KR20210016448A - 항-pvrig/항-tigit 이중특이적 항체 및 사용 방법 - Google Patents
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Abstract
본원은 항-PVRIG, 항-TIGIT 및 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체뿐만 아니라 조성물 및 암을 치료하기 위해 상기 항체를 사용하는 방법을 제공한다.
Description
관련 출원의 교차 참조
본원은 2018년 6월 1일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/679,703호 및 2018년 11월 30일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/773,586호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 모두는 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함된다.
본원은, ASCII 형식으로 전자적으로 제출되었으며 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함된 서열 목록을 포함한다. 2019년 5월 29일에 작성된 상기 ASCII 사본은 명칭이 114386-5011-WO_SL.txt이고 크기가 2,631,244 킬로바이트이다.
I. 발명의 배경
나이브 T-세포는 생산적으로 활성화되기 위해 항원-제시 세포 (APC)로부터 2개의 독립적인 신호를 수신해야 한다. 먼저, 신호 1은 항원-특이적이며, T 세포 항원 수용체가 APC 상의 적절한 항원-MHC 복합체를 만날 때 발생한다. 면역 반응의 운명은 APC-발현된 리간드가 관여하는 T 세포 공동자극 분자를 통해 전달되는 제2 항원-비의존성 신호 (신호 2)에 의해 결정된다. 이 제2 신호는 자극성 (양성 공동자극) 또는 억제성 (음성 공동자극 또는 공동억제) 중 하나일 수 있다. 공동자극 신호가 없거나 공동억제 신호가 있는 상태에서, T-세포 활성화는 손상 또는 중단되는데, 이는 항원-특이적 무반응 (T-세포 아네르기 (anergy)로 알려짐)의 상태를 야기할 수 있거나, 또는 T-세포 세포자멸사를 초래할 수 있다.
공동자극 분자 쌍은 보통 APC 상에서 발현되는 리간드 및 T 세포 상에서 발현되는 이들의 동족 수용체로 구성된다. 공동자극 분자의 프로토타입 리간드/수용체 쌍은 B7/CD28 및 CD40/CD40L이다. B7 패밀리는 구조적으로 관련된 세포-표면 단백질 리간드로 구성되어, 이는 면역 반응에 자극성 또는 억제성 정보를 제공할 수 있다. B7 패밀리의 구성원은 적어도 하나의 가변 또는 불변 면역글로불린 도메인을 함유하는 세포외 도메인과 구조적으로 관련된다.
양성 및 음성 공동자극 신호는 모두 세포-매개 면역 반응의 조절에 결정적인 역할을 하며, 이들 신호를 매개하는 분자는 면역조절에 효과적인 표적인 것으로 입증되어 왔다. 이 지식에 기초하여, 공동자극 분자의 표적화를 수반하는 여러 치료적 접근법이 개발되어 왔고, 이들은, 암 환자에서 면역 반응을 켜거나 (turning on) 면역 반응의 꺼짐 (turning off)을 방지하여 암의 예방 및 치료에 유용한 것으로 확인되었고, 또한 자가면역 질환 및 염증성 질환뿐만 아니라 동종 이식의 거부의 예방 및 치료에 유용한 것으로 확인되었는데, 이들 각각은 통제되지 않은 면역 반응을 끄거나 또는 이들 병리학적 병태를 갖는 대상에서 음성 공동자극 (또는 공동억제)에 의한 "신호 차단"의 유도에 의한다.
B7 리간드에 의해 전달된 신호의 조작은 자가면역, 염증성 질환 및 이식 거부의 치료에서 잠재력을 보였다. 치료 전략은 리간드 또는 공동자극 쌍의 수용체에 대한 단일클론 항체를 사용하거나, 적절한 리간드에 결합하고 이를 차단할 수 있는 공동자극 수용체로 구성된 가용성 융합 단백질을 사용하는 공동자극의 차단을 포함한다. 또 다른 접근법은 억제 리간드의 가용성 융합 단백질을 사용하는 공동억제의 유도이다. 이들 접근법은 적어도 부분적으로 자가- 또는 동종-반응성 T 세포 (자가면역 질환 또는 이식에서 병원성 과정을 각각 초래함)의 최종 결실에 의존하는데, 이는 (세포 생존 유전자를 유도하는) 공동자극이 없을 때, T 세포가 세포자멸사의 유도에 매우 민감하게 되기 때문일 가능성이 있다. 따라서, 면역계의 병원균 방어 능력을 손상시키지 않으면서 공동자극 신호를 조절할 수 있는 신규 제제는 이러한 병리학적 병태의 치료 및 예방에 매우 유리하다.
공동자극 경로는 종양 발달에 중요한 역할을 한다. 흥미롭게도, 종양은 항종양 T 세포 반응을 억제하는 조절 T 세포를 끌어당길뿐만 아니라 B7-CD28 및 TNF 패밀리에서의 공동자극 인자의 억제를 통해 T-세포 활성화를 방해함으로써 면역 파괴를 회피하는 것으로 나타났다 (Wang (2006), "Immune Suppression by Tumor Specific CD4+ Regulatory T cells in Cancer", Semin. Cancer. Biol. 16:73-79; Greenwald 등 (2005), "The B7 Family Revisited", Ann. Rev. Immunol. 23:515-48; Watts (2005), "TNF/TNFR Family Members in Co-stimulation of T Cell Responses", Ann. Rev. Immunol. 23:23-68; Sadum 등, (2007) "Immune Signatures of Murine 및 Human Cancers Reveal Unique Mechanisms of Tumor Escape 및 New Targets for Cancer Immunotherapy", Clin. Canc. Res. 13(13): 4016-4025 참조). 이러한 종양 발현된 공동자극 분자는 매력적인 암 바이오마커가 되었고, 종양-관련 항원 (TAA)으로서 작용할 수 있다. 또한, 공동자극 경로는 종양 전이 내의 개시 및 효과기 기능 모두에서 T 세포 의존성 면역 반응을 약화시키는 면역학적 체크포인트로 식별되었다.
지난 10년 동안, 다양한 공동자극 단백질에 대한 작용제 및/또는 길항제가 자가면역 질환, 이식 거부, 알레르기 및 암을 치료하기 위해 개발되어 왔다. 예를 들어, CTLA4-Ig (아바타셉트, 오렌시아® (Orencia®))는 RA의 치료를 위해, 돌연변이된 CTLA4-Ig (벨라타셉트, 눌로직스® (Nulojix®))는 급성 신장 이식 거부의 예방을 위해 승인되었고, 최근에는 항-CTLA4 항체 (이플리무맙, 예르보이® (Yervoy®))가 흑색종의 치료를 위해 승인되었다. Merck (Keytruda®) 및 BMS (Opdivo®)의 항-PD-1 항체와 같은 다른 공동자극 조절제가 승인되어 암 치료를 위해 승인되었으며, 바이러스성 감염 여부에도 마찬가지로 시험 중이다.
그러나, 항-체크포인트 억제제 항체를 이용하는 단일요법이 유망한 것으로 관찰되었던 한편, 종양 침윤성 림프구 (TIL)를 조사한 많은 연구 (Ahmadzadeh 등, Blood 114:1537 (2009), Matsuzaki 등, PNAS 107(17):7875-7880 (2010), Fourcade 등, Cancer Res. 72(4):887-896 (2012) 및 Gros 등, J. Clinical Invest. 124(5):2246 (2014))는 TIL이 공통적으로 다중 체크포인트 수용체를 발현하는 것을 보여주었다. 게다가, 다중 체크포인트를 발현하는 TIL이 실제로 종양 반응성이 가장 높을 가능성이 높다. 대조적으로, 말초에서의 비종양 반응성 T 세포는 단일 체크포인트를 발현할 가능성이 더 높다. 단일특이적 전장 항체를 사용한 체크포인트 차단은, 자가면역 독성에 기여하는 것으로 가정되는 자가 항원 반응성 단일 발현 T 세포에 대비해 종양 반응성 TIL의 탈억제와 관련하여 구별되지 않을 가능성이 높다.
관심 표적 중 하나는 PVRIG이다. 폴리오바이러스 수용체 관련 면역글로불린 도메인 함유 단백질, Q6DKI7 또는 C7orf15로도 불리는 PVRIG는 326개 아미노산 길이인 막통과 도메인 단백질이고, 신호 펩타이드 (아미노산 1번 내지 40번 범위), 세포외 도메인 (아미노산 41번 내지 171번 범위), 막통과 도메인 (아미노산 172번 내지190번 범위) 및 세포질 도메인 (아미노산 191번 내지 326번 범위)을 갖는다. PVRIG는 PVRIG의 결합 파트너인 폴리오바이러스 수용체-관련 2 단백질 (PVLR2, 넥틴-2, CD112 또는 헤르페스바이러스 진입 매개인자 B (HVEB)로도 알려짐, 인간 원형질막 당단백질)과 결합한다.
또 다른 관심 표적은 TIGIT이다. TIGIT는 효과기 및 조절 (Treg) CD4+ T 세포, 효과기 CD8+ T 세포 및 NK 세포 상에서 높게 발현되는 공동억제 수용체이다. TIGIT는 (1) 직접적인 신호전달, (2) 리간드 신호전달의 유도, (3) 공동자극 수용체 CD226 (DNAM-1로도 알려짐)에 의한 신호전달과의 경쟁 및 이를 방해함에 의해 면역 반응을 약화시키는 것으로 관찰되었다. TIGIT 신호전달은 NK 세포에서 가장 잘 연구되어 왔는데, 동종 리간드인 폴리오바이러스 수용체 (PVR, CD155로도 알려짐)와의 결합은 세포질 ITIM 도메인을 통해 직접적으로 NK 세포 세포독성을 억제하는 것으로 밝혀졌다. TIGIT 유전자의 녹아웃 (knockout) 또는 TIGIT/PVR 상호작용의 항체 차단은 생체내에서 자가면역 질환을 악화시킬뿐만 아니라 시험관내에서 NK 세포 살상을 향상시키는 것으로 나타났다. T 세포 및 NK 세포에 미치는 직접적인 효과 외에도, TIGIT는 수지상 세포 또는 종양 세포에서 PVR-매개 신호전달을 유도하여 IL10과 같은 항염증성 사이토카인의 생산을 증가시킨다. T-세포에서 TIGIT는 또한 공동자극 수용체 CD226의 동종이량체화를 교란시키고 PVR에 결합하기 위해 이와 경쟁함으로써 림프구 반응을 억제할 수 있다.
TIGIT는 상이한 유형의 종양에 침투하는 종양 침윤성 림프구 (TIL) 및 Treg을 비롯한 림프구에서 높게 발현된다. PVR은 또한 종양에서 광범위하게 발현되며, TIGIT-PVR 신호전달 축이 암에 대한 우세한 면역 탈출 메커니즘일 수 있음을 시사한다. 특히, TIGIT 발현은 또 다른 중요한 공동억제 수용체인 PD1의 발현과 밀접하게 상관 관계를 갖는다. TIGIT 및 PD1은 수많은 인간 및 마우스 종양의 TIL 상에서 공동 발현된다. TIGIT 및 CTLA4와는 달리, T 세포 반응의 PD1 억제는 공동자극 수용체와의 리간드 결합에 대한 경쟁을 수반하지 않는다.
따라서, 두 경로 모두를 표적화할 수 있는 PVRIG/TIGIT 이중특이적 항체는 단일 항체 요법의 매력적인 표적이다. 이러한 항체는 다중 체크포인트 수용체의 표적화를 허용하고 암 치료에서 치료적 중요성을 제공할 것이다. 본원에 기술된 용도를 위한 항-PVRIG 및 항-TIGIT 항체가 또한 제공된다.
II. 발명의 간단한 요약
따라서, 본 발명은 암 치료를 위한 T 세포 활성화에 사용하기 위한, 인간 PVRIG에 1가로 결합하고 TIGIT에 1가로 결합하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 암 치료를 위한 T 세포 및/또는 NK 세포 활성화에 사용하기 위한, 인간 PVRIG에 1가로 결합하고 TIGIT에 1가로 결합하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. 항-PVRIG 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인; 및
ii. 항-PVRIG 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-PVRIG 항체는 CHA.7.518.4, CHA.7.518.1, CHA.7.518, CHA.7.524 CHA.7.530, CHA.7.538_1, CHA.7.538_2, CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, CHA7.538.1.2, CPA.7.021, CPA.7.001, CPA.7.003, CPA.7.004, CPA.7.006, CPA.7.008, CPA.7.009, CPA.7.010, CPA.7.011, CPA.7.012, CPA.7.013, CPA.7.014, CPA.7.015, CPA.7.017, CPA.7.018, CPA.7.019, CPA.7.022, CPA.7.023, CPA.7.024, CPA.7.033, CPA.7.034, CPA.7.036, CPA.7.040, CPA.7.046, CPA.7.047, CPA.7.049, CPA.7.050, 및 CHA.7.518로 구성된 군으로부터 선택됨); 및
a) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분; 및
b) 하기를 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. 항-TIGIT 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인; 및
ii. 항-TIGIT 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-TIGIT 항체는 CPA.9.086, CHA.9.547.18, CPA.9.018, CPA.9.027, CPA.9.049, CPA.9.057, CPA.9.059, CPA.9.083, CPA.9.089, CPA.9.093, CPA.9.101, CPA.9.103, CHA.9.536.1, CHA.9.536.3, CHA.9.536.4, CHA.9.536.5, CHA.9.536.6, CHA.9.536.7, CHA.9.536.8, CHA.9.560.1, CHA.9.560.3, CHA.9.560.4, CHA.9.560.5, CHA.9.560.6, CHA.9.560.7, CHA.9.560.8, CHA.9.546.1, CHA.9.547.1, CHA.9.547.2, CHA.9.547.3, CHA.9.547.4, CHA.9.547.6, CHA.9.547.7, CHA.9.547.8, CHA.9.547.9, CHA.9.547.13, CHA.9.541.1, CHA.9.541.3, CHA.9.541.4, CHA.9.541.5, CHA.9.541.6, CHA.9.541.7, 및 CHA.9.541.8로 구성된 군으로부터 선택됨).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. 항-PVRIG 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인; 및
ii. 항-PVRIG 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-PVRIG 항체는 CHA.7.518.4, CHA.7.518.1, 인간화 CHA.7.518, 인간화 CHA.7.524, 인간화 CHA.7.530, 인간화 CHA.7.538_1, 인간화 CHA.7.538_2, CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, CHA7.538.1.2, CPA.7.021, CPA.7.001, CPA.7.003, CPA.7.004, CPA.7.006, CPA.7.008, CPA.7.009, CPA.7.010, CPA.7.011, CPA.7.012, CPA.7.013, CPA.7.014, CPA.7.015, CPA.7.017, CPA.7.018, CPA.7.019, CPA.7.022, CPA.7.023, CPA.7.024, CPA.7.033, CPA.7.034, CPA.7.036, CPA.7.040, CPA.7.046, CPA.7.047, CPA.7.049, 및 CPA.7.050CHA.7.518로 구성된 군으로부터 선택됨); 및
b) 하기를 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. 항-TIGIT 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인; 및
ii. 항-TIGIT 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-TIGIT 항체는 CPA.9.086, CHA.9.547.18, CPA.9.018, CPA.9.027, CPA.9.049, CPA.9.057, CPA.9.059, CPA.9.083, CPA.9.086, CPA.9.089, CPA.9.093, CPA.9.101, CPA.9.103, CHA.9.536.1, CHA.9.536.3, CHA.9.536.4, CHA.9.536.5, CHA.9.536.6, CHA.9.536.7, CHA.9.536.8, CHA.9.560.1, CHA.9.560.3, CHA.9.560.4, CHA.9.560.5, CHA.9.560.6, CHA.9.560.7, CHA.9.560.8, CHA.9.546.1, CHA.9.547.1, CHA.9.547.2, CHA.9.547.3, CHA.9.547.4, CHA.9.547.6, CHA.9.547.7, CHA.9.547.8, CHA.9.547.9, CHA.9.547.13, CHA.9.541.1, CHA.9.541.3, CHA.9.541.4, CHA.9.541.5, CHA.9.541.6, CHA.9.541.7, 및 CHA.9.541.8로 구성된 군으로부터 선택됨).
일부 구현예에서, 상기 제1 항원 결합 부분은 하기를 포함한다:
i. VH-CH1-힌지-CH2-CH3을 포함하는 제1 중쇄; 및
ii. VL-CL을 포함하는 제1 경쇄 (여기서 상기 CL은 카파 또는 람다 항체의 불변 도메인임).
일부 구현예에서, 상기 제1 중쇄 CH3은 아미노산 치환 S354C, E356D, M358L, 및 T366W를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CL은 카파이다.
일부 구현예에서, 상기 제2 항원 결합 부분은 하기를 포함한다:
i. HC-CL-힌지-CH2-CH3을 포함하는 제2 중쇄 (여기서 상기 CL은 카파 또는 람다임); 및
ii. VL-CH1을 포함하는 제2 경쇄.
일부 구현예에서, 상기 제2 중쇄 CH3은 아미노산 치환 Y349C, E356D, M358L, T366S, L368A, 및 Y407V를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CL은 람다이다.
일부 구현예에서, 상기 CL은 카파이다.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분; 및
b) 하기를 포함하는 제2 항-TIGIT 항원 결합 부분:
i. CPA.9.086 VH (EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS; 서열 번호 1634)를 포함하는 제2 중쇄 가변 영역; 및
ii. CPA.9.086 VL (QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL; 서열 번호 1639)를 포함하는 제2 경쇄 가변 영역.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
c) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분; 및
d) 하기를 포함하는 제2 항-TIGIT 항원 결합 부분:
i. CPA.9.547.18 VH (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1664)를 포함하는 제2 중쇄 가변 영역; 및
ii. CPA.9.547.18 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1668)를 포함하는 제2 경쇄 가변 영역.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.1 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1539)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.1 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1544)를 포함하는 제1 경쇄; 및
b) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 3179)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 3180)를 포함하는 제1 경쇄; 및
b) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.1 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1539)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.1 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1544)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역; 및
b) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CPA.9.086 VH (EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS;서열 번호 1634)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CPA.9.086 VL (QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL; 서열 번호 1639)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 3179)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 3180)를 포함하는 제1 경쇄; 및
b) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CPA.9.086 VH (EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS; 서열 번호 1634)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CPA.9.086 VL (QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL; 서열 번호 1639)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.1 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1539)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.1 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1544)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역; 및
b) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CHA.9.547.18 HC (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1664)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.9.547.18 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1668)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기를 포함한다:
a) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 3179)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 3180)를 포함하는 제1 경쇄; 및
b) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CHA.9.547.18 HC (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.9.547.18 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1668)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 인간화 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
핵산 조성물로서,
a) 본원에 기술된 제1 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제1 핵산;
b) 본원에 기술된 제1 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제2 핵산;
c) 본원에 기술된 제2 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제3 핵산; 및
d) 본원에 기술된 제2 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제4 핵산을 포함하는, 핵산 조성물.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 발현 벡터 조성물을 제공한다:
a) 본원에 기술된 제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터;
b) 본원에 기술된 제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터;
c) 본원에 기술된 제3 핵산을 포함하는 제3 발현 벡터; 및
d) 본원에 기술된 제4 핵산을 포함하는 제4 발현 벡터.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 발현 벡터 조성물을 제공한다:
a) 본원에 기술된 제1 및 제2 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
b) 본원에 기술된 제3 및 제4 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 발현 벡터 조성물을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제조하는 방법을 제공하며, 이는 하기를 포함한다:
a) 상기 항체가 발현되는 조건 하에서 본원에 기술된 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
b) 상기 항체를 회수하는 단계.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 T 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 T 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 세포독성 T 세포 (cytotoxic T cell; CTL)를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 CTL의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 NK 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 NK 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 γδ T 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 γδ T 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 Th1 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 Th1 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 조절 T 세포 (regulatory T cell; Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성을 감소시키거나 제거하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 인터페론-γ 생산 및/또는 전염증성 사이토카인 분비를 증가시키는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 암은 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다:
a) 하기를 포함하는 항-PVRIG 항원 결합 부분을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. 항-PVRIG 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인; 및
ii. 항-PVRIG 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-PVRIG 항원 결합 부분은 CPA.7.021, CPA.7.001, CPA.7.003, CPA.7.004, CPA.7.006, CPA.7.008, CPA.7.009, CPA.7.010, CPA.7.011, CPA.7.012, CPA.7.013, CPA.7.014, CPA.7.015, CPA.7.017, CPA.7.018, CPA.7.019, CPA.7.022, CPA.7.023, CPA.7.024, CPA.7.033, CPA.7.034, CPA.7.036, CPA.7.040, CPA.7.046, CPA.7.047, CPA.7.049, CPA.7.050, CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, CHA.7.518.1; CHA7.538.1.2 및 CHA.7.518.4로 구성된 군으로부터 선택됨); 및
b) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분 (여기서 상기 항-TIGIT 항원 결합 도메인은 도 24 및 도 41, 특히 도 24a 내지 도 24ee에 제공된 항체로부터의 것임).
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다:
a) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분 (여기서 상기 항-PVRIG 항원 결합 도메인은 도 35에 제공된 항체로부터의 것임); 및
b) 하기를 포함하는 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. 항-TIGIT 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인; 및
ii. 항-TIGIT 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-TIGIT 항원 결합 도메인은 CPA.9.018, CPA.9.027, CPA.9.049, CPA.9.057, CPA.9.059, CPA.9.083, CPA.9.086, CPA.9.089, CPA.9.093, CPA.9.101, CPA.9.103, CHA.9.536.1, CHA.9.536.3, CHA.9.536.4, CHA.9.536.5, CHA.9.536.6, CHA.9.536.7, CHA.9.536.8, CHA.9.560.1, CHA.9.560.3, CHA.9.560.4, CHA.9.560.5, CHA.9.560.6, CHA.9.560.7, CHA.9.560.8, CHA.9.546.1, CHA.9.547.1, CHA.9.547.2, CHA.9.547.3, CHA.9.547.4, CHA.9.547.6, CHA.9.547.7, CHA.9.547.8, CHA.9.547.9, CHA.9.547.13, CHA.9.541.1, CHA.9.541.3, CHA.9.541.4, CHA.9.541.5, CHA.9.541.6, CHA.9.541.7, CHA.9.541.8, 및 CHA.9.547.18로 구성된 군으로부터 선택됨).
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항-PVRIG 항체를 제공한다:
i) 하기 서열로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179),
및
ii) 하기 서열로부터의 vlCDR1, vlCDR2, vlCDR3을 포함하는 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180).
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항-TIGIT 항체를 제공한다:
i) 하기 서열로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664),
및
ii) 하기 서열로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인:
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG 항체는 하기를 포함한다:
a) CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C Q D E L TKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK; 서열 번호 3175)를 포함하는 중쇄; 및
b) CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC; 서열 번호 3362)를 포함하는 경쇄.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 항-PVRIG 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 핵산 조성물을 제공한다:
i) 본원에 기술된 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제1 핵산; 및
ii) 본원에 기술된 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제2 핵산.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 항-TIGIT 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 핵산 조성물을 제공한다:
i) 본원에 기술된 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제1 핵산; 및
ii) 본원에 기술된 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제2 핵산.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 발현 벡터 조성물을 제공한다:
i) 본원에 기술된 제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
ii) 본원에 기술된 제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터.
발현 벡터로서,
i) 본원에 기술된 제1 핵산; 및
ii) 본원에 기술된 제2 핵산을 포함하는, 발현 벡터.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 발현 벡터 조성물을 제공한다:
i) 본원에 기술된 제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
ii) 본원에 기술된 제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 발현 벡터를 제공한다:
i) 본원에 기술된 제1 핵산; 및
ii) 본원에 기술된 제2 핵산.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 발현 벡터 또는 벡터 조성물을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 제조하는 방법을 제공하며, 이는 하기를 포함한다:
i) 상기 항체가 발현되는 조건 하에서 본원에 기술된 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
ii) 상기 항체를 회수하는 단계.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 T 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 T 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 세포독성 T 세포 (cytotoxic T cell; CTL)를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 CTL의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 NK 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 NK 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 γδ T 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 γδ T 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 Th1 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 Th1 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 조절 T 세포 (regulatory T cell; Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성을 감소시키거나 제거하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 인터페론-γ 생산 및/또는 전염증성 사이토카인 분비를 증가시키는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 암은 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 항체 및 항-PD-1 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-TIGIT 항체 및 항-PD-1 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-TIGIT 항체 및 본원에 기술된 항-PVRIG 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PVRIG 항체, 및 항-PD-1 항체를 포함하는 삼중 조합 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 항-TIGIT, 본원에 기술된 항-PVRIG 항체, 및 항-PD-1 항체를 포함하는 삼중 조합 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-TIGIT, 본원에 기술된 항-PVRIG 항체, 및 항-PD-1 항체를 포함하는 삼중 조합 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 T 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 T 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 세포독성 T 세포 (cytotoxic T cell; CTL)를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 CTL의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 γδ T 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 γδ T 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자의 Th1 세포를 활성화하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자의 Th1 세포의 서브세트가 활성화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 조절 T 세포 (regulatory T cell; Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성을 감소시키거나 제거하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 인터페론-γ 생산 및/또는 전염증성 사이토카인 분비를 증가시키는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 기술된 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 암은 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
III. 도면의 간단한 설명
도 1은 인간 PVRIG의 서열 (전장 서열뿐만 아니라 2개의 상이한 메티오닌 개시점을 도시함)을 나타낸다. 신호 펩타이드는 밑줄이 표시되고, ECD는 이중 밑줄로 표시된다. 폴리오바이러스 수용체 관련 면역글로불린 도메인 함유 단백질, Q6DKI7 또는 C7orf15로도 불리는 PVRIG는 도 1에 도시된 RefSeq 기탁번호 NP_076975에 표시된 아미노산 및 핵산 서열과 관련된다.
도 2는 PVRIG의 결합 파트너인 인간 폴리오바이러스 수용체-관련 2 단백질 (PVLR2, 넥틴-2, CD112 또는 헤르페스바이러스 진입 매개인자 B (HVEB)로도 알려짐)의 서열을 나타낸다. PVLR2는 인간 원형질막 당단백질이다.
도 3a 내지 도 3c는 PVRIG와 이의 대응물인 PVRL2의 상호작용을 성공적으로 차단하는 것으로 판단된 Fab에 대한 CDR 서열을 도시한다.
도 4a 내지 도 4aa는 PVRIG에 결합하고 PVRIG와 PVLR2의 결합을 차단하는 본 발명의 열거된 인간 CPA 항-PVRIG 서열에 대한 가변 중쇄 및 경쇄 도메인, 전장 중쇄 및 경쇄, 및 가변 중쇄 및 가변 경쇄 CDR의 아미노산 서열을 도시한다.
도 5a 내지 도 5h는 PVRIG에 결합하지만 PVRIG와 PVLR2의 결합을 차단하지는 않는 본 발명의 8개의 인간 CPA 항-PVRIG 서열에 대한 가변 중쇄 및 경쇄 도메인, 전장 중쇄 및 경쇄, 및 가변 중쇄 및 가변 경쇄 CDR의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 6a 내지 도 6g는 PVRIG와 PVLR2의 결합을 차단하지 않는 것들을 비롯한, PVRIG에 결합하는 생성된 모든 CPA 항-PVRIG 항체 서열에 대한 CDR을 나타낸다.
도 7a 내지 도 7ae는 본 발명의 열거된 CHA 항체인 CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, 및 CHA.7.518.4 각각의 가변 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3 서열을 도시한다 (이는 마우스 서열 (하이브리도마로부터 유래됨)의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다).
도 8a 내지 도 8d는 본 발명의 열거된 CPA 항체인 CPA.7.001 내지 CPA.7.050 각각의 vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3 서열을 나타내며, 인간 서열 (파지 디스플레이로부터 유래됨)이다.
도 9a 내지 도 9c는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 서열을 나타낸다.
도 10은 다수의 인간 PVRIG ECD 단편을 나타낸다.
도 11a 내지 도 11i는 5개의 CHA 항체의 인간화 서열의 조사를 나타낸다.
도 12a 내지 도 12e는 5개의 CHA 항체의 인간화 서열의 조사를 도시한다.
도 13은 도 11a 내지 도 11i 및 도 12a 내지 도 12e의 인간화 VH 및 VL CHA 항체를 조합하기 위한 설계를 나타낸다. "chimVH" 및 "chimVL"은 인간 IgG 불변 도메인에 부착된 마우스 가변 중쇄 및 경쇄 서열이다.
도 14a 내지 도 14bx는 본 발명에서 용도를 찾은 다수의 PVRIG 서열 및 다른 서열을 도시한다.
도 15a 및 도 15b는 본 발명의 열거된 CHA 항체인 CHA.7.518.1.H4(S241P), 및 CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 각각의 가변 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3 서열을 나타낸다.
도 16a 내지 도 16e는 CHA.7.518, CHA.7.524, CHA.7.530, CHA.7.538_1 및 CHA.7.538_2 각각에 대한 4개의 인간화 서열을 나타낸다. 모든 인간화 항체는 H4(S241P) 치환을 포함한다. CHA.7.538_2의 경쇄는 CHA.7.538_1의 경우와 동일함을 주목한다. 각각의 "H1"은 "CDR 교환 (swap)"이며 인간 프레임워크에는 변화가 없다. 후속 서열들은 더 큰 굵은 글꼴로 표시된 프레임워크 변화를 변경시킨다. CDR 서열은 굵은 글꼴로 표시된다. CDR 정의는 웹사이트 www.bioinf.org.uk/abs/로부터의 AbM이다. IMGT® 국제 ImMunoGeneTics® 정보 시스템 www.imgt.org (설립자겸 이사: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France)으로부터의 인간 생식계열 및 연결 서열. 잔기 넘버링은 순차적으로 (seq) 또는 웹사이트 www.bioinf.org.uk/abs/ (AbM)로부터의 코티아 (Chothia)에 따라 나타낸다. "b"는 묻힌 측쇄를 표시하고; "p"는 부분적으로 묻힌 것을 표시하고; "i"는 VH 및 VL 도메인 사이의 계면에서의 측쇄를 표시한다. 인간 및 마우스 생식계열 사이의 서열 차이는 별표 (*)로 표시된다. 프레임워크에서의 잠재적인 추가 돌연변이는 서열 아래에 표시된다. 도면 상에 표시된 바와 같이, CDR 서열의 잠재적인 변화는 각 CDR 서열 아래에 표시된다 (# 탈아미드화 치환: Q/S/A; 이들은 아스파라긴 (N) 탈아미드화를 방지할 수 있음. @ 트립토판 산화 치환: Y/F/H; 이들은 트립토판 산화를 방지할 수 있음; @ 메티오닌 산화 치환: L/F/A).
도 17a 내지 도 17c는 3개의 CHA 항체, 즉, CHA.7.518, CHA.7.538.1 및 CHA.7.538.2의 인간화 서열의 조사를 나타낸다.
도 18은 인간화 VH 및 VL CHA 항체를 조합하기 위한 설계를 나타낸다. "chimVH" 및 "chimVL"은 인간 IgG 불변 도메인에 부착된 마우스 가변 중쇄 및 경쇄 서열이다.
도 19. PVRIG 오솔로그 (ortholog)의 서열 정렬. 인간, 시노몰구스, 마모셋 및 레서스 PVRIG 세포외 도메인의 정렬된 서열. 인간과 시노몰구스의 차이는 황색으로 강조된다.
도 20a 내지 도 20d는 AB-407 (BOJ-5G4-F4)의 경우 가변 중쇄 (각각 A 및 B)의 아미노산 서열 및 핵산 서열, 및 가변 경쇄 (각각 C 및 D)의 아미노산 서열 및 핵산 서열을 나타낸다.
도 21a 및 도 21b는 본 발명에서 특정 용도를 찾은 힌지 변이체를 갖는 인간 IgG1 (일부 유용한 아미노산 치환을 가짐), IgG2, IgG3, IgG4, IgG4의 불변 도메인 및 카파 및 람다 경쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 22는 인간 및 시노몰구스 마카크 (시노로도 지칭됨) TIGIT ECD 및 인간 PVR ECD 단백질의 서열을 나타낸다.
도 23a 내지 도 23d는 항-TIGIT 항체의 서열을 나타낸다. 달리 언급하지 않는 한, 상기 CDR은 IMGT 넘버링을 사용한다 (서열 목록의 항체 포함).
도 24a 내지 도 24ssss는 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 다수의 항-TIGIT 항체의 서열을 나타낸다.
도 25는 CrossMab 기술 (MAbs. 2016 Aug-Sep; 8(6): 1010-1020) and knobs in hole technology (Nat Biotechnol. 1998 Jul;16(7):677-81)을 사용하는 예시적인 이중특이적 항체 구현예의 개략도를 나타낸다.
도 26은 CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 이중특이적 항체의 각 팔 (arm)에 대한 중쇄 및 경쇄의 서열을 제공한다. 가변 도메인은 이탤릭체로 표시된다. CDR은 적색으로 표시된다. Fc 도메인의 돌연변이는 굵은 글꼴 및 밑줄이 표시되었다.
도 27은 2개의 독립적인 표면에 걸쳐 포획된 TIGIT-PVRIG 이중특이적 항체에 결합하는 (A) 인간 TIGIT 및 2개의 독립적인 표면에 걸쳐 포획된 TIGIT-PVRIG 이중특이적 항체에 결합하는 (B) 인간 PVRIG의 SPR 센서그램 (sensorgram) (흑색 선)을 제공한다. (A)와 (B) 모두에서의 적색 선은 센서그램을 단순 1:1 키네틱 결합 모델 (simple 1:1 kinetic binding model)로 글로벌 피팅 (global fit)한 것이다. TIGIT의 농도 범위는 362 pM - 88 nM였고 PVRIG의 농도 범위는 460 pM-112 nM이었다. TIGIT 항원의 경우 15분 후 해리 신호 감쇠 데이터가 충분하지 않았기 때문에, 글로벌 피팅을 위해 kd는 임의로 1e-5 초-1에서 일정하게 유지하였다. TIGIT-이중특이적 상호작용에 대해 kd 상수를 유지하는 경우, ka는 3.9e6 M-1초-1로 추정되었고, kd/ka 비율인 KD = 2.6 pM으로 계산되었다. PVRIG-이중특이적 항체 상호작용에 대한 결합 상수는 ka = 1.3e6 M-1초-1였고, kd = 2.4e-4 초-1였고, KD = 187 pM이었다.
도 28은 항-TIGIT-PVRIG 이중특이적 항체에 대한 인간 TIGIT 및 인간 PVRIG의 동시 결합을 입증하는 SPR "샌드위치" 분석을 나타낸다. 먼저, 바이오센서 칩에 공유결합에 의해 고정된 인간 TIGIT에 이중특이적 항체가 주입된다 (A). 그런 다음, 상기 TIGIT-결합된 이중특이적 항체에 인간 PVRIG가 주입된다 (B).
도 29는 pp65 특이적 CD8+ T 세포의 특성화를 나타낸다. A) PBMC는 pp65(495 - 503) 펩타이드, IL-2 및 IL-7을 사용하여 11일 동안 활성화되었다. pp65 반응성 T 세포의 백분율과 PVRIG, TIGIT 및 PD-1의 발현을 평가하기 위해, 유동 세포계측법을 수행하였다. 1명의 공여자로부터의 대표적인 게이팅 체계 및 2명의 공여자로부터의 대표적인 사량체 염색을 도시하였다. 좌측에서 우측으로, 림프구는 전방 산란 (FSC)/측면 산란 (SSC) (좌측 상단) 및 살아있는 CD3+CD8+ 양성 세포에 의해 게이트되었다. CD3+CD8+ 양성 집단 내에서, HLA-A201 pp65 사량체에 결합하는 세포의 백분율을 측정하고, 2명의 공여자로부터의 데이터를 도시하였다. B) pp65 반응성 T 세포 상에서의 PVRIG, TIGIT 및 PD-1의 발현을 유동 세포계측법에 의해 평가하였다. 우측 상단 모서리의 숫자는 이소타입 대조군에 대비한 관심 표적의 MFIr을 나타낸다.
도 30은 Mel-624 pp65 암 세포주와의 공동 배양에서의 CMV pp65 반응성 CD8 T 세포에 대한 억제 수용체 차단의 효과를 나타낸다. 2명의 공여자, 즉 공여자 4 (A) 및 공여자 72 (B)에 대한 CMV pp65 반응성 T 세포를, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 (단독 또는 조합으로), CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb 또는 인간 IgG 이소타입 대조군의 존재 하에, pp65를 이소성으로 발현하는 변형된 Mel-624 종양 세포주와 18시간 동안 공동 배양하였다. 사이토카인 분비에 대해 조건 배지를 분석하였다. 막대 위의 숫자는 이소타입 대조군에 대비한 변화 %를 나타낸다. 막대 그래프는 IFN-γ에 대한 평균 + 표준 편차를 도시한다 (N=2).
도 31은 Mel-624 pp65 암 세포주와의 공동 배양에서의 CMV pp65 반응성 CD8 T 세포에 대한 억제 수용체 차단의 용량-의존성 적정을 제공한다. 2명의 공여자, 즉 공여자 4 (A) 및 공여자 72 (B)에 대한 CMV pp65 반응성 T 세포를, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 (단독 또는 조합으로), CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb 또는 인간 IgG 이소타입 대조군의 존재 하에, pp65를 이소성으로 발현하는 변형된 Mel-624 종양 세포주와 18시간 동안 공동 배양하였다. 20 μg/ml에서 시작하는 10개 지점 4배 일련 희석이 각 항체에 사용되었다. 사이토카인 분비에 대해 조건 배지를 분석하였다. CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086을 사용하는 조합된 차단 및 이중특이적 항체 치료에 대한 EC50 (nM)값을 보고하였다. 대표 데이터 (N=2).
도 32는 본 발명의 이중특이적 항체에 적용 가능한 이중특이적 항체 생성에 사용하기 위한 Fc 이종이량체화 전략의 개요를 제공한다. (Godar 등, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 28(3):251-276 (2018) 참조.)
도 33은 본 발명의 이중특이적 항체에 적용 가능한 비대칭 이중특이적 항체 형식의 개요를 제공한다. (Brinkmann and Kontermann, The making of bispecific antibodies, MAbs, 9(2): 182-212 (2017) 참조.)
도 34는 본 발명의 이중특이적 항체에 적용 가능한 대칭 이중특이적 항체 형식의 개요를 제공한다. (Brinkmann and Kontermann, The making of bispecific antibodies, MAbs, 9(2): 182-212 (2017) 참조.)
도 35는 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 추가적인 항-PVRIG 항체를 제공한다.
도 36은 포획된 PVRIg 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체에 결합하는 인간 PVRIg의 SPR 센서그램 (흑색 선)을 제공한다. 둘 모두에서의 적색 선은 센서그램을 단순 1:1 키네틱 결합 모델 (simple 1:1 kinetic binding model)로 글로벌 피팅 (global fit)한 것이다. PVRIG의 농도 범위는 460 pM-112 nM이었다. (A) CHA.7.518.4-H4 홀+CHA.9.547.18-H4 CrossMab 놉, (B) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086-CrossMab H4 놉, (C) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VL-VH)-H4 놉, (D) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VH-VL)-H4 놉, (E) CPA.9.086 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.1 Fab H4 var2, (F) CHA.7.518.1 scFv (VL-VH) H4 var1+CPA.9.086 Fab H4 var2, (G) CHA.9.547.18 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.4 Fab H4 var2, (H) CHA.7.518.4 scFv (VL-VH) H4 var1+CHA.9.547.18 Fab H4 var2, (I) CHA.7.518.1 H4, (I) (J) Synagis H4. 각 항체에 대한 kd/ka 비율 (KD) 계산으로부터 결합 친화성을 추정하였으며, 이를 도 38에 제시하였다.
도 37은 포획된 TIGIT 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체에 결합하는 인간 TIGIT의 SPR 센서그램 (흑색 선)을 제공한다. 적색 선은 센서그램을 단순 1:1 키네틱 결합 모델 (simple 1:1 kinetic binding model)로 글로벌 피팅 (global fit)한 것이다. TIGIT의 농도 범위는 362 pM-88 nM이었다. (A) CHA.7.518.4-H4 홀+CHA.9.547.18-H4 CrossMab 놉, (B) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086-CrossMab H4 놉, (C) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VL-VH)-H4 놉, (D) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VH-VL)-H4 놉, (E) CPA.9.086 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.1 Fab H4 var2, (F) CHA.7.518.1 scFv (VL-VH) H4 var1+CPA.9.086 Fab H4 var2, (G) CHA.9.547.18 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.4 Fab H4 var2, (H) CHA.7.518.4 scFv (VL-VH) H4 var1+CHA.9.547.18 Fab H4 var2, (I) CPA.9.086 H4, (J) Synagis H4. 각 항체에 대한 kd/ka 비율 (KD) 계산으로부터 결합 친화성을 추정하였으며, 이를 도 39에 제시하였다.
도 38은 SPR에 의해 측정된 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체의 PVRIG 결합 친화성을 제공한다.
도 39는 SPR에 의해 측정된 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체의 TIGIT 결합 친화성을 제공한다.
도 40은 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 추가적인 항-PVRIG 항체를 제공한다. 적색 글자는 아미노산 치환을 나타내고 ()는 참조 인간 IgG4 아미노산 서열에 대비한 결실을 나타낸다. 밑줄이 표시된 글자는 CDR을 나타낸다. 회색으로 강조된 글자는 Fc 도메인을 나타낸다.
도 41은 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 추가적인 항-TIGIT 항체를 제공한다. 적색 글자는 아미노산 치환을 나타내고 ()는 참조 인간 IgG4 아미노산 서열에 대비한 결실을 나타낸다. 밑줄이 표시된 글자는 CDR을 나타낸다. 회색으로 강조된 글자는 Fc 도메인을 나타낸다.
도 42는 하나의 전통적인 항체 팔과 중쇄 및 경쇄 불변 도메인이 교환된 항체 팔을 갖는 예시적인 CrossMab 이중특이적 항체 형식의 다이어그램을 제공한다. "놉 인투 홀 (knob into hole)" 형식에 대한 아미노산 치환은 인간 IgG1 Eu 넘버링에 따라 표시하였다.
도 43은 하나의 전통적인 항체 팔 및 하나의 scFv-Fc 융합 팔을 갖는 예시적인 "병따개 (bottle opener)" 이중특이적 항체 형식의 다이어그램을 제공한다. "놉 인투 홀 (knob into hole)" 형식에 대한 아미노산 치환은 인간 IgG1 Eu 넘버링에 따라 표시하였다.
도 44는 하나의 전통적인 항체 팔 및 하나의 scFv-Fc 융합 팔을 갖는 예시적인 "병따개 (bottle opener)" 이중특이적 항체 형식의 다이어그램을 제공한다. "등량적 이종이량체화 (isovolumetric heterodimerization)" 형식에 대한 아미노산 치환은 인간 IgG1 Eu 넘버링에 따라 표시하였다. 감소된 FcgR 결합에 기여하는 추가적인 치환을 표시하였다.
도 45는 MabSelect Sure 친화성 크로마토그래피 단계 이후의 LC-MS 및 크기 배제 크로마토그래피 (친화성 크로마토그래피로부터의 단량체 %가 95% 미만인 경우)에 의해 측정된, 항-PVRIG-TIGIT 이중특이적 항체의 발현 및 정제, 단량체 함량 및 조립된 이중특이적 항체의 정확 %에 관한 데이터를 제공한다.
도 46은 3명의 상이한 T-세포 공여자에 대한 항-PVRIG-TIGIT 이중특이적 항체 스크리닝을 위한, 치료 당 총 항체 농도 10 ug/ml에서 수행된, CMV 스크리닝 분석에 관한 데이터를 제공한다.
도 47은 세포 분석에 사용된 재조합 CHO 세포주 상에서의 PVRIG, TIGIT 및 PD-1 리간드 (각각 PVR, PVRL2 및 PD-L1) 발현의 유동 세포계측법 예를 제공한다.
도 48은 3명의 상이한 공여자로부터의 T-세포에서의 PVRIG, TIGIT 및 PD-1 발현 수준의 유동 세포계측법 예를 제공한다.
도 49는, PVRIG 코팅된 플레이트를 사용하여 다양한 항-PVRIG-TIGIT 항체에 대한 PVRIG 및 TIGIT의 동시 결합을 입증하고 비오틴화된 TIGIT-His 및 스트렙타비딘-HRP를 사용하여 결합된 항체를 검출하는, ELISA 결합 데이터를 제공한다.
도 50은, TIGIT 코팅된 플레이트를 사용하여 다양한 항-PVRIG-TIGIT 항체에 대한 PVRIG 및 TIGIT의 동시 결합을 입증하고 비오틴화된 PVRIG-His 및 스트렙타비딘-HRP를 사용하여 결합된 항체를 검출하는, ELISA 결합 데이터를 제공한다.
도 51은 도 49 및 도 50에 제공된 ELISA 분석 데이터에 대한 EC-50 데이터를 제공한다.
도 52는 낮은 pH 유지 및 3 주기의 동결 및 해동 이후 시차 주사 형광 측정법 (DSF) 및 응집체 형성에 의해 평가 된, 다수의 형식의 이중특이적 항체에 대한 안정성 데이터 예를 제공한다.
도 53은 상이한 이중특이적 형식들에 대한 안정성 평가를 제공한다. pH 3에서 수회 항체를 유지함으로써 바이러스 불활성화를 시뮬레이션하고 3회의 연속 동결/해동 주기를 수행함으로써 시험을 압박하도록 시험을 수행하였다. 환원 조건 하에서의 중쇄 (scFv 또는 Fab-함유) (a), 경쇄 (b), 또는 비환원 조건 (CE-SDS) 및 저분자량, 고분자량에서의 무손상 분자 (c)의 상대적인 양, 및 단량체 종 함량 (SEC-UPLC) (d)의 변화. T=0으로부터의 변화로서 데이터를 보고하였다.
도 54a는 3명의 공여자 (공여자 4, 공여자 210, 및 공여자 234)로부터의 인간 CMV-특이적 CD8+ T 세포를 사용한 시험관내 공동 배양 분석을 제공하며, 이는 항-TIGIT 항체 (CPA.9.086 및 CHA.9.547.18) 및 항-PVRIG 항체 (CHA.7.518.1, CHA.7.518.4)가 단독으로, 조합으로, 또는 이중특이적 항체로서, 항원-특이적 사이토카인 분비에 대해 미치는 영향을 평가하기 위해 이용되었다. 분석에 사용된 표적 세포주는 pp65를 이소성으로 발현하도록 변형된 HLA-A2 + PVRL2 + PVR + 발현 흑색종 624 (Mel-624) 세포주였다. 96-웰 둥근-바닥 조직 배양 처리된 플레이트에 75,000 세포/웰로 세포를 도말하였다. 15,000개의 인간 CD8+ T 세포를 각 웰에 첨가하였다. 표시된 항-인간 PVRIG, TIGIT 또는 이소타입 대조군 hIgG4 항체를 1 μg/ml의 농도로 첨가하였다. 공동 배양물을 37℃에서 5% CO2로 24시간 동안 배양하였다. 공동 배양 상청액 내의 인간 IFNγ의 양은 LEGENDplex IFN 비드 분석 (BD Biosciences)을 사용하여 유동 세포계측법으로 측정하였다. hIgG4 이소타입에 대비하여 각 항체에 대한 IFNγ 분비의 증가 백분율을 표시하였다 (n=2개의 실험, 1개의 실험으로부터의 대표적인 결과를 도시함). (A) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086-CrossMab H4 놉, (B) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VH-VL)-H4 놉, (C) CPA.9.086 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.1 Fab H4 var2, (D) CHA.7.518.1 scFv (VL-VH) H4 var1+CPA.9.086 Fab H4 var2, (E) CHA.7.518.1 H4, (F) CPA.9.086 H4, (G) CHA.7.518.1 H4, (H) CPA.9.086 H4, (I) Synagis H4.
도 54b는 공여자 세포의 상이한 확장과 함께 수행된 2개의 CMV 분석 복제의 요약을 제공한다.
도 1은 인간 PVRIG의 서열 (전장 서열뿐만 아니라 2개의 상이한 메티오닌 개시점을 도시함)을 나타낸다. 신호 펩타이드는 밑줄이 표시되고, ECD는 이중 밑줄로 표시된다. 폴리오바이러스 수용체 관련 면역글로불린 도메인 함유 단백질, Q6DKI7 또는 C7orf15로도 불리는 PVRIG는 도 1에 도시된 RefSeq 기탁번호 NP_076975에 표시된 아미노산 및 핵산 서열과 관련된다.
도 2는 PVRIG의 결합 파트너인 인간 폴리오바이러스 수용체-관련 2 단백질 (PVLR2, 넥틴-2, CD112 또는 헤르페스바이러스 진입 매개인자 B (HVEB)로도 알려짐)의 서열을 나타낸다. PVLR2는 인간 원형질막 당단백질이다.
도 3a 내지 도 3c는 PVRIG와 이의 대응물인 PVRL2의 상호작용을 성공적으로 차단하는 것으로 판단된 Fab에 대한 CDR 서열을 도시한다.
도 4a 내지 도 4aa는 PVRIG에 결합하고 PVRIG와 PVLR2의 결합을 차단하는 본 발명의 열거된 인간 CPA 항-PVRIG 서열에 대한 가변 중쇄 및 경쇄 도메인, 전장 중쇄 및 경쇄, 및 가변 중쇄 및 가변 경쇄 CDR의 아미노산 서열을 도시한다.
도 5a 내지 도 5h는 PVRIG에 결합하지만 PVRIG와 PVLR2의 결합을 차단하지는 않는 본 발명의 8개의 인간 CPA 항-PVRIG 서열에 대한 가변 중쇄 및 경쇄 도메인, 전장 중쇄 및 경쇄, 및 가변 중쇄 및 가변 경쇄 CDR의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 6a 내지 도 6g는 PVRIG와 PVLR2의 결합을 차단하지 않는 것들을 비롯한, PVRIG에 결합하는 생성된 모든 CPA 항-PVRIG 항체 서열에 대한 CDR을 나타낸다.
도 7a 내지 도 7ae는 본 발명의 열거된 CHA 항체인 CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, 및 CHA.7.518.4 각각의 가변 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3 서열을 도시한다 (이는 마우스 서열 (하이브리도마로부터 유래됨)의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다).
도 8a 내지 도 8d는 본 발명의 열거된 CPA 항체인 CPA.7.001 내지 CPA.7.050 각각의 vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3 서열을 나타내며, 인간 서열 (파지 디스플레이로부터 유래됨)이다.
도 9a 내지 도 9c는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 서열을 나타낸다.
도 10은 다수의 인간 PVRIG ECD 단편을 나타낸다.
도 11a 내지 도 11i는 5개의 CHA 항체의 인간화 서열의 조사를 나타낸다.
도 12a 내지 도 12e는 5개의 CHA 항체의 인간화 서열의 조사를 도시한다.
도 13은 도 11a 내지 도 11i 및 도 12a 내지 도 12e의 인간화 VH 및 VL CHA 항체를 조합하기 위한 설계를 나타낸다. "chimVH" 및 "chimVL"은 인간 IgG 불변 도메인에 부착된 마우스 가변 중쇄 및 경쇄 서열이다.
도 14a 내지 도 14bx는 본 발명에서 용도를 찾은 다수의 PVRIG 서열 및 다른 서열을 도시한다.
도 15a 및 도 15b는 본 발명의 열거된 CHA 항체인 CHA.7.518.1.H4(S241P), 및 CHA.7.538.1.2.H4(S241P) 각각의 가변 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3 서열을 나타낸다.
도 16a 내지 도 16e는 CHA.7.518, CHA.7.524, CHA.7.530, CHA.7.538_1 및 CHA.7.538_2 각각에 대한 4개의 인간화 서열을 나타낸다. 모든 인간화 항체는 H4(S241P) 치환을 포함한다. CHA.7.538_2의 경쇄는 CHA.7.538_1의 경우와 동일함을 주목한다. 각각의 "H1"은 "CDR 교환 (swap)"이며 인간 프레임워크에는 변화가 없다. 후속 서열들은 더 큰 굵은 글꼴로 표시된 프레임워크 변화를 변경시킨다. CDR 서열은 굵은 글꼴로 표시된다. CDR 정의는 웹사이트 www.bioinf.org.uk/abs/로부터의 AbM이다. IMGT® 국제 ImMunoGeneTics® 정보 시스템 www.imgt.org (설립자겸 이사: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France)으로부터의 인간 생식계열 및 연결 서열. 잔기 넘버링은 순차적으로 (seq) 또는 웹사이트 www.bioinf.org.uk/abs/ (AbM)로부터의 코티아 (Chothia)에 따라 나타낸다. "b"는 묻힌 측쇄를 표시하고; "p"는 부분적으로 묻힌 것을 표시하고; "i"는 VH 및 VL 도메인 사이의 계면에서의 측쇄를 표시한다. 인간 및 마우스 생식계열 사이의 서열 차이는 별표 (*)로 표시된다. 프레임워크에서의 잠재적인 추가 돌연변이는 서열 아래에 표시된다. 도면 상에 표시된 바와 같이, CDR 서열의 잠재적인 변화는 각 CDR 서열 아래에 표시된다 (# 탈아미드화 치환: Q/S/A; 이들은 아스파라긴 (N) 탈아미드화를 방지할 수 있음. @ 트립토판 산화 치환: Y/F/H; 이들은 트립토판 산화를 방지할 수 있음; @ 메티오닌 산화 치환: L/F/A).
도 17a 내지 도 17c는 3개의 CHA 항체, 즉, CHA.7.518, CHA.7.538.1 및 CHA.7.538.2의 인간화 서열의 조사를 나타낸다.
도 18은 인간화 VH 및 VL CHA 항체를 조합하기 위한 설계를 나타낸다. "chimVH" 및 "chimVL"은 인간 IgG 불변 도메인에 부착된 마우스 가변 중쇄 및 경쇄 서열이다.
도 19. PVRIG 오솔로그 (ortholog)의 서열 정렬. 인간, 시노몰구스, 마모셋 및 레서스 PVRIG 세포외 도메인의 정렬된 서열. 인간과 시노몰구스의 차이는 황색으로 강조된다.
도 20a 내지 도 20d는 AB-407 (BOJ-5G4-F4)의 경우 가변 중쇄 (각각 A 및 B)의 아미노산 서열 및 핵산 서열, 및 가변 경쇄 (각각 C 및 D)의 아미노산 서열 및 핵산 서열을 나타낸다.
도 21a 및 도 21b는 본 발명에서 특정 용도를 찾은 힌지 변이체를 갖는 인간 IgG1 (일부 유용한 아미노산 치환을 가짐), IgG2, IgG3, IgG4, IgG4의 불변 도메인 및 카파 및 람다 경쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 22는 인간 및 시노몰구스 마카크 (시노로도 지칭됨) TIGIT ECD 및 인간 PVR ECD 단백질의 서열을 나타낸다.
도 23a 내지 도 23d는 항-TIGIT 항체의 서열을 나타낸다. 달리 언급하지 않는 한, 상기 CDR은 IMGT 넘버링을 사용한다 (서열 목록의 항체 포함).
도 24a 내지 도 24ssss는 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 다수의 항-TIGIT 항체의 서열을 나타낸다.
도 25는 CrossMab 기술 (MAbs. 2016 Aug-Sep; 8(6): 1010-1020) and knobs in hole technology (Nat Biotechnol. 1998 Jul;16(7):677-81)을 사용하는 예시적인 이중특이적 항체 구현예의 개략도를 나타낸다.
도 26은 CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 이중특이적 항체의 각 팔 (arm)에 대한 중쇄 및 경쇄의 서열을 제공한다. 가변 도메인은 이탤릭체로 표시된다. CDR은 적색으로 표시된다. Fc 도메인의 돌연변이는 굵은 글꼴 및 밑줄이 표시되었다.
도 27은 2개의 독립적인 표면에 걸쳐 포획된 TIGIT-PVRIG 이중특이적 항체에 결합하는 (A) 인간 TIGIT 및 2개의 독립적인 표면에 걸쳐 포획된 TIGIT-PVRIG 이중특이적 항체에 결합하는 (B) 인간 PVRIG의 SPR 센서그램 (sensorgram) (흑색 선)을 제공한다. (A)와 (B) 모두에서의 적색 선은 센서그램을 단순 1:1 키네틱 결합 모델 (simple 1:1 kinetic binding model)로 글로벌 피팅 (global fit)한 것이다. TIGIT의 농도 범위는 362 pM - 88 nM였고 PVRIG의 농도 범위는 460 pM-112 nM이었다. TIGIT 항원의 경우 15분 후 해리 신호 감쇠 데이터가 충분하지 않았기 때문에, 글로벌 피팅을 위해 kd는 임의로 1e-5 초-1에서 일정하게 유지하였다. TIGIT-이중특이적 상호작용에 대해 kd 상수를 유지하는 경우, ka는 3.9e6 M-1초-1로 추정되었고, kd/ka 비율인 KD = 2.6 pM으로 계산되었다. PVRIG-이중특이적 항체 상호작용에 대한 결합 상수는 ka = 1.3e6 M-1초-1였고, kd = 2.4e-4 초-1였고, KD = 187 pM이었다.
도 28은 항-TIGIT-PVRIG 이중특이적 항체에 대한 인간 TIGIT 및 인간 PVRIG의 동시 결합을 입증하는 SPR "샌드위치" 분석을 나타낸다. 먼저, 바이오센서 칩에 공유결합에 의해 고정된 인간 TIGIT에 이중특이적 항체가 주입된다 (A). 그런 다음, 상기 TIGIT-결합된 이중특이적 항체에 인간 PVRIG가 주입된다 (B).
도 29는 pp65 특이적 CD8+ T 세포의 특성화를 나타낸다. A) PBMC는 pp65(495 - 503) 펩타이드, IL-2 및 IL-7을 사용하여 11일 동안 활성화되었다. pp65 반응성 T 세포의 백분율과 PVRIG, TIGIT 및 PD-1의 발현을 평가하기 위해, 유동 세포계측법을 수행하였다. 1명의 공여자로부터의 대표적인 게이팅 체계 및 2명의 공여자로부터의 대표적인 사량체 염색을 도시하였다. 좌측에서 우측으로, 림프구는 전방 산란 (FSC)/측면 산란 (SSC) (좌측 상단) 및 살아있는 CD3+CD8+ 양성 세포에 의해 게이트되었다. CD3+CD8+ 양성 집단 내에서, HLA-A201 pp65 사량체에 결합하는 세포의 백분율을 측정하고, 2명의 공여자로부터의 데이터를 도시하였다. B) pp65 반응성 T 세포 상에서의 PVRIG, TIGIT 및 PD-1의 발현을 유동 세포계측법에 의해 평가하였다. 우측 상단 모서리의 숫자는 이소타입 대조군에 대비한 관심 표적의 MFIr을 나타낸다.
도 30은 Mel-624 pp65 암 세포주와의 공동 배양에서의 CMV pp65 반응성 CD8 T 세포에 대한 억제 수용체 차단의 효과를 나타낸다. 2명의 공여자, 즉 공여자 4 (A) 및 공여자 72 (B)에 대한 CMV pp65 반응성 T 세포를, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 (단독 또는 조합으로), CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb 또는 인간 IgG 이소타입 대조군의 존재 하에, pp65를 이소성으로 발현하는 변형된 Mel-624 종양 세포주와 18시간 동안 공동 배양하였다. 사이토카인 분비에 대해 조건 배지를 분석하였다. 막대 위의 숫자는 이소타입 대조군에 대비한 변화 %를 나타낸다. 막대 그래프는 IFN-γ에 대한 평균 + 표준 편차를 도시한다 (N=2).
도 31은 Mel-624 pp65 암 세포주와의 공동 배양에서의 CMV pp65 반응성 CD8 T 세포에 대한 억제 수용체 차단의 용량-의존성 적정을 제공한다. 2명의 공여자, 즉 공여자 4 (A) 및 공여자 72 (B)에 대한 CMV pp65 반응성 T 세포를, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 (단독 또는 조합으로), CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb 또는 인간 IgG 이소타입 대조군의 존재 하에, pp65를 이소성으로 발현하는 변형된 Mel-624 종양 세포주와 18시간 동안 공동 배양하였다. 20 μg/ml에서 시작하는 10개 지점 4배 일련 희석이 각 항체에 사용되었다. 사이토카인 분비에 대해 조건 배지를 분석하였다. CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086을 사용하는 조합된 차단 및 이중특이적 항체 치료에 대한 EC50 (nM)값을 보고하였다. 대표 데이터 (N=2).
도 32는 본 발명의 이중특이적 항체에 적용 가능한 이중특이적 항체 생성에 사용하기 위한 Fc 이종이량체화 전략의 개요를 제공한다. (Godar 등, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 28(3):251-276 (2018) 참조.)
도 33은 본 발명의 이중특이적 항체에 적용 가능한 비대칭 이중특이적 항체 형식의 개요를 제공한다. (Brinkmann and Kontermann, The making of bispecific antibodies, MAbs, 9(2): 182-212 (2017) 참조.)
도 34는 본 발명의 이중특이적 항체에 적용 가능한 대칭 이중특이적 항체 형식의 개요를 제공한다. (Brinkmann and Kontermann, The making of bispecific antibodies, MAbs, 9(2): 182-212 (2017) 참조.)
도 35는 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 추가적인 항-PVRIG 항체를 제공한다.
도 36은 포획된 PVRIg 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체에 결합하는 인간 PVRIg의 SPR 센서그램 (흑색 선)을 제공한다. 둘 모두에서의 적색 선은 센서그램을 단순 1:1 키네틱 결합 모델 (simple 1:1 kinetic binding model)로 글로벌 피팅 (global fit)한 것이다. PVRIG의 농도 범위는 460 pM-112 nM이었다. (A) CHA.7.518.4-H4 홀+CHA.9.547.18-H4 CrossMab 놉, (B) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086-CrossMab H4 놉, (C) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VL-VH)-H4 놉, (D) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VH-VL)-H4 놉, (E) CPA.9.086 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.1 Fab H4 var2, (F) CHA.7.518.1 scFv (VL-VH) H4 var1+CPA.9.086 Fab H4 var2, (G) CHA.9.547.18 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.4 Fab H4 var2, (H) CHA.7.518.4 scFv (VL-VH) H4 var1+CHA.9.547.18 Fab H4 var2, (I) CHA.7.518.1 H4, (I) (J) Synagis H4. 각 항체에 대한 kd/ka 비율 (KD) 계산으로부터 결합 친화성을 추정하였으며, 이를 도 38에 제시하였다.
도 37은 포획된 TIGIT 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체에 결합하는 인간 TIGIT의 SPR 센서그램 (흑색 선)을 제공한다. 적색 선은 센서그램을 단순 1:1 키네틱 결합 모델 (simple 1:1 kinetic binding model)로 글로벌 피팅 (global fit)한 것이다. TIGIT의 농도 범위는 362 pM-88 nM이었다. (A) CHA.7.518.4-H4 홀+CHA.9.547.18-H4 CrossMab 놉, (B) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086-CrossMab H4 놉, (C) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VL-VH)-H4 놉, (D) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VH-VL)-H4 놉, (E) CPA.9.086 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.1 Fab H4 var2, (F) CHA.7.518.1 scFv (VL-VH) H4 var1+CPA.9.086 Fab H4 var2, (G) CHA.9.547.18 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.4 Fab H4 var2, (H) CHA.7.518.4 scFv (VL-VH) H4 var1+CHA.9.547.18 Fab H4 var2, (I) CPA.9.086 H4, (J) Synagis H4. 각 항체에 대한 kd/ka 비율 (KD) 계산으로부터 결합 친화성을 추정하였으며, 이를 도 39에 제시하였다.
도 38은 SPR에 의해 측정된 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체의 PVRIG 결합 친화성을 제공한다.
도 39는 SPR에 의해 측정된 이중특이적 항체 및 단일특이적 항체의 TIGIT 결합 친화성을 제공한다.
도 40은 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 추가적인 항-PVRIG 항체를 제공한다. 적색 글자는 아미노산 치환을 나타내고 ()는 참조 인간 IgG4 아미노산 서열에 대비한 결실을 나타낸다. 밑줄이 표시된 글자는 CDR을 나타낸다. 회색으로 강조된 글자는 Fc 도메인을 나타낸다.
도 41은 본 발명의 이중특이적 항체에 사용하기 위한 추가적인 항-TIGIT 항체를 제공한다. 적색 글자는 아미노산 치환을 나타내고 ()는 참조 인간 IgG4 아미노산 서열에 대비한 결실을 나타낸다. 밑줄이 표시된 글자는 CDR을 나타낸다. 회색으로 강조된 글자는 Fc 도메인을 나타낸다.
도 42는 하나의 전통적인 항체 팔과 중쇄 및 경쇄 불변 도메인이 교환된 항체 팔을 갖는 예시적인 CrossMab 이중특이적 항체 형식의 다이어그램을 제공한다. "놉 인투 홀 (knob into hole)" 형식에 대한 아미노산 치환은 인간 IgG1 Eu 넘버링에 따라 표시하였다.
도 43은 하나의 전통적인 항체 팔 및 하나의 scFv-Fc 융합 팔을 갖는 예시적인 "병따개 (bottle opener)" 이중특이적 항체 형식의 다이어그램을 제공한다. "놉 인투 홀 (knob into hole)" 형식에 대한 아미노산 치환은 인간 IgG1 Eu 넘버링에 따라 표시하였다.
도 44는 하나의 전통적인 항체 팔 및 하나의 scFv-Fc 융합 팔을 갖는 예시적인 "병따개 (bottle opener)" 이중특이적 항체 형식의 다이어그램을 제공한다. "등량적 이종이량체화 (isovolumetric heterodimerization)" 형식에 대한 아미노산 치환은 인간 IgG1 Eu 넘버링에 따라 표시하였다. 감소된 FcgR 결합에 기여하는 추가적인 치환을 표시하였다.
도 45는 MabSelect Sure 친화성 크로마토그래피 단계 이후의 LC-MS 및 크기 배제 크로마토그래피 (친화성 크로마토그래피로부터의 단량체 %가 95% 미만인 경우)에 의해 측정된, 항-PVRIG-TIGIT 이중특이적 항체의 발현 및 정제, 단량체 함량 및 조립된 이중특이적 항체의 정확 %에 관한 데이터를 제공한다.
도 46은 3명의 상이한 T-세포 공여자에 대한 항-PVRIG-TIGIT 이중특이적 항체 스크리닝을 위한, 치료 당 총 항체 농도 10 ug/ml에서 수행된, CMV 스크리닝 분석에 관한 데이터를 제공한다.
도 47은 세포 분석에 사용된 재조합 CHO 세포주 상에서의 PVRIG, TIGIT 및 PD-1 리간드 (각각 PVR, PVRL2 및 PD-L1) 발현의 유동 세포계측법 예를 제공한다.
도 48은 3명의 상이한 공여자로부터의 T-세포에서의 PVRIG, TIGIT 및 PD-1 발현 수준의 유동 세포계측법 예를 제공한다.
도 49는, PVRIG 코팅된 플레이트를 사용하여 다양한 항-PVRIG-TIGIT 항체에 대한 PVRIG 및 TIGIT의 동시 결합을 입증하고 비오틴화된 TIGIT-His 및 스트렙타비딘-HRP를 사용하여 결합된 항체를 검출하는, ELISA 결합 데이터를 제공한다.
도 50은, TIGIT 코팅된 플레이트를 사용하여 다양한 항-PVRIG-TIGIT 항체에 대한 PVRIG 및 TIGIT의 동시 결합을 입증하고 비오틴화된 PVRIG-His 및 스트렙타비딘-HRP를 사용하여 결합된 항체를 검출하는, ELISA 결합 데이터를 제공한다.
도 51은 도 49 및 도 50에 제공된 ELISA 분석 데이터에 대한 EC-50 데이터를 제공한다.
도 52는 낮은 pH 유지 및 3 주기의 동결 및 해동 이후 시차 주사 형광 측정법 (DSF) 및 응집체 형성에 의해 평가 된, 다수의 형식의 이중특이적 항체에 대한 안정성 데이터 예를 제공한다.
도 53은 상이한 이중특이적 형식들에 대한 안정성 평가를 제공한다. pH 3에서 수회 항체를 유지함으로써 바이러스 불활성화를 시뮬레이션하고 3회의 연속 동결/해동 주기를 수행함으로써 시험을 압박하도록 시험을 수행하였다. 환원 조건 하에서의 중쇄 (scFv 또는 Fab-함유) (a), 경쇄 (b), 또는 비환원 조건 (CE-SDS) 및 저분자량, 고분자량에서의 무손상 분자 (c)의 상대적인 양, 및 단량체 종 함량 (SEC-UPLC) (d)의 변화. T=0으로부터의 변화로서 데이터를 보고하였다.
도 54a는 3명의 공여자 (공여자 4, 공여자 210, 및 공여자 234)로부터의 인간 CMV-특이적 CD8+ T 세포를 사용한 시험관내 공동 배양 분석을 제공하며, 이는 항-TIGIT 항체 (CPA.9.086 및 CHA.9.547.18) 및 항-PVRIG 항체 (CHA.7.518.1, CHA.7.518.4)가 단독으로, 조합으로, 또는 이중특이적 항체로서, 항원-특이적 사이토카인 분비에 대해 미치는 영향을 평가하기 위해 이용되었다. 분석에 사용된 표적 세포주는 pp65를 이소성으로 발현하도록 변형된 HLA-A2 + PVRL2 + PVR + 발현 흑색종 624 (Mel-624) 세포주였다. 96-웰 둥근-바닥 조직 배양 처리된 플레이트에 75,000 세포/웰로 세포를 도말하였다. 15,000개의 인간 CD8+ T 세포를 각 웰에 첨가하였다. 표시된 항-인간 PVRIG, TIGIT 또는 이소타입 대조군 hIgG4 항체를 1 μg/ml의 농도로 첨가하였다. 공동 배양물을 37℃에서 5% CO2로 24시간 동안 배양하였다. 공동 배양 상청액 내의 인간 IFNγ의 양은 LEGENDplex IFN 비드 분석 (BD Biosciences)을 사용하여 유동 세포계측법으로 측정하였다. hIgG4 이소타입에 대비하여 각 항체에 대한 IFNγ 분비의 증가 백분율을 표시하였다 (n=2개의 실험, 1개의 실험으로부터의 대표적인 결과를 도시함). (A) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086-CrossMab H4 놉, (B) CHA.7.518.4-H4 홀+CPA.9.086 scFv (VH-VL)-H4 놉, (C) CPA.9.086 scFv (VH-VL) H4 var1+CHA.7.518.1 Fab H4 var2, (D) CHA.7.518.1 scFv (VL-VH) H4 var1+CPA.9.086 Fab H4 var2, (E) CHA.7.518.1 H4, (F) CPA.9.086 H4, (G) CHA.7.518.1 H4, (H) CPA.9.086 H4, (I) Synagis H4.
도 54b는 공여자 세포의 상이한 확장과 함께 수행된 2개의 CMV 분석 복제의 요약을 제공한다.
IV. 발명의 상세한 설명
A. 개요
본 발명은, 특히 암의 치료에 사용하기 위한, 다수의 유용한 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. 암은 환자가 암성 세포를 인식하고 제거할 수 없는 것으로 간주될 수 있다. 많은 경우, 이들 형질전환된 (예를 들어, 암성) 세포는 면역 감시를 방해한다. 미억제된 T-세포 활성을 예방하기 위해 신체의 T-세포 활성화를 제한하는 자연적인 제어 메커니즘이 있고, 이는 암성 세포가 면역 반응을 회피하거나 억제하는 데 사용될 수 있다. 면역 효과기 세포, 특히 T 세포의 암을 인식하고 제거하는 능력을 회복시키는 것이 면역요법의 목표이다. 때로 "면역요법"으로도 지칭되는 면역항암제 분야는 Yervoy, Keytruda 및 Opdivo와 같은 T 세포 체크포인트 억제 항체에 대한 최근의 여러 승인으로 신속하게 진화하고 있다. 이들 항체는 T 세포 면역력의 정상적인 음성 조절인자를 차단하기 때문에 일반적으로 "체크포인트 억제제"라고 지칭한다. 공동자극성 및 공동억제성 둘 모두의 다양한 면역조절 신호가 최적의 항원-특이적 면역 반응을 조율하는 데 사용될 수 있는 것으로 일반적으로 이해된다. 일반적으로, 이들 항체는 CTLA-4 또는 PD-1과 같은 체크포인트 억제제 단백질에 결합하는데, 이는 정상적인 환경 하에서 세포독성 T-세포 (CTL)의 활성화를 방지하거나 억제한다. 예를 들어, 이들 단백질에 결합하는 항체의 사용을 통해 체크포인트 단백질을 억제함으로써, 종양에 대한 증가된 T 세포 반응을 달성할 수 있다. 즉, 이들 암 체크포인트 단백질은 면역 반응을 억제하고; 예를 들어 체크포인트 단백질에 대한 항체를 사용하여 상기 단백질이 차단되는 경우 면역계가 활성화되어 면역 자극을 유발하여 암 및 전염병과 같은 병태를 치료한다.
본 발명은 추가적인 체크포인트 단백질인 PVRIG 및 TIGIT에 대한 이중특이적 항체의 용도에 관한 것이다. PVRIG는 NK 및 T-세포의 세포 표면 상에 발현되고, 다른 공지된 면역 체크포인트과 여러 유사점을 공유한다. PVRIG가 체크포인트 수용체임을 입증하는 데 사용된 식별 및 방법은 WO2016/134333에 논의되어 있으며, 이 문헌은 원용에 의해 본원에 명시적으로 포함된다. PVLR2의 상호작용 및/또는 결합을 차단하는 인간 PVRIG에 대한 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 본원에 제공된다. PVRIG가 이의 리간드 (PVRL2)에 결합되는 경우, 표적 세포에 대한 NK 및 T-세포의 면역 반응을 약화시키도록 작용하는 억제 신호가 유도된다 (즉, PD-1/PDL1과 유사함). PVRIG에 대한 PVRL2의 결합을 차단하는 것은 PVRIG의 억제 신호를 차단하고 결과적으로 NK 및 T-세포의 면역 반응을 조절한다. PVRL2에 대한 결합을 차단하는 PVRIG에 대한 항체를 이용하는 것은 NK 및 T-세포에 의한 암 세포의 살상을 향상시키는 치료적 접근법이다. PVRIG와 결합하고 이의 리간드인 PVRL2의 결합을 차단하는 차단 항체가 생성되었다.
유사하게, TIGIT 또한 체크포인트 수용체의 특성을 갖는 것으로 나타났으며, 본 발명은 TIGIT와 PVR의 상호작용 및/또는 결합을 차단하는 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. TIGIT가 이의 리간드 (PVR)에 결합되는 경우, 표적 세포에 대한 NK 및 T-세포의 면역 반응을 약화시키도록 작용하는 억제 신호가 유도된다 (즉, PD-1/PDL1과 유사함). TIGIT에 대한 PVR의 결합을 차단함으로써 TIGIT의 억제 신호를 차단하고 결과적으로 NK 및 T-세포의 면역 반응을 조절한다. PVR에 대한 결합을 차단하는 TIGIT에 대한 항체를 이용하는 것은 NK 및 T-세포에 의한 암 세포의 살상을 증진시키는 치료적 접근법이다. TIGIT와 결합하고 이의 리간드인 PVR의 결합을 차단하는 차단 항체가 생성되었다.
또한, 본 발명은, 암의 치료에 사용하기 위한, 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
B. 정의
본원을 더 완벽하게 이해할 수 있도록 몇 가지 정의를 하기에 설명하였다. 이러한 정의는 문법적 등가물을 포함하는 의미이다.
본원에서 IgG 도메인 정의는 IMGT 참조 서열 (www.IMGT.org)에 따른 것이다.
본원에서 "절제"는 활성의 감소 또는 제거를 의미한다. 일부 구현예에서, 항체의 불변 도메인으로부터 활성을 제거하는 것이 유용하다. 따라서, 예를 들어, "FcγR 결합을 절제하는 것"은 Fc 영역 아미노산 변이체가 상기 특정 변이체를 포함하지 않는 Fc 영역과 비교하여 50% 미만의 시작 결합을 갖는 것을 의미하며, 70-80-90-95-98% 미만의 활성 손실이 바람직하고, 일반적으로 상기 활성은 비아코어 (Biacore) 분석에서 검출가능한 결합 수준 미만이다. 도 21에 도시된 바와 같이, IgG1 불변 영역의 하나의 절제 변이체는 N297A 변이체인데, 이는 미가공 글리코실화 부위를 제거하고 FcγRIIIa 결합을 유의하게 감소시켜 항체 의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC)을 감소시킨다.
본원에서 "항원 결합 도메인" 또는 "ABD"은 본원에서 논의된 바와 같이, 폴리펩타이드 서열의 일부로서 존재할 때, 특이적으로 표적 항원에 결합하는 6개의 상보성 결정 영역 (Complementary Determining Regions (CDR))의 세트를 의미한다. 따라서, "TIGIT 항원 결합 도메인"은 본원에 개략된 바와 같이 TIGIT 항원 (도 22에 나타낸 서열)에 결합한다. 유사하게, "PVRIG 항체 결합 도메인"은 본원에 개략된 바와 같이 PVRIG 항원 (도 1에 나타낸 서열)에 결합한다. 당업계에 공지된 바와 같이, 이들 CDR은 일반적으로, 각각이 3개의 CDR (중쇄의 경우 vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3 및 경쇄의 경우 vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3)을 포함하는, 중쇄 CDR (vhCDR 또는 VHCDR)의 제1 세트 및 경쇄 CDR (vlCDR 또는 VLCDR)의 제2 세트로서 존재한다. CDR은 가변 중쇄 및 가변 경쇄 도메인에 각각 존재하며, 함께 Fv 영역을 형성한다. 따라서, 일부 경우에 항원 결합 도메인의 6개의 CDR은 가변 중쇄 및 가변 경쇄에 기여한다. "Fab" 형식에서, 6개 CDR의 세트는 2개의 상이한 폴리펩타이드 서열, 가변 중쇄 도메인 (vh 또는 VH; vhCDR1, vhCDR2 및 vhCDR3 포함) 및 가변 경쇄 도메인 (vl 또는 VL; vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3 포함)에 기여하고, vh 도메인의 C-말단은 중쇄의 CH1 도메인의 N-말단에 부착되고, vl 도메인의 C-말단은 불변 경쇄 도메인의 N-말단에 부착된다 (따라서 경쇄를 형성함). 어구 "항원 결합 부분"은 ABD를 포함하거나 ABD와 동의어일 수 있다.
본원에서 "변형"은 폴리펩타이드 서열에서의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실 또는 단백질에 화학적으로 연결된 모이어티로의 변경을 의미한다. 예를 들어, 변형은 단백질에 부착된 변경된 탄수화물 또는 PEG 구조일 수 있다. 본원에서 "아미노산 변형"은 폴리펩타이드 서열에서의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 의미한다. 명확하게 하기 위해, 달리 언급하지 않는 한, 아미노산 변형은 항상 DNA에 의해 코딩된 아미노산, 예를 들어 DNA 및 RNA에서 코돈을 갖는 20개 아미노산에 대한 것이다.
본원에서 "아미노산 치환" 또는 "치환"은 모체 폴리펩타이드 서열 내의 특정 위치의 아미노산을 상이한 아미노산으로 치환하는 것을 의미한다. 특히, 일부 구현예에서, 치환은 유기체 내 또는 임의의 유기체에서 자연적으로 발생하지 않는, 특정 위치에서 자연적으로 발생하지 않는 아미노산에 대한 것이다. 예를 들어, 치환 N297A는 297번 위치의 아스파라긴이 알라닌으로 치환된 변이체 폴리펩타이드, 이 경우에서는 Fc 변이체를 의미한다. 명확하게 하기 위해, 핵산 코딩 서열을 변화시키지만 출발 아미노산을 변화시키지 않도록 조작된 단백질 (예를 들어, CGG (아르기닌을 인코딩함)을 CGA (여전히 아르기닌을 인코딩함)와 교환하여 숙주 유기체 발현 수준을 증가시킴)은 "아미노산 치환"이 아니며; 즉, 동일한 단백질을 인코딩하는 새로운 유전자의 생성에도 불구하고, 단백질이 시작하는 특정 위치에서 동일한 아미노산을 가지면, 이는 아미노산 치환이 아니다.
본원에서 "아미노산 삽입" 또는 "삽입"은 모체 폴리펩타이드 서열의 특정 위치에서 아미노산 서열을 첨가하는 것을 의미한다. 예를 들어, -233E 또는 233E는 233번 위치 이후와 234번 위치 이전으로의 글루탐산의 삽입을 표시한다. 또한, -233ADE 또는 A233ADE는 233번 위치 이후 및 234번 위치 이전으로의 AlaAspGlu의 삽입을 표시한다.
본원에서 "아미노산 결실" 또는 "결실"은 모체 폴리펩타이드 서열 내의 특정 위치에서의 아미노산 서열의 제거를 의미한다. 예를 들어, E233- 또는 E233#, E233 () 또는 E233del은 233번 위치의 글루탐산의 결실을 표시한다. 또한, EDA233- 또는 EDA233#은 233번 위치에서 시작하는 GluAspAla 서열의 결실을 표시한다.
본원에서 "변이체 단백질" 또는 "단백질 변이체"또는 "변이체"는 적어도 하나의 아미노산 변형에 의해 모체 단백질과 다른 단백질을 의미한다. 단백질 변이체는 단백질 자체, 상기 단백질을 포함하는 조성물, 또는 이를 인코딩하는 아미노산 서열을 의미할 수 있다. 바람직하게는, 단백질 변이체는 모체 단백질과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 변형, 예를 들어, 모체와 비교하여 약 1 내지 약 70개 아미노산 변형, 바람직하게는 약 1개 내지 약 5개 아미노산 변형을 갖는다. 하기 기술하는 바와 같이, 일부 구현예에서, 모체 폴리펩타이드, 예를 들어 Fc 모체 폴리펩타이드는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4로부터의 Fc 영역과 같은 인간 야생형 서열이지만, 변이체를 갖는 인간 서열도 "모체 폴리펩타이드"로서 기능할 수 있다. 본원의 단백질 변이체 서열은 바람직하게는 모체 단백질 서열과 적어도 약 80%의 동일성, 가장 바람직하게는 적어도 약 90%의 동일성, 더욱 바람직하게는 적어도 약 95-98-99%의 동일성을 보유할 것이다. 변이체 단백질은 변이체 단백질 자체, 상기 단백질 변이체를 포함하는 조성물 또는 이를 인코딩하는 DNA 서열을 의미할 수 있다. 따라서, 본원에서 "항체 변이체" 또는 "변이체 항체"는 적어도 하나의 아미노산 변형에 의해 모체 항체와 상이한 항체를 의미하며, 본원에서 "IgG 변이체"또는 "변이체 IgG"는 적어도 하나의 아미노산 변형에 의해 모체 IgG (다시 말하면, 많은 경우에서, 인간 IgG 서열)와 다른 항체를 의미하고, 본원에서 "면역글로불린 변이체" 또는 "변이체 면역글로불린"은 적어도 하나의 아미노산 변형에 의해 모체 면역글로불린 서열과 다른 면역글로불린 서열을 의미한다. 본원에서 "Fc 변이체" 또는 "변이체 Fc"는 Fc 도메인에서 아미노산 변형을 포함하는 단백질을 의미한다. 본 발명의 Fc 변이체는 이를 구성하는 아미노산 변형에 따라 정의된다. 따라서, 예를 들어 S241P 또는 S228P는 모체 IgG4 힌지 폴리펩타이드과 비교하여 228번 위치에서 치환 프롤린을 갖는 힌지 변이체이고, 넘버링 S228P는 EU 인덱스에 따른 것이고 S241P는 카밧 넘버링에 따른 것이다. EU 인덱스 또는 카밧 또는 EU 넘버링 설계에서와 같은 EU 인덱스는 EU 항체의 넘버링을 의미한다 (Edelman 등, 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)). 변형은 첨가, 결실 또는 치환일 수 있다. 치환은 자연 발생 아미노산 및 경우에 따라 합성 아미노산을 포함할 수 있다. 그 예는 미국 특허 제6,586,207호; WO 98/48032; WO 03/073238; US2004-0214988A1; WO 05/35727A2; WO 05/74524A2; J. W. Chin 등, (2002), Journal of the American Chemical Society 124:9026-9027; J. W. Chin, & P. G. Schultz, (2002), ChemBioChem 11:1135-1137; J. W. Chin 등, (2002), PICAS United States of America 99:11020-11024; 및 L. Wang, & P. G. Schultz, (2002), Chem. 1-10 (이들의 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)를 포함한다.
본원에서 "단백질"은 단백질, 폴리펩타이드, 올리고펩타이드 및 펩타이드를 비롯한, 적어도 2개의 공유 결합된 아미노산을 의미한다. 펩티딜기는 자연 발생 아미노산 및 펩타이드 결합, 또는 합성 펩타이드 모방체 구조, 예를 들어 펩토이드와 같은 "유사체"를 포함한다 (Simon 등, PNAS USA 89(20):9367 (1992) (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조). 당업자라면 이해할 바와 같이, 상기 아미노산은 자연 발생 또는 합성 (예를 들어, DNA에 의해 코딩된 아미노산이 아님)일 수 있다. 예를 들어, 호모-페닐알라닌, 시트룰린, 오르니틴 및 노르에류신은 본 발명의 목적을 위한 합성 아미노산으로 간주되며, D- 및 L- (R 또는 S) 입체구조의 아미노산 모두 사용될 수 있다. 본 발명의 변이체는, 예를 들어, Cropp & Shultz, 2004, Trends Genet. 20 (12):625-30, Anderson 등, 2004, Proc Natl Acad Sci USA 101 (2):7566-71, Zhang 등, 2003, 303 (5656):371-3, 및 Chin 등, 2003, Science 301 (5635):964-7 (이들의 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 의해 기술된 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는, Schultz 연구진에 의해 개발된 기술을 사용하여 혼입된 합성 아미노산의 사용을 포함하는 변형을 포함할 수 있다. 또한, 폴리펩타이드는 하나 이상의 측쇄 또는 말단의 합성 유도체화, 글리코실화, PEG화 (PEGylation), 원형 치환, 고리화, 다른 분자에 대한 링커, 단백질 또는 단백질 도메인에 대한 융합, 및 펩타이드 태그 또는 표지의 첨가를 포함할 수 있다.
본원에서 "잔기"는 단백질 내의 위치 및 이의 관련 아미노산 실체를 의미한다. 예를 들어, 아스파라긴 297 (Asn297 또는 N297로도 지칭됨)은 인간 항체 IgG1의 297번 위치의 잔기이다.
본원에서 "Fab" 또는 "Fab 영역"은 VH, CH1, VL 및 CL 면역글로불린 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 의미한다. Fab는 이 영역을 별개로, 또는 이 영역을 전장 항체 또는 항체 단편의 맥락에서 의미할 수 있다.
본원에서 "Fv" 또는 "Fv 단편" 또는 "Fv 영역"은 단일 항체의 VL 및 VH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 의미한다. 당업자라면 이해할 바와 같이, 이들은 일반적으로 2개의 사슬로 구성된다.
본원에서 "단일 사슬 Fv" 또는 "scFv"는 일반적으로 scFv 또는 scFv 도메인을 형성하기 위해 본원에서 논의된 바와 같은 scFv 링커를 사용하여, 가변 경쇄 도메인에 공유 결합으로 부착되는 가변 중쇄 도메인을 의미한다. scFv 도메인은 N-말단부터 C-말단으로의 배향 (vh-링커-vl 또는 vl-링커-vh)일 수 있다. 일반적으로, 링커는 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같은 scFv 링커이고, 링커 펩타이드는 우세하게 하기 아미노산 잔기를 포함한다: Gly, Ser, Ala 또는 Thr.
"링커"는 일반적으로, 본원에 기술된 scFv 또는 이중특이적 항체의 맥락에서 사용되는 펩타이드 링커를 의미한다. 링커 펩타이드는 목적하는 활성을 유지하도록 서로에 대해 정확한 입체구조를 취하는 방식으로 두 분자를 연결하는 데 적절한 길이를 가져야 한다. 일 구현예에서, 상기 링커는 약 1 내지 50개 아미노산 길이이고, 바람직하게는 약 1 내지 30개 아미노산 길이이다. 일 구현예에서, 1 내지 20개 아미노산 길이의 링커가 사용될 수 있으며, 약 5 내지 약 10개 아미노산이 일부 구현예에서 용도를 갖는다. 유용한 링커는 예를 들어 (GS)n, (GSGGS)n, (GGGGS)n 및 (GGGS)n (여기서 n은 적어도 1 (일반적으로 3 내지 4)의 정수임)을 비롯한 글리신-세린 중합체, 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체 및 다른 가요성 링커를 포함한다. 대안적으로, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 비단백질성 중합체가 링커로서 사용되어 링커로서의 용도를 찾을 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 하기 표 1 및 표 2에 열거된 것들로부터 선택된다 (또한 미국 특허 제9,650,446호의 도 7 참조).
본원에서 "IgG 서브클래스 변형" 또는 "이소타입 변형"은 하나의 IgG 이소타입의 하나의 아미노산을 상이한 정렬된 IgG 이소타입의 상응하는 아미노산으로 전환시키는 아미노산 변형을 의미한다. 예를 들어, EU 296번 위치에서 IgG1은 티로신을 포함하고 IgG2는 페닐알라닌을 포함하기 때문에, IgG2의 F296Y 치환은 IgG 서브클래스 변형으로 간주된다. 유사하게, IgG1은 241번 위치에 프롤린을 갖고 IgG4는 해당 위치에 세린을 갖기 때문에, S241P를 갖는 IgG4 분자는 IgG 서브클래스 변형으로 간주된다. 서브클래스 변형은 본원에서 아미노산 치환으로 간주되는 점을 주목해야 한다.
본원에서 "비-자연 발생 변형"은 이소타입이 아닌 아미노산 변형을 의미한다. 예를 들어, IgG 중 어느 것도 297번 위치에서 아스파라긴을 포함하지 않기 때문에, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 (또는 이들의 하이브리드)에서의 치환 N297A는 비-자연 발생 변형으로 간주된다.
본원에서 "아미노산" 및 "아미노산 실체"는 DNA 및 RNA에 의해 코딩되는 20개의 자연 발생 아미노산 중 하나를 의미한다.
본원에서 "효과기 기능"은 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용으로부터 유도되는 생화학적 사건을 의미한다. 효과기 기능은 ADCC, ADCP 및 CDC를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 "IgG Fc 리간드"는 IgG 항체의 Fc 영역에 결합하여 Fc/Fc 리간드 복합체를 형성하는 임의의 유기체로부터의 분자, 바람직하게는 폴리펩타이드를 의미한다. Fc 리간드는 FcγRI, FcγRII, FcγRIII, FcRn, C1q, C3, 만난 결합 렉틴, 만노스 수용체, 포도상구균 단백질 A, 연쇄상구균 단백질 G, 및 바이러스 FcγR을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. Fc 리간드는 또한 FcγR과 상동성인 Fc 수용체의 패밀리인 Fc 수용체 상동체 (FcRH)를 포함한다 (Davis 등, 2002, Immunological Reviews 190:123-136 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)). Fc 리간드는 Fc와 결합하는 발견되지 않은 분자를 포함할 수 있다. 특정 IgG Fc 리간드는 FcRn 및 Fc 감마 수용체이다. 본원에서 "Fc 리간드"는 항체의 Fc 영역에 결합하여 Fc/Fc 리간드 복합체를 형성하는 임의의 유기체로부터의 분자, 바람직하게는 폴리펩타이드를 의미한다.
본원에서 "모체 폴리펩타이드"는 변이체를 생성하기 위해 후속적으로 변형되는 출발 폴리펩타이드를 의미한다. 모체 폴리펩타이드는 자연 발생 폴리펩타이드 또는 자연 발생 폴리펩타이드의 변이체 또는 조작된 버전일 수 있다. 모체 폴리펩타이드는 폴리펩타이드 자체, 상기 모체 폴리펩타이드를 포함하는 조성물 또는 이를 인코딩하는 아미노산 서열을 의미할 수 있다. 따라서, 본원에서 "모체 면역글로불린"은 변이체를 생성하도록 변형되는 미변형된 면역글로불린 폴리펩타이드를 의미하고, 본원에서 "모체 항체"는 변이체 항체를 생성하도록 변형되는 미변형된 항체를 의미한다. "모체 항체"는 하기에 개략된 바와 같이 공지된 시판되는, 재조합으로 생성된 항체를 포함하는 것을 주목해야 한다.
본원에서 "Fc" 또는 "Fc 영역"또는 "Fc 도메인"은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 제외한 항체의 불변 영역, 일부 경우에서 힌지의 일부를 포함하는 폴리펩타이드를 의미한다. 따라서, Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 이들 도메인에 대한 가요성 힌지 N-말단을 의미한다. IgA 및 IgM의 경우, Fc는 J 사슬을 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc 도메인은 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3 (Cγ2 및 Cγ3) 및 Cγ1 (Cγ1) 및 Cγ2 (Cγ2) 사이의 하부 힌지 영역을 포함한다. Fc 영역의 경계가 변할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 보통 카르복실-말단에 잔기 C226 또는 P230을 포함하도록 정의되며, 넘버링은 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따른다. 하기에 보다 완벽하게 설명되는 바와 같이 일부 구현예에서, 아미노산 변형은 Fc 영역에 대해, 예를 들어 하나 이상의 FcγR 수용체 또는 FcRn 수용체에 대한 결합을 변경시키도록 이루어진다.
본원에서 "중쇄 불변 영역"은 항체의 CH1-힌지-CH2-CH3 부분을 의미한다.
본원에서 "위치"는 단백질의 서열 내의 위치를 의미한다. 위치는 순차적으로, 또는 확립된 형식, 예를 들어 항체 넘버링을 위한 EU 인덱스에 따라 넘버링될 수 있다.
본원에서 "표적 항원"은 특정 항체의 가변 영역에 특이적으로 결합하는 분자를 의미한다. 본원에서, 본원에서의 하나의 관심 표적 항원은 TIGIT, 보통 인간 TIGIT 및 선택적으로, 하기에 정의된 바와 같이, 시노 TIGIT이다. 또 다른 관심 표적 항원은 PVRIG이며, 보통 인간 PVRIG 및 선택적으로, 하기에 정의된 바와 같이, 시노 PVRIG이다.
본원에서 "표적 세포"는 표적 항원을 발현하는 세포를 의미한다.
본원에서 "가변 영역"은 카파, 람다 및 중쇄 면역글로불린 유전자 좌위를 각각 만드는 Vκ (V카파), Vλ (V람다) 및/또는 VH 유전자 중 임의의 것에 의해 실질적으로 인코딩되는 하나 이상의 Ig 도메인을 포함하는 면역글로불린의 영역을 의미한다.
본원에서 "야생형 또는 WT"는 대립유전자 변이를 포함하는, 자연에서 발견되는 아미노산 서열 또는 뉴클레오타이드 서열을 의미한다. WT 단백질은 의도적으로 변형되지 않은 아미노산 서열 또는 뉴클레오타이드 서열을 갖는다.
본 발명의 항체는 일반적으로 단리되거나 재조합된다. 본원에 개시된 다양한 폴리펩타이드를 기술하는 데 사용될 때, "단리된"은 발현된 세포 또는 세포 배양물로부터 식별되고 단리 및/또는 회수된 폴리펩타이드를 의미한다. 통상적으로, 단리된 폴리펩타이드는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 의미한다. "재조합"은 항체가 외인성 숙주 세포에서 재조합 핵산 기술을 사용하여 생성되는 것을 의미한다.
"특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 또는 특정 항원 또는 에피토프에 "특이적인"은 비-특이적인 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들어, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 측정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 측정될 수 있다.
특정 항원 또는 에피토프에 대한 특이적 결합은 예를 들어, 항원 또는 에피토프에 대해 적어도 약 10-9 M, 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 적어도 약 10-12 M, 적어도 약 10-13 M, 적어도 약 10-14 M, 적어도 약 10-15 M의 KD를 갖는 항체에 의해 나타날 수 있고, 여기서 KD는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 의미한다. 전형적으로, 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 항원 또는 에피토프에 대비해 대조군 분자에 대해 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5,000-, 10,000배 또는 그 초과의 KD를 가질 것이다.
또한, 특정 항원 또는 에피토프에 대한 특이적 결합은, 예를 들어, 대조군에 대비해 항원 또는 에피토프에 대해 적어도 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5,000-또는 10,000배 또는 그 초과의 KA 또는 Ka를 갖는 항체에 의해 나타날 수 있고, 여기서 KA 또는 Ka는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 지칭한다. 결합 친화성은 일반적으로 표면 플라스몬 공명 (예를 들어, 비아코어 분석) 및 항원-발현 세포를 사용한 유동 세포계측법을 사용하여 측정된다.
C. 서열
서열 목록은 도 23의 형식에 기초하여 다수의 서열을 제공하고; 서열의 표지에 대한 지침으로서 USSN 62/513,916 (원용에 의해 본원에 명시적으로 포함됨)의 도 4가 참조된다. 가변 중쇄 도메인은 식별자 (예를 들어, "CPA.9.086")로 표지되며, 다음 서열은 본 명세서의 도 23의 형식 (상기 참조된 도 4의 형식과 동일함)을 따르며, 다음 서열 식별자는 vhCDR1, 다음은 vhCDR2, vhCDR3, 전장 중쇄, 가변 경쇄, vlCDR1, vlCDR2, vlCDR3 및 전장 경쇄에 대한 것이다. 따라서 개별 항체는 10개의 관련 서열 식별자를 갖는다. BM26 마우스 IgG1 (BM26-M1) (WO2016/028656A1, 클론 31C6)와 BM29 마우스 IgG1 (BM29-M1) (US2016/0176963A1, 클론 22G2)의 서열이 서열 목록에 포함되어 있다. 명시되지 않는 한, PVRIG 및/또는 TIGIT 항체의 전장 HC 서열은 H4(S241P) 형식이다.
D. PVRIG 단백질
본 발명은, PVRIG 단백질에 특이적으로 결합하고 이의 리간드 단백질이며 인간 원형질막 당단백질인 PVRL2에 의한 활성화를 방지하는 항-PVRIG 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. 폴리오바이러스 수용체 관련 면역글로불린 도메인 함유 단백질, Q6DKI7 또는 C7orf15로도 불리는 PVRIG는 도 1에 도시된 RefSeq 기탁번호 NP_076975에 표시된 아미노산 및 핵산 서열과 관련된다. PVRIG의 결합 파트너 (미국 특허공보 제2016/0244521호의 실시예 5에 나타난 바와 같음)인 인간 폴리오바이러스 수용체-관련 2 단백질 (PVLR2, 넥틴-2, CD112 또는 헤르페스바이러스 진입 매개인자 B (HVEB)로도 알려짐)의 서열을 도 2에 도시하였다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 PVRIG와 PVLR2의 결합이 차단되도록 PVRIG 세포외 도메인에 특이적이다.
PVRIG는 326개 아미노산 길이인 막통과 도메인 단백질이고, 신호 펩타이드 (아미노산 1번 내지 40번 범위), 세포외 도메인 (아미노산 41번 내지 171번 범위), 막통과 도메인 (아미노산 172번 내지190번 범위) 및 세포질 도메인 (아미노산 191번 내지 326번 범위)을 갖는다. 개시 코돈일 수 있는 2개의 메티오닌이 존재하지만, 성숙한 단백질은 동일하다.
따라서, 본원에서 용어 "PVRIG" 또는 "PVRIG 단백질" 또는 "PVRIG 폴리펩타이드"는 선택적으로, 본원에 기술된 공지된 또는 야생형 PVRIG를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 이러한 단백질 또는 이의 변이체, 접합체 또는 단편뿐만 아니라 PVRIG의 임의의 자연 발생 스플라이스 변이체, 아미노산 변이체 또는 이소형, 특히 ECD 단편을 포함할 수 있다.
본원에 기재되고 하기에서 보다 상세하게 설명되는 바와 같이, PVRIG에 결합하고 PVRL2에 의한 활성화를 방지하는 (예를 들어, 가장 공통적으로 PVRIG와 PVRL2의 상호작용을 차단함으로써) 항-PVRIG 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 T 세포 및/또는 NK 세포 활성화를 향상시키는 데 사용되며, 암 및 병원균 감염과 같은 질환을 치료하는 데 사용된다.
E. TIGIT 단백질
본 발명은 TIGIT 단백질에 특이적으로 결합하고 이의 리간드 단백질이고 폴리오바이러스 수용체 (CD155로도 불림)이며 인간 원형질막 당단백질인 PVR에 의한 활성화를 방지하는 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. TIGIT, 또는 Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체는 WUCAM, Vstm3 또는 Vsig9로도 알려진 공동억제 수용체 단백질이다. TIGIT는 면역글로불린 가변 도메인, 막통과 도메인 및 면역수용체 티로신-기반 억제성 모티프 (ITIM)를 가지며 PVR 단백질 패밀리의 서명 서열 요소를 포함한다. TIGIT 및 PVR의 세포외 도메인 (ECD) 서열을 도 22에 도시하였다. 본 발명의 항체는 TIGIT과 PVR의 결합이 차단되도록 TIGIT ECD에 특이적이다.
따라서, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "TIGIT" 또는 "TIGIT 단백질" 또는 "TIGIT 폴리펩타이드"는 선택적으로 본원에 기술된 바와 같은 공지된 또는 야생형 TIGIT를 포함하지만 이에 한정되지 않는 임의의 이러한 단백질 또는 이의 변이체, 컨쥬게이트 또는 단편뿐만 아니라 임의의 자연 발생 스플라이스 변이체, 아미노산 변이체 또는 이소형, 특히 TIGIT의 ECD 단편을 포함할 수 있다.
본원에 기재되고 하기에서 보다 상세하게 설명되는 바와 같이, TIGIT에 결합하고 PVR에 의한 활성화를 방지하는 (예를 들어, 가장 공통적으로 TIGIT과 PVR의 상호작용을 차단함으로써) 항-TIGIT 항체 (항원-결합 단편 포함)는 T 세포 및/또는 NK 세포 활성화를 향상시키는 데 사용되며, 암 및 병원균 감염과 같은 질환을 치료하는 데 사용된다.
V. 항체
하기에 논의되는 바와 같이, 용어 "항체"가 일반적으로 사용된다. 전통적인 항체 구조 단위는 전형적으로 사량체를 포함한다. 각 사량체는 일반적으로 폴리펩타이드 사슬의 2개의 동일한 쌍으로 구성되며, 각 쌍은 하나의 "경쇄" (전형적으로 약 25 kDa의 분자량을 가짐) 및 하나의 "중쇄" (전형적으로 약 50 내지 70 kDa의 분자량을 가짐)를 갖는다. 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 본 발명은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하나 이에 제한되지는 않는 여러 서브클래스를 갖는 IgG 클래스에 일반적으로 기반하는 단일클론 항체에 관한 것이다. 일반적으로 IgG1, IgG2 및 IgG4는 IgG3보다 자주 사용된다. IgG1은 356번 (D 또는 E) 및 358번 (L 또는 M)에서 다형성을 갖는 상이한 동종이인자형을 갖는 점을 주목해야 한다. 본원에 기술된 서열은 356D/358M 동종이인자형을 사용하지만, 다른 동종이인자형도 본원에 포함된다. 즉, 본원에 포함된 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 임의의 서열은 356D/358M 동종이인자형을 대체하는 356E/358L을 가질 수 있다. 용어 항체는 이중특이적 항체, 예를 들어 적어도 2개의 상이한 표적에 결합하는 항체를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 PVRIG 및 TIGIT에 결합하는 이중특이적 항체 (본원에서 항-TIGIT/항-PVRIG 이중특이적 항체로 지칭됨)이다.
각 사슬의 아미노-말단 부분은 항원 인식에 주로 관여하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하며, 일반적으로 당업계 및 본원에서 "Fv 도메인"또는 "Fv 영역"으로 지칭된다. 가변 영역에서, 3개의 루프가 중쇄 및 경쇄의 V 도메인 각각을 위해 모여서 항원-결합 부위를 형성한다. 각각의 루프는 아미노산 서열의 변화가 가장 유의한, 상보성 결정 영역 (이하, "CDR"로 지칭됨)으로 지칭된다. "가변"은 가변 영역의 특정 분절이 서열에 있어 항체 간에 광범위하게 상이하다는 사실을 의미한다. 가변 영역 내의 가변성은 고르게 분포되지 않는다. 대신에, V 영역은 각각 9 내지 15개 이상의 아미노산 길이인 "과가변 영역"으로 불리는 극단적 가변성의 더 짧은 영역으로 구분된 15 내지 30개 아미노산의 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 상대적으로 변하지 않는 스트레치로 구성된다.
각각의 VH 및 VL은 하기 순서로 아미노-말단으로부터 카르복시-말단까지 배열된 3개의 과가변 영역 ("상보성 결정 영역", "CDR") 및 4개의 FR로 구성된다: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4.
과가변 영역은 일반적으로 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기 약 24 내지 34번 (LCDR1; "L"은 경쇄를 표시함), 50 내지 56번 (LCDR2) 및 89 내지 97번 (LCDR3)로부터 및 중쇄 가변 영역에서 약 31 내지 35B번 (HCDR1; "H"는 중쇄를 표시함), 50 내지 65번 (HCDR2) 및 95 내지 102번 (HCDR3) 주변의 아미노산 잔기; Kabat 등, SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991) 및/또는 과가변 루프를 형성하는 이들 잔기들 (예를 들어, 경쇄 가변 영역에서 잔기 26 내지 32번 (LCDR1), 50 내지 52번 (LCDR2) 및 91 내지 96번 (LCDR3) 및 중쇄 가변 영역에서 26 내지 32번 (HCDR1), 53 내지 55번 (HCDR2) 및 96 내지 101번 (HCDR3)); Chothia 및 Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917을 포괄한다. 본 발명의 특이적 CDR은 하기에 기술된다.
당업자라면 이해할 바와 같이, CDR의 정확한 넘버링 및 배치는 상이한 넘버링 시스템 간에 상이할 수 있다. 그러나, 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄의 개시는 연관된 (고유의) CDR의 개시를 포함하는 것으로 이해해야 한다. 따라서, 각 가변 중쇄 영역의 개시는 vhCDR (예를 들어, vhCDR1, vhCDR2 및 vhCDR3)의 개시이며 각 가변 경쇄 영역의 개시는 vlCDR (예를 들어, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3)의 개시이다. CDR 넘버링의 유용한 비교는 하기와 같으며, Lafranc 등, Dev. Comp. Immunol. 27 (1):55-77 (2003)을 참조한다.
본원 전반에 걸쳐, 가변 영역 (대략, 경쇄 가변 영역의 잔기 1 내지 107번 및 중쇄 가변 영역의 잔기 1 내지 113번) 및 힌지의 잔기를 언급할 때 카밧 넘버링 시스템이 일반적으로 사용되고, Fc 영역의 경우 EU 넘버링 시스템이 사용된다 (예를 들어, Kabat 등, 상기 (1991)).
본 발명은 매우 많은 상이한 CDR 세트를 제공한다. 이 경우에, "완전 CDR 세트"는 3개의 가변 경쇄 및 3개의 가변 중쇄 CDR, 예를 들어 vlCDR1, vlCDR2, vlCDR3, vhCDR1, vhCDR2 및 vhCDR3을 포함한다. 이들은 각각 더 큰 가변 경쇄 또는 가변 중쇄 도메인의 일부일 수 있다. 또한, 본원에서 보다 완전하게 설명된 바와 같이, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 도메인은 중쇄 및 경쇄가 사용될 때 별도의 폴리펩타이드 사슬 상에 존재할 수 있거나, 또는 scFv 서열의 경우 단일 폴리펩타이드 사슬 상에 존재할 수 있다.
CDR은 항원-결합, 보다 구체적으로는 항체의 에피토프 결합 부위의 형성에 기여한다. "에피토프"는 파라토프 (paratope)로 알려진 항체 분자의 가변 영역에서 특이적 항원 결합 부위와 상호작용하는 결정기를 의미한다. 에피토프는 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 그룹화이며 보통 특이적 전하 특징뿐만 아니라 특이적 구조적 특징을 갖는다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.
에피토프는 특이적 항원 결합 펩타이드에 의해 효과적으로 차단되는 아미노산 잔기와 같은, 결합에 직접 관여하는 아미노산 잔기 (에피토프의 면역우세 성분으로도 불림) 및 결합에 직접 관여하지 않는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있고; 달리 말하면 아미노산 잔기는 특이적 항원 결합 펩타이드의 자국 내에 있다.
에피토프는 입체구조 또는 선형일 수 있다. 입체구조적 에피토프는 선형 폴리펩타이드 사슬의 상이한 분절로부터 공간적으로 병치된 아미노산에 의해 생산된다. 선형의 에피토프는 폴리펩타이드 사슬에서 인접한 아미노산 잔기에 의해 생산된 것이다. 입체구조적 및 비-입체구조적 에피토프는 변성 용매 존재시 후자에 대한 결합은 아니지만 전자에 대한 결합이 손실되는 점에서 구별될 수 있다.
에피토프는 전형적으로 독특한 공간 입체구조에서 적어도 3개, 보다 일반적으로 적어도 5 또는 8 내지 10개 아미노산을 포함한다. 동일한 에피토프를 인식하는 항체는 표적 항원에 대한 다른 항체의 결합을 차단하는 하나의 항체의 능력, 예를 들어 "비닝 (binning)"을 보여주는 단순한 면역측정법으로 입증될 수 있다. 하기에 개략된 바와 같이, 본 발명은 본원에 열거된 항원 결합 도메인 및 항체를 포함할 뿐만 아니라 열거된 항원 결합 도메인에 의해 결합된 에피토프와의 결합을 경쟁하는 것들을 포함한다.
각 사슬의 카르복시-말단 부분은 주로 효과기 기능을 담당하는 불변 영역을 정의한다. 카밧 등은 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 수많은 1차 서열을 수집하였다. 서열의 보존 정도에 기반하여, 이들은 개별 1차 염기 서열을 CDR 및 프레임워크로 분류하고 이의 목록을 작성하였다 (SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th edition, NIH publication, No. 91-3242, E.A. Kabat 등 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조).
면역글로불린의 IgG 서브클래스에는 중쇄의 여러 면역글로불린 도메인이 존재한다. 본원에서 "면역글로불린 (Ig) 도메인"은 별개의 3차 구조를 갖는 면역글로불린의 영역을 의미한다. 본 발명에서 흥미로운 것은 불변 중쇄 (CH) 도메인 및 힌지 도메인을 포함하는 중쇄 도메인이다. IgG 항체의 맥락에서, IgG 이소타입은 각각 3개의 CH 영역을 갖는다. 따라서, IgG의 맥락에서 "CH" 도메인은 다음과 같다: "CH1"은 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 118 내지 220번 위치를 의미한다. "CH2"는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 237 내지 340번 위치를 의미하고, "CH3"은 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 341 내지 447번 위치를 의미한다.
중쇄의 또 다른 유형의 Ig 도메인은 힌지 영역이다. 본원에서 "힌지" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역" 또는 "면역글로불린 힌지 영역"은 항체의 제1 및 제2 불변 도메인 사이의 아미노산을 포함하는 가요성 폴리펩타이드를 의미한다. 구조적으로, IgG CH1 도메인은 EU 220번 위치에서 종결되고, IgG CH2 도메인은 EU 237번 잔기 위치에서 시작된다. 따라서 IgG의 경우, 항체 힌지는 본원에서 221번 (IgG1에서 D221) 내지 236번 (IgG1에서 G236) 위치를 포함하도록 정의되며, 넘버링은 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따른다.
경쇄는 일반적으로 2개의 도메인, 즉, 가변 경쇄 도메인 (경쇄 CDR을 Fv 영역을 형성하는 가변 중쇄 도메인과 함께 포함함) 및 불변 경쇄 영역 (종종 CL 또는 Cκ로 지칭됨)을 포함한다. 일반적으로, 불변 람다 또는 불변 카파 도메인 둘 중 하나가 사용될 수 있으며, 람다가 일반적으로 본 발명에서 용도를 찾는다.
하기에 개략된 추가적인 치환을 위한 또 다른 관심 영역은 Fc 영역이다.
A. 키메라 및 인간화 항체
일부 구현예에서, 본원의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 상이한 종으로부터의 혼합물, 예를 들어, 키메라 항체 및/또는 인간화 항체로부터 유래될 수 있다. 일반적으로, "키메라 항체" 및 "인간화 항체"는 하나 이상의 종으로부터의 영역을 조합하는 항체를 의미한다. 예를 들어, "키메라 항체"는 통상적으로 마우스 (또는 일부 경우에 래트)로부터의 가변 영역(들) 및 인간으로부터의 불변 영역(들)을 포함한다. "인간화 항체"는 일반적으로 가변-도메인 프레임워크 영역을 인간 항체에서 발견되는 서열로 교체한 비인간 항체를 의미한다. 일반적으로, 인간화 항체에서, CDR을 제외한 전체 항체는 인간 기원의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되거나 CDR 내를 제외하고 이러한 항체와 동일하다. 일부 또는 전부가 비인간 유기체에서 기원한 핵산에 의해 인코딩되는 CDR이 인간 항체 가변 영역의 베타-시트 프레임워크에 이식되어 항체를 생성하며, 항체의 특이성은 이식된 CDR에 의해 결정된다. 이러한 항체의 생성은 예를 들어, WO 92/11018, Jones, 1986, Nature 321:522-525, Verhoeyen 등, 1988, Science 239:1534-1536에 기술되어 있고, 이들 문헌은 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함된다. 선택된 수용체 프레임워크 잔기의 상응하는 공여자 잔기로의 "역돌연변이 (backmutation)"는 초기 이식된 구조물에서 손실된 친화성을 회복하기 위해 종종 요구된다 (US 5530101; US 5585089; US 5693761; US 5693762; US 6180370; US 5859205; US 5821337; US 6054297; US 6407213 (이들 모두는 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)). 인간화 항체는 또한 최적으로 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부, 보통은 전부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 일부를 포함할 것이고, 따라서 전형적으로 인간 Fc 영역을 포함할 것이다. 인간화 항체는 또한 유전자 조작된 면역계를 가진 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. Roque 등, 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨). 비인간 항체를 인간화하여 재성형하기 위한 다양한 기법 및 방법이 당업계에 널리 공지되어 있다 (Tsurushita & Vasquez, 2004, Humanization of Monoclonal Antibodies, Molecular Biology of B Cells, 533-545, Elsevier Science (USA) 및 이에 인용된 참고문헌 (이들 문헌의 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조). 인간화 방법은 Jones 등, 1986, Nature 321:522-525; Riechmann 등, 1988; Nature 332:323-329; Verhoeyen 등, 1988, Science, 239:1534-1536; Queen 등, 1989, Proc Natl Acad Sci, USA 86:10029-33; He 등, 1998, J. Immunol. 160:1029-1035; Carter 등, 1992, Proc Natl Acad Sci USA 89:4285-9, Presta 등, 1997, Cancer Res. 57 (20):4593-9; Gorman 등, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:4181-4185; O'Connor 등, 1998, Protein Eng 11:321-8 (이들 문헌의 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 기술된 방법들을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 인간화 또는 비인간 항체 가변 영역의 면역원성을 감소시키는 다른 방법은, 예를 들어 Roguska 등, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:969-973 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 기술된 바와 같이 재표면화 방법을 포함할 수 있다.
따라서, 본원에 열거된 임의의 항체로부터의 vhCDR 및 vlCDR은 인간화 (또는 이미 인간화 것들에 대해 "재인간화")될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 특정 생식계열 중쇄 면역글로불린 유전자로부터의 중쇄 가변 영역 및/또는 특정 생식계열 경쇄 면역글로불린 유전자로부터의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 예를 들어, 이러한 항체는 특정 생식계열 서열의 "산물"인 또는 "이로부터 유래된" 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 항체를 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 인간 생식계열 면역글로불린 서열의 "산물"인 또는 "이로부터 유래된" 인간 항체는 인간 항체의 아미노산 서열을 인간 생식계열 면역글로불린의 아미노산 서열과 비교하고 인간 항체의 서열과 가장 가까운 서열 (예를 들어, 가장 높은 동일성 %)의 인간 생식계열 면역글로불린 서열을 선택함으로써 식별될 수 있다. 특정 인간 생식계열 면역글로불린 서열의 "산물"인 또는 "이로부터 유래된" 인간 항체는 예를 들어 자연 발생 체세포 돌연변이 또는 부위-특이적 돌연변이의 의도적인 도입으로 인해 생식계열 서열과 비교하여 아미노산 차이를 포함할 수 있다. 그러나, 인간화 항체는 전형적으로 인간 생식계열 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과, 아미노산 서열에 있어, 적어도 90% 동일하고 다른 종의 생식계열 면역글로불린 아미노산 서열 (예를 들어, 마우스 생식계열 서열)과 비교할 때 항체를 인간 서열로부터 유래된 것으로 식별하는 아미노산 잔기를 포함한다. 특정 경우에서, 인간화 항체는 CDR을 제외한 생식계열 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 아미노산 서열이 적어도 95, 96, 97, 98 또는 99% 또는 심지어 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있다. 즉, CDR은 마우스의 것일 수 있지만, 가변 영역 (중쇄 또는 경쇄)의 프레임워크 영역은 하나의 인간 생식계열 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩되는 프레임워크 아미노산과 아미노산 서열이 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있다.
전형적으로, 특정 인간 생식계열 서열로부터 유래된 인간화 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 10 내지 20개 이하의 아미노산 차이를 나타낼 것이다. 특정 경우에서, 상기 인간화 항체는 생식계열 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 5개 이하 또는 심지어 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 차이를 나타낼 수 있다 (다시 말하면, 본원의 임의의 변이체의 도입 전에; 즉, 변이체의 수가 일반적으로 작음).
일 구현예에서, 상기 모체 항체는 당업계에 공지된 바와 같이 친화성이 성숙되어 있다. 구조-기반 방법이 예를 들어 USSN 11/004,590에 기술된 바와 같이 인간화 및 친화성 성숙을 위해 사용될 수 있다. 선택 기반 방법이 항체 가변 영역을 인간화하고/거나 친화성 성숙시키기 위해 사용될 수 있고, 이는 Wu 등, 1999, J. Mol. Biol. 294:151-162; Baca 등, 1997, J. Biol. Chem. 272 (16):10678-10684; Rosok 등, 1996, J. Biol. Chem. 271 (37):22611-22618; Rader 등, 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:8910-8915; Krauss 등, 2003, Protein Engineering 16 (10):753-759에 기술된 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다른 인간화 방법은 CDR의 일부만의 이식을 수반할 수 있고, 본원에서 모두 전문이 참고문헌으로 인용되는 미국 특허 USSN 09/810,510; Tan 등, 2002, J. Immunol. 169:1119-1125; De Pascalis 등, 2002, J. Immunol. 169:3076-3084 (이들 문헌의 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 기술된 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
B. 선택적 항체 조작
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 아미노산 치환에 의해 아미노산 서열을 변경시키도록 변형되거나 조작될 수 있다. 본원에서 논의된 바와 같이, 아미노산 치환은 항체의 추가적인 기능적 성질을 변경시키는 것뿐만 아니라 단백질 (예를 들어, TIGIT 또는 PVRIG, 결합의 증가 및 감소 모두 포함)에 대한 CDR의 친화성을 변경시킬 수 있다. 예를 들어, 항체는 전형적으로 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원-의존성 세포 세포독성과 같은 항체의 하나 이상의 기능적 성질을 변경하기 위해 Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 또한, 본 발명의 적어도 일부 구현예에 따른 항체는 화학적으로 변형될 수 있거나 (예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음), 이의 글리코실화를 변경하도록, 다시 말하면 항체의 하나 이상의 기능적 성질을 변경하도록 변형될 수 있다. 이러한 구현예는 하기에서 추가로 기술된다. Fc 영역에서 잔기의 넘버링은 카밧의 EU 인덱스의 넘버링이다.
일 구현예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역에서 시스테인 잔기의 수가 변경되도록, 예를 들어 증가되거나 감소되도록 변형된다. 이 접근법은 Bodmer 등의 미국 특허 제5,677,425호에 추가로 설명된다. CH1의 힌지 부위의 시스테인 잔기의 수는 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하거나 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키도록 변경된다.
또 다른 구현예에서, 특히 IgG4 불변 도메인이 사용되는 경우, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 생체내 Fab 팔 교환을 배제하기 위해 변형될 수 있다. 구체적으로, 이 과정은 기능적으로 1가인 이중특이적 항체를 효과적으로 생성하는 다른 IgG4 항체들 간에 IgG4 분자-절반 (하나의 중쇄와 하나의 경쇄)의 교환을 수반한다. 중쇄의 힌지 부위 및 불변 도메인의 돌연변이는 이러한 교환을 막을 수 있다 (Aalberse, RC, Schuurman J., 2002, Immunology 105:9-19 참조). 본원에 개략된 바와 같이, 본 발명에서 특정 용도를 찾은 돌연변이는 IgG4 불변 도메인의 맥락에서 S241P이다. IgG4는 유의한 효과기 기능을 갖지 않으며 따라서 세포 고갈 없이 리간드에 대한 수용체 결합 (예를 들어 PVRIG와 PVRL2 또는 TIGIT와 PVR)을 차단하는 데 사용되므로, 본 발명에서 용도를 발견한다.
일부 구현예에서, 일반적으로 FcγR 수용체에 대한 결합을 변경하기 위해, Fc 영역에서 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 본원에서 "Fc 감마 수용체", "FcγR" 또는 "Fc감마R"은 IgG 항체 Fc 영역에 결합하고 FcγR 유전자에 의해 인코딩되는 단백질 패밀리의 임의의 구성원을 의미한다. 인간에서 이 패밀리는 이소형 FcγRIa, FcγRIb 및 FcγRIc를 포함하는 FcγRI (CD64); 이소형 FcγRIIa (동종이인자형 H131 및 R131 포함), FcγRIIb (FcγRIIb-1 및 FcγRIIb-2 포함) 및 FcγRIIc를 포함하는 FcγRII (CD32); 및 이소형 FcγRIIIa (동종이인자형 V158 및 F158 포함) 및 FcγRIIIb (동종이인자형 FcγRIIIb-NA1 및 FcγRIIIb-NA2 포함)을 포함하는 FcγRIII (CD16) (Jefferis 등, 2002, Immunol Lett 82:57-65 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨))뿐만 아니라 임의의 발견되지 않은 인간 FcγR 또는 FcγR 이소형 또는 동종이인자형을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. FcγR은 인간, 마우스, 래트, 토끼 및 원숭이를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 유기체로부터 유래될 수 있다. 마우스 FcγR은 임의의 발견되지 않은 마우스 FcγR 또는 FcγR 이소형 또는 동종이인자형뿐만 아니라 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32), FcγRIII-1 (CD16) 및 FcγRIII-2 (CD16-2)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
하나 이상의 FcγR 수용체에 대한 결합을 변경하기 위해 이루어질 수 있는 다수의 유용한 Fc 치환이 존재한다. 증가된 결합뿐만 아니라 감소된 결합을 유도하는 치환이 유용할 수 있다. 예를 들어, FcγRIIIa에 대한 증가된 결합은 일반적으로 증가된 ADCC (항체 의존성 세포-매개 세포독성; FcγR을 발현하는 비특이적 세포독성 세포가 표적 세포 상의 결합된 항체를 인식하고 이어서 표적 세포의 용해를 유발하는 세포-매개 반응)를 유도하는 것으로 알려져 있다. 유사하게, FcγRIIb (억제 수용체)에 대한 감소된 결합은 일부 상황에서 마찬가지로 유익할 수 있다. 본 발명에서 용도를 찾은 아미노산 치환은 미국 특허 제11/124,620호 (특히 도 41) 및 미국 특허 제6,737,056호 (이들 문헌의 전체 내용이, 특히 그에 개시된 변이체들에 대해, 원용에 의해 본원에 명확히 포함됨)에 나열된 것들을 포함한다.
또 다른 예에서, Fc 영역은 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 항체 의존성 세포독성 (ADCC)을 매개하는 능력을 증가시키고/거나 Fcγ 수용체에 대한 상기 항체의 친화성을 증가시키고/거나 FcRn 결합을 증가시키도록, 하기 위치에서 하나 이상의 아미노산을 변형시킴으로써 변형된다: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 또는 439번. 이러한 접근법은 Presta의 PCT 공보 제WO 00/42072호에 추가로 기술되어 있다. 또한, FcγRI, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 대한 인간 IgG1 상의 결합 부위가 매핑되었고 개선된 결합을 갖는 변이체가 기술되어 있다 (Shields, R. L. 등 (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604 참조). 256, 290, 298, 333, 334 및 339번 위치에서의 특이적 돌연변이는 FcγRIII에의 결합을 개선하는 것으로 확인된다. 또한, 하기 조합 돌연변이체는 FcγRIII 결합을 개선하는 것으로 확인된다: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A 및 S298A/E333A/K334A. 또한, M252Y/S254T/T256E 또는 M428L/N434S와 같은 돌연변이는 FcRn과의 결합을 개선시키고 항체 순환 반감기를 증가시킨다 (Chan CA 및 Carter PJ (2010) Nature Rev Immunol 10:301-316 참조).
또한, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 항체는 이의 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근법이 가능한다. 예를 들어, Ward의 미국 특허 제6,277,375호에 기술된 바와 같이 하기 돌연변이 중 하나 이상이 도입될 수 있다: T252L, T254S, T256F. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 항체는 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경되어 Presta 등의 미국 특허 제5,869,046호 및 제6,121,022호에서 기술된 바와 같이, IgG의 Fc 영역의 CH2 영역의 2개의 루프로부터 가져온 구제 수용체 결합 에피토프를 포함할 수 있다. 혈청 반감기를 증가시키기 위한 추가적인 돌연변이가 미국 특허 제8,883,973호, 제6,737,056호 및 제7,371,826호에 개시되어 있으며, 428L, 434A, 434S 및 428L/434S를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 글리코실화가 변형될 수 있다. 예를 들어, 미글리코실화된 항체가 제조될 수 있다 (예를 들어, 상기 항체는 글리코실화가 결여됨). 글리코실화는 예를 들어 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키거나 ADCC와 같은 효과기 기능을 감소시키도록 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위, 예를 들어 N297을 변경시킴으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위를 제거하고 이로써 해당 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있으며, 일부 구현예에서, 알라닌 대체가 사용된다.
추가적으로 또는 대안적으로, 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화된 항체 또는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 갖는 항체와 같은 변형된 유형의 글리코실화를 갖는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 양상은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어 변경된 글리코실화 메커니즘을 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변형된 글리코실화 메커니즘을 갖는 세포는 당업계에 기술되어 왔으며, 본 발명의 적어도 일부 구현예에 따라 재조합 항체를 발현하여 변경된 글리코실화를 갖는 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공보 제20040110704호 및 WO 2003/035835 참조.
본 발명에 의해 고려되는 본원의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 또 다른 변형은, 예를 들어 반감기를 향상시키기 위한 PEG화 또는 다른 수용성 모이어티, 전형적으로 중합체의 첨가이다. 항체는 예를 들어 당업계에 공지된 바와 같이 항체의 생물학적 (예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시키기 위해 PEG화될 수 있다.
FcγR 및/또는 FcRn에 대한 결합 친화성을 변경시키고/거나 생체내 혈청 반감기를 증가시키기 위해 수행된 치환에 추가하여, 하기에서 더 자세히 기술되는 바와 같이 추가적인 항체 변형이 이루어질 수 있다.
일부 경우에는 친화성 성숙이 수행된다. CDR의 아미노산 변형은 때때로 "친화성 성숙"으로 지칭된다. "친화성 성숙된" 항체는 하나 이상의 CDR에서 하나 이상의 변경(들)을 갖고, 이로 인해 이들 변경(들)을 소유하지 않는 모체 항체와 비교하여 항원에 대한 항체의 친화성의 개선을 갖는 항체이다. 일부 경우에서, 항원에 대한 항체의 친화성을 감소시키는 것이 바람직할 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 CDR 중 하나 이상에서 (예를 들어, PVRIG CDR 또는 TIGIT CDR에) 이루어진다. 일반적으로, 임의의 단일 CDR에서 단지 1 또는 2 또는 3개 아미노산이 치환되고, 일반적으로, 6개의 CDR (예를 들어, vhCDR1-3 및 vlCDR1-3)의 한 세트에서 1, 2, 3. 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 변경이 이루어진다. 그러나, 임의의 CDR에서 치환 없음, 1, 2 또는 3개 치환의 임의의 조합은 독립적으로 및 선택적으로 임의의 다른 치환과 조합될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
친화성 성숙은 항원에 대한 항체의 결합 친화성을 "모체" 항체와 비교하여 적어도 약 10% 내지 50-100-150% 또는 그 초과, 또는 1 내지 5배로 증가시키도록 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 친화성 성숙된 항체는 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 수준의 친화성을 가질 것이다. 친화성 성숙된 항체는 공지된 절차에 의해 생산된다. 친화성과 효능의 상관 관계가 하기에서 논의된다.
대안적으로, 아미노산 변형은 "침묵 (silent)"하는, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 친화성을 유의하게 변경시키지 않는 본 발명의 항체의 CDR 중 하나 이상에서 이루어질 수 있다. 이들은 (본 발명의 항체를 인코딩하는 핵산에 대해 수행될 수 있는 바와 같이) 발현의 최적화를 비롯한 다수의 이유를 위해 이루어질 수 있다.
따라서, 본 발명의 CDR 및 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 정의 내에 변이체 CDR 및 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 포함되고; 즉, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 본 발명의 열거된 항체의 CDR 중 하나 이상에서 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 또한, 하기에 개략된 바와 같이, 아미노산 변형은 또한 프레임워크 및 불변 영역을 비롯한 CDR 외부의 임의의 영역에서 독립적으로 및 선택적으로 이루어질 수 있다.
VI. 본 발명의 항-PVRIG, 항-TIGIT 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체
본 발명은 이중특이적 항-PVRIG/항-TIGIT 항체 뿐만 아니라 항-PVRIG 및/또는 항-TIGIT 항체를 제공한다. (편의상, "항-PVRIG/항-TIGIT 항체" 및 "이중특이적 PVRIG/TIGIT 항체" 및 "항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체"는 상호교환적으로 사용된다). 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 인간 TIGIT, 바람직하게는 인간 TIGIT의 ECD뿐만 아니라 PVRIG, 바람직하게는 인간 PVRIG의 ECD에 특이적으로 결합한다. 본 발명은 또한 TIGIT에 결합하는 12개 CDR, 6개 CDR 및 PVRIG에 결합하는 6개 CDR의 다수의 특이적인 열거된 세트를 함유하는 전장 항체를 포함하는 항원 결합 도메인을 추가로 제공한다.
본 발명은 또한 단일특이적 항체 또는 이중특이적 항체의 맥락 내에 있을 수 있는 항-PVRIG 항체를 제공한다. 이러한 항체는 하기를 포함한다:
PVRIG에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는 굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨)
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTDYN INWVRQAPGQGLEWMGY IYPYIGGS GYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC AREDKTARNAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 3179)
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVS ENIYDV LAWYQQKPGKAPKLLIY EAT NLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 3180)
본 발명은 또한 단일특이적 항체 또는 이중특이적 항체의 맥락 내에 있을 수 있는 항-TIGIT 항체를 제공한다. 이러한 항체는 하기를 포함한다:
TIGIT에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는 굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨)
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYI MSWVRQAPGKGLEWVAT ISGGSKGQ YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AKWLLSYYAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 1664)
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRAS QSMAIW LSWYQQKPGKAPKLLIY KAS KSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQGQSYPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 1668)
PVRIG 및/또는 TIGIT 또는 PVRIG 및/또는 TIGIT 에피토프에 대한 특이적 결합은 예를 들어 적어도 약 10-4 M, 적어도 약 10-5 M, 적어도 약 10-6 M, 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 적어도 약 10-12 M, 적어도 약 10-13 M, 적어도 약 10-14 M, 적어도 약 10-15 M, 또는 그 초과의 KD를 갖는 항체에 의해 나타날 수 있고, 여기서 KD는 독립적으로 각 항원에 대한 특정 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 지칭한다. 전형적으로, 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 TIGIT 항원 또는 에피토프에 대비해 대조군 분자에 대해 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5,000-, 10,000배 또는 그 초과의 KD를 가질 것이다.
그러나, NK 및 T-세포의 표면 상에 발현된 PVRIG 및/또는 TIGIT에 대한 최적의 결합의 경우, 상기 항체는 바람직하게는 50 nM 미만, 가장 바람직하게는 1 nM 미만의 KD를 갖고, 0.1 nM 미만 및 1 pM 미만이 본 발명의 방법에서 용도를 찾는다.
또한, 특정 항원 또는 에피토프에 대한 특이적 결합은, 예를 들어, 대조군에 대비해 PVRIG 및/또는 TIGIT 항원 또는 에피토프에 대해 적어도 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5,000- 또는 10,000배 또는 그 초과의 ka (결합 속도 상수로 지칭됨)를 갖는 항체에 의해 나타날 수 있고, 여기서 ka는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도 상수를 지칭한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 인간 TIGIT 및/또는 인간 PVRIG에 100 nM 이하, 50 nM 이하, 10 nM 이하, 또는 1 nM 이하 (즉, 높은 결합 친화성), 또는 1 pM 이하의 KD로 결합하고, 여기서 KD는 공지된 방법, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 (SPR, 예를 들어 비아코어 분석), ELISA, KINEXA, 가장 전형적으로는 25℃ 또는 37℃에서의 SPR에 의해 측정된다.
A. 이중특이적 및/또는 이종이량체 항체
따라서, 본 발명은, 자가 조립되어 이종이량체인 Fc 도메인 및 이종이량체 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)인 항체를 형성하는, 2개의 상이한 중쇄 변이체 Fc 서열의 사용에 의존하는 이중특이적 PVRIG 및 TIGIT 체크포인트 항체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 PVRIG 및 TIGIT 둘 모두에의 결합을 허용하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. 본원에 기술된 항체 구조물은 2개의 중쇄로부터의 2개의 Fc 도메인이 자가 조립 및 쌍을 이루어 (예를 들어, 2개의 Fc 도메인. 상기 2개의 Fc 도메인을 포함하는 2개의 가변 영역 및/또는 2개의 중쇄) 이량체로 조립되는 것을 기반으로 한다. 일부 구현예에서, 각 단량체의 아미노산 서열은 이량체로의 단량체의 조립을 용이하게 하기 위해 변경된다. 일부 구현예에서, 이들 아미노산 변이체 및/또는 변경은 불변 영역에 존재한다. 일부 구현예에서, 상기 아미노산 변이체는, 동종이량체 조립과 비교하여 이종이량체 조립을 촉진 및/또는 용이하게 하기 위해, 각 불변 영역에 있어 상이하다. 이중특이적 항체에 대한 수많은 방법 및 형식이 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, Godar 등, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 28(3):251-276 (2018) and Brinkmann and Kontermann, The making of bispecific antibodies, MAbs, 9(2): 182-212 (2017) (두 문헌 모두 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조).
하기에 제공된 바와 같이, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 이종이량체 항체는, 각각 상이한 체크포인트 단백질, 특히 PVRIG 및 TIGIT에 결합하는 2개의 항원 결합 도메인 (ABD)을 포함한다. 이들 이종이량체 항체는 이중특이적이고 2가 (각 항원은 예를 들어 단일 ABD에 의해 결합됨)이거나, 또는 이중특이적이고 3가 (하나의 항원은 단일 ABD에 의해 결합되고, 다른 것은 2개의 ABD에 의해 결합됨)일 수 있다. 본원에 나열된 모든 가변 중쇄 도메인 및 경쇄 도메인에 대해, 추가적인 변이체가 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 본원에 나열된 가변 중쇄 및 경쇄 도메인 및/또는 사슬 중 임의의 것으로부터의, 예를 들어 도 4, 7, 8, 11, 12, 15, 16, 17, 23, 24, 40, 및 41의 것의, ABD를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 본원에 나열된 가변 중쇄 및 경쇄 도메인 및/또는 사슬 중 임의의 것으로부터의, 예를 들어 도 4, 7, 8, 11, 12, 15, 16, 17, 23, 24, 40, 및 41의 것의, CDR을 포함할 수 있다. 하기에 개략된 것처럼, 일부 구현예에서, (CDR을 배제한) 프레임워크가 인간 생식계열 서열과 적어도 약 80%, 85% 또는 90%의 동일성을 보유하는 한, 6개의 CDR의 세트는 0개, 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형 (아미노산 치환이 특히 사용됨)뿐만 아니라 가변 중쇄 및 경쇄 도메인의 프레임워크 영역에서의 변화를 가질 수 있다. 따라서, 예를 들어, 프레임워크 영역이 인간 생식계열 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90%의 동일성을 보유하는 한, 본원에 기술된 동일한 CDR들은 인간 생식계열 서열과 상이한 프레임워크 서열과 조합될 수 있다. 대안적으로, 프레임워크 영역이 인간 생식계열 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90%의 동일성을 보유하는 한, CDR은 아미노산 변형 (예를 들어, CDR의 세트에서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 변형 (즉, 6개의 CDR의 세트에서 변화의 총 수가 6개 미만의 아미노산 변형인 한 CDR이 변형될 수 있고, CDR의 임의의 조합은 변하고; 예를 들어 vlCDRl에서 1개의 변화, vhCDR2에서 2개의 변화, vhCDR3에서의 무변화 등이 있음))을 가질 뿐만 아니라, 프레임워크 영역 변화를 가질 수 있다.
본 발명은 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. 이중특이적 항체는 일반적으로, 숙주 세포에서 각 중쇄 및 경쇄에 대한 유전자를 발현함으로써 제조된다. 이는 일반적으로, 목적하는 이종이량체 (A-B)뿐만 아니라 2개의 동종이량체 (A-A 및 B-B (경쇄 이종이량체 문제를 포함하지 않음))를 형성시킨다.
동종이량체 및 이종이량체 항체 형성을 둘러싼 문제 (및 정제 도중 상기 둘의 분리에 관한 문제)를 해결하기 위해, 동종이량체 형태가 아닌 이종이량체 형태로 자가 조립을 편향시키는 방법이 개발되어 왔다. 이종이량체 항체, 특히 도 4, 7, 8, 11, 12, 15, 16, 17, 23, 24, 40, 및 41의 것들을 비롯한, 본 발명의 PVRIG 및 TIGIT 항체 서열을 사용하는 이종이량체를 생성하기 위해 다수의 메커니즘 및 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 도 26, 40 및 41에 제공된 서열 (서열 번호 3213-3612)을 포함한다. 일부 구현예에서, 높은 백분율의 이종이량체화를 보장하기 위해 메커니즘들 및 방법들이 조합된다.
이종이량체화 변이체를 촉진할 수 있는 변이체 (때때로 "이종이량체화 변이체"로 지칭됨)는 입체 변이체 (예를 들어, 도 25, 42, 및 43에 예로서 제공된 "놉 앤 홀 (knobs and holes)" 또는 하기에 기술된 "왜곡 (skew)" 변이체 및 하기에 기술된 "전하 쌍 (charge pairs)" 변이체), 및 "pi 변이체"를 포함할 수 있으며, 이는 이종이량체로부터의 동종이량체의 정제를 가능하게 한다. 이러한 방법은 WO1996/027011 및 WO2014/145806을 비롯한 다양한 특허 공보에 기술되어 있으며, 이들은 "이종이량체화 변이체"에 대한 논의에 대해 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함되고, 이종이량체화를 위한 유용한 메커니즘은 "놉 앤 홀 (knobs and holes)" ("KIH"; 때때로 본원에서, WO2006/106905 또는 WO2014/145806에 기술된 "왜곡" 변이체, "정전기 스티어링 (electrostatic steering)" 또는 "전하 쌍", WO 2007/114325 또는 WO2014/145806, 및 WO2017/218707, 및 WO2018045110에 기술된 pi 변이체)를 포함하며, 이들 문헌은 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함된다.
1. 이종이량체화 변이체
본 발명은 다양한 형식의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공하고, 이는 동종이량체로부터의 이종이량체 형성 및/또는 정제를 가능하게 하기 위해 이종이량체 변이체를 사용한다.
이종이량체화 왜곡 변이체의 세트의 다수의 적절한 쌍이 존재한다. 이들 변이체는 "세트"의 "쌍"으로 나타난다. 일부 구현예에서, 상기 쌍의 한 세트는 제1 단량체에 혼입되고, 상기 쌍의 다른 세트는 제2 단량체에 혼입된다. 일부 구현예에서, 이들 세트가 반드시 하나의 단량체 상의 잔기와 다른 하나의 단량체 상의 잔기 사이에서 일대일 대응을 갖는 "놉 인 홀 (knobs in holes)" 변이체로서 거동할 필요가 없으며, 그보다, 이들 세트 쌍은, 이종이량체 형성을 유리하게 하고 동종이량체 형성을 불리하게 하는 상기 2개의 단량체 사이의 계면을 형성하여, 생물학적 조건하에 자발적으로 형성되는 이종이량체의 백분율이 예상되는 50% (25%의 동종이량체 A/A:50%의 이종이량체 A/B:25%의 동종이량체 B/B)가 아니라 90%를 초과하는 것을 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 형성된 이종이량체의 백분율은 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과 또는 99% 초과이다.
일부 구현예에서, 이종이량체의 형성은 입체 변이체의 첨가에 의해 용이하게 될 수 있다. 일부 구현예에서, 각 중쇄에서 아미노산을 변경시키면, 상이한 중쇄들은 동일한 Fc 아미노산 서열을 갖는 동종이량체를 형성하기보다 (예를 들어, HC/HC 미스페어링 (mispairing)을 방지하기 위해) 이종이량체 구조를 형성하기 위해 결합할 가능성이 높다. 적합한 입체 변이체는 당업계에 공지되어 있으며 하기에서 더 상세히 논의된다.
일부 구현예에서, 이종이량체 형성을 촉진하고 동종이량체 형성을 선호하지 않는 입체적 영향을 생성하는 아미노산 조작을 지칭하는, "놉 앤 홀" 또는 "놉 인투 홀"로 지칭되는 메커니즘이 또한 선택적으로 사용될 수 있으며, 이는 때때로 "놉 앤 홀"로도 지칭되며, 이는 Ridgway 등, Protein Engineering 9(7):617 (1996); Atwell et al, J. Mol. Biol. 1997 270:26; US Patent No. 8,216,805; 및 WO1996/027011에 기술되어 있고, 이들 모두는 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함된다. 일부 구현예에서 "놉"은 CH3 도메인 a 변이체인 T366Y를 지칭하고, "홀"은 CH3 도메인 b 변이체인 Y407T를 지칭한다. 일부 구현예에서 "놉"은 CH3 도메인 a 변이체인 S354C/T366W를 지칭하고, "홀"은 CH3 도메인 b 변이체인 Y349C/T366S/L368A/Y407V를 지칭한다. 또한, Merchant 등, Nature Biotech. 16:677 (1998)에 기술된 바와 같이, 이들 "놉 앤 홀" 돌연변이는 이황화 결합과 조합되어 왜곡 형성을 이종이량체화로 편향되게 할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 한 세트의 치환을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 다른 세트의 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 "놉" 치환을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 "홀" 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 TIGIT 결합 부분은 "놉" 치환을 포함하고 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 "홀" 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 치환 S354C/T366W을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 치환 Y349C/T366S/L368A/Y407V을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 치환 S354C/E356D/M358L/T366W을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 치환 Y349C/E356D/M358L/T366S/L368A/Y407V을 포함한다.
일부 구현예에서, 정전 스티어링 효과를 생성하기 위해 돌연변이를 도입하는 아미노산 조작을 지칭하는, "ART-Ig"(Asymmetric Re-engineering Technology-Immunoglobulin (비대칭 재조작 기술-면역글로불린))로 지칭되는 메커니즘이 또한 선택적으로 사용될 수 있고; 예를 들어, 이는, 돌연변이를 도입하여 정전기 스티어링 효과를 생성함으로써, LC/HC 페어링 (프레임워크/상보성 결정 영역 셔플링에 의한 공통 LC) 및 HC/HC 미스페어링 문제를 해결한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 한 세트의 치환을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 다른 세트의 치환을 포함한다. 이러한 방법은 Gunasekaran 등, J. Biol. Chem. 285(25): 19637 (2010); 및 WO2006/106905 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 기술되어 있다. 이 방법은 때때로 "전하 쌍"으로도 지칭된다. 일부 구현예에서, 상기 형성을 이종이량체화로 편향되게 하기 위해 정전기학이 사용된다. 이들 치환은 또한 pi에 영향을 미칠 수 있고, 따라서 정제에 영향을 미칠 수 있으며, 일부 구현예에서, pi 변이체로 간주될 수도 있다. 일부 구현예에서, 이러한 치환은 "입체 변이체"로 간주 및/또는 지칭된다. 일부 구현예에서, 이는 D221R/P228R/K409R과 쌍을 이룬 치환 D221E/P228E/L368E의 세트를 포함하는 IgG1 힌지/CH3 전하 쌍 (EEE-RRR)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 C223R/E225R/P228R/K409R과 쌍을 이룬 치환 C223E/P228E/L368E의 세트를 포함하는 IgG2 힌지/CH3 전하 쌍 (EEE-RRRR)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 E356K/D399K와 쌍을 이룬 K392D/K409D CH3 전하 쌍 (DD-KK) 를 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 Q347R/D399V/F405T와 쌍을 이룬 K360E/K409W를 갖는 EW-RVT 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 Q347R/D399V/F405T/S354C와 쌍을 이룬 K360E/K409W/Y349C를 갖는 EW-RVTS-S 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 349, 368, 349, 또는 349 + 355번에서 351D 또는 E 또는 D와 쌍을 이룬 366K (+351K)를 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 K409R와 쌍을 이룬 F405L를 갖는 듀오바디 (DuoBody) (L-R) 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 IgG/A 키메라와 쌍을 이룬 IgG/A 키메라를 갖는 (SEED)바디 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 TCRβ 계면으로부터의 잔기와 쌍을 이룬 TCRα 계면으로부터의 잔기를 갖는 BEAT 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 CH3 도메인 b의 TCRβ 계면으로부터의 잔기와 쌍을 이룬 CH3 도메인의 TCRα 계면으로부터의 잔기를 갖는 BEAT 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 E345R/Q347R/T366V/K409V와 쌍을 이룬 K360D/D399M/Y407A를 갖는 7.8.60 (DMA-RRVV) 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 이는 E356G/E357D/S364Q/Y407A와 쌍을 이룬 Y349S/K370Y/T366M/K409V를 갖는 20.8.34 (SYMV-GDQA) 쌍을 포함한다. 예를 들어, Brinkmann and Kontermann, The making of bispecific antibodies, MAbs, 9(2): 182-212 (2017) 참조. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 한 세트의 치환을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 쌍으로부터의 다른 세트의 치환을 포함한다. 예를 들어, WO2012131555, 및 WO2011131746 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조.
일부 구현예에서, CrossMAb로 지칭되는 메커니즘이 LC/HC 미스페어링 문제를 해결하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CrossMAbVH-VL이 VH 및 VL 도메인을 교환하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, CrossMAbCH1-CL이 CH1 및 CL 도메인을 교환하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, CrossMAbFab이 VH-CH1 및 VL-CL 도메인을 교환하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 이종이량체 항체는 CrossMAbCH1-CL을 사용하고 CH1 및 CL 도메인이 교환된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 이종이량체 항체는 CrossMAbVH-VL을 사용하고 VH 및 VL 도메인이 교환된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 이종이량체 항체는 CrossMAbFab을 사용하고 VH-CH1 및 VL-CL 도메인이 교환된다. 예를 들어, WO2009080251 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조.
일부 구현예에서, LC/HC 및 HC/HC 미스페어링 문제를 해결하고 목적하는 이중특이적 항체의 형성을 촉진하기 위해, BiMAb로 지칭되는 메커니즘이 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2010129304 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조. 일부 구현예에서, LC/HC 및 HC/HC 미스페어링 문제는, 돌연변이를 도입하여, 예를 들어 인간 IgG2에서 정전기 스티어링 효과를 생성함으로써 해결될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 CH3 도메인 b 치환 E236K/D278K와 쌍을 이룬 CH3 도메인 a 치환 K249E/K288E를 갖는 BiMAb 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 BiMAb 쌍으로부터의 한 세트의 치환을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 BiMAb 쌍으로부터의 다른 세트의 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, LC/HC 및 HC/HC 미스페어링 문제를 해결하고 목적하는 이중특이적 항체의 형성을 촉진하기 위해, FcΔAdp로 지칭되는 메커니즘이 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2010151792 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조. 일부 구현예에서, LC/HC 및 HC/HC 미스페어링 문제는, 돌연변이를 도입하여 차등적 단백질 A 친화성을 생성함으로써 해결될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 CH3 도메인에서의 비치환과 쌍을 이룬 CH3 도메인 a 치환 H435R을 갖는 FcΔAdp 쌍을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 FcΔAdp 쌍으로부터의 한 세트의 치환을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 FcΔAdp 쌍으로부터의 다른 세트의 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, LC/HC (Fab-scFv-Fc) 및 HC/HC 미스페어링 문제를 해결하고 목적하는 이중특이적 항체의 형성을 촉진하기 위해, XmAb로 지칭되는 메커니즘이 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2011028952 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조. 일부 구현예에서, LC/HC (Fab-scFv-Fc) 및 HC/HC 미스페어링 문제는 HA-TF 치환을 도입함으로써 해결될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 HA-TF 쌍은 CH3 도메인 b 치환 Y349T/T394F와 함께 CH3 도메인 a 치환 S364H/F405A를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 XmAb 쌍으로부터의 한 세트의 치환을 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 XmAb 쌍으로부터의 다른 세트의 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, LC/HC (제어된 Fab-팔 교환) 및 HC/HC 미스페어링 문제를 해결하고 목적하는 이중특이적 항체의 형성을 촉진하기 위해, 듀오바디로 지칭되는 메커니즘이 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2011131746 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조. 일부 구현예에서, LC/HC 및 HC/HC 미스페어링 문제는 CH3 도메인 치환을 도입함으로써 해결될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 듀오바디 (L-R) 쌍은 CH3 도메인 b 치환 K409R과 쌍을 이룬 CH3 도메인 a 치환 F405L을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 듀오바디 쌍으로부터의 치환 중 하나를 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 듀오바디 쌍으로부터의 다른 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, LC/HC (orthoFab-Ig) 및 HC/HC 미스페어링 문제를 해결하고 목적하는 이중특이적 항체의 형성을 촉진하기 위해, Azymetric으로 지칭되는 메커니즘이 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2012058768 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조. 일부 구현예에서, 미스페어링 문제는 ZW1 치환을 도입함으로써 해결될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 ZW1 쌍은 CH3 도메인 b 치환 T350V/T366L/N390R/K392M/T394W와 쌍을 이룬 CH3 도메인 a 치환 T350V/L351Y/S400E/F405A/Y407V를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 ZW1 쌍으로부터의 치환 중 하나를 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 ZW1 쌍으로부터의 다른 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, LC/HC (트랜스제닉 마우스 MeMo 및 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 생성된 공통 LC) 및 HC/HC 미스페어링 문제를 해결하고 목적하는 이중특이적 항체의 형성을 촉진하기 위해, 바이클로닉 (Biclonics)으로 지칭되는 메커니즘이 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2013157953 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨) 참조. 일부 구현예에서, 미스페어링 문제는 다양한 치환을 도입함으로써 해결될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 치환 쌍은 Y349, L368, 또는 Y349, 및 + R355 중 어느 하나에서 CH3 도메인 b 치환 L351D/E 또는 D와 쌍을 이룬 CH3 도메인 a 치환 T366K (+L351K)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 상기 바이클로닉 쌍으로부터의 치환 중 하나를 포함하고 상기 TIGIT 결합 부분은 상기 바이클로닉 쌍으로부터의 다른 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 논의된 입체 변이체는 선택적으로 및 독립적으로 임의의 pi 변이체 또는 다른 변이체, 예를 들어 Fc 변이체, FcRn 변이체 등과 함께 한쪽 또는 양쪽 단량체에 혼입될 수 있으며, 이는 독립적으로 및 선택적으로 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체에 포함되거나 이로부터 배제될 수 있다.
2. 예시적인 이중특이적 항체 형식
당업자에 의해 이해되고 하기에서 보다 완전하게 논의되는 바와 같이, 본 발명의 항-TIGIT/항-PVRIG 이중특이적 이종이량체 항체는, 도 33 (비대칭 형식) 및 도 34 (대칭 형식)에 제공된 바와 같이, 다양한 구성으로 발생할 수 있다 (Brinkmann and Kontermann, The making of bispecific antibodies, MAbs, 9(2): 182-212 (2017) (원용에 의해 본원에 포함됨) 또한 참조). 일부 구현예에서, 본 발명의 항-TIGIT/항-PVRIG 이중특이적 항체의 이종이량체 형식은 상이한 원자가를 가질 수 있을 뿐만 아니라 이중특이적일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-TIGIT/항-PVRIG 이중특이적 이종이량체 항체는 2가이고 이중특이적일 수 있으며, 여기서 하나의 체크포인트 표적 (예를 들어, PVRIG 또는 TIGIT)은 하나의 결합 부분 또는 항원 결합 도메인 (ABD)에 의해 결합되고, 다른 체크포인트 표적 (예를 들어, TIGIT 또는 PVRIG)은 제2 결합 부분 또는 항원 결합 도메인 (ABD)에 의해 결합된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-TIGIT/항-PVRIG 이중특이적 이종이량체 항체는 또한 3가이고 이중특이적일 수 있으며, 여기서 제1 체크포인트 표적 (예를 들어, PVRIG 또는 TIGIT)은 2개의 결합 부분 또는 항원 결합 도메인 (ABD)에 의해 결합되고, 제2 체크포인트 표적 (예를 들어, PVRIG 또는 TIGIT)은 제2 결합 부분 또는 항원 결합 도메인 (ABD)에 의해 결합된다.
일부 구현예에서, 상기 형식은 예를 들어 도 33 및 도 34뿐만 아니라 WO2015/149077A1 및 WO2017/218707 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 것들 중 어느 하나이다. 이들 형식은 또한 상기 변이체 중 임의의 것과 조합될 수 있다.
B. 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분
PVRIG 또는 PVRIG 에피토프에 대한 특이적 결합은 예를 들어, 적어도 약 10-4 M, 적어도 약 10-5 M, 적어도 약 10-6 M, 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 적어도 약 10-12 M, 또는 그 초과의 KD를 갖는 항체에 의해 나타날 수 있고, 여기서 KD는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭한다. 전형적으로, 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 PVRIG 항원 또는 에피토프에 대비해 대조군 분자에 대해 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5,000-, 10,000배 또는 그 초과의 KD를 가질 것이다.
일반적으로, NK 및 T-세포의 표면 상에 발현된 PVRIG에 대한 최적의 결합의 경우, 항체는 바람직하게는 50 nM 미만, 가장 바람직하게는 1 nM 미만의 KD를 갖고, 0.1 nM 미만 및 1 pM 미만 및 0.1 pM 미만이 본 발명에서 용도를 찾는다.
또한, 특정 항원 또는 에피토프에 대한 특이적 결합은, 예를 들어, 대조군에 대비해 PVRIG 항원 또는 에피토프에 대해 적어도 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5,000- 또는 10,000배 또는 그 초과의 KA 또는 Ka를 갖는 항체에 의해 나타날 수 있고, 여기서 KA 또는 Ka는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 지칭한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 인간 PVRIG에 100 nM 이하, 50 nM 이하, 10 nM 이하, 또는 1 nM 이하 (즉, 높은 결합 친화성), 또는 1 pM 이하의 KD로 결합하고, 여기서 KD는 공지된 방법, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 (SPR, 예를 들어 비아코어 분석), ELISA, KINEXA, 가장 전형적으로는 25℃또는 37℃에서의 SPR에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체에 대한 결합 친화성은 활성과 상관 관계가 있다. T 세포 상에서 가장 높은 최대 신호를 나타내는 항체는 피코몰 범위의 친화성과 상관 관계가 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 T 세포-기반 면역요법에 유용할 수 있으며, 이는 부분적으로 이들의 친화성에 기반한다. WO2016/134333 (특히 도 38 (PVRIG와 결합하고 PVRIG와 PVRL2의 상호작용을 차단하는 서열을 도시함; 본원에 도 4로 포함됨), 도 39 (PVRIG와 결합하지만 PVRIG와 PVRL2의 상호작용을 차단하지는 않는 서열을 도시함; 본원에 도 5로 포함됨), 도 40 (이들 항체로부터의 CDR 및 데이타를 도시함; 본원에 도 6으로 포함됨) 및 도 41 (결합하고 차단하는 하이브리도마로부터의 CDR을 도시함; 본원에 도 7로 포함됨), 및 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체에 사용하기 위한 추가적인 PVRIG 결합 부분을 제공하는 도 35에 개략된 항-PVRIG 항원 결합 도메인에 대해, 원용에 의해 본원에 포함됨)으로 부터의 항체 서열이 참조된다. 즉, WO2016/134333로부터의 도면 및 범례뿐만 아니라 모든 CPA.7 및 CHA.7 항체로부터의 특정 서열 및 서열 번호 (CDR, VH 및 VL 및 전장 서열 포함)가 명시적으로 본원에 포함된다.
본 발명의 항-PVRIG 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 피코몰 범위, 예를 들어 0.1 내지 9 pM, 바람직하게는 약 0.2 내지 약 2의 결합 친화성 (본원에 개략된 기술을 사용하여 측정됨)를 가지며, 약 0.2 내지 약 0.5가 특히 사용된다.
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분을 제공하는 데 사용될 수 있는 PVRIG 항체는 다음과 같이 표지된다. 본원에 기술된 이들 PVRIG 항체는 다음과 같이 표지된다. 상기 PVRIG 항체들은 참조 번호, 예를 들어 "CPA.7.013"를 갖는다. 이는, 예를 들어, 도 4a 내지 4aa 및 도 5a 내지 도 5h에 도시된 바와 같이, 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 조합을 나타낸다. "CPA.7.013.VH"는 CPA.7.013의 가변 중쇄 부분을 지칭하며, "CPA.7.013.VL"은 가변 경쇄이다. "CPA.7.013.vhCDR1", "CPA.7.013.vhCDR2", "CPA.7.013.vhCDR3", "CPA.7.013.vlCDR1", "CPA.7.013.vlCDR2", 및 "CPA.7.013.vlCDR3"은 표시된 CDR을 지칭한다. "CPA.7.013.HC"는 이 분자의 전체 중쇄 (예를 들어, 가변 및 불변 도메인)을 지칭하고, "CPA.7.013.LC"는 동일한 분자의 전체 경쇄 (예를 들어, 가변 및 불변 도메인)을 지칭한다. "CPA.7.013.H1"은 인간 IgG1 (Human IgG1, 따라서 H1; IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 서열이 도 9 및 도 21에 도시되어 있음)의 불변 도메인을 포함하는 가변 중쇄 및 경쇄 도메인을 포함하는 전장 항체를 지칭한다. 따라서 "CPA.7.013.H2"는 인간 IgG2에 연결된 CPA.7.013 가변 도메인일 것이다. "CPA.7.013.H3"은 인간 IgG3에 연결된 CPA.7.013 가변 도메인일 것이고, "CPA.7.013.H4"는 인간 IgG4에 연결된 CPA.7.013 가변 도메인일 것이다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 상기 PVRIG 항체 서열 및/또는 PVRIG 항원 결합 도메인 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분을 제공하는 데 사용될 수 있는 PVRIG 항체는 다음과 같이 표지된다. 항체는 참조 번호, 예를 들어 "CHA.7.518.1"를 갖는다. 이는 예를 들어, 도 7에 도시된 바와 같이 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 조합을 나타내며, 이들 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 것으로 이해된다. "CPA. 7.518.1.VH"는 CPA. 7.518.1의 가변 중쇄 부분을 지칭하며, "CPA.7.518.1.VL"은 가변 경쇄이다. "CPA. 7.518.1.vhCDR1", "CPA.7.518.1.vhCDR2", "CPA. 7.518.1.vhCDR3", "CPA. 7.518.1.vlCDR1", "CPA. 7.518.1.vlCDR2", 및 "CPA. 7.518.1.vlCDR3"은 표시된 CDR을 지칭한다. "CPA. 7.518.1.HC"는 이 분자의 전체 중쇄 (예를 들어, 가변 및 불변 도메인)을 의미하고, "CPA. 7.518.1.LC"는 동일한 분자의 전체 경쇄 (예를 들어, 가변 및 불변 도메인)을 의미한다. 일반적으로, 인간 카파 경쇄가 본원에서의 각 파지 (또는 인간화 하이브리도마) 항체의 불변 도메인으로 사용되지만, 일부 구현예에서는 람다 경쇄 불변 도메인이 사용된다. "CPA. 7.518.1.H1"은 인간 IgG1 (Human IgG1, 따라서 H1; IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 서열이 도 21에 도시되어 있음)의 불변 도메인을 포함하는 가변 중쇄 및 경쇄 도메인을 포함하는 전장 항체를 지칭한다. 따라서 "CPA. 7.518.1.H2"는 인간 IgG2에 연결된 CPA. 7.518.1 가변 도메인일 것이다. "CPA. 7.518.1.H3"은 인간 IgG3에 연결된 CPA. 7.518.1 가변 도메인일 것이고, "CPA. 7.518.1.H4"는 인간 IgG4에 연결된 CPA. 7.518.1 가변 도메인일 것이다. 일부 경우에서, 상기 인간 IgG는 하기에 설명하는 바와 같은 추가적인 돌연변이를 가지며, 이에 대해 주석을 붙일 수 있는 점을 주목해야 한다. 예를 들어, 많은 구현예에서, 상기 인간 IgG4에 S241P 돌연변이가 있을 수 있으며, 이는 예를 들어 "CPA. 7.518.1.H4(S241P)"로 주석을 붙일 수 있다. 이러한 S241P 힌지 변이체를 갖는 인간 IgG4 서열을 도 21에 도시하였다. 다른 잠재적인 변이체는 IgG1 (N297A) (또는 이 부위에서의 글리코실화 및 따라서 FcγRIIIa 결합과 관련된 많은 효과기 기능을 절제하는 다른 변이체) 및 IgG1 (D265A)이고, 이는 FcγR 수용체에 대한 결합을 감소시킨다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 상기 PVRIG 항체 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 상기 PVRIG 항원 결합 도메인 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 전장 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 가변 중쇄 및 경쇄 도메인을 제공하며, 이들 중 임의의 것은 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분의 일부로서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 상기 개략된 바와 같이 scFv 링커에 의해 연결된 가변 중쇄 도메인 및 가변 경쇄 도메인을 포함하는 PVRIG에 결합하는 scFv를 제공한다. VL 및 VH 도메인은 어느 방향으로든 될 수 있으며, 예를 들어, N-말단부터 C-말단까지 "VH-링커-VL" 또는 "VL-링커-VH"일 수 있다. 이들은 성분 요소에 의해 명명되고, 예를 들어 "scFv-CHA.7.518.1VH-링커-VL" 또는 "scFv-CPA. 7.518.1.VL-링커-VH"이다. 따라서 "scFv-CPA. 7.518.1"은 어느 방향으로든 될 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, PVRIG에 결합하는 scFv를 포함할 수 있다.
본 발명은 6개 CDR의 다수의 특이적인 열거된 세트를 함유하는 전장 항체를 포함하는 항원 결합 도메인을 제공한다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 본원에 제공된 PVRIG 항체 서열로부터의 6개 CDR의 세트 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 전장 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 가변 중쇄 및 경쇄 도메인을 제공한다.
많은 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 인간 (파지로부터 유래됨)이고 PVRIG와 PVLR2의 결합을 차단한다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 수용체-리간드 상호작용에 결합하고 이를 차단할 수 있는 PVRIG 항체 및/또는 항원 결합 도메인 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 수용체-리간드 상호작용에 결합하고 이를 차단할 수 있는 PVRIG 항체 서열로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 수용체-리간드 상호작용에 결합하고 이를 차단하는 CPA 항체 및 CDR 서열은 하기와 같으며, 이들의 성분 또한 개략하였으며, 이들의 서열은 도 4에 도시하였다:
CPA.7.001, CPA.7.001.VH, CPA.7.001.VL, CPA.7.001.HC, CPA.7.001.LC 및 CPA.7.001.H1, CPA.7.001.H2, CPA.7.001.H3, CPA.7.001.H4; CPA.7.001.vhCDR1, CPA.7.001.vhCDR2, CPA.7.001.vhCDR3, CPA.7.001.vlCDR1, CPA.7.001.vlCDR2, 및 CPA.7.001.vlCDR3;
CPA.7.003, CPA.7.003.VH, CPA.7.003.VL, CPA.7.003.HC, CPA.7.003.LC, CPA.7.003.H1, CPA.7.003.H2, CPA.7.003.H3, CPA.7.003.H4; CPA.7.003.vhCDR1, CPA.7.003.vhCDR2, CPA.7.003.vhCDR3, CPA.7.003.vlCDR1, CPA.7.003.vlCDR2, 및 CPA.7.003.vlCDR3;
CPA.7.004, CPA.7.004.VH, CPA.7.004.VL, CPA.7.004.HC, CPA.7.004.LC, CPA.7.004.H1, CPA.7.004.H2, CPA.7.004.H3 CPA.7.004.H4; CPA.7.004.vhCDR1, CPA.7.004.vhCDR2, CPA.7.004.vhCDR3, CPA.7.004.vlCDR1, CPA.7.004.vlCDR2, 및 CPA.7.004.vlCDR3;
CPA.7.006, CPA.7.006.VH, CPA.7.006.VL, CPA.7.006.HC, CPA.7.006.LC, CPA.7.006.H1, CPA.7.006.H2, CPA.7.006.H3 CPA.7.006.H4; CPA.7.006.vhCDR1, CPA.7.006.vhCDR2, CPA.7.006.vhCDR3, CPA.7.006.vlCDR1, CPA.7.006.vlCDR2, 및 CPA.7.006.vlCDR3;
CPA.7.008, CPA.7.008.VH, CPA.7.008.VL, CPA.7.008.HC, CPA.7.008.LC, CPA.7.008.H1, CPA.7.008.H2, CPA.7.008.H3 CPA.7.008.H4; CPA.7.008.vhCDR1, CPA.7.008.vhCDR2, CPA.7.008.vhCDR3, CPA.7.008.vlCDR1, CPA.7.008.vlCDR2, 및 CPA.7.008.vlCDR3;
CPA.7.009, CPA.7.009.VH, CPA.7.009.VL, CPA.7.009.HC, CPA.7.009.LC, CPA.7.009.H1, CPA.7.009.H2, CPA.7.009.H3 CPA.7.009.H4; CPA.7.009.vhCDR1, CPA.7.009.vhCDR2, CPA.7.009.vhCDR3, CPA.7.009.vlCDR1, CPA.7.009.vlCDR2, 및 CPA.7.009.vlCDR3;
CPA.7.010, CPA.7.010.VH, CPA.7.010.VL, CPA.7.010.HC, CPA.7.010.LC, CPA.7.010.H1, CPA.7.010.H2, CPA.7.010.H3 CPA.7.010.H4; CPA.7.010.vhCDR1, CPA.7.010.vhCDR2, CPA.7.010.vhCDR3, CPA.7.010.vlCDR1, CPA.7.010.vlCDR2, 및 CPA.7.010.vlCDR3;
CPA.7.011, CPA.7.011.VH, CPA.7.011.VL, CPA.7.011.HC, CPA.7.011.LC, CPA.7.011.H1, CPA.7.011.H2, CPA.7.011.H3 CPA.7.011.H4; CPA.7.011.vhCDR1, CPA.7.011.vhCDR2, CPA.7.011.vhCDR3, CPA.7.011.vlCDR1, CPA.7.011.vlCDR2, 및 CPA.7.011.vlCDR3;
CPA.7.012, CPA.7.012.VH, CPA.7.012.VL, CPA.7.012.HC, CPA.7.012.LC, CPA.7.012.H1, CPA.7.012.H2, CPA.7.012.H3 CPA.7.012.H4; CPA.7.012.vhCDR1, CPA.7.012.vhCDR2, CPA.7.012.vhCDR3, CPA.7.012.vlCDR1, CPA.7.012.vlCDR2, 및 CPA.7.012.vlCDR3;
CPA.7.013, CPA.7.013.VH, CPA.7.013.VL, CPA.7.013.HC, CPA.7.013.LC, CPA.7.013.H1, CPA.7.013.H2, CPA.7.013.H3 CPA.7.013.H4; CPA.7.013.vhCDR1, CPA.7.013.vhCDR2, CPA.7.013.vhCDR3, CPA.7.013.vlCDR1, CPA.7.013.vlCDR2, 및 CPA.7.013.vlCDR3;
CPA.7.014, CPA.7.014.VH, CPA.7.014.VL, CPA.7.014.HC, CPA.7.014.LC, CPA.7.014.H1, CPA.7.014.H2, CPA.7.014.H3 CPA.7.014.H4; CPA.7.014.vhCDR1, CPA.7.014.vhCDR2, CPA.7.014.vhCDR3, CPA.7.014.vlCDR1, CPA.7.014.vlCDR2, 및 CPA.7.014.vlCDR3;
CPA.7.015, CPA.7.015.VH, CPA.7.015.VL, CPA.7.015.HC, CPA.7.015.LC, CPA.7.015.H1, CPA.7.015.H2, CPA.7.015.H3 CPA.7.015.H4; CPA.7.015.vhCDR1, CPA.7.015.vhCDR2, CPA.7.015.vhCDR3, CPA.7.015.vlCDR1, CPA.7.015.vlCDR2, 및 CPA.7.015.vlCDR3;
CPA.7.017, CPA.7.017.VH, CPA.7.017.VL, CPA.7.017.HC, CPA.7.017.LC, CPA.7.017H1, CPA.7.017.H2, CPA.7.017.H3 CPA.7.017.H4; CPA.7.017.vhCDR1, CPA.7.000171.vhCDR2, CPA.7.017.vhCDR3, CPA.7.017.vlCDR1, CPA.7.017.vlCDR2, 및 CPA.7.017.vlCDR3;
CPA.7.018, CPA.7.018.VH, CPA.7.018.VL, CPA.7.018.HC, CPA.7.018.LC, CPA.7.018.H1, CPA.7.018.H2, CPA.7.018.H3 CPA.7.018.H4; CPA.7.017.vhCDR1, CPA.7.017.vhCDR2, CPA.7.017.vhCDR3, CPA.7.017.vlCDR1, CPA.7.017.vlCDR2, 및 CPA.7.017.vlCDR3;
CPA.7.019, CPA.7.019.VH, CPA.7.019.VL, CPA.7.019.HC, CPA.7.019.LC, CPA.7.019.H1, CPA.7.019.H2, CPA.7.019.H3 CPA.7.019.H4; CPA.7.019.vhCDR1, CPA.7.019.vhCDR2, CPA.7.019.vhCDR3, CPA.7.019.vlCDR1, CPA.7.019.vlCDR2, 및 CPA.7.019.vlCDR3;
CPA.7.021, CPA.7.021.VH, CPA.7.021.VL, CPA.7.021.HC, CPA.7.021.LC, CPA.7.021.H1, CPA.7.021.H2, CPA.7.021.H3 CPA.7.021.H4; CPA.7.021.vhCDR1, CPA.7.021.vhCDR2, CPA.7.021.vhCDR3, CPA.7.021.vlCDR1, CPA.7.021.vlCDR2, 및 CPA.7.021.vlCDR3;
CPA.7.022, CPA.7.022.VH, CPA.7.022.VL, CPA.7.022.HC, CPA.7.022.LC, CPA.7.022.H1, CPA.7.022.H2, CPA.7.022.H3 CPA.7.022.H4; CPA.7.022.vhCDR1, CPA.7.022.vhCDR2, CPA.7.002201.vhCDR3, CPA.7.022.vlCDR1, CPA.7.022.vlCDR2, 및 CPA.7.022.vlCDR3;
CPA.7.023, CPA.7.023.VH, CPA.7.023.VL, CPA.7.023.HC, CPA.7.023.LC, CPA.7.023.H1, CPA.7.023.H2, CPA.7.023.H3 CPA.7.023.H4; CPA.7.023.vhCDR1, CPA.7.023.vhCDR2, CPA.7.023.vhCDR3, CPA.7.023.vlCDR1, CPA.7.023.vlCDR2, 및 CPA.7.023.vlCDR3;
CPA.7.024, CPA.7.024.VH, CPA.7.024.VL, CPA.7.024.HC, CPA.7.024.LC, CPA.7.024.H1, CPA.7.024.H2, CPA.7.024.H3 CPA.7.024.H4; CPA.7.024.vhCDR1, CPA.7.024.vhCDR2, CPA.7.024.vhCDR3, CPA.7.024.vlCDR1, CPA.7.024.vlCDR2, 및 CPA.7.024.vlCDR3;
CPA.7.033, CPA.7.033.VH, CPA.7.033.VL, CPA.7.033.HC, CPA.7.033.LC, CPA.7.033.H1, CPA.7.033.H2, CPA.7.033.H3 CPA.7.033.H4; CPA.7.033.vhCDR1, CPA.7.033.vhCDR2, CPA.7.033.vhCDR3, CPA.7.033.vlCDR1, CPA.7.033.vlCDR2, 및 CPA.7.033.vlCDR3;
CPA.7.034, CPA.7.034.VH, CPA.7.034.VL, CPA.7.034.HC, CPA.7.034.LC, CPA.7.034.H1, CPA.7.034.H2, CPA.7.034.H3 CPA.7.034.H4; CPA.7.034.vhCDR1, CPA.7.034.vhCDR2, CPA.7.034.vhCDR3, CPA.7.034.vlCDR1, CPA.7.034.vlCDR2, 및 CPA.7.034.vlCDR3;
CPA.7.036, CPA.7.036.VH, CPA.7.036.VL, CPA.7.036.HC, CPA.7.036.LC, CPA.7.036.H1, CPA.7.036.H2, CPA.7.036.H3 CPA.7.036.H4; CPA.7.036.vhCDR1, CPA.7.036.vhCDR2, CPA.7.036.vhCDR3, CPA.7.036.vlCDR1, CPA.7.036.vlCDR2, 및 CPA.7.036.vlCDR3;
CPA.7.040, CPA.7.040.VH, CPA.7.040.VL, CPA.7.040.HC, CPA.7.040.LC, CPA.7.040.H1, CPA.7.040.H2, CPA.7.040.H3 및 CPA.7.040.H4; CPA.7.040.vhCDR1, CPA.7.040.vhCDR2, CPA.7.040.vhCDR3, CPA.7.040.vlCDR1, CPA.7.040.vlCDR2, 및 CPA.7.040.vlCDR3;
CPA.7.046, CPA.7.046.VH, CPA.7.046.VL, CPA.7.046.HC, CPA.7.046.LC, CPA.7.046.H1, CPA.7.046.H2, CPA.7.046.H3 CPA.7.046.H4; CPA.7.046.vhCDR1, CPA.7.046.vhCDR2, CPA.7.046.vhCDR3, CPA.7.046.vlCDR1, CPA.7.046.vlCDR2, 및 CPA.7.046.vlCDR3;
CPA.7.047, CPA.7.047.VH, CPA.7.047.VL, CPA.7.047.HC, CPA.7.047.LC, CPA.7.047.H1, CPA.7.047.H2, CPA.7.047.H3 CPA.7.047.H4; CPA.7.047.vhCDR1, CPA.7.047.vhCDR2, CPA.7.047.vhCDR3, CPA.7.047.vlCDR1, CPA.7.004701.vlCDR2, 및 CPA.7.047.vlCDR3;
CPA.7.049, CPA.7.049.VH, CPA.7.049.VL, CPA.7.049.HC, CPA.7.049.LC, CPA.7.049.H1, CPA.7.049.H2, CPA.7.049.H3 CPA.7.049.H4; CPA.7.049.vhCDR1, CPA.7.049.vhCDR2, CPA.7.049.vhCDR3, CPA.7.049.vlCDR1, CPA.7.049.vlCDR2, 및 CPA.7.049.vlCDR3; 및
CPA.7.050, CPA.7.050.VH, CPA.7.050.VL, CPA.7.050.HC, CPA.7.050.LC, CPA.7.050.H1, CPA.7.050.H2, CPA.7.050.H3 CPA.7.050.H4, CPA.7.050.vhCDR1, CPA.7.050.vhCDR2, CPA.7.050.vhCDR3, CPA.7.050.vlCDR1, CPA.7.050.vlCDR2, 및 CPA.7.050.vlCDR3.
또한, PVRIG에 결합하지만 PVRIG와 PVLR2의 상호작용을 차단하지 않는, 본원에서 생성된 다수의 CPA 항체가 존재한다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 수용체-리간드 상호작용에 결합할 수 있지만 이를 차단할 수는 없는 PVRIG 항체 및/또는 항원 결합 도메인 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 수용체-리간드 상호작용에 결합할 수 있지만 이를 차단할 수는 없는 PVRIG 항체 서열로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 수용체-리간드 상호작용에 결합하지만 이를 차단하지는 않는 CPA 항체 및 CDR 서열은 하기와 같으며, 이들의 성분 또한 개략하였으며, 이들의 서열은 도 4에 도시하였다:
CPA.7.028, CPA.7.028.VH, CPA.7.028.VL, CPA.7.028.HC, CPA.7.028.LC, CPA.7.028.H1, CPA.7.028.H2, CPA.7.028.H3 및 CPA.7.028.H4; CPA.7.028.vhCDR1, CPA.7.028.vhCDR2, CPA.7.028.vhCDR3, CPA.7.028.vlCDR1, CPA.7.028.vlCDR2, 및 CPA.7.028.vlCDR3.
CPA.7.030, CPA.7.030.VH, CPA.7.030.VL, CPA.7.030.HC, CPA.7.030.LC, CPA.7.030.H1, CPA.7.030.H2, CPA.7.030.H3 및 CPA.7.030.H4; CPA.7.030.vhCDR1, CPA.7.030.vhCDR2, CPA.7.030.vhCDR3, CPA.7.030.vlCDR1, CPA.7.030.vlCDR2, 및 CPA.7.030.vlCDR3.
CPA.7.041, CPA.7.041.VH, CPA.7.041.VL, CPA.7.041.HC, CPA.7.041.LC, CPA.7.041.H1, CPA.7.041.H2, CPA.7.041.H3 및 CPA.7.041.H4; CPA.7.041.vhCDR1, CPA.7.041.vhCDR2, CPA.7.041.vhCDR3, CPA.7.041.vlCDR1, CPA.7.041.vlCDR2, 및 CPA.7.041.vlCDR3.
CPA.7.016, CPA.7.016.VH, CPA.7.016.VL, CPA.7.016.HC, CPA.7.016.LC, CPA.7.016.H1, CPA.7.016.H2, CPA.7.016.H3 및 CPA.7.016.H4; CPA.7.016.vhCDR1, CPA.7.016.vhCDR2, CPA.7.016.vhCDR3, CPA.7.016.vlCDR1, CPA.7.016.vlCDR2, 및 CPA.7.016.vlCDR3.
CPA.7.020, CPA.7.020.VH, CPA.7.020.VL, CPA.7.020.HC, CPA.7.020.LC, CPA.7.020.H1, CPA.7.020.H2, CPA.7.020.H3 및 CPA.7.020.H4; CPA.7.020.vhCDR1, CPA.7.020.vhCDR2, CPA.7.020.vhCDR3, CPA.7.020.vlCDR1, CPA.7.020.vlCDR2, 및 CPA.7.020.vlCDR3.
CPA.7.038, CPA.7.038.VH, CPA.7.038.VL, CPA.7.038.HC, CPA.7.038.LC, CPA.7.038.H1, CPA.7.038.H2, CPA.7.038.H3 및 CPA.7.038.H4; CPA.7.038.vhCDR1, CPA.7.038.vhCDR2, CPA.7.038.vhCDR3, CPA.7.038.vlCDR1, CPA.7.038.vlCDR2, 및 CPA.7.038.vlCDR3.
CPA.7.044, CPA.7.044.VH, CPA.7.044.VL, CPA.7.044.HC, CPA.7.044.LC, CPA.7.044.H1, CPA.7.044.H2, CPA.7.044.H3 및 CPA.7.044.H4; CPA.7.044.vhCDR1, CPA.7.044.vhCDR2, CPA.7.044.vhCDR3, CPA.7.044.vlCDR1, CPA.7.044.vlCDR2, 및 CPA.7.044.vlCDR3.
CPA.7.045, CPA.7.045.VH, CPA.7.045.VL, CPA.7.045.HC, CPA.7.045.LC, CPA.7.045.H1, CPA.7.045.H2, CPA.7.045.H3 및 CPA.7.045.H4; CPA.7.045.vhCDR1, CPA.7.045.vhCDR2, CPA.7.045.vhCDR3, CPA.7.045.vlCDR1, CPA.7.045.vlCDR2, 및 CPA.7.045.vlCDR3.
본원에서 논의된 바와 같이, 본 발명은 상기 개략된 바와 같이 CDR의 변이체를 비롯한 상기 성분들의 변이체를 추가로 제공한다. 또한, Fc 변이체가 사용되는 경우, 상기 가변 중쇄는 본원의 "VH" 서열과 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일하고/거나, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 아미노산 변화를 함유할 수 있다. Fc 변이체가 사용되는 경우, 본원의 "VL" 서열과 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일하고/거나, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 아미노산 변화를 함유할 수 있는 가변 경쇄가 제공된다. 유사하게, Fc 변이체가 사용되는 경우, 본원의 "HC" 및 "LC" 서열과 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일하고/거나, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 아미노산 변화를 함유하는 중쇄 및 경쇄가 제공된다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 이들 PVRIG 항체 및/또는 항원 결합 도메인 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 하이브리도마로부터 생성된 마우스 항체인 다수의 CHA 항체를 제공한다. 당업계에 공지된 바와 같이, 6개의 CDR은 인간 프레임워크 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역에 삽입될 때 또는 가변 중쇄 및 경쇄 도메인이 인간화될 때 유용하다.
본 발명의 항-PVRIG 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분의 일부로서, PVRIG 항체 서열로부터의 CDR의 하기 CHA 세트 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명은, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분의 일부로서, CDR의 하기 CHA 세트를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공하며, 이들의 서열은 도 7에 도시하였다:
CHA.7.502.vhCDR1, CHA.7.502.vhCDR2, CHA.7.502.vhCDR3, CHA.7.502.vlCDR1, CHA.7.502.vlCDR2, 및 CHA.7.502.vlCDR3.
CHA.7.503.vhCDR1, CHA.7.503.vhCDR2, CHA.7.503.vhCDR3, CHA.7.503.vlCDR1, CHA.7.503.vlCDR2, 및 CHA.7.503.vlCDR3.
CHA.7.506.vhCDR1, CHA.7.506.vhCDR2, CHA.7.506.vhCDR3, CHA.7.506.vlCDR1, CHA.7.506.vlCDR2, 및 CHA.7.506.vlCDR3.
CHA.7.508.vhCDR1, CHA.7.508.vhCDR2, CHA.7.508.vhCDR3, CHA.7.508.vlCDR1, CHA.7.508.vlCDR2, 및 CHA.7.508.vlCDR3.
CHA.7.510.vhCDR1, CHA.7.510.vhCDR2, CHA.7.510.vhCDR3, CHA.7.510.vlCDR1, CHA.7.510.vlCDR2, 및 CHA.7.510.vlCDR3.
CHA.7.512.vhCDR1, CHA.7.512.vhCDR2, CHA.7.512.vhCDR3, CHA.7.512.vlCDR1, CHA.7.512.vlCDR2, 및 CHA.7.512.vlCDR3.
CHA.7.514.vhCDR1, CHA.7.514.vhCDR2, CHA.7.514.vhCDR3, CHA.7.514.vlCDR1, CHA.7.514.vlCDR2, 및 CHA.7.514.vlCDR3.
CHA.7.516.vhCDR1, CHA.7.516.vhCDR2, CHA.7.516.vhCDR3, CHA.7.516.vlCDR1, CHA.7.516.vlCDR2, 및 CHA.7.516.vlCDR3.
CHA.7.518.vhCDR1, CHA.7.518.vhCDR2, CHA.7.518.vhCDR3, CHA.7.518.vlCDR1, CHA.7.518.vlCDR2, 및 CHA.7.518.vlCDR3.
CHA.7.520_1.vhCDR1, CHA.7.520_1.vhCDR2, CHA.7.520_1.vhCDR3, CHA.7.520_1.vlCDR1, CHA.7.520_1.vlCDR2, 및 CHA.7.520_1.vlCDR3.
CHA.7.520_2.vhCDR1, CHA.7.520_2.vhCDR2, CHA.7.520_2.vhCDR3, CHA.7.520_2.vlCDR1, CHA.7.520_2.vlCDR2, 및 CHA.7.520_2.vlCDR3.
CHA.7.522.vhCDR1, CHA.7.522.vhCDR2, CHA.7.522.vhCDR3, CHA.7.522.vlCDR1, CHA.7.522.vlCDR2, 및 CHA.7.522.vlCDR3.
CHA.7.524.vhCDR1, CHA.7.524.vhCDR2, CHA.7.524.vhCDR3, CHA.7.524.vlCDR1, CHA.7.524.vlCDR2, 및 CHA.7.524.vlCDR3.
CHA.7.526.vhCDR1, CHA.7.526.vhCDR2, CHA.7.526.vhCDR3, CHA.7.526.vlCDR1, CHA.7.526.vlCDR2, 및 CHA.7.526.vlCDR3.
CHA.7.527.vhCDR1, CHA.7.527.vhCDR2, CHA.7.527.vhCDR3, CHA.7.527.vlCDR1, CHA.7.527.vlCDR2, 및 CHA.7.527.vlCDR3.
CHA.7.528.vhCDR1, CHA.7.528.vhCDR2, CHA.7.528.vhCDR3, CHA.7.528.vlCDR1, CHA.7.528.vlCDR2, 및 CHA.7.528.vlCDR3.
CHA.7.530.vhCDR1, CHA.7.530.vhCDR2, CHA.7.530.vhCDR3, CHA.7.530.vlCDR1, CHA.7.530.vlCDR2, 및 CHA.7.530.vlCDR3.
CHA.7.534.vhCDR1, CHA.7.534.vhCDR2, CHA.7.534.vhCDR3, CHA.7.534.vlCDR1, CHA.7.534.vlCDR2, 및 CHA.7.534.vlCDR3.
CHA.7.535.vhCDR1, CHA.7.535.vhCDR2, CHA.7.535.vhCDR3, CHA.7.535.vlCDR1, CHA.7.535.vlCDR2, 및 CHA.7.535.vlCDR3.
CHA.7.537.vhCDR1, CHA.7.537.vhCDR2, CHA.7.537.vhCDR3, CHA.7.537.vlCDR1, CHA.7.537.vlCDR2, 및 CHA.7.537.vlCDR3.
CHA.7.538_1.vhCDR1, CHA.7.538_1.vhCDR2, CHA.7.538_1.vhCDR3, CHA.7.538_1.vlCDR1, CHA.7.538_1.vlCDR2, 및 CHA.7.538_1.vlCDR3.
CHA.7.538_2.vhCDR1, CHA.7.538_2.vhCDR2, CHA.7.538_2.vhCDR3, CHA.7.538_2.vlCDR1, CHA.7.538_2.vlCDR2, 및 CHA.7.538_2.vlCDR3.
CHA.7.543.vhCDR1, CHA.7.543.vhCDR2, CHA.7.543.vhCDR3, CHA.7.543.vlCDR1, CHA.7.543.vlCDR2, 및 CHA.7.543.vlCDR3.
CHA.7.544.vhCDR1, CHA.7.544.vhCDR2, CHA.7.544.vhCDR3, CHA.7.544.vlCDR1, CHA.7.544.vlCDR2, 및 CHA.7.544.vlCDR3.
CHA.7.545.vhCDR1, CHA.7.545.vhCDR2, CHA.7.545.vhCDR3, CHA.7.545.vlCDR1, CHA.7.545.vlCDR2, 및 CHA.7.545.vlCDR3.
CHA.7.546.vhCDR1, CHA.7.546.vhCDR2, CHA.7.546.vhCDR3, CHA.7.546.vlCDR1, CHA.7.546.vlCDR2, 및 CHA.7.546.vlCDR3.
CHA.7.547.vhCDR1, CHA.7.547.vhCDR2, CHA.7.547.vhCDR3, CHA.7.547.vlCDR1, CHA.7.547.vlCDR2, 및 CHA.7.547.vlCDR3.
CHA.7.548.vhCDR1, CHA.7.548.vhCDR2, CHA.7.548.vhCDR3, CHA.7.548.vlCDR1, CHA.7.548.vlCDR2, 및 CHA.7.548.vlCDR3.
CHA.7.549.vhCDR1, CHA.7.549.vhCDR2, CHA.7.549.vhCDR3, CHA.7.549.vlCDR1, CHA.7.549.vlCDR2, 및 CHA.7.549.vlCDR3.
CHA.7.550.vhCDR1, CHA.7.550.vhCDR2, CHA.7.550.vhCDR3, CHA.7.550.vlCDR1, CHA.7.550.vlCDR2, 및 CHA.7.550.vlCDR3.
CHA.7.518.4.vhCDR1, CHA.7.518.4.vhCDR2, CHA.7.518.4.vhCDR3, CHA.7.518.4.vlCDR1, CHA.7.518.4.vlCDR2, 및 CHA.7.518.4.vlCDR3.
상기와 같이, 이들 CDR 세트는 또한 전술한 아미노산 변이체일 수 있다.
또한, 상기 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 프레임워크 영역은 당업계에 공지된 바와 같이 인간화될 수 있고 (필요에 따라 CDR에서 생성된 변이체를 때때로 포함함), 따라서 도 7a 내지 도 7dd의 VH 및 VL 사슬의 인간화 변이체가 생성될 수 있다. 또한, 인간화 가변 중쇄 및 경쇄 도메인은 이어서, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터의 불변 영역과 같은 인간 불변 영역과 융합될 수 있다.
특히, 당업계에 공지된 바와 같이, 마우스 VH 및 VL 사슬은 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 Ye 등, Nucleic Acids Res. 41:W34-W40 (2013) (인간화 방법에 대해 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 개략된 바와 같이, NCBI 웹사이트의 IgBLAST 프로그램을 사용하여 인간화될 수 있다. IgBLAST는 마우스 VH 및/또는 VL 서열을 가져와서 이를 공지된 인간 생식계열 서열의 라이브러리와 비교한다. 본원에 나타난 바와 같이, 본원에서 생성된 인간화 서열에 대해, 사용된 데이터베이스는 IMGT 인간 VH 유전자 (F+ORF, 273개의 생식계열 서열) 및 IMGT 인간 VL 카파 유전자 (F+ORF, 74개의 생식계열 서열)였다. 다음과 같은 예시적인 5개의 CHA 서열을 선택하였다: CHA.7.518, CHA.7.530, CHA.7.538_1, CHA.7.538_2 및 CHA.7.524 (VH 및 VL 서열에 대해 도 7a 내지 도 7dd 참조). 인간화의 이러한 구현예에서, 인간 생식계열 IGHV1-46 (대립유전자 1)은 5개 모두의 경우에 수용체 서열 및 인간 중쇄 IGHJ4 (대립유전자 1) 연결 영역 (J 유전자)으로서 선택되었다. 4개 (CHA.7.518, CHA.7.530, CHA.7.538_1 및 CHA.7.538_2) 중 3개의 경우에서, 인간 생식계열 IGKV1-39 (대립유전자 1)가 수용체 서열로서 선택되었고, 인간 경쇄 IGKJ2 (대립유전자 1) (J 유전자)가 선택되었다. J 유전자는 IMGT® the international ImMunoGeneTics information system (www.imgt.org)에서 수집한 인간 연결 영역 서열로부터 선택되었다. CDR은 AbM 정의에 따라 정의되었다 (www.bioinfo.org.uk/abs/ 참조). 도 11a 내지 도 11i는 또한 PVRIG에 대한 결합을 최적화하기 위한 인간화 서열 및 일부 잠재적 변화를 나타낸다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 이들 인간화 PVRIG 항체 또는 항원 결합 도메인 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, CHA.7.518 PVRIG 항체 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, CHA.7.530 PVRIG 항체 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, CHA.7.538_1 PVRIG 항체 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, CHA.7.538_2 PVRIG 항체 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, CHA.7.518.4 PVRIG 항체 서열을 포함할 수 있다.
CHA 항체의 특정 인간화 항체는 도 11a 내지 도 11i, 도 12a 내지 12e 및 도 13에 도시된 것들을 포함한다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, 도 11a 내지 도 11i, 도 12a 내지 12e 및 도 13에 도시된 CHA PVRIG 항체 서열을 포함할 수 있다. 당업자에게 이해될 바와 같이, 각 인간화 가변 중쇄 (Humanized Heavy, HH) 및 가변 경쇄 (Humanized Light, HL) 서열은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 불변 영역과 조합될 수 있다. 즉, CHA.7.518.HH1은 제1 인간화 가변 중쇄이고 CHA.7.518.HH1.1은 "HH1" 인간화 서열과 IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 중쇄이다 (CHA.7.518.HH1.2는 CHA.7.518.HH1 및 IgG2임). 일부 구현예에서, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 PVRIG 결합 부분으로서, 도 4, 5, 7, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 26, 및/또는 40에 제공된 PVRIG 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG 항체는 상이한 항-PVRIG 항체들의 VH 및 VL 서열이 "혼합되고 매칭"되어 다른 항-PVRIG 항체를 생성할 수 있는 항-PVRIG 항체를 포함한다. 이러한 "혼합되고 매칭된" 항체의 PVRIG 결합은 상기에 기술된 결합 분석, 예를 들어 ELISA를 사용하여 시험될 수 있다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 사슬이 혼합되고 매칭될 때, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체된다. 마찬가지로, 일부 구현예에서, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체된다. 예를 들어, 상동성 항체의 VH 및 VL 서열은 특히 혼합 및 매칭에 적합하다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분으로서, "혼합되고 매칭"된 상이한 항-PVRIG 항체로부터의 PVRIG VH 및 VL 서열을 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명의 항체는 (a) 본원에 열거된 서열; (b) (a)에서 특정된 CDR 아미노산 서열과 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산 치환에 있어 상이한 서열; (c) (a) 또는 (b)에 특정된 서열과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; (d) 본원에 열거된 아미노산을 인코딩하는 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분의 일부로서, PVRIG 변이체 CDR 서열을 포함할 수 있다.
추가적으로, 본원에 열거된 PVRIG 항체와 동일성을 공유하는 항체가 PVRIG 항체의 정의에 포함된다. 즉, 특정 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PVRIG 항체는 바람직한 항-PVRIG 면역 분자의 단리된 항-PVRIG 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 상기 항체는 모체 항-PVRIG 항체의 목적하는 기능적 성질을 유지한다. 2개 서열 간의 동일성 백분율은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이고 (예를 들어, 상동성 % = 동일한 위치의 수/위치의 총수 X 100), 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려한다. 2개 서열 간의 서열 비교 및 동일성 백분율의 측정은 하기의 비제한적인 실시예에서 기술된 바와 같이 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 본원에 기술된 단리된 항-PVRIG 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
2개의 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은, ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내에 통합되어 있는 E. Meyers 및 W. Miller의 알고리즘 (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988))을 사용하고 PAM120 무게 잔기 표, 갭 길이 패널티 12 및 갭 패널티 4를 사용하여 측정할 수 있다. 또한, 2개의 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은, GCG 소프트웨어 패키지 (상업적으로 입수가능함)의 GAP 프로그램 내에 통합되어 있는 Needleman 및 Wunsch의 알고리즘 (J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)) 을 사용하고 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 갭 중량 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4 및 길이 무게 1, 2, 3, 4, 5 또는 6를 사용하여 측정할 수 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 단백질 서열은, 예를 들어 관련 서열을 식별하기 위해 공개 데이타베이스에 대한 검색을 수행하기 위해 "질문 서열"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 검색은 Altschul 등 (1990) J Mol. Biol. 215:403-10의 XBLAST 프로그램 (버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램, 점수=50, 단어 길이=3으로 수행되어 본 발명의 적어도 일부 구현예에 따른 항체 분자와 상동적인 아미노산 서열을 획득할 수 있다. 비교 목적으로 갭 정렬 (gapped alignment)을 얻기 위해, Altschul 등, (1997) Nucleic Acids Res. 25 (17):3389-3402에 기술된 바와 같이 갭 BLAST가 사용될 수 있다. BLAST 및 갭 BLAST 프로그램을 사용할 때 각 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수가 사용될 수 있다.
일반적으로, PVRIG 항체 간 비교에 대한 동일성 백분율은 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90% 이며, 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성 백분율이 바람직하다. 동일성 백분율은 전체 아미노산 서열, 예를 들어 전체 중쇄 또는 경쇄 또는 사슬의 부분을 따라 공유되는 동일성 백분율일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-PVRIG 항체의 정의 내에는 전체 가변 영역 (예를 들어, 동일성이 가변 영역을 따라 95% 또는 98% 동일함)을 따라, 또는 전체 불변 영역을 따라, 또는 단지 Fc 도메인을 따라 동일성을 공유하는 것들이 포함된다. 특히, 본 발명은, 상기 CHA.7.518.4 항체와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성 백분율을 갖는 PVRIG 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 갖는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
또한, 동일한 CDR을 갖지만 가변 도메인 (또는 전체 중쇄 또는 경쇄)에서의 변화를 가질 수 있는 서열도 역시 포함된다. 예를 들어, PVRIG 항체는 도 8a 내지 도 8d에 도시된 것들과 동일한 CDR을 갖지만, 가변 영역을 따라 동일성이 더 낮을 수 있는, 예를 들어 95 또는 98% 동일성 백분율을 갖는 항체를 포함한다. 특히, 본 발명은 CHA.7.518.4과 동일한 CDR을 갖지만 CHA.7.518.4과 95% 또는 98% 동일한 프레임워크 영역을 갖는 PVRIG 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 갖는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분의 일부로서, 도 8a 내지 도 8d에 도시된 것들과 동일한 CDR을 포함할 수 있다.
또한, 동일한 CDR을 갖지만 가변 도메인 (또는 전체 중쇄 또는 경쇄)에서의 변화를 가질 수 있는 서열도 역시 포함된다. 예를 들어, PVRIG 항체는 도 35a 내지 도 35d에 도시된 것들과 동일한 CDR을 갖지만, 가변 영역을 따라 동일성이 더 낮을 수 있는, 예를 들어 95 또는 98% 동일성 백분율을 갖는 항체를 포함한다.
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분의 일부로서, 도 35a 내지 도 35d에 도시된 것들과 동일한 CDR을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 WO 2017/041004 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 항-PVRIG 항체로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 상기 PVRIG 결합 부분은 WO 2018/017864 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 항-PVRIG 항체로부터의 것이다.
1. 열거된 항체들과 결합을 경쟁하는 PVRIG 항체
본 발명은 상기 열거된 항체뿐만 아니라 PVRIG 분자에 특이적으로 결합하기 위해 상기 열거된 항체 (PVRIG에 특이적으로 결합하는 본원에 열거된 CPA 및 CHA 번호)와 경쟁하는 추가적인 항체를 제공한다. 본 발명의 PVRIG 항체는 상이한 에피토프 빈 (bin) 내에 "비닝 (bin)"할 수 있다. 본원에 개략된 4개의 별도의 빈이 존재하며; 이는 1) CPA.7.002, CPA.7.003, CPA.7.005, CPA.7.007, CPA.7.010, CPA.7.012, CPA.7.015, CPA.7.016, CPA.7.017, CPA.7.019, CPA.7.020, CPA.7.021, CPA.7.024, CPA.7.028, CPA.7.032, CPA.7.033, CPA.7.036, CPA.7.037, CPA.7.038, CPA.7.043, CPA.7.046 및 CPA.7.041 모두가 속하는 에피토프 빈; 2) CPA.7.004, CPA.7.009, CPA.7.011, CPA.7.014, CPA.7.018, CPA.7.022, CPA.7.023, CPA.7.034, CPA.7.040, CPA.7.045 및 CPA.7.047 모두가 속하는 에피토프 빈; 3) CPA.7.039 (이는, 빈 1은 CPA.7.039 결합을 차단하고 빈 2는 리간드를 CPA.7.039와 붙인 다는 점에서 빈 1과 빈 2 간의 차이를 정의함), 및 CPA.7.050를 갖는 빈 4)이다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분의 일부로서, 상기 열거된 항체 (PVRIG에 특이적으로 결합하는 본원에 열거된 CPA 및 CHA 번호)와 경쟁할 수 있는 PVRIG 항체 및/또는 항원 결합 도메인 서열을 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명은 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공하며, 여기서 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 PVRIG 결합 부분은 빈 1에 있는 항체, 빈 2에 있는 항체, 빈 3에 있는 항체 및/또는 빈 4에 있는 항체와 결합을 경쟁할 수 있다.
상기 열거된 항체와 경쟁하는 추가적인 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 당업계에 공지되고 일반적으로 하기에 개략된 바와 같이 생성된다. 경쟁적 결합 연구는 일반적으로 SPR/비아코어® 결합 분석뿐만 아니라 ELISA 및 세포-기반 분석을 사용하여 당업계에 공지된 바와 같이 수행될 수 있다.
C. 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 TIGIT 결합 부분
본원에 기술된 항-TIGIT 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 TIGIT 결합 부분의 일부로서 TIGIT 항체 및/또는 항원 결합 도메인 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 TIGIT 항체는 다음과 같이 표지된다. 이러한 TIGIT 항체들은 참조 번호, 예를 들어, "CPA.9.086"을 갖는다. 이는 예를 들어, 도 23에 도시된 바와 같이 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 조합을 나타내며, 이들 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 것으로 이해된다. "CPA.9.086.VH"는 CPA.9.086의 가변 중쇄 부분을 지칭하며, "CPA.9.086.VL"은 가변 경쇄이다. "CPA.9.086.vhCDR1", "CPA.9.086.vhCDR2", "CPA.9.086.vhCDR3", "CPA.9.086.vlCDR1", "CPA.9.086.vlCDR2", 및 "CPA.9.086.vlCDR3"은 표시된 CDR을 지칭한다. "CPA.9.086.HC"는 이 분자의 전체 중쇄 (예를 들어, 가변 및 불변 도메인)을 지칭하고, "CPA.9.086.LC"는 동일한 분자의 전체 경쇄 (예를 들어, 가변 및 불변 도메인)을 지칭한다. 일반적으로, 인간 카파 경쇄가 본원에서의 각 파지 (또는 인간화 하이브리도마) 항체의 불변 도메인으로 사용되지만, 일부 구현예에서는 람다 경쇄 불변 도메인이 사용된다. "CPA.9.086.H1"은 인간 IgG1 (Human IgG1, 따라서 H1; IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 서열이 예를 들어, 도 9 및 도 21에 도시되어 있음)의 불변 도메인을 포함하는 가변 중쇄 및 경쇄 도메인을 포함하는 전장 항체를 지칭한다. 따라서 "CPA.9.086.H2"는 인간 IgG2에 연결된 CPA.9.086 가변 도메인일 것이다. "CPA.9.086.H3"은 인간 IgG3에 연결된 CPA.9.086 가변 도메인일 것이고, "CPA.9.086.H4"는 인간 IgG4에 연결된 CPA.9.086 가변 도메인일 것이다. 일부 경우에서, 상기 인간 IgG는 하기에 설명하는 바와 같은 추가적인 돌연변이를 가지며, 이에 대해 주석을 붙일 수 있는 점을 주목해야 한다. 예를 들어, 많은 구현예에서, 상기 인간 IgG4에 S241P 돌연변이가 있을 수 있으며, 이는 예를 들어 "CPA.9.086.H4 (S241P)"로 주석을 붙일 수 있다. 이러한 S241P 힌지 변이체를 갖는 인간 IgG4 서열을 도 21에 도시하였다. 다른 잠재적인 변이체는 IgG1 (N297A) (또는 이 부위에서의 글리코실화 및 따라서 FcγRIIIa 결합과 관련된 많은 효과기 기능을 절제하는 다른 변이체) 및 IgG1 (D265A)이고, 이는 FcγR 수용체에 대한 결합을 감소시킨다. 본 발명의 항-TIGIT 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-TIGIT 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 TIGIT 결합 부분으로서, 상기 TIGIT 항체 도메인 서열 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 항-TIGIT 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-TIGIT 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 TIGIT 결합 부분으로서, 상기 TIGIT 항원 결합 도메인 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 전장 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 가변 중쇄 및 경쇄 도메인을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 상기 개략된 바와 같이 scFv 링커에 의해 연결된 가변 중쇄 도메인 및 가변 경쇄 도메인을 포함하는 TIGIT에 결합하는 scFv를 제공한다. VL 및 VH 도메인은 어느 방향으로든 될 수 있으며, 예를 들어, N-말단부터 C-말단까지 "VH-링커-VL" 또는 "VL-링커-VH"일 수 있다. 이들은 성분 요소에 의해 명명되고, 예를 들어 "scFv-CPA. 9.086.VH-링커-VL " 또는 "scFv-CPA.9.086.VL-링커-VH"이다. 따라서 "scFv-CPA.9.086"은 어느 방향으로든 될 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 TIGIT 결합 부분의 일부로서, TIGIT에 결합하는 임의의 scFv를 포함할 수 있다. 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 TIGIT 항원 결합 도메인의 일부로서, TIGIT에 결합하는 임의의 scFv를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, PVRIG 결합 부분으로서, 도 26에 제공된 PVRIG 서열을 포함한다. 많은 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 (파지로부터 유래됨)이고 TIGIT과 PVR의 결합을 차단한다. 도 3 및 도 4에 도시된 바와 같이, 수용체-리간드 상호작용에 결합하고 이를 차단하는 CPA 항체는 하기와 같으며, 이들의 성분도 마찬가지로 개략된다 ("서열" 섹션에서 논의된 바와 같이, scFv 구조물을 제외한 모든 서열은 서열 목록에 있으며 도 24에도 또한 제공된다):
CPA.9.018, CPA.9.018.VH, CPA.9.018.VL, CPA.9.018.HC, CPA.9.018.LC, CPA.9.018.H1, CPA.9.018.H2, CPA.9.018.H3, CPA.9.018.H4; CPA.9.018.H4(S241P); CPA.9.018.vhCDR1, CPA.9.018.vhCDR2, CPA.9.018.vhCDR3, CPA.9.018.vlCDR1, CPA.9.018.vlCDR2, CPA.9.018.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.018;
CPA.9.027, CPA.9.027.VH, CPA.9.027.VL, CPA.9.027.HC, CPA.9.027.LC, CPA.9.027.H1, CPA.9.027.H2, CPA.9.027.H3, CPA.9.027.H4; CPA.9.018.H4(S241P); CPA.9.027.vhCDR1, CPA.9.027.vhCDR2, CPA.9.027.vhCDR3, CPA.9.027.vlCDR1, CPA.9.027.vlCDR2, CPA.9.027.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.027;
CPA.9.049, CPA.9.049.VH, CPA.9.049.VL, CPA.9.049.HC, CPA.9.049.LC, CPA.9.049.H1, CPA.9.049.H2, CPA.9.049.H3; CPA.9.049.H4; CPA.9.049.H4(S241P); CPA.9.049.vhCDR1, CPA.9.049.vhCDR2, CPA.9.049.vhCDR3, CPA.9.049.vlCDR1, CPA.9.049.vlCDR2, CPA.9.049.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.049;
CPA.9.057, CPA.9.057.VH, CPA.9.057.VL, CPA.9.057.HC, CPA.9.057.LC, CPA.9.057.H1, CPA.9.057.H2, CPA.9.057.H3; CPA.9.057.H4; CPA.9.057.H4(S241P); CPA.9.057.vhCDR1, CPA.9.057.vhCDR2, CPA.9.057.vhCDR3, CPA.9.057.vlCDR1, CPA.9.057.vlCDR2, CPA.9.057.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.057;
CPA.9.059, CPA.9.059.VH, CPA.9.059.VL, CPA.9.059.HC, CPA.9.059.LC, CPA.9.059.H1, CPA.9.059.H2, CPA.9.059.H3; CPA.9.059.H4; CPA.9.059.H4(S241P); CPA.9.059.vhCDR1, CPA.9.059.vhCDR2, CPA.9.059.vhCDR3, CPA.9.059.vlCDR1, CPA.9.059.vlCDR2, CPA.9.059.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.059;
CPA.9.083, CPA.9.083.VH, CPA.9.083.VL, CPA.9.083.HC, CPA.9.083.LC, CPA.9.083.H1, CPA.9.083.H2, CPA.9.083.H3; CPA.9.083.H4; CPA.9.083.H4(S241P); CPA.9.083.vhCDR1, CPA.9.083.vhCDR2, CPA.9.083.vhCDR3, CPA.9.083.vlCDR1, CPA.9.083.vlCDR2, CPA.9.083.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.083;
CPA.9.086, CPA.9.086.VH, CPA.9.086.VL, CPA.9.086.HC, CPA.9.086.LC, CPA.9.086.H1, CPA.9.086.H2, CPA.9.086.H3; CPA.9.086.H4; CPA.9.086.H4(S241P); CPA.9.086.vhCDR1, CPA.9.086.vhCDR2, CPA.9.086.vhCDR3, CPA.9.086.vlCDR1, CPA.9.086.vlCDR2, CPA.9.086.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.086;
CPA.9.089, CPA.9.089.VH, CPA.9.089.VL, CPA.9.089.HC, CPA.9.089.LC, CPA.9.089.H1, CPA.9.089.H2, CPA.9.089.H3; CPA.9.089.H4; CPA.9.089.H4(S241P); CPA.9.089.vhCDR1, CPA.9.089.vhCDR2, CPA.9.089.vhCDR3, CPA.9.089.vlCDR1, CPA.9.089.vlCDR2, CPA.9.089.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.089;
CPA.9.093, CPA.9.093.VH, CPA.9.093.VL, CPA.9.093.HC, CPA.9.093.LC, CPA.9.093.H1, CPA.9.093.H2, CPA.9.093.H3; CPA.9.093.H4; CPA.9.093.H4(S241P); CPA.9.093.vhCDR1, CPA.9.093.vhCDR2, CPA.9.093.vhCDR3, CPA.9.093.vlCDR1, CPA.9.093.vlCDR2, CPA.9.093.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.093;
CPA.9.101, CPA.9.101.VH, CPA.9.101.VL, CPA.9.101.HC, CPA.9.101.LC, CPA.9.101.H1, CPA.9.101.H2, CPA.9.101.H3; CPA.9.101.H4; CPA.9.101.H4(S241P); CPA.9.101.vhCDR1, CPA.9.101.vhCDR2, CPA.9.101.vhCDR3, CPA.9.101.vlCDR1, CPA.9.101.vlCDR2, CPA.9.101.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.101; 및
CPA.9.103, CPA.9.103.VH, CPA.9.103.VL, CPA.9.103.HC, CPA.9.103.LC, CPA.9.103.H1, CPA.9.103.H2, CPA.9.103.H3; CPA.9.103.H4; CPA.9.103.H4(S241P); CPA.9.103.vhCDR1, CPA.9.103.vhCDR2, CPA.9.103.vhCDR3, CPA.9.103.vlCDR1, CPA.9.103.vlCDR2, CPA.9.103.vlCDR3 및 scFv-CPA.9.103.
또한, 본 발명은 하이브리도마로부터 생성된 마우스 항체인 다수의 CHA 항체를 제공한다. 당업계에 공지된 바와 같이, 6개의 CDR은 인간 프레임워크 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역에 삽입될 때 또는 가변 중쇄 및 경쇄 도메인이 인간화될 때 유용하다. 따라서, 본 발명은 하기 CDR 세트를 포함하는 항체, 일반적으로 전장 또는 scFv 도메인을 제공하며, 이의 서열은 도 23 및/또는 서열 목록에 표시되어 있다:
CHA.9.536.1, CHA.9.536.1.VH, CHA.9.536.1.VL, CHA.9.536.1.HC, CHA.9.536.1.LC, CHA.9.536.1.H1, CHA.9.536.1.H2, CHA.9.536.1.H3; CHA.9.536.1.H4, CHA.9.536.1.H4(S241P), CHA.9.536.1.vhCDR1, CHA.9.536.1.vhCDR2, CHA.9.536.1.vhCDR3, CHA.9.536.1.vlCDR1, CHA.9.536.1.vlCDR2 및 CHA.9.536.1.vhCDR3;
CHA.9.536.3, CHA.9.536.3.VH, CHA.9.536.3.VL, CHA.9.536.3.HC, CHA.9.536.3.LC, CHA.9.536.3.H1, CHA.9.536.3.H2, CHA.9.536.3.H3; CHA.9.536.3.H4, CHA.9.536.3.H4(S241P); CHA.9.536.3.vhCDR1, CHA.9.536.3.vhCDR2, CHA.9.536.3.vhCDR3, CHA.9.536.3.vlCDR1, CHA.9.536.3.vlCDR2 및 CHA.9.536.3.vhCDR3;
CHA.9.536.4, CHA.9.536.4.VH, CHA.9.536.4.VL, CHA.9.536.4.HC, CHA.9.536.4.LC, CHA.9.536.4.H1, CHA.9.536.4.H2, CHA.9.536.4.H3; CHA.9.536.4.H4, CHA.9.536.4.H4(S241P), CHA.9.536.4.vhCDR1, CHA.9.536.4.vhCDR2, CHA.9.536.4.vhCDR3, CHA.9.536.4.vlCDR1, CHA.9.536.4.vlCDR2 및 CHA.9.536.4.vhCDR3;
CHA.9.536.5, CHA.9.536.5.VH, CHA.9.536.5.VL, CHA.9.536.5.HC, CHA.9.536.5.LC, CHA.9.536.5.H1, CHA.9.536.5.H2, CHA.9.536.5.H3; CHA.9.536.5.H4, CHA.9.536.5.H4(S241P), CHA.9.536.5.vhCDR1, CHA.9.536.5.vhCDR2, CHA.9.536.5.vhCDR3, CHA.9.536.5.vlCDR1, CHA.9.536.5.vlCDR2 및 CHA.9.536.5.vhCDR3;
CHA.9.536.6, CHA.9.536.6.VH, CHA.9.536.6.VL, CHA.9.536.6.HC, CHA.9.536.6.LC, CHA.9.536.6.H1, CHA.9.536.6.H2, CHA.9.536.6.H3; CHA.9.536.6.H4, CHA.9.536.6.vhCDR1, CHA.9.536.6.vhCDR2, CHA.9.536.6.vhCDR3, CHA.9.536.6.vlCDR1, CHA.9.536.6.vlCDR2 및 CHA.9.536.6.vhCDR3;
CHA.9.536.7, CHA.9.536.7.VH, CHA.9.536.7.VL, CHA.9.536.7.HC, CHA.9.536.7.LC, CHA.9.536.7.H1, CHA.9.536.7.H2, CHA.9.536.7.H3; CHA.9.536.7.H4, CHA.9.536.5.H4(S241P); CHA.9.536.7.vhCDR1, CHA.9.536.7.vhCDR2, CHA.9.536.7.vhCDR3, CHA.9.536.7.vlCDR1, CHA.9.536.7.vlCDR2 및 CHA.9.536.7.vhCDR3;
CHA.9.536.8, CHA.9.536.8.VH, CHA.9.536.8.VL, CHA.9.536.8.HC, CHA.9.536.8.LC, CHA.9.536.8.H1, CHA.9.536.8.H2, CHA.9.536.8.H3; CHA.9.536.8.H4, CHA.9.536.8.H4(S241P), CHA.9.536.8.vhCDR1, CHA.9.536.8.vhCDR2, CHA.9.536.8.vhCDR3, CHA.9.536.8.vlCDR1, CHA.9.536.8.vlCDR2 및 CHA.9.536.8.vhCDR3;
CHA.9.560.1, CHA.9.560.1VH, CHA.9.560.1.VL, CHA.9.560.1.HC, CHA.9.560.1.LC, CHA.9.560.1.H1, CHA.9.560.1.H2, CHA.9.560.1.H3; CHA.9.560.1.H4, CHA.9.560.1.H4(S241P), CHA.9.560.1.vhCDR1, CHA.9.560.1.vhCDR2, CHA.9.560.1.vhCDR3, CHA.9.560.1.vlCDR1, CHA.9.560.1.vlCDR2 및 CHA.9.560.1.vhCDR3;
CHA.9.560.3, CHA.9.560.3VH, CHA.9.560.3.VL, CHA.9.560.3.HC, CHA.9.560.3.LC, CHA.9.560.3.H1, CHA.9.560.3.H2, CHA.9.560.3.H3; CHA.9.560.3.H4, CHA.9.560.3.H4(S241P); CHA. 9.560. 3.vhCDR1, CHA. 9.560. 3.vhCDR2, CHA.9.560.3.vhCDR3, CHA.9.560.3.vlCDR1, CHA.9.560.3.vlCDR2 및 CHA.9.560.3.vhCDR3;
CHA.9.560.4, CHA.9.560.4VH, CHA.9.560.4.VL, CHA.9.560.4.HC, CHA.9.560.4.LC, CHA.9.560.4.H1, CHA.9.560.4.H2, CHA.9.560.4.H3; CHA.9.560.4.H4, CHA.9.560.4.H4(S241P), CHA.9.560. 4.vhCDR1, CHA.9.560. 4.vhCDR2, CHA.9.560.4.vhCDR3, CHA.9.560.4.vlCDR1, CHA.9.560.4.vlCDR2 및 CHA.9.560.4.vhCDR3;
CHA.9.560.5, CHA.9.560.5VH, CHA.9.560. 5.VL, CHA.9.560. 5.HC, CHA.9.560.5.LC, CHA.9.560.5.H1, CHA.9.560.5.H2, CHA.9.560.5.H3; CHA.9.560. 5.H4, CHA.9.560.5.vhCDR1, CHA.9.560.5.vhCDR2, CHA.9.560.5.vhCDR3, CHA.9.560.5.vlCDR1, CHA.9.560.5.vlCDR2 및 CHA.9.560.5.vhCDR3;
CHA.9.560.6, CHA.9.560.6VH, CHA.9.560.6.VL, CHA.9.560. 6.HC, CHA.9.560.6.LC, CHA.9.560.6.H1, CHA.9560.6.H2, CHA.9.560.6.H3; CHA.9.560.6.H4, CHA.9.560.6.H4(S241P), CHA.9.560.6.vhCDR1, CHA.9.560.6.vhCDR2, CHA.9.560.6.vhCDR3, CHA.9.560.6.vlCDR1, CHA.9.560.6.vlCDR2 및 CHA.9.560.6.vhCDR3;
CHA.9.560.7, CHA.9.560.7VH, CHA.9.560.7.VL, CHA.9.560.7.HC, CHA.9.560.7.LC, CHA.9.560.7.H1, CHA.9.560.7.H2, CHA.9.560.7.H3; CHA.9.560.7.H4; CHA.9.560.7.H4(S241P); CHA.9.560.7.vhCDR1, CHA.9.560.7.vhCDR2, CHA.9.560.7.vhCDR3, CHA.9.560.7.vlCDR1, CHA.9.560.7.vlCDR2 및 CHA.9.560.7.vhCDR3;
CHA.9.560.8, CHA.9.560.8VH, CHA.9.560.8.VL, CHA.9.560.8.HC, CHA.9.560.8.LC, CHA.9.560.8.H1, CHA.9.560.8.H2, CHA.9.560.8.H3; CHA.9.560.8.H4, CHA.9.560.8.H4(S241P); CHA.9.560.8.vhCDR1, CHA.9.560.8.vhCDR2, CHA.9.560.8.vhCDR3, CHA.9.560.8.vlCDR1, CHA.9.560.8.vlCDR2 및 CHA.9.560.8.vhCDR3;
CHA.9.546.1, CHA.9.546.1VH, CHA.9.546.1.VL, CHA.9.546.1.HC, CHA.9.546.1.LC, CHA.9.546.1.H1, CHA.9.546.1.H2, CHA.9.546.1.H3; CHA.9.546.1.H4, CHA.9.546.1.H4(S241P), CHA.9.546.1.vhCDR1, CHA.9.546.1.vhCDR2, CHA.9.546.1.vhCDR3, CHA.9.546.1.vlCDR1, CHA.9.546.1.vlCDR2 및 CHA.9.546.1.vhCDR3;
CHA.9.547.1, CHA.9.547.1VH, CHA.9.547.1.VL, CHA.9.547.1.HC, CHA.9.547.1.LC, CHA.9.547.1.H1, CHA.9.547.1.H2, CHA.9.547.1.H3; CHA.9.547.1.H4, CHA.9.547.1.H4(S241P), CHA.9.547.1.vhCDR1, CHA.9.547.1.vhCDR2, CHA.9.547.1.vhCDR3, CHA.9.547.1.vlCDR1, CHA.9.547.1.vlCDR2 및 CHA.9.547.1.vhCDR3;
CHA.9.547.2, CHA.9.547. 2VH, CHA.9.547. 2.VL, CHA.9.547. 2.HC, CHA.9.547. 2.LC, CHA.9.547. 2.H1, CHA.9.547. 2.H2, CHA.9.547. 2.H3; CHA.9.547.2.H4, CHA.9.547.2.H4(S241P), CHA.9.547. 2.vhCDR1, CHA.9.547. 2.vhCDR2, CHA.9.547. 2.vhCDR3, CHA.9.547. 2.vlCDR1, CHA.9.547. 2.vlCDR2 및 CHA.9.547. 2.vhCDR3;
CHA.9.547.3, CHA.9.547. 3VH, CHA.9.547. 3.VL, CHA.9.547. 3.HC, CHA.9.547. 3.LC, CHA.9.547. 3.H1, CHA.9.547. 3.H2, CHA.9.547. 3.H3; CHA.9.547.3.H4, CHA.9.547.3.H4(S241P), CHA.9.547. 3.vhCDR1, CHA. 9.547. 3.vhCDR2, CHA.9.547. 3.vhCDR3, CHA.9.547. 3.vlCDR1, CHA.9.547. 3.vlCDR2 및 CHA.9.547. 3.vhCDR3;
CHA.9.547.4, CHA.9.547. 4VH, CHA.9.547. 4.VL, CHA.9.547. 4.HC, CHA. 9.547. 4.LC, CHA.9.547. 4.H1, CHA.9.547. 4.H2, CHA.9.547. 4.H3; CHA.9.547.4.H4, CHA.9.547.4.H4(S241P), CHA.9.547. 4.vhCDR1, CHA.9.547. 4.vhCDR2, CHA.9.547. 4.vhCDR3, CHA.9.547. 4.vlCDR1, CHA.9.547. 4.vlCDR2 및 CHA.9.547. 4.vhCDR3;
CHA.9.547.6, CHA.9.547. 6 VH, CHA.9.547. 6.VL, CHA.9.547. 6.HC, CHA.9.547. 6.LC, CHA.9.547. 6.H1, CHA.9.547. 6.H2, CHA.9.547. 6.H3; CHA.9.547.6.H4, CHA.9.547.6.H4(S241P), CHA.9.547. 6.vhCDR1, CHA.9.547. 6.vhCDR2, CHA.9.547. 6.vhCDR3, CHA.9.547. 6.vlCDR1, CHA.9.547. 6.vlCDR2 및 CHA.9.547. 6.vhCDR3;
CHA.9.547.7, CHA.9.547. 7VH, CHA.9.547. 7.VL, CHA.9.547. 7.HC, CHA.9.547. 7.LC, CHA.9.547. 7.H1, CHA.9.547. 7.H2, CHA.9.547. 7.H3; CHA.9.547.7.H4, CHA.9.547.7.H4(S241P), CHA.9.547. 7.vhCDR1, CHA.9.547. 7.vhCDR2, CHA.9.547. 7.vhCDR3, CHA.9.547. 7.vlCDR1, CHA.9.547. 7.vlCDR2 및 CHA.9.547. 7.vhCDR3;
CHA.9.547.8, CHA.9.547. 8VH, CHA.9.547. 8.VL, CHA.9.547. 8.HC, CHA.9.547.8.LC, CHA.9.547. 8.H1, CHA.9.547. 8.H2, CHA.9.547. 8.H3; CHA.9.547.8.H4, CHA.9.547.8.H4(S241P), CHA.9.547. 8.vhCDR1, CHA.9.547. 8.vhCDR2, CHA.9.547. 8.vhCDR3, CHA.9.547. 8.vlCDR1, CHA.9.547. 8.vlCDR2 및 CHA.9.547. 8.vhCDR3;
CHA.9.547.9, CHA.9.547.9, CHA.9.547.9VH, CHA.9.547.9.VL, CHA.9. 547.9.HC, CHA.9.547.9.LC, CHA.9.547.9.H1, CHA.9.547.9.H2, CHA.9.547.9.H3; CHA.9.547.9.H4, CHA.9.547.9.H4, CHA.9.547.9.H4(S241P), CHA.9.547.9.H4(S241P), CHA.9.547.9.vhCDR1, CHA.9.547.9.vhCDR2, CHA.9.547.9.vhCDR3, CHA.9.547.9.vlCDR1, CHA.9.547.9.vlCDR2 및 CHA.9.547.9.vhCDR3;
CHA.9.547.13, CHA.9.547.13, CHA.9.547. 13VH, CHA.9. 547.13.VL, CHA.9. 547.13.HC, CHA. 9.547.13.LC, CHA. 9.547.13.H1, CHA.9.547.13.H2, CHA.9. 547.13.H3; CHA.9.547.13.H4, CHA.9.547.13.H4, CHA.9.547.13.H4(S241P), CHA.9.547.13.H4(S241P), CHA.9.547.13.vhCDR1, CHA.9.547.13.vhCDR2, CHA.9.547. 13.vhCDR3, CHA.9.547.13.vlCDR1, CHA.9.547.13.vlCDR2 및 CHA.9.547. 13.vhCDR3;
CHA.9.541.1, CHA.9.541.1.VH, CHA.9.541.1.VL, CHA.9.541.1.HC, CHA.9.541.1.LC, CHA.9.541.1.H1, CHA.9.541.1.H2, CHA.9.541.1.H3; CHA.9.541.1.H4, CHA.9.541.1.H4(S241P), CHA.9.541.1.vhCDR1, CHA.9.541.1.vhCDR2, CHA.9.541.1.vhCDR3, CHA.9.541.1.vlCDR1, CHA.9.541.1.vlCDR2 및 CHA. 9.541.1.vhCDR3;
CHA.9.541.3, CHA.9.541. 3.VH, CHA.9.541. 3.VL, CHA.9.541. 3.HC, CHA.9.541. 3.LC, CHA.9.541. 3.H1, CHA.9.541. 3.H2, CHA.9.541. 3.H3; CHA.9.541.3.H4, CHA.9.541.3.H4(S241P), CHA.9.541. 3.vhCDR1, CHA.9.541. 3.vhCDR2, CHA.9.541. 3.vhCDR3, CHA.9.541. 3.vlCDR1, CHA.9.541. 3.vlCDR2 및 CHA. 9.541. 3.vhCDR3;
CHA.9.541.4, CHA.9.541.4.VH, CHA.9.541. 4.VL, CHA.9.541. 4.HC, CHA.9.541. 4.LC, CHA.9.541. 4.H1, CHA.9.541. 4.H2, CHA.9.541. 4.H3; CHA.9.541.4.H4, CHA.9.541.4.H4(S241P), CHA.9.541. 4.vhCDR1, CHA.9.541. 4.vhCDR2, CHA.9.541. 4.vhCDR3, CHA.9.541. 4.vlCDR1, CHA.9.541. 4.vlCDR2 및 CHA. 9.541. 4.vhCDR3;
CHA.9.541.5, CHA.9.541. 5.VH, CHA.9.541. 5.VL, CHA.9.541. 5.HC, CHA.9.541. 5.LC, CHA.9.541. 5.H1, CHA.9.541. 5.H2, CHA.9.541. 5.H3; CHA.9.541.5.H4, CHA.9.541.5.H4(S241P), CHA.9.541. 5.vhCDR1, CHA.9.541. 5.vhCDR2, CHA.9.541. 5.vhCDR3, CHA.9.541. 5.vlCDR1, CHA.9.541. 5.vlCDR2 및 CHA. 9.541. 5.vhCDR3;
CHA.9.541.6, CHA.9.541. 6.VH, CHA.9.541. 6.VL, CHA.9.541. 6.HC, CHA.9.541. 6.LC, CHA.9.541. 6.H1, CHA.9.541. 6.H2, CHA.9.541.6.H3; CHA.9.541.6.H4, CHA.9.541.6.H4(S241P), CHA.9.541. 6.vhCDR1, CHA.9.541. 6.vhCDR2, CHA.9.541. 6.vhCDR3, CHA.9.541. 6.vlCDR1, CHA.9.541. 6.vlCDR2 및 CHA. 9.541. 6.vhCDR3;
CHA.9.541.7, CHA.9.541. 7.VH, CHA.9.541. 7.VL, CHA.9.541. 7.HC, CHA.9.541. 7.LC, CHA.9.541. 7.H1, CHA.9.541. 7.H2, CHA.9.541. 7.H3; CHA.9.541.7.H4, CHA.9.541.7.H4(S241P), CHA.9.541. 7.vhCDR1, CHA.9.541. 7.vhCDR2, CHA.9.541. 7.vhCDR3, CHA.9.541. 7.vlCDR1, CHA.9.541. 7.vlCDR2 및 CHA. 9.541. 7.vhCDR3; 및
CHA.9.541.8, CHA.9.541. 8.VH, CHA.9.541. 8.VL, CHA.9.541. 8.HC, CHA.9.541. 8.LC, CHA.9.541. 8.H1, CHA.9.541. 8.H2, CHA.9.541. 8.H3; CHA.9.541.8.H4, CHA.9.541.8.H4(S241P); CHA.9.541. 8vhCDR1, CHA.9.541. 8.vhCDR2, CHA.9.541. 8.vhCDR3, CHA.9.541. 8.vlCDR1, CHA.9.541. 8.vlCDR2 및 CHA. 9.541. 8.vhCDR3.
CHA.9.547.18vhCDR1, CHA.9.547.18.vhCDR2, CHA.9.547.18.vhCDR3, CHA.9.547.18.vlCDR1, CHA.9.547.18vlCDR2, 및 CHA.9.547.18.vlCDR3.
상기 항체들의 CDR을 포함하는 scFv의 경우, 이들은 상기 vhCDR을 갖는 가변 중쇄 도메인, 링커 및 상기 vlCDR을 갖는 가변 경쇄 도메인을, 상기와 같이 어느 방향으로든, 포함하는 scFv를 포함하는 scFv로서 표지된다. 따라서 본 발명은 scFv-CHA.9.536.3.1, scFv-CHA.9.536.3, scFv-CHA.9.536.4, scFv-CHA.9.536.5, scFv-CHA.9.536.7, scFv-CHA.9.536.8, scFv-CHA.9.560.1, scFv-CHA.9.560.3, scFv-CHA.9.560.4, scFv-CHA.9.560.5, scFv-CHA.9.560.6, scFv-CHA.9.560.7, scFv-CHA.9.560.8, scFv-CHA.9.546.1, scFv-CHA.9.547.1, scFv-CHA.9.547.2, scFv-CHA.9.547.3, scFv-CHA.9.547.4, scFv-CHA.9.547.6, scFv-CHA.9.547.7, scFv-CHA.9.547.8, scFv-CHA.9.547.9, scFv-CHA.9.547.13, scFv-CHA.9.541.1, scFv-CHA.9.541.3, scFv-CHA.9.541.4, scFv-CHA.9.541.5, scFv-CHA.9.541.6, scFv-CHA.9.541.7 및 scFv-CHA.9.541.8를 포함한다.
또한, CHA.9.543은 TIGIT와 결합하지만 TIGIT-PVR 상호작용을 차단하지는 않는다.
본원에서 논의된 바와 같이, 본 발명은 상기 개략된 바와 같이 CDR의 변이체를 비롯한 상기 성분들 (CPA 및 CHA)의 변이체를 추가로 제공한다. 따라서, 본 발명은, 항체가 TIGIT에 여전히 결합하는 한, CDR 세트 내에 1, 2 또는 3개의 아미노산 차이를 함유할 수 있는, 본원에 개략된 6개 CDR의 세트를 포함하는 항체를 제공한다. 본원에 개략된 CDR 서열과 비교하여 돌연변이를 함유하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체인지 여부를 시험하는 적합한 분석, 예를 들어, 비아코어 분석은 당업계에 공지되어 있다.
또한, 본 발명은 상기 가변 중쇄 및 경쇄의 변이체를 추가로 제공한다. 이 경우에서, Fc 변이체가 사용되는 경우, 상기 가변 중쇄는 본원의 "VH" 서열과 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일하고/거나, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 아미노산 변화를 함유할 수 있다. Fc 변이체가 사용되는 경우, 본원의 "VL" 서열 (특히 CPA.9.086)과 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일하고/거나, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 아미노산 변화를 함유할 수 있는 가변 경쇄가 제공된다. 이들 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 여전히 TIGIT에 결합하는 한, 본 발명은 이들 변이체를 포함한다. 본원에 개략된 CDR 서열과 비교하여 돌연변이를 함유하는 항-TIGIT 항체인지 여부를 시험하는 적합한 분석, 예를 들어, 비아코어 분석은 당업계에 공지되어 있다.
유사하게, Fc 변이체가 사용되는 경우, 본원의 전장 "HC" 및 "LC" 서열 (특히 CPA.9.086)과 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일하고/거나, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 아미노산 변화를 함유하는 중쇄 및 경쇄가 제공된다. 이들 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 여전히 TIGIT에 결합하는 한, 본 발명은 이들 변이체를 포함한다. 본원에 개략된 CDR 서열과 비교하여 돌연변이를 함유하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체인지 여부를 시험하는 적합한 분석, 예를 들어, 비아코어 분석은 당업계에 공지되어 있다.
또한, 본원에서 CPA 또는 CHA 항체의 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 프레임워크 영역은 당업계에 공지된 바와 같이 인간화 (또는 CHA 항체의 경우, 대안적인 인간화 방법이 수행될 수 있는 정도까지 "재인간화"될 수 있음)될 수 있고 (필요에 따라 CDR에서 생성된 변이체를 때때로 포함함), 따라서 도 23의 VH 및 VL 사슬의 인간화 변이체가 생성될 수 있다 (특히 CPA.9.086). 또한, 상기 인간화 가변 중쇄 및 경쇄 도메인은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 (IgG4 (S241P) 포함)로부터의 불변 영역과 같은 인간 불변 영역과 융합될 수 있다.
특히, 당업계에 공지된 바와 같이, 마우스 VH 및 VL 사슬은 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 Ye 등, Nucleic Acids Res. 41:W34-W40 (2013) (인간화 방법에 대해 그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 개략된 바와 같이, NCBI 웹사이트의 IgBLAST 프로그램을 사용하여 인간화될 수 있다. IgBLAST는 마우스 VH 및/또는 VL 서열을 가져와서 이를 공지된 인간 생식계열 서열의 라이브러리와 비교한다. 본원에 나타난 바와 같이, 본원에서 생성된 인간화 서열에 대해, 사용된 데이터베이스는 IMGT 인간 VH 유전자 (F+ORF, 273개의 생식계열 서열) 및 IMGT 인간 VL 카파 유전자 (F+ORF, 74개의 생식계열 서열)였다. 다음과 같은 예시적인 5개의 CHA 서열을 선택하였다: CHA.9.536, CHA9.560, CHA.9.546, CHA.9.547 및 CHA.9.541 (도 23 참조). 인간화의 이러한 구현예에서, 인간 생식계열 IGHV1-46 (대립유전자 1)은 5개 모두의 경우에 수용체 서열 및 인간 중쇄 IGHJ4 (대립유전자 1) 연결 영역 (J 유전자)으로서 선택되었다. 4개 (CHA.7.518, CHA.7.530, CHA.7.538_1 및 CHA.7.538_2) 중 3개의 경우에서, 인간 생식계열 IGKV1-39 (대립유전자 1)가 수용체 서열로서 선택되었고, 인간 경쇄 IGKJ2 (대립유전자 1) (J 유전자)가 선택되었다. J 유전자는 IMGT® the international ImMunoGeneTics information system (www.imgt.org)에서 수집한 인간 연결 영역 서열로부터 선택되었다. CDR은 AbM 정의에 따라 정의되었다 (www.bioinfo.org.uk/abs/ 참조). 일부 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 포함하며, 여기서 상이한 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인의 VH 및 VL 서열이 "혼합되고 매칭"되어 다른 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 생성한다. 이러한 "혼합되고 매칭된" 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 TIGIT 결합은 상기에 기술된 결합 분석, 예를 들어 ELISA 또는 비아코어 분석을 사용하여 시험될 수 있다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 사슬이 혼합되고 매칭될 때, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체된다. 마찬가지로, 일부 구현예에서, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체된다. 예를 들어, 상동성 항체의 VH 및 VL 서열은 특히 혼합 및 매칭에 적합하다.
따라서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 (a) 본원에 열거된 서열; (b) (a)에서 특정된 CDR 아미노산 서열과 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산 치환에 있어 상이한 서열; (c) (a) 또는 (b)에 특정된 서열과 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; (d) 본원에 열거된 아미노산을 인코딩하는 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로 구성된 군으로부터 선택된 CDR 아미노산 서열을 포함한다. 특히, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 (a), (b), (c) 또는 (d)로부터 선택된 서열을 가질 수 있는 CPA.9.086 항체로부터의 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다 (도 26; 놉 인투 홀 이종이량체화 접근법에 대한 아미노산 치환은 굵은 글꼴 및 밑줄로 표시됨):
CHA.7.518.1.H4(S241P) VH IgG1 CH1 IgG4 CH2-CH3 S354C, E356D, M358L, T366W
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C Q D E L TKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3175);
CHA.7.518.1.H4(S241P) VL C카파
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 3176);
및
CPA.9.086 HC C람다 Crossmab IgG4 Y349C, E356D, M358L, T366S, L368A, Y407V
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQV C TLPPSQ D E L TKNQVSL S C A VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL V SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3177);
CPA.9.086 LC CH1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC (서열 번호 3178).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.1 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.1 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열 중 하나를 포함한다. 하기 서열 내의 ()는 참조 인간 IgG4 아미노산 서열에 대비한 결실을 나타낸다. 굵은 글꼴은 참조 IgG4 서열에 대비한 아미노산 치환을 나타낸다.
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 서열 중 하나를 포함한다:
CHA.7.518.1 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3217);
CHA.7.518.1 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3227);
CHA.7.518.1 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3237);
CHA.7.518.1 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG; (서열 번호 3247);
CHA.7.518.1 hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG; (서열 번호 3257);
CHA.7.518.1 hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG; (서열 번호 3267);
CHA.7.518.1 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG; (서열 번호 3277);
CHA.7.518.1 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG; (서열 번호 3287);
CHA.7.518.1 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG; (서열 번호 3297);
CHA.7.518.1 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG; (서열 번호 3307);
CHA.7.518.4 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3317);
CHA.7.518.4 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3327);
CHA.7.518.4 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3337);
CHA.7.518.4 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3347);
CHA.7.518.4 hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3357);
CHA.7.518.4 hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3367);
CHA.7.518.4 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3651);
CHA.7.518.4 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3652);
CHA.7.518.4 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3397);
또는
CHA.7.518.4 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3407).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 항-PVRIG 서열 중 하나를 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3417);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3427);
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3457);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3477);
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3487);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3497);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3507);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3517);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3527);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3557);
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3653);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3654);
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3597);
또는
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3607).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3217);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3217);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3227);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3237);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3417);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3427);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3457);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3517);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3527);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3557);
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3247);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3417);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3427);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3457);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3517);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3527);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3557).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3257);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3267);
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3417);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3427);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3457);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3517);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3527);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3557).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3655);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3487);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3507);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3656);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3607).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3657);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3477);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3497);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3658);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3597).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3297);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3487);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3507);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3659);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3607).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.1 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3307);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3477);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3497);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3660);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3597).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3317);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3327);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3337);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3417);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3427);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3457);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3517);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3527);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3557).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3347);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3417);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3427);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3457);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3517);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3527);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3557).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 hIgG4 변이체 1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3357);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3437);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3447);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 2
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3467);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 2
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3537);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3547);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 2
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3567).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 hIgG4 변이체 2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWEEGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3367);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLggggsggggsggggsEVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3417);
CPA.9.086 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSggggsggggsggggsQSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3427);
CPA.9.086 hIgG4 변이체 1
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSDTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3457);
CHA.9.547.18 scFv (VL-링커-VH) hIgG4 변이체 1
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKggggsggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3517);
CHA.9.547.18 scFv (VH-링커-VL) hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3527);
및
CHA.9.547.18 hIgG4 변이체 1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVA()GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3557).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3661);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3487);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3507);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3662);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3607).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3663);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3477);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3497);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3664);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3597).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3397);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3487);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3507);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3665);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3607).
일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-PVRIG 부분은 하기 항-PVRIG 서열을 포함하고:
CHA.7.518.4 VH hIgG4 Fc Y354C E356D M348L T366W 놉
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCQDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3407);
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 항-TIGIT 부분은 하기 서열로 구성된 군으로부터 선택된 항-TIGIT 서열을 포함한다:
CPA.9.086 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3477);
CPA.9.086 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3497);
CHA.9.547.18 VH C람다- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3666);
및
CHA.9.547.18 VH hIgG4 Fc Y349C E356D L358L T366S L368A Y407V 홀
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSSASASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSQDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 3597).
추가적으로, 본원에 열거된 TIGIT 항체로부터의 결합 도메인과 동일성을 공유하는 TIGIT 결합 도메인을 포함하는 항체가, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 정의에 포함된다. 즉, 특정 구현예에서, 본 발명에 따른 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 바람직한 항-TIGIT 항체의 항-TIGIT 아미노산 서열로부터의 결합 도메인의 전부 또는 일부와 동일한 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 상기 항체는 모체 항-TIGIT 항체의 목적하는 기능적 성질을 유지한다. 2개 서열 간의 동일성 백분율은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이고 (즉, 상동성 % = 동일한 위치의 수/위치의 총수 X 100), 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려한다. 2개 서열 간의 서열 비교 및 동일성 백분율의 측정은 하기의 비제한적인 실시예에서 기술된 바와 같이 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
2개의 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은, ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내에 통합되어 있는 E. Meyers 및 W. Miller의 알고리즘 (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988))을 사용하고 PAM120 무게 잔기 표, 갭 길이 패널티 12 및 갭 패널티 4를 사용하여 측정할 수 있다. 또한, 2개의 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은, GCG 소프트웨어 패키지 (상업적으로 입수가능함)의 GAP 프로그램 내에 통합되어 있는 Needleman 및 Wunsch의 알고리즘 (J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)) 을 사용하고 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 갭 중량 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4 및 길이 무게 1, 2, 3, 4, 5 또는 6를 사용하여 측정할 수 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 단백질 서열은, 예를 들어 관련 서열을 식별하기 위해 공개 데이타베이스에 대한 검색을 수행하기 위해 "질문 서열"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 검색은 Altschul 등 (1990) J Mol. Biol. 215:403-10의 XBLAST 프로그램 (버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램, 점수=50, 단어 길이=3으로 수행되어 본 발명의 적어도 일부 구현예에 따른 항체 분자와 상동적인 아미노산 서열을 획득할 수 있다. 비교 목적으로 갭 정렬 (gapped alignment)을 얻기 위해, Altschul 등, (1997) Nucleic Acids Res. 25 (17):3389-3402에 기술된 바와 같이 갭 BLAST가 사용될 수 있다. BLAST 및 갭 BLAST 프로그램을 사용할 때 각 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수가 사용될 수 있다.
일반적으로, TIGIT 결합 도메인 또는 항원 결합 도메인 간을 비교하기 위한 동일성 백분율은 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90% 이며, 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성 백분율이 바람직하다. 동일성 백분율은 전체 아미노산 서열, 예를 들어 전체 중쇄 또는 경쇄 또는 사슬의 부분을 따라 공유되는 동일성 백분율일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 정의 내에는 전체 가변 영역 (예를 들어, 동일성이 가변 영역을 따라 95% 또는 98% 동일함) 또는 전체 불변 영역을 따라 또는 단지 Fc 도메인을 따라 동일성을 공유하는 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 갖는 것들이 포함된다. 특히, 본 발명은, 상기 CPA.9.086 항체와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성 백분율을 갖는 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 갖는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. 특히, 본 발명은, 상기 CHA.9.547.18 항체와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성 백분율을 갖는 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 갖는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
또한, 동일한 CDR을 갖지만 가변 도메인 (또는 전체 중쇄 또는 경쇄)의 프레임워크 부분에서의 변화를 가질 수 있는 서열도 역시 포함된다. 예를 들어, TIGIT 항체는 도 23에 도시된 CDR과 동일한 CDR을 갖지만, 가변 영역을 따라 동일성이 더 낮을 수 있는, 예를 들어 95 또는 98% 동일성 백분율을 갖는 항체를 포함한다. 특히, 본 발명은 CPA.9.086과 동일한 CDR을 갖지만 CPA.9.086과 95% 또는 98% 동일한 프레임워크 영역을 갖는 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 갖는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. 특히, 본 발명은 CHA.9.547.18과 동일한 CDR을 갖지만 CHA.9.547.18과 95% 또는 98% 동일한 프레임워크 영역을 갖는 TIGIT 결합 부분 또는 항원 결합 도메인을 갖는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
또한, 동일한 CDR을 갖지만 가변 도메인 (또는 전체 중쇄 또는 경쇄)의 프레임워크 부분에서의 변화를 가질 수 있는 서열도 역시 포함된다. 예를 들어, TIGIT 항체는 도 24a 내지 도 24ssss에 도시된 CDR과 동일한 CDR을 갖지만, 가변 영역을 따라 동일성이 더 낮을 수 있는, 예를 들어 95 또는 98% 동일성 백분율을 갖는 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 TIGIT 결합 부분은 US2016/0176963A1, (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 항-TIGIT 항체로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 상기 TIGIT 결합 부분은 US20170281764 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 항-TIGIT 항체로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 상기 TIGIT 결합 부분은 WO2015009856 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 항-TIGIT 항체로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 상기 TIGIT 결합 부분은 US 9713641 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 항-TIGIT 항체로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 상기 TIGIT 결합 부분은 WO2016028656 (그 전체 내용이 원용에 의해 본원에 포함됨)에 제공된 항-TIGIT 항체로부터의 것이다.
1. 결합을 경쟁하는 TIGIT 항체
본 발명은 상기 열거된 항체뿐만 아니라 TIGIT 분자에 특이적으로 결합하기 위해 상기 열거된 항체 (TIGIT에 특이적으로 결합하는 본원에 열거된 CPA 번호)와 경쟁하는 추가적인 항체를 제공한다. 본 발명의 TIGIT 항체는 상이한 에피토프 빈 (bin) 내에 "비닝 (bin)"할 수 있다. 에피토프 비닝 연구에서의 44개의 TIGIT 항체 중에서 4개의 집단이 있으며, 각각은 관련된 쌍을 이룬 차단 양상을 가지고, 본원에 개략된 12개의 구별된 빈으로 분리된다. 본원에 개략된 12개의 구별된 빈이 존재한다: 1) BM9-H4, CHA.9.525, CPA.9.081-H4, CHA.9.538, CHA.9.553, CPA.9.069-H4, CHA.9.543, CHA.9.556, CPA.9.077-H4 및 CHA.9.561; 2) CHA.9.560 및 CHA.9.528; 3) CHA.9.552, CHA.9.521, CHA.9.541, CHA.9.529, CHA.9.519, CHA.9.527 및 CHA.9.549; 4) CPA.9.057-H4 및 CHA.9.554; 5) CHA.9.546, CPA.9.012-H4, CHA.9.547, CPA.9.013-H4, CPA.9.018-H4, MBSA43-M1, 시노 PVR-Fc(리간드), CHA.9.555, PVR-Fc M2A(리간드), BM29-H4, CPA.9.027-H4, CPA.9.049-H4 및 CPA.9.053-H4; 6) CPA.9.064-H4; 7) BM26-H4; 8) CPA.9.059-H4; 9) CHA.9.535 및 CPA.9.009-H4; 10) CHA.9.536, CHA.9.522 및 CPA.9.015-H4; 11) CPA.9.011-H4 및 BM8-H4 및 12) CPA.9.071-H4. WO2018/033798 (그 전체가 원용에 의해 본원에 포함됨)에서 논의된 바와 같다.
따라서, 본 발명은 구별된 에피토프 빈 1 내지 12에 있는 항체와 결합을 경쟁하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 CPA.9.086과 결합을 경쟁하며 CPA.9.086과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제공한다.
상기 열거된 항체와 경쟁하는 추가적인 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 당업계에 공지되고 일반적으로 하기에 개략된 바와 같이, 생성된다. 경쟁적 결합 연구는 일반적으로 SPR/비아코어® 결합 분석뿐만 아니라 ELISA 및 세포-기반 분석을 사용하여 당업계에 공지된 바와 같이 수행될 수 있다.
VII. 항체를 인코딩하는 핵산
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 인코딩하는 핵산 조성물뿐만 아니라 상기 핵산을 함유하는 발현 벡터 및 상기 핵산 및/또는 발현 벡터 조성물로 형질전환된 숙주 세포가 또한 제공된다. 당업자에 의해 이해될 바와 같이, 본원에 도시된 단백질 서열은 유전 코드의 축퇴 (degeneracy)로 인해 임의의 수의 가능한 핵산 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 인코딩하는 핵산 조성물은 항체의 형식에 의존할 것이다. 전통적으로, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 사량체 항체는 2개의 상이한 핵산에 의해 인코딩되며, 하나는 중쇄를 인코딩하고 다른 하나는 경쇄를 인코딩한다. 이들은 당업계에 공지된 바와 같이 단일 발현 벡터 또는 2개의 발현 벡터 내에 삽입될 수 있으며, 이들은 숙주 세포 내로 형질전환되며, 여기서 본 발명의 항체를 형성하도록 발현된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 scFv 구조물이 사용되는 경우, 가변 중쇄-링커-가변 경쇄를 인코딩하는 단일 핵산이 일반적으로 사용되며, 이는 숙주 세포 내로의 형질전환을 위한 발현 벡터 내로 삽입될 수 있다. 핵산은 신호 및 분비 서열, 조절 서열, 프로모터, 복제 원점, 선별 유전자 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 적절한 전사 및 번역 조절 서열을 포함하는 발현 벡터 내에 삽입될 수 있다.
본 발명의 적어도 일부 구현예에 따른 재조합 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 발현하기 위한 바람직한 포유동물 숙주 세포는 당업계에 공지된 바와 같이 중국 햄스터 난소 (CHO 세포), PER.C6, HEK293 및 기타를 포함한다.
핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제된 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 알칼리/SDS 처리, CsCl 밴드화, 컬럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 당업계에 널리 공지된 기타를 포함하는 표준 기술에 의해 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포성 핵산 또는 단백질로부터 정제될 때, 핵산은 "단리되거나" 또는 "실질적으로 순수하게 된다".
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-인코딩 DNA 단편은, VH 및 VL 서열이 가요성 링커에 의해 연결된 VL 및 VH 영역을 갖는 인접한 단일-사슬 단백질로 발현되도록, 가요성 링커를 인코딩하는, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3 및 본원에 논의된 기타를 인코딩하는 또 다른 단편과 작동가능하게 연결될 수 있다.
VIII. 제제
전술한 방법의 실행에 사용되는 치료용 조성물 (특히 적어도 CHA.7.518.1, CHA.7.518.4, CPA.9.086, 및/또는 CHA.9.547.18로부터의 CDR을 포함하는 이중특이적 항체)은 목적하는 전달 방법에 적합한 담체를 포함하는 약학적 조성물로 제형화될 수 있다. 적합한 담체는, 상기 치료용 조성물과 조합될 때 상기 치료용 조성물의 항종양 기능을 유지하고 일반적으로 환자의 면역계와 비반응성인 임의의 물질을 포함한다. 그 예는 멸균 인산염 완충 식염수, 정균수 등과 같은 다수의 표준 약학적 담체 중 임의의 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (일반적으로, Remington 's Pharmaceutical Sciences 16th Edition, A. Osal., Ed., 1980 참조). 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정제는 사용되는 용량과 농도에서 수여자에게 독성이 없으며 완충액을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물로 제형화된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.1.H4(S241P) VH IgG1 CH1 IgG4 CH2-CH3 S354C, E356D, M358L, T366W
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C Q D E L TKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3175);
CHA.7.518.1.H4(S241P) VL C카파
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 3176);
및
CPA.9.086 HC C람다 Crossmab IgG4 Y349C, E356D, M358L, T366S, L368A, Y407V
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQV C TLPPSQ D E L TKNQVSL S C A VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL V SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3177);
CPA.9.086 LC CH1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC (서열 번호 3178).
일부 구현예에서, 약학적 조성물로 제형화된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
PVRIG에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는
굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨
)
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTDYN INWVRQAPGQGLEWMGY IYPYIGGS GYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC AREDKTARNAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVS ENIYDV LAWYQQKPGKAPKLLIY EAT NLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
TIGIT에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는
굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨
)
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYI MSWVRQAPGKGLEWVAT ISGGSKGQ YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AKWLLSYYAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRAS QSMAIW LSWYQQKPGKAPKLLIY KAS KSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQGQSYPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 약학적 조성물로 제형화된 항-PVRIG 항체는 하기 서열을 포함한다:
PVRIG에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는
굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨
)
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTDYN INWVRQAPGQGLEWMGY IYPYIGGS GYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC AREDKTARNAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
및
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVS ENIYDV LAWYQQKPGKAPKLLIY EAT NLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 3180).
일부 구현예에서, 약학적 조성물로 제형화된 항-TIGIT 항체는 하기 서열을 포함한다:
TIGIT에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는
굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨
)
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYI MSWVRQAPGKGLEWVAT ISGGSKGQ YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AKWLLSYYAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
및
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRAS QSMAIW LSWYQQKPGKAPKLLIY KAS KSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQGQSYPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
바람직한 구현예에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 포함하는 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 염으로서 존재하는 것과 같은 수용성 형태일 수 있으며, 이는 산 및 염기 부가염 모두를 포함하도록 의미한다. "약학적으로 허용가능한 산 부가염"은 유리 염기의 생물학적 유효성을 유지하고 생물학적으로 또는 달리 해롭지 않으며, 무기산 등으로 형성된 염을 의미한다. "약학적으로 허용가능한 염기 부가염"은 무기 염기 등으로부터 유래된 염을 포함한다.
바람직하게는 멸균 수용액 형태의 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 포함하는 약학적 조성물의 투여는 피하 및 정맥내를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 방식으로 수행될 수 있다.
용량 및 투여 빈도는 바람직한 구현예에서 치료적으로 또는 예방적으로 효과적이 되도록 선택된다. 당업계에 공지된 바와 같이, 단백질 분해, 전신 대 국소 전달, 및 새로운 프로테아제 합성 속도뿐만 아니라 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이, 투여시간, 약물 상호작용 및 병태의 중증도를 위한 조정이 필요할 수 있고, 당업자에 의한 통상적인 실험법으로 확인가능할 것이다.
환자를 치료하기 위해, 치료적 유효 용량의 본 발명의 Fc 변이체를 투여할 수 있다. 본원에서 "치료적 유효 용량"은 투여가 목적하는 효과를 생성하는 용량을 의미한다. 정확한 용량은 치료 목적에 따라 달라질 것이며, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인가능할 것이다.
IX. 항체를 사용하는 방법
본 발명의 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 다수의 진단적 및 치료적 응용 분야에 사용될 수 있다. 일부 경우에서, 환자에게 투여할 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 결정은 샘플 종양 생검의 발현 수준 (유전자 발현 수준 또는 단백질 발현 수준 중 하나, 후자가 바람직함)의 평가를 사용하여 수행되어, 샘플이 TIGIT 및/또는 PVRIG를 과다발현하는 여부를 측정하여 투여할 치료 항체를 결정한다.
A. 진단적 용도
따라서, 본 발명의 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 또한 PVRIG 및/또는 TIGIT를 각각 과다발현하는 종양의 영상화를 포함하는 시험관내 또는 생체내 진단에서 용도를 찾는다. 그러나 본원에 논의된 바와 같이, TIGIT 및 PVRIG 둘 모두는 면역항암제 표적 단백질로서 암 세포에서 반드시 과다발현되는 것이 아니라 암에서의 (예를 들어, 종양 미세환경 (TME로도 지칭됨)에서의) 면역 침윤물 내에 존재하는 것을 주목해야 한다. 따라서, 암 진단을 초래하는 것은 작용 메커니즘, 예를 들어 T 세포 및 NK 세포와 같은 면역 세포의 활성화이다. 따라서, 이들 항체는 암을 진단하는 데 사용될 수 있다. PVRIG 항체를 사용한 진단은 또한, 원용에 의해 본원에 포함된 WO 2016/134333, [0434 내지 0459]에 개략되어 있다.
일반적으로, 진단은 여러 방식으로 수행될 수 있다. 일 구현예에서, 항체가 내인성 TIGIT에 결합하도록, 생검 샘플과 같은 환자로부터의 조직을 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 (일반적으로 표지됨)와 접촉시킨다. 암의 존재 여부를 측정하기 위해, 동일한 환자 또는 참조 샘플로부터의 정상적인 비-암성 조직의 신호 수준과 신호 수준을 비교한다. 생검 샘플은 고형 종양, 혈액 샘플 (ALL, T 세포 림프종 등과 같은 림프종 및 백혈병의 경우)로부터 유래될 수 있다.
일반적으로, 이 구현예에서, 상기 표지된 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 예를 들어, 당업계에 널리 공지된 바와 같이 형광 측정기 또는 다른 광학적 검출 시스템을 사용하여 검출되는 형광단 또는 다른 광학적 표지로 표지된다. 대안적인 구현예에서, 이차 표지된 항체를, 당해 기술분야에 공지된 바와 같이, 예를 들어 상이한 포유동물 (마우스, 래트, 토끼, 염소 등)로부터의 항-인간 IgG 항체를 사용하여 샌드위치 분석을 형성하는 샘플과 접촉시킨다. 대안적으로, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 직접적으로 (예를 들어, 비오틴을 사용하여)표지될 수 있으며, 검출은 당업계의 표지화 제제에 대한 이차 Ab에 의해 수행될 수 있다.
일단 TIGIT의 과다발현이 관찰되면, 치료는 본원에 개략된 본 발명에 따른 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 투여로 진행될 수 있다.
다른 구현예에서, 생체내 진단이 수행된다. 일반적으로, 이 구현예에서, 상기 항-TIGIT 항체 (항체 단편 포함)를 환자에게 주입하고 영상화가 수행된다. 이 구현예에서, 예를 들어 상기 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 일반적으로 가돌리늄 킬레이트, mAb (단편 포함)의 방사성 표지화와 같은 광학적 표지 또는 MRI 표지로 표지된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 진단 및 치료 둘 모두 또는 진단 단독을 위해 사용된다. 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 진단 및 치료 둘 모두에 사용되는 경우, 일부 구현예는, 상기 진단용 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 치료용 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체와 결합을 경쟁하지 않도록, 2개의 상이한 에피토프에 대한 2개의 상이한 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 필요로 하지만, 일부 경우에서는 동일한 항체가 둘 모두에 사용될 수 있다. 예를 들어, 이는, 상이한 빈 (bin)들에 있는 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체들, 예를 들어 본원에 개략된 것과 같은, TIGIT 상의 상이한 에피토프들 또는 PVRIG 상의 상이한 에피토프들에 결합하는 항체들을 사용하여 수행될 수 있다. 따라서 본 발명은 진단용 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 및 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 포함하는 조성물을 포함하며, 일부 구현예에서, 상기 진단용 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 본원에 기술된 바와 같이 표지된다. 또한, 치료용 및 진단용 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 조성물은 본원에 개략된 다른 약물과 함께 공동 투여될 수 있다.
진단에 사용하는 데 특히 유용한 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 이들 열거된 항체 또는 변이체 서열을 갖는 CDR을 사용하는 항체 또는 도 5, 도 7, 및/또는 도 23의 항체 중 임의의 것과 결합을 경쟁하는 것들을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
많은 구현예에서, 진단용 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 표지된다. 본원에서 "표지된"은, 본원에 개시된 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가, 스크리닝 또는 진단 절차에서의 검출을 가능하게 하도록 부착된 하나 이상의 원소, 동위원소 또는 화학적 화합물을 갖는 것을 의미한다. 일반적으로 표지는 하기와 같은 여러 부류로 나뉜다: a) 항체에 의해 인식되는 융합 파트너로서 혼입된 에피토프일 수 있는 면역 표지, b) 방사성 동위원소 또는 중동위원소일 수 있는 동위원소 표지, c) 형광 및 비색 염료, 또는 다른 표지화 방법을 가능하게 하는 비오틴과 같은 분자를 포함할 수 있는 소분자 표지, 및 d) 입자 (초음파 표지화를 위한 거품 포함) 또는 신체 영상화를 허용하는 상자성 표지와 같은 표지. 표지는 임의의 위치에서 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로 혼입될 수 있으며, 당업계에 공지된 바와 같이, 단백질 발현 동안 시험관내 또는 생체내에서 혼입될 수 있다.
진단은 하기 기술된 바와 같이 전신 영상화를 가능하게 하는 진단용 항체의 투여에 의해 생체내에서 또는 환자로부터 제거된 샘플 상에서 시험관내에서 수행될 수 있다. 이 맥락에서의 "샘플"은 체액 (혈액, 소변, 혈청, 림프, 타액, 항문과 질 분비물, 땀과 정액을 포함하나 이에 제한되지는 않음)뿐만 아니라 적절한 조직의 생검 결과와 같은 조직 샘플을 포함하나 이에 제한되지는 않는 많은 것들을 포함한다.
또한, 하기 및 실시예 및 도면에 개략된 바와 같이, PVRIG 및/또는 TIGIT의 단백질 발현 수준에 관한 정보는 환자에게 투여되어야 할 항체를 결정하는 데 사용될 수 있다.
B. 암 치료
본 발명의 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 단일요법으로서 암의 치료에서 특정 용도를 찾는다. 면역항암제 작용 메커니즘의 특성으로 인해, PVRIG 및/또는 TIGIT는 반드시 특정 암 유형에서 과다발현되거나 이와 상관 관계를 가질 필요는 없으며; 즉, 목표는 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 T 세포 및 NK 세포 활성화를 탈억제하게 하여 면역계가 암을 추격하게 하는 것이다.
일부 구현예에서, 도 4, 5, 7, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 26, 및/또는 40의 항-PVRIG 항체 서열을 포함하는 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체, 특히 S241P 치환을 포함하는 것들이 암의 치료 (하기에 개략된 T 세포 및/또는 NK 세포의 활성화 포함)에서 용도를 찾는다. 도 4, 5, 7, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 26, 및/또는 40의 항-PVRIG 항체 서열을 포함하는 임의의 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 암의 치료 (하기에 개략된 T 세포 및/또는 NK 세포의 활성화 포함)에서 용도를 찾는 반면, 일부 구현예에서는, CHA.7.518.1, CHA.7.518.4, 및/또는 CHA.7.538.2를 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 특정 용도를 찾는다.
도 23, 24, 및/또는 41의 항-TIGIT 항체 서열을 포함하는 임의의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 암의 치료 (하기에 개략된 T 세포 및/또는 NK 세포의 활성화 포함)에서 용도를 찾는 반면, 일부 구현예에서는, CPA.9.086.H4(S241P), CPA.9.083.H4(S241P), CHA.9.547.7.H4(S241P), 및 CHA.9.547.13.H4(S241P), CHA.9.547.18를 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 특정 용도를 찾는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 또한 도 4, 5, 7, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 26, 및/또는 40의 항-PVRIG 항체 서열을 포함하는 항-PVRIG 항체를 제공하며, 이는 암의 치료 (하기에 개략된 T 세포 및/또는 NK 세포의 활성화 포함)에서 용도를 찾는다. 일부 구현예에서, 상기 항-PVRIG 항체는 하기를 포함한다:
PVRIG에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는 굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨)
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTDYN INWVRQAPGQGLEWMGY IYPYIGGS GYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC AREDKTARNAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
및
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVS ENIYDV LAWYQQKPGKAPKLLIY EAT NLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 3180).
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 암의 치료에서 특정 용도를 찾는다. 일반적으로, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 암 세포를 직접 공격하는 것이 아니라, 일반적으로 체크포인트 수용체 (예를 들어, PVRIG 또는 TIGIT)의 작용을 억제함으로써 면역계를 자극한다는 점에서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 면역조절성이다. 따라서 종양 성장 및 발달에 중요한 분자 경로를 억제하고/거나 종양 세포를 고갈시키는 것을 목표로 하는 종양 표적 요법과는 달리, 암 면역요법은 환자 자신의 면역계를 자극하여 암세포를 제거하여, 오래 지속되는 종양 파괴를 제공하는 것을 목표로 한다. 암 면역요법에는 다양한 접근법이 사용될 수 있고, 이들 중, 종양-특이적 T 세포 반응을 유도하는 치료용 암 백신 및 면역억제 경로를 제거하는 면역자극성 항체 (예를 들어, 억제 수용체의 길항제 = 면역 체크포인트)가 있다.
표적 요법 또는 통상적인 항암 요법에서의 임상 반응은 암세포가 저항성을 나타내고 종양 재발이 일어나기 때문에 일시적인 경향이 있다. 그러나, 지난 수년 동안 암 면역요법의 임상적 사용은 이러한 유형의 요법이 장기적인 생존에 극적인 영향을 미치는 지속적인 임상 반응을 나타낼 수 있음을 보여주었다. 그러나, 반응이 장기적이기는 하지만 단지 소수의 환자만이 반응한다 (매우 많은 수의 환자가 반응하지만 반응이 일시적인, 통상적인 요법 또는 표적 요법과 대조적임).
종양이 임상적으로 검출될 때는 이미 면역저항성 및 면역억제성 성질을 획득하고 다양한 메커니즘 및 다양한 면역 세포를 통해 면역억제성 종양 미세환경을 생성함으로써 면역 방어계를 회피하였다.
따라서, 본 발명의 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 암을 치료하는 데 유용하다. 면역항암제 작용 메커니즘의 특성으로 인해, 체크포인트 수용체 (TIGIT 또는 PVRIG)는 반드시 특정 암 유형에서 과다발현되거나 이와 상관 관계를 가질 필요가 없으며; 즉, 목표는 상기 항체가 T 세포 및 NK 세포 활성화를 탈억제하게 하여 면역계가 암을 추격하게 하는 것이다.
본원에서 "암"은 악성 성장 또는 종양 (예를 들어, 조절되지 않은 세포 성장)을 유발하는 비정상적이고 제어되지 않은 세포 분열을 특징으로 하는 임의의 신생물 질환 (침습성 또는 전이성)을 광범위하게 의미한다. 본원에서 용어 "암" 또는 "암성"은 악성 성장 또는 종양, 본원에 기술된 비제한적인 예를 유발하는 비정상적이고 조절되지 않는 세포 분열을 특징으로 하는 임의의 신생물 질환 (침습성, 비침습성 또는 전이성)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 이는 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물의 임의의 생리학적 병태를 포함한다. 암의 예는 실시예에 예시되어 있고, 또한 본 명세서 내에 역시 기술되어 있다.
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 사용하여 치료될 수 있는 암의 비제한적인 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예는 편평세포암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 샘암종 및 폐의 편평 암종 포함), 복막 암, 간세포암, 위암 (위장암 포함), 식도암, 흑색종, 중피종, 메르켈 세포암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액샘 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상샘암, 간 임종 및 다양한 유형의 두경부암, 후두암, 구강암, 요로상피암, KRAS 돌연변이 종양, 골수형성이상증후군 (MDS) 및 B-세포 악성 종양, B-세포 림프종 (저등급/여포 비호지킨 림프종 (NHL); 소림프성 (SL) NHL; 중등급/여포 NHL; 중등급 확산 NHL; 고등급 면역모세포 NHL; 고등급 림프모구 NHL; 고등급 비절단성 소세포 NHL; 대용량 질환 NHL; 피질세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 왈덴스트롬 거대글로불린혈증 포함), 만성 림프세포 백혈병 (CLL), 급성 림프모구 백혈병 (ALL), 털세포 백혈병, 만성 골수모세포 백혈병, 성인 T-세포 백혈병/림프종; 골수종; 다발성 골수종 및 이식후 림프증식성 장애 (PTLD), 악성 림프종, 모종증, 부종 (예를 들어, 뇌종양과 관련된 것) 및 메이그 증후군과 관련된 비정상적인 혈관 증식, 직장암, 신장 세포암, 연조직 육종, 카포시 육종, 유암종 암종, 초기 또는 진행 난소 (전이성 포함)를 포함한다.
WO2016/134333의 실시예에 나타난 바와 같이, PVRIG는 다양한 기원의 다수의 상이한 종양에서 종양 림프구 침윤에서 과다발현되고/거나 이와 상관 관계를 가지며 (CD3, CD4, CD8 및 PD-1 발현과의 상관 관계에 의해 입증됨), 따라서, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암, 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (비호지킨 림프종 (NHL) 및 호지킨 림프종 (HD)), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 및 식도암을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 암을 치료하는 데 유용하다.
특히, PVRIG 결합 부분으로서 CHA.7.518.1을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, PVRIG 결합 부분으로서 CHA.7.538.1.2을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, PVRIG 결합 부분으로서 CHA.7.518.4을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, TIGIT 결합 부분으로서 CPA.9.086을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, TIGIT 결합 부분으로서 CPA.9.083을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, TIGIT 결합 부분으로서 CHA.9.547.7을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, TIGIT 결합 부분으로서 CHA.9.547.13을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, TIGIT 결합 부분으로서 CPA.9.547.18을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS), 식도암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, 하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)을 치료하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.1.H4(S241P) VH IgG1 CH1 IgG4 CH2-CH3 S354C, E356D, M358L, T366W
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C Q D E L TKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3175);
CHA.7.518.1.H4(S241P) VL C카파
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 3176);
및
CPA.9.086 HC C람다 Crossmab IgG4 Y349C, E356D, M358L, T366S, L368A, Y407V
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQV C TLPPSQ D E L TKNQVSL S C A VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL V SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3177);
CPA.9.086 LC CH1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC (서열 번호 3178).
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, 하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)을 치료하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 중 어느 하나를 포함한다:
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.1 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, 하기 서열을 포함하는 항-PVRIG 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)을 치료하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 중 어느 하나를 포함한다:
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.1 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, 하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)을 치료하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 중 어느 하나를 포함한다:
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634);
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.1 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539);
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668);
또는
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 LC
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특히, 하기 서열을 포함하는 항-PVRIG 항체는, 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 방광암, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)을 치료하는 데 사용될 수 있다:
하기 서열을 포함하는 항-PVRIG 항체:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179)
및
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180).
일부 구현예에서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
C. 조합 요법
당업계에 공지된 바와 같이, 면역요법 표적을 표적화하는 치료용 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 및 질환 병태에 특이적인 추가적 치료제를 포함하는 조합 요법이 크게 유망하다. 예를 들어, 면역요법 분야에는 화학치료제 (소분자 약물 또는 항종양 항체) 또는 면역항암제 항체 (예를 들어, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체)를 사용하는 다수의 유망한 조합 요법이 존재한다.
용어 "~와 조합하여" 및 "공동 투여"는 정확히 동시에 예방제 또는 치료제를 투여하는 것으로 제한되지 않는다. 대신에, 상기 항체 및 상기 다른 제제 또는 제제들은, 이들이 단지 본 발명의 항체 또는 상기 다른 제제 또는 제제들을 사용한 치료에 대비하여 증가된 이익을 제공하도록 함께 작용할 수 있도록, 순차적으로 및 시간 간격 내에 투여되는 것을 의미한다. 상기 항체 및 상기 다른 제제 또는 제제들은 부가적으로 작용하는 것이 바람직하며, 상승적으로 작용하는 것은 특히 바람직하다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 적절하게 조합하여 존재한다. 숙련된 의사는 경험적으로, 또는 제제의 약동학 및 작용 방식, 각 치료제의 적절한 용량 또는 용량들뿐만 아니라 적절한 투여 시기 및 방법을 고려하여 결정할 수 있다.
따라서, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하나 이상의 다른 치료 요법 또는 제제와 동시에 투여될 수 있다. 상기 추가적인 치료 요법 또는 제제는 상기 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 효능 또는 안전성을 개선시키기 위해 사용될 수 있다. 또한, 상기 추가적인 치료 요법 또는 제제는 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 작용을 변경하기보다는 동일한 질환 또는 동반 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 화학요법, 방사선요법, 또는 화학요법 및 방사선요법 둘 모두와 함께 환자에게 투여될 수 있다.
1. 소분자 화학치료제와 조합된 PVRIG, TIGIT, 및/또는 PVRIG/TIGIT 이중특이적 항체
본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 세포독성제, 화학치료제, 사이토카인, 성장 억제제, 항-호르몬제, 키나제 억제제, 항-혈관형성 제제, 심장보호제, 면역자극성 제제, 면역억제제, 혈액학적 세포의 증식을 촉진시키는 제제, 혈관형성 억제제, 단백질 티로신 키나제 (PTK) 억제제 또는 다른 치료제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제와 조합하여 투여될 수 있다.
이러한 맥락에서 "화학치료제"는 암의 치료에 유용한 화합물이다. 화학치료제의 예는 티오테파 및 사이클로스포스포아미드와 같은 알킬화제, 부설판, 임프로설판 및 피포설판과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카보쿠온, 메튜레도파 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트레에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토제닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라하이드로칸나비놀 (드로나비놀, 마리놀'); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (HYCAMTN®), CPT-11 (이리노테칸, CAMPTOSAR®), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴 및 9-아미노캄프토테신 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토파이신 (특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴; 듀오카마이신 (합성 유사체 KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스펀지스타틴; 클로로암부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 염산염, 멜팔란, 노벰비신, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님무스틴과 같은 니트로소우레아; 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마II 및 칼리케아미신 오메가II (예를 들어, Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994) 참조); 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신; 에스페라미신과 같은 항생제; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 발색단백질 에네디인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 액티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 캑티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조 -5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페프로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 퀘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU)과 같은 항-대사물질; 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘과 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄과 같은 항-아드레날; 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세그락톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄신 및 안사미토신과 같은 메이탄시노이드; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK.RTM. 폴리사카라이드 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®); 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 택소이드, 예를 들어 파크리탁셀 (TAXOL®; Bristol-Myers Squibb Oncology, NJ), ABRAXANE® 파크리탁셀의 무-크레모포어, 알부민-조작된 나노입자 제제 (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) 및 도세탁셀 (TAXOTERE®; Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로란부실; 젬시타빈 (GEMZARM®); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴 (VELBAN®); 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴 (ONCOVIN®); 옥살리플라틴; 류코보빈; 비노렐빈 (NAVELBINE®); 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 카페시타빈 (XELODA®); 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 둘 이상의 조합, 예를 들어 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니졸론의 조합 요법의 약자인 CHOP; 사이클로포스파미드, 빈크리스틴 및 프레드니졸론의 조합 요법의 약자인 CVP; 및 5-FU 및 류코보린과 조합된 옥살리플라틴 (ELOXATIN®)을 사용한 치료 요법의 약자인 FOLFOX를 포함한다.
적어도 일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 당업계의 공지된 표준 간호의 암 치료 중 임의의 것과 조합하여 사용될 수 있다 (예를 들어, http://www.cancer.gov/cancertopics에서 찾을 수 있음).
따라서, 일부 경우에서, 본원에 개략된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 (특히, PVRIG 결합 부분으로서 CHA.7.538.1.2 및/또는 CHA.7.518.1을 포함하는 것들)는 화학치료제와 조합될 수 있다. 유사하게, 본원에 개략된 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체 (특히, TIGIT 결합 부분으로서 CPA.9.086, CPA.9.083 및/또는 CHA.9.547.13을 포함하는 것들)는 화학치료제와 조합될 수 있다.
일부 구현예에서, 화학치료제와 조합될 수 있는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.1.H4(S241P) VH IgG1 CH1 IgG4 CH2-CH3 S354C, E356D, M358L, T366W
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C Q D E L TKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3175)
CHA.7.518.1.H4(S241P) VL C카파
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 3176)
CPA.9.086 HC C람다 Crossmab IgG4 Y349C, E356D, M358L, T366S, L368A, Y407V
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSSASGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQV C TLPPSQ D E L TKNQVSL S C A VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL V SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 3177)
CPA.9.086 LC CH1
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVLSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC (서열 번호 3178)
일부 구현예에서, 화학치료제와 조합될 수 있는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
PVRIG에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는 굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨 )
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTDYN INWVRQAPGQGLEWMGY IYPYIGGS GYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC AREDKTARNAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 3179);
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVS ENIYDV LAWYQQKPGKAPKLLIY EAT NLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 3180);
및
TIGIT에 대한 항체 서열 (IMGT CDR 정의는 굵은 글꼴 및 밑줄이 표시됨 )
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYI MSWVRQAPGKGLEWVAT ISGGSKGQ YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AKWLLSYYAMDY WGQGTLVTVSS (서열 번호 1664);
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRAS QSMAIW LSWYQQKPGKAPKLLIY KAS KSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQGQSYPYT FGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 화학치료제와 조합될 수 있는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539)
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544)
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634)
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639).
일부 구현예에서, 화학치료제와 조합될 수 있는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179)
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180)
및
CPA.9.086 VH
EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS (서열 번호 1634)
CPA.9.086 VL
QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL (서열 번호 1639).
일부 구현예에서, 화학치료제와 조합될 수 있는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.1 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1539)
CHA.7.518.1 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1544)
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664)
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
일부 구현예에서, 화학치료제와 조합될 수 있는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 하기 서열을 포함한다:
CHA.7.518.4 VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179)
CHA.7.518.4 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180)
및
CHA.9.547.18 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664)
CHA.9.547.18 VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668).
치료의 평가
일반적으로, 본 발명의 항-PVRIG, 항-TIGIT, 및/또는 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 암을 가진 환자에게 투여되고, 효능은 본원에 기술된 다수의 방법으로 평가된다. 따라서, 암 부하, 종양의 크기, 전이의 존재 또는 정도의 평가 등과 같은 효능의 표준 분석이 수행될 수 있으며, 면역항암제 치료도 마찬가지로 면역 상태 평가에 기초하여 평가될 수 있다. 이는 시험관내 및 생체내 분석을 비롯한 다수의 방식으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 종양 부하, 크기, 침습성, LN 수반, 전이 등과 같은 "구식" 측정과 함께 면역 상태의 변화 (예를 들어, ipi 치료 후 ICOS+ CD4+ T 세포의 존재)를 평가할 수 있다. 따라서, 하기 중 임의의 것 또는 전부가 평가될 수 있다: CD4+ T 세포 활성화 또는 증식, CD8+ T (CTL) 세포 활성화 또는 증식, CD8+ T 세포-매개 세포독성 활성 및/또는 CTL 매개 세포 고갈, NK 세포 활성 및 NK 매개 세포 고갈에 미치는 PVRIG 또는 TIGIT의 억제 효과, Treg 세포 분화 및 증식 및 Treg- 또는 골수 유래 억제인자 세포 (MDSC)-매개 면역 억제 또는 면역 내성에 미치는 PVRIG 또는 TIGIT의 강화 효과 및/또는 면역 세포에 의한 전염증성 사이토카인 생산 예를 들어 T 또는 다른 면역 세포에 의한 IL-2, IFN-γ 또는 TNF-α 생산에 미치는 PVRIG 또는 TIGIT의 효과.
일부 구현예에서, 치료의 평가는 예를 들어 CFSE 희석 방법, 면역 효과기 세포의 Ki67 세포내 염색 및 3H-티미딘 도입 방법을 사용하여 면역 세포 증식을 평가함으로써 수행된다.
일부 구현예에서, 치료의 평가는 CD25, CD69, CD137, ICOS, PD1, GITR, OX40 중 하나 이상을 포함하는 활성화 관련 마커의 단백질 수준 증가 또는 유전자 발현 증가, 및 CD107A의 표면 발현에 의해 측정되는 세포 탈과립화를 평가함으로써 수행된다.
일부 구현예에서, 치료의 평가는 예를 들어 본 발명의 항체의 투여 전에 치료의 부재하에 T 세포 증식의 양을 평가함으로써 수행된다. 투여 후, 환자가 증가된 T 세포 증식을 갖고, 예를 들어 환자의 T 세포의 서브세트가 증식하면, 이는 T 세포가 활성화되었음을 표시하는 것이다.
유사하게, 본 발명의 항체를 사용한 치료의 평가는 치료의 유효성을 평가하기 위해 투여 전 및 투여 후 환자의 IFNγ 수준을 측정함으로써 수행될 수 있다. 이는 수 시간 또는 수 일 내에 수행될 수 있다.
일반적으로, 유전자 발현 분석은 당업계에 공지된 바와 같이 수행된다. 예를 들어 Goodkind 등, Computers and Chem. Eng. 29 (3):589 (2005), Han 등, Bioinform. Biol. Insights 11/15/15 9 (Suppl. 1): 29-46, Campo 등, Nod. Pathol. 2013 Jan; 26 suppl. 1: S97-S110 (이들 문헌의 유전자 발현 측정 기술은 원용에 의해 명확히 본원에 포함됨) 참조.
일반적으로, 단백질 발현 측정 또한 당업계에 공지된 바와 유사하게 수행되며, 예를 들어 Wang 등, Recent Advances in Capillary Electrophoresis-Based Proteomic Techniques for Biomarker Discovery, Methods. Mol. Biol. 2013:984:1-12; Taylor 등, BioMed Res. Volume 2014, Article ID 361590, 8 pages, Becerk 등, Mutat. Res 2011 June 17:722(2): 171-182 (이들 문헌의 측정 기술은 원용에 의해 명확히 본원에 포함됨)을 참조한다.
일부 구현예에서, 치료의 평가는 효소 활성 (프로테아제 활성 포함), 세포막 투과성, 세포 부착성, ATP 생산, 보조효소 생산 및 뉴클레오티드 흡수 활성과 같은 수많은 세포 매개변수를 평가함으로써 표적 세포 생존능 검출에 의해 측정된 세포독성 활성을 평가함으로써 수행된다. 이러한 분석의 특정 예는 트립판 블루 또는 PI 염색법, 51Cr 또는 35S 방출 방법, LDH 활성, MTT 및/또는 WST 분석, 칼세인-AM 분석, 발광성 기반 분석 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 구현예에서, 치료의 평가는, 널리 공지된 기술을 사용하여 IFNγ, TNFα, GM-CSF, IL2, IL6, IL4, IL5, IL10, IL13를 포함하나 이에 제한되지는 않는 사이토카인을 사용하는 배양 상청액에서의 세포내 측정으로, 사이토카인 생산에 의해 측정된 T 세포의 활성을 평가함으로써 수행된다.
따라서, 치료의 평가는 하기 중 하나 이상을 평가하는 분석을 사용하여 수행될 수 있다: (i) 면역 반응의 증가, (ii) αβ 및/또는 γδ T 세포의 활성화 증가, (iii) 세포독성 T 세포 활성의 증가, (iv) NK 및/또는 NKT 세포 활성의 증가, (v) αβ 및/또는 γδ T-세포 억제의 완화, (vi) 전염증성 사이토카인 분비의 증가, (vii) IL-2 분비의 증가, (viii) 인터페론-γ 생산의 증가, (ix) Th1 반응의 증가, (x) Th2 반응의 감소, (xi) 조절 T 세포 (Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성의 감소 또는 제거.
E. 효능을 측정하기 위한 분석
일부 구현예에서, T 세포 활성화는 실시예에 기술된 바와 같이 혼합 림프구 반응 (MLR) 분석을 사용하여 평가된다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 상이한 인자의 인산화 또는 탈인산화에 의해 또는 다른 번역후 변형을 측정함으로써 측정되는 면역 반응의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD137, CD107a, PD1 등의 발현 변화에 의해 측정된, αβ 및/또는 γδ T세포의 활성화의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 암 세포와 같은 표적 세포의 직접적인 살상에 의해 또는 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD137, CD107a, PD1 등의 발현 변화에 의해 측정된, 세포독성 T 세포 활성의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 암 세포와 같은 표적 세포의 직접적인 살상에 의해 또는 사이토카인 분비에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD107a 등의 발현 변화에 의해 측정된, NK 및/또는 NKT 세포 활성의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD137, CD107a, PD1 등의 발현 변화에 의해 측정된, αβ 및/또는 γδ T-세포 억제의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 ELISA에 의해 또는 루미넥스 (Luminex)에 의해 또는 멀티플렉스 (Multiplex) 비드 기반 방법에 의해 또는 세포내 염색 및 FACS 분석에 의해 또는 알리스팟 (Alispot) 등에 의해 측정된, 전염증성 사이토카인 분비의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 ELISA에 의해 또는 루미넥스 (Luminex)에 의해 또는 멀티플렉스 (Multiplex) 비드 기반 방법에 의해 또는 세포내 염색 및 FACS 분석에 의해 또는 알리스팟 (Alispot) 등에 의해 측정된, IL-2 분비의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 ELISA 또는 루미넥스 (Luminex)에 의해 또는 멀티플렉스 (Multiplex) 비드 기반 방법에 의해 또는 세포내 염색 및 FACS 분석에 의해 또는 알리스팟 (Alispot) 등에 의해 측정된, 인터페론-γ 생산의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된, Th1 반응의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된, Th2 반응의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 유동 세포계측법 또는 IHC에 의해 측정된, 조절 T 세포 (Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성의 증가 또는 감소를 측정한다. 반응의 감소는 면역자극 활성을 나타낸다. 적절한 감소는 하기에 개략된 증가의 경우와 동일하다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 유동 세포계측법 또는 IHC에 의해 측정된, M2 대식구 세포 수의 증가 또는 감소를 측정한다. 반응의 감소는 면역자극 활성을 나타낸다. 적절한 감소는 하기에 개략된 증가의 경우와 동일하다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된, M2 대식세포 친종양 형성 활성의 증가 또는 감소를 측정한다. 반응의 감소는 면역자극 활성을 나타낸다. 적절한 감소는 하기에 개략된 증가의 경우와 동일하다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 유동 세포계측법 또는 IHC에 의해 측정된, N2 호중구 증가의 증가 또는 감소를 측정한다. 반응의 감소는 면역자극 활성을 나타낸다. 적절한 감소는 하기에 개략된 증가의 경우와 동일하다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된, N2 호중구 친종양 형성 활성의 증가 또는 감소를 측정한다. 반응의 감소는 면역자극 활성을 나타낸다. 적절한 감소는 하기에 개략된 증가의 경우와 동일하다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD137, CD107a, PD1 등의 발현 변화에 의해 측정된, T 세포 활성화의 억제의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 암 세포와 같은 표적 세포의 직접적인 살상에 의해 또는 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커 예를 들어 CD137, CD107a, PD1 등의 발현 변화에 의해 측정된, CTL 활성화의 억제의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된, αβ 및/또는 γδ T 세포 고갈의 증가 또는 감소를 측정한다. 반응의 감소는 면역자극 활성을 나타낸다. 적절한 감소는 하기에 개략된 증가의 경우와 동일하다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD137, CD107a, PD1 등의 발현 변화에 의해 측정된, αβ 및/또는 γδ T세포 반응의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD45RA, CCR7 등의 발현 변화에 의해 측정된, 항원-특이적 기억 반응의 자극의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 MTT, Cr 방출, 칼신 AM과 같은 세포독성 분석에 의해 또는 예를 들어 CFSE 희석 또는 요오드화 프로피듐 염색 등과 같은 유동 세포계측법 기반 분석법에 의해 측정된, 암 세포의 세포자멸사 또는 용해의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 MTT, Cr 방출, 칼신 AM과 같은 세포독성 분석에 의해 또는 예를 들어 CFSE 희석 또는 요오드화 프로피듐 염색 등과 같은 유동 세포계측법 기반 분석법에 의해 측정된, 암 세포에 미치는 세포독성 또는 세포 증식 억제 효과의 자극의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 MTT, Cr 방출, 칼신 AM과 같은 세포독성 분석에 의해 또는 예를 들어 CFSE 희석 또는 요오드화 프로피듐 염색 등과 같은 유동 세포계측법 기반 분석법에 의해 측정된, 암 세포의 직접적인 살상의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된, Th17 활성의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, 신호전달 경로 분석은 예를 들어 MTT, Cr 방출, 칼신 AM과 같은 세포독성 분석에 의해 또는 예를 들어 CFSE 희석 또는 요오드화 프로피듐 염색 등과 같은 유동 세포계측법 기반 분석법에 의해 측정된, 보체 의존성 세포독성 및/또는 항체 의존성 세포-매개 세포독성의 유도의 증가 또는 감소를 측정한다. 활성의 증가는 면역자극 활성을 나타낸다. 활성의 적절한 증가는 하기에 개략되어 있다.
일 구현예에서, T 세포 활성화는, 예를 들어 암 세포와 같은 표적 세포의 직접적인 살상에 의해 또는 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD137, CD107a, PD1 등의 발현 변화에 의해 측정된다. T-세포의 경우, 증식, 세포 표면 마커 (예를 들어, CD25, CD69, CD137, PD1)의 활성화, 세포독성 (표적 세포를 살상하는 능력) 및 사이토카인 생산 (예를 들어, IL-2, IL-4, IL-6, IFNγ, TNF-a, IL-10, IL-17A)의 증가는 암 세포의 향상된 살상과 부합할 수 있는 면역 조절을 나타내는 것이다.
일 구현예에서, NK 세포 활성화는, 예를 들어 암 세포와 같은 표적 세포의 직접적인 살상에 의해 또는 사이토카인 분비에 의해 또는 활성화 마커, 예를 들어 CD107a 등의 발현 변화에 의해 측정된다. NK 세포의 경우, 증식, 세포독성 (표적 세포를 살상하고, CD107a, 그랜자임 및 퍼포린 발현을 증가시키는 능력), 사이토카인 생산 (예를 들어, IFNγ 및 TNF) 및 세포 표면 수용체 발현 (예를 들어, CD25)의 증가는 암 세포의 향상된 살상과 부합할 수 있는 면역 조절을 나타내는 것이다.
일 구현예에서, γδ T 세포 활성화는 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 증식에 의해 또는 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된다.
일 구현예에서, Th1 세포 활성화는 예를 들어 사이토카인 분비에 의해 또는 활성화 마커의 발현 변화에 의해 측정된다.
활성 또는 반응의 적절한 증가 (또는 상기 개략된 바와 같이 적절한 경우, 감소)는 참조 샘플 또는 대조군 샘플, 예를 들어 본 발명의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 함유하지 않는 시험 샘플에서의 신호에 대비해 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98 내지 99% 백분율의 증가이다.
유사하게, 참조 또는 대조군 샘플과 비교하여 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5배의 증가가 효능을 나타낸다.
X. 실시예
실시예 1: 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체의 생성 및 특성화
1. 서론
PVRIG 및 TIGIT는 T 세포와 자연 살해 세포 상에서 발현되는 억제 면역 체크포인트 수용체이다. 이들 수용체와 각각의 리간드의 상호작용에 대한 항체-매개 차단은 T 세포 활성을 향상시킨다. 조합 항-PVRIG 및 항-TIGIT 항체 요법은 시험관내 기능 분석에서 상승작용 효과 또는 부가 효과를 초래한다. 여기에서, 본 발명자들은 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 생성 및 특성화하고, 상기 항체가 각 표적 항원에 대한 각 팔의 결합 친화성을 유지함을 입증한다. 또한, 상기 PVRIG/TIGIT BsAb는 T 세포 기반 시험관내 기능 분석에서 상기 항-PVRIG 및 항-TIGIT 항체 조합과 동등하다.
2. 프로토콜
항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 구조물 설계: IMGT (http://www.imgt.org, Eu 넘버링에 기반한 위치; 도 42 내지 도 44 참조)에 기탁된 서열을 기반으로, "놉 인투 홀" (KIH) Fc 조작 및 CrossMab, KIH scFv-Fab ("병따개") 및 "병따개" 등량적 이종이량체화 ("IH") 형식의 조합을 사용하여 3개의 상이한 형식으로, 복수의 이중특이적 PVRIG/TIGIT 이중 억제제 항체의 대표 항체를 생성하였다. KIH CrossMab 형식의 완전한 인간 이중특이적 항체를 생성하기 위해, CPA.9.086 가변 중쇄와 알라닌 및 세린의 2-아미노산 링커를 인간 불변 람다 도메인과 돌연변이 S241P, S354C, E356D, M358L 및 T366W를 함유하는 인간 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인에 융합시켰다. CPA.9.086 가변 경쇄 도메인과 2개의 세린의 링커를 인간 IgG4의 CH1에 융합시켰다. CHA.7.518.1.H4(S241P)가변 중쇄 도메인을 인간 IgG4의 CH1 도메인과 돌연변이 Y349C, E356D, M358L, T366S, L368A 및 Y407V를 함유하는 인간 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인에 융합시켰다. CHA.7.518.1.H4(S241P) 가변 경쇄 도메인을 인간 불변 카파 도메인에 융합시켰다. KIH "병따개" 형식의 경우, 상기와 동일한 CHA.7.518.1 중쇄 및 경쇄 구조물이 사용되었고, 이는, 인간 IgG4의 힌지 영역에 융합되고 상기에 나열된 "놉" 돌연변이를 갖는 CH2 및 CH3을 또한 포함하는 CPA.9.086의 단일 사슬 가변 단편 (scFv)과 쌍을 이루었다. 발현 및 안정성에 대한 영향을 평가하기 위해, 단일 사슬 형식 (VH-VL 또는 VL-VH)에서 중쇄 및 경쇄의 순서를 변화시켰다. 등량적 이종이량체화 병따개 형식의 경우, 여러 가변 도메인 조합이 평가되었고 (CHA.7.518.1과 쌍을 이룬 CPA.9.086 scFv, CPA.9.086과 쌍을 이룬 CHA.7.518.1 scFv, CHA.7.518.4과 쌍을 이룬 CHA.9.547.18 scFv 및 CHA.547.18과 쌍을 이룬 CHA.7.518.4 scFv), scFv 함유 구조물은 CH2 및 CH3 도메인에서 하기의 치환을 가졌다: F234V L235A G236del S267K S357Q S364K. Fab 구조물은 하기의 치환을 함유하였다: N208D E233P F234V L235A G236del S267K Q295E L368D K370S N384D Q418E N421D. Fc 수용체 결합을 감소시키기 위해 치환 E233P F234V L235A G236del S267K 및 E233P F234V L235A G236del S267K K370S N384D Q418E N421D를 혼입하였다.
CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 이중특이적 항체의 발현: 이들 구조물 각각에 대한 DNA를 pcDNA3.4 발현 벡터 (ThermoFisher)에 클로닝하여 4개의 개별 벡터를 생성하였다. 이중특이적 항체를 발현하기 위해, 각 구조물에 대한 DNA를 1 ug/ml의 최종 총 농도로, 3 ml의 대수적으로 성장하는 Expi293 세포 (ThermoFisher)에 형질감염시켰다. 환원 및 비환원 조건 모두에서 LabChip (Perkin Elmer) 모세관 전기영동에 의해, 발현 수율에 대해 다양한 비율의 중쇄 및 경쇄를 분석하였다. 이는 복수의 조건에 대해, 비복합체화된 중쇄 및 경쇄의 상대적인 양을 정성적으로 측정하는 것을 가능하게 한다. 최적의 비율이 결정되고 나면, 더 큰 규모의 생산을 수행하고, 발현된 이중특이적 항체를 정제하였다.
CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 이중특이적 항체의 정제: 친화성 정제 및 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 정제하였다.
단백질 A를 사용한 친화성 정제: 상청액에 대해 단백질 A 친화성 크로마토그래피 (ProA)를 수행하여 세포 배양물 상청액으로부터 이중특이적 항체 (BsAb)를 정제하였다. 상청액은, 1000 mL의 상청액 당 20 mL의 1 M 인산 나트륨 pH 7.4 (Teknova) 및 100 mL의 5 M NaCl (Teknova)를 첨가한 다음 0.22 μm 여과를 수행함으로써, 크로마토그래피용으로 제조되었다. 분리는, 20 mM 인산 나트륨 pH 7.4, 0.6 M NaCl (Teknova)로 평형화된 MabSelect SuRe (GE Healthcare)의 5 mL HiTrap 컬럼을 사용하여 AKTA Pure (GE Healthcare) 상에서 수행되었다. 상청액은 1.25 mL/분으로 로딩되었다. 로딩 후, 5 mL/분에서 10 CV로 평형 완충액으로 컬럼을 세척하였다. 용출은 두 단계로 수행되었다. 1 단계는 20 mM 구연산 나트륨 pH 3.6, 150 mM NaCl (Teknova)를 사용하였고, 단계 2는 100 mM 글리신 pH 2.7, 150 mM NaCl (Teknova)를 사용하였다. 두 용출 모두 5 mL/분에서 4.3 CV로 수행되었고, 2.25 mL의 1 M 트리스 pH 7.5 (Teknova)로 사전 충전된 튜브에 12 mL 분획을 수집하였다. NanoDrop (Thermo) 을 사용하여 280 nm에서의 흡광도에 의해, 단백질 농도에 대해 분획을 분석하였고, 분석 HPLC-SEC에 의해, 단량체 함량에 대해 분획을 분석하였다.
단량체와 고분자량 (HMW) 성분의 분리: HMW로부터 단량체를 분리하기 위해, Pro A 정제된 이중특이적 항체에 대해 분취 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 수행하였다. SEC 크로마토그래피를 위해, 0.22 μm 여과에 의해 BsAb를 제조하였다. PBS, pH 7.3 (Teknova)의 등용매 구배를 실행하는 AKTA Pure (GE Healthcare) 상에서 분리를 수행하였다. 2.6 mL/분으로 Superdex 200pg 26/600 컬럼 (GE Healthcare)에 BsAb를 로딩하였다. 2.6 mL/분에서 1 컬럼 부피 (CV)의 PBS를 사용하여 용출을 수행하였다. 틈새 부피 (void volume) 후에 분획을 수집하였다. 예상대로, HMW는 단량체보다 먼저 용출되었다. 단량체 대 HMW 백분율을 측정하기 위해, HPLC-SEC 상에서 피크 분획을 실행하였고, 280 nm에서의 흡광도에 의해 농도를 측정하였다. 단량체 및 HMW 함유 분획을 개별적으로 수집하였다.
SEC-HPLC 분석: Acquity UPLC (Waters) 시스템을 사용하여 분석을 수행하였고, SEC 컬럼으로서 Protein BEH SEC, 200A, 1.7um, 4.6 mm X 150 mm, 10K-450K (Waters)를 사용하였다. PBS, pH 7.4 (Teknova)로 구성된 이동상을 사용하여 등용매적으로 주위 온도에서 SEC 분리를 수행하였다. 유속은 0.25 mL 분-1이었다. 280 nm에서 자외선 (UV) 검출기에 의해 검출된 피크 면적을 계산함으로써, BiSpAb 단량체, 응집체 및 단편의 상대적인 양을 정량화하였다.
이중특이적 항체에 결합하는 인간 TIGIT 및 인간 PVRIG의 SPR 키네틱 분석 (Kinetic Assay): 모든 실험은 22℃에서 ProteOn XPR 36 기기를 사용하여 수행하였고, 분석 중 샘플은 4℃에서 유지되었다. 먼저, 표준 아민 커플링을 사용하여 GLC 칩 (Bio Rad) 상의 모든 수직적 포획 레인 및 수평 간극에 고정된 염소 항-인간 Fc 다중클론 항체 (Thermo Fisher)를 사용하여 고밀도 포획 표면을 제조하였다. 각 레인에 대해 다중클론 항체에 대한 전형적인 고정 수준은 약 4600 RU였다. 인간 TIGIT-HIS 단량체는 Sino Biological로부터 입수한 반면, 인간 PVRIG-HIS는 사내에서 제조되었다. 여과된 BSA를 최종 농도 100 μg/mL로 첨가한 1xPBST인 전개 완충액에, 이중특이적 항체를 약 1 μg/mL로 희석하였다. ProteOn 기기 상의 각 "단일-샷 동력학 single-shot kinetics" 주기의 경우, 2분 동안 2개의 독특한 수직적 포획 레인에서 상이한 항체가 포획되었다. ProteOn의 완충액 유동을 수평 방향으로 전환한 후, 대략 15 내지 20분 동안 포획 표면을 안정화시켰다. 별개의 포획 주기들에 걸쳐, 인간 TIGIT (362 pM - 88 nM) 또는 인간 PVRIG (460 pM - 112 nM)의 3배 일련 희석의 6개 농도를 2분 동안 주입한 후, 15분 동안 유속 100 μL/분으로 해리시켰다. 이중 참조를 위한 여러 주기의 완충액 주입과 함께, 포획된 이중특이적 항체의 2개의 독립적인 표면에 각 농도 시리즈의 항원의 3개의 복제물을 주입하였다. 각 주기 사이에, 2회의, 146 mM 인산의 30초 펄스로 항-인간 항체 표면을 재생시켰다. 포획된 이중특이적 항체에 주입된 TIGIT 및 PVRIG의 센서그램은 ProteOn 버전의 스크러버 (Scrubber)를 사용하여 처리되었으며 대량 수송 조건을 포함한 1:1 키네틱 결합 모델에 피팅하였다.
이중특이적 항체에 동시에 결합된 인간 TIGIT 및 인간 PVRIG의 SPR 샌드위치 분석: 22℃에서 비아코어 3000 (GE Healthcare)을 사용하여 실험을 수행하였다. 표준 아민 커플링을 사용하여 800 RU 내지 1000 RU 범위의 RU 수준에서 CM5 비아코어 칩의 유동 채널 4개 모두에 인간 TIGIT (Sino Biologicals)을 공유결합에 의해 고정하였다. 25 μl/분의 유속으로 3분 동안 25 nM의 분자 농도로 하나의 유동 셀에 이중특이적 항체를 주입하였다. 이어서, 이중특이적 항체와 복합체화된 TIGIT 유동 셀 및 결합된 이중특이적 항체를 갖지 않는 대조군 TIGIT 표면에 걸쳐 25 μl/분의 유속으로 3분 동안 116 nM의 농도로 동시에 인간 PVRIG를 주입하였다. 결과 센서그램을 처리하기 위해, 스크러버 2.0 소프트웨어를 사용하여 대조군 TIGIT 표면을 기준 차감하였다.
이중 결합 ELISA (Dual Engagement ELISA): 이중특이적 항체 결합의 분석을 위한 ELISA 플레이트를 제조하기 위해, 4℃에서 100 ul의, PBS 중의 1 ug/mL PVRIG-hFc로 플레이트를 밤새 코팅하였다. 다음날, 코팅 용액을 폐기하고 250 μL의 2% BSA, 0.1% 트윈 20 (Tween 20)을 사용하여 2시간 동안 플레이트를 차단하였다. 300 μL의 1X PBS pH 7.4, 0.05% 트윈 20 (세척 완충액)으로 3회 웰을 세척하였다. 샘플을 1X PBS pH 7.4, 0.1% 트윈 20, 0.2% BSA (결합 완충액)에서 1 μg/mL부터 1.4 pg/mL까지 3배 연속 희석하고 300 RPM으로 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 대조군으로서, PVRIG 특이적 항체인 CHA.7.518.1.H4(S241P)와 TIGIT 특이적 항체인 CPA.9.086을 유사한 방식으로 제조하였고, 이중특이적 샘플로서 평가하였다. 웰을 상기와 같이 세척하고, 100 μL의 1 μg/mL TIGIT-His (Sino Biological 카탈로그 # 10917-H08H)를 첨가함으로써, TIGIT에 결합하는 능력을 평가하였다. 대조군 항체 결합을 평가하기 위해, 100 μL의 1 μg/mL PVRIG-His (Compugen, 로트 20170623)를 CHA.7.518.1.H4(S241P) 웰에 첨가하고 100 μl의 1μg/mL TIGIT-His를 CPA.9.086 웰에 첨가하였다. 가용성 리간드와의 배양은 300 RPM에서 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 수행되었다. 상기와 같이 웰을 세척한 다음, 100 ul의 1 ug/ml 항-His-태그 항체 HRP 접합체 (R&D Systems, 카탈로그 # MAB050H, 클론 # AD1.1.10)를 결합 완충액에 첨가함으로써 가용성 리간드 결합을 검출하였고, 실온에서 300 RPM으로 1시간 동안 진탕하면서 배양하였다. 상기와 같이 세척 완충액으로 3회 웰을 세척하고 100 μL의 실온 Ultra-TMB 기질 (Moss Inc.)을 첨가하였다. 7분 동안 현상을 진행하였으며 100 μL 2N H2SO4를 첨가하여 반응을 중단시켰다. 450 nM의 파장으로 설정된 Molecular Devices SpectraMax 340PC-384 플레이트 판독기에서 플레이트를 판독하였다.
이중특이적 항체의 가용성 PVRIG 결합 및 TIGIT-포획을 평가하기 위해, 상기에 사용된 것과 유사한 분석을 수행하였다. 이 경우에서, 100 μL/웰의, 1X PBS pH7.4 중의 1μg/ml TIGIT-Fc 융합 단백질을 4℃에서 밤새 코팅하였다. 코팅 용액을 폐기하고 1X PBS pH 7.4, 2% BSA 및 0.1% 트윈 20을 사용하여 실온에서 2시간 동안 플레이트를 차단하였다. 상기에서 사용된 이중특이적 및 단일특이적 대조군은 PVRIG 포획 실험과 동일한 범위로 연속적으로 희석되었다. 나머지 실험은, TIGIT-His가 사용된 CPA.9.086을 제외한 모든 샘플의 검출에 PVRIG-His가 사용되었다는 점을 제외하고는, 상기와 동일하였다.
인간 CMV-특이적 CD8 + T 세포 확장: 인간 CMV-반응성 말초혈액 단핵 세포 (PBMC) (CTL)를 해동시키고, 2×106 세포/ml로 재현탁시키고, 2 ng/ml 재조합 인간 IL-2 (R&D systems) 및 10 ng/ml 재조합 인간 IL-7 (R&D systems)가 보충된 완전 RPMI 배지에서 1 μg/ml의 CMV pp65 펩타이드 (Anaspec)로 37℃ 및 5% CO2에서 자극시켰다. 6일 후, 세포를 1:2로 분할하고 저용량 인간 IL-2 (100 IU/ml)로 휴지시켰다. 8일째에, 세포를 채취하고, 완전 RPMI 배지에 저용량 IL-2 (100 U/ml)에서 2백만/ml로 2일 동안 재도말하였다. 11일째에, CD8+ T 세포 순도 및 CMV pp65(495-503) 반응성을 위해 세포를 표현형화한다.
항-CD3 (클론: OKT3)-알로피코시아닌 7 (APC-Cy7; Biolegend), 항-CD8 (클론: H1T8a) -Alexa Fluor (AF) 488 (Biolegend), 항-CD14 (클론: HCD14)-페리디닌 클로로필 단백질 (PerCP-Cy5.5), 항-CD19 (클론: HIBCD14) PerCP-Cy5.5, 항-CD56 (클론: HCD56)-PerCP-Cy5.5 (Biolegend), 항-TIGIT (클론: MBSA43)-알로피코시아닌 (APC; e-Bioscience) 또는 IgG4 (Compugen)-이소타입 대조군 (APC: Biolegend), CHA.7.518.1.H4(S241P)-AF-647 (Compugen) 또는 IgG4-AF647 이소타입 대조군 (Compugen) 및 항-PD-1 (클론: EH12.2H7) -Brilliant Violet 421 (BV421: Biolegend) 또는 IgG1 (클론: MOPC21) BV421 (Biolegend)의 조합된 칵테일로 세포를 염색하였다. 사량체-반응성 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하기 위해, PBMC를 iTAg 사량체-HLA-A*02:01 CMV pp65(495 - 503) (NLVPMVATV) -피코에리트린 (MBL-BION)으로 실온에서 30분 동안 염색하였다. 세포를 PBS/1% BSA/0.01% 아지드화 나트륨 완충액으로 세척하고, Fortessa 유세포 분석기 (BD Biosciences)를 사용하여 데이터를 획득하고 FlowJo (Treestar)를 사용하여 분석하였다.
pp65-발현 흑색종 세포주를 사용한 인간 CMV- 특이적 CD8 + T 세포 공동 배양 분석: PVRIG 또는 TIGIT에 대한 단일클론 항체 (mAb) 및 PVRIG 및 TIGIT에 대한 이중특이적 항체 (BsAb)가 항원-특이적 사이토카인 분비에 미치는 영향을 평가하기 위해, 인간 CMV-특이적 CD8+ T 세포를 사용한 시험관내 공동 배양 분석을 사용하였다. 공동 배양 분석에 사용된 표적 세포는 변형된 Mel-624 세포주 (ATCC)인 Mel-624 pp65였다. 이 세포주는 CMV 단백질인 pp65를 이소성으로 발현시킴으로써 생성되었다. 이는 외인성 pp65 펩타이드를 추가할 필요없이, pp65로부터 유래된 펩타이드의 HLA-A2 제시를 초래한다. Mel-624 pp65 암 세포주와의 공동 배양에서의 CMV pp65 반응성 CD8 T 세포에 대한 억제 수용체 차단의 용량-의존성 적정을 수행하였다. 132 nM에서 시작하여 0.001 nM에서 끝나는 10개 지점 4배 일련 희석 항체를 Mel624 pp65 세포 및 CMV+ CD8+ T 세포와 함께 5:1의 표적 세포 (75,000) 대 T 세포 (15,000) 비율로 공동 배양하였다. T 세포, 종양 세포주 및 항체를 96-웰 U-바닥 플레이트 (Costar)에 함께 첨가하고 37℃에서 18시간 동안 배양하였다. 하기 항체를 시험하였다: 항-PVRIG (CHA.7.518.1.H4(S241P)), 항-TIGIT (CPA.9.086), CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086의 조합, PVRIG 및 TIGIT 둘 모두를 표적화하는 이중특이적 항체 (CHA.7.518.1.H4(S241P) 또는 CHA.7.518.4/CPA.9.086 또는 CHA.9.547.18 BsAb) 및 인간 IgG4 이소타입 대조군. 18시간의 배양 기간 후, 세포계측 비드 분석법 (BD)을 사용하여 유동 세포계측법에 의해 공동 배양 상청액 내의 인간 인터페론 감마 (IFN-γ)의 양을 측정하였다. 비선형 회귀 분석에 의해 데이터를 분석하였으며 GraphPad Prism을 사용하여 "1 부위 특이적 결합 (One site specific 결합)" 또는 "1 부위 - 전체 및 비특이적 결합 (One site - Total 및 nonspecific 결합)" 모델에 피팅하였다.
시차 주사 형광 측정법: 용융 온도는 항체 안정성의 척도를 제공한다. 용융 온도 변성 및 소수성 염료인 SYPRO 오렌지 (Thermo)의 결합에 대해 이중특이적 항체 및 대조군 단일특이적 항체를 분석하였다. SYPRO 오렌지를 사용하여 목적하는 완충액에서 적절한 농도로 항체를 희석하였다. StepOne Plus RT-PCR 기기 (Applied Biosystems)를 사용하여 제어된 용융 (25C-95C, 1도/분 상승)을 수행하고 1분 간격으로 SYPRO 오렌지의 형광을 검출하였다. 관찰된 효과가 제형으로 인한 것이 아님을 보장하기 위해, pH 6.0 및 pH 7.4에서 항체를 분석하였다.
LC-MS 분석: 질량 분석법은 LakePharma Inc. (Belmont, California, USA)에 의해 수행되었다. 효소 탈글리코실화 후, 모세관 UHPLC 시스템에 결합된 Agilent Q Exactive Orbitrap (Thermo Fisher Scientific)에서 샘플을 분석하였다. 단백질 특성화를 위해 비환원 및 환원 조건에서 무손상 분석 (Intact analysis)을 수행하였고 결과 분석을 위해 Waters MassLynx 소프트웨어를 사용하였다.
동결-해동 안정성 분석: 희석에 의해 또는 스핀 농축기를 사용하여 1X PBS, pH7.4에서 농도를 1.0 mg/mL로 조정함으로써 샘플을 제조하였다. 100 ul를 0.2 ml 스냅스트립 PCR 튜브에 넣고 -80℃에서 적어도 24시간 동안 동결시킨 후 하기 실온에서 해동시켰다. 3주기의 동결 및 해동에 대해 이러한 주기를 2회 반복하였다. 단량체, 고분자량 (HMW) 및 저분자량 (LMW) 종에 대해 SEC-UPLC로 20 ul의 각 샘플을 분석하였다. CE-SDS (환원 및 비환원, Lab Chip GXII, Perkin Elmer)에서 또한 샘플을 실행하였고 임의의 침전된 단백질을 제거하기 위해 원심 분리 후 농도를 평가하였다.
낮은 pH 유지: 희석에 의해 또는 스핀 농축기를 사용하여 1X PBS, pH7.4에서 농도를 1.0 mg/mL로 조정함으로써 샘플을 제조하였다. 0.1 M 글리신 pH 3.2를 첨가하여 각 샘플의 pH를 pH 3.0으로 조정하고 실온에서 0, 1, 2, 4 및 24시간 동안 배양하였다. 1M 트리스 pH7.5로 샘플을 중화하고, 임의의 침전된 단백질을 제거하기 위해 원심 분리 후, CE-SDS (환원 및 비환원, Lab Chip GXII, Perkin Elmer), SEC-UPLC 및 NanoDrop에 의한 280 nm에서의 흡광도에 의해 분석하였다.
결과
이중특이적 항체의 서열: 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체는 2개의 상이한 Fc 이종이량체화 형식 및 2개의 가변 도메인 디스플레이 형식을 사용하여 생성되었다. 각 단편의 서열을 도 26, 40 및 41에 도시하였다.
SPR 키네틱 분석: 도 27은 2개의 독립적인 표면에 걸쳐 캡처된 이중특이적 항체에 결합하는 (A) TIGIT 및 (B) PVRIG의 센서그램 데이터 및 그 데이터를 단순 1:1 키네틱 모델로 글로벌 피팅한 결과를 도시한다. 키네틱 모델이 TIGIT-이중특이적 항체 상호작용에 대한 오프-레이트 (off-rate)를 적절하게 추정할만큼 해리 신호가 충분하지 않았기 때문에, 데이터를 피팅하기 위해 kd 값은 임의로 1.0e-5 초-1에서 일정하게 유지하였다. 따라서 도 27의 TIGIT-이중특이적 항체 상호작용의 친화성 및 속도 상수는 대략적인 추정치로만 간주되어야 한다. kd를 1.0e-5 초-1로 일정하게 유지하여 SPR을 사용하여 측정된 TIGIT-이중특이적 항체 상호작용의 결합 상수는 ka = 3.9e6 M-1초-1였고 KD = 2.6 pM이었다. PVRIG-이중특이적 항체 상호작용에 대한 결합 상수는 ka = 1.3e6 M-1초-1, kd = 2.4e-4 초-1, KD = 187 pM로 추정되었다.
SPR 샌드위치 분석: 도 28은 고정된 인간 TIGIT를 갖는 비아코어 칩에 주입된 이중특이적 항체 (A)의 연속 주입 및 이어서 인간 PVRIG (B)의 주입에 대한 센서그램을 도시하며, 따라서 상기 이중특이적 항체가 인간 TIGIT 및 인간 PVRIG에 동시에 결합하는 능력을 보여준다. TIGIT 표면에 결합하는 상기 이중특이적 항체의 반응 수준은 약 1100 RU이었다. TIGIT 표면에 사전-복합화된 이중특이적 항체에 결합하는 인간 PVRIG의 반응 수준은 약 230 RU이었다.
CMVpp65 반응성 T 세포는 PVRIG, TIGIT 및 PD-1을 발현한다: CMV 단백질인 pp65에 특이적인 CD8+ T 세포는 특성이 잘 규명되어 있으며, 이들 CMV 특이적 T 세포는 T 세포 상에서의 조절 수용체의 역할을 연구하는 데 사용될 수 있다. CMV pp65 펩타이드, IL-2 및 IL-7을 사용한 HLA-A2+ 공여자 PBMC의 자극은 사량체 염색에 의해 측정하였을 때 CMV pp65-특이적 T 세포를 90-95% 범위의 순도까지 강하게 확장시켰다. 도 29a는 확장 후 2명의 공여자로부터의 CMV pp65 특이적 T 세포의 백분율을 도시한다. T 세포 상에서의 PVRIG, TIGIT 및 PD-1의 표면 발현을 이들 공여자로부터 평가하였다. 활성화 11일째에 CMV pp65 특이적 T 세포는 PVRIG gMFI 비율 (MFIr, 표적 항체의 MFI를 대조군 항체의 MFI로 나눈 값으로 정의됨): 3-5 배, TIGIT MFIr: 4 배, 및 PD-1 MFIr: 1-2배를 발현하였다 (도 29b).
항-인간 PVRIG 및 TIGIT 항체는, 단독으로 또는 조합하여, 인간 CMV-특이적 T 세포로부터 IFN-γ 분비를 증가시킨다: CD8+ T 세포 상에서의 TIGIT 및 PVRIG 발현의 유도가 T 세포 기능 장애와 상관 관계가 있다는 점을 근거로, 본 발명자들은 전염증성 사이토카인 생산능에 대한 PVRIG 및 TIGIT 차단의 효과를 평가하는 것을 목표로 하였다. 2명의 공여자 (공여자 4 및 공여자 72)로부터의 CMV 반응성 T 세포를 Mel-624 (PVR+PVRL2+) pp65 세포와 공동 배양하였다. CMV+CD8+ T 세포 상에서의 CHA.7.518.1.H4(S241P), CPA.9.086, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086, 및 CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb의 활성을 평가하였다. 본 발명자들은 CHA.7.518.1.H4(S241P)가 IgG 대조군 항체와 비교하여 IFN-γ 생산을 증가시키는 것 (32-46%)을 관찰하였다. CPA.9.086 항체의 첨가는 추가적인 IFN-y 증가 (55-86%)를 초래하였다. 조합시, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 치료는 CHA.7.518.1.H4(S241P) 또는 CPA.9.086 단일 차단과 비교하여, 상승적으로 또는 일부 경우에서 부가적으로, CD8+ T 세포의 사이토카인 생산을 증가시켰다 (99-189%). CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb는 CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 2 mAb의 조합과 동일한 기능적 효과 (100-191%)를 나타냈다. 각 이소타입 대조군 항체에 대비한 각 항체의 IFN-γ분비의 증가 백분율을 도 30에 도시하였다.
또한, CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb는, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 mAb의 조합과 유사한, CMV pp65 특이적 T 세포에 의한 IFN-γ 생산의 용량 의존적 증가를 나타내는 것이 관찰되었다 (도 31). 공여자 4 및 공여자 72 둘 모두에서, CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb 및 CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086의 조합에 대한 평균 + SEM IFN-γ 생산 EC50 값이 유사하였으며, 낮은 한 자릿수 nM 범위에 있는 것으로 계산되었다. 공여자 4에서, EC50은 CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086의 조합에 대해 0.38 nM으로 계산된 반면, CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb EC50은 0.36 nM로 계산되었다. 공여자 72에서, EC50은 CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086의 조합에 대해 0.58 nM으로 계산된 반면, CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086BsAb EC50은 0.53 nM로 계산되었다 (도 31).
이중 결합 ELISA (Dual Engagement ELISA): 코팅된 항원에 결합한 다음 제2 가용성 리간드에 동시에 결합하는 능력에 대해, 이중특이적 및 단일특이적 항체를 평가하였다. 도 49는 비오틴화된 TIGIT-His 단백질 및 스트렙타비딘-HRP의 결합을 통한 검출을 사용하여, PVRIG 코팅된 플레이트에 대한 이중특이적 및 단일특이적 항체의 3배 연속 희석물의 결합을 보여준다. 유사하게, 도 50은 재조합 TIGIT-His 코팅된 플레이트에 대한 이중특이적 및 단일특이적 항체의 3배 연속 희석물의 결합 및 비오틴화된 PVRIG 및 스트렙타비딘 HRP의 결합을 통한 검출을 보여준다. 모든 이중특이적 형식은 동시에 두 리간드 모두에 결합할 수 있었다. 친화성의 명백한 변화는 용액 중의 정확하게 조립된 항체의 상대적인 양 때문이었다. 도 51은, SoftMax Pro 소프트웨어 (Molecular Devices)를 사용하여 계산되고, LC-MS에 의해 측정되고 도 45에 도시된 정확하게 조립된 이중특이적 항체에 대해 보정된 EC50을 도시한다.
시차 주사 형광 측정법: 용융 온도 변성 및 소수성 염료인 SYPRO 오렌지 (Thermo)의 결합에 대해 이중특이적 및 단일특이적 항체를 분석하였다. 관찰된 효과가 제형으로 인한 것이 아님을 보장하기 위해, pH 6.0 및 pH 7.4에서 항체를 분석하였다. 모든 이중특이적 항체에 대해, CH2 도메인의 용해를 반영하는 Tm1은 pH 7.4에서 51.7C 내지 60.4C, pH 6.0에서 50.9C 내지 60.5C 범위였다 (도 52). 단일특이적 항체는 모두 더 높은 Tm1을 나타냈으며, pH 7.4에서 63.3C 내지 66.2C, pH 6.0에서 62.4C 내지 64.1C였다. 모든 항체에 대한 Tm2 (CH3 및 Fab 용융)는 > 70C였다 (범위 = pH 7.4에서 70.2C-77.1C 및 pH 6.0에서 70.9C 내지 77.1C).
LC-MS 분석: 3가지 형식 모두의 이중특이적 항체에 대해 탈글리코실화된 무손상 질량 분석법 (deglycosyated intact mass spectrometry)을 수행하였다. 놉 인투 홀 Fc 및 CrossMab 전략을 사용하는 이종이량체화는 32% 및 73% 정확하게 조립된 이중특이적 항체를 생성한 반면, 상이한 Fc 이종이량체화 접근법 (각각 놉 인투 홀 및 등량적 이종이량체화)을 통한 scFv 함유 팔 및 무손상 항체 팔을 함유하는 2개의 "병따개"형식은 >95% 정확하게 조립된 이중특이적 항체를 초래하였다 (도 45).
낮은 pH 유지: 이중특이적 항체 및 단일특이적 대조군 항체를 pH 3에서 0, 1, 2, 4 및 24시간 동안 배양하고, T=0으로부터의 단량체 함량 %의 변화에 의해 관찰된, LabChip GXII (Perkin Elmer) 및 SEC-UPLC를 사용한 CE-SDS에 의한, 응집체 또는 저분자량 생성물의 형성을 평가하였다. 모든 이중특이적 및 단일특이적 항체는 이 압박에 대해 안정적이었으며 24시간 동안 최대 6 %의 단량체 함량 변화를 나타냈다.
동결-해동 안정성 분석: 다양한 경쇄 억제 및 이종이량체화 접근법을 사용하는 이중특이적 항체 및 대조군 단일특이적 항체에 대해, 연속 동결 해동 주기를 견디는 능력을 평가하였다. 3주기의 동결 및 해동 후, 용액에 존재하는 저분자량 (LMW), 단량체 및 고분자량 종의 변화에 대해 SEC-UPLC로 항체를 분석하였다. 양수 값은 동결/해동 주기 후 보고된 종의 상대적 비율의 증가를 나타낸다. 이중특이적 항체 BsAb-14는 T=0으로부터 >5%의 단량체 함량 감소를 나타낸 유일한 샘플이었다 (도 53). 다른 모든 형식은 이 압박 이후 안정적이었다. CMV 분석 용량 반응
용량 반응에서 도 30에 대해 설명된 CMV 분석에서, 이중특이적 항체, 단일특이적 항체 및 단일특이적 항체들의 조합을 시험하였다. 66 nM 내지 0.003 nM의 항체 농도 범위를 제공하기 위해 각 항체 또는 혼합물의 연속 3배 희석을 수행하였다. 단일특이적 항체는 연속 희석 전에 비특이적 대조군 항체와 1:1 혼합되었다. 시험된 이중특이적 항체는 BsAb 2 (KIH+CrossMab), BsAb 4 (KIH 병따개), BsAb 14, 및 BsAb 18 (모두 IH 병따개)였다. CHA.7.518.1 및 CHA.7.518.4와 CPA.9.086의 조합도 또한 평가하였다. 이중특이적 항체는 모두, 시험된 모든 형식에 걸쳐, 항체들의 조합과 적어도 동등하게 기능하였으며, 2개의 독립적 분석에서 시험된 3개의 공여자 T 세포 모두에서 단일특이적 항체보다 우수하였다 (도 54).
요약 및 결론
CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 (단독으로 또는 조합하여) 및 CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb를 Mel-624 pp65 분석에 첨가한 것은, IgG 대조군 항체와 비교하여, IFN-y 분비의 용량 의존적 증가를 유도하였다. 조합시, CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086은, 단일 차단 단독과 비교하여, 상승적으로 또는 공여자 72의 경우 부가적으로, CD8+ T 세포의 사이토카인 생산을 증가시켰다. CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 BsAb는 CHA.7.518.1.H4(S241P)/CPA.9.086 mAb의 조합과 동일한 기능적 효과를 나타 냈으며, 두 공여자 모두의 EC50 값은 낮은 한 자리 nM 범위로 계산되었다. 종합하면, 이들 데이터는 CHA.7.518.1.H4(S241P) 및 CPA.9.086 항체가 단독으로 또는 조합하여, 또는 이중특이적 항체 형식으로, T 세포 효과기 기능을 향상시킬 수 있음을 입증한다.
실시예 2: ELISA 분석
PVRIG 코팅된 플레이트
이중특이적 항체 결합의 분석을 위한 ELISA 플레이트를 제조하기 위해, 4℃에서 100 ul의, PBS 중의 1 ug/mL PVRIG-hFc로 플레이트를 밤새 코팅하였다. 다음날, 코팅 용액을 폐기하고 250 μL의 2% BSA, 0.1% 트윈 20 (Tween 20)을 사용하여 2시간 동안 플레이트를 차단하였다. 300 μL의 1X PBS pH 7.4, 0.05% 트윈 20 (세척 완충액)으로 3회 웰을 세척하였다. 샘플을 1X PBS pH 7.4, 0.1% 트윈 20, 0.2% BSA (결합 완충액)에서 1 μg/mL부터 1.4 pg/mL까지 3배 연속 희석하고 300 RPM으로 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 대조군으로서, PVRIG 특이적 항체인 CHA.7.518.1 H4와 TIGIT 특이적 항체인 CPA.9.086 H4을 유사한 방식으로 제조하였고, 이중특이적 샘플로서 평가하였다. 웰을 상기와 같이 세척하고, 100 μL의 1 μg/mL TIGIT-His (Sino Biological 카탈로그 # 10917-H08H)를 첨가함으로써, TIGIT에 결합하는 능력을 평가하였다. 대조군 항체 결합을 평가하기 위해, 100 μL의 1 μg/mL PVRIG-His (Compugen, 로트 20170623)를 CHA.7.518.1 H4 웰에 첨가하고 100 μl의 1μg/mL TIGIT-His를 CPA.9.086 H4 웰에 첨가하였다. 가용성 리간드와의 배양은 300 RPM에서 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 수행되었다. 상기와 같이 웰을 세척한 다음, 100 ul의 1 ug/ml 항-His-태그 항체 HRP 접합체 (R&D Systems, 카탈로그 # MAB050H, 클론 # AD1.1.10)를 결합 완충액에 첨가함으로써 가용성 리간드 결합을 검출하였고, 실온에서 300 RPM으로 1시간 동안 진탕하면서 배양하였다. 상기와 같이 세척 완충액으로 3회 웰을 세척하고 100 μL의 실온 Ultra-TMB 기질 (Moss Inc.)을 첨가하였다. 7분 동안 현상을 진행하였으며 100 μL 2N H2SO4를 첨가하여 반응을 중단시켰다. 450 nM의 파장으로 설정된 Molecular Devices SpectraMax 340PC-384 플레이트 판독기에서 플레이트를 판독하였다.
이중특이적 항체의 가용성 PVRIG 결합 및 TIGIT-포획을 평가하기 위해, 상기에 사용된 것과 유사한 분석을 수행하였다. 이 경우에서, 100 μL/웰의, 1X PBS pH7.4 중의 1μg/ml TIGIT-Fc 융합 단백질을 4℃에서 밤새 코팅하였다. 코팅 용액을 폐기하고 1X PBS pH 7.4, 2% BSA 및 0.1% 트윈 20을 사용하여 실온에서 2시간 동안 플레이트를 차단하였다. 상기에서 사용된 이중특이적 및 단일특이적 대조군은 PVRIG 포획 실험과 동일한 범위로 연속적으로 희석되었다. 나머지 실험은, TIGIT-His가 사용된 CPA.9.086 H4을 제외한 모든 샘플의 검출에 PVRIG-His가 사용되었다는 점을 제외하고는, 상기와 동일하였다.
상기 기술된 실시예는 당업자에게 본 발명의 조성물, 시스템 및 방법의 구현예를 제조하고 사용하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 제시하기 위해 제공되는 것이며, 본 발명자들이 이들의 발명이라고 간주하는 것의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 당업자에게 명백한 본 발명을 수행하기 위한 상기 기술된 방식의 변형은 하기 청구범위의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다. 본 명세서에 언급된 모든 특허 및 간행물은 본 발명이 속하는 당업자의 기술 수준을 나타낸다.
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Met Gly His Arg Thr Leu Val Leu Pro Trp Val Leu Leu Thr Leu Cys
1 5 10 15
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
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Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
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Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
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Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
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Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
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Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
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Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Gly Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
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Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Phe Leu Ala Val Thr Pro Gly
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Leu Ser Val Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu
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Gly
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Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
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Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr
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Leu Gly Ser
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Met Gln Ala Leu Gln Ser Pro Val Thr
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Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
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Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ser Ala
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Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu Ser
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Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr
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Ala Thr Glu Val Gly Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ile Ser Tyr
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Tyr Tyr Gly Met Asp Val
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Gln Ser Leu Leu Tyr Arg Asn Gly His Asn Phe
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Leu Gly Ser
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Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ser Ala
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Ala Arg Asp Asp Thr Ala Arg Arg Val Arg Gly Val Pro Tyr Tyr Tyr
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Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu Ser
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Val
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Gln Ser Leu Leu Tyr Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr
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1 5
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Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ser Ala
1 5
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Ile Ile Pro Ile Tyr Gly Ile Thr
1 5
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Ala Arg Asp Asp Thr Ala Arg Arg Val Arg Gly Val Pro Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Tyr Ala Met Asp Val
20
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Arg Ser Leu Leu Asp Ser Asp Asp Gly Asn Thr His
1 5 10
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Ser Leu Ser
1
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Met Gln Arg Lys Glu Phe Pro Leu Thr
1 5
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Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
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<213> Artificial Sequence
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Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala
1 5
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<213> Artificial Sequence
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Ala Arg Gly Pro Trp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Ser Ser Tyr Ala
1 5 10 15
Tyr Tyr Met Asp Val
20
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<213> Artificial Sequence
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Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr
1 5 10
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Leu Gly Ser
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Met Gln Ala Leu His Thr Pro Gly Val Thr
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
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Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Glu Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Asp Tyr Tyr Thr Asn Ser Tyr Ser Met Asp His Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Gly
1 5
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Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile
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Gly Met Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
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Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Gly Met Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Lys Trp Met
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Val
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
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Ile Ile Pro Ile Tyr Gly Ile Thr
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Val
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Ala Arg Asp Asp Thr Ala Arg Arg Val Arg Gly Val Pro Tyr Tyr Tyr
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Tyr Tyr Ala Met Asp Val
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Ala Arg Gly Pro Trp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Ser Ser Tyr Ala
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Met Gln Ala Leu His Thr Pro Gly Val Thr
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<400> 1354
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
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65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
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Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
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Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
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Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
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Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<211> 326
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<213> Artificial Sequence
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<400> 1355
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
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Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
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Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
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Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
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Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
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Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
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Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
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Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
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Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<213> Artificial Sequence
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<400> 1356
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
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Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
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Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
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Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
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Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 1357
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 1357
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 1358
<211> 21
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1358
Thr Thr Leu Ala Val Leu His Pro Glu Arg Gly Ile Arg Gln Trp Ala
1 5 10 15
Pro Ala Arg Gln Ala
20
<210> 1359
<211> 34
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1359
Thr Thr Leu Ala Val Leu His Pro Glu Arg Gly Ile Arg Gln Trp Ala
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20 25 30
Leu Glu
<210> 1360
<211> 17
<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<400> 1386
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<210> 1387
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<213> Artificial Sequence
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gln Tyr
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn His
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<400> 1404
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<400> 1405
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<400> 1503
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<213> Homo sapiens
<400> 1504
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<213> Homo sapiens
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<400> 1543
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
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Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gln Tyr
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
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<213> Artificial Sequence
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<213> Homo sapiens
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<213> Macaca fascicularis
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<213> Callithrix jacchus
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<211> 131
<212> PRT
<213> Macaca mulatta
<400> 1617
Thr Pro Glu Val Trp Val Gln Val Gln Met Glu Ala Thr Glu Leu Ser
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Ser Phe Thr Val His Cys Gly Phe Leu Gly Pro Gly Ser Ile Ser Leu
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<213> Artificial Sequence
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Met Glu Trp Asn Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
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Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Pro Val Asp Thr Ala Val
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Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Thr Thr Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
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Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Asp Tyr
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Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
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Ala Tyr Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gln Ile Leu Leu Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
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Asp Tyr Asp Met Ser
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Gly
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Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
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Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Tyr His Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
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Lys
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Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
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Ala
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly
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Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
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65 70 75 80
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Met Arg Phe Gln Val Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Ile Ser
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Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly
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Arg Pro Leu Gly His Asn Thr Phe Asp Ser
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Gly Val Lys Glu Asn Leu Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Lys Ser Ser Gln Ser Leu Tyr Tyr Ser Gly Val Lys Glu Asn Leu Leu
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Ala
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Gln Gln Gly Ile Asn Asn Pro Leu Thr
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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
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Leu Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
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Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
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Gly
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Gly Ser Ile Ser Ser Thr Ser His Tyr Trp Gly
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Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
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Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
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Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
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Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
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Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly
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Ala Arg Asp Ala Asn Tyr Tyr Gly Ser Ala Trp Ala Phe Asp Pro
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Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
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Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
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Lys Gly Lys Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 3661
<211> 455
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CHA.7.518.4 VH Clambda- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D
L358L T366S L368A Y407V Hole
<400> 3661
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
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210 215 220
Gly Glu Cys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
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405 410 415
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
115 120 125
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130 135 140
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
195 200 205
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210 215 220
Glu Cys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
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420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 3663
<211> 455
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
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210 215 220
Gly Glu Cys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
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Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
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Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
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450 455
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CHA.9.547.18 VH Clambda- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
115 120 125
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Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
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210 215 220
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225 230 235 240
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
290 295 300
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385 390 395 400
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420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
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<211> 454
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CHA.9.547.18 VH Clambda- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y354C E356D
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<400> 3665
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Ser Lys Gly Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Lys Trp Leu Leu Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
115 120 125
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130 135 140
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165 170 175
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180 185 190
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210 215 220
Glu Cys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
325 330 335
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Gln Asp Glu Leu Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 3666
<211> 454
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CHA.9.547.18 VH Clambda- VL-CH1 Crossmab hIgG4 Fc Y349C E356D
L358L T366S L368A Y407V Hole
<400> 3666
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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450
Claims (80)
- 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 암 치료를 위한 T 세포 및/또는 NK 세포 활성화에 사용하기 위한, 인간 PVRIG에 1가로 결합하고 TIGIT에 1가로 결합하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체.
- 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
b) 하기를 포함하는 제1 항원 결합 부분:
iii. 항-PVRIG 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인; 및
iv. 항-PVRIG 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-PVRIG 항체는 CHA.7.518.4, CHA.7.518.1, CHA.7.518, CHA.7.524 CHA.7.530, CHA.7.538_1, CHA.7.538_2, CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, CHA7.538.1.2, CPA.7.021, CPA.7.001, CPA.7.003, CPA.7.004, CPA.7.006, CPA.7.008, CPA.7.009, CPA.7.010, CPA.7.011, CPA.7.012, CPA.7.013, CPA.7.014, CPA.7.015, CPA.7.017, CPA.7.018, CPA.7.019, CPA.7.022, CPA.7.023, CPA.7.024, CPA.7.033, CPA.7.034, CPA.7.036, CPA.7.040, CPA.7.046, CPA.7.047, CPA.7.049, CPA.7.050, 및 CHA.7.518로 구성된 군으로부터 선택됨); 및
b) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분; 및
d) 하기를 포함하는 제2 항원 결합 부분:
iii. 항-TIGIT 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인; 및
iv. 항-TIGIT 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-TIGIT 항체는 CPA.9.086, CHA.9.547.18, CPA.9.018, CPA.9.027, CPA.9.049, CPA.9.057, CPA.9.059, CPA.9.083, CPA.9.089, CPA.9.093, CPA.9.101, CPA.9.103, CHA.9.536.1, CHA.9.536.3, CHA.9.536.4, CHA.9.536.5, CHA.9.536.6, CHA.9.536.7, CHA.9.536.8, CHA.9.560.1, CHA.9.560.3, CHA.9.560.4, CHA.9.560.5, CHA.9.560.6, CHA.9.560.7, CHA.9.560.8, CHA.9.546.1, CHA.9.547.1, CHA.9.547.2, CHA.9.547.3, CHA.9.547.4, CHA.9.547.6, CHA.9.547.7, CHA.9.547.8, CHA.9.547.9, CHA.9.547.13, CHA.9.541.1, CHA.9.541.3, CHA.9.541.4, CHA.9.541.5, CHA.9.541.6, CHA.9.541.7, 및 CHA.9.541.8로 구성된 군으로부터 선택됨). - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 제1 항원 결합 부분:
iii. 항-PVRIG 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인; 및
iv. 항-PVRIG 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-PVRIG 항체는 CHA.7.518.4, CHA.7.518.1, CHA.7.518, CHA.7.524, CHA.7.530, CHA.7.538_1, CHA.7.538_2, CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, CHA7.538.1.2, CPA.7.021, CPA.7.001, CPA.7.003, CPA.7.004, CPA.7.006, CPA.7.008, CPA.7.009, CPA.7.010, CPA.7.011, CPA.7.012, CPA.7.013, CPA.7.014, CPA.7.015, CPA.7.017, CPA.7.018, CPA.7.019, CPA.7.022, CPA.7.023, CPA.7.024, CPA.7.033, CPA.7.034, CPA.7.036, CPA.7.040, CPA.7.046, CPA.7.047, CPA.7.049, 및 CPA.7.050CHA.7.518로 구성된 군으로부터 선택됨); 및
d) 하기를 포함하는 제2 항원 결합 부분:
iii. 항-TIGIT 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인; 및
iv. 항-TIGIT 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-TIGIT 항체는 CPA.9.086, CHA.9.547.18, CPA.9.018, CPA.9.027, CPA.9.049, CPA.9.057, CPA.9.059, CPA.9.083, CPA.9.086, CPA.9.089, CPA.9.093, CPA.9.101, CPA.9.103, CHA.9.536.1, CHA.9.536.3, CHA.9.536.4, CHA.9.536.5, CHA.9.536.6, CHA.9.536.7, CHA.9.536.8, CHA.9.560.1, CHA.9.560.3, CHA.9.560.4, CHA.9.560.5, CHA.9.560.6, CHA.9.560.7, CHA.9.560.8, CHA.9.546.1, CHA.9.547.1, CHA.9.547.2, CHA.9.547.3, CHA.9.547.4, CHA.9.547.6, CHA.9.547.7, CHA.9.547.8, CHA.9.547.9, CHA.9.547.13, CHA.9.541.1, CHA.9.541.3, CHA.9.541.4, CHA.9.541.5, CHA.9.541.6, CHA.9.541.7, 및 CHA.9.541.8로 구성된 군으로부터 선택됨). - 제4항에 있어서, 제1 항원 결합 부분이 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
iii. VH-CH1-힌지-CH2-CH3을 포함하는 제1 중쇄; 및
iv. VL-CL을 포함하는 제1 경쇄 (여기서 상기 CL은 카파 또는 람다 항체의 불변 도메인임). - 제5항에 있어서, 상기 제1 중쇄 CH3은 아미노산 치환 S354C, E356D, M358L, 및 T366W를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체.
- 제5항에 있어서, 상기 CL이 카파인, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체.
- 제4항에 있어서, 상기 제2 항원 결합 부분이 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
iii. HC-CL-힌지-CH2-CH3을 포함하는 제2 중쇄 (여기서 상기 CL은 카파 또는 람다임); 및
iv. VL-CH1을 포함하는 제2 경쇄. - 제8항에 있어서, 상기 제2 중쇄 CH3은 아미노산 치환 Y349C, E356D, M358L, T366S, L368A, 및 Y407V를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체.
- 제8항에 있어서, 상기 CL이 람다인, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체.
- 제8항에 있어서, 상기 CL이 카파인, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체.
- 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
e) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분; 및
f) 하기를 포함하는 제2 항-TIGIT 항원 결합 부분:
iii. CPA.9.086 VH (EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS; 서열 번호 1634)를 포함하는 제2 중쇄 가변 영역; 및
iv. CPA.9.086 VL (QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL; 서열 번호 1639)를 포함하는 제2 경쇄 가변 영역. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
g) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분; 및
h) 하기를 포함하는 제2 항-TIGIT 항원 결합 부분:
iii. CPA.9.547.18 VH (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1664)를 포함하는 제2 중쇄 가변 영역; 및
iv. CPA.9.547.18 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1668)를 포함하는 제2 경쇄 가변 영역. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.1 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1539)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.1 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1544)를 포함하는 제1 경쇄; 및
d) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 3179)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 3180)를 포함하는 제1 경쇄; 및
d) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.1 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1539)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.1 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1544)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역; 및
d) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CPA.9.086 VH (EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS;서열 번호 1634)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CPA.9.086 VL (QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL; 서열 번호 1639)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 3179)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 3180)를 포함하는 제1 경쇄; 및
d) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CPA.9.086 VH (EVQLVETGGGLIQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYAGEVKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLPLHYYGMDVWGQGTTVTVSS; 서열 번호 1634)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CPA.9.086 VL (QSALTQPRSASGNPGQRVTISCSGSSSNMGRRPVNWYQQIPGTAPKLLIYSQNQRPSGVPDRFSGSQSGTSASLTISGLQSEDEAEYFCAVWDDIGRVLQLGGGTQLAVL; 서열 번호 1639)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.1 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1539)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.1 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1544)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역; 및
d) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CHA.9.547.18 HC (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 1664)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.9.547.18 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1668)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역. - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 항-PVRIG 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS; 서열 번호 3179)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 3180)를 포함하는 제1 경쇄; 및
d) 하기를 포함하는 항-TIGIT 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
i. CHA.9.547.18 HC (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664)를 포함하는 제1 중쇄 가변 영역; 및
ii. CHA.9.547.18 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK; 서열 번호 1668)를 포함하는 제1 경쇄 가변 영역. - 제1항 내지 제19항 및 제37항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체가 인간화 항체인, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체.
- 조성물로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 포함하는, 조성물.
- 핵산 조성물로서,
e) 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 제1 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제1 핵산;
f) 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 제1 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제2 핵산;
g) 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 제2 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제3 핵산; 및
h) 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 제2 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제4 핵산을 포함하는, 핵산 조성물. - 발현 벡터 조성물로서,
e) 제22항의 제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터;
f) 제22항의 제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터;
g) 제22항의 제3 핵산을 포함하는 제3 발현 벡터; 및
h) 제22항의 제4 핵산을 포함하는 제4 발현 벡터를 포함하는, 발현 벡터 조성물. - 발현 벡터 조성물로서,
c) 제22항의 제1 및 제2 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
d) 제22항의 제3 및 제4 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터를 포함하는, 발현 벡터 조성물. - 숙주 세포로서, 제23항 또는 제24항의 발현 벡터 조성물을 포함하는, 숙주 세포.
- 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 제조하는 방법으로서,
c) 상기 항체가 발현되는 조건 하에서 제25항의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
d) 상기 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 방법. - 환자의 T 세포를 활성화하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 T 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 세포독성 T 세포 (CTL)를 활성화하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 CTL의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 NK 세포를 활성화하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 NK 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 γδ T 세포를 활성화하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 γδ T 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 Th1 세포를 활성화하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 Th1 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자에서 조절 T 세포 (Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성을 감소시키거나 제거하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 인터페론-γ 생산 및/또는 전염증성 사이토카인 분비를 증가시키는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항-PVRIG/항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제34항에 있어서, 상기 암은 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제35항에 있어서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
- 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 하기를 포함하는 항-PVRIG 항원 결합 부분을 포함하는 제1 항원 결합 부분:
i. 항-PVRIG 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인; 및
ii. 항-PVRIG 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-PVRIG 항원 결합 부분은 CPA.7.021, CPA.7.001, CPA.7.003, CPA.7.004, CPA.7.006, CPA.7.008, CPA.7.009, CPA.7.010, CPA.7.011, CPA.7.012, CPA.7.013, CPA.7.014, CPA.7.015, CPA.7.017, CPA.7.018, CPA.7.019, CPA.7.022, CPA.7.023, CPA.7.024, CPA.7.033, CPA.7.034, CPA.7.036, CPA.7.040, CPA.7.046, CPA.7.047, CPA.7.049, CPA.7.050, CHA.7.502, CHA.7.503, CHA.7.506, CHA.7.508, CHA.7.510, CHA.7.512, CHA.7.514, CHA.7.516, CHA.7.518, CHA.7.520.1, CHA.7.520.2, CHA.7.522, CHA.7.524, CHA.7.526, CHA.7.527, CHA.7.528, CHA.7.530, CHA.7.534, CHA.7.535, CHA.7.537, CHA.7.538.1, CHA.7.538.2, CHA.7.543, CHA.7.544, CHA.7.545, CHA.7.546, CHA.7.547, CHA.7.548, CHA.7.549, CHA.7.550, CHA.7.518.1; CHA7.538.1.2 및 CHA.7.518.4로 구성된 군으로부터 선택됨); 및
d) 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분 (여기서 상기 항-TIGIT 항원 결합 도메인은 도 24 및 도 41, 특히 도 24a 내지 도 24ee에 제공된 항체로부터의 것임). - 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체:
c) 항-PVRIG 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 항원 결합 부분 (여기서 상기 항-PVRIG 항원 결합 도메인은 도 35에 제공된 항체로부터의 것임); 및
d) 하기를 포함하는 항-TIGIT 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 항원 결합 부분:
iii. 항-TIGIT 항체로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인; 및
iv. 항-TIGIT 항체로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인;
(여기서 상기 항-TIGIT 항원 결합 도메인은 CPA.9.018, CPA.9.027, CPA.9.049, CPA.9.057, CPA.9.059, CPA.9.083, CPA.9.086, CPA.9.089, CPA.9.093, CPA.9.101, CPA.9.103, CHA.9.536.1, CHA.9.536.3, CHA.9.536.4, CHA.9.536.5, CHA.9.536.6, CHA.9.536.7, CHA.9.536.8, CHA.9.560.1, CHA.9.560.3, CHA.9.560.4, CHA.9.560.5, CHA.9.560.6, CHA.9.560.7, CHA.9.560.8, CHA.9.546.1, CHA.9.547.1, CHA.9.547.2, CHA.9.547.3, CHA.9.547.4, CHA.9.547.6, CHA.9.547.7, CHA.9.547.8, CHA.9.547.9, CHA.9.547.13, CHA.9.541.1, CHA.9.541.3, CHA.9.541.4, CHA.9.541.5, CHA.9.541.6, CHA.9.541.7, CHA.9.541.8, 및 CHA.9.547.18로 구성된 군으로부터 선택됨). - 항-PVRIG 항체로서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG 항체:
i) 하기 서열로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 3179),
및
ii) 하기 서열로부터의 vlCDR1, vlCDR2, vlCDR3을 포함하는 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 3180). - 항-TIGIT 항체로서, 하기를 포함하는, 항-TIGIT 항체:
i) 하기 서열로부터의 vhCDR1, vhCDR2, 및 vhCDR3을 포함하는 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMSWVRQAPGKGLEWVATISGGSKGQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKWLLSYYAMDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 1664),
및
ii) 하기 서열로부터의 vlCDR1, vlCDR2, 및 vlCDR3을 포함하는 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인:
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSMAIWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASKSHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPYTFGQGTKLEIK (서열 번호 1668). - 제38항에 있어서, 하기를 포함하는, 항-PVRIG 항체:
c) CHA.7.518.4 VH (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNINWVRQAPGQGLEWMGYIYPYIGGSGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREDKTARNAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C Q D E L TKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK; 서열 번호 3175)를 포함하는 중쇄; 및
d) CHA.7.518.4 VL (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSENIYDVLAWYQQKPGKAPKLLIYEATNLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC; 서열 번호 3362)를 포함하는 경쇄. - 조성물로서, 제38항 또는 제40항에 따른 항-PVRIG 항체를 포함하는, 조성물.
- 핵산 조성물로서,
i) 제38항 또는 제40항에 따른 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제1 핵산; 및
ii) 제38항 또는 제40항에 따른 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제2 핵산을 포함하는, 핵산 조성물. - 조성물로서, 제39항에 따른 항-TIGIT 항체를 포함하는, 조성물.
- 핵산 조성물로서,
i) 제38항에 따른 중쇄 또는 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제1 핵산; 및
ii) 제38항에 따른 경쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 제2 핵산을 포함하는, 핵산 조성물. - 발현 벡터 조성물로서,
i) 제41항의 제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
ii) 제41항의 제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터를 포함하는, 발현 벡터 조성물. - 발현 벡터로서,
i) 제41항의 제1 핵산; 및
ii) 제41항의 제2 핵산을 포함하는, 발현 벡터. - 발현 벡터 조성물로서,
i) 제43항의 제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
ii) 제43항의 제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터를 포함하는, 발현 벡터 조성물. - 발현 벡터로서,
i) 제43항의 제1 핵산; 및
ii) 제43항의 제2 핵산을 포함하는, 발현 벡터. - 숙주 세포로서, 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항의 발현 벡터 또는 벡터 조성물을 포함하는, 숙주 세포.
- 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 제조하는 방법으로서,
i) 상기 항체가 발현되는 조건 하에서 제48항의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
ii) 상기 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 방법. - 환자의 T 세포를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 T 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 세포독성 T 세포 (CTL)를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 CTL의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 NK 세포를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 NK 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 γδ T 세포를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 γδ T 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 Th1 세포를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 Th1 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자에서 조절 T 세포 (Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성을 감소시키거나 제거하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 인터페론-γ 생산 및/또는 전염증성 사이토카인 분비를 증가시키는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제58항에 있어서, 상기 암은 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제58항에 있어서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제38항의 항-PVRIG 항체 및 항-PD-1 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제62항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 항체인, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제39항의 항-TIGIT 항체 및 항-PD-1 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제64항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 항체인, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제39항의 항-TIGIT 항체 및 제38항의 항-PVRIG 항체를 포함하는 조합 요법을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제39항의 항-TIGIT 항체, 항-PVRIG 항체 및 항-PD-1 항체를 포함하는 삼중 조합 요법을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 항-TIGIT 항체, 제38항의 항-PVRIG 항체 및 항-PD-1 항체를 포함하는 삼중 조합 요법을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제39항의 항-TIGIT, 제38항의 항-PVRIG 항체 및 항-PD-1 항체를 포함하는 삼중 조합 요법을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제64항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 항체인, 방법.
- 환자의 T 세포를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 T 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 세포독성 T 세포 (CTL)를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 CTL의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 γδ T 세포를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 γδ T 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자의 Th1 세포를 활성화하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 환자의 Th1 세포의 서브세트가 활성화되는, 방법.
- 환자에서 조절 T 세포 (Treg) 중 적어도 하나의 세포 수 및/또는 활성을 감소시키거나 제거하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 인터페론-γ 생산 및/또는 전염증성 사이토카인 분비를 증가시키는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-PVRIG 또는 항-TIGIT 항체를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제77항에 있어서, 상기 암은 전립선암, 간암 (HCC), 결장직장암, 난소암, 자궁내막암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 두경부암, 갑상샘암, 고환암, 요로상피암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 흑색종, 비흑색종 피부암 (편평 및 기저 세포 암종), 교모세포종, 신장암 (RCC), 림프종 (NHL 또는 HL), 급성 골수성 백혈병 (AML), T 세포 급성 림프모구 백혈병 (T-ALL), 확산성 거대 B 세포 림프종, 고환 생식세포 종양, 중피종, 식도암, 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제77항에 있어서, 상기 암은 삼중 음성 유방암, 위암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암), 메르켈 세포암, 고빈도 현미부수체 불안정성 (MSI-high) 암, KRAS 돌연변이 종양, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 골수종 및 골수형성이상 증후군 (MDS)으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
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