JP7539834B2 - ガレクチン－３に対する抗体及びその使用方法 - Google Patents

ガレクチン－３に対する抗体及びその使用方法 Download PDF

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Description

（関連出願の相互引用）本出願は、米国仮特許出願62/625,166（2018年2月1日出願）（参照によってその全体が本明細書に含まれる）に対して優先権を主張する。
（技術分野）
ガレクチンは、小さな高度に保存された真核細胞タンパク質の一ファミリーであり、前記タンパク質はグリコシル化された細胞表面タンパク質の特定の複合糖類を認識する。それらは、癌細胞と間質のミクロ環境を連結し、発育、接着、シグナル伝達、侵襲及び免疫系相互作用を調整するために必須である。ガレクチンは、核、細胞質及び細胞周囲間隙で見出すことができる。細胞外ガレクチンは主としてエキソソームに放出され、ER又はゴルジに発する古典的分泌を有するようには思われない。ヒトは少なくとも12の異なるガレクチンを有し、それらは多様な組織及び発育期において様々に発現される。ここ10年の間に、ヒトガレクチン、特にガレクチン-3（LGALS3）はミクロ環境と腫瘍細胞との間の重要な連結物質であることが明らかになった。特に、糖タンパク質及び他の表面グリカンの生物学的機能は、主としてゴルジに結合した特異的な糖鎖（固有のガレクチン選択性をもたらす）に依存する。細胞の外側で、LGALS3は、細胞膜滞留時間、接着、遊走、侵襲及び脈管形成の調節に参加する。LGALS3は他の天然のリガンドと結合するが、そのもっとも高い親和性リガンドは、多くのO-及びN-グリカン種を飾るポリラクトサミン鎖の最近位ラクトサミン二糖類である。結合と重合化を通してLGALS3は格子を形成し、増殖因子受容体（とりわけEGFR、PDGFR、インテグリン及びCTLA4を含む）の位置及び滞留時間を調節する（図1）。下流シグナル伝達分子（例えばSRC、ERK、AKT及びFAK）の活性化は、転移及び侵襲に必要とされる重要な分子の産生を駆動する。T細胞の表面では、CTLA4表面濃度はLGALS3によって安定化され、免疫抑制がもたらされる。LGALS3格子の消失は、複数の癌細胞及び免疫細胞の行動を阻害する。癌に加えて、LGALS3発現はまた、腎疾患、肝線維症、肺線維症、心不全及び寄生性疾患と関連を有する（図3参照）。
本明細書で提供されるものは抗体を含む組成物、方法及び使用であり、前記抗体は、免疫特異的にガレクチン-3（LGALS3）と結合し、LGALS3の発現及び/又は活性を調整してLGALS媒介疾患（例えば癌）を操作又は治療する。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは抗体又はその抗原結合フラグメントであり、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガレクチン-3（LGALS3）の炭水化物結合ドメイン（CBD）と免疫特異的に結合する。いくつかの実施態様では、LGALS3 CBDは配列番号:27を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、モノクローナル抗体、単鎖抗体、又は前記の抗原結合フラグメントを含む任意の組成物である。
いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、マトリゲル侵襲アッセイで腫瘍細胞のin vitro侵襲を阻害する。いくつかの実施態様では、腫瘍細胞は卵巣腫瘍細胞である。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、LGALS3のグリコシル化細胞表面タンパク質への結合を阻害する。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、LGALS3のグリコシル化細胞表面受容体への結合を阻害する。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、LGALS3のグリコシル化増殖因子受容体への結合を阻害する。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、LGALS3の以下への結合を阻害する：グリコシル化ムチン-1（MUC-1）、ムチン-4（MUC4）、ムチン-16（MUC16）、ジシアロガングリオシド、GD2、表皮増殖因子受容体（EGFR）、血小板由来増殖因子受容体（PDGFR）、インスリン様増殖因子受容体（IGFR）、cMET/肝細胞増殖因子受容体（HGFR）、インテグリン及びCTLA4。いくつかの実施態様では、グリコシル化MUC16は、Asn1800又はAsn1806でN-グリコシル化される。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、MUC16のグリコシル化型を発現する腫瘍の増殖を阻害する。
いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下を含む重鎖可変領域（VH）を含む：（a）アミノ酸配列SYGVH（配列番号:5）を含むVH相補性決定領域（CDR）1；（b）アミノ酸配列VIWSDGSTTYNSTLKS（配列番号:6）を含むVH CDR2；及び（c）アミノ酸配列HISNYGTMDY（配列番号:7）を含むVH CDR3。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含むVHを含む：（a）アミノ酸配列GFSLSSY（配列番号:11）を含むVH相補性決定領域（CDR）1；（b）アミノ酸配列WSDGS（配列番号:12）を含むVH CDR2；及び（c）アミノ酸配列HISNYGTMDY（配列番号:13）を含むVH CDR3。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含むVHを含む：（a）アミノ酸配列GFSLSSYG（配列番号:17）を含むVH相補性決定領域（CDR）1；（b）アミノ酸配列IWSDGST（配列番号:18）を含むVH CDR2；及び（c）アミノ酸配列ARHISNYGTMDY（配列番号:19）を含むVH CDR3。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントはVHを含み、前記VHは、QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTISGFSLSSYGVHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGSTTYNSTLKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAMYYCARHISNYGTMDYWGQGTSVTVS（配列番号:24）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下を含む軽鎖可変領域（VL）を含む：（a）アミノ酸配列RASQDIRNYLN（配列番号:8）を含むVL CDR1；（b）アミノ酸配列YTSRLHS（配列番号:9）を含むVL CDR2；及び（c）アミノ酸配列QHFNTLPPT（配列番号:10）を含むVL CDR3。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下を含むVLを含む：（a）アミノ酸配列RASQDIRNYLN（配列番号:14）を含むVL CDR1；（b）アミノ酸配列YTSRLHS（配列番号:15）を含むVL CDR2；及び（c）アミノ酸配列QHFNTLPPT（配列番号:16）を含むVL CDR3。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下を含むVLを含む：（a）アミノ酸配列QDIRNY（配列番号:20）を含むVL CDR1；（b）アミノ酸配列YTS（配列番号:21）を含むVL CDR2；及び（c）アミノ酸配列QHFNTLPPT（配列番号:22）を含むVL CDR3。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントはVLを含み、前記VLは、DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGSIKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTIRNLEQEDIATYFCQHFNTLPPTFGGGTKLEIK（配列番号:26）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号:24のアミノ酸配列を含むVH及び配列番号:26のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖可変領域（VH）を含み、前記VHは、図13A、13B又は13Cのいずれか1つで提供される抗体のVH CDR1、VH CDR2及びVH CDR3を含む。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは軽鎖可変領域（VL）を含み、前記VLは、図13A、13B又は13Cのいずれか1つで提供される抗体のVL CDR1、VL CDR2及びVL CDR3を含む。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（VH）（図13A、13B又は13Cのいずれか1つで提供される抗体のVH CDR1、VH CDR2及びVH CDR3を含む）、及び軽鎖可変領域（VL）（図13A、13B又は13Cのいずれか1つで提供される抗体のVL CDR1、VL CDR2及びVL CDR3を含む）を含む。
いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12A、12B、13D、13E、13F、13G、13H、13I、13J、13K、13L、13M、13N、又は13Oのいずれか1つで提供される抗体の重鎖及び/又は軽鎖を含む。
いくつかの実施態様では、抗体はヒト由来重鎖及び軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、重鎖定常領域は、ガンマ1、ガンマ2、ガンマ3及びガンマ4から成る群から選択されるアイソタイプを有する。いくつかの実施態様では、軽鎖定常領域はカッパ及びラムダから成る群から選択されるアイソタイプを有する。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントはヒト化される。いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントはげっ歯類の抗体のヒト化型である。いくつかの実施態様では、抗体は、2つの同一の重鎖及び2つの同一の軽鎖を含む免疫グロブリンである。いくつかの実施態様では、免疫グロブリンはIgGである。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは抗体複合化物であり、前記は、ある薬剤と複合体化された本明細書提供の抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施態様では、薬剤は画像化薬剤又は細胞傷害薬剤である。
いくつかの実施態様では、抗体又はその抗原結合フラグメントは二重特異性抗体である。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は免疫特異的にCD3と結合する。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は免疫特異的にLGALS3と結合する免疫グロブリンを含み、ここで、当該免疫グロブリンの軽鎖は、免疫特異的にCD3と結合する単鎖可変フラグメント（scFv）とペプチドリンカーを介して複合体化される。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは二重特異性抗体複合化物であり、前記は、ある薬剤と複合体化された本明細書提供の二重特異性抗体を含む。いくつかの実施態様では、薬剤は画像化薬剤又は細胞傷害薬剤である。
いくつかの実施態様では、その抗原結合フラグメントはscFvである。ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、ある薬剤と複合体化された本明細書提供のscFvを含むscFv複合化物である。いくつかの実施態様では、薬剤は画像化薬剤又は細胞傷害薬剤である。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、本明細書提供の抗体若しくは抗原結合フラグメント又は本明細書提供のscFvを含むキメラ抗原受容体（CAR）である。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、本明細書提供のCARを組換え発現するT細胞である。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、本明細書提供の抗体重鎖、本明細書提供の抗体軽鎖、本明細書提供のscFv、及び/又は本明細書提供のCARをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドである。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、プロモーターに作動できるように連結された本明細書提供のポリヌクレオチドを含むベクターである。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、本明細書提供のポリヌクレオチド又は本明細書提供のベクターを含む単離細胞である。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは以下を含む医薬組成物である：治療的に有効な量の本明細書提供の抗体又はその抗原結合フラグメント、本明細書提供の抗体複合化物、本明細書提供の二重特異性抗体、本明細書提供の二重特異性抗体複合化物、本明細書提供のscFv、本明細書提供のscFv複合化物、本明細書提供のCAR、本明細書提供のポリヌクレオチド、本明細書提供のベクター、又は本明細書提供の細胞；及び医薬的に許容できる担体。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、その必要がある患者で癌を治療する方法であり、前記方法は、前記患者に本明細書提供の医薬組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施態様では、前記癌は、卵巣、肺、膵、乳房、子宮、卵管、原始腹膜（primary peritoneum）の癌である。いくつかの実施態様では、医薬組成物は患者において転移を阻害する。いくつかの実施態様では、前記患者は人間の患者である。いくつかの実施態様では、当該方法はさらにまた、治療的に有効な量の追加の治療薬剤を当該患者に投与する工程を含む。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、配列番号:2の免疫原性ペプチドである。いくつかの実施態様では、免疫原性ペプチドは免疫原性担体タンパク質と複合体化される。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、（a）LGALS3タンパク質又はLGALS3炭水化物結合ドメインを含む前記のフラグメント及び（b）Fcドメインを含む融合タンパク質である。いくつかの実施態様では、LGALS3炭水化物結合ドメインは、ドメイン配列番号:32を含む。いくつかの実施態様では、LGALS3炭水化物結合ドメインは、配列番号:1のアミノ酸117－244を含む。いくつかの実施態様では、FcドメインはヒトIgG1 Fcドメインである。
ある種の実施態様でさらにまた提供されるものは、LGALS3 CBDと特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法であり、前記方法は、対象動物を本明細書提供の免疫原性ペプチド又は本明細書提供の融合タンパク質で免疫する工程を含む。いくつかの実施態様では、対象動物は、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ニワトリ、モルモット、ラット、ウサギ、又はマウスである。いくつかの実施態様では、免疫原性ペプチドは免疫原性担体タンパク質と複合体化される。いくつかの実施態様では、免疫原性担体タンパク質はキーホールリンペットヘモシアニンである。
図１Aは、細胞外ガレクチン-3（LGALS3）の構造及び活性を示す。LGALS3は、ペンタマーを形成し、シグナル伝達受容体（例えばEGFR及びインテグリン）との接触を介して卵巣癌の細胞表面癌分子（例えばMUC16）をシグナル伝達分子に連結する。下流シグナル伝達分子（例えばSRC、ERK、AKT及びFAK）の活性化は、転移及び侵襲のために重要な分子の産生を駆動する。 図1Bは、LGALS3炭水化物結合ドメインと結合する抗体阻害剤が、LGALS3表面複合体の破壊及び細胞表面受容体の脱安定化によりどのようにして“外側から内側へ”のシグナル伝達の活性化を阻止するかを示す。 図２AはEGFR、AKT、ERK及びSRCのリン酸化（それぞれP-EGFR、P-AKT、P-ERK、P-SRC）によって評価される、MUC16オンコジーン活性化を阻止するLGALS3 shRNA示す。LGALS3の低下は、2つの卵巣モデルで多様なオンコジーンのMUC16活性化（MUC16c344）を強く阻害する。 図2Bは、LGALS3競合は、卵巣癌細胞株（OVCAR3、OVCA-432、OVCA-433及びCAOV3）のマトリゲル侵襲を阻止するが、LGAL1（ガレクチン-1）では阻止されないことを示す。LGALS3の炭水化物結合ドメイン（117-244LGAL3-pFUSE）は卵巣癌細胞侵襲を阻止するが、11-119LGAL1-pFUSEは阻止しない。スワインソニン及びキフネンシンはともにLGALS3リガンド、ポリラクトサミンの合成を阻止する。 図2Cは、LGALS3機能の阻害剤によるA2780卵巣癌の抑制を腫瘍異種移植モデルで示す。shLGALS3阻害によるLGALS3発現の低下は高度に阻害性である。中程度の腫瘍増殖阻害もまた、低親和性プロトドラッグLGALS3-pFUSEによって観察された。前記薬剤は、Fcバックボーンに連結されたLGALS3の非改変炭水化物結合ドメインの融合タンパク質である。図2Dは、MGAT5及びLGALS3のアンチセンスノックダウンは腫瘍増殖を阻害することを示す。SKOV3細胞では、MUC16発現は腫瘍増殖を増強した（最上部ライン）。対照的に、N-グリコシル化部位の消失、又はMGAT5若しくはLGALS3に対するshRNAは増殖をコントロールレベルにまで低下させた。 図2Dは、MGAT5及びLGALS3のアンチセンスノックダウンは腫瘍増殖を阻害することを示す。SKOV3細胞では、MUC16発現は腫瘍増殖を増強した（最上部ライン）。対照的に、N-グリコシル化部位の消失、又はMGAT5若しくはLGALS3に対するshRNAは増殖をコントロールレベルにまで低下させた。 ガレクチン3のin vitro及びin vivoの実験的機能並びに提供抗体による治療の潜在的な阻止抗体作用を示す。 LGALS3炭水化物結合ドメイン（CBD）の一次構造を示す。LGALS3 CBDは5つの部分ドメイン（各々はただ1つの糖残基と結合する）に分割され、通常ABCD及びEと標識される。図では、高度に保存されたアミノ酸は下線を付され、一方、ドメインC、D及びEは枠で囲んだ領域内に示されている。この配列をネズミのペプチド免疫に用いた。特にR186(*)はLGALS3の機能に重要である。LGALS3 CBD配列はネズミガレクチン-3と高度に相同であるが、GAL1、GAL7及びGAL9とは相違する。これらファミリーメンバーの各々は類似の糖結合ドメインを有するが、LGALS3は重合ドメインを有する唯一のレクチンである。 多様なガレクチンファミリーメンバーのELISA反応性及び配列を示す。略語：CBD-3＝ガレクチン-3（ヒト）の炭水化物結合ドメイン；LGALS3＝ヒトガレクチン-3全タンパク質；GAL1 CBD＝ガレクチン-1炭水化物結合ドメイン（ヒト）。選択抗体は、タンパク質全体（LGALS3）及びLGALS3炭水化物結合ドメイン（CBD-3）の両方に陽性であった。いくつかのグループD抗体をクローニングしてガレクチン1及びLGALS3の両方の共同阻害値を決定し、in vivo傷害性プロフィールと関連付けた。 候補抗体によるLGALS3のラミニン結合の阻害を示す。 ELISAアッセイにおける抗体14D11.2D2とLGALS3の結合を示す。アッセイでは以下を利用した：ニッケルメッキ96ウェルマイクロプレート、一次タンパク質として500ng/ウェルのポリヒスチジン標識LGALS3、出発濃度1mg/mLの一次抗体14D11.2D2の希釈、及び1:3000希釈のヤギ抗マウスIgG1-HRPの二次抗体。 表面プラズモン共鳴（SPR）アッセイにおける抗体14D11.2D2とLGALS3の結合を示す。最上部曲線は250.0nMの14D11.2D2、2番目の曲線は125.0nMの14D11.2D2、3番目の曲線は31.25nMの14D11.2D2、最下部の曲線は7.813nMの14D11.2D2。前記によって14.6nMの解離定数（KD）が得られた。 LGALS3のラミニンへの結合の14D11.2D2阻止を示すELISAアッセイを示す。250nMの濃度で、14D11.2D2はLGALS3結合を36.6％低下させた。 マトリゲル侵襲アッセイにおいて、無処理細胞と比較して、14D11.2D2は、SKOV3-MUC16c344（SKOV3c344）、A2780-MUC16c344（A2780c344）、及びOVCAR3細胞株の侵襲を阻害した。**又は***は、抗体無処理細胞及び処理細胞間の統計的に有意な差異を示す。マトリゲル侵襲アッセイは、SKOV3--MUC16c344、A2780--MUC16c344、及び野生型OVCAR3細胞株を用いて実施された。抗体で処理されたとき、有意に少ないMUC16トランスフェクトSKOV3細胞のマトリゲル膜侵襲が認められ（p＝0.001）、同様な結果は、抗体処理OVCAR3細胞についても認められた（p＝0.0009）。MUC16トランスフェクトA2780細胞は、14D11.2D2の存在下で細胞侵襲の低下を示したが、統計的有意には達しなかった（p＝0.1067）。 卵巣腫瘍異種移植モデルにおける14D11.2D2抗体処理マウスの生存増加効果を示す。14D11.2D2抗体で免疫付与されたマウスは、抗体を投与されなかったマウスより生存の可能性が高かった。卵巣腫瘍細胞（A2780-phrGFP-MUC16c344（A2780c344））を、20匹の無胸腺雌ヌードマウスの脇腹に移植した。50μg/マウスの14D11.2D2を週2回合計8回静脈内（iv）注射して10匹のマウスに免疫を付与した。腫瘍体積を週2回測定した。腫瘍体積が1500mm3に達したらマウスを犠牲にした。パイロットマウス実験は、A2780-MUC16c344細胞株を用い14D11.2D2で実施した。14D11.2D2を、50μg/マウスの用量で週2回合計8用量投与した。28日後、抗体を投与されなかった動物は、抗体を投与された動物よりも生存可能性が統計的に有意に低かった（p＝0.012）。 図12Aは、14D11.2D2抗体の重鎖DNA及びアミノ酸配列並びにCDR配列を示す。CDR配列はKabat、Chothia及びIMGTナンバリングによって同定した。影付き領域は重鎖の高度に保存された領域である。図12Bは、14D11.2D2抗体の軽鎖DNA及びアミノ酸配列並びにCDR配列を示す。CDR配列はKabat、Chothia及びIMGTナンバリングによって同定した。影付き領域は軽鎖の高度に保存された領域である。 図12Bは、14D11.2D2抗体の軽鎖DNA及びアミノ酸配列並びにCDR配列を示す。CDR配列はKabat、Chothia及びIMGTナンバリングによって同定した。影付き領域は軽鎖の高度に保存された領域である。 13A－Cは、ペプチド免疫によって得られた単離LGALS3抗体のCDR配列を示す。CDR配列は、Kabat（13A）、Chothia（11B）及びIMGT（13C）ナンバリングによって同定した。 図13D－Oは、同じLGALS3抗体のVH鎖及び/又はVL鎖配列を示す。3G10.D11、11D1.A12、及び21A12.A6の軽鎖配列は得られなかった。 図14Aは、LGALS3発現が欠損している乳癌細胞株を注射された無胸腺マウスにおける転移肺腫瘍の発達の低下を示す。雌無胸腺ヌードマウス（実験開始時6－8週齢）のグループ1（10マウス）及びグループ2（10マウス）に、それぞれMDA-MB-231-TGL wt又はMDA-MB-231-TGL shGAL3の1.5ｘ106細胞を尾静脈注射した。背側画像が示されている（週1*は注射後1週間）。MDA-MB-231細胞株は上皮性ヒト乳癌細胞株である。 図14Bは、Kaplan-Meier生存曲線（p＝0.0178）によって示されるLGALS3欠損マウスの生存延長を示す。 図14Cは、MDA-MB-231-TGL乳癌細胞株を注射されたマウスの腫瘍発達における14D11.2D2抗体による処理の効果を示す。 ヒトLGALS3の例示的ヌクレオチド（NM_002306.3）及びアミノ酸（NP_002297.2）配列を示す。
本開示は本出願に記載する個別の実施態様に関して限定されるべきではなく、それら実施態様は本開示の個々の特徴の一例示として意図される。本開示の多様な実施態様が全て本明細書に開示されるわけではない。当業者には明白であるように、本開示の多くの改変及び変型がその範囲を逸脱することなく為され得る。本明細書に列挙する方法及び装置に加え、本開示の範囲内の機能的に等価なものは前述の記載から当業者には明白であろう。そのような改変及び変型は添付の特許請求の範囲内に入ると考えられる。本開示は、添付の特許請求の範囲とともに、当該特許請求の範囲が享受すべき全範囲の等価物によってのみ限定されるべきである。
本開示は、特定の使用、方法、試薬、化合物、組成物又は生物学的な系に限定されず、前記はもちろん変動し得ることは理解されるべきである。本明細書で用いられる用語は単に特定の実施態様を説明する目的のためであり、制限することを意図しないこともまた理解されるべきである。
加えて、本開示の特色又は特徴がマーカッシュグループとして記述される場合、本開示は当該マーカッシュグループのメンバーの任意の個々のメンバー又はサブグループに関して記述されていることを当業者は認識するであろう。
当業者には理解されるように、一切の目的のために、特に書面による記述の提供に関して、本明細書に開示する全ての範囲はまた、一切の可能な部分範囲及び前記の部分範囲の組合せを包含する。任意の記載された範囲は十分に記載されていると容易に認識され、当該同じ範囲は少なくとも等しい1/2、1/3、1/4、1/5、1/10などに分解され得る。非限定的な例として、本明細書で考察される各範囲は、小さい方の1/3、中間の1/3及び大きい方の1/3などに容易に分解することができる。当業者にはまた理解されるであろうが、全ての言葉、例えば“まで”、“少なくとも”“～より大きい”、“～より少ない”などは記載された数を含み、上記で考察したように続いて部分範囲に分解することができる。最後に、当業者に理解されるように、範囲は個々の数の各々を含む。したがって、例えば、1－3個の細胞を有するグループは、1、2、又は3個の細胞を有するグループを指す。同様に、1－5個の細胞を有するグループは、1、2、3、4、又は5個の細胞を有するグループを指し、以下同様である。
定義
特段の規定がなければ、本明細書で用いられる全ての技術用語及び学術用語は、本開示が属する分野の業者が通常的に理解する意味を有する。以下の参考文献は、本発明で用いられる多くの用語の一般的定義を当業者に提供する：Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd ed., 1994；The Cambridge Dictionary of Science and Technology, Walker ed., 1988；The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al., eds., Springer Verlag, 1991；及びHale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology, 1991。本明細書で用いられるように、以下の用語は、特段の指定がなければ、それら用語に帰属する下記の意味を有する。本明細書で用いられる用語は個別の実施態様を記載するという目的のためにのみ用いられ、本開示を限定しようとするものではない。
本明細書で用いられるように、単数形“a”、“an”及び“the”は、文脈が明瞭にそうではないことを示していないかぎり、複数形も同様に含むことが意図される。
本明細書で用いられるように、“約”という用語は、数値又は数値範囲を修飾するために用いられるときには、当該値又は範囲の5％から10％上及び5％から10％下の偏差が当該記載の値又は範囲の意図される意味内に入ることを示す。
本明細書で用いられるように、ある薬剤のある対象動物への“投与”という用語は、当該薬剤の目的の機能を達成するために、対象動物に薬剤を導入又はデリバリーする任意のルートを含む。投与は、任意の適切なルート（静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下及び本明細書に記載する他の適切なルートを含むが、ただしこれらに限定されない）によって達成され得る。投与は自己投与及び別人による投与を含む。
“アミノ酸”という用語は、天然に存在するアミノ酸及び天然に存在しないアミノ酸とともに、天然に存在するアミノ酸に類似する態様で機能するアミノ酸アナローグ及びアミノ酸模倣物を指す。天然にコードされるアミノ酸は、20の通常のアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリン）並びにピロリジン及びセレノシステインである。アミノ酸アナローグは、天然に存在するアミノ酸と同じ化学構造を有する物質を指す。すなわち水素、カルボキシル基、アミノ基及びR基と結合するα炭素を有し、例えばホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムである。そのようなアナローグは修飾されたR基（例えばノルロイシン）又は修飾されたペプチドバックボーンを有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持する。いくつかの実施態様では、ポリペプチドを形成するアミノ酸はD型である。いくつかの実施態様では、ポリペプチドを形成するアミノ酸はL型である。いくつかの実施態様では、ポリペプチドを形成する第一の複数のアミノ酸はD型であり、第二の複数のアミノ酸はL型である。
アミノ酸は、本明細書ではそれらの一般的に公知の3文字記号によって、又はIUPAC-IUB生化学命名委員会の推奨する1文字記号によって称される。同様に、ヌクレオチドはそれらの一般的に許容される一文字コードによって称される。
“ポリペプチド”、“ペプチド”、及び“タンパク質”という用語は本明細書では互換的に用いられ、アミノ酸残基のポリマーを指す。当該用語は、天然に存在するアミノ酸のポリマーとともに、1つ以上のアミノ酸残基が天然に存在しないアミノ酸（例えばアミノ酸アナローグ）であるアミノ酸ポリマーに適用される。当該用語は、任意の長さのアミノ酸鎖（完全長タンパク質）を包含し、ここで、アミノ酸残基は共有ペプチド結合によって連結される。
本明細書で用いられるように、“コントロール”は、比較の目的のために実験で用いられるまた別のサンプルである。コントロールは“陽性”も“陰性”もあり得る。例えば、実験の目的が、該当するタイプの疾患の治療について治療薬剤の有効性の相関性を決定することである場合、典型的には陽性コントロール（所望の治療効果を示すことが判明している組成物）及び陰性コントロール（当該治療法を与えられない若しくはプラセボを与えられる対象動物又はサンプル）が用いられる。
本明細書で用いられるように、“有効量”又は“治療的に有効な量”という用語は、所望される治療効果を達成するために十分な薬剤の量を指す。治療薬の適用に関する文脈では、対象動物に投与される治療薬ペプチドの量は、感染症のタイプ及び重篤度並びに個体の特徴（例えば一般的な健康状態、年齢、性別、体重及び薬剤耐性）に左右され得る。前記はまた疾患の程度、重篤度及びタイプに左右され得る。当業者は、これらの要件及び他の要件にしたがって適切な投薬量を決定することができる。
本明細書で用いられるように、“発現”という用語は、ポリヌクレオチドがmRNAに転写されるプロセス、及び/又は転写されたmRNAがその後でペプチド、ポリペプチド又はタンパク質に翻訳されるプロセスを指す。ポリヌクレオチドがゲノムDNAに由来する場合、発現は真核細胞でのmRNAのスプライシングを含むことができる。遺伝子の発現レベルは、細胞若しくは組織サンプル中のmRNA又はタンパク質の量を測定することによって決定できる。ある特徴では、1つのサンプルの遺伝子の発現レベルは、コントロール又は参照サンプルにおける当該遺伝子の発現レベルと直接比較することができる。別の特徴では、1つのサンプルの遺伝子の発現レベルは、本明細書に開示の組成物を投与した後の同じサンプルにおける当該遺伝子の発現レベルと直接比較することができる。“発現”という用語はまた以下の事象の1つ以上を指す：（1）細胞内でのDNA配列から（例えば転写による）RNA鋳型の生成；（2）細胞内でのRNA転写物の（例えばスプライシング、編集、5’キャップ形成、及び/又は3'末端形成による）プロセッシング；（3）細胞内でのRNA配列のポリペプチド又はタンパク質への翻訳；（4）細胞内でのポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾；（5）ポリペプチド又はタンパク質の細胞表面の提示；及び（6）細胞からポリペプチド又はタンパク質の分泌若しくは提示若しくは放出。
“リンカー”という用語は、2つの配列を接続又は連結する（例えば2つのポリペプチドドメインを連結する）合成配列（例えばアミノ酸配列）を指す。いくつかの実施態様では、リンカーは1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10のアミノ酸配列を含む。
本明細書で用いられるように、“抗体”という用語は、完全な抗体分子だけでなく免疫原結合能力を保持する抗体分子のフラグメントも意味する。そのようなフラグメントはまた当業界で周知であり、in vivo及びin vitroの両方で頻繁に用いられる。したがって、本明細書で用いられるように、“抗体”という用語は、完全な免疫グロブリン分子だけでなく、周知の活性フラグメントF(ab’)2及びFabを意味する。F(ab’)2、及び完全抗体のFcフラグメントを欠くFabフラグメントは、より迅速に循環から除去され、完全抗体の非特異的組織結合がより少ない可能性がある（Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325, 1983）。本発明の抗体は、全ナイーブ抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Fab、Fab’、単鎖V領域フラグメント（scFv）、単ドメイン抗体（例えばナノボディ及び単ドメインラクダ抗体）、VNARフラグメント、二重特異性T細胞嵌合（BiTE）抗体、ミニボディ、ジスルフィド結合Fv（dsFv）、及び抗イディオタイプ（抗Id）抗体、イントラボディ、融合ポリペプチド、非慣例抗体（unconventional antibody）、及び上記のいずれかの抗原結合フラグメントを含む。特に、抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント（すなわち抗原結合部位を含む分子）が含まれる。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えばIgG、IgE、IgM、IgD、IgA及びIgY）、クラス（例えばIgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及びIgA2）又はサブクラスであり得る。
ある種の実施態様では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも2つの重（H）鎖及び2つの軽（L）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではVHと略する）及び重鎖定常（CH）領域で構成される。重鎖定常領域は3つのドメイン（CH1、CH2及びCH3）で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではVLと略する）及び軽鎖定常（CL）領域で構成される。軽鎖定常領域は1つのドメイン、CLで構成される。VH及びVL領域はさらにまた、超可変領域（相補性決定領域（CDR）と呼ばれる）に細分割され、フレームワーク領域（FR）と呼ばれるより保存された領域が点在する。各VH及びVLは3つのCDR及び4つのFRで構成され、それらは、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順序で並んでいる：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫グロブリンと宿主組織又は因子（免疫系の多様な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第一の成分（Cl q）を含む）との結合を媒介することができる。本明細書では互換的に用いられるように、抗体の“抗原結合部分”、“抗原結合フラグメント”、又は“抗原結合領域”という用語は、抗原と結合し、さらに抗体、抗原結合タンパク質のフラグメントに抗原特異性を付与する抗体の領域又は部分を指す。例えば、抗体は、抗原と特異的に結合する能力を保持する抗体の1つ以上のフラグメントを含む（例えばペプチド/HLA複合体）。抗体の抗原結合機能は完全長抗体のフラグメントによって発揮され得ることが示されている。抗体の“抗体フラグメント”という用語に包含される抗原結合部分の例には以下が含まれる：Fabフラグメント、VL、VH、CL及びCH1ドメインから成る一価フラグメント；F(ab)2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；VH及びCH1ドメインから成るFdフラグメント；抗体の単腕のVL及びVHドメインから成るFvフラグメント；VHドメインから成るdAbフラグメント（Ward et al., Nature 341 : 544-546, 1989）；及び単離された相補性決定領域（CDR）。
抗体及び抗体フラグメントは、全体的に又は部分的に哺乳動物（例えばヒト、非ヒト霊長類動物、ヤギ、モルモット、ハムスター、ウマ、マウス、ラット、ウサギ、及びヒツジ）又は非哺乳動物抗体生成動物（例えばニワトリ、アヒル、カモ、ヘビ、有尾両生類）から誘導することができる。抗体及び抗体フラグメントは動物で生成するか、又は動物以外、例えば酵母若しくはファージから（例えば単一抗体若しくは抗体フラグメントとして又は抗体ライブラリーの部分として）生成することができる。
さらにまた、Fvフラグメントの2つのドメイン（VL及びVH）は別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を用い合成リンカーによって結合させることができる。リンカーはそれらを単一タンパク質鎖とすることができ、当該単一鎖でVL及びVH領域ペアは一価分子を形成する。前記は単鎖Fv（scFv）として公知である（例えば以下を参照されたい：Bird et al., Science 242:423-426, 1988；及びHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 5879-5883, 1988）。これらの抗体フラグメントは当業者に公知の通常的な技術を用いて入手され、フラグメントは、完全な抗体と同じ態様で有用性についてスクリーニングされる。
“単離抗体”又は“単離された抗原結合タンパク質”は、識別されてその天然の環境成分から単離及び/又は回収されたものである。“合成抗体”又は“組換え抗体”は、一般的には、組換え技術を用いて又は当業者に公知のペプチド合成技術を用いて作製される。
本明細書で用いられるように、“単鎖可変フラグメント”又は“scFv”という用語は、免疫グロブリン（例えばマウス又はヒト）の重鎖（VH）及び軽鎖（VL）の可変領域の融合タンパク質であり、前記領域は共有結合されてVH：VLヘテロダイマーを形成する。重鎖（VH）及び軽鎖（VL）は直接結合されるか、又はペプチドコードリンカー（例えば約10、15、20、25アミノ酸）によって結合される。リンカーは、VHのN-末端をVLのC-末端に接続するか、又はVHのC-末端をVLのN-末端に接続する。通常、リンカーは可撓性のためにグリシンに富むとともに、可溶性のためにセリン又はスレオニンに富む。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を連結することができる。
定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、scFvタンパク質は本来の免疫グロブリンの特異性を保持する。単鎖Fvポリペプチド抗体は、Hustonらが記載したVH-及びVL-コード配列を含む核酸から発現され得る（Huston, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883, 1988）。さらに米国特許5,091,513号、5,132,405号及び4,956,778号並びに米国特許公開No. 20050196754及びNo. 20050196754も参照されたい。阻害活性を有するアンタゴニストscFvは記載されている（例えば以下を参照されたい：Zhao et al., Hybridoma (Larchmt) 27(6):455-51, 2008；Peter et al., J Cachexia Sarcopenia Muscle, 2012；Shieh et al., J Imunol 183(4):2277-85, 2009；Giomarelli et al., Thromb Haemost 97(6):955-63, 2007；Fife eta., J Clin Invst 116(8):2252-61, 2006；Brocks et al., Immunotechnology 3(3): 173-84, 1997；Moosmayer et al., Ther Immunol 2(10):31-40, 1995）。刺激活性を有するアンタゴニストscFvは記載されている（例えば以下を参照されたい：Peter et al., J Biol Chem 25278(38):36740-7, 2003；Xie et al., Nat Biotech 15(8):768-71, 1997；Ledbetter et al., Crit Rev Immunol 17(5-6):427-55, 1997；Ho et al., Bio Chim Biophys Acta 1638(3):257-66, 2003）。
本明細書で用いられるように、“F(ab)”は、抗原と結合するが一価でありかつFc部分を持たない抗体構造のフラグメントを指す。例えば、酵素パパインによって消化された抗体は、2つのF(ab)及びFcフラグメント（例えば重（H）鎖定常領域；抗原と結合しないFc領域）を生じる。
本明細書で用いられるように、“F(ab’)2”は、全IgG抗体のペプシン消化によって生成される抗体を指し、ここで、前記フラグメントは2つの抗原結合（ab’）（二価）領域を有し、各（ab1）領域は2つの別々のアミノ酸鎖、S-S結合によって連結された抗原結合のためのH鎖の部分及び軽（L）鎖を含み、さらに残余のH鎖部分はともに連結される。“F(ab’)2”フラグメントは2つの個々のFab’に分割され得る。
本明細書で用いられるように、“CDR”は抗体の相補性決定領域アミノ酸配列と定義され、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の超可変領域である。例えば以下を参照されたい：Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1987。一般的には、抗体は、可変領域に3つの重鎖及び軽鎖CDR又はCDR領域を含む。CDRは、抗体と抗原又はエピトープとの結合のために接触残基の大部分を提供する。ある種の実施態様では、CDR領域はKabat系を用いて輪郭が示される（Kabat, E. A., et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991）。
本明細書で用いられるように、“定常領域”又は“定常ドメイン”という用語は互換可能であり、当業界で周知の意味を有する。定常領域は、抗体の部分、例えば軽鎖及び/又は重鎖のカルボキシ末端部分であり、前記は抗体と抗原の結合に関与しないが、多様なエフェクター機能（例えばFc受容体との相互作用）を示すことができる。免疫グロブリン分子の定常領域は、免疫グロブリン可変ドメインと対比して概ねより保存されたアミノ酸配列を有する。
本明細書で用いられるように、“エピトープ”は当技術分野の用語であり、抗体が免疫特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指すことができる。エピトープは、例えばポリペプチドの連続するアミノ酸であるか（線状又は連続性エピトープ）、又はエピトープは1つのポリペプチド又は複数のポリペプチドの2つ以上の非連続領域から一体となることができる（立体構造性、非線状、不連続性、又は非連続性エピトープ）。
本明細書で用いられるように、“リガンド”という用語は受容体と結合する分子を指す。特に、リガンドは別の細胞上の受容体と結合して、細胞対細胞認識及び/又は相互作用を可能にする。
本明細書で用いられるように、“親和性”という用語は結合強度の尺度を意味する。理論に拘束されないが、親和性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の立体化学的一致の近さ、それらの間の接触面積のサイズ、並びに荷電基及び疎水基の分布に左右される。親和性はまた“アビディティー”という用語を含み、前記は、（例えば一価又は多価の）可逆性複合体形成後の抗原-抗体結合の強度を指す。抗原に対する抗体の親和性を計算する方法は当業界では公知であり、前記方法は親和性計算のための結合実験の使用を含む。機能アッセイ（例えばフローサイトメトリーアッセイ）における抗体活性もまた抗体親和性を反映する。抗体と親和性は表現型的に特徴づけることができ、機能アッセイ（例えばフローサイトメトリーアッセイ）を用いて比較することができる。本開示案件で有用な核酸分子には、ポリペプチド又はそのフラグメントをコードする任意の核酸分子が含まれる。ある種の実施態様では、本開示案件で有用な核酸分子には、抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子が含まれる。そのような核酸分子は、内因性核酸配列と100％同一である必要はないが、典型的には実質的な同一性を示すであろう。内在性配列に対して“実質的相同性”又は“実質的同一性”を有するポリヌクレオチドは、典型的には二本鎖核酸分子の少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることができる。“ハイブリダイズ”とは、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば本明細書に記載の遺伝子）又はその部分との間で、種々のストリンジェンシー条件下で二本鎖分子を形成するペアを意味する（例えば以下を参照されたい：Wahl, G. M. and S. L. Berger, Methods Enzymol. 152:399, 1987；Kimmel, A. R. Methods Enzymol. 152:507, 1987）。
本明細書で用いられるように、“免疫特異的に結合する”、“免疫特異的に認識する”、“特異的に結合する”及び“特異的に認識する”は、抗体に関して類似用語であり、当業者が理解するように抗原結合部位を介して抗原（例えばエピトープ又は免疫複合体）と結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを指し、抗体又はその抗原結合フラグメントと他の抗原との交差反応性を排除しない。
“実質的に相同”又は“実質的に同一”という用語は、参照アミノ酸配列（例えば本明細書に記載のアミノ酸配列のいずれか1つ）又は核酸配列（例えば本明細書に記載の核酸配列のいずれか1つ）に対して少なくとも50％若しくはそれより高い相同性又は同一性を示すポリペプチド又は核酸分子を意味する。例えば、そのような配列は、比較に用いられる配列（例えば野生型又は自然のままの配列）に対して、アミノ酸レベル又は核酸で少なくとも約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、若しくは約99％相同性又は同一性である。いくつかの実施態様では、実質的に相同又は実質的に同一のポリペプチドは、比較に用いられる配列と対比して1つ以上のアミノ酸置換、挿入、又は欠失を含む。いくつかの実施態様では、実質的に相同又は実質的に同一のポリペプチドは、相同配列の置き換えに1つ以上の非天然アミノ酸又はアミノ酸アナローグ（D-アミノ酸及び逆向き鏡像アミノを含む）を含む。
配列相同性又は配列同一性は、典型的には配列分析ソフトウェア、例えば配列分析ソフトウェアパッケージ（Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705）BLAST、BESTFIT、GAP、又はPILEUP/PRETTYBOXプログラムを用いて測定される。そのようなソフトウェアは、種々の置換、欠失及び/又は修飾に対して相同性の程度を選定することによって同一又は類似配列を適合させる。同一性の程度を決定する例示的アプローチでは、BLASTプログラムを、近縁配列を示すe-3及びe-100の間の確率スコアで用いることができる。
本明細書で用いられるように、“アナローグ”という用語は、参照ポリペプチド又は核酸分子の機能を有する構造的に関連するポリペプチド又は核酸分子を指す。
本明細書で用いられるように、“保存的配列改変”は、アミノ酸改変であって、当該改変が、本開示の抗LGALS3抗体又は当該アミノ酸配列を含むその抗原結合フラグメントの結合特性に有意に影響しないか又は結合特性を変更しないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸置換、付加及び欠失を含むことができる。改変は、本開示の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントのscFvに当業界で公知の標準技術（例えば、位置特異的変異誘導及びPCR媒介変異誘導）によって導入することができる。アミノ酸は、それらの物理化学的特性（例えば電荷及び極性）にしたがってグループに分類することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じグループ内のアミノ酸で入れ替えられる置換である。例えば、アミノ酸は電荷によって分類できる。すなわち、陽性電荷アミノ酸にはリジン、アルギニン、ヒスチジンが含まれ、陰性電荷アミノ酸にはアスパラギン酸、グルタミン酸が含まれ、中性電荷アミノ酸にはアラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンが含まれる。加えて、アミノ酸は極性によって分類できる。すなわち、極性アミノ酸にはアルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジ（塩基性極性）、セリン、スレオニン、及びチロシンが含まれ、非極性アミノ酸にはアラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びバリンが含まれる。したがって、CDR領域内の1つ以上のアミノ酸残基を同じグループ内の他のアミノ酸残基と入れ替え、保持されている機能（すなわち上記（c）から（1）に示す機能）について本明細書に記載の機能アッセイを用いて改変抗体を試験することができる。ある種の実施態様では、指定配列又はCDR領域で１つ、２つ以上、３つ、４つ、５つを超える残基は変更されない。
本明細書で用いられるように、“異種核酸分子又はポリペプチド”という用語は、ある細胞又はある細胞から得られるサンプルに通常は存在しない核酸分子（例えばcDNA、DNA又はRNA分子）又はポリペプチドを指す。この核酸は別の生物由来でもよく、又は、例えばある細胞若しくはサンプルで通常は発現されないmRNA分子でもよい。
本明細書で用いられるように、“調整する”という用語は正の方向又は負の方向に変化させることを指す。例示的な調整は、約1％、約2％、約5％、約10％、約25％、約50％、約75％、又は約100％の変化を含む。
本明細書で用いられるように、“増加する”という用語は、正の方向に少なくとも約5％（約5％、約10％、約25％、約30％、約50％、約75％又は約100％を含むが、ただし前記に限定されない）の変化を指す。
本明細書で用いられるように、“減少する”という用語は、負の方向に少なくとも約5％（約5％、約10％、約25％、約30％、約50％、約75％又は約100％を含むが、ただし前記に限定されない）の変化を指す。
本明細書で用いられるように、“単離された”ポリヌクレオチド又は核酸分子は、当該核酸分子の天然の供給源に（例えばマウス又はヒトに）存在する他の核酸分子からは分離されているものである。さらにまた、“単離された”核酸分子、例えばDNA分子は、組換え技術によって生成されるときには他の細胞性物質又は培養媒体を実質的には含み得ないか、又は化学的に合成されるときには化学的前駆体又は他の化学物質を実質的には含み得ない。例えば、“実質的に含まない”という言葉は、他の物質（例えば細胞性物質、培養媒体、他の核酸分子、化学的前駆体及び/又は他の化学物質）を約15％、10％、5％、2％、1％、0.5％、又は0.1％未満含むポリヌクレオチド又は核酸分子の調製物を含む。
本明細書で用いられるように、“単離された細胞”という用語は、天然では当該細胞に付随する分子性及び/又は細胞性成分から分離されている細胞を指す。
“有効量”（又は“治療的に有効な量”）は、治療に対して有益な又は所望される臨床成果を与えるために十分な量である。有効量は1用量以上で対象動物に投与され得る。治療に関して、有効量は、疾患（例えば新形成）の進行を緩和、改善、安定化するために、逆転させるために又は遅らせるために、或いは疾患（例えば新形成）の病理学的な結果を軽減するために十分な量である。有効量は、一般的には症例ごとに医師によって決定され、当業者の技量の範囲内である。有効量に達する適切な投薬量を決定するときには、典型的にはいくつかの要件が考慮される。これらの要件には、対象動物の年齢、性別及び体重、治療される症状、症状の重篤度、並びに投与される操作免疫細胞の形態及び有効濃度が含まれる。
本明細書で用いられるように、“新形成”という用語は、細胞又は組織の病理学的増殖及びその後に続く他の組織又は器官への遊走又は侵襲を特徴とする疾患である。新形成増殖は典型的には非制御性及び進行性であり、正常細胞の増殖を引き出さない又は正常細胞の増殖の停止を引起す条件下で発生する。新形成は、多様な細胞タイプ、組織又は器官に影響を及ぼすことができる。前記には、膀胱、結腸、骨、脳、乳房、軟骨、神経膠、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺臓、リンパ節、神経組織、卵巣、胸膜、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、泌尿生殖管、尿管、尿道、子宮及び膣から成る群から選択される器官（ただし前記に限定されない）、又は前記の組織若しくは細胞タイプが含まれる。新形成には癌、例えば肉腫、癌腫、又は形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）が含まれる。
本明細書で用いられるように、“治療する”又は“治療”という用語は、治療される個体又は細胞の疾患経過を変化させる試みにおける臨床的介入を指し、予防のため又は臨床病変の経過中に実施され得る。治療における治療的効果には、疾患の出現又は再発の予防、症候の改善、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の消失、転移の予防、疾患進行速度の低下、症状の改善又は緩和、並びに寛解又は予後改善が含まれるが、ただし前記に限定されない。疾患又は異常の進行を予防することによって、治療は、罹患した若しくは診断を受けた対象動物又は疾患を有すると疑われる対象動物で異常による悪化を予防することができるだけでなく、治療はまた、異常のリスクがあるか若しくは異常を有すると疑われる対象動物で異常の開始又は異常の症候を予防することができる。
本明細書で用いられるように、“対象動物”という用語は、任意の動物（例えば哺乳動物）を指し、人間、非ヒト霊長類動物、げっ歯類などが含まれるが、ただしそれらに限定されない（例えば、前記動物は該当する治療のレシピエントであるか、又は前記動物から細胞が採集される）。
概括
ガレクチン-3（LGALS3）はβ-ガラクトシド結合タンパク質であり、多くの細胞から分泌され得るが、ただし、小胞体及びゴルジ区画への移行及び古典的分泌経路への進入のためのシグナル配列を欠く。LGALS3は細胞の細胞内及び細胞外の複数の場所で見出され、多面的な生物学的機能（例えば細胞増殖、細胞接着及び細胞-細胞相互作用）を有する。LGALS3は、その局在化及び翻訳後修飾（例えば解裂及びリン酸化）に応じて、抗アポトーシス活性又はアポトーシス促進活性を示すことができる。ガレクチン-3の解裂は脈管形成潜在能力及びアポトーシス耐性に関係することが報告された。ガレクチン-3のリン酸化はその糖結合能力を調節する。
人工的に合成したキメラLGALS3を用いた卵巣癌における本発明者らの予備的研究は、LGALS3は卵巣癌の増殖、拡散及び侵襲特性で必須の役割を果たすと決定した（Rao, et al. (2017) ACS Chem. Biol. 12 (8): 2085-2096（参照によってその全体が本明細書に含まれる））。この研究は、LGALS3のノックダウンshRNA抑制及びキメラ抗体の両方を利用した（前記キメラ抗体では自然のままの低親和性LGALS3炭水化物結合ドメインが抗体可変領域と置き換えられた）。ノックダウン実験では、LGALS3の腫瘍発現は、卵巣癌ムチンMUC16/CA125のオンコジーン活性化効果のために要求されることが示された（図2A）。LGALS3ノックダウン細胞をヌードマウスに移植したとき、それら細胞は非常に限定された増殖を示し、in vivo腫瘍増殖におけるLGALS3の必須の役割が確認された（図2D）。さらにまた、LGALS3による増殖/侵襲増強は細胞外であることが示された。侵襲試験では、卵巣癌細胞のマトリゲル侵襲はLGALS3に左右されることが示された。Fcバックボーンに連結されたLGALS3の非修飾炭水化物結合ドメインの融合タンパク質を含む低親和性キメラ抗体は、LGALS3機能を阻止しマトリゲル侵襲を防ぐことができるが、一方、ガレクチン-1のキメラ阻止抗体は有効ではなかった（図2B）。加えて、低親和性のキメラ抗LGALS3阻止抗体はマウスで異種移植片のin vivo増殖を低下させた（図2C）。これらのキメラ抗体は宿主マウスに対して注目すべき副作用を持たず、報告されたLGALS3ノックアウト最少効果と一致した（Wright et al., (2017) J Leukoc Biol 101(3): 717-726）。
本明細書に記載するものは、LGALS3に対する阻害性、高親和性抗体を単離するための免疫戦略である。LGALS3炭水化物結合ドメイン（CBD）の一次配列を図4に示す。枠はCBDのC、D及びEドメインを示し、それらドメインはラクトサミン結合のために重要である。高度に保存されたアミノ酸には下線が付されている。R186(*)はGAL3の機能にとって重要である。GAL3 CBD配列はネズミガレクチン-3と高度に相同であるが、GAL1、GAL7及びGAL9とは相違する。これらファミリーメンバーの各々は類似する糖結合ドメインを有するが、一方、LGALS3は重合ドメインを有する唯一のレクチンである。本明細書の実施例で述べるように、LGALS3 CBDに対する抗体作製のために、LGALS3 CBD又はその部分を含むペプチド及び/又は融合構築物でマウスを免疫した。全タンパク質CBD並びにGAL1、LGALS3、GAL7及びGAL9のための全タンパク質に対して抗LGALS3 CBD抗体をスクリーニングして、抗体を選別した。単離抗体は、自然のままのヒトLGALS3及びマウスホモローグLgal3と結合する。加えて、抗体は、ラミニンのポリラクトサミンとのLGALS3結合の機能的阻害を示した。さらにまた、選別した抗体は、マトリゲル侵襲アッセイで評価したとき腫瘍細胞侵襲を阻害すること及びマウス卵巣癌異種移植モデルで生存を増加させることが示された。
種々の研究が腫瘍生物学及び炎症におけるLGALS3の役割を明示した。LGALS3標的化の効果の部分的リスト及び予想される結果は図3に示される。予想される効果の多くが癌治療で期待される利点である。LGALS3の作用は多様であるが、ノックアウトマウスモデルでのLGALS3の完全消失ですらほぼ通常の発達と一致し、いくらかの免疫抑制的作用はTNF阻害剤と実質的に相違しない。これらの研究に基づいて、本明細書で提供する抗体は、LGALS3媒介疾患及び症状（癌及び炎症が含まれるが、ただしそれらに限定されない）の治療のための有用な治療薬であると期待される。
提供されるものは、抗体及びその抗原結合フラグメント、並びにそのような抗体及びフラグメントを含むポリペプチド（例えば融合タンパク質、複合化物、及び/又はキメラ抗原受容体）の他に、前記を発現する細胞である。抗体及びフラグメントは、とりわけLGALS3タンパク質のエピトープと特異的に結合するものである。そのような抗体は、本明細書では“抗LGALS3抗体”と称される。そのようなエピトープは、典型的には、LGALS3分子の炭水化物結合ドメイン（CBD）内のエピトープ又は実質的に前記ドメイン内のエピトープである。いくつかの実施態様では、エピトープは、LGALS3（配列番号:1）のアミノ酸残基117－244内に存在するか又は前記を含む。いくつかの実施態様では、抗体又はフラグメントは、LGALS3（配列番号:1）のアミノ酸残基117－244内のエピトープ又は前記を含むエピトープと結合する。いくつかの実施態様では、エピトープは、LGALS3（配列番号:1）のアミノ酸残基152－195内に存在するか又は前記を含む。いくつかの実施態様では、抗体又はフラグメントは、LGALS3（配列番号:1）のアミノ酸残基152－195内のエピトープ又は前記を含むエピトープと結合する。いくつかの実施態様では、エピトープは、LGALS3（配列番号:1）のアミノ酸残基170－186内に存在するか又は前記を含む。いくつかの実施態様では、抗体又はフラグメントは、LGALS3（配列番号:1）のアミノ酸残基170－186内のエピトープ又は前記を含むエピトープと結合する。いくつかの実施態様では、エピトープは、配列CNTKLDNNWGREERQSVFPFESG（配列番号:2）を含むCBDの部分である。いくつかの実施態様では、抗体又はフラグメントは、配列CNTKLDNNWGREERQSVFPFESG内の又は前記を含むエピトープと結合する。いくつかの実施態様では、エピトープは、GALS3のCBDのドメインC、D及びE内に存在するか又は前記を含む。いくつかの実施態様では、抗体又はフラグメントは、LGALS3（配列番号:1）のアミノ酸残基170－186内のエピトープ又は前記を含むエピトープと結合する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、LGALS3によるラミニン結合を阻害する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、LGALS3とラクトサミンとの結合を阻害する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、癌を抑え又は治療する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、腫瘍細胞の侵襲及び増殖を阻害する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、腫瘍の脈管形成を阻害する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは転移を阻害する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、転移腫瘍の増殖を阻害する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、癌関連シグナル伝達分子（例えばAKT及びERK）の活性化を阻害する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、LGALS3によるT細胞アポトーシス誘導を阻害する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、T細胞の免疫抑制を阻害する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、心脈管系疾患を抑え又は治療する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、心不全、冠状動脈心疾患又は心筋梗塞を抑え又は治療する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、肺線維症を抑え又は治療する。
いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、腎疾患を抑え又は治療する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、糸球体腎炎を抑え又は治療する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載する抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントは、腎細胞癌腫を抑え又は治療する。
本明細書で提供されるものはまた、そのような抗体、及びその抗原結合フラグメント、重鎖、又は軽鎖をコードする核酸配列（例えば相補性DNA（cDNA））を含むポリヌクレオチド（例えば単離ポリヌクレオチド）である。さらにまた提供されるものは、そのような抗体、及びその抗原結合フラグメント、重鎖、又は軽鎖をコードする核酸配列（例えば相補性DNA（cDNA））を含むポリヌクレオチド（例えば単離ポリヌクレオチド）を含む、ベクター（例えば発現ベクター）及び細胞（例えば単離細胞又はex vivo細胞）である。提供されるものはまた、そのような抗体、その抗原結合フラグメント、重鎖、軽鎖、ベクター、及び細胞を作製する方法である。他の特徴では、本明細書で提供されるものは、本明細書に記載の症状又は異常を治療又は操作する、例えば癌を治療又は操作するための抗LGALS3抗体のための方法及び使用である。関連する組成物（例えば医薬組成物）、キット、及び診断方法もまた提供される。
本明細書で用いられるように、“LGALS3”、“LGALS3ポリペプチド”、“LGALS3ペプチド”、“Gal-3”、“Gal-3ポリペプチド”、“Gal-3ペプチド”という用語は、ガレクチン-3並びにβ-ガラクトシドと結合するその機能的ホモローグ及びフラグメントを指すために本明細書では互換的に用いられる。GenBankTMアクセッション番号NM_002306.3（配列番号:3）は、例示的なヒトLGALS3核酸配列を提供する。GenBankTMアクセッション番号NP_002297.2（配列番号:4）は、例示的なヒトLGALS3アミノ酸配列を提供する。
抗GALS3抗体
抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えばモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え生成抗体、一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、2つの重鎖及び2つの軽鎖分子を含むテトラマー抗体、抗体軽鎖モノマー、抗体重鎖モノマー、抗体軽鎖ダイマー、抗体重鎖ダイマー、抗体軽鎖-抗体重鎖ペア、イントラボディ、単ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体又は単鎖可変フラグメント（scFV）、ラクダ化抗体、アフィボディ、及びジスルフィド結合Fv（dsFv）又はそのフラグメントを含むことができる。そのような抗体は当業界で公知の方法によって作製することができる。
多重特異性抗体又はそのフラグメントは、異なる構造の少なくとも2つの標的（例えば2つの異なる抗原、同じ抗原上の2つの異なるエピトープ、又は1つのハプテンと1つの抗原若しくはエピトープ）と同時に結合することができる抗体又はそのフラグメントを指す。一方の特異性は、例えばB細胞、T細胞、骨髄系細胞、形質細胞若しくは肥満細胞抗原又はエピトープ、例えばCD3に対するものであり得る。別の特異性は、同じ又は異なる細胞タイプ上の異なる抗原、例えばLGALS3であり得る。多重特異性、多価抗体は2つ以上の結合部位を有する構築物であり、結合部位は異なる特異性を有し（例えば二重特異性ジアボディ）、ここで、1つの結合部位は1つの抗原と反応し他方は別の抗原と反応する。
二重特異性抗体は、異なる構造の2つの標的と同時に結合できる抗体である。二重特異性抗体（bsAb）及び二重特異性抗体フラグメント（bsFab）は、第一の標的（例えばLGALS3）と免疫特異的に結合する少なくとも1つの腕、及び第二の標的（例えばCD3）と免疫特異的に結合する少なくとも1つの他方の腕を有する。多様な二重特異性融合タンパク質を分子操作を用いて生成することができる。ある形態では、二重特異性融合タンパク質は二価であり、例えば（i）1つの抗原のための単一結合部位を有するscFv及び（ii）第二の抗原のための抗体又はFabから成る。別の形態では、二重特異性融合タンパク質は四価であり、例えば1つの抗原のために2つの結合部位を有するIgG及び第二の抗原のために2つの同一scFvから成る。例えば、国際公開WO 2011/1160119を参照されたい（前記は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。
二重特異性モノクローナル抗体を作製する最近の方法は、操作された組換えモノクローナル抗体の使用を含む。前記モノクローナル抗体は、追加のシステイン残基を有し、したがってそれらはより通常的な免疫グロブリンアイソタイプよりも強力に架橋結合することができる。例えば以下を参照されたい: FitzGerald et al., Protein Eng. 10(10): 1221-1225, 1997。別のアプローチは、組換え融合タンパク質を操作し、必要とされる二重特異性を有する2つ以上の異なる単鎖抗体又は抗体フラグメントの断片を連結することである。例えば以下を参照されたい：Coloma et al., Nature Biotech. 15: 159-163, 1997。分子操作を用いて、多様な二重特異性融合タンパク質を作製することができる。
2つ以上の異なる単鎖抗体又は抗体フラグメントを連結した二重特異性融合タンパク質を同様な態様で作製することができる。組換え方法を用いて、多様な融合タンパク質を作製できる。ある種の特徴では、可撓性リンカーが、モノクローナル抗体（例えば本明細書に記載する抗LGALS3抗体）の軽鎖の定常領域にscFv（例えばCD3を標的とするscFv）を接続する。重鎖FcとscFvとのインフレーム接続に必要な適切なリンカー配列を、PCR反応を介してVL及びVカッパドメインに導入する。続いて、CH1ドメインをコードするDNA配列を含むステージングベクターに、scFvをコードするDNAフラグメントを結合する。得られた構築物を切り出し、抗体（例えば抗LGALS3抗体）のVH領域をコードするDNA配列を含むベクターに結合する。得られたベクターを用いて適切な宿主細胞（例えば哺乳動物細胞）をトランスフェクトし、二重特異性融合タンパク質を発現させる。
ある種の実施態様では、さらに本明細書に記載の抗LGALS3抗体及びその抗原結合フラグメントを用いて、機能的な二重特異性単鎖抗体（bscAb）（ジアボディとも呼ばれる）を調製し、組換え方法により哺乳動物細胞で生成することができる。例えば以下を参照されたい：Mack et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 92: 7021-7025, 1995（前記は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。例えば、bscAbは、グリシン-セリンリンカーを介し2つの単鎖Fvフラグメントを組換え方法を用いて結合させることによって生成することができる。問題の2つの抗体のVL及びVHドメインは、当業界で公知の標準的なPCR方法を用いて単離される。二重特異性単鎖抗体及び二重特異性融合タンパク質は本発明の範囲内に含まれる。
ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗GALS3抗体又はその抗原結合フラグメンはscFvを指す。scFvは業界認識用語である。scFvは、免疫グロブリンの重（H）鎖及び軽（L）鎖の可変領域の融合タンパク質を含み、ここで、融合タンパク質は全免疫グロブリンと同じ抗原特異性を保持する。VHはペプチドリンカーを介してVLに融合される。ある種の実施態様では、ペプチドリンカーは、長さが5から25、5から15、10から20、10から15、又は15から25のアミノ酸残基である。ある種の実施態様では、scFvペプチドリンカーは、当業者に公知のペプチドリンカーに適切な1つ以上の特徴を示す。ある種の実施態様では、scFvペプチドリンカーは、scFvペプチドリンカーを可溶性にさせるアミノ酸、例えばセリン及びスレオニンを含む。ある種の実施態様では、scFvペプチドリンカーは、scFvペプチドリンカーを可撓性にさせるアミノ酸、例えばグリシンを含む。ある種の実施態様では、scFvペプチドリンカーはVHのN-末端をVLのC-末端に接続する。ある種の実施態様では、scFvペプチドリンカーはVHのC-末端をVLのN-末端に接続することができる。
ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗GALS3抗体又はその抗原結合フラグメンはキメラ抗原受容体（CAR）を指す。CARは業界認識用語である。CARは腫瘍関連抗原（例えばLGALS3）を標的とすることができる。本明細書で提供されるCARはLGALS3グリコシル化から誘導されるscFvで構成される。
いくつかの実施態様では、抗体、トランスメンブレンドメインは、T細胞共同刺激性分子由来トランスメンブレンドメイン（例えば、CD28、CD8、CD38、OX-40、又は4-IBB由来トランスメンブレンドメイン）、及び一次シグナル伝達ドメイン（例えばT細胞受容体（TCR）ゼータ（ζ）鎖細胞質シグナル伝達ドメイン）である。いくつかの実施態様では、CARはさらにまた、1つ以上の追加の領域又はドメイン、例えば1つ以上のスペーサー又はリンカー（細胞外スペーサーを含む）を含む。それらは、例えば抗体又は他の細胞表面分子に由来するものであり、例えば抗体CH2、CH3、及び/又はヒンジ領域の1つ以上を含むスペーサー、又はCD28分子若しくはCD8分子に由来するスペーサー、又は他のスペーサーである。本明細書で提供されるものはまた細胞、例えばそのようなCARを発現するように操作されたT細胞、例えばそのようなCARを組換え発現する細胞である。CAR発現T細胞は、LGALS3発現腫瘍の認識時に、好ましくはT細胞活性化、増殖、及び/又はそのような腫瘍の細胞の溶解を誘発する。
抗LGALS3抗体は、免疫グロブリンの任意のタイプ（例えばIgG、IgE、IgM、IgD、IgA又はIgY）、任意のクラス（例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1又はIgA2）、又は任意のサブクラス（例えばIgG2a又はIgG2b）であり得る。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG抗体又は前記のクラス若しくはサブクラスである。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG1抗体である。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG2抗体である。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG2a抗体である。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG2b抗体である。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG3抗体である。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG4抗体である。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体は、複数の抗体タイプの混合物又は複数のサブクラスの混合物である。ある種の実施態様では、本明細書に記載の抗体はIgG2a及びIgG2b抗体の混合物である。ある種の実施態様では、抗体はげっ歯類モノクローナル抗体のヒト化型である。
抗LGALS3抗体の抗原結合フラグメントは、Fabフラグメント、F(ab’)2フラグメント、又は抗LGALS3抗体の部分であり、前記部分は、抗原に対するその特異性を抗LGALS3抗体に付与するアミノ酸残基を含む（例えば相補性決定領域（CDR））。抗LGALS3抗体は、任意の動物種、例えばげっ歯類（例えばマウス、ラット又はハムスター）から誘導することができる。
本明細書で用いられるように、“可変領域”又は“可変ドメイン”という用語は互換的に用いられ、当業界では一般的である。可変領域は典型的には、抗体の一部分、概ね軽鎖又は重鎖部分、典型的には成熟重鎖のアミノ末端約110－120アミノ酸及び成熟軽鎖のアミノ末端約90から100アミノ酸を指し、前記部分は抗体間で配列が広範囲にわたって異なり、その該当する抗原に対し該当する抗体の結合及び特異性で用いられる。配列の可変性は相補性決定領域（CDR）と呼ばれる領域に集中し、一方、可変ドメインでより高度に保存される領域はフレームワーク領域（FR）と呼ばれる。CDRはFRとフランキングする。一般的には、CDRとFRの空間的な向きは、N-末端からC-末端方向にFR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4である。特定のメカニズム又は理論に拘束されないが、軽鎖及び重鎖のCDRは、本質的に抗体と抗原との相互作用及び特異性に必要である。ある種の実施態様では、可変領域は、げっ歯類（例えばマウス又はラット）の可変領域である。ある種の実施態様では、可変領域はヒト可変領域である。ある種の実施態様では、可変領域は、げっ歯類（例えばマウス又はラット）CDR及びヒトフレームワーク領域（FR）を含む。個別の実施態様では、可変領域は霊長類動物（例えば非ヒト霊長類動物）の可変領域である。ある種の実施態様では、可変領域は、げっ歯類又はネズミのCDR及び霊長類動物（例えば非ヒト霊長類動物）のフレームワーク領域（FR）を含む。
CDRは当業界では多様な方法で境界が決定される。前記方法には、Kabat、Chothia、及びIMGT、並びに例示的境界決定が含まれる。Kabat境界決定は配列可変性に基づく（Kabat, Elvin A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. Bethesda: National Institutes of Health, 1983）。Kabatの番号付与系では、（i）VH CDR1は典型的には重鎖のアミノ酸31から35位に存在し（場合によってアミノ酸35位の後に1つ又は2つの追加アミノ酸（Kabatの番号付与案では35A及び35Bと称される）を含むことができる）；（ii）VH CDR2は典型的には重鎖のアミノ酸50から65位に存在し；（iii）VH CDR2は典型的には重鎖のアミノ酸95から102位に存在する（Kabat, Elvin A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. Bethesda: National Institutes of Health, 1983）。Kabatの番号付与系では、（i）VL CDR1は軽鎖のアミノ酸24から34位に存在し；（ii）VL CDR2は典型的には軽鎖のアミノ酸50から56位に存在し；（iii）VL CDR3は典型的には軽鎖のアミノ酸89から97位に存在する（Kabat, Elvin A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. Bethesda: National Institutes of Health, 1983）。当業者には周知であるが、Kabatの番号付与系を用いたとき、抗体の可変ドメインの実際の線状アミノ酸配列は、FR及び/又はCDRの短縮又は伸長のためにより少ないアミノ酸又は追加アミノ酸を含むことがあり、したがってアミノ酸のKabat番号はその線状アミノ酸番号と必ずしも同じではない。
Chothiaの境界決定は構造ループ領域の位置に基づく（Chothia et al. (1987) J Mol Biol 196: 901-917; and U.S. Patent No. 7,709,226）。“ChothiaのCDR”という用語及び同様な用語は当業界では認識され、ChothiaとLesk（Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917）の方法にしたがって決定される抗体CDR配列を指し、本明細書では“ChothiaのCDR”と称されるであろう（例えば以下もまた参照されたい：U.S. Patent No. 7,709,226 and Martin, A., "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and Diibel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer- Verlag, Berlin, 2001）。Chothia番号付与系では、VH領域のアミノ酸残基の番号付けに関してKsbat番号付与系を用いたとき、（i）VH CDR1は典型的には重鎖のアミノ酸26から32位に存在し；（ii）VH CDR2は典型的には重鎖のアミノ酸53から55位に存在し；（iii）VH CDR3は典型的には重鎖のアミノ酸96から101位に存在する。具体的な実施態様では、Chothia番号付与系でVH領域のアミノ酸残基の番号付けに関してKsbat番号付与系を用いたとき、（i）VH CDR1は典型的には重鎖のアミノ酸26から32又は34位に存在し；（ii）VH CDR2は典型的には重鎖のアミノ酸52から56位に存在し（ある実施態様では、CDR2は52A－56位に存在し、ここで52Aは52位に続く）；（iii）VH CDR3は典型的には重鎖のアミノ酸95から102位に存在する（ある実施態様では、96－100と番号を付与される位置にアミノ酸は存在しない）。Chothia番号付与系では、VL領域のアミノ酸残基の番号付けに関してKsbat番号付与系を用いたとき、（i）VL CDR1は典型的には軽鎖のアミノ酸26から33位に存在し；（ii）VL CDR2は典型的には軽鎖のアミノ酸50から52位に存在し；（iii）VL CDR3は典型的には軽鎖のアミノ酸91から96位に存在する。具体的な実施態様では、Chothia番号付与系でVL領域のアミノ酸残基の番号付けに関してKsbat番号付与系を用いたとき、（i）VL CDR1は典型的には軽鎖のアミノ酸24から34位に存在し；（ii）VL CDR2は典型的には軽鎖のアミノ酸50から56位に存在し；（iii）VL CDR3は典型的には軽鎖のアミノ酸89から97位に存在する（ある実施態様では、96－100と番号を付与される位置にアミノ酸は存在しない）。これらのChothia CDRの配置は抗体に応じて変動することがあり、当業界で公知の方法にしたがって決定できる。
IMGT境界決定はEVIGTに由来する（IMGT(商標)；the international ImMunoGeneTics information system(商標) website imgt.org（設立者及びディレクター；Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France）（例えば以下を参照されたい：Lefranc, M.-P., 1999, The Immunologist, 7: 132-136；及びLefranc, M.-P. et al., 1999, Nucleic Acids Res., 27:209-212；（両文献は、参照によってその全体が本明細書に含まれる））。IMGT番号付与系では、（i）VH CDR1は典型的には重鎖のアミノ酸25から35位に存在し；（ii）VH CDR2は典型的には重鎖のアミノ酸51から57位に存在し；（iii）VH CDR3は典型的には重鎖のアミノ酸93から102位に存在する。IMGT番号付与系では、（i）VL CDR1は典型的には軽鎖のアミノ酸27から32位に存在し；（ii）VL CDR2は典型的には軽鎖のアミノ酸50から52位に存在し；（iii）VL CDR3は典型的には軽鎖のアミノ酸89から97位に存在する。
LGALS3抗体の配列及び構造
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、前記は、本明細書に提供する抗LGALS3抗体のいずれかの、例えば図12a、12b及び13A－Oに示すVH CDRを含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12aに示す抗LGALS3抗体のVH CDR1を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12aに示す抗LGALS3抗体のVH CDR2を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12aに示す抗LGALS3抗体のVH CDR3を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12aの表に示す抗LGALS3抗体のVH CDRの1つ、2つ又は3つ全てを含む。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、前記は、本明細書提供の抗LGALS3抗体のいずれかの、例えば図12及び13に示すVL CDRを含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12bに示す抗LGALS3抗体のVL CDR1を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12bに示す抗LGALS3抗体のVL CDR2を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12bに示す抗LGALS3抗体のVL CDR3を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図12bに示す抗LGALS3抗体のVL CDRの1つ、2つ又は3つ全てを含む。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、前記は、本明細書提供の抗LGALS3抗体のいずれかの、例えば図13A－Cに示すVH CDRを含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cに示す抗LGALS3抗体のVH CDR1を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cに示す抗LGALS3抗体のVH CDR2を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cに示す抗LGALS3抗体のVH CDR3を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cに示す抗LGALS3抗体のVH CDRの1つ、2つ又は3つ全てを含む。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、本明細書提供の抗LGALS3抗体のいずれかの、例えば図13A－Cに示すVL CDRを含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cに示す抗LGALS3抗体のVH CDR1を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cに示す抗LGALS3抗体のVH CDR2を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cに示す抗LGALS3抗体のVH CDR3を含む。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13A－Cの抗LGALS3抗体のVL CDRの1つ、2つ又は3つ全てを含む。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはVHを含み、前記VHは、（a）アミノ酸配列SYGVH（配列番号:5）を含むVH CDR1；（b）アミノ酸配列VIWSDGSTTYNSTLKS（配列番号:6）を含むVH CDR2；（c）アミノ酸配列HISNYGTMDY（配列番号:7）を含むVH CDR3を含む。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはVHを含み、前記VHは、配列番号:11又は17のアミノ酸配列を含むVH CDR1、配列番号:12又は18のアミノ酸配列を含むVH CDR2、及び配列番号:13又は19のアミノ酸配列を含むVH CDR3を含む。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはVLを含み、前記VLは、（a）アミノ酸配列RASQDIRNYLN（配列番号:8）を含むVL CDR1；（b）アミノ酸配列YTSRLHS（配列番号:9）を含むVL CDR2；（c）アミノ酸配列QHFNTLPPT（配列番号:10）を含むVL CDR3を含む。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはVLを含み、前記VLは、配列番号:14又は120のアミノ酸配列を含むVL CDR1、配列番号:15又は21のアミノ酸配列を含むVL CDR2、及び配列番号:16又は22のアミノ酸配列を含むVL CDR3を含む。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは以下を含む：（i）（a）アミノ酸配列SYGVH（配列番号:5）を含むVH CDR1、（b）アミノ酸配列VIWSDGSTTYNSTLKS（配列番号:6）を含むVH CDR2、及び（c）アミノ酸配列HISNYGTMDY（配列番号:7）を含むVH CDR3を含むVH；並びに（ii）（a）アミノ酸配列RASQDIRNYLN（配列番号:8）を含むVL CDR1、（b）アミノ酸配列YTSRLHS（配列番号:9）を含むVL CDR2、及び（c）アミノ酸配列QHFNTLPPT（配列番号:10）を含むVL CDR3を含むVL。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはVH領域を含み、前記VH領域は、QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTISGFSLSSYGVHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGSTTYNSTLKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAMYYCARHISNYGTMDYWGQGTSVTVS（配列番号:24）を含む。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはVL領域を含み、前記VL領域は、DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGSIKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTIRNLEQEDIATYFCQHFNTLPPTFGGGTKLEIK（配列番号:26）を含む。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13D－Oのいずれかに示す重鎖を含むVH領域を含む。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、図13D－Oのいずれかに示す軽鎖を含むVL領域を含む。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、そのVHドメインだけで、又はそのVLドメインだけで、又はその3つのVH CDRだけで、又はその3つのVL CDRだけで表すことができる。例えば、Raderらの論文（Rader C et al. (1998) PNAS 95: 8910-8915）を参照されたい（前記文献は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。前記論文は、補完性軽鎖又は重鎖をヒト軽鎖又は重鎖ライブラリーからそれぞれ識別し、本来の抗体と同じ親和性又は高い親和性を有するヒト化抗体変種を得ることによるマウス抗avP3抗体のヒト化を記載する。さらにClacksonらの論文（Clackson T et al., (1991) Nature 352: 624-628）もまた参照されたい（前記文献は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。前記論文は、特異的VHドメイン（又はVLドメイン）を用い、相補性可変ドメインについてライブラリーをスクリーニングすることによって、特異的抗原と結合する抗体を生成する方法を記載する。さらにKimとHongの論文（Kim and Hong (2007) J Microbiol 45: 572-577）もまた参照されたい（前記文献は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。前記論文は、特異的VHドメインを用い、相補性VLドメインについてライブラリー（例えばヒトVLライブラリー）をスクリーニングし、続いて選別VLドメインを用い、追加の相補性（例えばヒト）VHドメインの選別をガイドさせることによって、特異的抗原と結合する抗体を生成する方法を記載する。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト化抗体、例えばげっ歯類抗体のヒト化型であり得る。ヒト化抗体は、当業界で公知の多様な技術を用いて作製することができる。前記技術には以下が含まれる（ただしそれらに限定されない）：CDR移植（欧州特許EP 239,400；国際公開WO 91/09967；及び米国特許5,225,539号、5,530, 101号及び5,585,089号）、鎖のシャッフリング（米国特許5,565,332号）、上張り又は表面再構成（欧州特許EP 592,106及びEP 519,596；Padlan (1991) Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka et al. (1994) Protein Engineering 7(6):805-814；及びRoguska et al. (1994) PNAS 91:969-973）、及び以下に開示の技術（U.S. Pat. No. 6,407,213、U.S. Pat. No. 5,766,886、WO 9317105；Sandhu (1994) Gene 150(2):409-10；Pedersen et al. (1994) J. Mol. Biol. 235(3):959-73；Couto et al. (1995) Cancer Res. 55(8): 1717-22；Roguska et al. (1996) Protein Eng. 9(10):895 904；Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(16): 10678-84；Couto et al. (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s- 5977s, Caldas et al. (2000) Protein Eng. 13(5):353-60；Morea et al. (2000) Methods 20(3):267-79；及びTan et al. (2002) J. Immunol. 169: 1119-25）。さらに米国特許公開US 2005/0042664 Al（2005年2月24日）もまた参照されたい（その各々は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは合成ヒト抗体である。合成ヒト抗体は、例えば、複数のヒト抗体可変領域配列のフラグメントからT細胞エピトープを回避する態様で可変領域配列を設計し、それによって生成抗体の免疫原性を最小にすることによって作製することができる（例えば以下を参照されたい：Baker et al. (2010) Self Nonself l (4):314-322；Bryson et al. (2010) BioDrugs 24(l): l-8；及びJones et al. (2009) Methods Mol Biol. 525:405-23）。そのような抗体は、ヒト定常領域配列（例えばヒト軽鎖及び/又は重鎖定常定常領域）を含むことができる。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは脱免疫化抗体であり得る。脱免疫化抗体は、T細胞エピトープが除去されてある抗体である。脱免疫化抗体を作製する方法は記載されている。例えば以下を参照されたい：Jones et al. Methods Mol Biol. 2009;525:405-23, xiv；及びDe Groot et al. (2006) Cell. Immunol. 244: 148-153。
具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはヒト化免疫グロブリンであり、図12及び13の抗体のいずれかの3つのVH CDR及び3つのVL CDR（すなわちVH CDRl、VH CDR2、VH CDR3、VL CDRl、VL CDR2、及びVL CDR3）、ヒト由来フレームワーク領域、並びにヒト由来定常領域を含む。ヒトフレームワーク領域の非限定的な例は当業界では記載されてある。例えば以下を参照されたい：Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242。ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、フレームワーク領域（例えばVLドメイン及び/又はVHドメインのフレームワーク領域）を含み、前記フレームワーク領域はヒトフレームワーク領域であるか、又はヒトフレームワーク領域に由来する。ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、フレームワーク領域（例えばVLドメイン及び/又はVHドメインのフレームワーク領域）を含み、前記フレームワーク領域は、霊長類動物（例えば非ヒト霊長類動物）のフレームワーク領域であるか、又は霊長類動物（例えば非ヒト霊長類動物）フレームワーク領域に由来する。例えば、抗原特異的非ヒト抗体、典型的にはげっ歯類起原（例えばマウス又はラット）のCDRが、相同なヒト又は非ヒト霊長類動物（例えば旧世界類人猿、例えばチンパンジー（パン・トログロダイテス（Pan troglodytes））、ボノボ（パン・パニスクス（Pan paniscus））又はゴリラ（Gorilla）、旧世界サル、例えばマカク（Macaca）属、又はカニクイザル（マカカ・シノモルガス（Macaca cynomolgus）））に移植される。非ヒト霊長類動物フレームワーク領域配列は、米国特許出願公開US 2005/0208625に記載されている。
具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントのVH領域におけるVH CDR1、VH CDR2及び/又はVH CDR3の位置、及び/又はVL領域におけるVL CDR1、VL CDR2及び/又はVL CDR3の位置は、1、2、3、4、5、6アミノ酸、又は6アミノ酸を超える位置だけ変動し得るが、ただしLGALS3又は炭水化物結合ドメインを含むその部分との免疫特異的結合が（例えば少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％）維持される場合に限られる。
別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントのVH領域におけるVH CDR1、VH CDR2及び/又はVH CDR3の長さ、及び/又はVL領域におけるVL CDR1、VL CDR2及び/又はVL CDR3の長さは、1、2、3、4、5、6アミノ酸、又は6アミノ酸を超えて変動し得る（例えばより短いか又はより長い）が、ただしLGALS3又は炭水化物結合ドメインを含むその部分との免疫特異的結合が（例えば、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％）維持される場合に限られる。
別の実施態様では、本明細書記載のVH CDRl、VH CDR2、VH CDR3、VL CDRl、VL CDR2、及び/又はVL CDR3のアミノ末端及び/又はカルボキシ末端は、本明細書記載のCDRの1つ以上と比較して1、2、3、4、5、6アミノ酸、又は6アミノ酸を超えて伸長又は短縮されるが、ただしLGALS3又は炭水化物結合ドメインを含むその部分との免疫特異的結合が（例えば少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％）維持される場合に限られる。
当業界で公知の任意の方法、例えばELISA結合アッセイ、SPR分析、又はFACS分析を用いて、LGALS3との免疫特異的結合が維持されているか否かを確認することができる。
具体的な特徴では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、前記は、抗体重鎖及び/又は軽鎖、例えば重鎖だけ、軽鎖だけ、又は重鎖及び軽鎖の両方を含む。
いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖を含み、ここで、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、図12又は13に列挙された抗体のいずれか1つのVH CDR1、VH CDR2、及びVH CDR3を含み、さらに重鎖の定常領域はヒト重鎖定常領域である。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖を含み、ここで、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号:5、配列番号:6、及び配列番号:7のアミノ酸配列をそれぞれ有するVH CDR1、VH CDR2、及びVH CDR3を含み、さらに重鎖の定常領域はヒト重鎖定常領域である。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖を含み、ここで、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は配列番号:24のアミノ酸配列を含み、さらに重鎖の定常領域はヒト重鎖定常領域である。ヒト定常領域配列の非限定的な例は当業界では記載されてあり、例えば上掲書（Kabat EA et al., 1991）を参照されたい。
いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖であり得る。別の具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含むことができる。いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖を含み、ここで、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、図12又は13に列挙された抗体のいずれか1つのVH CDR1、VH CDR2、及びVH CDR3を含み、ここで、重鎖の定常領域は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖である。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖を含み、ここで、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号:5、配列番号:6、及び配列番号:7のアミノ酸配列をそれぞれ有するVH CDR1、VH CDR2、及びVH CDR3を含み、重鎖の定常領域は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖である。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは重鎖を含み、ここで、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は配列番号:24のアミノ酸配列を含み、さらに重鎖の定常領域はヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖である。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは軽鎖を含み、ここで、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、図12又は13に列挙された抗体のいずれか1つのVL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含み、さらに軽鎖の定常領域はヒト軽鎖定常領域である。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは軽鎖を含み、ここで、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体配列番号:8、配列番号:8、及び配列番号:10のアミノ酸配列をそれぞれ有するVL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含み、さらに軽鎖の定常領域はヒト軽鎖定常領域である。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは軽鎖を含み、ここで、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は配列番号:26のアミノ酸配列を含み、さらに軽鎖の定常領域はヒト軽鎖定常領域である。
いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖はカッパ軽鎖である。別の具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖はラムダ軽鎖である。さらに別の具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖はヒトカッパ軽鎖又はヒトラムダ軽鎖である。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは軽鎖を含み、ここで、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、図12又は13に列挙された抗体のいずれか1つのVL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含み、さらに軽鎖の定常領域はカッパ（κ）又はラムダ（λ）軽鎖定常領域である。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは軽鎖を含み、ここで、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体配列番号:8、配列番号:9、及び配列番号:10のアミノ酸配列をそれぞれ有するVL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含み、さらに軽鎖の定常領域はカッパ又はラムダ軽鎖定常領域である。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは軽鎖を含み、ここで、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は配列番号:26のアミノ酸配列を含み、さらに軽鎖の定常領域はカッパ又はラムダ軽鎖定常領域である。
具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の重鎖可変領域（VH）及び軽鎖可変領域（VL）を含み、ここで、定常領域は、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA若しくはIgY免疫グロブリン分子、又はヒトIgG、IgE、IgM、IgD、IgA若しくはIgY免疫グロブリン分子で見出されるタイプである。別の具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の任意のアミノ酸配列を含むVH及びVLを含み、ここで、定常領域は、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA若しくはIgY免疫グロブリン分子で見出されるタイプ、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2）、又は任意のサブクラス（例えばIgG2a及びIgG2b）である。個別の実施態様では、定常領域は、ヒトIgG、IgE、IgM、IgD、IgA若しくはIgY免疫グロブリン分子で見出されるタイプ、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2）、又は任意のサブクラス（例えばIgG2a及びIgG2）である。
ある種の実施態様では、抗体のエピトープは、例えばNMR分光法、X線回折結晶学試験、ELISAアッセイ、質量分析（例えばMALDI質量分析）と連結させた水素/重水素交換、アレー系オリゴペプチドスキャンニングアッセイ、及び/又は変異誘導マッピング（例えば位置特異的変異誘導マッピング）によって決定できる。X線結晶学のためには、結晶化は当業界で公知の方法のいずれかを用いて達成できる（例えば、Giege R et al. (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350；McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1- 23；Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300- 6303）。抗体：抗原結晶は、周知のX線回折技術によって試験でき、さらにコンピュータソフトウェア、例えばX-PLOR（Yale University, 1992（業者（Molecular Simulations, Inc.）によって配布される）；例えば以下を参照されたい：Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.：米国特許公開2004/0014194）、及びBUSTER（Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60；Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW；Roversi P et al. (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323）によって改良することができる。変異誘導マッピング試験は、当業者に公知の任意の方法を用いて達成することができる。変異誘導技術（アラニンスキャン変異誘導技術を含む）の説明については、例えば以下を参照されたい：Champe M et al., 1995；及びCunningham BC & Wells JA, 1989。加えて、同じエピトープ又はオーバーラップエピトープを認識して結合する抗体は、例えば免疫アッセイのような日常的技術を用い、例えば別の抗体と標的抗原との結合を阻止する1つの抗体の能力を示すことによって（すなわち競合結合アッセイ）識別することができる。競合結合アッセイはまた、2つの抗体があるエピトープに対して同様な結合特異性を有するか否かの決定に用いることができる。競合結合は、被検免疫グロブリンが参照抗体と共通抗原との免疫特異的結合を阻害するアッセイで決定することができる。競合結合アッセイの多様なタイプが知られている（例えば、固相直接又は間接放射性免疫アッセイ（RIA）、固相直接又は間接酵素免疫アッセイ（EIA）、サンドイッチ競合アッセイ（Stahli C et al. (1983) Methods Enzymol 9: 242-253）、固相直接ビオチン-アビジンEIA（Kirkland TN et al. (1986) J Immunol 137: 3614-9）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow E & Lane D, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press）、I-125標識を使用する固相直接標識RIA（Morel GA et al. (1988) Mol Immunol 25(1): 7-15）、固相直接ビオチン-アビジンEIA（heung RC et al. (1990) Virology 176: 546-52）、及び直接標識RIA（Moldenhauer G et al. (1990) Scand J Immunol 32: 77-82））。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原、又は非標識試験免疫グロブリン及び標識参照免疫グロブリンのどちらかを保持する細胞の使用を含む。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面又は細胞と結合した標識の量を決定することによって測定できる。通常では試験免疫グロブリンが過剰に存在する。競合抗体が過剰に存在するときには、通常、競合抗体は、参照抗体と共通抗原との免疫特異的結合を少なくとも50－55％、55－60％、60－65％、65－70％、70－75％又は前記を超えて阻害するであろう。競合結合アッセイは、多数の異なる様式で、標識抗原又は標識抗体のどちらかを使用して構成できる。このアッセイの一般的バージョンでは、抗原は96ウェルプレートに固定される。続いて、標識抗体と抗原との結合を阻止する非標識抗体の能力が、放射能標識又は酵素標識を用いて測定される。更なる詳細については、例えば以下を参照されたい：Wagener C et al. (1983) J Immunol 130: 2308-2315；Wagener C et al. (1984) J Immunol Methods 68: 269-274；Kuroki M et al. (1990) Cancer Res 50: 4872-4879；Kuroki M et al. (1992) Immunol Invest 21: 523-538；Kuroki M et al. (1992) Hybridoma 11: 391-407；及びAntibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow E & Lane D editors（上掲書、386-389）。
ある種の特徴では、競合結合アッセイを用いて、ある抗体が、例えば用量依存態様で別の抗体によって競合的に阻止されるか否かを決定することができる。例えば、2つの抗体が競合結合アッセイ（例えばELISAアッセイ）で同一又は立体的にオーバーラップするエピトープを認識するとき、抗体は、参照抗体と同じエピトープ又はオーバーラップするエピトープと本質的に結合する。当該アッセイは、種々の様式のいずれでも標識抗原又は標識抗体のどちらかを用いて構成することができる。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば14D11の可変領域を含むネズミIgG抗体）を用いて、抗体を競合結合アッセイで試験することができる。
別の特徴では、本明細書で提供されるものは、当業者に公知の又は本明細書記載のアッセイ（例えばELISA）を用いて決定したとき、LGALS3と本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば14D11の可変領域を含むネズミIgG抗体）との結合について（例えば用量依存態様で）競合する抗体である。別の特徴では、本明細書で提供されるものは、当業者に公知の又は本明細書記載のアッセイ（例えばELISA）を用いて決定したとき、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば14D11の可変領域を含むネズミIgG抗体）をLGALS3との結合に対して（例えば用量依存態様で）競合的に阻害する抗体である。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、本明細書記載の抗GALS3抗体又はその抗原結合フラグメントがLGALS3との結合について自家競合する程度と同じ程度で、結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗体である。ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、LGALS3との結合について本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する第一の抗体であり、ここで、当該競合は、80％を超える（例えば85％、90％、95％、若しくは98％、又は80％から85％、80％から90％、85％から90％、若しくは85％から95％）、第一の抗体とエピトープとの結合低下として示される。具体的な特徴では、本明細書で提供されるものは抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、それらは、LGALS3との免疫特異的結合について、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（図12又は13に記載のアミノ酸配列を含むVH CDR1、VH CDR2及び/又はVH CDR3を含むVH、及び/又は図12又は13に記載のアミノ酸配列を含むVL CDR1、VL CDR2及び/又はVL CDR3を含むVLを含む）と（例えば用量依存態様で）競合する。具体的な特徴では、本明細書で提供されるものは抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、前記は、LGALS3との免疫特異的結合について、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（図12aに記載のアミノ酸配列を有するVHドメイン及び/又は図12bに記載のVLを含む）と（例えば用量依存態様で）競合する。
具体的な特徴では、本明細書で提供されるものは抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、それらは、抗体（図12又は13に記載のアミノ酸配列を含むVH CDR1、VH CDR2及び/又はVH CDR3を含むVH、及び/又は図12又は13に記載のアミノ酸配列を含むVL CDR1、VL CDR2及び/又はVL CDR3を含むVLを含む抗体）と同じエピトープ又はオーバーラップするエピトープと結合する。具体的な特徴では、本明細書で提供されるものは抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントであり、それらは、抗体（図12aに記載のアミノ酸配列を有するVHドメイン及び/又は図12bに記載のVLを含む抗体）と同じエピトープ又はオーバーラップするエピトープと結合する。
当業者に公知の又は本明細書記載のアッセイ（例えばX線結晶学、ELISAアッセイ、表面プラズモン共鳴（SPR）アッセイ）を用いて、2つの抗体が同じエピトープに結合するか否かを決定することができる。親和性は、当業界で公知の多数の方法で測定又は表すことができる。それらには、平衡解離定数（KD）及び平衡結合定数（KA）が含まれるが、ただしそれらに限定されない。KDは、当業者に公知の技術、例えばバイオレイヤー干渉測定法によって決定することができる。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントが結合するエピトープを免疫原として用いて、抗体を生成することができる。いくつかの実施態様では、前記はLGALS3の炭水化物結合ドメインの全部又は部分を含む。
抗LGALS3抗体の機能的特徴
本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、約0.5ｘl0-3/s、lｘl0-3/s、1.5ｘl0-3/s、2ｘl0-3/s、2.5ｘl0-3/s、3ｘl0-3/s、4ｘl0-3/s、5ｘl0-3/s、6ｘl0-3/s、7ｘl0-3/s、8ｘl0-3/s、9ｘl0-3/s、lｘl0-4/s、2ｘl0-4/s、3ｘl0-4/s、4xl0-4/s、5ｘl0-4/s、6ｘl0-4/s、7ｘl0-4/s、若しくは8ｘl0-4/s又は前記未満のkdでLGALS3と結合する。いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、約0.5ｘl0-3/sから8ｘl0-4/sのkdでLGALS3と結合する。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、少なくとも、又は約2.5ｘl04/s、3ｘl04/s、3.5ｘl04/s、5ｘl04/s、5.5ｘl04/s、6ｘl04/s、6.5ｘl04/s、7ｘl04/s、7.5ｘl04/s、8ｘl04/s、9ｘl04/s、若しくは9.5ｘl04/sのkaでLGALS3と結合する。ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、少なくとも又は約2.5ｘl04/sから9ｘl05/sのkaでLGALS3と結合する。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、約1000nM、500nM、100nM、50nM、25nM、20nM、15nM、10nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.1nM、若しくは0.05nM又は前記未満のKDでLGALS3と結合する。いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、約10nMから約1000nMのKDでLGALS3と結合する。いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、約100nMから約1000nMのKDでLGALS3と結合する。いくつかの実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、約500nMから約1000nMのKDでLGALS3と結合する。
ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、アイソタイプコントロールよりも少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、250、500、又は1000倍多くLGALS3と結合する。アイソタイプコントロール抗体は業界認識用語であり、前記は、標的に対する特異性を欠くが一次抗体（例えば本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント）のクラス及びタイプと一致する。アイソタイプコントロールは陰性コントロールとして用いられ、非特異的バックグラウンドシグナルを特異的抗体シグナルから弁別するために役立つ。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、天然のリガンド結合よりも100－1,000倍増加する親和性でLGALS3と結合する。
抗LGALS3抗体又は抗原結合フラグメント媒介マトリゲル侵襲阻害を決定するアッセイは、当業者には公知である。例えば、BDバイオコートマトリゲル侵襲挿入片（BD BioCoatTM MatrigelTM Invasion Inserts）又は侵襲チャンバー（カタログ# 354480（24ウェルプレート中に存在））及びコントロール挿入片（カタログ# 354578（24ウェルプレート中に存在））はBDバイオサイエンス社（BD Biosciences, MA）から購入することができる。マトリゲル侵襲アッセイは製造業者のプロトコルにしたがって実施できる。簡単に記せば、24ウェルプレートのマトリゲルチャンバー（-20℃で保存）及びコントロール挿入片（4℃で保存）を室温に戻す。0.5mLの無血清培養液を用いて、両挿入片を挿入片内だけでなく24ウェルプレートのウェル外側も併せて37℃の5％CO2湿潤インキュベータで2時間再水和させる。培養SKOV3細胞をトリプシン処理し、培養液で洗浄する。百万の細胞を別の遠心分離チューブで分離し、無血清培養液で3回洗浄する。これらの細胞を後で調整して0.5mLの無血清培養液中の5000細胞にする。再水和挿入片の培養液を除去し、10％ウシ胎児血清（FBS）含有培養液の0.75mLを含む新しい24ウェルプレートに挿入片を移す（挿入片は化学誘引物質として機能する）。直ちに、0.5mLの無血清培養液中の細胞（5000細胞）を挿入片に添加する。適当な注意を払い、気泡が挿入片内及びウェル外側に閉じ込められないように観察する。24ウェルプレートを37℃の5％CO2湿潤インキュベータで48時間インキュベートする。インキュベーション後に、マトリゲル挿入片又はコントロール挿入片にコットンチップ綿棒を挿入し、膜表面上で綿棒の先端を移動させながら穏やかに圧して“擦過する”ことによって、膜の上部表面から非侵襲細胞を除去する。培養液で湿らした第二の綿棒で擦過を繰返す。続いて、蒸留水中の0.5％クリスタルバイオレット染料の0.5mLを含む新しい24ウェルプレートで挿入片を30分間染色する。染色に続いて、蒸留水の入った3つのビーカーで挿入片を水洗して過剰の染料を除去する。挿入片を新しい24ウェルプレートで風乾する。200xの倍率の倒立顕微鏡下で侵襲細胞を手動計測する。3つずつの膜の数視野を数えて図に記録する。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、マウスモデル試験で転移を阻害又は減少させるか、腫瘍増殖を阻害するか、又は腫瘍退縮を誘発することができる。例えば、腫瘍細胞株を無胸腺ヌードマウスに導入し、この無胸腺マウスに本明細書記載の抗LGALS3抗体を1回以上投与し、注射腫瘍細胞の腫瘍退縮を数週間及び/又は数ヶ月の期間監視することができる。いくつかの事例では、無胸腺ヌードマウスへの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの投与は、腫瘍細胞株の導入前に実施することができる。ある種の実施態様では、SKOV3細胞が本明細書記載のマウス異種移植モデルのために用いられる。
具体的な実施態様では、、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法によって評価したとき、模擬治療マウスと比較して少なくとも約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％、又は100％、マウスモデルで腫瘍増殖を阻害するか又は腫瘍退縮を誘発する。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法によって評価したとき、模擬治療マウスと比較して少なくとも約25％又は35％、場合によって約75％、マウスモデルで腫瘍増殖を阻害するか又は腫瘍退縮を誘発する。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法によって評価したとき、模擬治療マウスと比較して少なくとも約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、又は100倍、マウスモデルで腫瘍増殖を阻害するか又は腫瘍退縮を誘発する。模擬治療マウスは、例えばリン酸緩衝食塩水又はコントロール（例えば抗IgG抗体）で処置され得る。
腫瘍増殖阻害又は腫瘍退縮の決定は、例えばある期間にわたって腫瘍サイズを、例えば触診可能腫瘍の物理的測定又は他の視覚的検出方法によって監視することによって評価できる。例えば、腫瘍細胞株を作出して、可視化薬剤（例えば緑色蛍光タンパク質（GFP）又はルシフェラーゼ）を組換え発現させ、続いて、GFPのin vivo可視化を顕微鏡検査で実行するか、ルシフェラーゼ基質を異種移植マウスに投与してルシフェラーゼ基質のルシフェラーゼ酵素処理による発光を検出することによって実行することができる。GFP又はルシフェラーゼ検出の程度又はレベルは、異種移植マウスの腫瘍サイズと相関性を有する。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、模擬治療マウスと比較して腫瘍異種移植モデルで動物の生存を増加させることができる。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法によって評価したとき、模擬治療マウスと比較して少なくとも約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、又は99％、腫瘍異種移植モデルでマウスの生存を増加させる。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法によって評価したとき、模擬治療マウスと比較して少なくとも約25％又は35％、場合によって約75％、異種移植モデルでマウスの生存を増加させる。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法によって評価したとき、模擬治療マウスと比較して少なくとも約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、又は100倍、腫瘍異種移植モデルでマウスの生存を増加させる。生存は、例えば腫瘍細胞株注射後の時間（例えば日数又は週数）に対して生存マウスの数の生存曲線を作図することによって決定できる。模擬治療マウスは、例えばリン酸緩衝食塩水又はコントロール（例えば抗IgG抗体）で処置され得る。
抗体複合化物
いくつかの実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、別の分子、例えば有機性部分、検出可能標識、及び/又は同位体と複合体化することができる。
ある種の実施態様では、本明細書に提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの複合化物であり、ここで、前記抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上の薬剤、例えば画像化剤又は細胞傷害剤と複合体化される。さらに本明細書で提供されるものはまた二重特異性抗体複合化物であり、ここで、前記二重特異性抗体は、1つ以上の薬剤、例えば画像化剤又は細胞傷害剤と複合体化される。さらに本明細書で提供されるものはまた抗体重鎖複合化物であり、ここで、前記抗体重鎖は、1つ以上の薬剤、例えば画像化剤又は細胞傷害剤と複合体化される。さらに本明細書で提供されるものはまた抗体軽鎖複合化物であり、ここで、前記抗体軽鎖は、1つ以上の薬剤、例えば画像化剤又は細胞傷害剤と複合体化される。さらに本明細書で提供されるものはまた融合タンパク質複合化物であり、ここで、前記融合タンパク質は、薬剤、例えば画像化剤又は細胞傷害剤と複合体化される。ある種の実施態様では、薬剤は、共有結合又は非共有結合で複合体化される。ある種の実施態様では、画像化剤は、検出可能な標識、例えば発色性、酵素性、放射性同位元素、同位体性、蛍光性、傷害性、化学発光性標識、核磁気共鳴造影剤又は他の標識である。
適切な発色性標識の非限定的な例には、ジアミノベンジジン及び4-ヒドロキシアゾ-ベンゼン-2-カルボン酸が含まれる。
適切な酵素標識の非限定的な例には以下が含まれる：リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ-5-ステロイドイソメラーゼ、酵母-アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ-グリセロールリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼ。
適切な放射性同位元素標識の非限定的な例には、3H、111In、125I、131I、32P、35S、14C、51Cr、57To、58Co、59Fe、75Se、152Eu、90Y、67Cu、217Ci、211At、212Pb、47Sc、223Ra、224Ra、89Zr、177Lu及び109Pdが含まれる。ある種の実施態様では、125I又は131I標識-抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの肝臓における脱ハロゲン化の問題を回避するので、111Inがin vivo画像化に用いられる。加えて、画像化のために111Inはより好ましいガンマ放射エネルギーを有する（Perkins et al. (1985) Eur. J. Nucl. Med. 70:296-301；Carasquillo et ah, (1987) J. Nucl. Med. 25:281-287）。例えば、1-(P-イソチオシアネートベンジル)-DPTAによる111In結合モノクローナル抗体は、非腫瘍性組織（特に肝臓）にほとんど取り込まれず、したがって腫瘍局在化の特異性が増強される（Esteban et al., (1987) J. Nucl. Med. 28:861-870）。
適切な非放射性同位体標識の非限定的な例には、157Gd、55Mn、162Dy、52Tr及び56Feが含まれる。
適切な蛍光標識の非限定的な例には、152Eu標識、フルイレセイン標識、イソチオシアネート標識、ローダミン標識、フィコエリスリン標識、アロフィコシアニン標識、緑色蛍光タンパク質（GFP）、o-フタルデヒド標識、及びフルオレサミン標識が含まれる。
化学発光標識の非限定的な例には、ルミノール標識、イソルミノール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、シュウ酸エステル標識、ルシフェリン標識、ルシフェラーゼ標識、及びエクオリン標識が含まれる。
核磁気共鳴造影剤の非限定的な例には重金属核（例えばGd、Mn及び鉄）が含まれる。
上記の標識を前記抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、及び融合タンパク質に複合体化させる当業者に公知の技術は、例えば以下の文献に記載されている：Kennedy et al. (1976) Clin. Chm. Acta 70: 1-31；及びSchurs et al. (1977) Clin. Chm. Acta 81: 1-40。後者に記載されている結合技術は、グルタルアルデヒド方法、過ヨウ素酸塩方法、ジマレイミド方法、m-マレイミドベンジル-N-ヒドロキシ-スクシンイミドエステル方法であり、前記方法のいずれも参照によって本明細書に含まれる。
細胞傷害剤の非限定的な例には、細胞増殖抑制又は殺細胞薬剤、放射性金属イオン（例えばアルファ放射体）、及び毒素（例えばシュードモナス外毒素、アブリン、コレラ毒素、リシンA、及びジフテリア毒素）が含まれる。
ある種の実施態様では、薬剤は診断剤である。診断剤は、抗原を含む細胞の位置を決定することによって疾患の診断又は検出に有用な薬剤である。有用な診断剤には、放射性同位元素、染料（例えばビオチン-ストレプトアビジン複合体とともに）、造影剤、蛍光化合物又は分子、及び磁気共鳴画像（MRI）用強化剤（例えば常磁性イオン）が含まれるが、ただし前記に限定されない。米国特許6,331,175号は、MRI技術及びMRI増強薬剤と複合体化された抗体の調製を記載し、前記は参照によって本明細書に含まれる。いくつかの実施態様では、診断剤は、放射性同位元素、磁気共鳴画像で使用される増強薬剤、及び蛍光化合物から成る群から選択される。抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントに放射性金属又は常磁性イオンをローディングするために、前記を長いテールを有する試薬と反応させることが必要であり、当該テールにイオン結合のために複数のキレート基を結合させることができる。そのようなテールはポリマー、例えばポリリジン、多糖類、又は他の誘導鎖若しくは誘導可能鎖で、前記はペンダント基を有し、当該ペンダント基にキレート基、例えばエチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス-チオセミカルバゾン、ポリオキシム、及びこの目的のために有用であることが判明している類似の基が結合され得る。キレートは、標準的な化学反応を用いて抗体に結合される。キレートは、免疫反応性の最小限の低下及び最小限の凝集及び/又は内部架橋をもたらしながら、抗体分子との結合を可能にする基によって抗体分子と通常的に連結される。キレートと抗体を複合体化するための他のより一般的ではない方法及び試薬は、U.S. Pat. No. 4,824,659（Hawthorne；1989年4月25日発行；表題：“Antibody Conjugates”（前記の開示は参照によってその全体が本明細書に含まれる））に開示されている。特に有用な金属-キレート組合せには2-ベンジル-DTPA並びにそのモノメチル及びシクロヘキシルアナローグが含まれ、放射線画像化のために診断用同位体とともに用いられる。非放射性金属（例えばマンガン、鉄及びガドリニウム）と複合化され、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントとともに用いられるときには、同じキレートがMRIのために有用である。大環状キレート（例えばNOTA、DOTA及びTETA）が、多様な金属及び放射性金属、それぞれガリウム、イットリウム及び銅とともに用いられ特に有用である。そのような金属-キレート複合体は、対象の金属に対して環のサイズを調整することによって非常に安定化させることができる。他の環型キレート、例えば大環状ポリエーテル（核種を安定的に結合させるために興味深い）、例えばRAITのための223Raは本明細書に包含される。
ある種の実施態様では、薬剤は有機因子である。そのような有機因子は改善された薬物動態特性（例えばin vivo血中半減期の増加）を有する複合化物を生じることができる。有機部分は、親水性ポリマー基、脂肪酸基、又は脂肪酸エステル基であり得る。本明細書で用いられるように、“脂肪酸”という用語は、モノカルボン酸及びジカルボン酸を包含する。本明細書で用いられるように、“親水性ポリマー基”は、オクタンよりも水により溶解性である有機ポリマー、例えばポリリジンである。本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを改変するために適切な親水性ポリマーは直鎖状でも分枝状でもよく、例えば以下を含む：ポリアルカングリコール（例えばポリエチレングリコール（PEG）、モノメトキシ-ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコール）、炭水化物（例えばデキストラン、セルロース、オリゴ糖、及び多糖類）、親水性アミノ酸のポリマー（例えばポリリジン、ポリアルギニン、及びポリアスパラギン酸）、ポリアルカンオキシド（例えばポリエチレンオキシド及びポリプロピレンオキシド）、及びポリビニルピロリドン。ある種の実施態様では、本明細書で提供される抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、又は融合タンパク質を改変する親水性ポリマーは、別々の分子実体として約800から約150,000ダルトンの分子量を有する。例えば、PEG5000及びPEG20,000（下付き文字はポリマーのダルトンによる平均分子量）を用いることができる。親水性ポリマー基は、1つから約6つのアルキル、脂肪酸又は脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸又は脂肪酸エステル基で置換される親水性ポリマーは適切な方法を用いて調製できる。例えば、アミン基を含むポリマーは、脂肪酸又は脂肪酸エステルのカルボン酸基と結合させることができ、さらに脂肪酸又は脂肪酸エステル上の活性化カルボン酸基（例えばN,N-カルボニルジイミダゾールで活性化される）は、ポリマー上のヒドロキシル基と結合させることができる。
本明細書で提供される抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、又は融合タンパク質の改変に適切な脂肪酸及び脂肪酸エステルは、飽和されていてもよく、1つ以上の不飽和ユニットを含んでいてもよい。本明細書で提供される抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、又は融合タンパク質の改変に適切な脂肪酸には例えば以下が含まれる：n-ドデカン酸、n-テトラデカン酸、n-オクタデカン酸、n-エイコサン酸、n-ドコサン酸、n-トリアコンタン酸、n-テトラコンタン酸、シス-デルタ-9-オクタデカン酸、全てのシス-デルタ-5,8,l1,14-エイコサテトラエン酸、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、デコサン二酸、など。適切な脂肪酸エステルには、直鎖又は分枝低級アルキル基を含む二カルボン酸のモノエステルが含まれる。低級アルキル基は、1つから約12、好ましくは1つから約6つの炭素原子を含むことができる。
本明細書で提供される複合化物は、適切な方法を用いて、例えば1つ以上の改変薬剤との反応によって調製することができる。本明細書で用いられるように、“活性化基”は、適切な条件下で第二の化学基と反応することができ、それによって改変薬剤と第二の化学基との間に共有結合を形成する化学的部分又は官能基である。例えば、アミン反応性活性化基には、求電子基、例えばトシレート、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、N-ヒドロキシスクシンイミジルエステル（NHS）などが含まれる。チオールと反応できる活性化基には、例えばマレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、5-チオール-2-ニトロ安息香酸チオール（TNB-チオール）などが含まれる。アルデヒド官能基をアミン-又はヒドラジド-含有分子と結合させ、さらにアジド基をリン基と反応させてホスホロアミデート又はホスホルイミド結合を形成させることができる。活性化基を分子に導入する適切な方法は当業界で公知である（例えば以下を参照されたい：Hernanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, Calif., 1996）。活性化基を有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接結合させるか、又はリンカー部分を介して結合させることができる（例えば二価C1－C12基、ここで1つ以上の炭素原子はヘテロ原子（例えば酸素、窒素又は硫黄）によって入れ替えられる）。適切なリンカー部分には、例えばテトラエチレングリコール、(CH2)3、及びNHが含まれる。リンカー部分を含む改変剤は、例えばモノ-Boc-アルキルジアミン（例えばモノ-Boc-エチレンジアミン又はモノ-Boc-ジアミノヘキサン）を脂肪酸と1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロリル)カルボジイミド（EDC）の存在下で反応させアミド結合を遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間に形成させることによって生成できる。Boc保護基は、トリフルオロ酢酸で処理して一級アミン（記載の別のカルボキシレートと結合できる）を露出することによって生成物から除去するか、又は無水マレイン酸と反応させ、得られた生成物を環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成することができる（例えばThompson, et al., WO 92/16221を参照されたい（その全教示は参照によって本明細書に含まれる））。
“改変剤”は、活性化基を含む適切な有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、及び脂肪酸エステル）を指すことができる。例えば、有機部分を、アミン反応性改変剤（例えばPEGのN-ヒドロキシスクシンイミドエステル）を利用することによって、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントに位置非特異的態様で結合させることができる。改変抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはまた、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、又は融合タンパク質のジスルフィド結合（例えば内部鎖ジスルフィド結合）の還元によって調製され得る。続いて、還元抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、又は融合タンパク質をチオール反応性改変剤と反応させて、本明細書に提供する複合化物を生成することができる。本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの特異的な位置に結合される有機部分を含む複合化物は、適切な方法、例えば逆タンパク質分解（Fisch et al. (1992) Bioconjugate Chem., 3: 147-153；Werlen et al. (1994) Bioconjugate Chem., 5 :41 1-417；Kumaran et al. (1997) Protein Sci. 6(10):2233- 2241；Itoh et al. (1996) Bioorg. Chem., 24(1): 59-68；Capellas et al. (1997) Biotechnol. Bioeng. 56(4):456-463）、及び文献（Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, Calif., 1996）に記載の方法を用いて調製され得る。
抗体作製
抗体の作製及びスクリーニング
別の特徴では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法である。本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体の合成のために当業界で公知の任意の方法によって、例えば化学合成によって又は組換え発現技術によって作製できる。本明細書記載の方法は、特段の指示がなければ、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えDNA、有機化学、生物化学、PCR、オリゴヌクレオチド合成及び改変、核酸ハイブリダイゼーション、及び当業界の関連分野の通常的技術を利用する。これらの技術は、例えば本明細書に引用される参考文献に記載され、かつ文献で完全に説明されている。例えば以下を参照されたい：Maniatis T et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook J et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook J et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Ausubel FM et al. Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons（1987年及び年次更新版）；Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons（1987年及び年次更新版）；Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press；Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press；Birren B et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press。
具体的実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば合成、DNA配列の遺伝子操作による作出を含む任意の手段によって調製され、発現され、作出され又は単離される抗体（例えば組換え抗体）である。ある種の実施態様では、そのような抗体は、動物又は哺乳動物（例えばヒト）のin vivo抗体生殖細胞系列のレパートリー内には天然に存在しないDNA配列によってコードされる配列を含む。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、LGALS3の炭水化物結合ドメイン又はその一部分の使用を含む方法によって作製される。例えば、本明細書記載の抗体をどのように作製するかについての例示的な方法の詳細は実施例３に記載されている。
ある種の特徴では、本明細書で提供されるものは、CNTKLDNNWGREERQSVFPFESG（配列番号:2）を含む免疫原性ペプチドである。
ある種の特徴では、本明細書で提供されるものは、ヒトIgG1重鎖のFc領域（CH2及びCH3ドメイン）に連結されたLGALS3のアミノ酸117－224及びヒンジ領域を含むFc融合タンパク質を含む免疫原性ペプチドである。LGALS3のアミノ酸117－224は以下のアミノ酸配列によって表される：PYNLPLPGGVVPRMLITILGTVKPNANRIALDFQRGNDVAFHFNPRFNENNRRVIVCNTKLDNNWGREERQSVFPFESGKPFKIQVLVEPDHFKVAVNDAHLLQYNHRVKKLNEISKLGISGDIDLTS（配列番号:27）。
いくつかの実施態様では、LGALS3のアミノ酸117－224は以下の例示的ヌクレオチド配列によってコードされ得る：CCTTATAACCTGCCTTTGCCTGGGGGAGTGGTGCCTCGCATGCTGATAACAATTCTGGGCACGGTGAAGCCCAATGCAAACAGAATTGCTTTAGATTTCCAAAGAGGGAATGATGTTGCCTTCCACTTTAACCCACGCTTCAATGAGAACAACAGGAGAGTCATTGTTTGCAATACAAAGCTGGATAATAACTGGGGAAGGGAAGAAAGACAGTCGGTTTTCCCATTTGAAAGTGGGAAACCATTCAAAATACAAGTACTGGTTGAACCTGACCACTTCAAGGTTGCAGTGAATGATGCTCACTTGTTGCAGTACAATCATCGGGTTAAAAAACTCAATGAAATCAGCAAACTGGGAATTTCTGGTGACATAGACCTCACCAGT（配列番号:28）。
ある種の実施態様では、免疫原性ペプチドは、免疫原性担体タンパク質と複合体化される。ほとんどの事例で、小さな抗原（例えば短いペプチド又は小さなハプテン）は、抗体の生成を引き出すには十分に複雑ではない。免疫原性担体タンパク質は、それらの大きなサイズ及び複雑な構造故に、複合体化される小抗原に免疫原性を付与することができ、当該小抗原上のエピトープ及び免疫原性担体タンパク質に対して生成される抗体を生じる。したがって、小さな抗原は常に、免疫原性担体タンパク質と化学的に複合体化され、抗体が上手く生成されるように免疫応答が増強される。一般的に用いられる免疫原性担体タンパク質には、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）、ロコガイ（Concholepas concholepas）ヘモシアニン（CCH）、ウシ血清アルブミン（BSA）、及びオボアルブミン（OVA）が含まれるが、ただし前記に限定されない。具体的な実施態様では、免疫原性ペプチドはKLHと複合体化される。KLHは、ヘモシアニンと呼ばれる非ヘムタンパク質のグループ属する銅含有ポリペプチドであり、節足動物及び軟体動物で見出される。KLHはキーホールリンペット（Megathura crenulata）から単離される。哺乳動物とのその進化における隔たり、高分子量、複雑な構造、及び数百のリジン基（複合体化の標的として一級アミンを提供する）を含む広い表面故に、KLHは、哺乳動物における極めて免疫原性で有効な担体タンパク質である。
ある種の実施態様では、免疫原性ペプチドは長さが10から60アミノ酸残基である。いくつかの実施態様では、免疫原性ペプチドは長さが10から30アミノ酸残基である。いくつかの実施態様では、免疫原性ペプチドは長さが15から25アミノ酸残基である。いくつかの実施態様では、免疫原性ペプチドは長さが15から20アミノ酸残基である。具体的な実施態様では、免疫原性ペプチドは長さが15から18アミノ酸残基である。
ある種の実施態様では、免疫原性ペプチドはLGALS3 CBDドメインの少なくとも10アミノ酸部分を含む。ある種の実施態様では、免疫原性ペプチドは、配列番号:27のアミノ酸配列の少なくとも10アミノ酸部分を含む。ある種の実施態様では、免疫原性ペプチドは、配列番号:27のアミノ酸配列の少なくとも15、20、25、又は30アミノ酸部分を含む。具体的な実施態様では、免疫原性ペプチドは、配列番号:27の連続する15から30アミノ酸残基から成る。
別の特徴では、本明細書で提供されるものは、LGALS3と免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを作出する方法であり、前記方法は、上記記載の免疫原性ペプチドで対象動物を免疫する工程を含む。本明細書記載の方法にしたがって免疫される対象動物は、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ニワトリ、モルモット、ラット、ウサギ、又はマウスでよいが、ただし前記に限定されない。いくつかの実施態様では、本明細書記載の方法にしたがって免疫される対象動物はラット、ウサギ、又はマウスである。具体的な実施態様では、本明細書記載の方法にしたがって免疫される対象動物はマウスである。いくつかの実施態様では、本明細書記載の方法にしたがって免疫される対象動物は、多様な免疫グロブリン鎖のキメラ型を発現するトランスジェニックマウスである。いくつかの実施態様では、トランスジェニックマウスは、マウスの定常領域に連結されたヒト可変領域を発現する（例えば、米国特許8502018号、9580491号、米国特許公開No. 20170218090、20160222093、及び20130167256（前記の各々は参照によってその全体が本明細書に含まれる）、又はAlivaMab マウスプラットフォーム（Ablexis）を参照されたい）。
対象動物の免疫は、当業界で公知の任意の方法によって、例えば免疫原性ペプチド及びアジュバントを実施例3に記載するように対象動物に投与することによって実施できる。 別の特徴では、本明細書で提供されるものはまた、本明細書記載の免疫原性ペプチドの調製方法である。ある種の実施態様では、免疫原性ペプチドの調製方法は、ペプチド部分を合成する工程を含む。免疫原性ペプチドのペプチド部分は、当業界で公知の任意の方法によって、例えばFmoc固相ペプチド合成によって合成できる。
本明細書に記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法は、当業者に公知であり、例えば化学合成、生物学的供給源からの精製、又は組換え発現技術（例えば哺乳動物細胞又はトランスジェニック調製物によるものを含む）による。本明細書に記載の方法は、特段の指示がなければ、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えDNA、有機化学、生物化学、PCR、オリゴヌクレオチド合成及び改変、核酸ハイブリダイゼーション、及び当業界の関連分野の通常的技術を利用する。これらの技術は、例えば本明細書に引用される参考文献に記載され、かつ文献で完全に説明されている。例えば以下を参照されたい：Maniatis T et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook J et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook J et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Ausubel FM et al. Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons（1987年及び年次更新版）；Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons（1987年及び年次更新版）；Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press；Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press；Birren B et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press。
本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを作製するために、当業界には多様な方法が存在する。例えば、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、組換えDNA方法（例えば米国特許4,816,567号に記載されている方法）によって作製できる。本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする1つ以上のDNAは、一般的な手順を用いて容易に単離及び配列決定することができる。前記手順は、例えばネズミ抗体の重鎖又は軽鎖（又はヒト由来、ヒト化された若しくは他の供給源由来のそのような鎖）をコードする遺伝子と特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いる。いったん単離したら、DNAを発現ベクターに入れる。続いて発現ベクターで宿主細胞（例えばNSO細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞、酵母細胞、藻類細胞、又はミエローマ細胞（別の態様では免疫グロブリンタンパク質を生成しない））を形質転換し、当該組換え宿主細胞で抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを合成させる。DNAはまた、例えば相同なヒト配列の代わりに所望の種の重鎖及び軽鎖の配列を代用することによって（米国特許4,816,567号；上掲書（Morrison et al.））、又は非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部又は部分を免疫グロブリンコード配列に共有結合することによって改変することができる。そのような非免疫グロブリンポリペプチドを、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの定常ドメインと置換することができる。ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体をコードする又はその抗原結合フラグメントをコードするDNAはまた、少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを用いトランスジェニック動物又は哺乳動物（例えばヤギ、乳牛、ウマ、ヒツジなど（それらはその乳中にそのような抗体を産生する））を提供することによって調製され得る。公知の方法を用いてそのような動物を提供できる。例えば、U.S. Pat. Nos. 5,827,690；5,849,992；4,873,316；5,849,992；5,994,616；5,565,362；5,304,489など（前記に限定されない）を参照されたい（前記の各々は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。
ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはまた別に、本明細書提供の少なくとも1つの抗LGALS3抗体をコードする又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを用いトランスジェニック植物及び培養植物細胞（例えばタバコ及びトウモロコシであるが前記に限定されない）を提供することによって調製され得る。前記トランスジェニック植物又は培養植物細胞は、そのような抗体、特定の部分若しくは変種を当該植物部分で又は当該植物由来の細胞培養で産生する。非限定的な例として、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックなタバコの葉を上手く利用して大量の組換えタンパク質が誘導プロモーターを用いて提供された。例えば以下の論文（Cramer et al. (1999) Curr. Top. Microbol. Immunol. 240:95-118, 1999）及びその中に引用されている文献を参照されたい。さらにまた、トランスジェニックなトウモロコシを用いて、哺乳動物タンパク質が商業的生産レベルで発現され、前記タンパク質は、他の組換え系で生成されたもの又は天然の供給源から生成されたものと等価の生物学的活性を有していた。例えば以下の論文（Hood et al. (1999) Adv. Exp. Med. Biol. 464: 127-147）及びその中に引用されている文献を参照されたい。抗体はまた、抗体フラグメント（例えばscFv）を含むトランスジェニック植物の種子（タバコの種子及びジャガイモの塊茎を含む）から大量に産生された。例えば以下の論文（Conrad et al. (1998) Plant Mol. Biol. 38: 101-109）及びその中に引用されている参考文献を参照されたい。したがって、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントはまた、公知の方法にしたがってトランスジェニック植物を用いて生成することができる。例えばまた以下の論文（Fischer et al. (1999) Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108；Ma et al. (1995) Trends Biotechnol. 13 :522-7；Ma et al, (1995) Plant Physiol. 109:341-6；Whitelam et al. (1994) Biochem Soc. Trans. 22:940-944）及びその中に引用されている文献を参照されたい（上記の参考文献の各々は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。
ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書で提供される少なくとも1つの抗LGALS3抗体をコードする又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを用いそのような抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを産生する細菌を提供することによって調製され得る。非限定的な例として、組換えタンパク質を発現する大腸菌（E. coli）を上手く利用して大量の組換えタンパク質が提供された。例えば以下の論文（Verma et al. (1998) 216(1-2): 165-181）及びその中に引用されている参考文献を参照されたい。
多重特異性（例えば二重特異性抗体）にするための方法は、例えば米国特許No. 7,951,917；7, 183,076；8,227,577；5,837,242；5,989,830；5,869,620；6, 132,992；及び8,586,713を参照されたい。
ある種の実施態様では、本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントが二重特異性抗体の作出に利用される。二重特異性抗体は、2つのハイブリドーマを融合し、2つの結合部位を有するハイブリッド免疫グロブリン分子を作出することによって作製され得る。二重特異性抗体は腫瘍をT細胞に拘束するだけではない。二重特異性抗体はT細胞上のCD3と架橋し、活性化カスケードを開始させる。このようにして、T細胞受容体による細胞傷害は、MHC拘束を迂回して所望の腫瘍標的に向け直される。ポリクローナル的に活性化されるT細胞（ATC）の抗CD3-抗LGALS3二重特異性結合分子による武装は、抗LGALS3抗体の標的特異性をT細胞の非MHC拘束パーフォリン/グランザイム媒介細胞傷害性と結合させる。二重特異性結合分子BsAb又はBiTEは、患者に輸液される前にex vivoで増殖活性化させたT細胞を武装させることができる。この作戦はATCを悉く特異的CTLに転換させる（Thakur and Lum (2010) Curr Opin Mol Ther 12, 340-349；Grabert et al. (2006) Clin Cancer Res 12, 569-576）。
二重特異性結合分子は抗LGALS3抗体で構成されることができ、ここで当該抗LGALS3抗体は免疫グロブリンであり、当該免疫グロブリンの各軽鎖は融合タンパク質であり、当該融合タンパク質はCD3を標的とするscFvとペプチドリンカーを介して連結される免疫グロブリン軽鎖である。CH2ドメインのN297A変異は、FcR又はC1q無結合をもたらすグリコシル化を生じる。
本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを利用してCARを作出することができる。CARはもっとも一般的には以下で構成される：単鎖可変フラグメント長抗体（scFv）（例えば与えられた腫瘍関連抗原を標的とするモノクローナル抗体に由来するもの及び/又はその変種）、トランスメンブレンドメイン（例えば、T細胞表面分子に由来するトランスメンブレンドメイン、例えば共同刺激分子、例えばCD8、CD28、OX-40、及び4-1BB）、TCR複合体のシグナル伝達部分（例えばTCRゼータ（ζ）鎖の細胞内ドメイン及び/又は付加的部分、例えばその細胞質シグナル伝達ドメイン）。
具体的な実施態様では、本明細書記載のモノクローナル抗LGALS3抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、モノクローナル抗LGALS3抗体を生じるハイブリドーマ細胞株から単離される。例えば、当該ハイブリドーマ細胞株からRNAを抽出し、当該RNAから逆転写PCRによってcDNAを生成する。VH及びVL鎖可変領域を、そのような可変領域に特異的なプライマーを利用して標準的PCRでクローン化する。得られたVH及びVLフラグメントを、シャトルベクター（例えばTopoTA PCR2.1クローニングベクター（Invitrogen））でサブクローニングして配列決定する。続いて、VH及びVLフラグメントを(Gly4Ser)3スペーサードメインに連結し、抗LGALS3抗体scFvを作出し、さらにオーバーラップPCRによってヒトCD8リーダーペプチド（CD8L）に融合させる（CD8L-抗LGALS3抗体scFv）（例えば以下を参照されたい：Maher et al. (2002) Nat Biotechnol 20(l):70-5；及びGong et al. (1999) Neoplasia 1(2): 123-7）。CD8L-抗LGALS3抗体scFvのコード領域を、ヒトCD8ヒンジ及びトランスメンブレンドメイン、或いはまた別にCD28トランスメンブレンドメイン及び細胞質シグナル伝達ドメインと融合させ、T細胞受容体0)3-ζシグナル伝達ドメインと融合させる（例えば以下を参照されたい：Maher et al. (2002) Nat Biotechnol 20(l):70-5；Brentjens et al. (2003) Nat Med 9(3):279-86；及びBrentjens et al. (2007) Clin Cancer Res 13(18 Pt l):5426-35）。
本明細書で提供されるものはまた、本明細書記載のCARを発現するT細胞である。CARを発現するT細胞の作出方法は当業界では公知である。例えば、CAR構築物を、改変MMLVレトロウイルスベクターSFG（例えば以下を参照されたい：Riviere et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA 92(15):6733-7）又は他の適切なレトロウイルスベクターでサブクローニングすることができる。いくつかの実施態様では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクター（例えばHIV系ベクター）である。gpg29形質導入線維芽細胞から得られるVSV-G偽型レトロウイルス上清を用いて、安定なPG13テナガザル白血病ウイルス（GaLV）エンベロープ-偽型レトロウイルス産生細胞株を構築することができる（例えば以下を参照されたい：Gong et al. (1999) Neoplasia 1(2): 123-7）。健康なドナーの末梢血の単離単核球（PBMC）を、2μg/mLのフィトヘマグルチニン（PHA）（Sigma. St. Louis, MO）で活性化し、さらにレトロネクチン被覆非組織培養プレート上でレトロウイルスにより形質導入し（Quintas-Cardama A, et al. (2007) Hum Gene Ther 18(12): 1253-60）、CARを組換え発現するT細胞を作出することができる。T細胞へのCARの遺伝子導入はFACSによって評価できる。
単ドメイン抗体（例えば軽鎖を欠く抗体）は、当業界で周知の方法によって作製することができる。例えば、以下を参照されたい：Riechmann and Muyldermans (1999) J Immunol 231: 25-38；Nuttall SD et al. (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263；Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302；米国特許6,005,079号；及び国際公開WO 94/04678、WO 94/25591及びWO 01/44301（前記の各々は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。
個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（前記は本明細書記載の抗LGALS3抗体と同じ又はオーバーラップするエピトープと結合する）は、ヒト抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントである。個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（前記は、本明細書記載の抗体のいずれか1つをLGALS3との結合から（例えば用量依存態様で）競合的に阻止する）は、ヒト抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントである。
ヒト抗体は当業界で公知の任意の方法を用いて生成できる。例えば、トランスジェニックマウスを用いることができる（前記マウスは、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できる）。個別の実施態様では、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体を、ランダムに又は相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入することができる。また別には、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えてヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域をマウス胚性幹細胞に導入することができる。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の相同組換えによる導入により別々に又は同時に非機能性にすることができる。特に、JH領域のホモ接合欠失は内因性抗体生成を妨げる。改変胚性幹細胞を増殖させ、胚盤胞に顕微注射してキメラマウスを作製する。続いて、キメラマウスを交配し、ヒト抗体を発現するホモ接合子孫を作製する。当該トランスジェニックマウスを選択した抗原（例えば抗原の全部又は部分）を用いて通常の態様で免疫する。通常的なハイブリドーマ技術を用いて、当該抗原に対するモノクローナル抗体を免疫したトランスジェニックマウスから入手できる。トランスジェニックマウスが保持するヒト免疫グロブリントランスジーンはB細胞の分化中に再編成を生じ、その後クラススイッチング及び体細胞変異を経験する。したがって、そのような技術を用いて、治療的に有用なIgG、IgA、IgM及びIgE抗体を生産させることが可能である。ヒト抗体生産のためのこの技術の概略については、例えば文献（Lonberg and Huszar (1995) Int Rev Immunol 13 :65-93）を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体の生産並びにそのような抗体の生産のためのプロトコールに関するこの技術の詳細な考察については、例えば以下を参照されたい：国際公開WO 98/24893、WO 96/34096及びWO 96/33735；並びに米国特許5,413,923号、5,625,126号、5,633,425号、5,569,825号、5,661,016号、5,545,806号、5,814,318号及び5,939,598号。ヒト抗体を生産することができるマウスの例には以下が含まれる：XenomouseTM（Abgenix, Inc.；米国特許6,075,181号及び6, 150,184号）、HuAb-MouseTM（Mederex, Inc./Gen Pharm；米国特許5,545,806号及び5,569, 825号）、Trans Chromo MouseTM（Kirin）及びKM MouseTM（Medarex/Kirin）。
免疫特異的にLGALS3と結合するヒト抗体は、当業界で公知の多様な方法によって作成できる。前記方法には、ヒト免疫グロブリン配列から誘導される抗体ライブラリーを用いる上記に記載のファージディスプレー方法が含まれる。さらにまた下記を参照されたい：米国特許4,444,887号、4,716,111号、及び5,885,793号；並びに国際公開WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735、及びWO 91/10741。
いくつかの実施態様では、ヒト抗体はマウス-人ハイブリドーマを用いて生産することができる。例えば、エプスタイン-バーウイルス（EBV）で形質転換したヒト末梢血リンパ球をマウスミエローマ細胞に融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス-ヒトハイブリドーマを作製することができる。これらのマウス-ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原と免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定することができる。そのような方法は公知であり、当業界で記載されている（例えば以下を参照されたい：Shinmoto H et al. (2004) Cytotechnology 46: 19-23；Naganawa Y et al. (2005) Human Antibodies 14: 27-31）。
LGALS3と免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する例示的方法、並びにLGALS3と免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントをスクリーニング及び選別する方法は実施例3に記載される。例示的実施態様では、マウス-ヒトハイブリドーマは、実施例3に記載するように、LGALS3の免疫原性ペプチド又はキメラ融合タンパク質で免疫したマウスから作製される。例示的な実施態様では、当該ハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体をLGALS3炭水化物結合ドメインペプチド（CBD）、完全長LSGAL3タンパク質との結合についてスクリーニングする。いくつかの実施態様では、LGALS3 N-末端（重合化ドメインを含む）がコントロールとして利用される。いくつかの実施態様では、モノクローナル抗体はさらにまた、ネズミGal3 CBD（mCBD3）又はガレクチンファミリーの他のメンバー（例えばLGAL1、LGAL7、LGAL8、及びLGAL9）に対してスクリーニングされる。
本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントが生産されたら、免疫グロブリン分子の精製で当業者に公知の任意の方法によって精製できる。精製は、例えばクロマトグラフィー（例えばイオン交換、アフィニティ（特にタンパク質Aの後で特異的抗原に対するアフィニティによって）、及びサイズによるカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、弁別的可溶性、又はタンパク質精製のための他の任意の標準的技術による。さらにまた、本明細書記載の抗体は、本明細書記載の或いはまた別に精製を促進する当業界で公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは単離又は精製される。一般的には、単離抗体は、当該単離抗体以外の種々の抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない。例えば、個別の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの調製物は、細胞性物質及び/又は化学的前駆体を実質的に含まない。“細胞性物質を実質的に含まない”という言葉は、当該抗体が、それが単離又は組換え生成される細胞の細胞性成分から分離されている抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの調製物を含む。したがって、細胞性物質を実質的に含まない抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、異種タンパク質（本明細書では“夾雑タンパク質”とも称される）及び/又は抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの変種（例えば抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの種々の翻訳後修飾型、又は抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントのその他の種々のバージョン（例えば抗体フラグメント））を（乾燥重量で）約30％、20％、10％、5％、2％、1％、0.5％、又は0.1％未満有する抗体の調製物を含む。抗体が組換え生成されるとき、それはまた、一般的には培地を実質的に含まない。すなわち、培地は、タンパク質調製物の体積の約20％、10％、2％、1％、0.5％、又は0.1％未満である。抗体が化学合成によって生産されるとき、それは、一般的には化学的前駆体又は他の化学物質を実質的に含まない。すなわち、それはタンパク質合成に含まれる化学的前駆体又は他の化学物質から分離されている。したがって、抗体のそのような調製物は、問題の抗体以外の化学的前駆体又は化合物を（乾燥重量で）約30％、20％、10％、又は5％未満含む。具体的な実施態様では、本明細書に記載する抗体は単離又は精製される。
ポリヌクレオチド
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。本明細書で提供されるものはまた、そのようなポリヌクレオチドを含むベクターである。本明細書で提供されるものはまた、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの抗原をコードするポリヌクレオチドである。本明細書で提供されるものはまた、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドと、ストリンジェントな条件又はより低いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドである。
“精製される”という言葉は、他の物質（例えば細胞性物質、培養媒体、他の核酸分子、化学的前駆体及び/又は他の化学物質）を約15％、10％、5％、2％、1％、0.5％又は0.1％未満（特に約10％未満）有するポリヌクレオチド又は核酸分子の調製物を含む。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子は精製又は単離される。
本明細書で提供される核酸分子は、RNAの形態（例えばmRNA、hnRNA、tRNA又は任意の他の形態）、又はDNAの形態（クローニングによって得られるか又は合成で生成されるcDNA及びゲノムDNA）又は前記の任意の組合せであり得る。DNAは三本鎖、二本鎖若しくは一本鎖又は前記の任意の組合せであり得る。DNAの少なくとも1つの鎖の任意の部分又はRNAは、コード鎖（センス鎖としても知られている）でも、又は非コード鎖（アンチセンス鎖とも称される）でもよい。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。個別の実施態様では、本明細書で提供されるものはまた、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであり、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、LGALS3と免疫特異的に結合し、さらに本明細書に記載するアミノ酸配列を含むものだけでなく、前記抗体は、そのような抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントとLGALS3との結合について競合するか、又はそのような抗体のエピトープと同じエピトープに結合する。
本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、当業界で公知の任意の方法によって入手できる。例えば、本明細書に記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列が公知である場合、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから、例えば文献（Kutmeier et al. (1994) BioTechniques 17:242）に記載されたように組み立てることができる。前記は、簡単に記せば、抗体をコードする配列の部分を含むオーバーラップするオリゴヌクレオチドの合成、それらオリゴヌクレオチドのアニーリング及び連結、並びに連結オリゴヌクレオチドのその後のPCR増幅を含む。
また別には、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源に由来する核酸から生成することができる。個々の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含むクローンは入手できないが、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの配列は公知である場合、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸は化学的に合成するか、又は適切な供給源から当該配列の3’及び5’末端とハイブリダイズする合成プライマーを用いてPCR増幅によって、又は個々の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いてクローニングして、例えば抗体をコードするcDNAライブラリーからcDNAを識別することによって入手できる。前記適切な供給源は、例えば抗体cDNAライブラリー、又は抗原を発現する任意の組織若しくは細胞（例えば本明細書提供の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの発現のために選別されるハイブリドーマ細胞）から生成又は単離されたcDNAライブラリー又は核酸、好ましくはポリA＋RNAである。続いて、当業界で周知の任意の方法を用いて、PCRによって生成された増幅核酸を複製可能なクローニングベクターでクローニングする。そのような実施態様では、そのような抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列の操作について当業界で周知の方法、例えば組換えDNA技術、位置指定変異誘導、PCRなどを用いて操作して、種々のアミノ酸配列を有する抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する、例えばアミノ酸置換、欠失及び/又は挿入を作出することができる（例えば以下の文献に記載の技術を参照されたい：Sambrook et al. (1990) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.；及びAusubel et al., eds. (1998) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y.（前記文献はともに参照によってその全体が本明細書に含まれる））。例えば、そのような操作を実施して、コードアミノ酸を非グリコシル化するか、又は抗体のC1q、Fc受容体との結合能力若しくは補体系活性化能力を破壊することができる。
本明細書で提供される単離核酸分子は以下の核酸分子を含むことができる：オープンリーディングフレーム（ORF）（場合によって1つ以上のイントロンとともに）、例えば少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）の少なくとも1つの特定の部分、例えば少なくとも1つの重鎖又は軽鎖のCDR1、CDR2及び/又はCDR3（ただし前記に限定されない）を含む核酸分子；抗LGALS3抗体又は可変領域のコード配列を含む核酸分子；及び上記記載のものとは実質的に異なるヌクレオチド配列を含むが、遺伝暗号の縮退のために、なお本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子。
提供されるものはまた、選択的ハイブリダイゼーション条件下で本明細書に開示するポリヌクレオチドとハイブリダイズする単離核酸である。したがって、この実施態様のポリヌクレオチドを用いて、そのようなポリヌクレオチドを含む核酸を単離、検出、及び/又は定量することができる。例えば、本明細書で提供するポリヌクレオチドを用いて、寄託ライブラリーで部分長若しくは完全長クローンを識別、単離又は増幅することができる。いくつかの実施態様では、ポリヌクレオチドは、単離されたゲノム配列又はcDNA配列であるか、或いはヒト又は哺乳動物核酸ライブラリー由来のcDNAと相補性である。
便利には、核酸は、本明細書提供のポリヌクレオチドに加えて複数の配列を含むことができる。例えば、1つ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含むマルチクローニング部位を核酸に挿入し、当該ポリヌクレオチドの単離を補助することができる。加えて、翻訳可能配列を挿入して、本明細書提供ポリヌクレオチドの翻訳されたものの単離を補助することができる。例えば、6ヒスチジンマーカー配列は、本明細書提供のポリペプチドの精製に便利な手段を提供する。本明細書提供の核酸（コード配列を排除して）は、場合によって本明細書提供のポリヌクレオチドのクローニング及び/又は発現のためのベクター、アダプター、又はリンカーである。
付加配列をまたそのようなクローニング及び/又は発現配列に添加して、クローニング及び/又は発現でのそれらの機能を最適化し、ポリヌクレオチドの単離を補助するか、又はポリヌクレオチドの細胞への導入を改善することができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプター、及びリンカーの使用は当業界では周知である（例えばAusubelの上掲書又はSambrookの上掲書を参照されたい）。
具体的な実施態様では、日常的な組換えDNA技術を用いて、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの1つ以上のCDRを、公知のフレームワーク領域内に挿入することができる。フレームワーク領域は、天然に存在するか又はコンセンサスフレームワーク領域、好ましくはヒトフレームワーク領域であり得る（ヒトフレームワーク領域のリストのためには例えば以下を参照されたい：Chothia et al., (1998) J. Mol. Biol. 278: 457-479）。いくつかの実施態様では、フレームワーク領域及びCDRの組合せによって作製されたポリヌクレオチドは、LGALS3と免疫特異的に結合する抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする。1つ以上のアミノ酸置換をフレームワーク領域内で実施することができ、好ましくは、当該アミノ酸置換は抗体とその抗原との結合を改善する。加えて、そのような方法を用いて、鎖内ジスルフィド結合に関与する1つ以上の可変領域システイン残基のアミノ酸置換又は欠失を実施し、1つ以上の鎖内ジスルフィド結合を欠く抗体分子を作製することができる。ポリヌクレオチドに対する他の改変も本明細書で提供され、前記は当業界の技術範囲内である。
ある種の実施態様では、単離又は精製された核酸分子又はそのフラグメントは、別の核酸分子と連結されて融合タンパク質をコードすることができる。融合タンパク質の作製は当業者の技術範囲内であり、制限酵素又は組換えクローニング技術の使用を含む（例えばGatewayTM（Invitrogen）を参照されたい）。米国特許5,314,995号もまた参照されたい。
ある種の実施態様では、本明細書提供のポリヌクレオチドはベクター（例えば発現ベクター）の形態である。ある種の特徴では、本明細書で提供されるものは、LGALS3と免疫特異的に結合する本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば可変軽鎖領域及び/又は可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、及びベクター（例えば宿主細胞（例えば大腸菌及び哺乳動物細胞）でのポリヌクレオチドの効率的な発現のためにそのようなポリヌクレオチドを含むベクター）である。いくつかの実施態様では、ポリヌクレオチドは単離又は精製される。
個別の特徴では、本明細書で提供されるものは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであり、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書に記載するアミノ酸配列を含むものだけでなく、LGALS3との結合についてそのような抗体と（例えば用量依存態様で）競合するか、又はそのような抗体のエピトープと同じ若しくはオーバーラップするエピトープに結合するものである。
ある種の特徴では、本明細書で提供されるものは、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖又は重鎖をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドは、本明細書記載のVH CDRを含む重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる（例えば図12及び13参照）。ポリヌクレオチドは、本明細書記載のVL CDRを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる（例えば図12及び13参照）。
個別の実施態様では、本明細書で提供されるものは、3つのVH CDR（例えば、図12及び13に記載のVH CDR1、VH CDR2、及びVH CDR3を収納する）を含む抗LGALS3抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであり、ここで当該抗体はLGALS3と免疫特異的に結合する。具体的な実施態様では、本明細書記載のポリヌクレオチドは、14D11抗体のVH CDR1、VH CDR2、及びVH CDR3（すなわちそれぞれ配列番号:5、配列番号:6及び配列番号:7）をコードし、ここで当該抗体はLGALS3と免疫特異的に結合する。ある種の実施態様では、本明細書記載のポリヌクレオチドは、本明細書記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（例えば配列番号:24）を含む、抗LGALS3抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで当該抗体はLGALS3と免疫特異的に結合する。
個別の実施態様では、本明細書で提供されるものは、3つのVL CDR（例えば、図12及び13に記載のVL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を収納する）を含む抗LGALS3抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであり、ここで当該抗体はLGALS3と免疫特異的に結合する。具体的な実施態様では、本明細書記載のポリヌクレオチドは、14D11抗体のVL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3（すなわちそれぞれ配列番号:8、配列番号:9及び配列番号:10）をコードし、ここで当該抗体はLGALS3と免疫特異的に結合する。ある種の実施態様では、本明細書記載のポリヌクレオチドは、本明細書記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（例えば配列番号:26）を含む、抗LGALS3抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで当該抗体はLGALS3と免疫特異的に結合する。
ある種の実施態様では、本明細書記載のポリヌクレオチドは、本明細書記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（例えば配列番号:24）及び本明細書記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（例えば配列番号:26）を含む、本明細書記載の抗LGALS3抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで当該抗体はLGALS3と免疫特異的に結合する。
具体的な特徴では、本明細書で提供されるものは、軽鎖及び重鎖（例えば別々の軽鎖及び重鎖）を含む抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。重鎖に関しては、具体的な実施態様では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。軽鎖に関しては、具体的な実施態様では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、カッパ（κ）又はラムダ（λ）軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。
細胞及びベクター
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、1つ以上の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを（例えば組換えにより）発現する細胞（例えば単離細胞又はex vivo細胞）である。本明細書で提供されるものはまた、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞で組換え体を発現するための、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むベクター（例えば発現ベクター）である。本明細書で提供されるものはまた、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを組換え発現するために、そのようなベクター又はヌクレオチド配列を含む細胞（例えば単離細胞又はex vivo細胞）である。本明細書で提供されるものはまた、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法であり、前記方法は、そのような抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞（単離細胞又はex vivo細胞）から発現させる工程を含む。
ベクター（例えば発現ベクター）は、細胞（例えばex vivo細胞）で発現される遺伝子を含むDNA分子である。典型的には、遺伝子発現は、ある種の調節エレメント（構成的又は誘導性プロモーター、組織特異的調節エレメント及びエンハンサーを含む）の制御下に置かれる。そのような遺伝子は、調節エレメント（例えばプロモーター）と“作動できるように連結される”と称される。組換え宿主は、クローニングベクター又は発現ベクターのどちらかを含む任意の原核細胞又は真核細胞であり得る。この用語はまた、それら原核細胞又は真核細胞とともにトランスジェニック動物を含む。前記は、宿主細胞の染色体若しくはゲノムに又は宿主細胞の細胞（例えばex vivo細胞）にクローン化遺伝子を含むように、遺伝的に操作されてある。ある実施態様では、プロモーターはCMVプロモーターである。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、本明細書記載の1つ以上のポリヌクレオチドである。ある種の実施態様では、本明細書記載のポリヌクレオチドは適切なベクターでクローニングされ、任意の適切な宿主の形質転換又はトランスフェクションのために用いることができる。ベクター及びそのようなベクターを構築する方法は当業者に公知であり、一般的な技術参考書に記載されている（一般的には以下を参照されたい：“Recombinant DNA Part D” Methods in Enzymology, Vol. 153, Wu and Grossman, eds., Academic Press, 1987）。ある種の実施態様では、ベクターは、適切なようにかつ当該ベクターがDNAであるか又はRNAであるかを斟酌しつつ調節配列（例えば転写及び翻訳開始並びに終止コドン）を含む。前記調節配列は、ベクターが導入される宿主タイプ（例えば細菌、真菌、植物、昆虫又は哺乳動物）に特異的である。ある種の実施態様では、ベクターは、宿主の属に特異的な調節配列を含む。ある種の実施態様では、ベクターは、宿主の種に特異的な調節配列を含む。ある種の実施態様では、ベクターは1つ以上のマーカー遺伝子を含み、前記は形質転換又はトランスフェクト宿主の選別を可能にする。マーカー遺伝子の非限定的な例には、殺生物剤耐性（例えば抗生物質耐性、重金属耐性など）、原栄養性を提供する栄養要求性宿主の補完などが含まれる。個別の実施態様では、ベクターはアンピシリン及びヒグロマイシン選別マーカーを含む。
ある種の実施態様では、発現ベクターは、本明細書記載のポリヌクレオチドに作動できるように連結された自然のままの又は規範的なプロモーターを含む。プロモーターの選択（例えば強性、弱性、誘導性、組織特異性及び発育特異性）は、当業界の技術範囲内である。同様に、上記に記載の核酸分子又はそのフラグメントとプロモーターとの結合もまた当業界の技術範囲内である。
適切なベクターの非限定的な例には、増殖増大若しくは発現のため又はその両方のために設計されるベクターが含まれる。例えば、クローニングベクターは、pUCシリーズ、pBluescriptシリーズ（Stratagene, LaJolla, Calif）、pETシリーズ（Novagen, Madison, Wis.）、pGEXシリーズ（Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden）、及びpEXシリーズ（Clontech, Palo Alto, Calif）から成る群から選択できる。バクテリオファージベクター、例えばラムダ-GTIO、ラムダ-GTl 1、ラムダ-ZapII（Stratagene）、ラムダ-EMBL4及びラムダ-NMl 149もまた用いることができる。植物発現ベクターの非限定的な例には、pBIl 10、pBI101.2、pBI101.3、pBI121及びpBIN19（Clontech）が含まれる。動物発現ベクターの非限定的な例にはpEUK-Cl、pMAM及びpMAMneo（Clontech）が含まれる。TOPOクローニング系（Invitrogen, Carlsbad, Calif.）もまた製造業者の指示にしたがって用いることができる。
ある種の実施態様では、ベクターは哺乳動物ベクターである。ある種の実施態様では、哺乳動物ベクターは、少なくとも1つのプロモーターエレメント（mRNAの転写の開始を媒介する）、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントコード配列、並びに転写の終了及び転写物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。ある種の実施態様では、哺乳動物ベクターは、追加成分（例えばエンハンサー、Kozak配列、並びにRNAスプライシングのためのドナー部位及びアクセプター部位にフランキングされた介在配列）を含む。ある種の実施態様では、高度に効率の良い転写は、例えば、SV40の初期及び後期プロモーター、レトロウイルス（例えばRSV、HTLVI、HIVI）のロングターミナルリピート（LTR）、並びにサイトメガロウイルス（CMV）の初期プロモーターで達成できる。しかしながら、細胞性エレメント（例えばヒトアクチンプロモーター）もまた用いることができる。哺乳動物発現ベクターの非限定的な例には例えば以下のベクターが含まれる：pIRESlneo、pRetro-Off、pRetro-On、PLXSN、又はpLNCX（Clonetech Labs, Palo Alto, Calif）、pcDNA3.1(+/-)、pcDNA/Zeo(+/-)又はpcDNA3.1/Hygro(+/-)（Invitrogen）、PSVL及びPMSG（Pharmacia, Uppsala, Sweden）、pRSVcat（ATCC 37152）、pSV2dhfr（ATCC 37146）及びpBC12MI（ATCC 67109）。そのような哺乳動物ベクターと組合わせて用いることができる哺乳動物宿主細胞の非限定的な例には以下が含まれる：ヒトHela293、H9及びJurkat細胞、マウスNIH3T3及びC127細胞、Cos 1、Cos 7及びCV 1、ウズラQCl-3細胞、マウスL細胞並びにチャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞。
ある種の実施態様では、ベクターはウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクター、パルボウイルス系ベクター、例えばアデノ関連ウイルス（AAV）系ベクター、AAV-アデノウイルスキメラベクター、及びアデノウイルス系ベクター、並びにレンチウイルスベクター、例えば単純ヘルペスウイルス（HSV）系ベクターである。ある種の実施態様では、ウイルスベクターはウイルス複製欠損にするために操作される。ある種の実施態様では、ウイルスベクターは宿主に対する毒性を除去するために操作される。これらのウイルスベクターは、例えば以下の文献に記載されている標準的な組換えDNA技術を用いて調製できる：Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 2d edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989；及びAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1994。
ある種の実施態様では、本明細書に記載のベクター又はポリヌクレオチドを通常の技術によって細胞（例えばex vivo細胞）に導入し、得られた細胞を通常の技術によって培養して本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを生産することができる。したがって、本明細書で提供されるものは、ポリヌクレオチドを含む細胞であり、前記ポリヌクレオチドは、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、その重鎖若しくは軽鎖、又はその軽鎖融合ポリペプチドをコードし、宿主細胞でのそのような配列の発現のためにプロモーターに作動できるように連結されている。ある種の実施態様では、プロモーターに作動できるように連結された重鎖をコードするベクター及びプロモーターに作動できるように連結された軽鎖をコードするベクターを、抗LGALS3抗体全体の発現のために細胞で共同発現させることができる。ある種の実施態様では、プロモーターに作動できるように連結された重鎖をコードするベクター及びプロモーターに作動できるように連結された軽鎖融合ポリペプチドをコードするベクターを、二重特異性結合分子全体の発現のために細胞で共同発現させることができる。ある種の実施態様では、細胞は、本明細書記載の抗LGALS3抗体の重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードするポリヌクレオチド（プロモーターに作動できるように連結されている）を含むベクターを含む。ある種の実施態様では、細胞は、本明細書記載の二重特異性結合分子の重鎖及び軽鎖融合ポリペプチドの両方をコードするポリヌクレオチド（プロモーターに作動できるように連結されている）を含むベクターを含む。ある種の実施態様では、細胞は2つの異なるベクターを含み、第一のベクターはプロモーターに作動できるように連結された重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第二のベクターはプロモーターに作動できるように連結された軽鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、細胞は2つの異なるベクターを含み、第一のベクターはプロモーターに作動できるように連結された重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第二のベクターはプロモーターに作動できるように連結された軽鎖融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、第一の細胞は、本明細書記載の抗LGALS3抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第二の細胞は、本明細書記載の抗LGALS3抗体の軽鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、そのような第一の細胞及び第二の細胞を含む細胞混合物である。ある種の実施態様では、第一の細胞は、本明細書記載の二重特異性結合分子の重鎖をコードするポリヌクレオチドを含む第一のベクターを含み、第二の細胞は、本明細書記載の二重特異性結合分子の軽鎖融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む第二のベクターを含む。ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、そのような第一の細胞及びそのような第二の細胞を含む細胞混合物である。個別の実施態様では、細胞は、ポリヌクレオチドが効率的に転写も翻訳も細胞で達成されるように当該1つ又は複数のベクターを発現する。
いくつかの実施態様では、細胞は、ポリヌクレオチド又はそのフラグメントが効率的に転写も翻訳も細胞で達成されるように当該ベクターを発現する。
ある種の実施態様では、細胞は宿主細胞内に存在し、細胞は動物（例えば哺乳動物）であり得る。細胞の例には、ヒト細胞、ヒト細胞株、大腸菌（例えば大腸菌TB-1、TG-2、DH5a、XL-Blue MRF（Stratagene）、SA2821及びY1090）、枯草菌（B. subtilis）、緑膿菌（P. aerugenosa）、S.セレビシアエ（S. cerevisiae）、N.クラッサ（N. crassa）、昆虫細胞（例えばSf9、Ea4）、及び下記に示す他の細胞が含まれるが、ただし前記に限定されない。個別の実施態様では、細胞はCHO細胞である。別の個別の実施態様では、細胞はCHO-S細胞である。
ある種の実施態様では、本明細書記載のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドを細胞に導入することによって、染色体に組み込まれたポリヌクレオチドを含む安定細胞株で発現され得る。ある種の実施態様では、ポリヌクレオチドは、例えばエレクトロポレーションによって細胞に導入される。ある種の実施態様では、ポリヌクレオチドは、例えばポリヌクレオチドを含むベクターのトランスフェクションによって細胞に導入される。ある種の実施態様では、ベクターは選別可能なマーカー（例えばDHFR、GPT、ネオマイシン又はヒグロマイシン）とともに共同トランスフェクトされ、トランスフェクトされた細胞の識別及び単離を可能にする。ある種の実施態様では、トランスフェクトされたポリヌクレオチドはまた増幅され、大量のコードされた抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントが発現され得る。例えば、DHFR（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーを利用して、問題のポリヌクレオチドの数百又は数千ものコピーを保持する細胞株の開発が可能である。選別マーカーの別の例は酵素グルタミンシンターゼ（GS）である（Murphy, et al., Biochem. J. 227:277-279, 1991；Bebbington, et al., Bio/Technology 10: 169-175）。これらのマーカーを用い、細胞を選択培地で増殖させて最高の耐性を有する細胞を選別する。これらの細胞株は染色体に組み込まれた増幅遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（CHO）及びNSO細胞が抗体生産にしばしば用いられる。
いくつかの実施態様では、ベクターは、（i）LGALS3と結合する免疫グロブリン軽鎖をコードする、第一のプロモーターに作動できるように連結された第一のポリヌクレオチド、及び（ii）LGALS3と結合する免疫グロブリン重鎖をコードする、第二のプロモーターに作動できるように連結された第二のポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、ベクターはウイルスベクターである。
いくつかの実施態様では、ベクターは、（i）ペプチドリンカーを介してscFvと融合した免疫グロブリン軽鎖を含む軽鎖融合ポリペプチドをコードする、第一のプロモーターと作動できるように連結された第一のポリヌクレオチド（ここで軽鎖はLGALS3と結合し、scFvはCD3と結合する）、及び（ii）LGALS3と結合する免疫グロブリン重鎖をコードする、第二のプロモーターに作動できるように連結された第二のポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、ベクターはウイルスベクターである。
医薬組成物
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、組成物（例えば医薬組成物）及びキットであり、前記は医薬的に有効な1つ以上の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。ある種の実施態様では、医薬組成物は、免疫細胞（例えばT細胞）を含み、前記は、本明細書記載の抗体、その抗原結合フラグメント、及び/又はCARを組換え発現する。組成物は個々の単一ユニット剤型の調製に用いることができる。本明細書で提供される組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内、細胞内、小脳内、脳室内、頭蓋内、眼内、硝子体内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹膜内、胸膜腔内、前立腺内、肺臓内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、関節内、関節包内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻内、髄腔内、脳の心室内、脳の実質内、又は経皮投与のために処方できる。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む1つ以上のポリヌクレオチドを含む組成物である。ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは細胞を含む組成物であり、ここで、細胞は、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む1つ以上のポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものはベクターを含む組成物であり、ここで、ベクターは、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む1つ以上のポリヌクレオチドを含む。ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは細胞を含む組成物であり、ここで、細胞はベクターを含み、ベクターは、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む1つ以上のポリヌクレオチドを含む。
ある種の実施態様では、本明細書記載の組成物は安定又は保存加工処方物である。ある種の実施態様では、安定処方物は食塩水又は選択された塩とともにリン酸緩衝液を含む。ある種の実施態様では、記載の組成物は、医薬的又は獣医的使用に適切な、多用途保存加工処方物である。ある種の実施態様では、本明細書記載の組成物は保存料を含む。保存料は当業者には公知である。保存料の非限定的な例には、フェノール、m-クレゾール、p-クレゾール、o-クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば六水塩）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、並びにデヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール、又は水性希釈液中の前記の混合物が含まれる。当業界で公知の任意の適切な濃度又は混合物を用いることができる。濃度は、例えば0.001－5％又はその間の任意の範囲若しくは値であり、例えば0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9％、又はその間の任意の範囲若しくは値である。非限定的な例は、保存料無し、0.1－2％のm-クレゾール（例えば0.2、0.3、0.4、0.5、0.9、1.0％）、0.1－3％のベンジルアルコール（例えば0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5％）、0.001－0.5％のチメロサール（例えば0.005、0.01）、0.001－2.0％のフェノール（例えば0.05、0.25、0.28、0.5、0.9、1.0％）、0.0005－1.0％の（1種類又は複数種類の）アルキルパラベン（例えば0.00075、0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.002、0.005、0.075、0.09、0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0％）などを含む。
本明細書で提供される組成物は、対象動物に長期間にわたって、例えば1週間から1年又は1年を超えて1回の投与でデリバリーされることが所望され得る。多様な徐放出、デポ、又は移植剤型を利用することができる。例えば、剤型は、体液中で低度の溶解性を有する化合物の医薬的に許容できる非毒性塩を含むことができる。前記塩は、例えば（a）多塩基酸（例えばリン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノ-若しくはジ-スルホン酸、ポリガラクツロン酸など）との酸付加塩；（b）多価金属陽イオン（例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなど）又は例えばN,N’-ジベンジル-エチレンジアミン若しくはエチレンジアミンから形成される有機陽イオンとの塩；又は（c）（a）及び（b）の組合せ、例えば酒石酸亜鉛塩である。付け加えれば、本明細書で提供される組成物、好ましくは比較的不溶性の塩（例えばまさに記載の塩）は、ゲル、例えばアルミニウムモノステアリン酸ゲル中で、例えば注射に適切なゴマ油とともに処方することができる。特に適切な塩は亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモ酸塩などである。別のタイプの注射用の徐放出デポ処方物は、緩慢分解性、非毒性、非抗原性ポリマー（例えばポリ乳酸/ポリグリコール酸ポリマー、例えばU.S. Pat. No. 3,773,919に記載のもの）中で分散被包化された化合物又は塩を含むであろう。化合物又は好ましくは比較的不溶性の塩（例えば上記に記載のもの）はまた、コレステロールマトリックス、シラスチックペレット（特に動物に使用される）中で処方することができる。追加される徐放出、デポ又は移植組成物、例えば気体又は液体リポソームは文献で公知である（U.S. Pat. No. 5,770,222；及び“Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems”, J. R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., N.Y., 1978）。
本明細書で提供される少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの組成物の範囲は、湿潤/乾燥系である場合には、再構成時に約1.0マイクログラム/mLから約1000mg/mLを生じる量を含むが、ただし前記より低い及び高い濃度も取り扱い可能であり目的のデリバリービヒクルに左右される（例えば溶液処方物は経皮パッチ、肺用、経粘膜又は浸透圧若しくはマイクロポンプ法とは相違するであろう）。
ある種の実施態様では、本明細書で提供される組成物は、任意の適切な補助剤の少なくとも1つ（例えば希釈剤、結合剤、安定化剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、保存料、アジュバントなど）を含む。ある種の実施態様では、医薬的に許容できる補助剤が該当する。そのような無菌的溶液の非限定的な例及びそれらを調製する方法は、当業界で例えば以下（ただし前記に限定されない）で周知である：Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (Easton, Pa.) 1990。
本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの投与態様、可溶性及び/又は安定性に対して適切である、医薬的に許容できる担体は日常的に選択することができる。
ある種の実施態様では、本明細書で提供される組成物は、1つ以上の医薬賦形剤及び/又は添加剤を含む。医薬賦形剤及び添加剤の非限定的な例は、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、及び炭水化物、例えば糖類（単糖類、二、三、四糖類及びオリゴ糖；誘導糖類、例えばアルジトール、アルドン酸、エステル化糖類など；及び多糖類又は糖ポリマーを含む）であり、前記は単独で又は組み合わされて存在し、単独で又は組み合わされて重量若しくは体積の1－99.99％を構成する。タンパク質賦形剤の非限定的な例には、血清アルブミン（例えばヒト血清アルブミン（HAS））、組換えヒトアルブミン（rHA）、ゲラチン、カゼインなどが含まれる。アミノ酸/抗体成分（前記はまた緩衝性能として機能することができる）の非限定的な例には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが含まれる。ある種の実施態様では、アミノ酸はグリシンである。炭水化物賦形剤の非限定的な例には、単糖類、例えばフルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、D-マンノース、ソルボースなど；二糖類、例えばラクトース、シュクロース、トレハロース、セロビオースなど；多糖類、例えばラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；及びアルジトール、例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどが含まれる。ある種の実施態様では、炭水化物賦形剤はマンニトール、トレハロース、又はラフィノースである。
ある種の実施態様では、本明細書で提供される組成物は、1つ以上の緩衝剤又はpH調整剤を含み、典型的には、緩衝剤は有機酸又は塩基から調製される塩である。緩衝剤の非限定的な例には、有機酸塩、例えばクエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸又はフタル酸の塩；トリス、トロメタミン塩酸塩、又はリン酸緩衝剤が含まれる。ある種の実施態様では、緩衝剤は有機酸塩（例えばクエン酸塩）である。他の賦形剤、例えば等張性薬剤、緩衝剤、抗酸化剤、保存増強剤は場合によって及び好ましくは希釈剤に添加される。等張性薬剤（例えばグリセリン）は、一般的に公知の濃度で用いられる。生理学的に許容される緩衝剤が好ましくは添加され、改善されたpH制御を提供する。組成物は、広範囲のpH、例えばpH約4からpH約10、特にpH約5からpH約9の範囲、もっとも詳細には約6.0から約8.0の範囲をカバーすることができる。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される組成物は、約6.8から約7.8のpHを有する。好ましい緩衝剤にはリン酸緩衝剤、もっとも好ましくはリン酸ナトリウム、特にリン酸緩衝食塩水（PBS）が含まれる。
本明細書で提供される組成物は以下を含む：1つ以上のポリマー賦形剤/添加剤、例えばポリビニルピロリドン、フィコール（重合糖類）、デキストラン（例えばシクロデキストリン、例えば2-ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、香味剤、抗菌剤、甘味剤、抗酸化剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えばポリソルベート、例えば“TWEEN20”及び“TWEEN80”）、脂質（例えばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）、及び/又はキレート剤（例えばEDTA）。
他の添加剤も場合によって組成物に添加し凝集を防ぐことができる。前記は例えば以下である：医薬的に許容できる可溶化剤、例えばTween20（ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート）、Tween40（ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノパルミテート）、Tween80（ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレート）、PluronicF68（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、及びPEG（ポリエチレングリコール）又は非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート20若しくは80又はポロキサマー184若しくは188、Pluronic(商標)ポリオール（polyls）、他のブロックコポリマー、並びにキレーター、例えばEDTA及びEGTA。これらの添加剤は、ポンプ又はプラスチック容器を用いて組成物を投与する場合には特に有用である。医薬的に許容できる界面活性剤の存在は、タンパク質の凝集傾向を緩和する。
本明細書で提供される組成物での使用に適切な追加される医薬賦形剤及び/又は添加剤は当業者には公知であり、例えば以下で言及される：“Remington: The Science & Practice of Pharmacy”, 19.sup.th ed., Williams & Williams, 1995；及び“Physician's Desk Reference”, 52nd ed., Medical Economics, Montvale, N.J., 1998（前記は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。ある種の個別の実施態様では、担体又は賦形剤材料は、炭水化物（例えば糖類及びアルジトール）及び緩衝剤（例えばクエン酸）又はポリマー薬剤である。
いくつかの実施態様では、水性希釈剤は、場合によってさらに医薬的に許容できる保存料を含む。例示的な保存料には、フェノール、m-クレゾール、p-クレゾール、o-クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール、又は前記の混合物が含まれる。組成物で用いられる保存料の濃度は、抗微生物作用を生じるために十分な濃度である。そのような濃度は選択される保存料に左右され、当業者は容易に決定することができる。
本明細書で提供される組成物は、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを、フェノール、m-クレゾール、p-クレゾール、o-クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール又は前記の混合物とともに水性希釈剤中で混合する工程を含むプロセスによって調製できる。本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント及び保存料を水性希釈剤中で混合する工程は、通常的な溶解及び混合手順を用いて実施される。適切な組成物を調製するために、所望の濃度の本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント及び保存料を提供するために十分な量で、緩衝溶液中の本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの測定量を緩衝溶液中の所望の保存料と一緒にする。本明細書で提供される組成物は、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、及び選択された緩衝剤、好ましくは食塩水又は選択された塩を含むリン酸緩衝液を混合する工程を含むプロセスによって調製できる。本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント及び緩衝剤を水性希釈剤中で混合する工程は、通常的な溶解及び混合手順で実施される。適切な組成物を調製するために、所望の濃度のタンパク質及び緩衝液を提供するために十分な量で、水又は緩衝液中の本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの測定量を水中の所望の緩衝剤と一緒にする。当業者にはこれらのプロセスの多様なものが認識されていよう。例えば、添加される組成物の順序、追加の添加剤が用いられるか否か、組成物を調製する温度及びpHは、用いられる濃度及び投与手段のためにいずれも最適化され得る因子である。
非経口処方物
ある種の実施態様では、本明細書で提供される組成物は、非経口注射可能投与のために処方される。本明細書で用いられるように、“非経口”という用語は、静脈内、脈管内、筋肉内、皮内、皮下、及び眼内を含む。非経口投与のためには、組成物は、、溶液、懸濁液、エマルジョン又は凍結乾燥散剤として、医薬的に許容できる非経口ビヒクルと結合させて又は前記ビヒクルとは別々に提供される。そのようなビヒクルの非限定的な例は、水、食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、グリコール、エタノール、及び1－10％ヒト血清アルブミンである。リポソーム及び非水性ビヒクル（例えば不揮発性油）もまた用いることができる。ビヒクル又は凍結乾燥散剤は、等張性（例えば塩化ナトリウム、マンニトール）及び化学的安定性（例えば緩衝剤又は保存料）を維持する添加剤を含むことができる。処方物は公知の又は適切な技術によって安定化される。
適切な医薬担体は、この分野の標準的参考書であるレミントンの著書の最新版（Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol）に記載されている。
非経口投与用処方物は、一般的賦形剤として無菌水又は食塩水、ポリアルキレングリコール（例えばポリエチレングリコール）、植物起源の油、水素添加ナフタレンなどを含むことができる。注射用の水性又は油性懸濁物は、公知の方法にしたがい、適切な乳化剤又は加湿剤及び懸濁剤を用いて調製することができる。注射用薬剤は、非毒性非経口投与可能希釈剤、例えば水溶液又は無菌的注射可能溶液若しくは溶媒中の懸濁物であり得る。有用なビヒクル又は溶媒として、水、リンゲル溶液、等張食塩水などが可能である。通常溶媒又は懸濁溶媒として、無菌的な不揮発性油を用いることができる。これらの目的のために、任意の種類の不揮発性油及び脂肪酸を用いることができ、前記には、天然若しくは合成若しくは半合成脂肪油又は脂肪酸；天然若しくは合成若しくは半合成モノ-、ジ-、又はトリ-グリセリドが含まれる。非経口投与は当業界で公知であり、通常的な注射手段、ガス加圧無針注射装置（米国特許5,851,198号に記載）及びレーザー孔開け装置（米国特許5,839,446号に記載）が含まれるが、ただし前記に限定されない（前記特許は参照によってその全体が本明細書に含まれる）。
肺処方物
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含む組成物は、肺投与のために処方される。肺投与のためには、組成物は、肺又は洞の下部気道に到達するために有効な粒子サイズでデリバリーされる。
肺投与用組成物は、吸入による治療薬剤の投与のために当業界で公知の吸入又は鼻の多様な任意の装置によってデリバリーされ得る。患者の洞腔又は肺胞にエーロゾル化処方物を沈着させることができるこれらの装置には、用量計量吸入装置、ネブライザー、乾燥散剤発生装置、噴霧装置などが含まれる。本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの肺又は鼻投与のための適切な他の装置はまた当業界で公知である。そのような装置はいずれも、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントのエーロゾルを分配する装置に適切な処方物を使用する。そのようなエーロゾルは、溶液（水性及び非水性の両方）又は固体粒子のどちらかで構成され得る。用量計量吸入装置、例えばベントリン（Ventolin(商標)）用量計量吸入装置は典型的には推進剤ガスを使用し、吸気時の駆動を含む（例えばWO 94/16970、WO 98/35888を参照されたい）。乾燥散剤吸入装置、例えばタービュヘイラー（TurbuhalerTM）（Astra）、ロタヘイラー（Rotahaler(商標)）（Glaxo）、ディスカス（Diskus(商標)）（Glaxo）（例を挙げればインヘールテラピューティクス（Inhale Therapeutics）によって市販されている装置)は、呼気による混合散剤の駆動を利用する（U.S. Pat. No.4,668,218（Astra）、EP 237507（Astra）、WO 97/25086（Glaxo）、WO 94/08552（Dura）、U.S. Pat. No.5,458,135（Inhale）、WO 94/06498（Fisons）（前記は参照によってその全体が本明細書に含まれる））。
ネブライザー、例えばウルトラベント（Ultravent(商標)）ネブライザー（Mallinckrodt）、及びアコーンII（Acorn II(商標)）ネブライザー（Marquest Medical Products）（U.S. Pat. No.5,404,871（Aradigm）、WO 97/22376（前記参考文献は参照によってその全体が本明細書に含まれる））は溶液からエーロゾルを生じ、一方、用量計量吸入装置、乾燥散剤吸入装置などは小粒子エーロゾルを生成する。市場で入手できる吸入装置のそのような例は非限定的な例であり、範囲を限定しようとするものではない。
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含む噴霧は、少なくとも1つの本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの懸濁液又は溶液を加圧下のノズルから押し出すことによって生成できる。ノズルサイズ及び構造、適用圧力、液体送り速度を選択して、所望のアウトプット及び粒子サイズを達成することができる。エレクトロスプレーは、例えばキャピラリー又はノズル送り出しと接続された電場によって生成され得る。有利には、噴霧装置によってデリバリーされる、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含む組成物の粒子は、約10μm未満、例えば約1μmから約5μm、例えば約2μmから約3μmの範囲の粒子サイズを有する。
噴霧装置による使用で適切な、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含む組成物の処方物は、典型的には、溶液1mL当たり約0.1mgから約100mg（又はmg/gm）、又はその間の値（例えば0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90、又は100mg/mL（又はmg/gm）（ただし前記に限定されない））の任意の範囲の濃度で水溶液中に本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。処方物は、薬剤（例えば賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存料、界面活性剤、及び好ましくは亜鉛）を含む。処方物はまた、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの組成物の安定化のための賦形剤又は薬剤、例えば緩衝剤、還元剤、バルクタンパク質、又は炭水化物を含むことができる。そのような組成物を処方するときに有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミンなどが含まれる。抗体組成タンパク質を処方するときに有用な典型的な炭水化物には、シュクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどが含まれる。組成物はまた界面活性剤を含むことができ、前記は、エーロゾル形成時の溶液の霧化によって引き起こされる組成物の表面誘発凝集を軽減又は防止することができる。通常的な多様な界面活性剤、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステル及びアルコール、並びにポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルを利用することができる。量は概ね処方物の重量で0.001から14％の範囲であろう。好ましい界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリソルベート80、ポリソルベート20などである。
ある種の実施態様では、組成物は、ネブライザー（例えばジェットネブライザー又は超音波ネブライザー）により投与される。典型的には、ジェットネブライザーでは、圧縮空気源を用いて、穴を通る高速エアージェットを作り出す。ノズルを超えてガスが膨張するとき、低圧領域が作り出され、前記は、液体貯留槽に接続されたキャピラリーチューブから抗体組成タンパク質の溶液を引き出す。キャピラリーチューブからの液体流は不安定なフィラメント中に拡散し、それがチューブを出るとき小滴はエーロゾルを形成する。ある範囲の構造、流速及びバッフルタイプを用いて、与えられたジェットネブライザーから所望の性能特性を達成することができる。超音波ネブライザーでは、高周波数電気エネルギーを用い、典型的には圧電変換器を利用して振動性機械エネルギーを作り出す。このエネルギーを抗体組成タンパク質に直接的に又はカップリング流体を介して伝達し、抗体組成タンパク質を含むエーロゾルを作り出す。有利には、ネブライザーによってデリバリーされる抗体組成タンパク質の粒子は、約10μm未満、好ましくは約1μmから約5μm、もっとも好ましく約2μmから約3μmの範囲の粒子サイズを有する。
ある種の実施態様では、組成物は用量計量吸入装置（MDI）により投与され、ここでは、推進剤、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、及び任意の賦形剤又は他の添加剤は、混合物として液化圧縮ガスを含むキャニスターに収納される。
計量バルブの駆動はエーロゾルとしてダイ混合物を放出し、前記は好ましくは約10μm未満、好ましくは約1μmから約5μm、もっとも好ましくは約2μmから約3μmのサイズ範囲の粒子を含む。所望のエーロゾル粒子サイズは、当業者に公知の多様な方法（ジェットミル、噴霧乾燥、臨界点凝縮などを含む）によって生成される抗体組成タンパク質の処方を用いることによって得ることができる。好ましい用量計量吸入装置には、3M又はGlaxo製造でハイドロフルオロカーボン推進剤使用のものが含まれる。
用量計量吸入装置で使用される、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの処方物は、一般的には、水性媒体中の懸濁物として（界面活性剤に補助され推進剤中に懸濁されている）少なくとも1つの抗IL-6抗体を含む微細分割散剤を含む。推進剤は、この目的のために用いられる任意の通常的材料、例えばクロロフルオロカーボン、ハイドロクロロフルオロカーボン、ハイドロフルオロカーボン、又はハイドロカーボンでよく、前記には、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール及び1,1,1,2-テトラフルオロエタン、HFA-134a（ハイドロフルオロアルカン-134a）、HFA-227（ハイドロフルオロアルカン-227）などが含まれる。いくつかの実施態様では、推進剤はハイドロフルオロカーボンである。界面活性剤は、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを推進剤中の懸濁物として安定化させるために、化学的分解に対抗する活性薬剤を保護するなどのために選択することができる。適切な界面活性剤には、ソルビタン三オレイン酸、大豆レクチン、オレイン酸などが含まれる。いくつかの事例では、溶液エーロゾルは特にエタノールのような溶媒を使用する。
タンパク質を処方するために当業界で公知の追加の薬剤もまた当該処方物に含むことができる。
経口処方物
ある種の実施態様では、本明細書で提供される組成物は経口投与のために処方される。ある種の実施態様では、経口投与のために、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを投与する組成物及び方法は、腸壁の透過性の人工的増強のためにアジュバント（例えばレゾルシノール及び非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイルエーテル及びn-ヘキサデシルポリエチレンエーテル）の共同投与とともに、酵素分解阻害のために酵素阻害剤（例えば膵トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（DFF）及びトラシロール）の共同投与を含む。経口投与用の固体タイプ剤型の活性成分化合物を少なくとも1つの添加剤とともに混合することができる。前記添加剤にはシュクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、あるぎねーと、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成又は半合成ポリマー、及びグリセリドが含まれる。これらの剤型はまた、他のタイプの添加剤、例えば不活性希釈剤、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、パラベン、保存剤（例えばソルビン酸、アスコルビン酸、アルファ-トコフェノール）、抗酸化剤（例えばシステイン）、崩壊剤、結合剤、膨張剤、緩衝剤、甘味剤、香味剤、香料など含むことができる。
ある種の実施態様では、経口投与用錠剤及びピルはさらにまた腸溶性被覆調製物に加工することができる。ある種の実施態様では、経口投与用液体調製物には、医療的使用が可能な例えばエマルジョン、シロップ、エリキシル、懸濁物及び溶液調製物が含まれる。これらに調製物は、前記分野で通常的に使用される不活性希釈剤、例えば水を含むことができる。例えばインスリン及びヘパリンについて記載されたように（米国特許4,239,754号）、リポソーム調製物を経口投与調製物のために利用することができる。付け加えれば、例えば米国特許4,925,673号に記載されたように、混合アミノ酸の人工ポリマー（プロテイノイド）の微小球を医薬の経口投与に利用できる。さらにまた、担体化合物（例えば米国特許5,879,681号及び5,871,753号に記載されたもの）が生物学的活性薬剤の経口投与で用いられる。
粘膜処方物
ある種の実施態様では、本明細書で提供される組成物は、粘膜表面からの吸収のために処方される。ある種の実施態様では、粘膜表面からの吸収のために、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを投与する組成物及び方法はエマルジョンを含み、前記エマルジョンは、複数のミクロン以下の粒子、粘膜付着性巨大分子、生物活性ペプチド及び水性連続相（前記はエマルジョン粒子の粘膜吸着を達成することによって粘膜表面からの吸収を促進する（米国特許5,514,670号））を含む。本明細書提供のエマルジョンの適用に適切な粘膜表面には、例えば角膜、結膜、頬、舌下、鼻、肺、胃、腸、及び結腸投与ルートが含まれ得る。膣又は直腸投与用処方物（例えば座薬）は、賦形剤として例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、カカオ脂などを含むことができる。鼻内投与用処方物は固体でもよく賦形剤として例えばラクトースを含むか、又は水性若しくは油性点鼻溶液であってもよい。頬投与のために、賦形剤は、例えば糖類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、アルファデンプンなどを含む（米国特許5,849,695号）。
経皮処方物
ある種の実施態様では、本明細書提供の組成物は経皮投与のために処方される。ある種の実施態様では、経皮投与のために、組成物は、本明細書記載の少なくとも1つの抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント含み、前記は、デリバリー装置（例えばリポソーム又はポリマーナノ粒子、マイクロ粒子、マイクロカプセル、微小球（特段の記載がなければ包括的にマイクロ粒子と称される））中で被包化される。経皮投与のために、マイクロ粒子を含む複数の適切な装置が公知であり、マイクロ粒子は以下から作製される：合成ポリマー、例えばポリヒドロキシ酸、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸及び前記のコポリマー、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、及びポリホスファゼン、並びに天然ポリマー、例えばコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミン及び他のタンパク質、アルギネート及び他の多糖類、並びに前記の組合せ（米国特許5,814,599号）。
キット
本明細書で提供されるものはまたキットであり、前記は、本明細書記載の1つ以上の抗体又はその抗原結合フラグメント、又は前記の複合化物を含む。具体的な実施態様では、本明細書で提供されるものは医薬パック又はキットであり、前記は、本明細書記載の医薬組成物の成分（例えば本明細書記載の1つ以上の抗体又はその抗原結合フラグメント）の1つ以上で満たされた1つ以上の容器を含む。いくつかの実施態様では、キットは、本明細書記載の医薬組成物及び予防用又は治療用薬剤を含む。
場合によってそのような容器に付されるものは、医薬又は生物学的製剤、剤型の製造、使用又は販売を規制する政府機関による所定の様式の通知、及び/又はその使用についての指示である。ある種の実施態様では、キットに含まれる指示は、医薬組成物の投与のために投薬量及び/又は用量レジメンに関する指示を提供する。
医薬を放送する材料の例には、ブリスターパック、ビン、小箱、サシェ、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器、注射器、並びに選択された医薬組成物及び意図される投与及び治療態様に適切な任意の包装材料が含まれるが、ただし前記に限定されない。
本明細書で提供されるキットはさらにまた、活性成分を投与するために用いられる装置を含むことができる。そのような装置の例には、注射器、無針注射器、ドリップバッグ、貼り薬、及び吸入器が含まれるが、ただし前記に限定されない。
本明細書で提供されるキットはさらにまた、成分を投与するために用いることができる医薬的に許容できるビヒクルを含むことができる。例えば、成分が非経口投与のために再構成する必要がある固体形の場合、キットは、適切なビヒクルの封入容器を含むことができ、成分は前記ビヒクル中で溶解され、非経口投与に適切な微粒子を含まない溶液を形成することができる。或いは前記溶液を経口投与のための懸濁物として再構成してもよい。医薬的に許容できるビヒクルの例には以下が含まれる（ただしそれらに限定されない）：USP注射水、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロース塩化ナトリウム注射液、乳酸添加リンゲル注射液、水混和性ビヒクル（エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールが含まれるが、ただし前記に限定されない）、及び非水性ビヒクル（トウモロコシ油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルが含まれるがただしそれらに限定されない）。
使用及び方法
治療的使用及び方法
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものはLGALS3関連疾患又は症状を治療する方法であって、前記方法は、その必要がある対象動物に治療的に有効な量の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む。例示的なLGALS3関連疾患又は症状には、癌、腫瘍転移、腫瘍脈管形成、心不全、肺線維症、腎糸球体疾患、炎症性疾患、及びリウマチ性疾患が含まれるが、ただしそれらに限定されない。
具体的な実施態様では、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上の追加の治療薬剤と併用して投与される。いくつかの実施態様では、1つ以上の追加の治療薬剤は、LGALS3関連疾患又は症状の1つ以上の症候を抑え又は治療する。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは、対象動物の癌、特に対象動物のLGALS3陽性癌を治療する方法であって、前記方法は、その必要がある対象動物に治療的に有効な量の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む。具体的な実施態様では、LGALS3陽性癌は、卵巣癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、卵管癌、、子宮（例えば内膜）癌、原発性腹膜癌（primary peritoneum cancer）、又はLGALS3を発現する任意の他の組織の癌である。
特定の種の対象動物で抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを使用するために、当該特定の種のLGALS3と結合する抗LGALS3抗体又はそのフラグメントが用いられる。例えば、人間を治療するためには、ヒトLGALS3と結合する抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントが用いられる。具体的な実施態様では、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは免疫グロブリンである。
加えて、特定の種の対象動物で抗LGALS3抗体又はそのフラグメントを使用するために、ある種の実施態様では、抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントの定常領域は当該特定の種に由来する。例えば、ヒトを治療するためには、抗LGALS3抗体又はそのフラグメントは、免疫グロブリンである抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含み、ここで、前記免疫グロブリンはヒト定常領域を含む。具体的な実施態様では、対象動物はヒトである。
具体的な実施態様では、治療は有益な又は所望の臨床成果を達成するために実施され得る。前記成果には、検出できてもできなくても、症候の緩和、疾患の程度の軽減、疾患状態の安定化（すなわち悪化しない）、疾患進行の遅延又は減速、疾患状態の緩和又は軽減、及び寛解（部分的であれ総合的であれ）が含まれる（ただし前記に限定されない）。具体的な実施態様では、“治療”はまた、治療を受けなかった場合に予想される生存と比較して生存を引き延ばすことができる。具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、又は本明細書記載の医薬組成物の癌（例えば卵巣癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、卵管癌、、子宮（例えば内膜）癌、若しくは原発性腹膜癌、又はLGALS3を発現する任意の他の組織の癌）を有する対象動物への投与は、以下の効果の少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ若しくは5つ以上を達成する：（i）癌の1つ以上の症候の重篤度の軽減又は緩和；（ii）癌に関連する1つ以上の症候の持続期間の短縮；（iii）癌に関連する症候の再発の予防；（iv）対象動物の入院の減少；（v）入院期間の減少；（vi）対象動物の生存の増加；（vii）別の療法の治療効果の増強又は改善；（viii）癌に関連する1つ以上の症候の発達又は開始の抑制；（ix）癌に関連する症候の数の減少；（x）当業界で周知の方法によって評価される生活の質の改善；（x）腫瘍の再発の抑制；（xi）腫瘍及び/又は腫瘍に関連する1つ以上の症候の退行；（xii）腫瘍及び/又は腫瘍に関連する1つ以上の症候の進行の抑制；（xiii）腫瘍増殖の低下；（xiv）腫瘍サイズ（例えば体積又は直径）の低下；（xv）新規形成腫瘍の形成低下；（xvi）原発性、領域性及び/又は転移腫瘍の予防、消滅、除去又は制御；（xvii）転移の数又はサイズの低下；（xviii）死亡率の減少；（xix）無再発生存期間の増加；（xx）腫瘍のサイズが維持されるか若しくは増加しないか、又は当業者が利用できる通常的な方法（例えば磁気共鳴画像化（MRI）、ダイナミック造影MRI（DCE-MRI）、X-線、及びコンピュータ支援断層撮影（CT）スキャン、又は陽電子放射断層撮影（PET）スキャン）によって評価したとき、標準的治療法の実施後の腫瘍の増加より少ない増加；及び/又は（xxi）患者の寛解期間の増加。治療は前述の1つ以上を達成し得る。
診断的使用
ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを診断目的に用いて、本明細書記載の症状（例えばLGALS3陽性癌細胞を巻き込む症状）を検出、診断又は監視することができる。ある種の実施態様では、診断目的で使用される抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは標識される。
ある種の実施態様では、本明細書で提供されるものは本明細書記載の症状を検出する方法であって、前記方法は、本明細書記載の1つ以上の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを用いて、対象動物の細胞又は組織サンプルでLGALS3又はそのフラグメントの発現をアッセイする工程；及び（b）LGALS3又はそのフラグメント発現レベルを、コントロールレベル、例えば正常組織サンプル（例えば本明細書記載の症状を持たない対象動物由来、又は症状開始前の同じ患者由来）のレベルと比較する工程を含み、LGALS3又はそのフラグメント発現のコントロールレベルと比較した、LGALS3又はそのフラグメント発現のアッセイしたレベルの増加又は低下は本明細書記載の症状の指標となる。
本明細書記載の抗体を用いて、生物学的サンプル中のLGALS3又はそのフラグメントのレベルを古典的な免疫組織化学的方法を用いてアッセイすることができる。前記免疫組織化学的方法は、本明細書に記載され又は当業者に公知である（例えば以下を参照されたい：Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101 :976-985；及びJalkanen et al. (1987) J. Cell . Biol. 105:3087-3096）。タンパク質遺伝子発現の検出に有用な他の抗体系方法には、免疫アッセイ（例えば酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）及び放射性免疫アッセイ（RIA））が含まれる。適切な抗体アッセイ標識は当業界で公知であり、酵素標識（例えばグルコースオキシダーゼ）；放射性同位体、例えばヨウ素（125I、121I）、炭素（14C）、硫黄（35S）、トリチウム（3H）、インジウム（121In）、及びテクネチウム（99Tc）；発光標識、例えばルミノール；及び蛍光標識、例えばフルオレセイン及びローダミン；並びにビオチンが含まれる。
ある種の実施態様では、本明細書記載の症状（例えばLGALS3陽性癌）の監視は、最初の診断からある期間診断方法を繰返すことによって実施される。
標識分子の存在は、in vivoスキャンニングのために当業界で公知の方法を用いて対象動物で検出することができる。当業者は、個別の標識を検出するために適当な方法を決定することができるであろう。本発明の診断方法で用いることができる方法及び装置には、コンピュータ支援断層法（CT）、全身スキャン、例えばポジトロン（position）放射断層撮影法（PET）、磁気共鳴画像化（MRI）、及び超音波検査法が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
用量及びレジメン
本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、又は組成物、又は当該抗体を発現する細胞、又はその抗原結合フラグメントを、多様なルートによって対象動物にデリバリーすることができる。これらルートには、非経口、鼻内、気管内、経口、皮内、外用、筋肉内、腹膜内、経皮、静脈内、腫瘍内、及び皮下ルートが含まれるが、ただしこれらに限定されない。肺投与もまた、例えば吸入器又はネブライザー及びスプレーとして使用するためのエーロゾル化剤による処方物によって利用できる。ある実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、又は組成物は、非経口的に対象動物に投与される。具体的な実施態様では、前記非経口投与は静脈内、筋肉内又は皮下である。
症状の治療及び/又は予防で有効な抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、又は組成物の量は当該疾患の性質に左右され、標準的な臨床技術によって決定することができる。
組成物で用いられるべき正確な用量はまた、投与ルート及び癌のタイプに左右され、医師の判定及び各対象動物の環境にしたがって決定されるべきである。例えば、有効な用量はまた、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重及び健康状態を含む）、患者が人間であるか動物であるか、投与される他の医薬、又は治療が予防であるか治療であるかに応じて変動し得る。治療投薬量を場合によって滴定して、安全性及び有効性を最適化する。
ある種の実施態様では、in vitroアッセイを利用して最適投薬範囲の識別に役立てる。有効な用量は、in vitro又は動物モデル検査系から得られる用量応答曲線から外挿することができる。
抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントについては、投薬量は、約0.0001から100mg/kg患者体重、より通常では0.01から15mg/kgの範囲である。例えば投薬量は、1mg/kg体重、10mg/kg体重、又は1－10mg/kgの範囲内、換言すれば、70kgの患者で、それぞれ70mg又は700mg又は70－700mgの範囲内である。一般的には、外来ポリペプチドに対する免疫応答が原因で、ヒト抗体は他の種由来の抗体よりもヒトの体内でより長い半減期を有する。したがって、ヒト抗体ではより低い投薬量及びより少ない頻度がしばしば可能である。
ある種の実施態様では、例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント、又はCARを発現する操作細胞の投与では、対象動物は、約100万から約1000億細胞、例えば約100万から約500億細胞の範囲（例えば約500万細胞、約2500万細胞、約5億細胞、約10億細胞、約50億細胞、約200億細胞、約300億細胞、約400億細胞、又は前述の値の任意の2つによって指定される範囲）、例えば約1000万から約1000億細胞（例えば約2000万細胞、約3000万細胞、約4000万細胞、約6000万細胞、約7000万細胞、約8000万細胞、約9000万細胞、約100億細胞、約250億細胞、約500億細胞、約750億細胞、、約900億細胞、又は前述の値の任意の2つによって指定される範囲）、及びいくつかの事例では約1億細胞から約500憶細胞（例えば約1憶2000万細胞、約2憶5000万細胞、約3憶5000万細胞、約4憶5000万細胞、、約6憶5000万細胞、約8億細胞、約9億細胞、約30億細胞、約300億細胞、約450億細胞）又はこれら範囲の間の任意の値で投与される。いくつかの実施態様では、総細胞用量及び/又は個々の部分細胞集団用量は、体重1kg当たり104又は約104から109又は約109細胞の範囲内、例えば105から106細胞/kg体重、例えば1ｘ105細胞/kg又は約1ｘ105細胞/kg、1.5ｘ105細胞/kg又は約1.5ｘ105細胞/kg、2ｘ105細胞/kg又は約2ｘ105細胞/kg、1ｘ106細胞/kg又は約1ｘ106細胞/kg、2ｘ106細胞/kg又は約2ｘ106細胞/kg、5ｘ106細胞/kg又は約5ｘ106細胞/kg、又は10ｘ106細胞/kg体重又は約10ｘ106細胞/kg体重である。例えば、いくつかの実施態様では、細胞は、一定の誤差範囲又は誤差範囲内において、104又は約104から109又は約109のT細胞/kg体重で、例えば105から107T細胞/kg体重で投与される。
抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは複数の時点で投与できる。投薬毎の間隔は例えば1週間、2週間、3週間、4週間、1ヶ月、2ヶ月、3か月、6ヶ月、1年、又は2年であり得る。
併用療法
具体的な実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物をその必要がある対象動物に投与する工程を含む、本明細書で提供される、対象動物で癌（例えば卵巣癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、卵管癌、子宮（例えば内膜）癌、又は原発性腹膜癌）を治療する方法は、さらにまた1つ以上の追加の治療薬剤を当該対象動物に投与する工程を含む。具体的な実施態様では、追加の治療薬剤は、対象動物の癌（例えば卵巣癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、卵管癌、子宮（例えば内膜）癌、及び原発性腹膜癌）を治療するためのものである。具体的な実施態様では、追加の治療薬剤は、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントによる治療の任意の副作用を治療するためのものである。
具体的な実施態様では、追加の薬剤は卵巣癌を治療するために用いられる薬剤である。具体的な実施態様では、追加の薬剤は膵臓癌を治療するために用いられる薬剤である。具体的な実施態様では、追加の薬剤は肺癌を治療するために用いられる薬剤である。具体的な実施態様では、追加の薬剤は乳癌を治療するために用いられる薬剤である。具体的な実施態様では、追加の薬剤は卵管癌を治療するために用いられる薬剤である。具体的な実施態様では、追加の薬剤は子宮（例えば内膜）癌を治療するために用いられる薬剤である。具体的な実施態様では、追加の薬剤は原発性腹膜癌を治療するために用いられる薬剤である。
本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントは、追加の治療薬剤と一斉に又は連続して（前及び/又は後）投与され得る。抗体又はその抗原結合フラグメント及び追加の治療薬剤は、同じ組成物又は異なる組成物として、さらに同じ又は異なる投与ルートによって投与され得る。第一の治療法（本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、又は追加の治療薬剤）は、第二の治療法（本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント、又は追加の治療薬剤）の投与の前（例えば5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、又は12週間前）、投与に付随して、又は投与に続いて（例えば5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、又は12週間後）、癌（例えば卵巣癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、卵管癌、子宮（例えば内膜）癌、及び原発性腹膜癌）を有する対象動物に投与され得る。ある種の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントと併用して対象動物に投与される追加の治療薬剤は、同じ組成物（医薬組成物）で投与される。他の実施態様では、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメントと併用して投与される追加の治療薬剤は、本明細書記載の抗LGALS3抗体又はその抗原結合フラグメント以外の異なる組成物で対象動物に投与される（例えば2つ以上の医薬組成物が用いられる）。
患者集団
本明細書提供の方法にしたがって治療される対象動物は、任意の哺乳動物、例えばげっ歯類、ネコ、イヌ類、ウマ、乳牛、ブタ、サル、霊長類動物、又は人間などであり得る。個別の実施態様では、対象動物は人間である。別の個別の実施態様では、対象動物はイヌ類である。本明細書で用いられるように、“対象動物”及び“患者”は互換的に用いられる。
ある種の実施態様では、本明細書提供の方法にしたがって治療される対象動物は、LGALS3陽性癌と診断されてある（前記陽性癌は、卵巣癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、子宮癌、卵管癌、若しくは原発性腹膜癌、又はLGALS3を発現する任意の他の組織の癌を含むが、ただし前記に限定されない）。
以下の例は例示として提供され、限定として提供されるものではない。
ガレクチン-3-Fcドメイン融合タンパク質の作製
抗原としての使用のため及びLGALS3機能研究のためにガレクチン-3(LGALS3)-Fcドメイン融合タンパク質を作製した。
以前に、ムチン-16（MUC16）エクトドメインモノクローナル抗体及び融合タンパク質が、pFUSE-hIgG1-Fc2ベクター（InvivoGen）を用いて作製された。前記ベクターはヒトIgG1-Fcバックボーンを有する‘ダミー’抗体として機能する（Rao et al. (2015) PLoS One 10, e012663；Rao et al. (2017) ACS Chem. Biol. 12: 2085-2096（前記の各々は参照によってその全体が本明細書に含まれる））。pFUSE-hIgG1-Fc2ベクターは、ヒトIgG1重鎖のFc領域（CH2及びCH3ドメイン）及びヒンジ領域に連結された選択抗原（例えばLGALS3）を含む融合タンパク質の作製を可能にする。ヒンジはFc融合タンパク質の2つの部分の間の可撓性スペーサーとして機能し、当該分子の各部分が独立して機能することを可能にする。20アミノ酸のIL-2シグナル配列を選択した抗原のN-末端に連結して、抗原性融合タンパク質の分泌を可能にする。IL-2シグナルペプチドは細胞内でSer20の後ろで切断される。
PCRプライマーを、フォワードプライマーとして制限酵素部位EcoRV、及びリバースプライマーとしてNcoIを利用して設計し、LGALS3のフラグメント（配列番号:1のアミノ酸117－244、下記下線部分）をコードするDNAを抽出した。前記フラグメントはLGALS3糖結合ドメインをを含む（図4、下記太字部分）。
ヒトガレクチン-3
Figure 0007539834000001
（配列番号:1）
PCR増幅に用いられる鋳型は、ATCC（Manassas, VA）から入手したLGALS3 cDNAクローンBC001120.2（MGC:2058 IMAGE:3050135 GenBank：AAH01120.1）であった。BC001120.2ガレクチン-3 cDNAクローンは以下のヌクレオチド配列を有する（LGALS3の完全なコード配列はイタリック体であり、増幅部分は下線を付されている）
Figure 0007539834000002
（配列番号:29）
増幅される部分は、下記アミノ酸配列を有する117－244 LGALS3をコードする：
PYNLPLPGGVVPRMLITILGTVKPNANRIALDFQRGNDVAFHFNPRFNENNRRVIVCNTKLDNNWGREERQSVFPFESGKPFKIQVLVEPDHFKVAVNDAHLLQYNHRVKKLNEISKLGISGDIDLTS（配列番号:27）
117-244LGALS3をコードするPCR生成物を続いて1％アガロースゲルで精製し、配列決定してpFUSE-IgG1-Fc2ベクター（Invivogen）に挿入し、117-244LGALS3-pFUSE-hIgG1-Fc2を作製した。前記はガレクチン-3糖結合部分を模倣するが、ガレクチン-3ペンタマーを形成する能力を欠き、安定化したガレクチン-3ゲル/マトリックスの形成を妨げる。
pFUSE-IgG1-Fc2ベクター（Invivogen）は下記の核酸配列を有する（EcoRI及びNcoIクローニング部位には下線が付されている）：
GGATCTGCGATCGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACGGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGCTGAAGCTTCGAGGGGCTCGCATCTCTCCTTCACGCGCCCGCCGCCCTACCTGAGGCCGCCATCCACGCCGGTTGAGTCGCGTTCTGCCGCCTCCCGCCTGTGGTGCCTCCTGAACTGCGTCCGCCGTCTAGGTAAGTTTAAAGCTCAGGTCGAGACCGGGCCTTTGTCCGGCGCTCCCTTGGAGCCTACCTAGACTCAGCCGGCTCTCCACGCTTTGCCTGACCCTGCTTGCTCAACTCTACGTCTTTGTTTCGTTTTCTGTTCTGCGCCGTTACAGATCCAAGCTGTGACCGGCGCCTACCTGAGATCACCGGcGAAGGAGGGCCACCATGTACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTTGTCACGAATTCGATATCGGCCATGGTTAGATCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGTGCTAGCTGGCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATGGAATTAATTCTAAAATACAGCATAGCAAAACTTTAACCTCCAAATCAAGCCTCTACTTGAATCCTTTTCTGAGGGATGAATAAGGCATAGGCATCAGGGGCTGTTGCCAATGTGCATTAGCTGTTTGCAGCCTCACCTTCTTTCATGGAGTTTAAGATATAGTGTATTTTCCCAAGGTTTGAACTAGCTCTTCATTTCTTTATGTTTTAAATGCACTGACCTCCCACATTCCCTTTTTAGTAAAATATTCAGAAATAATTTAAATACATCATTGCAATGAAAATAAATGTTTTTTATTAGGCAGAATCCAGATGCTCAAGGCCCTTCATAATATCCCCCAGTTTAGTAGTTGGACTTAGGGAACAAAGGAACCTTTAATAGAAATTGGACAGCAAGAAAGCGAGCTTCTAGCTTATCCTCAGTCCTGCTCCTCTGCCACAAAGTGCACGCAGTTGCCGGCCGGGTCGCGCAGGGCGAACTCCCGCCCCCACGGCTGCTCGCCGATCTCGGTCATGGCCGGCCCGGAGGCGTCCCGGAAGTTCGTGGACACGACCTCCGACCACTCGGCGTACAGCTCGTCCAGGCCGCGCACCCACACCCAGGCCAGGGTGTTGTCCGGCACCACCTGGTCCTGGACCGCGCTGATGAACAGGGTCACGTCGTCCCGGACCACACCGGCGAAGTCGTCCTCCACGAAGTCCCGGGAGAACCCGAGCCGGTCGGTCCAGAACTCGACCGCTCCGGCGACGTCGCGCGCGGTGAGCACCGGAACGGCACTGGTCAACTTGGCCATGATGGCTCCTCctgtcaggagaggaaagagaagaaggttagtacaattgCTATAGTGAGTTGTATTATACTATGCAGATATACTATGCCAATGATTAATTGTCAAACTAGGGCTGCAgggttcatagtgccacttttcctgcactgccccatctcctgcccaccctttcccaggcatagacagtcagtgacttacCAAACTCACAGGAGGGAGAAGGCAGAAGCTTGAGACAGACCCGCGGGACCGCCGAACTGCGAGGGGACGTGGCTAGGGCGGCTTCTTTTATGGTGCGCCGGCCCTCGGAGGCAGGGCGCTCGGGGAGGCCTAGCGGCCAATCTGCGGTGGCAGGAGGCGGGGCCGAAGGCCGTGCCTGACCAATCCGGAGCACATAGGAGTCTCAGCCCCCCGCCCCAAAGCAAGGGGAAGTCACGCGCCTGTAGCGCCAGCGTGTTGTGAAATGGGGGCTTGGGGGGGTTGGGGCCCTGACTAGTCAAAACAAACTCCCATTGACGTCAATGGGGTGGAGACTTGGAAATCCCCGTGAGTCAAACCGCTATCCACGCCCATTGATGTACTGCCAAAACCGCATCATCATGGTAATAGCGATGACTAATACGTAGATGTACTGCCAAGTAGGAAAGTCCCATAAGGTCATGTACTGGGCATAATGCCAGGCGGGCCATTTACCGTCATTGACGTCAATAGGGGGCGTACTTGGCATATGATACACTTGATGTACTGCCAAGTGGGCAGTTTACCGTAAATACTCCACCCATTGACGTCAATGGAAAGTCCCTATTGGCGTTACTATGGGAACATACGTCATTATTGACGTCAATGGGCGGGGGTCGTTGGGCGGTCAGCCAGGCGGGCCATTTACCGTAAGTTATGTAACGCCTGCAGGTTAATTAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGGCTAGTTAATTAACATTTAAATCAGCGGCCGCAATAAAATATCTTTATTTTCATTACATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTGAATCGTAACTAACATACGCTCTCCATCAAAACAAAACGAAACAAAACAAACTAGCAAAATAGGCTGTCCCCAGTGCAAGTGCAGGTGCCAGAACATTTCTCTATCGAA（配列番号:30）
融合タンパク質をヒト293細胞で発現させ、免疫のためにタンパク質Aカラムで精製した。発現させた融合タンパク質は以下の配列を有する：
MYRMQLLSCIALSLALVTNSPYNLPLPGGVVPRMLITILGTVKPNANRIALDFQRGNDVAFHFNPRFNENNRRVIVCNTKLDNNWGREERQSVFPFESGKPFKIQVLVEPDHFKVAVNDAHLLQYNHRVKKLNEISKLGISGDIDLTSMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（配列番号:31）
ガレクチン-1の糖結合ドメインを有する陰性コントロールとして、第二の糖結合融合タンパク質（111-119LGALS1-pFUSE）を作製した。
ガレクチン-3の阻害は、オンコジーン活性化、細胞侵襲及び腫瘍増殖を抑制する
本発明者らによる以前の研究は、Raoらの論文に記載したように、卵巣腫瘍増殖及び侵襲におけるLGALS3-MUC16相互作用の役割を確立させた（Rao et al. (2017) ACS Chem. Biol. 12: 2085-2096（前記文献は参照によってその全体が本明細書に含まれる））。この研究から精選した実験は本明細書で重要であり、前記は、治療薬開発のための標的としてLGALS3を支持する。
図2Aは、MUC16オンコジーン活性化を阻止するLGALS3 shRNAを示す（いくつかのオンコジーン（EGFR、AKT、ERK及びSRCを含む）のリン酸化（それぞれP-EGFR、P-AKT、P-ERK、P-SRC）の阻害によって査定された）。SKOV3細胞におけるMUC16の発現は、pERK1/2、pSRC、及びEGFRのリン酸化を増加させた。しかしながら、MGAT5（shMGAT5）、ガレクチン-3（shLGALS3）、及びMUC16のN30のN－＞A変異のshRNAノックダウンはいずれも、MUC16c114誘発オンコジーン活性化を障害する。MGAT5（マンノシル(アルファ-1,6-)-糖タンパク質ベータ-1,6-N-アセチル-グルコサミニルトランスフェラーゼ）は、4-分枝N-グリカン（高親和性でガレクチン-3と結合する）の形成を触媒する。同様な効果がA2780-MUC16細胞で生じた。したがって、LGALS3の消失は、2つの卵巣モデルの多様なオンコジーンのMUC16活性化（MUC16c344）を大きく阻害する。
図2Bは、LGAL1（ガレクチン-1）ではなくLGALS3との競合は卵巣癌細胞株（OVCAR3、OVCA-432、OVCA-433及びCAOV3）のマトリゲル侵襲を阻止することを示す。これらの細胞株は、マルチタンデムリピートを有する完全長MUC16を発現し、CA125抗原を細胞培養上清に放出した。IgG1 Fcドメインに連結されたLGALS3の炭水化物結合ドメインを含む融合タンパク質117-244LGAL3-pFUSEは、卵巣癌細胞侵襲を有意に阻止したが、一方、LGALS1のN-末端タンパク質を含む融合タンパク質11-119LGAL1-pFUSEは侵襲を阻止しなかった。スウェインソニン及びキフネンシンは両方ともLGALS3リガンド（ポリラクトサミン）の合成を阻止し、さらにまたマトリゲル侵襲を実質的に低下させた。
図2Cは、LGALS3機能の阻害剤による腫瘍異種移植モデルにおけるA2780卵巣癌の抑制を示す。細胞株をグループ当たり10匹の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に導入した。shLGALS3阻害によるLGALS3発現の消失は腫瘍増殖において高度に阻害性である。117-244LGAL3-pFUSEによる腫瘍増殖の軽度の阻害もまた観察された。
図2Dは、MGAT5及びLGALS3のアンチセンスノックダウンは、SKOV3卵巣癌異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害することを示す。SKOV3では、MUC16過剰発現（c114）は腫瘍増殖を増強した（一番上の線）。対照的に、N-グリコシル化部位（N1-N24-N13-mut c114）の消失又はMGAT5若しくはLGALS3に対抗するshRNAは、コントロールレベルに増殖を低下させた。
ガレクチン-3抗体の作製
高親和性抗ガレクチン-（LGALS3）抗体を作製するために、いくつかの戦略を別々のキャンペーンで用いた。
第一の免疫キャンペーン（キャンペーン1）では、5匹の雌BALB/cマウスを一連の免疫原で3週間毎に合計7回の腹腔内（IP）注射により50μg/マウスの用量で免疫した。最初の5回の免疫は、117-244LGALS3-pFUSE-hIgG1-Fc2構築物（実施例1）によって生成された融合タンパク質を用いて実施した。最後の2回の免疫はヒトLGALS3タンパク質（OriGene：Rockville, MD）を用いて実施した。マウスの免疫血清は免疫毎の時点で収集し、LGALS4に対する反応性について酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）によってスクリーニングした。最後の免疫の後で、当該抗原に対して高いELISA力価を示した5匹のマウスのうち2匹を選択し、ヒトLGALS3タンパク質を10μg/マウスの用量で静脈内（IV）にブーストした（1匹のマウスを犠牲にすべく予定し、他方をバックアップとして選択した）。IVブースト後24時間で、マウスを犠牲にし、脾臓細胞を採集し、SP2/mIL6ハイブリドーマ融合パートナーと融合させ、96ウェルプレートに10、1、0.3又は0.1細胞/ウェルでプレートした。続いて、ハイブリドーマ上清を収集し、LGALS3結合についてスクリーニングした。上清陽性ハイブリドーマを一枚の96ウェルプレートから複数の96ウェルプレートに、続いて24ウェルプレートに拡張した。ハイブリドーマ細胞の継代のたびに、抗原に対しELISA反応性を試験して偽陽性を回避した。
抗体収量を高めるために、第二の免疫キャンペーン（キャンペーン2）を実施した。23アミノ酸のカスタムペプチドをLGALS3の糖結合ドメイン、CNTKLDNNWGREERQSVFPFESG（配列番号:2）（ペプチド1と称される）から合成した。前記ペプチド配列は多様な種で保存され、したがって当該タンパク質の重要な領域を表すと考えられたのでこれを選択した。続いて、イムジェクトマレイミド活性化mcKLHキット（Imject Maleimide-Activated mcKLH Kit（Rockford, IL））を用いて、前記ペプチドをキーホールリンペットヘモシアニン（KLH）と複合体化し、KLH-ペプチド1を作出した。
続いて、残った4匹のマウスをKLH-ペプチド1により50μg/マウスで3週間毎に合計3回IP注射して免疫した。免疫血清を収集し、ELISAによってLGALS3及びペプチド1に対する反応性についてスクリーニングした。最後の免疫の後で、2匹のマウスを選択してKLH-ペプチド1を10μg/マウスでIVブーストし、1匹のマウスを24時間後に犠牲にした。このマウスの脾臓細胞をハイブリドーマ融合パートナーと上記のように融合させた。
ハイブリドーマ上清を免疫グロブリン（Ig）アイソタイプについてスクリーニングし、IgG1、IgG2a及びIgG2bアイソタイプを選別した。上清はまたマウスLGALS3（mLGALS3）、ヒトLGALS1、ヒトLGALS7及びヒトLGALS9に対してスクリーニングした。所望の抗体を産生しているハイブリドーマ細胞を精製のために選別した（Bio X Cell（West Lebanon, NH）による）。
AlivaMabマウスプラットフォーム（Ablexis）を用い、追加の抗体もまた作製した。AlivaMabマウスは、ヒト可変ドメインを有するキメラ抗体を生じる。
ガレクチン-3抗体を特徴付ける機能アッセイ
いったん精製抗LGALS3抗体を得たら、抗体の活性について結合アッセイ、侵襲アッセイ及び抗腫瘍アッセイを用いてそれらをスクリーニングした。
方法
ELISA：Gal3へ結合する精製抗体をELISAによって確認した。これについては、2つの戦略を用いた。第一の戦略は、LGALS3タンパク質及びアイソタイプ特異的二次抗体（検出のためにセイヨウワサビペルオキシダーゼ（HRP）と複合体化されている）で被覆したプラスチック96ウェルマイクロプレートを利用した。LGALS3がその自然のままの構造を保持していないという懸念があったので、第二の戦略で、N-末端にポリヒスチジンタグを有するLGALS3構築物を作出した（Abcam, ab89487）。ニッケル被覆96ウェルマイクロプレートを、一次タンパク質としてポリヒスチジンタグ付きLGALS3とともに用いた。同様に、アイソタイプ特異的二次抗体を検出に用いた。
SPR：LGALS3への抗体結合を表面プラズモン共鳴（SPR）アッセイによって確認した。抗体を抗マウスFc表面及び8-ptで捕捉した。LGALS3の連続2倍希釈を500nMから開始して抗体上に流した。
ニッケルプレートELISA及びSPRで陽性とスクリーニングされた抗体を他の実験に向けて推し進めた。
ラミニン結合阻害：ラミニンとのLGALS3結合が抗体によって妨げられるか否かをチェックするために、ELISAアッセイを実施した。固定したラミニン濃度に対して種々の抗体濃度を用いた。
マキシソーブ（Maxisorb）プレートを50μLのラミニン（Sigma）（PBSに10μg/mL）でオービタル振盪により一晩4℃で被覆した。次の朝、プレートを室温に平衡化し、PBS-Tween20（PBS-T）で3回洗浄し、SuperBlock（Thermo Scientific）により2時間ブロッキングした。ウェルをガレクチン::ビオチンとともに室温で1時間インキュベートした。続いてウェルをPBS-Tで3回洗浄し、50μLの抗ビオチン-HRP（1：5000）又はストレプトアビジン-HRP（1：1000）のどちらかと1時間インキュベートした。続いて、プレートを3回洗浄して、100μLのTMB-Ultraとともに30分インキュベートし、その後で100μLの2N H2SO4を添加し、波長450nmでプレートリーダーにより読み取った。
マトリゲル侵襲アッセイ：
Raoらの以前の記載にしたがって、基底膜侵襲の抗体阻害をマトリゲル侵襲チャンバーで決定した（Rao, et al. (2017) ACS Chem. Biol. 12 (8): 2085-2096（前記文献は参照によってその全体が本明細書に含まれる））。簡単に記せば、MUC16陰性ヒト細胞株（SKOV3及びA2780）にC-末端MUC16の配列エレメント（腫瘍促進作用に必須である）をトランスフェクトすることによって、MUC16発現細胞株を作出した。トランスフェクションにはphrGFPベクター（A2780-phrGFP-MUC16c344及びSKOV3-phrGFP-MUC16c344）を用いた。
トランスフェクトした細胞及び野生型MUC16発現細胞（OVCAR3）を、マトリゲル侵襲チャンバーに暴露する前に選別した抗体で前処理した。侵襲細胞数を計測した。
マウスモデル：続いて、in vitro実験のリード抗体を用いて、移植卵巣腫瘍増殖移植片モデルで抗体の有効性を評価した。
16匹の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹領域に、A2780-MUC16c344細胞を200万細胞/マウスで導入した。同様に、6匹の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹にコントロールA2780-phrGFP細胞を200万細胞/マウスで導入した。A2780-MUC16c344トランスフェクト細胞を移植したマウスのうち8匹に週に2回の抗体注射を実施した（50μg/マウス、静脈内（i.v.））。日常的な動物管理は、MSKCC抗腫瘍評価コア施設（MSKCC Antitumor Assessment Core Facility）によって提供された。MSKCC実験動物リソースセンター（MSKCC Research Animal Resource Center）のガイドラインにしたがって、腫瘍測定を週に2回実施し、腫瘍増殖を記録した。2000mm3の最大腫瘍体積に達した後、動物を犠牲にした。
統計分析：増殖及び侵襲の研究を比較するために、データを平均±標準誤差（SE）で表し、独立スチューデントｔ検定を用いて統計的有意について分析した。カプランマイヤー曲線を生存及びログランク試験について構築し、有意さの決定に用いた（Stata 14, StataCorp 2015; College Station, TX）。
結果：
第一の免疫キャンペーンから2抗体が作製され、第二の免疫キャンペーンから追加の12抗体が作製された（表1）。表1は、作製された選別抗体、それらの免疫グロブリンアイソタイプ、及びそれら抗体の抗原標的の要旨を提供する。下記の表では、LGALS3はヒトガレクチン-3であり、ペプチド-1はLGALS3の炭水化物結合ドメインの保存領域から構築された23アミノ酸ペプチドであり、mLGALS3はマウスガレクチン-3であり、LGALS1はヒトガレクチン-1である。
表1：作製された選別抗体、免疫グロブリンアイソタイプ、及び抗体の抗原標的の要旨
Figure 0007539834000003
図5は、キャンペーン2の抗体の結合特性の要旨を示す。図6は、キャンペーン2の抗体とラミニンとの結合についてのELISAの結果を示す。
自然のままのLGALS3に対し高親和性抗体を達成することは特に困難であった。キャンペーン1及び2の抗体はいずれもELISAアッセイでLGALS3との結合について陽性とスクリーニングされたが、112516.14D11.2D2のみが自然のままのLGALS3に対する親和性をSPRで示した（図7及び8）。したがって、機能アッセイを用いてスクリーニングするのは当該ただ1つの抗体とした。112516.14D11.2D2はまた本明細書では14D11.2D2と称される。図7は、ELISAアッセイで14D11.2D2がLGALS3タンパク質と結合することを示す。図8は、SPRアッセイで14D11.2D2がLGALS3と結合することを示す。抗体解離定数はSPRで14.6nMであった。図9は、14D11.2D2がLGALS3とラミニンとの結合を阻害することを示す。150nMの濃度で14D11.2D2はガレクチン-3とラミニンとの結合を無処理コントロールと比較して36.6％低下させた。図10は、マトリゲルアッセイにおいて、14D11.2D2が無処理細胞と比較して、SKOV3-MUC16c344（SKOV3c344）、A2780-MUC16c344（A2780c344）、及びOVCAR3細胞株の侵襲を阻害することを示す。抗体で処理されたときには、有意により少ないMUC16トランスフェクトSKOV3細胞がマトリゲル膜を侵襲するのが注目された（p＝0.001）。同様な結果は抗体で処理されたOVCAR3細胞で認められた（p＝0.0009）。
図11は、14D11.2D2抗体で免疫されたマウスは、上記に記載の卵巣腫瘍異種移植マウスモデルで抗体を投与されなかったマウスよりも生存する可能性が高いことを示す。14D11.2D2は、50μg/マウスの用量で週に2回合計8用量投与された。28日後、抗体を投与されなかった動物は、抗体を投与された動物よりも生存の可能性は統計的に有意に低かった（p＝0.012）。加えて、MUC16発現A2780腫瘍は、Mabマウスで処理されたマウスで腫瘍増殖低下の傾向を示した。
これらのデータを総合すれば、14D11.2D2抗体は非変性LGALS3と結合し、抗腫瘍活性を示すことが提示される。
ガレクチン-3発現を欠く腫瘍細胞における転移活性の消失
in vivoでの腫瘍転移におけるLGALS3の役割を示すために、乳癌細胞株の肺への転移をマウス異種移植モデルで調べた。この実験のために、MDA-MB-231細胞株（上皮性MUC16+ヒト乳癌細胞株）の誘導株を用いた。MDA-MB-231-TGLは、ルシフェラーゼ及びGFPを発現し、非侵襲性生体発光分析を可能にする（Minn et al. (2005) Nature 436:518-524）。MDA-MB-231-TGL shGALは更なる誘導細胞株であり、LGALS3がヘアピンRNAを用いサイレンシングされている。
実験開始時に6－8週齢の雌無胸腺ヌードマウスを2つのグループ（グループ1（10マウス）及びグループ2（10マウス））に分け、尾静脈注射によりMDA-MB-231-TGL wt又はMDA-MB-231-TGL shGAL3をそれぞれ1ｘ106細胞投与した。図14Aは、注射後1週及び11週の注射マウスの背側画像を示す。図14Bは、この実験の生存曲線を示す。LGALS3欠損細胞を注射されたマウスは、腫瘍樹立後でさえも肺転移の有意な低下を示した（1週から11週のグループ1と比較して）。数匹のマウスでは、腫瘍は完全に根絶されたように見えた（図14A）。LGALS3欠損細胞を注射されたマウスはまた有意に長期の生存を示した（図14A）。
上記の結果に基づいて、転移における14D11.2D2抗LGALS3抗体の作用を試験した。期待したように、抗LGALS3抗体の投与は肺転移におけるLGALS3 siRNAの作用を再現した。図14に示すように、14D11抗体の投与は生存を高め、さらに癌転移をマウスの1/3から排除した。総合すれば、これらのデータは、転移及び転移癌の治療のためにLGALS3機能を阻害するために抗LGALS3抗体療法を用いることを支持する。
本明細書に引用される全ての刊行物、特許及び特許出願は、その個々の刊行物又は特許出願が各々具体的にかつ個々に提示されたかのように、参照によってその全体が本明細書に含まれる。前述の発明は、理解を明確にするために図示及び例によってある程度詳細に記載されてきたが、本発明の教示に照らせば添付の特許請求の範囲又は趣旨から逸脱することなくある種の変更及び改変を実施できることは当業者には極めて明白であろう。

Claims (17)

  1. ガレクチン-3（LGALS3）炭水化物結合ドメイン（CBD）と免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが重鎖可変領域（VH）及び軽鎖可変領域（VL）を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが
    （I）（a）アミノ酸配列SYGVH（配列番号:5）を含むVH相補性決定領域（CDR）1；
    （b）アミノ酸配列VIWSDGSTTYNSTLKS（配列番号:6）を含むVH CDR2；及び
    （c）アミノ酸配列HISNYGTMDY（配列番号:7）を含むVH CDR3；
    及び、
    アミノ酸配列RASQDIRNYLN(配列番号:8)を含むVL CDR1；
    アミノ酸配列YTSRLHS(配列番号:9)を含むVL CDR2；及び、
    アミノ酸配列QHFNTLPPT（配列番号:10)を含むVL CDR3；
    （II）（a）アミノ酸配列GFSLSSY（配列番号:11）を含むVH CDR1；
    （b）アミノ酸配列WSDGS（配列番号:12）を含むVH CDR2；及び
    （c）アミノ酸配列HISNYGTMDY（配列番号:13）を含むVH CDR3；
    及び、
    アミノ酸配列RASQDIRNYLN(配列番号:14)を含むVL CDR1；
    アミノ酸配列YTSRLHS(配列番号:15)を含むVL CDR2；及び、
    アミノ酸配列QHFNTLPPT(配列番号:16)を含むVL CDR3；
    又は、
    （III）（a）アミノ酸配列GFSLSSYG（配列番号:17）を含むVH CDR1；
    （b）アミノ酸配列IWSDGST（配列番号:18）を含むVH CDR2；及び、
    （c）アミノ酸配列ARHISNYGTMDY（配列番号:19）を含むVH CDR3；
    及び、
    アミノ酸配列QDIRNY (SEQ ID NO: 20)を含むVL CDR1；
    アミノ酸配列YTS(配列番号:21)を含むVL CDR2；及び、
    アミノ酸配列QHFNTLPPT(配列番号:22)を含むVL CDR3
    を含み、
    前記LGALS3 CBDが配列番号：27を含み、マトリゲル侵襲アッセイにおいてin vitroで腫瘍細胞の侵襲を阻害し、前記腫瘍細胞が卵巣腫瘍細胞であってもよく、かつ、前記VHは配列番号:24のアミノ酸配列を含み、前記VLは配列番号:26のアミノ酸配列を含む、前記抗体又はその抗原結合フラグメント。
  2. 抗体又はその抗原結合フラグメントが、
    LGALS3のグリコシル化細胞表面タンパク質、グリコシル化細胞表面受容体、または、グリコシル化増殖因子受容体への結合を阻害する；
    LGALS3と、グリコシル化ムチン-1（MUC-1）、ムチン-4（MUC4）、ムチン-16（MUC16）、ジシアロガングリオシド、GD2、表皮増殖因子受容体（EGFR）、血小板由来増殖因子受容体（PDGFR）、インスリン様増殖因子受容体（IGFR）、インテグリン及びCTLA4、との結合を阻害し、前記グリコシル化MUC16がAsn1800又はAsn1806においてN-グリコシル化されていてもよく；又は、
    MUC16のグリコシル化型を発現する腫瘍の増殖を阻害する、
    請求項1に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
  3. 抗体がモノクローナル抗体またはヒト化抗体であり、抗体又はその抗原結合フラグメントがげっ歯類抗体のヒト化型であってよい、請求項1又は2に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
  4. 抗体がヒト由来重鎖及び軽鎖定常領域を含む、請求項1-3のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
  5. 重鎖定常領域が、ガンマ1、ガンマ2、ガンマ3及びガンマ4から成る群から選択されるアイソタイプを有し、及び／又は、軽鎖定常領域がカッパ及びラムダから成る群から選択されるアイソタイプを有する、請求項4に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
  6. 抗体が2つの同一の重鎖及び2つの同一の軽鎖を含む免疫グロブリンであり、前記免疫グロブリンはIgGであってもよい、請求項1－5のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
  7. 画像化薬剤又は細胞障害薬剤であっても良い薬剤と複合体化された請求項1－6のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、抗体複合化物。
  8. 抗体又はその抗原結合フラグメントが二重特異性抗体である、請求項1－6のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
  9. 免疫特異的にCD3と結合する；又は、免疫特異的にLGALS3と結合する免疫グロブリンを含み、前記免疫グロブリンの軽鎖が、免疫特異的にCD3と結合する単鎖可変フラグメント（scFv）とペプチドリンカーを介して複合体化されている；又は、画像化薬剤又は細胞傷害薬剤であってよい薬剤と複合体化された、請求項8に記載の二重特異性抗体。
  10. 抗原結合フラグメントがscFvである、請求項1－6のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
  11. 画像化薬剤又は細胞傷害薬剤であってもよい薬剤と複合体化された請求項10に記載のscFv。
  12. 請求項1に記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は、請求項10又は11に記載のscFvをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
  13. プロモーターに作動できるように連結された請求項12に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  14. 請求項12に記載のポリヌクレオチド又は請求項13に記載のベクターを含む単離細胞。
  15. 治療的に有効な量の請求項1－6のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、請求項7に記載の抗体複合化物、請求項8－9のいずれかに記載の二重特異性抗体、請求項10又は11に記載のscFv、請求項12に記載のポリヌクレオチド、請求項13に記載のベクター、又は、請求項14に記載の細胞、を含む医薬組成物。
  16. 患者で癌を治療するための、請求項15に記載の医薬組成物。
  17. 癌が転位癌、卵巣癌、肺癌、膵癌、乳房癌、子宮癌、卵管癌、原発性腹膜癌である、請求項16に記載の医薬組成物。
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