提供されるバリアントであり、ここで、親ＶＬドメインは、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２－Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８およびＳＴＩＭ００９のいずれかのＶＬドメイン、またはそれらの抗体のいずれかの軽鎖相補性決定領域を含むＶＬドメインである。
バリアント抗体を作成する方法は、場合により、抗体またはＶＨ／ＶＬドメインの組み合わせのコピーを生成することを含む。方法は、得られる抗体を発現させることをさらに含むことができる。場合により、１つまたはそれ以上の発現ベクター中に、所望の抗体のＶＨおよび／またはＶＬドメインに対応するヌクレオチド配列を生成することが可能である。宿主細胞における組換え発現を含む発現の好適な方法は、本明細書において詳細に示される。
１．６．１１．コード核酸および発現の方法
単離された核酸は、本発明によるコード抗体を提供することができる。核酸は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡである。合成起源のゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡ、またはその任意の組み合わせは、抗体をコードすることができる。
本発明は、上記の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、プラスミド、ベクター、転写物または発現カセットの形態の構築物を提供する。例示的なヌクレオチド配列は、配列表に含まれる。本明細書において示されるヌクレオチド配列への言及は、文脈が他を必要としない限り、規定される配列を有するＤＮＡ分子を包含し、ＵがＴで置換された規定される配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
本発明は、抗体をコードする１つまたはそれ以上の核酸を含む組換え宿主細胞も提供する。コードされる抗体を生成する方法は、例えば、核酸を含有する組換え宿主細胞を培養することによる、核酸からの発現を含む。抗体は、このようにして得られ、任意の好適な技法を使用して単離および／または精製され、次いで、必要に応じて使用される。生成の方法は、薬学的に許容される賦形剤などの少なくとも１つの追加の構成要素を含む組成物に生成物を製剤化することを含むことができる。
各種の異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニングおよび発現のための系は周知である。好適な宿主細胞としては、細菌、哺乳動物細胞、植物細胞、糸状菌、酵母およびバキュロウイルス系、ならびにトランスジェニック植物および動物が挙げられる。
原核細胞における抗体および抗体断片の発現は、当技術分野において十分に確立されている。一般的な細菌宿主は、大腸菌である。培養中の真核生物における発現も、生成のための選択肢として当業者に利用可能である。異種ポリペプチドの発現のために当技術分野において利用可能な哺乳動物細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎細胞、ＮＳＯマウス黒色腫細胞、ＹＢ２／０ラット骨髄腫細胞、ヒト胎児腎細胞、ヒト胎児網膜細胞などが挙げられる。
ベクターは、プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および必要に応じて他の配列を含む、適切な調節配列を含有することができる。抗体をコードする核酸は、宿主細胞に導入することができる。核酸は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス、例えば、ワクシニア、または昆虫細胞についてバキュロウイルスを使用する形質導入を含むさまざまな方法によって、真核細胞に導入することができる。宿主細胞、特に、真核細胞における核酸の導入は、ウイルスまたはプラスミドに基づく系を使用することができる。プラスミド系は、エピソーム的に維持されるか、または宿主細胞にもしくは人工染色体に組み込まれる。組み込みは、単一または複数の遺伝子座で、１つもしくはそれ以上のコピーのランダムまたは標的化組み込みのいずれかによってである。細菌細胞について、好適な技術としては、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを使用するトランスフェクションが挙げられる。導入に、例えば、遺伝子の発現のための条件下で宿主細胞を培養することにより、核酸を発現させること、次いで場合により、抗体を単離または精製することが続く。
本発明の核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）に組み込まれる。組み込みは、標準的な技法に従って、ゲノムとの組換えを促進する配列の包含によって促進することができる。
本発明は、抗体を発現させるために、発現系において、本明細書において記載される核酸を使用することを含む方法も提供する。
１．６．１２．治療的使用
本明細書において記載される抗体（例えば、全長抗体またはその抗原結合性断片）は、療法によるヒトまたは動物の身体の処置の方法において使用することができる。抗体は、エフェクターＴ細胞応答を増加させる使用が見出され、これは、がんまたは固形腫瘍を処置することを含むある範囲の疾患または状態のために、およびワクチン接種の状況において、利益をもたらすものである。増加したＴｅｆｆ応答は、Ｔｅｆｆ活性に有利になるようにＴｅｆｆとＴｒｅｇとの間のバランスまたは比をモジュレートする抗体を使用して達成することができる。
抗ＩＣＯＳ抗体は、患者における調節性Ｔ細胞を枯渇させるためおよび／またはエフェクターＴ細胞応答を増加させるために使用することができ、患者に投与されて、調節性Ｔ細胞を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置することができる。
本発明の抗体、またはそのような抗体分子もしくはそのコード核酸を含む組成物は、任意のそのような方法における使用のために使用または提供される。任意のそのような方法における使用のための医薬の製造のための、抗体、またはそれもしくはそのコード核酸を含む組成物の使用も想定される。方法は、典型的には、抗体または組成物を哺乳動物に投与することを含む。好適な製剤および投与の方法は、本明細書の他の場所において記載される。
抗体の治療的使用ががんの処置であることも想定される。がんは、固形腫瘍、例えば、腎細胞がん（場合により、腎細胞癌、例えば、明細胞腎細胞癌）、頭頸部がん、黒色腫（場合により、悪性黒色腫）、非小細胞肺がん（例えば、腺癌）、膀胱がん、卵巣がん、子宮頸がん、胃がん、肝臓がん、膵臓がん、乳がん、精巣胚細胞癌、もしくはリストされたものなどの固形腫瘍の転移であるか、またはこれは、液状の血液学的腫瘍、例えば、リンパ腫（ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＤＬＢＣＬなど）もしくは白血病（例えば、急性骨髄性白血病）である。抗ＩＣＯＳ抗体は、黒色腫、頭頸部がんおよび非小細胞肺がん、ならびに中～高の変異負荷を有する他のがんにおける腫瘍排出を増強することができる［２６］。一部の実施形態において、がんは、乳がんである。一部の実施形態において、がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態において、がんは、頭頸部扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態において、がんは、陰茎がんである。一部の実施形態において、がんは、膵臓がんである。一部の実施形態において、がんは、非小細胞肺がんである。一部の実施形態において、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態において、がんは、食道がんである。一部の実施形態において、がんは、胃がんである。一部の実施形態において、がんは、黒色腫である。一部の実施形態において、がんは、腎細胞癌である。一部の実施形態において、がんは、子宮頸がんである。一部の実施形態において、がんは、進行性がんである。一部の実施形態において、がんは、転移性がんである。
一部の実施形態において、１用量またはそれ以上の用量の抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片による処置は、部分的な抗腫瘍応答をもたらす。一部の実施形態において、１用量またはそれ以上の用量の抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片による処置は、完全な抗腫瘍応答をもたらす。一部の実施形態において、１用量またはそれ以上の用量の抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片および１用量またはそれ以上の用量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片による処置は、部分的な抗腫瘍応答をもたらす。一部の実施形態において、１用量またはそれ以上の用量の抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片および１用量またはそれ以上の用量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片による処置は、完全な抗腫瘍応答をもたらす。
一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、ＫＹ１０４４のＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、ＫＹ１０４４のＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を含む。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、ＫＹ１０４４の重鎖および軽鎖配列を含む。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４である。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態において、ＫＹ１０４４による処置は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ）の有効性を促進する。
患者の新生物病変に対する患者の免疫応答を増強することによって、抗ＩＣＯＳ抗体を使用する免疫療法は、潜在的には末期疾患の状況においてさえ、永続的な治癒または長期の寛解の見込みを提供する。
がんは、疾患の多様な群であるが、抗ＩＣＯＳ抗体は、患者自身の免疫系を活用することによってある範囲の異なるがんを処置する可能性を提供し、これは、がん細胞を正常組織から識別する変異または過剰発現したエピトープの認識により、任意のがん細胞を死滅させる可能性を有する。Ｔｅｆｆ／Ｔｒｅｇバランスをモジュレートすることによって、抗ＩＣＯＳ抗体は、がん細胞の免疫認識および死滅を可能にするか、および／またはそれを促進することができる。したがって、抗ＩＣＯＳ抗体は、多種多様ながんのための有用な治療剤であるが、抗ＩＣＯＳ療法が特に適している、および／または他の治療剤が効果的でない場合に抗ＩＣＯＳ療法が効果的である、特定のカテゴリーのがんが存在する。
１つのそのような群は、ＩＣＯＳリガンドの発現について陽性であるがんである。がん細胞は、黒色腫について記載されているように［２７］、ＩＣＯＳリガンドの発現を獲得することができる。ＩＣＯＳリガンドの発現は、表面で発現したリガンドがＴｒｅｇ上のＩＣＯＳに結合し、Ｔｒｅｇの拡大および活性化を促進し、それによって、がんに対する免疫応答を抑制するするので、選択的な利点を有する細胞を提供する。ＩＣＯＳリガンドを発現するがん細胞は、それらの生存のために、Ｔｒｅｇによる免疫系のこの抑制に依存し、したがって、Ｔｒｅｇを標的にする抗ＩＣＯＳ抗体による処置に脆弱であろう。これは、ＩＣＯＳリガンドを天然に発現する細胞に由来するがんにも適用される。これらの細胞によるＩＣＯＳリガンドの継続的な発現は、再び、免疫抑制による生存優位性を提供する。ＩＣＯＳリガンドを発現するがんは、Ｂ細胞、樹状細胞および単球などの抗原提示細胞に由来し、本明細書において挙げられたものなどの液状の血液学的腫瘍である。興味深いことに、これらの種類のがんもＩＣＯＳおよびＦＯＸＰ３発現が高いことが示されている（ＴＣＧＡデータ）－実施例６を参照されたい。本明細書における実施例１は、ＩＣＯＳリガンドを発現する癌性Ｂ細胞（Ａ２０同系細胞）に由来する腫瘍の処置における例示的な抗ＩＣＯＳ抗体の有効性を実証する。
したがって、抗ＩＣＯＳ抗体は、ＩＣＯＳリガンドの発現について陽性であるがんを処置する方法において使用することができる。さらに、本発明による抗ＩＣＯＳ抗体で処置されるがんは、ＩＣＯＳおよび／またはＦＯＸＰ３の発現について陽性であり、場合によりＩＣＯＳリガンドも発現するがんである。
患者は、例えば、試験試料（例えば、腫瘍生検）を患者から取り、目的のタンパク質の発現を決定することによって、それらのがんが、目的のタンパク質（例えば、ＩＣＯＳリガンド、ＩＣＯＳおよび／またはＦＯＸＰ３）の発現について陽性であるかどうかを決定する試験を受けることができる。がんがそのような目的のタンパク質の１つ、２つまたはすべての発現について陽性として特徴付けられた患者は、抗ＩＣＯＳ抗体による処置のために選択される。本明細書の他の場所において議論されるように、抗ＩＣＯＳ抗体は、単剤療法として、または１つもしくはそれ以上の他の治療剤と組み合わせて使用することができる。
抗ＩＣＯＳ抗体はまた、がんがＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲまたはＣＤ７３などの免疫チェックポイント分子に対する抗体または他の薬物による処置に不応性である患者に希望を提供する。これらの免疫療法は、一部のがんに対して有効であるが、一部の場合において、がんは応答せず、抗体による継続的な処置に応答しなくなる。免疫チェックポイント阻害剤に対する抗体と共通して、抗ＩＣＯＳ抗体は、患者の免疫系をモジュレートするが、それにもかかわらず、抗ＩＣＯＳ抗体は、そのような他の抗体が失敗する場合に、成功する。Ａ２０ Ｂ細胞リンパ腫を持つ動物は、抗ＩＣＯＳ抗体で処置されて、腫瘍の成長が低減され、腫瘍が縮小し、実際に身体から腫瘍が除去されたが、抗ＰＤ－Ｌ１抗体による処置は、対照よりも良好ではなかったことが本明細書において示されている。Ａ２０細胞株は、抗ＣＴＬＡ－４に対して抵抗性であることも報告されている［２８］。
したがって、抗ＩＣＯＳ抗体は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＧＩＴＲ抗体または抗ＣＤ７３抗体（のいずれかまたはすべて）などの１つまたはそれ以上の免疫療法による処置に不応性であるがんを処置する方法において使用することができる。がんは、その抗体または薬物による処置ががんの成長を有意に低減しない場合に、例えば、腫瘍が成長し続けるか、もしくはサイズが低減されない場合に、または応答期間後に腫瘍がその成長を再開する場合に、抗体または他の薬物による処置に不応性であると特徴付けられる。治療剤に対する応答なしは、がん細胞の死滅もしくは成長阻害について試料（例えば、腫瘍生検試料）を試験することによってエクスビボで、および／または療法で処置された患者が処置に応答していないことを観察することによって（例えば、ＭＲＩを含むイメージング技術を使用して）臨床状況において、決定される。がんがそのような免疫療法による処置に対して不応性として特徴付けられた患者は、抗ＩＣＯＳ抗体による処置のために選択される。
さらに、抗ＩＣＯＳ抗体は、抗ＣＤ２０抗体による処置に対して抵抗性であるＢ細胞由来がんを処置するために使用することができる。抗ＩＣＯＳ抗体は、リツキシマブのような抗ＣＤ２０抗体による療法に応答しなかったか、またはそれに対して抵抗性になったがんのための処置を示す。抗ＩＣＯＳ抗体は、そのようながんのためのセカンドライン（またはさらに、または加えて）処置として使用することができる。抗ＣＤ２０抗体抵抗性がんは、Ｂ細胞がん、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫などのＢ細胞リンパ腫である。抗ＣＤ２０に対するがんの抵抗性は、抗ＣＤ２０抗体によるがん細胞の死滅もしくは成長阻害について試料（例えば、腫瘍生検試料）を試験することによってエクスビボで、および／または抗ＣＤ２０抗体で処置された患者が処置に応答していないことを観察することによって臨床状況において、決定することができる。あるいは、または加えて、がん（例えば、腫瘍生検試料）は、ＣＤ２０の発現を評価するために試験することができ、ここで、ＣＤ２０発現の非存在または低レベルは、抗ＣＤ２０抗体に対する感受性の喪失を示す。
患者から得られた試料は、このようにして試験されて、目的のタンパク質、例えば、ＩＣＯＳリガンド、ＩＣＯＳ、ＦＯＸＰ３および／または別の治療剤（例えば、抗受容体抗体）が対象とする標的受容体の表面発現が決定することができる。標的受容体は、ＣＤ２０（リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体療法が対象とする）、またはＰＤ１、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２もしくはＨＥＲ３などの別の受容体である。ＩＣＯＳリガンド、ＩＣＯＳ、ＦＯＸＰ３の表面発現および／または標的受容体の表面発現の欠如若しくは喪失は、がんが抗ＩＣＯＳ抗体療法に感受性である指標である。抗ＩＣＯＳ抗体は、がんが、ＩＣＯＳリガンド、ＩＣＯＳ、ＦＯＸＰ３の表面発現および／または標的受容体の表面発現の欠如若しくは喪失によって特徴付けられる、患者への投与を提供することができ、ここで場合により、患者は、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１、抗ＰＤ－Ｌ１、または標的受容体に対する抗体により以前に処置されており、例えば、継続的なまたは再開されたがん細胞成長、例えば、腫瘍サイズの増加によって測定されるように、その抗体による処置に応答しないか、または応答を停止している。
任意の好適な方法を用いて、がん細胞試験が、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ２０または本明細書において挙げられた他の標的受容体などのタンパク質の表面発現に対して陽性であるかどうかを決定することができる。典型的な方法は、免疫組織化学的検査であり、ここで、細胞の試料（例えば、腫瘍生検試料）を、目的のタンパク質に対する抗体と接触させ、抗体の結合は、標識試薬、典型的には、第１の抗体のＦｃ領域を認識し、蛍光マーカーなどの検出可能な標識を持つ二次抗体を使用して、検出される。試料は、細胞染色または他の標識の検出によって視覚化されるように、少なくとも５％の細胞が標識されている場合、試験に陽性であると言明される。場合により、１０％または２５％などのより高いカットオフを使用することができる。抗体は、一般に、過剰に使用される。目的の分子に対する試薬抗体は、入手可能であるか、または直接的方法によって作成することができる。ＩＣＯＳリガンドについて試験するために、抗体ＭＡＢ１６５１は、現在、ヒトＩＣＯＳリガンドを認識するマウスＩｇＧとして、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能である。ＣＤ２０発現について試験するために、リツキシマブを使用することができる。ＩＣＯＳリガンドまたは目的の標的受容体のｍＲＮＡレベルの検出は、代替技法である［２７］。
腫瘍が抗ＩＣＯＳ抗体による処置に応答することのさらなる指標は、腫瘍微小環境におけるＴｒｅｇの存在である。活性化されたＴｒｅｇは、ＩＣＯＳ高およびＦｏｘｐ３高の表面発現によって特徴付けられる。腫瘍におけるＴｒｅｇの存在、特に、数の上昇は、どの患者が抗ＩＣＯＳ抗体による処置のために選択されるかのさらなる基礎を提供する。Ｔｒｅｇは、腫瘍生検試料においてエクスビボで、例えば、免疫組織化学的検査（上記で記載されたように、標的タンパク質に対する抗体を使用し、それに続いて標識を検出する、Ｆｏｘｐ３およびＩＣＯＳの両方の共発現についてのアッセイ）によって、またはＩＣＯＳおよびＦｏｘｐ３に対する標識された抗体を用いるＦＡＣＳにおける使用のための試料の単一細胞分散によって、検出される。
抗ＩＣＯＳ抗体は、ウイルス誘発がんなどの感染病原体に関連するがんを処置するために使用することができる。このカテゴリーには、頭頸部扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、メルケル細胞癌などがある。がんに関連するウイルスとしては、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ（子宮頸がん、中咽頭がん）、およびＥＢＶ（バーキットリンパ腫、胃がん、ホジキンリンパ腫、他のＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌および移植後リンパ増殖性疾患）が挙げられる。国際がん研究機関（Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ １００Ｂ）は、以下の感染病原体に関連する主ながんの部位を特定した：
・胃：ヘリコバクター・ピロリ
・肝臓：Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、タイ肝吸虫、肝吸虫
・子宮頸部：ＨＩＶを伴うまたは伴わないヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）
・肛門性器（陰茎、外陰部、腟、肛門）：ＨＩＶを伴うまたは伴わないＨＰＶ
・鼻咽頭：エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）
・中咽頭：タバコまたはアルコール摂取を伴うまたは伴わないＨＰＶ
・カポジ肉腫：ＨＩＶを伴うまたは伴わないヒトヘルペスウイルス８型
・非ホジキンリンパ腫：Ｈ．ピロリ、ＨＩＶを伴うまたは伴わないＥＢＶ、ＨＣＶ、ヒトＴ細胞リンパ向性ウイルス１型
・ホジキンリンパ腫：ＨＩＶを伴うまたは伴わないＥＢＶ
・膀胱：ビルハルツ住血吸虫。
本発明による抗体は、上記に規定されたがんなどのこれらの感染病原体のいずれかに関連するか、またはそれによって誘発されるがんを処置するために使用することができる。
エフェクターＴ細胞応答の刺激はまた、感染性疾患に対する免疫および／または患者における感染性疾患からの回復に寄与する。そのため、抗ＩＣＯＳ抗体は、抗体を患者に投与することによって感染性疾患を処置するために使用することができる。
感染性疾患としては、病原体、例えば、細菌性、真菌性、ウイルス性または原生動物性病原体によって引き起こされるものが挙げられ、処置は、病原体感染に対する患者における免疫応答を促進することである。細菌性病原体の例は、結核である。ウイルス性病原体の例は、Ｂ型肝炎およびＨＩＶである。原性生物性病原体の例は、マラリアを引き起こすプラスモジウム属種、例えば、熱帯熱マラリア原虫である。
抗体は、感染症、例えば、本明細書において挙げられた任意の病原体による感染症を処置するために使用することができる。感染症は、持続性または慢性感染症である。感染症は、局所的または全身的である。病原体と免疫系との間の長時間の接触は、免疫系の消耗もしくは耐性の発達（例えば、Ｔｒｅｇの増加したレベル、およびＴｒｅｇ：ＴｅｆｆバランスがＴｒｅｇに有利に傾くことにより現れる）、ならびに／または提示された病原体抗原の進化および改変により病原体による免疫回避をもたらす。これらの機能は、がんにおいて起こると考えられるものと類似するプロセスを反映する。抗ＩＣＯＳ抗体は、ＴＥｆｆに有利になるＴｒｅｇ：Ｔｅｆｆ比および／または本明細書において記載される他の効果のモジュレーションによる、病原体による感染症、例えば、慢性感染症を処置するための治療的アプローチを提示する。
処置は、感染性疾患または感染症を有すると診断されている患者の処置である。あるいは、処置は、予防的であり、本明細書の他の場所において記載されるように、例えば、ワクチンとして、疾患への罹患を防御するために患者に投与される。
免疫応答、特に、ＩＦＮγ依存性全身性免疫応答が、アルツハイマー病および、一部として神経炎症性構成要素を共有する他のＣＮＳの病状の処置のために有益であることも提案されている［２９］。ＷＯ２０１５／１３６５４１号は、抗ＰＤ－１抗体を使用するアルツハイマー病の処置を提案した。抗ＩＣＯＳ抗体は、場合により１つまたはそれ以上の他の免疫モジュレーター（例えば、ＰＤ－１に対する抗体）と組み合わせて、アルツハイマー病または他の神経変性疾患の処置において使用することができる。
１．６．１３．併用療法
抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１、特にＦｃエフェクター機能を有するものなどの免疫モジュレート抗体による処置は、免疫抑制細胞が高度に発現するＩＣＯＳのさらなる枯渇が有益である環境を作出することができる。抗ＩＣＯＳ抗体を、その治療効果を増強するそのような免疫モジュレーターと組み合わせることは有益である。
免疫モジュレート抗体（例えば、抗ＰＤＬ－１、抗ＰＤ－１、抗ＣＴＬＡ－４）で処置された患者は、特に、抗ＩＣＯＳ抗体による処置から利益を受ける。これについての１つの理由は、免役モジュレート抗体が、患者におけるＩＣＯＳ陽性Ｔｒｅｇ（例えば、腫瘍内Ｔｒｅｇ）の数を増加させることである。この効果はまた、組換えＩＬ－２などのある特定の他の治療剤でも観察される。抗ＩＣＯＳ抗体は、別の治療剤による患者の処置から生じるＩＣＯＳ＋Ｔｒｅｇ（例えば、腫瘍内Ｔｒｅｇ）におけるサージまたは上昇を低減および／または反転させることができる。抗ＩＣＯＳ抗体による処置のために選択された患者は、したがって、第１の治療剤による処置を既に受けている患者であり、第１の治療剤は、抗体（例えば、免疫モジュレーター抗体）または患者においてＩＣＯＳ＋Ｔｒｅｇの数を増加させる他の薬剤（例えば、ＩＬ－２）である。
抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせることができる免疫モジュレーターとしては、ＰＤＬ１（例えば、アベルマブ）、ＰＤ－１（例えば、ペムブロリズマブまたはニボルマブ）またはＣＴＬＡ－４（例えば、イピリムマブまたはトレメリムマブ）のいずれかに対する抗体が挙げられる。抗ＩＣＯＳ抗体は、ピディリズマブと組み合わせることができる。他の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、抗ＣＴＬＡ－４抗体と組み合わされて投与されず、および／または場合により、抗ＣＴＬＡ－４抗体ではない治療用抗体と組み合わせて投与される。
例えば、抗ＩＣＯＳ抗体は、抗ＰＤＬ１抗体との併用療法において使用することができる。好ましくは、抗ＩＣＯＳ抗体は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣを媒介するものである。好ましくは、抗ＰＤＬ１抗体は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣを媒介するものである。そのような併用療法の例は、抗ＩＣＯＳ抗体と抗ＰＤＬ１抗体の投与であり、ここで、両方の抗体は、エフェクター陽性定常領域を有する。そのため、抗ＩＣＯＳ抗体および抗ＰＤＬ１抗体は両方とも、ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＰを媒介することが可能である。Ｆｃエフェクター機能および定常領域の選択は、本明細書の他の場所において詳細に記載されるが、一例として、抗ＩＣＯＳヒトＩｇＧ１は、抗ＰＤ－Ｌ１ヒトＩｇＧ１と組み合わせることができる。抗ＩＣＯＳ抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域と組み合わせることができる。あるいは、抗体のエフェクター陽性定常領域は、増強されたエフェクター機能、例えば、増強されたＣＤＣ、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰのために操作されているものである。野生型ヒトＩｇＧ１配列およびエフェクター機能を変更する変異を含む抗体の定常領域の例は、本明細書の他の場所において詳細に議論される。
抗ＩＣＯＳ抗体が組み合わせることができる抗ＰＤＬ１抗体としては、以下が挙げられる：
・場合により、エフェクター陽性ヒトＩｇＧ１として、ＰＤ－１のＰＤＬ１への結合を阻害するか、および／またはＰＤＬ１を阻害する、抗ＰＤＬ１抗体；
・ＰＤ－１のＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２への結合を阻害する抗ＰＤ－１抗体；
・ＰＤＬ－１へのＰＤ－１結合を阻害するヒトＩｇＧ１抗体である、アベルマブ。ＷＯ２０１３／０７９１７４号を参照されたい；
・変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａおよび３３１を有するバリアントヒトＩｇＧ１抗体である、デュルバルマブ（または「ＭＥＤＩ４７３６」）。ＷＯ２０１１／０６６３８９号を参照されたい；
・変異Ｎ２９７Ａ、Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍを有するバリアントヒトＩｇＧ１抗体である、アテゾリズマブ。ＵＳ２０１０／０２０３０５６号を参照されたい；
・変異Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４抗体である、ＢＭＳ－９３６５５９。ＷＯ２００７／００５８７４号を参照されたい。
一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブを含む。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体の多数のさらなる例は、本明細書において開示され、他のものは、当技術分野において公知である。本明細書において挙げられる抗ＰＤ－Ｌ１抗体の多くについての特徴付けデータは、両方とも参照によって本明細書に組み入れられるＵＳ９，５６７，３９９号およびＵＳ９，６１７，３３８号において公開されている。抗ＰＤ－Ｌ１抗体の例は、ＵＳ９，５６７，３９９号またはＵＳ９，６１７，３３８号に示されるような、１Ｄ０５、８４Ｇ０９、１Ｄ０５ ＨＣ変異体１、１Ｄ０５ ＨＣ変異体２、１Ｄ０５ ＨＣ変異体３、１Ｄ０５ ＨＣ変異体４、１Ｄ０５ ＬＣ変異体１、１Ｄ０５ ＬＣ変異体２、１Ｄ０５ ＬＣ変異体３、４１１Ｂ０８、４１１Ｃ０４、４１１Ｄ０７、３８５Ｆ０１、３８６Ｈ０３、３８９Ａ０３、４１３Ｄ０８、４１３Ｇ０５、４１３Ｆ０９、４１４Ｂ０６または４１６Ｅ０１のいずれかのＨＣＤＲおよび／またはＬＣＤＲを含むＶＨおよび／またはＶＬドメインを有する。抗体は、これらの抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインを含むことができ、場合により、これらの抗体のいずれかの重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列を有する重鎖および／または軽鎖を含むことができる。これらの抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨおよびＶＬドメインは、本明細書の他の場所においてさらに記載される。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体のさらなる例は、ＫＮ－０３５、ＣＡ－１７０、ＦＡＺ－０５３、Ｍ７８２４、ＡＢＢＶ－３６８、ＬＹ－３３０００５４、ＧＮＳ－１４８０、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＲＥＧＮ３５０４、またはＷＯ２０１７／０３４９１６号、ＷＯ２０１７／０２０２９１号、ＷＯ２０１７／０２０８５８号、ＷＯ２０１７／０２０８０１号、ＷＯ２０１６／１１１６４５号、ＷＯ２０１６／１９７３６７号、ＷＯ２０１６／０６１１４２号、ＷＯ２０１６／１４９２０１号、ＷＯ２０１６／０００６１９号、ＷＯ２０１６／１６０７９２号、ＷＯ２０１６／０２２６３０号、ＷＯ２０１６／００７２３５号、ＷＯ２０１５／１７９６５４号、ＷＯ２０１５／１７３２６７号、ＷＯ２０１５／１８１３４２号、ＷＯ２０１５／１０９１２４号、ＷＯ２０１５／１１２８０５号、ＷＯ２０１５／０６１６６８号、ＷＯ２０１４／１５９５６２号、ＷＯ２０１４／１６５０８２号、ＷＯ２０１４／１０００７９号、ＷＯ２０１４／０５５８９７号、ＷＯ２０１３／１８１６３４号、ＷＯ２０１３／１７３２２３号、ＷＯ２０１３／０７９１７４号、ＷＯ２０１２／１４５４９３号、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＷＯ２０１０／０７７６３４号、ＷＯ２０１０／０３６９５９号、ＷＯ２０１０／０８９４１１号およびＷＯ２００７／００５８７４号のいずれかにおいて開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＨＣＤＲおよび／またはＬＣＤＲを含むＶＨおよび／またはＶＬドメインを有する。抗体は、これらの抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインを含むことができ、場合により、これらの抗体のいずれかの重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列を有する重鎖および／または軽鎖を含むことができる。抗ＰＤ－Ｌ１との併用療法において使用される抗ＩＣＯＳ抗体は、本明細書において開示される本発明の抗体である。あるいは、抗ＩＣＯＳ抗体は、以下の刊行物のいずれかにおいて開示される抗ＩＣＯＳ抗体のＣＤＲ、またはＶＨおよび／もしくはＶＬドメインを含むことができる：
ＷＯ２０１６１５４１７７号、ＵＳ２０１６３０４６１０号－例えば、抗体７Ｆ１２、３７Ａ１０、３５Ａ９、３６Ｅ１０、１６Ｇ１０、３７Ａ１０Ｓ７１３、３７Ａ１０Ｓ７１４、３７Ａ１０Ｓ７１５、３７Ａ１０Ｓ７１６、３７Ａ１０Ｓ７１７、３７Ａ１０Ｓ７１８、１６Ｇ１０Ｓ７１、１６Ｇ１０Ｓ７２、１６Ｇ１０Ｓ７３、１６Ｇ１０Ｓ８３、３５Ａ９Ｓ７９、３５Ａ９Ｓ７１０または３５Ａ９Ｓ８９のいずれか；
ＷＯ１６１２０７８９号、ＵＳ２０１６２１５０５９号－例えば、４２２．２および／またはＨ２Ｌ５として公知の抗体；
ＷＯ１４０３３３２７号、ＥＰ２８９２９２８号、ＵＳ２０１５２３９９７８号－例えば、３１４－８として公知の抗体および／またはハイブリドーマＣＮＣＭ Ｉ－４１８０から生成される抗体；
ＷＯ１２１３１００４号、ＥＰ２６９１４１９号、ＵＳ９３７６４９３号、ＵＳ２０１６０２６４６６６－例えば、抗体Ｉｃｏｓ１４５－１および／またはハイブリドーマＣＮＣＭ Ｉ－４１７９によって生成される抗体；
ＷＯ１００５６８０４－例えば、抗体ＪＭＡｂ １３６または「１３６」；
ＷＯ９９１５５５３号、ＥＰ１０１７７２３Ｂ１号、ＵＳ７２５９２４７号、ＵＳ７１３２０９９号、ＵＳ７１２５５５１号、ＵＳ７３０６８００号、ＵＳ７７２２８７２号、ＷＯ０５１０３０８６号、ＥＰ１７４０６１７号、ＵＳ８３１８９０５号、ＵＳ８９１６１５５号－例えば、抗体ＭＩＣ－９４４または９Ｆ３；
ＷＯ９８３８２１号、ＵＳ７９３２３５８Ｂ２号、ＵＳ２００２１５６２４２号、ＥＰ０９８４０２３号、ＥＰ１５０２９２０号、ＵＳ７０３０２２５号、ＵＳ７０４５６１５号、ＵＳ７２７９５６０号、ＵＳ７２２６９０９号、ＵＳ７１９６１７５号、ＵＳ７９３２３５８号、ＵＳ８３８９６９０号、ＷＯ０２０７００１０号、ＥＰ１２８６６６８号、ＥＰ１３７４９０１号、ＵＳ７４３８９０５号、ＵＳ７４３８９０５号、ＷＯ０１８７９８１号、ＥＰ１１５８００４号、ＵＳ６８０３０３９号、ＵＳ７１６６２８３号、ＵＳ７９８８９６５号、ＷＯ０１１５７３２号、ＥＰ１１２５５８５号、ＵＳ７４６５４４５号、ＵＳ７９９８４７８号－例えば、任意のＪＭＡｂ抗体、例えば、ＪＭＡｂ－１２４、ＪＭＡｂ－１２６、ＪＭＡｂ－１２７、ＪＭＡｂ－１２８、ＪＭＡｂ－１３５、ＪＭＡｂ－１３６、ＪＭＡｂ－１３７、ＪＭＡｂ－１３８、ＪＭＡｂ－１３９、ＪＭＡｂ－１４０、ＪＭＡｂ－１４１のいずれか、例えば、ＪＭＡｂ１３６；
ＷＯ２０１４／０８９１１３号－例えば、抗体１７Ｇ９；
ＷＯ１２１７４３３８号；
ＵＳ２０１６１４５３４４号；
ＷＯ１１０２００２４号、ＥＰ２４６４６６１号、ＵＳ２０１６００２３３６号、ＵＳ２０１６０２４２１１号、ＵＳ８８４０８８９号；
ＵＳ８４９７２４４号。
抗ＩＣＯＳ抗体は、場合により、ＷＯ２０１６１５４１７７号において開示される３７Ａ１０Ｓ７１３のＣＤＲを含む。これは、３７Ａ１０Ｓ７１３のＶＨおよびＶＬドメインを含むことができ、場合により、３７Ａ１０Ｓ７１３の抗体の重鎖および軽鎖を有することができる。
抗ＩＣＯＳ抗体と免疫モジュレーターの組み合わせは、単剤療法と比較して、増加した治療効果を提供し、より低い用量の免疫モジュレーターで治療的利益を達成することを可能にする。そのため、例えば、抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせて使用される抗体（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、場合により、イピリムマブまたはアテゾリズマブ）は、より通常の用量の１０ｍｇ／ｋｇではなく、３ｍｇ／ｋｇで投薬される。抗ＰＤ－Ｌ１抗体または他の抗体の投与レジメンは、３週間ごとに９０分の期間にわたる、合計で４用量の静脈内投与を含むことができる。
抗ＩＣＯＳ抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体による処置に対する腫瘍の感受性を増加させるために使用することができ、これは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体が治療的利益を示す用量の低減として認識される。そのため、抗ＩＣＯＳ抗体は、患者におけるがんまたは腫瘍を処置するために有効な抗ＰＤ－Ｌ１抗体の用量を低減するために、患者に投与することができる。抗ＩＣＯＳ抗体の投与は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体が抗ＩＣＯＳなしで投与される場合の投薬量と比較して、その患者に対する抗ＰＤ－Ｌ１抗体投与の推奨投薬量または必要な投薬量を、例えば、７５％、５０％、２５％、２０％、１０％以下、低減することができる。患者は、本明細書において記載される併用療法において、抗ＩＣＯＳ抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与によって処置される。
抗ＰＤ－Ｌ１を抗ＩＣＯＳと組み合わせる利益は、単独療法としてのその使用と比較した場合に、それぞれの薬剤の投薬量の低減に拡張される。抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して、抗ＩＣＯＳ抗体が治療的利益を示す用量を低減することができ、そのため、患者におけるがんまたは腫瘍を処置するために有効な抗ＩＣＯＳ抗体の用量を低減するために、患者に投与することができる。そのため、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗ＩＣＯＳ抗体が抗ＰＤ－Ｌ１なしで投与される場合の投薬量と比較して、その患者に対する抗ＩＣＯＳ抗体投与の推奨投薬量または必要な投薬量を、例えば、７５％、５０％、２５％、２０％、１０％以下、低減することができる。患者は、本明細書において記載される併用療法において、抗ＩＣＯＳ抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与によって処置される。
本明細書の他の場所において議論されるように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、特に、エフェクター陽性Ｆｃを有する抗体による処置は、Ｔｅｆｆ細胞におけるＩＣＯＳの発現を増加させないように見える。これは、エフェクター陽性抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせてそのような抗体を投与する場合に有利であり、ここで、ＴｅｆｆにおけるＩＣＯＳ発現の増加は、不必要に、これらの細胞を抗ＩＣＯＳ抗体による枯渇に対してより感受性にする。抗ＰＤ－Ｌ１との組み合わせにおいて、したがって、抗ＩＣＯＳ療法は、Ｔｒｅｇと比較して、Ｔｅｆｆ上のＩＣＯＳの差次的発現を活用し、枯渇のためにＩＣＯＳ高Ｔｒｅｇを優先的に標的にすることができる。これは、次に、ＴＥｆｆの抑制を軽減し、患者におけるエフェクターＴ細胞応答を促進する正味の効果を有する。Ｔ細胞上のＩＣＯＳの発現に対する免疫チェックポイント分子を標的化する効果も以前に研究されており－参考文献［３０］の図Ｓ６Ｃを参照されたい（補助資料）、ここで、ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体による処置は、ＩＣＯＳを発現するＣＤ４＋ Ｔｒｅｇのパーセンテージを増加させることが報告された。ＴｒｅｇおよびＴｅｆｆにおけるＩＣＯＳ発現に対する治療剤の効果は、抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせた使用のための適切な薬剤の選択における因子であり、抗ＩＣＯＳ抗体の効果は、Ｔｒｅｇ対Ｔｅｆｆに対するＩＣＯＳの高い差次的発現が存在する条件下で増強されることに留意する。
本明細書において記載されるように、抗ＩＣＯＳ抗体の単回用量は、特に、抗ＰＤ－Ｌ１抗体などの他の治療剤との組み合わせにおいて、治療効果を提供するのに十分である。腫瘍療法において、この単回用量の利益についての根本的な理由は、少なくとも部分的に、腫瘍の微小環境を十分にリセットまたは変化させて、免疫攻撃および／または述べたものなどの他の免疫モジュレーターの効果に対して腫瘍をより感受性にすることによって、抗ＩＣＯＳ抗体がその効果を媒介することである。腫瘍微小環境のリセットは、例えば、ＩＣＯＳ陽性腫瘍浸潤Ｔ－ｒｅｇの枯渇により引き金が引かれる。そのため、例えば、患者は、抗ＩＣＯＳ抗体の単回用量、それに続いて抗ＰＤ－Ｌ１抗体１用量またはそれ以上の用量で処置される。処置の期間、例えば、６か月または１年にわたって、抗ＩＣＯＳ抗体は、単回用量で投与することができるが、他の薬剤、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、場合により、その処置の期間にわたって、複数回投与することができ、好ましくは、少なくとも１回のそのような用量は、抗ＩＣＯＳ抗体による処置後に投与される。
併用療法のさらなる例としては、抗ＩＣＯＳ抗体と以下との組み合わせが挙げられる：
－ アデノシンＡ２Ａ受容体のアンタゴニスト（「Ａ２ＡＲ阻害剤」）；
－ ＣＤ１３７アゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；
－ トリプトファンの分解を触媒する酵素のインドールアミン－２，３ジオキシゲナーゼのアンタゴニスト（「ＩＤＯ阻害剤」）。ＩＤＯは、樹状細胞およびマクロファージにおいて活性化される免疫チェックポイントであり、免疫抑制／寛容性に寄与する。
抗ＩＣＯＳ抗体は、ＩＬ－２（例えば、アルデスロイキンなどの組換えＩＬ－２）との併用療法において使用することができる。ＩＬ－２は、高用量（ＨＤ）で投与することができる。典型的なＨＤ ＩＬ－２療法は、療法のサイクルあたり、５００，０００ＩＵ／ｋｇ超のボーラス注入、例えば、６００，０００または７２０，０００ＩＵ／ｋｇのボーラス注入を含み、ここで、１０～１５回のそのようなボーラス注入は、５～１０時間の間の間隔で、例えば、最大で１５回のボーラス注入は、８時間ごとに与えられ、およそ１４～２１日ごとに、最大で６～８サイクルの療法サイクルが繰り返される。ＨＤ ＩＬ－２療法は、腫瘍、特に、黒色腫（例えば、転移性黒色腫）および腎細胞癌の処置において成功しているが、その使用は、重度の有害効果を引き起こす高毒性のＩＬ－２に限定される。
高用量のＩＬ－２による処置は、がん患者におけるＩＣＯＳ陽性Ｔｒｅｇの集団を増加させることが示されている［３１］。ＨＤ ＩＬ－２療法の最初のサイクル後のＩＣＯＳ＋ ＴＲｅｇのこの増加は、より悪い臨床転帰と相関し、より高いＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの数は、より悪い予後と相関することが報告された。ＩＬ－２バリアントのＦ４２Ｋは、ＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇ細胞のこの望ましくない増加を回避するための代替療法として提案されている［３２］。しかしながら、別のアプローチは、セカンドライン治療剤として本発明に従って抗体を使用することによるＩＣＯＳ＋ Ｔ ｒｅｇの増加を活用することであろう。
ＩＬ－２療法を抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせ、ＩＣＯＳを高度に発現するＴＲｅｇを標的にする抗ＩＣＯＳ抗体の能力を利用して、これらの細胞を阻害し、ＩＬ－２療法を受けている患者の予後を改善することは有益である。ＩＬ－２および抗ＩＣＯＳ抗体の同時的投与は、処置される患者集団における有害事象を回避または低減しながら、応答割合を増加させることができる。組み合わせは、ＩＬ－２単剤療法と比較して、ＩＬ－２をより低い用量で使用することを許容し、臨床的利益（例えば、腫瘍成長の低減、固形腫瘍の排出および／または転移の低減）を保持または増強しながら、ＩＬ－２療法から生じる有害事象のリスクまたはレベルを低減することができる。この方法において、抗ＩＣＯＳの追加は、高用量（ＨＤ）または低用量（ＬＤ）のＩＬ－２にかかわらず、ＩＬ－２を受けている患者の処置を改善することができる。
したがって、本発明の一態様は、抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することによる患者を処置する方法であって、患者が、ＩＬ－２、例えば、ＨＤ ＩＬ－２でも処置される、方法を提供する。本発明の別の態様は、患者の処置における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体であり、ここで、患者は、ＩＬ－２、例えば、ＨＤ ＩＬ－２でも処置される。抗ＩＣＯＳ抗体は、セカンドライン療法として使用することができる。そのため、患者は、ＩＬ－２で処置された患者、例えば、少なくとも１サイクルのＨＤ ＩＬ－２療法を受けている患者、およびＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの増加したレベルを有する患者である。アッセイは、本明細書の他の場所において記載される免疫組織化学的検査またはＦＡＣＳを使用して、がん細胞の試料、例えば、腫瘍生検試料において行われて、ＩＣＯＳ、Ｆｏｘｐ３、ＩＣＯＳＬ、および場合により目的の１つまたはそれ以上のさらなるマーカーに陽性の細胞を検出することができる。方法は、ＩＬ－２処置後にＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの増加したレベルを有する患者を決定することを含むことができ（例えば、末梢血において、または腫瘍生検において）、ここで、増加したレベルは、患者が抗ＩＣＯＳ抗体による処置から利益を受けるであろうことを示す。Ｔｒｅｇの増加は、対照（未処置）個体またはＩＬ－２療法前の患者と比べてである。上昇したＴｒｅｇを有するそのような患者は、継続的なＩＬ－２処置単独から利益を受けないが、抗ＩＣＯＳ抗体およびＩＬ－２療法の組み合わせ、または抗ＩＣＯＳ抗体単独による治療に対して治療的利益を提供する群を示す。そのため、患者がＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの増加したレベルを有するという陽性決定後、抗ＩＣＯＳ抗体および／またはさらなるＩＬ－２療法を投与することができる。抗ＩＣＯＳ抗体による処置は、そのような患者における他のＴ細胞集団と比べて、ＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇを選択的に標的にし、枯渇させる。これは、これらの細胞によって媒介される免疫抑制を軽減し、それによって標的細胞、例えば、腫瘍細胞または感染細胞に対するＴｅｆｆの活性を増強することによって、治療効果を提供する。
抗ＩＣＯＳ抗体およびＩＬ－２による併用療法は、本明細書において記載される任意の治療適応症のために、特に、腫瘍、例えば、転移性黒色腫などの黒色腫、または腎細胞癌を処置するために使用することができる。そのため、一例において、抗ＩＣＯＳ抗体で処置される患者は、転移性黒色腫を呈し、ＩＬ－２、例えば、ＨＤ ＩＬ－２療法またはＬＤ ＩＬ－２療法で処置されている患者である。
一般に、抗ＩＣＯＳ抗体が、第１の治療剤（例えば、免疫モジュレーター抗体）または他の薬剤（例えば、ＩＬ－２）による処置を受けている患者に投与される場合、抗ＩＣＯＳ抗体は、第１の治療剤の投与の最小期間後、例えば、２４時間後、４８時間後、７２時間後、１週間後または２週間後に投与することができる。抗ＩＣＯＳ抗体は、第１の治療剤の投与後２、３、４または５週間以内に投与することができる。これは、どんな時にもいずれかの薬剤の追加投与を排除しないが、患者のためのコンプライアンスを容易にし、コストを低減するために、投与される処置の数を最小限に抑えることが望ましい。むしろ、投与の相対的なタイミングは、それらの併用効果を増強するように選択され、第１の治療剤は、抗ＩＣＯＳ抗体の効果が特に有利である免疫学的環境（例えば、ＩＣＯＳ＋Ｔｒｅｇの上昇、または下記で議論される抗原放出）を作出する。そのため、第１の治療剤および次に抗ＩＣＯＳ抗体の逐次投与は、第１の薬剤が作用するための時間を可能にし、抗ＩＣＯＳ抗体がその増強された効果を示すことができるインビボ条件を作出する。同時または逐次併用処置を含むさまざまな投与レジメンは、本明細書において記載され、必要に応じて利用することができる。第１の治療剤が、患者におけるＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの数を増加させるものである場合、患者のための処置レジメンは、患者が増加した数のＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇを有することを決定すること、および次いで、抗ＩＣＯＳ抗体を投与することを含むことができる。
述べたように、併用療法における抗ＩＣＯＳ抗体の使用は、治療剤の有効用量および／または患者におけるＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇを増加させる治療剤の反対の有害効果を低減する利点を提供することができる。またさらなる治療的利益は、「免疫細胞死」により標的細胞からの抗原の放出を引き起こす第１の治療剤を選択すること、および抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせて第１の治療剤を投与することにより達成することができる。述べたように、抗ＩＣＯＳ抗体の投与は、その後、第１の治療剤の投与が続き、２つの薬剤の投与は、上記で議論されたようにある特定の時間枠によって分離されている。
免疫細胞死は、アポトーシスとは対照的な、細胞死の認識される方式である。これは、細胞からのＡＴＰおよびＨＭＧＢ１の放出、ならびに細胞膜上のカルレティキュリンの露出によって特徴付けられる［３３、３４］。
標的組織または標的細胞における免疫細胞死は、抗原提示細胞による細胞の貪食を促進し、標的細胞からの抗原の提示をもたらし、これは次に、抗原特異的Ｔｅｆｆ細胞を誘導する。抗ＩＣＯＳ抗体は、Ｔｅｆｆ細胞上のＩＣＯＳのアゴニストとして作用することによって、Ｔｅｆｆ応答の大きさおよび／または期間を増加させることができる。加えて、抗ＩＣＯＳ抗体が、Ｆｃエフェクター機能が有効である場合（例えば、ヒトＩｇＧ１抗体）、抗ＩＣＯＳ抗体は、抗原特異的Ｔｒｅｇの枯渇を引き起こす。そのため、これらの効果のいずれかまたは両方の組み合わせにより、ＴｅｆｆとＴｒｅｇ細胞との間のバランスは、Ｔｅｆｆ活性の増強に有利になるようにモジュレートされる。抗ＩＣＯＳ抗体と、標的組織または細胞型において、例えば、腫瘍またはがん細胞において免疫細胞死を誘導する処置との組み合わせは、それによって、標的組織または細胞に対する患者における免疫応答を促進し、ワクチン抗原がインビボで生じるワクチン接種の形態を示す。
したがって、本発明の一態様は、患者のがん細胞に対する患者のインビボワクチン接種により患者におけるがんを処置する方法である。本発明の別の態様は、そのような方法における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体である。抗ＩＣＯＳ抗体は、
がん細胞の免疫細胞死を引き起こす療法により患者を処置し、抗原の抗原特異的エフェクターＴ細胞への提示をもたらすこと、および
抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与すること
を含み、抗ＩＣＯＳ抗体が、がん細胞に対する抗原特異的エフェクターＴ細胞応答を増強する、
方法において使用することができる。
免疫細胞死を誘導する処置としては、放射線（例えば、ＵＶＣ光またはγ線を使用する細胞のイオン化照射）、化学療法剤（例えば、オキサリプラチン、アントラサイクリン、例えば、ドキソルビシン、イダルビシンもしくはミトキサントロン、ＢＫチャネルアゴニスト、例えば、フロレチンもしくはピマール酸、ボルテゾミブ、心臓性グリコシド、シクロホスファミド、ＧＡＤＤ３４／ＰＰ１阻害剤とマイトマイシン、ＰＤＴとヒペリシン、ポリイノシン－ポリシチジン酸、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、ゲフィチニブ、エルロチニブ、またはタプシガルジンとシスプラチン）、および腫瘍関連抗原に対する抗体が挙げられる。腫瘍関連抗原は、同じ組織の非腫瘍細胞、例えば、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＥＧＦＲと比べて、腫瘍細胞によって過剰発現される任意の抗体である。好適な抗体としては、ハーセプチン（抗ＨＥＲ２）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）またはセツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）が挙げられる。
そのため、一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体を１つまたはそれ以上のそのような処置と組み合わせることが有利である。場合により、抗ＩＣＯＳ抗体は、そのような処置を既に受けている患者に投与される。抗ＩＣＯＳ抗体は、免疫細胞死を誘導する処置のある期間後、例えば、２４時間後、４８時間後、７２時間後、１週間後または２週間後、例えば、処置の２４～７２時間後に投与することができる。抗ＩＣＯＳ抗体は、処置後２、３、４または５週間以内に投与することができる。併用療法のための他のレジメンは、本明細書の他の場所において議論される。
「インビボワクチン接種」は上記に記載したが、腫瘍細胞を処置して、エクスビボで免疫細胞死を誘導することも可能であり、その後、細胞は、患者に再導入される。患者に対して直接免疫細胞死を誘導する薬剤または処置を投与するよりもむしろ、処置された腫瘍細胞が患者に投与される。患者の処置は、上記に記載した投与レジメンに従うことができる。
既に述べたように、抗ＩＣＯＳ抗体の単回用量は、治療利益を提供するのに十分である。そのため、本明細書において記載される処置の方法において、抗ＩＣＯＳ抗体は、場合により、単回用量として投与される。抗ＩＣＯＳ抗体の単回用量は、がんなどの疾患におけるその後の有益な効果を伴って、患者においてＴｒｅｇを枯渇させることができる。Ｔｒｅｇの一過性アブレーションが、腫瘍進行を低減すること、確立された腫瘍および転移を処置すること、ならびに生存を延長することを含む、抗腫瘍効果を有すること、ならびにそれが腫瘍照射の治療効果を増強することができることが以前に報告されている［３５］。単回用量の抗ＩＣＯＳの投与は、そのようなＴｒｅｇ枯渇を提供し、放射線療法などの組み合わせて使用される他の治療アプローチの効果を増強するために使用することができる。
１．６．１４．ＰＤ－Ｌ１に対する抗体
抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせた使用のためのＰＤ－Ｌ１に対する抗体は、本明細書において記載されるように別々の治療剤としてまたは多重特異性抗体においてにかかわらず、任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体の抗原結合部位を含むことができる。抗ＰＤ－Ｌ１抗体の多数の例は、本明細書において開示され、他のものは、当技術分野において公知である。本明細書において挙げられた抗ＰＤ－Ｌ１抗体の多くについての特徴付けデータは、両方とも参照によって本明細書に組み入れられるＵＳ９，５６７，３９９号およびＵＳ９，６１７，３３８号において公開されている。
１Ｄ０５は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号：５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５である（重鎖核酸配列 配列番号３６）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５である（軽鎖核酸配列 配列番号４６）。
８４Ｇ０９は、配列番号７（ＩＭＧＴ）または配列番号１０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号８（ＩＭＧＴ）または配列番号１１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号９（ＩＭＧＴ）または配列番号１２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１４である。８４Ｇ０９は、配列番号１７（ＩＭＧＴ）または配列番号２０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１８（ＩＭＧＴ）または配列番号２１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号１９（ＩＭＧＴ）または配列番号２２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１５である（重鎖核酸配列 配列番号１６）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２５である（軽鎖核酸配列 配列番号２６）。
１Ｄ０５ ＨＣ変異体１は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４７の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５ ＨＣ変異体１は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５である（軽鎖核酸配列 配列番号４６）。
１Ｄ０５ ＨＣ変異体２は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５ ＨＣ変異体２は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５である（軽鎖核酸配列 配列番号４６）。
１Ｄ０５ ＨＣ変異体３は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４９の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５ ＨＣ変異体３は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５である（軽鎖核酸配列 配列番号４６）。
１Ｄ０５ ＨＣ変異体４は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３４２の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５ ＨＣ変異体４は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５である（軽鎖核酸配列 配列番号４６）。
１Ｄ０５ ＬＣ変異体１は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５ ＬＣ変異体１は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号５０の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５ ＬＣ変異体１のＣＤＲＬ２配列は、配列番号５０のＶＬ配列から、ＫａｂａｔまたはＩＭＧＴシステムによって定義される通りである。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５もしくは配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５である（重鎖核酸配列 配列番号３６）。
１Ｄ０５ ＬＣ変異体２は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５ ＬＣ変異体２は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号５１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５である（重鎖核酸配列 配列番号３６）。
１Ｄ０５ ＬＣ変異体３は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５ ＬＣ変異体３は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２９８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５ ＬＣ変異体３のＣＤＲＬ２配列は、配列番号２９８のＶＬ配列から、ＫａｂａｔまたはＩＭＧＴシステムによって定義される通りである。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５もしくは配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５である（重鎖核酸配列 配列番号３６）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５である（軽鎖核酸配列 配列番号４６）。
４１１Ｂ０８は、配列番号５２（ＩＭＧＴ）または配列番号５５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号５３（ＩＭＧＴ）または配列番号５６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号５４（ＩＭＧＴ）または配列番号５７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号５８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号５９である。４１１Ｂ０８は、配列番号６２（ＩＭＧＴ）または配列番号６５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号６３（ＩＭＧＴ）または配列番号６６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号６４（ＩＭＧＴ）または配列番号６７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号６８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号６９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号６０である（重鎖核酸配列 配列番号６１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号７０である（軽鎖核酸配列 配列番号７１）。
４１１Ｃ０４は、配列番号７２（ＩＭＧＴ）または配列番号７５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号７３（ＩＭＧＴ）または配列番号７６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号７４（ＩＭＧＴ）または配列番号７７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号７８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号７９である。４１１Ｃ０４は、配列番号８２（ＩＭＧＴ）または配列番号８５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号８３（ＩＭＧＴ）または配列番号８６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号８４（ＩＭＧＴ）または配列番号８７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号８８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号８９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号８０である（重鎖核酸配列 配列番号８１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号９０である（軽鎖核酸配列 配列番号９１）。
４１１Ｄ０７は、配列番号９２（ＩＭＧＴ）または配列番号９５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号９３（ＩＭＧＴ）または配列番号９６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号９４（ＩＭＧＴ）または配列番号９７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号９８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号９９である。４１１Ｄ０７は、配列番号１０２（ＩＭＧＴ）または配列番号１０５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１０３（ＩＭＧＴ）または配列番号１０６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号１０４（ＩＭＧＴ）または配列番号１０７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１０８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１０９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１００である（重鎖核酸配列 配列番号１０１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１１０である（軽鎖核酸配列 配列番号１１１）。
３８５Ｆ０１は、配列番号１１２（ＩＭＧＴ）または配列番号１１５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１１３（ＩＭＧＴ）または配列番号１１６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１１４（ＩＭＧＴ）または配列番号１１７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１１８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１１９である。３８５Ｆ０１は、配列番号１２２（ＩＭＧＴ）または配列番号１２５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１２３（ＩＭＧＴ）または配列番号１２６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号１２４（ＩＭＧＴ）または配列番号１２７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１２８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１２９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１２０である（重鎖核酸配列 配列番号１２１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１３０である（軽鎖核酸配列 配列番号１３１）。
３８６Ｈ０３は、配列番号１５２（ＩＭＧＴ）または配列番号１５５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１５３（ＩＭＧＴ）または配列番号１５６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１５４（ＩＭＧＴ）または配列番号１５７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１５８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１５９である。３８６Ｈ０３は、配列番号１６２（ＩＭＧＴ）または配列番号１６５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１６３（ＩＭＧＴ）または配列番号１６６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号１６４（ＩＭＧＴ）または配列番号１６７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１６８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１６９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１６０である（重鎖核酸配列 配列番号１６１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１７０である（軽鎖核酸配列 配列番号１７１）。
３８９Ａ０３は、配列番号１７２（ＩＭＧＴ）または配列番号１７５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１７３（ＩＭＧＴ）または配列番号１７６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１７４（ＩＭＧＴ）または配列番号１７７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１７８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１７９である。３８９Ａ０３は、配列番号１８２（ＩＭＧＴ）または配列番号１８５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１８３（ＩＭＧＴ）または配列番号１８６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号１８４（ＩＭＧＴ）または配列番号１８７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１８８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１８９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１８０である（重鎖核酸配列 配列番号１８１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１９０である（軽鎖核酸配列 配列番号１９１）。
４１３Ｄ０８は、配列番号１３２（ＩＭＧＴ）または配列番号１３５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１３３（ＩＭＧＴ）または配列番号１３６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号１３４（ＩＭＧＴ）または配列番号１３７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１３８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１３９である。４１３Ｄ０８は、配列番号１４２（ＩＭＧＴ）または配列番号１４５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１４３（ＩＭＧＴ）または配列番号１４６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号１４４（ＩＭＧＴ）または配列番号１４７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１４８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１４９である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は配列番号１４０である（重鎖核酸配列 配列番号１４１）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１５０である（軽鎖核酸配列 配列番号１５１）。
４１３Ｇ０５は、配列番号２３８（ＩＭＧＴ）または配列番号２４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２３９（ＩＭＧＴ）または配列番号２４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２４０（ＩＭＧＴ）または配列番号２４３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号２４４の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号２４５である。４１３Ｇ０５は、配列番号２４８（ＩＭＧＴ）または配列番号２５１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号２４９（ＩＭＧＴ）または配列番号２５２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２５０（ＩＭＧＴ）または配列番号２５３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２５４の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２５５である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号２４６である（重鎖核酸配列 配列番号２４７）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２５６である（軽鎖核酸配列 配列番号２５７）。
４１３Ｆ０９は、配列番号２５８（ＩＭＧＴ）または配列番号２６１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２５９（ＩＭＧＴ）または配列番号２６２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２６０（ＩＭＧＴ）または配列番号２６３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号２６４の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号２６５である。４１３Ｆ０９は、配列番号２６８（ＩＭＧＴ）または配列番号２７１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号２６９（ＩＭＧＴ）または配列番号２７２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２７０（ＩＭＧＴ）または配列番号２７３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２７５である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号２６６である（重鎖核酸配列 配列番号２６７）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２７６である（軽鎖核酸配列 配列番号２７７）。
４１４Ｂ０６は、配列番号２７８（ＩＭＧＴ）または配列番号２８１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２７９（ＩＭＧＴ）または配列番号２８２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号２８０（ＩＭＧＴ）または配列番号２８３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号２８４の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号２８５である。４１４Ｂ０６は、配列番号２８８（ＩＭＧＴ）または配列番号２９１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号２８９（ＩＭＧＴ）または配列番号２９２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号２９０（ＩＭＧＴ）または配列番号２９３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２９４の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２９５である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号２８６である（重鎖核酸配列 配列番号２８７）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２９６である（軽鎖核酸配列 配列番号２９７）。
４１６Ｅ０１は、配列番号３４３（ＩＭＧＴ）または配列番号３４６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３４４（ＩＭＧＴ）または配列番号３４７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列および配列番号３４５（ＩＭＧＴ）または配列番号３４８（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３４９の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３５０である。４１６Ｅ０１は、配列番号３５３（ＩＭＧＴ）または配列番号３５６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３５４（ＩＭＧＴ）または配列番号３５７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列および配列番号３５５（ＩＭＧＴ）または配列番号３５８（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号３５９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号３６０である。ＶＨドメインは、本明細書において記載される重鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２または配列番号５３４と組み合せることができる。ＶＬドメインは、本明細書において記載される軽鎖定常領域配列のいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６および５３８と組み合わせることができる。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５１である（重鎖核酸配列 配列番号３５２）。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号３６１である（軽鎖核酸配列 配列番号３６２）。
一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブを含む。一部の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。
１．６．１５．抗体－薬物コンジュゲート
抗ＩＣＯＳ抗体は、細胞傷害剤のキャリアとして使用して、Ｔｒｅｇを標的化することができる。腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に位置するＴｒｅｇは、ＩＣＯＳを強く発現する（米国特許第９，９５７，３２３号を参照されたい）。ＩＣＯＳは、腫瘍内Ｔｅｆｆまたは末梢Ｔｒｅｇにおいてよりも、腫瘍内Ｔｒｅｇにおいてより強く発現される。そのため、毒性薬物またはプロドラッグで標識された抗ＩＣＯＳ抗体は、ＴＭＥにおいて優先的にＴｒｅｇを標的化して、毒性ペイロードを送達し、それらの細胞を選択的に阻害する。細胞傷害剤のそのような標的化は、Ｔｒｅｇの免疫抑制効果を除去するための追加の経路を提供し、それによって、ＴＥｆｆ活性に有利になるようにＴｒｅｇ：Ｔｅｆｆバランスを変更し、本明細書において議論される他の治療アプローチ（例えば、ＴｒｅｇのＦｃエフェクター媒介阻害、エフェクターＴ細胞のアゴニズム）のいずれか１つまたはそれ以上の代替として、またはそれと組み合わせて使用することができる。
したがって、本発明は、細胞傷害薬またはプロドラッグにコンジュゲートされている抗ＩＣＯＳ抗体を提供する。プロドラッグの場合において、プロドラッグは、細胞傷害剤が生じるように、ＴＭＥまたは治療活性の他の標的部位において活性化可能である。活性化は、例えば、光吸収材コンジュゲートを活性化する近赤外光を使用して、光活性化などの引き金に応答する［３６］。プロドラッグの空間選択的活性化は、腫瘍内Ｔｒｅｇにおける高ＩＣＯＳ発現と組み合わせて、抗体－薬物コンジュゲートの細胞傷害効果をさらに増強して、これらの細胞に非常に選択的である細胞傷害効果を提供する。
抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために、細胞傷害薬またはプロドラッグは、好ましくは、血液中での抗体－薬物コンジュゲートの循環の間、非免疫原性および非毒性である（休止状態または不活性）。好ましくは、細胞傷害薬（または、活性化される場合、プロドラッグ）は、強力であり、例えば、薬物の４つの分子のうち２つで、標的細胞を死滅させるために十分である。光活性化可能なプロドラッグは、シリカフタロシアニン（ｓｉｌｉｃａｐｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ）色素（ＩＲＤｙｅ ７００ ＤＸ）であり、これは、近赤外光の曝露後に、細胞膜に致死的な損傷を誘導する。細胞傷害薬としては、モノメチルアウリスタチンＥなどの抗有糸分裂剤、およびマイタンシン誘導体、例えば、メルタンシン、ＤＭ１、エムタンシンなどの微小管阻害剤が挙げられる。
薬物（またはプロドラッグ）の抗体へのコンジュゲーションは、通常、リンカーを介してである。リンカーは、切断可能リンカー、例えば、ジスルフィド、ヒドラゾンまたはペプチド連結である。カテプシン切断可能リンカーが使用することができ、その結果、薬物は、腫瘍細胞において、カテプシンによって放出される。あるいは、非切断可能リンカー、例えば、チオエーテル連結を使用することができる。追加の付着基および／またはスペーサーも、含まれる。
抗体薬物コンジュゲート中の抗体は、そのような断片の小さなサイズが、組織部位（例えば、固形腫瘍）への浸透を支援することができるので、抗体断片、例えば、Ｆａｂ’２または本明細書において記載される他の抗原結合性断片である。
本発明による抗ＩＣＯＳ抗体は、イムノサイトカインとして提供される。抗ＩＣＯＳ抗体はまた、併用療法において、イムノサイトカインとともに投与することができる。いくつかの抗体の例は、抗ＩＣＯＳとの併用療法における使用のために本明細書において記載され、これらのいずれか（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）は、本発明における使用のためのイムノサイトカインとして提供される。イムノサイトカインは、ＩＬ－２などのサイトカインにコンジュゲートされた抗体分子を含む。抗ＩＣＯＳ：ＩＬ－２コンジュゲートおよび抗ＰＤ－Ｌ１：ＩＬ－２コンジュゲートは、したがって、本発明のさらなる態様である。
ＩＬ－２サイトカインは、高（αβγ）親和性ＩＬ－２受容体および／または中親和性（αβ）ＩＬ－２受容体で活性を有する。イムノサイトカインにおいて使用されるＩＬ－２は、ヒト野生型ＩＬ－２、または１つもしくはそれ以上のアミノ酸の欠失、置換もしくは付加を有するバリアントＩＬ－２サイトカイン、例えば、Ｎ末端で１～１０アミノ酸の欠失を有するＩＬ－２である。他のＩＬ－２バリアントは、変異Ｒ３８ＡまたはＲ３８Ｑを含む。
抗ＰＤ－Ｌ１イムノサイトカインの例は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、ここで、重鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向で、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメイン；ならびに
ｂ）重鎖定常領域；
を含み、
軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向で、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメイン；
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）；
ｅ）場合により、リンカー（Ｌ）；ならびに
ｆ）ＩＬ－２サイトカイン；
を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗原結合部位によって構成され；
イムノサイトカインは、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤ（配列番号６０９）（ここで、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸であり、Ｘ４は、存在するか、または非存在のいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸である）を含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含む。
ＶＨおよびＶＬドメインは、本明細書において挙げられた任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨおよびＶＬドメイン、例えば、１Ｄ０５のＶＨおよびＶＬドメインである。
ＩＬ－２は、ヒト野生型またはバリアントＩＬ－２である。
１．６．１６．ワクチン接種
抗ＩＣＯＳ抗体は、ワクチン組成物において提供されるか、またはワクチン調製物とともに共投与される。ＩＣＯＳは、Ｔ濾胞性ヘルパー細胞形成および胚中心反応に関与する［３７］。そのため、アゴニストＩＣＯＳ抗体は、ワクチン有効性を増強する分子アジュバントとしての潜在的な臨床有用性を有する。抗体は、Ｂ型肝炎、マラリア、ＨＩＶに対するワクチンなどの多数のワクチンの保護有効性を増加させるために使用することができる。
ワクチン接種の状況において、抗ＩＣＯＳ抗体は、一般に、Ｆｃエフェクター機能を欠き、したがって、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたはＡＤＣＰを媒介しないものである。抗体は、Ｆｃ領域を欠くか、またはエフェクターがゼロの定常領域を有するフォーマットで提供される。場合により、抗ＩＣＯＳ抗体は、１つもしくはそれ以上の種類のＦｃ受容体に結合するが、ＡＤＣＣ、ＣＤＣもしくはＡＤＣＰ活性を誘導しないか、または野生型ヒトＩｇＧ１と比較して、より低いＡＤＣＣ、ＣＤＣおよびＡＤＣＰ活性を示す、重鎖定常領域を有することができる。そのような定常領域は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたはＡＤＣＰ活性の引き金を引く原因となる特定のＦｃ受容体に結合することができないか、またはより低い親和性でそれに結合することができる。あるいは、細胞のエフェクター機能が、ワクチン接種の状況において許容されるまたは所望される場合、抗ＩＣＯＳ抗体は、Ｆｃエフェクター機能が陽性である重鎖定常領域を含むことができる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ４およびＩｇＧ４．ＰＥフォーマットのいずれかは、例えば、ワクチン接種レジメンにおいて抗ＩＣＯＳ抗体のために使用することができ、好適なアイソタイプおよび抗体定常領域の他の例は、本明細書の他の場所においてより詳細に示される。
１．６．１７．製剤および投与
抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであるが、好ましくは、治療的使用のためのモノクローナル抗体として提供される。それらは、場合により異なる結合特異性の抗体を含む、他の抗体の混合物の一部として提供される。
本発明による抗体、およびコード核酸は、通常、単離された形態で提供される。そのため、抗体、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン、ならびに核酸は、それらの天然環境またはそれらの生成環境から精製されて提供される。単離された抗体および単離された核酸は、それらが天然で会合する材料、例えば、それらがインビボ、またはそのような調製がインビトロでの組換えＤＮＡ技術によってである場合にそれらが調製される環境（例えば、細胞培養）において見出される、他のポリペプチドまたは核酸を含まないか、または実質的に含まない。場合により、単離された抗体または核酸は、（１）それとともに通常見出されるであろう少なくとも一部の他のタンパク質を含まない、（２）同じ起源由来、例えば、同じ種由来の他のタンパク質を実質的に含まない、（３）異なる種由来の細胞によって発現される、（４）少なくとも約５０パーセントのポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、もしくはそれが天然で会合する他の材料から分離されている、（５）それが天然で関連しないポリペプチドと作動可能に会合する（共有結合性または非共有結合性相互作用によって）、または（６）天然に存在しない。
抗体または核酸は、希釈剤またはアジュバントとともに製剤化され、さらに実用的な目的のために単離され、例えば、それらは、イムノアッセイにおける使用のためにマイクロタイタープレートをコーティングするために使用される場合、担体と混合され、療法において使用される場合、薬学的に許容される担体または希釈剤と混合される。本明細書の他の場所において記載されるように、他の活性成分も、治療用調製物に含まれる。抗体は、インビボで天然に、もしくはＣＨＯ細胞などの異種真核細胞の系によって、グリコシル化されるか、またはそれらは（例えば、原核細胞における発現によって生成される場合）アグリコシル化される。本発明は、改変されたグリコシル化パターンを有する抗体を包含する。一部の適用において、望ましくないグリコシル化部位を除去する改変は有用であり、または例えばフコース部分の除去は、ＡＤＣＣ機能を増加させることができる［３８］。他の適用において、ガラクトシル化の改変は、ＣＤＣを改変するために行うことができる。
典型的には、単離された生成物は、所与の試料の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％または少なくとも約５０％を構成する。抗体は、治療的使用、診断的使用、予防的使用、研究的使用または他の使用を妨げる、その天然環境または生成環境において見出されるタンパク質またはポリペプチドまたは他の混入物を実質的に含まない。
抗体は、その生成環境（例えば、天然または組換え）の構成要素から、特定、分離および／または回収することができる。単離された抗体は、その生成環境からのすべての他の構成要素との会合を含んでおらず、例えば、その結果、抗体は、ＦＤＡの承認可能な標準または承認標準まで単離されている。その生成環境の混入構成要素、例えば、組換えトランスフェクト細胞から生じるものは、典型的には、抗体についての研究的使用、診断的使用または治療的使用を妨げる材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含む。一部の実施形態において、抗体は、（１）例えば、Ｌｏｗｒｙ法によって決定される抗体の９５重量％超まで、一部の実施形態において、９９重量％超まで；（２）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な度合いまで、または（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用して、非還元条件または還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均一となるまで、精製される。単離された抗体は、抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、組換え細胞内の生体内原位置に抗体を含む。しかしながら、通常、単離された抗体またはそのコード核酸は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。
本発明は、本明細書において記載される抗体を含む治療用組成物を提供する。そのような抗体をコードする核酸を含む治療用組成物も提供される。コード核酸は、本明細書の他の場所においてより詳細に記載され、ＤＮＡおよびＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡを含む。本明細書において記載される治療的方法において、抗体をコードする核酸および／またはそのような核酸を含有する細胞の使用は、抗体それ自身を含む組成物に対する代替として（またはそれに加えて）使用することができる。抗体をコードする核酸を含有する細胞であって、場合により、核酸がゲノムに安定的に組み込まれている細胞は、このようにして、患者における治療的使用のための医薬となる。抗ＩＣＯＳ抗体をコードする核酸は、ヒトＢリンパ球、場合により、意図される患者に由来し、エクスビボで改変されたＢリンパ球に導入することができる。場合により、メモリーＢ細胞が使用される。コード核酸を含有する細胞の患者への投与は、抗ＩＣＯＳ抗体を発現することができる細胞のリザーバーを提供し、これは、単離された核酸または単離された抗体の投与と比較して、より長期間にわたって治療的利益を提供することができる。
組成物は、好適な担体、賦形剤、および改善された移動、送達、耐容性などを提供するために製剤に組み込まれる他の薬剤を含有することができる。数多くの適切な製剤は、すべての製薬化学者に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａにおいて見出すことができる。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮＴ（商標）など）を含有する脂質（カチオン性またはアニオン性）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンｃａｒｂｏｗａｘ（さまざまな分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにｃａｒｂｏｗａｘを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８～３１１も参照されたい。組成物は、抗体または核酸を医療用注射緩衝液および／またはアジュバントと組み合わせて含むことができる。
抗体またはそれらのコード核酸は、患者への所望の投与の経路のために、例えば、注射用の液体（場合により、水溶液）に製剤化される。さまざまな送達システムは、公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができる。導入の方法としては、限定されるものではないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が挙げられる。皮下投与のために抗体を製剤化するには、典型的には、静脈内調製物と比較して、それらをより少ない体積に濃縮することを必要とする。本発明による抗体の高い効力は、皮下製剤を実用化するのに十分に低い用量でのそれらの使用に役立ち、あまり強力ではない抗ＩＣＯＳ抗体と比較して利点を示す。
組成物は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を通した吸収によって、投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身的または局所的である。
医薬組成物は、ベシクル、特に、リポソームで送達することもできる（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７～１５３３頁；Ｔｒｅａｔら（１９８９）ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ、Ｌｏｐｅｚ ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編）、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、３５３～３６５頁；Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同書、３１７～３２７頁を参照されたい；一般に同書を参照されたい）。
ある特定の状況において、医薬組成物は、制御放出システムで送達することができる。一実施形態において、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ、上記；Ｓｅｆｔｏｎ（１９８７）ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１頁を参照されたい）。別の実施形態において、ポリマー材料を使用することができる；Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．（１９７４）を参照されたい。さらに別の実施形態において、制御放出システムは、組成物の標的の近位に置くことができ、そのため、全身用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上記、第２巻、１１５～１３８頁、１９８４を参照されたい）。
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴などのための剤形を含むことができる。これらの注射用調製物は、公に知られた方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、上記に記載された抗体またはその塩を、注射剤のために通常使用される無菌水性媒体または油性媒体に、溶解、懸濁または乳化することによって、調製することができる。注射のための水性媒体として、例えば、生理的食塩水、グルコースおよび他の補助剤を含有する等張溶液などがあり、これは、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］などのような適切な可溶化剤と組み合わせて使用することができる。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが用いられ、これは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような可溶化剤と組み合わせて使用することができる。このようにして調製された注射剤は、適切なアンプルに充填することができる。本発明の医薬組成物は、標準的な針および注射器を用いて、皮下または静脈内に送達することができる。処置が、臨床における使用に制限されないことが想定される。したがって、無針デバイスを使用する皮下注射も有利である。皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、容易に、本発明の医薬組成物の送達における適用を有する。そのようなペン型送達デバイスは、再利用可能であるか、または使い捨てである。再利用可能なペン型送達デバイスは、一般に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物のすべてが投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは、容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達デバイスは、再利用することができる。使い捨てペン型送達デバイスにおいて、交換可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバーに保持された医薬組成物で事前に充填されている状態で販売される。リザーバーの医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。多数の再利用可能なペン型送達デバイスおよび自動注入装置送達デバイスは、本発明の医薬組成物の皮下送達における適用を有する。例としては、ほんの数例を挙げると、必ず限定されるものではないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、Ｎ．Ｊ．）、ＯＰＴＩＰＥＮＴ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫＴ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達における適用を有する使い捨てペン型送達デバイスの例としては、必ず限定されるものではないが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）が挙げられる。
有利には、上記に記載された経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量で剤形に調製される。単位用量におけるそのような剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤などが挙げられる。含有される前述の抗体の量は、一般に、単位用量の剤形あたり約５～約５００ｍｇ；特に、注射剤の形態において、前述の抗体は、約５～約１００ｍｇで、他の剤形について、約１０～約２５０ｍｇで含有される。
抗体、核酸またはそれを含む組成物は、バイアル、注射器、ＩＶ容器または注射デバイスなどの医療用容器に含有される。ある例において、抗体、核酸または組成物は、インビトロにあり、滅菌容器中にある。ある例において、本明細書において記載される治療的方法における使用のための抗体、包装および使用説明書を含むキットが提供される。
本発明の一態様は、本発明の抗体または核酸、およびその例が上記にリストされる１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物である。「薬学的に許容される」とは、米国連邦政府または州政府の規制機関によって承認されたもしくは承認可能であること、または米国薬局方もしくはヒトを含む動物における使用のための他の一般に認識される薬局方にリストされていることを指す。薬学的に許容される担体、賦形剤またはアジュバントは、薬剤、例えば、本明細書において記載される任意の抗体または抗体鎖と一緒に患者に投与することができ、治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与される場合に、その薬理学的活性を破壊せず、非毒性である。
一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、本発明による組成物における単独の活性成分である。そのため、組成物は、抗体からなるか、または抗体と１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤からなる。しかしながら、本発明による組成物は、場合により、１つまたはそれ以上の追加の活性成分を含む。抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わされる薬剤の詳細な記載は、本明細書の他の場所において提供される。場合により、組成物は、組み合わされた調製物中、例えば、抗ＩＣＯＳ抗体および１つまたはそれ以上の他の抗体を含む単一製剤中に、複数の抗体（またはコード核酸）を含有する。本発明による抗体または核酸とともに投与することが所望される他の治療剤としては、鎮痛剤が挙げられる。任意のそのような薬剤または薬剤の組み合わせは、組み合わされた調製物または別々の調製物にかかわらず、本発明による抗体または核酸と組み合わせて投与することができ、またはそれを有する組成物で提供することができる。本発明による抗体または核酸は、別の治療剤または挙げられたものなどの薬剤と、別々におよび逐次的に、または同時的に、および場合により組み合わされた調製物として、投与される。
特定の治療適応症における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体は、許容される標準治療と組み合わせることができる。そのため、抗がん処置のために、抗体療法は、例えば、化学療法、外科手術および放射線療法も含む処置レジメンにおいて用いることができる。放射線療法は、罹患組織に直接または全身に送達される、単回用量または分割用量である。
複数の組成物は、別々にまたは同時に投与することができる。別々の投与は、異なる時間で、例えば、少なくとも１０、２０、３０、もしくは１０～６０分離れて、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２時間離れて投与される２つの組成物を指す。２４時間離れて、またはさらに長く離れて組成物を投与することもできる。あるいは、２つ以上の組成物は、同時に、例えば、１０分未満または５分未満離れて投与することができる。同時に投与される組成物は、一部の態様において、構成要素のそれぞれについて類似のまたは異なる持続放出メカニズムありまたはなしで、混合物として投与することができる。
抗体およびそれらのコード核酸は、治療剤として使用することができる。本明細書における患者は、一般に、哺乳動物、典型的には、ヒトである。抗体または核酸は、例えば、本明細書において挙げられた任意の投与経路によって、哺乳動物に投与することができる。
投与は、通常、「治療有効量」であり、これは、患者に利益を示すのに十分な、それが投与される所望の効果を生じる量である。正確な量は、処置の目的に依存し、公知の技法を使用して、当業者によって確認される（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。処置の処方、例えば、投薬量の決定などは、一般開業医および他の医師の責任の範囲内であり、処置されている疾患の症状の重症度および／またはその進行に依存する。抗体または核酸の治療有効量または好適な用量は、そのインビトロ活性および動物モデルにおけるインビボ活性を比較することによって決定することができる。マウスおよび他の試験動物における有効投薬量のヒトへの外挿のための方法は公知である。
本明細書における実施例において記載されるインビボ研究によって示されるように、抗ＩＣＯＳ抗体は、驚くべき低用量を含む、ある範囲の用量で有効である。驚くべきことに、これらの前臨床研究を考慮して、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）の体重あたりの低い用量または抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）の低い固定用量は、さまざまながんにわたって、ヒト患者における部分的なまたは完全な抗腫瘍活性を生じるのに有効であった。
抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、全長抗体またはその抗原結合性断片）は、以下の用量あたりの値または範囲の１つの量で対象に投与することができる：
約１０μｇ／ｋｇ体重～約３ｍｇ／ｋｇ体重、
約１０μｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、
約１０μｇ／ｋｇ体重～約０．３ｍｇ／ｋｇ体重、
約１０μｇ／ｋｇ体重～約０．１ｍｇ／ｋｇ体重、または
約１０μｇ／ｋｇ体重～約３０μｇ／ｋｇ体重。
成人ヒトにおける一定用量について、好適な用量は、約１０ｍｇ以下、９ｍｇ以下もしくは約８ｍｇ以下、例えば、約８ｍｇ、約７ｍｇ、約６ｍｇ、約５ｍｇ、約４ｍｇ、約３ｍｇ、約２．４ｍｇ、約２ｍｇ、約１ｍｇ、約０．８ｍｇもしくは約０．５ｍｇ、またはその間の任意の値である。一部の実施形態において、対象は、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）を用量あたり約０．５～１０ｍｇ投与される。一部の実施形態において、対象は、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）を用量あたり約０．５～８ｍｇ投与される。一部の実施形態において、対象は、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）を用量あたり約０．８～８ｍｇ投与される。一部の実施形態において、対象は、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）を用量あたり約０．８～２．４ｍｇ投与される。
一部の実施形態において、対象は、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）を用量あたり約８ｍｇ投与される。一部の実施形態において、対象は、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）を用量あたり約２．４ｍｇ投与される。一部の実施形態において、対象は、抗ＩＣＯＳ抗体（例えば、ＫＹ１０４４）を用量あたり約０．８ｍｇ投与される。
本明細書において記載される処置の方法において、１用量またはそれ以上の用量を投与することができる。一部の場合において、単回用量は、長期間利益を達成するために有効である。そのため、方法は、単回用量の抗体、そのコード核酸または組成物を投与することを含むことができる。あるいは、複数回用量は、通常、逐次的に、および数日、数週間または数か月のある期間離れて、投与することができる。抗ＩＣＯＳ抗体は、２～６週間、例えば、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごとまたは６週間ごとの間隔で、対象に繰り返し投与することができる。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、３週間ごとに対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体は、６週間ごとに対象に投与される。一部の実施形態において、ＫＹ１０４４は、３週間ごとに対象に投与される。一部の実施形態において、ＫＹ１０４４は、６週間ごとに対象に投与される。場合により、抗ＩＣＯＳ抗体は、１か月に１回、またはそれより少ない頻度で、例えば、２か月ごとまたは３か月ごとに対象に投与することができる。したがって、患者を処置する方法は、単回用量の抗ＩＣＯＳ抗体を対象に投与し、少なくとも１か月間、少なくとも２か月間、少なくとも３か月間、投与を繰り返さないこと、場合により、少なくとも１２か月間、投与を繰り返さないことを含むことができる。
一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体、例えば、ＫＹ１０４４は、少なくとも６か月間対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体、例えば、ＫＹ１０４４は、６か月間対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体、例えば、ＫＹ１０４４は、少なくとも１２か月間対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体、例えば、ＫＹ１０４４は、１２か月間対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＩＣＯＳ抗体、例えば、ＫＹ１０４４は、１２か月よりも長く対象に投与される。
一部の実施形態において、ＫＹ１０４４は、３週間ごとに、少なくとも６か月間、例えば、６か月間、１２か月間、または１２か月よりも長く対象に投与される。
同等の治療効果は、１用量または複数の用量の抗ＩＣＯＳ抗体のいずれかを使用して得ることができ、これは、腫瘍微小環境をリセットするのに有効である抗体の単回用量の結果である。医師は、抗ＩＣＯＳ抗体の投与レジメンを、疾患の状態および抗ＩＣＯＳ抗体が組み合わされている任意の他の治療剤または治療方策（例えば、外科手術、放射線療法など）を考慮して、疾患および治療中の患者に合わせることができる。一部の実施形態において、有効用量の抗ＩＣＯＳ抗体は、例えば、３週間ごとに１回、２週間ごとに１回または毎週１回などの１か月に１回よりも高い頻度で投与される。抗ＩＣＯＳ抗体による処置は、少なくとも１か月、少なくとも６か月または少なくとも１年の期間にわたって投与される複数回用量を含むことができる。複数回用量は、同じまたは異なる。
本明細書において使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「回復（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）」という用語は、治療的処置を指し、ここで、その目的は、疾患または障害に関連する状態の進行または重症度を、反転させること、軽減すること、回復させること、阻害すること、減速させることまたは止めることである。「処置すること」という用語は、状態、疾患または障害の少なくとも１つの有害効果または症状を低減することまたは軽減することを含む。１つまたはそれ以上の症状または臨床マーカーが低減される場合に、処置は、一般に、「有効」である。あるいは、疾患の進行が低減または停止される場合に、処置は「有効」である。すなわち、「処置」は、症状またはマーカーの改善だけではなく、処置がない場合に予想されるものと比較して、症状の休止、または少なくとも進行もしくは悪化を減速することも含む。有益なまたは所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、検出可能もしくは検出不能にかかわらず、１つもしくはそれ以上の症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患の進行の遅延もしくは減速、疾患状態の回復もしくは緩和、寛解（部分的もしくは全体的にかかわらず）、および／または死亡率の減少が挙げられる。疾患の「処置」という用語は、疾患の症状または副作用の除去を提供すること（緩和的処置を含む）も含む。有効である処置について、完全な治癒は企図されない。方法は、ある特定の態様において、同様に、治癒を含むことができる。本発明の文脈において、処置は、予防的処置である。
一部の実施形態において、「処置すること」は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置することを含む。本明細書において使用される場合、そのような疾患または状態としては、限定されるものではないが、腫瘍および／またはがんが挙げられる。一部の実施形態において、がんは、進行性および／または転移性がんである。
本明細書において使用される場合、ｍｇでの投薬量に関する「約」は、述べられた値が１．５ｍｇ未満である場合に、述べられた値のプラスまたはマイナス０．１ｍｇを指し、述べられた値が少なくとも１．５ｍｇである場合に、述べられた値のプラスまたはマイナス０．５ｍｇを指す。
１．６．１８．Ｔ細胞療法
ＷＯ２０１１／０９７４７７号は、場合により、Ｔｈ１７分極化剤、例えば、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、中和抗ＩＦＮγおよび／または抗ＩＬ－４の存在下で、Ｔ細胞の集団を、一次活性シグナルを提供する第１の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）およびＩＣＯＳを活性化する第２の薬剤（例えば、抗ＩＣＯＳ抗体）と接触させることによって、Ｔ細胞を作成するおよび増やすための抗ＩＣＯＳ抗体の使用を記載している。本明細書において記載される抗ＩＣＯＳ抗体は、そのような方法において使用されて、Ｔ細胞集団を提供することができる。培養され、増やされた、治療活性（例えば、抗腫瘍活性）を有するＴ細胞の集団を作成することができる。ＷＯ２０１１／０９７４７７号において記載されるように、そのようなＴ細胞は、免疫療法によって患者を処置する方法において治療的に使用することができる。
１．６．１９．治療薬候補としての抗ＩＣＯＳ抗体についての形態的アッセイ
候補治療薬の抗ＩＣＯＳ抗体が固相にカップリングされ、ＩＣＯＳ発現Ｔ細胞と接触する場合に、それらが細胞において形態的変化を誘導することができたことが観察された。抗ＩＣＯＳ抗体で最初にコーティングされたウェルへのＩＣＯＳ＋ Ｔ細胞の添加の際に、細胞は、それらの初期の円形形状から変化して、紡錘状の形状を取り、抗体コーティング表面に伸びて接着するのが見られた。この形態的変化は、対照抗体において観察されなかった。また、この効果は、用量依存性があることが見出され、表面上の抗体の濃度が増加するにつれて、より速くおよび／またはより顕著な形状の変化が起こった。形状の変化は、ＩＣＯＳに結合するＴ細胞のおよび／または抗ＩＣＯＳ抗体によるアゴニズムの代替指標を提供する。アッセイは、Ｔ細胞表面上でＩＣＯＳの多量体化を促進する抗体を特定するために使用することができる。そのような抗体は、治療薬候補のアゴニスト抗体を示す。好都合には、このアッセイによって提供される視覚的指標は、特に多くの数の、抗体または細胞をスクリーニングする簡素な方法である。アッセイは、ハイスループットシステムにおいて実行されるように自動化することができる。
したがって、本発明の一態様は、ＩＣＯＳに結合する抗体を選択するための、場合により、ＩＣＯＳアゴニスト抗体を選択するための、アッセイであり、アッセイは、以下を含む：
試験ウェルの基材に固定化された（付着または接着した）抗体のアレイを準備すること；
ＩＣＯＳ発現細胞（例えば、活性化された初代Ｔ細胞またはＭＪ細胞）を試験ウェルに添加すること；
細胞の形態を観察すること；
円形からウェル内の基材に対して平らになる細胞の形状の変化を検出すること；ここで、形状の変化は、抗体が、ＩＣＯＳに結合する抗体、場合によりＩＣＯＳアゴニスト抗体であることを示すこと、および
試験ウェルから抗体を選択すること。
アッセイは、場合により、並行して、例えば、９６ウェルプレートフォーマットで、試験のための異なる抗体をそれぞれ含有する複数の試験ウェルを用いて実行することができる。基材は、好ましくは、ウェルの内側表面である。そのため、それに対する細胞の平坦化が観察される二次元の表面が提供される。例えば、ウェルの底および／または壁は、抗体でコーティングすることができる。抗体の基材への繋ぎ止めは、抗体の定常領域を介してである。
ＩＣＯＳに結合しないことが公知の抗体、好ましくは、使用されるＩＣＯＳ発現細胞の表面上の抗原に結合しない抗体などの陰性対照を含むことができる。アッセイは、形態的変化の度合いを定量化すること、および複数の抗体が試験される場合、１つまたはそれ以上の他の試験抗体よりも大きな形態的変化を誘導する抗体を選択することを含むことができる。
抗体の選択は、目的の試験ウェル中に存在する抗体をコードする核酸を発現させること、またはその抗体のＣＤＲもしくは抗原結合ドメインを含む抗体を発現させることを含むことができる。抗体は、場合により、再フォーマットされて、例えば、選択された抗体、例えば、抗体断片または異なる定常領域を含む抗体の抗原結合ドメインを含む抗体を提供することができる。選択された抗体は、好ましくは、ヒトＩｇＧ１定常領域、または本明細書において記載される他の定常領域とともに提供される。選択された抗体は、１つまたはそれ以上の追加成分を含む組成物にさらに製剤化することができ、好適な医薬製剤は、本明細書の他の場所において議論される。
本発明のさまざまなさらなる態様および実施形態は、本開示を考慮して、当業者に明らかであろう。参照された任意の特許または特許出願の公開された米国対応物を含む、本明細書において挙げられたすべての文献は、それらの全体が、参照によって本明細書に組み入れられる。
１．７．実験例
抗ＩＣＯＳ抗体の作成、特徴付けおよび性能は米国特許第９，９５７，３２３号において以前に開示された。
１．８．実施例１：マウスにおけるＡ２０腫瘍成長に対する抗ＩＣＯＳ Ａｂの単剤療法有効性
抗ＩＣＯＳ抗体 ＳＴＩＭ００１ ｍＩｇＧ２ａおよびＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａは、マウスＡ２０同系モデルにおいてインビボで単剤療法として使用された場合に、強い抗腫瘍有効性をそれぞれ示した。
１．８．１．材料および方法
有効性研究は、皮下Ａ２０細網肉腫モデル（ＡＴＣＣ、ＴＩＢ－２０８）を使用して、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて行った。Ａ２０細胞株は、老齢のＢＡＬＢ／ｃＡｎＮ マウスにおいて見出された自発的細網細胞新生物に由来するＢＡＬＢ／ｃ Ｂ細胞リンパ腫株である。この細胞株は、ＩＣＯＳＬに陽性であることが報告されている。
ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ＵＫによって、＞１８グラムで供給され、特定の無菌条件下で収容した。合計で５×１０ｅ５個のＡ２０細胞（Ｐ２０を下回る継代数）を、マウスの右脇腹に皮下注射した。Ａ２０細胞を、インビトロで継代し、ＰＢＳで２回洗浄し、１０％のウシ胎児血清で補充されたＲＰＭＩに再懸濁した。細胞生存率が、腫瘍細胞注射の時に、８５％を上回っていることを確認した。他に明記されない限り、抗体またはアイソタイプの投与を、腫瘍細胞注射後８日目から開始した。
ＳＴＩＭ００１およびＳＴＩＭ００３ 抗ＩＣＯＳ抗体を、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプフォーマットで作成した。マウス交差反応性抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＡｂＷ）も、同じアイソタイプフォーマット（マウスＩｇＧ２ａ）で作成した。ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００３および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を、腫瘍細胞移植後８日目から開始して、週に２回、２００μｇのそれぞれの抗体で、腹腔内（ＩＰ）投薬した（８～２９日目の間に３週間投薬）。動物の体重および腫瘍体積を、腫瘍細胞注射の日から週に３回測定した。腫瘍体積を、改変楕円体式１／２（長さ×幅２）の使用によって計算した。マウスは、それらの腫瘍が１２ｍｍの平均直径に達するまで、研究が継続された。実験を、腫瘍細胞移植後４３日目に止めた。腫瘍成長を、モニターし、アイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）抗体で処置された動物の腫瘍と比較した。処置群を、下記の表Ｅ２０に示す。
Figure 2024518843000001
１．８．２．結果
Ａ２０腫瘍モデルにおけるＳＴＩＭ００１またはＳＴＩＭ００３（ｍＩｇＧ２ａ）いずれかの単剤療法投与は、完全な抗腫瘍応答を生じた（図３、図４）。ＳＴＩＭ００１またはＳＴＩＭ００３のいずれかを投与されたすべての動物は、疾患が治癒した。これは、アイソタイプ対照およびＰＤ－Ｌ１ ｍＩｇＧ２ａ群の結果と対照的である（図１、図２）。まれなケースにおいて、腫瘍の退縮が、アイソタイプ対照（自発的退縮）および抗ＰＤＬ－１群の一部の動物について観察されたが、抗ＩＣＯＳ抗体による処置は、有意に高い有効性を生じた。研究の最後に、８頭の対照動物のうち３頭、および８頭の抗ＰＤＬ－１処置動物のうち２頭は、腫瘍を有していなかった。しかしながら、ＳＴＩＭ００１またはＳＴＩＭ００３のいずれかで処置されたすべての動物は、研究の最後に腫瘍がなく（両群において８頭のマウスのうち８頭）、抗ＩＣＯＳ抗体を使用して１００％の治癒を示した。
１．９．実施例２：抗ＩＣＯＳ抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の組み合わせについてのＪ５５８骨髄腫同系モデルにおけるインビボでの強い抗腫瘍有効性
抗ＩＣＯＳ抗体ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａおよび抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＡｂＷ ｍＩｇＧ２ａを、Ｊ５５８腫瘍モデルにおいて、個々におよび組み合わせて投与した。これは、骨髄腫の同系マウスモデルである。抗ＩＣＯＳ抗体は、単剤療法として、または抗ＰＤ－Ｌ１との組み合わせで投薬された場合に、腫瘍成長を阻害することが分かった。
１．９．１．材料および方法
抗腫瘍有効性研究を、皮下Ｊ５５８形質細胞腫：骨髄腫細胞株（ＡＴＣＣ、ＴＩＢ－６）を使用して、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて行った。Ｂａｌｂ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ＵＫによって、６～８週齢および＞１８ｇで供給され、特定の無菌条件下で収容した。合計で５×１０６個の細胞（Ｐ１５を下回る継代数）を、マウスの右脇腹に皮下注射（１００μｌ）した。他に明記されない限り、腫瘍注射後１１日目に、動物を腫瘍サイズに基づいて無作為化し、処置を開始した。Ｊ５５８細胞を、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｅｎｚｙｍｅ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を使用することによってインビトロで継代し、ＰＢＳで２回洗浄し、１０％のウシ胎児血清で補充されたＤＭＥＭに再懸濁した。細胞生存率が、腫瘍細胞注射の時に、９０％を上回っていることを確認した。
処置を、腫瘍が約１４０ｍｍ＾３の平均体積に達した時に開始した。次いで、動物を類似する平均腫瘍サイズを有する４つの群に割り当てた（投薬群について、表Ｅ－２１を参照されたい）。福祉（まれ）または腫瘍サイズに起因して動物を研究から除かなければならなかった場合を除いて、マウス交差反応性である両方の抗体を、１１日目（腫瘍細胞移植後）から３週間、週に２回、ＩＰ投薬した（図８）。対照として、動物の群（ｎ＝１０）に、生理食塩水溶液を使用して、同じ時に投薬した。併用群について、ＳＴＩＭ００３および抗ＰＤＬ１抗体の両方を、それぞれ、６０μｇおよび２００μｇ（０．９％生理食塩水中）で、同時的にＩＰ投薬した。腫瘍成長を、３７日にわたってモニターし、生理食塩水で処置された動物の腫瘍と比較した。動物の体重および腫瘍体積を、腫瘍細胞注射の日から週に３回測定した。腫瘍体積を、改変楕円体式１／２（長さ×幅２）の使用によって計算した。マウスは、それらの腫瘍が１２ｍｍ３の平均直径に達するまで、またはまれな場合において、腫瘍潰瘍化の発生が観察された時（福祉）まで、研究が継続された。
Figure 2024518843000002
１．９．２．結果
Ｊ５５８同系腫瘍は、非常に攻撃的であり、生理食塩水対照群のすべての動物（ｎ＝１０）は、腫瘍サイズに起因して、２１日目までに研究から除かなければならなかった。抗ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａおよび抗ＰＤＬ１ ｍＩｇＧ２ａは両方とも、それぞれ、３７．５％および７５％の疾患が治癒した動物で、このモデルにおいて、単剤療法として良好な有効性を実証した。重要なことには、２つの抗体の組み合わせは、３７日目までに、１００％の動物において、形質細胞腫瘍の拒絶をもたらした。データを図８に示す。
１．１０．実施例３：抗ＰＤ１の投与は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体よりも有意にＴＩＬにおけるＩＣＯＳ発現を増加させる。
薬力学的研究を、確立されたＣＴ２６腫瘍を保持する動物において行って、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）のサブセットにおけるＩＣＯＳ発現に対する抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体による処置の効果を評価した。以下の抗体を比較した：
・抗ＰＤ－Ｌ１ ＡｂＷ ｍＩｇＧ１［限定的なエフェクター機能］
・抗ＰＤ－Ｌ１ ＡｂＷ ｍＩｇＧ２ａ［エフェクター機能を有する］
・抗ＰＤ－Ｌ１ １０Ｆ９．Ｇ２ラットＩｇＧ２ｂ［エフェクター機能を有する］
・抗ＰＤ１抗体ＲＭＴ１－１４ラットＩｇＧ２ａ［エフェクターがゼロ］。
処置されたマウスの腫瘍を、単離し、単一細胞に解離し、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸＰ３およびＩＣＯＳについて染色した。
１．１０．１．材料および方法
ラット抗ＰＤ－１ ＲＭＰ１－１４ ＩｇＧ２ａ（ＢｉｏＸＣｅｌｌ；カタログ番号：ＢＥ０１４６）、ラット抗ＰＤ－Ｌ１ １０Ｆ９．Ｇ２ ＩｇＧ２ｂ（Ｂｉｏ－Ｌｅｇｅｎｄ；カタログ番号：１２４３２５）ならびに抗ＰＤ－Ｌ１ ＡｂＷ ｍＩｇＧ１およびｍＩｇＧ２ａを、腫瘍細胞移植後１３および１５日目に１３０μｇをｉ．ｐ．投薬することによって、ＣＴ２６腫瘍モデルにおいて試験した。１６日目に、動物を選別し、マウス腫瘍をＦＡＣＳ分析のために採取した。腫瘍を、マウス腫瘍解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して解離し、ホモジネートした。得られた細胞懸濁液を、７０μＭのフィルターを通して澄明化し、ペレット化し、９６ウェルプレートにおいて、２百万個細胞／ウェルでＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞懸濁液を、抗１６／３２ｍＡｂ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とともにインキュベートし、すべてｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．から入手したＣＤ３（１７Ａ２）、ＣＤ４５（３０－Ｆ１１）、ＣＤ４（ＲＭ４－５）、ＣＤ８（５３－６．７）およびＩＣＯＳ（７Ｅ．１７Ｇ９）に特異的なＦＡＣＳ抗体で染色した。細胞を、ＬｉｖｅＤｅａｄ Ｙｅｌｌｏｗ ｆｉｘａｂｌｅ生存色素（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でも染色した。Ｆｏｘｐ３の細胞内染色について、試料を固定し、透過処理し、Ｆｏｘｐ３に特異的な抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＦＪＫ－１６ｓ）で染色した。試料をＰＢＳに再懸濁し、データを、Ａｔｔｕｎｅフローサイトメーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において取得し、ＦｌｏｗＪｏ Ｖ１０ソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。
１．１０．２．結果
抗ＰＤ１および抗ＰＤ－Ｌ１抗体による処置は、測定時点でＩＣＯＳを発現するＣＤ８細胞およびＴ Ｒｅｇのパーセンテージのわずかな増加のみをもたらした。しかしながら、抗ＰＤ１ラットＩｇＧ２ａに応答して、ＩＣＯＳ発現の明確で有意な（生理食塩水処理群を超える）増加（ｄＭＦＩの増加）が、ＩＣＯＳ＋ｖｅ ＣＤ８細胞の表面上で観察された。ＩＣＯＳ発現は、ＣＤ４エフェクターおよびＣＤ４ Ｔ Ｒｅｇ細胞において上方調節されるが、これは統計学的有意性には達しなかったことも指摘した。この抗ＰＤ１抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＩｇＧ２ａで辛うじて見られたＣＤ８エフェクター細胞上のＩＣＯＳ発現の著しい増加を誘導した。同様に、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の異なるフォーマットを比較する場合、処置された動物の一部において、最低のエフェクター機能を有する抗体（ｍＩｇＧ１）が、エフェクター機能を有する抗体（ｍＩｇＧ２ａおよびｒａｔＩｇＧ２ｂ）と比較した場合に、エフェクターＣＤ８およびＣＤ４細胞におけるより高いＩＣＯＳ発現と関連したことが観察され、これはまれに見られた。図９を参照されたい。
エフェクターＣＤ８／ＣＤ４ Ｔ細胞におけるＩＣＯＳ発現の増加は、抗ＩＣＯＳ抗体によって、これらの細胞を枯渇により感受性にする効果を有する（例えば、ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａによるマウスの処置において）。エフェクターＣＤ８およびＣＤ４ Ｔ細胞におけるより低いＩＣＯＳ誘導を示す抗体は、抗ＩＣＯＳ抗体と組み合わせる使用のために好ましい。この研究からのデータは、抗ＰＤ－Ｌ１エフェクター陽性抗体が、抗ＩＣＯＳエフェクター陽性抗体との組み合わせに特に好適であることを示し、本明細書における他の実施例において報告された抗ＰＤＬ１ ｍＩｇＧ２ａをＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａと組み合わせる場合に観察される抗腫瘍有効性を反映する。
１．１１．実施例４：Ｂ細胞リンパ腫同系モデルにおけるインビボでの単回用量の抗ＩＣＯＳ抗体単剤療法の強い抗腫瘍有効性
この実験は、単剤療法としてのＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａの抗腫瘍有効性を確認する。強い抗腫瘍有効性は、ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａの短い曝露後に実証された。
１．１１．１．材料および方法
有効性研究は、皮下Ａ２０細網肉腫モデル（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－ＴＩＢ－２０８）を使用して、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて行った。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ＵＫによって、６～８週齢および＞１８ｇで供給され、特定の無菌条件下で収容した。合計で５×１０Ｅ５個のＡ２０細胞（Ｐ２０を下回る継代数）を、マウスの右脇腹に皮下注射した。処置を、下記の表に示されるように、腫瘍細胞注射後８日目に開始した。Ａ２０細胞を、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｅｎｚｙｍｅ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を使用することによってインビトロで継代し、ＰＢＳで２回洗浄し、１０％のウシ胎児血清で補充されたＲＰＭＩに再懸濁した。細胞生存率が、腫瘍細胞注射の時に、８５％を上回っていることを確認した。ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａを、６０μｇ（２０ｇの動物について３ｍｇ／ｋｇと同等）の単回用量（ＳＤ）または６０μｇの複数回用量（ＭＤ、週に２回、３週間）のいずれかとして使用した。２つのスケジュールに応答して観察された抗腫瘍有効性を、生理食塩水で「処置された」動物（ＭＤ、週に２回、３週間）のものと比較した。抗体を、０．９％の生理食塩水中１ｍｇ／ｍｌとして、腹腔内（ＩＰ）投薬した。動物の体重および腫瘍体積を、腫瘍細胞注射の日から週に３回測定した。腫瘍体積を、改変楕円体式１／２（長さ×幅２）の使用によって計算した。マウスは、それらの腫瘍が１２ｍｍの平均直径に達するまで、またはまれに腫瘍潰瘍化の発生が観察された時（福祉）まで、研究が継続された。
Figure 2024518843000003
１．１１．２．結果
複数回用量および単回用量のＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａは両方とも、エンドポイント（４１日目）での腫瘍成長の徴候なしの動物の数によって示されるように、強く有意な単剤療法の抗腫瘍有効性をもたらした。ＳＤは、リンパ芽球性Ａ２０ Ｂ細胞を注射された、１０頭の動物のうち７頭の疾患からの治癒をもたらした一方で、複数回用量は、１０頭の動物のうち９頭の治癒をもたらした。生理食塩水処置群におけるすべての動物は、腫瘍サイズに起因して、４０日目までに研究から除かれなければならなかった。図１０を参照されたい。
人道的なエンドポイントの生存統計を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ７．０を使用して、カプランマイヤー曲線（図１１）から計算した。このアプローチを使用して、処置が生存の改善に関連したかを決定した。ハザード比（マンテル－ヘンツェル）値およびそれらの関連するＰ値（ログランク マンテル－コックス）を、下記の表に示す。
Figure 2024518843000004
１．１２．実施例５：ＣＴ－２６腫瘍保持動物における抗ＩＣＯＳ抗体の時間および用量依存性効果
この実施例は、ＣＴ－２６腫瘍を保持するマウスにおいて、免疫細胞に対する抗ＩＣＯＳ抗体の効果を評価する薬力学的研究の結果を示す。異なる組織由来のＴおよびＢ細胞サブタイプを、ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａの単回投与後に、ＦＡＣＳによって分析した。
１．１２．１．方法
ＣＴ－２６腫瘍保持動物に、腫瘍細胞移植後１２日目に、２００μｇ、６０μｇまたは６μｇの生理食塩水またはＳＴＩＭ００３をｉ．ｐ．投薬した。腫瘍組織、血液、腫瘍流入領域リンパ節（ＴＤＬＮ）および脾臓を、処置後１、２、３、４および８日目に採取した。腫瘍を、マウス腫瘍解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、解離して、単一細胞懸濁液にした。脾臓組織を、穏やかなＭＡＣＳ解離を使用して解離し、赤血球を、ＲＢＣ溶解緩衝液を使用して溶解した。腫瘍流入領域リンパ節を、機械的にばらばらにして、単一細胞懸濁液にした。得られた細胞懸濁液を、組織に応じて、７０μＭまたは４０μＭのいずれかのフィルターを通して澄明化し、次いで、細胞を、ＲＭＰＩ完全培地中で２回洗浄し、最後に、氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。総血液を血漿チューブに収集し、赤血球を、ＲＢＣ溶解緩衝液を使用して溶解し、細胞を、ＲＭＰＩ完全培地中で２回洗浄し、最後に、氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。全ての組織からの単一細胞懸濁液を、ＦＡＣＳ分析のために、９６ディープウェルプレートに分配した。細胞を、Ｌｉｖｅ Ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｙｅｌｌｏｗ生存色素（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。細胞懸濁液を、抗ＣＤ１６／ＣＤ３２ ｍＡｂ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とともにインキュベートし、すべてｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．から入手したＣＤ３（１７Ａ２）、ＣＤ４５（３０－Ｆ１１）、ＣＤ４（ＲＭ４－５）、ＣＤ８（５３－６．７）、ＣＤ２５（ＰＣ６１．５）、ＩＣＯＳＬ（ＨＫ５．３）、Ｂ２２０（ＲＡ３－６Ｂ２）、Ｋｉ－６７（ＳｏｌＡ１５）、ＣＤ１０７ａ（ｅＢｉｏ１Ｄ４Ｂ）、ＩＦＮ－γ（ＸＭＧ１．２）、ＴＮＦ－α（ＭＰ６－ＸＴ２２）、Ｆｏｘｐ３（ＦＪＫ－１６ｓ）およびＩＣＯＳ（７Ｅ．１７Ｇ９）に特異的なＦＡＣＳ抗体で染色した。ＦＡＣＳによるサイトカイン読み取りのために、腫瘍からの単一細胞懸濁液を、ブレフェルジン－Ａの存在下、４時間、２４ウェルプレートに蒔いた。細胞内染色のために、試料を、固定し、透過処理し、特異的抗体で染色した。試料を最後にＰＢＳに再懸濁し、データを、Ａｔｔｕｎｅフローサイトメーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において取得し、ＦｌｏｗＪｏ Ｖ１０ソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。
結果を下記に示し、議論する。
１．１２．２．ＩＣＯＳ発現は、ＣＴ２６モデルにおいて、腫瘍内Ｔ－ｒｅｇ上で高い
ＩＣＯＳを発現する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）のパーセンテージを、脾臓、血液およびＴＤＬＮにおける免疫細胞のパーセンテージと比較した場合、我々は、他の組織に対して、ＣＴ－２６腫瘍の微小環境においてより多くの免疫細胞が、ＩＣＯＳを発現したことを実証した。より重要なことには、すべての組織およびすべての時点におけるＩＣＯＳ陽性Ｔ－ｒｅｇ細胞のパーセンテージは、ＩＣＯＳに対して陽性のＣＤ４またはＣＤ８ エフェクターＴ細胞のパーセンテージよりも高かった。重要なことには、ＩＣＯＳについてのｄＭＦＩ（相対発現）も、類似する発現のランキングに従い、腫瘍内Ｔ－ｒｅｇは、他のＴＩＬサブタイプに対して、ＩＣＯＳ発現に対して高度に陽性であった。興味深いことに、この実験の時間枠内で、ＩＣＯＳ＋ ＴＩＬのパーセンテージの著しい変化は存在しなかった。類似の結果は、脾臓およびＴＤＬＮにおいても見られた。他方で、血液中において、ＩＣＯＳ発現は、Ｔエフェクター細胞において比較的安定であるが、実験の過程の間にＴ－ｒｅｇ上で増加する。データは、より多くの細胞が、腫瘍微小環境においてＩＣＯＳを発現し、これらの陽性細胞も、それらの表面上でより多くのＩＣＯＳ分子を発現したことを実証した。より重要なことには、ＴＩＬにおけるＴ ｒｅｇは、ＩＣＯＳに対して高度に陽性である。図１２を参照されたい。
１．１２．３．ＳＴＩＭ００３投与に応答する腫瘍内Ｔ－ｒｅｇ細胞の強い枯渇
ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ抗体に応答して、ＴＭＥにおけるＴ－ｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３）の強く迅速な枯渇が存在した。Ｔ－ｒｅｇは、他のＴ細胞サブセットと比較して、高いＩＣＯＳ発現を有するので、エフェクター機能を有する抗ＩＣＯＳ抗体が、これらの細胞を優先的に枯渇させると予想される。より低い用量のＳＴＩＭ００３（２０ｇの動物について０．３ｍｇ／ｋｇに対応する６μｇ）で、Ｔ－ｒｅｇの継続的な枯渇が存在し、３日目までに、ほとんどのＴ－ｒｅｇがＴＭＥから枯渇した。興味深いことに、８日目までに、Ｔ－ｒｅｇ細胞は、ＴＭＥを再増殖し、次いで、生理食塩水処置動物において観察されたレベルをわずかに上回るレベルに達する。より低い用量でのＴ－ｒｅｇ細胞の再増殖は、Ｋｉ－６７＋ ＣＤ４ Ｔ－細胞の観察された増加によって証拠付けられるように、ＴＭＥにおけるＣＤ４ Ｔ細胞の浸潤の増加に寄与する。６μｇよりも高い用量で、この研究において分析された最後の時点（８日目）までの完全なＴ Ｒｅｇ枯渇によって示されるように、Ｔ－ｒｅｇ細胞の長期間の枯渇が存在した。一方で、血液中では、すべての用量で、Ｔ－ｒｅｇ細胞の一過性の枯渇が存在した。重要なことには、８日目まで、すべての処置動物は、生理食塩水処置動物と比較した場合に、血液中でのＴ－ｒｅｇ細胞の類似する（または６μｇ用量についてより高い）レベルを有していた。データを図１３に示す。とりわけ、およびＣＴＬＡ－４抗体の枯渇について以前に公開されたデータと類似して、脾臓またはＴＤＬＮ組織において、Ｔ－ｒｅｇ細胞のパーセンテージの有意な変化は存在せず、Ｔ－ｒｅｇ細胞が、これらの器官における枯渇から保護されることを示唆した。
まとめると、ＴＭＥにおけるＴ－ｒｅｇ細胞の強い枯渇は、動物あたり６μｇ程度の低い用量で、ＣＴ－２６モデルにおいて達成された。しかしながら、６０μｇの用量は、ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａ注射後最大で８日間、長期間の枯渇をもたらした。これは、より高い用量（２００μｇ）を使用することによって改善されなかった。
１．１２．４．ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａはＣＤ８：Ｔ ＲｅｇおよびＣＤ４：Ｔ Ｒｅｇ比を増加させた
Ｔ－ｅｆｆ：Ｔ－ｒｅｇ比に対するＳＴＩＭ００３の効果を図１４に示す。
ＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａは、ＣＤ８：Ｔ－ｒｅｇ比だけでなくＣＤ４ ｅｆｆ：Ｔ－ｒｅｇ比も増加させた。すべての処置用量が、Ｔ－ｅｆｆとＴ－ｒｅｇの比の増加に関連したが、６０μｇ（２０ｇの動物について３ｍｇ／ｋｇと同等）の中間用量は、処置後８日目まで、最も高い比に関連した。
興味深いことに、６μｇ用量で、比は、４日目まで高かったが、処置後８日目までに、それらは、生理食塩水処置動物のものと一致していた。これは、処置後８日目までこの用量について観察されたＴｒｅｇの再増殖によって説明することができる。他方で、６０または２００μｇの用量で、ＴｅｆｆとＴ－ｒｅｇの比は、すべての時点で高いままであった。これは、これらの用量でのＴｒｅｇの長期間の枯渇によって説明される。とりわけ、より高い用量（２００μｇ）で、長期間のＴｒｅｇ枯渇にもかかわらず、８日目まで中程度の比の改善のみが存在した。これは、ＳＴＩＭ００３の高い濃度でのＩＣＯＳＩＮＴエフェクター細胞の一部の枯渇によって説明することができる。
要するに、データは、すべての試験された用量でのＴＲｅｇ枯渇および増加したエフェクター：Ｔ ｒｅｇ比を実証した。しかしながら、６０μｇ（約３ｍｇ／ｋｇ）の用量は、Ｔ－ｒｅｇの長期間の枯渇、および最も高いＴ－ｅｆｆとＴ－ｒｅｇの比の両方を達成し、これは、抗腫瘍免疫応答を開始するための最も好ましい免疫状況に関連するであろう。興味深いことに、類似のパターンが、血液中で観察され、６０μｇの中間用量は、最も高いＴ－ｅｆｆとＴ－ｒｅｇの比に関連した。重要なことには、血液中において、比の改善は、最も早い時点（３日目と４日目との間）で観察された。
１．１２．５．ＳＴＩＭ００３に応答したエフェクター細胞の活性化
腫瘍浸潤Ｔエフェクター細胞上でのＣＤ１０７ａの表面発現は、細胞傷害活性を達成し、それを示す細胞についての信頼性のあるマーカーとして以前に特定された［３９］。本研究において、ＳＴＩＭ００３は、Ｔ－ｒｅｇの枯渇に加えて、ＴＭＥにおいて、エフェクターＴ細胞の細胞傷害活性を刺激することができることを確認するためにこのマーカーを用いた。興味深いことに、処置後８日目に、ＳＴＩＭ００３のすべての用量で、ＣＤ４およびＣＤ８ エフェクターＴ細胞区画の両方におけるＣＤ１０７ａの表面発現の増加が存在した。さらにまた、ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞の両方における表面上でのＣＤ１０７ａ発現のこの上方調節は、２００μｇの投薬で改善が見られなかったので、動物に６０μｇを投薬した場合に、プラトーであると思われた。
ＴＭＥにおけるエフェクター細胞の活性化をさらに実証するために、ＣＤ４およびＣＤ８ ＴＩＬによるサイトカイン放出を、ＦＡＣＳによって分析した。予想されるように、本明細書における前の実施例において示されたインビトロアゴニズムデータと一致して、すべての用量のＳＴＩＭ００３ ｍＩｇＧ２ａは、エフェクターＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞による炎症促進性サイトカインＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－α産生を促進した。炎症促進性サイトカイン産生の誘導は、６０μｇの用量で高いと思われた。実際に、６０μｇのＳＴＩＭ００３は、ＣＤ４ Ｔ細胞によるサイトカイン産生を有意に増加させた。類似の傾向が、ＴＭＥにおけるエフェクターＣＤ８ Ｔ細胞による炎症性サイトカインＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－α産生について見られた。データを図１５に示す。
まとめると、すべての用量のＳＴＩＭ００３は、（１）それらの表面上の脱顆粒マーカーＣＤ１０７ａの存在、および（２）Ｔ細胞によるＴｈ１サイトカイン（ＩＦＮγおよびＴＮＦα）の産生によって示されるように、ＴＭＥにおけるＴ細胞活性化をもたらした。これは、ＳＴＩＭ００３が、ＴＭＥにおいて免疫状況に強い影響を及ぼし、Ｔｒｅｇ細胞の枯渇の二重の役割を果たし、Ｔエフェクター細胞の死滅活性を刺激することを示す。
１．１２．６．ヒト用量の推定
マウスにおいて見られた前臨床有効性データに基づいて、対応する生物学的表面積（ＢＳＡ）に基づいて、ヒト患者に適切な臨床用量の初期予測を行うことができる［４０］。
例えば、３ｍｇ／ｋｇ（６０μｇ）であるマウスにおける抗ＩＣＯＳ ＩｇＧの用量を取り、参考文献［４０］の方法に従うと、ヒトに対する対応する用量は、０．２５ｍｇ／ｋｇである。
Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒ式を使用して、６０ｋｇおよび１．７０ｍの個体について、ＢＳＡは１．６８ｍ２である。ｍｇ／ｋｇの用量に３５．７（６０／１．６８）の係数を掛けて、１５ｍｇの固定用量が得られる。８０ｋｇの個体について、対応する固定用量は、２０ｍｇであろう。
用量を、臨床試験におけるヒト療法のために調整して、安全で有効な処置レジメンを決定することができる。
１．１３．実施例６：腫瘍試料からのデータのバイオインフォマティクス分析
本発明によるがんの１つの標的群は、ＩＣＯＳ＋免疫抑制Ｔｒｅｇの相対的に高いレベルに関連するがんのものである。
高い含有量のＴｒｅｇに関連するがんの種類を特定するために、トランスクリプトームデータを、がんゲノムアトラス（ＴＣＧＡ）公開データセットから入手し、ＩＣＯＳおよびＦＯＸＰ３発現レベルについて分析した。ＴＣＧＡは、多くの異なるがんの種類について蓄積された目録作成されたゲノムおよびトランスクリプトミクスデータを有する大規模研究であり、実質的な試料のメタデータと一緒に、変異、コピー数変異、ｍＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ遺伝子発現、ならびにＤＮＡメチル化を含む。
遺伝子セット富化分析（ＧＳＥＡ）を以下の通り実施した。ＴＣＧＡコンソーシアムの一部として収集された遺伝子発現ＲＮＡ配列データを、ｌｏｇ２（ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ＿ｃｏｕｎｔ＋１）としてＵＣＳＣ Ｘｅｎａ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｂｒｏｗｓｅｒからダウンロードした。非腫瘍組織試料をデータセットから除去し、９７３２試料から２０５３０遺伝子についてのデータを残した。［４１］からのアルゴリズム、および既定の遺伝子セット内の遺伝子についての富化スコアを計算する［４２］におけるその実装を使用して、遺伝子レベルカウントをそれぞれの試料についての遺伝子セットスコアに置き換えた。目的の遺伝子セットを、ＩＣＯＳおよびＦＯＸＰ３の両方を含有するものとして定義した。試料を、原発性疾患によって群分けし、それぞれの群についてのｓｓＧＳＥＡスコアを、３３の原発性疾患群にわたって比較した。最も高い中央値スコアを示した疾患群が、リンパ性新生物のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胸腺腫、頭頸部扁平上皮細胞癌であることを見出したが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫は、高いスコアリングのサブセットと群中央値を下回る残りのスコアリングを伴う、スコアのマルチモーダルな分布を示した。
ＩＣＯＳおよびＦＯＸＰ３発現についての最高から最低のｓｓＧＳＥＡスコアのランク順で、トップ１５のがんの種類は以下であった：
ＤＬＢＣ（ｎ＝４８） リンパ性新生物のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫
ＴＨＹＭ（ｎ＝１２０） 胸腺腫
ＨＮＳＣ（ｎ＝５２２） 頭頸部扁平上皮細胞癌
ＴＧＣＴ（ｎ＝１５６） 精巣胚細胞性腫瘍
ＳＴＡＤ（ｎ＝４１５） 胃腺癌
ＳＫＣＭ（ｎ＝４７３） 皮膚の皮膚黒色腫
ＣＥＳＣ（ｎ＝３０５） 子宮頸部扁平上皮細胞癌および子宮頸管内腺癌
ＬＵＡＤ（ｎ＝５１７） 肺腺癌
ＬＡＭＬ（ｎ＝１７３） 急性骨髄性白血病
ＥＳＣＡ（ｎ＝１８５） 食道癌
ＬＵＳＣ（ｎ＝５０２） 肺扁平上皮細胞癌
ＲＥＡＤ（ｎ＝９５） 直腸腺癌
ＣＯＡＤ（ｎ＝２８８） 結腸腺癌
ＢＲＣＡ（ｎ＝１１０４） 浸潤性乳癌
ＬＩＨＣ（ｎ＝３７３） 肝臓の肝細胞癌
ここで、ｎは、ＴＣＧＡデータセットにおけるそのがんの種類についての患者試料の数である。本明細書において記載される抗ＩＣＯＳ抗体は、これらのおよび他のがんの処置のために使用することができる。
相対的に高いレベルのＩＣＯＳ＋免疫抑制Ｔｒｅｇに関連し、ＰＤ－Ｌ１をさらに発現するがんは、抗ＩＣＯＳ抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の組み合わせによる処置に特に十分に応答することができる。適切な処置レジメンおよびこの目的の抗体は、先述の記載において既に詳述している。
前と同じようにしてＴＣＧＡデータセットを使用して、ＩＣＯＳおよびＦＯＸＰ３についての富化スコアを、Ｓｐｅａｒｍａｎのランク補正を使用して、ＰＤ－Ｌ１の発現レベルと相関させ、原発性疾患の適応症によって群分けした。ｐ値をそれぞれの群について計算し、０．０５のｐ値（ボンフェローニの多重比較補正）を、統計学的有意として取った。ＩＣＯＳ／ＦＯＸＰ３とＰＤ－Ｌ１発現との間の最も高い相関を有する疾患群は以下であった：
ＴＧＣＴ（ｎ＝１５６） 精巣胚細胞性腫瘍
ＣＯＡＤ（ｎ＝２８８） 結腸腺癌
ＲＥＡＤ（ｎ＝９５） 直腸腺癌
ＢＬＣＡ（ｎ＝４０７） 膀胱尿路上皮癌
ＯＶ（ｎ＝３０８） 卵巣漿液性嚢胞腺癌
ＢＲＣＡ（ｎ＝１１０４） 浸潤性乳癌
ＳＫＣＭ（ｎ＝４７３） 皮膚の皮膚黒色腫
ＣＥＳＣ（ｎ＝３０５） 子宮頸部扁平上皮細胞癌および子宮頸管内腺癌
ＳＴＡＤ（ｎ＝４１５） 胃腺癌
ＬＵＡＤ（ｎ＝５１７） 肺腺癌
患者は、それらのがんがＩＣＯＳ＋免疫抑制ＴｒｅｇおよびＰＤ－Ｌ１の発現と関連することを決定するアッセイに従って、処置のために選択することができる。そこでのがんの種類について、上記のように、高い相関スコアが存在し、ＩＣＯＳ＋免疫抑制Ｔｒｅｇの１つおよびＰＤ－Ｌ１の発現が存在する（例えば、閾値を上回る）ことを決定するのに十分である。ＰＤ－Ｌ１免疫組織化学的アッセイをこの状況において使用することができる。
１．１４．実施例７：さらなる抗ＩＣＯＳ抗体の評価
ＣＬ－７４５７０およびＣＬ－６１０９１抗体配列を合成し、ＨＥＫ細胞においてＩｇＧ１フォーマットで発現させた。
これらの抗体の機能的特徴付けを、ＢＣＴ上清ではなく精製ＩｇＧ１を使用するアッセイを適合させるための改変を伴って、以前に記載されたようにして（例えば、米国特許第９，９５７，３２３号の実施例６を参照されたい）、ＨＴＲＦアッセイを使用して行った。ＨＥＫ細胞から発現されたヒトＩｇＧ１抗体を含有する５μＬの上清を、ＢＣＴ上清の代わりに使用し、総体積を、前のように、ＨＴＲＦ緩衝液を使用して、ウェルあたり最大で２０μｌにした。ヒトＩｇＧ１抗体を、陰性対照として使用した。両方の抗体は、式１を使用して計算された通り、ヒトおよびマウスＩＣＯＳへの結合について５％よりも高い効果を示し、したがって、このアッセイにおいて試験に陽性であることを確認した。
これらの抗体がＣＨＯ－Ｓ細胞の表面上で発現されるヒトおよびマウスＩＣＯＳに結合する能力を、Ｍｉｒｒｏｒｂａｌｌアッセイを使用してさらに確認した。このアッセイにおいて、抗ＩＣＯＳ ＩｇＧ１を含有する５μｌの上清を、３８４ Ｍｉｒｒｏｒｂａｌｌ黒色プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のそれぞれのウェルに移した。抗ＩＣＯＳ抗体の結合を、すべてのウェルに対して０．８ｍｇ／ｍｌの濃度で、アッセイ緩衝液（ＰＢＳ＋１％のＢＳＡ＋０．１％のアジ化ナトリウム）に希釈された１０μｌのヤギ抗ヒト４８８（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を添加することによって検出した。
陽性対照ウェルについて、アッセイ媒体に２．２μｇ／ｍＬで希釈された５μＬの参照抗体を、プレートに添加した。陰性対照ウェルについて、アッセイ媒体に２．２μｇ／ｍＬで希釈された５μｌのハイブリッド対照ＩｇＧ１を、プレートに添加した。１０μＭのＤＲＡＱ５（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、アッセイ緩衝液に再懸濁された０．４×１０６個／ｍｌの細胞に添加し、５μｌをすべてのウェルに添加した。プレートを、４度で２時間インキュベートした。
５００～７００個の単一細胞の集団から、Ｍｉｒｒｏｒｂａｌｌプレートリーダー（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用し、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ ４８８（励起４９３ｎＭ、発光５１９ｎｍ）を測定して、蛍光強度を測定した。アッセイシグナルを、中央値（ＦＬ２）平均強度として測定した。
総結合を、２．２μｇ／ｍＬのアッセイ濃度で参照抗体を使用して定義した。非特異的結合を、２．２２μｇ／ｍＬのアッセイ濃度でハイブリッド対照ｈＩｇＧ１を使用して定義した。両抗体は、１パーセントよりも高い効果を示し、したがって、このアッセイにおいて試験に陽性であることを確認した。
効果パーセント＝（試料ウェル－非特異的結合）×１００
（総結合－非特異的結合）
ＣＬ－７４５７０およびＣＬ－６１０９１のそれぞれも、フローサイトメトリーによって決定されるように、ＣＨＯ－Ｓ細胞において発現されるヒトおよびマウスＩＣＯＳへの結合を実証した。ＦＡＣＳスクリーニングを、ＢＣＴ上清ではなく精製ＩｇＧ１を使用して行った。両抗体は、ｈＩＣＯＳ、ｍＩＣＯＳおよびＷＴ ＣＨＯ細胞への陰性対照の結合の幾何平均の平均を＞１０倍上回る結合を示した。
Figure 2024518843000005
１．１５．実施例８：ＫＹ１０４４の臨床試験フェーズＩ／ＩＩ非盲検研究。
単一薬剤として、およびアテゾリズマブと組み合わせた、二重作用メカニズムを有する抗ＩＣＯＳ抗体のＫＹ１０４４のフェーズＩ／ＩＩ非盲検研究を、進行悪性腫瘍を有する成人患者において行った。参加者は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｕｒｓバージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ １．１）によって決定される測定可能な疾患（測定不能の疾患は、フェーズＩにおいてのみ許容された）を有していた進行性／転移性悪性腫瘍を有する患者を含んでおり、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＮＣＣＮ）ガイドラインに従って、それらの疾患に対する臨床上の利益を付与することが公知の利用可能な療法が存在しなかったか、またはそれらがそのような利用可能な選択肢をすべて使い尽くした場合に適格であった。
１．１５．１．方法
研究群：
ＫＹ１０４４ 単剤療法 フェーズＩ：ＫＹ１０４４ 単剤療法 用量漸増
ＫＹ１０４４およびアテゾリズマブ フェーズＩ：ＫＹ１０４４およびアテゾリズマブの組み合わせ 用量漸増
ＫＹ１０４４ 単剤療法 フェーズＩＩ：ＫＹ１０４４ 単剤療法
ＫＹ１０４４およびアテゾリズマブ フェーズＩＩ：ＫＹ１０４４およびアテゾリズマブの組み合わせ
フェーズＩ：進行性／転移性悪性腫瘍、および好ましい適応症（非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）、黒色腫、子宮頸がん、食道がん、胃がん、腎細胞癌、膵臓がんおよびトリプルネガティブ乳がん）を有する参加者。
フェーズＩＩ ＫＹ１０４４単一薬剤：抗腫瘍活性の徴候（完全奏功（ＣＲ）、部分奏功（ＰＲ）、またはＰＲについての資格がない腫瘍縮小を伴う耐久性のある安定疾患（ＳＤ））が単一薬剤としてのＫＹ１０４４の用量漸増の間に見られなかった適応症の進行性／転移性悪性腫瘍を有する参加者。
フェーズＩＩ アテゾリズマブと組み合わせたＫＹ１０４４：下記の選択された適応症および／またはフェーズＩにおいて有望な活性を示した適応症の進行性／転移性悪性腫瘍を有する参加者：
ＮＳＣＬＣ（抗ＰＤ－（Ｌ）１療法ナイーブおよび事前処置）
胃（抗ＰＤ－（Ｌ）１療法ナイーブおよび事前処置）
ＨＮＳＣＣ（抗ＰＤ－（Ｌ）１療法ナイーブおよび事前処置）
食道（抗ＰＤ－（Ｌ）１療法ナイーブおよび事前処置）
子宮頸部（抗ＰＤ－（Ｌ）１療法ナイーブおよび事前処置）
抗腫瘍活性の徴候が、ＫＹ１０４４をアテゾリズマブと組み合わせて用いるフェーズＩにおいて観察された適応症。
進行性／転移性悪性腫瘍を有する患者は、疾患進行または許容されない毒性まで３週間ごとにＩＶ注入によって、単一薬剤として、または１２００ｍｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブと組み合わせた、ＫＹ１０４４の用量漸増を受けた。用量漸増は、改変された毒性の確率間隔設計によってガイドされた。主要な目的は、安全性、耐容性、および最大耐用量を決定することであった。耐容性を示したコホートは、その後、より多くの対象で強化した。有害事象（ＡＥ）を、Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓバージョン５（ＣＴＣＡＥ ｖ５）に従って分類し、有効性の測定を、最初の１６週間は８週間ごと、次いで１２週間ごとに、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｕｒｓバージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）に従って行った。
１．１５．２．患者組み入れ基準：
参加者は、以下の追加の組み入れ基準のすべてを満たさなければならない：
１．抗ＰＤ－（Ｌ）１および／または抗ＰＤ－Ｌ１阻害剤による以前の療法は、以前の抗ＰＤ－（Ｌ）１および／または抗ＰＤ－Ｌ１指向性療法に起因する任意の毒性が療法の中止に至らなかった場合、許容される；
２．米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態０～１；
３．１２週間よりも長い平均余命；ならびに
４．生検に適した疾患の部位、および処置する施設のガイドラインに従って腫瘍生検についての候補である。
１．１５．３．患者除外基準：
患者は以下の除外基準のいずれかを有していてはならない：
１．症候性中枢神経系（ＣＮＳ）転移、もしくは局所的ＣＮＳ指向性療法を必要とするＣＮＳ転移、または研究処置の初回用量の２週間前以内のコルチコステロイドの漸増用量の存在；
２．他のモノクローナル抗体および／またはそれらの賦形剤に対する重度の過敏性反応の病歴；
３．抗アテゾリズマブ抗体を中和する既知の存在（アテゾリズマブで以前に処置された患者について）；
４．範囲外の検査値を有する：クレアチニン、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、好中球絶対数（ＡＮＣ）、血小板数、ヘモグロビン；
５．損なわれた心臓機能または臨床的に重要な心臓疾患；
６．公知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、活動性Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）または活動性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染；
７．この研究において処置されるもの以外の悪性腫瘍疾患；
８．治験責任医師の判断において、安全性の懸念、臨床研究手順の順守、または研究結果の解釈に起因する、臨床研究における参加を防止する、任意の医学的状態；
９．急性自己免疫疾患または自己免疫疾患の文書化された病歴；
１０．皮膚発疹について適切に処置されなかったか、または内分泌疾患に対する代替療法を受けていない、抗ＰＤ－（Ｌ）１処置を以前に経験した参加者は除外されなければならない；
１１．薬物誘発性間質性肺炎の病歴、または現在間質性肺炎を有する参加者；
１２．全身ステロイド療法または任意の免疫抑制療法。局所的、吸入、経鼻および眼科用ステロイドは禁止されない；
１３．研究処置の初回用量の４週間以内の感染性疾患に対する生弱毒化ワクチンの使用；
１４．研究処置の初回用量の４週間以内の抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ－（Ｌ）１処置；
１５．Ｔ細胞共刺激またはチェックポイント経路を特異的に標的にする任意の他の抗体または薬物と組み合わせた抗ＣＴＬＡ４抗体による事前処置；
１６．以前のがん療法に起因するＣｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓバージョン５（ＣＴＣＡＥ ｖ５）の≧グレード２の毒性（脱毛症、末梢神経障害および聴覚毒性を除く、これは、ＣＴＣＡＥ ｖ５の≧グレード３である場合除かれる）の存在；
１７．骨痛または局所的に痛みを伴う腫瘍塊の処置のためなどの限定的な部位への緩和的放射線療法を除く、研究処置の初回用量の２週間以内の放射線療法。処置に対する応答についての評価を可能にするために、フェーズＩＩパートに登録された参加者は、照射されていない測定可能な疾患が残ったままでなければならない；ならびに
１８．妊娠中または授乳中の女性。
１．１５．４．投薬
ＫＹ１０４４を、０．８ｍｇ、２．４ｍｇ、８ｍｇ、２４ｍｇ、８０ｍｇまたは２４０ｍｇの用量で、３週間ごとに、単一薬剤として、または１２００ｍｇのアテゾリズマブと組み合わせて投与した。
１．１５．５．中間結果
１０３人の患者を研究に登録した（０．８～２４０ｍｇの範囲の用量での６つのコホートにおける単剤療法として３８人の患者、および０．８～８０ｍｇの用量での５つのコホートにおけるアテゾリズマブとの組み合わせとして６５人の患者）。それぞれ、単一薬剤および併用コホートにおいて、６３％および５５％の患者は、≧４の以前の抗がん療法を受けていた。
すべてのコホートは、処置の最初の２１日の間、用量制限毒性（ＤＬＴ）なしで終了した。ＫＹ１０４４単一薬剤コホートにおいて、４７．４％の患者は、処置関連ＡＥ（ＴＲＡＥ）を経験し、すべてグレード１または２であった。併用コホートにおいて、ＴＲＡＥは、５８％の患者において観察された。＜８％の患者において起こった≧グレード３の８件のＴＲＡＥとは別に、ほとんどのＴＲＡＥは、グレード１または２であった。注入関連反応の発熱およびリンパ球減少は、≧１０％の患者において、最も一般的に起こったＴＲＡＥであった。投薬の中断に至るＴＲＡＥは、単一薬剤コホートにおいて１人の患者、併用コホートにおいて４人の患者で起こった。１人の患者のみ、併用に関連すると考えられた筋炎に起因して処置を中断した。
６９人の患者からの予備的なＫＹ１０４４のデータは、薬物動態（ＰＫ）モデル予測と一致した。
１．１５．６．結論：
これらの結果は、ＫＹ１０４４が、単一薬剤およびアテゾリズマブとの組み合わせとして、十分に耐容性を示したことを示す。
１．１６．実施例９：フェーズＩ／ＩＩ多施設試験からの臨床試験の予備的な薬力学的マーカー
長期的血液試料を使用して、ＫＹ１０４４標的関与レベルを循環における薬力学的（ＰＤ）性質と相関させた。
１．１６．１．方法：
実施例８において記載されたフェーズＩ／ＩＩの対象を、用量漸増および富化コホートに登録して、３週間ごとの単剤療法（０．８～２４０ｍｇ）および３週間ごとのアテゾリズマブ（１２００ｍｇ）との組み合わせ（０．８～８０ｍｇ）としてのＫＹ１０４４の効果を評価した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、血漿および腫瘍生検を、最初の３サイクルにわたって収集して、標的関与およびＫＹ１０４４の作用機序（ＭｏＡ）を確認した。試料の分析は以下を含んでいた：チップサイトメトリーによる循環Ｔ細胞受容体占有；ＰＢＭＣおよび腫瘍試料の処置前および処置後のトランスクリプトミクス分析；ならびに循環サイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦおよびＴＮＦα）の評価。
１．１６．２．中間結果：
ＰＢＭＣにおいて評価されたように、Ｔ細胞上の完全／持続的なＩＣＯＳ標的関与を、より高いフラット用量の８～２４０ｍｇのＫＹ１０４４を受けた対象において確認したが、部分的／一過性飽和が、より低いフラット用量（０．８～２．４ｍｇ）を受けた対象において観察された。ＩＣＯＳ標的関与を、患者血液の血漿試料からのチップサイトメトリーによって測定される、ＣＤ４メモリー細胞における占有パーセンテージとして定量化した。標的関与は、アテゾリズマブによって影響を受けなかった。図１６Ａおよび１６Ｂは、異なる用量レベルを受けている患者についてのＣＤ４メモリーにおける占有パーセンテージを示す。
ＫＹ１０４４依存性アゴニズムを、循環サイトカインレベルを測定することによって間接的に評価した。ＧＭ－ＣＳＦおよびＴＮＦαレベルを、最初の３サイクルにわたって評価し、ベースラインでの値と比較した。投薬後のＧＭ－ＣＳＦの一過性誘導は、０．８ｍｇおよび２．４ｍｇのＫＹ１０４４を投薬された対象において明白であったが、最小限の誘導が、８ｍｇ以上の用量で観察された。図１７Ａを参照されたい。投薬後のＴＮＦαの一過性誘導も、０．８ｍｇおよび２．４ｍｇ用量のＫＹ１０４４を投薬された対象において明白であったが、最小限の誘導が、８ｍｇ以上の用量で観察された。図１７Ｂを参照されたい。処置とＩＦＮγレベルとの間の関連は観察されなかった。
１．１６．３．結論：
より低い用量のＫＹ１０４４（０．８ｍｇおよび２．４ｍｇ）は、部分的な受容体占有をもたらし、処置後により強いＧＭ－ＳＣＦおよびＴＮＦαシグナルを誘導した。完全未満の受容体占有を達成する量のＫＹ１０４４の投薬は、したがって、より高い用量レベルと比較して、より低い用量レベルの反復投与におけるサイトカインレベルの投薬後のより高いピークを伴って、パルス状サイトカイン応答を生じる限りにおいて、有利である。
１．１７．実施例１０：長期的薬力学的データは予想されるＫＹ１０４４の作用機序を確認する
長期的試料を使用して、ＫＹ１０４４標的関与レベルを腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における薬力学的（ＰＤ）性質（例えば、二重の作用機序）と相関させた。
１．１７．１．方法
実施例８において記載されたフェーズＩ／ＩＩの対象を、用量漸増および富化コホートに登録して、３週間ごとの単剤療法（０．８～２４０ｍｇ）および３週間ごとのアテゾリズマブ（１２００ｍｇ）との組み合わせ（０．８～８０ｍｇ）としてのＫＹ１０４４の効果を評価した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、血漿および腫瘍生検を、最初の３サイクルにわたって収集して、標的関与およびＫＹ１０４４の作用機序（ＭｏＡ）を確認した。試料の分析は以下を含んでいた：腫瘍試料の免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）（ＩＣＯＳ、ＦＯＸＰ３およびＣＤ８）および循環Ｔ細胞免疫プロファイリング。
１．１７．２．中間結果：
免疫細胞プロファイリングは、一部の集団において変化を示したが、末梢ＩＣＯＳ＋細胞の有意な枯渇は存在しなかった。対照的に、腫瘍生検におけるＩＣＯＳ＋／ＦＯＸＰ３＋細胞の処置前および処置後のＩＨＣ分析は、ＩＣＯＳ＋ ＴｒｅｇのＫＹ１０４４用量依存性低減、およびＴＭＥにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞の維持を確認し、最も高い腫瘍内ＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇ枯渇は、８ｍｇ以上の用量で観察された。ＫＹ１０４４は、ＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇを低減し、ＴＭＥにおいてすべての試験された用量でＣＤ８とＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの比を改善し、８ｍｇ以上のＫＹ１０４４用量を受けている対象からプラトーになった。これらの結果は、ＫＹ１０４４指向性アゴニズムが、部分的ＩＣＯＳ受容体占有を達成した用量であるより低い用量（０．８ｍｇおよび２．４ｍｇ）で最も明白であることを示す。
１．１７．３．結論：
長期的ＰＤデータは、ＫＹ１０４４の作用機序、すなわち、ＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇ枯渇、およびＴＭＥにおけるＣＤ８＋／ＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇ比の増加だけでなく、Ｔ細胞共刺激も確認した。これらの結果は、実施例９において報告された結果と一緒に、ＫＹ１０４４の二重作用機序をサポートする。理論に縛られないが、より低い用量のＫＹ１０４４（例えば、＜８ｍｇ、例えば、２．４ｍｇまたは０．８ｍｇ）は、サイトカイン応答の増加（炎症促進性サイトカインＧＭ－ＣＳＦおよびＴＮＦαの増加）を刺激し、同時に、腫瘍内のＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの低減およびＣＤ８とＩＣＯＳ＋ Ｔｒｅｇの比の改善を媒介する。
１．１８．実施例１１：フェーズＩ／ＩＩ試験からの中間結果：併用療法に対する部分奏功および完全奏功。
１．１８．１．方法
使用される方法は、実施例８において列挙される。
１．１８．２．患者組み入れ基準：
患者は、実施例８に記載されたようにして登録した。
１．１８．３．中間結果：
フェーズＩ／ＩＩからの中間結果は、抗腫瘍活性の徴候を示す。部分奏功（ＰＲ）または完全奏功（ＣＲ）が、試験において観察された。文書化される目的の応答は以下を含む：
トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）におけるＣＲ ２．４ｍｇのＫＹ１０４４＋１２００ｍｇのａｔｅｚｏ
ＴＮＢＣにおけるＰＲ ２．４ｍｇのＫＹ１０４４＋１２００ｍｇのａｔｅｚｏ
頭頸部扁平上皮細胞癌におけるＰＲ ８ｍｇのＫＹ１０４４＋１２００ｍｇのａｔｅｚｏ
陰茎がんにおけるＰＲ ２４ｍｇのＫＹ１０４４＋１２００ｍｇのａｔｅｚｏ
膵臓がんにおけるＰＲ ０．８ｍｇのＫＹ１０４４＋１２００ｍｇのａｔｅｚｏ
これらの患者に（１２００ｍｇのアテゾリズマブとともに）投与されるＫＹ１０４４の用量を示す。
完全奏功を、以下の通り、ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉｒＲＥＳＩＳＴに従って定義した：完全奏功（ＣＲ）：すべての標的病変の消失。任意の病理学的リンパ節（標的または非標的にかかわらず）は、＜１０ｍｍの短軸の低減を有していなければならない。ＣＲ：すべての非標的病変の消失、および（適用可能な場合）腫瘍マーカーレベルの正常化。すべてのリンパ節は、非病理学的なサイズでなければならない（＜１０ｍｍの短軸）。
部分奏功を、以下の通り、ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＳＩＳＴに従って定義した：部分奏功（ＰＲ）：直径のベースライン合計を参照して取る、標的病変の直径の合計の少なくとも３０％の減少。ＣＲなし／ＰＤなし：１つもしくはそれ以上の非標的病変の持続、および／または（適用可能な場合）正常範囲を上回る腫瘍マーカーレベルの維持。
１．１８．４．結論：
抗ＩＣＯＳ抗体ＫＹ１０４４は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体療法の有効性を促進する。
１．１９．実施例１２：フェーズＩ／ＩＩ試験からの中間結果：処置期間。
１．１９．１．方法
使用される方法は、実施例８において列挙される。簡潔には、進行性／転移性悪性腫瘍を有する患者は、疾患進行または許容されない毒性まで３週間ごとにＩＶ注入によって、単一薬剤として、または１２００ｍｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブと組み合わせた、ＫＹ１０４４の用量を受けた。
１．１９．２．患者組み入れ基準：
患者は、実施例８に記載されたようにして登録した。
１．１９．３．中間結果：
すべての登録患者について処置期間の中央値は９週間であった。≧１６週間の処置期間は、それぞれ、単一薬剤および併用コホートにおける２４％（９／３８）および２７％（１７／６４）の患者で観察された。単剤療法および併用療法についての処置期間に対するさらなるデータを図１８Ａに提供する。例えば、図１８Ａは、≧２０週間の処置期間が、単剤療法としてＫＹ１０４４で処置された患者の１８％（７／３８）で、および併用療法で処置された患者の１０％（１１／１１０）で観察されたことを示す。
図１８Ｂにおいて、図１８Ａにおけるデータは、部分的または完全飽和（受容体占有）に従ってさらに階層化され、これは、それぞれ、より低い（０．８または２．４ｍｇ）またはより高い（≧８ｍｇ）用量のＫＹ１０４４によって得られた。≧２０週間の処置期間は、単剤療法としてＫＹ１０４４のより低い用量（０．８ｍｇまたは２．４ｍｇ）を受けた患者の２２％（２／９）で観察され、これは、部分的な受容体占有をもたらした。≧２０週間の処置期間は、単剤療法としてＫＹ１０４４のより高い用量（≧８ｍｇ）を受けた患者の１７％（５／２９）で観察された。≧２０週間の処置期間は、アテゾリズマブ（１２００ｍｇ）と組み合わせたＫＹ１０４４のより低い用量（０．８ｍｇまたは２．４ｍｇ）を受けた患者の８％（４／４９）で観察された。≧２０週間の処置期間は、アテゾリズマブ（１２００ｍｇ）と組み合わせたＫＹ１０４４のより高い用量（≧８ｍｇ）を受けた患者の１１％（７／６１）で観察された。図１８Ｂを参照されたい。さらに、≧２０週間の処置期間は、部分的な受容体占有をもたらす用量のＫＹ１０４４（０．８ｍｇまたは２．４ｍｇのＫＹ１０４４）を受けた患者の１０％（６／５８）で観察された。≧２０週間の処置期間は、完全な受容体占有をもたらす用量（≧８ｍｇ）のＫＹ１０４４を受けた患者の１３％（１２／９０）で観察された。図１８Ｃを参照されたい。
１．１９．４．結論：
これらのデータは、特に抗ＰＤ－Ｌ１抗体療法との組み合わせにおいて、より低い用量（例えば、０．８ｍｇ、２．４ｍｇ）の抗ＩＣＯＳ抗体ＫＹ１０４４の驚くべき有効性をサポートする。
１．２０．実施例１３：ＨＮＳＣＣ患者におけるアテゾリズマブと組み合わされたＫＹ１０４４
１．２０．１．方法
研究のこの段階において、フェーズ２コホート（２コホート、ＰＤ－Ｌ１ナイーブおよび事前処置）は、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）を有するｐｔｓにおいて開始されている。およそ４０のｐｔｓを、それぞれのコホートに登録する。使用される方法は、実施例８において列挙される。有効性の測定を、最初の１６週間は８週間ごと、次いで１２週間ごとに、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｕｒｓバージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）に従って行い、有害事象（ＡＥ）を、Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓバージョン５（ＣＴＣＡＥ ｖ５）に従って分類する。
１．２０．２．組み入れ／除外基準
重要な組み入れ基準：抗ＰＤ－Ｌ１療法ナイーブおよび事前処置、進行性疾患のための全身療法の１～２の治療経験、組織学的に文書化された進行性／転移性悪性腫瘍、ＲＥＣＩＳＴ １．１によって測定可能な疾患、生検に適した疾患の部位。
重要な除外基準：ＣＮＳ転移、活動性自己免疫疾患、著しい心臓疾患および／またはＱＴ延長、ステロイド療法、または任意の免疫抑制療法。
１．２０．３．中間結果：
ＫＹ１０４４は、十分な耐容性を示し、ＨＮＳＣＣ処置についての活性の初期徴候を示した。研究のフェーズ１段階において、療法の５つの治療経験（ニボルマブを含む）において進行したＨＰＶ＋ＨＮＳＣＣを有する５９歳男性患者は、部分奏功（４２％の腫瘍縮小）を経験し、これはサイクル２６の１日目（Ｃ２６Ｄ１）現在で、および＞２０か月間の処置において、依然として保持されていた（２０２２年２月１０日現在）。
１．２０．４．結論：
頭頸部がんにおける腫瘍内ＴｒｅｇにおけるＩＣＯＳの強い発現（Ｓａｉｎｓｏｎ Ｒら Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．８、２０２０：１５６８～８２）、および＞２０か月の処置期間での１人のＨＮＳＣＣ患者における有望な臨床活性（Ｐａｔｅｌ ＭＲら Ｊ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９、２０２１（補遺１５；要約２６２４）は、ＨＮＳＣＣがＫＹ１０４４についての好ましい適応症であることを示唆する（ＳＡＲ４４５２５６）。
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１．２１．配列
１．２１．１．１．抗体ＳＴＩＭ００１
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号３６７
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＴＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＴＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＧＧＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号３６６
ＱＶＱＶＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳＴＦＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＤＴＮＹＡＱＮＬＱＧＲＶＩＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＳＧＨＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＹＴＦＳＴＦＧ 配列番号３６３
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＳＡＹＮＧＤＴ 配列番号３６４
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＳＳＧＨＹＹＹＹＧＭＤＶ 配列番号３６５
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号３７４
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＡＡＴＡＣＡＡＣＴＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＴＴＴＴＧＧＧＴＴＣＴＡＡＴＣＧＧＧＣＣＴＣＣＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＡＡＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＴＣＴＣＴＡＣＡＡＡＣＴＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号３７３
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＥＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＴＲＶＥＡＥＤＶＧＩＹＹＣＭＱＳＬＱＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＬＬＨＳＮＥＹＮＹ 配列番号３７０
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＬＧＳ 配列番号３７１
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＭＱＳＬＱＴＰＬＴ 配列番号３７２
１．２１．１．２．抗体ＳＴＩＭ００２
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号３８１
ＣＡＧＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＣＴＡＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＴＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号３８０
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＴＹＦＹＧＳＧＴＬＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＹＴＦＴＳＹＧ 配列番号３７７
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＳＡＹＮＧＮＴ 配列番号３７８
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＳＴＹＦＹＧＳＧＴＬＹＧＭＤＶ 配列番号３７９
ＶＬドメインヌクレオチド配列：３８８
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＴＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＴＧＧＧＴＴＣＴＡＣＴＣＧＧＧＣＣＴＣＣＧＧＧＴＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＡＣＡＡＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
訂正ＳＴＩＭ００２ ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号５１９
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＴＡＣＡＡＣＴＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＴＧＧＧＴＴＣＴＡＣＴＣＧＧＧＣＣＴＣＣＧＧＧＴＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＡＣＡＡＡＣＴＣＣＧＣＴＣＡＧＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号３８７
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＴＲＡＳＧＦＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＬＳＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹ 配列番号３８４
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＬＧＳ 配列番号３８５
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＭＱＡＬＱＴＰＬＳ 配列番号３８６
１．２１．１．３．抗体ＳＴＩＭ００２－Ｂ
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号３９５
ＣＡＧＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＣＴＡＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＴＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＣＣＣＴＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号３９４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＴＹＦＹＧＳＧＴＬＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＹＴＦＴＳＹＧ 配列番号３９１
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＳＡＹＮＧＮＴ 配列番号３９２
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＳＴＹＦＹＧＳＧＴＬＹＧＭＤＶ 配列番号３９３
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４０２
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＴＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＴＧＧＧＴＴＣＴＡＣＴＣＧＧＧＣＣＴＣＣＧＧＧＴＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＡＣＡＡＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号４０１
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＣＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＴＲＡＳＧＦＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＣＳＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＣ 配列番号３９８
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＬＧＳ 配列番号３９９
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＭＱＡＬＱＴＰＣＳ 配列番号４００
１．２１．１．４．抗体ＳＴＩＭ００３
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号４０９
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＧＧＴＡＣＧＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＡＣＣＴＴＴＧＡＴＧＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＲＴＧＧＧＴＣＴＣＴＧＧＴＡＴＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＧＧＴＧＧＣＧＡＣＡＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＴＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＧＧＡＴＴＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＧＴＴＡＴＴＡＴＣＡＣＧＴＴＣＣＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＴＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
訂正ＳＴＩＭ００３ ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号５２１
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＧＧＴＡＣＧＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＡＣＣＴＴＴＧＡＴＧＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＧＧＴＡＴＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＧＧＴＧＧＣＧＡＣＡＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＴＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＧＧＡＴＴＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＧＴＴＡＴＴＡＴＣＡＣＧＴＴＣＣＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＴＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号４０８
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＲＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＶＴＦＤＤＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＮＷＮＧＧＤＴＤＹＳＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＤＦＹＧＳＧＳＹＹＨＶＰＦＤＹＷＧＱＧＩＬＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＶＴＦＤＤＹＧ 配列番号４０５
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＮＷＮＧＧＤＴ 配列番号４０６
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＤＦＹＧＳＧＳＹＹＨＶＰＦＤＹ 配列番号４０７
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４１６
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＡＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＧＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＧＡＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＴＧＴＣＡＣＣＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＴＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号４１５
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＲＳＹＬＡＷＹＱＱＫＲＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＤＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＨＱＹＤＭＳＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＶＳＲＳＹ 配列番号４１２
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＧＡＳ 配列番号４１３
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＨＱＹＤＭＳＰＦＴ 配列番号４１４
１．２１．１．５．抗体ＳＴＩＭ００４
ＶＨドメインヌクレオチド配列：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＧＧＴＡＣＧＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＣＴＣＡＣＣＴＴＴＧＡＴＧＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＧＧＴＡＴＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＡＣＡＣＡＧＡＴＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＴＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＧＧＡＴＴＡＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＧＴＴＡＴＴＡＴＡＡＣＧＴＴＣＣＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ 配列番号４２３
ＶＨドメインアミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＲＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＬＴＦＤＤＹＧＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＮＷＮＧＤＮＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＤＹＹＧＳＧＳＹＹＮＶＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号４２２
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＬＴＦＤＤＹＧ 配列番号４１９
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＮＷＮＧＤＮＴ 配列番号４２０
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＤＹＹＧＳＧＳＹＹＮＶＰＦＤＹ 配列番号４２１
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４３１
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＡＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＡＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＧＧＴＡＧＴＴＣＡＣＣＡＴＴＣＡＣＴＴＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＴＡＴＣＡＡＡ
上記ＶＬドメインヌクレオチド配列によってコードされるＶＬドメインアミノ酸配列。
訂正ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４３０
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＡＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＡＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＧＧＴＡＧＴＴＣＡＣＣＡＴＴＣＴＴＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＴＡＴＣＡＡＡ
訂正ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号４３２
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＲＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＦＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＶＳＳＳＹ 配列番号４２６
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＧＡＳ 配列番号４２７
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＱＱＹＧＳＳＰＦ 配列番号４２８
１．２１．１．６．抗体ＳＴＩＭ００５
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号４３９
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＡＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＡＴＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＴＴＣＡＣＡＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＴＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＣＧＧＧＴＴＡＣＧＡＴＡＴＴＴＴＧＡＣＴＧＡＴＴＴＴＴＣＣＧＡＴＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＣＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号４３８
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＮＳＹＧＩＩＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＶＨＮＧＮＴＮＣＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＴＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＧＹＤＩＬＴＤＦＳＤＡＦＤＩＷＧＨＧＴＭＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＹＴＦＮＳＹＧ 配列番号４３５
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＳＶＨＮＧＮＴ 配列番号４３６
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＡＧＹＤＩＬＴＤＦＳＤＡＦＤＩ 配列番号４３７
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４４６
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＴＴＡＡＴＡＡＣＴＴＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＡＧＧＧＡＴＡＣＣＡＴＣＡＡＣＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＡＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＴＡＴＣＣＣＧＴＧＧＧＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号４４５
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＮＩＮＮＦＬＮＷＹＱＱＫＥＧＫＧＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＲＧＩＰＳＴＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＩＣＱＱＳＹＧＩＰＷＶＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＮＩＮＮＦ 配列番号４４２
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＡＡＳ 配列番号４４３
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＱＱＳＹＧＩＰＷ 配列番号４４４
１．２１．１．７．抗体ＳＴＩＭ００６
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号４５３
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＧＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＴＣＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＡＣＣＡＴＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＧＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＴＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＣＡＣＴＡＣＧＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＣＣＴＣＴＡＣＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＴＴＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号４５４
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＦＭＳＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＳＹＩＳＳＳＧＳＴＩＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＹＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＹＤＧＳＧＩＹＰＬＹＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＦＴＦＳＤＹＦ 配列番号４４９
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＳＳＳＧＳＴＩ 配列番号４５０
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＤＨＹＤＧＳＧＩＹＰＬＹＹＹＹＧＬＤＶ 配列番号４５１
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４６０
ＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＡＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＡＴＡＣＡＡＣＴＡＴＴＴＧＧＡＴＴＡＴＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＴＧＧＧＴＴＣＴＴＡＴＣＧＧＧＣＣＴＣＣＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＡＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＧＣＡＧＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＣＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号４５９
ＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＹＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＲＳＦＧＱＧＴＴＬＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹ 配列番号４５６
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＬＧＳ 配列番号４５７
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＭＱＡＬＱＴＰＲＳ 配列番号４５８
１．２１．１．８．抗体ＳＴＩＭ００７
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号４６７
ＣＡＧＡＴＣＡＣＣＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＡＣＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＣＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＴＣＡＣＴＣＡＧＣＡＣＴＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＣＡＧＴＣＡＴＴＴＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＡＧＣＧＣＴＡＣＡＧＣＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＧＣＡＧＡＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＡＣＣＡＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＡＣＡＣＡＣＧＧＡＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＣＧＡＧＴＴＡＴＴＡＣＣＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号４６６
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＳＴＴＧＶＧＶＧＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＶＩＹＷＤＤＤＫＲＹＳＰＳＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＦＣＴＨＧＹＧＳＡＳＹＹＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＦＳＬＳＴＴＧＶＧ 配列番号４６３
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＹＷＤＤＤＫ 配列番号４６４
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＴＨＧＹＧＳＡＳＹＹＨＹＧＭＤＶ 配列番号４６５
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４７４
ＧＡＡＡＴＴＧＴＡＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＣＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＴＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号４７３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＮＹＬＡＷＨＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＲＳＮＷＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＶＴＮＹ 配列番号４７０
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＤＡＳ 配列番号４７１
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＱＨＲＳＮＷＰＬＴ 配列番号４７２
１．２１．１．９．抗体ＳＴＩＭ００８
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号４８１
ＣＡＧＡＴＣＡＣＣＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＡＣＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＣＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＴＣＡＣＴＣＡＧＣＡＣＴＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＣＡＧＴＣＡＴＴＴＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＡＧＣＧＣＴＡＣＡＧＣＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＡＣＣＡＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＴＡＣＡＣＡＣＧＧＡＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＣＧＡＧＴＴＡＴＴＡＣＣＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号４８０
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＳＴＳＧＶＧＶＧＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＶＩＹＷＤＤＤＫＲＹＳＰＳＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＦＣＴＨＧＹＧＳＡＳＹＹＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＦＳＬＳＴＳＧＶＧ 配列番号４７７
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＹＷＤＤＤＫ 配列番号４７８
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＴＨＧＹＧＳＡＳＹＹＨＹＧＭＤＶ 配列番号４７９
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号４８８
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＣＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＴＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号４８９
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＮＹＬＡＷＨＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＶＴＮＹ 配列番号４８４
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＤＡＳ 配列番号４８５
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＱＱＲＳＮＷＰＬＴ 配列番号４８６
１．２１．１．１０．抗体ＳＴＩＭ００９
ＶＨドメインヌクレオチド配列：配列番号４９５
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＡＣＣＡＴＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＴＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＴＴＴＴＡＣＧＡＴＡＴＴＴＴＧＡＣＴＧＡＴＡＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＴＡＣＴＡＣＧＧＴＧＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＶＨドメインアミノ酸配列：配列番号４９４
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＳＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＧＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＦＹＤＩＬＴＤＳＰＹＦＹＹＧＶＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＧＦＴＦＳＤＹＹ 配列番号４９１
ＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＩＳＳＳＧＳＴＩ 配列番号４９２
ＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＡＲＤＦＹＤＩＬＴＤＳＰＹＦＹＹＧＶＤＶ 配列番号４９３
ＶＬドメインヌクレオチド配列：配列番号５０２
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＡＴＡＣＡＡＣＴＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＴＧＧＧＴＴＣＴＡＡＴＣＧＧＧＣＣＴＣＣＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＡＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＶＬドメインアミノ酸配列：配列番号５０１
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列：ＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹ 配列番号４９８
ＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列：ＬＧＳ 配列番号４９９
ＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列：ＭＱＡＬＱＴＰＲＴ 配列番号５００
１．２１．１．１１．
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１．２１．１．１２．
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１．２１．１．１２．１．配列番号６１０ ＩＣＯＳＬ－Ｆｃ
Figure 2024518843000146
 リンカーは下線を付け太字とした。リンカーの前の配列はヒトＩＣＯＳＬ（Ｂ７－Ｈ２）である。リンカーの後の配列はヒトＩｇＧ１ Ｆｃである。
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１．２１．１．１３．
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１．２１．１．１４．
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１．２１．１．１５．
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Claims (42)

  1. それを必要とする対象における調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態を処置する方法であって、ヒトおよび／またはマウスＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含み、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約０．８ｍｇ～２４０ｍｇの用量で対象に投与される、方法。
  2. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３、ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで：
    （ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号３６３、配列番号３６４および配列番号３６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号３７０、配列番号３７１、配列番号３７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｂ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号３７７、配列番号３７８および配列番号３７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号３８４、配列番号３８５、配列番号３８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｃ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号３９１、配列番号３９２および配列番号３９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号３９８、配列番号３９９、配列番号４００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｄ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４０５、配列番号４０６および配列番号４０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４１２、配列番号４１３、配列番号４１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｅ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４１９、配列番号４２０および配列番号４２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４２６、配列番号４２７、配列番号４２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｆ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４３５、配列番号４３６および配列番号４３７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｇ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４４９、配列番号４５０および配列番号４５１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４５６、配列番号４５７、配列番号４５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｈ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４６３、配列番号４６４および配列番号４６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４７０、配列番号４７１、配列番号４７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４７７、配列番号４７８および配列番号４７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４８４、配列番号４８５、配列番号４８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、または
    （ｊ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、配列番号４９１、配列番号４９２および配列番号４９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含む、
    請求項１に記載の方法。
  3. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３、ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ここで：
    （ａ）ＨＣＤＲ１は、配列番号３６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３６４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３６５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３７０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３７１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３７２のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＨＣＤＲ１は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３７８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３７９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３８５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３８６のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）ＨＣＤＲ１は、配列番号３９１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３９２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３９３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３９８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３９９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４００のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４０５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４０６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４０７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４１２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４１４のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４１９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４２０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４２１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４２８のアミノ酸配列を含み；
    （ｆ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４３５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４３６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４３７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４４２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４４３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４４４のアミノ酸配列を含み；
    （ｇ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４４９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４５０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４５１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４５６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４５７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４５８のアミノ酸配列を含み；
    （ｈ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４６４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４６５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４７０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４７１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４７２のアミノ酸配列を含み；
    （ｉ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４７７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４７８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４７９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４８５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４８６のアミノ酸配列を含み；または
    （ｊ）ＨＣＤＲ１は、配列番号４９１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４９２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号４９３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４９８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４９９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号５００のアミノ酸配列を含む、
    請求項１または２に記載の方法。
  4. ＨＣＤＲ１は、配列番号４０５のアミノ酸配列を含み、
    ＨＣＤＲ２は、配列番号４０６のアミノ酸配列を含み、
    ＨＣＤＲ３は、配列番号４０７のアミノ酸配列を含み、
    ＬＣＤＲ１は、配列番号４１２のアミノ酸配列を含み、
    ＬＣＤＲ２は、配列番号４１３のアミノ酸配列を含み、
    ＬＣＤＲ３は、配列番号４１４のアミノ酸配列を含む、
    請求項３に記載の方法。
  5. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、ここで：
    （ａ）ＶＨドメインは、配列番号３６６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｂ）ＶＨドメインは、配列番号３８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｃ）ＶＨドメインは、配列番号３９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｄ）ＶＨドメインは、配列番号４０８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｅ）ＶＨドメインは、配列番号４２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｆ）ＶＨドメインは、配列番号４３８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４４５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｇ）ＶＨドメインは、配列番号４５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｈ）ＶＨドメインは、配列番号４６７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｉ）ＶＨドメインは、配列番号４８１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４８８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；または
    （ｊ）ＶＨドメインは、配列番号４９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号５０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含む、
    請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. ＶＨドメインは、配列番号４０８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５に記載の方法。
  7. （ａ）ＶＨドメインは、配列番号３６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３７３のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＶＨドメインは、配列番号３８０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３８７のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）ＶＨドメインは、配列番号３９４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４０１のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）ＶＨドメインは、配列番号４０８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１５のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）ＶＨドメインは、配列番号４２２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４２９のアミノ酸配列を含み；
    （ｆ）ＶＨドメインは、配列番号４３８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４４５のアミノ酸配列を含み；
    （ｇ）ＶＨドメインは、配列番号４５２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４５９のアミノ酸配列を含み；
    （ｈ）ＶＨドメインは、配列番号４６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４７３のアミノ酸配列を含み；
    （ｉ）ＶＨドメインは、配列番号４８０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４８７のアミノ酸配列を含み；または
    （ｊ）ＶＨドメインは、配列番号４９４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号５０１のアミノ酸配列を含む、
    請求項５に記載の方法。
  8. ＶＨドメインは、配列番号４０８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１５のアミノ酸配列を含む、請求項５～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖および軽鎖を含み、ここで：
    （ａ）重鎖は、配列番号３６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号３７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｂ）重鎖は、配列番号３８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号３８９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｃ）重鎖は、配列番号３９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｄ）重鎖は、配列番号４１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｅ）重鎖は、配列番号４２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｆ）重鎖は、配列番号４４０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｇ）重鎖は、配列番号４５４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｈ）重鎖は、配列番号４６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；
    （ｉ）重鎖は、配列番号４８２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４８９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み；または
    （ｊ）重鎖は、配列番号４９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号５０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％または９５％の配列同一性を有する配列を含む、
    請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 重鎖は、配列番号４１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号４１７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９に記載の方法。
  11. （ａ）重鎖は、配列番号３６８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３７５のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）重鎖は、配列番号３８２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３８９のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）重鎖は、配列番号３９６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４０３のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）重鎖は、配列番号４１０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４１７のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）重鎖は、配列番号４２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４３２のアミノ酸配列を含み；
    （ｆ）重鎖は、配列番号４４０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４４７のアミノ酸配列を含み；
    （ｇ）重鎖は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４６１のアミノ酸配列を含み；
    （ｈ）重鎖は、配列番号４６８のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４７５のアミノ酸配列を含み；
    （ｉ）重鎖は、配列番号４８２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４８９のアミノ酸配列を含み；または
    （ｊ）重鎖は、配列番号４９６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号５０３のアミノ酸配列を含む、
    請求項９に記載の方法。
  12. 重鎖は、配列番号４１０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４１７のアミノ酸配列を含む、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 抗ＩＣＯＳ抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 抗ＩＣＯＳ抗体は、ＫＹ１０４４である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約０．５ｍｇ～約１０ｍｇの用量で対象に投与される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約０．８ｍｇ～約８ｍｇの用量で対象に投与される、請求項１５に記載の方法。
  17. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約８ｍｇ未満の用量（例えば、７．５ｍｇ以下の用量、７ｍｇ以下の用量）で対象に投与される、請求項１５に記載の方法。
  18. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約０．８ｍｇ～約２．４ｍｇの用量で対象に投与される、請求項１５に記載の方法。
  19. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約２．４ｍｇ～約８ｍｇの用量で対象に投与される、請求項１５に記載の方法。
  20. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約０．８ｍｇの用量で対象に投与される、請求項１５に記載の方法。
  21. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約２．４ｍｇの用量で対象に投与される、請求項１５に記載の方法。
  22. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、約８ｍｇの用量で対象に投与される、請求項１５に記載の方法。
  23. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、２～６週間ごと、例えば、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごとまたは６週間ごとに対象に投与される、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、３週間ごとに対象に投与される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、６週間ごとに対象に投与される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
  26. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、毎月対象に投与される、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
  27. 抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも６か月間、例えば、６か月間、１２か月間または１２か月よりも長く対象に投与される、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. 第２の治療剤を対象に投与することをさらに含む、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. 第２の治療薬は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片を含む、請求項２８に記載の方法。
  30. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである、請求項２９に記載の方法。
  31. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、約１２００ｍｇの用量で対象に投与される、請求項２９または請求項３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、２～６週間ごと、例えば、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごとまたは６週間ごとに対象に投与される、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、３週間ごとに対象に投与される、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、６週間ごとに対象に投与される、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の方法。
  35. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、毎月対象に投与される、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の方法。
  36. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも６か月間、例えば、６か月間、１２か月間または１２か月よりも長く対象に投与される、請求項２９～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、３週間ごとに抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片とともに対象に共投与される、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の方法。
  38. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片との交互用量で対象に投与され、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片は、３週間ごとに投与され、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片は、６週間ごとに投与される、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の方法。
  39. 調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態は、腫瘍を含む、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。
  40. 調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることおよび／またはエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答を増加させることによる療法に適した疾患または状態は、がんを含む、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。
  41. がんは、進行性および／または転移性がんを含む、請求項４０に記載の方法。
  42. がんは、トリプルネガティブ乳がん、頭頸部扁平上皮細胞癌、陰茎がん、膵臓がん、非小細胞肺がん、肝細胞癌、食道がん、胃がん、黒色腫、腎細胞癌および／または子宮頸がんを含む、請求項４０または請求項４１に記載の方法。
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