KR20200095087A - 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류를 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류를 포함하는 화장료 조성물을 개시한다. 구체적으로, 본 발명에 의한 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류는 항산화 활성, 콜라게나아제 저해 활성, 엘라스타아제 저해 활성, 섬유아세포 증식 활성, 콜라겐 합성 증진 활성, 티로시나아제 저해 활성 등과 같은 생리활성 효과가 우수하여 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 뛰어난 항산화, 피부 탄력 및 주름 개선, 및 미백 효과를 나타낼 수 있다.

Description

톳 효소 추출물 또는 그의 다당류를 포함하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING ENZYME-ASSISTED EXTRACT OF HIZIKIA FUSIFORME OR POLYSACCHARIDES FROM THE SAME}
본 발명은 톳 효소 추출물 및 그의 다당류를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근 자연 지향적이고 환경 친화적인 소비추세에 따라 천연 소재, 친환경 소재를 테마로 한 다양한 산업이 관심을 받고 있으며, 천연 화장품 소재 시장 또한 꾸준히 성장하면서 화장품에 들어가는 유효성분도 식물 또는 동물 유래의 천연물이 그 기능성을 기반으로 하여 여러 가지 형태로 배합되어 사용되고 있다. 최근에는 천연물 소재의 추출물은 물론 이들의 효능, 효과를 극대화시키는 방법으로 추출효율을 높이거나 기존에 추출되기 힘든 유효성분을 추출해내는 기술 등이 각광을 받고 있다.
천연물질 중에는 여러 가지 생리활성을 가진 물질이 많이 존재하여 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 기능성 화장품 소재로 활용되고 있다. 최근, 천연물질의 생리활성 검색은 육상생물 대상뿐만 아니라 해양생물 대상으로도 활발히 이루어지고 있으며, 특히, 해조류의 생리활성 성분들에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 해양생물은 독특한 환경으로 인하여 육상생물에 없는 특유의 대사과정을 가지고 있어 다양한 신규 생리활성 물질의 탐색 가능성이 높다. 또한, 해양생물에 대한 연구는 육상생물에 대한 연구에 비해 아직 그 수가 많지 않아서 새로운 천연물질의 개발에 대한 기대가 높은 편이다.
톳(Hijikia fusiforme)은 우리나라 중남 이남부에 분포하고, 특히 제주도와 서남해안에서 많이 생산되며, 갈조류 모자반과에 속하고 형태는 원주상의 줄기로 최장 20~100cm까지 성장하는 다년생 해조류이다. 톳은 독특한 맛과 함께 칼슘, 비타민 A 및 식이섬유소 함량이 풍부하여 당뇨병, 고혈압 예방, 대장암 및 변비 등에 효과가 좋으며 요오드 성분 함량이 많아 갑상선암 및 각기병 예방에 효과가 있다고 알려져 있다.
한편, 다당류(polysaccharide)란 단당(monosaccharide)이 복수로 결합된 소재라고 정의할 수 있으며, 건강기능식품, 의약품, 화장품 등 다양한 분야에서 활용되고 있다. 특히, 미용, 의료분야에 주로 활용되고 있으며 해조류 다당류는 육상생물과는 다른 생리활성 물질을 함유하고 있고, 새로운 다당류를 포함한 생리활성 물질로서 항종양성, 항바이러스성, 항혈액응고 및 면역력 증가 등의 다양한 생리활성 기능을 갖는 것으로 알려지고 있다.
대한민국 공개특허공보 제10-2014-0010543호
본 발명은 기존의 추출 시 문제되는 인체 독성, 낮은 추출 수율, 고비용 등의 문제점을 해결하고, 피부 항산화, 피부 탄력 및 주름 개선, 피부 미백 효능이 우수한 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류를 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예는 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 다른 실시예는 톳 효소 추출물의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 탄력 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 또 다른 실시예는 톳 효소 추출물의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 의한 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류는 항산화 활성, 콜라게나아제 저해 활성, 엘라스타아제 저해 활성, 섬유아세포 증식 활성, 콜라겐 합성 증진 활성, 티로시나아제 저해 활성 등과 같은 생리활성 효과가 우수하여 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 뛰어난 항산화, 피부 탄력 및 주름 개선, 및 미백 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 톳 효소 추출물(HF)의 세포 독성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)의 산화스트레스로부터 세포 생존률 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)의 섬유아세포 증식 활성 평가, 콜라게나아제 저해 활성 평가, 및 엘라스타아제 저해 활성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)의 콜라겐 합성 증진 효능 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)의 UV-B 조사에 따른 세포 손상 억제능 측정 결과, 세포 생존률 측정 결과 및 활성산소 생성량 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)의 티로시나아제 저해 활성 평가, α-MSH로 멜라닌 생성 유도시킨 경우의 멜라닌 함량 측정 및 티로시나아제 활성 측정 결과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 일 측면에서, 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 항산화용 화장료 조성물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 다른 측면에서, 톳 효소 추출물의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 탄력 및 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 또 다른 측면에서, 톳 효소 추출물의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것일 수 있다.
상기 톳 효소 추출물은, 톳 분말에 물 및 효소를 첨가하여 반응시킴으로써 획득된 것일 수 있다.
이때, 일 구현 예에 따르면, 효소 반응 시 pH 3 내지 6 조건 하에서 반응시킨 것일 수 있다. 구체적으로, 효소 반응 시의 pH는 3 이상, 3.3 이상, 3.5 이상, 3.7 이상, 4 이상, 4.2 이상, 4.5 이상, 4.7 이상, 5 이상 또는 5.5 이상일 수 있고, 또한, 6 이하, 5.5 이하, 5 이하, 4.7 이하, 4.5 이하, 4.2 이하, 4 이하, 3.7 이하, 3.5 이하 또는 3.3 이하일 수 있다.
일 구현 예에 따르면, 상기 효소 반응은 40 내지 60℃의 온도 조건 하에서 수행될 수 있다. 구체적으로, 상기 효소 반응은 40℃ 이상, 42℃ 이상, 44℃ 이상, 46℃ 이상, 48℃ 이상, 50℃ 이상, 52℃ 이상, 54℃ 이상, 56℃ 이상 또는 58℃ 이상의 온도 조건 하에서 수행될 수 있으며, 또한, 60℃ 이하, 58℃ 이하, 56℃ 이하, 54℃ 이하, 52℃ 이하, 50℃ 이하, 48℃ 이하, 46℃ 이하, 44℃ 이하 또는 42℃ 이하의 온도 조건 하에서 수행될 수 있다.
일 구현 예에 따르면, 상기 효소 반응은 12 내지 36 시간 동안 수행될 수 있다. 구체적으로, 12 시간 이상, 15 시간 이상, 18 시간 이상, 21 시간 이상, 24 시간 이상, 27 시간 이상, 30 시간 이상 또는 33 시간 이상 동안 수행될 수 있으며, 또한, 36 시간 이하, 33 시간 이하, 30 시간 이하, 27 시간 이하, 24 시간 이하, 21 시간 이하, 18 시간 이하, 15 시간 이하, 12 시간 이하 동안 수행될 수 있다.
일 구현 예에 따르면, 상기 효소는 상기 톳 분말 중량에 대하여 1 내지 10%(v/w)의 비율로 첨가될 수 있다. 구체적으로, 상기 효소는 상기 톳 분말 중량에 대하여 1% 이상, 1.5% 이상, 2% 이상, 2.5% 이상, 3% 이상, 3.5% 이상, 4% 이상, 4.5% 이상, 5% 이상, 5.5% 이상, 6% 이상 또는 6.5% 이상의 비율로 첨가될 수 있으며, 또한, 7% 이하, 6.5% 이하, 6% 이하, 5.5% 이하, 5% 이하, 4.5% 이하, 4% 이하 3.5% 이하, 3% 이하, 2.5% 이하, 2% 이하, 1.5% 이하, 1%이하의 비율로 첨가될 수 있다.
일 구현 예에 따르면, 상기 효소 반응은 온도를 90 내지 100℃로 높임으로써 중단될 수 있다. 구체적으로, 상기 효소 반응은 온도를 90℃ 이상, 92℃ 이상, 94℃ 이상, 96℃ 이상 또는 98℃ 이상으로, 또한, 100℃ 이하, 98℃ 이하, 96℃ 이하, 94℃ 이하 또는 92℃ 이하로 높임으로써 중단시킬 수 있다.
일 구현 예에 따르면, 상기 효소는 당 분해효소 및 단백질 분해효소 중 적어도 하나 이상일 수 있다.
다른 구현 예에 따르면, 상기 당 분해효소는, 아밀로글루코시다아제(amylo glucosidase, AMG), 셀루클라스트(celluclast), 테르마밀(termamyl), 울트라플로(ultraflo) 및 비스코자임(viscozyme)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 셀루클라스트(celluclast)일 수 있으며, 상기 셀루클라스트는 트리코더마 레세이(Trichoderma reesei) 유래 셀룰라아제(cellulase)일 수 있다.
다른 구현 예에 따르면, 상기 단백질 분해효소는, 알칼라아제(alcalase), 코지자임(kojizyme), 뉴트라아제(neutrase), 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavozyme)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
일 구현 예에 따르면, 상기 톳 효소 추출물의 다당류는 푸코스(Fucose), 람노스(Rhamnose), 갈락토스(galactose), 글루코스(glucose), 만노스(Mannose), 자일로스(Xylose) 및 아라비노스(Arabinose)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단당류로 구성될 수 있으며, 총 분자량은 20,000~400,000 Da일 수 있다.
구체적으로, 상기 다당류의 총 분자량은 20,000Da 이상, 40,000Da 이상, 60,000Da 이상, 80,000Da 이상, 100,000Da 이상, 150,000Da 이상, 200,000Da 이상, 250,000Da 이상, 300,000Da 이상 또는 350,000Da 이상일 수 있으며, 또한, 400,000Da 이하, 350,000Da 이하, 300,000Da 이하, 250,000Da 이하, 200,000Da 이하, 150,000Da 이하, 100,000Da 이하, 80,000Da 이하, 60,000Da 이하 또는 40,000Da 이하일 수 있다.
일 구현 예에 다르면, 상기 톳 효소 추출물은 상기 조성물 총 중량을 기준으로 0.1 내지 20중량%의 양으로 포함될 수 있다. 구체적으로, 상기 톳 효소 추출물의 상기 조성물 총 중량 대비 함량은 0.1 중량% 이상, 1 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 7 중량% 이상, 9 중량% 이상, 11 중량% 이상, 13 중량% 이상, 15 중량% 이상, 17 중량% 이상 또는 19 중량% 이상일 수 있으며, 또한, 20 중량% 이하, 19 중량% 이하, 17 중량% 이하, 15 중량% 이하, 13 중량% 이하, 11 중량% 이하, 9 중량% 이하, 7 중량% 이하, 5 중량% 이하, 3 중량% 이하 또는 1 중량% 이하일 수 있다.
일 구현 예에 다르면, 상기 톳 효소 추출물의 다당류는 상기 조성물 총 중량을 기준으로 0.01 내지 10중량%의 양으로 포함될 수 있다. 구체적으로, 상기 톳 효소 추출물의 다당류의 상기 조성물 총 중량 대비 함량은 0.01 중량% 이상, 0.05 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 0.5 중량% 이상, 1 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상 또는 7 중량% 이상일 수 있으며, 또한, 10 중량% 이하, 7 중량% 이하, 5 중량% 이하, 3 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.5 중량% 이하, 0.1 중량% 이하 또는 0.05 중량% 이하일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 화장료 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유할 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택될 수 있다. 예를 들어, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 클렌징워터, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디클렌저 및 바디에센스 등의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물에는 상기 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어지는 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.
상기 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조절제, 알코올, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
이하, 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이러한 실시예 및 시험예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 이러한 실시예 및 시험예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포함된다.
[실시예 1] 톳 효소 추출물 및 그의 다당류의 제조
1. 톳 효소 추출물의 제조
톳은 2016년 6월 제주도 연안 지역에서 수집한 것을 사용하였다. 톳 원물을 물로 수세하여 착생식물, 모래 및 염분을 제거하고 동결 건조 후 분쇄하였다. 동결 건조된 톳 분말 10g에 1L의 증류수를 첨가하고, 1M HCl을 첨가하여 pH를 4.5로 조정한 다음 500μL의 셀루클라스트(Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark) 를 첨가하고 50℃에서 24시간 동안 진탕배양기(shaking incubator)에서 반응시켰다. 이후 100℃로 10분 동안 가온하여 효소 반응을 중단시킨 다음, 원심분리하여 상층액을 취하고, 1M NaOH를 사용하여 pH를 7로 조정하여 톳 효소 추출물(celluclast-assisted extract of H. fusiforme, HF)을 수득하였다.
2. 톳 효소 추출물로부터 다당류의 분리
상기에서 수득된 톳 효소 추출물(HF)에 2L의 95% 에탄올을 첨가하고 4℃에서 24시간 동안 교반시킨 다음 여과하여 침전물로서 톳 효소 추출물의 다당류(crude polysaccharides of H. fusiforme, HFPS)를 수득하였다.
[실시예 2 내지 10] 톳 효소 추출물의 제조
효소로서 상기 셀루클라스트(celluclast) 대신 각각 아밀로글루코시다아제(amylo glucosidase, AMG, ovo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 2), 테르마밀(termamyl, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark 실시예 3), 울트라플로(ultraflo, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 4), 비스코자임(viscozyme, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 5), 알칼라아제(alcalase, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 6), 코지자임(kojizyme, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 7), 뉴트라아제(neutrase, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 8), 프로타멕스(protamex, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 9) 및 플라보자임(flavozyme, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark)(실시예 10)을 사용한 것 외에는 상기 실시예 1의 1.과 동일한 방법으로 톳 효소 추출물을 제조하였다.
[비교예 1 및 2] 일반 톳 추출물의 제조
상기 실시예 1의 1.에서와 동일한 방법으로 동결 건조한 톳 분말 10g에 증류수 및 70%에탄올을 각각 1L씩 첨가하고, 25℃에서 24시간 동안 진탕배양기(shaking incubator)에서 반응시켰다. 이후 원심분리하여 상층액을 취하고, 톳 물 추출물(비교예 1)과 톳 70%에탄올 추출물(비교예 2)을 수득하였다.
[실험예 1] 추출 용매 및 효소별 톳 추출물의 수율, 일반 성분 함량 및 라디칼 소거능 비교 평가
상기 실시예 1 내지 10의 톳 효소 추출물 및 비교예 1, 2의 일반 톳 추출물의 일반 성분 함량 및 라디칼 소거능을 비교 평가하였다. 구체적으로, 일반 성분은 AOAC법(Association of Official Analytical Chemists, 1990)에 따라 측정하였으며, 글루코오스(glucose) 및 갈산(gallic acid)을 표준시약으로 하여 총 탄수화물 함량 및 총 페놀 함량을 정량하였다. 단백질함량은 Lowry assay를 이용하여 측정하였고 BSA(Bovine serum albumin)을 표준시약으로 하여 정량하였다.
라디칼 소거능은 ESR(electron spin resonance spectrometer, JES-FA ESR, JEOL, Japan)을 이용하여 측정하였다. 구체적으로 DPPH 라디칼 소거활성은 Nanjo 등(Nanjo F, Goto K, Seto R, Suzuki M, Sakai M, Hara Y. Scavenging effects of tea catechins and their derivatives on 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical. Free Radical Biology and Medicine 1996;21:895-902.)의 방법을 변형하여 측정하였다. 50 μL 시료용액에 50 μL DPPH 용액을 첨가하여 1분 30초 동안 반응 후 모세관(capillary tube)에 옮긴 후 electron spin resonance(ESR) spectrophotometer로 측정하였다. 스펙트럼은 scan time: 1mW, amplitude: 1×1000의 조건으로 측정하였다. 각각의 시료에 대한 라디칼 소거능(%)은 아래의 방법으로 계산하였으며, 라디칼 소거능이 50%일 때의 시료의 농도(IC50)를 측정하였다.
라디칼 소거능(%)={(대조군 측정값-시료 측정값)/대조군 측정값}×100
그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
수율(%) 탄수화물(%) 단백질(%) 총 페놀(%) IC50
(mg/mL)
DPPH
라디칼
비교예
1		 36.67 ±
0.62		 27.18 ±
0.93		 8.69 ±
0.14		 3.97 ±
0.00		 2.85 ±
0.03
비교예2 6.67 ±
0.24		 19.12 ±
3.30		 8.56 ±
0.19		 4.46 ±
0.14		 3.07 ±
0.01
실시예
1		 44.00 ±
0.71		 26.22 ±
3.73		 10.93 ±
0.55		 4.17 ±
0.01		 0.91 ±
0.02
실시예
2		 37.50 ±
1.78		 25.15 ±
0.50		 9.37 ±
0.17		 2.57 ±
0.09		 4.03 ±
0.11
실시예3 38.70 ±
0.85		 26.93 ±
0.29		 7.98 ±
0.09		 2.71 ±
0.05		 3.99 ±
0.10
실시예4 35.33 ±
1.03		 26.17 ±
0.79		 9.92 ±
0.26		 3.83 ±
0.03		 3.24 ±
0.01
실시예5 37.67 ±
1.55		 48.88 ±
1.08		 10.84 ±
0.14		 3.97 ±
0.14		 2.93 ±
0.09
실시예6 39.67 ±
1.03		 19.42 ±
3.15		 10.84 ±
0.41		 4.26 ±
0.28		 2.44 ±
0.12
실시예7 41.67 ±
1.31		 21.91 ±
0.65		 10.15 ±
0.00		 4.26 ±
0.28		 3.46 ±
0.05
실시예8 36.33 ±
0.46		 25.61 ±
1.15		 8.98 ±
0.00		 3.67 ±
0.14		 2.93 ±
0.11
실시예9 38.50 ±
0.41		 23.28 ±
1.00		 7.91 ±
0.14		 3.67 ±
0.00		 2.93 ±
0.06
실시예10 36.83 ±
0.62		 27.43 ±
1.43		 8.79 ±
0.28		 3.82 ±
0.07		 3.06 ±
0.03
상기 표 1의 결과로부터, 효소 추출물인 실시예 1 내지 10은 에탄올 추출물인 비교예 2에 비하여 현저히 높은 추출 수율을 나타냈으며, 그 중 셀루클라스트를 사용한 실시예 1은 나머지 비교예 1, 실시예 2 내지 10에 비해서도 가장 우수한 추출 수율을 보였다.
라디칼 소거능의 경우, 셀루클라스트를 사용한 실시예 1이 일반 물 및 에탄올 추출물인 비교예 1 및 2, 다른 효소를 사용한 효소 추출물인 실시예 2 내지 10에 비하여 DPPH 라디칼 소거능이 현저히 높은 것으로 확인되었다.
[실험예 2] 톳 효소 추출물의 세포독성 평가
멜라닌형성세포(B16F10) 및 섬유아세포(human dermal fibroblast cell, HDF) 각각에 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물(HF)을 25μg/mL, 50μg/mL 및 100μg/mL로 처리하고 MTT assay 평가를 수행하였다. B16F10은 한국세포주은행(Korea Cell Bank)로부터 제공받아 사용하였다. 생육 배지로는 Dulbecco's Modified Eagels' Medium (DMEM; Gibco, CA, USA) 배지를 사용하였고, 배지에는 10% fetal bovine serum (FBS)과 penicillin (100 U/ml) 및 streptomycin (100 μg/ml)을 첨가하였다. 실험기간 동안 세포주는 5% CO2가 공급되는 37℃ 환경에서 배양하였다. human dermal fibroblast(HDF) 세포는 Dulbeco's modified eagle's medium (DMEM) 배지에 F12를 3:1 비율로 혼합하여 10% fetal bovine serum (FBS)과 1% penicillin/streptomycin (100 U/mL)을 첨가하여 5% CO2, 37℃ 조건 하에서 배양하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1의 결과로부터, 본 발명에 따른 실시예 1의 톳 효소 추출물은 모든 농도에서 세포 생존률(cell viability)이 유의하게 감소하지 않았으며, 따라서 세포 독성이 확인되지 않았다.
[실험예 3] 톳 효소 추출물의 다당류의 라디칼 소거능 평가
상기 실험예 1에 기술된 방법에 따라 상기 실시예 1에서 수득된 톳 효소 추출물의 다당류의 DPPH 라디칼을 측정하였으며, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.
IC50 (mg/mL)
DPPH 라디칼
실시예 1의 톳 효소 추출물 0.91 ± 0.02
실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류 0.81 ± 0.02
상기 표 2의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류가 톳 효소 추출물에 비하여 보다 우수한 라디칼 소거능을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 톳 효소 추출물로부터 분리된 다당류가 톳 효소 추출물 보다 우수한 항산화능을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 4] 톳 효소 추출물의 다당류의 산화적 스트레스로부터 세포 생존률 평가
섬유아세포(HDF)에 자극원으로서 각각 AAPH, H2O2, UV-B를 처리하여 산화적 스트레스를 유도시킨 후, 톳 효소 추출물의 다당류의 세포 보호능에 따른 세포 생존률(cell viability)을 측정하였으며, 자극원 별 세포 생존률 평가 결과는 도 2(AAPH: (a), H2O2: (b), UV-B: (c))에 각각 나타내었다.
구체적으로, 산화적 스트레스를 유도하였을 때 샘플에 의한 ROS 소거능을 확인하기 위해 AAPH [2,2-azobis-(2-amidinopropane) dihydrochloride]와 H2O2로 자극을 주어 ROS의 변화를 측정하였다. 먼저 5 x 104세포농도의 세포를 만들어 24 well plate에 450μl를 분주하였고, 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하여 시료(실시예 1의 HFPS)를 농도 별(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)로 25μg/ml 처리하였다. 이 후 37℃ 인큐베이터에서 2시간 배양하여 5mM AAPH 25μl와 1mM H2O2 25μl 를 처리하였고, 37℃ 인큐베이터에서 48시간 반응시켜 2mg/mL MTT용액을 100μl 처리하고 빛을 차단시킨 후 37℃ 인큐베이터에서 3시간 반응시킨 후 상층액을 제거하고 dimethylsufoxide(DMSO) 500ul를 처리한 후 24시간동안 교반시키고 ELISA reader를 사용하여 540nm에서 측정하였다.
자외선 B(UV-B) 조사로 인한 세포독성 및 산화적 세포사멸에 대한 시료의 보호효과를 확인하기 위해서 자외선 B를 하기와 같은 조건으로 처리하였다. 5 × 104 세포농도의 세포를 만들어 24 well plate에 475ul를 분주하였고, 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하여 시료를 농도 별(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)로 처리하였다. 2시간 후, 인산완충용액으로 2회 세척하고 인산완충용액 200μl을 웰마다 분주 한 후, 자외선 조사장치를 사용하여 50mJ/cm2의 자외선 B를 조사하였다. 이 후 인산완충용액을 제거하고 DMEM(FBS-Free) 500ul를 분주한 후 2일간 37℃ 인큐베이터에서 배양하였고 2mg/mL MTT용액을 100μl 처리하고 빛을 차단시킨 후 37℃ 인큐베이터에서 3시간 반응시킨 후 상층액을 제거하고 dimethylsufoxide(DMSO) 500ul를 처리한 후 24시간동안 교반시키고 ELISA reader를 사용하여 540nm에서 측정하였다.
도 2의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류를 농도 별로 처리하였을 때, 각 자극원에 대하여 농도의존적으로 세포 생존률이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 5] 톳 효소 추출물의 다당류의 섬유아세포 증식 활성, 콜라게나아제(collagenase) 및 엘라스타아제(elastase) 저해 활성 평가
섬유아세포(HDF)에 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)를 농도 별로 처리하고 46시간 동안 배양 후 세포 증식에 따른 세포 생존률(cell viability)을 측정하였으며, 그 결과를 도 3(a)에 나타내었다. 구체적으로, 24-Well plate에 HDF 세포를 5 Х 104개로 접종한 후 5% CO2, 37℃이하에서 24시간 배양하였다. 농도 별(50μg/mL, 100μg/mL, 200μg/mL)로 시료를 첨가하여 48 시간 동안 배양하였다. 이후 2mg/ml 농도의 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 100 μl 처리하였고 37℃에서 3시간 배양하고 형성된 불용성 결정을 dimethylsufoxide (DMSO)로 완전히 녹인 후에 빛을 차단시켜 24시간 보관 후 상층액을 제거하고 dimethylsufoxide(DMSO) 500ul를 처리한 후 24시간동안 교반시키고 ELISA reader를 사용하여 540nm에서 측정하였다.
도 3(a)의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류가 섬유아세포를 20% 이상 농도의존적으로 증식시킴을 확인할 수 있었다.
콜라게나아제 효소에 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류를 농도별로 처리하여 효소 억제율을 측정하였다. 반응구는 0.1M Tris-HCI buffer (pH 7.5)에 4 mM CaCl2를 첨가하여, 4-phenyl azobenzy loxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-Arg (0.3 mg/ml)를 녹인 기질액 0.25 ml 및 농도 별(50μg/mL, 100μg/mL, 200μg/mL) 시료용액 0.1ml의 혼합액에 콜라게나아제 (0.2 mg/ml) 0.15 ml 를 첨가하여 실온에서 20분간 방치한 후 6% citric acid 0.5 ml를 넣어 반응을 정지시킨 후, ethylacetate 1.5 ml을 첨가하여 상등액을 320 nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라게나아제 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다. 양성 대조군으로는 EGCG(Epigallocatechin gallate, 100μg/mL)를 사용하였으며 그 결과는 도 3(b)에 나타내었다. 도 3(b)의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류가 농도 의존적으로 유의적인 콜라게나아제 저해 활성(collagenase inhibition activity)을 나타냈으며, 200 μg/mL 농도에서는 양성 대조군인 EGCG와 거의 유사한 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
엘라스타아제 효소에 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류를 농도별로 처리하여 효소 억제율을 측정하였다. 피부 주름 개선효과를 확인하기 위하여 기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide (sigma chemical Co., Ltd. St. Louis, MO, USA)를 사용하여 37℃에서 30분간 p-nitroanilide의 생성량을 측정함으로서 엘라스타아제(elastase, porcine pancreas 유래) 저해 활성을 조사하였다. 각 시험용액을 농도 별(50μg/mL, 100μg/mL, 200μg/mL)로 조제하여 0.1ml씩 시험관에 취하고 50mM Tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 엘라스타아제, pancreatic solution (Type I： From Porcine Pancreas유래, 0.6 units/ml)용액 0.05 ml를 가한 후 기질로 50 mM Tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide(1mg/ml)을 0.1 ml를 첨가하여 30분간 반응시키고 microplate reader를 이용하여 410 nm에서 흡광도를 측정하였다. 엘라스타아제 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다. 양성 대조군으로는 EGCG(Epigallocatechin gallate, 100μg/mL)를 사용하였으며 그 결과는 도 3(c)에 나타내었다. 도 3(c)의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류가 농도 의존적으로 유의적인 엘라스타아제 저해 활성(elastase inhibition activity)을 나타냈으며, 200 μg/mL 농도에서는 양성 대조군인 EGCG보다도 우수한 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
도 3의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류는 우수한 섬유아세포 증식 활성, 및 콜라게나아제 및 엘라스타아제 저해 활성을 나타내며 이에 따라 우수한 피부 탄력 및 주름 개선 효과를 나타낼 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 6] 톳 효소 추출물의 다당류의 콜라겐 합성능(pro-collagen synthesis) 평가
섬유아세포(HDF)에 자극원으로서 각각 AAPH, H2O2, UV-B를 처리한 다음 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류를 농도별로 처리하여 콜라겐 양의 변화를 측정하여 주름 형성 억제 정도를 확인하였다. 먼저 5 x 104세포농도의 세포를 만들어 24 well plate에 450μl를 분주하였고, 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하여 시료를 농도 별(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)로 25ug/ml 처리하였다. 이 후 37℃ 인큐베이터에서 2시간 배양하여 5mM AAPH 25μl와 1mM H2O2 25μl 를 처리하였고, 37℃ 인큐베이터에서 48시간 반응시켜 배양액을 모아서 procollagen type Ⅰ protein synthesis kit(Takara. Japan)를 이용하여 콜라겐 전구체의 C-말단의 양을 측정하였다.
자외선 B(UV-B) 조사로 인한 콜라겐 양의 변화를 측정을 위해서 5 × 104 세포농도의 세포를 만들어 24 well plate에 475μl를 분주하였고, 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하여 시료(실시예 1의 HFPS)를 농도 별(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)로 처리하였다. 2시간 후, 인산완충용액으로 2회 세척하고 인산완충용액 200ul을 웰마다 분주 한 후, 자외선 조사장치를 사용하여 50mJ/cm2의 UV-B를 조사하였다. 이 후 인산완충용액을 제거하고 DMEM(FBS-Free) 500ul를 분주한 후 48시간 37℃ 인큐베이터에서 배양하였고 배양액을 모아서 procollagen type Ⅰ protein synthesis kit(Takara. Japan)를 이용하여 콜라겐 전구체의 C-말단의 양을 측정하였다.
자극원 별 평가 결과는 도 4(AAPH: (a), H2O2: (b), UV-B: (c))에 나타냈으며, 도 4의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류는 농도 의존적으로 콜라겐 합성량을 크게 증가시키며, 이에 따라 우수한 주름 형성 억제 효과를 나타낼 수 있음을 확인할 수 있었다.
[실험예 7] 톳 효소 추출물의 다당류의 UV-B 조사에 따른 세포 보호능 평가
피부각질세포(HaCaT)에 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)를 농도 별(6.25μg/mL, 12.5μg/mL, 25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)로 처리한 다음 UV-B(30mJ/cm2)를 조사하여, 세포 손상 억제 정도에 따른 세포 생존률(cell viability)를 측정하였으며, 세포 생존률 측정 방법은 상기 실험예 4와 같다. 그 결과는 도 5(a)에 나타내었다. 도 5(a)의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류는 UV-B에 의한 세포 손상을 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다.
피부각질세포(HaCaT)에 UV-B(30mJ/cm2) 를 조사한 다음 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)를 농도 별(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)로 처리하여 UV-B 보호효과를 측정하였다. 구체적으로, 1 × 105세포농도의 세포를 만들어 24 well plate에 475μl를 분주하였고, 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하여 농도 별로 시료를 25μl씩 처리하고 37℃ 인큐베이터에서 2시간 반응시켰다. 이 후 인산완충용액으로 2회 세척하고 인산완충용액 200μl을 웰 마다 분주 한 후, 자외선 조사장치를 사용하여 30mJ/cm2의 UV-B를 조사하였다. 이 후 인산완충용액을 제거하고 DMEM(FBS-Free) 500μl를 분주한 후 2일간 37℃ 인큐베이터에서 배양하였고 2mg/mL MTT용액을 100μl 처리하고 빛을 차단시킨 후 37℃ 인큐베이터에서 3시간 반응시킨 후 상층액을 제거하고 dimethylsufoxide(DMSO) 500μl를 처리한 후 24시간동안 교반시키고 ELISA reader를 사용하여 540nm에서 측정하였다. 그 결과는 도 5(b)에 나타내었다.
활성산소 생성량 측정 방법은, 구체적으로, 1 × 105세포농도의 세포를 만들어 24 well plate에 475μl를 분주하였고, 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하여 농도 별(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)로 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)를 25μl씩 처리하고 37℃ 인큐베이터에서 30분 반응시켰다. 500μg/ml농도의 DCF-DA(dichlorofluorescein diacetate)를 25μl 처리하고, 30분 후 인산완충용액으로 2회 세척하고 인산완충용액 200μl을 웰마다 분주 한 후, 자외선 조사장치를 사용하여 30mJ/cm2의 UV-B를 조사하였다. 다시 37℃ 인큐베이터에서 30분 반응시킨 후 485nm(excitation), 535nm(emission)에서 흡광도를 측정하여 활성산소 생성량을 측정하였다. 그 결과는 도 5(c)에 나타내었다.
도 5(b) 및 도 5(c)의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류는 농도 의존적으로 높은 세포 생존률을 나타내고 활성산소 생성량을 크게 감소시키는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 8] 톳 효소 추출물의 다당류의 티로시나아제 저해 활성(tyrosinase inhibitory activity) 평가
티로시나아제 효소에 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류를 농도별로 처리하여 효소 억제율을 측정하였다. 티로시나아제(sigma chemical Co., Ltd. St. Louis, MO, USA; in 0.05M potassium phosphate buffer)와 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)와 증류수 정량을 섞어서 톳 효소 추출물의 다당류가 일정 농도(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL)가 되도록 한 뒤, 37℃ 에서 30분간 유지한 후 475nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 알부틴(arbutin, 350μM)를 사용하였으며 그 결과는 도 6(a)에 나타내었다. 도 6(a)의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류가 농도 의존적으로 유의적인 티로시나아제 저해 활성을 나타냈으며, 100 μg/mL 농도에서는 양성 대조군인 알부틴과 거의 유사한 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
멜라닌형성세포(B16F10)에 α-MSH를 처리하여 멜라닌 생성을 유도시킨 후 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류를 농도별로 처리한 다음 멜라닌 함량(melanin content) 및 티로시나아제 활성(relate tyrosinase activity)을 각각 측정하였다. 악성흑색종 세포주인 B16F10은 한국세포주은행(Korea Cell Bank)로부터 제공받아 사용하였다. 생육 배지로는 Dulbecco's Modified Eagels' Medium (DMEM; Gibco, CA, USA) 배지를 사용하였고, 배지에는 10% fetal bovine serum (FBS)과 penicillin (100 U/ml) 및 streptomycin (100 μg/ml)을 첨가하였다. 실험기간 동안 세포주는 5% CO2가 공급되는 37℃ 환경에서 배양하였다. human dermal fibroblast neonatal (HDFn) 세포는 Dulbeco's modified eagle's medium (DMEM) 배지에 10% fetal bovine serum (FBS)과 1% penicillin/streptomycin (100 U/mL)을 첨가하여 5% CO2, 37℃ 조건 하에서 배양하였다. 티로시나아제 저해활성 측정은 L-DOPA 산화 비율 정도를 통하여 측정하였다. 세포는 24 well plate에 1 Х 105cells/mL의 양으로 분주하여 전배양 시킨 후 50 nM의 α-MSH 처리 후 상기 실시예 1의 톳 효소 추출물의 다당류(HFPS)를 농도 별로(25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL) 처리하여 72 시간 배양하였다. 그 후 배양액을 제거하고 1% Triton X-100과 0.1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)가 첨가된 50 mM sodium phosphate buffer (pH 6.5)를 이용하여 세포를 용해(lysis) 하여 -80℃에 30 분간 방치하였다. 동결된 세포를 용해시켜 96 well plate로 옮긴 후 37℃에서 1 시간 동안 10 분 간격으로 492nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 각각 도 6(b) 및 도 6(c)에 나타냈으며, 도 6(b) 및 도 6(c)의 결과로부터, 본 발명에 따른 톳 효소 추출물의 다당류가 농도 의존적으로 멜라닌 함량 및 티로시나아제 활성을 감소시키며, 특히, 100 μg/mL 농도에서는 양성 대조군인 알부틴(100μM)과 거의 유사한 수준으로 멜라닌 함량을 감소시키고 알부틴보다도 더 높은 티로시나아제 저해 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (10)

  1. 톳 효소 추출물 또는 그의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 항산화용 화장료 조성물.
  2. 톳 효소 추출물의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 탄력 및 주름 개선용 화장료 조성물.
  3. 톳 효소 추출물의 다당류를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 당 분해효소 및 단백질 분해효소 중 적어도 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 당 분해효소는 아밀로글루코시다아제(amylo glucosidase, AMG), 셀루클라스트(celluclast), 테르마밀(termamyl), 울트라플로(ultraflo) 및 비스코자임(viscozyme)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  6. 제4항에 있어서,
    상기 단백질 분해효소는 알칼라아제(alcalase), 코지자임(kojizyme), 뉴트라아제(neutrase), 프로타멕스(protamex) 및 플라보자임(flavozyme)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 다당류는 푸코스(Fucose), 람노스(Rhamnose), 갈락토스(galactose), 글루코스(glucose), 만노스(Mannose), 자일로스(Xylose) 및 아라비노스(Arabinose)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단당류로 구성되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 다당류는 총 분자량이 20,00~400,000 Da인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 톳 효소 추출물은 상기 조성물 총 중량을 기준으로 0.1 내지 20 중량%의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  10. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 톳 효소 추출물의 다당류는 상기 조성물 총 중량을 기준으로 0.01 내지 10 중량%의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
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KR102643767B1 (ko) * 2023-04-10 2024-03-06 한국콜마주식회사 몰로키아 효소처리물을 유효성분으로 포함하는 피부장벽 기능 개선용 화장료 조성물

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KR20140010543A (ko) 2012-07-13 2014-01-27 (주)해림파메틱 톳 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물

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