KR20190003596A - 항체 함유 제제 - Google Patents

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쇼 니시자와
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도모유키 이가와
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추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은, FVIII의 기능을 대체하는 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910)의, 회합체 형성이 억제된 안정된 항체 함유 용액 제제에 관한 것이고, 구체적으로는, 20∼180mg/mL의 상기 이중특이성 항체, 10mM∼40mM의 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, 0.2∼1mg/mL의 Poloxamer 188, 및 100mM∼300mM의 아르기닌을 포함하고, pH가 4.5∼6.5인, 상기 항체 함유 용액 제제에 관한 것이다.

Description

항체 함유 제제
본 발명은 혈액 응고 제IX인자(FIX) 및/또는 활성화 혈액 응고 제IX인자(FIXa) 및 혈액 응고 제X인자(FX)의 쌍방에 결합하여, 혈액 응고 제VIII인자(FVIII)의 기능을 대체하는 이중특이성 항체를 함유하는 제제에 관한 것이다.
혈액 응고 제IX인자(FIX) 및/또는 활성화 혈액 응고 제IX인자(FIXa) 및 혈액 응고 제X인자(FX)의 쌍방에 결합하여, FVIII의 기능을 대체하는 이중특이성 항체가 발견되었다(비특허문헌 1, 2, 특허문헌 1, 2, 3). 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910)은 FVIII의 기능을 대체함으로써, FVIII 결손 및 기능 이상에 의한 응고 반응의 저하를 개선하기 때문에, 혈우병 A 환자를 대상으로 한 임상 시험이 행해지고 있다.
지금까지 항체의 용액 제제는 수많이 개발되어 있고, 지금까지 항체의 고농도의 용액 제제로는 히스티딘이나 아르기닌을 이용한 제제(특허문헌 4), 히스티딘-아스파라긴산염 완충액을 이용한 제제(특허문헌 5)가 보고되어 있다. 한편, 버퍼로서 히스티딘/히스티딘-HCl을 이용한 아밀로이드 β(Aβ)를 포함하는 안정된 액체 약학적 항체 제제(특허문헌 6)가 보고되어 있다.
그렇지만, 상기 이중특이성 항체를 포함하는 용액 제제로 회합체 형성 및/또는 전하적 헤테로 성분이 억제된 안정된 용액 제제는 아직 보고되어 있지 않다.
WO2005/035756 WO2006/109592 WO2012/067176 WO2002/030463 WO2011/090088 WO2013/131866
Nat Med. 2012; 18(10):1570-74 PLoS One. 2013; 8(2):e57479.
본 발명의 목적은, FIX 및/또는 FIXa 및 FX의 쌍방에 결합하여, FVIII의 기능을 대체하는 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910)을 함유하는, 안정된 용액 제제를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해 예의 연구한 결과, 본 발명자들은, 상기 이중특이성 항체를 20∼180mg/mL를 포함하고, 10mM∼40mM 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, 0.2∼1mg/mL Poloxamer 188, 100mM∼300mM 아르기닌, pH 4.5∼6.5인 용액 제제로 함으로써, 회합체 형성 및/또는 전하적 헤테로 성분이 억제된 안정된 항체 함유 용액 제제로 할 수 있음을 발견하여, 본 발명을 완성했다.
즉, 본 발명은 이하의 것을 제공한다.
〔1〕 20∼180mg/mL의, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 1, 2, 3(Q499의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 4, 5, 6(J327의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 7, 8, 9(L404의 L쇄 CDR)에 기재된 L쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체,
10mM∼40mM 히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
0.2∼1mg/mL Poloxamer 188,
100mM∼300mM 아르기닌
을 포함하고, pH는 4.5∼6.5인 항체 용액 제제.
〔2〕 상기 이중특이성 항체는, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 10에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 11에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 12에 기재된 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체인, 〔1〕의 항체 용액 제제.
〔3〕 Poloxamer 188의 농도는 0.5mg/mL인, 〔1〕 또는 〔2〕의 항체 용액 제제.
〔4〕 pH가 6.0인, 〔1〕∼〔3〕 중 어느 하나의 항체 용액 제제.
〔5〕 히스티딘-아스파라긴산염 완충액의 농도는 20mM인, 〔1〕∼〔4〕 중 어느 하나의 항체 용액 제제.
〔6〕 아르기닌 농도는 150mM인, 〔1〕∼〔5〕 중 어느 하나의 항체 용액 제제.
〔7〕 염화물 이온 및 아세트산 이온을 실질적으로 포함하지 않는, 〔1〕∼〔6〕 중 어느 하나의 항체 용액 제제.
〔8〕 20∼180mg/mL의, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 10에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 11에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 12에 기재된 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체,
20mM L-히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
0.5mg/mL Poloxamer 188
150mM L-Arginine
을 포함하고, pH는 6인 항체 용액 제제.
〔9〕 피하 투여에 이용되는, 〔1〕∼〔8〕 중 어느 하나의 항체 용액 제제.
〔10〕 혈우병 A 치료에 이용되는, 〔1〕∼〔9〕 중 어느 하나의 항체 용액 제제.
〔11〕 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체를 안정화하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하고, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM, Poloxamer 188의 농도가 0.2∼1mg/mL, 아르기닌 농도가 100mM∼300mM로 하는, 상기 방법.
〔12〕 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체의 회합화(회합체 형성)를 억제하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하고, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM, Poloxamer 188의 농도가 0.2∼1mg/mL, 아르기닌 농도가 100mM∼300mM로 하는, 상기 방법.
〔13〕항체 함유 제제에 있어서 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액을 첨가하는 것을 포함하고, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM로 하는, 상기 방법.
본 발명에 의해, 안정성이 우수한 항체 함유 제제가 제공된다. 또한 본 발명에 의해, 용액 상태의 제제에 있어서의 회합체 생성 및/또는 전하적 헤테로 성분이 억제된 항체 함유 제제를 제공하는 것이 가능해졌다.
[도 1] 실시예 8에 따른 진탕 실험 후의 불용성 이물을 나타내는 사진이다 (a: 0mg/mL Poloxamer188, b: 0.5mg/mL Poloxamer188).
[도 2] 실시예 8에 따른 진탕 실험 후 및 동결 융해 후의 불용성 미립자수(미립자수/mL)를 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은, FIX 및/또는 FIXa 및 FX의 쌍방에 결합하여, FVIII의 기능을 대체하는 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910)을 20∼180mg/mL를 포함하고, 10mM∼40mM 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, 0.2∼1mg/mL Poloxamer 188, 100mM∼300mM 아르기닌, pH 4.5∼6.5인 용액 제제를 제공한다.
상기 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910)은 이하에 기재한 바와 같다.
제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 1, 2, 3(Q499의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 4, 5, 6(J327의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 7, 8, 9(L404의 L쇄 CDR)에 기재된 L쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k).
더 구체적으로는, 상기 이중특이성 항체는, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 13에 기재된 H쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 14에 기재된 H쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 15에 기재된 L쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체이다.
더 구체적으로는, 상기 이중특이성 항체는, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 10에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 11에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 12에 기재된 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)이다.
이와 같은 항체는, 예를 들어 WO2005/035756, WO2006/109592, WO2012/067176 등에 기재된 방법에 따라 취득할 수 있다.
본 발명의 제제에 포함되는 항체 농도는 특별히 제한되지 않지만, 항체 농도는 바람직하게는, 20mg/mL∼180mg/ml이다. 본 발명의 제제에 포함되는 항체 농도는, 예를 들어 20mg/mL, 30mg/mL, 40mg/mL, 120mg/mL, 150mg/mL, 180mg/mL이다. 본 발명의 제제에 포함되는 항체 농도의 상한은, 특별히 한정되지 않지만, 통상, 250mg/mL이다.
본 발명에서 사용되는 항체는, 원하는 항원과 결합하는 한 특별히 제한은 없지만, 폴리클로날 항체여도 모노클로날 항체여도 되고, 균질한 항체를 안정되게 생산할 수 있는 점에서 모노클로날 항체가 바람직하다.
한편, 본 발명에서 기재되어 있는 아미노산 서열에 포함되는 아미노산은 번역 후에 수식(예를 들어, N말단의 글루타민의 파이로글루타밀화에 의한 파이로글루탐산으로의 수식은 당업자에게 잘 알려진 수식이다)을 받는 경우도 있지만, 그와 같이 아미노산이 번역 후 수식되었을 경우여도 당연히 본 발명에서 사용되는 항체에 포함된다.
본 발명에 있어서 「FVIII의 기능을 대체한다」란, FIX 또는 FIXa, 및 FX를 인식하여, FIXa에 의한 FX의 활성화를 촉진하는(FIXa에 의한 FXa 산생을 촉진하는) 것을 의미한다. FXa 산생 촉진 활성은, 예를 들어, FIXa, FX, 합성 기질 S-2222(FXa의 합성 기질), 인지질로 이루어지는 측정계로 평가할 수 있다. 이와 같은 측정계는, 혈우병 A 증례에 있어서의 질환의 중증도 및 임상 증상과 상관성을 나타낸다(Rosen S, Andersson M, Blomba¨ck M et al. Clinical applications of a chromogenic substrate method for determination of FVIII activity. Thromb Haemost 1985; 54: 811-23).
본 발명에 있어서 「공통 L쇄」란, 상이한 2종 이상의 H쇄와 각각 짝을 형성하여, 각각의 항원에 대해서 결합능을 나타낼 수 있는 L쇄이다. 여기에서, 「상이한 H쇄」란, 바람직하게는 상이한 항원에 대한 항체의 H쇄를 가리키지만, 그것에 한정되지 않고, 아미노산 서열이 서로 상이한 H쇄를 의미한다. 공통 L쇄는, 예를 들어 WO2006/109592에 기재된 방법에 따라 취득할 수 있다.
한편 본 발명에 있어서의 「안정된 항체 함유 제제」란, 당해 제제 중에 항체 등의 단백질의 회합체 및/또는 전하적 헤테로 성분이 생성되기 어려운, 즉 용액 중에 불용성 회합체, 가용성 회합체, 전하적 헤테로 성분 등의 생성을 비롯한 열화 반응이 일어나기 어려운 제제를 가리킨다.
전하적 헤테로 성분이란, 탈아마이드, 산화나 가수분해 등에 의해 단백질의 표면 전하가 주성분과 상이한 성분을 가리킨다.
본 발명에 있어서의 폴리펩타이드란, 통상, 10 아미노산 정도 이상의 길이를 갖는 펩타이드, 및 단백질을 가리킨다. 또한, 통상, 생물 유래의 폴리펩타이드이지만, 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 인공적으로 설계된 서열로 이루어지는 폴리펩타이드여도 된다. 또한, 천연 폴리펩타이드, 혹은 합성 폴리펩타이드, 재조합 폴리펩타이드 등의 어느 것이어도 된다. 더욱이, 상기의 폴리펩타이드의 단편도 또한, 본 발명의 폴리펩타이드에 포함된다.
「항체」라고 하는 용어는, 가장 넓은 의미로 사용되고, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 이량체, 다량체, 다중 특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체), 항체 유도체 및 항체 수식물이어도 된다(Miller K et al. J Immunol. 2003, 170(9), 4854-61). 항체는, 마우스, 인간, 인간화, 키메라여도 되고, 또는 다른 종 유래여도, 인공적으로 합성한 것이어도 된다. 본 명세서 중에 개시되는 항체는, 면역글로불린 분자의 임의의 타입(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 서브클래스일 수 있다. 면역글로불린은, 임의의 종(예를 들어, 인간, 마우스 또는 토끼) 유래일 수 있다. 한편, 「항체」, 「면역글로불린」 및 「이뮤노글로불린」이란 용어는 호환성을 가지고 광의인 의미로 사용된다.
「이중특이성」항체는, 각각 상이한 에피토프를 인식하는 2개의 가변 영역을 동일한 항체 분자 내에 갖는 항체를 말한다. 이중특이성 항체는 2개 이상의 상이한 항원을 인식하는 항체여도 되고, 동일 항원 상의 상이한 2개 이상의 에피토프를 인식하는 항체여도 된다. 이중특이성 항체에는, whole의 항체뿐만 아니라 항체 유도체가 포함되어 있어도 된다.
항체로서는, 유전자 재조합 기술을 이용하여 산생한 재조합형 항체를 이용할 수 있다. 재조합형 항체는, 그것을 코드하는 DNA를 하이브리도마, 또는 항체를 산생하는 감작 림프구 등의 항체 산생 세포로부터 클로닝하고, 벡터에 짜넣고, 이것을 숙주(숙주 세포)에 도입하여 산생시키는 것에 의해 얻을 수 있다.
이중특이성 항체는 IgG 타입의 것에 한정되지 않지만, 예를 들어 IgG 타입 이중특이성 항체는 IgG 항체를 산생하는 하이브리도마 2종을 융합하는 것에 의해 생기는 hybrid hybridoma(quadroma)에 의해 분비시킬 수 있다(Milstein C et al. Nature 1983, 305: 537-540). 또한 목적하는 2종의 IgG를 구성하는 L쇄 및 H쇄의 유전자, 합계 4종의 유전자를 세포에 도입하는 것에 의해 공발현시키는 것에 의해 분비시킬 수 있다.
본 발명의 항체는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 구체적으로는, 목적으로 하는 항체를 코드하는 DNA를 발현 벡터에 짜넣는다. 그 때, 발현 제어 영역, 예를 들어, 인핸서, 프로모터의 제어 아래에서 발현하도록 발현 벡터에 짜넣는다. 다음에, 이 발현 벡터에 의해 숙주 세포를 형질 전환하여, 항체를 발현시킨다. 그 때에는, 적당한 숙주와 발현 벡터의 조합을 사용할 수 있다.
이것에 의해 얻어진 본 발명의 항체는, 숙주 세포내 또는 세포외(배지 등)로부터 단리하여, 실질적으로 순수하고 균일한 항체로서 정제할 수 있다. 항체의 분리, 정제는, 통상의 항체의 정제에서 사용되고 있는 분리, 정제 방법을 사용하면 되고, 전혀 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 크로마토그래피 컬럼, 필터, 한외 여과, 염석, 용매 침전, 용매 추출, 증류, 면역 침강, SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기 영동, 등전점 전기 영동법, 투석, 재결정 등을 적절히 선택, 조합하면 항체를 분리, 정제할 수 있다.
본 발명의 제제 중의 히스티딘-아스파라긴산염 완충액의 바람직한 태양은, 히스티딘을 유리 아미노산 상태로 첨가한 수용액 등의 용액에, 아스파라긴산을 유리 아미노산 상태로 포함하는, 수용액 등의 액체로 적정하는 것에 의해 조정되는 완충액이다. 또한 그 역의 차례로 첨가하여 조정하는 것도 가능하고, 또한 분말에 의해 직접 적정하는 것도 가능하다.
본 발명자들은, 상기 이중특이성 항체를 함유하는 시료의 보존 시의 안정성을 평가하기 위해서, 동결 융해 시험, 열 가속 시험, 장기 보존 시험 및 동결 보존 시험 등에 의해 여러 가지 첨가제의 효과를 검토했다. 그 결과, 히스티딘 완충액을 이용하는 것에 의해, 인산 완충액, 시트르산 완충액, 아세트산 완충액에 비해, 회합체 생성 및/또는 전하적 헤테로 성분이 억제됨을 발견했다.
더욱이 그 짝이온종으로서, 산성 아미노산인 아스파라긴산을 이용하는 것에 의해, 즉, 완충액으로서 히스티딘-아스파라긴산염 완충액을 이용하는 것에 의해, 회합체 생성 및/또는 전하적 헤테로 성분이 억제됨을 발견했다.
본 발명의 제제에 있어서의 히스티딘-아스파라긴산염 완충액의 농도(양)는, 10∼100mM인 것이 바람직하고, 10∼40mM인 것이 보다 바람직하다. 또한, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액의 농도(양)는 예를 들어 10mM, 20mM, 40mM이다.
더욱이 항체 함유 제제의 안정화제로서 보고되어 있는 염화 나트륨과 비교하여, 아르기닌을 첨가하는 것에 의해, 보다 높은 안정화 효과(회합체 생성 억제 효과, 전하적 헤테로 성분 억제 효과)를 나타냄도 발견했다.
본 발명의 제제에 있어서의 아르기닌의 농도(양)는, 100mM∼300mM인 것이 바람직하다. 또한, 아르기닌의 농도(양)는, 예를 들어 100mM, 150mM, 200mM, 300mM이다.
본 발명의 제제는, 용액의 pH가 4.5∼6.5인 것이 바람직하고, 5.5∼6.5인 것이 보다 바람직하고, 5.5∼6인 것이 더 바람직하다. 또한, 용액의 pH는 예를 들어 5.5, 6이다.
본 발명의 제제에 포함되는 계면활성제는, 예를 들어 폴리소베이트 20(PS20), 플루로닉 F-68(폴록사머 188: 폴리옥시에틸렌(160) 폴리옥시프로필렌(30) 글라이콜)이지만, 특히 폴록사머 188이 바람직하다. 본 발명의 제제에 대한 폴록사머 188(Poloxamer 188 또는 PX188)의 첨가량은, 바람직하게는 0.2mg/mL∼1mg/mL이다. 또한, 제제에 대한 폴록사머 188의 첨가량은, 예를 들어, 0.2mg/mL, 0.5mg/mL, 0.8mg/mL, 1mg/mL이다.
본 발명에서 사용되는 히스티딘은, 단품 또는 그의 유도체의 어느 것을 이용해도 되고, 특히 L-히스티딘이 바람직하다. 본 발명에서 사용되는 아르기닌은, 단품, 그의 유도체, 그의 염의 어느 것을 이용해도 되고, 특히 L-아르기닌 또는 그의 염이 바람직하다. 또한, 아르기닌의 염은, 아스파라긴산염 또는 글루탐산염이 바람직하다.
본 발명의 제제는, 추가로 아미노산을 함유할 수 있다. 본 발명에서 이용되는 바람직한 아미노산은, 천연 아미노산 또는 아미노산 유도체이며, 특히 바람직한 것은 L-메티오닌, 및 L-프롤린이다.
본 발명의 제제는, 추가로 당류를 함유할 수 있다. 본 발명에서 이용되는 바람직한 당류는, 수크로스, 트레할로스, 메글루민 및 소비톨이다.
본 발명의 제제에 대한 아미노산 또는 당류의 첨가량은, 일반적으로는 1mM∼1000mM이며, 바람직하게는 5mM∼500mM이며, 더 바람직하게는 10mM∼300mM이다.
본 발명의 제제는, 추가로 무기염을 함유할 수 있다. 본 발명에서 이용되는 바람직한 무기염은, 마그네슘염 및 칼슘염이다.
더욱이 본 발명의 제제는, 완충액(완충제) 또는 안정화제의 짝이온으로서, 아스파라긴산 이외의 음이온을 포함하지 않는 것이 바람직하다. 그와 같은 제제의 일 태양으로서, 예를 들어, 염화물 이온 및 아세트산 이온을 실질적으로 포함하지 않는 제제를 들 수 있다. 「염화물 이온 및 아세트산 이온을 실질적으로 포함하지 않는다」란, 예를 들어 염화물 이온 및 아세트산 이온이 5mM 이하, 보다 바람직하게는 2mM 이하, 보다 바람직하게는 1mM 이하인 것을 의미한다. 안정화 효과가 작은 염화물 이온 및 아세트산 이온을 실질적으로 포함하지 않고, 안정화 효과가 큰 아스파라긴산을 짝이온으로서 이용함으로써, 침투압을 올리지 않고 안정성이 높은 항체 함유 제제를 제조하는 것이 가능하다.
또한 본 발명의 제제에는, 필요에 따라서, 동결 보호제, 현탁제, 용해 보조제, 등장화제, 보존제, 흡착 방지제, 희석제, 부형제, pH 조정제, 무통화제, 함황 환원제, 산화 방지제 등을 적절히 첨가할 수 있다.
동결 보호제로서 예를 들어, 트레할로스, 자당, 소비톨 등의 당류를 들 수 있다.
용액 보조제로서 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리소베이트 80, 니코틴산 아마이드, 폴리옥시에틸렌소비탄 모노라우레이트, 매크로골, 피마자유 지방산 에틸 에스터 등을 들 수 있다.
등장화제로서 예를 들어, 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 칼슘 등을 들 수 있다.
보존제로서 예를 들어, 파라옥시벤조산 메틸, 파라옥시벤조산 에틸, 소브산, 페놀, 크레졸, 클로로크레졸 등을 들 수 있다.
흡착 방지제로서 예를 들어, 인간 혈청 알부민, 레시틴, 덱스트란, 에틸렌 옥사이드·프로필렌 옥사이드 공중합체, 하이드록시프로필 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리에틸렌 글라이콜 등을 들 수 있다.
함황 환원제로서 예를 들어, N-아세틸시스테인, N-아세틸호모시스테인, 싸이옥트산, 싸이오다이글라이콜, 싸이오에탄올아민, 싸이오글리세롤, 싸이오소비톨, 싸이오글라이콜산 및 그의 염, 싸이오황산 나트륨, 글루타티온, 탄소 원자수 1∼7의 싸이오알칸산 등의 설프하이드릴기를 갖는 것 등을 들 수 있다.
산화 방지제로서 예를 들어, 에리소브산, 다이뷰틸하이드록시톨루엔, 뷰틸하이드록시아니솔, α-토코페롤, 아세트산 토코페롤, L-아스코브산 및 그의 염, L-아스코브산 팔미테이트, L-아스코브산 스테아레이트, 아황산 수소 나트륨, 아황산 나트륨, 갈산 트라이아밀, 갈산 프로필 혹은 에틸렌다이아민 사아세트산 이나트륨(EDTA), 피로인산 나트륨, 메타인산 나트륨 등의 킬레이트제를 들 수 있다.
본 발명의 제제의 하나의 실시태양은 이하와 같다.
20∼180mg/mL의, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 10에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 11에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 12에 기재된 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체,
20mM L-히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
0.5mg/mL Poloxamer 188
150mM L-Arginine
을 포함하고, pH는 6인 항체 용액 제제.
또한,
20∼180mg/mL의 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910),
20mM L-히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
0.5mg/mL Poloxamer 188
150mM L-Arginine
을 포함하고, pH는 6인 항체 용액 제제.
본 발명의 제제의 다른 하나의 실시태양은 이하와 같다.
20∼180mg/mL의, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 10에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 11에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 12에 기재된 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체,
20mM L-히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
0.05mg/mL PS20
150mM L-Arginine
을 포함하고, pH는 6인 항체 용액 제제.
또한,
20∼180mg/mL의 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910),
20mM L-히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
0.05mg/mL PS20
150mM L-Arginine
을 포함하고, pH는 6인 항체 용액 제제.
본 발명의 항체 함유 제제의 투여는, 임의의 적절한 경로를 통하여 환자에게 투여할 수 있다. 예를 들어, 볼러스로서 또는 일정 기간에 걸친 지속 주입에 의한 정맥내, 근육내, 피하에 의한 경로에 의해 환자에게 투여된다. 정맥내 투여 또는 피하 투여가 바람직하다.
Emicizumab(ACE910)의 투여량은, 예를 들어 0.001∼1000mg/kg이며, 투여 간격은 적어도 1일 이상이다.
보다 구체적으로는, 예를 들어 초회 용량 1mg/kg의 Emicizumab(ACE910)을 투여 후, 주 1회의 빈도로 계속 용량 0.3mg/kg의 Emicizumab(ACE910)을 투여할 수 있다. 또한, 예를 들어 초회 용량 3mg/kg의 Emicizumab(ACE910)을 투여 후, 주 1회의 빈도로 계속 용량 1mg/kg의 Emicizumab(ACE910)을 투여할 수 있다. 또한, 예를 들어 초회 용량 3mg/kg의 Emicizumab(ACE910)을 투여 후, 주 1회의 빈도로 계속 용량 3mg/kg의 Emicizumab(ACE910)을 투여할 수 있다.
본 발명의 항체 함유 제제는, FVIII 및/또는 활성화 혈액 응고 제VIII인자(FVIIIa)의 활성의 저하 내지 결손에 의해 발증 및/또는 진전하는 질환에 이용할 수 있고, 예를 들어 혈우병 A, FVIII/FVIIIa에 대한 인히비터가 출현하고 있는 혈우병 A, 후천성 혈우병 A, 폰빌레브란트병 등에 이용할 수 있지만, 이들 질환에 특별히 제한되지 않는다.
본 발명의 다른 하나의 실시태양은, 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체를 안정화하는 방법이다. 바람직하게는, 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체를 안정화하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하는, 상기 방법이다.
또한, 본 발명의 다른 하나의 실시태양은, 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체의 회합화(회합체 형성)를 억제하는 방법이다. 바람직하게는, 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체의 회합화(회합체 형성)를 억제하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하는, 상기 방법이다.
또한, 상기, 항체를 안정화하는 방법 및 항체의 회합화(회합체 형성)를 억제하는 방법에 있어서는, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하고, 항체 농도가 20∼180mg/mL, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM, Poloxamer 188의 농도가 0.2∼1mg/mL, 아르기닌 농도가 100mM∼300mM 및 pH가 4.5∼6.5로 하는 것이 바람직하고, 더욱이 항체 농도가 20∼180mg/mL, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 20mM, Poloxamer 188의 농도가 0.5mg/mL, 아르기닌 농도가 150mM 및 pH가 6으로 하는 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 하나의 실시태양은, 항체 함유 제제에 있어서 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법이다. 바람직하게는, 항체 함유 제제에 있어서 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액을 첨가하는 것을 포함하는, 상기 방법이다. 더 바람직하게는, 항체 함유 제제에 있어서 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액을 첨가하는 것을 포함하고, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM 혹은 20mM로 하는 것을 포함하는, 상기 방법이다.
또한, 본 발명의 다른 하나의 실시태양은, 항체 함유 제제에 있어서 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하는, 상기 방법이다. 더 바람직하게는, 항체 함유 제제에 있어서 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하고, 항체 농도가 20∼180mg/mL, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM, Poloxamer 188의 농도가 0.2∼1mg/mL, 아르기닌 농도가 100mM∼300mM 및 pH가 4.5∼6.5로 하는 것이 바람직하고, 더욱이 항체 농도가 20∼180mg/mL, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 20mM, Poloxamer 188의 농도가 0.5mg/mL, 아르기닌 농도가 150mM 및 pH가 6으로 하는 것이 바람직하다.
상기, 항체를 안정화하는 방법, 항체의 회합화(회합체 형성)를 억제하는 방법, 및 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법에 있어서는, 항체는 바람직하게는 이중특이성 항체이며, 더 바람직하게는 Emicizumab(ACE910)이다.
본 명세서에 있어서 이용하는 경우, 「···을 포함한다(comprising)」라는 표현에 의해 나타내지는 태양은, 「본질적으로 ···로 이루어지는(essentially consisting of)」이라는 표현에 의해 나타내지는 태양, 및 「···로 이루어지는(consisting of)」이라는 표현에 의해 나타내지는 태양을 포함한다.
본 명세서에 기재된 수치는, 예를 들어 기기, 측정 조건, 당업자의 손재주에 기인하여, 일정한 범위 내에서 변동할 수 있는 것이고, 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 범위 내이면, 예를 들어 10% 정도 변동하는 것은 있을 수 있다.
본 명세서에 있어서 명시적으로 인용되는 모든 특허 및 참고 문헌의 내용은 모두 본 명세서에 참조로서 원용된다.
본 발명은, 이하의 실시예에 의해 더 예시되지만, 하기의 실시예로 한정되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1: 히스티딘이 인간화 IgG4 항체 ACE910의 열 가속 보존 중에 미치는 회합체 억제 효과
(1) 재료
ACE910은 혈액 응고 제IX인자 및 혈액 응고 제X인자를 각각 인식하는 Bispecific 항체이며, 활성화 혈액 응고 제VIII인자의 기능 대체에 의해 혈우병 A의 출혈을 예방할 것이 기대되고 있는 인간화 IgG4 항체이다.
(2) 피험 시료
ACE910 100mg/mL, 150mmol/L NaCl, pH 6.0, 완충액으로서 20mmol/L Phosphate buffer, 혹은 20mmol/L Citrate buffer, 혹은 20mmol/L Acetate buffer, 혹은 20mmol/L Histidine buffer의 어느 하나를 포함하는 각 조제액을 조제하고, 유리 바이알에 5∼15μL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를, 25℃의 항온조 내에 8주간 정치한 후, 피험 시료로 했다.
(3) ACE910의 회합체량 측정 방법 및 회합체량의 산출 방법
시료는, 컬럼(도소 G3000SWXL)을 이용하고, 50mmol/L 인산 완충액(pH 7.0), 300mmol/L 염화 나트륨을 이동상으로 이용하여, 유속 0.5mL/min으로 행한 사이즈 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 회합체량을 측정했다.
검출되는 피크 중, 면적, 높이 모두 최대인 것을 모노머체, 모노머체 전에 검출되는 피크의 총칭을 회합체(HMWS)로 했다.
모든 피크에 대하여 면적을 산출하고, 이하의 식에 따라 대상 피크의 피크 면적 비율을 산출했다.
Figure pct00001
(4) 결과
얻어진 결과를 표 1에 나타낸다.
Figure pct00002
표 1로부터 분명한 바와 같이, 20mmol/L 히스티딘을 첨가한 시료는, 25℃ 열 가속 8주일 후의 시료에 있어서 높은 회합체 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 2: 염 농도 및 아르기닌이 인간화 IgG4 항체 ACE910의 열 가속 보존 중 및 동결 융해 중에 미치는 회합체 억제 효과
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
ACE910 100mg/mL, 20mmol/L Histidine, pH 6.0, 첨가제로서 50mmol/L NaCl 혹은 75mmol/L NaCl 혹은 150mmol/L NaCl 혹은 150mmol/L Arginine의 어느 하나를 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 5∼15μL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 25℃의 항온조 내에 8주간 정치한 후, 혹은 동결 융해(F/T)(5℃⇔-20℃)를 10회 반복한 후, 피험 시료로 했다.
(3) ACE910의 회합체량 측정 방법 및 회합체량의 산출 방법
실시예 1에 기재한 방법에 따랐다.
(4) 결과
얻어진 결과를 표 2에 나타낸다.
Figure pct00003
표 2로부터 분명한 바와 같이, 150mmol/L 아르기닌을 첨가한 시료는, 25℃ 열 가속 8주일 후의 시료 및 동결 융해 후의 시료에 있어서 높은 회합체 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 3: 아스파라긴산이 인간화 IgG4 항체 ACE910의 동결 융해 중에 미치는 회합체 억제 효과
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
ACE910 100mg/mL, 20mmol/L Histidine, pH 6.0, 짝이온으로서 150mmol/L NaCl 혹은 150mmol/L Sodium L-Aspartic acid의 어느 하나를 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 5∼15μL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 동결 융해(5℃⇔-20℃)를 10회 반복한 후, 피험 시료로 했다.
(3) ACE910의 회합체량 측정 방법 및 회합체량의 산출 방법
실시예 1에 기재한 방법에 따랐다.
(4) 결과
얻어진 결과를 표 3에 나타낸다.
Figure pct00004
표 3으로부터 분명한 바와 같이, 아스파라긴산을 첨가한 시료는, 동결 융해 후의 시료에 있어서 높은 회합체 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 4: pH가 인간화 IgG4 항체 ACE910의 열 가속 보존 중에 미치는 회합체 및 전하적 헤테로 성분 억제 효과
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
ACE910 100mg/mL, 20mmol/L Histidine-Aspartic acid, 150mmol/L Arginine-Aspartic acid, pH 4.5 혹은 5.0 혹은 5.5 혹은 6.0 혹은 6.5 혹은 7.0 혹은 7.5를 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 5∼15μL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 25℃의 항온조 내에 8주간 정치한 후, 피험 시료로 했다.
(3) ACE910의 회합체량 측정 방법 및 회합체량의 산출 방법
실시예 1에 기재한 방법에 따랐다.
(4) ACE910의 전하적 헤테로 성분 측정 방법 및 산출 방법
시료는, 컬럼(YMC제 BioPro QA-F)을 이용하고, 20mmol/L Tris-HCl 완충액(pH 7.8)을 이동상 A로, 20mmol/L Tris-HCl 완충액(pH7. 8), 500mmol/L 염화 나트륨을 이동상 B로 이용하여, 유속 0.5mL/min으로 행한 이온 교환 크로마토그래피(IEC)에 의해 전하적 헤테로 성분량을 측정했다.
검출되는 피크 중, 면적, 높이 모두 최대인 것을 Main peak, Main peak 후에 검출되는 피크의 총칭을 Acidic peak로 했다.
모든 피크에 대하여 면적을 산출하고, 이하의 식에 따라 대상 피크의 피크 면적 비율을 산출했다.
Figure pct00005
(5) 결과
얻어진 결과를 표 4에 나타낸다.
Figure pct00006
표 4로부터 분명한 바와 같이, pH 4.5∼pH 6.5, 특히 pH 5.5 및 pH 6.0의 시료는, 25℃ 보존 후의 시료에 있어서 높은 회합체 및 전하적 헤테로 성분 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 5: 히스티딘 농도가 인간화 IgG4 항체 ACE910의 열 가속 보존 중에 미치는 회합체 및 전하적 헤테로 성분 억제 효과
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
ACE910 100mg/mL, 150mmol/L Arginine, pH 6.0, Histidine-aspartic acid 5mmol/L 혹은 10mmol/L 혹은 20mmol/L 혹은 40mmol/L를 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 5∼15μL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 25℃의 항온조 내에 8주간 정치한 후, 피험 시료로 했다.
(3) ACE910의 회합체량 측정 방법 및 회합체량의 산출 방법
실시예 1에 기재한 방법에 따랐다.
(4) ACE910의 전하적 헤테로 성분 측정 방법 및 산출 방법
실시예 4에 기재한 방법에 따랐다.
(5) 결과
얻어진 결과를 표 5에 나타낸다.
Figure pct00007
표 5로부터 분명한 바와 같이, Histidine-aspartic acid 10mmol/L 이상 포함하는 시료는, 25℃ 보존 후의 시료에 있어서 높은 회합체 및 전하적 헤테로 성분 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 6: 아르기닌 농도가 인간화 IgG4 항체 ACE910의 동결 융해 및 열가속 보존 및 동결 보존 중에 미치는 회합체 억제 효과
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
ACE910 100mg/mL, 20mmol/L Histidine-aspartic acid, pH 6.0, Arginine 75mmol/L 혹은 100mmol/L 혹은 150mmol/L 혹은 200mmol/L 혹은 300mmol/L를 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 5∼15μL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 동결 융해(5℃⇔-20℃)를 10회 반복한 후, 혹은 25℃의 항온조 내에 8주간 정치한 후, 혹은 -20℃의 항온조 내에 6개월간 정치한 후, 피험 시료로 했다.
(3) ACE910의 회합체량 측정 방법 및 회합체량의 산출 방법
실시예 1에 기재한 방법에 따랐다.
(4) 결과
얻어진 결과를 표 6에 나타낸다.
Figure pct00008
표 6으로부터 분명한 바와 같이, Arginine 100mmol/L 이상 포함하는 시료는, 동결 융해 후 및 25℃ 보존 후 및 -20℃ 보존 후의 시료에 있어서 높은 회합체 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 7: 폴록사머 188이 인간화 IgG4 항체 ACE910의 5℃ 보존 중에 미치는 불용성 이물 및 불용성 미립자 생성 억제 효과
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
ACE910 80mg/mL, 20mmol/L Histidine-Aspartic acid, 150mmol/L Arginine, pH 6.0, 첨가제로서 0mg/mL Poloxamer 188 혹은 0.2mg/mL Poloxamer 188 혹은 0.5mg/mL Poloxamer 188 혹은 1.0mg/mL Poloxamer 188 혹은 0.05mg/mL Polysorbate 20 혹은 1.0mg/mL Polysorbate 20을 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 1.0mL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 5℃ 냉장실 내에 5개월간 정치한 후, 피험 시료로 했다.
(3) 불용성 이물 관측 방법
시료를 바이알용 목시 검사대의 시료대에 놓고 시료대를 회전시킨 후 바이알을 관찰하여, 불용성 이물의 유무를 확인했다.
(4) 불용성 미립자 측정법
액중 미립자 계측기(Hach Ultra Analytics, Model9703)를 이용하여 액중 불용성 미립자수를 계측했다.
(5) 결과
얻어진 결과를 표 7에 나타낸다.
Figure pct00009
표 7로부터 분명한 바와 같이, PS20을 0.05mg/mL 포함하는 시료, Poloxamer 188을 0.2mg/mL 이상 포함하는 시료는, 5℃ 보존 후의 시료에 있어서 높은 불용성 이물 및 불용성 미립자 생성 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 8: 폴록사머 188이 인간화 IgG4 항체 ACE910의 진탕 스트레스 및 동결 융해 보존 중에 미치는 불용성 이물 및 불용성 미립자 생성 억제 효과
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
ACE910 150mg/mL, 20mmol/L Histidine-Aspartic acid, 150mmol/L Arginine-Aspartic acid, pH 6.0, 첨가제로서 0mg/mL Poloxamer 188 혹은 0.2mg/mL Poloxamer 188 혹은 0.5mg/mL Poloxamer 188 혹은 0.8mg/mL Poloxamer 188을 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 0.9mL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 실온에 있어서 진탕 시험기를 이용하여 200stroke/min의 속도로 24시간 진탕한 후, 혹은 동결 융해(5℃⇔-20℃)를 10회 반복한 후, 피험 시료로 했다.
(3) 불용성 이물 관측 방법
실시예 7에 기재한 방법에 따랐다.
(4) 불용성 미립자 측정법
실시예 7에 기재한 방법에 따랐다.
(5) 결과
얻어진 결과를 표 8 및 도 1, 2에 나타낸다.
Figure pct00010
표 8 및 도 1, 2로부터 분명한 바와 같이, Poloxamer 188을 0.2mg/mL 이상 포함하는 시료는, 진탕 스트레스 및 동결 융해 보존 후의 시료에 있어서 높은 불용성 이물 및 불용성 미립자 생성 억제 효과가 얻어졌다.
실시예 9: 인간화 IgG4 항체 ACE910 농도의 열 가속 보존 중 및 동결 융해 보존 중에 미치는 안정성
(1) 재료
실시예 1에 기재한 항체를 사용했다.
(2) 피험 시료
20mmol/L Histidine-Aspartic acid, 150mmol/L Arginine-Aspartic acid, pH 6.0, 0.5mg/mL Poloxamer 188, ACE910으로서 20mg/mL ACE910 혹은 30mg/mL ACE910 혹은 40mg/mL ACE910 혹은 120mg/mL ACE910 혹은 150mg/mL ACE910 혹은 180mg/mL ACE910을 포함하는 각 조제액을 조제하여, 유리 바이알에 0.65mL씩 충전했다.
이와 같이 조제한 인간화 항체 함유 용액 제제를 40℃의 항온조 내에 8주간 정치한 후, 혹은 동결 융해(25℃⇔-20℃)를 5회 및 10회 반복한 후, 피험 시료로 했다.
(3) ACE910의 회합체량 측정 방법 및 회합체량의 산출 방법
실시예 1에 기재한 방법에 따랐다.
(4) ACE910의 전하적 헤테로 성분 측정 방법 및 산출 방법
시료는, 컬럼(Waters제 TSKgel Q-STAT)을 이용하고, 50mmol/L Tris-HCl 완충액(pH 8.0)을 이동상 A로, 50mmol/L Tris-HCl 완충액(pH8. 0), 200mmol/L 염화 나트륨을 이동상 B로 이용하여, 유속 0.5mL/min으로 행한 음이온 교환 크로마토그래피(AIEC)에 의해 전하적 헤테로 성분량을 측정했다.
검출되는 피크 중, 면적, 높이 모두 최대인 것을 Main peak, Main peak 전에 검출되는 피크의 총칭을 Basic peak, Main peak 후에 검출되는 피크의 총칭을 Acidic peak로 했다.
또한, 컬럼(Thermo Scientific제 ProPac WCX-10G)을 이용하고, 9.6mmol/L Tris, 6.0mmol/L piperazine, 11.0mmol/L imidazole 완충액(pH 6.0)을 이동상 A로, 9.6mmol/L Tris, 6.0mmol/L piperazine, 11.0mmol/L imidazole, 100mmol/L NaCl 완충액(pH 10.1)을 이동상 B로 이용하여, 유속 0.5mL/min으로 행한 양이온 교환 크로마토그래피(CIEC)에 의해 전하적 헤테로 성분량을 측정했다.
검출되는 피크 중, 면적, 높이 모두 최대인 것을 BiAb peak, BiAb peak 전에 검출되는 피크의 총칭을 Pre peak, BiAb peak 후에 검출되는 피크의 총칭을 Post peak로 했다.
모든 피크에 대하여 면적을 산출하고, 이하의 식에 따라 대상 피크의 피크 면적 비율을 산출했다.
Figure pct00011
(5) 결과
얻어진 결과를 표 9에 나타낸다. 한편, SE는 사이즈 배제 크로마토그래피의 결과, AE는 음이온 교환 크로마토그래피의 결과, CE는 양이온 교환 크로마토그래피의 결과를 나타낸다.
Figure pct00012
표 9로부터 분명한 바와 같이, ACE910 20mg/mL∼ACE910 180mg/mL의 시료를 비교하여, 40℃ 보존 후 및 동결 융해 후에 있어서 동등한 충분한 안정성을 갖고 있었다.
본 발명의 항체 용액 제제는, 종래의 제제와 비교하여, 용액 상태에서의 안정성이 우수한 제제이며, 저온, 상온, 또는 고온에서의 보존 후 및 동결 융해 후의 항체 분자 등의 단백질의 회합체 생성이 억제되는 것을 특징으로 한다. 이와 같이 열화 반응이 일어나기 어려운 본 발명의 항체 용액 제제는, 예를 들어, 피하 투여에 의한 혈우병 A의 치료에 이용할 수 있다.
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Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn 20 25 30 Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Thr Arg Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Glu Glu Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Ile Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr His Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Lys Ser Tyr Gly Tyr Tyr Leu Asp Glu Trp Gly Glu Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asn Ile Glu Arg Gln 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Glu Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gln Ala Ser Arg Lys Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asp Pro Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims (13)

  1. 20∼180mg/mL의, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 1, 2, 3(Q499의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 4, 5, 6(J327의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 7, 8, 9(L404의 L쇄 CDR)에 기재된 L쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체,
    10mM∼40mM 히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
    0.2∼1mg/mL Poloxamer 188,
    100mM∼300mM 아르기닌
    을 포함하고, pH는 4.5∼6.5인 항체 용액 제제.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 이중특이성 항체는, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 10에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 11에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 12에 기재된 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체인, 항체 용액 제제.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    Poloxamer 188의 농도는 0.5mg/mL인, 항체 용액 제제.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    pH가 6인, 항체 용액 제제.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    히스티딘-아스파라긴산염 완충액의 농도는 20mM인, 항체 용액 제제.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    아르기닌 농도는 150mM인, 항체 용액 제제.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    염화물 이온 및 아세트산 이온을 실질적으로 포함하지 않는, 항체 용액 제제.
  8. 20∼180mg/mL의, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 짝을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 짝을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열 번호: 10에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열 번호: 11에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열 번호: 12에 기재된 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체,
    20mM L-히스티딘-아스파라긴산염 완충액,
    0.5mg/mL Poloxamer 188
    150mM L-Arginine
    을 포함하고, pH는 6인 항체 용액 제제.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    피하 투여에 이용되는, 항체 용액 제제.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    혈우병 A 치료에 이용되는, 항체 용액 제제.
  11. 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체를 안정화하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하고, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM, Poloxamer 188의 농도가 0.2∼1mg/mL, 아르기닌 농도가 100mM∼300mM로 하는, 상기 방법.
  12. 항체 함유 용액 제제에 있어서 항체의 회합화(회합체 형성)를 억제하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액, Poloxamer 188 및 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하고, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM, Poloxamer 188의 농도가 0.2∼1mg/mL, 아르기닌 농도가 100mM∼300mM로 하는, 상기 방법.
  13. 항체 함유 제제에 있어서 전하적 헤테로 성분을 저감하는 방법으로서, 용액 중에 히스티딘-아스파라긴산염 완충액을 첨가하는 것을 포함하고, 히스티딘-아스파라긴산염 완충액 농도가 10mM∼40mM로 하는, 상기 방법.
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