KR20200024304A - 항인간 IgG4 모노클로날 항체, 및 그 항체를 이용한 인간 IgG4 측정 시약 - Google Patents
항인간 IgG4 모노클로날 항체, 및 그 항체를 이용한 인간 IgG4 측정 시약 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20200024304A KR20200024304A KR1020207003516A KR20207003516A KR20200024304A KR 20200024304 A KR20200024304 A KR 20200024304A KR 1020207003516 A KR1020207003516 A KR 1020207003516A KR 20207003516 A KR20207003516 A KR 20207003516A KR 20200024304 A KR20200024304 A KR 20200024304A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- ser
- val
- pro
- leu
- thr
- Prior art date
Links
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims abstract description 197
- 238000005259 measurement Methods 0.000 title claims description 27
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 119
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 52
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 47
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 47
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 47
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 44
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 41
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 21
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 17
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 13
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 208000004187 Immunoglobulin G4-Related Disease Diseases 0.000 claims description 11
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 10
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 10
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 9
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 6
- 208000021330 IgG4-related disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037142 IgG4-related systemic disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 63
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 55
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 32
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 30
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 26
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 22
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 22
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 22
- 230000008859 change Effects 0.000 description 21
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 20
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 20
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 19
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 16
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 16
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 15
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- HNDMFDBQXYZSRM-IHRRRGAJSA-N Ser-Val-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HNDMFDBQXYZSRM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 14
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 14
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 13
- OHLLDUNVMPPUMD-DCAQKATOSA-N Cys-Leu-Val Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OHLLDUNVMPPUMD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 13
- AAJHGGDRKHYSDH-GUBZILKMSA-N Glu-Pro-Gln Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O AAJHGGDRKHYSDH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 13
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 13
- DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 13
- BGTDGENDNWGMDQ-KJEVXHAQSA-N Val-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O BGTDGENDNWGMDQ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 13
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 13
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 13
- BVLIJXXSXBUGEC-SRVKXCTJSA-N Asn-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BVLIJXXSXBUGEC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 12
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 12
- WMKXFMUJRCEGRP-SRVKXCTJSA-N His-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N WMKXFMUJRCEGRP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 12
- VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 12
- UEJYSALTSUZXFV-SRVKXCTJSA-N Rigin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O UEJYSALTSUZXFV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 12
- SBJCTAZFSZXWSR-AVGNSLFASA-N Val-Met-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SBJCTAZFSZXWSR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 12
- KBQOUDLMWYWXNP-YDHLFZDLSA-N Asn-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N KBQOUDLMWYWXNP-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 11
- ALMBZBOCGSVSAI-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Asn Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N ALMBZBOCGSVSAI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 11
- PABFFPWEJMEVEC-JGVFFNPUSA-N Gly-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)CN)C(=O)O PABFFPWEJMEVEC-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 11
- WQDKIVRHTQYJSN-DCAQKATOSA-N Lys-Ser-Arg Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N WQDKIVRHTQYJSN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 11
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- KBUAPZAZPWNYSW-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KBUAPZAZPWNYSW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 11
- LAFLAXHTDVNVEL-WDCWCFNPSA-N Thr-Gln-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O LAFLAXHTDVNVEL-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 11
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 11
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 11
- KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 10
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 10
- KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 10
- MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 10
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 10
- ASJDFGOPDCVXTG-KATARQTJSA-N Thr-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ASJDFGOPDCVXTG-KATARQTJSA-N 0.000 description 10
- FYBFTPLPAXZBOY-KKHAAJSZSA-N Thr-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYBFTPLPAXZBOY-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 10
- YYLHVUCSTXXKBS-IHRRRGAJSA-N Tyr-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYLHVUCSTXXKBS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 10
- RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N Val-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 108010013768 glutamyl-aspartyl-proline Proteins 0.000 description 10
- 108010091078 rigin Proteins 0.000 description 10
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 9
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 9
- WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N Ala-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 9
- HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N Asn-Ser-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- YHOJJFFTSMWVGR-HJGDQZAQSA-N Glu-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YHOJJFFTSMWVGR-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 9
- FULZDMOZUZKGQU-ONGXEEELSA-N Gly-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)CN FULZDMOZUZKGQU-ONGXEEELSA-N 0.000 description 9
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 9
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 9
- YKIRNDPUWONXQN-GUBZILKMSA-N Lys-Asn-Gln Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N YKIRNDPUWONXQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 9
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 9
- RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N Lys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N 0.000 description 9
- QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N Phe-Pro-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 9
- FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 9
- YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N Pro-Val-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 9
- ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N Ser-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 9
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 9
- SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 9
- JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N Thr-Phe-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N)O JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N 0.000 description 9
- HGJRMXOWUWVUOA-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N HGJRMXOWUWVUOA-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 9
- DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N Val-Lys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 9
- SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 9
- VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N Val-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 9
- SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N Val-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 9
- JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N Val-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 9
- 108010050475 glycyl-leucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 9
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 9
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 9
- 108010024654 phenylalanyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 9
- TTYKEFZRLKQTHH-MELADBBJSA-N His-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O TTYKEFZRLKQTHH-MELADBBJSA-N 0.000 description 8
- XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 8
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 8
- QLFAPXUXEBAWEK-NHCYSSNCSA-N Lys-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QLFAPXUXEBAWEK-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 8
- HQVPQXMCQKXARZ-FXQIFTODSA-N Pro-Cys-Ser Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O HQVPQXMCQKXARZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 8
- UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N Ser-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 8
- VTHNLRXALGUDBS-BPUTZDHNSA-N Trp-Gln-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N VTHNLRXALGUDBS-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 8
- QFHRUCJIRVILCK-YJRXYDGGSA-N Tyr-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O QFHRUCJIRVILCK-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 8
- 108010052774 valyl-lysyl-glycyl-phenylalanyl-tyrosine Proteins 0.000 description 8
- ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N Arg-Val-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 7
- JZLFYAAGGYMRIK-BYULHYEWSA-N Asn-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O JZLFYAAGGYMRIK-BYULHYEWSA-N 0.000 description 7
- JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N Glu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 6
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 6
- SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N Gly-Val-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 6
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 6
- FWAHLGXNBLWIKB-NAKRPEOUSA-N Met-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCSC FWAHLGXNBLWIKB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 6
- SJRQWEDYTKYHHL-SLFFLAALSA-N Phe-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=CC=C3)N)C(=O)O SJRQWEDYTKYHHL-SLFFLAALSA-N 0.000 description 6
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 6
- MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N Ser-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N 0.000 description 6
- XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N Ser-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CO XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- QJKPECIAWNNKIT-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O QJKPECIAWNNKIT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 6
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 6
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 description 6
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 6
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 6
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- ZJBUILVYSXQNSW-YTWAJWBKSA-N Arg-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O ZJBUILVYSXQNSW-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 5
- ZUVMUOOHJYNJPP-XIRDDKMYSA-N Arg-Trp-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZUVMUOOHJYNJPP-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 5
- SRUUBQBAVNQZGJ-LAEOZQHASA-N Asn-Gln-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N SRUUBQBAVNQZGJ-LAEOZQHASA-N 0.000 description 5
- HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N Asn-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 5
- SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- SWJYSDXMTPMBHO-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SWJYSDXMTPMBHO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DHNWZLGBTPUTQQ-QEJZJMRPSA-N Gln-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N DHNWZLGBTPUTQQ-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 5
- AQPZYBSRDRZBAG-AVGNSLFASA-N Gln-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N AQPZYBSRDRZBAG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 5
- CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N Glu-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 5
- RFDHKPSHTXZKLL-IHRRRGAJSA-N Glu-Gln-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N RFDHKPSHTXZKLL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- QNJNPKSWAHPYGI-JYJNAYRXSA-N Glu-Phe-Leu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QNJNPKSWAHPYGI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 5
- WGYHAAXZWPEBDQ-IFFSRLJSSA-N Glu-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WGYHAAXZWPEBDQ-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 5
- GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N Gly-Lys-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N 0.000 description 5
- OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 5
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 5
- DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N Ile-Glu-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 5
- UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N Leu-Phe-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 5
- JDMKQHSHKJHAHR-UHFFFAOYSA-N Phe-Phe-Leu-Tyr Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 JDMKQHSHKJHAHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UAYHMOIGIQZLFR-NHCYSSNCSA-N Pro-Gln-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UAYHMOIGIQZLFR-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 5
- VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N Pro-Glu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 5
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 5
- XGFGVFMXDXALEV-XIRDDKMYSA-N Trp-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N XGFGVFMXDXALEV-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 5
- QYSBJAUCUKHSLU-JYJNAYRXSA-N Tyr-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QYSBJAUCUKHSLU-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 5
- OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N Val-His-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 5
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 5
- LLJLBRRXKZTTRD-GUBZILKMSA-N Val-Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N LLJLBRRXKZTTRD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 5
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 5
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 5
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 5
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 5
- OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N Ala-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N Asp-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- ALTQTAKGRFLRLR-GUBZILKMSA-N Cys-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N ALTQTAKGRFLRLR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- CGVWDTRDPLOMHZ-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CGVWDTRDPLOMHZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- FITIQFSXXBKFFM-NRPADANISA-N Gln-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FITIQFSXXBKFFM-NRPADANISA-N 0.000 description 4
- MKWSZEHGHSLNPF-NAKRPEOUSA-N Ile-Ala-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N MKWSZEHGHSLNPF-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 4
- VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N Leu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N Leu-Val-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N Lys-Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N 0.000 description 4
- GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- JOXIIFVCSATTDH-IHPCNDPISA-N Phe-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)N JOXIIFVCSATTDH-IHPCNDPISA-N 0.000 description 4
- ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N Phe-Pro-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Cys Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- ULWBBFKQBDNGOY-RWMBFGLXSA-N Pro-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O ULWBBFKQBDNGOY-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 4
- FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- QPFJSHSJFIYDJZ-GHCJXIJMSA-N Ser-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO QPFJSHSJFIYDJZ-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 4
- RCOUFINCYASMDN-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RCOUFINCYASMDN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N Thr-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 4
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- UDCHKDYNMRJYMI-QEJZJMRPSA-N Trp-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UDCHKDYNMRJYMI-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 4
- SSSDKJMQMZTMJP-BVSLBCMMSA-N Trp-Tyr-Val Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CC=C(O)C=C1 SSSDKJMQMZTMJP-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 4
- GZUIDWDVMWZSMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 GZUIDWDVMWZSMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 4
- QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N Val-Asp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 4
- BMGOFDMKDVVGJG-NHCYSSNCSA-N Val-Asp-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BMGOFDMKDVVGJG-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 4
- XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- HJSLDXZAZGFPDK-ULQDDVLXSA-N Val-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](C(C)C)N HJSLDXZAZGFPDK-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N Val-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- BZDGLJPROOOUOZ-XGEHTFHBSA-N Val-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O BZDGLJPROOOUOZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 4
- ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N Val-Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 4
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N Asn-Gly-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- QNNBHTFDFFFHGC-KKUMJFAQSA-N Asn-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O QNNBHTFDFFFHGC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 3
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 3
- NDNZRWUDUMTITL-FXQIFTODSA-N Cys-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NDNZRWUDUMTITL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- ZEEPYMXTJWIMSN-GUBZILKMSA-N Gln-Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZEEPYMXTJWIMSN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- HMIXCETWRYDVMO-GUBZILKMSA-N Gln-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HMIXCETWRYDVMO-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N Glu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 3
- BPCLDCNZBUYGOD-BPUTZDHNSA-N Glu-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 BPCLDCNZBUYGOD-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 3
- BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gln-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 3
- UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N Gly-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N 0.000 description 3
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- CQMFNTVQVLQRLT-JHEQGTHGSA-N Gly-Thr-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O CQMFNTVQVLQRLT-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 3
- MAABHGXCIBEYQR-XVYDVKMFSA-N His-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N MAABHGXCIBEYQR-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 3
- HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N His-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N 0.000 description 3
- CSTDQOOBZBAJKE-BWAGICSOSA-N His-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O CSTDQOOBZBAJKE-BWAGICSOSA-N 0.000 description 3
- JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N Ile-Ser-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 3
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KAFOIVJDVSZUMD-DCAQKATOSA-N Leu-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O KAFOIVJDVSZUMD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Gln Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BKTXKJMNTSMJDQ-AVGNSLFASA-N Leu-His-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N BKTXKJMNTSMJDQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 3
- UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- LUTDBHBIHHREDC-IHRRRGAJSA-N Lys-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O LUTDBHBIHHREDC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- RKIIYGUHIQJCBW-SRVKXCTJSA-N Met-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RKIIYGUHIQJCBW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- IHRFZLQEQVHXFA-RHYQMDGZSA-N Met-Thr-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IHRFZLQEQVHXFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 3
- ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N Pro-Val-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N Ser-Asn-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N Ser-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- RRVFEDGUXSYWOW-BZSNNMDCSA-N Ser-Phe-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O RRVFEDGUXSYWOW-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 3
- BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N Thr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N 0.000 description 3
- DQDXHYIEITXNJY-BPUTZDHNSA-N Trp-Gln-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N DQDXHYIEITXNJY-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 3
- RWOKVQUCENPXGE-IHRRRGAJSA-N Tyr-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RWOKVQUCENPXGE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- SQUMHUZLJDUROQ-YDHLFZDLSA-N Tyr-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SQUMHUZLJDUROQ-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 3
- UEHRGZCNLSWGHK-DLOVCJGASA-N Val-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UEHRGZCNLSWGHK-DLOVCJGASA-N 0.000 description 3
- KISFXYYRKKNLOP-IHRRRGAJSA-N Val-Phe-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N KISFXYYRKKNLOP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N Val-Ser-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 3
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 3
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 3
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 3
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- IESDGNYHXIOKRW-YXMSTPNBSA-N (2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-YXMSTPNBSA-N 0.000 description 2
- DPNZTBKGAUAZQU-DLOVCJGASA-N Ala-Leu-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N DPNZTBKGAUAZQU-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N Ala-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)NCC(O)=O SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N Ala-Pro-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N Arg-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Lys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N Asn-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- WQLJRNRLHWJIRW-KKUMJFAQSA-N Asn-His-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O WQLJRNRLHWJIRW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- SUIJFTJDTJKSRK-IHRRRGAJSA-N Asn-Pro-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SUIJFTJDTJKSRK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- MJIJBEYEHBKTIM-BYULHYEWSA-N Asn-Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MJIJBEYEHBKTIM-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- SVABRQFIHCSNCI-FOHZUACHSA-N Asp-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SVABRQFIHCSNCI-FOHZUACHSA-N 0.000 description 2
- WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- CUQDCPXNZPDYFQ-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CUQDCPXNZPDYFQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- 206010069002 Autoimmune pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 2
- ZXCAQANTQWBICD-DCAQKATOSA-N Cys-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CS)N ZXCAQANTQWBICD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- KSMSFCBQBQPFAD-GUBZILKMSA-N Cys-Pro-Pro Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 KSMSFCBQBQPFAD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- CRRFJBGUGNNOCS-PEFMBERDSA-N Gln-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CRRFJBGUGNNOCS-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- SNLOOPZHAQDMJG-CIUDSAMLSA-N Gln-Glu-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SNLOOPZHAQDMJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- XKBASPWPBXNVLQ-WDSKDSINSA-N Gln-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XKBASPWPBXNVLQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- XZLLTYBONVKGLO-SDDRHHMPSA-N Gln-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O XZLLTYBONVKGLO-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N Glu-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- HNVFSTLPVJWIDV-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Gln Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HNVFSTLPVJWIDV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- UHVIQGKBMXEVGN-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O UHVIQGKBMXEVGN-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N Glu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- GJBUAAAIZSRCDC-GVXVVHGQSA-N Glu-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GJBUAAAIZSRCDC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- MFNUFCFRAZPJFW-JYJNAYRXSA-N Glu-Lys-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFNUFCFRAZPJFW-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- GRIRDMVMJJDZKV-RCOVLWMOSA-N Gly-Asn-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GRIRDMVMJJDZKV-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- KOYUSMBPJOVSOO-XEGUGMAKSA-N Gly-Tyr-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KOYUSMBPJOVSOO-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 2
- FYVHHKMHFPMBBG-GUBZILKMSA-N His-Gln-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N FYVHHKMHFPMBBG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KUEVMUXNILMJTK-JYJNAYRXSA-N Leu-Gln-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KUEVMUXNILMJTK-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N Leu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- DIBZLYZXTSVGLN-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DIBZLYZXTSVGLN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- DLCAXBGXGOVUCD-PPCPHDFISA-N Lys-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O DLCAXBGXGOVUCD-PPCPHDFISA-N 0.000 description 2
- SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- UROWNMBTQGGTHB-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UROWNMBTQGGTHB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WRXOPYNEKGZWAZ-FXQIFTODSA-N Met-Ser-Cys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O WRXOPYNEKGZWAZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- NOFBJKKOPKJDCO-KKXDTOCCSA-N Phe-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O NOFBJKKOPKJDCO-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 2
- CDNPIRSCAFMMBE-SRVKXCTJSA-N Phe-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CDNPIRSCAFMMBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N Phe-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N Pro-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- MHHQQZIFLWFZGR-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MHHQQZIFLWFZGR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- QHSSUIHLAIWXEE-IHRRRGAJSA-N Pro-Tyr-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QHSSUIHLAIWXEE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N Ser-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- ULVMNZOKDBHKKI-ACZMJKKPSA-N Ser-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ULVMNZOKDBHKKI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 2
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N Ser-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 2
- DYEGLQRVMBWQLD-IXOXFDKPSA-N Ser-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O DYEGLQRVMBWQLD-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N Ser-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- JLNMFGCJODTXDH-WEDXCCLWSA-N Thr-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O JLNMFGCJODTXDH-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N Thr-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 2
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- NXRGXTBPMOGFID-CFMVVWHZSA-N Tyr-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NXRGXTBPMOGFID-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 2
- SINRIKQYQJRGDQ-MEYUZBJRSA-N Tyr-Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 SINRIKQYQJRGDQ-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 2
- MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- RIVVDNTUSRVTQT-IRIUXVKKSA-N Tyr-Thr-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O RIVVDNTUSRVTQT-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 2
- RYHUIHUOYRNNIE-NRPADANISA-N Val-Ser-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N RYHUIHUOYRNNIE-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N Val-Tyr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010079413 glycyl-prolyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 2
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 description 1
- COEXAQSTZUWMRI-STQMWFEESA-N (2s)-1-[2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 COEXAQSTZUWMRI-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- DIBLBAURNYJYBF-XLXZRNDBSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]hexanoyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 DIBLBAURNYJYBF-XLXZRNDBSA-N 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrahydroxy-6-[3,4,5-trihydroxy-6-[[3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxyhexanal Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)C(N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TTXMOJWKNRJWQJ-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N TTXMOJWKNRJWQJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N Ala-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N Ala-Leu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SYIFFFHSXBNPMC-UWJYBYFXSA-N Ala-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N SYIFFFHSXBNPMC-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N Ala-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C)N IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- GCTANJIJJROSLH-GVARAGBVSA-N Ala-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C)N GCTANJIJJROSLH-GVARAGBVSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YWENWUYXQUWRHQ-LPEHRKFASA-N Arg-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O YWENWUYXQUWRHQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- GIMTZGADWZTZGV-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N GIMTZGADWZTZGV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PRLPSDIHSRITSF-UNQGMJICSA-N Arg-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PRLPSDIHSRITSF-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- MFFOYNGMOYFPBD-DCAQKATOSA-N Asn-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MFFOYNGMOYFPBD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N Asn-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MYTHOBCLNIOFBL-SRVKXCTJSA-N Asn-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MYTHOBCLNIOFBL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N Asn-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- PUUPMDXIHCOPJU-HJGDQZAQSA-N Asn-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O PUUPMDXIHCOPJU-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N Asn-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- JPPLRQVZMZFOSX-UWJYBYFXSA-N Asn-Tyr-Ala Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JPPLRQVZMZFOSX-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- YFSLJHLQOALGSY-ZPFDUUQYSA-N Asp-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YFSLJHLQOALGSY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- AHWRSSLYSGLBGD-CIUDSAMLSA-N Asp-Pro-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AHWRSSLYSGLBGD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N Asp-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- PDIYGFYAMZZFCW-JIOCBJNQSA-N Asp-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O PDIYGFYAMZZFCW-JIOCBJNQSA-N 0.000 description 1
- RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N Asp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- 229920001342 Bakelite® Polymers 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- PJWWRFATQTVXHA-UHFFFAOYSA-N Cyclohexylaminopropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCNC1CCCCC1 PJWWRFATQTVXHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YMBAVNPKBWHDAW-CIUDSAMLSA-N Cys-Asp-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N YMBAVNPKBWHDAW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ASHTVGGFIMESRD-LKXGYXEUSA-N Cys-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O ASHTVGGFIMESRD-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZOKPRHVIFAUJPV-GUBZILKMSA-N Cys-Pro-Arg Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O ZOKPRHVIFAUJPV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MBRWOKXNHTUJMB-CIUDSAMLSA-N Cys-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MBRWOKXNHTUJMB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VIOQRFNAZDMVLO-NRPADANISA-N Cys-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIOQRFNAZDMVLO-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- NVEASDQHBRZPSU-BQBZGAKWSA-N Gln-Gln-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O NVEASDQHBRZPSU-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- KCJJFESQRXGTGC-BQBZGAKWSA-N Gln-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KCJJFESQRXGTGC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XSBGUANSZDGULP-IUCAKERBSA-N Gln-Gly-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O XSBGUANSZDGULP-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- XUMFMAVDHQDATI-DCAQKATOSA-N Gln-Pro-Arg Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O XUMFMAVDHQDATI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WTJIWXMJESRHMM-XDTLVQLUSA-N Gln-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WTJIWXMJESRHMM-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- WPJDPEOQUIXXOY-AVGNSLFASA-N Gln-Tyr-Asn Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O WPJDPEOQUIXXOY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OACQOWPRWGNKTP-AVGNSLFASA-N Gln-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OACQOWPRWGNKTP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- GLWXKFRTOHKGIT-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GLWXKFRTOHKGIT-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- GZWOBWMOMPFPCD-CIUDSAMLSA-N Glu-Asp-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N GZWOBWMOMPFPCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- HUFCEIHAFNVSNR-IHRRRGAJSA-N Glu-Gln-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUFCEIHAFNVSNR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N Glu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N Glu-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N Glu-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JMQFHZWESBGPFC-WDSKDSINSA-N Gly-Gln-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O JMQFHZWESBGPFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N Gly-Ile-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N Gly-Thr-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N Gly-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N Gly-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)CN)O GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- VLPMGIJPAWENQB-SRVKXCTJSA-N His-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VLPMGIJPAWENQB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HZWWOGWOBQBETJ-CUJWVEQBSA-N His-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O HZWWOGWOBQBETJ-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N His-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 208000015617 IgG4-related dacryoadenitis and sialadenitis Diseases 0.000 description 1
- 208000012439 IgG4-related kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024934 IgG4-related mediastinitis Diseases 0.000 description 1
- 208000014919 IgG4-related retroperitoneal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000012440 IgG4-related submandibular gland disease Diseases 0.000 description 1
- HDODQNPMSHDXJT-GHCJXIJMSA-N Ile-Asn-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HDODQNPMSHDXJT-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- LBRCLQMZAHRTLV-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gly-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LBRCLQMZAHRTLV-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- DBXXASNNDTXOLU-MXAVVETBSA-N Ile-Leu-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N DBXXASNNDTXOLU-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N Leu-Asn-Trp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- OVZLLFONXILPDZ-VOAKCMCISA-N Leu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OVZLLFONXILPDZ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- AUNMOHYWTAPQLA-XUXIUFHCSA-N Leu-Met-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O AUNMOHYWTAPQLA-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N Leu-Phe-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- HWMQRQIFVGEAPH-XIRDDKMYSA-N Leu-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 HWMQRQIFVGEAPH-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YNNPKXBBRZVIRX-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YNNPKXBBRZVIRX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- XNKDCYABMBBEKN-IUCAKERBSA-N Lys-Gly-Gln Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XNKDCYABMBBEKN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- PBLLTSKBTAHDNA-KBPBESRZSA-N Lys-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PBLLTSKBTAHDNA-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CTJUSALVKAWFFU-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CTJUSALVKAWFFU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WZVSHTFTCYOFPL-GARJFASQSA-N Lys-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O WZVSHTFTCYOFPL-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N Lys-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- 208000002805 Mediastinal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000019611 Mikulicz disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002462 Mikulicz' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100068676 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) gln-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- IILUKIJNFMUBNF-IHRRRGAJSA-N Phe-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O IILUKIJNFMUBNF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- WZEWCHQHNCMBEN-PMVMPFDFSA-N Phe-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)N WZEWCHQHNCMBEN-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- AXIOGMQCDYVTNY-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AXIOGMQCDYVTNY-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- OLHDPZMYUSBGDE-GUBZILKMSA-N Pro-Arg-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O OLHDPZMYUSBGDE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N Pro-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N Pro-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- PCWLNNZTBJTZRN-AVGNSLFASA-N Pro-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 PCWLNNZTBJTZRN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2NCCC2)CCC1 SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N Pro-Pro-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- CZCCVJUUWBMISW-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O CZCCVJUUWBMISW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SEZGGSHLMROBFX-CIUDSAMLSA-N Pro-Ser-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O SEZGGSHLMROBFX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QKWYXRPICJEQAJ-KJEVXHAQSA-N Pro-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O QKWYXRPICJEQAJ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010038979 Retroperitoneal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N Ser-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N Ser-Asn-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KNCJWSPMTFFJII-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KNCJWSPMTFFJII-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- RFBKULCUBJAQFT-BIIVOSGPSA-N Ser-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O RFBKULCUBJAQFT-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- SNVIOQXAHVORQM-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O SNVIOQXAHVORQM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ZUDXUJSYCCNZQJ-DCAQKATOSA-N Ser-His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CO)N ZUDXUJSYCCNZQJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N Ser-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N Ser-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- NLOAIFSWUUFQFR-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NLOAIFSWUUFQFR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZKBKUWQVDWWSRI-BZSNNMDCSA-N Ser-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKBKUWQVDWWSRI-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N Ser-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- UBTNVMGPMYDYIU-HJPIBITLSA-N Ser-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O UBTNVMGPMYDYIU-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- KIEIJCFVGZCUAS-MELADBBJSA-N Ser-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KIEIJCFVGZCUAS-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N Ser-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- YEDSOSIKVUMIJE-DCAQKATOSA-N Ser-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YEDSOSIKVUMIJE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- UNURFMVMXLENAZ-KJEVXHAQSA-N Thr-Arg-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O UNURFMVMXLENAZ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- DSLHSTIUAPKERR-XGEHTFHBSA-N Thr-Cys-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DSLHSTIUAPKERR-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- SXAGUVRFGJSFKC-ZEILLAHLSA-N Thr-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SXAGUVRFGJSFKC-ZEILLAHLSA-N 0.000 description 1
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N Thr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- NCXVJIQMWSGRHY-KXNHARMFSA-N Thr-Leu-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O NCXVJIQMWSGRHY-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N Thr-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- KKPOGALELPLJTL-MEYUZBJRSA-N Thr-Lys-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KKPOGALELPLJTL-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N Thr-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- BKVICMPZWRNWOC-RHYQMDGZSA-N Thr-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O BKVICMPZWRNWOC-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- FBGDDUKYOBNZJL-WDSOQIARSA-N Trp-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N FBGDDUKYOBNZJL-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- BGWSLEYVITZIQP-DCPHZVHLSA-N Trp-Phe-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O BGWSLEYVITZIQP-DCPHZVHLSA-N 0.000 description 1
- UOXPLPBMEPLZBW-WDSOQIARSA-N Trp-Val-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 UOXPLPBMEPLZBW-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- NOXKHHXSHQFSGJ-FQPOAREZSA-N Tyr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NOXKHHXSHQFSGJ-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- FBVGQXJIXFZKSQ-GMVOTWDCSA-N Tyr-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N FBVGQXJIXFZKSQ-GMVOTWDCSA-N 0.000 description 1
- HSVPZJLMPLMPOX-BPNCWPANSA-N Tyr-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HSVPZJLMPLMPOX-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- ZNFPUOSTMUMUDR-JRQIVUDYSA-N Tyr-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZNFPUOSTMUMUDR-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- YLRLHDFMMWDYTK-KKUMJFAQSA-N Tyr-Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 YLRLHDFMMWDYTK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N Tyr-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- COSLEEOIYRPTHD-YDHLFZDLSA-N Val-Asp-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 COSLEEOIYRPTHD-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- SCBITHMBEJNRHC-LSJOCFKGSA-N Val-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N SCBITHMBEJNRHC-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- JXGWQYWDUOWQHA-DZKIICNBSA-N Val-Gln-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N JXGWQYWDUOWQHA-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- BGXVHVMJZCSOCA-AVGNSLFASA-N Val-Pro-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BGXVHVMJZCSOCA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N Val-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 239000004637 bakelite Substances 0.000 description 1
- LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N bakuchiol Chemical compound CC(C)=CCC[C@@](C)(C=C)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 208000003167 cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940119743 dextran 70 Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 210000004561 lacrimal apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 108010057952 lysyl-phenylalanyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 210000000277 pancreatic duct Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000000574 retroperitoneal space Anatomy 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000002784 sclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/545—Synthetic resin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
에피토프가, 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 CH3 에 존재하는, 인간 IgG4 에 대한 모노클로날 항체, 그것을 산생하는 하이브리도마, 그 모노클로날 항체를 사용한 IgG4 의 검출 방법 및 그것에 사용하는 키트를 제공한다.
Description
본 발명은, 항인간 IgG4 모노클로날 항체, 및 그 항체를 이용한 인간 IgG4 측정 시약에 관한 것이다.
본 발명의 항인간 IgG4 항체를 사용하면, 시료 중의 인간 IgG4 를 특이적으로 검출 측정하는 것이 가능하고, IgG4 관련 질환 등의 진단이나 임상 검사의 분야에 있어서 매우 유효하다.
최근 IgG4 관련 질환이라는 새로운 질환 개념이 제창되어, 전신의 제장기 (諸臟器) 에 발생할 가능성이 있는 질환인 점에서, 이미 알려진 제장기 질환과 그것의 감별을 실시할 수 있는 것이 필요하게 된다 (비특허문헌 1). IgG4 관련 질환 포괄 진단 기준 2011 이 제창되어, 혈액 중의 IgG4 값이 135 ㎎/㎗ 이상인 것을 고 IgG4 혈증으로 한 진단 기준이 책정되었다. 피검 환자 중에는 5000 ㎎/㎗ 를 초과하는 예도 보고되어 있고, 임상 검사의 현장에서는 의사적으로 낮은 값을 나타내는 검사 결과가 문제시되고 있다 (비특허문헌 2). 또, 혈중 IgG4 측정 시약은, 병원 및 검사 센터 등에서 널리 도입되고 있는 범용형의 일반 생화학 자동 분석 장치에 대한 적용이 요구된다.
혈중 IgG4 측정 시약의 범용 자동 분석 장치에 대한 적용시에는, 이하의 2 개의 과제를 들 수 있다.
IgG4 는 약 146000 의 분자량을 갖는 헤테로테트라머 분자이고, 이러한 분자를 검출하는 데에는 항체를 사용하는 것이 적합하다.
따라서 제 1 과제로서, 측정 시약의 중요한 구성 요소가 되는 항체의 특이성을 들 수 있다. IgG4 는 IgG 서브클래스의 하나이고, 그 밖의 서브클래스인 IgG1, IgG2 또는 IgG3 과의 상동성이 매우 높은 것이 알려져 있다 (비특허문헌 3, 비특허문헌 4). 통상 정상인 혈청에 있어서 대략 IgG1 : 65 %, IgG2 : 23 %, IgG3 : 8 %, IgG4 : 4 % 의 비율로 존재하고 있고, 정상인에 있어서의 기준값은 IgG1 : 351 ∼ 962 ; IgG2 : 239 ∼ 838 ; IgG3 : 8.5 ∼ 140 ; IgG4 : 4.5 ∼ 117 (㎎/㎗) 이며, IgG4 의 양비가 적은 면에서 IgG4 에만 반응할 수 있는 우수한 특이성을 갖는 항체의 제조가 필수가 된다.
항체를 사용한 측정 방법으로서, 간접 효소 항체법 (ELISA 법), 간접 형광 항체법, CLEIA 법 (화학 발광 효소 면역 측정법) 등의 간접 항체법 ; 일원 방사상 면역 확산법 (single radial immunodiffusion method : SRID) 이나 이중 면역 확산법 (double immunodiffusion method : DID) 등의 면역 확산법, 면역 비탁법 (immunoturbidimetry : TIA) 이나 면역 비롱법 (immunonephelometry : NIA) 으로 분류되는 라텍스 (입자) 응집법 등이 사용되고 있지만, 현재 임상 검사의 현장에 있어서 많이 사용되고 있는 것은, 저농도의 표적 분자에서도 검출할 수 있는, 항원과 항체의 결합에 기초하는 응집체를 검출하는 것에 기초한, 라텍스 (입자) 응집법 등의 면역 비탁법 (immunoturbidimetry : TIA) 이나 면역 비롱법 (immunonephelometry : NIA) 이다.
그러나 혈액이나 뇨 등의 시료 중의 항원 농도가 측정 범위를 크게 웃돌고 있는 경우, 항원 과잉에 의한 응집 억제가 유도될 가능성이 있다 (지대 현상 또는 프로 존 현상으로 불린다). 그 결과, 측정값이 의사적으로 낮은 값이 되고, 잘못된 진단으로 이어질 우려가 있다. IgG4 의 경우, 상기와 같이 정상인과 고 IgG4 혈증 환자 사이에서 1000 배 가까운 농도차가 있고, 실제로 IgG4 측정 시약에 있어서 프로 존 현상이 발생한 사례가 보고되어 있다 (비특허문헌 2).
따라서 제 2 과제로서, 혈중 IgG4 측정 시약으로 하고 고농도의 IgG4 도 측정하는 것이 요구되고 있다.
상기 제 1 과제에 대해, 인간 IgG4 에 대한 모노클로날 항체가 알려져 있다 (특허문헌 1). 그러나, IgG 서브클래스 중 IgG4 에 대한 특이성이 높지만, 일반적으로 모노클로날 항체의 인식 부위 (에피토프) 는 1 개이므로, 항체 : 항원의 응집체 형성에는 부적합한 경우가 있다. 면역 비탁법을 사용한 IgG4 의 측정에 적용 가능한 IgG4 특이적 모노클로날 항체는 알려져 있지 않고, 또 모노클로날 항체를 사용한 범용 자동 분석 장치에 적응 가능한 IgG4 측정 시약도 알려져 있지 않다.
이 문제를 해결하는 방법으로는, 모노클로날 항체를 의사적으로 다가 (多價) 로 함으로써, 상기 과제 2 도 해결되는 방법을 들 수 있다. 예를 들어, 특허문헌 2 에는 모노클로날 항체를 비오틴화하고 스트렙토아비딘으로 다량체를 형성하는 방법이, 특허문헌 3 에는 프로테인 A 나 항이뮤노글로불린 항체 등을 사용하여 다량체를 형성하는 방법이, 또한 특허문헌 4 에는 불용성 담체에 모노클로날 항체를 고정화하는 방법이 기재되어 있다. 그러나, 어느 방법도 모노클로날 항체의 다가 형성하기 위한 공정이 번잡하고, 특히 항체의 가수를 항상 일정하게 제어하는 것이 어렵고, 면역 비탁법을 측정 원리로 한 범용 자동 분석 장치 대응의 시약으로서의 성능을 유지하는 데에 비용과 시간을 필요로 한다는 결점이 있다.
폴리클로날 항체를 얻기 위한 방법인, 일반적인 동물 실험적 수법에 기초한 염소, 양, 또는 토끼 등에 대한 인간 IgG4 의 면역에 의한 그 항혈청의 취득은, 산생되는 항체의 그 대부분이 각 IgG 서브클래스에 공통된 부분에 대한 것이 되고, IgG4 이외의 다른 서브클래스에도 반응할 수 있는 항체의 흡수 공정이 필요하게 되고, IgG4 에 대한 특이적인 항체를 입수하기까지, 매우 번잡한 정제 공정을 필요로 한다. 그 항혈청에 포함되는 IgG4 에 대한 특이적인 항체의 상대적 또는 절대적인 존재량과, 상기 정제 공정에 의해, 원하는 IgG4 에 대한 특이적인 항체의 수량은 매우 적어진다는 문제가 우려된다.
또 IgG 서브클래스의 어느 것에 특이성이 높은 폴리클로날 항체를 취득하는 방법이 알려져 있다 (특허문헌 5). 이 방법에 의하면, 상기와 같은 정제 공정을 필요로 하지 않고, 면역 관용에 의해 항원 특이적인 폴리클로날 항체의 취득이 가능하지만, 면역 관용의 야기의 정도에는 면역되는 동물 개체차가 존재하고, 또 면역 관용을 일으키기까지 시간을 필요로 하므로, 정상적으로 원하는 IgG4 에 대한 특이적인 항체를 취득하려면 다수의 피면역 동물을 필요로 하고, 비용 그리고 동물 애호의 관점에서 적당한 방법이라고는 말하기 어렵다.
N Engl J Med 2012 ; 366 : 539-551
Arthritis Rheumatol. 2014 Jan ; 66(1) : 213-7
J Mol Biol. 2014 Feb 6 ; 426(3) : 630-44
Front Immunol. 2014 ; 5 : 520
Consensus statement on the pathology of IgG4-related disease (Modern Pathology 2012 25, 1181-1192)
Epitope mapping of human immunoglobulin specific murine monoclonal antibodies with domain switched deleted and point mutated chimeric antibodies (Journal of Immunological Methods 158 1993 107-122)
이러한 문제를 감안하여, 본 발명은, IgG4 에 대해, 더욱 특이성과 친화성이 높은 모노클로날 항체, 그것을 산생하는 하이브리도마, 그 모노클로날 항체를 사용한 IgG4 의 검출 방법 및 그것에 사용하는 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
면역학적 입자 응집법 (라텍스 (입자) 응집법) 은, 불용성 담체에 항체를 고정화하고, 이것에 측정 대상인 항원을 포함하는 시료를 혼합하고, 항원-항체 반응에 기초하는 면역 응집 반응을 발생시킴으로써, 측정 대상이 되는 항원을 측정하는 방법이다. 이러한 방법은, 검출 감도를 높이기 위해, 사용하는 항체도 폴리클로날 항체 등의 많이 사용하는 에피토프를 인식하는 복수 종의 항체를 사용하는 것이 바람직하다. 1 개의 항원 분자에 대해, 복수의 항체 (불용성 담체) 가 결합함으로써 응집이 일어나기 때문이다. 그 대신에 각각의 항체 분자 중에 친화성이 낮은 것이 있어도 상관없다.
한편, 면역학적 입자 응집 저지법 (라텍스 (입자) 응집 저지법) 은 항원을 고정화한 불용성 담체, 항원에 대한 유리 항체, 항원을 포함하는 시료를 혼합함으로써, 불용성 담체에 고정화된 항원과 시료에 포함되는 항원이 경합하고, 결과적으로 응집 형성이 억제됨으로써, 측정 대상인 항원량을 측정하는 방법이다. 면역학적 입자 응집 저지법에 있어서는 측정 범위를 크게 웃도는 항원 농도가 존재하는 경우에도 프로 존 현상이 보이지 않으므로, 측정 원리로는, 범용 자동 분석 장치에 적용시키는 데에 있어서, 프로 존 현상의 리스크를 회피하는 이상적인 방법이라고 할 수 있다. 그러나, 이러한 방법에는 폴리클로날 항체를 사용하는 것은 적합하지 않다. 에피토프가 복수 존재하므로, 시료 내 항원과 담체에 담지한 항원을 개재한 응집이 일어나기 쉽기 때문에, 모노클로날 항체 (단일 에피토프를 인식) 와 비교하여, 측정계의 감도가 낮아지고, 감쇠 곡선을 그리기 어려워질 가능성이 있기 때문이다.
이상에 의해, 본원 발명자들은, 예의 연구한 결과, 인간 IgG4 검출을 위한 면역학적 입자 응집 저지법 (라텍스 (입자) 응집 저지법) 에 적합한 모노클로날 항체를 제조하는 것에 성공하여, 본원 발명을 완성시키기에 이르렀다.
즉, 본 발명의 구성은 이하의 [1] 내지 [24] 와 같다.
[1] 인간 IgG4 에 대해 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로서, 상기 항체의 에피토프가, 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열에 존재하고, 299 번째의 글루타민산을 포함하는, 모노클로날 항체 ;
[2] 상기 인간 IgG4 에, 해리 정수 5.0 × 10-10 이하에서 결합하는 [1] 에 기재된 모노클로날 항체 ;
[3] 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 인간 IgG4 에 대한 항체로서, 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 (Complementarity Determining Region ; 이하, CDR 이라고 기재한다) 1, 2 및 3 이 각각 서열 번호 9, 10 및 11 로 나타나는 아미노산 서열이고, 경쇄 가변 영역의 CDR1, 2 및 3 이, 각각 서열 번호 12, 13 및 14 로 나타나는 아미노산 서열인, 모노클로날 항체, 바람직하게는 [1] 또는 [2] 에 기재된 모노클로날 항체 ;
[4] 중쇄 가변 영역이 서열 번호 5 의 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역이 서열 번호 6 의 아미노산 서열을 갖는 [3] 에 기재된 모노클로날 항체 ;
[5] 하이브리도마 MaI4-08 이 산생하는 [4] 에 기재된 모노클로날 항체.
[6] 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 인간 IgG4 에 대한 항체로서, 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 CDR1, 2 및 3 이 각각 서열 번호 15, 16 및 17 로 나타나는 아미노산 서열이고, 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR1, 2 및 3 이, 각각 서열 번호 18, 19 및 20 으로 나타나는 아미노산 서열인, 모노클로날 항체, 바람직하게는 [1] 또는 [2] 에 기재된 모노클로날 항체 ;
[7] 중쇄 가변 영역이 서열 번호 7 의 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역이 서열 번호 8 의 아미노산 서열을 갖는 [6] 에 기재된 모노클로날 항체 ;
[8] 하이브리도마 MaI4-09 가 산생하는 [7] 에 기재된 모노클로날 항체.
[9] [1] ∼ [8] 중 어느 하나에 기재된 모노클로날 항체의 항원 (인식) 결합 부위를 1 분자당 2 개 이상 갖는, 다가 항체 또는 다가 항체 단편, 보다 바람직하게는 1 분자당 2 개 갖는 2 가 항체 또는 2 가 항체 단편 ;
[10] F(ab')2 인, [9] 에 기재된 항체 단편.
[11] [1] ∼ [8] 중 어느 하나에 기재된 모노클로날 항체 혹은 [9] 또는 [10] 에 기재된 항체 단편을 사용하여, 시료 중의 인간 IgG4 를 측정 검출하는 방법 ;
[12] 면역 비탁법 또는 면역 비롱법인 [11] 에 기재된 방법 ;
[13] 면역학적 입자 응집법인 [12] 에 기재된 방법 ;
[14] 면역학적 입자 응집 저지법인 [12] 에 기재된 방법 ;
[15] 면역 조직 화학 (IHC) 염색인 [11] 에 기재된 방법 ;
[16] 플로사이트메트리에 의한 [11] 에 기재된 방법.
[17] [14] 에 기재된 방법으로서 ;
[18] [1] ∼ [8] 중 어느 하나에 기재된 모노클로날 항체 혹은 [9] 또는 [10] 에 기재된 항체 단편을 포함하는, 인간 IgG4 의 측정 키트.
[19] [14] 또는 [17] 에 기재된 방법을 위한 키트로서 ;
(1) [1] ∼ [8] 중 어느 하나에 기재된 모노클로날 항체 혹은 [9] 또는 [10] 에 기재된 항체 단편 ;
(2) 단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편 ; 및
(3) 불용성 담체
를 포함하는 키트 ;
[20] (2) 단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편이, (3) 불용성 담체에 흡착되어 있는, [19] 에 기재된 키트.
[21] (3) 불용성 담체가 라텍스 입자인, [19] 또는 [20] 에 기재된 키트.
[22] IgG4 관련 질환의 진단을 보조하기 위한, [11] ∼ [17] 중 어느 하나에 기재된 방법 ;
[23] IgG4 관련 질환 진단에 사용하기 위한, [18] ∼ [21] 중 어느 하나에 기재된 키트.
[24] 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열의 전부 또는 일부로 이루어지고, 299 번째의 글루타민산을 포함하는, 단리된 펩티드.
본 발명의 실시형태에 의해, 생체 시료 중의 IgG4 를 효율적으로 검출 정량하는 것이 가능해지고, 다양한 질환의 진단에 일조할 수 있다. 예를 들어 이것으로 한정되지 않지만, IgG4 관련 질환 (혈청 IgG4 높은 값과 이환 장기에 대한 저명한 IgG4 양성 형질 세포 침윤을 특징으로 하는 전신성, 만성 염증성 질환) 의 진단에 일조할 수 있고, 이와 같은 질환으로는, 미쿨리츠병 (Mikulicz disease), Kuttner 종양, 눈물샘염, IgG4 관련 안질환, IgG4 관련 호흡기 질환, 염증성 거짓 종양, 종격 섬유증, 장염, 경화성 담관염, IgG4 관련 간장해 (肝障害), 자기 면역성 췌염 (AIP), IgG4 관련 신장병, 후복막 섬유증, 전립선염, 자기 면역성 하수체염, 갑상선염, 비후성 경막증, IgG4 관련 림프절증, 관절염, 염증성 복부 대동맥혹, 동맥 주위염을 들 수 있다.
[도 1] 선정 클론의 면역학적 입자 응집 저지법에 대한 적응성 평가
[도 2] ELISA 에 의한 MaI4-08 항체의 특이성의 평가. 도 2 는, MaI4-08 산생 항체에 있어서, 각 인간 글로불린에 대한 ELISA 의 반응 흡광도를 나타낸다.
[도 3] ELISA 에 의한 MaI4-09 산생 항체의 특이성의 평가. 도 3 은, MaI4-09 산생 항체에 있어서, 각 인간 글로불린에 대한 ELISA 의 반응 흡광도를 나타낸다.
[도 4] MaI4-08 산생 항체를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정. 도 4 는, 인간 IgG4 의 표준 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 또한 표준 시료로서, 인간 IgG4 농도를 각각 1.6, 6.3, 12.5, 25, 50 ㎎/㎗ 로 조정한 표준 인간 혈청을 사용하였다. 본 측정에서는 검체 시료의 측정을 20 배 희석으로 하여 측정하는 것을 전제로 하기 때문에, 최종적인 표준 시료 농도는 20 배가 되고, 31.3, 125, 250, 500, 1000 ㎎/㎗ 가 된다. 이후에 기재하는 시료 농도는 모두 20 배한 최종적인 시료 농도로 한다.
[도 5] MaI4-09 산생 항체를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정. 도 5 는, 인간 IgG4 의 표준 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 다른 조건은 도 4 와 동일하다.
[도 6] MaI4-05 산생 항체를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정 (비교예). 도 6 은, 인간 IgG4 의 표준 시료, MaI4-05 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 다른 조건은 도 4 와 동일하다.
[도 7] HP6025 를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정 (비교예). 도 7 은, 인간 IgG4 의 표준 시료, HP6025 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 다른 조건은 도 4 와 동일하다.
[도 8] MaI4-08 산생 항체를 사용한 희석 직선성의 평가. 도 8 은, 0 ∼ 1000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 9] MaI4-09 산생 항체를 사용한 희석 직선성의 평가. 도 9 는, 0 ∼ 1000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 10] MaI4-08 산생 항체를 사용한 프로 존 현상에 대한 내성의 평가. 도 10 은, 0 ∼ 8000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 11] MaI4-09 산생 항체를 사용한 프로 존 현상에 대한 내성의 평가. 도 11 은, 0 ∼ 8000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 12] MaI4-08 산생 항체의 인간 IgG4 에 대한 특이성의 평가 도 12 는, 3000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4 의 각 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 13] MaI4-09 산생 항체의 인간 IgG4 에 대한 특이성의 평가. 도 13 은, 3000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4 의 각 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 14] Uniprot 로부터 취득한 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 아미노산 서열 H1 (P01861, 서열 번호 4), 및 그 서열을 부분적으로 결손시킨 각 펩티드 H2 ∼ 12 의 아미노산 서열의 얼라인먼트를 나타낸다. 99 번째 ∼ 110 번째는 힌지 영역을 나타낸다.
[도 15] 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 아미노산 서열 (서열 번호 4) 의 221 번째 내지 327 번째의 CH3 영역의 아미노산 서열 (H-10), 그리고 H-10 의 일부를 인간 IgG1 중쇄 정상 영역의 대응하는 아미노산 (굵은 글씨) 으로 치환시킨 아미노산 서열 (H-31 ∼ H-39) 의 얼라인먼트를 나타낸다.
[도 16] MaI4-08 산생 항체의 펩티드 H1 ∼ 12 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 17] MaI4-09 산생 항체의 펩티드 H1 ∼ 12 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 18] MaI4-08 산생 항체의 펩티드 H10 및 H31 ∼ 39 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 19] MaI4-09 의 펩티드 H10 및 H31 ∼ 39 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 20] MaI4-05 의 펩티드 H1 ∼ 12 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 2] ELISA 에 의한 MaI4-08 항체의 특이성의 평가. 도 2 는, MaI4-08 산생 항체에 있어서, 각 인간 글로불린에 대한 ELISA 의 반응 흡광도를 나타낸다.
[도 3] ELISA 에 의한 MaI4-09 산생 항체의 특이성의 평가. 도 3 은, MaI4-09 산생 항체에 있어서, 각 인간 글로불린에 대한 ELISA 의 반응 흡광도를 나타낸다.
[도 4] MaI4-08 산생 항체를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정. 도 4 는, 인간 IgG4 의 표준 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 또한 표준 시료로서, 인간 IgG4 농도를 각각 1.6, 6.3, 12.5, 25, 50 ㎎/㎗ 로 조정한 표준 인간 혈청을 사용하였다. 본 측정에서는 검체 시료의 측정을 20 배 희석으로 하여 측정하는 것을 전제로 하기 때문에, 최종적인 표준 시료 농도는 20 배가 되고, 31.3, 125, 250, 500, 1000 ㎎/㎗ 가 된다. 이후에 기재하는 시료 농도는 모두 20 배한 최종적인 시료 농도로 한다.
[도 5] MaI4-09 산생 항체를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정. 도 5 는, 인간 IgG4 의 표준 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 다른 조건은 도 4 와 동일하다.
[도 6] MaI4-05 산생 항체를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정 (비교예). 도 6 은, 인간 IgG4 의 표준 시료, MaI4-05 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 다른 조건은 도 4 와 동일하다.
[도 7] HP6025 를 사용한 항체 흡광도 변화량의 측정 (비교예). 도 7 은, 인간 IgG4 의 표준 시료, HP6025 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 흡광도 변화를 나타낸다. 다른 조건은 도 4 와 동일하다.
[도 8] MaI4-08 산생 항체를 사용한 희석 직선성의 평가. 도 8 은, 0 ∼ 1000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 9] MaI4-09 산생 항체를 사용한 희석 직선성의 평가. 도 9 는, 0 ∼ 1000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 10] MaI4-08 산생 항체를 사용한 프로 존 현상에 대한 내성의 평가. 도 10 은, 0 ∼ 8000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 11] MaI4-09 산생 항체를 사용한 프로 존 현상에 대한 내성의 평가. 도 11 은, 0 ∼ 8000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG4 단계 희석 계열 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 12] MaI4-08 산생 항체의 인간 IgG4 에 대한 특이성의 평가 도 12 는, 3000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4 의 각 시료, MaI4-08 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 13] MaI4-09 산생 항체의 인간 IgG4 에 대한 특이성의 평가. 도 13 은, 3000 ㎎/㎗ 의 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4 의 각 시료, MaI4-09 산생 항체 함유 완충액 (제 1 시약), 인간 IgG4 감작 라텍스 함유 완충액 (제 2 시약) 을 혼합하고, 반응시켰을 때의 측정값을 나타낸다.
[도 14] Uniprot 로부터 취득한 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 아미노산 서열 H1 (P01861, 서열 번호 4), 및 그 서열을 부분적으로 결손시킨 각 펩티드 H2 ∼ 12 의 아미노산 서열의 얼라인먼트를 나타낸다. 99 번째 ∼ 110 번째는 힌지 영역을 나타낸다.
[도 15] 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 아미노산 서열 (서열 번호 4) 의 221 번째 내지 327 번째의 CH3 영역의 아미노산 서열 (H-10), 그리고 H-10 의 일부를 인간 IgG1 중쇄 정상 영역의 대응하는 아미노산 (굵은 글씨) 으로 치환시킨 아미노산 서열 (H-31 ∼ H-39) 의 얼라인먼트를 나타낸다.
[도 16] MaI4-08 산생 항체의 펩티드 H1 ∼ 12 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 17] MaI4-09 산생 항체의 펩티드 H1 ∼ 12 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 18] MaI4-08 산생 항체의 펩티드 H10 및 H31 ∼ 39 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 19] MaI4-09 의 펩티드 H10 및 H31 ∼ 39 에 대한 웨스턴 블롯 해석
[도 20] MaI4-05 의 펩티드 H1 ∼ 12 에 대한 웨스턴 블롯 해석
본 발명의 실시형태에 관련된 모노클로날 항체는, 예를 들어 정제 인간 IgG4 를 면역원으로 하여 동물을 면역시키고, 그 동물이 산생하는 항인간 IgG4 항체 산생 세포와 골수 종양 세포를 융합시킴으로써 얻어지는 하이브리도마에 의해 산생된다. 사용되는 동물은 한정되지 않지만, 인간 이외의 동물, 예를 들어 마우스, 래트, 모르모트, 햄스터, 토끼 등이 이것에 해당한다. 특히, IgG 의 서브타입이 IgG1, IgG2a, IgG2b, 및 IgG3 인 마우스가 바람직하다.
상기 하이브리도마는 이하의 방법에 의해 얻을 수 있다. 즉, 인간 IgG4 를, 프로인트의 완전, 불완전 아쥬반트, 수산화 알루미늄 아쥬반트, 백일해 아쥬반트 등의 이미 공지된 것을 사용하여 함께 혼화하고, 감작용 아쥬반트액을 제조하여 수 회로 나누어 마우스, 래트 등의 동물에 1 ∼ 3 주간 간격으로 복강내 피하, 또는 꼬리 정맥 투여함으로써 면역시킨다. 감작 항원량은 1 ㎍ ∼ 100 ㎎ 의 사이로 되어 있지만, 일반적으로는 50 ㎍ 정도가 바람직하다. 면역 횟수는 2 ∼ 7 회가 일반적이지만 다양한 방법이 알려져 있다. 이어서 비장 등에서 유래되는 항체 산생 세포와 골수 종양 세포 (미엘로마 세포) 등의 시험관 내에서 증식 능력을 갖는 세포를 융합한다. 항체 산생 세포는 마우스, 누드 마우스, 래트 등의 비장 등으로부터 얻을 수 있다.
상기 융합법으로는, 이미 그것 자체 공지된 쾰러와 밀스테인의 정법 (Nature.256, 495. 1975) 에 의해 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 을 사용함으로써 융합할 수 있다. 센다이 바이러스, 전기 융합법에 의해서도 융합을 실시할 수 있다.
상기 융합한 세포로부터 인간 IgG4 를 인식하는 항체를 산생하는 하이브리도마를 선택하는 방법으로는 이하와 같이 하여 실시할 수 있다. 즉, 상기 융합한 세포로부터 한계 희석법에 의해 HAT 배지 및 HT 배지에서 생존하고 있는 세포에 의해 만들어지는 콜로니로부터 하이브리도마를 선택한다. 96 웰 플레이트 등에 뿌려진 융합 세포로부터 생긴 콜로니 배양 상청 중에 인간 IgG4 에 대한 항체가 포함되어 있는 경우에는, 인간 IgG4 를 플레이트 상에 고정화한 어세이 플레이트 상에 상청을 놓고, 반응 후에 항마우스 이뮤노글로불린-HRP 표지 항체 등의 2 차 표지 항체를 반응시키는 ELISA 법에 의해, 인간 IgG4 에 대한 모노클로날 항체 산생 클론을 선택할 수 있다. 표지 항체의 표지 물질에는 HRP 외, 알칼리성 포스파타아제 등의 효소, 형광 물질, 방사성 물질 등을 사용할 수 있다. 또 컨트롤로서 블로킹제인 BSA 만을 결합한 어세이 플레이트에 의한 ELISA 를 동시에 실시함으로써 인간 IgG4 특이적 항체의 스크리닝을 할 수 있다. 요컨대 인간 IgG4 플레이트에서 양성이고, BSA 에 의한 ELISA 에서 음성인 클론을 선택할 수 있다.
본 발명의 실시형태에 관련된 하이브리도마로는, 인간 IgG4 를 인식하는 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마 중, 특히 인간 IgG4 와 결합하고, 다른 인간 면역 글로불린 (다른 IgG (IgG1, IgG2, IgG3), IgA (IgA1, IgA2), IgD, IgE 및 IgM) 에 결합하지 않는 항체를 산생하는 하이브리도마가 바람직하다.
여기서 「인간 IgG4 에 결합하고, 다른 인간 면역 글로불린에 결합하지 않는다」란, 예를 들어 간편하게는 통상적인 ELISA 에 있어서, 하기 이외의 측정 조건을 동일하게 했을 때, 고상 항원으로서 인간 IgG4 를 포함하는 경우에 어느 인간 면역 글로불린을 포함하지 않는 것을 대조 (블랭크) 로 했을 때의 흡광도의 비가 40 이상, 바람직하게는 50 이상, 보다 바람직하게는 100 이상을 나타내는 것이고, 또한 고상 항원으로서 인간 IgG4 이외를 포함하는 경우에 어느 인간 면역 글로불린을 포함하지 않는 것을 대조 (블랭크) 로 했을 때의 흡광도의 비가 5 이하, 바람직하게는 2 이하를 나타내는 것임을 말한다.
또, 다른 인간 면역 글로불린보다 인간 IgG4 에 대해 높은 결합 친화성을 나타내는 것임을 말하고, 결합 속도 정수와 해리 정수를 사용하여 평가할 수도 있다. 구체적으로는, 본 발명의 바람직한 실시형태에 의한 항체에서는, 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 특정한 에피토프에, 4.0 × 105 이상, 통상 4.0 × 105 ∼ 6.0 × 105 의 결합 속도 정수, 그리고 5.0 × 10-10 이하, 통상 5.0 × 10-10 ∼ 3.0 × 10-10 의 해리 정수로 결합한다.
상기 하이브리도마는 통상 세포 배양에 사용되는 배지, 예를 들어 α-MEM, RPMI1640, ASF, S-clone 등에서 배양하고, 그 배양 상청으로부터 모노클로날 항체를 회수할 수 있다. 또 하이브리도마가 유래되는 동물, 누드 마우스를 미리 프리스탄 처리해 두고, 그 동물에 세포를 복강내 주사함으로써 복수 (腹水) 를 저류시키고, 그 복수로부터 모노클로날 항체를 회수할 수도 있다.
상기의 상청, 복수로부터 모노클로날 항체를 회수하는 방법으로는, 통상적인 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어 황산암모늄, 황산나트륨 등에 의한 염석법이나 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 프로테인 A, 프로테인 G 등에 의한 어피니티 크로마토그래피 등을 들 수 있다.
본 발명의 실시형태에 관련된 모노클로날 항체를 사용한 면역 측정법에 의해 검체 중의 인간 IgG4 를 고감도로 또한 특이적으로 검출할 수 있다. 대상이 되는 검체로는, 검체로부터 채취, 단리된 혈액, 혈청, 혈장 등을 들 수 있다. 전신의 병변 조직, 예를 들어 하수체, 눈물샘, 침샘, 갑상선, 전립선, 기관지 상피, 폐포 격벽, 췌관, 후복막, 담관벽, 혹은 관절 류머티즘 활막으로부터의 생검 샘플이어도 된다.
「면역 측정법」이란 항원과 항체의 반응을 이용하여, 생물학적 시료 중에 포함되는 물질의 레벨을 측정하는 생화학적 시험 측정법을 의미한다.
본 발명의 실시형태에 관련된 모노클로날 항체를 사용한 「면역 측정법」에 의한 검출 방법으로는, 샌드위치 ELISA 법, 화학 발광 효소 면역 측정법 (CLEIA 법), 형광 면역 측정법 (FIA), 라텍스 (입자) 응집법 (비탁법) 등을 들 수 있지만, 보다 바람직하게는 라텍스 (입자) 응집 저지법이다.
「ELISA 법」은, ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)/EIA (EnzymeImmuno Assay)) 를 의미하고, 시료 중에 포함되는 물질의 농도를 효소 반응을 사용하여 검출 정량하는 방법을 가리킨다. 효소 반응에 기초하는 발색 발광을 시그널에 사용함으로써 대상을 검출 측정한다.
「경합 ELISA 법」이란 「표지한 항원」과 「시료 중에 존재하는 항원」이, 경합 조건하에서 어느 비율로 항체에 결합하는지를 측정하는 ELISA 법을 의미한다.
「면역 비탁법」이란 항원에 항체를 반응시키고, 면역 복합체의 침강물을 형성시키고, 그 응집 덩어리에 광을 조사하여, 산란에 의한 조사광의 감쇠 (흡광도) 를 자동 분석기로 계측하여 검체에 포함되는 항원량을 측정하는 방법이다.
「면역 비롱법」이란 항원에 항체를 반응시키고, 면역 복합체의 침강물을 형성시키고, 그 복합물에 광을 쬐어, 산란한 광을 측정함으로써, 검체에 포함되는, 항원을 검출하는 방법이다.
「라텍스 (입자) 응집법」이란, 항체를 라텍스 입자로 고상화하고, 항원 존재하에서 라텍스 입자를 응집시키고, 이 응집을 관찰함으로써, 항원을 검출하는 방법이다.
「라텍스 (입자) 응집 저지법」이란, 항원을 라텍스 입자로 고상화하고, 「라텍스 입자에 결합한 항원」과 「시료 중에 존재하는 항원」이, 경합 조건하에서 어느 비율로 항체에 결합하는지를, 라텍스 입자의 응집을 관찰하고, 간접적으로 「시료 중에 존재하는 항원」을 검출하는 방법이다.
어느 경우도, 그 응집의 관찰에, 산란에 의한 조사광의 감쇠 (흡광도) 를 계측 (면역 비탁법) 해도 되고, 산란한 광을 측정 (면역 비롱법) 해도 된다.
본원 발명의 실시형태에 있어서 「라텍스 입자에 결합한 항원」은 반드시, 「시료 중에 존재하는 항원」과 동일 분자일 필요는 없고, 본원 발명에 관련된 항체 또는 그 항원 결합 단편과의 결합에 있어서 「시료 중에 존재하는 항원」과 경합하는 분자이면 된다. 반대로 정의하면, 본원 발명에 관련된 항체를 「라텍스 (입자) 응집 저지법」을 사용하는 경우, 「라텍스 입자에 결합한 항원」및 「시료 중에 존재하는 항원」이 그 항체의 에피토프를 포함하는 것이 바람직하다.
에피토프 (epitope) 란, 항체가 인식하는 항원의 일부분을 가리킨다. 인간 IgG4 는, 가변 영역 (VL) 과 정상 영역 (CL) 으로 이루어지는 경쇄 2 분자와 ; 가변 영역 (VH) 과 정상 영역 (CH1), 힌지 영역, 정상 영역 (CH2) 및 정상 영역 (CH3) 으로 이루어지는 중쇄 2 분자 ; 로 이루어지는 약 146000 의 분자량을 갖는 헤테로테트라머 분자인데, 항체는 그 전체를 인식하는 것은 아니고, 항원의 비교적 작은 일부분만을 인식하여 결합한다. 에피토프로서 기능하기 위해서는 적어도 10 아미노산 잔기, 보다 바람직하게는 5 아미노산 잔기의 길이가 필요하다. 이 항체 결합 부분을 「에피토프」또는 「항원 결정기 (antigenic determinant)」라고도 부른다.
본 발명의 실시형태에 관련된 항체는, IgG4 를 인식하고, IgG1, IgG2 및 IgG3 을 인식하지 않는 것이 요구된다. 경쇄는 IgG1 ∼ IgG4 에서 공통되므로, 에피토프는 중쇄, 특히, 중쇄 정상 영역에 있는 것이 바람직하다. IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 의 중쇄 정상 영역은 각각 서열 번호 1, 2, 3 및 4 로 나타나고, 서열 번호 1 ∼ 3 과 서열 번호 4 의 상동성이 낮은 부분을 에피토프로 하는 것이 바람직하고, 후술하는 실시예에서 실증하는 바와 같이, 특히, 인간 IgG4 의 CH3 영역, 보다 구체적으로는, 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열의 범위 내에 존재하고, 299 번째의 글루타민산을 포함하는 에피토프가 다른 IgG 서브클래스에 대한 교차 반응이 없고 IgG4 에 대한 특이적인 결합을 달성하는 데에 있어서 바람직하다. 환언하면, 본 발명의 바람직한 실시형태에 관련된 항체의 에피토프는, 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열의 전부 또는 일부로 이루어지고, 299 번째의 글루타민산을 포함한다. 따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에 의하면, 에피토프를 포함하는 펩티드, 보다 구체적으로는, 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열의 전부 또는 일부 (통상, 5 개 내지 50 개, 바람직하게는 10 개 내지 30 개) 로 이루어지고, 299 번째의 글루타민산을 포함하는 펩티드도 제공된다.
「라텍스 (입자) 응집법」은, 통상 에피토프가 상이한 복수의 모노클로날 항체 (폴리클로날) 를 사용하지 않으면 응집이 일어나지 않지만, IgG4 자체, 경쇄와 중쇄의 헤테로다이머의 다이머이기 때문에, 모노클로날 항체라도 응집 반응에 적용할 수 있는 것이 있을 수 있다. 또한, 라텍스 입자에 복수의 항체 분자를 흡착시키면, 항체 분자가 1 가 항체 분자 (항원 (인식) 결합 부위가 1 분자당 1 개) 여도 응집이 일어날 수 있다.
「1 가 항체」란, 천연의 항체를 파파인으로 처리하여 생기는 Fab 단편이나, 유전자 공학적으로, 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역을 결합시킨, scFV (single-chain variable fragment) 등이 이것에 해당한다.
한편, 「라텍스 (입자) 응집 저지법」의 경우, 폴리클로날 항체 등의, 결합 정수, 에피토프, 특이성이 상이한 항체를 복수 사용하는 경우, 측정계 내에서의 반응에 편차가 생길 가능성은 있으므로, 폴리클로날 항체는 부적절하다.
또한, 사용하는 항체가 1 가 항체 분자이면, 항체를 개재한 (항원이 흡착된) 라텍스 입자간의 응집 반응이 일어나지 않기 때문에, 마찬가지로 부적절하다. 항원 (인식) 결합 부위가, 1 분자당 2 개 이상 필요하고, 천연의 이뮤노글로불린 타입 (IgG (2 가), IgA (4 가), IgD (2 가), IgE (2 가) 및 IgM (10 가)) 이나, 펩신 처리로 생기는 F(ab')2 (2 가) 나 상기 「1 가 항체」의 멀티머 항체일 필요가 있다.
「항원 (인식) 결합 부위」란, 항원에 결합할 수 있는 항체의 최소 부위를 나타낸다. 이것으로 한정되지 않지만, 중쇄 및 경쇄의 상보성 결정 영역 (CDR) 을 포함하는 부위를 가리킨다. 경쇄의 가변 영역인 VL 영역과 중쇄의 가변 영역인 VH 영역을 포함해도 된다. 이들은, 유전자 공학적으로, 혹은 SS 결합 등을 개재하여 결합되어 있어도 된다.
라텍스란, 본래, 폴리머 수지의 콜로이드상 수분산물을 가리키지만, 본원에 있어서, 「라텍스 입자」란, 균일한 입자경을 갖는 폴리머 수지를 가리킨다. 통상적인 면역 측정법에 사용할 수 있는 라텍스 입자이면, 특별히 한정되지 않지만, 폴리스티렌을 주재료로 하고 있는 것이 바람직하다.
본원에 사용하는 라텍스 입자의 입자경은, 50 ㎚ ∼ 500 ㎚, 바람직하게는 75 ㎚ ∼ 306 ㎚, 보다 바람직하게는 100 ㎚ ∼ 111 ㎚ 여도 된다.
본 발명의 실시형태에 관련된 측정 방법을 실시할 때에는, 인간 IgG4 를 면역 측정하기 위한 키트로서, (1) 본 발명 항체, (2) 단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편 및 (3) 고상 지지체를 포함하는 키트를 사용하여 실시할 수 있다.
이 키트에 있어서는, 고상 지지체와 단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편 용액을 따로 따로 제조해 두고, IgG4 를 측정할 때, 항체를 고상 지지체에 흡착시켜도 되고, 미리, 항체를 고상 지지체에 흡착시킨 상태로 제공해도 된다. 이 키트에 있어서는, 검체 중의 단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편을 항체에 결합시킨 후, 고상 지지체에 흡착하지 않았던 성분을 제거하기 위해서, 세정액을 포함하는 것이 바람직하다. 세정액으로는, 예를 들어 계면 활성제를 포함하는 트리스 완충액을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 키트에는, 필요에 따라, 검체 희석액을 첨가하여 포함할 수도 있다. 검체 희석액으로는, 예를 들어 트리스 등의 완충액을 사용할 수 있다. 그 완충액에는, 필요에 따라, EDTA·2Na 등의 킬레이트제, 식염 등의 무기염을 첨가해도 된다.
「단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편」은, 상기와 같이 「라텍스 입자에 결합한 항원」으로서 사용하므로, 본 발명 항체의 에피토프를 포함할 필요가 있다. 천연의 IgG4 분자를 단리 정제한 것이어도 상관없지만, 유전자 공학적으로 제조된 그 「펩티드 단편」, 예를 들어 인간 IgG4 의 경쇄 또는 중쇄의 정상 영역의 일부 또는 전부를 클로닝한 것이어도 상관없다. 그 인간 IgG4 의 중쇄의 정상 영역의 일부 또는 전부는 서열 번호 4 의 아미노산 서열의 일부 또는 전부를 포함하고 있어도 된다.
본 발명의 실시형태에 있어서는, 본 발명의 모노클로날 항체를 사용한 샌드위치 어세이 ELISA 법에 의해, IgG4 를 측정할 수도 있다. 이 경우, 모노클로날 항체로서, 본 발명 항체 이외에, 다른 IgG4 에 대한 별도의 항체도 사용하여 실시할 수 있다. 샌드위치 어세이에 의한 IgG4 를 측정하는 방법의 구체예는, 이하와 같다. 먼저, 1 차 항체로서 본 발명 항체를, 고상 지지체, 예를 들어 플레이트에 흡착시키고, 검체, 예를 들어 혈청 중의 IgG4 와 반응시키고, 고상 지지체를 세정하고, 이어서, 흡착한 IgG4 와, 비오틴화한 2 차 항체, 예를 들어 비오틴화한 별도의 IgG4 에 대한 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체를 반응시키고, 퍼옥시다아제 표지 스트렙토아비딘과 반응시킨 후, 퍼옥시다아제 효소 반응, 이어서, 발색 반응을 실시함으로써, IgG4 를 검출할 수 있다. 또, 2 차 항체를 직접 퍼옥시다아제나 알칼리성 포스파타아제 등에 의해 효소 표지한 것을 사용함으로써, 동일한 측정을 할 수 있다. 또, 2 차 표지 항체에 결합시키는 물질은 측정 방법에 의해 효소에 한정되는 것은 아니고, 방사선 동위 원소, 형광 물질, 자성 물질, 콜로이드 등이어도 된다.
본 발명의 실시형태에 있어서, 본 발명 항체를 사용한 샌드위치 어세이 ELISA 를 실시할 때에는, 샌드위치 어세이 ELISA 용의 키트를 사용하여 실시할 수 있다.
샌드위치 어세이 ELISA 법으로 본 발명의 측정 방법을 실시할 때에는, 예를 들어 IgG4 를 면역 측정하기 위한 키트로서, i) 고상 지지체, ii) 본 발명 항체, iii) 표지된, 별도의 IgG4 에 대한 항체, 및 iv) 표지를 검출하기 위한 성분을 포함하는 키트를 사용함으로써도, IgG4 를 측정할 수 있다.
표지를 검출하기 위한 성분이란, 항체가 표지된 것을 측정하기 위한 성분으로, 표지가 비오틴인 경우, 퍼옥시다아제 표지 스트렙토아비딘, 테트라메틸벤지딘의 퍼옥시다아제 효소 기질, 및 과산화수소를 포함하는 시약이며, 표지가 알칼리 포스파타아제인 경우, p-니트로페닐인산을 포함하는 시약이다. 이 키트에는, 필요에 따라, 세정액을 포함하고 있어도 된다.
본 발명에 있어서, 이 키트를 사용할 때에는, 검체 중의 IgG4 를 항체에 결합시킨 후, 고상 지지체에 흡착하지 않았던 성분을 제거하기 위해서, 세정액을 포함하는 것이 바람직하다. 세정액으로는, 예를 들어 계면 활성제를 포함하는 트리스 완충액을 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 키트에는, 필요에 따라, 검체 희석액을 첨가하여 포함할 수도 있다. 검체 희석액으로는, 예를 들어 트리스 등의 완충액을 사용할 수 있다. 그 완충액에는, 필요에 따라, EDTA·2Na 등의 킬레이트제, 식염 등의 무기염을 첨가해도 된다.
이와 같은, 조직 면역 염색법에 의한 검출은, i) 본 발명의 모노클로날 항체, ii) 표지된 2 차 항체 및 iii) 발색 시약을 구성 성분으로서 포함하는 키트를 사용하여 실시할 수 있다. 표지된 2 차 항체로는, 예를 들어 퍼옥시다아제나 알칼리 포스파타아제 등의 효소로 표지한, 동물 유래의 항 IgG 항혈청, 항 IgG 폴리클로날 항체 등을 들 수 있고, 발색 시약으로는, 표지에 사용한 효소를 발색하기 위한 통상 사용되는 발색 기질 등의 시약이 사용된다.
본 발명에 있어서, 본 발명 항체를 사용한 화학 발광 효소 면역 측정법 (CLEIA 법), 형광 면역 측정법 (FIA) 또는 라텍스 응집법을 실시하는 경우에는, 공지된 화학 발광 효소 면역 측정법 (CLEIA 법) 용 키트, 형광 면역 측정법 (FIA) 용 키트 또는 라텍스 응집법용의 키트를 각각 사용하여 실시할 수 있다.
실시예
이하의 실시예, 비교예 및 참고예에 의해 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 모노클로날 항체의 제조와 평가
(1) 모노클로날 항체 제조용 항원의 선택과 준비
인간 IgG4 를 인식하는 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마를 공지된 방법 (예를 들어 Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497) 에 준하여 제조하였다. 항원으로서 사용하는 IgG4 는 인간 혈청으로부터 조제하였다. 구체적으로는 인간 혈청을 유안 침전에 의해 분획·투석 후, CaptureSelectIgG4 Affinity Matrix (써모피셔 사이언티픽 주식회사) 의 제품 첨부 문서에 따라, IgG4 항원을 정제하였다.
(2) 면역
인간 혈청으로부터 상기의 방법으로 정제한 0.5 ㎎/㎖ 인간 IgG4 와 동 체적량의 프로인트 완전 아쥬반트 (시그마 알드리치) 를 유화할 때까지 잘 혼화하고, 유화 현탁액을 제조하였다. 4 주령 Balb/c 마우스를 디에틸에테르 마취하고, 상기 유화 현탁액을 1 마리당 50 ㎍ 의 인간 IgG4 로 복강내 투여를 실시하였다. 약 2 주간 간격으로 6 회, 상기와 동일하게 프로인트 불완전 아쥬반트 (시그마 알드리치) 로 제조한 유화 현탁액을 각각 마우스에 주사하였다. 최종 면역으로서 상기 6 회째의 주사로부터 약 3 주간 후, 동일하게 유화 현탁액을 주사하였다.
(3) 하이브리도마의 확립
최종 면역으로부터 3 일 후에 디에틸에테르 마취하에서 외과적 적출된 비장을 무균적으로 분산하여 비장 세포를 조제하였다. 폴리에틸렌글리콜을 사용하여, 비장 세포수와 골수종 세포 P3-X63-Ag8-U1 (P3U1) 수의 융합 비율을 5 : 1 로 융합을 실시하였다. 융합 세포를 10 % FBS (HyClone 사) ASF (코스모·바이오 주식회사) HAT (코스모·바이오 주식회사) 배지에 분산하고, 48 웰 플레이트 (스미토모 베이크라이트) 에 분주하여 37 ℃, 5 % CO2 조건에서 배양하였다. 이하의 스크리닝에 사용한 하이브리도마 콜로니수는 4481 이었다.
(4) 스크리닝
얻어진 하이브리도마의 스크리닝을 1) IgG4 에 대한 결합능 확인, 2) 특이성 확인, 3) 면역학적 응집 저지법에 대한 적응성 확인, 이라는 3 단계로 실시하였다.
1) IgG4 에 대한 결합능 평가
상기 항원으로서 사용한 정제한 인간 IgG4 를 0.1 ㎍/웰이 되도록 96 웰 플레이트 (Nunc) 에 분주하였다. 셰이커로 700 rpm, 25.0 ℃ 의 조건에서 1 시간 진탕하였다. 폐액하고 300 ㎕ 의 PBST (10 mM 인산 이수소나트륨 ; 150 mM 염화 나트륨 ; 0.05 % 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄모노라우레이트 ; pH 7.4) 로 3 회 세정 후, 100 ㎕ 의 블로킹 완충액 (10 mM 인산 이수소나트륨 ; 150 mM 염화 나트륨 ; 1 % 블록 에이스 분말 (다이닛폰 스미토모 제약) ; pH 7.4) 을 첨가하고, 하룻밤 이상 4 ℃ 에서 보존하였다. 동일하게 PBST 로 세정 후, 하이브리도마 콜로니의 배양 상청을 100 ㎕ 씩 첨가하고, 상기와 동조건에서 진탕시켰다. 동일하게 PBST 로 세정 후, 항체 희석 완충액 (10 mM 인산 이수소나트륨 ; 150 mM 염화 나트륨 ; 0.05 % 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄모노라우레이트 ; 0.05 % 소 혈청 알부민 ; pH 7.4) 으로 10000 배 희석한 항마우스 IgG (H + L) HRP 표지 항체 (Life Technologies) 를 100 ㎕ 씩 첨가하고, 상기와 동조건에서 진탕시켰다. 동일하게 PBST 로 세정 후, SureBlue (KPL) 를 100 ㎕ 첨가하였다. 실온에서 15 분간 정치한 후, 0.5 mol/ℓ 황산 (와코 순약 공업) 을 100 ㎕ 첨가하였다. 파장 450 ㎚ 를 마이크로 플레이트 리더 (BIO-RAD) 로 측정하였다. 합계 4481 웰 중, IgG4 에 대한 결합능이 확인된 192 웰을 선정하였다. 선정된 하이브리도마를 단클론화하고, 배양을 계속하였다.
2) 특이성 평가
1) 에서 선정된 클론으로부터 산생되는 항체의 특이성을 평가하였다. Myeloma 인간 IgG1 (EMD Millipore), Myeloma 인간 IgG2 (EMD Millipore), Myeloma 인간 IgG3 (시그마 알드리치), Myeloma 인간 IgG4 (EMD Millipore) 를 1 ㎍/㎖ 가 되도록 PBS(-) 로 조정하였다. 조정한 시료를 96 웰 플레이트 (Thermo Fisher) 에 100 ㎕ 씩 첨가하였다. 셰이커에 의한 진탕 이후의 조작을 상기 1) 과 동일하게 실시하였다. 192 클론 중, Myeloma 인간 IgG1, 2, 3 과 비교하여, Myeloma 인간 IgG4 에 강한 반응을 나타내는 8 클론을 선정하였다.
(3) 면역학적 입자 응집 저지법에 대한 적응성 평가
2) 에서 선정된 클론으로부터 산생되는 항체에 있어서, 면역학적 응집 저지법에 대한 적용성을 평가하였다.
1) 제 1 시약 (R1) 의 조제
2-[4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지닐]에탄술폰산 (HEPES) 완충 용액 1 에, 상기와 같이 선정된 8 클론 유래의 산생 항체를 각각 포함하는 용액을 15 ㎍/㎖ 의 농도가 되도록 첨가하고, 제 1 시약으로 하였다.
2) 제 2 시약 (R2) 의 조제
2 % 농도의 입경 107 ㎚ 의 폴리스티렌제의 라텍스 입자 용액 18 ㎖ 에, 인간 혈청으로부터 통상적인 방법으로 조 (粗) 정제한 인간 IgG4 0.35 ㎎/㎖ 용액 18 ㎖ 를 첨가하고, 실온에서 1 시간 교반하여 라텍스 입자에 인간 IgG4 를 물리 흡착시켰다. 그 후 20,000 rpm 으로 90 분간 원심 분리를 실시하고, 상청을 폐기하여 침전물을 회수하였다. 이 침전물에 3 % 농도의 소 혈청 알부민을 포함하는 코트 완충액을 24 ㎖ 첨가하여 현탁하고, 초음파 처리를 실시하여 완전하게 분산시킨 후, 실온에서 1 시간 교반하였다. 이어서, 다시 원심 분리를 실시하여 얻어진 침전물에 HEPES 완충 용액 2 를 12 ㎖ 첨가하여 현탁하고 초음파 처리를 실시하여 완전하게 분산시킨 후, HEPES 완충 용액 2 로 라텍스 농도 0.12 % 로 조정한 인간 IgG4 감작 라텍스 입자 현탁액을 얻고, 각 제 1 시약에 대해 공통되는 제 2 시약으로서 사용하였다.
또한, 각 시약의 조성은 이하와 같다.
HEPES 완충 용액 1
25 mM 2-[4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지닐]에탄술폰산 (사이쿄 화성 공업) ; 100 mM 3-(시클로헥실아미노)-1-프로판술폰산 (사이쿄 화성 공업) ; 150 mM 염화 나트륨 (와코 순약 공업) ; 1 mM EDTA·2Na (와코 순약 공업) ; 3.3 % 덱스트란 70 (도쿄 화성 공업) ; 0.1 % 블록 에이스 (다이닛폰 스미토모 제약) ; 0.09 % 아지화 나트륨 (와코 순약 공업) ; pH 7.40.
코트 완충액
25 mM 2-[4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지닐]에탄술폰산 (사이쿄 화성 공업) ; 150 mM 염화 나트륨 (와코 순약 공업) ; 1 mM EDTA·2Na (와코 순약 공업) ; 3 % 소 혈청 알부민 (머크 밀리포어) ; 0.09 % 아지화 나트륨 (와코 순약 공업) ; pH 7.50.
HEPES 완충 용액 2
500 mM 2-[4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지닐]에탄술폰산 (사이쿄 화성 공업) ; 25 mM 2-모르폴리노에탄술폰산 (와코 순약 공업) ; 1 mM EDTA·2Na (와코 순약 공업) ; 150 mM L-아르기닌 염산염 (와코 순약 공업) ; 0.075 % 프로클린 950 (시그마 알드리치) ; pH 6.00.
3) 흡광도 변화량의 측정
표준 시료로서, 인간 IgG4 농도를 각각 0.0, 1.6, 6.3, 12.5, 25.0, 50.0 ㎎/㎗ 로 조정한 표준 인간 혈청을 사용하였다. 또한 0.0 ㎎/㎗ 에는 생리 식염수를 사용하였다. 히타치 7180 형 자동 분석 장치를 사용하고, 시료 3 ㎕ 에 대해 제 1 시약 120 ㎕, 제 2 시약 120 ㎕ 를 반응시키고, 주파장 570 ㎚, 부파장 800 ㎚ 로 18 ∼ 28 측광 포인트간 (R2 첨가 후 약 1 분 후 내지 4 분 후에 상당) 에 있어서, 2 포인트 엔드법에 의한 흡광도 변화량을 측정하였다 (n = 2). 8 클론 중 5 클론으로부터 산생되는 항체는, 0.0 ㎎/㎗ 시에 가장 큰 흡광도 변화량을 나타내고, 인간 IgG4 농도가 상승함에 따라서 흡광도 변화량이 감소하였다. 따라서, 5 클론 (MaI4-09, MaI4-08, MaI4-01, MaI4-06, MaI4-03) 은 면역학적 응집 저지법에 대한 적응성을 나타냈다. 한편으로 다른 3 클론 (MaI4-02, MaI4-04, MaI4-05) 에 관해서는 0.0 ㎎/㎗ 시에 있어서의 가장 큰 흡광도 변화량, 및 인간 IgG4 농도 상승에 수반되는 흡광도 변화량의 감소가 관찰되지 않고, 면역학적 응집 저지법에 적응하지 않았다 (도 1). 면역학적 응집 저지법에 대한 적응성을 나타낸 항체를 산생하는 5 클론 중, 0.0 ㎎/㎗ 시의 흡광도 변화량이 많은 항체를 산생하는 상위 2 클론을 선정하고, 이후의 해석에 사용하였다.
(4) 기탁
상기에서 선정된 하이브리도마 MaI4-08 및 MaI4-09 는, 2015년 9월 1일자로 독립 행정법인 제품 평가 기술 기반 기구내 특허 미생물 기탁 센터에 대해 2015년 9월 1일에 수령 번호 NITE AP-02112 (MaI4-08) 및 NITE AP-02113 (MaI4-09) 으로 수령되었고, 2015년 9월 14일 생존 확인 후, 수탁 번호 NITE P-02112 (MaI4-08) 및 NITE P-02113 (MaI4-09) 이 부여되었다 (수탁증 2015년 9월 30일 발행).
이하에, 기탁을 특정하는 내용을 기재한다.
[1] 기탁 기관의 명칭·수신인 주소
명칭 : 독립 행정법인 제품 평가 기술 기반 기구 산업기술 종합 연구소 특허 미생물 기탁 센터
수신인 주소 : 일본국 치바현 키사라즈시 카즈사카마타리 2-5-8 (우편번호 292-0818)
[2] 기탁일 : 2015년 9월 1일
[3] 수탁 번호 NITE P-02112 (하이브리도마 MaI4-08)
NITE P-02113 (하이브리도마 MaI4-09)
그 후, 동일한 하이브리도마를 국제 기탁하기 위해서, 독립 행정법인 제품 평가 기술 기반 기구내 특허 미생물 기탁 센터에 대해 미생물 이관 청구를 실시하고, 2018년 6월 8일에 수령 번호 NITE ABP-02112 (MaI4-08) 및 NITE ABP-02113 (MaI4-09) 으로 수령되었다.
(5) 세포 배양법에 의한 모노클로날 항체의 산생
상기 하이브리도마로부터 항체를 산생시키는 방법으로서, 공지된 방법 (예를 들어 모노클로날 항체 : 생화학 실험법 도쿄 화학 동인) 에 준하여 실시하였다. 구체적으로는 모노클로날 항체를 산생하기 위해서는 in Virto 에서의 배양 및 In Vivo 에서의 배양이 있다. In Virto 에서의 배양으로는 배양액 중에 있어서의 하이브리도마의 배양 등이 있고, 한편으로 In Vivo 에서의 배양 방법으로서 마우스 복수를 제조하는 방법 등이 있지만, In Virto 에서의 배양을 선택하고, 모노클로날 항체를 포함하는 배양액 상청을 취득하였다.
(6) 모노클로날 항체의 정제
상기로부터 모노클로날 항체를 정제하는 방법으로서, 공지된 방법 (예를 들어 모노클로날 항체 : 생화학 실험법 도쿄 화학 동인) 에 준하여 실시하였다. 모노클로날 항체의 정제로서 어피니티 크로마토그래피 정제가 일반적이고, 프로테인 G 나 프로테인 A 등을 담지한 세파로오스 칼럼을 사용하는데, 프로테인 G 를 담지한 프로테인 G 세파로오스 칼럼 (GE 헬스케어) 을 선택하고, 정제를 실시하였다. 얻어진 모노클로날 항체에 있어서의 280 ㎚ 의 흡광도를 측정하고, 항체 농도를 확인하였다. 농도를 조정 후, 0.45 ㎛ 이하 필터로 여과 멸균하였다.
(7) 항체의 확인
MaI4-08, MaI4-09 산생 항체를 각각 Iso-Gold Rapid Mouse-Monoclonal Isotyping Kit (with κ and λ) (BioAssay Works) 의 제품 첨부 문서에 따라, 아이소 타입의 동정을 실시하였다. 아이소 타입은 표 1 과 같았다.
[표 1]
(8) ELISA 에 의한 특이성의 평가
Myeloma 인간 IgA1 (Abcam), Myeloma 인간 IgA2 (Abcam), Myeloma 인간 IgD (Abcam), Myeloma 인간 IgE (Abcam), Myeloma 인간 IgM (Abcam), Myeloma 인간 IgG1 (EMD Millipore), Myeloma 인간 IgG2 (EMD Millipore), Myeloma 인간 IgG3 (시그마 알드리치), Myeloma 인간 IgG4 (EMD Millipore) 를 1 ㎍/㎖ 가 되도록 PBS(-) 로 조정하였다. 조정한 시료를 96 웰 플레이트 (Thermo Fisher) 에 100 ㎕ 씩 첨가하였다. 셰이커로 700 rpm, 25.0 ℃ 의 조건에서 1 시간 진탕하였다. 폐액하고 300 ㎕ 의 PBST 로 3 회 세정 후, 100 ㎕ 의 블로킹 완충액을 첨가하고, 하룻밤 이상 4 ℃ 에서 보존하였다. 동일하게 PBST 로 세정 후, 1 ㎍/㎖ 가 되도록 항체 희석 완충액으로 조정한 MaI4-08, MaI4-09 산생 항체를 각각 100 ㎕ 씩 첨가하고, 상기와 동 조건에서 진탕시켰다. 동일하게 PBST 로 세정 후, 항체 희석 완충액으로 4000 배 희석한 항마우스 IgG HRP 표지 항체 (Abcam) 를 100 ㎕ 씩 첨가하고, 상기와 동 조건에서 진탕시켰다. 동일하게 PBST 로 세정 후, SureBlue (KPL) 를 100 ㎕ 첨가하였다. MaI4-08, MaI4-09 각각 5, 3 분 후에 0.5 mol/ℓ 황산 (와코 순약) 을 100 ㎕ 첨가하였다. 파장 450 ㎚ 를 마이크로 플레이트 리더 (BIO-RAD) 로 측정하였다. 그 결과, 다른 조정 시료와 비교하여 Myeloma 인간 IgG4 에 강한 시그널이 확인되었다 (표 2 및 3, 도 2 및 3).
[표 2]
[표 3]
(9) 모노클로날 항체의 아미노산 서열 해석
MaI4-08, MaI4-09 는 각각 Fusion Antibodies 사의 프로토콜에 의해, mRNA 의 추출, 클로닝 및 시퀀싱을 실시하였다. 해석한 결과, MaI4-08 의 가변 영역은 서열 번호 5 (중쇄 가변 영역) 및 서열 번호 6 (경쇄 가변 영역) 이고, MaI4-09 의 가변 영역은 서열 번호 7 (중쇄 가변 영역) 및 서열 번호 8 (경쇄 가변 영역) 이고, CDR 의 아미노산 서열은 표 4 와 같이 되었다.
[표 4]
<실시예 2> MaI4 -08, MaI4 -09 산생 항체를 사용한 측정 시약 조제 및 측정
(1) 시약의 조제
1) 제 1 시약 (R1) 의 조제
2-[4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지닐]에탄술폰산 (HEPES) 완충 용액 1 에, MaI4-08 또는 MaI4-09 산생 항체 용액을 15 ㎍/㎖ 의 농도가 되도록 첨가하고, 제 1 시약으로 하였다. 또 대조 시약으로서, MaI4-05 산생 항체 및 시판 항체 HP6025 (머크 밀리포어) 를 동일하게 HEPES 완충 용액 1 에 첨가한 용액을 조제하였다.
2) 제 2 시약 (R2) 의 조제
2 % 농도의 입경 107 ㎚ 의 폴리스티렌제의 라텍스 입자 용액 18 ㎖ 에, 인간 혈청으로부터 통상적인 방법으로 조정제한 인간 IgG4 0.35 ㎎/㎖ 용액 18 ㎖ 를 첨가하고, 실온에서 1 시간 교반하여 라텍스 입자에 인간 IgG4 를 물리 흡착시켰다. 그 후 20,000 rpm 으로 90 분간 원심 분리를 실시하고, 상청을 폐기하여 침전물을 회수하였다. 이 침전물에 3 % 농도의 소 혈청 알부민을 포함하는 코트 완충액을 24 ㎖ 첨가하여 현탁하고, 초음파 처리를 실시하여 완전하게 분산시킨 후, 실온에서 1 시간 교반하였다. 이어서, 다시 원심 분리를 실시하여 얻어진 침전물에 HEPES 완충 용액 2 를 12 ㎖ 첨가하여 현탁하고 초음파 처리를 실시하여 완전하게 분산시킨 후, HEPES 완충 용액 2 로 라텍스 농도 0.12 % 로 조정한 인간 IgG4 감작 라텍스 입자 현탁액을 얻고, 각 제 1 시약에 대해 공통되는 제 2 시약으로서 사용하였다.
또한, 각 시약의 조성은 이하와 같다.
[표 5]
[표 6]
[표 7]
(2) 흡광도 변화량의 측정
표준 시료로서, 인간 IgG4 농도를 각각 1.6, 6.3, 12.5, 25, 50 ㎎/㎗ 로 조정한 표준 인간 혈청을 사용하였다. 본 측정에서는 검체 시료의 측정을 20 배 희석으로 하여 측정하는 것을 전제로 하기 때문에, 최종적인 표준 시료 농도는 20 배가 되고, 31.3, 125, 250, 500, 1000 ㎎/㎗ 가 된다. 이후에 기재하는 시료 농도는 모두 20 배 한 최종적인 시료 농도로 한다. 인간 IgG4 농도 0.0 ㎎/㎗ 의 시료에는 염화 나트륨을 0.85 % 포함하는 생리 식염수를 사용하였다. 인간 IgG4 농도의 측정은 히타치 7180 형 자동 분석 장치를 사용하고, 시료 3 ㎕ 에 대해 제 1 시약 120 ㎕, 제 2 시약 120 ㎕ 를 반응시키고, 주파장 570 ㎚, 부파장 800 ㎚ 로 18 ∼ 28 측광 포인트간 (R2 첨가 후 약 1 분 후 내지 4 분 후에 상당) 에 있어서, 2 포인트 엔드법에 의한 흡광도 변화량을 측정하였다 (n = 2).
(3) 측정 결과
상기 시약을 사용하여, 인간 IgG4 농도를 측정했을 때의 흡광도 변화량을 표 8 그리고 도 4, 5, 6, 및 7 에 각각 나타냈다.
[표 8]
표 8 그리고 도 4 내지 7 에 나타내는 바와 같이, 제 1 시약에 사용하는 마우스 항인간 IgG4 모노클로날 항체로서 MaI4-08 산생 항체 또는 MaI4-09 산생 항체를 사용한 경우, 인간 IgG4 농도가 높아짐에 따라서, 흡광도 변화량이 감소하였다. 한편으로 MaI4-05 산생 항체 및 시판 항체 HP6025 로 조제한 대조 시약을 사용한 경우, 인간 IgG4 농도 의존적인 흡광도 변화는 볼 수 없었다. 이상으로부터, MaI4-05 산생 항체, 및 시판되는 항체 HP6025 로 조제한 시약은 자동 분석 장치에서의 라텍스 (입자) 응집 저지법에 적용시키는 것이 곤란한 것을 알 수 있었다. 한편으로 MaI4-08 및 MaI4-09 산생 항체로 조제한 시약은 라텍스 (입자) 응집 저지법에 적용하는 것이 가능하고, 자동 분석 장치를 사용한 인간 IgG4 농도 측정에 유용한 것이 분명해졌다.
(4) 희석 직선성의 평가
제 1 시약에 사용하는 마우스 항인간 IgG4 모노클로날 항체로서 MaI4-08 산생 항체 또는 MaI4-09 산생 항체를 사용한 경우에 대해, 희석 직선성의 평가를 실시하였다. 시료로서 인간 IgG4 농도를 1000 ㎎/㎗ 로 조정한 표준 인간 혈청을, 염화 나트륨을 0.85 % 포함하는 생리 식염수에 의해 단계 희석한 시료를 검체로서 사용하였다. 인간 IgG4 농도 0.0 ㎎/㎗ 의 시료에는 생리 식염수를 그대로 사용하였다. 인간 IgG4 농도의 측정은 히타치 7180 형 자동 분석 장치를 사용하고, 시료 3 ㎕ 에 대해 제 1 시약 120 ㎕, 제 2 시약 120 ㎕ 를 반응시키고, 주파장 570 ㎚, 부파장 800 ㎚ 로 18 ∼ 28 측광 포인트간 (R2 첨가 후 약 1 분 후 내지 4 분 후에 상당) 에 있어서, 2 포인트 엔드법에 의한 흡광도 변화량을 측정하였다 (n = 2). 표 6 의 결과로부터 검량선을 작성하고, 시료 중의 인간 IgG4 농도를 산출하였다.
(5) 프로 존 현상에 대한 내성의 평가
제 1 시약에 사용하는 마우스 항인간 IgG4 모노클로날 항체로서 MaI4-08 산생 항체 또는 MaI4-09 산생 항체를 사용한 경우에 대해, 프로 존 현상에 대한 내성 평가를 실시하였다. 시료로서 인간 IgG4 농도를 8000 ㎎/㎗ 로 조정한 표준 인간 혈청을, 염화 나트륨을 0.85 % 포함하는 생리 식염수에 의해 단계 희석하고, 검체로서 사용하였다. 인간 IgG4 농도의 측정은 히타치 7180 형 자동 분석 장치를 사용하고, 시료 3 uL 에 대해 제 1 시약 120 ㎕, 제 2 시약 120 uL 를 반응시키고, 주파장 570 ㎚, 부파장 800 ㎚ 로 18 ∼ 28 측광 포인트간 (R2 첨가 후 약 1 분 후 내지 4 분 후에 상당) 에 있어서, 2 포인트 엔드법에 의한 흡광도 변화량을 측정하였다 (n = 2). 표 6 의 결과로부터 검량선을 작성하고, 시료 중의 인간 IgG4 농도를 산출하였다.
(6) 인간 IgG4 에 대한 특이성의 평가
제 1 시약에 사용하는 마우스 항인간 IgG4 모노클로날 항체로서 MaI4-08 산생 항체 또는 MaI4-09 산생 항체를 사용한 경우에 대해, 인간 IgG4 에 대한 특이성의 평가를 실시하였다. 시료로서 3000 ㎎/㎗ 로 조정한 Myeloma 인간 IgG4 용액 (EMD Millipore) 을 사용하였다. 또 대조 시료로서, 동일하게 조정한 Myeloma 인간 IgG1 용액 (EMD Millipore), Myeloma 인간 IgG2 용액 (EMD Millipore), Myeloma 인간 IgG3 용액 (시그마 알드리치) 을 사용하였다. 블랭크 시료에는 생리 식염수를 사용하였다. 인간 IgG4 농도의 측정은 히타치 7180 형 자동 분석 장치를 사용하고, 시료 3 ㎕ 에 대해 제 1 시약 120 ㎕, 제 2 시약 120 ㎕ 를 반응시키고, 주파장 570 ㎚, 부파장 800 ㎚ 로 18 ∼ 28 측광 포인트간 (R2 첨가 후 약 1 분 후 내지 4 분 후에 상당) 에 있어서, 2 포인트 엔드법에 의한 흡광도 변화량을 측정하였다 (n = 2). 표 6 의 결과로부터 검량선을 작성하고, 시료 중의 인간 IgG4 농도를 산출하였다.
(7) 측정 결과
결과를 도 8 ∼ 13, 표 9 및 10 에 각각 나타냈다.
[표 9]
[표 10]
본 발명의 하이브리도마가 산생한 마우스 항인간 IgG4 모노클로날 항체를 제 1 시약에 사용한 경우, 0 ∼ 1000 ㎎/㎗ 의 검량 범위에서 충분한 희석 직선성을 갖는 것이 판명되었다 (도 8 및 9). 또, 프로 존 현상에 대해서는 8000 ㎎/㎗ 까지 측정값의 저하는 볼 수 없었다 (도 10 및 11). 또한, IgG1, IgG2, IgG3 에 대한 반응성은 거의 관찰되지 않았다 (도 12 및 13, 표 9 및 10).
이상과 같이, 스크리닝 단계뿐만 아니라, 항 IgG4 모노클로날 항체로서 보고되어 있는 항체 (HP6025) (비특허문헌 6) 에서도, 면역학적 입자 응집 저지법에 적합하지 않은 항체가 있는 것을 새롭게 알 수 있었다. 면역학적 입자 응집 저지법에 적합한 항체와 적합하지 않은 항체의 차이를 명확하게 하기 위해, 항체의 상호 작용의 해석 및 에피토프 해석을 실시하였다.
<실시예 3> 상호 작용의 해석
MaI4-08 및 MaI4-09 의 산생 항체와, 대조로서 MaI4-05 산생 항체 및 HP6025 를 1 ㎎/㎖ 가 되도록 조제하였다. 또 인간 혈청으로부터 정제한 1 ㎎/㎖ 의 IgG4 를 조제하였다. 주식회사 스미카 분석 센터의 프로토콜을 따라, IgG4 를 아민 커플링법으로 칩으로 고정화하고, Biacore 기종을 사용한 센서 그램 취득을 실시하였다. 얻어진 결합 속도 정수 (ka), 해리 속도 정수 (kd) 및 해리 정수 (KD) 는 표 11 과 같이 되었다.
[표 11]
3 종류의 항체 중, MaI4-05 산생 항체의 결합 속도 정수 (ka) 는 MaI4-08 및 MaI4-09 산생 항체의 10 분의 1 이하이고, HP6025 항체의 결합 속도 정수 (ka) 는 MaI4-08 및 MaI4-09 산생 항체의 100 분의 1 이하였다.
<실시예 4> 에피토프의 해석
Uniprot 로부터 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 아미노산 서열을 취득하였다 (P01861, 서열 번호 4). 얻어진 아미노산 서열을 부분적으로 결손시킨 각각 서열 번호 4 및 25 ∼ 35 로 나타내는 아미노산 서열 H1 ∼ 12 (도 14) 의 N 말단에 GST 태그를 연결한 펩티드를 설계하였다. H1 (서열 번호 4) 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역 전체 길이의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다. H2 는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 1 에서 274 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 25). H3 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 1 에서 220 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 26). H4 는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 1 에서 165 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 27). H5 는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 1 에서 110 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 28). H6 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 1 에서 55 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 29). H7 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 56 에서 327 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 30). H8 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 111 에서 327 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 31). H9 는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 166 에서 327 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 32). H10 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 221 에서 327 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 33). H11 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 275 에서 327 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 34). H12 는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 99 에서 220 번째까지의 아미노산 서열로 이루어지는 것이다 (서열 번호 35).
또, 인간 IgG4 중쇄 CH3 영역 중의 아미노산 서열 (H10, 서열 번호 33) 에 있어서, 인간 IgG4 특이 서열을 부분적으로 인간 IgG1 중쇄 정상 영역의 대응하는 아미노산에 부분적으로 치환시킨, 각각 서열 번호 36 ∼ 44 에 의해 나타나는 아미노산 서열 H31-39 (도 15) 의 N 말단에 GST 태그를 연결한 펩티드를 설계하였다. H31 은 H10 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 235 번째의 글루타민 잔기를 아르기닌 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 36). H32 는 H10 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 289 번째의 아르기닌 잔기를 리신 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 37). H33 은 H10 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 299 번째의 글루타민산 잔기를 글루타민 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 38). H34 는 H10 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 325 번째의 류신 잔기를 프롤린 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 39). H35 는 H10 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 235 번째의 글루타민 잔기를 아르기닌 잔기로, 289 번째의 아르기닌 잔기를 리신 잔기로, 299 번째의 글루타민산 잔기를 글루타민 잔기로, 325 번째의 류신 잔기를 프롤린 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 40). H36 은 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 221 내지 327 번째의 아미노산 서열 중의 IgG4 특이 서열을 모두 대응하는 IgG1 의 아미노산 서열로 치환한 것이다 (서열 번호 41). H37 은 H10 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 289 번째의 아르기닌 잔기를 리신 잔기로, 325 번째의 류신 잔기를 프롤린 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 42). H38 은 H10 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 289 번째의 아르기닌 잔기를 리신 잔기로, 299 번째의 글루타민산 잔기를 글루타민으로, 325 번째의 류신 잔기를 프롤린 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 43). H39 는 H36 의 아미노산 서열을 기초로, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 299 번째의 글루타민 잔기를 글루타민산 잔기로 치환한 것이다 (서열 번호 44).
설계한 각 아미노산 서열을 기초로, GenScript 사의 프로토콜에 의해 대장균에서의 단백질 발현에 적합한 염기 서열을 설계하고, 각 염기 서열을 삽입한 벡터 pGEX-6P-1 (GE 헬스케어·바이오사이언스) 을 제조하였다. 대장균 BL21 주에 제조한 발현 플라스미드를 도입하고 형질 전환체를 얻었다. 형질 전환체를 통상적인 방법으로 배양하고, IPTG 에 의한 단백질 발현을 유도하였다. 원심 분리로 집균 후, 통상적인 용해액으로 용해하고, 초음파 처리를 실시하였다. 얻어진 용해액 6 ㎕ 에 SDS 샘플 완충액 6 ㎕ 를 첨가하였다. 각 조제한 시료는 95 ℃ 에서 5 분간 가열 처리를 실시하였다. SDS 영동 완충액을 첨가한 5 ∼ 20 % 영동 겔 (아토) 의 각 웰에, 상기 대장균 파쇄 시료를 10 ㎕ 씩 첨가하였다. 또 분자량 스탠다드 (바이오래드) 도 동일하게 웰에 첨가하여 영동하였다. 영동 종료 후, 영동 겔을 전사 완충액으로 PVDF 멤브레인 (머크 밀리포어) 에 전사하였다. PVDF 멤브레인을 멤브레인 블로킹 완충액에 침지하고, 실온에서 30 분간 진탕시켰다. MaI4-08, MaI4-09, MaI4-05 산생 항체의 아미노기에 대해, POD 표지 키트 (도진 화학 연구소) 를 사용하여 POD 표지 처리를 실시하였다. 얻어진 표지 항체를 PBST 로 각각 1000 배 희석하였다. PVDF 멤브레인을 PBST 로 세정 후, 각각 조제한 상기 항체 용액을 PVDF 멤브레인에 첨가하고, 실온에서 1 시간 반응시켰다. PVDF 멤브레인을 PBST 로 세정 후, ECL Prime Western Blotting Detection Reagents (GE Healthcare) 를 사용하고 Image Quant Las4000 으로 시그널을 검출하였다.
그 결과, MaI4-08 및 MaI4-09 산생 항체의 어느 쪽도 H-1, H-7, H-8, H-9 및 H-10 에 있어서 시그널이 확인되었다. 따라서 MaI4-08 및 MaI4-09 산생 항체의 에피토프는, 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열에 존재하는 것이 분명해졌다 (도 16 및 도 17).
또한, MaI4-08, MaI4-09 산생 항체에 관해서는 299 번째의 글루타민산이 보존된 조건 (H-10, H-31, H-32, H-34, H-37) 에 있어서 시그널이 확인되었지만, 299 번째의 글루타민산을 글루타민으로 치환한 조건 (H-33, H-35, H-36, H-38) 에서는 시그널은 확인되지 않았다. 따라서 MaI4-08, MaI4-09 산생 항체의 에피토프는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 299 번째의 글루타민산 잔기를 포함하는 것을 필수로 하는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열에 존재하는 것이 분명해졌다 (도 18 및 도 19).
한편, MaI4-05 산생 항체는, 99 내지 110 번째의 아미노산 서열, 즉 힌지 영역을 포함하는 서열 (H-1, H-2, H-3, H-4, H-5, H-7, H-12) 에만 시그널이 확인되었다. 따라서, MaI4-05 산생 항체의 에피토프는 인간 IgG4 중쇄 정상 영역의 99 내지 110 번째의 아미노산 서열에 존재하는 것이 분명해졌다 (도 20).
H-1 내지 H-12, 그리고 H-31 내지 H-39 의 아미노산 서열을 이하에 나타낸다.
[표 12-1]
[표 12-2]
또, 각 시약의 조성은 이하와 같다.
[표 13]
산업상 이용가능성
이상에 상세하게 설명한 바와 같이, 본 발명의 면역 측정법에서는, 측정 대상 목적 물질 (인간 IgG4) 에 대해 반응성 및 선택성이 높은 항체를 이용하여 사용함으로써 반응계 중의 경합 물질 (IgG1 ∼ 3 등) 의 영향을 제외하고, 목적 물질을 특이적으로 정밀 측정할 수 있다. 본 발명의 항인간 IgG4 항체를 사용하면, 시료 중의 인간 IgG4 를 특이적으로 검출 측정하는 것이 가능하고, IgG4 관련 질환 등의 진단이나 임상 검사의 분야에 있어서 매우 유효하다.
<110> NITTO BOSEKI CO LTD
<120> anti-human IgG4 monoclonal antibody and measuring reagent for
IgG4 by using the antibody
<130> A00035JP01
<160> 44
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 2
<211> 326
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 3
<211> 377
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 4
<211> 327
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 5
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 VH
<400> 5
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ile Leu His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Gly Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Gly Tyr Gly Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Thr
115 120
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 VL
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 7
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 VH
<400> 7
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Val Met His Trp Met Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Arg Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ser Phe Tyr Tyr Gly Asn Ser His Val Leu Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 VL
<400> 8
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr His Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Thr Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 HCDR1
<400> 9
Ser Tyr Ile Leu His
1 5
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 HCDR2
<400> 10
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Lys Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 11
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 HCDR3
<400> 11
Ser Gly Gly Gly Tyr Gly Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 LCDR1
<400> 12
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Ser Leu Asn
1 5 10
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 LCDR2
<400> 13
Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 LCDR3
<400> 14
Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 HCDR1
<400> 15
Ser Ser Val Met His
1 5
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 HCDR2
<400> 16
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Arg Tyr Asn Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 HCDR3
<400> 17
Ser Phe Tyr Tyr Gly Asn Ser His Val Leu Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 LCDR1
<400> 18
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 LCDR2
<400> 19
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 LCDR3
<400> 20
Leu Gln Tyr Asp Glu Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 21
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 VH
<400> 21
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgaa ctggtaaagc ctgggacttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata catattcact agctatattt tgcactgggt gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattgcatat attaatcctt acaatgatgg tactaagtac 180
aaagagaagt tcaagggcaa gggcacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcagga 300
ggagggtatg gtaactacgc ctggtttgct tactggggcc cagggactct ggtcactgtc 360
tctaca 366
<210> 22
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-08 VL
<400> 22
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60
ctcacttgtc gggcaagtca ggacattggt agtagcttaa actggcttca gcaggaacca 120
gatggaacta ttaaacgcct gatctacgcc acatccagtt tagattctgg tgtccccaaa 180
aggttcagtg gcagtaggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag ccttgagtct 240
gaagattttg tagactatta ctgtctacaa tatgctagtt atcctcccac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa a 321
<210> 23
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 VH
<400> 23
gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattcact agctctgtta tgcactggat gaagcagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactagatac 180
aatgagaagt tccaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccaa cacagcctac 240
atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aagatcattc 300
tactatggta actcccacgt cctgtttgct tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
<210> 24
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MaI4-09 VL
<400> 24
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atatatccat ctctaggaga gagagtcact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat agttatttaa gttggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc cgaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatct 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggaatat 240
gaagatatgg gaatttatca ttgtctacag tatgatgagc ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccacgc tggaaataaa a 321
<210> 25
<211> 274
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2
<400> 25
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr
<210> 26
<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H3
<400> 26
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
210 215 220
<210> 27
<211> 165
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H4
<400> 27
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His
165
<210> 28
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H5
<400> 28
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
100 105 110
<210> 29
<211> 55
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H6
<400> 29
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala
50 55
<210> 30
<211> 272
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H7
<400> 30
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
1 5 10 15
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
20 25 30
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
35 40 45
Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
50 55 60
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
65 70 75 80
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
85 90 95
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
100 105 110
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
115 120 125
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
130 135 140
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
145 150 155 160
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
165 170 175
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
180 185 190
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
195 200 205
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
210 215 220
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
225 230 235 240
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
245 250 255
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
260 265 270
<210> 31
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H8
<400> 31
Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215
<210> 32
<211> 162
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H9
<400> 32
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
1 5 10 15
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
20 25 30
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu
35 40 45
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
50 55 60
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
85 90 95
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
100 105 110
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp
115 120 125
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
130 135 140
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu
145 150 155 160
Gly Lys
<210> 33
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H10
<400> 33
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 34
<211> 53
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H11
<400> 34
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
1 5 10 15
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
20 25 30
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
35 40 45
Leu Ser Leu Gly Lys
50
<210> 35
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H12
<400> 35
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H31
<400> 36
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 37
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H32
<400> 37
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H33
<400> 38
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 39
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H34
<400> 39
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H35
<400> 40
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 41
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H36
<400> 41
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H37
<400> 42
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 43
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H38
<400> 43
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H39
<400> 44
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
Claims (20)
- 인간 IgG4 에 대해 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로서, 상기 항체의 에피토프가, 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열에 존재하고, 299 번째의 글루타민산을 포함하는, 모노클로날 항체.
- 제 1 항에 있어서,
상기 인간 IgG4 에, 해리 정수 5.0 × 10-10 이하에서 결합하는 모노클로날 항체. - 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 인간 IgG4 에 대한 항체로서, 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 (Complementarity Determining Region ; 이하, CDR 이라고 기재한다) 1, 2 및 3 이 각각 서열 번호 9, 10 및 11 로 나타나는 아미노산 서열이고, 경쇄 가변 영역의 CDR1, 2 및 3 이, 각각 서열 번호 12, 13 및 14 로 나타나는 아미노산 서열인, 모노클로날 항체.
- 제 3 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열 번호 5 의 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역이 서열 번호 6 의 아미노산 서열을 갖는 모노클로날 항체. - 제 4 항에 있어서,
하이브리도마 MaI4-08 이 산생하는 모노클로날 항체. - 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 인간 IgG4 에 대한 항체로서, 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 CDR1, 2 및 3 이 각각 서열 번호 15, 16 및 17 로 나타나는 아미노산 서열이고, 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR1, 2 및 3 이, 각각 서열 번호 18, 19 및 20 으로 나타나는 아미노산 서열인 모노클로날 항체.
- 제 6 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열 번호 7 의 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 가변 영역이 서열 번호 8 의 아미노산 서열을 갖는 모노클로날 항체. - 제 7 항에 있어서,
하이브리도마 MaI4-09 가 산생하는 모노클로날 항체. - 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 기재된 모노클로날 항체의 항원 결합 부위를 2 개 갖는, 2 가 항체 분자 또는 2 가 항체 단편.
- 제 9 항에 있어서,
F(ab')2 인, 항체 단편. - 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 기재된 모노클로날 항체 혹은 제 9 항 또는 제 10 항에 기재된 2 가 항체 분자 또는 2 가 항체 단편을 사용하여, 시료 중의 인간 IgG4 를 측정 검출하는 방법.
- 제 11 항에 있어서,
면역학적 입자 응집 저지법인 방법. - 제 12 항에 있어서,
(1) 시료 중의 인간 IgG4 와 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 기재된 모노클로날 항체 혹은 제 9 항 또는 제 10 항에 기재된 2 가 항체 분자 또는 2 가 항체 단편을 결합시키고 ; 이어서
(2) 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편이 고정된 불용성 담체를 첨가하여, 시료 중의 인간 IgG4 와 결합하지 않았던 상기 모노클로날 항체 혹은 2 가 항체 분자 또는 2 가 항체 단편과의 사이에서 응집 반응을 일으키고, 그리고
(3) 응집된 불용성 담체를 검출함으로써, 시료 중의 인간 IgG4 를 검출 측정하는 방법. - 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 기재된 모노클로날 항체 혹은 제 9 항 또는 제 10 항에 기재된 2 가 항체 분자 또는 2 가 항체 단편을 포함하는, 인간 IgG4 의 측정 키트.
- 제 13 항에 기재된 방법을 위한 키트로서 ;
(1) 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 기재된 모노클로날 항체 혹은 제 9 항 또는 제 10 항에 기재된 2 가 항체 분자 또는 2 가 항체 단편 ;
(2) 단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편 ; 및
(3) 불용성 담체
를 포함하는 키트. - 제 15 항에 있어서,
(2) 단리 인간 IgG4 또는 그 펩티드 단편이, (3) 불용성 담체에 흡착되어 있는, 키트. - 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서,
(3) 불용성 담체가 라텍스 입자인, 키트. - 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
IgG4 관련 질환의 진단을 보조하기 위한, 방법. - 제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
IgG4 관련 질환 진단에 사용하기 위한, 키트. - 서열 번호 4 에 나타내는 인간 IgG4 의 중쇄 정상 영역의 221 번째 내지 327 번째의 아미노산 서열의 전부 또는 일부로 이루어지고, 299 번째의 글루타민산을 포함하는, 단리된 펩티드.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017132841 | 2017-07-06 | ||
JPJP-P-2017-132841 | 2017-07-06 | ||
PCT/JP2018/025441 WO2019009346A1 (ja) | 2017-07-06 | 2018-07-05 | 抗ヒトIgG4モノクローナル抗体、およびその抗体を利用したヒトIgG4測定試薬 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20200024304A true KR20200024304A (ko) | 2020-03-06 |
KR102661060B1 KR102661060B1 (ko) | 2024-04-25 |
Family
ID=64950125
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020207003516A KR102661060B1 (ko) | 2017-07-06 | 2018-07-05 | 항인간 IgG4 모노클로날 항체, 및 그 항체를 이용한 인간 IgG4 측정 시약 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11372001B2 (ko) |
EP (1) | EP3650547A4 (ko) |
JP (1) | JP6982226B2 (ko) |
KR (1) | KR102661060B1 (ko) |
CN (2) | CN111566214B (ko) |
TW (1) | TWI791551B (ko) |
WO (1) | WO2019009346A1 (ko) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111566214B (zh) | 2017-07-06 | 2024-03-08 | 日东纺绩株式会社 | 抗人IgG4单克隆抗体及利用该抗体的人IgG4测定试剂 |
EP3713508A4 (en) * | 2017-11-21 | 2021-01-20 | Intuitive Surgical Operations, Inc. | SYSTEMS AND PROCEDURES FOR MASTER / TOOL REGISTRATION AND CONTROL FOR INTUITIVE MOVEMENT |
CN114891110A (zh) * | 2020-12-31 | 2022-08-12 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 特异性结合人IgG4的蛋白及其应用 |
CN113311169A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-08-27 | 重庆中元汇吉生物技术有限公司 | 一种测定免疫球蛋白g4的试剂盒及其制备方法 |
WO2023028186A1 (en) * | 2021-08-27 | 2023-03-02 | Abbott Laboratories | Methods for detecting immunoglobulin g, subclass 4 (igg4) in a biological sample |
CN114807054B (zh) * | 2022-06-24 | 2022-09-13 | 北京索莱宝科技有限公司 | 小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株、抗体、抗体组合物及试剂盒 |
CN115327137B (zh) * | 2022-10-11 | 2023-01-17 | 苏州惠中生物科技有限公司 | 一种人免疫球蛋白g4亚型化学发光免疫检测试剂盒 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61286754A (ja) | 1985-06-12 | 1986-12-17 | Shionogi & Co Ltd | モノクロ−ナル抗ヒトIgG↓4抗体およびその製造法 |
JPH04350559A (ja) | 1991-05-28 | 1992-12-04 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 特異抗体の測定法 |
JP2001501579A (ja) | 1995-11-03 | 2001-02-06 | ザ・バインディング・サイト・リミテッド | 抗体の産生、及び抗体を含む医療的使用 |
JP2001337092A (ja) | 2000-05-26 | 2001-12-07 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 免疫学的測定方法及び測定用試薬 |
WO2008012944A1 (fr) | 2006-07-24 | 2008-01-31 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Procédé pour mesurer l'anticoagulation et réactif pour mesurer l'anticoagulation |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60228421A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-13 | Shionogi & Co Ltd | モノクロ−ナル抗ヒトIgG抗体およびその製造法 |
US8911726B2 (en) * | 2004-09-22 | 2014-12-16 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd | Stabilized human Igg4 antibodies |
GB0614780D0 (en) * | 2006-07-25 | 2006-09-06 | Ucb Sa | Biological products |
DK2975051T3 (da) | 2009-06-26 | 2021-04-26 | Regeneron Pharma | Let-at-isolere bispecifikke antistoffer med nativt immunoglobulinformat |
GB201203051D0 (en) * | 2012-02-22 | 2012-04-04 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
WO2017120222A1 (en) * | 2016-01-04 | 2017-07-13 | Cour Pharmaceuticals Development Company Inc. | Particles encapsulating fusion proteins containing linked epitopes |
JP6540524B2 (ja) | 2016-01-25 | 2019-07-10 | 王子ホールディングス株式会社 | 半透明性木目調延伸フィルム |
CN111566214B (zh) | 2017-07-06 | 2024-03-08 | 日东纺绩株式会社 | 抗人IgG4单克隆抗体及利用该抗体的人IgG4测定试剂 |
-
2018
- 2018-07-05 CN CN201880044906.XA patent/CN111566214B/zh active Active
- 2018-07-05 KR KR1020207003516A patent/KR102661060B1/ko active IP Right Grant
- 2018-07-05 EP EP18828757.7A patent/EP3650547A4/en active Pending
- 2018-07-05 WO PCT/JP2018/025441 patent/WO2019009346A1/ja unknown
- 2018-07-05 CN CN202410212910.XA patent/CN118459600A/zh active Pending
- 2018-07-05 US US16/628,217 patent/US11372001B2/en active Active
- 2018-07-05 JP JP2019527757A patent/JP6982226B2/ja active Active
- 2018-07-06 TW TW107123449A patent/TWI791551B/zh active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61286754A (ja) | 1985-06-12 | 1986-12-17 | Shionogi & Co Ltd | モノクロ−ナル抗ヒトIgG↓4抗体およびその製造法 |
JPH04350559A (ja) | 1991-05-28 | 1992-12-04 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 特異抗体の測定法 |
JP2001501579A (ja) | 1995-11-03 | 2001-02-06 | ザ・バインディング・サイト・リミテッド | 抗体の産生、及び抗体を含む医療的使用 |
JP2001337092A (ja) | 2000-05-26 | 2001-12-07 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 免疫学的測定方法及び測定用試薬 |
WO2008012944A1 (fr) | 2006-07-24 | 2008-01-31 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Procédé pour mesurer l'anticoagulation et réactif pour mesurer l'anticoagulation |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
APMIS 100: 615-622, 1992 (1992.07.) 1부.*< * |
Arthritis Rheumatol. 2014 Jan ; 66(1) : 213-7 |
Consensus statement on the pathology of IgG4-related disease (Modern Pathology 2012 25, 1181-1192) |
Epitope mapping of human immunoglobulin specific murine monoclonal antibodies with domain switched deleted and point mutated chimeric antibodies (Journal of Immunological Methods 158 1993 107-122) |
Front Immunol. 2014 ; 5 : 520 |
J Mol Biol. 2014 Feb 6 ; 426(3) : 630-44 |
N Engl J Med 2012 ; 366 : 539-551 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102661060B1 (ko) | 2024-04-25 |
TWI791551B (zh) | 2023-02-11 |
EP3650547A4 (en) | 2021-03-10 |
JPWO2019009346A1 (ja) | 2020-05-07 |
WO2019009346A1 (ja) | 2019-01-10 |
US11372001B2 (en) | 2022-06-28 |
TW201920274A (zh) | 2019-06-01 |
EP3650547A1 (en) | 2020-05-13 |
CN118459600A (zh) | 2024-08-09 |
US20210140973A1 (en) | 2021-05-13 |
JP6982226B2 (ja) | 2021-12-17 |
CN111566214B (zh) | 2024-03-08 |
CN111566214A (zh) | 2020-08-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102661060B1 (ko) | 항인간 IgG4 모노클로날 항체, 및 그 항체를 이용한 인간 IgG4 측정 시약 | |
CN105579471B (zh) | 结合人程序性死亡配体1(pd-l1)的抗体 | |
CN113330036B (zh) | 结合pd-l1和ox40的双特异性抗体 | |
AU2019384259A1 (en) | Specific antibody for AMH, and uses thereof | |
JP7315968B2 (ja) | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法及び対象におけるnashの検出方法 | |
CN115298216A (zh) | 抗体或其抗原结合片段、其制备方法及医药用途 | |
CN114106160A (zh) | 抗SARS-CoV-2病毒单克隆抗体及应用 | |
TWI741216B (zh) | 專一性抑制或減緩ptx3與ptx3受體結合之單株抗體或其抗原結合片段及其用途 | |
US11174310B2 (en) | Disulfide-type HMGB1-specific antibody, method for measuring disulfide-type HMGB1 and kit for said measurement, and measurement method capable of quantitating all of HMGB1 molecules including reduced HMGB1, disulfide-type HMGB1 and thrombin-cleavable HMGB1 and kit for said measurement | |
WO2019126194A1 (en) | Angptl8 assay and uses thereof | |
CN116284411B (zh) | 抗培重组人凝血因子VIII-Fc融合蛋白的抗体及其应用 | |
JP7366411B2 (ja) | ヒトαディフェンシンHD5を検出する方法及びキット、並びにこれらにおいて用いられる抗体 | |
JP7026282B1 (ja) | ヒトトロンボポエチンに対する抗体 | |
US20230331820A1 (en) | HSV gE ANTIBODIES | |
JP5585587B2 (ja) | 5.9kDaペプチドの免疫学的測定方法 | |
JP2023097737A (ja) | 試料中のhmgb1の測定方法及び測定試薬、抗hmgb1抗体を固定化した担体の非特異的凝集の抑制方法並びに試料中のhmgb1測定時の試薬ブランクの上昇の抑制方法 | |
JPWO2020158857A1 (ja) | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法及び測定キット | |
JP2011160696A (ja) | 修飾ヒトigf−1/eペプチドに対する抗体 | |
CN114106161A (zh) | 针对SARS-CoV-2冠状病毒S蛋白的抗体及其用途 | |
CN114106163A (zh) | SARS-CoV-2病毒中和抗体及其用途 | |
JP2011016773A (ja) | 抗ポリヒスチジンタグ抗体及びそれを用いた非特異反応の回避方法 | |
JP2005314397A (ja) | 抗コンドロモジュリン−1特異的抗体及びその利用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
AMND | Amendment | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
AMND | Amendment | ||
E601 | Decision to refuse application | ||
AMND | Amendment | ||
X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
GRNT | Written decision to grant |