TW202028459A - 靶定ｓｙｎｄｅｃａｎ－１及纖維母細胞生長因子受體的雙特異性結合劑 - Google Patents

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Abstract

本發明在某些具體例中提供一種雙特異性結合劑，其包含特異性結合於syndecan-1之抗體部份及特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)之Fynomer部份，並提供其組成物及其於治療贅瘤之用途。

Description

靶定SYNDECAN-1及纖維母細胞生長因子受體的雙特異性結合劑
本發明具體例係有關一種包含特異性結合CD138(Syndecan-1)之抗體部份及特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)之Fynomer部份之雙特異性結合劑，及其藥物接合物、其組成物與其用途。本文所揭示雙特異性結合劑可以單獨使用或與可以有效治療贅瘤之藥劑組合使用。
syndecan家族包括主要存在於細胞表面之四種跨膜硫酸乙醯肝素蛋白聚醣(HSPG)。此等不同syndecan之結構在脊椎動物與非脊椎動物中顯示高度同源性。所有四種syndecan均由芯蛋白質配合不同數目的醣胺聚醣(GAG)側鏈組成。Syndecan主要透過此等GAG鏈發揮功用，但不同的芯蛋白質結構域仍有獨特角色。syndecan-1與syndecan-3帶有硫酸乙醯肝素(HS)與硫酸軟骨素(CS)鏈，而syndecan-2與syndecan-4則僅帶有HS鏈。Syndecan涉及很廣範圍的生物過程，包括生長與分化、細胞擴散、細胞附著、細胞轉移、細胞骨架組織、浸潤、與血管新生。
syndecan-1為跨膜(第1型)硫酸乙醯肝素蛋白聚醣，其包含N-末端細胞外結構域、跨膜結構域、與C-末端細胞內訊號傳導結構域。人類syndecan-1(CD138)包含長度為310個胺基酸之芯蛋白質，並由SDC1基因編碼。SDC1基因係由五個外顯子組成且位在人類染色體2。第一個外顯子編碼信號肽，第二個外顯子編碼硫酸乙醯肝素之附接位點，第三個與第四個外顯子編碼硫酸軟骨素之結合位點，及第五個外顯子編碼跨膜與細胞質結構域。
syndecan-1係表現在成人組織之上皮細胞之基底側表面、發展中之間質細胞、及不同分化階段期間之淋巴細胞。syndecan-1可結合肝細胞生長因子(HGF)，可與各種不同生長因子交互作用，並作為輔助受體，活化多種可影響細胞轉移、細胞-基質交互作用、生長、增生與存活之訊號傳導途徑。數項研究顯示，syndecan-1與/或其功能障礙訊號傳導活性或過度表現涉及各種不同贅瘤之發病機制。
纖維母細胞生長因子受體(FGFR)為高度保留跨膜酪胺酸激酶受體之家族，其等涉及各種不同細胞內訊號傳導途徑。FGFR係由包含二至三個類似免疫球蛋白之結構域(D1、D2與D3)之細胞外配體結合區、單次跨膜區、及具有酪胺酸激酶活性之細胞質區。有4種主要FGF受體(FGFR1-4)，其等具有多重剪接變體，大多出現在受體之外顯子III(相當於結構域D3)(例如，參見Holzmann等人(2012)J.of Nucleic Acids 2012：950508)。D3結構域含有兩個由3種外顯子編碼之部份：(IIIa、IIIb、與IIIc)，並由基因剪接事件造成由基因的不變IIIa部份與IIIb或IIIc部份組合所轉錄之D3結構域。此等接合變化產生七種高度同源人類FGFR：FGFR1b、FGFR1c、FGFR2b、FGFR2c、FGFR3b、FGFR3c、與FGFR4，其等具有不同的組織分佈與配體特異性。
人類中，FGFR會被22種已知纖維母細胞生長因子(FGF)配體中之一種或多種之過度表現或結合而活化。FGFR3活化在胚胎發生、發育、細胞增生、細胞存活、轉移、分化與生長遏止中扮演關鍵角色。FGFR3之之活化會造成活化數種涉及致癌訊號傳導之關鍵途徑，包括促有絲分裂原活化蛋白質激酶(MAPK)與PI3K-AKT途徑。
本發明提供一種包含與syndecan-1結合之抗體部份及與FGFR3結合之Fynomer部份之雙特異性結合劑，及其於治療贅瘤上之用途。
有些態樣中，本文提供一種包含抗體部份(例如，抗體或其抗原結合部份)與一或多個Fynomer之雙特異性結合劑，其中抗體部份係特異性結合於syndecan-1(CD138)，及一或多個Fynomer係特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)。因此，在某些具體例中，本文提供一種特異性結合於syndecan-1及特異性結合於FGFR3或一種或多種FGFR3同型之雙特異性結合劑。有些具體例中，雙特異性結合劑之Fynomer部份係特異性結合於FGFR3b與/或FGFR3c。某些態樣中，雙特異性結合劑包含特異性結合於syndecan-1(CD138)之抗體部份(例如，抗體或其抗原結合部份)、特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)之Fynomer、及抗贅瘤劑或毒素。
有些具體例中，雙特異性結合劑之抗體部份包含一個或多個互補決定區(CDR)，其係選自：(i)CDR-L1(輕鏈CDR1)，其包含與選自SEQ ID NO：2-15之胺基酸序列具有至少90%一致性之胺基酸序列，(ii)CDR-L2(輕鏈CDR2)，其包含與選自SEQ ID NO：16-26之胺基酸序列具有至少90%一致性之胺基酸序 列，(iii)CDR-L3(輕鏈CDR3)，其包含與選自SEQ ID NO：27-33之胺基酸序列具有至少90%一致性之胺基酸序列，(iv)CDR-H1(重鏈CDR1)，其包含與選自SEQ ID NO：45-59之胺基酸序列具有至少90%一致性之胺基酸序列，(v)CDR-H2(重鏈CDR2)，其包含與選自SEQ ID NO：60-71之胺基酸序列具有至少90%一致性之胺基酸序列，及(vi)CDR-H3(重鏈CDR3)，其包含與選自SEQ ID NO：72-81之胺基酸序列具有至少90%一致性之胺基酸序列，其中該抗體或其結合部份係特異性結合於人類syndecan-1。雙特異性結合劑之抗體部份可能包含選自表1之任何合適CDR-L1、選自表2之任何合適CDR-L2、選自表3之任何合適CDR-L3、選自表6之任何合適CDR-H1、選自表7之任何合適CDR-H2、及選自表8之任何合適CDR-H3，其中該抗體或其結合部份係特異性結合於人類syndecan-1。有些具體例中，雙特異性結合劑之抗體部份包含CDR-L1(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：2)、CDR-L2(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18)、CDR-L3(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28)、CDR-H1(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：47)、CDR-H2(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：60、及CDR-H3(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：73。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、17、27、47、61與73。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、16、27、45、60與72。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、16、27、45、61與72。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、17、27、47、61與73。有 些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：5、21、30、50、64與75。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：4、20、29、50、63與75。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-1H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：4、19、29、48、63與74。有些具體例中，雙特異性結合劑之抗體部份包含人類抗體(例如，IgG)之一個或多個恆定區。有些具體例中，雙特異性結合劑之抗體部份包含人源化單株抗體或其人源化抗原結合部份，其中可變區序列係人源化。
有些具體例中，雙特異性結合劑之Fynomer包含多肽，其係具有與選自以下胺基酸序列為至少80%一致性之胺基酸序列之多肽：(i)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：99)，其中胺基酸(X1)、(X2)、(X3)、(X4)、(X5)、與(X6)為任何胺基酸，(ii)
GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：113)，其中(X7)為任何胺基酸，(iii)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：101；FF2L4C3)，(iv)
VTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：103；FF44L65G12)，(v)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：105；FF44L65G7)，(vi)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：107；FF48L66G7；「G7」)，(vii)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：109；FF43L65D5)，(viii)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：111；FF44L65B7)，及(ix)
GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：116；FF40L54A5)。
有些具體例中，雙特異性結合劑之Fynomer包含(comprise)或其組成為(consist of)具有與胺基酸序列SEQ ID NO：107至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽。有些具體例中，雙特異性結合劑之Fynomer包含或其組成為具有胺基酸序列SEQ ID NO：107之多肽。
有些具體例中，雙特異性劑包含抗贅瘤劑，其係選自下列各者所成群組：尾海兔素(dolastatin)、微管抑制素(auristatin)、美登素(maytansine)、微管菌素(tubulysin)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、倍癌黴素(duocarmycin)、阿黴素(doxorubicin)、假單胞菌外毒素-A(PE38)、伊立替康(irinotecan)與其衍生物。某些具體例中，雙特異性結合劑包含吡咯并苯并二氮呯毒素，其包含化學式I之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0006-1
 其中
Z1與Z2均為N；
Z3與Z4均為C；
雙虛線
Figure 108135510-A0202-12-0007-381
代表單鍵或雙鍵；
n為1至10；
各R3與R4獨立地為H、或C1-4烷氧基；及
各R1與R2係獨立地選自下列各者所成群組：H、C1-5烷基、C3-6環烷基、C2-5烯基、及視需要經R5取代之苯基，其中
R5係選自下列各者所成群組：-NH2、-NHR6、及經如下結構式之經R7取代之哌嗪基
Figure 108135510-A0202-12-0007-2
其中R6包含連接基，及
R7為H、或C1-5烷基；
X1為不存在、保護基、或包含連接基；
X2為不存在、保護基、或包含連接基；
X1、X2、R1、與R2中僅一者包含連接基；及
各Y1與Y2獨立地為不存在、OH、或SO3H；
但其限制條件為：
(i)當X1包含連接基時，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0007-378
Z3為N-C，
(ii)當X2包含連接基時，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0007-379
Z4為N-C，
(iii)當X1包含保護基時，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0007-380
Z3為N-C，及
(iv)當X2包含保護基時，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0008-382
Z4為N-C，
其中不存在意指沒有部份體存在或存在一個或多個氫以滿足所要求之價數。
某些具體例中，抗贅瘤劑包含式I吡咯并苯并二氮呯毒素與連接 基，其中吡咯并苯并二氮呯毒素係附接連接基，及連接基係附接本文說明之雙特異性劑。某些具體例中，連接基包含選自化學式(A)結構式之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0008-3
 其中
星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；
波浪線代表與結合劑之附接點；
m為1至20；
q為0至10；及
E為連結基團與化學式(B)之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0008-4
其中
星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；
波浪線代表與結合劑之附接點；
E為連結基團；
v為0至10；及
u為0或1；其中當u為1時，t為1至10。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含選自下列各式所成群組之結構：下式II；
Figure 108135510-A0202-12-0009-5
其中m為8；
下式III，
Figure 108135510-A0202-12-0009-6
其中m為8，p為3，及X2為保護基；
下式V，
Figure 108135510-A0202-12-0010-7
其中m為8；
下式VI，
Figure 108135510-A0202-12-0010-8
其中t為8，及v為1；
及下式VII，
Figure 108135510-A0202-12-0010-9
其中波浪線代表與結合劑之附接點。
有些具體例中，本文提供一種醫藥組成物，其包含本文說明之雙特異性結合劑與醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載劑。
有些態樣中，本文提供一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體之方法，其包括對個體投與醫療有效量之本文說明之雙特異性結合劑或醫藥組成物。某些具體例中，該贅瘤係選自：癌瘤、肉瘤、神經母細胞瘤、膠質母細胞瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、黑色素瘤或實體腫瘤或軟組織腫瘤，其中該贅瘤表現syndecan-1與/或FGFR3。有些具體例中，患有或疑似患有贅瘤之個體為具有或體內駐留有在贅瘤細胞之細胞表面表現人類syndecan-1與/或人類FGFR3之贅瘤細胞之人類。
下列說明文、實施例、申請專利範圍、與圖式進一步說明某些技術態樣。
圖式說明技術具體例，而且沒有限制。為了清楚及方便說明，圖式並未按比例呈現，且有些例子中，各種不同態樣可能擴大或放大，以方便了解該特定具體例。
第1圖出示衍生自人類、食蟹獼猴(cyno)與小鼠之syndecan-1蛋白質之排比。用於免疫接種之肽係來自框線區。
第2圖出示F12P16F6(第2A圖)與另一種與H929細胞之CD138結合之代表性陽性融合瘤純系F12P16G3(第2B圖)之螢光活化細胞分選法(FACS)直方圖。
第3圖出示代表性融合瘤F12P16F6(在圖式中以「12P16F6」表示)於167nM(L1A1)至10.4nM(L1A4)與人類CD138之結合之動力結合分析法(亦即SPR感測圖)之結果。
第4圖出示代表性嵌合抗體12P16F6 hIgG1(「chF6」，第4A圖)及13P30A7 hIgG1(「chP30A7」，第4B圖)對表現人類CD138之細胞(人類)及表現食蟹獼猴CD138之細胞(cyno)之結合。對照組抗體(「Sec」，亦即蘇金單抗(Secukinumab))對CD138顯示小或無特異結合性。Y-軸代表抗體chF6、13P30A7或蘇金單抗之濃度。
第5圖出示人源化重鏈(第5A圖)及輕鏈(第5B圖)與親代小鼠F12P16F6(「P16F6 VH」)之彼等重鏈與輕鏈之比較。代號cdr代表CDR移植法，代號abb代表縮短CDR(abbreviated CDR)移植法，代號sdr代表SDR-轉移法，代號fra代表弗蘭肯斯坦法(Frankenstein approach)，及代號ven代表鑲嵌(Veneering)法。代號repair代表進行第二輪人源化的可變區。
第6圖出示在還原條件下運作之SDS-PAGE凝膠影像，其說明11種代表性人源化抗體之分子量(仟道耳吞，kDa)與純度。電泳帶1=12P16F6 hIgG1(chF6)，電泳帶2=F6 aka-rep，電泳帶3=F6 aks-rep，電泳帶4=F6 akf-rep，電泳帶5=F6 cka-rep，電泳帶6=F6 ckf-rep(hF6)，電泳帶7=F6 f2ka-rep，電泳帶8=F6 f2ks-rep，電泳帶9=F6 f2kf-rep，電泳帶10=F6 f1ka-rep，電泳帶11=F6 f1ks-rep，電泳帶12=F6 f1kf-rep，及MW=分子量標記物。分子量標記物係標記在凝膠右邊。
第7圖出示十一種代表性人源化抗體對多發性骨髓瘤細胞株KMS-11(第7B圖)與膀胱癌株RT112/84(第7A圖)的表面人類CD138之細胞表面結合性之FACS分析法。採用蘇金單抗作為陰性對照。
第8圖出示來自人類syndecan-1肽與抗體Fab片段之複合物之X-射線晶體結構解析結果，其解析度為1.95Å。每個不對稱單位之syndecan-1肽與Fab各有一個複本。第8圖說明syndecan-1-Fab結合介面。Fab重鏈係以圖式左邊帶狀側鏈碳原子之形式表示。Fab輕鏈係以圖式右邊帶狀側鏈碳原子之形式表示。syndecan-1肽碳原子係以夾在Fab重鏈與輕鏈之間碳原子表示。syndecan-1肽與Fab片段之某些側鏈之某些胺基酸係以其對應三字母胺基酸縮寫與位置標記。
第9圖出示SEQ ID NO：101、109、103、105、107與111之抗-FGFR3 Fynomer之排比。
第10圖出示以FF2L4C3(SEQ ID NO：101)；FF2L4D4；FF3L6G2；FF5L7D3；FF5L7D4；FF15L31B1及FynSH3(陰性對照)代表之抗-FGFR3 Fynomer之內化性質。
第11圖出示特異性結合於FGFR3陽性KMS-11細胞表面的FGFR3之Fynomer多肽之FACS結合型態。第11A圖出示FF2L4C3(SEQ ID NO：101)；FF43L65D5(SEQ ID NO：109)；FF44L65B7(SEQ ID NO：111)；FF44L65G7(SEQ ID NO：105)；FF44L65G12(SEQ ID NO：103)；FF48L66G7(SEQ ID NO：107)及抗-FGFR3單株抗體(陽性對照組)對FGFR3-陽性KMS-11細胞之特異結合性，而第11B圖出示指定之Fynomer對FGFR3陰性對照細胞株N87沒有結合性。
第12圖出示FGFR3-Fynomer FF2L4C3-SEQ ID NO：101(第12A圖)、FF43L65D5-SEQ ID NO：109(第12B圖)、FF44L65B7-SEQ ID NO：111(第12C圖)、FF44L65G7-SEQ ID NO：105(第12D圖)、FF44L65G12-SEQ ID NO：103(第12E圖)，與FF48L66G7-SEQ ID NO：107(第12F圖)與塗佈人類FGFR3b(huFGFR3b)、人類FGFR3c(huFGFR3c)、食蟹獼猴FGFR3c(cyFGFR3c)、鼠類FGFR3c(muFGFR3c)、人類FGFR3 D1結構域(huFGFR3-D1)、人類FGFR3c D2結構域(huFGFR3-D2)、人類FGFR3 D1及D2結構域(huFGFR3-D1D2)、陰性對照多株抗體(IgG)之盤及與未塗佈之盤(PBS)結合之ELISA，如x-軸所示。
第13圖出示證實與Fynomer FF2L4C3(第13A圖、第13B圖與第13C圖)、FF43L65D5(第13B圖)、FF44L65G7(第13B圖)、FF44L65G12(第13B圖)、FF48L66G7(第13B圖)及FF44L65B7(第13C圖)接合之毒素之細胞毒性效應之內化分析法。包括與胞質myc蛋白質(FynSH3)結合之小鼠單株抗體9E10、及無製劑(僅有細胞)作為陰性對照。
第14圖出示雙特異性結合劑之四種具體例，其分別包含具有兩個Ig重鏈與兩個Ig輕鏈多肽之抗體部份，及Fynomer部份，其中Fynomer(以圓球表示)係附接至抗體之不同部份。第14A圖出示附接至抗體重鏈C-末端之Fynomer。第14B圖出示附接至抗體重鏈N-末端之Fynomer。第14C圖出示附接至抗體輕鏈C-末端之Fynomer。第14D圖出示附接至抗體輕鏈N-末端之Fynomer。
第15圖出示所製造並於還原條件下進行SDS PAGE之四種代表性雙特異性結合劑。電泳帶7係承載特異性結合於syndecan-1之全長抗-CD138單株抗體P16F6。電泳帶7提供沒有附接至Fynomer時之重鏈(上泳帶)及輕鏈(下 泳帶)之參考分子量。電泳帶2至6出示雙特異性結合劑之具體例，其包含P16F6抗體及FGFR3結合性Fynomer G7(SEQ ID NO：107)，後者係附接至抗體重鏈N-末端(電泳帶2與6)、附接至抗體重鏈C-末端(電泳帶4)、附接至抗體輕鏈N-末端(電泳帶5)、及附接至抗體輕鏈C-末端(電泳帶3)。電泳帶2、4與6中之重鏈分子量增加，證明有附接之Fynomer存在(相較於對照電泳帶7中之重鏈)。電泳帶3與5中之輕鏈分子量增加，證明有附接之Fynomer存在(相較於對照電泳帶7中之輕鏈)。
第16圖出示代表性雙特異性結合劑「hF6-HN-G7」與人源化單株抗體「hF6」對表現在轉染之CHO細胞表面之FGFR3c(第16圖A)與FGFR3b(第16圖B)之細胞表面結合性之FACS直方圖。hF6包含SEQ ID NO：44之輕鏈與SEQ ID NO：93之重鏈。hF6-HN-G7包含SEQ ID NO：44之輕鏈與融合蛋白質，其包括SEQ ID NO：107之Fynomer(G7)與SEQ ID NO：93之重鏈，其中G7之C-末端係利用肽鍵連結重鏈N-末端。
第17圖出示在未轉染之CHO細胞(第17圖A)、表現FGFR3b之CHO細胞(第17圖B)及表現FGFR3c之CHO細胞(第17圖C)進行之活體外細胞毒性分析法。細胞存活力示於y-軸，及結合劑之濃度示於x-軸。所測試之製劑包括隨機接合式II之PBD毒素之蘇金單抗(一種特異性結合間白素-17A之單株抗體)(蘇金單抗-II)、與G7 Fynomer表現在重鏈N-末端且依特定位點接合式II PBD毒素之蘇金單抗融合物(蘇金單抗-S119C-HN-G7-II)、及依特定位點接合式II PBD毒素之代表性雙特異性結合劑hF6-S119C-HN-G7(hF6-S119C-HN-G7-II)。雙特異性結合劑hF6-S119C-HN-G7之hF6抗體部份包含SEQ ID NO：44之輕鏈與SEQ ID NO：93之重鏈。因此，hF6-S119C-HN-G7為hF6抗體，其中SEQ ID NO：107之Fynomer(G7)與SEQ ID NO：93之重鏈係呈融合蛋白質表現，其中G7之C-末端係利用肽鍵連結重鏈N-末端。S119C表示hF6重鏈恆定區位置119之絲胺酸突變成半胱胺酸，以供共價附接PBD毒素(亦即抗贅瘤劑)。本實驗採用之代表性PBD毒素為式II毒素。該毒素係利用馬來醯亞胺化學共價附接位置119半胱胺酸之氫硫基。
第18圖出示式II抗贅瘤劑之實施例。
第19圖出示在細胞株KMS-11(第19A圖)、OPM-2(第19B圖)與ARH-77(第19C圖)，使用隨機接合式II抗贅瘤劑之全長hF6抗-CD138單株抗體(「hF6-II」)、隨機接合式11抗贅瘤劑之hF6-HN-G7(hF6-HN-G7-II)、及隨機接合式II抗贅瘤劑之hF6-LN-G7(hF6-LN-G7-II)進行之活體外細胞毒性分析法。
第20圖出示在細胞株KMS-11(第20A圖)、RT-112(第20B圖)、AN3CA(第20C圖)及HCC1806(第20D圖)，使用依特定位點接合式II抗贅瘤劑之hF6-T289C-HN-G7(hF6-T289C-HN-G7-II)、依特定位點接合式II抗贅瘤劑之hF6-S119C-HN-G7(hF6-S119C-HN-G7-II)、依特定位點接合式II抗贅瘤劑之hF6-V282C-HN-G7(hF6-V282C-HN-G7-II，僅第20C與20D圖)、hF6-II(僅第20A與20B圖)、及接合式II PBD毒素之對照抗體蘇金單抗(蘇金單抗-II)進行之活體外細胞毒性分析法。
第21圖出示活體內異種移植試驗，測試指定之雙特異性結合劑對殺死或抑制植入小鼠中之AN3CA細胞(第21A圖)或HCC1807細胞(第21B圖)之生長之能力之圖解。
許多種贅瘤細胞在其細胞表面表現纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3，包括其一種或多種同型)與syndecan-1(CD138)。本文提供一種以高度親和性與syndecan-1及FGFR3結合之雙特異性結合劑。已確定此等雙特異性結合劑可依高親和性及高選擇性，與表現這兩種標靶受體之贅瘤細胞結合。有些具體例中，本文說明之雙特異性結合劑在結合劑與一或兩種標靶受體(亦即CD138與FGFR3)結合時，誘發其內化。此外，藉由雙特異性結合劑與毒性負載物接合，該雙特異性結合劑可以特異性殺死表現該一或兩種標靶受體之贅瘤細胞。此外，亦可藉由在毒性負載物與雙特異性結合劑之間納入可被蛋白酶裂解之連接基，顯著降低脫靶細胞毒性，因此僅在內化後且被胞質蛋白酶裂解連接基後，才從結合劑中釋放毒素。本文之雙特異性結合劑代表下一代生物物質，提供殺死贅瘤細胞之更高效力與選擇性，同時降低不良反應。
有些具體例中，本文提供之雙特異性結合劑包含抗體部份(例如，抗體或其抗原結合部份)與Fynomer部份(亦即Fynomer)，其中Fynomer係附接至抗體部份。有些具體例中，Fynomer係利用共價鍵附接至抗體部份。有些具體例中，抗體部份包含特異性結合於syndecan-1(亦即syndecan-1多肽；例如，CD138)或其細胞外部份之抗體或其抗原結合部份。某些具體例中，Fynomer部份包含特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3或其一種或多種同型)之Fynomer。有些具體例中，雙特異性結合劑包含細胞毒性負載物。
有些具體例中，本文提供之雙特異性結合劑係用於治療、預防及/或診斷個體之贅瘤。
Syndecan
人類syndecan-1(例如，SEQ ID NO：1)通常包含310個胺基酸之未成熟多肽序列，其包括來自胺基酸1至22之N-末端單一序列、來自約胺基酸23至254之細胞外結構域、來自約胺基酸255至275之跨膜結構域、及來自胺基酸276至310之細胞質結構域，其等係從N-末端往C-末端編號。判別syndecan-1受體之前導序列、細胞外結構域、跨膜結構域、及細胞質結構域之方法係已知，且可使用任何合適方法來判別由合適哺乳動物物種所衍生syndecan-1多肽序列中之此等結構域或區域。
有些具體例中，syndecan-1為哺乳動物syndecan-1。syndecan-1可衍生自任何哺乳動物物種。有些具體例中，synedcan-1多肽為人類syndecan-1。某些具體例中，syndecan-1之細胞外結構域包含通常表現在完整哺乳動物細胞之細胞表面之syndecan-1多肽之N-末端部份。某些具體例中，syndecan-1之細胞外結構域係表現呈缺少細胞質結構域與/或跨膜結構域之可溶性或非膜結合型。某些具體例中，syndecan-1與/或syndecan-1之細胞外結構域包含一個或多個胺基酸加成、缺失或取代。syndecan-1多肽可包含與SEQ ID NO：1之syndecan-1多肽為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%一致性之胺基酸序列。某些具體例中，syndecan-1多肽包含syndecan-1蛋白質之一部份(例如，次序列)。有些具體例中，syndecan-1之一部份包含syndecan-1之細胞外結構域，或其一部份。
抗體與其抗原結合部份
有些具體例中，雙特異性結合劑包含特異性結合於syndecan-1(CD138)之抗體或其一部份(例如，其結合部份或其抗原結合部份)。特異性結合於syndecan-1(CD138)之抗體或其結合部份在本文中有時候稱為抗-CD138抗體。 本文所說明雙特異性結合劑所使用之抗-CD138抗體與其結合部份詳細說明於國際專利申請案案號PCT/JP2018/016847，其完整內容已以引用方式併入本文中。
有些具體例中，抗體為單株抗體或其結合部份。抗體之某些非限制實例包括單株抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、人源化抗體、與人類抗體。人類抗體可採用合適方法製得。例如，人類抗體可從轉染色體之動物經過工程改造，製得全人類抗體。某些具體例中，抗體不為多株，及/或不為多株抗體。
抗體或其結合部份可採用合適方法產生、製造或生產。有些具體例中，抗體或其結合部份係從合適之物種衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些具體例中，抗體或其結合部份例如係從兔、山羊、馬、牛、大鼠、小鼠、魚、鳥、或羊駝衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些具體例中，抗體係從鳥(例如，雞或鳥蛋)衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些具體例中，抗體或其結合部份係從植物(例如，由基因工程改造植物產生之重組抗體或其結合部份)衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些具體例中，抗體或其結合部份係由合適之哺乳動物衍生、製造、取得、單離及/或純化。某些具體例中，合適之哺乳動物為經過基因改造之哺乳動物(例如，轉染色體或轉殖基因哺乳動物)，其經過工程改造以產生包含人類重鏈與/或人類輕鏈或其一部份之抗體。有些具體例中，抗體或其結合部份係由原核細胞或真核細胞(例如，由經過基因工程改造之細胞產生之重組抗體或其結合部份)製造、取得、單離、或純化。有些具體例中，抗體或其結合部份係由病毒(例如，由經過基因工程改造之病毒產生之重組體抗體或其結合部份)製造、取得、單離或純化。
抗體或其結合部份或雙特異性劑可由合適之表現系統表現、單離及/或純化，該表現系統之非限制實例包括合適之細菌、噬菌體、昆蟲、病毒、 植物或哺乳動物表現系統。例如，可將編碼抗體之核酸引入合適之哺乳動物細胞株，其會表現及分泌該抗體至細胞培養基中。任何合適之哺乳動物細胞株均可用於產生抗體或雙特異性結合劑。製造抗體或雙特異性結合劑或其一部份之方法可包括以下一項或多項：(i)將一個或多個核酸引入合適之細胞株，其中該核酸主導表現該抗體、雙特異性結合劑或其一部份；(ii)採用可以表現抗體或雙特異性結合劑之合適培養方法培養該細胞株一段時間；(iii)收集細胞株(例如，藉由產生溶胞物)或收集細胞株所產生之條件培養基(例如，其中抗體或雙特異性結合劑已分泌至培養基中)；及(iv)採用合適方法單離及/或純化該抗體或雙特異性結合劑。
修飾詞「單株」不限於需要採用任何特定方法來製造抗體或其結合部份。單株抗體或其結合部份可採用任何合適方法製造。例如，某些具體例中，單株抗體係採用融合瘤方法(例如，Kohler等人Nature,256：495(1975)之說明)或其變化法製造。有些具體例中，單株抗體或其結合部份係由合適之重組DNA方法製造。例如，單株抗體或其結合部份可藉由使用合適表現系統(例如，噬菌體呈現表現系統)篩選重組體集合庫來製造。有些具體例中，單株抗體或其結合部份係例如，採用Clackson等人Nature 352：624-628(1991)與/或Marks等人J.Mol Biol,222：581-597(1991)說明之技術或其變化法，從噬菌體集合庫中單離。
某些具體例中，抗體或其結合部份包含哺乳動物抗體之一個或多個結構部份。某些具體例中，抗體或其結合部份包含一個或多個恆定區(例如，衍生自抗體，例如，哺乳動物抗體之恆定區)。抗體或其結合部份可包含抗體之任何合適恆定區，或其一個或多個部份。某些具體例中，抗體或其結合部份包含抗體輕鏈之恆定區與/或抗體重鏈之恆定區。有些具體例中，抗體或其結合部份包含λ輕鏈恆定區，或其一部份。有些具體例中，抗體或其結合部份包含κ輕鏈 恆定區，或其一部份。有些具體例中，抗體或其結合部份包含與哺乳動物抗體輕鏈恆定區或其一部份之多肽序列為至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之多肽。有些具體例中，抗體或其結合部份包含與人類抗體輕鏈恆定區之多肽序列為至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之多肽。有些具體例中，抗體之結合部份不包括輕鏈恆定區。有些具體例中，抗體或其結合部份不包括輕鏈恆定區之一個或多個部份。
抗體或其結合部份可包括任何合適之重鏈恆定區或其一部份。哺乳動物中，抗體可具有至少五種/類Ig重鏈，稱為IgA、IgD、IgE、IgG、與IgM，其等係依據所存在之各別的重鏈恆定區或其一部份來決定(例如，CH1、CL、CH2、CH3結構域)。有些具體例中，抗體或其結合部份包含IgM、IgD、IgA、或IgE同型之一個或多個重鏈恆定區或其一部份。有些具體例中，抗體或其結合部份包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之重鏈恆定區或其一個或多個部份。有些具體例中，抗體或其結合部份包含多肽，其與哺乳動物抗體重鏈恆定區多肽序列為至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%一致性、或100%一致性。有些具體例中，抗體或其結合部份包含多肽，其與人類抗體重鏈恆定區之多肽序列為至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%一致性或100%一致性。有些具體例中，抗體或其結合部份在恆定區包含一種或多種加成、缺失與/或修飾。抗體或其結合部份有時候經過修飾，以改變抗體類型或抗體之同型。有些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多種加成、缺失與/或修飾(一或多個胺基酸取代、缺失或加成)，來修飾抗體或其結合部份之一或多種功能，例如，廢除、加強或降低血清半衰期、Fc受體結合性、補體結合性(例 如，C1q結合性)、糖基化、唾液酸化、細胞毒性、抗體依賴性細胞介導之細胞吞噬作用(ADCP)、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、與類似物。有些具體例中，抗體之結合部份不包括重鏈恆定區。有些具體例中，抗體或其結合部份不包括重鏈恆定區之一個或多個部份。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為抗體之一或多個可變區或其一部份。有些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多個輕鏈可變區或其一部份。有些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多個重鏈可變區或其一部份。某些具體例中，抗體或其結合部份包含至少一個輕鏈可變區與至少一個重鏈可變區。輕鏈可變區與重鏈可變區可在相同或不同多肽。
哺乳動物中，抗體之重鏈可變區與輕鏈可變區分別構成三個CDR(互補決定區)，通稱為CDR1、CDR2與CDR3，其等藉由框架區(例如，FR1、FR2、FR3與FR4)分隔與/或側接。本文所採用術語「CDR」意指經判別為互補決定區之多肽之胺基酸序列。某些具體例中，藉由解析抗體或其結合部份之結構及/或解析抗體-抗原複合物之結構等等，來確認CDR多肽序列之輪廓及判別包含抗體或其結合部份之結合位點之殘基。某些具體例中，其可由任何合適方法完成，如X-射線結晶學與/或電腦模型。某些具體例中，採用各種不同分析方法來判別或估測抗體或其結合部份之CDR序列。例如，抗體、其結合部份、或其可變區之多肽序列中CDR之胺基酸序列與/或位置均可採用合適方法判別，其非限制實例包括Kabat或EU系統(例如，參見Kabat,E.A.等人，1991；Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication No.91-3242；及Johnson,G.and Wu,T.T.2000,Nucleic Acids Research)，及/或柯氏編號法(Chothia Numbering Scheme)(例如，Chothia & Lesk,(1987)J.Mol.Biol.,196：901-917；Chothia 等人Nature,(1989)342：878-883；及Al-Lazikani等人(1997)JMB 273,927-948)。有些具體例中，採用AbM方法及或接觸法判別抗體之CDR之胺基序列與/或位置。「AbM」係採用建立抗體結構模型之Oxford Molecular Group所製作的全套電腦軟體定義(參見例如，Martin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),86：9268-9272(1989)；「AbMTM,A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies」,Oxford,UK；Oxford Molecular,Ltd,Oxford,UK；Oxford Molecular,Ltd.)。AbM定義模型係利用已知資料庫及從頭開始之方法之組合，由一級序列建立抗體之三級結構模型，如彼等由Samudrala等人之「Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach」說明於PROTEINS,Structure,Function and Genetics Suppl.,3：194-198(1999)之方法。某些具體例中，接觸定義係依據可取得之複合結晶結構分析(參見例如，MacCallum等人J.Mol.Biol 5：732-45(1996))。
有些具體例中，抗體包含至少6個各別的CDR(例如，3個各別的重鏈CDR與3個各別的輕鏈CDR)。某些具體例中，抗體之結合部份包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、或至少6個各別的CDR。有些具體例中，抗體之結合部份包含3至6個各別的CDR。
某些具體例中，抗體或其結合部份包含輕鏈可變區之一、二、或三個CDR。有些具體例中，抗體或其結合部份之輕鏈可變區包含一或多個CDR(例如，一、二、三個或更多個CDR)。代表抗體之輕鏈可變區中CDR之胺基酸序列稱為CDR-L1(輕鏈CDR1)、CDR-L2(輕鏈CDR2)、與CDR-L3(輕鏈CDR3)，其等係依據從輕鏈可變區之胺基末端(N-末端)往羧基末端(C-末端)之方向依序編號(亦即L1、L2與L3)。例如，代表抗體或其結合部份之輕鏈可變區之 多肽，CDR-L1，當存在時，係最N-末端輕鏈CDR；CDR-L3，當存在時，係最C-末端輕鏈CDR；及CDR-L2，當存在時，則位於抗體之輕鏈可變區或結合部份之(i)CDR-L1與CDR-L3之間，(ii)CDR-L3之N-末端側，或(iii)CDR-L1之C-末端側。術語「CDR-L1」、「CDR-L2」與「CDR-L3」係指如本文判別或揭示為抗體之互補決定區之多肽之胺基酸序列之一部份(例如，輕鏈可變區之CDR)。CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3之胺基酸序列之非限制實例分別提供於表1至表3。抗體之輕鏈可變區或抗原結合部份可包含本文所揭示CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3之任何組合，其中該抗體之結合部份維持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。某些具體例中，抗體之輕鏈可變區或抗原結合部份包含單一輕鏈CDR，其包含與選自表3之CDR-L3至少70%一致性之胺基酸序列。某些具體例中，抗體之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3為至少70%一致性之胺基酸序列，及/或另一個合適之CDR-L2與/或CDR-L1多肽序列，其中該抗體或其結合部份維持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。某些具體例中，抗體之輕鏈可變區或抗原結合部份之輕鏈CDR係由CDR-L3與CDR-L2組成，其中CDR-L3包含與選自表3之CDR-L3為至少70%一致性之胺基酸序列，及CDR-L2包含與選自表2之CDR-L2為至少70%一致性之胺基酸序列。某些具體例中，抗體之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3為至少70%一致性之胺基酸序列及與選自表2之CDR-L2為至少70%一致性之胺基酸序列，及任何其他合適CDR-L1多肽序列，其中抗體或其結合部份維持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。某些具體例中，抗體之輕鏈可變區或抗原結合部份包含三個輕鏈CDR，其組成為與選自表3之CDR-L3為至少70%一致性之胺基酸序列、與選自表2之CDR-L2為至少70%一致性之胺基酸序列、及 與選自表1之CDR-L1為至少70%一致性之胺基酸序列。某些具體例中，抗體之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3為至少70%一致性之胺基酸序列、與選自表2之CDR-L2為至少70%一致性之胺基酸序列、及與選自表1之CDR-L1為至少70%一致性之胺基酸序列，其中抗體或其結合部份維持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含一個或多個輕鏈CDR，其與表1、表2或表3中所列任一CDR序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其與表1所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，抗體或其結合部份包含表1所示任一序列之CDR-L1。
Figure 108135510-A0202-12-0026-11
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含CDR-L2，其與表2所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表2所示任一序列之CDR-L2。
Figure 108135510-A0202-12-0027-12
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含CDR-L3，其與表3所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表3所示任一序列之CDR-L3。
Figure 108135510-A0202-12-0028-13
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含輕鏈可變區，其與表4所示胺基酸序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表4之輕鏈可變區序列。
Figure 108135510-A0202-12-0029-14
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含人源化輕鏈可變區，其與表5序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表5之人源化輕鏈可變區序列。
Figure 108135510-A0202-12-0030-15
某些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含重鏈可變區之一、二或三個CDR。有些具體例中，重鏈可變區包含一個或多個各別的CDR(例如，一、二、三個或更多個各別的CDR)。代表抗體之重鏈可變區中CDR之胺基酸序列稱為CDR-H1(重鏈CDR1)、CDR-H2(重鏈CDR2)、與CDR-H3(重鏈CDR3)，其係依據從重鏈可變區胺基末端(N-末端)往羧基末端(C-末端)依序編號(亦即H1、H2與H3)。例如，代表syndecan-1抗體或其結合部份之重鏈可變區 之多肽CDR-H1，當存在時，係最N-末端CDR；CDR-H3，當存在時，係最C-末端CDR；及CDR-H2，當存在時，係位在重鏈可變區之(i)CDR-H1與CDR-H3之間，(ii)在CDR-H3之N-末端側，或(iii)在CDR-H之C-末端側。術語「CDR-H1」、「CDR-H2」與「CDR-H3」係指本文所判別或揭示為syndecan-1抗體或其結合部份之互補決定區之多肽之胺基酸序列之一部份(例如，syndecan-1抗體之重鏈可變區之CDR)。CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3之胺基酸序列之非限制實例分別提供於表6-至表8。syndecan-1抗體之重鏈可變區或抗原結合部份可能包含CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3之任何組合，其中syndecan-1抗體或其結合部份維持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。某些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份之重鏈可變區或抗原結合部份包含單一重鏈CDR，其組成為與選自表8之CDR-H3為至少70%一致性之胺基酸序列。某些具體例中，syndecan-1抗體之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3具有至少70%一致性之胺基酸序列及任何其他合適CDR-H2與/或CDR-H1多肽序列，其中syndecan-1抗體或其結合部份保留對syndecan-1或其一部份之特異結合性。某些具體例中，syndecan-1抗體之重鏈可變區或抗原結合部份之重鏈CDR係由CDR-H3與CDR-H2組成，其中CDR-H3包含與選自表8之CDR-H3為至少70%一致性之胺基酸序列，及CDR-H2包含與選自表7之CDR-H2為至少70%一致性之胺基酸序列。某些具體例中，syndecan-1抗體之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3為至少70%一致性之胺基酸序列及與選自表7之CDR-H2為至少70%一致性之胺基酸序列，及任何其他合適CDR-H1多肽序列，其中syndecan-1抗體或其結合部份維持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。某些具體例中，syndecan-1抗體之重鏈可變區或抗原結合部份包含三個重 鏈CDR，其組成為與選自表8之CDR-H3為至少70%一致性之胺基酸序列、與選自表7之CDR-H2為至少70%一致性之胺基酸序列、及與選自表6之CDR-H1為至少70%一致性之胺基酸序列。某些具體例中，syndecan-1抗體之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3為至少70%一致性之胺基酸序列，與選自表7之CDR-H2為至少70%一致性之胺基酸序列，及與選自表6之CDR-H1為至少70%一致性之胺基酸序列，其中syndecan-1抗體維持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含一個或多個重鏈CDR，其與表6、表7或表8中任一CDR為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1或其結合部份包含CDR-H1，其係與表6所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表6所示任一序列之CDR-H1。
Figure 108135510-A0202-12-0033-16
有些具體例中，syndecan-1或其結合部份包含CDR-H2，其係與表7所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表7所示任一序列之CDR-H2。
Figure 108135510-A0202-12-0034-17
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含CDR-H3，其係與表8所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表8所示任一序列之CDR-H3。
Figure 108135510-A0202-12-0035-18
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與表1中任一胺基酸序列為至少90%、至少95%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與表2中任一胺基酸序列為至少90%、至少95%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與表3中任一胺基酸序列為至少90%、至少95%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與表6中任一胺基酸序列為至少90%、至少95%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與表7中任一胺基酸序列為至少90%、至少95%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與表8中任一胺基酸序列為至少90%、至少95%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：2或3為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：16、17或18為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：27或28為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：45、46或47為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：60或61為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：72或73為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、 至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：3為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：18為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：28為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：47為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：60為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：73為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：2為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：17為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：27為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：47為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：61為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：73為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含 CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：2為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：16為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：27為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：45為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：60為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：72為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、16與27；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：45、60與72。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、16與27；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：46、61與72。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、16與27；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：45、61與72。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：4或5為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：19、 20或21為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：29或30為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：48、49或50為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：62、63或64為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：74或75為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：5為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：21為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO： 30為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：62或64為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：75為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：4為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：20為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：29為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：63為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：75為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：4、19與29；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：48、63與75。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：4、19與29；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：49、63與75。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：4、19與29；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：49、63與74。有些具體例中，抗體或其結合部 份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：4、19與29；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：48、63與74。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：6或7為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：22為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：29或30為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50或51為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：62、63或64為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺 基酸序列SEQ ID NO：76為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：7為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：22為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：30為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：63為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：76為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：6為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：22為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：29為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：63為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：76為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合 部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：6、22與29；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：51、63與76。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：8或9為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：23為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：31為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：52或53為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：65或66為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：77為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：9為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：23為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：31為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：53為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：66為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：77為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：8為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：23為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：31為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：53為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：65為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：77為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO： 8、23與31；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：52、65與77。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：10或11為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：24為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：29或30為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50或54為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：62、64或67為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：78或79為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、 至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：11為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：24為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：30為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：62或64為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：79為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：10為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：24為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：29為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：50為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：67為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：79為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO： 10、24與29；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：54、67與78。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：12或13為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：25為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：32為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：55或56為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：68或69為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：80為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、 至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：13為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：25為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：32為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：56為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：69為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：80為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：12為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：25為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：32為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：56為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：68為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：80為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO： 12、25與32；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：55、68與80。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：14或15為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：26為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：33為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：57、58或59為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：70或71為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：81為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、 至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：15為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：26為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：33為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：59為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：70為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：81為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3，其包含分別與胺基酸序列SEQ ID NO：15、26、33、57、70、及81為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：14與為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：26為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：33為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：59為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：71為至少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：81為至 少80%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：14、26與33；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：58、71與81。有些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：14、26與33；及CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：57、71與81。
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含與表9序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性之重鏈可變區。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表9重鏈可變區序列。
Figure 108135510-A0202-12-0052-19
有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含與表10序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%一致性之人源化重鏈可變區。有些具體例中，syndecan-1抗體或其結合部份包含表10之人源化重鏈可變區序列。
Figure 108135510-A0202-12-0053-20
有些具體例中，抗體或其結合部份包含或其組成為重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：82至92中任一胺基酸序列為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列；及/或輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：34至43中任一胺基酸序列為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：89-92中任一胺基酸序列為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：41至43中任一胺基酸序列為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。有些具體例中，抗體或其結合部份包含重鏈可變區，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：90為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：41為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含選自表4與表5的輕鏈可變區之一或多個CDR。有些具體例中，抗體或其結合部份包含選自表9與表10的重鏈可變區之一或多個CDR。有些具體例中，抗體或其結合部份包含選自表4與表5的輕鏈可變區之一或多個CDR及選自表9與表10的重鏈可變區之一或多個CDR。某些具體例中，抗體或其結合部份包含CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3，其分別選自表4與表5之任一輕鏈可變區；及CDR-H1、CDR-H2、與CDR- H3，其分別選自表9與表10之任一重鏈可變區。可採用本文說明或習此相關技藝人士已知之任何合適方法，在本文所揭示之重鏈或輕鏈可變區中判別CDR之胺基酸序列(例如，CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3)。
有些具體例中，抗體包含重鏈，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：93為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列；及輕鏈，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：44為至少80%、至少85%、至少90%、或100%一致性之胺基酸序列。
有些具體例中，抗體或其結合部份包含選自表1至表10之一或多種合適序列，其中選擇之多肽序列包含0至5、1至5、0至10、1至10、0至15、或1至12個胺基酸修飾、加成、缺失及/或取代。有些具體例中，胺基酸取代為保留性取代，其中一個胺基酸被另一個類似結構或具有類似生化特徵之胺基酸置換。保留性取代之非限制實例包括一個親水性胺基酸被另一個親水性胺基酸取代、一個疏水性胺基酸被另一個疏水性胺基酸取代、一個酸性胺基酸被另一個酸性胺基酸取代、一個鹼性胺基酸被另一個鹼性胺基酸取代、及一個中性電荷胺基酸被另一個中性電荷胺基酸取代。有些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多種胺基酸類似物、非天然胺基酸或胺基酸衍生物。
某些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多個框架區(FR)。框架區經常位於CDR之間及/或抗體或其結合部份之重鏈或輕鏈可變區之側接CDR序列。哺乳動物中，重鏈可變區經常包含四個框架區，及輕鏈可變區經常包含四個框架區。任何合適方法均可用於判別抗體、抗體之可變區、或其結合部 份中之一或多個框架區。抗體或其結合部份可包含合成或天然框架區，其係未經修飾或如下文說明經過修飾(例如，優化)。
有些具體例中，抗體或其結合部份係嵌合、移植及/或人源化。嵌合、移植及/或人源化抗體經常包含經修飾或或取代之恆定區與/或框架區，同時保持對syndecan-1或其一部份之特異結合性。有些具體例中，抗體或其結合部份包含衍生自人類抗體之恆定區、框架區、或其一部份。有些具體例中，抗體或其結合部份包含不出現在天然抗體分子中之完全合成部份、一或多個胺基酸、或胺基酸之序列。
天然發生之框架區或其一部份可得自任何合適之物種。某些具體例中，抗體或其結合部份之輕鏈可變區及重鏈可變區之互補決定區(CDR)係移植在來自相同或另一種物種之框架區內。例如，抗體或其結合部份之一或多個框架區可衍生自囓齒類物種(例如，小鼠或大鼠)或靈長類物種(例如，人類)。
某些具體例中，抗體或其結合部份之輕鏈與/或重鏈可變區之CDR係移植在共通序列人類框架區。某些具體例中，為了建立共通序列人類框架區，來自數種人類重鏈或輕鏈胺基酸序列之框架區係經排比，以判別共通序列。某些具體例中，抗體或其結合部份之重鏈或輕鏈框架區被一或多個來自不同重鏈或輕鏈可變區之框架區或其一部份置換。有些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多個人類框架區。某些具體例中，抗體或其結合部份包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個人類框架區。有些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多個小鼠框架區。某些具體例中，抗體或其結合部份包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個小鼠框架區。某些具體例中，抗體或其結合部份包含一或多個人類框架區及一或多個小鼠框架區。
產生嵌合、人源化與/或優化抗體或其結合部份之方法係已知者，例如，藉由修飾、取代或缺失框架區或其一部份。CDR移植法之非限制實例說明於例如，美國專利案案號6,180,370、6,054,297、5,693,762、5,859,205、5,693,761、5,565,332、5,585,089、與5,530,101，及Jones等人，Nature,321：522-525(1986)；Verhoeyen等人，Science,239：1534-1536(1988)，及Winter,FEBS Letts.,430：92-94(1998)。產生嵌合、移植及/或人源化抗體之其他非限制實例包括美國專利案案號5,530,101；美國專利案案號5,707,622；美國專利案案號5,994,524；美國專利案案號6,245,894；Queen等人(1988)PNAS 86：10029-10033；Riechmann等人(1988)Nature 332：323-327；Antibody Engineering：Methods and Protocols,Vol.248 of Methods in molecular biology，Benny K.C.Lo編輯，Springer Science & Business Media,(2004)；及Antibody Engineering,Vol.1,Roland E.Kontermann,Stefan Dübel，第2版，Publisher Springer Science & Business Media,(2010)。有些具體例中，抗體或其結合部份之人源化法係由其中一或多個框架區或其一部份(例如，一或多個胺基酸)與來自人類抗體之一或多個框架區或其一部份交換(例如，參見「Humanization of Antibodies」，Eduardo A.Padlan Publ.Landes BioScience 2002)。某些具體例中，抗體或其結合部份之人源化法或移植法為由來自供體抗體(例如，小鼠單株抗體)之一或多個CDR(例如，1、2、3、4、5個或所有6個CDR)轉移至接受體抗體(例如，人類抗體)，同時維持該供體抗體之結合特異性。某些具體例中，製作該嵌合、移植、或人源化抗體之方法包括在抗體之恆定區或框架區中製造一或多個胺基酸取代、加成或缺失。某些具體例中，可採用如：「重構」、「高嵌合」或「鑲嵌/表面重修」等技術來製造抗體或其結合部份(例如，參見Vaswami等人，Annals of Allergy,Asthma,& Immunol.81：105(1998)；Roguska等 人，Prot.Engin.,9：895-904(1996)；及美國專利案案號6,072,035)。有些態樣中，抗體或其結合部份採用如上討論之方法或另一種合適方法修飾，以降低免疫原性(例如，參見Gilliland等人，J.Immunol,62(6)：3663-71(1999))。
某些具體例中，抗體或其結合部份之胺基酸序列經過修飾，以優化針對標靶(例如，syndecan-1)之結合親和性、物種交叉反應性、溶解性與/或功能(例如，促效劑活性、或缺少促效劑活性)。有些具體例中，本文所揭示CDR之特異組合可優化其對syndecan-1之結合性，及/或優化本文所揭示抗體或其結合部份之功能或特性。例如，本文所揭示經特徵化之輕鏈可變區(例如，SEQ ID NO：34-43中任一序列之輕鏈可變區)可使用合適之表現系統，與包含經特徵化之重鏈可變區之CDR-H1與CDR-H2之重鏈可變區集合庫(例如，選自表6或表7之重鏈可變區)共同表現，其中該CDR-H3已被例如，可包括一或多個表8之CDR-H3區之CDR-H3序列集合庫置換。可在所得輕鏈/重鏈抗體中篩選其與syndecan-1之結合與/或特定功能。可採用合適方法判別優化之抗體及CDR-H3之胺基酸序列。上述篩選方法可用於判別包含CDR之特異組合或特異優化CDR序列(例如，包含胺基酸取代、加成或缺失之CDR序列)之抗體或其結合部份，其所提供之抗體或其結合部份具有改良之結合特異性、結合親和性與/或功能。此等篩選及優化抗體或其結合部份之方法係已知者(例如，參見Portolano等人(1993)Journal of Immunology 150：880-887；與Clarkson等人(1991)Nature 352：624-628)。此等參考文獻教示利用已知可變輕鏈、已知可變重鏈、或其一部份(例如，其CDR)，藉由篩選互補可變區集合庫，來製造與特異性抗原結合之抗體之方法。
某些具體例中，抗體或其結合部份係經過修飾而消除或添加糖基化位點，以優化抗體或其結合部份之親和性與/或功能(例如，參見Co等人之Mol. Immunol,30：1361-1367(1993))。有些具體例中，抗體或其結合部份的糖基化位點之數目與/或型態已經過修飾或改變。N-連接之糖基化位點經常藉由序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr予以特徵化，其中該稱為X之胺基酸殘基可為除了脯胺酸以外之任何胺基酸殘基。創造此序列之胺基酸殘基取代提供一個潛在新位點，供N-連接碳水化合物鏈的加成。或者，消除此序列之取代則脫除現有之N-連接碳水化合物鏈。某些具體例中亦提供重排之N-連接碳水化合物鏈，其中消除一或多個N-連接糖基化位點(彼等通常為天然)及創造一或多個新的N-連接位點。有些具體例中，與未經修飾之抗體或其結合部份比較，抗體或其結合部份之修飾係缺失一或多個半胱胺酸殘基或以一或多個半胱胺酸殘基取代另一個胺基酸(例如，絲胺酸)。某些具體例中，半胱胺酸變體適用於優化表現、分泌與/或溶解性。
某些具體例中，抗體或其結合部份經過修飾，以便包括例如，某些設計或計畫之胺基酸添加、取代、或缺失，以降低抗體或其結合部份對蛋白質分解之感受性、降低抗體或其結合部份對氧化之感受性、增加抗體或其結合部份之血清半衰期及/或賦予或修飾其他生理化學、藥物動力學或功能性質。
本文說明之雙特異性結合劑之抗體部份可包含特異性結合CD138之抗體之抗原結合部份(例如，結合部份)。抗體之結合部份係指抗體之抗原結合部份。某些具體例中，抗體之結合部份至少包含足以特異性結合抗原(例如，syndecan-1或其一部份)之抗體之最小部份。某些具體例中，抗體之結合部份包含必要且足以主導特異性結合CD138之抗體的一個或多個互補決定區(CDR)。某些具體例中，抗體之結合部份包含抗體之重鏈可變區與輕鏈可變區。某些具體例中，抗體之結合部份包含或其組成為單一多肽(例如，單鏈抗體)。單鏈抗體可能包含來自抗體重鏈與/或輕鏈之一個或多個CDR。有些具體例中，抗體之結合 部份包含或其組成為兩個多肽(例如，重鏈可變區與輕鏈可變區)。有些具體例中，抗體之結合部份包含一個或多個結構部份(例如，支架、結構多肽、恆定區與/或框架區)。有些具體例中，抗體或抗體之結合部份係附接載劑或受質(例如，聚合物、非有機材料、矽、小珠、粒子或類似物)。
雙特異性結合劑可包含抗體之一個結合部份或抗體之多重結合部份。當雙特異性結合劑包含抗體之多重結合部份時，各結合部份係特異性結合相同抗原(例如，syndecan-1或其一部份)。有些具體例中，雙特異性結合劑包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個或更多個抗體之結合部份。
抗體之結合部份之非限制實例包括單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、單鏈Fv(scFv)、scFv-Fc、(scFv)2-Fc、二硫鍵連接之Fvs(sdFv)、VL(可變輕鏈)、VH(可變重鏈)、雙價抗體(Dab)、三價抗體(三價)、四價抗體(四價)、迷你抗體((scFV-CH3)2)、IgGdeltaCH2、奈米抗體、scFv-Igs、SVD-Igs、與類似物，及其組合。
編碼雙特異性結合劑、抗體、或其結合部份之一種或多種多肽之核酸或其一部份可經過選殖、次選殖、重排或修飾，以使用合適之選殖過程重組表現，隨後使用合適之表現系統，採用彼等習此相關技藝之人士已知之方法表現(例如，參見Maniatis等人Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,1982；Antibody Engineering：Methods and Protocols,Vol.248 of Methods in molecular biology,Benny K.C.Lo編輯，Springer Science & Business Media,2004；Antibody Engineering,Vol.1,Roland E.Kontermann,Stefan Dübel，第2版，Publisher Springer Science & Business Media,2010；Antibody Phage Display： Methods and Protocols,Biomed Protocols,Vol.178 of Methods in molecular biology,Philippa M.O’Brien,Robert Aitken編輯，Springer Science & Business Media,2004)。
有些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合哺乳動物syndecan-1或其一部份。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合哺乳動物syndecan-1或其一部份，其結合親和力(KD)為10-5M以下、10-6M以下、10-7M以下、10-8M以下、50nM以下、10nM以下、或1nM以下。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合哺乳動物syndecan-1或其一部份，其結合親和力(KD)為約10-5至10-15M、10-6至10-15M、10-7至10-15M、10-9至10-15M、10-9至10-14M、10-9至10-13M、或10-9至約10-12M。有些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合哺乳動物syndecan-1之細胞外結構域或細胞外區、或其一部份。某些態樣中，抗體或其結合部份係特異性結合來自天然界之未改變(未經基因改造)哺乳動物之細胞所產生之野生型syndecan-1。某些態樣中，抗體或其結合部份係特異性結合天然發生之syndecan-1變體。某些態樣中，抗體或其結合部份係特異性結合包含一個或多個胺基酸取代、加成或缺失之syndecan-1。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合由人類、非人類靈長類、狗、貓、或囓齒類(例如，小鼠或大鼠)之細胞所產生及/或表現在其等細胞之表面之syndecan-1。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合包含SEQ ID NO：1與126至130中任一胺基酸序列之一種或多種syndecan-1多肽或其一部份(例如，細胞外結構域)。某些具體例中，抗體或其結合部份與具有SEQ ID NO：1及126至130中任一胺基酸序列之一種或多種syndecan-1多肽或其一部份特異性結合之結合親和力(KD)為50nM以下、10nM以下、或1nM以下。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合於人類syndecan-1。某些具體例中，抗體或其結 合部份係特異性結合於人類syndecan-1之細胞外結構域。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合於人類syndecan-1，及/或其細胞外結構域。
某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合包含或其組成為胺基酸序列AGEGPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：94)或GPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：95)之多肽序列。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合包含或其組成為胺基酸序列AGEGPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：94)或GPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：95)之多肽序列，其結合親和力(KD)為10-5M以下、10-6M以下、10-7M以下、10-8M以下、50nM以下、10nM以下、或1nM以下。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合包含或其組成為胺基酸序列GX1KEX2EAX3VLP(SEQ ID NO：96)之多肽序列，其中X1、X2與X3係選自任何胺基酸。有些具體例中，X1係選自：脯胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、與纈胺酸，及/或X2係選自：脯胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、與纈胺酸，及/或X3係選自：脯胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、異白胺酸與苯基丙胺酸。某些具體例中，抗體或其結合部份係特異性結合包含或其組成為胺基酸序列GX1KEX2EAX3VLP(SEQ ID NO：96)之多肽序列，其結合親和力(KD)為50nM以下、10nM以下、或1nM以下，其中X1係選自：脯胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、與纈胺酸，X2係選自：脯胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、與纈胺酸，及X3係選自：脯胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、異白胺酸與苯基丙胺酸。某些具體例中，X1為脯胺酸，X2係選自：丙胺酸、甘胺酸、或絲胺酸，及X3係選自：丙胺酸、甘胺酸、與纈胺酸。
FGFR
異常活化之FGFR已涉及數種人類惡性病，且過度表現之FGFR3在數種動物模式中足以誘發致癌性轉化。已有進行數種嘗試來產生靶定FGFR之抗體與抗體藥物接合物(ADC)。然而，此等抗體經常僅被一種FGFR同型辨識或在不同FGFR同型中展現顯著不同結合親和性。
本文提供之雙特異性結合劑包含Fynomer，其依高度親和性及特異性結合一種或多種FGFR3之剪接型。有些具體例中，雙特異性結合劑可以在結合時內化進入標靶細胞內。
Fynomer
有些具體例中，Fynomer為小型抗原結合性多肽(例如，5至10kDa，有些具體例中，為約7kDa)，其包含衍生自人類原致癌基因酪胺酸-蛋白質激酶Fyn(p59-FYN、Slk、Syn、MGC45350、基因ID 2534)之SH3結構域之非免疫球蛋白支架。因此，在某些具體例中，Fynomer為包含N-末端(N-末端胺基酸)與C-末端(C-末端胺基酸)之單鏈多肽，其可採用重組技術由核酸序列表現或可以化學合成(例如，採用合適之固相化學)。由Fyn SH3衍生之Fynomer係相關技藝已知且已說明於例如，Grabulovski等人(2007)JBC,282,p.3196-3204；WO 2008/022759；Bertschinger等人(2007)Protein Eng.Des.Sel.20(2)：57-68：及Gebauer與Skerra(2009)Curr.Opinion in Chemical Biology 13：245-255。Fynomer可包含長度為50至80個胺基酸之多肽。有些具體例中，Fynomer包含長度為50至70個、或60至70個胺基酸之多肽。有些具體例中，Fynomer包含長度為60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70個胺基酸之多肽。Fynomer經常可透過兩個可變環(RT-環與src-環)之隨機突變進行工程改造，以高親和性及特異性 來結合所選之抗原標靶，同時由Fynomer之周圍序列提供實質上保留在Fynomer序列中之結構支架。咸信這兩個可變環之胺基酸序列及有時候緊鄰該可變環之胺基酸實質上影響Fynomer對所選抗原標靶之特異性與結合親和性。雖然可變環外面之Fynomer序列主要提供結構骨架，但咸了解支架區內某些胺基酸可被取代，而不實質損失結構或結合特異性。
本文所提供Fynomer之胺基酸序列特異性結合於FGFR3或其一種或多種特異性同型或其變體。有些具體例中，本文說明之Fynomer特異性結合於FGFR3或其一種或多種特異性同型或其變體。有些具體例中，本文說明之Fynomer特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3同型3b(FGFR3b)。有些具體例中，本文說明之Fynomer特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3同型3c(FGFR3c)。有些具體例中，本文說明之Fynomer特異性結合於FGFR3b與FGFR3c二者。有些具體例中，FGFR3為哺乳動物FGFR3。有些具體例中，FGFR3為人類、小鼠、大鼠、或猴的FGFR3蛋白質，或其同型。有些具體例中，FGFR3為人類FGFR3，或其同型。人類FGFR3b之胺基酸序列示於SEQ ID NO：97，及人類FGFR3c之胺基酸序列示於SEQ ID NO：98。有些具體例中，本文說明之Fynomer係特異性結合於人類FGFR3b與/或人類FGFR3c。
有些具體例中，Fynomer(例如，本文所揭示雙特異性結合劑之Fynomer部份)係結合FGFR3或其同型，其KD為1 x 10-7M以下、KD為1 x 10-8M以下、KD為1 x 10-9M以下、或KD為1 x 10-10M以下。有些具體例中，Fynomer(例如，本文所揭示雙特異性結合劑之Fynomer部份)係結合一或兩種同型FGFR3b及/或FGFR3c，其KD為1 x 10-7M以下、KD為1 x 10-8M以下、KD為1 x 10-9M以下、或KD為1 x 10-10M以下。有些具體例中，Fynomer係結合兩 種同型FGFR3b與FGFR3c，其KD為10-7至10-12M、KD為10-8至10-12M、或KD為10-9至10-12M。有些具體例中，Fynomer係特異性結合一或兩種同型FGFR3b及/或FGFR3c，且實質上不會與其他相關蛋白質(如FGFR1、FGFR2、或FGFR4)結合。有些具體例中，實質上不會與FGFR結合之Fynomer為未證實有可檢測之特異結合性之Fynomer，或與FGFR結合之KD大於5 x 10-6M之Fynomer。
有些具體例中，本文所揭示雙特異性結合劑之Fynomer部份係在受體結合配體(例如，FGF1)之存在下，結合FGFR3或其同型。因此，有些具體例中，本文所揭示雙特異性結合劑之Fynomer部份不阻斷、消除、或抑制FGFR3配體(例如，FGF1)與FGFR3之結合。有些具體例中，本文所揭示雙特異性結合劑之Fynomer部份不阻斷、消除、或抑制FGFR3配體(例如，FGF1)與FGFR3之結合。有些具體例中，本文所揭示雙特異性結合劑不阻斷、消除、或抑制FGFR3配體(例如，FGF1)與FGFR3之結合。有些具體例中，本文所揭示雙特異性結合劑之Fynomer部份及/或本文所揭示之雙特異性結合劑在受體結合配體(例如，FGF1)之存在下，與FGFR3或其同型結合。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVAIYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFOIL(X 1 )(X 2 )(X 3 )(X 4 )GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：99)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中胺基酸X1至X6獨立地選自任何胺基酸，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。有些具體例中，該具有與胺基酸序列SEQ ID NO：99為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之序列之Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，人類FGFR3)。有些具體例中，該具有與胺基酸序列SEQ ID NO：99為至少80%、至少85%、 至少90%、至少95%或100%一致性之序列之Fynomer係特異性結合於FGFR3b與FGFR3c二者。本文所提供Fynomer序列之N-末端RT環與C-末端src-環經常僅為了說明的目的，以下底線表示。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：99為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中(i)胺基酸X1至X6獨立地選自任何胺基酸，及(ii)保留SEQ ID NO：99胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：99胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y。
某些具體例中，X1係選自N、R、H與K。某些具體例中，X1為N、R或K。某些具體例中，X2係選自S、G、A、V、及P。某些具體例中，X2係選自S、G、A、V、P、及任何鹼性胺基酸。某些具體例中，X2為S、G、K或R。某些具體例中，X3為S、G、A、V、或P。某些具體例中，X3為S或G。某些具體例中，X4係選自任何帶電荷、鹼性或酸性胺基酸。某些具體例中，X4係選自S、G、A、V及P。某些具體例中，X4為E、Q、D、S或K。某些具體例中，X5係選自S、G、A、V、P、S及T。某些具體例中，X5為T或A。某些具體例中，X6係選自任何疏水性胺基酸。某些具體例中，X6係選自任何極性胺基酸。某些具體例中，X6係選自Q、N、H、S、T、Y、C、W、A、L、V及I。某些具體例中，X6為Y、W或L。
某些具體例中，X1為N、R或K；X2為S、G、K或R；X3為S或G；X4為E、Q、D、S或K；X5為T或A；及/或X6為Y、W或L。
有些具體例中，Fynomer包含與胺基酸序列SEQ ID NO：99為至少95%一致性之胺基酸序列，其中(i)胺基酸位置X1至X6可為任何胺基酸序列；(ii)一致性測定不包括胺基酸位置X1至X6；(iii)及保留SEQ ID NO：99胺基酸位 置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：99胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y；及(iv)Fynomer係特異性結合於FGFR3。
有些具體例中，Fynomer包含與胺基酸序列SEQ ID NO：99為至少95%一致性之胺基酸序列，其中(i)X1為N、R或K；X2為S、G、K或R；X3為S或G；X4為E、Q、D、S或K；X5為T或A；及X6為Y、W或L；(ii)一致性測定不包括胺基酸位置X1至X6；(iii)及保留SEQ ID NO：99胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：99胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y；及(iv)Fynomer係特異性結合於FGFR3。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：101)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽(本文中有時候稱為FF2L4C3)，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：101為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：101胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：101胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y，且Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：101為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：101胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：101胺基酸位置32至38之胺基酸序列NSSEGPY(SEQ ID NO：102)，且Fynomer係特異性結合於FGFR3。有些具體例中，Fynomer具有與胺基酸序列SEQ ID NO： 101為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)，其為包含不消除或顯著降低Fynomer與FGFR3特異性結合之能力之0至12個、0至8個、0至5個、或1至2個胺基酸取代、加成與/或缺失之Fynomer。顯著降低之特異結合性為使結合親和力(亦即KD)比SEQ ID NO：101之Fynomer與人類FGFR3b或FGFR3c之結合親和力降低超過20%。習此相關技藝者不需要太多實驗即很容易採用例行方法決定Fynomer對FGFR3b或FGFR3c之結合親和力。因此，習此相關技藝者可容易地決定如何製造具有與胺基酸序列SEQ ID NO：101為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之Fynomer，其中Fynomer特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：101。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：103)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽(文中有時候稱為FF44L65G12)，且該Fynomer特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：103為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：103胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：103胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y，且該Fynomer特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：103為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：103胺基酸 位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：103胺基酸位置32至38之胺基酸序列RGGQGPY(SEQ ID NO：104)，且該Fynomer特異性結合於FGFR3。有些具體例中，Fynomer具有與胺基酸序列SEQ ID NO：103為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列，其中Eynomer特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)，其為包含不消除或顯著降低Fynomer與FGFR3特異性結合之能力之0至12個、0至8個、0至5個、或1至2個胺基酸取代、加成與/或缺失之Fynomer。顯著降低之特異結合性為使結合親和力(亦即KD)比SEQ ID NO：103之Fynomer與人類FGFR3b或FGFR3c之結合親和力降低超過20%。習此相關技藝者不需要太多實驗即很容易採用例行方法決定Fynomer對FGFR3b或FGFR3c之結合親和力。因此，習此相關技藝者很容易決定如何製造具有與胺基酸序列SEQ ID NO：103為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之Fynomer，其中Fynomer特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：103。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：105)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽(本文中有時候稱為FF44L65G7)，且Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：105為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：105胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：105胺基酸位置37與38 之胺基酸P與Y，且Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：105為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：105胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：105胺基酸位置32至38之胺基酸RGGDGPY(SEQ ID NO：106)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。有些具體例中，Fynomer具有與胺基酸序列SEQ ID NO：105為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)，其為包含不消除或顯著降低Fynomer與FGFR3特異性結合之能力之0至12個、0至8個、0至5個、或1至2個胺基酸取代、加成與/或缺失之Fynomer。顯著降低之特異結合性為使結合親和力(亦即KD)比SEQ ID NO：105之Fynomer與人類FGFR3b或FGFR3c之結合親和力降低超過20%。習此相關技藝者不需要太多實驗即很容易採用例行方法決定Fynomer對FGFR3b或FGFR3c之結合親和力。因此，習此相關技藝者很容易決定如何製造具有與胺基酸序列SEQ ID NO：105為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之Fynomer，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：105。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：107)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽(本文中有時候稱為FF48L66G7或「G7」)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基 酸序列SEQ ID NO：107為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：107胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)與SEQ ID NO：107胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：107為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：107胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)與SEQ ID NO：107胺基酸位置32至38之胺基酸KGGSGPY(SEQ ID NO：108)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。有些具體例中，Fynomer具有與胺基酸序列SEQ ID NO：107為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)，其為包含不消除或顯著降低Fynomer與FGFR3特異性結合之能力之0至12個、0至8個、0至5個、或1至2個胺基酸取代、加成與/或缺失之Fynomer。顯著降低之特異結合性為使結合親和力(亦即KD)比SEQ ID NO：107之Fynomer與人類FGFR3b或FGFR3c之結合親和力降低超過20%。習此相關技藝者不需要太多實驗即很容易採用例行方法決定Fynomer對FGFR3b或FGFR3c之結合親和力。因此，習此相關技藝者很容易決定如何製造具有與胺基酸序列SEQ ID NO：107為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之Fynomer，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：107。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIP SNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：109)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽(本文中有時候稱為FF43L65D5)，且Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：109至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：109胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)與SEQ ID NO：109胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y，且Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：109為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：109胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)與SEQ ID NO：109胺基酸位置32至38之胺基酸RKGKGPY(SEQ ID NO：110)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。有些具體例中，Fynomer具有與胺基酸序列SEQ ID NO：109為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)，其為包含不消除或顯著降低Fynomer與FGFR3特異性結合之能力之0至12個、0至8個、0至5個、或1至2個胺基酸取代、加成與/或缺失之Fynomer。顯著降低之特異結合性為使結合親和力(亦即KD)比SEQ ID NO：109之Fynomer與人類FGFR3b或FGFR3c之結合親和力降低超過20%。習此相關技藝者不需要太多實驗即很容易採用例行方法決定Fynomer對FGFR3b或FGFR3c之結合親和力。因此，習此相關技藝者很容易決定如何製造具有與胺基酸序列SEQ ID NO：109為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之Fynome，其中 Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：109。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：111)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽(本文中有時候稱為FF44L65B7)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3或其同型(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：111為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：111胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：111胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y，及Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：111為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之多肽，其中保留SEQ ID NO：111胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：111胺基酸位置32至38之胺基酸RRGSGPY(SEQ ID NO：112)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)。有些具體例中，Fynomer具有與胺基酸序列SEQ ID NO：111為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)，其為包含不消除或顯著降低Fynomer與FGFR3特異性結合之能力之0至12個、0至8個、0至5個、或1至2個胺基酸取代、加成與/或缺失之Fynomer。顯著降低之特異結合性為使結合親和力(亦即KD)比SEQ ID NO：111之Fynomer與人類FGFR3b 或FGFR3c之結合親和力降低超過20%。習此相關技藝者不需要太多實驗即很容易採用例行方法決定Fynomer對FGFR3b或FGFR3c之結合親和力。因此，習此相關技藝者很容易決定如何製造具有與胺基酸序列SEQ ID NO：111為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之Fynomer，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：111。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：113)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中該胺基酸(X7)係選自任何胺基酸。某些具體例中，X7係選自任何疏水性胺基酸。某些具體例中，X7係選自任何極性胺基酸。某些具體例中，X7係選自Q、N、H、S、T、Y、C、W、A、L、V及I。某些具體例中，X7為Y、W或L。某些具體例中，X7為W。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：113為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中(i)位置X7之可為任何胺基酸；(ii)一致性測定不包括胺基酸位置X7；(iii)保留SEQ ID NO：113胺基酸位置12至18之胺基酸序列EVMSTTA(SEQ ID NO：114)及SEQ ID NO：113胺基酸位置31至35之SQSPH(SEQ ID NO：115)；(iv)保留SEQ ID NO：113胺基酸位置37與38之胺基酸Q與Y；及(v)Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)。
某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIP SNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：116)為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽(本文中有時候稱為FF40L54A5)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：116為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中(i)保留SEQ ID NO：116胺基酸位置12至18之胺基酸序列EVMSTTA(SEQ ID NO：114)；(ii)保留SEQ ID NO：116胺基酸位置31至35之胺基酸序列SQSPH(SEQ ID NO：115)；(iii)保留SEQ ID NO：116胺基酸位置37與38之胺基酸Q與Y，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含具有與胺基酸序列SEQ ID NO：116為至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中(i)保留SEQ ID NO：116胺基酸位置12至18之胺基酸序列EVMSTTA(SEQ ID NO：114)；(ii)保留SEQ ID NO：116胺基酸位置31至38之胺基酸序列SQSPHGQY(SEQ ID NO：117)，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。有些具體例中，Fynomer具有與胺基酸序列SEQ ID NO：116為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3(例如，FGFR3b與/或FGFR3c)，其為包含不消除或顯著降低Fynomer與FGFR3特異性結合之能力之0至12個、0至8個、0至5個、或1至2個胺基酸取代、加成與/或缺失之Fynomer。顯著降低之特異結合性為使結合親和力(亦即KD)比SEQ ID NO：116之Fynomer與人類FGFR3b或FGFR3c之結合親和力降低超過20%。習此相關技藝者不需要太多實驗即很容易採用例行方法決定Fynomer對FGFR3b或FGFR3c之結合親和力。因此，習此相關技藝者很容易決定如何製造具有與胺基酸序列SEQ ID NO：116為至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%一致 性之胺基酸序列之Fynomer，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3。某些具體例中，Fynomer包含或其組成為具有胺基酸序列SEQ ID NO：116之多肽。
雙特異性結合劑之Fynomer部份可以採用任何合適方法，在任何合適位置附接雙特異性結合劑之抗體部份。Fynomer可以共價附接或非共價附接至抗體或其結合部份。Fynomer可以附接至抗體或其抗原結合部份之N-末端(N-末端胺基酸)與/或C-末端(C-末端胺基酸)。有些具體例中，Fynomer係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈N-末端與/或輕鏈N-末端。有些具體例中，Fynomer係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈C-末端與/或輕鏈C-末端。有些具體例中，Fynomer係附接在抗體或其抗原結合部份之恆定結構域內合適位置。
某些具體例中，Fynomer係利用肽鍵附接至抗體或抗體內。有些具體例中，雙特異性結合劑包括包含Fynomer與抗體之多肽(例如，重鏈、輕鏈、或單鏈)之融合蛋白質，其中Fynomer與抗體多肽係利用肽鍵連結。因此，有些具體例中，雙特異性結合劑係採用重組技術製造，其中核酸之組態係表現包含Fynomer與抗體或其一部份(例如，輕鏈或重鏈)作為單一多肽之多肽。有些具體例中，雙特異性結合劑包含Fynomer與抗體或其抗原結合部份，其中Fynomer之C-末端胺基酸係利用肽鍵連接抗體之N-末端胺基酸(例如，重鏈之N-末端胺基酸，或輕鏈之N-末端胺基酸)。有些具體例中，雙特異性結合劑包含Fynomer與抗體或其抗原結合部份，其中Fynomer之N-末端胺基酸係利用肽鍵連接抗體之C-末端胺基酸(例如，重鏈之C-末端胺基酸，或輕鏈之C-末端胺基酸)。某些具體例中，Fynomer肽係整合在抗體之多肽內。
有些具體例中，雙特異性結合劑包含特異性結合FGFR3之一個或多個Fynomer。例如，雙特異性結合劑可包含具有兩個重鏈與兩個輕鏈之抗 體，且Fynomer附接至抗體之一或兩個重鏈之N-末端、Fynomer附接至抗體之一或兩個輕鏈之N-末端、Fynomer附接至抗體之一或個兩重鏈之C-末端及/或Fynomer附接至抗體之一或兩個輕鏈之C-末端。因此，在某些具體例中，雙特異性結合劑包含1至12個、1至8個或1至4個Fynomer。有些具體例中，雙特異性結合劑包含1、2、3、4、5、6、7或8個Fynomer。
有些具體例中，雙特異性結合劑在Fynomer與抗體之間包含連接子。合適連接子之非限制實例包括胺基酸、肽類(例如，2個或更多個胺基酸)、視需要經取代之C1-C50烷基、視需要經取代之C2-C50烯基、炔基、醯基、醯基氧基、烷氧基、芳基氧基、環烷基、環烯基、環烷氧基、芳基、胺基羰基、疊氮基、羧基、矽烷、硫醇、亞碸、碸、磺酸酯、氰基、醯胺、胺基、酯、膦酸、聚乙二醇(PEG)等等、其衍生物、其聚合物與其組合。採用連接子附接兩個或更多個分子之方法係彼等相關技藝已知，且此等方法有時候稱為「交聯」。
有些具體例中，連接子包含之肽包含兩個或更多個胺基酸、2至100個胺基酸、5至100個胺基酸、2至50個胺基酸、5至50個胺基酸、2至25個胺基酸、5至25個胺基酸、2至20個胺基酸、5至20個胺基酸、2至10個胺基酸或5至10個胺基酸。有些具體例中，連接子包含之肽包含2、3、4或5個胺基酸。有些具體例中，連接子包含基序(GGGGS)X(X=1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)或GGGGSGGGGSGGGGS。
術語「一致百分比」或「一致性百分比」係指兩個胺基酸序列之間之序列一致性。有些具體例中，以比對之目的排比各序列，由比對位置來決定一致性。當比對之序列中同等位置被相同胺基酸佔據時，則該等分子在該位置具有一致性。當同等位置被相同或類似胺基酸殘基(例如，類似立體性與/或電子性) 佔據時，則該等分子可稱為在該位置具有同源(相似)性。同源性、相似性、或一致性之百分比係以比對之序列在相同位置有相同或類似胺基酸之數量為函數表示。同源性、相似性、或一致性之百分比係以比對之序列在相同位置有相同或類似胺基酸之數量為函數表示。可採用各種不同排比演算法與/或程式，包括FASTA、BLAST、或ENTREZ。FASTA與BLAST係來自GCG序列分析套裝軟體之一部份(University of Wisconsin,Madison,Wis.)，且可與例如，預設值併用。ENTREZ可透過國家衛生研究院國家醫學圖書館之國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information,National Library of Medicine,National Institutes of Health,Bethesda,Md.)取得。一項具體例中，兩個序列之間之一致性百分比可採用GCG程式決定，空位權重為1，例如，每個胺基酸空位係視同單一胺基酸或兩個序列之間之核苷酸錯配進行加權。
其他排比技術說明於：Methods in Enzymology,vol.266：Computer Methods for Macromolecular Sequence Analysis(1996)，Doolittle編輯，Academic Press,Inc.(Harcourt Brace & Co.,San Diego,Calif.,USA之分部)。有些具體例中，採用容許在序列中出現空位之排比程式來進行序列排比。Smith-Waterman即為其中一種演算法，其容許在序列排比中出現空位。參見Meth.Mol.Biol.70：173-187(1997)。此外，可採用使用Needleman與Wunsch排比方法之GAP程式來排比序列。另一種搜尋法係採用在MASPAR電腦上運作之MPSRCH軟體。MPSRCH採用Smith-Waterman演算法，在大量平行電腦取得序列得分。此方法改良挑出遠親匹配之能力，特別能忍受小空位及核苷酸序列錯誤。可採用由核酸編碼之胺基酸序列來搜尋蛋白質與DNA資料庫。
術語「特異性結合」係指雙特異性結合劑、Fynomer、抗體或其一部份對標靶蛋白質、肽或抗原表位之結合優先於對其他分子或其他肽之結合，其係由例如，合適之活體外分析法測定(例如，Elisa、免疫墨點法、流式細胞術，與類似物)。特異結合性交互作用超過非特異結合性交互作用約2倍以上，經常約10倍以上，及有時候約100倍以上、1000倍以上、10,000倍以上、100,000倍以上、或1,000,000倍以上。
有些具體例中，特異性結合於syndecan-1或其一部份之抗體或其結合部份為與syndecan-1或其一部份(例如，syndecan-1之細胞外結構域)結合之抗體或其結合部份，其結合親和力常數(KD)等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM。有些具體例中，特異性結合於syndecan-1或其一部份之抗體或其結合部份為與人類syndecan-1或其一部份(例如，人類syndecan-1細胞外結構域)結合之抗體或其結合部份，其結合親和力常數(KD)等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM。有些具體例中，特異性結合於syndecan-1或其一部份之抗體或其結合部份為與衍生自非人類物種(例如，非人類靈長類或囓齒類(例如，小鼠或大鼠)之syndecan-1或其一部份特異性結合之抗體或其結 合部份，其結合親和力常數(KD)等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM。某些具體例中，本文揭示之抗體或其結合部份係特異性結合於人類syndecan-1或其一部份，及特異性結合衍生自非人類靈長類之syndecan-1或其一部份。某些具體例中，本文揭示之抗體或其結合部份係特異性結合於人類syndecan-1或其一部份，及特異性結合衍生自囓齒類(例如，小鼠或大鼠)之syndecan-1或其一部份。某些具體例中，抗體或其結合部份(i)特異性結合於人類syndecan-1或其一部份(例如，人類syndecan-1之細胞外結構域)，其結合親和力(KD)為10nM以下、或1nM以下；及(ii)特異性結合大鼠或小鼠syndecan-1或其一部份(例如，大鼠或小鼠syndecan-1之細胞外結構域)，其結合親和力(KD)為100nM以下、90nM以下、80nM以下、70nM以下、60nM以下、50nM以下、40nM以下、30nM以下、20nM或less或10nM以下。
某些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗體或其結合部份與本文說明之抗-syndecan-1抗體競爭結合至syndecan-1或至包含胺基酸序列SEQ ID NO：94、95或96之多肽。某些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗體部份與本文說明之抗-syndecan-1抗體競爭結合至syndecan-1，其中本文說明之抗-syndecan-1抗體包含表1至10所示之一個或多個CDR，或實質上類似表1至10所示彼等之一個或多個CDR。某些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗體部份與本文說明之抗-syndecan-1抗體競爭結合至syndecan-1，其中本文說明之抗- syndecan-1抗體包含選自表1之CDR-L1、選自表2之CDR-L2、選自表3之CDR-L3、選自表6之CDR-H1、選自表7之CDR-H2、及選自表8之CDR-H3。某些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗體部份與本文說明之抗-syndecan-1抗體競爭結合至syndecan-1，其中本文說明之抗-syndecan-1抗體包含分別包含胺基酸序列SEQ ID NO：2、17、27、47、61與73之CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3。某些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗體或抗體部份與本文說明之抗-syndecan-1抗體結合相同之syndecan-1之抗原表位。某些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗體或抗體部份與本文說明之抗-syndecan-1抗體特異性結合相同之syndecan-1之抗原表位。某些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗體或抗體部份係特異性結合胺基酸序列SEQ ID NO：94、95或96。
某些具體例中，雙特異性劑包含之抗體部份具有與本文說明之抗-syndecan-1抗體各別及/或不同之一個或多個CDR序列，其中該雙特異性劑與本文說明之抗-syndecan-1抗體競爭結合至syndecan-1。
判別競爭結合至抗原之抗體之方法係已知者。任何合適之方法均可用於決定雙特異性劑或其抗體部份是否與本文說明之抗-syndecan-1抗體競爭結合至syndecan-1。例如，可採用基於ELISA之方法，其中syndecan-1抗原或其一部份塗佈在96-孔板。添加雙特異性劑，讓其與已塗佈之抗原結合。然後洗滌培養板，添加本文說明之抗-syndecan-1抗體至培養板，讓其等結合。在雙特異性劑存在或不存在下測定本文所說明抗-syndecan-1抗體之結合量，以測定該雙特異性劑是否與本文所說明抗-syndecan-1抗體競爭結合。亦可採用相關技藝已知之其他合適方法。
有些具體例中，雙特異性結合劑包含標記物。本文所採用術語「標記物」或「標記」係指納入可檢測之標識物，例如，納入有標記之胺基酸或附接生物素部份體之多肽，其可利用有標記之抗生物素蛋白(例如，含有螢光標識物之鏈黴抗生物素蛋白或可利用光學或染色法檢測之酵素活性)檢測。某些具體例中，標記物或標識物可以附接雙特異性結合劑，產生診斷劑。雙特異性結合劑可以共價或非共價附接任何合適之標記物或標識物。習此相關技藝者已知且可使用各種不同標記多肽與醣蛋白之方法。多肽之標記物之非限制實例包括(但不限於)：螢光標記物、酵素性標記物(例如，辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記物、金屬標記物、發色團、電化學發光標記物、磷光標記物、消光物(例如，螢光團消光物)、螢光共振能量轉移(FRET)對(例如，供體與接受體)、染劑、酵素受質、小分子、質量標籤、量子點、奈米粒子、生物素基團、被第二報導子辨識之預定多肽抗原表位(例如，白胺酸拉鍊對序列、二級抗體之結合位點、金屬結合結構域、抗原表位標籤)、其類似物或其組合。
有些具體例中，雙特異性結合劑包含合適之載劑。雙特異性結合劑可以共價或非共價附接合適之載劑。有些具體例中，雙特異性劑之Fynomer部份係附接載劑。有些具體例中，雙特異性結合劑之抗體部份係附接載劑。載劑之非限制實例包括改變或延長雙特異性結合劑之活體內半衰期之製劑或分子，包括聚乙二醇、糖原與/或碳水化合物(例如，藉由多肽之糖基化引入者)、葡聚醣、美國專利案案號6,660,843說明之載劑或媒劑、其類似物或其組合。某些具體例中，雙特異性劑或其一部份係經糖基化。有些具體例中，由標記物或載劑利用合適之連接子與雙特異性結合劑結合。
有些具體例中，標記物、載劑、抗贅瘤劑、毒素或連接子係附接雙特異性結合劑之合適硫醇基(例如，半胱胺酸殘蹟之硫醇基)。有些具體例中，標記物、載劑、抗贅瘤劑、毒素或連接子係附接雙特異性結合劑之胺基之合適反應性氮。雙特異性結合劑之任何合適胺基酸殘基均可基於附接標記物、載劑、抗贅瘤劑、毒素或連接子之目的，以含有硫醇基之胺基酸殘基(例如，半胱胺酸)或含有反應性氮之胺基酸殘基(例如，離胺酸)予以取代。雙特異性結合劑之抗體部份中可經含有硫醇之胺基酸殘基或遊離胺基取代之胺基酸之非限制實例包括IgG2或IgG1之A118、S119、S239、V282、T289、N361、與V422(對應於EU編號系統)、或IgG3或IgG4中之對應位置。因此，有些具體例中，本文說明之雙特異性結合劑包含之抗體包含人類重鏈恆定區，其中抗體IgG重鏈之重鏈恆定區包含A118C(位置118丙胺酸成為半胱胺酸)、S119C(位置119絲胺酸成為半胱胺酸)、S239C(位置239絲胺酸成為半胱胺酸)、V282C(位置282纈胺酸成為半胱胺酸)、T289C(位置289蘇胺酸成為半胱胺酸)、N361C(位置361天冬醯胺成為半胱胺酸)、及/或V422C(位置422纈胺酸成為半胱胺酸)等取代，其中抗贅瘤劑或毒素係共價附接所指定半胱胺酸殘基之硫醇基。有些具體例中，本文說明之雙特異性結合劑包含含有人類重鏈恆定區之抗體，其中抗體之IgG重鏈之恆定區包含A118K(位置118丙胺酸成為離胺酸)、S119K(位置119絲胺酸成為離胺酸)、S239K(位置239絲胺酸成為離胺酸)、V282K(位置282纈胺酸成為離胺酸)、T289K(位置289蘇胺酸成為離胺酸)、N361K(位置361天冬醯胺成為離胺酸)、及/或V422K(位置422纈胺酸成為離胺酸)等取代，其中抗贅瘤劑或毒素係共價附接所指定離胺酸殘基之遊離胺基之反應性氮。在雙特異性結合劑上附接標記物、載劑、抗贅瘤劑、毒素、及/或連接子之其他非限制實例包括由胺與琥珀醯 亞胺基酯(例如，N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯)、亞胺基酯、五氟苯基(PFP)酯、羥甲基膦、環氧乙烷、異硫氰酸酯、磺醯基鹵化物、鹵乙醯基衍生物或任何其他羰基化合物反應；由羧基與碳化二亞胺反應；由氫硫基與馬來醯亞胺、鹵乙醯基衍生物、二硫吡啶、或乙烯基碸反應；由醛與肼反應；由任何非選擇性基團與二氮雜環丙烯或芳基疊氮化物反應；由羥基與異氰酸酯反應；由羥基胺與羰基化合物反應；及其類似物與組合。
抗贅瘤劑、毒素與連接基
某些具體例中，本文所揭示雙特異性結合劑包含抗贅瘤劑。有些具體例中，抗體或其結合部份包含抗贅瘤劑。有些具體例中，Fynomer包含抗贅瘤劑。有些具體例中，雙特異性結合劑、抗體或Fynomer包含一種或多種(例如，1至20、1至10、或1至5種)抗贅瘤劑。有些具體例中，雙特異性結合劑、抗體或Fynomer包含1、2、3、4或5種抗贅瘤劑。
任何合適之抗贅瘤劑均可附接本文揭示之雙特異性結合劑、抗體或Fynomer。有些具體例中，抗贅瘤劑係對贅瘤細胞有毒性之製劑。有些具體例中，抗贅瘤劑包含毒性化合物、毒性分子或毒性負載物。抗贅瘤劑之無限制實施例包括尾海兔素(dolastatin)、微管抑制素(auristatin)、美登素(maytansine)、微管菌素(tubulysin)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、倍癌黴素(duocarmycin)、阿黴素(doxorubicin)、假單胞菌外毒素-A(PE38)、伊立替康(irinotecan)、及其類似物或衍生物。有些具體例中，抗贅瘤劑包含單甲基微管抑制素E(monomethyl auristatin E)(MMAE)或單甲基微管抑制素F(MMAF)。有些具體例中，抗贅瘤劑包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)毒素與/或連接基。
有些具體例中，抗贅瘤劑係附接雙特異性結合劑之抗體部份或Fynomer部份。抗贅瘤劑可以共價或非共價附接至雙特異性結合劑、抗體或Fynomer。抗贅瘤劑可能直接或間接(例如，利用連接子或連接基)附接雙特異性結合劑、抗體或Fynomer。例如，有些具體例中，抗贅瘤劑係利用連接子或連接基共價附接至雙特異性結合劑、抗體或Fynomer。
抗贅瘤劑可在雙特異性結合劑之任何合適位置附接雙特異性結合劑。有些具體例中，抗贅瘤劑係附接雙特異性結合劑之Fynomer部份及/或雙特異性結合劑之抗體部份。有些具體例中，抗贅瘤劑係附接雙特異性結合劑之抗體部份之恆定區(例如，抗體之恆定區)。有些具體例中，抗贅瘤劑係直接或間接(例如，利用連接子或連接基)附接雙特異性結合劑之抗體部份中恆定區之合適半胱胺酸殘基。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)毒素。有些具體例中，抗贅瘤劑包含連接基或合適連接子。有些具體例中，抗贅瘤劑包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)毒素與連接基。某些具體例中，吡咯并苯并二氮呯毒素係共價連接連接基，及連接基係共價連接本文說明之雙特異性結合劑。
PBD毒素及製造PBD毒素之方法之非限制實例說明於下列專利申請公開案：US 2011/0256157、WO/2015/052322、US 2016/0106861、US 2007/0072846、US 2011/0201803、US 2010/0113425、US 2008/0167293、US 2014/0127239、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2015/0111880、US 2015/0315196、US 2016/0015828、US 2014/0088089、US 2013/0035484、US 2011/0196148、US 2013/0028919、US 2013/0059800、US 2014/0274907、US 2014/0275522、US 2014/0234346、US 2013/0266595、US 2014/0302066、US 2014/0286970、US 2014/0294868、US 2016/0144052、US 2016/0031887、US 2014/0120118、US 2016/0250344、WO/2017/137553、WO/2017/137555與WO/2017/186894，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。
有些具體例中，吡咯并苯并二氮呯毒素包含化學式I之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0086-21
其中Z1與Z2均為N；Z3與Z4均為C；雙虛線
Figure 108135510-A0202-12-0086-385
代表單鍵或雙鍵；n為1至12；各R3與R4獨立地為H、或C1-4烷氧基；及各R1與R2係獨立地選自下列各者所成群組：H、C1-5烷基、C3-6環烷基、C2-5烯基、及視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自下列各者所成群組：-NH2、-NHR6、及經具有如下結構式之R7取代之哌嗪基
Figure 108135510-A0202-12-0086-22
，其中R6包含連接基，及R7為不存在、或C1-5烷基；X1為不存在、保護基、或包含連接基；X2為不存在、保護基、或包含連接基；X1、X2、R1、及R2中僅一者包含連接基；及各Y1與Y2獨立地為不存在、OH、或SO3；但其限制條件為：(i)當X1包含連接基時，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0086-23
Z3為N-C；(ii)當X2包含連接基時，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0086-24
Z4為N-C；(iii)當X1包含保護基時，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0086-26
Z3為N-C；及(iv)當X2包含保護基時，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0086-25
Z4為N-C，其中「不存在」意指沒有部份體存在或存在一個或多個氫以滿足所要求之價數。
某些具體例中，PBD毒素僅包含一個連接基。例如，化學式I中，X1、X2、R1、及R2中僅一者包含連接基。例如，當X1包含連接基時，X2、R1、及R2不包含連接基。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，n為1-12。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，n為1-10、1-9、1-7、1-5，或1-3。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，n為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。有些具體例中，n為1、3或5。有些具體例中，n為3或5。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R3與R4獨立地為C1-4烷氧基。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R3與R4獨立地選自：-O-CH2CH3或-O-CH3。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R3與R4均為-O-CH3。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R1與R2係獨立地選自下列各者所成群組：H、C1-5烷基、C3-C6環烷基、及C2-5烯基。R1與R2可以相同或相異。有些具體例中，R1與R2獨立地選自：C1-C3烷基與C2-C3烯基。某些具體例中，R1與R2獨立地選自：-CH2CH2CH3與-CH3。某些具體例中，R1與R2二者均為-CH2CH2CH3或-CH3。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R1與R2獨立地選自：C3-C6環烷基、及視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自下列各者所成群組：-NH2、-NHR6、及經具有如下結構式之R7取代之哌嗪基
Figure 108135510-A0202-12-0087-27
，其中R6包含連接基，及R7為不存在、或C1-5烷基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i)C3-C6環烷基；及(ii)視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自：-NH2、及-NHR6，其中R6包含連接基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i) C3環烷基；及(ii)經-NH2或-NHR6取代之苯基，其中R6包含連接基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i)視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自：-NH2與-NHR6，其中R6包含連接基；及(ii)經具有如下結構式之R7取代之哌嗪基
Figure 108135510-A0202-12-0088-28
，其中R7為不存在、或C1-C2烷基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i)經R5取代之苯基，其中R5為-NH2與-NHR6，其中R6包含連接基；及(ii)經具有如下結構式之R7取代之哌嗪基
Figure 108135510-A0202-12-0088-29
，其中R7為-CH3。某些具體例中，R2為經4-甲基哌嗪-1-基取代之苯基。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，X1為不存在，Y1為不存在，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0088-31
Z3為N=C，X2為不存在，Y2為不存在，及Z2
Figure 108135510-A0202-12-0088-32
Z4為N=C。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，X1包含連接基，Y1為OH，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0088-33
Z4為N=C，X2為不存在，及Y2為不存在。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，X1包含連接基，Y1為OH，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0088-34
Z4為N-C，X2為保護基，及Y2為OH。
有些具體例中，PBD毒素包含如下所示化學式VII之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0088-30
 其中X1包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素包含如下所示化學式VIII之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0089-35
 其中X1包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素包含如下所示化學式IX之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0089-36
 其中R6包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素包含如下所示化學式X之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0089-37
 其中R6包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素係利用合適之鍵結、部份體或基團附接(例如，共價連接)連接基。有些具體例中，PBD毒素係利用羰基連接或醯胺連接附接(例如，共價連接)連接基。有些具體例中，PBD毒素係利用胺甲酸根基團附接(例如，共價連接)連接基。有些具體例中，PBD毒素係利用醯胺基附接(例如，共價連接)連接基。附接PBD毒素與連接基之無限制實施例說明於US 2017/0002096、US 2016/0331842、US 2015/0250896、US 2017/0080103、US 2016/0136300、US 2017/0152274、US 2015/0209444、US 2013/0274091、US 2017/0095570、US 2017/0157264、US 2015/0125474、US 2011/0256157、WO/2015/052322、US 2016/0106861、US 2007/0072846、US 2011/0201803、US 2010/0113425、US 2008/0167293、US 2014/0127239、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2015/0111880、US 2015/0315196、US 2016/0015828、US 2014/0088089、US 2013/0035484、US 2011/0196148、US 2013/0028919、US 2013/0059800、US 2014/0274907、US 2014/0275522、US 2014/0234346、US 2013/0266595、US 2014/0302066、US 2014/0286970、US 2014/0294868、US 2016/0144052、US 2016/0031887、US 2014/0120118、US 2016/0250344、WO/2017/137553、WO/2017/137555與WO/2017/186894，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。
本文所採用術語「不存在(null)」係指所指示之部份體不存在於該結構式中，然而所指示之部份體可能被一個或多個氫原子置換或佔據，以滿足所要求之價數。此外，本文所示之任何結構中，可能存在一個或多個氫，以滿足結構式中所示碳、氮、或氧原子所要求之價數。因此，若沒有明確指示時，其中可能存在一個或多個氫原子。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含合適之連接基。有些具體例中，連接基促成雙特異性結合劑與毒素(例如，PBD毒素)之間之連接。有些具體例中，連接基可以裂解。例如，在某些具體例中，連接基包含可被細胞內肽酶辨識之內切肽酶裂解位點。在雙特異性結合劑內化進入贅瘤細胞中後，內切肽酶裂解位點即提供一種讓抗贅瘤劑從雙特異性結合劑脫離及/或釋放之方式。連接基與製造 連接基之方法之非限制實例說明於WO/2015/052322、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2014/0127239、US 2017/0002096、US 2016/0331842、US 2015/0250896、US 2017/0080103、US 2016/0136300、US 2017/0152274、US 2015/0209444、US 2013/0274091、US 2017/0095570、US 2017/0157264與US 2015/0125474，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。有些具體例中，連接基包含C1-C20烷基、C1-C20烯基、C1-C20烷氧基、一個或多個胺基酸或胺基酸衍生物、包含1至20個胺基酸之肽、苯基、合適聚合物(例如，聚乙二醇)、或其組合。
有些具體例中，連接基包含化學式A之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0091-38
其中星號代表連接基與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點，波浪線代表連接基與雙特異性結合劑之附接點，m為0至20，q為0至10，及E為連接基團。化學式A連接基之有些具體例中，m為1至20、1至10、1至8、1至6、1至4、2至8、或4或8。化學式A連接基之有些具體例中，m係選自：1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。化學式A連接基之有些具體例中，q為1至10、1至8、1至6、或1至4。化學式A連接基之有些具體例中，q係選自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。化學式A連接基之有些具體例中，q為0、1或2。化學式A連接基之有些具體例中，m為8，及q為2。
有些具體例中，連接基包含化學式B之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0092-39
 其中星號代表連接基與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點、波浪線代表連接基與雙特異性結合劑之附接點，v為0至10，及u為0或1，其中當u為1時，t為1至10，及E為連接基團。化學式B連接基之有些具體例中，v為1至10、1至8、1至4、或0至4。化學式B連接基之有些具體例中，v係選自：0、1、2、3、4、5、6、7或8。化學式B連接基之有些具體例中，當u為1時，t為1至8、1至5、1至4、或2至5。化學式B連接基之有些具體例中，當u為1時，t係選自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。化學式B連接基之有些具體例中，t為8，u為1，及v為2。化學式B連接基之有些具體例中，u為0，及v為4。
化學式A與B之連接基團E可包含任何合適之鍵結、連接基或部份體，其無限制實施例包括二硫鍵、硫醚鍵、硫酯鍵、醯胺鍵、胺、酮、羧酸根醚、胺甲酸酯、酯、硫酯、類似物、或其組合。某些具體例中，E包含連接基與雙特異性結合劑之間之共價連接。有些具體例中，E包含共價鍵。有些具體例中，E包含在進行合適之接合反應後保留之反應部份體。相關技藝上已知許多種接合反應，其中任何一種均可用於共價連接本文所揭示之連接基與本文所揭示之雙特異性結合劑。任何合適之接合化學均可用於讓連接基共價附接在雙特異性結合劑上，不論隨機反應或位點專一性反應，其無限制實施例包括以下說明之接合反應：Shan S.Wong(1991年6月18日公開)Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking,CRC Press；Greg T.Hermanson(2013版權)Bioconjugate Techniques，第3版，Elsevier Inc.；及Thiol-X Chemistries in Polymer and Materials Science,RSC Polymer Chemistry Series No.6(2013)Andrew B.Lowe與Christopher N.Bowman編輯，RCS Publishing；WO/2015/052322、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2014/0127239、US 2017/0002096、US 2016/0331842、US 2015/0250896、US 2017/0080103、US 2016/0136300、US 2017/0152274、US 2015/0209444、US 2013/0274091、US 2017/0095570、US 2017/0157264、及US 2015/0125474，其等完整內容已以引用之方式完整併入本文中。使抗贅瘤劑或連接基與雙特異性結合劑接合之其他無限制實施例包括由胺或胺基與N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯、琥珀酸琥珀醯亞胺基酯、琥珀醯亞胺基酯琥珀醯胺、丙酸琥珀醯亞胺基酯、碳酸琥珀醯亞胺基酯、氧羰基咪唑、碳酸硝基苯基酯、碳酸三氯苯基酯、三氟乙磺酸酯(tresylate)、馬來酸酐、甲基馬來酸酐、亞胺基酯、五氟苯基(PFP)酯、羥甲基膦、環氧乙烷或任何其他羰基部份體反應；由羧基部份體與碳化二亞胺反應；由氫硫基部份體與馬來醯亞胺、鹵乙醯基、二硫吡啶、鄰二硫吡啶及/或乙烯基碸反應；由醛部份體與肼或醯肼反應；由任何非選擇性基團與二氮雜環丙烯及/或芳基疊氮化物反應；由羥基部份體與異氰酸酯反應；由羥基胺部份體與羰基部份體反應；及其類似物與組合。
因此，E經常由用於接合連接基與雙特異性結合劑之化學來定義。有些具體例中，E包含其組態在於附接連接基與雙特異性結合劑之合適部份體。有些具體例中，連接基係利用合適之氫硫基-氫硫基反應共價連接雙特異性結合劑，例如，利用馬來醯亞胺或吡啶基二硫醇反應基，與還原之半胱胺酸反應，形成安定之硫醚鍵。反應性氫硫基反應性部份體之其他無限制實施例包括鹵乙醯基、氮雜環丙烷、丙烯醯基化合物、芳基化劑、乙烯基碸、二硫吡啶、及TNB-硫醇。某些具體例中，雙特異性結合劑係利用雙特異性結合劑之半胱胺酸硫醇殘 基(例如，硫醇)與E之間形成之硫醚鍵與E連接。因此，某些具體例中，E包含二硫鍵或硫醚鍵。有些具體例中，例如，若採用馬來醯亞胺反應來共價連接雙特異性結合劑與連接基時，則E包含化學式C之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0094-40
 其中波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點，及雙星號(**)代表與連接基之附接點。某些具體例中，化學式C之雙星號代表硫醚鍵。
抗贅瘤劑、毒素、連接基或連接基可以隨機或依位點專一性，與雙特異性結合劑之任何合適胺基酸接合。有些具體例中，抗贅瘤劑、毒素、連接基或連接基係接合雙特異性結合劑之一或多個合適之半胱胺酸。有些具體例中，抗贅瘤劑、毒素、連接基或連接基係接合雙特異性結合劑之一或多個合適之離胺酸殘基。某些具體例中，雙特異性結合劑之一或多個胺基酸係經適合與抗贅瘤劑、毒素、連接基或連接基接合之胺基酸取代。可被包含硫醇之胺基酸殘基或離胺酸殘基取代之胺基酸之無限制實施例包括包括IgG1或IgG2恆定結構域之A118、S119、S239、V282、T289、N361、及V422(對應於EU編號系統)，或IgG3或IgG4恆定結構域之對應位置。採取誘變法將半胱胺酸引入雙特異性結合劑或抗體中，可以讓抗贅瘤劑、毒素、連接基或連接基直接接合在雙特異性結合劑或抗體上特定位點，例如，利用二硫鍵或硫醚鍵。例如，雙特異性結合劑之一或多個胺基酸可被半胱胺酸取代，其中半胱胺酸可採用合適之化學反應，用於依位點專一性接合抗贅瘤劑、毒素、連接基或連接基。抗體恆定區之任何合適胺基酸均 可突變成半胱胺酸或離胺酸，以供依位點專一性接合抗贅瘤劑、毒素、連接基或連接基。
有些具體例中，連接基包含合適之酵素裂解位點。某些具體例中，酵素裂解位點包含哺乳動物蛋白酶之酵素辨識位點。因此，有些具體例中，連接基或其一部份可被哺乳動物蛋白酶裂解。連接基可被存在或接近標靶位點((例如，存在或接近FGFR3或CD138蛋白質)之酵素裂解。存在或接近標靶位點之酵素可在細胞內、與膜結合、與膜相聯或在細胞外(例如，分泌)。例如，連接基之組態可以被細胞表面蛋白酶、分泌蛋白酶、或細胞內蛋白酶(例如，胞溶體蛋白酶)裂解。酵素裂解位點之無限制實施例包括胞溶體半胱胺酸蛋白酶與/或胞溶體天冬胺酸蛋白酶之蛋白酶辨識位點。胞溶體蛋白酶之無限制實施例包括細胞自溶酵素(cathepsin)B、C、H、I、J、K、L、M、N、O、P、S、T與X；及細胞自溶酵素D、E、F、G；及/或細胞自溶酵素A(羧基肽酶A)。
保護基
有些具體例中，PBD毒素包含合適保護基。保護基及製造保護基之方法之無限制實施例說明於下列專利申請公告案：US 2011/0256157、WO/2015/052322、US2011/0201803、US2008/0167293、US2014/0127239、US2015/0158869、US2015/0344482、US2015/0315196、US2015/0315196、US2014/0302066、US2006/0264622與US2015/0133435，其等完整內容已以引用之方式完整併入本文中。
有些具體例中，保護基包含如下化學式D之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0096-41
 其中星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；及w為0至10。有些具體例中，w為0至8、0至6、0至4、1至10、1至8、1至5、或1至4。某些具體例中，w其係選自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9與10。有些具體例中，w為2。
有些具體例中，保護基可以移除。某些具體例中，保護基可採用合適之化學法裂解。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含化學式II之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0096-42
 其中m為8，及波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含化學式III之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0096-43
 (III)，其中m為8，p為1或3，X2為不存在，或為保護基，及波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點。某些具體例中，抗贅瘤劑包含化學式IV之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0097-44
 其中波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含化學式V之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0097-45
 其中m為8，E為合適之連接基團，及波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點。有些具體例中，E包含結構式C之琥珀醯亞胺部份體：
Figure 108135510-A0202-12-0097-46
 其中該波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點，及雙星號代表與化學式V抗贅瘤劑之附接點。包含結構式C連接基團之化學式V抗贅瘤劑在本文中有時候稱為化學式XI。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含化學式VI之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0098-47
 其中t為8，v為1，及波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點。
有些具體例中，抗贅瘤劑包含化學式VII之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0098-48
 其中波浪線代表與雙特異性結合劑之附接點。
有些具體例中，雙特異性結合劑包含之抗贅瘤劑包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI中任一者之結構。
醫藥組成物
有些具體例中，組成物或醫藥組成物包含本文說明之雙特異性結合劑(例如，包含抗贅瘤劑之雙特異性結合劑)。有些具體例中，醫藥組成物包含雙特異性結合劑與醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載劑。
醫藥組成物可配合合適投藥途徑調配。有些具體例中，醫藥組成物係調配成供經皮下(s.c.)、皮內、肌內、腹膜內與/或靜脈內(i.v.)投藥。某些具體例中，醫藥組成物可包含用於修飾、維持或保存組成物之例如，pH、滲透性、黏度、澄清度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、安定性、溶解或釋放速率、吸附或穿透性之調配材料。某些具體例中，合適之調配材料包括(但不限於)：胺基酸(如：甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸、或離胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(如：抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(如：硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽(例如，磷酸鹽緩衝生理食鹽水)或合適之有機酸)；增積劑(如：甘露糖醇或甘胺酸)；螯合劑(如：乙二胺四乙酸(EDTA))；錯合劑(如：咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精)；蛋白質(如：血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、調味劑與稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(如：聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；形成鹽之抗衡離子(如：鈉)；溶劑(如：甘油、丙二醇、或聚乙二醇)；稀釋劑；賦形劑與/或醫藥佐劑。特定言之，醫藥組成物可以包含任何合適載劑、調配物、或成份、類似物或其組合，如：列於「Remington：The Science and Practice Of Pharmacy」Mack Publishing Co.,Easton,PA，第19版(1995)(下文稱為「Remington’95」)或「Remington：The Science and Practice Of Pharmacy」,Pharmaceutical Press,Easton,PA，第22版(2013)(下文稱為「Remington 2013」)，其等完整內容已以引用之方式完整併入本文中。本文所列之各種不同材料可以單獨或組合納入Remington’95或Remington 2013說明之材料中或與其等併用。任何合適之技術、載劑、與賦形劑均可使用，包括彼等相關技藝習知者；例如，說明於Remington’95或Remington 2013中者。
某些具體例中，醫藥組成物包含合適之賦形劑，其無限制實施例包括抗附著劑(例如，硬脂酸鎂)、黏合劑、填料、單糖、雙醣、其他碳水化合物(例如，葡萄糖、甘露糖或糊精)、糖醇類(例如，甘露糖醇或山梨糖醇)、包衣(例如，纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、微晶纖維素、合成性聚合物、蟲膠、明膠、玉米蛋白質(玉米蛋白)、腸衣或其他多醣)、澱粉(例如，馬鈴薯、玉米或小麥澱粉)、矽石、著色劑、崩解劑、調味劑、潤滑劑、防腐劑、吸附劑、甜味劑、媒劑、懸浮劑、介面活性劑與/或濕化劑(如：普朗尼克(pluronics)、PEG、山梨糖醇酐酯、聚山梨酸酯如：聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、曲拉通(triton)、三羥基胺基甲烷(tromethamine)、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊(tyloxapal))、安定性加強劑(如：蔗糖或山梨糖醇)、與張性加強劑(如：鹼金屬鹵化物、氯化鈉或鉀、甘露糖醇、山梨糖醇)、及/或Remington’95或Remington 2013中揭示之任何賦形劑。本文所採用術語「黏合劑」係指有助於保持醫藥混合物組合在一起之化合物或成份。適合製造醫藥調配物且經常用於製備醫藥錠劑、膠囊、與粒劑之黏合劑係彼等習此相關技藝者已知。
有些具體例中，醫藥組成物包含合適之醫藥上可接受之添加劑與/或載劑。合適添加劑之無限制實施例包括合適之pH調整劑、緩和劑、緩衝劑、含硫還原劑、抗氧化劑、與類似物。含硫還原劑之無限制實施例包括彼等具有氫硫基者，如：N-乙醯基半胱胺酸、N-乙醯基高碳半胱胺酸、硫辛酸、硫二甘醇、硫乙醇胺、硫甘油、硫山梨糖醇、硫乙醇酸與其鹽、硫代硫酸鈉、穀胱甘肽、及C1-C7硫烷酸。抗氧化劑之無限制實施例包括異抗壞血酸、二丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、α-生育酚、乙酸生育酚、L-抗壞血酸與其鹽、L-抗壞血酸基棕櫚酸酯、L-抗壞血酸基硬脂酸酯、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、沒食子酸三戊酯與沒食 子酸丙酯、及螯合劑，如：乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、焦磷酸鈉、及偏磷酸鈉。此外，稀釋劑、添加劑與賦形劑可包含其他常用成份，例如，無機鹽類，如：氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、磷酸鈉、磷酸鉀、與碳酸氫鈉，及有機鹽類，如：檸檬酸鈉、檸檬酸鉀與乙酸鈉。
本文所採用醫藥組成物可以長期時間保持安定，例如，保持數月或數年。有些具體例中，醫藥組成物包含一或多種合適之防腐劑。防腐劑之無限制實施例包括氯化苯二甲烴銨、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定(chlorhexidine)、山梨酸、過氧化氫、其類似物與/或其組合。防腐劑可包含四級銨化合物，如：氯化苯二甲烴銨、苯佐氯銨(benzoxonium chloride)、氯化苄乙氧銨(benzethonium chloride)、溴化十六烷基三甲銨(cetrimide)、氯司帕唑(sepazonium chloride)、十六烷基氯化吡啶、或度米芬溴(domiphen bromide)(BRADOSOL®))。防腐劑可包含硫水楊酸之烷基-汞鹽，如：硫柳汞、硝酸苯基汞、乙酸苯基汞、或硼酸苯基汞。防腐劑可包含對羥基苯甲酸酯，如：對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯。防腐劑可包含醇類，如：氯丁醇、苯甲醇或苯基乙基醇。防腐劑可包含雙胍衍生物，如：氯己定或聚六亞甲基雙胍。防腐劑可包含過硼酸鈉、咪唑啶基脲、與/或山梨酸。防腐劑可包含安定化之氧氯複合物，如：已知且可取得名稱為PURITE®之商品。防腐劑可包含聚二醇-聚胺縮合樹脂，如：已知且可自Henkel KGaA取得名稱為POLYQUART®之商品。防腐劑可包含安定化之過氧化氫。防腐劑可為氯化苯二甲烴銨。有些具體例中，醫藥組成物不含防腐劑。
有些具體例中，組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑實質上不含血液、或血液產物雜質(例如，血球、血小板、多肽、礦物質、血源性化合物 或化學物質，與類似物)。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑實質上不含血清與血清雜質(例如，血清蛋白質、血清脂質、血清碳水化合物、血清抗原，與類似物)。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑實質上不含病原菌(例如，病毒、寄生蟲或細菌)。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑實質上不含內毒素。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑係無菌。某些具體例中，組成物或醫藥組成物包含雙特異性結合劑與稀釋劑(例如，磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS))。某些具體例中，組成物或醫藥組成物包含雙特異性結合劑與賦形劑(例如，檸檬酸鈉脫水物或聚氧乙烯-山梨醇酐-20單油酸酯(聚山梨酸酯80))。
本文說明之醫藥組成物之組態係依據所採用之療法，呈用於投與個體之任何合適型式及/或用量。例如，供非經腸式投藥(例如，注射或輸注)之醫藥組成物組態可含於油性或水性媒劑中，呈懸浮液、溶液或乳液型式，且其可包含調配劑、賦形劑、添加劑與/或稀釋劑，如：水性或非水性溶劑、共溶劑、懸浮溶液、防腐劑、安定劑與/或分散劑。有些具體例中，適合非經腸式投藥之醫藥組成物可包含一或多種賦形劑。有些具體例中，醫藥組成物經過凍乾形成乾粉型式。有些具體例中，醫藥組成物經過凍乾形成乾粉型式，其適合使用合適之醫藥溶劑(例如，水、生理食鹽水、等滲性緩衝液(例如，PBS)，與類似物)再組成。某些具體例中，凍乾醫藥組成物之再組成型式適合非經腸式投藥(例如，經靜脈內投藥)給哺乳動物。
某些具體例中，醫藥組成物係呈經口投藥之組態，並可調配成錠劑、微錠、迷你錠、微粒、粉劑、粒劑、膠囊(例如，填充微錠、微粒、粉劑、或粒劑之膠囊)、乳液或溶液。呈經口投藥組態之醫藥組成物可能包含合適之包 衣，以延緩或持續釋放活性成份(例如，雙特異性結合劑)，其無限制實施例包括腸溶性包衣，如：脂肪酸、蠟類、蟲膠、塑膠、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、纖維素乙酸酯酞酸酯(CAP)、纖維素乙酸酯琥珀酸酯、羥基丙基甲基纖維素酞酸酯、羥基丙基甲基纖維素乙酸酯琥珀酸酯(羥丙甲纖維素乙酸酯琥珀酸酯)、聚乙烯乙酸酯酞酸酯(PVAP)、甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、纖維素乙酸酯偏苯三酸酯、藻酸鈉、玉米蛋白、植物纖維，及類似物與其組合。
有些具體例中，本文說明之醫藥組成物可呈供局部投藥用之組態，且可包括一或多種結合劑與/或潤滑劑、聚合性二醇類、明膠、可哥脂或其他合適蠟類或脂肪。有些具體例中，本文說明之醫藥組成物係納入包含局部用載劑之局部用調配物中，其通常適合局部投與藥物且包含彼等習此相關技藝者已知之任何合適材料。某些具體例中，醫藥組成物之局部用調配物係調配用於從局部用貼布投與雙特異性結合劑。
某些具體例中，最佳醫藥組成物將由習此相關技藝者依據例如，計畫採用之投藥途徑、傳遞方式與所需劑量決定(參見例如，如上述之Remington’95或Remington 2013)。某些具體例中，此等組成物會影響本發明抗體藥物接合物之物理狀態、安定性、活體內釋放速率及活體內清除速率。醫藥組成物可採用任何合適方式製造，包括例如，採用傳統混合、溶解、造粒、包覆糖衣、細磨、乳化、囊封、包埋或壓錠過程(例如，參見Remington’95或Remington 2013中說明之方法)。
有些具體例中，本文提供一種可用為治療個體之贅瘤之醫藥之組成物或醫藥組成物，其中該組成物或醫藥組成物包含本文說明之雙特異性結合劑(例如，包含抗贅瘤劑之雙特異性結合劑)。有些具體例中，本文提供一種組成 物或醫藥組成物，其包含雙特異性結合劑、或由雙特異性結合劑接合(例如，共價附接)抗贅瘤劑或PBD毒素，供用於治療贅瘤。
有些具體例中，本文說明之組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑(例如，包含抗贅瘤劑之雙特異性結合劑)係用於治療患有或疑似患有贅瘤之個體。有些具體例中，本文說明之組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑(例如，包含抗贅瘤劑之雙特異性結合劑)係投與患有或疑似患有贅瘤之個體。有些具體例中，本文提供一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體之方法。某些具體例中，一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體之方法包括對該個體投與醫療有效量之本文說明之組成物或雙特異性結合劑。某些具體例中，雙特異性結合劑或包含雙特異性結合劑之醫藥組成物係投與個體，其中該雙特異性結合劑係特異性結合於人類syndecan-1之細胞外結構域與/或結合FGFR3(例如，FGFR3、FGFR3b與/或FGFR3c)。
某些具體例中，一種治療個體之方法包括由個體之細胞(例如，一個或多個細胞)與醫療有效量之本文說明之組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑接觸。某些具體例中，一種治療方法包括由個體之細胞(例如，一個或多個細胞)與醫療有效量之特異性結合於人類syndecan-1或其變體之細胞外部份及/或與FGFR3(例如，FGFR3、FGFR3b與/或FGFR3c)之雙特異性結合劑接觸。個體之細胞經常為表現syndecan-1細胞外部份之細胞。個體之細胞可能出現在個體內(例如，活體內)或個體外(例如，活體外或離體)。
可利用本文說明之方法治療之贅瘤之無限制實施例包括癌瘤、肉瘤、神經系統贅瘤(神經系統之贅瘤)、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、間皮瘤、實體或軟組織腫瘤、及繼發性癌症(例如，由原發位點衍生))。癌瘤之無限 制實施例包括包括呼吸系統癌瘤、胃腸系統癌瘤、泌尿生殖系統癌瘤、睪丸癌瘤、攝護腺癌瘤、內分泌系統癌瘤、皮膚之基底細胞癌瘤、未知之原發性癌瘤、膽管癌瘤、乳腺管原位癌(DCIS)、默克細胞癌瘤(Merkel cell carcinoma)、肺癌瘤、胸腺瘤與胸腺癌瘤、身體中線癌瘤、肺小細胞癌瘤、甲狀腺癌瘤、肝臟肝細胞癌瘤、鱗狀細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、乳房癌瘤、上皮癌瘤、腎上腺皮質癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤等等，進一步包括子宮、子宮頸、結腸、胰臟、腎臟、食道、胃與卵巢之癌瘤。肉瘤之無限制實施例包括：尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、淋巴肉瘤、脂肉瘤、骨肉瘤、乳房肉瘤、軟組織肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)、橫紋肌肉瘤、子宮肉瘤、軟骨肉瘤、平滑肌肉瘤、纖維肉瘤等等。神經系統贅瘤之無限制實施例包括膠質瘤、膠質母細胞瘤、腦膜瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤、星細胞瘤、寡樹突細胞瘤等等。淋巴瘤、骨髓瘤、與白血病之無限制實施例包括急性與慢性淋巴母細胞白血病、骨髓母細胞白血病、多發性骨髓瘤、分化不良急性白血病(例如，紅血球母細胞白血病與急性巨核母細胞白血病)、急性前骨髓樣白血病(APML)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)(其包括B-細胞系ALL與T-細胞系ALL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、前淋巴細胞白血病(PLL)、毛細胞白血病(HLL)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia)(WM)、非何傑金氏(non-Hodgkin)淋巴瘤及變體、周邊T-細胞淋巴瘤、成人T-細胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮膚T-細胞淋巴瘤(CTCL)、大粒淋巴細胞白血病(LGF)、何傑金氏症(Hodgkin’s disease)及李特-斯頓柏格症(Reed-Sternberg disease)。軟組織或實體組織腫瘤之無限制實施例包括內臟腫瘤、精原細胞瘤、肝腫瘤，及乳房、肝臟、肺臟、胰臟、子宮、卵巢、睪丸、頭、頸、眼睛、腦、口、咽、聲帶、耳、鼻、食道、胃、腸、結腸、 腎上腺、腎臟、骨、膀胱、尿道、癌瘤、肺臟、肌肉、皮膚、腳、手、與軟組織之其他腫瘤。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或雙特異性結合劑治療之贅瘤係選自：膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、胃癌、肝癌、肝細胞癌、下嚥癌、肺癌、腺癌、卵巢癌與腎癌。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或雙特異性結合劑治療之贅瘤係選自：胰臟癌(例如，胰臟腺癌、外分泌胰臟癌或胰臟神經內分泌癌)、結腸直腸癌(例如，結腸直腸腺癌)、小腸惡性病、膽管癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌症、胃腺癌、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、女性生殖道惡性病、乳房癌瘤、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後腔或腹膜腔肉瘤、攝護腺腺癌、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤或非上皮卵巢癌。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或雙特異性結合劑治療之贅瘤為乳癌，其無限制實施例包括乳腺管原位癌(DCIS)、侵襲性管狀癌瘤(IDC)(例如，乳房之管狀癌瘤、乳房之髓質癌瘤、乳房之黏液性癌瘤、乳房之乳突狀癌瘤、及乳房之篩板型癌瘤)、侵襲性小葉癌瘤(ILC)、發炎性乳癌、原位葉狀癌瘤(LCIS)、男性乳癌、分子亞型乳癌(例如，乳管B型乳癌或激素-受體陽性乳癌、三陰性乳癌、HER2過度表現型乳癌、及類正常型乳癌)、佩吉特乳頭病(Paget’s disease of the nipple)、乳房之葉狀腫瘤、及轉移性乳癌。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或雙特異性結合劑治療之贅瘤為三陰性乳癌。
有些具體例中，本文所說明治療法之效力可一部份藉由贅瘤或贅瘤細胞表現之CD138與/或FGFR3(例如，FGFR3，或其同型)之量來測定或預估。例如，在不受理論限制下，具有表現高度CD138與/或FGFR3之贅瘤或贅瘤細胞之個體對採用本文所說明雙特異性結合劑之療法之反應可能優於患有表現較 少或沒有表現CD138或FGFR3之贅瘤或贅瘤細胞之個體之反應。贅瘤細胞或癌細胞可以採用合適之抗-CD138抗體與合適之免疫分析法(例如，全細胞ELISA、FAC等等)快速分析，以決定CD138之表現程度。同樣地，可以採用合適之抗-FGFR3抗體與合適之免疫分析法快速分析贅瘤細胞或癌細胞所表現之FGFR3。因此有些具體例中，一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體之方法包括投與醫療有效量之本文說明之雙特異性結合劑，其中該贅瘤或其贅瘤細胞係表現可檢測量之CD138與/或FGFR3(例如，FGFR3，或其同型)。某些具體例中，會表現可檢測量之CD138與/或FGFR3之贅瘤為已知或報告指出會表現CD138與/或FGFR3者。某些具體例中，贅瘤係疑似會表示CD138與/或FGFR3(例如，具有類似另一種已知會表現CD138與/或FGFR3之贅瘤細胞之基因型或表型)。有些具體例中，會表現或疑似表現CD138與/或FGFR3之贅瘤為會表現編碼CD138與/或FGFR3或其一部份之RNA轉錄本之贅瘤。有些具體例中，會表現或疑似表現CD138與/或FGFR3之贅瘤為會在其細胞表面上表現CD138與/或FGFR3之贅瘤。具有確定表現CD138與/或FGFR3之癌症之無限制實施例包括腎上腺皮質癌瘤、膀胱泌尿上皮癌瘤、乳房侵襲性癌瘤、子宮頸鱗狀細胞癌瘤、子宮頸內腺癌瘤、膽道癌瘤、結腸腺癌瘤、結腸直腸腺癌瘤、淋巴癌獼漫性大B細胞淋巴瘤、食道癌瘤、多形性膠質母細胞瘤、膠質瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、腎臟嫌色細胞癌、混合腎癌(pan-kidney cohort)(KICH+KIRC+KIR)、腎臟腎亮細胞癌瘤、腎臟腎乳突細胞癌瘤、急性骨髓性白血病、腦低度膠質瘤、肝臟肝細胞癌瘤、肺腺癌瘤、肺鱗狀細胞癌瘤、間皮瘤、卵巢漿液性囊腺癌瘤、胰臟腺癌瘤、嗜鉻細胞瘤與副神經節瘤、攝護腺腺癌瘤、直腸腺癌瘤、肉瘤、皮膚黑色素瘤、胃腺癌 瘤、胃與食道癌瘤、睾丸生殖細胞腫瘤、甲狀腺癌瘤、胸腺瘤、子宮體內膜癌瘤、子宮惡性肉瘤、與葡萄膜黑色素瘤。
有些具體例中，一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體之方法包括投與醫療有效量之本文說明之雙特異性結合劑與另一種抗癌療法之組合，其無限制實施例包括T-細胞活化劑、佐劑、抗癌疫苗、放射治療、免疫療法(例如，抗-HER2或抗-CD20)、化療法等等或其組合。有些具體例中，T-細胞活化劑為會與CD3、OX40、GITR、CD137(41BB)、CD27、HVEM、LAG-3、TIM3、VISTA或BTLA結合之抗體。
任何合適之化療劑均可用於本文說明之方法中。有些具體例中，化療劑包含或其組成為烷化劑、蒽環黴素(anthracycline)、細胞骨架瓦解劑、埃博黴素類(epothilone)(例如，埃博黴素(epothilone)]、組蛋白脫乙醯酶抑制劑(例如，伏立諾他(vorinostat)、羅醚酯肽(romidepsin))、拓撲異構酶I之抑制劑(例如，伊立替康(irinotecan)、托普樂肯(topotecan))、拓撲異構酶II之抑制劑(例如，依託泊苷(etoposide)、託尼泊苷(teniposide)、塔弗帕苷(tafluposidean))、激酶抑制劑、肽抗生素(例如，博來黴素(bleomycin)、放線菌素(actinomycin))、基於鉑之製劑(例如，卡鉑(carboplatin)、順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin))、靶定DNA修復酵素聚-ADP核糖聚合酶-1之化合物(例如，Parp抑制劑)、類視黃素(例如，維A酸(tretinoin)、順式視黃酸(alitretinoin)、貝沙羅汀(bexarotene))、長春花生物鹼與化合物(例如，長春花鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine))、抗代謝物、植物抽出物、植物鹼、硝基脲、激素、核苷或核苷酸類似物，及其組合。烷化抗贅瘤劑之無限制實施例包括六甲蜜胺(Altretamine)(六甲三聚氰胺，HEXALEN®)、白消安(Busulfan)、卡莫司汀 (Carmustine)(BCNU)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、環磷醯胺、達卡巴仁(Dacarbazine)(DTIC)、福莫司汀(Fotemustine)、異環磷醯胺(Ifosfamide)、洛莫司汀(Lomustine)(CCNU)、甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine)、美法侖(Melphalan)、甲基苄肼(Procarbazine)、司莫司汀(semustine)(MeCCNU)、鏈脲佐菌素(Streptozotocin)、替莫唑胺(Temozolomide)、噻替哌(Thiotepa)(三伸乙基硫-磷醯胺)、卡鉑(Carboplatin)、順鉑(Cisplatin)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、單官能基烷化劑、硝基脲、替莫唑胺(temozolomide)等等或其組合。DNA嵌入劑之無限制實施例包括丙烯醛(acrolein)、蒽環黴素(anthracycline)、磷醯胺、放線菌素D(Actinomycin D)、博來黴素(bleomycin)、艾達黴素(idarubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)、依沙蘆星A(elsamicin A)、泛艾黴素(epirubicin)、溴化乙錠(ethidium)、m-AMSA、米托蒽醌(mitoxantrone)、阿黴素(doxorubicin)(阿黴素(Adriamycin、Doxil、Myocet)、羥基柔紅黴素(hydroxydaunorubicin)、羥基道諾黴素(hydroxydaunomycin))、泛艾黴素(Epirubicin)、艾達黴素(Idarubicin)、戊柔比星(Valrubicin)、TAS-103、MLN944(XR5944)、奧巴克拉(Obatoclax)、甲基二(氯乙基)胺(mechlorethamine)、胺甲蝶呤(methotrexate)、6-氫硫基嘌呤、硫鳥嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、5-氮雜胞苷(5-AZC)及5-氮雜胞苷相關化合物、光輝黴素(mithramycin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、羥基脲、卡鉑(carboplatin)、奧利鉑(oxiplatin)、密妥坦(mitotane)、紫杉烷、長春花鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、二溴甘露糖醇、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)等等或其組合。細胞骨架瓦解劑(例如，紫杉烷)之無限制實施例包括太平洋紫杉醇(paclitaxel)、紫杉醇與多西紫杉醇(docetaxel)。激酶抑制劑之無限制實施例包括硼替佐米(bortezomib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、伊馬替尼(imatinib)、 維羅非尼(vemurafenib)、維莫德吉(vismodegib)等等、其類似與化合物。核苷酸類似物之無限制實施例包括阿紮胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、卡培他濱(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、氟尿嘧啶、吉西他濱(gemcitabine)、羥基脲、氫硫基嘌呤、胺甲蝶呤(methotrexate)、硫代鳥嘌呤(tioguanine)(舊稱硫鳥嘌呤)等等、其類似物與化合物。PARP抑制劑之無限制實施例為奧拉帕尼(olaparib)、蘆卡帕尼(rucaparib)、尼拉帕尼(niraparib)、維利帕尼(veliparib)、他拉唑帕尼(talazoparib)等等，其類似物與化合物。
術語「個體」係指哺乳動物。任何合適之哺乳動物均可接受本文說明之方法或組成物治療。哺乳動物之無限制實施例包括人類、非人類靈長類(例如，類人猿、長臂猿、黑猩猩、紅毛猩猩、猴子、獼猴等等)、家庭動物(例如，狗與貓)、農場動物(例如，馬、牛、山羊、綿羊、與豬)、及實驗動物(例如，小鼠、大鼠、兔子、與天竺鼠)。有些具體例中，哺乳動物為人類。哺乳動物可為任何年齡或任何發育階段(例如，成人、青少年、幼兒、嬰兒、或胎內之哺乳動物)。哺乳動物可為雄性或雌性。有些具體例中，有需要之個體為患有或疑似患有贅瘤之個體。
任何適合投與組成物、醫藥組成物或雙特異性結合劑給個體之方法均可採用。根據本文所說明本發明方法所採用投與組成物之正確調配物與途徑可由個別醫事人士依據患者條件選擇。參見例如，Fingl等人1975，「The Pharmacological Basis of Therapeutics」,Ch.1,p.1；其內容已以引用之方式完整併入本文中。任何合適之投藥途徑均可用於投與本文說明之醫藥組成物或雙特異性結合劑。投藥途徑之無限制實施例包括局部表面或局部(例如，皮下、穿皮式或經皮膚(例如，皮膚上或表皮)、投藥至眼睛內或眼睛上、經鼻內、穿透黏膜、 耳內、耳內部(例如，耳鼓後面))、經腸內(例如，透過胃腸道傳遞，例如，經口(例如，呈錠劑、膠囊、粒劑、液體、乳化、口含錠、或其組合)、舌下、利用胃飼管、經直腸、與類似物)、非經腸式投藥(例如，非經腸式，例如，經靜脈內、經動脈內、肌內、腹膜內、皮內、皮下、腔內、顱內、關節內、投至關節腔內、心內(進心臟內)、海綿體內注射、病灶內(進皮膚病灶內)、骨內輸液(進骨髓內)、鞘內(進脊髓管內)、子宮內、陰道內、膀胱內輸液、玻璃體內)、等等或其組合。
有些具體例中，提供本文之組成物給個體。提供給個體之組成物有時候係提供給個體用於自行投藥或由另一個人(例如，非醫事專業人員)投藥給個體。例如，本文說明之組成物提供醫事人員書寫的說明書，其授權給患者接受提供本文說明之組成物或治療法(例如，處方籤)。另一項實施例中，可提供組成物給個體，其中該個體例如，經口、經靜脈內、或利用吸藥器自行投與組成物。
或者，使用根據本發明方法時，可採用局部而非全身方式投與組成物，例如，直接施用至皮膚、黏膜、或所需治療區域，包括使用儲積器或持續釋放調配物。
有些具體例中，包含雙特異性結合劑之醫藥組成物可單獨投與(例如，呈單一活性成份(AI或例如，呈單一活性醫藥成份(API))。其他具體例中，包含雙特異性結合劑之醫藥組成物可與一或多種其他AI/API組合投與，例如，呈兩個分開組成物或呈單一組成物，其中該一或多種其他AI/API係與雙特異性結合劑於醫藥組成物中混合或共同調配。
某些具體例中，雙特異性結合劑係傳遞至細胞(例如，哺乳動物細胞)。雙特異性結合劑可採用任何合適方法傳遞至細胞。某些具體例中，將雙特 異性結合劑送至細胞之傳遞法包括由哺乳動物細胞於活體外或活體內，與包含雙特異性結合劑之組成物，在可以讓雙特異性結合劑與細胞結合之條件下接觸。
醫藥組成物可採用任何合適方式製造，包括：利用傳統混合、溶解、造粒、製作糖衣、磨細、乳化、囊封、包埋、或壓錠過程。
有些具體例中，一種治療個體之贅瘤之方法包括對個體投與醫療有效量之雙特異性結合劑，或醫療有效量之包含雙特異性結合劑之醫藥組成物。「醫療有效量」意指足以得到有效醫療結果時之用量及/或足以預防、終止、阻斷、抑制、緩解、消除、減慢、壓制、殺死、或降低贅瘤之生長、活力、轉移、嚴重性、發作、或症狀時之需要量。因此有些具體例中，有效醫療結果可藉由測定個體中贅瘤或贅瘤細胞在治療前及/或治療後之數量、大小、活力、生長、有絲分裂、或轉移來決定。因此有些具體例中，投與醫療有效量之雙特異性結合劑、或醫療有效量之包含雙特異性結合劑之醫藥組成物給個體，為個體預防、終止、阻斷、抑制、緩解、消除、減慢、壓制、殺死、或降低贅瘤之生長、活力、轉移、嚴重性、發作、或症狀。某些具體例中，投與醫療有效量之雙特異性結合劑、或醫療有效量之包含雙特異性結合劑之醫藥組成物給個體，以誘發有些或全部贅瘤癌細胞死亡、壞死、或凋亡。彼等習此相關技藝者，特別依據本文提供之詳細揭示內容即有能力決定醫療有效量。
有些具體例中，組成物中雙特異性結合劑之量為至少醫療有效量且低到足以使不要之副反應降至最低時之量。雙特異性結合劑之準確量將會隨個體之間，依個體之年齡、體重與一般狀況、待治療病症之嚴重性、及所投與藥物之特定組合而定。因此，不一定總是能在不同個體族群中指明可投與供治療新生瘤病變之雙特異性結合劑之精確醫療有效量。如眾所周知，針對指定患者之明 確劑量照例會隨特定病症與特定疾病變化，但很容易藉由簡單例行過程決定各病例之最適量。因此，用於治療贅瘤病變之雙特異性結合劑之醫療有效量可由習此相關技藝者採用例行實驗決定。
某些具體例中，組成物中雙特異性結合劑之醫療有效量包含劑量約0.01mg/kg(例如，每公斤個體體重)至500mg/kg、0.1mg/kg至500mg/kg、0.1mg/kg至400mg/kg、0.01mg/kg至300mg/kg、0.1mg/kg至300mg/kg、0.1mg/kg至200mg/kg、0.1mg/kg至150mg/kg、0.1mg/kg至100mg/kg、0.1mg/kg至75mg/kg、0.1mg/kg至50mg/kg、0.1mg/kg至25mg/kg、0.1mg/kg至10mg/kg、0.1mg/kg至5mg/kg或0.1mg/kg至1mg/kg。有些態樣中，雙特異性結合劑之量可為約10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.9mg/kg、0.8mg/kg、0.7mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg,或0.1mg/kg。有些具體例中，雙特異性結合劑之醫療有效量在包含劑量約0.1mg/kg至500mg/kg之間、或1mg/kg與約300mg/kg之間。適合各種不同投藥途徑之體積係相關技藝已知者。
有些具體例中，雙特異性結合劑或包含雙特異性結合劑之醫藥組成物係依需要，以合適頻率及/或間隔投藥，以得到有效之醫療結果。有些具體例中，包含雙特異性結合劑之醫藥組成物係每小時、一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、及/或依規律間隔投藥，例如，每天、每隔一天、一週三次、每週、每隔一週、一個月一次及/或單純依需要或專業醫師所建議之頻率或間隔投藥。
套組
有些具體例中，包含雙特異性結合劑用量或劑量之醫藥組成物若需要時可以呈套組、包裝、或配送裝置提供，其可包含一或多個劑量之雙特異性結合劑。有些具體例中，套組或包裝可以例如，一個或多個合適之容器、小瓶或發泡包，及一個或多個合適之配送裝置。有些具體例中，套組或包裝可附有投藥說明書，及/或由管理醫藥之製造、用法或出售之政府機關規定之聲明書，該聲明書反映該藥物型式已由管理當局核准用於人類或獸醫投藥。此等聲明書可以例如，針對處方藥物，標示美國食品藥物檢驗局(U.S.Food and Drug Administration)之核准、或核准之產品插頁。
有些具體例中，套組或包裝中之雙特異性結合劑含量足以治療患者歷時1天至1年、1天至180天、1天至120天、1天至90天、1天至60天、1天至30天、或其間之任一天或任何天數、1-4小時、1-12小時、或1-24小時。
套組可視需要包括產品標示或包裝插頁，其提供組份說明或其中組份於活體外、活體內、或離體之使用說明書。說明書實施例包括診斷方法、治療方法或醫療療程之說明書。有些具體例中，套組包含包裝材料，其係指容納套組組份之物理結構。包裝材料可以維持組份無菌狀態，且可以由此等目的常用之材料製成(例如，紙、瓦楞紙、玻璃、塑膠、箔、安瓿、小瓶、管子等等)。產品標示或插頁包括「印刷品」，例如，紙或卡紙板，或分離或固定在組份、套組或包裝材料(例如，箱子)上，或貼在含有套組組份之安瓿、管子或小瓶上。標示或插頁亦可另外包括電腦可讀式媒體，如：CD-或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁帶、或電子儲存媒體，如：RAM與ROM或此等之混合物，如：磁/光儲存媒體、FLASH媒體、或記憶型卡片。產品標示或插頁可包括說明其中一或多種組份、劑量、活性成份(群)之臨床藥理學，包括作用機轉、藥物動力學(PK)與藥效 學(PD)之資訊。產品標示或插頁可包括說明製造商資訊、批號、製造商位置、日期、適應症之資訊、可利用該套組組份之病變、疾病或症狀之資訊。產品標示或插頁包括指示醫師或個體使用其中一或多種套組組份之方法、治療法或療程之說明書。該說明書可包括劑量、頻率或持續時間，及說明本文所示任何操作方法、治療法或療程之說明書。因此本發明套組可另外包括指示操作本文所說明任何本發明方法與用途之標示或說明書。產品標示或插頁可包括有關可能副作用與/或警告之資訊。
某些具體例中，套組包含一或多個具有已知量syndecan-1與/或FGFR3之對照組。有些具體例中，套組包含表現syndecan-1與或FGFR3之細胞。該套組中之細胞可維持在適當儲存條件下，直到準備使用該等細胞時為止。
有些具體例中，套組為包含雙特異性結合之診斷套組。含在該診斷套組中之雙特異性結合可呈任何合適型式。有些具體例中，診斷劑包含雙特異性結合與可檢測之標記物。某些具體例中，例如，診斷套組包含或其組成為檢測棒，包括執行本發明方法所必要之試劑，及產生例如，比色結果，其可與色卡或標準曲線比較。診斷套組亦可包含供檢測會細胞特異性結合之雙特異性結合劑時必要之組份，例如，二級抗體。
實施例
實施例1-抗-CD138抗體之製法
製造針對人類CD138之單株抗體，其係(i)以高度親和性及特異性進行結合，(ii)展現快速內化，及/或(iii)展現與食蟹獼猴所衍生之CD138之交叉反應性。要產生抗體時，由小鼠(Balb/C小鼠；雌性6-8週齡)接受免疫接種，追加CD138肽1-3(融合物12)或肽4-6(融合物13)之混合物，參見表11。
此等肽之設計在於遠離糖化位點，且所在區域幾乎沒有保留在人類與小鼠之間，但強力保留在人類與獼猴物種之間。小鼠依據免疫時程，採用已與KLH載劑蛋白質接合之指定肽，使用完全弗氏佐劑(Complete Freund’s Adjuvant(CFA))進行初次注射免疫接種，隨後所有追加接種均使用不完全弗氏佐劑進行。採用人類CD138與CD138-Fc結合性ELISA測定免疫小鼠之抗體血清效價，測定結合性。選擇具有高效價之小鼠進行融合。採用最優化方法，由小鼠B細胞與SP2/O骨髓瘤細胞之電融合法，製造融合瘤。
Figure 108135510-A0202-12-0116-49
不同於傳統方法，融合瘤之選殖係於單一步驟中同時進行，其中採用HAT選拔法選拔融合細胞，取單一細胞純系移至含有HT培養基之96孔板中，於限制選拔條件下生長，取上清液篩選抗原結合性。取陽性融合瘤擴增至更大體積，細胞冷凍存放。
於CD138陽性細胞(H929)上之初次融合瘤FACS篩選法
採用螢光啟動細胞分選法(FACS)，使用每孔包含20,000個H929細胞之96孔板，篩選來自融合物12(培養板12-19)之融合瘤上清液。H929細胞為在細胞表面上表現CD138之人類B-淋巴球細胞株。添加融合瘤上清液至H929 細胞中，於4℃下1小時。洗滌細胞後，添加AlexaFluro 647抗小鼠抗體，再洗滌一次，排除未結合之抗體。採用FACS分析細胞，檢測結合性。採用Flowjo軟體分析FACS數據。若上清液中與抗體結合之細胞量高於培養板中平均訊號
Figure 108135510-A0202-12-0117-384
3個標準差，則選擇其等進行FACS確認及進一步分析特徵。此初次FACS篩選來自融合物12中共5013個融合瘤，有134個陽性；此初次篩選總命中率2.7%。來自融合物12分析板16之陽性融合瘤純系樣本示於下表12。兩個代表性陽性融合瘤純系之FACS直方圖示於第2圖。
Figure 108135510-A0202-12-0117-50
融合物12融合瘤之二次FACS篩選
在初次FACS篩選中選拔證實呈陽性結合之融合瘤，並進一步分析特徵。二次篩選時，取融合瘤上清液進行FACS，分析對H929(表現CD138)之陽性結合及對ARH-77(陰性表現CD138)之陰性結合之細胞。陰性細胞經過CSFE 染色，以助於更容易區分陽性與陰性細胞株。再比較上清液中非特異結合性與特異性CD138結合性。代表性二次FACS篩選結果綜合示於表13。
Figure 108135510-A0202-12-0118-51
融合物12融合瘤之二次ELISA篩選法
亦在二次篩選後進行CD138與IgG1同型ELISA，以助於證實結合特異性與IgG型。採用重組體CD138-標誌進行CD138結合性ELISA。ELISA數據顯示，所有FACS-陽性融合瘤亦結合CD138。IgG ELISA判別IgG陽性抗體。進一步試驗中不包括IgM抗體。此時之選拔過程綜合說明示於表14。
Figure 108135510-A0202-12-0118-52
SPR之代表性抗體結合性動力學
從融合瘤上清液中純化鼠類IgG，並由IgG進行SPR(表面電漿共振)，以測定結合動力學。由人類或小鼠CD138 His固定在BioRad Proteon之GLM晶片上，50μg/mL。讓抗體流經已結合之晶片，流速30μL/min，濃度範圍為167nM至10.4nM，以檢測結合動力學。採用兩價分析物擬合法，測定KD。動力學結果示於表15與第3圖。
Figure 108135510-A0202-12-0119-53
抗體表現
分析兩種代表性嵌合抗體之表現，以決定放大規模生產後之效能。取Expi293細胞(250mL)接受主導12P16F6 hIgG1表現之載體(亦稱為「chF6」)或13P30A7 hIgG1表現之載體(亦稱為「chP30a7」)過渡轉染。嵌合抗體12P16F6 hIgG1包括F12P16F6之鼠類重鏈可變區(SEQ ID NO：82)與輕鏈可變區(SEQ ID NO：34)及人類IgG1κ同型之恆定區。嵌合抗體13P30A7 hIgG1包括F13P30A7之鼠類重鏈可變區(SEQ ID NO：83)與輕鏈可變區(SEQ ID NO：35)及人類IgG1κ同型之恆定區。結果綜合示於下表16。亦採用SDS-PAGE及分子大小排阻層析法分析所表現之抗體(未出示數據)。
Figure 108135510-A0202-12-0120-54
代表性抗體之食蟹獼猴交叉反應性
測試12P16F6 hIgG1或13P30A7 hIgG1對食蟹獼猴CD138之交叉反應性。會與來自食蟹獼猴(cyno)之CD138交叉反應之抗體之優點在於可以在進行效力試驗之前，先測試其在此非人類靈長類細胞株中之毒性。簡言之，由主導人類CD138或cyno CD138之細胞表面表現之載體轉染Expi293細胞。由33.3μg/mL開始，依三倍稀釋測試12P16F6 hIgG1與13P30A7 hIgG1對轉染之Expi293細胞之結合性。使用蘇金單抗(Sec)作為陰性對照組，以確保轉染之細胞沒有任何背景結合性。代表性抗體12P16F6 hIgG1與13P30A7 hIgG1顯示對人類與cyno CD138二者之特異結合性(第4圖)。
Figure 108135510-A0202-12-0121-55
實施例1所使用某些試劑與材料之定義
應注意，本文中融合瘤純系之名稱係指融合瘤細胞或由融合瘤細胞產生之抗體，依內文中所使用名稱而定。融合瘤純系名稱經常指融合物(例如，融合物#12或#13，縮寫為F12與F13)，接著為以字母「P」開頭的分析板編號，及分析孔編號。例如，融合瘤純系F12P16F6(本文亦稱為12P16F6或P16F6)，係指抗體得自融合物12分析板16與分析孔F6之融合瘤。mBT-062為IgG1，CD138結合對照組抗體。
實施例2-人源化
發展一種策略來設計及創造本文所說明人源化型之鼠類抗-CD138(抗-syndecan-1)抗體，其中人源化型抗體保留母株單株抗體之性質。本文提供嵌合單株抗-CD138抗體之人源化實施例，稱為chF6，其包括人類IgG1/κ同型之人類恆定區與F12P16F6之小鼠可變區。
本文所產生人源化型chF6經常成為對抗母株chF6嵌合抗體之標準物。若適當時亦使用其他陽性與陰性對照組。
平行採用五種人源化策略，結果產生三種人源化F12P16F6輕鏈序列與四種人源化F12P16F6重鏈序列。某些具體例中，該等方法涉及移植鼠類互補決定區(CDR)至人類框架與恆定區上。所得三種人源化輕鏈與四種人源化重鏈彼此組合表現，及純化，造成共12種人源化抗-CD138單株抗體。分析人源化抗體之表現/純化型態、生物物理性質、與CD138肽抗原之結合、與天然CD138之結合、及特異性。亦分析代表性人源化抗體之其他生物物理性質。
方法
chP16F6之表現與純化
由主導嵌合抗體chP16F6表現之載體使用EXPIFECTAMINETM 293轉染套組，以250ml之體積轉染至Expi293細胞中。上清液採用依賴pH變化之蛋白質A純化法純化。嵌合抗體係採用HiTrap MabSelect SuRe 5ml純化。純化後，抗體利用Zeba旋轉管柱，使用緩衝液交換至1x DPBS中。chP16F6依2.21mg/mL之回收量為7.1mg。
F12P16F6之人源化
進行重鏈與輕鏈可變結構域之人源化所採用之方法係選自：(i)CDR移植(稱為cdr)，其係依據Jones等人(1986)「Replacing the complementarity determining regions in a human antibody with those from a mouse」Nature 321：522-525；及Verhoeyen等人(1988)「Reshaping human antibodies：grafting an anti-lysozyme activity」Science 239：1534-1536進行，其中由依據Kabat等人(1991)「Sequences of Proteins of Immunological Interest」第5版US Department of Health and Human Services,Public Health Service,National Institutes of Health(NIH公告案號91-3242)定義之CDR移植至適當人類骨架上，同時保留關鍵之框架殘基；(ii)縮短CDR(abbreviated CDR)移植法(稱為abb)，其係依據Padlan等人(1995)「Identification of specificity-determining residues in antibodies」FASEB J 9：133-139進行，其係將縮短之CDR(限定輕鏈中殘基27D-34、50-55、與89-96，及重鏈中31-35B、50-58、與95-101)移植在適當人類骨架上，同時保留重要之框架殘基；(iii)SDR-轉移(稱為sdr)，其係依據Padlan等人(1995)「Identification of specificity determining residues in antibodies」FASEB J 9：133-139進行，其中由可能涉及抗原結合之殘基移植至適當人類序列中，同時保留關鍵之框架殘基；(iv)科學怪人拼裝法(Frankenstein approach)(稱為fra)，其係依據Wu與Kabat(1992)「Possible use of similar framework region amino acid sequences between human and mouse immunoglobulins for humanizing mouse antibodies」,Mol.Immunol.29：1141-1146進行，其中由CDR移植在由來自適當人類抗體之個別框架區組成之人類骨架上，同時保留關鍵框架殘基；及(v)鑲嵌法(Veneering)(稱為ven)，其係依據Padlan(1991)「A possible procedure for reducing the immunogenicity of antibody variable domains while preserving their ligand-binding properties」Mol.Immunol.28：489-498進行，其中由曝露在非人類抗體之殘基(若已知其結構)或在同源分子中之殘基(若未知其結構)改變成來自適當人類抗體之對應殘基，同時保留CDR 與關鍵框架殘基。所有已說明之方法中，使用「適當人類抗體」來代表最接近之人類序列(可得自GenBank)。術語「關鍵框架殘基」係用於代表被認為維持三維立體結構所必要之殘基(由PDB中相關高解析X-光結構分析測得)。有時候，進行第二輪人源化「修復」，以改善抗體之SEC型態。第二輪所產生之人源化抗體係以代號rep或repair表示。所得人源化重鏈與輕鏈可變區之胺基酸序列示於第10圖A與10B。
人源化P16F6修復構築體之表現與純化
由四種人源化重鏈與3種輕鏈配對，產生12種不同抗體(表18)。由這12種人源化P16F6抗體於Expi293細胞中，使用EXPIFECTAMINETM 293轉染套組表現。所有構築體之轉染體積為125ml，但F6 cks-rep除外(需要進一步試驗)及F6 f2ka-rep因蛋白質表現程度低而使用375ml。取上清液通過0.22μm濾器過濾，使用蛋白酶抑制劑處理。選出在交換緩衝液後可提供之表現程度>5mg/L及有能力濃縮成高於
Figure 108135510-A0202-12-0124-383
1mg/mL之抗體進一步分析。
Figure 108135510-A0202-12-0125-56
抗體係利用依賴pH變化之蛋白質A純化法(HiTrap MabSelect SuRe 5mL)純化。純化後，抗體使用zeba旋轉管柱，經過緩衝液交換至1x DPBS中。由分子大小排阻層析法(SEC)分析測得人源化抗體之間之不同回收率與相對安定性(未出示SEC型態)。表19綜合說明SEC所測定回收率、濃度與單體百分比。11種代表性人源化抗體之SDS-PAGE分析法示於第6圖。該命名法有時候呈hF6 xky-rep型式，其中h代表人源化，F6代表衍生自F12P16F6，x代表用於產生人源化重鏈序列之第一製程之第一個字母(例如，x可為a=abb，s=sdr，f=fra， 或c=cdr)，k代表κ輕鏈，及y代表用於產生人源化輕鏈序列之第一製程之第一個字母(a=abb，s=sdr，f=fra，c=cdr)。術語「rep」代表「修復」，表示至少進行第二輪人源化，通常使用不同方法進行。
Figure 108135510-A0202-12-0126-57
FACS測定人源化P16F6修復構築體之CD138結合性
在9種代表性人源化抗-CD138抗體上，採用FACS分析對人類CD138之細胞表面結合性(第7圖)。採用蘇金單抗作為陰性對照組。採用兩種表現中等程度CD138之細胞株：多發性骨髓瘤細胞株KMS-11與膀胱癌細胞株RT112/84，測試結合性。過去的實驗中，12P16F6 hIgG1在RT-122/84細胞中顯 示之EC50為約9nM，及在KMS-11細胞中顯示為~3nM。採用四種擬合曲線計算EC50(表20)。亦針對ARH-77細胞(其係CD138陰性淋巴母細胞)測試構築體。NB代表沒有觀察到特異結合性。
Figure 108135510-A0202-12-0127-58
人源化P16F6修復構築體之CD138結合性ELISA
由9種代表性人源化抗體進行CD138結合性ELISA，以測定與用於免疫接種之一部份線性CD138肽之結合性(第7圖)。在分析板上塗佈hCD138肽(AGEGPKEGEAVVLP；SEQ ID NO：94)與陰性對照組肽(QAAVTSHPHGGMQPGLHETSA；SEQ ID NO：124)，或不會與F12P16F6結合之小鼠CD138肽。已塗佈之分析板與各種不同稀釋度之各9種代表性抗體培養 一夜，並使用山羊抗-人類IgG(H+L)-HRP檢測。採用四參數擬合曲線決定EC50(表21)。亦進行ELISA來檢測對塗佈人類CD138-Fc蛋白質之分析板之結合性(表21)。分析與結果均類似。
Figure 108135510-A0202-12-0128-59
所選擇試驗結果之綜合說明
表22出示13種代表性人源化抗-CD138單株抗體之分析結果綜合說明。
Figure 108135510-A0202-12-0129-60
實施例3-晶體結構之測定
在1.95Å下解析人類syndecan-1肽在與人源化抗-CD138抗體Fab片段所形成複合物中之X-射線晶體結構。該結構在每個不對稱單位各包括syndecan-1肽與Fab之一個複本(第8圖)。
結構說明
人源化抗體Fab包含人源化重鏈可變區(SEQ ID NO：90)與人源化輕鏈可變區(SEQ ID NO：41)。CDR正則結構係依據PyIgClassify資料庫分析。重鏈CDR分類如下：H1-13-1(CDR-長度叢集)、H2-10-1與H3-6-1。輕鏈CDR分類如下：L1-16-1、L2-8-1與L3-9-cis7-1。syndecan-1肽會與單一Fab結合，所形成之複合物包埋了540Å2之syndecan-1肽與Fab中溶劑可觸及之表面區域(A與H鏈313.6Å2；A與L鏈226.4Å2)。
來自98-108之所有可見syndecan-1肽殘基均參與直接接觸Fab(第8圖)。涉及介面之特異性Fab殘基為來自H鏈之31-33、35、47、50、52、58、94-96與101-102及來自L鏈之27-28、32、34、46、49-50、89-94與96。此表示來自CDR H1之四個殘基，與來自CDR H2之三個殘基及來自CDR H3之五個殘基一起參與介面。此外，來自CDR L1之四個殘基、來自CDR L2之兩個殘基、及來自CDR L3之七個殘基參與介面。
取一份1mL之Fab(5.88mg/mL，約125μM)與250μM syndcean-1肽(AGEGPKEGEAVVLP；SEQ ID NO：94)混合，於4℃下培養2小時。複合物於已先經過包含20mM Tris pH 7.5與150mM NaCl之緩衝液平衡之S200分子大小排阻管柱離析。收集波峰溶出液，濃縮，以便進行結晶。由Bradford分析法測得之最終蛋白質濃度為3mg/mL。
採用微量長晶分注器(mosquito robot)(TTP Labtech)，於96孔格式中，採用蒸氣擴散之懸滴法，篩選約400種結晶條件。於20℃下，在兩種條件下觀察晶體生長：2.1M DL-蘋果酸pH 7.0，與60% Tacsimate pH 7.0。進一步在24孔格式中優化結晶過程。
晶體冷卻與數據收集
所說明之晶體係於24孔分析板中，採用蒸氣擴散之懸滴法，使用包含1.7M DL-蘋果酸pH 7.0之沉澱溶液生長。自製X-光繞射篩選顯示，可以藉由預先浸泡在包含3.0M DL-蘋果酸pH 7.0之溶液中24小時，來改良解析度。晶體之低溫冷卻法係在一個迴路中直接從浸泡滴液中捕捉，並陡降至液態氮中。在ESRF光束ID30A-1下收集同步加速數據組。
結構解析與精算
在MOSFLM(CCP4)與AIMLESS(CCP4)中處理之數據顯示，最可能之空間群為P212121，單位晶胞尺寸a=60.6Å，b=132.9Å，及c=51.2Å，總晶胞體積為411706.34Å。計算馬修係數(Matthews coefficient)(2.14Å3/Da，及溶劑含量為42.7%)顯示，最可能為每個不對稱單位有一個完整Fab-syndecan-1複合物。用於分子置換(MR)之模式係由BLAST搜尋針對PDB之各組份(Fab重鏈與輕鏈)之序列來選擇。具有最高序列一致性之模式為3sqo(Fab重鏈)與4ojf(Fab輕鏈)。寄存在PDB中之大量Fab晶體結構已顯示存在於可變與恆定結構域之間之彎肘角度(elbow angles)有很大變異。此彎肘角度之變異會造成兩個原本高度同源之Fab片段之整體三級結構出現顯著差異，進而造成MR失敗。因此，排除重鏈與輕鏈之可變與恆定結構域之間之鉸鍊區，以產生四個分開之MR搜尋集成(search ensembles)(VH、VL、CH與CL)。在COOT中目視檢測後，修整來自重鏈與輕鏈可變結構域之CDR之胺基酸殘基，以防止任何可能亦造成MR失敗之衝突。需要輸入所有四個搜尋集成(search ensembles)(VH、VL、CH與CL)，建立完整Fab，以採用PHASER藉由MR準確定位(McCoy等人，2007)(CCP4)。MR輸出模式提供採用REFMAC5(CCP4)之20次循環凍膠體精算。採用 CHAINSAW(CCP4)，讓蛋白質序列突變以匹配Fab之蛋白質序列。透過模式建構與精算之連續循環逐步改良模式，直到可在電子密度圖譜上看到所有指定Fab區為止。重鏈與輕鏈胺基酸再依據Kabat抗體編號規則重新編號。可以清楚看出對應於syndecan-1肽之電子密度。在COOT中，手動添加syndecan-1胺基酸殘基，並採用正確編號。在COOT中，採用水置換選項，添加水分子，採用REFMAC5(CCP4)精算整個模式。最終Fab模式包含重鏈殘基1-216(H鏈)與輕鏈殘基1-212(L鏈)，任一條鏈均不含破裂點。最終syndecan-1模式包含殘基98-108(A鏈)。最終模式亦包含205個水分子。最終Rwork=21.2%，Rfree=26.1%。
Figure 108135510-A0202-12-0133-61
Figure 108135510-A0202-12-0134-62
實施例4-FGFR3 Fynomer製法
人類Fyn激酶之SH3結構域已成功用為骨架，來建構可依高度親和性及特異性來結合FGFR3標靶蛋白質之Fynomer多肽。採用包含超過8.5 x 1010個別Fynomer純系之專有噬菌體展示集合庫來選拔不同重組體FGFR3抗原。採用不同選拔及篩選策略。其中一種策略係使用來自人類與/或猴子(例如，食蟹獼猴，Macacafascicularis)之重組體FGFR3同型3B與FGFR3同型3C來選拔會表現可特異性結合至少兩種FGFR3剪接同型(例如，3B與3C)之Fynomer之噬菌體純系。使用不同FGFR3抗原與/或FGFR3抗原之組合進行數回合之選 拔。Fynomer選拔過程之目的之一為單離具有(i)對FGFR3b與FGFR3c二者有選擇結合性，(ii)對人類及猴子，及可能對小鼠有交叉反應性，及(iii)有能力內化已結合之受體之Fynomer。此代表性實施例說明選拔此等Fynomer之過程。
吾等已使用重組體人類FGFR3b-Fc與FGFR3c-Fc作為標靶，成功選拔及單離數個來自Fyn SH3之結合性蛋白質家族，其等可以結合人類FGFR3之兩種剪接變體(FGFR3b及FGFR3c)。吾等繼續利用最可靠之候選物家族進一步研究。
值得注意的是，在選拔過程中，富集了Fyn SH3所衍生之帶有RT-環序列「EVYGPTPM」(SEQ ID NO：100)之多肽(稱為FF2L4C3(SEQ ID NO：101))，且在29種所測試之抗-FGFR3 Fynomer中顯示極穩健之內化性質(參見第10圖)。更詳言之，從進一步試驗中排除5個其他序列家族。屬於最穩健序列家族之Fynomer顯示最佳親和性及內化性質。
為了得到具有較高親和性及改良之內化性質之Fyn SH3所衍生之FGFR3結合劑，使用FF2L4C3(SEQ ID NO：101)作為親和性突變之模板。RT-環序列「EVYGPTP」(SEQ ID NO：131)保持不變，並與隨機化n-src-環組庫(其中在SEQ ID NO：99之位置(X1)至(X4)中引進一組4至6個隨機化胺基酸殘基)組合。產生親和性突變集合庫之過程基本上與使用隨機化n-src-環選殖原始集合庫([25]中稱為「集合庫0」)時相同。
經過原始及親和性突變選拔後，採用溶胞液ELISA，篩選富集Fyn SH3所衍生多肽對FGFR3之結合性。選殖編碼Fyn SH3所衍生結合性蛋白質之DNA進入細菌表現載體pQE12(Qiagen)，因此所得構築體帶有C-末端myc-六組胺酸標記物，如Grabulovski等人[26]所說明。於96孔格式中，由大腸桿菌(E. coli)細菌之細胞溶質表現該等多肽，每個分析孔製備200μL澄清溶胞液，如Bertschinger等人[27]所說明。簡言之，從洋菜分析板中挑選已轉化之細菌純系，於圓底96孔分析板(Nunc，目錄編號163320)中，於包含100μg/mL胺苄青黴素(ampicillin)與0.1%(w/v)葡萄糖之200μL 2xYT培養基中生長。於37℃及在200r.p.m.旋轉振盪下生長3h，藉由添加1mM IPTG(Applichem,Germany)來誘發蛋白質表現。在旋轉振盪器(200r.p.m.,30℃)中表現蛋白質一夜。隨後，96孔分析板於1800g下離心10min，棄置上清液。取細菌集結塊使用BugBuster®加Benzonase®(Millipore 70750-3)溶胞，溶胞物隨後藉由在1800 x g下離心10分鐘而澄清化。取60μL溶胞物與170μL PBS混合，通過0.45μm Multiscreen濾板(Millipore MSHVN4510)過濾，以排除任何殘留之細菌碎片。
使用單株細菌溶胞物進行ELISA。進行ELISA時，在Maxisorp分析板上塗佈5μg/mL huFGFR3b-Fc、5μg/mL huFGFR3c-Fc或5μg/mL聚IgG一夜，並使用2% MPBS阻斷至少1h。包含可溶性Eynomer(帶有C-末端myc-與六組胺酸肽標記物)之澄清溶胞物係含在包含鼠類單株抗-myc標記物抗體，純系9E10(Roche Applied Science 11 667 203 001)之2% MPBS中，加至maxisorp分析板中。經由9E10，利用抗小鼠IgG-辣根過氧化酶接合物(Sigma-Aldrich A2554)檢測已結合之Fynomer。過氧化酶活性之檢測法係添加BM藍POD受質(Roche)，及添加1M H2SO4中止反應。
採用DNA定序法驗證特異性結合劑之DNA序列。
結果
會特異性結合於FGFR3b與FGFR3c之代表性ELISA陽性Fyn SH3所衍生之多肽之胺基酸序列示於SEQ ID NO：101、103、105、107、109與 111。Fyn-SH3所衍生多肽SEQ ID NO：103、105、107與109係在FF2L4C3(SEQ ID NO：101)之親和性突變後，從所得之大量集合分子中選拔之結合劑，且因其具有改良之親和性與內化性質，而出示在本文中(如本文所示)。
得到超過80種衍生自SEQ ID NO：101之Fynomer，並分析特徵，各個均證實對FGFR3b及FGFR3c之特異結合性，並證實所需之生物物理性質、親和性與內化性質。具有胺基酸序列SEQ ID NO：103、105、107、109、與111之Fynomer為此等結合劑之代表。
實施例5：本發明之Fyn SH3所衍生多肽以高親和性結合人類FGFR3b及FGFR3c
本實施例利用表面電漿共振法及流式細胞計實驗，出示Fyn SH3所衍生之較佳FGFR3結合性多肽之特徵分析。
方法
a)BIAcore之親和性測定法
採用BIAcore T200儀器測定親和性。使用胺偶聯套組(GE Healthcare BR100633)，在CM5系列S晶片(GE Healthcare BR-1005-30)上的一排格子上塗佈抗-myc抗體9E10(Roche 11 667 203 001；塗佈密度範圍在6000與8000RU之間)。
在9E10表面上捕捉親本Fynomer FF2L4C3(SEQ ID NO：101)(濃度500nM)及SEQ ID NO：103、105、107、109及111之Fynomer(濃度100nM)，隨後注射不同濃度之huFGFR3b-Fc、huFGFR3c-Fc或cynoFGFR3c-Fc(0nM、3.9nM、7.8nM、15.6nM、31.25nM、62.5nM、125nM、250nM與500nM，供測定親本Fynomer FF2L4C3；0nM、0.046nM、0.14nM、0.41nM、1.2nM、3.7 nM、11.1nM、33.3nM與100nM，供測定SEQ ID NO：103、105、107、109與111之Fynomer)。記錄感測譜，並在BIAevaluation 2.1軟體中使用1.1 Langmuir交互作用模式，決定表觀動力學常數。
b)採用流式細胞計測定親和性
採用流式細胞計，使用KMS-11細胞(JCRB1179)作為FGFR3-陽性細胞，及使用N87(ATCC，CRL-5822)作為FGFR3-陰性對照細胞株，分析Fynomer對細胞上huFGFR3之結合性。KMS-11與N87細胞二者均維持在RPMI1640培養基(Invitrogen 52400-25)中，所有培養基均補充25U/mL青黴素、25μg/mL鏈黴素及10% FCS。從T150燒瓶中收集半附著之KMS-11細胞時，移出上清液至50mL falcon離心管(falcon tube)，使用10ml PBS洗滌細胞，亦加至falcon離心管中。在燒瓶中添加2ml細胞剝離劑(Accutase)(Sigma A6964)，於37℃下培養10min。添加10ml培養基滅活細胞剝離劑，加至falcon離心管中，再離心一次(250 x g,5min)，使細胞集結成塊。細胞再懸浮於FACS緩衝液(PBS+1% FCS+0.2%疊氮化鈉)中，至細胞濃度為1 x 106個細胞/mL，在流式細胞計之96孔圓底分析板(Nunc 163320)中，每個分析孔使用100μL(1 x 105個細胞/孔)，進行染色。檢測附著之N87細胞時，棄置上清液與洗液，僅收集及製備被細胞剝離劑(Accutase)剝離之細胞。
Fynomer與小鼠抗-myc抗體(純系9E10；Roche 11667149001)共同培養，先與標記myc之Fynomer交鏈後，再測定細胞結合性。取Fynomer稀釋至1μM，與667nM 9E10抗-myc抗體(莫耳比3：2)於FACS緩衝液中，於冰上共同培養約10分鐘。
此混合物經過1：4連續稀釋至Fynomer濃度為0.06nM(共有8種濃度)。對照組僅包括二級抗體9E10(沒有Fynomer；667nM 9E10)、僅包括細胞(僅FACS緩衝液)、及抗-FGFR3抗體(R&D systems；目錄編號MAB766)，濃度為10nM。細胞於96孔分析板中離心(250 x g，5min)，並使用上述樣本再懸浮，然後於冰上培養1hr。分析板離心，及洗滌(PBS+0.2%疊氮化鈉)，然後再離心一次。隨後添加50μL二級抗體抗-mIgG Alexa488(Life Technologies A21202)至細胞中，濃度為4μg/mL，之後於黑暗中，於冰上培養45min。分析板離心，使用PBS+0.2%疊氮化鈉洗滌二次後，再懸浮於FACS緩衝液中，進行FACS分析法(Millipore Guava easyCyte 8HT)。
採用Prism 6進行FACS數據分析。數據經過換算(X=logX)，使用非線性擬合法分析，log(促效劑)相對於效應-可變斜率(4個參數)。
結果
a)採用BIAcore測定親和性
於BIAcore晶片上進行實時交互作用分析法分析結合性質，出示下列所選定FGFR3結合性多肽之解離常數(KD)：
Figure 108135510-A0202-12-0140-63
考量到在僅經過一回合親和性突變後所得到低於奈米莫耳濃度值，測定Fyn SH3所衍生之多肽(SEQ ID NO：101、103、105、107、109與111)對FGFR3b及FGFR3c之結合性時，竟然具有驚人之高度表觀親和性(表24)。此外，此等數值證實Fyn SH3所衍生之多肽(SEQ ID NO：101、103、105、107、109與111)對人類同型FGFR3(FGFR3b與FGFR3c)及對獼猴FGFR3c(未測定對獼猴FGFR3b之結合性)具有類似之結合性質。
b)採用流式細胞計測定親和性
採用流式細胞計，使用FGFR3-陽性KMS-11細胞與FGFR3-陰性N87細胞作為陰性對照組，分析結合性質。下列所選定FGFR3結合性多肽所測定之EC50值示於表25與第11圖。
Figure 108135510-A0202-12-0141-64
於表現FGFR3之細胞株上測定之EC50值(低的奈米莫耳濃度範圍(表25))(第11圖A，KMS-11)證實採用表面電漿共振法測得之高表觀親和性(表24)，並證實在天然細胞表面背景下會與FGFR3結合。所有Fyn SH3所衍生之多肽(SEQ ID NO：101、103、105、107、109及111)均會與FGFR3結合，不會對不表現FGFR3之細胞株出現非特異結合性(第11圖B)。
實施例6：對FGFR3具有特異性之本發明Fyn SH3所衍生多肽不會干擾配體結合性
較佳係若可與FGFR3b與FGFR3c兩種同型結合之Fyn SH3所衍生之多肽不會干擾配體(例如，FGF1)結合性，因為配體結合位點位在接近形成FGFR3b或FGFR3c之剪接位點。
為了證實Fyn SH3所衍生之多肽在FGFR3之其中一種配體存在下仍有能力與FGFR3結合，設計一個BIAcore實驗，在FGF1(纖維母細胞生長 因子1，係FGFR3之主要配體之一)之存在及不存在下，測定Fynomer對FGFR3之親和性。
類似用於測定親和性之方法(如實施例5之說明)，在9E10表面上捕捉濃度100nM之Fynomer(FF2L4C3-SEQ ID NO：101除外，其使用濃度為500nM)，然後在200nM FGF1(R&D systems 232-FA-025/CF)之存在或不存在下，注射不同濃度之huFGFR3c-Fc(0nM、11nM、33nM、100nM)。記錄感測譜，並使用BIAevaluation 2.1軟體，計算表觀動力常數。
結果
不論溶液中是否有200nM FGF1存在或不存在下，Fyn SH3所衍生多肽對huFGFR3c之結合性未改變，表示Fynomer對FGFR3之結合性不會干擾配體結合性。
Figure 108135510-A0202-12-0142-65
儘管如此，由於分析變異性，沒有FGF1存在下之KDapp值些微不同於實施例2所示實驗所得之數值(表24)，此實驗顯示，即使配體(此例中指 FGF1)與配體結合位點結合，Fyn SH3所衍生多肽仍可與FGFR3結合。由此可得到結論，與本文所說明Fyn SH3所衍生多肽結合之抗原表位位在FGFR3恆定區中。
實施例7：與FGFR3結構域D1-D2結合之本發明Fyn SH3所衍生多肽
採用ELISA測試與FGFR3結合之Fyn-SH3所衍生多肽之特異性。
在分析板(Maxisorp分析板；Nunc 439454)上塗佈不同抗原：huFGFR3b-Fc、huFGFR3c-Fc、cyFGFR3c-Fc、muFGFR3c-His、huD1-Fc、huD2-Fc、huD1-D2-Fc。
在分析板上塗佈100μL抗原(5μg/mL(0.5μg/孔))，於4℃下培養一夜。使用3x PBS洗滌分析孔後，使用200μL 4% MPBS，於RT下阻斷1hr。再次洗滌分析孔，添加20μL 10% MPBS(包含15μg/mL 9E10)後，添加80μl Fynomer(250nM(Fynomer最終濃度200nM))。分析孔於RT下培養45min後，洗滌及添加100μL抗小鼠IgG-HRP(Sigma A2554)(於2% MPBS中稀釋1：1000)。分析孔於RT下培養30min後，依序使用3x 0.1% Tween-20之PBS溶液洗滌，然後使用3x PBS洗滌。在各分析孔中添加100μL BM POD Blue受質(Roche 11 484 281 001)後，添加50μL 1M H2SO4中止反應。採用Tecan M1000儀器記錄450nm-650nm吸光度。
結果
如第12A-F圖所示，Fyn SH3所衍生多肽均會與獼猴及鼠類FGFR3c交叉反應。值得注意的是。當結構域D1與D2進行物理性連接時，所有結合劑均僅特異性針對存在之抗原表位(參見第12 A-F圖bar huFGFR3-D1D2)， 事實上，若在ELISA分析板上固定單一結構域D1或D2(hFGFR3-D1或huFGFR3-D2)時，沒有觀察到結合性。
實施例8：本發明Fyn SH3所衍生多肽造成FGFR3有效內化
內化作用係本文所說明Fyn SH3所衍生多肽之中心特徵，其提供利用此等結合劑在細胞內傳送毒性負載藥物及/或融合蛋白質(如：抗體)的機會。
為了分析會與FGFR3結合之Fyn SH3所衍生多肽在與標靶結合時內化的能力，依據細胞毒性劑之細胞內傳送法，建立內化分析法。
該分析法測定與MMAF(單甲基微管抑制素F)-接合9E10交鏈之抗-FGFR3 Fynomer對KMS-11細胞之細胞毒性效應。MMAF為一種抗有絲分裂劑(阻斷微管蛋白聚合)，且僅在內化至細胞中時活化。因此，此分析法代表Fynomer如何促使MMAF內化。取50μL KMS-11細胞(2 x 105個細胞/mL)接種至96孔平底分析板(Corning Costar 3610)中，達成每孔10,000個細胞。細胞培養4小時，讓細胞附著(37℃，5% CO2)。Fynomer與9E10-MMAF依3：1比例混合。於RPMI培養基中製備4x Fynomer母液(4μM)與4x 9E10-MMAF母液(1.33μM)(參見第5.4.1節)，並依1：1混合(40μl+40μL)。此混合物再經過連續稀釋1：3，產生一個濃度範圍1000nM-50pM。添加50μL樣本至50μL細胞中(如上述接種之細胞)，培養5天(37℃，5% CO2)。包括適當對照組(野生型Fynomer FynSH3、不含Fynomer之MMAF-9E10、及未添加任何試劑之細胞)。所有樣本均製備二重覆。5天後，添加100μL Cell titer glo(Promega G7573)至各孔中，於黑暗中溫和振盪培養10min。細胞活力之讀出值係採用Tecan M1000儀器測定發光度。使用Prism 6進行分析。數據經過換算(X=logX)，使用非線性擬合法分析，log(抑制劑)相對於效應一可變斜率(4個參數)。
結果
本文說明之所有Fyn SH3所衍生FGFR3結合性多肽，在所有3項實驗中，均比僅經過標記MMAF之二級抗體(9E10，第13A圖)處理或經過野生型Fynomer FynSH3與標記MMAF之9E10之組合處理之細胞顯示提高之細胞毒性(例如，內化)(第13A-C圖，以FynSH3表示)，其僅出示在最高試驗濃度下之細胞毒性，可能因為MMAF本身毒性。第13圖出示不同實驗所得之細胞毒性型態，且表27出示不同Fyn SH3所衍生FGFR3結合性多肽得到之EC50。
Figure 108135510-A0202-12-0145-66
第13圖與表27所示數據顯示提高之親和性亦造成更有效之內化。
實施例9：另一種顯示優異結合性與內化性質且衍生自不同家族之Fyn-SH3所衍生多肽
除了由SEQ ID NO：99衍生之序列家族以外，吾等亦判別另一種Fynomer，FF40L54A5(GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ；SEQ ID NO：116)，其驚人地亦顯示優異結合性與內化性質，並與SEQ ID NO：99衍生之Fynomer有共通的可製造性及交叉反應性質(參見表28)。未曾期待Fynomer FF40L54A5會有優異之內化性質，因為其序列衍生自內化性質極差之Fynomer。
表28綜合說明Fynomer FF40L54A5之性質。
Figure 108135510-A0202-12-0146-67
Figure 108135510-A0202-12-0146-68
Figure 108135510-A0202-12-0147-69
實施例10-Fynomer-抗體雙特異性結合劑(Fynomab)
下文提供製造包含一種FGFR3結合性Fynomer具體例與一種抗-CD138單株抗體具體例之雙特異性結合劑之非限制性實施例。本文所揭示任何Fynomer具體例均可附接本文所揭示任何抗-CD138抗體或其結合部份具體例，產生可特異性結合於FGFR3及CD138之雙特異性結合劑。本實施例所使用FGFR3結合性Fynomer稱為FF48L66G7(「G7」，(SEQ ID NO：107))，其係附接稱為hF6之人源化抗-CD138單株抗體。hF6抗體為人源化IgG1/κ抗體，其包含重鏈可變區SEQ ID NO：93與輕鏈可變區SEQ ID NO：44。G7 Fynomer特異性結合小鼠與人類FGFR3二者。G7 Fynomer亦特異性結合於FGFR3b與FGFR3c二者。G7 Fynomer係利用重組技術，利用連接子GGGGSGGGGSGGGGS共價附接在hF6單株抗體之四個不同位置上。該等位置包括重鏈或輕鏈N-末端(以HN與LN表示)，及重鏈或輕鏈C-末端(以HC與LC表示)(例如，參見第14圖)。簡言之，為了要表現包含與重鏈N-末端融合之G7之hF6，產生之核酸構築體包含主導位在編碼該連接子之序列5’且在讀碼框內之G7表現之編碼區及主導hF6 重鏈表現之編碼區。hF6-HN-G7構築體隨後與主導hF6輕鏈表現之核酸構築體共同轉染至CHO細胞中。從細胞培養物上清液中單離包含IgG1/κ同型之全長度hF6抗體及G7 Fynomer(hF6-HN-G7)之所得雙特異性結合劑及純化。
同樣地，要表現包含與重鏈C-末端融合之G7之hF6時，產生之核酸構築體包含主導位在編碼該連接子之序列5’且在讀碼框內之hF6重鏈表現之編碼區及主導G7表現之編碼區。要表現包含與輕鏈N-末端融合之G7之hF6時，產生之核酸構築體包含主導位在編碼該連接子之序列5’且在讀碼框內之G7表現之編碼區及主導hF6輕鏈表現之編碼區。要表現包含與輕鏈C-末端融合之G7之hF6時，產生之核酸構築體包含主導位在編碼該連接子之序列5’且在讀碼框內之hF6輕鏈表現之編碼區及主導G7表現之編碼區。所指定之構築體隨後再與主導hF6對應重鏈或輕鏈表現之核酸構築體共同轉染至CHO細胞中。從細胞培養物上清液中單離包含IgG1/κ同型之全長度hF6抗體及G7 Fynomer(亦即hF6-HC-G7、hF6-LC-G7、與hF6-LN-G7)之所得雙特異性結合劑及純化。採用ELISA分析每一種所得之雙特異性結合劑對CD138及FGFR3之結合性，其等結果示於表29。
Figure 108135510-A0202-12-0149-70
表28中，雙特異性構築體：名稱hF6-LC-G7表示G7 Fynomer附接在hF6抗體輕鏈C-末端(例如，參見第14C圖具體例)，hF6-LN-G7表示G7 Fynomer附接在hF6抗體輕鏈N-末端(例如，參見第14D圖具體例)，hF6-HC-G7表示G7 Fynomer附接在hF6抗體重鏈C-末端(例如，參見第14A圖具體例)，及hF6-HN-G7表示G7 Fynomer附接在hF6抗體重鏈N-末端(例如，參見第14B圖具體例)。表28出示所得雙特異性結合劑保留對小鼠FGFR3c及人類CD138之特異結合親和性，如：ELISA所測定。
CHO(Chinese Hamster Ovary)細胞經過轉染，在細胞表面上表現人類FGFR3c(第16A圖)或人類FGFR3b(第16B圖)。代表性雙特異性結合劑hF6-HN-G7隨後經過FACS分析顯示，對表現在已轉染之CHO細胞表面上之人類FGFR3b(第16B圖)及人類FGFR3c(第16A圖)均具有特異結合性。
表28與第16圖之代表性結合數據證實該雙特異性結合劑保留G7 Fynomer之結合特異性，及hF6抗-CD138抗體之結合特異性。
實施例11-Fynomer/抗體(Fynomab)藥物接合物
代表性雙特異性結合劑hF6-S119C-HN-G7係依位點特異性接合式II PBD毒素，產生雙特異性結合劑之代表性藥物接合物，稱為hF6-S119C-HN-G7-II。hF6-S119C-HN-G7-II在低於10000pM之濃度下證實對表現人類FGFR3b(第17B圖)與人類FGFR3c(第17C圖)之CHO細胞具有特異細胞毒性，但對未轉染之CHO細胞未證實有特異殺死作用(第17A圖)。藥物接合結合劑在高濃度(亦即>10000pM)下觀察到之細胞毒性最可能歸因於高濃度毒素本身之非特異性殺死作用，與結合性無關。
代表性雙特異性結合劑藥物接合物hF6-HN-G7-II與hF6-LN-G7-II亦證實對細胞株KMS-11(一種高度CD138表現細胞株)及OPM-2(一種中度CD138表現細胞株)出現特異細胞毒性，但未對ARH-77(一種陰性對照組細胞株)出現特異細胞毒性(例如，參見第19圖)。
雙特異性結合劑hF6-HN-G7之抗體部份(亦即hF6)經過工程處理，以便在hF6抗體重鏈恆定區中五個位置(亦即S119、V282、T289、N361、與V422)其中之一引進半胱胺酸胺基酸取代，藉以提供經半胱胺酸取代之抗體，稱為hF6-S119C、hF6-V282C、hF6-T289C、hF6-N361C與hF6-V422C。對應雙特異性結合劑稱為hF6-S119C-HN-G7、hF6-V282C-HN-G7、hF6-T289C-HN-G7、hF6-N361C-HN-G7與hF6-V422C-HN-G7，其中「G7」代表FF48L66G7 Fynomer之存在，其係附接hF6重鏈N-末端。經過工程處理之半胱胺酸殘基為抗贅瘤劑之位點特異性接合(SSC)提供接合點，供接合各雙特異性結合劑。親本hF6-HN-G7之代表性序列示於下文。下加虛線代表訊號傳導序列，下加單線代表Fynomer部份，下加雙線代表視需要選用之連接子區，其接著為hF6抗體之重鏈。每個可 以獨立地突變成半胱胺酸之胺基酸(亦即A118、S119、S239、V282、T289、N361與V422)係以陰影表示。
SEQ ID NO：125
Figure 108135510-A0202-12-0151-71
Figure 108135510-A0202-12-0152-72
在A118C、S119C、S239C、V282C、T289C、N361C與V422C之重鏈恆定區具有突變之雙特異性結合劑，亦即雙特異性結合劑hF6-A118C-HN-G7、hF6-S119C-HN-G7、hF6-S239C-HN-G7、hF6-V282C-HN-G7、hF6-T289C-HN- G7、hF6-N361C-HN-G7與hF6-V422C-HN-G7之胺基酸序列提供於SEQ ID NO：135-141。
每一種代表性雙特異性結合劑係接合例示性之毒性式II吡咯并苯并二氮呯(PBD)(亦參見第18圖)。隨機接合之雙特異性結合劑係在自行使用經修改之DHAA還原法接合。簡言之，由抗體劑於dPBS中稀釋至1.1mg，於25至37℃下，在不定時渦轉下，使用2x-20x安定化TCEP(鍵破裂劑)還原1-3小時。然後將樣本之緩衝液換成dPBS，使用1mM EDTA排除TCEP，於室溫下使用2.5X DHAA氧化2.5小時。抗體之緩衝液換成dPBS，以排除DHAA，於室溫下與8X毒素II培養1.5小時。已接合之製劑之緩衝液隨後再換成dPBS，採用微量分光光度計(nanodrop)測定濃度。在較不嚴苛的還原條件下達成位點特異性接合法。依位點特異性接合之所得藥物接合雙特異性結合劑稱為hF6-S119C-HN-G7-II、hF6-V282C-HN-G7-II、hF6-T289C-HN-G7-II、hF6-N361C-HN-G7-II與hF6-V422C-HN-G7-II。
使用表現「高度CD138」之細胞株(KMS11)、「中度CD138」之細胞株(RT112)、及陰性對照組細胞株(ARH77)進行5天期細胞毒性分析法(N=3)。細胞毒性分析法結果示於下表與第20圖中。
Figure 108135510-A0202-12-0154-73
於對抗KMS-11細胞(高度表現CD138之細胞株)、RT-112細胞、AN3CA細胞(CD138/FGFR3陽性細胞株)、HCC1806細胞(CD138/FGFR3陽性細胞株)(例如，參見第20圖)及其他細胞型態之活體外毒性分析法中測試稱為hF6-S119C-HN-G7-II、hF6-V282C-HN-G7-II、與hF6-T289C-HN-G7-II之代表性藥物接合雙特異性結合劑。對細胞之細胞毒性結果綜合示於下表。
Figure 108135510-A0202-12-0155-74
於活體內異種移植試驗中測試不同劑量之稱為hF6-S119C-HN-G7-II、hF6-V282C-HN-G7-II、與hF6-T289C-HN-G7-II之代表性藥物接合雙特異性結合劑(第21圖)。簡言之，在免疫缺陷雌性小鼠(品系：Nu/Nu)皮下接種5x106個An3CA或HCC1806細胞。使用數位卡尺測量腫瘤，依據公式0.5236*L*W2測定腫瘤體積。小鼠隨機分組，當腫瘤達到平均175mm3(AN3CA)或195mm3(HCC1806)時，經靜脈內投與指定之雙特異性結合劑。結果綜合示於下表32(AN3CA)與33(ACC1806)。
Figure 108135510-A0202-12-0156-386
Figure 108135510-A0202-12-0156-387
實施例12-某些代表性序列
人類syndecan-1(syndecan-1)-UniProtKB-P18827
SEQ ID NO：1
Figure 108135510-A0202-12-0156-388
Figure 108135510-A0202-12-0156-389
Figure 108135510-A0202-12-0157-390
小鼠syndecan-1(syndecan-1)-UniProtKB-P18828
SEQ ID NO：126
Figure 108135510-A0202-12-0157-392
Figure 108135510-A0202-12-0157-391
大鼠syndecan-1(syndecan-1)-UniProtKB-P26260
SEQ ID NO：127
Figure 108135510-A0202-12-0157-394
Figure 108135510-A0202-12-0157-393
普通獼猴(Macaca mulatta)(Rhesus macaque)syndecan-1-UniProtKB-A0A1D5RIX8
SEQ ID NO：128
Figure 108135510-A0202-12-0158-396
Figure 108135510-A0202-12-0158-395
家犬(Canis lupus familiaris)(狗)(Canis familiaris)syndecan-1-UniProtKB-E2RT70
SEQ ID NO：129
Figure 108135510-A0202-12-0158-398
Figure 108135510-A0202-12-0158-397
食蟹獼猴(Macaca fascicularis)syndecan-1
SEQ ID NO：130
Figure 108135510-A0202-12-0158-400
Figure 108135510-A0202-12-0158-399
Figure 108135510-A0202-12-0159-401
人類，FGFR3，同型b(SEQ ID NO：97)
Figure 108135510-A0202-12-0159-403
Figure 108135510-A0202-12-0159-402
人類，FGFR3，同型c(SEQ ID NO：98)
Figure 108135510-A0202-12-0159-405
Figure 108135510-A0202-12-0159-404
實施例13-某些具體例
A1. 一種雙特異性結合劑，其包含(a)特異性結合於syndecan-1之抗體，或其抗原結合部份(CD138)；與(b)特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)之Fynomer。
A1.1. 如具體例A1之雙特異性結合劑，其中syndecan-1為哺乳動物syndecan-1。
A1.2. 如具體例A1或A1.1之雙特異性結合劑，其中syndecan-1係選自：人類syndecan-1、小鼠syndecan-1與猴子syndecan-1。
A1.3. 如具體例A1至A1.2中任一項之雙特異性結合劑，其中雙特異性劑及/或抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1與小鼠syndecan-1。
A1.4. 如具體例A1至A1.3中任一項之雙特異性結合劑，其中雙特異性劑及/或抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1與猴子syndecan-1。
A1.5. 如具體例A1至A1.4中任一項之雙特異性結合劑，其中雙特異性劑及/或抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1、小鼠syndecan-1與猴子syndecan-1。
A1.6. 如具體例A1.2、A1.4或A1.5之雙特異性結合劑，其中猴子syndecan-1包含在獼猴(Macaca)屬猴子中表現之syndecan-1、從其中取得或單離之syndecan-1。
A1.7. 如具體例A1.6之雙特異性結合劑，其中猴子syndecan-1為在食蟹獼猴(Macaca fascicularis)物種之猴子中表現之syndecan-1、從其中取得或單離之syndecan-1。
A1.8. 如具體例A1.6之雙特異性結合劑，其中猴子syndecan-1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：128或130
A2. 如具體例A1.2至A1.8中任一項之雙特異性結合劑，其中雙特異性劑及/或抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1、猴子syndecan-1、及/或小鼠syndecan-1，其KD為50nM或更低。
A3. 如具體例A1至A2中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係共價附接至Fynomer。
A4. 如具體例A1至A3中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於syndecan-1之細胞外區。
A5. 如具體例A1至A4中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於包含胺基酸序列AGEGPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：94)之多肽。
A5.1. 如具體例A1至A5中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份與另一種會特異性結合包含或其組成為胺基酸序列AGEGPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：94)之多肽之結合劑競爭結合。
A5.2. 如具體例A1至A5.1中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份與包含或其組成為選自表1之CDR-L1、選自表2之CDR-L2、選自表3之CDR-L3、選自表6之CDR-H1、選自表7之CDR-H2、及選自表8之CDR-H3之第二種結合劑競爭結合至syndecan-1。
A5.3. 如具體例A5.2之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：CDR-L1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：3為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：18為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：28為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基 酸序列；CDR-H1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：47為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：60為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：73為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
A5.4. 如具體例A5.2之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：CDR-L1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：2為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：17為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：27為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：47為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：61為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：73為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
A5.5. 如具體例A5.4之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：CDR-L2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：16為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：45或46為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：72為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
A5.6. 如具體例A5.2之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含人源化輕鏈可變區及人源化重鏈可變區。
A5.7. 如具體例A5.6之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：人源化輕鏈可變區，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：41為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及人源化重鏈可變區，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：90為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
A5.8. 如具體例A5.6之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：人源化輕鏈，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：44為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及人源化重鏈，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：93為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
A6. 如具體例A1至A5.1中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列輕鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-L1(輕鏈CDR1)，其包含與選自：SEQ ID NO：2至15之胺基酸序列具有90%一致性之胺基酸序列；(ii)CDR-L2(輕鏈CDR2)，其包含與選自：SEQ ID NO：16至26之胺基酸序列具有至少85%、或至少90%一致性之胺基酸序列；及(iii)CDR-L3(輕鏈CDR3)，其包含與選自：SEQ ID NO：27至33之胺基酸序列具有至少85%、或至少90%一致性之胺基酸序列。
A6.1. 如具體例A1至A5.1中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列輕鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-L1(輕鏈CDR1)，其包含或其組成為選自SEQ ID NO：2至15之胺基酸序列；(ii)CDR-L2(輕鏈CDR2)，其包含或其組成為選自SEQ ID NO：16至26之胺基酸序列；及(iii)CDR-L3(輕鏈CDR3)，其包含或其組成為選自SEQ ID NO：27至33之胺基酸序列。
A7. 如具體例A1至A5.1、及A6至A6.1中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列重鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-H1(重鏈CDR1)，其包含或其組成為與選自：SEQ ID NO：45至59之胺基酸序列具有至少85%、或至少90%一致性之胺基酸序列；(ii)CDR-H2(重鏈CDR2)，其包含或其組成為與選自：SEQ ID NO：60至71之胺基酸序列具有至少85%、或至少90%一致性之胺基酸序列；(iii)CDR-H3(重鏈CDR3)，其包含或其組成為與選自SEQ ID NO：72至81之胺基酸序列具有至少85%、或至少90%一致性之胺基酸序列。
A7.1. 如具體例A1至A5.1、及A6至A6.1中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列重鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-H1(重鏈CDR1)，其包含或其組成為選自SEQ ID NO：45至59之胺基酸序列；(ii)CDR-H2(重鏈CDR2)，其包含或其組成為選自SEQ ID NO：60至71之胺基酸序列；(iii)CDR-H3(重鏈CDR3)，其包含或其組成為選自SEQ ID NO：72至81之胺基酸序列。
A8. 如具體例A6至A7.1中任一項之雙特異性結合劑，其中CDR-L3係選自：SEQ ID NO：27或SEQ ID NO：29；CDR-L2係選自：SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：20；及CDR-L1係選自：SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4。
A9. 如具體例A6至A8中任一項之雙特異性結合劑，其中CDR-H3係選自：SEQ ID NO：73或SEQ ID NO：75；CDR-H2係選自：SEQ ID NO：61或SEQ ID NO：63；及CDR-H1係選自：SEQ ID NO：47或SEQ ID NO：50。
A10. 如具體例A1至A9中任一項之雙特異性結合劑，其中CDR-L1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：2；CDR-L2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：17；CDR-L3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：27；CDR-H1包含胺 基酸序列SEQ ID NO：47；CDR-H2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：61；及CDR-H3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：73。
A10.1. 如具體例A10之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含：輕鏈可變區，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：41為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及重鏈可變區，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：90為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
A10.2. 如具體例A10.1之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含：輕鏈，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：44為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及重鏈，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：93為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
A11. 如具體例A1至A9中任一項之雙特異性結合劑，其中CDR-L1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：4；CDR-L2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：20；CDR-L3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：29；CDR-H1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：50；CDR-H2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：63；及CDR-H3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：75。
A12. 如具體例A1至A11中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體包含IgG、IgD、IgE、IgA或IgM之恆定區。
A13. 如具體例A1至A12中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份為嵌合抗體與/或人源化抗體。
A13.1. 如具體例A13之雙特異性結合劑，其中嵌合抗體包含IgG1之人類恆定結構域。
A13.2. 如具體例A13或A13.1之雙特異性結合劑，其中人源化抗體包含一個或多個人類框架區，或1、2、3、4、5個或更多個包含或其組成為與對應人類框架區為至少85%、至少90%一致性、至少95%一致性、或至少100%一致性之胺基酸序列之框架區。
A14. 如具體例A1至A13.2中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1之細胞外結構域、猴子syndecan-1之細胞外結構域、及/或小鼠syndecan-1之細胞外結構域。
A15. 如具體例A1至A13中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1、猴子syndecan-1及/或小鼠syndecan-1之細胞外結構域，其結合親和力(KD)為50nM以下。
A16. 如具體例A1至A15中任一項之雙特異性結合劑，其中FGFR3為人類纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)。
A17. 如具體例A1至A16中任一項之雙特異性結合劑，其中人類FGFR3包含FGFR3同型3b或FGFR3同型3c。
A18. 如具體例A16或A17之雙特異性結合劑，其中Fynomer特異性結合於人類FGFR3同型3b與FGFR3同型3c。
A19. 如具體例A1至A18中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含RT-環，其包含或其組成為胺基酸序列EVMSTTA(SEQ ID NO：114)；及SRC環，其包含或其組成為胺基酸序列SQSPH(SEQ ID NO：115)。
A20. 如具體例A1至A19中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含或其組成為具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：113)為至少85%、至少90%、或至少95%一致性之胺基酸序列之多肽，其中位置(X7)之胺基酸為任何胺基酸。
A20.1. 如具體例A1至A19中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含或其組成為具有胺基酸序列GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：113)之多肽，其中位置(X7)之胺基酸為任何胺基酸。
A21. 如具體例A20或A20.1之雙特異性結合劑，其中(X7)係選自：N、R、W與K。
A22. 如具體例A1至A18中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含RT-環，其包含或其組成為胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)。
A23. 如具體例A1至A18、或A22中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含或其組成為具有與胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：99)為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列之多肽，其中胺基酸(X1)、(X2)、(X3)、(X4)、(X5)與(X6)係選自任何胺基酸。
A23.1. 如具體例A23之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含或其組成為胺基酸序列GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL (X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：99)，其中胺基酸(X1)、(X2)、(X3)、(X4)、(X5)與(X6)係選自任何胺基酸。
A24. 如具體例A23或A23.1之雙特異性結合劑，其中
(X1)為N、R、或K；
(X2)為S、G、K、或R；
(X3)為S或G；
(X4)為E、Q、D、S、或K；
(X5)為T或A；及
(X6)為Y、W或L。
A25. 如具體例A1至A18中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含多肽，其包含與選自下列胺基酸序列為至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性或100%一致性之胺基酸序列：
(SEQ ID NO：101；FF2L4C3)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
(SEQ ID NO：103；FF44L65G12)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
(SEQ ID NO：105；FF44L65G7)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
(SEQ ID NO：107；FF48L66G7；「G7」)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
(SEQ ID NO：109；FF43L65D5)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
(SEQ ID NO：111；FF44L65B7)
GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；及
(SEQ ID NO：116；FF40L54A5)
GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ。
A25.1. 如具體例A1至A18中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含多肽，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：107為至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性或100%一致性之胺基酸序列，其中保留SEQ ID NO：107胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：107胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。
A25.2. 如具體例A1至A18中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含多肽，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：107為至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性或100%一致性之胺基酸序列，其中保留SEQ ID NO：107胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及SEQ ID NO：107胺基酸位置32至38之胺基酸，及Fynomer係特異性結合於FGFR3。
A25.3. 如具體例A1至A18中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含或其組成為多肽，其包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：107。
A25.4. 如具體例A1至A25.3中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於人類FGFR3同型b與FGFR3同型二者。
A26. 如具體例A1至A25.4中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3、FGFR3b或FGFR3c之細胞外區。
A27. 如具體例A1至A26中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3、FGFR3b、FGFR3c、或其一部份，其結合親和力(KD)為約10-5M至約10-15M。
A28. 如具體例A1至A27中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3、FGFR3b、FGFR3c、或其一部份，其結合親和力(KD)為10-8M以下。
A29. 如具體例A1至A28中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係經糖基化。
A30. 如具體例A1至A29中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係利用連接子共價附接至抗體或其抗原結合部份。
A30.1 如具體例A30之雙特異性結合劑，其中連接子包含或其組成為肽鍵。
A31. 如具體例A30或A30.1之雙特異性結合劑，其中連接子包含或其組成為肽，其包含或其組成為一個或多個胺基酸、5至100個胺基酸、5至50個胺基酸、5至25個胺基酸、5至20個胺基酸、或5至10個胺基酸。
A32. 如具體例A30、A30.1、或A31之雙特異性結合劑，其中連接子包含或其組成為視需要經取代之C1-C50烷基、視需要經取代之C2-C50烯基、視需要經取 代之C2-C50炔基、醯基、醯基氧基、烷基氧羰基氧、芳基氧羰基氧基、環烷基、環烯基、烷氧基、環烷氧基、芳基、雜芳基、芳基烷氧基羰基、烷氧基羰基醯基、胺基羰基、胺基羧基氧基、疊氮基、苯基、環烷基醯基、烷基硫基、芳基硫基、氧磺醯基、羧基、硫基、亞碸、碸、磺酸酯、硫代氰基、醯胺、胺基、酯、鹵化烷基、或其組合。
A33. 如具體例A1至A29中任一項之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係利用結合配對，依非共價附接至Fynomer。
A34. 如具體例A1至A33中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈或輕鏈之N-末端。
A35.1. 如具體例A1至A33中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係利用肽鍵共價附接至抗體重鏈之N-末端。
A35.2. 如具體例A35.1之雙特異性結合劑，其中Fynomer之C-末端胺基酸係利用肽鍵共價附接至抗體重鏈之N-末端胺基酸。
A35.3. 如具體例A35.1之雙特異性結合劑，其中Fynomer之C-末端胺基酸係利用肽鍵共價附接至抗體輕鏈之N-末端胺基酸。
A35.4. 如具體例A1至A33中任一項之雙特異性結合劑，其中Fynomer係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈或輕鏈之羧基末端。
A35.5. 如具體例A35.4之雙特異性結合劑，其中Fynomer之N-末端胺基酸係利用肽鍵共價附接至抗體重鏈之羧基末端胺基酸。
A35.6. 如具體例A35.4之雙特異性結合劑，其中Fynomer之N-末端胺基酸係利用肽鍵共價附接至抗體輕鏈之羧基末端胺基酸。
A35.7. 如具體例A1至A29中任一項之雙特異性結合劑，其包含(i)Fynomer與SEQ ID NO：125之重鏈胺基酸序列及(ii)SEQ ID NO：44之輕鏈胺基酸序列。
A35.8. 如具體例A1至A29中任一項之雙特異性結合劑，其包含或其組成為(i)Fynomer與SEQ ID NO：125之重鏈胺基酸序列，其中SEQ ID NO：125胺基酸位置213之絲胺酸係突變成半胱胺酸，(ii)SEQ ID NO：44之輕鏈胺基酸序列，及(iii)共價附接至半胱胺酸之腫瘤藥劑。
A36. 如具體例A1至A35.7中任一項之雙特異性結合劑，其進一步包含抗贅瘤劑。
A37. 如具體例A35.8或A36之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係選自下列各者所成群組：微管抑制素(auristatin)、尾海兔素(dolastatin)、美登素(maytansine)、微管菌素(tubulysin)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、倍癌黴素(duocarmycin)、阿黴素(doxorubicin)、假單胞菌外毒素-A(PE38)、伊立替康(irinotecan)及上述任一者之衍生物。
A38. 如具體例A35.8、A36或A37之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係共價或非共價附接至雙特異性結合劑。
A39. 如具體例A38之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係附接至抗體或其抗原結合部份。
A40. 如具體例A38之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係附接至Fynomer。
A41. 如具體例A35.8至A40中任一項之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係利用結合配對，以非共價附接至雙特異性結合劑。
A42. 如具體例A35.8至A40中任一項之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係利用連接子共價附接至雙特異性結合劑。
A43. 如具體例A35.8至A42中任一項之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含單甲基微管抑制素E(MMAE)或單甲基微管抑制素F(MMAF)。
A44. 如具體例A35.8至A40、及A42中任一項之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含或其組成為吡咯并苯并二氮呯毒素及連接基；其中吡咯并苯并二氮呯毒素係與連接基共價連接，及連接基係與雙特異性結合劑共價連接。
A45. 如具體例A44之雙特異性結合劑，其中吡咯并苯并二氮呯毒素包含或其組成為化學式I之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0173-406
 其中
Z1與Z2均為N；
Z3與Z4均為C；
雙虛線
Figure 108135510-A0202-12-0173-378
代表單鍵或雙鍵；
n為1至10；
各R3與R4獨立地為H、或C1-4烷氧基；及
各R1與R2係獨立地選自下列各者所成群組：H、C1-5烷基、C3-6環烷基、C2-5烯基、及視需要經R5取代之苯基，其中
R5係選自下列各者所成群組：-NH2、-NHR6、及經如下結構式之R7取代之哌嗪基
Figure 108135510-A0202-12-0174-407
其中R6包含或其組成為連接基，及
R7為H、或C1-5烷基；
X1為不存在、保護基、或包含或其組成為連接基；
X2為不存在、保護基、或包含或其組成為連接基；
X1、X2、R1、與R2中僅一者包含或其組成為連接基；及
各Y1與Y2獨立地為不存在、OH、或SO3H；
但其限制條件為：
(i)當X1包含或其組成為連接基時，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0174-408
Z3為N-C，
(ii)當X2包含或其組成為連接基時，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0174-409
Z4為N-C，
(iii)當X1為保護基時，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0174-410
Z3為N-C，及
(iv)當X2為保護基時，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0174-411
Z4為N-C，其中不存在意指化學式I結構中沒有部份體存在或意指存在一個或多個氫，或若未明確指明時，可存在一個或多個氫以滿足所要求之價數。
A46. 如具體例A45之雙特異性結合劑，其中n為3、4或5。
A47. 如具體例A45或A46之雙特異性結合劑，其中R3與R4均為-O-CH3。
A48. 如具體例A45至A47中任一項之雙特異性結合劑，其中R1與R2均為甲基。
A49. 如具體例A45至A47中任一項之雙特異性結合劑，其中R1與R2均為-CH=CH-CH3。
A50. 如具體例A45至A47中任一項之雙特異性結合劑，其中R2為環丙基。
A51. 如具體例A45至A47中任一項之雙特異性結合劑，其中R2為經4-甲基哌嗪-1-基取代之苯基。
A52. 如具體例A50或A51之雙特異性結合劑，其中R1為視需要經R5取代之苯基，R5為-NHR6，及R6包含或其組成為連接基。
A53. 如具體例A45至A47及A50至A52中任一項之雙特異性結合劑，其中X1為不存在，Y1為不存在，Z1
Figure 108135510-A0202-12-0175-412
Z3為N=C，X2為不存在，Y2為不存在，及Z2
Figure 108135510-A0202-12-0175-413
Z4為N=C。
A54. 如具體例A45至A51中任一項之雙特異性結合劑，其中X1包含或其組成為連接基，Y1為OH，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0175-414
Z4為N=C，X2為不存在，及Y2為不存在。
A55. 如具體例A45至A51中任一項之雙特異性結合劑，其中X1包含或其組成為連接基，Y1為OH，Z2
Figure 108135510-A0202-12-0175-415
Z4為N-C，X2為保護基，及Y2為OH。
A56. 如具體例A44至A55中任一項之雙特異性結合劑，其中連接基係利用胺甲酸根基團附接至吡咯并苯并二氮呯毒素。
A57. 如具體例A44至A55中任一項之雙特異性結合劑，其中連接基係利用醯胺基附接至吡咯并苯并二氮呯毒素。
A58. 如具體例A44至A57中任一項之雙特異性結合劑，其中連接基包含或其組成為化學式A之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0175-416
 其中
星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；
波浪線代表與結合劑之附接點；
m為1至20；
q為0至10；及
E為連接基團。
A59. 如具體例A58之雙特異性結合劑，其中m為4或8。
A60. 如具體例A58或A59之雙特異性結合劑，其中q為0、1或2。
A61. 如具體例A58之雙特異性結合劑，其中m為8，及q為2。
A62. 如具體例A44至A57中任一項之雙特異性結合劑，其中連接基包含或其組成為化學式B之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0176-417
 其中
星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；
波浪線代表與結合劑之附接點；
E為連接基團；
v為0至10；及
u為0或1；其中當u為1時，t為1至10。
A63. 如具體例A62之雙特異性結合劑，其中v為1。
A64. 如具體例A62或A63之雙特異性結合劑，其中u為1，及t為8。
A65. 如具體例A62之雙特異性結合劑，其中u為0，及v為4。
A66. 如具體例A58至A65中任一項之雙特異性結合劑，其中結合劑係利用結合劑之半胱胺酸硫醇殘基與E之間形成之硫醚鍵而與E連接。
A67. 如具體例A58至A66中任一項之雙特異性結合劑，其中E包含或其組成為化學式C之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0177-418
 其中波浪線代表與結合劑之附接點，及雙星號代表與連接基之附接點。
A68. 如具體例A45至A67中任一項之雙特異性結合劑，其中保護基具有下列結構(D)：
Figure 108135510-A0202-12-0177-419
 其中星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；及
w為1至5。
A69. 如具體例A68之雙特異性結合劑，其中w為2。
A70. 如具體例A45至A69中任一項之雙特異性結合劑，其中保護基為可裂解之保護基。
A71. 如具體例A44之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含或其組成為選自下列各物所成群組之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0178-420
 其中m為8；
Figure 108135510-A0202-12-0178-421
 其中m為8，p為3，及X2為保護基；
Figure 108135510-A0202-12-0178-422
 其中m為8；
Figure 108135510-A0202-12-0179-423
 其中t為8，及v為1；及
Figure 108135510-A0202-12-0179-424
 其中波浪線代表與結合劑之附接點。
A72. 如具體例A71之雙特異性結合劑，其中X2之保護基具有下列結構(D)：
Figure 108135510-A0202-12-0179-425
 其中星號代表與抗贅瘤劑或PBD毒素之附接點；及w為1至5。
A73. 如具體例A44至A72中任一項之雙特異性結合劑，其中結合劑之至少一個胺基酸突變成半胱胺酸，且半胱胺酸係利用硫醇醚鍵與連接基共價連接。
A73.1. 如具體例A73之雙特異性結合劑，其中抗體包含IgG1或IgG2之人類重鏈恆定區，及抗體重鏈恆定區位置119之絲胺酸係突變成半胱胺酸，且半胱胺酸係利用硫醇醚鍵與連接基共價連接。
A73.2. 如具體例A44至A72中任一項之雙特異性結合劑，其中結合劑之至少一個胺基酸突變成離胺酸，且離胺酸之游離胺基係與連接基共價連接。
A74. 如具體例A44或A73.2之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含或其組成為化學式(II)之結構：
Figure 108135510-A0202-12-0180-426
 其中m為8，及波浪線代表與結合劑之硫醇基之附接點。
A75. 一種醫藥組成物，其包含如具體例A1至A74中任一項之雙特異性結合劑，及醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載劑。
A76. 如具體例A75之醫藥組成物，其中醫藥組成物係調配成無菌凍乾粉末。
A77. 如具體例A75或A76之醫藥組成物，其中醫藥組成物係調配成經靜脈內投與哺乳動物。
A77.1. 如具體例A75至A77中任一項之醫藥組成物，其係用於治療贅瘤。
A77.2. 如具體例A77.1之醫藥組成物，其中贅瘤包含表現syndecan-1之贅瘤細胞或癌細胞。
A77.3. 如具體例A77.1至A77.2中任一項之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：癌瘤、肉瘤、神經系統贅瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、間皮瘤、實體或軟組織腫瘤、與繼發性癌。
A77.4. 如具體例A77.1至A77.3中任一項之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、胰臟癌、食道癌、肝臟癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌瘤、卵巢癌與腎癌。
A77.5. 如具體例A77.1至A77.3中任一項之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：胰臟腺癌瘤、胰臟神經內分泌癌瘤、結腸直腸腺癌瘤、小腸惡性病、膽管癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌症、胃腺癌、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、女性生殖道惡性病、乳房癌瘤、三陰性乳癌、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後腔或腹膜腔肉瘤、攝護腺腺癌、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤與非上皮卵巢癌。
A77.6. 如具體例A77.1至A77.3中任一項之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：多發性骨髓瘤、卵巢癌瘤、子宮頸癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、睪丸癌、腎臟癌瘤、膽囊癌瘤、移行上皮細胞膀胱癌瘤、胃癌、攝護腺癌、攝護腺腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌瘤、何傑金氏(Hodgkin’s)與非何傑金氏(Hodgkin’s)淋巴瘤與多發性骨髓瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、T-細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)、-細胞惡性病、-細胞急性淋巴母細胞性白血病(-ALL)、急性骨髓母細胞性白血病(AML)、實體組織肉瘤、結腸癌瘤、非小細胞肺癌瘤、鱗狀細胞肺癌瘤、結腸直腸癌瘤、肝癌瘤、胰臟癌、腦癌(例如，神經母細胞瘤或腦膜瘤)、皮膚癌(例如，黑色素瘤、基底細胞癌瘤、或鱗狀細胞癌瘤)、及頭與頸癌瘤。
A78. 一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體之方法，其包括：
a)提供患有或疑似患有贅瘤之個體；及
b)對個體投與醫療有效量之如具體例A1至A74中任一項之雙特異性結合劑，或如具體例A75至A77中任一項之醫藥組成物。
A79. 如具體例A78之方法，其中在投與雙特異性結合劑後，該雙特異性結合劑會阻斷、抑制、緩解、消除、或壓制癌之生長、活力或轉移。
A80. 如具體例A78至A79中任一項之方法，其中在投與雙特異性結合劑後，該雙特異性結合劑會誘發有些或所有癌死亡、壞死或凋亡。
A81. 如具體例A78至A80中任一項之方法，其中贅瘤包含或其組成為癌瘤、肉瘤、神經系統贅瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、間皮瘤、實體或軟組織腫瘤、或繼發性癌症。
A82. 如具體例A81之方法，其中贅瘤包含或其組成為膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、胰臟癌、食道癌、肝臟癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌瘤、卵巢癌或腎癌。
A83. 如具體例A81或A82之方法，其中贅瘤包含或其組成為胰臟腺癌瘤、胰臟神經內分泌癌、結腸直腸腺癌瘤、小腸惡性病、膽道癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌、胃腺癌瘤、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、雌性生殖道惡性病、乳房癌瘤、三陰性乳癌、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後或腹膜肉瘤、攝護腺腺癌瘤、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤或非上皮卵巢癌。
A84. 如具體例A81之方法，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：多發性骨髓瘤、卵巢癌瘤、子宮頸癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、睪丸癌、腎臟癌瘤、膽囊癌瘤、移行上皮細胞膀胱癌瘤、胃癌、攝護腺癌、攝護腺腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌瘤、何傑金氏與非何傑金氏淋巴瘤與多發性骨髓瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、 急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、T-細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)、B-細胞惡性病、B-細胞急性淋巴母細胞性白血病(B-ALL)、急性骨髓母細胞性白血病(AML)、實體組織肉瘤、結腸癌瘤、非小細胞肺癌瘤、鱗狀細胞肺癌瘤、結腸直腸癌瘤、肝癌瘤、胰臟癌、腦癌(例如，神經母細胞瘤或腦膜瘤)、皮膚癌(例如，黑色素瘤、基底細胞癌瘤、或鱗狀細胞癌瘤)、及頭與頸癌瘤。
A85. 如具體例A78至A84中任一項之方法，其進一步包括對個體投與化療劑。
A86. 如具體例A78至A85中任一項之方法，其中個體為人類。
A87. 如具體例A1至A74中任一項之雙特異性結合劑，或如具體例A75至A77中任一項之醫藥組成物，其係用於治療患有或疑似患有贅瘤之個體。
A88. 如具體例A78至A87中任一項之方法或用途，其中贅瘤包含表現syndecan-1或FGFR3之贅瘤細胞或癌細胞。
A89. 如具體例A78至A87中任一項之方法或用途，其中FGFR3為人類FGFR3。
A90. 如具體例A1至A89中任一項之雙特異性結合劑，其中雙特異性劑在與表現在細胞表面上之syndecan-1結合時及/或在與表現在細胞表面上之FGFR3結合時，會內化進入細胞中。
A91. 如具體例A1至A90中任一項之雙特異性結合劑，其包含(i)Fynomer與SEQ ID NO：125之重鏈胺基酸序列，及(ii)SEQ ID NO：44之輕鏈胺基酸序列。
A92. 如具體例A1至A90中任一項之雙特異性結合劑，其包含(i)Fynomer與SEQ ID NO：125之重鏈胺基酸序列，其中SEQ ID NO：125胺基酸位置213之絲胺酸係突變成半胱胺酸，及(ii)SEQ ID NO：44之輕鏈胺基酸序列，其中吡咯并苯并二氮呯毒素係共價附接至半胱胺酸之硫醇基。
B0. 一種結合劑，其包含(a)特異性結合於syndecan-1之抗體或其抗原結合部份(CD138)；及(b)抗贅瘤劑。
B1. 如具體例B0之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係共價或非共價附接至抗贅瘤劑。
B2. 如具體例B0或B1之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於syndecan-1之細胞外區。
B3. 如具體例B0至B2中任一項之結合劑，其中syndecan-1為哺乳動物syndecan-1。
B4. 如具體例B0至B3中任一項之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於包含或其組成為胺基酸序列AGEGPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：94)之多肽。
B5. 如具體例B0至B4中任一項之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列輕鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-L1(輕鏈CDR1)，其包含或其組成為與選自SEQ ID NO：2至15之胺基酸序列具有至少85%一致性或至少90%一致性之胺基酸序列；(ii)CDR-L2(輕鏈CDR2)，其包含或其組成為與選自SEQ ID NO：16至26之胺基酸序列具有至少85%一致性或至少90%一致性之胺基酸序列；及(iii)CDR-L3(輕鏈CDR3)，其包含或其組成為與選自SEQ ID NO：27至33之胺基酸序列具有至少85%一致性或至少90%一致性之胺基酸序列。
B6. 如具體例B5之結合劑，其中CDR-L1係選自：SEQ ID NO：2與SEQ ID NO：4；CDR-L2係選自：SEQ ID NO：17與SEQ ID NO：20；及CDR-L3係選自：SEQ ID NO：27與SEQ ID NO：29。
B7. 如具體例B0至B6中任一項之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列重鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-H1(重鏈CDR1)，其包含或其組成為與選自SEQ ID NO：45至59之胺基酸序列具有至少85%一致性或至少90%一致性之胺基酸序列；(ii)CDR-H2(重鏈CDR2)，其包含或其組成為與選自SEQ ID NO：60至71之胺基酸序列具有至少85%一致性或至少90%一致性之胺基酸序列；及(iii)CDR-H3(重鏈CDR3)，其包含或其組成為與選自SEQ ID NO：72至81之胺基酸序列具有至少85%一致性或至少90%一致性之胺基酸序列。
B8. 如具體例B0至B7中任一項之結合劑，其中CDR-H3係選自：SEQ ID NO：73與SEQ ID NO：75；CDR-H2係選自：SEQ ID NO：61與SEQ ID NO：63；及CDR-H1係選自：SEQ ID NO：47與SEQ ID NO：50。
B9. 如具體例B0至B8中任一項之結合劑，其中CDR-L1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：2；CDR-L2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：17；CDR-L3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：27；CDR-H1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：47；CDR-H2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：61；及CDR-H3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：73。
B10. 如具體例B0至B8中任一項之結合劑，其中CDR-L1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：4；CDR-L2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：20；CDR-L3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：29；CDR-H1包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：50；CDR-H2包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：63；及CDR-H3包含或其組成為胺基酸序列SEQ ID NO：75。
B11. 如具體例B0至B10中任一項之結合劑，其中抗體包含IgG、IgD、IgE、IgA或IgM之恆定區。
B12. 如具體例B0至B11中任一項之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係人源化。
B13. 如具體例B0至B12中任一項之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1，其結合親和力(KD)為50nM以下。
B14. 如具體例B0至B13中任一項之結合劑，其中抗贅瘤劑係利用連接子共價附接至抗體或其抗原結合部份。
B15. 如具體例B14之結合劑，其中連接子包含或其組成為包含一個或多個胺基酸、5至100個胺基酸、5至50個胺基酸、5至25個胺基酸、5至20個胺基酸、或5至10個胺基酸之肽。
B16. 如具體例B14之結合劑，其中連接子包含視需要經取代之C1-C50烷基、視需要經取代之C2-C50烯基、視需要經取代之C2-C50炔基、醯基、醯基氧基、烷基氧羰基氧、芳基氧羰基氧基、環烷基、環烯基、烷氧基、環烷氧基、芳基、雜芳基、芳基烷氧基羰基、烷氧基羰基醯基、胺基羰基、胺基羧基氧基、疊氮基、苯基、環烷基醯基、烷基硫基、芳基硫基、氧磺醯基、羧基、硫基、亞碸、碸、磺酸酯、硫代氰基、醯胺、胺基、酯、鹵化烷基、或其組合。
B17. 如具體例B0至B16中任一項之結合劑，其中抗體或其抗原結合部份利用結合配對，以非共價附接至抗贅瘤劑。
B18. 如具體例B0至B17中任一項之結合劑，其中抗贅瘤劑係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈或輕鏈之胺基末端。
B19. 如具體例B0至B18中任一項之結合劑，其中抗贅瘤劑係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈或輕鏈份之羧基末端。
B20. 如具體例B0至B19中任一項之結合劑，其中抗贅瘤劑係選自下列各者所成群組：微管抑制素(auristatin)、尾海兔素(dolastatin)、美登素(maytansine)、微管菌素(tubulysin)、卡奇黴素(calicheamicin)、倍癌黴素(duocarmycin)、阿黴素(doxorubicin)、假單胞菌外毒素-A(PE38)、伊立替康(irinotecan)及上述任一者之衍生物。
B21. 如具體例B0至B20中任一項之結合劑，其中抗贅瘤劑包含單甲基微管抑制素E(MMAE)或單甲基微管抑制素F(MMAF)。
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本文所摘錄之各專利案、專利申請案、公開案或任何其他參考文獻或檔案之完整內容已以引用之方式併入本文中。若有抵觸，將以說明書(包括定義)主導。
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除非另有說明，否則本文所採用所有技術與科學術語均具有熟悉本發明所屬相關領域之人士咸了解之相同定義。雖然本文說明合適之方法與材料，但仍可採用與彼等本文說明之類似或相同方法及材料來操作或試驗本發明。
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本文所採用所有數值或數字範圍包括此等範圍內之整數及範圍內數值或整數之分數，除非本文中另有明確說明。此外，當本文說明中列出數值 (例如，約50%、60%、70%、80%、85%或86%)時，該表列包括所有中間值與其分數(例如，54%、85.4%)。因此，為了說明，提及80%或更高之一致性時，包括81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%等等，及81.1%、81.2%、81.3%、81.4%、81.5%、etc.、82.1%、82.2%、82.3%、82.4%、82.5%等等，依此類推。
所提及超過(大於)或小於某整數時，包括大於或小於該所提及數字之任何數字。因此例如，提及小於100時，包括99、98、97等等，一直到數字一(1)；及小於10時，則包括9、8、7等等，直到數字一(1)。
本文所採用所有數值或範圍包括此等範圍內數值與整數之分數，及此等範圍內整數之分數，除非本文中另有明確說明。因此為了說明，所提及之數字範圍如：1-10，包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，及1.1、1.2、1.3、1.4、1.5等等，依此類推。因此提及之1-50範圍包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等等，至高且包括50，及1.1、1.2、1.3、1.4、1.5等等，2.1、2.2、2.3、2.4、2.5等等，依此類推。
提及之一系列範圍包括該等系列內不同範圍之界限值之組合。因此為了說明所提及之一系列範圍，例如，1-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-75、75-100、100-150、150-200、200-250、250-300、300-400、400-500、500-750、750-1,000、1,000-1,500、1,500-2,000、2,000-2,500、2,500-3,000、3,000-3,500、3,500-4,000、4,000-4,500、4,500-5,000、5,500-6,000、6,000-7,000、7,000-8,000、或8,000-9,000，包括10-50、50-100、100-1,000、1,000-3,000、2,000-4,000等等範圍。
上述內容可在不偏離技術之基本態樣下進行修飾。雖然已參照一或多項明確具體例詳細說明技術，但彼等習此相關技藝之人士咸了解，可在本申請書明確揭示之具體例中進行改變，同時此等修飾與改進均在該等技術之範圍與精神內。
本發明通常採用肯定式語言來說明數項具體例與態樣。本發明亦明確包括其中已完全或部分排除特定個別物資，如：物質或材料、方法步驟與條件、程序或製程之具體例。例如，本發明某些具體例或態樣中，已排除材料與/或方法步驟。因此即使本發明通常不會以本發明未包括之術語來表示，但本文仍將揭示未表示排除在本發明以外之態樣。
本文說明之技術可在沒有本文所揭示任何元素(群)下操作。因此例如，本文各例中，任何術語「包括」、「基本上其組成為」與「其組成為」其中之一可改用任何其他兩種術語置換。本文所採用術語與標記法係供說明之術語，並沒有限制，且此等術語與表達法不排除所出示及所說明特色或其一部份之任何同等物，且此等不同修飾均在所主張技術範圍內。術語「一個」或「一種」可指一或複數個其所形容之元素(例如，「一種試劑」可指一或多種試劑)，除非本文中另有明確說明其係一種元素或超過一種元素。本文所採用術語「約」係指在所指示參數之10%內之數值(亦即加或減10%)，及用在一連串數值開始前之術語「約」係形容各數值(亦即「約1、2與3」係指約1、約2與約3)。例如，重量「約100克」可包括在90克與110克之間之重量。本文所採用術語「實質上」係指該形容之數值意義為「至少95%」、「至少96%」、「至少97%」、「至少98%」、「至少99%」，且可包括100%。例如，一種實質上不含X之組成物可 能包括小於5%、小於4%、小於3%、小於2%、或小於1%之X，且/或該組成物中之X可能不存在或無法檢測。
因此咸了解，雖然本技術已採用代表性具體例及選用之特色明確揭示，但彼等習此相關技藝者仍可在本文揭示之觀念下進行修飾與變化，且此等修飾與變化均被視為此技術範圍內。
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Figure 108135510-A0202-12-0191-427
Figure 108135510-A0202-12-0192-428
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0192-429
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<213> 人工序列
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0193-431
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0193-432
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0193-433
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<213> 人工序列
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0194-434
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDR
<400> 8
Figure 108135510-A0202-12-0194-435
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0194-436
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0194-437
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0195-438
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<213> 人工序列
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Figure 108135510-A0202-12-0195-440
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Figure 108135510-A0202-12-0195-441
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Figure 108135510-A0202-12-0196-445
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDR
<400> 20
Figure 108135510-A0202-12-0197-447
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<211> 6
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Figure 108135510-A0202-12-0197-448
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Figure 108135510-A0202-12-0197-449
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Figure 108135510-A0202-12-0198-452
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Figure 108135510-A0202-12-0198-453
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<212> PRT
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Figure 108135510-A0202-12-0198-454
Figure 108135510-A0202-12-0199-455
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Figure 108135510-A0202-12-0199-458
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Figure 108135510-A0202-12-0200-462
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Figure 108135510-A0202-12-0201-465
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Figure 108135510-A0202-12-0202-467
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Figure 108135510-A0202-12-0203-468
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<212> PRT
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Figure 108135510-A0202-12-0203-469
Figure 108135510-A0202-12-0204-470
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Figure 108135510-A0202-12-0204-471
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<212> PRT
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<213> 人工序列
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<223> Humanized Light chain variable region
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Figure 108135510-A0202-12-0205-473
Figure 108135510-A0202-12-0206-474
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<212> PRT
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<223> Humanized Light chain variable region
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Figure 108135510-A0202-12-0206-475
Figure 108135510-A0202-12-0207-476
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> Humanized Light chain variable region
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Figure 108135510-A0202-12-0207-477
Figure 108135510-A0202-12-0208-478
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Figure 108135510-A0202-12-0208-479
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<212> PRT
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<210> 54
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<210> 55
<211> 13
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Figure 108135510-A0202-12-0212-494
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<212> PRT
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<212> PRT
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<223> CDR
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Figure 108135510-A0202-12-0215-508
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Figure 108135510-A0202-12-0215-509
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Figure 108135510-A0202-12-0216-511
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<212> PRT
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Figure 108135510-A0202-12-0216-512
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR
<400> 78
Figure 108135510-A0202-12-0216-513
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR
<400> 79
Figure 108135510-A0202-12-0217-514
<210> 80
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR
<400> 80
Figure 108135510-A0202-12-0217-515
<210> 81
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR
<400> 81
Figure 108135510-A0202-12-0217-516
<210> 82
<211> 113
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 82
Figure 108135510-A0202-12-0217-517
Figure 108135510-A0202-12-0218-518
<210> 83
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 83
Figure 108135510-A0202-12-0218-519
<210> 84
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 84
Figure 108135510-A0202-12-0219-520
<210> 85
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 85
Figure 108135510-A0202-12-0219-521
Figure 108135510-A0202-12-0220-522
<210> 86
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 86
Figure 108135510-A0202-12-0220-523
<210> 87
<211> 113
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 87
Figure 108135510-A0202-12-0221-524
<210> 88
<211> 114
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 88
Figure 108135510-A0202-12-0221-525
Figure 108135510-A0202-12-0222-526
<210> 89
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Humanized Heavy chain variable region
<400> 89
Figure 108135510-A0202-12-0222-527
<210> 90
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Humanized Heavy chain variable region
<400> 90
Figure 108135510-A0202-12-0223-528
<210> 91
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Humanized Heavy chain variable region
<400> 91
Figure 108135510-A0202-12-0223-529
Figure 108135510-A0202-12-0224-530
<210> 92
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Humanized Heavy chain variable region
<400> 92
Figure 108135510-A0202-12-0224-531
Figure 108135510-A0202-12-0225-532
<210> 93
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Humanized Heavy chain
<400> 93
Figure 108135510-A0202-12-0225-533
Figure 108135510-A0202-12-0226-534
Figure 108135510-A0202-12-0227-535
<210> 94
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人
<400> 94
Figure 108135510-A0202-12-0227-536
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<400> 95
Figure 108135510-A0202-12-0227-537
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> X represents Pro,Ala,Cys,Gly,Ser,Thr,or Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> X represents Pro,Ala,Cys,Gly,Ser,Thr,or Val.
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> X represents Pro,Ala,Cys,Gly,Ser,Thr,Val,Met,Leu,Ile or Phe.
<400> 96
Figure 108135510-A0202-12-0228-538
<210> 97
<211> 357
<212> PRT
<213> 智人
<400> 97
Figure 108135510-A0202-12-0228-539
Figure 108135510-A0202-12-0229-540
<210> 98
<211> 355
<212> PRT
<213> 智人
<400> 98
Figure 108135510-A0202-12-0229-541
Figure 108135510-A0202-12-0230-542
Figure 108135510-A0202-12-0231-543
<210> 99
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> X represents any amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> X represents any amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (34)..(34)
<223> X represents any amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (35)..(35)
<223> X represents any amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> X represents any amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (51)..(51)
<223> X represents any amino acid
<400> 99
Figure 108135510-A0202-12-0232-544
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RT-loop sequence
<400> 100
Figure 108135510-A0202-12-0232-546
<210> 101
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<400> 101
Figure 108135510-A0202-12-0232-545
Figure 108135510-A0202-12-0233-547
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 102
Figure 108135510-A0202-12-0233-548
<210> 103
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<400> 103
Figure 108135510-A0202-12-0233-549
<210> 104
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 104
Figure 108135510-A0202-12-0234-550
<210> 105
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<400> 105
Figure 108135510-A0202-12-0234-551
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 106
Figure 108135510-A0202-12-0234-552
<210> 107
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<400> 107
Figure 108135510-A0202-12-0235-553
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 108
Figure 108135510-A0202-12-0235-554
<210> 109
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<400> 109
Figure 108135510-A0202-12-0235-555
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 110
Figure 108135510-A0202-12-0236-556
<210> 111
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<400> 111
Figure 108135510-A0202-12-0236-557
<210> 112
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 112
Figure 108135510-A0202-12-0236-558
<210> 113
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<220>
<221> misc_feature
<222> (51)..(51)
<223> X represents any amino acid.
<400> 113
Figure 108135510-A0202-12-0237-559
<210> 114
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 114
Figure 108135510-A0202-12-0237-560
<210> 115
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SRC loop
<400> 115
Figure 108135510-A0202-12-0237-561
<210> 116
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fynomer
<400> 116
Figure 108135510-A0202-12-0238-562
<210> 117
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> conserved sequence
<400> 117
Figure 108135510-A0202-12-0238-563
<210> 118
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人
<400> 118
Figure 108135510-A0202-12-0238-564
<210> 119
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人
<400> 119
Figure 108135510-A0202-12-0239-565
<210> 120
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人
<400> 120
Figure 108135510-A0202-12-0239-566
<210> 121
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人
<400> 121
Figure 108135510-A0202-12-0239-567
<210> 122
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<400> 122
Figure 108135510-A0202-12-0239-568
<210> 123
<211> 24
<212> PRT
<213> 智人
<400> 123
Figure 108135510-A0202-12-0240-569
<210> 124
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> negative control peptide
<400> 124
Figure 108135510-A0202-12-0240-570
<210> 125
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bi-specific binding agent hF6-HN-G7
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> signaling sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(83)
<223> Fynomer portion
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(98)
<223> linker
<400> 125
Figure 108135510-A0202-12-0240-571
Figure 108135510-A0202-12-0241-572
Figure 108135510-A0202-12-0242-573
Figure 108135510-A0202-12-0243-574
<210> 126
<211> 311
<212> PRT
<213> 小鼠肌肉
<400> 126
Figure 108135510-A0202-12-0243-575
Figure 108135510-A0202-12-0244-576
<210> 127
<211> 313
<212> PRT
<213> Rattus norvegicus
<400> 127
Figure 108135510-A0202-12-0244-577
Figure 108135510-A0202-12-0245-578
Figure 108135510-A0202-12-0246-579
<210> 128
<211> 338
<212> PRT
<213> Macaca mulatta
<400> 128
Figure 108135510-A0202-12-0246-580
Figure 108135510-A0202-12-0247-581
<210> 129
<211> 310
<212> PRT
<213> Canis lupus familiaris
<400> 129
Figure 108135510-A0202-12-0248-582
Figure 108135510-A0202-12-0249-583
<210> 130
<211> 310
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 130
Figure 108135510-A0202-12-0249-584
Figure 108135510-A0202-12-0250-585
<210> 131
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RT loop sequence
<400> 131
Figure 108135510-A0202-12-0251-586
<210> 132
<211> 1629
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Coding sequence for bi-specific binding agent hF6-HN-G7
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1629)
<400> 132
Figure 108135510-A0202-12-0251-587
Figure 108135510-A0202-12-0252-588
Figure 108135510-A0202-12-0253-589
<210> 133
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 133
Figure 108135510-A0202-12-0253-590
Figure 108135510-A0202-12-0254-591
Figure 108135510-A0202-12-0255-592
Figure 108135510-A0202-12-0256-593
<210> 134
<211> 1629
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Non coding sequence for bi-specific binding agent hF6-HN-G7
<400> 134
Figure 108135510-A0202-12-0256-594
Figure 108135510-A0202-12-0257-595
<210> 135
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bi-specific binding agent hF6-A118C-HN-G7
<400> 135
Figure 108135510-A0202-12-0257-596
Figure 108135510-A0202-12-0258-597
Figure 108135510-A0202-12-0259-598
<210> 136
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bispecific binding agent hF6-S119C-HN-G7
<400> 136
Figure 108135510-A0202-12-0260-599
Figure 108135510-A0202-12-0261-600
Figure 108135510-A0202-12-0262-601
<210> 137
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bispecific binding agent hF6-S239C-HN-G7
<400> 137
Figure 108135510-A0202-12-0262-602
Figure 108135510-A0202-12-0263-603
Figure 108135510-A0202-12-0264-604
<210> 138
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bispecific binding agent hF6-V282C-HN-G7
<400> 138
Figure 108135510-A0202-12-0265-605
Figure 108135510-A0202-12-0266-606
Figure 108135510-A0202-12-0267-607
<210> 139
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bispecific binding agent hF6-T289C-G7
<400> 139
Figure 108135510-A0202-12-0267-608
Figure 108135510-A0202-12-0268-609
Figure 108135510-A0202-12-0269-610
<210> 140
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bispecific agent hF6-N361C-HN-G7
<400> 140
Figure 108135510-A0202-12-0270-611
Figure 108135510-A0202-12-0271-612
Figure 108135510-A0202-12-0272-613
<210> 141
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> bispecific binding agent hF6-V422C-HN-G7
<400> 141
Figure 108135510-A0202-12-0272-614
Figure 108135510-A0202-12-0273-615
Figure 108135510-A0202-12-0274-616

Claims (147)

  1. 一種雙特異性結合劑，其包含(a)特異性結合於syndecan-1(CD138)之抗體或其抗原結合部份；及(b)特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)之Fynomer，其中Fynomer包含具有與下列胺基酸序列為至少90%一致性之胺基酸序列之多肽：(i)GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQIL(X1)(X2)(X3)(X4)GPYWEARSL(X5)TGETG(X6)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：99)或(ii)GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETG(X7)IPSNYVAPVDSIQ(SEQ ID NO：113)，其中(X1)、(X2)、(X3)、(X4)、(X5)、(X6)與(X7)胺基酸係選自任何胺基酸。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係共價附接至Fynomer。
  3. 如申請專利範圍第1或2項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於syndecan-1之細胞外區。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於包含胺基酸序列AGEGPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：94)之多肽。
  5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份與另一種會特異性結合於包含胺基酸序列AGEGPKEGEAVVLP(SEQ ID NO：94)之多肽之結合劑競爭結合。
  6. 如申請專利範圍第1至5項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列輕鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-L1(輕鏈 CDR1)，其包含與選自SEQ ID NO：2至15之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列；(ii)CDR-L2(輕鏈CDR2)，其包含與選自SEQ ID NO：16至26之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列；及(iii)CDR-L3(輕鏈CDR3)，其包含與選自SEQ ID NO：27至33之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含下列重鏈互補決定區(CDR)：(i)CDR-H1(重鏈CDR1)，其包含與選自SEQ ID NO：45至59之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列；(ii)CDR-H2(重鏈CDR2)，其包含與選自SEQ ID NO：60至71之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列；及(iii)CDR-H3(重鏈CDR3)，其包含與選自SEQ ID NO：72至81之胺基酸序列具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：18具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：28具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：47具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：60具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：73具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  9. 如申請專利範圍第7或8項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：17具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：27具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：47具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：61具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：73具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  10. 如申請專利範圍第7至9項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：16具有至少85%一致性之胺基酸序列；CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：46或SEQ ID NO：45具有至少85%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：72具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  11. 如申請專利範圍第7或8項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：16具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：27具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：45具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：60具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：72具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  12. 如申請專利範圍第7至11項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係經人源化。
  13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含：人源化輕鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO：41、42、與43所組成之群中之胺基酸序列；及/或人源化重鏈可變區，其包含選自SEQ ID NO：89、90、91與92所組成之群中之胺基酸序列。
  14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含：人源化輕鏈可變區，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：41具有至少85%一致性之胺基酸序列；及/或人源化重鏈可 變區，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：90具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  15. 如申請專利範圍第14項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含：人源化輕鏈，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：44具有至少85%一致性之胺基酸序列；及/或人源化重鏈，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：93具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  16. 如申請專利範圍第7項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：5具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：21具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：30具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：50具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：64或62具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：75具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  17. 如申請專利範圍第7或16項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：4具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：20具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：29具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：50具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：63具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：75具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  18. 如申請專利範圍第7、16及17項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中
    CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：19具有至少85%一致性之胺基酸序列；CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：48或49具有至少85%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：74具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  19. 如申請專利範圍第7項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：7具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：22具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：30具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：50具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：64或62具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：76具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  20. 如申請專利範圍第7或19項所述之雙特異性結合劑，其中
    CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：6具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：29具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：51具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：63具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  21. 如申請專利範圍第7項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：9具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：23具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：31具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：53具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：66具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：77具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  22. 如申請專利範圍第7或21項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：8具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：23具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：31具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：53具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：65具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：77具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  23. 如申請專利範圍第7、21或22項所述之雙特異性結合劑，其中
    CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：52具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  24. 如申請專利範圍第7項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：11具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：24具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：30具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：50具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：64或62具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：79具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  25. 如申請專利範圍第7或24項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：10具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：24具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：29具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：50具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：67具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：79具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  26. 如申請專利範圍第7、24或25項所述之雙特異性結合劑，其中
    CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：54具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：78具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  27. 如申請專利範圍第7項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：13具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：25具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：32具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：56具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：69具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：80具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  28. 如申請專利範圍第7或27項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：13具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：25具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：32具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：56具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：68具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：80具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  29. 如申請專利範圍第7、27或28項所述之雙特異性結合劑，其中
    CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：55具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  30. 如申請專利範圍第7項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：15具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：26具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：33具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：57或59具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：70具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：81具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  31. 如申請專利範圍第7或30項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：14具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：26具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：33具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：59具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：71具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：81具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  32. 如申請專利範圍第7、30或31項所述之雙特異性結合劑，其中
    CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：58具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  33. 如申請專利範圍第1至7及16至32項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含人源化輕鏈可變區及/或人源化重鏈可變區。
  34. 如申請專利範圍第1至33項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體為包含人類輕鏈恆定區及/或人類重鏈恆定區之嵌合抗體。
  35. 如申請專利範圍第1至34項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1，其結合親和力(KD)為50nM以下。
  36. 如申請專利範圍第1至35項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中FGFR3為FGFR3同型3b或FGFR3同型3c。
  37. 如申請專利範圍第36項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於人類FGFR3同型3b及FGFR3同型3c。
  38. 如申請專利範圍第1至37項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含與胺基酸序列SEQ ID NO：99為至少95%一致性之胺基酸序列，其中該一致性測定不包括位置(X1)至(X6)之胺基酸，且其條件為保留SEQ ID NO：99胺基酸位置12至19之胺基酸序列EVYGPTPM(SEQ ID NO：100)及保留SEQ ID NO：99胺基酸位置37與38之胺基酸P與Y。
  39. 如申請專利範圍第1至37項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含與胺基酸序列SEQ ID NO：113為至少95%一致性之胺基酸序列，其中該一致性測定不包括位置(X7)之胺基酸，且其條件為保留SEQ ID NO：113胺基酸位置12至18之胺基酸序列EVMSTTA(SEQ ID NO：114)及保留SEQ ID NO：113胺基酸位置37與38之胺基酸Q與Y。
  40. 如申請專利範圍第1至37及39項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中(X7)為Y、W或L。
  41. 如申請專利範圍第40項所述之雙特異性結合劑，其中(X7)為W或L。
  42. 如申請專利範圍第38項所述之雙特異性結合劑，其中
    (X1)為N、R、或K；
    (X2)為S、G、K或R；
    (X3)為S或G；
    (X4)為E、Q、D、S或K；
    (X5)為T或A；及
    (X6)為Y、W或L。
  43. 如申請專利範圍第42項所述之雙特異性結合劑，其中
    (X1)為R、或K；
    (X2)為G、K或R；
    (X3)為S；
    (X4)為Q、D、S或K；
    (X5)為T或A；及
    (X6)為W或L。
  44. 如申請專利範圍第1至37項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer包含多肽，該多肽包含與選自下列者之胺基酸序列為至少90%一致性之胺基酸序列：
    (SEQ ID NO：101；FF2L4C3)
    GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILNSSEGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
    (SEQ ID NO：103；FF44L65G12)
    GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGQGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
    (SEQ ID NO：105；FF44L65G7)
    GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRGGDGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
    (SEQ ID NO：107；FF48L66G7；「G7」)
    GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILKGGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
    (SEQ ID NO：109；FF43L65D5)
    GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRKGKGPYWEARSLATGETGLIPSNYVAPVDSIQ；
    (SEQ ID NO：111；FF44L65B7)
    GVTLFVALYDYEVYGPTPMLSFHKGEKFQILRRGSGPYWEARSLTTGETGLIPSNYVAPVDSIQ；及
    (SEQ ID NO：116；FF40L54A5)
    GVTLFVALYDYEVMSTTALSFHKGEKFQILSQSPHGQYWEARSLTTGETGWIPSNYVAPVDSIQ。
  45. 如申請專利範圍第1至44項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3之細胞外區。
  46. 如申請專利範圍第1至45項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3或其一部份，其結合親和力(KD)為約10-5M至約10-15M。
  47. 如申請專利範圍第1至46項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於FGFR3或其一部份，其結合親和力(KD)為10-8M以下。
  48. 如申請專利範圍第1至47項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係經糖基化。
  49. 如申請專利範圍第1至48項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係利用連接子共價附接至抗體或其抗原結合部份。
  50. 如申請專利範圍第49項所述之雙特異性結合劑，其中連接子包含肽鍵。
  51. 如申請專利範圍第49或50項所述之雙特異性結合劑，其中連接子包含含有一個或多個胺基酸、5至100個胺基酸、5至50個胺基酸、5至25個胺基酸、5至20個胺基酸、或5至10個胺基酸之肽。
  52. 如申請專利範圍第49、50或51項所述之雙特異性結合劑，其中連接子包含視需要經取代之C1-C50烷基、視需要經取代之C2-C50烯基、炔基、 醯基、醯基氧基、烷氧基、芳基氧基、環烷基、環烯基、環烷氧基、芳基、胺基羰基、疊氮基、羧基、硫基、亞碸、碸、磺酸酯、氰基、醯胺、胺基、酯、或其組合。
  53. 如申請專利範圍第1至52項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈或輕鏈之胺基末端。
  54. 如申請專利範圍第1至52項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈或輕鏈之羧基末端。
  55. 如申請專利範圍第1至54項中任一項所述之雙特異性結合劑，其進一步包含抗贅瘤劑。
  56. 如申請專利範圍第55項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係選自下列各者所成群組：尾海兔素(dolastatin)、微管抑制素(auristatin)、美登素(maytansine)、微管菌素(tubulysin)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)、倍癌黴素(duocarmycin)、阿黴素(doxorubicin)、假單胞菌外毒素-A(PE38)、伊立替康(irinotecan)及上述任一者之衍生物。
  57. 如申請專利範圍第55或56項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係共價附接至雙特異性結合劑。
  58. 如申請專利範圍第55至57項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係附接至抗體或其抗原結合部份。
  59. 如申請專利範圍第55至57項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係附接至Fynomer。
  60. 如申請專利範圍第55至59項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑係利用連接子共價附接至雙特異性結合劑。
  61. 如申請專利範圍第55至60項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含單甲基微管抑制素E(MMAE)或單甲基微管抑制素F(MMAF)。
  62. 如申請專利範圍第55至61項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含吡咯并苯并二氮呯毒素。
  63. 如申請專利範圍第62項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含連接基，其中吡咯并苯并二氮呯毒素係與連接基共價連接，及該連接基係與雙特異性結合劑共價連接。
  64. 如申請專利範圍第62或63項所述之雙特異性結合劑，其中吡咯并苯并二氮呯毒素包含化學式I之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0018-617
     其中
    Z1與Z2均為N；
    Z3與Z4均為C；
    雙虛線
    Figure 108135510-A0202-13-0018-618
    代表單鍵或雙鍵；
    n為1至10；
    各R3與R4獨立地為H、或C1-4烷氧基；及
    各R1與R2係獨立地選自下列各者所成群組：H、C1-5烷基、C3-6環烷基、C2-5烯基、及視需要經R5取代之苯基，其中
    R5係選自下列各者所成群組：-NH2、-NHR6、及經如下結構式之R7取代之哌嗪基
    Figure 108135510-A0202-13-0019-619
    其中R6包含連接基，及
    R7為H、或C1-5烷基；
    X1為不存在、保護基、或包含連接基；
    X2為不存在、保護基、或包含連接基；
    X1、X2、R1、與R2中僅一者包含連接基；及
    各Y1與Y2獨立地為不存在、OH、或SO3H；
    但其限制條件為：
    (i)當X1包含連接基時，Z1
    Figure 108135510-A0202-13-0019-620
    Z3為N-C，
    (ii)當X2包含連接基時，Z2
    Figure 108135510-A0202-13-0019-621
    Z4為N-C，
    (iii)當X1為保護基時，Z1
    Figure 108135510-A0202-13-0019-622
    Z3為N-C，及
    (iv)當X2為保護基時，Z2
    Figure 108135510-A0202-13-0019-623
    Z4為N-C，
    其中不存在意指沒有部份體存在或存在一個或多個氫，以滿足所要求之價數。
  65. 如申請專利範圍第64項所述之雙特異性結合劑，其中n為3、4或5。
  66. 如申請專利範圍第64或65項所述之雙特異性結合劑，其中R3與R4均為-O-CH3。
  67. 如申請專利範圍第64至66項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中R1與R2均為甲基。
  68. 如申請專利範圍第64至66項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中R1與R2均為-CH=CH-CH3。
  69. 如申請專利範圍第64至66項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中R2為環丙基。
  70. 如申請專利範圍第64至66項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中R2為經4-甲基哌嗪-1-基取代之苯基。
  71. 如申請專利範圍第69或70項所述之雙特異性結合劑，其中R1為視需要經R5取代之苯基，R5為-NHR6，及R6包含連接基。
  72. 如申請專利範圍第64至66及69至71項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中X1為不存在，Y1為不存在，Z1
    Figure 108135510-A0202-13-0020-624
    Z3為N=C，X2為不存在，Y2為不存在，及Z2
    Figure 108135510-A0202-13-0020-625
    Z4為N=C。
  73. 如申請專利範圍第64至70項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中X1包含連接基，Y1為OH，Z2
    Figure 108135510-A0202-13-0020-626
    Z4為N=C，X2為不存在，及Y2為不存在。
  74. 如申請專利範圍第64至70項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中X1包含連接基，Y1為OH，Z2
    Figure 108135510-A0202-13-0020-627
    Z4為N-C，X2為保護基，及Y2為OH。
  75. 如申請專利範圍第64至74項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中連接基係利用胺甲酸根基團附接至吡咯并苯并二氮呯毒素。
  76. 如申請專利範圍第64至74項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中連接基係利用醯胺基附接至吡咯并苯并二氮呯毒素。
  77. 如申請專利範圍第634至76項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中連接基包含化學式(A)之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0021-628
     其中
    星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；
    波浪線代表與結合劑之附接點；
    m為1至20；
    q為0至10；及
    E為連接基團。
  78. 如申請專利範圍第77項所述之雙特異性結合劑，其中m為4或8。
  79. 如申請專利範圍第77或78項所述之雙特異性結合劑，其中q為0、1或2。
  80. 如申請專利範圍第77項所述之雙特異性結合劑，其中m為8，及q為2。
  81. 如申請專利範圍第64至76項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中連接基包含化學式(B)之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0021-629
     其中
    星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；
    波浪線代表與結合劑之附接點；
    E為連接基團；
    v為0至10；及
    u為0或1；其中當u為1時，t為1至10。
  82. 如申請專利範圍第81項所述之雙特異性結合劑，其中v為1。
  83. 如申請專利範圍第81或82項所述之雙特異性結合劑，其中u為1，及t為8。
  84. 如申請專利範圍第81項所述之雙特異性結合劑，其中u為0，及v為4。
  85. 如申請專利範圍第77至84項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中結合劑係利用結合劑之半胱胺酸硫醇殘基與E之間形成之硫醚鍵來連接E。
  86. 如申請專利範圍第77至85項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中E包含化學式(C)之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0022-630
     其中波浪線代表與結合劑之附接點，及雙星號代表與連接基之附接點。
  87. 如申請專利範圍第64至86項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中保護基具有下列結構(D)：
    Figure 108135510-A0202-13-0022-631
     其中星號代表與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；及
    w為1至5。
  88. 如申請專利範圍第87項所述之雙特異性結合劑，其中w為2。
  89. 如申請專利範圍第64至88項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中保護基為可裂解之保護基。
  90. 如申請專利範圍第64項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含選自下列各者所成群組之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0023-632
     其中m為8；
    Figure 108135510-A0202-13-0023-633
     其中m為8，p為3，及X2為保護基；
    Figure 108135510-A0202-13-0024-634
     其中m為8；
    Figure 108135510-A0202-13-0024-635
     其中t為8，及v為1；及
    Figure 108135510-A0202-13-0024-636
     其中波浪線代表與結合劑之附接點。
  91. 如申請專利範圍第90項所述之雙特異性結合劑，其中X2之保護基具有下列結構(D)：
    Figure 108135510-A0202-13-0025-637
     其中星號代表與抗贅瘤劑之附接點，及w為1至5。
  92. 如申請專利範圍第64至91項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中結合劑之至少一個胺基酸突變成半胱胺酸，且該半胱胺酸係利用硫醇醚鍵與連接基共價連接。
  93. 如申請專利範圍第64或92項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含化學式(II)之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0025-638
     其中m為8，及波浪線代表與結合劑硫醇基之附接點。
  94. 如申請專利範圍第1至93項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份與第二種結合劑競爭結合至syndecan-1，該第二種結合劑包含：CDR-L1，其具有與選自SEQ ID NO：2至15之胺基酸序列為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其具有與選自SEQ ID NO：16至26之胺基酸序列為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其具有與選自SEQ ID NO：27至33之胺基酸序列為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1， 其具有與選自SEQ ID NO：45至59之胺基酸序列為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其具有與選自SEQ ID NO：60至71之胺基酸序列為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其具有與選自SEQ ID NO：72至81之胺基酸序列為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  95. 如申請專利範圍第94項所述之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：CDR-L1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：3為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：18為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：28為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：47為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：60為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：73為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  96. 如申請專利範圍第94項所述之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：CDR-L1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：2為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：17為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-L3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：27為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：47為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H2，其具 有與胺基酸序列SEQ ID NO：61為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：73為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  97. 如申請專利範圍第95項所述之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：CDR-L2，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：16為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；CDR-H1，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：45或46為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及CDR-H3，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：72為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  98. 如申請專利範圍第94至97項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含人源化輕鏈可變區與人源化重鏈可變區。
  99. 如申請專利範圍第98項所述之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：人源化輕鏈可變區，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：41為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及人源化重鏈可變區，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：90為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  100. 如申請專利範圍第98或99項所述之雙特異性結合劑，其中第二種結合劑包含：人源化輕鏈，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：44為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列；及人源化重鏈，其具有與胺基酸序列SEQ ID NO：93為至少85%、至少90%、至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  101. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至100項中任一項所述之雙特異性結合劑，與醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載劑。
  102. 如申請專利範圍第101項所述之醫藥組成物，其係用於治療贅瘤。
  103. 如申請專利範圍第102項所述之醫藥組成物，其中贅瘤包含表現syndecan-1之贅瘤細胞或癌細胞。
  104. 如申請專利範圍第102或103項所述之醫藥組成物，其中贅瘤係選自：癌瘤、肉瘤、神經系統贅瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、間皮瘤、實體或軟組織腫瘤，及繼發性癌。
  105. 一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體之方法，其包括：
    a)提供患有或疑似患有贅瘤之個體；及
    b)對該個體投與醫療有效量之如申請專利範圍第1至100項中任一項所述之雙特異性結合劑，或如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物。
  106. 如申請專利範圍第105項所述之方法，其中在投與雙特異性結合劑後，該雙特異性結合劑會阻斷、抑制、緩解、消除、或壓制贅瘤之生長、活力或轉移。
  107. 如申請專利範圍第105至106項中任一項所述之方法，其中在投與雙特異性結合劑後，該雙特異性結合劑會誘發有些或所有贅瘤死亡、壞死或凋亡。
  108. 如申請專利範圍第105至107項中任一項所述之方法，其中該贅瘤包含癌瘤、肉瘤、神經母細胞瘤、膠質母細胞瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、黑色素瘤或實體或軟組織腫瘤。
  109. 如申請專利範圍第108項所述之方法，或如申請專利範圍第102至104項中任一項所述之醫藥組成物，其中贅瘤包含膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、胰臟癌、食道癌、肝臟癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌瘤、卵巢癌或腎癌。
  110. 如申請專利範圍第108或109項所述之方法，或如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物，其中贅瘤包含胰臟腺癌瘤、胰臟神經內分泌癌、結腸直腸腺癌瘤、小腸惡性病、膽道癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌、胃腺癌瘤、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、雌性生殖道惡性病、乳房癌瘤、三陰性乳癌、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後或腹膜肉瘤、攝護腺腺癌瘤、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤或非上皮卵巢癌。
  111. 如申請專利範圍第108項所述之方法，或如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：多發性骨髓瘤、卵巢癌瘤、子宮頸癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、睪丸癌、腎臟癌瘤、膽囊癌瘤、移行上皮細胞膀胱癌瘤、胃癌、攝護腺癌、攝護腺腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌瘤、何傑金氏(Hodgkin’s)與非何傑金氏淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、急性骨髓母細胞性白血病(AML)、T-細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)、實體組織肉瘤、結腸癌瘤、非小細胞肺癌瘤、鱗狀細胞肺癌瘤、結腸直腸癌瘤、肝癌瘤、胰臟癌、腦癌(例如，神經母細 胞瘤或腦膜瘤)、皮膚癌(例如，黑色素瘤、基底細胞癌瘤、或鱗狀細胞癌瘤)、及頭與頸癌瘤。
  112. 如申請專利範圍第105至111項中任一項所述之方法，其進一步包括對個體投與化療劑。
  113. 如申請專利範圍第105至112項中任一項所述之方法，其中個體為人類。
  114. 如申請專利範圍第1至100項中任一項所述之雙特異性結合劑，或如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物，其係用於治療患有或疑似患有贅瘤之個體。
  115. 如申請專利範圍第105至114項中任一項所述之方法或用途，其中贅瘤包含表現syndecan-1或FGFR3之贅瘤細胞或癌細胞。
  116. 如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、胰臟癌、食道癌、肝臟癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌瘤、卵巢癌與腎癌。
  117. 如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：胰臟腺癌瘤、胰臟神經內分泌癌、結腸直腸腺癌瘤、小腸惡性病、膽道癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌、胃腺癌瘤、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、雌性生殖道惡性病、乳房癌瘤、三陰性乳癌、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後或腹膜肉瘤、攝護腺腺癌瘤、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤與非上皮卵巢癌。
  118. 如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：多發性骨髓瘤、卵巢癌瘤、子宮頸癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、睪丸癌、腎臟癌瘤、膽囊癌瘤、移行上皮細胞膀胱癌瘤、胃癌、攝護腺癌、攝護腺腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌瘤、何傑金氏與非何傑金氏淋巴瘤及多發性骨髓瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、T-細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)、急性骨髓母細胞性白血病(AML)、實體組織肉瘤、結腸癌瘤、非小細胞肺癌瘤、鱗狀細胞肺癌瘤、結腸直腸癌瘤、肝癌瘤、胰臟癌、腦癌(例如，神經母細胞瘤或腦膜瘤)、皮膚癌(例如，黑色素瘤、基底細胞癌瘤、或鱗狀細胞癌瘤)、及頭與頸癌瘤。
  119. 如申請專利範圍第105至113項中任一項所述之方法，或如申請專利範圍第101至104項中任一項所述之醫藥組成物，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：腎上腺皮質癌瘤、膀胱泌尿上皮癌瘤、乳房侵襲性癌瘤、子宮頸鱗狀細胞癌瘤、子宮頸內腺癌瘤、膽道癌瘤、結腸腺癌瘤、結腸直腸腺癌瘤、淋巴癌瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食道癌瘤、多形性膠質母細胞瘤、膠質瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、腎臟嫌色細胞、混合腎癌(pan-kidney cohort)(KICH+KIRC+KIR)、腎臟腎亮細胞癌瘤、腎臟腎乳突細胞癌瘤、急性骨髓性白血病、腦低度膠質瘤、肝臟肝細胞癌瘤、肺腺癌瘤、肺鱗狀細胞癌瘤、間皮瘤、卵巢漿液性囊腺癌瘤、胰臟腺癌瘤、嗜鉻細胞瘤與副神經節瘤、攝護腺腺癌瘤、直腸腺癌瘤、肉瘤、皮膚黑色素瘤、胃腺癌瘤、胃與食道癌瘤、睾丸生殖細胞腫瘤、甲狀腺癌瘤、胸腺瘤、子宮體內膜癌瘤、子宮惡性肉瘤、及萄膜黑色素瘤。
  120. 如申請專利範圍第105至113項中任一項所述之方法，其中贅瘤係膀胱癌。
  121. 如申請專利範圍第104至113項中任一項所述之方法，其中贅瘤係多發性骨髓瘤。
  122. 如申請專利範圍第105至113項中任一項所述之方法，其中贅瘤係食道癌。
  123. 一種雙特異性結合劑，其包含
    (a)抗體或其抗原結合部份，其包含下列互補決定區(CDR)：
    (i)CDR-L1，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：18具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：28具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：47具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：60具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：73具有至少85%一致性之胺基酸序列，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於syndecan-1(CD138)；及
    (b)Fynomer，係包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：107為至少85%一致性之胺基酸序列之多肽，其中Fynomer係特異性結合於纖維母細胞生長因子受體3(FGFR3)。
  124. 如申請專利範圍第123項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：17具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：27具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：47具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：61具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：73具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  125. 如申請專利範圍第123項所述之雙特異性結合劑，其中
    (i)CDR-L1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (ii)CDR-L2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：16具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iii)CDR-L3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：27具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (iv)CDR-H1包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：45具有至少85%一致性之胺基酸序列；
    (v)CDR-H2包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：60具有至少85%一致性之胺基酸序列；及
    (vi)CDR-H3包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：72具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  126. 如申請專利範圍第123、124或125項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含：人源化輕鏈可變區，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：41具有至少85%一致性之胺基酸序列；及/或人源化重鏈可變區，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：90具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  127. 如申請專利範圍第126項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份包含：人源化輕鏈，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：44具有至少85%一致性之胺基酸序列；及/或人源化重鏈，其包含或其組成為與胺基酸序列SEQ ID NO：93具有至少85%一致性之胺基酸序列。
  128. 如申請專利範圍第123至127項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於猴子syndecan-1之細胞外結構域。
  129. 如申請專利範圍第123至128項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體或其抗原結合部份係特異性結合於人類syndecan-1、猴子syndecan-1及小鼠syndecan-1之細胞外結構域，其結合親和力(KD)為50nM以下。
  130. 如申請專利範圍第123至129項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體包含人類IgG之重鏈恆定區，而重鏈恆定區包含選自下列者之胺基酸取代：A118C(位置118丙胺酸成為半胱胺酸)、S119C(位置119絲胺酸成為 半胱胺酸)、S239C(位置239絲胺酸成為半胱胺酸)、V282C(位置282纈胺酸成為半胱胺酸)、T289C(位置289蘇胺酸成為半胱胺酸)、N361C(位置361天冬醯胺成為半胱胺酸)、及/或V422C(位置422纈胺酸成為半胱胺酸)、A118K(位置118丙胺酸成為離胺酸)、S119K(位置119絲胺酸成為離胺酸)、S239K(位置239絲胺酸成為離胺酸)、V282K(位置282纈胺酸成為離胺酸)、T289K(位置289蘇胺酸成為離胺酸)、N361K(位置361天冬醯胺成為離胺酸)、及/或V422K(位置422纈胺酸成為離胺酸)。
  131. 如申請專利範圍第123至129項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中抗體包含人類IgG之重鏈恆定區，而重鏈恆定區在重鏈恆定區位置119包含絲胺酸成為半胱胺酸之胺基酸取代。
  132. 如申請專利範圍第123至131項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer係特異性結合於人類FGFR3同型3b與人類FGFR3同型3c。
  133. 如申請專利範圍第123至132項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中Fynomer之羧基末端(C-末端)係連接於抗體或其結合部份之重鏈可變區之胺基末端(N-末端)，其中Fynomer係利用肽鍵連接於抗體重鏈可變區。
  134. 如申請專利範圍第123至133項中任一項所述之雙特異性結合劑，其中雙特異性結合劑包含抗贅瘤劑。
  135. 如申請專利範圍第134項所述之雙特異性結合劑，其中抗贅瘤劑包含吡咯并苯并二氮呯毒素。
  136. 如申請專利範圍第135項所述之雙特異性結合劑，其中吡咯并苯并二氮呯毒素包含如下示化學式VIII之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0036-639
     其中X1包含連接基。
  137. 如申請專利範圍第135或136項所述之雙特異性結合劑，其中吡咯并苯并二氮呯毒素包含如下示化學式II之結構：
    Figure 108135510-A0202-13-0036-640
     其中m為8，吡咯并苯并二氮呯毒素係共價附接至抗體或其抗原結合部份之重鏈，及波浪線代表吡咯并苯并二氮呯毒素與結合劑硫醇基之附接點。
  138. 如申請專利範圍第137項所述之雙特異性結合劑，其中(i)抗體包含人類IgG之重鏈恆定區，(ii)重鏈恆定區包含在重鏈恆定區位置119之絲胺酸成為半胱胺酸之胺基酸取代，及(iii)吡咯并苯并二氮呯毒素係共價附接至位在重鏈恆定區位置119之半胱胺酸之硫醇基。
  139. 如申請專利範圍第123至138項中任一項所述之雙特異性結合劑，其包含Fynomer及SEQ ID NO：125之重鏈胺基酸序列與SEQ ID NO：44之輕鏈胺基酸序列。
  140. 如申請專利範圍第135至138項中任一項所述之雙特異性結合劑，其包含(i)Fynomer與SEQ ID NO：125之重鏈胺基酸序列，其中SEQ ID NO：125胺基酸位置213之絲胺酸係突變成半胱胺酸，及(ii)SEQ ID NO：44之輕鏈胺基酸序列，其中吡咯并苯并二氮呯毒素係共價附接至半胱胺酸之硫醇基。
  141. 一種治療患有或疑似患有贅瘤之個體的方法，其包括：
    a)提供患有或疑似患有贅瘤之個體；及
    b)對該個體投與醫療有效量之如申請專利範圍第123至140項中任一項所述之雙特異性結合劑。
  142. 如申請專利範圍第141項所述之方法，其中贅瘤包含癌瘤、肉瘤、神經母細胞瘤、膠質母細胞瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、黑色素瘤或實體或軟組織腫瘤。
  143. 如申請專利範圍第141項所述之方法，其中贅瘤包含膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、胰臟癌、食道癌、肝臟癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌瘤、卵巢癌或腎癌。
  144. 如申請專利範圍第141項所述之方法，其中贅瘤包含胰臟腺癌瘤、胰臟神經內分泌癌、結腸直腸腺癌瘤、小腸惡性病、膽道癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌、胃腺癌瘤、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、雌性生殖道惡性病、乳房癌瘤、三陰性乳癌、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後或腹膜肉瘤、攝護腺腺癌瘤、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤或非上皮卵巢癌。
  145. 如申請專利範圍第141項所述之方法，其中贅瘤係選自下列各者所成群組：多發性骨髓瘤、卵巢癌瘤、子宮頸癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、睪 丸癌、腎臟癌瘤、膽囊癌瘤、移行上皮細胞膀胱癌瘤、胃癌、攝護腺癌、攝護腺腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌瘤、何傑金氏與非何傑金氏淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、急性骨髓母細胞性白血病(AML)、T-細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)、實體組織肉瘤、結腸癌瘤、非小細胞肺癌瘤、鱗狀細胞肺癌瘤、結腸直腸癌瘤、肝癌瘤、胰臟癌、腦癌(例如，神經母細胞瘤或腦膜瘤)、皮膚癌(例如，黑色素瘤、基底細胞癌瘤、或鱗狀細胞癌瘤)、及頭與頸癌瘤。
  146. 如申請專利範圍第141項所述之方法，其中贅瘤為膀胱癌、多發性骨髓瘤、或食道癌。
  147. 如申請專利範圍第139至146項中任一項所述之方法，其中贅瘤包含表現syndecan-1及/或FGFR3之贅瘤細胞或癌細胞。
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