KR20180110411A - 와송 추출물을 포함하는 피부 개선 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 와송 추출물을 포함하는 피부 개선 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 와송 추출물은 안정성과 안전성이 뛰어나고 항산화, 미백, 주름개선 또는 자외선 차단 등의 피부 개선 효과가 매우 우수하다.

Description

와송 추출물을 포함하는 피부 개선 화장료 조성물{Cosmetic composition for skin improvement Containing Orostachys japonicus extract}

본 발명은 와송 추출물을 포함하는 피부 개선 화장료 조성물에 관한 것이다.

나이가 들면서 나타나는 피부탄력의 저하, 피부과산화로 인한 푸석거림 및 미세한 잔주름 등의 피부 노화 증후는 여성들에게 있어서 매우 큰 고민으로 이에 대한 지연이나 해결방안에 대한 지대한 관심을 가져왔다.

이의 문제로, 최근 10여년 동안 자신들의 피부를 더욱 더 젊게 가꾸어 10대 후반에서 20대 초반에 가지고 있던 깨끗하고 매끄러운 피부를 가꾸는 것이 대다수 여성들의 큰 관심사가 되었고 점차 그 연령대가 어려지고 있으며, 심지어 남성들도 자신들의 피부상태 개선과 노화방지에 관심을 갖기 시작하기 시작하면서, 항노화에 대하여 효과가 우수한 원료뿐만 아니라, 이를 함유한 화장료에 대한 관심과 수요가 폭발적으로 증가되어 전세계적으로 항노화 및 주름, 탄력개선 화장품은 스킨케어 시장에서 큰 부분을 자리 잡고 있다.

사람의 피부색을 결정하는 데는 여러 요인들이 관여하는데, 그 중에서도 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드, 빌리루빈 등의 인체 내외의 색소 함유 유무 등의 요인들이 중요하다. 특히, 가장 중요한 요인은 인체 내의 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색 색소이다. 이 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비, 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인 등이 영향을 미친다.

신체 피부의 멜라닌 세포에서 생성되는 멜라닌 색소는 검은 색소와 단백질의 복합체 형태를 갖는 페놀계 고분자 물질로서, 태양으로부터 조사되는 자외선을 차단하여 진피 이하의 피부기관을 보호해주는 동시에 피부 생체 내에 생겨난 자유 라디칼 등을 잡아주는 등 피부내 단백질과 유전자들을 보호해주는 유용한 역할을 담당한다. 이렇게 피부 내, 외부의 스트레스적 자극에 의해 생겨난 멜라닌은, 스트레스가 사라져도 피부 각질화를 통해서 외부로 배출되기 전까지는 없어지지 않는 안정한 물질이다. 하지만 멜라닌이 필요 이상으로 많이 생기게 되면 기미나 주근께, 점 등과 같은 과색소 침착증을 유발하여 미용상으로 좋지 않은 결과를 가져오게 되고, 또한 레져인구의 증가로 외부에서 활동하는 것을 즐기는 사람들이 많아지면서 자외선에 의한 멜라닌 색소 침착을 막고자하는 요구가 늘어나게 되었다. 이런 요구에 부응하여 이전부터 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체, 또는 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합하여 사용하여 왔으나, 이들의 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안전성 문제, 화장료에 배합 시 나타나는 제형 및 안정성의 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.

그러므로 낮은 독성, 높은 안정성 및 피부 개선 효과를 보유한 천연 식물을 이용한 피부 개선용 화장료 조성물에 대한 연구와 개발이 필요하다.

한국공개특허 제2010-0035746호 한국공개특허 제2009-0019887호

이에 본 발명자들은 와송 추출물 또는 이의 분획물에 항산화, 미백, 주름개선 또는 자외선 차단 등의 피부 개선 효과가 있어 피부 개선용 조성물로 사용하기 적합함을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 와송(Orostachys japonicus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 와송(Orostachys japonicus) 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 와송(Orostachys japonicus) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.

나아가 본 발명의 목적은 와송(Orostachys japonicus) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 와송(Orostachys japonicus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 피부 개선은 항산화, 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 와송을 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 C1~C4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다.

또한, 본 발명은 와송(Orostachys japonicus) 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 피부 개선은 항산화, 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 분획물은 와송을 물, n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 n-헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 또는 에틸아세테이트 분획물일 수 있다.

또한, 본 발명은 와송(Orostachys japonicus) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

나아가 본 발명은 와송(Orostachys japonicus) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 와송 추출물은 안정성과 안전성이 뛰어나고 항산화, 미백, 주름개선 또는 자외선 차단 등의 피부 개선 효과가 매우 우수하다.

도 1은 본 발명에서 사용한 와송 2가지 OJ1 및 OJ2의 사진이다.
도 2는 본 발명 와송의 추출방법을 나타낸 모식도이다.
도 3은 본 발명 와송 추출물 OJ1(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 세포독성 유무를 확인한 결과이다.
도 4는 본 발명 와송 추출물 OJ2(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 세포독성 유무를 확인한 결과이다.
도 5는 본 발명 와송 추출물 OJ1(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 항산화 정도를 DPPH 자유 라디칼 소거 검정법으로 확인한 결과이다.
도 6은 본 발명 와송 추출물 OJ2(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 항산화 정도를 DPPH 자유 라디칼 소거 검정법으로 확인한 결과이다.
도 7은 본 발명 와송 추출물 OJ1(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 환원력을 측정한 결과이다.
도 8은 본 발명 와송 추출물 OJ2(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 환원력을 측정한 결과이다.
도 9는 본 발명 와송 추출물 OJ1(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 미백 효과를 티로시나아제 저해 시험으로 확인한 결과이다.
도 10은 본 발명 와송 추출물 OJ2(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 미백 효과를 티로시나아제 저해 시험으로 확인한 결과이다.
도 11은 본 발명 와송 추출물 OJ1(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 항주름 효과를 엘라스타아제 억제 분석으로 확인한 결과이다.
도 12는 본 발명 와송 추출물 OJ2(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 항주름 효과를 엘라스타아제 억제 분석으로 확인한 결과이다.
도 13은 본 발명 와송 추출물 OJ1(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 자외선 흡수 스펙트럼을 확인한 결과이다.
도 14는 본 발명 와송 추출물 OJ2(열수 추출, 에탄올 추출 및 메탄올 추출)의 자외선 흡수 스펙트럼을 확인한 결과이다.
도 15는 35일 동안 와송 추출물 OJ1 에탄올 추출물을 포함한 스킨 제제의 pH 안정성을 확인한 결과이다.
도 16은 35일 동안 와송 추출물 OJ2 에탄올 추출물을 포함한 스킨 제제의 pH 안정성을 확인한 결과이다.
도 17은 35일 동안 와송 추출물 OJ1 에탄올 추출물을 포함한 로션 제제의 pH 안정성을 확인한 결과이다.
도 18은 35일 동안 와송 추출물 OJ2 에탄올 추출물을 포함한 로션 제제의 pH 안정성을 확인한 결과이다.
도 19는 35 일 동안 와송 추출물 OJ1 에탄올 추출물을 포함한 스킨 제제의 점도 안정성을 확인한 결과이다.
도 20은 35 일 동안 와송 추출물 OJ2 에탄올 추출물을 포함한 스킨 제제의 점도 안정성을 확인한 결과이다.
도 21은 35 일 동안 와송 추출물 OJ1 에탄올 추출물을 포함한 로션 제제의 점도 안정성을 확인한 결과이다.
도 22는 35 일 동안 와송 추출물 OJ2 에탄올 추출물을 포함한 로션 제제의 점도 안정성을 확인한 결과이다.

와송(Orostachys japonicas)은 돌나물과의 다년생 초본 식물로서, 오랫동안 간염, 폐렴, 지혈, 습진, 화상, 부종의 치료를 위한 치료제로 사용해 왔으며, 약리 작용으로는 혈관 수축작용, 호흡 흥분 작용, 장관의 긴장도 증강 작용, 혈압강화, 이뇨 작용 및 해열 작용이 있다고 알려져 있다.

한편 본 발명자들은 이러한 와송을 이용한 피부 개선용 조성물을 개발하기 위해 연구하던 중, 와송 추출물에 안정성과 안전성이 뛰어나고 항산화, 미백, 주름개선 또는 자외선 차단 등의 피부 개선 효과가 매우 우수하다는 사실을 알 수 있었다.

본 발명에서 상기 “피부 개선”은 항산화, 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선이다.

본 발명에서 상기 와송(Orostachys japonicus) 추출물은 용매로서 물, 에탄올 또는 메탄올을 사용하여 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에게 알려진 정제 방법을 이용하여 추출 및 정제될 수 있는데, 본 발명에 따른 와송 유래 추출물은 당업계에 공지된 방법, 예를 들면, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매 추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다.

또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.

바람직하게 본 발명의 피부 개선 효과를 가지는 와송 추출물은 유기용매로서 n-헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 또는 에틸아세테이트를 사용하는 추출방법을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 와송 분획물은 용매추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 공정을 수행할 수 있고, 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제하는 과정을 수행할 수 있다.

따라서 본 발명에 있어서 와송 추출물 또는 분획물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획물 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명에 따른 와송 분획물을 제조하는 방법을 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.

본 발명의 와송 유래 분획물은 (a) 건조된 와송(Orostachys japonicus) 분말을 에탄올을 이용하여 추출하는 단계; (b) 에탄올 추출물을 헥산과 물이 혼합된 혼합용매를 가하여 헥산 분획물과 물 분획물로 분획하는 단계; (c) 상기 (b) 단계를 통해 수득한 물 분획물에 디클로로메탄과 물이 혼합된 혼합용매를 가하여 디클로로메탄 분획물과 물 분획물로 분획하는 단계; 및 (d) 상기 (c)단계를 통해 수득한 물 분획물에 에틸아세테이트와 물이 혼합된 혼합용매를 가하여 에틸아세테이트 분획물과 물 분획물로 분획하는 단계를 통하여 제조될 수 있다.

이러한 각종 유기용매를 이용하여 추출물을 분획화하는 과정은 추출물(또는 분획물)이 가지고 있는 약리효과를 최대로 나타내는 분획물(fraction)을 찾아내게 하는 바, 필요 없는 물질을 분획화 과정을 통해 제거하여, 특정 효과를 나타내는 활성물질만이 최대로 농축된 추출물 상태를 만들 수 있게 한다. 이러한 분획화 과정을 통해 천연식물의 추출물은 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강기능식품의 소재로서의 활용도를 높일 수 있게 된다.

본 발명은 와송(Orostachys japonicus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에 따른 와송 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 50 중량%로 첨가할 수 있다.

와송 추출물을 화장료 총 중량에 대해 0.0001 중량% 미만으로 첨가하는 경우에는 본 발명의 화장료 조성물이 가지는 다양한 생리활성 효과를 나타내지 않으며, 반면 50 중량%를 초과하여 첨가될 경우에는 세포 등에 독성으로 작용하거나 또는 목적하는 효과를 첨가량에 비례하여 얻지 못하기 때문에 경제성을 고려하여 상기 기술된 범위 이내의 함량으로 첨가하는 것이 바람직하며, 또한 첨가량에 따른 화장료 조성물 가격이 상승되므로 경제적이지 못한 문제점이 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 상술한 와송 추출물 뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 피부에 도포하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 개선 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 와송(Orostachys japonicus) 추출물 및 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 기타 액제로 제형화될 수 있다.

구체적으로 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형, 예를 들면 정체, 트로치제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 또는 우성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀롤로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 와송 추출물, 이의 분획물 또는 분획물의 활성분획을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.

본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적절히 선택되나, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 추출물을 0.0001 ~ 500 ㎎의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며, 0.001 ~ 100㎎의 양으로 투여하는 것이 바람직하다.

아울러, 본 발명은 와송 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성분획을 유효성분으로 함유하는 피부 주름개선용 건강식품을 제공한다.

본 발명의 건강식품은 와송 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성분획을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 와송 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성분획을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 와송 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성분획은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.

그 밖에 본 발명의 와송 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물의 활성분획은 천연 과일 주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1>

실험 준비

<1-1> 와송 추출물 제조방법

본 발명에서 OJ1은 경상남도 산청에서 자랐고 OJ2는 경상남도 밀양에서 자랐다. OJ1의 경우에는 줄기, 잎 및 꽃을 고온에서 건조시켜 본 발명에서 사용하였으며 OJ2는 자연 건조시켰다.

<1-1-1> 와송 열수 추출물

건조된 와송 줄기, 잎, 꽃 200g을 2ℓ의 정제수에 넣고 약 100℃에서 4 시간 가열하여 추출하였다. 열수 추출은 두 번 행해졌다. 이 추출물을 여과지(Whatman, UK)를 통해 여과하고, 증발시키고 동결 건조시켜 사용하였다.

<1-1-2> 와송 에탄올 추출물

건조된 와송 줄기, 잎, 꽃 200g을 2ℓ의 정제수에 넣고 약 50 ℃에서 4 시간 가열하여 추출하였다. 에탄올 추출은 두 번 행해졌다. 이 추출물을 여과지(Whatman, UK)를 통해 여과하고, 증발시키고 동결 건조시켜 사용하였다.

<1-1-3> 와송 메탄올 추출물

건조된 와송 줄기, 잎, 꽃 200g을 2ℓ의 정제수에 넣고 약 40 ℃에서 4 시간 가열하여 추출하였다. 메탄올 추출은 두 번 행해졌다. 이 추출물을 여과지(Whatman, UK)를 통해 여과하고, 증발시키고 동결 건조시켜 사용하였다.

시료(a, b, c)를 증류수, 에탄올, 메탄올로 희석한 후 1,000, 500, 300, 200, 100 μg / ml의 농도로 시험에 사용하였다.

<1-2> 본 발명에서 사용한 시약 및 세포

2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH), 버섯형 티로시나제(mushroom-tyrosinase), L-tyrosine, 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine(DOPA), elastase(pancreatic solution) N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide, 아데노신(adenosine),[3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-5-(3-carboxy methoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)] (MTS), 파라아미노벤조산(para-aminobenzoic acid), 4-tert-butyl-4'-methoxydibenzoylmethane, 페리시안화 칼륨(potassium ferricyanide), 트라이클로로아세트산(trichloroacetic acid), 염화 제2철(ferric chloride), 아스코르브산(ascorbic acid), 탄산나트륨(sodium carbonate) 및 본 발명에서 사용된 다른 모든 시약은 최고 등급이다.

Folin-Denis 시약과 갈릭산은 Sigma(미국)에서 구입하였다. 한국 세포주 은행에서 구입한 마우스 흑색종세포(B16F10)를 10% (v/v) FBS (fetal bovine serum) 및 1% (v/v) 페니실린 / 스트렙토마이신(penicillin/ streptomycin)이 포함된 Dulbecco's modified Eagle's 배지(DMEM, Lonza, USA)를 사용하여 37 ℃에서 5 % CO₂ 인큐베이터 (MCO-15AC, Sanyo, Japan)에서 배양하였다.

<1-3> 본 발명에서 사용한 도구(Instruments)

돼지의 태반 추출물을 제조하기 위해 진탕 배양기(Seyoung Scientific Co.)를 사용하였다. 항균 시험에는 고속 원심 분리기 (Supra 30K, 한일 과학 공업)를 사용하였다. CO₂ 배양기(MCO-15AC, Sanyo)를 사용하여 세포를 배양하였다. PowerWave XS2 마이크로 플레이트 분광 광도계 (ELIZA Reader, BIOTEK)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. 도립 현미경(Inverted microscope; Optike)을 사용하여 세포를 관찰하였다. UV / VIS 분광 광도계(UV-2501(PC)S, Shimadzu)를 사용하여 UV 흡광도를 측정하였다.

< 실시예 2>

세포독성 실험

세포 독성 시험은 MTS 분석법을 사용하여 수정된 Mosmann 방법으로 수행되었다. B16F10 마우스 흑색종 세포를 1x10⁵ 세포/ml 농도로 24-웰 플레이트에 접종한 후 CO₂ 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다.

본 발명의 와송 추출물을 포함한 새로운 세포 배지로 교환하고 24 시간 동안 배양하였다. 이어서, MTS [3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)] (20 mg / ml)를 가하고, 37 ℃의 5 % CO₂ 인큐베이터에서 2 시간 두었다.

포마잔(Fomazan)을 DMSO에 용해시키고 96 웰 플레이트로 옮겼다. ELISA 판독기로 595 nm에서 흡광도를 측정하고 세포 생존력을 하기와 같이 계산 하였다:

Cell viability (%) = [(Exp. - Blank)/ Control] × 100

상기와 같이 세포 독성 테스트를 한 결과, 본 발명의 와송 추출물 OJ1과 OJ2의 추출물은 중간 농도에서 세포 독성을 나타내지 않았다(도 3 및 4 참조).

또한, 와송 열수 추출물은 고농도에서는 세포 독성을 나타내지 않았다. 한편, OJ1 또는 OJ2의 에탄올, 메탄올 추출물은 저농도에서 세포 독성을 나타내지 않았지만, 고농도에서는 약간 나타났음을 알 수 있었다.

< 실시예 3>

총 폴리페놀 농도 측정 분석

총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis 시약을 사용하여 측정하였다. 200 μl의 추출물(500-1,000 μg/ml)과 200 μl의 Folin-Denis 시약을 혼합하고 실온에서 3 분간 유지하였다. 이 용액에 2 M 탄산나트륨 용액 400 μl와 증류수 200 μl를 넣었다. 혼합물을 실온에서 30 분간 유지하고 마이크로 플레이트 판독기 (Power Wave XS2, BIOTEK, USA)로 725 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준 곡선은 갈산(0-500 μg/ml)을 사용하여 형성되었다.

표 1의 결과에 따르면, 유기용매 추출물의 폴리페놀 함량은 열수 추출물의 폴리페놀 함량보다 높았다. 구체적으로 열수 추출물의 경우 OJ1과 OJ2의 총 폴리페놀 함량은 유사하였으며, 에탄올 추출물의 경우 OJ2 함량은 OJ1의 함량보다 높았다. 한편, 메탄올 추출물의 경우에는 OJ1의 함량이 OJ2의 함량보다 다소 높음을 알 수 있었다.

< 실시예 4>

DPPH 자유 라디칼 소거 검정

항산화 효과는 DPPH 자유 라디칼 소거 검정을 통해 측정하였다. DPPH 자체는 517 nm에서 광 흡수를하는 매우 안정한 유리 라디칼 및 어두운 보라색 색의 화합물이다. 그러나 산화 방지제가 라디칼 소거능을 발휘하여 황색으로 변색되어 항산화 효과를 측정하기가 쉽다. DPPH 100㎕를 200㎕의 추출물과 20 분간 반응시킨 후 흡광도를 ELISA 판독기(Synergy HT, BIOTEK, USA)에서 517 nm로 측정하였다. DPPH 억제는 다음과 같이 계산되었다:

DPPH inhibition (%) = [1 (Exp. Blank) / Control] × 100

상기와 같이 DPPH 자유 라디칼 소거 검정을 통해 항산화 효과를 측정한 결과, 와송의 열수, 에탄올 및 메탄올 추출물의 경우 농도가 10 내지 100 ㎍ / ml로 증가함에 따라 선형적으로 증가하였음을 알 수 있었다(도 5 및 6 참조).

양성 대조군인 아스코르브산(ascorbic acid)의 효과는 농도에 관계없이 일정한 효과를 나타냈다. 와송 열수 추출물은 농도가 증가함에 따라 선형적으로 증가하였고, 와송 에탄올과 메탄올 추출물은 50㎍ / ml 이후 아스코르브산보다 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다(도 5 및 6 참조).

비타민 C는 강력한 항산화제이지만, 화장품으로 사용했을 때 신속하게 용해되는 것으로 잘 알려져 있다. 따라서, 본 발명의 와송 추출물은 천연 항산화제로서의 가능성이 높다.

와송 와송 에탄올 및 메탄올 추출물은 충분한 양의 페놀 화합물을 함유하고있어 높은 항산화 효과가 있다고 생각되며, 따라서 노화 방지용 천연 화장품 원료로 사용될 가능성이 높다고 평가된다.

< 실시예 5>

환원력 분석

환원력은 수정된 Oyaizu 방법에 의해 계산되었다. Fe^{3 +}는 환원력이있는 물질에 의해 Fe^{2 +}로 환원되므로 분석을 위해 분광 광도계로 측정한 색상이 노란색에서 파란색으로 변한다.

pH 6.6의 0.2M 인산 완충 용액 100㎕와 1 % 페리시안화칼륨 100㎕를 시료 100㎕에 연속적으로 가한 뒤 흔들어 섞고 50 ℃에서 20 분간 배양하였다. 이 화합물에 10 % TCA (trichloroacetic acid) 용액 100㎕를 가하고 1000rpm으로 10 분간 원심 분리하였다. 100 μl의 증류수와 10 μl의 염화 제 2 철을 100 μl의 상층액과 혼합한 뒤 마이크로플레이트리더(Molocular Devices, Sunnyvale, CA USA)로 700nm에서 흡광도를 측정하였다.

아스코르브산을 양성 대조군으로 실험한 결과 아스코르브산의 환원력은 농도가 증가함에 따라 선형적으로 증가하였으나 와송 추출물에서는 현저한 경향이 관찰되지는 않았다(도 7 및 8 참조). 그러나 항산화 활동은 항상 환원력을 감소시키는 것을 의미하지 않으며 생물 시스템에서는 두 가지 활동이 다르기 때문에 실험은 가치가 있다.

< 실시예 6>

티로시나아제 저해 효과

와송 추출물의 미백 효과를 확인하기 위해 티로시나아제 저해 시험을 하기와 같이 실시하였다.

먼저, 0.1M 인산 칼륨 완충액(pH 6.8) 220㎕, 1.5mM L-tyrosine 40㎕ 및 버섯 티로시나아제(2,000 U/ml, Sigma, USA) 20㎕를 추출물 20㎕와 37 ℃에서 10 분간 반응시켰다. 흡광도는 490 nm에서 ELISA 판독기로 측정하였고 억제율은 다음과 같이 계산 하였다 :

Inhibition ratio (%) = [1 - (Exp. - Blank) / Control] × 100

본 발명에서는 와송 추출물을 100, 200, 300, 500 및 1,000 μg / ml의 농도로 달리하여 티로시나아제 저해 효과를 측정하였다. 그러나, 알부틴(arbutin)은 단일 물질이며 와송 추출물은 여러가지 화합물을 포함하므로 간단하게 비교하기가 어렵다.

그럼에도 불구하고, 같은 양의 두 가지를 비교할 때, 와송(OJ1, OJ2) 메탄올 추출물의 효과는 와송 열수 및 에탄올 추출물의 효과보다 우수하며 동일한 경향을 나타내어 미백 효과가 있음을 알 수 있었다(도 9 및 10 참조).

H. X. Nguen et al.는 Artocarpus heterophyllous로부터의 7 가지 플라보노이드(flavonoids)의 분리 및 구조 해명과 그 티로시나제 억제 활성을 보고했다.

결론적으로 풍부한 flavonoids를 함유하고 있는 본 발명의 와송 메탄올 추출물의 경우 아주 우수한 티로시나아제 억제 효과가 있음이 확인되었다. 따라서, 본 발명의 와송 추출물은 미백용 화장품 성분의 천연자원으로 사용될 가능성이 높다.

< 실시예 7>

엘라스타아제 억제 효과

와송 추출물의 주름 개선 효과를 알아보기 위해 다음과 같이 변형된 엘라스타제 억제 분석을 수행하였다.

항주름 효과를 확인하기 위해 37 ℃에서 30 분 동안 얼마나 많은 p- 니트로 아닐리드가 생성되는지를 N-succinyl-(L-Ala)₃-p-nitroanilide를 사용하여 측정하고, 돼지 췌장 엘라스타제의 억제 활성을 연구하였다. 일정 농도의 각 시험 용액을 만들고 시험 용액 0.1ml를 시험관에 넣었다. 그런다음, 50mM Teis-HCl 완충액(pH 8.6)에 용해된 N-succinyl-(L-Ala)₃-p-nitroanilide(1㎎/ml) 0.1㎖를 가하여 30 분간 반응시킨 후, 410 nm에서 마이크로 플레이트 판독기를 이용하여 흡광도를 측정하였다.

엘라스타아제 저해 활성은 시료 용액의 첨가 및 비 첨가의 흡광도를 감소시켰다.

Inhibition ratio (%) = [1 (Exp. Blank) / Control] × 100

엘라스타아제 저해 활성을 측정한 결과, 양성 대조군인 우르솔릭산(ursolic acid)의 효과는 농도가 증가함에 따라 선형적으로 증가하였다. 그러나 본 발명의 와송 추출물(OJ1과 OJ2)의 경우 열수 추출물의 항 엘라스타아제 효과가 높지는 않지만, 메탄올 추출물의 효과는 우르솔릭산의 효과보다 훨씬 더 높았다.

상기 결과로 소수성 및 지용성인 메탄올 추출물은 친수성 추출물 및 지질의 용해도가 유사한 에탄올 추출물과는 달리 주름 개선 효과를 나타내는 주목할만한 항 엘라스타아제 활성을 갖는 것으로 판단된다(도 11 및 12 참조).

T. S. Thring et al.는 플라반-3-올스, 퀘르세틴, 켐페놀, 갈산, 카페익산, 쿠마르산을 주요 화학 성분으로 가지는 흰 차 추출물의 항 엘라스타아제 활성 및 항 콜라게나아제 활성을 보고했다.

따라서, 본 발명의 와송 메탄올 추출물은 충분한 플라보노이드를 함유하고 있어 항 엘라스타아제 활성이 높다는 것이 입증되었다. 즉, 본 발명의 와송 추출물은 주름 개선 효과를 위한 천연 화장품 원료로 사용될 가능성이 높다.

< 실시예 8>

UV A and B 보호 효과

본 발명 와송 추출물의 UV 흡광도를 측정하였다. 자외선을 차단하는 재료로는 폴리페놀, 자외선 흡수제, 자외선 산란제 등의 유기물을 들 수 있으며, 예를 들면 TiO₂, ZnO 등의 무기물을들 수 있다. UV B 보호를 위한 파라 아미노벤조산 (PABA), UV A 보호를 위한 4-tert-butyl-4'-methoxydibenzoylmethane을 포함한 유기 물질을 대조군으로 사용하여 화학 작용을 통해 자외선이 피부로 흡수되는 것을 방지했다.

10 mg의 열수, EtOH 또는 MeOH 추출물을 각각 10 ml의 증류수, EtOH 또는 MeOH에 용해시키고 각각의 용액을 원 용액의 1/10로 희석하여 사용하였다. PABA 및 4-tert-butyl-4'-methoxydibenzoylmethane을 표준물질로 사용하였다. UV / VIS 분광 광도계[UV-2501(PC)S, Shimadzu]를 사용하여 280 내지 400 nm 범위의 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 13 및 14에서 볼 수 있듯이 OJ1의 경우 에탄올과 메탄올 추출물은 UV B 보호에 사용된 PABA보다 약간 낮은 값을 나타내지만 OJ2의 경우에는 에탄올과 메탄올의 효과가 양성 대조군인 PABA보다 높았다.

플라보노이드의 UV 흡수 특성은 오랫동안 UV 차단에서 플라보노이드의 역할에 대한 증거로 간주되어 왔다. 실제로, 플라보노이드는 종종 잎의 표피 세포층인 꽃가루 및 정점 분열 조직과 같은 자외선에 민감한 조직에 존재한다. UV 보호에서 플라보노이드의 역할은 Bieza와 Lois가 애기장대(Arabidopsis) 돌연변이를 분리함으로써 극도로 높은 UV B 수준을 견딜 수 있음을 뒷받침한다.

따라서, 본 발명 와송 추출물의 플라보노이드 함량은 매우 높기 때문에 자외선 차단을 위한 천연 화장품 성분으로 사용될 가능성이 높다.

< 실시예 9>

pH 및 점도 안정성 시험

본 발명 와송 추출물 중 에탄올 추출물을 사용하여 스킨 또는 로션 제형을 제조하였다. 스킨은 와송 추출물 5 %, 로즈 워터 40 %, 히알루론산 2 %, 글리세린 3 %, 정제수 50 %를 함유하고, 로션에는 와송 추출물 1 %, 조조바 오일 12.5 %, 아몬드 오일, 왁스 5.5 %, 보존제 3.5 %, 정제수 65 %를 함유하고 있다.

안정성 시험으로서 스킨 및 로션의 pH, 점도 및 외관 (상분리 및 색상)을 4 ℃, 25 ℃ 및 40 ℃에서 35일 동안 4 회 평가하였다.

점도는 Brookfield 점도계(DV-1, USA)로 측정하였으며, no.63S 니들과 no. 64S 니들을 사용하여 로션과 스킨의 점도를 각각 50rpm, 30 초간 측정하였다.

안정성 테스트는 실제 상업 상황을 모방하기 위해 더운 여름 기간 동안 실험실에서 수행하였다. 그 결과, 스킨 및 로션의 외관은 백색 투명하고 분리가 관찰되지 않았다.

또한, 도 15 내지 도 22에서 알 수 있는 바와 같이, 스킨 및 로션의 pH 및 점도는 일반적으로 실온(25 ℃)에서 35 일 동안 현저하게 안정하였다. 안정성 시험에서 OJ1 및 OJ2의 에탄올(EtOH) 추출물은 화장품 스킨 또는 로션 제제에 대해 우수한 안정성을 나타냄을 확인할 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (9)

1. 와송(Orostachys japonicus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 피부 개선은 항산화, 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 와송을 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
4. 제3항에 있어서,
   상기 C1~C4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
5. 와송(Orostachys japonicus) 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물.
6. 제5항에 있어서,
   상기 피부 개선은 항산화, 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
7. 제5항에 있어서,
   상기 분획물은 와송을 물, n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 n-헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물 또는 에틸아세테이트 분획물인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
8. 와송(Orostachys japonicus) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 건강식품 조성물.
9. 와송(Orostachys japonicus) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백, 자외선 차단 또는 주름 개선용 약학적 조성물.

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