CN111526880A - 整联蛋白配体及其用途 - Google Patents

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李珍
X.李
E.W.布什
朱锐
D.书
J.本森
P.邵
M.富勒-沃特斯
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Abstract

描述了合成的式I的αvβ6整联蛋白配体，其具有血清稳定性和对整联蛋白αvβ6的亲和力，所述整联蛋白αvβ6是在多种细胞类型中表达的受体。所述配体可用于将被转运的分子诸如RNAi剂或其它基于寡核苷酸的化合物递送至表达整联蛋白αvβ6的细胞，从而促进被转运的分子被摄入这些细胞。还描述了包括αvβ6整联蛋白配体的组合物和使用方法。

Description

整联蛋白配体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求在2017年11月1日提交的序列号为62/580，398的美国临时专利申请、在2018年3月22日提交的序列号为62/646，739的美国临时专利申请和在2018年6月1日提交的序列号为62/679，549的美国临时专利申请的优先权，每个所述申请的内容通过整体引用并入本文中。
背景
在包括上皮细胞在内的各种细胞类型中表达的整联蛋白α-vβ-6 (αvβ6)是TGF-β的延迟相关肽(LAP)和细胞外基质(ECM)蛋白纤连蛋白、玻连蛋白和肌腱蛋白的受体。尽管在正常健康成人上皮细胞中几乎检测不到，但αvβ6整联蛋白在伤口愈合期间和在不同癌症(例如结肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌和胃癌)中上调，并且通常与差的癌症预后相关。已经显示αvβ6整联蛋白可促进转移中的细胞侵袭和迁移，并抑制凋亡。αvβ6整联蛋白还可调节基质金属蛋白酶(MMP)的表达并激活TGF-β1。主要来自体外研究的越来越多的证据表明αvβ6整联蛋白可促进癌症进展。因此，整联蛋白αvβ6作为肿瘤标志物和潜在的治疗靶标是有吸引力的，尤其考虑到其在基质金属蛋白酶(MMP)的表达和TGF-β1的激活中的作用。
治疗有效的化合物（诸如药物化合物）体内递送至期望的细胞和/或组织对于药物产品的开发一直是普遍的挑战。一直存在对能够选择性靶向细胞或组织的稳定且有效的靶向配体的需要，其可用于促进被转运的分子（cargo molecules）(例如，治疗活性化合物或成分)向特定细胞或组织的靶向递送。实际上，有对可与一种或多种所选的被转运的分子（诸如一种或多种药物产品或其它有效载荷）缀合的靶向配体的普遍需要，以促进被转运的分子在体内递送至所需细胞或组织。此外，存在对靶向整联蛋白α-vβ-6的化合物的需要，所述化合物适于与被转运的分子缀合，以在体内将被转运的分子递送至表达整联蛋白α-vβ-6的细胞。对于特定的被转运的分子，诸如治疗性的基于寡核苷酸的化合物(例如反义寡核苷酸或RNAi剂)，存在对能够靶向整联蛋白α-vβ-6的靶向配体的需要，所述配体可与基于寡核苷酸的化合物缀合以将治疗剂递送至表达整联蛋白α-vβ-6的细胞和/或组织，并促进治疗剂通过受体介导的胞吞作用、胞饮作用或通过其它方式进入细胞。
发明简述
本文描述了新的合成αvβ6整联蛋白配体(本文也称为αvβ6配体)。本文公开的αvβ6整联蛋白配体在血清中是稳定的，并且对αvβ6整联蛋白具有亲和力，并且可以特异性结合至αvβ6整联蛋白。αvβ6整联蛋白配体可以与被转运的分子缀合，以促进被转运的分子递送至表达αvβ6整联蛋白的期望的细胞或组织，诸如递送至上皮细胞。
本文还公开了将被转运的分子体内递送至表达αvβ6整联蛋白的组织和/或细胞的方法，其中所述方法包括将一种或多种本文公开的已经与一种或多种被转运的分子缀合的αvβ6整联蛋白配体施用至对象。进一步公开了治疗患有疾病、症状或障碍的对象的方法，对于所述疾病、症状或障碍，将治疗性被转运的分子(例如，活性药物成分)递送至表达αvβ6整联蛋白的细胞能够治疗所述对象，其中所述方法包括将一种或多种本文公开的已经与一种或多种治疗性被转运的分子缀合的αvβ6整联蛋白配体施用于所述对象。
在一些实施方案中，本文描述了抑制细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向细胞施用有效量的一种或多种αvβ6整联蛋白配体，所述配体已经与一种或多种能够抑制细胞中靶基因表达的基于寡核苷酸的化合物(例如，基于寡核苷酸的治疗剂)（诸如RNAi剂）缀合。在一些实施方案中，本文描述了抑制对象的细胞中靶基因表达的方法，其中向对象施用有效量的一种或多种αvβ6整联蛋白配体，所述配体已经与一种或多种能够抑制细胞中靶基因表达的基于寡核苷酸的化合物（诸如RNAi剂）缀合。
本文进一步描述了包含αvβ6整联蛋白配体的组合物。本文所述的组合物可以是药物组合物，其包括与一种或多种治疗物质（诸如RNAi剂或其它被转运的分子）缀合的一种或多种本文公开的αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文描述了治疗患有至少部分由靶基因表达介导的疾病或障碍的对象的方法，其中所述方法包括向有需要的对象施用有效量的药物组合物，其中所述药物组合物包括与一种或多种基于寡核苷酸的化合物（诸如RNAi剂）缀合的一种或多种本文公开的αvβ6整联蛋白配体。
在第一方面，本公开提供了合成的αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包括下式的结构：
Figure 54010DEST_PATH_IMAGE001
(式I)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从0至7的整数；
J是C-H或N；
Z是OR13、N (R13)2或SR13；
R1是H、任选取代的C1-C6烷基、OH、COOH、CON (R5)2、OR6，或R1包含被转运的分子，其中每个R5独立地是H或C1-C6烷基，并且R6是H或C1-C6烷基；
R2、RP1和RP2各自独立地是H、卤素、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂环烷基或任选取代的亚杂芳基，或R2、RP1和RP2可包含被转运的分子；
R10是H或任选取代的烷基；
R11是H或任选取代的烷基，或R11和R1与它们所连接的原子一起形成任选取代的杂环；
R12是H或任选取代的烷基；
每个R13独立地是H、任选取代的烷基，或R13包含被转运的分子；
R14是任选取代的烷基；以及
其中R1、R2、R13、RP1和RP2中的至少一个包含被转运的分子。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体可与一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30；或1至30、1至25、1至20、1至15、1至10、1至5、5至30、5至25、5至20、5至15、5至10、10至30、10至25、10至20、10至15、15至30、15至25、15至20、20至30、20至25或25至30)被转运的分子(例如，本文描述的或本领域已知的任何被转运的分子) 缀合。
在一些实施方案中，多于一个本文公开的αvβ6整联蛋白配体(例如，2、3、4、5、6、7、8或1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4、2至3、3至8、3至7、3至6、3至5、3至4、4至8、4至7、4至6或4至5个αvβ6整联蛋白配体)可与一个被转运的分子(例如，本文描述的或本领域已知的任何被转运的分子) 缀合。
在另一个方面，本公开提供了包括一种或多种本文所述的αvβ6整联蛋白配体的组合物。例如，在一些实施方案中，包含一种或多种本文公开的αvβ6整联蛋白配体的组合物包括一种或多种待体内递送至细胞的基于寡核苷酸的化合物（诸如一种或多种RNAi剂）。在一些实施方案中，本文描述了用于体内递送RNAi剂至细胞的组合物，其中所述RNAi剂与一种或多种αvβ6整联蛋白配体连接。
描述了包括一种或多种αvβ6整联蛋白配体的组合物。在一些实施方案中，组合物包含药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，包括一种或多种αvβ6整联蛋白配体的组合物包含一种或多种其它药物物质或药物活性成分或化合物。在一些实施方案中，本文描述了包括一种或多种αvβ6整联蛋白配体的药物。
包括与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种本文公开的αvβ6整联蛋白配体的组合物可以促进被转运的分子体内或体外递送至表达整联蛋白αvβ6的细胞。例如，包括一种或多种本文公开的αvβ6整联蛋白配体的组合物可在体内或体外将被转运的分子，诸如基于寡核苷酸的化合物，递送至I型和II型肺泡上皮细胞、杯状细胞、分泌性上皮细胞、纤毛上皮细胞、角膜和结膜上皮细胞、真皮上皮细胞、胆管上皮细胞、肠上皮细胞、导管上皮细胞、腺上皮细胞和上皮肿瘤(癌)。
在另一个方面，本公开提供了方法，其包括使用一种或多种如本文所述的αvβ6整联蛋白配体和/或组合物，并且如果需要，将所公开的αvβ6整联蛋白配体和/或组合物制成适合作为药物产品施用的形式。在其它实施方案中，本公开提供了用于制备本文所述的配体和组合物，例如药物的方法。
考虑到要施用的被转运的分子，可以使用本领域已知的适于这样的施用的施用途径将包括一种或多种αvβ6整联蛋白配体的组合物体内施用至对象，包括例如吸入(气溶胶或干粉制剂)、鼻内、皮下、静脉内、腹膜内、皮内、透皮、口服、舌下、局部或肿瘤内施用。在一些实施方案中，可以施用包括一种或多种αvβ6整联蛋白配体的组合物用于全身递送，例如，通过静脉内或皮下施用。在一些实施方案中，可以施用包括一种或多种αvβ6整联蛋白配体的组合物用于局部递送，例如，通过经由干粉吸入器或雾化器吸入递送。在一些实施方案中，包含一种或多种αvβ6整联蛋白配体的组合物可以通过局部施用来局部递送。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至I型肺泡上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至II型肺泡上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至杯状细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至分泌性上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至纤毛上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至角膜上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至结膜上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至真皮上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至胆管上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至肠上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至导管上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至腺上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于体内递送一种或多种期望的被转运的分子至上皮肿瘤(癌)的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种被转运的分子缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至I型肺泡上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内递送RNAi剂至I型肺泡上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制I型肺泡上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至II型肺泡上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内递送RNAi剂至II型肺泡上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制II型肺泡上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至杯状细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内递送RNAi剂至杯状细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制杯状细胞中靶基因表达的方法，其中该方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至分泌性上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内递送RNAi剂至分泌性上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制分泌性上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至纤毛上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内递送RNAi剂至纤毛上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制纤毛上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至角膜上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至角膜上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制角膜上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至结膜上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至结膜上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制结膜上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至真皮上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至真皮上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制真皮上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至胆管上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至胆管上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制胆管上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至肠上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至肠上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制肠上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至导管上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至导管上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制导管上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至腺上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至腺上皮细胞的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制腺上皮细胞中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了体内递送基于寡核苷酸的化合物至上皮肿瘤(癌)的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种基于寡核苷酸的化合物缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内送递RNAi剂至上皮肿瘤(癌)的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种RNAi剂缀合的一种或多种αvβ6整联蛋白配体。在一些实施方案中，本文公开了体内抑制上皮肿瘤(癌)中靶基因表达的方法，其中所述方法包括向对象施用与一种或多种对αvβ6整联蛋白具有亲和力的配体缀合的RNAi剂。
除非另有定义，如本文所用，所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文所述的那些类似或等同的方法和材料可用于本发明的实践或测试，但在下文描述合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献均通过整体引用并入本文中。在冲突的情况下，以本说明书，包括定义为准。此外，材料、方法和实施例仅是说明性的，而不是限制性的。
本发明的其它目的、特征、方面和优点将从以下详细描述和从权利要求书中显而易见。
发明详述
αvβ6整联蛋白配体
本文描述的是合成的αvβ6整联蛋白配体，其具有血清稳定性和对整联蛋白αvβ6的亲和力。αvβ6整联蛋白配体可用于靶向在体外、原位、离体和/或体内表达整联蛋白αvβ6的细胞。在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体可以与一种或多种被转运的分子缀合，以优先将被转运的分子引导和靶向至在体外、原位、离体和/或体内表达整联蛋白αvβ6的细胞。在一些实施方案中，被转运的分子包括药学活性化合物或由其组成。在一些实施方案中，被转运的分子包括基于寡核苷酸的化合物（诸如RNAi剂）或由其组成。在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子缀合以在体内将被转运的分子引导至上皮细胞。
在第一方面，本公开提供了合成的αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包括下式的结构：
Figure 756256DEST_PATH_IMAGE002
(式I)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从0至7的整数；
J是C-H或N；
Z是OR13、N (R13)2或SR13；
R1是H、任选取代的C1-C6烷基、OH、COOH、CON (R5)2、OR6，或R1包含被转运的分子，其中每个R5独立地是H或C1-C6烷基，和R6是H或C1-C6烷基；
R2、RP1和RP2各自独立地是H、卤素、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂环烷基或任选取代的亚杂芳基，或R2、RP1和RP2可包含被转运的分子；
R10是H或任选取代的烷基；
R11是H或任选取代的烷基，或R11和R1与它们所连接的原子一起形成任选取代的杂环；
R12是H或任选取代的烷基；
每个R13独立地是H、任选取代的烷基，或R13包含被转运的分子；
R14是任选取代的烷基；以及
其中R1、R2、R13、RP1和RP2中的至少一个包含被转运的分子。
在一些实施方案中，式I中n =3。在一些实施方案中，式I中n =4。
在式I的一些实施方案中，R2是亚萘基。在式I的一些实施方案中，R2是取代的亚萘基，并且R2还包含被转运的分子。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包括下式的结构：
Figure 741529DEST_PATH_IMAGE003
(式II)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从0至7的整数(即，n是0、1、2、3、4、5、6或7)；
J是C-H或N；
R1是H、C1-C6烷基、CH (R3) (R4)、OH、COOH、CH2CH2CH2NH2、CONHR5、OR6，其中R3是H或C1-C6烷基，R4是H、C1-C6烷基，R5是H或C1-C6烷基，和R6是H或C1-C6烷基；
R2是任选取代的亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂环烷基或任选取代的亚杂芳基，
R10是H或任选取代的烷基；
R11是H或任选取代的烷基，或R11和R1与它们所连接的原子一起形成任选取代的杂环；
R12是H或任选取代的烷基；
R13是H或任选取代的烷基；
R14是任选取代的烷基；
其中R1或R2中的至少一个包括被转运的分子。
在一些实施方案中，式II中n =3。在一些实施方案中，式II中n =4。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包括下式的结构：
Figure 51288DEST_PATH_IMAGE004
(式III)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从1至7的整数(即，n是1、2、3、4、5、6或7)；
R7包括一个或多个被转运的分子；以及
R8是一个或多个任选取代的具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的二价环状部分，诸如环烷基(例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基)、环烯基(例如环戊烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基或环庚烯基)、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯、吡唑、咪唑、噻吩、苯并噻吩、噻唑、苯并噻唑、呋喃、噁唑、异噁唑、苯并呋喃、吲哚、吲唑、苯并咪唑、噁二唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、四唑、喹啉基、异喹啉基或喹喔啉基)或杂环基(例如四氢呋喃、四氢吡喃、哌啶、吡咯烷、二氧杂环己烷或二氧戊环)。
在一些实施方案中，式III中n =3。在一些实施方案中，式III中n =4。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包括下式的结构：
Figure 856433DEST_PATH_IMAGE005
(式IV)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从1至7的整数(即，n是1、2、3、4、5、6或7)；以及
R9包括一个或多个被转运的分子。
在一些实施方案中，式IV中n =3。在一些实施方案中，式IV中n =4。
在另一个方面，本发明提供了具有以下结构的整联蛋白靶向配体前体：
Figure 847522DEST_PATH_IMAGE006
(式Ib)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从0至7的整数；
J是C-H或N；
Z是OR13、N (R13)2或SR13；
R1是H、任选取代的C1-C6烷基、OH、COOH、CON (R5)2、OR6，或R1包含与反应性基团缀合的连接基团，其中每个R5独立地是H或C1-C6烷基，并且R6是H或C1-C6烷基；
R2、RP1和RP2各自独立地是H、卤素、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂环烷基或任选取代的亚杂芳基，或R2、RP1和RP2可包含与反应性基团缀合的连接基团；
R10是H或任选取代的烷基；
R11是H或任选取代的烷基，或R11和R1与它们所连接的原子一起形成任选取代的杂环；
R12是H或任选取代的烷基；
每个R13独立地是H、任选取代的烷基，或R13包含与反应性基团缀合的连接基团；
R14是任选取代的烷基；以及
其中R1、R2、R13、RP1和RP2中的至少一个包含与反应性基团缀合的连接基团。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体可与一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30；或1至30、1至25、1至20、1至15、1至10、1至5、5至30、5至25、5至20、5至15、5至10、10至30、10至25、10至20、10至15、15至30、15至25、15至20、20至30、20至25或25至30)被转运的分子(例如，本文描述的或本领域已知的任何被转运的分子) 缀合。
在一些实施方案中，多于一个本文公开的αvβ6整联蛋白配体(例如，2、3、4、5、6、7、8或1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4、2至3、3至8、3至7、3至6、3至5、3至4、4至8、4至7、4至6或4至5个αvβ6整联蛋白配体)可与一个被转运的分子(例如，本文描述的或本领域已知的任何被转运的分子) 缀合。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体任选经由连接基团，诸如，例如聚乙二醇(PEG)基团与一个或多个被转运的分子缀合。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体任选经由支架（scaffold）与一个或多个被转运的分子缀合，所述支架包括每个配体的至少一个连接点和每个被转运的分子的至少一个连接点。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体包含一个被转运的分子、由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体包含多于一个被转运的分子、由其组成或基本上由其组成。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体包含如下结构的任一个、由如下结构的任一个组成或基本上由如下结构的任一个组成：结构1、结构2、结构5、结构5.1、结构5.2、结构6、结构6.1、结构6.2、结构6.3、结构6.4、结构7、结构8、结构9、结构10、结构11、结构12、结构13、结构14、结构15、结构16、结构17、结构18、结构19、结构20、结构22、结构23、结构24、结构25、结构27、结构29、结构30、结构31、结构32、结构33、结构34、结构35、结构36或结构37，每个结构如本文所公开。
本文公开的任何αvβ6整联蛋白配体可以与被转运的分子、反应性基团和/或受保护的反应性基团连接。反应性基团可用于促进αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子的缀合。本文公开的αvβ6整联蛋白配体可以增加被转运的分子对αvβ6整联蛋白或对表达αvβ6整联蛋白的细胞的靶向。被转运的分子可以是，但不限于，药物活性成分或化合物、前药或具有已知治疗或诊断益处的其它物质。在一些实施方案中，被转运的分子可以是但不限于小分子、抗体、抗体片段、免疫球蛋白、单克隆抗体、标记或标志物、脂质、天然或修饰的基于寡核苷酸的化合物(例如反义寡核苷酸或RNAi剂)、天然或修饰的核酸、肽、核酸适配体、聚合物、多胺、蛋白质、毒素、维生素、聚乙二醇、半抗原、地高辛、生物素、放射性原子或分子、或荧光团。在一些实施方案中，被转运的分子包括药物活性成分或前药。在一些实施方案中，被转运的分子包括基于寡核苷酸的化合物作为药物活性成分。在一些实施方案中，被转运的分子包括RNAi剂作为药物活性成分。
除非另有说明，如本文所用，术语“烷基”指具有从1至10个碳原子的直链或支链的饱和脂族烃基团。例如，“C1-C6烷基”包括具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链排列的烷基基团。烷基基团的非限制性实例包括甲基、乙基、异丙基、叔丁基、正己基。如本文所用，术语“氨基烷基”指以正常化合价允许的方式在任何位置被一个或多个氨基基团取代的如上定义的烷基基团。氨基基团可以是未取代的、单取代的或二取代的。氨基烷基基团的非限制性实例包括氨基甲基、二甲基氨基甲基和2-氨基丙-1-基。
除非另有说明，如本文所用，术语“环烷基”指具有从3至14个碳原子的饱和或不饱和的非芳族烃环基团。环烷基基团的非限制性实例包括但不限于环丙基、甲基-环丙基、2，2-二甲基-环丁基、2-乙基-环戊基和环己基。环烷基可以包括多个螺环或稠环。环烷基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“亚环烷基”指如本文所述的环烷基的二价基团。环亚烷基是环烷基的子集，指与环烷基相同的残基，但具有两个取代点。亚环烷基的实例包括亚环丙基
Figure 687303DEST_PATH_IMAGE007
、1，4-亚环己基
Figure 167962DEST_PATH_IMAGE008
和1，5-亚环辛基
Figure 912933DEST_PATH_IMAGE009
。亚环烷基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。亚环烷基基团可以是单-、二-或三-环的。
除非另有说明，如本文所用，术语“烯基”指含有至少一个碳-碳双键，并具有从2至10个碳原子的直链或支链的非芳族烃基团。在这样的基团中可以存在至多五个碳-碳双键。例如，“C2-C6”烯基定义为具有从2至6个碳原子的烯基基团。烯基基团的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基和环己烯基。烯基基团的直链、支链或环状部分可以含有双键，并且任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。术语“环烯基”指具有特定数量的碳原子和至少一个碳-碳双键的单环烃基基团。
除非另有说明，如本文所用，术语“炔基”指含有从2至10个碳原子，并且含有至少一个碳-碳三键的直链或支链的烃基基团。可以存在至多5个碳-碳三键。因此，“C2-C6炔基”指具有从2至6个碳原子的炔基基团。炔基基团的实例包括但不限于乙炔基、2-丙炔基和2-丁炔基。炔基基团的直链或支链部分可任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，“烷氧基（alkoxyl）”或“烷氧基（alkoxy）”指具有指定数目的碳原子的-O-烷基基团。例如，C1-6烷氧基意在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷氧基基团。例如C1-8烷氧基意在包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7和C8烷氧基基团。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、仲戊氧基、正庚氧基和正辛氧基。
如本文所用，“酮基”指通过羰基桥连接的本文定义的任何烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、杂芳基或芳基基团。酮基基团的实例包括但不限于烷酰基(例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基或己酰基)、烯酰基(例如丙烯酰基)、炔酰基(例如乙炔酰基、丙炔酰基、丁炔酰基、戊炔酰基或己炔酰基)、芳酰基(例如苯甲酰基)、杂芳酰基(例如吡咯酰基、咪唑酰基、喹啉酰基或吡啶酰基)。
如本文所用，“烷氧基羰基”指通过羰基桥连接的如上定义的任何烷氧基基团(即，-C (O) O-烷基)。烷氧基羰基基团的实例包括但不限于甲氧基羰基、乙氧基羰基、异丙氧基羰基、正丙氧基羰基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基或正戊氧基羰基。
如本文所用，“芳氧基羰基”指通过氧羰基桥连接的如本文定义的任何芳基基团(即，-C (O) O-芳基)。芳氧基羰基基团的实例包括但不限于苯氧基羰基和萘氧基羰基。
如本文所用，“杂芳氧基羰基”指通过氧羰基桥连接的如本文定义的任何杂芳基(即，-C (O) O-杂芳基)。杂芳氧基羰基的实例包括但不限于2-吡啶氧基羰基、2-噁唑氧基羰基、4-噻唑氧基羰基或嘧啶氧基羰基。
如本文所用，“芳基”或“芳族的”指在每个环中具有至多6个原子的任何稳定的单环或多环碳环，其中至少一个环是芳族的。芳基基团的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、四氢萘基、二氢茚基和联苯基。在其中芳基取代基是双环的并且一个环是非芳族的情况下，应理解连接是经由芳族环进行的。芳基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“亚芳基”指如本文所述的芳基的二价基团。亚芳基是芳基的子集，指与芳基相同的残基，但具有两个取代点。亚芳基的实例包括亚苯基，其指二价苯基。亚芳基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“卤素”指卤素基团。例如，“卤素”可以指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)基团。
如本文所用，术语“杂芳基”代表每个环中具有至多7个原子的稳定的单环或多环的环，其中至少一个环是芳族的，并且含有1-4个选自O、N和S的杂原子。杂芳基基团的实例包括但不限于吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、吡嗪基、吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑酮基（benzimidazolonyl）、苯并噁唑酮基（benzoxazolonyl）、喹啉基、异喹啉基、二氢异吲哚酮基（dihydroisoindolonyl）、咪唑并吡啶基、异吲哚酮基、吲唑基、噁唑基、噁二唑基、异噁唑基、吲哚基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基和四氢喹啉。“杂芳基”还应理解为包括任何含氮杂芳基的N-氧化物衍生物。在其中杂芳基取代基是双环的并且一个环是非芳族的或不含杂原子的情况下，应理解连接是经由芳族环或经由含杂原子的环进行的。杂芳基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“亚杂芳基”指如本文所述的杂芳基基团的二价基团。亚杂芳基是杂芳基的子集，指与杂芳基相同的残基，但具有两个取代点。亚杂芳基的实例包括亚吡啶基、亚嘧啶基和亚吡咯基。亚杂芳基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“杂环”、“ 杂环的”或“杂环基”指含有从1至4个选自O、N和S的杂原子的3-至14-元芳族或非芳族杂环，包括多环基团。如本文所用，术语“杂环的”也被认为与术语“杂环”和“杂环基”同义，并且应理解为也具有本文给出的相同定义。“杂环基”包括上述杂芳基，以及其二氢和四氢类似物。杂环基基团的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基（benzofurazanyl）、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲哚吖嗪基（indolazinyl）、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、萘吡啶基（naphthpyridinyl）、噁二唑基、氧代噁唑烷基、噁唑基、噁唑啉、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基、氧代吗啉基、异噁唑啉、氧杂环丁烷基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基（pyridopyridinyl）、哒嗪基、吡啶基、吡啶酮基、嘧啶基、嘧啶酮基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢噻喃基、四氢异喹啉基、四唑基、四唑并吡啶基（tetrazolopyridyl）、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、1，4-二氧杂环己烷基、六氢氮杂卓基（hexahydroazepinyl）、哌嗪基、哌啶基、吡啶-2-酮基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噁唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、二氧化硫代吗啉基、亚甲基二氧苯甲酰基、四氢呋喃基和四氢噻吩基，及其N-氧化物。杂环基取代基的连接可经由碳原子或经由杂原子发生。杂环基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“杂环烷基”指含有从1至4个选自O、N和S的杂原子的3-至14-元非芳族杂环，包括多环基团。杂环基基团的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基、氧代吗啉基、氧杂环丁烷基、吡喃基、吡啶酮基、嘧啶酮基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢噻喃基、四氢异喹啉基、1，4-二氧杂环己烷基、六氢氮杂卓基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氧化硫代吗啉基和四氢噻吩基，及其N-氧化物。杂环烷基取代基的连接可以经由碳原子或经由杂原子发生。杂环基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“亚杂环烷基”指如本文所述的杂环烷基基团的二价基团。亚杂环烷基是杂环烷基的子集，指与杂环烷基相同的残基，但具有两个取代点。亚杂环烷基的实例包括亚哌啶基、亚氮杂环丁烷基和亚四氢呋喃基。亚杂环烷基基团任选以正常化合价允许的方式在任何位置上被单-、二-、三-、四-或五-取代。
如本文所用，术语“治疗”（“treat”，“treatment”）等指为减轻或缓解对象中疾病的一种或多种症状的数量、严重性和/或频率所采取的方法或步骤。如本文所用，“治疗（treat）”和“治疗（treatment）”可包括预防、控制、预防性治疗和/或抑制对象中疾病的一种或多种症状的数量、严重性和/或频率。
如本文所用，短语“导入细胞”在指RNAi剂时，指将RNAi剂功能性递送入细胞。短语“功能性递送”指以使RNAi剂能够具有预期生物活性（例如，基因表达的序列特异性抑制）的方式将RNAi剂送递至细胞。
除非另有说明，本文所用的符号
Figure 504452DEST_PATH_IMAGE010
的用途指任何一个或多个基团可与其连接，这符合本文所述发明的范围。
如本文所用，术语“异构体”指具有相同分子式但在其原子的性质或键合顺序或其原子的空间排列上不同的化合物。在其原子空间排列方面不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不成镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，并且不能重叠镜像的立体异构体称为“对映异构体”，或有时称为光学异构体。与四个不相同取代基键合的碳原子被称为“手性中心”。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心时（对其异构体结构没有具体定义），预期该化合物可单独地包括E和Z几何异构体二者或包括其混合物。式I化合物或其药学上可接受的盐，例如，意在包括所有可能的异构体，以及它们的外消旋和光学纯的形式。同样，除非另有明确说明，预期所有互变异构形式也包括在内。
如本文所用，连接基团是将一个分子或分子的一部分连接到另一个分子或分子的另一部分的一个或多个原子。在本领域中，术语连接基团和间隔基团有时可互换使用。类似地，如本领域中所用，术语支架有时与连接基团互换使用。在一些实施方案中，连接基团可包括肽可裂解的连接基团。在一些实施方案中，连接基团可以包括肽苯丙氨酸-瓜氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸或由其组成。在一些实施方案中，连接基团可以包括PEG基团或由其组成。
如本文所用，术语“连接”在涉及两个分子之间的连接时意指两个分子通过共价键连接或两个分子经由非共价键(例如氢键或离子键)缔合。在一些实例中，当术语“连接”指两个分子之间经由非共价键的缔合时，两个不同分子之间的缔合在生理学可接受的缓冲液(例如，磷酸盐缓冲盐水)中具有小于1×10-4M (例如，小于1×10-5M、小于1×10-6M或小于1×10-7M)的KD。除非另有说明，如本文所用的术语连接可以指第一化合物和第二化合物之间的连接，其中具有或不具有任何插入的原子或原子团。
本领域普通技术人员将容易理解和领会，本文公开的化合物和组合物可具有质子化或去质子化状态的某些原子(例如，N、O或S原子)，这取决于化合物或组合物所处的环境。因此，如本文所用，本文所公开的结构设想某些官能团，诸如，例如OH、SH或NH可被质子化或去质子化。如本领域普通技术人员将容易理解的，本文的公开内容旨在涵盖所公开的化合物和组合物，而不管它们基于环境pH的质子化状态。
结构可以描述为具有“浮动”在环结构上的键，以表示以化合价所允许的方式与环上的任何碳或杂原子的结合。例如，结构
Figure 464318DEST_PATH_IMAGE011
表示R可以替代环上五个可用位置中的任何一个位置上的任何氢原子。“浮动”键也可用于双环结构中以表示以化合价所允许的方式与双环的任一环上任何位置的键合。在双环的情况下，键将显示为“浮动”在两个环上，例如
Figure 115879DEST_PATH_IMAGE012
表示R可以替代环上七个可用位置中的任何一个位置上的任何氢原子。
如本文权利要求中所用，短语“由…组成”排除权利要求中未指明的任何要素、步骤或成分。当在本文的权利要求中使用时，短语“基本上由…组成”将权利要求的范围限制到指定的材料或步骤以及那些不实质上影响要求保护的本发明的一个或多个基本和新颖特征的材料或步骤。
本文描述了所述αvβ6整联蛋白配体靶向和递送被转运的分子至表达αvβ6整联蛋白的细胞的用途。被转运的分子可以在体外、原位、离体或体内递送至细胞。
在式Ib的一些实施方案中，连接基团是含有2-20个乙二醇单元的PEG基团。
在式Ib的一些实施方案中，反应性基团是叠氮化物。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体具有包括、由其组成或基本上由其组成的以下代表的任何结构或其药学上可接受的盐的结构：
Figure 895616DEST_PATH_IMAGE013
(结构1)；
Figure 228508DEST_PATH_IMAGE014
(结构2)；
Figure 42880DEST_PATH_IMAGE015
(结构5)；
Figure 865343DEST_PATH_IMAGE016
(结构5.1)；
Figure 132376DEST_PATH_IMAGE017
(结构5.2)；
Figure 518227DEST_PATH_IMAGE018
(结构6)；
Figure 187106DEST_PATH_IMAGE019
(结构6.1)；
Figure 180470DEST_PATH_IMAGE020
(结构6.2)；
Figure 934799DEST_PATH_IMAGE021
(结构6.3)；
Figure 875073DEST_PATH_IMAGE022
(结构6.4)；
Figure 398458DEST_PATH_IMAGE023
(结构7)；
Figure 562724DEST_PATH_IMAGE024
(结构8)；
Figure 804349DEST_PATH_IMAGE025
(结构9)；
Figure 345052DEST_PATH_IMAGE026
(结构10)；
Figure 909894DEST_PATH_IMAGE027
(结构11)；
Figure 510640DEST_PATH_IMAGE028
(结构12)；
Figure 973982DEST_PATH_IMAGE029
(结构13)；
Figure 318376DEST_PATH_IMAGE030
(结构14)；
Figure 488457DEST_PATH_IMAGE031
(结构15)；
Figure 260104DEST_PATH_IMAGE032
(结构16)；
Figure 210743DEST_PATH_IMAGE033
(结构17)；
Figure 93248DEST_PATH_IMAGE034
(结构18)；
Figure 632683DEST_PATH_IMAGE035
(结构19)；
Figure 575231DEST_PATH_IMAGE036
(结构20)；
Figure 13165DEST_PATH_IMAGE037
(结构22)；
Figure 699362DEST_PATH_IMAGE038
(结构23)；
Figure 906352DEST_PATH_IMAGE039
(结构24)；
Figure 957485DEST_PATH_IMAGE040
(结构25)；
Figure 882715DEST_PATH_IMAGE041
(结构27)；
Figure 107023DEST_PATH_IMAGE042
(结构29)；
Figure 434099DEST_PATH_IMAGE043
(结构30)；
Figure 639822DEST_PATH_IMAGE044
(结构31)；
Figure 52348DEST_PATH_IMAGE045
(结构32)；
Figure 80347DEST_PATH_IMAGE046
(结构33)；
Figure 261930DEST_PATH_IMAGE047
(结构34)；
Figure 717182DEST_PATH_IMAGE048
(结构35)；
Figure 289109DEST_PATH_IMAGE049
(结构36)；和
Figure 855219DEST_PATH_IMAGE050
(结构37)，
其中
Figure 156888DEST_PATH_IMAGE051
指示与包含被转运的分子的部分的连接点。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体可与一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30；或1至30、1至25、1至20、1至15、1至10、1至5、5至30、5至25、5至20、5至15、5至10、10至30、10至25、10至20、10至15、15至30、15至25、15至20、20至30、20至25或25至30)被转运的分子(例如，本文描述的或本领域已知的任何被转运的分子) 缀合。
在一些实施方案中，多于一个本文公开的αvβ6整联蛋白配体(例如，2、3、4、5、6、7、8或1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4、2至3、3至8、3至7、3至6、3至5、3至4、4至8、4至7、4至6或4至5个αvβ6整联蛋白配体)可与一个被转运的分子(例如，本文描述的或本领域已知的任何被转运的分子) 缀合。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体任选经由连接基团，诸如，例如聚乙二醇(PEG)基团与一个或多个被转运的分子缀合。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体任选经由支架与一个或多个被转运的分子缀合，所述支架包括对每个配体的至少一个连接点和对每个被转运的分子的至少一个连接点。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体包含一个被转运的分子、由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体包含多于一个被转运的分子、由其组成或基本上由其组成。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体包含如下结构的任一个、由如下结构的任一个组成或基本上由如下结构的任一个组成：结构1、结构2、结构5、结构5.1、结构5.2、结构6、结构6.1、结构6.2、结构6.3、结构6.4、结构7、结构8、结构9、结构10、结构11、结构12、结构13、结构14、结构15、结构16、结构17、结构18、结构19、结构20、结构22、结构23、结构24、结构25、结构27、结构29、结构30、结构31、结构32、结构33、结构34、结构35、结构36或结构37，每个结构如本文所公开。
本文公开的任何αvβ6整联蛋白配体可以与被转运的分子、反应性基团和/或受保护的反应性基团连接。反应性基团可用于促进αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子的缀合。本文公开的αvβ6整联蛋白配体可以增加被转运的分子对αvβ6整联蛋白或对表达αvβ6整联蛋白的细胞的靶向。被转运的分子可以是但不限于药物活性成分或化合物、前药或具有已知治疗益处的其它物质。在一些实施方案中，被转运的分子可以是但不限于小分子、抗体、抗体片段、免疫球蛋白、单克隆抗体、标记或标志物、脂质、天然或修饰的基于寡核苷酸的化合物(例如反义寡核苷酸或RNAi剂)、天然或修饰的核酸、肽、核酸适配体、聚合物、多胺、蛋白质、毒素、维生素、聚乙二醇、半抗原、地高辛、生物素、放射性原子或分子、或荧光团。在一些实施方案中，被转运的分子包括药物活性成分或前药。在一些实施方案中，被转运的分子包括基于寡核苷酸的化合物作为药物活性成分。在一些实施方案中，被转运的分子包括RNAi剂作为药物活性成分。
在一个方面，本发明提供了包含如本文所述的αvβ6整联蛋白配体、连接基团和支架的结构，其中所述支架结合至被转运的分子。在一些实施方案中，结构可包含单齿形式的配体。在一些实施方案中，结构可以包含二齿形式的配体。在一些实施方案中，结构可以包含三齿形式的配体。在一些实施方案中，结构可以包含四齿形式的配体。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 783041DEST_PATH_IMAGE052
(结构1)。
在一些实施方案中，结构1的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 91532DEST_PATH_IMAGE053
(结构1a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构
Figure 461333DEST_PATH_IMAGE054
(结构1b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 617508DEST_PATH_IMAGE055
(结构2)。
在一些实施方案中，结构2的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 414563DEST_PATH_IMAGE056
(结构2a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 23398DEST_PATH_IMAGE057
(结构2b)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 868995DEST_PATH_IMAGE058
(结构5)。
在一些实施方案中，结构5的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 879676DEST_PATH_IMAGE059
(结构5a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 847632DEST_PATH_IMAGE060
(结构5b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 943764DEST_PATH_IMAGE061
(结构5.1)。
在实施方案中，PEG-叠氮化物反应性基团中PEG的长度可以变化。在一些实施方案中，结构5.1的αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 859897DEST_PATH_IMAGE062
(结构5.1b)。
反应性基团(或受保护的反应性基团)可用于促进αvβ6整联蛋白配体与目标分子例如被转运的分子的缀合(直接或经由一个或多个支架和/或接头)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 725085DEST_PATH_IMAGE063
(结构5.2)。
在一些实施方案中，结构5.2的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，PEG-叠氮化物反应性基团可被烷基-叠氮化物反应性基团替代。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括烷基-叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 863942DEST_PATH_IMAGE064
(结构5.2b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 447370DEST_PATH_IMAGE065
(结构6)。
在一些实施方案中，结构6的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 900348DEST_PATH_IMAGE066
(结构6a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 620043DEST_PATH_IMAGE067
(结构6b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 929801DEST_PATH_IMAGE068
(结构6.1)。
在一些实施方案中，结构6.1的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在实施方案中，PEG-叠氮化物反应性基团中PEG的长度可以变化。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 525DEST_PATH_IMAGE069
(结构6.1b)。
反应性基团(或受保护的反应性基团)可用于促进αvβ6整联蛋白配体与目标分子例如被转运的分子的缀合(直接或经由一个或多个支架和/或接头)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 53932DEST_PATH_IMAGE070
(结构6.2)。
在一些实施方案中，结构6.2的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，PEG-叠氮化物反应性基团可被烷基-叠氮化物反应性基团替代。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括烷基-叠氮化物反应性基团，并且包含以下结构：
Figure 80663DEST_PATH_IMAGE071
(结构6.2b)。
反应性基团(或受保护的反应性基团)可用于促进αvβ6整联蛋白配体与目标分子例如被转运的分子的缀合(直接或经由一个或多个支架和/或接头)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 561323DEST_PATH_IMAGE072
(结构6.3)。
在一些实施方案中，结构6.3的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子。在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括叠氮化物反应性基团并包含以下结构：
Figure 119343DEST_PATH_IMAGE073
(结构6.3b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 710861DEST_PATH_IMAGE074
(结构6.4)。
在一些实施方案中，结构6.4的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括叠氮化物反应性基团并包含以下结构：
Figure 342831DEST_PATH_IMAGE075
(结构6.4b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 259971DEST_PATH_IMAGE076
(结构7)。
在一些实施方案中，结构7的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 39708DEST_PATH_IMAGE077
(结构7a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括PEG-叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 434918DEST_PATH_IMAGE078
(结构7b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 249290DEST_PATH_IMAGE079
(结构8)。
在一些实施方案中，结构8的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 258703DEST_PATH_IMAGE080
(结构8a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括PEG-叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 525736DEST_PATH_IMAGE081
(结构8b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 724637DEST_PATH_IMAGE082
(结构9)。
在一些实施方案中，结构9的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 393515DEST_PATH_IMAGE083
(结构9a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 324562DEST_PATH_IMAGE084
(结构9b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 78892DEST_PATH_IMAGE085
(结构10)。
在一些实施方案中，结构10的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 815903DEST_PATH_IMAGE086
(结构10a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 339289DEST_PATH_IMAGE087
(结构10b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 956084DEST_PATH_IMAGE088
(结构11)。
在一些实施方案中，结构11的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 197709DEST_PATH_IMAGE089
(结构11a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 472833DEST_PATH_IMAGE090
(结构11b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 116304DEST_PATH_IMAGE091
(结构12)。
在一些实施方案中，结构12的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 451470DEST_PATH_IMAGE092
(结构12a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 118075DEST_PATH_IMAGE093
(结构12b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 196889DEST_PATH_IMAGE094
(结构13)。
在一些实施方案中，结构13的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 694867DEST_PATH_IMAGE095
(结构13a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 653464DEST_PATH_IMAGE096
(结构13b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 604103DEST_PATH_IMAGE097
(结构14)。
在一些实施方案中，结构14的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 486608DEST_PATH_IMAGE098
(结构14a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 839092DEST_PATH_IMAGE099
(结构14b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 781640DEST_PATH_IMAGE100
(结构15)。
在一些实施方案中，结构15的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 157258DEST_PATH_IMAGE101
(结构15a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 577875DEST_PATH_IMAGE102
(结构15b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 50445DEST_PATH_IMAGE103
(结构16)。
在一些实施方案中，结构16的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 163894DEST_PATH_IMAGE104
(结构16a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 276075DEST_PATH_IMAGE105
(结构16b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 500383DEST_PATH_IMAGE106
(结构17)。
在一些实施方案中，结构17的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 561880DEST_PATH_IMAGE107
(结构17a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 846231DEST_PATH_IMAGE108
(结构17b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 258758DEST_PATH_IMAGE109
(结构18)。
在一些实施方案中，结构18的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 224440DEST_PATH_IMAGE110
(结构18a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 406022DEST_PATH_IMAGE111
(结构18b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 595695DEST_PATH_IMAGE112
(结构19)。
在一些实施方案中，结构19的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 495518DEST_PATH_IMAGE113
(结构19a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 248580DEST_PATH_IMAGE114
(结构19b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 550248DEST_PATH_IMAGE115
(结构20)。
在一些实施方案中，结构20的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 910822DEST_PATH_IMAGE116
(结构20a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 297941DEST_PATH_IMAGE117
(结构20b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 605426DEST_PATH_IMAGE118
(结构22)。
在一些实施方案中，结构22的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 496021DEST_PATH_IMAGE119
(结构22a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 293076DEST_PATH_IMAGE120
(结构22b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 901912DEST_PATH_IMAGE121
(结构23)。
在一些实施方案中，结构23的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 75404DEST_PATH_IMAGE122
(结构23a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 273036DEST_PATH_IMAGE123
(结构23b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 240992DEST_PATH_IMAGE124
(结构24)。
在一些实施方案中，结构24的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 337124DEST_PATH_IMAGE125
(结构24a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 48728DEST_PATH_IMAGE126
(结构24b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 851599DEST_PATH_IMAGE127
(结构25)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 990456DEST_PATH_IMAGE128
(结构25a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 573885DEST_PATH_IMAGE129
(结构25b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 823600DEST_PATH_IMAGE130
(结构27)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 1684DEST_PATH_IMAGE131
(结构27a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 311442DEST_PATH_IMAGE132
(结构27b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 382167DEST_PATH_IMAGE133
(结构29)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 435573DEST_PATH_IMAGE134
(结构29a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 275353DEST_PATH_IMAGE135
(结构29b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 693696DEST_PATH_IMAGE136
(结构30)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 986137DEST_PATH_IMAGE137
(结构30a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 843235DEST_PATH_IMAGE138
(结构30b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 537522DEST_PATH_IMAGE139
(结构31)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 376033DEST_PATH_IMAGE140
(结构31a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 421350DEST_PATH_IMAGE141
(结构31b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 816559DEST_PATH_IMAGE142
(结构32)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 365352DEST_PATH_IMAGE143
(结构32a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 391077DEST_PATH_IMAGE144
(结构32b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 658110DEST_PATH_IMAGE145
(结构33)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 857010DEST_PATH_IMAGE146
(结构33a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 260310DEST_PATH_IMAGE147
(结构33b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 519253DEST_PATH_IMAGE148
(结构34)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 460533DEST_PATH_IMAGE149
(结构34a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 197545DEST_PATH_IMAGE150
(结构34b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 720930DEST_PATH_IMAGE151
(结构35)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 150774DEST_PATH_IMAGE152
(结构35a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 64504DEST_PATH_IMAGE153
(结构35b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 605206DEST_PATH_IMAGE154
(结构36)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 248677DEST_PATH_IMAGE155
(结构36a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 583844DEST_PATH_IMAGE156
(结构36b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含以下结构：
Figure 312765DEST_PATH_IMAGE157
(结构37)。
在一些实施方案中，结构25的αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子(例如一个或多个RNAi剂)连接。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子，并且包含以下结构：
Figure 578531DEST_PATH_IMAGE158
(结构37a)，
其中X包括反应性基团、受保护的反应性基团或被转运的分子(例如RNAi剂)。
在一些实施方案中，αvβ6整联蛋白配体可被合成以包括聚乙二醇(PEG) -叠氮化物反应性基团，并包含以下结构：
Figure 76508DEST_PATH_IMAGE159
(结构37b)。
结构1a、结构1b、结构2a、结构2b、结构5a、结构5b、结构6a、结构6b、结构7a、结构7b、结构8a、结构8b、结构9a、结构9b、结构10a、结构10b、结构11a、结构11b、结构12a、结构12b、结构13a、结构13b、结构14a、结构14b、结构15a、结构15b、结构16a、结构16b、结构17a、结构17b、结构18a、结构18b、结构19a、结构19b、结构20a、结构20b、结构22a、结构22b、结构23a、结构23b、结构24a、结构24b、结构25a、结构25b、结构27a、结构27b、结构29a、结构29b、结构30a、结构30b、结构31a、结构31b、结构32a、结构32b、结构33a、结构33b、结构34a、结构34b、结构35a、结构35b、结构36a、结构36b、结构37a或结构37b的任一种中公开的反应性基团可用于将αvβ6整联蛋白配体连接至感兴趣的分子，即被转运的分子，诸如RNAi剂。被转运的分子可以是被期望靶向于表达αvβ6整联蛋白的细胞的任何分子。
多齿αvβ6整联蛋白配体和支架
如本文所公开的，在一些实施方案中，一个或多个αvβ6整联蛋白配体可与一个或多个被转运的分子连接。在一些实施方案中，仅一个αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子缀合(本文称为“单齿”或“单价”配体)。在一些实施方案中，两个αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子缀合(本文称为“二齿”或“二价”配体)。在一些实施方案中，三个αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子缀合(本文称为“三齿”或“三价”配体)。在一些实施方案中，四个αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子缀合(本文称为“四齿”或“四价”配体)。在一些实施方案中，多于四个αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子缀合。
在一些实施方案中，当仅一个αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子缀合(本文称为“单齿”配体)时，αvβ6整联蛋白配体可直接与被转运的分子缀合。在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体可以经由支架或其它接头结构与被转运的分子缀合。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包括一个或多个支架。支架，有时在本领域也称为连接基团或接头，可用于促进一个或多个被转运的分子与本文公开的一个或多个αvβ6整联蛋白配体的连接。与本文公开的配体相容的有用支架通常是本领域已知的。可与本文公开的αvβ6整联蛋白配体一起使用的支架的非限制性实例包括但不限于聚合物和聚氨基酸(例如，双谷氨酸、聚-L-赖氨酸等)。在一些实施方案中，支架可以包括半胱氨酸接头或基团、DBCO-PEG1-24-NHS、炔丙基-PEG1-24-NHS和/或多齿DBCO和/或炔丙基部分。
在一些实施方案中，用于将本文公开的一个或多个αvβ6整联蛋白配体与一个或多个被转运的分子连接的支架具有以下结构：
Figure 582576DEST_PATH_IMAGE160
(支架1)。
例如，支架1的使用促进与αvβ6整联蛋白配体单体和一个或多个被转运的分子两者的有效缀合。支架1包括胺反应性对硝基苯酚(也称为4-硝基苯酚)酯、酰胺键和三个PEG2单元，以及末端炔。4-硝基苯酚酯可以通过酰胺形成与被转运的分子上的伯胺(诸如用末端胺基(例如NH2-C6)配制的RNA引发剂上的伯胺)缀合。末端炔可以通过铜催化的点击化学与叠氮基修饰的配体(肽和小分子两者)缀合。
在一些实施方案中，被转运的分子是RNAi剂。在一些实施方案中，支架1可以与RNAi剂的末端连接，诸如与RNAi剂的有义链的5'末端连接。例如，可以修饰RNAi剂的有义链的5'末端以包括连接至RNAi剂的5'末端核苷酸的5'末端的C6胺(-C6-NH2)。具有这样的C6胺修饰(或产生末端胺的其它修饰)的RNAi剂可容易地与支架1缀合，如下述结构中的表述所示：
Figure 798793DEST_PATH_IMAGE161
(结构380)， 其中
Figure 618982DEST_PATH_IMAGE162
表示RNAi 剂。
然后，可以将上述结构380的炔基与本文公开的αvβ6整联蛋白配体缀合以形成三齿αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，支架可使用DBCO (二苯并环辛炔)合成，其可由以下结构代表：
Figure 971466DEST_PATH_IMAGE163
(结构381)， 其中
Figure 914014DEST_PATH_IMAGE164
表示与包含被转运的分子的反应性基团或部分的连接。
在一些实施方案中，在RNAi剂和本文公开的αvβ6整联蛋白配体之间形成三唑基团，如下列通用结构所示：
Figure 351949DEST_PATH_IMAGE165
(结构390)， 其中
Figure 959516DEST_PATH_IMAGE166
表示可用于将配体与RNAi剂连接的任何合适的支架或连接基团，并且
Figure 432086DEST_PATH_IMAGE167
表示RNAi剂。
在一些实施方案中，支架可以被合成为亚磷酰胺化合物，其可以允许三齿配体通过亚磷酰胺合成容易地偶联至RNAi剂的有义链的5'末端，如下述结构所示：
Figure 279956DEST_PATH_IMAGE168
(结构400)。
在合成以将结构400的化合物连接至RNAi剂的有义链的5'末端后，末端炔可然后被连接至本文公开的αvβ6整联蛋白配体。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含结构1、结构2、结构5、结构5.1、结构5.2、结构6、结构6.1、结构6.2、结构6.3、结构6.4、结构7、结构8、结构9、结构10、结构11、结构12、结构13、结构14、结构15、结构16、结构17、结构18、结构19、结构20、结构22、结构23、结构24、结构25、结构27、结构29、结构30、结构31、结构32、结构33、结构34、结构35、结构36、结构37，其中αvβ6整联蛋白配体是经由支架连接的三齿配体。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含三齿形式的结构2，并且可以由以下结构代表：
Figure 205187DEST_PATH_IMAGE169
(结构700)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含三齿形式的结构6.1，并且可以由以下结构代表：
Figure 367178DEST_PATH_IMAGE170
(结构701)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含三齿形式的结构6.1，并且可以由以下结构代表：
Figure 694254DEST_PATH_IMAGE171
(结构701a)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含包括戊二酸基接头的三齿形式的结构6.1，并且可以由以下结构代表：
Figure 978605DEST_PATH_IMAGE172
(结构701b)。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含与RNAi剂缀合的三齿形式的结构6.1，并且可以由以下结构代表：
Figure 391132DEST_PATH_IMAGE173
(结构701c)，其中
Figure 153551DEST_PATH_IMAGE174
表示RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含三齿形式的结构6.1，并且可以由以下结构代表：
Figure 522085DEST_PATH_IMAGE175
(结构701d)， 其中
Figure 977337DEST_PATH_IMAGE176
表示可用于连接配体和被转运的分子的任何合适的支架。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体包含与RNAi剂缀合的三齿形式的结构6.1，并且可以由以下结构代表：
Figure 877160DEST_PATH_IMAGE177
(结构701e) ， 其中
Figure 443270DEST_PATH_IMAGE178
表示可用于连接配体和RNAi剂的任何合适的支架，并且
Figure 417042DEST_PATH_IMAGE179
表示RNAi剂。
反应性基团和受保护的反应性基团
反应性基团是本领域公知的，并且提供两个分子或反应物之间的共价键的形成。用于本发明范围的合适的反应性基团包括但不限于：氨基、酰胺基、羧酸基、叠氮化物、炔、炔丙基、BCN (二环[6.1.0]壬炔、DBCO (二苯并环辛炔)、硫醇、马来酰亚胺基、氨基氧基、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或其它活化酯(例如PNP、TFP、PFP)、溴基、醛、碳酸酯基、甲苯磺酸酯基、四嗪、反式环辛烯(TCO)、酰肼、羟基、二硫化物和邻吡啶基二硫化物基团。
反应性基团的并入可促进本文所公开的αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子的缀合。缀合反应是本领域公知的，并且提供了两个分子或反应物之间的共价键的形成。用于本发明范围的合适的缀合反应包括但不限于酰胺偶联反应、迈克尔加成反应、腙形成反应和点击化学环加成反应。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白靶向配体被合成为四氟苯基(TFP)酯，其可以被反应性氨基取代以连接被转运的分子。在一些实施方案中，本文公开的整联蛋白靶向配体被合成为叠氮化物，其可例如经由点击化学环加成反应与炔丙基或DBCO基团缀合，以连接被转运的分子。
受保护的反应性基团也是本领域常用的。保护基提供在非保护基团反应的条件下反应性基团向不反应的基团的暂时化学转化，例如，在随后的化学反应中提供化学选择性。用于本发明范围的合适的受保护的反应性基团包括，但不限于，BOC基团(叔丁氧基羰基)、Fmoc (9-芴基甲氧基羰基)、羧基苄基(CBZ)基团、苄基酯和PBF (2，2，4，6，7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基)。
被转运的分子(包括RNAi剂)
被转运的分子是当与本文所述的αvβ6整联蛋白配体分离时将对包含αvβ6整联蛋白受体的细胞具有期望的作用的任何分子。被转运的分子可以是但不限于药物成分、药物产品、前药、具有已知治疗益处的物质、小分子、抗体、抗体片段、免疫球蛋白、单克隆抗体、标记或标志物、脂质、天然或修饰的核酸或多核苷酸、肽、聚合物、多胺、蛋白质、核酸适配体、毒素、维生素、PEG、半抗原、地高辛、生物素、放射性原子或分子、或荧光团。在一些实施方案中，一种或多种被转运的分子(例如，相同或不同的被转运的分子)与一种或多种αvβ6整联蛋白配体连接，以将被转运的分子靶向表达αvβ6整联蛋白的细胞。
在一些实施方案中，一种或多种被转运的分子是药物成分或药物组合物。在一些实施方案中，一种或多种被转运的分子是基于寡核苷酸的化合物。如本文所用，“基于寡核苷酸的化合物”是包含约10-50 (例如，10至48、10至46、10至44、10至42、10至40、10至38、10至36、10至34、10至32、10至30、10至28、10至26、10至24、10至22、10至20、10至18、10至16、10至14、10至12、12至50、12至48、12至46、12至44、12至42、12至40、12至38、12至36、12至34、12至32、12至30、12至28、12至26、12至24、12至22、12至20、12至18、12至16、12至14、14至50、14至48、14至46、14至44、14至42、14至40、14至38、14至36、14至34、14至32、14至30、14至28、14至26、14至24、14至22、14至20、14至18、14至16、16至50、16至48、16至46、16至44、16至42、16至40、16至38、16至36、16至34、16至32、16至30、16至28、16至26、16至24、16至22、16至20、16至18、18至50、18至48、18至46、18至44、18至42、18至40、18至38、18至36、18至34、18至32、18至30、18至28、18至26、18至24、18至22、18至20、20至50、20至48、20至46、20至44、20至42、20至40、20至38、20至36、20至34、20至32、20至30、20至28、20至26、20至24、20至22、22至50、22至48、22至46、22至44、22至42、22至40、22至38、22至36、22至34、22至32、22至30、22至28、22至26、22至24、24至50、24至48、24至46、24至44、24至42、24至40、24至38、24至36、24至34、24至32、24至30、24至28、24至26、26至50、26至48、26至46、26至44、26至42、26至40、26至38、26至36、26至34、26至32、26至30、26至28、28至50、28至48、28至46、28至44、28至42、28至40、28至38、28至36、28至34、28至32、28至30、30至50、30至48、30至46、30至44、30至42、30至40、30至38、30至36、30至34、30至32、32至50、32至48、32至46、32至44、32至42、32至40、32至38、32至36、32至34、34至50、34至48、34至46、34至44、34至42、34至40、34至38、34至36、36至50、36至48、36至46、36至44、36至42、36至40、36至38、38至50、38至48、38至46、38至44、38至42、38至40、40至50、40至48、40至46、40至44、40至42、42至50、42至48、42至46、42至44、44至50、44至48、44至46、46至50、46至48或48至50)个核苷酸或核苷酸碱基对的核苷酸序列。在一些实施方案中，基于寡核苷酸的化合物具有与细胞内表达的靶核酸或靶基因中的编码序列至少部分互补的核碱基序列。在一些实施方案中，基于寡核苷酸的化合物在递送至表达基因的细胞后能够抑制潜在基因的表达，并且在本文中称为“表达抑制性基于寡核苷酸的化合物”。基因表达可以在体外或体内被抑制。
“基于寡核苷酸的化合物”包括但不限于：单链寡核苷酸、单链反义寡核苷酸、短干扰RNA (siRNA)、双链RNA (dsRNA)、微RNA (miRNA)、短发夹RNA (shRNA)、核酶、干扰RNA分子和dicer底物。在一些实施方案中，基于寡核苷酸的化合物是单链寡核苷酸，诸如反义寡核苷酸。在一些实施方案中，基于寡核苷酸的化合物是双链寡核苷酸。在一些实施方案中，基于寡核苷酸的化合物是双链寡核苷酸，其是RNAi剂。
在一些实施方案中，一种或多种被转运的分子是“RNAi剂”，其如本文所定义是含有RNA或RNA样(例如，化学修饰的RNA)寡核苷酸分子的组合物，所述RNA或RNA样寡核苷酸分子能够以序列特异性方式降解或抑制靶mRNA的信使RNA (mRNA)转录物的翻译。如本文所用，RNAi剂可通过RNA干扰机制(即，通过与哺乳动物细胞的RNA干扰途径机制(RNA诱导的沉默复合体或RISC)相互作用诱导RNA干扰)或通过任何一种或多种替代机制或途径起作用。尽管据信，RNAi剂，如本文所用的术语，主要通过RNA干扰机制起作用，但所公开的RNAi剂不受任何特定途径或作用机制的束缚或限制。本文公开的RNAi剂由有义链和反义链组成，并且包括但不限于：短(或小)干扰RNA (siRNA)、双链RNA (dsRNA)、微RNA (miRNA)、短发夹RNA (shRNA)和dicer底物。本文所述RNAi剂的反义链至少部分地与被靶向的mRNA互补。RNAi剂可包括一种或多种修饰的核苷酸和/或一种或多种非磷酸二酯键。
通常，RNAi剂可至少由包括第一序列的有义链(也称为过客链)和包括第二序列的反义链(也称为引导链)组成。RNAi剂有义链和反义链的长度可以各自为16至49个核苷酸的长度。在一些实施方案中，RNAi剂的有义链和反义链的长度独立地为17至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为19至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21至24个核苷酸。有义链和反义链可以是相同长度或不同长度。RNAi剂包括与靶基因中的序列至少部分互补的反义链序列，并且在递送至表达靶的细胞后，RNAi剂可在体内或体外抑制一种或多种靶基因的表达。
基于寡核苷酸的化合物，特别是RNAi剂，通常可以由修饰的核苷酸和/或一种或多种非磷酸二酯键组成。如本文所用，“修饰的核苷酸”是核糖核苷酸(2' -羟基核苷酸)以外的核苷酸。在一些实施方案中，至少50% (例如，至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)的核苷酸是修饰的核苷酸。如本文所用，修饰的核苷酸包括但不限于脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、无碱基核苷酸、2' -修饰的核苷酸、3'至3'键(反向)核苷酸、含非天然碱基的核苷酸、桥连核苷酸、肽核酸、2'，3'-无环核苷酸模拟物(未锁定的核碱基类似物)、锁定的核苷酸、3' -O-甲氧基(2'核苷间连接的)核苷酸、2'-F-阿拉伯糖核苷酸、5' -Me，2' -氟核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基膦酸酯脱氧核糖核苷酸、含乙烯基膦酸酯的核苷酸和含环丙基膦酸酯的核苷酸。 2' -修饰的核苷酸(即在五元糖环的2'位具有羟基以外的基团的核苷酸)包括但不限于2'-O-甲基核苷酸、2' -脱氧-2'-氟核苷酸、2' -脱氧核苷酸、2' -甲氧基乙基(2' -O-2-甲氧基乙基)核苷酸、2' -氨基核苷酸和2' -烷基核苷酸。
此外，基于寡核苷酸的化合物(诸如RNAi剂)的一个或多个核苷酸可通过非标准键或骨架(即，修饰的核苷间键或修饰的骨架)连接。修饰的核苷间键合可以是含非磷酸酯的共价核苷间键。修饰的核苷间键或骨架包括但不限于5' -硫代磷酸酯基团、手性硫代磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基-磷酸三酯、烷基膦酸酯(例如甲基膦酸酯或3' -亚烷基膦酸酯)、手性膦酸酯、次膦酸酯、磷酰胺酯(例如3' -氨基磷酰胺酯、氨基烷基磷酰胺酯或硫代磷酰胺酯)、硫代烷基-膦酸酯、硫代烷基磷酸三酯、吗啉代键、具有正常3' -5'键的硼烷磷酸酯、硼烷磷酸酯的2' -5'连接类似物、或具有相反极性的硼烷磷酸酯，其中相邻的核苷单元对连接3' -5'至5' -3'或2' -5'至5' -2'。
给定化合物中的所有位置不必均匀地修饰。相反，可以将多于一种修饰并入单个基于寡核苷酸的化合物中或甚至其单个核苷酸中。
在一些实施方案中，被转运的分子是用于抑制αENaC基因表达的RNAi剂。被转运的分子可以是国际专利申请No. PCT/US18/40874中描述的RNAi剂，该专利申请通过引用整体并入本文。
RNAi剂有义链和反义链可通过本领域已知的方法合成和/或修饰。例如，涉及抑制α-ENaC表达的RNAi剂的公开内容可以见于例如国际专利申请公开No. WO2008/152131，其通过引用整体并入本文。与RNAi剂相关的其它公开内容可以见于例如修改的公开内容，可以见于例如Arrowahead Pharmaceuticals，Inc的国际专利申请No. PCT/US2017/0455446，该专利申请也通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，一种或多种被转运的分子可以包括PEG部分或由PEG部分组成，所述PEG部分可以作为药代动力学(PK)调节剂。在一些实施方案中，一种或多种被转运的分子可包括具有约20-900个亚乙基氧(CH2-CH2-O)单元的PEG部分(例如，20至850、20至800、20至750、20至700、20至650、20至600、20至550、20至500、20至450、20至400、20至350、20至300、20至250、20至200、20至150、20至100、20至75、20至50、100至850、100至800、100至750、100至700、100至650、100至600、100至550、100至500、100至450、100至400、100至350、100至300、100至250、100至200、100至150、200至850、200至800、200至750、200至700、200至650、200至600、200至550、200至500、200至450、200至400、200至350、200至300、200至250、250至900、250至850、250至800、250至750、250至700、250至650、250至600、250至550，250至500、250至450、250至400、250至350、250至300、300至900，300至850、300至800、300至750、300至700、300至650、300至600、300至550、300至500、300至450、300至400、300至350、350至900、350至850、350至800、350至750、350至700、350至650、350至600、350至550、350至500、350至450、350至400、400至900、400至850、400至800、400至750、400至700、400至650、400至600、400至550、400至500、400至450、450至900、450至850、450至800、450至750、450至700、450至650、450至600、450至550、450至500、500至900、500至850、500至800、500至750、500至700、500至650、500至600、500至550、550至900、550至850、550至800、550至750、550至700、550至650、550至600、600至900、600至850、600至800、600至750、600至700、600至650、650至900、650至850、650至800、650至750、650至700、700至900、700至850、700至800、700至750、750至900、750至850、750至800、800至900、850至900或850至900个亚乙基氧单元)。在一些实施方案中，所述一种或多种被转运的分子由具有约455个亚乙基氧单元(约20千道尔顿(kDa)分子量)的PEG部分组成。在一些实施方案中，PEG部分具有约2千道尔顿的分子量。在一些实施方案中，PEG部分具有约20千道尔顿的分子量。在一些实施方案中，PEG部分具有约40千道尔顿的分子量。本文所述的PEG部分可以是直链或支链的。PEG部分可以是离散的(单分散的)或非离散的(多分散的)。用作PK增强被转运的分子的PEG部分可以商购。在一些实施方案中，所述一种或多种被转运的分子包括可以作为PK调节剂或增强剂的PEG部分，以及不同的被转运的分子，诸如药物活性成分或化合物。
所述αvβ6整联蛋白配体包括其盐或溶剂化物。αvβ6整联蛋白配体的溶剂化物意指惰性溶剂分子在αvβ6整联蛋白配体上的加合，其由于它们的相互吸引力而形成。溶剂化物是例如单或二水合物或与醇的加成化合物，诸如，例如与甲醇或乙醇的加成化合物。
游离氨基基团或游离羟基基团可以作为αvβ6整联蛋白配体的取代基与相应的保护基一起提供。
αvβ6整联蛋白配体还包括例如衍生物，即用例如烷基或酰基、糖或寡肽修饰的αvβ6整联蛋白配体，其在体外或在生物体中裂解。
在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体促进被转运的分子通过配体介导的胞吞作用、胞饮作用或通过其它方式递送到在其表面上存在αvβ6整联蛋白的细胞的胞浆中。在一些实施方案中，本文公开的αvβ6整联蛋白配体促进被转运的分子递送至存在αvβ6整联蛋白的细胞的质膜。
药物组合物
在一些实施方案中，本公开提供了药物组合物，其包括本文公开的一种或多种αvβ6整联蛋白配体、由其组成、或基本上由其组成。
如本文所用，“药物组合物”包含药理学有效量的活性药物成分(API)和任选一种或多种药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂(赋形剂)是除有意包括在药物递送系统中的活性药物成分(API，治疗产品)之外的物质。赋形剂在预期剂量下不发挥或不意图发挥治疗效果。赋形剂可以用于a)在制造过程中辅助药物递送系统的加工，b)保护、支持或增强API的稳定性、生物利用度或患者可接受性，c)帮助产品鉴定，和/或d)在储存或使用过程中增强API递送的总体安全性、有效性的任何其它属性。药学上可接受的赋形剂可以是或可以不是惰性物质。
赋形剂包括但不限于：吸收增强剂、抗粘附剂、消泡剂、抗氧化剂、粘合剂、缓冲剂、载体、包衣剂、着色剂、递送增强剂、递送聚合物、葡聚糖、右旋糖、稀释剂、崩解剂、乳化剂、增量剂、填充剂、调味剂、助流剂、湿润剂、润滑剂、油、聚合物、防腐剂、盐水、盐、溶剂、糖、悬浮剂、持续释放基质、甜味剂、增稠剂、张度剂、媒介物、疏水剂和润湿剂。
本文所述的药物组合物可以含有通常在药物组合物中发现的其它附加组分。在一些实施方案中，所述附加组分是药物活性材料。药物活性材料包括但不限于：止痒剂、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎剂(例如抗组胺药、苯海拉明等)、小分子药物、抗体、抗体片段、核酸适配体和/或疫苗。
药物组合物还可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、气味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。它们还可以含有具有已知治疗益处的其它试剂。
药物组合物可以以多种方式施用，这取决于是需要局部治疗还是全身治疗以及取决于待治疗的区域。可以通过本领域公知的任何方式进行施用，诸如但不限于局部(例如通过透皮贴剂)、肺部(例如通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括通过雾化器、气管内、鼻内)、表皮、透皮、口服或肠胃外施用。肠胃外施用包括但不限于静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注；皮下(例如，经由植入的装置)、颅内、脑实质内（intraparenchymal）、鞘内和心室内施用。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物通过皮下注射施用。药物组合物可以口服施用，例如以片剂、包衣片剂、糖锭剂、硬或软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂的形式。施用也可以经直肠进行，例如使用栓剂；局部或经皮，例如使用软膏、乳膏、凝胶或溶液；或肠胃外，例如使用可注射溶液。
适于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(水溶性的)或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM (BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水。其在生产和储存条件下应该是稳定的，并且应该被保存以防止微生物诸如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其合适的混合物。例如，通过使用包衣诸如卵磷脂，通过在分散液的情况下保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇（诸如甘露醇、山梨醇）和氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射组合物的延长的吸收。
无菌可注射溶液可以通过将活性化合物以所需量与上述列举的成分之一或组合一起并入适当溶剂中，根据需要，随后过滤灭菌来制备。通常，通过将活性化合物并入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体含有基本分散介质和来自以上列举的那些的所需其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分加上任何附加所需成分的粉末，所述任何附加所需成分来自其先前无菌过滤的溶液。
适于关节内施用的制剂可以是本文所述的任何配体的无菌水性制剂的形式，其可以是微晶形式，例如，水性微晶混悬剂的形式。脂质体制剂或可生物降解的聚合物系统也可用于提供本文所述的任何配体以用于关节内和眼部施用两者。
活性化合物可以用载体制备，所述载体将保护化合物免于从体内快速消除，诸如控释制剂，包括植入物和微囊包封的递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这样的制剂的方法对本领域技术人员是显而易见的。脂质体混悬剂也可用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法制备，例如，如美国专利No. 4，522，811中所述。
药物组合物可以含有通常见于药物组合物中的其它附加组分。这样的附加组分包括但不限于：止痒剂、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎剂(例如抗组胺药、苯海拉明等)。如本文所用，“药理学有效量”、“ 治疗有效量”或简单地“有效量”指产生药理学、治疗或预防效果的药物活性剂的量。
含有αvβ6整联蛋白配体的药物也是本发明的目的，制备这样的药物的方法也是本发明的目的，所述方法包括将一种或多种含有αvβ6整联蛋白配体的化合物，和如果需要，一种或多种具有已知治疗益处的其它物质，制成药学上可接受的形式。
本文公开的所述αvβ6整联蛋白配体和包含αvβ6整联蛋白配体的药物组合物可以被包装或包括在试剂盒、容器、包装或分配器中。αvβ6整联蛋白配体和包含αvβ6整联蛋白配体的药物组合物可以被包装在预填充的注射器或小瓶中。
细胞、组织和非人类生物体
考虑包括至少一种本文所述的αvβ6整联蛋白配体的细胞、组织和非人类生物体。通过本领域可用的任何方法将αvβ6整联蛋白配体递送至细胞、组织或非人类生物体来制备细胞、组织或非人类生物体。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物细胞，包括但不限于人类细胞。
靶向基团、连接基团、药代动力学(PK)调节剂和递送媒介物
在一些实施方案中，αvβ6配体与一个或多个非核苷酸基团缀合，所述非核苷酸基团包括但不限于连接基团、药代动力学(PK)调节剂、递送聚合物或递送媒介物。非核苷酸基团可以增强被转运的分子的靶向、递送或附着。靶向基团和连接基团的实例提供于表6中。非核苷酸基团可以共价连接到有义链和/或反义链的3'和/或5'端。在其中被转运的分子是RNAi剂的实施方案中，所述RNAi剂含有与有义链的3'和/或5'端连接的非核苷酸基团。在一些实施方案中，非核苷酸基团与RNAi剂有义链的5'末端连接。αvβ6配体可直接或经由接头/连接基团间接连接至被转运的分子。在一些实施方案中，αvβ6配体经由不稳定的、可裂解的或可逆的键或接头与被转运的分子连接。
在一些实施方案中，非核苷酸基团增强RNAi剂或其所连接的缀合物的药代动力学或生物分布特性，以改善缀合物的细胞或组织特异性分布和细胞特异性摄取。在一些实施方案中，非核苷酸基团增强RNAi剂的胞吞作用。
靶向基团或靶向部分增强它们所连接的被转运的分子的药代动力学或生物分布特性，以改善被转运的分子的细胞特异性(在一些情况下，包括器官特异性)分布和细胞特异性(或器官特异性)摄取。在一些实施方案中，靶向基团可以包含如本文所述的αvβ6配体。在一些实施方案中，靶向基团包含接头。在一些实施方案中，靶向基团包含PK调节剂。在一些实施方案中，αvβ6配体使用接头(诸如PEG接头或一个、两个或三个无碱基的和/或核糖醇(无碱基核糖)残基，其在一些情况下可用作接头)与被转运的分子连接。
可以合成具有反应性基团诸如氨基(在本文中也称为胺)的被转运的分子。在被转运的分子是RNAi剂的实施方案中，反应性基团可在5' -末端和/或3' -末端连接。随后可以使用本领域典型的方法，使用反应性基团连接αvβ6配体。
例如，在一些实施方案中，合成在RNAi剂的有义链的5'末端具有NH2-C6基团的RNAi剂。末端氨基随后可以与例如包括αvβ6整联蛋白靶向配体的基团反应形成缀合物。在一些实施方案中，合成在RNAi剂的有义链的5'末端具有一个或多个炔基基团的RNAi剂。一个或多个末端炔基基团可以随后与例如包括αvβ6整联蛋白靶向配体的基团反应以形成缀合物。
在一些实施方案中，连接基团与αvβ6配体缀合。连接基团促进αvβ6配体与被转运的分子、药代动力学调节剂、递送聚合物或递送媒介物的共价连接。连接基团的实例包括但不限于：Alk-SMPT-C6、Alk-SS-C6、DBCO-TEG、Me-Alk-SS-C6和C6-SS-Alk-Me，反应性基团诸如伯胺和炔烃、烷基基团、无碱基残基/核苷酸、氨基酸、三炔官能化基团、核糖醇和/或PEG基团。
接头或连接基团是两个原子之间的连接，其经由一个或多个共价键将一个化学基团(诸如RNAi剂)或感兴趣的片段与另一个化学基团(诸如αvβ6配体、药代动力学调节剂或递送聚合物)或感兴趣的片段连接。不稳定的连接含有不稳定的键。连接可任选包括增加两个连接原子之间距离的间隔基团。间隔基团可进一步增加连接的柔性和/或长度。间隔基团包括但不限于烷基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、芳烷基基团、芳烯基基团和芳炔基基团；其中的每一个可以含有一个或多个杂原子、杂环、氨基酸、核苷酸和糖。间隔基团是本领域公知的，并且前述列表不意味着限制本说明书的范围。
在一些实施方案中，αvβ6配体不使用附加接头而与被转运的分子连接。在一些实施方案中，αvβ6配体被设计成具有容易存在的接头以促进与被转运的分子的连接。在一些实施方案中，当组合物中包括两种或更多种RNAi剂时，可以用相同的接头将两种或更多种RNAi剂与它们各自的靶向基团连接。在一些实施方案中，当组合物中含有两种或更多种RNAi剂时，用不同的接头将两种或更多种RNAi剂与它们各自的靶向基团连接。
某些连接基团的实例提供于表A中。
表A. 代表各种连接基团的结构
Figure 43196DEST_PATH_IMAGE180
Figure 430315DEST_PATH_IMAGE181
Figure 534537DEST_PATH_IMAGE182
Figure 877663DEST_PATH_IMAGE183
Figure 674717DEST_PATH_IMAGE184
Figure 283553DEST_PATH_IMAGE185
Figure 457046DEST_PATH_IMAGE186
Figure 467727DEST_PATH_IMAGE187
Figure 373366DEST_PATH_IMAGE188
Figure 469498DEST_PATH_IMAGE189
Figure 915523DEST_PATH_IMAGE190
其中
Figure 46290DEST_PATH_IMAGE191
表示与被转运的分子的连接点。
或，可以使用本领域已知的其它连接基团。
现在通过以下非限制性的实施例来举例说明以上提供的实施方案和项目。
实施例
以下实施例不是限制性的，并且旨在举例说明本文公开的某些实施方案。
实施例1. αvβ6整联蛋白配体的合成
在实施例合成的以下实验细节中使用的一些缩写定义如下：h或hr =小时；min =分钟；mol =摩尔；mmol =毫摩尔；M =摩尔；μM =微摩尔；g =克；μg =微克；rt或RT =室温；L =升；mL =毫升；wt =重量；Et2O =乙醚；THF =四氢呋喃；DMSO =二甲亚砜；EtOAc =乙酸乙酯；Et3N或TEA =三乙胺；i-Pr2NEt或DIPEA或DIEA =二异丙基乙胺；CH2Cl2或DCM =二氯甲烷；CHCl3=氯仿；CDCl3 =氘化氯仿；CCl4 =四氯化碳；MeOH =甲醇；EtOH =乙醇；DMF =二甲基甲酰胺；BOC =叔丁氧基羰基；CBZ =苄氧基羰基；TBS =叔丁基二甲基甲硅烷基；TBSCl或TBDMSCl =叔丁基二甲基氯硅烷；TFA =三氟乙酸；DMAP = 4-二甲基氨基吡啶；NaN3 =叠氮化钠；Na2SO4=硫酸钠；NaHCO3 =碳酸氢钠；NaOH =氢氧化钠；MgSO4 =硫酸镁；K2CO3 =碳酸钾；KOH =氢氧化钾；NH4OH =氢氧化铵；NH4Cl =氯化铵；SiO2 =二氧化硅；Pd-C =碳载钯；HCl =氯化氢或盐酸；NMM = N-甲基吗啉；H2 =氢气；KF =氟化钾；EDC-HCl = N- (3-二甲基氨基丙基) -N '-乙基碳二亚胺盐酸盐；MTBE =甲基叔丁基醚；Ar =氩气；N2 =氮气；RT =保留时间。
结构1-37的化学名称使用ChemDraw®软件自动生成。
结构1b ((14S，17S) -1-叠氮基-14- (5- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)戊酰胺基)-17- (4- (萘-1-基)苯基) -15-氧代-3，6，9，12-四氧杂-16-氮杂十九烷-19-酸) 的合成
Figure 372098DEST_PATH_IMAGE192
将化合物1 (S) - (-) -1-三苯甲基氮杂环丙烷-2-甲酸甲酯(4.204g，12.24 mmol，1.0当量)和三异丙基硅烷(3.877g，5.02 mL，24.48 mmol，2当量)溶解在DCM (40 mL)中，将溶液冷却至0℃，然后滴加TFA (8.5当量)。溶液在0℃保持1小时。通过TLC己烷：乙酸乙酯(8：2)监测反应。干燥溶液得到白色沉淀物和浅黄色油的混合物，加入己烷(40 mL)，并在热风器上缓慢加热直到所有白色沉淀物溶解。加入己烷得到两个层，澄清的上层和油层。倒出己烷层并保留油层。重复己烷加入，并再次倒出。将油干燥。将氮杂环丙烷(1.06g，10.5mmol)溶解在总计60 mL的THF/H2O (2/1)中。在室温向混合物中加入Fmoc-OSu (5.312g，15.75 mmol，1.5当量)和NaHCO3 (2.646g，31.5 mmol，3当量以保持pH = 8.5)，并使其反应过夜。通过TLC，己烷：乙酸乙酯8：2监测反应。浓缩混合物直到除去所有THF，然后用乙酸乙酯(350 mL)和H2O (25 mL)稀释。分离各层，将有机物用H2O (40 mL)洗涤。然后用pH3-4的水(2×40 mL)、然后H2O (40 mL)、然后饱和NaCl水溶液(40 mL)洗涤有机物。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物在硅胶柱上，用在己烷中的10% -20%乙酸乙酯纯化。
Figure 955526DEST_PATH_IMAGE193
将化合物2 (Fmoc-氮杂环丙烷) (1.46g，4.52 mmol)和HO-PEG4-N3 (1.983g，9.04mmol，2当量)溶解在DCM中。将混合物冷却至0℃，滴加三氟化硼乙醚(12滴)。将混合物在室温搅拌48小时。用TLC，含5%甲醇的DCM监测反应。用NH4Cl饱和溶液(5 mL)淬灭反应，用DCM(60 mL)稀释，用H2O (3×20 mL)、饱和NaCl水溶液(20 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物在硅胶柱上，用在己烷中的40%-60%乙酸乙酯纯化。
Figure 205242DEST_PATH_IMAGE194
将化合物3溶解于在DMF中的20%三乙胺溶液中。通过TLC监测反应。浓缩产物。
Figure 190515DEST_PATH_IMAGE195
将化合物5((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯) (0.501g，2.406 mmol，1.0当量)溶解在DMF (17 mL)中。在室温向混合物中加入NaH (0.116 mg，3.01 mmol，1.25当量，在矿物油中的60%分散体)。将混合物搅拌10分钟，然后加入5-溴戊酸乙酯(0.798g，3.82mmol，0.604 mL)。3小时后，用乙醇(18 mL)淬灭反应并浓缩。将产物溶解在DCM (50 mL)中，用饱和NaCl水溶液(50 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物在硅胶柱上纯化，梯度为在DCM中的0-5%甲醇。
Figure 437957DEST_PATH_IMAGE196
将化合物7 (0.80g，2.378 mmol)溶解在100 mL的丙酮：0.1M NaOH (1：1) 中，通过TLC (在己烷中的5%乙酸乙酯)监测反应。浓缩有机物，并用0.3M柠檬酸(40 mL)将混合物酸化至pH 3-4。用DCM (3×75 mL)萃取产物。合并有机物，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。产物不经进一步纯化使用。
Figure 508681DEST_PATH_IMAGE197
将化合物4 (0.340g，1.104 mmol) 溶解在DMF (10 mL)中。向溶液中加入TBTU(0.531g，1.655 mmol)和二异丙基乙胺(0.320 mL，1.839 mmol)。然后加入化合物8 (0.295g，0.9197 mmol)。通过LC-MS和TLC (含5% MeOH的DCM)监测反应。反应在2小时内完成。将产物浓缩并溶解在乙酸乙酯(150 mL)中，用pH 3-4的H2O (2×12 mL)洗涤。然后用H2O (2×12mL)、饱和NaHCO3水溶液(12 mL)、然后饱和NaCl水溶液(12 mL)洗涤产物。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物在硅胶柱上纯化（在乙酸乙酯中的20%己烷至100%乙酸乙酯）。
Figure 562088DEST_PATH_IMAGE198
将化合物9 (0.330g，0.540 mmol) 溶解在10 mL的MeOH：二氧杂环己烷[1：1] 和1M LiOH溶液(10 mL)中。将混合物在室温搅拌2小时，通过LC-MS和TLC (EtOAc)监测。浓缩除去有机物，用H2O (5 mL)稀释混合物并酸化至pH4。用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取产物。合并有机物，用饱和NaCl水溶液(10 mL) 洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。产物不经进一步纯化使用。
Figure 401868DEST_PATH_IMAGE199
将化合物11 ((S) -3- (4-溴苯基) -3- ((叔丁氧基羰基)氨基) -丙酸) (2.0g，5.81 mmol)溶解在DMF (40 mL)中。向该混合物中加入K2CO3 (1.2g，8.72 mmol)。然后加入碘甲烷(1.65g，11.62 mmol，0.72 mL)。通过TLC (己烷：乙酸乙酯(7：3))监测反应。完成后，将混合物冷却至0℃，加入H2O (20 mL)和MTBE (40 mL)。用MTBE (4×40 mL)萃取产物。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(40 mL)，然后H2O (4×40 mL)洗涤。将混合物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。
向干燥的产物化合物12 (1.0g，2.7915 mmol)中加入化合物13 (1-萘硼酸(0.960g，5.583 mmol，2当量))。向该混合物中加入[1，1' -双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)或Pd (dppf) Cl2 (0.0817g，0.1117 mmol，0.4当量)以及Na2CO3 (0.888g，8.375mmol，3当量)。接着，加入1，4-二氧杂环己烷(5 mL)和H2O (0.2 mL)，将混合物在100℃搅拌4小时。通过TLC (己烷：乙酸乙酯(7：3))监测反应。将产物通过硅胶色谱纯化，梯度为在己烷中的0%至50%乙酸乙酯。
将化合物14 (0.200g，0.493 mmol)溶解在DCM (2.5 mL)中，然后加入TFA (0.45mL)。通过TLC (DCM：甲醇(9：1))监测反应。完成后，浓缩反应混合物。将残余物溶解在DCM(4 mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液 (2×2 mL)，然后饱和NaCl水溶液 (2×2 mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。产物不经进一步纯化使用。
Figure 63619DEST_PATH_IMAGE200
将化合物10 (0.3224g，0.54 mmol)溶解在DMF (7 mL)中。向该混合物中加入TBTU(0.236g，0.735 mmol)和二异丙基乙胺(0.170 mL，0.98 mmol)。然后加入化合物15(0.1496g，0.49mmol)。将反应物在室温搅拌2小时。通过LC-MS监测反应。浓缩混合物，将残余物溶解在乙酸乙酯(90 mL)中，用pH3-4的H2O (3×10 mL)洗涤。用H2O (2×10 mL)、饱和NaHCO3水溶液(10 mL)、然后饱和NaCl水溶液 (1×10 mL) 洗涤产物。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物通过硅胶色谱纯化，使用DCM，梯度至5% MeOH。
Figure 356060DEST_PATH_IMAGE201
将化合物16 (0.250g，0.2828 mmol) 溶解在MeOH：二氧杂环己烷[1：1] (4 mL)和1M LiOH (4 mL) 中。将混合物在室温搅拌2小时。浓缩除去有机物，将残余物用H2O (3 mL)稀释并酸化至pH4。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取产物。合并有机物并用饱和NaCl水溶液 (10mL) 洗涤。将产物经Na2SO4干燥。将产物 (0.200g，0.2299 mmol) 溶解在2 mL DCM：TFA[25：75]中并在室温搅拌2小时。向混合物中加入甲苯(4 mL)。浓缩混合物，然后与乙腈(2×4mL)共蒸发。将产物通过HPLC纯化，梯度为经30分钟35% ACN至50%，0.1% TFA缓冲液。= >[ M + H ] + C41H51N7O8的计算值：769.90，实测值：770.45；1H NMR (400 MHz， DMSO) δ8.64 (d， 1H)， 8.07 (d， 1H)， 8.00 (d， 1H)， 7.95 (d， 1H)， 7.78 (t， 2H)， 7.60至7.40 (m， 8H)， 6.80 (s， 1H)， 6.67 (d， 1H)， 5.31 (q， 1H)， 4.55 (m， 1H)，3.62 –3.45 (m， 18H)， 3.40 (t， 2H)， 3.25 (m， 2H)， 2.80 (dd， 2H)， 2.30 (s， 3H)， 2.20(t， 2H)， 1.55 (m， 4H)。
结构2b ((14S，17S) -1-叠氮基-14- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)-17- (4- (萘-1-基)苯基) -15-氧代-3，6，9，12-四氧杂-16-氮杂十九烷-19-酸) 的合成
Figure 213158DEST_PATH_IMAGE202
将化合物5 ((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯) (0.501g，2.406 mmol，1当量)溶解在DMF (17 mL)中。向混合物中加入NaH (0.116 mg，3.01 mmol，1.25当量，在油中的60%分散体)。将混合物搅拌10分钟，然后加入化合物20 (4-溴丁酸乙酯(0.745g，3.82 mmol，0.547 mL)) (Sigma167118)。3小时后，用乙醇(18 mL)淬灭反应并浓缩。将浓缩物溶解在DCM (50 mL)中，用饱和NaCl水溶液(1×50 m L) 洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物在硅胶柱上纯化，梯度为在DCM中的0-5%甲醇。
Figure 907444DEST_PATH_IMAGE203
将化合物21 (0.80g，2.378 mmol) 溶解在100 mL的丙酮：0.1M NaOH [1：1] 中。通过TLC (在己烷中的5%乙酸乙酯)监测反应。浓缩除去有机物，用0.3M柠檬酸(40 mL)将残余物酸化至pH3-4。用DCM (3×75 mL)萃取产物。合并有机物，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。产物不经进一步纯化使用。
Figure 559005DEST_PATH_IMAGE204
将化合物22 (0.340g，1.104 mmol) 溶解在DMF (10 mL)中。向该混合物中加入TBTU (0.531g，1.655 mmol)和二异丙基乙胺(0.320 mL，1.839 mmol)。然后加入化合物10(0.295g，0.9197 mmol)。通过LC-MS和TLC (含5% MeOH的DCM)监测反应。反应在2小时内完成。将混合物浓缩，溶解在乙酸乙酯(150 mL)中，用pH3-4的H2O (2×12 mL)洗涤。然后用H2O(2×12 mL)、饱和NaHCO3水溶液(12 mL)、然后饱和NaCl水溶液(12 mL)洗涤混合物。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物在硅胶柱上纯化（在乙酸乙酯中的20%己烷至100%乙酸乙酯）。
Figure 542005DEST_PATH_IMAGE205
将化合物23 (0.330g，0.540 mmol) 溶解在10 mL的MeOH：二氧杂环己烷[1：1]和1M LiOH (10 mL) 中。将混合物在室温搅拌2小时，并通过LC-MS和TLC (100% EtOAc)监测。浓缩有机物，用H2O (5 mL)稀释残余物，并酸化至pH4。用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取产物。将合并的有机相用饱和NaCl水溶液 (1×10 mL) 洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。产物不经进一步纯化使用。
Figure 937214DEST_PATH_IMAGE206
将化合物24 (0.3224g，0.54 mmol) 溶解在DMF (7 mL)中。向混合物中加入TBTU(0.236g，0.735 mmol)和二异丙基乙胺(0.170 mL，0.98 mmol)。然后加入化合物15(0.1496g，0.49 mmol)。将混合物在室温搅拌2小时。通过LC-MS监测反应。浓缩混合物，将残余物溶解在乙酸乙酯(90 mL)中，并用pH3-4的H2O (3×10 mL)洗涤。将浓缩物用H2O (2×10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10 mL)、然后饱和NaCl水溶液 (10 mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将产物在硅胶柱上纯化（DCM，梯度至5% MeOH）。
Figure 486007DEST_PATH_IMAGE207
将化合物25 (0.250g，0.2828 mmol)溶解在MeOH：二氧杂环己烷[1：1] (4 mL)和1M LiOH (4 mL)中。将混合物在室温搅拌2小时，通过LC-MS监测。浓缩有机物，用H2O (3mL)稀释残余物，并酸化至pH4。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取产物。合并有机物并用饱和NaCl水溶液 (1×10 mL) 洗涤。将有机相经Na2SO4干燥并浓缩。将残余物 (0.200g，0.2299mmol)溶解在2 mL DCM/TFA (25/75)中，并在室温搅拌2小时，同时通过LC-MS监测。加入甲苯(4 mL)，浓缩混合物。然后加入乙腈(2×4mL)，浓缩混合物。将产物在HPLC上纯化，梯度35% ACN至50%，经30分钟，0.1% TFA缓冲液。[ M + H ] + C40H49N7O8的计算值：755.87，实测值：756.32；1H NMR (400 MHz， DMSO) δ 8.64 (t， 1H)， 8.17 – 8.10 (m， 1H)， 8.00(d， 1H)， 7.95 (d， 1H)， 7.80 (d， 1H)， 7.75 (m， 1H)， 7.60至7.40 (m， 8H)， 6.8(s， 1H)， 6.67 (d， 1H)， 5.31 (q， 1H)， 4.55 (m， 1H)，3.62 – 3.45 (m， 18H)， 3.40(t， 2H)， 3.25 (m， 2H)， 2.80 (dd， 2H)， 2.30 (s， 3H)， 2.26 (t， 2H)， 1.80 (m，2H)。
结构5b、5.1b和5.2b的合成。
结构5b (3- (4- (2- (2- (2-叠氮基乙氧基) 乙氧基) 乙氧基)-3，5-二氯苯基) -3- (2- (5- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)戊酰胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 574049DEST_PATH_IMAGE208
在N2气氛下，在0℃向化合物5 (0.98g，4.70 mmol，1当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中分批加入NaH (0.226g，5.647 mmol，1.2当量，60%油分散体)。将反应混合物在0℃保持30分钟，随后在相同温度加入化合物6 (1.18 mL，5.647 mmol，1.2当量)。在0℃再搅拌30分钟后，将混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，通过饱和NH4Cl水溶液淬灭反应。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水相，将有机层合并，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。LC-MS：[ M + H ] + 337.20，实测值337.39。
Figure 28033DEST_PATH_IMAGE209
在0℃，向化合物7 (1.347g，4.00 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入一水合氢氧化锂(0.505g，12.01 mmol，5当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH4.0。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水相，将有机层合并，经Na2SO4干燥并浓缩。LC-MS：[ M + H ] + 309.17，实测值309.39。
Figure 961354DEST_PATH_IMAGE210
在0℃，向化合物8 (1.163g，3.77 mmol，1当量)、化合物45 (568 mg，4.52 mmol，1.2当量)和TBTU (1.453g，4.52 mmol，1.2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(1.97 mL，11.31 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(20 mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层，将有机相合并，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。LC-MS：计算值[ M + H ] + 380.21，实测值380.51。
Figure 630233DEST_PATH_IMAGE211
在室温，向化合物47 (1.0g，5.23 mmol，1当量)和丙二酸(1.09g，10.47 mmol，2当量)在乙醇(10 mL)中的溶液中加入乙酸铵(0.807 mg，10.47 mmol，2.0当量)。将反应混合物在回流下搅拌过夜。过滤固体，并用冷乙醇洗涤。产物不经进一步纯化直接用于进一步的步骤。LC-MS：计算值[ M + H ] + 250.00，实测值250.16。
Figure 889176DEST_PATH_IMAGE212
在0℃，向化合物46 (1.412g，3.72 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入一水合氢氧化锂(0.469g，11.16 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌3小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH4.0。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水相，将有机层合并，经Na2SO4干燥，并浓缩。LC-MS：计算值[ M + H ] + 366.20，实测值366.46。
Figure 315609DEST_PATH_IMAGE213
在冰浴上，向化合物49 (0.531g，2.12 mmol，1当量)在无水甲醇(10 mL)中的悬浮液中加入亚硫酰氯(308μL，4.24 mmol，2.0当量)。将反应物温热至室温并搅拌过夜。在减压下除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 264.01，实测值264.20。
Figure 318200DEST_PATH_IMAGE214
在0℃，向化合物50 (150 mg，0.410 mmol，1当量)、化合物51 (148 mg，0.492mmol，1.2当量)和TBTU (158 mg，0.492 mmol，1.2当量)在无水DMF (5 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.214 mL，1.23 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并搅拌3小时。通过饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用DCM中的2-4%甲醇洗脱。
Figure 841585DEST_PATH_IMAGE215
在0℃向化合物52 (80 mg，0.130 mmol，1当量)和叠氮基-PEG3-OTs (86 mg，0.262 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入K2CO3 (36 mg，0.262 mmol，2当量)。将反应混合物在80℃搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的2-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] +768.28，实测值769。
Figure 5850DEST_PATH_IMAGE216
在室温，向化合物53 (58 mg，0.0755 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入一水合氢氧化锂(10 mg，0.226 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌2小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (0.25 mL)和DCM (0.75 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 654.21，实测值655。
结构5.1b (3- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基) -3，5-二氯 苯基) -3- (2- (5- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)戊酰胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 247476DEST_PATH_IMAGE217
在0℃，向化合物52 (100 mg，0.163 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (205 mg，0.491mmol，3当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入K2CO3 (68 mg，0.491 mmol，2当量)。将反应混合物在80℃搅拌1小时，通过旋转蒸发器除去溶剂。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 856.33，实测值857.07。
Figure 975129DEST_PATH_IMAGE218
在室温，向化合物55 (119 mg，0.139 mmol，1.0当量)在THF (4 mL)和水(4 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(10 mg，0.417 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (2 mL)和DCM (2 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 742.27，实测值743.02。
结构5.2b (3- (4- ((8-叠氮基辛基)氧基) -3，5-二氯苯基) -3- (2- (5- ((4- 甲基吡啶-2-基)氨基)戊酰胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 353021DEST_PATH_IMAGE219
在室温，向化合物52 (89 mg，0.14 mmol，1当量)和1，8-二溴辛烷(80μL，0.436 mmol，3当量)在丙酮(2 mL)中的溶液中加入K2CO3 (60 mg，0.436 mmol，3当量)。将反应混合物在55℃搅拌6小时。用饱和NaHCO3溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。LC-MS：计算值[ M + H ] + 801.23，实测值801.98。
Figure 953766DEST_PATH_IMAGE220
在室温，向化合物57 (97 mg，0.114 mmol，1当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入叠氮化钠(15 mg，0.229 mmol，2当量)。将反应混合物在80℃搅拌2小时。用水淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 764.32，实测值765.07。
Figure 417109DEST_PATH_IMAGE221
在室温，向化合物58 (78 mg，0.101 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(7 mg，0.304 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (2 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 650.25，实测值650.83。
结构6b、6.1b、6.2b、6.3b和6.4b的合成
结构6b ((S) -3- (4- (4- (2- (2- (2-叠氮基乙氧基) 乙氧基) 乙氧基)萘-1-基) 苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 699186DEST_PATH_IMAGE222
在0℃，向化合物22 (1.1g，3.95 mmol，1当量)、化合物45 (595 mg，4.74 mmol，1.2当量)和TBTU (1.52g，4.74 mmol，1.2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(2.06 mL，11.85 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，并将有机相合并，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。LC-MS：计算值[ M+ H ] + 366.20，实测值367。
Figure 197163DEST_PATH_IMAGE223
在0℃，向化合物61 (2g，8.96 mmol，1当量)和化合物62 (2.13 mL，17.93 mmol，2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入K2CO3 (2.48g，17.93 mmol，2当量)。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。用水(10 mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，并将有机相合并，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。
Figure 703231DEST_PATH_IMAGE224
在0℃，向化合物60 (1.77g，4.84 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入一水合氢氧化锂(0.61g，14.53 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌3小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水相，并将有机层合并，经Na2SO4干燥，并浓缩。LC-MS：计算值[ M + H ] + 352.18，实测值352。
Figure 919448DEST_PATH_IMAGE225
在-78℃，向化合物63 (1.88g，6.0 mmol，1.0当量)在无水THF (20 mL)中的溶液中滴加在己烷中的正丁基锂 (3.6 mL，9.0 mmol，1.5当量)。反应在-78℃再保持1小时。然后在-78℃将硼酸三异丙酯(2.08 mL，9.0 mmol，1.5当量)加入到混合物中。然后将反应物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NH4Cl溶液(20 mL)淬灭反应，并将pH调节至3。用EtOAc(3×20 mL)萃取水相，并将有机相合并，经Na2SO4干燥，并浓缩。
Figure 801954DEST_PATH_IMAGE226
将化合物12 (300 mg，0.837 mmol，1.0当量)、化合物65 (349 mg，1.256 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (13 mg，0.0167 mmol，0.02当量)和K3PO4 (355 mg，1.675mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (8 mL)和水(2 mL)。用氮气鼓泡混合物20分钟，并将反应物在室温保持过夜。用水(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。将有机相经Na2SO4干燥，浓缩，并通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，用在己烷中的15%EtOAc洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 512.24，实测值512.56。
Figure 341388DEST_PATH_IMAGE227
将化合物66 (858 mg，1.677 mmol，1.0当量)用冰浴冷却。将二氧杂环己烷中的HCl (8.4 mL，33.54 mmol，20当量)加入到烧瓶中。将反应物温热至室温并再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +412.18，实测值412.46。
Figure 18357DEST_PATH_IMAGE228
在0℃，向化合物64 (500 mg，1.423 mmol，1当量)、化合物67 (669 mg，1.494mmol，1.05当量)和TBTU (548 mg，0.492 mmol，1.2当量)在无水DMF (15 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.744 mL，4.268 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。产率为96.23%。LC-MS：计算值[ M + H ] + 745.35，实测值746.08。
Figure 456292DEST_PATH_IMAGE229
在室温，向化合物68 (1.02g，1.369 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (0.15g，50% H2O)。将反应混合物温热至室温，并通过LC-MS监测反应。将反应物保持在室温过夜。将固体滤过Celite®，并通过旋转蒸发器除去溶剂。产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：[ M + H ] + 655.31，实测值655.87。
Figure 142488DEST_PATH_IMAGE230
在0℃，向化合物69 (100 mg，0.152 mmol，1当量)和叠氮基-PEG3-OTs (100 mg，0.305 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入K2CO3 (42 mg，0.305 mmol，2当量)。将反应混合物在80℃搅拌6小时。用饱和NaHCO3溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。LC-MS：计算值[ M + H ] + 812.39，实测值813.14。
Figure 287162DEST_PATH_IMAGE231
在室温，向化合物70 (77 mg，0.0948 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(7 mg，0.284 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌2小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (0.5 mL)和DCM (0.5 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 698.32，实测值698.81。
结构6.1b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基) 萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 400611DEST_PATH_IMAGE232
在0℃，向化合物69 (100 mg，0.152 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (128 mg，0.305mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入K2CO3 (42 mg，0.305 mmol，2当量)。将反应混合物在80℃搅拌6小时。用饱和NaHCO3溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。LC-MS：计算值[ M + H ] + 900.40，实测值901.46。
Figure 325842DEST_PATH_IMAGE233
在室温，向化合物72 (59 mg，0.0656 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(5 mg，0.197 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (0.5 mL)和DCM (0.5 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 786.37，实测值786.95。
结构6.2b ((S) -3- (4- (4- ((8-叠氮基辛基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 550150DEST_PATH_IMAGE234
在室温，向化合物69 (150 mg，0.229 mmol，1当量)和1，8-二溴辛烷(127μL，0.687mmol，3当量)在丙酮(2 mL)中的溶液中加入K2CO3 (95 mg，0.687 mmol，3当量)。将反应混合物在55℃搅拌过夜，用饱和NaHCO3溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。LC-MS：计算值[ M + H ] + 845.34，实测值845.91。
Figure 142805DEST_PATH_IMAGE235
在室温，向化合物74 (97 mg，0.114 mmol，1当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入叠氮化钠(15 mg，0.229 mmol，2当量)。将反应混合物在80℃搅拌2小时，用水淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。LC-MS：计算值[ M + H ] + 808.43，实测值809.00。
Figure 427156DEST_PATH_IMAGE236
在室温，向化合物75 (92 mg，0.114 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(8 mg，0.342 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (0.5 mL)和DCM (0.5 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 694.36，实测值694.94。
结构6.3b ((S) -3- (4- (4- ((20-叠氮基-3，6，9，12，15，18-六氧杂二十烷基) 氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 574104DEST_PATH_IMAGE237
在0℃，向化合物69 (100 mg，0.152 mmol，1当量)和叠氮基-PEG7-OTs (154 mg，0.305mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (100 mg，0.305 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌过夜。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash ®进行分离，将产物用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] +988.50，实测值989.14。
Figure 602103DEST_PATH_IMAGE238
在室温，向化合物21 (112 mg，0.113 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(8 mg，0.340 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (4 mL)和DCM (2 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 874.43，实测值875.08。
结构6.4b ((S) -3- (4- (4- ((35-叠氮基-3，6，9，12，15，18，21，24，27，30，33- 十一氧杂三十五烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰 胺基)乙酰胺基)丙酸)
Figure 783685DEST_PATH_IMAGE239
在0℃，向化合物69 (80 mg，0.122 mmol，1当量)和叠氮基-PEG12-OTs (184 mg，0.244mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (80 mg，0.244 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌5小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] +1208.63，实测值1209.21。
Figure 97992DEST_PATH_IMAGE240
在室温，向化合物82 (100 mg，0.0972 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(7 mg，0.292 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 1094.56，1095.05。
结构7b ((R) -3- (4- (4- (2- (2- (2-叠氮基乙氧基) 乙氧基) 乙氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 997815DEST_PATH_IMAGE241
在室温，向化合物84 (1.0g，2.90 mmol，1当量)和碳酸钾(0.60g，4.36 mmol，1.5当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入碘甲烷(362μL，5.81 mmol，2.0当量)。将反应混合物在室温搅拌1小时。LC-MS：计算值[ M + H ] + 358.06，实测值358.34。
Figure 563925DEST_PATH_IMAGE242
将化合物85 (1.0g，2.791 mmol，1.0当量)用冰浴冷却。将在二氧杂环己烷中的HCl (7.0 mL，27.91 mmol，10当量)加入到烧瓶中。将反应物温热至室温并再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +258.01，实测值257.97。
Figure 600014DEST_PATH_IMAGE243
在0℃，向化合物64 (790 mg，2.248 mmol，1当量)、化合物86 (728 mg，2.473mmol，1.10当量)和TBTU (866 mg，2.698 mmol，1.20当量)在无水DMF (15 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(1.175 mL，6.744 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 591.17，实测值591.49。
Figure 413118DEST_PATH_IMAGE244
将化合物87 (200 mg，0.338 mmol，1.0当量)、化合物65 (141 mg，0.507 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (5.3 mg，0.068 mmol，0.02当量)和K3PO4 (143 mg，0.676 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (8 mL)和水(2 mL)。用氮气鼓泡混合物20分钟，并将反应物在室温保持过夜。用水(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。将有机相经Na2SO4干燥并浓缩。LC-MS：计算值[ M + H ] + 745.35，实测值746.08。
Figure 534658DEST_PATH_IMAGE245
在室温向化合物88 (0.247g，0.331 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值655.96。
Figure 904460DEST_PATH_IMAGE246
在0℃，向化合物89 (50 mg，0.076 mmol，1当量)和叠氮基-PEG3-OTs (50 mg，0.152 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (50 mg，0.152 mmol，2当量)。将反应混合物在室温搅拌72小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的4% MeOH洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 812.39，实测值813.14。
Figure 60635DEST_PATH_IMAGE247
在室温，向化合物90 (36 mg，0.0443 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(3 mg，0.133 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (0.5 mL)和DCM (0.5 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 698.32，实测值698.90。
结构8b ((S) -3- (4- (7- (2- (2- (2-叠氮基乙氧基) 乙氧基) 乙氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 857689DEST_PATH_IMAGE248
在室温，向化合物92 (1.0g，4.48 mmol，1当量)和化合物62 (1.06 mL，8.96 mmol，2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入K2CO3 (1.24g，8.96 mmol，2当量)。将反应混合物在80℃搅拌过夜。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的5%乙酸乙酯洗脱。
Figure 404208DEST_PATH_IMAGE249
在-78℃，向化合物94 (0.5g，1.596 mmol，1.0当量)在无水THF (10 mL)中的溶液中滴加在己烷中的n-BuLi (0.96 mL，2.394 mmol，1.5当量)。将反应在-78℃再保持1小时。然后在-78℃将硼酸三异丙酯(0.553 mL，2.394 mmol，1.5当量)加入到混合物中。然后将反应温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NH4Cl溶液(20 mL)淬灭反应，并将pH调节至3。用EtOAc (3×20 mL)萃取水相，并将有机相合并，经Na2SO4干燥，并浓缩。将固体用己烷研磨并过滤。产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M-H ]- 277.11，实测值277.35。
Figure 312121DEST_PATH_IMAGE250
将化合物96 (100 mg，0.169 mmol，1.0当量)、化合物95 (70 mg，0.253 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (2.7 mg，0.0034 mmol，0.02当量)和K3PO4 (72 mg，0.338 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (8 mL)和水(2 mL)。用氮气鼓泡混合物20分钟，并将反应在室温保持过夜。用水(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3%甲醇洗脱。
Figure 322803DEST_PATH_IMAGE251
在室温向化合物97 (0.116g，0.157 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值655.87。
Figure 290759DEST_PATH_IMAGE252
在室温向化合物98 (87 mg，0.133 mmol，1当量)和叠氮基-PEG3-OTs (87 mg，0.266 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (87 mg，0.266 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌6小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash ®进行分离，并用在DCM中的3-4% MeOH洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] +812.39，实测值813.05。
Figure 573841DEST_PATH_IMAGE253
在室温，向化合物99 (65 mg，0.0801 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(6 mg，0.240 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (0.5 mL)和DCM (0.5 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 698.32，实测值698.99。
结构9b ((14S，17R) -1-叠氮基-14- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)-17- (4- (萘-1-基)苯基) -15-氧代-3，6，9，12-四氧杂-16-氮杂十九烷-19-酸)的合成
Figure 285445DEST_PATH_IMAGE254
将化合物102 (0.19g，0.468 mmol，1.0当量)用冰浴冷却。将在二氧杂环己烷中的HCl(2.35 mL，9.37 mmol，20当量)加入到烧瓶中。将反应温热至室温并再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 306.14，实测值306.51。
Figure 416212DEST_PATH_IMAGE255
在0℃，向化合物23 (110 mg，0.188 mmol，1当量)、化合物103 (71 mg，0.207mmol，1.10当量)和TBTU (72.7 mg，0.226 mmol，1.20当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.1 mL，0.566 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 870.43，实测值871.12。
Figure 555070DEST_PATH_IMAGE256
在室温，向化合物104 (110 mg，0.126 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(9 mg，0.379 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将TFA (4 mL)和DCM (2 mL)加入到残余物中，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 756.36，实测值756.88。
结构10b ((S) -3- (4- (5- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)的合成
Figure 872919DEST_PATH_IMAGE257
在室温，向化合物106 (1.0g，4.48 mmol，1当量)和化合物62 (1.06 mL，8.96 mmol，2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (2.92g，8.96 mmol，2当量)。将反应混合物在室温搅拌过夜。用水溶液(20 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的5%乙酸乙酯洗脱。
Figure 653793DEST_PATH_IMAGE258
在-78℃，向化合物107 (1.188g，3.793 mmol，1.0当量)在无水THF (10 mL)中的溶液中滴加在己烷中的n-BuLi (2.27 mL，5.689 mmol，1.5当量)。将反应在-78℃再保持1小时。然后在-78℃将硼酸三异丙酯(1.31 mL，5.689 mmol，1.5当量)加入到混合物中。然后将反应温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NH4Cl溶液(20 mL)淬灭反应，并将pH调节至3。用EtOAc (3×20 mL)萃取水相，并合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将固体用己烷研磨并过滤。产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M-H ]-，277.11，实测值277.26。
Figure 639066DEST_PATH_IMAGE259
将化合物96 (100 mg，0.169 mmol，1.0当量)、化合物108 (70 mg，0.253 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (2.7 mg，0.0034 mmol，0.02当量)和K3PO4 (72 mg，0.338 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (8 mL)和水(2 mL)。用氮气鼓泡混合物20分钟，并将反应物在室温保持过夜。用水(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 745.35，实测值745.99。
Figure 948825DEST_PATH_IMAGE260
在室温向化合物109 (0.135g，0.181 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值655.87。
Figure 753970DEST_PATH_IMAGE261
在室温向化合物110 (50 mg，0.0764 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (64 mg，0.152 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (50 mg，0.152 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时，用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。产率为62%。LC-MS：计算值[ M + H ]+900.44，实测值901.19。
Figure 666431DEST_PATH_IMAGE262
在室温，向化合物111 (43 mg，0.0478 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(3.4 mg，0.143 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ]+ 786.37，实测值787.04。
结构11b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((S) -1- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)丙酸)的合成
Figure 506211DEST_PATH_IMAGE263
在0℃，向化合物22 (500 mg，1.698 mmol，1当量)、化合物113 (295 mg，1.783 mmol，1.05当量)和TBTU (654 mg，2.038 mmol，1.2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.888 mL，5.096 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。产率为98.72%。LC-MS：计算值[ M + H ] + 406.23，实测值406.07。
Figure 986871DEST_PATH_IMAGE264
在0℃，向化合物114 (0.68g，1.676 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(0.12g，5.030 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，并合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS：计算值[ M + H ]+392.21，实测值392.39。
Figure 544891DEST_PATH_IMAGE265
在0℃，向化合物115 (300 mg，0.766 mmol，1当量)、化合物116 (237 mg，0.804mmol，1.05当量)和TBTU (295 mg，0.919 mmol，1.2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.400 mL，2.299 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温，并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。产率为83%。LC-MS：计算值[ M + H ]+ 631.21，实测值631.46。
Figure 74093DEST_PATH_IMAGE266
将化合物118 (100 mg，0.158 mmol，1.0当量)、化合物65 (66 mg，0.237 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (2.5 mg，0.0032 mmol，0.02当量)和K3PO4 (67 mg，0.316 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物20分钟，并将反应在40℃保持1小时。用水(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3%甲醇洗脱。产率为96%。LC-MS：计算值[ M + H ]+ 785.38，实测值785.69。
Figure 33959DEST_PATH_IMAGE267
在室温向化合物119 (0.120g，0.153 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 695.34，实测值695.66。
Figure 685520DEST_PATH_IMAGE268
在室温向化合物120 (83 mg，0.119 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (100 mg，0.239 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (78 mg，0.239 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时，用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash ®纯化，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。产率为79%。LC-MS：计算值940.47，实测值941.16。
Figure 465257DEST_PATH_IMAGE269
在室温，向化合物121 (89 mg，0.0947 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(6.8 mg，0.284 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 826.41，实测值827.10。
结构12b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)苯并[ d ]噁唑-7-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 126045DEST_PATH_IMAGE270
在0℃，向化合物123 (1.0g，7.40 mmol，1当量)和化合物62 (1.32 mL，11.10 mmol，1.5当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (3.62g，11.10 mmol，1.5当量)。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。用水(10 mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，并合并有机相，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的5-7%乙酸乙酯洗脱。产率为85%。
Figure 940418DEST_PATH_IMAGE271
在0℃，向化合物124 (1.425g，6.326 mmol，1当量)在无水乙腈(20 mL)中的溶液中分批加入N-溴代琥珀酰亚胺(1.216g，6.832 mmol，1.08当量)。将反应混合物在0℃再保持30分钟，然后将其温热至室温并搅拌过夜。在减压下除去溶剂，并将残余物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化。将产物用在己烷中的4-5%乙酸乙酯洗脱。产率为65%。LC-MS：计算值[ M + H ]+ 303.99。实测值304.08。
Figure 762880DEST_PATH_IMAGE272
将化合物125 (1.339g，4.402 mmol，1当量)、双(频哪醇合)二硼(2.236g，8.805mmol，2当量)、乙酸钾(0.864g，8.805 mmol，2当量)和Pd (dppf) Cl2 (161 mg，0.220mmol，0.05当量)在15 mL无水1，4-二氧杂环己烷中的混合物在100℃和氮气下搅拌8小时。浓缩后，将残余物在H2O和DCM之间分配，用DCM萃取水相，并用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在己烷中的15-20%乙酸乙酯洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 352.16，实测值352.06。
Figure 29913DEST_PATH_IMAGE273
将化合物96 (200 mg，0.338 mmol，1.0当量)、化合物126 (178 mg，0.507 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (5.3 mg，0.0068 mmol，0.02当量)和K3PO4 (143 mg，0.676 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物20分钟，并将反应在40℃保持1小时。用饱和NaHCO3 (10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 736.33，实测值736.89。
Figure 228814DEST_PATH_IMAGE274
在室温向化合物127 (0.219g，0.297 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 646.28，实测值646.78。
Figure 762606DEST_PATH_IMAGE275
在室温向化合物128 (73 mg，0.113 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (94 mg，0.226 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (74 mg，0.226 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。产率为80%。LC-MS：计算值[ M + H ] +891.42，实测值892.00。
Figure 755970DEST_PATH_IMAGE276
在室温，向化合物129 (43 mg，0.0478 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(3.4 mg，0.143 mmol，3.0当量)。将混合物在室温搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 777.35，实测值777.94。
结构13b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基) -5，6，7，8-四氢化萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 510300DEST_PATH_IMAGE277
将化合物1 (300 mg，1.321 mmol，1当量)、二(频哪醇合)二硼(671 mg，2.642 mmol，2当量)、乙酸钾(389 mg，3.963 mmol，2当量)和Pd (dppf) Cl2 (48 mg，0.066 mmol，0.05当量)在10 mL无水1，4-二氧杂环己烷中的混合物在80℃和氮气下搅拌过夜。浓缩后，将残余物在H2O和DCM之间分配，用DCM萃取水相，用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在己烷中的10%乙酸乙酯洗脱。LC-MS：计算值[ M-H ] - 273.17，实测值273.29。
Figure 512891DEST_PATH_IMAGE278
将化合物1 (100 mg，0.169 mmol，1.0当量)、化合物2 (70 mg，0.253 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (2.7 mg，0.0034 mmol，0.02当量)和K3PO4 (72 mg，0.338 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物20分钟，并将反应在40℃保持3小时。然后将反应冷却至室温并放置过夜。用饱和NaHCO3 (10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的4-5%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M +H ] + 659.34，实测值659.57。
Figure 301855DEST_PATH_IMAGE279
在室温向化合物1 (30 mg，0.0455 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (38 mg，0.0911 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (30 mg，0.0911 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。产率为70%。LC-MS：计算值[ M + H ] +904.47，实测值904.88。
Figure 466120DEST_PATH_IMAGE280
在室温，向化合物1 (29 mg，0.0321 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(2.3 mg，0.0962 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 790.41，实测值790.64。
结构14b ((S) -3- (4' - ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基) -2'- (三氟甲氧基) - [1，1' -联苯] -4-基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 707746DEST_PATH_IMAGE281
将化合物1 (150 mg，0.253 mmol，1.0当量)、化合物2 (118 mg，0.380 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (4 mg，0.0051 mmol，0.02当量)和K3PO4 (107 mg，0.507 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应在40℃保持过夜。用水(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 779.32，实测值779.65。
Figure 248448DEST_PATH_IMAGE282
在室温向化合物1 (0.19g，0.244 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应物排空并用氢气回填(该过程重复3次)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 689.27，实测值689.54。
Figure 626340DEST_PATH_IMAGE283
在室温向化合物1 (80 mg，0.116 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (97 mg，0.232 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (76 mg，0.232 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash ®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。产率是82%。LC-MS：计算值[ M + H ] +934.41，实测值935.04。
Figure 86140DEST_PATH_IMAGE284
在室温，向化合物1 (90 mg，0.0964 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(7 mg，0.289 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 820.34，实测值820.89。
结构15b ((S) -3- (3- (5- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 549483DEST_PATH_IMAGE285
在室温，向化合物1 (1.0g，2.90 mmol，1当量)和碳酸钾(0.60g，4.36 mmol，1.5当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入碘甲烷(362μL，5.81 mmol，2.0当量)。将反应混合物在室温搅拌1小时。然后用水(20 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的15%乙酸乙酯洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 358.06，实测值358.18。
Figure 893876DEST_PATH_IMAGE286
将化合物1 (858 mg，1.677 mmol，1.0当量)用冰浴冷却。将在二氧杂环己烷中的HCl (8.4 mL，33.54 mmol，20当量)加入到烧瓶中。将反应温热至室温并再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 258.01，实测值258.08。
Figure 126275DEST_PATH_IMAGE287
在0℃，向化合物1 (640 mg，1.821 mmol，1当量)、化合物2 (590 mg，2.003 mmol，1.10当量)和TBTU (702 mg，2.185 mmol，1.20当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.952 mL，5.464 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 591.17，实测值591.40。
Figure 84872DEST_PATH_IMAGE288
将化合物1 (150 mg，0.253 mmol，1.0当量)、化合物2 (106 mg，0.380 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (4 mg，0.0051 mmol，0.02当量)和K3PO4 (107 mg，0.507 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应在40℃保持2小时。用水(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 745.35，实测值745.99。
Figure 35511DEST_PATH_IMAGE289
在室温向化合物1 (0.189g，0.253 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应排空并用氢气回填(该过程重复3次)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值655.42。
Figure 918016DEST_PATH_IMAGE290
在室温向化合物1 (80 mg，0.122 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (102 mg，0.244 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (80 mg，0.244 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的1-2%甲醇洗脱。产率为90%。LC-MS：计算值900.44，实测值901.10。
Figure 270500DEST_PATH_IMAGE291
在室温，向化合物1 (100 mg，0.111 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(8 mg，0.333 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 786.37，实测值786.95。
结构16b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((R) -1- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 213048DEST_PATH_IMAGE292
在0℃，向化合物1 (500 mg，1.698 mmol，1当量)、化合物2 (295 mg，1.783 mmol，1.05当量)和TBTU (654 mg，2.038 mmol，1.2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.888 mL，5.096 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。产率为98.43%。LC-MS：计算值[ M + H ] + 406.23，实测值406.34。
Figure 916562DEST_PATH_IMAGE293
在0℃，向化合物1 (0.678g，1.672 mmol，1当量)在THF (10 mL)和H2O (10 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(0.12g，5.016 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS计算值[M+H] +392.21，实测值392.39。
Figure 602758DEST_PATH_IMAGE294
在0℃，向化合物1 (130 mg，0.332 mmol，1当量)、化合物2 (125 mg，0.348 mmol，1.05当量)和TBTU (128 mg，0.398 mmol，1.2当量)在无水DMF (5 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.174 mL，0.996 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取产物。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。产率为86%。LC-MS：计算值[ M + H ] + 695.34，实测值695.93。
Figure 809749DEST_PATH_IMAGE295
在室温向化合物1 (80 mg，0.115 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (96 mg，0.230 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (75 mg，0.230 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时，用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的4-5%甲醇洗脱。产率为60%。
Figure 923198DEST_PATH_IMAGE296
在室温，向化合物1 (65 mg，0.0691 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(5 mg，0.207 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 826.41，实测值827.01。
结构17b ((S) -3- (4- (7- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)苯并[ b ]噻吩-4-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 707483DEST_PATH_IMAGE297
在0℃，在1.5小时期间将溴(1.877g，11.745 mmol，1.05当量)在干燥四氯甲烷(20 mL)中的溶液滴加到化合物1 (1.837g，11.186 mmol，1当量)在四氯甲烷(20 mL)中的搅拌溶液中。在0℃再一小时后，将有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩，得到残余物，将其通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化。用含有杂质的纯己烷洗脱产物。
Figure 931791DEST_PATH_IMAGE298
在0℃，在氮气气氛下，向化合物1 (2.70g，11.105 mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三氟化硼二甲硫醚络合物（boron trifluoride dimethyl sulfidecomplex）(3.5 mL，33.317 mmol，3.0当量)，并在室温搅拌20小时。将反应混合物冷却至0℃，并用饱和NH4Cl溶液(20 mL)淬灭。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水相，合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的5%乙酸乙酯洗脱。LC-MS：计算值[ M-H ] -226.92，实测值227.03。
Figure 258867DEST_PATH_IMAGE299
在室温，向化合物1 (1.838g，8.023 mmol，1当量)和化合物2 (1.906 mL，16.04mmol，2当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (5.228g，16.04 mmol，2当量)。将反应混合物在室温搅拌过夜。用水(20 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的2-3%乙酸乙酯洗脱。
Figure 277639DEST_PATH_IMAGE300
在-78℃向化合物1 (2.22g，6.954 mmol，1.0当量)在无水THF (20 mL)中的溶液中滴加在己烷中的n-BuLi (4.17 mL，10.43 mmol，1.5当量)。将反应在-78℃再保持1小时。然后在-78℃向混合物中加入硼酸三异丙酯(2.40 mL，10.43 mmol，1.5当量)。然后将反应温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NH4Cl溶液(20 mL)淬灭反应，并将pH调节至3。用EtOAc(3×20 mL)萃取水相，并合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的4-6%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M-H ] -283.07，实测值283.20。
Figure 955745DEST_PATH_IMAGE301
将化合物1 (400 mg，0.676 mmol，1.0当量)、化合物2 (288 mg，1.01 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (10 mg，0.0135 mmol，0.02当量)和K3PO4 (287 mg，1.352 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (8 mL)和水(2 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应在40℃保持2小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 751.31，实测值751.84。
Figure 983744DEST_PATH_IMAGE302
在室温向化合物1 (0.50g，0.666 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (100 mg)。将反应排空并用氢气回填(该过程重复3次)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的5%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 661.26，实测值661.73。
Figure 165327DEST_PATH_IMAGE303
在室温向化合物1 (130 mg，0.196 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (164 mg，0.393 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (128 mg，0.393 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时，用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。产率为82%。LC-MS：计算值[ M + H ]+ 906.40，实测值906.95。
Figure 620579DEST_PATH_IMAGE304
在室温，向化合物1 (147 mg，0.162 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(12 mg，0.486 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (2 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。LC-MS：计算值[ M + H ] + 792.33，实测值792.89。
结构18b ((S) -3- (4- (6- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-2-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)的合成
Figure 254822DEST_PATH_IMAGE305
将化合物1 (150 mg，0.253 mmol，1.0当量)、化合物2 (71.5 mg，0.380 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (4 mg，0.0051 mmol，0.02当量)和K3PO4 (107 mg，0.507 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应在40℃保持2小时。用水(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值655.87。
Figure 758616DEST_PATH_IMAGE306
在室温向化合物1 (160 mg，0.244 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (204 mg，0.488 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (160 mg，0.488 mmol，2当量)。将反应混合物在60℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。产率为30%。LC-MS：计算值[ M + H ]+ 900.44，实测值901.01。
Figure 60284DEST_PATH_IMAGE307
在室温，向化合物1 (67 mg，0.0744 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(5 mg，0.223 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (2 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的10%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 786.37，实测值786.86。
结构19b ((S) -3- (3- (6- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-2-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 686438DEST_PATH_IMAGE308
将化合物1 (150 mg，0.253 mmol，1.0当量)、化合物2 (71.5 mg，0.380 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (4 mg，0.0051 mmol，0.02当量)和K3PO4 (107 mg，0.507 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应在40℃保持2小时。用水(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值655.78。
Figure 807977DEST_PATH_IMAGE309
在室温向化合物1 (104 mg，0.158 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (132 mg，0.317 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (103 mg，0.317 mmol，2当量)。将反应混合物在60℃搅拌3小时，用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 900.44，实测值901.01。
Figure 36834DEST_PATH_IMAGE310
在室温，向化合物1 (125 mg，0.138 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(10 mg，0.416 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的12%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 786.37，实测值786.86。
结构20b ((S) -3- (3- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 193008DEST_PATH_IMAGE311
将化合物1 (150 mg，0.253 mmol，1.0当量)、化合物2 (102 mg，0.380 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (4 mg，0.0051 mmol，0.02当量)和K3PO4 (107 mg，0.507 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应在40℃保持2小时。用水(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值655.78。
Figure 990063DEST_PATH_IMAGE312
在室温向化合物1 (160 mg，0.244 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (204 mg，0.488 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (159 mg，0.488 mmol，2当量)。将反应混合物在60℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 900.44，实测值901.01。
Figure 598899DEST_PATH_IMAGE313
在室温，向化合物1 (125 mg，0.138 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(10 mg，0.416 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的 8-12%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 786.37，实测值786.86。
结构22b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((S) -2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)丙酰胺基)丙酸的合成
Figure 506812DEST_PATH_IMAGE314
在0℃，向化合物1 (250 mg，0.85 mmol)、L-丙氨酸甲酯盐酸盐(130 mg，0.93 mmol)和TBTU (327 mg，1.02 mmol)在DMF (2 mL)中的溶液中加入DIPEA (329 mg，444μL，2.55mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1小时。用饱和NH4Cl水溶液(0.75 mL)和去离子水(1 mL) 淬灭反应，然后用乙酸乙酯(3 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×3 mL)萃取水层。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(2 mL) 洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-5%甲醇分离粗混合物。化合物2的产率：294 mg (91%)。[ M + H ] C19H29N3O5的计算值：380.46，实测值：380.33。
Figure 783073DEST_PATH_IMAGE315
在0℃，向化合物2 (294 mg，0.77 mmol)在THF (4.5 mL)和去离子水(3 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(56 mg，2.32 mmol)在去离子水(1 mL)中的溶液。将反应温热至室温并搅拌40分钟。用6M HCl (aq)将反应混合物酸化至pH =3。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。化合物3不经进一步纯化使用。化合物3的产率：267 mg (94%)。[ M + H ] C18H27N3O5的计算值：366.43，实测值：366.19。
Figure 751029DEST_PATH_IMAGE316
在0℃，向化合物3 (267 mg，0.73 mmol)、化合物3a (288 mg，0.80 mmol)和TBTU(282 mg，0.88 mmol)在DMF (3 mL)中的溶液中加入DIPEA (283 mg，382μL，2.19 mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1小时。用饱和NH4Cl 水溶液(1.5 mL)和去离子水(1.5 mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(12 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×12 mL)萃取水层。用半饱和NH4Cl水溶液 (10 mL)，半饱和NaHCO3水溶液(10 mL)，和饱和NaCl水溶液 (10 mL)洗涤合并的有机相。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-5%甲醇分离粗混合物。化合物4的产率：342 mg (70%)。[ M +H ] C38H44N4O7的计算值：669.79，实测值：669.74。
Figure 847161DEST_PATH_IMAGE317
向化合物4 (150 mg，0.22 mmol)和叠氮基-PEG5-OTs (187 mg，0.49 mmol)在无水DMF (1.2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (146 mg，0.49 mmol)。将反应混合物在60℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3水溶液 (10 mL)和去离子水(5 mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(7.5 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×7.5 mL)萃取水层。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-4%甲醇分离粗混合物。化合物5的产率：142 mg (69%)。[ M + H ] C48H63N7O11的计算值：915.06，实测值：914.96。
Figure 558765DEST_PATH_IMAGE318
在0℃，向化合物5 (142 mg，0.16 mmol)在THF (2 mL)和去离子水(1.5 mL)中的溶液中添加氢氧化锂(11 mg，0.47 mmol)在去离子水(0.5 mL)中的溶液。将反应物温热至室温并搅拌1小时。用6M HCl (aq)将反应混合物酸化至pH =3。用乙酸乙酯(3×8 mL)萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。向粗残余物中加入TFA (2.0 mL)和水(100μL)。将反应混合物在室温搅拌1.5小时。在减压下除去溶剂，将残余物与乙腈：甲苯[1：1] (2×20 mL)共蒸发。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-13%甲醇分离粗混合物。结构22b的产率：100 mg (80%)。[ M + H ] C42H53N7O9的计算值：800.92，实测值：800.81。
结构23b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((S) -3-甲基-2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基) 丁酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 283007DEST_PATH_IMAGE319
在0℃，向化合物1 (250 mg，0.85 mmol)、L-缬氨酸甲酯盐酸盐(157 mg，0.93 mmol)和TBTU (327 mg，1.02 mmol)在DMF (2 mL)中的溶液中加入DIPEA (329 mg，444μL，2.55mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1小时。用饱和NH4Cl水溶液 (0.75 mL)和去离子水(1 mL) 淬灭反应，然后用乙酸乙酯(3 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×3 mL)萃取水层。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(2 mL) 洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-5%甲醇分离粗混合物。化合物2的产率：297 mg (86%)。[ M + H ] C21H33N3O5的计算值：408.51，实测值：407.87。
Figure 421864DEST_PATH_IMAGE320
在0℃，向化合物2 (297 mg，0.73 mmol)在THF (4.5 mL)和去离子水(3 mL)中的溶液中添加氢氧化锂(52 mg，2.19 mmol)在去离子水(1 mL)中的溶液。将反应物温热至室温并搅拌40分钟。用6M HCl (aq)将反应混合物酸化至pH =3。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。化合物3不经进一步纯化使用，假定100%产率。[ M + H ] C20H31N3O5的计算值：394.49，实测值：393.83。
Figure 5292DEST_PATH_IMAGE321
在0℃，向化合物3 (287 mg，0.73 mmol)、化合物3a (287 mg，0.80 mmol)和TBTU(281 mg，0.88 mmol)在DMF (3 mL)中的溶液中加入DIPEA (283 mg，382μL，2.19 mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1小时。用饱和NH4Cl水溶液 (2.5 mL)和去离子水(2.5 mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(12 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×12 mL)萃取水层。用半饱和NH4Cl水溶液 (10 mL)，半饱和NaHCO3水溶液(10 mL)，和饱和NaCl水溶液 (10 mL)洗涤合并的有机相。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-5%甲醇分离粗混合物。化合物4的产率：374 mg (74%)。[ M +H ] C40H48N4O7的计算值：697.84，实测值：697.46。
Figure 520587DEST_PATH_IMAGE322
向化合物4 (150 mg，0.215 mmol)和叠氮基-PEG5-OTs (180 mg，0.43 mmol)在无水DMF (1.2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (140 mg，0.43 mmol)。将反应混合物在60℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3水溶液 (10 mL)和去离子水(5 mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(7.5 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×7.5 mL)萃取水层。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-4%甲醇分离粗混合物。化合物5的产率：134 mg (66%)。[ M + H ] C50H67N7O11的计算值：943.12，实测值：942.96。
Figure 240282DEST_PATH_IMAGE323
在0℃，向化合物5 (134 mg，0.14 mmol)在THF (2 mL)和去离子水(1.5 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(10 mg，0.43 mmol)在去离子水(0.5 mL)中的溶液。将反应温热至室温并搅拌1小时。用6M HCl (aq)将反应混合物酸化至pH =3。用乙酸乙酯(3×8 mL)萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。向粗残余物中加入TFA (1.9 mL)和水(95μL)。将反应混合物在室温搅拌1.5小时。在减压下除去溶剂，并将残余物与乙腈：甲苯[1：1](2×20 mL)共蒸发。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®，用在DCM中的0-10%甲醇分离粗混合物。结构23b的产率：36 mg (30.5%)。[ M + H ] C44H57N7O9的计算值：828.97，实测值828.90。
结构24b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((S) -2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基) -3-苯基丙酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 815620DEST_PATH_IMAGE324
在0℃，向化合物1 (200 mg，0.679 mmol，1当量)、化合物2 (161 mg，0.747 mmol，1.2当量)和TBTU (261 mg，0.815 mmol，1.2当量)在无水DMF (4 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.355 mL，2.038 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 456.24，实测值456.12。
Figure 886344DEST_PATH_IMAGE325
在0℃，向化合物1 (300 mg，0.658 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(47 mg，1.975 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +442.23，实测值442.08。
Figure 939750DEST_PATH_IMAGE326
在0℃，向化合物1 (290 mg，0.656 mmol，1当量)、化合物2 (258 mg，0.722 mmol，1.1当量)和TBTU (253 mg，0.788 mmol，1.2当量)在无水DMF (5 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.343 mL，1.970 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 745.35，实测值745.63。
Figure 779530DEST_PATH_IMAGE327
在室温向化合物1 (113 mg，0.151 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (126 mg，0.303 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (99 mg，0.303 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 990.49，实测值990.87。
Figure 447141DEST_PATH_IMAGE328
在室温，向化合物1 (140 mg，0.141 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(10 mg，0.424 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的6-10%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 876.42，实测值876.88。
结构25b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((S) -3- (苄氧基) -2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)丙酰胺基)丙酸)的合成
Figure 5161DEST_PATH_IMAGE329
在0℃，向化合物1 (100 mg，0.339 mmol，1当量)、化合物2 (92 mg，0.373 mmol，1.1当量)和TBTU (131 mg，0.407 mmol，1.2当量)在无水DMF (4 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.178 mL，1.019 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 486.25，实测值486.37。
Figure 596680DEST_PATH_IMAGE330
在0℃，向化合物1 (160 mg，0.329 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(23 mg，0.988 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +472.24，实测值472.32。
Figure 290966DEST_PATH_IMAGE331
在0℃，向化合物1 (1600 mg，0.339 mmol，1当量)、化合物2 (133 mg，0.373mmol，1.1当量)和TBTU (130 mg，0.815 mmol，1.2当量)在无水DMF (3 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.177 mL，1.018 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 775.36，实测值775.87。
Figure 208107DEST_PATH_IMAGE332
在室温向化合物1 (140 mg，0.180 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (150 mg，0.361 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (117 mg，0.361 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 1020.50，实测值1020.88。
Figure 846898DEST_PATH_IMAGE333
在室温，向化合物1 (170 mg，0.166 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(12 mg，0.499 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (4 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的6-10%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 906.43，实测值906.95。
结构27b ((S) -3- (3- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基) -3，5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)的合成
Figure 242108DEST_PATH_IMAGE334
在室温向化合物1 (3.0g，8.71 mmol，1当量)和碳酸钾(1.806g，13.073 mmol，1.5当量)在无水DMF (10 mL)中的溶液中加入碘甲烷(1.085 mL，17.431 mmol，2.0当量)。将反应混合物在室温搅拌1小时。然后用水(20 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的15%乙酸乙酯洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 358.06，实测值358.15。
Figure 56480DEST_PATH_IMAGE335
将化合物1 (200 mg，0.558 mmol，1当量)、化合物2 (169 mg，0.837 mmol，1.5当量)、碘化亚铜(I) (106 mg，0.558 mmol，1.0当量)、碳酸钾(154 mg，1.116 mmol，2.0当量)和反式-N，N ' -二甲基环己烷-1，2-二胺(88μL，0.558 mmol，1.0当量)在无水DMF (5 mL)中的混合物用氮气回填3次。将混合物在120℃搅拌24小时。将混合物冷却至室温并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在己烷中的30-40%乙酸乙酯洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 480.24，实测值480.43。
Figure 878942DEST_PATH_IMAGE336
将化合物1 (30 mg，0.0626 mmol，1.0当量)用冰浴冷却。将在二氧杂环己烷中的HCl (0.313 mL，1.25 mmol，20当量)加入到烧瓶中。将反应温热至室温并再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +380.19，实测值380.33。
Figure 411555DEST_PATH_IMAGE337
在0℃，向化合物1 (10 mg，0.0571 mmol，1当量)、化合物2 (26 mg，0.0628 mmol，1.1当量)和TBTU (22 mg，0.0685 mmol，1.2当量)在无水DMF (1 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.030 mL，0.171 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(5 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 537.26，实测值537.41。
Figure 610455DEST_PATH_IMAGE338
将化合物1 (30 mg，0.0626 mmol，1.0当量)用冰浴冷却。将在二氧杂环己烷中的HCl (0.313 mL，1.25 mmol，20当量)加入到烧瓶中。将反应温热至室温并再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +437.21，实测值437.31。
Figure 279334DEST_PATH_IMAGE339
在0℃，向化合物1 (20 mg，0.0569 mmol，1当量)、化合物2 (26 mg，0.0626 mmol，1.1当量)和TBTU (22 mg，0.0683 mmol，1.2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.03 mL，0.170 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(5 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的4-5%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 713.36，实测值713.85。
Figure 272698DEST_PATH_IMAGE340
在室温向化合物1 (0.033g，0.0463 mmol，1当量)在乙酸乙酯(10 mL)中的溶液中加入10% Pd/C (20 mg)。将反应混合物与氢气在室温搅拌过夜。通过滤过Celite®除去催化剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 623.31，实测值623.56。
Figure 964710DEST_PATH_IMAGE341
在室温向化合物1 (16 mg，0.0257 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (22 mg，0.0514 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (17 mg，0.0514 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时，用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 868.45，实测值868.96。
Figure 701722DEST_PATH_IMAGE342
在室温，向化合物1 (5 mg，0.0058 mmol，1.0当量)在THF (1 mL)和水(1 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1 mg，0.0346 mmol，6.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl(6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (1 mL)和DCM (1 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。LC-MS：计算值[ M + H ] + 754.38，实测值755。
结构29b ((S) -3- (4- (3- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- (2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)乙酰胺基)丙酸)的合成
Figure 225107DEST_PATH_IMAGE343
将化合物1 (100 mg，0.169 mmol，1.0当量)、化合物2 (68 mg，0.253 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (3 mg，0.0034 mmol，0.02当量)和K3PO4 (72 mg，0.338 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应物在40℃保持2小时。用水(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的 CombiFlash®分离化合物，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 655.31，实测值656。
Figure 654951DEST_PATH_IMAGE344
在室温向化合物1 (100 mg，0.152 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (127 mg，0.305 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (100 mg，0.305 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 900.44，实测值901。
Figure 896577DEST_PATH_IMAGE345
在室温，向化合物1 (125 mg，0.138 mmol，1.0当量)在THF (1 mL)和水(1 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(10 mg，0.416 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (3 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂。产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] + 786.37，实测值787。
结构30b ((S) -N- (1-叠氮基-21- (4- (萘-1-基)苯基) -19，23-二氧代-3，6，9，12，15-五氧杂-18，22-二氮杂二十四烷-24-基) -4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺)的合成
Figure 376229DEST_PATH_IMAGE346
将化合物1 (100 mg，0.169 mmol，1.0当量)、化合物2 (43 mg，0.253 mmol，1.5当量)、XPhos Pd G2 (3 mg，0.0034 mmol，0.02当量)和K3PO4 (72 mg，0.338 mmol，2.0当量)在圆底烧瓶中混合。用螺帽隔膜密封烧瓶，然后抽空并用氮气回填(该过程重复总共3次)。然后，经由注射器加入THF (5 mL)和水(1 mL)。用氮气鼓泡混合物10分钟，并将反应物在40℃保持2小时。用水(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将化合物通过用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 639.31，实测值640。
Figure 19700DEST_PATH_IMAGE347
在0℃，向化合物1 (90 mg，0.140 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(10 mg，0.422 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，并合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +625.29，实测值625.36。
Figure 354867DEST_PATH_IMAGE348
在0℃，向化合物1 (88 mg，0.140 mmol，1当量)、化合物2 (48 mg，0.154 mmol，1.1当量)和TBTU (54 mg，0.169 mmol，1.2当量)在无水DMF (3 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.074 mL，0.422 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的4-6%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 913.47，实测值913.70。
Figure 83788DEST_PATH_IMAGE349
向化合物1 (93 mg，0.101 mmol，1.0当量)在DCM (2 mL)中的溶液中加入TFA (3mL)，并将该混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。将产物用在二氯甲烷中的10-12%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 813.42，实测值813.68。
结构31b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((S) -3-羟基-2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)丙酰胺基)丙酸)的合成
Figure 100286DEST_PATH_IMAGE350
在0℃，向化合物1 (150 mg，0.509 mmol，1当量)、化合物2 (87 mg，0.560 mmol，1.1当量)和TBTU (196 mg，0.196 mmol，1.2当量)在无水DMF (3 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.074 mL，0.422 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的4-6%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 396.21，实测值396.17。
Figure 598263DEST_PATH_IMAGE351
在0℃，向化合物1 (196 mg，0.495 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(35 mg，1.486 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +382.19，实测值382.13。
Figure 369910DEST_PATH_IMAGE352
在0℃，向化合物1 (189 mg，0.495 mmol，1当量)、化合物2 (195 mg，0.545 mmol，1.1当量)和TBTU (190 mg，0.595 mmol，1.2当量)在无水DMF (5 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.259 mL，1.486 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM 中的4-6%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 685.32，实测值685.58。
Figure 320549DEST_PATH_IMAGE353
在室温向化合物1 (75 mg，0.109 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (91 mg，0.219 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (71 mg，0.219 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌过夜，用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。产率为29%。LC-MS：计算值[ M + H ] +930.45，实测值930.90。
Figure 62109DEST_PATH_IMAGE354
在室温，向化合物1 (30 mg，0.0323 mmol，1.0当量)在THF (1 mL)和水(1 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(2.3 mg，0.0968 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (2 mL)和DCM (1 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。将产物用在二氯甲烷中的12-15%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 816.39，实测值816.92。
结构32b ((S) -4- (((S) -1- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -2-羧乙基)氨基) -3- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基) -4-氧代丁酸)的合成
Figure 414592DEST_PATH_IMAGE355
在0℃，向化合物1 (100 mg，0.404 mmol，1当量)、化合物2 (160 mg，0.444 mmol，1.1当量)和TBTU (155 mg，0.485 mmol，1.2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.211 mL，1.213 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 551.23，实测值551.45。
Figure 357141DEST_PATH_IMAGE356
将化合物1 (0.164g，0.297 mmol，1.0当量)用冰浴冷却。将在二氧杂环己烷中的HCl (0.745 mL，2.978 mmol，10当量)加入到烧瓶中。将反应物温热至室温并再搅拌1小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，产物不经进一步纯化直接使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +451.18，实测值451.35。
Figure 795075DEST_PATH_IMAGE357
在0℃，向化合物1 (100 mg，0.404 mmol，1当量)、化合物2 (160 mg，0.444 mmol，1.1当量)和TBTU (155 mg，0.485 mmol，1.2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.211 mL，1.213 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-5%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 727.33，实测值727.53。
Figure 481272DEST_PATH_IMAGE358
在室温向化合物1 (150 mg，0.206 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (172 mg，0.412 mmol，2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (134 mg，0.412 mmol，2当量)。将反应混合物在室温搅拌过夜。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。产率为29%。LC-MS：计算值[ M + H ] +940.45，实测值940.71。
Figure 953841DEST_PATH_IMAGE359
在室温，向化合物1 (30 mg，0.0344 mmol，1.0当量)在THF (1 mL)和水(1 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(2.5 mg，0.103 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (2 mL)和DCM (1 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。将产物用在二氯甲烷中的20%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 844.38，实测值844.56。
结构33b ((S) -3- ((S) -6-氨基-2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)己酰胺基) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基)丙酸)的合成
Figure 67291DEST_PATH_IMAGE360
在0℃，向化合物1 (150 mg，0.509 mmol，1当量)、化合物2 (166 mg，0.560 mmol，1.1当量)和TBTU (196 mg，0.611 mmol，1.2当量)在无水DMF (3 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.266 mL，1.528 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-5%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 537.32，实测值537.23。
Figure 992521DEST_PATH_IMAGE361
在0℃，向化合物1 (230 mg，0.428 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(31 mg，1.285 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +523.31，实测值523.55。
Figure 216829DEST_PATH_IMAGE362
在0℃，向化合物1 (230 mg，0.440 mmol，1当量)、化合物2 (173 mg，0.484 mmol，1.1当量)和TBTU (170 mg，0.528 mmol，1.2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.230 mL，1.320 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的4-6%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 826.43，实测值826.65。
Figure 465277DEST_PATH_IMAGE363
在室温向化合物1 (150 mg，0.181 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (113 mg，0.272 mmol，1.5当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (118 mg，0.363 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(5 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的4%甲醇洗脱。产率为66%。LC-MS：计算值[ M + H ] +1071.57，实测值1071.89。
Figure 749628DEST_PATH_IMAGE364
在室温，向化合物1 (130 mg，0.121 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(8.7 mg，0.364 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (3 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。将产物用在二氯甲烷中的20%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 857.45，实测值857.64。
结构34b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((S) -4-甲基-2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)戊酰胺基)丙酸)的合成
Figure 162154DEST_PATH_IMAGE365
在0℃，向化合物1 (150 mg，0.509 mmol，1当量)、化合物2 (101 mg，0.560 mmol，1.1当量)和TBTU (196 mg，0.611 mmol，1.2当量)在无水DMF (3 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.266 mL，1.528 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(5 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的3-5%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 422.26，实测值422.36。
Figure 190153DEST_PATH_IMAGE366
在0℃，向化合物1 (186 mg，0.441 mmol，1当量)在THF (3 mL)和H2O (3 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(31 mg，1.323 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。LC-MS：计算值[ M + H ] +408.24，实测值408.23。
Figure 309419DEST_PATH_IMAGE367
在0℃，向化合物1 (168 mg，0.412 mmol，1当量)、化合物2 (162 mg，0.453 mmol，1.1当量)和TBTU (159 mg，0.494 mmol，1.2当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.215 mL，1.237 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离，并用在DCM中的2-4%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 711.37，实测值711.69。
Figure 499092DEST_PATH_IMAGE368
在室温向化合物1 (150 mg，0.206 mmol，1当量)和叠氮基-PEG5-OTs (132 mg，0.317 mmol，1.5当量)在无水DMF (2 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (137 mg，0.422 mmol，2当量)。将反应混合物在40℃搅拌3小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®纯化，并用在DCM中的3-4%甲醇洗脱。产率为82%。LC-MS：计算值[ M + H ]+ 956.51，实测值956.64。
Figure 398915DEST_PATH_IMAGE369
在室温，向化合物1 (160 mg，0.167 mmol，1.0当量)在THF (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(12 mg，0.502 mmol，3.0当量)。将混合物在室温再搅拌1小时。用HCl (6N)将pH调节至3.0，并用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。向残余物中加入TFA (3 mL)和DCM (2 mL)，并将混合物在室温再搅拌3小时。通过旋转蒸发器除去溶剂，并将产物通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash®进行分离。将产物用在二氯甲烷中的8-10%甲醇洗脱。LC-MS：计算值[ M + H ] + 842.44，实测值842.67。
结构35b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((2S，3R) -3-羟基-2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基) 丁酰胺基)丙酸)的合成
Figure 965025DEST_PATH_IMAGE370
向含有L-苏氨酸-OMe HCl (1.000g，5.896 mmol，1.3当量)的小瓶中加入化合物1(1.335g，4.535 mmol，1当量)、二甲基氨基吡啶(0.277g，2.268 mmol，0.5当量)和CH2Cl2(13.3 mL)。向混合物中加入二异丙胺(2.054 mL，11.792 mmol，2.6当量)，并将得到的溶液冷却到0℃。加入EDC·HCl (1.130g，5.896 mmol，1.3当量)，在温热至室温之前，将反应在0℃搅拌30分钟。16小时后通过HPLC确定反应完成，并转移到分液漏斗中，用66%饱和NH4Cl(4×20 mL)和饱和NH4Cl (20 mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粘性油(1.7588g，94.7%)，将其直接用于下一步骤。LC-MS：计算值[ M + H ] +：410.22，实测值410.03。
Figure 266694DEST_PATH_IMAGE371
将化合物1溶解在MeOH (4.5 mL)中，并向该混合物中加入2.0M LiOH溶液(9.1mL)。将反应搅拌1.5小时，浓缩除去MeOH。然后用20% KHSO4酸化混合物至pH = 4，并用EtOAc (3×15 mL)萃取。将合并的有机物用盐水(20 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩，得到作为固体的3 (1.5095g，88.9%产率)。LC-MS：计算值[ M-H ] -：394.21，实测值394.37。1HNMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.26 (d， 1H)， 7.27 – 7.24 (m， 1H)， 7.23 (s， 1H)， 6.95(ddd， 1H)， 4.60 (dd， 1H)， 4.39 (qd， 1H)， 3.97 – 3.77 (m， 2H)， 2.36 (s， 3H)， )，2.41 – 2.23 (m， 2H)， 1.98 – 1.84 (m， 2H)， 1.45 (s， 9H)， 1.19 (d， 3H)。
Figure 814219DEST_PATH_IMAGE372
向小瓶中装入化合物1 (0.200g，0.506 mmol，1当量)、TBTU (0.195g，0.607mmol，1.2当量)、DMF (2.0 mL)和DIEA (0.264 mL，1.517 mmol，3.0当量)。将反应搅拌2分钟，然后加入2 (0.253g，0.708 mmol，1.4当量)。完成后，用饱和NaHCO3水溶液 (10 mL)稀释反应，用EtOAc (3×5 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将粗物料经柱色谱纯化，用在CH2Cl2中的0-20% MeOH洗脱，得到产物(150.8 mg，42.7%产率)。LC-MS：计算值[ M + H ] +：699.33，实测值699.53。
Figure 201338DEST_PATH_IMAGE373
向含有化合物1 (0.151g，0.216 mmol，1当量)的小瓶中加入Cs2CO3 (0.106g，0.324 mmol，1.5当量)和DMF (1.9 mL)。将N3-PEG5-OTs (0.135g，0.324 mmol，1.5当量)加入到混合物中，并在40℃搅拌反应。反应完成后，用EtOAc (10 mL)、饱和NaHCO3水溶液 (5mL)和水(5 mL) 稀释反应。分离各层，用总共3×10 mL的EtOAc萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。将粗物料经柱色谱纯化，用在CH2Cl2中的0-20% MeOH洗脱，得到产物(103 mg，50.4%产率)。LC-MS：计算值[ M + H ] +：944.47，实测值944.56。
Figure 571139DEST_PATH_IMAGE374
向含有化合物1 (0.103g，0.109 mmol，1当量)的小瓶中加入MeOH (1.5 mL)和2.0M LiOH (2.0 mL)。将反应在室温搅拌，然后浓缩以除去MeOH，用20% KHSO4酸化至pH =2。向混合物中加入EtOAc (5 mL)和水(4 mL)。用EtOAc (3×5 mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩，得到产物(0.0879g，86.9%)。LC-MS：计算值[M + H ] +：930.45，实测值930.56。
Figure 461735DEST_PATH_IMAGE375
向含有化合物1 (0.0879g，0.0945 mmol，1当量)的小瓶中加入CH2Cl2 (0.3 mL)和三氟乙酸(0.64 mL)。在室温搅拌溶液。完成后(＞97%产物)，浓缩反应物，用甲苯(3 mL)然后用乙腈(2×3 mL)共蒸发。得到的产物中还存在TFA (115.6 mg)。
结构36b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((2S，3S) -3-甲基-2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基)戊酰胺基)丙酸)的合成
Figure 196473DEST_PATH_IMAGE376
向含有L-异亮氨酸-OMe HCl (1.000g，5.505 mmol，1.3当量)的小瓶中加入化合物1(1.246g，4.234 mmol，1当量)、二甲基氨基吡啶(0.259g，2.117 mmol，0.5当量)和CH2Cl2(12.5 mL)。向混合物中加入二异丙胺(2.054 mL，11.792 mmol，2.6当量)，并将得到的溶液冷却到0℃。加入EDC·HCl (1.055g，5.505 mmol，1.3当量)，在温热至室温之前，将反应物在0℃搅拌30分钟。16小时后通过HPLC确定反应完成，并转移到分液漏斗中，用66%饱和NH4Cl (4×20 mL)和饱和NH4Cl (1×20 mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粘性油 (1.8634g，用CH2Cl2润湿)，将其直接用于下一步骤。LC-MS：计算值[ M + H ] +：422.26，实测值422.00。
Figure 805308DEST_PATH_IMAGE377
将化合物1溶解在MeOH (4.2 mL)中，并向该混合物中加入2.0 mL LiOH溶液(8.5mL)。将反应物搅拌1.5小时，浓缩除去MeOH。然后用20% KHSO4酸化混合物至pH = 4，并用EtOAc (3×15 mL)萃取。将合并的有机物用盐水(20 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩，得到产物为粘性油 (1.6123g，两步产率为93.4%)。LC-MS：计算值[ M-H ] -：406.24，实测值406.43。1H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 8.23 (d， 1H)， 7.12 (d， 1H)， 6.95 – 6.88 (m，1H)， 4.58 (dd， 1H)， 3.99 – 3.83 (m， 2H)， 2.35 – 2.34 (s， 3H)， 2.30 (七重峰（hept）， 2H)， 2.00 – 1.84 (m， 4H)， 1.45 (s， 9H)， 0.91 (m， 6H)。
Figure 978801DEST_PATH_IMAGE378
向小瓶中装入化合物1 (0.200g，0.491 mmol，1当量)、TBTU (0.189g，0.589mmol，1.2当量)、DMF (2.0 mL)和DIEA (0.256 mL，1.472 mmol，3.0当量)。将反应物搅拌2分钟，然后加入2 (0.246g，0.687 mmol，1.4当量)。完成后，用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)稀释反应物，用EtOAc (3×5 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将粗物料经柱色谱纯化，用在CH2Cl2中的0-20% MeOH洗脱，得到产物(0.3024 mg，86.7%收率)。LC-MS：计算值[ M + H ] +：711.37，实测值711.51。
Figure 989482DEST_PATH_IMAGE379
向含有化合物1 (0.170g，0.238 mmol，1当量)的小瓶中加入Cs2CO3 (0.116g，0.358 mmol，1.5当量)和DMF (2.1 mL)。将N3-PEG5-OTs (0.149g，0.358 mmol，1.5当量)加入到混合物中，并在40℃搅拌反应物。反应完成后，用EtOAc (10 mL) 、饱和NaHCO3水溶液(5 mL)和水(5 mL) 稀释反应物。分离各层，用总共3×10 mL的EtOAc萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。将粗物料经柱色谱纯化，用在CH2Cl2中的0-20% MeOH洗脱，得到产物(0.1645g，72.1%收率)。LC-MS：计算值[ M + H ] +：956.51，实测值956.78。
Figure 144389DEST_PATH_IMAGE380
向含有化合物1 (0.164g，0.172 mmol，1当量)的小瓶中加入MeOH (2.0 mL)和2.0M LiOH (3.0 mL)。在室温搅拌反应物并通过HPLC监测。需要另外的LiOH (33 mg，1.38mmol，8当量)、水(5 mL)和MeOH (4 mL)以溶解物料并驱动反应。HPLC显示形成两个新的峰，认为是非对映异构体。当转化率达到＞94%时，浓缩反应物以除去MeOH，用20% KHSO4酸化至pH = 2。向混合物中加入EtOAc (5 mL)和水(4 mL)。用EtOAc (4×5 mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(10 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩，得到产物(0.1417g，87.4%)。LC-MS：计算值[ M + H ] +：942.49，实测值942.56。
Figure 240521DEST_PATH_IMAGE381
向含有化合物1 (0.1417g，0.1504 mmol，1当量)的小瓶中加入CH2Cl2 (0.5 mL)和三氟乙酸(1.0 mL)。在室温搅拌溶液。完成后(＞97%产物)，浓缩反应物，用甲苯(3 mL)然后用乙腈(2×3 mL)共蒸发。得到的产物中还存在TFA (150.3 mg)。在整个反应中对于起始材料和产物两个峰都存在。LC-MS：计算值[ M + H ] +：842.44，实测值842.56。发现两个产物峰具有相同的质量，表示存在非对映异构体。
结构37b ((S) -3- (4- (4- ((14-叠氮基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)萘-1-基)苯基) -3- ((R) -3-甲基-2- (4- ((4-甲基吡啶-2-基)氨基)丁酰胺基) 丁酰胺基)丙酸) 的合成
Figure 952125DEST_PATH_IMAGE382
在0℃，向化合物1 (150 mg，0.509 mmol，1当量)、化合物2 (94 mg，0.560 mmol，1.1当量)和TBTU (196 mg，0.611 mmol，1.2当量)在无水DMF (3 mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.266 mL，1.528 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温并再搅拌1小时。用饱和NaHCO3溶液(10 mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。合并有机相，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过CombiFlash分离，并用在DCM中的2-3%甲醇洗脱。产率：205 mg(99%)。
Figure 817313DEST_PATH_IMAGE383
在0℃，向化合物1 (207 mg，0.508 mmol，1当量)在THF (5 mL)和H2O (5 mL)中的溶液中分批加入氢氧化锂(36 mg，1.523 mmol，3当量)。将反应混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，用HCl (6N)酸化反应混合物至pH3.0。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相，合并有机层，经Na2SO4干燥，并浓缩。产物不经进一步纯化使用。产率：180 mg (91%)。
Figure 956170DEST_PATH_IMAGE384
在0℃，向化合物3 (180 mg，0.46 mmol)、化合物3a (180 mg，0.50 mmol)和TBTU(176 mg，0.55 mmol)在DMF (2.5 mL)中的溶液中加入DIPEA (177 mg，239μL，1.37 mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1小时。用饱和NH4Cl水溶液 (1.75 mL)和去离子水(1.75mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(8 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×8 mL)萃取水层。用半饱和NH4Cl水溶液 (6 mL)和半饱和NaHCO3水溶液(6 mL) 洗涤合并的有机相。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash，用在DCM中的0-5%甲醇分离粗混合物。化合物4的产率：295 mg (92%)。[ M + H ] + C40H48N4O7的计算值：697.84，实测值：697.82。
向化合物4 (200 mg，0.29 mmol)和叠氮基-PEG5-OTs (240 mg，0.57 mmol)在无水DMF (2.5 mL)中的溶液中加入Cs2CO3 (187 mg，0.57 mmol)。将反应混合物在60℃搅拌2小时。用饱和NaHCO3水溶液 (15 mL)和去离子水(7.5 mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(10 mL)萃取。进一步用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取水层。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash，用在DCM中的0-5%甲醇分离粗混合物。化合物5的产率：97 mg (36%)。[ M + H ] + C50H67N7O11的计算值：943.15，实测值：942.96。
向化合物5 (94 mg，0.10 mmol)在THF (1.5 mL)和去离子水(1 mL)中的溶液中加入氢氧化锂(7.2 mg，0.30 mmol)在去离子水(0.5 mL)中的溶液。将反应混合物搅拌1小时，然后用6M HCl (aq)酸化至pH =3。用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。向粗残余物中加入TFA (1.34 mL)和水(67μL)。将反应混合物在室温搅拌1.5小时。在减压下除去溶剂，并将残余物与乙腈：甲苯[1：1] (2×20 mL)共蒸发。通过使用硅胶作为固定相的CombiFlash，用在DCM中的0-10%甲醇分离粗混合物。结构37b的产率：44 mg (53%)。[ M + H ] + C44H57N7O9的计算值：828.97，实测值：828.63。
实施例2. 三齿αvβ6整联蛋白配体的合成和αvβ6整联蛋白配体与被转运的分子(RNAi剂)的缀合
αvβ6整联蛋白配体可与一种或多种可用于抑制一种或多种靶基因的表达的RNAi剂缀合。αvβ6整联蛋白配体促进RNAi剂向靶细胞和/或组织的递送。上文的实施例1描述了本文公开的某些αvβ6整联蛋白配体的合成。下面描述在本文给出的非限制性实施例中举例说明的合成某些αvβ6整联蛋白配体-RNAi剂缀合物的一般程序。
A.RNAi剂的合成。RNAi剂可以使用本领域公知的方法合成。对于本文实施例中举例说明的RNAi剂的合成，根据亚磷酰胺技术在寡核苷酸合成中所用的固相上合成RNAi剂的有义链和反义链。根据规模，使用MerMade96E ® (Bioautomation)、MerMade12 ®(Bioautomation)或OP Pilot100 (GE Healthcare)。合成在由可控孔度玻璃(CPG，500 Å或600 Å，得自Prime Synthesis，Aston，PA，USA)制成的固体载体上进行。所有RNA和2' -修饰的RNA亚磷酰胺购自Thermo Fisher Scientific (Milwaukee，WI，USA)。具体地，使用了下列2' -O-甲基亚磷酰胺：(5' -O-二甲氧基三苯甲基-N6- (苯甲酰基) -2' -O-甲基-腺苷-3' -O- (2-氰乙基-N，N-二异丙基氨基)亚磷酰胺、5' -O-二甲氧基-三苯甲基-N4- (乙酰基) -2' -O-甲基-胞苷-3' -O- (2-氰乙基-N，N-二异丙基氨基)亚磷酰胺、(5' -O-二甲氧基三苯甲基-N2- (异丁酰基) -2' -O-甲基-鸟苷-3' -O- (2-氰乙基-N，N-二异丙基氨基)亚磷酰胺和5' -O-二甲氧基三苯甲基-2' -O-甲基-尿苷-3' -O- (2-氰乙基-N，N-二异丙基氨基)亚磷酰胺。2' -脱氧-2' -氟亚磷酰胺带有与2' -O-甲基RNA亚酰胺（amidites）相同的保护基。5' -二甲氧基三苯甲基-2' -O-甲基-肌苷-3' -O- (2-氰乙基-N，N-二异丙基氨基)亚磷酰胺购自Glen Research (Virginia)。反向无碱基(3' -O-二甲氧基三苯甲基-2' -脱氧核糖-5' -O- (2-氰乙基-N，N-二异丙基氨基)亚磷酰胺购自ChemGenes(Wilmington， MA， USA)。使用下列UNA亚磷酰胺：5' - (4，4' -二甲氧基三苯甲基) -N6-(苯甲酰基) -2'，3' –断（seco）-腺苷、2' -苯甲酰基-3' - [ (2-氰乙基) - (N，N-二异丙基) ] -亚磷酰胺、5' - (4，4' -二甲氧基三苯甲基) -N-乙酰基-2'，3' -断（seco）-胞嘧啶、2' -苯甲酰基-3' - [ (2-氰乙基) - (N，N-二异丙基) ] -亚磷酰胺、5' - (4，4' -二甲氧基三苯甲基) -N-异丁酰基-2'，3' -断（seco）-鸟苷、2' -苯甲酰基-3' - [ (2-氰乙基) - (N，N-二异丙基) ] -亚磷酰胺、和5' - (4，4' -二甲氧基-三苯甲基) -2'，3' -断（seco）-尿苷、2' -苯甲酰基-3' - [ (2-氰乙基) - (N，N-二异丙基) ] -亚磷酰胺。TFA氨基连接臂亚磷酰胺也是商业购买的(ThermoFisher)。
在一些实例中，通过将组分连接至包括三炔烃基团的支架，将本文公开的αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。在一些实例中，通过使用含三炔烃的亚磷酰胺添加三炔烃基团，所述亚磷酰胺可在RNAi剂的有义链的5'末端添加。当与本文某些实施例中提供的RNAi剂结合使用时，将含三炔烃的亚磷酰胺溶解于无水二氯甲烷或无水乙腈(50 mM)中，同时将所有其它亚磷酰胺溶解于无水乙腈(50 mM)中，并加入分子筛(3 Å)。5-苄硫基-1H-四唑(BTT，250 mM于乙腈中)或5-乙硫基-1H-四唑(ETT，250 mM于乙腈中)用作活化剂溶液。偶联时间为10分钟(RNA)、90秒(2' O-Me)和60秒(2' F)。为了引入硫代磷酸酯键，使用3-苯基1，2，4-二噻唑啉-5-酮(POS，得自PolyOrg，Inc，Leomister，MA，USA)在无水乙腈中的100mM溶液。
或，当αvβ6整联蛋白配体经由三炔烃支架与RNAi剂偶联时，代替使用亚磷酰胺方法，可以合成后引入含三炔烃的化合物(参见例如下文的E部分)。当与本文列出的某些实施例中提供的RNAi剂结合使用时，，当将三炔烃基团合成后连接至有义链的5'末端时，用在5'末端包括伯胺的核苷酸官能化所述有义链的5'末端核苷酸，以促进与含三炔烃的支架的连接。将TFA氨基连接臂亚磷酰胺溶解在无水乙腈(50 mM)中，加入分子筛(3 Å)。5-苄硫基-1H-四唑(BTT，250 mM于乙腈中)或5-乙硫基-1H-四唑(ETT，250 mM于乙腈中)用作活化剂溶液。偶联时间为10分钟(RNA)、90秒(2' O-Me)和60秒(2' F)。为了引入硫代磷酸酯键，使用3-苯基1，2，4-二噻唑啉-5-酮(POS，得自PolyOrg，Inc，Leomister，MA，USA)在无水乙腈中的100mM溶液。
B. 裂解和脱保护与载体结合的低聚物。在固相合成完成后，将干燥的固体载体用1：1体积的40 wt%甲胺的水溶液和28% -31%氢氧化铵溶液(Aldrich)在30℃处理1.5小时。蒸发溶液并将固体残余物在水中重构(见下文)。
C. 纯化。使用TSKgel SuperQ-5 PW13μm柱和Shimadzu LC-8系统，通过阴离子交换HPLC纯化粗低聚物。缓冲液A是20 mM Tris、5 mM EDTA，pH9.0，含有20%乙腈，且缓冲液B与缓冲液A相同，加入1.5M氯化钠。记录260 nm处的UV痕迹。合并合适的级分，然后使用填充有Sephadex G-25 Fine的GE Healthcare XK16/40柱在尺寸排阻HPLC上运行，运行缓冲液为100mM碳酸氢铵，pH6.7和20%乙腈或过滤水。
D. 退火。通过将等摩尔RNA溶液(有义和反义)在1×PBS (磷酸盐缓冲盐水，1x，Corning，Cellgro)中组合，混合互补链，以形成RNAi剂。将一些RNAi剂冻干并储存在-15至-25℃。通过在UV-Vis分光光度计上在1×PBS中测量溶液吸光度来测定双链体浓度。然后将260 nm处的溶液吸光度乘以转换因子和稀释因子以确定双链体浓度。所使用的转换因子为0.037 mg/(mL·cm)，或，对于一些实验替代地，由实验确定的消光系数来计算转换因子。
E. 三炔烃支架的偶联。在退火之前或之后，RNAi剂的5'或3'胺官能化有义链可以与三炔烃支架缀合。可用于形成本文公开的结构体的示例性三炔烃支架结构包括以下：
Figure 477281DEST_PATH_IMAGE385
Figure 726997DEST_PATH_IMAGE386
Figure 712270DEST_PATH_IMAGE387
。
以下描述了三炔烃支架与退火双链体的缀合：将胺官能化的双链体以～50至70mg/mL溶解于90% DMSO/10% H2O中。加入40当量三乙胺，然后加入3当量三炔烃-PNP。一旦完成，在1x磷酸盐缓冲盐水/乙腈(1：14比例)的溶剂系统中沉淀缀合物两次，并干燥。
F. αvβ6整联蛋白配体的缀合。在退火之前或之后，将5'或3'三齿炔烃官能化的有义链与αvβ6整联蛋白配体缀合。以下实施例描述了αvβ6整联蛋白配体与退火双链体的缀合：在去离子水中制备0.5M三(3-羟丙基三唑基甲基)胺(THPTA)、0.5M五水合硫酸Cu (II)(Cu (II) SO4·5H2O)和2M抗坏血酸钠溶液的储备溶液。制备αvβ6整联蛋白配体的DMSO中的75 mg/mL溶液。在含有三炔烃官能化双链体(3mg，75μL，40mg/mL，在去离子水中，～15，000g/mol)的1.5 mL离心管中，加入25μL的1M Hepes pH8.5缓冲液。涡旋后，加入35μLDMSO，并将溶液涡旋。将αvβ6整联蛋白配体加入到反应物中(6当量/双链体，2当量/炔烃，～15μL)，并将溶液涡旋。用pH试纸检查pH并确认为pH～8。在单独的1.5 mL离心管中，将50μL0.5M的THPTA与10μL 0.5M的Cu (II) SO4·5H2O混合，涡旋，并在室温培育5分钟。5分钟后，将THPTA/Cu溶液(7.2μL，6当量5：1 THPTA：Cu)加入到反应小瓶中，并涡旋。之后立即将2M抗坏血酸盐(5μL，50当量/双链体，16.7 /炔烃)加入反应小瓶中并涡旋。一旦反应完成(通常在0.5-1小时内完成)，立即通过非变性阴离子交换色谱纯化反应物。
G. 半胱氨酸接头上的巯基的官能化。在一些实施例中，半胱氨酸接头可用于促进αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂的缀合。在退火之前或之后，将5'或3'三齿炔烃-Cys (Stbu) -PEG2官能化的有义链用含马来酰亚胺的部分官能化，或可以还原并作为游离硫醇留下，如下列结构所示：
Figure 22029DEST_PATH_IMAGE388
以下实施例描述了用N-乙基马来酰亚胺修饰三炔烃-Cys (Stbu) -PEG2-双链体：将三炔烃-Cys (Stbu) -PEG2-双链体(35 mg)溶解在500μL去离子的H2O中。将HEPES缓冲液(1M，pH8.5，82μL)加入到反应物中，并将溶液涡旋。加入1M二硫苏糖醇溶液(DTT，100当量，236μL)，并将该溶液置于涡旋振荡器上3小时。通过变性RP-HPLC证实二硫化物被还原后，在1x磷酸盐缓冲盐水/乙腈(1：14比例)的溶剂系统中沉淀缀合物三次。将沉淀的颗粒在0.5 mL的0.1M HEPES (pH6.5)中重构，并将N-乙基马来酰亚胺(3mg，10当量)加入到溶液中，并置于涡旋混合器上保持~15分钟。反应完成后，在1x磷酸盐缓冲盐水/乙腈(1：14比例)的溶剂系统中沉淀缀合物三次，脱盐，并干燥。
实施例3. αvβ6整联蛋白配体结合活性
如下表1中所报告的，获得结构1和2的αvβ6整联蛋白配体的IC50结合数据：
表1. IC50结合活性
Figure 279704DEST_PATH_IMAGE389
在本领域通常使用和已知的条件下，检查叠氮化物官能化的结构(即结构1b和2b)的IC50。如上表1所示，结构1和2显示与αvβ6整联蛋白的选择性结合。
实施例4. 在大鼠中，体内气管内施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
如本文实施例2所述，按照本领域已知并常用于寡核苷酸合成的常规方法，根据亚磷酰胺技术在固相上合成包括有义链和反义链的RNAi剂。RNAi剂包括具有至少部分互补于表达阿米洛利敏感性上皮钠通道的α亚基的基因(通常称为α-ENaC或SCNN1A)的核苷碱基序列的反义链。α-ENaC RNAi剂被设计成能够以序列特异性方式降解或抑制α-ENaC的信使RNA(mRNA)转录物的翻译，从而抑制α-ENaC基因的表达。本实施例中使用的RNAi剂(AD04835)由修饰的核苷酸和一个以上非磷酸二酯键组成，并包括以下核苷酸序列：
Figure 333111DEST_PATH_IMAGE390
其中(invAb)代表反向 (3' -3'连接的)无碱基脱氧核糖核苷酸；s代表硫代磷酸酯键；a、c、g和u分别代表2' -O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2' -氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；cPrPu代表5' -环丙基膦酸酯-2' -O-甲基尿苷(参见例如表A)；和(NH2-C6) 代表C6末端胺，以促进所需的靶向配体缀合(参见例如表A)。
如本领域普通技术人员将清楚地理解的，核苷酸单体通过标准磷酸二酯键连接，除了如本文公开的修饰的核苷酸序列中所示的其中包括硫代磷酸酯键的情况，替代了寡核苷酸中通常存在的磷酸二酯键。
在研究第1天和第2天，经由微型喷雾器装置(Penn Century，Philadelphia，PA)向雄性Sprague-Dawley大鼠气管内施用200微升的剂量，其包括以下给药组：
(1) 在水中的5%右旋糖媒介物(D5W)；
(2) 3.0 mg/kg无配体的α-ENaC RNAi剂(AD04835) (“裸的RNAi剂”)，配制于在水中的5%右旋糖 (d5w)中；或
(3) 3.0 mg/kg 在d5w中配制的与结构1的三齿αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC RNAi剂(AD04835)。
在第2和3组中使用相同的α-ENaC RNAi剂。对于第3组，然后将RNAi剂的有义链的5'末端上存在的末端胺(NH2-C6)与包括三个末端炔烃基团的支架缀合。然后将所述炔烃基团与存在于结构1b上的叠氮化物官能团缀合，从而形成结构1的三齿αvβ6整联蛋白配体。一般合成程序描述于上文的实施例2中。
每组给药四(4)只大鼠。在研究第5天对大鼠实施安乐死，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR定量α-ENaC的mRNA丰度，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表2. 相对于实施例4的对照归一化的mRNA的相对α-ENaC表达
Figure 172891DEST_PATH_IMAGE391
如上表2所示，在体内，与不含任何配体的裸的RNAi剂(64%基因下调（knockdown）)(即第2组)和媒介物对照相比，与α-ENaC RNAi剂缀合的三齿形式的结构1的αvβ6整联蛋白配体(即第3组)显示α-ENaC mRNA的相对基因下调增加(约81%基因下调)。
实施例5. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在以下实施例中，使用各种RNAi剂作为被转运的分子来测试被转运的分子经由αvβ6整联蛋白向感兴趣的细胞的递送。本文所用的某些RNAi剂描述于US62/679，549中，将其通过整体引用并入本文中。
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表3.实施例5中大鼠的给药组：
Figure 653551DEST_PATH_IMAGE392
合成具有核苷酸序列的RNAi剂，所述核苷酸序列涉及靶向人类α-ENaC基因，并在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6) 以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。然后，经由包括半胱氨酸-N-乙基-马来酰亚胺接头的三齿支架将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。对于实施例5的RNAi剂-αvβ6整联蛋白配体缀合物，所述RNAi剂以及支架/接头结构对于第2-7组中的每一组都是一致的。因此， 第2至7组的唯一变量是所使用的特异性αvβ6整联蛋白配体(各为三齿形式)。实施例5的RNAi剂-αvβ6整联蛋白配体缀合物具有由下式代表的结构：
Figure 945992DEST_PATH_IMAGE393
其中
Figure 740772DEST_PATH_IMAGE394
代表RNAi剂，且“ avb6配体”代表各自的配体结构。本实施例中所用RNAi剂(AD04835)的结构如上文实施例4所述。
每组中对五(5)只大鼠给药(n =5)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表4.实施例5中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 435059DEST_PATH_IMAGE395
如上表4所示，与对照相比，每种α-ENaC RNAi剂都显示出在大鼠中mRNA表达的降低。例如， 第6 组(AD04835-三齿-结构6.1)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约65%的降低 (0.351)； 第2组 (AD04835-三齿-结构2)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约46%的降低 (0.543)；并且第4组 (AD04835-三齿-结构5.2)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约48%的降低(0.522)。
实施例6. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表5.实施例6中大鼠的给药组
Figure 86620DEST_PATH_IMAGE396
合成具有核苷酸序列的RNAi剂，所述核苷酸序列涉及靶向人类α-ENaC基因，并在有义链的5'末端包含官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。本实施例中使用的RNAi剂由修饰的核苷酸和一个以上的非磷酸二酯键组成，并包括下列核苷酸序列：
Figure 131936DEST_PATH_IMAGE397
Figure 714096DEST_PATH_IMAGE398
其中(invAb)代表反向(3' -3'连接的)无碱基脱氧核糖核苷酸；s代表硫代磷酸酯键；a、c、g和u分别代表2' -O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2' -氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；cPrPu代表5' -环丙基膦酸酯-2' -O-甲基尿苷(参见例如表A)；和(NH2-C6)代表C6末端胺，以促进所需的靶向配体缀合(参见例如表A)。
对于第2、3、4、5和6组，将各αvβ6整联蛋白配体经由包括如以下结构300a中所示的戊二酸接头(经由加入戊二酸)的三齿支架/接头结构与RNAi剂缀合：
Figure 262889DEST_PATH_IMAGE399
(结构300a)，其中
Figure 350931DEST_PATH_IMAGE400
代表RNAi剂，“avb6配体”代表各配体结构。
对于第7和8组，将各αvβ6整联蛋白配体通过具有结构330a中所示结构的三齿支架/接头结构与RNAi剂缀合：
Figure 617964DEST_PATH_IMAGE401
(结构330a)， 其中
Figure 754548DEST_PATH_IMAGE402
代表RNAi剂，“avb6配体”代表各配体结构。
在第1、3、4、6和7组中对四(4)只大鼠给药(n =4)；在第5和8组中对五(5)只大鼠给药(n =5)；并且在第2组中对三(3)只大鼠给药(n =3)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表6.实施例6中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 157847DEST_PATH_IMAGE403
如上表6所示，与对照相比，每种α-ENaC RNAi剂均显示在大鼠中mRNA表达降低。例如， 第5组 (AD05453-三齿αvβ6整联蛋白配体结构6.1)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约51%的降低 (0.494)， 第3组 (AD05453-三齿αvβ6整联蛋白配体结构2)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约38%的降低 (0.615)。此外， 第5组 (其包括αvβ6整联蛋白配体结构6.1)显示了优于第6组(其包括αvβ6整联蛋白配体结构7)的改进，表明对于αvβ6整联蛋白配体，如结构6.1中发现的(s)优于结构7中发现的(r)的手性依赖性。
实施例7. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表7. 实施例7中大鼠的给药组
Figure 416790DEST_PATH_IMAGE404
合成具有核苷酸序列的RNAi剂，所述核苷酸序列涉及靶向人类α-ENaC基因，并在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。用于本实施例的RNAi剂的核苷酸序列如上文实施例6所述。对于第2、3、4、5、6、7、8、9和10组，如上文实施例6中所示，将各αvβ6整联蛋白配体经由包括如结构300a中所述的戊二酸接头的三齿支架/接头结构与RNAi剂缀合。对于第11组，上皮细胞靶向配体由已知结合αvβ6整联蛋白的RGD模拟肽组成，并包括作为药代动力学(PK)调节剂的20kDa PEG部分。
每组对四(4)只大鼠给药(n =4)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表8.实施例7中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 171120DEST_PATH_IMAGE405
如上述表8所示，与对照相比，每种α-ENaC RNAi剂都显示出在大鼠中mRNA表达的降低。例如，第 3组 (AD05347-戊二酸-三齿αvβ6整联蛋白配体结构6.1)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约64%的降低 (0.358)， 第8组 (AD05453-戊二酸-三齿αvβ6整联蛋白配体结构6.1)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约55%的降低 (0.454)。此外，实施例7中的αvβ6整联蛋白配体(即结构2、结构6、结构6.1、结构8、结构9、结构10和结构11)均显示与三齿基于肽的上皮细胞靶向配体相当的基因下调水平，所述配体还包括相对大的20千道尔顿PEG部分以增强第11组的药代动力学效应。
实施例8.在大鼠中，体内气管内施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天和第2天，经由微型喷雾器装置(Penn Century，Philadelphia，PA) 向雄性Sprague-Dawley大鼠气管内施用200微升的剂量，其包括以下给药组：
表9.实施例8中大鼠的给药组
Figure 908131DEST_PATH_IMAGE406
合成具有核苷酸序列的RNAi剂，所述核苷酸序列靶向人类α-ENaC基因的，并在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。用于本实施例的RNAi剂的核苷酸序列如上文实施例4所述。
对于第3和4组，结构1的αvβ6整联蛋白配体经由包括如下述结构331a所示的半胱氨酸接头的三齿支架和接头结构与RNAi剂缀合：
Figure 618467DEST_PATH_IMAGE407
(结构331a)， 其中
Figure 48312DEST_PATH_IMAGE408
代表RNAi剂，且“avb6配体”代表各配体结构。
对于第5组，αvβ6整联蛋白配体经由包括如以上实施例6中表示的结构330a中所述的半胱氨酸-n-乙基-马来酰亚胺接头的三齿支架和接头结构与RNAi剂缀合。对于第7组，αvβ6整联蛋白配体经由包括如以上实施例6中表示的结构300a中所述的戊二酸接头的三齿支架和接头结构与RNAi剂缀合。对于第2和6组，基于肽的上皮细胞靶向配体由RGD模拟肽组成，并包括20kDa PEG部分作为药代动力学(PK)调节剂。
在第2至7组中的每一组使用相同的α-ENaC RNAi剂。
在第1、2、3、4、5和6组的每一个中对五(5)只大鼠给药(n =5)，并且在第7组中对四(4)只大鼠给药(n =4)。在研究第8天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表10. 实施例8中处死动物时(第8天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 24358DEST_PATH_IMAGE409
如上述表10所示，与对照相比，每种α-ENaC RNAi剂都显示出在大鼠中mRNA表达的降低。例如， 第5 组(包含AD04835-Cys- (n-乙基-Mal) -三齿αvβ6整联蛋白配体结构1)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约65%的降低 (0.358)，这与第2组中实现的基因下调水平相当，所述第2组具有基于肽的上皮细胞靶向配体，其还包括20kDa PEG部分作为药代动力学调节剂。
实施例9.在大鼠中，体内气管内施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天和第2天，经由微型喷雾器装置(Penn Century，Philadelphia，PA)向雄性Sprague-Dawley大鼠气管内施用200微升的剂量，其包括以下给药组：
表11.实施例9中大鼠的给药组
Figure 565061DEST_PATH_IMAGE410
合成具有核苷酸序列的RNAi剂，所述核苷酸序列涉及靶向人类α-ENaC基因，并在有义链的5'末端包含官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。用于本实施例的RNAi剂的核苷酸序列如上文实施例4所述。对于第2和3组，将各αvβ6整联蛋白配体经由包括如上文实施例6中表示的结构300a中所述的戊二酸接头的三齿支架/接头结构与RNAi剂缀合。对于第6组，如上文实施例8中所示，将各αvβ6整联蛋白配体经由包括如结构331a中所述的半胱氨酸接头的三齿支架/接头结构与RNAi剂缀合。
在第2至8组中的每一组使用相同的α-ENaC RNAi剂。在第1组中对五(5)只大鼠给药(n =5)，在第2和3组的每一组中对四(4)只大鼠给药(n =4)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表12.实施例9中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 146215DEST_PATH_IMAGE411
如上表12所示，与对照相比，每种α-ENaC RNAi剂都显示出大鼠mRNA表达的降低。例如， 第3组(RNAi剂-戊二酸-三齿αvβ6整联蛋白配体结构2)显示与对照相比平均rENaCmRNA表达约52%的降低 (0.483)， 和第6组 (RNAi剂-Cys-三齿αvβ6整联蛋白配体结构2)显示与对照相比平均rENaC mRNA表达约76%的降低 (0.237)。
实施例10. 在大鼠中，体内气管内施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天和第2天，经由微型喷雾器装置(Penn Century，Philadelphia，PA)向雄性Sprague-Dawley大鼠气管内施用200微升的剂量，其包括以下给药组：
表13.实施例10中大鼠的给药组
Figure 481381DEST_PATH_IMAGE412
合成具有核苷酸序列的RNAi剂，所述核苷酸序列涉及靶向人类α-ENaC基因，并在有义链的5'末端包含官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。用于本实施例的RNAi剂的核苷酸序列如上文实施例4所述。对于第3、4、5和6组，如上文实施例8中所示，将各αvβ6整联蛋白配体经由包括如结构331a中所述的半胱氨酸接头的三齿支架/接头结构与RNAi剂缀合。对于第2组，靶向配体由RGD模拟肽组成，并包括作为药代动力学(PK)调节剂的20kDa PEG部分和FCFP肽接头。
在第2至7组中的每一组使用相同的α-ENaC RNAi剂。
每组中对五(5)只大鼠给药(n =5)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表14. 实施例10中处死动物时(第8天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 210303DEST_PATH_IMAGE413
如上表14所示，与对照相比，每种α-ENaC RNAi剂都显示出在大鼠中mRNA表达的降低。值得注意的是，尽管不包括大的20千道尔顿PEG部分作为药代动力学调节剂，第5组(1.0mg/kg AD04835-Cys-三齿αvβ6整联蛋白配体结构2)显示了与第2组 (1.0 mg/kg AD04835-Cys-PEG20kDa-FCFP-PEG20-基于肽的上皮细胞靶向配体)相比数值上更高水平的α-ENaC表达抑制(第5组 =约56%的基因下调 (0.436)； 第2 组=约47%的基因下调(0.531))。
实施例11. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天、第2天和第3天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表15. 实施例11中大鼠的给药组
Figure 289117DEST_PATH_IMAGE414
合成具有核苷酸序列的RNAi剂，所述核苷酸序列涉及靶向人类α-ENaC基因，并在有义链的5'末端包含官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。用于本实施例的RNAi剂的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
在第1、3、4、5、8和9组的每一个中对五(5)只大鼠给药(n =5)，并且在第2、6和7组中对六(6)只大鼠给药(n =6)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表16. 实施例11中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 787095DEST_PATH_IMAGE415
如上表16所示，与对照相比，与具有结构6.1的αvβ6整联蛋白配体(三齿型)缀合的各α-ENaC RNAi剂在大鼠中显示mRNA表达降低。此外，在每个剂量水平，与具有结构6.1的αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC RNAi剂优于裸施用的α-ENaC RNAi剂，显示对RNAi剂递送的配体效应。(例如，比较第2和6组； 第3和7组； 第4和8组；以及第5和9组)。
实施例12.另外的αvβ6整联蛋白配体结合活性
如下表17中所报告的，获得了本文某些实施例中所用的结构2、6.1、7和23的αvβ6整联蛋白配体的另外的IC50结合数据：
表17.IC50结合活性
Figure 485972DEST_PATH_IMAGE416
在本领域通常使用和已知的条件下，检测叠氮化物官能化的结构(即结构2b和6.1b、7b和23b)的IC50。如上表17所示，结构6.1显示出对αvβ6整联蛋白的有效结合活性(IC50 = 1.6 nM)。
实施例13.在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表18.实施例13中大鼠的给药组
Figure 702190DEST_PATH_IMAGE417
合成具有靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列以及包括AD05347双链体的核苷酸序列的RNAi剂，所述双链体在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05347的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组中对五(5)只大鼠给药(n =5)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表19.实施例13中处死动物时(第9天)的平均相对 rENaC mRNA表达
Figure 584695DEST_PATH_IMAGE418
实施例14. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表20.实施例14中大鼠的给药组
Figure 937179DEST_PATH_IMAGE419
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列以及包括AD05347和AD05453双链体的核苷酸序列的RNAi剂，所述双链体在有义链的5'末端包括官能化胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。用于本实施例的RNAi剂的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对四(4)只大鼠给药(n =4)。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表21.实施例14中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 817411DEST_PATH_IMAGE420
实施例15. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表22.实施例15中大鼠的给药组
Figure 255345DEST_PATH_IMAGE421
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包含官能化的胺反应性基团(NH2-C6)，以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
在第1-9和12组的每一组中对四(4)只大鼠给药(n =4)。在第10和11组中对三(3)只大鼠给药(n =3)。在研究第7天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表23.实施例15中处死动物时(第7天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 675962DEST_PATH_IMAGE422
实施例16. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表24.实施例16中大鼠的给药组
Figure 148532DEST_PATH_IMAGE423
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对四(4)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表25.实施例16中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 996402DEST_PATH_IMAGE424
实施例17. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表26.实施例17中大鼠的给药组
Figure 108584DEST_PATH_IMAGE425
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对五(5)只大鼠给药，除了第4组，其对四(4)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A)mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表27. 实施例17中处死动物时(第9天) 的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 332891DEST_PATH_IMAGE426
实施例18. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表28.实施例18中大鼠的给药组
Figure 659968DEST_PATH_IMAGE427
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对四(4)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表29.实施例18中处死动物(第9天)时的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 944318DEST_PATH_IMAGE428
实施例19. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表30.实施例19中大鼠的给药组
Figure 294528DEST_PATH_IMAGE429
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对四(4)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表31.实施例19中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 56948DEST_PATH_IMAGE430
实施例20. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1和2天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表32.实施例20中大鼠的给药组
Figure 238531DEST_PATH_IMAGE431
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对四(4)只大鼠给药，除了第1组，其对三(3)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A)mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表33.实施例20中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 693783DEST_PATH_IMAGE432
实施例21. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1和2天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表34.实施例21中大鼠的给药组
Figure 780556DEST_PATH_IMAGE433
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对五(5)只大鼠给药，除了第2组，其对六(6)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A)mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表35.实施例21中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 346667DEST_PATH_IMAGE434
实施例22. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1和2天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表36.实施例22中大鼠的给药组
Figure 382756DEST_PATH_IMAGE435
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对四(4)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表37.实施例22中处死动物(第9天)时的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 8909DEST_PATH_IMAGE436
实施例23. 在大鼠中，体内口咽吸入施用靶向与αvβ6整联蛋白配体缀合的α-ENaC的RNAi剂
在研究第1和2天，根据以下给药组，使用移液管经由口咽(“OP”)吸入施用将200微升给药至雄性Sprague Dawley大鼠：
表38.实施例23中大鼠的给药组
Figure 396028DEST_PATH_IMAGE437
合成具有涉及靶向人类α-ENaC基因的核苷酸序列的RNAi剂，所述RNAi剂在有义链的5'末端包括官能化的胺反应性基团(NH2-C6)以促进与αvβ6整联蛋白配体的缀合。RNAi剂AD05453的核苷酸序列如上文实施例6所述。如以上实施例6中所示，经由包括如结构300a中所示的戊二酸接头的三齿支架/接头结构将各αvβ6整联蛋白配体与RNAi剂缀合。
每组对四(4)只大鼠给药。在研究第9天处死大鼠，在收集和匀浆后从两个肺中分离总RNA。通过基于探针的定量PCR对α-ENaC (SCNN1A) mRNA表达进行定量，对GAPDH表达归一化并表示为媒介物对照组的分数(几何平均值，+/-95%置信区间)。
表39.实施例23中处死动物时(第9天)的平均相对rENaC mRNA表达
Figure 437934DEST_PATH_IMAGE438
其它实施方案
应当理解，尽管已经结合本发明的详细描述对本发明进行了描述，但是前面的描述旨在举例说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其它方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。
序列表
<110> ARROWHEAD PHARMACEUTICALS, INC.
<120> 整联蛋白配体及其用途
<130> 30661-WO1
<150> 62/580,398
<151> 2017-11-01
<150> 62/646,739
<151> 2018-03-22
<150> 62/679,549
<151> 2018-06-01
<160> 4
<210> 1
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> RNAi剂有义链修饰序列
<400> 1
gcugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> RNAi剂反义链修饰序列
<400> 2
uauuuguucu gguugcacag c 21
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> RNAi剂有义链修饰序列
<400> 3
ccugugcaac cagaacaaau a 21
<210> 4
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> RNAi剂反义链修饰序列
<400> 4
uauuuguucu gguugcacag g 21

Claims (36)

1.αvβ6整联蛋白配体，其包含结构:
Figure 100964DEST_PATH_IMAGE001
(式I)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从0至7的整数；
J是C-H或N；
Z是OR13、N (R13)2或SR13；
R1是H、任选取代的C1-C6烷基、OH、COOH、CON (R5)2、OR6，或R1包含被转运的分子，其中每个R5独立地是H或C1-C6烷基，并且R6是H或C1-C6烷基；
R2、RP1和RP2各自独立地是H、卤素、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂环烷基或任选取代的亚杂芳基，或R2、RP1和RP2可包含被转运的分子；
R10是H或任选取代的烷基；
R11是H或任选取代的烷基，或R11和R1与它们所连接的原子一起形成任选取代的杂环；
R12是H或任选取代的烷基；
每个R13独立地是H、任选取代的烷基，或R13包含被转运的分子；
R14是任选取代的烷基；以及
其中R1、R2、R13、RP1和RP2中的至少一个包含被转运的分子。
2.αvβ6整联蛋白配体，其包含结构:
Figure 18104DEST_PATH_IMAGE002
(式II)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从0至7的整数(即，n是0、1、2、3、4、5、6或7)；
J是C-H或N；
R1是H、C1-C6烷基、CH(R3)(R4)、OH、COOH、CH2CH2CH2NH2、CONHR5、OR6，或R1包含被转运的分子，其中R3是H或C1-C6烷基， R4是H、C1-C6烷基，R5是H或C1-C6烷基，且R6是H或C1-C6烷基；
R2是任选取代的亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂环烷基、任选取代的亚杂芳基，或R2包含被转运的分子；
R10是H或任选取代的烷基；
R11是H或任选取代的烷基，或R11和R1与它们所连接的原子一起形成任选取代的杂环；
R12是H或任选取代的烷基；
R13是H或任选取代的烷基；
R14是任选取代的烷基；
其中R1或R2中的至少一个包含被转运的分子。
3.权利要求1的αvβ6整联蛋白配体，其包含结构:
Figure 998174DEST_PATH_IMAGE003
(式III)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从1至7的整数(即，n是1、2、3、4、5、6或7)；
R7包括一个或多个被转运的分子；以及
R8是一个或多个任选取代的具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的二价环状部分，诸如环烷基(例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基)、环烯基(例如环戊烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基或环庚烯基)、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯、吡唑、咪唑、噻吩、苯并噻吩、噻唑、苯并噻唑、呋喃、噁唑、异噁唑、苯并呋喃、吲哚、吲唑、苯并咪唑、噁二唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、四唑、喹啉基、异喹啉基或喹喔啉基)或杂环基(例如四氢呋喃、四氢吡喃、哌啶、吡咯烷、二氧杂环己烷或二氧戊环)。
4.权利要求1的αvβ6整联蛋白配体，其包含结构:
Figure 393383DEST_PATH_IMAGE004
(式IV)
或其药学上可接受的盐，其中，
n是从1至7的整数(即，n是1、2、3、4、5、6或7)；以及
R8包含一个或多个被转运的分子。
5.权利要求1至3任一项的αvβ6整联蛋白配体，其中n是3。
6.权利要求1至3任一项的αvβ6整联蛋白配体，其中n是4。
7.αvβ6整联蛋白配体，其选自：
Figure 207756DEST_PATH_IMAGE005
(结构1a)，
Figure 30218DEST_PATH_IMAGE006
(结构2a)，
Figure 969355DEST_PATH_IMAGE007
(结构5a)，
Figure 168255DEST_PATH_IMAGE008
(结构6a)，
Figure 837134DEST_PATH_IMAGE009
(结构7a)，
Figure 830498DEST_PATH_IMAGE010
(结构8a)，
Figure 522510DEST_PATH_IMAGE011
(结构9a)，
Figure 259522DEST_PATH_IMAGE012
(结构10a)，
Figure 782907DEST_PATH_IMAGE013
(结构11a)，
Figure 212752DEST_PATH_IMAGE014
(结构12a)，
Figure 392060DEST_PATH_IMAGE015
(结构13a)，
Figure 667184DEST_PATH_IMAGE016
(结构14a)，
Figure 310655DEST_PATH_IMAGE017
(结构15a)，
Figure 645821DEST_PATH_IMAGE018
(结构16a)，
Figure 374743DEST_PATH_IMAGE019
(结构17a)，
Figure 391240DEST_PATH_IMAGE020
(结构18a)，
Figure 889218DEST_PATH_IMAGE021
(结构19a)，
Figure 660865DEST_PATH_IMAGE022
(结构20a)，
Figure 611503DEST_PATH_IMAGE023
(结构22a)，
Figure 431692DEST_PATH_IMAGE024
(结构24a)，
Figure 784176DEST_PATH_IMAGE025
(结构25a)，
Figure 726724DEST_PATH_IMAGE026
(结构27a)，
Figure 164658DEST_PATH_IMAGE027
(结构29a)，
Figure 522959DEST_PATH_IMAGE028
(结构30a)，
Figure 995528DEST_PATH_IMAGE029
(结构31a)，
Figure 108978DEST_PATH_IMAGE030
(结构32a)，
Figure 34208DEST_PATH_IMAGE031
(结构33a)，
Figure 258516DEST_PATH_IMAGE032
(结构34a)，
Figure 257696DEST_PATH_IMAGE033
(结构35a)，
Figure 542047DEST_PATH_IMAGE034
(结构36a)，和
Figure 954574DEST_PATH_IMAGE035
(结构37a)，
或其药学上可接受的盐，其中X包含被转运的分子。
8.αvβ6整联蛋白配体，其选自:
Figure 917326DEST_PATH_IMAGE036
(结构1)；
Figure 98909DEST_PATH_IMAGE037
(结构2)；
Figure 288582DEST_PATH_IMAGE038
(结构5)；
Figure 188405DEST_PATH_IMAGE039
(结构5.1)；
Figure 754515DEST_PATH_IMAGE040
(结构5.2)；
Figure 993867DEST_PATH_IMAGE041
(结构6)；
Figure 354441DEST_PATH_IMAGE042
(结构6.1)；
Figure 741560DEST_PATH_IMAGE043
(结构6.2)；
Figure 111361DEST_PATH_IMAGE044
(结构6.3)；
Figure 939640DEST_PATH_IMAGE045
(结构6.4)；
Figure 736695DEST_PATH_IMAGE046
(结构7)；
Figure 345531DEST_PATH_IMAGE047
(结构8)；
Figure 519023DEST_PATH_IMAGE048
(结构9)；
Figure 529704DEST_PATH_IMAGE049
(结构10)；
Figure 435343DEST_PATH_IMAGE050
(结构11)；
Figure 531475DEST_PATH_IMAGE051
(结构12)；
Figure 243079DEST_PATH_IMAGE052
(结构13)；
Figure 108267DEST_PATH_IMAGE053
(结构14)；
Figure 184808DEST_PATH_IMAGE054
(结构15)；
Figure 768236DEST_PATH_IMAGE055
(结构16)；
Figure 17951DEST_PATH_IMAGE056
(结构17)；
Figure 940908DEST_PATH_IMAGE057
(结构18)；
Figure 250667DEST_PATH_IMAGE058
(结构19)；
Figure 259074DEST_PATH_IMAGE059
(结构20)；
Figure 312481DEST_PATH_IMAGE060
(结构22)；
Figure 152261DEST_PATH_IMAGE061
(结构23)；
Figure 632921DEST_PATH_IMAGE062
(结构24)；
Figure 863045DEST_PATH_IMAGE063
(结构25)；
Figure 720142DEST_PATH_IMAGE064
(结构27)；
Figure 414429DEST_PATH_IMAGE065
(结构29)；
Figure 65990DEST_PATH_IMAGE066
(结构30)；
Figure 111306DEST_PATH_IMAGE067
(结构31)；
Figure 441269DEST_PATH_IMAGE068
(结构32)；
Figure 990062DEST_PATH_IMAGE069
(结构33)；
Figure 78104DEST_PATH_IMAGE070
(结构34)；
Figure 345137DEST_PATH_IMAGE071
(结构35)；
Figure 481720DEST_PATH_IMAGE072
(结构36)；和
Figure 885020DEST_PATH_IMAGE073
(结构37)，
或其药学上可接受的盐，其中
Figure 143963DEST_PATH_IMAGE074
指示与包含被转运的分子的部分的连接点。
9.权利要求1至8任一项的αvβ6整联蛋白配体，其中被转运的分子是活性药物成分或前药。
10.权利要求1-8任一项的αvβ6整联蛋白配体，其中被转运的分子包括小分子、抗体、抗体片段、免疫球蛋白、单克隆抗体、标记或标志物、脂质、天然或修饰的核酸、天然或修饰的核酸寡核苷酸、天然或修饰的核酸多核苷酸、肽、核酸适配体、聚合物、多胺、蛋白质、毒素、维生素、聚乙二醇、半抗原、地高辛、生物素、放射性原子或分子、或荧光团。
11.权利要求1-8任一项的αvβ6整联蛋白配体，其中被转运的分子包含RNAi剂。
12.权利要求1至11任一项的αvβ6整联蛋白配体，进一步包含具有2-20个亚乙基氧单元的聚乙二醇接头。
13.结构，其包含权利要求1-12任一项的αvβ6整联蛋白配体、连接基团和支架，其中所述结构结合至被转运的分子。
14.权利要求13的结构，其中所述结构包含单齿形式的αvβ6整联蛋白配体。
15.权利要求13的结构，其中所述结构包含二齿形式的αvβ6整联蛋白配体。
16.权利要求13的结构，其中所述结构包含三齿形式的αvβ6整联蛋白配体。
17.权利要求13的结构，其中所述结构包含四齿形式的αvβ6整联蛋白配体。
18.权利要求13的结构，其中支架具有下式:
Figure 898292DEST_PATH_IMAGE075
(结构300a)，
其中
Figure 635304DEST_PATH_IMAGE076
代表RNAi剂，和" avb6配体"代表各配体结构和连接剂。
19.αvβ6整联蛋白配体前体，其包含结构：
Figure 96373DEST_PATH_IMAGE077
(式Ib)，
或其药学上可接受的盐，
其中，
n是从0至7的整数；
J是C-H或N；
Z是OR13、N (R13)2或SR13；
R1是H、任选取代的C1-C6烷基、OH、COOH、CON (R5)2、OR6，或R1包含与反应性基团缀合的连接基团，其中每个R5独立地是H或C1-C6烷基，并且R6是H或C1-C6烷基；
R2、RP1和RP2各自独立地是H、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂环烷基或任选取代的亚杂芳基，或R2、RP1和RP2可包含与反应性基团缀合的连接基团；
R10是H或任选取代的烷基；
R11是H或任选取代的烷基，或R11和R1与它们所连接的原子一起形成任选取代的杂环；
R12是H或任选取代的烷基；
每个R13独立地是H、任选取代的烷基，或R13包含与反应性基团缀合的连接基团；
R14是任选取代的烷基；以及
其中R1、R2、R13、RP1和RP2中的至少一个包含与反应性基团缀合的连接基团。
20.权利要求19的αvβ6整联蛋白配体前体，其中连接基团是PEG接头。
21.权利要求19的αvβ6整联蛋白配体前体，其中PEG接头包含2-20个PEG单元。
22.权利要求19的αvβ6整联蛋白配体前体，其中反应性基团是叠氮化物。
23.权利要求19的αvβ6整联蛋白配体前体，其中与反应性基团缀合的连接基团具有结构:
Figure 526217DEST_PATH_IMAGE078
其中n是2-20的整数，和
Figure 502263DEST_PATH_IMAGE079
表示与式Ib的结构的连接点。
24.αvβ6整联蛋白配体前体，其选自：
Figure 42966DEST_PATH_IMAGE080
(结构1b)，
Figure 624120DEST_PATH_IMAGE081
(结构2b)，
Figure 959286DEST_PATH_IMAGE082
(结构5b)，
Figure 688208DEST_PATH_IMAGE083
(结构5.1b)，
Figure 767022DEST_PATH_IMAGE084
(结构5.2b)，
Figure 202683DEST_PATH_IMAGE085
(结构6b)，
Figure 708751DEST_PATH_IMAGE086
(结构6.1b)，
Figure 924968DEST_PATH_IMAGE087
(结构6.2b)，
Figure 807474DEST_PATH_IMAGE088
(结构6.3b)，
Figure 97641DEST_PATH_IMAGE089
(结构6.4b)，
Figure 40189DEST_PATH_IMAGE090
(结构7b)，
Figure 478123DEST_PATH_IMAGE091
(结构8b)，
Figure 898741DEST_PATH_IMAGE092
(结构9b)，
Figure 371310DEST_PATH_IMAGE093
(结构10b)，
Figure 156864DEST_PATH_IMAGE094
(结构11b)，
Figure 82094DEST_PATH_IMAGE095
(结构12b)，
Figure 306402DEST_PATH_IMAGE096
(结构13b)，
Figure 633478DEST_PATH_IMAGE097
(结构14b)，
Figure 855512DEST_PATH_IMAGE098
(结构15b)，
Figure 268039DEST_PATH_IMAGE099
(结构16b)，
Figure 30459DEST_PATH_IMAGE100
(结构17b)，
Figure 212041DEST_PATH_IMAGE101
(结构18b)，
Figure 602047DEST_PATH_IMAGE102
(结构19b)，
Figure 501870DEST_PATH_IMAGE103
(结构20b)，
Figure 67980DEST_PATH_IMAGE104
(结构22b)，
Figure 104069DEST_PATH_IMAGE105
(结构23b)，
Figure 730223DEST_PATH_IMAGE106
(结构24b)，
Figure 55025DEST_PATH_IMAGE107
(结构25b)，
Figure 159247DEST_PATH_IMAGE108
(结构27b)，
Figure 315422DEST_PATH_IMAGE109
(结构29b)，
Figure 112477DEST_PATH_IMAGE110
(结构30b)，
Figure 658996DEST_PATH_IMAGE111
(结构31b)，
Figure 832488DEST_PATH_IMAGE112
(结构32b)，
Figure 843169DEST_PATH_IMAGE113
(结构33b)，
Figure 811125DEST_PATH_IMAGE114
(结构34b)，
Figure 844940DEST_PATH_IMAGE115
(结构35b)，
Figure 290965DEST_PATH_IMAGE116
(结构36b)，和
Figure 421732DEST_PATH_IMAGE117
(结构37b)，
或其药学上可接受的盐。
25.组合物，其包含权利要求1-12任一项的αvβ6整联蛋白配体或权利要求13-18任一项的结构，和药学上可接受的赋形剂。
26.权利要求25的组合物，其中αvβ6整联蛋白配体与能够抑制上皮细胞中靶基因表达的基于寡核苷酸的化合物缀合。
27.权利要求25的组合物，其中αvβ6整联蛋白配体与能够抑制上皮细胞中靶基因表达的RNAi剂缀合。
28.权利要求25的组合物，其中αvβ6整联蛋白配体与能够抑制细支气管上皮细胞中靶基因表达的RNAi剂缀合。
29.将一种或多种被转运的分子递送至细胞的方法，所述方法包括向所述细胞施用权利要求1-12任一项的αvβ6整联蛋白配体或权利要求13-18任一项的结构。
30.将一种或多种被转运的分子体内递送至对象的细胞或组织的方法，所述方法包括向所述对象施用权利要求1-12任一项的αvβ6整联蛋白配体、权利要求13-18任一项的结构或权利要求19-22任一项的组合物。
31.权利要求29或30的方法，其中细胞选自I型和II型肺泡上皮细胞、杯状细胞、分泌性上皮细胞、纤毛上皮细胞、角膜和结膜上皮细胞、真皮上皮细胞、胆管上皮细胞、肠上皮细胞、导管上皮细胞、腺上皮细胞和上皮肿瘤(癌)。
32.权利要求29或30的方法，其中一种或多种被转运的分子包含基于寡核苷酸的化合物。
33.权利要求32的方法，其中基于寡核苷酸的化合物是RNAi剂。
34.体内抑制细胞中靶基因表达的方法，所述方法包括向对象施用有效量的组合物，所述组合物包括与权利要求1-12任一项的αvβ6整联蛋白配体缀合的基于寡核苷酸的化合物。
35.权利要求34的方法，其中细胞选自I型和II型肺泡上皮细胞、杯状细胞、分泌性上皮细胞、纤毛上皮细胞、角膜和结膜上皮细胞、真皮上皮细胞、胆管上皮细胞、肠上皮细胞、导管上皮细胞、腺上皮细胞和上皮肿瘤(癌)。
36.权利要求34或35的方法，其中基于寡核苷酸的化合物是RNAi剂。
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