KR20190045938A - 항-pd-1(cd279) 항체 - Google Patents

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KR20190045938A
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Abstract

본 개시 내용은 신규한 항-PD-1 항체, 상기 신규한 항체를 포함하는 조성물, 상기 항체를 코딩하는 핵산, 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 제공한다.

Description

항-PD-1(CD279) 항체
1. 관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 35 U.S.C. 제119(e)항-하에 2016년 9월 14일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/394,314호의 우선권을 주장하며, 그 내용은 본원에 참고로 인용되어있다.
2. 서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자 제출되며, 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2017년 8월 10일자로 생성된 상기 ASCII 복사본은 명칭이 381493-327WO_SL.txt이며, 크기가 33,195 바이트이다.
3. 기술 분야
본 출원은 특히, 신규한 항-PD-1 항체, 새로운 항체를 포함하는 조성물, 항체를 코딩하는 핵산, 및 이를 제조 및 사용하는 방법에 관한 것이다.
암 치료법은 수술, 방사선 및 화학요법을 포함하는 광범위한 치료 접근법을 포함한다. 다양한 접근법은 암을 치료하기 위해 의료 종사자가 이용할 수 있는 광범위한 치료선택을 허용하지만, 현존하는 치료법은 다수의 단점들로 고통받고 있는데, 예컨대 정상적이고 건강한 세포보다 암 세포를 표적화하는 선택성이 결여되어 있고, 암에 의한 치료에 대한 저항성이 생성된다.
정상 세포보다 우선적으로 암세포의 세포 과정을 방해하는, 표적 치료제를 기반으로 한 최근 접근법은 방사선 치료와 같은 비-표적 치료법에 비해 부작용이 적은 화학요법을 유도했다.
암 면역요법은 현존하는 치료 표준을 보완하는 유망한 치료법으로 부상했다. 예를 들어, Miller, 등 Cancer Cell, 27, 439-449(2015)를 참조한다. 상기 면역요법은 암세포를 죽이기 위해 면역계를 조절하는데 사용되는 항체의 개발을 포함한다.
예를 들어, 타입 I 세포 표면 수용체인 PD-1과 그의 2개의 리간드 PD-L1 또는 PD-L2 중 어느 하나와의 상호작용은 후속하는 항원 수용체-유도 세포 활성화를 제한하는 우세한 음성 체크포인트 신호를 초래한다. PD-1에 대한 리간드는 면역계의 항원-제시 세포를 포함하여, 다양한 조직 및 세포 유형에서 차별적으로 발현되며, 많은 유형의 종양 세포에서 상향조절된다. 종양 미세환경내 PD-L1의 상향조절은 숙주에 의한 방어성 항-종양 면역 반응을 파괴하는 종양의 제안된 기전이다. 수용체와 그의 리간드 중 어느 하나와의 상호작용을 차단하는 PD-1로 향하는 항체는 음성 시그널링의 억제를 초래한다. PD-1 매개 체크포인트 신호의 시험관내 억제는 항원-특이적 T 세포 활성화를 연장시키는 것으로 입증되었다. 생체내 PD-1 차단은 동종 마우스 종양 모델 및 인간 임상 시험에서 항-종양 면역 반응을 향상시키는 것으로 나타났다.
고형 종양 환자에서의 항-종양 면역 반응은 항-PD-1 치료에 의해 향상되었다. 절제불가능한 또는 전이성 흑색종 및 전이성 비-소세포 폐암과 같은 질병을 치료하기 위해 항-PD-1 모노클로날 항체: 니볼루맙(OPDIVO®) 및 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®)가 미국 및 유럽 연합에서 승인 및 판매되었다. 이 약제로 환자를 치료한 결과, 무진행 생존 및/또는 전체 생존율의 개선에 의해 측정한 바와 같은 항-종양 반응이 초래되었다.
OPDIVO®를 종래의 화학요법과 비교하는 임상 시험에서 치료-무경험(naive) 환자 집단에서 진행성 폐암의 진행을 늦추는 OPDIVO®의 최근 실패는 기존의 치료적 치료 표준을 보완하기 위한 대안적인 접근법 및 추가의 암 치료의 필요성을 강조한다.
본 개시 내용은 PD-1에 특이적으로 결합하는 항-PD-1 항체 및 이의 결합 단편을 제공한다. 예시적인 항-PD-1 항체의 중쇄 및 경쇄의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열뿐만 아니라 예시적인 CDR의 아미노산 서열이 하기 상세한 설명에 제공된다. 본원에서 제공된 항체는 그의 리간드(PD-L1, SEQ ID NO: 3; PD-L2, SEQ ID NO: 4) 중 어느 하나와 PD-1 수용체의 상호작용을 방해하여, 음성 시그널링의 억제 및 적응 면역 반응의 상향조절을 초래한다.
항-PD-1 항체는 당 업계에 공지된 바와 같이, 항체의 성질을 변화시키는 변형 및/또는 돌연변이, 예컨대 반감기 증가, ADCC 증가 또는 감소 등을 포함할 수 있다.
본 개시 내용의 항-PD-1 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산이 본 명세서에 제공되며, 핵산을 포함하는 벡터도 제공된다. 또한, 뉴클레오타이드 서열을 발현하도록 조작된 진핵 세포(예를 들어, 포유류) 숙주 세포뿐만 아니라 개시된 항-PD-1 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된 원핵 및 진핵 숙주 세포가 본 명세서에 제공된다. 숙주 세포를 배양하고 항체를 회수함으로써 항체를 생산하는 방법이 또한 제공되며, 하기 상세한 설명에서 추가로 논의된다.
또 다른 양태에서, 본 개시 내용은 본원에 기재된 항-PD-1 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 일반적으로 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 항-PD-1 항체 및/또는 이의 염, 및 하나 이상의 부형제, 담체 또는 희석제를 포함한다.
본 개시 내용은 항-PD-1 항체에 의해 고형 종양 또는 혈액 악성종양으로 진단된 대상체, 예컨대 인간 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 일반적으로 치료적 이득을 제공하는데 효과적인 본원에 기재된 유효량의 항-PD-1 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 대상체는 새로 진단된, 재발된, 또는 재발 및 불응성일 수 있는 다수의 고형 종양 또는 혈액 악성종양 중 하나로 진단될 수 있다. 항-PD-1 항체는 전형적으로 정맥내 주입으로서 주 2회, 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 또는 8주에 1회 투여된다.
항-PD-1 항체는 단일 치료제(단일 요법)로서 또는 다른 치료제에 대한 보조제로서 또는 다른 치료제와 함께, 전형적으로는 필수적이지는 않지만 고형 종양 또는 혈액 악성종양의 치료에 사용되는 것과 병용하여 투여될 수 있다. 치료제는 전형적으로 승인된 용량, 투여 경로 및 투여 빈도로 사용될 것이지만, 더 적은 용량으로 사용될 수 있다.
항-PD-1 항체는 정맥내 주입 및/또는 주사, 종양내 주사 및 피하 주사를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다양한 투여 경로 또는 투여 방식을 통해 투여될 수 있다. 투여되는 양은 당해 분야에 잘 공지된 바와 같이, 투여 경로, 투여 스케줄, 치료되는 암의 유형, 치료되는 암의 단계, 및 환자의 연령 및 체중과 같은 다른 파라미터에 좌우될 것이다. 치료적 이득을 제공할 것으로 예상되는 특정 예시적인 투여 스케쥴은 상세한 설명에 제공된다.
도 1a~1b는 인간 PD-1(SEQ ID NO: 1), 뮤린 PD-1(SEQ ID NO: 2), 인간 PD-L1(SEQ ID NO: 3) 및 인간 PD-L2(SEQ ID NO: 4)의 아미노산 서열을 도시한다. 도 1a는 인간 및 뮤린 PD-1의 서열을 도시하고; 도 1b는 인간 PD-L1 및 PD-L2의 서열을 도시한다.
도 2는 본 개시 내용의 예시적인 항-PD-1 항체에서 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열을 제공한다.
도 3a~3c는 예시적인 인간화된 항체 Hu12A11.2b1 및 CDR-H3의 Kabat 99에서의 그의 점 돌연변이에 대한 산화 및 가변 온도 조건의 효과를 나타낸다. 도 3a는 30일 동안 또는 산화 조건(1% 과산화수소, "1% HP"; 1% tert-부틸 하이드로퍼옥사이드, "1% TBHP")을 겪은 후 -80, 5, 25 또는 40℃에서 저장된 Hu12A11.2b1의 Jurkat 세포에서 PD-1에 대한 결합을 도시하며; 도 3b는 항-PD-1 항체 Hu12A11.2b1, Hu12A11.2b2, Hu12A11.2b3, 및 Hu12A11.2b4의 결합을 도시하며; 도 3c는 30일 동안 -80, 5, 25 또는 40℃에서 배양한 후 Jurkat 세포에서 PD-1에 대한 Hu12A11.2b4의 결합을 도시한다.
도 4a 및 4b는 혼합 백혈구 반응(MLR) 및 파상풍 톡소이드 항원 리콜 분석에서 니볼루맙(nivolumab) 및 Hu12A11.2b4의 생물학적 활성을 나타낸다. 도 4a는 혼합 백혈구 배양에서 10 μg/mL의 니볼루맙, Hu12A11.2b4, 또는 이소타입 대조군으로 처리한 후 IL-2 또는 인터페론-감마(IFN-γ) 수준의 증진을 나타낸다. 도 4b는 파상풍 톡소이드 반응 분석에서 IFN-γ 증진에 대한 니볼루맙, Hu12A11.2b4 또는 이소타입 대조군의 용량-의존적 반응을 나타낸다.
본 개시 내용은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 및 단편, 상기 항체를 포함하는 조성물, 항-PD-1 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 항체를 생산할 수 있는 숙주 세포, 상기 항체 및 결합 단편을 제조하는데 유용한 방법 및 조성물, 및 이를 사용하는 다양한 방법에 관한 것이다.
당업자라면 인식할 수 있는 바와 같이, 항체는 사실상 "모듈식"이다. 본 개시 내용 전반에 걸쳐, 항체를 구성하는 다양한 "모듈"의 다양한 특정 구현예가 기재되어있다. 특정 비-제한적인 예로서, VH CDR, VH 사슬, VL CDR 및 VL 사슬의 다양한 특정 구현예가 기재되어있다. 각각의 특정 조합이 개별적으로 명시적으로 기술된 것처럼 특정 구현예 모두 서로 조합될 수 있는 것으로 의도된다.
7.1. 약어
본원에 기술된 항체, 결합 단편, 및 폴리뉴클레오타이드는 많은 구현예에서 각각의 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 기술된다. 달리 명시하지 않는 한, 폴리펩타이드 서열은 N→C 배향으로 제공되며; 폴리뉴클레오타이드 서열은 5'→3' 배향으로 제공된다. 폴리펩타이드 서열의 경우, 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 유전적으로 인코딩된 아미노산에 대한 통상의 3-문자 또는 1-문자 약어가 사용될 수 있다.
[표 1]
Figure pct00001
특정 서열은 특정 부류 (예를 들어, 지방족, 소수성 등)에 속하는 아미노산 잔기를 특정하는 구조식에 의해 정의된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 유전적으로 코딩된 아미노산이 속하는 다양한 부류가 하기 표 2에 기재되어있다. 일부 아미노산은 하나 이상의 부류에 속할 수 있다. 설프하이드릴기를 함유한 시스테인 및, 구조적으로 제한된 프롤린은 부류를 지정하지 않는다.
[표 2]
Figure pct00002
본 명세서에 개시된 다양한 예시적 항체들에 대하여 사용된 약어들은 하기 표 3에 제공되어 있다:
[표 3]
Figure pct00003
7.2. 정의
본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 개시 내용과 관련하여 사용되는 과학적 및 기술적 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 가져야 한다.
7.3. 항-PD-1 항체 및 결합 단편
일 양태에서, 본 개시 내용은 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1) 수용체(PDCD1, CD279, PD1, SLEB2 또는 SLE1로도 공지되어 있음)에 특이적으로 결합하는 항체 및/또는 이의 결합 단편에 관한 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "항체"(Ab)는 특정 항원, 여기서는 PD-1에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, 본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 인간 PD-1에 결합하여, 면역계를 조절한다. 결과적으로 일어나는 면역계 반응은 종양 세포에 세포독성을 나타낸다. 본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서 초가변 영역으로도 공지되어 있는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분을 프레임워크(FR)라고 한다. 당 업계에 공지된 바와 같이, 항체의 초가변 영역을 나타내는 아미노산 위치/경계는 당 업계에 공지된 다양한 정의 및 문맥에 따라 다양할 수 있다. 가변 도메인 내의 일부 위치는 이들 위치가 한 세트의 기준하에 초가변 영역 내에 있는 것으로 간주될 수 있는 반면, 다른 세트의 기준하에 초가변 영역 외부에 있는 것으로 간주될 수 있다는 점에서, 하이브리드 초가변 위치로 보여질 수 있다. 이러한 위치 중 하나 이상은 확장된 초가변 영역에서도 발견될 수 있다. 본 개시 내용은 이러한 하이브리드 초가변 위치에 변형을 포함하는 항체를 제공한다. 본래의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 β-시트 구조를 채택하여 4개의 FR 영역을 포함하며, β-시트 구조를 연결하고 일부 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3개의 CDR로 연결된다. 각 사슬 내의 CDR은 FR 영역에 의해 근접하여 함께 유지되고, 다른 사슬의 CDR과 함께 항체의 표적 결합 부위의 형성에 기여한다. 문헌[Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987)]을 참조한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 면역글로불린 아미노산 잔기의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, Kabat 등의 면역글로불린 아미노산 잔기 넘버링 시스템에 따라 행해진다.
본 개시 내용의 항체는 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 단쇄 항체 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는 본질적으로 폴리클로널, 모노클로널, 유전자 조작되고, 및/또는 다르게 변형될 수 있다. 다양한 구현예에서, 항체는 항체의 불변 영역의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역은 IgA(예를 들어, IgA1 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4) 및 IgM으로부터 선택되는 이소타입이다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 항체는 IgG1을 포함한다. 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 IgG2를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 IgG4를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항체의 "불변 영역"은 인간 IgG1에서 D356E 및 L358M, 또는 A431G와 같은 천연 불변 영역, 알로타입 또는 천연 변이체를 포함한다. 예를 들어, Jefferis and Lefranc, MAbs, 1(4): 332-338 (Jul-Aug 2009)를 참조한다.
항-PD-1 항체의 경 불변 영역은 카파 (κ)경 영역 또는 람다 (λ) 영역일 수 있다. λ 경 영역은 공지된 서브타입 중 임의의 것, 예를 들어 λ1, λ2, λ3, 또는 λ4일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 카파 (κ) 경 영역을 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "모노클로널 항체"는 하이브리도마 기술을 통해 생성되는 항체에 제한되지 않는다. 모노클로널 항체는 임의의 진핵세포, 원핵세포 또는 파지 클론을 비롯한 단일 클론으로부터, 당 업계에서 이용가능한 또는 공지된 임의의 수단에 의해 유래된다. 모노클로널 항체를 하이브리도마, 재조합 및 파지 디스플레이 기술 또는 그들의 조합의 이용을 포함하는 해당 분야에 알려져 있는 매우 다양한 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 인간에서의 항-PD-1 항체의 생체내 사용을 포함하는 본 개시 내용의 많은 용도에서, 키메라, 인간화된, 또는 인간 항체가 적합하게 사용될 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "키메라" 항체는 비-인간 면역글로불린, 예컨대 랫트 또는 마우스 항체로부터 유도된 가변 서열, 및 전형적으로 인간 면역글로불린 주형으로부터 선택된 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 항체를 나타낸다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당 업계에 공지되어 있다. 예를 들어, Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7; Oi 등, 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies 등, 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; 미국 특허 제5,807,715호; 제4,816,567호; 및 제4,816,397호를 참조한다.
비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유도된 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린이다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이며, 여기서 CDR 영역 모두 또는 실질적으로 모두는 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하며, FR 영역 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화된 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 컨센서스 서열의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체 인간화 방법은 당 업계에 공지되어 있다. 예를 들어, Riechmann 등, 1988, Nature 332:323-7; Queen 등의 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 및 제6,180,370호; EP239400; PCT 공보 WO 91/09967; 미국 특허 제5,225,539호; EP592106; EP519596; Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498; Studnicka 등, 1994, Prot. Eng. 7:805-814; Roguska 등, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973; 및 미국 특허 제5,565,332호를 참조한다.
"인간 항체"는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하며, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대해 트랜스제닉인 동물로부터 분리된 항체를 포함하고, 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는 항체를 포함한다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 사용하는 파지 디스플레이 방법을 포함하는 당 업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 미국 특허 제4,444,887호 및 제4,716,111호; 및 PCT 공보 WO 98/46645; WO 98/50433; WO 98/24893; WO 98/16654; WO 96/34096; WO 96/33735; 및 WO 91/10741을 참조한다. 인간 항체는 또한 기능적 내인성 면역글로불린을 발현할 수 없지만 인간 면역글로불린 유전자를 발현할 수 있는 트랜스제닉 마우스를 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, PCT 공보 WO 98/24893; WO 92/01047; WO 96/34096; WO 96/33735; 미국 특허 제5,413,923호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,569,825호; 제5,661,016호; 제5,545,806호; 제5,814,318호; 제5,885,793호; 제5,916,771호; 및 제5,939,598호를 참조한다. 또한, LakePharma, Inc. (Belmont, CA) 또는 Creative BioLabs (Shirley, NY)와 같은 회사는 위에서 설명한 기술과 유사한 기술을 사용하여 선택된 항원에 대한 인간 항체를 제공할 수 있다. 선택된 에피토프를 인식하는 완전 인간 항체는 "안내된 선택"으로 지칭되는 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 접근법에서, 선택된 비-인간 모노클로널 항체, 예를 들어 마우스 항체를 사용하여, 동일한 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체의 선택을 유도한다 (Jespers 등, 1988, Biotechnology 12:899-903 참조).
본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 전장(온전한) 항체 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시 내용은 또한 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있는 항-PD-1 결합 단편을 포함한다. 항체 결합 단편의 예는 한 예로서 포함하며, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 단일 사슬 Fv 단편 및 단일 도메인 단편을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.
Fab 단편은 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복실 말단에 약간의 잔기를 부가함으로써 Fab 단편과 상이하다. F(ab') 단편은 F(ab')2 펩신 분해 산물의 힌지 시스테인에서 디설파이드 결합의 절단에 의해 생성된다. 항체 단편의 추가적인 화학적 커플링은 당업자에게 공지되어 있다. Fab 및 F(ab')2 단편은 온전한 항체의 Fc 단편이 없으며, 동물의 순환으로부터보다 신속하게 제거되며, 온전한 항체보다 덜 비-특이적인 조직 결합을 가질 수 있다(예를 들어, Wahl 등. 1983, J. Nucl. Med. 24:316을 참조).
"Fv" 단편은 완전한 표적 인식 및 결합 부위를 함유하는 항체의 최소 단편이다. 이러한 영역은 단단하게 비-공유적으로 회합된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체(VH-VL 이량체)로 이루어진다. VH-VL 이량체의 표면 상에 표적 결합 부위를 정의하기 위해 각 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하는 것이 이 구성에 있다. 종종, 6개의 CDR은 항체에 표적 결합 특이성을 부여한다. 그러나 어떤 경우에는 단일 가변 도메인 (또는 표적에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 전체 결합 부위보다 낮은 친화도에서도 표적을 인식하고 결합할 수 있는 능력을 가질 수 있다.
"단쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 결합 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 이들 도메인은 단일의 폴리펩타이드 사슬에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩타이드는 scFv가 표적 결합에 대해 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다.
"단일 도메인 항체"는 PD-1에 대하여 충분한 친화성을 나타내는 단일의 VH 또는 VL 도메인으로 이루어진다. 구체적인 구현예에서, 단일 도메인 항체는 낙타화 항체이다(예를 들어, 문헌[Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38] 참조).
본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 유도체화된 항체를 포함한다. 예를 들어, 제한적이지는 않지만, 유도체화된 항체는 전형적으로 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질 분해성 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 결합에 의해 변형된다. 특정 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 튜니카마이신(tunicamycin)의 대사 합성 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 공지된 기술에 의해 수많은 화학적 변형 중 임의의 것이 수행될 수 있다. 또한, 유도체는 예를 들어, ambrx 기술을 사용하여, 하나 이상의 비-천연 아미노산을 함유할 수 있다 (예를 들어, Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2 참조).
항-PD-1 항체 또는 결합 단편은 적어도 하나의 불변 영역-매개된 생물학적 효과기 기능을 변경하도록 그의 서열이 변형된 항체 또는 단편일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 변형되지 않은 항체와 비교하여 적어도 하나의 불변 영역-매개된 생물학적 효과기 기능을 감소시키도록 변형될 수 있으며, 예를 들어, 하나 이상의 Fc 수용체(FcγR), 예컨대, FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA 및/또는 FcγRIIIB에 대한 감소된 결합을 포함한다. FcγR 결합은 FcγR 상호작용에 필요한 특정 영역에서 항체의 면역글로불린 불변 영역 세그먼트를 돌연변이시킴으로써 감소될 수 있다(예를 들어, Canfield and Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491; 및 Lund 등, 1991, J. Immunol. 147:2657-2662 참조). 항체의 FcγR 결합 능력의 감소는 또한 FcγR상호작용에 의존하는 다른 효과기 기능, 예컨대 옵소닌화, 식균작용 및 항원-의존성 세포의 세포독성("ADCC")을 감소시킬 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 결합 단편은 예를 들어 FcγR 상호작용을 증진시키기 위해 변형되지않은 항체와 관련하여 적어도 하나의 불변 영역-매개된 생물학적 효과기 기능을 획득 또는 개선하도록 변형된 항체를 포함한다(예를 들어, 미국 특허 출원 제2006/0134709호 참조). 예를 들어, 본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 상응하는 야생형 불변 영역보다 큰 친화도로 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA 및/또는 FcγRIIIB와 결합하는 불변 영역을 가질 수 있다.
따라서, 본 개시 내용의 항체는 증가된 또는 감소된 옵소닌화, 식균작용 또는 ADCC를 초래하는 생물학적 활성의 변화를 가질 수 있다. 이러한 변경은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, ADCC 활성을 감소시키는 항체의 변형은 미국 특허 제5,834,597호에 기재되어 있다. 예시적인 ADCC 하강 변이체는 잔기 234 및 237(EU 넘버링 사용)이 알라닌으로 치환된 "돌연변이체 3"(미국 특허 제5,834,597호의 도 4에 도시된 "M3"으로도 공지되어 있음)에 상응한다. 돌연변이 3("M3"으로돌연변이체 3("M3"으로도 공지되어 있음) 변이는 많은 항체 이소타입, 예를 들어 IgG2에서 사용될 수 있다.
항-PD-1 항체의 FcγR 결합 및/또는 ADCC 효과기 기능을 변형시킬 수 있는 추가적인 치환은 Fc 영역에서의 K322A 치환 또는 L234A 및 L235A 이중 치환을 포함한다. 예를 들어, Hezareh, 등 J. Virol., 75(24): 12161-12168(2001)을 참조한다.
일부 구현예에서, 본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 푸코스의 수준이 낮거나 또는 결여되어 있다. 푸코스가 결여된 항체는 특히 항체의 저용량에서 증강된 ADCC 활성과 상관관계가 있다. 문헌 [Shields 등, 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740; Shinkawa 등, 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73]을 참조한다. 푸코스-적은 항체를 제조하는 방법은 랫트 골수종 YB2/0 세포 (ATCC CRL 1662)에서의 성장을 포함한다. YB2/0 세포는 폴리펩타이드의 푸코실화에 필요한 효소인 α-1,6-푸코실트랜스퍼라제를 코딩하는 FUT8 mRNA의 낮은 수준을 발현한다.
본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 상응하는 야생형 CH2 또는 Fc 영역의 결합과 비교하여 FcγRIIB에 대한 결합을 증가시키고, 및/또는 FcγRIIIA에 대한 결합을 감소시키는 아미노산 치환을 포함하는 변형된 (또는 변이체) CH2 도메인 또는 전체 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 변이체 CH2 또는 변이체 Fc 도메인은 미국 특허 출원 제2014/0377253호에 기술되어 있다. 변이체 CH2 또는 변이체 Fc 도메인은 전형적으로 위치 263, 위치 266, 위치 273 및 위치 305에서 하나 이상의 치환을 포함하며, Fc 도메인에서 잔기의 넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 야생형 CH2 도메인에 비해 V263L, V266L, V273C, V273E, V273F, V273L, V273M, V273S, V273Y, V305K, 및 V305W로부터 선택된 하나 이상의 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, CH2 도메인의 하나 이상의 치환은 인간 IgG1의 CH2 도메인에 비해, V263L, V273E, V273F, V273M, V273S, 및 V273Y로부터 선택된다. 예를 들어, IgG1 CH2 도메인의 하나 이상의 치환은 V273E일 수 있다. 또 다른 특정 구현예에서, 본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 아미노산 치환 V263L을 포함하는 변이체 IgG1 힌지 영역을 포함한다.
상응하는 야생형 CH2 또는 Fc 영역의 결합과 비교하여 FcγRIIB에 대한 증가된 결합 및/또는 FcγRIIIA에 대한 감소된 결합을 부여할 수 있는 변이체 CH2 또는 변이체 Fc 도메인의 다른 예는 문헌 [Vonderheide, 등 Clin. Cancer Res., 19(5), 1035-1043 (2013)]에서 발견된 것들, 예컨대 인간 IgG1의 S267E 또는 S267E/L328F을 포함한다.
인간 IgG4 불변 영역을 포함하는 항-PD-1 항체 또는 결합 단편은 Fab 아암(arm) 교환을 방지하는 것으로 보고된 S228P 변이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Silva, JP, 등 Journal of Biological Chemistry, 290(9), 5462-5469 (2015)]을 참조한다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 또는 결합 단편은 예를 들어, FcRn 상호작용과 관련된 특정 영역에서 면역글로불린 불변 영역 세그먼트를 돌연변이시킴으로써 태아 Fc 수용체, FcRn에 대한 그의 결합 친화도를 증가 또는 감소시키는 변형을 포함한다 (예를 들어, WO 2005/123780 참조). 특정 구현예에서, IgG 부류의 항-PD-1 항체는 중쇄 불변 영역의 아미노산 잔기 250, 314 및 428 중 적어도 하나가 단독으로, 또는 그의 임의의 조합으로, 예컨대, 위치 250 및 428, 또는 위치 250 및 314, 또는 위치 314 및 428, 또는 위치 250, 314 및 428에서 치환되도록 돌연변이되며, 위치 250 및 428은 특정 조합이다. 위치 250에 대해, 치환된 아미노산 잔기는 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 라이신, 류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 세린, 발린, 트립토판 또는 티로신을 포함하지만 이에 한정되지 않는 트레오닌 이외의 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 위치 314에 대해, 치환된 아미노산 잔기는 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 라이신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판 또는 티로신을 포함하지만 이에 제한되지 않는 류신 이외의 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 위치 428에 대해, 치환된 아미노산 잔기는 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 라이신, 류신, 아스파라긴, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판 또는 티로신을 포함하지만 이에 한정되지 않는 메티오닌 이외의 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. Fc 효과기 기능을 변형시키는 것으로 알려진 예시적인 치환은 Fc 치환 T250Q와 조합하여 발생할 수 있는 Fc 치환 M428L이다. 적합한 아미노산 치환의 추가적인 특정 조합이 미국 특허 제7,217,797호의 표 1에 확인되어있다. 상기 돌연변이는 항체를 분해로부터 보호하고 반감기를 증가시키는 FcRn에 대한 결합을 증가시킨다.
항-PD-1 항체는 예를 들어 Jung 및 Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10:9, 959-966; Yazaki 등, 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. Epub 2004 Aug 17; 및 미국 특허 출원 제2007/0280931호에 기재된 바와 같이 그의 CDR 중 하나 이상에 삽입된 하나 이상의 아미노산을 가질 수 있다.
인간 PD-1에 대해 높은 친화성을 갖는 항-PD-1 항체는 치료 및 진단 용도에 바람직할 수 있다. 따라서, 본 개시 내용은 인간 PD-1에 대해 높은 결합 친화성을 갖는 항체를 고려한다. 구체적인 구현예에서, 인간 PD-1에 결합하는 항-PD-1 항체는 적어도 약 100 nM의 친화도로 결합하지만, 더 큰 친화도, 예를 들어, 적어도 약 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.1 nM, 0.01 nM 또는 훨씬 더 높은 친화도를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 100 nM 범위의 친화도, 또는 임의의 상기 값 사이의 범위의 친화도로 인간 PD-1에 결합한다.
인간 PD-1에 대한 항-PD-1 항체의 친화도는 당 업계에 공지된 기술 또는 본 명세서에 기재된 기술, 예컨대 예를 들어 제한없이, ELISA, 등온 적정 열량계(ITC), 표면 플라스몬 공명 또는 형광 편광 분석을 사용하여 측정될 수 있다.
항-PD-1 항체는 일반적으로 VH CDR#1, VH CDR#2, 및 VH CDR#3으로서 본 명세서에서 (N→C 순서로) 언급되는 3개의 상보성 결정 영역("CDR")을 갖는 가변 영역(VH)을 포함하는 중쇄, 및 VL CDR#1, VL CDR#2, 및 VL CDR#3으로서 본 명세서에서 (N→ C 순서로) 언급되는 3개의 상보성 결정 영역을 갖는 가변 영역 (VL)을 포함하는 경쇄를 포함한다. 예시적인 항-PD-1 항체의 중쇄 및 경쇄의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열뿐만 아니라 예시적인 CDR의 아미노산 서열이 본 명세서에 제공된다. 항-PD-1 항체의 특정 구현예는 인간 PD-1을 상기 항체와 결합시키는데 경쟁하는 항체뿐만 아니라 상기 예시적인 CDRs 및/또는 VH 및/또는 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간에게 투여하기에 적합하다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체의 CDR의 아미노산 서열은 하기 서열로부터 선택된다:
Figure pct00004
상기 CDR을 갖는 항-PD-1 항체의 특정 예시적인 구현예가 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NOS: 11, 12, 13, 14, 15, 및 16의 CDR을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NOS: 11, 12, 21, 14, 15, 및 16의 CDR을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NOS: 11, 12, 22, 14, 15, 및 16의 CDR을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NOS: 11, 12, 23, 14, 15, 및 16의 CDR을 갖는다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체의 각 CDR은, 다른 것과 독립적으로, 표 3에 제공된 항체의 각각의 CDR에 연속적으로 상응하도록 선택된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 IgG이고, 표 3에 제공된 항체의 VH 및 VL에 연속적으로 상응하는 VH 및 VL을 갖는다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 31에 순서대로 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 41에 순서대로 상응하는 VL 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 32에 순서대로 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42에 순서대로 상응하는 VL 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 33에 순서대로 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42에 순서대로 상응하는 VL 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 34에 순서대로 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42에 순서대로 상응하는 VL 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 35에 순서대로 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42에 순서대로 상응하는 VL 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 36에 순서대로 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42에 순서대로 상응하는 VL 사슬을 포함한다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체에서의 VH 또는 VL 서열의 특정 돌연변이는 본 개시 내용의 범위 내에서 항-PD-1 항체를 제공한다고 당업자에 의해 이해될 것이다. 돌연변이는 유의한 항-PD-1 활성을 유지하면서 본 명세서에 개시된 바와 같은 VH 또는 VL 서열로부터의 아미노산 치환, 첨가 또는 결실을 포함할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 VH 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 93%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 항-PD-1 항체는 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 VH 서열과 비교하여 최대 8개, 최대 7개, 최대 6개, 최대 5개, 최대 4개, 최대 3개 또는 최대 2개의 돌연변이를 갖는 VH 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 VH 서열과 비교하여 5개 이하, 4개, 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하의 돌연변이를 갖는 VH 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 VL 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 93%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함한다. 항-PD-1 항체는 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 VL 서열과 비교하여 최대 8개, 최대 7개, 최대 6개, 최대 5개, 최대 4개, 최대 3개 또는 최대 2개의 돌연변이를 갖는 VL 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 VL 서열과 비교하여 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하의 돌연변이를 갖는 VL 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 하기에 따른 중쇄 아미노산 서열:
EIQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTHYGMNWVRQAPGQGLEWVGWVNTYTGEPTYADDFKGRLTFTLDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTREGEGLGFGDWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:51);
및 하기에 따른 경쇄 아미노산 서열을 포함하며:
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSHGDTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPVTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:61),
상기 밑줄 친 아미노산은 CDR을 나타내고, 이탤릭체 아미노산은 불변 영역을 나타낸다.
항-PD-1 항체의 서열에 대한 번역 후 변형, 예컨대 항체 중쇄의 C-말단상의 하나 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 그 이상의) 아미노산 잔기의 절단이 발생할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 하기에 따른 중쇄 아미노산 서열:
EIQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTHYGMNWVRQAPGQGLEWVGWVNTYTGEPTYADDFKGRLTFTLDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTREGEGLGFGDWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:52);
및 하기에 따른 경쇄 아미노산 서열을 포함하며:
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSHGDTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPVTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:61),
상기 밑줄 친 아미노산은 CDR을 나타내고, 이탤릭체 아미노산은 불변 영역을 나타낸다.
항-PD-1 항체의 추가적인 번역 후 변형은 글리코실화를 포함할 수 있다. 일반적인 바이안테너리 복합체는 2개의 N-아세틸글루코사민(GlcNAc), 3개의 만노스, 및 α-6 만노스와 α-3 만노스에 β-1,2 결합되어 2개의 안테나를 형성하는 2개의 GlcNAc 잔기를 갖는 핵심 구조로 구성될 수 있다. 하나 이상의 푸코스(Fuc), 갈락토스(Gal), 고 만노스 글리칸 Man-5 또는 Man-9, 이등분 GlcNAc 및 N-아세틸뉴라민산(NANA) 또는 N-글리콜릴뉴라민산(NGNA) 잔기를 포함하는 시알산이 코어에 부착될 수 있다. N-연결된 글리코폼은 G0(코어 바이안테너리 글리코실화 구조를 갖는 단백질), G0F(푸코실화된 G0), G0F GlcNAc, G1(하나의 갈락토스 잔기를 갖는 코어 글리코실화 구조를 갖는 단백질), G1F(푸코실화 G1), G2(2개의 갈락토스 잔기를 갖는 코어 글리코실화 구조를 갖는 단백질) 및/또는 G2F(푸코실화 G2)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 G0F 글리칸을 갖는다
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 시험관내 검정법에서 인간 PD-1을 결합하는 것에 대해 기준 항체와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간 PD-1을 발현하는 세포 상에서 인간 PD-1을 결합하는 것에 대해 경쟁한다. 기준 항체는 본 명세서에 기술된 임의의 항-PD-1 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 표 3에 제공된 항체이다. 특정 구현예에서, 기준 항체는 마우스 항체 12A11("Mu12A11")로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 Mu12A11의 인간화된 버전이다. 특정 구현예에서, 기준 항체는 인간화된 항체 12A11.1b("Hu12A11.1b") 또는 인간화된 항체 12A11.2b M99L("Hu12A11.2b4")이다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간 PD-1(SEQ ID NO: 1)을 길항, 예를 들어, 억제한다. PD-1 수용체 길항작용은 다수의 기작에 의해, 예를 들어, 인간 PD-L1(SEQ ID NO: 3) 또는 PD-L2(SEQ ID NO: 4)에 의한 PD-1의 결합을 억제함으로써 일어날 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 일반적으로 인간 PD-1에 특이적으로 결합한다. 다른 종, 예를 들어, 원숭이, 예를 들어, 사이노몰구스 원숭이로부터의 PD-1과의 결합에 대한 항체의 교차 반응성은 원숭이 동물 모델에서 생물학적 활성을 시험할 수 있는 능력과 같은 이점을 제공할 수 있다. 상기 동물 모델 시험은 효능, 예를 들어 호의적인 약물 동력학과 관련된 특성, 또는 안전성, 예를 들어 감소된 간 독성과 관련된 특성을 선택하기 위해 항-PD-1 항체를 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간 PD-1뿐만 아니라 사이노몰구스 PD-1에 결합한다.
경쟁에 대한 분석은 방사성 물질 라벨링 면역분석법 (RIA), 효소-결합 면역흡착 분석법 (ELISA), 샌드위치 ELISA, 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 분석법 및 표면 플라스몬 공명 분석법을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
기준 항체와 시험 항체 사이의 항체 경쟁 분석을 수행할 때 (종 또는 이소타입에 상관없이), 형광물질, 바이오틴 또는 효소 (또는 심지어 방사성) 표지와 같은 검출가능한 표지로 기준을 먼저 표지하여, 후속 식별을 가능하게 할 수 있다. 이 경우, 인간 PD-1을 발현하는 세포가 표지되지않은 시험 항체와 함께 배양되고, 표지된 기준 항체가 첨가되고, 결합된 표지의 강도가 측정된다. 시험 항체가 중첩 에피토프에 결합함으로써 표지된 기준 항체와 경쟁하는 경우, 시험 항체없이 수행된 대조군 반응과 비교하여 강도가 감소될 것이다.
이 분석의 특정 구현예에서, 분석 조건 (예를 들어, 세포의 특정 밀도) 하에서 최대 결합의 80%를 생성하는 표지된 기준 항체의 농도("conc80%")가 먼저 측정되고, 표지되지 않은 시험 항체의 10X conc80% 및 표지된 기준 항체의 conc80%를 사용하여 경쟁 분석이 수행된다.
억제는 하기의 식에 따라 계산되는 억제 상수 또는 Ki로서 표현될 수 있다:
Ki = IC50/ (1 + [기준 Ab 농도]/Kd),
상기 식에서, IC50은 기준 항체의 결합의 50% 감소를 제공하는 시험 항체의 농도이며, Kd는 기준 항체의 해리 상수, 인간 PD-1에 대한 그의 친화성의 척도이다. 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체와 경쟁하는 항체는 본 명세서에 기재된 분석 조건 하에서 10 pM 내지 10 nM의 Ki를 가질 수 있다.
다양한 구현예에서, 시험 항체는 사용된 특정 분석 조건 하에서 최대 결합의 80%인 기준 항체 농도에서, 및 기준 항체 농도보다 10배 높은 시험 항체 농도에서, 기준 항체의 결합을 적어도 약 20% 또는 그 이상, 예를 들어 적어도 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상 감소시키는 경우, 또는 상기 값들 중 임의의 값 사이의 백분율 범위까지 감소시키는 경우, 기준 항체와 경쟁하는 것으로 간주된다.
항체가 인간 PD-1과 결합하기 위해 본 명세서에 기술된 바와 같은 기준 항체와 경쟁하는지의 여부를 평가하는데 유용한 특정 분석 및 분석 조건은 섹션 8.1.5에 제공된다.
7.4. 항-PD-1 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 발현 시스템 및 항체 제조 방법
본 개시 내용은 항-PD-1 항체에 대한 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 유전자를 코딩하는 핵산 분자, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 및 본 개시 내용의 항-PD-1 항체를 생산할 수 있는 숙주 세포를 포함한다.
본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 숙주 세포에서 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 유전자의 재조합 발현에 의해 제조될 수 있다. 항체를 재조합적으로 발현시키기 위해, 숙주 세포는 경쇄 및 중쇄가 숙주 세포에서 발현되고 선택적으로, 숙주 세포가 배양된 배지로 분비되도록 항체의 면역글로불린 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA 단편을 갖는 하나 이상의 재조합 발현 벡터로 형질감염되고, 그 배지로부터 항체가 회수될 수 있다. 표준 재조합 DNA 방법을 사용하여 항체 중쇄 및 경쇄 유전자를 수득하고, 이들 유전자를 재조합 발현 벡터 내로 혼입시키고, 벡터를 숙주 세포, 예컨대 Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition(Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F.M. 등, eds., Greene Publishing Associates, 1989) 및 미국 특허 제4,816,397호에 기재된 것들로 도입한다.
상기 항-PD-1 항체를 코딩하는 핵산을 생성하기 위해, 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 단편이 먼저 수득된다. 이들 DNA는 예를 들어 중합효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하여 경쇄 및 중쇄 가변 서열을 코딩하는 생식계열 DNA 또는 cDNA의 증폭 및 변형에 의해 수득될 수 있다. 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식계열 DNA 서열은 당 업계에 공지되어있다.(예를 들어, "VBASE” 인간 생식계열 서열 데이터베이스; Kabat, E.A. 등, 1991, 관심의 면역학적 단백질의 서열, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson 등, 1992, J. Mol. Biol. 22T:116-198; 및 Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836 참조, 각각의 내용은 본 명세서에 참고로 포함됨).
일단 항-PD-1 항체-관련 VH 및 VL 세그먼트를 코딩하는 DNA 단편이 수득되면, 이들 DNA 단편은 표준 재조합 DNA 기술, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자로, Fab 단편 유전자로, 또는 scFv 유전자로 전환시키기 위해, 추가 조작될 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH-코딩 DNA 단편은 또 다른 단백질을 코딩하는 또 다른 DNA 단편, 예컨대 항체 불변 영역 또는 가요성 링커에 작동가능하게 연결된다. 이와 관련하여 사용되는 바와 같이 용어 "작동가능하게 연결된"은, 2개의 DNA 단편에 의해 코딩된 아미노산 서열이 골격내(in-frame) 유지되도록 2개의 DNA 단편이 접합됨을 의미한다.
VH 영역을 코딩하는 단리된 DNA는, VH-코딩 DNA를 중쇄 불변 영역(CH1, CH2, CH3 및, 선택적으로 CH4)을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당 업계에 공지되어 있으며(예를 들어, Kabat, E.A., 등, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 및 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있지만, 특정 구현예에서는 IgG1 또는 IgG4이다. Fab 단편 중쇄 유전자에 대해, VH-코딩 DNA는 단지 중쇄 CH1 불변 영역을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 코딩하는 단리된 DNA는, VL-코딩 DNA를 경쇄 불변 영역, CL을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자(뿐만 아니라 Fab 경쇄 유전자)로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당 업계에 공지되어있으며(예를 들어, Kabat, 등, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 및 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있지만, 특정 구현예에서는 카파 불변 영역이다. scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-코딩 DNA 단편은 가요성 링커를 코딩하는 또다른 단편, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4~Ser)3(SEQ ID NO:5)을 코딩하는 다른 단편에 작동가능하게 연결되어, VH 및 VL 서열은 가요성 링커에 의해 결합된 VL 및 VH 영역을 갖는 인접 단쇄 단백질로서 발현될 수 있다(예를 들어, Bird 등, 1988, Science 242:423-426; Huston 등, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty 등, 1990, Nature 348:552-554 참조).
본 개시 내용의 항-PD-1 항체를 발현시키기 위해, 유전자가 전사 및 번역 제어 서열에 작동가능하게 연결되도록, 전술한 바와 같이 수득된 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA가 발현 벡터에 삽입된다. 이러한 맥락에서, 용어 "작동가능하게 연결된"은 벡터 내의 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 그들의 의도된 기능을 제공하도록 항체 유전자가 벡터 내로 결찰되는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 양립할 수 있도록 선택된다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터에 삽입될 수 있거나, 보다 전형적으로 두 유전자는 동일한 발현 벡터에 삽입된다.
항체 유전자는 표준 방법 (예를 들어, 항체 유전자 단편 및 벡터상의 상보적 제한 부위의 연결, 또는 제한 부위가 존재하지 않는 경우 평활 말단 연결)에 의해 발현 벡터에 삽입된다. 항-PD-1 항체-관련 경쇄 또는 중쇄 서열을 삽입하기 전에, 발현 벡터는 이미 항체 불변 영역 서열을 보유할 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1 모노클로널 항체-관련 VH 및 VL 서열을 전장 항체 유전자로 전환시키는 하나의 접근법은 VH 세그먼트가 벡터 내의 CH 세그먼트(들)에 작동가능하게 연결되고, VL 세그먼트가 벡터 내의 CL 세그먼트에 작동가능하게 연결되도록, 이들을 각각 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 인코딩하는 발현 벡터 내로 삽입하는 것이다. 부가적으로 또는 대안적으로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 사슬의 분비를 용이하게 하는 신호 펩타이드를 코딩할 수 있다. 항체 사슬 유전자는 신호 펩타이드가 항체 사슬 유전자의 아미노 말단에 골격내(in-frame) 연결되도록 벡터에 클로닝될 수 있다. 신호 펩타이드는 면역글로불린 신호 펩타이드 또는 이종 신호 펩타이드(즉, 비-면역글로불린 단백질로부터의 신호 펩타이드)일 수 있다.
항체 사슬 유전자 이외에, 본 개시 내용의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 항체 사슬 유전자의 발현을 제어하는 조절 서열을 보유한다. 용어 "조절 서열"은 프로모터, 인핸서 및 항체 사슬 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 다른 발현 제어 요소(예를 들어, 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것으로 의도된다. 상기 조절 서열은 예를 들어, Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA, 1990에 기재되어 있다. 조절 서열의 선택을 포함하는 발현 벡터의 설계가 형질전환될 숙주 세포의 선택, 원하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 인자에 좌우될 수 있는 것이 해당 분야의 숙련자에 의해 인식될 것이다. 포유류 숙주 세포 발현을 위해 적합한 조절 서열은 포유류 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 유도하는 바이러스 요소, 예컨대, 사이토메갈로바이러스(CMV)(예컨대 CMV 프로모터/인핸서), 유인원 바이러스 40(SV40)(예컨대 SV40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(AdMLP)) 및 폴리오마로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 바이러스 조절 요소 및 그의 서열의 추가 설명을 위해, 예를 들어 Stinski의 미국 특허 제5,168,062호, Bell 등의 미국 특허 제4,510,245호, 및 Schaffner등의 미국 특허 제4,968,615호를 참조한다.
항체 사슬 유전자 및 조절 서열 이외에, 본 개시 내용의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포내 벡터(예를 들어, 복제 기원) 및 선별 마커 유전자에서 벡터의 복제를 조절하는 서열과 같은 추가 서열을 보유할 수 있다. 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다(예를 들어, Axel 등의 미국 특허 제4,399,216호; 제4,634,665호; 및 제5,179,017호를 참조). 예를 들어, 전형적으로 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 적합한 선별 마커 유전자는 디하이드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선택/증폭을 갖는 DHFR- 숙주 세포에 사용) 및 네오 유전자 (G418 선별)를 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 벡터가 표준 기술에 의해 숙주 세포 내로 형질감염된다. 용어 "트랜스펙션"의 다양한 형태는 외인성 DNA를 원핵 또는 진핵 숙주 세포로 도입하기 위해 일반적으로 이용되는 광범위한 기술, 예를 들어, 전기천공, 리포펙션, 인산-칼슘 침전, DEAE-덱스트란 트랜스펙션 등을 포함하는 것으로 의도된다.
원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 본 개시 내용의 항체를 발현시키는 것이 가능하다. 특정 구현예에서, 항체의 발현은 적절하게 접혀지고 면역학적으로 활성인 항체의 최적 분비의 진핵 세포, 예를 들어, 포유동물 숙주 세포에서 수행된다. 본 개시 내용의 재조합 항체를 발현하기 위한 예시적인 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들어, Kaufman 및 Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621에 기재된 바와 같은 DHFR 선별 마커와 함께 사용된, Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220에 기재된 DHFR- CHO 세포 포함), NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 항체 유전자를 인코딩하는 재조합 발현 벡터를 포유동물 숙주 세포로 도입하는 경우, 항체는 숙주 세포에서 항체의 발현 또는, 보다 바람직하게는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지로의 항체의 분비를 허용하기에 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생성된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 숙주 세포는 또한 Fab 단편 또는 scFv 분자와 같은 온전한 항체의 일부를 생성하는데 사용될 수 있다. 상기 절차에서의 변형이 본 개시 내용의 범위 내에 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, 본 개시 내용의 항-PD-1 항체의 경쇄 또는 중쇄(둘 다는 아님)를 코딩하는 DNA에 의해 숙주 세포를 형질감염시키는 것이 바람직할 수 있다.
또한, 재조합 DNA 기술을 이용하여 인간 PD-1에 대한 결합에 필수적이지 않은 경쇄 및 중쇄 중의 어느 하나 또는 둘 다를 인코딩하는 DNA 중 일부 또는 모두를 제거할 수 있다. 상기 절두된(truncated) DNA 분자로부터 발현된 분자가 또한 본 개시 내용의 항체에 포함된다.
본 개시 내용의 항-PD-1 항체의 재조합 발현을 위해, 숙주 세포는 본 개시 내용의 2개의 발현 벡터, 중쇄 유래 폴리펩타이드를 코딩하는 제1 벡터 및 경쇄 유래 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 벡터로 공동-형질감염될 수 있다. 두 벡터는 동일한 선별 마커를 포함할 수 있거나, 각각 별도의 선별 마커를 포함할 수 있다. 대안적으로, 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 모두를 코딩하는 단일 벡터가 사용될 수 있다.
일단 항-PD-1 항체의 하나 이상의 부분을 인코딩하는 핵산이 수득되면, 추가의 변경 또는 돌연변이를 코딩 서열 내로 도입하여, 예를 들어, 상이한 CDR 서열을 갖는 항체, Fc 수용체에 대한 친화성이 감소된 항체 또는 상이한 하위부류의 항체를 인코딩하는 핵산을 생성할 수 있다.
본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 또한 화학 합성(예를 들어, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.에 기재된 방법에 의해) 제조될 수 있다. 변이 항체는 또한 세포-없는 플랫폼을 사용하여 생성될 수 있다(예를 들어, Chu 등, Biochemia No. 2, 2001(Roche Molecular Biologicals) 및 Murray 등, 2013, Current Opinion in Chemical Biology, 17:420~426를 참조함).
일단 본 개시 내용의 항-PD-1 항체가 재조합 발현에 의해 생성되면, 면역글로불린 분자의 정제를 위한 당 업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화도 및 사이징 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 분별 용해도, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제될 수 있다. 또한, 본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 정제를 용이하게 하기 위해 본원에 기술된 또는 그렇지 않으면 당 업계에 공지된 이종 폴리펩타이드 서열에 융합될 수 있다.
일단 단리된 경우, 항-PD-1 항체는 원한다면 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피(예를 들어, Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology, Work and Burdon, eds., Elsevier, 1980 참조), 또는 SuperdexTM 75 컬럼(Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) 상의 겔 여과 크로마토그래피에 의해 추가 정제될 수 있다.
7.5. 제약 조성물
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 항체 및 하나 이상의 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 조성물의 형태일 수 있다. 상기 조성물은 동물에서의 용도 또는 인간에서의 약제학적 용도와 같은 특정 용도를 위해 제형화될 수 있다. 조성물의 형태 (예를 들어, 건조 분말, 액체 제형 등) 및 사용되는 부형제, 희석제 및/또는 담체는 항체의 의도된 용도 및 치료 용도에 따른 투여 방식에 좌우될 것이다.
치료적 용도를 위해, 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 멸균된 제약 조성물의 일부로서 공급될 수 있다. 이 조성물은 (이것을 환자에게 투여하는 요망되는 방법에 따라)임의의 적합한 형태로 존재할 수 있다. 제약 조성물은 환자에게 다양한 경로에 의해, 예컨대, 경구, 경피, 피하, 비내, 정맥내, 근육내, 종양내, 척수강내, 국부 또는 국소로 투여될 수 있다. 특정 경우의 투여에 가장 적합한 경로는 특정 항체, 대상체, 질환의 성질 및 중증도 및 대상체의 신체 상태에 따라 달라질 것이다. 전형적으로, 제약 조성물은 정맥내 또는 피하로 투여될 것이다.
제약 조성물은 투여량 당 본 명세서에 기재된 소정량의 항-PD-1 항체를 함유하는 단위 투여 형태로 편리하게 제공될 수 있다. 단위 투여량에 포함된 항-PD-1 항체의 양은 당해 분야에 잘 공지된 다른 인자뿐만 아니라 치료되는 질환에 좌우될 것이다. 이러한 단위 투여 형태는 단일 투여에 적합한 양의 항체를 함유하는 동결건조 분말의 형태, 또는 액체의 형태일 수 있다. 건조 분말 단위 투여 형태는 주사기, 적당한 양의 희석제 및/또는 투여에 유용한 기타 성분과 함께 키트에 포장될 수 있다. 액체 형태의 단위 투여 형태는 단일 투여에 적합한 양의 항-PD-1 항체가 사전-충전된 주사기의 형태로 편리하게 공급될 수 있다.
제약 조성물은 또한 다중 투여에 적합한 양의 항-PD-1 항체를 함유하는 벌크 형태로 공급될 수 있다.
제약 조성물은 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 임의의 약학적으로-허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 (이들 모두는 본원에서 "담체"로 지칭됨), 즉 완충제, 안정화제, 방부제, 등장화제, 비-이온성 제제, 항산화제 및 기타 다양한 첨가제와 원하는 정도의 순도를 갖는 항체를 혼합함으로써 동결건조 제형 또는 수용액으로서 저장하기 위해 제조될 수 있다. Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980)을 참조한다. 이러한 첨가제는 사용된 용량 및 농도에서 수혜자에게 무독성이어야 한다.
완충제는 생리적 조건에 가까운 범위의 pH를 유지하는데 도움을 준다. 이들은 다양한 농도로 존재할 수 있지만, 전형적으로 약 2 mM 내지 약 50 mM 범위의 농도로 존재할 것이다. 본 개시 내용에 사용하기에 적합한 완충제는 유기산 및 무기산 둘다 및 이들의 염, 예컨대 시트르산 완충액(예를 들어, 모노소듐 시트레이트-디소듐 시트레이트 혼합물, 시트르산-트리소듐 시트레이트 혼합물, 시트르산-모노소듐 시트레이트 혼합물 등), 숙시네이트 완충액(예를 들어, 숙신산-모노소듐 숙시네이트 혼합물, 숙신산-수산화나트륨 혼합물, 숙신산-디소듐 숙시네이트 혼합물 등), 타르트레이트 완충액(예를 들어, 타르타르산-타르타르산 나트륨 혼합물, 타르타르산-타르타르산 칼륨 혼합물, 타르타르산-수산화 나트륨 혼합물 등), 인산 완충액(예를 들어, 인산-모노소듐 포스페이트 혼합물, 인산-디소듐 포스페이트 혼합물, 모노소듐 포스페이트-디소듐 포스페이트 혼합물 등), 글루콘산 완충액(예를 들어, 글루콘산-글루콘산 나트륨 혼합물, 글루콘산-수산화 나트륨 혼합물, 글루콘산-글루콘산 칼륨 혼합물 등), 옥살산 완충액(예를 들어, 옥살산-옥살산 나트륨 혼합물, 옥살산-수산화 나트륨 혼합물, 옥살산-옥살산 칼륨 혼합물 등), 젖산 완충액(예를 들어, 젖산-젖산 나트륨 혼합물, 젖산-수산화 나트륨 혼합물, 젖산-젖산 칼륨 혼합물 등) 및 아세트산 완충액(예를 들어, 아세트산-아세트산 나트륨 혼합물, 아세트산-수산화 나트륨 혼합물 등)을 포함한다. 또한, 푸마레이트 완충액, 히스티딘 완충액 및 트리메틸아민 염, 예컨대 2-아미노-2-하이드록시메틸-프로판-1,3-디올(즉, Tris, THAM 또는 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄)이 사용될 수 있다.
때때로 “안정화제”로 공지된 등장화제는 본 개시 내용의 액체 조성물의 등장성을 보장하기 위하여 첨가될 수 있으며, 다가 당 알코올, 예를 들어 3가 이상의 당 알코올, 예컨대 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 자일리톨, 소르비톨 및 만니톨을 포함할 수 있다. 안정화제는 기능 면에서 벌킹제로부터, 치료제를 가용화하거나, 변성 또는 용기 벽에의 부착을 방지하는 것을 돕는 첨가제까지의 범위일 수 있는 넓은 카테고리의 부형제를 지칭한다. 전형적인 안정화제는 다가 당 알콜 (상기 열거된 것); 아미노산, 예컨대 아르기닌, 라이신, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 알라닌, 오르니틴, 류신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌, 등, 유기 당류 또는 당 알콜, 예컨대 락토스, 트레할로스, 스타키오스, 만니톨, 소르비톨, 자일리톨, 리비톨, 미오이노시톨, 갈락티톨, 시클리톨, 예컨대 이노시톨을 포함하는 글리세롤 등; 폴리에틸렌 글리콜; 아미노산 중합체; 황 함유 환원제, 예컨대 우레아, 글루타티온, 티옥트산, 나트륨 티오글리콜레이트, 티오글리세롤, α-모노티오글리세롤 및 나트륨 티오설페이트; 저분자량 폴리펩타이드(예를 들어, 10 잔기 이하의 펩타이드); 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈 모노사카라이드, 예컨대 크실로스, 만노스, 프룩토스, 글루코스; 디사카라이드, 예컨대 락토스, 말토스, 수크로스 및 트레할로스; 및 트리사카라이드, 예컨대 라피노스; 및 폴리사카라이드, 예컨대 덱스트란일 수 있다. 안정화제는 항-PD-1 항체의 중량 당 0.5 내지 10 중량% 범위의 양으로 존재할 수 있다.
비이온성 계면활성제 또는 세제(“습윤제”로도 공지됨)를 첨가하여 당단백질의 가용화를 도울 수 있고, 이외에도 당단백질을 교반-유발된 응집으로부터 보호할 수 있는데, 이는 또한 단백질 변성의 야기 없이 응력을 받는 전단 표면에 제형이 노출되게 한다. 적합한 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 (20, 80 등), 폴록사머(184, 188 등) 및 플루로닉 폴리올을 포함한다. 비이온성 계면활성제는 약 0.05 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL의 범위로 존재할 수 있다.
정맥 내 주입을 통한 투여에 적합한 수성 조성물의 특정 예시적인 구현예는 SEQ ID NO: 51 또는 SEQ ID NO: 52의 중쇄 서열 및 SEQ ID NO: 61의 경쇄 서열을 포함하는 20 mg/mL의 항-PD-1 항체, 15 mM 히스티딘 pH 5.7, 8.0%(w/v) 수크로스 및 0.05%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 조성물은 멸균 수 또는 주사 또는 주입에 적합한 다른 용액 (예를 들어, 0.9% 식염수, 링거액, 락테이티드 링거액 등)으로 재구성할 때, 상기 수성 조성물을 제공하는 동결건조된 분말의 형태일 수 있다. 조성물 또는 조성물의 다른 구현예는 또한 항-PD-1 항체의 단일 투여에 적합한 양의 조성물로 미리 채워진 주사 및/또는 주입에 적합한 주사기 또는 다른 장치의 형태일 수 있다.
7.6. 사용 방법
7.6.1. 치료적 이득
본원에서 제공된 데이터는 개시된 항-PD-1 항체가 암 세포의 존재하에 PD-1에 길항하고 생체내 고형 종양 및 혈액 악성종양과 같은 암에 대해 강력한 항암 활성을 발휘한다는 것을 입증한다. 따라서, 항-PD-1 항체, 결합 단편 및/또는 항-PD-1 항체를 포함하는 제약 조성물은 고형 종양 또는 혈액 악성종양을 치료하기 위해 치료적으로 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 고형 종양을 갖는 인간 환자에게 PD-1에 길항하여, 치료 효과를 제공하기에 유효한 비율로 종양 세포를 사멸하는 유효량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 항-PD-1 항체로 치료될 수 있는 고형 종양은 부신암, 방광암, 골암, 뇌암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 자궁경부암, 대장암, 자궁내막암, 식도암, 안암, 위암, 두경부암, 신장암(예를 들어, 진행성 신세포 암종), 간암(예를 들어, 간세포 암종, 담관암), 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암, 중피종, 소세포 폐암), 두경부암, 흑색종(예를 들어, 절제불가능 또는 전이성 흑색종, 진행성 악성 흑색종), 구강암, 난소암, 음경암, 전립선암, 췌장암, 피부암(예를 들어, 메르켈(Merkel)세포 암종), 고환암, 갑상선암, 자궁암, 질 암, 및 DNA 부정합 치료 결핍의 증거가 있는 종양을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 암은 PD-L1 또는 PD-L2를 발현하는 종양 세포로 이루어질 수 있고, PD-L1 또는 PD-L2를 발현하지 않는 종양 세포로 이루어진 암, 또는 일부는 PD-L1 또는 PD-L2를 발현하고, 일부는 그렇지 않는 종양 세포로 이루어진 암으로 구성될 수 있다. 암은 새로 진단되어 치료에 순진하지 않거나, 재발하거나, 불응성이거나, 재발 및 불응성이거나, 전이성 형태의 고형 종양일 수 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 방광암, 유방암, 두경부암, 신장암, 폐암, 림프종, 흑색종 및 위암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 흑색종(예를 들어, 절제불가능 또는 전이성 흑색종), 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암) 및 신장 세포 암종(예를 들어, 진행성 신장 세포 암종)으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 삼중 음성 유방암, 난소암, 간세포 암종, 위암, 소세포 폐암, 중피종, 담관암종, 메르켈 세포 암종 및 DNA 부정합 치료 결핍의 증거가 있는 종양으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 흑색종은 BRAF V600 야생형 절제불가능 또는 전이성 흑색종이다. 다른 특정 구현예에서, 흑색종은 BRAF V600 돌연변이-양성 절제불가능 또는 전이성 흑색종이다. 특정 구현예에서, 폐암은 백금-기초 화학요법 시에 또는 이후 진행하는 전이성 비-소세포 폐암이다. 특정 구현예에서, 폐암은 백금-계 요법에 실패하고 PD-1 표적화 제제에 대해 순진하지 않은 국소 진행성 또는 전이성 비-소세포 폐암이다. 특정 구현예에서, 두경부암은 국소 치료법으로 치료할 수 없다고 고려되는 구강, 구인두, 하인두 및 후두의 전이성(파종성) 두경부 편평 세포 암종이다. 특정 구현예에서, 신장 세포 암종은 선행 항-혈관신생 요법을 받은 진행성 신장 세포 암종이다.
일부 구현예에서, 본 개시 내용의 방법은 혈액 악성종양을 갖는 인간 환자에게 PD-1에 길항하여, 치료적 이득을 제공하는데 유효한 비율로 악성 세포를 사멸시키는 양의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 암은 PD-L1 또는 PD-L2를 발현하는 악성 세포로 이루어질 수 있고, PD-L1 또는 PD-L2를 발현하지 않는 악성 세포로 이루어진 암, 또는 일부는 PD-L1 또는 PD-L2를 발현하고, 일부는 그렇지 않는 악성 세포로 이루어진 암으로 구성될 수 있다. 암은 새로 진단되어 치료에 순진하지 않거나, 재발하거나, 불응성이거나, 재발 및 불응성이거나, 전이성 형태의 혈액 악성종양일 수 있다. 항-PD-1 항체로 치료될 수 있는 혈액-매개 악성종양은 골수종(예를 들어, 다발성 골수종), 림프종(예를 들어, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 발덴스트롬의 거대글로불린혈증, 맨틀 세포 림프종), 백혈병(예를 들어, 만성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병), 및 골수이형성 증후군을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
전술한 바와 같이, 본원에 개시된 항-PD-1 항체는 면역학적 반응을 조절한다. 따라서, 면역계가 손상된 환자는 치료에서 배제될 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 하기 기준 중 하나 이상을 충족시킨 후에 배제된다: (1) 지난 2년 내에 활성 또는 이전에 입증된 자가면역 질환(염증성 장 질환, 체강 질환, 베게너 증후군을 포함하지만, 이에 한정되지 않음). (소아기 아토피 또는 천식, 백반증, 탈모증, 하시모토 증후군, 그레이브스 병, 또는 전신 치료를 필요로 하지 않는 건선(과거 2년 이내)이 있는 대상체는 배제되지 않는다); (2) 원발성 면역결핍, 골수 이식, 만성 림프구성 백혈병, 고형 장기 이식 또는 결핵에 대한 이전 임상 진단의 병력; (3) 응고병증 또는 혈소판 장애의 병력; (4) 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 또는 만성 또는 활동성 B형 또는 C형 간염을 갖는 대상체(B형 간염 또는 C형 간염의 병력이 있고 항-바이러스 요법을 받은 후 치료법을 기록한 대상체)에 대한 양성 결과가 확인됨; (5) 면역 요법(CTLA-4, PD-L1, 또는 PD-1에 대한 약제를 포함하지만, 이에 한정되지 않음)을 받는 동안 이전의 3등급 이상의 면역-매개된 신경독성 또는 간질성 폐렴. 또한, 3개월 이내에 해결되지 않거나 무증상이 된 면역요법을 받는 동안 임의의 다른 이전의 3등급 이상의 면역-매개된 이상 반응; (6) 항-PD-1 항체의 첫 번째 투여 28일 전에 생백신 감수성 백신 접종.
본 개시 내용의 항-PD-1 항체는 단독으로 (단일요법) 또는 다른 항암 요법 및/또는 표적화되거나 표적화되지않은 항암제에 보조제로 또는 이들과 함께 투여될 수 있다. 항-PD-1 단독요법으로 투여될 때, 하나 이상의 항체가 사용될 수 있다. 단일 요법으로 투여되거나 또는 다른 요법 또는 제제에 보조제로 또는 이들과 함께 투여되든지간에, 항-PD-1 항체의 양은 전체 치료 요법이 치료적 이득을 제공하도록 투여된다.
치료적 이득은 환자에서 암을 치료하기 위한 항-PD-1 항체의 사용이 임의의 치료법 (적절한 경우) 또는 공지된 치료 표준에 비해 입증된 임의의 임상적 이득을 얻는 것을 의미한다. 임상적 이득은 당업자에게 공지된 임의의 방법으로 평가할 수 있다. 일 구현예에서, 임상적 이득은 객관적 반응 속도(ORR)(RECIST 버전 1.1을 사용하여 측정됨), 응답 지속 시간 (DOR), 무-진행 생존 (PFS) 및/또는 전체 생존 (OS)에 기초하여 평가된다. 일부 구현예에서, 완전한 반응은 치료적 이득을 나타낸다. 일부 구현예에서, 부분 반응은 치료적 이득을 나타낸다. 일부 구현예에서, 안정한 질환은 치료적 이득을 나타낸다. 일부 구현예에서, 전체 생존의 증가는 치료적 이득을 나타낸다. 일부 구현예에서, 치료적 이득은 질환 진행에 대한 시간의 개선 및/또는 증상 또는 삶의 질의 개선을 구성할 수 있다. 다른 구현예에서, 치료적 이득은 증가된 질환 제어 기간으로 해석되지 않고, 오히려 개선된 삶의 질을 초래하는 현저하게 감소된 증상 부담으로 해석될 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 항-PD-1 항체 단독 (단일 요법)을 사용하거나 또는 다른 항암 요법 및/또는 표적화되거나 또는 표적화되지 않은 항-암 치료제에 보조제로 또는 이와 함께 사용하여 치료적 이득을 관찰할 수 있다.
전형적으로, 치료적 이득은 암에 대한 새로운 치료에 대한 반응을 측정하도록 고안된 표준 임상 시험을 사용하여 평가된다. 본원에 기재된 항-PD-1 항체의 치료적 이익을 평가하기 위하여, 하기의 시험 중 하나 또는 조합이 이용될 수 있다: (1) 고형 종양에서의 반응 평가 기준 (RECIST) 버전 1.1, (2) 면역-관련 RECIST(irRECIST), (3) 동부 협력 종양학 그룹(ECOG) 성능 상태, (4) 면역-관련 반응 기준(irRC), (5) 종양 항원의 평가로 평가할 수 있는 질병, (6) 검증된 환자 보고 결과 척도, 및/또는 (7) 전체 생존 및 무진행 생존에 대한 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 평가.
종양 부담 변화의 평가는 암 치료제의 임상적 평가의 중요한 특징이다. 종양 수축 (객관적 반응)과 질병 진행의 발달까지의 시간 모두 암 임상 시험의 중요한 종점이다. RECIST (고형 종양의 반응 평가 기준)로 공지되어 있는 표준화된 반응 기준은 2000년에 발표되었다. 2009년에 업데이트(RECIST 1.1)가 배포되었다. RECIST 기준은 결과 측정이 해부학적 종양 부담의 평가와 임상 진행 과정의 변화를 기반으로 하기 때문에 전형적으로, 객관적 반응이 기본 연구 종점인 임상 시험에서 뿐만 아니라, 안정적인 질환, 종양 진행 또는 진행 분석까지의 시간을 평가하는 임상 시험에서 사용된다. 표 4는 본 명세서에 기술된 항-PD-1 항체와 같은 연구 약물에 대한 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용된 반응 기준의 정의를 제공한다.
[표 4]
Figure pct00005
본 명세서에 기술된 항-PD-1 항체의 치료적 이득을 결정하는데 사용될 수 있는 2차 결과 측정은 객관적인 반응 속도 (ORR), 무 진행 생존 (PFS), 전반적인 생존 (OS), 전체 반응의 지속 기간 (DOR) 및 반응 심도 (DpR)를 포함한다. ORR은 완전한 반응 (CR) 또는 부분 반응 (PR)을 얻은 참가자의 비율로 정의된다. PFS는 항-PD-1 항체의 첫 번째 투여일부터 질환의 진행 또는 사망 중 어느 것이 먼저 발생한 시간으로 정의된다. OS는 질환의 진단 날짜 또는 치료 시작 시점으로부터 질환의 진단을 받은 환자가 아직 생존하는 지의 시간의 길이로 정의된다. DOR은 참가자의 초기 CR 또는 PR에서 질병 진행 시간까지의 시간으로 정의된다. DpR은 기준선 종양 하중과 비교한 최대 반응 지점에서 관찰된 종양 수축률의 백분율로 정의된다. ORR과 PFS의 임상 종말점은 위에서 설명한 RECIST 1.1 기준에 따라 결정될 수 있다.
면역요법 치료를 받는 암 환자에게 특정한 임상 평가를 위해 사용될 수 있는 부가적인 기준은 표준화된 면역-관련 RECIST(irRECIST) 기준을 포함한다. 예를 들어, Nishino, M. 등 Eur. J. Radiol., 84(7), pages 1259-1268 (2015 July)을 참조한다. 상기 가이드라인은 잠재적인 면역조절 효과를 고려하여 상기 RECIST 1.1 기준을 수정했다. 표 5는 본 명세서에 기술된 항-PD-1 항체와 같은 면역조절 약물에 대한 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용된 반응 기준의 정의를 제공한다.
[표 5]
Figure pct00006
표 6의 성능 상태(Performance Status)의 ECOG 척도는 환자 자신의 능력, 일상 활동 및 신체 능력의 측면에서 환자의 기능 수준을 설명하기 위해 사용된다. 이 척도는 현재 ECOG-ACRIN Cancer Research Group의 일부인 동부 협동 종양 그룹 (ECOG)에 의해 개발되어 1982년에 발표되었다.
[표 6]
Figure pct00007
면역치료제, 예컨대, 항체-기반의 암 치료법에 대한 반응을 완전히 특성화하고 이를 결정하기 위해 사용될 수 있는 또 다른 세트의 기준은 면역-관련 반응 기준(irRC)이며, 이는 2009년도에 고형 종양의 측정을 위해 개발되었으며, 2013년에 갱신되었다(문헌[Wolchok, 등 Clin Cancer Res. 2009; 15(23): 7412-7420 and Nishino, 등 Clin Cancer Res. 2013; 19(14): 3936-3943]). 업데이트된 irRC 기준은 전형적으로 종양 부담에 대한 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체와 같은 면역요법제의 효과를 평가하는데 사용되며, 표 7에 따른 반응을 정의한다.
[표 7]
Figure pct00008
본원에 기재된 항-PD-1 항체의 치료적 이득을 평가하기 위해 사용될 수 있는 종양 항원은 ApoE, CD11c, CD40, CD45 (PTPRC), CD49D (ITGA4), CD80, CSF1R, CTSD, GZMB, Ly86, MS4A7, PIK3AP1, PIK3CD, CD74, CCL5, CCR5, CXCL10, IFNG, IL10RA1, IL-6, ACTA2, COL7A1, LOX, LRRC15, MCPT8, MMP10, NOG, SERPINE1, STAT1, TGFBR1, CTSS, PGF, VEGFA, C1QA, C1QB, ANGPTL4, EGLN, ANGPTL4, EGLN3, BNIP3, AIF1, CCL5, CXCL10, CXCL11, IFI6, PLOD2, KISS1R, STC2, DDIT4, PFKFB3, PGK1, PDK1, AKR1C1, AKR1C2, CADM1, CDH11, COL6A3, CTGF, HMOX1, KRT33A, LUM, WNT5A, IGFBP3, MMP14, CDCP1, PDGFRA, TCF4, TGF, TGFB1, TGFB2, CD11b, ADGRE1 (EMR1, F4/80), CD86, CD68, MHC-부류 II, CD3, HLA-DR, CD4, CD3, CD5, CD19, CD7, CD8, CD16, TCRαβ, TCRγδ, PD-1, PDL-1, CTLA-4, 산 포스파타제, ACTH, 알칼리성 포스파타제, 알파-태아단백질 CA-125, CA15-3, CA19-9, CA-195, C-212, CA-549, 칼시토닌(calcitonin), 카테콜아민(catecholamine), 카텝신-D, CEA, ERBB2(HER2/neu), 크로모그라닌(chromogranin)-A, c-Myc, EGFR, ERA(에스트로겐 수용체 검정), 페리틴(ferritin), 개스트린(gastrin), 5-HIAA, hCG, 알파-HCG, 베타-HCG, HVA, LDH1-5, NSE(뉴런 특이적 에놀라제), 췌장 폴리펩타이드, PLAP, PLP, PRA(프로게스테론 수용체 A), 프로인슐린 C-펩타이드, PSA, SMA, SCC, 티로글로불린, TDT, TPA 및 알파-TSH를 포함한다. 이들 종양 항원은 해당 분야의 전문가에게 알려져 있는 바와 같이 DNA 시퀀싱 기법, RNA 시퀀싱 기법, 유전자 칩 마이크로어레이, PCR 기반의 방법, 유세포분석 또는 면역조직화학 방법을 사용하여 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서 평가될 수 있다.
고형 종양을 치료하기 위한, 본 명세서에 기술된 항-PD-1 항체의 사용으로부터 야기된 하나의 예시적인 치료적 이득은 단일 요법으로 투여되든지 또는 다른 요법 또는 제제에 보조적으로 또는 이와 함께 투여되든지 완전한 반응이다. 고형 종양을 치료하기 위한, 본 명세서에 기술된 항-PD-1 항체의 사용으로부터 야기된 또 다른 예시적인 치료적 이득은 단일 요법으로 투여되든지 또는 다른 요법 또는 제제에 보조적으로 또는 이와 함께 투여되든지 부분적인 반응이다.
검증된 환자보고 결과 척도는 또한 특정 보고 시스템을 통해 각 환자에 의해 제공된 응답을 나타내기 위해 사용될 수 있다. 질병에 중점을 두기보다는 그러한 결과 척도는 만성 질환을 관리하는 동안 유지된 기능과 관련이 있다. 검증된 환자가 보고한 결과 척도의 한 비-제한적인 예는 미국 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 PROMIS® (Patient Reported Outcomes Measurement Information System)이다. 예를 들어, 성인 암 환자를 위한 PROMIS® Physical Function Instrument는 상지 (예를 들어, 손재주), 하지 (예를 들어, 걷기 또는 이동) 및 중간 영역 (예를 들어, 목, 등 운동)의 기능에 대한 자체-보고 기능을 평가할 수 있으며, 심부름과 같은 일상적인 일상 활동을 포함한다.
카플란-마이어 곡선(Kaplan and Meier, J. Am. Stat. Assoc. 1958; 53(282): 457-481)은 또한 표준 치료와 비교하여 항-PD-1 항체 치료를 겪는 암 환자의 전반적인 생존 및 무 진행 생존을 산정하는데 사용될 수 있다.
7.6.2. 보조 치료법
항-PD-1 항체는 항-암 특성을 갖는 다른 제제 또는 치료제에 보조로, 또는 함께 사용될 수 있다. 보조적으로 사용되는 경우, 항-PD-1 항체 및 다른 제제는 단일 조합 약제학적 제형으로 함께 제형화될 수 있거나, 단일 배위 투여 요법 또는 상이한 투여 요법 중 하나에서 제형화되고 별도로 투여될 수 있다. 항-PD-1 항체에 보조적으로 또는 항-PD-1 항체와 함께 투여된 제제는 전형적으로 항-PD-1 항체에 대한 보체 활성을 가지므로 항체 및 다른 제제는 서로 악영향을 미치지 않을 것이다.
항-PD-1 항체와 함께 보조제로 사용될 수 있는 제제는 알킬화제, 혈관생성 억제제, 항체, 항대사물질, 항분열제, 항증식제, 항바이러스제, 오로라 키나제 억제제, 아폽토시스 촉진제(예를 들어, Bcl-2 계열 억제제), 세포사멸 수용체 경로의 활성화제, Bcr-Abl 키나제 억제제, BiTE (이중특이성 T 세포 인게이저(Engager)) 항체, 항체 약물 접합체, 생물학적 반응 조절제, 브루턴의 티로신 키나제 (BTK) 억제제, 사이클린-의존성 키나제 억제제, 세포주기 억제제, 사이클로옥시게나제-2 억제제, DVD, 백혈병 바이러스성 종양유전자 동족체 (ErbB2) 수용체 억제제, 성장 인자 억제제, 열 충격 단백질 (HSP)90 억제제, 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 억제제, 호르몬 요법, 면역물질, 세포자멸 단백질 억제제의 억제제(IAP), 인터칼레이팅 항생제, 키나제 억제제, 키네신 억제제, Jak2 억제제, 라파마이신의 포유동물 표적 억제제, 마이크로RNA, 미토겐-활성화된 세포외 신호-조절 키나제 억제제, 다가 결합 단백질, 비-스테로이드성 항-염증성 약물 (NSAIDs), 폴리 ADP(아데노신 디포스페이트)-리보스 폴리머라제 (PARP) 억제제, 백금 화학요법제, 폴로-형 키나제 (PlK) 억제제, 포스포이노시타이드-3 키나제 (PI3K) 억제제, 프로테아좀 억제제, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 수용체 티로신 키나제 억제제, 레티노이드/삼각근, 식물 알칼로이드, 작은 억제 리보핵산 (siRNA), 토포이소머라제 억제제, 유비퀴틴 리가제 억제제 뿐만 아니라 상기 제제들 중 하나 이상의 조합을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
BiTE 항체는 2개의 세포에 동시에 결합함으로써 T-세포가 암 세포를 공격하도록 유도하는 이중특이적 항체이다. 이어서, T-세포는 표적 암 세포를 공격한다. BiTE 항체의 예는 아데카투무맙(Micromet MT201), 블리나투모맙(Micromet MT103) 등을 포함한다. 이론에 의해 제한되지 않고, T-세포가 표적 암 세포의 아폽토시스를 유도하는 메커니즘 중 하나는 세포용해 과립 성분의 엑소시토시스에 의한 것이며, 이는 퍼포린(perforin) 및 그랜자임 B를 포함한다.
siRNA는 내인성 RNA 염기 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오티드를 갖는 분자이다. 변형은 세포 활성을 없애지 않고, 오히려 증가된 안정성 및/또는 증가된 세포 효력을 부여한다. 화학적 변형의 예는 포스포로티오에이트 기, 2'-데옥시뉴클레오티드, 2'-OCH3-함유 리보뉴클레오티드, 2'-F-리보뉴클레오티드, 2'-메톡시에틸 리보뉴클레오티드, 이의 조합 등을 포함한다. siRNA는 다양한 길이(예를 들어, 10 내지 200 bp) 및 구조(예를 들어, 헤어핀, 단일/이중 가닥, 벌지(bulge), 닉/갭, 불일치)를 가질 수 있으며, 세포에서 활성 유전자 침묵화를 제공하도록 처리된다. 이중-가닥 siRNA(dsRNA)는 각 가닥에 동일한 수의 뉴클레오티드를 갖거나(블런트 말단), 비대칭 말단(오버행)을 가질 수 있다. 1 내지 2개 뉴클레오티드의 오버행은 센스 및/또는 안티센스 가닥 상에, 그리고 주어진 가닥의 5'- 및/또는 3'-말단 상에 존재할 수 있다.
다가 결합 단백질은 둘 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 단백질이다. 다가 결합 단백질은 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖도록 조작되며, 일반적으로 천연 발생 항체가 아니다. 용어 "다중특이적 결합 단백질"은 둘 이상의 관련되거나 관련되지 않은 표적에 결합할 수 있는 결합 단백질을 의미한다. 이중 가변 도메인(DVD) 결합 단백질은 둘 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 단백질에 결합하는 4가 또는 다가 결합 단백질이다. 이러한 DVD는 단일특이적(즉, 하나의 항원에 결합할 수 있음)이거나 다중특이적(즉, 둘 이상의 항원에 결합할 수 있음)일 수 있다. 2개의 중쇄 DVD 폴리펩타이드 및 2개의 경쇄 DVD 폴리펩타이드를 포함하는 DVD 결합 단백질은 DVD Ig로 지칭된다. DVD Ig의 각각의 절반은 중쇄 DVD 폴리펩타이드, 경쇄 DVD 폴리펩타이드 및 2개의 항원 결합 부위를 포함한다. 각각의 결합 부위는 항원 결합 부위마다 항원 결합에 연루된 총 6개의 CDR을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
알킬화제는 알트레타민(altretamine), AMD-473, AP-5280, 아파지쿠온(apaziquone), 벤다무스틴(bendamustine), 브로스탈리신(brostallicin), 부설판(busulfan), 카보쿠온(carboquone), 카르무스틴(carmustine)(BCNU), 클로람부실, CLORETAZINE®(라로무스틴(laromustine), VNP 40101M), 사이클로포스파미드, 다카르바진, 에스트라무스틴(estramustine), 포테무스틴(fotemustine), 글루포스파미드(glufosfamide), 이포스파미드(ifosfamide), KW-2170, 로무스틴(lomustine)(CCNU), 마포스파미드(mafosfamide), 멜팔란(melphalan), 미토브로니톨(mitobronitol), 미톨락톨(mitolactol), 니무스틴(nimustine), 질소 머스타드 N-옥시드, 라니무스틴(ranimustine), 테모졸로미드(temozolomide), 티오테파(thiotepa), TREANDA®(벤다무스틴(bendamustine)), 트레오술판(treosulfan) 및 트로포스파미드(trofosfamide)를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
혈관신생 억제제는 내피-특이적 수용체 티로신 키나제(Tie-2) 억제제, 상피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제, 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 억제제, 델타-유사 리간드 4(DLL4) 억제제, 인슐린 성장 인자-2 수용체(IGFR-2) 억제제, 매트릭스 메탈로프로테이나제-2(MMP-2) 억제제, 매트릭스 메탈로프로테이나제-9(MMP-9) 억제제, 혈소판-유래 성장 인자 수용체(PDGFR) 억제제, 트롬보스폰딘(thrombospondin) 유사체 및 혈관 내피 성장 인자 수용체 티로신 키나제(VEGFR) 억제제를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항체 약물 접합체는 c-Met 키나제(예를 들어, 미국 특허 제7,615,529호에 기재된 ADC), LRRC15, CD30(예를 들어, ADCETRIS®(브렌툭시맙 베도틴)), CS1(예를 들어, 미국 특허공개 제20160122430호에 기재된 ADC), DLL3(예를 들어, 로발피투주맙 테시린(ROVA-T)), HER2(예를 들어, KADCYLA®(트라스투주맙 엠탄신)), EGFR(예를 들어, 미국 특허공개 제20150337042에 기재된 ADC), 및 프로락틴 수용체(예를 들어, 미국 특허공개 제20140227294에 기술된 ADC)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
항대사물질은 ALIMTA®(페메트렉시드(pemetrexed) 이나트륨, LY231514, MTA), 5-아자시티딘, XELODA®(카페시타빈(capecitabine)), 카모푸르(carmofur), LEUSTAT®(클라드리빈(cladribine)), 클로파라빈(clofarabine), 시타라빈(cytarabine), 시타라빈 옥포스페이트(cytarabine ocfosfate), 시토신 아라비노시드(cytosine arabinoside), 데시타빈(decitabine), 데페록사민(deferoxamine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에플로르니틴(eflornithine), EICAR(5-에티닐-1-β -D-리보푸라노실이미다졸-4-카복사미드), 에노시타빈(enocitabine), 에트닐시티딘(ethnylcytidine), 플루다라빈(fludarabine), 단독의 또는 류코보린(leucovorin)과 병용되는 5-플루오로우라실, GEMZAR®(젬시타빈), 하이드록시우레아, ALKERAN®(멜팔란), 머캅토퓨린, 6-머캅토퓨린 리보시드, 메토트렉세이트, 마이코페놀산, 넬라라빈(nelarabine), 놀라트렉스드(nolatrexed), 옥포스페이트(ocfosfate), 펠리트렉솔(pelitrexol), 펜토스타틴(pentostatin), 랄티트렉스드(raltitrexed), 리바비린(Ribavirin), 트리아핀(triapine), 트리메트렉세이트(trimetrexate), S-1, 티아조푸린(tiazofurin), 테가푸르(tegafur), TS-1, 비다라빈(vidarabine) 및 UFT를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항바이러스제는 리토나비르(ritonavir), 아시클로버(acyclovir), 시도포비르(cidofovir), 간시클로버(ganciclovir), 포스카네트(foscarnet), 지도부딘(zidovudine), 리바비린(ribavirin) 및 하이드록시클로로퀸(hydroxychloroquine)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
오로라 키나제 억제제는 ABT-348, AZD-1152, MLN-8054, VX-680, 오로라 A-특이적 키나제 억제제, 오로라 B-특이적 키나제 억제제 및 범-오로라 키나제 억제제를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
Bcl-2 단백질 억제제는 ABT-263(네비토클락스(navitoclax)), AT-101((-)고시폴(gossypol)), GENASENSE®(G3139 또는 오블리메르슨(Bcl-2-표적화 안티센스 올리고뉴클레오티드), IPI-194, IPI-565, N-(4-(4-((4'-클로로(1,1'-비페닐)-2-일)메틸)피페라진-1-일벤조일)-4-(((1R)-3-(디메틸아미노)-1-((페닐술파닐)메틸)프로필)아미노)-3-니트로벤젠술폰아미드), N-(4-(4-((2-(4-클로로페닐)-5,5-디메틸-1-사이클로헥스-1-엔-1-일)메틸)피페라진-1-일)벤조일)-4-(((1R)-3-(모르폴린-4-일)-1-((페닐술파닐)메틸)프로필)아미노)-3-((트리플루오로메틸)술포닐)벤젠술폰아미드, 베네토클락스(venetoclax) 및 GX-070(오바토클락스(obatoclax))를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
Bcr-Abl 키나제 억제제는 DASATINIB®(BMS-354825) 및 GLEEVEC®(이마티닙)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
BTK 억제제는 이브루티닙 및 아칼라브루티닙을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
CDK 억제제는 AZD-5438, BMI-1040, BMS-032, BMS-387, CVT-2584, 플라보피리돌(flavopyridol), GPC-286199, MCS-5A, PD0332991, PHA-690509, 셀리시클리브(seliciclib)(CYC-202, R-로스코비틴(roscovitine)) 및 ZK-304709를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
COX-2 억제제는 ABT-963, ARCOXIA®(에토리콕시브(etoricoxib)), BEXTRA®(발데콕시브(valdecoxib)), BMS347070, CELEBREX®(셀레콕시브(celecoxib)), COX-189(루미라콕시브(lumiracoxib)), CT-3, DERAMAXX®(데라콕시브(deracoxib)), JTE-522, 4-메틸-2-(3,4-디메틸페닐)-1-(4-술파모일페닐-1H-피롤), MK-663(에토리콕시브(etoricoxib)), NS-398, 파레콕시브(parecoxib), RS-57067, SC-58125, SD-8381, SVT-2016, S-2474, T-614 및 VIOXX®(로페콕시브(rofecoxib))를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
EGFR 억제제는 ABX-EGF, 항-EGFR 면역리포솜, EGF-백신, EMD-7200, ERBITUX®(세툭시맙(cetuximab)), HR3, IgA 항체, IRESSA®(제피티닙), TARCEVA®(에를로티닙 또는 OSI-774), TAGRISSO®(오시메르티닙(osimertinib)), TP-38, EGFR 융합 단백질 및 TYKERB®(라파티닙)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
ErbB2 수용체 억제제는 CP-724-714, CI-1033(카네르티닙(canertinib)), HERCEPTIN®(트라스투주맙(trastuzumab)), TYKERB®(라파티닙), OMNITARG®(2C4, 퍼투주맙(pertuzumab)), TAK-165, GW-572016(이오나파닙(ionafarnib)), GW-282974, EKB-569, PI-166, dHER2(HER2 백신), APC-8024(HER-2 백신), 항-HER/2neu 이중특이적 항체, B7.her2IgG3, AS HER2 삼중기능성 이중특이적 항체, mAB AR-209 및 mAB 2B-1을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
히스톤 데아세틸라제 억제제는 뎁시펩타이드(depsipeptide), LAQ-824, MS-275, 트라폭신(trapoxin), 수베로일아닐리드 하이드록삼산(suberoylanilide hydroxamic acid)(SAHA), TSA 및 발프로산을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
HSP-90 억제제는 17-AAG-nab, 17-AAG, CNF-101, CNF-1010, CNF-2024, 17-DMAG, 겔다나마이신(geldanamycin), IPI-504, KOS-953, MYCOGRAB®(HSP-90에 대한 인간 재조합 항체), NCS-683664, PU24FCl, PU-3, 라디시콜(radicicol), SNX-2112, STA-9090 및 VER49009를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
아폽토시스 단백질의 억제제는 HGS1029, GDC-0145, GDC-0152, LCL-161 및 LBW-242를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
사멸 수용체 경로의 활성화제는 TRAIL, 항체 또는 TRAIL 또는 사멸 수용체(예를 들어, DR4 및 DR5)를 표적화하는 항체 또는 다른 작용제, 예컨대, 아포맙(Apomab), 코나투무맙(conatumumab), ETR2-ST01, GDC0145(렉사투무맙(lexatumumab)), HGS-1029, LBY-135, PRO-1762 및 트라스투주맙(trastuzumab)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
키네신 억제제는 Eg5 억제제, 예컨대 AZD4877, ARRY-520; 및 CENPE 억제제, 예컨대 GSK923295A를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
JAK-2 억제제는 CEP-701(레스아우르티닙(lesaurtinib)), XL019 및 INCB018424를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
MEK 억제제는 ARRY-142886, ARRY-438162, PD-325901, 및 PD-98059를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
mTOR 억제제는 AP-23573, CCI-779, 에베롤리무스(everolimus), RAD-001, 라파마이신, 템시롤리무스(temsirolimus), ATP-경쟁적 TORC1/TORC2 억제제, 예컨대 PI-103, PP242, PP30 및 토린(Torin) 1를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
비-스테로이드성 항-염증 약물은 AMIGESIC®(살살레이트(salsalate)), DOLOBID®(디플루니살(diflunisal)), MOTRIN®(이부프로펜), ORUDIS®(케토프로펜(ketoprofen)), RELAFEN®(나부메톤(nabumetone)), FELDENE®(피록시캄(piroxicam)), 이부프로펜 크림, ALEVE®(나프록센) 및 NAPROSYN®(나프록센), VOLTAREN®(디클로페낙(diclofenac)), INDOCIN®(인도메타신(indomethacin)), CLINORIL®(술린다크(sulindac)), TOLECTIN®(톨메틴(tolmetin)), LODINE®(에토돌락(etodolac)), TORADOL®(케토롤락(ketorolac)) 및 DAYPRO®(옥사프로진(oxaprozin))를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
PDGFR 억제제는 C-451, CP-673 및 CP-868596을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
백금 화학요법제는 시스플라틴, ELOXATIN®(옥살리플라틴) 에프타플라틴(eptaplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 네다플라틴(nedaplatin), PARAPLATIN®(카보플라틴(carboplatin)), 사트라플라틴(satraplatin) 및 피코플라틴(picoplatin)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
폴로-유사 키나제 억제제는 BI-2536을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
포스포이노시티드-3 키나제(PI3K) 억제제는 보르트만닌(wortmannin), LY294002, XL-147, CAL-120, ONC-21, AEZS-127, ETP-45658, PX-866, GDC-0941, BGT226, BEZ235 및 XL765를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
트롬보스폰딘 유사체는 ABT-510, ABT-567, ABT-898 및 TSP-1을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
VEGFR 억제제는 ABT-869, AEE-788, ANGIOZYMETM(혈관신생을 억제하는 리보자임(Ribozyme Pharmaceuticals(Boulder, CO) 및 Chiron(Emeryville, CA)), 액시티닙(AG-13736), AZD-2171, CP-547,632, CYRAMZA®(라무시루맙(ramucirumab)), IM-862, MACUGEN®(페갑타밉(pegaptamib)), NEXAVAR®(소라페닙(sorafenib), BAY43-9006), 파조파닙(pazopanib)(GW-786034), 바탈라닙(vatalanib)(PTK-787, ZK-222584), SUTENT®(수니티닙(sunitinib), SU-11248), STIVARGA®(레고라페닙(regorafenib)), VEGF 트랩 및 ZACTIMA™(반데타닙(vandetanib), ZD-6474)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항생제는 끼어들기 항생제 아클라루비신(aclarubicin), 악티노마이신(actinomycin) D, 암루비신(amrubicin), 안나마이신(annamycin), 아드리아마이신(adriamycin), BLENOXANE®(블레오마이신(bleomycin)), 다우노루비신, CAELYX® 또는 MYOCET®(리포좀 독소루비신), 엘사미트루신(elsamitrucin), 에피루비신(epirubicin), 글라부신(glarbuicin), ZAVEDOS®(이다루비신(idarubicin)), 미토마이신 C, 네모루비신(nemorubicin), 네오카지노스타틴(neocarzinostatin), 페플로마이신(peplomycin), 피라루비신(pirarubicin), 레베카마이신(rebeccamycin), 스티말라머(stimalamer), 스트렙토조신(streptozocin), VALSTAR®(발루비신(valrubicin)) 및 지노스타틴(zinostatin)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
이성질화효소 억제제는 아클라루비신(aclarubicin), 9-아미노캄프토테신, 아모나피드(amonafide), 암사크린(amsacrine), 베카테카린(becatecarin), 벨로테칸(belotecan), BN-80915, CAMPTOSAR®(이리노테칸 하이드로라이드), 캄프토테신, CARDIOXANE®(덱스라족신(dexrazoxine)), 디플로모테칸(diflomotecan), 에도테카린(edotecarin), ELLENCE® 또는 PHARMORUBICIN®(에피루비신(epirubicin)), 오토포시드(etoposide), 엑사테칸(exatecan), 10-하이드록시캄프토테신, 지마테칸(gimatecan), 루르토테칸(lurtotecan), 미톡산트론(mitoxantrone), Onivyde™(리포좀 이리노테칸), 오라테신(orathecin), 피라르부신(pirarbucin), 픽산트론(pixantrone), 루비테칸(rubitecan), 소부족산(sobuzoxane), SN-38, 타플루포시드(tafluposide) 및 토포테칸(topotecan)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항체는 AVASTIN®(베바시주맙(bevacizumab)), CD40-특이적 항체, chTNT-1/B, 데노수맙(denosumab), ERBITUX®(세툭시맙(cetuximab)), HUMAX-CD4®(자놀리무맙(zanolimumab)), IGF1R-특이적 항체, 린투주맙(lintuzumab), OX-40 특이적 항체, PANOREX®(데드레콜로맙(edrecolomab)), RENCAREX®(WX G250), RITUXAN®(리툭시맙(rituximab)), 티실리무맙(ticilimumab), 트라스투주맙(trastuzumab), 퍼투주맙(pertuzumab), VECTIBIX®(파니투무맙(panitumumab)) 및 CD20 항체 유형 I 및 II를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
호르몬 요법제는 ARIMIDEX®(아나스트로졸(anastrozole)), AROMASIN®(엑세메스탄(exemestane)), 아족시펜(arzoxifene), CASODEX®(비칼루타미드(bicalutamide)), CETROTIDE®(세트로렐릭스(cetrorelix)), 데가렐릭스(degarelix), 데슬로렐린(deslorelin), DESOPAN®(트릴로스탄(trilostane)), 덱사메타손(dexamethasone), DROGENIL®(플루타미드(flutamide)), EVISTA®(랄록시펜(raloxifene)), AFEMA™(파드로졸(fadrozole)), FARESTON®(토레미펜(toremifene)), FASLODEX®(풀베스트란트(fulvestrant)), FEMARA®(레트로졸(letrozole)), 포르메스탄(formestane), 글루코코르티코이드, HECTOROL®(독세르칼시페롤(doxercalciferol)), RENAGEL®(세벨라머 카보네이트(sevelamer carbonate)), 라소폭시펜(lasofoxifene), 류프롤리드 아세테이트(leuprolide acetate), MEGACE®(메게스테롤(megesterol)), MIFEPREX®(미페프리스톤(mifepristone)), NILANDRON™(닐루타미드(nilutamide)), NOLVADEX®(타목시펜 시트레이트(tamoxifen citrate)), PLENAXIS™(아바렐릭스(abarelix)), 프레드니손, PROPECIA®(피나스테리드(finasteride)), 릴로스탄(rilostane), SUPREFACT®(부세렐린(buserelin)), TRELSTAR®(황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH)), VANTAS®(히스트렐린(Histrelin) 이식물), VETORYL®(트릴로스탄(trilostane) 또는 모드라스탄(modrastane)), 및 ZOLADEX®(포스렐린(fosrelin), 고세렐린(goserelin))를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
델토이드 및 레티노이드는 세오칼시톨(seocalcitol)(EB1089, CB1093), 렉사칼시트롤(lexacalcitrol)(KH1060), 펜레티니드(fenretinide), PANRETIN®(알리레티노인(aliretinoin)), ATRAGEN®(리포좀 트레티노인(liposomal tretinoin)), TARGRETIN®(벡사로텐(bexarotene)) 및 LGD-1550을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
PARP 억제제는 ABT-888(벨리파립), KU-59436, AZD-2281(올라파립(olaparib)), AG-014699(루카파립), MK4827(니라파립(niraparib)), BMN-673(탈라조파립(talazoparib)), 이니파립(iniparib), BSI-201, BGP-15, INO-1001 및 ONO-2231을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
식물 알칼로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신(vindesine) 및 비노렐빈(vinorelbine)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
프로테아좀 억제제는 VELCADE®(보르테조밉(bortezomib)), KYPROLIS®(카필조밉(carfilzomib)), MG132, NPI-0052 및 PR-171을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
면역학적제제의 예는 인터페론, 면역 체크포인트 억제제, 동시-자극 작용제 및 다른 면역-향상제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 인터페론은 인터페론 알파, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 인터페론 베타, 인터페론 감마-1a, ACTIMMUNE® (인터페론 감마-1b) 또는 인터페론 감마-n1, 이들의 조합 등을 포함한다. 면역 체크포인트 억제제는 PD-L1 (예를 들어, 두발루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, MEDI4736, MSB0010718C 및 MPDL3280A), 및 CTLA4 (세포독성 림프구 항원 4; 예를 들어, 이필리무맙, 트레멜리무맙)을 타겟팅하는 항체를 포함한다. 동시-자극 작용제는 CD3, CD40, CD40L, CD27, CD28, CSF1R, CD137(예를 들어, 우렐루맙(urelumab)), B7H1, GITR, ICOS, CD80, CD86, OX40, OX40L, CD70, HLA-DR, LIGHT, LIGHT-R, TIM3, A2AR, NKG2A, KIR(예를 들어, 리릴루맙(lirilumab)), TGF-β(예를 들어, 프레솔리무맙(fresolimumab))에 대한 항체 및 이의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
다른 작용제는 ALFAFERONE®(IFN-α), BAM-002(산화된 글루타티온), BEROMUN®(타소네르민(tasonermin)), BEXXAR®(토시투모맙(tositumomab)), CAMPATH®(알렘투주맙(alemtuzumab)), 다카르바진, 데니류킨(denileukin), 에프라투주맙(epratuzumab), GRANOCYTE®(레노그라스팀(lenograstim)), 렌티난(lentinan), 백혈구 알파 인터페론, 이미퀴모드(imiquimod), 흑색종 백신, 미투모맙(mitumomab), 몰그라모스팀(molgramostim), MYLOTARG™(젬투주맙 오조가미신(gemtuzumab ozogamicin)), NEUPOGEN®(필그라스팀(filgrastim)), OncoVAC-CL, OVAREX®(오레고보맙(oregovomab)), 펨투모맙(pemtumomab)(Y-muHMFG1), PROVENGE®(시풀레우셀(sipuleucel)-T), 사르가라모스팀(sargaramostim), 시조필란(sizofilan), 테셀류킨(teceleukin), THERACYS®(바실러스 칼메트-게린(Bacillus Calmette-Guerin)), 우베니멕스(ubenimex), VIRULIZIN®(면역치료제, 로루스 파마슈티컬즈(Lorus Pharmaceuticals)), Z-100(마루야마의 특이적 물질(SSM)), WF-10(테트라클로로데카옥시드(TCDO)), PROLEUKIN®(알데스류킨(aldesleukin)), ZADAXIN®(티말파신(thymalfasin)), ZINBRYTA®(다클리주맙(daclizumab) 고-수율 과정) 및 ZEVALIN®(90Y-이브리투모맙 티욱세탄(Ibritumomab tiuxetan))를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
생물학적 반응 변형제는 살아있는 유기체의 방어 메커니즘 또는 조직 세포가 항-종양 활성을 갖게 하는 조직 세포의 생물학적 반응, 예컨대 생존, 성장 또는 분화를 변형시키는 작용제이며, 크레스틴(krestin), 렌티난(lentinan), 시조피란(sizofiran), 피시바닐(picibanil), PF-3512676(CpG-8954) 및 우베니멕스(ubenimex)를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
피리미딘 유사체는 사이타라빈(cytarabine)(ara C 또는 아라비노시드 C), 시토신 아라비노시드(cytosine arabinoside), 독시플루리딘(doxifluridine), FLUDARA®(플루다라빈(fludarabine)), 5-FU(5-플루오로우라실), 플록수리딘(floxuridine), GEMZAR®(겜시타빈(gemcitabine)), TOMUDEX®(라티트렉스드(Ratitrexed)) 및 TROXATYL™(트리아세틸우리딘 트록사시타빈(triacetyluridine troxacitabine))를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
퓨린 유사체는 LANVIS®(티오구아닌) 및 PURINETHOL®(머캅토퓨린)를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항유사분열제는 바타불린(batabulin), 에포틸론(epothilone) D(KOS-862), N-(2-((4-하이드록시페닐)아미노)피리딘-3-일)-4-메톡시벤젠술폰아미드, 익사베필론(ixabepilone)(BMS 247550), TAXOL®(파클리탁셀(paclitaxel)), TAXOTERE®(도세탁셀(docetaxel)), PNU100940(109881), 파투필론(patupilone), XRP-9881(라로탁셀(larotaxel)), 빈플루닌(vinflunine) 및 ZK-EPO(합성 에포틸론(synthetic epothilone))를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
유비퀴틴 리가제 억제제는 MDM2 억제제, 예컨대 누틀린(nutlins) 및 NEDD8 억제제, 예컨대 MLN4924를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항-PD-1 항체는 또한 방사선 요법의 효능을 향상시키는데 사용될 수 있다. 방사선 요법의 예는 외부 빔 방사선 요법, 내부 방사선 요법(즉, 근접 치료) 및 전신 방사선 요법을 포함한다.
항-PD-1 항체는 다른 화학치료제, 예컨대 ABRAXANE™(ABI-007), ABT-100(파네실 트랜스퍼라제 억제제), ADVEXIN®(Ad5CMV-p53 백신), ALTOCOR® 또는 MEVACOR®(로바스타틴(lovastatin)), AMPLIGEN®(폴리 I:폴리 C12U, 합성 RNA), APTOSYN®(엑시술린드(exisulind)), AREDIA®(파미드론산(pamidronic acid)), 아르글라빈(arglabin), L-아스파라기나제, 아타메스탄(atamestane)(1-메틸-3,17-디온-안드로스타-1,4-디엔), AVAGE®(타자로텐(tazarotene)), AVE-8062(콤브레아스타틴(combreastatin) 유도체) BEC2(미투모맙(mitumomab)), 카켁틴(cachectin) 또는 카켁신(cachexin)(종양 괴사 인자), 칸박신(canvaxin)(백신), CEAVAC®(암 백신), CELEUK®(셀몰류킨(celmoleukin)), CEPLENE®(히스타민 디하이드로클로라이드), CERVARIX®(인간 유두종 바이러스 백신), CHOP®(C:CYTOXAN®(사이클로포스파미드); H:ADRIAMYCIN®(하이드록시독소루비신); O: 빈크리스틴(ONCOVIN®); P: 프레드니손), CYPAT™(사이프로테론 아세테이트(cyproterone acetate)), 콤브레스타틴(combrestatin) A4P, DAB(389)EGF(His-Ala 링커를 통해 인간 상피 성장 인자에 융합된 디프테리아 독소의 촉매 및 전위 도메인) 또는 TransMID-107R™(디프테리아 독소), 다카르바진, 닥티노마이신, 5,6-디메티리잔테논-4-아세트산(DMXAA), 에닐우라실(eniluracil), EVIZON™(스쿠알라민 락테이트(squalamine lactate)), DIMERICINE®(T4N5 리포좀 로션), 디스코데르몰리드(discodermolide), DX-8951f(엑사테칸 메실레이트(exatecan mesylate)), 엔자스타우린(enzastaurin), EPO906(에포틸론(epothilone) B), GARDASIL®(4가 인간 유두종바이러스(6, 11, 16, 18형) 재조합 백신), GASTRIMMUNE®, GENASENSE®, GMK(강글리오시드 컨쥬게이트 백신), GVAX®(전립선암 백신), 할로푸지논(halofuginone), 히스트렐린(histrelin), 하이드록시카바미드(hydroxycarbamide), 이반드론산(ibandronic acid), IGN-101, IL-13-PE38, IL-13-PE38QQR(신트레데킨 베수도톡스(cintredekin besudotox)), IL-13-슈도모나스(pseudomonas) 외독소, 인터페론-α, 인터페론-γ, JUNOVAN™ 또는 MEPACT™(미파무티드(mifamurtide)), 로나파닙(lonafarnib), 5,10-메틸렌테트라하이드로폴레이트, 밀테포신(miltefosine)(헥사데실포스포콜린(hexadecylphosphocholine)), NEOVASTAT®(AE-941), NEUTREXIN®(트리메트렉세이트 글루쿠로네이트(trimetrexate glucuronate)), NIPENT®(펜토스타틴(pentostatin)), ONCONASE®(리보뉴클레아제 효소), ONCOPHAGE®(흑색종 백신 치료), ONCOVAX®(IL-2 백신), ORATHECIN™(루비테칸(rubitecan)), OSIDEM®(항체-기반의 세포 약물), OVAREX® MAb(쥣과 모노클로널 항체), 파클리탁셀(paclitaxel), PANDIMEX™(20(S)프로토파낙사디올(aPPD) 및 20(S)프로토파낙사트리올(aPPT)을 포함하는 인삼 유래의 아글리콘 사포닌), 파니투무맙(panitumumab), PANVAC®-VF(연구 암 백신), 페가스파가제(pegaspargase), PEG 인터페론 A, 페녹소디올(phenoxodiol), 프로카바진(procarbazine), 레비마스타트(rebimastat), REMOVAB®(카투막소맙(catumaxomab)), REVLIMID®(레날리도미드(lenalidomide)), RSR13(에파프록시랄(efaproxiral)), SOMATULINE® LA(란레오티드(lanreotide)), SORIATANE®(아시트레틴(acitretin)), 스타우로스포린(staurosporine)(스트렙토마이세스 스타우로스포어즈(Streptomyces staurospores)), 탈라보스타트(talabostat)(PT100), TARGRETIN®(벡사로텐(bexarotene)), TAXOPREXIN®(DHA-파클리탁셀(paclitaxel)), TELCYTA®(칸포스파미드(canfosfamide), TLK286), 테밀리펜(temilifene), TEMODAR®(테모졸로미드(temozolomide)), 테스밀리펜(tesmilifene), 탈리도미드(thalidomide), THERATOPE®(STn-KLH), 티미택(thymitaq)(2-아미노-3,4-디하이드로-6-메틸-4-옥소-5-(4-피리딜티오)퀴나졸린 디하이드로클로라이드), TNFERADE™(아데노벡터:종양 괴사 인자-α에 대한 유전자를 함유하는 DNA 운반체), TRACLEER® 또는 ZAVESCA®(보센탄(bosentan)), 트레티노인(tretinoin)(Retin-A), 테트란드린(tetrandrine), TRISENOX®(아세닉 트리옥시드(arsenic trioxide)), VIRULIZIN®, 우크레인(ukrain)(더 큰 애기똥풀 식물로부터의 알칼로이드의 유도체), 비탁신(vitaxin)(항-알파v베타3 항체), XCYTRIN®(모텍사핀 가돌리늄(motexafin gadolinium)), XINLAY™(아트라센탄(atrasentan)), XYOTAX™(파클리탁셀 폴리글루멕스(paclitaxel poliglumex)), YONDELIS®(트라벡테딘(trabectedin)), ZD-6126, ZINECARD®(덱스라족산(dexrazoxane)), ZOMETA®(졸렌드론산(zolendronic acid)) 및 조루비신(zorubicin), 및 이들 작용제 중 임의의 조합에 부가하여 또는 이와 함께 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 비-소세포 폐암, 두경부암, 췌장암, 결장 직장암, 및 위암을 치료하기 위한 c-Met 키나제를 표적으로 하는 항체-약물 접합체에 보조적으로 또는 약물 접합체와 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 비-소세포 폐암, 두경부암, 췌장암, 육종, 삼중 음성 유방암, 또는 흑색종을 치료하기 위한 LRRC15를 표적으로 하는 항체-약물 접합체에 보조적으로 또는 약물 접합체와 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 아교모세포종을 치료하기 위한 EGFR을 표적으로 하는 항체-약물 접합체에 보조적으로 또는 항체-약물 접합체와 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 다발성 골수종과 같은 혈액 악성종양을 치료하기 위한 CS1을 표적으로 하는 항체-약물 접합체에 보조적으로 또는 항체-약물 접합체와 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 소세포 폐암 또는 아교모세포종을 치료하기 위한 DLL3을 표적으로 하는 항체-약물 접합체에 보조적으로 또는 항체-약물 접합체와 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 두경부암, 폐암(예컨대, 선암종, 비-소세포 폐암, 중피종, 소세포 폐암), 흑색종, 난소암 또는 췌장암을 치료하기 위한 항-CD40 단백질에 보조적으로 또는 항-CD40 단백질과 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 만성 림프구성 백혈병과 같은 혈액 악성종양을 치료하기 위한 베네토클락스에 보조적으로 또는 베네토클락스와 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 만성 림프구성 백혈병, 맨틀 세포 림프종, 또는 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 또는 고형 종양과 같은 혈액 악성종양을 치료하기 위한 이브루티닙에 보조적으로 또는 이브루티닙과 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 비-소세포 폐암을 치료하기 위한 c-Met 키나제를 표적으로 하는 이필리무맙, 및 항체-약물 접합체에 보조적으로 또는 이와 함께 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 비-소세포 폐암을 치료하기 위한 LRRC15를 표적으로 하는 이필리무맙, 및 항체-약물 접합체에 보조적으로 또는 이와 함께 투여된다.
7.7. 용량 및 투여 용법
투여되는 항-PD-1 항체의 양은 치료된 고형 종양의 특정 유형, 치료되는 고형 종양의 단계, 투여 방식, 투여 빈도, 원하는 치료적 이득 및 환자의 연령, 체중 및 기타 특성과 같은 기타 변수 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다양한 인자들에 좌우될 것이다. 투여의 특정 모드 및 빈도에 대한 치료적 이득을 제공하는데 효과적인 투여량의 결정은 당업자의 능력 내에 있다.
치료적 이득을 제공하는데 효과적인 투여용량은 초기에 생체내 동물 모델 또는 임상에서 추정될 수 있다. 다양한 질병에 적합한 동물 모델이 당 업계에 공지되어 있다.
본 명세서에 개시된 항-PD-1 항체는 치료될 질환에 적합한 임의의 경로로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 표 3에 열거된 인간화된 항체들 중 임의의 하나이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 51 또는 SEQ ID NO: 52에 따른 중쇄 및 SEQ ID NO: 61에 따른 경쇄를 갖는다. 항-PD-1 항체는 전형적으로 비경구적으로, 즉 주입, 피하, 근육내, 정맥내(IV), 피부내, 척수강내, 볼루스, 종양내 주사 또는 경막외 투여될 것이다((Shire 등, 2004, J. Pharm. Sciences 93(6):1390-1402)). 일 구현예에서, 항-PD-1 항체는 바이알에서 동결건조된 분말로서 제공된다. 바이얼은 100 ㎎, 110 ㎎, 120 ㎎, 150 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 300 ㎎ 또는 400 ㎎의 항-PD-1 항체를 함유할 수 있다. 투여 전에, 동결건조된 분말을 주사를 위한 멸균 수 (SWFI) 또는 다른 적합한 매질로 재구성하여, 20 mg/mL 항-PD-1 항체를 함유하는 용액을 제공한다. 일부 구현예에서, 생성된 재구성된 용액을 식염수 또는 다른 주입에 적합한 매질로 추가로 희석하고, IV 주입을 통해, 7일마다 2회, 7일마다 1회, 14일마다 1회, 21일마다 1회, 28일마다 1회, 35일마다 1회, 42일마다 1회, 49일마다 1회, 또는 56일마다 1회 투여한다. 일부 구현예에서, 제1 사이클 동안, 주입은 90분에 걸쳐 일어난다. 일부 구현예에서, 후속적 주입은 60분에 걸쳐 일어난다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 6.0 mg/kg, 8.0 mg/kg, 또는 10.0 mg/kg으로 7일마다 1회 IV 주입으로서 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 6.0 mg/kg, 8.0 mg/kg, 또는 10.0 mg/kg으로 14일마다 1회 IV 주입으로서 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 6.0 mg/kg, 8.0 mg/kg, 또는 10.0 mg/kg으로 21일마다 1회 IV 주입으로서 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 6.0 mg/kg, 8.0 mg/kg, 또는 10.0 mg/kg으로 28일마다 1회 IV 주입으로서 투여된다.
한 예시적인 구현예에서, 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 항-PD-1 항체가 이필리무맙(YERVOY®)에 보조적으로 사용된다. 항-PD-1 항체는 1.0 mg/kg 또는 3.0 mg/kg으로 21일마다 1회 IV 주입을 통해 투여된다. 이필리무맙은 4회 투여동안 3주마다 1회, 1 mg/kg 용량으로 정맥내 주입에 의해 투여된다. 최종 이필리무맙 투여 후, 항-PD-1 항체는 1.0 mg/kg 또는 3.0 mg/kg으로 14일마다 1회 IV 주입을 통해 투여된다. 질환 진행 또는 환자가 더 이상 용인할 수 없을 때까지 보조적 항-PD-1 항체/이필리무맙 요법이 계속된다.
한 예시적인 구현예에서, 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 항-PD-1 항체가 이필리무맙(YERVOY®)에 보조적으로 사용된다. 항-PD-1 항체는 1.0 mg/kg 또는 3.0 mg/kg으로 14일마다 1회 IV 주입을 통해 투여된다. 이필리무맙은 4회 투여동안 6주마다 1회, 1 mg/kg 용량으로 정맥내 주입에 의해 투여된다. 질환 진행 또는 환자가 더 이상 용인할 수 없을 때까지 보조적 항-PD-1 항체/이필리무맙 요법이 계속된다.
한 예시적인 구현예에서, 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 항-PD-1 항체가 이필리무맙(YERVOY®)에 보조적으로 사용된다. 항-PD-1 항체는 1.0 mg/kg 또는 3.0 mg/kg으로 14일마다 1회 IV 주입을 통해 투여된다. 이필리무맙은 4회 투여동안 12주마다 1회, 1 mg/kg 용량으로 정맥내 주입에 의해 투여된다. 질환 진행 또는 환자가 더 이상 용인할 수 없을 때까지 보조적 항-PD-1 항체/이필리무맙 요법이 계속된다.
다른 화학요법제와 같은 다른 약제에 보조제로, 또는 이와 함께 투여될 때, 항-PD-1 항체는 다른 제제와 동일한 스케쥴로 또는 상이한 스케줄에 따라 투여될 수 있다. 동일한 스케줄에서 투여될 때, 항-PD-1 항체는 다른 제제의 전후, 또는 동시에 투여될 수 있다. 항-PD-1 항체가 간호 표준에 보조적으로 또는 간호 표준과 함께 투여되는 일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 표준 치료의 시작 전에, 예를 들어 치료 요법의 표준을 시작하기 전에 하루, 수일, 1주, 수주, 1개월 또는 심지어 수개월 동안 개시될 수 있다. 항-PD-1 항체가 간호 표준에 보조적으로 또는 간호 표준과 함께 투여되는 일부 구현예에서, 항-CD40 항체는 표준 치료의 시작 후에, 예를 들어 치료 요법의 표준을 시작한 후에 하루, 수일, 1주, 수주, 1개월 또는 심지어 수개월 동안 개시될 수 있다.
당업자라면 알 수 있는 바와 같이, 전술한 다양한 약제에 대한 권장 투여량은 환자 반응을 최적화하고 치료적 이득을 최대화하기 위해 조정될 필요가 있을 수 있다.
7.8. 예시적인 구현예들
다음은 본 개시 내용의 예시적인 열거된 구현예들이다.
1. (i) 3개의 CDR을 포함하는 VH 사슬; 및 (ii) 3개의 CDR을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 항-PD-1 결합 단백질로서, 여기서, VH CDR#1은 GYTFTHYGMN(SEQ ID NO:11)이고; VH CDR#2는 WVNTYTGEPTYADDFKG(SEQ ID NO:12)이고; VH CDR#3은 EGEGLGFGD(SEQ ID NO:13)이고; VL CDR#1은 RSSQSIVHSHGDTYLE(SEQ ID NO:14); VL CDR#2는 KVSNRFS (SEQ ID NO:15)이고; 및 VL CDR#3은 FQGSHIPVT(SEQ ID NO:16)인, 항-PD-1 결합 단백질.
2. 구현예 1에 있어서, SEQ ID NO: 31에 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 41에 상응하는 VL 사슬을 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
3. 구현예 1에 있어서, 인간화되는, 항-PD-1 결합 단백질.
4. 구현예 3에 있어서, SEQ ID NO: 36에 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42에 상응하는 VL 사슬을 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
5. (i) 3개의 CDR을 포함하는 VH 사슬; 및 (ii) 3개의 CDR을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 항-PD-1 결합 단백질로서, 여기서, VH CDR#1은 GYTFTHYGMN(SEQ ID NO:11)이고; VH CDR#2는 WVNTYTGEPTYADDFKG(SEQ ID NO:12)이고; VH CDR#3은 EGEGMGFGD (SEQ ID NO:23)이고; VL CDR#1은 RSSQSIVHSHGDTYLE(SEQ ID NO:14); VL CDR#2는 KVSNRFS (SEQ ID NO:15)이고; 및 VL CDR#3은 FQGSHIPVT(SEQ ID NO:16)인, 항-PD-1 결합 단백질.
6.구현예 5에 있어서, SEQ ID NO: 33에 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42에 상응하는 VL 사슬을 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
7. 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, IgG인, 항-PD-1 결합 단백질.
8. 구현예 7에 있어서, 아미노산 치환체 L234A 또는 L235A를 포함하는 변이체 CH2 도메인을 임의로 포함하는, IgG1인, 항-PD-1 결합 단백질.
9. 구현예 7에 있어서, 임의로 아미노산 치환 S228P를 포함하는 변이체 Fc 영역을 포함하는, IgG4인, 항-PD-1 결합 단백질.
10. 구현예 8에 있어서, SEQ ID NO: 51 또는 SEQ ID No: 52의 서열에 상응하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 61의 서열에 상응하는 경쇄를 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
11. 구현예 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 약 100 nM 미만의 KD를 갖는, 항-PD-1 결합 단백질.
12. 구현예 11에 있어서, 약 10 nM 미만의 KD를 갖는, 항-PD-1 결합 단백질.
13. 구현예 1 내지 구현예 12 중 어느 하나의 항-PD-1 결합 단백질 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
14. 구현예 1 내지 구현예 12 중 어느 하나의 항-PD-1 결합 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산.
15. 구현예 14의 핵산을 포함하는 벡터.
16. 구현예 15의 벡터로 형질전환된 원핵 숙주 세포.
17. 구현예 15의 벡터로 형질전환된 진핵 숙주 세포.
18. 구현예 14의 핵산을 발현하도록 조작된 진핵 숙주 세포.
19. 구현예 18에 있어서, 포유동물 숙주 세포인, 진핵 숙주 세포.
20. 이의 항-PD-1 결합 단백질의 제조 방법으로서, (a) 구현예 17 또는 구현예 18의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 (b) 항-PD-1 결합 단백질을 회수하는 단계를 포함하는, 제조 방법.
21. 면역계를 활성화시키는 방법으로서, 구현예 1 내지 구현예 12 중 어느 하나의 항-PD-1 결합 단백질, 또는 구현예 13에 따른 제약 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
22. 암을 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 구현예 12 중 어느 하나의 항-PD-1 결합 단백질, 또는 구현예 13에 따른 제약 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
23. 구현예 22에 있어서, 상기 암은 방광암, 유방암, 두경부암, 신장암, 폐암, 림프종, 흑색종 및 위암으로부터 선택되는, 방법.
24. 구현예 23에 있어서, 상기 폐암은 비-소세포 폐암인, 방법.
25. 구현예 22에 있어서, 상기 항-PD-1 결합 단백질이 단일요법으로서 투여되는, 방법.
26. 구현예 22에 있어서, 상기 항-PD-1 결합 단백질은 암을 치료하기 위해 통상적으로 사용되는 또다른 약제에 보조제로, 또는 이 약제와 함께 투여되는, 방법.
27. 구현예 26에 있어서, 상기 다른 약제가 방사선, 화학요법, 항체 약물 접합체, 항-CD40 항체, 항-CTLA-4 항체 및 항-OX40 항체로부터 선택되는, 방법.
28. 구현예 27에 있어서, 상기 화학요법이 시스플라틴, 카보플라틴, 파클리탁셀, 도세탁셀, 겜시타빈, 비노렐빈, 빈블라스틴, 이리노테칸, 에토포시드 또는 페메트렉세드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 방법.
29. 구현예 27에 있어서, 상기 항체 약물 접합체가 c-Met 키나제를 표적으로 하는. 방법.
30. 구현예 27에 있어서, 상기 항체 약물 접합체가 LRRC15를 표적으로 하는. 방법.
31. 구현예 27에 있어서, 상기 항체 약물 접합체가 EGFR을 표적으로 하는. 방법.
32. 구현예 27에 있어서, 상기 항체 약물 접합체가 CS1을 표적으로 하는. 방법.
33. 구현예 27에 있어서, 상기 항체 약물 접합체가 로발피투주맙 테시린인, 방법.
34. 구현예 27에 있어서, 상기 항-CTLA-4 항체가 이필리무맙인, 방법
실시예
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체의 구현예의 특정 특징 및 특성을 강조하는 하기 실시예는 설명의 목적으로 제공되는 것일뿐 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1: 재료 및 방법
8.1.1. ELISA에 의한 플레이트 결합된 인간 PD-1에 결합하는 항체
Immunolon 4xHB 96 웰 플레이트를 1㎍/ml의 인간 PD-1 Fc 융합체로 4℃에서 밤새 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1% BSA를 함유하는 PBS로 30분간 차단한 후, 플레이트 워셔를 사용하여 0.1% Tween 20(PBST)을 함유하는 PBS로 3회 세척하였다. 이어서, PD-1-코팅된 플레이트를 지시된 농도의 항체와 함께 실온(RT)에서 1 시간 동안 배양하였다. 플레이트를 PBST로 4회 세척한 후, 실온에서 1시간 동안, 1% BSA를 함유하는 PBS 중의 1:5000의 희석액으로 제조된 염소 항-인간 Fab 단편 특이적-비오틴 100 μL과 함께 배양하였다. 플레이트를 PBST에서 5회 세척하고, 스트렙타비딘-HRP의 1:1000 희석액 100 μL를 각 웰에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 배양하였다. PBST에서 플레이트를 5회 세척하고, TMB 1 성분 100μL를 각 웰에 첨가하고 발색될 때까지(약 5~10분) 실온에서 배양하였다. Spectromax 190(Molecular Devices)을 사용하여 광학 밀도(OD)를 650 nm에서 판독하였다.
8.1.2. 세포 표면 발현된 인간 PD-1에 결합하는 항체
PD-1 발현 Jurkat 세포를 플라스크로부터 수확하고, 1% BSA를 함유하는 PBS 중에서 2 x 106 세포/mL로 재현탁시켰다. 100 μL의 세포를 100 μL의 적정 시험 항체 또는 이소타입 대조군을 함유하는 둥근 바닥 96 웰 플레이트에 첨가하였다. 세포를 실온에서 25분 동안 항체와 함께 배양한 다음, 1% BSA를 함유하는 PBS로 2회 세척하였다. 세포 펠렛을 1:250 희석된 2차 항체 염소 항-인간 Fab PE 100 μL에 재현탁시켰다. 실온에서 25분 동안 배양한 후, 세포를 1% BSA를 함유하는 PBS로 2회 세척하고, 200㎕의 1% BSA에 재현탁시켰다. Becton Dickinson FACSCanto 유동 세포계측기를 사용하여 세포를 분석하였다. BD FACSDiva 소프트웨어(버전 8.0.1)를 사용하여 데이터를 분석하였다.
8.1.3. ELISA에 의해 플레이트 결합된 사이노몰구스 원숭이 PD-1에 결합하는 항체
Immunolon 4xHB 96-웰 플레이트를 DPBS 중의 1㎍/ml의 사이노몰구스 PD-1 Fc 융합체로 4℃에서 밤새 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1% BSA를 함유하는 PBS로 30분간 차단한 후, 플레이트 워셔를 사용하여 PBST(PBS Tween 20 0.1%)로 3회 세척하였다. 이어서, PD-1-코팅된 플레이트를 지시된 농도의 항체와 함께 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 PBST로 4회 세척한 후, 실온에서 1시간 동안, 1% BSA를 함유하는 PBS 중의 1:5000의 희석액으로 제조된 염소 항-인간 Fab 단편 특이적-비오틴 100 μL과 함께 배양하였다. 플레이트를 PBST에서 5회 세척하고, 스트렙타비딘-HRP의 1:1000 희석액 100 μL를 각 웰에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 배양하였다. 이어서 플레이트를 PBST 및 TMB 100 ㎕에서 5회 세척하였다. 하나의 성분을 각 웰에 첨가하고 발색될 때까지 실온에서 배양하였다(약 5~10분). Spectromax 190(Molecular Devices)을 사용하여 광학 밀도(OD)를 650 nm에서 판독하였다.
8.1.4. 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 결합하는 항체
인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 스탠포드 혈액 센터(Palo Alto, CA)로부터 구입한 버피 코트로부터 분리하였다. 간단히 말해서, 버피 코트를 마그네슘과 칼슘이 없는 PBS와 1:1 비율로 희석하였다. 희석된 혈액(30 mL)을 SepMate 튜브에 함유된 마그네슘 및 칼슘이 없는 PBS에서 제조된 90% Ficoll-Paque Plus 15 mL 위에 겹쳐놓았다. 튜브를 1200g에서 10분 동안 회전시켰다. 계면을 수집하고 1x PBS로 2회 세척하였다. PBMC를 1 μg/mL PHA 및 50 U/mL 재조합 인간 IL-2를 갖는 10% HI FCS를 함유하는 RPMI 배지에서 48시간 동안 2 x 106 세포/mL에서 배양하였다. 세포를 수집하고, 세척하고, 실온에서 25분 동안 항체와 함께 배양하였다. 표지된 세포를 1% BSA를 함유하는 PBS로 2회 세척하였다. 세포를 PBS + 1% BSA 100 μL에 재현탁시키고, PE 접합된 염소 항-인간 Fab 단편과 항-CD4-FITC의 1:250 희석액을 첨가하였다. 30분 후, 세포를 1% BSA를 함유하는 PBS로 2회 세척하고, 200㎕의 1% BSA에 재현탁시켰다. Becton Dickinson FACSCanto 유동 세포계측기를 사용하여 세포를 분석하였다. BD FACSDiva 소프트웨어(버전 8.0.1)를 사용하여 데이터를 분석하였다.
8.1.5. 표면 플라즈몬 공명에 의한 PD-1에 대한 결합 친화도
재조합 가용성 PD-1 ECD(세포외 도메인)에 대한 항-PD-1 항체의 결합 동역학은 항-Fc 포획 분석법을 사용하여 25℃에서 Biacore T200 기기로 수행된 표면 플라스몬 공명-기반 측정에 의해 결정하였다. 인간 PD-1(잔기 1~167) 및 사이노몰구스 PD-1(잔기 21~167)의 재조합 세포외 도메인을 상업적 공급원으로부터 구입하고, 10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA에서 겔 여과에 의해 추가로 정제하였다. 칩 제조 및 결합 동역학 측정은 분석 완충액 HBS-EP+(10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 트윈(Tween) 20) 중에서 이루어졌다. 항-Fc 캡쳐 칩 제조를 위해, 10 mM 아세트산 나트륨(pH 4.5)에서 25 μg/mL로 희석한 염소 항-인간 IgG Fc 폴리클로날 항체 약 2000 RU를 표준 아민 커플링 키트를 제조업체의 지침 및 절차에 따라 사용하여 CM5 바이오센서 칩에 직접 고정시켰다. 바이오센서 표면의 반응하지 않은 모이어티는 에탄올아민으로 차단하였다. 결합 동역학 측정을 위하여, 각각의 분석 사이클은 다음 단계들을 포함한다: (1) 시험 표면 단독에서의 시험 항체의 포획 단계; (2) 기준면과 시험 표면 모두에서 80 μL/분으로 240 μL 분석물 주입(PD-1 ECD 또는 완충액 단독), 그 후, 80 μL/분으로 900초 동안 해리를 모니터링하는 단계; 및 (3) 기준 및 시험 표면 위로 10 mM 글리신 하이드로클로라이드, pH 1.5 주입에 의한 포획 표면의 재생 단계. 분석하는 동안, 모든 측정은 포획 표면 단독에 대해서 (즉, 포획된 시험 항체 없이) 참조되었고, 완충액-단독 주입을 이중 참조에 사용하였다. PD-1 주입은 2배 희석 계열로 900 nM 내지 11.1 nM의 농도 범위였다. 비아코어(Biacore) T200 평가 소프트웨어를 사용하여 데이터를 처리하고 결합 동역학 상수인 ka(M-1.-sec-1) 및 kd(sec-1), 그리고 평형 해리 상수 KD(M)을 결정하였다.
8.1.6. PD-L1 및 PD-L2와의 PD-1 상호작용 차단
인간 PD-1 발현 HEK 293G 세포를 합류 플라스크로부터 수확하였다. 세포를 2 x 106 세포/mL의 농도로 PBS에 재현탁시켰다. 세포(1 x 105)를 96-웰 V 바닥 플레이트의 각 웰에 첨가하고 세포를 인간 FcR 블록을 사용하여 4℃에서 15분 동안 차단시켰다. 별도의 플레이트에서 시험 항체와 이소타입 대조군 용액을 20 μg/mL 출발 농도의 3-배 단계 희석액을 사용하여 준비했다. 세포를 1x PBS로 세척하고, 준비된 항체 희석액 50 μL 및 PD-L1 His-태그된 또는 PD-L2 His-태그된 리간드(10 μg/ml) 50 μL를 세포를 함유하는 플레이트에 첨가하였다. 세포를 4℃에서 30분 동안 배양하고, 1x PBS로 2회 세척하였다. PBS에 1:50으로 희석하여 제조한 항-His APC 항체(50 μL)를 각 웰에 첨가하고, 4℃에서 30분 동안 배양하였다. 세포를 2회 세척하고, PBS에 재현탁시키고 LSR II Fortessa(BD Biosciences, San Jose, CA)에서 습득하였다.
8.1.7. 정제된 CD4 T 세포 및 수지상 세포를 이용한 동종 인간 혼합 림프구 반응(MLR) 분석
인간 PBMC를 스탠포드 혈액 센터(Palo Alto, CA)로부터 구입한 버피 코트로부터 분리하였다. 간단히 말해서, 버피 코트를 마그네슘과 칼슘이 없는 PBS와 1:1 비율로 희석하였다. 희석된 혈액(30 mL)을 SepMate 튜브에 함유된 마그네슘 및 칼슘이 없는 PBS에서 제조된 90% Ficoll-Paque Plus 15 mL 위에 겹쳐놓았다. 튜브를 1200g에서 10분 동안 회전시켰다. 계면을 수집하고 1x PBS로 2회 세척하였다. 베타 머캅토에탄올을 함유하는 AIM-V 배지에서 세포를 1 x 108/mL로 재현탁시켰다. T75 플라스크에서 80 ng/mL GM-CSF 및 50 ng/mL IL-4의 존재하에 7일 동안 플라스틱 부착 PBMC를 배양하여 수지상 세포(DC)를 유도하였다. 5일째에, 50 pg/mL IL-1α 및 200 pg/mL TNF-α를 DC 배양물에 첨가하였다. 7일째에, DC를 플라스크로부터 수확하고, 414 R/분으로 7.3분간 조사하고, 완전한 배지(10% FBS, 1x 비-필수 비타민, 1% Pen/Strep 용액, 1% 피루브산 나트륨, 1% HEPES를 함유하는 L 글루타민을 갖는 RPMI)에서 1 x 105 세포/mL의 최종 농도로 재현탁시켰다. CD4 T 세포 분리 키트를 사용하여 동종 인간 CD4 T 세포를 분리하였다. DC(1 x 104/웰) 및 정제된 CD4 T 세포(1 x 105/웰)를 U 바닥 플레이트에 첨가하였다. 시험 항체 또는 이소타입 대조군(10 μg/mL)을 DC 및 T 세포를 함유하는 플레이트에 첨가하였다. 배양 5일 후, 상등액을 수집하고, Milliplex 세포계측 비드 어레이 키트를 사용하여 IL-2 및 IFN-γ를 분석하였다. IFN-γ는 BioRad Bioplex System(Bioplex manager 6.0)을 사용하여 측정하였다.
8.1.8. 파상풍 톡소이드에 대한 항원 리콜 반응
이미 기재된 바와 같이, 스탠포드 혈액 센터로부터 구입한 버피 코트로부터 인간 PBMC를 분리하였다. 베타 머캅토에탄올을 함유하는 AIM-V 배지에서 세포를 2 x 106세포/mL의 최종 농도로 재현탁시켰다. PBMCs(2 x 105)를 0.2 μg/mL 파상풍 톡소이드와 함께 웰당 사용하였다. 항체를 적정하고 플레이트를 5일 동안 배양하였다. 상등액을 5일에 수집하고, Milliplex 세포계측 비드 어레이 키트를 사용하여 IFN-γ를 평가하였다. IFN-γ는 BioRad Bioplex System(Bioplex manager 6.0)을 사용하여 측정하였다.
실시예 2: 마우스 항-PD-1 항체의 생성 및 인간화
마우스를 당 업계에 공지된 방법(E. Harlow, D. Lane. Antibody: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1998))에 따라 면역화시켰다. 마우스 이소타이핑(Mouse Isotyping) 키트(Roche)를 사용하여 각 모노클로날 항체의 이소타입을 결정하였다. 대상 항체를 생산하는 하이브리도마 클론을 정제하고, 표면 플라스몬 공명 및 리간드 경쟁(ELISA)에 의해 친화도를 추가로 특성화하였다.
발현 벡터의 클로닝 및 구축은 재조합 모노클로날 항체의 발현을 위한 당 업계에 공지된 방법에 의해 수행하였다.
항체 V 영역의 인간화는 Queen, C. et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989; 86:10029-10033)에 의해 나타낸 바와 같이 실시하였다. CDR의 표준 구조는 Huang 등 (Methods, 2005; 36: 35-42)에 따라 결정하였다. 동일하거나 가장 유사한 CDR 정준 구조를 갖는 인간 가변성 생식세포계 서열이 동정되고, 적당한 인간 VH, VL 및 J 세그먼트 서열을 선택하여 항-PD-1 가변 영역에 대한 프레임워크를 제공하였다. 컴퓨터 모델이 CDR과의 중요한 접촉을 제안한 프레임워크 위치에서, 뮤린 항-PD-1 V 영역으로부터의 아미노산은 원래의 인간 프레임워크 아미노산으로 대체되었다(역-돌연변이). 예시적인 마우스 및 인간화된 항체의 VH 및 VL 영역의 전체 아미노산 서열이 도 2에 나타나 있다.
항-PD-1 마우스 항체 Mu12A11을 상기 기재된 방법에 따라 인간화시켰다. Mu12A11 VH의 인간화된 버전은 Hu12A11.1b VH 및 Hu12A11.2b VH이었다. Hu12A11.1b VH는 V2I, M48V, F67L, 및 A93T의 4개의 역 돌연변이를 갖는, VH 7-4-1 프레임워크 영역을 가졌다. Hu12A11.2b VH는 V2I, M48V, V67L, I69F, A71L, E73T, 및 A93T의 4개의 역 돌연변이를 갖는, VH 1~69 프레임워크 영역을 가졌다. 2개의 인간화된 VH 중 하나는 I2V의 1개의 역 돌연변이를 갖는, VL 2~28 프레임워크 영역을 갖는 인간화된 경쇄 Hu12A11.1a VL과 조합될 수 있다.
실시예 3: 항-PD-1 항체의 안정성
예시적인 항체의 안정성은 산화적 또는 가변 온도 조건 하에서 처리한 후 항체의 PD-1 결합을 측정함으로써 결정하였다.
책임 모티프의 평가는 용제가 노출되고 탈아미드화되기 쉬운 것으로 생각되는 Kabat 위치 99(M99)에서 보존된 메티오닌 잔기를 확인하였다. M99 친계 항체 Hu12A11.2b1의 샘플을 가속된 분해 조건에 노출시켜 잠재적인 탈 아미드화를 향상시켰다(도 3a). 1% 과산화수소(1% HP) 또는 1% tert-부틸 하이드로퍼옥사이드(1% TBHP)로 처리한 샘플은 결합 친화성의 상실을 입증하여, 메티오닌-99 잔기의 산화 가능성을 시사했다. 이소류신(M99I, SEQ ID NO: 34에 따른 VH를 갖는 Hu12A11.2b2), 발린(M99V, SEQ ID NO: 35에 따른 VH를 갖는 Hu12A11.2b3) 및 류신(M99L, SEQ ID NO: 36에 따른 VH를 갖는 Hu12A11.2b4) 돌연변이를 포함하는, 위치 M99에서의 점 돌연변이를 함유하는 항체 세트를 작제하였다. 항체 변이체를 인간 PD-1 트랜스펙션된 Jurkat 세포에 대한 결합에 대해 스크리닝하고, EC50 값을 결정하였다(도 3b). 세 점 돌연변이-함유 항체 모두가 유사하게 세포 표면 PD-1에 결합하였지만, M99L 변이체 항체는 M99V 또는 M99I 변이체에 비해 더 높은 결합 활성을 나타냈다.
M99L 변이체 Hu12A11.2b4는 온도 안정성 시험 후에 완전 결합능을 유지하는 것으로 밝혀졌다(도 3c). Hu12A11.2b4를 -80, 5, 25 또는 40℃에서 배양하면 EC50 또는 최대 형광 강도(MFI) 측면에서 유의한 활성 상실을 일으키지 않았다.
실시예 4: 항-PD-1 항체의 결합 친화도
하기 표 4-1은 미국 특허 제9,073,994호에서 밝혀진 절차에 따라 제조된 문헌 항-PD-1 항체 니볼루맙과 비교하여 예시적인 항체 Hu12A11.2b4의 시험관내 결합 친화도 데이터를 나타낸다. Hu12A11.2b4는 실시예 1의 분석에서 측정된 바와 같이 표면 플라스몬 공명, 인간(Hu) 또는 사이노몰구스(Cyno) PD-1, 또는 인간 Jurkat 세포에서의 ELISA 분석에 따라 니볼루맙과 비교하여 PD-1에 대한 유사한 결합 특성을 나타냈다.
[표 4-1]
Figure pct00009
실시예 5: 항-PD-1 항체 Hu12A11.2b4의 생물학적 활성
Hu12A11.2b4는 실시예 1에 기술된 다수의 시험관내 인간 세포 검정에서 생물학적 활성에 대해 평가하였다. 표 5-1에 나타낸 바와 같이, Hu12A11.2b4는 CD4+ T 세포에서 PD-1에 대한 180 pM 결합을 나타내었다. 또한, Hu12A11.2b4의 항-PD-1 활성은 유동 세포계측법에 의해 평가된 PD-1과의 PD-L1 또는 PD-L2 상호작용을 차단하는 능력에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 것으로 나타났다. 이 생물학적 활성은 인간 PD-1의 구성적 발현을 갖는 NFAT 반응 요소의 제어하에 반딧불이 루시퍼 라제 유전자를 발현하는 재조합 Jurkat T 세포에서 Hu12A11.2b4의 활성과 일치하였다(Jurkat NFAT 분석법).
[표 5-1]
Figure pct00010
항-PD-1 항체 Hu12A11.2b4는 시험관내 분석에서 면역학적 반응의 증진을 추가로 입증하였다. 도 4a에 도시된 바와 같이, 혼합 백혈구 배양물에서 10㎍/mL의 Hu12A11.2b4로 처리하면 IL-2가 유의하게 증가할 뿐만 아니라 IFN-γ가 약 7.4배 증가했다. 도 4b는 Hu12A11.2b4가 EC50 = 161 ng/mL로 10 ㎍/mL에서 항체 치료를 하지 않은 경우보다 약 6배의 파상풍 톡소이드 리콜 반응을 나타냈다는 것을 보여준다.
Hu12A11.2b4에 대해 관찰된 시험관내 생물학적 활성은 실시예 4에서 사용된 니볼루맙에 대해 측정된 것과 유사하였다. 면역학적 반응과 관련하여, 비교 항체 니볼루맙은 MLR에서 약 5.6배의 IFN-γ 증가를 나타내었고, EC50 = 218 ng/mL인, 10 μg/mL에서 항체 치료를 하지 않은 경우보다 약 6배의 파상풍 톡소이드 리콜 반응을 나타냈다.
본원에 인용된 모든 공보, 특허, 특허 출원 및 기타 문헌은 각각의 개별 공보, 특허, 특허 출원 또는 기타 문헌이 모든 목적을 위해 참고로 포함되도록 개별적으로 표시되는 경우와 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 본원에 참고로 통합된다.
다양한 특정 구현예가 도시되고 기술되었지만, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 다양한 변경이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> ABBVIE BIOTHERAPEUTICS INC. <120> ANTI-PD-1(CD279) ANTIBODIES <130> 381493-327WO <150> 62/394,314 <151> 2016-09-14 <160> 61 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 288 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 115 120 125 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 130 135 140 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 145 150 155 160 Arg Pro Ala Gly Gln Phe 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Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Glu Gly Met Gly Phe Gly Asp Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 34 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 34 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Val Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Leu Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Glu Gly Ile Gly Phe Gly Asp Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 35 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Val Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Leu Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Glu Gly Val Gly Phe Gly Asp Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 36 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 36 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Val Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp 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Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro 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Claims (25)

  1. (i) 3개의 CDR을 포함하는 VH 사슬; 및 (ii) 3개의 CDR을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 항-PD-1 결합 단백질로서,
    VH CDR#1은 GYTFTHYGMN(SEQ ID NO:11)이고;
    VH CDR#2는 WVNTYTGEPTYADDFKG(SEQ ID NO:12)이고;
    VH CDR#3은 EGEGLGFGD(SEQ ID NO:13)이고;
    VL CDR#1은 RSSQSIVHSHGDTYLE(SEQ ID NO:14)이고;
    VL CDR#2는 KVSNRFS (SEQ ID NO:15)이고; 및
    VL CDR#3은 FQGSHIPVT(SEQ ID NO:16)인, 항-PD-1 결합 단백질.
  2. 제1항에 있어서,
    인간화되는, 항-PD-1 결합 단백질.
  3. 제2항에 있어서,
    SEQ ID NO: 36의 서열에 상응하는 VH 사슬; 및 SEQ ID NO: 42의 서열에 상응하는 VL 사슬을 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
  4. 제3항에 있어서,
    IgG인, 항-PD-1 결합 단백질.
  5. 제4항에 있어서,
    IgG1인, 항-PD-1 결합 단백질.
  6. 제5항에 있어서,
    아미노산 치환체 L234A 및 L235A를 갖는 변이체 CH2 도메인을 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
  7. 제4항에 있어서,
    IgG4인, 항-PD-1 결합 단백질.
  8. 제7항에 있어서,
    아미노산 치환체 S228P를 갖는 변이체 Fc 영역을 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
  9. 제3항에 있어서,
    카파 경 불변 영역을 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
  10. 제3항에 있어서,
    SEQ ID NO: 51 또는 SEQ ID NO: 52의 서열에 상응하는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 61의 서열에 상응하는 경쇄를 포함하는, 항-PD-1 결합 단백질.
  11. 제1항에 있어서,
    약 100 nM 미만의 KD를 갖는, 항-PD-1 결합 단백질.
  12. 제11항에 있어서,
    약 10 nM 미만의 KD를 갖는, 항-PD-1 결합 단백질.
  13. 제1항의 항-PD-1 결합 단백질 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  14. 항-PD-1 결합 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산으로서, 상기 결합 단백질은 (i) 3개의 CDR을 포함하는 VH 사슬; 및 (ii) 3개의 CDR을 포함하는 VL 사슬을 포함하며,
    VH CDR#1은 GYTFTHYGMN(SEQ ID NO:11)이고;
    VH CDR#2는 WVNTYTGEPTYADDFKG(SEQ ID NO:12)이고;
    VH CDR#3은 EGEGLGFGD(SEQ ID NO:13)이고;
    VL CDR#1은 RSSQSIVHSHGDTYLE(SEQ ID NO:14)이고;
    VL CDR#2는 KVSNRFS (SEQ ID NO:15)이고; 및
    VL CDR#3은 FQGSHIPVT(SEQ ID NO:16)인, 핵산.
  15. 제14항의 핵산을 포함하는 벡터.
  16. 제15항의 벡터로 형질전환된 원핵 숙주 세포.
  17. 제15항의 벡터로 형질전환된 진핵 숙주 세포.
  18. 제14항의 핵산을 발현하도록 조작된 진핵 숙주 세포.
  19. 제18항에 있어서,
    포유동물 숙주 세포인, 진핵 숙주 세포.
  20. 이의 항-PD-1 결합 단백질을 제조하는 방법으로서,
    (a) 제19항의 숙주 세포를 배양하는 단계 및
    (b) 항-PD-1 결합 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 방법.
  21. 제18항의 숙주 세포에 의해 발현된 유효량의 항-PD-1 결합 단백질을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 면역계를 활성화시키는 방법.
  22. 치료적 유효량의 항-PD-1 결합 단백질을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료 방법으로서, 상기 결합 단백질은 (i) 3개의 CDR을 포함하는 VH 사슬; 및 (ii) 3개의 CDR을 포함하는 VL 사슬을 포함하며,
    VH CDR#1은 GYTFTHYGMN(SEQ ID NO:11)이고;
    VH CDR#2는 WVNTYTGEPTYADDFKG(SEQ ID NO:12)이고;
    VH CDR#3은 EGEGLGFGD(SEQ ID NO:13)이고;
    VL CDR#1은 RSSQSIVHSHGDTYLE(SEQ ID NO:14)이고;
    VL CDR#2는 KVSNRFS (SEQ ID NO:15)이고; 및
    VL CDR#3은 FQGSHIPVT(SEQ ID No:16)인, 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 암은 방광암, 유방암, 두경부암, 신장암, 폐암, 림프종, 흑색종 및 위암으로부터 선택되는, 방법
  24. 제23항에 있어서,
    상기 폐암은 비소세포 폐암인, 방법.
  25. 제21항에 있어서,
    상기 항-PD-1 결합 단백질이 정맥내로 투여되는, 방법.
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