KR20210068936A - 천연물을 포함하는 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물 - Google Patents
천연물을 포함하는 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 천연추출물을 포함하는 아토피 피부 개선 및 피부 보습용 조성물에 관한 것으로, 소성산호분말, 부평초 및 침향을 이용하여, 비만세포 혹은 호중성과립구의 히스타민 방출 및 β-헥소사미니데이즈 방출 억제능을 나타내는 것으로 아토피 피부를 개선할 수 있으며, 피부의 장벽 강화 및 수분 함유량을 증가시키는 아토피 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 천연물을 포함하는 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 소성산호분말, 부평초 및 침향을 이용하여, 비만세포 혹은 호중성과립구의 히스타민 방출 및 β-hexosaminidase 방출 억제능을 나타내는 것으로 아토피 피부를 개선할 수 있으며, 수분 함유량을 증가시키는 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물에 관한 것이다.
인체의 피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 기능을 하는 기관으로서, 인체 내의 물, 전해질 등의 생체 성분의 손실을 방지하며, 동시에 외부로부터 유해물질의 침입을 막는 역할을 한다. 피부의 구조는 크게 표피층, 피층 및 피하지방으로 구분된다. 표피층은 각질세포와 멜라닌 세포로 구성되는데, 피부 최외각의 각질 세포층은 외부 환경과 직접 접촉하기 때문에 물리적, 화학적 혹은 물질의 투과에 대한 1차 방어막으로 작용한다. 또한 피부 외부로 수분 손실을 막음과 동시에 자체적으로 세포 간지질을 라멜라층으로 형성하여 자체 수분을 보유함으로써 유연성의 유지 또한 요구된다. 각질층의 중요성이 강조됨에 따라 이에 대한 연구가 활발하게 이루어지고 있으며, 특히 각질층 내에 존재하는 각질세포간 지질의 구조와 기능 등에 대한 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 각질 세포간 지질은 라멜라 구조로 명명되는 여러 층의 지질막 형태를 나타내며, 특히 세라마이드 성분이 각질세포간 지질의 기능에 중요한 역할을 하는 것으로 알려지면서 이를 활용한 다양한 보습제 등이 개발되고 있다.
한편, 아토피 피부염(atopic dermatitis)의 기전을 이해하는 데에는 면역학적 이상, 특히 Th2 면역 반응이 관여하는 염증에 기인한다는 의견이 우세하였으나, 최근에는 아토피 피부염을 표피 투과 및 항균 장벽 기능의 손상에 의한 일차적인 피부 장벽의 이상에 의한 것이라는 의견이 제시되고 있다. 즉, 아토피 피부염 환자의 피부는 유전적인 이상 및 피부 장벽을 구성하는 세라마이드 등의 지질 이상으로 표피의 수분 함유량 감소 및 피부 장벽이 기능 이상이 유발된다. 이로 인해 항원의 피부 침투가 증가하게 되고, 면역반응이 증가하며, 세정제의 사용 등에 의한 피부 pH 변화 등의 다양한 악화 요인이 피부 장벽의 악화를 심화시키게 된다.
아토피 피부염(atopic dermatitis)은 소양증, 피부 건조증, 습진 등을 동반하는 염증성 질환 또는 유전적, 환경적, 면역학적 원인으로 인하여 피부의 가장 바깥에 위치한 피부 보호벽인 각질층에 이상이 생겨서 발생하는 질환으로 건조한 기후에서는 더욱 심해지는 경향이 있다. 이러한 아토피 피부염은 다양한 원인이 복합하게 뒤엉켜 발생하고 완화와 재발을 반복한다. 아토피 소인에 의한 알레르기 질환으로 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 알레르기성 결막염, 아토피성 두드러기 등이 있으며, 이들 질환은 단독으로 또는 다른 질환과 동시에 나타날 수 있다. 아토피 피부염은 상당히 많은 사람들이 앓고 있는데, 전 인구의 0.5~1%, 어린이의 경우 5~10%가 아토피 피부염으로 고통받고 있다. 환자의 50%는 두 돌 이내에 치유되나 25%는 청소년기까지 이어지며, 나머지 25%는 성인이 되어도 아토피 피부염이 없어지지 않고 계속된다.
이러한 아토피 피부염의 원인은 명확하게 알려져 있지 않으나 주로 유전적인 요인이 많고 면역계 결핍과 관련있는 것으로 밝혀져 있다. 그 외에 건조한 피부, 정상인에 비해 쉽게 피부 가려움증을 느끼는 특성, 세균, 바이러스, 곰팡이 등에 의한 감염, 정서적 요인, 환경적 요인 등이 서로 복합적으로 작용하여 일어나는 것으로 보인다.
아토피 피부염의 주요 증상은 심한 가려움증, 피부 건조, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부(인비늘) 등이다. 특히 아토피 피부염의 극심한 가려움증은 정신적으로도 피해를 일으키며 정상적인 생활을 어렵게 한다.
아토피 체질은 근본적으로 치료하기 매우 어려우므로 아토피 피부염은 완치를 목표로 하기 보다는 유발 인자를 피하고 적절한 치료를 통해 조절해 나가고 있다. 현재 사용되고 있는 일반적인 아토피 피부염 증산 완화제로는 보습제, 소양증(가려움증)을 감소시켜주는 항히스타민제, 항염증, 혈관수축, 면역 억제 작용을 통해 치료 효과를 보는 국소 스테로이드제 등이 있으며, 아토피 피부염에 대한 처방은 이러한 스테로이드제, 항히스타민제, 항생제 등과 같은 약물요법이 주로 이루어지고 있다. 스테로이드 계열의 글루코코르티코이드(Glucocorticoid), 사이클로스포린(Cyclospoline) 등의 약물은 당뇨병, 고혈압을 유발시킬 수 있으며 쿠싱 증후군, 안과질환(백내장, 녹내장), 신장, 간 독성이 생기는 등 심각한 부작용을 초래한다. 특히, 스테로이드제(부신피질호르몬제)는 크게 소염작용과 면역억제 작용이 있으며 효과가 우수하지만, 장기간 바르면 피부약화, 전신 호르몬 증상, 중독성 등의 부작용이 나타날 수 있다. 항히스타민제는 비만세포에서 히스타민이 유리되지 못하도록 하여 가려운 증상을 경감시키지만, 임시방편으로 이용되는 것으로서, 장기간 복용시에는 불면, 불안, 식욕감퇴 등의 부작용이 있을 수 있다.
이에 아토피 피부염에 효과가 있으면서도 부작용이 없는 새로운 개념의 아토피 피부염 치료제가 요구되고 있다.
본 발명의 목적은 천연물을 포함하는 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 소성산호분말, 부평초 및 침향을 이용하여, 비만세포 혹은 호중성과립구의 히스타민 방출 및 β-헥소사미니데이즈 방출 억제능을 나타내는 것으로 아토피 피부를 개선할 수 있으며, 수분 함유량을 증가시키는 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물은 소성산호분말, 부평초, 침향 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 천연추출물을 유효성분으로 포함한다.
상기 아토피 피부는 피부건조증, 피부소양증, 피부묘기증 및 습진성 병변으로 이루어진 군으로부터 선택되는 증상인 것이다.
상기 조성물은 히스타민 및 β-헥소사미니데이즈 억제를 통해 아토피성 피부의 완화 효과를 나타내는 것이다.
상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출하는 것이다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 화장료 조성물은 상기 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 보습 크림은 상기 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 피부 재생 크림은 상기 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물'은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 식물 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한 외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 식물 추출물에 포함되는 것이다.
본 발명에서 이용되는 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 명세서에서, "염증성 질환" 이란 외부의 물리·화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염 또는 자가면역에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 염증 반응이 일으키는 병리적 증상으로서 정의될 수 있다. 이러한 염증반응은 각종 염증 매개 인자와 면역세포와 관련된 효소(iNOS, COX-2) 활성화, 염증 매개 물질의 분비 (NO, TNF-α, IL-6 등의 분비), 채액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물은 소성산호분말, 부평초, 침향 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 천연추출물을 유효성분으로 포함한다.
상기 소성산호분말은 수 억년 전의 지질시대이래 청정 해역에서만 서생하는 산호초와 산호사로 형성된 풍화퇴적 산호 석회암을 특수한 제조기술로 소성하여 물에 녹는 수용성 산화칼슘(CaO)및 소량 무기 미네랄(약70종류)이 함유되어 있는 청정 자연산 미네랄로서 사람과 동물, 식물 등 자연환경을 건강하고 무공해 한 환경으로 만들어 주는 종합 미네랄이다.
부평초(Spirodela polyrhiza)는 개구리밥과에 속하는 일년생 부유성 수생식물로 식물체는 잎처럼 넓은 도란형을 가지고 있으며 논이나 연못의 물위에 2-6개씩 모여 특이한 번식방법을 가지고 군생하며 우리나라에는 전국적으로 자생하고 있다. 또한 이는 수면에 떠 있는 작은 풀로 개구리밥의 전초를 부평초라고도 한다. 부평초의 생리활성 성분으로는 개구리밥의 전초에 flavonoid, anthocyanin 및 tannin 등이 있으며, sterol의 campesterol, β-sitosterol, flavones-O-glycoside의 apigenin-7-O-ß-D-glucoside, luteolin-7-O-β-D-glucoside 등이 함유되어 있다고 보고되었다. 또한, 엽록소, 초산칼륨 및 염화칼륨 등의 성분도 알려져 있는 데, 이는 한방작용으로 강심작용과 해혈작용 효과와 함께 면역 및 항암효과가 있는 것으로 보고되었다. 최근에는 수련과의 여러해살이 수생식물인 연잎 추출물의 항산화 효과 및 마름의 열매로 한해살이풀로서 연못 등에 자라는 능실 추출물 및 그 분획물이 노화억제에 효과가 있다는 보고가 있다. 뿐만 아니라 피부 아토피 치료를 위하여
침향(Aquilariae Agallochae Lignum Resinatum)은 침향나무의 수지가 침착된 수간목으로 침향나무에 천연적으로 분비된 수지가 침착하여 침향나무의 심재부위에 조직학적으로 단단한 덩어리 모양을 이루고 있는 부분이다. 침향은 예전부터 왕이나 왕족들은 병이 생기기 전 미리 침향을 피우고 적당량을 복용하면서 나쁜 기운을 몰아내 혈자리가 막히는 것을 예방했으며, 양에 비해 효과가 뛰어나고 치료 효과뿐만 아니라 예방효과까지 뛰어나지만 희귀성으로 인해 상류층의 전유물이었다. 뿐만 아니라 기가 허하거나 순환이 원활하지 않을 때, 혹은 악기에 의해 천식, 복수, 변비, 갑상선 질환, 신장질환, 양기부족 같은 질환이 생겼을 때 침향만으로도 상당한 효과를 본다. 특히 신부전으로 인해 신장투석을 하는 환자나 간경화로 인한 복수 등에는 탁월한 효과를 발휘한다고 알려져 있다.
상기 천연추출물을 사용하는 경우, 천연추출물 내에 포함되어 있는 유효성분에 의해 항염증 효과를 나타내어 아토피 피부를 개선할 수 있으며, 피부의 장벽 강화 및 수분 함유량을 증가시키는 동시에 인체 안정성이 우수하다.
바람직하게 본 발명의 조성물은 소성산호분말 추출물 100 중량부에 대해, 부평초 추출물 100 중량부 및 침향 추출물 100 중량부로 포함할 수 있다.
염증은 외부로부터 박테리아나 바이러스와 같은 외부 항원이 체내로 침입하거나 세포나 조직이 어떠한 원인에 의하여 손상 받았을 때 그 손상에 대한 조직 반응을 일컫는다. 염증세포는 종양의 개시, 증진에서 DNA 손상을 야기하는 활성 질소 및 산소종과 같은 다양한 염증전 매개인자를 방출한다. 염증은 크게 급성염증(acute inflammatory)과 만성염증(chronic inflammatory)으로 나뉘며, 만성적으로 염증반응이 일어날 경우 염증전 사이토카인과 케모카인이 과도하게 방출되어 주변 조직 손상과 더불어 종양세포의 내습, 전이, 이전 그리고 혈관신생을 증진시켜 종양의 성장을 돕는다.
일반적으로 염증 반응에 있어서, LPS(lipopolysaccharide)는 그람 음성 박테리아의 세포벽으로부터 유래된 세포내 독소로 TLR4(toll-like receptor 4)와의 결합함으로써 전사인자인 NF-κB를 활성화시키며, iNOS 및 COX-2의 발현을 유도하여 NO, 염증성 사이토카인 및 PGE₂등 여러 염증 조절 물질을 분비하게 한다.
더욱이, 염증과정에서 내피 세포, 호중구 그리고 대식세포에서 발생되는 NO와 슈퍼옥사이드 라디칼은 매우 높은 반응성의 산화제인 퍼옥시니트리트(ONOO-)를 생성하여 병리적 조직(pathophysiological tissue)을 유발한다. 따라서 inducible nitric oxide synthase(iNOS)와 cyclooxygease-2(COX-2) 유전자는 대표적인 염증 인자로 여겨지며 이들의 발현을 억제하는 물질은 잠재적으로 유용한 항염증제로서의 개발가능성이 크게 평가된다.
상기 소성산호분말, 부평초 및 침향 추출물은 농도 의존적으로 NO, 염증성(IL-1β, IL-6, TNF-α), PGE₂, COX-2 및 iNOS의 생성을 억제하는 것으로 항염증제의 용도로 사용될 수 있다.
상기 PGE₂는 염증 매개 물질 중 하나로 phospholipase A2의 효소작용에 의해 합성이 이루어지는데 막 인지질(membrane phospholipid)로부터 아라키돈 산(arachidonic acid)가 만들어지는 것으로 시작된다.
상기 아라키돈 산(Arachidonic acid)은 효소작용에 의해 프로스타글란딘(prostaglandin) G2가 되고 다시 불안정한 대사산물인 프로스타글란딘(prostaglandin) H2가 된다.
이 두 과정은 시클로옥시제나아제(cyclooxygenase, COX)에 의해 촉진되며, COX는 두 종류 이상의 아이소엔자임(isoenzyme)이 존재하는데 이들 중 COX-1은 지속적으로 발현하여 혈소판 응집, 위 점막 보호, 신기능 조절 등의 생리적 기능을 담당하고 COX-2는 염증 등의 자극에 의해 발현된다.
COX에 의해 생성된 PGH₂는 불안정한 중간 대사산물로 세포의 종류나 자극에 따라 다양한 프로스타노이드 신타아제(prostanoid synthase 들에 의해 PGE₂, PGD₂, PGI₂, PGF₂, thromboxane A2 (TXA₂) 등으로 대사된다.
또한, PGH₂에서 PGE₂로의 대사에 관여하는 PGE synthase (PGES)는 현재까지 cytosolic PGES (cPGES), microsomal PGES-1 (mPGES-1), mPGES-2 등 세 종류의 아이소폼(isoform)이 알려져 있는데 이 중 mPGES-1은 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharid, LPS)와 같은 염증성 자극이나 IL-1β, TNF-α와 같은 염증성 사이토카인, 산화질소(NO)에 의해 발현이 증가되며 COX-2와 기능적으로 밀접하게 연계되어 PGE₂의 생성에 관여한다.
즉, PGE₂의 생성은 COX-2와 기능적으로 밀접하게 연계되어 있으며, 염증반응에 중요한 역할을 한다.
이에, 본 발명은 소성산호분말, 부평초 및 침향을 유효성분으로 이용함에 따라, COX-2 및 iNOS의 생성을 억제하고, 염증성 사이토카인(Cytokine), 산화질소(NO) 및 COX-2의 발현을 저해함에 따라, 우수한 항염증 효과를 나타낼 수 있다.
상기 아토피 피부는 피부건조증, 피부소양증, 피부묘기증 및 습진성 병변으로 이루어진 군으로부터 선택되는 증상인 것이다.
아토피 피부는 만성적으로 건조하므로 각종 자극에 의해 쉽게 습진이 유발되고, 소양감이 심하며, 반복적으로 재발되는 특징을 가지고 있다. 이러한 소양감과 습진은 피부 건조증에 의해 반복적으로 약화되며 적절한 관리를 하지 않으면 결국 태선화, 색소변화, 홍피증 등의 아급성, 만성병변으로 진행된다. 면역학적 이상과 동반하여 표재성 모낭염, 피틸로스포럼 모낭염, 전풍, 표재성 피부사상균증, 사마귀, 재발성 단순포진 등이 흔하다. 세균성 감염은 대개 코아귤라제 양성 포도상구균에 의하며, 주로 팔, 다리에 표재성의 소양감을 가진 모낭염 병변으로 나타나고, 심부조직의 농양 및 봉와 직염을 잘 동반하지는 않으나 심한 정도의 재발성 환상 습진병변에 동반되는 경우는 전신증상을 동반하는 재발성 봉와 직염을 일으킬 수 있다.
또한, 아토피 피부염(atopic dermatitis)은 소양증, 피부 건조증, 습진 등을 동반하는 염증성 질환 또는 유전적, 환경적, 면역학적 원인으로 인하여 피부의 가장 바깥에 위치한 피부 보호벽인 각질층에 이상이 생겨서 발생하는 질환으로 건조한 기후에서는 더욱 심해지는 경향이 있다. 그러므로 아토피 피부염의 피부건조증을 개선을 위한 보습제의 사용과 피부장벽 기능의 회복력 증가는 아토피 피부염 치료에서 중요한 위치를 차지한다.
상기 피부건조증은 건조함으로 인해 불편감을 느낄 수 있는 피부 상태를 의미하며, 피부에 수분이 정상의 10% 이하로 부족한 상태를 가리킨다. 임상적으로는 약간의 붉은 반점과 열창이 있으면서 비늘을 보이고 표면이 거친 피부 상태를 말한다. 건조 피부를 유발하는 피부 질환이나 전신 질환이 있는 경우에는 원인 질환을 치료하는 것이 중요하다. 일반적인 피부 건조증 치료의 기본 원칙은 각질층의 수분 손실을 최소화하면서 각질층에 수분을 공급하고 유지시키는 것이다. 샤워나 목욕을 통해 수분을 직접 피부에 공급해 주는 것이 도움이 되지만 만약 공급된 수분을 계속 유지시킬 능력이 없으면 샤워나 목욕은 도움이 되지 않으며 오히려 자연 보습인자, 각질층의 지질, 피지 등을 씻어 내어 피부는 더 건조하게 될 수 있다. 따라서 피부의 수분과 지질 성분을 유지하기 위하여 때를 밀어 억지로 각질층을 제거하지 않는 것이 좋다. 그리고 과도한 세정과 비누 사용을 줄이고, 외부의 유해 환경으로부터 피부를 보호하며 적절한 보습제를 사용하는 것이 중요하다. 피부 건조증이 조절되지 않으면 피부염으로 진행할 수 있다.
피부소양증은 피부 가려움증이라고도 하며, 원발성 피진이 없이 피부 가려움이 주증상이 되며 속발성으로 긁은 자리, 가피(痂皮) 등을 동반하게 되는 만성 피부 질병을 말한다. 풍열사(風熱邪) · 풍한사(風寒邪)나 습열사(濕熱邪)가 기부(肌膚)에 몰리거나 몸 안에 풍사(風邪)가 오래 머물러 있으면서 화(火)로 변하여 진액과 혈액을 말려 기부를 영양하지 못하여 생긴다. 발작성으로 나타나며 열을 받거나 자극성 음식, 술 등을 먹었을 때 심해진다. 오래 되면 2차적으로 색소 침착, 태선양 변화, 습진양 변화를 가져올 수 있다. 전신 증상으로 수면 장애, 신경쇠약, 식욕 부진 등이 수반될 수 있다. 국소 증상으로 항문 소양증, 음낭이나 음부 소양증이 많으며 머리 · 다리 · 손바닥 소양증도 있다. 대개 어른 특히 노인들에게서 자주 본다.
피부묘기증은 피부에 물리적인 자극을 가했을 때 해당 부위에 국한되어 홍반성 발적과 팽진(부종)이 발생하는 현상으로, 두드러기 일종이다. 피부를 어느 정도 이상의 압력을 주어 긁거나 누르면, 그 부위에 국한되어 두드러기와 유사하게 가렵고 붉게 변하면서 부어오른다. 그 결과 마치 피부에 글씨를 쓴 듯한 양상으로 보이게 된다. 약한 자극에 의해서도 온몸의 피부 어느 곳에서나 발생할 수 있고, 가려워서 긁으면 더욱 심하게 두드러기 증상이 나타나기도 한다. 우리나라 인구의 약 5% 정도에서 나타나고, 대개 만성적인 경과를 보인다.
상기 조성물은 히스타민 및 β-헥소사미니데이즈 억제를 통해 아토피성 피부의 완화 효과를 나타내는 것이다.
아토피 피부염은 가장 흔한 만성 염증성 피부 질환이며 유병률은 소아에서 약 20% 이며 성인에서는 약 3% 정도를 차지하는 흔한 질환이다. 특징적인 임상 증상은 피부소양증, 피부태선화, 피부발적, 만성 피부세균감염을 나타내며, 최근에는 피부장벽에 결함이 가장 주요한 특징중의 하나로 인식되고 있다. 병태 생리에 대한 최신 견해는 피부 상피 세포의 비정상적인 분화로 인하여 피부장벽의 결손이 발생하고 이로 인하여 알러지 유발 물질들이 침투하여 히스타민 및 β-헥소아미데이즈의 방출과 염증성 반응을 유발하고 전신적인 면역학적 반응이 발생한다는 것이다.
특히 알러지 및 아토피 질환에서 중요한 히스타민은 활성아민의 일종으로 비만세포나 호염기성세포 등에서 분비된다. 히스타민은 세포질내 과립으로 존재하다가 외부자극(스트레스)이 가해지면 세포 외부로 분비되어 평활근의 수축, 혈관 확장에 따른 혈압 강하 외에 알레르기 반응이나 염증을 일으킨다. 또한 히스타민은 소리나 빛과 같은 외부적 자극이나 공복감, 체온의 상승과 같은 내부적 자극에도 분비가 촉진되는 것으로 밝혀졌다. 히스타민이 지나치게 많이 분비되면 히스타민 제1수용체(H1수용체)라는 단백질과 결합하여 콧물, 두드러기, 가려움증, 통증, 기관지수축에 따른 천식 등의 알레르기 증상을 일으킨다. 아토피를 비롯한 각종 피부염의 초기 증상들은 비만세포에서 분비되는 히스타민에 의해 일어나며 치료를 위해 항히스타민 계열의 약물을 사용하는 것이 일반적이다
바람직하게 상기 조성물은 고광나무(Philadelphus schrenkii Rupr. var. schrenkii) 추출물, 난티나무 (Ulmus laciniata(Trautv.) mayr) 추출물, 개새비나무(Callicarpa shiraswana Makino) 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 더 포함한다.
고광나무(Philadelphus schrenkii Rupr. var. schrenkii)는 우리나라 각처의 골짜기에서 자라는 낙엽 관목이다. 생육환경은 토양의 물 빠짐이 좋고 주변습도가 높으며 부엽질이 풍부한 곳에서 자란다. 키는 2~4m가량이고, 잎은 어긋나며 길이 7~13㎝, 폭 4~7㎝로 표면은 녹색이고 털이 거의 없으며, 뒷면은 연녹색으로 잔털이 있고 달걀 모양을 하고 있다. 가지는 2개로 갈라지고 작은 가지는 갈색으로 털이 있으며 2년생 가지는 회색이고 껍질이 벗겨진다. 꽃은 정상부 혹은 잎이 붙은 곳에서 긴 꽃대에 여러 개의 꽃들이 백색으로 달리고 향이 있다. 열매는 9월경에 길이 0.6~0.9㎝, 직경 0.4~0.5㎝로 타원형으로 달린다. 주로 관상용으로 쓰이며, 어린잎은 식용으로 쓰인다.
난티나무 (Ulmus laciniata(Trautv.) mayr)는 쌍떡잎식물 이판화군 쐐기풀목 느릅나무과 낙엽활엽 교목으로, 산허리 밑의 골짜기에서 자란다. 높이는 20m, 지름 1m 정도이고 작은가지는 연한 갈색이다. 잎은 어긋나고 긴 타원형 또는 거꾸로 세운 달걀 모양으로 넓으며 가장자리가 3군데 깊이 패였으며 급히 뾰족해진다. 또한 길이 10∼20cm이고 가장자리에 예리한 겹톱니가 있으며 표면은 거칠고 털이 있으며 뒷면은 연한 녹색이다. 꽃은 양성(兩性)으로 4∼5월에 피는데, 화피(花被)가 5∼6개로 갈라진다. 5∼6개의 수술은 자홍색이며 암술대가 두 개로 갈라진다. 열매는 시과(翅果)이고 편평하며 길이 1.5cm로 넓은 달걀 모양이고 5∼6월에 익는다. 기구재나 땔감 등으로 사용되고, 나무껍질은 약용재료로 사용한다.
개새비나무(Callicarpa shiraswana Makino)는 우리나라 남해안 도서지방 산록의 수림에서 자라며, 내한성은 약하나 내음력이 강해 바닷가에서 잘자란다. 잎은 마주나기하며 달걀모양, 타원형 또는 타원상 피침형이고 점첨두이며 원저 또는 예저이고 길이 3~12cm, 폭 2.5~5cm로서 양면에 잔 선점이 있으며 표면에 짧은 털이 있고 뒷면에 성모가 밀생하며 가장자리에 예리한 톱니가 있고 엽병은 길이 5~10mm로서 성모가 밀생한다. 꽃은 8월에 피며 취산꽃차례는 액생하고 성모가 밀생하며 꽃받침은 5개로 깊게 갈라지고 성모 또는 우상의 털이 밀생한다. 꽃부리는 길이 4~5mm로서 연한 자주색이며 판통은 꽃받침과 길이가 거의 같고 수술은 화관과 길이가 같다.
상기 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물은 소성산호분말, 부평초 추출물, 침향 추출물에 더하여, 고광나무 추출물, 난티나무 추출물, 개새비나무 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 더 포함하여 사용하며, 복합 추출물로 사용 시, 아토피 피부 개선 및 피부 보습 효과를 보다 우수하게 나타낼 수 있다.
바람직하게 본 발명의 조성물은 소성산호분말 추출물 100 중량부, 부평초 추출물 100 중량부 및 침향 추출물 100 중량부에 대해, 고광나무 추출물 40 내지 60 중량부, 난티나무 추출물 40 내지 60 중량부, 개새비나무 추출물 40 내지 60 중량부로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서 복합 추출물로 사용하는 경우, 각 성분 간의 복합 작용으로 인해 아토피 피부 개선 및 피부 보습 효과가 더욱 상승하게 된다.
상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출하는 것이다.
구체적으로, 상기 천연추출물을 제조하기 위해서는 천연물을 세척하는 단계; 세척 후 건조시키는 단계; 건조 후 천연물을 분쇄하는 단계; 유기 용매를 사용하여 상기 분쇄물을 침출시키는 단계; 시료를 침출 후 건조시키는 단계; 물을 이용하여 침출시키는 단계; 및 침출하는 단계를 포함하여, 천연 추출물을 획득할 수 있다.
상기 유기 용매를 사용하여 추출한 천연 추출물은 유기 용매를 사용하여 분획을 실시하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 침출법 및 환류 추출법 등 당업계의 통상적인 추출 방법일 수 있다. 구체적으로 세척 및 건조로 이물질이 제거된 천연물을 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 추출물일 수 있으며, 상기 용매들을 순차적으로 시료에 적용하여 추출한 추출물일 수 있다.
상기 환류 추출법은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 100mL기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 30g, 환류 시간 1 내지 3시간 및 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 물에 의한다. 보다 구체적으로, 탄소수 1 내지 6의 알코올 100 mL 또는 물 100mL 기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 20g, 환류 시간 1 내지 2시간 및 70 내지 90%의 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 물에 의한 것이다.
상기 침출법은 15 내지 30℃, 24 내지 72시간 동안 진행하며, 추출 용매로 물 또는 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올을 이용한다. 보다 구체적으로는 20 내지 25℃, 30 내지 54시간 동안 진행하며, 추출 용매는 물 또는 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.
상기 초음파 추출법은 30 내지 50℃, 0.5 내지 2.5시간 동안 반응을 진행하며, 추출용매는 물 또는 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다. 구체적으로는 40 내지 50℃, 1 내지 2.5시간 동안 추출하며, 추출용매로 물 또는 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.
상기 추출 용매는 시료의 중량 기준으로 2 내지 50배를 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로는 2 내지 20배이다. 추출을 위해 시료는 추출 용매에서 침출을 위해 1 내지 72시간 동안 방치될 수 있으며, 보다 구체적으로 24 내지 48시간 동안 방치될 수 있다.
추출 후, 추출물은 새로운 분획 용매를 순차적으로 적용하여 분획할 수 있다. 분획시 사용하는 분획 용매는 상기 용매는 물, 헥산, 부탄올, 에틸아세트산, 에틸 아세테이트, 메틸렌클로라이드 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상이며, 바람직하게는 에틸아세테이트 또는 메틸렌클로라이드이다.
추출물 또는 분획물을 얻은 후에는 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 화장료 조성물은 상기 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 포함하는 형태인 것이다. 상기 화장료 조성물은 통상의 화장료 제조방법에 따라, 다양한 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물은 상기 아토피 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 함유하는 향장 제품, 화장수, 크림, 로션 등의 형태로 제조될 수 있으며, 이는 통상의 클렌징액, 수렴액 및 보습액으로 희석하여 사용될 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 화장료 조성물 분야에서 통상적으로 사용되는 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 보습 크림은 상기 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 피부 재생 크림은 상기 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본 발명의 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물에 의하면 소성산호분말, 부평초 및 침향을 이용하여, 비만세포 혹은 호중성과립구의 히스타민 방출 및 β-헥소사미니데이즈 방출 억제능을 나타내는 것으로 아토피 피부를 개선할 수 있으며, 피부의 장벽 강화 및 수분 함유량을 증가시키는 아토피 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 세포 독성에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 부평초 추출물의 세포 독성에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물, 부평초 추출물 및 침향 추출물을 혼합한 MIX1의 세포 독성에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 산화 질소(NO) 생성 억제에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 PGE2 생성 억제에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 TNF-α 생성 억제에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 7은는 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 IL-1β 생성에 대한 결과 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물 처리에 따른 사이토카인의 발현 감소에 대한 웨스턴 블롯(Western blot) 분석 결과이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 아토피성 피부 완화 및 피부 보습용 조성물(MIX1)의 히스타민 방출 억제효과에 대한 시험결과에 관한 것이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 아토피성 피부 완화 및 피부 보습용 조성물(MIX1)의 β-헥소아미데이즈 방출 억제효과에 대한 시험결과에 관한 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 부평초 추출물의 세포 독성에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물, 부평초 추출물 및 침향 추출물을 혼합한 MIX1의 세포 독성에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 산화 질소(NO) 생성 억제에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 PGE2 생성 억제에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 TNF-α 생성 억제에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 7은는 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물의 IL-1β 생성에 대한 결과 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 소성산호분말 추출물 처리에 따른 사이토카인의 발현 감소에 대한 웨스턴 블롯(Western blot) 분석 결과이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 아토피성 피부 완화 및 피부 보습용 조성물(MIX1)의 히스타민 방출 억제효과에 대한 시험결과에 관한 것이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 아토피성 피부 완화 및 피부 보습용 조성물(MIX1)의 β-헥소아미데이즈 방출 억제효과에 대한 시험결과에 관한 것이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
[제조예1: 추출물의 제조]
1.
부평초 추출물의 제조
부평초를 흐르는 물에 깨끗이 세척한 다음 완전히 자연 건조시켰다. 건조된 부평초를 믹서기로 분쇄한 다음 80% 에탄올을 사용하여 상온에서 48시간 동안 침출시킨 후 시료를 여과(filter)하여 부평초 추출물(SE)을 제조하였다.
2.
기타 천연 추출물의 제조
상기 부평초 추출물(SE)의 제조 방법과 동일한 방법을 이용하여, 침향 추출물(AE), 고광나무 추출물(PE), 난티나무 추출물(UE) 및 개새비나무 추출물(CE)을 제조하였으며, 소성산호분말은 구매 상기 부평초 추출물(SE)의 제조 방법과 동일하게 80% 에탄올을 사용하여 상온에서 48시간 동안 침출시킨 후 시료를 여과(filter)하여 소성산호분말 추출물(PE)을 제조하였다.
3.
복합 추출물의 제조
상기 소성산호분말 추출물(PE), 부평초 추출물(SE), 침향 추출물(AE), 고광나무 추출물(PE), 난티나무 추출물(UE) 및 개새비나무 추출물(CE)은 하기 표 1과 같은 중량 범위내로 혼합하여 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물로 제조하였다.
MIX1 | MIX2 | MIX3 | MIX4 | MIX5 | MIX6 | |
PE | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
SE | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
AE | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
PE | - | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 |
UE | - | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 |
CE | - | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 |
(단위: 중량부)
[실험예1: 항염증 효과]
세포배양 및 시료
세포주는 호염기성 과립구인 RBL-2H3와 KU812 세포를 한국세포주은행에서 분양받은 후 10% feta bovine serum (FBS, Hyclone, South Logan, UT, USA)과 1% antibiotics(100 U/㎖ penicillin G, 100 ㎍/㎖ streptomycin, Hyclone)을 첨가한 DMEM 배지로 37℃, 5% CO2 가습된 조건에서 배양하였다.
세포독성 평가
식약처에서 제시하는 동물대체시험법이자 식약처에서 제시하는 시험기준인 MTT assay를 이용하여 MTT 분석을 실시하였다. 세포배양용 Dish에 배양된 RBL-2H3 세포를 Trypsin으로 분리시킨 후 새 배지에 혼합하여 Counting Chamber와 현미경을 이용하여 세포주를 계수한 다음 각각 96 well plate에 1~105 cells/ml의 농도로 분주하고 시료를 농도별로 조제하여 24시간 배양하였다.
세포주 RBL-2H3 세포를 분주하여 24시간 배양한 다음, 소성산호분말 추출물(PE)을 농도 별 처리하였으며, 배지 제거 후 MTT 용액을 1 μg/ml의 농도로 넣고 37℃에서 4시간동안 반응시킨 후 MTT 용액을 제거하고 DMSO 100 μl를 분주하여 형성된 반응물을 용해시키고, 30분간 반응시킨 뒤 ELISA Reader로 540nm에서의 흡광도를 측정하였다.
각 세포에 대한 생존율은 대조군에 대한 흡광도의 차를 백분율로 표시하여 비교 분석하였다.
세포생존율(%) = [(시표첨가군의 흡광도)/무첨가군의 흡광도] X 100
도 1 및 도 2는 RBL-2H3 세포에서 소성산호분말 추출물(PE), 부평초 추출물(SE)의 세포 독성 확인한 결과로, 세포생존율 측정결과 농도가 높아졌으나, 생존률에서는 거의 차이를 보이지 않았다.
도 3은 소성산호분말 추출물(PE), 부평초 추출물(SE) 및 침향 추출물(AE)를 혼합한 MIX 1의 세포 독성을 확인한 결과로, 생존률에서는 거의 차이를 보이지 않았다.
NO 생성 억제 활성 실험
염증 반응에 대한 각 농도별 소성산소분말 추출물(PE)의 항염증 효과를 측정하기 위한 첫 단계로, 세포 배양액 중의 NO를 정량하고 비교하였다. NO 소거 활성을 측정하기 위하여 RBL-2H3 세포를 96 well plate에 2x104 cells/ml로 분주하여 37℃, 5% CO2 조건에서 24 시간 배양한 다음, 소성산소분말 추출물(PE)를 농도별(un, con 50 μg/ml, 100 μg/ml, 150 μg/ml, 200 μg/ml, 250 μg/ml)로 처리하였다.
생성된 NO 양은 그리스(Griess) 시약을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 형태로 측정하기위해 그리스(Griess) 시약 A는 distilled water (DW) 35 ml, 100% acetic acid 15 ml, sulfanilamide 0.5 g을 혼합시켜 만들었으며, 그리스(Griess) 시약 B는 DW 20 ml, 100% acetic acid 30 ml과 N-(1-Naphthyl) ethylenediamine 0.05 g을 넣어 준비하였다.
세포배양 상등액 100μl와 그리스(Griess) 시약 100μl를 혼합하여 상온에서 10분 동안 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이는 세포배양액 중에 존재하는 형태이며, 생성된 NO의 양은 Sodium nitrite (NaNO2)를 기준으로 비교하였다.
그 결과는 도 4에서 알 수 있듯이, 소성산소분말 추출물(PE)는 농도가 높을수록 NO 생성 억제 활성이 높음을 확인하였다.
염증성 사이토카인 및 PGE
2
의 생성 억제 활성 실험
Prostaglandin E2 (PGE2), Interleukin (IL)-1β, Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α)와 같은 염증성 사이토카인 생성에 미치는 소성산소분말 추출물(PE)의 효과를 검증하기 위해 위와 같은 조건으로 세포를 배양한 후, 상층액을 수집하여 PGE2, IL-1β, TNF-α (Enzo LifeScience)의 함량을 ELISA kit 이용하여 정량하였다.
그 결과는 도5, 도6 및 도7에서 알 수 있듯이, 소성산소분말 추출물(PE)는 유의성 있게 PGE2, TNF-α 및 IL-1β를 억제함을 확인하였다.
웨스턴 블롯(Western blot) 분석을 통한 iNOS, COX-2, TNF-α, IL-1β의 발현 변화 확인 단백질(protein) 수준에서 면역 조절관련 전사인자들의 발현 변화를 관찰하기 위해 위와 같은 조건으로 세포를 배양한 후 웨스턴 블롯 분석을 실시하였다.
준비된 세포들을 250mM NaCl, 25mM Tris-HCL (pH 7.5), 10mM ethylenediaminetetraacetic acid, 1% Nonidet P-40, 0.1mM phenyl-methysulfonylfuoride와 protease inhibitor 등을 함유한 완충액(lysis buffer)을 사용하여 단백질(protein)을 용해시켰다. 분리된 단백질의 농도는 단백질 정량 시약 (Bio-Rad, Herculs, CA, USA)을 이용해 측정하였다. 동량의 단백질들을 10% sodium dodecy sulfate (SDS)-polyacrylamide gel electrophoresis를 이용하여 분리하고 nitrocellulose membrane (Schleicher % Schuell, Keene, NH, USA)으로 전이시켰다. 각각 분리막(membrane)은 비특이적인 단백질들을 브로킹(blocking)하기 위해 5% skim milk를 1 시간 처리하였다.
해당하는 항체들과 enhanced chemiluminescence (ECL, Amersham Corp. Arlington Heights, IL, USA) 용액을 처리한 다음 X-ray film으로 감광시켜 단백질 발현량을 확인하였다. 본 실험에서 사용한 1차 항체는 Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA, USA) 및 Cell signaling (Beverly, MA, USA)에서 구입하였으며, 2차 항체는 Amersham Life Science Co.에서 구입하여 사용하였다.
그 결과는 도 8에서 확인할 수 있듯이, 소성산소분말 추출물(PE) 처리에 의해 RBL-2H3 세포에서 NO의 생성이 감소함을 확인하였다. 이러한 감소는 imducible NOS (iNOS)의 발현 감소에 의한 것임을 확인하였다.
따라서 RBL-2H3 세포에서 소성산소분말 추출물(PE)는 NO, PGE2, IL-1β, TNF-α의 생성 감소로 인해 항염증 효과를 나타낸다고 할 것이다.
[실험예2: 아토피성 피부 개선 효과]
1.
히스타민 분비 측정
세포배양 디시에 배양한 KU812 cell를 50ml Conical Tube에 넣고 200xg 속도로 5분동안 원심분리 한 후에 상등액을 버리고 tyrode buffer (pH7.2) 10ml를 첨가하여 혼합하였다. 이후 다시 200xg 속도로 5분동안 원심분리 하여, 상등액을 버리고 50ml conical tube안에 30ml Tyrode buffer(pH7.2) 넣어 inverting, pipetting 하였다. 24well을 만든 후 MIX 1 시료를 시험농도 처리하여 CO2 incubator에서 15분동안 배양하였다.
대조군과 MIX 1을 농도별로 처리한 시험군에 2 μM A23187 처리 후 바로 1ng/mL PMA를 처리하고 30분동안 배양하였다. pipetting 2번 정도 한 후 1ml 상등액을 15ml conical tube에 첨가하고 400xg속도로 5분동안 원심분리 하였다. 상등액 800μl를 새로운 15ml conical tube에 넣고 1N NaOH 와 1.5ml n-butanol 및 1ml chloroform 첨가한 후 5분 동안 혼합 후에 200xg속도로 5분동안 원심분리 하였다. 이후 하층에서 800μl를 15ml conical tube에 넣고 1 NaOH 5ml 첨가하여 반응시켰다. 이를 200xg속도로 5분 동안 원심분리 한 후에 새로운 conical tube에 첨가하고 450μl 0.1N HCl과 1500μl n-heptane넣은 후 1분동안 원심분리를 또 진행하였다. 후에 아래층에서 800μl를 새로운 15ml conical tube에 넣고 160μl 1N NaOH 및 40μl ortho-phthalaldehyde를 넣어 4min 반응시켜 80μl 3N HCl을 넣고 반응을 종결시켰다. 이후 black plate에서 100 μl씩 첨가하여 형광 광도를 excitation350/365/emission465/465에서 측정하였다.
비만세포의 탈과립 현상은 히스타민을 유리시키는 중요한 과정으로서 유리된 히스타민은 가려움증, 발진과 같은 알러지 반응을 유도하는 매개 물질로 알려져 있어, 본 실험에서는 MIX 1이 호염기성 과립구인 KU812 세포의 히스타민 분비를 하는 효과를 검증하였다. 식염수만 처리한 공시험군 A23187과 PMA를 처리한 대조군, MIX 1를 농도별로 전처리 후에 A23187과 PMA를 처리한 시험군에서 히스타민의 분비 함량을 측정하여 비교 평가하였다.
도 9에서 보는 바와 같이, 히스타민 분비를 자극한 대조군은 공시험군에 비하여 히스타민 분비량이 3배 정도 증가하였고 MIX 1 처리군에서는 A23187과 PMA로 자극된 히스타민 분비가 억제되어 정상으로 회복되었다. 이러한 결과는 MIX 1가 알러지 반응을 억제하거나 항 아토피 효과가 있음을 나타낸다.
2.
헥소아미데이즈 분비 측정
RBL-2H3 세포주를 24 well plate에 각각 well 당 2×105 개의 세포가 들어가도록 분주한 다음, well 당 200 ng/mL의 anti-DNP Ig E로 감작시키고 5%의 CO2 배양기에서 12 시간 동안 배양하였다. 세포주는 siraganian buffer로 2 회 세척한 후 MIX 1 시료를 농도 별로 첨가한 후 30 min 동안 37℃에서 다시 반응시켰다. 여기에 DNP-HAS (25 ng/mL)를 처리하고 30 min 간 알레르기 반응을 유도한 후 ice bath에서 10 분 동안 반응을 정지하여, 12,000 rpm에서 3 min 원심분리 하였다. 상등액만 회수하고, 베타-헥소아미데이즈 (β-hexosaminidase) 측정에 이용하였다. 이 효소의 분비 저해 측정은 상등액 30 μL와 1mM p-NAG 30 μL을 혼합한 반응액을 1 시간 동안 37℃에서 반응시키고 0.1M carbonate buffer 250 mL를 첨가하여 반응을 종결시키고, microplate reader (Molecular Devices, USA)를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 히스타민 함량은 시료 첨가군과 대조군의 흡광도 비를 % 값으로 환산하여 나타내었다.
그 결과, 항 알레르기 효과에 대한 MIX 1의 효과를 조사하기 위해 알레르기 반응을 나타내는 주요 세포인 RBL-2H3 세포주를 이용하여 알레르기 반응 시 세포의 탈과립 지표로 알려진 β-hexosaminidase 분비를 측정하였다. 도 10에서 보는 바와 같이 anti-DNP Ig E로 감작시키고 DNP-HAS를 처리하여 알레르기 반응을 유도한 자극한 대조군은 공시험군에 비하여 히스타민 분비량이 40% 정도 증가하였고 MIX 1 처리군에서는 anti-DNP Ig E로 감작시키고 DNP-HAS를 자극된 β-hexosaminidase 활성이 억제되어 정상으로 회복되었다. 이러한 결과는 MIX 1이 알러지 반응을 억제하거나 항 아토피 효과가 있음을 나타낸다.
[실험예3: 복합 추출물의 효과]
1.
항염증 효과
상기와 같이 소성산소분말 추출물(PE)에 대한 항염증 활성 시험 결과를 확인하였다. 이에 복합 추출물 MIX1 내지 MIX6에 대한 항염증 활성 시험을 진행하였고, 상대적인 평가를 위해, 소성산소분말 추출물(PE)의 항염증 정도를 지수 5로 놓고, 다른 복합 추출물에 대한 항염증 효과 정도를 지수로 기재하였다.
복합 추출물에 대한 항염증 활성 시험 결과는 하기 표 2와 같다.
PE | MIX1 | MIX2 | MIX3 | MIX4 | MIX5 | MIX6 | |
NO 생성 억제 | 5 | 6 | 6 | 8 | 9 | 10 | 7 |
염증성 사이토카인 생성 억제 | 5 | 6 | 7 | 8 | 10 | 10 | 6 |
PGE2의 생성 억제 | 5 | 7 | 7 | 7 | 9 | 9 | 7 |
(단위: 지수)
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 항염증 효과를 확인하기 위한 NO 생성 억제, 염증성 사이토카인의 생성 억제 및 PGE2의 생성 억제에 대해, 소성산소분말 추출물(PE)에 대한 상대적인 비교 결과, MIX1 내지 MIX6에서 동등 이상의 우수한 항염증 효과를 나타냄을 확인하였다.
특히, 고광나무 추출물(PE), 난티나무 추출물(UE) 및 개새비나무 추출물(CE)을 더 포함하는 MIX3 내지 MIX6에서 우수한 항염증 효과를 나타내었다.
2.
아토피 피부 개선 효과
상기와 같이 소성산소분말 추출물(PE)에 대한 히스타민 분비 및 헥소아미데이즈 분비를 측정한 결과를 확인하였다. 이에 복합 추출물 MIX1 내지 MIX6에 대한 히스타민 분비 및 헥소아미데이즈 분비 측정을 진행하였고, 상대적인 평가를 위해, 소성산소분말 추출물(PE)의 히스타민 및 헥소아미데이즈 분비 억제 정도를 지수 5로 놓고, 다른 복합 추출물에 대한 효과 정도를 지수로 기재하였다.
복합 추출물에 대한 효과는 하기 표 3와 같다.
PE | MIX1 | MIX2 | MIX3 | MIX4 | MX5 | |
히스타민 분비 억제 효과 | 5 | 7 | 8 | 9 | 10 | 6 |
헥소아미데이즈 분비 억제 효과 | 5 | 7 | 8 | 10 | 10 | 7 |
(단위: 지수)
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 아토피 피부 개선 효과를 확인하기 결과, MIX1 내지 MIX6에서 동등 이상의 히스타민 및 헥소아미데이즈 분비 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.
항염증 효과와 더불어, 아토피 피부 개선 효과에도 고광나무 추출물(PE), 난티나무 추출물(UE) 및 개새비나무 추출물(CE)을 더 포함하는 MIX3 내지 MIX6에서 우수한 효과를 나타내었다.
[실험예4: 피부 보습 효과]
20세 ~ 25세 여성 10명을 대상으로 상기 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물 MIX1 내지 MIX6를 보습 크림으로 제조하여, 피부 보습 효과를 평가하였다.
피시험자들은 매일 아침(7시~9시 사이)과 저녁(7시~9시 사이) 12시간 간격으로 2회씩 4주간 동안 세안 후 상기 보습 크림을 사용하였으며, 피부의 보습 효과 평가는 2주째와 4주째에 피부 수분증발속도의 측정을 통해 피부의 보습 효과를 평가하였다.
상기 피부 수분증발속도는 Tewamter TM300으로 측정하여 피시험자 10명의 평균값으로 나타냈으며, 그 결과는 표 4과 같다.
PE | MIX1 | MIX2 | MIX3 | MIX4 | MIX5 | MIX6 | |
수분증발속도 (g/h/m2) | 17.23 | 18.24 | 19.77 | 20.22 | 22.09 | 23.49 | 19.34 |
최초 사용 전 대비 수분증발속도 감소율(%) | 39.16 | 35.59 | 30.19 | 28.50 | 26.12 | 27.55 | 34.24 |
상기 표 4에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 제조예에서 제조된 아토피 피부 개선 및 피부 보습용 조성물 MIX1 내지 MIX5를 보습 크림으로 제조하여 지속적인 사용에 의하는 경우 상기 피부 수분 증발속도가 점차 줄어드는 것을 확인할 수 있었다.
특히, 복합 조성물 MIX3 내지 MIX5에 의하는 경우 도포 후 12시간이 경과한 후에도, 사용하기 전의 피부의 수분증발속도에 비해 현저히 감소되는 효과를 확인하였다.
제형예 1. 보습크림
상기 MIX1 내지 MIX5를 함유하는 보습 크림을 하기 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.
MIX1 3.0 중량%
글리세린 8.0 중량%
부틸렌글라이콜 5.0 중량%
글리세릴스테아레이트/피이지-100스테아레이트 1.0 중량%
폴리솔베이트60 0.5 중량%
소르비탄 스테아레이트 0.5 중량%
피토스쿠알란 5.0 중량%
호호바 오일 3.0 중량%
카프릴/카프릭 트리글리세라이드 15.0 중량%
알로에 버터 2.0 중량%
밀납 1.0 중량%
스테아릴 알코올 0.5 중량%
베헤릴 알코올 0.5 중량%
스테아린산 0.5 중량%
카르복실비닐폴리머 0.2 중량%
잔탄검 0.1 중량%
아르기닌 0.5 중량%
디메치콘 0.5 중량%
베타글루칸 0.2 중량%
방부제 0.5 중량%
정제수 잔량
제형예 2. 보습크림
[실험예5: 아토피 치료 효과 실험]
아토피로 고생하는 유아기 내지 10대, 20대, 30대의 건강한 여성 및 남성 대상으로 실시예 각 본 발명의 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물(MIX1 내지 MIX6) 당 임의로 각 10명을 선정하고, 아토피가 발생한 1곳의 부위를 선정하여 그 부위에 상기 MIX1 내지 MIX6을 아침, 저녁으로 하루에 2회씩, 3달간 적용하게 하였다. 아토피 치료효과의 판정은 본 발명 조성물을 사용한 후, 피험자 개인의 주관적 평가로 하기의 평가점수를 통해 백발 생성 억제 정도를 평가하도록 하였다. 그 결과는 하기의 표 5와 같다.
사람의 수 | ||||
0점 | 1점 | 2점 | 3점 | |
MIX 1 | 5 | 4 | 1 | - |
MIX 2 | 4 | 5 | 1 | - |
MIX 3 | - | 1 | 3 | 6 |
MIX 4 | - | 1 | 2 | 7 |
MIX 5 | - | - | 3 | 7 |
MIX 6 | - | 3 | 3 | 4 |
(단위: 지수)
평가점수
3 : 도포개시 전의 아토피 부위에 비하여 도포 후의 아토피 부위가 90%이하로 감소하였다.
2 : 도포개시 전의 아토피 부위에 비하여 도포 후의 아토피 부위가 60%이하로 감소하였다.
1 : 도포개시 전의 아토피 부위에 비하여 도포 후의 아토피 부위가 30%이하로 감소하였다.
0 : 아토피 부위에 비하여 도포 후의 아토피 부위가 전혀 감소하지 않았다.
본 발명에 따른 아토피 치료 효과는 MIX1와 같이 소성산호분말 추출물(PE), 부평초 추출물(SE) 및 침향 추출물(AE)의 혼합 처리시 보다 MIX2 내지 MIX6과 같이 고광나무 추출물(PE), 난티나무 추출물(UE) 및 개새비나무 추출물(CE)을 더 포함하는 복합처리시 상승효과가 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 특히 MIX3 내지 5에 의하는 경우 그 효과가 상당히 우수하다는 것을 알 수 있었다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.
Claims (8)
- 소성산호분말, 부평초, 침향 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 천연추출물을 유효성분으로 포함하는
아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물. - 제 1항에 있어서,
상기 아토피 피부는 피부건조증, 피부소양증, 피부묘기증 및 습진성 병변으로 이루어진 군으로부터 선택되는 증상인
아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물. - 제 1항에 있어서,
상기 조성물은 히스타민 및 β-헥소사미니데이즈 억제를 통해 아토피성 피부의 완화 효과를 나타내는 것인
아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물. - 제 1항에 있어서,
상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출하는
아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물. - 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 따른 아토피성 피부 개선 및 피부 보습용 조성물을 포함하는 화장료 조성물.
- 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는 기능성 식품 조성물.
- 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는 보습 크림.
- 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는 재생 크림.
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