JP2021165268A - シンデカン−１および線維芽細胞増殖因子受容体を標的とする二重特異性結合物質を含む医薬組成物 - Google Patents

シンデカン−１および線維芽細胞増殖因子受容体を標的とする二重特異性結合物質を含む医薬組成物 Download PDF

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Abstract

【課題】シンデカン−１に結合する抗体部分およびＦＧＦＲ３に結合するフィノマー部分を含む二重特異性結合物質ならびに新生物の処置のためのその使用を提供する。【解決手段】（ａ）シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分および（ｂ）線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）に特異的に結合するフィノマーを含む二重特異性結合物質であって、フィノマーは、（ｉ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQまたは（ｉｉ）GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、二重特異性結合物質である。【選択図】なし

Description

本発明の実施形態は、ＣＤ１３８（シンデカン−１）に特異的に結合する抗体部分および線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）に特異的に結合するフィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒ）部分を含む二重特異性結合物質を含有する医薬組成物、ならびに該二重特異性結合物質の薬物コンジュゲートを含む医薬組成物、およびその使用に関する。本明細書において開示される医薬組成物は、新生物を効率的に処置するために、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用され得る。
シンデカンファミリーは、主に細胞表面に存在する４つの膜貫通ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）を含む。これらの異なるシンデカンの構造は、脊椎動物および無脊椎動物において高い相同性を示す。４種のシンデカンすべてが、変動する数のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）側鎖で装飾されたコアタンパク質で構成されている。シンデカンは、主にこれらのＧＡＧ鎖を介してその機能を発揮するが、コアタンパク質の異なるドメインは、同様に別個の役割を有する。シンデカン−１およびシンデカン−３は、ヘパラン硫酸（ＨＳ）およびコンドロイチン硫酸（ＣＳ）鎖の両方を保持するのに対し、シンデカン−２およびシンデカン−４は、ＨＳ鎖のみを保持する。シンデカンは、成長および分化、細胞伸展、細胞接着、細胞遊走、細胞骨格構築、浸潤および脈管形成を含む広範な生物学的プロセスに関与している。
シンデカン−１は、Ｎ末端細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよびＣ末端細胞内シグナル伝達ドメインを含む膜貫通（１型）ヘパラン硫酸プロテオグリカンである。ヒトでは、シンデカン−１（ＣＤ１３８）は、３１０アミノ酸長のコアタンパク質を含み、ＳＤＣ１遺伝子によってコードされる。ＳＤＣ１遺伝子は、５つのエクソンからなり、ヒト染色体２に位置する。第１のエクソンは、シグナルペプチドをコードし、第２のエクソンは、ヘパラン硫酸の付着部位をコードし、第３および第４のエクソンは、コンドロイチン硫酸結合のための部位をコードし、第５のエクソンは、膜貫通および細胞質ドメインをコードする。
シンデカン−１は、成体組織では上皮細胞の基底膜側で、発達中は間葉系細胞で、分化の別個の段階の間はリンパ球系細胞で発現される。シンデカン−１は、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）を結合でき、種々の増殖因子と相互作用でき、細胞遊走、細胞−マトリックス相互作用、成長、増殖および生存を達成する複数のシグナル伝達経路の活性化をもたらす共受容体として作用できる。いくつかの研究が、シンデカン−１および／または種々の新生物の病態形成におけるその機能障害性シグナル伝達活性もしくは過剰発現に関与してきた。
線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）は、種々の細胞内シグナル伝達経路に関与する高度に保存された膜貫通チロシンキナーゼ受容体のファミリーである。ＦＧＦＲは、２〜３の免疫グロブリン様ドメイン（Ｄ１、Ｄ２およびＤ３）を含む細胞外リガンド結合領域、１回膜貫通領域およびチロシンキナーゼ活性を有する細胞質領域から構成される。複数のスプライス変異体を有し、そのほとんどが、受容体のエクソンＩＩＩ（ドメインＤ３に対応する）において生じる、４つの主要なＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ１〜４）がある（例えば、Holzmann et al. (2012) J. of Nucleic Acids 2012:950508を参照されたい）。Ｄ３ドメインは、３つのエクソン：（ＩＩＩａ、ＩＩＩｂおよびＩＩＩｃ）によってコードされる２つのパートを含有し、遺伝子スプライシング事象によって、ＩＩＩｂまたはＩＩＩｃ部分のいずれかと組み合わされた、遺伝子の不変のＩＩＩａ部分から転写されるＤ３ドメインにつながる。これらのスプライス変動によって７つの高度に相同なヒトＦＧＦＲ：ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｂ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｂ、ＦＧＦＲ３ｃおよびＦＧＦＲ４が生じ、これらは別個の組織分布およびリガンド特異性を有する。
ヒトでは、ＦＧＦＲは、２２種の既知線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）リガンドのうち１つまたは複数の過剰発現によって、または結合によって活性化され得る。ＦＧＦＲ３活性化は、胚形成、発達、細胞増殖、細胞生存、遊走、分化および成長停止において重要な役割を果たす。ＦＧＦＲ３の活性化は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）およびＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ経路を含む発癌性シグナル伝達に関わるいくつかの重要な経路の活性化につながり得る。
シンデカン−１に結合する抗体部分およびＦＧＦＲ３に結合するフィノマー部分を含む二重特異性結合物質ならびに新生物の処置のためのその使用が、本明細書において示される。
一部の態様では、抗体部分（例えば、抗体またはその抗原結合部分）および１つまたは複数のフィノマーを含む二重特異性結合物質が、本明細書において示され、抗体部分は、シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合し、１つまたは複数のフィノマーは、線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）に特異的に結合する。したがって、ある特定の実施形態では、シンデカン−１に特異的に結合し、ＦＧＦＲ３または１つもしくは複数のＦＧＦＲ３のアイソフォームに特異的に結合する二重特異性結合物質が、本明細書において示される。一部の実施形態では、二重特異性結合物質のフィノマー部分は、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃに特異的に結合する。ある特定の態様では、シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体部分（例えば、抗体またはその抗原結合部分）および線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）に特異的に結合するフィノマーならびに抗悪性腫瘍剤または毒素を含む二重特異性結合物質。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質の抗体部分は、（ｉ）配列番号２〜１５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１（軽鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号１６〜２６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２（軽鎖ＣＤＲ２）、（ｉｉｉ）配列番号２７〜３３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３（軽鎖ＣＤＲ３）、（ｉｖ）配列番号４５〜５９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１（重鎖ＣＤＲ１）、（ｖ）配列番号６０〜７１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２（重鎖ＣＤＲ２）および（ｖｉ）配列番号７２〜８１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３（重鎖ＣＤＲ３）から選択される１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１に特異的に結合する。二重特異性結合物質の抗体部分は、表１から選択される任意の適したＣＤＲ−Ｌ１、表２から選択される任意の適したＣＤＲ−Ｌ２、表３から選択される任意の適したＣＤＲ−Ｌ３、表６から選択される任意の適したＣＤＲ−Ｈ１、表７から選択される任意の適したＣＤＲ−Ｈ２および表８から選択される任意の適したＣＤＲ−Ｈ３を含む場合があり、抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１に特異的に結合する。一部の実施形態では、二重特異性結合物質の抗体部分は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ、配列番号２、１７、２７、４７、６１および７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ、配列番号２、１６、２７、４５、６０および７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ、配列番号２、１６、２７、４５、６１および７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ、配列番号２、１７、２７、４７、６１および７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ、配列番号５、２１、３０、５０、６４および７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号４、２０、２９、５０、６３および７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号４、１９、２９、４８、６３および７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、二重特異性結合物質の抗体部分は、ヒト抗体（例えば、ＩｇＧ）の１つまたは複数の定常領域を含む。一部の実施形態では、二重特異性結合物質の抗体部分は、ヒト化モノクローナル抗体またはそのヒト化抗原結合部分を含み、可変領域配列は、ヒト化されている。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質のフィノマーは、（ｉ）ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬ（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）（Ｘ４）ＧＰＹＷＥＡＲＳＬ（Ｘ５）ＴＧＥＴＧ（Ｘ６）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号９９）（ここで、アミノ酸（Ｘ１）、（Ｘ２）、（Ｘ３）、（Ｘ４）、（Ｘ５）および（Ｘ６）は、任意のアミノ酸である）、（ｉｉ）ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＭＳＴＴＡＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＱＳＰＨＧＱＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧ（Ｘ７）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１１３）（ここで、（Ｘ７）は、任意のアミノ酸である）、（ｉｉｉ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ （配列番号１０１；ＦＦ２Ｌ４Ｃ３）、（ｉｖ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ（配列番号１０３；ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ１２）、（ｖ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ（配列番号１０５；ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ７）、（ｖｉ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ（配列番号１０７；ＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７；「Ｇ７」）、（ｖｉｉ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ（配列番号１０９；ＦＦ４３Ｌ６５Ｄ５）、（ｖｉｉｉ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ（配列番号１１１；ＦＦ４４Ｌ６５Ｂ７）、および（ｉｘ）GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ（配列番号１１６；ＦＦ４０Ｌ５４Ａ５）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドから選択されるポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質のフィノマーは、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはからなる。一部の実施形態では、二重特異性結合物質のフィノマーは、配列番号１０７のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、二重特異性薬剤は、ドラスタチン、オーリスタチン、マイタンシン、ツブリシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、シュードモナス外毒素−Ａ（ＰＥ３８）、イリノテカンおよびそれらの誘導体からなる群から選択される抗悪性腫瘍剤を含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、次化学式Ｉ：
Figure 2021165268
 ［式中、
Ｚ１およびＺ２は、両方ともＮであり、
Ｚ３およびＺ４は、両方ともＣであり、
二重破線
Figure 2021165268
 は、単結合または二重結合を表し、
ｎは、１〜１０であり、
Ｒ３およびＲ４の各々は独立に、ＨまたはＣ１〜４アルコキシルであり、
Ｒ１およびＲ２の各々は独立に、Ｈ、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ２〜５アルケニルおよびＲ５で適宜置換されたフェニルからなる群から選択され、
Ｒ５は、−ＮＨ２、−ＮＨＲ６および次構造
Figure 2021165268
 を有するＲ７で置換されたピペラジニルからなる群から選択され、
（ここで、Ｒ６は、連結基を含み、
Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜５アルキルである）、
Ｘ１は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、
Ｘ２は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、
Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１およびＲ２のうち１つのみが連結基を含み、
Ｙ１およびＹ２の各々は独立に、ヌル、ＯＨまたはＳＯ３Ｈのいずれかであり、
ただし、
（ｉ）Ｘ１が連結基を含む場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｉ）Ｘ２が連結基を含む場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｉｉ）Ｘ１が保護基である場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｖ）Ｘ２が保護基である場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃである］
の構造を含むピロロベンゾジアゼピン毒素を含み、
ヌルは、必要な原子価を完成するための部分がないことまたは１つもしくは複数の水素の存在を意味する。
ある特定の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、式Ｉのピロロベンゾジアゼピン毒素および連結基を含み、ピロロベンゾジアゼピン毒素は、連結基と結合され、連結基は、本明細書において記載される二重特異性薬剤に結合される。ある特定の実施形態では、連結基は、次化学式（Ａ）：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、波線は、結合物質との結合点を示し、
ｍは、１〜２０であり、
ｑは、１〜１０であり、
Ｅは、接続基である］
および次化学式（Ｂ）：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、波線は、結合物質との結合点を示し、
Ｅは、接続基を含み、
ｖは、０〜１０であり、
ｕは、０または１であり、
ｕが１である場合には、ｔは、１〜１０である］
の構造から選択される構造を含む。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、以下の式ＩＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは８である］、
以下の式ＩＩＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは、８であり、ｐは、３であり、Ｘ２は、保護基である］、
以下の式Ｖ：
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは、８である］、
以下の式ＶＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、ｔは、８であり、ｖは、１である］
および以下の式ＶＩＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、波線は、結合物質との結合点を示す］
からなる群から選択される構造を含む。
一部の実施形態では、本明細書において記載される二重特異性結合物質および医薬上許容される賦形剤、希釈剤、添加物または担体を含む医薬組成物が、本明細書において示される。
一部の態様では、新生物を有するか、または有すると疑われる対象を処置する方法であって、対象に、本明細書において記載される二重特異性結合物質または医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む方法が、本明細書において示される。ある特定の実施形態では、新生物は、癌腫、肉腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、黒色腫または固形もしくは軟部組織腫瘍から選択され、新生物は、シンデカン−１および／またはＦＧＦＲ３を発現する。一部の実施形態では、新生物を有するか、または有すると疑われる対象は、新生細胞の細胞表面でヒトシンデカン−１および／またはヒトＦＧＦＲ３を発現する新生細胞を有するまたは抱えるヒトである。
技術のある特定の態様は、以下の説明、実施例および特許請求の範囲および図面にさらに記載されている。
図面は、技術の実施形態を例示するが、制限ではない。明確化および例示を容易にするために、図面は、縮尺するように作成されておらず、一部の場合には、種々の態様が、特定の実施形態の理解を促進するように誇張してまたは拡大して示されている場合もある。
図１は、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ）およびマウスに由来するシンデカン−１タンパク質のアラインメントを示す。免疫処置のために使用されるペプチドは、四角で囲まれた区域に由来していた。
図２は、Ｆ１２Ｐ１６Ｆ６の蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）ヒストグラム（図２Ａ）およびＨ９２９細胞上のＣＤ１３８への別の代表的な陽性ハイブリドーマクローンＦ１２Ｐ１６Ｇ３（図２Ｂ）結合を示す。
図３は、１６７ｎＭ（Ｌ１Ａ１）〜１０．４ｎＭ（Ｌ１Ａ４）での、ヒトＣＤ１３８への結合についての、代表的ハイブリドーマＦ１２Ｐ１６Ｆ６（「１２Ｐ１６Ｆ６」として図では示されている）の動態学的結合分析（すなわち、ＳＰＲセンサーグラム）の結果を示す。
図４は、代表的キメラ抗体１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１（「ｃｈＦ６」、図４Ａ）および１３Ｐ３０Ａ７ ｈＩｇＧ１（「ｃｈＰ３０Ａ７」、図４Ｂ）の、ヒトＣＤ１３８発現細胞（ヒト）およびカニクイザルＣＤ１３８発現細胞（ｃｙｎｏ）への結合を示す。対照抗体（「Ｓｅｃ」、すなわち、セクキヌマブ）は、ＣＤ１３８への特異的結合をわずかしか示さないか、または全く示さなかったＹ軸は、抗体ｃｈＦ６、１３Ｐ３０Ａ７またはセクキヌマブの濃度を表す。
図５Ａは、親マウスＦ１２Ｐ１６Ｆ６（「Ｐ１６Ｆ６ ＶＨ」）のものと比較されたヒト化重鎖を示す。名称ｃｄｒは、ＣＤＲグラフティングアプローチを示し、名称ａｂｂは、省略されたＣＤＲのグラフティングアプローチを示し、名称ｓｄｒは、ＳＤＲ移送（ＳＤＲ−ｔｒａｎｓｆｅｒ）アプローチを示し、名称ｆｒａは、フランケンシュタインアプローチを示し、名称ｖｅｎは、ベニヤリング（Ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）アプローチを示す。名称ｒｅｐａｉｒは、可変領域が第２ラウンドのヒト化に付されたことを示す。 図５Ｂは、親マウスＦ１２Ｐ１６Ｆ６（「Ｐ１６Ｆ６ ＶＨ」）のものと比較されたヒト化軽鎖を示す。
図６は、１１種の代表的なヒト化抗体の分子量（キロダルトン、ｋＤａ）および純度を例示する、還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル実施の写真を示す。レーン１＝１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１（ｃｈＦ６）、レーン２＝Ｆ６ ａｋａ−ｒｅｐ、レーン３＝Ｆ６ ａｋｓ−ｒｅｐ、レーン４＝Ｆ６ ａｋｆ−ｒｅｐ、レーン５＝Ｆ６ ｃｋａ−ｒｅｐ、レーン６＝Ｆ６ ｃｋｆ−ｒｅｐ（ｈＦ６）、レーン７＝Ｆ６ ｆ２ｋａ−ｒｅｐ、レーン８＝Ｆ６ ｆ２ｋｓ−ｒｅｐ、レーン９＝Ｆ６ ｆ２ｋｆ−ｒｅｐ、レーン１０＝Ｆ６ ｆ１ｋａ−ｒｅｐ、レーン１１＝Ｆ６ ｆ１ｋｓ−ｒｅｐ、レーン１２＝Ｆ６ ｆ１ｋｆ−ｒｅｐおよびＭＷ＝分子量マーカー。分子量マーカーは、ゲルの右側に表示されている。
図７は、１１種の代表的なヒト化抗体の、多発性骨髄腫細胞株ＫＭＳ−１１（図７Ｂ）および膀胱癌株ＲＴ１１２／８４（図７Ａ）の表面上のヒトＣＤ１３８への細胞表面結合のＦＡＣＳ分析を示す。セクキヌマブを陰性対照として使用した。
図８は、１．９５Å分解能で解析された、抗体Ｆａｂ断片との複合体中のヒトシンデカン−１ペプチドから導かれたＸ線結晶構造の例示を示す。非対称ユニットあたりシンデカン−１ペプチドおよびＦａｂ各々の１つのコピーがある。図８は、シンデカン−１−Ｆａｂ結合界面を例示する。Ｆａｂ重鎖は、図の左にリボン側鎖炭素原子の形態で示されている。Ｆａｂ軽鎖は、図の右にリボン側鎖炭素原子の形態で示されている。シンデカン−１ペプチド炭素原子は、Ｆａｂ重鎖と軽鎖の間に挟まれて示されている。シンデカン−１ペプチドのある特定のアミノ酸およびＦａｂ断片のある特定の側鎖は、その対応する３文字アミノ酸略語および位置で表示されている。
図９は、配列番号１０１、１０９、１０３、１０５、１０７および１１１の抗ＦＧＦＲ３フィノマーのアラインメントを示す。
図１０は、ＦＦ２Ｌ４Ｃ３（配列番号１０１）、ＦＦ２Ｌ４Ｄ４、ＦＦ３Ｌ６Ｇ２、ＦＦ５Ｌ７Ｄ３、ＦＦ５Ｌ７Ｄ４、ＦＦ１５Ｌ３１Ｂ１およびＦｙｎＳＨ３（陰性対照）と名付けられた抗ＦＧＦＲ３フィノマーの内部移行特性を示す。
図１１は、ＦＧＦＲ３陽性ＫＭＳ−１１細胞の表面上のＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーポリペプチドのＦＡＣＳ結合プロファイルを示す。図１１Ａは、ＦＦ２Ｌ４Ｃ３（配列番号１０１）、ＦＦ４３Ｌ６５Ｄ５（配列番号１０９）、ＦＦ４４Ｌ６５Ｂ７（配列番号１１１）、ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ７（配列番号１０５）、ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ１２（配列番号１０３）、ＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７（配列番号１０７）および抗ＦＧＦＲ３モノクローナル抗体（陽性対照）の、ＦＧＦＲ３陽性ＫＭＳ−１１細胞への特異的結合を示し、一方で、図１１Ｂは、示されたフィノマーの、ＦＧＦＲ３陰性対照細胞株Ｎ８７への結合がないことを示す。
図１２−１は、ｘ軸に示されるような、プレーティングされコーティングされたヒトＦＧＦＲ３ｂ（ｈｕＦＧＦＲ３ｂ）、ヒトＦＧＦＲ３ｃ（ｈｕＦＧＦＲ３ｃ）、カニクイザルＦＧＦＲ３ｃ（ｃｙＦＧＦＲ３ｃ）、マウスＦＧＦＲ３ｃ（ｍｕＦＧＦＲ３ｃ）、ヒトＦＧＦＲ３ Ｄ１ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ１）、ヒトＦＧＦＲ３ｃ Ｄ２ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ２）、ヒトＦＧＦＲ３ Ｄ１およびＤ２ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ１Ｄ２）、陰性対照ポリクローナル抗体（ＩｇＧ）およびコーティングされていないプレート（ＰＢＳ）と結合するＦＧＦＲ３−フィノマーＦＦ２Ｌ４Ｃ３−配列番号１０１（図１２Ａ）およびＦＦ４３Ｌ６５Ｄ５−配列番号１０９（図１２Ｂ）のＥＬＩＳＡを示す。 図１２−２は、ｘ軸に示されるような、プレーティングされコーティングされたヒトＦＧＦＲ３ｂ（ｈｕＦＧＦＲ３ｂ）、ヒトＦＧＦＲ３ｃ（ｈｕＦＧＦＲ３ｃ）、カニクイザルＦＧＦＲ３ｃ（ｃｙＦＧＦＲ３ｃ）、マウスＦＧＦＲ３ｃ（ｍｕＦＧＦＲ３ｃ）、ヒトＦＧＦＲ３ Ｄ１ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ１）、ヒトＦＧＦＲ３ｃ Ｄ２ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ２）、ヒトＦＧＦＲ３Ｄ１およびＤ２ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ１Ｄ２）、陰性対照ポリクローナル抗体（ＩｇＧ）およびコーティングされていないプレート（ＰＢＳ）と結合するＦＦ４４Ｌ６５Ｂ７−配列番号１１１（図１２Ｃ）およびＦＦ４４Ｌ６５Ｇ７−配列番号１０５（図１２Ｄ）のＥＬＩＳＡを示す。 図１２−３は、ｘ軸に示されるような、プレーティングされコーティングされたヒトＦＧＦＲ３ｂ（ｈｕＦＧＦＲ３ｂ）、ヒトＦＧＦＲ３ｃ（ｈｕＦＧＦＲ３ｃ）、カニクイザルＦＧＦＲ３ｃ（ｃｙＦＧＦＲ３ｃ）、マウスＦＧＦＲ３ｃ（ｍｕＦＧＦＲ３ｃ）、ヒトＦＧＦＲ３ Ｄ１ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ１）、ヒトＦＧＦＲ３ｃ Ｄ２ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ２）、ヒトＦＧＦＲ３ Ｄ１およびＤ２ドメイン（ｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ１Ｄ２）、陰性対照ポリクローナル抗体（ＩｇＧ）およびコーティングされていないプレート（ＰＢＳ）と結合するＦＦ４４Ｌ６５Ｇ１２−配列番号１０３（図１２Ｅ）およびＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７−配列番号１０７（図１２Ｆ）のＥＬＩＳＡを示す。
図１３は、毒素がコンジュゲートしているフィノマーＦＦ２Ｌ４Ｃ３（図１３Ａ、ＢおよびＣ）、ＦＦ４３Ｌ６５Ｄ５（図１３Ｂ）、ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ７（図１３Ｂ）、ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ１２（図１３Ｂ）、ＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７（図１３Ｂ）およびＦＦ４４Ｌ６５Ｂ７（図１３Ｃ）の細胞傷害性効果を実証する内部移行アッセイを示す。細胞質ｍｙｃタンパク質、ＦｙｎＳＨ３と結合するマウスモノクローナル抗体９Ｅ１０および薬剤なし（細胞のみ）を陰性対照として含めた。
図１４は、２つのＩｇ重鎖および２つのＩｇ軽鎖ポリペプチドを有する抗体部分ならびにフィノマー部分を各々含む二重特異性結合物質の４つの実施形態の例示を示し、フィノマー（球として表される）は、抗体の異なる部分に結合される。図１４Ａは、抗体の重鎖のＣ末端に結合されるフィノマーを示す。図１４Ｂは、抗体の重鎖のＮ末端に結合されるフィノマーを示す。図１４Ｃは、抗体の軽鎖のＣ末端に結合されるフィノマーを示す。図１４Ｄは、抗体の軽鎖のＮ末端に結合されるフィノマーを示す。
図１５は、作製され、還元条件下でＳＤＳ ＰＡＧＥに付された４種の代表的な二重特異性結合物質を示す。レーン７には、シンデカン−１に特異的に結合する全長抗ＣＤ１３８モノクローナル抗体Ｐ１６Ｆ６がロードされた。レーン７は、結合されたフィノマーの不在下での重鎖（上側のバンド）および軽鎖（下側のバンド）の分子量の参考を提供する。レーン２〜６は、抗体の重鎖のＮ末端に結合される（レーン２および６）、抗体の重鎖のＣ末端に結合される（レーン４）、抗体の軽鎖のＮ末端に結合される（レーン５）および抗体の軽鎖のＣ末端に結合される（レーン３）、Ｐ１６Ｆ６抗体およびＦＧＦＲ３結合フィノマーＧ７（配列番号１０７）を含む二重特異性結合物質の実施形態を示す。レーン２、４および６中の重鎖の分子量の増大は、結合しているフィノマーの存在の証拠である（対照レーン７における重鎖と比較して）。レーン３および５中の軽鎖の分子量の増大は、結合しているフィノマーの存在の証拠である（対照レーン７における軽鎖と比較して）。
図１６は、代表的な二重特異性結合物質「ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７」およびヒト化モノクローナル抗体「ｈＦ６」の、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞の表面上に発現されたＦＧＦＲ３ｃ（図１６Ａ）およびＦＧＦＲ３ｂ（図１６Ｂ）への細胞表面結合を示すＦＡＣｓヒストグラムを示す。ｈＦ６は、配列番号４４の軽鎖および配列番号９３の重鎖を含む。ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７は、配列番号４４の軽鎖および配列番号１０７（Ｇ７）のフィノマーと配列番号９３の重鎖を含む融合タンパク質を含み、Ｇ７のＣ末端は、ペプチド結合によって重鎖のＮ末端に接続されている。
図１７は、トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞（図１７Ａ）、ＦＧＦＲ３ｂを発現するＣＨＯ細胞（図１７Ｂ）およびＦＧＦＲ３ｃを発現するＣＨＯ細胞（図１７Ｃ）で実施されたインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）細胞傷害性アッセイを示す。細胞生存力が、ｙ軸に示され、結合物質の濃度が、ｘ軸に示されている。試験された薬剤には、式ＩＩのＰＢＤ毒素に確率論的にコンジュゲートされたセクキヌマブ（インターロイキン−１７Ａに特異的に結合するモノクローナル抗体）（セクキヌマブ−ＩＩ）、重鎖Ｎ末端および式ＩＩのＰＢＤ毒素に特異的にコンジュゲートされた部位でＧ７フィノマーとともに発現されるセクキヌマブ融合物（セクキヌマブ−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ）および式ＩＩのＰＢＤ毒素に特異的にコンジュゲートされた代表的な二重特異性結合物質ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ）が含まれる。二重特異性結合物質ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７のｈＦ６抗体部分は、配列番号４４の軽鎖および配列番号９３の重鎖を含む。したがって、ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７は、配列番号１０７（Ｇ７）のフィノマーおよび配列番号９３の重鎖が、融合タンパク質として発現され、Ｇ７のＣ末端がペプチド結合によって重鎖のＮ末端に接続されているｈＦ６抗体である。Ｓ１１９Ｃは、ＰＢＤ毒素（すなわち、抗悪性腫瘍剤）の共有結合のためにｈＦ６の重鎖定常領域の１１９位のセリンが、システインに突然変異されたことを示す。この実験に使用された代表的なＰＢＤ毒素は、式ＩＩの毒素であった。毒素は、マレイミド化学を使用して１１９位のシステインのスルフヒドリル基に共有結合によって結合された。
図１８は、式ＩＩの例示的抗悪性腫瘍剤を示す。
図１９は、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に確率論的にコンジュゲートされた全長ｈＦ６抗ＣＤ１３８モノクローナル抗体（「ｈＦ６−ＩＩ」）、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に確率論的にコンジュゲートされたｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ）および式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に確率論的にコンジュゲートされたｈＦ６−ＬＮ−Ｇ７（ｈＦ６−ＬＮ−Ｇ７−ＩＩ）を用いて、細胞株ＫＭＳ−１１（図１９Ａ）、ＯＰＭ−２（図１９Ｂ）およびＡＲＨ−７７（図１９Ｃ）で実施されたインビトロ細胞傷害性アッセイを示す。
図２０−２は、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に部位特異的にコンジュゲートされたｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ）、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に部位特異的にコンジュゲートされたｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ）、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に部位特異的にコンジュゲートされたｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ、図２０Ｃおよび２０Ｄのみ）、ｈＦ６−ＩＩ（図２０Ａおよび２０Ｂのみ）ならびに式ＩＩのＰＢＤ毒素にコンジュゲートされた対照抗体セクキヌマブ（セクキヌマブ−ＩＩ）を用いて、細胞株ＫＭＳ−１１（図２０Ａ）およびＲＴ−１１２（図２０Ｂ）で実施されたインビトロ細胞傷害性アッセイを示す。 図２０−２は、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に部位特異的にコンジュゲートされたｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ）、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に部位特異的にコンジュゲートされたｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ）、式ＩＩの抗悪性腫瘍剤に部位特異的にコンジュゲートされたｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７（ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ、図２０Ｃおよび２０Ｄのみ）、ｈＦ６−ＩＩ（図２０Ａおよび２０Ｂのみ）および式ＩＩのＰＢＤ毒素にコンジュゲートされた対照抗体セクキヌマブ（セクキヌマブ−ＩＩ）を用いて、細胞株ＡＮ３ＣＡ（図２０Ｃ）およびＨＣＣ１８０６（図２０Ｄ）で実施されたインビトロ細胞傷害性アッセイを示す。
図２１Ａは、示された二重特異性結合物質の、マウスに埋め込まれたＡＮ３ＣＡ細胞（図２１Ａ）を死滅させるか、またはその成長を阻害する能力を試験するインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）異種移植研究の図的結果を示す。 図２１Ｂは、示された二重特異性結合物質の、マウスに埋め込まれたＨＣＣ１８０７細胞を死滅させるか、またはその成長を阻害する能力を試験するインビボ異種移植研究の図的結果を示す。
多数の新生細胞は、その細胞表面に線維芽細胞増殖因子受容体３（その１つまたは複数のアイソフォームを含むＦＧＦＲ３）およびシンデカン−１（ＣＤ１３８）を発現する。シンデカン−１およびＦＧＦＲ３に高親和性で結合する二重特異性結合物質が、本明細書において示される。これらの二重特異性結合物質は、標的受容体の両方を発現する新生細胞に高親和性および高選択性で結合し得ることが決定された。一部の実施形態では、本明細書において記載される二重特異性結合物質は、標的受容体（すなわち、ＣＤ１３８およびＦＧＦＲ３）の一方または両方に結合すると、結合物質の内部移行を誘導する。さらに、二重特異性結合物質を毒性ペイロードとコンジュゲートすることによって、二重特異性結合物質は、標的受容体の一方または両方を発現する新生細胞を特異的に死滅させることができる。また、毒素が、内部移行および細胞質プロテアーゼによる連結基の切断後でのみ結合物質から放出されるように、毒性ペイロードと二重特異性結合物質の間にプロテアーゼによって切断可能な連結基を組み込むことによって、オフターゲット細胞傷害性を有意に低減することができる。本明細書における二重特異性結合物質は、有害事象を低減しながら新生細胞のより効率的および選択的な死滅を提供する次世代の生物製剤に相当する。
一部の実施形態では、本明細書において示される二重特異性結合物質は、抗体部分（例えば、抗体またはその抗原結合部分）およびフィノマー部分（すなわち、フィノマー）を含み、フィノマーは、抗体部分に結合されている。一部の実施形態では、フィノマーは、共有結合によって抗体部分に結合されている。一部の実施形態では、抗体部分は、シンデカン−１（すなわち、シンデカン−１ポリペプチド、例えば、ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分またはその細胞外部分を含む。ある特定の実施形態では、フィノマー部分は、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３またはその１つもしくは複数のアイソフォーム）に特異的に結合するフィノマーを含む。一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、細胞傷害性ペイロードを含む。
一部の実施形態では、本明細書において示される二重特異性結合物質は、対象において新生物の処置、予防および／または診断のために使用される。
シンデカン
ヒトシンデカン−１（例えば、配列番号１）は、一般に、Ｎ末端からＣ末端に番号付けられた、アミノ酸１〜２２のＮ末端単一配列、およそアミノ酸２３〜２５４の細胞外ドメイン、およそアミノ酸２５５〜２７５の膜貫通ドメインおよびおよそアミノ酸２７６〜３１０の細胞質ドメインを含む３１０個のアミノ酸の免疫ポリペプチド配列を含む。シンデカン−１受容体のリーダー配列、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを同定する方法は、公知であり、適した哺乳動物種由来のシンデカン−１ポリペプチド配列内のこのようなドメインまたは領域を同定するために、任意の適した方法が使用され得る。
一部の実施形態では、シンデカン−１は、哺乳動物シンデカン−１である。シンデカン−１は、任意の哺乳動物種に由来し得る。一部の実施形態では、シンデカン−１ポリペプチドは、ヒトシンデカン−１である。ある特定の実施形態では、シンデカン−１の細胞外ドメインは、通常、無傷の哺乳動物細胞の細胞表面に発現されるシンデカン−１ポリペプチドのＮ末端部分を含む。ある特定の実施形態では、シンデカン−１の細胞外ドメインは、細胞質および／または膜貫通ドメインを欠く、可溶性または非膜結合形態で発現される。ある特定の実施形態では、シンデカン−１および／またはシンデカン−１の細胞外ドメインは、１つまたは複数のアミノ酸付加、欠失または置換を含む。シンデカン−１ポリペプチドは、配列番号１のシンデカン−１ポリペプチドに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％同一のアミノ酸配列を含み得る。ある特定の実施形態では、シンデカン−１ポリペプチドは、シンデカン−１タンパク質の（例えば、部分配列の）部分を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１の部分は、シンデカン−１の細胞外ドメインまたはその部分を含む。
抗体およびそのＡｇ結合部分
一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその部分（例えば、その結合部分またはその抗原結合部分）を含む。シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその結合部分は、本明細書において抗ＣＤ１３８抗体と呼ばれることもある。本明細書において記載される二重特異性結合物質において使用するために企図される抗ＣＤ１３８抗体およびその結合部分は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる国際特許出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２０１８／０１６８４７に詳述されている。
一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体またはその結合部分である。抗体のある特定の限定されない例として、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体が挙げられる。ヒト抗体は、適した方法によって得ることができる。例えば、ヒト抗体は、完全ヒト抗体を産生するように操作されたトランス染色体動物から得ることができる。ある特定の実施形態では、抗体は、ポリクローナルではない、および／またはポリクローナル抗体ではない。
抗体またはその結合部分は、適した方法によって作製、製造または産生され得る。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、適した種から由来する、産生される、得られる、単離されるおよび／または精製される。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ウサギ、ヤギ、ウマ、ウシ、ラット、マウス、魚類、鳥類またはラマから由来する、産生される、得られる、単離されるおよび／または精製される。例えば、一部の実施形態では、抗体は、鳥類（例えば、ニワトリまたは鳥卵）から由来する、産生される、得られる、単離されるおよび／または精製される。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、植物から由来する、産生される、得られる、単離されるおよび／または精製される（例えば、遺伝子操作された植物によって産生された組換え抗体またはその結合部分）。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分、適した哺乳動物から由来する、産生される、得られる、単離されるおよび／または精製される。ある特定の実施形態では、適した哺乳動物は、ヒト重鎖および／またはヒト軽鎖またはその部分を含む抗体を産生するように操作された遺伝子変更された哺乳動物（例えば、トランス染色体またはトランスジェニック哺乳動物）である。一部の実施形態では抗体またはその結合部分は、原核細胞または真核細胞から産生される、得られる、単離される、または精製される（例えば、遺伝子操作された細胞によって産生された組換え抗体またはその結合部分）。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ウイルスから産生される、得られる、単離される、または精製される（例えば、遺伝子操作されたウイルスによって産生された組換え抗体またはその結合部分）。
抗体またはその結合部分または二重特異性薬剤は、適した発現系から発現、単離および／または精製されてもよく、その限定されない例として、適した細菌、ファージ、昆虫、ウイルス、植物または哺乳動物発現系が挙げられる。例えば、抗体をコードする核酸は、抗体を発現し、細胞培養培地中に分泌する適した哺乳動物細胞株中に導入され得る。任意の適した哺乳動物細胞株を使用して、抗体または二重特異性結合物質を作製してもよい。抗体または二重特異性結合物質またはその部分を生成する方法は、（ｉ）適した細胞株中に１つまたは複数の核酸を導入し、核酸が、抗体、二重特異性結合物質またはその部分の発現を指示すること、（ｉｉ）適した培養法を使用して細胞株を、抗体または二重特異性結合物質の発現を可能にする期間培養すること、（ｉｉｉ）細胞株を回収すること（例えば、溶解物を作製することによって）または細胞株によって生成されたコンディショニングされた培地を回収すること（例えば、抗体または二重特異性結合物質が培地中に分泌される場合）および（ｉｖ）適した方法を使用して抗体または二重特異性結合物質を単離および／または精製することのうち１つまたは複数を含み得る。
修飾語句「モノクローナル」は、特定の方法による抗体またはその結合部分の生成を必要とすると解釈されるべきではない。モノクローナル抗体またはその結合部分は、任意の適した方法によって生成され得る。例えば、ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法（例えば、Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)）によって記載されるようなまたはその変法によって作られる。一部の実施形態では、モノクローナル抗体またはその結合部分は、組換えＤＮＡ法によって作られる。例えば、モノクローナル抗体またはその結合部分は、適した発現系（例えば、ファージディスプレイ発現系）を使用して組換えライブラリーをスクリーニングすることによって作られ得る。一部の実施形態では、モノクローナル抗体またはその結合部分は、ファージライブラリーから、例えば、Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)および/またはMarks et al., J.Mol.Biol., 222:581-597 (1991)に記載される技術またはその変法を使用することによって単離される。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、哺乳動物抗体の１つまたは複数の構造部分を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数の定常領域（例えば、抗体、例えば、哺乳動物抗体に由来する定常領域）を含む。抗体またはその結合部分は、抗体またはその１つまたは複数の部分の任意の適した定常領域を含み得る。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、抗体軽鎖の定常領域および／または抗体重鎖の定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ラムダ（λ）軽鎖定常領域またはその部分を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、カッパ（κ）軽鎖定常領域またはその部分を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、哺乳動物抗体またはその部分の軽鎖定常領域のポリペプチド配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ヒト抗体の軽鎖定常領域のポリペプチド配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体の結合部分は、軽鎖定常領域を含まない。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、軽鎖定常領域の１つまたは複数の部分を含まない。
抗体またはその結合部分は、任意の適した重鎖定常領域またはその部分を含み得る。哺乳動物では、抗体は、別個の重鎖定常領域またはその部分（例えば、ＣＨ１、ＣＬ、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン）の存在によって決定されるＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭと表される少なくとも５つの種類／クラスのＩｇ重鎖を有し得る。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＥアイソタイプまたはその部分の１つまたは複数の重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４またはその１つもしくは複数の部分の重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、哺乳動物抗体の重鎖定常領域のポリペプチド配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％同一である、または１００％同一であるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ヒト抗体の重鎖定常領域のポリペプチド配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％同一である、または１００％同一であるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、定常領域への１つもしくは複数の付加、欠失および／または修飾を含む。抗体またはその結合部分は、抗体クラスまたは抗体のアイソタイプを変更するように修飾されることもある。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、抗体またはその結合部分の１つまたは複数の機能を修飾するように、例えば、血清半減期、Ｆｃ受容体結合、補体結合（例えば、Ｃ１ｑ結合）、グリコシル化、シアリル化、細胞毒性、抗体依存性細胞媒介性貪食（ＡＤＣＰ）、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などを消失させる、増強するまたは減少させるように、１つまたは複数の付加、欠失および／または修飾（１つまたは複数のアミノ酸置換、欠失または付加）を含む。一部の実施形態では、抗体の結合部分は、重鎖定常領域を含まない。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、重鎖定常領域の１つまたは複数の部分を含まない。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、抗体またはその部分の１つまたは複数の可変領域を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数の軽鎖可変領域またはその部分を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数の重鎖可変領域またはその部分を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、少なくとも１つの軽鎖可変領域および少なくとも１つの重鎖可変領域を含む。軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、同一ポリペプチド上にある場合も、異なるポリペプチド上にある場合もある。
哺乳動物では、抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は各々、フレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）によって分離および／または隣接される、一般に、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれる３つのＣＤＲ（相補性決定領域）に寄与する。用語「ＣＤＲ」とは、本明細書において使用される場合、相補性決定領域として同定されるポリペプチドのアミノ酸配列を指す。ある特定の実施形態では、ＣＤＲポリペプチド配列の決定的な描写および抗体またはその結合部分の結合部位を含む残基の同定は、抗体またはその結合部分の構造を解析することおよび／または抗体抗原複合体の構造を解析することなどによって達成される。ある特定の実施形態では、これは、任意の適した方法、例えば、Ｘ線結晶学および／またはコンピュータモデリングによって達成される。ある特定の実施形態では、種々の分析方法が使用されて、抗体またはその結合部分の配列を同定するかまたは近似される。例えば、抗体、その結合部分またはその可変領域のポリペプチド配列中のアミノ酸配列および／またはＣＤＲの位置は、適した方法を使用して同定され、その限定されない例として、ＫａｂａｔまたはＥＵシステム（例えば、Kabat, E. A., et al., 1991、Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication No. 91-3242ならびにJohnson, G. and Wu, T. T. 2000, Nucleic Acids Researchを参照されたい）および／またはＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム（例えば、Chothia & Lesk, (1987) J.Mol.Biol., 196:901-917、Chothia et al., Nature, (1989) 342:878-883およびAl-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948）が挙げられる。一部の実施形態では、抗体のアミノ配列および／またはＣＤＲの位置は、ＡｂＭ法および／または接触法を使用して同定される。「ＡｂＭ」定義は、抗体構造をモデル化するＯｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐによって製造されたコンピュータプログラムの統合スイートを使用する（例えば、Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 86:9268-9272 (1989); "AbM(Trademark), A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies," Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd.を参照されたい）。ＡｂＭ定義は、知識データベースとアブイニシオ（ａｂ ｉｎｉｔｉｏ）法の組合せ、例えば、Samudrala et al., "Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach," in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198 (1999)によって記載されたものを使用して一次配列から抗体の三次構造をモデル化する。ある特定の実施形態では、接触定義は、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく（例えば、MacCallum et al., J.Mol.Biol、5:732-45 (1996)を参照されたい）。
一部の実施形態では、抗体は、少なくとも６つ別個のＣＤＲ（例えば、３つの別個の重鎖ＣＤＲおよび３つの別個の軽鎖ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体の結合部分は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは少なくとも６つの別個のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体の結合部分は、３〜６つの別個のＣＤＲを含む。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、軽鎖可変領域の１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分の軽鎖可変領域は、１つまたは複数のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多いＣＤＲ）を含む。抗体の軽鎖可変領域中のＣＤＲに相当するアミノ酸配列は、ＣＤＲ−Ｌ１（軽鎖ＣＤＲ１）、ＣＤＲ−Ｌ２（軽鎖ＣＤＲ２）およびＣＤＲ−Ｌ３（軽鎖ＣＤＲ３）と呼ばれ、軽鎖可変領域のアミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシ末端の方向に連続して番号がつけられている（すなわち、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）。例えば、抗体またはその結合部分の軽鎖可変領域に相当するポリペプチドでは、ＣＤＲ−Ｌ１は、存在する場合には、最もＮ末端の軽鎖ＣＤＲであり、ＣＤＲ−Ｌ３は、存在する場合には、最もＣ末端の軽鎖ＣＤＲであり、ＣＤＲ−Ｌ２は、存在する場合には、抗体の軽鎖可変領域または結合部分の（ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１とＣＤＲ−Ｌ３の間に、（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３のＮ末端側に、または（ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ１のＣ末端側に位置する。用語「ＣＤＲ−Ｌ１」、「ＣＤＲ−Ｌ２」および「ＣＤＲ−Ｌ３」とは、幾分かは、抗体の相補性決定領域（例えば、軽鎖可変領域のＣＤＲ）として同定される、または本明細書において開示されるポリペプチドのアミノ酸配列を指す。ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３のアミノ酸配列の限定されない例は、それぞれ表１〜３に提供される。抗体の軽鎖可変領域または抗原結合部分は、本明細書において開示されるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３の任意の組合せを含む場合があり、抗体の結合部分は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖可変領域または抗原結合部分は、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む単一軽鎖ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖可変領域または抗原結合部分は、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３および／または別の適したＣＤＲ−Ｌ２および／またはＣＤＲ−Ｌ１ポリペプチド配列に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、抗体またはその結合部分は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖可変領域または抗原結合部分の軽鎖ＣＤＲは、ＣＤＲ−Ｌ３およびＣＤＲ−Ｌ２からなり、ＣＤＲ−Ｌ３は、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ２は、表２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖可変領域または抗原結合部分は、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列および表２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列および任意の他の適したＣＤＲ−Ｌ１ポリペプチド配列を含み、抗体またはその結合部分は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖可変領域または抗原結合部分は、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列、表２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列および表１のＣＤＲ−Ｌ１に対して少なくとも７０％同一の選択されたアミノ酸配列からなる３つの軽鎖ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、抗体の軽鎖可変領域または抗原結合部分は、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列、表２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列および表１から選択されるＣＤＲ−Ｌ１に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、抗体またはその結合部分は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表１、２または３において列挙されるＣＤＲ配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％同一である１つまたは複数の軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表１に示される配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％同一であるＣＤＲ−Ｌ１を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表１に示される配列のうちいずれか１つのＣＤＲ−Ｌ１を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表２に示される配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％同一であるＣＤＲ−Ｌ２を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表２に示される配列のうちいずれか１つのＣＤＲ−Ｌ２を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表３に示される配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％同一であるＣＤＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表３に示される配列のうちいずれか１つのＣＤＲ−Ｌ３を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表４の軽鎖可変領域配列を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表５の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有するヒト化軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表５のヒト化軽鎖可変領域配列を含む。
Figure 2021165268
ある特定の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、重鎖可変領域の１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、１以上の別個のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれより多い別個のＣＤＲ）を含む。抗体の重鎖可変領域中のＣＤＲに相当するアミノ酸配列は、ＣＤＲ−Ｈ１（重鎖ＣＤＲ１）、ＣＤＲ−Ｈ２（重鎖ＣＤＲ２）およびＣＤＲ−Ｈ３（重鎖ＣＤＲ３）と呼ばれ、重鎖可変領域のアミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシ末端の方向に連続して番号がつけられている（すなわち、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）。例えば、シンデカン−１抗体またはその結合部分の重鎖可変領域に相当するポリペプチドでは、ＣＤＲ−Ｈ１は、存在する場合には、最もＮ末端のＣＤＲであり、ＣＤＲ−Ｈ３は、存在する場合には、最もＣ末端のＣＤＲであり、ＣＤＲ−Ｈ２は、存在する場合には、重鎖可変領域の（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１とＣＤＲ−Ｈ３の間に、（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｈ３のＮ末端側に、または（ｉｉｉ）ＣＤＲ−ＨのＣ末端側に位置する。用語「ＣＤＲ−Ｈ１」、「ＣＤＲ−Ｈ２」および「ＣＤＲ−Ｈ３」とは、幾分かは、シンデカン−１抗体またはその結合部分の相補性決定領域（例えば、シンデカン−１抗体重鎖可変領域のＣＤＲ）として同定される、または本明細書において開示されるポリペプチドのアミノ酸配列を指す。ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列の限定されない例は、それぞれ表６〜８に提供される。シンデカン−１抗体の重鎖可変領域または抗原結合部分は、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３の任意の組合せを含む場合があり、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。ある特定の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分の重鎖可変領域または抗原結合部分は、表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列からなる単一重鎖ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、シンデカン−１抗体の重鎖可変領域または抗原結合部分は、表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３および任意の他の適したＣＤＲ−Ｈ２および／またはＣＤＲ−Ｈ１ポリペプチド配列に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。ある特定の実施形態では、シンデカン−１抗体の重鎖可変領域または抗原結合部分の重鎖ＣＤＲは、ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｈ２からなり、ＣＤＲ−Ｈ３は、表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ２は、表７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、シンデカン−１抗体の重鎖可変領域または抗原結合部分は、表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列、表７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列および任意の他の適したＣＤＲ−Ｈ１ポリペプチド配列を含み、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。ある特定の実施形態では、シンデカン−１抗体の重鎖可変領域または抗原結合部分は、表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列、表７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列および表６のＣＤＲ−Ｈ１に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列からなる重鎖ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、シンデカン−１抗体の重鎖可変領域または抗原結合部分は、表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列、表７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列および表６から選択されるＣＤＲ−Ｈ１に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、シンデカン−１抗体は、シンデカン−１またはその部分への特異的結合を保持する。
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表６、７または８のＣＤＲのいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有する１つまたは複数の重鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表６に示される配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％同一であるＣＤＲ−Ｈ１を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表６に示される配列のうちいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表７に示される配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％同一であるＣＤＲ−Ｈ２を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表７に示される配列のうちいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ２を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表８に示される配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％同一であるＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表８に示される配列のうちいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ３を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表１のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、表２のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、表３のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、表６のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、表７のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および表８のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号２または３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１６、１７または１８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２７または２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４５、４６または４７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６０または６１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７２または７３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号２、１６および２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号４５、６０および７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号２、１６および２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号４６、６１および７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号２、１６および２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号４５、６１および７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号４または５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１９、２０または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２９または３０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４８、４９または５０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６２、６３または６４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７４または７５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６２または６４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号４、１９および２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号４８、６３および７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号４、１９および２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号４９、６３および７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号４、１９および２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号４９、６３および７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号４、１９および２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号４８、６３および７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号６または７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２９または３０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０または５１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６２、６３または６４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号６、２２および２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号５１、６３および７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号８または９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５２または５３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６５または６６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号８、２３および３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号５２、６５および７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１０または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２９または３０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０または５４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６２、６４または６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７８または７９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６２または６４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号１０、２４および２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号５４、６７および７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１２または１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５５または５６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６８または６９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号１２、２５および３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号５５、６８および８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１４または１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５７、５８または５９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７０または７１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号１５、２６、３３、５７、７０および８１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号１４、２６および３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号５８、７１および８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、それぞれ配列番号１４、２６および３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびにそれぞれ配列番号５７、７１および８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表９の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表９の重鎖可変領域配列を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表１０の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有するヒト化重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、シンデカン−１抗体またはその結合部分は、表１０のヒト化重鎖可変領域配列を含む。
Figure 2021165268
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号８２〜９２のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または配列番号３４〜４３のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号８９〜９２のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４１〜４３のアミノ酸配列のうちいずれか１つに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表４および５の軽鎖可変領域から選択される１つまたは複数のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表９および１０の重鎖可変領域から選択される１つまたは複数のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表４および５の軽鎖可変領域から選択される１つまたは複数のＣＤＲならびに表９および１０の重鎖可変領域から選択される１つまたは複数のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表４および５の軽鎖可変領域のうちいずれか１つから各々選択されるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびに表９および１０の重鎖可変領域のうちいずれか１つから各々選択されるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３）のアミノ酸配列は、本明細書において記載されるか、または当業者に公知の任意の適した方法によって、本明細書において開示される重鎖または軽鎖可変領域内で同定され得る。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、表１〜１０から選択される１つまたは複数の適した配列を含み、選択されたポリペプチド配列は、０〜５、１〜５、０〜１０、１〜１０、０〜１５または１〜１２のアミノ酸修飾、付加、欠失および／または置換を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、あるアミノ酸が、同様の構造の、または同様の生化学的特徴を有する別のアミノ酸と置き換えられる保存的置換である。保存的置換の限定されない例として、親水性アミノ酸を別の親水性アミノ酸で置換すること、疎水性アミノ酸を別の疎水性アミノ酸で置換すること、酸性アミノ酸を別の酸性アミノ酸で置換すること、塩基性アミノ酸を別の塩基性アミノ酸で置換すること、および中性電荷を有するアミノ酸を別の中性電荷を有するアミノ酸で置換することが挙げられる。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数のアミノ酸類似体、非天然アミノ酸またはアミノ酸誘導体を含む。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分、１つまたは複数のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。フレームワーク領域は、抗体の重鎖もしくは軽鎖可変領域またはその結合部分のＣＤＲの間に位置する、および／またはＣＤＲ配列に隣接することが多い。哺乳動物では、重鎖可変領域は、４つのフレームワーク領域を含むことが多く、軽鎖可変領域は、４つのフレームワーク領域を含むことが多い。抗体中の、抗体の可変領域またはその結合部分中の１つまたは複数のフレームワーク領域を同定するために、任意の適した方法が使用され得る。抗体またはその結合部分は、以下に論じられるように未修飾である、または修飾されている（例えば、最適化されている）、合成または天然に存在するフレームワーク領域を含み得る。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、キメラ、グラフト化および／またはヒト化されている。キメラ、グラフト化および／またはヒト化抗体は、シンデカン−１またはその部分に対する結合特異性を維持しながら、修飾または置換された定常領域および／またはフレームワーク領域を含むことが多い。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ヒト抗体に由来する定常領域、フレームワーク領域またはその部分を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、完全合成部分、天然抗体分子中には見出されない、１つまたは複数のアミノ酸またはアミノ酸の配列を含む。
天然に存在するフレームワーク領域またはその部分は、任意の適した種から得てもよい。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分の軽鎖および重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）が、同一または別の種から得たフレームワーク領域中にグラフトされる。例えば、抗体またはその結合部分の１つまたは複数のフレームワーク領域は、げっ歯類種（例えば、マウスまたはラット）または霊長類種（例えば、ヒト）に由来し得る。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分の軽鎖および／または重鎖可変領域のＣＤＲは、コンセンサスヒトフレームワーク領域にグラフトされる。コンセンサスヒトフレームワーク領域を作出するために、ある特定の実施形態では、いくつかのヒト重鎖または軽鎖アミノ酸配列から得たフレームワーク領域がアラインされて、コンセンサス配列が同定される。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分の重鎖または軽鎖フレームワーク領域が、異なる重鎖または軽鎖可変領域から得た１つまたは複数のフレームワーク領域またはその部分と置き換えられる。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のヒトフレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数のマウスフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のマウスフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域および１つまたは複数のマウスフレームワーク領域を含む。
例えば、フレームワーク領域またはその部分を修飾、置換または欠失することによって、キメラ、ヒト化および／または最適化された抗体またはその結合部分を作製する方法は、公知である。ＣＤＲグラフティングの限定されない例は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号、同６，０５４，２９７号、同５，６９３，７６２号、同５，８５９，２０５号、同５，６９３，７６１号、同５，５６５，３３２号、同５，５８５，０８９号および同５，５３０、１０１号に、およびJones et al., Nature, 321 :522-525 (1986)、Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)およびWinter, FEBS Letts., 430:92-94 (1998)に記載されている。キメラ、グラフト化および／またはヒト化抗体を作製する追加の限定されない例として、米国特許第５，５３０，１０１号、同５，７０７，６２２号、同５，９９４，５２４号、同６，２４５，８９４号、Queen et al., (1988) PNAS 86:10029-10033、Riechmann et al., Nature (1988) 332:323-327、Antibody Engineering: Methods and Protocols, Vol. 248 of Methods in molecular biology, edited by Benny K. C. Lo, Springer Science & Business Media, (2004)およびAntibody Engineering, Vol. 1, Roland E. Kontermann, Stefan Duebel, Edition 2, Publisher Springer Science & Business Media, (2010)が挙げられる。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数のフレームワーク領域またはその部分（例えば、１個または複数のアミノ酸）を、ヒト抗体から得た１つまたは複数のフレームワーク領域またはその部分と交換することによってヒト化される（例えば、"Humanization of Antibodies" by Eduardo A. Padlan Publ. Landes BioScience 2002を参照されたい）。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ドナー抗体の結合特異性を維持しながら、ドナー抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）からアクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）に１つまたは複数のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５または６つすべてのＣＤＲ）を移すことによって、ヒト化されるか、またはグラフト化される。ある特定の実施形態では、キメラ、グラフト化またはヒト化抗体を作製するプロセスは、抗体の定常領域またはフレームワーク領域またはその結合部分において１つまたは複数のアミノ酸置換、付加または欠失を行うことを含む。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体またはその結合部分を生成するために、「再形状化（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」、「超キメラ化（ｈｙｐｅｒｃｈｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」または「ベニヤリング／リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」などの技術が使用される。（例えば、Vaswami et al., Annals of Allergy, Asthma, & Immunol. 81 :105 (1998)、Roguska et al., Prot. Engin., 9:895-904 (1996)および米国特許第6,072,035号を参照されたい）。一部の態様では、抗体またはその結合部分は、免疫原性を低減するように、上記で論じられた方法によって、または別の適した方法によって修飾される（例えば、Gilliland et al., J. Immunol、62(6):3663-71 (1999)を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分のアミノ酸配列は、標的（例えば、シンデカン−１）に対する結合親和性、種交差反応性、溶解度および／または機能（例えば、アゴニスト活性またはその欠如）を最適化するように修飾される。一部の実施形態では、本明細書において開示されるＣＤＲの特定の組合せは、シンデカン−１への結合について、および／または抗体またはその結合部分の機能もしくは特徴を最適化するように最適化される。例えば、本明細書において開示される特性決定された軽鎖可変領域（例えば、配列番号３４〜４３のうちいずれか１つの軽鎖可変領域）は、適した発現系を使用して、特性決定された重鎖可変領域（例えば、表６または７から選択される重鎖可変領域）のＣＤＲ−Ｈ１およびＣＤＲ−Ｈ２を含む重鎖可変領域のライブラリーと同時発現されてもよく、これでは、ＣＤＲ−Ｈ３は、例えば、表８の１つまたは複数のＣＤＲ−Ｈ３領域を含み得るＣＤＲ−Ｈ３配列のライブラリーと置き換えられる。得られた軽鎖／重鎖抗体は、シンデカン−１への結合について、および／または特定の機能についてスクリーニングされ得る。適した方法によって、最適化された抗体を同定することができ、ＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列は同定することができる。抗体またはその結合部分に、改善された結合特異性、結合親和性および／または機能を提供する、ＣＤＲの特定の組合せまたは特定の最適化されたＣＤＲ配列（例えば、アミノ酸置換、付加または欠失を含むＣＤＲ配列）を含む抗体またはその結合部分を同定するために、上記のスクリーニング法が使用され得る。抗体またはその結合部分をスクリーニングし、最適化するこのような方法は公知である（例えば、Portolano et al., (1993) Journal of Immunology 150:880-887およびClarkson et al., (1991) Nature 352:624-628を参照されたい）。このような参考文献は、相補性可変領域のライブラリーをスクリーニングすることにより既知軽鎖可変鎖、既知重鎖可変鎖またはその部分（例えば、そのＣＤＲ）を使用することによって、特定の抗原に結合する抗体を生成する方法を教示する。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、抗体またはその結合部分の親和性および／または機能を最適化するためにグリコシル化部位を排除または付加するように修飾される（例えば、Co et al., Mol. Immunol、30:1361-1367 (1993)を参照されたい）。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分中のグリコシル化部位の数および／または種類が、修飾されるかまたは変更される。Ｎ結合型グリコシル化部位は、配列Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒによって特性決定されることが多く、Ｘと名付けられたアミノ酸残基は、プロリンを除く任意のアミノ酸残基である。この配列を作出するためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ結合型炭水化物鎖の付加のための有望な新規部位を提供する。あるいは、この配列を排除する置換は、既存のＮ結合型炭水化物鎖を除去する。また、ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＮ結合型グリコシル化部位（通常、天然に存在するもの）が排除され、１つまたは複数の新規Ｎ結合型部位が作出されるＮ結合型炭水化物鎖の再配列も提供される。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、未修飾抗体またはその結合部分と比較して、１個もしくは複数のシステイン残基を欠失することまたは１個もしくは複数のシステイン残基を別のアミノ酸（例えば、セリン）と置換することによって修飾される。ある特定の実施形態では、システイン変異体は、発現、分泌および／または溶解度を最適化するために有用である。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、抗体またはその結合部分のタンパク質分解に対する感受性を低減するように、抗体またはその結合部分の酸化に対する感受性を低減するように、血清半減期を増大するように、および／または抗体またはその結合部分の他の物理化学的、薬物動態的もしくは機能的特性を付与もしくは修飾するように設計もしくは意図された、ある特定のアミノ酸付加、置換または欠失を含むように修飾される。
本明細書において記載される二重特異性結合物質の抗体部分は、ＣＤ１３８に特異的に結合する抗体の抗原結合部分（例えば、結合部分）を含み得る。抗体の結合部分とは、抗体の抗原結合部分を指す。ある特定の実施形態では、抗体の結合部分は、少なくとも、抗原（例えば、シンデカン−１またはその部分）に特異的に結合するのに十分である抗体の最小部分を含む。ある特定の実施形態では、抗体の結合部分は、ＣＤ１３８への特異的結合を指示するのに必要であり、十分である抗体の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体の結合部分は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体の結合部分は、単一ポリペプチドを含むかまたはからなる（例えば、一本鎖抗体）。一本鎖抗体は、抗体の重鎖および／または軽鎖に由来する１つまたは複数のＣＤＲを含み得る。一部の実施形態では、抗体の結合部分は、２つのポリペプチド（例えば、重鎖可変領域および軽鎖可変領域）を含むかまたはからなる。一部の実施形態では、抗体の結合部分は、１つまたは複数の構造部分（例えば、足場、構造ポリペプチド、定常領域および／またはフレームワーク領域）を含む。一部の実施形態では、抗体または抗体の結合部分は、担体または基質（例えば、ポリマー、非有機材料、シリコン、ビーズ、粒子など）に結合されている。
二重特異性結合物質は、抗体の１つの結合部分を含む場合も、抗体の複数の結合部分を含む場合もある。二重特異性結合物質が、抗体の複数の結合部分を含む場合には、各結合部分は、同一抗原（例えば、シンデカン−１またはその部分）に特異的に結合する。一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、抗体の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０またはそれより多い結合部分を含む。
抗体の結合部分の限定されない例として、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ（軽鎖可変鎖）、ＶＨ（重鎖可変鎖）、ダイアボディー（Ｄａｂ）、トリアボディー（三価）、テトラボディー（四価）、ミニボディー（（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）２）、ＩｇＧｄｅｌｔａＣＨ２、ナノボディー、ｓｃＦｖ−Ｉｇ、ＳＶＤ−Ｉｇなどおよびそれらの組合せが挙げられる。
二重特異性結合物質、抗体またはその結合部分の１つまたは複数のポリペプチドをコードする核酸またはその部分は、当業者に公知の方法によって、適したクローニング手順を使用して組換え発現のためにクローニング、サブクローニング、再編成または修飾され、その後、適した発現系を使用して発現され得る（例えば、Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982、Antibody Engineering: Methods and Protocols, Vol. 248 of Methods in molecular biology, edited by Benny K. C. Lo, Springer Science & Business Media, 2004、Antibody Engineering, Vol. 1, Roland E. Kontermann, Stefan Duebel, Edition 2, Publisher Springer Science & Business Media, 2010、Antibody Phage Display: Methods and Protocols, Biomed Protocols, Vol. 178 of Methods in molecular biology, Editors Philippa M. O'Brien, Robert Aitken, Springer Science & Business Media, 2004を参照されたい）。
一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、哺乳動物シンデカン−１またはその部分に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１０−５以下、１０−６以下、１０−７以下、１０−８以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下または１ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で哺乳動物シンデカン−１またはその部分に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、約１０−５〜１０−１５Ｍ、１０−６〜１０−１５Ｍ、１０−７〜１０−１５Ｍ、１０−９〜１０−１５Ｍ、１０−９〜１０−１４Ｍ、１０−９〜１０−１３Ｍまたは１０−９〜約１０−１２Ｍの結合親和性（ＫＤ）で哺乳動物シンデカン−１またはその部分に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、哺乳動物シンデカン−１またはその部分の細胞外ドメインまたは細胞外領域に特異的に結合する。ある特定の態様では、抗体またはその結合部分は、天然に見られない変更されていない（遺伝子修飾されていない）哺乳動物の細胞によって産生された野生型シンデカン−１に特異的に結合する。ある特定の態様では、抗体またはその結合部分は、天然に存在するシンデカン−１変異体に特異的に結合する。ある特定の態様では、抗体またはその結合部分は、１つまたは複数のアミノ酸置換、付加または欠失を含むシンデカン−１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコまたはげっ歯類（例えば、マウスまたはラット）の細胞の表面で産生および／または発現されたシンデカン−１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部は、１つもしくは複数のシンデカン−１ポリペプチドまたは配列番号１および１２６〜１３０のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含むその部分（例えば、細胞外メイン）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、１つもしくは複数のシンデカン−１ポリペプチドまたは配列番号１および１２６〜１３０のうちいずれか１つのアミノ酸配列を有するその部分に、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下または１ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１の細胞外ドメインに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１および／またはその細胞外ドメインに特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９４）またはＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９５）のアミノ酸配列を含むかまたはからなるポリペプチド配列に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９４）またはＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９５）のアミノ酸配列を含むかまたはからなるポリペプチド配列に、１０−５以下、１０−６以下、１０−７以下、１０−８以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下または１ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ＧＸ１ＫＥＸ２ＥＡＸ３ＶＬＰ（配列番号９６）（式中、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、任意のアミノ酸から選択される）のアミノ酸配列を含むかまたはからなるポリペプチド配列に特異的に結合する。一部の実施形態では、Ｘ１は、プロリン、アラニン、システイン、グリシン、セリン、トレオニンおよびバリンから選択され、および／またはＸ２は、プロリン、アラニン、システイン、グリシン、セリン、トレオニンおよびバリンから選択され、および／またはＸ３は、プロリン、アラニン、システイン、グリシン、セリン、トレオニン、バリン、メチオニン、ロイシン、イソロイシンおよびフェニルアラニンから選択される。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、ＧＸ１ＫＥＸ２ＥＡＸ３ＶＬＰ（配列番号９６）のアミノ酸配列を含むかまたはからなるポリペプチド配列に、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下または１ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合し、Ｘ１は、プロリン、アラニン、システイン、グリシン、セリン、トレオニンおよびバリンから選択され、Ｘ２は、ロリン、アラニン、システイン、グリシン、セリン、トレオニンおよびバリンから選択され、Ｘ３は、プロリン、アラニン、システイン、グリシン、セリン、トレオニン、バリン、メチオニン、ロイシン、イソロイシンおよびフェニルアラニンから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ１は、プロリンであり、Ｘ２は、アラニン、グリシンまたはセリンから選択され、Ｘ３は、アラニン、グリシンおよびバリンから選択される。
ＦＧＦＲ
異常に活性化されたＦＧＦＲは、いくつかのヒト悪性腫瘍に関与しており、ＦＧＦＲ３の過剰発現は、いくつかの動物モデルにおいて発癌性形質転換を誘導するのに十分である。ＦＧＦＲを標的とする抗体および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を作製するいくつかの試みがなされてきた。しかし、これらの抗体は、ＦＧＦＲの１つのアイソフォームのみを認識し、種々のＦＧＦＲアイソフォームの間で結合親和性において有意差を示すことが多い。
ＦＧＦＲ３の１つまたは複数のスプライス形態と高親和性および特異性で結合するフィノマーを含む二重特異性結合物質が、本明細書において示される。一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、結合の際に標的細胞中に内部移行されることが可能である。
フィノマー
一部の実施形態では、フィノマーは、ヒト癌原遺伝子チロシンタンパク質キナーゼＦｙｎのＳＨ３ドメインに由来する非免疫グロブリン足場を含む小さい抗原結合ポリペプチド（例えば、５〜１０ｋＤａ、一部の実施形態では、約７ｋＤａ）である（ｐ５９−ＦＹＮ、Ｓｌｋ、Ｓｙｎ、ＭＧＣ４５３５０、遺伝子ＩＤ２５３４）。したがって、ある特定の実施形態では、フィノマーは、組換え技術を使用して核酸配列から発現され得る、または化学的に合成され得る（例えば、適した固相化学を使用することによって）Ｎ末端（Ｎ末端アミノ酸）およびＣ末端（Ｃ末端アミノ酸）を含む一本鎖ポリペプチドである。Ｆｙｎ ＳＨ３由来フィノマーは、当技術分野で公知であり、例えば、Grabulovski et al. (2007) JBC, 282, p. 3196-3204、WO2008/022759、Bertschinger et al. (2007) Protein Eng. Des. Sel. 20(2):57-68およびGebauer and Skerra (2009) Curr. Opinion in Chemical Biology 13:245-255に記載されている。フィノマーは、５０〜８０個のアミノ酸長のポリペプチドを含み得る。一部の実施形態では、フィノマーは、５０〜７０または６０〜７０個のアミノ酸長のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、フィノマーは、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９または７０個のアミノ酸長のポリペプチドを含む。フィノマーは、しばしば、２つの可変ループ（ＲＴループおよびｓｒｃループ）のランダム突然変異によって、選択した抗原標的に高親和性および特異性で結合するように操作され得るが、一方で、フィノマーの周囲の配列は、フィノマー配列間で実質的に保存されている構造足場を提供する。これら２つの可変ループのアミノ酸配列および時には、可変ループに直接隣接するアミノ酸は、選択された抗原標的に対するフィノマーの特異性および結合親和性に実質的に寄与すると考えられる。可変ループの外側のフィノマー配列は、主に構造足場を提供するが、足場領域内のある特定のアミノ酸は、構造または結合特異性の実施素敵な喪失を伴わずに置換され得ると理解される。
本明細書において示されるフィノマーのアミノ酸配列は、ＦＧＦＲ３または１つもしくは複数の特定のアイソフォームまたはその変異体に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書において記載されるフィノマーは、ＦＧＦＲ３または１つもしくは複数の特定のアイソフォームまたはその変異体に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書において記載されるフィノマーは、線維芽細胞増殖因子受容体３、アイソフォーム３ｂ（ＦＧＦＲ３ｂ）に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書において記載されるフィノマーは、線維芽細胞増殖因子受容体３、アイソフォーム３ｃ（ＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書において記載されるフィノマーは、ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃの両方に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３は、哺乳動物ＦＧＦＲ３である。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３は、ヒト、マウス、ラットまたはサルＦＧＦＲ３タンパク質またはそのアイソフォームである。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ３は、ヒトＦＧＦＲ３またはそのアイソフォームである。ヒトＦＧＦＲ３ｂのアミノ酸配列は、配列番号９７に示されており、ヒトＦＧＦＲ３ｃのアミノ酸配列は、配列番号９８に示されている。一部の実施形態では、本明細書において記載されるフィノマーは、ヒトＦＧＦＲ３ｂおよび／またはヒトＦＧＦＲ３ｃに特異的に結合する。
一部の実施形態では、フィノマー（例えば、本明細書において開示される二重特異性結合物質のフィノマー部分）は、ＦＧＦＲ３またはそのアイソフォームに、１×１０−７以下のＫＤ、１×１０−８以下のＫＤ、１×１０−９以下のＫＤで、または１×１０−１０以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、フィノマー（例えば、本明細書において開示される二重特異性結合物質のフィノマー部分）は、アイソフォームＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃの一方または両方に、１×１０−７以下のＫＤ、１×１０−８以下のＫＤ、１×１０−９以下のＫＤで、または１×１０−１０以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、フィノマーは、アイソフォームＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃの両方に、１０−７〜１０−１２ＭのＫＤ、１０−８〜１０−１２ＭのＫＤまたは１０−９〜１０−１２ＭのＫＤで結合する。一部の実施形態では、フィノマーは、アイソフォームＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃの一方または両方に特異的に結合し、他の関連タンパク質、例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２またはＦＧＦＲ４と実質的に結合しない。一部の実施形態では、ＦＧＦＲと実質的に結合しないフィノマーは、検出可能な特異的結合を全く実証しないまたはＦＧＦＲに、５×１０−６Ｍよりも大きいＫＤで結合するフィノマーである。
一部の実施形態では、本明細書において開示される二重特異性結合物質のフィノマー部分は、受容体が結合しているリガンド（例えば、ＦＧＦ１）の存在下でＦＧＦＲ３またはそのアイソフォームに結合する。したがって、一部の実施形態では、本明細書において開示される二重特異性結合物質のフィノマー部分は、ＦＧＦＲ３リガンド（例えば、ＦＧＦ１）の、ＦＧＦＲ３への結合を遮断、抑制または阻害しない。一部の実施形態では、本明細書において開示される二重特異性結合物質のフィノマー部分は、ＦＧＦＲ３リガンド（例えば、ＦＧＦ１）のＦＧＦＲ３への結合を遮断、抑制または阻害しない。一部の実施形態では、本明細書において開示される二重特異性結合物質は、ＦＧＦＲ３リガンド（例えば、ＦＧＦ１）のＦＧＦＲ３への結合を遮断、抑制または阻害しない。一部の実施形態では、本明細書において開示される二重特異性結合物質のフィノマー部分および／または本明細書において開示される二重特異性結合物質は、受容体が結合しているリガンド（例えば、ＦＧＦ１）の存在下でＦＧＦＲ３またはそのアイソフォームに結合する。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、アミノ酸配列ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬ（Ｘ １ ）（Ｘ ２ ）（Ｘ ３ ）（Ｘ ４ ）ＧＰＹＷＥＡＲＳＬ（Ｘ５）ＴＧＥＴＧ（Ｘ６）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号９９）（ここで、アミノ酸Ｘ１〜Ｘ６は独立に、任意のアミノ酸から選択される）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一の配列を有するフィノマーは、ＦＧＦＲ３（例えば、ヒトＦＧＦＲ３）に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一の配列を有するフィノマーは、ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃの両方に特異的に結合する。本明細書において提供されるフィノマー配列のＮ末端ＲＴループおよびＣ末端ｓｒｃループには、単に例示目的で下線が引かれている。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、（ｉ）アミノ酸Ｘ１〜Ｘ６は独立に、任意のアミノ酸から選択され、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号９９のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＰおよびＹは保存されている。
ある特定の実施形態では、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ、ＨおよびＫから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ１は、Ｎ、ＲまたはＫである。ある特定の実施形態では、Ｘ２は、Ｓ、Ｇ、Ａ、ＶおよびＰから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ２は、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｐおよび任意の塩基性アミノ酸から選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ２は、Ｓ、Ｇ、ＫまたはＲである。ある特定の実施形態では、Ｘ３は、Ｓ、Ｇ、Ａ、ＶまたはＰである。ある特定の実施形態では、Ｘ３は、ＳまたはＧである。ある特定の実施形態では、Ｘ４は、任意の電荷を有する、塩基性または酸性アミノ酸から選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ４は、Ｓ、Ｇ、Ａ、ＶおよびＰから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ４は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＳまたはＫである。ある特定の実施形態では、Ｘ５は、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｐ、ＳおよびＴから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ５は、ＴまたはＡである。ある特定の実施形態では、Ｘ６は、任意の疎水性アミノ酸から選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ６は、任意の極性アミノ酸から選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ６は、Ｑ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｗ、Ａ、Ｌ、ＶおよびＩから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ６は、Ｙ、ＷまたはＬである。
ある特定の実施形態では、Ｘ１は、Ｎ、ＲまたはＫであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｇ、ＫまたはＲであり、Ｘ３は、ＳまたはＧであり、Ｘ４は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＳまたはＫであり、Ｘ５は、ＴまたはＡであり、および／またはＸ６は、Ｙ、ＷまたはＬである。
一部の実施形態では、フィノマーは、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、（ｉ）アミノ酸位置Ｘ１〜Ｘ６は、任意のアミノ酸配列であってよく、（ｉｉ）同一性決定は、アミノ酸位置Ｘ１〜Ｘ６を除外し、（ｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸位置１２〜１９におけるアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号９９のアミノ酸位置３７および３８におけるアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、（ｉｖ）フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。
一部の実施形態では、フィノマーは、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、（ｉ）Ｘ１は、Ｎ、ＲまたはＫであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｇ、ＫまたはＲであり、Ｘ３は、ＳまたはＧであり、Ｘ４は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＳまたはＫであり、Ｘ５は、ＴまたはＡであり、Ｘ６は、Ｙ、ＷまたはＬである、（ｉｉ）同一性決定は、アミノ酸位置Ｘ１〜Ｘ６を除外し、（ｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸位置１２〜１９におけるアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号９９のアミノ酸位置３７および３８におけるアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、（ｉｖ）フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＮＳＳＥＧＰＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＬＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１０１；本明細書においてＦＦ２Ｌ４Ｃ３と呼ばれることもある）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０１のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０１のアミノ酸位置３７および３８におけるアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０１のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０１のアミノ酸位置３２〜３８のアミノ酸配列ＮＳＳＥＧＰＹ（配列番号１０２）は保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合するフィノマーは、フィノマーの、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する能力を取り除かないかまたは大幅に低減しない、０〜１２、０〜８、０〜５または１〜２つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を含むフィノマーである。特異的結合の大幅な低減は、配列番号１０１のフィノマーのヒトＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性の２０％を超える結合親和性（すなわち、ＫＤ）の低減である。当業者ならば、日常的な方法を使用してフィノマーのＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性を容易に決定でき、このような決定は、過度の実験を必要としないであろう。したがって、当業者ならば、配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーを作製する方法を容易に決定できる。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＲＧＧＱＧＰＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＬＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１０３；本明細書においてＦＦ４４Ｌ６５Ｇ１２と呼ばれることもある）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０３のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０３のアミノ酸位置３７および３８におけるアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０３のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０３のアミノ酸位置３２〜３８のアミノ酸配列ＲＧＧＱＧＰＹ（配列番号１０４）は保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合するフィノマーは、フィノマーの、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する能力を取り除かないかまたは大幅に低減しない、０〜１２、０〜８、０〜５または１〜２つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を含むフィノマーである。特異的結合の大幅な低減は、配列番号１０３のフィノマーのヒトＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性の２０％を超える結合親和性（すなわち、ＫＤ）の低減である。当業者ならば、日常的な方法を使用してフィノマーのＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性を容易に決定でき、このような決定は、過度の実験を必要としないであろう。したがって、当業者ならば、配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーを作製する方法を容易に決定できる。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＲＧＧＤＧＰＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＬＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１０５；本明細書においてＦＦ４４Ｌ６５Ｇ７と呼ばれることもある）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０５のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０５のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０５のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）および配列番号１０５のアミノ酸位置３２〜３８のアミノ酸ＲＧＧＤＧＰＹ（配列番号１０６）は保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合するフィノマーは、フィノマーの、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する能力を取り除かないかまたは大幅に低減しない、０〜１２、０〜８、０〜５または１〜２つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を含むフィノマーである。特異的結合の大幅な低減は、配列番号１０５のフィノマーのヒトＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性の２０％を超える結合親和性（すなわち、ＫＤ）の低減である。当業者ならば、日常的な方法を使用してフィノマーのＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性を容易に決定でき、このような決定は、過度の実験を必要としないであろう。したがって、当業者ならば、配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーを作製する方法を容易に決定できる。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＫＧＧＳＧＰＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＬＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１０７；本明細書においてＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７または「Ｇ７」と呼ばれることもある）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０７のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０７のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０７のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）および配列番号１０７のアミノ酸位置３２〜３８のアミノ酸ＫＧＧＳＧＰＹ（配列番号１０８）は保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合するフィノマーは、フィノマーの、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する能力を取り除かないかまたは大幅に低減しない、０〜１２、０〜８、０〜５または１〜２つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を含むフィノマーである。特異的結合の大幅な低減は、配列番号１０７のフィノマーのヒトＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性の２０％を超える結合親和性（すなわち、ＫＤ）の低減である。当業者ならば、日常的な方法を使用してフィノマーのＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性を容易に決定でき、このような決定は、過度の実験を必要としないであろう。したがって、当業者ならば、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーを作製する方法を容易に決定できる。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＲＫＧＫＧＰＹＷＥＡＲＳＬＡＴＧＥＴＧＬＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１０９；本明細書においてＦＦ４３Ｌ６５Ｄ５と呼ばれることもある）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０９のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０９のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１０９のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）および配列番号１０９のアミノ酸位置３２〜３８のアミノ酸ＲＫＧＫＧＰＹ（配列番号１１０）は保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合するフィノマーは、フィノマーの、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する能力を取り除かないかまたは大幅に低減しない、０〜１２、０〜８、０〜５または１〜２つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を含むフィノマーである。特異的結合の大幅な低減は、配列番号１０９のフィノマーのヒトＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性の２０％を超える結合親和性（すなわち、ＫＤ）の低減である。当業者ならば、日常的な方法を使用してフィノマーのＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性を容易に決定でき、このような決定は、過度の実験を必要としないであろう。したがって、当業者ならば、配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーを作製する方法を容易に決定できる。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＲＲＧＳＧＰＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＬＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１１１；本明細書においてＦＦ４４Ｌ６５Ｂ７と呼ばれることもある）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３またはそのアイソフォーム（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１１１のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１１１のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＰおよびＹは保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、配列番号１１１のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１１１のアミノ酸位置３２〜３８のアミノ酸ＲＲＧＳＧＰＹ（配列番号１１２）は保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合するフィノマーは、フィノマーの、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する能力を取り除かないかまたは大幅に低減しない、０〜１２、０〜８、０〜５または１〜２つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を含むフィノマーである。特異的結合の大幅な低減は、配列番号１１１のフィノマーのヒトＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性の２０％を超える結合親和性（すなわち、ＫＤ）の低減である。当業者ならば、日常的な方法を使用してフィノマーのＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性を容易に決定でき、このような決定は、過度の実験を必要としないであろう。したがって、当業者ならば、配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーを作製する方法を容易に決定できる。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＭＳＴＴＡＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＱＳＰＨＧＱＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧ（Ｘ７）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１１３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、アミノ酸（Ｘ７）は、任意のアミノ酸から選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ７は、任意の疎水性アミノ酸から選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ７は、任意の極性アミノ酸から選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ７は、Ｑ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｗ、Ａ、Ｌ、ＶおよびＩから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ７は、Ｙ、ＷまたはＬである。ある特定の実施形態では、Ｘ７は、Ｗである。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、（ｉ）Ｘ７位のアミノ酸は、任意のアミノ酸であってよく、（ｉｉ）同一性決定は、アミノ酸位置Ｘ７を除外し、（ｉｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸位置１２〜１８のアミノ酸配列ＥＶＭＳＴＴＡ（配列番号１１４）および配列番号１１３のアミノ酸位置３１〜３５のＳＱＳＰＨ（配列番号１１５）は、保存されており、（ｉｖ）配列番号１１３のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＱおよびＹは、保存されており、（ｖ）フィノマーは、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＭＳＴＴＡＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＱＳＰＨＧＱＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＷＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１１６；本明細書においてＦＦ４０Ｌ５４Ａ５と呼ばれることもある）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、（ｉ）配列番号１１６のアミノ酸位置１２〜１８のアミノ酸配列ＥＶＭＳＴＴＡ（配列番号１１４）、（ｉｉ）配列番号１１６のアミノ酸位置３１〜３５のアミノ酸配列ＳＱＳＰＨ（配列番号１１５）は、保存されており、（ｉｉｉ）配列番号１１６のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＱおよびＹは、保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、（ｉ）配列番号１１６のアミノ酸位置１２〜１８のアミノ酸配列ＥＶＭＳＴＴＡ（配列番号１１４）は、保存されており、（ｉｉ）配列番号１１６のアミノ酸位置３１〜３８のアミノ酸配列ＳＱＳＰＨＧＱＹ（配列番号１１７）は、保存されており、フィノマーは、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する。一部の実施形態では、配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合するフィノマーは、フィノマーの、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する能力を取り除かないかまたは大幅に低減しない、０〜１２、０〜８、０〜５または１〜２つのアミノ酸置換、付加および／または欠失を含むフィノマーである。特異的結合の大幅な低減は、配列番号１１６のフィノマーのヒトＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性の２０％を超える結合親和性（すなわち、ＫＤ）の低減である。当業者ならば、日常的な方法を使用してフィノマーのＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃに対する結合親和性を容易に決定でき、このような決定は、過度の実験を必要としないであろう。したがって、当業者ならば、配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有し、ＦＧＦＲ３に特異的に結合するフィノマーを作製する方法を容易に決定できる。ある特定の実施形態では、フィノマーは、配列番号１１６のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはからなる。
二重特異性結合物質のフィノマー部分は、任意の適した方法を使用して任意の適した位置で二重特異性結合物質の抗体部分に結合され得る。フィノマーは、抗体またはその結合部分に共有結合によって、または非共有結合によって結合され得る。フィノマーは、抗体またはその抗原結合部分のＮ末端（Ｎ末端アミノ酸）および／またはＣ末端（Ｃ末端アミノ酸）に結合され得る。一部の実施形態では、フィノマーは、抗体またはその抗原結合部分の重鎖のＮ末端および／または軽鎖のＮ末端に結合され得る。一部の実施形態では、フィノマーは、抗体またはその抗原結合部分の重鎖のＣ末端および／または軽鎖のＣ末端に結合される。一部の実施形態では、フィノマーは、抗体またはその抗原結合部分の定常ドメイン内の適した位置に結合される。
ある特定の実施形態では、フィノマーは、ペプチド結合によって抗体または抗体内に結合される。一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、フィノマーおよび抗体のポリペプチド（例えば、重鎖、軽鎖または一本鎖）を含む融合タンパク質を含み、フィノマーおよび抗体ポリペプチドは、ペプチド結合によって接合される。したがって、一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、核酸が、フィノマーおよび抗体またはその部分（例えば、軽鎖または重鎖）を含むポリペプチドを、単一ポリペプチドとして発現するように構成される組換え技術を使用して作られる。一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、フィノマーおよび抗体またはその抗原結合部分を含み、フィノマーのＣ末端アミノ酸は、ペプチド結合によって、抗体のＮ末端アミノ酸（例えば、重鎖のＮ末端アミノ酸または軽鎖のＮ末端アミノ酸）に連結される。一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、フィノマーおよび抗体またはその抗原結合部分を含み、フィノマーのＮ末端アミノ酸は、ペプチド結合によって抗体のＣ末端アミノ酸（例えば、重鎖のＣ末端アミノ酸または軽鎖のＣ末端アミノ酸）に連結される。ある特定の実施形態では、フィノマーペプチドは、抗体のポリペプチド内に組み込まれる。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する１つまたは複数のフィノマーを含む。例えば、二重特異性結合物質は、２つの重鎖および２つの軽鎖を有する抗体ならびに抗体の重鎖の一方または両方のＮ末端に結合されたフィノマー、軽鎖の一方または両方のＮ末端に結合されたフィノマー、重鎖の一方または両方のＣ末端に結合されたフィノマーおよび／または軽鎖の一方または両方のＣ末端に結合されたフィノマーを含み得る。したがって、ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、１〜１２、１〜８または１〜４のフィノマーを含む。一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、１、２、３、４、５、６、７または８のフィノマーを含む。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、フィノマーと抗体の間にリンカーを含む。適したリンカーの限定されない例として、アミノ酸、ペプチド（例えば、２個またはそれより多いアミノ酸）、適宜置換されたＣ１〜Ｃ５０アルキル、適宜置換されたＣ２〜Ｃ５０アルケニル、アルキニル、アシル、アシルオキシ、アルコキシ、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルコキシ、アリール、アミノカルボニル、アジド、カルボキシ、シラン、チオール、スルホキシド、スルホン、スルホネートエステル、シアノ、アミド、アミノ、エステル、ホスホン酸、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など、その誘導体、そのポリマーおよびその組合せが挙げられる。リンカーを使用して２つまたはそれより多い分子を結合する方法は、当業者には公知であり、このような方法は、「架橋」と呼ばれることもある。
一部の実施形態では、リンカーは、２個またはそれより多いアミノ酸、２〜１００個のアミノ酸、５〜１００個のアミノ酸、２〜５０個のアミノ酸、５〜５０個のアミノ酸、２〜２５個のアミノ酸、５〜２５個のアミノ酸、２〜２０個のアミノ酸、５〜２０個のアミノ酸、２〜１０個のアミノ酸または５〜１０個のアミノ酸を含むペプチドを含む。一部の実施形態では、リンカーは、２、３、４または５個のアミノ酸を含むペプチドを含む。一部の実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）Ｘ（Ｘ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）の、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのモチーフを含む。
用語「同一パーセント」または「同一性パーセント」とは、２つのアミノ酸配列間の配列同一性を指す。一部の実施形態では、同一性は、比較目的でアラインされ得る各配列中の位置を比較することによって決定される。比較される配列中の同等の位置が同一アミノ酸によって占められる場合には、分子はその位置で同一である。同等の部位が同一または類似のアミノ酸残基（例えば、立体的および／または電子的性質において類似）によって占められる場合には、分子は、その位置で相同な（類似）と呼ばれ得る。相同性、類似性または同一性のパーセンテージとしての表現は、比較される配列によって共有される位置での同一または類似アミノ酸の数の関数を指す。相同性、類似性または同一性のパーセンテージとしての表現は、比較される配列によって共有される位置での同一または類似アミノ酸の数の関数を指す。ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＥＮＴＲＥＺを含め、種々のアラインメントアルゴリズムおよび／またはプログラムが使用され得る。ＦＡＳＴＡおよびＢＬＡＳＴは、ＧＣＧ配列分析パッケージ（ウィスコンシン大学、ウィスコンシン州、マディソン）の一部として入手可能であり、例えば、デフォルト設定を用いて使用され得る。ＥＮＴＲＥＺは、米国国立生物工学情報センター、米国国立医学図書館、米国国立衛生研究所、メリーランド州ベセスダから入手可能である。一実施形態では、２つの配列の同一性パーセントは、１のギャップ重みを用いるＧＣＧプログラムによって決定することができ、例えば、各アミノ酸ギャップは、２つの配列間の単一アミノ酸またはヌクレオチドミスマッチであるかのように重み付けされる。
アラインメントのための他の技術は、Methods in Enzymology, vol. 266: Computer Methods for Macromolecular Sequence Analysis (1996), ed. Doolittle, Academic Press, Inc., a division of Harcourt Brace & Co., San Diego, Calif., USAに記載されている。一部の実施形態では、配列をアラインするために、配列中のギャップを許容するアラインメントプログラムが利用される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎは、配列アラインメント中のギャップを許容する１つの種類のアルゴリズムである。Meth. Mol. Biol. 70:173-187 (1997)を参照されたい。また、配列をアラインするために、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈアラインメント法を使用するＧＡＰプログラムも利用され得る。代替検索戦略は、ＭＰＳＲＣＨソフトウェアを使用し、これは、ＭＡＳＰＡＲコンピュータで実施する。ＭＰＳＲＣＨは、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用して、大規模並列処理コンピュータで配列をスコア化する。このアプローチは、遠く関連するマッチを選び取る能力を改善し、小さいギャップおよびヌクレオチド配列エラーに特に強い。タンパク質およびＤＮＡデータベースの両方を検索するために、核酸によってコードされるアミノ酸配列が使用され得る。
用語「特異的に結合する」とは、例えば、適したインビトロアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、イムノブロット、フローサイトメトリーなど）によって決定されるように、他の分子または他のペプチドに結合することに優先して、標的タンパク質、ペプチドまたはエピトープに結合する二重特異性結合物質、フィノマー、抗体またはその部分を指す。特異的結合相互作用は、非特異的結合相互作用を約２倍以上、多くの場合、約１０倍以上、時には、約１００倍以上、１０００倍以上、１０，０００倍以上、１００，０００倍以上または１，０００，０００倍以上上回って区別する。
一部の実施形態では、シンデカン−１またはその部分に特異的に結合する抗体またはその結合部分は、シンデカン−１またはその部分（例えば、シンデカン−１の細胞外ドメイン）に、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、９００ｐＭ以下、８００ｐＭ以下、７５０ｐＭ以下、７００ｐＭ以下、６００ｐＭ以下、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下または１００ｐＭ以下の結合親和性定数（ＫＤ）で結合する抗体またはその結合部分である。一部の実施形態では、シンデカン−１またはその部分に特異的に結合する抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１またはその部分（例えば、ヒトシンデカン−１の細胞外ドメイン）に、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、９００ｐＭ以下、８００ｐＭ以下、７５０ｐＭ以下、７００ｐＭ以下、６００ｐＭ以下、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下または１００ｐＭ以下の結合親和性定数（ＫＤ）で結合する抗体またはその結合部分である。一部の実施形態では、シンデカン−１またはその部分に特異的に結合する抗体またはその結合部分は、非ヒト種（例えば、非ヒト霊長類またはげっ歯類；例えば、マウスまたはラット）に由来するシンデカン−１またはその部分に、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、９００ｐＭ以下、８００ｐＭ以下、７５０ｐＭ以下、７００ｐＭ以下、６００ｐＭ以下、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下または１００ｐＭ以下の結合親和性定数（ＫＤ）で特異的に結合する抗体またはその結合部分である。ある特定の実施形態では、本明細書において開示される抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１またはその部分に特異的に結合し、非ヒト霊長類に由来するシンデカン−１またはその部分に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書において開示される抗体またはその結合部分は、ヒトシンデカン−１またはその部分に特異的に結合し、げっ歯類（例えば、マウスまたはラット）に由来するシンデカン−１またはその部分に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその結合部分は、（ｉ）ヒトシンデカン−１またはその部分（例えば、ヒトシンデカン−１の細胞外ドメイン）に１０ｎＭ以下または１ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、（ｉｉ）ラットまたはマウスシンデカン−１またはその部分（例えば、ラットまたはマウスシンデカン−１の細胞外ドメイン）に、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下または１０ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、シンデカン−１への、または配列番号９４、９５もしくは９６のアミノ酸配列を含むポリペプチドへの結合について、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と競合する抗体またはその結合部分を含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、シンデカン−１への結合について、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と競合する抗体部分を含み、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体は、表１〜１０に示される１つもしくは複数のＣＤＲまたは表１〜１０に示されるものと実質的に同様の１つもしくは複数のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、シンデカン−１への結合について、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と競合する抗体部分を含み、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体は、表１から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、表２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、表６から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、表７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２および表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３を含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、シンデカン−１への結合について、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と競合する抗体部分を含み、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体は、それぞれ配列番号２、１７、２７、４７、６１および７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と同一の、シンデカン−１のエピトープに結合する抗体または抗体部分を含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と同一の、シンデカン−１のエピトープに特異的に結合する抗体または抗体部分を含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、配列番号９４、９５または９６のアミノ酸配列に特異的に結合する抗体または抗体部分を含む。
ある特定の実施形態では、二重特異性薬剤は、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体とは別個のおよび／または異なる１つまたは複数のＣＤＲ配列を有する抗体部分を含み、二重特異性薬剤は、シンデカン−１への結合について、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と競合する。
抗原への結合について競合する抗体を同定する方法は、公知である。二重特異性薬剤またはその抗体部分が、シンデカン−１への結合について、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と競合するか否かを調べるために、任意の適した方法が使用され得る。例えば、シンデカン−１抗原またはその部分が、９６ウェルプレート上にコーティングされるＥＬＩＳＡベースの方法が使用され得る。二重特異性薬剤は、付加され、コーティングされた抗原に結合することが可能となる。次いで、プレートが洗浄され、本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体がプレートに付加され、結合することが可能となる。二重特異性薬剤の存在下または不在下で本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体の結合量が測定され、二重特異性薬剤が結合について本明細書において記載される抗シンデカン−１抗体と競合するか否かが決定される。当技術分野で公知の他の適した方法も使用され得る。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、標識を含む。本明細書において、用語「標識」または「標識された」とは、例えば、標識されたアミノ酸の組み込みまたは標識されたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的もしくは比色法によって検出され得る酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチン部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの組み込みを指す。ある特定の実施形態では、標識またはマーカーは、診断薬を作製するために二重特異性結合物質に結合され得る。二重特異性結合物質は、任意の適した標識またはマーカーに共有結合によって結合され得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する種々の方法が、当業者に公知であり、使用され得る。ポリペプチドの標識の限定されない例として、それだけには限らないが、蛍光標識、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光標識、金属標識、発色団、電気電気化学発光標識、リン光標識、クエンチャー（例えば、フルオロフォアクエンチャー）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）対（例えば、ドナーおよびアクセプター）、色素、酵素基質、小分子、質量タグ、量子ドット、ナノ粒子、ビオチニル基、二次リポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ、それらの同様のものまたは組合せが挙げられる。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、適した担体を含む。二重特異性結合物質は、共有結合によって、または非共有結合によって適した担体に結合され得る。一部の実施形態では、二重特異性薬剤のフィノマー部分が、担体に結合される。一部の実施形態では、二重特異性結合物質の抗体部分が、担体に結合される。担体の限定されない例として、二重特異性結合物質のインビボ半減期を変更または延長する薬剤または分子が挙げられ、ポリエチレングリコール、グリコーゲンおよび／または炭水化物（例えば、ポリペプチドのグリコシル化によって導入されるような）、デキストラン、米国特許第６，６６０，８４３号に記載されるような担体またはビヒクル、それらの同様のものまたは組合せが挙げられる。ある特定の実施形態では、二重特異性薬剤またはその部分は、グリコシル化される。一部の実施形態では、標識または担体は、適したリンカーの使用によって二重特異性結合物質に結合される。
一部の実施形態では、標識、担体、抗悪性腫瘍剤、毒素またはリンカーは、二重特異性結合物質の適したチオール基（例えば、システイン残基のチオール基）に結合される。一部の実施形態では、標識、担体、抗悪性腫瘍剤、毒素またはリンカーは、二重特異性結合物質のアミノ基の適した反応性窒素に結合される。標識、担体、抗悪性腫瘍剤、毒素またはリンカーを結合する目的で、二重特異性結合物質の任意の適したアミノ酸残基は、チオール基を含有するアミノ酸残基（例えば、システイン）または反応性窒素を含有するアミノ酸残基（例えば、リシン）と置換され得る。チオール含有アミノ酸残基または遊離アミノ基で置換され得る、二重特異性結合物質の抗体部分中のアミノ酸の限定されない例として、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ１のＡ１１８、Ｓ１１９、Ｓ２３９、Ｖ２８２、Ｔ２８９、Ｎ３６１およびＶ４２２（ＥＵ番号付けシステムに対応する）またはＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４中の対応する位置が挙げられる。したがって、一部の実施形態では、本明細書において記載される二重特異性結合物質は、ヒト重鎖定常領域を含む抗体を含み、抗体のＩｇＧ重鎖の重鎖定常領域は、Ａ１１８Ｃ（１１８位のアラニンからシステインへの）、Ｓ１１９Ｃ（１１９位のセリンからシステインへの）、Ｓ２３９Ｃ（２３９位のセリンからシステインへの）、Ｖ２８２Ｃ（２８２位のバリンからシステインへの）、Ｔ２８９Ｃ（２８９位のトレオニンからシステインへの）、Ｎ３６１Ｃ（３６１位のアスパラギンからシステインへの）および／またはＶ４２２Ｃ（４２２位のバリンからシステインへの）置換を含み、抗悪性腫瘍剤または毒素は、共有結合によって示されたシステイン残基のチオール基に結合される。一部の実施形態では、本明細書において記載される二重特異性結合物質は、ヒト重鎖定常領域を含む抗体を含み、抗体のＩｇＧ重鎖の定常領域は、Ａ１１８Ｋ（１１８位のアラニンからリシンへの）、Ｓ１１９Ｋ（１１９位のセリンからリシンへの）、Ｓ２３９Ｋ（２３９位のセリンからリシンへの）、Ｖ２８２Ｋ（２８２位のバリンからリシンへの）、Ｔ２８９Ｋ（２８９位のトレオニンからリシンへの）、Ｎ３６１Ｋ（３６１位のアスパラギンからリシンへの）および／またはＶ４２２Ｋ（４２２位のバリンからリシンへの）置換を含み、抗悪性腫瘍剤または毒素は、共有結合によって示されたリシン残基の遊離アミノ基の反応性窒素に結合される。標識、担体、抗悪性腫瘍剤、毒素および／またはリンカーを二重特異性結合物質に結合する他の限定されない例として、アミンをスクシンイミジルエステル（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル）、イミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル、ヒドロキシメチルホスフィン、オキシラン、イソチオシアネート、ハロゲン化スルホニル、ハロアセチル誘導体または任意の他のカルボニル化合物と反応させること、カルボキシルを、カルボジイミドと反応させること、スルフヒドリルをマレイミド、ハロアセチル誘導体、ピリジルスルフィドまたはビニルスルホンと反応させること、アルデヒドを、ヒドラジンと反応させること、任意の非選択基をジアジリンまたはアリールアジドと反応させること、ヒドロキシルをイソシアネートと反応させること、ヒドロキシルアミンをカルボニル化合物と反応させること、それらの同様のものおよび組合せが挙げられる。
抗悪性腫瘍剤、毒素および連結基
ある特定の実施形態では、本明細書において開示される二重特異性結合物質は、抗悪性腫瘍剤を含む。一部の実施形態では、抗体またはその結合部分は、抗悪性腫瘍剤を含む。一部の実施形態では、フィノマーが、抗悪性腫瘍剤を含む。一部の実施形態では、二重特異性結合物質、抗体またはフィノマーが、１つまたは複数の（例えば、１〜２０、１〜１０または１〜５種の）抗悪性腫瘍剤を含む。一部の実施形態では、二重特異性結合物質、抗体またはフィノマーとして、１、２、３、４または５種の抗悪性腫瘍剤を含む。
任意の適した抗悪性腫瘍剤が、本明細書において開示される二重特異性結合物質、抗体またはフィノマーに結合され得る。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、新生細胞にとって毒性である薬剤である。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、毒性化合物、毒性分子または毒性ペイロードを含む。抗悪性腫瘍剤の限定されない例として、ドラスタチン、オーリスタチン、マイタンシン、ツブリシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、シュードモナス外毒素−Ａ（ＰＥ３８）、イリノテカンおよびその類似体または誘導体が挙げられる。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤として、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）が挙げられる。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤として、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）毒素および／または連結基が挙げられる。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤が、二重特異性結合物質の抗体部分またはフィノマー部分に結合される。抗悪性腫瘍剤は、共有結合によって、または非共有結合によって二重特異性結合物質、抗体またはフィノマーに結合され得る。抗悪性腫瘍剤は、直接的に、または間接的に（例えば、リンカーまたは連結基によって）二重特異性結合物質、抗体またはフィノマーに結合され得る。例えば、一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、リンカーまたは連結基によって、共有結合によって二重特異性結合物質、抗体またはフィノマーに結合される。
抗悪性腫瘍剤は、二重特異性結合物質の任意の適した位置で二重特異性結合物質に結合され得る。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、二重特異性結合物質のフィノマー部分および／または二重特異性結合物質の抗体部分に結合される。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、二重特異性結合物質の抗体部分の定常領域（例えば、抗体の定常領域）に結合される。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、直接的または間接的に（例えば、リンカーまたは連結基によって）二重特異性結合物質の抗体部分の定常領域の適したシステイン残基に結合される。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）毒素を含む。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、連結基または適したリンカーを含む。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）毒素および連結基を含む。ある特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン毒素は、共有結合によって連結基に連結され、連結基は、共有結合によって本明細書において記載される二重特異性結合物質に連結される。
ＰＢＤ毒素の限定されない例およびＰＢＤ毒素を作製する方法は、以下の特許出願公開：ＵＳ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ２０１５／０５２３２２、ＵＳ２０１６／０１０６８６１、ＵＳ２００７／００７２８４６、ＵＳ２０１１／０２０１８０３、ＵＳ２０１０／０１１３４２５、ＵＳ２００８／０１６７２９３、ＵＳ２０１４／０１２７２３９、ＵＳ２０１５／０１５８８６９、ＵＳ２０１５／０３４４４８２、ＵＳ２０１５／０１１１８８０、ＵＳ２０１５／０３１５１９６、ＵＳ２０１６／００１５８２８、ＵＳ２０１４／００８８０８９、ＵＳ２０１３／００３５４８４、ＵＳ２０１１／０１９６１４８、ＵＳ２０１３／００２８９１９、ＵＳ２０１３／００５９８００、ＵＳ２０１４／０２７４９０７、ＵＳ２０１４／０２７５５２２、ＵＳ２０１４／０２３４３４６、ＵＳ２０１３／０２６６５９５、ＵＳ２０１４／０３０２０６６、ＵＳ２０１４／０２８６９７０、ＵＳ２０１４／０２９４８６８、ＵＳ２０１６／０１４４０５２、ＵＳ２０１６／００３１８８７、ＵＳ２０１４／０１２０１１８、ＵＳ２０１６／０２５０３４４、ＷＯ２０１７／１３７５５３、ＷＯ２０１７／１３７５５５およびＷＯ２０１７／１８６８９４に記載されており、その全開示内容は、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン毒素は、次化学式Ｉ：
Figure 2021165268
［式中、Ｚ１およびＺ２は両方ともＮであり、Ｚ３およびＺ４は両方ともＣであり、
二重破線
Figure 2021165268
 は、単結合または二重結合を表し、
ｎは、１〜１２であり、Ｒ３およびＲ４の各々は独立に、ＨまたはＣ１〜４アルコキシルであり、Ｒ１およびＲ２の各々は独立に、Ｈ、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ２〜５アルケニルおよびＲ５で適宜置換されたフェニルからなる群から選択され、Ｒ５は、−ＮＨ２、−ＮＨＲ６および次構造
Figure 2021165268
 を有するＲ７で置換されたピペラジニルからなる群から選択され、（ここで、Ｒ６は、連結基を含み、Ｒ７は、ヌルまたはＣ１〜５アルキルである）、Ｘ１は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、Ｘ２は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１およびＲ２のうち１つのみが連結基を含み、Ｙ１およびＹ２の各々は独立に、ヌル、ＯＨまたはＳＯ３Ｈのいずれかであり、ただし、
（ｉ）Ｘ１が連結基を含む場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｉ）Ｘ２が連結基を含む場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｉｉ）Ｘ１が保護基を含む場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｖ）Ｘ２が保護基を含む場合には、
Figure 2021165268
 は−Ｃである、
ヌルは、必要な原子価を完成するための部分がないことまたは１つもしくは複数の水素の存在を意味する。
ある特定の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、１つのみの連結基を含む。例えば、化学式Ｉでは、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１およびＲ２のいずれか１つは、連結基を含み得る。例えば、Ｘ１が連結基を含む場合には、Ｘ２、Ｒ１およびＲ２は、連結基を含まない。
化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、ｎは、１〜１２である。化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、ｎは、１〜１０、１〜９、１〜７、１〜５または１〜３である。化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２である。一部の実施形態では、ｎは、１、３または５である。一部の実施形態では、ｎは、３または５である。
化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は独立に、Ｃ１〜４アルコキシルである。化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は独立に、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ３または−Ｏ−ＣＨ３から選択される。化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は両方とも−Ｏ−ＣＨ３である。
化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は独立に、Ｈ、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルおよびＣ２〜５アルケニルからなる群から選択される。Ｒ１およびＲ２は、同一である場合も異なる場合もある。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣ２〜Ｃ３アルケニルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は独立に、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３および−ＣＨ３から選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は両方とも、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ３である。
化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は独立に、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルおよびＲ５で適宜置換されたフェニルから選択され、Ｒ５は、−ＮＨ２、−ＮＨＲ６および次構造
Figure 2021165268
 を有するＲ７で置換されたピペラジニルからなる群から選択され、
（ここで、Ｒ６は、連結基を含み、Ｒ７は、ヌルまたはＣ１〜５アルキルである）。ある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、異なっており、（ｉ）Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルおよび（ｉｉ）Ｒ５で適宜置換されたフェニル（ここで、Ｒ５は、−ＮＨ２および−ＮＨＲ６から選択され、Ｒ６は連結基を含む）から独立に選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は異なっており、（ｉ）Ｃ３シクロアルキルおよび（ｉｉ）−ＮＨ２または−ＮＨＲ６で置換されたフェニル（ここで、Ｒ６は、連結基を含む）から独立に選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、異なっており、（ｉ）Ｒ５で適宜置換されたフェニル（ここで、Ｒ５は、−ＮＨ２および−ＮＨＲ６から選択され、Ｒ６は、連結基を含む）および（ｉｉ）Ｒ７がヌルまたはＣ１〜Ｃ２アルキルである構造を有するＲ７で置換されたピペラジニルから独立に選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は異なっており、（ｉ）Ｒ５で置換されたフェニル（ここで、Ｒ５は、−ＮＨ２および−ＮＨＲ６であり、Ｒ６は連結基を含む）および（ｉｉ）次構造
Figure 2021165268
 ［式中、Ｒ７は、−ＣＨ３である］
を有するＲ７で置換されたピペラジニルから独立に選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、４−メチルピペラジン−１−イルで置換されたフェニルである。
化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、Ｘ１はヌルであり、Ｙ１はヌルおよび
Figure 2021165268
 はＮ＝Ｃであり、Ｘ２はヌルであり、Ｙ２はヌルであり、および
Figure 2021165268
 はＮ＝Ｃである。化学式ＩのＰＢＤ毒素のある特定の実施形態では、Ｘ１は連結基を含み、Ｙ１はＯＨであり、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、Ｘ２は保護基であり、Ｙ２はＯＨである。
一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、以下に示される化学式ＶＩＩの構造を含む：
Figure 2021165268
 ［式中、Ｘ１は連結基を含む］。
一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、以下に示される化学式ＶＩＩＩの構造を含む：
Figure 2021165268
 ［式中、Ｘ１は、連結基を含む］。
一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、以下に示される化学式ＩＸの構造を含む：
Figure 2021165268
 ［式中、Ｒ６は、連結基を含む］。
一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、以下に示される化学式Ｘ：
Figure 2021165268
 ［式中、Ｒ６は、連結基を含む］
で示される構造を含む。
一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、適した結合、部分または基によって連結基に（例えば、共有結合によって連結されて）結合される。一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、カルボニル連結またはアミド結合によって連結基に（例えば、共有結合によって連結されて）結合される。一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、カルバメート基によって連結基に（例えば、共有結合によって連結されて）結合される。一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、アミド基によって連結基に（例えば、共有結合によって連結されて）結合される。連結基に結合するＰＢＤ毒素の限定されない例は、ＵＳ２０１７／０００２０９６、ＵＳ２０１６／０３３１８４２、ＵＳ２０１５／０２５０８９６、ＵＳ２０１７／００８０１０３、ＵＳ２０１６／０１３６３００、ＵＳ２０１７／０１５２２７４、ＵＳ２０１５／０２０９４４４、ＵＳ２０１３／０２７４０９１、ＵＳ２０１７／００９５５７０、ＵＳ２０１７／０１５７２６４、ＵＳ２０１５／０１２５４７４、ＵＳ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ２０１５／０５２３２２、ＵＳ２０１６／０１０６８６１、ＵＳ２００７／００７２８４６、ＵＳ２０１１／０２０１８０３、ＵＳ２０１０／０１１３４２５、ＵＳ２００８／０１６７２９３、ＵＳ２０１４／０１２７２３９、ＵＳ２０１５／０１５８８６９、ＵＳ２０１５／０３４４４８２、ＵＳ２０１５／０１１１８８０、ＵＳ２０１５／０３１５１９６、ＵＳ２０１６／００１５８２８、ＵＳ２０１４／００８８０８９、ＵＳ２０１３／００３５４８４、ＵＳ２０１１／０１９６１４８、ＵＳ２０１３／００２８９１９、ＵＳ２０１３／００５９８００、ＵＳ２０１４／０２７４９０７、ＵＳ２０１４／０２７５５２２、ＵＳ２０１４／０２３４３４６、ＵＳ２０１３／０２６６５９５、ＵＳ２０１４／０３０２０６６、ＵＳ２０１４／０２８６９７０、ＵＳ２０１４／０２９４８６８、ＵＳ２０１６／０１４４０５２、ＵＳ２０１６／００３１８８７、ＵＳ２０１４／０１２０１１８、ＵＳ２０１６／０２５０３４４、ＷＯ２０１７／１３７５５３、ＷＯ２０１７／１３７５５５およびＷＯ２０１７／１８６８９４に記載されており、その全開示内容は、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。
用語「ヌル」とは、本明細書において使用される場合、示された部分が構造から存在しないが、示された部分は、必要な原子価を完成するために１つまたは複数の水素原子によって置き換えられ得るかまたは占められ得ることを意味する。さらに、本明細書において示される任意の構造に関連して、構造中に示される炭素、窒素または酸素原子の必要な原子価を完成するために、１つまたは複数の水素が存在し得る。したがって、明確に示されない場合には、１つまたは複数の水素原子が存在し得る。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、適した連結基を含む。一部の実施形態では、連結基は、二重特異性結合物質と毒素（例えば、ＰＢＤ毒素）の間の連結を容易にする。一部の実施形態では、連結基は、切断可能である。例えば、ある特定の実施形態では、連結基は、細胞内ペプチダーゼによって認識されるエンドペプチダーゼ切断部位を含む。エンドペプチダーゼ切断部位は、二重特異性結合物質が新生細胞中に内部移行された後に、抗悪性腫瘍剤が二重特異性結合物質から剥離および／または放出される手段を提供する。連結基の限定されない例および連結基を作製する方法は、ＷＯ２０１５／０５２３２２、ＵＳ２０１５／０１５８８６９、ＵＳ２０１５／０３４４４８２、ＵＳ２０１４／０１２７２３９、ＵＳ２０１７／０００２０９６、ＵＳ２０１６／０３３１８４２、ＵＳ２０１５／０２５０８９６、ＵＳ２０１７／００８０１０３、ＵＳ２０１６／０１３６３００、ＵＳ２０１７／０１５２２７４、ＵＳ２０１５／０２０９４４４、ＵＳ２０１３／０２７４０９１、ＵＳ２０１７／００９５５７０、ＵＳ２０１７／０１５７２６４およびＵＳ２０１５／０１２５４７４に記載されており、これは、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、連結基は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシル、１個または複数のアミノ酸またはアミノ酸誘導体、１〜２０個のアミノ酸を含むペプチド、フェニル基、適したポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）またはそれらの組合せを含む。
一部の実施形態では、連結基は、次化学式Ａ：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、連結基のピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、波線は、連結基の二重特異性結合物質との結合点を示し、ｍは、０〜２０であり、ｑは、０〜１０であり、Ｅは、接続基である］
で示される構造を含む。化学式Ａの連結基の一部の実施形態では、ｍは、１〜２０、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜４、２〜８または４または８である。化学式Ａの連結基の一部の実施形態では、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択される。化学式Ａの連結基の一部の実施形態では、ｑは、１〜１０、１〜８、１〜６または１〜４である。化学式Ａの連結基の一部の実施形態では、ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択される。化学式Ａの連結基の一部の実施形態では、ｑは、０、１または２である。１８。化学式Ａの連結基の一部の実施形態では、ｍは、８であり、ｑは、２である。
一部の実施形態では、連結基は、次化学式Ｂ：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、連結基のピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、波線は、連結基の二重特異性結合物質との結合点を示し、ｖは、０〜１０であり、ｕは、０または１であり、ｕが１である場合は、ｔは、１〜１０であり、Ｅは、接続基である］
で示される構造を含む。化学式Ｂの連結基の一部の実施形態では、ｖは、１〜１０、１〜８、１〜４または０〜４である。２１。化学式Ｂの連結基の一部の実施形態では、ｖは、０、１、２、３、４、５、６、７または８から選択される。化学式Ｂの連結基の一部の実施形態では、ｕが１である場合には、ｔは、１〜８、１〜５、１〜４または２〜５である。化学式Ｂの連結基の一部の実施形態では、ｕが１である場合には、ｔは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択される。化学式Ｂの連結基の一部の実施形態では、ｔは、８であり、ｕは、１であり、ｖは、２である。化学式Ｂの連結基の一部の実施形態では、ｕは０であり、ｖは、４である。
化学式ＡおよびＢの接続基Ｅは、任意の適した結合、リンカーまたは部分を含む場合があり、その限定されない例として、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、アミド結合、アミン、ケトン、カルボキシレートエーテル、カルバメート、エステル、ａチオエステル、同様のものまたはそれらの組合せが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｅは、連結基と二重特異性結合物質の間の共有結合連結を含む。一部の実施形態では、Ｅは、共有結合を含む。一部の実施形態では、Ｅは、適したコンジュゲーション反応が実施されたのちに残存する反応した部分を含む。多数のコンジュゲーション反応が当技術分野で公知であり、本明細書において開示される連結基を本明細書において開示される二重特異性結合物質に共有結合によって連結するために、そのいずれか１つが使用され得る。連結基を二重特異性結合物質に、確率論的にか、または部位特異的にのいずれかで共有結合によって結合するために任意の適したコンジュゲーション化学が使用されてもよく、その限定されない例として、Shan S. Wong (Published June 18, 1991) Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking, CRC Press、Greg T. Hermanson (Copyright 2013) Bioconjugate Techniques, Third Edition, Elsevier Inc.およびThiol-X Chemistries in Polymer and Materials Science, RSC Polymer Chemistry Series No. 6 (2013) Edited by Andrew B. Lowe and Christopher N. Bowman, RCS Publishing、ＷＯ２０１５／０５２３２２、ＵＳ２０１５／０１５８８６９、ＵＳ２０１５／０３４４４８２、ＵＳ２０１４／０１２７２３９、ＵＳ２０１７／０００２０９６、ＵＳ２０１６／０３３１８４２、ＵＳ２０１５／０２５０８９６、ＵＳ２０１７／００８０１０３、ＵＳ２０１６／０１３６３００、ＵＳ２０１７／０１５２２７４、ＵＳ２０１５／０２０９４４４、ＵＳ２０１３／０２７４０９１、ＵＳ２０１７／００９５５７０、ＵＳ２０１７／０１５７２６４およびＵＳ２０１５／０１２５４７４に記載されるコンジュゲーション反応が挙げられ、その全開示内容は、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。抗悪性腫瘍剤または連結基を二重特異性結合物質にコンジュゲートする他の限定されない例として、アミンまたはアミノ基を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、スクシンイミジルスクシネート、スクシンイミジルスクシンアミド、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルカルボネート、オキシカルボニルイミダゾール、ニトロフェニルカルボネート、トリクロロフェニルカルボネート、トレシレート（ｔｒｅｓｙｌａｔｅ）、無水マレイン酸、メチルマレイン酸無水物、イミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル、ヒドロキシメチルホスフィン、オキシランまたは任意の他のカルボニル部分と反応させること、カルボキシル部分を、カルボジイミドと反応させること、スルフヒドリル部分を、マレイミド、ハロアセチル、ピリジルスルフィド、オルトピリジルスルフィドおよび／またはビニルスルホンと反応させること、アルデヒド部分を、ヒドラジンまたはヒドラジドと反応させること、任意の非選択基を、ジアジリンおよび／またはアリールアジドと反応させること、ヒドロキシル部分を、イソシアネートと反応させること、ヒドロキシルアミン部分を、カルボニル部分と反応させること、それらの同様のものおよび組合せが挙げられる。
したがって、Ｅは、連結基を二重特異性結合物質にコンジュゲートするために使用される化学によって定義されることが多い。一部の実施形態では、Ｅは、連結基を二重特異性結合物質に結合するように構成された適した部分を含む。一部の実施形態では、連結基は、適したスルフヒドリル−スルフヒドリル反応によって、例えば、還元システインと反応して、安定なチオエーテル結合を形成するマレイミドまたはピリジルジチオール反応性基の使用によって、二重特異性結合物質に共有結合によって連結される。反応性スルフヒドリル反応性部分のさらなる限定されない例として、ハロアセチル、アジリジン、アクリルオイル、アリール化剤、ビニルスルホン、ピリジルジスルフィドおよびＴＮＢ−チオールが挙げられる。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、二重特異性結合物質のシステインチオール残基（例えば、チオール）とＥの間に形成されるチオエーテル結合によってＥに接続される。したがって、ある特定の実施形態では、Ｅは、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合を含む。一部の実施形態では、例えば、二重特異性結合物質を連結基に共有結合によって連結するためにマレイミド反応が使用される場合には、Ｅは、次化学式Ｃ：
Figure 2021165268
 ［式中、波線は、結合剤との結合点を示し、２倍のアスタリスク（＊＊）は、連結基との結合点を示す］
で示される構造を含む。ある特定の実施形態では、化学式Ｃの２倍のアスタリスクは、チオエーテル結合を表す。
抗悪性腫瘍剤、毒素、連結基または接続基は、確率論的にか、または部位特異的にのいずれかで、二重特異性結合物質の任意の適したアミノ酸にコンジュゲートされ得る。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤、毒素、連結基または接続基は、二重特異性結合物質の１つまたは複数の適したシステイン残基にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤、毒素、連結基または接続基は、二重特異性結合物質の１つまたは複数の適したリシン残基にコンジュゲートされる。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質の１個または複数のアミノ酸は、抗悪性腫瘍剤、毒素、連結基または接続基へのコンジュゲーションに適しているアミノ酸で置換される。チオール含有アミノ酸残基またはリシン残基で置換され得るアミノ酸の限定されない例として、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ２定常ドメインのＡ１１８、Ｓ１１９、Ｓ２３９、Ｖ２８２、Ｔ２８９、Ｎ３６１およびＶ４２２（ＥＵ番号付けシステムに対応する）またはＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４定常ドメイン中の対応する位置が挙げられる。突然変異誘発によるシステインの二重特異性結合物質または抗体への組み込みによって、例えば、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合による、抗悪性腫瘍剤、毒素、連結基または接続基の、二重特異性結合物質または抗体上の特定の部位への直接コンジュゲーションが可能となる。例えば、二重特異性結合物質の１個または複数のアミノ酸は、システインで置換されてもよく、システインは、適した化学反応を使用する、抗悪性腫瘍剤、毒素、連結基または接続基の部位特異的コンジュゲーションのために使用され得る。抗体の定常領域の任意の適したアミノ酸は、抗悪性腫瘍剤、毒素、連結基または接続基への部位特異的コンジュゲーションのためにシステインまたはリシンに突然変異されてもよい。
一部の実施形態では、連結基は、適した酵素切断部位を含む。ある特定の実施形態では、酵素切断部位は、哺乳動物プロテアーゼの酵素認識部位を含む。したがって、一部の実施形態では、連結基またはその部分は、哺乳動物プロテアーゼによって切断可能である。連結基は、標的部位に、またはその付近に（例えば、ＦＧＦＲ３またはＣＤ１３８タンパク質に、またはその付近に）存在する酵素によって切断され得る。標的部位に、またはその付近に存在する酵素は、細胞内、膜結合型、膜会合型または細胞外（例えば、分泌型）であり得る。例えば、連結基は、細胞表面プロテアーゼ、分泌型プロテアーゼまたは細胞内プロテアーゼ（例えば、リソソームプロテアーゼ）によって切断されるように構成され得る。酵素切断部位の限定されない例として、リソソームシステインプロテアーゼおよび／またはリソソームアスパラギン酸プロテアーゼのプロテアーゼ認識部位が挙げられる。リソソームプロテアーゼの限定されない例として、カテプシンＢ、Ｃ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、ＴおよびＸならびにカテプシンＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇおよび／またはカテプシンＡ（カルボキシペプチダーゼＡ）が挙げられる。
保護基
一部の実施形態では、ＰＢＤ毒素は、適した保護基を含む。保護基および保護基を作製する方法の限定されない例は、以下の特許出願公開：ＵＳ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ２０１５／０５２３２２、ＵＳ２０１１／０２０１８０３、ＵＳ２００８／０１６７２９３、ＵＳ２０１４／０１２７２３９、ＵＳ２０１５／０１５８８６９、ＵＳ２０１５／０３４４４８２、ＵＳ２０１５／０３１５１９６、ＵＳ２０１５／０３１５１９６、ＵＳ２０１４／０３０２０６６、ＵＳ２００６／０２６４６２２およびＵＳ２０１５／０１３３４３５に記載されており、その全開示内容は、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、保護基は、以下の化学式Ｄ：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、ｗは、０〜１０である］
で示される構造を含む。一部の実施形態では、ｗは、０〜８、０〜６、０〜４、１〜１０、１〜８、１〜５または１〜４である。ある特定の実施形態では、ｗは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から選択される。一部の実施形態では、ｗは、２である。
一部の実施形態では、保護基は、除去可能である。ある特定の実施形態では、保護基は、適した化学を使用して切断可能である。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、次化学式ＩＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは、８であり、波線は、結合剤との結合点を示す］
で示される構造を含む。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、次化学式ＩＩＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは、８であり、ｐは、１または３であり、Ｘ２は、ヌルであるか、または保護基であり、波線は、結合剤との結合点を示す］
で示される構造を含む。ある特定の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、次化学式ＩＶ：
Figure 2021165268
 ［式中、波線は、結合剤との結合点を示す］
で示される構造を含む。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、次化学式Ｖ’
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは、８であり、Ｅは、適した接続基であり、波線は、結合剤との結合点を示す］
で示される構造を含む。一部の実施形態では、Ｅは、次構造Ｃ：
Figure 2021165268
 ［式中、波線は、結合剤との結合点を示し、２倍のアスタリスクは、化学式Ｖの抗悪性腫瘍剤との結合点を示す］
で示されるスクシンアミド部分を含む。構造Ｃの接続基を含む化学式Ｖの抗悪性腫瘍剤は、本明細書において化学式ＸＩと呼ばれることもある。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、次化学式ＶＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、ｔは、８であり、ｖは、１であり、波線は、結合剤との結合点を示す］
で示される構造を含む。
一部の実施形態では、抗悪性腫瘍剤は、次化学式ＶＩＩ：
Figure 2021165268
 ［式中、波線は、結合剤との結合点を示す］
で示される構造を含む。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質は、化学式ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ’、ＶＩ、ＶＩＩおよびＸＩのいずれか１つから選択される構造を含む抗悪性腫瘍剤を含む。
医薬組成物
一部の実施形態では、組成物または医薬組成物は、本明細書において記載される二重特異性結合物質（例えば、抗悪性腫瘍剤を含む二重特異性結合物質）を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、二重特異性結合物質および医薬上許容される賦形剤、希釈剤、添加物または担体を含む。
医薬組成物は、適した投与経路のために製剤化され得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、皮下（ｓ．ｃ．）、皮内、筋肉内、腹膜内および／または静脈内（ｉ．ｖ．）投与のために製剤化される。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、ｐＨ、浸透圧、粘度、清澄度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解または放出の速度、組成物の吸着または浸透を修飾、維持または保存するための製剤化材料を含有し得る。ある特定の実施形態では、適した製剤化材料として、それだけには限らないが、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン）、抗菌剤、抗酸化物質（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウム）、バッファー（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）または適した有機酸）、増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）、キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン）、タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）、着色剤、矯味剤および希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）、低分子量ポリペプチド、塩形成性対イオン（例えば、ナトリウム）、溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）、希釈剤、賦形剤および／または医薬アジュバントが挙げられる。特に、医薬組成物は、"Remington: The Science And Practice Of Pharmacy" Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th Edition, (1995)（本明細書において以下、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’９５」）または"Remington: The Science And Practice Of Pharmacy", Pharmaceutical Press, Easton, PA, 22nd Edition, (2013)（本明細書において以下、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ２０１３」）に列挙されるような、任意の適した担体、製剤または成分、それらの同様のものまたは組合せを含んでもよく、その開示内容は、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において列挙される種々の材料は、単独でかまたは組み合わせて、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’９５またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ ２０１３に記載された材料中に組み込まれ得るかまたはそれとともに使用され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’９５またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ ２０１３に記載されるような、当技術分野において理解されるものを含む、任意の適した技術、担体および賦形剤が使用され得る。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、適した賦形剤を含み、その限定されない例として、付着防止剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）、結合剤、充填剤、単糖、二糖、他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）、糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）、コーティング（例えば、セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、微晶質セルロース、合成ポリマー、セラック、ゼラチン、トウモロコシタンパク質ゼイン、腸内またはその他の多糖）、デンプン（例えば、ジャガイモ、トウモロコシまたはコムギデンプン）、シリカ、色、崩壊剤、フレーバー、滑沢剤、保存料、吸着剤、甘味料、ビヒクル、懸濁剤、界面活性物質および／または湿潤剤（例えば、プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパル（ｔｙｌｏｘａｐａｌ））、安定性向上剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）および張力向上剤（例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトール、ソルビトール）および／またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’９５またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ ２０１３に記載される任意の賦形剤が挙げられる。用語「結合剤」とは、本明細書において使用される場合、組み合わされた医薬混合物を維持するのに役立つ化合物または成分を指す。医薬製剤を作製するために適した、医薬錠剤、カプセル剤および顆粒剤の調製において使用される結合剤は、当業者に公知である。
一部の実施形態では、医薬組成物は、適した医薬上許容される添加物および／または担体を含む。適した添加物の限定されない例として、適したｐＨ調整剤、無痛化剤（ｓｏｏｔｈｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、バッファー、硫黄含有還元剤、抗酸化剤などが挙げられる。硫黄含有還元剤の限定されない例として、スルフヒドリル基を有するもの、例えば、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−アセチルホモシステイン、チオクト酸、チオジグリコール、チオエタノールアミン、チオグリセロール、チオソルビトール、チオグリコール酸およびその塩、チオ硫酸ナトリウム、グルタチオンおよびＣ１〜Ｃ７チオアルカン酸が挙げられる。抗酸化剤の限定されない例として、エリトルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、アルファ−トコフェロール、酢酸トコフェロール、Ｌ−アスコルビン酸およびその塩、Ｌ−アスコルビルパルミテート、Ｌ−アスコルビルステアレート、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリアミルおよび没食子酸プロピルならびにキレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、ピロリン酸ナトリウムおよびメタリン酸ナトリウムが挙げられる。さらに、希釈剤、添加物および賦形剤は、他のよく使用される成分、例えば、無機塩、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウムおよび重炭酸ナトリウムならびに有機塩基、例えば、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよび酢酸ナトリウムを含み得る。
本明細書において使用される医薬組成物は、例えば、数か月または数年ほどの長期間にわたって安定であり得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の適した保存料を含む。保存料の限定されない例として、塩化ベンズアルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、過酸化水素、それらの同等のものおよび／または組合せが挙げられる。保存料として、第四級アンモニウム化合物、例えば、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゾキソニウム、塩化ベンゼトニウム、セトリミド、塩化セパゾニウム、塩化セチルピリジニウムまたは臭化ドミフェン（ＢＲＡＤＯＳＯＬ（登録商標））を含み得る。保存料は、チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、例えば、チメロサール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀またはホウ酸フェニル水銀を含み得る。保存料は、パラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベンを含み得る。保存料は、アルコール、例えば、クロロブタノール、ベンジルアルコールまたはフェニルエチルアルコールを含み得る。保存料は、ビグアニド誘導体、例えば、クロロヘキシジンまたはポリヘキサメチレンビグアニドを含み得る。保存料は、過ホウ酸ナトリウム、イミダゾリジニル尿素および／またはソルビン酸を含み得る。保存料は、例えば、商標名ＰＵＲＩＴＥ（登録商標）の下で知られ、市販されているような、安定化されたオキシクロロ複合体を含み得る。保存料は、Ｈｅｎｋｅｌ ＫＧａＡから商標名ＰＯＬＹＱＵＡＲＴ（登録商標）の下で知られ、市販されるような、ポリグリコール−ポリアミン縮合樹脂を含み得る。保存料は、安定化された過酸化水素を含み得る。保存料は、塩化ベンズアルコニウムであり得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、保存料を含まない。
一部の実施形態では、組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質は、血液または血液製剤混入物（例えば、血液細胞、血小板、ポリペプチド、ミネラル、血液由来化合物または化学物質など）を実質的に含まない。一部の実施形態では、組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質は、血清および血清混入物（例えば、血清タンパク質、血清脂質、血清炭水化物、血清抗原など）を実質的に含まない。一部の実施形態では、組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質は、病原体（例えば、ウイルス、寄生生物または細菌）を実質的に含まない。一部の実施形態では、組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質は、エンドトキシンを実質的に含まない。一部の実施形態では、組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質は、無菌である。ある特定の実施形態では、組成物または医薬組成物は、二重特異性結合物質および希釈剤（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））を含む。ある特定の実施形態では、組成物または医薬組成物は、二重特異性結合物質および賦形剤、（例えば、クエン酸ナトリウム脱水またはポリオキシエチレン−ソルビタン−２０モノオレエート（ポリソルベート８０））を含む。
本明細書において記載される医薬組成物は、それらが使用される療法に従う任意の適した形態および／または量での対象への投与のために構成され得る。例えば、非経口投与（例えば、注射または注入による）のために構成された医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンの形態をとることができ、製剤化剤、賦形剤、添加物および／または希釈剤、例えば、水性または非水性溶媒、共溶媒、懸濁溶液、保存料、安定化剤または分散剤を含有し得る。一部の実施形態では、非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）投与に適した医薬組成物は、１つまたは複数の賦形剤を含有し得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、乾燥粉末形態に凍結乾燥される。一部の実施形態では、医薬組成物は、乾燥粉末形態に凍結乾燥され、これは、適した医薬溶媒（例えば、水、生理食塩水、等張性バッファー溶液（例えば、ＰＢＳ）など）を用いる再構成に適している。ある特定の実施形態では、再構成された形態の凍結乾燥医薬組成物は、哺乳動物への非経口投与（例えば、静脈内投与）に適している。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、経口投与のために構成され、錠剤、マイクロ錠剤、ミニ錠剤、マイクロペレット、散剤顆粒剤、カプセル剤（例えば、マイクロ錠剤、マイクロペレット、散剤または顆粒剤が充填されたカプセル剤）、エマルジョンまたは溶液として製剤化され得る。経口投与のために構成された医薬組成物は、有効成分（例えば、二重特異性結合物質）の放出を遅延または持続させるために適したコーティングを含む場合があり、その限定されない例として、腸溶コーティング、例えば、脂肪酸、ワックス、セラック、プラスチック、メチルアクリレート−メタクリル酸コポリマー、フタル酸酢酸セルロース（ＣＡＰ）、酢酸コハク酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（酢酸コハク酸ヒプロメロース）、ポリ酢酸フタル酸ビニル（ＰＶＡＰ）、メチルメタクリレート−メタクリル酸コポリマー、トリメリト酸酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、ゼイン、植物繊維、それらの同様のものおよび組合せが挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書において記載される医薬組成物は、局所投与のために構成されてもよく、結合および／または滑沢剤、ポリマーグリコール、ゼラチン、ココアバターまたは他の適したワックスまたは脂肪のうち１つまたは複数を含み得る。一部の実施形態では、本明細書において記載される医薬組成物は、局所薬物投与に全般的に向いており、当業者に公知の任意の適した材料を含む局所担体を含有する局所製剤中に組み込まれる。ある特定の実施形態では、医薬組成物の局所製剤は、局所パッチからの二重特異性結合物質の投与のために製剤化される。
ある特定の実施形態では、最適医薬組成物は、例えば、意図される投与経路、デリバリー形式および望まれる投与量（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’９５またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ ２０１３、前掲を参照されたい）に応じて当業者によって決定されるであろう。ある特定の実施形態では、このような組成物は、本発明の抗体薬物コンジュゲートの物理的状態、安定性、インビボ放出される速度およびインビボクリアランスの速度に影響を及ぼし得る。医薬組成物は、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、粉末状、乳化、カプセル化、捕捉または打錠プロセスによってを含め、任意の適した方法によって製造され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’９５またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ ２０１３に記載される方法を参照されたい）。
一部の実施形態では、対象において新生物の処置のための医薬として使用するための組成物または医薬組成物が、本明細書において示され、組成物または医薬組成物は、本明細書において記載される二重特異性結合物質（例えば、抗悪性腫瘍剤を含む二重特異性結合物質）を含む。一部の実施形態では、新生物の処置において使用するための、抗悪性腫瘍剤またはＰＢＤ毒素にコンジュゲートされた（例えば、共有結合によって結合された）二重特異性結合物質または二重特異性結合物質を含む組成物または医薬組成物が本明細書において示される。
一部の実施形態では、本明細書において記載される組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質（例えば、抗悪性腫瘍剤を含む二重特異性結合物質）は、新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を処置するために使用される。一部の実施形態では、本明細書において記載される組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質（例えば、抗悪性腫瘍剤を含む二重特異性結合物質）は、新生物を有するかまたは有すると疑われる対象に投与される。一部の実施形態では、新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を処置する方法が、本明細書において示される。ある特定の実施形態では、新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を処置する方法は、対象に、本明細書において記載される組成物または二重特異性結合物質の治療上有効量を投与することを含む。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質または二重特異性結合物質を含む医薬組成物は、対象に投与され、二重特異性結合物質は、ヒトシンデカン−１の細胞外ドメインおよび／またはＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、対象を処置する方法は、対象の細胞（例えば、１個または複数の細胞）を、治療上有効量の本明細書において記載される組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質と接触させることを含む。ある特定の実施形態では、処置の方法は、対象の細胞（例えば、１個または複数の細胞）を、治療上有効量の、ヒトシンデカン−１の細胞外部分またはその変異体に、および／またはＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ３ｂおよび／またはＦＧＦＲ３ｃ）に特異的に結合する二重特異性結合物質と接触させることを含む。対象の細胞は、シンデカン−１の細胞外部分を発現する細胞であることが多い。対象の細胞は、対象の内側で（例えば、インビボ）または対象の外側（例えば、インビトロまたはエクスビボ）で見出され得る。
本明細書において記載される方法によって処置され得る新生物の限定されない例として、癌腫、肉腫、神経系新生物（神経系の新生物）、リンパ腫、骨髄腫、白血病、黒色腫、中皮腫、固形または軟部組織腫瘍および続発的癌（例えば、原発部位から導かれた））が挙げられる。癌腫の限定されない例として、呼吸系癌腫、胃腸系癌腫、泌尿生殖器系癌腫、精巣癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫、皮膚の基底細胞癌、未知原発性癌腫、胆管癌、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、メルケル細胞癌腫、肺癌腫、胸腺腫および胸腺癌腫、正中線癌腫、肺小細胞癌腫、甲状腺癌腫、肝臓肝細胞癌腫、扁平上皮癌、頭頚部扁平上皮癌、乳癌、上皮性癌、副腎皮質癌、卵巣表面上皮性癌などが挙げられ、子宮、子宮頸部、結腸、膵臓、腎臓、食道、胃および卵巣癌腫をさらに含む。肉腫の限定されない例として、ユーイング肉腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、乳房肉腫、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、横紋筋肉腫、子宮肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、線維肉腫などが挙げられる。神経系新生物の限定されない例として、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、乏突起膠細胞腫などが挙げられる。リンパ腫、骨髄腫および白血病の限定されない例として、急性および慢性リンパ性白血病、骨髄芽球性白血病、多発性骨髄腫、低分化急性白血病（例えば、赤芽球性白血病および急性巨核芽球性白血病）、急性前骨髄性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ系統ＡＬＬおよびＴ系統ＡＬＬを含む急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、へアリー細胞白血病（ＨＬＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、非ホジキンリンパ腫および変異体、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成体Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ性白血病（ＬＧＦ）、ホジキン病およびリード・シュテルンベルク病が挙げられる。軟部または固形組織腫瘍の限定されない例として、内臓腫瘍、セミノーマ、ヘパトーマならびに乳房、肝臓、肺、膵臓、子宮、卵巣、精巣、頭部、頸部、眼部、脳、口腔、咽頭、声帯、耳、鼻、食道、胃、腸、結腸、副腎、腎臓、骨、膀胱、尿道、癌腫、肺、筋肉、皮膚、足、手および軟部組織の他の腫瘍が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書において開示される医薬組成物または二重特異性結合物質によって処置され得る新生物は、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、肝細胞癌、下咽頭癌、肺癌、腺癌、卵巣癌および腎癌から選択される。一部の実施形態では、本明細書において開示される医薬組成物または二重特異性結合物質によって処置され得る新生物は、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌、膵外分泌癌または膵臓神経内分泌癌）、結腸直腸癌（例えば、結腸直腸腺癌）、小腸悪性腫瘍、胆管癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺癌腫、食道または食道胃接合部（ＥＧＪ）癌、胃腺癌、肝臓肝細胞癌腫、頭頚部扁平上皮癌、雌生殖器悪性腫瘍、乳癌、肺小細胞癌腫、卵巣表面上皮性癌、後腹膜または腹膜肉腫、前立腺腺癌、神経内分泌腫瘍、消化管間質性腫瘍、神経膠芽腫または非上皮性卵巣癌から選択される。一部の実施形態では、本明細書において開示される医薬組成物または二重特異性結合物質によって処置され得る新生物は、乳癌であり、その限定されない例として、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、侵襲性乳管癌腫（ＩＤＣ）（例えば、乳房の管状癌腫、乳房の髄様癌、乳房の粘液性癌腫、乳房の乳頭癌および乳房の篩状癌）、浸潤性小葉癌腫（ＩＬＣ）、炎症性乳癌、非浸潤性小葉癌腫（ＬＣＩＳ）、男性乳癌、乳癌の分子サブタイプ（例えば、管腔Ｂ乳癌またはホルモン受容体陽性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、ＨＥＲ２濃縮乳癌および正常様乳癌）、乳頭のパジェット病、乳房の葉状腫瘍および転移性乳癌が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書において開示される医薬組成物または二重特異性結合物質によって処置され得る新生物は、トリプルネガティブ乳癌である。
一部の実施形態では、本明細書において記載される処置の有効性は、幾分かは、新生物または新生細胞が発現するＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３またはそのアイソフォーム）の量によって決定または予測され得る。例えば、理論に制限されるものではないが、高レベルのＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現する新生物または新生細胞を有する対象は、本明細書において記載される二重特異性結合物質を用いる療法に対して、ＣＤ１３８またはＦＧＦＲ３をわずかに発現するかまたは全く発現しない新生物または新生細胞を有する別の対象よりも良好に応じる可能性がある。新生細胞または癌細胞は、適した抗ＣＤ１３８抗体および適したイムノアッセイ（例えば、全細胞ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣなど）を使用してＣＤ１３８の発現レベルを調べるために、迅速にアッセイされ得る。同様に、新生細胞または癌細胞は、適した抗ＦＧＦＲ３抗体および適したイムノアッセイを使用してＦＧＦＲ３の発現について迅速にアッセイされ得る。したがって、一部の実施形態では、新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を処置する方法は、本明細書において記載される二重特異性結合物質の治療上有効量を投与することを含み、その新生物または新生細胞は、検出可能なレベルのＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３またはそのアイソフォーム）を発現する。ある特定の実施形態では、検出可能なレベルのＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現する新生物は、ＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現すると知られているかまたは報告されている新生物である。ある特定の実施形態では、新生物は、ＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現すると疑われる（例えば、ＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現すると知られている別の新生細胞種に対して、同様の遺伝子型または表現型を有することによって）。一部の実施形態では、ＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現するか、または発現すると疑われる新生物は、ＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３またはその部分をコードするＲＮＡ転写物を発現する新生物である。一部の実施形態では、ＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現するか、または発現すると疑われる新生物は、その細胞表面にＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３を発現する新生物である。ＣＤ１３８および／またはＦＧＦＲ３発現の確認された癌の限定されない例として、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌腫、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、結腸直腸腺癌、リンパ系新生物びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌腫、多形性神経膠芽腫、神経膠腫、頭頚部扁平上皮癌、腎臓嫌色素性、汎腎臓コホート（ＫＩＣＨ＋ＫＩＲＣ＋ＫＩＲ）、腎臓腎明細胞癌、腎臓腎乳頭細胞癌、急性骨髄性白血病、脳の低悪性度神経膠腫、肝臓肝細胞癌腫、肺腺癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵臓腺癌、褐色細胞腫および傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、肉腫、皮膚の皮膚黒色腫、胃腺癌、胃および食道癌腫、精巣生殖細胞腫瘍、甲状腺癌腫、胸腺腫、子宮体子宮内膜癌、子宮癌肉腫およびブドウ膜黒色腫が挙げられる。
一部の実施形態では、新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を処置する方法は、本明細書において記載される二重特異性結合物質の治療上有効量を、別の抗癌療法と組み合わせて投与することを含み、その限定されない例として、Ｔ細胞活性化剤、アジュバント、抗癌ワクチン、放射線治療、免疫療法（例えば、抗ＨＥＲ２または抗ＣＤ２０）、化学療法およびそれらの同様のものまたは組合せが挙げられる。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化剤は、ＣＤ３、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７（４１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡまたはＢＴＬＡに結合する抗体である。
任意の適した化学療法薬が、本明細書において記載される方法のために使用され得る。一部の実施形態では、化学療法薬は、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊物質、エポチロン（例えば、エポチロン）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、ボリノスタット、ロミデプシン）、トポイソメラーゼＩの阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン）、トポイソメラーゼＩＩの阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシド、タフルポシデアン（ｔａｆｌｕｐｏｓｉｄｅａｎ））、キナーゼ阻害剤、ペプチド抗生物質（例えば、ブレオマイシン、アクチノマイシン）、白金ベースの薬剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン）、ＤＮＡ修復酵素ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ−１を標的とする化合物（例えば、Ｐａｒｐ阻害剤）、レチノイド（例えば、トレチノイン、アリトレチノイン、ベキサロテン）、ビンカアルカロイドおよび化合物（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、代謝拮抗物質、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシドまたはヌクレオチド類似体およびそれらの組合せを含むかまたはからなる。アルキル化抗悪性腫瘍剤の限定されない例として、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン、ＨＥＸＡＬＥＮ（登録商標））、ブスルファン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、クロラムブシル、シクロホスファミド、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ホテムスチン、イホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミン、メルファラン、プロカルバジン、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、テモゾロミド、チオテパ（トリエチレンチオ−ホスホラミド）、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、単官能性アルキル化剤、ニトロソ尿素、テモゾロミド、それらの同様のものまたは組合せが挙げられる。ＤＮＡインターカレート剤の限定されない例として、アクロレイン、アントラサイクリン、ホスホラミド、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エルサマイシンＡ、エピルビシン、エチジウム、ｍ−ＡＭＳＡ、ミトキサントロン、ドキソルビシン（アドリアマイシン、ドキシル、Ｍｙｏｃｅｔ、ヒドロキシダウノルビシン、ヒドロキシダウノマイシン）、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、ＴＡＳ−１０３、ＭＬＮ９４４（ＸＲ５９４４）、オバトクラックス、メクロレタミン、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）および５−アザシチジン関連化合物、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、ヒドロキシ尿素、カルボプラチン、オキシプラチン、ミトタン、タキサン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ジブロモマンニトール、ゲムシタビン、ペメトレキセド、それらの同様のものまたは組合せが挙げられる。細胞骨格破壊物質（例えば、タキサン）の限定されない例として、パクリタキセル、タキソールおよびドセタキセルが挙げられる。キナーゼ阻害剤の限定されない例として、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、ビスモデギブ、それらの同様のもの、類似体および化合物が挙げられる。ヌクレオチド類似体の限定されない例として、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、ドキシフルリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、チオグアニン（以前は、チオグアニン）、それらの同様のもの、類似体および化合物が挙げられる。ＰＡＲＰ阻害剤の限定されない例として、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、ベリパリブ、タラゾパリブなど、それらの類似体および化合物がある。
用語「対象」とは、哺乳動物である。任意の適した哺乳動物が、本明細書において記載される方法または組成物によって処置され得る。哺乳動物の限定されない例として、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、サル、マカクなど）、飼育動物（例えば、イヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジおよびブタ）および実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギおよびモルモット）が挙げられる。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。哺乳動物は、任意の年齢または発達の任意の段階（例えば、成体、１０代、小児、乳児または子宮内の哺乳動物）であり得る。哺乳動物は、男性または女性であり得る。一部の実施形態では、必要とする対象は、新生物を有するかまたは有すると疑われる対象である。
対象に組成物、医薬組成物または二重特異性結合物質を投与する任意の適した方法が使用され得る。本明細書において記載される本発明の方法に従って使用するための組成物の正確な製剤および投与経路は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。例えば、参照によりその全文で本明細書に組み込まれるFingl et al. 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics," Ch. 1, p. 1を参照されたい。本明細書において記載される医薬組成物または二重特異性結合物質の投与のために、任意の適した投与経路が使用され得る。投与経路の限定されない例として、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）または局所（ｌｏｃａｌ）（例えば、皮下に、経皮的にまたは皮膚に、（例えば、皮膚または表皮上）、眼の中または眼の上、鼻腔内に、経粘膜的に、耳中に、耳の内側に（例えば、鼓膜の後ろ））、腸内に（例えば、胃腸管を通って送達される、例えば、経口的に（例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、液体、乳化、ロゼンジまたはそれらの組合せとして）、舌下、経胃栄養チューブによって、直腸性になど）、非経口投与によって（例えば、非経口的に、例えば、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、腹膜内に、皮内に、皮下に、腔内に、頭蓋内、関節内、関節腔内、心臓内（心臓中）、空洞内注射、病巣内（皮膚病変中）、骨内注入（骨髄中）、くも膜下腔内（脊柱管中）、子宮内、膣内、膀胱腔内注入、硝子体内）、それらの同様のものまたは組合せが挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書における組成物が、対象に提供される。対象に提供される組成物は、自己投与のために、または別のもの（例えば、非医療従事者）による対象への投与のために対象に提供されることもある。例えば、本明細書において記載される組成物は、患者が本明細書において記載される組成物または処置（例えば、処方）を提供されることを許可する医師による書面の説明書とともに提供され得る。別の例では、対象が、組成物を経口的に、静脈内に、または例えば、吸入器によって自己投与する場合に、組成物が対象に提供され得る。
あるいは、例えば、デポーまたは持続放出製剤を使用することを含めて、目的の皮膚、粘膜または領域への直接投与によって、全身方法よりも局所において、本発明の方法に従って使用するために組成物を投与できる。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質を含む医薬組成物は、単独で（例えば、単一有効成分として（ＡＩまたは例えば、単一活性医薬品成分（ＡＰＩ）として）投与される。他の実施形態では、二重特異性結合物質を含む医薬組成物は、１つまたは複数のさらなるＡＩ／ＡＰＩと組み合わせて、例えば、２つの別個の組成物として、または１つもしくは複数のさらなるＡＩ／ＡＰＩが混合されて、二重特異性結合物質と一緒に医薬組成物製剤化される単一組成物として投与される。
ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質は、細胞（例えば、哺乳動物細胞）に送達される。二重特異性結合物質は、任意の適した方法を使用して細胞に送達され得る。ある特定の実施形態では、二重特異性結合物質を細胞に送達することは、二重特異性結合物質が細胞に結合することを可能にする条件下で、哺乳動物細胞を、インビトロまたはインビボで、二重特異性結合物質を含む組成物と接触させることを含む。
医薬組成物は、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、粉末状、乳化、カプセル化、捕捉または打錠プロセスによってを含め、任意の適した方法によって製造され得る。
一部の実施形態では、対象において新生物を処置する方法は、二重特異性結合物質の治療上有効量または二重特異性結合物質を含む医薬組成物の治療上有効量を対象に投与することを含む。「治療上有効量」とは、有効な治療成績を得るのに十分な量ならびに／または新生物の成長、生存力、転移、重症度、発症もしくは症状を、予防する、終結させる、遮断する、阻害する、寛解する、抑制する、減速させる、抑止する、死滅させるもしくは低減するのに必要なおよび／もしくは十分な量を意味する。一部の実施形態では、有効な治療成績は、処置の前および／または後に、対象において新生物または新生細胞の数、大きさ、生存力、成長、有糸分裂または転移を測定および／またはモニタリングすることによって決定され得る。したがって、一部の実施形態では、対象に二重特異性結合物質の治療上有効量または二重特異性結合物質を含む医薬組成物の治療上有効量を投与することは、新生物の成長、生存力、転移、重症度、発症または症状を、予防する、終結させる、遮断する、阻害する、寛解する、抑制する、減速させる、抑止する、死滅させるもしくは低減する。ある特定の実施形態では、対象に二重特異性結合物質の治療上有効量または二重特異性結合物質を含む医薬組成物の治療上有効量を投与することは、新生物の癌性細胞の一部またはすべての死滅、壊死またはアポトーシスを誘導する。治療上有効量の決定は、特に、本明細書において提供される詳細な開示を踏まえると、十分に当業者の能力内である。
一部の実施形態では、組成物中の二重特異性結合物質の量は、少なくとも治療上有効量である量および望まれない有害反応を最小にするために十分に少ない量である。二重特異性結合物質の正確な量は、対象の年齢、体重および全身状態、処置されている状態の重症度および／または投与される他の治療薬物の量に応じて対象ごとに変わる。したがって、対象の多様な群において新生物を処置するために投与され得る二重特異性結合物質の正確な治療上有効量を指定することは常に可能というわけではない。周知であるように、特定の条件下での、特定の疾患のための所与の患者の特定の投与量は、常に変わるが、各症例における最適量の決定は、簡単な常法によって容易に達成され得る。したがって、新生物を処置するために使用される二重特異性結合物質の治療上有効量は、日常的な実験を使用して当業者によって決定され得る。
ある特定の実施形態では、組成物中の二重特異性結合物質の治療上有効量は、約．０１ｍｇ／ｋｇ（例えば、対象の体重１ｋｇあたり）〜５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜７５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの用量を含む。一部の態様では、二重特異性結合物質の量は、約１０ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の実施形態では、二重特異性結合物質の治療上有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇの間または約１ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇの間である。種々の投与経路に適した容積は、当技術分野で公知である。
一部の実施形態では、二重特異性結合物質または二重特異性結合物質を含む医薬組成物は、有効な治療成績を得るために必要とされるような適した頻度および／または間隔で投与される。一部の実施形態では、二重特異性結合物質を含む医薬組成物は、１時間ごとに、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回および／または一定間隔で、例えば、毎日、隔日で、週に３回、毎週、隔週で、１ヶ月に１回および／または簡単に、必要とされる、もしくは医療従事者によって推奨されるような頻度もしくは間隔で投与される。
キット
一部の実施形態では、二重特異性結合物質の一定量または用量を含む医薬組成物が、二重特異性結合物質の１または複数の用量を含有し得るキット、パックまたは分配デバイス中で提供される。キットまたはパックは、例えば、１つまたは複数の適した容器、バイアルまたはブリスターパックおよび１つまたは複数の適した分配デバイスを含み得る。一部の実施形態では、キットまたはパックには、医薬品の製造、使用または販売を規制する行政機関によって規定された投与および／または通知についての使用説明書が添付され、この注意は、人間または獣医用投与のための薬物の形態の機関による承認を反映している。このような通知は、例えば、処方薬物について米国医薬品局によって承認された表示または承認された製品挿入物であり得る。
一部の実施形態では、キットまたはパックは、１日〜１年、１日〜１８０日、１日〜１２０日、１日〜９０日、１日〜６０日、１日〜３０日またはその間の任意の日または日数、１〜４時間、１〜１２時間または１〜２４時間、患者を処置するのに十分な量の二重特異性結合物質を含む。
キットは、本明細書における構成成分のインビトロ、インビボもしくはエクスビボでの使用のための成分の説明または使用説明書を含む、製品ラベルまたは添付文書を含んでもよい。例示的使用説明書として、診断法、処置プロトコールまたは治療レジメンの使用説明書が挙げられる。ある特定の実施形態では、キットは、キットの構成成分を収容する物理的構造を指す、パッケージング材料を含む。パッケージング材料は、構成成分を無菌的に維持することができ、このような目的のためによく使用される材料（例えば、紙、段ボール、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプル、バイアル、チューブなど）から製造され得る。製品ラベルまたは挿入物として、「印刷物」、例えば、紙もしくはボール紙、または構成成分、キットまたは梱包材料（例えば、箱）とは別個のものもしくはそれに張り付けられたものまたはキット構成成分を含有するアンプル、チューブもしくはバイアルに取り付けられたものが挙げられる。ラベルまたは挿入物は、コンピュータによって読み取り可能な媒体、光学ディスク、例えば、ＣＤ−もしくはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープまたは電気記憶媒体、例えば、ＲＡＭおよびＲＯＭまたはこれらのハイブリッド、例えば、磁気／光学記憶媒体、ＦＬＡＳＨ媒体またはメモリータイプのカードをさらに含み得る。製品ラベルまたは挿入物は、その中の１つまたは複数の構成成分の同定情報、用量量、作用機序、薬物動態（ＰＫ）および薬動力学（ＰＤ）を含む有効成分（複数可）の臨床薬理学を含み得る。製品ラベルまたは挿入物は、製造者情報、ロット番号、製造者位置、日付を同定する情報、キット構成成分が使用され得る指示される状態、障害、疾患または症状に関する情報を含み得る。製品ラベルまたは挿入物は、方法、処置プロトコールまたは治療レジメンにおいて１つまたは複数のキット構成成分を使用するための臨床医のための、または対象のための使用説明書を含み得る。使用説明書は、本明細書において使用される方法、処置プロトコールまたは治療レジメンのいずれかを実施するための投与量、頻度または期間および使用説明書を含み得る。したがって、本発明のキットは、本明細書において記載される本発明の方法および使用のいずれかを実施するためのラベルまたは使用説明書をさらに含み得る。製品ラベルまたは挿入物は、可能性ある有害副作用および／または警告に関する情報を含み得る。
ある特定の実施形態では、キットは、既知量のシンデカン−１および／またはＦＧＦＲ３を有する１つまたは複数の対照を含む。一部の実施形態では、キットは、シンデカン−１および／またはＦＧＦＲ３を発現する細胞を含む。キット中の細胞は、細胞が使用される準備ができるまで、適当な保管条件下で維持され得る。
一部の実施形態では、キットは、二重特異性結合物質を含む診断キットである。診断キット中に含まれる二重特異性結合物質は、任意の適した形態をとり得る。一部の実施形態では、診断のものは、二重特異性結合物質および検出可能な標識を含む。ある特定の実施形態では、例えば、診断キットは、本発明の方法を実施するための、および例えば、カラーチャートまたは標準曲線に対して比較され得る比色分析結果を生成するための必要な試薬を含むスティックテストを含むかまたはからなる。診断キットはまた、細胞に特異的に結合する二重特異性結合物質、例えば、二次抗体を検出するために必要な構成成分を含み得る。
[実施例]
抗ＣＤ１３８抗体の作製
（ｉ）高親和性および特異性で結合し、（ｉｉ）迅速な内部移行を示し、および／または（ｉｉｉ）カニクイザル由来ＣＤ１３８と交差反応性を示す、ヒトＣＤ１３８に対するモノクローナル抗体を作製した。抗体を作製するために、マウス（Ｂａｌｂ／Ｃマウス、雌６〜８週齢）を、ＣＤ１３８ペプチド１〜３（融合物１２）またはペプチド４〜６（融合物１３）の混合物を用いて免疫処置し、追加免疫した、表１１を参照されたい。
これらのペプチドは、グリコシル化部位に対して遠位であるように、ヒトとマウスの間で不十分にしか保存されなかったが、ヒトとカニクイザル種の間では強力に保存された領域中に設計した。ＫＬＨ担体タンパク質にコンジュゲートされた示されたペプチドを用い、一次注射にフロイントの完全アジュバント（ＣＦＡ）およびすべてのその後の追加免疫にフロイントの不完全アジュバントを使用する免疫処置スケジュールに従ってマウスを免疫処置した。免疫処置されたマウスの抗体血清力価を、ヒトＣＤ１３８およびＣＤ１３８−Ｆｃ結合ＥＬＩＳＡによって結合について評価した。高い力価を有するマウスを、融合のために選択した。最適化された方法を使用するマウスＢ細胞およびＳＰ２／Ｏ骨髄腫細胞の電気融合によって、ハイブリドーマを生成した。
Figure 2021165268
伝統的な方法とは異なり、ハイブリドーマのクローニングは、単一ステップで同時に実施し、これでは、融合された細胞をＨＡＴ選択によって選択し、単細胞コロニーをＨＴ培地を含有する９６ウェルプレートに移し、制限された選択下で成長させ、上清を抗原結合についてスクリーニングした。陽性ハイブリドーマをより大きな容積に拡大増殖させ、細胞を保管のために凍結させた。
ＣＤ１３８陽性細胞（Ｈ９２９）での一次ハイブリドーマＦＡＣＳスクリーニング
ウェルあたり２０，０００個のＨ９２９細胞を含有する９６ウェルプレートを使用する蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって、融合物１２（プレート１２〜１９）から得たハイブリドーマ上清を、スクリーニングした。Ｈ９２９細胞は、その細胞表面にＣＤ１３８を発現するヒトＢリンパ球細胞株である。ハイブリドーマ上清を、Ｈ９２９細胞に４℃で１時間添加した。細胞を洗浄し、続いて、ＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ ６４７抗マウス抗体を添加し、再度洗浄して、未結合抗体を除去した。細胞をＦＡＣＳによって分析して結合を検出した。ＦＡＣＳデータをＦｌｏｗｊｏソフトウェアによって分析した。上清抗体が、プレートの平均シグナルを上回ってレベル≧３標準偏差で細胞に結合した場合に、それらを確認ＦＡＣＳおよびさらなる特性決定のために選択した。融合物１２から得られた合計５０１３のハイブリドーマが、この一次ＦＡＣＳスクリーニングを経て、１３４の陽性ヒット：一次スクリーニングにおいて２．７％の総ヒット率を得た。融合物１２プレート１６から得た陽性ハイブリドーマクローンのサンプルは、以下の表１２に示されている。２つの代表的な陽性ハイブリドーマクローンのＦＡＣＳヒストグラムは、図２に示されている。
Figure 2021165268
融合物１２ハイブリドーマの二次ＦＡＣＳスクリーニング
一次ＦＡＣＳスクリーニングにおいて陽性結合を実証するハイブリドーマを選択し、さらに特性決定した。二次スクリーニングのために、ハイブリドーマ上清を、ＦＡＣＳによってＨ９２９（ＣＤ１３８発現）への陽性結合およびＡＲＨ−７７（陰性ＣＤ１３８発現）細胞への陰性結合についてアッセイした。陰性細胞をＣＳＦＥ染色して、より良好に陽性と陰性細胞株を区別することを補助した。次いで、上清を、特異的ＣＤ１３８結合に対するその非特異的結合と比較した。代表的な二次ＦＡＣＳスクリーニングの結果が、表１３にまとめられている。
Figure 2021165268
融合物１２ハイブリドーマでの二次ＥＬＩＳＡスクリーニング
結合特異性およびＩｇＧ型を確認することを補助するために二次スクリーニング後に、ＣＤ１３８およびＩｇＧ１アイソタイプＥＬＩＳＡも実施した。組換えＣＤ１３８−Ｆｌａｇを使用してＣＤ１３８結合ＥＬＩＳＡを実施した。データは、ＥＬＩＳＡによって、すべてのＦＡＣＳ陽性ハイブリドーマはまた、ＣＤ１３８に結合したということを示した。ＩｇＧ ＥＬＩＳＡは、ＩｇＧ陽性抗体を同定した。ＩｇＭ抗体は、さらなる研究から除外した。これまでの選択プロセスの概要は、表１４に示されている。
Figure 2021165268
ＳＰＲによる代表的な抗体の動態学的結合
マウスＩｇＧをハイブリドーマ上清から精製し、ＩｇＧを動態学的結合測定のためにＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）に付した。ＢｉｏＲａｄ Ｐｒｏｔｅｏｎで、ヒトまたはマウスＣＤ１３８ヒットを、５０μｇ／ｍＬでＧＬＭチップ上に固定化した。次いで、抗体を、１６７ｎＭ〜１０．４ｎＭの濃度範囲で３０μＬ／分の速度で結合しているチップの上に流して、動態学的結合を検出した。二価分析物フィット（ｂｉｖａｌｅｎｔ ａｎａｌｙｔｅ ｆｉｔ）を使用してＫＤを測定した。動態学的結果は、表１５および図３に示されている。
Figure 2021165268
抗体発現
２つの代表的なキメラ抗体の発現を評価して、スケールアップ生成の可能性を決定した。Ｅｘｐｉ２９３細胞（２５０ｍＬ）を、１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１（「ｃｈＦ６」とも呼ばれる）または１３Ｐ３０Ａ７ ｈＩｇＧ１（「ｃｈＰ３０ａ７」とも呼ばれる）の発現を指示するベクターを用いて一過性にトランスフェクトした。キメラ抗体１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１は、Ｆ１２Ｐ１６Ｆ６のマウス重鎖可変領域（配列番号８２）および軽鎖可変領域（配列番号３４）およびヒトＩｇＧ１、カッパアイソタイプの定常領域を含む。キメラ抗体１３Ｐ３０Ａ７ ｈＩｇＧ１は、Ｆ１３Ｐ３０Ａ７のマウス重鎖可変領域（配列番号８３）および軽鎖可変領域（配列番号３５）およびヒトＩｇＧ１、カッパアイソタイプの定常領域を含む。結果は、以下の表１６にまとめられている。発現された抗体をまた、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびサイズ排除クロマトグラフィー（示されていないデータ）によって分析した。
Figure 2021165268
代表的な抗体のカニクイザル交差反応性
１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１または１３Ｐ３０Ａ７ ｈＩｇＧ１を、カニクイザルＣＤ１３８に対する交差反応性について試験した。カニクイザル（ｃｙｎｏ）由来のＣＤ１３８と交差反応する抗体は、有効性治験を実施する前に非ヒト霊長類のこの株において毒性について試験できるという利点を有する。手短には、ヒトＣＤ１３８またはｃｙｎｏ ＣＤ１３８の細胞表面発現を指示するベクターをＥｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトした。１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１および１３Ｐ３０Ａ７ ｈＩｇＧ１の、トランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３細胞への結合を３３．３μｇ／ｍＬで始まる３倍希釈で試験した。セクキヌマブ（Ｓｅｃ）を陰性対照として使用して、トランスフェクトされた細胞がバックグラウンド結合を全く有さないことを確実にした。代表的な抗体１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１および１３Ｐ３０Ａ７ ｈＩｇＧ１は、ヒトおよびｃｙｎｏ ＣＤ１３８両方への特異的結合を示した（図４）。
Figure 2021165268
実施例１において使用されたある特定の試薬および材料の定義
本明細書におけるハイブリドーマクローンの名称は、名称が使用される状況に応じて、ハイブリドーマ細胞またはハイブリドーマ細胞から産生された抗体のいずれかを指す場合があるということは留意されたい。ハイブリドーマクローンの名称は、融合物（例えば、融合物１２番または１３番、それぞれ略されてＦ１２およびＦ１３）と、それに続く、文字「Ｐ」が前につくプレート番号およびウェル番号を指すことが多い。例えば、ハイブリドーマクローンＦ１２Ｐ１６Ｆ６（本明細書において１２Ｐ１６Ｆ６またはＰ１６Ｆ６とも呼ばれる）は、融合物１２、プレート１６およびウェルＦ６に由来するハイブリドーマから得られた抗体を指す。ｍＢＴ−０６２は、ＩｇＧ１、ＣＤ１３８結合対照抗体である。
ヒト化
本明細書において記載されるマウス抗ＣＤ１３８（抗シンデカン−１）抗体のヒト化版を設計し、作出するための戦略を開発し、抗体のヒト化版は、親モノクローナル抗体の特性を保持する。ヒトＩｇＧ１／カッパアイソタイプのヒト定常領域およびＦ１２Ｐ１６Ｆ６のマウス可変領域を含む、ｃｈＦ６と名付けられたキメラモノクローナル抗ＣＤ１３８抗体をヒト化する実施例が、本明細書において提供される。
本明細書において作製されたｃｈＦ６のヒト化版は、親ｃｈＦ６キメラ抗体に対して評価されることが多かった。適切な場合には、他の陽性および陰性対照も使用した。
５つのヒト化戦略を並行して使用し、この結果、３つのヒト化Ｆ１２Ｐ１６Ｆ６軽鎖配列および４つのヒト化Ｆ１２Ｐ１６Ｆ６重鎖配列が作製された。ある特定の実施形態では、方法は、ヒトフレームワークおよび定常領域へのマウス相補性決定領域（ＣＤＲ）のグラフト化を含む。得られた３つのヒト化軽鎖および４つのヒト化重鎖の各々を、互いに組み合わせて発現させ、精製し、その結果、合計１２のヒト化抗ＣＤ１３８モノクローナル抗体が得られた。ヒト化抗体を、その発現／精製プロファイル、生物物理学的特性、ＣＤ１３８ペプチド抗原への結合、天然ＣＤ１３８への結合および特異性について分析した。代表的なヒト化抗体をまた、他の生物物理学的特性についても評価した。
方法
ｃｈＰ１６Ｆ６の発現および精製
キメラ抗体ｃｈＰ１６Ｆ６の発現を指示するベクターを、ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）２９３トランスフェクションキットを使用して２５０ｍｌの容積でＥｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトした。上清を、ｐＨ依存性プロテインＡ精製を利用して精製した。キメラ抗体を、ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ５ｍｌを使用して精製した。精製後、抗体を、Ｚｅｂａスピンカラムを使用して１×ＤＰＢＳにバッファー交換した。ｃｈＰ１６Ｆ６の回収は、２．２１ｍｇ／ｍＬで７．１ｍｇであった。
Ｆ１２Ｐ１６Ｆ６のヒト化
（ｉ）重大なフレームワーク残基が保存されながら、Kabat et al. (1991) "Sequences of Proteins of Immunological Interest" 5th ed. US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institutes of Health（ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２）によって定義されたＣＤＲが適当なヒト足場にグラフトされる、Jones et al. (1986) "Replacing the complementarity determining regions in a human antibody with those from a mouse" Nature 321:522-525およびVerhoeyen et al. (1988) "Reshaping human antibodies: grafting an anti-lysozyme activity" Science 239:1534-1536に従って実施された、ＣＤＲグラフティング（ｃｄｒと名付けられた）、（ｉｉ）重大なフレームワーク残基が保存されながら、軽鎖中の残基２７Ｄ〜３４、５０〜５５および８９〜９６ならびに重鎖中の３１〜３５Ｂ、５０〜５８および９５〜１０１として定義された省略されたＣＤＲが、適当なヒト足場にグラフトされる、Padlan et al. (1995) "Identification of specificity-determining residues in antibodies" FASEB J 9:133-139に従って実施された、省略されたＣＤＲのグラフティング（ａｂｂと名付けられた）、（ｉｉｉ）重大なフレームワーク残基が保存されながら、抗原結合に関与している可能性がある残基が、適当なヒト配列中に移植される、Padlan et al. (1995) "Identification of specificity determining residues in antibodies" FASEB J 9:133-139に従って実施された、ＳＤＲ移送（ｓｄｒと名付けられた）、（ｉｖ）重大なフレームワーク残基が保存されながら、ＣＤＲが、適当なヒト抗体に由来する個々のフレームワーク領域で構成されているヒト足場にグラフトされる、Wu and Kabat (1992) "Possible use of similar framework region amino acid sequences between human and mouse immunoglobulins for humanizing mouse antibodies" Mol. Immunol. 29:1141-1146に従って実施された、フランケンシュタインアプローチ（ｆｒａと名付けられた）および（ｖ）重大なフレームワーク残基が保存されながら、構造が公知である場合には非ヒト抗体において、または構造が公知ではない場合には相同分子において、露出されている残基が、適当なヒト抗体からの対応する残基に変更される、Padlan (1991) "A possible procedure for reducing the immunogenicity of antibody variable domains while preserving their ligand-binding properties" Mol. Immunol. 28:489-498に従って実施された、ベニヤリング（ｖｅｎと名付けられた）から選択される方法を使用して、重鎖および軽鎖可変ドメインのヒト化を実施した。記載された方法のすべてにおいて、「適当なヒト抗体」は、最も近いヒト配列を表すように使用される（ＧｅｎＢａｎｋにおいて入手可能）。用語「重大なフレームワーク残基」は、三次元構造の維持に必要と思われる（ＰＤＢにおける関連高分解能Ｘ線構造の分析から）残基を表す。時には、抗体のＳＥＣプロファイルを改善するために、ヒト化の第２の「修復された」ラウンドが実施された。第２ラウンドにおいて生成されたヒト化抗体は、ｒｅｐまたはｒｅｐａｉｒの名称で示される。得られたヒト化重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、それぞれ、図１０Ａおよび１０Ｂに示されている。
ヒト化Ｐ１６Ｆ６修復コンストラクトの発現および精製
４つのヒト化重鎖の各々を、３つの軽鎖の各々を用いて修復して、１２の異なる抗体（表１８）を得た。１２のヒト化Ｐ１６Ｆ６抗体を、ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）２９３トランスフェクションキットを使用してＥｘｐｉ２９３細胞において発現させた。すべてのコンストラクトを、Ｆ６ ｃｋｓ−ｒｅｐ（さらなる研究のためにより多くが必要とされた）および低タンパク質発現による３７５ｍｌのＦ６ ｆ２ｋａ−ｒｅｐを除いて、１２５ｍｌの容積でトランスフェクトした。上清を０．２２μｍフィルターを通して濾過し、プロテアーゼ阻害剤を用いて処置した。バッファー交換後＞５ｍｇ／Ｌの発現レベルおよび≧１ｍｇ／ｍＬを上回って濃縮する能力を提供する抗体を、さらなる分析のために選択した。
Figure 2021165268
抗体を、ｐＨ依存性プロテインＡ精製（ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ５ ｍＬ）を利用して精製した。精製後、抗体を、Ｚｅｂａスピンカラムを使用して１×ＤＰＢＳにバッファー交換した。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析によって決定されたような回収および相対安定性は、ヒト化抗体間で異なった（示されていないＳＥＣプロファイル）。表１９には、ＳＥＣによって決定されたような、回収、濃度およびモノマーパーセントがまとめられている。１１の代表的なヒト化抗体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析が、図６に示されている。命名法は、ｈＦ６ ｘｋｙ−ｒｅｐの形をとることもあり、ｈは、ヒト化を表し、Ｆ６は、Ｆ１２Ｐ１６Ｆ６由来を表し、ｘは、ヒト化重鎖配列を作製するために使用された最初の手順の最初の文字を表し（例えば、ｘは、ａ＝ａｂｂ、ｓ＝ｓｄｒ、ｆ＝ｆｒａまたはｃ＝ｃｄｒであり得る）、ｋは、カッパ軽鎖を表し、ｙは、ヒト化軽鎖配列を作製するために使用された最初の手順の最初の文字を表す（ａ＝ａｂｂ、ｓ＝ｓｄｒ、ｆ＝ｆｒａ、ｃ＝ｃｄｒ）。用語「ｒｅｐ」は、「修復された」を表し、ヒト化の少なくとも第２ラウンドが、多くは異なる方法を使用して実施されたことを示す。
Figure 2021165268
ＦＡＣＳによるヒト化Ｐ１６Ｆ６修復コンストラクトのＣＤ１３８結合
ＦＡＣＳによって、９つの代表的なヒト化抗ＣＤ１３８抗体でヒトＣＤ１３８への細胞表面結合の分析を実施した（図７）。セクキヌマブを陰性対照として使用した。中程度のレベルのＣＤ１３８を発現する２つの細胞株を使用して、結合を試験した；多発性骨髄腫細胞株ＫＭＳ−１１および膀胱癌株ＲＴ１１２／８４。これまでの実験では、１２Ｐ１６Ｆ６ ｈＩｇＧ１は、ＲＴ１２２／８４細胞においておよそ９ｎＭの、およびＫＭＳ−１１細胞において約３ｎＭのＥＣ５０を示した。ＥＣ５０は、４パラメータフィット曲線を使用して算出した（表２０）。コンストラクトをまた、ＣＤ１３８陰性リンパ芽球であるＡＲＨ−７７細胞に対して試験した。ＮＢは、特異的結合が観察されなかったことを示す。
Figure 2021165268
ヒト化Ｐ１６Ｆ６修復コンストラクトのＣＤ１３８結合ＥＬＩＳＡ
ＣＤ１３８結合ＥＬＩＳＡを９つの代表的なヒト化抗体を用いて実施して、免疫処置に使用した線形ＣＤ１３８ペプチドの部分への結合を決定した（図７）。プレートを、ｈＣＤ１３８ペプチド（ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ；配列番号９４）および陰性対照ペプチド（ＱＡＡＶＴＳＨＰＨＧＧＭＱＰＧＬＨＥＴＳＡ；配列番号１２４）またはＦ１２Ｐ１６Ｆ６が結合しないマウスＣＤ１３８ペプチドを用いてコーティングした。コーティングされたプレートを、９つの代表的な抗体各々の種々の希釈物とともに一晩インキュベートし、結合をヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰを用いて検出した。ＥＣ５０を、４パラメータフィット曲線を使用して決定した（表２１）。ＥＬＩＳＡも実施して、プレートにコーティングされたヒトＣＤ１３８−Ｆｃタンパク質への結合を検出した（表２１）。分析および結果は同様であった。
Figure 2021165268
選択された研究結果の概要
表２２は、１３の代表的なヒト化抗ＣＤ１３８モノクローナル抗体の分析結果の概要を示す。
Figure 2021165268
結晶構造の決定
ヒト化抗ＣＤ１３８抗体Ｆａｂ断片との複合体中のヒトシンデカン−１ペプチドのＸ線結晶構造を、１．９５Å分解能で解析した。構造は、非対称ユニットあたりシンデカン−１ペプチドおよびＦａｂ各々の１つのコピーを含んでいた（図８）。
構造説明
ヒト化抗体Ｆａｂは、ヒト化重鎖可変領域（配列番号９０）およびヒト化軽鎖可変領域（配列番号４１）を含む。ＣＤＲ限界構造を、ＰｙＩｇＣｌａｓｓｉｆｙデータベースに従って分析した。重鎖ＣＤＲを以下のとおりに分類した：Ｈ１−１３−１（ＣＤＲ−長さ−クラスター）、Ｈ２−１０−１およびＨ３−６−１。軽鎖ＣＤＲを以下のとおりに分類した：Ｌ１−１６−１、Ｌ２−８−１およびＬ３−９−ｃｉｓ７−１。シンデカン−１ペプチドは、単一Ｆａｂに結合し、複合体形成によって、シンデカン−１ペプチドおよびＦａｂの溶媒到達可能表面積の５４０ Ｔ２が埋もれる（３１３．６Å２鎖ＡおよびＨ；２２６．４ Å２鎖ＡおよびＬ）。
９８〜１０８のすべての眼に見えるシンデカン−１ペプチド残基は、Ｆａｂとの直接接触に参加する（図８）。界面に関与する特定のＦａｂ残基は、鎖Ｈからの３１〜３３、３５、４７、５０、５２、５８、９４〜９６および１０１〜１０２ならびに鎖Ｌからの２７〜２８、３２、３４、４６、４９〜５０、８９〜９４および９６である。これは、ＣＤＲ Ｈ１から４個の残基が、ＣＤＲ Ｈ２からの３個の残基およびＣＤＲ Ｈ３からの５個の残基とともに界面に参加することを意味する。さらに、ＣＤＲ Ｌ１からの４個の残基、ＣＤＲ Ｌ２からの２個の残基およびＣＤＲ Ｌ３からの７個の残基が、界面に参加する。
１ｍＬの、５．８８ｍｇ／ｍＬのＦａｂのアリコート（およそ１２５μＭ）を、２５０μＭシンデカン−１ペプチド（ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ；配列番号９４）と混合し、４℃で２時間インキュベートした。複合体を、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５および１５０ｍＭ ＮａＣｌを含有するバッファーで予め平衡化されているＳ２００サイズ排除カラムで分画した。ピーク画分をプールし、結晶化のために濃縮した。Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによって決定されたような最終タンパク質濃度は、３ｍｇ／ｍＬであった。
蚊ロボット（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用して、９６ウェル形式で蒸気拡散のハンギングドロップ法によって、およそ４００の結晶化条件をスクリーニングした。結晶成長を２つの条件で２０℃で観察した：２．１Ｍ ＤＬ−リンゴ酸ｐＨ７．０および６０％ Ｔａｃｓｉｍａｔｅ ｐＨ７．０。結晶化を２４ウェル形式でさらに最適化した。
結晶冷却およびデータ収集
１．７Ｍ ＤＬ−リンゴ酸、ｐＨ７．０を含有する沈殿剤溶液を用いて２４ウェルプレートで蒸気拡散のハンギングドロップ法を使用して、記載された結晶を成長させた。社内Ｘ線回折スクリーニングによって、分解能は、結晶を３．０Ｍ ＤＬ−リンゴ酸、ｐＨ７．０を含有する溶液中に２４時間予め浸漬することによって改善され得るということが示された。結晶を、浸漬液滴から直接ループで捕捉し、液体窒素中に沈めることによって低温冷却した。シンクロトロンデータセットを、ＥＳＲＦビームラインＩＤ３０Ａ−１で収集した。
構造解および精緻化
ＭＯＳＦＬＭ（ＣＣＰ４）およびＡＩＭＬＥＳＳ（ＣＣＰ４）におけるデータ処理によって、最も可能性の高い空間群は、Ｐ２１２１２１であり、単位セル寸法ａ＝６０．６Å、ｂ＝１３２．９Åおよびｃ＝５１．２Åを有し、４１１７０６．３４Åの総セル容積をもたらすことが示された。マシューズ係数（２．１４Å３／Ｄａおよび４２．７％溶媒含量）の算出によって、非対称ユニットあたりほぼ確実に１つの完全Ｆａｂ−シンデカン−１複合体があることが示された。分子置換法（ＭＲ）において使用するためのモデルを、ＰＤＢに対して各構成成分（Ｆａｂ重鎖および軽鎖）の配列をＢＬＡＳＴ検索することによって選択した。最高配列同一性を有するモデルは、３ｓｑｏ（Ｆａｂ重鎖）および４ｏｊｆ（Ｆａｂ軽鎖）であった。ＰＤＢに寄託されたＦａｂ結晶構造の多数は、可変および定常ドメイン間に存在するエルボー角度の多様性を明らかにした。このエルボー角度の多様性は、２つのそうでなければ高度に相同なＦａｂ断片の全体的な三次構造を有意に異なるものにし、次いで、ＭＲを失敗させる可能性がある。この理由のために、重鎖および軽鎖の可変および定常ドメインの間のヒンジ領域を除去して、４つの別個のＭＲ検索アンサンブル（ＶＨ、ＶＬ、ＣＨおよびＣＬ）を作出した。ＣＯＯＴにおける目視検査後にアミノ酸残基を重および軽可変ドメインモデルのＣＤＲからトリミングして、ＭＲを失敗させる可能性のあるあらゆる潜在的な衝突を防いだ。完全Ｆａｂを構築するために必要であるインプット検索アンサンブル（ＶＨ、ＶＬ、ＣＨおよびＣＬ）のうち４つすべてを、ＰＨＡＳＥＲ（McCoy et al., 2007）（ＣＣＰ４）を使用してＭＲによって正しく位置付けた。ＭＲアウトプットモデルには、ＲＥＦＭＡＣ５（ＣＣＰ４）を使用する２０サイクルのゼリーボディ精密化を与えた。ＣＨＳＩＮＳＡＷ（ＣＣＰ４）を使用して、タンパク質配列を、Ｆａｂのものに対応するように突然変異させた。電子密度マップにおいて視認されたＦａｂの順序付けられた領域のすべてが完成するまで、モデル構築および精密化の連続サイクルによってモデルを繰り返し改善した。重鎖および軽鎖アミノ酸を、Ｋａｂａｔ抗体番号付け規則に従って再度番号付けした。シンデカン−１ペプチドに対応する電子密度は、明確に視認できた。ＣＯＯＴにおいてシンデカン−１アミノ酸残基を手作業で付加し、正しい番号付けを適用した。ＣＯＯＴにおいて水置換オプションを使用して水分子を付加し、完全モデルをＲＥＦＭＡＣ５（ＣＣＰ４）を使用して精緻化した。最終Ｆａｂモデルは、重鎖残基１〜２１６（鎖Ｈ）および軽鎖残基１〜２１２（鎖Ｌ）を含有し、いずれの鎖にも切断はなかった。最終シンデカン−１モデルは、残基９８〜１０８（鎖Ａ）を含有していた。最終モデルはまた、２０５水分子を含有していた。最終Ｒｗｏｒｋ＝２１．２％、Ｒｆｒｅｅ＝２６．１％。
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ＦＧＦＲ３フィノマー生成
ヒトＦｙｎキナーゼのＳＨ３ドメインを、高親和性および特異性でＦＧＦＲ３標的タンパク質に結合するフィノマーポリペプチドを操作するための足場として成功裏に使用した。８．５×１０１０を超える個々のフィノマークローンを含有する独自のファージディスプレイライブラリーを、種々の組換えＦＧＦＲ３抗原での選択に使用した。種々の選択およびスクリーニング戦略を使用した。１つの戦略では、ヒトおよび／またはサル（例えば、カニクイザル、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））由来の組換えＦＧＦＲ３アイソフォーム３ＢおよびＦＧＦＲ３アイソフォーム３Ｃを、少なくとも２つのＦＧＦＲ３スプライスアイソフォーム（例えば、３Ｂおよび３Ｃ）と特異的に結合するフィノマーを発現するファージクローンの選択のために使用した。種々のＦＧＦＲ３抗原および／またはＦＧＦＲ３抗原の組合せを使用して数ラウンドの選択を実施した。フィノマー選択プロセスの１つの目標は、（ｉ）ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃ両方への選択的結合、（ｉｉ）ヒトおよびサルに対する、およびおそらくはマウスに対する交差反応性および（ｉｉｉ）結合された受容体を内部移行する能力を有するフィノマーを単離することであった。この代表的な実施例は、このようなフィノマーを選択するプロセスを説明する。
組換えヒトＦＧＦＲ３ｂ−ＦｃおよびＦＧＦＲ３ｃ−Ｆｃを標的として使用することで、本発明者らは、ヒトＦＧＦＲ３の両方のスプライス変異体（ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃ）に結合可能である、Ｆｙｎ ＳＨ３由来結合タンパク質のいくつかのファミリーを成功裏に選択し、単離した。本発明者らは、さらなる研究のために最も有望な候補ファミリーを用いて継続した。
興味深いことに、２９種の試験した抗ＦＧＦＲ３フィノマーの中で、ＦＦ２Ｌ４Ｃ３（配列番号１０１）と呼ばれ、ＲＴ−ループ配列「ＥＶＹＧＰＴＰＭ」（配列番号１００）を保持するＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドが、選択プロセスの間に濃縮され、極めて有望な内部移行特性を示した（図１０を参照されたい）。より詳細には、５種の他の配列ファミリーは、さらなる分析から排除された。最も有望な配列ファミリーに属するフィノマーは、最良の親和性および内部移行特性を示した。
より高い親和性および改善された内部移行特性を有するＦｙｎ ＳＨ３由来ＦＧＦＲ３結合剤を得るために、ＦＦ２Ｌ４Ｃ３（配列番号１０１）を親和性成熟のための鋳型として使用した。ＲＴ−ループ配列「ＥＶＹＧＰＴＰ」（配列番号１３１）を一定に維持し、ランダム化ｎ−ｓｒｃ−ループレパートリーと組み合わせた（４〜６個のランダム化アミノ酸残基のストレッチを、配列番号９９中の位置（Ｘ１）〜（Ｘ４）に導入した）。親和性成熟ライブラリー生成のプロセスは、ランダム化ｎ−ｓｒｃ−ループを用いるナイーブライブラリーのクローニングについて記載されたもの（［２５］に記載されるような「ライブラリー０」）と本質的に同一である。
ナイーブおよび親和性成熟選択後に、濃縮されたＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドを、溶解物ＥＬＩＳＡによってＦＧＦＲ３への結合についてスクリーニングした。Ｆｙｎ ＳＨ３由来結合タンパク質をコードするＤＮＡを、細菌発現ベクターｐＱＥ１２（Ｑｉａｇｅｎ）にクローニングし、その結果、得られたコンストラクトは、Grabulovski et al. [26]に記載されたようにＣ末端ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを保持していた。ポリペプチドを、９６ウェル形式で大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌のサイトゾルにおいて発現させ、ウェルあたり２００μＬの透明な溶解物を、Bertschinger et al. [27]に記載されるように準備した。手短には、形質転換された細菌コロニーを寒天プレートから選び取り、２００μＬの、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンおよび０．１％（ｗ／ｖ）グルコースを含有する２ｘＹＴ培地中で丸底９６ウェルプレートで成長させた（Ｎｕｎｃ、カタログ番号１６３３２０）。３７℃で３時間成長させた後、１ｍＭ ＩＰＴＧ （Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を添加して２００ｒ．ｐ．ｍ．で回転振盪することによって、タンパク質発現を誘導した。タンパク質をロータリーシェーカー（２００ｒ．ｐ．ｍ．、３０℃）中で一晩発現させた。その後、９６ウェルプレートを１８００ｇで１０分間遠心分離し、上清を廃棄した。細菌ペレットを、ＢｕｇＢｕｓｔｅｒ（登録商標）およびＢｅｎｚｏｎａｓｅ（登録商標）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ７０７５０−３）を使用して溶解し、その後、溶解物を１８００×ｇで１０分間の遠心分離によって透明化した。６０μＬの溶解物を、１７０μＬのＰＢＳと混合し、あらゆる残存する細菌細片を排除するために０．４５μｍのＭｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ濾紙プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＭＳＨＶＮ４５１０）を通して濾過した。
モノクローナル細菌溶解物をＥＬＩＳＡに使用した。ＥＬＩＳＡのために、５μｇ／ｍＬのｈｕＦＧＦＲ３ｂ−Ｆｃ、５μｇ／ｍＬのｈｕＦＧＦＲ３ｃ−Ｆｃまたは５μｇ／ｍＬのポリＩｇＧのいずれかを用いてＭａｘｉｓｏｒｐプレートを一晩コーティングし、２％ ＭＰＢＳを用いて少なくとも１時間ブロッキングした。Ｃ末端ｍｙｃ−およびヘキサヒスチジンペプチドタグを有する可溶性フィノマーを含有する透明な溶解物を、マウスモノクローナル抗ｍｙｃタグ抗体、クローン９Ｅ１０（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ １１ ６６７ ２０３ ００１）を含有する２％ＭＰＢＳ中で、ｍａｘｉｓｏｒｐプレートに添加した。結合されたフィノマーを、抗マウスＩｇＧセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ａ２５５４）によって９Ｅ１０を介して検出した。ペルオキシダーゼ活性の検出は、ＢＭブルーＰＯＤ基質（Ｒｏｃｈｅ）を添加することによって行い、１Ｍ Ｈ２ＳＯ４を添加することによって反応を停止した。
特異的結合剤のＤＮＡ配列を、ＤＮＡシーケンシングによって検証した。
結果
ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃに特異的に結合する代表的なＥＬＩＳＡ陽性Ｆｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１０１、１０３、１０５、１０７、１０９および１１１に示されている。Ｆｙｎ−ＳＨ３由来ポリペプチド配列番号１０３、１０５、１０７および１０９は、ＦＦ２Ｌ４Ｃ３（配列番号１０１）の親和性成熟後に得られた分子の大きなプールからの結合剤の選択であり、改善された親和性および内部移行特性のために本明細書において示される（本明細書において示されるような）。
配列番号１０１に由来する８０を超えるフィノマーを得、特性決定し、各々ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃへの特異的結合を実証し、望ましい生物物理学的特性、親和性および内部移行特性を実証した。配列番号１０３、１０５、１０７、１０９および１１１のアミノ酸配列を有するフィノマーは、これらの結合剤のうち代表的なものである。
本発明のＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドは、ヒトＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃと高親和性で結合する
この実施例は、表面プラズモン共鳴およびフローサイトメトリー実験による好ましいＦｙｎ ＳＨ３由来ＦＧＦＲ３結合ポリペプチドの特性決定を示す。
方法
ａ）ＢＩＡｃｏｒｅによる親和性測定
親和性をＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して測定した。ＣＭ５シリーズＳチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＲ−１００５−３０）上の１つのフローセルを、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＲ１００６３３）を使用して、抗ｍｙｃ抗体９Ｅ１０（Ｒｏｃｈｅ １１ ６６７ ２０３ ００１；６０００から８０００ＲＵの範囲のコーティング密度）を用いてコーティングした。
５００ｎＭの濃度の親フィノマーＦＦ２Ｌ４Ｃ３（配列番号１０１）ならびに１００ｎＭの濃度の配列番号１０３、１０５、１０７、１０９および１１１を有するフィノマーを、９Ｅ１０表面で捕捉し、続いて、種々の濃度のｈｕＦＧＦＲ３ｂ−Ｆｃ、ｈｕＦＧＦＲ３ｃ−ＦｃまたはｃｙｎｏＦＧＦＲ３ｃ−Ｆｃ（親フィノマーＦＦ２Ｌ４Ｃ３の測定のための０ｎＭ、３．９ｎＭ、７．８ｎＭ、１５．６ｎＭ、３１．２５ｎＭ、６２．５ｎＭ、１２５ｎＭ、２５０ｎＭおよび５００ｎＭ、配列番号１０３、１０５、１０７、１０９および１１１を有するフィノマーのための０ｎＭ、０．０４６ｎＭ、０．１４ｎＭ、０．４１ｎＭ、１．２ｎＭ、３．７ｎＭ、１１．１ｎＭ、３３．３ｎＭおよび１００ｎＭ）を注射した。センソグラムを記録し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ２．１ソフトウェアにおいて１．１ラングミュア相互作用モデルを使用して曲線フィッティングによって見かけの動態定数を決定した。
ｂ）フローサイトメトリーによる親和性測定
フィノマーの細胞上のｈｕＦＧＦＲ３への結合を、ＦＧＦＲ３陽性細胞としてＫＭＳ−１１細胞（ＪＣＲＢ１１７９）を、およびＦＧＦＲ３陰性対照細胞株としてＮ８７（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−５８２２）を使用するフローサイトメトリーによって分析した。ＫＭＳ−１１およびＮ８７細胞の両方とも、ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ５２４００−２５）で維持した。すべての培地に、２５Ｕ／ｍＬのペニシリン、２５μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび１０％のＦＣＳを補給した。Ｔ１５０フラスコから半接着性ＫＭＳ−１１細胞を収集するために、上清を５０ｍＬファルコンチューブ中に回収し、細胞を１０ｍｌ ＰＢＳで洗浄し、これもファルコンチューブに添加した。フラスコに２ｍｌのアキュターゼ（Ｓｉｇｍａ Ａ６９６４）を添加し、３７℃で１０分間インキュベートした。１０ｍｌ培地の添加によってアキュターゼを不活性化し、ファルコンチューブに添加し、これを遠心分離（２５０×ｇ、５分）して、細胞をペレットにした。細胞を、ＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ＋１％ ＦＣＳ＋０．２％ナトリウムアジド）で１×１０６個細胞／ｍＬの細胞濃度に再懸濁し、９６ウェル丸底プレート（Ｎｕｎｃ １６３３２０）におけるフローサイトメトリー染色のためにウェルあたり１００μＬを使用した（１×１０５個細胞／ウェル）。接着性Ｎ８７細胞については、上清および洗浄液を廃棄し、アキュターゼによって剥離された細胞のみを集め、準備した。
フィノマーを、マウス抗ｍｙｃ抗体（クローン９Ｅ１０；Ｒｏｃｈｅ １１６６７１４９００１）と同時インキュベートして、細胞結合の前にｍｙｃタグが付いたフィノマーの架橋結合を可能にした。フィノマーを１μＭに希釈し、ＦＡＣＳバッファー中、６６７ｎＭの９Ｅ１０抗ｍｙｃ抗体（３：２モル比）と氷上でおよそ１０分間同時インキュベートした。
この混合物を、０．０６ｎＭのフィノマー濃度まで４分の１で段階希釈した（合計８濃度）。対照は、二次抗体９Ｅ１０のみ（フィノマーなし；６６７ｎＭ ９Ｅ１０）、細胞のみ（ＦＡＣＳバッファーのみ）および１０ｎＭの濃度の抗ＦＧＦＲ３抗体（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号ＭＡＢ７６６）を含んでいた。細胞を９６ウェルプレート中で遠心分離し（２５０×ｇ、５分）、上記で示されたサンプルで再懸濁し、その後、氷上で１時間インキュベートした。プレートを遠心分離し、洗浄し（ＰＢＳ＋０．２％ナトリウムアジド）、その後、再度遠心分離した。次いで、５０μＬの二次抗体抗ｍＩｇＧ Ａｌｅｘａ４８８（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ２１２０２）を、細胞に４μｇ／ｍＬの濃度で添加し、その後、暗所、氷上で４５分間インキュベートした。プレートを遠心分離し、ＰＢＳ＋０．２％ナトリウムアジドで２回洗浄し、その後、ＦＡＣＳバッファーに再懸濁し、ＦＡＣＳ分析（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｇｕａｖａ ｅａｓｙＣｙｔｅ ８ＨＴ）を行った。
Ｐｒｉｓｍ ６を使用してＦＡＣＳデータ分析を実施した。データを変換し（Ｘ＝ｌｏｇＸ）、非線形フィット、ｌｏｇ（アゴニスト）対反応−可変勾配（４パラメータ）を使用して分析した。
結果
ａ）ＢＩＡｃｏｒｅによる親和性測定
結合特性を、ＢＩＡｃｏｒｅチップでのリアルタイム相互作用分析によって分析し、選択されたＦＧＦＲ３結合ポリペプチドの以下の解離定数（ＫＤ）が明らかとなった：
Figure 2021165268
ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃに結合するＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチド（配列番号１０１、１０３、１０５、１０７、１０９および１１１）の測定された見かけの親和性（表２４）は、１ラウンドのみの親和性成熟後にナノモル未満の値が得られたという事実を考慮して驚くほど高かった。さらに、これらの測定値によって、Ｆｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチド（配列番号１０１、１０３、１０５、１０７、１０９および１１１）の、ＦＧＦＲ３の両方のヒトアイソフォーム（ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃ）への、およびカニクイザルＦＧＦＲ３ｃへの（カニクイザルＦＧＦＲ３ｂへの結合は試験されなかった）同等の結合特性が確認された。
ｂ）フローサイトメトリーによる親和性測定
結合特性を、ＦＧＦＲ３陽性ＫＭＳ−１１細胞および陰性対照としてＦＧＦＲ３陰性Ｎ８７細胞を使用するフローサイトメトリーによって分析した。選択されたＦＧＦＲ３結合ポリペプチドの以下のＥＣ５０値は、表２５および図１１に示されるように測定した。
Figure 2021165268
ＦＧＦＲ３を発現する細胞株で測定された、低ナノモル範囲（表２５）におけるＥＣ５０値（図１１Ａ、ＫＭＳ−１１）によって、表面プラズモン共鳴によって測定された高い見かけの親和性が確認され（表２４）、細胞表面の天然状況におけるＦＧＦＲ３への結合が実証される。ＦＧＦＲ３に結合するすべてのＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチド（配列番号１０１、１０３、１０５、１０７、１０９および１１１）は、ＦＧＦＲ３を発現しない細胞株で非特異的結合を示さなかった（図１１Ｂ）。
ＦＧＦＲ３に特異的な本発明のＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドは、リガンド結合に干渉しない
両アイソフォームＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃと結合するためのＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドが、リガンド（例えば、ＦＧＦ１）結合に干渉しない場合、リガンド結合部位がスプライス部位に近接して位置するように、ＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃのいずれかを生じさせることが好ましいであろう。
Ｆｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドの、そのリガンドのうちの１つの存在下でＦＧＦＲ３に結合する能力を検証する目的で、ＦＧＦ１の存在下または不在下でのフィノマーのＦＧＦＲ３に対する親和性を測定するためにＢＩＡｃｏｒｅ実験を設定した（線維芽細胞増殖因子１は、ＦＧＦＲ３の主要なリガンドの１つである）。
親和性を測定するために使用される方法（実施例５に記載されるような）と同様に、１００ｎＭの濃度のフィノマー（５００ｎＭの濃度で使用されるＦＦ２Ｌ４Ｃ３−配列番号１０１を除いて）を９Ｅ１０表面で捕捉し、続いて、２００ｎＭ ＦＧＦ１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ ２３２−ＦＡ−０２５／ＣＦ）の存在下または不在下で、種々の濃度のｈｕＦＧＦＲ３ｃ−Ｆｃ（０ｎＭ、１１ｎＭ、３３ｎＭ、１００ｎＭ）を注射した。センソグラムを記録し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ２．１ソフトウェアを使用して見かけの動態定数を算出した。
結果
溶液中の２００ｎＭ ＦＧＦ１の有無とは独立に、Ｆｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドの、ｈｕＦＧＦＲ３ｃへの結合は、不変であり、フィノマーのＦＧＦＲ３への結合は、リガンド結合に干渉しないことを示した。表２７は、２００ｎＭ ＦＧＦ１の存在下または不在下で得られた動態定数を示す。
Figure 2021165268
それにもかかわらず、アッセイ変動性のために、ＦＧＦ１の不在下でのＫＤａｐｐの値は、実施例２において示された実験において得られた値とはわずかに異なっており（表２４）、この実験は、Ｆｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドは、リガンド（この場合には、ＦＧＦ１）が、リガンド結合部位に結合される場合であっても、ＦＧＦＲ３と結合できることを示す。このことから、本発明者らは、本明細書において記載されるＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドによって結合されるエピトープは、ＦＧＦＲ３の定常領域に位置すると結論付ける。
本発明のＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドは、ＦＧＦＲ３のドメインＤ１〜Ｄ２に結合する
ＦＧＦＲ３へのＦｙｎ−ＳＨ３由来ポリペプチド結合の特異性を、ＥＬＩＳＡによって試験した。
種々の抗原を、プレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐプレート；Ｎｕｎｃ ４３９４５４）にコーティングした：ｈｕＦＧＦＲ３ｂ−Ｆｃ、ｈｕＦＧＦＲ３ｃ−Ｆｃ、ｃｙＦＧＦＲ３ｃ−Ｆｃ、ｍｕＦＧＦＲ３ｃ−Ｈｉｓ、ｈｕＤ１−Ｆｃ、ｈｕＤ２−Ｆｃ、ｈｕＤ１−Ｄ２−Ｆｃ。
プレートを、５μｇ／ｍＬの１００μＬの抗原（０．５μｇ／ウェル）を用いてコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。ウェルをＰＢＳで３回洗浄し、その後、２００μＬの４％ＭＰＢＳを用いて室温で１時間ブロッキングした。ウェル再度を洗浄し、２０μＬの、１５μｇ／ｍＬの９Ｅ１０を含有する１０％ＭＰＢＳを添加し、その後、２５０ｎＭの８０μｌのフィノマーを添加した（２００ｎＭ最終フィノマー濃度）。ウェルを室温で４５分間インキュベートし、その後、洗浄し、１００μＬの、２％ＭＰＢＳで１：１０００希釈した抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ Ａ２５５４）を添加した。ウェルを室温で３０分間インキュベートし、その後、ＰＢＳ中の０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を用いて３回、次いで、ＰＢＳで３回洗浄した。各ウェルに１００μＬのＢＭ ＰＯＤ Ｂｌｕｅ基質（Ｒｏｃｈｅ １１ ４８４ ２８１ ００１）を添加し、続いて、５０μＬの１Ｍ Ｈ２ＳＯ４を添加して、反応を停止させた。Ｔｅｃａｎ Ｍ１０００機器を使用して吸光度４５０ｎＭ〜６５０ｎＭを記録した。
結果
図１２Ａ〜Ｆに示されるように、Ｆｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドはすべて、カニクイザルおよびマウスＦＧＦＲ３ｃに対して交差反応性である。興味深いことに、すべての結合剤は、ドメインＤ１およびＤ２が物理的に連結されている場合にのみ存在するエピトープに対して特異的であり（図１２Ａ〜ＦバーｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ１Ｄ２を参照されたい）、実際、単一ドメインＤ１またはＤ２（ｈＦＧＦＲ３−Ｄ１またはｈｕＦＧＦＲ３−Ｄ２）が、ＥＬＩＳＡプレート上に固定化されている場合には結合は観察されない。
本発明のＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドは、ＦＧＦＲ３の効率的な内部移行を引き起こす
内部移行は、本明細書において記載されるＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドの中心的な特徴であり、毒性ペイロードおよび／または融合されたタンパク質、例えば、抗体を細胞内に送達するためにこれらの結合剤を使用する機会を提供する。
ＦＧＦＲ３に結合するＦｙｎ ＳＨ３由来ポリペプチドの、標的への結合の際に内部移行する能力を評価するために、細胞傷害性薬剤の細胞内デリバリーに基づく内部移行アッセイを確立した。
アッセイは、ＫＭＳ−１１細胞に対するＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）がコンジュゲートしている９Ｅ１０と架橋している抗ＦＧＦＲ３フィノマーの細胞傷害性効果を測定する。ＭＭＡＦは、細胞分裂抑制薬（チュブリン重合を遮断する）であり、細胞中への内部移行の際にのみ活性である。したがって、このアッセイは、フィノマーがＭＭＡＦの内部移行をどれ程促進するか示す。５０μＬの、２×１０５個細胞／ｍＬのＫＭＳ−１１細胞を、９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ ３６１０）中に播種して、ウェルあたり１０，０００個細胞を得た。細胞を４時間インキュベートして、細胞を接着させた（３７℃、５％ＣＯ２）。フィノマーおよび９Ｅ１０−ＭＭＡＦを、３：１比で混合した。フィノマーの４×ストック（４μＭ）および９Ｅ１０−ＭＭＡＦの４×ストック（１．３３μＭ）をＲＰＭＩ培地で調製し（節５．４．１を参照されたい）、１：１混合した（４０μｌ＋４０μＬ）。次いで、この混合物を、３分の１で段階希釈して、濃度範囲１０００ｎＭ〜５０ｐＭを得た。５０μＬのサンプルを５０μＬの細胞に添加し（上記で播種されたように）、５日間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ２）。適当な対照、野生型フィノマーＦｙｎＳＨ３、フィノマーを有さないＭＭＡＦ−９Ｅ１０およびまた、いかなる試薬の付加も伴わない細胞が含まれた。すべてのサンプルを２連で調製した。５日後、１００μＬの細胞力価ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ７５７３）を各ウェルに添加し、穏やかに振盪しながら暗所で１０分間インキュベートした。細胞生存力の読み取りとして、Ｔｅｃａｎ Ｍ１０００機器を使用して発光を測定した。分析は、Ｐｒｉｓｍ ６を使用して実施した。データを変換し（Ｘ＝ｌｏｇＸ）、非線形フィット、ｌｏｇ（阻害剤）対反応−可変勾配（４パラメータ）を使用して分析した。
結果
本明細書において記載されるすべてのＦｙｎ ＳＨ３由来ＦＧＦＲ３結合ポリペプチドは、おそらくはＭＭＡＦ自体の毒性のために、試験された最高濃度でのみ細胞傷害性を示す、ＭＭＡＦ標識された二次抗体のみ（図１３Ａにおける９Ｅ１０）または３実験すべてにおいて示されたＭＭＡＦ標識された９Ｅ１０と組み合わせた野生型フィノマーＦｙｎＳＨ３（ＦｙｎＳＨ３として示された図１３Ａ〜Ｃ）を用いて処置された細胞と比較して、細胞傷害性（例えば、内部移行）の増大を示す。図１３は、種々の実験において得られた細胞傷害性プロファイルを示し、表２７は、種々のＦｙｎ ＳＨ３由来ＦＧＦＲ３結合ポリペプチドについて得られたＥＣ５０を示す。
Figure 2021165268
図１３および表２７において示されたデータは、親和性の増大はまた、より効率的な内部移行につながることを示す。
優れた結合および内部移行特性を示し、種々のファミリーに由来する代替Ｆｙｎ−ＳＨ３由来ポリペプチド
配列番号９９に由来する配列のファミリーに加えて、本発明者らは、驚くべきことに、同様に優れた結合および内部移行特性を示し、配列番号９９に由来するフィノマー（表２８を参照されたい）と製造可能性および交差反応性特性を共有する、代替フィノマー、ＦＦ４０Ｌ５４Ａ５（ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＭＳＴＴＡＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＱＳＰＨＧＱＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＷＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ；配列番号１１６）を同定した。フィノマーＦＦ４０Ｌ５４Ａ５は、その配列が、極めて不十分な内部移行特性しか示さなかったフィノマーに由来したので、優れた内部移行特性を有すると予測されなかった。
表２８に、フィノマーＦＦ４０Ｌ５４Ａ５の特性をまとめた。
Figure 2021165268
フィノマー−抗体二重特異性結合物質（フィノマブ（Ｆｙｎｏｍａｂｓ））
以下は、ＦＧＦＲ３結合フィノマーの一実施形態および抗ＣＤ１３８モノクローナル抗体の一実施形態を含む二重特異性結合物質を作製する限定されない例を提供する。本明細書において開示されるフィノマーの任意の実施形態は、ＦＧＦＲ３に、およびＣＤ１３８に特異的に結合する二重特異性結合物質を作製するために本明細書において開示される抗ＣＤ１３８抗体またはその結合部分の任意の実施形態に結合され得る。この実施例において使用されるＦＧＦＲ３結合フィノマーは、ＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７（「Ｇ７」、（配列番号１０７））と名付けられ、ｈＦ６と名付けられたヒト化抗ＣＤ１３８モノクローナル抗体に結合される。ｈＦ６抗体は、配列番号９３の重鎖可変領域および配列番号４４の軽鎖可変領域を含むヒト化ＩｇＧ１／カッパ抗体である。Ｇ７フィノマーは、マウスおよびヒトＦＧＦＲ３の両方に特異的に結合する。Ｇ７フィノマーはまた、ＦＧＦＲ３ｂおよびＦＧＦＲ３ｃの両方に特異的に結合する。Ｇ７フィノマーは、組換え技術を使用して、ｈＦ６モノクローナル抗体上の４つの異なる位置でリンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳによって共有結合によって結合された。位置は、重鎖または軽鎖Ｎ末端（それぞれ、ＨＮおよびＬＮと示される）ならびに重鎖または軽鎖Ｃ末端（それぞれ、ＨＣおよびＬＣと示される）を含む（例えば、図１４を参照されたい）。手短には、重鎖のＮ末端に融合されたＧ７を含むｈＦ６の発現のために、リンカーをコードする配列の５’に、それとインフレームで位置するＧ７の発現を指示するコーディング領域およびｈＦ６重鎖の発現を指示するコーディング領域を含む核酸コンストラクトを作製した。次いで、ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７コンストラクトを、ＣＨＯ細胞に、ｈＦ６軽鎖の発現を指示する核酸コンストラクトと同時トランスフェクトした。得られたＩｇＧ１／カッパアイソタイプの全長ｈＦ６抗体およびＧ７フィノマー（ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７）を含む二重特異性結合物質を、細胞培養上清から単離し、精製した。
同様に、重鎖のＣ末端に融合されたＧ７を含むｈＦ６の発現のために、リンカーをコードする配列の５’に、それとインフレームで位置するｈＦ６重鎖の発現を指示するコーディング領域およびＧ７の発現を指示するコーディング領域を含む核酸コンストラクトを作製した。軽鎖のＮ末端に融合されたＧ７を含むｈＦ６の発現のために、リンカーをコードする配列の５’に、それとインフレームで位置するＧ７の発現を指示するコーディング領域およびｈＦ６軽鎖の発現を指示するコーディング領域を含む核酸コンストラクトを作製した。軽鎖のＣ末端に融合されたＧ７を含むｈＦ６の発現のために、リンカーをコードする配列の５’に、それとインフレームで位置するｈＦ６軽鎖の発現を指示するコーディング領域およびＧ７の発現を指示するコーディング領域を含む核酸コンストラクトを作製した。次いで、示されたコンストラクトをＣＨＯ細胞に、ｈＦ６の対応する重鎖または軽鎖の発現を指示する核酸コンストラクトと同時トランスフェクトした。得られたＩｇＧ１／カッパアイソタイプの全長ｈＦ６抗体およびＧ７フィノマーを含む二重特異性結合物質（すなわち、ｈＦ６−ＨＣ−Ｇ７、ｈＦ６−ＬＣ−Ｇ７およびｈＦ６−ＬＮ−Ｇ７）を、細胞培養上清から単離し、精製した。得られた二重特異性結合物質の各々を、ＥＬＩＳＡによってＣＤ１３８およびＦＧＦＲ３への結合についてアッセイし、その結果は、表２９に示されている。
Figure 2021165268
表２８では、ｈＦ６−ＬＣ−Ｇ７と名付けられた二重特異性コンストラクトは、Ｇ７フィノマーの、ｈＦ６抗体の軽鎖のＣ末端への結合を示し（例えば、図１４Ｃの実施形態を参照されたい）、ｈＦ６−ＬＮ−Ｇ７は、Ｇ７フィノマーの、ｈＦ６抗体の軽鎖のＮ末端への結合を示し（例えば、図１４Ｄの実施形態を参照されたい）、ｈＦ６−ＨＣ−Ｇ７は、Ｇ７フィノマーの、ｈＦ６抗体の重鎖のＣ末端への結合を示し（例えば、図１４Ａの実施形態を参照されたい）、ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７は、Ｇ７フィノマーの、ｈＦ６抗体の重鎖のＮ末端への結合を示す（例えば、図１４Ｂの実施形態を参照されたい）。表２８は、得られた二重特異性結合物質が、ＥＬＩＳＡによって決定されるように、マウスＦＧＦＲ３ｃおよびヒトＣＤ１３８に対する特異的結合親和性を保持していたことを示す。
ＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞）を、細胞表面にヒトＦＧＦＲ３ｃ（図１６Ａ）またはヒトＦＧＦＲ３ｂ（図１６Ｂ）を発現するようにトランスフェクトした。次いで、ＦＡＣｓ分析によって、代表的な二重特異性結合物質ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞の細胞表面に発現されたヒトＦＧＦＲ３ｂ（図１６Ｂ）およびヒトＦＧＦＲ３ｃ（図１６Ａ）の両方と特異的に結合するとわかった。
表２８および図１６の代表的な結合データは、二重特異性結合物質が、Ｇ７フィノマーの結合特異性ならびにｈＦ６抗ＣＤ１３８抗体の結合特異性を保持することを実証する。
フィノマー／抗体（フィノマブ）薬物コンジュゲート
代表的な二重特異性結合物質ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７を、式ＩＩのＰＢＤ毒素に部位特異的にコンジュゲートして、ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩと名付けられた二重特異性結合物質の代表的な薬物コンジュゲートを作製した。ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩは、１００００ｐＭ未満の濃度で、ヒトＦＧＦＲ３ｂ（図１７Ｂ）およびヒトＦＧＦＲ３ｃ（図１７Ｃ）を発現するＣＨＯ細胞への特異的細胞傷害性を実証したが、トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞の特異的死滅は実証しなかった（図１７Ａ）。高濃度の薬物がコンジュゲートされた結合物質（すなわち、＞１００００ｐＭ）で観察された細胞傷害性は、結合とは独立に、高濃度の毒素自体による非特異的死滅による可能性が最も高い。
代表的な二重特異性結合物質薬物コンジュゲートｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩおよびｈＦ６−ＬＮ−Ｇ７−ＩＩもまた、細胞株ＫＭＳ−１１（高度ＣＤ１３８発現性細胞株）およびＯＰＭ−２（中度ＣＤ１３８発現性細胞株）に対して特異的細胞傷害性を実証したが、ＡＲＨ−７７（陰性対照細胞株）（例えば、図１９を参照されたい）には実証しなかった。
二重特異性結合物質ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７の抗体部分（すなわち、ｈＦ６）を、ｈＦ６抗体重鎖定常領域中の５つの位置（すなわち、Ｓ１１９、Ｖ２８２、Ｔ２８９、Ｎ３６１およびＶ４２２）のうち１つでシステインアミノ酸置換を組み込むように操作し、それによって、ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ、ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ、ｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ、ｈＦ６−Ｎ３６１ＣおよびｈＦ６−Ｖ４２２Ｃと名付けられたシステイン置換抗体を提供した。対応する二重特異性結合物質は、それぞれｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｎ３６１Ｃ−ＨＮ−Ｇ７およびｈＦ６−Ｖ４２２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７と名付けられ、「Ｇ７」は、ｈＦ６の重鎖のＮ末端に結合されているＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７フィノマーの存在を示す。操作されたシステイン残基は、抗悪性腫瘍剤の、二重特異性結合物質各々への部位特異的コンジュゲーション（ＳＳＣ）のためのコンジュゲーション点を提供した。親ｈＦ６−ＨＮ−Ｇ７の代表的な配列は以下に示されている。点線の下線は、シグナル伝達配列を示し、単一下線は、フィノマー部分に相当し、二重下線は、任意選択のリンカー領域に相当し、それにｈＦ６抗体の重鎖が続く。システインに独立に突然変異されたアミノ酸各々（すなわち、Ａ１１８、Ｓ１１９、Ｓ２３９、Ｖ２８２、Ｔ２８９、Ｎ３６１およびＶ４２２）が示されている。
配列番号１２５
Figure 2021165268
 配列番号１２５（続き）
Figure 2021165268
Ａ１１８Ｃ、Ｓ１１９Ｃ、Ｓ２３９Ｃ、Ｖ２８２Ｃ、Ｔ２８９Ｃ、Ｎ３６１ＣおよびＶ４２２Ｃの重鎖定常領域中に突然変異を有する二重特異性結合物質、すなわち、二重特異性結合物質ｈＦ６−Ａ１１８Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｓ２３９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７、ｈＦ６−Ｎ３６１Ｃ−ＨＮ−Ｇ７およびｈＦ６−Ｖ４２２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７のアミノ酸配列が、配列番号１３５〜１４１として提供されている。
代表的な二重特異性結合物質の各々は、式ＩＩの例示的毒性ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）にコンジュゲートされた（図１８も参照されたい）。確率論的にコンジュゲートされた二重特異性結合物質を、修飾ＤＨＡＡ還元プロトコールを使用して社内でコンジュゲートした。手短には、抗体剤をｄＰＢＳ中１．１ｍｇに希釈し、２×〜２０×安定化ＴＣＥＰ（結合破壊剤（ｂｏｎｄ ｂｒｅａｋｅｒ））を用いて、２５〜３７℃で時折旋回させながら１〜３時間還元した。次いで、サンプルを、１ｍＭ ＥＤＴＡを有するｄＰＢＳにバッファー交換して、ＴＣＥＰを除去し、２．５×ＤＨＡＡを使用して室温で２．５時間酸化した。抗体をｄＰＢＳにバッファー交換して、ＤＨＡＡを除去し、８×の毒素ＩＩとともに室温で１．５時間インキュベートした。次いで、コンジュゲートされた薬剤を、ｄＰＢＳにバッファー交換し、ナノドロップ（ｎａｎｏｄｒｏｐ）によって濃度を決定した。部位特異的コンジュゲーションは、あまりストリンジェントではない還元条件下で達成した。得られた、部位特異的にコンジュゲートされた、薬物がコンジュゲートされた二重特異性結合物質は、ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ、ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ、ｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ、ｈＦ６−Ｎ３６１Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩおよびｈＦ６−Ｖ４２２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩと名付けられた。
「高度ＣＤ１３８」発現性細胞株（ＫＭＳ１１）、「中度ＣＤ１３８」細胞株（ＲＴ１１２）および陰性対照細胞株（ＡＲＨ７７）を使用して、５日細胞傷害性アッセイを実施した（Ｎ＝３）。細胞傷害性アッセイの結果は、以下の表および図２０に示されている。
Figure 2021165268
ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ、ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩおよびｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩと名付けられた代表的な薬物がコンジュゲートされた二重特異性結合物質を、ＫＭＳ−１１細胞（高度発現性ＣＤ１３８細胞株）、ＲＴ−１１２細胞、ＡＮ３ＣＡ細胞（ＣＤ１３８／ＦＧＦＲ３陽性細胞株）、ＨＣＣ１８０６細胞（ＣＤ１３８／ＦＧＦＲ３陽性細胞株）（例えば、図２０を参照されたい）および他の細胞種に対するインビトロ毒性アッセイで試験した。細胞の細胞傷害性結果は、以下の表にまとめられている。
Figure 2021165268
ｈＦ６−Ｓ１１９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩ、ｈＦ６−Ｖ２８２Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩおよびｈＦ６−Ｔ２８９Ｃ−ＨＮ−Ｇ７−ＩＩと名付けられた代表的な薬物がコンジュゲートされた二重特異性結合物質を、種々の用量でインビボ異種移植研究において試験した（図２１）。手短には、免疫不全の雌マウス（株：Ｎｕ／Ｎｕ）に、５×１０６個のＡｎ３ＣＡまたはＨＣＣ１８０６細胞を用いて皮下に播種した。腫瘍をデジタルノギスを使用して測定し、腫瘍容積を、式０．５２３６＊Ｌ＊Ｗ２に従って決定した。腫瘍が１７５ｍｍ３（ＡＮ３ＣＡ）または１９５ｍｍ３（ＨＣＣ１８０６）の平均に達した時点で、マウスをランダム化し、示された二重特異性結合物質を用いて静脈内に投薬した。結果は、以下の表３２（ＡＮ３ＣＡ）および３３（ＡＣＣ１８０６）にまとめられている。
Figure 2021165268
Figure 2021165268
ある特定の代表的な配列
ヒトシンデカン−１（シンデカン−１）−ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１８８２７
配列番号１
MRRAALWLWLCALALSLQPALPQIVATNLPPEDQDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTWKDTQLLTAIPTSPEPTGLEATAASTSTLPAGEGPKEGEAVVLPEVEPGLTAREQEATPRPRETTQLPTTHLASTTTATTAQEPATSHPHRDMQPGHHETSTPAGPSQADLHTPHTEDGGPSATERAAEDGASSQLPAAEGSGEQDFTFETSGENTAVVAVEPDRRNQSPVDQGATGASQGLLDRKEVLGGVIAGGLVGLIFAVCLVGFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
マウスシンデカン−１（シンデカン−１）−ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１８８２８
配列番号１２６
MRRAALWLWLCALALRLQPALPQIVAVNVPPEDQDGSGDDSDNFSGSGTGALPDTLSRQTPSTWKDVWLLTATPTAPEPTSSNTETAFTSVLPAGEKPEEGEPVLHVEAEPGFTARDKEKEVTTRPRETVQLPITQRASTVRVTTAQAAVTSHPHGGMQPGLHETSAPTAPGQPDHQPPRVEGGGTSVIKEVVEDGTANQLPAGEGSGEQDFTFETSGENTAVAAVEPGLRNQPPVDEGATGASQSLLDRKEVLGGVIAGGLVGLIFAVCLVAFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
ラットシンデカン−１（シンデカン−１）−ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ２６２６０
配列番号１２７
MRRAALWLWLCALALRLQPALPQIVTANVPPEDQDGSGDDSDNFSGSGTGALPDMTLSRQTPSTWKDVWLLTATPTAPEPTSRDTEATLTSILPAGEKPEEGEPVAHVEAEPDFTARDKEKEATTRPRETTQLPVTQQASTAARATTAQASVTSHPHGDVQPGLHETLAPTAPGQPDHQPPSVEDGGTSVIKEVVEDETTNQLPAGEGSGEQDFTFETSGENTAVAGVEPDLRNQSPVDEGATGASQGLLDRKEVLGGVIAGGLVGLIFAVCLVAFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）（アカゲザル）シンデカン−１−ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ａ０Ａ１Ｄ５ＲＩＸ８
配列番号１２８
MGATAYIPNSNSLSALLRGLELPHQTELLRVRALPTLLCPCALCRAPGCVQIVATNLPPEDQDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTWKDTWLLTATPMSPEPTGLEATAASTSTLPAGEGPKEGEAVVLLEVEPDLTAREQEATPQPTETTQLPTTHQAPTARATTAQEPATSHPHRDMQPGHHETSAPAGPGQADLHTPRTEDGGPSATERAAEDGASSQLPAAEGSGEQDFTFETSGENTAIVAVEPDHRNQSPVDPGATGASQGLLDRKEVLGGIIAGGLVGLIFAVCLVGFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
ハイイロオオカミ（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ）ファミリー（イヌ）（イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ））シンデカン−１−ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｅ２ＲＴ７０
配列番号１２９
MRRAALWLWLCALALRLQPALPQIVATNVPPEDQDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTWKDMALLTAMPTAQEPTGADDIDSSTSILLTREGPEGGEAVLVAEAEPGFTDREKETAHPPSETTPHPTTHRASTARATTAQGPATLHPHRDAQPDHHQISVLAEPSQLDPHTPRVEDGGPSATERAAEDGVSTQLPAGEGSGEQDFTFDVSGENTAGTAVEPDQRNQPPVDRGATGASQGLLDRKEVLGGVIAGGLVGLIFAVCLVGFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPSKQEEFYA
カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）（カニクイザル）シンデカン−１
配列番号１３０
MRRAALWLWLCALALSLQPAMPQIVATNLPPEDQDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTWKDTWLVRATPMSPEPTGLEATAASTSTIQAGEGPKEGEAVVLLEVEPDLTAREQEATPQPTETTQLPTTHQAPTARATTAQEPATSHPHRDMQPGHHETSAPAGPGQADLHTPRTEDGGPSATERAAEDGASSQLPAAEGSGEQDFTFETSGENTAIVAVEPDHRNQSPVDPGATGASQGLLDRKEVLGGIIAGGLVGLIFAVCLVGFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
ヒト、ＦＧＦＲ３、アイソフォームｂ（配列番号９７）
ISESLGTEQRVVGRAAEVPGPEPGQQEQLVFGSGDAVELSCPPPGGGPMGPTVWVKDGTGLVPSERVLVGPQRLQVLNASHEDSGAYSCRQRLTQRVLCHFSVRVTDAPSSGDDEDGEDEAEDTGVDTGAPYWTRPERMDKKLLAVPAANTVRFRCPAAGNPTPSISWLKNGREFRGEHRIGGIKLRHQQWSLVMESVVPSDRGNYTCVVENKFGSIRQTYTLDVLERSPHRPILQAGLPANQTAVLGSDVEFHCKVYSDAQPHIQWLKHVEVNGSKVGPDGTPYVTVLKSWISESVEADVRLRLANVSERDGGEYLCRATNFIGVAEKAFWLSVHGPRAAEEELVEADEAGSVYAG
ヒト、ＦＧＦＲ３、アイソフォームｃ（配列番号９８）
ISESLGTEQRVVGRAAEVPGPEPGQQEQLVFGSGDAVELSCPPPGGGPMGPTVWVKDGTGLVPSERVLVGPQRLQVLNASHEDSGAYSCRQRLTQRVLCHFSVRVTDAPSSGDDEDGEDEAEDTGVDTGAPYWTRPERMDKKLLAVPAANTVRFRCPAAGNPTPSISWLKNGREFRGEHRIGGIKLRHQQWSLVMESVVPSDRGNYTCVVENKFGSIRQTYTLDVLERSPHRPILQAGLPANQTAVLGSDVEFHCKVYSDAQPHIQWLKHVEVNGSKVGPDGTPYVTVLKTAGANTTDKELEVLSLHNVTFEDAGEYTCLAGNSIGFSHHSAWLVVLPAEEELVEADEAGSVYAG
ある特定の実施形態
Ａ１．（ａ）シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分および（ｂ）線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）に特異的に結合するフィノマーを含む二重特異性結合物質。
Ａ１．１．シンデカン−１が、哺乳動物シンデカン−１である、実施形態Ａ１の二重特異性結合物質。
Ａ１．２．シンデカン−１が、ヒトシンデカン−１、マウスシンデカン−１およびサルシンデカン−１から選択される、実施形態Ａ１またはＡ１．１の二重特異性結合物質。
Ａ１．３．二重特異性薬剤および／または抗体もしくはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１およびマウスシンデカン−１に特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ１．２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１．４．二重特異性薬剤および／または抗体もしくはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１およびサルシンデカン−１に特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ１．３のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１．５．二重特異性薬剤および／または抗体もしくはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１、マウスシンデカン−１およびサルシンデカン−１に特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ１．４のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１．６．サルシンデカン−１が、マカク属のサルにおいて発現された、から得られた、またはから単離されたシンデカン−１を含む、実施形態Ａ１．２、Ａ１．４またはＡ１．５の二重特異性結合物質。
Ａ１．７．サルシンデカン−１が、カニクイザル種（カニクイザル）のサルにおいて発現された、から得られた、またはから単離されたシンデカン−１である、実施形態Ａ１．６の二重特異性結合物質。
Ａ１．８．サルシンデカン−１が、配列番号１２８または１３０のアミノ酸配列を含むかまたはからなる、実施形態Ａ１．６の二重特異性結合物質。
Ａ２．二重特異性薬剤および／または抗体もしくはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１、サルシンデカン−１および／またはマウスシンデカン−１に、５０ｎＭ以下のＫＤで特異的に結合する、実施形態Ａ１．２〜Ａ１．８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３．抗体またはその抗原結合部分が、フィノマーに共有結合によって結合される、実施形態Ａ１〜Ａ２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ４．抗体またはその抗原結合部分が、シンデカン−１の細胞外領域に特異的に結合する実施形態Ａ１〜Ａ３のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５．抗体またはその抗原結合部分が、ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９４）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ４のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５．１．抗体またはその抗原結合部分が、結合について、ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９４）のアミノ酸配列を含むかまたはからなるポリペプチドに特異的に結合する別の結合物質と競合する、実施形態Ａ１〜Ａ５のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５．２．抗体またはその抗原結合部分が、シンデカン−１への結合について、表１から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、表２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、表３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、表６から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、表７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２および表８から選択されるＣＤＲ−Ｈ３を含むかまたはからなる第２の結合物質と競合する、実施形態Ａ１〜Ａ５．１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５．３．第２の結合物質が、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３を含む、実施形態Ａ５．２の二重特異性結合物質。
Ａ５．４．第２の結合物質が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３を含む、実施形態Ａ５．２の二重特異性結合物質。
Ａ５．５．第２の結合物質が、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４５または４６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１および配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３を含む、実施形態Ａ５．４の二重特異性結合物質。
Ａ５．６．第２の結合物質が、ヒト化軽鎖可変領域およびヒト化重鎖可変領域を含む、実施形態Ａ５．２の二重特異性結合物質。
Ａ５．７．第２の結合物質が、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化軽鎖可変領域および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化重鎖可変領域を含む、実施形態Ａ５．６の二重特異性結合物質。
Ａ５．８．第２の結合物質が、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化軽鎖および配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化重鎖を含む、実施形態Ａ５．６の二重特異性結合物質。
Ａ６．抗体またはその抗原結合部分が、以下の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号２〜１５から選択されるアミノ酸配列に対して９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１（軽鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号１６〜２６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２（軽鎖ＣＤＲ２）および（ｉｉｉ）配列番号２７〜３３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３（軽鎖ＣＤＲ３）を含む、実施形態Ａ１〜Ａ５．１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ６．１．抗体またはその抗原結合部分が、以下の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号２〜１５から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ１（軽鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号１６〜２６から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ２（軽鎖ＣＤＲ２）および（ｉｉｉ）配列番号２７〜３３から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ３（軽鎖ＣＤＲ３）を含む、実施形態Ａ１〜Ａ５．１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ７．抗体またはその抗原結合部分が、以下の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号４５〜５９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ１（重鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号６０〜７１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ２（重鎖ＣＤＲ２）、（ｉｉｉ）配列番号７２〜８１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ３（重鎖ＣＤＲ３）を含む、実施形態Ａ１〜Ａ５．１およびＡ６〜Ａ６．１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ７．１．抗体またはその抗原結合部分が、以下の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号４５〜５９から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ１（重鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号６０〜７１から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ２（重鎖ＣＤＲ２）、（ｉｉｉ）配列番号７２〜８１から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ３（重鎖ＣＤＲ３）を含む、実施形態Ａ１〜Ａ５．１およびＡ６〜Ａ６．１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ８．ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７または配列番号２９から選択され、ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１７または配列番号２０から選択され、ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２または配列番号４から選択される、実施形態Ａ６〜Ａ７．１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ９．配列番号７３または配列番号７５から選択され、ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６１または配列番号６３から選択され、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４７または配列番号５０から選択される、実施形態Ａ６〜Ａ８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１０．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６１のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を含むかまたはからなる、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１０．１．抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含むかまたはからなる軽鎖可変領域および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含むかまたはからなる重鎖可変領域を含む、実施形態Ａ１０の二重特異性結合物質。
Ａ１０．２．抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含むかまたはからなる軽鎖および配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含むかまたはからなる重鎖を含む、実施形態Ａ１０．１の二重特異性結合物質。
Ａ１１．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号４のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２９のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６３のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７５のアミノ酸配列を含むかまたはからなる、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１２．抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡまたはＩｇＭの定常領域を含む、実施形態Ａ１〜Ａ１１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１３．抗体またはその抗原結合部分が、キメラ抗体および／またはヒト化抗体である、実施形態Ａ１〜Ａ１２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１３．１．キメラ抗体が、ＩｇＧ１のヒト定常ドメインを含む実施形態Ａ１３の二重特異性結合物質。
Ａ１３．２．ヒト化抗体が、１つもしくは複数のヒトフレームワーク領域または対応するヒトフレームワーク領域に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％同一性、少なくとも９５％同一性、もしくは少なくとも１００％同一性のアミノ酸配列を含むかもしくはからなる１、２、３、４、５もしくはそれより多いフレームワーク領域を含む、実施形態Ａ１３またはＡ１３．１の二重特異性結合物質。
Ａ１４．抗体またはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１の細胞外ドメイン、サルシンデカン−１の細胞外ドメインおよび／またはマウスシンデカン−１の細胞外ドメインに特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ１３．２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１５．抗体またはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１、サルシンデカン−１および／またはマウスシンデカン−１の細胞外ドメインに、５０ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する実施形態Ａ１〜Ａ１３のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１６．ＦＧＦＲ３が、ヒト線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）である、実施形態Ａ１〜Ａ１５のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１７．ヒトＦＧＦＲ３が、ＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｂまたはＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｃを含む、実施形態Ａ１〜Ａ１６のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ１８．フィノマーが、ヒトＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｂおよびＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｃに特異的に結合する、実施形態Ａ１６またはＡ１７の二重特異性結合物質。
Ａ１９．フィノマーが、アミノ酸配列ＥＶＭＳＴＴＡ（配列番号１１４）を含むかまたはからなるＲＴループおよびアミノ酸配列ＳＱＳＰＨ（配列番号１１５）を含むかまたはからなるＳＲＣループを含む、実施形態Ａ１〜Ａ１８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２０．フィノマーが、アミノ酸配列ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＭＳＴＴＡＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＱＳＰＨＧＱＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧ（Ｘ７）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ （配列番号１１３）に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはからなり、位置（Ｘ７）のアミノ酸が、任意のアミノ酸である、実施形態Ａ１〜Ａ１９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２０．１．フィノマーが、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＭＳＴＴＡＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＱＳＰＨＧＱＹＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧ（Ｘ７）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ （配列番号１１３）のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはからなり、位置（Ｘ７）のアミノ酸が、任意のアミノ酸である、実施形態Ａ１〜Ａ１９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２１．（Ｘ７）が、Ｎ、Ｒ、ＷおよびＫから選択される、実施形態Ａ２０またはＡ２０．１の二重特異性結合物質。
Ａ２２．フィノマーが、アミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）を含むかまたはからなるＲＴループを含む、実施形態Ａ１〜Ａ１８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２３．フィノマーが、アミノ酸配列ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬ（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）（Ｘ４）ＧＰＹＷＥＡＲＳＬ（Ｘ５）ＴＧＥＴＧ（Ｘ６）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号９９）に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはからなり、アミノ酸（Ｘ１）、（Ｘ２）、（Ｘ３）、（Ｘ４）、（Ｘ５）および（Ｘ６）が、任意のアミノ酸から選択される、実施形態Ａ１〜Ａ１８またはＡ２２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２３．１．フィノマーが、アミノ酸配列ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＶＹＧＰＴＰＭＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬ（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）（Ｘ４）ＧＰＹＷＥＡＲＳＬ（Ｘ５）ＴＧＥＴＧ（Ｘ６）ＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号９９）を含むかまたはからなり、アミノ酸（Ｘ１）、（Ｘ２）、（Ｘ３）、（Ｘ４）、（Ｘ５）および（Ｘ６）が、任意のアミノ酸から選択される、Ａ２３の二重特異性結合物質。
Ａ２４．（Ｘ１）が、Ｎ、ＲまたはＫであり、
（Ｘ２）が、Ｓ、Ｇ、ＫまたはＲであり、
（Ｘ３）が、ＳまたはＧであり、
（Ｘ４）が、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＳまたはＫであり、
（Ｘ５）が、ＴまたはＡであり、
（Ｘ６）が、Ｙ、ＷまたはＬである、実施形態Ａ２３またはＡ２３．１の二重特異性結合物質。
Ａ２５．フィノマーが、
（配列番号１０１；ＦＦ２Ｌ４Ｃ３）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
（配列番号１０３；ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ１２）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
（配列番号１０５；ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ７）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
（配列番号１０７；ＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７；「Ｇ７」）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
（配列番号１０９；ＦＦ４３Ｌ６５Ｄ５）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
（配列番号１１１；ＦＦ４４Ｌ６５Ｂ７）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;および
（配列番号１１６；ＦＦ４０Ｌ５４Ａ５）GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ
から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、少なくとも９０％同一である、少なくとも９５％同一であるかまたは１００％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、実施形態Ａ１〜Ａ１８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２５．１．フィノマーが、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、少なくとも９０％同一である、少なくとも９５％同一であるかまたは１００％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み、配列番号１０７のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０７のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＰおよびＹが保存され、フィノマーが、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ１８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２５．２．フィノマーが、配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、少なくとも９０％同一である、少なくとも９５％同一であるかまたは１００％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み、配列番号１０７のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）ならびに配列番号１０７のアミノ酸位置３２〜３８のアミノ酸が保存され、フィノマーが、ＦＧＦＲ３に特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ１８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２５．３．フィノマーが、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むかまたはからなるポリペプチドを含むかまたはからなる、実施形態Ａ１〜Ａ１８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２５．４．フィノマーが、ヒトＦＧＦＲ３アイソフォームｂおよびＦＧＦＲ３アイソフォームｃの両方と特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ２５．３のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２６．フィノマーが、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ３ｂまたはＦＧＦＲ３ｃの細胞外領域に特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ２５．４のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２７．フィノマーが、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ３ｂ、ＦＧＦＲ３ｃまたはその部分に、約１０−５Ｍ〜約１０−１５Ｍの結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ２６のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２８．フィノマーが、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ３ｂ、ＦＧＦＲ３ｃまたはその部分に、１０−８以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、実施形態Ａ１〜Ａ２７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ２９．フィノマーが、グリコシル化される、実施形態Ａ１〜Ａ２８のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３０．フィノマーが、リンカーによって抗体またはその抗原結合部分に共有結合によって結合される、実施形態Ａ１〜Ａ２９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３０．１．リンカーが、ペプチド結合を含むかまたはからなる、実施形態Ａ３０の二重特異性結合物質。
Ａ３１．リンカーが、１個もしくは複数のアミノ酸、５〜１００個のアミノ酸、５〜５０個のアミノ酸、５〜２５個のアミノ酸、５〜２０個のアミノ酸または５〜１０個のアミノ酸を含むかまたはからなるペプチドを含むかまたはからなる、実施形態Ａ３０またはＡ３０．１の二重特異性結合物質。
Ａ３２．リンカーが、適宜置換されたＣ１〜Ｃ５０アルキル、適宜置換されたＣ２〜Ｃ５０アルケニル、適宜置換されたＣ２〜Ｃ５０アルキニル、アシル、アシルオキシ、アルキルオキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルコキシ、シクロアルコキシ、アリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアシル、アミノカルボニル、アミノカルボニルオキシ（ａｍｉｎｏｃａｒｂｏｙｌｏｘｙ）、アジド、フェニル、シクロアルキルアシル、アルキルチオ、アリールチオ、オキシスルホニル、カルボキシ、チオ、スルホキシド、スルホン、スルホネートエステル、チオシアノ、アミド、アミノ、エステル、ハロゲン化アルキルまたはそれらの組合せを含むかまたはからなる、実施形態Ａ３０、Ａ３０．１またはＡ３１の二重特異性結合物質。
Ａ３３．抗体またはその抗原結合部分が、結合対によってフィノマーに非共有結合によって結合される、実施形態Ａ１〜Ａ２９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３４．フィノマーが、抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖のＮ末端に結合される、実施形態Ａ１〜Ａ３３のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３５．１．フィノマーが、ペプチド結合によって、抗体の重鎖のＮ末端に共有結合によって結合される、実施形態Ａ１〜Ａ３３のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３５．２．フィノマーのＣ末端アミノ酸が、ペプチド結合によって、抗体の重鎖のＮ末端アミノ酸に共有結合によって結合される、実施形態Ａ３５．１の二重特異性結合物質。
Ａ３５．３．フィノマーのＣ末端アミノ酸が、ペプチド結合によって、抗体の軽鎖のＮ末端アミノ酸に共有結合によって結合される、実施形態Ａ３５．１の二重特異性結合物質。
Ａ３５．４．フィノマーが、抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖のカルボキシ末端に結合される、実施形態Ａ１〜Ａ３３のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３５．５．フィノマーのＮ末端アミノ酸が、ペプチド結合によって、抗体の重鎖のカルボキシ末端アミノ酸に共有結合によって結合される、実施形態Ａ３５．４の二重特異性結合物質。
Ａ３５．６．フィノマーのＮ末端アミノ酸が、ペプチド結合によって、抗体の軽鎖のカルボキシ末端アミノ酸に共有結合によって結合される、実施形態Ａ３５．４の二重特異性結合物質。
Ａ３５．７．（ｉ）フィノマーおよび配列番号１２５の重鎖アミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項Ａ１からＡ２９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３５．８．（ｉ）フィノマーおよび配列番号１２５のアミノ酸位置２１３のセリンが、システインに突然変異されている配列番号１２５の重鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列ならびに（ｉｉｉ）システインに共有結合によって結合される新生物剤を含むかまたはからなる、請求項Ａ１からＡ２９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３６．抗悪性腫瘍剤をさらに含む、実施形態Ａ１〜Ａ３５．７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ３７．抗悪性腫瘍剤が、オーリスタチン、ドラスタチン、マイタンシン、ツブリシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、シュードモナス外毒素−Ａ（ＰＥ３８）、イリノテカンおよび前記のうちいずれか１つの誘導体からなる群から選択される実施形態Ａ３５．８またはＡ３６の二重特異性結合物質。
Ａ３８．抗悪性腫瘍剤が、二重特異性結合物質に共有結合によって、または非共有結合によって結合される、実施形態Ａ３５．８、Ａ３６またはＡ３７の二重特異性結合物質。
Ａ３９．抗悪性腫瘍剤が、抗体またはその抗原結合部分に結合される、実施形態Ａ３８の二重特異性結合物質。
Ａ４０．抗悪性腫瘍剤が、フィノマーに結合される、実施形態Ａ３８の二重特異性結合物質。
Ａ４１．抗悪性腫瘍剤が、結合対によって二重特異性結合物質に非共有結合によって結合される、実施形態Ａ３５．８〜Ａ４０のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ４２．抗悪性腫瘍剤が、リンカーによって二重特異性結合物質に共有結合によって結合される、実施形態Ａ３５．８〜Ａ４０のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ４３．抗悪性腫瘍剤が、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を含む、実施形態Ａ３５．８〜Ａ４２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ４４．抗悪性腫瘍剤が、ピロロベンゾジアゼピン毒素および連結基を含むかまたはからなり、
ピロロベンゾジアゼピン毒素が、連結基に共有結合によって結合され、連結基が、二重特異性結合物質に共有結合によって結合される、
実施形態Ａ３５．８〜Ａ４０およびＡ４２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ４５．ピロロベンゾジアゼピン毒素が、次化学式Ｉ：
Figure 2021165268
 ［式中、
Ｚ１およびＺ２が、両方ともＮであり、
Ｚ３およびＺ４が、両方ともＣであり、
Figure 2021165268
 は、単結合または二重結合を表し、
ｎは、１〜１０であり、Ｒ３およびＲ４の各々は独立に、ＨまたはＣ１〜４アルコキシルであり、Ｒ１およびＲ２の各々は独立に、Ｈ、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ２〜５アルケニルおよびＲ５で適宜置換されたフェニルからなる群から選択され、
Ｒ５は、−ＮＨ２、−ＮＨＲ６および次構造
Figure 2021165268
 を有するＲ７で置換されたピペラジニルからなる群から選択され、
（ここで、Ｒ６は、連結基を含み、Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜５アルキルである）、
Ｘ１は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、Ｘ２は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１およびＲ２のうち１つのみが連結基を含み、Ｙ１およびＹ２の各々は独立に、ヌル、ＯＨまたはＳＯ３Ｈのいずれかであり、
ただし、
（ｉ）Ｘ１が連結基を含む、または連結基からなる場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｉ）Ｘ２が連結基を含む、または連結基からなる場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｉｉ）Ｘ１が保護基である場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃであり、
（ｉｖ）Ｘ２が保護基である場合には、
Figure 2021165268
 はＮ−Ｃである］
の構造を含むかまたはからなり、
ヌルが、示された部分が化学式Ｉの構造にないことを意味するか、または１つもしくは複数の水素の存在を示し、または明確に指定されない場合には、必要な原子価を完成するために１つもしくは複数の水素が存在し得る、実施形態Ａ４４の二重特異性結合物質。
Ａ４６．ｎが、３、４または５である、実施形態Ａ４５の二重特異性結合物質。
Ａ４７．Ｒ３およびＲ４が両方とも、−Ｏ−Ｈ３である、実施形態Ａ４５またはＡ４６の二重特異性結合物質。
Ａ４８．Ｒ１およびＲ２が両方とも、メチルである、実施形態Ａ４５〜Ａ４７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ４９．Ｒ１およびＲ２が両方とも、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３である、実施形態Ａ４５〜Ａ４７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５０．Ｒ２が、シクロプロピルである、実施形態Ａ４５〜Ａ４７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５１．Ｒ２が、４−メチルピペラジン−１−イルで置換されたフェニルである、実施形態Ａ４５〜Ａ４７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５２．Ｒ１が、Ｒ５で適宜置換されたフェニルであり、Ｒ５が、−ＮＨＲ６であり、Ｒ６が、連結基を含むかまたはからなる、実施形態Ａ５０またはＡ５１の二重特異性結合物質。
Ａ５３．Ｘ１が、ヌルであり、Ｙ１が、ヌルであり、
Figure 2021165268
 がＮ＝Ｃであり、Ｘ２がヌルであり、Ｙ２がヌルであり、
Figure 2021165268
 が、Ｎ＝Ｃである、実施形態Ａ４５〜Ａ４７およびＡ５０〜Ａ５２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５４．Ｘ１が連結基を含むかまたはからなり、Ｙ１がＯＨであり、
Figure 2021165268
 がＮ＝Ｃであり、Ｘ２がヌルであり、Ｙ２がヌルである、実施形態Ａ４５〜Ａ５１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５５．Ｘ１が、連結基を含むかまたはからなり、Ｙ１がＯＨであり、
Figure 2021165268
 がＮ−Ｃであり、Ｘ２が保護基であり、Ｙ２がＯＨである、実施形態Ａ４５〜Ａ５１のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５６．連結基が、カルバメート基によってピロロベンゾジアゼピン毒素に結合される、実施形態Ａ４４〜Ａ５５のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５７．連結基が、アミド基によってピロロベンゾジアゼピン毒素に連結される、実施形態Ａ４４〜Ａ５５のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５８．連結基が、次化学式Ａ：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、
波線は、結合物質との結合点を示し、
ｍは、１〜２０であり、
ｑは、０〜１０であり、
Ｅは、接続基である］
の構造を含むかまたはからなる、実施形態Ａ４４〜Ａ５７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ５９．ｍが、４または８である、実施形態Ａ５８の二重特異性結合物質。
Ａ６０．ｑが、０、１または２である、実施形態Ａ５８またはＡ５９の二重特異性結合物質。
Ａ６１．ｍが、８であり、ｑが、２である、実施形態Ａ５８の二重特異性結合物質。
Ａ６２．連結基が、次化学式Ｂ：
Figure 2021165268
 ［式中、
アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、
波線は、結合物質との結合点を示し、
Ｅは、接続基であり、
ｖは、０〜１０であり、
ｕは、０または１であり、ｕが１である場合には、ｔは、１〜１０である］
の構造を含むかまたはからなる、実施形態Ａ４４〜Ａ５７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ６３．ｖが１である、実施形態Ａ６２の二重特異性結合物質。
Ａ６４．ｕが１であり、ｔが８である、実施形態Ａ６２またはＡ６３の二重特異性結合物質。
Ａ６５．ｕが０であり、ｖが４である、実施形態Ａ６２の二重特異性結合物質。
Ａ６６．結合物質が、結合物質のシステインチオール残基とＥの間に形成されたチオエーテル結合によってＥに接続される、実施形態Ａ５８〜Ａ６５のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ６７．Ｅが、次化学式Ｃ：
Figure 2021165268
 ［式中、波線は、結合物質との結合点を示し、２倍のアスタリスクは、連結基との結合点を示す］
の構造を含むかまたはからなる、実施形態Ａ５８〜Ａ６６のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ６８．保護基が、以下の構造（Ｄ）：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、
ｗは、１〜５である］
を有する、実施形態Ａ４５〜Ａ６７のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ６９．ｗが２である、実施形態Ａ６８の二重特異性結合物質。
Ａ７０．保護基が、切断可能な保護基である、実施形態Ａ４５〜Ａ６９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ７１．抗悪性腫瘍剤が、
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは８である］、
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは８であり、ｐは３であり、Ｘ２は保護基である］、
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは８である］、
Figure 2021165268
 ［式中、ｔは８であり、ｖは１である］および
Figure 2021165268
 ［式中、波線は、結合物質との結合点を示す］
からなる群から選択される構造を含む、実施形態Ａ４４の二重特異性結合物質。
Ａ７２．Ｘ２の保護基が、以下の構造（Ｄ）：
Figure 2021165268
 ［式中、アスタリスクは、抗悪性腫瘍剤との結合点またはＰＢＤ毒素を示し、ｗは、１〜５である］
を有する、実施形態Ａ７１の二重特異性結合物質。
Ａ７３．結合物質の少なくとも１個のアミノ酸が、システインに突然変異され、システインが、チオールエーテル結合によって連結基に共有結合によって連結される、実施形態Ａ４４〜Ａ７２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ７３．１．抗体が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２のヒト重鎖定常領域を含み、抗体の重鎖定常領域の１１９位のセリンが、システインに突然変異され、システインが、チオールエーテル結合によって連結基に共有結合によって連結される、実施形態Ａ７３の二重特異性結合物質。
Ａ７３．２．結合物質の少なくとも１個のアミノ酸が、リシンに突然変異され、リシンの遊離アミノ基が、連結基に共有結合によって結合される、実施形態Ａ４４〜Ａ７２のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ７４．抗悪性腫瘍剤が、次化学式（ＩＩ）：
Figure 2021165268
 ［式中、ｍは８であり、波線は、結合物質のチオール基との結合点を示す］
の構造を含むかまたはからなる、実施形態Ａ４４またはＡ７３．２の二重特異性結合物質。
Ａ７５．実施形態Ａ１〜Ａ７４のいずれか１つの二重特異性結合物質および医薬上許容される賦形剤、希釈剤、添加物または担体を含む医薬組成物。
Ａ７６．無菌の凍結乾燥散剤として製剤化される、実施形態Ａ７５の医薬組成物。
Ａ７７．哺乳動物への静脈内投与用に製剤化される、実施形態Ａ７５またはＡ７６の医薬組成物。
Ａ７７．１．新生物の処置において使用するための、実施形態Ａ７５〜Ａ７７のいずれか１つの医薬組成物。
Ａ７７．２．新生物が、シンデカン−１を発現する新生細胞または癌細胞を含む、実施形態Ａ７７．１の医薬組成物。
Ａ７７．３．新生物が、癌腫、肉腫、神経系新生物、リンパ腫、骨髄腫、白血病、黒色腫、中皮腫、固形または軟部組織腫瘍および続発性癌からなる群から選択される、実施形態Ａ７７．１〜Ａ７７．２のいずれか１つの医薬組成物。
Ａ７７．４．新生物が、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、食道癌、肝臓癌、肝細胞癌、下咽頭癌、肺癌、腺癌、卵巣癌および腎癌からなる群から選択される、実施形態Ａ７７．１〜Ａ７７．３のいずれか１つの医薬組成物。
Ａ７７．５．新生物が、膵臓腺癌、膵神経内分泌癌、結腸直腸腺癌、小腸悪性腫瘍、胆管癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺癌腫、食道または食道胃接合部（ＥＧＪ）癌、胃腺癌、肝臓肝細胞癌腫、頭頚部扁平上皮癌、雌生殖器悪性腫瘍、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、肺小細胞癌腫、卵巣表面上皮性癌、後腹膜または腹膜肉腫、前立腺腺癌、神経内分泌腫瘍、消化管間質性腫瘍、神経膠芽腫および非上皮性卵巣癌からなる群から選択される、実施形態Ａ７７．１〜Ａ７７．３のいずれか１つの医薬組成物。
Ａ７７．６．新生物が、多発性骨髄腫、卵巣癌腫、子宮頸癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、精巣癌、腎臓癌腫、胆嚢癌腫、移行細胞膀胱癌、胃癌、前立腺癌、前立腺腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ−細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、−細胞悪性腫瘍、−細胞急性リンパ性白血病（−ＡＬＬ）、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）、固形組織肉腫、結腸癌腫、非小細胞肺癌、扁平細胞肺癌腫、結腸直腸癌腫、肝細胞癌、膵臓癌、脳癌（例えば、神経芽細胞腫または髄膜腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫、基底細胞癌または扁平上皮癌）および頭頚部癌腫からなる群から選択される、実施形態Ａ７７．１〜Ａ７７．３のいずれか１つの医薬組成物。
Ａ７８．新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を処置する方法であって、
ａ）新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を提供することと、
ｂ）対象に実施形態Ａ１〜Ａ７４のいずれか１つの二重特異性結合物質または実施形態Ａ７５〜Ａ７７のいずれか１つの医薬組成物の治療上有効量を投与することと
を含む、方法。
Ａ７９．投与後に、二重特異性結合物質が、癌の成長、生存力または転移を遮断、阻害、寛解、抑制または抑止する、実施形態Ａ７８の方法。
Ａ８０．投与後に、二重特異性結合物質が、癌の一部またはすべての死滅、壊死またはアポトーシスを誘導する、実施形態Ａ７８〜Ａ７９のいずれかの方法。
Ａ８１．新生物が、癌腫、肉腫、神経系新生物、リンパ腫、骨髄腫、白血病、黒色腫、中皮腫、固形または軟部組織腫瘍または続発性癌を含むかまたはからなる、実施形態Ａ７８〜Ａ８０のいずれか１つの方法。
Ａ８２．新生物が、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、食道癌、肝臓癌、肝細胞癌、下咽頭癌、肺癌、腺癌、卵巣癌または腎癌を含むかまたはからなる、実施形態Ａ８１の方法。
Ａ８３．新生物が、膵臓腺癌、膵神経内分泌癌、結腸直腸腺癌、小腸悪性腫瘍、胆管癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺癌腫、食道または食道胃接合部（ＥＧＪ）癌、胃腺癌、肝臓肝細胞癌腫、頭頚部扁平上皮癌、雌生殖器悪性腫瘍、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、肺小細胞癌腫、卵巣表面上皮性癌、後腹膜または腹膜肉腫、前立腺腺癌、神経内分泌腫瘍、消化管間質性腫瘍、神経膠芽腫または非上皮性卵巣癌を含むかまたはからなる、実施形態Ａ８１またはＡ８２の方法。
Ａ８４．新生物が、多発性骨髄腫、卵巣癌腫、子宮頸癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、精巣癌、腎臓癌腫、胆嚢癌腫、移行細胞膀胱癌、胃癌、前立腺癌、前立腺腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、Ｂ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）、固形組織肉腫、結腸癌腫、非小細胞肺癌、扁平細胞肺癌腫、結腸直腸癌腫、肝細胞癌、膵臓癌、脳癌（例えば、神経芽細胞腫または髄膜腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫、基底細胞癌または扁平上皮癌）および頭頚部癌腫からなる群から選択される、実施形態Ａ８１の方法。
Ａ８５．化学療法薬を対象に投与することをさらに含む、実施形態Ａ７８〜Ａ８４のいずれか１つの方法。
Ａ８６．対象がヒトである、実施形態Ａ７８〜Ａ８５のいずれか１つの方法。
Ａ８７．新生物を有するかまたは有すると疑われる対象の処置において使用するための、実施形態Ａ１〜Ａ７４のいずれか１つの二重特異性結合物質または実施形態Ａ７５〜Ａ７７のいずれか１つの医薬組成物。
Ａ８８．新生物が、シンデカン−１またはＦＧＦＲ３を発現する新生細胞または癌細胞を含む、実施形態Ａ７８〜Ａ８７のいずれか１つの方法または使用。
Ａ８９．ＦＧＦＲ３が、ヒトＦＧＦＲ３である、実施形態Ａ７８〜Ａ８７のいずれか１つの方法または使用。
Ａ９０．細胞の表面に発現されるシンデカン−１への結合の際に、および／または細胞の表面に発現されたＦＧＦＲ３への結合の際に、細胞中に内部移行される、実施形態Ａ１〜Ａ８９のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ９１．（ｉ）フィノマーおよび配列番号１２５の重鎖アミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項Ａ１からＡ９０のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ａ９２．（ｉ）フィノマーおよび配列番号１２５のアミノ酸位置２１３のセリンが、システインに突然変異されている配列番号１２５の重鎖アミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含み、ピロロベンゾジアゼピン毒素が、システインのチオール基に共有結合によって結合される、請求項Ａ１からＡ９０のいずれか１つの二重特異性結合物質。
Ｂ０．（ａ）シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分および（ｂ）抗悪性腫瘍剤を含む結合物質。
Ｂ１．抗体またはその抗原結合部分が、抗悪性腫瘍剤に共有結合によって、または非共有結合によって結合される、実施形態Ｂ０の結合物質。
Ｂ２．抗体またはその抗原結合部分が、シンデカン−１の細胞外領域に特異的に結合する、実施形態Ｂ０またはＢ１の結合物質。
Ｂ３．シンデカン−１が、哺乳動物シンデカン−１である、実施形態Ｂ０〜Ｂ２のいずれか１つの結合物質。
Ｂ４．抗体またはその抗原結合部分が、ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９４）のアミノ酸配列を含むかまたはからなるポリペプチドに特異的に結合する、実施形態Ｂ０〜Ｂ３のいずれか１つの結合物質。
Ｂ５．抗体またはその抗原結合部分が、以下の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号２〜１５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ１（軽鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号１６〜２６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ２（軽鎖ＣＤＲ２）および（ｉｉｉ）配列番号２７〜３３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ３（軽鎖ＣＤＲ３）を含む、実施形態Ｂ０〜Ｂ４のいずれか１つの結合物質。
Ｂ６．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２および配列番号４から選択され、ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１７および配列番号２０から選択され、ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７および配列番号２９から選択される、実施形態Ｂ５の結合物質。
Ｂ７．抗体またはその抗原結合部分が、以下の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号４５〜５９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ１（重鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号６０〜７１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ２（重鎖ＣＤＲ２）および（ｉｉｉ）配列番号７２〜８１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性または少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ３（重鎖ＣＤＲ３）を含む、実施形態Ｂ０〜Ｂ６のいずれか１つの結合物質。
Ｂ８．ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７３および配列番号７５から選択され、ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６１および配列番号６３から選択され、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４７および配列番号５０から選択される、実施形態Ｂ０〜Ｂ７のいずれか１つの結合物質。
Ｂ９．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４７のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６１のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を含むかまたはからなる、実施形態Ｂ０〜Ｂ８のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１０．ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号４のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２９のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６３のアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７５のアミノ酸配列を含むかまたはからなる、実施形態Ｂ０〜Ｂ８のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１１．抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡまたはＩｇＭの定常領域を含む、実施形態Ｂ０〜Ｂ１０のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１２．抗体またはその抗原結合部分が、ヒト化される、実施形態Ｂ０〜Ｂ１１のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１３．抗体またはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１に、５０ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、実施形態Ｂ０〜Ｂ１２のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１４．抗悪性腫瘍剤が、リンカーによって抗体またはその抗原結合部分に共有結合によって結合される、実施形態Ｂ０〜Ｂ１３のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１５．リンカーが、１個もしくは複数のアミノ酸、５〜１００個のアミノ酸、５〜５０個のアミノ酸、５〜２５個のアミノ酸、５〜２０個のアミノ酸または５〜１０個のアミノ酸を含むペプチドを含むかまたはからなる、実施形態Ｂ１４の結合物質。
Ｂ１６．リンカーが、適宜置換されたＣ１〜Ｃ５０アルキル、適宜置換されたＣ２〜Ｃ５０アルケニル、適宜置換されたＣ２〜Ｃ５０アルキニル、アシル、アシルオキシ、アルキルオキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルコキシ、シクロアルコキシ、アリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアシル、アミノカルボニル、アミノカルボニルオキシ、アジド、フェニル、シクロアルキルアシル、アルキルチオ、アリールチオ、オキシスルホニル、カルボキシ、チオ、スルホキシド、スルホン、スルホネートエステル、チオシアノ、アミド、アミノ、エステル、ハロゲン化アルキルまたはそれらの組合せを含む、実施形態Ｂ１４の結合物質。
Ｂ１７．抗体またはその抗原結合部分が、結合対によって抗悪性腫瘍剤に非共有結合によって結合される、実施形態Ｂ０〜Ｂ１６のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１８．抗悪性腫瘍剤が、抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖のアミノ末端に結合される、実施形態Ｂ０〜Ｂ１７のいずれか１つの結合物質。
Ｂ１９．抗悪性腫瘍剤が、抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖のカルボキシ末端に結合される、実施形態Ｂ０〜Ｂ１８のいずれか１つの結合物質。
Ｂ２０．抗悪性腫瘍剤が、オーリスタチン、ドラスタチン、マイタンシン、ツブリシン、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、シュードモナス外毒素−Ａ（ＰＥ３８）、イリノテカンおよび前記のいずれか１つの誘導体からなる群から選択される、実施形態Ｂ０〜Ｂ１９のいずれか１つの結合物質。
Ｂ２１．抗悪性腫瘍剤が、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を含む、実施形態Ｂ０〜Ｂ２０のいずれか１つの結合物質。
本明細書で引用される各特許、特許出願、刊行物、または任意の他の参考文献または文書の全体は、参照により組み込まれる。対立する場合には、定義を含む明細書が支配する。
任意の特許、特許出願、刊行物または任意のその他の文書の引用は、前述のいずれかが関連する先行技術であることを認めるものではなく、これらの刊行物または文書の内容または日付に関する何らかの承認を構成するものでもない。
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用できるが、適した方法および材料は、本明細書に記載されている。
本明細書に開示されるすべての特徴は、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書に開示されている各特徴は、同一、同等の、または同様の目的を果たす代替特徴によって置き換えることができる。したがって、特に明記しない限り、開示された特徴（例えば、抗体）は、同等または同様の特徴の属の例である。
本明細書において使用される場合、すべての数値または数値範囲は、文脈で別に明確に示されていない限り、そのような範囲内の整数および値の分数または範囲内の整数を含む。さらに、値のリストが本明細書に記載されている場合（例えば、約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％または８６％）、リストは、そのすべての中間値および小数値（例えば、５４％、８５．４％）を含む。したがって、例示するために、８０％以上の同一性への言及は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％など、ならびに８１．１％、８１．２％、８１．３％、８１．４％、８１．５％など、８２．１％、８２．２％、８２．３％、８２．４％、８２．５％など、その他を含む。
より多い（より大きい）またはより小さい整数への言及は、それぞれ、参照数よりも大きいまたは小さい任意の数を含む。したがって、例えば、１００未満への言及は、９９、９８、９７などを、数字１（１）の最後まで下がって含み、１０未満は、９、８、７などを、数字１（１）の最後まで下がって含む。
本明細書において使用される場合、すべての数値または範囲は、文脈で別に明確に示されていない限り、そのような範囲内の値の分数および整数、およびそのような範囲内の整数の分数を含む。したがって、例示するために、１〜１０などの数値範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ならびに１．１、１．２、１．３、１．４、１．５など、その他を含む。したがって、１〜５０の範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０など、最大で５０を含めて、ならびに１．１、１．２、１．３、１．４、１．５など、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５など、その他を含む。
一連の範囲への言及は、一連のもの内の異なる範囲の境界の値を組み合わせる範囲を含む。したがって、例示するために、例えば、１〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜７５０、７５０〜１，０００、１，０００〜１，５００、１，５００〜２，０００、２，０００〜２，５００、２，５００〜３，０００、３，０００〜３，５００、３，５００〜４，０００、４，０００〜４，５００、４，５００〜５，０００、５，５００〜６，０００、６，０００〜７，０００、７，０００〜８，０００または８，０００〜９，０００の一連の範囲への言及は、１０〜５０、５０〜１００、１００〜１，０００、１，０００〜３，０００、２，０００〜４，０００などの範囲を含む。
技術の基本的な側面から逸脱することなく、前記ものに修飾を行うことができる。技術を１つまたは複数の特定の実施形態を参照してかなり詳細に記載してきたが、当業者は、本出願で具体的に開示された実施形態に変更を行うことができることを認識するであろうが、これらの修飾および改善は技術の範囲および趣旨の範囲内である。
本発明は、一般に、多数の実施形態および態様を説明するために肯定的な言葉を使用して本明細書に開示される。本発明はまた、物質または材料、方法のステップおよび条件、プロトコールまたは手順など、特定の主題が完全にまたは部分的に除外される実施形態も具体的に含む。例えば、本発明のある特定の実施形態または態様では、材料および／または方法のステップが除外される。したがって、本発明は、本発明において明示的に除外されない態様を本発明が含まないという点で本明細書に全般的に表現されていないが、それにもかかわらず、本明細書に開示されている。
本明細書に例示的に記載されている技術は、本明細書に具体的に開示されていない要素（複数可）の不在下で適宜実施され得る。したがって、例えば、本明細書の各場合において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語のいずれかを、他の２つの用語のいずれかに置き換えることができる。使用されてきた用語および表現は、限定ではなく説明の用語として使用され、そのような用語および表現の使用は、示され、説明された特徴またはそのセグメントの任意の同等物を排除するものではなく、特許請求される技術の範囲内で様々な修飾が可能である。「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という用語は、１つの要素または２つ以上の要素のいずれかが記載されているかが文脈上明確でない限り、それが修飾する要素の１つまたは複数を指すことができる（例えば、「試薬」は１つまたは複数の試薬を意味できる）。本明細書で使用される場合「約」という用語は、基礎となるパラメータの１０％以内の値（すなわち、プラスマイナス１０％）を指し、一連の値の始まりでの「約」という用語の使用によって、各値が修飾される（すなわち、「約１、２および３」は、約１、約２および約３を指す）。例えば、「約１００グラム」の重量には、９０グラムから１１０グラムの間の重量を含めることができる。本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、「少なくとも９５％」、「少なくとも９６％」、「少なくとも９７％」、「少なくとも９８％」、または「少なくとも９９％」を意味する値修飾語を指し、１００％を含む場合がある。例えば、実質的にＸを含まない組成物は、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満のＸを含む場合があり、および／またはＸが組成物中に存在しないか、検出されない場合がある。
したがって、本技術は、代表的な実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される概念の修飾および変形は、当業者によって頼ることができ、そのような修飾および変形は、本技術の範囲内と考えられる。

Claims (139)

  1. （ａ）シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分および（ｂ）線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）に特異的に結合するフィノマーを含む二重特異性結合物質であって、フィノマーは、（ｉ）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ（配列番号９９）または（ｉｉ）GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ（配列番号１１３）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、アミノ酸（Ｘ１）、（Ｘ２）、（Ｘ３）、（Ｘ４）、（Ｘ５）、（Ｘ６）および（Ｘ７）は、任意のアミノ酸から選択される二重特異性結合物質、および
    医薬上許容される賦形剤、希釈剤、添加物または担体を含む医薬組成物。
  2. 抗体またはその抗原結合部分が、フィノマーに共有結合によって結合される、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 抗体またはその抗原結合部分が、シンデカン−１の細胞外領域に特異的に結合する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
  4. 抗体またはその抗原結合部分が、ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９４）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合する、請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. 抗体またはその抗原結合部分が、ＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰ（配列番号９４）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合する別の結合物質と結合について競合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  6. 抗体またはその抗原結合部分が、以下の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号２〜１５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１（軽鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号１６〜２６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２（軽鎖ＣＤＲ２）および（ｉｉｉ）配列番号２７〜３３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３（軽鎖ＣＤＲ３）を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  7. 抗体またはその抗原結合部分が、以下の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）：（ｉ）配列番号４５〜５９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１（重鎖ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号６０〜７１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２（重鎖ＣＤＲ２）および（ｉｉｉ）配列番号７２〜８１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３（重鎖ＣＤＲ３）を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  8. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の医薬組成物。
  9. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または８に記載の医薬組成物。
  10. ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４６または配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  11. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または８に記載の医薬組成物。
  12. 抗体またはその抗原結合部分が、ヒト化されている、請求項７から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  13. 抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４１、４２および４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域ならびに／または配列番号８９、９０、９１および９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  14. 抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化軽鎖可変領域および／または配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化重鎖可変領域を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  15. 抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化軽鎖および／または配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化重鎖を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
  16. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６４または６２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の医薬組成物。
  17. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または１６に記載の医薬組成物。
  18. ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４８または４９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７、１６および１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  19. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６４または６２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の医薬組成物。
  20. ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または１９に記載の医薬組成物。
  21. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の医薬組成物。
  22. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または２１に記載の医薬組成物。
  23. ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７、２１または２２に記載の医薬組成物。
  24. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６４または６２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の医薬組成物。
  25. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または２４に記載の医薬組成物。
  26. ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７、２４または２５に記載の医薬組成物。
  27. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の医薬組成物。
  28. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または２７に記載の医薬組成物。
  29. ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７、２７または２８に記載の医薬組成物。
  30. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５７または５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の医薬組成物。
  31. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７または３０に記載の医薬組成物。
  32. ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項７、３０または３１に記載の医薬組成物。
  33. 抗体またはその抗原結合部分が、ヒト化軽鎖可変領域および／またはヒト化重鎖可変領域を含む、請求項１から７および１６から３２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  34. 抗体が、ヒト軽鎖定常領域および／またはヒト重鎖定常領域を含むキメラ抗体である、請求項１から３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  35. 抗体またはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１に、５０ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、請求項１から３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  36. ＦＧＦＲ３が、ＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｂまたはＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｃである、請求項１から３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  37. フィノマーが、ヒトＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｂおよびＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｃに特異的に結合する、請求項３６に記載の医薬組成物。
  38. フィノマーが、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、配列番号９９のアミノ酸位置１２〜１９のアミノ酸配列ＥＶＹＧＰＴＰＭ（配列番号１００）が保存され、配列番号９９のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＰおよびＹが保存される限り、同一性決定が、位置（Ｘ１）〜（Ｘ６）のアミノ酸を除外する、請求項１から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  39. フィノマーが、配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、配列番号１１３のアミノ酸位置１２〜１８のアミノ酸配列ＥＶＭＳＴＴＡ（配列番号１１４）が保存され、配列番号１１３のアミノ酸位置３７および３８のアミノ酸ＱおよびＹが保存される限り、同一性決定が、位置（Ｘ７）のアミノ酸を除外する、請求項１から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  40. （Ｘ７）が、Ｙ、ＷまたはＬである、請求項１から３７および３９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  41. （Ｘ７）が、ＷまたはＬである、請求項４０に記載の医薬組成物。
  42. （Ｘ１）が、Ｎ、ＲまたはＫであり、
    （Ｘ２）が、Ｓ、Ｇ、ＫまたはＲであり、
    （Ｘ３）が、ＳまたはＧであり、
    （Ｘ４）が、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＳまたはＫであり、
    （Ｘ５）が、ＴまたはＡであり、
    （Ｘ６）が、Ｙ、ＷまたはＬである、請求項３８に記載の医薬組成物。
  43. （Ｘ１）が、ＲまたはＫであり、
    （Ｘ２）が、Ｇ、ＫまたはＲであり、
    （Ｘ３）が、Ｓであり、
    （Ｘ４）が、Ｑ、Ｄ、ＳまたはＫであり、
    （Ｘ５）が、ＴまたはＡであり、
    （Ｘ６）が、ＷまたはＬである、請求項４２に記載の医薬組成物。
  44. フィノマーが、
    （配列番号１０１；ＦＦ２Ｌ４Ｃ３）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
    （配列番号１０３；ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ１２）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
    （配列番号１０５；ＦＦ４４Ｌ６５Ｇ７）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
    （配列番号１０７；ＦＦ４８Ｌ６６Ｇ７；「Ｇ７」）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
    （配列番号１０９；ＦＦ４３Ｌ６５Ｄ５）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ;
    （配列番号１１１；ＦＦ４４Ｌ６５Ｂ７）GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ;および
    （配列番号１１６；ＦＦ４０Ｌ５４Ａ５）GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ
    から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  45. フィノマーが、ＦＧＦＲ３の細胞外領域に特異的に結合する、請求項１から４４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  46. フィノマーが、ＦＧＦＲ３またはその部分に、約１０−５Ｍ〜約１０−１５Ｍの結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、請求項１から４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  47. フィノマーが、ＦＧＦＲ３またはその部分に１０−８Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、請求項１から４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  48. フィノマーが、グリコシル化される、請求項１から４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  49. フィノマーが、リンカーによって抗体またはその抗原結合部分に共有結合によって結合される、請求項１から４８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  50. リンカーが、ペプチド結合を含む、請求項４９に記載の医薬組成物。
  51. リンカーが、１個もしくは複数のアミノ酸、５〜１００個のアミノ酸、５〜５０個のアミノ酸、５〜２５個のアミノ酸、５〜２０個のアミノ酸または５〜１０個のアミノ酸を含むペプチドを含む、請求項４９または５０に記載の医薬組成物。
  52. リンカーが、適宜置換されたＣ１〜Ｃ５０アルキル、適宜置換されたＣ２〜Ｃ５０アルケニル、アルキニル、アシル、アシルオキシ、アルコキシ、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルコキシ、アリール、アミノカルボニル、アジド、カルボキシ、チオ、スルホキシド、スルホン、スルホネートエステル、シアノ、アミド、アミノ、エステルまたはそれらの組合せを含む、請求項４９、５０または５１に記載の医薬組成物。
  53. フィノマーが、抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖のアミノ末端に結合される、請求項１から５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  54. フィノマーが、抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖のカルボキシ末端に結合される、請求項１から５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  55. 抗悪性腫瘍剤をさらに含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  56. 抗悪性腫瘍剤が、ドラスタチン、オーリスタチン、マイタンシン、ツブリシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、シュードモナス外毒素−Ａ（ＰＥ３８）、イリノテカンおよび前記のうちいずれか１つの誘導体からなる群から選択される、請求項５５に記載の医薬組成物。
  57. 抗悪性腫瘍剤が、二重特異性結合物質に共有結合によって結合される、請求項５５または５６に記載の医薬組成物。
  58. 抗悪性腫瘍剤が、抗体またはその抗原結合部分に結合される、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  59. 抗悪性腫瘍剤が、フィノマーに結合される、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  60. 抗悪性腫瘍剤が、リンカーによって二重特異性結合物質に共有結合によって結合される、請求項５５から５９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  61. 抗悪性腫瘍剤が、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を含む、請求項５５から６０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  62. 抗悪性腫瘍剤が、ピロロベンゾジアゼピン毒素を含む、請求項５５から６１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  63. 抗悪性腫瘍剤が、連結基を含み、ピロロベンゾジアゼピン毒素が、連結基に共有結合によって連結され、連結基が、二重特異性結合物質に共有結合によって連結される、請求項６２に記載の医薬組成物。
  64. ピロロベンゾジアゼピン毒素が、次化学式Ｉ：
    Figure 2021165268
     ［式中、
    Ｚ１およびＺ２は、両方ともＮであり、
    Ｚ３およびＺ４は、両方ともＣであり、
    二重破線
    Figure 2021165268
     は、単結合または二重結合を表し、
    ｎは、１〜１０であり、
    Ｒ３およびＲ４の各々は独立に、ＨまたはＣ１〜４アルコキシルであり、
    Ｒ１およびＲ２の各々は独立に、Ｈ、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ２〜５アルケニルおよびＲ５で適宜置換されたフェニルからなる群から選択され、
    Ｒ５は、−ＮＨ２、−ＮＨＲ６および次構造
    Figure 2021165268
     を有するＲ７で置換されたピペラジニルからなる群から選択され、
    （ここで、Ｒ６は、連結基を含み、
    Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜５アルキルである）、
    Ｘ１は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、
    Ｘ２は、ヌル、保護基であるかまたは連結基を含み、
    Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１およびＲ２のうち１つのみが連結基を含み、
    Ｙ１およびＹ２の各々は独立に、ヌル、ＯＨまたはＳＯ３Ｈのいずれかであり、
    （ｉ）Ｘ１が連結基を含む場合には、
    Figure 2021165268
     はＮ−Ｃであり、
    （ｉｉ）Ｘ２が連結基を含む場合には、
    Figure 2021165268
     はＮ−Ｃであり、
    （ｉｉｉ）Ｘ１が保護基である場合には、
    Figure 2021165268
     はＮ−Ｃであり、
    （ｉｖ）Ｘ２が保護基である場合には、
    Figure 2021165268
     はＮ−Ｃである］
    の構造を含み、ヌルが、必要な原子価を完成するための部分がないことまたは１つもしくは複数の水素の存在を示す、請求項６２または６３に記載の医薬組成物。
  65. ｎが、３、４または５である、請求項６４に記載の医薬組成物。
  66. Ｒ３およびＲ４が両方とも−Ｏ−ＣＨ３である、請求項６４または６５に記載の医薬組成物。
  67. Ｒ１およびＲ２が両方ともメチルである、請求項６４から６６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  68. Ｒ１およびＲ２が両方とも−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３である、請求項６４から６６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  69. Ｒ２が、シクロプロピルである、請求項６４から６６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  70. Ｒ２が、４−メチルピペラジン−１−イルで置換されたフェニルである、請求項６４から６６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  71. Ｒ１が、Ｒ５で適宜置換されたフェニルであり、Ｒ５が、−ＮＨＲ６であり、Ｒ６が、連結基を含む、請求項６９または７０に記載の医薬組成物。
  72. Ｘ１が、ヌルであり、Ｙ１が、ヌルであり、
    Ｘ１が、ヌルであり、Ｙ１が、ヌルであり、
    Figure 2021165268
     がＮ＝Ｃであり、Ｘ２がヌルであり、Ｙ２がヌルであり、
    Figure 2021165268
     が、Ｎ＝Ｃである、Ｎ＝Ｃである、請求項６４から６６および６９から７１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  73. Ｘ１が、連結基を含み、Ｙ１が、ＯＨであり、
    Figure 2021165268
     がＮ＝Ｃであり、Ｘ２が、ヌルであり、Ｙ２が、ヌルである、請求項６４から７０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  74. Ｘ１が、連結基を含み、Ｙ１が、ＯＨであり、
    Figure 2021165268
     がＮ−Ｃであり、Ｘ２が、保護基であり、Ｙ２が、ＯＨである、請求項６４から７０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  75. 連結基が、カルバメート基によってピロロベンゾジアゼピン毒素に結合される、請求項６４から７４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  76. 連結基が、アミド基によってピロロベンゾジアゼピン毒素に結合される、請求項６４から７４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  77. 連結基が、次化学式（Ａ）：
    Figure 2021165268
     ［式中、
    アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、
    波線は、結合物質との結合点を示し、
    ｍは、１〜２０であり、
    ｑは、０〜１０であり、
    Ｅは、接続基である］
    の構造を含む、請求項６３４から７６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  78. ｍが、４または８である、請求項７７に記載の医薬組成物。
  79. ｑが、０、１または２である、請求項７７または７８に記載の医薬組成物。
  80. ｍが８であり、ｑが２である、請求項７７に記載の医薬組成物。
  81. 連結基が、化学式（Ｂ）
    Figure 2021165268
     ［式中、
    アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、
    波線は、結合物質との結合点を示し、
    Ｅは、接続基を含み、
    ｖは、０〜１０であり、
    ｕは、０または１であり、
    ｕが１である場合には、ｔは、１〜１０である］
    の構造を含む、請求項６４から７６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  82. ｖが１である、請求項８１に記載の医薬組成物。
  83. ｕが１であり、ｔが８である、請求項８１または８２に記載の医薬組成物。
  84. ｕが０であり、ｖが４である、請求項８１に記載の医薬組成物。
  85. 結合物質が、結合物質のシステインチオール残基とＥの間に形成されるチオエーテル結合によってＥに接続される、請求項７７から８４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  86. Ｅが、次化学式（Ｃ）：
    Figure 2021165268
     ［式中、波線は、結合物質との結合点を示し、２倍のアスタリスクは、連結基との結合点を示す］
    の構造を含む、請求項７７から８５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  87. 保護基が、以下の構造（Ｄ）：
    Figure 2021165268
     ［式中、アスタリスクは、ピロロベンゾジアゼピン毒素との結合点を示し、ｗは、１〜５である］
    を有する、請求項６４から８６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  88. ｗが２である、請求項８７に記載の医薬組成物。
  89. 保護基が、切断可能な保護基である、請求項６４から８８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  90. 抗悪性腫瘍剤が、
    Figure 2021165268
     ［式中、ｍは８である］、
    Figure 2021165268
     ［式中、ｍは８であり、ｐは３であり、Ｘ２は保護基である］、
    Figure 2021165268
     ［式中、ｍは８である］、
    Figure 2021165268
     ［式中、ｔは８であり、ｖは１である］および
    Figure 2021165268
     ［式中、波線は、結合物質との結合点を示す］
    からなる群から選択される構造を含む、請求項６４に記載の医薬組成物。
  91. Ｘ２の保護基が、以下の構造（Ｄ）：
    Figure 2021165268
     ［式中、アスタリスクは、新生物剤との結合点を示し、ｗは、１から５である］
    を有する、請求項９０に記載の医薬組成物。
  92. 結合物質の少なくとも１個のアミノ酸が、システインに突然変異され、システインが、チオールエーテル結合によって連結基に共有結合によって連結される、請求項６４から９１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  93. 抗悪性腫瘍剤が、次化学式（ＩＩ）：
    Figure 2021165268
     ［式中、ｍは８であり、波線は、結合物質のチオール基との結合点を示す］
    の構造を含む、請求項６４または９２に記載の医薬組成物。
  94. 抗体またはその抗原結合部分が、シンデカン−１への結合について、配列番号２〜１５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１６〜２６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２７〜３３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４５〜５９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６０〜７１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７２〜８１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３を含む第２の結合物質と競合する、請求項１から９３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  95. 第２の結合物質が、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３を含む、請求項９４に記載の医薬組成物。
  96. 第２の結合物質が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ３、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３を含む、請求項９４に記載の医薬組成物。
  97. 第２の結合物質が、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４５または４６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ１および配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲ−Ｈ３を含む、請求項９５に記載の医薬組成物。
  98. 第２の結合物質が、ヒト化軽鎖可変領域およびヒト化重鎖可変領域を含む、請求項９４から９７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  99. 第２の結合物質が、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化軽鎖可変領域および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化重鎖可変領域を含む、請求項９８に記載の医薬組成物。
  100. 第２の結合物質が、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化軽鎖および配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有するヒト化重鎖を含む、請求項９８または９９に記載の医薬組成物。
  101. 対象における新生物の処置のための、請求項１から１００のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  102. 新生物が、シンデカン−１を発現する新生細胞または癌細胞を含む、請求項１０１に記載の医薬組成物。
  103. 新生物が、癌腫、肉腫、神経系新生物、リンパ腫、骨髄腫、白血病、黒色腫、中皮腫、固形または軟部組織腫瘍および続発性癌から選択される、請求項１０１または１０２に記載の医薬組成物。
  104. 新生物が、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、食道癌、肝臓癌、肝細胞癌、下咽頭癌、肺癌、腺癌、卵巣癌または腎癌を含む、請求項１０１から１０３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  105. 新生物が、膵臓腺癌、膵神経内分泌癌、結腸直腸腺癌、小腸悪性腫瘍、胆管癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺癌腫、食道または食道胃接合部（ＥＧＪ）癌、胃腺癌、肝臓肝細胞癌腫、頭頚部扁平上皮癌、雌生殖器悪性腫瘍、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、肺小細胞癌腫、卵巣表面上皮性癌、後腹膜または腹膜肉腫、前立腺腺癌、神経内分泌腫瘍、消化管間質性腫瘍、神経膠芽腫または非上皮性卵巣癌を含む、請求項１０１から１０４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  106. 新生物が、多発性骨髄腫、卵巣癌腫、子宮頸癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、精巣癌、腎臓癌腫、胆嚢癌腫、移行細胞膀胱癌、胃癌、前立腺癌、前立腺腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、固形組織肉腫、結腸癌腫、非小細胞肺癌、扁平細胞肺癌腫、結腸直腸癌腫、肝細胞癌、膵臓癌、脳癌（例えば、神経芽細胞腫または髄膜腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫、基底細胞癌または扁平上皮癌）および頭頚部癌腫からなる群から選択される、請求項１０１から１０５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  107. 新生物が、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌腫、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、結腸直腸腺癌、リンパ系新生物びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌腫、多形性神経膠芽腫、神経膠腫、頭頚部扁平上皮癌、腎臓嫌色素性、汎腎臓コホート（ＫＩＣＨ＋ＫＩＲＣ＋ＫＩＲ）、腎臓腎明細胞癌、腎臓腎乳頭細胞癌、急性骨髄性白血病、脳の低悪性度神経膠腫、肝臓肝細胞癌腫、肺腺癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵臓腺癌、褐色細胞腫および傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、肉腫、皮膚の皮膚黒色腫、胃腺癌、胃および食道癌腫、精巣生殖細胞腫瘍、甲状腺癌腫、胸腺腫、子宮体子宮内膜癌、子宮癌肉腫およびブドウ膜黒色腫からなる群から選択される、請求項１０１から１０５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  108. 投与後に、二重特異性結合物質が、新生物の成長、生存力または転移を遮断、阻害、寛解、抑制または抑止する、請求項１０１から１０７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  109. 投与後に、二重特異性結合物質が、新生物の一部またはすべての死滅、壊死またはアポトーシスを誘導する、請求項１０１から１０７のいずれか一項に記載に記載の医薬組成物。
  110. 化学療法薬と組み合わせて投与されるものである、請求項１０１から１０９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  111. 対象がヒトである、請求項１０１から１１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  112. 新生物が膀胱癌である、請求項１０１から１１１のいずれか一項に記載の方法。
  113. 新生物が多発性骨髄腫である、請求項１０１から１１１のいずれか一項に記載の方法。
  114. 新生物が食道癌である、請求項１０１から１１１のいずれか一項に記載の方法。
  115. （ａ）以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
    （ｉ）配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ１、
    （ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ２、
    （ｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｌ３、
    （ｉｖ）配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ１、
    （ｖ）配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ２、
    （ｖｉ）配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなるＣＤＲ−Ｈ３
    を含み、シンデカン−１（ＣＤ１３８）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分および
    （ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはからなり、線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）に特異的に結合するフィノマー
    を含む医薬組成物。
  116. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項１１５に記載の医薬組成物。
  117. （ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｉｖ）ＣＤＲ−Ｈ１が、配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖ）ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなり、
    （ｖｉ）ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる、請求項１１５に記載の医薬組成物。
  118. 抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化軽鎖可変領域および／または配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化重鎖可変領域を含む、請求項１１５、１１６または１１７に記載の医薬組成物。
  119. 抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化軽鎖および／または配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはからなるヒト化重鎖を含む、請求項１１８に記載の医薬組成物。
  120. 抗体またはその抗原結合部分が、サルシンデカン−１の細胞外ドメインに特異的に結合する、請求項１１５から１１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  121. 抗体またはその抗原結合部分が、ヒトシンデカン−１、サルシンデカン−１およびマウスシンデカン−１の細胞外ドメインに、５０ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する、請求項１１５から１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  122. 抗体が、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域が、Ａ１１８Ｃ（１１８位のアラニンからシステインへ）、Ｓ１１９Ｃ（１１９位のセリンからシステインへ）、Ｓ２３９Ｃ（２３９位のセリンからシステインへ）、Ｖ２８２Ｃ（２８２位のバリンからシステインへ）、Ｔ２８９Ｃ（２８９位のトレオニンからシステインへ）、Ｎ３６１Ｃ（３６１位のアスパラギンからシステインへ）、Ｖ４２２Ｃ（４２２位のバリンからシステインへ）、Ａ１１８Ｋ（１１８位のアラニンからリシンへ）、Ｓ１１９Ｋ（１１９位のセリンからリシンへ）、Ｓ２３９Ｋ（２３９位のセリンからリシンへ）、Ｖ２８２Ｋ（２８２位のバリンからリシンへ）、Ｔ２８９Ｋ（２８９位のトレオニンからリシンへ）、Ｎ３６１Ｋ（３６１位のアスパラギンからリシンへ）およびＶ４２２Ｋ（４２２位のバリンからリシンへ）から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１１５から１２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  123. 抗体が、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域が、重鎖定常領域の１１９位でのセリンのシステインへのアミノ酸置換を含む、請求項１１５から１２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  124. フィノマーが、ヒトＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｂおよびヒトＦＧＦＲ３アイソフォーム３ｃに特異的に結合する、請求項１１５から１２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  125. フィノマーのカルボキシ末端（Ｃ末端）が、抗体またはその結合部分の重鎖可変領域のアミノ末端（Ｎ末端）に接続され、フィノマーが、ペプチド結合によって抗体重鎖可変領域に接続される、請求項１１５から１２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  126. 二重特異性結合物質が、抗悪性腫瘍剤を含む、請求項１１５から１２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  127. 抗悪性腫瘍剤が、ピロロベンゾジアゼピン毒素を含む、請求項１２６に記載の医薬組成物。
  128. ピロロベンゾジアゼピン毒素が、以下に示される化学式ＶＩＩＩ：
    Figure 2021165268
     ［式中、Ｘ１は、連結基を含む］
    の構造を含む、請求項１２７に記載の医薬組成物。
  129. ピロロベンゾジアゼピン毒素が、以下に示される化学式ＩＩ：
    Figure 2021165268
     ［式中、ｍは８であり、ピロロベンゾジアゼピン毒素は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖に共有結合によって結合され、波線は、ピロロベンゾジアゼピン毒素の、結合物質のチオール基との結合点を示す］
    の構造を含む、請求項１２７または１２８に記載の医薬組成物。
  130. （ｉ）抗体が、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域を含み、（ｉｉ）重鎖定常領域が、重鎖定常領域の１１９位でのセリンのシステインへのアミノ酸置換を含み、（ｉｉｉ）ピロロベンゾジアゼピン毒素が、重鎖定常領域の１１９位に位置するシステインのチオール基に共有結合によって結合される、請求項１２９に記載の医薬組成物。
  131. フィノマーおよび配列番号１２５の重鎖アミノ酸配列および配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１１５から１３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  132. （ｉ）フィノマーおよび配列番号１２５のアミノ酸位置２１３のセリンが、システインに突然変異されている配列番号１２５の重鎖アミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含み、ピロロベンゾジアゼピン毒素が、システインのチオール基に共有結合によって結合される、請求項１２７から１３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  133. 新生物を有するかまたは有すると疑われる対象を処置するための、請求項１１５から１３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  134. 新生物が、癌腫、肉腫、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、黒色腫または固形もしくは軟部組織腫瘍を含む、請求項１３３に記載の医薬組成物。
  135. 新生物が、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、食道癌、肝臓癌、肝細胞癌、下咽頭癌、肺癌、腺癌、卵巣癌または腎癌を含む、請求項１３３に記載の医薬組成物。
  136. 新生物が、膵臓腺癌、膵神経内分泌癌、結腸直腸腺癌、小腸悪性腫瘍、胆管癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺癌腫、食道または食道胃接合部（ＥＧＪ）癌、胃腺癌、肝臓肝細胞癌腫、頭頚部扁平上皮癌、雌生殖器悪性腫瘍、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、肺小細胞癌腫、卵巣表面上皮性癌、後腹膜または腹膜肉腫、前立腺腺癌、神経内分泌腫瘍、消化管間質性腫瘍、神経膠芽腫または非上皮性卵巣癌を含む、請求項１３３に記載の医薬組成物。
  137. 新生物が、多発性骨髄腫、卵巣癌腫、子宮頸癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、精巣癌、腎臓癌腫、胆嚢癌腫、移行細胞膀胱癌、胃癌、前立腺癌、前立腺腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）固形組織肉腫、結腸癌腫、非小細胞肺癌、扁平細胞肺癌腫、結腸直腸癌腫、肝細胞癌、膵臓癌、脳癌（例えば、神経芽細胞腫または髄膜腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫、基底細胞癌または扁平上皮癌）および頭頚部癌腫からなる群から選択される、請求項１３３に記載の医薬組成物。
  138. 新生物が、膀胱癌、多発性骨髄腫または食道癌である、請求項１３３に記載の医薬組成物。
  139. 新生物が、シンデカン−１および／またはＦＧＦＲ３を発現する新生細胞または癌細胞を含む、請求項１３１から１３８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
JP2021064845A 2020-04-07 2021-04-06 シンデカン−１および線維芽細胞増殖因子受容体を標的とする二重特異性結合物質を含む医薬組成物 Pending JP2021165268A (ja)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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