CN109414511A - 用于治疗与酸性α-葡糖苷酶基因相关的疾病的反义寡聚物及其使用方法 - Google Patents

用于治疗与酸性α-葡糖苷酶基因相关的疾病的反义寡聚物及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本公开内容涉及修饰的反义寡核苷酸。本文所述的核苷酸具有10至40个核碱基，并且包括与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1内的靶区域互补的靶向序列。与靶向序列相比，靶区域包括至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶向序列中不具有互补的核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶区域的内部。

Description

用于治疗与酸性α-葡糖苷酶基因相关的疾病的反义寡聚物及 其使用方法
发明领域
本发明涉及用于诱导外显子包含（exon inclusion）作为用于II型糖原贮积病（GSD-II）（也称为庞皮病（Pompe disease）、糖原病II、酸性麦芽糖酶缺乏症（AMD）、酸性α-葡糖苷酶缺乏症和溶酶体α-葡糖苷酶缺乏症）的治疗的反义寡聚物以及相关组合物和方法，并且更具体地涉及诱导外显子2的包含且由此恢复由GAA基因编码的酶促活性的酸性α-葡糖苷酶(GAA)蛋白的水平。
相关领域描述
可变剪接通过从单个基因产生多个蛋白质增加了人基因组的编码潜力。不适当的可变剪接也与越来越多的人疾病相关。
GSD-II是由称为酸性α-葡糖苷酶(GAA)的酶缺乏引起的遗传性常染色体隐性溶酶体贮积症。GAA在体内的作用是分解糖原。GAA活性水平降低或缺失导致受影响组织中的糖原积累，所述组织包括心脏、骨骼肌（包括涉及呼吸的那些）、肝和神经系统。这种糖原积累被认为在患有GSD-II的个体中引起进行性肌无力和呼吸功能不全。GSD-II可以在婴儿、幼儿或成人中发生，并且预后根据发作时间和症状的严重性而变化。临床上，GSD-II可以显示出广泛且连续的严重性谱，范围从重度（婴儿）到较轻的迟发性成人形式。患者最终由于呼吸功能不全而死亡。在疾病的严重性和残留的酸性α-葡糖苷酶活性之间存在良好的相关性，该活性在迟发型中为正常的10-20%，并且在疾病的早发形式中小于2%。据估计，GSD-II影响全世界大约5,000至10,000人。
与疾病的成年发作形式相关的最常见突变是IVS1-13T>G。在超过三分之二的成年发作GSD-II患者中发现，这种突变可以赋予杂合子个体中的选择优势，或者是非常古老的突变。具有这种突变的成年发作GSD-II个体的广泛种族变异反对共同建立者。
GAA基因由跨越约20kb的20个外显子组成。3.4kb mRNA编码分子量大约105kD的蛋白质。IVS1-13T>G突变导致外显子2（577个碱基）的丧失，其含有起始AUG密码子。
用于GSD-II的治疗已涉及药物治疗策略、饮食操纵和骨髓移植，但没有显著成功。近年来，酶替代疗法（ERT）已对于GSD-II患者提供了新的希望。例如，Myozyme®，一种重组GAA蛋白药物，于2006年在美国和欧洲均获得批准用于在患有GSD-II疾病的患者中使用。Myozyme®依赖于GAA蛋白表面上的甘露糖-6-磷酸（M6P）用于递送至溶酶体。
主要用于RNA下调的反义技术最近已适于改变剪接过程。处理许多基因的初级基因转录物（前mRNA）涉及内含子的去除和外显子的精确剪接，其中供体剪接位点与受体剪接位点连接。剪接是精确的过程，涉及供体和受体剪接位点的协调识别，以及分支点（受体剪接位点的上游）与阳性外显子剪接增强子（主要位于外显子内）和阴性剪接基序（剪接沉默子主要位于内含子中）的平衡。
可以改变GAA前mRNA剪接的有效试剂很可能在治疗上可用于GSD-II的改善治疗。
发明概述
在一个方面，本发明的特征在于10至40个核碱基的修饰的反义寡核苷酸。修饰的反义寡核苷酸包括与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA内的靶区域（例如，在GAA的内含子1内，例如SEQ ID NO:1内的靶区域）互补的靶向序列，其中与靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在靶向序列中不具有互补的核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在靶区域的内部。靶向区域和靶向序列之间的相互作用可以是100%互补性，但也可以包括较低的互补性阈值（例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%）。靶区域可以包括SEQ IDNO: 2或SEQ ID NO: 3中的至少一个。任选地，靶区域可以包括SEQ ID NO: 4。任选地，靶区域可以包括SEQ ID NO: 5。修饰的反义区域寡核苷酸可以在靶向序列与靶区域结合后促进GAA mRNA中的外显子2保留。与靶向序列相比，靶区域可以包括一至三个另外的核碱基。然而，在靶区域中也可以存在多于三个另外的核碱基。此外，另外的核碱基可以沿靶区域彼此分开。与SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，修饰的反义寡核苷酸可以诱导至少两倍的GAA酶活性。与SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，修饰的反义寡核苷酸可以诱导至少三倍或至少四倍的GAA酶活性。
在另一个方面，本发明的特征在于式(I)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
每个Y独立地选自O和–NR4，其中每个R4独立地选自H、C1-C6烷基、芳烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2和G，其中R5选自H和C1-C6烷基，并且n是1至5的整数；
T选自OH和下式的部分：
其中：
A选自-OH、-N(R7)2和R1，其中每个R7独立地选自H和C1-C6烷基，和
R6选自OH、–N(R9)CH2C(O)NH2和下式的部分：
其中：
R9选自H和C1-C6烷基；和
R10选自G、-C(O)-R11OH、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、 -C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2，其中：
m是1至5的整数，
R11具有式-(O-烷基)y-，其中y是3至10的整数，和
每个y烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R12选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地选自：
–N(R13)2，其中每个R13独立地选自H和C1-C6烷基；
式(II)的部分：
其中：
R15选自H、G、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2，其中：
R18选自H和C1-C6烷基；和
q是1至5的整数，和
每个R17独立地选自H和甲基；和
式(III)的部分：
其中：
R19选自H、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2和G，其中：
R22选自H和C1-C6烷基；和
r是1至5的整数，和
R20选自H和C1-C6烷基；或
R19和R20连同它们与之附接的氮原子一起形成具有5-7个环原子的杂环或杂芳基环，并且任选地含有选自氧、氮和硫的另外的杂原子；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)-R23、-C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2和下式的部分：
其中，
R23具有式-(O-烷基)v-OH，其中v是3至10的整数，并且每个v烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R24选自H和C1-C6烷基；
s是1至5的整数；
L选自–C(O)(CH2)6C(O)–和-C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)–；和
每个R25具有式–(CH2)2OC(O)N(R26)2，其中每个R26具有式–(CH2)6NHC(=NH)NH2，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中G可以出现一次或不存在。
在某些实施方案中，每个R1是-N(CH3)2。在一些实施方案中，约50-90%的R1基团是二甲基氨基（即-N(CH3)2）。在某些实施方案中，约66%的R1基团是二甲基氨基。
在一些非限制性实施方案中，靶向序列选自表2A-2C的序列，其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。在一些非限制性实施方案中，每个R1是-N(CH3)2，并且靶向序列选自表2A-2C的序列，其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
在本发明的一些实施方案中，R1可以选自：
在某些实施方案中，T选自：
Y在每次出现时是O。在一些实施方案中，R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
在某些实施方案中，T具有下式：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。
在某些实施方案中，T具有下式：
并且Y在每次出现时是O。
在某些实施方案中，T具有下式：，Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是H。
在另一个方面，本发明的特征在于式(VII)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自：
每个R1是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中T是或R2是G。
在一些实施方案中，本发明的反义寡聚物的靶向序列，包括例如式(I)和(IV)的反义寡聚物的一些实施方案，选自表2A-2C中概述的序列，如本文所述且如下：
I.
a) SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
b) SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
c) SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
d) SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
e)SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
f)SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
g)SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
h)SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
i)SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j)SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k)SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l)SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m)SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n)SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o)SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p)SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q)SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r)SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s) SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t)SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u)SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v)SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w)SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x)SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y)SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z)SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa)SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb)SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc)SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd)SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
ee)SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff)SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg)SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh)SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii)SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj)SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk)SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ll)SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm) SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn)SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo)SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp)SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq)SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
rr)SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss)SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt)SEQ ID NO: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
II.
a)SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b)SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c)SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d)SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e)SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f)SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g)SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h)SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i)SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j)SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k)SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l) SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m)SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n)SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o)SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p)SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q)SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；和
III.
a) SEQ ID NO: 76 (GCC AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X)，其中Z是23；
b)SEQ ID NO: 77 (CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C)，其中Z是23；
c) SEQ ID NO: 78 (GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G)，其中Z是23；
d)SEQ ID NO: 79 (AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是23；
e)SEQ ID NO: 80 (ACX CAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C)，其中Z是23；
f)SEQ ID NO: 81 (GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX)，其中Z是23；
g)SEQ ID NO: 82 (GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是18，
h)SEQ ID NO: 83 (GAG AGG GCC AGA AGG AAG GG)，其中Z是18，
i)SEQ ID NO: 84 (XXX GCC AXG XXA CCC AGG CX)，其中Z是18，
j)SEQ ID NO: 85 (GCG CAC CCX CXG CCC XGG CC)，其中Z是18，和
k)SEQ ID NO: 86 (GGC CCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36和59。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29和34-36。在某些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82中任何一个中的X的每次出现是T。
在一些实施方案中，包括例如式(I)和(IV)的反义寡聚物的一些实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补。在一些实施方案中，靶向序列与人GAA基因的外显子2或内含子2中的靶区域互补。在各种实施方案中，包括例如式(I)和(IV)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补，其中与靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在靶向序列中不具有互补核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在靶区域的内部。在某些实施方案中，靶向序列包含选自SEQ ID NO:13-86的序列，如本文表2A-2C中所示。在某些实施方案中，靶向序列包含选自表2A和2B的序列。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。此外，并且关于本文表2A-2C（或表2B和2C）中概述的序列，在某些实施方案中，选择具有100%互补性的序列，并且去除一个或多个核碱基（或可替代地伴随一个或多个缺失的核碱基合成），使得所得到的序列在靶区域中具有与其天然互补体相比一个或多个缺失的核碱基。除了其中去除一个或多个核碱基的部分之外，考虑剩余部分是100%互补的。然而，可能存在降低水平的互补性也在本发明的范围内。
在一些实施方案中，SEQ ID NO:13-86中的至少一个X是T。在一些实施方案中，SEQID NO: 13-86中的至少一个X是U。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13-86中的每个X是T。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13-86中的每个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是U。
参考下述详细描述和附图，本发明的这些和其它方面将变得显而易见。本文公开的所有参考文献都在此整体引入作为参考，如同每个参考文献个别地并入一样。
附图简述
图1和2是描绘在筛选期间对于各种PMO化合物发现的GAA酶活性（酶测定）的条形图。Y轴表示相对于未反应的对照，GAA酶活性中的倍数增加。“N”指在每个研究中评估的重复数。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。各个化合物以5 μM和0.2 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。
图3和4是描绘对于各种PMO化合物发现的酶测定剂量响应的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM、1 μM、0.2 μM和0.4 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。
图5-8是描绘对于各种PMO化合物发现的酶测定剂量响应的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM、1 μM、0.2 μM和0.04 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。
图9-14是描绘对于各种PMO化合物发现的酶测定剂量响应的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。
图15a和15b是描绘对于各种PPMO化合物发现的酶测定剂量响应的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM、1.6 μM和0.5 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。
图16是描绘对于各种PMO化合物发现的酶测定剂量响应的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。
图17和18是描绘对于各种PPMO化合物发现的GAA酶活性（酶测定）的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM、1.6 μM和0.5 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。“N=9”指在每个研究中评估的重复数。数据汇总表显示以μM计的EC50。
图19是描述关于各种PPMO化合物的EC50（以 μM计）的数据汇总表。
图20-22是描绘对于各种PPMO化合物发现的GAA酶活性（酶测定）的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM、1.6 μM和0.5 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。数据汇总表显示以μM计的EC50。
图23是描述关于各种PPMO化合物的EC50（以 μM计）的数据汇总表。
图24-26是描绘对于各种PPMO化合物发现的GAA酶活性（酶测定）的条形图。Y轴表示相对于未处理的对照，GAA酶活性中的倍数增加。各个化合物以5 μM、1.6 μM和0.5 μM给药。水平散列线表示未处理的细胞中的GAA活性水平。数据汇总表显示以μM计的EC50。
发明详述
I. 定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与由本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管描述了优选的方法和材料，但与本文描述的那些类似或等价的任何方法和材料都可以用于本发明的主题的实践或测试中。出于本发明的目的，下文限定了下述术语。
冠词“一个”和“一种”在本文中用于指该冠词的一个/种或多于一个/种（即至少一个/种）语法对象。例如，“要素”意指一种要素或多于一种要素。
“约”意指数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度与参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度改变多达30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1%。
“编码序列”意指促成编码基因的多肽产物的任何核酸序列。相比之下，术语“非编码序列”指不直接促成编码基因的多肽产物的任何核酸序列。
贯穿本发明，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”理解为暗示包括所述步骤或元件或者步骤或元件组，但不排除任何其它步骤或要素或者步骤或要素组。
“由……组成”意欲包括且不限于短语“由……组成”之后的任何内容。因此，短语“由……组成”指示所列要素是必需的或强制性的，并且不存在其它要素。“基本上由……组成”意欲包括在该短语之后列出的任何要素，并且限于不干扰或促成本发明中对于所列要素指定的活性或作用的其它要素。因此，短语“基本上由……组成”指示所列要素是必需的或强制性的，但其它要素是任选的并且可以存在或不存在，取决于它们是否实质上影响所列要素的活性或作用。
如本文使用的，术语“接触细胞”，“引入”或“递送”包括通过本领域常规的方法将本发明的寡聚物递送到细胞内，所述方法例如转染（例如脂质体、磷酸钙、聚乙烯亚胺）、电穿孔（例如核转染）、显微注射）。
如本文使用的，术语“烷基”预期包括线性（即，非分支或无环的）、分支、环状或多环非芳族烃基，其任选被一个或多个官能团取代。除非另有说明，否则“烷基”基团含有1至8个，且优选1至6个碳原子。C1-C6烷基预期包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基。低级烷基指含有1至6个碳原子的烷基基团。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、戊基、异戊基、叔戊基、环戊基、己基、异己基、环己基等。烷基可以是取代的或未取代的。示例性取代的烷基包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、羟甲基、2-羟乙基、3-羟丙基、苄基、取代的苄基、苯乙基、取代的苯乙基等。
如本文使用的，术语“烷氧基”意指烷基的子集，其中如上定义的烷基具有通过氧桥附接的指定数目的碳原子。例如，“烷氧基”指基团-O-烷基，其中所述烷基基团含有1至8个碳原子的线性、分支、环状构型。“烷氧基”的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基、正丁氧基、仲戊氧基等等。
如本文使用的，术语“芳基”单独使用或作为较大部分的一部分使用，如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基-烷基”中，指具有六至十四个环原子的芳环基团，例如苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。“芳基”环可以含有一个或多个取代基。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。“芳基”还包括稠合多环芳环系统，其中芳环与一个或多个环稠合。有用的芳基环基团的非限制性实例包括苯基、羟基苯基、卤代苯基、烷氧基苯基、二烷氧基苯基、三烷氧基苯基、亚烷基二氧基苯基、萘基、菲基、蒽基、菲并等等，以及1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。如它在本文中使用的，在术语“芳基”的范围内还包括的是其中芳环与一个或多个非芳环稠合的基团，例如在茚满基、菲啶基或四氢萘基中，其中原子团或附接点在芳环上。
术语“酰基”意指C(O)R基团（其中R表示如上定义的H、烷基或芳基）。酰基的实例包括甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、苯乙酰基和类似基团。
如本文使用的，术语“同源物”意指通过连续添加相同的化学基团而有规律地不同的化合物。例如，化合物的同源物可以通过添加一个或多个-CH2-基团、氨基酸残基、核苷酸或核苷酸类似物而不同。
术语“细胞穿透肽”(CPP)或“增强细胞摄取的肽部分”可互换使用，并且指阳离子细胞穿透肽，也称为“转运肽”、“载体肽”或“肽转导结构域”。如本文所示，所述肽具有在给定细胞培养群体的至少约30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%的细胞内诱导细胞穿透的能力，并且在全身施用后允许体内多个组织内的大分子易位。在一些实施方案中，CPP具有式-[(C(O)CHR'NH)m]R''，其中R'是天然存在的氨基酸或者其一碳或二碳同源物的侧链，R''选自氢或酰基，并且m是直到50的整数。CPP也可以具有式-[(C(O)CHR'NH)m]Ra，其中R'是天然存在的氨基酸或者其一碳或二碳同源物的侧链，并且其中Ra选自氢、酰基、苯甲酰基或硬脂酰基。任何结构的CPP都可以经由“接头”连接到反义寡聚物的3'或5'末端，所述接头例如-C(O)(CH2)5NH-、-C(O)(CH2)2NH-、-C(O)(CH2)2NH-C(O)(CH2)5NH-或-C(O)CH2NH-。另外的CPP是本领域众所周知的，并且例如在美国申请号2010/0016215中公开，所述美国申请整体引入作为参考。在其它实施方案中，m是选自1至50的整数，其中当m是1时，该部分是单个氨基酸或其衍生物。
如本文使用的，“氨基酸”指由碳原子组成的化合物，伯氨基、羧酸基、侧链和氢原子与所述碳原子附接。例如，术语“氨基酸”包括但不限于甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸和精氨酸。另外，如本文使用的，“氨基酸”还包括氨基酸的衍生物，例如酯、酰胺和盐，以及其它衍生物，包括在代谢为活性形式时具有药理性质的衍生物。相应地，术语“氨基酸”应理解为包括天然存在的和非天然存在的氨基酸。
如本文使用的，“电子对”指未与其它原子键合或共享的价电子对。
如本文使用的，“同源性”指相同或构成保守取代的氨基酸的百分数。可以使用序列比较程序如GAP（Deveraux等人，1984, Nucleic Acids Research 12, 387-395）确定同源性。以这种方式，可以通过将间隙插入比对内来比较与本文引用的那些相似或基本上不同长度的序列，此类间隙例如通过由GAP使用的比较算法确定。
“分离的”意指基本上或基本不含在其天然状态下通常伴随其的组分的物质。例如，如本文使用的，“分离的多核苷酸”、“分离的寡核苷酸”或“分离的寡聚物”可以指已从天然存在状态侧接其的序列中纯化或取出的多核苷酸，例如，从与基因组中的片段相邻的序列中取出的DNA片段。当它与细胞有关时，术语“分离”指从来源主体（例如，具有多核苷酸重复疾病的主体）中纯化细胞（例如成纤维细胞、成淋巴细胞）。在mRNA或蛋白质的上下文中，“分离”指从来源例如细胞中回收mRNA或蛋白质。
术语“调节”包括“增加”或“降低”一个或多个可量化参数，任选地通过限定的和/或统计学显著的量。“增加(increase)”或“增加(increasing)”、“增强(enhance)”或“增强(enhancing)”、或者“刺激(stimulate)”或“刺激(stimulating)”一般指相对于由无反义化合物或对照化合物引起的应答，一种或多种反义化合物或组合物在细胞或主体中产生或引起更大生理应答的能力（即，下游效应）。相关的生理或细胞应答（在体内或体外）对于本领域技术人员而言是显而易见的，并且可以包括在GAA编码前mRNA中的外显子2包含的增加，或者在细胞、组织或有此需要的主体中功能性GAA酶的表达的增加。“增加的”或“增强的”量通常是“统计上显著的”量，并且可以包括其为通过无反义化合物（不存在试剂）或对照化合物产生的量的1.1、1.2、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50或更多倍（例如，500、1000次）的增加，包括1和超过1之间的所有整数和小数点（例如，1.5、1.6、1.7、1.8）。术语“减少”或“抑制”一般可以涉及一种或多种反义化合物或组合物“降低”相关生理或细胞应答的能力，例如本文所述的疾病或状况的症状，如根据诊断领域的常规技术测量的。相关的生理或细胞应答（在体内或体外）对于本领域技术人员而言是显而易见的，并且可以包括糖原贮积病例如庞皮病的症状或病理状况中的减少，例如，一种或多种组织中的糖原积累的降低。与通过无反义化合物或对照组合物产生的应答相比，应答中的“降低”可以是“统计学上显著的”，并且可以包括1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%降低，包括其间的所有整数。
如本文使用的，“反义寡核苷酸”、“反义寡聚物”或“寡核苷酸”指核苷酸或核苷酸类似物的线性序列，其允许核碱基通过沃森-克里克碱基配对与RNA中的靶序列杂交，以在靶序列内形成寡聚物:RNA异源双链体。术语“反义寡核苷酸”、“修饰的反义寡核苷酸”、“反义寡聚物”、“寡聚物”和“化合物”可互换地用于指寡聚物。环状亚基可以基于核糖或另一种戊糖，或者在某些实施方案中，基于吗啉代基团（参见下文的吗啉代寡聚物的描述）。还考虑的是肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、三环-DNA寡聚物、三环-硫代磷酸酯寡聚物和2'-O-甲基寡聚物、以及本领域已知的其它反义试剂。
包括的是非天然存在的寡聚物或“寡核苷酸类似物”，包括具有以下的寡聚物：(i)修饰的主链结构，例如，除天然存在的寡核苷酸和多核苷酸中发现的标准磷酸二酯键外的主链，和/或(ii)修饰的糖部分，例如吗啉代部分而不是核糖或脱氧核糖部分。寡聚物类似物支持能够通过沃森-克里克碱基配对与标准多核苷酸碱基形成氢键的碱基，其中类似物主链以这样的方式呈现碱基，以允许在寡聚物类似物分子和标准多核苷酸（例如，单链RNA或单链DNA）中的碱基之间以序列特异性方式的此类氢键。优选的类似物是具有基本上不带电的含磷主链的那些。
“核酸酶抗性”寡聚物指其主链以非杂交或杂交形式对核酸酶切割基本上抗性的寡聚物；通过体内常见的细胞外和细胞内核酸酶（例如，通过核酸外切酶如3'-核酸外切酶、核酸内切酶、RNA酶H）；即，寡聚物在体内寡聚物暴露于其的正常核酸酶条件下显示很少的核酸酶切割或未显示核酸酶切割。“核酸酶抗性异源双链体”指通过反义寡聚物与其互补靶结合形成的异源双链体，使得异源双链体基本上抵抗通过细胞内和细胞外核酸酶的体内降解，所述核酸酶能够切割双链RNA/RNA或RNA/DNA复合物。“异源双链体”指反义寡聚物与靶RNA的互补部分之间的双链体。
如本文使用的，“核碱基”(Nu)、“碱基配对部分”或“碱基”可互换地用于指天然DNA或RNA中发现的嘌呤或嘧啶碱基（尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶和鸟嘌呤），以及天然存在的嘌呤和嘧啶的类似物，其赋予改善的性质，例如与寡聚物的结合亲和力。示例性的类似物包括次黄嘌呤（核苷肌苷的碱基组分）；2,6-二氨基嘌呤；5-甲基胞嘧啶；C5-丙炔基修饰的嘧啶；9-(氨基乙氧基)吩噁嗪（G夹(G-clamp)）等等。
碱基配对部分的进一步实例包括但不限于其各自的氨基被酰基保护基团保护的尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤和次黄嘌呤，2-氟尿嘧啶、2-氟胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、2,6-二氨基嘌呤、氮杂胞嘧啶、嘧啶类似物如假异胞嘧啶和假尿嘧啶，以及其它修饰的核碱基如8-取代的嘌呤、黄嘌呤或次黄嘌呤（后两者是天然降解产物）。还考虑了Chiu和Rana，RNA, 2003, 9, 1034-1048，Limbach等人Nucleic Acids Research, 1994,22, 2183-2196以及Revankar和Rao，Comprehensive Natural Products Chemistry，第7卷，313中公开的修饰的核碱基。
碱基配对部分的进一步实例包括但不限于其中已加入一个或多个苯环的扩展尺寸的核碱基。Glen Research目录(www.glenresearch.com)；Krueger AT等人，Acc. Chem.Res., 2007, 40, 141-150；Kool, ET, Acc. Chem. Res., 2002, 35, 936-943；BennerS.A.等人，Nat. Rev. Genet., 2005, 6, 553-543；Romesberg, F.E.等人，Curr. Opin.Chem. Biol., 2003, 7, 723-733；Hirao, I., Curr. Opin. Chem. Biol., 2006, 10,622-627中描述的核碱基替代考虑为可用于合成本文所述的寡聚物。扩展大小的核碱基的实例显示于下文：
与核糖、糖类似物或吗啉代共价连接的核碱基包含核苷。“核苷酸”由核苷连同一个磷酸基团组成。磷酸基团将相邻的核苷酸彼此共价连接以形成寡聚物。
如果寡聚物在生理条件下与靶杂交，其Tm基本上大于40℃或45℃，优选至少50℃，且通常60℃-80℃或更高，则寡聚物与靶多核苷酸“特异性杂交”。此类杂交优选对应于严格杂交条件。在给定的离子强度和pH下，Tm是在其下50%的靶序列与互补多核苷酸杂交的温度。此类杂交可以伴随反义寡聚物与靶序列的“接近”或“基本”互补性以及确切互补性发生。
如本文使用的，“足够长度”指与GAA内含子1、外显子2或内含子2的区域，或跨越前述任何的区域中的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、至少23、至少24、至少25、至少26、至少27、至少28、至少29、或至少30或更多，例如8-40和例如15-40个邻接核碱基互补的反义共聚物或其靶向序列。具有足够长度的反义寡聚物具有至少最少数目的核苷酸，以能够与突变体RNA中的GAA前mRNA重复区域特异性杂交。优选地，具有足够长度的寡聚物为长度8至30个核苷酸。更优选地，具有足够长度的寡聚物为长度9至27个核苷酸。甚至更优选地，具有足够长度的寡聚物为长度15至40个核苷酸。
如本文使用的，术语“序列同一性”或例如包含“与之50%相同的序列”指序列在比较窗口上在逐个核苷酸的基础上或逐个氨基酸的基础上相同的程度。因此，可以通过以下来计算“序列同一性百分比”：在比较窗口上比较两个最佳比对的序列，确定在其处相同的核酸碱基（例如，A、T、C、G、I）或相同的氨基酸残基（例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met）在两个序列出现的位置数目，以产生匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗口中的位置总数目（即窗口大小），并将结果乘以100以产生序列同一性百分比。用于比对比较窗口的序列的最佳比对可以通过算法的计算机化实现（Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0,Genetics Computer Group, 575 Science Drive Madison, Wis., USA中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA或者通过检查来进行，并且通过所选择的各种方法中的任一种生成最佳比对（即，导致在比较窗口上的最高百分比同源性）。还可以参考BLAST程序家族，如例如由Altschul等人，Nucl. Acids Res. 25:3389, 1997公开的。
“主体”或“有此需要的主体”包括哺乳动物主体，例如人主体。示例性哺乳动物主体患有GSD-II（或庞皮病）或处于具有患GSD-II（或庞皮病）的风险中。如本文使用的，术语“GSD-II”指II型糖原贮积病（GSD-II或庞皮病），一种特征通常在于受影响个体中GAA蛋白的表达不足的人常染色体隐性疾病。在某些实施方案中，主体在一种或多种组织（例如心脏、骨骼肌、肝和神经系统组织）中具有减少的GAA蛋白的表达和/或活性。在一些实施方案中，主体在一种或多种组织（例如心脏、骨骼肌、肝和神经系统组织）中具有增加的糖原积累。在具体实施方案中，主体具有IVS1-13T>G突变或导致功能性GAA蛋白的表达减少的其它突变（参见例如，Zampieri等人，European J. Human Genetics. 19:422-431, 2011）。
如本文使用的，术语“靶”指RNA区，并且具体地，指由GAA基因鉴定的区域。在一个特定实施方案中，靶是编码GAA的前mRNA的内含子1内的区域（例如，SEQ ID NO: 1），其负责抑制促进外显子2包含的信号。在另一个实施方案中，靶区域是GAA外显子2的mRNA的区域。在一个进一步的实施方案中，靶包含编码GAA的前mRNA的内含子1的一个或多个不连续亚区。这些亚区包括但不限于由SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3限定的序列。
术语“靶序列”指寡聚物类似物针对的靶RNA的一部分，即寡聚物类似物通过互补序列的沃森-克里克碱基配对与之杂交的序列。
术语“靶向序列”是寡聚物或寡聚物类似物中与RNA基因组中的“靶序列”互补（意味着，另外，基本上互补）的序列。反义寡聚物的完整序列或仅一部分可以与靶序列互补。例如，在具有20-30个碱基的寡聚物中，约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个可以是与靶区域互补的靶向序列。通常，靶向序列由寡聚物中的邻接碱基形成，但也可以可替代地由非邻接序列形成，当放在一起时，所述非邻接序列例如从寡聚物的相对末端构成跨越靶序列的序列。
“靶向序列”可以与靶序列具有“接近”或“基本”互补性，并且仍然起到本发明目的的作用，即，仍然是“互补的”。优选地，本发明中采用的寡聚物类似物化合物与靶序列具有10个核苷酸中的至多一个错配，并且优选20个中的至多一个错配。可替代地，所采用的反义寡聚物具有至少90%的序列同源性，且优选至少95%的序列同源性，其中示例性的靶向序列如本文指定的。
如本文使用的，术语“TEG”或“三甘醇尾”指与例如在其3'或5'末端处寡核苷酸缀合的三甘醇部分。例如，在一些实施方案中，“TEG”包括其中例如式(I)、(VI)或(VII)的化合物的T具有下式：
。
如本文使用的，术语“定量(quantifying)”、“定量(quantification)”或其它相关词语指确定核酸、多核苷酸、寡聚物、肽、多肽或蛋白质的单位体积中的数量、质量或浓度。
如本文使用的，主体（例如哺乳动物，例如人）或细胞的“治疗”是改变个体或细胞的自然进程的尝试中使用的任何类型的干预。治疗包括但不限于药物组合物的施用，并且可以预防性地或者在病理事件开始后或与致病因子接触后执行。还包括的是“预防性”治疗，其可以涉及减少待治疗的疾病或状况的进展速率，延迟该疾病或状况的发作，或降低其发作的严重性。“治疗”或“预防”不一定指示疾病或状况或其相关症状的完全根除、治愈或预防。
II. 用于GAA剪接调节的序列
某些实施方案涉及相对于细胞中外显子-2缺失的GAA mRNA，用于增强含有外显子2的GAA编码mRNA的水平的方法，其包括使细胞与具有足够长度和互补性的反义寡聚物接触，以与GAA基因内的区域特异性杂交，使得相对于细胞中外显子-2缺失的GAA mRNA，含有外显子2的GAA mRNA的水平增强。在一些实施方案中，细胞在主体中，并且该方法包括向主体施用反义寡聚物。
反义寡聚物可以设计为阻断或抑制或调节mRNA的翻译，或者抑制或调节前mRNA剪接加工，或诱导靶向mRNA的降解，并且可以被说成“针对”或“靶向”它与之杂交的靶序列。在某些实施方案中，靶序列包括包含预加工mRNA的3'或5'剪接位点的区域、分支点或涉及剪接调节的其它序列。靶序列可以在外显子内或在内含子内或跨越内含子/外显子连接。
在某些实施方案中，反义寡聚物与靶RNA（即，剪接位点选择对于其进行调节的RNA）具有足够的序列互补性，以有效方式阻断靶RNA（例如前mRNA）的区域。在示例性实施方案中，GAA前mRNA的此类阻断作用于调节剪接，通过掩蔽关于天然蛋白质的结合位点（否则其将调节剪接），和/或通过改变靶向RNA的结构。在一些实施方案中，靶RNA是靶前mRNA（例如，GAA基因前mRNA）。
与靶RNA序列具有足够序列互补性以调节靶RNA剪接的反义寡聚物意指反义试剂具有的序列足以触发关于天然蛋白质的结合位点（否则其将调节剪接）的掩蔽，和/或改变靶向RNA的三维结构。同样地，具有与靶RNA序列互补的足够序列以调节靶RNA剪接的寡聚物试剂意指寡聚物试剂具有的序列足以触发关于天然蛋白质的结合位点（否则其将调节剪接）的掩蔽，和/或改变靶向RNA的三维结构。
在某些实施方案中，反义寡聚物具有足够的长度，以及与人GAA前mRNA的内含子1、人GAA前mRNA的外显子2、或人GAA前mRNA的内含子2中的序列的互补性。还包括的是反义寡聚物，其与跨越人GAA前mRNA的内含子1/外显子2的区域互补，或跨越人GAA前mRNA的外显子2/内含子2的区域互补。关于人GAA基因的内含子1 (SEQ ID NO: 1)、外显子2 (SEQ ID NO:4)和内含子2 (SEQ ID NO: 5)序列显示于下表1中（接近 SEQ ID NO: 1的3'末端突出显示的T/G是上述IVS1-13T>G突变；在该位置处的核苷酸是T或G）。
在某些实施方案中，反义靶向序列被设计为与表1中列出的一种或多种靶序列的区域杂交。选择的反义靶向序列可以制备得更短，例如约12个碱基，或更长，例如约40个碱基，并且包括少量错配，只要该序列足够互补以在与靶序列杂交时实现剪接调节，并且任选地与RNA形成具有45℃或更高的Tm的异源双链体。
在某些实施方案中，靶序列和反义靶向序列之间的互补性程度足以形成稳定的双链体。反义寡聚物与靶RNA序列的互补性区域可以短至8-11个碱基，但可以是12-15个碱基或更多，例如10-40个碱基、12-30个碱基、12-25个碱基、15-25个碱基、12-20个碱基或15-20个碱基，包括这些范围之间的所有整数。约14-15个碱基的反义寡聚物一般足够长以具有独特的互补序列。在某些实施方案中，可能需要最小长度的互补碱基以实现必要的结合Tm，如本文所讨论的。
在某些实施方案中，长达40个碱基的寡聚物可以是合适的，其中至少最小数目的碱基，例如10-12个碱基，与靶序列互补。在一些实施方案中，在小于约30个碱基的寡聚物长度下优化细胞中的促进或活性摄取。对于本文进一步描述的PMO寡聚物，结合稳定性和摄取的最佳平衡一般在18-25个碱基的长度下出现。本发明中包括的是反义寡聚物（例如，PMO、PMO-X、PNA、LNA、2'-OMe），其由约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个碱基组成，其中至少约6、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个邻接或非邻接碱基与表1的靶序列（例如，SEQ ID NO: 1-5，跨越SEQ IDNO: 1/4或SEQ ID NO: 4/5的序列）互补。
反义寡聚物通常包含与人GAA基因的前mRNA序列的内含子1、外显子2或内含子2内或其附近的序列或区域充分互补的碱基序列。在某些实施方案中，寡聚物与SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3互补。理想地，反义寡聚物能够有效调节GAA前mRNA的异常剪接，且从而增加活性GAA蛋白的表达。当寡聚物化合物具有被哺乳动物细胞主动吸收的能力时，该要求任选得到满足，并且一旦吸收，与靶mRNA形成稳定的双链体（或异源双链体），任选地具有大于约40℃或45℃的Tm。
在某些实施方案中，反义寡聚物可以与靶序列100%互补，或者可以包括错配，例如，以适应变体，只要在寡聚物和靶序列之间形成的异源双链体足够稳定，以经得住细胞核酸酶的作用和可能在体内发生的其它降解模式。因此，某些寡聚物可以具有基本互补性，意指，约或至少约70%的序列互补性，例如寡聚物和靶序列之间70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列互补性。本文讨论了较不易被核酸酶切割的寡聚物主链。如果存在，则错配通常针对杂交双链体的末端区域的不稳定性比在中间的不稳定性低。根据众所周知的双链体稳定性原理，允许的错配数目将取决于寡聚物的长度、双链体中G:C碱基对的百分比、以及双链体中错配的位置。尽管此类反义寡聚物不一定与v靶序列100%互补，但它有效稳定且特异性地结合靶序列，使得靶前RNA的剪接得到调节。
在寡聚物和靶序列之间形成的双链体的稳定性是结合Tm和双链体对细胞酶促切割的易感性的函数。关于互补序列RNA的寡聚物的Tm可以通过常规方法测量，所述方法例如由Hames等人，Nucleic Acid Hybridization, IRL Press, 1985，第107-108页描述的，或如Miyada C. G.和Wallace R. B.，1987, Oligomer Hybridization Techniques,Methods Enzymol.第154卷第94-107页中描述的那些方法。在某些实施方案中，反义寡聚物可以具有大于体温，且优选大于约45℃或50℃的相对于互补序列RNA的结合Tm。还包括在60-80℃或更高的范围内的Tm。根据众所周知的原理，通过增加双链体中C:G配对碱基的比率，和/或通过增加异源双链体的长度（以碱基对计），可以增加寡聚物相对于基于互补性的RNA杂合体的Tm。同时，为了优化细胞摄取，限制寡聚物的大小可能是有利的。为此，对于高Tm值，在25个碱基或更短的长度下显示高Tm（45-50℃或更高）的化合物通常优于需要大于25个碱基的那些化合物。
表2A、2B和2C显示了与人GAA基因的前mRNA序列互补的示例性靶向序列（以5'-至3'方向）。
因此，某些反义寡聚物包含以下、由以下组成或基本上由以下组成：表2A-2C中的序列或者其变体或邻接或非邻接部分组成。例如，某些反义寡聚物包含表2A-2C中概述的任何SEQ ID NO的约或至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27个邻接或非邻接核苷酸。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。对于非邻接部分，可以缺失间插核苷酸。变体的另外实例包括具有在表2A-C中概述的任何SEQ ID NO的整个长度上约或至少约70%序列同一性或同源性的寡聚物，例如70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性或同源性。在一些实施方案中，包含此类变体序列、由此类变体序列组成、或基本上由此类变体序列组成的任何反义寡聚物或化合物抑制GAA前mRNA中的ISS和/或ESS元件。在一些实施方案中，具有靶向序列的反义寡聚物或化合物包含抑制GAA前mRNA中的ISS和/或ESS元件的这种变体序列，由这种变体序列组成或基本上由这种变体序列组成。在一些实施方案中，根据本文所述的至少一个实施例或方法，具有包含此类变体序列、由此类变体序列组成、或基本上由此类变体序列组成的靶向序列的反义寡聚物或化合物增加、增强或促进成熟GAA mRNA中的外显子2保留，任选地，相对于对照至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%或更多。在一些实施方案中，根据本文所述的至少一个实施例或方法，具有包含此类变体序列、由此类变体序列组成、或基本上由此类变体序列组成的靶向序列的反义寡聚物或化合物增加、增强或促进细胞中的GAA蛋白表达，任选地，相对于对照至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%或更多。在一些实施方案中，根据本文所述的至少一个实施例或方法，包含此类变体序列、由此类变体序列组成、或基本上由此类变体序列组成的反义寡聚物或化合物增加、增强或促进细胞中的GAA酶促活性，任选地，相对于对照至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%或更多。如本文例证的，细胞（例如，成纤维细胞）可以从具有IVS1-13T>G突变的患者获得。
在一些实施方案中，某些反义寡聚物包含以下、由以下组成或基本上由以下组成：如表2B（或表2C）中详述的序列或者其变体或邻接或非邻接部分。例如，某些反义寡聚物包含表2B或2C中概述的任何SEQ ID NO的约或至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27个邻接或非邻接核苷酸。对于非邻接部分，可以缺失间插核苷酸。变体的另外实例包括具有在表2B或2C中概述的任何SEQ ID NO的整个长度上约或至少约70%序列同一性或同源性的寡聚物，例如70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性或同源性。在一些实施方案中，具有靶向序列的反义寡聚物或化合物包含抑制GAA前mRNA中的ISS和/或ESS元件的这种变体序列，由这种变体序列组成或基本上由这种变体序列组成。在一些实施方案中，根据本文所述的至少一个实施例或方法，具有包含此类变体序列、由此类变体序列组成、或基本上由此类变体序列组成的靶向序列的反义寡聚物或化合物增加、增强或促进成熟GAA mRNA中的外显子2保留，任选地，相对于对照至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%或更多。在一些实施方案中，根据本文所述的至少一个实施例或方法，具有包含此类变体序列、由此类变体序列组成、或基本上由此类变体序列组成的靶向序列的反义寡聚物或化合物增加、增强或促进细胞中的GAA蛋白表达，任选地，相对于对照至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%或更多。在一些实施方案中，根据本文所述的至少一个实施例或方法，包含此类变体序列、由此类变体序列组成、或基本上由此类变体序列组成的反义寡聚物或化合物增加、增强或促进细胞中的GAA酶促活性，任选地，相对于对照至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%或更多。如本文例证的，细胞（例如，成纤维细胞）可以从具有IVS1-13T>G突变的患者获得。
在各个方面，提供了反义寡聚物或化合物，其包含与人GAA前mRNA的靶区域互补（例如，至少80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%互补）的靶向序列，任选地其中所述靶向序列如表2A-2C中任一所示。在另一个方面，提供了反义寡聚物或化合物，其包含变体靶向序列，例如本文所述的任何变体，其中所述变体靶向序列结合与表2A-2C中的任何一个中所述的一种或多种靶向序列互补（例如，80%-100%互补）的人前mRNA的互补靶区域。在一些实施方案中，反义寡聚物或化合物结合包含人GAA前mRNA（例如，SEQ ID NO：1、2或3中的任一个，或跨越由SEQ ID NO: 1/4或SEQ ID NO: 4/5限定的GAA前mRNA剪接连接的序列）的至少10个（例如，至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个）连续碱基的靶序列。在一些实施方案中，靶序列与表2A-2C中的任何一个所示的一种或多种靶向序列互补（例如，至少80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%互补）。在一些实施方案中，靶序列与表2A-2C中的任何一个所示的一种或多种靶向序列的至少10个（例如，至少11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个）连续碱基互补（例如，至少80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%互补）。在一些实施方案中，靶序列由如本文一个或多个表中所示的退火位点（例如，GAA-IVS1.SA.(-189,-165)）限定。
可以根据本领域的常规技术测定反义寡聚物及其变体的活性。例如，可以通过用于检测剪接形式和/或转录核酸或蛋白质表达的广泛多种众所周知的方法中的任一种，来评价所调查的RNA和蛋白质的剪接形式和表达水平。此类方法的非限制性实例包括剪接形式的RNA的RT-PCR，随后为PCR产物的大小分离、核酸杂交方法例如RNA印迹和/或核酸阵列的使用；核酸扩增方法；用于检测蛋白质的免疫学方法；蛋白质纯化方法；和蛋白质功能或活性测定。
RNA表达水平可以通过以下来评估：从细胞、组织或生物制备mRNA/cDNA（即转录的多核苷酸），并且将mRNA/cDNA与其为测定核酸的互补体的参考多核苷酸或其片段杂交。在与互补多核苷酸杂交之前，可以任选地使用各种聚合酶链反应或体外转录方法中的任一种扩增cDNA；优选地，它不进行扩增。还可以使用定量PCR检测一种或多种转录物的表达，以评价转录物的表达水平。
III. 反义寡聚物化学
A. 一般特征
本发明的某些反义寡聚物与内含子剪接沉默子元件或外显子剪接沉默子元件特异性杂交。一些反义寡聚物包含表2A-2C中所示的靶向序列，表2A-2C中的靶向序列的至少10个邻接核苷酸的片段，或与表2A-2C中的靶向序列具有至少80%序列同一性的变体。特异性反义寡聚物由表2A-2C中所示的靶向序列组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，寡聚物是核酸酶抗性的。
在某些实施方案中，反义寡聚物包含选自氨基磷酸酯或二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PMO)、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、硫代磷酸酯寡聚物、三环-DNA寡聚物、三环-硫代磷酸酯寡聚物、2'O-Me-修饰的寡聚物、或前述的任何组合的非天然化学主链，以及与人酸性α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID. NO: 1) [包括由SEQ ID NO：2和SEQ IDNO: 3鉴定的部分]、内含子2 (SEQ ID. NO: 5)或外显子2 (SEQ ID. NO: 4)内的区域互补的靶向序列。例如，在一些实施方案中，靶向序列选自表2A-2C中概述的序列，其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。此外且例如，靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，本文描述的寡核苷酸具有表4A-4C中所示的靶向序列。
本发明的反义寡聚物通常包含各自带有核碱基的多个核苷酸亚基，所述核碱基一起形成靶向序列或包含靶向序列，例如，如上文讨论的。相应地，在一些实施方案中，反义寡聚物长度范围为约10至约40个亚基，更优选约10至30个亚基，并且通常为15-25个亚基。例如，本发明的反义化合物可以是长度10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个亚基，或范围为10个亚基至40个亚基、10个亚基至30个亚基、14个亚基至25个亚基、15个亚基至30个亚基、17个亚基至30个亚基、17个亚基至27个亚基、10个亚基至27个亚基、10个亚基至25个亚基、以及10个亚基至20个亚基。在某些实施方案中，反义寡聚物为长度约10至约40、或约5至约30个核苷酸。在一些实施方案中，反义寡聚物为长度约14至约25、或约17至约27个核苷酸。
在各种实施方案中，反义寡聚物可以包含完全修饰的主链，例如，100%的主链被修饰（例如，25聚体反义寡聚物包含其用如本文所述的主链修饰的任何组合修饰的整个主链）。在各种实施方案中，反义寡聚物可以包含其约100%至2.5%修饰的主链。在各种实施方案中，反义寡聚物可以包含其约99%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%或2.5%修饰的主链，以及其间的迭代。在其它实施方案中，反义寡聚物可以包含如本文所述的主链修饰的任何组合。
在各种实施方案中，反义寡聚物可以包含以下、由以下组成或基本上由以下组成：氨基磷酸酯吗啉代寡聚物和二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PMO)、硫代磷酸酯修饰的寡聚物、2' O-甲基修饰的寡聚物、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、硫代磷酸酯寡聚物、2' O-MOE修饰的寡聚物、2'-氟代修饰的寡聚物、2'O,4'C-乙烯桥接核酸(ENA)、三环-DNA、三环-DNA硫代磷酸酯核苷酸、2'-O-[2-(N-甲基氨基甲酰基)乙基]修饰的寡聚物、吗啉代寡聚物、肽缀合的氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PPMO)、具有磷原子的二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物，其具有(i)与吗啉代环的氮原子的共价键，和(ii)与(1,4-哌嗪)-1-基取代基或取代的(1,4-哌嗪)-1-基(PMOplus)的第二共价键，以及具有磷原子的二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物，所述磷原子具有(i)与吗啉代环的氮原子的共价键，和(ii)与4-氨基哌啶-1-基（即APN）或4-氨基哌啶-1-基(PMO-X)化学衍生物的环氮的第二共价键，包括前述任何的组合。
在一些实施方案中，反义寡聚物的主链基本上不带电，并且任选地被识别为跨越细胞膜的主动或促进转运的底物。在一些实施方案中，所有的核苷间键都是不带电的。寡聚物与靶RNA形成稳定双链体的能力还可以涉及主链的其它特点，包括反义寡聚物相对于靶的长度和互补性程度、G:C与A:T碱基匹配的比率、以及任何错配碱基的位置。反义寡聚物抵抗细胞核酸酶的能力可以促进试剂的存活和对细胞质的最终递送。示例性反义寡聚物靶向序列在表2A、2B和2C中列出。
在某些实施方案中，反义寡聚物具有在生理pH下带正电或阳离子的至少一个核苷间键。在一些实施方案中，反义寡聚物具有至少一个核苷间键，其显示出约5.5至约12的pKa。在进一步的实施方案中，反义寡聚物含有约、至少约、或不超过约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷间键，其显示出约4.5至约12的pKa。在一些实施方案中，反义寡聚物含有约或至少约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%的核苷间键，其显示出约4.5至约12的pKa。任选地，反义寡聚物与碱性氮和烷基、芳基或芳烷基两者具有至少一个核苷间键。在特定实施方案中，阳离子核苷间键或键包含4-氨基哌啶-1-基(APN)基团或其衍生物。虽然不受任何一种理论的束缚，但认为寡聚物中的一个或多个阳离子键（例如，APN基团或APN衍生物）的存在促进与靶核苷酸中带负电的磷酸酯的结合。因此，突变型RNA和含阳离子键的寡聚物之间的异源双链体的形成可以通过离子吸引力和沃森-克里克碱基配对保持在一起。
在一些实施方案中，阳离子键的数目为总核苷间键的至少2且不超过约一半，例如，约或不超过约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个阳离子键。然而，在一些实施方案中，至多所有核苷间键是阳离子键，例如，约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个总核苷间键是阳离子键。在具体实施方案中，约19-20个亚基的寡聚物可以具有2-10个，例如4-8个阳离子键，并且剩余部分为不带电的键。在其它具体实施方案中，14-15个亚基的寡聚物可以具有2-7个，例如2、3、4、5、6或7个阳离子键，并且剩余部分为不带电的键。因此，寡聚物中阳离子键的总数目可以从约1到10到15到20到30或更高（包括其间的所有整数）不等，并且可以散布在寡聚物各处。
在一些实施方案中，反义寡聚物可以具有约或至多约1个阳离子键/每2-5或2、3、4或5个不带电的键，例如约4-5或4或5个/每10个不带电的键。
某些实施方案包括含有约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%阳离子键的反义寡聚物。在某些实施方案中，如果约25%的主链键是阳离子的，则可以看到反义活性中的最佳改善。在某些实施方案中，可以用少量例如10-20%阳离子键看到增强，或当阳离子键的数目在范围50-80%内，例如约60%时看到增强。
在一些实施方案中，阳离子键沿主链散布。此类寡聚物任选地含有至少两个连续的不带电的键；即，寡聚物任选地不具有沿其整个长度严格交替的图案。在特定情况下，每一个或两个阳离子键沿主链由至少1、2、3、4或5个不带电的键分开。
还包括的是具有阳离子键的嵌段和不带电的键的嵌段。例如，不带电的键的中心嵌段可以侧面为阳离子键的嵌段，或反之亦然。在一些实施方案中，寡聚物具有大致相等长度的5'、3'和中心区域，并且中心区域中阳离子键的百分比为阳离子键总数目的大于约50%、60%、70%或80%。
在某些反义寡聚物中，大部分阳离子键（例如，70、75%、80%、90%的阳离子键）分布接近于“中心区域”主链键，例如6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个最中心的键。例如，16、17、18、19、20、21、22、23或24聚体寡聚物可以具有定位于8、9、10、11或12个最中心键的至少50%、60%、70%或80%的总阳离子键。
B. 主链化学特点
反义寡聚物可以采用各种反义化学。寡聚物化学的实例包括但不限于氨基磷酸酯吗啉代寡聚物和二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PMO)、硫代磷酸酯修饰的寡聚物、2' O-甲基修饰的寡聚物、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、硫代磷酸酯寡聚物、2' O-MOE修饰的寡聚物、2'-氟代修饰的寡聚物、2'O,4'C-乙烯桥接核酸(ENA)、三环-DNA、三环-DNA硫代磷酸酯核苷酸、2'-O-[2-(N-甲基氨基甲酰基)乙基]修饰的寡聚物、吗啉代寡聚物、肽缀合的氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PPMO)、具有磷原子的二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物，其具有(i)与吗啉代环的氮原子的共价键，和(ii)与(1,4-哌嗪)-1-基取代基或取代的(1,4-哌嗪)-1-基(PMOplus)的第二共价键，以及具有磷原子的二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物，所述磷原子具有(i)与吗啉代环的氮原子的共价键，和(ii)与4-氨基哌啶-1-基（即APN）或4-氨基哌啶-1-基(PMO-X)化学衍生物的环氮的第二共价键，包括前述任何的组合。一般而言，PNA和LNA化学可以利用较短的靶向序列，因为它们相对于PMO和2'O-Me修饰的寡聚物相对高的靶结合强度。可以组合硫代磷酸酯和2'O-Me-修饰的化学，以生成2'O-Me-硫代磷酸酯主链。参见例如PCT公开号WO/2013/112053和WO/2009/008725，其在此整体引入作为参考。
在一些情况下，反义寡聚物如PMO可以与细胞穿透肽(CPP)缀合，以促进细胞内递送。肽缀合的PMO称为PPMO，并且某些实施方案包括PCT公开号WO/2012/150960中描述的那些，其整体引入本文作为参考。在一些实施方案中，可以使用与例如如本文所述的反义寡聚物的3'末端缀合或连接的富含精氨酸的肽序列。在某些实施方案中，可以使用与例如如本文所述的反义寡聚物的5'末端缀合或连接的富含精氨酸的肽序列。
1. 肽核酸(PNA)
肽核酸(PNA)是DNA的类似物，其中主链与脱氧核糖主链在结构上是同形的，由嘧啶或嘌呤碱基与之附接的N-(2-氨基乙基)甘氨酸单元组成。含有天然嘧啶和嘌呤碱基的PNA遵循沃森-克里克碱基配对规则与互补寡聚物杂交，并且在碱基对识别方面模拟DNA（Egholm，Buchardt等人1993）。PNA的主链由肽键而不是磷酸二酯键形成，使得它们非常适合于反义应用（参见下文的结构）。主链是不带电的，导致显示出大于正常的热稳定性的PNA/DNA或PNA/RNA双链体。PNA不被核酸酶或蛋白酶识别。PNA的非限制性实例在下文描述：
尽管对天然结构的根本性结构变化，但PNA能够以螺旋形式与DNA或RNA序列特异性结合。PNA的特征包括对互补DNA或RNA的高结合亲和力、由单碱基错配引起的失稳效应、对核酸酶和蛋白酶的抗性、不依赖于盐浓度与DNA或RNA杂交、以及具有同型嘌呤DNA的三链体形成。PANAGENE™已开发了其专有的Bts PNA单体（Bts；苯并噻唑-2-磺酰基）和专有的低聚方法。使用Bts PNA单体的PNA寡聚化由脱保护、偶联和加帽的重复循环组成。PNA可以使用本领域已知的任何技术合成产生。参见例如，美国专利号6,969,766、7,211,668、7,022,851、7,125,994、7,145,006和7,179,896。关于PNA的制备，还参见美国专利号5,539,082；5,714,331；和5,719,262。PNA化合物的进一步教导可以在Nielsen等人，Science, 254:1497-1500, 1991中找到。前述各自均整体引入作为参考。
2. 锁核酸(LNA)
反义寡聚物化合物还可以含有“锁核酸”亚基(LNA)。“LNA”是称为桥接核酸(BNA)的一类修饰的成员。BNA的特征在于共价键，其将核糖环的构象锁定在C30-内（北）糖皱褶中。对于LNA，桥由2'-O和4'-C位置之间的亚甲基组成。LNA增强主链预组构和碱基堆积，以增加杂交和热稳定性。
LNA的结构可以在例如Wengel等人，Chemical Communications (1998) 455；Tetrahedron (1998) 54:3607, and Accounts of Chem. Research (1999) 32:301)；Obika等人，Tetrahedron Letters (1997) 38:8735；(1998) 39:5401和BioorganicMedicinal Chemistry (2008) 16:9230中找到，所述参考文献在此整体引入作为参考。LNA的非限制性实例在下文描述：
本发明的化合物可以掺入一种或多种LNA；在一些情况下，化合物可以完全由LNA组成。用于合成各个LNA核苷亚基及其掺入寡聚物内的方法例如在美国专利号7,572,582、7,569,575、7,084,125、7,060,809、7,053,207、7,034,133、6,794,499和6,670,461中描述，所述专利各自整体引入作为参考。通常的亚基间接头包括磷酸二酯和硫代磷酸酯部分；可替代地，可以采用不含磷的接头。进一步的实施方案包括含有LNA的化合物，其中每个LNA亚基由DNA亚基分开。某些化合物由交替的LNA和DNA亚基组成，其中亚基间接头是硫代磷酸酯。
2'O,4'C-乙烯-桥接核酸(ENA)是BNA类别的另一个成员。非限制性实例在下文描述：
ENA寡聚物及其制备在Obika等人，Tetrahedron Ltt 38 (50): 8735中描述，所述参考文献在此整体引入作为参考。本发明的化合物可以掺入一个或多个ENA亚基。
3. 硫代磷酸酯
“硫代磷酸酯”（或S-寡聚物）是正常DNA的变体，其中非桥接氧之一替换为硫。硫代磷酸酯的非限制性实例在下文描述：
核苷酸间键的硫化减少了核酸内切酶和核酸外切酶的作用，所述酶包括5'至3'和3'至5' DNA POL 1核酸外切酶、核酸酶S1和P1、RNA酶、血清核酸酶和蛇毒磷酸二酯酶。硫代磷酸酯通过两种主要途径制备：通过元素硫的二硫化碳溶液对膦酸氢的作用，或通过用二硫化四乙基秋兰姆(TETD)或3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮1,1-二氧化物(BDTD)硫化亚磷酸三酯的方法（参见例如，Iyer等人，J. Org. Chem. 55, 4693-4699, 1990，其在此整体引入作为参考）。后一种方法避免了元素硫在大多数有机溶剂中的不溶性和二硫化碳的毒性问题。TETD和BDTD方法也产生更高纯度的硫代磷酸酯。
4. 三环-DNA和三环-硫代硫酸酯核苷酸
三环-DNA (tc-DNA)是一类受约束的DNA类似物，其中通过引入环丙烷环来修饰每个核苷酸，以限制主链的构象灵活性并优化扭转角γ的主链几何形状。含有同源碱基(Homobasic)腺嘌呤和胸腺嘧啶的tc-DNA与互补RNA形成非常稳定的A-T碱基对。三环-DNA及其合成在国际专利申请公开号WO2010/115993中描述，所述专利在此整体引入作为参考。本发明的化合物可以掺入一种或多种三环-DNA核苷酸；在一些情况下，化合物可以完全由三环-DNA核苷酸组成。
三环-硫代磷酸酯核苷酸是具有硫代磷酸酯亚基间键的三环-DNA核苷酸。三环-硫代磷酸酯核苷酸及其合成在国际专利申请公开号WO2013/053928中描述，所述专利在此整体引入作为参考。本发明的化合物可以掺入一种或多种三环-DNA核苷酸；在一些情况下，化合物可以完全由三环-DNA核苷酸组成。三环-DNA/三环-硫代磷酸酯核苷酸的非限制性实例在下文描述：
5. 2'O-甲基、2'O-MOE和2'-F寡聚物
“2'O-Me寡聚物”分子在核糖分子的2'-OH残基处携带甲基。2'-O-Me-RNA显示与DNA相同（或相似）的行为，但保护不受核酸酶降解。2'-O-Me-RNA也可以与硫代磷酸酯寡聚物(PTO)组合，用于进一步稳定化。可以根据本领域的常规技术（参见例如，Yoo等人，NucleicAcids Res. 32:2008-16, 2004，其在此整体引入作为参考）合成2'O-Me寡聚物（磷酸二酯或硫代磷酸酯）。2'O-Me寡聚物的非限制性实例在下文描述：
2'O-Me寡聚物也可以包含硫代磷酸酯键（2'O-Me硫代磷酸酯寡聚物）。2'O-甲氧基乙基寡聚物(2’-O MOE)，如同2'O-Me寡聚物，在核糖分子的2'-OH残基处携带甲氧基乙基，并且在Martin等人，Helv. Chim. Acta, 78, 486-504, 1995中讨论，所述参考文献在此整体引入作为参考。2'O-MOE核苷酸的非限制性实例在下文描述：
与前述烷基化的2'OH核糖衍生物相反，2'-氟寡聚物在2'位置处具有氟原子团代替2'OH。2'-F寡聚物的非限制性实例在下文描述：
2'-氟寡聚物在WO 2004/043977中进一步描述，所述参考文献在此整体引入作为参考。本发明的化合物可以掺入一个或多个2'O-甲基、2'O-MOE和2'-F亚基，并且可以利用此处所述的任何亚基间键。在一些情况下，本发明的化合物可以完全由2'O-甲基、2'O-MOE或2'-F亚基组成。本发明的化合物的一个实施方案完全由2'O-甲基亚基组成。
6. 2'-O-[2-(N-甲基氨基甲酰基)乙基]寡核苷酸(MCE)
MCE是可用于本发明的化合物中的2'O修饰的核糖核苷的另一个实例。此处，将2'OH衍生为2-(N-甲基氨基甲酰基)乙基部分，以增加核酸酶抗性。MCE寡聚物的非限制性实例在下文描述：
MCE及其合成在Yamada等人，J. Org. Chem., 76(9):3042-53中描述，所述参考文献在此整体引入作为参考。本发明的化合物可以掺入一个或多个MCE亚基。
7. 立体特异性寡聚物
立体特异性寡聚物是通过合成方法固定每个含磷键的立体化学的那些，使得产生基本上纯的单一寡聚物。立体特异性寡聚物的非限制性实例在下文描述：
在上文实例中，寡聚物的每个磷具有相同的立体化学。另外的实例包括上述寡聚物。例如，LNA、ENA、三环-DNA、MCE、2'O-甲基、2'O-MOE、2'-F和基于吗啉代的寡聚物可以用立体特异性含磷的核苷间键制备，所述键例如，硫代磷酸酯、磷酸二酯、氨基磷酸酯、二氨基磷酸酯或其它含磷的核苷间键。用于制备此类寡聚物的立体特异性寡聚物、制备方法、手性控制的合成、手性设计和手性助剂详细例如在WO2015107425、WO2015108048、WO2015108046、WO2015108047、WO2012039448、WO2010064146、WO2011034072、WO2014010250、WO2014012081、WO20130127858和WO2011005761中描述，所述专利各自在此整体引入作为参考。
8. 基于吗啉代的寡聚物
基于吗啉代的寡聚物指包含支持核碱基的吗啉代亚基的寡聚物，并且代替核糖，含有吗啉环。示例性的核苷间键包括例如连接一个吗啉代亚基的吗啉环氮与相邻吗啉代亚基的4'环外碳的氨基磷酸酯或二氨基磷酸酯核苷间键。每个吗啉代亚基包含嘌呤或嘧啶核碱基，其通过碱基特异性氢键与寡核苷酸中的碱基有效结合。
基于吗啉代的寡聚物（包括反义寡聚物）在例如以下中详细描述：美国专利号5,698,685；5,217,866；5,142,047；5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,521,063；5,506,337和未决的美国专利申请号12/271,036；12/271040；以及PCT公开号WO/2009/064471和WO/2012/043730，以及Summerton等人1997, Antisense and Nucleic Acid DrugDevelopment, 7, 187-195，所述参考文献在此整体引入作为参考。在寡聚物结构内，磷酸基团通常被称为形成寡聚物的“核苷间键”。RNA和DNA的天然存在的核苷间键是3'至5'磷酸二酯键。“氨基磷酸酯”基团包含具有三个附接的氧原子和一个附接的氮原子的磷，而“二氨基磷酸酯”基团包含具有两个附接的氧原子和两个附接的氮原子的磷。在本文所述的基于吗啉代的寡聚物的不带电或阳离子亚基间键中，一个氮总是悬挂在主链上。二氨基磷酸酯键中的第二个氮通常是吗啉环结构中的环氮。
“PMO-X”指具有磷原子的基于二氨基磷酸酯吗啉代的寡聚物，所述磷原子具有(i)与吗啉代环的氮原子的共价键，和(ii)与4-氨基哌啶-1-基（即APN）或4-氨基哌啶-1-基衍生物的环氮的第二共价键。示例性PMO-X寡聚物公开于PCT申请号PCT/US2011/38459和PCT公开号WO2013/074834中，所述专利在此整体引入作为参考。PMO-X包括“PMO-apn”或“APN”，其指包含至少一个核苷间键的PMO-X寡聚物，其中磷原子与吗啉代基团和4-氨基哌啶1-基（即APN）的环氮连接。在具体实施方案中，包含如表2A、2B或2C中所示的靶向序列的反义寡聚物包含至少一个含APN的键或含APN衍生物的键。各种实施方案包括基于吗啉代的寡聚物，其具有约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%含有APN/APN衍生物的键，其中剩余的键（如果小于100%）是不带电的键，例如，约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个总核苷间键是含有APN/APN衍生物的键。
在一些实施方案中，反义寡聚物是式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
每个Y独立地选自O和–NR4，其中每个R4独立地选自H、C1-C6烷基、芳烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2和G，其中R5选自H和C1-C6烷基，并且n是1至5的整数；
T选自OH和下式的部分：
其中：
A选自-OH、-N(R7)2和R1，其中每个R7独立地选自H和C1-C6烷基，和
R6选自OH、–N(R9)CH2C(O)NH2和下式的部分：
其中：
R9选自H和C1-C6烷基；和
R10选自G、-C(O)-R11OH、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、 -C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2，其中：
m是1至5的整数，
R11具有式-(O-烷基)y-，其中y是3至10的整数，和
每个y烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R12选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地选自：
–N(R13)2，其中每个R13独立地选自H和C1-C6烷基；
式(II)的部分：
其中：
R15选自H、G、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2，其中：
R18选自H和C1-C6烷基；和
q是1至5的整数，和
每个R17独立地选自H和甲基；和
式(III)的部分：
其中：
R19选自H、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2和G，其中：
R22选自H和C1-C6烷基；和
r是1至5的整数，和
R20选自H和C1-C6烷基；或
R19和R20连同它们与之附接的氮原子一起形成具有5-7个环原子的杂环或杂芳基环，并且任选地含有选自氧、氮和硫的另外的杂原子；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)-R23、-C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2和下式的部分：
其中，
R23具有式-(O-烷基)v-OH，其中v是3至10的整数，并且每个v烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R24选自H和C1-C6烷基；
s是1至5的整数；
L选自–C(O)(CH2)6C(O)–和-C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)–；和
每个R25具有式–(CH2)2OC(O)N(R26)2，其中每个R26具有式–(CH2)6NHC(=NH)NH2，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中G可以出现一次或不存在。
在一些实施方案中，R2是下式的部分：
其中L选自-C(O)(CH2)6C(O)–或–C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)–，和
并且每个R25具有式–(CH2)2OC(O)N(R26)2，其中每个R26具有式-(CH2)6NHC(=NH)NH2。在美国专利号7,935,816中进一步描述了此类部分，所述专利整体引入本文作为参考。
在某些实施方案中，R2可以包含下述描述的任一部分：
在某些实施方案中，每个R1是-N(CH3)2。在一些实施方案中，约50-90%的R1基团是二甲基氨基（即-N(CH3)2）。在某些实施方案中，约66%的R1基团是二甲基氨基。
在一些非限制性实施方案中，靶向序列选自表2A-2C的序列，其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。在一些非限制性实施方案中，每个R1是-N(CH3)2，并且靶向序列选自表2A-2C的序列，其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
在本发明的一些实施方案中，R1可以选自：
。
在一些实施方案中，至少一个R1是：
。
在某些实施方案中，T选自：
Y在每次出现时是O。在一些实施方案中，R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
在各种实施方案中，T选自：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。
在一些实施方案中，T具有下式：
R6具有下式：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。
在某些实施方案中，T具有下式：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。在一些实施方案中，T具有下式：
Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是G。
在某些实施方案中，T具有下式：
并且Y在每次出现时是O。在一些实施方案中，T具有下式：
Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是乙酰基。
在某些实施方案中，T具有下式：，Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是H。
在一些实施方案中，R2选自H、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
在各种实施方案中，R2选自H或G。在特定实施方案中，R2是G。在一些实施方案中，R2是H或酰基。在一些实施方案中，每个R1是-N(CH3)2。在一些实施方案中，R1的至少一次出现是-N(CH3)2。在某些实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2。
在一些实施方案中，G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在另一个方面，反义寡聚物是式(Ia)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是约13至约38的整数；
每个Y独立地选自O和–NR4，其中每个R4独立地选自H、C1-C6烷基、芳烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2和G，其中R5选自H和C1-C6烷基，并且n是1至5的整数；
T选自OH和下式的部分：
其中：
A选自-OH、-N(R7)2和R1，其中每个R7独立地选自H和C1-C6烷基，和
R6选自OH、–N(R9)CH2C(O)NH2和下式的部分：
其中：
R9选自H和C1-C6烷基；和
R10选自G、-C(O)-R11OH、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、 -C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2，其中：
m是1至5的整数，
R11具有式-(O-烷基)y-，其中y是3至10的整数，和
每个y烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R12选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地选自：
–N(R13)2，其中每个R13独立地选自H和C1-C6烷基；
式(II)的部分：
其中：
R15选自H、G、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2，其中：
R18选自H和C1-C6烷基；和
q是1至5的整数，和
每个R17独立地选自H和甲基；和
式(III)的部分：
其中：
R19选自H、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2和G，其中：
R22选自H和C1-C6烷基；和
r是1至5的整数，和
R20选自H和C1-C6烷基；或
R19和R20连同它们与之附接的氮原子一起形成具有5-7个环原子的杂环或杂芳基环，并且任选地含有选自氧、氮和硫的另外的杂原子；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)-R23、-C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2和下式的部分：
其中，
R23具有式-(O-烷基)v-OH，其中v是3至10的整数，并且每个v烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R24选自H和C1-C6烷基；
s是1至5的整数；
L选自–C(O)(CH2)6C(O)–和-C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)–；和
每个R25具有式–(CH2)2OC(O)N(R26)2，其中每个R26具有式–(CH2)6NHC(=NH)NH2，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)和包含式-C(O)CH2NH-CPP的接头部分，其中CPP具有下式：
其中Ra是H或酰基，和
其中G可以出现一次或不存在。
在某些实施方案中，T选自：
Y在每次出现时是O。在一些实施方案中，R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
在各种实施方案中，T选自：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。
在一些实施方案中，T具有下式：
R6具有下式：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。
在某些实施方案中，T具有下式：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。在一些实施方案中，T具有下式：
Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是G。
在某些实施方案中，T具有下式：
并且Y在每次出现时是O。在一些实施方案中，T具有下式：
Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是乙酰基。
在某些实施方案中，T具有下式：Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是H。
在一些实施方案中，R2选自H、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
在各种实施方案中，R2选自H或G。在特定实施方案中，R2是G。在一些实施方案中，R2是H或酰基。在一些实施方案中，每个R1是-N(CH3)2。在一些实施方案中，R1的至少一次出现是-N(CH3)2。在某些实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2。
在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在一些实施方案中，包括例如式(I)和(Ia)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补。在各种实施方案中，包括例如式(I)和(Ia)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补，其中与靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在靶向序列中不具有互补核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在靶区域的内部。在某些实施方案中，靶向序列包含选自SEQ ID NO:13-86的序列，如本文表2A-2C中所示。在某些实施方案中，靶向序列包含选自表2A和2B的序列。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。此外，并且关于本文表2A-2C（或表2B和2C）中概述的序列，在某些实施方案中，选择具有100%互补性的序列，并且去除一个或多个核碱基（或可替代地伴随一个或多个缺失的核碱基合成），使得所得到的序列在靶区域中具有与其天然互补体相比一个或多个缺失的核碱基。除了其中去除一个或多个核碱基的部分之外，考虑剩余部分是100%互补的。然而，可能存在降低水平的互补性也在本发明的范围内。
在某些实施方案中，本发明的反义寡聚物是式(IVa)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自OH和下式的部分：
其中：
A选自-OH、-N(R7)2R8和R1，其中：
每个R7独立地选自H和C1-C6烷基，和
R8选自电子对和H，和
R6选自OH、–N(R9)CH2C(O)NH2和下式的部分：
其中：
R9选自H和C1-C6烷基；和
R10选自-C(O)-R11OH、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、 -C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2，其中：
m是1至5的整数，
R11具有式-(O-烷基)y-，其中y是3至10的整数，和
每个y烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R12选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地为–N(R13)2R14，其中每个R13独立地选自H和C1-C6烷基，并且R14选自电子对和H；和
R2选自H、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基和C1-C6烷基。
在某些实施方案中，T选自：
Y在每次出现时是O。在一些实施方案中，R2选自H、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
在各种实施方案中，T选自：
在一些实施方案中，T具有下式：
R6具有下式：
。
在某些实施方案中，T具有下式：
。
在一些实施方案中，R2是H、三苯甲基或酰基。在一些实施方案中，R1的至少一次出现是-N(CH3)2。在一些实施方案中，每个R1是-N(CH3)2。
在某些实施方案中，本发明的反义寡聚物是式(IVb)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自下式的部分：
其中R3选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地为–N(R4)2，其中每个R4独立地选自H和C1-C6烷基；和
R2选自H、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基和C1-C6烷基。
在各种实施方案中，R2选自H或酰基。在一些实施方案中，R2是H。
在某些实施方案中，T具有下式：
R2是氢。
在某些实施方案中，本发明的反义寡聚物是式(IVc)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
每个Y是O；
每个R1独立地选自：
其中至少一个R1是–N(CH3)2。
在一些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 4至30、133至255、或296至342，其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。在一些实施方案中，每个R1是–N(CH3)2。
在某些实施方案中，反义寡聚物是式(V)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；和
Z是8至38的整数。
在一些实施方案中，包括例如式(IVa)、(IVb)、(IVc)和(V)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补。在各种实施方案中，包括例如式(IVa)、(IVb)、(IVc)和(V)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补，其中与靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在靶向序列中不具有互补核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在靶区域的内部。在某些实施方案中，靶向序列包含选自SEQ ID NO: 13 – SEQ ID NO: 86的序列，如本文表2A-2C中所示。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。在某些实施方案中，靶向序列包含选自表2A-2C的序列。此外，并且关于本文表2A-2C（或表2B和2C）中概述的序列，在某些实施方案中，选择具有100%互补性的序列，并且去除一个或多个核碱基（或可替代地伴随一个或多个缺失的核碱基合成），使得所得到的序列在靶区域中具有与其天然互补体相比一个或多个缺失的核碱基。除了其中去除一个或多个核碱基的部分之外，考虑剩余部分是100%互补的。然而，可能存在降低水平的互补性也在本发明的范围内。
在某些实施方案中，反义寡聚物是式(VI)的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自：
每个R1独立地选自：
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中T是或R2是G。
在某些实施方案中，T具有下式：
并且R2是G。在某些实施方案中，R1的至少一次出现是–N(CH3)2。在一些实施方案中，R1的每次出现是–N(CH3)2。在一些实施方案中，T具有下式：
。
在某些实施方案中，R1的至少一次出现是–N(CH3)2。在一些实施方案中，R1的每次出现是–N(CH3)2。
在一些实施方案中，T具有下式：
R2是G，并且R1的每次出现是–N(CH3)2。
在某些实施方案中，R2选自H、乙酰基、三苯甲基、4甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基，并且T具有下式：
。在各种实施方案中，R2是乙酰基。在某些实施方案中，R1的至少一次出现是–N(CH3)2。在一些实施方案中，R1的每次出现是–N(CH3)2。
在各种实施方案中，R2选自H、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
在某些实施方案中，R2是乙酰基，T具有下式：
，R1的每次出现是–N(CH3)2。
在一些实施方案中，其中G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在一些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，反义寡聚物是式(VII)的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自：
每个R1是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中T是或R2是G。
在一些实施方案中，R1的至少一次出现是–N(CH3)2。在某些实施方案中，R1的每次出现是–N(CH3)2。
在某些实施方案中，T具有下式：
，并且R2是G。在一些实施方案中，R1的至少一次出现是–N(CH3)2。在某些实施方案中，R1的每次出现是–N(CH3)2。
在各种实施方案中，G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，反义寡聚物是式(VIIa)的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自：
R1的每次出现是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接。
在一些实施方案中，R1的至少一次出现是-N(CH3)2。在某些实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2。
在一些实施方案中，G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在各种实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2，G具有下式：
Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在各种实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2，CPP具有下式：
Ra是乙酰基。
在各个方面，本发明的反义寡核苷酸包括式(VIIb)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
R1的每次出现是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接。
在一些实施方案中，R1的至少一次出现是-N(CH3)2。在某些实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2。
在一些实施方案中，G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在各种实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2，G具有下式：
Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在各种实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2，CPP具有下式：
Ra是乙酰基。
在各个方面，本发明的反义寡核苷酸包括式(VIIc)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；和
G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接。
在一些实施方案中，G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在各种实施方案中，G具有下式：
Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在各种实施方案中，CPP具有下式：
Ra是乙酰基。
在各个方面，本发明的反义寡聚物是式(VIId)的化合物：
其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
R1的每次出现是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
R2选自H、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基；和
G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接。
在一些实施方案中，R1的至少一次出现是-N(CH3)2。在某些实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2。
在一些实施方案中，G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在各种实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2，G具有下式：
Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在各种实施方案中，R1的每次出现是-N(CH3)2，CPP具有下式：
Ra是乙酰基。
在各个方面，本发明的反义寡核苷酸包括式(VIIe)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
R2选自H、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基；和
G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接。
在一些实施方案中，G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在各种实施方案中，G具有下式：
Ra是乙酰基。
在某些实施方案中，CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在各种实施方案中，CPP具有下式：
Ra是乙酰基。
在一些实施方案中，包括例如式(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补。在各种实施方案中，包括例如式(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补，其中与靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在靶向序列中不具有互补核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在靶区域的内部。在某些实施方案中，靶向序列包含选自SEQ ID NO: 13 – SEQ ID NO: 86（例如，SEQ ID NO: 13-58或59-75）的序列。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。在某些实施方案中，靶向序列包含选自表2A-2C的序列。此外，并且关于本文表2A-2C中概述的序列，在某些实施方案中，选择具有100%互补性的序列，并且去除一个或多个核碱基（或可替代地伴随一个或多个缺失的核碱基合成），使得所得到的序列在靶区域中具有与其天然互补体相比一个或多个缺失的核碱基。除了其中去除一个或多个核碱基的部分之外，考虑剩余部分是100%互补的。然而，可能存在降低水平的互补性也在本发明的范围内。
在本文所述的任何反义寡聚物、方法或组合物的一些实施方案中，Z是8至28、15至38、15至28、8至25、15至25、10至38、10至25、12至38、12至25、14至38或14至25的整数。在本文所述的任何反义寡聚物、方法或组合物的一些实施方案中，Z是12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38。在本文所述的任何反义寡聚物、方法或组合物的一些实施方案中，Z是12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28。在本文所述的任何反义寡聚物、方法或组合物的一些实施方案，Z是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是8至28的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是15至38的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是15至28的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是8至25的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是15至25的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是10至38的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是10至25的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是12至38的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是12至25的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是14至38的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是14至25的整数。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28。
在一些实施方案中，本发明的修饰的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII) 的化合物的每个Z是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
在一些实施方案中，本发明的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII)的化合物的每个Nu独立地选自腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、胞嘧啶、次黄嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、5-甲基胞嘧啶、C5-丙炔基修饰的嘧啶和9-(氨基乙氧基)吩噁嗪。
在一些实施方案中，本发明的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII)的化合物的靶向序列是在人酸性α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID. NO. 1)、内含子2 (SEQ ID.NO. 60)、或外显子2 (SEQ ID. NO. 61)内的靶区域中互补的10个或更多个邻接核苷酸。在某些实施方案中，本发明的反义寡聚物，包括式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII)的化合物的靶向序列包含选自如本文所述的表2A-2C的序列的序列，是选自如本文所述的表2A-2C的序列的至少12个邻接核苷酸的片段，或者是与选自如本文所述的表2A-2C的序列具有至少90%序列同一性的变体（其中适当时，X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)，取决于参考表）。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。
可根据本发明使用的另外的反义寡聚物/化学物质包括在下述专利和专利公开中描述的那些，所述专利的内容引入本文作为参考：PCT公开号WO/2007/002390；WO/2010/120820；和WO/2010/148249；美国专利号7,838,657；和美国申请号2011/0269820。
反义寡核苷酸可以通过逐步固相合成来制备，采用本领域已知且在本文引用的参考文献中描述的方法。
C. CPP和PMO的富含精氨酸的肽缀合物(PPMO)
在某些实施方案中，反义寡核苷酸与细胞穿透肽（在本文中称为“CPP”）缀合。在一些实施方案中，CPP是富含精氨酸的肽。术语“富含精氨酸”指具有至少2个，优选2、3、4、5、6、7或8个精氨酸残基的CPP，每个精氨酸残基任选地被一个或多个不带电的疏水残基分开，并且任选地含有约6-14个氨基酸残基。如下文说明的，CPP优选在其羧基末端处通过接头与反义寡核苷酸的3'和/或5'末端连接，所述接头也可以是一个或多个氨基酸，并且优选还在其氨基末端处通过取代基Ra加帽，其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基或硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
如下表中可见的，用于在本文中使用的CPP的非限制性实例包括–(RXR)4-Ra、R-(FFR)3-Ra、-B-X-(RXR)4-Ra、-B-X-R-(FFR)3-Ra、-GLY-R-(FFR)3-Ra、-GLY-R6-Ra和–R6-Ra，其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基，并且其中R是精氨酸，X是6-氨基己酸，B是β-丙氨酸，F是苯丙氨酸，并且GLY（或G）是甘氨酸。CPP “R6”意指经由酰胺键（而不是单个取代基，例如R6）连接在一起的六(6)个精氨酸残基的肽。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
示例性CPP在表2D中提供(SEQ ID NO: 6-12)。
CPP、其合成以及与寡聚物缀合的方法在美国申请公开号2012/0289457以及国际专利申请公开号WO 2004/097017、WO 2009/005793和WO 2012/150960中进一步描述，所述专利的公开内容整体引入本文作为参考。
在一些实施方案中，反义寡核苷酸包含取代基“G”，其定义为CPP和接头的组合。接头在其羧基末端处将CPP与寡核苷酸的3'末端和/或5'末端桥接。在各种实施方案中，反义寡核苷酸可以仅包含与寡聚物的3'末端连接的一个CPP。在其它实施方案中，反义寡核苷酸可以仅包含与寡聚物的5'末端连接的一个CPP。
G内的接头可以包含例如1、2、3、4或5个氨基酸。
在具体的实施方中，G选自：
-C(O)(CH2)5NH-CPP；
-C(O)(CH2)2NH-CPP；
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP；
-C(O)CH2NH-CPP和下式：
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接。
在各种实施方案中，CPP是如上定义的富含精氨酸的肽，并且参见表2D。在某些实施方案中，富含精氨酸的CPP是R6-Ra（即，六个精氨酸残基；SEQ ID NO: 12），其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。Ra是乙酰基。在各种实施方案中，CPP选自SEQ ID NO: 6、7或12，并且接头选自上述组。在一些实施方案中，CPP是SEQ ID NO: 12，并且接头是Gly。
在某些实施方案中，G是在寡聚物的5'和/或3'末端处与本发明的反义寡聚物共价键的-C(O)CH2NH-R6-Ra，其中Ra是H、酰基、苯甲酰基或硬脂酰基，以加帽R6的氨基末端。Ra是乙酰基。在这些非限制性实例中，CPP是–R6-Ra且接头是-C(O)CH2NH-（即GLY）。G = -C(O)CH2NH-R6-Ra的这个特定实例也由下述结构例证：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，G选自SEQ ID NO: 3-6。在某些实施方案中，G是SEQ ID NO: 6。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在各种实施方案中，CPP是-R6-Ra，也如下式例证的：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在某些实施方案中，CPP是SEQ ID NO: XX。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。
在一些实施方案中，CPP是–(RXR)4-Ra，也如下式例证的：
。
在各种实施方案中，CPP是–R-(FFR)3-Ra，也如下式例证的：
。
在各种实施方案中，G选自：
-C(O)(CH2)5NH-CPP；
-C(O)(CH2)2NH-CPP；
-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP；
-C(O)CH2NH-CPP和下式：
，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，并且其中CPP选自：
。在一些实施方案中，Ra是乙酰基
在一些实施方案中，本发明的反义寡聚物是选自以下的式(VIII)的化合物：
和
或前述任一的药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是嘌呤或嘧啶碱基配对部分，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基；和
Rb选自H、乙酰基、苯甲酰基、硬脂酰基、三苯甲基和4-甲氧基三苯甲基。
在一些实施方案中，包括例如式(VIII)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补。
在各种实施方案中，包括例如式(VIII)的反义寡聚物的实施方案，靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补，其中与靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在靶向序列中不具有互补核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在靶区域的内部。在某些实施方案中，靶向序列包含选自SEQ ID NO: 13 – SEQ ID NO: 86（例如，SEQ ID NO: 13-58或59-75中的任何一个）的序列。在某些实施方案中，靶向序列包含选自表2A-2C的序列。在某些实施方案中，靶向序列包含选自表2A和2B的序列。此外，并且关于本文表2A-2C中概述的序列，在某些实施方案中，选择具有100%互补性的序列，并且去除一个或多个核碱基（或可替代地伴随一个或多个缺失的核碱基合成），使得所得到的序列在靶区域中具有与其天然互补体相比一个或多个缺失的核碱基。除了其中去除一个或多个核碱基的部分之外，考虑剩余部分是100%互补的。然而，可能存在降低水平的互补性也在本发明的范围内。
在一些实施方案中，本发明的反义寡聚物的靶向序列，包括例如式(I)、(Ia)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(V)、(VI)、(VII)、(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)和(VIII)的反义寡聚物的一些实施方案选自表2A-2C中概述的序列，如本文所述且如下：
I.
uu)SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
vv)SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
ww)SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
xx)SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
yy)SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
zz)SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
aaa)SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
bbb) SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
ccc)SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
ddd) SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
eee)SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
fff)SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
ggg) SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
hhh) SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
iii)SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
jjj)SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
kkk) SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
lll)SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
mmm)SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
nnn) SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
ooo) SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
ppp) SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
qqq) SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
rrr)SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
sss)SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
ttt)SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
uuu) SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
vvv) SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
www)SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
xxx) SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
yyy) SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
zzz)SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
aaaa)SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
bbbb)SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
cccc)SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
dddd)SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
eeee)SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ffff)SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
gggg)SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
hhhh)SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
iiii)SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
jjjj)SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
kkkk) SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
llll)SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
mmmm)SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
nnnn)SEQ ID NO: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
II.
r)SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
s)SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
t)SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
u) SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
v)SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
w)SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
x)SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
y)SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
z) SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
aa)SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
bb)SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
cc)SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
dd)SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
ee)SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
ff)SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
gg)SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
hh)SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；和
III.
l)SEQ ID NO: 76 (GCC AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X)，其中Z是23；
m)SEQ ID NO: 77 (CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C)，其中Z是23；
n)SEQ ID NO: 78 (GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G)，其中Z是23；
o)SEQ ID NO: 79 (AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是23；
p)SEQ ID NO: 80 (ACX CAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C)，其中Z是23；
q)SEQ ID NO: 81 (GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX)，其中Z是23；
r) SEQ ID NO: 82 (GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是18，
s) SEQ ID NO: 83 (GAG AGG GCC AGA AGG AAG GG)，其中Z是18，
t)SEQ ID NO: 84 (XXX GCC AXG XXA CCC AGG CX)，其中Z是18，
u)SEQ ID NO: 85 (GCG CAC CCX CXG CCC XGG CC)，其中Z是18，和
v)SEQ ID NO: 86 (GGC CCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36和59。在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29和34-36。在某些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82中的任何一个中的X的每次出现是T。
在一些实施方案中，式(I)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(Ia)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(IVa)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(IVb)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(IVc)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(V)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VI)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VII)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VIIa)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VIIb)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VIIc)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VIId)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VIIe)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。在一些实施方案中，式(VIII)的反义寡聚物化合物的靶向序列选自表2A-2C中概述的序列。
在一些实施方案中，表2A-2C中概述的序列的至少一个X是T。在一些实施方案中，表2A-2C中概述的序列的至少一个X是U。在一些实施方案中，表2A中概述的序列的每个X是T。序列在一些实施方案中，表2A中概述的序列的每个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是U。
此外，在一些实施方案中，本发明的反义寡聚物是式(XX)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
I.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 13 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是22；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 14 (GCCAGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)，其中Z是22；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 15 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)，其中Z是22；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 16 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)，其中Z是22；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 17 (AGAAGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)，其中Z是22；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 18 (GAAGGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)，其中Z是22；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列（5'至3'）SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGCGAG AAA AGC XCC AGC)，其中Z是22；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 20 (AGGAAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)，其中Z是22；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 21 (CGGCXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 22 (ACGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 23 (CACGGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 24 (XCACGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 25 (CXCACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 26 (ACXCAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 27 (GCGGCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 28 (GGCGGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 29 (CGGCAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 30 (GCACXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 31 (GGCACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 32 (CACXCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 33 (GCCAGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 34 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 35 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 36 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 37 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 38 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 39 (CGGCAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 40 (GCGGCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 41 (GGCGGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 42 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)，其中Z是22；
ee)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 43 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 44 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 45 (GGCCAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 46 (GGCCAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 47 (AGGAAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 48 (AGGAAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 49 (CGGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是22；
11)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 50 (CGCXCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 51 (CCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 52 (GGCGGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 53 (GGCGGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 54 (GGCGGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 55 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)，其中Z是22；
rr)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 56 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 57 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 58 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
II.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 59 (GGCCAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 60 (CCAGAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 61 (AAGGAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 62 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 63 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 64 (AGAAGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 65 (GCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 66 (CXCXCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 67 (XCXCAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 68 (CXCAAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 69 (XCAAAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 70 (CAAAGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 71 (AAAGCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 72 (AAGCAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 73 (AGCAGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 74 (GCAGCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 75 (CAGCXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；和
III.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 76 (GCCAGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X)，其中Z是23；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 77 (CAGAAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C)，其中Z是23；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 78 (GAAGGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G)，其中Z是23；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 79 (AGGAAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是23；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 80 (ACXCAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C)，其中Z是23；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 81(GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX)，其中Z是23；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 82 (GGCXCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是18；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 83 (GAGAGG GCC AGA AGG AAG GG)，其中Z是18；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 84 (XXXGCC AXG XXA CCC AGG CX)，其中Z是18；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 85 (GCGCAC CCX CXG CCC XGG CC)，其中Z是18；和
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 86 (GGCCCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
并且其中Ra是H或乙酰基。
在一些实施方案中，SEQ ID NO:13-86的至少一个X是T。在一些实施方案中，SEQID NO: 13-86的至少一个X是U。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13-86的每个X是T。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13-86的每个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是U。
在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82的至少一个X是T。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82的至少一个X是U。在一些实施方案中，SEQ ID NO:13、27-29、34-36、59和82的每个X是T。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82的每个X是U。
在本发明的反义寡聚物的一些实施方案中，包括例如式(XX)的反义寡聚物，反义寡聚物可以具有式(XXI)：
或其药学上可接受的盐，其中：
I.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 13 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是22；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 14 (GCCAGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)，其中Z是22；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 15 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)，其中Z是22；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 16 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)，其中Z是22；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 17 (AGAAGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)，其中Z是22；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 18 (GAAGGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)，其中Z是22；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列（5'至3'）SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGCGAG AAA AGC XCC AGC)，其中Z是22；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 20 (AGGAAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)，其中Z是22；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 21 (CGGCXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 22 (ACGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 23 (CACGGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 24 (XCACGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 25 (CXCACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 26 (ACXCAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 27 (GCGGCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 28 (GGCGGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 29 (CGGCAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 30 (GCACXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 31 (GGCACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 32 (CACXCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 33 (GCCAGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 34 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 35 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 36 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 37 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 38 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 39 (CGGCAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 40 (GCGGCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 41 (GGCGGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 42 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)，其中Z是22；
ee)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 43 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 44 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 45 (GGCCAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 46 (GGCCAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 47 (AGGAAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 48 (AGGAAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 49 (CGGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是22；
11)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 50 (CGCXCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 51 (CCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 52 (GGCGGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 53 (GGCGGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 54 (GGCGGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 55 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)，其中Z是22；
rr)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 56 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 57 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 58 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
II.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 59 (GGCCAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 60 (CCAGAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 61 (AAGGAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 62 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 63 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 64 (AGAAGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 65 (GCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 66 (CXCXCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 67 (XCXCAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 68 (CXCAAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 69 (XCAAAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 70 (CAAAGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 71 (AAAGCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 72 (AAGCAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 73 (AGCAGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 74 (GCAGCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 75 (CAGCXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；和
III.
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 76 (GCCAGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC X)，其中Z是23；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 77 (CAGAAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC C)，其中Z是23；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 78 (GAAGGA AGG GCG AGA AAA GCX CCA G)，其中Z是23；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 79 (AGGAAG GGC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是23；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 80 (ACXCAC GGG GCX CXC AAA GCA GCX C)，其中Z是23；
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 81(GGCXCXCAAAGCAGCXCXGAGACAX)，其中Z是23；
r)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 82 (GGCXCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是18；
s)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 83 (GAGAGG GCC AGA AGG AAG GG)，其中Z是18；
t)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 84 (XXXGCC AXG XXA CCC AGG CX)，其中Z是18；
u)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 85 (GCGCAC CCX CXG CCC XGG CC)，其中Z是18；和
v)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 86 (GGCCCX GGX CXG CXG GCX CCC XGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
并且其中Ra是H或乙酰基。
在一些实施方案中，SEQ ID NO:13-86的至少一个X是T。在一些实施方案中，SEQID NO: 13-86的至少一个X是U。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13-86的每个X是T。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13-86的每个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是T。在各种实施方案中，靶向序列的至少一个X是U。在各种实施方案中，靶向序列的每个X是U。
在某些实施方案中，靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82的至少一个X是T。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82的至少一个X是U。在一些实施方案中，SEQ ID NO:13-86的每个X是T。在一些实施方案中，SEQ ID NO: 13、27-29、34-36、59和82的每个X是U。
在一些实施方案中，反义寡聚物是式(XXII)的化合物或其药学上可接受的盐，选自以下：
和
，
其中X在每次出现时独立地选自或。在一些实施方案中，每个X是T。在其它实施方案中，每个X是U。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII a)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII a)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII a)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII a)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII b)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII b)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII b)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII b)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII c)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII c)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII c)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII c)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII d)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII d)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII d)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII d)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII e)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII e)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII e)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII e)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII f)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII f)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII f)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII f)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII g)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII g)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII g)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII g)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII h)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII h)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII h)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII h)，其中每个X是T。
在一些实施方案中，式(XXII)的反义寡聚物是式(XXII i)，其中至少一个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII i)，其中至少一个X是T。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII i)，其中每个X是U。在一些实施方案中，式(XXII)的化合物是式(XXII i)，其中每个X是T。
在本发明的反义寡聚物的一些实施方案中，包括例如式(XXII)的反义寡聚物，反义寡聚物是式(XXIII)的化合物或其药学上可接受的盐，选自以下：
和
。
在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIII a)。在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIII b)。在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIII c)。在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIII d)。在一些实施方案中，式(XX)的反义寡聚物具有式(XXIII e)。在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIII f)。在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIIIg)。在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIII h)。在一些实施方案中，式(XXIII)的反义寡聚物具有式(XXIII i)。
在另一个方面，本发明的特征在于式(XXII a)至(XXIIi)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐，其中X在每次出现时独立地选自或。在一些实施方案中，每个X是T。
在另一个方面，本发明的特征在于式(XXIIIa)至(XXIIIi)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐。
D. 用碱性氮核苷间接头制备PMO-X
吗啉代亚基、修饰的亚基间键和包含其的寡聚物可以如例如美国专利号5,185,444和7,943,762中所述进行制备，所述专利整体引入作为参考。吗啉代亚基可以根据下述一般反应方案I进行制备。
反应方案1. 吗啉代亚基的制备
参考反应方案1，其中B代表碱基配对部分，并且PG代表保护基团，吗啉代亚基可以如所示由相应的核糖核苷(1)制备。吗啉代亚基(2)可以任选地通过与合适的保护基团前体（例如三苯甲基氯）反应得到保护。一般在固态寡聚物合成期间去除3'保护基团，如下文更详细地描述的。可以适当地保护碱基配对部分用于固相寡聚物合成。合适的保护基团包括用于腺嘌呤和胞嘧啶的苯甲酰基，用于鸟嘌呤的苯乙酰基和用于次黄嘌呤(I)的新戊酰氧基甲基。新戊酰氧基甲基可以引入次黄嘌呤杂环碱基的N1位置上。尽管可以采用未受保护的次黄嘌呤亚基，但当碱被保护时，活化反应的产率要高得多。其它合适的保护基团包括在共同未决的美国申请号12/271,040中公开的那些，所述申请在此整体引入作为参考。
3与活化的磷化合物4的反应导致具有所需键部分5的吗啉代亚基。结构4的化合物可以使用本领域技术人员已知的许多方法制备。例如，此类化合物可以通过相应的胺和三氯氧磷的反应来制备。在这方面，胺原材料可以使用本领域已知的任何方法制备，所述方法例如实施例和美国专利号7,943,762中描述的那些方法。
结构5的化合物可以用于固相自动化寡聚物合成中，用于制备包含亚基间键的寡聚物。此类方法是本领域众所周知的。简言之，结构5的化合物可以在5'末端处进行修饰，以含有与固体支持物的接头。例如，化合物5可以通过包含L11和L15的接头与固体支持物连接。
在实施例中更详细地描述了修饰的吗啉代亚基和吗啉代寡聚物的制备。含有任何数目的修饰键的吗啉代寡聚物可以使用本文所述的方法、本领域已知和/或通过本文的参考文献描述的方法进行制备。实施例中还描述的是如先前所述制备的吗啉代寡聚物的总体修饰（参见例如PCT公开WO2008036127）。
术语“保护基团”指封闭化合物的一些或所有反应部分，并且阻止此类部分参与化学反应直至保护基团被去除的化学部分，例如T.W. Greene, P.G.M. Wuts, ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第3版John Wiley & Sons (1999)中列出且描述的那些部分。当采用不同保护基团时，每个（不同的）保护基团可通过不同手段去除可能是有利的。在完全不同的反应条件下切割的保护基团允许此类保护基团的差异去除。例如，可以通过酸、碱和氢解去除保护基团。基团例如三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、缩醛和叔丁基二甲基甲硅烷基是酸不稳定的，并且可以用于在由Cbz基团和Fmoc基团保护的氨基的存在下保护羧基和羟基反应部分，所述Cbz基团可通过氢解去除，所述Fmoc基团是碱不稳定的。羧酸部分可以用碱不稳定基团例如但不限于甲基或乙基封闭，并且羟基反应部分可以在被酸不稳定基团例如氨基甲酸叔丁酯封闭的胺的存在下用碱不稳定基团例如乙酰基封闭，或用氨基甲酸酯封闭，所述氨基甲酸酯是酸和碱两者稳定的，但可水解去除。
羧酸和羟基反应部分也可以用可水解去除的保护基团如苄基封闭，而胺基可以用碱不稳定基团如Fmoc封闭。用于合成式(I)的化合物的特别有用的胺保护基团是三氟乙酰胺。羧酸反应部分可以用可氧化去除的保护基团如2,4-二甲氧基苄基封闭，而共存的氨基可以用氟不稳定的甲硅烷基氨基甲酸酯封闭。
烯丙基封闭基团在酸-和碱-保护基团的存在下是有用的，因为前者是稳定的并且随后可以通过金属或π-酸催化剂去除。例如，烯丙基封闭的羧酸可以在酸不稳定的氨基甲酸叔丁酯或碱不稳定的乙酸胺保护基团的存在下用钯(0)催化的反应脱保护。另外一种形式的保护基团是化合物或中间产物可以与之附接的树脂。只要残基附接至树脂，该官能团就被封闭而不能反应。一旦从树脂中释放，官能团就可用于反应。
通常的封闭/保护基团是本领域已知的，并且包括但不限于下述部分：
除非另有说明，否则所有化学品均得自Sigma-Aldrich-Fluka。苯甲酰腺苷、苯甲酰胞苷和苯乙酰鸟苷得自Carbosynth Limited，UK。
含有如本文所述的进一步键修饰的PMO、PMO+、PPMO和PMO-X的合成使用本领域已知且在未决的美国申请号12/271,036和12/271,040以及PCT公开号WO/2009/064471中描述的方法完成，所述专利在此整体引入作为参考。
具有3'三苯甲基修饰的PMO基本上如PCT公开号WO/2009/064471中所述合成，除了省略脱三苯甲基步骤之外。
IV. 制剂
本发明的化合物还可以与其它分子、分子结构或化合物的混合物，如例如脂质体、受体靶向分子、经口、直肠、局部或其它制剂混合、包封、缀合或以其它方式结合，用于辅助摄取、分布和/或吸收。教导此类摄取、分布和/或吸收辅助制剂的制备的代表性美国专利包括但不限于美国专利号5,108,921；5,354,844；5,416,016；5,459,127；5,521,291；5,543,158；5,547,932；5,583,020；5,591,721；4,426,330；4,534,899；5,013,556；5,108,921；5,213,804；5,227,170；5,264,221；5,356,633；5,395,619；5,416,016；5,417,978；5,462,854；5,469,854；5,512,295；5,527,528；5,534,259；5,543,152；5,556,948；5,580,575；和5,595,756；所述专利各自引入本文作为参考。
本发明的反义化合物涵盖此类酯的任何药学上可接受的盐、酯或盐，或者在施用于动物包括人后能够（直接或间接地）提供生物活性代谢产物的任何其它化合物或其残留物。相应地，例如，本发明还涉及本发明的化合物的前药和药学上可接受的盐、此类前药的药学上可接受的盐和其它生物等价物。
术语“前药”指示以无活性形式制备的治疗剂，其通过内源酶或者其它化学品和/或条件的作用在体内或其细胞内转换为活性形式（即药物）。特别地，根据于1993年12月9日公开的授予Gosselin等人的WO 93/24510、或者在WO 94/26764和授予Imbach等人的美国专利号5,770,713中公开的方法，将本发明的寡聚物的前药形式制备为SATE [(S-乙酰基-2-硫代乙基)磷酸酯]衍生物。
术语“药学上可接受的盐”指本发明的化合物的生理学和药学上可接受的盐：即，保留母体化合物的所需生物活性并且不对其赋予不希望有的毒理学效应的盐。对于寡聚物，药学上可接受的盐的实例及其用途在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。
本发明还包括药物组合物和制剂，其包括本发明的反义化合物。本发明的药物组合物可以多种方式施用，这取决于是需要局部还是全身治疗以及待治疗的区域。施用可以是局部（包括眼科以及对粘膜，包括阴道和直肠递送）、肺部例如包括通过喷雾器通过吸入或吹入粉末或气溶胶；气管内、鼻内、表皮和经皮）、经口或肠胃外的。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注；或颅内例如鞘内或心室内施用。具有至少一个2'-O-甲氧基乙基修饰的寡聚物被认为可特别用于经口施用。用于局部施用的药物组合物和制剂可以包括经皮贴剂、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规的药物载体、水性、粉末或油性基质，增稠剂等等可能是必需的或期望的。涂布的避孕套、手套等等也可能是有用的。
可以方便地以单位剂型呈现的本发明的药物制剂可以根据制药工业中众所周知的常规技术制备。此类技术包括使活性成分与药物载体或赋形剂结合的步骤。一般而言，通过以下制备制剂：将活性成分与液体载体或精细分开的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然后，需要时，使产物成形。
本发明的组合物可以配制成许多可能剂型中的任一种，例如但不限于片剂、胶囊、凝胶胶囊、液体糖浆剂、软凝胶、栓剂和灌肠剂。本发明的组合物还可以配制为水性、非水性或混合介质中的悬浮液。水性悬浮液可以进一步含有增加悬浮液粘度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。悬浮液也可以含有稳定剂。
本发明的药物组合物包括但不限于溶液、乳液、泡沫和含脂质体的制剂。本发明的药物组合物和制剂可以包含一种或多种渗透增强剂、载体、赋形剂或者其它活性或非活性成分。
乳液通常是一种液体以液滴的形式分散在另一种液体中的非均相系统，所述液滴通常直径超过0.1 μm。除分散相之外，乳液还可以含有另外的组分，并且活性药物可以作为溶液存在于水相、油相中或作为分离相存在自身中。包括微乳液作为本发明的实施方案。乳液及其用途是本领域众所周知的，并且在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。
本发明的制剂包括脂质体制剂。如本发明中使用的，术语“脂质体”意指由布置在一个或多个球形双层中的两亲脂质组成的囊泡。脂质体是单层或多层囊泡，其具有由亲脂性材料形成的膜和含有待递送的组合物的水性内部。阳离子脂质体是带正电的脂质体，其被认为与带负电的DNA分子相互作用，以形成稳定的复合物。其为pH敏感或带负电的脂质体被认为诱陷DNA而不是与之复合。阳离子和非阳离子脂质体两者均已用于将DNA递送至细胞。
脂质体还包括“空间稳定的”脂质体，如本文使用的，所述术语指包含一种或多种特化脂质的脂质体，当掺入脂质体内时，相对于缺乏此类特化脂质的脂质体，所述特化脂质导致增强的循环寿命。空间稳定的脂质体的实例是其中脂质体的囊泡形成脂质部分的一部分包含一种或多种糖脂，或者用一种或多种亲水聚合物例如聚乙二醇(PEG)部分衍生。脂质体及其用途在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。
本发明的药物制剂和组合物还可以包括表面活性剂。表面活性剂在药物产物、制剂和乳液中的使用是本领域众所周知的。表面活性剂及其用途在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。
在一些实施方案中，本发明采用各种渗透增强剂来实现核酸，特别是寡聚物的有效递送。除帮助非亲脂性药物扩散穿过细胞膜之外，渗透增强剂还增强了亲脂性药物的渗透性。渗透增强剂可以分类为属于五大类之一，即表面活性剂、脂肪酸、胆汁盐、螯合剂和非螯合非表面活性剂。渗透增强剂及其用途在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。
本领域技术人员将认识到，制剂根据其预期用途，即施用途径进行常规设计。
用于局部施用的制剂包括其中本发明的寡聚物与局部递送试剂如脂质、脂质体、脂肪酸、脂肪酸酯、类固醇、螯合剂和表面活性剂混合的制剂。脂质和脂质体包括中性（例如二油酰基磷脂酰基DOPE乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱DMPC、二硬脂酰基磷脂酰胆碱）、阴性（例如二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油DMPG）和阳离子的（例如二油酰基四甲基氨丙基DOTAP和二油酰基磷脂酰乙醇胺DOTMA）。
对于局部或其它施用，本发明的寡聚物可以包封在脂质体内或可以与其（特别是阳离子脂质体）形成复合物。可替代地，寡聚物可以与脂质特别是阳离子脂质复合。脂肪酸和酯、其药学上可接受的盐及其用途在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。局部制剂在于1999年5月20日提交的美国专利申请序列号09/315,298中详细描述，所述专利整体引入本文作为参考。
用于经口施用的组合物和制剂包括粉末或颗粒、微粒、纳米颗粒、水或非水介质中的悬浮液或溶液、胶囊、凝胶胶囊、小药囊、片剂或小片。增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂可能是期望的。经口制剂是其中本发明的寡聚物与一种或多种渗透增强剂、表面活性剂和螯合剂结合施用的那些。表面活性剂包括脂肪酸和/或其酯或盐、胆汁酸和/或其盐。胆汁酸/盐和脂肪酸及其用途在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。在一些实施方案中，本发明提供了渗透增强剂的组合，例如与胆汁酸/盐组合的脂肪酸/盐。示例性组合是月桂酸、癸酸和UDCA的钠盐。进一步的渗透增强剂包括聚氧乙烯-9-月桂基醚、聚氧乙烯-20-鲸蜡基醚。本发明的寡聚物可以以颗粒形式包括喷雾干燥的颗粒经口递送，或复合以形成微粒或纳米颗粒。寡聚物复合剂及其用途在美国专利号6,287,860中进一步描述，所述专利整体引入本文。用于寡聚物的经口制剂及其制备在美国专利序列号09/108,673（于1998年7月1日提交）、09/315,298（于1999年5月20日提交）和于2002年2月8日提交的10/071,822中详细描述，所述专利各自整体引入本文作为参考。
用于肠胃外、鞘内或心室内施用的组合物和制剂可以包括无菌水溶液，其还可以含有缓冲剂、稀释剂和其它适合的添加剂，例如但不限于，渗透增强剂、载体化合物和其它药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的某些实施方案提供了含有一种或多种寡聚物化合物和一种或多种其它化学治疗剂的药物组合物，所述化学治疗剂通过非反义机制起作用。此类化疗剂的实例包括但不限于癌症化疗药物，例如柔红霉素、道诺霉素、更生霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、依索比星、博来霉素、马磷酰胺、异环磷酰胺、胞嘧啶阿糖核苷、双氯乙基亚硝基脲、白消安、丝裂霉素C、放线菌素D、光辉霉素、泼尼松、羟孕酮、睾酮、他莫昔芬、达卡巴嗪、丙卡巴肼、六甲蜜胺、五甲蜜胺、米托蒽醌、安吖啶、苯丁酸氮芥、甲基环己基亚硝基脲、氮芥、美法仑、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氮杂胞苷、羟基脲、脱氧肋间型霉素、4-羟基过氧环磷酰胺、5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-氟脱氧尿苷(5-FUdR)、氨甲蝶呤( MTX)、秋水仙碱、泰素、长春新碱、长春碱、依托泊苷(VP-16)、三甲曲沙、伊立替康、拓扑替康、吉西他滨、替尼泊苷、顺铂和己烯雌酚(DES)。当与本发明的化合物一起使用时，此类化学治疗剂可以个别使用（例如，5-FU和寡聚物）、序贯使用（例如，5-FU和寡聚物一段时间，随后为MTX和寡聚物）、或者与一种或多种其它此类化学治疗剂（例如，5-FU、MTX和寡聚物，或5-FU、放射疗法和寡聚物）组合使用。抗炎药包括但不限于非甾体抗炎药和皮质类固醇，以及抗病毒药包括但不限于利巴韦林、阿糖腺苷、阿昔洛韦和更昔洛韦，也可以在本发明的组合物中组合。反义化合物和其它非反义药物的组合也在本发明的范围内。两种或更多种组合的化合物可以一起使用或序贯使用。
在另一个相关实施方案中，本发明的组合物可以含有靶向第一核酸的一种或多种反义化合物，特别是寡聚物，以及靶向第二核酸靶的一种或多种另外的反义化合物。可替代地，本发明的组合物可以含有靶向相同核酸靶的不同区域的两种或更多种反义化合物。反义化合物的众多实例是本领域已知的。两种或更多种组合的化合物可以一起使用或序贯使用。
V. 使用方法
某些实施方案涉及使用本发明的反义寡聚物增加含有外显子2的GAA mRNA和/或蛋白质的表达用于治疗目的（例如，治疗患有GSD-II的主体）的方法。相应地，在一些实施方案中，本发明提供了治疗患有GSD-II或处于发展GSD-II的风险中的个体的方法，其包括向主体施用有效量的本发明的反义寡聚物。在一些实施方案中，反义寡聚物包含足够长度和互补性的核苷酸序列，以与酸性α-葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA内的区域特异性杂交，其中所述反义寡聚物与该区域的结合增加含有外显子2的GAA mRNA在主体的细胞和/或组织中的水平。示例性的反义靶向序列显示于本文的表2A-2C中。
还包括的是用于制备用于治疗II型糖原贮积病（GSD-II；庞皮病）的药剂的反义寡聚物，其包含足够长度和互补性的核苷酸序列，以与酸性α-葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA内的区域特异性杂交，其中所述反义寡聚物与该区域的结合增加含有外显子2的GAA mRNA的水平。
在治疗GSD-II的方法或用于治疗GSD-II的药剂的一些实施方案中，反义寡聚物化合物包含：
非天然化学主链，其选自氨基磷酸酯或二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PMO)、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、硫代磷酸酯寡聚物、三环-DNA寡聚物、三环-硫代磷酸酯寡聚物、2'O-Me-修饰的寡聚物或前述的任何组合；和
与人酸性α-葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID. NO: 1)、内含子2 (SEQID. NO: 60)或外显子2 (SEQ ID. NO: 61)内的区域互补的靶向序列。
如上文指出的，“GSD-II”指II型糖原贮积病（GSD-II或庞皮病），其特征通常在于受影响个体中GAA蛋白的表达不足的人常染色体隐性疾病。包括的是具有婴儿GSD-II的主体和具有疾病的迟发形式的主体。
在某些实施方案中，主体具有在一种或多种组织中减少的GAA蛋白表达和/或活性（例如，相对于健康主体或更早的时间点），所述组织包括心脏、骨骼肌、肝和神经系统组织。在一些实施方案中，主体具有在一种或多种组织中增加的糖原积累（例如，相对于健康主体或更早的时间点），所述组织包括心脏、骨骼肌、肝和神经系统组织。在具体实施方案中，主体具有至少一个IVS1-13T>G突变（也称为c.336-13T>G），可能与导致功能性GAA蛋白表达减少的其它突变组合。GSD-II中使用的分子遗传学测试的概括显示于下表3中。
某些实施方案涉及增加细胞、组织和/或主体中含有外显子2的GAA mRNA或蛋白质的表达的方法，如本文所述。在一些情况下，相对于对照，例如对照细胞/主体、不含反义寡聚物的对照组合物、治疗的不存在和/或较早时间点，含有外显子2的GAA mRNA或蛋白质增加约或至少约5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。还包括的是相对于健康对照的水平维持含有GAA mRNA或蛋白质表达的方法。
一些实施方案涉及增加细胞、组织和/或主体中的功能/活性GAA蛋白表达的方法，如本文所述。在某些情况下，相对于对照，例如对照细胞/主体、不含反义寡聚物的对照组合物、治疗的不存在和/或较早时间点，功能/活性GAA蛋白的水平增加约或至少约5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。还包括的是相对于健康对照的水平维持功能/活性GAA蛋白表达的方法。
特定实施方案涉及减少一种或多种细胞、组织和/或主体中的糖原积累的方法，如本文所述。在某些情况下，相对于对照，例如对照细胞/主体、不含反义寡聚物的对照组合物、治疗的不存在和/或较早时间点，糖原的积累减少约或至少约5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。还包括的是维持细胞、组织和/或主体中的正常或在其它方面健康的糖原水平（例如，无症状水平或与GSD-II症状减轻相关的水平）的方法。
还包括的是减少有此需要的主体中GSD-II的一种或多种症状的方法。特定实例包括婴儿GSD-II的症状，例如心脏肥大、张力减退、心肌病、左心室流出道梗阻、呼吸窘迫、运动延迟/肌无力、以及喂养困难/生长停滞。另外的实例包括迟发型GSD-II的症状，例如肌无力（例如骨骼肌无力，包括进行性肌无力）、咳嗽受损、复发性胸部感染、张力减退、运动发展指标延迟、吞咽或咀嚼困难、以及肺活量减少或呼吸功能不全。
本发明的反义寡聚物可以施用于主体，以（预防性或治疗性地）治疗GSD-II。结合此类治疗，可以考虑药物基因组学（即，个体的基因型与个体对外来化合物或药物的反应之间的关系的研究）。通过改变药理学活性药物的剂量和血液浓度之间的关系，治疗剂的代谢差异可以导致严重的毒性或治疗失败。
因此，医生或临床医生可以考虑应用在相关药物基因组学研究中获得的知识来确定是否施用治疗剂以及定制用治疗剂治疗的剂量和/或治疗方案。
将反义寡聚物有效递送至靶核酸是治疗的一个方面。反义寡聚物递送的途径包括但不限于各种全身途径，包括经口和肠胃外途径，例如静脉内、皮下、腹膜内和肌内，以及吸入、经皮和局部递送。适当的途径可以由本领域技术人员确定为对于处于治疗的主体的状况适当的。血管或血管外循环、血液或淋巴系统以及脑脊液是其中可以引入RNA的一些非限制性位点。可以采用直接CNS递送，例如，脑内静脉内或鞘内施用可以用作施用途径。
在特定实施方案中，通过肌内注射(IM)将反义寡聚物施用于主体，即，它们被肌内施用或递送。肌内注射部位的非限制性实例包括手臂的三角肌、腿的股外侧肌、以及髋部的前腹侧股臀肌(ventrogluteal muscle)和臀部的大臀肌(dorsogluteal muscle)。在具体实施方案中，通过IM施用PMO、PMO-X或PPMO。
在某些实施方案中，有此需要的主体作为中枢神经系统组织中的糖原积累。实例包括其中中枢神经系统病理状况导致GSD-II中的呼吸缺陷的情况（参见例如，DeRuisseau等人，PNAS USA. 106:9419-24, 2009）。相应地，本文所述的反义寡聚物可以通过任何本领域公认的方法递送至主体的神经系统，例如，当主体患有牵涉CNS的GSD-II时。例如，本发明的反义寡聚物的外周血注射可以用于经由扩散和/或主动手段将所述试剂递送至外周神经元。可替代地，可以修饰反义寡聚物以促进血脑屏障(BBB)的穿过，以实现所述试剂对中枢神经系统(CNS)的神经元细胞的递送。反义寡聚物技术和递送策略中的最新特定进展已拓宽了反义寡聚物用于神经元病症的范围（参见例如，Forte, A.等人2005. Curr. DrugTargets 6:21-29；Jaeger, L. B.和W. A. Banks. 2005. Methods Mol. Med. 106:237-251；Vinogradov, S. V.等人2004. Bioconjug. Chem. 5:50-60；前述整体引入本文作为参考）。例如，本发明的反义寡聚物可以作为肽核酸(PNA)化合物生成。已经鉴定PNA试剂各自穿过BBB（Jaeger, L. B.和W. A. Banks. 2005. Methods Mol. Med. 106:237-251）。还已描述了用例如血管活性剂治疗主体以促进跨越BBB的转运（同上）。将本发明的反义寡聚物栓系至主动转运穿过BBB的试剂也可以用作递送机制。如整体引入作为参考的PCT公开号WO/2013/086207中所述，将反义剂连同造影剂例如碘海醇一起施用（例如，分开地、同时地、在相同制剂中）也可以促进跨越BBB的递送。
在某些实施方案中，本发明的反义寡聚物可以通过经皮方法递送（例如，经由将反义寡聚物掺入例如乳液内，其中此类反义寡聚物任选地包装到脂质体内）。此类经皮和乳液/脂质体介导的递送方法例如在美国专利号6,965,025中描述用于递送本领域的反义寡聚物，所述专利的内容整体引入本文作为参考。
本文所述的反义寡聚物也可以经由可植入装置递送。此类装置的设计是本领域公认的方法，使用例如美国专利号6,969,400中描述的合成植入物设计，所述专利的内容整体引入本文作为参考。
可以使用本领域公认的技术（例如，转染、电穿孔、融合、脂质体、胶体聚合物颗粒以及病毒和非病毒载体、以及本领域已知的其它手段）将反义寡聚物引入细胞内。选择的递送方法至少取决于寡聚物化学、待处理的细胞和细胞的位置，并且对于技术人员是显而易见的。例如，可以通过在表面上具有特异性标记物以指导脂质体的脂质体、直接注射到含有靶细胞的组织内、特异性受体介导的摄取等等来实现定位。
如本领域已知的，可以使用例如涉及以下的方法来递送反义寡聚物：脂质体介导的摄取、脂质缀合物、聚赖氨酸介导的摄取、纳米颗粒介导的摄取和受体介导的内吞作用、以及另外的非内吞递送模式，例如显微注射、透化（例如链球菌溶血素-O透化、阴离子肽透化）、电穿孔和本领域已知的各种非侵入性非内吞递送方法（参考整体引入作为参考的Dokka和Rojanasakul, Advanced Drug Delivery Reviews 44, 35-49）。
反义寡聚物可以在生理学和/或药学上可接受的任何方便的媒介物或载体中施用。此类组合物可以包括由本领域普通技术人员采用的各种标准药学上可接受的载体中的任一种。实例包括但不限于盐水、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、水、含水乙醇、乳液例如油/水乳液或甘油三酯乳液、片剂和胶囊。合适的生理学上可接受的载体的选择将取决于所选择的施用模式而变化。“药学上可接受的载体”预期包括与药物施用相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等等。此类介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域众所周知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则考虑其在组合物中的使用。补充的活性化合物也可以掺入组合物内。
本发明的化合物（例如，反义寡聚物）一般可以用作游离酸或游离碱。可替代地，本发明的化合物可以以酸或碱加成盐的形式使用。本发明的游离氨基化合物的酸加成盐可以通过本领域众所周知的方法制备，并且可以由有机酸和无机酸形成。合适的有机酸包括马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏血酸、琥珀酸、甲磺酸、乙酸、三氟乙酸、草酸、丙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡萄糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、乙醇酸、谷氨酸和苯磺酸。
合适的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。碱加成盐包括由羧酸根阴离子形成的那些盐，并且包括由有机和无机阳离子形成的盐，例如选自碱金属和碱土金属的那些（例如，锂、钠、钾、镁、钡和钙），以及铵离子及其取代衍生物（例如，二苄基铵、苄基铵、2-羟乙基铵等等）。因此，术语“药学上可接受的盐”预期涵盖任何和所有可接受的盐形式。
另外，前药也包括在本发明的上下文中。前药是任何共价键的载体，当此类前药施用于患者时，其在体内释放化合物。前药一般通过这样的方式修饰官能团来制备，使得通过常规操作或在体内切割修饰，产生母体化合物。前药包括例如本发明的化合物，其中羟基、胺基或巯基与任何基团键，当施用于患者时，所述基团切割以形成羟基、胺基或巯基。因此，前药的代表性实例包括（但不限于）本发明的反义寡聚物的醇和胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。此外，在羧酸(-COOH)的情况下，可以采用酯，例如甲酯、乙酯等等。
在一些情况下，脂质体可以用于促进将反义寡聚物摄取到细胞内（参见例如，Williams, S.A., Leukemia 10(12):1980-1989, 1996；Lappalainen等人，AntiviralRes. 23:119, 1994；Uhlmann等人，antisense oligomers: a new therapeuticprinciple, Chemical Reviews，第90卷，No. 4, 25第544-584页，1990；Gregoriadis, G.,ChapteR14, Liposomes, Drug Carriers in Biology和Medicine，第287-341页，AcademicPress, 1979）。水凝胶也可以用作用于反义寡聚物施用的媒介物，例如，如WO 93/01286中所述。可替代地，寡聚物可以在微球体或微粒中施用。（参见例如，Wu, G.Y.和Wu, C.H.，J.Biol. Chem. 262:4429-4432, 30 1987）。可替代地，如美国专利号6,245,747中所述，与反义寡聚物复合的充气微泡的使用可以增强对靶组织的递送。也可以使用持续释放组合物。这些可以包括以成形制品例如薄膜或微胶囊的形式的半透性聚合物基质。
在一个实施方案中，将反义寡聚物在合适的药物载体中施用于显示出溶酶体贮积症症状的哺乳动物主体，例如人或驯养动物。在该方法的一个方面，主体是人主体，例如诊断为患有GSD-II（庞皮病）的患者。在一个优选实施方案中，反义寡聚物包含在药学上可接受的载体中，并且经口递送。在另一个优选实施方案中，寡聚物包含在药学上可接受的载体中，并且静脉内(i.v.)递送。
在一个实施方案中，反义化合物以有效的量和方式施用，以导致至少200-400 nM反义寡聚物的峰值血液浓度。通常，一般以规则的间隔施用一个或多个剂量的反义寡聚物，共约一至两周的时期。用于经口施用的优选剂量为约1-1000 mg寡聚物/70 kg。在一些情况下，可能需要大于1000 mg寡聚物/患者的剂量。对于i.v.施用，优选剂量为约0.5 mg至1000mg寡聚物/70 kg。反义寡聚物可以以规律的间隔施用短时间段，例如每天一次共两周或更短时间。然而，在一些情况下，寡聚物经过较长时间段间歇地施用。施用可以随后为抗生素或其它治疗性治疗的施用或与之同时。基于免疫测定的结果、其它生物化学测试和处于治疗的主体的生理学检查，可以如所指出的调整治疗方案（剂量、频率、途径等）。
使用本发明的反义寡聚物的有效体内治疗方案可以根据施用的持续时间、剂量、频率和途径、以及处于治疗的主体的状况而变化（即，预防性施用相对于响应局限性或全身感染的施用）。相应地，此类体内疗法经常需要通过对处于治疗的特定类型病症适当的测试以及剂量或治疗方案中的相应调整来监测，以便实现最佳治疗结果。
可以例如通过本领域已知的疾病的一般指标来监测治疗。本发明的体内施用的反义寡聚物的功效可以由生物样品（组织、血液、尿等）确定，所述生物样品在反义寡聚物施用之前、期间和之后取自主体。此类样品的测定包括(1)使用本领域技术人员已知的程序，例如电泳凝胶迁移率测定，监测由靶和非靶序列的异源双链体形成的存在或不存在；(2)如通过标准技术如RT-PCR、RNA印迹、ELISA或蛋白质印迹测定的，监测突变型mRNA相对于参考正常mRNA或蛋白质的量。
在一些实施方案中，反义寡聚物被哺乳动物细胞主动摄取。在进一步的实施方案中，反义寡聚物可以与如本文所述的转运部分（例如，转运肽或CPP）缀合，以促进此类摄取。
VI. 给药
治疗组合物的制剂及其随后的施用（给药）被认为在本领域技术人员的能力内。给药取决于待治疗的疾病状态的严重性和反应性，其中治疗过程持续数天至数月，或直至实现治愈或达到疾病状态的减轻。可以由患者体内药物积累的测量来计算最佳给药时间表。普通技术人员可以容易地确定最佳剂量、给药方法和重复率。最佳剂量可以根据各个寡聚物的相对效力而变化，并且一般可以基于在体外和体内动物模型中发现有效的EC50来估计。一般而言，剂量为0.01 μg至100 g/kg体重，并且可以每天、每周、每月或每年给予一次或多次，或甚至每2至20年给予一次。基于在体液或组织中测量的药物的停留时间和浓度，本领域普通技术人员可以容易地评估关于给药的重复率。在成功治疗之后，可能期望让患者经历维持疗法，以预防疾病状态的复发，其中所述寡聚物以维持剂量施用，范围为0.01 μg至100 g/kg体重，每天一次或多次至每20年一次。
虽然已根据其某些实施方案特异性地描述了本发明，但下述实施例仅作用于示出本发明而不旨在限制其。本申请中引用的参考文献、专利、专利申请、GenBank登录号等等各自整体引入本文作为参考。
VII. 实施例
实施例1
反义靶向序列的设计
反义寡聚物靶向序列设计用于与人GAA基因中的IVS1-13T>G突变有关的治疗性剪接转换应用。此处，预期剪接转换寡聚物抑制内含子和外显子剪接沉默子元件（分别为ISS和ESS元件），且从而促进成熟GAA mRNA中的外显子2保留。正常或接近正常的GAA表达的恢复然后将允许合成功能性酶，从而对GSD-II患者提供临床益处。
某些反义靶向序列因此设计为掩盖在GAA基因的外显子2内或其侧翼内含子内的剪接沉默子元件。潜在的沉默子元件靶的非限制性实例包括hnRNPA1基序(TAGGGA)、Tra2-β基序和9G8基序。内含子1和2（分别为IVS1和IVS2）mRNA的计算机芯片二级结构分析(mFold)也用于鉴定可以提供合适的反义靶序列的长距离相互作用。起因于该分析的反义靶向序列显示于本文表2A-2C中。
将包含如表2A-2C中所示的靶向序列的示例性寡聚物制备为PMO和/或PPMO（与CPP缀合的寡聚物，例如富含精氨酸的CPP）。如下所述，使用同样如下文实施例2中所述的核转染方案，将这些反义寡聚物引入GSD-II患者衍生的成纤维细胞内。
实施例2
材料和方法
GSD-II细胞。根据具有10% FBS的Eagle's MEM中的标准方案，培养患者衍生的成纤维细胞或来自患有GSD-II的个体的淋巴细胞（Coriell细胞系GM00443和GM11661）。细胞在实验前约3-5天传代，并且在转染或核转染时为大约80%汇合。
GM00443成纤维细胞来自30岁的男性。成人形式；在三十岁开始；通过抗体检测关于GAA的mRNA、GAA蛋白的正常大小和量，但仅正常酸性α-1,4葡糖苷酶活性的9至26%；在CCR时的通道3；供体主体是杂合的，其中一个等位基因携带在GAA基因的内含子1的受体位点的位置-13处的T>G颠换，导致具有第一编码外显子缺失的可变剪接的转录物[外显子2(IVS1-13T>G)]。
GM11661成纤维细胞来自38岁的男性。肝功能测试异常；在体力活动期间偶尔的腿部抽筋；早晨头痛；对油腻食物不耐受；腹部囊肿；缺乏成纤维细胞和WBC酸性α-1,4葡糖苷酶活性；供体主体是复合杂合子：等位基因一携带在GAA基因的内含子1的受体位点的位置-13处的T>G颠换(IVS1-13T>G)；所得到的可变剪接的转录物具有外显子2的框内缺失，所述外显子2含有起始密码子；等位基因二携带外显子18的缺失。
核转染方案。将反义PMO/PPMO（与富含精氨酸的肽缀合的PMO）制备为在无核酸酶的水（未用DEPC处理）中的1-2 mM储备溶液，由其制备适当的稀释物用于核转染。GSD-II细胞受胰蛋白酶作用，计数，以90g离心10分钟，并且将1-5x105个细胞/孔重悬浮于核转染溶液P2 (Lonza)中。然后将反义PMO溶液和细胞加入Nucleocuvette 16孔条带的每个孔中，并且用程序EN-100进行脉冲。使细胞在室温下温育10分钟，并且一式两份转移到12孔板中。48小时后，使用GE Illustra 96 Spin试剂盒，遵循制造商推荐的方案，从处理的细胞中分离总RNA。回收的RNA在分析前贮存于-80℃下。
GAA RT-PCR。对于含有外显子2的mRNA的PCR检测，引物序列选自外显子1（正向）至外显子3（反向）。跨越外显子1-3的RT-PCR将生成约1177个碱基的全长扩增子。完整扩增子（~1177个碱基）和缺失外显子2（外显子2为~578个碱基）的~600碱基转录物之间的大小差异意指存在较短产物的基本优先扩增。这在测定反义寡聚物诱导全长转录物或含有外显子2的转录物的剪接的功效中设定高基准。
使用SuperScript III One-Step RT-PCR系统(Invitrogen)，执行逆转录酶PCR，以扩增GAA等位基因。从核转染的细胞中分离的400 ng总RNA被逆转录，且用基因特异性引物扩增。
One-Step试剂盒中提供的扩增溶液补充有Cy5标记的dCTP (GE)，以允许通过荧光的条带显现。消化的样品在预制的10%丙烯酰胺/TBE凝胶(Invitrogen)上运行，并且使用633nm激发激光和670nm BP 30发射滤光器在Typhoon Trio (GE)上显现，其中焦平面在压板表面处。用ImageQuant (GE)分析凝胶，以确定条带的强度。来自含有外显子2的所有条带的强度加在一起，以表示包含分析中的完全外显子2转录物水平。
可替代地，在Caliper LabChip GX生物分析仪或Agilent 2200 Tape Station上分析PCR扩增产物（不含补充的Cy5标记的dCTP），用于测定%外显子包含。
GAA酶测定和蛋白质简单Wes。未转化的患者衍生的成纤维细胞(GM00443)用在Lonza的P3核转染溶液中以不同浓度的PMO进行核转染，并且在37℃和5% CO2下温育6天。用Hank's平衡盐溶液(HBSS)洗涤细胞两次，用无缓冲的H2O裂解，冷冻/解冻三次，然后以1000r pm振荡1分钟。Bio-Rad DC™ Assay Kit用于定量总蛋白浓度。对于酶测定，将细胞裂解产物与1.4 mM 4-甲基伞形酮基α-D-吡喃葡萄糖苷在0.2 M乙酸盐缓冲液（pH 3.9或6.5）中组合，在37℃下温育三小时，然后在360 nm激发和460 nm发射下读取荧光。使用4-甲基伞形酮生成标准曲线。
使用ProteinSimple® Wes™系统(12-230 kDa Master Kit)执行对GAA蛋白的蛋白质印迹。将来自Abcam的兔抗GAA抗体[克隆EPR4716(2)]以1:100稀释，并且与1:5稀释的来自Santa Cruz Biotechnology的小鼠抗GAPDH [克隆6c5]双链体化。来自ProteinSimple®的小鼠和兔二抗1:1组合用于双链体化。使用ProteinSimple® Compass软件将GAA定量为所有形式的GAA的曲线下面积，并且针对GAPDH归一化。
实施例3
反义PMO和PPMO的制备
反义PMO设计为靶向人GAA前mRNA（例如，人GAA前mRNA的内含子1）如本文所述合成，并且用于治疗GSD-II患者衍生的成纤维细胞。
实施例4
反义寡聚物诱导GSD-II患者衍生的成纤维细胞中酸性α-葡糖苷酶升高的表达水平
通过核转染将上述反义PMO和PPMO递送至GM00443或GM11661细胞（参见上文，例如，材料和方法）。在37℃与5% CO2下温育六天后，将细胞裂解并且通过如上所述的免疫测定测量裂解产物或GAA蛋白表达中的GAA活性。一般而言，用本发明的反义寡核苷酸处理的细胞中GAA酶的蛋白质表达高于未处理的细胞中的GAA表达水平（参见下文的具体实验结果）。这些结果指示本发明的寡核苷酸在GSD-II患者衍生的成纤维细胞中诱导GAA酶的蛋白质表达水平升高。尽管不受任何理论或作用机制的束缚，但鉴于本文所述的实验结果，本发明人认为本发明的寡聚物抑制ISS和/或ESS元件，且从而促进成熟GAA mRNA中的外显子2保留。
如下述实验中详述的，评估了一系列变体PPMO和PMO寡核苷酸在来自患有庞皮病的患者的细胞中增加GAA酶表达和/或活性的能力。变体寡核苷酸的靶向序列与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补，其中与靶向序列相比，所述靶区域包含一个、两个、三个或四个另外的核碱基，其中那些另外的核碱基是胞嘧啶，并且其中一个、两个、三个或四个另外的核碱基在靶向序列中没有相应的互补核碱基（因此，“-G”（鸟嘌呤）、“-2G”、“-3G”或“-4G”注释）。另外的核碱基在靶区域内部。令人惊讶的是，发现这些变体寡核苷酸中的许多具有与具有相应的非变体靶向序列的寡核苷酸相同或相似的活性（参见例如图10b和16）。在一些情况下，与具有相应的非变体靶向序列的寡核苷酸相比，具有变体靶向序列的寡核苷酸在增加患者细胞中的GAA酶活性方面更具活性（参见例如图16）。例如，如图16中所示，与具有与GAA（非变体）100%互补的靶向序列的寡核苷酸相比，具有少一个G残基的变体靶向序列的两种不同寡核苷酸在增加衍生自庞皮患者的成纤维细胞中的GAA方面更具活性（图16）。
实验1
在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM和0.2 μM）评估选择的寡核苷酸。在核转染的细胞温育六天后，如上制备裂解产物，并且在裂解产物中测量GAA酶活性。如图1和2中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验2
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1 μM、0.2 μM和0.4 μM）评估选择的寡核苷酸。如图3和4中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验3
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1 μM、0.2 μM和0.04 μM）评估选择的寡核苷酸。如图5-8中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验4
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的寡核苷酸。如图9中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验5
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的寡核苷酸。如图10a中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验6
在另一个实验中，在GM11661细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的寡核苷酸。如图10b中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验7
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的寡核苷酸。如图11和12中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验8
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的寡核苷酸。如图13a中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验9
在另一个实验中，在GM11661细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的寡核苷酸。如图13b中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验10
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的寡核苷酸。如图14中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验11
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图15a中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验12
在另一个实验中，在GM11661细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM、0.5 μM和0.16 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图15b中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验13
在另一个实验中，在GM00443细胞中以5μM的单一剂量评估选择的寡核苷酸。如图16中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。
实验14
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图17中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.042至0.836。
实验15
在另一个实验中，在GM11661细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图18中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.086至0.414。
实验16
图19提供了在GM00443和GM11661细胞两者中评估关于选择的PPMO寡核苷酸的EC50 (μM)值的表格概括，在三个实验中求平均值，N=9。
实验17
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图20中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.149至0.896。
实验18
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图21中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.100至0.550。
实验19
在另一个实验中，在GM00443细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图22中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.025至0.675。
实验20
图23提供了在GM00443和GM11661细胞两者中评估关于选择的PPMO寡核苷酸的EC50 (μM)值的表格概括，跨越所有测定求平均值，N=9。
实验21
在另一个实验中，在GM11661细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图24中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.144至0.630。
实验22
在另一个实验中，在GM11661细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图25中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.128至0.763。
实验23
在另一个实验中，在GM11661细胞中以多重剂量（5 μM、1.6 μM和0.5 μM）评估选择的PPMO寡核苷酸。如图26中所示，与来自未处理的细胞的裂解产物中的GAA酶活性水平相比，在测试的所有浓度下用这些化合物中的每一种处理的细胞裂解产物显示出增加的GAA酶活性。另外，EC50 (μM)范围为0.002至0.218。

Claims (114)

1.一种10至40个核碱基的修饰的反义寡核苷酸，其包含：与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补的靶向序列，其中与所述靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶向序列中不具有互补的核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶区域的内部。
2.权利要求1的修饰的反义寡核苷酸，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 2或SEQ IDNO: 3中的至少一个。
3.权利要求2的修饰的反义寡核苷酸，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 2。
4.权利要求2的修饰的反义寡核苷酸，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 3。
5.权利要求1-4中任一项的修饰的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸在所述靶向序列与所述靶区域结合后促进GAA mRNA中的外显子2保留。
6.权利要求1的修饰的反义寡核苷酸，其中与所述靶向序列相比，所述靶区域包含一至三个另外的核碱基。
7.权利要求1的修饰的反义寡核苷酸，其中与和SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，所述反义寡核苷酸诱导至少两倍的GAA酶活性。
8.权利要求1的修饰的反义寡核苷酸，其中与和SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，所述反义寡核苷酸诱导至少三倍或至少四倍的GAA酶活性。
9.权利要求1的修饰的反义寡核苷酸，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO:13-58中的任何一个。
10.权利要求1的修饰的反义寡核苷酸，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、33-38、45、46和87-123中的任何一个。
11.权利要求1的修饰的反义寡核苷酸，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29或34-36中的任何一个。
12.一种式(I)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
每个Y独立地选自O和–NR4，其中每个R4独立地选自H、C1-C6烷基、芳烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2和G，其中R5选自H和C1-C6烷基，并且n是1至5的整数；
T选自OH和下式的部分：
其中：
A选自-OH、-N(R7)2和R1，其中每个R7独立地选自H和C1-C6烷基，和
R6选自OH、–N(R9)CH2C(O)NH2和下式的部分：
其中：
R9选自H和C1-C6烷基；和
R10选自G、-C(O)-R11OH、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2，其中：
m是1至5的整数，
R11具有式-(O-烷基)y-，其中y是3至10的整数，和
每个y烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R12选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地选自：
–N(R13)2，其中每个R13独立地选自H和C1-C6烷基；
式(II)的部分：
其中：
R15选自H、G、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2，其中：
R18选自H和C1-C6烷基；和
q是1至5的整数，和
每个R17独立地选自H和甲基；和
式(III)的部分：
其中：
R19选自H、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2和G，其中：
R22选自H和C1-C6烷基；和
r是1至5的整数，和
R20选自H和C1-C6烷基；或
R19和R20连同它们与之附接的氮原子一起形成具有5-7个环原子的杂环或杂芳基环，并且任选地含有选自氧、氮和硫的另外的杂原子；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)-R23、-C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2和下式的部分：
其中，
R23具有式-(O-烷基)v-OH，其中v是3至10的整数，并且每个v烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R24选自H和C1-C6烷基；
s是1至5的整数；
L选自–C(O)(CH2)6C(O)–和-C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)–；和
每个R25具有式–(CH2)2OC(O)N(R26)2，其中每个R26具有式–(CH2)6NHC(=NH)NH2，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中G可以出现一次或不存在；其中所述靶向序列选自：
I.
a) SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
b) SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
c) SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
d) SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
e) SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
f) SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
g) SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
h) SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
i) SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j) SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k) SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l) SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m) SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n) SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o) SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p) SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q) SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r) SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s) SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t) SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u) SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v) SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w) SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x) SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y) SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z) SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa) SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb) SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc) SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd) SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
ee) SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff) SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg) SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh) SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii) SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj) SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk) SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ll) SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm) SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn) SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo) SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp) SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq) SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
rr) SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss) SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt) SEQ ID NO: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
II.
a) SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b) SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c) SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d) SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e) SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f) SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g) SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h) SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i) SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j) SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k) SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l) SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m) SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n) SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o) SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p) SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q) SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
13.权利要求12的反义寡聚物化合物，其中每个R1是-N(CH3)2。
14.权利要求12的反义寡聚物化合物，R1选自：
。
15.权利要求12-14中任一项的反义寡聚物化合物，其中T选自：
Y在每次出现时是O。
16.权利要求15的反义寡聚物化合物，其中R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
17.权利要求12-14中任一项的反义寡聚物化合物，其中T选自：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。
18.权利要求12-14中任一项的反义寡聚物化合物，其中T具有下式：
，Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是G。
19.权利要求12-18中任一项的反义寡聚物化合物，其中所述CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
20.权利要求19的反义寡聚物化合物，其中Ra是乙酰基。
21.权利要求12-18中任一项的反义寡聚物化合物，其中所述CPP包含SEQ ID NO: 6-12中的任何一个所示的序列。
22.权利要求12的反义寡聚物化合物，其中T具有下式：，Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是H。
23.权利要求12-22中任一项的反义寡聚物化合物，其中X的每次出现是T。
24.一种式(VII)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自：
每个R1是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中T是或R2是G，和
其中靶向序列选自：
I.
a) SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
b) SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
c) SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
d) SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
e) SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
f) SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
g) SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
h) SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
i) SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j) SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k) SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l) SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m) SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n) SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o) SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p) SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q) SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r) SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s) SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t) SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u) SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v) SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w) SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x) SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y) SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z) SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa) SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb) SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc) SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd) SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
ee) SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff) SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg) SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh) SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii) SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj) SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk) SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ll) SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm) SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn) SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo) SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp) SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq) SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
rr) SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss) SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt) SEQ ID NO: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；或
II.
a) SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b) SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c) SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d) SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e) SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f) SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g) SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h) SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i) SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j) SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k) SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l) SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m) SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n) SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o) SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p) SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q) SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
25.权利要求24的反义寡聚物化合物，其中T具有下式：
，并且R2是G。
26.权利要求24的反义寡聚物化合物，其中R1的至少一次出现是-N(CH3)2。
27.权利要求24-26中任一项的反义寡聚物化合物，其中R1的每次出现是-N(CH3)2。
28.权利要求24-27中任一项的反义寡聚物化合物，其中G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
29.权利要求28的反义寡聚物化合物，其中Ra是乙酰基。
30.权利要求24-29中任一项的反义寡聚物化合物，其中所述CPP具有下式：
其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
31.权利要求30的反义寡聚物化合物，其中Ra是乙酰基。
32.权利要求24-30中任一项的反义寡聚物化合物，其中X的每次出现是T。
33.一种式(XX)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
I.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 13 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是22；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 14 (GCCAGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)，其中Z是22；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 15 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)，其中Z是22；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 16 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)，其中Z是22；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 17 (AGAAGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)，其中Z是22；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 18 (GAAGGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)，其中Z是22；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列（5'至3'）SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGCGAG AAA AGC XCC AGC)，其中Z是22；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 20 (AGGAAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)，其中Z是22；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 21 (CGGCXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 22 (ACGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 23 (CACGGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 24 (XCACGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 25 (CXCACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 26 (ACXCAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 27 (GCGGCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 28 (GGCGGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 29 (CGGCAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 30 (GCACXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 31 (GGCACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 32 (CACXCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 33 (GCCAGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 34 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 35 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 36 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 37 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 38 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 39 (CGGCAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 40 (GCGGCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 41 (GGCGGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 42 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)，其中Z是22；
ee)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 43 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 44 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 45 (GGCCAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 46 (GGCCAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 47 (AGGAAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 48 (AGGAAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 49 (CGGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是22；
11)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 50 (CGCXCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 51 (CCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 52 (GGCGGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 53 (GGCGGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 54 (GGCGGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 55 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)，其中Z是22；
rr)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 56 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 57 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；或
tt)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 58 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；或
II.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 59 (GGCCAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 60 (CCAGAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 61 (AAGGAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 62 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 63 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 64 (AGAAGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 65 (GCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 66 (CXCXCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 67 (XCXCAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 68 (CXCAAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 69 (XCAAAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 70 (CAAAGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 71 (AAAGCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 72 (AAGCAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 73 (AGCAGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 74 (GCAGCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；或
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 75 (CAGCXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)，
并且其中Ra是H或乙酰基。
34.权利要求33的反义寡聚物化合物，其中X的每次出现是T。
35.权利要求12-34中任一项的反义寡聚物化合物，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO:13、27-29、34-36或59中的任何一个，其中X的每次出现是T。
36.一种式(XXII a)至(XXII i)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐，其中X在每次出现时独立地选自或。
37.权利要求36的反义寡聚物化合物，其中每个X是T。
38.一种式(XXIII a)至(XXIII i)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐。
39.一种药物组合物，其包含：(a)药学上可接受的载体和(b) 10至40个核碱基的修饰的反义寡核苷酸，其包含：与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补的靶向序列，其中与所述靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶向序列中不具有互补的核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶区域的内部。
40.权利要求39的药物组合物，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3中的至少一个。
41.权利要求40的药物组合物，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 2。
42.权利要求40的药物组合物，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 3。
43.权利要求39-42中任一项的药物组合物，其中所述反义寡核苷酸在所述靶向序列与所述靶区域结合后促进GAA mRNA中的外显子2保留。
44.权利要求39的药物组合物，其中与所述靶向序列相比，所述靶区域包含一至三个另外的核碱基。
45.权利要求39的药物组合物，其中与和SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，所述反义寡核苷酸诱导至少两倍的GAA酶活性。
46.权利要求39的药物组合物，其中与和SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，所述反义寡核苷酸诱导至少三倍或至少四倍的GAA酶活性。
47.权利要求39的药物组合物，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO:13-58中的任何一个。
48.权利要求39的药物组合物，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、33-38、45、46和87-123中的任何一个。
49.权利要求39的药物组合物，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29或34-36中的任何一个。
50.一种药物组合物，其包含：(a)药学上可接受的载体和(b)式(I)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
每个Y独立地选自O和–NR4，其中每个R4独立地选自H、C1-C6烷基、芳烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2和G，其中R5选自H和C1-C6烷基，并且n是1至5的整数；
T选自OH和下式的部分：
其中：
A选自-OH、-N(R7)2和R1，其中每个R7独立地选自H和C1-C6烷基，和
R6选自OH、–N(R9)CH2C(O)NH2和下式的部分：
其中：
R9选自H和C1-C6烷基；和
R10选自G、-C(O)-R11OH、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、 -C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2，其中：
m是1至5的整数，
R11具有式-(O-烷基)y-，其中y是3至10的整数，和
每个y烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R12选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地选自：
–N(R13)2，其中每个R13独立地选自H和C1-C6烷基；
式(II)的部分：
其中：
R15选自H、G、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2，其中：
R18选自H和C1-C6烷基；和
q是1至5的整数，和
每个R17独立地选自H和甲基；和
式(III)的部分：
其中：
R19选自H、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2和G，其中：
R22选自H和C1-C6烷基；和
r是1至5的整数，和
R20选自H和C1-C6烷基；或
R19和R20连同它们与之附接的氮原子一起形成具有5-7个环原子的杂环或杂芳基环，并且任选地含有选自氧、氮和硫的另外的杂原子；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)-R23、-C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2和下式的部分：
其中，
R23具有式-(O-烷基)v-OH，其中v是3至10的整数，并且每个v烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R24选自H和C1-C6烷基；
s是1至5的整数；
L选自–C(O)(CH2)6C(O)–和-C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)–；和
每个R25具有式–(CH2)2OC(O)N(R26)2，其中每个R26具有式–(CH2)6NHC(=NH)NH2，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中G可以出现一次或不存在；其中所述靶向序列选自：
I.
a) SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
b) SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
c) SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
d) SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
e) SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
f) SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
g) SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
h) SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
i) SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j) SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k) SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l) SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m) SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n) SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o) SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p) SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q) SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r) SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s) SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t) SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u) SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v) SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w) SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x) SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y) SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z) SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa) SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb) SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc) SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd) SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
ee) SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff) SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg) SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh) SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii) SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj) SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk) SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ll) SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm) SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn) SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo) SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp) SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq) SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
rr) SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss) SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和SEQ ID NO:58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
II.
a) SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b) SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c) SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d) SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e) SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f) SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g) SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h) SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i) SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j) SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k) SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l) SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m) SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n) SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o) SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p) SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q) SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
51.权利要求50的药物组合物，其中每个R1是-N(CH3)2。
52.权利要求50的药物组合物，R1选自：
。
53.权利要求50-52中任一项的药物组合物，其中T选自：
Y在每次出现时是O。
54.权利要求53的药物组合物，其中R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
55.权利要求50-52中任一项的反义寡聚物化合物，其中T选自：
Y在每次出现时是O，并且R2是G。
56.权利要求50-52中任一项的药物组合物，其中T具有下式：
，Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是G。
57.权利要求50-56中任一项的药物组合物，其中所述CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
58.权利要求57的药物组合物，其中Ra是乙酰基。
59.权利要求50-58中任一项的药物组合物，其中所述CPP包含SEQ ID NO: 6-12中的任何一个所示的序列。
60.权利要求50的药物组合物，其中T具有下式：，Y在每次出现时是O，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是G。
61.权利要求50-60中任一项的药物组合物，其中X的每次出现是T。
62.一种药物组合物，其包含：(a)药学上可接受的载体和(b)式(VII)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自：
每个R1是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中T是或R2是G，和
其中靶向序列选自：
I.
a) SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
b) SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
c) SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
d) SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
e) SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
f) SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
g) SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
h) SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
i) SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j) SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k) SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l) SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m) SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n) SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o) SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p) SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q) SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r) SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s) SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t) SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u) SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v) SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w) SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x) SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y) SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z) SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa) SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb) SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc) SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd) SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
ee) SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff) SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg) SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh) SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii) SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj) SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk) SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ll) SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm) SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn) SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo) SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp) SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq) SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
rr) SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss) SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt) SEQ ID NO: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；或
II.
a) SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b) SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c) SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d) SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e) SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f) SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g) SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h) SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i) SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j) SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k) SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l) SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m) SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n) SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o) SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p) SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q) SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)。
63.权利要求62的药物组合物，其中T具有下式：
，并且R2是G。
64.权利要求62的药物组合物，其中R1的至少一次出现是-N(CH3)2。
65.权利要求62-64中任一项的药物组合物，其中R1的每次出现是-N(CH3)2。
66.权利要求62-65中任一项的药物组合物，其中G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
67.权利要求66的药物组合物，其中Ra是乙酰基。
68.权利要求62-66中任一项的药物组合物，其中所述CPP具有下式：
其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
69.权利要求68的药物组合物，其中Ra是乙酰基。
70.权利要求62-69中任一项的药物组合物，其中X的每次出现是T。
71.一种药物组合物，其包含：(a)药学上可接受的载体和(b)式(XX)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
I.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 13 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是22；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 14 (GCCAGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)，其中Z是22；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 15 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)，其中Z是22；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 16 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)，其中Z是22；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 17 (AGAAGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)，其中Z是22；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 18 (GAAGGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)，其中Z是22；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列（5'至3'）SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGCGAG AAA AGC XCC AGC)，其中Z是22；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 20 (AGGAAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)，其中Z是22；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 21 (CGGCXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 22 (ACGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 23 (CACGGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 24 (XCACGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 25 (CXCACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 26 (ACXCAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 27 (GCGGCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 28 (GGCGGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 29 (CGGCAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 30 (GCACXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 31 (GGCACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 32 (CACXCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 33 (GCCAGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 34 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 35 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 36 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 37 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 38 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 39 (CGGCAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 40 (GCGGCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 41 (GGCGGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 42 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)，其中Z是22；
ee)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 43 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 44 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 45 (GGCCAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 46 (GGCCAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 47 (AGGAAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 48 (AGGAAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 49 (CGGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是22；
11)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 50 (CGCXCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 51 (CCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 52 (GGCGGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 53 (GGCGGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 54 (GGCGGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 55 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)，其中Z是22；
rr)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 56 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 57 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；或
tt)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 58 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；或
II.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 59 (GGCCAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 60 (CCAGAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 61 (AAGGAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 62 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 63 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 64 (AGAAGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 65 (GCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 66 (CXCXCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 67 (XCXCAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 68 (CXCAAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 69 (XCAAAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 70 (CAAAGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 71 (AAAGCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 72 (AAGCAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 73 (AGCAGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 74 (GCAGCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；或
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 75 (CAGCXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)，
并且其中Ra是H或乙酰基。
72.权利要求71的药物组合物，其中X的每次出现是T。
73.权利要求39-72中任一项的药物组合物，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36或59中的任何一个，其中X的每次出现是T。
74.一种药物组合物，其包含：(a)药学上可接受的载体和(b)式(XXII a)至(XXII i)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐，其中X在每次出现时独立地选自或。
75.权利要求74的药物组合物，其中每个X是T。
76.一种药物组合物，其包含：(a)药学上可接受的载体和(b)式(XXIII a)至(XXIII i)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐。
77.一种用于治疗有此需要的主体中的II型糖原贮积病的方法，所述方法包括：向所述主体施用有效量的10至40个核碱基的修饰的反义寡核苷酸，其包含：与人α葡糖苷酶(GAA)基因的前mRNA的内含子1 (SEQ ID NO: 1)内的靶区域互补的靶向序列，其中与所述靶向序列相比，所述靶区域包含至少一个另外的核碱基，其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶向序列中不具有互补的核碱基，并且其中所述至少一个另外的核碱基在所述靶区域的内部，从而治疗所述主体。
78.权利要求77的方法，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3中的至少一个。
79.权利要求78的方法，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 2。
80.权利要求78的方法，其中所述靶区域包含SEQ ID NO: 3。
81.权利要求77-80中任一项的方法，其中所述反义寡核苷酸在所述靶向序列与所述靶区域结合后促进GAA mRNA中的外显子2保留。
82.权利要求77的方法，其中与所述靶向序列相比，所述靶区域包含一至三个另外的核碱基。
83.权利要求77的方法，其中与和SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，所述反义寡核苷酸诱导至少两倍的GAA酶活性。
84.权利要求77的方法，其中与和SEQ ID NO: 1内的靶区域完全互补的第二反义寡核苷酸相比，根据酶活性测试，所述反义寡核苷酸诱导至少三倍或至少四倍的GAA酶活性。
85.权利要求77的方法，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO:13-58中的任何一个。
86.权利要求77的方法，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、33-38、45、46和87-123中的任何一个。
87.权利要求77的方法，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29或34-36中的任何一个。
88.一种用于治疗有此需要的主体中的II型糖原贮积病的方法，所述方法包括：向所述主体施用有效量的式(I)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
每个Y独立地选自O和–NR4，其中每个R4独立地选自H、C1-C6烷基、芳烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)nNR5C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR5C(=NH)NH2和G，其中R5选自H和C1-C6烷基，并且n是1至5的整数；
T选自OH和下式的部分：
其中：
A选自-OH、-N(R7)2和R1，其中每个R7独立地选自H和C1-C6烷基，和
R6选自OH、–N(R9)CH2C(O)NH2和下式的部分：
其中：
R9选自H和C1-C6烷基；和
R10选自G、-C(O)-R11OH、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、 -C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)mNR12C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR12C(=NH)NH2，其中：
m是1至5的整数，
R11具有式-(O-烷基)y-，其中y是3至10的整数，和
每个y烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R12选自H和C1-C6烷基；
R1的每次出现独立地选自：
–N(R13)2，其中每个R13独立地选自H和C1-C6烷基；
式(II)的部分：
其中：
R15选自H、G、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)qNR18C(=NH)NH2和-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR18C(=NH)NH2，其中：
R18选自H和C1-C6烷基；和
q是1至5的整数，和
每个R17独立地选自H和甲基；和
式(III)的部分：
其中：
R19选自H、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)rNR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR22C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)4NH2和G，其中：
R22选自H和C1-C6烷基；和
r是1至5的整数，和
R20选自H和C1-C6烷基；或
R19和R20连同它们与之附接的氮原子一起形成具有5-7个环原子的杂环或杂芳基环，并且任选地含有选自氧、氮和硫的另外的杂原子；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基、硬脂酰基、C1-C6烷基、-C(=NH)NH2、-C(O)-R23、-C(O)(CH2)sNR24C(=NH)NH2、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NR24C(=NH)NH2、-C(O)CH(NH2)(CH2)3NHC(=NH)NH2和下式的部分：
其中，
R23具有式-(O-烷基)v-OH，其中v是3至10的整数，并且每个v烷基独立地选自C2-C6烷基；和
R24选自H和C1-C6烷基；
s是1至5的整数；
L选自–C(O)(CH2)6C(O)–和-C(O)(CH2)2S2(CH2)2C(O)–；和
每个R25具有式–(CH2)2OC(O)N(R26)2，其中每个R26具有式–(CH2)6NHC(=NH)NH2，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中G可以出现一次或不存在；其中所述靶向序列选自：
I.
a) SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
b) SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
c) SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
d) SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
e) SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
f) SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
g) SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
h) SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
i) SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j) SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k) SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l) SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m) SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n) SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o) SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p) SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q) SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r) SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s) SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t) SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u) SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v) SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w) SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x) SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y) SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z) SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa) SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb) SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc) SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd) SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
ee) SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff) SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg) SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh) SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii) SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj) SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk) SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ll) SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm) SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn) SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo) SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp) SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq) SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
rr) SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss) SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt) SEQ ID NO: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；
II.
a) SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b) SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c) SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d) SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e) SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f) SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g) SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h) SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i) SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j) SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k) SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l) SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m) SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n) SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o) SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p) SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q) SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)，从而治疗主体。
89.权利要求88的方法，其中每个R1是-N(CH3)2。
90.权利要求88的方法，R1选自：
。
91.权利要求88-90中任一项的方法，其中T选自：
Y在每次出现时是O。
92.权利要求91的方法，其中R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基。
93.权利要求88-92中任一项的方法，其中T选自：
Y在每次出现时是O ，并且R2是G。
94.权利要求88-92中任一项的方法，其中T具有下式：
，Y在每次出现时是O ，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是G。
95.权利要求88-94中任一项的方法，其中所述CPP具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
96.权利要求95的方法，其中Ra是乙酰基。
97.权利要求88-96中任一项的方法，其中所述CPP包含SEQ ID NO: 6-12中的任何一个所示的序列。
98.权利要求88的方法，其中T具有下式： ，Y在每次出现时是O ，每个R1是–N(CH3)2，并且R2是G。
99.权利要求88-98中任一项的方法，其中X的每次出现是T。
100.一种用于治疗有此需要的主体中的II型糖原贮积病的方法，所述方法包括：向所述主体施用有效量的式(VII)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列；
Z是8至38的整数；
T选自：
每个R1是–N(R4)2，其中每个R4独立地是C1-C6烷基；和
R2选自H、G、酰基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、苯甲酰基和硬脂酰基，
其中G是细胞穿透肽(“CPP”)以及选自-C(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)(CH2)2NH-CPP、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP、-C(O)CH2NH-CPP和：
的接头部分，
其中CPP通过在CPP羧基末端处的酰胺键与接头部分附接，和
其中T是或R2是G，和
其中靶向序列选自：
I.
a) SEQ ID NO: 13 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC) ，其中Z是22；
b) SEQ ID NO: 14 (GCC AGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X) ，其中Z是22；
c) SEQ ID NO: 15 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC) ，其中Z是22；
d) SEQ ID NO: 16 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC) ，其中Z是22；
e) SEQ ID NO: 17 (AGA AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA) ，其中Z是22；
f) SEQ ID NO: 18 (GAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG) ，其中Z是22；
g) SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC AGC) ，其中Z是22；
h) SEQ ID NO: 20 (AGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA) ，其中Z是22；
i) SEQ ID NO: 21 (CGG CXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j) SEQ ID NO: 22 (ACG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k) SEQ ID NO: 23 (CAC GGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l) SEQ ID NO: 24 (XCA CGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m) SEQ ID NO: 25 (CXC ACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n) SEQ ID NO: 26 (ACX CAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o) SEQ ID NO: 27 (GCG GCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p) SEQ ID NO: 28 (GGC GGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q) SEQ ID NO: 29 (CGG CAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r) SEQ ID NO: 30 (GCA CXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s) SEQ ID NO: 31 (GGC ACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t) SEQ ID NO: 32 (CAC XCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u) SEQ ID NO: 33 (GCC AGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v) SEQ ID NO: 34 (CCA GAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w) SEQ ID NO: 35 (CAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x) SEQ ID NO: 36 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y) SEQ ID NO: 37 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z) SEQ ID NO: 38 (GGC CAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa) SEQ ID NO: 39 (CGG CAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb) SEQ ID NO: 40 (GCG GCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc) SEQ ID NO: 41 (GGC GGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd) SEQ ID NO: 42 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC) ，其中Z是22；
ee) SEQ ID NO: 43 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff) SEQ ID NO: 44 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg) SEQ ID NO: 45 (GGC CAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh) SEQ ID NO: 46 (GGC CAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii) SEQ ID NO: 47 (AGG AAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj) SEQ ID NO: 48 (AGG AAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk) SEQ ID NO: 49 (CGG GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA) ，其中Z是22；
ll) SEQ ID NO: 50 (CGC XCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm) SEQ ID NO: 51 (CCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn) SEQ ID NO: 52 (GGC GGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo) SEQ ID NO: 53 (GGC GGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp) SEQ ID NO: 54 (GGC GGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq) SEQ ID NO: 55 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC) ，其中Z是22；
rr) SEQ ID NO: 56 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss) SEQ ID NO: 57 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；和
tt) SEQ ID NO: 58 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；或
II.
a) SEQ ID NO: 59 (GGC CAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b) SEQ ID NO: 60 (CCA GAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c) SEQ ID NO: 61 (AAG GAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d) SEQ ID NO: 62 (GCG GGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e) SEQ ID NO: 63 (XGG GGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f) SEQ ID NO: 64 (AGA AGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g) SEQ ID NO: 65 (GCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h) SEQ ID NO: 66 (CXC XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i) SEQ ID NO: 67 (XCX CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j) SEQ ID NO: 68 (CXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k) SEQ ID NO: 69 (XCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l) SEQ ID NO: 70 (CAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m) SEQ ID NO: 71 (AAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n) SEQ ID NO: 72 (AAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o) SEQ ID NO: 73 (AGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p) SEQ ID NO: 74 (GCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；和
q) SEQ ID NO: 75 (CAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)，从而所述治疗主体。
101.权利要求100的方法，其中T具有下式：
，并且R2是G。
102.权利要求100的方法，其中R1的至少一次出现是-N(CH3)2。
103.权利要求100-102中任一项的方法，其中R1的每次出现是-N(CH3)2。
104.权利要求100-103中任一项的方法，其中G具有下式：
其中Ra选自H、酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
105.权利要求104的方法，其中Ra是乙酰基。
106.权利要求100-104中任一项的方法，其中所述CPP具有下式：
其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。
107.权利要求100的方法，其中Ra是乙酰基。
108.权利要求100-107中任一项的方法，其中X的每次出现是T。
109.一种用于治疗有此需要的主体中的II型糖原贮积病的方法，所述方法包括：向所述主体施用有效量的式(XX)的反义寡聚物化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
I.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 13 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是22；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 14 (GCCAGA AGG AAG GC GAG AAA AGC X)，其中Z是22；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 15 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG CXC)，其中Z是22；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 16 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC XCC)，其中Z是22；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 17 (AGAAGG AAG GCG AGA AAA GCX CCA)，其中Z是22；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 18 (GAAGGA AGG CGA GAA AAG CXC CAG)，其中Z是22；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成靶向序列（5'至3'）SEQ ID NO: 19 (AAG GAA GGCGAG AAA AGC XCC AGC)，其中Z是22；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 20 (AGGAAG GCG AGA AAA GCX CCA GCA)，其中Z是22；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 21 (CGGCXC XCA AAG CAG CXC XGA GA)，其中Z是21；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 22 (ACGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AG)，其中Z是21；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 23 (CACGGC XCX CAA AGC AGC XCX GA)，其中Z是21；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 24 (XCACGG CXC XCA AAG CAG CXC XG)，其中Z是21；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 25 (CXCACG GCX CXC AAA GCA GCX CX)，其中Z是21；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 26 (ACXCAC GGC XCX CAA AGC AGC XC)，其中Z是21；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 27 (GCGGCA CXC ACG GCX CXC AAA GC)，其中Z是21；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 28 (GGCGGC ACX CAC GGC XCX CAA AG)，其中Z是21；
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 29 (CGGCAC XCA CGG CXC XCA AAG CA)，其中Z是21；
r)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 30 (GCACXC ACG GCX CXC AAA GCA GC)，其中Z是21；
s)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 31 (GGCACX CAC GGC XCX CAA AGC AG)，其中Z是21；
t)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 32 (CACXCA CGG CXC XCA AAG CAG CX)，其中Z是21；
u)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 33 (GCCAGA AGG AAG GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
v)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 34 (CCAGAA GGA AGG CGA GAA AAG C)，其中Z是19；
w)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 35 (CAGAAG GAA GGC GAG AAA AGC)，其中Z是19；
x)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 36 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA AG)，其中Z是21；
y)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 37 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA A)，其中Z是19；
z)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 38 (GGCCAG AAG GAA GGC GAG AAA)，其中Z是19；
aa)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 39 (CGGCAC XCA CGGC XCX CAA AGC A)，其中Z是21；
bb)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 40 (GCGGCA CXC ACGG CXC XCA AAG C)，其中Z是21；
cc)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 41 (GGCGGC ACX CAC G GCX CXC AAA G)，其中Z是21；
dd)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 42 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGC)，其中Z是22；
ee)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 43 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GC)，其中Z是21；
ff)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 44 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA C)，其中Z是20；
gg)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 45 (GGCCAG AAG GAA GCG AGA AAA GC)，其中Z是21；
hh)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 46 (GGCCAG AAG GAA CGA GAA AAG C)，其中Z是20；
ii)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 47 (AGGAAG CGA GAA AAG CXC CAG CA)，其中Z是21；
jj)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 48 (AGGAAC GAG AAA AGC XCC AGC A)，其中Z是20；
kk)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 49 (CGGGCX CXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是22；
11)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 50 (CGCXCX CAA AGC AGC XCX GAG A)，其中Z是20；
mm)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 51 (CCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA)，其中Z是19；
nn)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 52 (GGCGGC ACX CAC GGG CXC XCA AAG)，其中Z是22；
oo)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 53 (GGCGGC ACX CAC GCX CXC AAA G)，其中Z是20；
pp)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 54 (GGCGGC ACX CAC CXC XCA AAG)，其中Z是19；
qq)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 55 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGC)，其中Z是22；
rr)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 56 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GC)，其中Z是21；
ss)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 57 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG C)，其中Z是20；或
tt)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 58 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACC)，其中Z是19，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)；或
II.
a)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 59 (GGCCAG AAG GAA GGG CGA GAA AAG C)，其中Z是23；
b)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 60 (CCAGAA GGA AGG GCG AGA AAA GCX C)，其中Z是23；
c)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 61 (AAGGAA GGG CGA GAA AAG CXC CAG C)，其中Z是23；
d)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 62 (GCGGGA GGG GCG GCA CXC ACG GGG C)，其中Z是23；
e)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 63 (XGGGGA GAG GGC CAG AAG GAA GGG C)，其中Z是23；
f)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 64 (AGAAGG AAG GGC GAG AAA AGC XCC A)，其中Z是23；
g)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 65 (GCXCXC AAA GCA GCX CXG AGA CAX C)，其中Z是23；
h)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 66 (CXCXCA AAG CAG CXC XGA GAC AXC A)，其中Z是23；
i)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 67 (XCXCAA AGC AGC XCX GAG ACA XCA A)，其中Z是23；
j)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 68 (CXCAAA GCA GCX CXG AGA CAX CAA C)，其中Z是23；
k)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 69 (XCAAAG CAG CXC XGA GAC AXC AAC C)，其中Z是23；
l)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 70 (CAAAGC AGC XCX GAG ACA XCA ACC G)，其中Z是23；
m)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 71 (AAAGCA GCX CXG AGA CAX CAA CCG C)，其中Z是23；
n)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 72 (AAGCAG CXC XGA GAC AXC AAC CGC G)，其中Z是23；
o)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 73 (AGCAGC XCX GAG ACA XCA ACC GCG G)，其中Z是23；
p)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 74 (GCAGCX CXG AGA CAX CAA CCG CGG C)，其中Z是23；或
q)每个Nu是一个核碱基，其一起形成以下的靶向序列（5’至3’）：SEQ ID NO: 75 (CAGCXC XGA GAC AXC AAC CGC GGC X)，其中Z是23，
其中X选自尿嘧啶(U)或胸腺嘧啶(T)，
并且其中Ra是H或乙酰基，从而治疗所述主体。
110.权利要求109的方法，其中X的每次出现是T。
111.权利要求88-110中任一项的方法，其中所述靶向序列选自SEQ ID NO: 13、27-29、34-36或59中的任何一个，其中X的每次出现是T。
112.一种用于治疗有此需要的主体中的II型糖原贮积病的方法，所述方法包括：向所述主体施用有效量的式(XXII a)至(XXII i)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐，其中X在每次出现时独立地选自或，从而治疗所述主体。
113.权利要求112的方法，其中每个X是T。
114.一种用于治疗有此需要的主体中的II型糖原贮积病的方法，所述方法包括：向所述主体施用有效量的式(XXIII a)至(XXIII i)中的任何一个的反义寡聚物化合物或其药学上可接受的盐，从而治疗所述主体。
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