KR20210045453A - 핵산 오염 제거 방법 - Google Patents

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amidated pectin
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알렉스 아이. 쿠티아빈
케빈 피. 룬드
올리버 제트. 나나시
알렉산더 에이. 갈
윌리엄 브라반트
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세페이드
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Abstract

표면, 공기, 및 용액에서 핵산 오염의 감소를 위한 방법 및 세정 조성물이 제공된다.

Description

핵산 오염 제거 방법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2018년 8월 17일자, 미국 가출원번호 제62/765,014호의 우선권을 주장하며, 상기 문헌은 본 명세서에 그 전체가 참조 문헌으로 포함된다.
서열 목록에 관한 진술
본 출원과 관련된 서열 목록은 종이 사본 대신 텍스트 파일 형식으로 제공되며 본 명세서에 참조로 포함된다. 서열 목록을 포함하는 텍스트 파일의 이름은 70134_Seq_Final_2019-08-14.txt이다. 텍스트 파일은 2.23 KB이며; 2019년 8월 14일에 생성되었고; 본 명세서의 출원과 함께 EFS-Web를 통해 제출하였다.
발명의 분야
본 발명은 표면, 공기, 및 용액에서 핵산 오염의 감소를 위한 방법 및 세정 조성물에 관한 것이다.
중합 효소 연쇄 반응 (PCR)과 같은 핵산 증폭 기반 기술의 사용은 다양한 분자 생물학 응용 프로그램과 임상 진단 분야에서 널리 보급되었다. 안타깝게도, 이러한 높은 감도의 기술은 오염에 취약하다. 실험실에서의 핵산 교차-오염은 매우 민감한 증폭 기반 분석에 심각한 문제를 야기한다. 실험실 환경에서, 표적 서열 자체의 반복적인 증폭은, 증폭 산물 또는 소위 앰플리콘이 축적을 야기하는데, 이것이 교차 오염의 가장 큰 원인이다. 생성된 앰플리콘을 파괴하거나 증폭에 적합하지 않게 만들어, 앰플리콘 교차오염(carryover) 방지 및/또는 생성된 앰플리콘의 멸균이 분자 생물학 및 진단 분야에서 중요하다.
이전에 보고된 오염 제거 방법은 일반적으로 소듐 하이포클로라이트(sodium hypochlorite) 또는 소랄렌(psoralen) 용액과 같이 취급하기 어려운 부식성 시약을 사용한다. 대부분의 경우에, 오염 제거 시약 잔류물을 세척하는 추가 단계가 또한 요구된다. 민감한 환경에서 사용하기에 적합한 앰플리콘 오염 제거 용액 및 방법이 항상 신뢰할 수 있는 결과를 생성하는 것은 아니다. (Fischer M. et al, Efficacy Assessment of Nucleic Acid Decontamination Reagents Used in Molecular Diagnostics Laboratories, PLOS One, July 13, 2016). Eliminase 및 DNA Away TM, 및 일부 경우에 표백제와 같은 일반적으로 입수 가능한 많은 조성물은 증폭 가능한 핵산을 일관되고 효과적으로 분해하지 않고 표면에서 오염된 핵산을 부분적으로만 제거하는 것으로 제안된다. 게다가, 표백제 및 유사한 시약은 다른 생체 분자를 그대로 유지하는 것이 바람직할 때 용액에서 핵산을 선택적으로 제거하는데 부적절하다. 따라서, 사용하기 쉽고, 안정적인 시약을 사용하며, 광범위한 기질 및 표면과 상용성이 있는 개선된, 저렴한 핵산 오염 제거 방법이 필요하다.
하나의 양태에서, 본 명세서에는 표면의 핵산 오염을 감소시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 핵산으로 오염된 표면과 변형된 펙틴을 포함하는 조성물을 접촉시키는 것을 포함하고, 이러한 변형된 펙틴은 복수의 아미노 기를 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 펙틴은 아미드 펙틴(amidated pectin)이다. 일부 구현예에서, 변형된 펙틴은 다음의 화학식으로 나타낸 하나 이상의 단량체 단위:
Figure pct00001
,
이의 이성질체, 염, 또는 호변 이성질체를 포함하며,
화학식 중:
n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
R1은 H 또는 C1-C3 알킬이고;
X는, 각각의 경우에, 독립적으로 C2-C4 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
Y는 C2-C3 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
R2 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴의 분자량은 약 0.5 kDa 내지 약 500 kDa 또는 약 100 kDa 내지 약 300 kDa이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 용액 내 약 0.001% 내지 약 5%, 약 0.01% 내지 약 1%, 또는 약 0.1% 내지 약 0.5%의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 약 0.1　μg/mL 내지 약 1,000 μg/mL, 약 1 μg/mL 내지 약 500 μg/mL, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 100 μg/mL의 농도로 존재한다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 아미드 시트러스 펙틴 또는 아미드 사과 펙틴이다.
일부 구현예에서, 조성물은 면봉, 와이프(wipe), 포(cloth), 필터, 패드, 또는 스폰지에 존재한다. 일부 구현예에서, 표면은 기구의 표면 또는 실험실 벤치 표면이다.
또 다른 양태에서, 본 명세서에는 용액에서 핵산의 오염을 감소시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 핵산으로 오염된 용액을, 공유 결합된 변형된 펙틴을 포함하는 고체 지지체와 접촉시키는 것을 포함하고, 이러한 변형된 펙틴은 복수의 아미노 기를 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 펙틴은 아미드 펙틴(amidated pectin)이다. 일부 구현예에서, 변형된 펙틴, 예를 들어, 아미드화 펙틴은 다음의 화학식으로 나타낸 하나 이상의 단량체 단위:
Figure pct00002
,
이의 호변 이성질체, 이성질체, 또는 염을 포함하며,
화학식 중
n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
R1은 H 또는 C1-C3 알킬이고;
X는, 각각의 경우에, 독립적으로 C2-C4 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
Y는 C2-C3 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
R2 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이다.
일부 구현예에서, 고체 지지체는 자기 비드, 유리 비드, 폴리스타이렌 비드, 폴리스타이렌 필터, 또는 유리 필터이다. 일부 구현예에서, 고체 지지체는 면봉, 와이프(wipe), 포, 필터, 또는 스폰지이다.
또 다른 양태에서, 본 명세서에는 공기 중의 에어로졸화된 핵산 오염을 감소시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 에어로졸화된 핵산으로 오염된 공기를 변형된 펙틴을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함하고, 이러한 변형된 펙틴은 복수의 아미노 기를 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 펙틴은 아미드 펙틴(amidated pectin)이다. 일부 구현예에서, 변형된 펙틴, 예를 들어, 아미드화 펙틴은 다음의 화학식으로 나타낸 하나 이상의 단량체 단위:
Figure pct00003
,
이의 호변 이성질체, 이성질체, 또는 염을 포함하며,
화학식 중
n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
R1은 H 또는 C1-C3 알킬이고;
X는, 각각의 경우에, 독립적으로 C2-C4 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
Y는 C2-C3 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
R2 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이다.
일부 구현예에서, 접촉은 변형된 펙틴을 포함하는 수성 조성물, 예를 들어 물 중의 아미드화 펙틴의 용액 또는 현탁액을 통해 오염된 공기를 통과시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 접촉은 아미드화 펙틴을 포함하는 필터를 통해 오염된 공기를 통과시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 필터에 공유 결합된다.
일부 구현예에서, 핵산은 핵산 증폭 반응의 산물이다. 일부 구현예에서, 증폭 반응은 중합 효소 사슬 반응이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음으로 나타낸 화학식의 단량체 단위:
Figure pct00004
,
Figure pct00005
,　
이의 이성질체, 염, 또는 호변 이성질체를 포함하는 펙틴이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음으로 나타낸 화학식의 단량체 단위:
Figure pct00006
,
이의 이성질체, 염, 또는 호변 이성질체를 포함한다.
본 발명의 전술한 양태 및 수반되는 수 많은 이점은 첨부하는 도면과 함께 다음의 상세한 설명을 참조하여 보다 잘 이해되는 것과 동일하게 더욱 용이하게 이해될 것이다:
도　1은 다양한 양의 예시적인 폴리아민 변형된 다당류 (스페르민-펙틴)으로 처리한 후 앰플리콘 DNA의 증폭 플롯이다.
도　2는 오염 DNA와 예시적인 폴리아민 변형된 다당류 (스페르민-펙틴)의 결합에 이어 표적 DNA의 증폭을 도시한다.
도　3은 1000만 카피의 dsDNA (126 bp)를 1 μg의 예시적인 스페르민-변형 다당류로 처리되었을 때, 증폭이 완전히 억제됨 (B)을 도시한다. 더욱 많은 카피 (1.9 x 1010)가 스페르민-펙틴-DNA 혼합물에 첨가 된 후, 증폭이 회복되었고 (C) 처리되지 않은 DNA의 증폭과 유사하다(A). 이것은 스페르민-펙틴 컨쥬게이트가 어떻게 작은 DNA 오염물에 결합하여 표적의 증폭이 일어나도록 하는지를 보여준다.
도 4는 건조 앰플리콘으로 처리된 표면에서 24 시간에 걸쳐 3cm 위에 수집된 두 세트의 공기 샘플에 대한 8 회의 PCR 실행의 평균을 비교한다. 그래프 (A)는 처리되지 않은 표면의 앰플리콘이고 그래프 (B)는 예시적인 스페르민-변형된 다당류의 0.1 % 용액이 분무된 앰플리콘이 있는 건조 표면이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 오염 제거될 표면을, 복수의 아미노 기를 포함하는 변형된 펙틴, 예를 들어, 아미드화 펙틴을 포함하는 오염 제거제와 접촉함으로써 표면 상의 핵산 오염을 감소시키는 방법을 제공한다. 바람직하게, 아미드화 펙틴은 폴리아민으로부터 유도된 기를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 폴리아민으로 아미드화된 아미드이다. 본 명세서에 개시된 아미드화 펙틴 화합물이 핵산의 응집을 촉진시키며, 변형된, 예를 들어, 아미드화 펙틴에 결합되는 경우 핵산의 개별 분자가 작은 입자로 응집 또는 침전하여, 핵산을 증폭에 적합하지 않게 만드는 과정으로 여겨지지만,이러한 메커니즘 또는 이론에 제한되고자 하는 것은 아니다. 오염 제거제는 용액, 현탁액의 형태로 사용될 수 있으며, 또는 와이프 또는 스폰지와 같은 고체 지지체에 결합될 수 있다.
본 명세서에서 사용 시, "오염 제거(decontamination)" 또는 "핵산 오염 감소"는 변경되지 않은 핵산과 비교하여 증폭 반응에서 더 이상 주형으로서 작용할 수 없거나 덜 작용할 수 있게 만드는 방법으로 핵산을 변경하는 것을 의미한다. 오염 제거는 일반적으로 핵산이 다른 증폭 반응을 방해할 수 없거나 또는 덜 방해하도록 만든다. 일부 구현예에서, 오염 제거는 또한 오염 제거될 표면이 핵산 오염물을 실질적으로 가지지 않도록 만드는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용 시, "실질적으로 핵산 오염물을 가지지 않는"은 오염 핵산이 증폭이 불가능하고 및/또는 증폭-기반의 핵산 검출 방법에 의해 검출될 수 없는 농도로 존재함을 의미하는데 사용된다.
본 명세서에서 사용 시, "시제" 및 "시약"은 오염 제거 조성물에 대해 지칭될 때 달리 언급되지 않는 한 상호교환적으로 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, "오염 감소" 또는 "오염 제거"는 핵산이 또 다른 핵산, 단백질, 또는 다른 생물학적 물질에 결합하는 능력을 감소시키거나 또는 이를 방지하는 것을 지칭한다. 핵산 오염 감소 또는 핵산 오염 제거는 또한 핵산이 효소의 기질 역할을 하는 것을 방지하거나 덜 할 수 있도록 만드는 것을 지칭한다. 본 명세서에서 사용 시, 핵산 오염 감소 또는 핵산 오염 제거는 오염 감소, 또는 오염 제거가 발생하는 임의의 특정 메커니즘을 지칭하지 않는다.
변형된 펙틴
일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 오염 제거제는 변형된 다당류를 포함한다. 일부 구현예에서, 다당류는 펙틴이다. 펙틴은 일반적으로 식물 세포벽에서 발견되는 자연적으로 발생한 복합 다당류이다. 펙틴은 람노스 잔기에 의해 개재되고 중성 당 측쇄로 변형된 알파 1-4 연결된 폴리갈락투론산 백본 및 비-당 성분 예컨대 아세틸렌, 메틸, 및 페룰산 기를 포함한다. 펙틴의 갈락투론산 잔기는 부분적으로 에스터화되어 메틸 에스터로 존재한다. 에스터화 정도는 에스터화된 카복실 기의 백분율로 정의된다. 예를 들어, 에스터화 정도가 50% 이상인 펙틴은, 고메틸 에스터 ("HM") 펙틴 또는 고 에스터 펙틴으로 분류되며, 에스터화 정도가 50% 미만인 펙틴은 저메틸 에스터 ("LM") 펙틴 또는 저 에스터 펙틴으로 지칭된다. 과일 및 채소에서 발견되는 대부분의 펙틴은 HM 펙틴이다.
본 명세서에서 사용 시, "아미드화 펙틴"은 예를 들어, 화학적, 물리적, 또는 생물학적 (효소 포함) 수단으로, 또는 이의 일부 조합으로, 구조적으로 변형된 자연에 존재하는 임의의 펙틴을 지칭하며, 여기서 에스터 또는 산 기는 아미드 기로 변환된다. 아미드화 펙틴은 변형되지 않은 펙틴을 적합한 아민 용액과 접촉시켜 변형되지 않은 펙틴의 에스터 기를 아미드로 전환함으로써 제조될 수 있다.
Figure pct00007
택일적으로, 변형되지 않은 펙틴 또는 부분적으로 가수분해된 펙틴을 비롯한 가수분해된 펙틴은 적합한 커플링제의 존재하에 아민과 반응하여 아미드화 펙틴을 형성할 수 있다. 적합한 커플링제의 예로는 카보다이이미드 커플링제 예컨대 EDC 및 EDCI, 포스포늄 및 이모늄 유형의 시약 예컨대 BOP, PyBOP, PyBrOP, TBTU, HBTU, HATU, COMU, 및 TFFH를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
Figure pct00008
변형된, 예를 들어 아미드화된 펙틴은, 본 명세서에 기재된 임의의 방법에 의해 수득될 수 있다. 변형된 펙틴의 합성에 특히 유용한 출발 물질로는 과일 펙틴, 예를 들어, 사과 및 시트러스 펙틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 전구체 (변형되지 않은) 펙틴은 상대 분자량이 약 5 kDa 내지 약 1,100 kDa, 약 10 kDa 내지 약 500 kDa, 약 10 kDa 내지 약 300 kDa, 약 20 kDa 내지 약 200 kDa, 또는 약 20 kDa 내지 약 100 kDa이다. 일부 구현예에서, 다당류 시제는 상대 분자량이 약 120 kDa 내지 약 300 kDa, 약 150kDa 내지 약 300 kDa, 또는 약 120 kDa 내지 약 175 kDa이다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴의 상대 분자량은 기준으로서 분자량 표준, 예컨대 Pullulan 시리즈 표준을 사용하는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 오염 제거 시약은 적어도 하나의 아미노 기로 치환된 하나 이상의 단량체 단위를 포함하는 아미드화 펙틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 화학식 I의 구조를 가지는 단량체 단위:
Figure pct00009
(I)를 포함하고,
화학식 중:
n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
R1은 H 또는 C1-C3 알킬이고;
X는, 각각의 경우에, 독립적으로 C2-C4 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
Y는 C2-C3 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
R2 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 화학식 II로 나타낸 단량체 단위:
Figure pct00010
(II),
이의 이성질체, 호변 이성질체, 및 이의 조합을 포함하며, 화학식 중:
n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
m은, 각각의 경우에, 독립적으로 2, 3, 또는 4이고;
p는 2, 3, 또는 4이고;
R4는 H이거나, 또는 C1-C3 알킬이고;
R5 및 R6는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 1차 아미노 기를 포함하는 하나 이상의 단량체 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 폴리아민으로 아미드화된 아미드이다. 본 명세서에서 사용 시, 폴리아민은 둘 이상의 아미노 기를 포함하는 화합물이다. 본 명세서에 개시된 고체 지지체의 펙틴 변형에 사용될 수 있는 폴리 아민으로는 합성 폴리아민 및 천연에 존재하는 폴리아민, 예를 들어, 스페르미딘, 스페르민, 푸트레신 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리아민은 스페르민, 스페르미딘, 카다베린, 에틸렌다이아민, 및 푸트레신으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 폴리아민은 스페르민 또는 스페르미딘이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 화학식 III 또는 화학식 IV의 구조를 가지는 단위:
Figure pct00011
또는
Figure pct00012
(III) (IV)
및 이의 이성질체 및 호변 이성질체를 포함한다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음으로 나타낸 화학식의 단량체 단위:
Figure pct00013
(V)
이의 이성질체, 염, 또는 호변 이성질체를 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 다당류는 변형되지 않은 펙틴의 과요오드 산화에 이어 환원성 아민화, 예를 들어, 폴리아민을 사용한 환원성 아민화에 의해 수득된 펙틴이다. 과요오드산 산화 및 탄수화물의 환원적 아민화 방법은 기술 분야 내에 공지되어 있다.
본 명세서에서 사용 시, 용어 "알킬," "알케닐," 및 "알키닐"은 직선형-사슬, 분지형-사슬, 및 사이클릭 1가 하이드로카빌 라디칼, 및 이들의 조합을 포함하며, 이들은 치환되지 않을 때 오직 C 및 H만을 함유한다. 예로는 메틸, 에틸, 아이소뷰틸, 사이클로헥실, 사이클로펜틸에틸, 2-프로페닐, 3-뷰티닐, 등을 포함한다. 이러한 각각의 기의 전체 탄소 원자 수가 종종 본 명세서에 기재되며, 예를 들어, 기가 최대 10개의 탄소 원자를 포함할 수 있는 경우, 1-10C, C1-C10, C1-10 또는 C1-10로서 나타낼 수 있다. 본 명세서에서 사용 시, 용어 "헤테로알킬," "헤테로알케닐," 및 "헤테로알키닐"은 하나 이상의 사슬 탄소 원자가 헤테로원자로 대체된 상응하는 탄화수소를 의미한다. 예시적인 헤테로원자로는 N, O, S, 및 P를 포함한다. 헤테로원자가, 예를 들어 헤테로알킬 기 내의 탄소 원자를 대체할 수 있는 경우, 기를 설명하는 숫자는, 예를 들어 C3-C10으로서 표기되지만, 이는 고리 또는 사슬 내 탄소 원자의 수와, 기재된 고리 또는 사슬 내 탄소 원자에 대한 대체물로서 포함된 헤테로원자 수의 합을 나타낸다.
단일 기는 하나 이상의 유형의 다중 결합 또는 하나 이상의 다중 결합을 포함할 수 있고; 이러한 기는 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 경우 용어 "알케닐"의 정의 내에 포함되며, 이들이 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 경우 용어 "알키닐"에 포함된다.
알킬, 알케닐, 및 알키닐 기는 이러한 치환이 화학적으로 타당한 정도로 임의 치환될 수 있다. 일반적인 치환기로는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 할로겐 (F, Cl, Br, I), =O, =NCN, =NOR, =NR, 또는, NR2, SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRC(O)OR, NRC(O)R, CN, C(O)OR, C(O)NR2, OC(O)R, C(O)R, 및 NO2, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C2-C8 헤테로알킬, C1-C8 아실, C2-C8 헤테로아실, C2-C8 알케닐, C2-C8 헤테로알케닐, C2-C8 알키닐, C2-C8 헤테로알키닐, C6-C10 아릴, 또는 C5-C10 헤테로아릴이고, 각각의 R은 할로겐 (F, Cl, Br, I), =O, =NCN, =NOR', =NR', 또는', NR'2, SR', SO2R', SO2NR'2, NR'SO2R', NR'CONR'2, NR'C(O)OR', NR'C(O)R', CN, C(O)OR', C(O)NR'2, OC(O)R', C(O)R', 및 NO2으로 임의 치환되며, 각각의 R'은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C2-C8 헤테로알킬, C1-C8 아실, C2-C8 헤테로아실, C6-C10 아릴 또는 C5-C10 헤테로아릴이다. 알킬, 알케닐 및 알키닐 기는 또한 C1-C8 아실, C2-C8 헤테로아실, C6-C10 아릴, 또는 C5-C10 헤테로아릴으로 치환될 수 있으며, 상기 각각은 특정 기에 적절한 치환기로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용 시 "알킬"은 사이클로알킬 및 사이클로알킬알킬 기를 포함하며, 용어 "사이클로알킬"은 본 명세서에서 고리 탄소 원자를 통해 연결된 카보사이클릭 비-방향족 기를 설명하도록 사용되며, "사이클로알킬알킬"은 알킬 링커를 통해 분자에 연결된 카보사이클릭 비-방향족 기를 설명하도록 사용된다. 이와 유사하게, "헤테로사이클릴"은 고리 구성원으로서 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하고 고리 원자 (이는 C 또는 N일 수 있음)를 통해 분자에 연결되는 비-방향족 사이클릭 기를 식별하는데 사용되며; "헤테로사이클릴알킬"은 알킬렌 링커를 통해 또 다른 분자에 연결된 기를 설명하는데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용 시, 이러한 용어는 또한 고리가 방향족이 아닌 한 이중 결합 또는 2 개를 함유하는 고리를 포함한다.
"방향족" 또는 "아릴" 치환체 또는 모이어티는 잘 알려진 방향족 특성을 가지는 모노사이클릭 또는 접합된 바이사이클릭 모이어티를 지칭하며; 아릴의 예로는 페닐 및 나프틸을 포함한다. 이와 유사하게, "헤테로방향족" 및 "헤테로아릴"은 고리 구성원으로서 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 모노사이클릭 또는 접합된 바이사이클릭 고리 시스템을 지칭한다. 적합한 헤테로원자로는 N, O, 및 S를 포함하며, 이를 포함하여 5-원 고리 뿐만 아니라 6-원 고리의 방향족성을 허용한다. 일반적인 헤테로방향족 시스템으로는 모노사이클릭 C5-C6 방향족 기 예컨대 피리딜, 피리미딜, 피라지닐, 싸이에닐, 퓨라닐, 피롤릴, 피라졸릴, 싸이아졸릴, 옥사졸릴, 및 이미다졸릴, 및 C8-C10 바이사이클릭 기를 형성하기 위해 이러한 모노사이클릭 기 중 하나를 페닐 고리와 또는 임의의 헤테로방향족 모노사이클릭 기와 접합하여 형성된 접합된 바이사이클릭 모이어티, 예컨대 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 인다졸릴, 벤조트라이아졸릴, 아이소퀴놀릴, 퀴놀릴, 벤조싸이아졸릴, 벤조퓨란일, 피라졸로피리딜, 퀴나졸린일, 퀴녹살린일, 시놀린일, 등을 포함한다. 고리 시스템 전체에 걸친 전자 분포의 측면에서 방향족 특성을 가지는 임의의 모노사이클릭 또는 접합된 고리 바이사이클릭 시스템이 이러한 정의에 포함된다. 또한 방향족의 특성을 가지는 분자의 나머지 부분에 직접적으로 부착되는 바이사이클릭 기를 포함한다. 일반적으로, 고리 시스템은 5-14개의 고리 구성원 원자를 포함한다. 일반적으로, 모노사이클릭 헤테로아릴은 5-6 개의 고리 구성원을 포함하며, 바이사이클릭 헤테로아릴은 8-10 개의 고리 구성원을 포함한다.
아릴 및 헤테로아릴 모이어티는 다양한 치환기, 예를 들어 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C5-C12 아릴, C1-C8 아실, 및 이의 헤테로폼으로 치환될 수 있고, 상기 각각은 그 자체가 추가로 치환될 수 있다; 아릴 및 헤테로아릴 모이어티에 대한 다른 치환기로로는 다음을 포함한다: 할로겐 (F, Cl, Br, I), 또는, NR2, SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRC(O)OR, NRC(O)R, CN, C(O)OR, C(O)NR2, OC(O)R, C(O)R, 및 NO2, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C2-C8 헤테로알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 헤테로알케닐, C2-C8 알키닐, C2-C8 헤테로알키닐, C6-C10 아릴, C5-C10 헤테로아릴, C7-C12 아릴알킬, 또는 C6-C12 헤테로아릴알킬이며, 각각의 R은 알킬 기에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의 치환된다. 아릴 또는 헤테로아릴 기 상의 치환기는 본 명세서에서 치환기의 각 유형 또는 치환기의 각 성분에 대해 적합한 것으로 기재된 기로 추가로 치환될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 아릴알킬 치환체는 아릴 부분에서 아릴 기에 대해 전형적인 것으로 본 명세서에 기재된 치환기로 치환될 수 있으며, 알킬 부분에 알킬 기에 전형적이거나 적합한 것으로 본 명세서에 기재된 치환기로 추가적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용 시, "임의 치환"은 기재되는 구체적인 기가 비-수소 치환체로 대체된 하나 이상의 수소 치환기를 가질 수 있음을 나타낸다. 일부 임의 치환된 기 또는 모이어티에서, 모든 수소 치환기는 비-수소 치환체로 치환된다 (예를 들어, 트라이플루오로메틸과 같은 폴리플루오로화 알킬). 달리 명시되지 않는 경우, 존재할 수 있는 이러한 치환기의 총 개수는 기재되는 기의 비치환 형태에 존재하는 H 원자의 개수와 동일하다. 임의 치환기가 카보닐 산소 또는 옥소 (=O)와 같이 이중 결합을 통해 부착되는 경우, 이러한 기는 2 개의 가용 원자가를 차지하므로, 포함될 수 있는 총 치환기 수는 사용 가능한 원자가 수에 따라 감소한다.
일부 구현예에서, 오염 제거 시약은 하나 이상의 다음의 화학식으로 나타낸 단량체 단위:
Figure pct00014
,
이의 호변 이성질체, 이의 이성질체, 또는 염을 가지는 아미드화 펙틴 용액을 포함하며, 화학식 중:
n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
m은 2, 3, 또는 4이고;
p는 2, 3, 또는 4이고;
R1, R2, 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬이다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 1차 아미노 기를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 폴리아민으로 아미드화된 아미드이다. 일부 구현예에서, 폴리아민은 스페르민, 스페르미딘, 카다베린, 에틸렌다이아민, 및 푸트레신으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음의 화학식으로 나타낸 단위:
Figure pct00015
또는
Figure pct00016
,
이의 호변 이성질체, 이성질체, 염, 또는 이의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음으로 나타낸 화학식의 단량체 단위:
Figure pct00017
,
이의 이성질체, 염, 또는 호변 이성질체를 포함한다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 상기 도시된 화학식으로 나타낸 복수의 단량체 단위를 포함한다. 본 명세서에서 사용 시, 용어 "복수"는 하나 이상을 의미한다. 예를 들어, 복수의 단량체 단위는 적어도 두 개의 단량체 단위, 적어도 3 개의 단량체 단위, 또는 적어도 단량체 단위, 등을 의미한다. 본 발명의 구현예가 하나 이상의 유형의 단량체 단위를 포함하는 경우, 제1 단량체 단위, 제2 단량체 단위, 제3 단량체 단위, 등으로 지칭될 수 있다.
오염 제거 방법
하나의 양태에서, 본 명세서에는 표면에서 핵산 오염을 감소시키는 방법이 개시되며, 용해된 또는 현탁된 복수의 아미노 기를 포함하는 변형된 펙틴, 예를 들어, 아미드화 펙틴을 포함하는 용액과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 펙틴은 아미드화 펙틴이며, 이러한 아미드화 펙틴은 화학식 I-V의 구조를 가지는 하나 이상의 단량체 단위를 포함한다. 다른 구체예에서, 오염 제거 용액 내 아미드화 펙틴의 농도는 약 0.01% 내지 약 5%, 약 0.01% 내지 약 1%, 약 0.01% 내지 약 0.1%, 약 0. 1% 내지 약 5%, 약 0.1% 내지 약 1%, 약 0.5% 내지 약 5%, 또는 약 0.5% 내지 약 2%이다. 일부 구현예에서, 오염 제거 용액 내 아미드화 펙틴의 농도는 약 0.1 μg/mL 내지 약 10,000 μg/mL, 약 0. 1 μg/mL 내지 약 5,000 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 1,000 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 100 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 5 μg/mL이다. 당업자는 제거되는 핵산 오염물의 양에 따라 적합한 오염 제거 펙틴의 양 및/또는 농도를 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 오염 제거 조성물, 예를 들어, 아미드화 펙틴의 용액 또는 현탁액은 실온에서 저장할 때 안정하다.
일부 구현예에서, 오염 제거 조성물은 비누, 세제, 소독제, 및/또는 다른 적합한 화합물과 같은 첨가제를 추가적으로 포함할 수 있다. 소독제의 적합한 예로는, 예를 들어, 4차 암모늄 화합물, 콜로이드성 은, 아세트산, 과산화수소, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 오염 제거 용액은 면봉, 와이프, 포, 필터, 또는 스폰지에 존재한다. 특히 구현예, 오염 제거될 표면은 기구의 표면 또는 실험실 벤치 표면이다. 다른 구체예에서, 용액은 실험실 피펫을 오염 제거하는데 사용된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된오염 제거 방법은 오염 제거될 표면을, 아미드화 펙틴을 포함하지 않는 물 또는 다른 용액으로 헹구거나 닦는 것을 추가적으로 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 핵산 오염물로부터 오염 제거될 표면 또는 용액을, 펙틴과 함께 하이드로겔을 형성할 수 있는 금속 이온을 포함하는 용액과 접촉시켜, 핵산 또는 본 명세서에 개시된 오염 제거 용액의 아미드화 펙틴의 복합체를 침전, 포획, 복합체화, 또는 불용성을 만드는 것을 추가로 포함한다. 적합한 금속 이온은 Ca2+ 및 Mg2+ 이온을 포함한다. 펙틴 또는 아미드화 펙틴과 가교할 수 있는 임의의 금속이 본 명세서에 개시된 오염 제거 조성물에 포함되기 적합하다.
또 다른 양태에서, 본 명세서에는 용액에서 핵산 오염을 감소시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 오염 제거될 용액을 고체 지지체에 공유 결합된 아미드화 펙틴을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함하고, 이러한 아미드화 펙틴은 상기 도시된 화학식 I-V의 구조를 가지는 복수의 단량체 잔기를 포함한다. 본 명세서에서 사용 시, 용어 "고체 지지체"는 상자성 입자, 겔, 제어된 공극 유리, 자기 비드, 미세구(microsphere), 나노구(nanosphere), 모세관, 필터 막, 컬럼, 포(cloth), 와이프(wipe), 종이, 편평한 지지체, 다중 웰 플레이트, 다공성 막, 다공성 단일체, 웨이퍼, 빗(comb), 또는 이의 임의의 조합을 비롯한 임의의 기질을 지칭한다. 고체 지지체는 유리, 실리카, 티타늄 옥사이드, 산화철, 에틸렌 백본 중합체, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리스티렌, 세라믹, 셀룰로스, 나이트로셀룰로스, 및 다이비닐벤젠을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 물질을 포함할 수 있다.
고체 지지체에 대한 아미드화 펙틴과 같은 변형된 펙틴의 공유 부착은 펙틴을 아민-반응성 기, 예를 들어, 에폭사이드, 알데하이드, 케톤, 또는 활성화된 에스터를 포함하는 고체 지지체와 반응시킴으로써 임의의 적합한 방식으로 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 아미드화 펙틴은 아미드 결합, 예를 들어, 고체 지지체의 카복시 기와 아미드화 펙틴의 아미노 기 사이에 형성되는 아미드 결합을 통해 고체 지지체에 공유적으로 부착된다. 아미드 결합의 형성은 임의의 적합한 방법에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 1차 아미노 기를 포함하는 아미드화 펙틴은 적합한 커플링제의 존재하에 하나 이상의 카복실산 기를 포함하는 기질과 반응할 수 있다. 적합한 커플링제의 예로는 카보다이이미드 커플링제 예컨대 DCC 및 EDCI, 포스포늄 및 이모늄 유형의 시약 예컨대 BOP, PyBOP, PyBrOP, TBTU, HBTU, HATU, COMU, 및 TFFH를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 바람직한 구현예에서, 고체 기질의 카복실산 기는 활성화된 에스터로 전환된 다음, 아미드화 펙틴의 아미노 기와 반응할 수 있다.
일부 구현예에서, 고체 지지체는 고체 지지체에 공유적으로 부착된 화학식 I-V 중 임의의 하나의 화합물을 포함한다.
일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 아미드화 펙틴을 포, 스폰지, 패드, 또는 와이프에 함침 또는 코팅함으로써, 상기 포, 스폰지, 패드, 또는 와이프에 혼입된다. 예로는 Kimberly-Clark Corporation에서 제조한 KimWipesTM와 같이 실험실 용도로 일반적으로 사용되는 면봉, 직조 섬유 패드 또는 와이프를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 명세서에는 공기 중의 에어로졸화된 핵산 오염을 감소시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 에어로졸화된 핵산으로 오염된 공기를, 변형된 펙틴, 예를 들어, 화학식 I-V 또는 이의 조합 중 임의의 하나 이상의 단량체 단위를 포함하는 아미드화 펙틴을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 에어로졸화된 핵산으로 오염된 공기를 접촉시키는 것은 공기를 아미드화 펙틴의 용액 또는 현탁액을 통해 통과시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 에어로졸 핵산으로 오염된 공기를 접촉시키는 것은 공기를, 아미드화 펙틴을 포함하는 필터 통해 통과시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은 필터에 공유 결합된다. 일부 구현예에서, 에어로졸 핵산으로 오염된 공기를 접촉시키는 것은 공유 결합된 아미드화 펙틴을 포함하는 표면 상에 공기를 통과시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴은, 예를 들어, NHS/EDC 커플링에 의해, 또는 펙틴과 과요오드산염의 순차적 산화 및 아민, 예를 들어, 스페르민, 및 소듐 보로하이드라이드와의 환원적 아미드화에 의해 스페르민으로 아미드화된 펙틴이다.
핵산 오염물은 에어로졸 형태로, 또는 먼지 입자에 존재할 수도 있다. 따라서, 본 발명의 아미드화 펙틴을 포함하는 공기 필터는 이러한 오염물의 제거에 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 필터는, 예를 들어, 필터 재료를 본 발명의 아미드화 펙틴을 함유하는 용액에 침지한 다음, 필터를 건조시킴으로써 제조될 수 있다. 다른 구체예에서, 필터 물질은 아미드화 펙틴으로 공유 코팅될 수 있다.
일부 구현예에서, 용액으로부터 핵산 오염물을 제거하는 것이 유리하다. 이러한 구현예에서, 오염물을 포함하는 용액은 본 발명의 아미드화 펙틴을 포함하는 조성물, 예를 들어, 고체 지지체에 공유 부착된 아미드화 펙틴을 포함하는 고체 지지체로 처리될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 처리는 오염 제거될 용액을 필터, 단일체, 막, 등을 통해 통과시키는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 오염 제거될 용액은 고체 지지체, 예를 들어, 자기 비드와 접촉된다.
일부 구현예에서, 핵산 오염물은 앰플리콘이다. 일부 구현예에서, 아미드화 펙틴을 포함하는 조성물은 분자 진단 실험실 표면, 기기, 및 장비의 앰플리콘 오염 제거 및/또는 상기 오염 방지를 위해 사용된다. 이러한 표면, 기기, 또는 장비의 오염 제거는 임의의 적합한 방식으로, 예를 들어, 상기 기재된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 오염 제거 용액은 증폭 반응의 완료 및 증폭 산물의 검출 후 증폭반응에 첨가되어, 증폭 산물, 예를 들어, 앰플리콘을, 실질적으로 증북 불가능하게 만든다. 일부 구현예에서, 오염 제거 용액은 자동화 카트리지에서 증폭-후 증폭 반응에 첨가된다. 본 명세서에 개시된 오염 제거제는, 분자 진단 시험의 특정 성분과 반응할 수 있으며, 독성 부산물의 방출하는 표백제 또는 다른 산화제와 달리, 오염 제거제가 이러한 성분과 반응하지 않기 때문에 특정한 이점을 가진다.
본 명세서에 개시된 조성물의 오염 제거 성능은 임의의 적합한 방법, 예를 들어, 와이프 테스트를 사용하여 테스트될 수 있다. 일부 구현예에서, 문헌에 개시되어 있는 오염 제거 시약의 효능을 평가하는 임의의 방법이 사용될 수 있다 (예를 들어, Fischer M. et al, Efficacy Assessment of Nucleic Acid Decontamination Reagents Used in Molecular Diagnostics Laboratories, PLOS One, July 13, 2016 참조).
본 발명을 수행하기 위해 본 발명자들에게 알려진 최상의 모드를 포함하여, 상기 발명의 바람직한 구현예가 본 명세서에 기재된다. 상기 바람직한 구체예의 등가물의 변형, 변경, 수정 및 대체는 전술한 설명을 읽음으로써 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명자는 당업자가 이러한 균등물의 변형, 변경, 수정 및 대체를 적절하게 사용할 것을 예상하며, 본 발명자는 본 명세서에 구체적으로 기재된 것 이외의 방법으로 본 발명이 수행되는 것을 의도한다. 당업자는 본질적으로 유사한 결과를 산출하기 위하여 변화 또는 변경될 수 있는 중요하지 않은 다양한 지표를 용이하게 알고 있을 것이다. 따라서, 본 발명은 적용 가능한 법률이 허용하는 바에 따라 본 명세서에 첨부된 청구범위에 언급된 주제의 모든 변형 및 균등물을 포함한다. 게다가, 상기 설명한 구성의 모든 가능한 변형에 속하는 이러한 요소의 임의의 조합은, 본 명세서에서 달리 언급하지 않는 한 또는 달리 명확하게 본 내용에 대조되는 것으로 언급되지 않는 한 본 발명에 포함된다.
예시적인 구체예가 예시되고 설명되었지만, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 본 발명의 요소 각각이 여러 구체예를 포함하는 것으로 본 명세서에 기재되어 있지만, 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 주어진 요소의 구체예 각각은 본 발명의 다른 요소의 구체예 각각과 함께 사용될 수 있고, 이러한 각각의 사용은 본 발명의 상이한 구체예를 형성하는 것으로 의도된 것임을 이해해야 한다.
본 명세서에 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 과학 문헌은, 각 개별적인 간행물, 특허 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되도록 지시된 바와 같이, 그 전체가 본 명세서에 참조 문헌으로 인용된다. 본 명세서에서 언급된 참조와 본 명세서의 특정 내용 사이의 충돌은 후자를 위해 해결되어야 한다. 마찬가지로, 분야에서 이해되는 단어 또는 문구의 정의와 본 명세서에서 구체적으로 교시되는 단어 또는 문구의 정의 사이의 충돌은 후자를 위해 해결되어야 한다.
상기 본 발명으로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명은 광범위한 적용을 가진다. 본 발명은 다음의 실시예에 의해 추가적으로 설명되며, 이는 단지 예시적인 것이며, 본 발명의 정의 및 범위를 어떤 방식으로든 제한하려는 것은 아니다.
실시예
실시예 1. 아미드화 펙틴의 제조
스페르민-펙틴 컨쥬게이트 화합물 1의 합성
사과 펙틴 (10.0 g)을 1 L의 Milli-Q 여과수에 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. 5 M NaOH (10 mL)를 첨가하고, 또 다른 20 분 동안 교반한 다음, 1 N HCl (30 mL)을 첨가하였다 (pH = 4.2). N-(3-다이메틸아미노프로필)-N'-에틸카보다이이미드 하이드로클로라이드 (EDC, 10.08 g, 52.59 mmol) 및 N-하이드록시석신이미드 (NHS, 3.026 g, 52.59 mmol)를 용액에 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 스페르민 (80 mL, 368 mmol)을 첨가하교 용액을 실온에서 22 시간 동안 교반하였다. 이어서 용액을 빠르게 교반하는 MeOH (2 L)에 붓고 20 분 동안 교반 하였다. 용액을 중간 프릿 유리 깔대기를 통해 여과하여 고체를 수집한 다음 MeOH로 2 회 세척하였다. 고체를 진공하에 50 ℃에서 40 시간 동안 건조시켰다. 전기 커피 분쇄기를 사용하여 고체를 미세 분말로 분쇄하고 500 mL의 산 세척 용액 (55% 아이소프로필 알코올, 34.5% 물, 및 10.5% 진한 염산)에 현탁시키고 4.5 시간 동안 교반하였다. 용액을 여과하고 고체를 산 세척 용액으로 추가로 2 회 세척한 다음 진공하에 50 ℃에서 밤새 건조시켰다. 고체를 750 mL의 탈이온수에 현탁시키고 50 mL 원심 분리 튜브를 사용하여 10 분 동안 4200 rpm에서 원심 분리하였다. 상청액을 수집하여 조합하였다. 펠릿을 조합하고 350 mL의 탈이온수에 현탁시키고 50 mL 원심 분리 튜브를 사용하여 4200 rpm에서 17 시간 동안 원심 분리하였다. 상청액은 첫 번째 상청액과 조합하였다. 조합된 모든 상청액은 2 마이크론 필터를 통해 여과하였다. 여과된 용액을 동결 건조에 의해 건조시켜 7.78 g의 스페르민-펙틴 컨쥬게이트를 수득하였다. Anal. Calc for C16H32N4O5 (갈락투론산 단량체 + 스페르민): C, 53.3; H, 8.95; N, 15.5. Found: N, 7.21.
펙틴의 산화적 절단 후 환원적 아민화에 의한
스페르민 컨쥬게이트 화합물 2의 합성
상기 실시에서는, 산화 후 환원적 아미노화를 통해 다양한 폴리아민을 사용한 다당류 중합체의 변형에 대한 일반적인 절차가 제공된다.
(A). 산화. 사과 펙틴 (2.5 g)을 자기 교반하면서 모두 용해될 때까지 탈이온수 250mL에 부분적으로 첨가하였다. 여기에, 교반하면서 포타슘 페리오데이트 (2.43 g)를 부분적으로 첨가하고 18 시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 3 일에 걸쳐 8 kd MWCO 투석 튜브를 통해 물에 대해 투석하였다. 생성된 탈염된 중합체를 후속적으로 동결 건조하여 바삭한 회백색 고체로서 산화된 펙틴을 수득하였다. 알데하이드의 농도는 하이드록시아민 적정을 통해 용이하게 측정될 수 있다 (Zhao, H.; Heindel, N. D. J. Pharm. Res. 8(3), 400-402. 참조). 알데하이드 함량은 4.9 mmol/g (중합체 단위 당 ~1 당량의 알데하이드)로 측정되었다.
(B). 환원적 아미노화. 단계 A에서 산화된 펙틴 (1.0 g)을 100 mL의 탈이온수에 현탁시키고, 스페르민 (1.32 g, 1.25 eq)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 1 g의 소듐 보로하이드라이드 펠릿을 반응에 첨가하고 18 시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 3 일에 걸쳐 8 kd MWCO 투석 튜브를 통해 물에 대해 투석한 뒤 동결 건조하여, 회백색의 푹신한 고체로서 200mg의 화합물 2를 수득하였다.
스페르민-펙틴 컨쥬게이트 용액의 제조
1.0 g의 동결건조된 스페르민-펙틴 컨쥬게이트 화합물 1 또는 화합물 2를 100 mL의 Milli-Q 여과수에 용해시키고 원심 분리에 의해 임의의 불용성 입자를 제거하여 스페르민-펙틴 컨쥬게이트 화합물 1 및 화합물 2의 용액 (1%, w/w)을 제조하였다.
1% 용액으로부터 물 중의 0.1%, 0.01%, 0.001% 및 0.0001% 희석액을 제조하였다.
실시예 2 작용기화된 비드의 제조
스페르민-펙틴 컨쥬게이트의 합성
사과 펙틴 (2.45 g)을 빠르게 교반되는 250mL의 Milli-Q 여과수에 천천히 첨가하였다. 펙틴이 완전히 젖을 때까지 (1.5 시간) 용액을 교반하였다. 용액의 pH가 12가 될 때까지 2.5M NaOH (~ 5 mL)를 첨가하였다. 용액을 30 분 동안 교반한 다음 pH 9가 될 때까지 1N HCl (~ 7 mL)을 첨가하였다. N-(3-다이메틸아미노프로필)-N'-에틸카보다이이미드 하이드로클로라이드 (2.45 g, 12.8 mmol) 및 N-하이드록시석신이미드 (1.45 g, 12.6 mmol)를 용액에 첨가하고 혼합물을 실온에서 1.25 시간 동안 교반하였다. 스페르민 (25.0 g, 124 mmol)을 첨가하교 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서 용액을 빠르게 교반하는 MeOH (1.5 L)에 붓고 45 분 동안 교반 하였다. 용액을 중간 프릿 유리 깔대기를 통해 여과하여 고체를 수집한 다음 MeOH로 3 회 세척하였다. 고체를 진공하에 50 ℃에서 밤새 건조시켰다. 막자 사발을 사용하여 고체를 미세 분말로 분쇄하고, 분말을 50 mL의 산 세척 용액 (55% 아이소프로필 알코올, 34.5% 물, 및 10.5% 진한 염산)에 넣은 다음, 1 시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고 추가의 산 세척 용액 (5회) 및 중성 세척 용액 (59 % 아이소프로필 알코올 및 41 % 물)으로 5 회 세척하였다. 고체를 MeOH로 세척하고 (5회) 고진공 하에서 건조하여 2.20 g의 스페르민-펙틴 접합체를 수득하였다. Anal. Calcd for C16H32N4O5 (갈락투론산 단량체 + 스페르민): C, 53.3; H, 8.95; N, 15.5. Found: C, 39.0; H, 6.58; N, 4.07.
B 비드의 변형
다음의 비드를 상기 기재된 펙틴으로 변형시켰다:
실리카 미세구, 카복실, 1.0μm (펜실베니아 워링턴 소재의 Polysciences, 24754-1)
카복실-폴리스티렌 입자, 5.11 μm (독일 소재의 Spherotech, CP-50-10)
NHS-활성화 세파로스 4 패스트 플로우 (일리노이 시카고 소재의 GE healthcare, 세파로스 비드, 17-0906-01)
세파로스 비드의 경우, NHS 활성화 비드 형태를 사용하여, EDC/NHS 활성화 단계를 수행하지 않았다. 가수 분해된 NHS-세파로스 비드를 변형되지 않은 비드 대조군으로서 사용하였다. 상기 실시예에서, 아민 함유 펙틴 중합체, 예컨대 상기 기재된 변형된 펙틴을 사용하여 카복실-변형된 비드의 작용기화를 위한 절차가 제공된다.
카복실 기 (Spherotech, CP-50-10)로 변형된 폴리스티렌 비드 (~5 마이크론, 2 mL의 5 중량% 현탁액)을 탈이온수 (4 mL)로 희석하고 15 분 동안 초음파 처리하였다. 비드 현탁액에, 40　mg의 EDC.HCl 및 40 mg의 NHS를 첨가하였다. 활성화를 위해 현탁액을 24 시간 동안 교반하고, 4000 rpm에서 5 분 동안 간단히 원심 분리하고 상등액을 상층 분리하였다. 비드를 5 mL 탈이온수에 재현탁하고, 여기에 아민 중합체 1 % 용액 (5 mL)을 첨가하였다. 아민 펙틴 중합체 용액은 탈이온수에서 18 시간 동안 아민 펙틴 중합체를 교반하여 제조한 다음, 용해된 물질을 제거하기 위해 9000 rpm에서 30 분 동안 원심 분리하였다. 현탁액을 18 시간 동안 교반한 다음, 9000 rpm에서 30 분 동안 원심 분리하고, 45 mL의 물로 희석하고 동일한 방식으로 세정하였다. 0.1 M NaOH (1x), 0.1 M HCl (1x), 및 탈이온수 (2x)으로 공정을 반복하였다. 비드를 5 mL 탈이온수에 재현탁하고, 30 분 동안 초음파 처리하고, SpeedVac에서 진공하에 150 ul 분취량을 칭량하여, 농도를 측정하였다.
실시예 3 핵산의 오염 제거
실험 A
각각 100μL의 물에 2.5 ng의 연어 dsDNA (126bp) 앰플리콘 주형 서열을 포함하는 7 개의 개별 샘플 바이알을 제조하였다. 제1 바이알에는 스페르민-펙틴 컨쥬게이트를 첨가하지 않았다. 10 uL 물 중의 스페르민-펙틴 컨쥬게이트를 남아있는 바이알 각각에 첨가하였다 (0.5, 2, 3, 4, 5 및 6 μg). 실온에서 1 시간 동안 방치한 후 각각의 바이알에서 5μL를 제거하고 PCR 반응 용액 (15μL)에 첨가하였다. 하기 기재된 조건을 사용하여 PCRmax Eco 48에서 실시간 qPCR을 수행하였다. 열적 사이클은 95 ℃에서 60 초 동안 프로그래밍된 다음 95 ℃에서 10 초 동안 40 사이클, 60 ℃에서 60 초 동안 프로그래밍되었다. PCR 반응 용액: 25 mM KCl, 50 mM MgCl2, 4.2 mM HEPES, 0.1% Tween, 0.2 mM dNTP's, 1.5 mU/uL of 핫 스타트 Taq 효소, 400 nM 프롭 및 400 nM 프라이머.
정방향 프라이머: 5'-AGCCTGGATGACAATGACTCT-3' 서열 번호: 1
역방향 프라이머: 5'-CTTATGCAT GTCCTTCTTG-3' 서열 번호: 2
프로브: FAM (5') 및 BHQ (3')으로 변형된 5'-CGACGGCAACG(T-Dabcyl)CAGGAGGAACTACGA-3' 서열 번호: 3.
연어 게놈 서열의 이중 가닥 DNA (126 bp)는 PCR의 앰플리콘 제품 모델로 Integrated DNA Technologies에서 구매하였다.
앰플리콘 주형 서열 (126-mer):
5'AGCCTGGATGACAATGACTCTCAGCATCTGCCCCCCTACGGGAACTACTTCCAGAACCTGGGGGGCGACGGCAACGTCAGGAGGAACTACGAACTGTTGGCCTGCTTCAAGAAGGACATGCATAAG-3' 서열 번호: 4
도 1은 2.5ng의 dsDNA (126bp) 주형이 스페르민 컨쥬게이션된 펙틴으로 처리된 PCR 곡선을 도시한다. 각각의 곡선은 0.5 내지 6.0ng의 스페르민-펙틴을 2.5 ng의 dsDNA에 첨가한 실험을 나타낸다. 왼쪽의 첫 번째 곡선은 12.2의 Ct를 가지며 이는 스페르민-펙틴 대조군이 없음을 나타낸다. 더 많은 펙틴이 개별 반응에 추가됨에 따라 Ct가 길어지며, 6ug의 스페르민-펙틴까지 Ct가 관찰되지 않는다. 이것은 모든 주형이 스페르민-펙틴 컨쥬게이트에 의해 결합된 농도이며, 이러한 주형은은 PCR 반응에서 증폭될 수 없다.
실험 B
60 μL의 물에 6 μg의 스페르민-펙틴 컨쥬게이트를 각각 포함하는 두 개의 개별 바이알을 제조하였다. 하나의 바이알에는, 20 μL의 물에 4 μg의 hgDNA를 첨가하고 1 시간 동안 실온에 두었다. 100 uL 중의 2.5ng 연어 dsDNA (126bp) 모델 앰플리콘을 두 바이알에 첨가하였다. 각 바이알에서 5 μL 분취량을 제거하여 PCR에 사용하였다.
2.5ng의 연어 dsDNA (126bp)를 6ug의 스페르민-펙틴 컨쥬게이트로 처리했을때 PCR 증폭이 발생하지 않았다 (도 2). 그러나, 6μg의 스페르민-펙틴을 4μg의 hgDNA로 먼저 처리하여 DNA 오염물을 나타내고, 2.5ng의 연어 dsDNA를 추가하는 경우, 2.5ng의 연어 DNA 만의 대조군과 동일한 PCR 신호가 획득되었다 (그림 2). 상기 실시예는 스페르민-펙틴 컨쥬게이트가 먼저 오염 DNA에 결합할 수 있고 원하는 표적 DNA의 증폭이 여전히 스페르민-펙틴-오염 DNA 복합체의 존재하에 발생할 수 있음을 보여준다.
실험 C
연어 dsDNA (126bp) 모델 앰플리콘은 물 1mL 당 1,000 만 카피의 농도로 희석하였다. 1 mL의 DNA 용액을 3 개의 개별 바이알 각각에 첨가하였다. 하나의 바이알을 스페르민-펙틴이 없는 대조군 샘플로 사용하였다. 나머지 2 개의 바이알에는 10μL의 물에 1μg의 스페르민-펙틴 컨쥬게이트를 첨가하였다. 그리고, 상기 바이알 중 하나에만, 추가적인2.5ng의 연어 dsDNA (126bp) 모델 앰플리콘을 100μL의 물에 첨가하였다. 1 시간 동안 방치 한 후, 하기 기재된 바와 같이 PCR 반응을 위해 각 바이알에서 5μL를 사용하였다.
도 3은 1000만 카피의 dsDNA (126 bp)를 1 μg의 예시적인 스페르민-펙틴 컨쥬게이트로 처리하였을 때, 증폭이 완전히 억제됨 (B)을 도시한다. 더욱 많은 카피 (1.9 x 1010)가 스페르민-펙틴-DNA 혼합물에 첨가된 후, 증폭이 회복되었고 (C) 처리되지 않은 DNA의 증폭과 유사하다(A). 이것은 스페르민-펙틴 컨쥬게이트가 어떻게 작은 DNA 오염물에 결합하여 표적의 증폭이 일어나도록 하는지를 보여준다.
실시예 4 앰플리콘으로부터 표면의 오염 제거
앰플리콘 용액의 제조
연어 DNA 표적을 이용한 PCR은 프로브를 사용하지 않고 상기 기재된 방법으로 수행하였다. 40 회 PCR 사이클 후, PCR 튜브의 내용물을 1000 배 희석하여 약 400B의 DNA/mL 카피가 있는 "앰플리콘 용액"을 수득하였다. 증폭 능력 및 복제 수/mL는 연어 DNA 표적의 표준 10K 복제와 PCR의 병렬 비교에 의해 확인하였다. 앰플리콘 용액은 다음 실험에서 사용하였다.
표면 상의 건조 앰플리콘 제조
31x23 cm 폴리프로필렌 플레이트를 P150 (매우 미세한) 사포를 사용하여 거칠게 만들었다. 표면을 물로 세척하고 습윤성을 테스트하고 건조하였다. 일부 실험의 경우, 다양한 처리 및 실행 제어를 테스트하기 위해 표면에 7.5cm x 1.8cm의 넓게 분리된 세그먼트를 표시하였다. 10 mL의 앰플리콘 용액을 건조 표면에 침착시키고 면봉을 사용하여 표면 전체에 일관되게 확산시켰다. 플레이트를 수평 평면에두고 4 시간 동안 건조시켰다. 건조된 앰플리콘을 포함하는 표면은 다음과 같은 오염 제거 및 대조 실험을 거쳤다.
다양한 농도의 화합물 1 용액으로 표면 앰플리콘 처리
앰플리콘을 함유하는 표면의 13.5 cm2 세그먼트 8 세트에 화합물 1의 1 % 용액 2mL를 도포하였다. 용액을 면봉을 사용하여 4 개의 세그먼트 모두에 고르게 펼치고 수평 표면에서 밤새 건조시켰다. 각각의 세그먼트에서 수집된 습윤 면봉을 물 0.5 mL에 수집하고 PCR 분석을 3 회 실시하였다.
0.1 %, 0.01 %, 0.001 %, 0.0001 % 화합물 1 용액 및 0 % 대조군 (물)으로 동일한 실험을 수행하였다. 처리되지 않은 대조군을 위해 추가 8 개의 세그먼트가 남았다. 면봉 및 10K DNA 표적이 첨가된 동일한 샘플의 평균 Ct 값이 표 1에 나타난다.
표 1. 화합물 1 용액에 의한 앰플리콘의 비활성화
샘플 Ct 10 K DNA 첨가된 Ct
0.1% ND ND
0.01% ND ND
0.001% 17 16
0.0001% 16 16
물 16 16
에어로졸 형태의 증폭 가능한 앰플리콘 비활성화
표면 3cm 위에 설치된 7cm 직경의 폴리프로필렌 깔때기를 사용하여, 건조된 분석물을 포함하는 거친 31x23cm 폴리프로필렌 표면의 표면 상에 에어로졸을 수집하였다. 깔때기는 30 mL의 물을 포함하는 폴리프로필렌 임핀저(impinger)에 가요성 튜브로 연결하였다. 임핀저의 출구는 5L/분 속도로 설정된 흡입 펌프에 연결하였다. 부유 입자의 수집은 24 시간에 걸쳐 수행되었으며 PCR 분석을 위해 용액 샘플을 제출하였다. 처리되지 않은 표면 앰플리콘은 Ct 35에서 PCR 신호를 생성하였다. 0.1 % 화합물 1 용액을 분무하여 처리한 다음, 밤새 건조시킨 표면은 앰플리콘이 검출되지 않았다 (도 4). 이와 유사하게, 0.01 %의 화합물 1의 용액은 앰플리콘의 완전한 억제를 나타냈고, 0.001 % 화합물 1을 사용하여 부분 억제를 나타냈다 (표 2). 모든 경우에, PCR 샘플에 첨가된 표적 DNA의 10K 카피는 대조군과 동일한 Ct를 나타내어 에어로졸 상태에서 PCR 억제제가 생성되지 않았음을 입증한다.
PCR 억제제가 에어로졸 형태로 생성되지 않았음을 입증하기 위해, 1 % 화합물 1을 깨끗한 거친 폴리 프로필렌 표면에 도포하고 밤새 건조하엿다. 에어로졸은 24 시간에 걸쳐 30mL 물로 포획하였고, 샘플을 10K 표적 DNA가 첨가된 PCR로 테스트하였다. PCR은 순수한 물에서 10K 표적 DNA의 대조군 샘플과 비교하여 Ct의 차이를 나타내지 않았다 (표 2).
표 2. 화합물 1의 용액에 의해 분무된 에어로졸 형태의 앰플리콘의 비활성화
샘플 Ct 10 K DNA 첨가된 Ct
처리하지 않은 대조군 36 13
0.1% 화합물 1 ND 14
0.1% 화합물 1 ND 17
0.01% 화합물 1 ND ND
0.001% 화합물 1 46 16
1% 화합물 1;
앰플리콘 없음 24 시간		 ND 16
1% 화합물 1;
앰플리콘 없음 72 시간		 ND 16
실시예 5 앰플리콘으로부터 오염 제거 공기를 위한 스크러버(scrubber)
표면 3cm 위에 설치된 7cm 직경의 폴리프로필렌 깔때기를 사용하여, 건조된 앰플리콘을 포함하는 거친 31x23cm 폴리프로필렌 표면의 표면 상에 에어로졸을 수집하였다. 깔때기는 30 mL의 물을 포함하는 폴리프로필렌 임핀저 A에 가요성 튜브로 연결하였다. 30 mL의 물이 있는 또 다른 임핀저 B는 임핀저 A와 직렬로 연결하였다. 임핀저 B의 출구는 5L/분 속도로 설정된 흡입 펌프에 연결하였다. 임핀저 A에서 공기 중 입자를 수집한 다음 임핀저 B에서 24 시간에 걸쳐 수행하고, A와 B의 용액 샘플을 PCR 분석에 제출하였다. 표면 앰플리콘의 에어로졸은 A에서 Ct 35, B에서 42에서 PCR 신호를 생성하였다. 상기 실험은 물이 효과적인 스크러빙 물질이 아님을 입증한다: 앰플리콘은 여전히 임핀저 A에서 빠져 나와 임핀저 B에서 앰플리콘이 검출된다.
직렬로 연결된 두 개의 임핀저 A와 B로 또 다른 유사한 실험을 수행하였는데, 단 A는 30 mL의 0.1 % 화합물 1로 채웠다. PCR 분석은 두 임핀저 모두에서 활성 앰플리콘을 나타내지 않았으며 (ND) B의 샘플도 또한 PCR 억제가 일어나지 않음을 입증하였다.
표 3. 화합물 1을 포함하는 스크러버를 사용하여 앰플리콘으로부터 공기 정화
설정 임핀저 A A + 10 K DNA 임핀저 B B + 10 K DNA
A 및 B 중의 물 35 19 42 19
A 중의 0.1 % 화합물 1 및 B 중의 물 ND 17 ND 16
SEQUENCE LISTING <110> Cepheid Kutyavin, Alex I. Lund, Kevin P. Nanassy, Oliver Z. Gall, Alexander A. Brabant, William <120> Nucleic Acid Decontamination Methods <130> CEPH-1-70134 <150> US 62/765014 <151> 2018-08-17 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 agcctggatg acaatgactc t 21 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 cttatgcatg tccttcttg 19 <210> 3 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> N at position 12 is Dabcyl-labeled cytosine <400> 3 cgacggcaac gncaggagga actacga 27 <210> 4 <211> 126 <212> DNA <213> Salmo <400> 4 agcctggatg acaatgactc tcagcatctg cccccctacg ggaactactt ccagaacctg 60 gggggcgacg gcaacgtcag gaggaactac gaactgttgg cctgcttcaa gaaggacatg 120 cataag 126

Claims (27)

  1. 표면의 핵산 오염을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 핵산으로 오염된 표면과 변형된 펙틴을 포함하는 조성물을 접촉시키는 것을 포함하며, 이러한 변형된 펙틴은 복수의 아미노 기를 포함하는 것인 방법.
  2. 제1항에 있어서, 변형된 펙틴은 아미드화 펙틴(amidated pectin)인 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음의 화학식으로 나타낸 단량체 단위:
    Figure pct00018
    ,
    이의 호변 이성질체, 이성질체, 또는 염을 포함하며,
    화학식 중:
    n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
    R1은 H 또는 C1-C3 알킬이고;
    X는, 각각의 경우에, 독립적으로 C2-C4 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
    Y는 C2-C3 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
    R2 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬인 것인 방법.
  4. 제2항에 있어서, 아미드화 펙틴의 분자량은 약 0.5 kDa 내지 약 500 kDa인 것인 방법.
  5. 제2항에 있어서, 아미드화 펙틴의 분자량은 약 100 kDa 내지 약 300 kDa인 것인 방법.
  6. 제2항에 있어서, 아미드화 펙틴을 포함하는 조성물은 아미드화 펙틴의 용액인 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 아미드화 펙틴은 약 0.01% 내지 약 5%의 농도로 용액에 존재하는 것인 방법.
  8. 제6항에 있어서, 아미드화 펙틴은 약 0.1% 내지 약 0.5%의 농도로 용액에 존재하는 것인 방법.
  9. 제6항에 있어서, 아미드화 펙틴은 약 1 ug/mL 내지 약 1000 ug/mL의 농도로 용액 내에 존재하는 것인 방법.
  10. 제2항에 있어서, 아미드화 펙틴은 아미드 시트러스 펙틴 또는 아미드 사과 펙틴인 것인 방법.
  11. 제2항에 있어서, 조성물은 면봉, 와이프(wipe), 포(cloth), 필터, 또는 스폰지에 존재하는 것인 방법.
  12. 제2항에 있어서, 표면은 기구의 표면 또는 실험실 벤치 표면인 것인 방법.
  13. 용액에서 핵산의 오염을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 핵산으로 오염된 용액을, 공유 결합된 변형된 펙틴을 포함하는 고체 지지체와 접촉시키는 것을 포함하며, 이러한 변형된 펙틴은 복수의 아미노 기를 포함하는 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 변형된 펙틴은 아미드화 펙틴인 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음의 화학식으로 나타낸 단량체 단위:
    Figure pct00019
    ,
    이의 호변 이성질체, 이성질체, 또는 염을 포함하며,
    화학식 중
    n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
    R1은 H 또는 C1-C3 알킬이고;
    X는, 각각의 경우에, 독립적으로 C2-C4 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
    Y는 C2-C3 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
    R2 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬인 것인 방법.
  16. 제13항에 있어서, 고체 지지체는 자기 비드, 유리 비드, 폴리스타이렌 비드, 폴리스타이렌 필터, 또는 유리 필터인 것인 방법.
  17. 제13항에 있어서, 고체 지지체는 면봉, 와이프, 포, 필터, 또는 스폰지인 것인 방법.
  18. 공기 중의 에어로졸화된 핵산 오염을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 에어로졸화된 핵산으로 오염된 공기를 변형된 펙틴을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함하며, 이러한 변형된 펙틴은 복수의 아미노 기를 포함하는 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 변형된 펙틴은 아미드화 펙틴인 것인 방법.
  20. 제19항에 있어서, 아미드화 펙틴은 하나 이상의 다음의 화학식으로 나타낸 단량체 단위:
    Figure pct00020
    ,
    이의 호변 이성질체, 이성질체, 또는 염을 포함하며,
    화학식 중
    n은 0, 1, 2, 또는 3이고;
    R1은 H 또는 C1-C3 알킬이고;
    X는, 각각의 경우에, 독립적으로 C2-C4 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
    Y는 C2-C3 알킬렌 또는 C4-C6 헤테로알킬렌이고;
    R2 및 R3는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬인 것인 방법.
  21. 제19항에 있어서, 에어로졸 핵산으로 오염된 공기를 접촉시키는 것은 아미드화 펙틴을 포함하는 용액을 통해 공기를 통과시키는 것을 포함하는 것인 방법.
  22. 제19항에 있어서, 에어로졸 핵산으로 오염된 공기를 접촉시키는 것은 아미드화 펙틴을 포함하는 필터를 통해 공기를 통과시키는 것을 포함하는 것인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 아미드화 펙틴은 필터에 공유 결합된 것인 방법.
  24. 제14항에 있어서, 에어로졸 핵산으로 오염된 공기를 접촉시키는 것은 공유 결합된 아미드화 펙틴을 포함하는 표면 상에 공기를 통과시키는 것을 포함하는 것인 방법.
  25. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산은 핵산 증폭 반응의 산물인 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 증폭 반응은 중합 효소 사슬 반응인 것인 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 펙틴은 하나 이상의 다음의 화학식으로 나타낸 단량체 단위:
    Figure pct00021
    ,
    Figure pct00022
    ,

    Figure pct00023
    ,
    또는 이의 이성질체, 염, 또는 호변 이성질체를 포함하는 아미드화 펙틴인 것인 방법.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210045452A (ko) * 2018-08-17 2021-04-26 세페이드 핵산 단리 및 관련 방법
CN114672482B (zh) * 2022-05-31 2022-08-30 上海百力格生物技术有限公司 核酸探针制备方法
CN115873663B (zh) * 2022-12-11 2024-07-12 熠创鼎惠(上海)生物科技有限公司 用于清除物表核酸污染的水溶液及其湿巾

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1264321B (it) 1992-01-13 1996-09-23 Mini Ricerca Scient Tecnolog Esteri di acidi pectici e pectinici, procedimento di preparazione e loro applicazioni farmaceutiche e biosanitarie
EP0726965A1 (en) 1993-11-23 1996-08-21 Ciba Corning Diagnostics Corp. Use of antisense oligomers in a process for controlling contamination in nucleic acid amplification reactions
WO2002090386A2 (en) 2001-05-04 2002-11-14 Ato B.V. Regulatory protein involved in pectin modification
DK176653B1 (da) 2002-07-02 2009-02-02 Cp Kelco Aps Fremgangsmåde til fremstilling af amideret pektin med lav forestringsgrad, amideret pektin, som er opnåeligt ved fremgangsmåden, og anvendelse af dette
ES2598037T3 (es) 2003-04-04 2017-01-24 Basf Enzymes Llc Pectato liasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para su preparación y uso
US7125842B2 (en) * 2003-04-07 2006-10-24 Canbas Co. Ltd. Anti-fungal compounds and methods of use
CN1798570A (zh) 2003-04-07 2006-07-05 坎巴斯有限公司 抗真菌肽模拟物
DK1689859T3 (da) 2003-12-03 2011-06-06 Danisco Us Inc Perhydrolase
US20050163825A1 (en) * 2004-01-27 2005-07-28 Naidu A. S. Lactoferrin-treated filament materials
CA2588833A1 (en) 2004-12-09 2007-04-19 The Dial Corporation Compositions having a high antiviral and antibacterial efficacy
US8580192B2 (en) 2006-10-31 2013-11-12 Ethicon, Inc. Sterilization of polymeric materials
DE102008063003A1 (de) * 2008-12-23 2010-06-24 Qiagen Gmbh Nukleinsäureaufreinigungsverfahren
AU2015201538A1 (en) 2009-03-04 2015-04-16 Trustees Of Tufts College Silk fibroin systems for antibiotic delivery
US8039613B2 (en) 2009-08-28 2011-10-18 Promega Corporation Methods of purifying a nucleic acid and formulation and kit for use in performing such methods
US8716176B2 (en) 2011-09-19 2014-05-06 Cp Kelco Aps Low soluble solids acid gels and methods for making same
BR112016006772A2 (pt) 2013-09-30 2017-09-19 Southern Gardens Citrus Métodos para determinar a qualidade de um suco ou cidra, se a quantidade de um microrganismo em um suco ou cidra é muito alta, se um suco ou cidra é inseguro para consumo e uma qualidade do gosto de uma amostra de suco e método melhorado para isolar ácidos nucleicos de um líquido
JP2015119656A (ja) * 2013-12-24 2015-07-02 東洋紡株式会社 核酸増幅法
WO2016087639A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Dalli-Werke Gmbh & Co. Kg Pectin comprising effervescent compositions
CN108219026A (zh) * 2016-12-14 2018-06-29 杭州垚信生物科技有限公司 一种高胶凝甜菜果胶的制备方法
CN107141369B (zh) * 2017-05-25 2019-10-18 华南理工大学 一种改性果胶的制备方法

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