KR20210091714A - 엑소좀-표적 이중 특이적 항체 - Google Patents

Abstract

본원에 기재된 발명은 제1 엑소좀-연관 단백질 및 제2 엑소좀-연관 단백질로서 프로그램된 사멸 리간드-1 ("PD-L1")에 특이적으로 결합함으로써 엑소좀을 선택적으로 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 이들 이중 특이적 항체는 T 세포 활성화를 저해하는 종양 세포 유래 엑소좀을 표적화함으로써 면역 세포에 의한 항-종양 활성의 억제를 방해할 수 있다. 따라서, 본 발명의 이중 특이적 항체는 암 치료 방법에 사용될 수 있다.

Description

엑소좀-표적 이중 특이적 항체

본 발명의 분야는 암 치료를 위한 항체-기반 치료제에 관한 것이다.

인간의 후천성 면역계(adaptive immune system)는 세포 (T 세포) 및 체액 (B 세포) 과정 모두를 통해 항원 공격에 반응한다. 체액 반응은 항원에 결합할 수 있는 표면 결합 면역 글로불린 (Ig) 분자를 발현하는 B 세포의 선택 및 클론 증폭을 초래한다. T 세포는 골수에서 시작된 미성숙 전구체에서 발달한 다음 흉선으로 이동하여 증식하고 성숙한 T 림프구로 분화한다.

체액 반응의 발달은 체세포 과돌연변이(somatic hypermutation) 및 클론 증폭(clonal amplification)과 일치하여 일어나는 클래스 전환(class switching)의 과정을 포함한다. 함께, 이러한 과정은 표적 항원에 대해 친화성 성숙된 분비된 항체로 이어지며 4가지 일반 클래스 (M, D, A, G 또는 E) 중 하나에 속하는 불변 도메인을 포함한다. 각 클래스의 항체 (IgM, IgD, IgA, IgG 및 IgE)는 세포 면역계와 별개의 방식으로 상호 작용한다. 표적 항원에 대해 친화성이 성숙된 항체의 특징은 다음을 포함할 수 있다: 1) 뉴클레오타이드 및 후속 아미노산, 생식선 유전자에 대한 변화, 2) 표적 항원에 대한 높은 결합 친화성, 3) 다른 단백질에 비교하여 표적 항원에 대한 결합 선택성.

종양 환자가 종양 세포 항원에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있다는 것은 잘 이해되고 있다. 이러한 항원은 돌연변이된 단백질로 이어지는 종양 내의 유전적 변화 또는 면역 체계에 정상적인 단백질의 비정상적인 제시(aberrant presentation)로 인해 발생할 수 있다. 비정상적인 제시는 이에 제한되지는 않으나, 신생아 단백질(neonatal protein)의 이소성 발현(ectopic expression), 세포 표면에 대한 세포 내 단백질의 잘못된 국소화(mis-localization) 또는 세포 용해를 포함하는 과정을 통해 발생할 수 있다. 단백질의 글리코실화를 변화시키는 효소의 비정상적인 발현은 체액성 면역계에 의해 인식되는 비-자기 항원(non-self antigen)의 생성을 초래할 수도 있다.

암과 관련된 것들을 포함하여 질병 관련 단백질에 선택적으로 결합하는 항체는 치료 효능을 유도하는 방식으로 표적 단백질의 기능을 조절한다는 것이 성공적으로 입증되었다. 돌연변이된 또는 비정상적인 단백질에 대한 항체 반응을 일으키는 인간 면역 체계의 능력은 환자의 면역 반응에 중요한 종양 드라이버(tumor-driver)의 기능을 인식하고 조절할 수 있는 항체가 포함될 수 있음을 시사한다. 이와 관련하여 세포막 트래픽킹(cell membrane trafficking)에 관여하는 단백질의 발현 증가는 종양 성장 및 종양 전이 증가와 관련이 있다.

막 트래피킹은 광범위한 세포 과정의 조절에 기여한다. 세포 표면 수용체의 내재화는 성장 인자 수용체 매개 신호 전달의 적절한 조절을 위한 중요한 메커니즘이다. 클라트린(clathrin) 코팅된 소포를 통한 내재화는 세포 표면으로부터 암 관련 수용체의 내재화를 위한 하나의 경로를 보여준다. 클라트린 코팅된 소포(clathrin-coated vesicles)의 후속 내재화를 위해 클라트린 코팅된 핏츠 (clathrin-coated Pits, CCP)에 수용체를 로딩하는 것은 경로의 첫 번째 단계 중 하나이다. CCP에 수용체의 로딩은 부분적으로 Epsin-1 (EPN1)과 같은 어댑터 분자와의 상호 작용에 의해 결정된다.

EPN1은 세포막에 위치하는 약 60.3 kDa의 단백질이다. 이는 PI(4,5)P2-, 유비퀴틴-(ubiquitin-) 및 클라트린(clathrin)/AP-2-상호작용 도메인을 함유한다. EPN1의 내인성 발현을 넉-다운하거나, EPN1의 돌연변이 형태를 과발현하거나, EPN1과 카고 분자(cargo molecule)의 상호 작용을 차단하도록 설계된 제제로 세포를 처리하면, 알려진 CCP 의존적 카고의 내재화를 억제할 수 있다. 이러한 카고의 예는 VEGFR 및 ERBB3이다. 특히, 특정 유형의 암 종양 세포는 EPN1 로딩된 엑소좀을 방출하며, 이러한 세포의 성장은 EPN1이 수용체와 상호 작용하는 것을 방지함으로써 차단될 수 있다.

나이브(

), 성숙, T 세포는 흉선을 떠나 림프절, 비장 및 편도선과 같은 특수한 림프 기관으로 이동한다. 나이브 T 세포가 활성화 신호를 받으면 여러 회(multiple round)의 분할을 거쳐 효과기 세포(effector cell) 집단을 생성하고 활성화 신호에 대한 후속 노출에 반응하도록 준비된 정지 상태로 돌아가는 다른 세포를 생성한다.

T 세포의 활성화는 2-신호 공동 자극 모델(two-signal co-stimulation model)을 통해 일어난다 (도 21). T 세포 활성화를 위한 1 차 신호는 T 세포 표면의 T 세포 수용체 (TCR)와 주조직 적합성 복합체 ("MHC") 단백질을 가진 복합체에서의 항원 제시 세포 ("APC")의 표면에 존재하는 동족 항원 (cognate antigen)의 결합이다. 이 활성화 모드는 외래 항원에 대한 반응을 허용하는 것 외에도 자기 대 비자기의 구별(self versus non-self discrimination) 및 면역 관용(immune tolerance) 달성을 허용한다.

두 번째 활성화 신호는 APC 표면에 존재하는 공동 자극 분자(co-stimulatory molecule)를 통해 T 림프구로 전달된다. 적절한 T 세포 활성화를 위해서는 1 차 신호와 2 차 신호의 강도(strength) 간의 상호 작용(interplay)이 필요하다. 항원 활성화의 존재 하에서 공동 자극의 부족은 T 세포 고갈 또는 외부 항원 자극에 대한 관용으로 이어질 수 있다. 대조적으로, TCR을 통한 강력한 1 차 신호 전달은 공동 자극의 부족을 극복할 수 있다.

공동 자극을 통한 T 세포의 활성화는 또한 음성 공동 자극 신호에 의해 균형을 이룬다. 양성 및 음성 공동 자극 신호 간의 상호 작용은 관용 파괴(breaking of tolerance)와 자가 면역 발달을 방지하면서 외부 항원에 대한 면역 활성화의 적절한 균형을 제공한다.

공동 자극을 담당하는 분자는 이러한 분자를 통한 신호 전달의 조작이 T 세포 반응을 향상시키거나 약화시킬 수 있기 때문에 치료적 관심사가 된다. T 세포 고갈(exhaustion) 또는 무반응(anergy)은 T 세포 표면에서 프로그램된 세포 사멸 1(programmed cell death 1) (PD-1)의 발현과 관련이 있다. 그 리간드인 프로그램된 세포 사멸 -리간드 1 (PD-L1)이 동족 수용체인 PD-1에 결합하면 T 세포 활성화가 감소한다. PD-L1이 PD-1에 결합하는 것을 방지할 수 있는 항체로 PD-1/PD-L1 경로를 길항(antagonizing)하는 것은 T 세포의 활성화를 향상시키고 종양 환자의 임상 결과를 향상시키는 것으로 입증되었다.

종양 유래 엑소좀에 존재하는 PD-L1은 T 세포에 대한 강력한 음성 조절 신호를 나타낸다. 엑소좀은 나노 크기 (30-150nm)의 막 소포로 다소포 체(multivesciular bodies)에서 파생되어 세포 외 환경으로 분비된다. 엑소좀은 세포 유래, 막 결합 수용체 및 리간드 뿐만 아니라 RNA 및 대사 산물과 같은 세포 내 구성 요소를 포함한다. 종양 세포는 먼 거리에서 종양 유래 성분을 정상 세포로 옮길 수 있는 엑소좀을 생산하는 것으로 알려져 있다. 종양 유래 엑소좀은 무엇보다도 정상 세포의 변형(transformation of normal cell)과 전이성 틈새(metastatic niche)의 조절과 관련이 있다.

엑소좀-연관 PD-L1의 증가된 수준은 진행성 질환(advanced disease)에 대한 마커이며 두경부암, 위암, 흑색종 및 다형성 교모세포종을 포함한 특정 암에서의 임상 결과와 역 상관(inversely correlate)될 수 있다. 종양에서 엑소좀 유발 T 세포 억제의 파괴는 암 치료를 위한 치료 전략을 나타낸다. 이러한 목적을 염두에 두고, 엑소좀 PD-L1 및 다른 엑소좀 마커를 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체는 PD-L1 유도된 면역 억제를 극복하고 다양한 암을 치료하기 위한 효과적인 제제로서 본원에서 설명된다. 보다 구체적으로, PD-L1 및 EPN1을 표적으로 하는 이중 특이적 항체가 본원에 개시되고 예시된다.

본원에 기재된 본 발명은 제1 엑소좀-연관 단백질 및 제2 엑소좀-연관 단백질로서 프로그램된 사멸 리간드-1 ("PD-L1")에 특이적으로 결합함으로써 엑소좀을 동시에 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 이러한 이중 특이적 항체는 T 세포 활성화를 억제하는 PD-L1과 같은 리간드를 함유하는 종양 세포 유래 엑소좀을 표적화함으로써 면역 세포에 의한 항 종양 활성의 억제를 방해할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법은 암 치료에 사용될 수 있다.

이중 특이적 항체의 제1 엑소좀 관련 표적은, 예를 들어 테트라스파닌 막 횡단 패밀리 단백질(Tetraspanin transmembrane family protein), 종양 감수성 유전자 101 ( Tumor susceptibility gene 101, "TSG101"), 주조직 적합성 복합체 (MHC) 클래스 II 분자, 프로그램된 세포 사멸 6 상호작용 단백질 ("PDCD6IP"), 열 충격 단백질(Heat shock protein), 세포 골격 단백질(cytoskeletal protein), 아넥신(Annexin), 또는 막 수송 단백질(membrane transport protein)일 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 제1 결합 모이어티는 예를 들어 Epsin-1 ("EPN1"), CD9, CD10, CD26, CD37, CD45/ICAM-1, CD63, CD69, CD81, EGFR, EGFRvIII, EpCAM, Flotillin-1, Glypican-1, HER2, HER3, HSP70, HSP90, 및 NKCC2에 특이적으로 결합할 수 있다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 제2 결합 모이어티는 PD-L1-특이적 항체의 V_H 및 V_L 쇄를 포함하는, 임의의 PD-L1-특이적 항체, 예컨대, 이에 제한되지는 않으나, 아테졸리주맙(atezolizumab), 아벨루맙(avelumab), 두르발루맙(durvalumab) 또는 BMS 936559로부터 유래될 수 있다.

도 1은 B7 패밀리의 T 세포 공동 자극 분자를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 유세포 분석에 의해 분석된 항-CD63 코팅된 비드에 대한 엑소좀의 용량 의존적 결합을 보여준다. 항-CD63 비드에 결합된 엑소좀은 형광 표지된 항-CD63 항체로 검출되었다.
도 3은 흡착에 의해 라텍스 비드에 포획된 엑소좀이 유세포 분석에 의해 결합을 평가할 때 항-EPN1 항체 IMM20059와 반응함을 보여준다. 대조적으로, IMM20059는 BSA 코팅된 비드에는 결합하지 않는다.
도 4는 온전한 A549 폐암 세포주(intact A549 lung cancer cell line)에 대한 IMM20059 결합을 Attune™ NxT 기기 (Life Technologies)를 사용한 유세포 분석에 의해 관찰한 농도 의존적 결합 곡선을 보여준다. IMM20059의 온전한 세포에 대한 결합은 형광단 표지된 항-인간 2차 항체로 검출되었다.
도 5는 온전한 Huh7 간세포 암종 세포(intact Huh7 hepatocellular carcinoma cell)에 대한 IMM20059 결합을 Attune™ NxT 기기 (Life Technologies)를 사용한 유세포 분석에 의해 관찰한 농도 의존적 결합 곡선을 보여준다. IMM20059의 온전한 세포에 대한 결합은 형광단 표지된 항-인간 2차 항체로 검출되었다.
도 6은 동족체(homolog) EPN2를 넘는 EPN1에 대한 IMM20059의 선택성을 나타내는 정량적 도트 블롯 결과(quantitative dot blot)를 보여준다. IMM20059의 결합은 재조합 EPN1 또는 EPN2의 증가하는 농도에 대하여 도트 블롯으로 분석되었다.
도 7은 IMM20059가 뮤린 EPN1 항원과 교차 반응하는 것을 입증하는 유세포 분석을 보여준다. 뮤린 NIH3T3 및 인간 MFE296 세포주의 세포의 표면 및 세포 내 염색을 수행하였다. IMM20059의 세포 표면 및 세포 내 결합은 두 세포주 모두에서 관찰되었다. 마우스 및 인간 EPN1 모두와 교차 반응하는 것으로 알려진 상업적 항-EPN1 항체는 NIH3T3 및 MFE296 세포와 유사하게 결합하였다. 그러나 해당 상업적 항체는 두 세포 풀 모두의 세포 표면에서 EPN1과 상호 작용하지 못하였다.
도 8은 2개의 상이한 IgG 항체로부터 분리된 가변 도메인으로부터 생성된 2 개의 단일 특이적 IgG 항체 및 이중 특이적 항체의 카툰식 표현이다.
도 9는 이중 특이성 항-EPN1/항-PDL1 항체가 두 마커를 포함하는 엑소좀에 결합할 것임을 묘사하는 카툰식 표현이다.
도 10은 이중 특이적 항체 내의 항-PD-L1 가변 도메인의 위치가 EPN1이 아닌 PD-L1에 결합하는 항체의 능력에 영향을 미친다는 것을 보여주는 도트 블롯 결과를 보여준다.
도 11은 온전한 A549 폐암 세포주에 대한 Ate/PR045-2H11:L 항-EPN1/항-PD-L1 이중 특이적 항체에 대해 Attune™ NxT 기기 (Life Technologies)를 사용한 유세포 분석에 의해 관찰된 농도 의존적 결합 곡선을 보여준다. IMM20059의 온전한 세포에 대한 결합은 형광단 표지된 항-인간 2차 항체로 검출되었다.

본원에 기재된 본 발명은 제1 및 제2 엑소좀-연관 단백질에 특이적으로 결합함으로써 엑소좀을 동시에 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명에 따른 제2 에피솜 관련 단백질(episome-associated protein)은 프로그램된 사멸 리간드-1 ("PD-L1")이다. 따라서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 엑소좀-연관 단백질 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 모이어티 및 PD-L1상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 모이어티를 보유한다. 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 T 세포 활성화를 억제하는 PD-L1과 같은 리간드를 함유하는 종양 세포 유래 엑소좀을 표적화함으로써 면역 세포에 의한 항 종양 활성의 억제를 방해할 수 있다. 그러므로 이중 특이적 항체는 다양한 유형의 암에 걸린 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 암 치료 프로토콜의 구성 요소로서 본 발명의 이중 특이적 항체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여 및 전달하기 위해 제형화 된 조성물을 포함한다.

일반적으로, 엑소좀은 다음 그룹 중 하나 이상에 속하는 단백질을 함유하는 것으로 알려진 소포이다: CD9, CD63 및 CD81과 같은 테트라스파닌 막 횡단 패밀리 단백질; 종양 감수성 유전자 101 (Tumor susceptibility gene 101, "TSG101"); 주조직 적합성 복합체(MHC) 클래스 II 분자; 프로그램된 세포 사멸 6 상호 작용 단백질 (Programmed cell death 6 interacting proteins, "PDCD6IP") 18,22,37,38,41; 열 충격 단백질 (HSP60, HSP70 및 HSP90); 세포 골격 단백질 (Cytoskeletal proteins, 액틴 및 튜불린); 아넥신 (막과 막 융합의 세포 골격 변화를 조절하는 단백질); 및 막 수송 단백질(Membrane transport protein). 엑소좀은 일반적으로 칼넥신(calnexin) 및 골지 기질 단백질 또는 핵 단백질과 같은 소포체 단백질을 포함하지 않는 것으로 생각된다. 엑소좀은 또한 CD10, CD26, CD37, CD45/ICAM-1, CD63, CD69, CD81, EGFR, EGFRvIII, EpCAM, Flotillin-1, Glypican-1, HER2, HER3 또는 NKCC2 단백질을 포함할 수 있는 것으로 알려져 있다.

기본 항체 구조는 2개의 중쇄 (H) 및 2 개의 경쇄 (L) 폴리펩타이드 쇄를 포함하고, 각각은 불변 영역 및 가변 영역을 포함하고 이황화 결합에 의해 상호 연결된다. 인간에게는 람다("λ") 및 카파("κ")라고 하는 두 가지 유형의 면역 글로불린 경쇄와 항체 분자의 기능적 활성을 결정하는 이소타입이라고도 하는 다섯 가지 주요 면역 글로불린 중쇄 클래스가 있다: IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE. 이와 함께, 중쇄 가변 ("V_H") 영역 및 경쇄 가변 ("VL") 영역은 항체의 항원에 대한 특이적 결합을 담당하는 가변 단편 "Fv"를 형성한다. 전장 중쇄는 또한 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2, CH3)을 가지고 있다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 효과기 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1 성분 (C1q)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역 글로불린의 결합을 매개할 수 있다.

V_H 및 V_L 영역은 상보성 결정 영역 ("CDR")이라고 하는 3개의 초가변 영역에 의해 단절된(interupted) "프레임 워크(framework)"영역을 포함한다. CDR은 주로 항원의 에피토프에 대한 결합을 담당한다. 상이한 경쇄 또는 중쇄의 프레임 워크 영역의 서열은 종 내에서 상대적으로 보존되어 있으며, CDR을 3차원 공간에 배치하고 정렬하는 역할을 한다. 각 쇄의 3개의 CDR은 일반적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지칭되며, N-말단에서 시작하여 순차적으로 번호가 매겨지며 특정 CDR이 위치한 쇄로 종종 식별된다. 따라서, 중쇄 CDR은 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3으로 지정되고; 마찬가지로, 경쇄 CDR은 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3으로 지정된다. 항원 결합 단편, 중쇄 및 경쇄 각각의 하나의 불변 및 하나의 가변 도메인은 Fab 단편으로 지칭된다. F(ab)'₂ 단편은 두 개의 Fab 단편을 포함하며, 힌지 영역 아래로 면역 글로불린 분자를 절단하여 생성할 수 있다.

이중 특이적 항체는 2개의 상이한 에피토프에 동시 결합이 가능하다. 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 동일한 분자에 수용되는 임의의 면역 글로불린 또는 면역 글로불린 유래 분자, 또는 분자 복합체의 형태일 수 있다. 다양한 구체예에서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 제1 결합 모이어티는, 예컨대 이에 제한되지는 않으나, Epsin-1 ("EPN1"), CD9, CD10, CD26, CD37, CD45/ICAM-1, CD63, CD69, CD81, EGFR, EGFRvIII, EpCAM, Flotillin-1, Glypican-1, HER2, HER3, HSP70, HSP90 및 NKCC2와 같은 아넥소좀-연관 단백질(anexosome-associated protein) 상의 에피토프에 결합하는 항체로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 이중 특이적 항체는 참조로 포함되는 국제 특허 출원 번호 PCT/US19/54259에 기재된 결합 모이어티와 같은 인간 EPN1 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 모이어티를 포함 할 수 있다. 다양한 구체예에서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 EPN1-특이적 제 1 결합 모이어티는 서열번호 2 또는 서열번호 6에 나타낸 가변 중쇄, 서열번호 4 또는 서열번호 8에 나타낸 가변 경쇄를 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 제1 항원 결합 모이어티는 다음을 갖는다: (1) 다음 중 하나 이상: (a) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, (b) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2,및 (c) 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3; (2) 다음 중 하나 이상: (a) 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, (b) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 (c) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 제2 결합 모이어티는 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만 아테졸리주맙(atezolizumab), 아벨루맙(avelumab), 두르발루맙(durvalumab) 또는 BMS 936559와 같은 PD-L1-특이적 항체의 V_H 및 V_L 쇄를 포함하는 임의의 PD-L1-특이적 항체로부터 유래될 수 있다.

상기 이중 특이적 항체에 대한 설명을 염두에 두고, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 한 구체예는 서열번호 9에 기초한 중쇄 CDR1, 서열번호 10에 기초한 중쇄 CDR2, 및 서열번호 11에 기초한 중쇄 CDR3, 서열번호 12에 기초한 경쇄 CDR1, 서열번호 13에 기초한 경쇄 CDR2, 및 서열번호 14에 기초한 경쇄 CDR3를 가지는 EPN1-특이적 제1 결합 모이어티와 PD-L1-특이적 항체로부터 유래된 중쇄 및 경쇄 CDR을 가지는 PD-L1-특이적 제2 결합 모이어티를 가질 수 있다. 그러므로, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 또 다른 구체예는 서열번호 9에 기초한 중쇄 CDR1, 서열번호 10에 기초한 중쇄 CDR2, 및 서열번호 11에 기초한 중쇄 CDR3, 서열번호 12에 기초한 경쇄 CDR1, 서열번호 13에 기초한 경쇄 CDR2, 및 서열번호 14에 기초한 경쇄 CDR3를 가지는 EPN1-특이적 제1 결합 모이어티와 서열번호 17에 기초한 중쇄 CDR1, 서열번호 18에 기초한 중쇄 CDR2, 및 서열번호 19에 기초한 중쇄 CDR3, 서열 번호 20에 기초한 경쇄 CDR1, 서열번호 21에 기초한 경쇄 CDR2, 및 서열번호 22에 기초한 경쇄 CDR3를 가지는 PD-L1-특이적 제2 결합 모이어티를 가질 수 있다.

이중 특이적 항-CD-63/항-PD-L1 항체는 PD-L1-양성 엑소좀 풀을 선택적으로 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체의 또 다른 구체예이다. 항-CD-63/항-PD-L1 이중 특이적 항체의 구체예는, 이에 제한되지는 않으나, 항-CD-63 항체의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR(서열 번호 44 및 45)과 조합하여 아테졸리주맙(서열번호 15 및 16); 아벨루맙(서열번호 23 및 24); 두르발루맙(서열번호 25 및 26); 또는 BMS-936559(서열번호 27 및 28) 중 하나의 항-PD-L1 항체의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR을 가지는 항체를 포함한다. 바람직한 구체예는 DVD-Ig 형태로 조작된 항-CD-63 항체(서열번호 44 및 45) 및 아테졸리주맙의 V_H 및 V_L 도메인을 포함하는 항-CD-63/항-PD-L1 이중 특이적 항체이다. 항-EPN-1/항-PD-L1 이중 특이적 항체에 대해 정의된 링커 및 배향을 사용하여 항-CD-63 및 아테졸리주맙 가변 도메인의 4 가지 상이한 구성(configuration)이 가능하다.

이중 특이적 항-HER2/항-PD-L1 항체는 PD-L1-양성 엑소좀 풀을 선택적으로 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체의 또 다른 구체예이다. 항-HER2/항-PD-L1 이중 특이적 항체의 구체예는, 이에 제한되지는 않으나, 항-HER2 항체 트라스트주맙의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR(서열번호 46 및 47)과 조합하여 아테졸리주맙(서열번호 15 및 16); 아벨루맙(서열번호 23 및 24); 두르발루맙(서열번호 25 및 26); 또는 BMS-936559(서열번호 27 및 28) 중 하나의 항-PD-L1 항체의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR을 가지는 항체를 포함한다. 바람직한 구체예는 DVD-Ig 형태로 조작된 항-HER2 항체 (서열번호 46 및 47) 및 아테졸리주맙의 V_H 및 V_L 도메인을 포함하는 항-HER2/항-PD-L1 이중 특이적 항체이다. 항-HER2 및 아테졸리주맙 가변 도메인의 4 가지 상이한 구성은 항-EPN-1/항-PD-L1 이중 특이적 항체에 대해 정의된 링커 및 배향을 사용하여 가능하다.

이중 특이적 항-EpCAM/항-PD-L1 항체는 PD-L1-양성 엑소좀 풀을 선택적으로 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체의 또 다른 구체예이다. 항-EpCAM/항-PD-L1 이중 특이적 구체예는 항-EpCAM 항체 오포르투주맙의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR (서열번호 48 및 49)과 조합하여 아테졸리주맙(서열번호 15 및 16); 아벨루맙(서열번호 23 및 24); 두르발루맙(서열번호 25 및 26); 또는 BMS-936559(서열번호 27 및 28) 중 하나의 항-PD-L1 항체의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR을 가진다. 바람직한 구체예는 DVD-Ig 형태로 조작된 항-EpCAM 항체(서열번호 48 및 49) 및 아테졸리주맙의 V_H 및 V_L 도메인을 포함하는 항-EpCAM/항-PD-L1 이중 특이적 항체이다. 항-EpCAM 및 아테졸리주맙 가변 도메인의 4 가지 상이한 구성은 항-EPN-1/항-PD-L1 이중 특이적 항체에 대해 정의된 링커 및 배향을 사용하여 가능하다.

이중 특이적 항-HER3/항-PD-L1 항체는 PD-L1-양성 엑소좀 풀을 선택적으로 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체의 또 다른 구체예이다. 항-HER3/항-PD-L1 이중 특이적 구체예는 항-HER 3 항체의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR (서열번호 50 및 51)과 조합하여 아테졸리주맙(서열번호 15 및 16); 아벨루맙(서열번호 23 및 24); 두르발루맙(서열번호 25 및 26); 또는 BMS-936559(서열번호 27 및 28) 중 하나의 항-PD-L1 항체의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR을 가진다. 바람직한 구체예는 DVD-Ig 형태로 조작된 항-HER3 항체(서열번호 50 및 51) 및 아테졸리주맙의 V_H 및 V_L 도메인을 포함하는 항-HER3/항-PD-L1 이중 특이적 항체이다. 항-HER3 및 아테졸리주맙 가변 도메인의 4 가지 상이한 구성은 항-EPN-1/항-PD-L1 이중 특이적 항체에 대해 정의된 링커 및 배향을 사용하여 가능하다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 완전 인간 또는 인간화 단일 클론 항체이다. 즉, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 하나 이상의 인간 면역 글로불린으로부터 유래된 프레임 워크 영역 및 CDR을 포함할 수 있다. 실제로, 프레임 워크 영역은 하나의 인간 항체에서 유래할 수 있고 다른 인간 항체의 CDR을 포함하도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 항체는 다음을 가질 수 있다: i) 엑소좀 단백질 표적에 특이적인 인간 항체로부터 유래된 하나 이상의 CDR; ii) PD-L1에 특이적인 인간 항체로부터 유래된 하나 이상의 CDR; 및 다른 인간 항체로부터 유래된 프레임 워크 영역.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 항체 단편 변이체 일 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 단편 변이체는 2가 F(ab)'₂ 단편, 2가 단일 사슬 Fv 단백질("bi-scFv") 및 2가 이황화물 안정화 Fv 단백질 ("bi- dsFv")을 포함한다. (Fab')₂ 단편은 후속 환원없이 전체 항체를 효소 펩신으로 처리하여 얻을 수 있는 두 개의 Fab' 단편의 이량체이므로 Fab '단량체는 두 개의 이황화 결합에 의해 함께 유지된다. bi-scFv 단편과 같은 단일 사슬 ("sc") 항체는 유전적으로 융합된 단일 사슬 분자를 생성하기 위하여, 모두 하나 이상의 적합한 폴리펩타이드 링커에 의해 연결되어 있는, 제1 항체의 중쇄 및 경쇄의 V_L 및 V_H 영역, 및 제2 항체의 중쇄 및 경쇄의 V_L 및 V_H 영역을 포함하는 유전적으로 조작된 분자이다. 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 또한 2 개의 상이한 scFV 항체의 이량체일 수 있다. 이중 특이적 항체의 또 다른 예는 탠덤 scFv (taFv 또는 scFv2), 디아바디(diabody), dAb2NHH2, 놉-인투-홀 유도체(knob-into-holes derivatives), SEED-IgG, heteroFc-scFv, Fab-scFv, scFvJun/Fos, Fab'-Jun/Fos, 트리바디(tribody), DNL-F(ab)3, scFv3-CHl/CL, Fab-scFv2, IgG-scFab, IgG-scFv, scFv-IgG, scFv2 -Fc, F(ab')2-scFv2, scDB-Fc, scDb-CH3, Db-Fe, scFv2-H/L, DVD-lg, 탠덤 디아바디(tandem diabody, "TandAb"), scFv-dhlx-scFv, dAb2-IgG, dAb-IgG, dAb-Fc-dAb를 포함한다.

당업자는 이중 특이적 항체의 보존적 변이체(conservative variant)가 생성될 수 있음을 인식할 것이다. 이러한 보존적 변이체는 V_H와 V_L 영역 사이의 올바른 폴딩 및 안정화에 필요한 중요한 아미노산 잔기를 유지하고 분자의 낮은 pI 및 낮은 독성을 보존하기 위해 잔기의 전하 특성을 유지한다. 아미노산 치환 (예컨대, 최대 1개, 최대 2개, 최대 3개, 최대 4개 또는 최대 5개 아미노산 치환)을 V_H 및 V_L 영역에서 만들어 수율을 높일 수 있다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 아미노산 치환표는 당업자에게 잘 알려져 있다. 다음 6 개의 아미노산 그룹은 서로에 대한 보존적 치환으로 간주되는 아미노산의 예이다. i) 알라닌(A), 세린(S) 및 트레오닌(T); ii) 아스파르트산(D) 및 글루타민산(E); iii) 아스파라긴(N) 및 글루타민(Q); iv) 아르기닌(R) 및 라이신(K); v) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M) 및 발린(V); 및 vi) 페닐알라닌(F), 티로신(Y) 및 트립토판(W).

본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 또한 내인성 항체의 백그라운드에 대한 생물학적 제제의 검출을 용이하게 하기 위해 "태깅된(tagged)" 면역 글로불린 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 태깅된 CH3 도메인은 인간 IgG 유래 CH3 도메인의 AB, EF 또는 CD 구조 루프 중 하나 이상에 통합된 이종 항체 에피토프이다. CH3 태그는 바람직하게는 IgG1 서브클래스 항체의 구조적 맥락에 포함되며, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 다른 인간 IgG 서브 클래스도 본 발명에 따라 이용 가능하다. "CH3 스캐폴드(CH3 scaffolds)"로도 지칭되는 에피토프-태깅된 CH3 도메인은 일반적으로 면역 글로불린 Fc 부분의 형태로 중쇄 불변 영역을 갖는 본 발명의 임의의 항체에 통합될 수 있다. CH3 스캐폴드 태그의 예 및 이들을 항체에 통합하는 방법은 PCT 특허출원번호 PCT/US19/32780에 개시되어 있다. 에피토프 태깅된 CH3 스캐폴드를 검출하는데 사용되는 항체는 일반적으로 본원에서 "검출기 항체(detector antibodies)"로 지칭된다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 치료적 효과는 표적 항원에 대한 결합 친화도와 상관 관계가 있다. 결합 친화도는 Frankel et al., Mol. Immunol., 16:101-106, 1979에 설명된 Scatchard 방법을 수정하여 계산할 수 있다. 대안적으로, 결합 친화도는 항원으로부터 항체의 해리 속도에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 경쟁 방사성 면역 분석(competition radioimmunoassay), ELISA 및 유세포 분석을 포함하는 다양한 방법을 사용하여 결합 친화성을 측정할 수 있다.

항원에 "특이적으로 결합하는" 항체는 그 항원에 높은 친화도로 결합하고 다른 관련없는 항원에 유의하게 결합하지 않는 항체이다. 항원에 대한 항체의 높은 친화력 결합은 항원 표적의 항원 결정 인자로도 알려진 에피토프에 대한 항체의 CDR 중 하나 이상의 결합 상호 작용에 의해 매개된다. 에피토프는 항원성 분자의 특정 화학 그룹 또는 펩타이드 서열로, 특정 면역 반응을 유도할 수 있음을 의미한다. 본 발명에 따른 항체에 의해 특이적으로 결합되는 에피토프는 예를 들어 하나 이상의 암 유형의 세포에 의해 발현되는 단백질 내에 포함될 수 있다. 일반적으로 항체는 해리 상수 값 ("K_D")이 50 nM 이하인 경우 "고친화성 결합"을 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 그 항체와 적어도 하나의 그 결합 표적 사이의 KD가 50nM, 40nM 이하, 30nM 이하, 20nM 이하, 10nM 이하, 9nM 이하, 8nM 이하, 7nM 이하, 6nM 이하, 5nM 이하, 4nM 이하, 3nM 이하, 2nM 이하, 또는 1nM 이하일 때, 그의 엑소좀 단백질 또는 PD L1 결합 표적에 대한 높은 친화도 결합을 나타낸다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 고친화성 결합은 예를 들어 PD-L1을 발현하는 세포에 대한 그의 결합과 관련하여 기술될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명에 따른 항체는 반 최고 효과 농도 (half maximal effective concentration, EC₅₀)가 10nM 이하, 9nM 이하, 8nM 이하, 7nM 이하, 6nM 이하, 5nM 이하, 4nM 이하, 3nM 이하, 2nM 이하 또는 1nM 이하인 경우 PD-L1 발현 세포에 대한 높은 친화도 결합을 나타낸다. 유사하게, PD-L1을 높은 친화도로 결합하는 것 외에도, 동일한 항체는 TSG101, CD9, CD10, CD26, CD37, CD45/ICAM-1, CD63, CD69, CD81, EGFR, EGFRvIII, EpCAM, Flotillin-1, Glypican-1, HER2, HER3, HSP70, HSP90, 또는 NKCC2에 결합하는 것과 같이,높은 친화도로 다른 엑소좀 관련 단백질에 결합할 수도 있다. 다양한 변이체에서, 예를 들어, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 (i) EPN1-발현 엑소좀 또는 세포에 대해 10nM 이하, 9nM 이하, 8nM 이하, 7nM 이하, 6nM 이하, 5nM 이하, 4nM 이하, 3nM 이하, 2nM 이하, 또는 1nM 이하; 및 PD-L1-발현 에피좀 또는 세포에 대해 10nM 이하, 9nM 이하, 8nM 이하, 7nM 이하, 6nM 이하, 5nM 이하, 4nM 이하, 3nM 이하, 2nM 이하 또는 1nM 이하의 EC₅₀을 나타낸다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 대상체에서 질병을 예방, 치료 또는 개선하는 방법에 사용될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 암을 예방, 치료 또는 개선하는데 사용될 수 있다. 질병을 "예방(preventing)" 하는 것은 질병의 완전한 발달을 억제하는 것을 의미한다. "치료(treating)"는 종양 부담(tumor burden) 감소 또는 전이 크기 감소와 같은 질병 또는 병리학적 상태가 발생하기 시작한 후 질병 또는 병리학적 상태의 징후 또는 증상을 개선하는 치료적 개입을 의미한다. "개선(ameliorating)"은 암과 같은 질병의 징후 또는 증상의 수 또는 중증도의 감소를 의미한다. 본 발명에 따른 일정량의 이중 특이적 항체는 증상(들)의 주관적 완화 또는 임상의 또는 기타 자격있는 전문가가 지적한 객관적으로 식별 가능한 개선을 제공한다. 암을 예방, 치료 또는 개선하는 방법은, i) 항 종양 유도된 T 세포 활성화(anti-tumor-induced T cell activation)의 억제제(suppressor)인 PD-L1; 및 ii) T 세포 활성화를 억제하거나 억제하지 않을 수 있는 다른 엑소좀 단백질을 함유하는 종양 세포 유래 엑소좀을 표적화하여 면역 세포에 의한 항 종양 활성 억제를 방해함으로써 종양의 성장 또는 전이를 억제하기 위하여 대상체에게 유효량의 본 발명에 따른 이중 특이적 항체를 포함하는 조성물의 투여를 필요로 할 수 있다. 따라서, 투여된 이중 특이적 항체는 종양 세포 유래 엑소좀과 접촉하고 (즉, 엑소좀과 직접적인 물리적 결합하도록 배치됨), 여기서 이중 특이적 항체는 PD-L1이 T 세포 활성화의 억제제로서 기능하는 것을 방지하기 위해 하나 이상의 엑소좀 표적에 결합할 수 있다. 다양한 구체예에서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 PD-L1-매개 세포 신호 전달을 방지하고, 그렇지 않으면 림프절에서 항원-특이적 T-세포의 증식을 감소시키면서 동시에 조절 T 세포(항-염증, 억제 T 세포)에서 세포 사멸을 감소시키는 억제 신호를 전달한다

이를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 본 발명에 따른 이중특이적 항체는 조성물로 제형화된다. 보다 구체적으로, 이중 특이적 항체는 전신 투여 또는 종양 내 투여와 같은 국소 투여를 위해 제형화 될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 정맥 내 투여와 같은 비경구 투여 용으로 제형화 될 수있다. 조성물은 대상체에게 투여하기 위한 단위 투여 형태(unit dosage form)로 제조될 수있다. 원하는 결과를 얻기 위한 투여량과 시기는 치료 임상의의 재량에 달려 있다. 본 발명에 따른 이중 특이적 항체의 투여는 또한 다른 항암제의 투여 또는 종양의 외과적 절제와 같은 치료(therapeutic treatment)를 동반할 수 있다. 임의의 적합한 항암제가 본원에 개시된 이중 특이적 항체와 조합하여 투여될 수 있다. 예시적인 항암제는, 이에 제한되는 것은 아니나, 화학요법제(chemotherapeutic agent), 예를 들어 유사 분열 억제제, 알킬화제, 항-대사 산물, 인터칼레이팅 항생제, 성장 인자 억제제, 세포주기 억제제, 효소, 토포아이소머라제 억제제, 항생존제(anti-survival agent), 생물학적 반응 조절제, 항호르몬 (예: 항 안드로겐) 및 항 혈관 형성제를 포함한다. 다른 항암 치료에는 방사선 요법과 암세포를 특이적으로 표적으로 하는 기타 항체가 포함된다.

투여용 조성물은 수성 담체와 같은 약제학적으로 허용되는 담체에 용해된 이중 특이적 항체의 용액을 포함할 수 있다. 일반적으로 담체의 성질은 사용되는 특정 투여 방식에 따라 달라진다. 예를 들어, 비경구 제형은 일반적으로 물, 생리 식염수, 균형 잡힌 염 용액, 수성 덱스트로스 또는 비히클로서 글리세롤과 같은 약제학적 및 생리학적으로 허용되는 유체를 포함하는 주사 가능한 유체를 포함한다. 분말, 알약, 정제 또는 캡슐 형태와 같은 고체 조성물의 경우, 통상적인 무독성 고체 담체는 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분 또는 마그네슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 생물학적으로 중성인 담체(biologically neutral carrier)에 더하여, 투여될 약제학적 조성물은 습윤제 또는 유화제, 방부제 및 pH 완충제 등과 같은 소량의 무독성 보조 물질, 예를 들어 나트륨 아세테이트 또는 소르비탄 모노라우레이트(sorbitan monolaurate)를 함유할 수 있다. 전술한 담체 용액은 멸균되고 일반적으로 바람직하지 않은 물질이 없으며, 잘 알려진 통상적인 멸균 기술로 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제와 같은 생리적 조건에 근접하는데 필요한 약제학적으로 허용되는 보조 물질, 및 나트륨아세테이트, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 및 젖산나트륨과 같은 독성 조절제를 함유할 수 있다. 이들 제형에서 항체의 농도는 광범위하게 변할 수 있으며, 선택된 특정 투여 방식 및 대상체의 필요에 따라 주로 유체 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택될 것이다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체 조성물을 투여하기 위한 옵션은 느린 주입(slow infusion)에 의한 투여, 또는 정맥 내 푸시(intravenous push) 또는 볼루스(bolus)를 통한 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 투여하기 전에, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체 조성물은 동결 건조된 형태로 제공될 수 있고, 투여 전에 원하는 농도로 멸균 용액에서 재수화 될 수 있다. 예를 들어, 상기 이중 특이적 항체 용액은 0.9% 염화나트륨, USP를 함유하는 주입 백에 첨가될 수 있으며, 일부 경우에는 체중 1kg 당 0.5 내지 20mg의 투여량으로 투여될 수 있다. 본 발명에 따른 항체 조성물의 투여의 한 예에서, 더 높은 로딩 용량이 투여되고, 후속적으로 유지 용량이 더 낮은 수준으로 투여된다. 예를 들어, 4mg/kg의 초기 로딩 용량을 약 90분 동안 주입한 다음, 이전 투여량을 잘 견딘다면 4-8주 동안 30분 간 2mg/kg을 주입하는 주간 유지 용량을 투여할 수 있다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체 조성물은 또한 제어 방출 제제(controlled release formulation)일 수 있다. 예를 들어 제어 방출 비경구 제제는 임플란트 또는 유성 주사로 만들 수 있다. 마이크로스피어, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 나노캡슐, 나노스피어 및 나노입자를 포함하는 입자 시스템이 또한 본 발명에 따른 이중 특이적 항체 조성물을 전달하기 위해 사용될 수 있다. 본원에서 언급되는 마이크로캡슐은 중심 코어 성분으로서 본 발명에 따른 이중 특이적 항체를 함유한다. 마이크로스피어에서, 본 발명에 따른 항체는 입자 전체에 분산되어 있다. 약 1㎛보다 작은 입자, 마이크로스피어 및 마이크로캡슐은 일반적으로 각각 나노입자, 나노스피어 및 나노캡슐이라고 한다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체 조성물은 또한 대상체에서 암을 치료하기위한 키트에 포장될 수 있다. 이러한 키트는 본원에 개시된 임의의 조성물을 포함한다. 키트는 또한 대상체에게 조성물을 투여하는데 사용하기 위해 각 제약 조성물 및 기타 포함된 시약 (예: 완충액 및 균형 잡힌 염 용액)에 대해 앰플, 바이알 및 튜브와 같은 적합한 저장용기를 포함할 수 있다. 조성물 및 기타 시약은 용액 또는 분말 형태와 같은 임의의 편리한 형태로 키트에 존재할 수 있다. 키트는 조성물의 사용 지침을 추가로 포함할 수 있다. 키트는 약제학적 조성물 및 다른 시약을 수용하기 위한 하나 이상의 구획을 가질 수 있는 포장용기를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 조성물의 사용지침(instruction)을 추가로 포함할 수 있다. 키트는 약제학적 조성물 및 다른 시약을 수용하기 위한 하나 이상의 구획을 가질 수 있는 포장용기(packaging container)를 추가로 포함할 수 있다.

이중 특이적 항체를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어있다. 예를 들어, 이중 특이적 항체는 2개의 면역 글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동 발현을 사용하여 재조합적으로 생산될 수 있다. 예를 들어, Milstein, et al. (1983) Nature 305 : 537-39 참조. 대안적으로, 화학적 결합을 사용하여 이중 특이적 항체를 제조할 수 있다. 예를 들어, Brennan, et al. (1985) Science 229:81 참조. 이중 특이적 항체에는 이중 특이적 항체 단편이 포함된다. 예를 들어, Bolliger, et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-48, Gruber, et al. (1994) J. Immunol. 152:5368 참조. 따라서, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 배양 중인 살아있는 세포에서 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열의 발현에 의해 생산될 수 있다. 본 발명에 따른 "단리된(isolated)" 이중 특이적 항체는 세포, 단백질 및 소기관과 같은 다른 생물학적 성분 환경으로부터 실질적으로 분리되거나 정제된 항체이다. 예를 들어, 이중 특이적 항체는 i) Lowry 방법에 의해 결정된 단백질 중량의 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 초과, 대안적으로 99 중량% 이상; ii) 스피닝 컵 시쿼네이터(spinning cup sequenator)를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상의 잔기를 얻기에 충분한 정도; iii) 쿠마시 블루 또는 실버스테인을 사용하여 환원 또는 비환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의한 균질성을 갖도록 정제된 경우 분리될 수 있다. 항체의 자연 환경(antibody's natural euvironment)의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에 단리된 항체는 또한 in situ 에서 재조합 세포 내에 있는 본 발명에 따른 항체일 수 있다. 그러나 일반적으로 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.

본 발명에 따른 항체에 대한 적절한 뉴클레오티드 코딩 서열로 세포를 형질 전환 또는 형질 감염시킴으로써 본 발명에 따른 이중 특이적 항체를 발현시키기 위해 다양한 숙주-발현 벡터 시스템이 이용될 수 있다. 숙주-발현 세포의 예는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터 내에 포함된 이중 특이적 항체 코딩 서열로 형질 감염될 수있는 E.coli 및 B. Subtilis와 같은 박테리아; 항체 코딩 서열을 포함하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질 전환된 Saccharomyces 및 Pichia와 같은 효모; 항체 코딩 서열을 포함하는 바큘로빈1(baculovin1)과 같은 재조합 바이러스 발현 벡터로 감염된 곤충 세포 시스템; 항체 코딩 서열을 포함하는, 콜리 플라워 모자이크 바이러스("CaMV") 또는 담배 모자이크 바이러스("TMV")와 같은 재조합 바이러스 발현 벡터로 감염된 식물 세포 시스템; 및 메탈로티오네인 프로모터 또는 연장 인자 I 알파 프로모터와 같은 포유 동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터 또는 아데노 바이러스 후기 프로모터와 같은 포유 동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 및 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터를 함유하는 재조합 발현 작제물을 보유하는 COS, 차이니즈 햄스터 난소("CHO") 세포, ExpiCHO, 아기 햄스터 신장("BHK") 세포, HEK293, Expi293, 3T3, NSO 세포와 같은 포유류 세포 시스템. 예를 들어, 인간 배아 신장 293 (HEK293)과 같은 포유류 세포 또는 Expi293과 같은 이의 유도체는 각각 중쇄 및 경쇄 단편을 발현하기 위하여 마우스 및 랫트 신장 인자 1 알파 프로모터를 통합하는 이중 프로모터 벡터와 함께, 본 발명에 따른 항체에 대한 효과적인 발현 시스템이며, 이는 발현되는 항체 분자에 대해 의도된 용도에 따라 유리하게 선택될 수 있다.

항체의 약제학적 조성물의 생성을 위해 본 발명에 따른 이중 특이적 항체를 다량으로 생산해야 하는 경우, 정제된 융합 단백질 생성물의 높은 수준의 발현을 용이하게 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터에는 pUR278 벡터 (Ruther et al. EMBO J. 2 : 1791 (1983)), 여기서 항체 코딩 서열은 lac Z 코딩 영역이 있는 프레임에서 벡터에 개별적으로 연결되어 융합 단백질이 생성될 수 있다; a plN vector (Inouye & Inouye, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109 (1985), 및 Van Heeke & Schuster, J. Biol. Chem. 24:5503-5509 (1989)); 본 발명의 항체를 글루타티온 S-트랜스퍼라제 ("GST")와 융합하기 위한 pGEX 벡터가 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 따른 항체 및 폴리펩티드 태그의 GST 융합 단백질은 가용성이며, 용해된 세포로부터 매트릭스 글루타티온-아가로스 비드에 흡착 및 결합한 다음 유리 글루타티온의 존재하에 용출함으로써 용이하게 정제될 수있다. 대조적으로, pGEX 벡터는 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계되어 복제된 표적 유전자 생성물(본 발명에 따른 항체)이 GST 모이어티로부터 방출될 수 있다.

본 발명에 따른 항체를 코딩하는 삽입된 서열(들)의 발현을 조절하거나 원하는대로 유전자 생성물을 변형 및 처리하는 숙주 발현 세포 시스템이 또한 선택될 수 있다. 예를 들어, 단백질 산물의 글리코실화 및 절단과 같은 처리를 포함하는 변형은 단백질의 기능에 중요할 수 있다. 실제로, 서로 다른 숙주 세포들은 단백질 및 유전자 산물의 번역 후 처리 및 변형을 위한 특징적이고 구체적인 메커니즘을 가지고 있다. 이를 위해, 본 발명에 따른 유전자 생성물의 글리코실화 및 인산화뿐만 아니라 1차 전사체의 적절한 처리를 위한 적절한 세포 기구를 보유한 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다.

실시예

다음 실시예는 엑소좀을 표적으로 하는 이중 특이적 항체의 설계 및 특성화를 설명한다.

실시예 1. 엑소좀은 항체의 표적이 될 수 있는 막 결합 단백질을 함유한다.

정상 조직과 종양 조직 모두에서 파생되는, 세포는 별개의 생물학적 과정을 통해 파생되는 적어도 두 가지 부류의 세포외 소포(EV), 엑소좀(exosome) 및 엑토좀(ectosome)을 생성할 수 있다. EV는 세포의 소통(cellular communication)에 역할을 하는 것으로 인식된다. EV는 소포의 지질 이중층에 삽입되는 단백질을 포함하여 일련의 다른 단백질 성분으로 특징지어진다. 엑소좀 막에 존재하는 것으로 알려진 단백질은 테트라스파닌(tetraspanins), 열 충격 단백질(heat shock proteins), 막 수송체(membrane transporters), 세포 표면 수용체(cell surface receptors) 및 지질 결합 분자(lipid-bound molecules)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 기능적 분류로 나눌 수 있다. 이러한 기능적 분류를 포함하는 알려진 단백질(recognized protein)은 TSG101, CD9, CD10, CD26, CD37, CD45/ICAM-1, CD63, CD69, CD81, EGFR, EGFRvIII, EpCAM, Flotillin-1, Glypican-1, HER2, HER3, HSP70, HSP90, NKCC2, 및 PD-L1을 포함하나, 이제 제한되지는 않는다. CD63과 같은 엑소좀의 표면에 존재하는 단백질은 이러한 표면 분자에 특이적인 항체에 의해 검출될 수 있다. 도 2는 22Rv1 전립선 암 세포로부터 유래된 엑소좀이 항-CD63 코팅된 비드와의 상호 작용을 통해 용량 의존적 방식으로 분리될 수 있음을 보여준다. 엑소좀과 관련된 막 관통 단백질의 조성은 엑소좀이 유래된 세포 유형에 따라 달라질 수 있다. 엑소좀의 벌크 제제 (bulk preparations of exosome)는 라텍스 비드에 접합될 수 있으며 유세포 분석에 의해 항-CD63 항체로 검출될 수 있다 (도 3). 벌크 엑소좀 코팅된 비드는 또한 항-EPN1 항체 IMM20059와 반응하였다. IMM20059 염색은 비드 표면에 존재하는 엑소좀에 의존적이었다; BSA 코팅된 비드는 IMM20059와 상호 작용하지 못했다. 데이터는 EPN1이 엑소좀의 표면 상에, 적어도 일부에는, 존재함을 시사한다.

실시예 2. IMM20059는 EPN1에 결합하는 항체이다.

인간 하이브리도마 PR045-2H11은 두경부암 환자의 림프절에서 분리된 인간 B 세포를 B56T 융합 파트너와 융합하여 생성되었다. 인간 B 세포와 B56T의 융합은 본질적으로 USPTO# EP2242836 "유용한 항체를 발현하는 하이브리드 세포를 만드는 방법(Method of making hybrid cells that express useful antibodies)"에 설명된대로 전기 융합에 의해 제조되었다. PR045-2H11의 가변 중쇄 (V_H) 및 가변 경쇄 (V_L) 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 PR045-2H11을 생성한 하이브리도마 계통의 세포에서 분리된 RNA의 RT-PCR 증폭과 그 항체 cDNA의 서열분석 반응을 통해 획득하였다. 서열번호 1은 V_H에 상응하고 서열번호 3은 하이브리도마로부터 분리된 PR045-2H11의 V_L에 상응한다. RT-PCR 전략으로 인해 이러한 서열에는 가변 도메인의 프레임워크(framework) 1의 5' 대부분에 해당하는 영역이 없다. IGHV 및 IGKL 유전자 할당(assignment)은 알려진 생식 계열 유전자 서열과의 상동성을 기반으로 예측되었으며, V_H 및 V_L 서열의 진정한 5' 말단(bona fide 5' end)에 대한 대리물(surrogate)로 사용되었다. IMM20059는 PR045-2H11 V_H 및 V_L 도메인을 포함하는 재조합적으로 발현된 인간 IgG1 항체이다. IMM20059 V_H (서열번호 5)에 대한 발현 단편은 IGHV3-48^*02의 프레임워크 1의 5' 말단에 상응하는 생식선 서열(germline sequence)을 사용하여 생성되었다. PR045-2H11 V_L (서열번호 7)에 대한 전장 발현 단편은 IGKV3-11^*01의 프레임워크 1의 5' 말단에 상응하는 생식선 서열을 사용하여 생성되었다. 서열번호 5 및 서열번호 7에 상응하는 단편을 추가 5' 및 3' 연장(additional 5' and 3' extension)으로 합성하여 이중 프로모터 IgG1 발현 벡터로의 Gibson 스타일 클로닝을 촉진하였다. V_H 및 V_L 단편에 의해 코딩되는 상응하는 단백질 서열은 각각 서열번호 6 및 서열번호 8에 정의되어 있다. V_H 및 V_L 도메인의 코딩 영역은 생식선 서열과 각각 15개 및 14개 뉴클레오티드가 다른 체세포 과돌연변이의 특징(hallmarks of somatic hypermutation)을 갖는다.

IMM20059는 제조사 권장 조건을 사용하여 Expi293 세포로의 일시적 형질 감염에 의해 재조합 발현되었다. 재조합 항체를 단백질 A/G 친화성 크로마토그래피에 의해 컨디셔닝 배지로부터 정제하고, 완충액을 PBS로 교환하고, 유세포 분석에 의해 활성을 분석하였다. IMM20059는 오리지널 PR045-2H11 하이브리도마 생산 항체와 일치하는 결합 활성을 나타낸다. 도 4 및 5에 도시된 바와 같이, IMM20059는 유세포 분석에 의해 분석될 때 A549 폐 선암 및 Huh7 간세포 암종 세포주의 표면에 대한 포화 결합을 나타낸다. IMM20059는 각각 0.9 및 1.3μg/mL의 EC50으로 A549 및 Huh7에 결합한다. 이 값은 6-9 nM 사이의 EC50 값에 해당한다.

IMM20059는 동족체(homolog) EPN2와 비교하여 재조합 EPN1에 용량 의존적 방식으로 선택적으로 결합한다 (도 6). IMM20059는 또한 역상 단백질 분석 (RPPA)에서 EPN3에 비해 EPN1에 대한 선택성을 나타내었다. 재조합 EPN1과의 상호 작용 강도는 표면 플라즈몬 공명에 의해 추가로 정의되었다 (표 1). IMM20059 또는 이소 타입 대조군을 결합 및 대조군 표면을 생성하기 위하여 항-인간 Fc 센서 표면에 포착하였다. 재조합 EPN1을 증가되는 농도로 3중으로 표면 위로 흘려보냈다. 이중 차감 데이터(double-subtracted data)는 1:1 결합 모델에 적합하였다. 표 1에 요약 된 바와 같이, IMM20059는 평균 K_D가 950 +/- 10pM 인 EPN1에 대해 재현 가능한 결합을 보여주었다.

IMM20059는 EPN-1 양성 뮤린(murine) 세포의 표면에 결합한다. 도 7에 도시된 바와 같이, IMM20059는 뮤린 NIH-3T3 세포에 존재하는 항원의 세포 표면 및 세포 내 풀 모두에 결합한다. 이러한 결합 패턴은 인간 세포주 MFE296에 대해서도 관찰된다. 시판되는 항-뮤린 EPN1 항체는 EPN1의 세포 표면 풀을 인식하지 못한다.

실시예 3. 항-EPN-1/항-PD-L1 이중 특이적 항체의 설계.

2개의 고유한(unique) 표적 항원에 결합할 수 있는 항체인 이중 특이적 항체는 2개의 단일 특이적 항체로부터의 가변 도메인을 하나의 항체 유사 분자로 결합함으로써 생성될 수 있다. 다중 이중 특이적 항체 구조가 문헌에 기술되어 있다 (Brinkman, U. 및 Kontermann, R. mAbs, 9 : 182-212; 2017). 이중 특이적 항체 구조의 한 구체예는 이중 가변 도메인 Ig (DVD-Ig)이다. 도 8은 2개의 단일 특이적 항체와 2개의 단일 특이적 항체로부터 생성된 DVD-Ig 형태(format)의 이중 특이적 항체의 카툰식 표현(cartoon representation)이다. 이중 특이적 항체는 표적 중 하나만 발현하는 것과 비교하여 두 표적 항원을 모두 발현하는 세포에 대한 표적화 선택성을 향상시키고 엑소좀으로 확장하여 향상시킬 수 있다 (Robinson et al BR J Cancer 99 : 1415-1425; 2008). 도 9는 EPN-1 또는 PD-L1만을 표적화 할 수 있는 단일 특이적 항체와 비교하여 EPN1 및 PD-L1 모두에 결합할 수 있는 이중 특이적 항체에 의한 엑소좀 표적화의 카툰식 표현이다.

다수의 항-PD-L1 항체가 문헌에 기재되어 있다. 이들에는 아테졸리주맙( atezolizumab), 아벨루맙(avelumab), 두르발루맙(durvalumab) 및 BMS-936559가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 엑소좀 PD-L1 및 제2 엑소좀 마커를 공동 표적화 할 수 있는 이중 특이적 항체는 종양 세포에 국소화된 PD-L1과 비교하여 엑소좀 PD-L1을 선택적으로 표적화하도록 개발될 수 있다. PD-L1 이중 특이적으로 표적화 될 수 있는 엑소좀 마커는 CD9, CD10, CD26, CD37, CD45/ICAM-1, CD63, CD69, CD81, EGFR, EGFRvIII, EpCAM, Flotillin-1, Glypican-1, HER2, HER3, HSP70, HSP90, NKCC2 및 EPN-1을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 이중 특이적 항-EPN-1/항 -PD-L1 항체는 하나의 가능한 구체예를 나타낸다. 바람직한 구체예는 항-PD-L1 항체 아테졸리주맙 (서열번호 15 및 16), 아벨루맙 (서열번호 23 및 24), 두르발루맙 (서열번호 25 및 26) 또는 BMS-936559 (서열번호 27 및 28) 중 하나의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR과 조합하여 IMM20059의 가변 도메인 또는 가변 도메인 내에 존재하는 CDR을 포함하는 항-EPN-1/항-PD-L1 이중 특이적인 것이다. 바람직한 구체예는 DVD-Ig 형태로 조작된 IMM20059 및 아테졸리주맙의 V_H 및 V_L 도메인을 포함하는 항-EPN-1/항-PD-L1 이중 특이적 항체이다. IMM20059 및 아테졸리주맙 가변 도메인의 4 가지 상이한 구성이 설계되었다. V_H 도메인은 IMM20059-L-아테졸리주맙 (서열번호 33) 배향 및 아테졸리주맙-L-IMM20059 (서열번호 39) 모두에서 펩타이드 링커 ASTKGPSVFPLAP (서열번호 29)를 통해 연결되었다. IMM20059 및 아테졸리주맙의 V_L 도메인은 두 개의 서로 다른 링커와 두 개 모두에서 N- 말단에서 C- 말단의 순서로 단일 폴리펩타이드로 융합되었다. "L" 링커는 아미노산 서열 TVAAPSVFIFPP (서열번호 30)를 포함하고 "S" 링커는 아미노산 서열 TVAAP (서열번호 31)를 포함한다. 서열번호 35 및 서열번호 41은 각각 IMM20059-L-아테졸리주맙 및 아테졸리주맙-L-IMM20059 순서의 작제물을 포함하는 "L" 링커를 나타낸다. 서열번호 37 및 서열번호 43은 "S" 링커 서열에 의해 연결된 이중 특이적 작제물에 상응한다.

실시예 4. 항-EPN1/항-PD-L1 DVD-IgG 이중 특이적 항체의 결합 활성.

이중 특이적 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 플라스미드로 일시적으로 형질 감염된 HEK293 포유류 세포주의 유도체의 컨디셔닝 배지로부터 4개의 항-EPN1/항-PD-L1 이중 특이적 항체를 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 4개의 이중 특이적 항체를 포함하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 33 및 35, 서열번호 33 및 37, 서열번호 39 및 41, 및 서열번호 39 및 43이었다. 정제된 항체는 도트 블롯 분석(dot blot analysis)을 통해 재조합 EPN1 및 재조합 PD-L1 모두에 결합할 수 있는지 확인하였다. 정제된 재조합 단백질은 도 10에 도시된 바와 같이 3 가지 용량 수준에서 스팟팅(spot)되었고, 4개의 항-EPN1/항-PD-L1 이중 특이적 항체로 프로브(probe)되었다. 단일 특이적 IMM20059/PR045-2H11 및 아테졸리주맙은 각각 EPN1 및 PD-L1에 대한 결합에 대한 양성 대조군으로 사용되었다. 뎅기 바이러스의 외피 단백질(coat protein)에 특이적인 항체가 음성 대조군으로 사용되었다. 4개의 이중 특이적 항체는 모두 EPN1에 IMM20059와 유사한 수준으로 결합되었다. PD-L1에 대한 결합은 항-PD-L1 가변 도메인이 DVD-IgG (Ate/PR045-2H11:S 및 Ate/PR045-2H11:L)의 N-말단에 존재해야 한다. 이를 항-EPN1 가변 도메인 (PR045-2H11/Ate:S 및 PR045-2H11/Ate:L)에 대해 C-말단에 배치하면 도트 블롯 형태(dotblot format)에서 PD-L1에 결합하는 능력이 감소하였다. 가변 경쇄 작제물 내 링커의 길이는 결합에 영향을 미치지 않았다. 서열번호 37 및 39에 상응하는 가변 경쇄 도메인을 함유하는 항체는 도트 블롯 형태에서 재조합 PD-L1에 동등하게 결합된다.

유세포 분석에 의해 분석된 경우, 서열번호 33 및 39로 정의된 가변 도메인을 포함하는 이중 특이적 항체는 세포 표면에 EPN1 및 PD-L1을 모두 발현하는 것으로 알려진 A549 세포의 표면에 결합된다. 이중 특이적 항체의 세포 표면에 대한 결합은 약 0.3 마이크로그램/mL의 EC50으로 용량 의존적 결합 프로파일을 나타내었다 (도 11).

서열목록

서열번호 1 - V_H PR045-2H11 뉴클레오티드 서열

GACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTATCCATAGCCTGAATTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCGTATATTAGTAGTAACAGTACTACCATATATTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGGACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTCAGAGACGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGACTACTACTGTACTGGTGGTACCTGCTTCTTTCTTCCTGACCTCTGGGGCCGGGGAGCCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGC

서열번호 2 - V_H PR045-2H11 아미노산 서열

LSCAASGFTFSIHSLNWVRQAPGKGLEWVSYISSNSTTIYYADSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDYYCTGGTCFFLPDLWGRGALVTVSSASTKKGPSVFPLA

서열번호 3- V_L PR045-2H11 뉴클레오티드 서열

AAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATATCAGCAACTTCTTAGCCTGGTACCAACACAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCATCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTTACAACTGGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTAGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCT

서열번호 4 - V_L PR045-2H11 아미노산 서열

RATLSCRASQNISNFLAWYQHKPGQAPRLLIYDASIRATGIPARFSGSGSGTDFSLTISSLEPEDFAVYFCQQRYNWLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI

서열번호 5 - IMM20059 V_H 도메인 뉴클레오티드 서열

ACAGGCGCGCACTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTATCCATAGCCTGAATTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCGTATATTAGTAGTAACAGTACTACCATATATTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGGACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTCAGAGACGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGACTACTACTGTACTGGTGGTACCTGCTTCTTTCTTCCTGACCTCTGGGGCCGGGGAGCCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATC

서열번호 6 - IMM20059 V_H 도메인 아미노산 서열

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIHSLNWVRQAPGKGLEWVSYISSNSTTIYYADSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDYYCTGGTCFFLPDLWGRGALVTVSSASTKGPSVFPL

서열번호 7 - IMM20059 V_L 도메인 뉴클레오티드 서열

TCAGATACCTCCGGAGAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATATCAGCAACTTCTTAGCCTGGTACCAACACAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCATCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTTACAACTGGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTAGAGATCAAACGAACTGTGGCTG

서열번호 8 - IMM20059 V_L 도메인 아미노산 서열

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQNISNFLAWYQHKPGQAPRLLIYDASIRATGIPARFSGSGSGTDFSLTISSLEPEDFAVYFCQQRYNWLTFGGGTKVEIKRTVA

서열번호 9 - IMM20059 H-CDR1

SIHSLN

서열번호 10 - IMM20059 H-CDR2

YISSNSTTIYYADSVKG

서열번호 11 - IMM20059 H-CDR3

DYYCTGGTCFFLPDL

서열번호 12 - IMM20059 L-CDR1

RASQNISNFLA

서열번호 13 - IMM20059 L-CDR2

DASIRAT

서열번호 14 - IMM20059 L-CDR3

QQRYNWLT

서열번호 15 - 아테졸리주맙(atezolizumab) V_H 도메인

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA

서열번호 16 - 아테졸리주맙(atezolizumab) V_L 도메인

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVA

서열번호 17 - 아테졸리주맙(atezolizumab) H-CDR1

SDSWIH

서열번호 18 - 아테졸리주맙(atezolizumab) H-CDR2

PYGGSTYYADSVKG

서열번호 19 - 아테졸리주맙(atezolizumab) H-CDR3

ARRHWPGGFDY

서열번호 20 - 아테졸리주맙(atezolizumab) L-CDR1

RASQDVSTAVA

서열번호 21 - 아테졸리주맙(atezolizumab) L-CDR2

SASFLYS

서열번호 22 - 아테졸리주맙(atezolizumab) L-CDR3

QQYLYHPAT

서열번호 23 - 아벨루맙(avelumab) V_H 도메인

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA

서열번호 24 - 아벨루맙(avelumab) V_L 도메인

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLG

서열번호 25 - 두르발루맙(durvalumab) V_H 도메인

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA

서열번호 26 - 두르발루맙(durvalumab) V_L 도메인

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIKRTVA

서열번호 27 - BMS-936559 V_H 도메인

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGDTFSTYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGKAHYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARKFHFVSGSPFGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLA

서열번호 28- BMS-936559 V_L 도메인

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIKRTVA

서열번호 29 - V_H “L”링커

ASTKGPSVFPLAP

서열번호 30 - V_L “L”링커

TVAAPSVFIFPP

서열번호 31 - VL "S" 링커

TVAAP

서열번호 32 -IMM20059-L-ATE 이중 특이적 V_H 도메인 뉴클레오티드 서열

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTATCCATAGCCTGAATTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCGTATATTAGTAGTAACAGTACTACCATATATTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGGACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTCAGAGACGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGACTACTACTGTACTGGTGGTACCTGCTTCTTTCTTCCTGACCTCTGGGGCCGGGGAGCCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCGAGCACAAAAGGACCATCTGTATTTCCACTCGCCCCCGAAGTACAGCTCGTAGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTCCAACCTGGTGGTTCCCTTCGACTGTCATGTGCCGCGTCTGGCTTCACTTTTTCCGATTCATGGATACACTGGGTGAGGCAAGCACCTGGCAAAGGTTTGGAATGGGTGGCCTGGATCTCACCGTATGGGGGTAGTACTTATTATGCGGATTCAGTAAAGGGAAGATTTACCATTTCAGCGGACACAAGTAAAAATACCGCCTATTTGCAGATGAACAGCCTGCGAGCGGAAGACACTGCTGTCTATTATTGTGCTAGACGCCACTGGCCTGGTGGTTTTGACTACTGGGGGCAGGGCACTTTGGTGACCGTTTCCTCA

서열번호 33 - IMM20059-L-ATE 이중 특이적 V_H 도메인 아미노산 서열

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIHSLNWVRQAPGKGLEWVSYISSNSTTIYYADSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDYYCTGGTCFFLPDLWGRGALVTVSSASTKGPSVFPLAPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS

서열번호 34 - IMM20059-L-ATE 이중 특이적 V_L 도메인 뉴클레오티드 서열

GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATATCAGCAACTTCTTAGCCTGGTACCAACACAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCATCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTTACAACTGGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTAGAGATCAAACGAACAGTAGCAGCTCCGTCAGTTTTTATTTTTCCTCCAGATATTCAGATGACCCAGTCCCCGTCCTCTCTCTCCGCTAGTGTAGGTGATAGAGTGACAATAACATGCCGGGCCAGCCAGGATGTATCCACGGCGGTCGCGTGGTACCAGCAGAAACCTGGGAAAGCCCCCAAACTGCTTATTTATAGCGCCAGCTTCTTGTACTCAGGAGTACCTAGCAGATTTAGCGGTTCAGGAAGTGGGACTGATTTTACACTCACTATATCTTCCCTGCAACCGGAGGATTTTGCAACATATTATTGTCAACAATATCTCTACCATCCCGCGACATTCGGGCAGGGCACAAAAGTAGAGATCAAACGA

서열번호 35- IMM20059-L-ATE 이중 특이적 V_L 도메인 아미노산 서열

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQNISNFLAWYQHKPGQAPRLLIYDASIRATGIPARFSGSGSGTDFSLTISSLEPEDFAVYFCQQRYNWLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR

서열번호 36 - 2H11-S-ATE 이중 특이적 V_L 도메인 뉴클레오티드 서열

GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATATCAGCAACTTCTTAGCCTGGTACCAACACAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCATCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTTACAACTGGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTAGAGATCAAACGAACAGTAGCAGCTCCGGATATTCAGATGACCCAGTCCCCGTCCTCTCTCTCCGCTAGTGTAGGTGATAGAGTGACAATAACATGCCGGGCCAGCCAGGATGTATCCACGGCGGTCGCGTGGTACCAGCAGAAACCTGGGAAAGCCCCCAAACTGCTTATTTATAGCGCCAGCTTCTTGTACTCAGGAGTACCTAGCAGATTTAGCGGTTCAGGAAGTGGGACTGATTTTACACTCACTATATCTTCCCTGCAACCGGAGGATTTTGCAACATATTATTGTCAACAATATCTCTACCATCCCGCGACATTCGGGCAGGGCACAAAAGTAGAGATCAAACGA

서열번호 37 - 2H11-S-ATE 이중 특이적 V_L 도메인 아미노산 서열

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQNISNFLAWYQHKPGQAPRLLIYDASIRATGIPARFSGSGSGTDFSLTISSLEPEDFAVYFCQQRYNWLTFGGGTKVEIKRTVAAPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR

서열번호 38 - ATE-L-2H11 이중 특이적 V_H 도메인 뉴클레오티드 서열

GAAGTACAGCTCGTAGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTCCAACCTGGTGGTTCCCTTCGACTGTCATGTGCCGCGTCTGGCTTCACTTTTTCCGATTCATGGATACACTGGGTGAGGCAAGCACCTGGCAAAGGTTTGGAATGGGTGGCCTGGATCTCACCGTATGGGGGTAGTACTTATTATGCGGATTCAGTAAAGGGAAGATTTACCATTTCAGCGGACACAAGTAAAAATACCGCCTATTTGCAGATGAACAGCCTGCGAGCGGAAGACACTGCTGTCTATTATTGTGCTAGACGCCACTGGCCTGGTGGTTTTGACTACTGGGGGCAGGGCACTTTGGTGACCGTTTCCTCAGCCGCGAGCACAAAAGGACCATCTGTATTTCCACTCGCCCCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTATCCATAGCCTGAATTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCGTATATTAGTAGTAACAGTACTACCATATATTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGGACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTCAGAGACGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGACTACTACTGTACTGGTGGTACCTGCTTCTTTCTTCCTGACCTCTGGGGCCGGGGAGCCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTC

서열번호 39 - ATE-L-2H11 이중 특이적 V_H 도메인 아미노산 서열

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSAASTKGPSVFPLAPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIHSLNWVRQAPGKGLEWVSYISSNSTTIYYADSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDYYCTGGTCFFLPDLWGRGALVTVSSASTKGPSV

서열번호 40 - ATE-L-2H11 이중 특이적 V_L 도메인 뉴클레오티드 서열

GATATTCAGATGACCCAGTCCCCGTCCTCTCTCTCCGCTAGTGTAGGTGATAGAGTGACAATAACATGCCGGGCCAGCCAGGATGTATCCACGGCGGTCGCGTGGTACCAGCAGAAACCTGGGAAAGCCCCCAAACTGCTTATTTATAGCGCCAGCTTCTTGTACTCAGGAGTACCTAGCAGATTTAGCGGTTCAGGAAGTGGGACTGATTTTACACTCACTATATCTTCCCTGCAACCGGAGGATTTTGCAACATATTATTGTCAACAATATCTCTACCATCCCGCGACATTCGGGCAGGGCACAAAAGTAGAGATCAAACGAACCGTCGCCGCACCATCAGTTTTTATTTTTCCTCCAGAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATATCAGCAACTTCTTAGCCTGGTACCAACACAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCATCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTTACAACTGGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTAGAGATCAAACGA

서열번호 41 - ATE-L-2H11 이중 특이적 V_L 도메인 아미노산 서열

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQNISNFLAWYQHKPGQAPRLLIYDASIRATGIPARFSGSGSGTDFSLTISSLEPEDFAVYFCQQRYNWLTFGGGTKVEIKR

서열번호 42 - ATE-S-2H11 이중 특이적 V_L 도메인 뉴클레오티드 서열

GATATTCAGATGACCCAGTCCCCGTCCTCTCTCTCCGCTAGTGTAGGTGATAGAGTGACAATAACATGCCGGGCCAGCCAGGATGTATCCACGGCGGTCGCGTGGTACCAGCAGAAACCTGGGAAAGCCCCCAAACTGCTTATTTATAGCGCCAGCTTCTTGTACTCAGGAGTACCTAGCAGATTTAGCGGTTCAGGAAGTGGGACTGATTTTACACTCACTATATCTTCCCTGCAACCGGAGGATTTTGCAACATATTATTGTCAACAATATCTCTACCATCCCGCGACATTCGGGCAGGGCACAAAAGTAGAGATCAAACGAACAGTAGCAGCTCCGGAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATATCAGCAACTTCTTAGCCTGGTACCAACACAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCATCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGCGTTACAACTGGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTAGAGATCAAA

서열번호 43 - ATE-S-2H11 이중 특이적 V_L 도메인 아미노산 서열

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQNISNFLAWYQHKPGQAPRLLIYDASIRATGIPARFSGSGSGTDFSLTISSLEPEDFAVYFCQQRYNWLTFGGGTKVEIK

서열번호 44 - 항-CD-63 항체의 V_H 도메인 아미노산 서열

QVQLQESGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTTYVIHWVKQKPGQGLEWIGYFDPNNDGTKYNERFKGKATLTSDRSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARSRTYYDASMDYWGQGTSVTVSS

서열번호 45 - 항-CD-63 항체의 V_L 도메인 아미노산 서열

DIWMTQSPSSLAVSPGEKVTMNCKSSQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGGSGTDFTLTISNIQTEDLAVYYCQQIFSSYTFGGGTKLELKR

서열번호 46 - 항-HER2 항체의 V_H 도메인 아미노산 서열

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA

서열번호 47 - 항-HER2 항체의 V_L 도메인 아미노산 서열

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK

서열번호 48 - 항-EpCAM 항체의 V_H 도메인 아미노산 서열

EVQLVQSGPGLVQPGGSVRISCAASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLEWMGWINTYTGESTYADSFKGRFTFSLDTSASAAYLQINSLRAEDTAVYYCARFAIKGDYWGQGTLLTVSS

서열번호 49 - 항-EpCAM 항체의 V_L 도메인 아미노산 서열

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHSNGITYLYWYQQKPGKAPKLLIYQMSNLASGVPSRFSSSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQNLEIPRTFGQGTKVELK

서열번호 50 - 항-HER3 항체의 V_H 도메인 아미노산 서열

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHWMHWVRQAPGQGLEWIGEFNPSNGRTNYNEKFKSKATMTVDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCASRDYDYDGRYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA

서열번호 51 - 항-HER3 항체의 V_L 도메인 아미노산 서열

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVTYMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSHIFTFGQGTKVEIK

서열번호 52 - 항-EGFR 항체의 V_H 도메인 아미노산 서열

QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPL

서열번호 53 - 항-EGFR 항체의 V_L 도메인 아미노산 서열

DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK

SEQUENCE LISTING <110> IMMUNOME, INC. <120> EXOSOME-TARGETING BISPECIFIC ANTIBODIES <130> 172.0003-WO00 <150> 67/746,862 <151> 2018-10-17 <160> 53 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 gactctcctg tgcagcctct ggattcacct tcagtatcca tagcctgaat tgggtccgcc 60 aggctccagg gaagggactg gagtgggttt cgtatattag tagtaacagt actaccatat 120 attacgcaga ctctgtgaag ggccgattca ccatctccag agacaatgcc aaggactccc 180 tgtatctgca aatgaacagc ctcagagacg aggacacggc tgtatattac tgtgcgagag 240 actactactg tactggtggt acctgcttct ttcttcctga cctctggggc cggggagccc 300 tggtcaccgt ctcctcagcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgc 354 <210> 2 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile His Ser Leu Asn 1 5 10 15 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile 20 25 30 Ser Ser Asn Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg 35 40 45 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Ser Leu Tyr Leu Gln Met 50 55 60 Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp 65 70 75 80 Tyr Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Cys Phe Phe Leu Pro Asp Leu Trp Gly 85 90 95 Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Lys Gly Pro 100 105 110 Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 <210> 3 <211> 299 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gaatatcagc aacttcttag cctggtacca 60 acacaaacct ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccatca gggccactgg 120 catcccagcc aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcagtctca ccatcagcag 180 cctggagcct gaagattttg cagtttattt ctgtcagcag cgttacaact ggctcacttt 240 cggcggaggg accaaggtag agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatct 299 <210> 4 <211> 99 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 20 25 30 Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 50 55 60 Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Arg Tyr Asn Trp Leu Thr Phe 65 70 75 80 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser 85 90 95 Val Phe Ile <210> 5 <211> 407 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 acaggcgcgc actccgaggt gcagctggtg gagtctgggg gaggcttggt acagcctggg 60 gggtccctga gactctcctg tgcagcctct ggattcacct tcagtatcca tagcctgaat 120 tgggtccgcc aggctccagg gaagggactg gagtgggttt cgtatattag tagtaacagt 180 actaccatat attacgcaga ctctgtgaag ggccgattca ccatctccag agacaatgcc 240 aaggactccc tgtatctgca aatgaacagc ctcagagacg aggacacggc tgtatattac 300 tgtgcgagag actactactg tactggtggt acctgcttct ttcttcctga cctctggggc 360 cggggagccc tggtcaccgt ctcctcagcc tccaccaagg gcccatc 407 <210> 6 <211> 135 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile His 20 25 30 Ser Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Asn Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Cys Phe Phe Leu Pro Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 130 135 <210> 7 <211> 346 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 tcagatacct ccggagaaat tgtgttgaca cagtctccag ccaccctgtc tttgtctcca 60 ggggaaagag ccaccctctc ctgcagggcc agtcagaata tcagcaactt cttagcctgg 120 taccaacaca aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct atgatgcatc catcagggcc 180 actggcatcc cagccaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcag tctcaccatc 240 agcagcctgg agcctgaaga ttttgcagtt tatttctgtc agcagcgtta caactggctc 300 actttcggcg gagggaccaa ggtagagatc aaacgaactg tggctg 346 <210> 8 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Arg Tyr Asn Trp Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Ser Ile His Ser Leu Asn 1 5 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Tyr Ile Ser Ser Asn Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Asp Tyr Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Cys Phe Phe Leu Pro Asp Leu 1 5 10 15 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Gln Gln Arg Tyr Asn Trp Leu Thr 1 5 <210> 15 <211> 130 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala 130 <210> 16 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Ser Asp Ser Trp Ile His 1 5 <210> 18 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr 1 5 <210> 23 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala 130 <210> 24 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 25 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala 130 <210> 26 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 <210> 27 <211> 135 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 130 135 <210> 28 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 <210> 29 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 29 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 1 5 10 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 30 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 1 5 10 <210> 31 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 31 Thr Val Ala Ala Pro 1 5 <210> 32 <211> 765 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 32 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt atccatagcc tgaattgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtttcgtat attagtagta acagtactac catatattac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagga ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctcag agacgaggac acggctgtat attactgtgc gagagactac 300 tactgtactg gtggtacctg cttctttctt cctgacctct ggggccgggg agccctggtc 360 accgtctcct cagcgagcac aaaaggacca tctgtatttc cactcgcccc cgaagtacag 420 ctcgtagagt ccggaggagg cctggtccaa cctggtggtt cccttcgact gtcatgtgcc 480 gcgtctggct tcactttttc cgattcatgg atacactggg tgaggcaagc acctggcaaa 540 ggtttggaat gggtggcctg gatctcaccg tatgggggta gtacttatta tgcggattca 600 gtaaagggaa gatttaccat ttcagcggac acaagtaaaa ataccgccta tttgcagatg 660 aacagcctgc gagcggaaga cactgctgtc tattattgtg ctagacgcca ctggcctggt 720 ggttttgact actgggggca gggcactttg gtgaccgttt cctca 765 <210> 33 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 33 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile His 20 25 30 Ser Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Asn Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Cys Phe Phe Leu Pro Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 145 150 155 160 Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His Trp Val Arg Gln 165 170 175 Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly 180 185 190 Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser 195 200 205 Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg 210 215 220 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg His Trp Pro Gly 225 230 235 240 Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 34 <211> 681 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 34 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gaatatcagc aacttcttag cctggtacca acacaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccatca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcagtctca ccatcagcag cctggagcct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcagcag cgttacaact ggctcacttt cggcggaggg 300 accaaggtag agatcaaacg aacagtagca gctccgtcag tttttatttt tcctccagat 360 attcagatga cccagtcccc gtcctctctc tccgctagtg taggtgatag agtgacaata 420 acatgccggg ccagccagga tgtatccacg gcggtcgcgt ggtaccagca gaaacctggg 480 aaagccccca aactgcttat ttatagcgcc agcttcttgt actcaggagt acctagcaga 540 tttagcggtt caggaagtgg gactgatttt acactcacta tatcttccct gcaaccggag 600 gattttgcaa catattattg tcaacaatat ctctaccatc ccgcgacatt cgggcagggc 660 acaaaagtag agatcaaacg a 681 <210> 35 <211> 227 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 35 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Arg Tyr Asn Trp Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 115 120 125 Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala 130 135 140 Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 145 150 155 160 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly 165 170 175 Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 180 185 190 Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 195 200 205 Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 210 215 220 Ile Lys Arg 225 <210> 36 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 36 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gaatatcagc aacttcttag cctggtacca acacaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccatca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcagtctca ccatcagcag cctggagcct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcagcag cgttacaact ggctcacttt cggcggaggg 300 accaaggtag agatcaaacg aacagtagca gctccggata ttcagatgac ccagtccccg 360 tcctctctct ccgctagtgt aggtgataga gtgacaataa catgccgggc cagccaggat 420 gtatccacgg cggtcgcgtg gtaccagcag aaacctggga aagcccccaa actgcttatt 480 tatagcgcca gcttcttgta ctcaggagta cctagcagat ttagcggttc aggaagtggg 540 actgatttta cactcactat atcttccctg caaccggagg attttgcaac atattattgt 600 caacaatatc tctaccatcc cgcgacattc gggcagggca caaaagtaga gatcaaacga 660 <210> 37 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 37 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Arg Tyr Asn Trp Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 115 120 125 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 130 135 140 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 145 150 155 160 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 165 170 175 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 180 185 190 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 195 200 205 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 210 215 220 <210> 38 <211> 1243 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 38 gaagtacagc tcgtagagtc cggaggaggc ctggtccaac ctggtggttc ccttcgactg 60 tcatgtgccg cgtctggctt cactttttcc gattcatgga tacactgggt gaggcaagca 120 cctggcaaag gtttggaatg ggtggcctgg atctcaccgt atgggggtag tacttattat 180 gcggattcag taaagggaag atttaccatt tcagcggaca caagtaaaaa taccgcctat 240 ttgcagatga acagcctgcg agcggaagac actgctgtct attattgtgc tagacgccac 300 tggcctggtg gttttgacta ctgggggcag ggcactttgg tgaccgtttc ctcagccgcg 360 agcacaaaag gaccatctgt atttccactc gcccccgagg tgcagctggt ggagtctggg 420 ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg agaagtacag ctcgtagagt ccggaggagg 480 cctggtccaa cctggtggtt cccttcgact gtcatgtgcc gcgtctggct tcactttttc 540 cgattcatgg atacactggg tgaggcaagc acctggcaaa ggtttggaat gggtggcctg 600 gatctcaccg tatgggggta gtacttatta tgcggattca gtaaagggaa gatttaccat 660 ttcagcggac acaagtaaaa ataccgccta tttgcagatg aacagcctgc gagcggaaga 720 cactgctgtc tattattgtg ctagacgcca ctggcctggt ggttttgact actgggggca 780 gggcactttg gtgaccgttt cctcagccgc gagcacaaaa ggaccatctg tatttccact 840 cgcccccgag gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtacagcctg gggggtccct 900 gagactctcc tgtgcagcct ctggattcac cttcagtatc catagcctga attgggtccg 960 ccaggctcca gggaagggac tggagtgggt ttcgtatatt agtagtaaca gtactaccat 1020 atattacgca gactctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaaggactc 1080 cctgtatctg caaatgaaca gcctcagaga cgaggacacg gctgtatatt actgtgcgag 1140 agactactac tgtactggtg gtacctgctt ctttcttcct gacctctggg gccggggagc 1200 cctggtcacc gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtc 1243 <210> 39 <211> 264 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 39 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Ile His Ser Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Asn Ser Thr Thr Ile Tyr Tyr 180 185 190 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys 195 200 205 Asp Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Cys Phe 225 230 235 240 Phe Leu Pro Asp Leu Trp Gly Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 260 <210> 40 <211> 681 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 40 gatattcaga tgacccagtc cccgtcctct ctctccgcta gtgtaggtga tagagtgaca 60 ataacatgcc gggccagcca ggatgtatcc acggcggtcg cgtggtacca gcagaaacct 120 gggaaagccc ccaaactgct tatttatagc gccagcttct tgtactcagg agtacctagc 180 agatttagcg gttcaggaag tgggactgat tttacactca ctatatcttc cctgcaaccg 240 gaggattttg caacatatta ttgtcaacaa tatctctacc atcccgcgac attcgggcag 300 ggcacaaaag tagagatcaa acgaaccgtc gccgcaccat cagtttttat ttttcctcca 360 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 420 ctctcctgca gggccagtca gaatatcagc aacttcttag cctggtacca acacaaacct 480 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccatca gggccactgg catcccagcc 540 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcagtctca ccatcagcag cctggagcct 600 gaagattttg cagtttattt ctgtcagcag cgttacaact ggctcacttt cggcggaggg 660 accaaggtag agatcaaacg a 681 <210> 41 <211> 227 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 41 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 115 120 125 Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 130 135 140 Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro 145 150 155 160 Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr 165 170 175 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser 180 185 190 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys 195 200 205 Gln Gln Arg Tyr Asn Trp Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 210 215 220 Ile Lys Arg 225 <210> 42 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 42 gatattcaga tgacccagtc cccgtcctct ctctccgcta gtgtaggtga tagagtgaca 60 ataacatgcc gggccagcca ggatgtatcc acggcggtcg cgtggtacca gcagaaacct 120 gggaaagccc ccaaactgct tatttatagc gccagcttct tgtactcagg agtacctagc 180 agatttagcg gttcaggaag tgggactgat tttacactca ctatatcttc cctgcaaccg 240 gaggattttg caacatatta ttgtcaacaa tatctctacc atcccgcgac attcgggcag 300 ggcacaaaag tagagatcaa acgaacagta gcagctccgg aaattgtgtt gacacagtct 360 ccagccaccc tgtctttgtc tccaggggaa agagccaccc tctcctgcag ggccagtcag 420 aatatcagca acttcttagc ctggtaccaa cacaaacctg gccaggctcc caggctcctc 480 atctatgatg catccatcag ggccactggc atcccagcca ggttcagtgg cagtgggtct 540 gggacagact tcagtctcac catcagcagc ctggagcctg aagattttgc agtttatttc 600 tgtcagcagc gttacaactg gctcactttc ggcggaggga ccaaggtaga gatcaaa 657 <210> 43 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bispecific <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro 115 120 125 Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn 130 135 140 Phe Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 145 150 155 160 Ile Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 180 185 190 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Arg Tyr Asn Trp Leu 195 200 205 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 210 215 <210> 44 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Val Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Phe Asp Pro Asn Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Thr Tyr Tyr Asp Ala Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 45 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Asp Ile Trp Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 65 70 75 80 Thr Ile Ser Asn Ile Gln Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln 85 90 95 Gln Ile Phe Ser Ser Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys Arg <210> 46 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala 130 <210> 47 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 48 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Asp Ser Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser Ala Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Phe Ala Ile Lys Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 49 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 50 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Phe Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Gly Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala 130 <210> 51 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser His Ile Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 52 <211> 130 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu 130 <210> 53 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105

Claims (20)

1. 다음을 포함하는 이중 특이적 항체:
   (A) 엑소좀 단백질에 특이적인 제1 항원 결합 모이어티, 및
   (B) 프로그램된 세포 사멸-리간드 1(Programmed cell death-ligand 1, PD-L1)에 특이적인 제2 항원 결합 모이어티.
2. 제1항에 있어서, 상기 제2 항원 결합 모이어티가 다음을 포함하는 이중 특이적 항체:
   (1) 다음 중 적어도 하나:
   (a) 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 ( "CDR") 1;
   (b) 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2; 및
   (c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3; 및
   (2) 다음 중 적어도 하나:
   (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
   (b) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
   (c) 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
3. 제1항에 있어서, 상기 제2 항원 결합 모이어티가 아테졸리주맙(atezolizumab), 아벨루맙(avelumab), 두르발루맙(durvalumab), 및 BMS-936559로부터 선택되는 항 PD-L1 항체의 V_H 쇄 또는 이의 단편, 및 V_L 쇄 또는 이의 단편을 포함하는, 이중 특이적 항체.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항원 결합 모이어티는 EPN1, CD9, CD10, CD26, CD37, CD45/ICAM-1, CD63, CD69, CD81, EGFR, EGFRvIII, EpCAM, Flotillin-1, Glypican-1, HER2, HER3, HSP70, HSP90, 및 NKCC2로부터 선택되는 엑소좀 단백질에 특이적으로 결합하는, 이중 특이적 항체.
5. 제4항에 있어서, 상기 제1 항원 결합 모이어티는 인간 EPN1상의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 이중 특이적 항체.
6. 제5항에 있어서, 상기 제1 항원 결합 모이어티가 다음을 포함하는, 이중 특이적 항체:
   (1) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 단편; 및
   (2) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 단편.
7. 제 5 항에있어서, 상기 제1 항원 결합 모이어티가 다음을 포함하는, 이중 특이적 항체:
   (1) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 이의 단편; 및
   (2) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 또는 이의 단편.
8. 제5항에 있어서, 상기 제1 항원 결합 모이어티가 다음을 포함하는 이중 특이적 항체:
   (1) 다음 중 하나 이상 :
   (a) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
   (b) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2; 및
   (c) 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3; 및
   (2) 다음 중 하나 이상 :
   (a) 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
   (b) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및
   (c) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및 제2 제1 항원 결합 모이어티는 직접 또는 링커에 의해 연결되어 있는, 이중 특이적 항체.
10. 제9항에 있어서, 상기 링커는 화학적 링커(chemical linker) 또는 폴리펩타이드 링커(polypeptide linker)로 구성된 군으로부터 선택되는, 이중 특이적 항체.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체는 놉-인투-홀 유도체(knob-into-hole derivative); SEED-IgG, DEKK 돌연변이된 Fc, DVD-Ig, heteroFc-scFv, IgG-scFv, scFv2-Fc, scDB-Fc로 구성된 군으로부터 선택되는, 이중 특이적 항체.
12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체는 Fc 도메인을 함유하지 않고, 탠덤 scFv(tandem scFv), 디아바디(diabody), Fab-scFv로 구성된 군으로부터 선택되는, 이중 특이적 항체.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 완전 인간(fully human) 또는 인간화 항체(humanized antibody) 인, 이중 특이적 항체.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 이중 특이적 항체 및 적어도 하나의 약제학상 허용되는 부형제(excipient)를 포함하는, 약제학적 조성물.
15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 이중 특이적 항체; 및
    적합한 저장 용기, pH 완충 용액 및 키트 사용을 위한 지침서(instruction) 중 적어도 하나를 포함하는, 키트.
16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 이중 특이적 항체의 치료적 유효량을 대상체(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
17. 제16항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체는 종양 세포 유래 엑소좀을 표적화함으로써 면역 세포에 의한 항-종양 활성(anti-tumor activity)의 억제를 방해하는(discupt), 방법.
18. 제17항에 있어서, 상기 항-종양 활성의 억제는 CD8⁺ 억제 인자 T 세포(CD8⁺ suppressor T cell)에 의해 매개되는, 방법.
19. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
20. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.5-20mg/kg의 상기 이중 특이적 항체가 대상체에게 투여되는, 방법.

Images