KR20200083523A - 인테그린 리간드 및 그의 용도 - Google Patents

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KR20200083523A
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젠 리
시아오카이 리
에릭 더블유. 부시
루이 주
동쉬 슈
조나단 벤슨
패트릭 샤오
매튜 파울러-와터스
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애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드
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Abstract

혈청 안정성 및 다양한 세포 유형에서 발현되는 수용체인 인테그린 αvβ6에 대한 친화도를 갖는 화학식 I의 합성 αvβ6 인테그린 리간드가 기재된다. 기재된 리간드는 인테그린 αvβ6을 발현하는 세포로 화물 분자, 예컨대 RNAi 작용제 또는 다른 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 전달하여 이들 세포 내로의 화물 분자의 흡수를 용이하게 하는데 유용하다. αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물 및 사용 방법이 또한 기재된다.

Description

인테그린 리간드 및 그의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 11월 1일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/580,398, 2018년 3월 22일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/646,739, 및 2018년 6월 1일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/679,549를 우선권 주장하고, 이들 각각의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
상피 세포를 포함한 다양한 세포 유형에서 발현되는 인테그린 알파-v 베타-6 (αvβ6)은 TGF-β의 잠복기-연관 펩티드 (LAP) 및 세포외 매트릭스 (ECM) 단백질 피브로넥틴, 비트로넥틴 및 테나신에 대한 수용체이다. αvβ6 인테그린은 정상인 건강한 성체 상피에서는 거의 검출할 수 없지만, 상처 치유 동안 및 상이한 암 (예를 들어, 결장암, 난소암, 자궁내막암 및 위암)에서 상향조절되며, 종종 불량한 암 예후와 연관된다. αvβ6 인테그린은 전이에서 세포 침습 및 이동을 촉진할 수 있고, 아폽토시스를 억제할 수 있는 것으로 제시되었다. αvβ6 인테그린은 또한 매트릭스 메탈로프로테아제 (MMP)의 발현을 조절하며 TGF-β1을 활성화시킬 수 있다. 주로 시험관내 연구로부터, αvβ6 인테그린이 암종 진행을 촉진할 수 있다는 것을 시사하는 증거가 증가하고 있다. 따라서, 인테그린 αvβ6은, 특히 매트릭스 메탈로프로테아제 (MMP)의 발현 및 TGF-β1의 활성화에서의 그의 역할을 고려하면, 종양 바이오마커 및 잠재적 치료 표적으로서 매력적이다.
치료상 유효한 화합물, 예컨대 약물 화합물을 목적하는 세포 및/또는 조직으로 생체내 전달하는 것은, 약물 제품을 개발하는데 있어서 계속되는 일반적 도전과제이다. 특정 세포 또는 조직으로의 화물 분자 (예를 들어, 치료상 활성 화합물 또는 성분)의 표적화된 전달을 용이하게 하는데 사용될 수 있는, 세포 또는 조직을 선택적으로 표적화할 수 있는 안정하고 효과적인 표적화 리간드에 대한 필요는 계속해서 존재해 왔다. 실제로, 목적하는 세포 또는 조직으로의 화물 분자의 생체내 전달을 용이하게 하기 위해, 선택된 1개 이상의 화물 분자, 예컨대 1개 이상의 약물 제품 또는 다른 페이로드에 접합될 수 있는 표적화 리간드에 대한 일반적 필요가 존재한다. 또한, 인테그린 알파-v 베타-6을 발현하는 세포로 화물 분자를 생체내 전달하기 위해, 화물 분자에 접합되는데 적합한, 인테그린 알파-v 베타-6을 표적화하는 화합물에 대한 필요가 존재한다. 특정 화물 분자, 예컨대 치료 올리고뉴클레오티드-기반 화합물 (예를 들어, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 RNAi 작용제)과 관련하여, 치료제를 인테그린 알파-v 베타-6을 발현하는 세포 및/또는 조직으로 전달하고, 수용체-매개 세포내이입, 음세포작용을 통해, 또는 다른 수단에 의해 세포 내로의 치료제의 진입을 용이하게 하기 위해, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합될 수 있는 인테그린 알파-v 베타-6을 표적화할 수 있는 표적화 리간드에 대한 필요가 존재한다.
신규, 합성 αvβ6 인테그린 리간드 (본원에서 αvβ6 리간드로도 지칭됨)가 본원에 기재된다. 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 혈청에서 안정하고, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖고, 그에 특이적으로 결합할 수 있다. αvβ6 인테그린 리간드는 화물 분자에 접합되어, αvβ6 인테그린을 발현하는 목적하는 세포 또는 조직, 예컨대 상피 세포로의 화물 분자의 전달을 용이하게 할 수 있다.
또한, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 화물 분자를 αvβ6 인테그린을 발현하는 조직 및/또는 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 추가로, 1개 이상의 치료 화물 분자에 접합된 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, αvβ6 인테그린을 발현하는 세포로 치료 화물 분자 (예를 들어, 활성 제약 성분)를 전달하는 것이 대상체를 치료할 수 있는 질환, 증상, 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
일부 실시양태에서, 세포에서 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있는 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물 (예를 들어, 올리고뉴클레오티드-기반 치료제), 예컨대 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드의 유효량을 세포에 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 표적 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 기재된다. 일부 실시양태에서, 대상체의 세포에서 표적 유전자의 발현을 억제하는 방법이 본원에 기재되며, 여기서 대상체에게 세포에서 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있는 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물, 예컨대 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드의 유효량이 투여된다.
αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물이 본원에 추가로 기재된다. 본원에 기재된 조성물은 1개 이상의 치료 물질, 예컨대 RNAi 작용제 또는 다른 화물 분자에 접합된 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 제약 조성물일 수 있다.
일부 실시양태에서, 표적 유전자의 발현에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 표적 유전자의 발현에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 기재되며, 여기서 제약 조성물은 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물, 예컨대 RNAi 작용제에 접합된 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함한다.
제1 측면에서, 본 개시내용은 합성 αvβ6 인테그린 리간드를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 화학식의 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며:
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여기서,
n은 0 내지 7의 정수이고;
J는 C-H 또는 N이고;
Z는 OR13, N(R13)2 또는 SR13이고;
R1은 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, OH, COOH, CON(R5)2, OR6이거나, 또는 R1은 화물 분자를 포함하고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고, R6은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
R2, RP1 및 RP2는 각각 독립적으로 H, 할로, 임의로 치환된 시클로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴렌이거나, 또는 R2, RP1 및 RP2는 화물 분자를 포함할 수 있고;
R10은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
R11은 H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R11 및 R1은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 임의로 치환된 헤테로사이클을 형성하고;
R12는 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
각각의 R13은 독립적으로 H, 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R13은 화물 분자를 포함하고;
R14는 임의로 치환된 알킬이고;
여기서 R1, R2, R13, RP1 및 RP2 중 적어도 1개는 화물 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30; 또는 1 내지 30, 1 내지 25, 1 내지 20, 1 내지 15, 1 내지 10, 1 내지 5, 5 내지 30, 5 내지 25, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 30, 10 내지 25, 10 내지 20, 10 내지 15, 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 20, 20 내지 30, 20 내지 25, 또는 25 내지 30개)의 화물 분자 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 화물 분자)에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 1개 초과의 αvβ6 인테그린 리간드 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 3, 3 내지 8, 3 내지 7, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 4 내지 8, 4 내지 7, 4 내지 6, 또는 4 내지 5개의 αvβ6 인테그린 리간드)가 1개의 화물 분자 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 화물 분자)에 접합될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 αvβ6 인테그린 리간드 중 1개 이상을 포함하는 조성물을 제공한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은 세포로 생체내 전달될 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물(들), 예컨대 1개 이상의 RNAi 작용제(들)를 포함한다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제를 세포로 생체내 전달하기 위한 조성물이 본원에 기재되며, 여기서 RNAi 작용제는 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드에 연결된다.
1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물이 기재된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은 1개 이상의 다른 제약 물질 또는 제약 활성 성분 또는 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 의약이 본원에 기재된다.
1개 이상의 화물 분자에 접합된 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은 인테그린 αvβ6을 발현하는 세포로의 화물 분자의 생체내 또는 시험관내 전달을 용이하게 할 수 있다. 예를 들어, 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은 화물 분자, 예컨대 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을, 생체내 또는 시험관내에서, 유형 I 및 II 폐포 상피 세포, 배상 세포, 분비 상피 세포, 섬모 상피 세포, 각막 및 결막 상피 세포, 피부 상피 세포, 담관세포, 장세포, 관 상피 세포, 선 상피 세포, 및 상피 종양 (암종)으로 전달할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드 및/또는 조성물의 사용을 포함하는 방법, 및 원하는 경우, 개시된 αvβ6 인테그린 리간드 및/또는 조성물을 제약 제품으로서 투여하기에 적합한 형태가 되게 하는 방법을 제공한다. 다른 실시양태에서, 개시내용은 본원에 기재된 리간드 및 조성물, 예를 들어, 의약의 제조 방법을 제공한다.
1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은, 예를 들어, 흡입 (에어로졸 또는 건조 분말 제제), 비강내, 피하, 정맥내, 복강내, 피내, 경피, 경구, 설하, 국소, 또는 종양내 투여를 포함한, 투여하고자 하는 화물 분자를 고려하여 투여에 적합한 것으로 관련 기술분야에 공지된 투여 경로를 사용하여 대상체에게 생체내 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은 전신 전달을 위해, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 투여에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은 국부 전달을 위해, 예를 들어, 건조 분말 흡입기 또는 네뷸라이저를 통한 흡입 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 조성물은 국부 전달을 위해 국소 투여에 의해 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 유형 I 폐포 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 유형 II 폐포 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 배상 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 분비 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 섬모 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 각막 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 결막 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 피부 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 담관세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 장세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 관 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 선 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 1개 이상의 목적하는 화물 분자(들)를 상피 종양 (암종)으로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 유형 I 폐포 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 유형 I 폐포 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 유형 I 폐포 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 유형 II 폐포 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 유형 II 폐포 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 유형 II 폐포 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 배상 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 배상 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 배상 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 분비 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 분비 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 분비 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 섬모 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 섬모 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 섬모 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 각막 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 각막 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 각막 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 결막 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 결막 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 결막 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 피부 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 피부 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 피부 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 담관세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 담관세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 담관세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 장세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 장세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 장세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 관 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 관 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 관 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 선 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 선 상피 세포로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 선 상피 세포에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 상피 종양 (암종)으로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, RNAi 작용제를 상피 종양 (암종)으로 생체내 전달하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린에 대해 친화도를 갖는 1개 이상의 리간드에 접합된 RNAi 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상피 종양 (암종)에서 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법이 본원에 개시된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질이 하기에 기재된다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다. 상충되는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서가 우선한다. 또한, 물질, 방법 및 예는 예시적일 뿐이며, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 다른 목적, 특색, 측면 및 이점은 하기의 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
αvβ6 인테그린 리간드.
혈청 안정성 및 인테그린 αvβ6에 대한 친화도를 갖는 합성 αvβ6 인테그린 리간드가 본원에 기재된다. αvβ6 인테그린 리간드는 인테그린 αvβ6을 발현하는 세포를 시험관내, 계내, 생체외 및/또는 생체내 표적화하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자에 접합되어, 화물 분자를 인테그린 αvβ6을 발현하는 세포로 시험관내, 계내, 생체외 및/또는 생체내 우선적으로 지시하고 이를 표적화하게 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 제약 활성 화합물을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 올리고뉴클레오티드-기반 화합물, 예컨대 RNAi 작용제를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 화물 분자에 접합되어, 화물 분자를 상피 세포로 생체내 지시한다.
제1 측면에서, 본 개시내용은 합성 αvβ6 인테그린 리간드를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 화학식의 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며:
Figure pct00002
여기서,
n은 0 내지 7의 정수이고;
J는 C-H 또는 N이고;
Z는 OR13, N(R13)2 또는 SR13이고;
R1은 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, OH, COOH, CON(R5)2, OR6이거나, 또는 R1은 화물 분자를 포함하고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고, R6은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
R2, RP1 및 RP2는 각각 독립적으로 H, 할로, 임의로 치환된 시클로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴렌이거나, 또는 R2, RP1 및 RP2는 화물 분자를 포함할 수 있고;
R10은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
R11은 H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R11 및 R1은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 임의로 치환된 헤테로사이클을 형성하고;
R12는 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
각각의 R13은 독립적으로 H, 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R13은 화물 분자를 포함하고;
R14는 임의로 치환된 알킬이고;
여기서 R1, R2, R13, RP1 및 RP2 중 적어도 1개는 화물 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 화학식 I에서 n=3이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I에서 n=4이다.
화학식 I의 일부 실시양태에서, R2는 나프틸렌이다. 화학식 I의 일부 실시양태에서, R2는 치환된 나프틸렌이고, R2는 또한 화물 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 화학식의 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며:
Figure pct00003
여기서,
n은 0 내지 7의 정수이고 (즉, n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고);
J는 C-H 또는 N이고;
R1은 H, C1-C6 알킬, CH(R3)(R4), OH, COOH, CH2CH2CH2NH2, CONHR5, OR6이고, 여기서 R3은 H 또는 C1-C6 알킬이고, R4는 H, C1-C6 알킬이고, R5는 H 또는 C1-C6 알킬이고, R6은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
R2는 임의로 치환된 시클로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴렌이고,
R10은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
R11은 H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R11 및 R1은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 임의로 치환된 헤테로사이클을 형성하고;
R12는 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
R13은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
R14는 임의로 치환된 알킬이고;
여기서 R1 또는 R2 중 적어도 1개는 화물 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 화학식 II에서 n=3이다. 일부 실시양태에서, 화학식 II에서 n=4이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 화학식의 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며:
Figure pct00004
여기서,
n은 1 내지 7의 정수이고 (즉, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고);
R7은 1개 이상의 화물 분자를 포함하고;
R8은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 탄소 원자를 갖는 1개 이상의 임의로 치환된 2가 시클릭 모이어티, 예컨대 시클로알킬 (예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 또는 시클로헵틸), 시클로알케닐 (예를 들어, 시클로펜테닐, 시클로부테닐, 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, 또는 시클로헵테닐), 아릴 (예를 들어, 페닐), 헤테로아릴 (예를 들어, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피롤, 피라졸, 이미다졸, 티오펜, 벤조티오펜, 티아졸, 벤조티아졸, 푸란, 옥사졸, 이속사졸, 벤조푸란, 인돌, 인다졸, 벤즈이미다졸, 옥사디아졸, 1,2,3-트리아졸, 1,2,4-트리아졸, 테트라졸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 또는 퀴녹살리닐), 또는 헤테로시클릴 (예를 들어, 테트라히드로푸란, 테트라히드로피란, 피페리딘, 피롤리딘, 디옥산, 또는 디옥솔란)이다.
일부 실시양태에서, 화학식 III에서 n=3이다. 일부 실시양태에서, 화학식 III에서 n=4이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 화학식의 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며:
Figure pct00005
여기서,
n은 1 내지 7의 정수이고 (즉, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고);
R9는 1개 이상의 화물 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 화학식 IV에서 n=3이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IV에서 n=4이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 인테그린 표적화 리간드 전구체를 제공하며:
Figure pct00006
여기서,
n은 0 내지 7의 정수이고;
J는 C-H 또는 N이고;
Z는 OR13, N(R13)2 또는 SR13이고;
R1은 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, OH, COOH, CON(R5)2, OR6이거나, 또는 R1은 반응성 기에 접합된 연결기를 포함하고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고, R6은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
R2, RP1 및 RP2는 각각 독립적으로 H, 할로, 임의로 치환된 시클로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴렌이거나, 또는 R2, RP1 및 RP2는 반응성 기에 접합된 연결기를 포함할 수 있고;
R10은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
R11은 H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R11 및 R1은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 임의로 치환된 헤테로사이클을 형성하고;
R12는 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
각각의 R13은 독립적으로 H, 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R13은 반응성 기에 접합된 연결기를 포함하고;
R14는 임의로 치환된 알킬이고;
여기서 R1, R2, R13, RP1 및 RP2 중 적어도 1개는 반응성 기에 접합된 연결기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30; 또는 1 내지 30, 1 내지 25, 1 내지 20, 1 내지 15, 1 내지 10, 1 내지 5, 5 내지 30, 5 내지 25, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 30, 10 내지 25, 10 내지 20, 10 내지 15, 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 20, 20 내지 30, 20 내지 25, 또는 25 내지 30개)의 화물 분자 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 화물 분자)에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 1개 초과의 αvβ6 인테그린 리간드 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 3, 3 내지 8, 3 내지 7, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 4 내지 8, 4 내지 7, 4 내지 6, 또는 4 내지 5개의 αvβ6 인테그린 리간드)가 1개의 화물 분자 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 화물 분자)에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 연결기, 예컨대 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 기를 통해 1개 이상의 화물 분자에 임의로 접합된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 각각의 리간드에 대한 적어도 1개의 부착 지점 및 각각의 화물 분자에 대한 적어도 1개의 부착 지점을 포함하는 스캐폴드를 통해 1개 이상의 화물 분자에 임의로 접합된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 1개의 화물 분자를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 1개 초과의 화물 분자를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 각각 본원에 개시된 바와 같은 구조 1, 구조 2, 구조 5, 구조 5.1, 구조 5.2, 구조 6, 구조 6.1, 구조 6.2, 구조 6.3, 구조 6.4, 구조 7, 구조 8, 구조 9, 구조 10, 구조 11, 구조 12, 구조 13, 구조 14, 구조 15, 구조 16, 구조 17, 구조 18, 구조 19, 구조 20, 구조 22, 구조 23, 구조 24, 구조 25, 구조 27, 구조 29, 구조 30, 구조 31, 구조 32, 구조 33, 구조 34, 구조 35, 구조 36, 또는 구조 37 중 임의의 것을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진다.
본원에 개시된 임의의 αvβ6 인테그린 리간드는 화물 분자, 반응성 기, 및/또는 보호된 반응성 기에 연결될 수 있다. 반응성 기는 화물 분자에 대한 αvβ6 인테그린 리간드의 접합을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 αvβ6 인테그린 또는 αvβ6 인테그린을 발현하는 세포에 대한 화물 분자의 표적화를 증가시킬 수 있다. 화물 분자는 제약 활성 성분 또는 화합물, 전구약물, 또는 공지된 치료 또는 진단 이익을 갖는 또 다른 물질일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 소분자, 항체, 항체 단편, 이뮤노글로불린, 모노클로날 항체, 표지 또는 마커, 지질, 천연 또는 변형된 올리고뉴클레오티드-기반 화합물 (예를 들어, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 RNAi 작용제), 천연 또는 변형된 핵산, 펩티드, 압타머, 중합체, 폴리아민, 단백질, 독소, 비타민, 폴리에틸렌 글리콜, 합텐, 디곡시게닌, 비오틴, 방사성 원자 또는 분자, 또는 형광단일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 제약 활성 성분 또는 전구약물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 제약 활성 성분으로서 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 제약 활성 성분으로서 RNAi 작용제를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 달리 명시되지 않는 한 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는, 직쇄 또는 분지형의 포화 지방족 탄화수소 기를 지칭한다. 예를 들어, "C1-C6 알킬"은 선형 또는 분지형 배열의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소를 갖는 알킬 기를 포함한다. 알킬 기의 비제한적 예는 메틸, 에틸, 이소-프로필, tert-부틸, n-헥실을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "아미노알킬"은 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 1개 이상의 아미노 기로 치환된, 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 아미노 기는 비치환, 일치환 또는 이치환될 수 있다. 아미노알키 기의 비제한적 예는 아미노메틸, 디메틸아미노메틸 및 2-아미노프로프-1-일을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은 달리 명시되지 않는 한 3 내지 14개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 비방향족 탄화수소 고리 기를 의미한다. 시클로알킬 기의 비제한적 예는 시클로프로필, 메틸-시클로프로필, 2,2-디메틸-시클로부틸, 2-에틸-시클로펜틸 및 시클로헥실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 시클로알킬은 다중 스피로- 또는 융합 고리를 포함할 수 있다. 시클로알킬 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬렌"은 본원에 기재된 바와 같은 시클로알킬 기의 2가 라디칼을 지칭한다. 시클로알킬렌은 시클로알킬과 동일한 잔기를 지칭하지만 2개의 치환 지점을 갖는 시클로알킬의 하위세트이다. 시클로알킬렌의 예는 시클로프로필렌,
Figure pct00007
, 1,4-시클로헥실렌,
Figure pct00008
, 및 1,5-시클로옥실렌
Figure pct00009
을 포함한다. 시클로알킬렌 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다. 시클로알킬렌 기는 모노-, 디-, 또는 트리-시클릭일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알케닐"은 달리 명시되지 않는 한 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하며 2 내지 10개의 탄소 원자를 갖는, 직쇄형 또는 분지형의 비-방향족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 5개 이하의 탄소-탄소 이중 결합이 이러한 기에 존재할 수 있다. 예를 들어, "C2-C6" 알케닐은 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알케닐 라디칼로서 정의된다. 알케닐 기의 예는 에테닐, 프로페닐, 부테닐 및 시클로헥세닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 알케닐 기의 직쇄형, 분지형 또는 시클릭 부분은 이중 결합을 함유할 수 있으며, 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다. 용어 "시클로알케닐"은 명시된 수의 탄소 원자 및 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 모노시클릭 탄화수소 기를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "알키닐"은 달리 명시되지 않는 한 2 내지 10개의 탄소 원자를 함유하며 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는, 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 5개 이하의 탄소-탄소 삼중 결합이 존재할 수 있다. 따라서, "C2-C6 알키닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알키닐 라디칼을 의미한다. 알키닐 기의 예는 에티닐, 2-프로피닐 및 2-부티닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 알키닐 기의 직쇄형 또는 분지형 부분은 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환될 수 있다.
본원에 사용된 "알콕실" 또는 "알콕시"는 나타낸 수의 탄소 원자를 갖는 -O-알킬 라디칼을 지칭한다. 예를 들어, C1-6 알콕시는 C1, C2, C3, C4, C5 및 C6 알콕시 기를 포함하도록 의도된다. 예를 들어, C1-8 알콕시는 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7 및 C8 알콕시 기를 포함하도록 의도된다. 알콕시의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, n-부톡시, s-부톡시, t-부톡시, n-펜톡시, s-펜톡시, n-헵톡시 및 n-옥톡시를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "케토"는 카르보닐 가교를 통해 부착된, 본원에 정의된 바와 같은 임의의 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 또는 아릴 기를 지칭한다. 케토 기의 예는 알카노일 (예를 들어, 아세틸, 프로피오닐, 부타노일, 펜타노일 또는 헥사노일), 알케노일 (예를 들어, 아크릴로일), 알키노일 (예를 들어, 에티노일, 프로피노일, 부티노일, 펜티노일 또는 헥시노일), 아릴로일 (예를 들어, 벤조일), 헤테로아릴로일 (예를 들어, 피롤로일, 이미다졸로일, 퀴놀리노일 또는 피리디노일)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "알콕시카르보닐"은 카르보닐 가교를 통해 부착된, 상기 정의된 바와 같은 임의의 알콕시 기 (즉, -C(O)O-알킬)를 지칭한다. 알콕시카르보닐 기의 예는 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, 이소-프로폭시카르보닐, n-프로폭시카르보닐, t-부톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 또는 n-펜톡시카르보닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "아릴옥시카르보닐"은 옥시카르보닐 가교를 통해 부착된, 본원에 정의된 바와 같은 임의의 아릴 기 (즉, -C(O)O-아릴)를 지칭한다. 아릴옥시카르보닐 기의 예는 페녹시카르보닐 및 나프틸옥시카르보닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "헤테로아릴옥시카르보닐"은 옥시카르보닐 가교를 통해 부착된, 본원에 정의된 바와 같은 임의의 헤테로아릴 기 (즉, -C(O)O-헤테로아릴)를 지칭한다. 헤테로아릴옥시카르보닐 기의 예는 2-피리딜옥시카르보닐, 2-옥사졸릴옥시카르보닐, 4-티아졸릴옥시카르보닐 또는 피리미디닐옥시카르보닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "아릴" 또는 "방향족"은 각각의 고리에 6개 이하의 원자를 가지며, 여기서 적어도 1개의 고리는 방향족인, 임의의 안정한 모노시클릭 또는 폴리시클릭 탄소 고리를 의미한다. 아릴 기의 예는 페닐, 나프틸, 안트라세닐, 테트라히드로나프틸, 인다닐 및 비페닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 아릴 치환기가 비시클릭이고 1개의 고리가 비-방향족인 경우에, 방향족 고리를 통해 부착이 이루어지는 것으로 이해된다. 아릴 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "아릴렌"은 본원에 기재된 바와 같은 아릴 기의 2가 라디칼을 지칭한다. 아릴렌은 아릴과 동일한 잔기를 지칭하지만 2개의 치환 지점을 갖는 아릴의 하위세트이다. 아릴렌의 예는 2가 페닐 기를 지칭하는 페닐렌을 포함한다. 아릴렌 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "할로"는 할로겐 라디칼을 지칭한다. 예를 들어, "할로"는 플루오린 (F), 염소 (Cl), 브로민 (Br), 또는 아이오딘 (I) 라디칼을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 각각의 고리에 7개 이하의 원자를 가지며, 여기서 적어도 1개의 고리는 방향족이고, O, N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 것인, 안정한 모노시클릭 또는 폴리시클릭 고리를 나타낸다. 헤테로아릴 기의 예는 아크리디닐, 카르바졸릴, 신놀리닐, 퀴녹살리닐, 피라졸릴, 인돌릴, 벤조트리아졸릴, 푸라닐, 티에닐, 벤조티에닐, 벤조푸라닐, 벤즈이미다졸로닐, 벤족사졸로닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 디히드로이소인돌로닐, 이미다조피리디닐, 이소인돌로닐, 인다졸릴, 옥사졸릴, 옥사디아졸릴, 이속사졸릴, 인돌릴, 피라지닐, 피리다지닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피롤릴 및 테트라히드로퀴놀린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "헤테로아릴"은 또한 임의의 질소-함유 헤테로아릴의 N-옥시드 유도체를 포함하는 것으로 이해된다. 헤테로아릴 치환기가 비시클릭이고 1개의 고리가 비-방향족이거나 또는 헤테로원자를 함유하지 않는 경우에, 방향족 고리 또는 헤테로원자 함유 고리를 통해 부착이 이루어지는 것으로 이해된다. 헤테로아릴 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴렌"은 본원에 기재된 바와 같은 헤테로아릴 기의 2가 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴렌은 헤테로아릴과 동일한 잔기를 지칭하지만 2개의 치환 지점을 갖는 헤테로아릴의 하위세트이다. 헤테로아릴의 예는 피리디닐렌, 피리미디닐렌 및 피롤릴렌을 포함한다. 헤테로아릴렌 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클", "헤테로시클릭" 또는 "헤테로시클릴"은 폴리시클릭 기를 포함한, O, N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 3- 내지 14-원 방향족 또는 비방향족 헤테로사이클을 의미한다. 본원에 사용된 용어 "헤테로시클릭"은 또한 용어 "헤테로사이클" 및 "헤테로시클릴"과 동의어인 것으로 간주되며, 또한 본원에 제시된 동일한 정의를 갖는 것으로 이해된다. "헤테로시클릴"은 상기 언급된 헤테로아릴, 뿐만 아니라 그의 디히드로 및 테트라히드로 유사체를 포함한다. 헤테로시클릴 기의 예는 아제티디닐, 벤조이미다졸릴, 벤조푸라닐, 벤조푸라자닐, 벤조피라졸릴, 벤조트리아졸릴, 벤조티오페닐, 벤족사졸릴, 카르바졸릴, 카르볼리닐, 신놀리닐, 푸라닐, 이미다졸릴, 인돌리닐, 인돌릴, 인돌라지닐, 인다졸릴, 이소벤조푸라닐, 이소인돌릴, 이소퀴놀릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 나프트피리디닐, 옥사디아졸릴, 옥소옥사졸리디닐, 옥사졸릴, 옥사졸린, 옥소피페라지닐, 옥소피롤리디닐, 옥소모르폴리닐, 이속사졸린, 옥세타닐, 피라닐, 피라지닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리도피리디닐, 피리다지닐, 피리딜, 피리디노닐, 피리미딜, 피리미디노닐, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀릴, 퀴녹살리닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오피라닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 테트라졸릴, 테트라졸로피리딜, 티아디아졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 트리아졸릴, 1,4-디옥사닐, 헥사히드로아제피닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피리딘-2-오닐, 피롤리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 디히드로벤조이미다졸릴, 디히드로벤조푸라닐, 디히드로벤조티오페닐, 디히드로벤족사졸릴, 디히드로푸라닐, 디히드로이미다졸릴, 디히드로인돌릴, 디히드로이소옥사졸릴, 디히드로이소티아졸릴, 디히드로옥사디아졸릴, 디히드로옥사졸릴, 디히드로피라지닐, 디히드로피라졸릴, 디히드로피리디닐, 디히드로피리미디닐, 디히드로피롤릴, 디히드로퀴놀리닐, 디히드로테트라졸릴, 디히드로티아디아졸릴, 디히드로티아졸릴, 디히드로티에닐, 디히드로트리아졸릴, 디히드로아제티디닐, 디옥시도티오모르폴리닐, 메틸렌디옥시벤조일, 테트라히드로푸라닐 및 테트라히드로티에닐, 및 그의 N-옥시드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 헤테로시클릴 치환기의 부착은 탄소 원자 또는 헤테로원자를 통해 발생할 수 있다. 헤테로시클릴 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클로알킬"은 폴리시클릭 기를 포함한, O, N, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 3- 내지 14-원 비방향족 헤테로사이클을 의미한다. 헤테로시클릴 기의 예는 아제티디닐, 옥소피페라지닐, 옥소피롤리디닐, 옥소모르폴리닐, 옥세타닐, 피라닐, 피리디노닐, 피리미디노닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오피라닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 1,4-디옥사닐, 헥사히드로아제피닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피롤리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 디히드로푸라닐, 디히드로이미다졸릴, 디히드로이소옥사졸릴, 디히드로이소티아졸릴, 디히드로옥사디아졸릴, 디히드로옥사졸릴, 디히드로피라지닐, 디히드로피라졸릴, 디히드로피리디닐, 디히드로피리미디닐, 디히드로피롤릴, 디히드로테트라졸릴, 디히드로티아디아졸릴, 디히드로티아졸릴, 디히드로티에닐, 디히드로트리아졸릴, 디옥시도티오모르폴리닐, 및 테트라히드로티에닐, 및 그의 N-옥시드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 헤테로시클로알킬 치환기의 부착은 탄소 원자를 통해 또는 헤테로원자를 통해 이루어질 수 있다. 헤테로시클릴 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클로알킬렌"은 본원에 기재된 바와 같은 헤테로시클로알킬 기의 2가 라디칼을 지칭한다. 헤테로시클로알킬렌은 헤테로시클로알킬과 동일한 잔기를 지칭하지만 2개의 치환 지점을 갖는 헤테로시클로알킬의 하위세트이다. 헤테로시클로알킬렌의 예는 피페리디닐렌, 아제티디닐렌, 및 테트라히드로푸라닐렌을 포함한다. 헤테로시클로알킬렌 기는 정상 원자가에 의해 허용될 때 임의의 위치에서 임의로 일치환, 이치환, 삼치환, 사치환 또는 오치환된다.
본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료" 등은 대상체에서 질환의 1종 이상의 증상의 완화 또는 그의 수, 중증도 및/또는 빈도의 경감을 제공하도록 취해지는 방법 또는 단계를 의미한다. 본원에 사용된 "치료하다" 및 "치료"는 대상체에서의 질환의 1종 이상의 증상의 수, 중증도 및/또는 빈도의 방지, 관리, 예방적 치료 및/또는 억제를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 어구 "세포 내로 도입하는"은, RNAi 작용제를 언급할 때, RNAi 작용제를 세포 내로 기능적으로 전달하는 것을 의미한다. 어구 "기능적 전달"은 RNAi 작용제가 예상된 생물학적 활성, 예를 들어, 유전자 발현의 서열-특이적 억제를 갖는 것을 가능하게 하는 방식으로 RNAi 작용제를 세포로 전달하는 것을 의미한다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 기호
Figure pct00010
의 사용은 본원에 기재된 본 발명의 범주에 따라 임의의 기 또는 기들이 상기 기호에 연결될 수 있다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "이성질체"는 동일한 분자식을 갖지만, 그의 원자의 성질 또는 결합 순서에 있어서 또는 그의 원자의 공간 배열에 있어서 상이한 화합물을 지칭한다. 그의 원자의 공간 배열이 상이한 이성질체는 "입체이성질체"로 명명된다. 서로 거울상이 아닌 입체이성질체는 "부분입체이성질체"로 명명되고, 중첩가능하지 않은 거울상인 입체이성질체는 "거울상이성질체" 또는 때때로 광학 이성질체로 명명된다. 4개의 동일하지 않은 치환기에 결합된 탄소 원자는 "키랄 중심"으로 명명된다. 본원에 기재된 화합물이 올레핀계 이중 결합 또는 이성질체 구조가 구체적으로 정의되지 않는 기하학적 비대칭의 다른 중심을 함유하는 경우에, 화합물은 E 및 Z 기하 이성질체 둘 다를 개별적으로 또는 혼합물로 포함할 수 있는 것으로 의도된다. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은, 예를 들어, 모든 가능한 이성질체, 뿐만 아니라 그의 라세미체 및 광학적으로 순수한 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, 달리 명백하게 언급되지 않는 한, 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 연결기는 하나의 분자 또는 분자의 부분을 또 다른 내지 제2 분자 또는 분자의 제2 부분에 연계시키는 1개 이상의 원자이다. 관련 기술분야에서, 연결기 및 스페이서라는 용어는 때때로 상호교환가능하게 사용된다. 유사하게, 관련 기술분야에서 사용되는 바와 같이, 스캐폴드라는 용어가 때때로 연결기와 상호교환가능하게 사용된다. 일부 실시양태에서, 연결기는 펩티드-절단가능한 연결기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 연결기는 펩티드 페닐알라닌-시트룰린-페닐알라닌-프롤린을 포함하거나 또는 이로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 연결기는 PEG 기를 포함하거나 또는 이로 이루어질 수 있다.
본원에 사용된 용어 "연결된"은, 2개의 분자 사이의 연계를 지칭하는 경우에, 2개의 분자가 공유 결합에 의해 이어지거나 또는 2개의 분자가 비공유 결합 (예를 들어, 수소 결합 또는 이온 결합)을 통해 회합되는 것을 의미한다. 일부 예에서, 용어 "연결된"이 비공유 결합을 통한 2개의 분자 사이의 회합을 지칭하는 경우에, 2개의 상이한 분자 사이의 회합은 생리학상 허용되는 완충제 (예를 들어, 포스페이트 완충 염수) 중에서 1 x 10-4 M 미만 (예를 들어, 1 x 10-5 M 미만, 1 x 10-6 M 미만, 또는 1 x 10-7 M 미만)의 KD를 갖는다. 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 연결된은 임의의 개재 원자 또는 원자단을 갖거나 또는 갖지 않는, 제1 화합물과 제2 화합물 사이의 연계를 지칭할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는, 본원에 개시된 화합물 또는 조성물이 위치하는 환경에 따라, 화합물 및 조성물이 특정 원자 (예를 들어, N, O 또는 S 원자)를 양성자화 또는 탈양성자화된 상태로 가질 수 있다는 것을 용이하게 이해하고 인지할 것이다. 따라서, 본원에 사용되는 바와 같이, 본원에 개시된 구조는 특정 관능기, 예컨대, 예를 들어, OH, SH 또는 NH가 양성자화 또는 탈양성자화될 수 있는 것으로 고려된다. 본원의 개시내용은, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 개시된 화합물 및 조성물을 환경의 pH에 기초하여 그의 양성자화 상태와 상관없이 포괄하도록 의도된다.
구조는 원자가에 의해 허용될 때 고리 상의 임의의 탄소 또는 헤테로원자에 대한 결합을 나타내기 위해 고리 구조 상에 "부유하는" 결합을 갖는 것으로 도시될 수 있다. 예를 들어, 구조
Figure pct00011
는 R이 고리 상의 5개의 이용가능한 위치 중 임의의 것에서 임의의 수소 원자를 대체할 수 있음을 나타낸다. 또한, "부유하는" 결합은 원자가에 의해 허용될 때 비사이클의 어느 하나의 고리 상의 임의의 위치에 대한 결합을 나타내기 위해 비시클릭 구조에서 사용될 수 있다. 비사이클의 경우에, 결합은 둘 다의 고리 상에서 "부유하는" 것으로 제시될 것이고, 예를 들어
Figure pct00012
는 R이 고리 상의 7개의 이용가능한 위치 중 임의의 것에서 임의의 수소 원자를 대체할 수 있음을 나타낸다.
본원의 청구항에 사용된 어구 "로 이루어진"은 그 청구항에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. 본원의 청구항에 사용되는 경우에, 어구 "로 본질적으로 이루어진"은 청구항의 범주를 명시된 물질 또는 단계 및 청구된 발명의 기본적이며 신규한 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들로 제한한다.
화물 분자를 αvβ6 인테그린을 발현하는 세포로 표적화하고 이를 전달하기 위한, 기재된 αvβ6 인테그린 리간드의 용도가 본원에 기재된다. 화물 분자는 세포로 시험관내, 계내, 생체외, 또는 생체내 전달될 수 있다.
화학식 Ib의 일부 실시양태에서, 연결기는 2-20개의 에틸렌 글리콜 단위를 함유하는 PEG 기이다.
화학식 Ib의 일부 실시양태에서, 반응성 기는 아지드이다.
일부 실시양태에서, αv6 인테그린 리간드는 하기에 의해 나타내어지는 구조 중 임의의 것을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진 구조:
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
또는 그의 제약상 허용되는 염을 가지며, 여기서
Figure pct00024
는 화물 분자를 포함하는 모이어티에 대한 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30; 또는 1 내지 30, 1 내지 25, 1 내지 20, 1 내지 15, 1 내지 10, 1 내지 5, 5 내지 30, 5 내지 25, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 30, 10 내지 25, 10 내지 20, 10 내지 15, 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 20, 20 내지 30, 20 내지 25, 또는 25 내지 30개)의 화물 분자 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 화물 분자)에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 1개 초과의 αvβ6 인테그린 리간드 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 3, 3 내지 8, 3 내지 7, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4, 4 내지 8, 4 내지 7, 4 내지 6, 또는 4 내지 5개의 αvβ6 인테그린 리간드)가 1개의 화물 분자 (예를 들어, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 화물 분자)에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 연결기, 예컨대 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 기를 통해 1개 이상의 화물 분자에 임의로 접합된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 각각의 리간드에 대한 적어도 1개의 부착 지점 및 각각의 화물 분자에 대한 적어도 1개의 부착 지점을 포함하는 스캐폴드를 통해 1개 이상의 화물 분자에 임의로 접합된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 1개의 화물 분자를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 1개 초과의 화물 분자를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 각각 본원에 개시된 바와 같은 구조 1, 구조 2, 구조 5, 구조 5.1, 구조 5.2, 구조 6, 구조 6.1, 구조 6.2, 구조 6.3, 구조 6.4, 구조 7, 구조 8, 구조 9, 구조 10, 구조 11, 구조 12, 구조 13, 구조 14, 구조 15, 구조 16, 구조 17, 구조 18, 구조 19, 구조 20, 구조 22, 구조 23, 구조 24, 구조 25, 구조 27, 구조 29, 구조 30, 구조 31, 구조 32, 구조 33, 구조 34, 구조 35, 구조 36, 또는 구조 37 중 임의의 것을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진다.
본원에 개시된 임의의 αvβ6 인테그린 리간드는 화물 분자, 반응성 기, 및/또는 보호된 반응성 기에 연결될 수 있다. 반응성 기는 화물 분자에 대한 αvβ6 인테그린 리간드의 접합을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 αvβ6 인테그린 또는 αvβ6 인테그린을 발현하는 세포에 대한 화물 분자의 표적화를 증가시킬 수 있다. 화물 분자는 제약 활성 성분 또는 화합물, 전구약물, 또는 공지된 치료 이익을 갖는 또 다른 물질일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 소분자, 항체, 항체 단편, 이뮤노글로불린, 모노클로날 항체, 표지 또는 마커, 지질, 천연 또는 변형된 올리고뉴클레오티드-기반 화합물 (예를 들어, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 RNAi 작용제), 천연 또는 변형된 핵산, 펩티드, 압타머, 중합체, 폴리아민, 단백질, 독소, 비타민, 폴리에틸렌 글리콜, 합텐, 디곡시게닌, 비오틴, 방사성 원자 또는 분자, 또는 형광단일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 제약 활성 성분 또는 전구약물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 제약 활성 성분으로서 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화물 분자는 제약 활성 성분으로서 RNAi 작용제를 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 αvβ6 인테그린 리간드, 연결기, 및 스캐폴드를 포함하는 구조물을 제공하며, 여기서 스캐폴드는 화물 분자에 결합된다. 일부 실시양태에서, 구조물은 한자리 형태의 리간드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 구조물은 두자리 형태의 리간드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 구조물은 세자리 형태의 리간드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 구조물은 네자리 형태의 리간드를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00025
.
일부 실시양태에서, 구조 1의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00026
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00027
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00028
일부 실시양태에서, 구조 2의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00029
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00030
.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00031
일부 실시양태에서, 구조 5의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00032
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00033
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00034
.
실시양태에서, PEG-아지드 반응성 기에서 PEG의 길이는 다양할 수 있다. 일부 실시양태에서, 구조 5.1의 αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00035
.
반응성 기 (또는 보호된 반응성 기)는 관심 분자, 예를 들어 화물 분자에 대한 (직접적으로의 또는 1개 이상의 스캐폴드 및/또는 링커를 통한) αvβ6 인테그린 리간드의 접합을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00036
일부 실시양태에서, 구조 5.2의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, PEG-아지드 반응성 기는 알킬-아지드 반응성 기로 대체될 수 있다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 알킬-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00037
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00038
일부 실시양태에서, 구조 6의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00039
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00040
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00041
일부 실시양태에서, 구조 6.1의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
실시양태에서, PEG-아지드 반응성 기에서 PEG의 길이는 다양할 수 있다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00042
반응성 기 (또는 보호된 반응성 기)는 관심 분자, 예를 들어 화물 분자에 대한 (직접적으로의 또는 1개 이상의 스캐폴드 및/또는 링커를 통한) αvβ6 인테그린 리간드의 접합을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00043
일부 실시양태에서, 구조 6.2의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, PEG-아지드 반응성 기는 알킬-아지드 반응성 기로 대체될 수 있다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 알킬-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00044
반응성 기 (또는 보호된 반응성 기)는 관심 분자, 예를 들어 화물 분자에 대한 (직접적으로의 또는 1개 이상의 스캐폴드 및/또는 링커를 통한) αvβ6 인테그린 리간드의 접합을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00045
일부 실시양태에서, 구조 6.3의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있다. 일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00046
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00047
일부 실시양태에서, 구조 6.4의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00048
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00049
일부 실시양태에서, 구조 7의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00050
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 PEG-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00051
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00052
일부 실시양태에서, 구조 8의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00053
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 PEG-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00054
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00055
일부 실시양태에서, 구조 9의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00056
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00057
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00058
일부 실시양태에서, 구조 10의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00059
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00060
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00061
일부 실시양태에서, 구조 11의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00062
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00063
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00064
일부 실시양태에서, 구조 12의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00065
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00066
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00067
일부 실시양태에서, 구조 13의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00068
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00069
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00070
일부 실시양태에서, 구조 14의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00071
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00072
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00073
일부 실시양태에서, 구조 15의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00074
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00075
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00076
일부 실시양태에서, 구조 16의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00077
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00078
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00079
일부 실시양태에서, 구조 17의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00080
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00081
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00082
일부 실시양태에서, 구조 18의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00083
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00084
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00085
일부 실시양태에서, 구조 19의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00086
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00087
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00088
일부 실시양태에서, 구조 20의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00089
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00090
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00091
일부 실시양태에서, 구조 22의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00092
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00093
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00094
일부 실시양태에서, 구조 23의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00095
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00096
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00097
일부 실시양태에서, 구조 24의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00098
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00099
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00100
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00101
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00102
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00103
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00104
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00105
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00106
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00107
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00108
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00109
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00110
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00111
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00112
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00113
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00114
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00115
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00116
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00117
.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00118
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00119
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00120
.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00121
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00122
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00123
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00124
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00125
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00126
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00127
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00128
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00129
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00130
일부 실시양태에서, 구조 25의 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제(들))에 연결된다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함하며:
Figure pct00131
여기서, X는 반응성 기, 보호된 반응성 기, 또는 화물 분자 (예를 들어, RNAi 작용제)를 포함한다.
일부 실시양태에서, αvβ6 인테그린 리간드는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-아지드 반응성 기를 포함하도록 합성될 수 있고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00132
구조 1a, 구조 1b, 구조 2a, 구조 2b, 구조 5a, 구조 5b, 구조 6a, 구조 6b, 구조 7a, 구조 7b, 구조 8a, 구조 8b, 구조 9a, 구조 9b, 구조 10a, 구조 10b, 구조 11a, 구조 11b, 구조 12a, 구조 12b, 구조 13a, 구조 13b, 구조 14a, 구조 14b, 구조 15a, 구조 15b, 구조 16a, 구조 16b, 구조 17a, 구조 17b, 구조 18a, 구조 18b, 구조 19a, 구조 19b, 구조 20a, 구조 20b, 구조 22a, 구조 22b, 구조 23a, 구조 23b, 구조 24a, 구조 24b, 구조 25a, 구조 25b, 구조 27a, 구조 27b, 구조 29a, 구조 29b, 구조 30a, 구조 30b, 구조 31a, 구조 31b, 구조 32a, 구조 32b, 구조 33a, 구조 33b, 구조 34a, 구조 34b, 구조 35a, 구조 35b, 구조 36a, 구조 36b, 구조 37a, 또는 구조 37b 중 어느 하나에 개시된 바와 같은 반응성 기는 αvβ6 인테그린 리간드를 관심 분자, 즉 화물 분자, 예컨대 RNAi 작용제에 부착시키는데 사용될 수 있다. 화물 분자는 αvβ6 인테그린-발현 세포로 표적화되는 것을 목적으로 하는 임의의 분자일 수 있다.
다중자리 αvβ6 인테그린 리간드 및 스캐폴드
본원에 개시된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드가 1개 이상의 화물 분자에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단지 1개의 αvβ6 인테그린 리간드가 화물 분자에 접합된다 (본원에서 "한자리" 또는 "1가" 리간드로 지칭됨). 일부 실시양태에서, 2개의 αvβ6 인테그린 리간드가 화물 분자에 접합된다 (본원에서 "두자리" 또는 "2가" 리간드로 지칭됨). 일부 실시양태에서, 3개의 αvβ6 인테그린 리간드가 화물 분자에 접합된다 (본원에서 "세자리 " 또는 "3가" 리간드로 지칭됨). 일부 실시양태에서, 4개의 αvβ6 인테그린 리간드가 화물 분자에 접합된다 (본원에서 "네자리" 또는 "4가" 리간드로 지칭됨). 일부 실시양태에서, 4개 초과의 αvβ6 인테그린 리간드가 화물 분자에 접합된다.
일부 실시양태에서, 오직 1개의 αvβ6 인테그린 리간드가 화물 분자에 접합된 경우 (본원에서 "한자리" 리간드로 지칭됨), αvβ6 인테그린 리간드는 화물 분자에 직접 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 스캐폴드 또는 다른 링커 구조를 통해 화물 분자에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 스캐폴드를 포함한다. 또한, 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드에 대한 1개 이상의 화물 분자의 연결을 용이하게 하기 위해, 때때로 관련 기술분야에서 연결기 또는 링커로서 지칭되는 스캐폴드가 사용될 수 있다. 본원에 개시된 리간드와 상용성인 유용한 스캐폴드는 일반적으로 관련 기술분야에 공지되어 있다. 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드와 함께 사용될 수 있는 스캐폴드의 비제한적 예는 중합체 및 폴리아미노산 (예를 들어, 비스-글루탐산, 폴리-L-리신 등)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 스캐폴드는 시스테인 링커 또는 기, DBCO-PEG1-24-NHS, 프로파르길-PEG1-24-NHS, 및/또는 다중자리 DBCO 및/또는 프로파르길 모이어티를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드를 1개 이상의 화물 분자에 연결시키는데 사용되는 스캐폴드는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00133
스캐폴드 1의 사용은, 예를 들어, αvβ6 인테그린 리간드 단량체 및 1개 이상의 화물 분자 둘 다와의 효율적인 접합을 용이하게 한다. 스캐폴드 1은 아민 반응성 p-니트로페놀 (또한 4-니트로페놀로도 불림) 에스테르, 아미드 연결, 및 3개의 PEG2 단위, 뿐만 아니라 말단 알킨을 포함한다. 4-니트로페놀 에스테르는 화물 분자 상의 1급 아민, 예컨대 말단 아민 기 (예를 들어, NH2-C6)를 갖도록 제제화된 RNA 촉발자 상의 1급 아민과, 아미드 형성을 통해 접합될 수 있다. 말단 알킨은 아지도 변형된 리간드 (펩티드 및 소분자 둘 다)와 구리-촉매된 클릭 화학을 통해 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화물 분자는 RNAi 작용제이다. 일부 실시양태에서, 스캐폴드 1은 RNAi 작용제의 말단 단부, 예컨대 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 말단 단부에 부착될 수 있다. 예를 들어, RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 말단 단부는 RNAi 작용제의 5' 말단 뉴클레오티드의 5' 단부에 부착된 C6 아민 (-C6-NH2)을 포함하도록 변형될 수 있다. 하기 구조로 표시되어 제시된 바와 같이, 이러한 C6 아민 변형 (또는 말단 아민을 생성하는 또 다른 기타 변형)을 갖는 RNAi 작용제는 스캐폴드 1에 용이하게 접합될 수 있고:
Figure pct00134
여기서,
Figure pct00135
는 RNAi 작용제를 나타낸다.
이어서, 상기 구조 380의 알킨 기는 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드에 접합되어 세자리 αvβ6 인테그린 리간드를 형성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 스캐폴드는 하기 구조로 표시될 수 있는 DBCO (디벤조시클로옥틴)를 사용하여 합성될 수 있고:
Figure pct00136
여기서,
Figure pct00137
는 반응성 기 또는 모이어티 포함 화물 분자에 대한 부착을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 하기 일반 구조에 제시된 바와 같이, 본원에 개시된 RNAi 작용제 및 αvβ6 인테그린 리간드 사이에 트리아졸 기가 형성되고:
Figure pct00138
여기서,
Figure pct00139
는 리간드를 RNAi 작용제에 연결하는데 사용될 수 있는 임의의 적합한 스캐폴드 또는 연결기를 나타내고,
Figure pct00140
는 RNAi 작용제를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 스캐폴드는 포스포르아미다이트 화합물로서 합성될 수 있고, 이는 하기 구조에 제시된 바와 같이 세자리 리간드가 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 말단 단부에 포스포르아미다이트 합성을 통해 용이하게 커플링되게 할 수 있다.
Figure pct00141
.
구조 400의 화합물을 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 말단 단부에 부착시키기 위해 합성한 후, 이어서 말단 알킨을 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드에 연결할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 구조 1, 구조 2, 구조 5, 구조 5.1, 구조 5.2, 구조 6, 구조 6.1, 구조 6.2, 구조 6.3, 구조 6.4, 구조 7, 구조 8, 구조 9, 구조 10, 구조 11, 구조 12, 구조 13, 구조 14, 구조 15, 구조 16, 구조 17, 구조 18, 구조 19, 구조 20, 구조 22, 구조 23, 구조 24, 구조 25, 구조 27, 구조 29, 구조 30, 구조 31, 구조 32, 구조 33, 구조 34, 구조 35, 구조 36, 구조 37을 포함하며, 여기서 αvβ6 인테그린 리간드는 스캐폴드를 통해 연결된 세자리 리간드이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 세자리 형태의 구조 2를 포함하고, 이는 하기 구조로 표시될 수 있다:
Figure pct00142
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 세자리 형태의 구조 6.1을 포함하고, 이는 하기 구조로 표시될 수 있다:
Figure pct00143
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 세자리 형태의 구조 6.1을 포함하고, 이는 하기 구조로 표시될 수 있다:
Figure pct00144
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 형태의 구조 6.1을 포함하고, 이는 하기 구조로 표시될 수 있다:
Figure pct00145
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 RNAi 작용제에 접합된 세자리 형태의 구조 6.1을 포함하고, 이는 하기 구조로 표시될 수 있고:
Figure pct00146
여기서,
Figure pct00147
는 RNAi 작용제를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 세자리 형태의 구조 6.1을 포함하고, 이는 하기 구조로 표시될 수 있고:
Figure pct00148
여기서
Figure pct00149
는 리간드 및 화물 분자를 연결하는데 사용될 수 있는 임의의 적합한 스캐폴드를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 RNAi 작용제에 접합된 세자리 형태의 구조 6.1을 포함하고, 이는 하기 구조로 표시될 수 있고:
Figure pct00150
여기서,
Figure pct00151
는 리간드 및 RNAi 작용제를 연결하는데 사용될 수 있는 임의의 적합한 스캐폴드를 나타내고,
Figure pct00152
는 RNAi 작용제를 나타낸다.
반응성 기 및 보호된 반응성 기.
반응성 기는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 2개의 분자 또는 반응물 사이의 공유 연결의 형성을 제공한다. 본원 발명의 범주에서 사용하기에 적합한 반응성 기는 아미노 기, 아미드 기, 카르복실산 기, 아지드, 알킨, 프로파르길 기, BCN(비시클로[6.1.0]노닌, DBCO(디벤조시클로옥틴) 티올, 말레이미드 기, 아미노옥시 기, N-히드록시숙신이미드 (NHS) 또는 다른 활성화된 에스테르 (예를 들어, PNP, TFP, PFP), 브로모 기, 알데히드, 카르보네이트, 토실레이트, 테트라진, 트랜스-시클로옥텐 (TCO), 히드라지드, 히드록실 기, 디술피드, 및 오르토피리딜 디술피드 기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
반응성 기의 혼입은 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드의 화물 분자에 대한 접합을 용이하게 할 수 있다. 접합 반응은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 2개의 분자 또는 반응물 사이의 공유 연결의 형성을 제공한다. 본원 발명의 범주에서 사용하기에 적합한 접합 반응은 아미드 커플링 반응, 마이클 첨가 반응, 히드라존 형성 반응 및 클릭 화학 고리화첨가 반응을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 표적화 리간드는 화물 분자를 부착시키기 위해 반응성 아미노 기에 의해 대체될 수 있는, 테트라플루오로페닐 (TFP) 에스테르로서 합성된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 인테그린 표적화 리간드는 화물 분자를 부착시키기 위해 예를 들어 클릭 화학 고리화첨가 반응을 통해 프로파르길 또는 DBCO 기에 접합될 수 있는 아지드로서 합성된다.
보호된 반응성 기가 또한 관련 기술분야에서 통상적으로 사용된다. 보호기는, 예를 들어 후속 화학 반응에서 화학-선택성을 제공하기 위해, 비-보호된 기가 반응하는 조건 하에 반응하지 않는 기로의 반응성 기의 일시적인 화학적 변환을 제공한다. 본원 발명의 범주에서 사용하기에 적합한 보호된 반응성 기는 BOC 기 (t-부톡시카르보닐), Fmoc (9-플루오레닐메톡시카르보닐), 카르복시벤질 (CBZ) 기, 벤질 에스테르, 및 PBF (2,2,4,6,7-펜타메틸디히드로벤조푸란-5-술포닐)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
화물 분자 (RNAi 작용제 포함)
화물 분자는 본원에 기재된 αvβ6 인테그린 리간드로부터 탈착되는 경우 αvβ6 인테그린 수용체를 포함하는 세포에 대해 바람직한 효과를 갖게 될 임의의 분자이다. 화물 분자는 제약 성분, 약물 제품, 전구약물, 공지된 치료 이익을 갖는 물질, 소분자, 항체, 항체 단편, 이뮤노글로불린, 모노클로날 항체, 표지 또는 마커, 지질, 천연 또는 변형된 핵산 또는 폴리뉴클레오티드, 펩티드, 중합체, 폴리아민, 단백질, 압타머, 독소, 비타민, PEG, 합텐, 디곡시게닌, 비오틴, 방사성 원자 또는 분자, 또는 형광단일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자 (예를 들어, 동일하거나 상이한 화물 분자)는 화물 분자를 αvβ6 인테그린을 발현하는 세포로 표적화하기 위해 1개 이상의 αvβ6 인테그린 리간드에 연결된다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자는 제약 성분 또는 제약 조성물이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자는 올리고뉴클레오티드-기반 화합물이다. 본원에 사용된 "올리고뉴클레오티드-기반 화합물"은 약 10-50 (예를 들어, 10 내지 48, 10 내지 46, 10 내지 44, 10 내지 42, 10 내지 40, 10 내지 38, 10 내지 36, 10 내지 34, 10 내지 32, 10 내지 30, 10 내지 28, 10 내지 26, 10 내지 24, 10 내지 22, 10 내지 20, 10 내지 18, 10 내지 16, 10 내지 14, 10 내지 12, 12 내지 50, 12 내지 48, 12 내지 46, 12 내지 44, 12 내지 42, 12 내지 40, 12 내지 38, 12 내지 36, 12 내지 34, 12 내지 32, 12 내지 30, 12 내지 28, 12 내지 26, 12 내지 24, 12 내지 22, 12 내지 20, 12 내지 18, 12 내지 16, 12 내지 14, 14 내지 50, 14 내지 48, 14 내지 46, 14 내지 44, 14 내지 42, 14 내지 40, 14 내지 38, 14 내지 36, 14 내지 34, 14 내지 32, 14 내지 30, 14 내지 28, 14 내지 26, 14 내지 24, 14 내지 22, 14 내지 20, 14 내지 18, 14 내지 16, 16 내지 50, 16 내지 48, 16 내지 46, 16 내지 44, 16 내지 42, 16 내지 40, 16 내지 38, 16 내지 36, 16 내지 34, 16 내지 32, 16 내지 30, 16 내지 28, 16 내지 26, 16 내지 24, 16 내지 22, 16 내지 20, 16 내지 18, 18 내지 50, 18 내지 48, 18 내지 46, 18 내지 44, 18 내지 42, 18 내지 40, 18 내지 38, 18 내지 36, 18 내지 34, 18 내지 32, 18 내지 30, 18 내지 28, 18 내지 26, 18 내지 24, 18 내지 22, 18 내지 20, 20 내지 50, 20 내지 48, 20 내지 46, 20 내지 44, 20 내지 42, 20 내지 40, 20 내지 38, 20 내지 36, 20 내지 34, 20 내지 32, 20 내지 30, 20 내지 28, 20 내지 26, 20 내지 24, 20 내지 22, 22 내지 50, 22 내지 48, 22 내지 46, 22 내지 44, 22 내지 42, 22 내지 40, 22 내지 38, 22 내지 36, 22 내지 34, 22 내지 32, 22 내지 30, 22 내지 28, 22 내지 26, 22 내지 24, 24 내지 50, 24 내지 48, 24 내지 46, 24 내지 44, 24 내지 42, 24 내지 40, 24 내지 38, 24 내지 36, 24 내지 34, 24 내지 32, 24 내지 30, 24 내지 28, 24 내지 26, 26 내지 50, 26 내지 48, 26 내지 46, 26 내지 44, 26 내지 42, 26 내지 40, 26 내지 38, 26 내지 36, 26 내지 34, 26 내지 32, 26 내지 30, 26 내지 28, 28 내지 50, 28 내지 48, 28 내지 46, 28 내지 44, 28 내지 42, 28 내지 40, 28 내지 38, 28 내지 36, 28 내지 34, 28 내지 32, 28 내지 30, 30 내지 50, 30 내지 48, 30 내지 46, 30 내지 44, 30 내지 42, 30 내지 40, 30 내지 38, 30 내지 36, 30 내지 34, 30 내지 32, 32 내지 50, 32 내지 48, 32 내지 46, 32 내지 44, 32 내지 42, 32 내지 40, 32 내지 38, 32 내지 36, 32 내지 34, 34 내지 50, 34 내지 48, 34 내지 46, 34 내지 44, 34 내지 42, 34 내지 40, 34 내지 38, 34 내지 36, 36 내지 50, 36 내지 48, 36 내지 46, 36 내지 44, 36 내지 42, 36 내지 40, 36 내지 38, 38 내지 50, 38 내지 48, 38 내지 46, 38 내지 44, 38 내지 42, 38 내지 40, 40 내지 50, 40 내지 48, 40 내지 46, 40 내지 44, 40 내지 42, 42 내지 50, 42 내지 48, 42 내지 46, 42 내지 44, 44 내지 50, 44 내지 48, 44 내지 46, 46 내지 50, 46 내지 48, 또는 48 내지 50)개의 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 염기 쌍을 함유하는 뉴클레오티드 서열이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물은 세포 내의 발현된 표적 핵산 또는 표적 유전자 내의 코딩 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 핵염기 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물은, 유전자를 발현하는 세포로 전달되면, 근본적인 유전자의 발현을 억제할 수 있고, 이는 본원에서 "발현-억제 올리고뉴클레오티드-기반 화합물"로 지칭된다. 유전자 발현은 시험관내 또는 생체내 억제될 수 있다.
"올리고뉴클레오티드-기반 화합물"은 단일-가닥 올리고뉴클레오티드, 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA (siRNA), 이중-가닥 RNA (dsRNA), 마이크로 RNA (miRNA), 짧은 헤어핀 RNA (shRNA), 리보자임, 간섭 RNA 분자, 및 다이서 기질을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물은 단일-가닥 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물은 이중-가닥 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물은 RNAi 작용제인 이중-가닥 올리고뉴클레오티드이다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자는 "RNAi 작용제"이고, 이는 서열 특이적 방식으로 표적 mRNA의 메신저 RNA (mRNA) 전사체의 번역을 분해 또는 억제할 수 있는 RNA 또는 RNA-유사 (예를 들어, 화학적으로 변형된 RNA) 올리고뉴클레오티드 분자를 함유하는 조성물이다. 본원에 사용된 RNAi 작용제는 RNA 간섭 메카니즘을 통해 작동할 수 있거나 (즉, 포유동물 세포의 RNA 간섭 경로 기구 (RNA-유도 침묵화 복합체 또는 RISC)와의 상호 작용을 통해 RNA 간섭을 유도함), 또는 임의의 대안적 메카니즘(들) 또는 경로(들)에 의해 작동할 수 있다. RNAi 작용제는 이 용어가 본원에 사용되는 경우에, 주로 RNA 간섭 메카니즘을 통해 작동하는 것으로 여겨지지만, 개시된 RNAi 작용제는 임의의 특정한 작용 경로 또는 메카니즘에 얽매이거나 또는 이에 제한되지 않는다. 본원에 개시된 RNAi 작용제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥으로 구성되고, 짧은 (또는 작은) 간섭 RNA (siRNA), 이중-가닥 RNA (dsRNA), 마이크로 RNA (miRNA), 짧은 헤어핀 RNA (shRNA), 및 다이서 기질을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에 기재된 RNAi 작용제의 안티센스 가닥은 표적화되는 mRNA에 적어도 부분적으로 상보적이다. RNAi 작용제는 1개 이상의 변형된 뉴클레오티드 및/또는 1개 이상의 비-포스포디에스테르 연결을 포함할 수 있다.
전형적으로, RNAi 작용제는 적어도 제1 서열을 포함하는 센스 가닥 (또한 패신저 가닥으로 지칭됨), 및 제2 서열을 포함하는 안티센스 가닥 (또한 가이드 가닥으로도 지칭됨)으로 구성될 수 있다. RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥의 길이는 각각 16 내지 49개 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 17 내지 26개 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 19 내지 26개 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 21 내지 26개 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, 센스 및 안티센스 가닥은 독립적으로 21 내지 24개 뉴클레오티드 길이이다. 센스 및 안티센스 가닥은 동일한 길이 또는 상이한 길이일 수 있다. RNAi 작용제는 표적 유전자 내의 서열에 적어도 부분적으로 상보적인 안티센스 가닥 서열을 포함하고, 표적을 발현하는 세포로 전달되면, RNAi 작용제는 1개 이상의 표적 유전자의 발현을 생체내 또는 시험관내 억제할 수 있다.
일반적으로 올리고뉴클레오티드-기반 화합물은, 및 특히 RNAi 작용제는, 변형된 뉴클레오티드 및/또는 1개 이상의 비-포스포디에스테르 연결로 구성될 수 있다. 본원에 사용된 "변형된 뉴클레오티드"는 리보뉴클레오티드 (2'-히드록실 뉴클레오티드) 이외의 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드의 적어도 50% (예를 들어, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%)가 변형된 뉴클레오티드이다. 본원에 사용된 변형된 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 뉴클레오티드 모방체, 무염기성 뉴클레오티드, 2'-변형된 뉴클레오티드, 3'에서 3' 연결 (역전된) 뉴클레오티드, 비-천연 염기-포함 뉴클레오티드, 가교된 뉴클레오티드, 펩티드 핵산, 2',3'-세코 뉴클레오티드 모방체 (비잠금 핵염기 유사체, 잠금 뉴클레오티드, 3'-O-메톡시 (2' 뉴클레오시드간 연결된) 뉴클레오티드, 2'-F-아라비노 뉴클레오티드, 5'-Me, 2'-플루오로 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 비닐 포스포네이트 데옥시리보뉴클레오티드, 비닐 포스포네이트 함유 뉴클레오티드, 및 시클로프로필 포스포네이트 함유 뉴클레오티드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 2'-변형된 뉴클레오티드 (즉, 5-원 당 고리의 2' 위치에 히드록실 기 이외의 기를 갖는 뉴클레오티드)는 2'-O-메틸 뉴클레오티드, 2'-데옥시-2'-플루오로 뉴클레오티드, 2'-데옥시 뉴클레오티드, 2'-메톡시에틸 (2'-O-2-메톡시에틸) 뉴클레오티드, 2'-아미노 뉴클레오티드 및 2'-알킬 뉴클레오티드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물, 예컨대 RNAi 작용제의 1개 이상의 뉴클레오티드는 비-표준 연결 또는 백본 (즉, 변형된 뉴클레오시드간 연결 또는 변형된 백본)에 의해 연결될 수 있다. 변형된 뉴클레오시드간 연결은 비-포스페이트-함유 공유 뉴클레오시드간 연결일 수 있다. 변형된 뉴클레오시드간 연결 또는 백본은 5'-포스포로티오에이트 기, 키랄 포스포로티오에이트, 티오포스페이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬-포스포트리에스테르, 알킬 포스포네이트 (예를 들어, 메틸 포스포네이트 또는 3'-알킬렌 포스포네이트), 키랄 포스포네이트, 포스피네이트, 포스포르아미데이트 (예를 들어, 3'-아미노 포스포르아미데이트, 아미노알킬포스포르아미데이트, 또는 티오노포스포르아미데이트), 티오노알킬-포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르, 모르폴리노 연결, 통상적인 3'-5' 연결을 갖는 보라노포스페이트, 보라노포스페이트의 2'-5' 연결된 유사체, 또는 역극성을 갖는 보라노포스페이트 (여기서 뉴클레오시드 단위의 인접 쌍은 3'-5'에서 5'-3' 또는 2'-5'에서 5'-2' 연결됨)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
주어진 화합물 내의 모든 위치가 균일하게 변형될 필요는 없다. 반대로, 1개 초과의 변형이 단일 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 또는 심지어 그의 단일 뉴클레오티드에 혼입될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화물 분자는 알파 ENaC 유전자 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제이다. 화물 분자는 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 번호 PCT/US18/40874에 기재된 RNAi 작용제일 수 있다.
RNAi 작용제 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 관련 기술 분야에 공지된 방법에 의해 합성되고/거나 변형될 수 있다. 예를 들어, 알파-ENaC 발현의 억제를 위해 지시된 RNAi 작용제의 개시내용은, 예를 들어 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2008/152131에서 확인할 수 있다. RNAi 작용제에 관한 추가의 개시내용은, 예를 들어 변형의 개시내용에서 확인할 수 있고, 예를 들어, 또한 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 번호 PCT/US2017/0455446 (애로우헤드 파마슈티칼스, 인크.(Arrowhead Pharmaceuticals, Inc.))에서 확인할 수 있다.
일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자(들)는 약동학 (PK) 조정제로서 작용할 수 있는 PEG 모이어티를 포함할 수 있거나 또는 이로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자는 약 20-900개의 에틸렌 옥시드 (CH2-CH2-O) 단위 (예를 들어, 20 내지 850, 20 내지 800, 20 내지 750, 20 내지 700, 20 내지 650, 20 내지 600, 20 내지 550, 20 내지 500, 20 내지 450, 20 내지 400, 20 내지 350, 20 내지 300, 20 내지 250, 20 내지 200, 20 내지 150, 20 내지 100, 20 내지 75, 20 내지 50, 100 내지 850, 100 내지 800, 100 내지 750, 100 내지 700, 100 내지 650, 100 내지 600, 100 내지 550, 100 내지 500, 100 내지 450, 100 내지 400, 100 내지 350, 100 내지 300, 100 내지 250, 100 내지 200, 100 내지 150, 200 내지 850, 200 내지 800, 200 내지 750, 200 내지 700, 200 내지 650, 200 내지 600, 200 내지 550, 200 내지 500, 200 내지 450, 200 내지 400, 200 내지 350, 200 내지 300, 200 내지 250, 250 내지 900, 250 내지 850, 250 내지 800, 250 내지 750, 250 내지 700, 250 내지 650, 250 내지 600, 250 내지 550, 250 내지 500, 250 내지 450, 250 내지 400, 250 내지 350, 250 내지 300, 300 내지 900, 300 내지 850, 300 내지 800, 300 내지 750, 300 내지 700, 300 내지 650, 300 내지 600, 300 내지 550, 300 내지 500, 300 내지 450, 300 내지 400, 300 내지 350, 350 내지 900, 350 내지 850, 350 내지 800, 350 내지 750, 350 내지 700, 350 내지 650, 350 내지 600, 350 내지 550, 350 내지 500, 350 내지 450, 350 내지 400, 400 내지 900, 400 내지 850, 400 내지 800, 400 내지 750, 400 내지 700, 400 내지 650, 400 내지 600, 400 내지 550, 400 내지 500, 400 내지 450, 450 내지 900, 450 내지 850, 450 내지 800, 450 내지 750, 450 내지 700, 450 내지 650, 450 내지 600, 450 내지 550, 450 내지 500, 500 내지 900, 500 내지 850, 500 내지 800, 500 내지 750, 500 내지 700, 500 내지 650, 500 내지 600, 500 내지 550, 550 내지 900, 550 내지 850, 550 내지 800, 550 내지 750, 550 내지 700, 550 내지 650, 550 내지 600, 600 내지 900, 600 내지 850, 600 내지 800, 600 내지 750, 600 내지 700, 600 내지 650, 650 내지 900, 650 내지 850, 650 내지 800, 650 내지 750, 650 내지 700, 700 내지 900, 700 내지 850, 700 내지 800, 700 내지 750, 750 내지 900, 750 내지 850, 750 내지 800, 800 내지 900, 850 내지 900, 또는 850 내지 900개의 에틸렌 옥시드 단위)를 갖는 PEG 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자(들)는 대략 455개의 에틸렌 옥시드 단위를 갖는 PEG 모이어티 (약 20 킬로달톤 (kDa) 분자량)로 이루어진다. 일부 실시양태에서, PEG 모이어티는 약 2 킬로달톤의 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, PEG 모이어티는 약 20 킬로달톤의 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, PEG 모이어티는 약 40 킬로달톤의 분자량을 갖는다. 본원에 기재된 PEG 모이어티는 선형 또는 분지형일 수 있다. PEG 모이어티는 이산 (단분산) 또는 비-이산 (다분산)될 수 있다. PK 증진 화물 분자로서 사용하기 위한 PEG 모이어티는 상업적으로 구입할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 화물 분자(들)는 PK 조정제 또는 증진제로서 작용할 수 있는 PEG 모이어티, 뿐만 아니라 상이한 화물 분자, 예컨대 제약 활성 성분 또는 화합물을 포함한다.
기재된 αvβ6 인테그린 리간드는 그의 염 또는 용매화물을 포함한다. αvβ6 인테그린 리간드의 용매화물은 상호 인력으로 인해 형성된, αvβ6 인테그린 리간드 상의 불활성 용매 분자의 부가물을 의미하는 것으로 이해된다. 용매화물은, 예를 들어, 1- 또는 2수화물 또는 알콜, 예컨대 예를 들어, 메탄올 또는 에탄올과의 부가 화합물이다.
유리 아미노 기 또는 유리 히드록실 기는 상응하는 보호기를 갖는 αvβ6 인테그린 리간드의 치환기로서 제공될 수 있다.
αvβ6 인테그린 리간드는 또한 예를 들어 유도체, 즉 시험관내 또는 유기체에서 절단되는, 예를 들어 알킬 또는 아실 기, 당 또는 올리고펩티드로 변형된 αvβ6 인테그린 리간드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 리간드-매개 세포내 이입, 음세포작용을 통해, 또는 다른 수단에 의해, 그의 표면 상에서 αvβ6 인테그린을 제시하는 세포의 시토졸로의 화물 분자의 전달을 용이하게 한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는 αvβ6 인테그린을 제시하는 세포의 형질 막으로의 화물 분자의 전달을 용이하게 한다.
제약 조성물
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드 중 1개 이상을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진 제약 조성물을 제공한다.
본원에 사용된 "제약 조성물"은 약리학상 유효량의 활성 제약 성분 (API), 및 임의로 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 제약상 허용되는 부형제 (부형제)는 약물 전달 시스템에 의도적으로 포함되는, 활성 제약 성분 (API, 치료 제품) 이외의 물질이다. 부형제는 의도된 투여량에서 치료 효과를 발휘하지 않거나 또는 치료 효과를 발휘하도록 의도되지 않는다. 부형제는 a) 제조 동안 약물 전달 시스템의 가공을 보조하고/거나, b) API의 안정성, 생체이용률 또는 환자 용인성을 보호, 지원 또는 증진시키고/거나, c) 제품 식별을 돕고/거나, d) 저장 또는 사용 동안 API의 전반적인 안전성, 유효성, 전달의 임의의 다른 속성을 증진시키는 작용을 할 수 있다. 제약상 허용되는 부형제는 불활성 물질일 수 있거나 또는 불활성 물질이 아닐 수 있다.
부형제는 흡수 증진제, 부착방지제, 소포제, 항산화제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 전달 증진제, 전달 중합체, 덱스트란, 덱스트로스, 희석제, 붕해제, 유화제, 증량제, 충전제, 향미제, 활택제, 함습제, 윤활제, 오일, 중합체, 보존제, 염수, 염, 용매, 당, 현탁화제, 지속 방출 매트릭스, 감미제, 증점제, 등장화제, 비히클, 발수제 및 습윤제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 제약 조성물은 제약 조성물에서 통상적으로 발견되는 다른 추가의 성분을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 성분은 제약 활성 물질이다. 제약 활성 물질은 항소양제, 수렴제, 국부 마취제 또는 항염증제 (예를 들어, 항히스타민제, 디펜히드라민 등), 소분자 약물, 항체, 항체 단편, 압타머 및/또는 백신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
제약 조성물은 또한 보존제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 부취제, 삼투압의 변동을 위한 염, 완충제, 코팅제 또는 항산화제를 함유할 수 있다. 이들은 또한 공지된 치료 이익을 갖는 다른 작용제를 함유할 수 있다.
제약 조성물은 국부 치료가 바람직한지 또는 전신 치료가 바람직한지의 여부 및 치료하고자 하는 부위에 따라 다수의 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 관련 기술분야에 통상적으로 공지된 임의의 방식에 의해, 예컨대, 비제한적으로, 국소 (예를 들어, 경피 패치에 의해), 폐 (예를 들어, 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 취입에 의해, 예컨대 네뷸라이저, 기관내, 비강내에 의한 것 포함), 표피, 경피, 경구 또는 비경구로 이루어질 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사 또는 주입; 피하 (예를 들어, 이식된 장치를 통해), 두개내, 실질내, 척수강내 및 뇌실내 투여를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제약 조성물은 피하 주사에 의해 투여된다. 제약 조성물은 경구로, 예를 들어 정제, 코팅된 정제, 당의정, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 에멀젼 또는 현탁액의 형태로 투여될 수 있다. 투여는 또한 직장으로, 예를 들어 좌제를 사용하여; 국부로 또는 경피로, 예를 들어 연고, 크림, 겔 또는 용액을 사용하여; 또는 비경구로, 예를 들어 주사액을 사용하여 수행될 수 있다.
주사가능한 사용에 적합한 적합한 제약 조성물은 멸균 수용액 (수용성인 경우) 또는 분산액, 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여를 위해 적합한 담체는 생리 염수, 정박테리아 수, 크레모포르 ELTM (바스프(BASF), 뉴저지주 파시파니) 또는 포스페이트 완충 염수를 포함한다. 이는 제조 및 저장 조건 하에 안정적이어야 하며, 미생물 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 코팅 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 다수의 경우에, 등장화제, 예를 들어, 당, 폴리알콜 예컨대 만니톨, 소르비톨, 및 염화나트륨을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 야기될 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은 요구되는 양의 활성 화합물을, 필요에 따라 상기 열거된 성분 중 1종 또는 그의 조합과 함께 적절한 용매 중에 혼입한 다음, 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들 중 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 중에 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 제조 방법은 그의 이전에 멸균-여과된 용액으로부터 활성 성분 플러스 임의의 추가의 목적하는 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 동결-건조를 포함한다.
관절내 투여에 적합한 제제는 미세결정질 형태, 예를 들어, 수성 미세결정질 현탁액의 형태일 수 있는, 본원에 기재된 임의의 리간드의 멸균 수성 제제의 형태일 수 있다. 리포솜 제제 또는 생분해성 중합체 시스템이 또한 관절내 및 안과적 투여 둘 다를 위한 본원에 기재된 임의의 리간드를 제공하기 위해 사용될 수 있다.
활성 화합물은, 이식물 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함한 제어 방출 제제와 같이, 체내로부터의 급속 제거에 대해 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다. 생분해성 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제제의 제조 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 리포솜 현탁액이 또한 제약상 허용되는 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 따라, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,522,811에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
제약 조성물은 제약 조성물에서 통상적으로 발견되는 다른 추가의 성분을 함유할 수 있다. 이러한 추가의 성분은 항소양제, 수렴제, 국부 마취제 또는 항염증제 (예를 들어, 항히스타민제, 디펜히드라민 등)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에 사용된 "약리학상 유효량", "치료 유효량" 또는 간단하게 "유효량"은 약리학적, 치료적 또는 예방적 결과를 발생시키기 위한 제약 활성제의 양을 지칭한다.
αvβ6 인테그린 리간드를 함유하는 의약이 또한 본 발명의 목적이며, αvβ6 인테그린 리간드를 함유하는 1종 이상의 화합물 및 원하는 경우에 1종 이상의 다른 공지된 치료 이익을 갖는 물질을 제약상 허용되는 형태가 되도록 하는 것을 포함하는, 이러한 의약의 제조 방법도 마찬가지로 본 발명의 목적이다.
기재된 αvβ6 인테그린 리간드, 및 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 제약 조성물은 키트, 용기, 팩 또는 분배기 내에 패키징되거나 포함될 수 있다. αvβ6 인테그린 리간드, 및 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 제약 조성물은 사전-충전된 시린지 또는 바이알 내에 패키징될 수 있다.
세포, 조직, 및 비-인간 유기체
본원에 기재된 αvβ6 인테그린 리간드 중 적어도 1개를 포함하는 세포, 조직 및 비-인간 유기체가 고려된다. 세포, 조직 또는 비-인간 유기체는 관련 기술분야에서 이용가능한 임의의 수단에 의해 αvβ6 인테그린 리간드를 세포, 조직 또는 비-인간 유기체로 전달함으로써 이루어진다. 일부 실시양태에서, 세포는 인간 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물 세포이다.
표적화 기, 연결기, 약동학 (PK) 조정제, 및 전달 비히클
일부 실시양태에서, αvβ6 리간드는 연결기, 약동학 (PK) 조정제, 전달 중합체, 또는 전달 비히클을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1개 이상의 비-뉴클레오티드 기에 접합된다. 비-뉴클레오티드 기는 화물 분자의 표적화, 전달 또는 부착을 증진시킬 수 있다. 표적화 기 및 연결기의 예가 표 6에 제공된다. 비-뉴클레오티드 기는 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 3' 및/또는 5' 말단에 공유 연결될 수 있다. 화물 분자가 RNAi 작용제인 실시양태에서, RNAi 작용제는 센스 가닥의 3' 및/또는 5' 말단에 연결된 비-뉴클레오티드 기를 함유한다. 일부 실시양태에서, 비-뉴클레오티드 기는 RNAi 작용제 센스 가닥의 5' 단부에 연결된다. αvβ6 리간드는 링커/연결기를 통해 화물 분자에 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, αvβ6 리간드는 불안정성, 절단가능한 또는 가역적인 결합 또는 링커를 통해 화물 분자에 연결된다.
일부 실시양태에서, 비-뉴클레오티드 기는 그것이 부착되는 RNAi 작용제 또는 접합체의 약동학 또는 생체분포 특성을 증진시켜, 접합체의 세포- 또는 조직-특이적 분포 및 세포-특이적 흡수를 개선시킨다. 일부 실시양태에서, 비-뉴클레오티드 기는 RNAi 작용제의 세포내이입을 증진시킨다.
표적화 기 또는 표적화 모이어티는 그것이 부착되는 화물 분자의 약동학 또는 생체분포 특성을 증진시켜, 화물 분자의 세포-특이적 (일부 경우에, 기관 특이적을 포함) 분포 및 세포-특이적 (또는 기관 특이적) 흡수를 개선시킨다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 본원에 기재된 바와 같은 αvβ6 리간드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적화 기는 PK 조정제를 포함한다. 일부 실시양태에서, αvβ6 리간드는 링커, 예컨대 PEG 링커, 또는 일부 경우에 링커로서 기능할 수 있는 1, 2, 또는 3개의 무염기성 및/또는 리비톨 (무염기성 리보스) 잔기를 사용하여 화물 분자에 연결된다.
화물 분자는 반응성 기, 예컨대 아미노 기 (또한 본원에서 아민으로도 지칭됨)를 갖도록 합성될 수 있다. 화물 분자가 RNAi 작용제인 실시양태에서, 반응성 기는 5'-말단 및/또는 3'-말단에서 연결될 수 있다. 반응성 기는 후속해서, 관련 기술분야에서 전형적인 방법을 사용하여, αvβ6 리간드에 부착시키는데 사용될 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, RNAi 작용제는 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5'-말단에서 NH2-C6 기를 갖도록 합성된다. 후속해서, 말단 아미노 기는 예를 들어 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 포함하는 기와 접합체를 형성하도록 반응할 수 있다. 일부 실시양태에서, RNAi 작용제는 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5'-말단에서 1개 이상의 알킨 기를 갖도록 합성된다. 후속해서, 말단 알킨 기(들)는 예를 들어 αvβ6 인테그린 표적화 리간드를 포함하는 기와 접합체를 형성하도록 반응할 수 있다.
일부 실시양태에서, 연결기는 αvβ6 리간드에 접합된다. 연결기는 화물 분자, 약동학 조정제, 전달 중합체 또는 전달 비히클에 대한 αvβ6 리간드의 공유 연결을 용이하게 한다. 연결기의 예는 Alk-SMPT-C6, Alk-SS-C6, DBCO-TEG, Me-Alk-SS-C6, 및 C6-SS-Alk-Me, 반응성 기 예컨대 1급 아민 및 알킨, 알킬 기, 무염기성 잔기/뉴클레오티드, 아미노산, 트리-알킨 관능화 기, 리비톨, 및/또는 PEG 기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
링커 또는 연결기는 하나의 화학적 기 (예컨대 RNAi 작용제) 또는 관심 절편을 또 다른 화학적 기 (예컨대 αvβ6 리간드, 약동학 조정제, 또는 전달 중합체) 또는 관심 절편에 1개 이상의 공유 결합을 통해 연결하는 2개의 원자 사이의 연계이다. 불안정성 연결은 불안정성 결합을 함유한다. 연결은 2개의 이어진 원자 사이의 거리를 증가시키는 스페이서를 임의로 포함할 수 있다. 스페이서는 연결에 가요성 및/또는 길이를 추가로 부가할 수 있다. 스페이서는 알킬 기, 알케닐 기, 알키닐 기, 아릴 기, 아르알킬 기, 아르알케닐 기, 및 아르알키닐 기를 포함하나 이에 제한되지는 않고; 이들 각각은 1개 이상의 헤테로원자, 헤테로사이클, 아미노산, 뉴클레오티드, 및 사카라이드를 함유할 수 있다. 스페이서 기는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 상기 목록은 설명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
일부 실시양태에서, αvβ6 리간드는 추가의 링커를 사용하지 않고 화물 분자에 연결된다. 일부 실시양태에서, αvβ6 리간드는 화물 분자에 대한 연결을 용이하게 하기 위해 용이하게 존재하는 링커를 갖도록 설계된다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물 내에 포함되는 경우, 2개 이상의 RNAi 작용제는 동일한 링커를 사용하여 그의 각각의 표적화 기에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 RNAi 작용제가 조성물 내에 포함되는 경우, 2개 이상의 RNAi 작용제는 상이한 링커를 사용하여 그의 각각의 표적화 기에 연결된다.
특정 연결기의 예가 표 A에 제공된다.
표 A. 다양한 연결기를 나타내는 구조
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
여기서
Figure pct00164
는 화물 분자에 대한 부착 지점을 나타낸다.
대안적으로, 관련 기술 분야에 공지되어 있는 다른 연결기가 사용될 수 있다.
상기 제공된 실시양태 및 항목은 이제 하기의 비제한적인 실시예로 예시된다.
실시예
하기 실시예는 본원에 개시된 특정 실시양태를 제한하지 않고 예시하는 것으로 의도된다.
실시예 1. αvβ6 인테그린 리간드의 합성
실시예의 합성의 하기 실험 세부사항에 사용된 약어의 일부는 하기와 같이 정의된다: h 또는 hr = 시간; min = 분; mol = 몰; mmol = 밀리몰; M = 몰; μM = 마이크로몰; g = 그램; μg = 마이크로그램; rt 또는 RT = 실온; L= 리터; mL = 밀리리터; wt = 중량; Et2O = 디에틸 에테르; THF = 테트라히드로푸란; DMSO = 디메틸 술폭시드; EtOAc = 에틸 아세테이트; Et3N 또는 TEA = 트리에틸아민; i-Pr2NEt 또는 DIPEA 또는 DIEA = 디이소프로필에틸아민; CH2Cl2 또는 DCM = 메틸렌 클로라이드; CHCl3 = 클로로포름; CDCl3 = 중수소화 클로로포름; CCl4 = 사염화탄소; MeOH = 메탄올; EtOH = 에탄올; DMF = 디메틸포름아미드; BOC = t-부톡시카르보닐; CBZ = 벤질옥시카르보닐; TBS = t-부틸디메틸실릴; TBSCl 또는 TBDMSCl = t-부틸디메틸실릴 클로라이드; TFA = 트리플루오로아세트산; DMAP = 4-디메틸아미노피리딘; NaN3 = 아지드화나트륨; Na2SO4 = 황산나트륨; NaHCO3 = 중탄산나트륨; NaOH = 수산화나트륨; MgSO4 = 황산마그네슘; K2CO3 = 탄산칼륨; KOH = 수산화칼륨; NH4OH = 수산화암모늄; NH4Cl = 염화암모늄; SiO2 = 실리카; Pd-C = 탄소 상 팔라듐; HCl = 염화수소 또는 염산; NMM = N-메틸모르폴린; H2 = 수소 기체; KF = 플루오린화칼륨; EDC-HCl = N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드; MTBE = 메틸-tert-부틸 에테르; Ar = 아르곤; N2 = 질소; RT = 체류 시간.
구조 1-37에 대한 화학 명칭은 켐드로우(ChemDraw)® 소프트웨어를 사용하여 자동 생성하였다.
구조 1b ((14S,17S)-1-아지도-14-(5-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)펜탄아미도)-17-(4-(나프탈렌-1-일)페닐)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데칸-19-산)의 합성.
Figure pct00165
화합물 1 (메틸 (S)-(-)-1-트리틸아지리딘-2-카르복실레이트 (4.204 g, 12.24 mmol, 1.0 당량) 및 트리이소프로필실란 (3.877 g, 5.02 mL, 24.48 mmol, 2 당량)을 DCM (40 mL) 중에 용해시키고, 용액을 0℃로 냉각시킨 다음, TFA (8.5 당량)를 적가하였다. 용액을 1시간 동안 0℃에서 유지시켰다. 반응물을 TLC 헥산 : 에틸 아세테이트 (8: 2)에 의해 모니터링하였다. 용액을 건조시켜 백색 침전물 및 담황색 오일의 혼합물을 수득하였다. 헥산 (40 mL)을 첨가하고, 모든 백색 침전물이 용해될 때까지 열선총 상에서 서서히 가열하였다. 헥산의 첨가는 2개의 층, 투명한 상부 층 및 오일 층을 생성하였다. 헥산 층을 따라 내고, 오일 층을 남겼다. 헥산 첨가를 반복하고, 다시 한번 따라 내었다. 오일이 건조되게 두었다. 아지리딘 (1.06 g, 10.5 mmol)을 THF / H2O (2 / 1) 총 60 mL 중에 용해시켰다. Fmoc-OSu (5.312 g, 15.75 mmol, 1.5 당량) 및 NaHCO3 (2.646 g, 31.5 mmol, 3 당량, pH = 8.5 유지)을 혼합물에 실온에서 첨가하고, 밤새 반응하게 두었다. 반응물을 TLC, 헥산:에틸 아세테이트 8:2에 의해 모니터링하였다. 모든 THF가 제거될 때까지 혼합물을 농축시킨 다음, 에틸 아세테이트 (350 mL) 및 H2O (25 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 유기부를 H2O (40 mL)로 세척하였다. 이어서, 유기부를 pH 3-4 물 (2 x 40 mL), 이어서 H2O (40 mL), 이어서 포화 수성 NaCl 용액 (40 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 칼럼 상에서 헥산 중 10%-20% 에틸 아세테이트에 의해 정제하였다.
Figure pct00166
화합물 2 (Fmoc-아지리딘) (1.46 g, 4.52 mmol) 및 HO-PEG4-N3 (1.983 g, 9.04 mmol, 2 당량)을 DCM 중에 용해시켰다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 삼플루오린화붕소 디에틸 에테레이트 (12 방울)를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC, 5% MeOH를 함유하는 DCM에 의해 모니터링하였다. 반응물을 NH4Cl 포화 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, DCM (60 mL)으로 희석하고, H2O (3 x 20 mL), 포화 수성 NaCl 용액 (20 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 칼럼 상에서, 헥산 중 40%-60% 에틸 아세테이트에 의해 정제하였다.
Figure pct00167
화합물 3을 DMF 중 20% 트리에틸아민의 용액 중에 용해시켰다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 생성물을 농축시켰다.
Figure pct00168
화합물 5 (tert-부틸(4-메틸피리딘-2-일)카르바메이트) (0.501 g, 2.406 mmol, 1.0 당량)을 DMF (17 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물에 실온에서 NaH (0.116 mg, 3.01 mmol, 1.25 당량, 미네랄 오일 중 60% 분산액)를 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, 에틸 5-브로모발레레이트 (0.798 g, 3.82 mmol, 0.604 mL)를 첨가하였다. 3시간 후, 반응물을 에탄올 (18 mL)로 켄칭하고, 농축시켰다. 생성물을 DCM (50 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaCl 용액 (50 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 칼럼 상에서, 구배 DCM 중 0-5% 메탄올에 의해 정제하였다.
Figure pct00169
화합물 7 (0.80 g, 2.378 mmol)을 아세톤 : 0.1 M NaOH (1:1) 100 mL 중에 용해시키고, 반응물을 TLC (헥산 중 5% 에틸 아세테이트)에 의해 모니터링하였다. 유기부를 농축시키고, 혼합물을 0.3 M 시트르산 (40 mL)을 사용하여 pH 3-4로 산성화시켰다. 생성물을 DCM (3 x 75 mL)으로 추출하였다. 유기부를 풀링하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00170
화합물 4를 DMF (10 mL) 중에 용해시켰다 (0.340g, 1.104 mmol). 용액에 TBTU (0.531g, 1.655 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.320 mL, 1.839 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 화합물 8 (0.295g, 0.9197 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS 및 TLC (5% MeOH를 함유하는 DCM)에 의해 모니터링하였다. 반응은 2시간 내에 완결되었다. 생성물을 농축시키고, 에틸 아세테이트 (150 mL) 중에 용해시키고, pH 3-4 H2O (2 x 12 mL)로 세척하였다. 이어서, 생성물을 H2O (2 x 12 mL), 포화 수성 NaHCO3 용액 (12 mL)에 이어서 포화 수성 NaCl 용액 (12 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 칼럼 상에서 에틸 아세테이트 중 헥산 20% 내지 100% 에틸 아세테이트에 의해 정제하였다.
Figure pct00171
화합물 9를 10 mL MeOH:디옥산 [1:1] 및 1 M LiOH 용액 (10 mL) 중에 용해시켰다 (0.330g, 0.540 mmol). 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC (EtOAc)에 의해 모니터링하였다. 유기부를 농축시키고, 혼합물을 H2O (5 mL)로 희석하고, pH 4로 산성화시켰다. 생성물을 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기부를 풀링하고, 포화 수성 NaCl 용액 (10 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00172
화합물 11 ((S)-3-(4-브로모페닐)-3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-프로피온산) (2.0g, 5.81 mmol)을 DMF (40 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물에 K2CO3 (1.2 g, 8.72 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 아이오도메탄 (1.65 g, 11.62 mmol, 0.72 mL)을 첨가하였다. 반응물을 TLC (헥산 : 에틸 아세테이트 (7 :3))에 의해 모니터링하였다. 완결된 후, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, H2O (20 mL) 및 MTBE (40 mL)를 첨가하였다. 생성물을 MTBE (4 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 수성 NaHCO3 (40 mL)에 이어서 H2O (4 x 40 mL)로 세척하였다. 혼합물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다.
건조된 생성물 화합물 12 (1.0 g, 2.7915 mmol)에 화합물 13 (1-나프탈렌 보론산 (0.960 g, 5.583 mmol, 2 당량))을 첨가하였다. 혼합물에 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) 또는 Pd(dppf)Cl2 (0.0817 g, 0.1117 mmol, 0.4 당량)를 Na2CO3 (0.888 g, 8.375 mmol, 3 당량)과 함께 첨가하였다. 다음에, 1,4-디옥산 (5 mL) 및 H2O (0.2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC (헥산 : 에틸 아세테이트 (7 :3))에 의해 모니터링하였다. 생성물을 실리카 크로마토그래피, 구배 헥산 중 0%에서 50% 에틸 아세테이트에 의해 정제하였다.
화합물 14 (0.200 g, 0.493 mmol)를 DCM (2.5 mL) 중에 용해시키고, 이어서 TFA (0.45 mL)를 첨가하였다. 반응물을 TLC, (DCM : 메탄올 (9: 1))에 의해 모니터링하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 DCM (4 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액 (2 x 2 mL)에 이어서 포화 수성 NaCl 용액 (2 x 2 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00173
화합물 10 (0.3224g, 0.54 mmol)을 DMF (7 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물에 TBTU (0.236 g, 0.735 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.170 mL, 0.98 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 화합물 15를 첨가하였다 (0.1496g, 0.49 mmol). 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 모니터링하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (90 mL) 중에 용해시키고, pH 3-4 H2O (3 x 10 mL)로 세척하였다. 생성물을 H2O (2 x 10 mL), 포화 수성 NaHCO3 용액 (10 mL)에 이어서 포화 수성 NaCl 용액 (1 x 10 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 크로마토그래피에 의해 DCM, 5% MeOH까지의 구배를 사용하여 정제하였다.
Figure pct00174
화합물 16을 MeOH : 디옥산 [1:1] (4 mL) 및 1 M LiOH (4 mL) 중에 용해시켰다 (0.250g, 0.2828 mmol). 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 유기부를 농축시키고, 잔류물을 H2O (3 mL)로 희석하고, pH 4로 산성화시켰다. 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기부를 풀링하고, 포화 수성 NaCl 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 생성물을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 생성물을 2 mL DCM : TFA [25:75] 중에 용해시키고 (0.200 g, 0.2299 mmol), 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물에 톨루엔 (4 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 농축시킨 다음, 아세토니트릴 (2 x 4mL)과 공증발시켰다. 생성물을 HPLC 상에서, 구배 30분에 걸쳐 35% ACN에서 50%, 0.1% TFA 완충제에 의해 정제하였다. => [M+H]+ 계산치 C41H51N7O8: 769.90, 실측치: 770.45;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.64 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.78 (t, 2H), 7.60-7.40 (m, 8H), 6.80 (s, 1H), 6.67 (d, 1H), 5.31 (q, 1H), 4.55 (m, 1H), 3.62 - 3.45 (m, 18H), 3.40 (t, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.80 (dd, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.20 (t, 2H), 1.55 (m, 4H).
구조 2b ((14S,17S)-1-아지도-14-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)-17-(4-(나프탈렌-1-일)페닐)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데칸-19-산)의 합성.
Figure pct00175
화합물 5 (tert-부틸(4-메틸피리딘-2-일)카르바메이트) (0.501 g, 2.406 mmol, 1 당량)를 DMF (17 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물에 NaH (0.116 mg, 3.01 mmol, 1.25 당량, 오일 중 60% 분산액)를 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 화합물 20 (에틸 4-브로모부티레이트 (0.745 g, 3.82 mmol, 0.547 mL)) (시그마 167118)을 첨가하였다. 3시간 후, 반응물을 에탄올 (18 mL)로 켄칭하고, 농축시켰다. 농축물을 DCM (50 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaCl 용액 (1 x 50 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 칼럼 상에서, 구배 DCM 중 0-5% 메탄올에 의해 정제하였다.
Figure pct00176
화합물 21을 아세톤 : 0.1 M NaOH [1:1] 100 mL 중에 용해시켰다 (0.80 g, 2.378 mmol). 반응물을 TLC (헥산 중 5% 에틸 아세테이트)에 의해 모니터링하였다. 유기부를 농축시키고, 잔류물을 0.3 M 시트르산 (40 mL)을 사용하여 pH 3-4로 산성화시켰다. 생성물을 DCM (3 x 75 mL)으로 추출하였다. 유기부를 풀링하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00177
화합물 22를 DMF (10 mL) 중에 용해시켰다 (0.340g, 1.104 mmol). 혼합물에 TBTU (0.531g, 1.655 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.320 mL, 1.839 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 화합물 10 (0.295g, 0.9197 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS 및 TLC (5% MeOH를 함유하는 DCM)에 의해 모니터링하였다. 반응은 2시간 내에 완결되었다. 혼합물을 농축시키고, 에틸 아세테이트 (150 mL) 중에 용해시키고, pH 3-4 H2O (2 x 12 mL)로 세척하였다. 이어서, 혼합물을 H2O (2 x 12 mL), 포화 수성 NaHCO3 용액 (12 mL)에 이어서 포화 수성 NaCl 용액 (12 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 칼럼 상에서 에틸 아세테이트 중 헥산 20% 내지 100% 에틸 아세테이트에 의해 정제하였다.
Figure pct00178
화합물 23을 10 mL MeOH : 디옥산 [1:1] 및 1 M LiOH (10 mL) 중에 용해시켰다 (0.330g, 0.540 mmol). 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, LC-MS 및 TLC (100% EtOAc)에 의해 모니터링하였다. 유기부를 농축시키고, 잔류물을 H2O (5 mL)로 희석하고, pH 4로 산성화시켰다. 생성물을 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 수성 NaCl 용액 (1 x 10 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00179
화합물 24를 DMF (7 mL) 중에 용해시켰다 (0.3224g, 0.54 mmol). 혼합물에 TBTU (0.236 g, 0.735 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.170 mL, 0.98 mmol)을 첨가하였다. 이어서 화합물 15를 첨가하였다 (0.1496g, 0.49 mmol). 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 모니터링하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (90 mL) 중에 용해시키고, pH 3-4 H2O (3 x 10 mL)로 세척하였다. 농축물을 H2O (2 x 10 mL), 포화 수성 NaHCO3 용액 (10 mL)에 이어서 포화 수성 NaCl 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물을 실리카 칼럼 상에서, DCM, 5% MeOH까지의 구배에 의해 정제하였다.
Figure pct00180
화합물 25를 MeOH : 디옥산 [1:1] (4 mL) 및 1 M LiOH (4 mL) 중에 용해시켰다 (0.250g, 0.2828 mmol). 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, LC-MS에 의해 모니터링하였다. 유기부를 농축시키고, 잔류물을 H2O (3 mL)로 희석하고, pH 4로 산성화시켰다. 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기부를 풀링하고, 포화 수성 NaCl 용액 (1 x 10 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 2 mL DCM / TFA (25 / 75) 중에 용해시키고 (0.200 g, 0.2299 mmol), LC-MS에 의해 모니터링하면서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 톨루엔 (4 mL)을 첨가하고, 혼합물을 농축시켰다. 이어서, 아세토니트릴 (2 x 4 mL)을 첨가하고, 혼합물을 농축시켰다. 생성물을 HPLC 상에서, 구배 30분에 걸쳐 35% ACN에서 50%, 0.1% TFA 완충제에 의해 정제하였다. [M+H]+ 계산치 C40H49N7O8: 755.87, 실측치: 756.32;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.64 (t, 1H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.75 (m, 1H), 7.60-7.40 (m, 8H), 6.8 (s, 1H), 6.67 (d, 1H), 5.31 (q, 1H), 4.55 (m, 1H), 3.62 - 3.45 (m, 18H), 3.40 (t, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.80 (dd, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.26 (t, 2H), 1.80 (m, 2H).
구조 5b, 5.1b, 및 5.2b의 합성.
구조 5b (3-(4-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)-3,5-디클로로페닐)-3-(2-(5-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)펜탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00181
건조 DMF (10 mL) 중 화합물 5 (0.98 g, 4.70 mmol, 1 당량)의 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 NaH (0.226 g, 5.647 mmol, 1.2 당량, 60% 오일 분산액)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 유지시킨 후, 동일한 온도에서 화합물 6 (1.18 mL, 5.647 mmol, 1.2 당량)을 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 추가로 교반한 후, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 포화 NH4Cl 수용액으로 켄칭하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬(CombiFlash)®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다.
LC-MS: [M+H]+ 337.20, 실측치 337.39.
Figure pct00182
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 7 (1.347 g, 4.00 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 1수화물 (0.505 g, 12.01 mmol, 5 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 4.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: [M+H]+ 309.17, 실측치 309.39.
Figure pct00183
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 8 (1.163 g, 3.77 mmol, 1 당량), 화합물 45 (568 mg, 4.52 mmol, 1.2 당량), 및 TBTU (1.453 g, 4.52 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (1.97 mL, 11.31 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (20 mL)으로 켄칭하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 380.21, 실측치 380.51.
Figure pct00184
에탄올 (10 mL) 중 화합물 47 (1.0 g, 5.23 mmol, 1 당량) 및 말론산 (1.09 g, 10.47 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 아세트산암모늄 (0.807 mg, 10.47 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 밤새 교반하였다. 고체를 여과하고, 차가운 에탄올로 세척하였다. 생성물을 추가의 단계 동안 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 250.00, 실측치 250.16.
Figure pct00185
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 46 (1.412 g, 3.72 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 1수화물 (0.469 g, 11.16 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 4.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 366.20, 실측치 366.46.
Figure pct00186
무수 메탄올 (10 mL) 중 화합물 49 (0.531 g, 2.12 mmol, 1 당량)의 현탁액에 빙조에서 티오닐 클로라이드 (308 uL, 4.24 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 264.01, 실측치 264.20.
Figure pct00187
무수 DMF (5 mL) 중 화합물 50 (150 mg, 0.410 mmol, 1 당량), 화합물 51 (148 mg, 0.492 mmol, 1.2 당량), 및 TBTU (158 mg, 0.492 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.214 mL, 1.23 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 2-4% 메탄올로 용리시켰다.
Figure pct00188
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 52 (80 mg, 0.130 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG3-OTs (86 mg, 0.262 mmol, 2 당량)의 용액에 0℃에서 K2CO3 (36 mg, 0.262 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 2-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 768.28, 실측치 769.
Figure pct00189
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 53 (58 mg, 0.0755 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 1수화물 (10 mg, 0.226 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (0.25 mL) 및 DCM (0.75 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 654.21, 실측치 655.
구조 5.1b (3-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)-3,5-디클로로페닐)-3-(2-(5-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)펜탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00190
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 52 (100 mg, 0.163 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (205 mg, 0.491 mmol, 3 당량)의 용액에 0℃에서 K2CO3 (68 mg, 0.491 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 856.33, 실측치 857.07.
Figure pct00191
THF (4 mL) 및 물 (4 mL) 중 화합물 55 (119 mg, 0.139 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (10 mg, 0.417 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (2 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 742.27, 실측치 743.02.
구조 5.2b (3-(4-((8-아지도옥틸)옥시)-3,5-디클로로페닐)-3-(2-(5-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)펜탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00192
아세톤 (2 mL) 중 화합물 52 (89 mg, 0.14 mmol, 1 당량) 및 1,8-디브로모옥탄 (80 uL, 0.436 mmol, 3 당량)의 용액에 실온에서 K2CO3 (60 mg, 0.436 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 801.23, 실측치 801.98.
Figure pct00193
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 57 (97 mg, 0.114 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 아지드화나트륨 (15 mg, 0.229 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 764.32, 실측치 765.07.
Figure pct00194
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 58 (78 mg, 0.101 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (7 mg, 0.304 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (2 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 650.25, 실측치 650.83.
구조 6b, 6.1b, 6.2b, 6.3b, 및 6.4b의 합성.
구조 6b ((S)-3-(4-(4-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00195
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 22 (1.1 g, 3.95 mmol, 1 당량), 화합물 45 (595 mg, 4.74 mmol, 1.2 당량), 및 TBTU (1.52 g, 4.74 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (2.06 mL, 11.85 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 366.20, 실측치 367.
Figure pct00196
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 61 (2 g, 8.96 mmol, 1 당량), 및 화합물 62 (2.13 mL, 17.93 mmol, 2 당량)의 용액에 0℃에서 K2CO3 (2.48 g, 17.93 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 물 (10 mL)으로 켄칭하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다.
Figure pct00197
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 60 (1.77 g, 4.84 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 1수화물 (0.61 g, 14.53 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 352.18, 실측치 352.
Figure pct00198
무수 THF (20 mL) 중 화합물 63 (1.88 g, 6.0 mmol, 1.0 당량)의 용액에 헥산 중 n-BuLi (3.6 mL, 9.0 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 추가로 1시간 동안 유지시켰다. 이어서, 트리이소프로필보레이트 (2.08 mL, 9.0 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, pH를 3으로 조정하였다. 수성 상을 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
Figure pct00199
화합물 12 (300 mg, 0.837 mmol, 1.0 당량), 화합물 65 (349 mg, 1.256 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (13 mg, 0.0167 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (355 mg, 1.675mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (8 mL) 및 물 (2 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 20분 동안 버블링하고, 반응물을 실온에서 밤새 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 콤비플래쉬®를 통해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 15% EtOAc로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 512.24, 실측치 512.56.
Figure pct00200
화합물 66 (858 mg, 1.677 mmol, 1.0 당량)을 빙조에 의해 냉각시켰다. 디옥산 중 HCl (8.4 mL, 33.54 mmol, 20 당량)을 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 412.18, 실측치 412.46.
Figure pct00201
무수 DMF (15 mL) 중 화합물 64 (500 mg, 1.423 mmol, 1 당량), 화합물 67 (669 mg, 1.494 mmol, 1.05 당량), 및 TBTU (548 mg, 0.492 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.744 mL, 4.268 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 96.23%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 745.35, 실측치 746.08.
Figure pct00202
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 68 (1.02 g, 1.369 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (0.15 g, 50% H2O)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 반응을 LC-MS에 의해 모니터링하였다. 반응물을 실온에서 밤새 유지시켰다. 고체를 셀라이트®를 통해 여과하고, 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다. 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: [M+H]+ 655.31, 실측치 655.87.
Figure pct00203
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 69 (100 mg, 0.152 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG3-OTs (100 mg, 0.305 mmol, 2 당량)의 용액에 0℃에서 K2CO3 (42 mg, 0.305 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 812.39, 실측치 813.14.
Figure pct00204
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 70 (77 mg, 0.0948 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (7 mg, 0.284 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (0.5 mL) 및 DCM (0.5 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 698.32, 실측치 698.81.
구조 6.1b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00205
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 69 (100 mg, 0.152 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (128 mg, 0.305 mmol, 2 당량)의 용액에 0℃에서 K2CO3 (42 mg, 0.305 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 900.40, 실측치 901.46.
Figure pct00206
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 72 (59 mg, 0.0656 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (5 mg, 0.197 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (0.5 mL) 및 DCM (0.5 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 786.37, 실측치 786.95.
구조 6.2b ((S)-3-(4-(4-((8-아지도옥틸)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00207
아세톤 (2 mL) 중 화합물 69 (150 mg, 0.229 mmol, 1 당량) 및 1,8-디브로모옥탄 (127 uL, 0.687 mmol, 3 당량)의 용액에 실온에서 K2CO3 (95 mg, 0.687 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 845.34, 실측치 845.91.
Figure pct00208
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 74 (97 mg, 0.114 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 아지드화나트륨 (15 mg, 0.229 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 808.43, 실측치 809.00.
Figure pct00209
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 75 (92 mg, 0.114 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (8 mg, 0.342 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (0.5 mL) 및 DCM (0.5 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 694.36, 실측치 694.94.
구조 6.3b ((S)-3-(4-(4-((20-아지도-3,6,9,12,15,18-헥사옥사이코실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00210
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 69 (100 mg, 0.152 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG7-OTs (154 mg, 0.305 mmol, 2 당량)의 용액에 0℃에서 Cs2CO3 (100 mg, 0.305 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 생성물을 DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 988.50, 실측치 989.14.
Figure pct00211
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 21 (112 mg, 0.113 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (8 mg, 0.340 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 874.43, 실측치 875.08.
구조 6.4b ((S)-3-(4-(4-((35-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-운데카옥사펜타트리아콘틸)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)
Figure pct00212
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 69 (80 mg, 0.122 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG12-OTs (184 mg, 0.244 mmol, 2 당량)의 용액에 0℃에서 Cs2CO3 (80 mg, 0.244 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 1208.63, 실측치 1209.21.
Figure pct00213
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 82 (100 mg, 0.0972 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (7 mg, 0.292 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 1094.56, 1095.05.
구조 7b ((R)-3-(4-(4-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00214
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 84 (1.0 g, 2.90 mmol, 1 당량) 및 탄산칼륨 (0.60 g, 4.36 mmol, 1.5 당량)의 용액에 실온에서 메틸 아이오다이드 (362 uL, 5.81 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 교반하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 358.06, 실측치 358.34.
Figure pct00215
화합물 85 (1.0 g, 2.791 mmol, 1.0 당량)를 빙조에 의해 냉각시켰다. 디옥산 중 HCl (7.0 mL, 27.91 mmol, 10 당량)을 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 258.01, 실측치 257.97.
Figure pct00216
무수 DMF (15 mL) 중 화합물 64 (790 mg, 2.248 mmol, 1 당량), 화합물 86 (728 mg, 2.473 mmol, 1.10 당량), 및 TBTU (866 mg, 2.698 mmol, 1.20 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (1.175 mL, 6.744 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 591.17, 실측치 591.49.
Figure pct00217
화합물 87 (200 mg, 0.338 mmol, 1.0 당량), 화합물 65 (141 mg, 0.507 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (5.3 mg, 0.068 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (143 mg, 0.676 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (8 mL) 및 물 (2 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 20분 동안 버블링하고, 반응물을 실온에서 밤새 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 745.35, 실측치 746.08.
Figure pct00218
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 88 (0.247 g, 0.331 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 655.96.
Figure pct00219
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 89 (50 mg, 0.076 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG3-OTs (50 mg, 0.152 mmol, 2 당량)의 용액에 0℃에서 Cs2CO3 (50 mg, 0.152 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4% MeOH로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 812.39, 실측치 813.14.
Figure pct00220
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 90 (36 mg, 0.0443 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (3 mg, 0.133 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (0.5 mL) 및 DCM (0.5 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 698.32, 실측치 698.90.
구조 8b ((S)-3-(4-(7-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00221
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 92 (1.0 g, 4.48 mmol, 1 당량), 및 화합물 62 (1.06 mL, 8.96 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 K2CO3 (1.24 g, 8.96 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 5% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
Figure pct00222
무수 THF (10 mL) 중 화합물 94 (0.5 g, 1.596 mmol, 1.0 당량)의 용액에 헥산 중 n-BuLi (0.96 mL, 2.394 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 추가로 1시간 동안 유지시켰다. 이어서, 트리이소프로필보레이트 (0.553 mL, 2.394 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, pH를 3으로 조정하였다. 수성 상을 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 고체를 헥산으로 연화처리하고, 여과하였다. 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M-H]- 277.11, 실측치 277.35.
Figure pct00223
화합물 96 (100 mg, 0.169 mmol, 1.0 당량), 화합물 95 (70 mg, 0.253 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (2.7 mg, 0.0034 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (72 mg, 0.338 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (8 mL) 및 물 (2 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 20분 동안 버블링하고, 반응물을 실온에서 밤새 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3% 메탄올로 용리시켰다.
Figure pct00224
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 97 (0.116 g, 0.157 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 655.87.
Figure pct00225
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 98 (87 mg, 0.133 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG3-OTs (87 mg, 0.266 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (87 mg, 0.266 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-4% MeOH로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 812.39, 실측치 813.05.
Figure pct00226
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 99 (65 mg, 0.0801 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (6 mg, 0.240 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (0.5 mL) 및 DCM (0.5 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 698.32, 실측치 698.99.
구조 9b ((14S,17R)-1-아지도-14-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)-17-(4-(나프탈렌-1-일)페닐)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데칸-19-산)의 합성.
Figure pct00227
화합물 102 (0.19 g, 0.468 mmol, 1.0 당량)를 빙조에 의해 냉각시켰다. 디옥산 중 HCl (2.35 mL, 9.37 mmol, 20 당량)을 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 306.14, 실측치 306.51.
Figure pct00228
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 23 (110 mg, 0.188 mmol, 1 당량), 화합물 103 (71 mg, 0.207 mmol, 1.10 당량), 및 TBTU (72.7 mg, 0.226 mmol, 1.20 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.1 mL, 0.566 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 870.43, 실측치 871.12.
Figure pct00229
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 104 (110 mg, 0.126 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (9 mg, 0.379 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 756.36, 실측치 756.88.
구조 10b ((S)-3-(4-(5-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00230
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 106 (1.0 g, 4.48 mmol, 1 당량), 및 화합물 62 (1.06 mL, 8.96 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (2.92 g, 8.96 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 수용액 (20 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 5% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
Figure pct00231
무수 THF (10 mL) 중 화합물 107 (1.188 g, 3.793 mmol, 1.0 당량)의 용액에 헥산 중 n-BuLi (2.27 mL, 5.689 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 추가로 1시간 동안 유지시켰다. 이어서, 트리이소프로필보레이트 (1.31 mL, 5.689 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, pH를 3으로 조정하였다. 수성 상을 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 고체를 헥산으로 연화처리하고, 여과하였다. 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M-H]-, 277.11, 실측치 277.26.
Figure pct00232
화합물 96 (100 mg, 0.169 mmol, 1.0 당량), 화합물 108 (70 mg, 0.253 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (2.7 mg, 0.0034 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (72 mg, 0.338 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (8 mL) 및 물 (2 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 20분 동안 버블링하고, 반응물을 실온에서 밤새 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 745.35, 실측치 745.99.
Figure pct00233
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 109 (0.135 g, 0.181 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 655.87.
Figure pct00234
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 110 (50 mg, 0.0764 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (64 mg, 0.152 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (50 mg, 0.152 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 62%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 900.44, 실측치 901.19.
Figure pct00235
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 111 (43 mg, 0.0478 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (3.4 mg, 0.143 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 786.37, 실측치 787.04.
구조 11b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((S)-1-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부타노일)피롤리딘-2-카르복스아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00236
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 22 (500 mg, 1.698 mmol, 1 당량), 화합물 113 (295 mg, 1.783 mmol, 1.05 당량), 및 TBTU (654 mg, 2.038 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.888 mL, 5.096 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 98.72%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 406.23, 실측치 406.07.
Figure pct00237
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 114 (0.68 g, 1.676 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (0.12 g, 5.030 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 392.21, 실측치 392.39.
Figure pct00238
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 115 (300 mg, 0.766 mmol, 1 당량), 화합물 116 (237 mg, 0.804 mmol, 1.05 당량), 및 TBTU (295 mg, 0.919 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.400 mL, 2.299 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 83%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 631.21, 실측치 631.46.
Figure pct00239
화합물 118 (100 mg, 0.158 mmol, 1.0 당량), 화합물 65 (66 mg, 0.237 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (2.5 mg, 0.0032 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (67 mg, 0.316 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 20분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 1시간 동안 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 96%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 785.38, 실측치 785.69.
Figure pct00240
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 119 (0.120 g, 0.153 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 695.34, 실측치 695.66.
Figure pct00241
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 120 (83 mg, 0.119 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (100 mg, 0.239 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (78 mg, 0.239 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 79%였다.
LC-MS: 계산치 940.47, 실측치 941.16.
Figure pct00242
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 121 (89 mg, 0.0947 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (6.8 mg, 0.284 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 826.41, 실측치 827.10.
구조 12b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)벤조[d]옥사졸-7-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00243
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 123 (1.0 g, 7.40 mmol, 1 당량), 및 화합물 62 (1.32 mL, 11.10 mmol, 1.5 당량)의 용액에 0℃에서 Cs2CO3 (3.62 g, 11.10 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 5-7% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 85% 수율.
Figure pct00244
무수 아세토니트릴 (20 mL) 중 화합물 124 (1.425 g, 6.326 mmol, 1 당량)의 용액에 N-브로모숙신이미드 (1.216 g, 6.832 mmol, 1.08 당량)를 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 추가로 30분 동안 유지시킨 다음, 실온으로 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 콤비플래쉬 ®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하였다. 생성물을 헥산 중 4-5% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 65% 수율.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 303.99. 실측치 304.08.
Figure pct00245
무수 1,4-디옥산 15 mL 중 화합물 125 (1.339 g, 4.402 mmol, 1 당량), 비스(피나콜레이토)디보론 (2.236 g, 8.805 mmol, 2 당량), 아세트산칼륨 (0.864 g, 8.805 mmol, 2 당량) 및 Pd(dppf)Cl2 (161 mg, 0.220 mmol, 0.05 당량)의 혼합물을 질소 하에 100℃에서 8시간 동안 교반하였다. 농축시킨 후, 잔류물을 H2O 및 DCM 사이에 분배하고, 수성 상을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 15-20% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 352.16, 실측치 352.06.
Figure pct00246
화합물 96 (200 mg, 0.338 mmol, 1.0 당량), 화합물 126 (178 mg, 0.507 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (5.3 mg, 0.0068 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (143 mg, 0.676 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 20분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 1시간 동안 유지시켰다. 반응물을 포화 NaHCO3 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 736.33, 실측치 736.89.
Figure pct00247
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 127 (0.219 g, 0.297 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 646.28, 실측치 646.78.
Figure pct00248
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 128 (73 mg, 0.113 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (94 mg, 0.226 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (74 mg, 0.226 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 80%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 891.42, 실측치 892.00.
Figure pct00249
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 129 (43 mg, 0.0478 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (3.4 mg, 0.143 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 777.35, 실측치 777.94.
구조 13b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00250
무수 1,4-디옥산 10 mL 중 화합물 1 (300 mg, 1.321 mmol, 1 당량), 비스(피나콜레이토)디보론 (671 mg, 2.642 mmol, 2 당량), 아세트산칼륨 (389 mg, 3.963 mmol, 2 당량) 및 Pd(dppf)Cl2 (48 mg, 0.066 mmol, 0.05 당량)의 혼합물을 질소 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. 농축시킨 후, 잔류물을 H2O 및 DCM 사이에 분배하고, 수성 상을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 10% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M-H]- 273.17, 실측치 273.29.
Figure pct00251
화합물 1 (100 mg, 0.169 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (70 mg, 0.253 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (2.7 mg, 0.0034 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (72 mg, 0.338 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 20분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 3시간 동안 유지시켰다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 밤새 정치시켰다. 반응물을 포화 NaHCO3 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4-5% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 659.34, 실측치 659.57.
Figure pct00252
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (30 mg, 0.0455 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (38 mg, 0.0911 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (30 mg, 0.0911 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 70%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 904.47, 실측치 904.88.
Figure pct00253
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (29 mg, 0.0321 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (2.3 mg, 0.0962 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 790.41, 실측치 790.64.
구조 14b ((S)-3-(4'-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)-2'-(트리플루오로메톡시)-[1,1'-비페닐]-4-일)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00254
화합물 1 (150 mg, 0.253 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (118 mg, 0.380 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (4 mg, 0.0051 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (107 mg, 0.507 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 밤새 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 779.32, 실측치 779.65.
Figure pct00255
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 1 (0.19 g, 0.244 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응물을 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 3회 반복함). 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 689.27, 실측치 689.54.
Figure pct00256
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (80 mg, 0.116 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (97 mg, 0.232 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (76 mg, 0.232 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 82%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 934.41, 실측치 935.04.
Figure pct00257
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (90 mg, 0.0964 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (7 mg, 0.289 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 820.34, 실측치 820.89.
구조 15b ((S)-3-(3-(5-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00258
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 1 (1.0 g, 2.90 mmol, 1 당량) 및 탄산칼륨 (0.60 g, 4.36 mmol, 1.5 당량)의 용액에 실온에서 메틸 아이오다이드 (362 uL, 5.81 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물 (20 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 15% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 358.06, 실측치 358.18.
Figure pct00259
화합물 1 (858 mg, 1.677 mmol, 1.0 당량)을 빙조에 의해 냉각시켰다. 디옥산 중 HCl (8.4 mL, 33.54 mmol, 20 당량)을 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 258.01, 실측치 258.08.
Figure pct00260
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 1 (640 mg, 1.821 mmol, 1 당량), 화합물 2 (590 mg, 2.003 mmol, 1.10 당량), 및 TBTU (702 mg, 2.185 mmol, 1.20 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.952 mL, 5.464 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 591.17, 실측치 591.40.
Figure pct00261
화합물 1 (150 mg, 0.253 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (106 mg, 0.380 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (4 mg, 0.0051 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (107 mg, 0.507 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 745.35, 실측치 745.99.
Figure pct00262
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 1 (0.189 g, 0.253 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응물을 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 3회 반복함). 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 655.42.
Figure pct00263
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (80 mg, 0.122 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (102 mg, 0.244 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (80 mg, 0.244 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 1-2% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 90%였다.
LC-MS: 계산치 900.44, 실측치 901.10.
Figure pct00264
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (100 mg, 0.111 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (8 mg, 0.333 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 786.37, 실측치 786.95.
구조 16b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((R)-1-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부타노일)피롤리딘-2-카르복스아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00265
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 1 (500 mg, 1.698 mmol, 1 당량), 화합물 2 (295 mg, 1.783 mmol, 1.05 당량), 및 TBTU (654 mg, 2.038 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.888 mL, 5.096 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 98.43%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 406.23, 실측치 406.34.
Figure pct00266
THF (10 mL) 및 H2O (10 mL) 중 화합물 1 (0.678 g, 1.672 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (0.12 g, 5.016 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 392.21, 실측치 392.39.
Figure pct00267
무수 DMF (5 mL) 중 화합물 1 (130 mg, 0.332 mmol, 1 당량), 화합물 2 (125 mg, 0.348 mmol, 1.05 당량), 및 TBTU (128 mg, 0.398 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.174 mL, 0.996 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 86%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 695.34, 실측치 695.93.
Figure pct00268
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (80 mg, 0.115 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (96 mg, 0.230 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (75 mg, 0.230 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4-5% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 60%였다.
Figure pct00269
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (65 mg, 0.0691 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (5 mg, 0.207 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 826.41, 실측치 827.01.
구조 17b ((S)-3-(4-(7-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)벤조[b]티오펜-4-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00270
건조 테트라클로로메탄 (20 mL) 중 브로민 (1.877 g, 11.745 mmol, 1.05 당량)의 용액을 0℃에서 테트라클로로메탄 (20 mL) 중 화합물 1 (1.837 g, 11.186 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 1.5시간 동안 적가하였다. 0℃에서 추가로 1시간 후에, 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 콤비플래쉬 ®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하였다. 생성물을 불순물이 존재하는 순수한 헥산으로 용리시켰다.
Figure pct00271
화합물 1 (2.70 g, 11.105 mmol, 1.0 당량)의 디클로로메탄 (20 ml) 용액에, 0℃에서 질소 분위기 하에 삼플루오린화붕소 디메틸 술피드 착물 (3.5 mL, 33.317 mmol, 3.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 NH4Cl 용액 (20 mL)으로 켄칭하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 5% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M-H]- 226.92, 실측치 227.03.
Figure pct00272
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 1 (1.838 g, 8.023 mmol, 1 당량), 및 화합물 2 (1.906 mL, 16.04 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (5.228 g, 16.04 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물 (20 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 2-3% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
Figure pct00273
무수 THF (20 mL) 중 화합물 1 (2.22 g, 6.954 mmol, 1.0 당량)의 용액에 헥산 중 n-BuLi (4.17 mL, 10.43 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 추가로 1시간 동안 유지시켰다. 이어서, 트리이소프로필보레이트 (2.40 mL, 10.43 mmol, 1.5 당량)를 -78℃에서 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, pH를 3으로 조정하였다. 수성 상을 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4-6% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M-H]- 283.07, 실측치 283.20.
Figure pct00274
화합물 1 (400 mg, 0.676 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (288 mg, 1.01 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (10 mg, 0.0135 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (287 mg, 1.352 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (8 mL) 및 물 (2 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 751.31, 실측치 751.84.
Figure pct00275
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 1 (0.50 g, 0.666 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (100 mg)를 첨가하였다. 반응물을 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 3회 반복함). 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 5% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 661.26, 실측치 661.73.
Figure pct00276
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (130 mg, 0.196 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (164 mg, 0.393 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (128 mg, 0.393 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 82%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 906.40, 실측치 906.95.
Figure pct00277
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (147 mg, 0.162 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (12 mg, 0.486 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (2 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 792.33, 실측치 792.89.
구조 18b ((S)-3-(4-(6-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-2-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00278
화합물 1 (150 mg, 0.253 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (71.5 mg, 0.380 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (4 mg, 0.0051 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (107 mg, 0.507 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 655.87.
Figure pct00279
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (160 mg, 0.244 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (204 mg, 0.488 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (160 mg, 0.488 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 30%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 900.44, 실측치 901.01.
Figure pct00280
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (67 mg, 0.0744 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (5 mg, 0.223 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (2 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 10% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 786.37, 실측치 786.86.
구조 19b ((S)-3-(3-(6-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-2-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00281
화합물 1 (150 mg, 0.253 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (71.5 mg, 0.380 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (4 mg, 0.0051 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (107 mg, 0.507 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 655.78.
Figure pct00282
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (104 mg, 0.158 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (132 mg, 0.317 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (103 mg, 0.317 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 900.44, 실측치 901.01.
Figure pct00283
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (125 mg, 0.138 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (10 mg, 0.416 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 12% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 786.37, 실측치 786.86.
구조 20b ((S)-3-(3-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00284
화합물 1 (150 mg, 0.253 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (102 mg, 0.380 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (4 mg, 0.0051 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (107 mg, 0.507 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 655.78.
Figure pct00285
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (160 mg, 0.244 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (204 mg, 0.488 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (159 mg, 0.488 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 900.44, 실측치 901.01.
Figure pct00286
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (125 mg, 0.138 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (10 mg, 0.416 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 8-12% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 786.37, 실측치 786.86.
구조 22b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((S)-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)프로판아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00287
DMF (2 mL) 중 화합물 1 (250 mg, 0.85 mmol), L-알라닌 메틸 에스테르 히드로클로라이드 염 (130 mg, 0.93 mmol), 및 TBTU (327 mg, 1.02 mmol)의 용액에 0℃에서 DIPEA (329 mg, 444 μL, 2.55 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl (수성) 용액 (0.75 mL) 및 탈이온수 (1 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (3 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 3 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 NaHCO3 (수성) 용액 (2 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-5% 메탄올로 분리하였다. 화합물 2의 수율: 294 mg (91%). [M+H] 계산치 C19H29N3O5: 380.46, 실측치: 380.33.
Figure pct00288
0℃에서 THF (4.5 mL) 및 탈이온수 (3 mL) 중 화합물 2 (294 mg, 0.77 mmol)의 용액에 탈이온수 (1 mL) 중 수산화리튬 (56 mg, 2.32 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 40분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 6 M HCl (수성)를 사용하여 pH=3으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 화합물 3을 추가 정제 없이 사용하였다. 화합물 3의 수율: 267 mg (94%). [M+H] 계산치 C18H27N3O5: 366.43, 실측치: 366.19.
Figure pct00289
DMF (3 mL) 중 화합물 3 (267 mg, 0.73 mmol), 화합물 3a (288 mg, 0.80 mmol), 및 TBTU (282 mg, 0.88 mmol)의 용액에 0℃에서 DIPEA (283 mg, 382 μL, 2.19 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (수성) 용액 (1.5 mL) 및 탈이온수 (1.5 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (12 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 12 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 반포화 NH4Cl (수성) 용액 (10 mL), 반포화 NaHCO3 (수성) 용액 (10 mL), 및 포화 NaCl (수성) 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-5% 메탄올로 분리하였다. 화합물 4의 수율: 342 mg (70%). [M+H] 계산치 C38H44N4O7: 669.79, 실측치: 669.74.
Figure pct00290
무수 DMF (1.2 mL) 중 화합물 4 (150 mg, 0.22 mmol) 및 아지도-PEG5-OTs (187 mg, 0.49 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (146 mg, 0.49 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (수성) 용액 (10 mL) 및 탈이온수 (5 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (7.5 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 7.5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-4% 메탄올로 분리하였다. 화합물 5의 수율: 142 mg (69%). [M+H] 계산치 C48H63N7O11: 915.06, 실측치: 914.96.
Figure pct00291
0℃에서 THF (2 mL) 및 탈이온수 (1.5 mL) 중 화합물 5 (142 mg, 0.16 mmol)의 용액에 탈이온수 (0.5 mL) 중 수산화리튬 (11 mg, 0.47 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 6 M HCl (수성)을 사용하여 pH=3으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 8 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 잔류물에 TFA (2.0 mL) 및 물 (100 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 아세토니트릴:톨루엔 [1:1] (2 x 20 mL)과 공증발시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-13% 메탄올로 분리하였다. 구조 22b의 수율: 100 mg (80%). [M+H] 계산치 C42H53N7O9: 800.92, 실측치: 800.81.
구조 23b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((S)-3-메틸-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)부탄아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00292
DMF (2 mL) 중 화합물 1 (250 mg, 0.85 mmol), L-발린 메틸 에스테르 히드로클로라이드 염 (157 mg, 0.93 mmol), 및 TBTU (327 mg, 1.02 mmol)의 용액에 0℃에서 DIPEA (329 mg, 444 μL, 2.55 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl (수성) 용액 (0.75 mL) 및 탈이온수 (1 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (3 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 3 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 NaHCO3 (수성) 용액 (2 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-5% 메탄올로 분리하였다. 화합물 2의 수율: 297 mg (86%). [M+H] 계산치 C21H33N3O5: 408.51, 실측치: 407.87.
Figure pct00293
0℃에서 THF (4.5 mL) 및 탈이온수 (3 mL) 중 화합물 2 (297 mg, 0.73 mmol)의 용액에 탈이온수 (1 mL) 중 수산화리튬 (52 mg, 2.19 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 40분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 6 M HCl (수성)을 사용하여 pH=3으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 화합물 3을 추가 정제 없이 사용하였고, 100% 수율로 가정되었다. [M+H] 계산치 C20H31N3O5: 394.49, 실측치: 393.83.
Figure pct00294
DMF (3 mL) 중 화합물 3 (287 mg, 0.73 mmol), 화합물 3a (287 mg, 0.80 mmol), 및 TBTU (281 mg, 0.88 mmol)의 용액에 0℃에서 DIPEA (283 mg, 382 μL, 2.19 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (수성) 용액 (2.5 mL) 및 탈이온수 (2.5 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (12 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 12 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 반포화 NH4Cl (수성) 용액 (10 mL), 반포화 NaHCO3 (수성) 용액 (10 mL), 및 포화 NaCl (수성) 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-5% 메탄올로 분리하였다. 화합물 4의 수율: 374 mg (74%). [M+H] 계산치 C40H48N4O7: 697.84, 실측치: 697.46.
Figure pct00295
무수 DMF (1.2 mL) 중 화합물 4 (150 mg, 0.215 mmol) 및 아지도-PEG5-OTs (180 mg, 0.43 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (140 mg, 0.43 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (수성) 용액 (10 mL) 및 탈이온수 (5 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (7.5 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 7.5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-4% 메탄올로 분리하였다. 화합물 5의 수율: 134 mg (66%). [M+H] 계산치 C50H67N7O11: 943.12, 실측치: 942.96.
Figure pct00296
0℃에서 THF (2 mL) 및 탈이온수 (1.5 mL) 중 화합물 5 (134 mg, 0.14 mmol)의 용액에 탈이온수 (0.5 mL) 중 수산화리튬 (10 mg, 0.43 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 6 M HCl (수성)을 사용하여 pH=3으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 8 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 잔류물에 TFA (1.9 mL) 및 물 (95 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 아세토니트릴:톨루엔 [1:1] (2 x 20 mL)과 공증발시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-10% 메탄올로 분리하였다. 구조 23b의 수율: 36 mg (30.5%). [M+H] 계산치 C44H57N7O9: 828.97, 실측치 828.90.
구조 24b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((S)-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)-3-페닐프로판아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00297
무수 DMF (4 mL) 중 화합물 1 (200 mg, 0.679 mmol, 1 당량), 화합물 2 (161 mg, 0.747 mmol, 1.2 당량), 및 TBTU (261 mg, 0.815 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.355 mL, 2.038 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 456.24, 실측치 456.12.
Figure pct00298
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 1 (300 mg, 0.658 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (47 mg, 1.975 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 442.23, 실측치 442.08.
Figure pct00299
무수 DMF (5 mL) 중 화합물 1 (290 mg, 0.656 mmol, 1 당량), 화합물 2 (258 mg, 0.722 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (253 mg, 0.788 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.343 mL, 1.970 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 745.35, 실측치 745.63.
Figure pct00300
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (113 mg, 0.151 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (126 mg, 0.303 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (99 mg, 0.303 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 990.49, 실측치 990.87.
Figure pct00301
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (140 mg, 0.141 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (10 mg, 0.424 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 6-10% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 876.42, 실측치 876.88.
구조 25b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((S)-3-(벤질옥시)-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)프로판아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00302
무수 DMF (4 mL) 중 화합물 1 (100 mg, 0.339 mmol, 1 당량), 화합물 2 (92 mg, 0.373 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (131 mg, 0.407 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.178 mL, 1.019 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 486.25, 실측치 486.37.
Figure pct00303
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 1 (160 mg, 0.329 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (23 mg, 0.988 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 472.24, 실측치 472.32.
Figure pct00304
무수 DMF (3 mL) 중 화합물 1 (1600 mg, 0.339 mmol, 1 당량), 화합물 2 (133 mg, 0.373 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (130 mg, 0.815 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.177 mL, 1.018 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 775.36, 실측치 775.87.
Figure pct00305
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (140 mg, 0.180 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (150 mg, 0.361 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (117 mg, 0.361 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 1020.50, 실측치 1020.88.
Figure pct00306
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (170 mg, 0.166 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (12 mg, 0.499 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (4 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 6-10% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 906.43, 실측치 906.95.
구조 27b ((S)-3-(3-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)-3,5-디메틸-1H-피라졸-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00307
무수 DMF (10 mL) 중 화합물 1 (3.0 g, 8.71 mmol, 1 당량) 및 탄산칼륨 (1.806 g, 13.073 mmol, 1.5 당량)의 용액에 실온에서 메틸 아이오다이드 (1.085 mL, 17.431 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물 (20 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 15% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 358.06, 실측치 358.15.
Figure pct00308
무수 DMF (5 mL) 중 화합물 1 (200 mg, 0.558 mmol, 1 당량), 화합물 2 (169 mg, 0.837 mmol, 1,5 당량), 아이오딘화구리 (I) (106 mg, 0.558 mmol, 1.0 당량), 탄산칼륨 (154 mg, 1.116 mmol, 2.0 당량) 및 트랜스-N,N'-디메틸시클로헥산-1,2-디아민 (88 μL, 0.558 mmol, 1.0 당량)의 혼합물을 질소로 3회 다시 채웠다. 혼합물을 120℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, 헥산 중 30-40% 에틸 아세테이트로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 480.24, 실측치 480.43.
Figure pct00309
화합물 1 (30 mg, 0.0626 mmol, 1.0 당량)을 빙조에 의해 냉각시켰다. 디옥산 중 HCl (0.313 mL, 1.25 mmol, 20 당량)을 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 380.19, 실측치 380.33.
Figure pct00310
무수 DMF (1 mL) 중 화합물 1 (10 mg, 0.0571 mmol, 1 당량), 화합물 2 (26 mg, 0.0628 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (22 mg, 0.0685 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.030 mL, 0.171 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 537.26, 실측치 537.41.
Figure pct00311
화합물 1 (30 mg, 0.0626 mmol, 1.0 당량)을 빙조에 의해 냉각시켰다. 디옥산 중 HCl (0.313 mL, 1.25 mmol, 20 당량)을 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 437.21, 실측치 437.31.
Figure pct00312
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (20 mg, 0.0569 mmol, 1 당량), 화합물 2 (26 mg, 0.0626 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (22 mg, 0.0683 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.03 mL, 0.170 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4-5% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 713.36, 실측치 713.85.
Figure pct00313
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 화합물 1 (0.033 g, 0.0463 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 10% Pd/C (20 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 기체의 존재 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 촉매를 셀라이트®를 통한 여과에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 623.31, 실측치 623.56.
Figure pct00314
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (16 mg, 0.0257 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (22 mg, 0.0514 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (17 mg, 0.0514 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 868.45, 실측치 868.96.
Figure pct00315
THF (1 mL) 및 물 (1 mL) 중 화합물 1 (5 mg, 0.0058 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (1 mg, 0.0346 mmol, 6.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (1 mL) 및 DCM (1 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 754.38, 실측치 755.
구조 29b ((S)-3-(4-(3-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-(2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)아세트아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00316
화합물 1 (100 mg, 0.169 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (68 mg, 0.253 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (3 mg, 0.0034 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (72 mg, 0.338 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 655.31, 실측치 656.
Figure pct00317
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (100 mg, 0.152 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (127 mg, 0.305 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (100 mg, 0.305 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 900.44, 실측치 901.
Figure pct00318
THF (1 mL) 및 물 (1 mL) 중 화합물 1 (125 mg, 0.138 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (10 mg, 0.416 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (3 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하였다. 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 786.37, 실측치 787.
구조 30b ((S)-N-(1-아지도-21-(4-(나프탈렌-1-일)페닐)-19,23-디옥소-3,6,9,12,15-펜타옥사-18,22-디아자테트라코산-24-일)-4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미드)의 합성.
Figure pct00319
화합물 1 (100 mg, 0.169 mmol, 1.0 당량), 화합물 2 (43 mg, 0.253 mmol, 1.5 당량), XPhos Pd G2 (3 mg, 0.0034 mmol, 0.02 당량), 및 K3PO4 (72 mg, 0.338 mmol, 2.0 당량)를 둥근 바닥 플라스크에서 혼합하였다. 플라스크를 스크류 마개 격막으로 밀봉한 다음, 배기하고, 질소로 다시 채웠다 (이 과정을 총 3회 반복함). 이어서, THF (5 mL) 및 물 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 질소로 10분 동안 버블링하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 유지시켰다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 639.31, 실측치 640.
Figure pct00320
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 1 (90 mg, 0.140 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (10 mg, 0.422 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 625.29, 실측치 625.36.
Figure pct00321
무수 DMF (3 mL) 중 화합물 1 (88 mg, 0.140 mmol, 1 당량), 화합물 2 (48 mg, 0.154 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (54 mg, 0.169 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.074 mL, 0.422 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4-6% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 913.47, 실측치 913.70.
Figure pct00322
DCM (2 mL) 중 화합물 1 (93 mg, 0.101 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다. 생성물을 디클로로메탄 중 10-12% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 813.42, 실측치 813.68.
구조 31b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((S)-3-히드록시-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)프로판아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00323
무수 DMF (3 mL) 중 화합물 1 (150 mg, 0.509 mmol, 1 당량), 화합물 2 (87 mg, 0.560 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (196 mg, 0.196 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.074 mL, 0.422 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4-6% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 396.21, 실측치 396.17.
Figure pct00324
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 1 (196 mg, 0.495 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (35 mg, 1.486 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 382.19, 실측치 382.13.
Figure pct00325
무수 DMF (5 mL) 중 화합물 1 (189 mg, 0.495 mmol, 1 당량), 화합물 2 (195 mg, 0.545 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (190 mg, 0.595 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.259 mL, 1.486 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4-6% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 685.32, 실측치 685.58.
Figure pct00326
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (75 mg, 0.109 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (91 mg, 0.219 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (71 mg, 0.219 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 29%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 930.45, 실측치 930.90.
Figure pct00327
THF (1 mL) 및 물 (1 mL) 중 화합물 1 (30 mg, 0.0323 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (2.3 mg, 0.0968 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (2 mL) 및 DCM (1 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다. 생성물을 디클로로메탄 중 12-15% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 816.39, 실측치 816.92.
구조 32b ((S)-4-(((S)-1-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-2-카르복시에틸)아미노)-3-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)-4-옥소부탄산)의 합성.
Figure pct00328
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (100 mg, 0.404 mmol, 1 당량), 화합물 2 (160 mg, 0.444 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (155 mg, 0.485 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.211 mL, 1.213 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 551.23, 실측치 551.45.
Figure pct00329
화합물 1 (0.164 g, 0.297 mmol, 1.0 당량)을 빙조에 의해 냉각시켰다. 디옥산 중 HCl (0.745 mL, 2.978 mmol, 10 당량)을 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 451.18, 실측치 451.35.
Figure pct00330
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (100 mg, 0.404 mmol, 1 당량), 화합물 2 (160 mg, 0.444 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (155 mg, 0.485 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.211 mL, 1.213 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-5% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 727.33, 실측치 727.53.
Figure pct00331
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (150 mg, 0.206 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (172 mg, 0.412 mmol, 2 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (134 mg, 0.412 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 29%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 940.45, 실측치 940.71.
Figure pct00332
THF (1 mL) 및 물 (1 mL) 중 화합물 1 (30 mg, 0.0344 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (2.5 mg, 0.103 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (2 mL) 및 DCM (1 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다. 생성물을 디클로로메탄 중 20% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 844.38, 실측치 844.56.
구조 33b ((S)-3-((S)-6-아미노-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)헥산아미도)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)프로판산)의 합성.
Figure pct00333
무수 DMF (3 mL) 중 화합물 1 (150 mg, 0.509 mmol, 1 당량), 화합물 2 (166 mg, 0.560 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (196 mg, 0.611 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.266 mL, 1.528 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-5% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 537.32, 실측치 537.23.
Figure pct00334
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 1 (230 mg, 0.428 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (31 mg, 1.285 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 523.31, 실측치 523.55.
Figure pct00335
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (230 mg, 0.440 mmol, 1 당량), 화합물 2 (173 mg, 0.484 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (170 mg, 0.528 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.230 mL, 1.320 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 4-6% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 826.43, 실측치 826.65.
Figure pct00336
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (150 mg, 0.181 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (113 mg, 0.272 mmol, 1.5 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (118 mg, 0.363 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 66%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 1071.57, 실측치 1071.89.
Figure pct00337
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (130 mg, 0.121 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (8.7 mg, 0.364 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (3 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다. 생성물을 디클로로메탄 중 20% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 857.45, 실측치 857.64.
구조 34b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((S)-4-메틸-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)펜탄아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00338
무수 DMF (3 mL) 중 화합물 1 (150 mg, 0.509 mmol, 1 당량), 화합물 2 (101 mg, 0.560 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (196 mg, 0.611 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.266 mL, 1.528 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 3-5% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 422.26, 실측치 422.36.
Figure pct00339
THF (3 mL) 및 H2O (3 mL) 중 화합물 1 (186 mg, 0.441 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (31 mg, 1.323 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 408.24, 실측치 408.23.
Figure pct00340
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (168 mg, 0.412 mmol, 1 당량), 화합물 2 (162 mg, 0.453 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (159 mg, 0.494 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.215 mL, 1.237 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하고, DCM 중 2-4% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 711.37, 실측치 711.69.
Figure pct00341
무수 DMF (2 mL) 중 화합물 1 (150 mg, 0.206 mmol, 1 당량) 및 아지도-PEG5-OTs (132 mg, 0.317 mmol, 1.5 당량)의 용액에 실온에서 Cs2CO3 (137 mg, 0.422 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 정제하고, DCM 중 3-4% 메탄올로 용리시켰다. 수율은 82%였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 956.51, 실측치 956.64.
Figure pct00342
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 화합물 1 (160 mg, 0.167 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 수산화리튬 (12 mg, 0.502 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. pH를 HCl (6N)에 의해 3.0으로 조정하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. TFA (3 mL) 및 DCM (2 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발기에 의해 제거하고, 생성물을 콤비플래쉬®에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 분리하였다. 생성물을 디클로로메탄 중 8-10% 메탄올로 용리시켰다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+ 842.44, 실측치 842.67.
구조 35b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((2S,3R)-3-히드록시-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)부탄아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00343
L-트레오닌-OMe HCl (1.000 g, 5.896 mmol, 1.3 당량)이 들은 바이알에 화합물 1 (1.335 g, 4.535 mmol, 1 당량), 디메틸아미노피리딘 (0.277 g, 2.268 mmol, 0.5 당량), 및 CH2Cl2 (13.3 mL)를 첨가하였다. 혼합물에 디이소프로필아민 (2.054 mL, 11.792 mmol, 2.6 당량)을 첨가하고, 생성된 용액을 0℃로 냉각시켰다. EDC·HCl (1.130 g, 5.896 mmol, 1.3 당량)을 첨가하고, 반응물이 0℃에서 30분 동안 교반되도록 한 후, 실온으로 가온하였다. 16시간 후 HPLC에 의해 반응이 완결된 것으로 결정되었고, 이를 분리 깔때기로 옮기고, 66% 포화 NH4Cl (4 x 20 mL) 및 포화 NH4Cl (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 점성 오일 (1.7588 g, 94.7%)을 수득하였고, 이것으로 직접 후속 단계를 수행하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 410.22, 실측치 410.03
Figure pct00344
화합물 1을 MeOH (4.5 mL) 중에 용해시키고, 혼합물에 LiOH의 2.0 M 용액 (9.1 mL)을 첨가하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반하고, 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 이어서, 혼합물을 20% KHSO4로 pH = 4로 산성화시키고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 3을 고체 (1.5095 g, 88.9% 수율)로서 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M-H]-: 394.21, 실측치 394.37.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.26 (d, 1H), 7.27 - 7.24 (m, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.95 (ddd, 1H), 4.60 (dd, 1H), 4.39 (qd, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), ), 2.41 - 2.23 (m, 2H), 1.98 - 1.84 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.19 (d, 3H).
Figure pct00345
바이알에 화합물 1 (0.200 g, 0.506 mmol, 1 당량), TBTU (0.195 g, 0.607 mmol, 1.2 당량), DMF (2.0 mL) 및 DIEA (0.264 mL, 1.517 mmol, 3.0 당량)를 채웠다. 반응물을 2분 동안 교반한 후, 2 (0.253 g, 0.708 mmol, 1.4 당량)를 첨가하였다. 완결된 후, 반응물을 포화 수성 NaHCO3 (10 mL)으로 희석하고, EtOAc (3 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 CH2Cl2 중 0-20% MeOH로 용리시키면서 정제하여 생성물 (150.8 mg, 42.7% 수율)을 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 699.33, 실측치 699.53
Figure pct00346
화합물 1 (0.151 g, 0.216 mmol, 1 당량)이 들은 바이알에 Cs2CO3 (0.106 g, 0.324 mmol, 1.5 당량) 및 DMF (1.9 mL)를 첨가하였다. N3-PEG5-OTs (0.135 g, 0.324 mmol, 1.5 당량)를 혼합물에 첨가하고, 반응물을 40℃에서 교반하였다. 완결된 후, 반응물을 EtOAc (10 mL), 포화 수성 NaHCO3 (5 mL) 및 물 (5 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 총 3 x 10 mL로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 CH2Cl2 중 0-20% MeOH로 용리시키면서 정제하여 생성물 (103 mg, 50.4% 수율)을 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 944.47, 실측치 944.56
Figure pct00347
화합물 1 (0.103 g, 0.109 mmol, 1 당량)이 들은 바이알에 MeOH (1.5 mL) 및 2.0 M LiOH (2.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 교반한 다음 농축시켜 MeOH를 제거하고, 20% KHSO4로 pH = 2로 산성화시켰다. 혼합물에 EtOAc (5 mL) 및 물 (4 mL)을 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc (3x5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 생성물 (0.0879 g, 86.9%)을 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 930.45, 실측치 930.56.
Figure pct00348
화합물 1 (0.0879 g, 0.0945 mmol, 1 당량)이 들은 바이알에 CH2Cl2 (0.3 mL) 및 트리플루오로아세트산 (0.64 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 교반하였다. 완결된 후 (>97% 생성물), 반응물을 농축시키고, 톨루엔 (3 mL) 및 이어서 아세토니트릴 (2x3 mL)과 공증발시켰다. 생성물을 추가의 TFA로 수득하였다 (115.6 mg).
구조 36b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((2S,3S)-3-메틸-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)펜탄아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00349
L-이소류신-OMe HCl (1.000 g, 5.505 mmol, 1.3 당량)이 들은 바이알에 화합물 1 (1.246 g, 4.234 mmol, 1 당량), 디메틸아미노피리딘 (0.259 g, 2.117 mmol, 0.5 당량), 및 CH2Cl2 (12.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물에 디이소프로필아민 (2.054 mL, 11.792 mmol, 2.6 당량)을 첨가하고, 생성된 용액을 0℃로 냉각시켰다. EDC·HCl (1.055 g, 5.505 mmol, 1.3 당량)을 첨가하고, 반응물이 0℃에서 30분 동안 교반되도록 한 후, 실온으로 가온하였다. 16시간 후 HPLC에 의해 반응이 완결된 것으로 결정되었고, 이를 분리 깔때기로 옮기고, 66% 포화 NH4Cl (4 x 20 mL) 및 포화 NH4Cl (1x20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 점성 오일 (1.8634 g, 습윤, CH2Cl2 포함)을 수득하였고, 이것으로 직접 후속 단계를 수행하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 422.26, 실측치 422.00.
Figure pct00350
화합물 1을 MeOH (4.2 mL) 중에 용해시키고, 혼합물에 LiOH의 2.0 mL 용액 (8.5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반하고, 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 이어서, 혼합물을 20% KHSO4로 pH = 4로 산성화시키고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 생성물을 점성 오일 (1.6123 g, 93.4% 수율, 2 단계에 걸침)로서 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M-H]-: 406.24, 실측치 406.43.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.23 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.95 - 6.88 (m, 1H), 4.58 (dd, 1H), 3.99 - 3.83 (m, 2H), 2.35 - 2.34 (s, 3H), 2.30 (hept, 2H), 2.00 - 1.84 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 0.91 (m, 6H).
Figure pct00351
바이알을 화합물 1 (0.200 g, 0.491 mmol, 1 당량), TBTU (0.189 g, 0.589 mmol, 1.2 당량), DMF (2.0 mL) 및 DIEA (0.256 mL, 1.472 mmol, 3.0 당량)로 채웠다. 반응물을 2분 동안 교반한 후, 2 (0.246 g, 0.687 mmol, 1.4 당량)를 첨가하였다. 완결된 후, 반응물을 포화 수성 NaHCO3 (10 mL)으로 희석하고, EtOAc (3x5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 CH2Cl2 중 0-20% MeOH로 용리시키면서 정제하여 생성물 (0.3024 mg, 86.7% 수율)을 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 711.37, 실측치 711.51.
Figure pct00352
화합물 1 (0.170 g, 0.238 mmol, 1 당량)이 들은 바이알에 Cs2CO3 (0.116 g, 0.358 mmol, 1.5 당량) 및 DMF (2.1 mL)를 첨가하였다. N3-PEG5-OTs (0.149 g, 0.358 mmol, 1.5 당량)를 혼합물에 첨가하고, 반응물을 40℃에서 교반하였다. 완결된 후, 반응물을 EtOAc (10 mL), 포화 수성 NaHCO3 (5 mL) 및 물 (5 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 총 3x10 mL로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 CH2Cl2 중 0-20% MeOH로 용리시키면서 정제하여 생성물 (0.1645 g, 72.1% 수율)을 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 956.51, 실측치 956.78.
Figure pct00353
화합물 1 (0.164 g, 0.172 mmol, 1 당량)이 들은 바이알에 MeOH (2.0 mL) 및 2.0 M LiOH (3.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 교반하고, HPLC에 의해 모니터링하였다. 물질을 용해시키고 반응을 구동시키는데 추가의 LiOH (33 mg, 1.38 mmol, 8 당량), 물 (5 mL) 및 MeOH (4 mL)가 필요하였다. HPLC는 2개의 신규 피크의 형성을 나타내었고, 이는 부분입체이성질체인 것으로 생각되었다. >94% 전환율에 도달하면, 반응물을 농축시켜 MeOH를 제거하고, 20% KHSO4로 pH = 2로 산성화시켰다. 혼합물에 EtOAc (5 mL) 및 물 (4 mL)을 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc (4x5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 생성물 (0.1417 g, 87.4%)을 수득하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 942.49, 실측치 942.56.
Figure pct00354
화합물 1 (0.1417 g, 0.1504 mmol, 1 당량)이 들은 바이알에 CH2Cl2 (0.5 mL) 및 트리플루오로아세트산 (1.0 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 교반하였다. 완결된 후 (>97% 생성물), 반응물을 농축시키고, 톨루엔 (3 mL) 및 이어서 아세토니트릴 (2x3 mL)과 공증발시켰다. 생성물을 추가의 TFA로 수득하였다 (150.3 mg). 2개의 피크는 반응 내내 출발 물질 및 생성물 둘 다에 대해 존재하였다.
LC-MS: 계산치 [M+H]+: 842.44, 실측치 842.56.
둘 다의 생성물 피크는 동일한 질량을 갖는 것으로 확인되었고, 이는 부분입체이성질체의 존재를 나타낸다.
구조 37b ((S)-3-(4-(4-((14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)나프탈렌-1-일)페닐)-3-((R)-3-메틸-2-(4-((4-메틸피리딘-2-일)아미노)부탄아미도)부탄아미도)프로판산)의 합성.
Figure pct00355
무수 DMF (3 mL) 중 화합물 1 (150 mg, 0.509 mmol, 1 당량), 화합물 2 (94 mg, 0.560 mmol, 1.1 당량), 및 TBTU (196 mg, 0.611 mmol, 1.2 당량)의 용액에 0℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.266 mL, 1.528 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 콤비플래쉬에 의해 분리하고, DCM 중 2-3% 메탄올로 용리시켰다.
수율: 205 mg (99%).
Figure pct00356
THF (5 mL) 및 H2O (5 mL) 중 화합물 1 (207 mg, 0.508 mmol, 1 당량)의 용액에 0℃에서 수산화리튬 (36 mg, 1.523 mmol, 3 당량)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HCl (6 N)에 의해 pH 3.0으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다.
수율: 180 mg (91%).
Figure pct00357
DMF (2.5 mL) 중 화합물 3 (180 mg, 0.46 mmol), 화합물 3a (180 mg, 0.50 mmol), 및 TBTU (176 mg, 0.55 mmol)의 용액에 0℃에서 DIPEA (177 mg, 239 μL, 1.37 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (수성) 용액 (1.75 mL) 및 탈이온수 (1.75 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (8 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 8 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 반포화 NH4Cl (수성) 용액 (6 mL) 및 반포화 NaHCO3 (수성) 용액 (6 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-5% 메탄올로 분리하였다. 화합물 4의 수율: 295 mg (92%). [M+H]+ 계산치 C40H48N4O7: 697.84, 실측치: 697.82.
무수 DMF (2.5 mL) 중 화합물 4 (200 mg, 0.29 mmol) 및 아지도-PEG5-OTs (240 mg, 0.57 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (187 mg, 0.57 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (수성) 용액 (15 mL) 및 탈이온수 (7.5 mL)로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-5% 메탄올로 분리하였다. 화합물 5의 수율: 97 mg (36%). [M+H]+ 계산치 C50H67N7O11: 943.15, 실측치: 942.96.
THF (1.5 mL) 및 탈이온수 (1 mL) 중 화합물 5 (94 mg, 0.10 mmol)의 용액에 탈이온수 (0.5 mL) 중 수산화리튬 (7.2 mg, 0.30 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 6 M HCl (수성)을 사용하여 pH=3으로 산성화시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 잔류물에 TFA (1.34 mL) 및 물 (67 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 아세토니트릴:톨루엔 [1:1] (2 x 20 mL)과 공증발시켰다. 조 혼합물을 콤비플래쉬에 의해 고정상으로서 실리카 겔을 사용하여 DCM 중 0-10% 메탄올로 분리하였다. 구조 37b의 수율: 44 mg (53%). [M+H]+ 계산치 C44H57N7O9: 828.97, 실측치: 828.63.
실시예 2. 세자리 αvβ6 인테그린 리간드의 합성 및 화물 분자 (RNAi 작용제)에의 αvβ6 인테그린 리간드의 접합.
αvβ6 인테그린 리간드는 1개 이상의 표적화된 유전자의 발현을 억제하는데 유용한 1개 이상의 RNAi 작용제에 접합될 수 있다. αvβ6 인테그린 리간드는 표적화된 세포 및/또는 조직으로의 RNAi 작용제의 전달을 용이하게 한다. 상기 실시예 1은 본원에 개시된 특정 αvβ6 인테그린 리간드의 합성을 기재하고 있다. 하기는 본원에 제시된 비제한적인 실시예에 예시된 특정 αvβ6 인테그린 리간드-RNAi 작용제 접합체의 합성에 대한 일반적인 절차를 기재한다.
A. RNAi 작용제의 합성. RNAi 작용제는 관련 기술분야에 일반적으로 공지된 방법을 사용하여 합성할 수 있다. 본원에 제시된 실시예에 예시된 RNAi 작용제의 합성을 위해, RNAi 작용제의 센스 및 안티센스 가닥을 올리고뉴클레오티드 합성에 사용되는 고체 상 상에서의 포스포르아미다이트 기술에 따라 합성하였다. 규모에 따라, 머메이드96E(MerMade96E)® (바이오오토메이션(Bioautomation)), 머메이드12® (바이오오토메이션), 또는 OP 파일럿 100(OP Pilot 100) (지이 헬스케어(GE Healthcare))를 사용하였다. 합성은 제어된 세공 유리 (CPG, 500 Å 또는 600Å, 미국 펜실베니아주 아스톤 소재의 프라임 신테시스(Prime Synthesis)로부터 입수함)로 제조된 고체 지지체 상에서 수행하였다. 모든 RNA 및 2'-변형된 RNA 포스포르아미다이트는 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific) (미국 위스콘신주 밀워키)에서 구입하였다. 구체적으로, 하기 2'-O-메틸 포스포르아미다이트를 사용하였다: (5'-O-디메톡시트리틸-N6-(벤조일)-2'-O-메틸-아데노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미다이트, 5'-O-디메톡시-트리틸-N4-(아세틸)-2'-O-메틸-시티딘-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필-아미노) 포스포르아미다이트, (5'-O-디메톡시트리틸-N2-(이소부티릴)-2'-O-메틸-구아노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미다이트, 및 5'-O-디메톡시트리틸-2'-O-메틸-우리딘-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미다이트. 2'-데옥시-2'-플루오로-포스포르아미다이트는 2'-O-메틸 RNA 아미다이트와 동일한 보호기를 보유하였다. 5'-디메톡시트리틸-2'-O-메틸-이노신-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미다이트는 글렌 리서치(Glen Research) (버지니아주)에서 구입하였다. 역전된 무염기성 (3'-O-디메톡시트리틸-2'-데옥시리보스-5'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필아미노) 포스포르아미다이트는 켐진스(ChemGenes) (미국 매사추세츠주 윌밍톤)에서 구입하였다. 하기 UNA 포스포르아미다이트를 사용하였다: 5'-(4,4'-디메톡시트리틸)-N6-(벤조일)-2',3'-세코-아데노신, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N-디이소프로필)]-포스포르아미다이트, 5'-(4,4'-디메톡시트리틸)-N-아세틸-2',3'-세코-시토신, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N-디이소-프로필)]-포스포르아미다이트, 5'-(4,4'-디메톡시트리틸)-N-이소부티릴-2',3'-세코-구아노신, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N-디이소프로필)]-포스포르아미다이트, 및 5'-(4,4'-디메톡시-트리틸)-2',3'-세코-우리딘, 2'-벤조일-3'-[(2-시아노에틸)-(N,N- 디이소-프로필)]-포스포르아미다이트. TFA 아미노연결 포스포르아미다이트도 또한 상업적으로 구입하였다 (써모피셔).
일부 예에서, 본원에 개시된 αvβ6 인테그린 리간드는, 성분을 트리-알킨 기를 포함하는 스캐폴드에 연결시킴으로써, RNAi 작용제에 접합된다. 일부 예에서, 트리-알킨 기는 RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 말단 단부에 부가될 수 있는 트리-알킨-함유 포스포르아미다이트를 사용함으로써 부가된다. 본원의 특정 실시예에 제시된 RNAi 작용제와 관련하여 사용되는 경우, 트리-알킨-함유 포스포르아미다이트는 무수 디클로로메탄 또는 무수 아세토니트릴 (50 mM) 중에 용해시키는 한편, 다른 모든 아미다이트는 무수 아세토니트릴 (50 mM) 중에 용해시키고, 분자체 (3Å)를 첨가하였다. 5-벤질티오-1H-테트라졸 (BTT, 아세토니트릴 중 250 mM) 또는 5-에틸티오-1H-테트라졸 (ETT, 아세토니트릴 중 250 mM)을 활성화제 용액으로서 사용하였다. 커플링 시간은 10분 (RNA), 90초 (2' O-Me), 및 60초 (2' F)였다. 포스포로티오에이트 연결을 도입하기 위해, 무수 아세토니트릴 중 3-페닐 1,2,4-디티아졸린-5-온 (POS, 미국 매사추세츠주 레민스터 소재의 폴리오르그, 인크.(PolyOrg, Inc.)로부터 입수함)의 100 mM 용액을 사용하였다.
대안적으로, 포스포르아미다이트 접근법을 사용하는 대신 트리-알킨 스캐폴드를 통해 αvβ6 인테그린 리간드를 RNAi 작용제에 접합시키는 경우, 트리-알킨-함유 화합물이 합성 후에 도입될 수 있다 (예를 들어, 하기 섹션 E 참조). 본원에 제시된 특정 실시예에 제시된 RNAi 작용제와 관련하여 사용되는 경우, 센스 가닥의 5' 단부에 트리-알킨 기를 합성 후 부착시킬 때, 센스 가닥의 5' 말단 뉴클레오티드는 트리-알킨-함유 스캐폴드에 대한 부착이 용이하도록 5' 단부에 1급 아민을 포함하는 뉴클레오티드로 관능화된다. TFA 아미노연결 포스포르아미다이트를 무수 아세토니트릴 (50 mM) 중에 용해시키고, 분자체 (3Å)를 첨가하였다. 5-벤질티오-1H-테트라졸 (BTT, 아세토니트릴 중 250 mM) 또는 5-에틸티오-1H-테트라졸 (ETT, 아세토니트릴 중 250 mM)을 활성화제 용액으로서 사용하였다. 커플링 시간은 10분 (RNA), 90초 (2' O-Me), 및 60초 (2' F)였다. 포스포로티오에이트 연결을 도입하기 위해, 무수 아세토니트릴 중 3-페닐 1,2,4-디티아졸린-5-온 (POS, 미국 매사추세츠주 레민스터 소재의 폴리오르그, 인크.(PolyOrg, Inc.)로부터 입수함)의 100 mM 용액을 사용하였다.
B. 지지체 결합된 올리고머의 절단 및 탈보호. 고체상 합성을 최종화한 후, 건조된 고체 지지체를 1:1 부피 용액의 물 중 40 중량% 메틸아민 및 28% 내지 31% 수산화암모늄 용액 (알드리치(Aldrich))으로 1.5시간 동안 30℃에서 처리하였다. 용액을 증발시키고, 고체 잔류물을 물 중에 재구성하였다 (하기 참조).
C. 정제. 조 올리고머를 음이온 교환 HPLC에 의해 TSK겔 슈퍼Q-5PW 13μm 컬럼 및 시마즈(Shimadzu) LC-8 시스템을 사용하여 정제하였다. 완충제 A는 20 mM 트리스, 5 mM EDTA, pH 9.0이었고, 20% 아세토니트릴을 함유하였으며, 완충제 B는 1.5 M 염화나트륨이 첨가된 완충제 A와 동일하였다. 260 nm에서의 UV 트레이스를 기록하였다. 적절한 분획을 풀링한 후, 100mM 중탄산암모늄, pH 6.7 및 20% 아세토니트릴 또는 여과수의 구동 완충제와 함께 세파덱스 G-25 파인(Sephadex G-25 fine)이 패킹된 지이 헬스케어 XK 16/40 칼럼을 사용하여 크기 배제 HPLC 상에서 전개시켰다.
D. 어닐링. 1x PBS (포스페이트 완충 염수, 1x, 코닝(Corning), 셀그로(Cellgro)) 중에서 등몰 RNA 용액 (센스 및 안티센스)을 조합함으로써 상보적 가닥을 혼합하여 RNAi 작용제를 형성하였다. 일부 RNAi 작용제를 동결건조시키고, -15 내지 -25 ℃에서 저장하였다. 1x PBS 중에서 UV-Vis 분광계 상에서 용액 흡광도를 측정함으로써 듀플렉스 농도를 결정하였다. 그 후, 260 nm에서의 용액 흡광도에 전환 인자 및 희석 배율을 곱하여 듀플렉스 농도를 결정하였다. 사용된 전환 인자는 0.037 mg/(mL·cm)이거나, 또는 대안적으로 일부 실험의 경우, 전환 인자는 실험적으로 결정된 흡광 계수로부터 계산되었다.
E. 트리-알킨 스캐폴드의 접합. 어닐링 전 또는 후에, RNAi 작용제의 5' 또는 3' 아민 관능화 센스 가닥을 트리-알킨 스캐폴드에 접합시킬 수 있다. 본원에 개시된 구축물을 형성하는데 사용될 수 있는 예시적인 트리-알킨 스캐폴드 구조는 다음을 포함한다:
Figure pct00358
다음은 어닐링된 듀플렉스에의 트리-알킨 스캐폴드의 접합을 기재한다: 아민 관능화된 듀플렉스를 90% DMSO/10% H2O 중에 ~50-70 mg/mL로 용해시켰다. 40 eq 트리에틸아민에 이어서 3 eq 트리-알킨-PNP를 첨가하였다. 완결되면, 접합체를 1x 포스페이트 완충 염수/아세토니트릴 (1:14 비)의 용매 시스템에서 2회 침전시키고, 건조시켰다.
F. αvβ6 인테그린 리간드의 접합. 어닐링 전 또는 후에, 5' 또는 3' 세자리 알킨 관능화된 센스 가닥을 αvβ6 인테그린 리간드에 접합시켰다. 하기 실시예는 어닐링된 듀플렉스에의 αvβ6 인테그린 리간드의 접합을 기재한다: 0.5M 트리스(3-히드록시프로필트리아졸릴메틸)아민 (THPTA), 0.5M Cu(II) 술페이트 펜타히드레이트 (Cu(II)SO4 · 5 H2O) 및 나트륨 아스코르베이트 2M 용액의 원액을 탈이온수 중에서 제조하였다. αvβ6 인테그린 리간드의 DMSO 중 75 mg/mL 용액을 제조하였다. 트리-알킨 관능화된 듀플렉스 (3mg, 75μL, 탈이온수 중 40mg/mL, ~15,000 g/mol)를 함유하는 1.5 mL 원심분리 튜브에, 25 μL의 1M Hepes pH 8.5 완충제를 첨가하였다. 볼텍싱 후, DMSO 35 μL를 첨가하고, 용액을 볼텍싱하였다. αvβ6 인테그린 리간드를 반응물 (6 eq/듀플렉스, 2 eq/알킨, ~15μL)에 첨가하고, 용액을 볼텍싱하였다. pH 시험지를 사용하여 pH를 체크하고, pH ~8인 것을 확인하였다. 별개의 1.5 mL 원심분리 튜브에서, 0.5M THPTA 50 μL를 0.5M Cu(II)SO4 · 5 H2O 10uL와 혼합하고, 볼텍싱하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 5분 후, THPTA/Cu 용액 (7.2 μL, 6 eq 5:1 THPTA:Cu)을 반응 바이알에 첨가하고, 볼텍싱하였다. 그 직후에, 2M 아스코르베이트 (5 μL, 듀플렉스당 50 eq, 알킨당 16.7)를 반응 바이알에 첨가하고, 볼텍싱하였다. 반응이 완결되면 (전형적으로 0.5-1시간 내에 완결됨), 비-변성 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 반응물을 즉시 정제하였다.
G. 시스테인 링커 상의 티올 기의 관능화. 일부 예에서, RNAi 작용제에의 αvβ6 인테그린 리간드의 접합을 용이하게 하기 위해 시스테인 링커를 사용할 수 있다. 어닐링 전 또는 후에, 5' 또는 3' 세자리 알킨-Cys(Stbu)-PEG2 관능화된 센스 가닥을 말레이미드-함유 모이어티로 관능화하거나, 또는 하기 구조에 제시된 바와 같이 환원시켜 유리 티올로서 남길 수 있다:
Figure pct00359
하기 실시예는 트리-알킨-Cys(Stbu)-PEG2-듀플렉스의 N-에틸 말레이미드에 의한 변형을 기재한다: 트리-알킨-Cys(Stbu)-PEG2-듀플렉스 (35 mg)를 500 μL 탈이온 H2O 중에 용해시켰다. HEPES 완충제 (1M, pH 8.5, 82 μL)를 반응물에 첨가하고, 용액을 볼텍싱하였다. 1 M 디티오트레이톨 용액 (DTT, 100 eq, 236 μL)을 첨가하고, 용액을 볼텍스 진탕기 상에 3시간 동안 두었다. 변성 RP-HPLC에 의해 디술피드의 환원을 확인한 후, 접합체를 1x 포스페이트 완충 염수/아세토니트릴 (1:14 비)의 용매 시스템에서 3회 침전시켰다. 침전된 펠릿을 0.5 mL의 0.1 M HEPES, pH 6.5 중에 재구성하고, N-에틸 말레이미드 (3 mg, 10 eq)를 용액에 첨가하고, 볼텍스 혼합기 상에 ~15분 동안 두었다. 반응의 완결 후, 접합체를 1x 포스페이트 완충 염수/아세토니트릴 (1:14 비)의 용매 시스템에서 3회 침전시키고, 탈염시키고, 건조시켰다.
실시예 3. αvβ6 인테그린 리간드 결합 활성.
하기 표 1에 보고된 바와 같이, 구조 1 및 2의 αvβ6 인테그린 리간드에 대해 IC50 결합 데이터를 수득하였다:
표 1. IC50 결합 활성.
Figure pct00360
관련 기술분야에서 전형적으로 사용되고 공지된 조건 하에 아지드-관능화된 구조 (즉, 화학식 1b 및 2b)에 대해 IC50을 조사하였다. 상기 표 1에 제시된 바와 같이, 구조 1 및 2는 αvβ6 인테그린에 대해 선택적 결합을 나타내었다.
실시예 4. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는 RNAi 작용제를, 관련 기술분야에 공지되고 본원의 실시예 2에 제시된 바와 같은 올리고뉴클레오티드 합성에서 통상적으로 사용되는 일반적 절차에 따라, 고체 상 상에서의 포스포르아미다이트 기술에 따라 합성하였다. RNAi 작용제는 아밀로리드-감수성 상피 나트륨 채널의 알파 서브유닛 (통상적으로 알파-ENaC 또는 SCNN1A로 지칭됨)을 발현하는 유전자에 적어도 부분적으로 상보적인 핵염기 서열을 갖는 안티센스 가닥을 포함하였다. 알파-ENaC RNAi 작용제는, 알파-ENaC의 메신저 RNA (mRNA) 전사체의 번역을 서열 특이적 방식으로 저하 또는 억제시켜 알파-ENaC 유전자의 발현을 억제할 수 있도록 설계하였다. 본 실시예에 사용된 RNAi 작용제 (AD04835)는 변형된 뉴클레오티드 및 1개 초과의 비-포스포디에스테르 연결로 구성되었고, 하기 뉴클레오티드 서열을 포함하였다:
센스 가닥 서열 (5' → 3'):
(NH2-C6)sgscugugcaAfCfCfagaacaaauas(invAb) (서열식별번호: 1);
안티센스 가닥 서열 (5' → 3')
cPrpusAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsc (서열식별번호: 2),
여기서 (invAb)는 역전된 (3'-3' 연결된) 무염기성 데옥시리보뉴클레오티드를 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고; a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘을 나타내고 (예를 들어, 표 A 참조); (NH2-C6)는 목적하는 바와 같은 표적화 리간드 접합을 용이하게 하는 C6 말단 아민을 나타낸다 (예를 들어, 표 A 참조).
관련 기술분야의 통상의 기술자가 분명하게 이해할 바와 같이, 본원에 개시된 변형된 뉴클레오티드 서열에 제시된 바와 같은 포스포로티오에이트 연결의 포함이 올리고뉴클레오티드에 전형적으로 존재하는 포스포디에스테르 연결을 대체하는 경우를 제외하고, 뉴클레오티드 단량체는 표준 포스포디에스테르 연결에 의해 연결된다.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그-돌리 래트에게 마이크로스프레이어 장치 (펜 센츄리(Penn Century), 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 200 마이크로리터의 용량을 기관내로 투여하였고, 이는 하기 투여 군을 포함하였다:
(1) 물 비히클 중 5% 덱스트로스 (D5W);
(2) 물 중 5% 덱스트로스 (d5w) 중에 제제화된, 리간드를 갖지 않는 알파-ENaC RNAi 작용제 (AD04835) ("네이키드 RNAi 작용제") 3.0 mg/kg; 또는
(3) d5w 중에 제제화된, 구조 1의 세자리 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제 (AD04835) 3.0 mg/kg.
동일한 알파-ENaC RNAi 작용제를 군 2 및 3에 사용하였다. 군 3의 경우, RNAi 작용제의 센스 가닥의 5' 말단 단부에 존재하는 말단 아민 (NH2-C6)을 3개의 말단 알킨 기를 포함하는 스캐폴드에 후속 접합시켰다. 이어서, 알킨 기를 구조 1b 상에 존재하는 아지드 관능기에 접합시켜, 구조 1의 세자리 αvβ6 인테그린 리간드를 형성하였다. 일반적 합성 절차는 상기 실시예 2에 기재되어 있다.
군당 4마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제5일에 안락사시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC의 mRNA 존재량을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 2. 실시예 4의 대조군에 대해 정규화된 mRNA의 상대 알파-ENaC 발현.
Figure pct00361
상기 표 2에 제시된 바와 같이, 알파-ENaC RNAi 작용제에 접합된 세자리 형태의 구조 1의 αvβ6 인테그린 리간드 (즉, 군 3)는, 생체내에서, 어떠한 리간드도 없는 네이키드 RNAi 작용제 (즉, 군 2) (64% 녹다운) 및 비히클 대조군과 비교하여, 알파-ENaC mRNA의 증가된 상대 녹다운 (대략 81% 녹다운)을 나타내었다.
실시예 5. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
하기 실시예에서, αvβ6 인테그린을 통한 관심 세포로의 화물 분자의 전달을 시험하기 위해 화물 분자로서 다양한 RNAi 작용제를 사용하였다. 본원에 사용된 특정 RNAi 작용제는 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 US 62/679,549에 기재되어 있는 것이다.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 3. 실시예 5에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00362
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 이어서, 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 시스테인-n-에틸-말레이미드 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다. 실시예 5의 RNAi 작용제-αvβ6 인테그린 리간드 접합체의 경우, RNAi 작용제 뿐만 아니라 스캐폴드/링커 구조는 각각의 군 2-7에 대한 것과 일치하였다. 따라서 군 2 내지 7의 경우 유일한 변수는 사용된 특이적 αvβ6 인테그린 리간드 (각각 세자리 형태)였다. 실시예 5의 RNAi 작용제-αvβ6 인테그린 리간드 접합체는 하기 제시된 구조를 가졌다:
Figure pct00363
여기서,
Figure pct00364
는 RNAi 작용제를 나타내고, "avb6 리간드"는 각각의 리간드 구조를 나타낸다. 본 실시예 (AD04835)에서 사용된 RNAi 작용제의 구조는 상기 실시예 4에 제시되어 있다.
각각의 군에서 5마리의 래트에게 투여하였다 (n=5). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 4. 실시예 5에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00365
상기 표 4에 제시된 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 대조군과 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타내었다. 예를 들어, 군 6 (AD04835-세자리-구조 6.1)은 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 65% 감소 (0.351)를 나타내었고; 군 2 (AD04835-세자리-구조 2)는 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 46% 감소 (0.543)를 나타내었고; 군 4 (AD04835-세자리-구조 5.2)는 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 48% 감소 (0.522)를 나타내었다.
실시예 6. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 5. 실시예 6에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00366
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에 사용된 RNAi 작용제는 변형된 뉴클레오티드 및 1개 초과의 비-포스포디에스테르 연결로 구성되었고, 하기 뉴클레오티드 서열을 포함하였다:
AD05347:
센스 가닥 서열 (5' → 3'):
(NH2-C6)cscugugcaAfCfCfagaacaaauas(invAb) (서열식별번호: 3)
안티센스 가닥 서열 (5' → 3')
cPrpusAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsc (서열식별번호: 2), 및
AD05453:
센스 가닥 서열 (5' → 3'):
(NH2-C6)cscugugcaAfCfCfagaacaaauas(invAb) (서열식별번호: 3)
안티센스 가닥 서열 (5' → 3')
usAfsusUfuGfuUfcUfgGfuUfgCfaCfaGfsg (서열식별번호: 4),
여기서 (invAb)는 역전된 (3'-3' 연결된) 무염기성 데옥시리보뉴클레오티드를 나타내고; s는 포스포로티오에이트 연결을 나타내고; a, c, g, 및 u는 각각 2'-O-메틸 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; Af, Cf, Gf, 및 Uf는 각각 2'-플루오로 아데노신, 시티딘, 구아노신, 또는 우리딘을 나타내고; cPrpu는 5'-시클로프로필 포스포네이트-2'-O-메틸 우리딘을 나타내고 (예를 들어, 표 A 참조); (NH2-C6)는 목적하는 바와 같은 표적화 리간드 접합을 용이하게 하는 C6 말단 아민을 나타낸다 (예를 들어, 표 A 참조).
군 2, 3, 4, 5 및 6의 경우, 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를, 하기 구조 300a에 도시된 바와 같이 글루타르산 링커 (글루타르산의 부가를 통함)를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰고:
Figure pct00367
여기서
Figure pct00368
는 RNAi 작용제를 나타내고, "avb6 리간드"는 각각의 리간드 구조를 나타낸다.
군 7 및 8의 경우, 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를, 구조 330a에 도시된 구조를 갖는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰고:
Figure pct00369
여기서
Figure pct00370
는 RNAi 작용제를 나타내고, "avb6 리간드"는 각각의 리간드 구조를 나타낸다.
군 1, 3, 4, 6 및 7에서는 4마리의 래트에게 투여하고 (n=4); 군 5 및 8에서는 5마리의 래트에게 투여하고 (n=5); 군 2에서는 3마리의 래트에게 투여하였다 (n=3). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 6. 실시예 6에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00371
상기 표 6에 제시된 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 대조군과 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타내었다. 예를 들어, 군 5 (AD05453-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 6.1)는 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 51% 감소 (0.494)를 나타내었고, 군 3 (AD05453-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 2)는 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 38% 감소 (0.615)를 나타내었다. 또한, 군 5 (αvβ6 인테그린 리간드 구조 6.1 포함)는 군 6 (αvβ6 인테그린 리간드 구조 7 포함)을 초과하는 개선을 보여주었고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에 대해 구조 6.1에서 발견되는 (s)의 키랄 의존성이 구조 7에서 발견되는 (r)을 초과한다는 것을 나타낸다.
실시예 7. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 7. 실시예 7에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00372
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에 사용된 RNAi 작용제에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 군 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10의 경우, 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다. 군 11의 경우, 상피 세포 표적화 리간드는 αvβ6 인테그린에 결합하는 것으로 공지된 RGD-모방체 펩티드로 구성되었고, 약동학 (PK) 조정제로서 20 kDa PEG 모이어티를 포함하였다.
각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다 (n=4). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 8. 실시예 7에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00373
상기 표 8에 제시된 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 대조군과 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타내었다. 예를 들어, 군 3 (AD05347-글루타르산-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 6.1)은 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 64% 감소 (0.358)를 나타내었고, 군 8 (AD05453-글루타르산-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 6.1)은 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 55% 감소 (0.454)를 나타내었다. 추가로, 실시예 7에서의 αvβ6 인테그린 리간드 (즉, 구조 2, 구조 6, 구조 6.1, 구조 8, 구조 9, 구조 10, 및 구조 11)는 모두, 군 11의 약동학 효과를 증진시키기 위해 비교적 대형의 20 킬로달톤 PEG 모이어티를 추가로 포함하는 세자리 펩티드-기반 상피 세포 표적화 리간드와 대등한 녹다운 수준을 나타내었다.
실시예 8. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그-돌리 래트에게 마이크로스프레이어 장치 (펜 센츄리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 200 마이크로리터의 용량을 기관내로 투여하였고, 이는 하기 투여 군을 포함하였다:
표 9. 실시예 8에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00374
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에서 사용된 RNAi 작용제에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 4에 제시되어 있다.
군 3 및 4의 경우, 구조 1의 αvβ6 인테그린 리간드를, 하기 구조 331a에 도시된 바와 같이 시스테인 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드 및 링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰고:
Figure pct00375
여기서
Figure pct00376
는 RNAi 작용제를 나타내고, "avb6 리간드"는 각각의 리간드 구조를 나타낸다.
군 5의 경우, αvβ6 인테그린 리간드를, 상기 실시예 6에 제시된 구조 330a에 도시된 바와 같이 시스테인-n-에틸-말레이미드 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드 및 링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다. 군 7의 경우, αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드 및 링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다. 군 2 및 6의 경우, 펩티드-기반 상피 세포 표적화 리간드는 RGD-모방체 펩티드로 구성되었고, 약동학 (PK) 조정제로서 20kDa PEG 모이어티를 포함하였다.
동일한 알파-ENaC RNAi 작용제를 각각의 군 2 내지 7에서 사용하였다.
각각의 군 1, 2, 3, 4, 5, 및 6에서는 5마리의 래트에게 투여하고 (n=5), 군 7에서는 4마리의 래트에게 투여하였다 (n=4). 래트를 연구 제8일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 10. 실시예 8에서의 희생 시 (제8일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00377
상기 표 10에 제시된 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 대조군과 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타내었다. 예를 들어, 군 5 (AD04835-Cys-(n-에틸-Mal)-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 1 포함)는 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 65% 감소 (0.358)를 나타내었고, 이는 약동학 조정제로서 20kDa PEG 모이어티를 또한 포함하는 펩티드-기반 상피 세포 표적화 리간드를 갖는 군 2에서 달성된 녹다운의 수준과 대등하였다.
실시예 9. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그-돌리 래트에게 마이크로스프레이어 장치 (펜 센츄리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 200 마이크로리터의 용량을 기관내로 투여하였고, 이는 하기 투여 군을 포함하였다:
표 11. 실시예 9에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00378
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에서 사용된 RNAi 작용제에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 4에 제시되어 있다. 군 2 및 3의 경우, 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다. 군 6의 경우, 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 8에 제시된 구조 331a에 도시된 바와 같이, 시스테인 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
동일한 알파-ENaC RNAi 작용제를 각각의 군 2 내지 8에서 사용하였다.
군 1에서는 5마리의 래트에게 투여하고 (n=5), 군 2 및 3에서는 4마리의 래트에게 투여하였다 (n=4). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 12. 실시예 9에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00379
상기 표 12에 제시된 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 대조군과 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타내었다. 예를 들어, 군 3 (RNAi 작용제-글루타르산-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 2)은 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 52% 감소 (0.483)를 나타내었고, 군 6 (RNAi 작용제-Cys-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 2)은 대조군과 비교하여 평균 rENaC mRNA 발현에서 대략 76% 감소 (0.237)를 나타내었다.
실시예 10. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 기관내 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그-돌리 래트에게 마이크로스프레이어 장치 (펜 센츄리, 펜실베니아주 필라델피아)를 통해 200 마이크로리터의 용량을 기관내로 투여하였고, 이는 하기 투여 군을 포함하였다:
표 13. 실시예 10에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00380
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에서 사용된 RNAi 작용제에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 4에 제시되어 있다. 군 3, 4, 5, 및 6의 경우, 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 8에 제시된 구조 331a에 도시된 바와 같이, 시스테인 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다. 군 2의 경우, 표적화 리간드는 RGD-모방체 펩티드로 구성되었고, 약동학 (PK) 조정제로서 20kDa PEG 모이어티 및 FCFP 펩티드 링커를 포함하였다.
동일한 알파-ENaC RNAi 작용제를 각각의 군 2 내지 7에서 사용하였다.
각각의 군에서 5마리의 래트에게 투여하였다 (n=5). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 14. 실시예 10에서의 희생 시 (제8일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00381
상기 표 14에 제시된 바와 같이, 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 대조군과 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타내었다. 특히, 군 5 (1.0 mg/kg AD04835-Cys-세자리 αvβ6 인테그린 리간드 구조 2)는 군 2 (1.0 mg/kg AD04835-Cys-PEG20kDa-FCFP-PEG20-펩티드-기반 상피 세포 표적화 리간드)와 비교하여, 약동학 조정제로서 대형의 20 킬로달톤 PEG 모이어티를 포함하지 않음에도 불구하고, 수치상 뛰어난 알파-ENaC 발현 억제 수준을 나타내었다 (군 5 = 대략 56% 녹다운 (0.436); 군 2 = 대략 47% 녹다운 (0.531)).
실시예 11. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일, 제2일, 및 제3일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 15. 실시예 11에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00382
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, 이는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에 사용된 RNAi 작용제에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군 1, 3, 4, 5, 8, 및 9에서는 5마리의 래트에게 투여하고 (n=5), 군 2, 6, 및 7에서는 6마리의 래트에게 투여하였다 (n=6). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 16. 실시예 11에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00383
상기 표 16에 제시된 바와 같이, 구조 6.1을 갖는 avb6 인테그린 리간드 (세자리 형태)에 접합된 각각의 알파-ENaC RNAi 작용제는 대조군과 비교하여 래트에서 mRNA 발현의 감소를 나타내었다. 추가로, 각각의 투여량 수준에서, 구조 6.1을 갖는 avb6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC RNAi 작용제는 네이키드로 투여된 알파-ENaC RNAi 작용제를 능가하였고, 이는 RNAi 작용제의 전달에 대한 리간드 효과를 보여준다. (예를 들어, 군 2 및 6; 군 3 및 7; 군 4 및 8; 및 군 5 및 9 비교).
실시예 12. 추가의 αvβ6 인테그린 리간드 결합 활성.
하기 표 17에 보고된 바와 같이, 본원의 특정 실시예에 사용된 구조 2, 6.1, 7, 및 23의 αvβ6 인테그린 리간드에 대해 추가의 IC50 결합 데이터를 수득하였다:
표 17. IC50 결합 활성.
Figure pct00384
관련 기술분야에서 전형적으로 사용되고 공지된 조건 하에 아지드-관능화된 구조 (즉, 구조 2b 및 6.1b, 7b, 및 23b)에 대해 IC50을 조사하였다. 상기 표 17에 제시된 바와 같이, 구조 6.1은 αvβ6 인테그린에 대해 강력한 결합 활성을 나타내었다 (IC50 = 1.6 nM).
실시예 13. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 18. 실시예 13에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00385
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, AD05347 듀플렉스를 포함하는 것은 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에 사용된 RNAi 작용제 AD05347에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군에서 5마리의 래트에게 투여하였다 (n=5). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 19. 실시예 13에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00386
실시예 14. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 20. 실시예 14에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00387
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, AD05347 및 AD05453 듀플렉스를 포함하는 것은 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. 본 실시예에 사용된 RNAi 작용제에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다 (n=4). 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 21. 실시예 14에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00388
실시예 15. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 22. 실시예 15에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00389
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군 1-9 및 12에서 4마리의 래트에게 투여하였다 (n=4). 군 10 및 11에서 3마리의 래트에게 투여하였다 (n=3). 래트를 연구 제7일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 23. 실시예 15에서의 희생 시 (제7일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00390
실시예 16. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 24. 실시예 16에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00391
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 25. 실시예 16에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00392
실시예 17. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 26. 실시예 17에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00393
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
4마리의 래트에게 투여한 군 4를 제외하고, 각각의 군에서 5마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 27. 실시예 17에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00394
실시예 18. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 28. 실시예 18에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00395
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 29. 실시예 18에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00396
실시예 19. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 30. 실시예 19에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00397
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 31. 실시예 19에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00398
실시예 20. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 32. 실시예 20에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00399
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
3마리의 래트에게 투여한 군 1을 제외하고, 각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 33. 실시예 20에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00400
실시예 21. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 34. 실시예 21에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00401
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
6마리의 래트에게 투여한 군 2를 제외하고, 각각의 군에서 5마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 35. 실시예 21에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00402
실시예 22. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 36. 실시예 22에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00403
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 37. 실시예 22에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00404
실시예 23. 래트에서의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 알파-ENaC를 표적화하는 RNAi 작용제의 생체내 구인두 흡인 투여.
연구 제1일 및 제2일에, 수컷 스프라그 돌리 래트에게 하기 투여 군에 따라 피펫을 사용하여 200 마이크로리터를 구인두 ("OP") 흡인 투여를 통해 투여하였다:
표 38. 실시예 23에서의 래트의 투여 군.
Figure pct00405
인간 알파-ENaC 유전자를 표적화하도록 지시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 작용제를 합성하였고, RNAi 작용제는 αvβ6 인테그린 리간드에의 접합을 용이하게 하기 위해 센스 가닥의 5' 말단 단부에 관능화된 아민 반응성 기 (NH2-C6)를 포함하였다. RNAi 작용제 AD05453에 대한 뉴클레오티드 서열은 상기 실시예 6에 제시되어 있다. 각각의 αvβ6 인테그린 리간드를 상기 실시예 6에 제시된 구조 300a에 도시된 바와 같이, 글루타르산 링커를 포함하는 세자리 스캐폴드/링커 구조를 통해 RNAi 작용제에 접합시켰다.
각각의 군에서 4마리의 래트에게 투여하였다. 래트를 연구 제9일에 희생시키고, 둘 다의 폐로부터 수집 및 균질화 후에 총 RNA를 단리하였다. 알파-ENaC (SCNN1A) mRNA 발현을 프로브-기반 정량적 PCR에 의해 정량화하고, GAPDH 발현에 대해 정규화하고, 비히클 대조군의 분율로서 표현하였다 (기하 평균, +/- 95% 신뢰 구간).
표 39. 실시예 23에서의 희생 시 (제9일) 평균 상대 rENaC mRNA 발현.
Figure pct00406
다른 실시양태
본 발명이 그의 상세한 설명과 함께 기재되었지만, 상기 설명은 예시하기 위한 것이며, 첨부된 청구범위의 범주에 의해 정의되는 본 발명의 범주를 제한하지 않도록 의도되는 것으로 이해되어야 한다. 다른 측면, 이점 및 변형은 하기 청구범위의 범주 내에 있다.
SEQUENCE LISTING <110> ARROWHEAD PHARMACEUTICALS, INC. <120> Integrin Ligands and Uses Thereof <130> 30661-WO1 <150> 62/580,398 <151> 2017-11-01 <150> 62/646,739 <151> 2018-03-22 <150> 62/679,549 <151> 2018-06-01 <160> 4 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> RNAi agent sense strand modified sequence <400> 1 gcugugcaac cagaacaaau a 21 <210> 2 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> RNAi agent antisense strand modified sequence <400> 2 uauuuguucu gguugcacag c 21 <210> 3 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> RNAi agent sense strand modified sequence <400> 3 ccugugcaac cagaacaaau a 21 <210> 4 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> RNAi agent antisense strand modified sequence <400> 4 uauuuguucu gguugcacag g 21

Claims (36)

  1. 하기 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 αvβ6 인테그린 리간드.
    Figure pct00407

    여기서,
    n은 0 내지 7의 정수이고;
    J는 C-H 또는 N이고;
    Z는 OR13, N(R13)2 또는 SR13이고;
    R1은 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, OH, COOH, CON(R5)2, OR6이거나, 또는 R1은 화물 분자를 포함하고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고, R6은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    R2, RP1 및 RP2는 각각 독립적으로 H, 할로, 임의로 치환된 시클로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴렌이거나, 또는 R2, RP1 및 RP2는 화물 분자를 포함할 수 있고;
    R10은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
    R11은 H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R11 및 R1은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 임의로 치환된 헤테로사이클을 형성하고;
    R12는 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
    각각의 R13은 독립적으로 H, 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R13은 화물 분자를 포함하고;
    R14는 임의로 치환된 알킬이고;
    여기서 R1, R2, R13, RP1 및 RP2 중 적어도 1개는 화물 분자를 포함한다.
  2. 하기 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 αvβ6 인테그린 리간드.
    Figure pct00408

    여기서,
    n은 0 내지 7의 정수이고 (즉, n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고);
    J는 C-H 또는 N이고;
    R1은 H, C1-C6 알킬, CH(R3)(R4), OH, COOH, CH2CH2CH2NH2, CONHR5, OR6이거나, 또는 R1은 화물 분자를 포함하고, 여기서 R3은 H 또는 C1-C6 알킬이고, R4는 H, C1-C6 알킬이고, R5는 H 또는 C1-C6 알킬이고, R6은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    R2는 임의로 치환된 시클로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로시클로알킬렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌이거나, 또는 R2는 화물 분자를 포함하고,
    R10은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
    R11은 H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R11 및 R1은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 임의로 치환된 헤테로사이클을 형성하고;
    R12는 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
    R13은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
    R14는 임의로 치환된 알킬이고;
    여기서 R1 또는 R2 중 적어도 1개는 화물 분자를 포함한다.
  3. 제1항에 있어서, 하기 구조:
    Figure pct00409

    또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며,
    여기서,
    n은 1 내지 7의 정수이고 (즉, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고);
    R7은 1개 이상의 화물 분자를 포함하고;
    R8은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 탄소 원자를 갖는 1개 이상의 임의로 치환된 2가 시클릭 모이어티, 예컨대 시클로알킬 (예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 또는 시클로헵틸), 시클로알케닐 (예를 들어, 시클로펜테닐, 시클로부테닐, 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, 또는 시클로헵테닐), 아릴 (예를 들어, 페닐), 헤테로아릴 (예를 들어, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피롤, 피라졸, 이미다졸, 티오펜, 벤조티오펜, 티아졸, 벤조티아졸, 푸란, 옥사졸, 이속사졸, 벤조푸란, 인돌, 인다졸, 벤즈이미다졸, 옥사디아졸, 1,2,3-트리아졸, 1,2,4-트리아졸, 테트라졸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 또는 퀴녹살리닐), 또는 헤테로시클릴 (예를 들어, 테트라히드로푸란, 테트라히드로피란, 피페리딘, 피롤리딘, 디옥산, 또는 디옥솔란)인
    αvβ6 인테그린 리간드.
  4. 제1항에 있어서, 하기 구조:
    Figure pct00410

    또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서,
    n은 1 내지 7의 정수이고 (즉, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7이고);
    R8은 1개 이상의 화물 분자를 포함하는 것인
    αvβ6 인테그린 리간드.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, n이 3인 αvβ6 인테그린 리간드.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, n이 4인 αvβ6 인테그린 리간드.
  7. 하기, 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 αvβ6 인테그린 리간드.
    Figure pct00411

    Figure pct00412

    Figure pct00413

    Figure pct00414

    Figure pct00415

    Figure pct00416

    Figure pct00417

    Figure pct00418

    여기서 X는 화물 분자를 포함한다.
  8. 하기, 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 αvβ6 인테그린 리간드.
    Figure pct00419

    Figure pct00420

    Figure pct00421

    Figure pct00422

    Figure pct00423

    Figure pct00424

    Figure pct00425

    Figure pct00426

    Figure pct00427

    Figure pct00428

    Figure pct00429

    여기서
    Figure pct00430
    는 화물 분자를 포함하는 모이어티에 대한 연계 지점을 나타낸다.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화물 분자가 활성 제약 성분 또는 전구약물인 αvβ6 인테그린 리간드.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화물 분자가 소분자, 항체, 항체 단편, 이뮤노글로불린, 모노클로날 항체, 표지 또는 마커, 지질, 천연 또는 변형된 핵산, 천연 또는 변형된 핵산 올리고뉴클레오티드, 천연 또는 변형된 핵산 폴리뉴클레오티드, 펩티드, 압타머, 중합체, 폴리아민, 단백질, 독소, 비타민, 폴리에틸렌 글리콜, 합텐, 디곡시게닌, 비오틴, 방사성 원자 또는 분자, 또는 형광단을 포함하는 것인 αvβ6 인테그린 리간드.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화물 분자가 RNAi 작용제를 포함하는 것인 αvβ6 인테그린 리간드.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 2-20개의 에틸렌 옥시드 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 링커를 추가로 포함하는 αvβ6 인테그린 리간드.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 αvβ6 인테그린 리간드, 연결기, 및 스캐폴드를 포함하는 구조물이며, 화물 분자에 결합되는 구조물.
  14. 제13항에 있어서, 한자리 형태의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 구조물.
  15. 제13항에 있어서, 두자리 형태의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 구조물.
  16. 제13항에 있어서, 세자리 형태의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 구조물.
  17. 제13항에 있어서, 네자리 형태의 αvβ6 인테그린 리간드를 포함하는 구조물.
  18. 제13항에 있어서, 스캐폴드가 화학식:
    Figure pct00431

    을 갖고, 여기서
    Figure pct00432
    는 RNAi 작용제를 나타내고, "avb6 리간드"는 각각의 리간드 구조 및 연결제를 나타내는 것인 구조물.
  19. 하기 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 αvβ6 인테그린 리간드 전구체.
    Figure pct00433

    여기서,
    n은 0 내지 7의 정수이고;
    J는 C-H 또는 N이고;
    Z는 OR13, N(R13)2 또는 SR13이고;
    R1은 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, OH, COOH, CON(R5)2, OR6이거나, 또는 R1은 반응성 기에 접합된 연결기를 포함하고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고, R6은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    R2, RP1 및 RP2는 각각 독립적으로 H, 임의로 치환된 시클로알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴렌이거나, 또는 R2, RP1 및 RP2는 반응성 기에 접합된 연결기를 포함할 수 있고;
    R10은 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
    R11은 H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R11 및 R1은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 임의로 치환된 헤테로사이클을 형성하고;
    R12는 H 또는 임의로 치환된 알킬이고;
    각각의 R13은 독립적으로 H, 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 R13은 반응성 기에 접합된 연결기를 포함하고;
    R14는 임의로 치환된 알킬이고;
    여기서 R1, R2, R13, RP1 및 RP2 중 적어도 1개는 반응성 기에 접합된 연결기를 포함한다.
  20. 제19항에 있어서, 연결기가 PEG 링커인 αvβ6 인테그린 리간드 전구체.
  21. 제19항에 있어서, PEG 링커가 2-20개의 PEG 단위를 포함하는 것인 αvβ6 인테그린 리간드 전구체.
  22. 제19항에 있어서, 반응성 기가 아지드인 αvβ6 인테그린 리간드 전구체.
  23. 제19항에 있어서, 반응성 기에 접합된 연결기가 구조:
    Figure pct00434

    를 갖고, 여기서 n은 2 내지 20의 정수이고,
    Figure pct00435
    는 화학식 Ib의 구조에 대한 연계 지점을 나타내는 것인 αvβ6 인테그린 리간드 전구체.
  24. 하기 구조, 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 αvβ6 인테그린 리간드 전구체.
    Figure pct00436

    Figure pct00437

    Figure pct00438

    Figure pct00439

    Figure pct00440

    Figure pct00441

    Figure pct00442

    Figure pct00443

    Figure pct00444

    Figure pct00445
  25. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 αvβ6 인테그린 리간드 또는 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항의 구조물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물.
  26. 제25항에 있어서, αvβ6 인테그린 리간드가 상피 세포 내의 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드-기반 화합물에 접합된 것인 조성물.
  27. 제25항에 있어서, αvβ6 인테그린 리간드가 상피 세포 내의 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있는 RNAi 작용제에 접합된 것인 조성물.
  28. 제25항에 있어서, αvβ6 인테그린 리간드가 세기관지 상피 세포 내의 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있는 RNAi 작용제에 접합된 것인 조성물.
  29. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 αvβ6 인테그린 리간드 또는 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항의 구조물을 세포에게 투여하는 것을 포함하는, 세포에게 1개 이상의 화물 분자를 전달하는 방법.
  30. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 αvβ6 인테그린 리간드, 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항의 구조물, 또는 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 세포 또는 조직에게 1개 이상의 화물 분자를 생체내 전달하는 방법.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 세포가 유형 I 및 II 폐포 상피 세포, 배상 세포, 분비 상피 세포, 섬모 상피 세포, 각막 및 결막 상피 세포, 피부 상피 세포, 담관세포, 장세포, 관 상피 세포, 선 상피 세포, 및 상피 종양 (암종)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  32. 제29항 또는 제30항에 있어서, 1개 이상의 화물 분자가 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 포함하는 것인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물이 RNAi 작용제인 방법.
  34. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 αvβ6 인테그린 리간드에 접합된 올리고뉴클레오티드-기반 화합물을 포함하는 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 세포 내의 표적 유전자의 발현을 생체내 억제하는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 세포가 유형 I 및 II 폐포 상피 세포, 배상 세포, 분비 상피 세포, 섬모 상피 세포, 각막 및 결막 상피 세포, 피부 상피 세포, 담관세포, 장세포, 관 상피 세포, 선 상피 세포, 및 상피 종양 (암종)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 올리고뉴클레오티드-기반 화합물이 RNAi 작용제인 방법.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TN2019000308A1 (en) * 2017-07-06 2021-05-07 Arrowhead Pharmaceuticals Inc RNAi AGENTS FOR INHIBITING EXPRESSION OF ALPHA-ENaC AND METHODS OF USE
CN114058623B (zh) * 2020-08-06 2023-12-12 中国科学院化学研究所 一种核酸适体识别并结合整合素α3亚基及其相关功能
MX2023002853A (es) * 2020-09-11 2023-03-31 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Agentes de arni para inhibir la expresion de dux4, composiciones de dichos agentes, y metodos de uso.
CN116783294A (zh) * 2020-09-11 2023-09-19 箭头药业股份有限公司 整联蛋白靶向配体及其用途

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
DE19831710A1 (de) 1998-07-15 2000-01-20 Merck Patent Gmbh Diacylhydrazinderivate
BR0008310A (pt) 1999-02-20 2002-01-22 Merck Patent Gmbh Derivados de alfa-alanina
DE19929410A1 (de) 1999-06-26 2000-12-28 Merck Patent Gmbh Inhibitoren des Integrins avß6
DE10028402A1 (de) 2000-06-13 2001-12-20 Merck Patent Gmbh Pyridin-2-yl-aminoalkycarbonylglycyl-beta-alanin und Derivate
AU2005272816B2 (en) 2004-08-10 2011-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides
GB0520068D0 (en) 2005-10-03 2005-11-09 Cancer Res Technology av peptide ligand
US20080213249A1 (en) 2006-07-07 2008-09-04 The Scripps Research Insitute Use of Retro-Aldol Reaction to Generate Reactive Vinyl Ketone for Attachment to Antibody Molecules by Michael Addition Reaction for Use in Immunostaining and Immunotargeting
US20110003858A1 (en) 2006-09-04 2011-01-06 Bergstroem Lena Multimeric heterocyclic compounds useful as neutrophil elastase inhibitors
AR066984A1 (es) * 2007-06-15 2009-09-23 Novartis Ag Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia)
EP2221334B1 (en) 2007-11-28 2016-12-28 FUJIFILM Corporation Method for chemically modifying biopolymer and polypeptide
CN102083850B (zh) * 2008-04-21 2015-08-12 加利福尼亚大学董事会 选择性高亲和力多齿配体及其制备方法
CN102596922A (zh) 2009-10-06 2012-07-18 免疫基因公司 有效的缀合物和亲水性连接体
GB0922014D0 (en) 2009-12-17 2010-02-03 Ge Healthcare Ltd Novel integrin binders
US9161948B2 (en) * 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
AU2013221585B2 (en) * 2012-02-17 2017-03-30 Seagen Inc. Antibodies to integrin alphavbeta6 and use of same to treat cancer
JP2014029990A (ja) 2012-06-29 2014-02-13 Sharp Corp 窒化物半導体装置の電極構造およびその製造方法並びに窒化物半導体電界効果トランジスタ
EP2913064A1 (en) * 2014-02-26 2015-09-02 celares GmbH Branched drug-linker conjugates for the coupling to biological targeting molecules
WO2015160770A1 (en) 2014-04-15 2015-10-22 The Regents Of The University Of California Bi-terminal pegylated integrin-binding peptides and methods of use thereof
WO2015179823A2 (en) 2014-05-23 2015-11-26 The California Institute For Biomedical Research Lung localized inhibitors of alpha(v)beta 6
EP3270903B1 (en) 2015-03-17 2020-05-06 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Disulfide-containing alkyne linking agents
EA201792103A1 (ru) * 2015-05-29 2018-06-29 Эрроухэд Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы для ингибирования экспрессии генов hif2альфа
JOP20170161A1 (ar) 2016-08-04 2019-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب

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