KR20210070307A - 신데칸-1 및 섬유아세포 성장 인자 수용체를 표적화하는 이중특이적 결합제 - Google Patents

신데칸-1 및 섬유아세포 성장 인자 수용체를 표적화하는 이중특이적 결합제 Download PDF

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로빈 리차드슨
안줄리 팀머
롤랜드 뉴먼
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Abstract

(a) 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분; 및 (b) 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 에 특이적으로 결합하는 피노머를 포함하는 이중특이적 결합제가 제공되며, 여기서 피노머는 SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 113 의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 또한, 항-신생물제와 접합되는 이중특이적 결합제가 제공된다.

Description

신데칸-1 및 섬유아세포 성장 인자 수용체를 표적화하는 이중특이적 결합제
본 발명의 구현예는 CD138 (신데칸-1) 에 특이적으로 결합하는 항체 부분, 및 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 에 특이적으로 결합하는 피노머 부분을 포함하는 이중특이적 결합제 뿐만 아니라 이의 약물 접합체, 이의 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다. 본원에 개시된 이중특이적 결합제는 신생물을 효과적으로 치료하기 위해 단독으로 또는 다른 작용제와 조합으로 사용될 수 있다.
신데칸 패밀리는 주로 세포 표면에 존재하는 4 개의 트랜스멤브레인 헤파린 술페이트 프로테오글리칸 (HSPG) 을 포함한다. 이들 상이한 신데칸의 구조는 척추동물과 무척추동물에서 높은 상동성을 나타낸다. 모든 4 개 신데칸은 다양한 수의 글리코사미노글리칸 (GAG) 측쇄로 장식된 코어 단백질로 구성된다. 신데칸은 주로 이러한 GAG 사슬을 통해 그의 기능을 발휘하지만, 코어 단백질의 상이한 도메인이 또한 뚜렷한 역할을 한다. 신데칸-1 및 신데칸-3 은 헤파린 술페이트 (HS) 및 콘드로이틴 술페이트 (CS) 사슬 모두를 가지고 있는 반면, 신데칸-2 및 신데칸-4 는 HS 사슬만을 가지고 있다. 신데칸은 성장 및 분화, 세포 확산, 세포 접착, 세포 이동, 세포골격 조직화, 침투 및 혈관신생을 포함하는 광범위한 생물학적 과정에 관여한다.
신데칸-1 은 N-말단 세포외 도메인, 트랜스멤브레인 도메인 및 C-말단 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 트랜스멤브레인 (유형 1) 헤파린 술페이트 프로테오글리판이다. 인간에서 신데칸-1 (CD138) 은 310 개 아미노산 길이의 코어 단백질을 포함하며 SDC1 유전자에 의해 인코딩된다. SDC1 유전자는 5 개의 엑손으로 이루어지며 인간 염색체 2 에 위치한다. 제 1 엑손은 신호 펩티드를 인코딩하고, 제 2 엑손은 헤파린 표면에 대한 부착 위치를 인코딩하고, 제 3 및 제 4 엑손은 콘드로이틴 술페이트 결팝에 대한 위치를 인코딩하며, 제 5 엑손은 트랜스멤브레인 및 세포질 도메인을 인코딩한다.
신데칸-1 은 성체 조직에서의 상피 세포의 기저측 표면, 발달 중 중간엽 세포, 및 별개의 분화 단계 동안 림프계 세포에서 발현된다. 신데칸-1 은 간세포 성장 인자 (HGF) 에 결합할 수 있고, 다양한 성장 인자와 상호작용할 수 있으며, 세포 이동, 세포-매트릭스 상호작용, 성장, 증식 및 생존에 영향을 주는 다중 신호전달 경로의 활성화를 초래하는 공동수용체로서 역할할 수 있다. 여러 연구가 신데칸-1 및/또는 이의 기능장애 신호전달 활성 또는 다양한 신생물의 병인에서의 과발현이 연루되어 있음을 보여주었다.
섬유아세포 성장 인자 수용체 (FGFR) 는 다양한 세포내 신호전달 경로에 관여하는 고도로 보존된 트랜스멤브레인 티로신 키나아제 수용체의 패밀리이다. FGFR 은 2 내지 3 개의 면역글로불린-유사 도메인 (D1, D2 및 D3), 단일-관통 트랜스멤브레인 부위 및 티로신 키나아제 활성을 갖는 세포질 부위를 포함하는 세포외 리간드 결합 부위로 구성된다. 4 개의 주요 FGF 수용체 (FGFR1-4) 가 존재하며, 이는 다수의 스플라이스 변이체를 갖고, 대부분은 수용체의 엑손 III 에서 발생한다 (도메인 D3 에 상응함) (예를 들어, Holzmann et al. (2012) J. of Nucleic Acids 2012:950508 참조). D3 도메인은 3 개의 엑손: (IIIa, IIIb 및 IIIc) 에 의해 인코딩되는 2 개 부분을 함유하고, 유전자 스플라이싱 이벤트는 IIIb 또는 IIIc 부분과 조합된 유전자의 불변하는 IIIa 부분으로부터 전사된 D3 도메인으로 이어진다. 이러한 스플라이스 변이체는 7 개의 고도로 상동성인 인간 FGFR: FGFR1b, FGFR1c, FGFR2b, FGFR2c, FGFR3b, FGFR3c 및 FGFR4 를 생성하는데, 이는 뚜렷한 조직 분포 및 리간드 특이도를 갖는다.
인간에서, FGFR 은 과발현에 의해, 또는 22 개의 공지된 섬유아세포 성장 인자 (FGF) 리간드 중 하나 이상에 대한 결합에 의해 활성화될 수 있다. FGFR3 활성화는 배발생, 발생, 세포 분화, 세포 생존, 이동, 분화 및 성장 정지에서 중요한 역할을 한다. FGFR3 의 활성화는 미토겐-활성화된 단백질 키나아제 (MAPK) 및 PI3K-AKT 경로를 포함하는 발암성 신호전달에 연루되는 여러 핵심 경로의 활성화로 이어질 수 있다.
신데칸-1 에 결합하는 항체 부분 및 FGFR3 에 결합하는 피노머 부분을 포함하는 이중특이적 결합제, 및 신생물의 치료를 위한 이의 용도가 본원에서 제시된다.
일부 측면에서, 항체 부분 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분) 및 하나 이상의 피노머를 포함하는 이중특이적 결합제가 본원에서 제시되며, 항체 부분은 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하고 하나 이상의 피노머는 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 에 특이적으로 결합한다. 따라서, 특정 구현예에서, 신데칸-1 에 특이적으로 결합하며 FGFR3, 또는 FGFR3 의 하나 이상의 동형에 특이적으로 결합하는 이중특이적 결합제가 본원에서 제시된다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 피노머 부분은 FGFR3b 및/또는 FGFR3c 에 특이적으로 결합한다. 특정 측면에서, 이중특이적 결합제는 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 항체 부분 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분), 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 에 특이적으로 결합하는 피노머 및 항신생물제 또는 독소를 포함한다.
일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 항체 부분은 (i) SEQ ID NO:2-15 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1 (경쇄 CDR1), (ii) SEQ ID NO:16-26 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2 (경쇄 CDR2), (iii) SEQ ID NO:27-33 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3 (경쇄 CDR3), (iv) SEQ ID NO:45-59 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1 (중쇄 CDR1), (v) SEQ ID NO:60-71 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2 (중쇄 CDR2), 및 (vi) SEQ ID NO:72-81 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 (중쇄 CDR3) 에서 선택되는 하나 이상의 상보성 결정 부위 (CDR) 를 포함하며, 여기서 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 신데칸-1 에 특이적으로 결합한다. 이중특이적 결합제의 항체 부분은 표 1 에서 선택되는 임의의 적합한 CDR-L1, 표 2 에서 선택되는 임의의 적합한 CDR-L2, 표 3 에서 선택되는 임의의 적합한 CDR-L3, 표 6 에서 선택되는 임의의 적합한 CDR-H1, 표 7 에서 선택되는 임의의 적합한 CDR-H2 및 표 8 에서 선택되는 임의의 적합한 CDR-H3 을 포함할 수 있으며, 여기서 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 신데칸-1 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 항체 부분은 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:18 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:28 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:73 의 아미노산을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:2, 17, 27, 47, 61 및 73 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:2, 16, 27, 45, 60 및 72 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:2, 16, 27, 45, 61 및 72 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:2, 17, 27, 47, 61 및 73 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:5, 21, 30, 50, 64 및 75 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:4, 20, 29, 50, 63 및 75 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO: 4, 19, 29, 48, 63 및 74 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 항체 부분은 인간 항체 (예를 들어, IgG) 의 하나 이상의 불변부를 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 항체 부분은 인간화된 단일클론 항체, 또는 이의 인간화된 항원 결합 부분을 포함하며, 여기서 가변부 서열은 인간화된다.
일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 피노머는 (i) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:99) (아미노산 (X1), (X2), (X3), (X4), (X5) 및 (X6) 은 임의의 아미노산임), (ii) GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:113) ((X7) 은 임의의 아미노산임), (iii) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:101; FF2L4C3), (iv) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:103; FF44L65G12), (v) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:105; FF44L65G7), (vi) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:107; FF48L66G7; "G7"), (vii) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:109; FF43L65D5), (viii) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:111; FF44L65B7), 및 (ix) GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:116; FF40L54A5) 의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에서 선택되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 피노머는 SEQ ID NO: 107 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 피노머는 SEQ ID NO: 107 의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서, 이중특이적 작용제는 돌라스타틴, 아우리스타틴, 메이탄신, 튜불리신, 칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD), 듀오카르마이신, 독소루비신, 슈도모나스 외독소-A (PE38), 이리노테칸 및 이의 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는 항-신생물제를 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 화학식 I 의 구조를 포함하는 피롤로벤조디아제핀 독소를 포함한다:
[화학식 1]
Figure pct00001
식 중에서,
Z1 및 Z2 는 둘 모두 N 이고;
Z3 및 Z4 는 둘 모두 C 이고;
[화학식 2]
이중 점선
Figure pct00002
은 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
n 은 1 내지 10 이고;
각각의 R3 및 R4 는 독립적으로 H, 또는 C1-4 알콕실이고;
각각의 R1 및 R2 는 독립적으로 H, C1-5 알킬, C3-6 시클로알킬, C2-5 알케닐, 및 R5 로 임의 치환된 페닐로 이루어지는 군에서 선택되고, 여기서
R5 는 -NH2, -NHR6, 및 하기 구조를 갖는 R7 로 치환된 피페라지닐로 이루어지는 군에서 선택되고:
[화학식 3]
Figure pct00003
이때 R6 은 연결기를 포함하고,
R7 은 H, 또는 C1-5 알킬이고;
X1 은 널 (null), 보호기이거나, 연결기를 포함하고;
X2 는 널, 보호기이거나, 연결기를 포함하고;
X1, X2, R1 및 R2 중 단 하나는 연결기를 포함하고;
각각의 Y1 및 Y2 는 독립적으로 널, OH 또는 SO3H 이고;
단:
[화학식 4]
(i) X1 이 연결기를 포함하는 경우,
Figure pct00004
은 N-C 이고,
(ii) X2 가 연결기를 포함하는 경우,
Figure pct00005
는 N-C 이고,
(iii) X1 이 보호기인 경우,
Figure pct00006
은 N-C 이고,
(iv) X2 가 보호기인 경우,
Figure pct00007
는 N-C 이고,
여기서, 널은 원하는 원자가를 완료하기 위한 하나 이상의 수소의 존재 또는 모이어티의 부재를 의미한다.
특정 구현예에서, 항-신생물제는 식 I 의 피롤로벤조디아제핀 독소 및 연결기를 포함하고, 여기서 피롤로벤조디아제핀 독소는 연결기에 부착되고, 연결기는 본원에 기재된 이중특이적 작용제에 부착된다. 특정 구현예에서, 연결기는 화학식 (A) 의 구조에서 선택되는 구조를 포함한다:
[화학식 5]
Figure pct00008
식 중에서,
별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고; 물결선은 결합체에 대한 부착점을 나타내고;
m 은 1 내지 20 이고;
q 는 1 내지 10 이고;
E 는 연계기 (connecting group), 및 화학식 (B) 의 구조이고:
[화학식 6]
Figure pct00009
식 중에서,
별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고;
물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고;
E 는 연계기를 포함하고;
v 는 0 내지 10 이고;
u 는 0 또는 1 이고; u 가 1 인 경우, t 는 1 내지 10 이다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 하기 식 II;
[화학식 7]
Figure pct00010
[식 중, m 은 8 임];
하기 식 III:
[화학식 8]
Figure pct00011
[식 중, m 은 8 이고, p 는 3 이고, X2 는 보호기임];
하기 식 V:
[화학식 9]
Figure pct00012
[식 중, m 은 8 임],
하기 식 VI:
[화학식 10]
Figure pct00013
[식 중, t 는 8 이고, v 는 1 임]; 및
하기 식 VII:
[화학식 11]
Figure pct00014
[식 중, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타냄].
로 이루어지는 군에서 선택되는 구조를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 이중특이적 결합제 및 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제, 첨가제 또는 담체를 포함하는 약학 조성물이 본원에 제공된다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 치료적 유효량의 이중특이적 결합제 또는 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 신생물을 갖거나 신생물을 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 신생물은 암종, 육종, 신경아세포종, 교모세포종, 골수종, 림프종, 흑색종, 또는 고형 또는 연조직 종양에서 선택되며, 여기서 신생물은 신데칸-1 및/또는 FGFR3 을 발현한다. 일부 구현예에서, 신생물을 갖거나 신생물을 가질 것으로 의심되는 대상체는, 신생 세포의 세포 표면 상에 인간 신데칸-1 및/또는 인간 FGFR3 을 발현하는 신생 세포를 갖거나 보유하는 인간이다.
기술의 특정 측면을 하기 상세한 설명, 실시예, 청구범위 및 도면에서 추가로 기재한다.
도면은 기술의 구현예를 예시하며 제한하지 않는다. 명확성과 설명의 용이함을 위해, 도면은 축척으로 만들어지지 않으며, 일부 경우, 특정 규현예의 이해를 용이하게 하기 위해 다양한 측면이 과장되거나 확대되어 보여질 수 있다.
[도 1] 도 1 은 인간, 시노몰구스 (cynomolgus) 원숭이 (cyno) 및 마우스에서 유래한 신데칸-1 단백질의 정렬을 나타낸다. 면역화에 사용된 펩티드는 박스 영역에서 유래하였다.
[도 2] 도 2 는 H929 세포에서 CD138 에 결합하는 F12P16F6 (도 2A) 및 또 다른 대표적 양성 하이브리도마 클론 F12P16G3 (도 2B) 에 대한 형광-활성화 세포 분류 (FACS) 를 나타낸다.
[도 3] 도 3 은 167 nM (L1A1) 내지 10.4 nM (L1A4) 에서 인간 CD138 에 대한 결합을 위한 대표적 하이브리도마 F12P16F6 ("12P16F6" 으로서 도면에 표시됨) 에 대한 운동학적 결합 분석 (즉, SPR 센서그램) 의 결과를 나타낸다.
[도 4] 도 4 는 대표적 키메라 항체 12P16F6 hIgG1 ("chF6", 도 4A) 및 13P30A7 hIgG1 ("chP30A7", 도 4B) 의 인간 CD138 발현 세포 (인간) 및 시노몰구스 CD138 발현 세포 (cyno) 에 대한 결합을 나타낸다. 대조군 항체 ("Sec", 즉, 세쿠키누맙) 는 CD138 에 대한 약간의 특이적 결합을 나타내거나 특이적 결합을 나타내지 않았다. Y-축은 항체 chF6, 13P30A7 또는 세쿠키누맙의 농도를 나타낸다.
[도 5A] 도 5A 는 모 마우스 F12P16F6 의 중쇄와 비교한 인간화 중쇄 ("P16F6 VH") 를 나타낸다. 지정 cdr 은 CDR 그래프팅 접근법을 나타내고, 지정 abb 는 축약된 CDR 의 그래프팅 접근법을 나타내고, 지정 sdr 은 SDR-전송 접근법을 나타내고, 지정 fra 는 프랑켄슈타인 (Frankenstein) 접근법을 나타내고, 지정 ven 은 베니어링 (Veneering) 접근법을 나타낸다. 지정 수선 (repair) 은 가변부가 제 2 라운드 (round) 의 인간화를 거쳤다는 것을 나타낸다.
[도 5B] 도 5B 는 모 마우스 F12P16F6 의 경쇄와 비교한 인간화 경쇄 ("P16F6 VL") 를 나타낸다.
[도 6] 도 6 은 11 개의 대표적 인간화 항체의 분자량 (킬로달톤, kDa) 및 순도를 설명하는 환원 조건 하에 실행된 SDS-PAGE 겔의 사진을 나타낸다. 레인 1= 12P16F6 hIgG1 (chF6), 레인 2=F6 aka-rep, 레인 3=F6 aks-rep, 레인 4=F6 akf-rep, 레인 5=F6 cka-rep, 레인 6=F6 ckf-rep (hF6), 레인 7=F6 f2ka-rep, 레인 8=F6 f2ks-rep, 레인 9=F6 f2kf-rep, 레인 10=F6 f1ka-rep, 레인 11=F6 f1ks-rep, 레인 12=F6 f1kf-rep, 및 MW=분자량 마커. 분자량 마커는 겔의 우측에 표지되어 있다.
[도 7] 도 7 은 다발성 골수종 세포주 KMS-11 (도 7B) 및 방광암 주 RT112/84 (도 7A) 의 표면에서의 11 개의 대표적 인간화 항체의 인간 CD138 에 대한 세포-표면 결합의 FACS 분석을 나타낸다. 세쿠키누맙을 음성 대조군으로서 사용하였다.
[도 8] 도 8 은 1.95 Å 해상도에서 해결된 항체 Fab 단편과의 복합체로의 인간 신데칸-1 펩티드에서 유래한 X-선 결정 구조의 예시를 나타낸다. 비대칭 단위 당 신데칸-1 펩티드 및 Fab 각각의 1 카피가 존재한다. 도 8 은 신데칸-1-Fab 결합 인터페이스를 예시한다. Fab 중쇄는 도면 좌측에 리본 측쇄 탄소 원자의 형태로 나타난다. Fab 경쇄는 도면 우측에 리본 측쇄 탄소 원자의 형태로 나타난다. 신데칸-1 펩티드 탄소 원자는 Fab 중쇄와 경쇄 사이에 끼워져 나타난다. 신데칸-1 펩티드의 특정 아미노산 및 Fab 단편의 특정 측쇄는 그의 상응하는 3-문자 아미노산 축약 및 위치로 표지되어 있다.
[도 9] 도 9 는 SEQ ID NO:101, 109, 103, 105, 107 및 111 의 항-FGFR3 피노머의 정렬을 나타낸다.
[도 10] 도 10 은 FF2L4C3 (SEQ ID NO:101); FF2L4D4; FF3L6G2; FF5L7D3; FF5L7D4; FF15L31B1 및 FynSH3 (음성 대조군) 으로 지정된 항-FGFR3 피노머의 내재화 특성을 나타낸다.
[도 11] 도 11 은 FGFR3 양성 KMS-11 세포의 표면에서 FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머 폴리펩티드의 FACS 결합 프로파일을 나타낸다. 도 11A 는 FF2L4C3 (SEQ ID NO:101); FF43L65D5 (SEQ ID NO:109); FF44L65B7 (SEQ ID NO:111); FF44L65G7 (SEQ ID NO:105); FF44L65G12 (SEQ ID NO:103); FF48L66G7 (SEQ ID NO:107) 및 항-FGFR3 단일클론 항체 (양성 대조군) 의 FGFR3-양성 KMS-11 세포에 대한 특이적 결합을 나타내는 한편, 도 11B 는 표시한 피노머의 FGFR3 음성 대조군 세포주 N87 에 대한 결합이 없음을 나타낸다.
[도 12-1] 도 12-1 은 x-축에 표시한 바와 같이, 플레이팅 코팅된 인간 FGFR3b (huFGFR3b), 인간 FGFR3c (huFGFR3c), 시노몰구스 원숭이 FGFR3c (cyFGFR3c), 쥐과 FGFR3c (muFGFR3c), 인간 FGFR3 D1 도메인 (huFGFR3-D1), 인간 FGFR3c D2 도메인 (huFGFR3-D2), 인간 FGFR3 D1 및 D2 도메인 (huFGFR3-D1D2), 음성 대조군 다클론 항체 (IgG) 및 미코팅된 플레이트 (PBS) 에 대한 FGFR3-피노머 FF2L4C3 - SEQ ID NO:101 (도 12A) 및 FF43L65D5 - SEQ ID NO:109 (도 12B) 결합의 ELISA 를 나타낸다.
[도 12-2] 도 12-2 는 x-축에 표시한 바와 같이, 플레이팅 코팅된 인간 FGFR3b (huFGFR3b), 인간 FGFR3c (huFGFR3c), 시노몰구스 원숭이 FGFR3c (cyFGFR3c), 쥐과 FGFR3c (muFGFR3c), 인간 FGFR3 D1 도메인 (huFGFR3-D1), 인간 FGFR3c D2 도메인 (huFGFR3-D2), 인간 FGFR3 D1 및 D2 도메인 (huFGFR3-D1D2), 음성 대조군 다클론 항체 (IgG) 및 미코팅된 플레이트 (PBS) 에 대한 FF44L65B7 - SEQ ID NO:111 (도 12C) 및 FF44L65G7 - SEQ ID NO:105 (도 12D) 결합의 ELISA 를 나타낸다.
[도 12-3] 도 12-3 은 x-축에 표시한 바와 같이, 플레이팅 코팅된 인간 FGFR3b (huFGFR3b), 인간 FGFR3c (huFGFR3c), 시노몰구스 원숭이 FGFR3c (cyFGFR3c), 쥐과 FGFR3c (muFGFR3c), 인간 FGFR3 D1 도메인 (huFGFR3-D1), 인간 FGFR3c D2 도메인 (huFGFR3-D2), 인간 FGFR3 D1 및 D2 도메인 (huFGFR3-D1D2), 음성 대조군 다클론 항체 (IgG) 및 미코팅된 플레이트 (PBS) 에 대한 FF44L65G12 - SEQ ID NO:103 (도 12E), 및 FF48L66G7 - SEQ ID NO:107 (도 12F) 결합의 ELISA 를 나타낸다.
[도 13] 도 13 은 독소 접합된 피노머 FF2L4C3 (도 13A, B 및 C), FF43L65D5 (도 13B), FF44L65G7 (도 13B), FF44L65G12 (도 13B), FF48L66G7 (도 13B) 및 FF44L65B7 (도 13C) 의 세포독성 효과를 입증하는 내재화 어세이를 나타낸다. 사이토졸성 myc 단백질, FynSH3 에 결합하며 작용제가 없는 (세포 단독) 마우스 단일클론 항체 9E10 이 음성 대조군에 포함되었다.
[도 14] 도 14 는 2 개의 Ig 중쇄 및 2 개의 Ig 경쇄 폴리펩티드를 갖는 항체 부분, 및 피노머 부분을 각각 포함하는 이중특이적 결합제의 4 개 구현예의 예시를 보여주며, 피노머 (구체로 표시) 는 항체의 상이한 부분에 부착된다. 도 14A 는 항체 중쇄의 C-말단 끝에 부착된 피노머를 나타낸다. 도 14B 는 항체 중쇄의 N-말단 끝에 부착된 피노머를 나타낸다. 도 14C 는 항체 경쇄의 C-말단 끝에 부착된 피노머를 나타낸다. 도 14D 는 항체 경쇄의 N-말단 끝에 부착된 피노머를 나타낸다.
[도 15] 도 15 는 환원 조건 하에 제조되고 SDS PAGE 처리된 4 개의 대표적 이중특이적 결합제를 나타낸다. 레인 7 에는 신데칸-1 에 특이적으로 결합하는 전장 항-CD138 단일클론 항체 P16F6 이 로딩되었다. 레인 7 은 부착된 피노머의 부재 하의 중쇄 (상부 밴드) 및 경쇄 (하부 밴드) 의 분자량에 대한 기준을 제공한다. 레인 2-6 은 항체 중쇄의 N-말단에 부착된 (레인 2 및 6), 항체 중쇄의 C-말단에 부착된 (레인 4), 항체 경쇄의 N-말단에 부착된 (레인 5), 및 항체 경쇄의 C-말단에 부착된 (레인 3), P16F6 항체 및 FGFR3-결합 피노머 G7 (SEQ ID NO:107) 을 포함하는 이중특이적 결합제의 구현예를 나타낸다. 레인 2, 4 및 6 에서의 중쇄 분자량의 증가는 부착된 피노머의 존재의 증거이다 (레인 7 에서의 중쇄와 비교). 레인 3 및 5 에서의 경쇄 분자량의 증가는 부착된 피노머의 존재의 증거이다 (레인 7 에서의 경쇄와 비교).
[도 16] 도 16 은 트랜스펙션된 CHO 세포의 표면에서 발현된 FGFR3c (도 16A) 및 FGFR3b (도 16B) 에 대한 대표적 이중특이적 결합제 "hF6-HN-G7" 및 인간화 단일클론 항체 "hF6" 의 세포 표면 결합을 나타내는 FACS 히스토그램을 나타낸다. hF6 은 SEQ ID NO:44 의 경쇄 및 SEQ ID NO:93 의 중쇄를 포함한다. hF6-HN-G7 은 SEQ ID NO:44 의 경쇄, 및 SEQ ID NO:107 의 피노머 (G7) 및 SEQ ID NO:93 의 중쇄를 포함하는 융합 단백질을 포함하는데, G7 의 C-말단은 펩티드 결합에 의해 중쇄의 N-말단에 연계된다.
[도 17] 도 17 은 미트랜스펙션된 CHO 세포 (도 17A), FGFR3b 를 발현하는 CHO 세포 (도 17B) 및 FGFR3c 를 발현하는 CHO 세포 (도 17C) 에서 수행된 시험관내 세포독성 어세이를 나타낸다. 세포 생존력을 y-축에 나타내고 결합제의 농도를 x-축에 나타낸다. 시험한 작용제는 식 II 의 PBD 독소에 확률적으로 접합된 세쿠키누맙 (인터류킨-17A 에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체) (세쿠키누맙-II), 중쇄 N-말단 및 식 II 의 PBD 독소에 특이적으로 접합된 위치에서 G7 피노머를 발현한 세쿠키누맙 융합물 (세쿠키누맙-S119C-HN-G7-II), 및 식 II 의 PBD 독소에 특이적으로 접합된 위치인 대표적 이중특이적 결합제 hF6-S119C-HN-G7 (hF6-S119C-HN-G7-II) 을 포함한다. 이중특이적 결합제 hF6-S119C-HN-G7 의 hF6 항체 부분은 SEQ ID NO:44 의 경쇄 및 SEQ ID NO:93 의 중쇄를 포함한다. 따라서, hF6-S119C-HN-G7 은 SEQ ID NO:107 의 피노머 (G7) 및 SEQ ID NO:93 의 중쇄가 융합 단백질로서 발현되는 hF6 항체이며 이때 G7 의 C-말단은 펩티드 결합에 의해 중쇄의 N-말단에 연계된다. S119C 는 hF6 의 중쇄 불변부의 위치 119 에서의 세린이 PBD 독소 (즉, 항-신생물제) 의 공유 부착을 위해 시스테인으로 돌연변이되었음을 나타낸다. 이 실험에서 사용한 대표적 PBD 독소는 식 II 의 독소였다. 독소는 말레이미드 화학 반응을 사용하여 위치 119 에서 시스테인의 술프히드릴 기에 공유 부착되었다.
[도 18] 도 18 은 예시적인 식 II 의 항-신생물제를 나타낸다.
[도 19] 도 19 는 식 II 의 항-신생물제에 확률적으로 접합된 전장 hF6 항-CD138 단일클론 항체 ("hF6-II"), 식 II 의 항-신생물제에 확률적으로 접합된 hF6-HN-G7 (hF6-HN-G7-II), 및 식 II 의 항-신생물제에 확률적으로 접합된 hF6-LN-G7 (hF6-LN-G7-II) 를 사용하여 세포주 KMS-11 (도 19A), OPM-2 (도 19B) 및 ARH-77 (도 19C) 에 대해 수행된 시험관내 세포독성 어세이를 나타낸다.
[도 20-1] 도 20-2 는 식 II 의 항-신생물제에 위치-특이적으로 접합된 hF6-T289C-HN-G7 (hF6-T289C-HN-G7-II), 식 II 의 항-신생물제에 위치-특이적으로 접합된 hF6-S119C-HN-G7 (hF6-S119C-HN-G7-II), 식 II 의 항-신생물제에 위치-특이적으로 접합된 hF6-V282C-HN-G7 (hF6-V282C-HN-G7-II, 오직 도 20C 및 20D), hF6-II (오직 도 20A 및 20B) 및 식 II 의 PBD 독소에 접합된 대조군 항체 세쿠키누맙 (세쿠키누맙-II) 을 사용하여 세포주 KMS-11 (도 20A) 및 RT-112 (도 20B) 에 대해 수행된 시험관내 세포독성 어세이를 나타낸다.
[도 20-2] 도 20-2 는 식 II 의 항-신생물제에 위치-특이적으로 접합된 hF6-T289C-HN-G7 (hF6-T289C-HN-G7-II), 식 II 의 항-신생물제에 위치-특이적으로 접합된 hF6-S119C-HN-G7 (hF6-S119C-HN-G7-II), 식 II 의 항-신생물제에 위치-특이적으로 접합된 hF6-V282C-HN-G7 (hF6-V282C-HN-G7-II, 오직 도 20C 및 20D), hF6-II (오직 도 20A 및 20B) 및 식 II 의 PBD 독소에 접합된 대조군 항체 세쿠키누맙 (세쿠키누맙-II) 을 사용하여 세포주 AN3CA (도 20C) 및 HCC1806 (도 20D) 에 대해 수행된 시험관내 세포독성 어세이를 나타낸다.
[도 21A] 도 21A 는 마우스에 이식된 AN3CA 세포를 사멸시키거나 성장을 억제하는 표시된 이중특이적 결합제의 능력을 시험하는 생체내 이종이식 연구의 그래프 결과를 나타낸다 (도 21A).
[도 21B] 도 21B 는 마우스에 이식된 HCC1807 세포를 사멸시키거나 성장을 억제하는 표시된 이중특이적 결합제의 능력을 시험하는 생체내 이종이식 연구의 그래프 결과를 나타낸다.
발명의 상세한 설명
많은 신생 세포는 그의 세포 표면 상에서 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3, 이의 하나 이상의 동형 포함) 및 신데칸-1 (CD138) 을 발현한다. 높은 친화도로 신데칸-1 및 FGFR3 에 결합하는 이중특이적 결합제가 본원에 제공된다. 이들 이중특이적 결합제는 높은 친화도 및 높은 선택성으로, 표적 수용체 둘 모두를 발현하는 신생 세포에 결합할 수 있는 것으로 결정되었다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 이중특이적 결합제는 표적 수용체 중 하나 또는 둘 모두 (즉, CD138 및 FGFR3) 에 결합시 결합제의 내재화를 유도한다. 또한, 이중특이적 결합제를 독성 페이로드 (payload) 에 접합시킴으로써, 이중특이적 결합제는 표적 수용체 중 하나 또는 둘 모두를 발현하는 신생 세포를 특이적으로 사멸시킬 수 있다. 또한, 표적외 (off-target) 세포독성은 독성 페이로드와 이중특이적 결합제 사이에 프로테아제 절단가능한 연결기를 혼입함으로써 상당히 감소될 수 있어, 독소가 사이토졸성 프로테아제에 의해 연결기의 절단 및 내재화 후에만 결합제로부터 방출된다. 본원의 이중특이적 결합제는 부작용을 감소시키면서 신생 세포의 보다 효율적이고 선택적인 사멸을 제공하는 차세대 생물제제를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본원에 제시된 이중특이적 결합제는 항체 부분 (예를 들어, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분) 및 피노머 부분 (즉, 피노머) 을 포함하며, 여기서 피노머는 항체 부분에 부착된다. 일부 구현예에서, 피노머는 공유 결합에 의해 항체 부분에 부착된다. 일부 구현예에서, 항체 부분은 신데칸-1 (즉, 신데칸-1 폴리펩티드; 예를 들어, CD138), 또는 이의 세포외 부분에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 특정 구현예에서, 피노머 부분은 FGFR3 (예를 들어, FGFR3, 또는 이의 하나 이상의 동형) 에 특이적으로 결합하는 피노머를 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 세포독성 페이로드를 포함한다.
일부 구현예에서 본원에 제시된 이중특이적 결합제는 대상체에서의 신생물의 치료, 예방 및/또는 진단에 사용된다.
신데칸
인간 신데칸-1 (예를 들어, SEQ ID NO:1) 은 일반적으로, N-말단에서 C-말단으로 넘버링하여, 아미노산 1-22 개의 N-말단 단일 서열, 약 아미노산 23-254 개의 세포외 도메인, 약 아미노산 255 내지 275 개의 트랜스멤브레인 도메인 및 약 아미노산 276 내지 310 개의 세포질 도메인을 포함하는, 310 개 아미노산의 미성숙 폴리펩티드 서열을 포함한다. 신데칸-1 수용체의 리더 서열, 세포외 도메인, 트랜스멤브레인 도메인 및 세포질 도메인의 식별 방법은 공지되어 있으며, 임의의 적합한 방법을 사용하여 적합한 포유동물 종에서 유래한 신데칸-1 폴리펩티드 서열 내의 이러한 도메인 또는 부위를 식별할 수 있다.
일부 구현예에서 신데칸-1 은 포유동물 신데칸-1 이다. 신데칸-1 은 임의의 포유동물 종에서 유래할 수 있다. 일부 구현예에서, 신데칸-1 폴리펩티드는 인간 신데칸-1 이다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 의 세포외 도메인은 미손상 포유동물 세포의 세포 표면 상에 전형적으로 발현되는 신데칸-1 폴리펩티드의 N-말단 부분을 포함한다. 특정 구현예에서 신데칸-1 의 세포외 도메인은 세포질 및/또는 트랜스멤브레인 도메인이 결핍된 가용성 또는 비-멤브레인 결합 형태로 발현된다. 특정 구현예에서 신데칸-1 및/또는 신데칸-1 의 세포외 도메인은 하나 이상의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 포함한다. 신데칸-1 폴리펩티드는 SEQ ID NO:1 의 신데칸-1 폴리펩티드와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 폴리펩티드는 신데칸-1 단백질의 부분 (예를 들어, 신데칸-1 단백질의 하위서열) 을 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 의 부분은 신데칸-1 의 세포외 도메인, 또는 이의 부분을 포함한다.
항체 & 이의 Ag 결합 부분
일부 구현예에서 이중특이적 결합제는 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 부분 (예를 들어, 이의 결합 부분, 또는 이의 항원 결합 부분) 을 포함한다. 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 결합 부분은 때때로 본원에서 항-CD138 항체로서 지칭된다. 본원에 기재된 이중특이적 결합제에서 사용하기 위해 고려되는 항-CD138 항체 및 이의 결합 부분은, 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 번호 PCT/JP2018/016847 에 상세히 기재되어 있다.
일부 구현예에서 항체는 단일클론 항체, 또는 이의 결합 부분이다. 항체의 특정 비제한적 예는 단일클론 항체, 키메라 항체, CDR-그래프트된 항체, 인간화 항체 및 인간 항체를 포함한다. 인간 항체는 적합한 방법에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 인간 항체는 완전한 인간 항체가 생산되도록 조작된 염색체이식 (trans-chromosomal) 동물로부터 수득될 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는 다클론이 아니고/아니거나 다클론 항체가 아니다.
항체, 또는 이의 결합 부분은 적합한 방법에 의해 생성, 제조 또는 생산될 수 있다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 적합한 종으로부터 유래, 생산, 수득, 단리 및/또는 정제된다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 예를 들어 토끼, 염소, 말, 소, 랫트, 마우스, 어류, 새 또는 라마로부터 유리, 생산, 수득, 단리 및/또는 정제된다. 일부 구현예에서 항체는 새 (예를 들어, 닭 또는 새 알) 로부터 유래, 생산, 수득, 단리 및/또는 정제된다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 식물 (예를 들어, 유전적으로 조작된 식물에 의해 생산된 재조합 항체, 또는 이의 결합 부분) 로부터 유래, 생산, 수득, 단리 및/또는 정제된다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 적합한 포유류로부터 유래, 생산, 수득, 단리 및/또는 정제된다. 특정 구현예에서 적합한 포유류는 인간 중쇄 및/또는 인간 경쇄 또는 이의 부분을 포함하는 항체가 생산되도록 조작된 유전적 변형 포유류 (예를 들어, 염색체이식 또는 트랜스제닉 포유류) 이다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 원핵 또는 진핵 세포 (예를 들어, 유전적으로 조작된 세포에 의해 생산된 재조합 항체, 또는 이의 결합 부분) 로부터 생산, 수득, 단리 또는 정제된다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 바이러스 (예를 들어, 유전적으로 조작된 바이러스에 의해 생산된 재조합 항체, 또는 이의 결합 부분) 로부터 생산, 수득, 단리 또는 정제된다.
항체, 또는 이의 결합 부분, 또는 이중특이적 작용제는 그의 비제한적 예가 적합한 박테리아, 파지, 곤충, 바이러스, 식물 또는 포유동물 발현 시스템을 포함하는 적합한 발현 시스템으로부터 발현, 단리 및/또는 정제될 수 있다. 예를 들어, 항체를 인코딩하는 핵산은 항체를 발현하고 세포 배양 배지에 항체를 분비하는 적합한 포유동물 세포주에 도입될 수 있다. 임의의 적합한 포유동물 세포주를 사용하여 항체 또는 이중특이적 결합제를 생성할 수 있다. 항체 또는 이중특이적 결합제, 또는 이의 부분을 생산하는 방법은 (i) 적합한 세포주에 하나 이상의 핵산을 도입하는 단계로서, 핵산이 항체, 이중특이적 결합제 또는 이의 부분의 발현을 유도하는 것인 단계; (ii) 항체 또는 이중특이적 결합제의 발현을 허용하는 기간 동안 적합한 배양 방법을 사용하여 세포주를 배양하는 단계; (iii) 세포주를 수확하거나 (예를 들어, 용해물 생성을 통해) 세포주로부터 생산된 조건화 배지를 수확하는 (예를 들어, 항체 또는 이중특이적 결합제가 배지에 분비됨) 단계; 및 (iv) 적합한 방법을 사용하여 항체 또는 이중특이적 결합제를 단리 및/또는 정제하는 단계 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
수식어 "단일클론" 은 임의의 특정 방법에 의해 항체, 또는 이의 결합 부분의 생산을 요구하는 것으로서 해석되어서는 안된다. 단일클론 항체, 또는 이의 결합 부분은 임의의 적합한 방법에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어 특정 구현예에서, 단일클론 항체는 하이브리도마 방법 (예를 들어, Kohler et al., Nature, 256:495 (1975) 에 의해 기재된 바와 같음), 또는 이의 변형에 의해 만들어진다. 일부 구현예에서 단일클론 항체, 또는 이의 결합 부분은 재조합 DNA 방법에 의해 만들어진다. 예를 들어, 단일클론 항체, 또는 이의 결합 부분은 적합한 발현 시스템 (예를 들어, 파지 디스플레이 발현 시스템) 을 사용하여 재조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 만들어질 수 있다. 일부 구현예에서 단일클론 항체, 또는 이의 결합 부분은, 예를 들어 Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및/또는 Marks et al., J.Mol.Biol., 222:581-597 (1991) 에서 기재된 기법 또는 이의 변형을 사용하여 파지 라이브러리로부터 단리된다.
특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 포유동물 항체의 하나 이상의 구조적 부분을 포함한다. 특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 불변부 (예를 들어, 항체, 예를 들어 포유동물 항체에서 유래한 불변부) 를 포함한다. 항체, 또는 이의 결합 부분은 항체의 임의의 적합한 불변부, 또는 이의 하나 이상의 부분을 포함할 수 있다. 특정 구현예 항체, 또는 이의 결합 부분은 항체 경쇄의 불변부 및/또는 항체 중쇄의 불변부를 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 람다 (λ) 경쇄 불변부, 또는 이의 부분을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 카파 (κ) 경쇄 불변부, 또는 이의 부분을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 포유동물 항체의 경쇄 불변부의 폴리펩티드 서열, 또는 이의 부분과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 항체의 경쇄 불변부의 폴리펩티드 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서 항체의 결합 부분은 경쇄 불변부를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 경쇄 불변부의 하나 이상의 부분을 포함하지 않는다.
항체, 또는 이의 결합 부분은 임의의 적합한 중쇄 불변부, 또는 이의 부분을 포함할 수 있다. 포유류에서, 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 으로 표시한 Ig 중쇄의 적어도 5 개의 유형/클래스를 가질 수 있는데, 이는 별개의 중쇄 불변부 또는 이의 부분의 존재에 의해 결정된다 (예를 들어, CH1, CL, CH2, CH3 도메인). 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 IgM, IgD, IgA 또는 IgE 이소타입의 하나 이상의 중쇄 불변부, 또는 이의 부분을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 의 중쇄 불변부, 또는 이의 하나 이상의 부분을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 포유동물 항체의 중쇄 불변부의 폴리펩티드 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 동일하거나 100% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 항체의 중쇄 불변부의 폴리펩티드 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 동일하거나 100% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 불변부에 대한 하나 이상의 부가, 결실 및/또는 변형을 포함한다. 항체, 또는 이의 결합 부분은 때때로 항체 부류, 또는 항체의 이소타입을 변경하기 위해 변형된다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 항체, 또는 이의 결합 부분의 하나 이상의 기능을 변형하기 위해, 예를 들어 혈청 반감기, Fc 수용체 결합, 보체 결합 (예를 들어, C1q 결합), 글리코실화, 시알릴화, 세포 독성, 항체-의존적 세포 매개 식균작용 (ADCP), 항체 의존적 세포 세포독성 (ADCC) 등을 폐지, 증진 또는 감소시키기 위해 하나 이상의 부가, 결실 및/또는 변형 (하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가) 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체의 결합 부분은 중쇄 불변부를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 중쇄 불변부의 하나 이상의 부분을 포함하지 않는다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 항체의 하나 이상의 가변부, 또는 이의 부분을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 경쇄 가변부, 또는 이의 부분을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 중쇄 가변부, 또는 이의 부분을 포함한다. 특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 적어도 하나의 경쇄 가변부 및 적어도 하나의 중쇄 가변부를 포함한다. 경쇄 가변부 및 중쇄 가변부는 동일하거나 상이한 폴리펩티드 상에 있을 수 있다.
포유류에서, 항체의 중쇄 가변부 및 경쇄 가변부는 각각, 골격부 (예를 들어, FR1, FR2, FR3 및 FR4) 에 의해 분리되고/되거나 측면위치하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 으로 흔히 지칭되는 3 개의 CDR (상보성 결정 부위) 에 기여한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "CDR" 은 상보성 결정 부위로서 식별되는 폴리펩티드의 아미노산 서열을 지칭한다. 특정 구현예에서, CDR 폴리펩티드 서열의 확정적 서술 및 항체, 또는 이의 결합 부분의 결합 위치를 포함하는 잔기의 식별은 항체, 또는 이의 결합 부분의 구조를 해결하고/하거나 항체-항원 복합체 등의 구조를 해결함으로써 달성된다. 특정 구현예에서, 이는 임의의 적합한 방법, 예컨대 X-선 결정학 및/또는 컴퓨터 모델링에 의해 달성된다. 특정 구현예에서, 다양한 분석 방법을 이용하여 항체 또는 이의 결합 부분의 CDR 서열을 식별하거나 근사화한다. 예를 들어, 항체, 이의 결합 부분 또는 이의 가변부의 폴리펩티드 서열에서의 CDR 의 아미노산 서열 및/또는 위치는 적합한 방법을 사용하여 식별되며, 이의 비제한적 예는 카밧 (Kabat) 또는 EU 시스템 (예를 들어, Kabat, E. A., et al., 1991; Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication No. 91-3242 뿐만 아니라 Johnson, G. and Wu, T. T. 2000, Nucleic Acids Research 참조), 및/또는 초티아 넘버링 스킴 (Chothia Numbering Scheme) (예를 들어, Chothia & Lesk, (1987) J.Mol.Biol., 196:901-917; Chothia et al., Nature, (1989) 342:878-883; 및 Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948) 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체의 CDR 의 아미노산 서열 및/또는 위치는 AbM 방법 및/또는 접촉 방법을 사용하여 식별된다. "AbM" 정의는 항체 구조를 모델링하는 Oxford Molecular Group 에 의해 제조된 컴퓨터 프로그램의 통합 도구를 사용한다 (예를 들어, Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 86:9268-9272 (1989); "AbM(Trademark), A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies," Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd. 참조). AbM 정의는 Samudrala et al., "Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach," in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198 (1999) 에 의해 기재된 것들과 같은 제 1 원리 (ab initio) 방법 및 지식 데이터베이스의 조합을 사용하여 1 차 서열로부터 항체의 3 차 구조를 모델링한다. 특정 구현예에서, 접촉 정의는 이용가능한 복잡한 결정 구조의 분석을 기반으로 한다 (예를 들어, MacCallum et al., J.Mol.Biol, 5:732-45 (1996) 참조).
일부 구현예에서 항체는 적어도 6 개의 별개의 CDR (예를 들어, 3 개의 별개의 중쇄 CDR 및 3 개의 별개의 경쇄 CDR) 을 포함한다. 특정 구현예에서, 항체의 결합 부분은 적어도 2 개, 적어도 3 개, 적어도 4 개, 적어도 5 개 또는 적어도 6 개의 별개의 CDR 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체의 결합 부분은 3 내지 6 개의 별개의 CDR 을 포함한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 결합 부분은 경쇄 가변부의 1, 2 또는 3 개 CDR 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체 또는 이의 결합 부분의 경쇄 가변부는 하나 이상의 CDR (예를 들어, 1, 2, 3 개 이상의 CDR) 을 포함한다. 항체의 경쇄 가변부에서 CDR 을 나타내는 아미노산 서열은 CDR-L1 (경쇄 CDR1), CDR-L2 (경쇄 CDR2) 및 CDR-L3 (경쇄 CDR3) 으로서 지칭되는데, 이는 경쇄 가변부의 아미노 말단 (N-말단) 에서 카르복시 말단 (C-말단) 의 방향으로 순차적으로 넘버링된다 (즉, L1, L2 및 L3). 예를 들어, 항체 또는 이의 결합 부분의 경쇄 가변부를 나타내는 폴리펩티드에서, CDR-L1 은 존재시 가장 N-말단 경쇄 CDR 이고; CDR-L3 은 존재시 가장 C-말단 경쇄 CDR 이며; CDR-L2 는 존재시 (i) CDR-L1 과 CDR-L3 사이, (ii) 항체의 경쇄 가변부 또는 결합 부분의 CDR-L3 의 N-말단 측, 또는 (iii) 항체의 경쇄 가변부 또는 결합 부분의 CDR-L1 의 C-말단 측에 위치한다. 용어 "CDR-L1", "CDR-L2" 및 "CDR-L3" 은 부분적으로, 항체의 상보성 결정 부위 (예를 들어, 경쇄 가변부의 CDR) 로서 식별된, 또는 그로서 본원에 개시된, 폴리펩티드의 아미노산 서열을 지칭한다. CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 의 아미노산 서열의 비제한적 예는 각각 표 1-3 에 제공된다. 항체의 경쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 본원에 개시된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 의 임의의 조합을 포함할 수 있으며, 항체의 결합 부분은 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다. 특정 구현예에서, 항체의 경쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 3 에서 선택된 CDR-L3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 단일 경쇄 CDR 을 포함한다. 특정 구현예에서, 항체의 경쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 3 에서 선택된 CDR-L3 및/또는 또 다른 적합한 CDR-L2 및/또는 CDR-L1 폴리펩티드 서열과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 항체, 또는 이의 결합 부분은 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다. 특정 구현예에서, 항체의 항원 결합 부분 또는 경쇄 가변부의 경쇄 CDR 은 CDR-L3 및 CDR-L2 로 이루어지며, CDR-L3 은 표 3 에서 선택된 CDR-L3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하고 CDR-L2 는 표 2 에서 선택된 CDR-L2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 항체의 경쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 3 에서 선택된 CDR-L3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열 및 표 2 에서 선택된 CDR-L2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열 및 임의의 다른 적합한 CDR-L1 폴리펩티드 서열을 포함하며, 항체, 또는 이의 결합 부분은 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다. 특정 구현예에서, 항체의 경쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 3 에서 선택된 CDR-L3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열, 표 2 에서 선택된 CDR-L2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열 및 표 1 에서 선택된 CDR-L1 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열로 이루어지는 3 개의 경쇄 CDR 을 포함한다. 특정 구현예에서, 항체의 경쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 3 에서 선택된 CDR-L3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열, 표 2 에서 선택된 CDR-L2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열 및 표 1 에서 선택된 CDR-L1 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 항체, 또는 이의 결합 부분은 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 1, 2 또는 3 에 열거된 CDR 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 하나 이상의 경쇄 CDR 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 1 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 CDR-L1 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 1 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나의 CDR-L1 을 포함한다.
[표 1]
CDR-L1 서열
Figure pct00015
* CDR 이 카밧 (Kabat) 방법에 의해 정의되었음을 나타냄.
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 2 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 CDR-L2 를 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 2 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나의 CDR-L2 를 포함한다.
[표 2]
CDR-L2 서열
Figure pct00016
* CDR 이 카밧 방법에 의해 정의되었음을 나타냄.
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 3 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 CDR-L3 을 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 3 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나의 CDR-L3 을 포함한다.
[표 3]
CDR-L3 서열
Figure pct00017
* CDR 이 카밧 방법에 의해 정의되었음을 나타냄.
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 4 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 4 의 경쇄 가변부 서열을 포함한다.
[표 4]
마우스 가변 경쇄 서열
Figure pct00018
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 5 의 서열과 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 인간화 경쇄 가변부를 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 5 의 인간화 경쇄 가변부 서열을 포함한다.
[표 5]
인간화 경쇄 가변부
Figure pct00019
특정 구현예에서, 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 중쇄 가변부의 1, 2 또는 3 개의 CDR 을 포함한다. 일부 구현예에서 중쇄 가변부는 하나 이상의 별개의 CDR (예를 들어, 1, 2, 3 개 이상의 별개의 CDR) 을 포함한다. 항체의 중쇄 가변부에서 CDR 을 나타내는 아미노산 서열은 CDR-H1 (중쇄 CDR1), CDR-H2 (중쇄 CDR2) 및 CDR-H3 (중쇄 CDR3) 으로서 지칭되는데, 이는 중쇄 가변부의 아미노 말단 (N-말단) 에서 카르복시 말단 (C-말단) 의 방향으로 순차적으로 넘버링된다 (즉, H1, H2 및 H3). 예를 들어, 신데칸-1 항체 또는 이의 결합 부분의 중쇄 가변부를 나타내는 폴리펩티드에서, CDR-H1 은 존재시 가장 N-말단 CDR 이고; CDR-H3 은 존재시 가장 C-말단 CDR 이며; CDR-H2 는 존재시 (i) CDR-H1 과 CDR-H3 사이, (ii) 중쇄 가변부의 CDR-H3 의 N-말단 측, 또는 (iii) 중쇄 가변부의 CDR-H1 의 C-말단 측에 위치한다. 용어 "CDR-H1", "CDR-H2" 및 "CDR-H3" 은 부분적으로, 신데칸-1 항체의 상보성 결정 부위, 또는 이의 결합 부분 (예를 들어, 신데칸-1 항체의 중쇄 가변부의 CDR) 로서 식별된, 또는 그로서 본원에 개시된, 폴리펩티드의 아미노산 서열을 지칭한다. CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 의 아미노산 서열의 비제한적 예는 각각 표 6-8 에 제공된다. 신데칸-1 항체의 중쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 의 임의의 조합을 포함할 수 있으며, 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 항체의 중쇄 가변부 또는 항원 결합 부분, 또는 이의 결합 부분은 표 8 에서 선택된 CDR-H3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열로 이루어지는 단일 중쇄 CDR 을 포함한다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 항체의 중쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 8 에서 선택된 CDR-H3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열, 및 임의의 다른 적합한 CDR-H2 및/또는 CDR-H1 폴리펩티드 서열을 포함하며, 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 항체의 항원 결합 부분 또는 중쇄 가변부의 중쇄 CDR 은 CDR-H3 및 CDR-H2 로 이루어지며, CDR-H3 은 표 8 에서 선택된 CDR-H3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하고 CDR-H2 는 표 7 에서 선택된 CDR-H2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 항체의 중쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 8 에서 선택된 CDR-H3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열 및 표 7 에서 선택된 CDR-H2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열, 및 임의의 다른 적합한 CDR-H1 폴리펩티드 서열을 포함하며, 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 신데칸-1 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 항체의 중쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 8 에서 선택된 CDR-H3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열, 표 7 에서 선택된 CDR-H2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열 및 표 6 에서 선택된 CDR-H1 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열로 이루어지는 3 개의 중쇄 CDR 을 포함한다. 특정 구현예에서, 신데칸-1 항체의 중쇄 가변부 또는 항원 결합 부분은 표 8 에서 선택된 CDR-H3 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열, 표 7 에서 선택된 CDR-H2 와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열 및 표 6 에서 선택된 CDR-H1 과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 신데칸-1 항체는 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 특이적 결합을 유지한다.
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 6, 7 또는 8 의 CDR 중 임의의 하나에 대해 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 을 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 6 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 CDR-H1 을 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 6 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나의 CDR-H1 을 포함한다.
[표 6]
CDR-H1 서열
Figure pct00020
* CDR 이 카밧 방법에 의해 정의되었음을 나타냄.
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 7 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 CDR-H2 를 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 7 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나의 CDR-H2 를 포함한다.
[표 7]
CDR-H2 서열
Figure pct00021
* CDR 이 카밧 방법에 의해 정의되었음을 나타냄.
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 8 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일한 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 8 에서 나타낸 서열 중 임의의 하나의 CDR-H3 을 포함한다.
[표 8]
CDR-H3 서열
Figure pct00022
* CDR 이 카밧 방법에 의해 정의되었음을 나타냄.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 1 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 표 2 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 표 3 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 표 6 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 표 7 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 표 8 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:2 또는 3 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:16, 17 또는 18 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:27 또는 28 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:45, 46 또는 47 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:60 또는 61 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:72 또는 73 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:3 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:18 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:28 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:17 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:61 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:16 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:45 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:72 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:2, 16 및 27 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:45, 60 및 72 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:2, 16 및 27 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:46, 61 및 72 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:2, 16 및 27 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:45, 61 및 72 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:4 또는 5 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:19, 20 또는 21 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:29 또는 30 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:48, 49 또는 50 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:62, 63 또는 64 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:74 또는 75 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:5 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:21 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:30 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:62 또는 64 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:75 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:4 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:20 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:63 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:75 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:4, 19 및 29 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:48, 63 및 75 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:4, 19 및 29 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:49, 63 및 75 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:4, 19 및 29 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:49, 63 및 74 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:4, 19 및 29 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:48, 63 및 74 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:6 또는 7 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:22 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:29 또는 30 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 또는 51 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:62, 63 또는 64 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:76 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:7 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:22 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:30 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:63 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:76 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:6 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:22 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:63 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:76 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:6, 22 및 29 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:51, 63 및 76 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:8 또는 9 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:23 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:31 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:52 또는 53 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:65 또는 66 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:77 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:9 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:23 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:31 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:53 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:66 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:77 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:8 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:23 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:31 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:53 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:65 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:77 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:8, 23 및 31 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:52, 65 및 77 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:10 또는 11 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:24 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:29 또는 30 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 또는 54 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:62, 64 또는 67 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:78 또는 79 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:11 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:24 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:30 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:62 또는 64 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:79 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:10 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:24 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:67 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:79 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:10, 24 및 29 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:54, 67 및 78 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:12 또는 13 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:25 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:32 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:55 또는 56 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:68 또는 69 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:80 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:13 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:25 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:32 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:56 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:69 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:80 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:12 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:25 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:32 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:56 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:68 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:80 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:12, 25 및 32 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:55, 68 및 80 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:14 또는 15 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:26 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:33 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:57, 58 또는 59 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:70 또는 71 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:81 의 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:15 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:26 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:33 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:59 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:70 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:81 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:15, 26, 33, 57, 70 및 81 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:14 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, SEQ ID NO:26 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, SEQ ID NO:33 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, SEQ ID NO:59 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, SEQ ID NO:71 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:81 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:14, 26 및 33 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 각각 SEQ ID NO:58, 71 및 81 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 각각 SEQ ID NO:14, 26 및 33 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 및 각각 SEQ ID NO:57, 71 및 81 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다.
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 9 의 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변부를 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 9 의 중쇄 가변부 서열을 포함한다.
[표 9]
마우스 가변 중쇄 서열
Figure pct00023
Figure pct00024
일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 10 의 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 인간화 중쇄 가변부를 포함한다. 일부 구현예에서 신데칸-1 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 10 의 인간화 중쇄 가변부 서열을 포함한다.
[표 10]
인간화 중쇄
Figure pct00025
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:82~92 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변부 및/또는 SEQ ID NO:34~43 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변부를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:89-92 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:41~43 의 아미노산 서열 중 임의의 하나와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변부를 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO:90 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:41 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변부를 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 4 및 5 의 경쇄 가변부에서 선택되는 하나 이상의 CDR 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 9 및 10 의 중쇄 가변부에서 선택되는 하나 이상의 CDR 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 4 및 5 의 경쇄 가변부에서 선택되는 하나 이상의 CDR, 및 표 9 및 10 의 중쇄 가변부에서 선택되는 하나 이상의 CDR 을 포함한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 4 및 5 의 경쇄 가변부 중 임의의 하나에서 각각 선택되는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 표 9 및 10 의 중쇄 가변부 중 임의의 하나에서 각각 선택되는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. CDR 의 아미노산 서열 (예를 들어, CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3) 은 본원에 기재된 임의의 적합한 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 중쇄 또는 경쇄 가변부 내에서 식별될 수 있다.
일부 구현예에서 항체는 SEQ ID NO:93 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO:44 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 표 1-10 에서 선택되는 하나 이상의 적합한 서열을 포함하며, 선택된 폴리펩티드 서열은 0 내지 5 개, 1 내지 5 개, 0 내지 10 개, 1 내지 10 개, 0 내지 15 개, 또는 1 내지 12 개의 아미노산 변형, 부가, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 하나의 아미노산이 유사한 구조 또는 유사한 생화학적 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 대체되는 보존적 치환이다. 보존적 치환의 비제한적 예는 친수성 아미노산을 또 다른 친수성 아미노산으로 치환하는 것, 소수성 아미노산을 또 다른 소수성 아미노산으로 치환하는 것, 산성 아미노산을 또 다른 산성 아미노산으로 치환하는 것, 염기성 아미노산을 또 다른 염기성 아미노산으로 치환하는 것, 및 중성 하전 아미노산을 또 다른 중성 하전 아미노산으로 치환하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 아미노산 유사체, 비-천연 아미노산 또는 아미노산 유도체를 포함한다.
특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 골격부 (FR) 를 포함한다. 골격부는 종종 항체 또는 이의 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄 가변부의 CDR 및/또는 측면 CDR 서열 사이에 위치한다. 포유류에서, 중쇄 가변부는 종종 4 개의 골격부를 포함하며 경쇄 가변부는 종종 4 개의 골격부를 포함한다. 임의의 적합한 방법은 항체에서, 항체 또는 이의 결합 부분의 가변부에서 하나 이상의 골격부를 식별하는데 사용될 수 있다. 항체, 또는 이의 결합 부분은 하기 토의한 바와 같이 미변형되거나 변형되는 (예를 들어, 최적화되는) 합성 또는 자연 발생 골격부를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 키메라, 그래프트 및/또는 인간화된 것이다. 키메라, 그래프트 및/또는 인간화 항체는 종종 신데칸-1, 또는 이의 부분에 대한 결합 특이도를 유지하면서 변형 또는 치환된 불변부 및/또는 골격부를 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 항체에서 유래하는 불변부, 골격부 또는 이의 부분을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 전체 합성 부분, 하나 이상의 아미노산, 또는 천연 항체 분자에서 발견되지 않는 아미노산의 서열을 포함한다.
자연 발생 골격부, 또는 이의 부분은 임의의 적합한 종으로부터 수득될 수 있다. 특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분의 경쇄 및 중쇄 가변부의 상보성 결정 부위 (CDR) 은 동일한 종 또는 또 다른 종으로부터의 골격부에 그래프트된다. 예를 들어, 항체, 또는 이의 결합 부분의 하나 이상의 골격부는 설치류 종 (예를 들어, 마우스 또는 랫트) 또는 영장류 종 (예를 들어, 인간) 에서 유래할 수 있다.
특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분의 경쇄 및/또는 중쇄 가변부의 CDR 은 컨센서스 (consensus) 인간 골격부에 그래프트된다. 컨센서스 인간 골격부를 생성하기 위해, 특정 구현예에서, 여러 인간 중쇄 또는 경쇄 아미노산 서열로부터의 골격부는 컨센서스 서열이 식별되도록 정렬된다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄 골격부는 상이한 중쇄 또는 경쇄 가변부로부터의 하나 이상의 골격부, 또는 이의 부분으로 대체된다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 인간 골격부를 포함한다. 특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 개의 인간 골격부를 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 마우스 골격부를 포함한다. 특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 개의 마우스 골격부를 포함한다. 특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 인간 골격부 및 하나 이상의 마우스 골격부를 포함한다.
예를 들어 골격부 또는 이의 부분을 변형, 치환 또는 결실시킴으로써 키메라, 인간화 및/또는 최적화 항체, 또는 이의 결합 부분을 생성하는 방법은 공지되어 있다. CDR 그래프팅의 비제한적 예는 예를 들어, U.S. 특허 번호 6, 180,370, 6,054,297, 5,693,762, 5,859,205, 5,693,761, 5,565,332, 5,585,089 및 5,530, 101, 및 Jones et al., Nature, 321 :522-525 (1986); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988), 및 Winter, FEBS Letts., 430:92-94 (1998) 에 기재되어 있다. 키메라, 그래프트 및/또는 인간화 항체를 생성하는 추가적인 비제한적 예는 U.S. 특허 번호 5,530,101; U.S. 특허 번호 5,707,622; U.S. 특허 번호 5,994,524; U.S. 특허 번호 6,245,894; Queen et al., (1988) PNAS 86:10029-10033; Riechmann et al., Nature (1988) 332:323-327; Antibody Engineering: Methods and Protocols, Vol. 248 of Methods in molecular biology, edited by Benny K. C. Lo, Springer Science & Business Media, (2004); 및 Antibody Engineering, Vol. 1, Roland E. Kontermann, Stefan Dubel, Edition 2, Publisher Springer Science & Business Media (2010) 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 골격부, 또는 이의 부분 (예를 들어, 하나 이상의 아미노산) 을 인간 항체로부터의 하나 이상의 골격부, 또는 이의 부분으로 교환함으로써 인간화된다 (예를 들어, "Humanization of Antibodies" by Eduardo A. Padlan Publ. Landes BioScience 2002 참조). 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 공여체 항체의 결합 특이도를 유지하면서 하나 이상의 CDR (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 모든 6 개의 CDR) 을 공여자 항체 (예를 들어, 마우스 단일클론 항체) 로부터 수용체 항체 (예를 들어, 인간 항체) 로 이동시킴으로써 인간화 또는 그래프트된다. 특정 구현예에서, 키메라, 그래프트 또는 인간화 항체의 제조 방법은 항체, 또는 이의 결합 부분의 불변부 또는 골격부에서 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 제조하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, "재성형 (reshaping)", "하이퍼키메라화 (hyperchimerization)", 또는 "베니어링/표면치환 (veneering/resurfacing)" 과 같은 기법을 사용하여 인간화 항체, 또는 이의 결합 부분을 생산한다 (예를 들어, Vaswami et al., Annals of Allergy, Asthma, & Immunol. 81: 105 (1998); Roguska et al., Prot. Engin., 9:895-904 (1996); 및 U.S. 특허 번호 6,072,035 참조). 일부 측면에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 상기 토의된 방법에 의해, 또는 또 다른 적합한 방법에 의해, 면역원성이 감소되도록 변형된다 (예를 들어, Gilliland et al., J. Immunol, 62(6):3663-71 (1999) 참조).
특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분의 아미노산 서열은 표적 (예를 들어, 신데칸-1) 에 대한 결합 친화도, 종 교차반응성, 용해도 및/또는 기능 (예를 들어, 아고니스트 활성, 또는 이의 결핍) 이 최적화되도록 변형된다. 일부 구현예에서 본원에 개시된 CDR 의 특이적 조합은 신데칸-1 에 대한 결합에 대해 최적화되고/되거나 항체, 또는 이의 결합 부분의 기능 또는 특징을 최적화하기 위해 최적화된다. 예를 들어, 특징화된 중쇄 가변부 (예를 들어, 표 6 또는 7 에서 선택된 중쇄 가변부) 의 CDR-H1 및 CDR-H2 를 포함하는 중쇄 가변부 라이브러리와 함께, 적합한 발현 시스템을 사용하여, 본원에 개시된 특징화된 경쇄 가변부 (예를 들어, SEQ ID NO:34-43 중 임의의 하나의 경쇄 가변부) 가 동시발현될 수 있으며, CDR-H3 은 예를 들어 표 8 의 하나 이상의 CDR-H3 부위를 포함할 수 있는 CDR-H3 서열의 라이브러리로 대체된다. 생성 경쇄/중쇄 항체는 신데칸-1 로의 결합 및/또는 특이적 기능에 대하여 스크리닝될 수 있다. 최적화된 항체가 식별될 수 있으며, CDR-H3 의 아미노산 서열이 적합한 방법에 의해 식별될 수 있다. 상기 스크리닝 방법은 항체, 또는 이의 결합 부분에 개선된 결합 특이도, 결합 친화도 및/또는 기능을 제공하는 CDR 의 특이적 조합, 또는 특정 최적화된 CDR 서열 (예를 들어, 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 포함하는 CDR 서열) 을 포함하는 항체, 또는 이의 결합 부분을 식별하는데 사용될 수 있다. 항체, 또는 이의 결합 부분의 이러한 스크리닝 및 최적화 방법은 공지되어 있다 (예를 들어, Portolano et al., (1993) Journal of Immunology 150:880-887; 및 Clarkson et al., (1991) Nature 352:624-628 참조). 이러한 참조문헌은 상보성 가변부의 라이브러리를 스크리닝함으로써 공지된 가변 경쇄, 공지된 가변 중쇄, 또는 이의 부분 (예를 들어, 이의 CDR) 을 사용하여 특이적 항원에 결합하는 항체의 생산 방법을 교시한다.
특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 친화도 및/또는 function of 항체, 또는 이의 결합 부분의 친화도 및/또는 기능을 최적화하기 위해 글리코실화 위치가 제거되거나 첨가되도록 변형된다 (예를 들어, Co et al., Mol. Immunol, 30:1361-1367 (1993) 참조). 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분에서의 글리코실화 위치의 수 및/또는 유형은 변형되거나 변경된다. N-연결 글리코실화 위치는 종종 서열 Asn-X-Ser 또는 Asn-X-Thr (X 로 지정된 아미노산 잔기는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산 잔기임) 을 특징으로 한다. 이러한 서열을 생성하기 위한 아미노산 잔기의 치환은 N-연결 탄수화물 사슬의 부가를 위한 잠재적인 새로운 위치를 제공한다. 대안적으로, 이러한 서열을 제거하는 치환은 존재하는 N-연결 탄수화물 사슬을 제거할 것이다. 또한 특정 구현예에서 하나 이상의 N-연결 글리코실화 위치 (전형적으로 자연 발생하는 것들) 가 제거되고 하나 이상의 새로운 N-연결 위치가 생성되는 N-연결 탄수화물 사슬의 재배열이 제공된다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 미변형된 항체 또는 이의 결합 부분과 비교하여, 하나 이상의 시스테인 잔기를 결실시키거나 또 다른 아미노산 (예를 들어, 세린) 에 대해 하나 이상의 시스테인을 치환함으로써 변형된다. 특정 구현예에서 시스테인 변이체는 발현, 분비 및/또는 용해도를 최적화하는데 유용하다.
특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은, 예를 들어 단백질분해에 대한 항체, 또는 이의 결합 부분의 감수성을 감소시키고, 산화에 대한 항체, 또는 이의 결합 부분의 감수성을 감소시키기 위해 설계 또는 의도된 특정 아미노산 부가, 치환 또는 결실이 포함되고, 혈청 반감기를 증가시키고/시키거나 항체, 또는 이의 결합 부분의 다른 생리화학적, 약물동태학적 또는 기능적 특성이 부여 또는 변형되도록 변형된다.
본원에 기재된 이중특이적 결합제의 항체 부분은 CD138 에 특이적으로 결합하는 항체의 항원 결합 부분 (예를 들어, 결합 부분) 을 포함할 수 있다. 항체의 결합 부분은 항체의 항원 결합 부분을 지칭한다. 특정 구현예에서, 항체의 결합 부분은 적어도, 항원에 특이적으로 결합하기에 충분한 항체의 최소 부분 (예를 들어, 신데칸-1, 또는 이의 부분) 을 포함한다. 특정 구현예에서, 항체의 결합 부분은 CD138 에 대한 특이적 결합을 유도하기에 필요하고 충분한 항체의 하나 이상의 상보성 결정 부위 (CDR) 를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체의 결합 부분은 항체의 중쇄 및 경쇄 가변부를 포함한다. 특정 구현예에서 항체의 결합 부분은 단일 폴리펩티드 (예를 들어, 단일 사슬 항체) 를 포함하거나 이로 이루어진다. 단일 사슬 항체는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄로부터의 하나 이상의 CDR 을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서 항체의 결합 부분은 2 개의 폴리펩티드 (예를 들어, 중쇄 가변부 및 경쇄 가변부) 를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 구현예에서 항체의 결합 부분은 하나 이상의 구조적 부분 (예를 들어, 스캐폴드, 구조적 폴리펩티드, 불변부 및/또는 골격부) 을 포함한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 항체의 결합 부분은 담체 또는 기질 (예를 들어, 중합체, 비-유기 물질, 실리콘, 비드, 입자 등) 에 부착된다.
이중특이적 결합제는 항체의 하나의 결합 부분 또는 항체의 다수 결합 부분을 포함할 수 있다. 이중특이적 결합제가 항체의 다수 결합 부분을 포함하는 경우, 각각의 결합 부분은 동일한 항원에 특이적으로 결합한다 (예를 들어, 신데칸-1, 또는 이의 부분). 일부 구현예에서 이중특이적 결합제는 항체의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 개 이상의 결합 부분을 포함한다.
항체의 결합 부분의 비제한적 예는 단일 사슬 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 단일 사슬 Fv (scFv), scFv-Fc, (scFv)2-Fc, 디술피드-연결 Fv (sdFv), VL (가변 경쇄), VH (가변 중쇄), 디아바디 (Dab), 트리아바디 (3가), 테트라바디 (4가), 미니바디 ((scFV-CH3)2), IgG델타CH2, 나노바디, scFv-Ig, SVD-Ig 등, 및 이의 조합을 포함한다.
이중특이적 결합제, 항체, 또는 이의 결합 부분의 하나 이상의 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산, 또는 이의 부분은 적합한 클로닝 절차를 사용하여 재조합 발현을 위해 클로닝, 서브클로닝, 재배열 또는 변형된 후 당업자에게 공지된 방법에 의해 적합한 발현 시스템을 사용하여 발현될 수 있다 (예를 들어, Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982; Antibody Engineering: Methods and Protocols, Vol. 248 of Methods in molecular biology, edited by Benny K. C. Lo, Springer Science & Business Media, 2004; Antibody Engineering, Vol. 1, Roland E. Kontermann, Stefan Dubel, Edition 2, Publisher Springer Science & Business Media, 2010; Antibody Phage Display: Methods and Protocols, Biomed Protocols, Vol. 178 of Methods in molecular biology, Editors Philippa M. O'Brien, Robert Aitken, Springer Science & Business Media, 2004 참조).
일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 포유동물 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 10-5 M 이하, 10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 50 nM 이하, 10 nM 이하 또는 1 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 포유동물 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 약 10-5 내지 10-15 M, 10-6 내지 10-15 M, 10-7 내지 10-15 M, 10-9 내지 10-15 M, 10-9 내지 10-14 M, 10-9 내지 10-13 M, 또는 10-9 내지 약 10-12 M 의 결합 친화도 (KD) 로 포유동물 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 포유동물 신데칸-1, 또는 이의 부분의 세포외 도메인 또는 세포외 부위에 특이적으로 결합한다. 특정 측면에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 자연에서 발견된 미변경 (비-유전적 변형) 포유류의 세포에 의해 생산된 야생형 신데칸-1 에 특이적으로 결합한다. 특정 측면에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 자연 발생 신데칸-1 변이체에 특이적으로 결합한다. 특정 측면에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 포함하는 신데칸-1 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간, 비-인간 영장류, 개, 고양이 또는 설치류 (예를 들어, 마우스 또는 랫트) 의 세포 표면 상에서 생산 및/또는 발현된 신데칸-1 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO: 1 및 126~130 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 신데칸-1 폴리펩티드, 또는 이의 부분 (예를 들어, 세포외 도메인) 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 SEQ ID NO: 1 및 126~130 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 신데칸-1 폴리펩티드, 또는 이의 부분에 50 nM 이하, 10 nM 이하 또는 1 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 신데칸-1 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 신데칸-1 의 세포외 도메인에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 신데칸-1, 및/또는 이의 세포외 도메인에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 AGEGPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:94) 또는 GPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:95) 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드 서열에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 AGEGPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:94) 또는 GPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:95) 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드 서열에 10-5 M 이하, 10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 50 nM 이하, 10 nM 이하 또는 1 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 GX1KEX2EAX3VLP (SEQ ID NO:96) 의 아미노산 서열 (X1, X2 및 X3 은 임의의 아미노산에서 선택됨) 을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드 서열에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서 X1 은 프롤린, 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌 및 발린에서 선택되고/되거나 X2 는 프롤린, 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌 및 발린에서 선택되고/되거나 X3 은 프롤린, 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌, 발린, 메티오닌, 류신, 이소류신 및 페닐알라닌에서 선택된다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 GX1KEX2EAX3VLP (SEQ ID NO:96) 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드 서열에 50 nM 이하, 10 nM 이하 또는 1 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 특이적으로 결합하며, 여기서 X1 은 프롤린, 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌 및 발린에서 선택되고, X2 는 프롤린, 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌 및 발린에서 선택되며, X3 은 프롤린, 알라닌, 시스테인, 글리신, 세린, 트레오닌, 발린, 메티오닌, 류신, 이소류신 및 페닐알라닌에서 선택된다. 특정 구현예에서, X1 은 프롤린이고, X2 는 알라닌, 글리신 또는 세린에서 선택되며, X3 은 알라닌, 글리신 및 발린에서 선택된다.
FGFR
비정상적으로 활성화된 FGFR 은 여러 인간 악성 종양과 관련이 있으며 FGFR3 의 과발현은 여러 동물 모델에서 발암성 형질전환을 유도하기에 충분하다. FGFR 을 표적화하는 항체 및 항체 약물 접합체 (ADC) 를 생성하려는 여러 시도가 있었다. 그러나, 이들 항체는 종종 FGFR 의 단 하나의 동형을 인식하거나 상이한 FGFR 동형 간의 결합 친화도에서 유의한 차이를 나타낸다.
본원에는 높은 친화도 및 특이도로 FGFR3 의 하나 이상의 스플라이스 형태에 결합하는 피노머를 포함하는 이중특이적 결합제가 제시되어 있다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 결합시 표적 세포로 내재화될 수 있다.
피노머
일부 구현예에서, 피노머는 인간 원종양유전자 티로신-단백질 키나아제 Fyn (p59-FYN, Slk, Syn, MGC45350, Gene ID 2534) 의 SH3 도메인에서 유래한 비-면역글로불린 스캐폴드를 포함하는 작은 항원-결합 폴리펩티드 (예를 들어, 5-10 kDa, 일부 구현예에서 약 7 kDa) 이다. 따라서, 특정 구현예에서 피노머는 재조합 기술을 사용하여 핵산 서열로부터 발현될 수 있거나 화학적으로 합성될 수 있는 (예를 들어, 적합한 고체상 화학 반응을 사용하여) N-말단 (N-말단 아미노산) 및 C-말단 (C-말단 아미노산) 을 포함하는 단일 사슬 폴리펩티드이다. Fyn SH3-유래 피노머는 당업계에 공지되어 있으며 예를 들어 Grabulovski et al. (2007) JBC, 282, p. 3196-3204; WO 2008/022759; Bertschinger et al. (2007) Protein Eng. Des. Sel. 20(2):57-68; 및 Gebauer and Skerra (2009) Curr. Opinion in Chemical Biology 13:245-255 에 기재되었다. 피노머는 50 내지 80 개 아미노산 길이의 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 피노머는 50 내지 70 개, 또는 60 내지 70 개 아미노산 길이의 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 피노머는 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 또는 70 개 아미노산 길이의 폴리펩티드를 포함한다. 피노머는, 피노머의 주변 서열이 피노머 서열 사이에 실질적으로 보존되는 구조적 스캐폴드를 제공하면서 높은 친화도 및 특이도로 2 개 가변 루프 (RT-루프 및 src-루프) 의 무작위 돌연변이를 통해 종종 선택 항원 표적에 결합하도록 조작될 수 있다. 이들 2 개의 가변 루프의 아미노산 서열, 및 때때로 가변 루프에 바로 인접한 아미노산이 선택된 항원 표적에 대한 피노머의 특이도 및 결합 친화도에 실질적으로 기여한다고 여겨진다. 가변 루프 외부의 피노머 서열이 주로 구조적 스캐폴드를 제공하지만, 스캐폴드 부위 내의 특정 아미노산이 구조 또는 결합 특이도의 실질적 손실 없이 치환될 수 있다고 이해된다.
본원에 제시된 피노머의 아미노산 서열은 FGFR3, 또는 하나 이상의 특이적 동형, 또는 이의 변이체에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 피노머는 FGFR3, 또는 하나 이상의 특이적 동형, 또는 이의 변이체에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 피노머는 섬유아세포 성장 인자 수용체 3, 동형 3b (FGFR3b) 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 피노머는 섬유아세포 성장 인자 수용체 3, 동형 3c (FGFR3c) 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 피노머는 FGFR3b 및 FGFR3c 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, FGFR3 은 포유동물 FGFR3 이다. 일부 구현예에서, FGFR3 은 인간, 마우스, 랫트 또는 원숭이 FGFR3 단백질, 또는 이의 동형이다. 일부 구현예에서, FGFR3 은 인간 FGFR3, 또는 이의 동형이다. 인간 FGFR3b 의 아미노산 서열을 SEQ ID NO:97 에 나타내며 인간 FGFR3c 의 아미노산 서열을 SEQ ID NO:98 에 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 피노머는 인간 FGFR3b 및/또는 인간 FGFR3c 에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 피노머 (예를 들어, 본원에 개시된 이중특이적 결합제의 피노머 부분) 는 1 x 10-7 M 이하의 KD, 1 x 10-8 M 이하의 KD, 1 x 10-9 M 이하의 KD, 또는 1 x 10-10 M 이하의 KD 로 FGFR3, 또는 이의 동형에 결합한다. 일부 구현예에서, 피노머 (예를 들어, 본원에 개시된 이중특이적 결합제의 피노머 부분) 는 1 x 10-7 M 이하의 KD, 1 x 10-8 M 이하의 KD, 1 x 10-9 M 이하의 KD, 또는 1 x 10-10 M 이하의 KD 로 하나 또는 둘 모두의 동형 FGFR3b 및/또는 FGFR3 에 결합한다. 일부 구현예에서, 피노머는 10-7 내지 10-12 M 의 KD, 10-8 내지 10-12 M 의 KD, 또는 10-9 내지 10-12 M 의 KD 로 둘 모두의 동형 FGFR3b 및 FGFR3c 에 결합한다. 일부 구현예에서, 피노머는 하나의 또는 둘 모두의 동형 FGFR3b 및/또는 FGFR3c 에 특이적으로 결합하며, FGFR1, FGFR2 또는 FGFR4 와 같은 다른 관련 단백질에 실질적으로 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, FGFR 에 실질적으로 결합하지 않는 피노머는, 임의의 검출가능한 특이적 결합을 입증하지 않거나 5 x 10-6 M 초과의 KD 로 FGFR 에 결합하는 피노머이다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 이중특이적 결합제의 피노머 부분은 수용체 결합 리간드 (예를 들어, FGF1) 의 존재 하에 FGFR3, 또는 이의 동형에 결합한다. 따라서 일부 구현예에서, 본원에 개시된 이중특이적 결합제의 피노머 부분은 FGFR3 리간드 (예를 들어, FGF1) 의 FGFR3 으로의 결합을 차단, 폐지 또는 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 이중특이적 결합제의 피노머 부분은 FGFR3 리간드 (예를 들어, FGF1) 의 FGFR3 으로의 결합을 차단, 폐지 또는 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 이중특이적 결합제는 FGFR3 리간드 (예를 들어, FGF1) 의 FGFR3 으로의 결합을 차단, 폐지 또는 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 이중특이적 결합제의 피노머 부분, 및/또는 본원에 개시된 이중특이적 결합제는 수용체 결합 리간드 (예를 들어, FGF1) 의 존재 하에 FGFR3, 또는 이의 동형에 결합한다.
특정 구현예에서, 피노머는 아미노산 서열 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X 1 )(X 2 )(X 3 )(X 4 )GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:99) 와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 아미노산 X1 ~ X6 은 독립적으로 임의의 아미노산에서 선택되고, 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:99 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 갖는 피노머는 FGFR3 (예를 들어, 인간 FGFR3) 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:99 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 갖는 피노머는 FGFR3b 및 FGFR3c 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 본원에 제공된 피노머 서열의 N-말단 RT 루프 및 C-말단 src-루프는 종종 설명의 목적으로만 밑줄그어져 있다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:99 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 가지며, 이때 (i) 아미노산 X1 ~ X6 은 독립적으로 임의의 아미노산에서 선택되고, (ii) SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 12 ~ 19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존된다.
특정 구현예에서 X1 은 N, R, H 및 K 에서 선택된다. 특정 구현예에서 X1 은 N, R 또는 K 이다. 특정 구현예에서 X2 는 S, G, A, V 및 P 에서 선택된다. 특정 구현예에서 X2 는 S, G, A, V, P, 및 임의의 염기성 아미노산에서 선택된다. 특정 구현예에서 X2 는 S, G, K 또는 R 이다. 특정 구현예에서 X3 은 S, G, A, V 또는 P 이다. 특정 구현예에서 X3 은 S 또는 G 이다. 특정 구현예에서 X4 는 임의의 하전된, 염기성 또는 산성 아미노산에서 선택된다. 특정 구현예에서 X4 는 S, G, A, V 및 P 에서 선택된다. 특정 구현예 X4 는 E, Q, D, S 또는 K 이다. 특정 구현예에서 X5 는 S, G, A, V, P, S 및 T 에서 선택된다. 특정 구현예에서 X5 는 T 또는 A 이다. 특정 구현예에서 X6 은 임의의 소수성 아미노산에서 선택된다. 특정 구현예에서 X6 은 임의의 극성 아미노산에서 선택된다. 특정 구현예에서 X6 은 Q, N, H, S, T, Y, C, W, A, L, V 및 I 에서 선택된다. 특정 구현예에서 X6 은 Y, W 또는 L 이다.
특정 구현예에서 X1 은 N, R 또는 K 이고; X2 는 S, G, K 또는 R 이고; X3 은 S 또는 G 이고; X4 는 E, Q, D, S 또는 K 이고; X5 는 T 또는 A 이고/이거나; X6 은 Y, W 또는 L 이다.
일부 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:99 의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 이때 (i) 아미노산 위치 X1 ~ X6 은 임의의 아미노산 서열일 수 있고, (ii) 동일성 결정은 아미노산 위치 X1 ~ X6 을 배제하고, (iii) SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 는 보존되며, (iv) 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:99 의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 이때 (i) X1 은 N, R 또는 K 고; X2 는 S, G, K 또는 R 이고; X3 은 S 또는 G 이고; X4 는 E, Q, D, S 또는 K 이고; X5 는 T 또는 A 이고; X6 은 Y, W 또는 L 이고, (ii) 동일성 결정은 아미노산 위치 X1 ~ X6 을 배제하고, (iii) SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 는 보존되며, (iv) 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:101; 때때로 본원에서 FF2L4C3 으로 지칭함) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:101 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:101 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:101 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존되고, 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:101 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:101 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:101 의 아미노산 위치 32~38 에서의 아미노산 서열 NSSEGPY (SEQ ID NO:102) 이 보존되며, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:101 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머 (피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합함) 는, FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머의 능력을 제거하거나 상당히 감소시키지 않는 0 내지 12 개, 0 내지 8 개, 0 내지 5 개, 또는 1 내지 2 개의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 포함하는 피노머이다. 특이적 결합에 있어서의 상당한 감소는, SEQ ID NO:101 의 피노머의 인간 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도의 20% 를 초과하는 결합 친화도 (즉, KD) 의 감소이다. 당업자는 일상적 방법을 사용하여 피노머의 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도를 쉽게 결정할 수 있으며, 이러한 결정은 지나친 실험을 필요로 하지 않을 수 있다. 따라서, 당업자는 SEQ ID NO:101 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머를 만드는 방법을 쉽게 결정할 수 있으며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:101 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:103); 때때로 본원에서 FF44L65G12 로 지칭함) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:103 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:103 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:103 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존되며, 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:103 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:103 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:103 의 아미노산 위치 32~38 에서의 아미노산 서열 RGGQGPY (SEQ ID NO:104) 이 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:103 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머 (피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합함) 는, FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머의 능력을 제거하거나 상당히 감소시키지 않는 0 내지 12 개, 0 내지 8 개, 0 내지 5 개, 또는 1 내지 2 개의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 포함하는 피노머이다. 특이적 결합에 있어서의 상당한 감소는, SEQ ID NO:103 의 피노머의 인간 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도의 20% 를 초과하는 결합 친화도 (즉, KD) 의 감소이다. 당업자는 일상적 방법을 사용하여 피노머의 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도를 쉽게 결정할 수 있으며, 이러한 결정은 지나친 실험을 필요로 하지 않을 수 있다. 따라서, 당업자는 SEQ ID NO:103 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머를 만드는 방법을 쉽게 결정할 수 있으며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:103 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:105; 때때로 본원에서 FF44L65G7 로 지칭함) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:105 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:105 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:105 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:105 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:105 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:105 의 아미노산 위치 32~38 에서의 아미노산 RGGDGPY (SEQ ID NO:106) 가 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:105 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머 (피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합함) 는, FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머의 능력을 제거하거나 상당히 감소시키지 않는 0 내지 12 개, 0 내지 8 개, 0 내지 5 개, 또는 1 내지 2 개의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 포함하는 피노머이다. 특이적 결합에 있어서의 상당한 감소는, SEQ ID NO:105 의 피노머의 인간 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도의 20% 를 초과하는 결합 친화도 (즉, KD) 의 감소이다. 당업자는 일상적 방법을 사용하여 피노머의 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도를 쉽게 결정할 수 있으며, 이러한 결정은 지나친 실험을 필요로 하지 않을 수 있다. 따라서, 당업자는 SEQ ID NO:105 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머를 만드는 방법을 쉽게 결정할 수 있으며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:105 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:107; 때때로 본원에서 FF48L66G7 또는 "G7" 로 지칭함) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 32~38 에서의 아미노산 KGGSGPY (SEQ ID NO:108) 이 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머 (피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합함) 는, FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머의 능력을 제거하거나 상당히 감소시키지 않는 0 내지 12 개, 0 내지 8 개, 0 내지 5 개, 또는 1 내지 2 개의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 포함하는 피노머이다. 특이적 결합에 있어서의 상당한 감소는, SEQ ID NO:107 의 피노머의 인간 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도의 20% 를 초과하는 결합 친화도 (즉, KD) 의 감소이다. 당업자는 일상적 방법을 사용하여 피노머의 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도를 쉽게 결정할 수 있으며, 이러한 결정은 지나친 실험을 필요로 하지 않을 수 있다. 따라서, 당업자는 SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머를 만드는 방법을 쉽게 결정할 수 있으며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:109; 때때로 본원에서 FF43L65D5 로 지칭함) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:109 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:109 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:109 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:109 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:109 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:109 의 아미노산 위치 32~38 에서의 아미노산 RKGKGPY (SEQ ID NO:110) 이 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:109 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머 (피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합함) 는, FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머의 능력을 제거하거나 상당히 감소시키지 않는 0 내지 12 개, 0 내지 8 개, 0 내지 5 개, 또는 1 내지 2 개의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 포함하는 피노머이다. 특이적 결합에 있어서의 상당한 감소는, SEQ ID NO:109 의 피노머의 인간 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도의 20% 를 초과하는 결합 친화도 (즉, KD) 의 감소이다. 당업자는 일상적 방법을 사용하여 피노머의 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도를 쉽게 결정할 수 있으며, 이러한 결정은 지나친 실험을 필요로 하지 않을 수 있다. 따라서, 당업자는 SEQ ID NO:109 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머를 만드는 방법을 쉽게 결정할 수 있으며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:109 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:111; 때때로 본원에서 FF44L65B7 로 지칭함) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며 피노머는 FGFR3, 또는 이의 동형 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:111 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:111 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:111 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존되고, 피노머가 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:111 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 SEQ ID NO:111 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 및 SEQ ID NO:111 의 아미노산 위치 32~38 에서의 아미노산 RRGSGPY (SEQ ID NO:112) 이 보존되고, 피노머가 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:111 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머 (피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합함) 는, FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머의 능력을 제거하거나 상당히 감소시키지 않는 0 내지 12 개, 0 내지 8 개, 0 내지 5 개, 또는 1 내지 2 개의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 포함하는 피노머이다. 특이적 결합에 있어서의 상당한 감소는, SEQ ID NO:111 의 피노머의 인간 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도의 20% 를 초과하는 결합 친화도 (즉, KD) 의 감소이다. 당업자는 일상적 방법을 사용하여 피노머의 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도를 쉽게 결정할 수 있으며, 이러한 결정은 지나친 실험을 필요로 하지 않을 수 있다. 따라서, 당업자는 SEQ ID NO:111 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머를 만드는 방법을 쉽게 결정할 수 있으며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:111 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:113) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 아미노산 (X7) 은 임의의 아미노산에서 선택된다. 특정 구현예에서 X7 은 임의의 소수성 아미노산에서 선택된다. 특정 구현예에서 X7 은 임의의 극성 아미노산에서 선택된다. 특정 구현예에서 X7 은 Q, N, H, S, T, Y, C, W, A, L, V 및 I 에서 선택된다. 특정 구현예에서 X7 은 Y, W 또는 L 이다. 특정 구현예에서 X7 은 W 이다.
특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:113 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 (i) 위치 X7 에서의 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있고; (ii) 동일성 결정은 아미노산 위치 X7 을 배제하고, (iii) SEQ ID NO:113 의 아미노산 위치 12~18 에서의 아미노산 서열 EVMSTTA (SEQ ID NO:114) 및 SEQ ID NO:113 의 아미노산 위치 31~35 에서의 SQSPH (SEQ ID NO:115) 는 보존되고, (iv) SEQ ID NO:113 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 Q 및 Y 는 보존되고, (v) 피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, 피노머는 GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:116; 때때로 본원에서 FF40L54A5 로 지칭함) 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:116 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 (i) SEQ ID NO:116 의 아미노산 위치 12~18 에서의 아미노산 서열 EVMSTTA (SEQ ID NO:114) 은 보존되고, (ii) SEQ ID NO:116 의 아미노산 위치 31~35 에서의 아미노산 서열 SQSPH (SEQ ID NO:115) 은 보존되고, (iii) SEQ ID NO:116 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 Q 및 Y 는 보존되고, 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:116 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 이때 (i) SEQ ID NO:116 의 아미노산 위치 12~18 에서의 아미노산 서열 EVMSTTA (SEQ ID NO:114) 는 보존되고, (ii) SEQ ID NO:116 의 아미노산 위치 31~38 에서의 아미노산 서열 SQSPHGQY (SEQ ID NO:117) 은 보존되고, 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO:116 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머 (피노머는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합함) 는, FGFR3 에 특이적으로 결합하는 피노머의 능력을 제거하거나 상당히 감소시키지 않는 0 내지 12 개, 0 내지 8 개, 0 내지 5 개, 또는 1 내지 2 개의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 포함하는 피노머이다. 특이적 결합에 있어서의 상당한 감소는, SEQ ID NO:116 의 피노머의 인간 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도의 20% 를 초과하는 결합 친화도 (즉, KD) 의 감소이다. 당업자는 일상적 방법을 사용하여 피노머의 FGFR3b 또는 FGFR3c 에 대한 결합 친화도를 쉽게 결정할 수 있으며, 이러한 결정은 지나친 실험을 필요로 하지 않을 수 있다. 따라서, 당업자는 SEQ ID NO:116 의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 피노머를 만드는 방법을 쉽게 결정할 수 있으며, 이때 피노머는 FGFR3 에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 피노머는 SEQ ID NO:116 의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진다.
이중특이적 결합제의 피노머 부분은 임의의 적합한 방법을 사용하여 임의의 적합한 장소에서 이중특이적 결합제의 항체 부분에 부착될 수 있다. 피노머는 항체, 또는 이의 결합 부분에 공유 또는 비-공유 부착될 수 있다. 피노머는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 N-말단 (N-말단 아미노산) 및/또는 C-말단 (C-말단 아미노산) 에 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 피노머는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄의 N-말단 및/또는 경쇄의 N-말단에 부착된다. 일부 구현예에서, 피노머는 항체, 또는 항원 결합 부분의 중쇄의 C-말단 및/또는 경쇄의 C-말단에 부착된다. 일부 구현예에서, 피노머는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 불변 도메인 내의 적합한 장소에 부착된다.
특정 구현예에서, 피노머는 펩티드 결합에 의해 항체에, 또는 항체 내에 부착된다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 항체 (예를 들어, 중쇄, 경쇄 또는 단일 사슬) 의 폴리펩티드 및 피노머를 포함하는 융합 단백질을 포함하며, 피노머 및 항체 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 연결된다. 따라서 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 핵산이 피노머 및 항체, 또는 이의 부분 (예를 들어, 경쇄 또는 중쇄) 를 포함하는 폴리펩티드를 단일 폴리펩티드로서 발현하도록 구성되는 재조합 기술을 사용하여 만들어진다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 피노머 및 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하며, 피노머의 C-말단 아미노산은 펩티드 결합에 의해 항체의 N-말단 아미노산 (예를 들어, 중쇄의 N-말단 아미노산, 또는 경쇄의 N-말단 아미노산) 에 연결된다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 피노머 및 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하며, 피노머의 N-말단 아미노산은 펩티드 결합에 의해 항체의 C-말단 아미노산 (예를 들어, 중쇄의 C-말단 아미노산, 또는 경쇄의 C-말단 아미노산) 에 연결된다. 특정 구현예에서, 피노머 펩티드는 항체의 폴리펩티드 내에 통합된다.
일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 FGFR3 에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 피노머를 포함한다. 예를 들어, 이중특이적 결합제는 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄를 갖는 항체, 및 항체의 하나 또는 둘 모두의 중쇄의 N-말단에 부착된 피노머, 항체의 하나 또는 둘 모두의 경쇄의 N-말단에 부착된 피노머, 항체의 하나 또는 둘 모두의 중쇄의 C-말단에 부착된 피노머 및/또는 항체의 하나 또는 둘 모두의 경쇄의 C-말단에 부착된 피노머를 포함할 수 있다. 따라서 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 1 내지 12 개, 1 내지 8 개 또는 1 내지 4 개의 피노머를 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 개의 피노머를 포함한다.
일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 피노머와 항체 사이에 링커를 포함한다. 적합한 링커의 비제한적 예는 아미노산, 펩티드 (예를 들어, 2 개 이상의 아미노산), 임의 치환된 C1-C50 알킬, 임의 치환된 C2-C50 알케닐, 알키닐, 아실, 아실옥시, 알콕시, 아릴옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알콕시, 아릴, 아미노카르보닐, 아지도, 카르복시, 실란, 티올, 술폭시드, 술폰, 술포네이트 에스테르, 시아노, 아미드, 아미노, 에스테르, 포스폰산, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 등, 이의 유도체, 이의 중합체 및 이의 조합을 포함한다. 링커를 사용하여 2 개 이상의 분자를 부착시키는 방법은 당업자에게 공지되어 있으며 이러한 방법은 때때로 "가교" 로 지칭된다.
일부 구현예에서, 링커는 2 개 이상의 아미노산, 2 내지 100 개의 아미노산, 5 내지 100 개의 아미노산, 2 내지 50 개의 아미노산, 5 내지 50 개의 아미노산, 2 내지 25 개의 아미노산, 5 내지 25 개의 아미노산, 2 내지 20 개의 아미노산, 5 내지 20 개의 아미노산, 2 내지 10 개의 아미노산 또는 5 내지 10 개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 (GGGGS)X (X=1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10) 또는 GGGGSGGGGSGGGGS 의 모티프를 포함한다.
용어 "동일한 퍼센트" 또는 "퍼센트 동일성" 은 2 개의 아미노산 서열 사이의 서열 동일성을 지칭한다. 일부 구현예에서, 상동성은 비교의 목적을 위해 정렬될 수 있는 각 서열 내 위치를 비교하여 결정된다. 비교된 서열에서의 동등한 위치가 동일한 아미노산에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 동일하다. 동등한 위치가 동일하거나 유사한 아미노산 잔기 (예를 들어, 입체 및/또는 전자적 성질이 유사함) 에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 상동 (유사) 하다고 지칭될 수 있다. 상동성, 유사성 또는 동일성의 백분율로서의 발현은 비교된 서열에 의해 공유되는 위치에서 동일하거나 유사한 아미노산 수의 함수를 의미한다. FASTA, BLAST 또는 ENTREZ 를 포함하는 다양한 정렬 알고리즘 및/또는 프로그램이 사용될 수 있다. FASTA 및 BLAST 는 GCG 서열 분석 패키지 (University of Wisconsin, Madison, Wis.) 의 일부로서 이용가능하며, 예를 들어, 디폴트 세팅으로 사용될 수 있다. ENTREZ 는 미국 국립 생물공학정보센터 (National Center for Biotechnology Information), 미국 국립 의학 도서관 (National Library of Medicine), 미국 국립 보건원 (National Institutes of Health), Bethesda, Md 를 통해 이용가능하다. 한 구현예에서, 2 개 서열의 퍼센트 동일성은 1 의 갭 가중치를 갖는 GCG 프로그램에 의해 결정될 수 있으며, 예를 들어, 각각의 아미노산 갭은 이것이 두 서열 사이의 단일 아미노산 또는 뉴클레오티드 미스매치인 것처럼 가중치가 부여된다.
정렬을 위한 다른 기법은 Methods in Enzymology, vol. 266: Computer Methods for Macromolecular Sequence Analysis (1996), ed. Doolittle, Academic Press, Inc., a division of Harcourt Brace & Co., San Diego, Calif., USA 에 기재되어 있다. 일부 구현예에서 서열에서의 갭을 허용하는 정렬 프로그램을 활용하여 서열을 정렬한다. 스미스-워터맨 (Smith-Waterman) 은 서열 정렬에서의 갭을 허용하는 알고리즘 중 하나의 유형이다. Meth. Mol. Biol. 70:173-187 (1997) 을 참조한다. 또한, 니들맨과 분슈 (Needleman and Wunsch) 정렬 방법을 사용하는 GAP 프로그램을 활용하여 서열을 정렬할 수 있다. 대안적인 검색 전략은 MASPAR 컴퓨터에서 실행되는 MPSRCH 소프트웨어를 사용한다. MPSRCH 는 스미스-워터맨 알고리즘을 사용하여 대규모 병렬 컴퓨터에서 서열을 점수 매긴다. 이러한 접근 방식은 멀리 관련이 있는 매치를 픽업하는 능력을 개선시키며, 특히 작은 갭 및 뉴클레오티드 서열 에러에 대해 내성이 있다. 핵산-인코딩된 아미노산 서열을 사용하여 단백질 및 DNA 데이터베이스 모두를 검색할 수 있다.
용어 "특이적으로 결합하는" 는 예를 들어 적합한 시험관내 어세이 (예를 들어, ELISA, 면역블롯 (Immunoblot), 유세포 분석 등) 에 의해 결정되는 바와 같이 다른 분자 또는 다른 펩티드에 대한 결합보다 우선적으로 표적 단백질, 펩티드 또는 에피토프에 결합하는 이중특이적 결합제, 피노머, 항체, 또는 이의 부분을 지칭한다. 특이적 결합 상호작용은 비-특이적 결합 상호작용을 약 2-배 이상, 종종 약 10-배 이상, 및 때때로 약 100-배 이상, 1000-배 이상, 10,000-배 이상, 100,000-배 이상, 또는 1,000,000-배 이상으로 구별해낸다.
일부 구현예에서 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 결합 부분은 100 nM 이하, 50 nM 이하, 25 nM 이하, 10 nM 이하, 5 nM 이하, 1 nM 이하, 900 pM 이하, 800 pM 이하, 750 pM 이하, 700 pM 이하, 600 pM 이하, 500 pM 이하, 400 pM 이하, 300 pM 이하, 200 pM 이하, 또는 100 pM 이하의 결합 친화도 상수 (KD) 로 신데칸-1, 또는 이의 부분 (예를 들어, 신데칸-1 의 세포외 도메인) 에 결합하는 항체, 또는 이의 결합 부분이다. 일부 구현예에서 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 결합 부분은 100 nM 이하, 50 nM 이하, 25 nM 이하, 10 nM 이하, 5 nM 이하, 1 nM 이하, 900 pM 이하, 800 pM 이하, 750 pM 이하, 700 pM 이하, 600 pM 이하, 500 pM 이하, 400 pM 이하, 300 pM 이하, 200 pM 이하, 또는 100 pM 이하의 결합 친화도 상수 (KD) 로 인간 신데칸-1, 또는 이의 부분 (예를 들어, 인간 신데칸-1 의 세포외 도메인) 에 결합하는 항체, 또는 이의 결합 부분이다. 일부 구현예에서 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 결합 부분은 100 nM 이하, 50 nM 이하, 25 nM 이하, 10 nM 이하, 5 nM 이하, 1 nM 이하, 900 pM 이하, 800 pM 이하, 750 pM 이하, 700 pM 이하, 600 pM 이하, 500 pM 이하, 400 pM 이하, 300 pM 이하, 200 pM 이하, 또는 100 pM 이하의 결합 친화도 상수 (KD) 로 비-인간 종 (예를 들어, 비-인간 영장류, 또는 설치류; 예를 들어, 마우스 또는 랫트) 에서 유래한 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 결합 부분이다. 특정 구현예에서, 본원에서 개시된 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하며, 비-인간 영장류에서 유래한 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본원에 개시된 항체, 또는 이의 결합 부분은 인간 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하며, 설치류 (예를 들어, 마우스 또는 랫트) 에서 유래한 신데칸-1, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은, (i) 10 nM 이하, 또는 1 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 인간 신데칸-1, 또는 이의 부분 (예를 들어, 인간 신데칸-1 의 세포외 도메인) 에 특이적으로 결합하고, (ii) 100 nM 이하, 90 nM 이하, 80 nM 이하, 70 nM 이하, 60 nM 이하, 50 nM 이하, 40 nM 이하, 30 nM 이하, 20 nM 이하 또는 10 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 랫트 또는 마우스 신데칸-1, 또는 이의 부분 (예를 들어, 랫트 또는 마우스 신데칸-1 의 세포외 도메인) 에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 신데칸-1, 또는 SEQ ID NO:94, 95 또는 96 의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 대해 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 결합에 대하여 경쟁하는 항체, 또는 이의 결합 부분을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 신데칸-1 에 대해 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 결합에 대하여 경쟁하는 항체 부분을 포함하며, 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체는 표 1-10 에서 나타낸 하나 이상의 CDR, 또는 표 1-10 에서 나타낸 것들과 실질적으로 유사한 하나 이상의 CDR 을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 신데칸-1 에 대해 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 결합에 대하여 경쟁하는 항체 부분을 포함하며, 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체는 표 1 에서 선택된 CDR-L1, 표 2 에서 선택된 CDR-L2, 표 3 에서 선택된 CDR-L3, 표 6 에서 선택된 CDR-H1, 표 7 에서 선택된 CDR-H2, 및 표 8 에서 선택된 CDR-H3 을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 신데칸-1 에 대해 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 결합에 대하여 경쟁하는 항체 부분을 포함하며, 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체는 각각 SEQ ID NO:2, 17, 27, 47, 61 및 73 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 동일한 신데칸-1 의 에피토프에 결합하는 항체, 또는 항체 부분을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 동일한 신데칸-1 의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 항체 부분을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 SEQ ID NO:94, 95 또는 96 의 아미노산 서열에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 항체 부분을 포함한다.
특정 구현예에서, 이중특이적 작용제는 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 구별되고/되거나 상이한 하나 이상의 CDR 서열을 갖는 항체 부분을 포함하며, 이중특이적 작용제는 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 신데칸-1 에 대한 결합에 대하여 경쟁한다.
항원에 대한 결합에 대하여 경쟁하는 항체를 식별하는 방법은 공지되어 있다. 임의의 적합한 방법을 사용하여, 이중특이적 작용제, 또는 이의 항체 부분이 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 신데칸-1 에 대한 결합에 대하여 경쟁하는지를 결정할 수 있다. 예를 들어, ELISA-기반 방법이 사용될 수 있는데, 신데칸-1 항원, 또는 이의 부분이 96-웰 플레이트에 코팅된다. 이중특이적 작용제를 첨가하고 코팅된 항원에 결합시킨다. 그럼 다음, 플레이트를 세척하고 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체를 플레이트에 첨가하여 결합시킨다. 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체의 결합량은, 이중특이적 작용제가 본원에 기재된 항-신데칸-1 항체와 결합에 대하여 경쟁하는지를 결정하기 위해 이중특이적 작용제의 존재 또는 부재 하에 측정된다. 당업계에 공지된 다른 적합한 방법이 또한 사용될 수 있다.
일부 구현예에서 이중특이적 결합제는 표지를 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "표지" 또는 "표지된" 은 예를 들어, 표지된 아비딘 (예를 들어, 광학 또는 비색 방법에 의해 검출될 수 있는 형광 마커 또는 효소 활성을 함유하는 스트렙타비딘) 에 의해 검출될 수 있는 비오틴 모이어티의 폴리펩티드에 대한 부착 또는 표지된 아미노산의 혼입에 의한, 검출가능한 마커의 혼입을 지칭한다. 특정 구현예에서, 표지 또는 마커는 진단제가 생성되도록 이중특이적 결합제에 부착될 수 있다. 이중특이적 결합제는 임의의 적합한 표지 또는 마커에 공유 또는 비-공유 부착될 수 있다. 폴리펩티드 및 당단백질을 표지하는 다양한 방법이 당업자에게 공지되어 있으며 사용될 수 있다. 폴리펩티드에 대한 표지의 비 제한적인 예는 형광 표지, 효소 표지 (예를 들어, 서양고추냉이 퍼옥시다아제, β-갈락토시다아제, 루시퍼라아제, 알칼리성 포스파타아제), 화학발광 표지, 금속 표지, 발색단, 전기-화학발광 표지, 인광 표지, 소광제 (예를 들어, 형광단 소광제), 형광 공명 에너지 전달 (FRET) 쌍 (예를 들어, 공여체 및 수용체), 염료, 효소 기질, 소분자, 질량 태그, 양자점, 나노입자, 비오티닐기, 2 차 리포터에 의해 인식되는 사전결정된 폴리펩티드 에피토프 (예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2 차 항체에 대한 결합 위치, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그) 등 또는 이의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서 이중특이적 결합제는 적합한 담체를 포함한다. 이중특이적 결합제는 적합한 담체에 공유 또는 비-공유 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 이중특이적 작용제의 피노머 부분은 담체에 부착된다. 일부 구현예에서 이중특이적 결합제의 항체 부분은 담체에 부착된다. 담체의 비제한적 예는 이중특이적 결합제의 생체내 반감기를 변경 또는 연장시키는 작용제 또는 분자를 포함하며 폴리에틸렌 글리콜, 글리코겐 및/또는 탄수화물 (예를 들어, 폴리펩티드의 글리코실화에 의해 도입되는 바와 같음), 덱스트란, 담체 또는 비히클 (U.S. 특허 번호 6,660,843 에서 기재됨) 등 또는 이의 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 작용제, 또는 이의 부분이 글리코실화된다. 일부 구현예에서 표지 또는 담체는 적합한 링커의 사용에 의해 이중특이적 결합제에 결합한다.
일부 구현예에서 표지, 담체, 항-신생물제, 독소 또는 링커는 이중특이적 결합제의 적합한 티올 기 (예를 들어, 시스테인 잔기의 티올 기) 에 부착된다. 일부 구현예에서 표지, 담체, 항-신생물제, 독소 또는 링커는 이중특이적 결합제의 아미노 기의 적합한 반응성 질소에 부착된다. 이중특이적 결합제의 임의의 적합한 아미노산 잔기는 표지, 담체, 항-신생물제, 독소 또는 링커 부착의 목적으로 티올 기 (예를 들어, 시스테인) 또는 반응성 질소 (예를 들어, 리신) 함유 아미노산 잔기로 치환될 수 있다. 티올 함유 아미노산 잔기 또는 자유 아미노 기로 치환될 수 있는 이중특이적 결합제의 항체 부분에서의 아미노산의 비제한적 예는 IgG2 또는 IgG1 의 A118, S119, S239, V282, T289, N361 및 V422 (EU 번호화 시스템에 상응함), 또는 IgG3 또는 IgG4 에서의 상응하는 위치를 포함한다. 따라서 일부 구현예에서, 본원에 기재된 이중특이적 결합제는 인간 중쇄 불변부를 포함하는 항체를 포함하며, 항체의 IgG 중쇄의 중쇄 불변부는 A118C (위치 118 에서 알라닌에서 시스테인으로), S119C (위치 119 에서 세린에서 시스테인으로), S239C (위치 239 에서 세린에서 시스테인으로), V282C (위치 282 에서 발린에서 시스테인으로), T289C (위치 289 에서 트레오닌에서 시스테인으로), N361C (위치 361 에서 아스파라긴에서 시스테인으로), 및/또는 V422C (위치 422 에서 발린에서 시스테인으로) 치환을 포함하고, 항-신생물제 또는 독소는 나타낸 시스테인 잔기의 티올 기에 공유 부착된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 이중특이적 결합제는 인간 중쇄 불변부를 포함하는 항체를 포함하며, 항체의 IgG 중쇄의 불변부는 A118K (위치 118에서 알라닌에서 리신으로), S119K (위치 119 에서 세린에서 리신으로), S239K (위치 239 에서 세린에서 리신으로), V282K (위치 282 에서 발린에서 리신으로), T289K (위치 289 에서 트레오닌에서 리신으로), N361K (위치 361 에서 아스파라긴에서 리신으로), 및/또는 V422K (위치 422 에서 발린에서 리신으로) 치환을 포함하고, 항-신생물제 또는 독소는 나타낸 리신 잔기의 자유 아미노 기의 반응성 질소에 공유 부착된다. 표지, 담체, 항-신생물제, 독소 및/또는 링커를 이중특이적 결합제에 부착시키는 것의 다른 비제한적 예는 아민을 숙신이미딜 에스테르 (예를 들어, N-히드록시숙신이미드 (NHS) 에스테르), 이미도에스테르, 펜타플루오로페닐 (PFP) 에스테르, 히드록시메틸 포스핀, 옥시란, 이소티오시아네이트, 술포닐 할라이드, 할로아세틸 유도체 또는 임의의 다른 카르보닐 화합물과 반응시키는 것; 카르복실과 카르보디이미드를 반응시키는 것; 술프히드릴을 말레이미드, 할로아세틸 유도체, 피리딜디술피드 또는 비닐 술폰과 반응시키는 것; 알데히드를 히드라진과 반응시키는 것; 임의의 비-선택적 기를 디아지린 또는 아릴 아지드와 반응시키는 것; 히드록실을 이소시아네이트와 반응시키는 것; 히드록실아민을 카르보닐 화합물과 반응시키는 것; 등 및 이의 조합을 포함한다.
항-신생물제, 독소 및 연결기
특정 구현예에서, 본원에 개시된 이중특이적 결합제는 항-신생물제를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 결합 부분은 항-신생물제를 포함한다. 일부 구현예에서, 피노머는 항-신생물제를 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제, 항체 또는 피노머는 하나 이상의 (예를 들어, 1 내지 20 개, 1 내지 10 개 또는 1 내지 5 개) 항-신생물제를 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제, 항체 또는 피노머는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 항-신생물제를 포함한다.
임의의 적합한 항-신생물제는 본원에 개시된 이중특이적 결합제, 항체 또는 피노머에 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 신생 세포에 독성인 작용제이다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 독성 화합물, 독성 분자 또는 독성 페이로드 (payload) 를 포함한다. 항-신생물제의 비제한적 예는 돌라스타틴, 아우리스타틴, 메이탄신, 튜불리신, 칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD), 듀오카르마이신, 독소루비신, 슈도모나스 외독소-A (PE38), 이리노테칸 및 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 또는 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF) 를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 독소 및/또는 연결기를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 이중특이적 결합제의 항체 부분 또는 피노머 부분에 부착된다. 항-신생물제는 이중특이적 결합제, 항체 또는 피노머에 공유 또는 비-공유 부착될 수 있다. 항-신생물제는 이중특이적 결합제, 항체 또는 피노머에 직접 또는 간접적으로 (예를 들어, 링커 또는 연결기에 의해) 부착될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서 항-신생물제는 링커 또는 연결기에 의해 이중특이적 결합제, 항체 또는 피노머에 공유 부착된다.
항-신생물제는 이중특이적 결합제의 임의의 적합한 위치에서 이중특이적 결합제에 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 이중특이적 결합제의 피노머 부분 및/또는 이중특이적 결합제의 항체 부분에 부착된다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 이중특이적 결합제의 항체 부분의 불변부 (예를 들어, 항체의 불변부) 에 부착된다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 이중특이적 결합제의 항체 부분의 불변부의 적합한 시스테인 잔기에 직접 또는 간접적으로 부착된다 (예를 들어, 링커 또는 연결기에 의해).
일부 구현예에서, 항-신생물제는 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 독소를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 연결기 또는 적합한 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-신생물제는 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 독소 및 연결기를 포함한다. 특정 구현예에서 피롤로벤조디아제핀 독소는 연결기에 공유 연결되며, 연결기는 본원에 기재된 이중특이적 결합제에 공유 연결된다.
PBD 독소 및 PBD 독소 제조 방법의 비제한적 예는 하기 특허 출원 공개물: US2011/0256157, WO2015/052322, US2016/0106861, US2007/0072846, US2011/0201803, US2010/0113425, US2008/0167293, US2014/0127239, US2015/0158869, US2015/0344482, US2015/0111880, US2015/0315196, US2016/0015828, US2014/0088089, US2013/0035484, US2011/0196148, US2013/0028919, US2013/0059800, US2014/0274907, US2014/0275522, US2014/0234346, US2013/0266595, US2014/0302066, US2014/0286970, US2014/0294868, US2016/0144052, US2016/0031887, US2014/0120118, US2016/0250344, WO2017/137553, WO2017/137555 및 WO2017/186894 에 기재되어 있으며, 이의 전체 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 피롤로벤조디아제핀 독소는 화학식 I 의 구조를 포함한다:
[화학식 12]
Figure pct00026
식 중에서,
Z1 및 Z2 는 둘 모두 N 이고; Z3 및 Z4 는 둘 모두 C 이고;
[화학식 13]
이중 점선
Figure pct00027
은 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
n 은 1 내지 12 이고; 각각의 R3 및 R4 는 독립적으로 H, 또는 C1-4 알콕실이고; 각각의 R1 및 R2 는 독립적으로 H, C1-5 알킬, C3-6 시클로알킬, C2-5 알케닐, 및 R5 로 임의 치환된 페닐로 이루어지는 군에서 선택되고, 여기서 R5 는 -NH2, -NHR6, 및 하기 구조를 갖는 R7 로 치환된 피페라지닐로 이루어지는 군에서 선택되고:
[화학식 14]
Figure pct00028
이때
R6 은 연결기를 포함하고, R7 는 널, 또는 C1-5 알킬이고; X1 은 널, 보호기이거나, 연결기를 포함하고; X2 는 널, 보호기이거나, 연결기를 포함하고; X1, X2, R1 및 R2 중 단 하나는 연결기를 포함하고; 각각의 Y1 및 Y2 는 독립적으로 널, OH 또는 SO3 이고;
단:
[화학식 15]
(i) X1 이 연결기를 포함하는 경우,
Figure pct00029
은 N-C 이고,
(ii) X2 가 연결기를 포함하는 경우,
Figure pct00030
는 N-C 이고,
(iii) X1 이 보호기를 포함하는 경우,
Figure pct00031
은 N-C 이고,
(iv) X2 가 보호기를 포함하는 경우,
Figure pct00032
는 N-C 이고,
여기서, 널은 원하는 원자가를 완료하기 위한 하나 이상의 수소의 존재 또는 모이어티의 부재를 의미한다.
특정 구현예에서, PBD 독소는 단 하나의 연결기를 포함한다. 예를 들어, 화학식 I 에서, X1, X2, R1 및 R2 중 단 하나는 연결기를 포함할 수 있다. 예를 들어, X1 이 연결기를 포함하는 경우, X2, R1 및 R2 는 연결기를 포함하지 않는다.
화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, n 은 1-12 이다. 화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서 n 은 1-10, 1-9, 1-7, 1-5 또는 1-3 이다. 화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, n 은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 이다. 일부 구현예에서, n 은 1, 3 또는 5 이다. 일부 구현예에서, n 은 3 또는 5 이다.
화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, R3 및 R4 는 독립적으로 C1-4 알콕실이다. 화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, R3 및 R4 는 독립적으로 -O-CH2CH3 또는 -O-CH3 에서 선택된다. 화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, R3 및 R4 는 둘 모두 -O-CH3 이다.
화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, R1 및 R2 는 독립적으로 H, C1-5 알킬, C3-C6 시클로알킬 및 C2-5 알케닐로 이루어지는 군에서 선택된다. R1 및 R2 는 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 구현예에서, R1 및 R2 는 독립적으로 C1-C3 알킬 및 C2-C3 알케닐에서 선택된다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 는 독립적으로 -CH2CH2CH3 및 -CH3 에서 선택된다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 둘 모두는 -CH2CH2CH3 또는 -CH3 이다.
화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, R1 및 R2 는 독립적으로 C3-C6 시클로알킬, 및 R5 로 임의 치환된 페닐에서 선택되고, 여기서 R5 는 -NH2, -NHR6, 및 하기 구조를 갖는 R7 로 치환된 피페라지닐로 이루어지는 군에서 선택된다:
[화학식 16]
Figure pct00033
식 중에서,
R6 은 연결기를 포함하고, R7 는 널 또는 C1-5 알킬이다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 는 상이하며 독립적으로 (i) C3-C6 시클로알킬, 및 (ii) R5 로 임의 치환된 페닐 (R5 는 -NH2 및 -NHR6 에서 선택되며 R6 은 연결기를 포함함) 에서 선택된다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 는 상이하며 독립적으로 (i) C3 시클로알킬, 및 (ii) -NH2 또는 -NHR6 으로 치환된 페닐 (R6 은 연결기를 포함함) 에서 선택된다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 는 상이하며 독립적으로 (i) R5 로 임의 치환된 페닐 (R5 는 -NH2 및 -NHR6 에서 선택되며 R6 은 연결기를 포함함) (ii) 하기 구조를 갖는 R7 로 치환된 피페라지닐 (R7 은 널 또는 C1-C2 알킬임) 에서 선택된다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 는 상이하며 독립적으로 (i) R5 로 치환된 페닐 (R5 는 -NH2 및 -NHR6 이며 R6 은 연결기를 포함함) 및 (ii) 하기 구조를 갖는 R7 로 치환된 피페라지닐에서 선택되고:
[화학식 17]
Figure pct00034
식 중에서, R7 은 -CH3 이다. 특정 구현예에서, R2 는 4-메틸피페라진-1-일로 치환된 페닐이다.
화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, X1 은 널이고, Y1 은 널이고,
[화학식 18]
Figure pct00035
은 N=C 이고, X2 는 널이고, Y2 는 널이고,
Figure pct00036
는 N=C 이다. 화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, X1 은 연결기를 포함하고, Y1 은 OH 이고,
Figure pct00037
는 N=C 이고, X2 는 널이고, Y2 는 널이다. 화학식 I 의 PBD 독소의 특정 구현예에서, X1 은 연결기를 포함하고, Y1 은 OH 이고,
Figure pct00038
는 N-C 이고, X2 는 보호기이고, Y2 는 OH 이다.
일부 구현예에서, PBD 독소는 하기 나타낸 화학식 VII 의 구조를 포함하며:
[화학식 19]
Figure pct00039
식 중에서, X1 은 연결기를 포함한다.
일부 구현예에서, PBD 독소는 하기 나타낸 화학식 VIII 의 구조를 포함하며:
[화학식 20]
Figure pct00040
식 중에서, X1 은 연결기를 포함한다.
일부 구현예에서, PBD 독소는 하기 나타낸 화학식 IX 의 구조를 포함하며:
[화학식 21]
Figure pct00041
식 중에서, R6 은 연결기를 포함한다.
일부 구현예에서, PBD 독소는 하기 나타낸 화학식 X 의 구조를 포함하며:
[화학식 22]
Figure pct00042
식 중에서, R6 은 연결기를 포함한다.
일부 구현예에서, PBD 독소는 적합한 결합, 모이어티 또는 기에 의해 연결기에 부착된다 (예를 들어, 공유 연결된다). 일부 구현예에서, PBD 독소는 카르보닐 결합 또는 아미드 결합에 의해 연결기에 부착된다 (예를 들어, 공유 연결된다). 일부 구현예에서, PBD 독소는 카르바메이트 기에 의해 연결기에 부착된다 (예를 들어, 공유 연결된다). 일부 구현예에서, PBD 독소는 아미드 기에 의해 연결기에 부착된다 (예를 들어, 공유 연결된다). PBD 독소를 연결기에 부착시키는 것의 비제한적 예는 US2017/0002096, US2016/0331842, US2015/0250896, US2017/0080103, US2016/0136300, US2017/0152274, US2015/0209444, US2013/0274091, US2017/0095570, US2017/0157264, US2015/0125474, US2011/0256157, WO2015/052322, US2016/0106861, US2007/0072846, US2011/0201803, US2010/0113425, US2008/0167293, US2014/0127239, US2015/0158869, US2015/0344482, US2015/0111880, US2015/0315196, US2016/0015828, US2014/0088089, US2013/0035484, US2011/0196148, US2013/0028919, US2013/0059800, US2014/0274907, US2014/0275522, US2014/0234346, US2013/0266595, US2014/0302066, US2014/0286970, US2014/0294868, US2016/0144052, US2016/0031887, US2014/0120118, US2016/0250344, WO2017/137553, WO2017/137555 및 WO2017/186894 에 기재되어 있으며, 이의 전체 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "널" 은, 나타낸 모이어티가 구조에서 부재하지만, 나타낸 모이어티가 하나 이상의 수소 원자에 의해 대체되거나 점유되어 원하는 원자가를 완료할 수 있다는 것을 의미한다. 또한, 본원에서 나타낸 임의의 구조에 관하여, 하나 이상의 수소가 존재하여 구조에 나타낸 탄소, 질소 또는 산소 원자의 원하는 원자가를 완료할 수 있다. 따라서, 명백하게 나타내지 않는 경우, 하나 이상의 수소 원자가 존재할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 적합한 연결기를 포함한다. 일부 구현예에서 연결기는 이중특이적 결합제와 독소 (예를 들어, PBD 독소) 사이의 결합이 용이하게 한다. 일부 구현예에서 연결기는 절단가능하다. 예를 들어, 특정 구현예에서 연결기는 세포내 펩티다아제에 의해 인식되는 엔도펩티다아제 절단 위치를 포함한다. 엔도펩티다아제 절단 위치는 이중특이적 결합제가 신생 세포에 내재화된 후 이중특이적 결합제로부터 항-신생물제를 분리하고/하거나 방출하는 수단을 제공한다. 연결기 및 연결기 제조 방법의 비제한적 예는 WO2015/052322, US2015/0158869, US2015/0344482, US2014/0127239, US2017/0002096, US2016/0331842, US2015/0250896, US2017/0080103, US2016/0136300, US2017/0152274, US2015/0209444, US2013/0274091, US2017/0095570, US2017/0157264 및 US2015/0125474 에 기재되어 있으며, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 연결기는 C1-C20 알킬, C1-C20 알케닐, C1-C20 알콕실, 하나 이상의 아미노산 또는 아미노산 유도체, 1 내지 20 개의 아미노산을 포함하는 펩티드, 페닐 기, 적합한 중합체 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜), 또는 이의 조합을 포함한다
일부 구현예에서, 연결기는 화학식 A 의 구조를 포함하며:
[화학식 23]
Figure pct00043
식 중에서, 별표는 연결기의 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고, 물결선은 연결기의 이중특이적 결합제에 대한 부착점을 나타내고, m 은 0 내지 20 이고, q 는 0 내지 10 이고, E 는 연계기이다. 화학식 A 의 연결기의 일부 구현예에서, m 은 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 2 내지 8, 또는 4 또는 8 이다. 화학식 A 의 연결기의 일부 구현예에서, m 은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 에서 선택된다. 화학식 A 의 연결기의 일부 구현예에서, q 는 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 6, 또는 1 내지 4 이다. 화학식 A 의 연결기의 일부 구현예에서, q 는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 에서 선택된다. 화학식 A 의 연결기의 일부 구현예에서, q 는 0, 1 또는 2 이다. 화학식 A 의 연결기의 일부 구현예에서, m 은 8 이고, q 는 2 이다.
일부 구현예에서, 연결기는 화학식 B 의 구조를 포함하며:
[화학식 24]
Figure pct00044
식 중에서, 별표는 연결기의 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고, 물결선은 연결기의 이중특이적 결합제에 대한 부착점을 나타내고, v 는 0 내지 10 이고, u 는 0 또는 1 이고, 여기서 u 가 1 인 경우, t 는 1 내지 10 이고, E 는 연계기이다. 화학식 B 의 연결기의 일부 구현예에서, v 는 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 4, 또는 0 내지 4 이다. 화학식 B 의 연결기의 일부 구현예에서, v 는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 에서 선택된다. 화학식 B 의 연결기의 일부 구현예에서, u 가 1 인 경우, t 는 1 내지 8, 1 내지 5, 1 내지 4, 또는 2 내지 5 이다. 화학식 B 의 연결기의 일부 구현예에서, u 가 1 인 경우, t 는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 에서 선택된다. 화학식 B 의 연결기의 일부 구현예에서, t 는 8 이고, u 는 1 이고, v 는 2 이다. 화학식 B 의 연결기의 일부 구현예에서, u 는 0 이고, v 는 4 이다.
화학식 A 및 B 의 연계기 E 는 임의의 적합한 결합, 링커 또는 모이어티를 포함할 수 있으며 이의 비제한적 예는 디술피드 결합, 티오에테르 결합, 티오에스테르 결합, 아미드 결합, 아민, 케톤, 카르복실레이트 에테르, 카르바메이트, 에스테르, 티오에스테르 등, 또는 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, E 는 연결기와 이중특이적 결합제 사이에 공유 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, E 는 공유 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, E 는 적합한 접합 반응이 수행된 후 남아있는 반응한 모이어티를 포함한다. 다수의 접합 반응은 당업계에 공지되어 있으며, 이 중 임의의 하나가 본원에 개시된 연결기를 본원에 개시된 이중특이적 결합제에 공유 연결시키는데 사용될 수 있다. 임의의 적합한 접합 화학 반응이 확률적으로 또는 위치-특이적으로 연결기를 이중특이적 결합제에 공유 연결시키는데 사용될 수 있으며, 이의 비제한적 예는 Shan S. Wong (Published June 18, 1991) Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking, CRC Press; Greg T. Hermanson (Copyright 2013) Bioconjugate Techniques, Third Edition, Elsevier Inc.; 및 Thiol-X Chemistries in Polymer and Materials Science, RSC Polymer Chemistry Series No. 6 (2013) Edited by Andrew B. Lowe and Christopher N. Bowman, RCS Publishing, WO2015/052322, US2015/0158869, US2015/0344482, US2014/0127239, US2017/0002096, US2016/0331842, US2015/0250896, US2017/0080103, US2016/0136300, US2017/0152274, US2015/0209444, US2013/0274091, US2017/0095570, US2017/0157264 및 US2015/0125474 에서 기재된 접합 반응을 포함하며, 이의 전체 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 항-신생물제 또는 연결기를 이중특이적 결합제에 접합시키는 것의 다른 비제한적 예는 아민 또는 아미노 기를 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 에스테르, 숙신이미딜 숙시네이트, 숙신이미딜 숙신아미드, 숙신이미딜 프로피오네이트, 숙신이미딜 카르보네이트, 옥시카르보닐이미다졸, 니트로페닐 카르보네이트, 트리클로로페닐 카르보네이트, 트레실레이트, 말레산 무수물, 메틸말레산 무수물, 이미도에스테르, 펜타플루오로페닐 (PFP) 에스테르, 히드록시메틸 포스핀, 옥시란 또는 임의의 다른 카르보닐 모이어티와 반응시키는 것; 카르복실 모이어티를 카르보디이미드와 반응시키는 것; 술프히드릴 모이어티를 말레이미드, 할로아세틸, 피리딜디술피드, 오르토피리딜디술피드 및/또는 비닐 술폰과 반응시키는 것; 알데히드 모이어티를 히드라진 또는 히드라지드와 반응시키는 것; 임의의 비-선택성 기를 디아지린 및/또는 아릴 아지드와 반응시키는 것; 히드록실 모이어티를 이소시아네이트와 반응시키는 것; 히드록실아민 모이어티를 카르보닐 모이어티와 반응시키는 것; 등 및 이의 조합을 포함한다.
따라서, E 는 종종 연결기를 이중특이적 결합제에 접합시키는데 사용되는 화학 반응에 의해 정의된다. 일부 구현예에서, E 는 연결기를 이중특이적 결합제에 부착시키기 위해 구성된 적합한 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 연결기는 적합한 술프히드릴-술프히드릴 반응에 의해, 예를 들어 환원된 시스테인과 반응하여 안정한 티오에테르 결합을 형성하는 말레이미드 또는 피리딜디티올 반응성 기의 사용에 의해 이중특이적 결합제에 공유 연결된다. 반응성 술프히드릴 반응성 모이어티의 추가적인 비제한적 예는 할로아세틸, 아지리딘, 아크릴로일, 아릴화제, 비닐술폰, 피리딜 디술피드 및 TNB-티올을 포함한다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 이중특이적 결합제의 시스테인 티올 잔기 (예를 들어, 티올) 와 E 사이에 형성된 티오에테르 결합에 의해 E 에 연계된다. 따라서, 특정 구현예에서, E 는 디술피드 결합 또는 티오에테르 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 말레이미드 반응이 이중특이적 결합제를 연결기에 공유 연결시키는데 사용되는 경우, E 는 화학식 C 의 구조를 포함하며:
[화학식 25]
Figure pct00045
식 중에서, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고, 이중 별표 (**) 는 연결기에 대한 부착점을 나타낸다. 특정 구현예에서 화학식 C 의 이중 별표는 티오에테르 결합을 나타낸다.
항-신생물제, 독소, 연결기 (linking group) 또는 연계기 (connecting group) 는 이중특이적 결합제의 임의의 적합한 아미노산에 확률적으로 또는 위치-특이적으로 접합될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-신생물제, 독소, 연결기 또는 연계기는 이중특이적 결합제의 하나 이상의 적합한 시스테인 잔기에 접합된다. 일부 구현예에서, 항-신생물제, 독소, 연결기 또는 연계기는 이중특이적 결합제의 하나 이상의 적합한 리신 잔기에 접합된다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제의 하나 이상의 아미노산은 항-신생물제, 독소, 연결기 또는 연계기에 대한 접합에 적합한 아미노산으로 치환된다. 티올 함유 아미노산 잔기 또는 리신 잔기로 치환될 수 있는 아미노산의 비제한적 예는 IgG1 또는 IgG2 불변 도메인의 A118, S119, S239, V282, T289, N361 및 V422 (EU 번호화 시스템에 상응함), 또는 IgG3 또는 IgG4 불변 도메인에서의 상응하는 위치를 포함한다. 돌연변이유발에 의해 시스테인을 이중특이적 결합제 또는 항체에 통합시키는 것은, 예를 들어 디술피드 결합 또는 티오에테르 결합을 통해 항-신생물제, 독소, 연결기 또는 연계기가 이중특이적 결합제 또는 항체 상의 특이적 위치에 직접 접합되게 한다. 예를 들어, 이중특이적 결합제의 하나 이상의 아미노산은 시스테인으로 치환될 수 있으며, 시스테인은 적합한 화학적 반응을 사용하는 항-신생물제, 독소, 연결기 또는 연계기의 위치-특이적 접합에 사용될 수 있다. 항체 불변부의 임의의 적합한 아미노산은 항-신생물제, 독소, 연결기 또는 연계기에 대한 위치-특이적 접합을 위해 시스테인 또는 리신으로 돌연변이될 수 있다.
일부 구현예에서, 연결기는 적합한 효소 절단 위치를 포함한다. 특정 구현예에서, 효소 절단 위치는 포유동물 프로테아제의 효소 인식 위치를 포함한다. 따라서 일부 구현예에서, 연결기, 또는 이의 부분은 포유동물 프로테아제에 의해 절단가능하다. 연결기는 표적 위치에서 또는 이의 근처에서 (예를 들어, FGFR3 또는 CD138 단백질에서 또는 이의 근처에서) 존재하는 효소에 의해 절단될 수 있다. 표적 위치에서 또는 이의 근처에서 존재하는 효소는 세포내, 멤브레인 결합, 멤브레인 연합 또는 세포외 (예를 들어, 분비) 일 수 있다. 예를 들어, 연결기는 세포 표면 프로테아제, 분비 프로테아제, 또는 세포내 프로테아제 (예를 들어, 리소좀 프로테아제) 에 의해 절단되는 것으로 구성될 수 있다. 효소 절단 위치의 비제한적 예는 리소좀 시스테인 프로테아제 및/또는 리소좀 아스파르틱 프로테아제의 프로테아제 인식 위치를 포함한다. 리소좀 프로테아제의 비제한적 예는 카텝신 B, C, H, I, J, K, L, M, N, O, P, S, T 및 X, 및 카텝신 D, E, F, G, 및/또는 카텝신 A (카르복시펩티다아제 A) 를 포함한다.
보호기
일부 구현예에서, PBD 독소는 적합한 보호기를 포함한다. 보호기 및 보호기 제조 방법의 비제한적 예는 하기 특허 출원 공개물: US2011/0256157, WO2015/052322, US2011/0201803, US2008/0167293, US2014/0127239, US2015/0158869, US2015/0344482, US2015/0315196, US2015/0315196, US2014/0302066, US2006/0264622 및 US2015/0133435 에 기재되어 있으며, 이의 전체 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 보호기는 하기 화학식 D 의 구조를 포함하며:
[화학식 26]
Figure pct00046
식 중에서, 별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고; w 는 0 내지 10 이다. 일부 구현예에서, w 는 0 내지 8, 0 내지 6, 0 내지 4, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 5, 또는 1 내지 4 이다. 특정 구현예에서, w 는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10 에서 선택된다. 일부 구현예에서, w 는 2 이다.
일부 구현예에서, 보호기는 제거가능하다. 특정 구현예에서, 보호기는 적합한 화학 반응을 사용하여 절단가능하다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 화학식 II 의 구조를 포함하며:
[화학식 27]
Figure pct00047
식 중에서, m 은 8 이고, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 화학식 III 의 구조를 포함하며:
[화학식 28]
Figure pct00048
식 중에서, m 은 8 이고, p 는 1 또는 3 이고, X2 는 널이거나 보호기이고, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타낸다. 특정 구현예에서, 항-신생물제는 화학식 IV 의 구조를 포함하며:
[화학식 29]
Figure pct00049
식 중에서, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 화학식 V' 의 구조를 포함하며:
[화학식 30]
Figure pct00050
식 중에서, m 은 8 이고, E 는 적합한 연계기이고, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타낸다. 일부 구현예에서, E 는 구조 C 의 숙신아미드 모이어티를 포함하며:
[화학식 31]
Figure pct00051
식 중에서, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고, 이중 별표는 화학식 V 의 항-신생물제에 대한 부착점을 나타낸다. 구조 C 의 연계기를 포함하는 화학식 V 의 항-신생물제는 때때로 본원에서 화학식 XI 로 지칭된다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 화학식 VI 의 구조를 포함하며:
[화학식 32]
Figure pct00052
식 중에서, t 는 8 이고, v 는 1 이고, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 항-신생물제는 화학식 VII 의 구조를 포함하며:
[화학식 33]
Figure pct00053
식 중에서, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 이중특이적 결합제는 화학식 II, III, IV, V', VI, VII 및 XI 중 임의의 하나에서 선택되는 구조를 포함하는 항-신생물제를 포함한다.
약학 조성물
일부 구현예에서, 조성물 또는 약학 조성물은 본원에 기재된 이중특이적 결합제 (예를 들어, 항-신생물제를 포함하는 이중특이적 결합제) 를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 이중특이적 결합제 및 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제, 첨가제 또는 담체를 포함한다.
약학 조성물은 적합한 투여 경로를 위해 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 피하 (sc), 피내, 근육내, 복강내 및/또는 정맥내 (iv) 투여를 위해 제형화된다. 특정 구현예에서, 약학 조성물은 예를 들어 조성물의 pH, 삼투압, 점도, 투명도, 색, 등장성, 냄새, 무균성, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡착 또는 침투를 변형, 유지 또는 보존하기 위한 제형 물질을 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 적합한 제형 물질은 아미노산 (예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신); 항균제; 산화방지제 (예컨대 아스코르브산, 소듐 술파이트 또는 소듐 히드로겐-술파이트); 완충제 (예컨대 보레이트, 바이카르보네이트, Tris-HCl, 시트레이트, 포스페이트 (예를 들어, 인산완충식염수) 또는 적합한 유기산); 증량제 (예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이트제 (예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)); 착화제 (예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 단백질 (예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 향료 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체 (예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩티드; 염-형성 반대 이온 (예컨대 소듐); 용매 (예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 희석제; 부형제 및/또는 약학적 아쥬반트를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 특히, 약학 조성물은 "Remington: The Science And Practice Of Pharmacy" Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th Edition, (1995) (hereafter, "Remington '95"), 또는 "Remington: The Science And Practice Of Pharmacy", Pharmaceutical Press, Easton, PA, 22nd Edition, (2013) (이하, "Remington 2013") (그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨) 에서 열거된 바와 같은 임의의 적합한 담체, 제형, 또는 성분 등, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 본원에 열거된 다양한 물질은 단독 또는 조합으로, Remington '95 또는 Remington 2013 에 기재된 물질과 함께 사용하거나 이에 통합될 수 있다. 당업자에게 이해된 것들; 예를 들어, Remington '95 또는 Remington 2013 에서 기재된 바와 같은 것들을 포함하는, 임의의 적합한 기법, 담체 및 부형제가 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 약학 조성물은 적합한 부형제를 포함하며 이의 비제한적 예는 부착방지제 (예를 들어, 마그네슘 스테아레이트), 결합제, 충전제, 단당류, 이당류, 기타 탄수화물 (예를 들어, 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린), 당 알코올 (예를 들어, 만니톨 또는 소르비톨), 코팅 (예를 들어, 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC), 미세결정질 셀룰로오스, 합성 중합체, 셸락, 젤라틴, 옥수수 단백질 제인, 장용제 또는 기타 다당류), 전분 (예를 들어, 감자, 옥수수 (maize) 또는 밀 전분), 실리카, 색소, 붕해제, 향미, 윤활제, 보존제, 흡수제, 감미료, 비히클, 현탁제, 계면활성제 및/또는 습윤제 (예컨대 플루로닉 (pluronics), PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔), 안정성 증진제 (예컨대 수크로오스 또는 소르비톨), 및 긴장도 증진제 (예컨대 알칼리 금속 할라이드, 소듐 또는 칼륨 클로라이드, 만니톨, 소르비톨), 및/또는 Remington '95 또는 Remington 2013 에서 개시된 임의의 부형제를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "결합제" 는 조합된 약학적 혼합물을 유지하는데 도움이 되는 화합물 또는 성분을 지칭한다. 약학적 제형을 제조하는데 적합한 결합제는 종종 약학적 정제, 캡슐 및 과립의 제조에 사용되며, 당업자에게 공지되어 있다.
일부 구현예에서 약학 조성물은 적합한 약학적으로 허용가능한 첨가제 및/또는 담체를 포함한다. 적합한 첨가제의 비제한적 예는 적합한 pH 조정제, 수딩제, 완충제, 황-함유 환원제, 산화방지제 등을 포함한다. 황-함유 환원제의 비제한적 예는 술프히드릴 기를 갖는 것들 예컨대 N-아세틸시스테인, N-아세틸호모시스테인, 티옥산, 티오디글리콜, 티오에탄올아민, 티오글리세롤, 티오소르비톨, 티오글리콜산 및 이의 염, 소듐 티오술페이트, 글루타티온 및 C1-C7 티오알칸산을 포함한다. 산화방지제의 비제한적 예는 에리소르빈산, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 알파-토코페롤, 토코페롤 아세테이트, L-아스코르브산 및 이의 염, L-아스코르빌 팔미테이트, L-아스코르빌 스테아레이트, 소듐 바이술파이트, 소듐 술파이트, 트리아밀 갈레이트 및 프로필 갈레이트, 뿐만 아니라 킬레이트제 예컨대 디소듐 에틸렌디아민테트라아세테이트 (EDTA), 소듐 피로포스페이트 및 소듐 메타포스페이트를 포함한다. 또한, 희석제, 첨가제 및 부형제는 다른 통상 사용되는 성분, 예를 들어, 무기 염 예컨대 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드, 칼슘 클로라이드, 소듐 포스페이트, 포타슘 포스페이트 및 소듐 바이카르보네이트, 뿐만 아니라 유기 염 예컨대 소듐 시트레이트, 포타슘 시트레이트 및 소듐 아세테이트를 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 약학 조성물은 예를 들어 대략 수개월 또는 수년의 장기간에 걸쳐 안정할 수 있다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 하나 이상의 보존제를 포함한다. 보존제의 비제한적 예는 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산, 히드로겐 퍼옥시드 등 및/또는 이의 조합을 포함한다. 보존제는 4차 암모늄 화합물, 예컨대 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈옥소늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 세트리드, 세파조늄 클로라이드, 세틸피리디늄 클로라이드 또는 도미펜 브로마이드 (BRADOSOL (등록 상표)) 를 포함할 수 있다. 보존제는 티오살리실산의 알킬-수은 염, 예컨대 티메로살, 페닐머큐릭 니트레이트, 페닐머큐릭 아세테이트 또는 페닐머큐릭 보레이트를 포함할 수 있다. 보존제는 파라벤, 예컨대 메틸파라벤 또는 프로필파라벤을 포함할 수 있다. 보존제는 알코올, 예컨대 클로로부탄올, 벤질 알코올 또는 페닐 에틸 알코올을 포함할 수 있다. 보존제는 바이구아니드 유도체, 예컨대 클로로헥시딘 또는 폴리헥사메틸렌 바이구아니드를 포함할 수 있다. 보존제는 소듐 퍼보레이트, 이미다졸리디닐 우레아 및/또는 소르브산을 포함할 수 있다. 보존제는 공지되며 상품명 PURITE (등록 상표) 로 시판되는 것과 같은 안정화된 옥시클로로 착물을 포함할 수 있다. 보존제는 공지되며 상품명 POLYQUART (등록 상표) (Henkel KGaA) 로 시판되는 것과 같은 폴리글리콜-폴리아민 축합 수지를 포함할 수 있다. 보존제는 안정화된 히드로겐 퍼옥시드를 포함할 수 있다. 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드일 수 있다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 보존제를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제는 실질적으로 혈액, 또는 혈액 제제 오염물 (예를 들어, 혈액 세포, 혈소판, 폴리펩티드, 미네랄, 혈액 매개 화합물 또는 화학 물질 등) 을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제는 실질적으로 혈청 및 혈청 오염물 (예를 들어, 혈청 단백질, 혈청 지질, 혈청 탄수화물, 혈청 항원 등) 을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제는 실질적으로 병원체 (예를 들어, 바이러스, 기생충 또는 박테리아) 를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제는 실질적으로 내독소를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제는 멸균된다. 특정 구현예에서, 조성물 또는 약학 조성물은 이중특이적 결합제 및 희석제 (예를 들어, 인산완충식염수 (PBS)) 를 포함한다. 특정 구현예에서, 조성물 또는 약학 조성물은 이중특이적 결합제 및 부형제 (예를 들어, 소듐 시트레이트 데히드레이트, 또는 폴리옥시에틸렌-소르비탄-20 모노-올레이트 (폴리소르베이트 80)) 를 포함한다.
본원에 기재된 약학 조성물은 이들이 이용되는 요법에 따라 임의의 적합한 형태 및/또는 양으로 대상체에게 투여하기 위해 구성될 수 있다. 예를 들어, 비경구 투여 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의해) 를 위해 구성된 약학 조성물은, 유성 또는 수성 비히클 중 현탁액, 용액 또는 유액의 형태를 취할 수 있으며, 제형 작용제, 부형제, 첨가제 및/또는 희석제 예컨대 수성 또는 비-수성 용매, 조용매, 현탁 용액, 보존제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서 비경구 투여에 약학 조성물은 하나 이상의 부형제를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 건조 분말 형태로 동결건조된다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 적합한 약학적 용매 (예를 들어, 물, 염수, 등장성 완충액 (예를 들어, PBS) 등) 로 재구성하기에 적합한 건조 분말 형태로 동결건조된다. 특정 구현예에서, 동결건조된 약학 조성물의 재구성된 형태는 포유류에 대한 비경구 투여 (예를 들어, 정맥내 투여) 에 적합하다.
특정 구현예에서, 약학 조성물은 경구 투여를 위해 구성되며 정제, 마이크로정제, 미니정제, 마이크로펠렛, 분말 과립, 캡슐 (예를 들어, 마이크로정제, 마이크로펠렛, 분말 또는 과립으로 충전된 캡슐), 유액 또는 용액으로서 제형화될 수 있다. 경구 투여를 위해 구성된 약학 조성물은 활성 성분 (예를 들어, 이중특이적 결합제) 의 지연 또는 지속 방출을 위해 적합한 코팅을 포함할 수 있으며, 이의 비제한적 예는 장용 코팅 예컨대 지방산, 왁스, 셸락, 플라스틱, 메틸 아크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트 (CAP), 셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 히드록시프로필 메틸 셀룰로오스 프탈레이트, 히드록시프로필 메틸 셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트 (히프로멜로오스 아세테이트 숙시네이트), 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트 (PVAP), 메틸 메타크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 셀룰로오스 아세테이트 트리멜리테이트, 소듐 알기네이트, 제인, 식물 섬유 등, 및 이의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서 본원에 기재된 약학 조성물은 국소 투여를 위해 구성될 수 있으며 결합제 및/또는 윤활제, 중합체성 글리콜, 젤라틴, 코코아-버터 또는 기타 적합한 왁스 또는 지방 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서 본원에 기재된 약학 조성물은 일반적으로 국소 약물 투여에 적합하고 당업자에게 공지된 임의의 적합한 물질을 포함하는 국소 담체를 함유하는 국소 제형에 통합된다. 특정 구현예에서, 약학 조성물의 국소 제형은 국소 패치로부터 이중특이적 결합제의 투여를 위해 제형화된다.
특정 구현예에서, 최적의 약학 조성물은 예를 들어 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 투약량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다 (예를 들어, 상기 Remington '95 또는 Remington 2013 참조). 특정 구현예에서, 이러한 조성물은 본 발명의 항체 약물 접합체의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 제거 속도에 영향을 미칠 수 있다. 약학 조성물은 예를 들어, 종래의 혼합, 용해, 과립화, 드라제-제조, 가루화 (levigating), 유화, 캡슐화, 포획 또는 정제화 공정을 포함하는 임의의 적합한 방식에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, Remington '95 또는 Remington 2013 에 기재된 방법 참조).
일부 구현예에서, 본원에 제시된 것은 대상체에서의 신생물 치료를 위한 약제로서 사용하기 위한 조성물 또는 약학 조성물이며, 조성물 또는 약학 조성물은 본원에 기재된 이중특이적 결합제 (예를 들어, 항-신생물제를 포함하는 이중특이적 결합제) 를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제시된 것은 신생물 치료에 사용하기 위한 이중특이적 결합제, 또는 항-신생물제 또는 PBD 독소에 접합 (예를 들어, 공유 부착) 된 이중특이적 결합제를 포함하는 조성물 또는 약학 조성물이다.
일부 구현예에서 본원에 기재된 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제 (예를 들어, 항-신생물제를 포함하는 이중특이적 결합제) 는 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는데 사용된다. 일부 구현예에서 본원에 기재된 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제 (예를 들어, 항-신생물제를 포함하는 이중특이적 결합제) 는 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제시된 것은 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체의 치료 방법이다. 특정 구현예에서 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체의 치료 방법은 대상체에게 치료적 유효량의 본원에 기재된 조성물 또는 이중특이적 결합제를 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서 이중특이적 결합제, 또는 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물이 대상체에게 투여되며, 여기서 이중특이적 결합제는 인간 신데칸-1 의 세포외 도메인 및/또는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, 대상체 치료 방법은 대상체의 세포 (예를 들어, 하나 이상의 세포) 를 치료적 유효량의 본원에 기재된 조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 치료 방법은 대상체의 세포 (예를 들어, 하나 이상의 세포) 를 인간 신데칸-1 의 세포외 부분, 또는 이의 변이체 및/또는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3, FGFR3b 및/또는 FGFR3c) 에 특이적으로 결합하는 치료적 유효량의 이중특이적 결합제와 접촉시키는 것을 포함한다. 대상체의 세포는 종종 신데칸-1 의 세포외 부분을 발현하는 세포이다. 대상체의 세포는 대상체 내부 (예를 들어, 생체내) 또는 대상체 외부 (예를 들어, 시험관내 또는 생체외) 에서 발견될 수 있다.
본원에 기재된 방법에 의해 치료될 수 있는 신생물의 비제한적 예는 암종, 육종, 신경계 신생물 (신경계의 신생물), 림프종, 골수종, 백혈병, 흑색종, 중피종, 고형 또는 연조직 종양, 및 2차 암 (예를 들어, 원발 부위 유래) 을 포함한다. 암종의 비제한적 예는 호흡기 암종, 위장계 암종, 비뇨생식계 암종, 고환 암종, 전립선 암종, 내분비계 암종, 피부의 기저 세포 암종, 미지의 원발성 암종, 담관암종, 유방 관상피내암 (DCIS), 메르켈 세포 암종, 폐 암종, 흉선종 및 흉선 암종, 정중선관암종, 폐 소세포 암종, 갑상선 암종, 간 간세포 암종, 편평 세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 유방 암종, 상피 암종, 부신 피질 암종, 상피성 난소 암종 등을 포함하며, 자궁, 자궁경부, 결장, 췌장, 신장, 식도, 위 및 난소의 암종을 추가로 포함한다. 육종의 비제한적 예는 유잉 육종, 림프육종, 지방육종, 골육종, 유방 육종, 연조직 육종, 카포시 육종, 횡문근육종, 자궁 육종, 연골육종, 평활근육종, 섬유육종 등을 포함한다. 신경계 신생물의 비제한적 예는 신경교종, 교모세포종, 뇌수막종, 신경아세포종, 망막모세포종, 성상세포종, 희돌기교세포종 등을 포함한다. 림프종, 골수종 및 백혈병의 비제한적 예는 급성 및 만성 림프모구성 백혈병, 골수모구 백혈병, 다발성 골수종, 분화 불량 급성 백혈병 (예를 들어, 적혈구모세포성 백혈병 및 급성 거핵아구성 백혈병), 급성 전골수성 백혈병 (APML), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (B-계통 ALL 및 T-계통 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 전림프구성 백혈병 (PLL), 모세포 백혈병 (HLL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 (WM), 비호지킨 림프종 및 변이체, 말초 T-세포 림프종, 성인 T-세포 백혈병/림프종 (ATL), 피부 T-세포 림프종 (CTCL), 거대 과립성 림프구성 백혈병 (LGF), 호지킨병 및 리드-스턴버그 병을 포함한다. 연조직 또는 고형 조직 종양의 비제한적 예는 내장 종양, 정상피종, 간세포암, 및 유방, 간, 폐, 췌장, 자궁, 난소, 고환, 머리, 목, 눈, 뇌, 입, 인두, 성대, 귀, 코, 식도, 위, 장, 결장, 부신, 신장, 뼈, 방광, 요도, 암종, 폐, 근육, 피부, 발, 손 및 연조직의 기타 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제에 의해 치료될 수 있는 신생물은 방광암, 유방암, 결장직장암, 자궁경부암, 위암, 간암, 간세포암, 하인두암, 폐암, 선암, 난소암 및 신장암에서 선택된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제에 의해 치료될 수 있는 신생물은 췌장암 (예를 들어, 췌장 선암, 외분비 췌장암 또는 췌장 신경내분비암), 결장직장암 (예를 들어, 결장직장 선암), 소장 악성 종양, 담관암종, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 갑상선 암종, 식도 또는 식도위 접합부 (EGJ) 암, 위 선암, 간 간세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 여성 생식관 악성 종양, 유방암종, 폐 소세포 암종, 상피성 난소 암종, 후복막 또는 복막 육종, 전립선 선암, 신경내분비 종양, 위장 간질 종양, 교모세포종 또는 비-상피성 난소암에서 선택된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제에 의해 치료될 수 있는 신생물은 유방암이며, 이의 비제한적 예는 유방 관상피내암 (DCIS), 침습성 관 암종 (IDC) (예를 들어, 유방의 관상 암종, 유방의 수질 암종, 유방의 점액성 암종, 유방의 유두 암종 및 유방의 사상형 암종), 침윤성 소엽 암종 (ILC), 염증성 유방암, 소엽 상피 내암 (LCIS), 남성 유방암, 유방암의 분자 아형 (예를 들어, 내강형 B 유방암 또는 호르몬-수용체 양성 유방암, 삼중-음성 유방암, HER2-풍부 유방암 및 정상-유사 유방암), 유방의 파체트병, 유방의 엽상 종양 및 전이성 유방암을 포함한다. 일부 구현예에서 본원에 개시된 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제에 의해 치료될 수 있는 신생물은 삼중 음성 유방암이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료의 유효성은 신생물 또는 신생 세포가 발현하는 CD138 및/또는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3, 또는 이의 동형) 의 양에 의해, 부분적으로, 결정되거나 예측될 수 있다. 예를 들어, 이론에 제한됨이 없이, 높은 수준의 CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하는 신생물 또는 신생 세포를 갖는 대상체는 CD138 또는 FGFR3 을 약간 발현하거나 발현하지 않는 신생물 또는 신생 세포를 갖는 또 다른 대상체보다 본원에 기재된 이중특이적 결합제로의 치료요법에 더 양호하게 반응할 수 있다. 신생 세포 또는 암 세포는 적합한 항-CD138 항체 및 적합한 면역어세이 (예를 들어, 전체 세포 ELISA, FACs 등) 를 사용하여 CD138 의 발현 수준을 결정하기 위해 신속하게 어세이될 수 있다. 마찬가지로, 신생 세포 또는 암 세포는 적합한 항-FGFR3 항체 및 적합한 면역어세이를 사용하여 FGFR3 의 발현에 대해 신속하게 어세이될 수 있다. 따라서 일부 구현예에서, 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체의 치료 방법은 치료적 유효량의 본원에 기재된 이중특이적 결합제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 신생물, 또는 이의 신생 세포는 검출가능한 수준의 CD138 및/또는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3, 또는 이의 동형) 을 포함한다. 특정 구현예에서, 검출가능한 수준의 CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하는 신생물은 CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하는 것으로 공지되거나 보고되는 신생물이다. 특정 구현예에서, 신생물은 CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하는 것으로 의심된다 (예를 들어, CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하는 것으로 공지되는 또 다른 신생 세포와 유사한 유전자형 또는 표현형을 가짐으로써). 일부 구현예에서, CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하거나 발현하는 것으로 의심되는 신생물은 CD138 및/또는 FGFR3, 또는 이의 부분을 인코딩하는 RNA 전사체를 발현하는 신생물이다. 일부 구현예에서, CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하거나 발현하는 것으로 의심되는 신생물은 그의 세포 표면 상에 CD138 및/또는 FGFR3 을 발현하는 신생물이다. CD138 및/또는 FGFR3 의 확인된 발현을 갖는 암의 비제한적 예는 부신 피질 암종, 방광 요로 상피 암종, 유방 침습성 암종, 자궁경부 편평세포 암종, 자궁경내 선암, 담관암종, 결장 선암, 결장직장 선암, 림프 신생물 미만성 거대 B 세포 림프종, 식도 암종, 다형성 교모세포종, 신경교종, 두경부 편평 세포 암종, 신장 혐색소세포, 판 (pan)-신장 코호트 (KICH+KIRC+KIR), 신장 신 투명 세포 암종, 유두형 신장 신 세포 암종, 급성 골수성 백혈병, 뇌 저등급 신경교종, 간 간세포 암종, 폐 선암, 폐 편평 세포 암종, 중피종, 난소 장액낭샘암종, 췌장 선암, 갈색세포종 및 부신경절종, 전립선 선암, 직장 선암, 육종, 피부 흑색종, 위 선암, 위 및 식도 암종, 고환 생식 세포 종양, 갑상선 암종, 흉선종, 자궁 체부 자궁내막 암종, 자궁 암육종 및 포도막 흑색종을 포함한다.
일부 구현예에서, 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체의 치료 방법은 또 다른 항암 치료요법과 조합으로 치료적 유효량의 본원에 기재된 이중특이적 결합제를 투여하는 것을 포함하며, 이의 비제한적 예는 T-세포 활성화제, 아쥬반트, 항암 백신, 방사선 치료, 면역요법 (예를 들어, 항-HER2, 또는 항-CD20), 화학요법 등, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, T-세포 활성화제는 CD3, OX40, GITR, CD137 (41BB), CD27, HVEM, LAG-3, TIM3, VISTA 또는 BTLA 에 결합하는 항체이다.
임의의 적합한 화학요법제가 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서 화학요법제는 알킬화제, 안트라사이클린, 세포골격 파괴제, 에포틸론 (예를 들어, 에포틸론), 히스톤 데아세틸라아제 억제제 (예를 들어, 비리노스타트, 로미뎁신), 토포이소머라아제 I 의 억제제 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸), 토포이소머라아제 II 의 억제제 (예를 들어, 에토포시드, 테니포시드, 타플루포시딘), 키나아제 억제제, 펩티드 항생제 (예를 들어, 블레오마이신, 악티노마이신), 백금-기반 작용제 (예를 들어, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴), DNA 수선 효소 폴리-ADP 리보오스 폴리머라아제-1 표적화 화합물 (예를 들어, Parp 억제제), 레티노이드 (예를 들어, 트레티노인, 알리트레티노인, 벡사로텐), 빈카 알칼로이드 및 화합물 (예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈), 항-대사산물, 식물 추출물, 식물 알칼로이드, 니트로소우레아, 호르몬, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체 및 이의 조합을 포함하거나 이로 이루어진다. 알킬화 항-신생물제의 비제한적 예는 알트레타민 (헥사메틸멜라민, HEXALEN (등록 상표)), 부술판, 카르무스틴 (BCNU), 클로람부실, 시클로포스파미드, 다카르바진 (DTIC), 포테무스틴, 이소프파미드, 로무스틴 (CCNU), 메클로레타민, 멜팔란, 프로카르바진, 세무스틴 (MeCCNU), 스트렙토조토신, 테모졸로미드, 티오테파 (트리에틸렌티오-포스포르아미드), 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 일작용성 알킬화제, 니트로소우레아, 테모졸로미드 등, 또는 이의 조합을 포함한다. DNA 삽입제의 비제한적 예는 아크롤레인, 안트라사이클린, 포스포르아미드, 악티노마이신 D, 블레오마이신, 이다루비신, 다우노루비신, 독소루비신, 엘사미신 A, 에피루비신, 에티듐, m-AMSA, 미톡산트론, 독소루비신 (아드리아마이신, 독실, 미오세트, 히드록시다우노루비신, 히드록시다우노마이신), 에피루비신, 이다루비신, 발루비신, TAS-103, MLN944 (XR5944), 오바토클락스, 메클로레타민, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 티오구아닌, 5-플로오로우라실, 시토신 아라비노시드, 5-아자시티딘 (5-AZC) 및 5-아자시티딘 관련 화합물, 미트라마이신, 미토마이신 C, 히드록시우레아, 카르보플라틴, 옥시플라틴, 미토탄, 탁산, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 디브로모만니톨, 겜시타빈, 페메트렉세드 등 또는 이의 조합을 포함한다. 세포골격 파괴제 (예를 들어, 탁산) 의 비제한적 예는 파클리탁셀, 탁솔 및 도세탁셀을 포함한다. 키나아제 억제제의 비제한적 예는 보르테조밉, 엘로티닙, 게피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 비스모데깁 등, 이의 유사체 및 화합물을 포함한다. 뉴클레오티드의 비제한적 예는 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 독시플루리딘, 플루오로우라실, 겜시타빈, 히드록시우레아, 머캅토 퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌 (이전: 티오구아닌) 등, 이의 유사체 및 화합물을 포함한다. PARP 억제제의 비제한적 예는 올라파립, 루카파립, 니라파립, 벨리파립, 탈라조파립 등, 이의 유사체 및 화합물이다.
용어 "대상체" 는 포유류를 지칭한다. 임의의 적합한 포유류는 본원에 기재된 방법 또는 조성물에 의해 치료될 수 있다. 포유류의 비제한적 예는 인간, 비-인간 영장류 (예를 들어, 유인원, 긴팔원숭이, 침팬지, 오랑우탄, 원숭이, 마카크 등), 가축 (예를 들어, 개 및 고양이), 농장 동물 (예를 들어, 말, 소, 염소, 양 및 돼지) 및 실험 동물 (예를 들어, 마우스, 랫트, 토끼 및 기니피그) 을 포함한다. 일부 구현예에서 포유류는 인간이다. 포유류는 임의의 연령이거나 또는 임의의 발달 단계에 있을 수 있다 (예를 들어, 성인, 청소년, 어린이, 유아 또는 자궁 내 포유류). 포유류는 남성 또는 여성일 수 있다. 일부 구현예에서 이를 필요로 하는 대상체는 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체이다.
조성물, 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제를 대상체에게 투여하는 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 본원에 기재된 발명의 방법에 따라 사용하기 위한 조성물에 대한 정확한 제형 및 투여 경로는 환자의 상태를 고려하여 개별 의사에 의해 선택될 수 있다. 예를 들어, Fingl et al. 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics," Ch. 1, p. 1 를 참조한다; 이는 본원에 그 전문이 참조로 포함된다. 임의의 적합한 투여 경로가 본원에 기재된 약학 조성물 또는 이중특이적 결합제의 투여에 사용될 수 있다. 투여 경로의 비제한적 예는 국소 또는 국부 (예를 들어, 피하, 경피 또는 피부 (예를 들어, 피하 또는 표피 상에서), 눈 내 또는 눈 위, 비강내, 경점막, 귀 내, 귀 내부 (예를 들어, 고막 뒤)), 장관 (예를 들어, 위장관을 통해 전달, 예를 들어, 경구 (예를 들어, 정제, 캡슐, 과립, 액체, 유화, 로젠지 또는 이의 조합으로서), 설하, 위 공급관에 의해, 직장 등), 비경구 투여 (예를 들어, 비경구적으로, 예를 들어, 정맥내, 동맥내, 근육내, 복강내, 피내, 피하, 공동내, 두개내, 관절내, 관절 공간 내로, 심장내 (심장 내로), 해면내 주사, 병변내 (피부 병변 내로), 골내 주입 (골수 내로), 척수강내 (척추관 내로), 자궁내, 질내, 방광내 주입, 유리체내) 등, 또는 이의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서 본원의 조성물은 대상체에게 제공된다. 대상체에게 제공되는 조성물은 때때로 자가 투여를 위해 또는 다른 사람 (예를 들어, 비-의료 전문가) 에 의한 대상체로의 투여를 위해 대상체에게 제공된다. 예를 들어 본원에 기재된 조성물은 본원에 기재된 조성물 또는 치료를 제공하도록 환자를 승인하는 의사에 의해 작성된 지시사항 (예를 들어, 처방전) 과 함께 제공될 수 있다. 또 다른 예에서, 조성물은 대상체가 예를 들어 조성물을 경구, 정맥내 또는 흡입기에 의해 자가 투여하는 대상체에게 제공될 수 있다.
대안적으로, 전신 방식보다는 국부 방식으로, 예를 들어, 데포 또는 지속 방출 제형을 사용하는 것을 포함하여, 피부, 점막 또는 치료 관심 부위에 직접 적용을 통해, 본 발명의 방법에 따라 사용하기 위한 조성물을 투여할 수 있다.
일부 구현예에서 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물은 단독으로 투여된다 (예를 들어, 단일 활성 성분으로서 (AI 또는 예를 들어, 단일 활성 약학 성분 (API) 으로서). 다른 구현예에서, 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가적인 추가적인 AI/API 와 조합으로, 예를 들어 2 개의 개별 조성물로서 또는 단일 조성물로서 투여되며, 이때 하나 이상의 추가적인 AI/API 가 약학 조성물 중에서 이중특이적 결합제와 함께 혼합되거나 제형화된다.
특정 구현예에서, 이중특이적 결합제는 세포 (예를 들어, 포유동물 세포) 에 전달된다. 이중특이적 결합제는 임의의 적합한 방법을 사용하여 세포에 전달될 수 있다. 특정 구현예에서, 이중특이적 결합제를 세포에 전달하는 것은 이중특이적 결합제가 세포에 결합하게 하는 조건 하에 포유동물 세포를 시험관내 또는 생체내, 이중특이적 결합제를 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.
약학 조성물은 예를 들어, 종래의 혼합, 용해, 과립화, 드라제-제조, 가루화, 유화, 캡슐화, 포획 또는 정제화 공정에 의한 것을 포함하는 임의의 적합한 방식에 의해 제조될 수 있다.
일부 구현예에서 대상체에서의 신생물 치료 방법은 치료적 유효량의 이중특이적 결합제, 또는 치료적 유효량의, 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. "치료적 유효량" 은 효과적인 치료 결과를 수득하기에 충분한 양 및/또는 신생물의 성장, 생존력, 전이, 중증도, 발병 또는 증상을 예방, 종결, 차단, 억제, 개선, 폐지, 둔화, 진압, 사멸 또는 감소시키는데 필요하고/필요하거나 충분한 양을 의미한다. 일부 구현예에서, 효과적인 치료 결과는 치료 전 및/또는 후에 대상체에서의 신생물 또는 신생 세포의 수, 크기, 생존력, 성장, 유사 분열 또는 전이를 측정하고/하거나 모니터링함으로써 결정될 수 있다. 따라서 일부 구현예에서, 치료적 유효량의 이중특이적 결합제, 또는 치료적 유효량의, 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 것은 신생물의 성장, 생존력, 전이, 중증도, 발병 또는 증상을 예방, 종결, 차단, 억제, 개선, 폐지, 둔화, 진압, 사멸 또는 감소시킨다. 특정 구현예에서, 치료적 유효량의 이중특이적 결합제, 또는 치료적 유효량의, 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 것은 신생물의 암 세포 중 일부 또는 전부의 사멸, 괴사 또는 세포 자멸사 를 유도한다. 치료적 유효량의 결정은 특히 본원에 제공된 상세한 개시물을 고려하면, 당업자의 능력 내에 있다.
일부 구현예에서, 조성물 중 이중특이적 결합제의 양은 적어도 치료적 유효량인 양이며 원치 않는 역반응을 최소화하기에 충분히 낮은 양이다. 이중특이적 결합제의 정확한 양은 대상체의 연령, 체중 및 일반적인 상태, 치료하는 병상의 중증도 및/또는 투여되는 다른 치료 약물의 양에 따라 대상체마다 가변적일 것이다. 따라서, 다양한 군의 대상체에서 신생물을 치료하기 위해 투여될 수 있는 정확한 치료적 유효량의 이중특이적 결합제를 명시하는 것이 항상 가능한 것은 아니다. 잘 알려진 바와 같이, 특정 조건 하의 정해진 환자 및 특정 질환에 대한 특정 투약량은 일상적으로 가변적일 것이나, 각각의 경우에 최적의 양을 결정하는 것은 간단한 일상적 절차에 의해 용이하게 수행될 수 있다. 따라서, 신생물을 치료하는데 사용되는 이중특이적 결합제의 치료적 유효량은 일상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.
특정 구현예에서, 조성물 중 이중특이적 결합제의 치료적 유효량은 약 0.01 mg/kg (예를 들어, 대상체 체중 kg 당) 내지 500 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 500 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 400 mg/kg, 0.01 mg/kg 내지 300 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 300 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 200 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 150 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 75 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 25 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 5 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg 의 용량을 포함한다. 일부 측면에서 이중특이적 결합제의 양은 약 10 mg/kg, 9 mg/kg, 8 mg/kg, 7 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg, 1 mg/kg, 0.9 mg/kg, 0.8 mg/kg, 0.7 mg/kg, 0.6 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.2 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 일 수 있다. 일부 구현예에서 이중특이적 결합제의 치료적 유효량은 약 0.1 mg/kg 내지 500 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 300 mg/kg 이다. 다양한 투여 경로를 위해 적합한 부피는 당업계에 공지되어 있다.
일부 구현예에서 이중특이적 결합제 또는 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물은 효과적인 치료 결과를 수득하기 위해 필요한 적합한 빈도 및/또는 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이중특이적 결합제를 포함하는 약학 조성물은 예를 들어, 매시간, 1 일 1 회, 1 일 2 회, 1 일 3 회, 1 일 4 회, 1 일 5 회 및/또는 규칙적인 간격, 예를 들어 매일, 격일, 1 주일에 3 회, 매주, 격주로, 1 개월에 1 회 및/또는 단순히 의료 전문가에 의해 필요하거나 권장하는 빈도 또는 간격으로 투여된다.
키트
일부 구현예에서, 이중특이적 결합제의 양 또는 용량을 포함하는 약학 조성물은 하나 이상 용량의 이중특이적 결합제를 함유할 수 있는 키트, 팩 또는 분배 장치에 제공된다. 키트 또는 팩은 예를 들어 하나 이상의 적합한 용기, 바이알 또는 블리스터 팩 및 하나 이상의 적합한 분배 장치를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트 또는 팩에는 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 투여 지시 사항 및/또는 통지가 수반되며, 통지는 인간 또는 수의학적 투여용 약물 형태의 기관에 의한 승인을 반영한다. 예를 들어, 이러한 통지는 처방 약물에 대해 미국 식품의약국에 의해 승인된 라벨링이거나 승인된 제품 삽입물일 수 있다.
일부 구현예에서 키트 또는 팩은 1 일 내지 1 년, 1 일 내지 180 일, 1 일 내지 120 일, 1 일 내지 90 일, 1 일 내지 60 일, 1 일 내지 30 일, 또는 1-4 시간, 1-12 시간 또는 1-24 시간 사이의 임의의 일 또는 일수 동안 환자를 치료하기에 충분한 이중특이적 결합제의 양을 포함한다.
키트는 임의로는 그 안의 성분의 시험관내, 생체내 또는 생체외 사용을 위한 성분의 설명 또는 지시 사항을 포함하는 제품 표지 또는 패키징 삽입물을 포함한다. 예시적인 지시 사항은 진단 방법, 치료 프로토콜 또는 치료 요법에 대한 지시 사항을 포함한다. 특정 구현예에서, 키트는 키트의 성분을 수용하는 물리적 구조를 지칭하는 패키징 재료를 포함한다. 패키징 재료는 성분을 멸균으로 유지할 수 있으며, 이러한 목적에 흔히 사용되는 재료로 만들어질 수 있다 (예를 들어, 종이, 골판지 섬유, 유리, 플라스틱, 호일, 앰플, 바이알, 튜브 등). 제품 표지 또는 삽입물은 "인쇄물", 예를 들어, 종이 또는 판지, 또는 성분, 키트 또는 패키징 재료 (예를 들어, 상자) 에 대해 별개의 또는 부착된, 또는 키트 성분을 포함하는 앰플, 튜브 또는 바이알에 부착된 것을 포함한다. 표지 또는 삽입물은 컴퓨터 판독가능 매체, 광학 디스크 예컨대 CD- 또는 DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, 자기 테이프, 또는 전기 저장 매체 예컨대 RAM 및 ROM 또는 예컨대 자기/광학 저장 매체, FLASH 매체 또는 메모리 유형 카드와 같은 것들의 하이브리드를 추가로 포함할 수 있다. 제품 표지 또는 삽입물은 작용 메커니즘, 약동학 (PK) 및 약력학 (PD) 을 포함하는 활성 성분(들) 의 임상 약리학, 투여량, 그 안의 하나 이상의 성분의 식별 정보를 포함할 수 있다. 제품 표지 또는 삽입물은 제조업체 정보, 로트 번호, 제조업체 위치, 날짜, 키트 성분을 사용할 수 있는 표시된 병상, 장애, 질환 또는 증상에 대한 정보를 식별하는 정보를 포함할 수 있다. 제품 표지 또는 삽입물은 방법, 치료 프로토콜 또는 치료 요법에서 하나 이상의 키트 성분을 사용하기 위한 임상의 또는 대상체를 위한 지시 사항을 포함할 수 있다. 지시 사항은 투약량, 빈도 또는 기간, 및 본원에 제시된 임의의 방법, 치료 프로토콜 또는 치료 요법을 실시하기 위한 지시 사항을 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 키트는 본원에 기재된 본 발명의 임의의 방법 및 용도를 실시하기 위한 지시 사항 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 제품 표지 또는 삽입물은 잠재적인 부작용 및/또는 경고에 대한 정보를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 키트는 공지된 양의 신데칸-1 및/또는 FGFR3 을 갖는 하나 이상의 대조군을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 신데칸-1 및/또는 FGFR3 을 발현하는 세포를 포함한다. 키트 중 세포는 세포가 사용할 준비가 될 때까지 적절한 저장 조건 하에 유지될 수 있다.
일부 구현예에서, 키트는 이중특이적 결합제를 포함하는 진단 키트이다. 진단 키트에 포함된 이중특이적 결합제는 임의의 적합한 형태를 취할 수 있다. 일부 구현예에서, 진단 키트는 이중특이적 결합제 및 검출가능한 표지를 포함한다. 특정 구현예에서, 예를 들어, 진단 키트는 본 발명의 방법을 수행하고 예를 들어 색 차트 또는 표준 곡선과 비교할 수 있는 비색 결과를 생성하는데 필요한 시약을 포함하는 스틱 시험을 포함하거나 이로 이루어진다. 진단 키트는 또한 세포에 특이적으로 결합하는 이중특이적 결합제, 예를 들어 2 차 항체를 검출하는데 필요한 성분을 포함할 수 있다.
실시예
실시예 1 - 항-CD138 항체의 생성
단일클론 항체를, (i) 높은 친화도 및 특이도로 결합하고, (ii) 빠른 내재화를 나타내고/내거나 (iii) 시노몰구스 원숭이 유래 CD138 과 교차반응성을 나타내는 인간 CD138 에 대해 생성시켰다. 항체를 생성하기 위해, 마우스 (Balb/C 마우스; 암컷 6-8 주령) 를 면역화하고 CD138 펩티드 1-3 (융합 12) 또는 펩티드 4-6 (융합 13) 의 믹스로 부스팅하였다 (표 11 참조).
이들 펩티드는, 글리코실화 위치에서 멀리 있고, 인간과 마우스 사이에 불량하게 보존되었으나 인간과 시노몰구스 종 사이에는 강하게 보존된 부위에 있도록 설계되었다. 마우스를 KLH 담체 단백질에 접합된 표시된 펩티드로 면역화한 후, 1 차 주사에 대해 완전 프로인드 아쥬반트 (Complete Freund's Adjuvant (CFA)) 및 모든 후속 부스트에 대해 불완전 프로인드 아쥬반트 (Incomplete Freund's Adjuvant) 를 사용하는 면역화 일정에 따랐다. 면역화된 마우스의 항체 혈청 역가를 인간 CD138 및 CD138-Fc 결합 ELISA 에 의한 결합에 대해 평가하였다. 높은 역가를 갖는 마우스를 융합을 위해 선택하였다. 최적화된 방법을 사용하여 마우스 B 세포 및 SP2/O 골수종 세포의 전기융합에 의해 하이브리도마를 생산하였다.
[표 11]
면역화에 사용한 CD138 펩티드
Figure pct00054
전통적인 방법과 달리, 하이브리도마의 클로닝은 융합된 세포가 HAT 선택에 의해 선택되는 단일 단계에서 동시에 수행되었으며, 단일 세포 콜로니는 HT 배지를 함유하는 96 웰 플레이트에 옮겨지고, 제한된 선택 하에 성장하고, 상청액을 항원 결합에 대해 스크리닝하였다. 양성 하이브리도마를 더 큰 부피로 확장하고 저장을 위해 세포를 동결하였다.
CD138 양성 세포 (H929) 에 대한 1 차 하이브리도마 FACS 스크리닝
융합 12 (플레이트 12-19) 로부터의 하이브리도마 상청액을 웰 당 20,000 개 H929 세포를 함유하는 96-웰 플레이트를 사용하여 형광-활성화 세포 분류 (Fluorescence-activated cell sorting (FACS)) 에 의해 스크리닝하였다. H929 세포는 그의 세포 표면 상에서 CD138 을 발현하는 인간 B-림프구 세포주이다. 하이브리도마 상청액을 1 시간 동안 4℃ 에서 H929 세포에 첨가하였다. 세포를 세척한 후, AlexaFluro 647 항-마우스 항체를 첨가하고, 다시 세척하여 미결합 항체를 제거하였다. 결합을 검출하기 위해 세포를 FACS 에 의해 분석하였다. FACS 데이터를 Flowjo 소프트웨어에 의해 분석하였다. 상청액 항체가 플레이트의 평균 신호보다 3 표준 편차 이상의 수준에서 세포에 결합한다면, FACS 확인 및 추가 특성화를 위해 이를 선택하였다. 융합 12 로부터의 총 5013 명의 하이브리도마가 134 개의 양성 히트 (hit) 로의 이러한 1 차 FACS 스크리닝을 거쳤고; 총 히트 비율은 1 차 스크리닝에서 2.7% 였다. 융합 12 플레이트 16 으로부터의 양성 하이브리도마 클론의 샘플을 하기 표 12 에 나타낸다. 2 개의 대표적 양성 하이브리도마 클론의 FACS 히스토그램을 도 2 에 나타낸다.
[표 12]
융합 12 플레이트 16 으로부터의 대표적 양성 하이브리도마를 나타내는 대표적 H929 FACS 스크리닝으로부터의 표.
Figure pct00055
* 기하 평균은 도 2 에 나타낸 표시한 사분면 내의 세포의 평균 형광 강도를 나타내고; Q1 은 항체의 H929 세포에 대한 양성 결합을 나타내는 한편, Q4 는 미결합 세포를 나타냄.
융합 12 하이브리도마의 2 차 FACS 스크리닝
1 차 FACS 스크리닝에서 양성 결합을 입증하는 하이브리도마를 선택하고, 추가로 특성화하였다. 2 차 스크리닝을 위해, 하이브리도마 상청액은 H929 에 대한 양성 결합 (CD138 발현) 및 ARH-77 세포에 대한 음성 결합 (음성 CD138 발현) 에 대하여 FACS 에 의해 어세이하였다. 보다 양호한 양성 및 음성 세포주를 구별하는데 도움이 되도록 음성 세포를 CSFE 염색하였다. 그런 다음, 상청액을 그의 비-특이적 결합 대 특이적 CD138 결합과 비교하였다. 대표적 2 차 FACS 스크리닝의 결과를 표 13 에 요약한다.
[표 13]
CD138-양성 H292 세포에 대한 양성 결합 및 CD138-음성 ARH77 세포에 대한 음성 결합을 나타내는 대표적 하이브리도마 클론 F12P16F6 (12P16F6) 에 대한 FACS 데이터 요약.
Figure pct00056
* 기하 평균은 세포의 평균 형광 강도를 나타내고; Q1% 는 항체에 의해 결합된 H929 세포의 백분율을 나타냄.
융합 12 하이브리도마에 대한 2 차 ELISA 스크리닝
결합 특이도 및 IgG 유형의 확인에 도움이 되도록 2 차 스크리닝 후에 CD138 및 IgG1 이소타입 ELISA 를 또한 실시하였다. CD138 결합 ELISA 를 재조합 CD138-Flag 를 사용하여 수행하였다. 데이터는 ELISA 에 의해 모든 FACS-양성 하이브리도마가 또한 CD138 에 결합되었음을 나타내었다. IgG ELISA 는 IgG 양성 항체를 식별하였다. IgM 항체는 추가 연구에서 제거하였다. 이 시점까지의 선택 과정의 요약을 표 14 에 나타낸다.
[표 14]
1 차 및 2 차 스크리닝 결과의 요약.
Figure pct00057
SPR 에 의한 대표적 항체의 결합 반응 속도
쥐과 IgG 를 하이브리도마 상청액으로부터 정제하였고, IgG 를 결합 반응 속도 측정을 위해 SPR (표면 플라즈몬 공명) 처리하였다. 인간 또는 마우스 CD138 His 를 BioRad Proteon 에서 50 μg/mL 로 GLM 칩에 고정하였다. 항체를 167 nM ~ 10.4 nM 의 농도 범위에서 30 μL/분의 속도로 결합된 칩 위에 흘려 결합 반응 속도를 검출하였다. 2가 분석물 피트를 사용하여 KD 를 측정하였다. 반응 속도 결과를 표 15 및 도 3 에 나타낸다.
[표 15]
대표적 항체에 대한 SPR 반응 속도 측정.
Figure pct00058
* NB = 무-결합; NA = 분석하지 않음.
** 이들 표시된 NA 는 SPR 에 의해 분석되지 않았으나 ELISA 결합 어세이를 통해 마우스 CD138 과 교차-반응하지 않는 것으로 나타났음 (데이터는 나타내지 않음).
항체 발현
2 개의 대표적 키메라 항체의 발현을 평가하여 생산 규모 확대 가능성을 결정하였다. Expi293 세포 (250 mL) 를 12P16F6 hIgG1 ("chF6" 으로도 지칭함) 또는 13P30A7 hIgG1 ("chP30a7" 로도 지칭함) 의 발현을 유도하는 벡터로 일시적 트랜스펙션시켰다. 키메라 항체 12P16F6 hIgG1 은 F12P16F6 의 쥐과 중쇄 가변부 (SEQ ID NO:82) 및 경쇄 가변부 (SEQ ID NO:34) 및 인간 IgG1, 카파 이소타입의 불변부를 포함한다. 키메라 항체 13P30A7 hIgG1 은 F13P30A7 의 쥐과 중쇄 가변부 (SEQ ID NO:83) 및 경쇄 가변부 (SEQ ID NO:35) 및 인간 IgG1, 카파 이소타입의 불변부를 포함한다. 결과를 하기 표 16 에 요약한다. 발현된 항체를 또한 SDS-PAGE 및 크기 배제 크로마토그래피 (데이터는 나타내지 않음) 로 분석하였다.
[표 16]
Figure pct00059
대표적 항체의 시노몰구스 교차반응성.
12P16F6 hIgG1 또는 13P30A7 hIgG1 을 시노몰구스 원숭이 CD138 에 대한 교차반응성에 대해 시험하였다. 시노몰구스 원숭이 (cyno) 로부터의 CD138 과 교차반응하는 항체는, 효능 시험을 실시하기 전에 비-인간 영장류의 이러한 계통에서 독성을 검사할 수 있다는 이점을 갖는다. 간략하게, 인간 CD138 또는 cyno CD138 의 세포-표면 발현을 유도하는 벡터를 Expi293 세포에서 트랜스펙션시켰다. 12P16F6 hIgG1 및 13P30A7 hIgG1 의 트랜스펙션된 Expi293 세포에 대한 결합을 33.3 μg/mL 에서 시작하여 3-배 희석으로 시험하였다. 세쿠키누맙 (Sec) 을 음성 대조군으로 사용하여, 트랜스펙션된 세포가 어떠한 배경 결합도 갖지 않음을 확인하였다. 대표적 항체 12P16F6 hIgG1 및 13P30A7 hIgG1 은 인간 및 cyno CD138 둘 모두에 대해 특이적 결합을 나타내었다 (도 4).
[표 17]
대표적 CD138 하이브리도마-유래 항체에 대한 데이터 요약.
Figure pct00060
* NB = 검출가능한 결합 없음. NA = 분석하지 않음.
실시예 1 에서 사용한 특정 시약 및 재료의 정의
여기서 하이브리도마 클론의 명칭은 명칭이 사용되는 맥락에 따라 하이브리도마 세포 또는 하이브리도마 세포로부터 생산된 항체를 지칭할 수 있다는 것에 주의한다. 하이브리도마 클론의 명칭은 종종 융합 (예를 들어, 융합 #12 또는 #13, 각각 F12 및 F13 으로 축약), 이어서 문자 "P" 가 선행하는 플레이트 번호, 및 웰 번호를 지칭한다. 예를 들어, 하이브리도마 클론 F12P16F6 (본원에서 12P16F6 또는 P16F6 으로도 지칭함) 은 융합 12, 플레이트 16 및 웰 F6 에서 유래한 하이브리도마로부터 수득한 항체를 지칭한다. mBT-062 는 IgG1, CD138 결합 대조군 항체이다.
실시예 2 - 인간화
인간화 버전의 항체가 모 (parental) 단일클론 항체의 특성을 유지하는 본원에 기재된 쥐과 항-CD138 (항-신데칸-1) 항체의 인간화 버전을 설계하고 생성하기 위한 전략을 개발하였다. 인간 IgG1/카파 이소타입의 인간 불변부 및 F12P16F6 의 마우스 가변부를 포함하는, chF6 로서 지정된 키메라 단일클론 항-CD138 항체를 인간화하는 것의 예가 본원에 제공된다.
본원에서 생성된 chF6 의 인간화 버전은 종종 모 chF6 키메라 항체에 대해 벤치마킹되었다. 적절한 경우 다른 양성 및 음성 대조군도 사용되었다.
5 개의 인간화 전략을 병렬로 이용하여, 3 개의 인간화 F12P16F6 경쇄 서열 및 4 개의 인간화 F12P16F6 중쇄 서열의 생성을 초래하였다. 특정 구현예에서, 방법은 쥐과 상보성 결정 부위 (CDR) 를 인간 골격 및 불변부에 그래프트하는 것을 포함한다. 생성된 3 개의 인간화 경쇄 및 4 개의 인간화 중쇄 각각을 서로 조합하여 발현하고 정제하여 총 12 개의 인간화 항-CD138 단일클론 항체를 초래하였다. 인간화 항체를 발현/정제 프로파일, 생물물리학적 특성, CD138 펩티드 항원에 대한 결합, 천연 CD138 에 대한 결합 및 특이도에 대해 분석하였다. 대표적 인간화 항체를 또한 다른 생물물리학적 특성에 대해 평가하였다.
방법
chP16F6 의 발현 및 정제
키메라 항체 chP16F6 의 발현을 유도하는 벡터를 EXPIFECTAMINE (상표) 293 트랜스펙션 키트를 사용하여 Expi293 세포에 250 ml 부피로 트랜스펙션시켰다. pH 의존적, 단백질 A 정제를 이용하여 상청액을 정제하였다. HiTrap MabSelect SuRe 5 ml 을 사용하여 키메라 항체를 정제하였다. 정제 후, 항체를 Zeba 스핀 컬럼을 사용하여 1x DPBS 로 완충제 교환하였다. chP16F6 의 회수는 2.21 mg/mL 에서 7.1 mg 이었다.
F12P16F6 의 인간화.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 인간화를, (i) CDR 그래프팅 (cdr 로 지정) {이는 Jones et al. (1986) "Replacing the complementarity determining regions in a human antibody with those from a mouse" Nature 321:522-525 및 Verhoeyen et al. (1988) "Reshaping human antibodies: grafting an anti-lysozyme activity" Science 239:1534-1536 에 따라 수행됨, 여기서 Kabat et al. (1991) "Sequences of Proteins of Immunological Interest" 5th ed. US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institutes of Health (NIH Publication No 91-3242) 에 의해 정의된 바와 같은 CDR 이 적절한 인간 스캐폴드에 그래프트되는 한편, 중요한 골격 잔기는 보존됨}; (ii) 축약된 CDR (abb 로 지정) 의 그래프팅 {이는 Padlan et al. (1995) "Identification of specificity-determining residues in antibodies" FASEB J 9:133-139 에 따라 수행됨, 경쇄에서 잔기 27D-34, 50-55 및 89-96, 및 중쇄에서 31-35B, 50-58 및 95-101 로서 정의된 축약된 CDR 이 적절한 인간 스캐폴드에 그래프트되는 한편, 중요한 골격 잔기는 보존됨}; (iii) SDR-이송 (sdr 로 지정) {이는 Padlan et al. (1995) "Identification of specificity determining residues in antibodies" FASEB J 9:133-139 에 따라 수행됨, 여기서 항원 결합에 포함될 수 있는 잔기는 적절한 인간 서열에 이식되는 한편, 중요한 골격 잔기는 보존됨}; (iv) 프랑켄슈타인 (Frankenstein) 접근 방식 (fra 로 지정) {이는 Wu and Kabat (1992) "Possible use of similar framework region amino acid sequences between human and mouse immunoglobulins for humanizing mouse antibodies" Mol. Immunol. 29:1141-1146 에 따라 수행됨, 여기서 CDR 은 적절한 인간 항체에서 유래하는 개별 골격부로 만들어진 인간 스캐폴드에 그래프트되는 한편, 중요한 골격 잔기는 보존됨}; 및 (v) 베니어링 (Veneering) (ven 으로 지정) {이는 Padlan (1991) "A possible procedure for reducing the immunogenicity of antibody variable domains while preserving their ligand-binding properties" Mol. Immunol. 28:489-498 에 따라 수행됨, 여기서 구조가 공지되어 있는 경우 비-인간 항체에서, 또는 구조가 공지되어 있지 않은 경우 상동 분자에서 노출되는 잔기는 적절한 인간 항체로부터의 상응하는 잔기로 변화하는 한편, CDR 및 중요한 골격 잔기는 보존됨} 에서 선택된 방법을 사용하여 수행하였다. 기재한 모든 방법에서, '적절한 인간 항체' 는 가장 가까운 인간 서열을 표시하는 데 사용된다 (GenBank 에서 이용가능). 용어 "중요한 골격 잔기" 는 (PDB 에서 관련 고해상도 X-선 구조의 분석으로부터의) 3 차원 구조의 유지에 필수적인 것으로 여겨지는 잔기를 나타내는 것으로 사용된다. 때때로, 항체의 SEC 프로파일을 개선하기 위해 인간화의 제 2 "수선" 라운드 (round) 를 수행하였다. 제 2 라운드에서 생산된 인간화 항체는 지정 rep 또는 수선에 의해 표시된다. 생성된 인간화 중쇄 및 경쇄 가변부의 아미노산 서열을 각각 도 10A 및 도 10B 에 나타낸다.
인간화 P16F6 수선 구조물의 발현 및 정제
4 개의 인간화 중쇄 각각은 3 개의 경쇄 각각과 쌍을 이루어 12 개의 상이한 항체를 생성하였다 (표 18). 12 개의 인간화 P16F6 항체를 EXPIFECTAMINE (상표) 293 트랜스펙션 키트를 사용하여 Expi293 세포에서 발현시켰다. F6 cks-rep (추가 연구를 위해 더 필요함) 및 낮은 단백질 발현으로 인한 375 ml 의 F6 f2ka-rep 를 제외하고 모든 구축물을 125 ml 의 부피로 트랜스펙션시켰다. 상청액을 0.22 μm 필터를 통해 여과하고 프로테아제 억제제로 처리하였다. 완충제 교환 후 > 5 mg/L 의 발현 수준 및 ≥ 1 mg/mL 보다 높은 농축 능력을 제공하는 항체를 추가 분석을 위해 선택하였다.
[표 18]
Figure pct00061
* F6 및 P16F6 은 인간화 항체 사슬이 F12P16F6 에서 유래하였다는 것을 나타냄.
항체를 pH 의존적, 단백질 A 정제 (HiTrap MabSelect SuRe 5 mL) 를 이용하여 정제하였다. 정제 후, 항체를 zeba 스핀 컬럼을 사용하여 1x DPBS 로 완충제 교환하였다. 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 분석에 의해 결정된 바와 같은 회수 및 상대적 안정성은 인간화 항체 사이에 가변적이었다 (SEC 프로파일은 나타내지 않음). 표 19 는 SEC 에 의해 결정된 바와 같은 회수, 농도 및 단량체 퍼센트를 요약한다. 11 개의 대표적 인간화 항체의 SDS-PAGE 분석을 도 6 에 나타낸다. 명명법은 때때로 hF6 xky-rep 의 형태를 취하며, 이때 h 는 인간화를 나타내고, F6 은 F12P16F6-유래를 나타내고, x 는 인간화 중쇄 서열을 생성하는데 사용되는 제 1 절차의 제 1 문자를 나타내고 (예를 들어, x 는 하기의 것일 수 있다; a=abb, s=sdr, f=fra, 또는 c=cdr), k 는 카파 경쇄를 나타내고, y 는 인간화 경쇄 서열을 생성하는데 사용되는 제 1 절차의 제 1 문자를 나타낸다 (a=abb, s=sdr, f=fra, c=cdr). 용어 "rep" 는 종종 상이한 방법을 사용하여 적어도 제 2 인간화 라운드가 수행되었음을 나타내는 "수선" 을 의미한다.
[표 19]
Figure pct00062
FACS 에 의한 인간화 P16F6 수선 구축물의 CD138 결합
인간 CD138 에 대한 세포-표면 결합의 분석을 FACS 에 의해 9 개의 대표적 인간화 항-CD138 항체에 대해 수행하였다 (도 7). 세쿠키누맙을 음성 대조군으로서 사용하였다. 중간 수준의 CD138 을 발현하는 2 개의 세포주를 사용하여 결합을 시험하였다; 다발성 골수종 세포주 KMS-11 및 방광암주 RT112/84. 이전 실험에서, 12P16F6 hIgG1 은 RT-122/84 세포에서 대략 9 nM 및 KMS-11 세포에서 ~3 nM 의 EC50 을 나타내었다. EC50 을 4 개의 매개변수 피트 곡선을 사용하여 계산하였다 (표 20). 구축물을 또한, CD138 음성 림프모구인 ARH-77 세포에 대해 시험하였다. NB 는 관찰된 특이적 결합이 없음을 나타낸다.
[표 20]
내인성 CD138 에 대한 결합의 계산된 EC50 값
Figure pct00063
* NB = 검출가능한 결합이 없음.
인간화 P16F6 수선 구축물의 CD138 결합 ELISA.
면역화에 사용된 선형 CD138 펩티드의 부분에 대한 결합을 결정하기 위해 9 개의 대표적 인간화 항체로 CD138 결합 ELISA 를 수행하였다 (도 7). 플레이트를 hCD138 펩티드 (AGEGPKEGEAVVLP; SEQ ID NO:94) 및 음성 대조군 펩티드 (QAAVTSHPHGGMQPGLHETSA; SEQ ID NO:124), 또는 F12P16F6 이 결합하지 않는 마우스 CD138 펩티드로 코팅하였다. 코팅된 플레이트를 9 개의 대표적 항체 각각의 다양한 희석액과 함께 밤새 인큐베이션하고, 염소 항-인간 IgG (H+L)-HRP 로 결합을 검출하였다. EC50 을 4 개의 매개변수 피트 곡선을 사용하여 결정하였다 (표 21). 플레이트-코팅된 인간 CD138-Fc 단백질에 대한 결합을 검출하기 위해 ELISA 를 또한 수행하였다 (표 21). 분석 및 결과는 유사하였다.
[표 21]
Figure pct00064
선택된 연구 결과 요약
표 22 는 13 개의 대표적 인간화 항-CD138 단일클론 항체에 대한 분석 결과 요약을 나타낸다.
[표 22]
대표적 인간화 항체의 생물물리학적 특징의 요약.
Figure pct00065
실시예 3 - 결정 구조의 측정
인간화 항-CD138 항체 Fab 단편과 복합체로의 인간 신데칸-1 펩티드의 X-선 결정 구조를 1.95 Å 해상도에서 해결하였다. 구조는 비대칭 단위 당 신데칸-1 펩티드 및 Fab 각각의 1 카피를 포함하였다 (도 8).
구조 설명
인간화 항체 Fab 는 인간화 중쇄 가변부 (SEQ ID NO:90) 및 인간화 경쇄 가변부 (SEQ ID NO:41) 를 포함한다. CDR 표준 구조는 PyIgClassify 데이터베이스에 따라 분석되었다. 중쇄 CDR 을 하기와 같이 분류하였다: H1-13-1 (CDR-길이-클러스터), H2-10-1 및 H3-6-1. 경쇄 CDR 을 하기와 같이 분류하였다: L1-16-1, L2-8-1 및 L3-9-cis7-1. 신데칸-1 펩티드는 단일 Fab 에 결합하며, 복합체 형성은 Fab 및 신데칸-1 펩티드의 용매-접근가능 표면 영역의 540 Å2 를 덮는다 (313.6 Å2 사슬 A 및 H; 226.4 Å2 사슬 A 및 L).
98-108 로부터의 모든 가시적인 신데칸-1 펩티드 잔기는 Fab 와의 직접 접촉에 참여한다 (도 8). 인터페이스에 관련된 특정 Fab 잔기는 사슬 H 로부터의 31-33, 35, 47, 50, 52, 58, 94-96 및 101-102, 및 사슬 L 로부터의 27-28, 32, 34, 46, 49-50, 89-94 및 96 이다. 이는 CDR H1 로부터의 4 개의 잔기가, CDR H2 로부터의 3 개의 잔기 및 CDR H3 으로부터의 5 개의 잔기와 함께 인터페이스에 참여한다는 것을 의미한다. 또한, CDR L1 로부터의 4 개 잔기, CDR L2 로부터의 2 개 잔기 및 CDR L3 으로부터의 7 개 잔기가 인터페이스에 참여한다.
5.88 mg/mL 에서의 Fab 의 1 mL 분취액 (대략 125 μM) 을 250 μM 신데칸-1 펩티드 (AGEGPKEGEAVVLP; SEQ ID NO:94) 와 혼합하고 4℃ 에서 2 시간 동안 인쿠베이션하였다. 20 mM Tris pH 7.5 및 150 mM NaCl 을 함유하는 완충제로 사전평형화된 S200 크기 배제 컬럼 상에서 복합체를 분별하였다. 결정화를 위해 피크 분획물을 풀링하고 농축하였다. 브래드포드 (Bradford) 어세이에 의해 측정된 바와 같은 최종 단백질 농도는 3 mg/mL 였다.
대략 400 개의 결정화 조건을 모기 로봇 (TTP Labtech) 을 사용하여 96 웰 포맷으로 증기 확산의 현적 (hanging drop) 방법에 의해 스크리닝하였다. 결정 성장을 2 가지 조건에서 20℃ 에서 관찰하였다: 2.1 M DL-말산 pH 7.0, 및 60% Tacsimate pH 7.0. 결정화는 24 웰 포맷에서 더 최적화되었다.
결정 냉각 및 데이터 수집
기재된 결정을 1.7 M DL-말산, pH 7.0 을 함유하는 침전제 용액으로 24 웰 플레이트에서 증기 확산의 현적 방법을 사용하여 성장시켰다. 인 하우스 (In house) X-선 회절 스크리닝은 3.0 M DL-말산, pH 7.0 을 함유하는 용액에 결정을 24 시간 동안 미리 담금으로써 해상도가 개선될 수 있음을 나타내었다. 결정을, 담금 액적으로부터 직접 루프에서 이를 포획하고 액체 질소에 넣음으로써 극저온 냉각하였다. 싱크로트론 데이터 세트를 ESRF 빔라인 ID30A-1 에서 수집하였다.
구조 해결 및 재정밀화
MOSFLM (CCP4) 및 AIMLESS (CCP4) 에서의 데이터 프로세싱은, 가장 가능성이 큰 공간군이, a = 60.6 Å, b = 132.9 Å 및 c = 51.2 Å 의 단위 셀 치수를 가져 총 세포 부피가 411706.34 Å 인 P212121 이라는 것을 나타내었다. 매튜 (Matthews) 계수의 계산 (2.14 Å3/Da 및 42.7% 용매 함량) 은, 비대칭 단위당 하나의 완전한 Fab-신데칸-1 복합체가 존재할 가능성이 가장 높음을 나타내었다. 분자 대체 (MR) 에 사용하기 위한 모델은 PDB 에 대해 각 성분 (Fab 중쇄 및 경쇄) 의 서열을 검색하는 BLAST 에 의해 선택하였다. 서열 동일성이 가장 높은 모델은 3sqo (Fab 중쇄) 및 4ojf (Fab 경쇄) 였다. PDB 에 침착된 다수의 Fab 결정 구조는 가변 도메인과 불변 도메인 사이에 존재하는 광범위한 팔꿈치 각도를 나타내었다. 팔꿈치 각도의 이러한 변화는 2 개의 달리 고도로 상동성인 Fab 단편의 전체 3 차 구조를 상당히 상이하게 할 수 있으며, 이로 인해 MR 이 실패하게 된다. 이러한 이유로 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인과 불변 도메인 사이의 힌지 부위를 제거하여, 4 개의 별개의 MR 검색 앙상블 (VH, VL, CH 및 CL) 을 생성하였다. 아미노산 잔기를 COOT 에서 육안 검사 후 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 모델의 CDR 로부터 잘라내어, MR 이 실패하게 할 수도 있는 임의의 잠재적인 충돌을 방지하였다. 완전한 Fab 를 구축하는데 필요한 4 개의 입력 검색 앙상블 (VH, VL, CH 및 CL) 모두를 PHASER 를 사용하는 MR 에 의해 올바르게 위치시켰다 (McCoy et al., 2007) (CCP4). MR 출력 모델에는 REFMAC5 (CCP4) 를 사용하는 20 사이클의 젤리 바디 재정밀화가 제공되었다. 단백질 서열을 CHAINSAW (CCP4) 를 사용하여 Fab 의 것과 매치되도록 돌연변이시켰다. 전자 밀도 맵에서 볼 수 있는 Fab 의 모든 정렬된 부위가 완료될 때까지 모델 구축 및 재정밀화의 연속 사이클을 통해 반복적으로 모델을 개선시켰다. 중쇄 및 경쇄 아미노산은 카밧 항체 번호화 컨벤션에 따라 번호를 다시 매겼다. 신데칸-1 펩티드에 상응하는 전자 밀도가 명백하게 가시적이었다. 신데칸-1 아미노산 잔기를 COOT 에 수동으로 추가하고 올바른 번호화를 적용하였다. 물 분자를 COOT 의 물 배치 옵션을 사용하여 추가하고, 완전한 모델은 REFMAC5 (CCP4) 를 사용하여 재정밀화하였다. 최종 Fab 모델은 중쇄 잔기 1-216 (사슬 H) 및 경쇄 잔기 1-212 (사슬 L) 를 포함하며 어느 사슬에도 파단이 없었다. 최종 신데칸-1 모델은 잔기 98-108 (사슬 A) 을 포함하였다. 최종 모델은 또한 205 개의 물 분자를 포함하였다. 최종 Rwork = 21.2%, Rfree = 26.1%.
[표 23]
데이터 수집, 프로세싱 및 재정밀화 통계
Figure pct00066
실시예 4 - FGFR3 피노머 생산
인간 Fyn 키나아제의 SH3 도메인을 FGFR3 표적 단백질에 대해 높은 친화도 및 특이도로 결합하는 피노머 폴리펩티드를 조작하기 위한 스캐폴드로서 성공적으로 사용하였다. 8.5 x 1010 개 초과의 개별 피노머 클론을 함유하는 전매 파지 디스플레이 라이브러리를 상이한 재조합 FGFR3 항원에 대한 선택에 사용하였다. 상이한 선택 및 스크리닝 전략을 사용하였다. 하나의 전략에서, 인간 및/또는 원숭이 (예를 들어, 시노몰구스 원숭이, 게잡이 원숭이 (Macaca fascicularis)) 에서 유래한 재조합 FGFR3 동형 3B 및 FGFR3 동형 3C 를, 적어도 2 개의 FGFR3 스플라이스 동형 (예를 들어, 3B 및 3C) 에 특이적으로 결합하는 피노머를 발현하는 파지 클론의 선택에 사용하였다. 상이한 FGFR3 항원 및/또는 FGFR3 항원의 조합을 사용하여 여러 라운드의 선택을 실시하였다. 피노머 선택 과정의 한 가지 목표는 (i) FGFR3b 및 FGFR3c 둘 모두에 대한 선택적 결합, (ii) 인간 및 원숭이, 및 가능하게는 마우스에 대한 교차반응성, 및 (iii) 결합된 수용체를 내재화하는 능력을 갖는 피노머를 단리하는 것이었다. 이 대표적 실시예는 이러한 피노머의 선택 과정을 기재하고 있다.
재조합 인간 FGFR3b-Fc 및 FGFR3c-Fc 를 표적으로서 사용하여, 인간 FGFR3 의 스플라이스 변이체 (FGFR3b 및 FGFR3c) 모두에 결합할 수 있는 Fyn SH3-유래 결합 단백질의 여러 패밀리를 성공적으로 선택 및 단리하였다. 추가 연구를 위해 가장 유망한 후보 패밀리로 지속하였다.
흥미롭게도, RT-루프 서열 "EVYGPTPM" (SEQ ID NO:100) 을 보유하는 FF2L4C3 (SEQ ID NO:101) 로 지칭하는 Fyn SH3-유래 폴리펩티드는 선택 과정 동안 풍부해졌으며, 29 개의 시험한 항-FGFR3 피노머 중에서 매우 유망한 내재화 특성을 나타내었다 (도 10 참조). 보다 상세히, 5 개의 다른 서열 패밀리는 추가 분석에서 제외하였다. 가장 유망한 서열 패밀리에 속하는 피노머는 최고의 친화도 및 내재화 특성을 나타내었다.
더 높은 친화도 및 개선된 내재화 특성을 갖는 Fyn SH3-유래 FGFR3 결합제를 수득하기 위해, FF2L4C3 (SEQ ID NO:101) 을 친화도 돌연변이에 대한 주형으로서 사용하였다. RT-루프 서열 "EVYGPTP" (SEQ ID NO:131) 을 일정하게 유지하였고, 무작위화 n-src-루프 레퍼토리와 조합하였다 (4 내지 6 개의 무작위화 아미노산 잔기의 스트레치를 SEQ ID NO:99 에서의 위치 (X1) ~ (X4) 에 도입하였음). 친화도 돌연변이 라이브러리 생성 과정은 무작위화 n-src-루프를 갖는 나이브 (naive) 라이브러리 ([25] 에서 기재된 "라이브러리 0") 의 클로닝에 대해 기재된 바와 본질적으로 동일하였다.
나이브 및 친화도 성숙 선택 후, 풍부한 Fyn SH3-유래 폴리펩티드를 용해물 ELISA 에 의해 FGFR3 에 대한 결합에 대하여 스크리닝하였다. Fyn SH3-유래 결합 단백질을 인코딩하는 DNA 를 박테리아 발현 벡터 pQE12 (Qiagen) 에 클로닝하여 생성 구축물이 Grabulovski et al. [26] 에서 기재된 바와 같이 C-말단 myc-헥사히스티딘 태그를 보유하게 하였다. 폴리펩티드를 96-웰 포맷으로 대장균 (E. coli) 박테리아의 세포질에서 발현시키고, 웰 당 200 μL 의 클리어된 (cleared) 용해물을 Bertschinger et al. [27] 에 기재된 바와 같이 제조하였다. 간략하게, 형질전환된 박테리아 콜로니를 한천 플레이트로부터 골라내고, 100 μg/mL 암피실린 및 0.1% (w/v) 글루코오스를 함유하는 200 μL 2 x YT 배지 중 둥근 바닥 96-웰 플레이트 (Nunc, cat. no. 163320) 에서 성장시켰다. 3 시간 동안 37℃ 에서 성장 및 1 mM IPTG (Applichem, Germany) 를 첨가하여 200 r.p.m. 에서 회전 진탕 후 단백질 발현을 유도하였다. 단백질을 회전 진탕기 (200 r.p.m., 30℃) 에서 밤새 발현시켰다. 이후, 96-웰 플레이트를 1800 g 에서 10 분 동안 원심분리하고, 상청액을 폐기하였다. 박테리아 펠렛을 BugBuster(등록 상표) + Benzonase(등록 상표) (Millipore 70750-3) 를 사용하여 용해하고, 용해물을 이후 10 분 동안 1800 x g 에서 원심분리에 의해 클리어하였다. 60 μL 용해물을 170 μL PBS 와 혼합하고, 임의의 잔류 박테리아 잔해를 제거하기 위해 0.45 μm Multiscreen 필터 플레이트 (Millipore MSHVN4510) 를 통해 여과하였다.
단일클론 박테리아 용해물을 ELISA 에 사용하였다. ELISA 를 위해, Maxisorp 플레이트를 5 μg/mL huFGFR3b-Fc, 5 μg/mL huFGFR3c-Fc 또는 5 μg/mL 폴리 IgG 로 밤새 코팅하고, 적어도 1 시간 동안 2% MPBS 로 블로킹하였다. C-말단 myc- 및 헥사히스티딘 펩티드 태그를 갖는 가용성 피노머를 함유하는 클리어된 용해물을 쥐과 단일클론 항-myc 태그 항체, 클론 9E10 (Roche Applied Science 11 667 203 001) 을 함유하는 2% MPBS 중 maxisorp 플레이트에 첨가하였다. 항-마우스 IgG-서양고추냉이 퍼옥시다아제 접합체 (Sigma-Aldrich A2554) 에 의해 9E10 을 통해 결합된 피노머를 검출하였다. BM 블루 POD 기질 (Roche) 을 첨가하여 퍼옥시다아제 활성의 검출을 수행하고, 1 M H2SO4 를 첨가하여 반응을 중단하였다.
특정 결합제의 DNA 서열을 DNA 서열분석에 의해 확인하였다.
결과
FGFR3b 및 FGFR3c 에 특이적으로 결합하는 대표적 ELISA 양성 Fyn SH3-유래 폴리펩티드의 아미노산 서열을 SEQ ID NO: 101, 103, 105, 107, 109 및 111 에 나타낸다. Fyn-SH3 유래 폴리펩티드 SEQ ID NO: 103, 105, 107 및 109 는 FF2L4C3 (SEQ ID NO:101) 의 친화도 성숙 후 수득한 분자의 대규모 풀 (pool) 로부터의 결합제의 선택이며, 그의 개선된 친화도 및 내재화 특성으로 인해 여기 제시된다 (본원에 나타낸 바와 같음).
SEQ ID NO:101 에서 유래한 80 개 초과의 피노머를 수득하고 특성화하였으며, 각각은 FGFR3b 및 FGFR3c 에 대한 특이적 결합을 입증하였고 바람직한 생물물리학적 특성, 친화도 및 내재화 특성을 입증하였다. SEQ ID NO:103, 105, 107, 109 및 111 의 아미노산 서열을 갖는 피노머는 이들 결합제를 대표하는 것이다.
실시예 5: 본 발명의 Fyn SH3-유래 폴리펩티드는 높은 친화도로 인간 FGFR3b 및 FGFR3c 에 결합함.
이 실시예는 표면 플라즈몬 공명 및 유세포 분석 실험에 의한 바람직한 Fyn SH3-유래 FGFR3-결합 폴리펩티드의 특성화를 나타낸다.
방법
a) BIAcore 에 의한 친화도 측정
BIAcore T200 기기를 사용하여 친화도를 측정하였다. CM5 시리즈 S 칩 (GE Healthcare BR-1005-30) 상의 하나의 플로우 셀을, 아민 커플링 키트 (GE Healthcare BR100633) 를 사용하여 항-myc 항체 9E10 (Roche 11 667 203 001; 코팅 밀도 6000 내지 8000 RU 범위) 으로 코팅하였다.
500 nM 의 농도의 모 피노머 FF2L4C3 (SEQ ID NO:101), 및 100 nM 농도의 SEQ ID NO:103, 105, 107, 109 및 111 을 갖는 피노머를 9E10 표면 상에서 포획한 후, 상이한 농도의 huFGFR3b-Fc, huFGFR3c-Fc 또는 cynoFGFR3c-Fc 를 주입하였다 (모 피노머 FF2L4C3 의 측정을 위해서는 0 nM, 3.9 nM, 7.8 nM, 15.6 nM, 31.25 nM, 62.5 nM, 125 nM, 250 nM 및 500 nM, SEQ ID NO: 103, 105, 107, 109 및 111 을 갖는 피노머의 측정을 위해서는 0 nM, 0.046 nM, 0.14 nM, 0.41 nM, 1.2 nM, 3.7 nM, 11.1 nM, 33.3 nM 및 100 nM). 센서그램을 기록하고, BIAevaluation 2.1 소프트웨어에서 1.1 랭뮤어 (Langmuir) 상호작용 모델을 사용하여 곡선 피팅에 의해 겉보기 반응 속도 상수를 결정하였다.
b) 유세포 분석에 의한 친화도 측정
세포 상의 huFGFR3 에 대한 피노머의 결합을, FGFR3-양성 세포로서 KMS-11 세포 (JCRB1179) 및 FGFR3-음성 대조군 세포주로서 N87 (ATCC, CRL-5822) 을 사용하여 유세포 분석에 의해 분석하였다. KMS-11 및 N87 세포 둘 모두를 RPMI1640 배지 (Invitrogen 52400-25) 에서 유지시켰다. 모든 배지에는 25 U/mL 페니실린, 25 μg/mL 스트렙토마이신 및 10% FCS 가 보충되었다. 반-부착성 KMS-11 세포를 T150 플라스크로부터 수확하기 위해, 상청액을 50 mL 팔콘 (falcon) 튜브에 제거하고, 세포를 10 ml PBS 로 세척하여, 이를 팔콘 튜브에 또한 첨가하였다. 2 ml 의 Accutase (Sigma A6964) 를 플라스크에 첨가하고, 10 분 동안 37℃ 에서 인큐베이션하였다. 10 ml 배지를 첨가하여 Accutase 를 불활성화시키고 팔콘 튜브에 첨가하여, 이를 원심분리 (250 x g, 5 분) 하여 세포를 펠렛화하였다. 세포를 FACS 완충제 (PBS + 1% FCS + 0.2% 소듐 아지드) 에 1 x 106 개 세포/mL 의 세포 농도로 재현탁하고, 96-웰 둥근 바닥 플레이트 (Nunc 163320) 에서 유세포 분석 염색을 위해 웰 당 100 μL 를 사용하였다 (1 x 105 개 세포/웰). 부착성 N87 세포에 대해 상청액 및 세척액을 폐기하고, Accutase-분리 세포를 수집 및 제조하였다.
피노머를 마우스 항-myc 항체 (클론 9E10; Roche 11667149001) 와 함께 동시 인큐베이션하여, 세포 결합 전에 myc-태깅된 피노머를 교차 연결시켰다. 피노머를 1 μM 로 희석하고 FACS 완충제 중 667 nM 9E10 항-myc 항체와 얼음 상에서 대략 10 분 동안 동시 인큐베이션하였다 (3:2 몰 비).
이 혼합물을 피노머 농도 0.06 nM 로 1/4 로 연속 희석하였다 (총 8 가지 농도). 2 차 항체 9E10 단독 (무-피노머; 667 nM 9E10), 세포 단독 (FACS 완충제 단독) 및 항-FGFR3 항체 (R&D systems; 카탈로그 번호 MAB766) 를 10 nM 농도로 포함하였다. 세포를 96-웰 플레이트에서 원심분리 (250 x g, 5 분) 하고, 상기 나타낸 샘플 내에 재현탁한 후, 얼음 상에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 원심분리하고 세척 (PBS + 0.2% 소듐 아지드) 한 후, 다시 원심분리하였다. 그런 다음, 50 μL 의 2 차 항체 항-mIgG Alexa488 (Life Technologies A21202) 을 4 μg/mL 의 농도로 세포에 첨가한 후, 암환경 하에 얼음 상에서 45 분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 원심분리하고 PBS + 0.2% 소듐 아지드로 2 회 세척한 후, FACS 완충제에 재현탁하고 FACS 분석하였다 (Millipore Guava easyCyte 8HT).
FACS 데이터 분석을 Prism 6 을 사용하여 수행하였다. 데이터를 변형하고 (X = logX), 비-선형 피트, log(아고니스트) 대 반응 - 변수 기울기 (4 개 매개변수) 를 사용하여 분석하였다.
결과
a) BIAcore 에 의한 친화도 측정
BIAcore 칩 상에서 실시간 상호작용 분석에 의해 결합 특성을 분석하여, 선택된 FGFR3-결합 폴리펩티드에 대한 다음의 해리 상수 (KD) 가 밝혀졌다:
[표 24]
FGFR3-결합 피노머의 재조합 인간 FGFR3b, 인간 FGFR3c 및 시노몰구스 FGFR3c 에 대한 결합의 겉보기 반응 속도 상수.
Figure pct00067
FGFR3b 및 FGFR3c 에 결합하는 Fyn SH3-유래 폴리펩티드 (SEQ ID NO:101, 103, 105, 107, 109 및 111) 의 측정된 겉보기 친화도 (표 24) 는, 단 1 회 라운드의 친화도 성숙 후 나노몰 이하 값이 수득되었다는 점을 고려할 때 놀랍게도 높다. 더욱이 이들 측정으로, Fyn SH3 유래 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 101, 103, 105, 107, 109 및 111) 의, FGFR3 의 인간 동형 둘 모두 (FGFR3b 및 FGFR3c) 및 시노몰구스 FGFR3c 에 대한 비슷한 결합 특성이 확인되었다 (시노몰구스 FGFR3b 에 대한 결합은 시험하지 않았음).
b) 유세포 분석에 의한 친화도 측정
FGFR3-양성 KMS-11 세포 및 FGFR3-음성 N87 세포 (음성 대조군으로서) 를 사용하여 유세포 분석에 의해 결합 특성을 분석하였다. 선택된 FGFR3-결합 폴리펩티드에 대한 하기의 EC50 값을 표 25 및 도 11 에서 나타낸 바와 같이 측정하였다.
[표 25]
Fyn SH3-유래 FGFR3-결합 폴리펩티드에 대하여 FGFR3-양성 KMS-11 세포에 대해 결정된 EC50 값.
Figure pct00068
FGFR3 를 발현하는 세포주 (도 11A, KMS-11) 에서 측정된 낮은 나노몰 범위의 EC50 (표 25) 으로, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 높은 겉보기 친화도가 확인되었으며 (표 24), 세포 표면의 자연스러운 맥락에서 FGFR3 에 대한 결합을 입증한다. FGFR3 에 결합하는 모든 Fyn SH3-유래 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 101, 103, 105, 107, 109 및 111) 는 FGFR3 을 발현하지 않는 세포주에서 비특이적 결합을 나타내지 않았다 (도 11B).
실시예 6: FGFR3 에 대해 특이적인 본 발명의 Fyn SH3-유래 폴리펩티드는 리간드 결합을 방해하지 않음.
리간드 결합 위치가 스플라이스 위치에 근접하게 위치하여 FGFR3b 또는 FGFR3c 를 발생시키므로, 동형 FGFR3b 및 FGFR3c 모두에 결합하기 위한 Fyn SH3-유래 폴리펩티드가 리간드 (예를 들어 FGF1) 결합을 방해하지 않는 경우가 바람직할 수 있다.
Fyn SH3-유래 폴리펩티드가 그의 리간드 중 하나의 존재 하에 FGFR3 에 결합하는 능력을 확인하기 위해, FGF1 의 존재 또는 부재 하에 (섬유아세포 성장 인자 1 은 FGFR3 의 주요 리간드 중 하나임) FGFR3 에 대한 피노머의 친화도가 측정되도록 BIAcore 실험을 설정하였다.
친화도 측정에 사용한 방법 (실시예 5 에서 기재된 바와 같음) 과 유사하게, 100 nM 의 농도에서의 피노머 (500 nM 의 농도에서 사용한 FF2L4C3 - SEQ ID NO:101 제외) 를 9E10 표면에서 포획한 후, 200 nM FGF1 (R&D systems 232-FA-025/CF) 의 존재 또는 부재 하에 상이한 농도의 huFGFR3c-Fc (0 nM, 11 nM, 33 nM, 100 nM) 를 주입하였다. 센서그램을 기록하고, BIAevaluation 2.1 소프트웨어를 사용하여 겉보기 반응 속도 상수를 계산하였다.
결과
용액 중 200 nM FGF1 의 존재 또는 부재와 관계없이, Fyn SH3-유래 폴리펩티드의 huFGFR3c 에 대한 결합을 불변이었으며, 이는 피노머의 FGFR3 에 대한 결합이 리간드 결합을 방해하지 않았음을 나타낸다. 표 27 은 200 nM FGF1 의 존재 또는 부재 하에 수득된 반응 속도 상수를 나타낸다.
[표 26]
Figure pct00069
그러나, 어세이 가변성으로 인해 FGF1 의 부재 하 KDapp 에 대한 값은 실시예 2 (표 24) 에서 나타낸 실험에서 수득한 값과 약간 상이하며, 이 실험은 리간드 (이 경우 FGF1) 가 리간드 결합 위치에 결합한다 해도 Fyn SH3-유래 폴리펩티드가 FGFR3 에 결합할 수 있다는 것을 보여준다. 이로부터, 여기 기재된 Fyn SH3-유래 폴리펩티드에 의해 결합된 에피토프가 FGFR3 의 불변부에 위치한다고 결론 내린다.
실시예 7: 본 발명의 Fyn SH3-유래 폴리펩티드는 FGFR3 의 도메인 D1-D2 에 결합함.
FGFR3 에 결합하는 Fyn-SH3 유래 폴리펩티드의 특이도를 ELISA 에 의해 시험하였다.
상이한 항원을 플레이트 (Maxisorp 플레이트; Nunc 439454) 상에 코팅하였다: huFGFR3b-Fc, huFGFR3c-Fc, cyFGFR3c-Fc, muFGFR3c-His, huD1-Fc, huD2-Fc, huD1-D2-Fc.
플레이트를 5 μg/mL (0.5 μg/웰) 의 100 μL 항원으로 코팅하고, 4℃ 에서 밤새 인큐베이션하였다. 웰을 PBS 로 3x 세척한 후, 200 μL 4% MPBS 로 1 시간 동안 RT 에서 블로킹하였다. 웰을 다시 세척하고, 15 μg/mL 9E10 을 함유하는 20 μL 10% MPBS 를 첨가한 후, 250 nM 의 80 μl 피노머를 첨가하였다 (200 nM 최종 피노머 농도). 웰을 45 분 동안 RT 에서 인큐베이션한 후, 세척하고 2% MPBS 중 1:1000 로 희석한 100 μL 항-마우스 IgG-HRP (Sigma A2554) 를 첨가하였다. 웰을 30 분 동안 RT 에서 인큐베이션한 후, PBS 중 0.1% Tween-20 으로 3x 세척한 다음, 3x PBS 로 세척하였다. 100 μL BM POD 블루 기질 (Roche 11 484 281 001) 을 각 웰에 첨가한 후, 50 μL 1M H2SO4 를 첨가하여 반응을 중단시켰다. Tecan M1000 기기를 사용하여 흡광도 450 nm - 650 nm 를 기록하였다.
결과
도 12 A-F 에서 나타낸 바와 같이, Fyn SH3-유래 폴리펩티드 모두는 시노몰구스 및 쥐과 FGFR3c 와 교차반응성이다. 흥미롭게도, 모든 결합제는 도메인 D1 및 D2 가 물리적으로 연결되는 경우에만 존재하는 에피토프에 대해 특이적이며 (도 12 A-F 막대 huFGFR3-D1D2 참조), 사실상 단일 도메인 D1 또는 D2 (hFGFR3-D1 또는 huFGFR3-D2) 가 ELISA 플레이트 상에 고정되는 경우 결합이 관찰되지 않는다.
실시예 8: 본 발명의 Fyn SH3-유래 폴리펩티드는 FGFR3 의 효율적 내재화를 초래함.
내재화는 여기 기재한 Fyn SH3-유래 폴리펩티드의 중심적 특성이며, 이들 결합제를 사용하여 독성 페이로드 및/또는 융합 단백질 예컨대 항체를 세포내로 전달할 기회를 제공한다.
FGFR3 에 결합하는 Fyn SH3-유래 폴리펩티드의, 표적에 결합시 내재화하는 능력을 평가하기 위해, 세포독성제의 세포내 전달을 기반으로 하는 내재화 어세이를 확립하였다.
어세이는 KMS-11 세포에서 MMAF (모노메틸 아우리스타틴 F)-접합 9E10 와 교차 연결된 항-FGFR3 피노머의 세포독성 효과를 측정한다. MMAF 는 항유사분열제 (튜불린 중합 차단) 이며 세포 내로 내재화시에만 활성이다. 따라서, 이 어세이는 피노머가 MMAF 의 내재화를 얼마나 잘 촉진시키는지를 나타낸다. 2 x 105 개 세포/mL 의 KMS-11 세포 50 μL 를 96-웰 평면 바닥 플레이트 (Corning Costar 3610) 에 시딩하여, 웰 당 10,000 개 세포를 제공하였다. 세포가 부착되도록 세포를 4 시간 동안 인큐베이션하였다 (37℃, 5% CO2). 피노머 및 9E10-MMAF 를 3:1 비로 혼합하였다. 피노머의 4x 저장액 (4 μM) 및 9E10-MMAF 의 4x 저장액 (1.33 μM) 을 RPMI 배지에서 준비하고 (섹션 5.4.1 참조), 1:1 로 혼합하였다 (40 μl + 40 μL). 그런 다음, 이 혼합물을 1/3 로 연속 희석하여, 1000 nM - 50 pM 의 농도 범위를 제공하였다. 50 μL 의 샘플을 50 μL 의 세포에 첨가하고 (상기와 같이 시딩), 5 일 동안 인큐베이션하였다 (37℃, 5% CO2). 적절한 대조군인 야생형 피노머 FynSH3, MMAF-9E10 (피노머를 갖지 않음) 및 또한 어떠한 시약도 첨가하지 않은 세포가 포함되었다. 모든 샘플을 이반복하여 준비하였다. 5 일 후, 100 μL Cell titer glo (Promega G7573) 를 각각의 웰에 첨가하고, 암환경 하에 10 분 동안 부드럽게 진탕하면서 인큐베이션하였다. 세포 생존력에 대한 판독치로서, Tecan M1000 기기를 사용하여 발광을 측정하였다. Prism 6 을 사용하여 분석을 수행하였다. 데이터를 변형하고 (X = logX), 비-선형 피트, log(억제제) 대 반응 - 변수 기울기 (4 개 매개변수) 를 사용하여 분석하였다.
결과
여기 기재된 모든 Fyn SH3-유래 FGFR3-결합 폴리펩티드는 MMAF-표지 2 차 항체 단독 (도 13A 에서 9E10) 또는 모든 3 개 실험에서 나타낸 MMAF-표지 9E10 과 조합으로의 야생형 피노머 FynSH3 (도 13 A-C 에서 FynSH3 로 표시) 으로 처리한 세포와 비교하여 (아마도 MMAF 자체의 독성으로 인해 시험한 최고 농도에서만 세포독성을 나타냄) 증가한 세포독성 (예를 들어 내재화) 을 나타낸다. 도 13 은 상이한 실험에서 수득한 세포독성 프로파일을 나타내고, 표 27 은 상이한 Fyn SH3-유래 FGFR3-결합 폴리펩티드에 대해 수득한 EC50 을 나타낸다.
[표 27]
Fyn SH3-유래 FGFR3-결합 폴리펩티드에 대해 FGFR3+ KMS-11 세포를 사용하여 내재화 어세이에서 결정된 EC50 값.
Figure pct00070
* 주의: 도 13 에서 나타낸 FF2L4C3 에 대해 3 개 실험에서 수득한 3 개 값을 나타냄.
도 13 및 표 27 에서 나타낸 데이터는 친화도 증가가 또한 보다 효율적인 내재화를 이끌어낸다는 것을 보여준다.
실시예 9: 우수한 결합 및 내재화 특성을 나타내며 상이한 패밀리에서 유래하는 대안적 Fyn-SH3 유래 폴리펩티드
SEQ ID NO:99 에서 유래한 서열 패밀리에 추가로, 놀랍게도 또한 우수한 결합 및 내재화 특성을 나타내며 SEQ ID NO:99 에서 유래한 피노머와 생산성 및 교차반응성 특성을 공유하는 (표 28 참조) 대안적 피노머, FF40L54A5 (GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ; SEQ ID NO:116) 가 식별되었다. 그의 서열이 단지 매우 불량한 내재화 특성을 나타낸 피노머에서 유래하였으므로, 피노머 FF40L54A5 는 우수한 내재화 특성을 가질 것으로 예상되지 않았다.
표 28 은 피노머 FF40L54A5 의 특성을 요약한다.
[표 28]
- 파트 1
Figure pct00071
- 파트 2
Figure pct00072
* : 실험적 가변성으로 인한 차이
- 파트 3
Figure pct00073
실시예 10 - 피노머-항체 이중특이적 결합제 (Fynomab)
하기는 FGFR3 결합 피노머의 한 구현예 및 항-CD138 단일클론 항체의 한 구현예를 포함하는 이중특이적 결합제의 비제한적 제조예를 제공한다. 본원에 개시된 피노머의 임의의 구현예는 FGFR3 및 CD138 에 특이적으로 결합하는 이중특이적 결합제가 생성되도록 본원에 개시되는 항-CD138 항체, 또는 이의 결합 부분의 임의의 구현예에 부착될 수 있다. 이 실시예에서 사용된 FGFR3 결합 피노머는 hF6 으로 지정된 인간화 항-CD138 단일클론 항체에 부착되는 FF48L66G7 ("G7", (SEQ ID NO:107)) 로 지정된다. hF6 항체는 SEQ ID NO:93 의 중쇄 가변부 및 SEQ ID NO:44 의 경쇄 가변부를 포함하는 인간화 IgG1/카파 항체이다. G7 피노머는 마우스 및 인간 FGFR3 둘 모두에 특이적으로 결합한다. G7 피노머는 또한 FGFR3b 및 FGFR3c 둘 모두에 특이적으로 결합한다. G7 피노머는 재조합 기술을 사용하여 hF6 단일클론 항체에서의 4 개 상이한 위치에서 링커 GGGGSGGGGSGGGGS 에 의해 공유 부착되었다. 위치는 중쇄 또는 경쇄 N-말단 (각각 HN 및 LN 으로 표시), 및 중쇄 또는 경쇄 C-말단 (각각 HC 및 LC 로 표시)(예를 들어, 도 14 참조) 을 포함한다. 간략하게, 중쇄의 N-말단에 융합된 G7 을 포함하는 hF6 의 발현을 위해, 링커를 인코딩하는 서열과 인-프레임인, 그리고 상기 서열의 5' 에 위치한 G7 의 발현을 유도하는 코딩 부위 및 hF6 중쇄의 발현을 유도하는 코딩 부위를 포함하는 핵산 구축물을 생성하였다. 그런 다음, hF6-HN-G7 구축물을 hF6 경쇄의 발현을 유도하는 핵산 구축물과 함께 CHO 세포에 동시-트랜스펙션하였다. IgG1/카파 이소타입의 전장 hF6 항체 및 G7 피노머를 포함하는 생성 이중특이적 결합제 (hF6-HN-G7) 를 단리하고, 세포 배양 상청액으로부터 정제하였다.
유사하게, 중쇄의 C-말단에 융합된 G7 을 포함하는 hF6 의 발현을 위해, 링커를 인코딩하는 서열과 인-프레임인, 그리고 상기 서열의 5' 에 위치한 hF6 중쇄의 발현을 유도하는 코딩 부위 및 G7 의 발현을 유도하는 코딩 부위를 포함하는 핵산 구축물을 생성하였다. 경쇄의 N-말단에 융합된 G7 을 포함하는 hF6 의 발현을 위해, 링커를 인코딩하는 서열과 인-프레임인, 그리고 상기 서열의 5' 에 위치한 G7 의 발현을 유도하는 코딩 부위 및 hF6 경쇄의 발현을 유도하는 코딩 부위를 포함하는 핵산 구축물을 생성하였다. 경쇄의 C-말단에 융합된 G7 을 포함하는 hF6 의 발현을 위해, 링커를 인코딩하는 서열과 인-프레임인, 그리고 상기 서열의 5' 에 위치한 hF6 경쇄의 발현을 유도하는 코딩 부위 및 G7 의 발현을 유도하는 코딩 부위를 포함하는 핵산 구축물을 생성하였다. 그런 다음, 표시한 구축물을 hF6 의 상응하는 중쇄 또는 경쇄의 발현을 유도하는 핵산 구축물과 함께 CHO 세포에 동시-트랜스펙션하였다. IgG1/카파 이소타입의 전장 hF6 항체 및 G7 피노머를 포함하는 생성 이중특이적 결합제 (즉, hF6-HC-G7, hF6-LC-G7 및 hF6-LN-G7) 를 단리하고, 세포 배양 상청액으로부터 정제하였다. 각각의 생성 이중특이적 결합제를, ELISA 에 의해 CD138 및 FGFR3 에 대한 결합에 대해 어세이하였고, 그 결과를 표 29 에 나타낸다.
[표 29]
Figure pct00074
* NB = 무-결합.
표 28 에서, hF6-LC-G7 로 지정된 이중특이적 구축물은 G7 피노머의 hF6 항체 경쇄의 C-말단 끝으로의 부착을 나타내고 (예를 들어, 도 14C 의 구현예 참조), hF6-LN-G7 은 G7 피노머의 hF6 항체 경쇄의 N-말단 끝으로의 부착을 나타내고 (예를 들어, 도 14D 의 구현예 참조), hF6-HC-G7 은 G7 피노머의 hF6 항체 중쇄의 C-말단 끝으로의 부착을 나타내며 (예를 들어, 도 14A 의 구현예 참조), hF6-HN-G7 은 G7 피노머의 hF6 항체 중쇄의 N-말단 끝으로의 부착을 나타낸다 (예를 들어, 도 14B 의 구현예 참조). 표 28 은 생성 이중특이적 결합제가 ELISA 에 의해 측정된 바와 같이 마우스 FGFR3c 및 인간 CD138 에 대한 특이적 결합 친화도를 유지하였음을 나타낸다.
CHO 세포 (중국 햄스터 난소 세포) 를 세포 표면 상에 인간 FGFR3c (도 16A) 또는 인간 FGFR3b (도 16B) 가 발현되도록 트랜스펙션시켰다. 그런 다음 대표적 이중특이적 결합제 hF6-HN-G7 은 FACs 분석에 의해 트랜스펙션된 CHO 세포의 세포 표면 상에서 발현된 인간 FGFR3b (도 16B) 및 인간 FGFR3c (도 16A) 둘 모두에 특이적으로 결합하는 것으로 나타났다.
표 28 및 도 16 의 대표적 결합 데이터는 이중특이적 결합제가 G7 피노머의 결합 특이도 뿐만 아니라 hF6 항-CD138 항체의 결합 특이도를 유지함을 입증한다.
실시예 11 - 피노머/항체 (Fynomab) 약물 접합체
대표적 이중특이적 결합제 hF6-S119C-HN-G7 은 hF6-S119C-HN-G7-II 로 지정된 이중특이적 결합제의 대표적 약물 접합체가 생성되도록 식 II 의 PBD 독소에 특이적으로 접합된 위치였다. hF6-S119C-HN-G7-II 는 인간 FGFR3b (도 17B) 및 인간 FGFR3c (도 17C) 를 발현하는 CHO 세포에 대한 특이적 세포독성을 입증하였으나 10000 pM 미만의 농도에서 미트랜스펙션된 CHO 세포의 특이적 사멸을 입증하지 않았다 (도 17A). 약물 접합 결합제의 높은 농도 (즉, > 10000 pM) 에서 관찰된 세포독성은 결합에 관계없이 독소 자체의 높은 농도에 의한 비-특이적 사멸로 인한 것일 가능성이 크다.
대표적 이중특이적 결합제 약물 접합체 hF6-HN-G7-II 및 hF6-LN-G7-II 는 또한 세포주 KMS-11 (고 CD138 발현 세포주), 및 OPM-2 (중간 CD138 발현) 에 대한 특이적 세포독성을 입증하였으나, ARH-77 (음성 대조군 세포주) 에 대해서는 그렇지 않았다 (예를 들어, 도 19 참조).
이중특이적 결합제 hF6-HN-G7 의 항체 부분 (즉, hF6) 은 hF6 항체 중쇄 불변부에서의 5 개 위치 (즉, S119, V282, T289, N361 및 V422) 중 하나에서 시스테인 아미노산 치환을 통합하도록 조작되어, hF6-S119C, hF6-V282C, hF6-T289C, hF6-N361C 및 hF6-V422C 로 지정된 시스테인 치환 항체를 제공한다. 상응하는 이중특이적 결합제를 각각 hF6-S119C-HN-G7, hF6-V282C-HN-G7, hF6-T289C-HN-G7, hF6-N361C-HN-G7 및 hF6-V422C-HN-G7 로 지정하였으며, 여기서 "G7" 은 hF6 의 중쇄의 N-말단에 부착되는 FF48L66G7 피노머의 존재를 나타낸다. 조작된 시스테인 잔기는 각각의 이중특이적 결합제에 대한 항-신생물제의 위치-특이적 접합 (SSC) 을 위한 접합점을 제공하였다. 모 hF6-HN-G7 의 대표적 서열을 하기에 나타낸다. 점선 밑줄은 신호화 서열을 나타내고, 단일 밑줄은 피노머 부분을 나타내고, 이중 밑줄은 hF6 항체의 중쇄가 뒤이어지는 선택적 링커 부위를 나타낸다. 독립적으로 시스테인으로 돌연변이된 각각의 아미노산을 나타낸다 (즉, A118, S119, S239, V282, T289, N361 및 V422).
SEQ ID NO:125
[화학식 34]
Figure pct00075
SEQ ID NO:125 (계속)
[화학식 35]
Figure pct00076
A118C, S119C, S239C, V282C, T289C, N361C 및 V422C 의 중쇄 불변부에서 돌연변이를 갖는 이중특이적 결합제, 즉 이중특이적 결합제 hF6-A118C-HN-G7, hF6-S119C-HN-G7, hF6-S239C-HN-G7, hF6-V282C-HN-G7, hF6-T289C-HN-G7, hF6-N361C-HN-G7 및 hF6-V422C-HN-G7 의 아미노산 서열을 SEQ ID NO:135-141 로서 제공한다.
각각의 대표적 이중특이적 결합제를 식 II 의 예시적 독성 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 에 접합시켰다 (도 18 을 또한 참조). 확률적으로 접합된 이중특이적 결합제를 변형 DHAA 환원 프로토콜을 사용하여 인-하우스 (in-house) 로 접합시켰다. 간략하게, 항체 작용제를 dPBS 중 1.1 mg 으로 희석하고, 간헐적 소용돌이시키면서 1-3 시간 동안 25℃ 내지 37℃ 에서 2x-20x 안정화 TCEP (bond breaker) 로 환원시켰다. 그런 다음, 샘플을 1 mM EDTA 와 dPBS 로 완충제 교환하여 TCEP 를 제거하고, 2.5X DHAA 를 사용하여 2.5 시간 동안 실온에서 산화시켰다. 항체를 dPBS 로 완충제 교환하여 DHAA 를 제거하고, 8X 에서 독소 II 와 함께 1.5 시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 그 후 접합된 작용제를 dPBS 로 완충제 교환하고, nanodrop 에 의해 농도를 결정하였다. 덜 엄격한 환원 조건 하에 위치 특이적 접합이 달성되었다. 위치-특이적으로 접합된 생성 약물-접합 이중특이적 결합제를 hF6-S119C-HN-G7-II, hF6-V282C-HN-G7-II, hF6-T289C-HN-G7-II, hF6-N361C-HN-G7-II 및 hF6-V422C-HN-G7-II 로 지정하였다.
'고 CD138' 발현 세포주 (KMS11), '중간 CD138' 세포주 (RT112) 및 음성 대조군 세포주 (ARH77) 를 사용하여 5-일 세포독성 어세이를 실행하였다 (N=3). 세포독성 어세이의 결과를 하기 표 및 도 20 에 나타낸다.
[표 30]
Figure pct00077
hF6-S119C-HN-G7-II, hF6-V282C-HN-G7-II 및 hF6-T289C-HN-G7-II 로 지정된 대표적 약물-접합 이중특이적 결합제를, KMS-11 세포 (고 발현 CD138 세포주), RT-112 세포, AN3CA 세포 (CD138/FGFR3 양성 세포주), HCC1806 세포 (CD138/FGFR3 양성 세포주) (예를 들어, 도 20 참조) 및 기타 세포 유형에 대해 시험관내 독성 어세이에서 시험하였다. 세포독성 결과를 하기 표에 요약한다.
[표 31]
Figure pct00078
hF6-S119C-HN-G7-II, hF6-V282C-HN-G7-II 및 hF6-T289C-HN-G7-II 로 지정된 대표적 약물-접합 이중특이적 결합제를 상이한 용량으로 생체내 이종이식 연구에서 시험하였다 (도 21). 간략하게, 면역결핍 암컷 마우스 (계통:Nu/Nu) 에게 5x106 개 An3CA 또는 HCC1806 세포를 피하 접종하였다. 디지털 캘리퍼스를 사용하여 종양을 측정하고, 식 0.5236*L*W2 에 따라 종양 부피를 결정하였다. 마우스를 무작위화하고, 종양이 평균 175 mm3 (AN3CA) 또는 195 mm3 (HCC1806) 에 도달하였을 때 표시한 이중특이적 결합제를 정맥내 투여하였다. 결과를 하기 표 32 (AN3CA) 및 표 33 (ACC1806) 에 요약한다.
[표 32]
( AN3CA 이종이식 요약 표 )
Figure pct00079
[표 33]
( HCC1806 이종이식 요약 표)
Figure pct00080
실시예 12 - 특정 대표적 서열
인간 신데칸-1 (신데칸-1) - UniProtKB - P18827
SEQ ID NO:1
Figure pct00081
마우스 신데칸-1 (신데칸-1) - UniProtKB - P18828
SEQ ID NO:126
Figure pct00082
랫트 신데칸-1 (신데칸-1) - UniProtKB - P26260
SEQ ID NO:127
Figure pct00083
Figure pct00084
히말라야 원숭이 (Macaca mulatta (Rhesus macaque)) 신데칸-1- UniProtKB - A0A1D5RIX8
SEQ ID NO:128
Figure pct00085
개 (Canis lupus familiaris (Dog)) (Canis familiaris) 신데칸-1- UniProtKB - E2RT70
SEQ ID NO:129
Figure pct00086
게잡이 원숭이 (Macaca fascicularis) (시노몰구스 원숭이) 신데칸-1
SEQ ID NO:130
Figure pct00087
인간, FGFR3, 동형 b (SEQ ID NO:97)
Figure pct00088
인간, FGFR3, 동형 c (SEQ ID NO:98)
Figure pct00089
실시예 13 - 특정 구현예
A1. (a) 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분; 및 (b) 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 에 특이적으로 결합하는 피노머를 포함하는 이중특이적 결합제.
A1.1. 구현예 A1 에 있어서, 신데칸-1 이 포유동물 신데칸-1 인, 이중특이적 결합제.
A1.2. 구현예 A1 또는 A1.1 에 있어서, 신데칸-1 이 인간 신데칸-1, 마우스 신데칸-1 및 원숭이 신데칸-1 에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
A1.3. 구현예 A1 내지 A1.2 중 어느 하나에 있어서, 이중특이적 작용제 및/또는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 인간 신데칸-1 및 마우스 신데칸-1 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A1.4. 구현예 A1 내지 A1.3 중 어느 하나에 있어서, 이중특이적 작용제 및/또는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 인간 신데칸-1 및 원숭이 신데칸-1 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A1.5. 구현예 A1 내지 A1.4 중 어느 하나에 있어서, 이중특이적 작용제 및/또는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 인간 신데칸-1, 마우스 신데칸-1 및 원숭이 신데칸-1 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A1.6. 구현예 A1.2, A1.4 또는 A1.5 에 있어서, 원숭이 신데칸-1 이 마카크 (Macaca) 속의 원숭이에서 발현되는, 이로부터 수득되는, 또는 이로부터 단리되는 신데칸-1 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A1.7. 구현예 A1.6 에 있어서, 원숭이 신데칸-1 이 게잡이 원숭이 (Macaca fascicularis) (시노몰구스 원숭이) 종의 원숭이에서 발현되는, 이로부터 수득되는, 또는 이로부터 단리되는 신데칸-1 인, 이중특이적 결합제.
A1.8. 구현예 A1.6 에 있어서, 원숭이 신데칸-1 이 SEQ ID NO:128 또는 130 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A2. 구현예 A1.2 내지 A1.8 중 어느 하나에 있어서, 이중특이적 작용제 및/또는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 50 nM 이하의 KD 로 인간 신데칸-1, 원숭이 신데칸-1 및/또는 마우스 신데칸-1 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A3. 구현예 A1 내지 A2 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 피노머에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A4. 구현예 A1 내지 A3 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 신데칸-1 의 세포외 부위에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A5. 구현예 A1 내지 A4 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 AGEGPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:94) 의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A5.1.구현예 A1 내지 A5 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이, AGEGPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:94) 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 또 다른 결합제와 결합을 위해 경쟁하는, 이중특이적 결합제.
A5.2. 구현예 A1 내지 A5.1 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이, 표 1 에서 선택된 CDR-L1, 표 2 에서 선택된 CDR-L2, 표 3 에서 선택된 CDR-L3, 표 6 에서 선택된 CDR-H1, 표 7 에서 선택된 CDR-H2 및 표 8 에서 선택된 CDR-H3 을 포함하거나 이로 이루어지는 제 2 결합제와 신데칸-1 에 대한 결합을 위해 경쟁하는, 이중특이적 결합제.
A5.3. 구현예 A5.2 에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:3 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, SEQ ID NO:18 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, SEQ ID NO:28 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3, SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A5.4.구현예 A5.2 에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, SEQ ID NO:17 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3, SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, SEQ ID NO:61 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A5.5. 구현예 A5.4 에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:16 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, SEQ ID NO:45 또는 46 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, 및 SEQ ID NO:72 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A5.6. 구현예 A5.2 에 있어서, 제 2 결합제가 인간화 경쇄 가변부 및 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A5.7. 구현예 A5.6 에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:41 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 경쇄 가변부 및 SEQ ID NO:90 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A5.8. 구현예 A5.6 에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:44 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 경쇄 및 SEQ ID NO:93 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 중쇄를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A6. 구현예 A1 내지 A5.1 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 경쇄 상보성 결정 부위 (CDR): (i) SEQ ID NO:2-15 에서 선택되는 아미노산 서열과 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1 (경쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:16-26 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2 (경쇄 CDR2), 및 (iii) SEQ ID NO:27-33 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3 (경쇄 CDR3) 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A6.1. 구현예 A1 내지 A5.1 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 경쇄 상보성 결정 부위 (CDR): (i) SEQ ID NO:2-15 에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L1 (경쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:16-26 에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L2 (경쇄 CDR2), 및 (iii) SEQ ID NO:27-33 에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L3 (경쇄 CDR3) 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A7. 구현예 A1 내지 A5.1, 및 A6 내지 A6.1 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 중쇄 상보성 결정 부위 (CDR): (i) SEQ ID NO:45-59 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H1 (중쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:60-71 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H2 (중쇄 CDR2), (iii) SEQ ID NO:72-81 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H3 (중쇄 CDR3) 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A7.1. 구현예 A1 내지 A5.1, 및 A6 내지 A6.1 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 중쇄 상보성 결정 부위 (CDR): (i) SEQ ID NO:45-59 에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H1 (중쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:60-71 에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H2 (중쇄 CDR2), (iii) SEQ ID NO:72-81 에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H3 (중쇄 CDR3) 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A8. 구현예 A6 내지 A7.1 중 어느 하나에 있어서, CDR-L3 이 SEQ ID NO:27 또는 SEQ ID NO:29 에서 선택되고; CDR-L2 가 SEQ ID NO:17 또는 SEQ ID NO:20 에서 선택되고; CDR-L1 이 SEQ ID NO:2 또는 SEQ ID NO:4 에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
A9. 구현예 A6 내지 A8 중 어느 하나에 있어서, CDR-H3 이 SEQ ID NO:73 또는 SEQ ID NO:75 에서 선택되고; CDR-H2 가 SEQ ID NO:61 또는 SEQ ID NO:63 에서 선택되고; CDR-H1 이 SEQ ID NO:47 또는 SEQ ID NO:50 에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
A10. 구현예 A1 내지 A9 중 어느 하나에 있어서, CDR-L1 이 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L2 가 SEQ ID NO:17 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L3 이 SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H1 이 SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H2 가 SEQ ID NO:61 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H3 이 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A10.1. 구현예 A10 에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 SEQ ID NO:41 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 경쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:90 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A10.2. 구현예 A10.1 에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 SEQ ID NO:44 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 경쇄, 및 SEQ ID NO:93 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 중쇄를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A11. 구현예 A1 내지 A9 중 어느 하나에 있어서, CDR-L1 이 SEQ ID NO:4 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L2 가 SEQ ID NO:20 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L3 이 SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H1 이 SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H2 가 SEQ ID NO:63 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H3 이 SEQ ID NO:75 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A12. 구현예 A1 내지 A11 중 어느 하나에 있어서, 항체가 IgG, IgD, IgE, IgA or IgM 의 불변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A13. 구현예 A1 내지 A12 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 키메라 항체 및/또는 인간화 항체인, 이중특이적 결합제.
A13.1. 구현예 A13 에 있어서, 키메라 항체가 IgG1 의 인간 불변 도메인을 포함하는, 이중특이적 결합제.
A13.2. 구현예 A13 또는 A13.1 에 있어서, 인간화 항체가 상응하는 인간 골격부와 적어도 85%, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 또는 적어도 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 하나 이상의 인간 골격부, 또는 1, 2, 3, 4, 5 개 이상의 골격부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A14. 구현예 A1 내지 A13.2 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 인간 신데칸-1 의 세포외 도메인, 원숭이 신데칸-1 의 세포외 도메인 및/또는 마우스 신데칸-1 의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A15. 구현예 A1 내지 A13 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 50 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 인간 신데칸-1, 원숭이 신데칸-1 및/또는 마우스 신데칸-1 의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A16. 구현예 A1 내지 A15 중 어느 하나에 있어서, FGFR3 이 인간 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 인, 이중특이적 결합제.
A17. 구현예 A1 내지 A16 중 어느 하나에 있어서, 인간 FGFR3 이 FGFR3 동형 3b 또는 FGFR3 동형 3c 를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A18. 구현예 A16 또는 A17 에 있어서, 피노머가 인간 FGFR3 동형 3b 및 FGFR3 동형 3c 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A19. 구현예 A1 내지 A18 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 아미노산 서열 EVMSTTA (SEQ ID NO:114) 을 포함하거나 이로 이루어지는 RT-루프 및 아미노산 서열 SQSPH (SEQ ID NO:115) 를 포함하거나 이로 이루어지는 SRC 루프를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A20. 구현예 A1 내지 A19 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 아미노산 서열 GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:113) 와 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어지며, 위치 (X7) 에서의 아미노산이 임의의 아미노산인, 이중특이적 결합제.
A20.1. 구현예 A1 내지 A19 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:113) 의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어지며, 위치 (X7) 에서의 아미노산이 임의의 아미노산인, 이중특이적 결합제.
A21. 구현예 A20 또는 A20.1 에 있어서, (X7) 이 N, R, W 및 K 에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
A22. 구현예 A1 내지 A18 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 을 포함하거나 이로 이루어지는 RT-루프를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A23. 구현예 A1 내지 A18, 또는 A22 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 아미노산 서열 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:99) 와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어지며, 아미노산 (X1), (X2), (X3), (X4), (X5) 및 (X6) 이 임의의 아미노산에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
A23.1. A23 에 있어서, 피노머가 아미노산 서열 GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:99) 를 포함하거나 이로 이루어지며, 아미노산 (X1), (X2), (X3), (X4), (X5) 및 (X6) 이 임의의 아미노산에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
A24. 구현예 A23 또는 A23.1 에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
(X1) 은 N, R 또는 K 임;
(X2) 는 S, G, K 또는 R 임;
(X3) 은 S 또는 G 임;
(X4) 는 E, Q, D, S 또는 K 임;
(X5) 는 T 또는 A 임; 및
(X6) 은 Y, W 또는 L 임.
A25. 구현예 A1 내지 A18 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 하기에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 이중특이적 결합제:
Figure pct00090
A25.1. 구현예 A1 내지 A18 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 SEQ ID NO:107 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하며, SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 12~19 에서 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100), 및 SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 37 및 38 에서 아미노산 P 및 Y 가 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A25.2. 구현예 A1 내지 A18 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하며, SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 12~19 에서 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100), 및 SEQ ID NO:107 의 아미노산 위치 32~38 에서 아미노산이 보존되고, 피노머가 FGFR3 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A25.3. 구현예 A1 내지 A18 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A25.4. 구현예 A1 내지 A25.3 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 인간 FGFR3 동형 b 및 FGFR3 동형 c 둘 모두에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A26. 구현예 A1 내지 A25.4 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 FGFR3, FGFR3b 또는 FGFR3c 의 세포외 부위에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A27. 구현예 A1 내지 A26 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 약 10-5 M 내지 약 10-15 M 의 결합 친화도 (KD) 로 FGFR3, FGFR3b, FGFR3c, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A28. 구현예 A1 내지 A27 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 10-8 M 이하의 결합 친화도 (KD) 로 FGFR3, FGFR3b, FGFR3c, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
A29. 구현예 A1 내지 A28 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 글리코실화되는, 이중특이적 결합제.
A30. 구현예 A1 내지 A29 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 링커에 의해 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A30.1. 구현예 A30 에 있어서, 링커가 펩티드 결합을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A31. 구현예 A30 또는 A30.1 에 있어서, 링커가 하나 이상의 아미노산, 5 내지 100 개의 아미노산, 5 내지 50 개의 아미노산, 5 내지 25 개의 아미노산, 5 내지 20 개의 아미노산, 또는 5 내지 10 개의 아미노산을 포함하거나 이로 이루어지는 펩티드를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A32. 구현예 A30, A30.1 또는 A31 에 있어서, 링커가 임의 치환된 C1-C50 알킬, 임의 치환된 C2-C50 알케닐, 임의 치환된 C2-C50 알키닐, 아실, 아실옥시, 알킬옥시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 알콕시, 시클로알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알콕시 카르보닐, 알콕시 카르보닐아실, 아미노카르보닐, 아미노카르보일옥시, 아지도, 페닐, 시클로알킬아실, 알킬티오, 아릴티오, 옥시술포닐, 카르복시, 티오, 술폭시드, 술폰, 술포네이트 에스테르, 티오시아노, 아미드, 아미노, 에스테르, 할로겐화 알킬, 또는 이의 조합을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A33. 구현예 A1 내지 A29 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 결합 쌍에 의해 피노머에 비-공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A34. 구현예 A1 내지 A33 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄의 N-말단 끝에 부착되는, 이중특이적 결합제.
A35.1. 구현예 A1 내지 A33 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 펩티드 결합에 의해 항체의 중쇄의 N-말단 끝에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A35.2. 구현예 A35.1 에 있어서, 피노머의 C-말단 아미노산이 펩티드 결합에 의해 항체의 중쇄의 N-말단 아미노산에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A35.3. 구현예 A35.1 에 있어서, 피노머의 C-말단 아미노산이 펩티드 결합에 의해 항체의 경쇄의 N-말단 아미노산에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A35.4. 구현예 A1 내지 A33 중 어느 하나에 있어서, 피노머가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄의 카르복시-말단 끝에 부착되는, 이중특이적 결합제.
A35.5. 구현예 A35.4 에 있어서, 피노머의 N-말단 아미노산이 펩티드 결합에 의해 항체의 중쇄의 카르복시-말단 아미노산에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A35.6. 구현예 A35.4 에 있어서, 피노머의 N-말단 아미노산이 펩티드 결합에 의해 항체의 경쇄의 카르복시-말단 아미노산에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A35.7. 구현예 A1 내지 A29 중 어느 하나에 있어서, (i) SEQ ID NO:125 의 피노머 및 중쇄 아미노산 서열, 및 (ii) SEQ ID NO:44 의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 이중특이적 결합제.
A35.8. 구현예 A1 내지 A29 중 어느 하나에 있어서, (i) SEQ ID NO:125 의 피노머 및 중쇄 아미노산 서열 (SEQ ID NO:125 의 아미노산 위치 213 에서의 세린은 시스테인으로 돌연변이됨), (ii) SEQ ID NO:44 의 경쇄 아미노산 서열, 및 (iii) 시스테인에 공유 부착된 항-신생물제를 포함하거나 이로 이루어지는 이중특이적 결합제.
A36. 구현예 A1 내지 A35.7 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제를 추가로 포함하는 이중특이적 결합제.
A37. 구현예 A35.8 또는 A36 에 있어서, 항-신생물제가 아우리스타틴, 돌라스타틴, 메이탄신, 튜불리신, 칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD), 듀오카르마이신, 독소루비신, 슈도모나스 외독소-A (PE38), 이리노테칸 및 전술한 것 중 어느 하나의 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
A38. 구현예 A35.8, A36 또는 A37 에 있어서, 항-신생물제가 이중특이적 결합제에 공유 또는 비-공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A39. 구현예 A38 에 있어서, 항-신생물제가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 부착되는, 이중특이적 결합제.
A40. 구현예 A38 에 있어서, 항-신생물제가 피노머에 부착되는, 이중특이적 결합제.
A41. 구현예 A35.8 내지 A40 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 결합 쌍에 의해 이중특이적 결합제에 비-공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A42. 구현예 A35.8 내지 A40 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 링커에의해 이중특이적 결합제에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
A43. 구현예 A35.8 내지 A42 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 또는 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF) 를 포함하는, 이중특이적 결합제.
A44. 구현예 A35.8 내지 A40, 및 A42 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 피롤로벤조디아제핀 독소 및 연결기를 포함하거나 이로 이루어지며;
피롤로벤조디아제핀 독소가 연결기에 의해 공유 연결되고 연결기가 이중특이적 결합제에 공유 연결되는, 이중특이적 결합제.
A45. 구현예 A44 에 있어서, 피롤로벤조디아제핀 독소가 화학식 I 의 구조를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제:
[화학식 36]
Figure pct00091
식 중에서,
Z1 및 Z2 는 둘 모두 N 이고;
Z3 및 Z4 는 둘 모두 C 이고;
[화학식 37]
이중 점선
Figure pct00092
은 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
n 은 1 내지 10 이고; 각각의 R3 및 R4 는 독립적으로 H, 또는 C1-4 알콕실이고; 각각의 R1 및 R2 는 독립적으로 H, C1-5 알킬, C3-6 시클로알킬, C2-5 알케닐, 및 R5 로 임의 치환된 페닐로 이루어지는 군에서 선택되고,
여기서 R5 는 -NH2, -NHR6, 및 하기 구조를 갖는 R7 로 치환된 피페라지닐로 이루어지는 군에서 선택되고:
[화학식 38]
Figure pct00093
이때 R6 은 연결기를 포함하고, R7 은 H, 또는 C1-5 알킬이고;
X1 은 널, 보호기이거나, 연결기를 포함하고; X2 는 널, 보호기이거나, 연결기를 포함하고; X1, X2, R1 및 R2 중 단 하나는 연결기를 포함하고; 각각의 Y1 및 Y2 는 독립적으로 널, OH 또는 SO3H 이고;
단:
[화학식 39]
(i) X1 이 연결기를 포함하거나 이로 이루어지는 경우,
Figure pct00094
은 N-C 이고,
(ii) X2 가 연결기를 포함하거나 이로 이루어지는 경우,
Figure pct00095
는 N-C 이고,
(iii) X1 이 보호기인 경우,
Figure pct00096
은 N-C 이고,
(iv) X2 가 보호기인 경우,
Figure pct00097
는 N-C 이고,
여기서, 널은 나타낸 모이어티가 화학식 I 의 구조에서 부재함을 나타내거나, 하나 이상의 수소의 존재, 또는 명백히 명시하지 않으면, 원하는 원자가를 완료하기 위해 하나 이상의 수소가 존재할 수 있다는 것을 나타냄.
A46. 구현예 A45 에 있어서, n 이 3, 4 또는 5 인, 이중특이적 결합제.
A47. 구현예 A45 또는 A46 에 있어서, R3 및 R4 둘 모두가 -O-CH3 인, 이중특이적 결합제.
A48. 구현예 A45 내지 A47 중 어느 하나에 있어서, R1 및 R2 둘 모두가 메틸인, 이중특이적 결합제.
A49. 구현예 A45 내지 A47 중 어느 하나에 있어서, R1 및 R2 둘 모두가 -CH=CH-CH3 인, 이중특이적 결합제
A50. 구현예 A45 내지 A47 중 어느 하나에 있어서, R2 가 시클로프로필인, 이중특이적 결합제.
A51. 구현예 A45 내지 A47 중 어느 하나에 있어서, R2 가 4-메틸피페라진-1-일로 치환된 페닐인, 이중특이적 결합제.
A52. 구현예 A50 또는 A51 에 있어서, R1 이 R5 로 임의 치환된 페닐이고, R5 가 -NHR6 이고, R6 이 연결기를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
A53. 구현예 A45 내지 A47 및 A50 내지 A52 중 어느 하나에 있어서, X1 이 널이고, Y1 이 널이고,
[화학식 40]
Figure pct00098
이 N=C 이고, X2 가 널이고, Y2 가 널이며,
Figure pct00099
가 N=C 인, 이중특이적 결합제.
A54. 구현예 A45 내지 A51 중 어느 하나에 있어서, X1 이 연결기를 포함하거나 이로 이루어지고, Y1 이 OH 이고,
[화학식 41]
Figure pct00100
가 N=C 이고, X2 가 널이며, Y2 가 널인, 이중특이적 결합제.
A55. 구현예 A45 내지 A51 중 어느 하나에 있어서, X1 이 연결기를 포함하거나 이로 이루어지고, Y1 이 OH 이고,
[화학식 42]
Figure pct00101
가 N-C 이고, X2 가 보호기이며, Y2 가 OH 인, 이중특이적 결합제.
A56. 구현예 A44 내지 A55 중 어느 하나에 있어서, 연결기가 카르바메이트 기에 의해 피롤로벤조디아제핀 독소에 부착되는, 이중특이적 결합제.
A57. 구현예 A44 내지 A55 중 어느 하나에 있어서, 연결기가 아미드 기에 의해 피롤로벤조디아제핀 독소에 부착되는, 이중특이적 결합제.
A58. 구현예 A44 내지 A57 중 어느 하나에 있어서, 연결기가 화학식 A 의 구조를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제:
[화학식 43]
Figure pct00102
식 중에서,
별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고;
물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고;
m 은 1 내지 20 이고;
q 는 0 내지 10 이고;
E 는 연계기임.
A59. 구현예 A58 에 있어서, m 이 4 또는 8 인, 이중특이적 결합제.
A60. 구현예 A58 또는 A59 에 있어서, q 가 0, 1 또는 2 인, 이중특이적 결합제.
A61. 구현예 A58 에 있어서, m 이 8 이고, q 가 2 인, 이중특이적 결합제.
A62. 구현예 A44 내지 A57 중 어느 하나에 있어서, 연결기가 화학식 B 의 구조를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제:
[화학식 44]
Figure pct00103
식 중에서,
별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고;
물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고;
E 는 연계기이고;
v 는 0 내지 10 이고;
u 는 0 또는 1 이고; 여기서 u 가 1 인 경우, t 는 1 내지 10 임.
A63. 구현예 A62 에 있어서, v 가 1 인, 이중특이적 결합제.
A64. 구현예 A62 또는 A63 에 있어서, u 가 1 이고, t 가 8 인, 이중특이적 결합제.
A65. 구현예 A62 에 있어서, u 가 0 이고, v 가 4 인, 이중특이적 결합제.
A66. 구현예 A58 내지 A65 중 어느 하나에 있어서, 결합제가 결합제의 시스테인 티올 잔기와 E 사이에 형성된 티오에테르 결합에 의해 E 에 연계되는, 이중특이적 결합제.
A67. 구현예 A58 내지 A66 중 어느 하나에 있어서, E 가 화학식 C 의 구조를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제:
[화학식 45]
Figure pct00104
식 중에서,
물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고, 이중 별표는 연결기에 대한 부착점을 나타냄.
A68. 구현예 A45 내지 A67 중 어느 하나에 있어서, 보호기가 하기 구조 (D) 를 갖는, 이중특이적 결합제:
[화학식 46]
Figure pct00105
식 중에서,
별표가 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고;
w 가 1 내지 5 임.
A69. 구현예 A68 에 있어서, w 가 2 인, 이중특이적 결합제.
A70. 구현예 A45 내지 A69 중 어느 하나에 있어서, 보호기가 절단가능한 보호기인, 이중특이적 결합제.
A71. 구현예 A44 에 있어서, 항-신생물제가 하기로 이루어지는 군에서 선택되는 구조를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제:
[화학식 47]
Figure pct00106
식 중에서, m 은 8 임;
[화학식 48]
Figure pct00107
식 중에서, m 은 8 이고, p 는 3 이고, X2 는 보호기임;
[화학식 49]
Figure pct00108
식 중에서, m 은 8 임;
[화학식 50]
Figure pct00109
식 중에서, t 는 8 이고, v 는 1 임; 및
[화학식 51]
Figure pct00110
식 중에서, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타냄.
A72. 구현예 A71 에 있어서, X2 의 보호기가 하기 구조 (D) 를 갖는, 이중특이적 결합제:
[화학식 52]
Figure pct00111
식 중에서, 별표는 항-신생물제 또는 PBD 독소에 대한 부착점을 나타내고; w 는 1 내지 5 임.
A73. 구현예 A44 내지 A72 중 어느 하나에 있어서, 결합제의 적어도 하나의 아미노산이 시스테인으로 돌연변이되고, 시스테인이 티올 에테르 결합에 의해 연결기에 공유 연결되는, 이중특이적 결합제.
A73.1. 구현예 A73 에 있어서, 항체가 IgG1 또는 IgG2 의 인간 중쇄 불변부를 포함하고, 항체의 중쇄 불변부의 위치 119 에서의 세린이 시스테인으로 돌연변이되며, 시스테인이 티올 에테르 결합에 의해 연결기에 공유 연결되는, 이중특이적 결합제.
A73.2. 구현예 A44 내지 A72 중 어느 하나에 있어서, 결합제의 적어도 하나의 아미노산이 리신으로 돌연변이되고, 리신의 자유 아미노 기가 연결기에 공유 연결되는, 이중특이적 결합제.
A74. 구현예 A44 또는 A73.2 에 있어서, 항-신생물제가 화학식 (II) 의 구조를 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제:
[화학식 53]
Figure pct00112
식 중에서,
m 은 8 이고, 물결선은 결합제의 티올 기에 대한 부착점을 나타냄.
A75. 구현예 A1 내지 A74 중 어느 하나의 이중특이적 결합제 및 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제, 첨가제 또는 담체를 포함하는 약학 조성물.
A76. 구현예 A75 에 있어서, 약학 조성물이 멸균, 동결건조된 분말로서 제형화되는, 약학 조성물.
A77. 구현예 A75 또는 A76 에 있어서, 약학 조성물이 포유류에 대한 정맥내 투여용으로 제형화되는, 약학 조성물.
A77.1. 구현예 A75 내지 A77 중 어느 하나에 있어서, 신생물의 치료에 사용하기 위한, 약학 조성물.
A77.2. 구현예 A77.1 에 있어서, 신생물이 신데칸-1 을 발현하는 신생 세포 또는 암 세포를 포함하는, 약학 조성물.
A77.3. 구현예 A77.1 내지 A77.2 중 어느 하나에 있어서, 신생물이 암종, 육종, 신경계 신생물, 림프종, 골수종, 백혈병, 흑색종, 중피종, 고형 또는 연조직 종양 및 2차 암으로 이루어지는 군에서 선택되는, 약학 조성물.
A77.4. 구현예 A77.1 내지 A77.3 중 어느 하나에 있어서, 신생물이 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 췌장암, 식도암, 간암, 간세포암, 하인두암, 폐암, 선암, 난소암 및 신장암으로 이루어지는 군에서 선택되는, 약학 조성물.
A77.5. 구현예 A77.1 내지 A77.3 중 어느 하나에 있어서, 신생물이 췌장 선암, 췌장 신경내분비암, 결장직장 선암, 소장 악성 종양, 담관암종, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 갑상선 암종, 식도 또는 식도위 접합부 (EGJ) 암, 위 선암, 간 간세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 여성 생식관 악성 종양, 유방암종, 삼중 음성 유방암, 폐소세포 암종, 상피성 난소 암종, 후복막 또는 복막 육종, 전립선 선암, 신경내분비 종양, 위장 간질 종양, 교모세포종 및 비-상피성 난소암으로 이루어지는 군에서 선택되는, 약학 조성물.
A77.6. 구현예 A77.1 내지 A77.3 중 어느 하나에 있어서, 신생물이 다발성 골수종, 난소 암종, 자궁경부암, 자궁내막암, 갑상선암, 고환암, 신장 암종, 담낭암, 이행 세포 방광 암종, 위암, 전립선암, 전립선 선암, 유방암, 폐암, 결장암종, 호지킨 및 비-호지킨 림프종 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL), B-세포 악성 종양, B-세포 급성 림프모구성 백혈병 (B-ALL), 급성 골수모구 백혈병 (AML), 고형 조직 육종, 결장암종, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 폐 암종, 결장직장암종, 간암종, 췌장암, 뇌암 (예를 들어, 신경아세포종 또는 뇌수막종), 피부암 (예를 들어, 흑색종, 기저 세포 암종 또는 편평 세포 암종) 및 두경부 암종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 약학 조성물.
A78. 하기 단계를 포함하는, 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체의 치료 방법:
a) 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 제공하는 단계; 및
b) 치료적 유효량의 구현예 A1 내지 A74 중 어느 하나의 이중특이적 결합제, 또는 구현예 A75 내지 A77 중 어느 하나의 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 단계.
A79. 구현예 A78 에 있어서, 투여 후에, 이중특이적 결합제가 암의 성장, 생존력 또는 전이를 차단, 억제, 개선, 폐지 또는 진압하는, 방법.
A80. 구현예 A78 내지 A79 중 어느 하나에 있어서, 투여 후에, 이중특이적 결합제가 암의 사멸, 괴사 또는 세포 자멸사를 유도하는, 방법.
A81. 구현예 A78 내지 A80 중 어느 하나에 있어서, 신생물이 암종, 육종, 신경계 신생물, 림프종, 골수종, 백혈병, 흑색종, 중피종, 고형 또는 연조직 종양, 또는 2차 암을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
A82. 구현예 A81 에 있어서, 신생물이 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 췌장암, 식도암, 간암, 간세포암, 하인두암, 폐암, 선암, 난소암 또는 신장암을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
A83. 구현예 A81 또는 A82 에 있어서, 신생물이 췌장 선암, 췌장 신경내분비암, 결장직장 선암, 소장 악성 종양, 담관암종, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 갑상선 암종, 식도 또는 식도위 접합부 (EGJ) 암, 위 선암, 간 간세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 여성 생식관 악성 종양, 유방암종, 삼중 음성 유방암, 폐소세포 암종, 상피성 난소 암종, 후복막 또는 복막 육종, 전립선 선암, 신경내분비 종양, 위장 간질 종양, 교모세포종 또는 비-상피성 난소암을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
A84. 구현예 A81 에 있어서, 신생물이 다발성 골수종, 난소 암종, 자궁경부암, 자궁내막암, 갑상선암, 고환암, 신장 암종, 담낭암종, 이행 세포 방광 암종, 위암, 전립선암, 전립선 선암, 유방암, 폐암, 결장암종, 호지킨 및 비-호지킨 림프종 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL), B-세포 악성 종양, B-세포 급성 림프모구성 백혈병 (B-ALL), 급성 골수모구 백혈병 (AML), 고형 조직 육종, 결장암종, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 폐 암종, 결장직장암종, 간암종, 췌장암, 뇌암 (예를 들어, 신경아세포종 또는 뇌수막종), 피부암 (예를 들어, 흑색종, 기저 세포 암종 또는 편평 세포 암종) 및 두경부 암종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
A85. 구현예 A78 내지 A84 중 어느 하나에 있어서, 대상체에게 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
A86. 구현예 A78 내지 A85 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인, 방법.
A87. 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한, 구현예 A1 내지 A74 중 어느 하나의 이중특이적 결합제, 또는 구현예 A75 내지 A77 중 어느 하나의 약학 조성물.
A88. 구현예 A78 내지 A87 중 어느 하나에 있어서, 신생물이 신데칸-1 또는 FGFR3 을 발현하는 신생 세포 또는 암 세포를 포함하는, 방법 또는 용도.
A89. 구현예 A78 내지 A87 중 어느 하나에 있어서, FGFR3 이 인간 FGFR3 인 방법 또는 용도.
A90. 구현예 A1 내지 A89 중 어느 하나에 있어서, 이중특이적 작용제가 세포 표면 상에서 발현되는 신데칸-1 에 결합시 및/또는 세포 표면 상에서 발현되는 FGFR3 에 결합시 세포로 내재화되는, 이중특이적 결합제.
A91. 구현예 A1 내지 A90 중 어느 하나에 있어서, (i) SEQ ID NO:125 의 중쇄 아미노산 서열 및 피노머, 및 (ii) SEQ ID NO:44 의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 이중특이적 결합제.
A92. 구현예 A1 내지 A90 중 어느 하나에 있어서, (i) SEQ ID NO:125 의 피노머 및 중쇄 아미노산 서열 (SEQ ID NO:125 의 아미노산 위치 213 에서의 세린이 시스테인으로 돌연변이됨) (ii) SEQ ID NO:44 의 경쇄 아미노산 서열 (피롤로벤조디아제핀 독소가 시스테인의 티올 기에 공유 부착됨) 을 포함하는 이중특이적 결합제.
B0. (a) 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분; 및 (b) 항-신생물제를 포함하는 결합제.
B1. 구현예 B0 에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 항-신생물제에 공유 또는 비-공유 부착되는, 결합제.
B2. 구현예 B0 또는 B1 에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 신데칸-1 의 세포외 부위에 특이적으로 결합하는, 결합제.
B3. 구현예 B0 내지 B2 중 어느 하나에 있어서, 신데칸-1 이 포유동물 신데칸-1 인, 결합제.
B4. 구현예 B0 내지 B3 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 AGEGPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:94) 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는, 결합제.
B5. 구현예 B0 내지 B4 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 경쇄 상보성 결정 부위 (CDR) 를 포함하는, 결합제: (i) SEQ ID NO:2-15 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L1 (경쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:16-26 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L2 (경쇄 CDR2), 및 (iii) SEQ ID NO:27-33 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L3 (경쇄 CDR3).
B6. 구현예 B5 에 있어서, CDR-L1 이 SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:4 에서 선택되고; CDR-L2 가 SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:20 에서 선택되고; CDR-L3 이 SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:29 에서 선택되는, 결합제.
B7. 구현예 B0 내지 B6 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 중쇄 상보성 결정 부위 (CDR) 를 포함하는, 결합제: (i) SEQ ID NO:45-59 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H1 (중쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:60-71 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H2 (중쇄 CDR2), 및 (iii) SEQ ID NO:72-81 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성 또는 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H3 (중쇄 CDR3).
B8. 구현예 B0 내지 B7 중 어느 하나에 있어서, CDR-H3 이 SEQ ID NO:73 및 SEQ ID NO:75 에서 선택되고; CDR-H2 가 SEQ ID NO:61 및 SEQ ID NO:63 에서 선택되고; CDR-H1 이 SEQ ID NO:47 및 SEQ ID NO:50 에서 선택되는, 결합제.
B9. 구현예 B0 내지 B8 중 어느 하나에 있어서, CDR-L1 이 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L2 가 SEQ ID NO:17 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L3 이 SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H1 이 SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H2 는 SEQ ID NO:61 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H3 이 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 결합제.
B10. 구현예 B0 내지 B8 중 어느 하나에 있어서, CDR-L1 이 SEQ ID NO:4 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L2 가 SEQ ID NO:20 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-L3 이 SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H1 이 SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H2 가 SEQ ID NO:63 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H3 이 SEQ ID NO:75 의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 결합제.
B11. 구현예 B0 내지 B10 중 어느 하나에 있어서, 항체가 IgG, IgD, IgE, IgA 또는 IgM 의 불변부를 포함하는, 결합제.
B12. 구현예 B0 내지 B11 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 인간화되는, 결합제.
B13. 구현예 B0 내지 B12 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 50 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 인간 신데칸-1 에 특이적으로 결합하는, 결합제.
B14. 구현예 B0 내지 B13 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 링커에 의해 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 공유 부착되는, 결합제.
B15. 구현예 B14 에 있어서, 링커가 하나 이상의 아미노산, 5 내지 100 개의 아미노산, 5 내지 50 개의 아미노산, 5 내지 25 개의 아미노산, 5 내지 20 개의 아미노산, 또는 5 내지 10 개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 포함하거나 이로 이루어지는, 결합제.
B16. 구현예 B14 에 있어서, 링커가 임의 치환된 C1-C50 알킬, 임의 치환된 C2-C50 알케닐, 임의 치환된 C2-C50 알키닐, 아실, 아실옥시, 알킬옥시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 알콕시, 시클로알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알콕시 카르보닐, 알콕시 카르보닐아실, 아미노카르보닐, 아미노카르보일옥시, 아지도, 페닐, 시클로알킬아실, 알킬티오, 아릴티오, 옥시술포닐, 카르복시, 티오, 술폭시드, 술폰, 술포네이트 에스테르, 티오시아노, 아미드, 아미노, 에스테르, 할로겐화 알킬, 또는 이의 조합을 포함하는, 결합제.
B17. 구현예 B0 내지 B16 중 어느 하나에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 결합 쌍에 의해 항-신생물제에 비-공유 부착되는, 결합제.
B18. 구현예 B0 내지 B17 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 끝에 부착되는, 결합제.
B19. 구현예 B0 내지 B18 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄의 카르복시-말단 끝에 부착되는, 결합제.
B20. 구현예 B0 내지 B19 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 아우리스타틴, 돌라스타틴, 메이탄신, 튜불리신, 칼리케아미신, 듀오카르마이신, 독소루비신, 슈도모나스 외독소-A (PE38), 이리노테칸 및 전술한 것 중 어느 하나의 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는, 결합제.
B21. 구현예 B0 내지 B20 중 어느 하나에 있어서, 항-신생물제가 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 또는 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF) 를 포함하는, 결합제.
본원에 인용된 각각의 특허, 특허 출원, 공개물 또는 임의의 기타 참조 또는 문헌의 전체가 참조로 포함된다. 상충 (conflict) 이 있는 경우, 정의를 포함하는 명세서가 지배할 것이다.
임의의 특허, 특허 출원, 공개물 또는 임의의 기타 문헌의 인용은 임의의 전술한 것이 선행 기술과 관련이 있음을 인정하는 것이 아니며, 이러한 공개물 또는 문헌의 내용 또는 일자에 관한 임의의 인정을 구성하지도 않는다.
다르게 정의하지 않는 한, 본원에서 사용한 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서의 통상의 지식을 갖는 숙련자 중 하나에 의해 흔히 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 본원에 기재된다.
본원에 개시된 모든 특성은 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 명세서에 개시된 각각의 특성은 동일, 동등 또는 유사한 목적을 제공하는 대안적인 특성에 의해 대체될 수 있다. 따라서, 다르게 명백히 언급하지 않는 한, 개시된 특성 (예를 들어, 항체) 은 동등하거나 유사한 특성의 종류의 예이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 모든 수치 또는 수 범위는, 맥락에서 다르게 명백히 나타내지 않는 한, 이러한 범위 내의 정수 및 범위 내의 값 또는 정수의 분수를 포함한다. 또한, 값의 목록이 본원에 기재되는 경우 (예를 들어, 약 50%, 60%, 70%, 80%, 85% 또는 86%), 목록은 모든 중간값 및 이의 분수 값을 포함한다 (예를 들어, 54%, 85.4%). 따라서 실례로, 80% 이상 동일성에 대한 언급은 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% 등 뿐만 아니라 81.1%, 81.2%, 81.3%, 81.4%, 81.5% 등, 82.1%, 82.2%, 82.3%, 82.4%, 82.5% 등을 포함한다.
이상 (초과) 또는 미만의 정수에 대한 언급은 각각 언급 수 초과 또는 미만의 임의의 수를 포함한다. 따라서 예를 들어, 100 미만에 대한 언급은 99, 98, 97 등에서 숫자 1 까지를 포함하고; 10 미만에 대한 언급은 9, 8, 7 등에서 숫자 1 까지를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 모든 수치 또는 범위는, 맥락에서 다르게 명백히 나타내지 않는 한, 이러한 범위 내의 값 및 정수의 분수, 및 이러한 범위 내의 정수의 분수를 포함한다. 따라서 실례로, 1-10 과 같은 수 범위에 대한 언급은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 뿐만 아니라 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5 등을 포함한다. 따라서 1-50 의 범위에 대한 언급은 50 이하, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 등 뿐만 아니라 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5 등, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5 등을 포함한다.
연속 범위에 대한 언급은 연속물 내의 상이한 범위의 경계 값을 조합하는 범위를 포함한다. 따라서 실례로, 예를 들어 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-75, 75-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-400, 400-500, 500-750, 750-1,000, 1,000-1,500, 1,500-2,000, 2,000-2,500, 2,500-3,000, 3,000-3,500, 3,500-4,000, 4,000-4,500, 4,500-5,000, 5,500-6,000, 6,000-7,000, 7,000-8,000, 또는 8,000-9,000 의 연속 범위에 대한 언급은 10-50, 50-100, 100-1,000, 1,000-3,000, 2,000-4,000 등의 범위를 포함한다.
기술의 기본적 측면에서 벗어나지 않고, 전술한 것에 대해 변형을 가할 수 있다. 기술이 하나 이상의 특정 구현예에 관련하여 상당히 상세하게 기재되었음에도 불구하고, 당업자는 이 출원에 구체적으로 개시된 구현예에 변화가 가해질 수 있으나 이러한 변형 및 개선이 기술의 범주 및 취지 내에 있다는 것을 인식할 것이다.
발명은 수많은 구현예 및 측면을 기재하기 위해 긍정적인 언어를 사용하여 본원에 일반적으로 개시된다. 발명은 또한 물질 또는 재료, 방법 단계 및 조건, 프로토콜 또는 절차와 같은 특정 주제가 전부 또는 부분적으로 배제되는 구현예를 구체적으로 포함한다. 예를 들어, 발명의 특정 구현예 또는 측면에서, 재료 및/또는 방법 단계가 배제된다. 따라서, 비록 발명이 본원에서 본 발명이 포함하지 않는 용어로 일반적으로 표현되지 않더라도, 본 발명에서 명백하게 배제되지 않는 측면이 본원에 개시된다.
본원에 예시적으로 기재된 기술은 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소(들) 의 부재 하에 적합하게 실행될 수 있다. 따라서 예를 들어, 본원에서 각각의 경우 용어 "포함하는", "~로 본질적으로 이루어지는" 및 "~로 이루어지는" 중 임의의 것은 다른 두 단어 중 어느 하나로 대체될 수 있다. 이용된 용어 및 표현은 서술 용어로서 제한 없이 사용되고, 이러한 용어 및 표현의 사용은 나타내고 기재한 특성의 임의의 등가물 또는 이의 일부를 배제하지 않으며, 청구된 기술의 범주 내에서 다양한 변형이 가능하다. 단수형 표현은, 문맥상으로 요소 중 하나 또는 요소 중 하나 이상이 명백하게 기재되지 않는 한, 그것이 수식하는 요소 중 하나 또는 복수의 요소를 지칭할 수 있다 (예를 들어, "시약" 은 하나 이상의 시약을 의미할 수 있음). 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "약" 은 기본적 매개변수의 10% 내의 값을 지칭하고 (즉, ±10%), 값의 문자열 시작시 용어 "약" 의 사용은 각각의 값을 수식한다 (즉, "약 1, 2 및 3" 은 약 1, 약 2 및 약 3 을 지칭함). 예를 들어, "약 100 그램" 의 중량은 90 그램 내지 110 그램의 중량을 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "실질적으로" 는 "적어도 95%", "적어도 96%", "적어도 97%", "적어도 98%" 또는 "적어도 99%" 를 의미하는 값 수식어를 지칭하며 100% 를 포함할 수 있다. 예를 들어, X 가 실질적으로 없는 조성물은 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 X 를 포함할 수 있고/있거나 X 는 조성물에서 부재하거나 검출가능하지 않을 수 있다.
따라서, 본 기술이 대표적 구현예 및 선택적 특성에 의해 구체적으로 개시되었으나, 본원에 개시된 컨셉의 변형 및 변화가 당업자에 의해 재분류될 수 있으며 이러한 변형 및 변화가 이 기술의 범주 내에 있는 것으로 간주된다는 것이 이해되어야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> MITSUBISHI TANABE PHARMA CORPORATION <120> BI-SPECIFIC BINDING AGENTS TARGETING SYNDECAN-1 AND FIBROBLAST GROWTH FACTOR RECEPTOR <130> 675162 <150> US 62/740,337 <151> 2018-10-02 <160> 141 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 310 <212> PRT <213> Homo sapience <400> 1 Met Arg Arg Ala Ala Leu Trp Leu Trp Leu Cys Ala Leu Ala Leu Ser 1 5 10 15 Leu Gln Pro Ala Leu Pro Gln Ile Val Ala Thr Asn Leu Pro Pro Glu 20 25 30 Asp Gln Asp Gly Ser Gly Asp Asp Ser Asp Asn Phe Ser Gly Ser Gly 35 40 45 Ala Gly Ala Leu Gln Asp Ile Thr Leu Ser Gln Gln Thr Pro Ser Thr 50 55 60 Trp Lys Asp Thr Gln Leu Leu Thr Ala Ile Pro Thr Ser Pro Glu Pro 65 70 75 80 Thr Gly Leu Glu Ala Thr Ala Ala Ser Thr Ser Thr Leu Pro Ala Gly 85 90 95 Glu Gly Pro Lys Glu Gly Glu Ala Val Val Leu Pro Glu Val Glu Pro 100 105 110 Gly Leu Thr Ala Arg Glu Gln Glu Ala Thr Pro Arg Pro Arg Glu Thr 115 120 125 Thr Gln Leu Pro Thr Thr His Leu Ala Ser Thr Thr Thr Ala Thr Thr 130 135 140 Ala Gln Glu Pro Ala Thr Ser His Pro 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Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro 100 105 110 Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 115 120 125 Ser Tyr Tyr Leu Tyr Trp Val Lys Lys Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp 130 135 140 Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Gly Thr Asn Ile Asn Glu 145 150 155 160 Lys Phe Leu Ser Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr 165 170 175 Ala Tyr Leu Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr 180 185 190 Tyr Cys Thr Arg Ser Leu Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 195 200 205 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 210 215 220 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 225 230 235 240 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 245 250 255 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 260 265 270 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 275 280 285 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 290 295 300 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 305 310 315 320 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 325 330 335 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 340 345 350 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 355 360 365 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 370 375 380 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 385 390 395 400 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 405 410 415 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 420 425 430 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 435 440 445 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 450 455 460 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 465 470 475 480 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 485 490 495 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 500 505 510 Gln Gly Asn Cys Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 515 520 525 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 530 535 540

Claims (147)

  1. (a) 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분; 및 (b) 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 에 특이적으로 결합하는 피노머를 포함하는 이중특이적 결합제로서, 피노머가 (i) GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:99) 또는 (ii) GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ (SEQ ID NO:113) 의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 아미노산 (X1), (X2), (X3), (X4), (X5), (X6) 및 (X7) 이 임의의 아미노산에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
  2. 제 1 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 피노머에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 신데칸-1 의 세포외 부위에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 AGEGPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:94) 의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 AGEGPKEGEAVVLP (SEQ ID NO:94) 의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 또 다른 결합제와 결합에 대해 경쟁하는, 이중특이적 결합제.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 경쇄 상보성 결정 부위 (CDR) 를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    (i) SEQ ID NO:2-15 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1 (경쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:16-26 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2 (경쇄 CDR2); 및 (iii) SEQ ID NO:27-33 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3 (경쇄 CDR3).
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 하기 중쇄 상보성 결정 부위 (CDR) 를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    (i) SEQ ID NO:45-59 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1 (중쇄 CDR1); (ii) SEQ ID NO:60-71 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2 (중쇄 CDR2); 및 (iii) SEQ ID NO:72-81 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3 (중쇄 CDR3).
  8. 제 7 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:3 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:18 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:28 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  9. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:17 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:61 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  10. 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, CDR-L2 가 SEQ ID NO:16 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H1 이 SEQ ID NO:46 또는 SEQ ID NO:45 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDR-H3 이 SEQ ID NO:72 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
  11. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:16 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:45 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:72 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  12. 제 7 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 인간화되는, 이중특이적 결합제.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 SEQ ID NO:41, 42 및 43 으로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 인간화 경쇄 가변부 및/또는 SEQ ID NO:89, 90, 91 및 92 로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 SEQ ID NO:41 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 경쇄 가변부 및/또는 SEQ ID NO:90 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  15. 제 14 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 SEQ ID NO:44 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 경쇄 및/또는 SEQ ID NO:93 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 중쇄를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  16. 제 7 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:5 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:21 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:30 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:64 또는 62 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:75 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  17. 제 7 항 또는 제 16 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:4 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:20 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:63 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:75 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  18. 제 7 항, 제 16 항 및 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    CDR-L2 는 SEQ ID NO:19 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고; CDR-H1 은 SEQ ID NO:48 또는 49 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고; CDR-H3 은 SEQ ID NO:74 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  19. 제 7 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:7 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:22 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:30 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:64 또는 62 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:76 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  20. 제 7 항 또는 제 19 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    CDR-L1 은 SEQ ID NO:6 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    CDR-L3 은 SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    CDR-H1 은 SEQ ID NO:51 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    CDR-H2 는 SEQ ID NO:63 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  21. 제 7 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:9 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:23 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:31 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:53 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:66 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:77 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  22. 제 7 항 또는 제 21 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:8 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:23 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:31 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:53 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:65 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:77 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  23. 제 7 항, 제 21 항 또는 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, CDR-H1 이 SEQ ID NO:52 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
  24. 제 7 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:11 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:24 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:30 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:64 또는 62 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:79 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  25. 제 7 항 또는 제 24 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:10 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:24 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:29 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:50 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:67 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:79 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  26. 제 7 항, 제 24 항 또는 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    CDR-H1 은 SEQ ID NO:54 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    CDR-H3 은 SEQ ID NO:78 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  27. 제 7 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:13 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:25 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:32 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:56 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:69 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:80 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  28. 제 7 항 또는 제 27 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:13 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:25 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:32 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:56 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:68 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:80 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  29. 제 7 항, 제 27 항 또는 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서, CDR-H1 이 SEQ ID NO:55 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
  30. 제 7 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:15 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:26 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:33 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:57 또는 59 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:70 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:81 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  31. 제 7 항 또는 제 30 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:14 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:26 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:33 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:59 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:71 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:81 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  32. 제 7 항, 제 30 항 또는 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서, CDR-H1 이 SEQ ID NO:58 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 이중특이적 결합제.
  33. 제 1 항 내지 제 7 항 및 제 16 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 인간화 경쇄 가변부 및/또는 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  34. 제 1 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 경쇄 불변부 및/또는 인간 중쇄 불변부를 포함하는 키메라 항체인, 이중특이적 결합제.
  35. 제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 50 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 인간 신데칸-1 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  36. 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR3 이 FGFR3 동형 3b 또는 FGFR3 동형 3c 인, 이중특이적 결합제.
  37. 제 36 항에 있어서, 피노머가 인간 FGFR3 동형 3b 및 FGFR3 동형 3c 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  38. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 SEQ ID NO:99 의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 동일성 결정은 위치 (X1) ~ (X6) 에서의 아미노산은 배제하고, 단, SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 12~19 에서의 아미노산 서열 EVYGPTPM (SEQ ID NO:100) 이 보존되며 SEQ ID NO:99 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 P 및 Y 가 보존되는, 이중특이적 결합제.
  39. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 SEQ ID NO:113 의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 동일성 결정이 위치 (X7) 에서의 아미노산은 배제하고, 단, SEQ ID NO:113 의 아미노산 위치 12~18 에서의 아미노산 서열 EVMSTTA (SEQ ID NO:114) 가 보존되며 SEQ ID NO:113 의 아미노산 위치 37 및 38 에서의 아미노산 Q 및 Y 가 보존되는, 이중특이적 결합제.
  40. 제 1 항 내지 제 37 항 및 제 39 항 중 어느 한 항에 있어서, (X7) 이 Y, W 또는 L 인, 이중특이적 결합제.
  41. 제 40 항에 있어서, (X7) 이 W 또는 L 인, 이중특이적 결합제.
  42. 제 38 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (X1) 은 N, R 또는 K 임;
    (X2) 는 S, G, K 또는 R 임;
    (X3) 은 S 또는 G 임;
    (X4) 는 E, Q, D, S 또는 K 임;
    (X5) 는 T 또는 A 임; 및
    (X6) 은 Y, W 또는 L 임.
  43. 제 42 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (X1) 은 R 또는 K 임;
    (X2) 는 G, K 또는 R 임;
    (X3) 은 S 임;
    (X4) 는 Q, D, S 또는 K 임;
    (X5) 는 T 또는 A 임; 및
    (X6) 은 W 또는 L 임.
  44. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 하기에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00113

    Figure pct00114
  45. 제 1 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 FGFR3 의 세포외 부위에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  46. 제 1 항 내지 제 45 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 약 10-5 M 내지 약 10-15 M 의 결합 친화도 (KD) 로 FGFR3, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  47. 제 1 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 10-8 M 이하의 결합 친화도 (KD) 로 FGFR3, 또는 이의 부분에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  48. 제 1 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 글리코실화되는, 이중특이적 결합제.
  49. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 링커에 의해 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
  50. 제 49 항에 있어서, 링커가 펩티드 결합을 포함하는, 이중특이적 결합제.
  51. 제 49 항 또는 제 50 항에 있어서, 링커가 하나 이상의 아미노산, 5 내지 100 개의 아미노산, 5 내지 50 개의 아미노산, 5 내지 25 개의 아미노산, 5 내지 20 개의 아미노산, 또는 5 내지 10 개의 아미노산을 포함하는 펩티드를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  52. 제 49 항, 제 50 항 또는 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 임의 치환된 C1-C50 알킬, 임의 치환된 C2-C50 알케닐, 알키닐, 아실, 아실옥시, 알콕시, 아릴옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알콕시, 아릴, 아미노카르보닐, 아지도, 카르복시, 티오, 술폭시드, 술폰, 술포네이트 에스테르, 시아노, 아미드, 아미노, 에스테르, 또는 이의 조합을 포함하는, 이중특이적 결합제.
  53. 제 1 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 끝에 부착되는, 이중특이적 결합제.
  54. 제 1 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 또는 경쇄의 카르복시-말단 끝에 부착되는, 이중특이적 결합제.
  55. 제 1 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-신생물제를 추가로 포함하는 이중특이적 결합제.
  56. 제 55 항에 있어서, 항-신생물제가 돌라스타틴, 아우리스타틴, 메이탄신, 튜불리신, 칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD), 듀오카르마이신, 독소루비신, 슈도모나스 외독소-A (PE38), 이리노테칸 및 전술한 것 중 어느 하나의 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는, 이중특이적 결합제.
  57. 제 55 항 또는 제 56 항에 있어서, 항-신생물제가 이중특이적 결합제에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
  58. 제 55 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-신생물제가 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 부착되는, 이중특이적 결합제.
  59. 제 55 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-신생물제가 피노머에 부착되는, 이중특이적 결합제.
  60. 제 55 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-신생물제가 링커에 의해 이중특이적 결합제에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
  61. 제 55 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-신생물제가 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 또는 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF) 를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  62. 제 55 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-신생물제가 피롤로벤조디아제핀 독소를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  63. 제 62 항에 있어서, 항-신생물제가 연결기를 포함하고, 피롤로벤조디아제핀 독소가 연결기에 공유 연결되며, 연결기가 이중특이적 결합제에 공유 연결되는, 이중특이적 결합제.
  64. 제 62 항 또는 제 63 항에 있어서, 피롤로벤조디아제핀 독소가 화학식 I 의 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00115

    식 중에서,
    Z1 및 Z2 는 둘 모두 N 이고;
    Z3 및 Z4 는 둘 모두 C 이고;
    이중 점선
    Figure pct00116
    은 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
    n 은 1 내지 10 이고;
    각각의 R3 및 R4 는 독립적으로 H, 또는 C1-4 알콕실이고;
    각각의 R1 및 R2 는 독립적으로 H, C1-5 알킬, C3-6 시클로알킬, C2-5 알케닐, 및 R5 로 임의 치환된 페닐로 이루어지는 군에서 선택되고, 여기서
    R5 는 -NH2, -NHR6, 및 하기 구조를 갖는 R7 로 치환된 피페라지닐로 이루어지는 군에서 선택되고:
    Figure pct00117

    이때 R6 은 연결기를 포함하고,
    R7 은 H, 또는 C1-5 알킬이고;
    X1 은 널 (null), 보호기이거나, 연결기를 포함하고;
    X2 는 널, 보호기이거나, 연결기를 포함하고;
    X1, X2, R1 및 R2 중 단 하나는 연결기를 포함하고;
    각각의 Y1 및 Y2 는 독립적으로 널, OH 또는 SO3H 이고;
    단:
    (i) X1 이 연결기를 포함하는 경우,
    Figure pct00118
    은 N-C 이고,
    (ii) X2 가 연결기를 포함하는 경우,
    Figure pct00119
    는 N-C 이고,
    (iii) X1 이 보호기인 경우,
    Figure pct00120
    은 N-C 이고,
    (iv) X2 가 보호기인 경우,
    Figure pct00121
    는 N-C 이고,
    여기서, 널은 원하는 원자가를 완료하기 위한 하나 이상의 수소의 존재 또는 모이어티의 부재를 나타냄.
  65. 제 64 항에 있어서, n 이 3, 4 또는 5 인, 이중특이적 결합제.
  66. 제 64 항 또는 제 65 항에 있어서, R3 및 R4 둘 모두가 -O-CH3 인, 이중특이적 결합제.
  67. 제 64 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2 둘 모두가 메틸인, 이중특이적 결합제.
  68. 제 64 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2 둘 모두가 -CH=CH-CH3 인, 이중특이적 결합제.
  69. 제 64 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서, R2 가 시클로프로필인, 이중특이적 결합제.
  70. 제 64 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서, R2 가 4-메틸피페라진-1-일로 치환된 페닐인, 이중특이적 결합제.
  71. 제 69 항 또는 제 70 항에 있어서, R1 이 R5 로 임의 치환된 페닐이고, R5 가 -NHR6 이며, R6 이 연결기를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  72. 제 64 항 내지 제 66 항 및 제 69 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 있어서, X1 이 널이고, Y1 이 널이고,
    Figure pct00122
    이 N=C 이고, X2 가 널이고, Y2 가 널이며,
    Figure pct00123
    가 N=C 인, 이중특이적 결합제.
  73. 제 64 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서, X1 이 연결기를 포함하고, Y1 이 OH 이고,
    Figure pct00124
    가 N=C 이고, X2 가 널이며, Y2 가 널인, 이중특이적 결합제.
  74. 제 64 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서, X1 이 연결기를 포함하고, Y1 이 OH 이고,
    Figure pct00125
    가 N-C 이고, X2 가 보호기이며, Y2 가 OH 인, 이중특이적 결합제.
  75. 제 64 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서, 연결기가 카르바메이트 기에 의해 피롤로벤조디아제핀 독소에 부착되는, 이중특이적 결합제.
  76. 제 64 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서, 연결기가 아미드 기에 의해 피롤로벤조디아제핀 독소에 부착되는, 이중특이적 결합제.
  77. 제 64 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항에 있어서, 연결기가 화학식 (A) 의 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00126

    [식 중,
    별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고;
    물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고;
    m 은 1 내지 20 이고;
    q 는 0 내지 10 이고;
    E 는 연계기 (connecting group) 임].
  78. 제 77 항에 있어서, m 이 4 또는 8 인, 이중특이적 결합제.
  79. 제 77 항 또는 제 78 항에 있어서, q 가 0, 1 또는 2 인, 이중특이적 결합제.
  80. 제 77 항에 있어서, m 이 8 이고, q 가 2 인, 이중특이적 결합제.
  81. 제 64 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항에 있어서, 연결기가 화학식 (B) 의 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00127

    [식 중,
    별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고;
    물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고;
    E 는 연계기이고;
    v 는 0 내지 10 이고;
    u 는 0 또는 1 이고; u 가 1 인 경우, t 는 1 내지 10 임].
  82. 제 81 항에 있어서, v 가 1 인, 이중특이적 결합제.
  83. 제 81 항 또는 제 82 항에 있어서, u 가 1 이고, t 가 8 인, 이중특이적 결합제.
  84. 제 81 항에 있어서, u 가 0 이고, v 가 4 인, 이중특이적 결합제.
  85. 제 77 항 내지 제 84 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제가 결합제의 시스테인 티올 잔기와 E 사이에 형성된 티오에테르 결합에 의해 E 에 연계되는, 이중특이적 결합제.
  86. 제 77 항 내지 제 85 항 중 어느 한 항에 있어서, E 가 화학식 (C) 의 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00128

    [식 중,
    물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타내고, 이중 별표는 연결기에 대한 부착점을 나타냄].
  87. 제 64 항 내지 제 86 항 중 어느 한 항에 있어서, 보호기가 하기 구조 (D) 를 갖는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00129

    [식 중,
    별표는 피롤로벤조디아제핀 독소에 대한 부착점을 나타내고;
    w 는 1 내지 5 임].
  88. 제 87 항에 있어서, w 가 2 인, 이중특이적 결합제.
  89. 제 64 항 내지 제 88 항 중 어느 한 항에 있어서, 보호기가 절단가능한 보호기인, 이중특이적 결합제.
  90. 제 64 항에 있어서, 항-신생물제가 하기로 이루어지는 군에서 선택되는 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00130

    (식 중, m 은 8 임);
    Figure pct00131

    (식 중, m 은 8 이고, p 는 3 이고, X2 는 보호기임);
    Figure pct00132

    (식 중, m 은 8 임);
    Figure pct00133

    (식 중, t 는 8 이고, v 는 1 임); 및
    Figure pct00134

    (식 중, 물결선은 결합제에 대한 부착점을 나타냄).
  91. 제 90 항에 있어서, X2 의 보호기가 하기 구조 (D) 를 갖는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00135

    [식 중,
    별표는 항-신생물제에 대한 부착점을 나타내고; w 는 1 내지 5 임].
  92. 제 64 항 내지 제 91 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제의 적어도 하나의 아미노산이 시스테인으로 돌연변이되고, 시스테인이 티올 에테르 결합에 의해 연결기에 공유 연결되는, 이중특이적 결합제.
  93. 제 64 항 또는 제 92 항에 있어서, 항-신생물제가 화학식 (II) 의 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00136

    [식 중에서,
    m 은 8 이고, 물결선은 결합제의 티올 기에 대한 부착점을 나타냄].
  94. 제 1 항 내지 제 93 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이, SEQ ID NO:2-15 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, SEQ ID NO:16-26 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, SEQ ID NO:27-33 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3, SEQ ID NO:45-59 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, SEQ ID NO:60-71 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:72-81 에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 을 포함하는 제 2 결합제와 신데칸-1 에 대한 결합을 위해 경쟁하는, 이중특이적 결합제.
  95. 제 94 항에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:3 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, SEQ ID NO:18 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, SEQ ID NO:28 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3, SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
  96. 제 94 항에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, SEQ ID NO:17 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3, SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, SEQ ID NO:61 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
  97. 제 95 항에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:16 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, SEQ ID NO:45 또는 46 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, 및 SEQ ID NO:72 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 을 포함하는, 이중특이적 결합제.
  98. 제 94 항 내지 제 97 항 중 어느 한 항에 있어서, 제 2 결합제가 인간화 경쇄 가변부 및 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  99. 제 98 항에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:41 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 경쇄 가변부 및 SEQ ID NO:90 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  100. 제 98 항 또는 제 99 항에 있어서, 제 2 결합제가 SEQ ID NO:44 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 경쇄 및 SEQ ID NO:93 의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 인간화 중쇄를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  101. 제 1 항 내지 제 100 항 중 어느 한 항에 따른 이중특이적 결합제 및 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제, 첨가제 또는 담체를 포함하는 약학 조성물.
  102. 제 101 항에 있어서, 신생물의 치료에 사용하기 위한, 약학 조성물.
  103. 제 102 항에 있어서, 신생물이 신데칸-1 을 발현하는 신생 세포 또는 암 세포를 포함하는, 약학 조성물.
  104. 제 102 항 또는 제 103 항에 있어서, 신생물이 암종, 육종, 신경계 신생물, 림프종, 골수종, 백혈병, 흑색종, 중피종, 고형 또는 연조직 종양, 및 2차 암에서 선택되는, 약학 조성물.
  105. 하기 단계를 포함하는, 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체의 치료 방법:
    (a) 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 제공하는 단계; 및
    (b) 치료적 유효량의 제 1 항 내지 제 100 항 중 어느 한 항에 따른 이중특이적 결합제, 또는 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 단계.
  106. 제 105 항에 있어서, 투여 후, 이중특이적 결합제가 신생물의 성장, 생존력 또는 전이를 차단, 억제, 개선, 폐지 또는 진압하는, 치료 방법.
  107. 제 105 항 또는 제 106 항에 있어서, 투여 후, 이중특이적 결합제가 신생물의 일부 또는 전부의 사멸, 괴사 또는 세포 자멸사를 유도하는, 치료 방법.
  108. 제 105 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 암종, 육종, 신경아세포종, 교모세포종, 골수종, 림프종, 흑색종, 또는 고형 또는 연조직 종양을 포함하는, 치료 방법.
  109. 신생물이 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 췌장암, 식도암, 간암, 간세포암, 하인두암, 폐암, 선암, 난소암 또는 신장암을 포함하는, 제 108 항에 따른 치료 방법, 또는 제 102 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물.
  110. 신생물이 췌장 선암, 췌장 신경내분비암, 결장직장 선암, 소장 악성 종양, 담관암종, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 갑상선 암종, 식도 또는 식도위 접합부 (EGJ) 암, 위 선암, 간 간세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 여성 생식관 악성 종양, 유방암종, 삼중 음성 유방암, 폐소세포 암종, 상피성 난소 암종, 후복막 또는 복막 육종, 전립선 선암, 신경내분비 종양, 위장 간질 종양, 교모세포종 또는 비-상피성 난소암을 포함하는, 제 108 항 또는 제 109 항에 따른 치료 방법, 또는 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물.
  111. 신생물이 다발성 골수종, 난소 암종, 자궁경부암, 자궁내막암, 갑상선암, 고환암, 신장 암종, 담낭암종, 이행 세포 방광 암종, 위암, 전립선암, 전립선 선암, 유방암, 폐암, 결장암종, 호지킨 및 비-호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수모구 백혈병 (AML), T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL), 고형 조직 육종, 결장암종, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 폐 암종, 결장직장암종, 간암종, 췌장암, 뇌암 (예를 들어, 신경아세포종 또는 뇌수막종), 피부암 (예를 들어, 흑색종, 기저 세포 암종 또는 편평 세포 암종), 및 두경부 암종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 제 108 항에 따른 치료 방법, 또는 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물.
  112. 제 105 항 내지 제 111 항 중 어느 한 항에 있어서, 화학요법제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는, 치료 방법.
  113. 제 105 항 내지 제 112 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간인, 치료 방법.
  114. 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한, 제 1 항 내지 제 100 항 중 어느 한 항에 따른 이중특이적 결합제, 또는 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물.
  115. 제 105 항 내지 제 114 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 신데칸-1 또는 FGFR3 을 발현하는 신생 세포 또는 암 세포를 포함하는, 치료 방법 또는 용도.
  116. 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 췌장암, 식도암, 간암, 간세포암, 하인두암, 폐암, 선암, 난소암 및 신장암으로 이루어지는 군에서 선택되는, 약학 조성물.
  117. 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 췌장 선암, 췌장 신경내분비암, 결장직장 선암, 소장 악성 종양, 담관암종, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 갑상선 암종, 식도 또는 식도위 접합부 (EGJ) 암, 위 선암, 간 간세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 여성 생식관 악성 종양, 유방암종, 삼중 음성 유방암, 폐소세포 암종, 상피성 난소 암종, 후복막 또는 복막 육종, 전립선 선암, 신경내분비 종양, 위장 간질 종양, 교모세포종 및 비-상피성 난소암으로 이루어지는 군에서 선택되는, 약학 조성물.
  118. 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 다발성 골수종, 난소 암종, 자궁경부암, 자궁내막암, 갑상선암, 고환암, 신장 암종, 담낭암종, 이행 세포 방광 암종, 위암, 전립선암, 전립선 선암, 유방암, 폐암, 결장암종, 호지킨 및 비-호지킨 림프종 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL), 급성 골수모구 백혈병 (AML), 고형 조직 육종, 결장암종, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 폐 암종, 결장직장암종, 간암종, 췌장암, 뇌암 (예를 들어, 신경아세포종 또는 뇌수막종), 피부암 (예를 들어, 흑색종, 기저 세포 암종 또는 편평 세포 암종), 및 두경부 암종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 약학 조성물.
  119. 신생물이 부신 피질 암종, 방광 요로 상피 암종, 유방 침습성 암종, 자궁경부 편평세포 암종, 자궁경내 선암, 담관암종, 결장 선암, 결장직장 선암, 림프 신생물 미만성 거대 B 세포 림프종, 식도 암종, 다형성 교모세포종, 신경교종, 두경부 편평 세포 암종, 신장 혐색소세포, 판-신장 코호트 (KICH+KIRC+KIR), 신장 신 투명 세포 암종, 유두형 신장 신 세포 암종, 급성 골수성 백혈병, 뇌 저등급 신경교종, 간 간세포 암종, 폐 선암, 폐 편평 세포 암종, 중피종, 난소 장액낭샘암종, 췌장 선암, 갈색세포종 및 부신경절종, 전립선 선암, 직장 선암, 육종, 피부 흑색종, 위 선암, 위 및 식도 암종, 고환 생식 세포 종양, 갑상선 암종, 흉선종, 자궁 체부 자궁내막 암종, 자궁 암육종 및 포도막 흑색종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 제 105 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항에 따른 치료 방법, 또는 제 101 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물.
  120. 제 105 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 방광암인, 치료 방법.
  121. 제 104 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 다발성 골수종인, 치료 방법.
  122. 제 105 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 식도암인, 치료 방법.
  123. 하기를 포함하는 이중특이적 결합제:
    (a) 하기 상보성 결정 부위 (CDR) 를 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분:
    (i) SEQ ID NO:3 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L1;
    (ii) SEQ ID NO:18 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L2;
    (iii) SEQ ID NO:28 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-L3;
    (iv) SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H1;
    (v) SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H2; 및
    (vi) SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 CDR-H3 으로서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 신데칸-1 (CD138) 에 특이적으로 결합하는 것인 CDR-H3; 및
    (b) SEQ ID NO:107 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어지는 피노머로서, 피노머가 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3) 에 특이적으로 결합하는 것인, 피노머.
  124. 제 123 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:17 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:47 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:61 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:73 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  125. 제 123 항에 있어서, 하기와 같은 이중특이적 결합제:
    (i) CDR-L1 은 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (ii) CDR-L2 는 SEQ ID NO:16 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iii) CDR-L3 은 SEQ ID NO:27 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (iv) CDR-H1 은 SEQ ID NO:45 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐;
    (v) CDR-H2 는 SEQ ID NO:60 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐; 및
    (vi) CDR-H3 은 SEQ ID NO:72 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어짐.
  126. 제 123 항, 제 124 항 또는 제 125 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 항원 결합 부분이 SEQ ID NO:41 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 경쇄 가변부 및/또는 SEQ ID NO:90 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 중쇄 가변부를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  127. 제 126 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 SEQ ID NO:44 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 경쇄 및/또는 SEQ ID NO:93 의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 인간화 중쇄를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  128. 제 123 항 내지 제 127 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 원숭이 신데칸-1 의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  129. 제 123 항 내지 제 128 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 50 nM 이하의 결합 친화도 (KD) 로 인간 신데칸-1, 원숭이 신데칸-1 및 마우스 신데칸-1 의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  130. 제 123 항 내지 제 129 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 IgG 의 중쇄 불변부를 포함하고, 중쇄 불변부가 A118C (위치 118 에서 알라닌에서 시스테인으로), S119C (위치 119 에서 세린에서 시스테인으로), S239C (위치 239 에서 세린에서 시스테인으로), V282C (위치 282 에서 발린에서 시스테인으로), T289C (위치 289 에서 트레오닌에서 시스테인으로), N361C (위치 361 에서 아스파라긴에서 시스테인으로), V422C (위치 422 에서 발린에서 시스테인으로), A118K (위치 118 에서 알라닌에서 리신으로), S119K (위치 119 에서 세린에서 리신으로), S239K (위치 239 에서 세린에서 리신으로), V282K (위치 282 에서 발린에서 리신으로), T289K (위치 289 에서 트레오닌에서 리신으로), N361K (위치 361 에서 아스파라긴에서 리신으로) 및 V422K (위치 422 에서 발린에서 리신으로) 에서 선택되는 아미노산 치환을 포함하는, 이중특이적 결합제.
  131. 제 123 항 내지 제 129 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 IgG 의 중쇄 불변부를 포함하고, 중쇄 불변부가 중쇄 불변부의 위치 119 에서 세린에서 시스테인으로의 아미노산 치환을 포함하는, 이중특이적 결합제.
  132. 제 123 항 내지 제 131 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머가 인간 FGFR3 동형 3b 및 인간 FGFR3 동형 3c 에 특이적으로 결합하는, 이중특이적 결합제.
  133. 제 123 항 내지 제 132 항 중 어느 한 항에 있어서, 피노머의 카르복시 말단 끝 (C-말단) 이 항체, 또는 이의 결합 부분의 중쇄 가변부의 아미노 말단 끝 (N-말단) 에 연계되고, 피노머가 펩티드 결합에 의해 항체 중쇄 가변부에 연계되는, 이중특이적 결합제.
  134. 제 123 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이적 결합제가 항-신생물제를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  135. 제 134 항에 있어서, 항-신생물제가 피롤로벤조디아제핀 독소를 포함하는, 이중특이적 결합제.
  136. 제 135 항에 있어서, 피롤로벤조디아제핀 독소가 하기 나타낸 화학식 VIII 의 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00137

    [식 중,
    X1 은 연결기를 포함함].
  137. 제 135 항 또는 제 136 항에 있어서, 피롤로벤조디아제핀 독소가 하기 나타낸 화학식 II 의 구조를 포함하는, 이중특이적 결합제:
    Figure pct00138

    [식 중,
    m 은 8 이고, 피롤로벤조디아제핀 독소는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄에 공유 부착되고, 물결선은 결합제의 티올 기에 대한 피롤로벤조디아제핀 독소의 부착점을 나타냄].
  138. 제 137 항에 있어서, (i) 항체가 인간 IgG 의 중쇄 불변부를 포함하고, (ii) 중쇄 불변부가 중쇄 불변부의 위치 119 에서 세린에서 시스테인으로의 아미노산 치환을 포함하며, (iii) 피롤로벤조디아제핀 독소가 중쇄 불변부의 위치 119 에 위치한 시스테인의 티올 기에 공유 부착되는, 이중특이적 결합제.
  139. 제 123 항 내지 제 138 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO:125 의 피노머 및 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:44 의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 이중특이적 결합제.
  140. 제 135 항 내지 제 138 항 중 어느 한 항에 있어서, (i) SEQ ID NO:125 의 피노머 및 중쇄 아미노산 서열 (SEQ ID NO:125 의 아미노산 위치 213 에서 세린이 시스테인으로 돌연변이됨) 및 (ii) SEQ ID NO:44 의 경쇄 아미노산 서열 (피롤로벤조디아제핀 독소가 시스테인의 티올 기에 공유 부착됨) 을 포함하는 이중특이적 결합제.
  141. 하기 단계를 포함하는, 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체의 치료 방법:
    (a) 신생물을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 제공하는 단계; 및
    (b) 치료적 유효량의 제 123 항 내지 제 140 항 중 어느 한 항에 따른 이중특이적 결합제를 대상체에게 투여하는 단계.
  142. 제 141 항에 있어서, 신생물이 암종, 육종, 신경아세포종, 교모세포종, 골수종, 림프종, 흑색종, 또는 고형 또는 연조직 종양을 포함하는, 치료 방법.
  143. 제 141 항에 있어서, 신생물이 방광암, 유방암, 결장직장암, 위암, 췌장암, 식도암, 간암, 간세포암, 하인두암, 폐암, 선암, 난소암 또는 신장암을 포함하는, 치료 방법.
  144. 제 141 항에 있어서, 신생물이 췌장 선암, 췌장 신경내분비암, 결장직장 선암, 소장 악성 종양, 담관암종, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 갑상선 암종, 식도 또는 식도위 접합부 (EGJ) 암, 위 선암, 간 간세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 여성 생식관 악성 종양, 유방암종, 삼중 음성 유방암, 폐소세포 암종, 상피성 난소 암종, 후복막 또는 복막 육종, 전립선 선암, 신경내분비 종양, 위장 간질 종양, 교모세포종 또는 비-상피성 난소암을 포함하는, 치료 방법.
  145. 제 141 항에 있어서, 신생물이 다발성 골수종, 난소 암종, 자궁경부암, 자궁내막암, 갑상선암, 고환암, 신장 암종, 담낭암종, 이행 세포 방광 암종, 위암, 전립선암, 전립선 선암, 유방암, 폐암, 결장암종, 호지킨 및 비-호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수모구 백혈병 (AML), T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL), 고형 조직 육종, 결장암종, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 폐 암종, 결장직장암종, 간암종, 췌장암, 뇌암 (예를 들어, 신경아세포종 또는 뇌수막종), 피부암 (예를 들어, 흑색종, 기저 세포 암종 또는 편평 세포 암종), 및 두경부 암종으로 이루어지는 군에서 선택되는, 치료 방법.
  146. 제 141 항에 있어서, 신생물이 방광암, 다발성 골수종 또는 식도암인, 치료 방법.
  147. 제 139 항 내지 제 146 항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물이 신데칸-1 및/또는 FGFR3 을 발현하는 신생 세포 또는 암 세포를 포함하는, 치료 방법.
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