KR20180134389A - 안티센스 올리고머, 및 산성 알파-글루코시다제 유전자와 연관된 질환을 치료하기 위한 이의 사용 방법 - Google Patents

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Abstract

본 개시는 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 관한 것이다. 본원에 기재된 뉴클레오티드는 10 내지 40개의 핵염기의 뉴클레오티드이고, 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 내의 표적 영역에 상보적인 표적화 서열을 포함한다. 상기 표적 영역은 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재한다.

Description

안티센스 올리고머, 및 산성 알파-글루코시다제 유전자와 연관된 질환을 치료하기 위한 이의 사용 방법
본 개시의 분야
본 개시는 안티센스 올리고머 및 관련 조성물 및 II형 글리코겐 축적병(glycogen storage disease type II) (GSD-II) (폼페병(Pompe disease), II형 글리코겐증(glycogenosis II), 산성 말타제 결핍증(acid maltase deficiency) (AMD), 산성 알파-글루코시다제 결핍증, 및 리소좀 알파-글루코시다제 결핍증으로도 알려짐)에 대한 치료법으로서 엑손 포함(exon inclusion)을 유도하는 방법에 관한 것이며, 보다 구체적으로는 엑손 2의 포함을 유도함으로써 산성 알파-글루코시다제 (GAA) 유전자에 의해 코딩되는 효소 활성 GAA 단백질의 수준을 회복시키는 것에 관한 것이다.
관련 기술의 설명
대안적 스플라이싱(splicing)은 단일 유전자로부터 다수의 단백질을 생산함으로써 인간 게놈의 코딩 가능성을 증가시킨다. 부적절한 대안적 스플라이싱은 또한 점점 더 다수의 인간 질환과 연관된다.
GSD-II는 산성 알파-글루코시다제 (GAA)라 불리는 효소의 결핍에 기인한 유전적 상염색체성 열성 리소좀 축적 장애이다. 체내 GAA의 역할은 글리코겐을 분해하는 것이다. GAA 활성의 수준 감소 또는 부재는 심장, 골격근 (호흡에 관여된 것들을 포함), 간, 및 신경계를 포함한, 발병된 조직 내 글리코겐의 축적을 야기한다. 글리코겐의 이러한 축적은 GSD-II를 가진 개인의 진행성 근력 저하 및 호흡 부전을 야기하는 것으로 여겨진다. GSD-II는 영아, 유아, 또는 성인에서 일어날 수 있고, 예후는 증상의 발병 시점 및 중증도에 따라 달라진다. 임상적으로, GSD-II는 중증 (영아기)에서부터 보다 경증의 후기 발병 성인형에 이르기까지 광범위하고 지속적인 각양각색의 중증도를 나타낼 수 있다. 환자는 호흡 부전으로 인해 결국 사망한다. 질환의 중증도와 잔여 산성 알파-글루코시다제 활성 간에는 양호한 상관관계가 존재하며, 상기 활성이 후기 발병시 정상치의 10-20%이고 질환의 조기 발병 형태에서는 2% 미만이다. GSD-II는 전세계적으로 대략 5,000 내지 10,000 명에서 발병하는 것으로 추정된다.
질환의 성인 발병 형태와 연관된 가장 흔한 돌연변이는 IVS1-13T>G이다. 성인 발병 GSD-II 환자의 삼분의 이 이상에서 발견되므로, 이 돌연변이는 이형접합성 개인에서 선택적 이점을 부여할 수 있거나 매우 오래된 돌연변이이다. 이 돌연변이를 가진 성인 발병 GSD-II 개인의 광범위한 인종적 변이는 공동 설립자(common founder)에 대해 논박한다.
GAA 유전자는 약 20 kb를 스패닝(spanning)하는 20개 엑손으로 이루어진다. 3.4 kb mRNA는 대략 105 kD의 분자량을 가진 단백질을 코딩한다. IVS1-13T>G 돌연변이는 개시 AUG 코돈을 함유하는 엑손 2 (577개 염기)의 손실을 야기한다.
GSD-II의 치료는 현저한 성공 없이 약물 치료 전략, 식단 조절, 및 골수 이식을 수반하여 왔다. 최근에, 효소 대체 요법(enzyme replacement therapy) (ERT)은 GSD-II 환자에게 새로운 희망을 제공하였다. 예를 들어, 재조합 GAA 단백질 약물인 미오자임(Myozyme)®은 미국 및 유럽 둘 다에서 2006년에 GSD-II 질환을 가진 환자에서의 사용 승인을 받았다. 미오자임®은 리소좀에 전달을 위한 GAA 단백질의 표면 상의 만노스-6-포스페이트 (M6P)에 의존한다.
RNA 하향 조절에 주로 사용된 안티센스 기술은 스플라이싱 프로세스를 변경하도록 최근 적합화되었다. 많은 유전자의 일차 유전자 전사물 (프리-mRNA(pre-mRNA))의 프로세싱은 인트론의 제거 및 엑손의 정교한 스플라이싱을 수반하고 여기서 공여자 스플라이스 부위(donor splice site)가 수용자 스플라이스 부위(acceptor splice site)에 연결된다. 스플라이싱은 포지티브 엑손 스플라이스 인핸서(enhancer) (엑손 내에 우세하게 위치됨) 및 네거티브 스플라이스 모티프 (스플라이스 사일런서(silencer)가 인트론 내에 우세하게 위치됨)가 균형을 이루어 공여자 및 수용자 스플라이스 부위, 및 분지점 (수용자 스플라이스 부위의 상류)의 동조된 인식을 수반하는 정교한 프로세스이다.
GAA 프리-mRNA의 스플라이싱을 변경할 수 있는 효과적인 작용제는 GSD-II의 개선된 치료를 위해 치료적으로 유용할 가능성이 있다.
개요
한 측면에서, 본 개시는 10 내지 40개의 핵염기의 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 특징으로 한다. 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 (예를 들어, 서열번호(SEQ ID NO): 1 내의 표적 영역과 같은, GAA의 인트론 1 내의) 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA 내의 표적 영역에 상보적인 표적화 서열(targeting sequence)을 포함하며, 여기서 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재한다. 표적 영역과 표적화 서열 사이의 상호작용은 달리 100% 상보성일 수 있으나 더 낮은 역치의 상보성을 또한 포함할 수 있다 (예를 들어, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%). 표적 영역은 서열번호: 2 또는 서열번호: 3 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 임의로, 표적 영역은 서열번호: 4를 포함할 수 있다. 임의로, 표적 영역은 서열번호: 5를 포함할 수 있다. 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 표적 부위에 대한 표적화 서열의 결합시 GAA mRNA 내의 엑손 2의 잔류를 촉진할 수 있다. 표적 영역은 표적화 서열과 비교하여 1 내지 3개의 추가적 핵염기를 포함할 수 있다. 그러나, 3개 초과의 추가적 핵염기는 표적 영역에 또한 존재할 수 있다. 추가로, 추가적 핵염기는 표적 영역을 따라 서로 분리될 수 있다. 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 2배 유도할 수 있다. 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 3배 또는 적어도 4배 유도할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 개시는 화학식 (I)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 특징으로 한다:
Figure pct00001
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
각각의 Y는 O 및 -NR4로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 각각의 R4는 H, C1-C6 알킬, 아르알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2, 및 G로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R5는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고 n은 1 내지 5의 정수이고;
T는 OH 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00002
[여기서,
A는 -OH, -N(R7)2, 및 R1로부터 선택되고 여기서 각각의 R7은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
R6은 OH, -N(R9)CH2C(O)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00003
(여기서,
R9는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
R10은 G, -C(O)-R11OH, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸,
-C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2, 및
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
m은 1 내지 5의 정수이고,
R11은 화학식 -(O-알킬)y-이고 여기서 y는 3 내지 10의 정수이고
상기 y 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다)
로부터 선택된다]
로부터 선택되고;
각각의 경우의 R1은,
-N(R13)2 (여기서 각각의 R13은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다);
화학식 (II)의 모이어티:
Figure pct00004
[여기서,
R15는 H, G, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2, 및
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
R18은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
q는 1 내지 5의 정수이고,
각각의 R17은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택된다]; 및
화학식 (III)의 모이어티:
Figure pct00005
[여기서,
R19는 H, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2,
-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2,
-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2 및 G로부터 선택되고, 여기서,
R22는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
r은 1 내지 5의 정수이고,
R20은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되거나;
R19 및 R20은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고 산소, 질소, 및 황으로부터 선택된 추가적 헤테로원자를 임의로 함유하는 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다]
로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)-R23, -C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2, -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00006
[여기서,
R23은 화학식 -(O-알킬)v-OH이고 여기서 v는 3 내지 10의 정수이고 상기 v 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R24는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
s는 1 내지 5의 정수이고;
L은 -C(O)(CH2)6C(O)- 및 -C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)-로부터 선택되고;
각각의 R25는 화학식 -(CH2)2OC(O)N(R26)2이고 여기서 각각의 R26은 화학식 -(CH2)6NHC(=NH)NH2이다]
로부터 선택되고,
여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00007
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
여기서 G는 한 번 존재할 수 있거나 부재한다.
특정 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, R1 기의 약 50-90%는 디메틸아미노 (즉 -N(CH3)2)이다. 특정 실시양태에서, R1 기의 약 66%는 디메틸아미노이다.
일부 비제한적 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C의 서열로부터 선택되고, 여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다. 일부 비제한적 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C의 서열로부터 선택되고, 여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다.
본 개시의 일부 실시양태에서, R1은,
Figure pct00008
Figure pct00009
, 및
Figure pct00010
로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, T는,
Figure pct00011
; 및
Figure pct00012
로부터 선택되고,
Y는 각각의 경우에 O이다. 일부 실시양태에서, R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00013
이고,
Y는 각각의 경우에 O이고 R2는 G이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00014
이고, Y는 각각의 경우에 O이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00015
이고, Y는 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고, R2는 H이다.
또 다른 측면에서, 본 개시는 화학식 (VII)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 특징으로 한다:
Figure pct00016
상기 식에서, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
T는,
Figure pct00017
; 및
Figure pct00018
로부터 선택되고;
각각의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고,
여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00019
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
여기서 T는
Figure pct00020
이거나 R2는 G이다.
일부 실시양태에서, 예를 들어, 화학식 (I) 및 (IV)의 안티센스 올리고머의 일부 실시양태를 포함한, 본 개시의 안티센스 올리고머의 표적화 서열은 본원에 기재된 바와 같은, 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택되며, 다음과 같다:
I.
a) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
b) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
c) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
d) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
e) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
f) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
g) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
h) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
i) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
j) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
k) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
l) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
m) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
n) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
o) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
p) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
q) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
r) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
s) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
t) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
u) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
v) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
w) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
x) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
y) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
z) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
aa) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
bb) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
cc) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
dd) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
ee) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
ff) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
gg) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
hh) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
ii) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
jj) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
kk) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
ll) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
mm) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
nn) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
oo) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
pp) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
qq) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
rr) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
ss) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및
tt) 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다)
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
II.
a) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
b) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
c) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
d) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
e) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
f) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
g) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
h) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
i) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
j) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
k) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
l) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
m) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
n) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
o) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
p) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
q) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다); 및
III.
a) 서열번호: 76 (GCC AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 23이다);
b) 서열번호: 77 (CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C) (여기서 Z는 23이다);
c) 서열번호: 78 (GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G) (여기서 Z는 23이다);
d) 서열번호: 79 (AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 23이다);
e) 서열번호: 80 (ACX CAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
f) 서열번호: 81 (GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX) (여기서 Z는 23이다);
g) 서열번호: 82 (GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 18이다);
h) 서열번호: 83 (GAG AGG GCC AGA AGG AAG GG) (여기서 Z는 18이다);
i) 서열번호: 84 (XXX GCC AXG XXA CCC AGG CX) (여기서 Z는 18이다);
j) 서열번호: 85 (GCG CAC CCX CXG CCC XGG CC) (여기서 Z는 18이다); 및
k) 서열번호: 86 (GGC CCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X) (여기서 Z는 23이다)
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 및 59로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 및 34-36으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82 중 어느 하나에서 각각의 경우의 X는 T이다.
예를 들어, 화학식 (I) 및 (IV)의 안티센스 올리고머의 일부 실시양태를 포함한 일부 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이다. 일부 실시양태에서, 표적화 서열은 상기 인간 GAA 유전자의 엑손 2 또는 인트론 2의 표적 영역에 상보적이다. 예를 들어, 화학식 (I) 및 (IV)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 다양한 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이고, 여기서 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 본원의 표 2A 내지 표 2C에 나타낸 바와 같은, 서열번호: 13-86으로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 및 표 2B로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가로, 그리고 본원의 표 2A 내지 표 2C (또는 표 2B 및 표 2C)에 개략된 서열과 관련하여, 특정 실시양태에서, 100% 상보성을 가진 서열이 선택되고 하나 이상의 핵염기가 제거되어 (또는 교대로 하나 이상의 결손 핵염기로 합성되어) 생성된 서열이 표적 영역에서 그의 자연 보체보다 하나 이상의 결손 핵염기를 갖도록 한다. 하나 이상의 핵염기가 제거되는 부분을 제외하고는, 나머지 부분은 100% 상보적인 것으로 고려된다. 그러나, 상보성의 감소된 수준이 존재할 수 있다는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 각각의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 각각의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 U이다.
본 개시의 이들 및 다른 측면은 하기 상세한 설명 및 첨부 도면을 참조하면 명백해질 것이다. 본원에 개시된 모든 참고문헌은 각각이 개별적으로 포함된 것처럼 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
도 1 및 도 2는 스크리닝 동안에 다양한 PMO 화합물에 대해 밝혀진 GAA 효소 활성 (효소 검정)을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. "N"은 각각의 연구에서 평가된 반복 횟수를 지칭한다. 수평 해시 라인(horizontal hashed line인)은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다. 개별 화합물을 5 μM 및 0.2 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다.
도 3 및 도 4는 다양한 PMO 화합물에 대해 밝혀진 효소 검정 용량 반응(Enzyme Assay Dose Response)을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM, 1 μM, 0.2 μM 및 0.4 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다.
도 5 내지 도 8은 다양한 PMO 화합물에 대해 밝혀진 효소 검정 용량 반응을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM, 1 μM, 0.2 μM 및 0.04 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다.
도 9 내지 도 14는 다양한 PMO 화합물에 대해 밝혀진 효소 검정 용량 반응을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM 및 0.16 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다.
도 15a 및 15b는 다양한 PPMO 화합물에 대해 밝혀진 효소 검정 용량 반응을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다.
도 16은 다양한 PMO 화합물에 대해 밝혀진 효소 검정 용량 반응을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다.
도 17 및 도 18은 다양한 PPMO 화합물에 대해 밝혀진 GAA 효소 활성 (효소 검정)을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다. "N=9"는 각각의 연구에서 평가된 반복 횟수를 지칭한다. 데이터 요약 표는 μM 단위의 EC50을 보여준다.
도 19는 다양한 PPMO 화합물에 대한 EC50 (μM 단위)을 도시하는 데이터 요약 표이다.
도 20 내지 도 22는 다양한 PPMO 화합물에 대해 밝혀진 GAA 효소 활성 (효소 검정)을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다. 데이터 요약 표는 μM 단위의 EC50을 보여준다.
도 23은 다양한 PPMO 화합물에 대한 EC50 (μM 단위)을 도시하는 데이터 요약 표이다.
도 24 내지 26은 다양한 PPMO 화합물에 대해 밝혀진 GAA 효소 활성 (효소 검정)을 도시하는 막대 그래프이다. Y 축은 비처리 대조군에 비해 GAA 효소 활성의 배수 증가를 나타낸다. 개별 화합물을 5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM에서 투여하였다. 수평 해시 라인은 비처리 세포에서의 GAA 활성의 수준을 의미한다. 데이터 요약 표는 μM 단위의 EC50을 보여준다.
상세한 설명
I. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 과학 기술 용어는 본 개시가 속한 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 비록 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질은 본 개시의 주제의 실시 또는 시험에 사용될 수 있긴 하지만, 바람직한 방법 및 물질이 기재된다. 본 개시의 목적상, 하기 용어가 이하에 정의된다.
관사 "a" 및 "an"은 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나)의 관사의 문법적 대상을 지칭하도록 본원에 사용된다. 예로써, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.
"약"이란 기준 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 비해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 만큼 다른 수량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.
"코딩 서열"이란 유전자의 폴리펩티드 생성물에 대한 코드에 기여하는 임의의 핵산 서열을 의미한다. 대조적으로, 용어 "비-코딩 서열"은 유전자의 폴리펩티드 생성물에 대한 코드에 직접적으로 기여하지 않는 임의의 핵산 서열을 지칭한다.
본 개시 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단어 "포함하다", "포함한다", 및 "포함하는"은 언급된 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 군의 포함을 의미하나, 임의의 다른 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 군의 배제를 의미하지는 않는 것으로 이해될 것이다.
"로 이루어진"이란 어구 "다음으로 이루어진"의 뒤를 잇는 무엇이든 포함하고, 이에 제한된다는 것을 의미한다. 따라서, 어구 "로 이루어진"은 열거된 요소가 필요하거나 필수적이고, 다른 어떠한 요소도 존재할 수 없음을 나타낸다. "로 본질적으 이루어진"이란 상기 어구 이후에 열거된 임의의 요소를 포함하고, 열거된 요소에 대한 개시에 명시된 활성 또는 작용에 간섭하거나 기여하지 않는 다른 요소로 제한된다는 것을 의미한다. 따라서, 어구 "로 본질적으로 이루어진"은 열거된 요소가 필요하거나 필수적이나, 다른 요소도 임의적이고 이들이 열거된 요소의 활성 또는 작용에 물질적으로 영향을 미치든지 미치지 않든지에 따라 존재할 수도 있고 존재하지 않을 수도 있음을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포에 접촉시키는", "도입하는" 또는 "전달하는"은 관련 기술분야에서 통상적인 방법, 예를 들어, 형질감염 (예를 들어, 리포솜, 칼슘-포스페이트, 폴리에틸렌이민), 전기천공 (예를 들어, 뉴클레오펙션(nucleofection), 미세주입법)에 의해 세포 내로 본 개시의 올리고머를 전달하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 하나 이상의 관능기로 임의로 치환된, 선형 (즉, 비분지형 또는 비시클릭), 분지형, 시클릭, 또는 폴리시클릭 비방향족 탄화수소 기를 포함하는 것으로 의도된다. 달리 명시되지 않는 한, "알킬" 기는 1 내지 8개, 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다. C1-C6 알킬은 C1, C2, C3, C4, C5, 및 C6 알킬 기를 포함하는 것으로 의도된다. 저급 알킬은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 알킬 기를 지칭한다. 알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 시클로프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 시클로부틸, 펜틸, 이소펜틸, tert-펜틸, 시클로펜틸, 헥실, 이소헥실, 시클로헥실 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 알킬은 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 예시적인 치환된 알킬 기는 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 2-플루오로에틸, 3-플루오로프로필, 히드록시메틸, 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 벤질, 치환된 벤질, 펜에틸, 치환된 펜에틸 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알콕시"는 명시된 수의 탄소를 가진 상기에서 정의된 알킬 기가 산소 가교를 통해 부착된 알킬의 부분집합을 의미한다. 예를 들어, "알콕시"는 알킬 기가 선형, 분지형, 시클릭 구조의 1 내지 8개의 탄소 원자를 함유하는, -O-알킬 기를 의미한다. "알콕시"의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, t-부톡시, n-부톡시, s-펜톡시 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 단독으로 또는 "아르알킬", "아르알콕시", 또는 "아릴옥시-알킬"에서와 같이 보다 큰 모이어티의 일부로서 사용되는 용어 "아릴"은 6 내지 14개의 고리 원자를 갖는 방향족 고리 기, 예컨대 페닐, 1-나프틸, 2-나프틸, 1-안트라실 및 2-안트라실을 지칭한다. "아릴" 고리는 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있다. 용어 "아릴"은 용어 "아릴 고리"와 상호교환적으로 사용될 수 있다. "아릴"은 방향족 고리가 하나 이상의 고리에 융합된, 융합된 폴리시클릭 방향족 고리 시스템을 또한 포함한다. 유용한 아릴 고리 기의 비제한적인 예는 페닐, 히드록시페닐, 할로페닐, 알콕시페닐, 디알콕시페닐, 트리알콕시페닐, 알킬렌디옥시페닐, 나프틸, 페난트릴, 안트릴, 페난트로 등, 뿐만 아니라 1-나프닐, 2-나프틸, 1-안트라실 및 2-안트라실을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 방향족 고리가 예컨대 인다닐, 페난트리디닐, 또는 테트라히드로나프틸에서의 하나 이상의 비방향족 고리에 융합되어 있으며, 여기서 라디칼 또는 부착점이 방향족 고리에 있는 기가 용어 "아릴"의 범위 내에 또한 포함된다.
용어 "아실"은 C(O)R 기 (여기서 R은 상기에 정의된 바와 같이 H, 알킬 또는 아릴을 지칭함)를 의미한다. 아실 기의 예는 포르밀, 아세틸, 벤조일, 페닐아세틸 및 유사한 기를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "상동체"는 동일한 화학 기의 연속 부가에 의해 규칙적으로 달라지는 화합물을 의미한다. 예를 들어, 화합물의 상동체는 하나 이상의 -CH2- 기, 아미노산 잔기, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오티드 유사체의 부가에 의해 달라질 수 있다.
용어 "세포 관통 펩티드"(CPP) 또는 "세포 흡수를 강화하는 펩티드 모이어티"는 상호교환적으로 사용되고, 양이온성 세포 관통 펩티드를 지칭하며, "수송 펩티드", "담체 펩티드", 또는 "펩티드 형질도입 도메인"으로도 또한 불린다. 본원에 나타낸 바와 같은 펩티드는 주어진 세포 배양 집단의 세포 중 약 또는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 내에서 세포 관통을 유도할 수 있는 능력을 갖고, 전신 투여시 생체내에서 다중 조직 내에서 거대분자 전위를 허용한다. 일부 실시양태에서, CPP는 화학식 -[(C(O)CHR'NH)m]R''이고, 여기서 R'는 자연 발생 아미노산 또는 그의 일- 또는 이-탄소 상동체의 측쇄이고, R''는 수소 또는 아실로부터 선택되고, m은 50 이하의 정수이다. CPP는 또한 화학식 -[(C(O)CHR'NH)m]Ra를 가질 수 있고 여기서 R'는 자연 발생 아미노산 또는 그의 일- 또는 이-탄소 상동체의 측쇄이고, 여기서 Ra는 수소, 아실, 벤조일, 또는 스테아로일로부터 선택된다. 임의의 구조의 CPP는 "링커" 예컨대, 예를 들어, -C(O)(CH2)5NH-, -C(O)(CH2)2NH-, -C(O)(CH2)2NH-C(O)(CH2)5NH-, 또는 -C(O)CH2NH-를 통해 안티센스 올리고머의 3' 또는 5' 말단에 연결될 수 있다. 추가적 CPP는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함된 미국 출원 번호 2010/0016215에 개시되어 있다. 다른 실시양태에서, m은 1 내지 50으로부터 선택된 정수이고, 여기서, m이 1일 때, 모이어티는 단일 아미노산 또는 그의 유도체이다.
본원에 사용된 바와 같이, "아미노산"은 1급 아미노 기, 카르복실산 기, 측쇄, 및 수소 원자가 부착된 탄소 원자로 이루어진 화합물을 지칭한다. 예를 들어, 용어 "아미노산"은 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 아스파라긴, 글루타민, 리신 및 아르기닌을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 게다가, 본원에 사용된 바와 같이, "아미노산"은 또한, 아미노산의 유도체 예컨대 에스테르, 및 아미드, 및 염, 뿐만 아니라 활성 형태로의 대사시 약물특성(pharmacoproperty)을 갖는 유도체를 포함한 다른 유도체를 포함한다. 따라서, 용어 "아미노산"은 자연 발생 및 비-자연 발생 아미노산을 포함하는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 바와 같이, "전자쌍"은 다른 원자와 결합되거나 공유되지 않은 전자의 원자가 쌍을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "상동성"은 동일하거나 보존적 치환을 구성하는 아미노산의 백분율 수를 지칭한다. 상동성은 서열 비교 프로그램, 예컨대 GAP를 사용하여 결정될 수 있다 (Deveraux et al., 1984, Nucleic Acids Research 12, 387-395). 이 방식으로 본원에 인용된 것들과 유사하거나 실질적으로 상이한 길이의 서열이 예를 들어, GAP에 의해 사용된 비교 알고리즘에 의해 결정된 간격을 정렬에 삽입함으로써 비교될 수 있을 것이다.
"단리된"이란 그의 천연 상태에서는 정상적으로 이를 수반하는 성분이 실질적으로 또는 본질적으로 부재한 물질을 의미한다. 예를 들어, 본원에 사용된 바와 같은, "단리된 폴리뉴클레오티드", "단리된 올리고뉴클레오티드", 또는 "단리된 올리고머"는 자연 발생 상태에서 이에 플랭킹된 서열로부터 정제되거나 제거된 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, 게놈 내 단편에 인접한 서열로부터 제거된 DNA 단편을 지칭할 수 있다. 세포와 관련된 바와 같은 용어 "단리하는"은 공급원 대상체 (예를 들어, 폴리뉴클레오로티드 반복 질환을 가진 대상체)로부터의 세포 (예를 들어, 섬유모세포, 림프아구)의 정제를 지칭한다. mRNA 또는 단백질의 맥락에서, "단리하는"은 공급원, 예를 들어 세포로부터 mRNA 또는 단백질의 회수를 지칭한다.
용어 "조정하다"는, 임의로 한정된 및/또는 통계적으로 유의한 양 만큼 하나 이상의 정량 가능한 파라미터를 "증가시키다" 또는 "감소시키다"를 포함한다. "증가시키다" 또는 "증가시키는", "강화하다" 또는 "강화하는", 또는 "자극하다" 또는 "자극하는"이란, 안티센스가 없는 화합물 또는 대조군 화합물에 의해 야기된 반응에 비해, 세포 또는 대상체에서 훨씬 더 큰 생리학적 반응 (즉, 하류 효과)을 생성하거나 야기하는 하나 이상의 안티센스 화합물 또는 조성물의 능력을 일반적으로 지칭한다. 관련된 생리학적 또는 세포 반응 (생체내 또는 시험관내)은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이고, GAA-코딩 프리-mRNA 내 엑손 2의 포함의 증가, 또는 이를 필요로 하는 세포, 조직, 또는 대상체에서 기능성 GAA 효소의 발현의 증가를 포함할 수 있다. "증가된" 또는 "강화된" 양은 전형적으로 "통계학적으로 유의한" 양이고, 안티센스가 없는 화합물 (작용제의 부재) 또는 대조군 화합물에 의해 생성된 양에 비해, 그 사이 및 1 초과 (예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7. 1.8)의 모든 정수 및 소수점을 포함하여, 1.1, 1.2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 그 초과의 배수 (예를 들어, 500, 1000 배)의 증가를 포함할 수 있다. 용어 "줄이다" 또는 "억제하다"는 하나 이상의 안티센스 화합물 또는 조성물이 관련된 생리학적 또는 세포 반응, 예컨대 진단 분야에서 통상적인 기술에 따라 측정된 바와 같은, 본원에 기재된 질환 또는 병태의 증상을 "감소시키는" 능력에 일반적으로 관련될 수 있다. 관련된 생리학적 또는 세포 반응 (생체내 또는 시험관내)은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이고, 글리코겐 축적병, 예컨대 폼페병의 증상 또는 병상의 감소, 예를 들어, 하나 이상의 조직 내에서 글리코겐의 축적의 감소를 포함할 수 있다. 반응에서 "감소시키다"는 안티센스가 없는 화합물 또는 대조군 조성물에 의해 생성된 반응과 비교하면 "통계적으로 유의한" 것일 수 있고, 그 사이의 모든 정수를 포함하여 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "안티센스 올리고뉴클레오티드", "안티센스 올리고머" 또는 "올리고뉴클레오티드"는 왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기 쌍형성에 의해 RNA에서 핵염기가 표적 서열에 혼성화하여 표적 서열 내에서 올리고머:RNA 헤테로듀플렉스(heteroduplex)를 형성하게 하는, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체의 선형 서열을 지칭한다. 용어 "안티센스 올리고뉴클레오티드", "변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드", "안티센스 올리고머", "올리고머" 및 "화합물"은 올리고머를 지칭하는 것으로 상호교환적으로 사용될 수 있다. 시클릭 서브유닛은 리보스 또는 또 다른 펜토스 당 또는, 특정 실시양태에서, 모르폴리노 기 (하기 모르폴리노 올리고머의 기재 참조)에 기반할 수 있다. 또한, 관련 기술분야에 공지된 다른 안티센스 작용제 중에서, 펩티드 핵산 (PNA), 잠금 핵산(locked nucleic acid) (LNA), 트리시클로-DNA 올리고머, 트리시클로-포스포로티오에이트 올리고머, 및 2'-O-메틸 올리고머가 고려된다.
(i) 변형된 백본 구조, 예를 들어, 자연 발생 올리고- 및 폴리뉴클레오티드에서 발견되는 표준 포스포디에스테르 연결 외의 백본, 및/또는 (ii) 변형된 당 모이어티, 예를 들어, 리보스 또는 데옥시리보스 모이어티보다는 모르폴리노 모이어티를 갖는 올리고머를 포함한, 비-자연 발생 올리고머 또는 "올리고뉴클레오티드 유사체"가 포함된다. 올리고머 유사체는 표준 폴리뉴클레오티드 염기에 왓슨-크릭 염기 쌍형성에 의해 수소 결합이 가능한 염기를 지지하고, 여기서 유사체 백본은 올리고머 유사체 분자 및 표준 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 단일 가닥 RNA 또는 단일 가닥 DNA) 내 염기 간에 서열-특이적 방식의 이러한 수소 결합을 허용하는 방식으로 염기를 제시한다. 바람직한 유사체는 실질적으로 비하전된, 인 함유 백본을 갖는 유사체이다.
"뉴클레아제-저항성" 올리고머는 비-혼성화되거나 혼성화된 형태에서, 체내 통상적인 세포외 및 세포내 뉴클레아제에 의해 (예를 들어, 엑소뉴클레아제 예컨대 3'-엑소뉴클레아제, 엔도뉴클레아제, RNase H에 의해); 그의 백본이 뉴클레아제 절단에 실질적으로 저항성을 갖는 것인 올리고머를 지칭하고; 즉, 올리고머는 올리고머가 노출된 체내 정상 뉴클레아제 상태 하에 뉴클레아제 절단이 거의 없거나 전혀 없음을 보여준다. "뉴클레아제-저항성 헤테로듀플렉스"는 헤테로듀플렉스가 이중 가닥 RNA/RNA 또는 RNA/DNA 복합체를 커팅할 수 있는 세포내 및 세포외 뉴클레아제에 의한 생체내 분해에 실질적으로 저항성이도록, 안티센스 올리고머가 그의 상보적 표적에 결합함으로써 형성된 헤테로듀플렉스를 지칭한다. "헤테로듀플렉스"는 안티센스 올리고머와 표적 RNA의 상보적 부분 간의 듀플렉스(duplex)를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "핵염기"(Nu), "염기 쌍형성 모이어티" 또는 "염기"는 천연 DNA 또는 RNA (우라실, 티민, 아데닌, 시토신, 및 구아닌)에서 발견되는 퓨린 또는 피리미딘, 뿐만 아니라 올리고머에 대한 결합 친화력과 같은 개선된 특성을 부여하는 자연 발생 퓨린 및 피리미딘의 유사체를 지칭하는 것으로 상호교환적으로 사용된다. 예시적 유사체는 히포크산틴 (뉴클레오시드 이노신의 염기 성분); 2, 6-디아미노퓨린; 5-메틸 시토신; C5-프로피닐-변형된 피리미딘; 9-(아미노에톡시)페녹사진 (G-클램프) 등을 포함한다.
염기 쌍형성 모이어티의 추가 예는 아실 보호기에 의해 보호되는 그의 각각의 아미노 기를 갖는 우라실, 티민, 아데닌, 시토신, 구아닌 및 히포크산틴, 2-플루오로우라실, 2-플루오로시토신, 5-브로모우라실, 5-아이오도우라실, 2,6-디아미노퓨린, 아자시토신, 피리미딘 유사체 예컨대 슈도이소시토신 및 슈도우라실 및 다른 변형된 핵염기 예컨대 8-치환된 퓨린, 크산틴, 또는 히포크산틴 (후자 두 개는 천연 분해 생성물이다)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 문헌 [Chiu and Rana, RNA, 2003, 9, 1034-1048, Limbach et al. Nucleic Acids Research, 1994, 22, 2183-2196] 및 [Revankar and Rao, Comprehensive Natural Products Chemistry, vol. 7, 313]에 개시된 변형된 핵염기가 또한 고려된다.
염기 쌍형성 모이어티의 추가 예는 하나 이상의 벤젠 고리가 부가된 확장된 크기의 핵염기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 문헌 [Glen Research catalog (www.glenresearch.com); Krueger AT et al, Acc. Chem. Res., 2007, 40, 141-150; Kool, ET, Acc. Chem. Res., 2002, 35, 936-943; Benner S.A., et al., Nat. Rev. Genet., 2005, 6, 553-543; Romesberg, F.E., et al., Curr. Opin. Chem. Biol., 2003, 7, 723-733; Hirao, I., Curr. Opin. Chem. Biol., 2006, 10, 622-627]에 기재된 핵 염기 대체가 본원에 기재된 올리고머의 합성을 위해 유용한 것으로 고려된다. 확장된 크기의 핵염기의 예를 하기에 나타냈다:
Figure pct00021
Figure pct00022
리보스, 당 유사체 또는 모르폴리노에 공유결합으로 연결된 핵염기는 뉴클레오시드를 포함한다. "뉴클레오티드"는 뉴클레오시드와 함께 하나의 포스페이트 기로 구성된다. 포스페이트 기는 인접한 뉴클레오티드와 서로 공유결합으로 연결되어 올리고머를 형성한다.
만약 올리고머가 40℃ 또는 45℃보다 실질적으로 더 높은, 바람직하게는 적어도 50℃, 및 전형적으로 60℃-80℃ 또는 그 초과의 Tm의, 생리학적 조건 하에 표적과 혼성화한다면, 올리고머는 표적 폴리뉴클레오티드에 "특이적으로 혼성화한다". 이러한 혼성화는 바람직하게는 엄격한 혼성화 조건에 상응한다. 주어진 이온 세기 및 pH에서, Tm은 표적 서열의 50%가 상보적 폴리뉴클레오티드에 혼성화하는 온도이다. 이러한 혼성화는 표적 서열에 대한 안티센스 올리고머의 "근접한" 또는 "실질적인" 상보성으로, 뿐만 아니라 정확한 상보성으로도 일어날 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "충분한 길이"는 GAA 인트론 1, 엑손 2, 또는 인트론 2의 영역, 또는 상기 중 어느 하나를 스패닝하는 영역에서 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18, 적어도 19, 적어도 20, 적어도 21, 적어도 22, 적어도 23, 적어도 24, 적어도 25, 적어도 26, 적어도 27, 적어도 28, 적어도 29, 또는 적어도 30 또는 그 초과의, 예컨대 8-40, 및 예컨대 15-40의 인접한 핵염기에 대해 상보적인 안티센스 올리고머 또는 그의 표적화 서열을 지칭한다. 충분한 길이의 안티센스 올리고머는 돌연변이 RNA 내 GAA 프리-mRNA 반복의 영역에 특이적으로 혼성화할 수 있는 적어도 최소 수의 뉴클레오티드를 갖는다. 바람직하게는 충분한 길이의 올리고머는 길이가 8 내지 30개 뉴클레오티드이다. 보다 바람직하게는, 충분한 길이의 올리고머는 길이가 9 내지 27개 뉴클레오티드이다. 훨씬 보다 바람직하게는, 충분한 길이의 올리고머는 길이가 15 내지 40개 뉴클레오티드이다.
예를 들어, "와 50% 동일한 서열"을 포함하는 용어 "서열 동일성"은, 본원에 사용된 바와 같이, 서열이 비교의 창에 걸쳐 뉴클레오티드-대-뉴클레오티드 기준 또는 아미노산-대-아미노산 기준에서 동일한 정도를 지칭한다. 따라서, "서열 동일성의 백분율"은, 비교의 창에 걸쳐 두 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교하고, 동일한 핵산 염기 (예를 들어, A, T, C, G, I) 또는 동일한 아미노산 잔기 (예를 들어, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met)가 두 서열 모두에서 나타나는 위치의 수를 결정하여 일치된 위치의 수를 산출하고, 비교의 창 내 위치의 총 수 (즉, 창 크기)로 일치된 위치의 수를 나누고, 그 결과에 100을 곱해 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 비교의 창을 정렬하기 위한 서열의 최적 정렬은 알고리즘의 컴퓨터화된 실행 (지네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group) (미국 위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575 소재)의 위스콘신 지네틱스 소프트웨어 패키지 릴리즈(Wisconsin Genetics Software Package Release) 7.0에서, GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 선택된 다양한 방법 중 어느 하나에 의해 생성된 점검 및 최상의 정렬 (즉, 비교의 창에 걸쳐 최고의 백분율 상동성을 결과하는)에 의해 수행될 수 있다. 또한, 예를 들어 문헌 [Altschul et al., Nucl. Acids Res. 25:3389, 1997]에 개시된 바와 같은 프로그램의 BLAST 패밀리를 참조할 수 있다.
"대상체" 또는 "이를 필요로 하는 대상체"는 인간 대상체와 같은 포유동물 대상체를 포함한다. 예시적 포유동물 대상체는 GSD-II (또는 폼페병)를 갖거나 가질 위험에 처해 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "GSD-II"는 발병한 개체에서 GAA 단백질의 발현 부족을 흔히 특징으로 하는 인간 상염색체성 열성 질환인, II형 글리코겐 축적병 (GSD-II 또는 폼페병)을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 하나 이상의 조직, 예를 들어, 심장, 골격근, 간, 및 신경계 조직에서 GAA 단백질의 발현 및/또는 활성이 감소된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 하나 이상의 조직, 예컨대, 심장, 근골격, 간, 및 신경계 조직에서 글리코겐의 축적이 증가된다. 구체적 실시양태에서, 대상체는 IVS1-13T>G 돌연변이 또는 기능성 GAA 단백질의 발현 감소로 이어지는 다른 돌연변이를 갖는다 (예를 들어, 문헌 [Zampieri et al., European J. Human Genetics. 19:422-431, 2011] 참조).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "표적"은 RNA 영역, 및 구체적으로, GAA 유전자에 의해 확인된 영역을 지칭한다. 특정한 실시양태에서 표적은 엑손 2 포함을 촉진하는 신호의 억제의 원인이 되는 GAA-코딩 프리-mRNA (예를 들어, 서열번호: 1)의 인트론 1 내의 영역이다. 또 다른 실시양태에서 표적 영역은 GAA 엑손 2의 mRNA의 영역이다. 추가 실시양태에서, 표적은 GAA-코딩 프리-mRNA의 인트론 1의 하나 이상의 이산 하위 영역을 포함한다. 이들 하위 영역은 서열번호: 2 및 서열번호: 3에 의해 정의된 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "표적 서열"은 이에 대항하여 올리고머 유사체가 지향되는 표적 RNA의 부분, 즉, 올리고머 유사체가 상보적 서열의 왓슨-크릭 염기 쌍형성에 의해 혼성화될 서열을 지칭한다.
용어 "표적화 서열"은 RNA 게놈 내 "표적 서열"에 상보적인 (게다가, 실질적으로 상보적임을 의미함) 올리고머 또는 올리고머 유사체의 서열이다. 안티센스 올리고머의 전체 서열, 또는 단지 부분은 표적 서열에 상보적일 수 있다. 예를 들어, 20-30개 염기를 갖는 올리고머에서, 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29개가 표적 영역에 상보적인 표적화 서열일 수 있다. 전형적으로, 표적화 서열은 올리고머 내 인접 염기들로 형성되나, 예를 들어, 올리고머의 반대편 말단으로부터 함께 위치될 경우, 표적 서열을 스패닝하는 서열을 구성하는 비-인접 서열로 대안적으로 형성될 수 있다.
"표적화 서열"은 표적 서열에 "근접한" 또는 "실질적인" 상보성을 갖고 본 개시의 목적을 위해 여전히 기능할 수 있고, 즉, 여전히 "상보적"이다. 바람직하게는, 본 개시에 이용된 올리고머 유사체 화합물은 10개 뉴클레오티드 중에서 표적 서열과 기껏해야 하나의 불일치, 및 바람직하게는 20개 뉴클레오티드 중에서 기껏해야 하나의 불일치를 갖는다. 대안적으로, 이용된 안티센스 올리고머는 본원에 표시된 예시적 표적화 서열과, 적어도 90%의 서열 상동성, 및 바람직하게는 적어도 95%의 서열 상동성을 갖는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "TEG" 또는 "트리에틸렌 글리콜 꼬리"는 올리고뉴클레오티드에, 예를 들어, 그의 3'- 또는 5'-말단에 접합된 트리에틸렌 글리콜 모이어티를 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, "TEG"는 화학식 (I), (VI), 또는 (VII)의 화합물의 T가 하기 화학식인 것을 포함한다:
Figure pct00023
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "정량화하는", "정량화" 또는 다른 관련 단어는 핵산, 폴리뉴클레오티드, 올리고머, 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질의 단위 부피 내의 양, 질량, 또는 농도를 결정하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상체 (예를 들어, 인간과 같은 포유동물) 또는 세포의 "치료"는 개체 또는 세포의 자연적 과정을 변경하기 위한 시도에 사용되는 임의의 유형의 개입이다. 치료는 제약 조성물의 투여를 포함하나, 이제 제한되지는 않고, 병리학적 사건의 개시 또는 병인체와의 접촉에 대해 예방적으로 또는 후속으로 수행될 수 있다. 또한, 치료되는 질환 또는 병태의 진행 속도를 감소시키거나, 그 질환 또는 병태의 발병을 지연시키거나, 그 발병의 중증도를 감소시키는 것에 관련될 수 있는 "예방적" 치료가 포함된다. "치료" 또는 "예방"은 질환 또는 병태, 또는 그의 연관된 증상의 완전한 박멸, 치유, 또는 방지를 반드시 지시하지는 않는다.
II. GAA의 스플라이스 조정을 위한 서열
특정 실시양태는, GAA 유전자 내의 영역에 특이적으로 혼성화하기에 충분한 길이 및 상보성을 갖는 안티센스 올리고머와 세포를 접촉시켜, 세포 내 엑손-2 결실된 GAA mRNA에 비해 엑손 2-함유 GAA mRNA의 수준이 강화되도록 하는 것을 포함하는, 세포 내 엑손-2 결실된 GAA mRNA에 비해 엑손 2-함유 GAA-코딩 mRNA의 수준을 강화하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 세포는 대상체에 존재하고, 방법은 대상체에게 안티센스 올리고머를 투여하는 것을 포함한다.
안티센스 올리고머는 mRNA의 번역을 차단하거나 억제하거나 조정하도록, 프리-mRNA 스플라이스 프로세싱을 억제하거나 조정하도록, 또는 표적화된 mRNA의 분해를 유도하도록 설계될 수 있고, 그것이 혼성화되는 표적 서열"에 지향하거나" 또는 표적 서열"에 대항하여 표적화된다"고 언급될 수 있다. 특정 실시양태에서, 표적 서열은 프리-프로세싱된 mRNA의 3' 또는 5' 스플라이스 부위, 분지점, 또는 스플라이싱의 조절에 관여된 다른 서열을 포함하는 영역을 포함한다. 표적 서열은 엑손 내에 또는 인트론 내에 존재하거나 인트론/엑손 접합부에 스패닝할 수 있다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 효과적인 방식으로 표적 RNA (예를 들어, 프리-mRNA)의 영역을 차단하기 위해 표적 RNA (즉, 스플라이스 부위 선택이 조정되는 RNA)에 대한 충분한 서열 상보성을 갖는다. 예시적 실시양태에서, GAA 프리-mRNA의 이러한 차단은 달리 스플라이싱을 조정할 천연 단백질에 대한 결합 부위를 차폐함으로써, 및/또는 표적화된 RNA의 구조를 변경시킴으로써, 스플라이싱을 조정하는 결과를 낳는다. 일부 실시양태에서, 표적 RNA는 표적 프리-mRNA (예를 들어, GAA 유전자 프리-mRNA)이다.
표적 RNA의 스플라이싱을 조정하기 위한 표적 RNA 서열에 대한 충분한 서열 상보성을 갖는 안티센스 올리고머란 안티센스 작용제가 달리 표적화된 RNA의 3차원 구조를 변경시키고/거나 스플라이싱을 조정할 천연 단백질에 대한 결합 부위의 차폐를 촉발시키기에 충분한 서열을 갖는다는 것을 의미한다. 마찬가지로, 표적 RNA의 스플라이싱을 조정하기 위한 표적 RNA 서열에 대한 충분한 서열 상보성을 갖는 올리고머 시약이란 올리고머 시약이 달리 표적화된 RNA의 3차원 구조를 변경시키고/거나 스플라이싱을 조정할 천연 단백질에 대한 결합 부위의 차폐를 촉발시키기에 충분한 서열을 갖는다는 것을 의미한다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 충분한 길이 및 인간 GAA 프리-mRNA의 인트론 1, 인간 GAA 프리-mRNA의 엑손 2, 또는 인간 GAA 프리-mRNA의 인트론 2 내의 서열에 상보성을 갖는다. 또한, 인간 GAA 프리-mRNA의 인트론 1/엑손 2를 스패닝하는 영역, 또는 인간 GAA 프리-mRNA의 엑손 2/인트론 2를 스패닝하는 영역에 상보적인 안티센스 올리고머가 포함된다. 인간 GAA 유전자에 대한 인트론 1 (서열번호: 1), 엑손 2 (서열번호: 4), 및 인트론 2 (서열번호: 5) 서열은 하기 표 1에 나타냈다 (서열번호: 1의 3' 말단 근처에 하이라이트된 T/G는 상기 기재된 IVS1-13T>G 돌연변이이고; 이 위치의 뉴클레오티드는 T 또는 G이다).
Figure pct00024
Figure pct00025
특정 실시양태에서, 안티센스 표적화 서열은 표 1에 열거된 하나 이상의 표적 서열의 영역에 혼성화되도록 설계된다. 선택된 안티센스 표적화 서열은 예를 들어, 약 12개 염기 또는 그 초과, 예를 들어, 약 40개 염기로 보다 짧게 만들어질 수 있고, 서열이 표적 서열에 혼성화 직후 스플라이스 조정을 초래하기에 충분히 상보적이고, 임의로 RNA와 함께 45℃ 이상의 Tm을 갖는 헤테로듀플렉스를 형성하는 한, 소수의 불일치를 포함한다.
특정 실시양태에서, 표적 서열 및 안티센스 표적화 서열 간의 상보성의 정도는 안정한 듀플렉스를 형성하기에 충분하다. 표적 RNA 서열과 안티센스 올리고머의 상보성의 영역은 8-11개 염기만큼 짧을 수 있으나, 12-15개 염기 이상, 예를 들어, 10-40개 염기, 12-30개 염기, 12-25개 염기, 15-25개 염기, 12-20개 염기, 또는 15-20개 염기 (이들 범위 사이의 모든 정수를 포함)일 수 있다. 약 14-15개 염기의 안티센스 올리고머는 독특한 상보적 서열을 갖기에 일반적으로 충분히 길다. 특정 실시양태에서, 상보적 염기의 최소 길이는 본원에서 논의된 바와 같이, 필수 결합 Tm을 달성하는 것을 필요로 할 수 있다.
특정 실시양태에서, 적어도 최소 수의 염기, 예컨대, 10-12개 염기가 표적 서열에 대해 상보적인 40개 염기만큼 긴 올리고머가 적합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 촉진되거나 능동적인 세포 내 흡수는 약 30개 염기 미만의 올리고머 길이에서 최적화된다. 본원에서 추가로 기재된 PMO 올리고머의 경우, 결합 안정성 및 흡수의 최적 균형은 18-25개 염기의 길이에서 일반적으로 일어난다. 적어도 약 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 인접 또는 비-인접 염기가 표 1의 표적 서열 (예를 들어, 서열번호: 1-5, 서열번호: 1/4 또는 서열번호: 4/5를 스패닝하는 서열)에 대해 상보적인, 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 염기로 이루어진 안티센스 올리고머 (예를 들어, PMO, PMO-X, PNA, LNA, 2'-OMe)가 본 개시 내에 포함된다.
안티센스 올리고머는 인간 GAA 유전자의 프리-mRNA 서열의 인트론 1, 엑손 2, 또는 인트론 2 내 또는 그에 인접한 서열 또는 영역에 충분히 상보적인 염기 서열을 전형적으로 포함한다. 특정 실시양태에서, 올리고머는 서열번호: 2 및 서열번호: 3에 상보적이다. 이상적으로, 안티센스 올리고머는 GAA 프리-mRNA의 이상 스플라이싱을 효과적으로 조정함으로써, 활성 GAA 단백질의 발현을 증가시키는 것이 가능하다. 이 요건은 올리고머 화합물이 포유동물 세포에 의해 능동적으로 흡수될 수 있고, 일단 흡수되면, 임의로 약 40℃ 또는 45℃보다 더 높은 Tm으로, 표적 mRNA와 안정한 듀플렉스 (또는 헤테로듀플렉스)를 형성할 수 있는 능력을 갖을 경우 임의로 충족된다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 표적 서열에 100% 상보적일 수 있거나, 예를 들어, 올리고머 및 표적 서열 간에 형성된 헤테로듀플렉스가 세포 뉴클레아제의 작용 및 생체내에서 일어날 수 있는 다른 양식의 분해를 견뎌내기에 충분히 안정한 한, 변이체를 수용하기 위한 불일치를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 올리고머는 올리고머 및 표적 서열 간에 약 또는 적어도 약 70% 서열 상보성, 예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 상보성을 의미하는 실질적인 상보성을 가질 수 있다. 뉴클레아제에 의한 절단에 덜 민감한 올리고머 백본이 본원에서 논의된다. 만약 존재한다면, 불일치는 전형적으로 혼성체 듀플렉스의 중간에서보다 말단 영역에 대해 덜 탈안정화한다. 허용되는 불일치의 수는 듀플렉스 안정성의 널리 이해된 원칙에 따라, 올리고머의 길이, 듀플렉스 내 G:C 염기 쌍의 백분율, 및 듀플렉스 내 불일치(들)의 위치에 따라 달라질 것이다. 비록 이러한 안티센스 올리고머가 반드시 v 표적 서열에 대해 100% 상보적일 필요는 없긴 하지만, 이는 표적 프리-RNA의 스플라이싱이 조정되도록, 표적 서열에 안정적이고 특이적으로 결합하는데 효과적이다.
올리고머 및 표적 서열 간에 형성된 듀플렉스의 안정성은 결합 Tm 및 세포의 효소 절단에 대한 듀플렉스의 민감도의 함수이다. 상보적-서열 RNA에 대한 올리고머의 Tm은 예컨대 문헌 [Hames et al., Nucleic Acid Hybridization, IRL Press, 1985, pp. 107-108]에 기재된 것들 또는 문헌 [Miyada C. G. and Wallace R. B., 1987, Oligomer Hybridization Techniques, Methods Enzymol. Vol. 154 pp. 94-107107]에 기재된 바와 같은 종래 방법에 의해 측정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 체온보다 더 높고 바람직하게는 약 45℃ 또는 50℃보다 더 높은, 상보적-서열 RNA에 대한 결합 Tm을 가질 수 있다. 60-80℃ 이상의 범위의 Tm이 또한 포함된다. 널리 공지된 원칙에 따라, 상보성-기반의 RNA 혼성체에 관한 올리고머의 Tm은 듀플렉스 내 C:G 쌍형성된 염기의 비를 증가시킴으로써, 및/또는 헤테로듀플렉스의 길이 (염기쌍 내)를 증가시킴으로써 증가될 수 있다. 동시에, 세포의 흡수를 최적화하기 위한 목적에서, 올리고머의 크기를 제한하는 것이 이로울 수 있다. 이러한 이유로, 높은 Tm 값에 대해 25개 염기 초과를 필요로 하는 것들에 비해 25개 이하의 염기의 길이에서 높은 Tm (45-50℃ 이상)을 보여주는 화합물이 일반적으로 바람직하다.
표 2A, 표 2B, 및 표 2C는 인간 GAA 유전자의 프리-mRNA 서열에 대해 상보적인 (5'-에서-3'로의 배향으로) 예시적 표적화 서열을 보여준다.
표 2A
Figure pct00026
Figure pct00027
표 2B
Figure pct00028
표 2C
Figure pct00029
따라서 특정 안티센스 올리고머는 표 2A 내지 표 2C의 서열 또는 그의 변이체 또는 인접 또는 비-인접 부분(들)을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진다. 예를 들어, 특정 안티센스 올리고머는 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열번호 중 어느 하나의 약 또는 적어도 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27개 인접 또는 비-인접 뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 비-인접 부분의 경우, 개재 뉴클레오티드는 결실될 수 있다. 변이체의 추가적 예는 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열번호 중 어느 하나의 전체 길이에 대해 약 또는 적어도 약 70% 서열 동일성 또는 상동성, 예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성 또는 상동성을 갖는 올리고머를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 안티센스 올리고머 또는 화합물 중 어느 것이든 GAA 프리-mRNA에서 ISS 및/또는 ESS 요소를 억제한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 표적화 서열을 가진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 GAA 프리-mRNA에서 ISS 및/또는 ESS 요소를 억제한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 표적화 서열을 가진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 본원에 기재된 실시예 또는 방법 중 적어도 하나에 따라, 대조군에 비해, 임의로, 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 또는 65% 또는 그 초과 만큼 성숙한 GAA mRNA에서 엑손 2 잔류를 증가시키거나, 강화하거나 촉진한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 표적화 서열을 가진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 본원에 기재된 실시예 또는 방법 중 적어도 하나에 따라, 대조군에 비해, 임의로, 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 또는 65% 또는 그 초과 만큼 세포에서 GAA 단백질 발현을 증가시키거나, 강화하거나 촉진한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 본원에 기재된 실시예 또는 방법 중 적어도 하나에 따라, 대조군에 비해, 임의로, 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 또는 65% 또는 그 초과 만큼 세포에서 GAA 효소 활성을 증가시키거나, 강화하거나 촉진한다. 본원에 예시된 바와 같이, 세포 (예를 들어, 섬유모세포 세포)를 IVS1-13T>G 돌연변이를 갖는 환자로부터 수득할 수 있다.
일부 실시양태에서, 특정 안티센스 올리고머는 표 2B (또는 표 2C)에 상세히 설명된 바와 같은 서열 또는 그의 변이체 또는 인접 또는 비-인접 부분(들)을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진다. 예를 들어, 특정 안티센스 올리고머는 표 2B 또는 표 2C에 개략된 서열번호 중 어느 하나의 약 또는 적어도 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27개 인접 또는 비-인접 뉴클레오티드를 포함한다. 비-인접 부분의 경우, 개재 뉴클레오티드는 결실될 수 있다. 변이체의 추가적 예는 표 2B 또는 표 2C에 개략된 서열번호 중 어느 하나의 전체 길이에 대해 약 또는 적어도 약 70% 서열 동일성 또는 상동성, 예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성 또는 상동성을 갖는 올리고머를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 표적화 서열을 가진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 GAA 프리-mRNA에서 ISS 및/또는 ESS 요소를 억제한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 표적화 서열을 가진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 본원에 기재된 실시예 또는 방법 중 적어도 하나에 따라, 대조군에 비해, 임의로, 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 또는 65% 또는 그 초과 만큼 성숙한 GAA mRNA에서 엑손 2 잔류를 증가시키거나, 강화하거나 촉진한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 표적화 서열을 가진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 본원에 기재된 실시예 또는 방법 중 적어도 하나에 따라, 대조군에 비해, 임의로, 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 또는 65% 또는 그 초과 만큼 세포에서 GAA 단백질 발현을 증가시키거나, 강화하거나 촉진한다. 일부 실시양태에서, 이러한 변이체 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어진 표적화 서열을 가진 안티센스 올리고머 또는 화합물은 본원에 기재된 실시예 또는 방법 중 적어도 하나에 따라, 대조군에 비해, 임의로, 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 또는 65% 또는 그 초과 만큼 세포에서 GAA 효소 활성을 증가시키거나, 강화하거나 촉진한다. 본원에 예시된 바와 같이, 세포 (예를 들어, 섬유모세포 세포)를 IVS1-13T>G 돌연변이를 갖는 환자로부터 수득할 수 있다.
다양한 측면에서, 인간 GAA 프리-mRNA의 표적 영역에 상보적인 (예를 들어, 적어도 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 상보적인) 표적화 서열을 포함하며, 임의로 여기서 표적화 서열이 표 2A 내지 표 2C 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 것인, 안티센스 올리고머 또는 화합물이 제공된다. 또 다른 측면에서, 본원에 기재된 바와 같은 것들 중 어느 하나와 같은 변이체 표적화 서열을 포함하며, 여기서 변이체 표적화 서열이 표 2A 내지 표 2C 중 어느 하나에 제시된 표적화 서열 중 하나 이상에 상보적인 (예를 들어, 80%-100% 상보적인) 인간 GAA 프리-mRNA의 표적 영역에 결합하는 것인, 안티센스 올리고머 또는 화합물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머 또는 화합물은 인간 GAA pre-mRNA의 적어도 10개 (예를 들어, 적어도 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개)의 연이은 염기를 포함하는 표적 서열 (예를 들어, 서열번호: 1, 2, 또는 3 또는 서열번호: 1/4 또는 서열번호: 4/5에 의해 정의된 GAA 프리-mRNA 스플라이스 접합부를 스패닝하는 서열 중 어느 하나)에 결합한다.　 일부 실시양태에서, 표적 서열은 표 2A 내지 표 2C 중 어느 하나에 제시된 표적화 서열 중 하나 이상에 상보적이다 (예를 들어, 적어도 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 상보적이다).　 일부 실시양태에서, 표적 서열은 표 2A 내지 표 2C 중 어느 하나에 제시된 표적화 서열 중 하나 이상의 적어도 10개 (예를 들어, 적어도 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개)의 연이은 염기에 상보적이다 (예를 들어, 적어도 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 상보적이다).　 일부 실시양태에서, 표적 서열은 본원에 표 중 하나 이상에 제시된 바와 같은 어닐링 부위 (예를 들어, GAA-IVS1.SA.(-189,-165))에 의해 정의된다.
안티센스 올리고머 및 그의 변이체의 활성은 관련 기술분야의 통상적인 기술에 따라 검정될 수 있다. 예를 들어, 조사된 RNA 및 단백질의 스플라이스 형태 및 발현 수준은 전사된 핵산 또는 단백질의 스플라이스 형태 및/또는 발현을 검출하는 다종다양한 널리 공지된 방법 중 어느 하나에 의해 평가될 수 있다. 이러한 방법의 비제한적인 예는 RNA의 스플라이싱된 형태의 RT-PCR 이후 PCR 생성물의 크기 분리, 핵산 혼성화 방법, 예를 들어, 노던 블롯(Northern blot) 및/또는 핵산 검정의 사용; 핵산 증폭 방법; 단백질의 검출을 위한 면역학적 방법; 단백질 정제 방법; 및 단백질 기능 또는 활성 검정을 포함한다.
RNA 발현 수준은 세포, 조직 또는 생물로부터 mRNA/cDNA (즉, 전사된 폴리뉴클레오티드)를 준비하고, 검정된 핵산, 또는 그의 단편의 보체인 기준 폴리뉴클레오티드와 mRNA/cDNA를 혼성화함으로써 평가될 수 있다. cDNA는 상보적 폴리뉴클레오티드와의 혼성화 전에 여러 가지의 폴리머라제 연쇄 반응 또는 시험관내 전사 방법 중 어느 하나를 사용하여 임의로 증폭될 수 있고; 바람직하게는, 증폭되지 않는다. 하나 이상의 전사물의 발현은 전사물(들)의 발현의 수준을 평가하기 위해 정량적 PCR을 사용하여 또한 검출될 수 있다.
III. 안티센스 올리고머 화학
A. 일반적 특성
본 개시의 특정 안티센스 올리고머는 인트론 스플라이스 사일런서 요소 또는 엑손 스플라이스 사일런서 요소에 특이적으로 혼성화한다. 일부 안티센스 올리고머는 표 2A 내지 표 2C에 제시된 표적화 서열, 표 2A 내지 표 2C의 표적화 서열의 적어도 10개의 인접 뉴클레오티드, 또는 표 2A 내지 표 2C의 표적화 서열과 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함한다. 특이적 안티센스 올리고머는 표 2A 내지 표 2C에 제시된 표적화 서열로 이루어지거나 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 올리고머는 뉴클레아제-저항성이다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 포스포라미데이트 또는 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 펩티드 핵산 (PNA), 잠금 핵산 (LNA), 포스포로티오에이트 올리고머, 트리시클로-DNA 올리고머, 트리시클로-포스포로티오에이트 올리고머, 2'O-Me-변형된 올리고머, 또는 상기의 임의의 조합으로부터 선택된 비천연 화학적 백본, 및 인간 산성 알파-글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) [서열번호: 2 및 서열번호: 3에 의해 확인된 부분을 포함], 인트론 2 (서열번호: 5), 또는 엑손 2 (서열번호: 4) 내의 영역에 상보적인 표적화 서열을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택되고, 여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다. 추가로, 그리고 예를 들어, 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 올리고뉴클레오티드는 표 4A 내지 표 4C에 제시된 표적화 서열을 갖는다.
본 개시의 안티센스 올리고머는, 예를 들어, 상기에서 논의된 바와 같이, 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하거나 포함하는 핵염기를 각각 보유하는 복수의 뉴클레오티드 서브유닛을 일반적으로 포함한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 길이가 약 10 내지 약 40개 서브유닛, 보다 바람직하게는 약 10 내지 30개 서브유닛, 및 전형적으로 15-25개 서브유닛의 범위에 있다. 예를 들어, 본 개시의 안티센스 화합물은 길이가 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 서브유닛일 수 있거나, 10개 서브유닛 내지 40개 서브유닛, 10개 서브유닛 내지 30개 서브유닛, 14개 서브유닛 내지 25개 서브유닛, 15개 서브유닛 내지 30개 서브유닛, 17개 서브유닛 내지 30개 서브유닛, 17개 서브유닛 내지 27개 서브유닛, 10개 서브유닛 내지 27개 서브유닛, 10개 서브유닛 내지 25개 서브유닛, 및 10개 서브유닛 내지 20개 서브유닛의 범위에 있을 수 있다. 특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 길이가 약 10 내지 약 40개 또는 약 5 내지 약 30개 뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 길이가 약 14 내지 약 25개 또는 약 17 내지 약 27개 뉴클레오티드이다.
다양한 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 예를 들어 백본의 100%가 변형된 완전히 변형된 백본을 포함할 수 있다 (예를 들어, 25 량체(mer) 안티센스 올리고머는 본원에 기재된 바와 같은 백본 변형의 임의의 조합으로 변형된 그의 전체 백본을 포함한다). 다양한 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 약 100% 내지 2.5%의 변형된 그의 백본을 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 약 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 2.5%의 변형된 그의 백본, 및 그 사이에 반복을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 본원에 기재된 바와 같은 백본 변형의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 포스포로티오에이트 변형된 올리고머, 2' O-메틸 변형된 올리고머, 펩티드 핵산 (PNA), 잠금 핵산 (LNA), 포스포로티오에이트 올리고머, 2' O-MOE 변형된 올리고머, 2'-플루오로-변형된 올리고머, 2'O,4'C-에틸렌-가교된 핵산 (ENA), 트리시클로-DNA, 트리시클로-DNA 포스포로티오에이트 뉴클레오티드, 2'-O-[2-(N-메틸카르바모일)에틸] 변형된 올리고머, 모르폴리노 올리고머, 펩티드-접합된 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PPMO), (i) 모르폴리노 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합, 및 (ii) (1,4-피페라진)-1-일 치환기에 또는 치환된 (1,4-피페라진)-1-일에 대한 제2 공유 결합을 가진 인 원자를 갖는 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO플러스), 및 (i) 모르폴리노 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합 및 (ii) 4-아미노피페리딘-1-일 (즉, APN) 또는 4-아미노피페리딘-1-일의 유도체의 고리 질소에 대한 제2 공유 결합을 가진 인 원자를 갖는 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO-X) 화학 (상기 중 어느 하나의 조합을 포함)을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어질 수 있다.
일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머의 백본은 실질적으로 비하전되고, 세포막을 통한 능동적 또는 촉진된 수송을 위한 기질로서 임의로 인식된다. 일부 실시양태에서, 모든 뉴클레오시드간 연결은 비하전된다. 표적 RNA와 함께 안정한 듀플렉스를 형성하는 올리고머의 능력은 표적에 대한 안티센스 올리고머의 길이 및 상보성의 정도, G:C 대 A:T 염기 일치의 비, 임의의 불일치된 염기의 위치를 포함한, 백본의 다른 특징에 또한 관련될 수 있다. 세포 뉴클레아제에 저항하는 안티센스 올리고머의 능력은 생존 및 세포 원형질로의 작용제의 궁극적 전달을 촉진할 수 있다. 예시적인 안티센스 올리고머 표적화 서열은 표 2A, 표 2B, 및 표 2C에 열거되어 있다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 생리학적 pH에서 양전하이거나 양이온성인 적어도 하나의 뉴클레오시드간 연결을 갖는다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 약 5.5 내지 약 12의 pKa를 나타내는 적어도 하나의 뉴클레오시드간 연결을 갖는다. 추가 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 약 4.5 내지 약 12의 pKa를 나타내는 약, 적어도 약, 또는 단지 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 뉴클레오시드간 연결을 함유한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 약 4.5 내지 약 12의 pKa를 나타내는 약 또는 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 뉴클레오시드간 연결을 함유한다. 임의로, 안티센스 올리고머는 염기성 질소 및 알킬, 아릴, 또는 아르알킬 기 둘 다를 가진 적어도 하나의 뉴클레오시드간 결합을 갖는다. 특정한 실시양태에서, 양이온성 뉴클레오시드간 연결 또는 연결들은 4-아미노피페리딘-1-일 (APN) 기, 또는 그의 유도체를 포함한다. 어떠한 한 이론에 의해서도 구속되지 않으면서, 올리고머 내 양이온성 연결 또는 연결들 (예를 들어, APN 기 또는 APN 유도체)의 존재는 표적 뉴클레오티드 내 음전하 포스페이트에 대한 결합을 용이하게 하는 것으로 여겨진다. 따라서, 돌연변이 RNA 및 양이온성 연결-함유 올리고머간 헤테로듀플렉스의 형성은 이온성 인력 및 왓슨-크릭 염기 쌍형성 둘 다에 의해 결합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 양이온성 연결의 수는 적어도 2이고 총 뉴클레오시드간 연결의 약 절반 이하, 예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이하의 양이온성 연결이다. 일부 실시양태에서, 그러나, 최대 모든 뉴클레오시드간 연결이 양이온성 연결이고, 예를 들어, 총 뉴클레오시드간 연결 중 약 또는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개가 양이온성 연결이다. 구체적 실시양태에서, 약 19-20개 서브유닛의 올리고머는 2-10개, 예컨대, 4-8개 양이온성 연결을 가질 수 있고, 나머지는 비하전된 연결일 수 있다. 다른 구체적 실시양태에서, 14-15개 서브유닛의 올리고머는 2-7개, 예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개 양이온성 연결을 가질 수 있고 나머지는 비하전된 연결일 수 있다. 올리고머 내 양이온성 연결의 총 수는 따라서 약 1 내지 10 내지 15 내지 20 내지 30 또는 그 초과 (그 사이의 모든 정수 포함)으로 변할 수 있고, 올리고머 전반에 걸쳐 배치될 수 있다.
일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 매 2-5개 또는 2, 3, 4, 또는 5개의 비하전된 연결당 약 또는 최대 약 1개의 양이온성 결합, 예컨대 매 10개의 비하전된 연결당 약 4-5개 또는 4 또는 5개의 연결을 가질 수 있다.
특정 실시양태는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 양이온성 연결을 함유하는 안티센스 올리고머를 포함한다. 특정 실시양태에서, 안티센스 활성의 최적의 개선은 만약 약 25%의 백본 연결이 양이온성일 경우 나타날 수 있다. 특정 실시양태에서, 강화는 소수 예를 들어, 10-20% 양이온성 연결에서, 또는 양이온성 연결의 수가 50-80% 범위, 예컨대 약 60%일 경우 나타날 수 있다.
일부 실시양태에서, 양이온성 연결은 백본을 따라 배치된다. 이러한 올리고머는 적어도 2개의 연이은 비하전된 연결을 임의로 함유하고; 즉, 올리고머는 임의로 그의 전체 길이를 따라 엄격하게 교대되는 패턴을 갖지 않는다. 구체적인 경우에, 각각의 하나 또는 두 양이온성 연결(들)은 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비하전된 연결에 의해 백본을 따라 분리된다.
또한, 양이온성 연결의 블록 및 비하전된 연결의 블록을 갖는 올리고머가 포함된다. 예를 들어, 비하전된 연결의 중심 블록은 양이온성 연결의 블록에 의해 플랭킹될 수 있고, 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 실시양태에서, 올리고머는 대략 동일-길이 5', 3' 및 중심 영역을 갖고, 중심 영역 내 양이온성 연결의 백분율은 양이온성 연결의 총 수의 약 50%, 60%, 70%, 또는 80% 초과이다.
특이적 안티센스 올리고머에서, 대부분의 양이온성 연결 (예를 들어, 양이온성 연결의 70, 75%, 80%, 90%)은 "중심-영역" 백본 연결, 예를 들어, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 최중심 연결에 근접하게 분포된다. 예를 들어, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24-량체 올리고머는 8, 9, 10, 11, 또는 12개의 최중심 연결에 국재화된 총 양이온성 연결 중 적어도 50%, 60%, 70%, 또는 80%를 가질 수 있다.
B. 백본 화학 특징
안티센스 올리고머는 여러 가지의 안티센스 화학을 이용할 수 있다. 올리고머 화학의 예는 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 포스포로티오에이트 변형된 올리고머, 2' O-메틸 변형된 올리고머, 펩티드 핵산 (PNA), 잠금 핵산 (LNA), 포스포로티오에이트 올리고머, 2' O-MOE 변형된 올리고머, 2'-플루오로-변형된 올리고머, 2'O,4'C-에틸렌-가교된 핵산 (ENA), 트리시클로-DNA, 트리시클로-DNA 포스포로티오에이트 뉴클레오티드, 2'-O-[2-(N-메틸카르바모일)에틸] 변형된 올리고머, 모르폴리노 올리고머, 펩티드-접합된 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PPMO), (i) 모르폴리노 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합, 및 (ii) (1,4-피페라진)-1-일 치환기에 또는 치환된 (1,4-피페라진)-1-일에 대한 제2 공유 결합을 가진 인 원자를 갖는 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO플러스), 및 (i) 모르폴리노 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합 및 (ii) 4-아미노피페리딘-1-일 (즉, APN) 또는 4-아미노피페리딘-1-일의 유도체의 고리 질소에 대한 제2 공유 결합을 가진 인 원자를 갖는 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO-X) 화학 (상기 중 어느 하나의 조합을 포함)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로, PNA 및 LNA 화학은 PMO 및 2'O-Me 변형된 올리고머에 비해 상대적으로 높은 그의 표적 결합 강도 때문에 보다 짧은 표적화 서열을 이용할 수 있다. 포스포로티오에이트 및 2'O-Me-변형된 화학이 조합되어 2'O-Me-포스포로티오에이트 백본을 생성할 수 있다. 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함된, PCT 공개 번호 WO/2013/112053 및 WO/2009/008725를 참조한다.
일부 경우에, PMO와 같은 안티센스 올리고머는 세포 관통 펩티드 (CPP)에 접합되어 세포내 전달을 용이하게 할 수 있다. 펩티드-접합된 PMO는 PPMO라 불리고 특정 실시양태는 그 전문이 본원에 참조로 포함된 PCT 공개 번호 WO/2012/150960에 기재된 것들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고머의 3' 말단부(terminal end)에 접합되거나 연결된 아르기닌-풍부 펩티드 서열이 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 안티센스 올리고머의 5' 말단부에 접합되거나 연결된 아르기닌-풍부 펩티드 서열이 사용될 수 있다.
1. 펩티드 핵산 (PNA)
펩티드 핵산 (PNA)은 피리미딘 또는 퓨린 염기가 부착된 N-(2-아미노에틸)글리신 단위로 이루어진, 백본이 데옥시리보스 백본과 구조적으로 동형인 DNA의 유사체이다. 천연 피리미딘 및 퓨린 염기를 함유하는 PNA는 왓슨-크릭 염기 쌍형성 규칙을 준수하면서 상보적 올리고머에 혼성화하고, 염기쌍 인식의 면에서 DNA를 모방한다 (Egholm, Buchardt et al 1993). PNA의 백본은 포스포디에스테르 결합보다는 펩티드 결합에 의해 형성되어, 이들을 안티센스 적용에 잘 들어맞게 한다 (하기 구조 참조). 백본은 비하전되어, 정상보다 더 큰 열 안정성을 나타내는 PNA/DNA 또는 PNA/RNA 듀플렉스를 결과한다. PNA는 뉴클레아제 또는 프로테아제에 의해 인식되지 않는다. PNA의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00030
천연 구조로의 급격한 구조적 변화에도 불구하고, PNA는 DNA 또는 RNA로의 나선 형태의 서열-특이적 결합이 가능하다. PNA의 특성은 상보적 DNA 또는 RNA에 대한 높은 결합 친화도, 단일-염기 불일치에 기인한 탈안정화 효과, 뉴클레아제 및 프로테아제에 대한 저항성, 염 농도에 비의존적인 DNA 또는 RNA와의 혼성화 및 호모퓨린 DNA와의 트리플렉스(triplex) 형성을 포함한다. 파나진(PANAGENE)™은 그의 전매인 Bts PNA 단량체 (Bts; 벤조티아졸-2-술포닐 기) 및 전매 올리고머화 프로세스를 개발하였다. Bts PNA 단량체를 사용한 PNA 올리고머화는 탈보호, 커플링 및 캡핑의 반복적 사이클로 구성된다. PNA는 관련 기술분야에 공지된 임의의 기술을 사용하여 합성적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,969,766, 7,211,668, 7,022,851, 7,125,994, 7,145,006 및 7,179,896호를 참조. 또한, PNA의 제조에 대해서는 미국 특허 번호 5,539,082; 5,714,331; 및 5,719,262를 참조. PNA 화합물의 추가 교시는 문헌 [Nielsen et al, Science, 254:1497-1500, 1991]에서 찾을 수 있다. 상기 문헌 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.
2. 잠금 핵산 (LNA)
안티센스 올리고머 화합물은 "잠금 핵산" 서브유닛 (LNA)을 또한 함유할 수 있다. "LNA"는 가교된 핵산(bridged nucleic acid) (BNA)이라 불리는 변형체의 부류의 구성원이다. BNA는 C30-엔도 (노던) 당 주름(sugar pucker) 내 리보스 고리의 입체형상을 잠그는 공유 연결을 특징으로 한다. LNA의 경우, 가교는 2'-O 및 4'-C 위치 간의 메틸렌으로 구성된다. LNA는 백본 사전조직화 및 염기 쌓임을 강화하여 혼성화 및 열 안정성을 증가시킨다.
LNA의 구조는, 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함된, 문헌 [Wengel, et al, Chemical Communications (1998) 455; Tetrahedron (1998) 54:3607, and Accounts of Chem Research (1999) 32:301); Obika, et al, Tetrahedron Letters (1997) 38:8735; (1998) 39:5401], 및 [Bioorganic Medicinal Chemistry (2008) 16:9230]에서 찾을 수 있다. LNA의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00031
본 개시의 화합물은 하나 이상의 LNA를 혼입할 수 있고; 일부 경우에, 화합물은 LNA로 전적으로 구성될 수 있다. 개별 LNA 뉴클레오시드 서브유닛의 합성 및 올리고머로의 그의 혼입 방법은, 예를 들어, 각각 그 전문이 참조로 포함된 미국 특허 번호 7,572,582, 7,569,575, 7,084,125, 7,060,809, 7,053,207, 7,034,133호, 6,794,499, 및 6,670,461에 기재되어 있다. 전형적인 서브유닛간 링커는 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트 모이어티를 포함하고; 대안적으로, 비-인 함유 링커가 이용될 수 있다. 추가 실시양태는 각각의 LNA 서브유닛이 DNA 서브유닛에 의해 분리된 LNA 함유 화합물이다. 특정 화합물은 서브유닛간 링커가 포스포로티오에이트인 교대 LNA 및 DNA 서브유닛으로 구성된다.
2'O,4'C-에틸렌-가교된 핵산 (ENA)은 BNA의 부류의 또 다른 구성원이다. 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00032
ENA 올리고머 및 그의 제법은 문헌 [Obika et al., Tetrahedron Ltt 38 (50): 8735]에 기재되어 있고, 이 문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 본 개시의 화합물은 하나 이상의 ENA 서브유닛을 혼입할 수 있다.
3. 포스포로티오에이트
"포스포로티오에이트" (또는 S-올리고)는 비가교 산소 중 하나가 황에 의해 대체된 정상 DNA의 변이체이다. 포스포로티오에이트의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00033
뉴클레오티드간 결합의 황화는 5' → 3' 및 3' → 5' DNA POL 1 엑소뉴클레아제, 뉴클레아제 S1 및 P1, RNase, 혈청 뉴클레아제 및 뱀독 포스포디에스테라제를 포함한 엔도-및 엑소뉴클레아제의 작용을 줄인다. 포스포로티오에이트는 히드로겐 포스포네이트의 이황화탄소 내 황 원소의 용액의 작용에 의해, 또는 테트라에틸티우람 디술피드 (TETD) 또는 3H-1,2-벤조디티올-3-온 1,1-디옥시드 (BDTD)로 포스파이트 트리에스테르를 황화시키는 방법에 의한 두 가지 주요 경로에 의해 제조된다 (예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함된, 문헌 [Iyer et al., 　J. Org. Chem. 55, 4693-4699, 1990] 참조). 후자의 방법은 대부분의 유기 용매 내 황 원소의 불용성 및 이황화탄소의 독성의 문제를 피한다. TETD 및 BDTD 방법은 또한 보다 고순도의 포스포로티오에이트를 산출한다.
4. 트리시클로-DNA 및 트리시클로-포스포로티오에이트 뉴클레오티드
트리시클로-DNA (tc-DNA)는 각각의 뉴클레오티드가 백본의 입체형태적 유연성을 제한하고 비틀림각 γ의 백본 기하학적 구조를 최적화하기 위해 시클로프로판 고리의 도입에 의해 변형된 제약된 DNA 유사체의 부류이다. 동종염기성(homobasic) 아데닌- 및 티민-함유 tc-DNA는 상보적 RNA와 이례적으로 안정한 A-T 염기쌍을 형성한다. 트리시클로-DNA 및 그의 합성은 그 전문이 본원에 참조로 포함된 국제특허출원 공개 번호 WO 2010/115993에 기재되어 있다. 본 개시의 화합물은 하나 이상의 트리사이클-DNA 뉴클레오티드를 혼입할 수 있고; 일부 경우에, 화합물은 트리사이클-DNA 뉴클레오티드로 전적으로 구성될 수 있다.
트리시클로-포스포로티오에이트 뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 서브유닛간 연결을 가진 트리시클로-DNA 뉴클레오티드이다. 트리시클로-포스포로티오에이트 뉴클레오티드 및 그의 합성은 그 전문이 본원에 참조로 포함된 국제특허출원 공개 번호 WO 2013/053928호에 기재되어 있다. 본 개시의 화합물은 하나 이상의 트리사이클-DNA 뉴클레오티드를 혼입할 수 있고; 일부 경우에, 화합물은 트리사이클-DNA 뉴클레오티드로 전적으로 구성될 수 있다. 트리사이클-DNA/트리사이클-포스포티오에이트 뉴클레오티드의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00034
5. 2' O-메틸, 2' O-MOE, 및 2'-F 올리고머
"2'O-Me 올리고머" 분자는 리보스 분자의 2'-OH 잔기에 메틸기를 갖고 있다. 2'-O-Me-RNA는 DNA와 동일한 (또는 유사한) 거동을 나타내나, 뉴클레아제 분해로부터 보호된다. 2'-O-Me-RNA는 추가의 안정성을 위해 포스포티오에이트 올리고머 (PTO)와 또한 조합될 수 있다. 2'O-Me 올리고머 (포스포디에스테르 또는 포스포티오에이트)는 관련 기술분야의 통상적인 기술에 따라 합성될 수 있다 (예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 문헌 [Yoo et al., Nucleic Acids Res. 32:2008-16, 2004] 참조). 2'O-Me 올리고머의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00035
2'O-Me 올리고머는 포스포로티오에이트 연결 (2'O-Me 포스포로티오에이트 올리고머)을 또한 포함할 수 있다. 2 'O-Me 올리고머와 같이 2' O-메톡시에틸 올리고머 (2'-O MOE)는 리보스 분자의 2'-OH 잔기에 메톡시에틸 기를 갖고 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 문헌 [Martin et al., Helv. Chim. Acta, 78, 486-504, 1995]에 논의되어 있다. 2'　O-MOE 뉴클레오티드의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00036
선행 알킬화 2'OH 리보스 유도체와 대조적으로, 2'-플루오로 올리고머는 2'OH 대신에 2 '위치에 플루오로 라디칼을 갖는다. 2'-F 올리고머의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00037
2'-플루오로 올리고머는 그 전문이 본원에 참조로 포함된 WO 2004/043977에 추가로 기재되어 있다. 본 개시의 화합물은 하나 이상의 2'O-메틸, 2' O-MOE, 및2'-F 서브유닛을 혼입할 수 있고, 여기에 기재된 서브유닛간 연결 중 어느 하나를 이용할 수 있다. 일부 경우에, 본 개시의 화합물은 전적으로 2'O-메틸, 2' O-MOE, 또는 2'-F 서브유닛으로 구성될 수 있을 것이다. 본 개시의 화합물의 한 실시양태는 2'O-메틸 서브유닛으로 전적으로 구성된다.
6. 2'-O-[2-(N-메틸카르바모일)에틸] 올리고뉴클레오티드 (MCE)
MCE는 본 개시의 화합물에서 유용한 2'O 변형된 리보뉴클레오시드의 또 다른 예이다. 여기서, 2'OH는 뉴클레아제 저항성을 증가시키기 위해 2-(N-메틸카르바모일)에틸 모이어티로 유도체화된다. MCE 올리고머의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00038
MCE 및 그의 합성은, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 문헌 [Yamada et al., J. Org. Chem., 76(9):3042-53]에 기재되어 있다. 본 개시의 화합물은 하나 이상의 MCE 서브유닛을 혼입할 수 있다.
7. 입체 특이적 올리고머
입체 특이적 올리고머는, 각각의 인-함유 연결의 입체 화학이 실질적으로 순수한 단일 올리고머가 생성되도록 하는 합성 방법에 의해 고정된 것인 올리고머이다. 입체 특이적 올리고머의 비제한적인 예가 하기에 도시되어 있다:
Figure pct00039
상기 예에서, 올리고머의 각각의 인은 동일한 입체 화학을 갖는다. 추가적 예는 상기 기재된 올리고머를 포함한다. 예를 들어, LNA, ENA, 트리시클로-DNA, MCE, 2' O-메틸, 2' O-MOE, 2'-F, 및 모르폴리노-기반 올리고머가 입체-특이적 인-함유 뉴클레오시드간 연결 예컨대, 예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포디에스테르, 포스포라미데이트, 포스포로디아미데이트, 또는 다른 인-함유 뉴클레오시드간 연결로 제조될 수 있다. 이러한 올리고머의 제조에서 사용하기 위한 입체 특이적 올리고머, 제조 방법, 키랄 제어된 합성, 키랄 설계, 및 키랄 보조제가, 예를 들어, WO2015107425, WO2015108048, WO2015108046, WO2015108047, WO2012039448, WO2010064146, WO2011034072, WO2014010250, WO2014012081, WO20130127858, 및 WO2011005761에 상세히 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
8. 모르폴리노-기반 올리고머
모르폴리노-기반 올리고머는 핵염기를 지지하는 모르폴리노 서브유닛을 포함하는 올리고머를 지칭하고, 리보스 대신에, 모르폴린 고리를 함유한다. 예시적 뉴클레오시드간 연결은, 예를 들어, 하나의 모르폴리노 서브유닛의 모르폴린 고리 질소를 인접한 모르폴리노 서브유닛의 4' 외향 고리 탄소에 연결시키는 포스포라미데이트 또는 포스포로디아미데이트 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 각각의 모르폴리노 서브유닛은, 염기-특이적 수소 결합에 의해, 올리고뉴클레오티드 내 염기에 결합하는데 효과적인 퓨린 또는 피리미딘 핵 염기를 포함한다.
모르폴리노-기반 올리고머 (안티센스 올리고머 포함)는, 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함된, 미국 특허 번호 5,698,685; 5,217,866; 5,142,047; 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,521,063; 5,506,337 및 계류 중인 미국 특허출원 번호 12/271,036; 12/271,040; 및 PCT 공개 번호 WO/2009/064471 및 WO/2012/043730 및 문헌 [Summerton et al. 1997, Antisense and Nucleic Acid Drug Development, 7, 187-195]에 상세히 기재되어 있다. 올리고머 구조 내에서, 포스페이트 기는 올리고머의 "뉴클레오시드간 연결"을 형성하는 것으로 흔히 언급된다. RNA 및 DNA의 자연 발생 뉴클레오시드간 연결은 3' → 5' 포스포디에스테르 연결이다. "포스포라미데이트" 기는 세 개의 부착된 산소 원자 및 한 개의 부착된 질소 원자를 갖는 인을 포함하며, 한편 "포스포로디아미데이트" 기는 두 개의 부착된 산소 원자 및 두 개의 부착된 질소 원자를 갖는 인을 포함한다. 본원에 기재된 모르폴리노-기반 올리고머의 비하전된 또는 양이온성 서브유닛간 연결에서, 하나의 질소는 항상 백본 쇄에 대해 펜던트성이다. 포스포로디아미데이트 연결 내 제2 질소는 전형적으로 모르폴리노 고리 구조 내 고리 질소이다.
"PMO-X"는 (i) 모르폴리노 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합 및 (ii) 4-아미노피페리딘-1-일 (즉, APN) 또는 4-아미노피페리딘-1-일의 유도체의 고리 질소에 대한 제2 공유 결합을 가진 인 원자를 갖는 포스포로디아미데이트 모르폴리노-기반 올리고머를 지칭한다. 예시적 PMO-X 올리고머는, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 PCT 출원 번호 PCT/US2011/38459 및 PCT 공개 번호 WO 2013/074834에 개시되어 있다. PMO-X는 "PMO-apn" 또는 "APN"을 포함하며, 이는 인 원자가 모르폴리노 기에 그리고 4-아미노피페리딘-1-일 (즉, APN)의 고리 질소에 연결된, 적어도 하나의 뉴클레오시드간 연결을 포함하는 PMO-X 올리고머를 지칭한다. 구체적 실시양태에서, 표 2A, 표 2B, 또는 표 2C에 제시된 바와 같은 표적화 서열을 포함하는 안티센스 올리고머는 적어도 하나의 APN-함유 연결 또는 APN 유도체-함유 연결을 포함한다. 다양한 실시양태는 나머지 연결 (만약 100% 미만일 경우)이 비하전된 연결인, 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% APN/APN 유도체-함유 연결을 갖는 모르폴리노-기반 올리고머를 포함하고, 예를 들어, 총 뉴클레오시드간 연결 중 약 또는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개가 APN/APN 유도체-함유 연결이다.
일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00040
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
각각의 Y는 O 및 -NR4로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 각각의 R4는 H, C1-C6 알킬, 아르알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2, 및 G로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R5는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고 n은 1 내지 5의 정수이고;
T는 OH 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00041
[여기서,
A는 -OH, -N(R7)2, 및 R1로부터 선택되고 여기서 각각의 R7은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
R6은 OH, -N(R9)CH2C(O)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00042
(여기서,
R9는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
R10은 G, -C(O)-R11OH, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸,
-C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2, 및
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
m은 1 내지 5의 정수이고,
R11은 화학식 -(O-알킬)y-이고 여기서 y는 3 내지 10의 정수이고
상기 y 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다)
로부터 선택된다]
로부터 선택되고;
각각의 경우의 R1은,
-N(R13)2 (여기서 각각의 R13은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다);
화학식 (II)의 모이어티:
Figure pct00043
[여기서,
R15는 H, G, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2, 및
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
R18은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
q는 1 내지 5의 정수이고,
각각의 R17은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택된다]; 및
화학식 (III)의 모이어티:
Figure pct00044
[여기서,
R19는 H, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2,
-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2,
-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2 및 G로부터 선택되고, 여기서,
R22는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
r은 1 내지 5의 정수이고,
R20은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되거나;
R19 및 R20은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고 산소, 질소, 및 황으로부터 선택된 추가적 헤테로원자를 임의로 함유하는 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다]
로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)-R23, -C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2, -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00045
[여기서,
R23은 화학식 -(O-알킬)v-OH이고 여기서 v는 3 내지 10의 정수이고 상기 v 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R24는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
s는 1 내지 5의 정수이고;
L은 -C(O)(CH2)6C(O)- 및 -C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)-로부터 선택되고;
각각의 R25는 화학식 -(CH2)2OC(O)N(R26)2이고, 여기서 각각의 R26은 화학식 -(CH2)6NHC(=NH)NH2이다]
로부터 선택되고,
여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00046
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
여기서 G는 한 번 존재할 수 있거나 부재한다.
일부 실시양태에서, R2는 하기 화학식의 모이어티이다:
Figure pct00047
상기 식에서, L은 -C(O)(CH2)6C(O)- 또는 -C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)-로부터 선택되고,
각각의 R25는 화학식 -(CH2)2OC(O)N(R26)2이고 여기서 각각의 R26은 화학식 -(CH2)6NHC(=NH)NH2이다. 이러한 모이어티는 그 전문이 본원에 참조로 포함된 미국 특허 번호 7,935,816에 더 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, R2는 하기에 도시된 둘 중 어느 모이어티든 포함할 수 있다:
Figure pct00048
특정 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, R1 기의 약 50-90%는 디메틸아미노 (즉 -N(CH3)2)이다. 특정 실시양태에서, R1 기의 약 66%는 디메틸아미노이다.
일부 비제한적 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C의 서열로부터 선택되고, 여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다. 일부 비제한적 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C의 서열로부터 선택되고, 여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다.
본 개시의 일부 실시양태에서, R1은,
Figure pct00049
Figure pct00050
, 및
Figure pct00051
로부터 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 R1은,
Figure pct00052
이다.
특정 실시양태에서, T는,
Figure pct00053
; 및
Figure pct00054
로부터 선택되고,
Y는 각각의 경우에 O이다. 일부 실시양태에서, R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, T는,
Figure pct00055
; 및
Figure pct00056
로부터 선택되고, Y는 각각의 경우에 O이고 R2는 G이다.
일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00057
이고,
R6은 하기 화학식:
Figure pct00058
이고,
Y는 각각의 경우에 O이고 R2는 G이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00059
이고, Y는 각각의 경우에 O이고 R2는 G이다. 일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00060
이고, Y는 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고, R2는 G이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00061
이고, Y는 각각의 경우에 O이다. 일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00062
이고, Y는 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고, R2는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00063
이고, Y는 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고, R2는 H이다.
일부 실시양태에서, R2는 H, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, R2는 H 또는 G로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, R2는 G이다. 일부 실시양태에서, R2는 H 또는 아실이다. 일부 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 특정 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00064
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00065
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
또 다른 측면에서, 안티센스 올리고머는 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00066
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 약 13 내지 약 38의 정수이고;
각각의 Y는 O 및 -NR4로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 각각의 R4는 H, C1-C6 알킬, 아르알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2, 및 G로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R5는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고 n은 1 내지 5의 정수이고;
T는 OH 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00067
[여기서,
A는 -OH, -N(R7)2, 및 R1로부터 선택되고 여기서,
각각의 R7은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
R6은 OH, -N(R9)CH2C(O)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00068
(여기서,
R9는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
R10은 G, -C(O)-R11OH, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸,
-C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2, 및
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
m은 1 내지 5의 정수이고,
R11은 화학식 -(O-알킬)y-이고 여기서 y는 3 내지 10의 정수이고
상기 y 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다)
로부터 선택된다]
로부터 선택되고;
각각의 경우의 R1은,
-N(R13)2 (여기서 각각의 R13은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다);
화학식 (II)의 모이어티:
Figure pct00069
[여기서,
R15는 H, G, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2, 및
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
R18은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
q는 1 내지 5의 정수이고,
각각의 R17은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택된다]; 및
화학식 (III)의 모이어티:
Figure pct00070
[여기서,
R19는 H, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2,
-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2,
-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2 및 G로부터 선택되고, 여기서,
R22는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
r은 1 내지 5의 정수이고,
R20은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되거나;
R19 및 R20은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고 산소, 질소, 및 황으로부터 선택된 추가적 헤테로원자를 임의로 함유하는 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다]
로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)-R23, -C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2,
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2, -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00071
[여기서,
R23은 화학식 -(O-알킬)v-OH이고 여기서 v는 3 내지 10의 정수이고 상기 v 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R24는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
s는 1 내지 5의 정수이고;
L은 -C(O)(CH2)6C(O)- 및 -C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)-로부터 선택되고;
각각의 R25는 화학식 -(CH2)2OC(O)N(R26)2이고 여기서 각각의 R26은 화학식 -(CH2)6NHC(=NH)NH2이다]
로부터 선택되고,
여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 화학식 -C(O)CH2NH-CPP-를 포함하는 링커 모이어티이고, 여기서 CPP는 하기 화학식:
Figure pct00072
(여기서, Ra는 H 또는 아실이다)이고,
여기서 G는 한 번 존재할 수 있거나 부재한다.
특정 실시양태에서, T는,
; 및
Figure pct00074
로부터 선택되고,
Y는 각각의 경우에 O이다. 일부 실시양태에서, R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, T는,
Figure pct00075
; 및
Figure pct00076
로부터 선택되고, Y는 각각의 경우에 O이고 R2는 G이다.
일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00077
이고,
R6은 하기 화학식:
Figure pct00078
이고, Y는 각각의 경우에 O이고 R2는 G이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00079
이고, Y는 각각의 경우에 O이고 R2는 G이다. 일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00080
이고, Y는 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고, R2는 G이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00081
이고, Y는 각각의 경우에 O이다. 일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00082
이고, Y는 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고, R2는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00083
이고, Y는 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1은 -N(CH3)2이고, R2는 H이다.
일부 실시양태에서, R2는 H, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, R2는 H 또는 G로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, R2는 G이다. 일부 실시양태에서, R2는 H 또는 아실이다. 일부 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 특정 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
예를 들어, 화학식 (I) 및 (Ia)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 일부 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이다. 예를 들어, 화학식 (I) 및 (Ia)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 다양한 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이고, 여기서 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 본원의 표 2A 내지 표 2C에 나타낸 바와 같은, 서열번호: 13-86으로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 및 표 2B로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가로, 그리고 본원의 표 2A 내지 표 2C (또는 표 2B 및 표 2C)에 개략된 서열과 관련하여, 특정 실시양태에서, 100% 상보성을 가진 서열이 선택되고 하나 이상의 핵염기가 제거되어 (또는 교대로 하나 이상의 결손 핵염기로 합성되어) 생성된 서열이 표적 영역에서 그의 자연 보체보다 하나 이상의 결손 핵염기를 갖도록 한다. 하나 이상의 핵염기가 제거되는 부분을 제외하고는, 나머지 부분은 100% 상보적인 것으로 고려된다. 그러나, 상보성의 감소된 수준이 존재할 수 있다는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (IVa)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00084
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
T는 OH 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00085
[여기서,
A는 -OH, -N(R7)2R8, 및 R1로부터 선택되고 여기서,
각각의 R7은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
R8은 전자쌍 및 H로부터 선택되고,
R6은 OH, -N(R9)CH2C(O)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00086
(여기서,
R9는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
R10은 -C(O)-R11OH, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸,
-C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2, 및
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
m은 1 내지 5의 정수이고,
R11은 화학식 -(O-알킬)y-이고 여기서 y는 3 내지 10의 정수이고
상기 y 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R12는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다)
로부터 선택된다]
로부터 선택되고;
각각의 경우의 R1은 독립적으로 -N(R13)2R14 (여기서 각각의 R13은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고, R14는 전자쌍 및 H로부터 선택된다)이고;
R2는 H, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, T는,
Figure pct00087
; 및
Figure pct00088
로부터 선택되고,
Y는 각각의 경우에 O이다. 일부 실시양태에서, R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, T는,
Figure pct00089
; 및
Figure pct00090
로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00091
이고,
R6은 하기 화학식:
Figure pct00092
이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00093
이다.
일부 실시양태에서, R2는 H, 트리틸, 또는 아실이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이다.
특정 실시양태에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (IVb)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00094
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
T는 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00095
; 및
Figure pct00096
로부터 선택되고, 여기서 R3은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
각각의 경우의 R1은 독립적으로 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 H, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, R2는 H 또는 아실로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, R2는 H이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00097
이고;
R2는 수소이다.
특정 실시양태에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (IVc)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00098
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
각각의 Y는 O이고;
각각의 R1은,
Figure pct00099
Figure pct00100
, 및
Figure pct00101
로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고:,
여기서 적어도 하나의 R1은 -N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 4 내지 30, 133 내지 255, 또는 296 내지 342로부터 선택되고, 여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 각각의 R1은 -N(CH3)2이다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 화학식 (V)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00102
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이다.
예를 들어, 화학식 (IVa), (IVb), (IVc) 및 (V)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 일부 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이다. 예를 들어, 화학식 (IVa), (IVb), (IVc) 및 (V)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 다양한 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이고, 여기서 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 본원의 표 2A 내지 표 2C에 나타낸 바와 같은, 서열번호: 13 내지 서열번호: 86으로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C로부터 선택된 서열을 포함한다. 추가로, 그리고 본원의 표 2A 내지 표 2C (또는 표 2B 및 표 2C)에 개략된 서열과 관련하여, 특정 실시양태에서, 100% 상보성을 가진 서열이 선택되고 하나 이상의 핵염기가 제거되어 (또는 교대로 하나 이상의 결손 핵염기로 합성되어) 생성된 서열이 표적 영역에서 그의 자연 보체보다 하나 이상의 결손 핵염기를 갖도록 한다. 하나 이상의 핵염기가 제거되는 부분을 제외하고는, 나머지 부분은 100% 상보적인 것으로 고려된다. 그러나, 상보성의 감소된 수준이 존재할 수 있다는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 화학식 (VI)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00103
상기 식에서, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
T는,
Figure pct00104
; 및
Figure pct00105
로부터 선택되고;
각각의 R1은,
Figure pct00106
Figure pct00107
, 및
Figure pct00108
로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고,
R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고,
여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00109
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
여기서 T는
Figure pct00110
이거나 R2는 G이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00111
이고, R2는 G이다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00112
이다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2.이다.
일부 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00113
이고,
R2는 G이고, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
특정 실시양태에서, R2는 H, 아세틸, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고, T는 하기 화학식:
Figure pct00114
이다. 다양한 실시양태에서, R2는 아세틸이다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 일부 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
다양한 실시양태에서, R2는 H, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, R2는 아세틸이고, T는 하기 화학식:
Figure pct00115
이고, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00116
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00117
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 화학식 (VII)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00118
상기 식에서, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
T는
Figure pct00119
; 및
Figure pct00120
로부터 선택되고;
각각의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고,
여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00121
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
여기서 T는
Figure pct00122
거나 R2는 G이다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 특정 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
특정 실시양태에서, T는 하기 화학식:
Figure pct00123
이고 R2는 G이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 특정 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
다양한 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00124
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00125
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아세틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 화학식 (VIIa)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00126
상기 식에서, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
T는
Figure pct00127
; 및
Figure pct00128
로부터 선택되고;
각각의 경우의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00129
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착된다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 특정 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00130
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이고, G는 하기 화학식:
Figure pct00131
이고,
Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00132
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다. 다양한 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이고, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00133
이고,
Ra는 아세틸이다.
다양한 측면에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (VIIb)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00134
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
각각의 경우의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00135
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착된다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 특정 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00136
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이고, G는 하기 화학식:
Figure pct00137
이고,
Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00138
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다. 다양한 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이고, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00139
이고,
Ra는 아세틸이다.
다양한 측면에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (VIIc)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00140
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00141
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착된다.
일부 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00142
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00143
이고,
Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00144
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다. 다양한 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00145
이고,
Ra는 아세틸이다.
다양한 측면에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (VIId)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00146
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
각각의 경우의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
R2는 H, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 아세틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고;
G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00147
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착된다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다. 특정 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00148
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이고, G는 하기 화학식:
Figure pct00149
이고,
Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00150
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다. 다양한 실시양태에서, 각각의 경우의 R1은 -N(CH3)2이고, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00151
이고,
Ra는 아세틸이다.
다양한 측면에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (VIIe)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00152
상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
R2는 H, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 아세틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고;
G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
-C(O)CH2NH-CPP, 및:
Figure pct00153
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착된다.
일부 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00154
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시양태에서, G는 하기 화학식:
Figure pct00155
이고,
Ra는 아세틸이다.
특정 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00156
이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다. 다양한 실시양태에서, CPP는 하기 화학식:
Figure pct00157
이고,
Ra는 아세틸이다.
예를 들어, 화학식 (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 일부 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이다. 예를 들어, 화학식 (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 다양한 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이고, 여기서 표적 영역은 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13 - 서열번호: 86 (예를 들어, 서열번호: 13-58 또는 59-75)으로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C로부터 선택된 서열을 포함한다. 추가로, 그리고 본원의 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열과 관련하여, 특정 실시양태에서, 100% 상보성을 가진 서열이 선택되고 하나 이상의 핵염기가 제거되어 (또는 교대로 하나 이상의 결손 핵염기로 합성되어) 생성된 서열이 표적 영역에서 그의 자연 보체보다 하나 이상의 결손 핵염기를 갖도록 한다. 하나 이상의 핵염기가 제거되는 부분을 제외하고는, 나머지 부분은 100% 상보적인 것으로 고려된다. 그러나, 상보성의 감소된 수준이 존재할 수 있다는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
본원에 기재된 안티센스 올리고머, 방법, 또는 조성물 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, Z는 8 내지 28, 15 내지 38, 15 내지 28, 8 내지 25, 15 내지 25, 10 내지 38, 10 내지 25, 12 내지 38, 12 내지 25, 14 내지 38, 또는 14 내지 25의 정수이다. 본원에 기재된 안티센스 올리고머, 방법, 또는 조성물 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, Z는 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 또는 38이다. 본원에 기재된 안티센스 올리고머, 방법, 또는 조성물 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, Z는 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28이다. 본원에 기재된 안티센스 올리고머, 방법, 또는 조성물 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, Z는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 8 내지 28의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 15 내지 38의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 15 내지 28의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 8 내지 25의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 15 내지 25의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 10 내지 38의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 10 내지 25의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 12 내지 38의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 12 내지 25의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 14 내지 38의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 14 내지 25의 정수이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 또는 38이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 변형된 안티센스 올리고머의 각각의 Z는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 안티센스 올리고머의 각각의 Nu는 아데닌, 구아닌, 티민, 우라실, 시토신, 히포크산틴, 2,6-디아미노퓨린, 5-메틸 시토신, C5-프로피닐-변형된 피리미딘, 및 9-(아미노에톡시)페녹사진으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 안티센스 올리고머의 표적화 서열은 인간 산성 알파-글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1), 인트론 2 (서열번호: 60), 또는 엑손 2 (서열번호:　61) 내의 표적 영역에서 상보적인 10개 이상의 인접 뉴클레오티드이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 화합물을 포함한, 본 개시의 안티센스 올리고머의 표적화 서열은, 본원에 기재된 바와 같은 표 2A 내지 표 2C의 서열로부터 선택된 서열을 포함하고, 본원에 기재된 바와 같은 표 2A 내지 표 2C로부터 선택된 서열의 적어도 12개의 인접 뉴클레오티드의 단편이거나, 본원에 기재된 바와 같은 표 2A 내지 표 2C로부터 선택된 서열과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체 (여기서 참조된 표에 따라 해당되는 경우 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다). 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시에 따라 사용될 수 있는 추가적 안티센스 올리고머/화학은 하기 특허 및 특허 공보에 기재된 것들을 포함하며, 그 내용은 본원에 참조로 포함된다: PCT 공개 번호 WO/2007/002390; WO/2010/120820; 및 WO/2010/148249; 미국 특허 번호 7,838,657; 및 미국 출원 번호 2011/0269820.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 관련 기술분야에 공지되어 있고 본원에 인용 된 참고문헌에 기재된 방법을 이용하여, 단계별 고상 합성에 의해 제조될 수 있다.
C. PMO의 CPP 및 아르기닌-풍부 펩티드 접합체 (PPMO)
특정 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 세포-관통 펩티드 (본원에서 "CPP"로 언급됨)에 접합된다. 일부 실시양태에서, CPP는 아르기닌-풍부 펩티드이다. 용어 "아르기닌-풍부"는 하나 이상의 비하전된 소수성 잔기에 의해 각각 임의로 분리된 적어도 2개, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아르기닌 잔기를 갖고, 임의로 약 6-14개의 아미노산 잔기를 함유하는 CPP를 지칭한다. 이하에 설명된 바와 같이, CPP는 바람직하게는 그의 카르복시 말단에서, 또한 하나 이상의 아미노산일 수 있는 링커를 통해 안티센스 올리고뉴클레오티드의 3' 및/또는 5' 말단에 연결되고, 바람직하게는 그의 아미노 말단에서 치환기 Ra (여기서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 또는 스테아로일로부터 선택된다)에 의해 또한 캡핑된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
하기 표에 나타낸 바와 같이, 본원에서 사용하기 위한 CPP의 비제한적인 예는 -(RXR)4-Ra, R-(FFR)3-Ra, -B-X-(RXR)4-Ra, -B-X-R-(FFR)3-Ra, -GLY-R-(FFR)3-Ra, -GLY-R6-Ra 및 -R6-Ra를 포함하고, 여기서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고, 여기서 R은 아르기닌이고, X는 6-아미노헥산산이고, B는 β-알라닌이고, F는 페닐알라닌이고 GLY (또는 G)는 글리신이다. CPP "R6"은 아미드 결합을 통해 함께 연결된 여섯 (6)개의 아르기닌 잔기의 펩티드를 나타냄 (단일 치환기 예를 들어 R6이 아님)을 의미한다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
예시적 CPP는 표 2D에 제공되어 있다 (서열번호: 6-12).
Figure pct00158
CPP, 그의 합성, 및 올리고머에 접합시키는 방법은 미국 출원 공개 번호 2012/0289457 및 국제특허출원 공개 번호 WO 2004/097017, WO 2009/005793, 및 WO 2012/150960에 더 기재되어 있으며, 상기 공개들의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 CPP와 링커의 조합으로서 정의된 치환기 "G"를 포함한다. 상기 링커는 그의 카르복시 말단에서의 CPP를 올리고뉴클레오티드의 3'-말단 및/또는 5'-말단에 가교시킨다. 다양한 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 올리고머의 3' 말단에 연결된 단지 하나의 CPP를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 올리고머의 5' 말단에 연결된 단지 하나의 CPP를 포함할 수 있다.
G 내의 링커는, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산을 포함할 수 있다.
특정한 실시양태에서, G는
-C(O)(CH2)5NH-CPP;
-C(O)(CH2)2NH-CPP;
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP;
-C(O)CH2NH-CPP, 및 하기 화학식:
Figure pct00159
로부터 선택되고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착된다.
다양한 실시양태에서, CPP는 상기에 정의된 바와 같고 표 2D에 나타낸 아르기닌-풍부 펩티드이다. 특정 실시양태에서, 아르기닌-풍부 CPP는 -R6-Ra (즉, 6개의 아르기닌 잔기; 서열번호: 12)이고, 상기 식에서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. Ra는 아세틸이다. 다양한 실시양태에서, CPP는 서열번호: 6, 7, 또는 12로부터 선택되고, 링커는 상기에 기재된 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, CPP는 서열번호: 12이고 링커는 Gly이다.
특정 실시양태에서, G는 본 개시의 안티센스 올리고머의 5' 및/또는 3' 말단에서 상기 올리고머에 공유 결합되어 R6의 아미노 말단을 캡핑하는 -C(O)CH2NH-R6-Ra (여기서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 또는 스테아로일이다)이다. Ra는 아세틸이다. 이들 비제한적 예에서, CPP는 -R6-Ra이고 링커는 -C(O)CH2NH- (즉 GLY)이다. G = -C(O)CH2NH-R6-Ra의 이 특정한 예는 하기 구조에 의해 또한 예시된다:
Figure pct00160
여기서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, G는 서열번호: 3-6으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, G는 서열번호: 6이다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시양태에서, CPP는 하기 화학식으로서 또한 예시되는 -R6-Ra이다:
Figure pct00161
여기서 Ra는 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, CPP는 서열번호: XX이다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시양태에서, CPP는 하기 화학식으로서 또한 예시되는 -(RXR)4-Ra이다:
Figure pct00162
다양한 실시양태에서, CPP는 하기 화학식으로서 또한 예시되는 -R-(FFR)3-Ra이다:
Figure pct00163
다양한 실시양태에서, G는,
-C(O)(CH2)5NH-CPP;
-C(O)(CH2)2NH-CPP;
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP;
-C(O)CH2NH-CPP, 및 하기 화학식:
Figure pct00164
로부터 선택되고,
여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고, 여기서 CPP는,
Figure pct00165
, (-R-(FFR)3-Ra),
Figure pct00166
, (-(RXR)4-Ra), 또는
Figure pct00167
, (-R6-Ra)
로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시양태에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는,
Figure pct00168
및
Figure pct00169
로부터 선택된 화학식 (VIII)의 화합물 또는 상기 중 어느 한 쪽의 제약상 허용되는 염이고, 상기 식에서,
각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 퓨린 또는 피리미딘 염기-쌍형성 모이어티이고;
Z는 8 내지 38의 정수이고;
Ra는 H, 아세틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고;
Rb는 H, 아세틸, 벤조일, 스테아로일, 트리틸, 및 4-메톡시트리틸로부터 선택된다.
예를 들어, 화학식 (VIII)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 일부 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이다.
예를 들어, 화학식 (VIII)의 안티센스 올리고머의 실시양태를 포함한 다양한 실시양태에서, 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적이고, 여기서 표적 영역은 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13 - 서열번호: 86 (예를 들어, 서열번호: 13-58 또는 59-75 중 어느 하나)으로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 표 2A 및 표 B로부터 선택된 서열을 포함한다. 추가로, 그리고 본원의 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열과 관련하여, 특정 실시양태에서, 100% 상보성을 가진 서열이 선택되고 하나 이상의 핵염기가 제거되어 (또는 교대로 하나 이상의 결손 핵염기로 합성되어) 생성된 서열이 표적 영역에서 그의 자연 보체보다 하나 이상의 결손 핵염기를 갖도록 한다. 하나 이상의 핵염기가 제거되는 부분을 제외하고는, 나머지 부분은 100% 상보적인 것으로 고려된다. 그러나, 상보성의 감소된 수준이 존재할 수 있다는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
일부 실시양태에서, 예를 들어, 화학식 (I), (Ia), (IVa), (IVb), (IVc), (V), (VI), (VII), (VIIa), (VIIb), (VIIc), (VIId), (VIIe), 및 (VIII)의 안티센스 올리고머의 일부 실시양태를 포함한, 본 개시의 안티센스 올리고머의 표적화 서열은 본원에 기재된 바와 같은, 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택되며, 다음과 같다:
I.
uu) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
vv) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
ww) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
xx) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
yy) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
zz) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
aaa) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
bbb) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
ccc) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
ddd) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
eee) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
fff) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
ggg) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
hhh) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
iii) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
jjj) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
kkk) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
lll) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
mmm) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
nnn) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
ooo) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
ppp) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
qqq) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
rrr) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
sss) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
ttt) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
uuu) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
vvv) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
www) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
xxx) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
yyy) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
zzz) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
aaaa) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
bbbb) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
cccc) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
dddd) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
eeee) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
ffff) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
gggg) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
hhhh) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
iiii) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
jjjj) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
kkkk) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
llll) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
mmmm) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및
nnnn) 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다)
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
II.
r) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
s) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
t) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
u) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
v) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
w) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
x) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
y) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
z) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
aa) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
bb) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
cc) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
dd) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
ee) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
ff) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
gg) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
hh) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다); 및
III.
l) 서열번호: 76 (GCC AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 23이다);
m) 서열번호: 77 (CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C) (여기서 Z는 23이다);
n) 서열번호: 78 (GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G) (여기서 Z는 23이다);
o) 서열번호: 79 (AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 23이다);
p) 서열번호: 80 (ACX CAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
q) 서열번호: 81 (GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX) (여기서 Z는 23이다);
r) 서열번호: 82 (GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 18이다);
s) 서열번호: 83 (GAG AGG GCC AGA AGG AAG GG) (여기서 Z는 18이다);
t) 서열번호: 84 (XXX GCC AXG XXA CCC AGG CX) (여기서 Z는 18이다);
u) 서열번호: 85 (GCG CAC CCX CXG CCC XGG CC) (여기서 Z는 18이다); 및
v) 서열번호: 86 (GGC CCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X) (여기서 Z는 23이다)
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 및 59로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 및 34-36으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82 중 어느 하나에서 각각의 경우의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (Ia)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (IVa)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (IVb)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (IVc)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (V)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VI)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VII)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VIIa)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VIIb)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VIIc)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VIId)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VIIe)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (VIII)의 안티센스 올리고머 화합물의 표적화 서열은 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열의 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열의 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열의 각각의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 표 2A 내지 표 2C에 개략된 서열의 각각의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 U이다.
추가로, 일부 실시양태에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 화학식 (XX)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00170
상기 식에서,
I.
a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
r) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
s) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
t) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
u) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
v) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
w) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
x) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
y) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
z) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
aa) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
bb) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다);
cc) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
dd) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
ee) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
ff) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
gg) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
hh) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
ii) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
jj) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
kk) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
ll) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
mm) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
nn) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
oo) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
pp) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
qq) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
rr) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
ss) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
tt) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
II.
a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
III.
a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 76 (GCC AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 77 (CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 78 (GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 79 (AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 80 (ACX CAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 81 (GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 82 (GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 83 (GAG AGG GCC AGA AGG AAG GG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 84 (XXX GCC AXG XXA CCC AGG CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 85 (GCG CAC CCX CXG CCC XGG CC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 86 (GGC CCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
상기 식에서, Ra는 H 또는 아세틸이다.
일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 각각의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 각각의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 U이다.
특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82의 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82의 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82의 각각의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82의 각각의 X는 U이다.
예를 들어, 화학식 (XX)의 안티센스 올리고머를 포함한, 본 개시의 안티센스 올리고머의 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 화학식 (XXI) 또는 그의 제약상 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00171
상기 식에서,
I.
a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
r) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
s) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
t) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
u) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
v) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
w) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
x) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
y) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
z) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
aa) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
bb) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
cc) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
dd) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
ee) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
ff) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
gg) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
hh) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
ii) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
jj) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
kk) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
ll) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
mm) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
nn) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
oo) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
pp) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고;
qq) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이고;
rr) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이고;
ss) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이고;
tt) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이고
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
II.
a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
III.
l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 76 (GCC AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 77 (CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 78 (GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 79 (AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 80 (ACX CAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 81 (GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고;
r) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 82 (GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
s) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 83 (GAG AGG GCC AGA AGG AAG GG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
t) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 84 (XXX GCC AXG XXA CCC AGG CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
u) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 85 (GCG CAC CCX CXG CCC XGG CC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 18이다)이고;
v) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 86 (GGC CCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이고
(여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
상기 식에서 Ra는 H 또는 아세틸이다.
일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 각각의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 각각의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 T이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 적어도 하나의 X는 U이다. 다양한 실시양태에서, 표적화 서열의 각각의 X는 U이다.
특정 실시양태에서, 표적화 서열은 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82의 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82의 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13-86의 각각의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 59, 및 82의 각각의 X는 U이다.
일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 다음으로부터 선택된, 화학식 (XXII)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
Figure pct00180
.
상기 식에서 각각의 경우에 X는
Figure pct00181
(U) 또는
Figure pct00182
(T)로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, 각각의 X는 T이다. 다른 실시양태에서, 각각의 X는 U이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII a)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII a)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII a)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII a)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII b)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII b)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII b)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII b)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII c)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII c)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII c)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII c)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII d)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII d)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII d)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII d)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII e)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII e)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII e)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII e)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII f)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII f)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII f)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII f)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII g)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII g)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII g)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII g)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII h)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII h)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII h)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII h)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXII i)이고 여기서 적어도 하나의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII i)이고 여기서 적어도 하나의 X는 T이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII i)이고 여기서 각각의 X는 U이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXII)의 화합물은 화학식 (XXII i)이고 여기서 각각의 X는 T이다.
예를 들어, 화학식 (XXII)의 안티센스 올리고머를 포함한, 본 개시의 안티센스 올리고머의 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 다음으로부터 선택된, 화학식 (XXIII)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00183
Figure pct00184
Figure pct00185
Figure pct00186
Figure pct00187
Figure pct00188
Figure pct00189
Figure pct00190
Figure pct00191
일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII a)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII b)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII c)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII d)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XX)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII e)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII f)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII g)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII h)이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (XXIII)의 안티센스 올리고머는 화학식 (XXIII i)이다.
또 다른 측면에서, 본 개시는 각각의 경우에 X가
Figure pct00192
(U) 또는
Figure pct00193
(T)로부터 독립적으로 선택된 것인, 화학식 (XXII a) 내지 (XXII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 각각의 X는 T이다.
또 다른 측면에서, 본 개시는 화학식 (XXIII a) 내지 (XXIII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 특징으로 한다.
D. 염기성 질소 뉴클레오시드간 링커를 가진 PMO-X의 제조
모르폴리노 서브유닛, 변형된 서브유닛간 연결, 및 그를 포함하는 올리고머는, 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함된 미국 특허 번호 5,185,444호, 및 7,943,762에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 모르폴리노 서브유닛은 다음 일반 반응식 I에 따라 제조될 수 있다.
반응식 1. 모르폴리노 서브유닛의 제조
Figure pct00194
B가 염기 쌍형성 모이어티를 나타내고 PG가 보호기를 나타내는 반응식 1을 참조하면, 모르폴리노 서브유닛은 도시된 바와 같이 상응하는 리보뉴클레오시드 (1)로부터 제조될 수 있다. 모르폴리노 서브유닛 (2)은 적합한 보호기 전구체, 예컨대 트리틸 클로라이드와의 반응에 의해 임의로 보호될 수 있다. 3' 보호기는 일반적으로 하기에서 보다 상세히 기재되는 바와 같이 고체-상태 올리고머 합성 동안에 제거된다. 염기 쌍형성 모이어티는 고상 올리고머 합성을 위해 적절히 보호될 수 있다. 적합한 보호기는 아데닌 및 시토신에 대해 벤조일, 구아닌에 대해 페닐아세틸, 및 히포크산틴 (I)에 대해 피발로일옥시메틸을 포함한다. 피발로일옥시메틸 기는 히포크산틴 헤테로시클릭 염기의 N1 위치에 도입될 수 있다. 비록 비보호된 히포크산틴 서브유닛이 이용될 수 있긴 하지만, 활성화 반응의 수율은 염기가 보호될 경우 훨씬 더 우수하다. 다른 적합한 보호기는 그 전문이 본원에 참조로 포함된, 공계류 중인 미국 출원 번호 12/271,040에 개시된 것들을 포함한다.
활성화된 인 화합물 (4)과의 (3)의 반응은 바람직한 연결 모이어티 (5)를 갖는 모르폴리노 서브유닛을 결과한다. 구조 (4)의 화합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 개수의 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 이러한 화합물은 상응하는 아민 및 인 옥시클로라이드의 반응에 의해 제조될 수 있다. 이와 관련하여, 아민 출발 물질은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 실시예 및 미국 특허 번호 7,943,762에 기재된 그러한 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
구조 (5)의 화합물은 서브유닛간 연결을 포함하는 올리고머의 제조를 위해 고상 자동화된 올리고머 합성에서 사용될 수 있다. 이러한 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 간략하게, 구조 (5)의 화합물은 5' 말단에서 변형되어 고체 지지체에 대한 링커를 함유할 수 있다. 예를 들어, 화합물 (5)은 L11 및 L15를 포함하는 링커에 의해 고체 지지체에 연결될 수 있다.
변형된 모르폴리노 서브유닛 및 모르폴리노 올리고머의 제조는 실시예에 더 상세히 기재되어 있다. 임의의 개수의 변형된 연결을 함유하는 모르폴리노 올리고머는 본원에 기재된 방법, 관련 기술분야에 공지된 방법 및/또는 본원에 참고문헌에 의해 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 또한, 이전에 기재된 바와 같이 제조된 모르폴리노 올리고머의 전반적 변형이 실시예에 기재되어 있다 (예를 들어, PCT 공개 WO2008036127 참조).
용어 "보호기"는 보호기가 제거될 때까지 화합물의 일부 또는 모든 반응성 모이어티를 차단하고 이러한 모이어티가 화학 반응에 참여하지 못하게 하는 화학적 모이어티, 예를 들어, 문헌 [T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed. John Wiley & Sons (1999)]에 열거되고 기재된 그러한 모이어티를 지칭한다. 상이한 보호기가 이용될 경우, 각각의 (상이한) 보호기가 상이한 수단에 의해 제거될 수 있는 것이 이로울 수 있다. 완전히 이질적인 반응 조건 하에 절단되는 보호기는 이러한 보호기의 차등적 제거를 허용한다. 예를 들어, 보호기는 산, 염기, 및 가수소분해에 의해 제거될 수 있다. 트리틸, 디메톡시트리틸, 아세틸 및 tert-부틸디메틸실릴과 같은 기는 산 불안정성이고, 가수소분해에 의해 제거 가능한 Cbz 기 및 염기 불안정성인 Fmoc 기로 보호된 아미노 기의 존재 하에 카르복시 및 히드록시 반응성 모이어티를 보호하기 위해 사용될 수 있다. 카르복실산 모이어티는 메틸, 또는 에틸과 같은 염기 불안정성 기로 제한 없이 차단될 수 있고, 히드록시 반응성 모이어티는 tert-부틸 카르바메이트와 같은 산 불안정성 기로 또는 산 및 염기 둘 다에서 안정적이나 가수분해적으로 제거 가능한 카르바메이트로 차단된 아민의 존재 하에 아세틸과 같은 염기 불안정성 기로 차단될 수 있다.
카르복실산 및 히드록실 반응성 모이어티는 벤질 기와 같은 가수분해적으로 제거 가능한 보호기로 또한 차단될 수 있으며, 한편 아민 기는 Fmoc와 같은 염기 불안정성 기로 차단될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 합성을 위해 특히 유용한 아민 보호기는 트리플루오로아세트아미드이다. 카르복실산 반응성 모이어티는 2,4-디메톡시벤질과 같은 산화적으로 제거 가능한 보호기로 차단될 수 있으며, 한편 공존하는 아미노 기는 플루오라이드 불안정성 실릴 카르바메이트로 차단될 수 있다.
안정적이며 금속 또는 파이-산 촉매에 의해 후속 제거될 수 있기 때문에, 알릴 차단기는 산- 및 염기- 보호기의 존재 하에 유용하다. 예를 들어, 알릴-차단된 카르복실산은 산 불안정성 t-부틸 카르바메이트 또는 염기-불안정성 아세테이트 아민 보호기의 존재 하에 팔라듐(0)-촉매된 반응으로 탈보호화될 수 있다. 또한 또 다른 형태의 보호기는 화합물 또는 중간체가 부착될 수 있는 수지이다. 잔기가 수지에 부착되는 한, 그 관능기는 차단되고 반응할 수 없다. 일단 수지로부터 방출되면, 관능기가 반응에 이용 가능하다.
전형적인 차단/보호기는 관련 기술분야에 공지되어 있고 다음 모이어티를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00195
달리 표시되지 않는 한, 모든 화학물질은 시그마-알드리치-플루카(Sigma-Aldrich-Fluka)로부터 입수하였다. 벤조일 아데노신, 벤조일 시티딘, 및 페닐아세틸 구아노신은 영국 카르보신스 리미티드(Carbosynth Limited)로부터 입수하였다.
본원에 개시된 바와 같은 추가의 연결 변형을 함유하는 PMO, PMO+, PPMO, 및 PMO-X의 합성은 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수행되었고, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 계류 중인 미국 출원 번호 12/271,036 및 12/271,040 및 PCT 공개 번호 WO/2009/064471에 기재되어 있다.
3' 트리틸 변형을 가진 PMO는 탈트리틸화 단계가 생략된 것을 제외하고는 본질적으로 PCT 공개 번호 WO/2009/064471에 기재된 바와 같이 합성된다.
IV. 제제
또한, 본 개시의 화합물은 다른 분자, 분자 구조 또는 화합물의 혼합물, 예를 들어, 리포솜, 수용체-표적화된 분자, 구강, 직장, 국소적 또는 섭취, 분배 및/또는 흡수를 돕기 위한 다른 제제와 혼합되거나, 캡슐화되거나, 접합되거나 달리 회합될 수 있다. 이러한 섭취, 분배 및/또는 흡수-보조 제제의 제법을 교시하는 대표적인 미국 특허는 그 각각이 본원에 참조로 포함된, 미국 특허 번호 5,108,921; 5,354,844; 5,416,016; 5,459,127; 5,521,291; 5,543,158; 5,547,932; 5,583,020; 5,591,721; 4,426,330; 4,534,899; 5,013,556; 5,108,921; 5,213,804; 5,227,170; 5,264,221; 5,356,633; 5,395,619; 5,416,016; 5,417,978; 5,462,854; 5,469,854; 5,512,295; 5,527,528; 5,534,259; 5,543,152; 5,556,948; 5,580,575; 및 5,595,756을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 개시의 안티센스 화합물은 임의의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 또는 이러한 에스테르의 염, 또는 인간을 포함한 동물에게 투여시 생물학적으로 활성인 대사물질 또는 그의 잔여물을 (직접적으로 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 임의의 다른 화합물을 망라한다. 따라서, 예를 들어, 본 개시는 본 개시의 화합물의 전구약물 및 제약상 허용되는 염, 이러한 전구약물의 제약상 허용되는 염, 및 다른 생물학적 동등물에도 또한 관련된다.
용어 "전구약물"은 내인성 효소 또는 다른 화학물질의 작용 및/또는 조건에 의한 신체 또는 그의 세포 내의 활성 형태 (즉, 약물)로 전환되는 불활성 형태로 제조된 치료제를 나타낸다. 특히, 본 개시의 올리고머의 전구약물 버전은 문헌 [1993년 12월 9일에 공개된 고셀린(Gosselin) 등의 WO 93/24510] 또는 문헌 [WO 94/26764 및 미국 특허 번호 5,770,713 (임바흐(Imbach) 등]에 개시된 방법에 따른 SATE [(S-아세틸-2-티오에틸) 포스페이트] 유도체로서 제조된다.
용어 "제약상 허용되는 염"은 본 개시의 화합물의 생리학상 및 제약상 허용되는 염: 즉, 모 화합물의 바람직한 생물학적 활성을 보유하고 그에 바람직하지 않는 독성학적 효과를 부여하지는 않는 염을 지칭한다. 올리고머의 경우, 제약상 허용되는 염 및 그의 용도의 예는 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 번호 6,287,860에 더 기재되어 있다.
본 개시는 본 개시의 안티센스 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 제제를 또한 포함한다. 본 개시의 제약 조성물은 국부 또는 전신 치료를 원하는지에 따라 그리고 치료되는 영역에 따라 다수의 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 국소적 (눈 그리고 질 및 직장을 포함한 점막에의 전달을 포함), 예를 들어, 네불라이저를 포함한, 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 통기에 의해, 폐; 기관내, 비강내, 표피 및 경피), 경구 또는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내, 또는 근육내 주사 또는 주입; 또는 두개내, 예를 들어, 척추강내 또는 뇌실내 투여를 포함한다. 적어도 하나의 2'-O-메톡시에틸 변형을 가진 올리고머는 경구 투여에 특히 유용한 것으로 여겨진다. 국소 투여를 위한 제약 조성물 및 제제는 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 겔, 드롭, 좌약, 스프레이, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 종래의 제약 담체, 수성, 분말 또는 오일성 베이스, 점증제 등이 필요하거나 바람직할 수 있다. 코팅된 콘돔, 글로브 등이 또한 유용할 수 있다.
편리하게는 단위 투여 형태로 제시될 수 있는 본 개시의 제약 제제는 제약 산업에 널리 공지된 종래 기술에 따라 제조될 수 있다. 이러한 기술은 활성 성분을 제약 담체(들) 또는 부형제(들)와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제제는 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 다와 균일하게 및 충실히 회합시킨 다음에, 만약 필요하다면, 제품을 성형함으로써 제조된다.
본 개시의 조성물은 임의의 많은 가능한 투여 형태 예컨대, 정제, 캡슐, 겔 캡슐, 액체 시럽, 연성 겔, 좌약, 및 관장제로 제제화될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 개시의 조성물은 또한 수성, 비-수성 또는 혼합 매질 내 현탁액으로서 제제화될 수 있다. 수성 현탁액은 예를 들어, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 소르비톨, 및/또는 덱스트란을 포함한, 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 추가로 함유할 수 있다. 현탁액은 안정화제를 또한 함유할 수 있다.
본 개시의 제약 조성물은 용액, 에멀젼, 폼 및 리포솜-함유 제제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 개시의 제약 조성물 및 제제는 하나 이상의 경피흡수 촉진제, 담체, 부형제 또는 다른 활성 또는 불활성 성분을 포함할 수 있다.
에멀젼은 전형적으로, 지름 0.1 μm을 보통 초과하는 액적의 형태로 한 액체가 또 다른 액체에 분산된 비균질 시스템이다. 에멀젼은 분산된 상에 더하여 추가적 성분, 및 수성 상, 오일 상 또는 분리된 상 그 자체로서 용액으로서 존재할 수 있는 활성 약물을 함유할 수 있다. 마이크로에멀젼은 본 개시의 실시양태로서 포함된다. 에멀젼 및 그의 용도는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 번호 6,287,860에 더 기재되어 있다.
본 개시의 제제는 리포솜 제제를 포함한다. 본 개시에서 사용된 바와 같이, 용어 "리포솜"은 구형 이중층 또는 이중층들로 배열된 양친매성 액체로 구성된 소포를 의미한다. 리포솜은 친유성 물질로부터 형성된 막 및 전달될 조성물을 함유하는 수성 내부공간을 갖는 단층 또는 다층 소포이다. 양이온성 리포솜은 음전하 DNA 분자와 상호작용하여 안정한 복합체를 형성한다고 여겨지는 양전하 리포솜이다. pH-민감성이거나 음전하 리포솜은 그와 복합체를 형성하기보다는 DNA를 포획한다고 여겨진다. 양이온성 및 비양이온성 리포솜 둘 다는 세포에 DNA를 전달하기 위해 사용되었다.
리포솜은, 본원에 사용된 바와 같이, 리포솜에 도입될 경우 이러한 특화된 지질이 없는 리포솜에 비해 강화된 순환 수명을 결과하는 하나 이상의 특화된 지질을 포함하는 리포솜을 지칭하는 용어인 "입체적으로 안정된" 리포솜을 또한 포함한다. 입체적으로 안정화된 리포솜의 예는 리포솜의 소포 형성 지질 부위의 부분이 하나 이상의 당지질을 포함하거나 하나 이상의 친수성 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티와 유도체화된 것인 리포솜이다. 리포솜 및 그의 용도는 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 번호 6,287,860에 더 기재되어 있다.
본 개시의 제약 제제 및 조성물은 계면활성제를 또한 포함할 수 있다. 약물 제품, 제제 및 에멀젼에서 계면활성제의 용도는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 계면활성제 및 그의 용도는 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 6,287,860에 더 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시는 핵산, 특히 올리고머의 효율적인 전달을 초래하기 위해 다양한 경피흡수 촉진제를 이용한다. 세포막을 통한 비-친유성 약물의 확산을 보조하는 것에 더하여, 경피흡수 촉진제는 친유성 약물의 침투성을 또한 강화한다. 경피흡수 촉진제는 다섯 가지 넓은 카테고리, 즉, 계면활성제, 지방산, 담즙 염, 킬레이트제, 및 비-킬레이팅 비-계면활성제 중 하나에 속하는 것으로 분류될 수 있다. 경피흡수 촉진제 및 그의 용도는 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 6,287,860에 더 기재되어 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 제제가 그의 의도된 용도, 즉 투여의 경로에 따라 통상적으로 설계된다는 것을 인식할 것이다.
국소 투여를 위한 제제는 본 개시의 올리고머가 국소 전달 제제 예컨대 지질, 리포솜, 지방산, 지방산 에스테르, 스테로이드, 킬레이트제 및 계면활성제와의 혼합물인 것인 제제를 포함한다. 지질 및 리포솜은 중성 (예를 들어, 디올레오일포스파티딜 DOPE 에탄올아민, 디미리스토일포스파티딜 콜린 DMPC, 디스테아로일포스파티딜 콜린), 음성 (예를 들어, 디미리스토일포스파티딜 글리세롤 DMPG) 및 양이온성 (예를 들어, 디올레오일테트라메틸아미노프로필 DOTAP 및 디올레오일포스파티딜 에탄올아민 DOTMA)을 포함한다.
국소 또는 다른 투여를 위해, 본 개시의 올리고머는 리포솜 내에 캡슐화될 수 있거나 그것에, 특히 양이온성 리포솜에 복합체를 형성할 수 있다. 대안적으로, 올리고머는 지질에, 특히 양이온성 지질에 복합체 형성될 수 있다. 지방산 및 에스테르, 그의 제약상 허용되는 염, 및 그의 용도는 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 6,287,860에 더 기재되어 있다. 국소 제제는 그 전문이 본원에 참조로 포함된, 1999년 5월 20일에 출원된 미국 특허출원 일련 번호 09/315,298에 상세히 기재되어 있다.
경구 투여를 위한 조성물 및 제제는 분말 또는 과립, 마이크로입자, 나노입자, 물 또는 비-수성 매질 내 현탁액 또는 용액, 캡슐, 겔 캡슐, 사셰, 정제 또는 미니정제를 포함한다. 점증제, 방향제, 희석제, 유화제, 분산 조제 또는 결합제가 바람직할 수 있다. 경구 제제는 본 개시의 올리고머가 하나 이상의 경피흡수 촉진제, 계면활성제 및 킬레이터와 함께 투여되는 것인 제제이다. 계면활성제는 지방산 및/또는 에스테르 또는 그의 염, 담즙산 및/또는 그의 염을 포함한다. 담즙 산/염 및 지방산 및 그의 용도는 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 6,287,860에 더 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시는 경피흡수 촉진제의 조합, 예컨대, 담즙산/염과 조합된 지방산/염을 제공한다. 예시적 조합은 라우릴산, 카프르산 및 UDCA의 나트륨 염이다. 추가의 경피흡수 촉진제는 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-20-세틸 에테르를 포함한다. 본 개시의 올리고머는 분무된 건조 입자를 포함하거나, 복합체 형성되어 마이크로입자 또는 나노입자를 형성하도록 과립 형태로 경구로 전달될 수 있다. 올리고머 착화제 및 그의 용도는 그 전문이 본원에 포함된 미국 특허 6,287,860에 더 기재되어 있다. 올리고머를 위한 경구 제제 및 그의 제법은 미국 출원 일련 번호 09/108,673 (1998년 7월 1일에 출원), 09/315,298 (1999년 5월 20일에 출원) 및 10/071,822 (2002년 2월 8일에 출원)에 상세히 기재되어 있으며, 이들 출원 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
비경구, 척추강내 또는 뇌실내 투여를 위한 조성물 및 제제는 완충제, 희석제 및 다른 적합한 첨가제, 예컨대, 이에 제한되지 않고, 경피흡수 촉진제, 담체 화합물 및 다른 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 또한 함유할 수 있는 멸균 수성 용액을 포함할 수 있다.
본 개시의 특정 실시양태는 하나 이상의 올리고머 화합물 및 비-안티센스 메커니즘에 의해 기능하는 하나 이상의 다른 화학요법제를 함유하는 제약 조성물을 제공한다. 이러한 화학요법제의 예는 암 화학요법 약물 예컨대 다우노루비신, 다우노마이신, 닥티노마이신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 에소루비신, 블레오마이신, 마포스파미드, 이포스파미드, 시토신 아라비노시드, 비스-클로로에틸니트로스우레아, 부술판, 미토마이신 C, 악티노마이신 D, 미트라마이신, 프레드니손, 히드록시프로게스테론, 테스토스테론, 타목시펜, 다카르바진, 프로카르바진, 헥사메틸멜라민, 펜타메틸멜라민, 미톡산트론, 암사크린, 클로람부실, 메틸시클로헥실니트로스우레아, 질소 머스타드, 멜팔란, 시클로포스파미드, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-아자시티딘, 히드록시우레아, 데옥시코-포르마이신, 4-히드록시퍼옥시시클로포스포라미드, 5-플루오로우라실 (5-FU), 5-플루오로데옥시우리딘 (5-FUdR), 메토트렉세이트 (MTX), 콜히친, 택솔, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드 (VP-16), 트리메트렉세이트, 이리노테칸, 토포테칸, 겜시타빈, 테니포시드, 시스플라틴 및 디에틸스틸베스트롤 (DES)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 개시의 화합물과 함께 사용될 경우, 이러한 화학요법제는 개별적으로 (예를 들어, 5-FU 및 올리고머), 순차적으로 (예를 들어, 일정 기간의 5-FU 및 올리고머에 뒤이어 MTX 및 올리고머), 또는 하나 이상의 다른 이러한 화학요법제 (예를 들어, 5-FU, MTX 및 올리고머, 또는 5-FU, 방사성요법 및 올리고머)와 조합하여 사용될 수 있다. 비스테로이드성 항염증성 약물 및 코르티코스테로이드를 포함하나 이에 제한되지 않는 항염증성 약물, 및 리비비린, 비다라빈, 아시클로비르 및 간시클로비르를 포함하나 이에 제한되지 않는 항바이러스성 약물이 본 개시의 조성물과 또한 조합될 수 있다. 안티센스 화합물 및 다른 비-안티센스 약물의 조합도 또한 본 개시의 범위 내에 있다. 둘 이상의 조합된 화합물은 함께 또는 순차적으로 사용될 수 있다.
또 다른 관련 실시양태에서, 본 개시의 조성물은 제1 핵산에 표적화된 하나 이상의 안티센스 화합물, 특히 올리고머, 및 제2 핵산 표적에 표적화된 하나 이상의 부가적 안티센스 화합물을 함유할 수 있다. 대안적으로, 본 개시의 조성물은 동일한 핵산 표적의 상이한 영역에 표적화된 둘 이상의 안티센스 화합물을 함유할 수 있다. 안티센스 화합물의 수많은 예시가 관련 기술분야에 공지되어 있다. 둘 이상의 조합된 화합물은 함께 또는 순차적으로 사용될 수 있다.
V. 사용 방법
특정 실시양태는 치료 목적을 위해 (예를 들어, GSD-II를 가진 대상체의 치료) 본 개시의 안티센스 올리고머를 사용하여 엑손 2-함유 GAA mRNA 및/또는 단백질의 발현을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 개시는 유효량의 본 개시의 안티센스 올리고머를 대상체에게 유효량을 투여하는 것을 포함하는, GSD-II에 의해 고통받거나 발병 위험에 처해 있는 개체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 산성 알파-글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA 내의 영역에 특이적으로 혼성화하기에 충분한 길이 및 상보성의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 상기 영역에 대한 안티센스 올리고머의 결합은 대상체의 세포 및/또는 조직 내 엑손 2-함유 GAA mRNA의 수준을 증가시킨다. 예시적 안티센스 표적화 서열은 본원의 표 2A 내지 표 2C에 나타냈다.
또한, 산성 알파-글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA 내의 영역에 특이적으로 혼성화하기에 충분한 길이 및 상보성의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 상기 영역에 대한 안티센스 올리고머의 결합이 엑손 2-함유 GAA mRNA의 수준을 증가시키는 것인, II형 글리코겐 축적병 (GSD-II; 폼페병)의 치료를 위한 의약의 제조에서 사용하기 위한 안티센스 올리고머가 포함된다.
GSD-II의 치료 방법 또는 GSD-II의 치료를 위한 의약의 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머 화합물은 다음을 포함한다:
포스포라미데이트 또는 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 펩티드 핵산 (PNA), 잠금 핵산 (LNA), 포스포로티오에이트 올리고머, 트리시클로-DNA 올리고머, 트리시클로-포스포로티오에이트 올리고머, 2'O-Me-변형된 올리고머, 또는 상기의 임의의 조합으로부터 선택된 비천연 화학적 백본; 및
인간 산성 알파-글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1), 인트론 2 (서열번호: 60), 또는 엑손 2 (서열번호:　61) 내의 영역에 상보적인 표적화 서열.
상기에 언급된 바와 같이, "GSD-II"는 발병한 개체에서 GAA 단백질의 발현 부족을 흔히 특징으로 하는 인간 상염색체성 열성 질환인, II형 글리코겐 축적병 (GSD-II 또는 폼페병)을 지칭한다. 영아기 GSD-II를 갖는 대상체 및 질환의 후기 발병 형태를 갖는 대상체가 포함된다.
특정 실시양태에서, 대상체는 심장, 골격근, 간, 및 신경계 조직을 포함한, 하나 이상의 조직 내 GAA 단백질의 발현 및/또는 활성이 (예를 들어, 건강한 대상체 또는 보다 초기 시점에 비해) 감소된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 심장, 골격근, 간, 및 신경계 조직을 포함한, 하나 이상의 조직 내 글리코겐의 축적이 (예를 들어, 건강한 대상체 또는 보다 초기 시점에 비해) 증가된다. 구체적 실시양태에서, 대상체는 기능성 GAA 단백질의 발현 감소로 이어질 수 있는 다른 돌연변이(들)와 조합할 수도 있는, 적어도 하나의 IVS1-13T>G 돌연변이 (c.336-13T>G로도 언급됨)를 갖는다. GSD-II에서 사용된 분자 유전자 검사의 요약을 하기 표 3에 나타냈다.
표 3
유전자 기호 검사 방법 검출된 돌연변이 검사 방법에 의한 돌연변이 검출 빈도 검사 이용 가능성
GAA 서열 분석 p.Arg854* ~50%-60%　 임상적
p.Asp645Glu ~40%-80%　
IVS1-13T>G ~50%-85%　
유전자의 다른 서열 변이체　 83%-93%　
선택 엑손의 서열 분석 선택 엑손에서의 서열 변이체　 83%-93%　
표적화된 돌연변이 분석 표적화된 부위에서의 서열 변이체　 표적화된 돌연변이 중에서 변이체의 경우 100%
결실/중복 분석 엑손 및 전체-유전자 결실/중복 5%-13%　
특정 실시양태는 본원에 기재된 바와 같이, 세포, 조직, 및/또는 대상체 내 엑손 2-함유 GAA mRNA 또는 단백질의 발현을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 일부 경우에, 엑손-2 함유 GAA mRNA 또는 단백질은 대조군, 예를 들어, 대조군 세포/대상체, 안티센스 올리고머가 없는 대조군 조성물, 치료의 부재, 및/또는 보다 초기 시점에 비해 약 또는 적어도 약 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 만큼 증가한다. 또한, 건강한 대조군의 수준에 비해 GAA mRNA 또는 단백질의 발현을 유지하는 방법이 포함된다.
일부 실시양태는 본원에 기재된 바와 같이, 세포, 조직, 및/또는 대상체 내 기능성/활성 GAA 단백질의 발현을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 특정 경우에, 기능성/활성 GAA 단백질의 수준은 대조군, 예를 들어, 대조군 세포/대상체, 안티센스 올리고머가 없는 대조군 조성물, 치료의 부재, 및/또는 보다 초기 시점에 비해 약 또는 적어도 약 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 만큼 증가한다. 또한, 건강한 대조군의 수준에 비해 기능성/활성 GAA 단백질의 발현을 유지하는 방법이 포함된다.
특정한 실시양태는 본원에 기재된 바와 같이, 하나 이상의 세포, 조직, 및/또는 대상체 내 글리코겐의 축적을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 특정 경우에, 글리코겐의 축적은 대조군, 예를 들어 대조군 세포/대상체, 안티센스 올리고머가 없는 대조군 조성물, 치료의 부재, 및/또는 보다 초기 시점에 비해 약 또는 적어도 약 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 만큼 감소된다. 또한, 세포, 조직, 및/또는 대상체 내 정상이거나 달리 건강한 글리코겐 수준 (예를 들어, 무증상 수준 또는 GSD-II의 감소된 증상과 연관된 수준)를 유지하는 방법이 포함된다.
또한, GSD-II의 하나 이상의 증상의 감소를 필요로 하는 대상체에서 GSD-II의 하나 이상의 증상을 감소시키는 방법이 제공된다. 특정한 예는 영아기 GSD-II의 증상 예컨대 심장 비대증, 저안압, 심근증, 좌심실 유출로 협착, 호흡 곤란, 운동 지연/근력 저하, 및 섭식 곤란/성장 장애를 포함한다. 추가적 예는 후기 발병 GSD-II의 증상 예컨대 근력 저하 (예를 들어, 진행성 근력 저하를 포함한 골격근 약화), 기침 악화, 재발성 흉부 감염, 저안압, 지연된 운동 이정표, 연하 또는 저작 곤란, 및 폐활량 감소 또는 호흡 부전을 포함한다.
본 개시의 안티센스 올리고머는 대상체에게 GSD-II를 치료하기 위해 (예방적으로 또는 치료적으로) 투여될 수 있다. 이러한 치료와 함께, 게놈약학 (즉, 개체의 유전자형 및 외래 화합물 또는 약물에 대한 개체의 반응 간의 연관관계의 연구)이 고려될 수 있다. 치료제의 대사의 차이는 약리학상 활성 약물의 용량 및 혈중 농도 간의 관계를 변경시킴으로써 중증 독성 또는 치료적 실패로 이어질 수 있다.
따라서, 의사 또는 임상의는 치료제를 투여할 것인지를 결정하는 것 뿐만 아니라 치료제에 의한 치료의 투여량 및/또는 치료 요법을 미세조정하기 위해 관련 게놈약학 연구에서 얻은 지식을 적용하는 것을 고려할 수 있다.
표적 핵산으로의 안티센스 올리고머의 효과적 전달은 치료의 한 측면이다. 안티센스 올리고머 전달의 경로는 경구 및 비경구 경로, 예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 및 근육내, 뿐만 아니라 흡입, 경피 및 국소 전달을 포함한, 다양한 전신 경로를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 적절한 경로는 치료 중인 대상체의 병태에 적절하게 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 혈관 또는 혈관외 순환, 혈액 또는 림프계, 및 뇌척수액은 RNA가 도입될 수 있는 일부 비제한적 부위이다. 직접적 CNS 전달이 이용될 수 있고, 예를 들어, 대뇌 뇌실 또는 척추강내 투여가 투여의 경로로 사용될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 안티센스 올리고머(들)은 근육내 주사 (IM)에 의해 대상체에 투여되고, 즉, 이들은 근육내 투여되거나 전달된다. 근육내 주사 부위의 비제한적인 예는 팔의 삼각 근육, 다리의 외측 광근 근육, 및 둔부의 복면 근육(ventrogluteal muscle), 및 볼기의 배면 근육(dorsogluteal muscle)을 포함한다. 구체적 실시양태에서, PMO, PMO-X, 또는 PPMO는 IM에 의해 투여된다.
특정 실시양태에서, 이를 필요로 하는 대상체는 중추 신경계 조직 내 글리코겐 축적을 갖는다. 예는 중추 신경계 병상이 GSD-II의 호흡 결함의 한 원인이 되는 경우를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [DeRuisseau et al., PNAS USA. 106:9419-24, 2009] 참조)). 따라서, 본원에 기재된 안티센스 올리고머는 예를 들어, 대상체가 CNS가 관여된 GSD-II를 갖는 경우, 임의의 관련 기술분야에 인식된 방법에 의해 대상체의 신경계에 전달될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 안티센스 올리고머의 말초 혈액 주사가 확산 및/또는 능동 수단을 통해 상기 시약을 말초 뉴런으로 전달하기 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 안티센스 올리고머는 중추 신경계 (CNS)의 뉴런 세포에 상기 시약의 전달을 달성하기 위해 혈액-뇌-장벽 (BBB)의 통과를 촉진하도록 변형될 수 있다. 안티센스 올리고머 기술 및 전달 전략의 특정의 최근 진보는 뉴런 장애를 위한 안티센스 올리고머 이용의 범위를 확장하였다 (예를 들어, 문헌 [Forte, A., et al. 2005. Curr. Drug Targets 6:21-29; Jaeger, L. B., and W. A. Banks. 2005. Methods Mol. Med. 106:237-251; Vinogradov, S. V., et al. 2004. Bioconjug. Chem. 5:50-60]을 참조; 상기 문헌은 참고문헌으로 그 전문이 본원에 포함된다). 예를 들어, 본 개시의 안티센스 올리고머는 펩티드 핵산 (PNA) 화합물로서 생성될 수 있다. PNA 시약은 BBB를 통과하는 것으로 각각 확인되었다 (Jaeger, L. B., and W. A. Banks. 2005. Methods Mol. Med. 106:237-251). 예를 들어, 혈관작용제에 의한 대상체의 치료는 또한 BBB를 통한 수송을 촉진하는 것으로 기재되어 있다 (Id). BBB를 통해 능동 수송된 작용제로의 본 개시의 안티센스 올리고머의 테더링(tethering)이 전달 메카니즘으로서 또한 사용될 수 있다. 이오헥솔과 같은 대조 작용제와 함께 (예를 들어, 동일한 제제 내 별도로, 공동으로) 안티센스 작용제의 투여는 그 전문이 참조로 포함된 PCT 공개 번호 WO/2013/086207에 기재된 바와 같이 BBB를 통한 전달을 또한 용이하게 할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시의 안티센스 올리고머는 경피적 방법에 의해 (예를 들어, 리포솜으로 임의로 패키징된 이러한 안티센스 올리고머와 함께 에멀젼에 안티센스 올리고머를 도입함으로써) 전달될 수 있다. 이러한 경피 및 에멀젼/리포솜-매개 전달 방법은 관련 기술분야에, 예를 들어, 그의 내용이 본원에 참조로 그 전문이 포함된 미국 특허 번호 6,965,025에 안티센스 올리고머의 전달에 대해 기재되어 있다.
본원에 기재된 안티센스 올리고머는 임플란트식 장치를 통해서도 또한 전달될 수 있다. 이러한 장치의 설계는, 예를 들어, 그의 내용이 본원에 참조로 그 전문이 포함된 미국 특허 6,969,400호에 기재된, 예를 들어, 합성 임플란트 설계와 함께 관련 기술분야에 인식된 프로세스이다.
안티센스 올리고머는 관련 기술분야에 인식된 기술 (예를 들어, 형질감염, 전기천공, 융합, 리포솜, 콜로이드성 중합체 입자 및 바이러스성 및 비-바이러스성 벡터 뿐만 아니라 관련 기술분야에 공지된 다른 수단)을 사용하여 세포에 도입될 수 있다. 선택된 전달의 방법은 적어도 올리고머 화학, 처리될 세포 및 세포의 위치에 따라 달라질 것이고 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 국재화는 리포솜을 지향하기 위해 표면에 특이적 마커를 가진 리포솜, 표적 세포를 함유하는 조직에의 직접 주사, 특이적 수용체-매개 흡수 등에 의해 달성될 수 있다.
관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 안티센스 올리고머는 예를 들어 리포솜-매개 흡수, 지질 접합체, 폴리리신-매개 흡수, 나노입자-매개 흡수, 및 수용체-매개 엔도시토시스를 수반하는 방법, 뿐만 아니라 부가적인 비-엔도시토시스 전달 방식, 예컨대 미세주입, 투과화 (예를 들어, 스트렙토리신-O 투과화, 음이온성 펩티드 투과화), 전기 천공법, 및 관련 기술분야에 공지된 다양한 비-침습적 비-엔도시토시스적 전달 방법 (그 전문이 참조로 포함된 문헌 [Dokka and Rojanasakul, Advanced Drug Delivery Reviews 44, 35-49] 참조)을 사용하여 전달될 수 있다.
안티센스 올리고머는 생리학상 및/또는 제약상 허용되는 임의의 편리한 비히클 또는 담체로 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이용되는 임의의 여러 가지의 표준 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 예는 식염수, 포스페이트 완충 식염수 (PBS), 물, 수성 에탄올, 에멀젼, 예컨대 오일/물 에멀젼 또는 트리글리세리드 에멀젼, 정제 및 캡슐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 적합한 생리학상 허용되는 담체의 선택은 선택된 투여의 방식에 따라 달라질 것이다. "제약상 허용되는 담체"는 제약적 투여에 적합한, 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연 제제 등을 포함하도록 의도된다. 제약상 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 종래 매질 또는 작용제가 활성 화합물에 부적합하지 않는 한, 조성물에서 그의 사용이 고려된다. 보충적 활성 화합물이 조성물에 또한 도입될 수 있다.
본 개시의 화합물 (예를 들어, 안티센스 올리고머)은 유리 산 또는 유리 염기로서 일반적으로 이용될 수 있다. 대안적으로, 본 개시의 화합물은 산 또는 염기 부가 염의 형태로 사용될 수 있다. 본 개시의 유리 아미노 화합물의 산 부가염은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고, 유기 및 무기산으로부터 형성될 수 있다. 적합한 유기산은 말레산, 푸마르산, 벤조산, 아스코르브산, 숙신산, 메탄술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 옥살산, 프로피온산, 타르타르산, 살리실산, 시트르산, 글루콘산, 락트산, 만델산, 시남산, 아스파르트산, 스테아르산, 팔미트산, 글리콜산, 글루탐산, 및 벤젠술폰산을 포함한다.
적합한 무기산은 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 및 질산을 포함한다. 염기 부가 염은 카르복실레이트 음이온과 함께 형성된 그러한 염을 포함하며, 유기 및 무기 양이온 예컨대 알칼리 및 알칼리 토금속 (예를 들어, 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 바륨 및 칼슘), 뿐만 아니라 암모늄 이온 및 그의 치환된 유도체 (예를 들어, 디벤질암모늄, 벤질 암모늄, 2-히드록시에틸암모늄 등)로부터 선택된 것들과 함께 형성된 염을 포함한다. 따라서, 용어 "제약상 허용되는 염"은 임의의 그리고 모든 허용되는 염 형태를 망라하도록 의도된다.
게다가, 전구약물이 본 개시의 맥락 내에 또한 포함된다. 전구약물은 이러한 전구약물이 환자에게 투여될 경우 생체내에서 화합물을 방출하는 임의의 공유결합된 담체이다. 전구약물은 통상적인 조작법에 의해 또는 생체내에서 변형체가 절단되어 모 화합물을 산출하는 방식으로 관능기를 변형함으로써 일반적으로 제조된다. 전구약물은, 예를 들어, 히드록시, 아민 또는 술프히드릴 기가, 환자에게 투여될 경우, 절단되어 히드록시, 아민 또는 술프히드릴 기를 형성하는 임의의 기에 결합되는, 본 개시의 화합물을 포함한다. 따라서, 전구약물의 대표적인 예는 본 개시의 안티센스 올리고머의 알콜 및 아민 관능기의 아세테이트, 포르메이트 및 벤조에이트 유도체를 포함한다 (그러나 이에 제한되지 않는다). 추가로, 카르복실산 (-COOH)의 경우에, 메틸 에스테르, 에틸 에스테르 등과 같은 에스테르가 이용될 수 있다.
일부 경우에, 리포솜이 세포로의 안티센스 올리고머의 흡수를 용이하게 하기 위해 이용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Williams, S.A., Leukemia 10(12):1980-1989, 1996; Lappalainen et al., Antiviral Res. 23:119, 1994; Uhlmann et al., antisense oligomers: a new therapeutic principle, Chemical Reviews, Volume 90, No. 4, 25 pages 544-584, 1990; Gregoriadis, G., Chapter 14, Liposomes, Drug Carriers in Biology and Medicine, pp. 287-341, Academic Press, 1979] 참조). 히드로겔이 예를 들어, WO 93/01286에 기재된 바와 같이, 안티센스 올리고머 투여를 위한 비히클로 또한 사용될 수 있다. 대안적으로, 올리고머는 마이크로스피어 또는 마이크로입자로 투여될 수 있다. (예를 들어, 문헌 [Wu, G.Y. and Wu, C.H., J. Biol. Chem. 262:4429-4432, 30 1987] 참조). 대안적으로, 안티센스 올리고머와 복합체 형성된 가스-충전된 마이크로버블의 사용은 미국 특허 번호 6,245,747에 기재된 바와 같이 표적 조직으로의 전달을 강화할 수 있다. 지속 방출 조성물이 또한 사용될 수 있다. 이들은 필름 또는 마이크로캡슐과 같은 성형품의 형태의 반침투성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 적합한 제약 담체로 리소좀 축적 장애의 증상을 나타내는 포유동물 대상체, 예를 들어, 인간 또는 가축에게 투여된다. 방법의 한 측면에서, 대상체는 인간 대상체, 예를 들어, GSD-II (폼페병)를 갖는 것으로 진단된 환자이다. 한 바람직한 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 제약상 허용되는 담체에 함유되고, 경구로 전달된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 올리고머는 제약상 허용되는 담체에 함유되고, 정맥내 (i.v.) 전달된다.
한 실시양태에서, 안티센스 화합물은 적어도 200-400 nM 안티센스 올리고머의 피크 혈중 농도를 결과하는 데 효과적인 양 및 방식으로 투여된다. 전형적으로, 안티센스 올리고머의 하나 이상의 용량이 일반적으로 약 1 내지 2주의 기간 동안 일정한 간격으로 투여된다. 경구 투여를 위한 바람직한 용량은 70 kg 당 약 1-1000 mg 올리고머이다. 일부 경우에, 1000 mg 올리고머/환자 초과의 용량이 필요할 수 있다. 정맥내 투여를 위해, 바람직한 용량은 70 kg 당 약 0.5 mg 내지 1000 mg 올리고머이다. 안티센스 올리고머는 짧은 기간 동안 일정한 간격으로, 예를 들어, 2주 이하 동안 매일 투여될 수 있다. 그러나, 일부 경우에 올리고머는 보다 긴 기간 동안 간헐적으로 투여된다. 투여는 항생제의 투여 또는 다른 치료제 치료가 뒤따르거나, 병행될 수 있다. 치료 요법은 치료 중인 대상체의 면역검정, 다른 생화학적 검사 및 생리학적 검사의 결과에 기초하여, 지시된 바와 같이 조정될 수 있다 (투여량, 빈도, 경로 등).
본 개시의 안티센스 올리고머를 사용한 효과적인 생체내 치료 요법은 투여의 지속시간, 용량, 빈도 및 경로, 뿐만 아니라 치료 중인 대상체의 병태 (즉, 예방적 투여 대 국소성 또는 전신 감염에 대한 투여)에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 이러한 생체내 요법은 최적의 치료 결과를 달성하기 위해, 치료 중인 장애의 특정한 유형에 적절한 검사에 의한 모니터링, 및 용량 또는 치료 요법의 상응하는 조정을 종종 필요로 할 것이다.
치료는 예를 들어, 관련 기술분야에 공지된 질환의 일반적 지표에 의해 모니터링될 수 있다. 본 개시의 생체내 투여된 안티센스 올리고머의 효능은 안티센스 올리고머의 투여 이전, 동안에, 및 이후 대상체로부터 취한 생물학적 샘플 (조직, 혈액, 소변 등)로부터 결정될 수 있다. 이러한 샘플의 검정은 (1) 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 절차, 예를 들어, 전기영동 겔 이동 검정을 사용한, 표적 및 비-표적 서열에 의한 헤테로듀플렉스의 존재 또는 부재의 모티터링; (2) 표준 기술 예컨대 RT-PCR, 노던 블롯팅, ELISA 또는 웨스턴 블롯팅에 의해 결정된 바와 같은 기준 정상 mRNA 또는 단백질에 대한 돌연변이 mRNA의 양의 모니터링을 포함한다.
일부 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 포유동물 세포에 의해 능동적으로 흡수된다. 추가 실시양태에서, 안티센스 올리고머는 이러한 흡수를 용이하게 하기 위해 본원에 기재된 바와 같이 수송 모이어티 (예를 들어, 수송 펩티드 또는 CPP)에 접합될 수 있다.
VI. 투약
치료 조성물 및 그의 후속 투여 (투약)의 배합은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 달려있다고 여겨진다. 용량은 수 일 내지 수 개월 지속되는 치료의 과정으로 또는 치유가 효과를 나타내거나 질환 상태의 축소가 달성될 때까지 치료되는 질환 상태의 중증도 및 반응성에 의존한다. 최적의 투약 일정은 환자의 체내 약물 축적의 측정으로부터 계산될 수 있다. 통상의 기술자는 최적 투여량, 투약 방법론 및 반복률을 쉽게 결정할 수 있다. 최적 투여량은 개별 올리고머의 상대적 효능에 따라 달라질 수 있고, 시험관내 및 생체내 동물 모델에서 효과적인 것으로 밝혀진 EC50에 기초하여 일반적으로 추정될 수 있다. 일반적으로, 투여량은 체중 kg 당 0.01 μg 내지 100 g이고, 매일, 매주, 매월, 또는 매년 1회 이상, 또는 심지어 매 2 내지 20년에 1회 제공될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 체액 또는 조직 내 약물의 측정된 체류 시간 및 농도에 기초한 용량의 반복률을 쉽게 추정할 수 있다. 성공적인 치료 이후, 질환 상태의 재발을 방지하기 위해 올리고머가 체중 kg 당 0.01 μg 내지 100 g 범위로, 매일 1회 이상에서 매 20년에 1회 유지 용량으로 투여되도록 환자가 유지 요법을 체험하게 하는 것이 바람직할 수 있다.
본 개시는 그의 실시양태의 일부에 따른 특수성에 따라 기재되었지만, 하기 실시예는 본 개시를 오직 예시하기 위해 제공되고 이를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 출원에 인용된 각각의 참조문헌, 특허, 특허출원, 젠뱅크(GenBank) 수탁 번호 등은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
VII. 실시예
실시예 1
안티센스 표적화 서열의 설계
안티센스 올리고머 표적화 서열을 인간 GAA 유전자의 IVS1-13T>G 돌연변이에 관한 치료용 스플라이스-스위칭 적용을 위해 설계하였다. 여기서, 스플라이스-스위칭 올리고머는 인트론 및 엑손 스플라이스 사일런서 요소 (각각 ISS 및 ESS 요소)를 억제함으로써 성숙한 GAA mRNA 내 엑손 2 잔류를 촉진할 것으로 예상된다. 그 다음에, 정상적이거나 거의 정상적인 GAA 발현의 복원은 기능성 효소가 합성되게 함으로써 GSD-II 환자에게 임상적 이점을 제공할 것이다.
따라서, 특정 안티센스 표적화 서열을 GAA 유전자의 엑손 2 내의 또는 그의 플랭킹 인트론 내의 스플라이스 사일런서 요소를 차폐하도록 설계하였다. 가능한 사일런서 요소 표적의 비제한적인 예는 hnRNPA1 모티프 (TAGGGA), Tra2-β 모티프, 및 9G8 모티프를 포함한다. 인트론 1 및 2 (각각 IVS1 및 IVS2) mRNA의 실리코 이차 구조 분석 (mFold)을 적합한 안티센스 표적 서열을 제공할 수 있는 장거리 상호작용을 확인하기 위해 또한 이용하였다. 이 분석으로부터 생성된 안티센스 표적화 서열은 본원에 표 2A 내지 표 2C에 나타냈다.
표 2A 내지 표 2C에 제시된 바와 같은 표적화 서열을 포함하는 예시적 올리고머를 PMO 및/또는 PPMO (CPP, 예컨대 아르기닌-풍부 CPP에 접합된 올리고머)로서 제조하였다. 이하에 기재된 바와 같이, 이들 안티센스 올리고머를 하기 실시예 2에 또한 기재된 바와 같이 뉴클레오펙션 프로토콜을 사용하여 GSD-II 환자-유래된 섬유모세포에 도입하였다.
실시예 2
물질 및 방법
GSD-II 세포. GSD-II를 가진 개인으로부터 환자-유래된 섬유모세포 또는 림프구 (코리엘(Coriell) 세포주 GM00443 및 GM11661)를 10% FBS를 가진 이글스(Eagle's) MEM에서의 표준 프로토콜에 따라 배양하였다. 세포를 실험 전 약 3-5일 계대배양하였고 형질감염 또는 뉴클레오펙션시 대략 80% 전면생장률(confluent)이었다.
GM00443 섬유모세포는 30세 연령의 남성으로부터였다. 성인형; 30대에 발병; GAA에 대한 mRNA의 정상적인 크기 및 양, 항체에 의해 검출된 GAA 단백질, 그러나 오직 9 내지 26%의 정상 산성 알파-1,4-글루코시다제 활성; CCR에서 계대배양 3; 공여 대상체는 제1 코딩 엑손 [엑손 2(IVS1-13T>G)]이 결실된 대안적인 스플라이싱된 전사물을 결과하는, GAA 유전자의 인트론 1의 수용자 부위의 위치 -13에서 T/G 염기변환(transversion)을 갖고 있는 하나의 대립유전자를 가진 이형접합성이었다.
GM11661 섬유모세포는 38세 연령의 남성으로부터였다. 비정상적 간 기능 검사; 육체 활동 동안 때때로 다리의 근육 경직(charley-horse); 아침 두통; 기름진 음식에 불내성; 복부 낭포; 결손 섬유모세포 및 WBC 산성-알파-1,4 글루코시다제 활성; 공여자 대상체는 복합 이형접합체이고; 대립유전자 1은 GAA 유전자의 인트론 1의 수용자 부위의 위치 -13에서 T>G 염기전환을 갖고 있고 (IVS1-13T>G); 생성된 대안적인 스플라이싱된 전사물은 개시 코돈을 함유하는 엑손 2의 프레임 결실을 갖고; 대립유전자 2는 엑손 18의 결실을 갖고 있었다.
뉴클레오펙션 프로토콜. 안티센스 PMO/PPMO (아르기닌-풍부 펩티드에 접합된 PMO)를 뉴클레오펙션을 위해 적절한 희석액이 만들어진 뉴클레아제-미함유 물 (DEPC로 처리하지 않음)에서 1-2 mM 스톡 용액으로서 제조하였다. GSD-II 세포를 트립신 처리하고, 카운팅하고, 10분 동안 90 g에서 원심분리하고, 웰당 1-5x105개 세포를 뉴클레오펙션 용액 P2 (론자(Lonza))에 재현탁시켰다. 그 다음에 안티센스 PMO 용액 및 세포를 뉴클레오큐벳(Nucleocuvette) 16-웰 스트립의 각각의 웰에 첨가하고, 프로그램 EN-100으로 펄싱하였다. 세포를 10분 동안 실온에서 인큐베이션하고 12-웰 플레이트에 이중으로 옮겼다. 전체 RNA를 제조자의 추천 프로토콜에 따라 GE 일러스트라(Illustra) 96 스핀(Spin) 키트를 사용하여 48시간 후 처리된 세포로부터 단리하였다. 회수된 RNA를 분석 전에 -80℃에 보관하였다.
GAA RT-PCR. 엑손 2-함유 mRNA의 PCR 검출을 위해, 프라이머 서열을 엑손 1 (전방향)부터 엑손 3 (역방향)까지로 선택하였다. 엑손 1-3에 걸친 RT-PCR은 약 1177개 염기의 전장 앰플리콘을 생성할 것이다. 무손상 앰플리콘 (~1177개 염기) 및 엑손 2 (엑손 2는 ~578개 염기이다)가 결손된 ~600개 염기 전사물 간의 크기 차이는 더 짧은 생성물의 실질적으로 선호되는 증폭이 존재할 것임을 의미한다. 이것은 전장 전사물 또는 엑손 2-함유 전사물의 스플라이싱을 유도하는 안티센스 올리고머의 효능을 검정하는데 있어서 높은 척도(high benchmark)를 설정할 것이다.
역 전사효소 PCR을 수퍼스크립트(SuperScript) III 원-스텝 RT-PCR 시스템 (인비트로젠(Invitrogen))을 사용하여 GAA 대립유전자를 증폭하기 위해 수행하였다. 뉴클레오펙션된 세포로부터 단리된 400 ng 전체 RNA를 역전사시키고 유전자-특이적 프라이머로 증폭시켰다.
원-스텝 키트에 제공된 증폭 용액을 형광에 의한 밴드 시각화를 가능하게 하기 위해 Cy5-표지된 dCTP (GE)로 보충하였다. 소화된 샘플을 미리 주조된(pre-cast) 10% 아크릴아미드/TBE 겔 (인비트로젠) 상에서 시행하였고 플라텐 표면에서 초점면을 가진 670 nm BP 30 방출 필터 및 633 nm 여기 레이저를 사용한 타이푼 트리오(Typhoon Trio) (GE)에서 가시화하였다. 겔을 밴드의 강도를 결정하기 위해 이미지퀀트(ImageQuant) (GE)로 분석하였다. 엑손 2를 함유하는 모든 밴드의 강도가 함께 더해져 포함 분석에서 전체 엑손 2 전사물 수준을 나타냈다.
대안적으로, PCR 증폭 생성물 (보충된 Cy5-표지된 dCTP 없이)을 % 엑손 포함의 결정을 위해 캘리퍼(Caliper) 랩칩(LabChip) GX 바이오분석기 또는 애질런트(Agilent) 2200 테이프 스테이션(Tape Station) 상에서 분석하였다.
GAA 효소 검정 및 프로테인 심플(Protenin Simple) Wes. 비형질전환된 환자-유래된 섬유모세포 (GM00443)를 론자의 P3 뉴클레오펙터(nucleofector) 용액에서 다양한 농도로 PMO로 뉴클레오펙션시키고 37℃에서 5% CO2와 6일 동안 인큐베이션하였다. 세포를 행크스 평형 염 용액(Hank 's Balanced Salt Solution) (HBSS)으로 2회 세척하고, 비완충된 H2O로 용해시키고, 3회 동결/해동시킨 다음에, 1분 동안 1000 rpm으로 진탕하였다. 바이오-래드(Bio-Rad) DC™ 검정 키트를 사용하여 총 단백질 농도를 정량하였다. 효소 검정을 위해, 세포 용해물을 0.2 M 아세테이트 완충제 (pH 3.9 또는 6.5)에서 1.4 mM 4-메틸움벨리페릴 α-D-글루코피라노시드와 합하고, 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션한 다음에, 형광을 360 nm 여기 및 460 nm 방출에서 판독하였다. 4-메틸움벨리페론을 사용하여 표준 곡선을 생성시켰다.
GAA 단백질에 대한 웨스턴 블롯을 프로테인심플(ProteinSimple)® Wes™ 시스템 (12-230 kDa 매스터 키트(Master Kit))을 사용하여 수행하였다. 압캠(Abcam)으로부터의 토끼 항-GAA 항체 [클론 EPR4716(2)]를 1:100으로 희석하고 1:5로 희석 한 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology)로부터의 마우스 항-GAPDH [클론 6c5]와 듀플렉스시켰다. 프로테인심플®로부터의 마우스 및 토끼 2 차 항체를 듀플렉싱을 위해 1:1로 합하였다. GAA는 프로테인심플® 컴퍼스(Compass) 소프트웨어를 사용하여 모든 형태의 GAA에 대한 곡선 하 면적으로서 정량화하고 GAPDH로 정규화하였다.
실시예 3
안티센스 PMO 및 PPMO의 제조
안티센스 PMO를 인간 GAA 프리-mRNA (예를 들어, 인간 GAA 프리-mRNA의 인트론 1)를 표적으로 하도록 설계하고 본원에 기재된 바와 같이 합성하고 GSD-II 환자-유래된 섬유모세포를 치료하는데 사용하였다.
Figure pct00196
Figure pct00197
Figure pct00198
*티민 (T)은 임의로 우라실 (U)이다.
**TEG는 상기에 정의되어 있다.
Figure pct00199
*티민 (T)은 임의로 우라실 (U)이다.
**TEG는 상기에 정의되어 있다.
Figure pct00200
*티민 (T)은 임의로 우라실 (U)이다.
**TEG는 상기에 정의되어 있다.
실시예 4
안티센스 올리고머는 GSD-II 환자-유래된 섬유모세포 내 산성 알파-글루코시다제의 발현 수준의 상승을 유도한다
상기-기재된 안티센스 PMO 및 PPMO는 뉴클레오펙션에 의해 GM00443 또는 GM11661 세포에 전달되었다 (상기, 예를 들어, 물질 및 방법 참조). 37℃에서 5% CO2와 6일의 인큐베이션 후, 세포를 용해시키고, 용해물 또는 GAA 단백질 발현에서의 GAA 활성을 상기 기재된 바와 같이 면역검정에 의해 측정하였다. 일반적으로, 본 개시의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리된 세포에서 GAA 효소의 단백질 발현은 비처리 세포에서의 GAA 발현 수준보다 더 높았다 (하기 구체적 실험 결과 참조). 이들 결과는 본 개시의 올리고뉴클레오티드가 GSD-II 환자-유래된 섬유모세포에서 GAA 효소의 단백질 발현 수준의 상승을 유도한다는 것을 나타낸다. 어떠한 이론 또는 작용 기전에 의해서도 구속되지 않으면서, 본원에 기재된 실험 결과를 고려하면, 본 발명자들은 본 개시의 올리고머가 ISS 및/또는 ESS 요소를 억제함으로써 성숙한 GAA mRNA에서의 엑손 2 잔류를 촉진하는 것으로 여긴다.
하기 실험에서 상세히 설명된 바와 같이, 일련의 변이체 PPMO 및 PMO 올리고뉴클레오티드는 폼페병을 가진 환자로부터의 세포에서 GAA 효소의 발현 및/또는 활성을 증가시키는 그의 능력에 대해 평가되었다. 변이체 올리고뉴클레오티드의 표적화 서열은 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역 내에 상보적이고, 여기서 표적 영역은 표적화 서열과 비교하여 1, 2, 3, 또는 4개의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 그러한 추가적 핵염기는 시토신이고, 여기서 1, 2, 3, 또는 4개의 추가적 핵염기는 표적화 서열에서 어떠한 상응하는 상보적 핵염기도 갖지 않는다 (이런 이유로, "-G" (구아닌), "-2G", "-3G", 또는 "-4G" 주석(annotation)). 추가적 핵염기는 표적 영역의 내부에 존재한다. 놀랍게도 이들 변이체 올리고뉴클레오티드의 다수가 상응하는 비변이체 표적화 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드와 동일하거나 유사한 활성을 갖는다는 것이 발견되었다 (도 10b 및 도 16 참조). 일부 경우에, 변이체 표적화 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드는 상응하는 비변이체 표적화 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드와 비교하면, 환자 세포에서 GAA 효소 활성을 증가시키는데 있어서 보다 활성이 있었다 (예를 들어, 도 16 참조). 예를 들어, 도 16에 도시된 바와 같이, GAA (비변이체)에 100% 상보적인 표적화 서열을 가진 올리고뉴클레오티드와 비교하면, G 잔기가 하나 적은 변이체 표적화 서열을 갖는 2개의 상이한 올리고뉴클레오티드는 폼페 환자로부터 유래된 섬유모세포에서 GAA를 증가시키는데 있어서 보다 활성이었다 (도 16).
실험 1
선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 및 0.2 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 6일 동안 뉴클레오펙션된 세포의 인큐베이션 후에, 용해물을 상기와 같이 제조하고 GAA 효소 활성을 용해물에서 측정하였다. 도 1 및 도 2에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 2
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1 μM, 0.2 μM, 및 0.4 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 3 및 도 4에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 3
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1 μM, 0.2 μM, 및 0.04 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 5 내지 도 8에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 4
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 9에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 5
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 10a에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 6
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM11661 세포에서 평가하였다. 도 10b에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 7
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 11 및 도 12에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 8
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 13a에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 9
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM11661 세포에서 평가하였다. 도 13b에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 10
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 14에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 11
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 15a에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 12
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 0.5 μM, 및 0.16 μM)에서 GM11661 세포에서 평가하였다. 도 15b에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 13
또 다른 실험에서, 선택된 올리고뉴클레오티드를 5 μM의 단일 용량에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 16에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다.
실험 14
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 17에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.042 내지 0.836의 범위이었다.
실험 15
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM11661 세포에서 평가하였다. 도 18에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.086 내지 0.414의 범위이었다.
실험 16
도 19는 GM00443 및 GM11661 세포 둘 다에서 평가하고, 3회 실험 (N=9)에 걸쳐 평균을 낸, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드에 대한 EC50 (μM) 값의 표 요약을 제공한다.
실험 17
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 20에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.149 내지 0.896의 범위이었다.
실험 18
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 21에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.100 내지 0.550의 범위이었다.
실험 19
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM00443 세포에서 평가하였다. 도 22에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.025 내지 0.675의 범위이었다.
실험 20
도 23은 GM00443 및 GM11661 세포 둘 다에서 평가하고, 모든 검정 (N=9)에 걸쳐 평균을 낸, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드에 대한 EC50 (μM) 값의 표 요약을 제공한다.
실험 21
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM11661 세포에서 평가하였다. 도 24에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.144 내지 0.630의 범위이었다.
실험 22
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM11661 세포에서 평가하였다. 도 25에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.128 내지 0.763의 범위이었다.
실험 23
또 다른 실험에서, 선택된 PPMO 올리고뉴클레오티드를 다중 용량 (5 μM, 1.6 μM, 및 0.5 μM)에서 GM11661 세포에서 평가하였다. 도 26에 도시된 바와 같이, 시험한 모든 농도에서 이들 화합물의 각각의 양으로 처리한 세포의 용해물은 비처리 세포로부터의 용해물에서의 GAA 효소 활성 수준과 비교하면, 증가된 GAA 효소 활성을 나타냈다. 게다가, EC50 (μM)은 0.002 내지 0.218의 범위이었다.

Claims (114)

  1. 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역(traget region)에 상보적인 표적화 서열을 포함하는, 10 내지 40개의 핵염기의 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드로서, 여기서 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재하는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  2. 제1항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 2 또는 서열번호: 3 중 적어도 하나를 포함하는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  3. 제2항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 2를 포함하는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  4. 제2항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 3을 포함하는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 표적 부위에 대한 표적화 서열의 결합시 GAA mRNA 내의 엑손 2의 잔류를 촉진하는, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  6. 제1항에 있어서, 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 1 내지 3개의 추가적 핵 염기를 포함하는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  7. 제1항에 있어서, 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 2배 유도하는, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  8. 제1항에 있어서, 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 3배 또는 적어도 4배 유도하는, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  9. 제1항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13-58 중 어느 하나로부터 선택되는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  10. 제1항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 33-38, 45, 46, 및 87-123 중 어느 하나로부터 선택되는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  11. 제1항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 27-29, 또는 34-36 중 어느 하나로부터 선택되는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드.
  12. 화학식 (I)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00201

    상기 식에서,
    각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
    Z는 8 내지 38의 정수이고;
    각각의 Y는 O 및 -NR4로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 각각의 R4는 H, C1-C6 알킬, 아르알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2, 및 G로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R5는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고 n은 1 내지 5의 정수이고;
    T는 OH 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00202

    [여기서,
    A는 -OH, -N(R7)2, 및 R1로부터 선택되고 여기서 각각의 R7은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
    R6은 OH, -N(R9)CH2C(O)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00203

    (여기서,
    R9는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    R10은 G, -C(O)-R11OH, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸,
    -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2, 및
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
    m은 1 내지 5의 정수이고,
    R11은 화학식 -(O-알킬)y-이고 여기서 y는 3 내지 10의 정수이고
    상기 y 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R12는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다)
    로부터 선택된다]
    로부터 선택되고;
    각각의 경우의 R1은,
    -N(R13)2 (여기서 각각의 R13은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다);
    화학식 (II)의 모이어티:
    Figure pct00204

    [여기서,
    R15는 H, G, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2, 및
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
    R18은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    q는 1 내지 5의 정수이고,
    각각의 R17은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택된다]; 및
    화학식 (III)의 모이어티:
    Figure pct00205

    [여기서,
    R19는 H, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2,
    -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2,
    -C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2 및 G로부터 선택되고, 여기서,
    R22는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    r은 1 내지 5의 정수이고,
    R20은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되거나;
    R19 및 R20은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고 산소, 질소, 및 황으로부터 선택된 추가적 헤테로원자를 임의로 함유하는 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다]
    로부터 독립적으로 선택되고;
    R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)-R23, -C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2, -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00206

    [여기서,
    R23은 화학식 -(O-알킬)v-OH이고 여기서 v는 3 내지 10의 정수이고 상기 v 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R24는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    s는 1 내지 5의 정수이고;
    L은 -C(O)(CH2)6C(O)- 및 -C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)-로부터 선택되고;
    각각의 R25는 화학식 -(CH2)2OC(O)N(R26)2이고 여기서 각각의 R26은 화학식 -(CH2)6NHC(=NH)NH2이다]
    로부터 선택되고,
    여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
    -C(O)CH2NH-CPP, 및:
    Figure pct00207

    로부터 선택된 링커 모이어티이고,
    여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
    여기서 G는 한 번 존재할 수 있거나 부재하고; 여기서 표적화 서열은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
    I.
    a) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
    b) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
    c) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
    d) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
    e) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
    f) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
    g) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
    h) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
    i) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
    j) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
    k) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
    l) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
    m) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
    n) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
    o) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    p) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    q) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    r) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
    s) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
    t) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
    u) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    v) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
    w) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
    x) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    y) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
    z) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
    aa) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
    bb) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
    cc) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
    dd) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
    ee) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    ff) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
    gg) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    hh) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
    ii) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    jj) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
    kk) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
    ll) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
    mm) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
    nn) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
    oo) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
    pp) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
    qq) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
    rr) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
    ss) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및
    tt) 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다),
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
    II.
    a) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
    b) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
    c) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
    d) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    e) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    f) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
    g) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
    h) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
    i) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
    j) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
    k) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
    l) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
    m) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
    n) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
    o) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
    p) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
    q) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
  13. 제12항에 있어서, 각각의 R1이 -N(CH3)2인 안티센스 올리고머 화합물.
  14. 제12항에 있어서, R1이,
    Figure pct00208

    Figure pct00209
    , 및
    Figure pct00210


    로부터 선택되는 것인 안티센스 올리고머 화합물.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, T가,
    Figure pct00211
    ; 및
    Figure pct00212

    로부터 선택되고,
    Y가 각각의 경우에 O인 안티센스 올리고머 화합물.
  16. 제15항에 있어서, R2가 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 안티센스 올리고머 화합물.
  17. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, T가,
    Figure pct00213
    ; 및
    Figure pct00214
    로부터 선택되고, Y가 각각의 경우에 O이고, R2가 G인 안티센스 올리고머 화합물.
  18. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00215
    이고, Y가 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1이 -N(CH3)2이고, R2가 G인 안티센스 올리고머 화합물.
  19. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 하기 화학식:
    Figure pct00216

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 안티센스 올리고머 화합물.
  20. 제19항에 있어서, Ra가 아세틸인 안티센스 올리고머 화합물.
  21. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 서열번호: 6-12 중 어느 하나에 나타낸 서열을 포함하는 것인 안티센스 올리고머 화합물.
  22. 제12항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00217
    이고, Y가 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1이 -N(CH3)2이고, R2가 H인 안티센스 올리고머 화합물.
  23. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 안티센스 올리고머 화합물.
  24. 화학식 (VII)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00218

    상기 식에서, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
    Z는 8 내지 38의 정수이고;
    T는
    Figure pct00219
    ; 및
    Figure pct00220

    로부터 선택되고;
    각각의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
    R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고,
    여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
    -C(O)CH2NH-CPP, 및:
    Figure pct00221

    로부터 선택된 링커 모이어티이고,
    여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
    여기서 T는
    Figure pct00222
    이거나 R2는 G이고,
    여기서 표적화 서열은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
    I.
    a) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
    b) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
    c) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
    d) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
    e) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
    f) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
    g) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
    h) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
    i) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
    j) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
    k) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
    l) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
    m) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
    n) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
    o) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    p) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    q) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    r) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
    s) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
    t) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
    u) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    v) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
    w) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
    x) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    y) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
    z) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
    aa) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
    bb) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
    cc) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
    dd) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
    ee) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    ff) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
    gg) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    hh) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
    ii) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    jj) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
    kk) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
    ll) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
    mm) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
    nn) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
    oo) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
    pp) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
    qq) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
    rr) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
    ss) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및
    tt) 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다); 또는
    II.
    a) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
    b) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
    c) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
    d) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    e) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    f) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
    g) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
    h) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
    i) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
    j) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
    k) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
    l) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
    m) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
    n) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
    o) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
    p) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
    q) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
  25. 제24항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00223
    이고, R2가 G인 안티센스 올리고머 화합물.
  26. 제24항에 있어서, 적어도 하나의 경우의 R1이 -N(CH3)2인 안티센스 올리고머 화합물.
  27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 R1이 -N(CH3)2인 안티센스 올리고머 화합물.
  28. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, G가 하기 화학식:
    Figure pct00224

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 안티센스 올리고머 화합물.
  29. 제28항에 있어서, Ra가 아세틸인 안티센스 올리고머 화합물.
  30. 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 하기 화학식:
    Figure pct00225

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아세틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 안티센스 올리고머 화합물.
  31. 제30항에 있어서, Ra가 아세틸인 안티센스 올리고머 화합물.
  32. 제24항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 안티센스 올리고머 화합물.
  33. 화학식 (XX)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00226

    상기 식에서,
    I.
    a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    r) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    s) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    t) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    u) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    v) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    w) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    x) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    y) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    z) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    aa) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    bb) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다);
    cc) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    dd) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    ee) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    ff) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    gg) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    hh) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    ii) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    jj) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    kk) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    ll) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    mm) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    nn) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    oo) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    pp) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    qq) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    rr) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    ss) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    tt) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다)이거나;
    II.
    a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다)이고,
    상기 식에서 Ra는 H 또는 아세틸이다.
  34. 제33항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 안티센스 올리고머 화합물.
  35. 제12항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 또는 59 중 어느 하나로부터 선택되고, 여기서 각각의 경우의 X가 T인 안티센스 올리고머 화합물.
  36. 각각의 경우에 X가
    Figure pct00227
    (U) 또는
    Figure pct00228
    (T)로부터 독립적으로 선택된 것인 화학식 (XXII a) 내지 (XXII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  37. 제36항에 있어서, 각각의 X가 T인 안티센스 올리고머 화합물.
  38. 화학식 (XXIII a) 내지 (XXIII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  39. (a) 제약상 허용되는 담체 및 (b) 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적인 표적화 서열을 포함하는, 10 내지 40개의 핵염기의 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드로서, 여기서 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재하는 것인, 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 제약 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 2 또는 서열번호: 3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 제약 조성물.
  41. 제40항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 2를 포함하는 것인 제약 조성물.
  42. 제40항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 3을 포함하는 것인 제약 조성물.
  43. 제39항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 표적 영역에 대한 표적화 서열의 결합시 GAA mRNA 내의 엑손 2의 잔류를 촉진하는 것인 제약 조성물.
  44. 제39항에 있어서, 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 1 내지 3개의 추가적 핵염기를 포함하는 것인 제약 조성물.
  45. 제39항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 2배 유도하는 것인 제약 조성물.
  46. 제39항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 3배 또는 적어도 4배 유도하는 것인 제약 조성물.
  47. 제39항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13-58 중 어느 하나로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  48. 제39항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 33-38, 45, 46, 및 87-123 중 어느 하나로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  49. 제39항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 27-29, 또는 34-36 중 어느 하나로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  50. (a) 제약상 허용되는 담체 및 (b) 화학식 (I)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물:
    Figure pct00229

    상기 식에서,
    각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
    Z는 8 내지 38의 정수이고;
    각각의 Y는 O 및 -NR4로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 각각의 R4는 H, C1-C6 알킬, 아르알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2, 및 G로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R5는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고 n은 1 내지 5의 정수이고;
    T는 OH 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00230

    [여기서,
    A는 -OH, -N(R7)2, 및 R1로부터 선택되고 여기서, 각각의 R7은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
    R6은 OH, -N(R9)CH2C(O)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00231

    (여기서,
    R9는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    R10은 G, -C(O)-R11OH, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸,
    -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2, 및
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
    m은 1 내지 5의 정수이고,
    R11은 화학식 -(O-알킬)y-이고 여기서 y는 3 내지 10의 정수이고
    상기 y 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R12는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다)
    로부터 선택된다]
    로부터 선택되고;
    각각의 경우의 R1은,
    -N(R13)2 (여기서 각각의 R13은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다);
    화학식 (II)의 모이어티:
    Figure pct00232

    [여기서,
    R15는 H, G, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2, 및
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
    R18은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    q는 1 내지 5의 정수이고,
    각각의 R17은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택된다]; 및
    화학식 (III)의 모이어티:
    Figure pct00233

    [여기서,
    R19는 H, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2,
    -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2,
    -C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2 및 G로부터 선택되고, 여기서,
    R22는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    r은 1 내지 5의 정수이고,
    R20은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되거나;
    R19 및 R20은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고 산소, 질소, 및 황으로부터 선택된 추가적 헤테로원자를 임의로 함유하는 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다]
    로부터 독립적으로 선택되고;
    R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)-R23, -C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2, -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00234

    [여기서,
    R23은 화학식 -(O-알킬)v-OH이고 여기서 v는 3 내지 10의 정수이고 상기 v 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R24는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    s는 1 내지 5의 정수이고;
    L은 -C(O)(CH2)6C(O)- 및 -C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)-로부터 선택되고;
    각각의 R25는 화학식 -(CH2)2OC(O)N(R26)2이고 여기서 각각의 R26은 화학식 -(CH2)6NHC(=NH)NH2이다]
    로부터 선택되고,
    여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
    -C(O)CH2NH-CPP, 및:
    Figure pct00235

    로부터 선택된 링커 모이어티이고,
    여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
    여기서 G는 한 번 존재할 수 있거나 부재하고; 여기서 표적화 서열은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
    I.
    a) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
    b) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
    c) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
    d) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
    e) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
    f) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
    g) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
    h) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
    i) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
    j) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
    k) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
    l) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
    m) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
    n) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
    o) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    p) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    q) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    r) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
    s) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
    t) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
    u) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    v) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
    w) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
    x) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    y) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
    z) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
    aa) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
    bb) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
    cc) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
    dd) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
    ee) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    ff) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
    gg) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    hh) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
    ii) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    jj) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
    kk) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
    ll) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
    mm) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
    nn) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
    oo) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
    pp) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
    qq) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
    rr) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
    ss) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);
    II.
    a) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
    b) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
    c) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
    d) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    e) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    f) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
    g) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
    h) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
    i) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
    j) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
    k) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
    l) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
    m) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
    n) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
    o) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
    p) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
    q) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
  51. 제50항에 있어서, 각각의 R1이 -N(CH3)2인 제약 조성물.
  52. 제50항에 있어서, R1이,
    Figure pct00236

    Figure pct00237
    , 및
    Figure pct00238

    로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  53. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, T가,
    Figure pct00239
    ; 및
    Figure pct00240

    로부터 선택되고,
    Y가 각각의 경우에 O인 제약 조성물.
  54. 제53항에 있어서, R2가 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  55. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, T가,
    Figure pct00241
    ; 및
    Figure pct00242
    로부터 선택되고, Y가 각각의 경우에 O이고, R2가 G인 제약 조성물.
  56. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00243
    로부터 선택되고, Y가 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1이 -N(CH3)2이고, R2가 G인 제약 조성물.
  57. 제50항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 하기 화학식:
    Figure pct00244

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  58. 제57항에 있어서, Ra가 아세틸인 제약 조성물.
  59. 제50항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 서열번호: 6-12 중 어느 하나에 나타낸 서열을 포함하는 것인 제약 조성물.
  60. 제50항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00245
    이고, Y가 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1이 -N(CH3)2이고, R2가 H인 제약 조성물.
  61. 제50항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 제약 조성물.
  62. (a) 제약상 허용되는 담체 및 (b) 화학식 (VII)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물:
    Figure pct00246

    상기 식에서,
    각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
    Z는 8 내지 38의 정수이고;
    T는,
    Figure pct00247
    ; 및
    Figure pct00248

    로부터 선택되고;
    각각의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
    R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고,
    여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
    -C(O)CH2NH-CPP, 및:
    Figure pct00249

    로부터 선택된 링커 모이어티이고,
    여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
    여기서 T는
    Figure pct00250
    이거나 R2는 G이고,
    여기서 표적화 서열은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
    I.
    a) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
    b) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
    c) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
    d) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
    e) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
    f) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
    g) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
    h) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
    i) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
    j) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
    k) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
    l) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
    m) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
    n) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
    o) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    p) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    q) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    r) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
    s) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
    t) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
    u) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    v) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
    w) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
    x) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    y) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
    z) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
    aa) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
    bb) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
    cc) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
    dd) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
    ee) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    ff) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
    gg) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    hh) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
    ii) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    jj) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
    kk) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
    ll) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
    mm) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
    nn) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
    oo) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
    pp) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
    qq) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
    rr) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
    ss) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및
    tt) 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다); 또는
    II.
    a) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
    b) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
    c) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
    d) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    e) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    f) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
    g) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
    h) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
    i) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
    j) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
    k) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
    l) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
    m) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
    n) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
    o) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
    p) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
    q) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
  63. 제62항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00251
    이고, R2가 G인 제약 조성물.
  64. 제62항에 있어서, 적어도 하나의 경우의 R1이 -N(CH3)2인 제약 조성물.
  65. 제62항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 R1이 -N(CH3)2인 제약 조성물.
  66. 제62항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, G가 하기 화학식:
    Figure pct00252

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  67. 제66항에 있어서, Ra가 아세틸인 제약 조성물.
  68. 제62항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 하기 화학식:
    Figure pct00253

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아세틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  69. 제68항에 있어서, Ra가 아세틸인 제약 조성물.
  70. 제62항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 제약 조성물.
  71. (a) 제약상 허용되는 담체 및 (b) 화학식 (XX)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물:
    Figure pct00254

    상기 식에서,
    I.
    a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    r) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    s) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    t) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    u) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    v) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    w) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    x) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    y) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    z) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    aa) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    bb) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다);
    cc) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    dd) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    ee) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    ff) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    gg) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    hh) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    ii) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    jj) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    kk) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    ll) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    mm) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    nn) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    oo) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    pp) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    qq) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    rr) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    ss) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    tt) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다)이거나;
    II.
    a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다)이고,
    상기 식에서 Ra는 H 또는 아세틸이다.
  72. 제71항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 제약 조성물.
  73. 제39항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 또는 59 중 어느 하나로부터 선택되고, 여기서 각각의 경우의 X가 T인 제약 조성물.
  74. (a) 제약상 허용되는 담체 및 (b) 각각의 경우에 X가
    Figure pct00255
    (U) 또는
    Figure pct00256
    (T)로부터 독립적으로 선택된 것인 화학식 (XXII a) 내지 (XXII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.
  75. 제74항에 있어서, 각각의 X가 T인 제약 조성물.
  76. (a) 제약상 허용되는 담체 및 (b) 화학식 (XXIII a) 내지 (XXIII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.
  77. II형 글리코겐 축적병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 인간 알파 글루코시다제 (GAA) 유전자의 프리-mRNA의 인트론 1 (서열번호: 1) 내의 표적 영역에 상보적인 표적화 서열을 포함하고, 여기서 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가적 핵염기를 포함하고, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적화 서열에서 어떠한 상보적인 핵염기도 갖지 않으며, 여기서 적어도 하나의 추가적 핵염기가 표적 영역의 내부에 존재하는 것인, 10 내지 40개의 핵염기의 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드 유효량을 투여함으로써 상기 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 II형 글리코겐 축적병을 치료하는 방법.
  78. 제77항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 2 또는 서열번호: 3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 방법.
  79. 제78항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 2를 포함하는 것인 방법.
  80. 제78항에 있어서, 표적 영역이 서열번호: 3을 포함하는 것인 방법.
  81. 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 표적 영역에 대한 표적화 서열의 결합시 GAA mRNA 내의 엑손 2의 잔류를 촉진하는 것인 방법.
  82. 제77항에 있어서, 표적 영역이 표적화 서열과 비교하여 1 내지 3개의 추가적 핵염기를 포함하는 것인 방법.
  83. 제77항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 2배 유도하는 것인 방법.
  84. 제77항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 서열번호: 1 내의 표적 영역에 완전히 상보적인 제2 안티센스 올리고뉴클레오티드와 비교하면 효소 활성 시험에 따라 GAA 효소 활성을 적어도 3배 또는 적어도 4배 유도하는 것인 방법.
  85. 제77항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13-58 중 어느 하나로부터 선택된 것인 방법.
  86. 제77항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 33-38, 45, 46, 및 87-123 중 어느 하나로부터 선택된 것인 방법.
  87. 제77항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 27-29, 또는 34-36 중 어느 하나로부터 선택된 것인 방법.
  88. II형 글리코겐 축적병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (I)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 상기 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 II형 글리코겐 축적병을 치료하는 방법:
    Figure pct00257

    상기 식에서,
    각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
    Z는 8 내지 38의 정수이고;
    각각의 Y는 O 및 -NR4로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 각각의 R4는 H, C1-C6 알킬, 아르알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2, 및 G로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R5는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고 n은 1 내지 5의 정수이고;
    T는 OH 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00258

    [여기서,
    A는 -OH, -N(R7)2, 및 R1로부터 선택되고 여기서, 각각의 R7은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
    R6은 OH, -N(R9)CH2C(O)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00259

    (여기서,
    R9는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    R10은 G, -C(O)-R11OH, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸,
    -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2, 및
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
    m은 1 내지 5의 정수이고,
    R11은 화학식 -(O-알킬)y-이고 여기서 y는 3 내지 10의 정수이고
    상기 y 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R12는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택된다)
    로부터 선택된다]
    로부터 선택되고;
    각각의 경우의 R1은,
    -N(R13)2 (여기서 각각의 R13은 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다);
    화학식 (II)의 모이어티:
    Figure pct00260

    [여기서,
    R15는 H, G, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2, 및
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2로부터 선택되고, 여기서,
    R18은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    q는 1 내지 5의 정수이고,
    각각의 R17은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택된다]; 및
    화학식 (III)의 모이어티:
    Figure pct00261

    [여기서,
    R19는 H, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2,
    -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2,
    -C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2 및 G로부터 선택되고, 여기서,
    R22는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    r은 1 내지 5의 정수이고,
    R20은 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되거나;
    R19 및 R20은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고 산소, 질소, 및 황으로부터 선택된 추가적 헤테로원자를 임의로 함유하는 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다]
    로부터 독립적으로 선택되고;
    R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 스테아로일, C1-C6 알킬, -C(=NH)NH2, -C(O)-R23, -C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2,
    -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2, -C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2, 및 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00262

    [여기서,
    R23은 화학식 -(O-알킬)v-OH이고 여기서 v는 3 내지 10의 정수이고 상기 v 알킬 기 각각은 C2-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    R24는 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    s는 1 내지 5의 정수이고;
    L은 -C(O)(CH2)6C(O)- 및 -C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)-로부터 선택되고;
    각각의 R25는 화학식 -(CH2)2OC(O)N(R26)2이고 여기서 각각의 R26은 화학식 -(CH2)6NHC(=NH)NH2이다]
    로부터 선택되고,
    여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
    -C(O)CH2NH-CPP, 및:
    Figure pct00263

    로부터 선택된 링커 모이어티이고,
    여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
    여기서 G는 한 번 존재할 수 있거나 부재하고; 여기서 표적화 서열은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
    I.
    a) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
    b) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
    c) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
    d) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
    e) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
    f) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
    g) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
    h) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
    i) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
    j) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
    k) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
    l) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
    m) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
    n) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
    o) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    p) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    q) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    r) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
    s) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
    t) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
    u) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    v) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
    w) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
    x) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    y) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
    z) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
    aa) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
    bb) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
    cc) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
    dd) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
    ee) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    ff) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
    gg) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    hh) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
    ii) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    jj) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
    kk) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
    ll) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
    mm) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
    nn) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
    oo) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
    pp) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
    qq) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
    rr) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
    ss) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및
    tt) 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다);

    II.
    a) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
    b) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
    c) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
    d) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    e) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    f) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
    g) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
    h) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
    i) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
    j) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
    k) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
    l) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
    m) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
    n) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
    o) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
    p) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
    q) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
  89. 제88항에 있어서, 각각의 R1이 -N(CH3)2인 방법.
  90. 제88항에 있어서, R1이,
    Figure pct00264

    Figure pct00265
    , 및
    Figure pct00266

    로부터 선택되는 것인 방법.
  91. 제88항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, T가,
    Figure pct00267
    ; 및
    Figure pct00268

    로부터 선택되고,
    Y가 각각의 경우에 O인 방법.
  92. 제91항에 있어서, R2가 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 방법.
  93. 제88항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, T가
    Figure pct00269
    ; 및
    Figure pct00270
    로부터 선택되고, Y가 각각의 경우에 O이고, R2가 G인 방법.
  94. 제88항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00271
    로부터 선택되고, Y가 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1이 -N(CH3)2이고, R2가 G인 방법.
  95. 제88항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 하기 화학식:
    Figure pct00272

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 방법.
  96. 제95항에 있어서, Ra가 아세틸인 방법.
  97. 제88항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 서열번호: 6-12 중 어느 하나에 나타낸 서열을 포함하는 것인 방법.
  98. 제88항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00273
    이고, Y가 각각의 경우에 O이고, 각각의 R1이 -N(CH3)2이고, R2가 H인 방법.
  99. 제88항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 방법.
  100. II형 글리코겐 축적병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (VII)의 안티센스 올리고머 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 상기 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 II형 글리코겐 축적병을 치료하는 방법:
    Figure pct00274

    상기 식에서,
    각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
    Z는 8 내지 38의 정수이고;
    T는,
    Figure pct00275
    ; 및
    Figure pct00276

    로부터 선택되고;
    각각의 R1은 -N(R4)2이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이고;
    R2는 H, G, 아실, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되고,
    여기서 G는 세포 관통 펩티드 ("CPP") 및 -C(O)(CH2)5NH-CPP, -C(O)(CH2)2NH-CPP, -C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP,
    -C(O)CH2NH-CPP, 및:
    Figure pct00277

    로부터 선택된 링커 모이어티이고,
    여기서 CPP는 CPP 카르복시 말단에서 아미드 결합에 의해 링커 모이어티에 부착되고,
    여기서 T는
    Figure pct00278
    이거나 R2는 G이고,
    여기서 표적화 서열은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
    I.
    a) 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 22이다);
    b) 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) (여기서 Z는 22이다);
    c) 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) (여기서 Z는 22이다);
    d) 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) (여기서 Z는 22이다);
    e) 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) (여기서 Z는 22이다);
    f) 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) (여기서 Z는 22이다);
    g) 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) (여기서 Z는 22이다);
    h) 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) (여기서 Z는 22이다);
    i) 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA) (여기서 Z는 21이다);
    j) 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG) (여기서 Z는 21이다);
    k) 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA) (여기서 Z는 21이다);
    l) 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG) (여기서 Z는 21이다);
    m) 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX) (여기서 Z는 21이다);
    n) 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC) (여기서 Z는 21이다);
    o) 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    p) 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    q) 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    r) 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC) (여기서 Z는 21이다);
    s) 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG) (여기서 Z는 21이다);
    t) 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX) (여기서 Z는 21이다);
    u) 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    v) 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 19이다);
    w) 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) (여기서 Z는 19이다);
    x) 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG) (여기서 Z는 21이다);
    y) 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A) (여기서 Z는 19이다);
    z) 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA) (여기서 Z는 19이다);
    aa) 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A) (여기서 Z는 21이다);
    bb) 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C) (여기서 Z는 21이다);
    cc) 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 21이다);
    dd) 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) (여기서 Z는 22이다);
    ee) 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    ff) 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C) (여기서 Z는 20이다);
    gg) 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC) (여기서 Z는 21이다);
    hh) 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 20이다);
    ii) 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA) (여기서 Z는 21이다);
    jj) 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A) (여기서 Z는 20이다);
    kk) 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 22이다);
    ll) 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A) (여기서 Z는 20이다);
    mm) 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) (여기서 Z는 19이다);
    nn) 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG) (여기서 Z는 22이다);
    oo) 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G) (여기서 Z는 20이다);
    pp) 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG) (여기서 Z는 19이다);
    qq) 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) (여기서 Z는 22이다);
    rr) 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC) (여기서 Z는 21이다);
    ss) 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C) (여기서 Z는 20이다); 및
    tt) 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC) (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다); 또는
    II.
    a) 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C) (여기서 Z는 23이다);
    b) 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C) (여기서 Z는 23이다);
    c) 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C) (여기서 Z는 23이다);
    d) 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    e) 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C) (여기서 Z는 23이다);
    f) 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A) (여기서 Z는 23이다);
    g) 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C) (여기서 Z는 23이다);
    h) 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A) (여기서 Z는 23이다);
    i) 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A) (여기서 Z는 23이다);
    j) 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C) (여기서 Z는 23이다);
    k) 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C) (여기서 Z는 23이다);
    l) 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G) (여기서 Z는 23이다);
    m) 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C) (여기서 Z는 23이다);
    n) 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G) (여기서 Z는 23이다);
    o) 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G) (여기서 Z는 23이다);
    p) 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C) (여기서 Z는 23이다); 및
    q) 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X) (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다).
  101. 제100항에 있어서, T가 하기 화학식:
    Figure pct00279
    이고, R2가 G인 방법.
  102. 제100항에 있어서, 적어도 하나의 경우의 R1이 -N(CH3)2인 방법.
  103. 제100항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 R1이 -N(CH3)2인 방법.
  104. 제100항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, G가 하기 화학식:
    Figure pct00280

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아실, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 방법.
  105. 제104항에 있어서, Ra가 아세틸인 방법.
  106. 제100항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, CPP가 하기 화학식:
    Figure pct00281

    이고, 상기 식에서 Ra가 H, 아세틸, 벤조일, 및 스테아로일로부터 선택되는 것인 방법.
  107. 제100항에 있어서, Ra가 아세틸인 방법.
  108. 제100항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 방법.
  109. II형 글리코겐 축적병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (XX)의 안티센스 올리고머 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 상기 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 II형 글리코겐 축적병을 치료하는 방법:
    Figure pct00282

    상기 식에서,
    I.
    a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    r) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    s) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    t) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    u) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    v) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    w) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    x) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    y) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    z) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    aa) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    bb) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다);
    cc) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    dd) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    ee) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    ff) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    gg) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    hh) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    ii) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    jj) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    kk) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    ll) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    mm) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    nn) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    oo) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    pp) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)이거나;
    qq) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 22이다)이거나;
    rr) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 21이다)이거나;
    ss) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 20이다)이거나;
    tt) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 19이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다)이거나;
    II.
    a) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    b) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    c) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    d) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    e) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    f) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    g) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    h) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    i) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    j) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    k) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    l) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    m) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    n) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    o) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    p) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)이거나;
    q) 각각의 Nu는 함께 취해져서 서열번호: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)의 표적화 서열 (5' → 3')을 형성하는 핵염기 (여기서 Z는 23이다)
    (여기서 X는 우라실 (U) 또는 티민 (T)으로부터 선택된다)이고,
    상기 식에서 Ra는 H 또는 아세틸이다.
  110. 제109항에 있어서, 각각의 경우의 X가 T인 방법.
  111. 제88항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 서열이 서열번호: 13, 27-29, 34-36, 또는 59 중 어느 하나로부터 선택되고, 여기서 각각의 경우의 X가 T인 방법.
  112. II형 글리코겐 축적병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 각각의 경우에 X가
    Figure pct00283
    (U) 또는
    Figure pct00284
    (T)로부터 독립적으로 선택된 것인 유효량의, 화학식 (XXII a) 내지 (XXII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 상기 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 II형 글리코겐 축적병을 치료하는 방법.
  113. 제112항에 있어서, 각각의 X가 T인 방법.
  114. II형 글리코겐 축적병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 화학식 (XXIII a) 내지 (XXIII i) 중 어느 하나의 안티센스 올리고머 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 상기 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 II형 글리코겐 축적병을 치료하는 방법.
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