KR20240011906A - 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물 - Google Patents

와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물에 관한 것으로, 이들을 복합물로 처리함에 따라 각각 단독 처리한 경우에 비해 피부 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 효과 및 아토피 피부염 개선 효과가 월등히 우수한바, 기능성 화장료 조성물, 건강기능식품 조성물, 약학 조성물, 의약외품 조성물, 동물용 사료 첨가제 및 동물용 사료 조성물로 이용할 수 있다.

Description

와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물 {Composition for skin improvement with Orostachys japonica, Scutellaria baicalensis, Houttuynia cordata and Chamomile extracts as active ingredients}
본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체 내에서 외부 환경과 가장 밀접하게 접하고 있는 신체 기관으로 인체 내부를 보호하는 기능을 가지며, 표피(epidermis), 진피(dermis) 및 피하지방(hypodermis) 3가지로 크게 나눌 수 있다. 진피층은 프로테오글리칸류의 기질에 콜라겐 섬유와 엘라스틴 섬유가 특유의 삼차원 구조를 형성하고 있는데, 노화, 자외선, 공해, 스트레스 등에 의해 피부의 탄성 섬유가 변형되어 피부의 탄력이 감소하거나 피부가 늘어져 주름이 발생한다.
한편, 정상 피부의 각질층에는 수분이 20% 함유되어 있어 피부의 탄력성과 유연성을 유지할 수 있게 한다. 각질층의 수분이 10% 이하일 경우, 피부는 건성화되고 피부 트러블의 원인이 된다고 알려져 있다. 이러한 피부 수분 균형은 표피에 의해 조절된다. 피부 지질층의 주성분은 세라마이드이며 핵이 있는 표피층에는 치밀이음과 부착반점이 장벽 역할을 한다. 이러한 피부장벽 형성 과정에서 여러 사이토카인들이 영향을 미치며 이러한 변화는 염증성 피부 질환에서 피부장벽의 이상을 초래할 수 있다. 특히 피부장벽의 급성 손상 이후 표피에서 사이토카인 및 가려움 인자들의 발현 증가가 관찰되며, 이는 피부장벽의 구성과 기능 유지, 정상적인 표피 분화과정에 부정적인 영향을 줄 수 있다. 따라서 건강한 피부 환경을 만들기 위해 피부 장벽 및 수분 인자들을 개선시키는 것뿐만 아니라 여러 염증 인자들을 억제시키는 것도 중요하다.
이에 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 포함함에 따라 피부 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습, 아토피 피부염 개선 효과를 확인하였으며, 이를 이용한 화장료, 건강기능식품, 약학 조성물, 의약외품 조성물, 동물용 사료 첨가제 및 동물용 사료 조성물을 제공하고자 한다.
KR 10-2017377 B1
본 발명은 노화, 자외선 등에 의해 유발되는 피부 주름을 개선하고, 피부 장벽을 개선하며, 피부 보습 효과가 있는 기능성 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 기능성 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물은, 바람직하게는 추출용매로 에탄올을 사용한 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 에탄올은 더욱 바람직하게는 주정에탄올인 것이 좋다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은, 바람직하게는 와송 추출물 40~60 중량%, 황금 추출물 20~40 중량%, 어성초 추출물 1~10 중량% 및 캐모마일 추출물 10~20 중량%인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 동물용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 동물용 사료 조성물을 제공한다.
본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일을 복합물로 포함함에 따라 피부 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 효과 및 아토피 피부염 개선 효과가 있는 피부 개선용 조성물을 제공한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 세포독성을 비교한 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 DPPH 자유라디칼 소거능을 비교한 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 ABTS 자유라디칼 소거능을 비교한 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 콜라게나아제 활성 억제 효과를 비교한 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 엘라스타아제 활성 억제 효과를 비교한 도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 RANTES 발현을 비교한 도이다.
도 7는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 TARC 발현을 비교한 도이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 IL-8 발현을 비교한 도이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 각 추출물을 단독 처리한 경우와 본 발명의 복합물을 처리한 경우의 Claudin-1, Filaggrin, HAS-3 및 Aquaporin-3 발현을 비교한 도이다.
본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 기능성 화장료 조성물을 제공한다.
와송(Orostachys japonica)은 쌍떡잎식물 장미목 돌나물과의 여러해살이풀로 지붕의 기와 위에서 자라는 모양이 소나무 꽃을 닮았다고 해서 와송이라 불린다.
황금(Scutellaria baicalensis)은 쌍떡잎식물 통화식물목 꿀풀과의 여러해살이풀로 한국, 중국 등에 분포하며, 항암효과가 있다고 알려져 있다.
어성초는 삼백초과에 속하는 약모밀(Houttuynia cordata)의 지상부로, 잎을 비벼서 부수면 생선비린내가 난다고 하여 어성초라고 불린다. 어성초는 항균, 항염증 효과가 있다고 알려져 있다.
캐모마일(Chamomile)은 국화과의 풀로, 위장장애가 있을 경우 차로 마시며 긴장을 완화시키고 몸을 따뜻하게 하는 효과가 있다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 추출용매로 에탄올을 사용한 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 주정에탄올을 사용하는 것이 좋다. 주정에탄올은 전분질, 당질 원료 등을 효모를 이용하여 발효시켜 만듦으로써 인체에 무해하여 식음용으로 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물은, 바람직하게는 와송 추출물 40~60 중량%, 황금 추출물 20~40 중량%, 어성초 추출물 1~10 중량% 및 캐모마일 추출물 10~20 중량%로 구성되는 것이 좋으며, 더욱 바람직하게는 와송 추출물 45~55 중량%, 황금 추출물 25~35 중량%, 어성초 추출물 4~10 중량% 및 캐모마일 추출물 11~17 중량%로 구성되는 것이 좋다. 하기 실험예에서는 와송 추출물 : 황금 추출물 : 어성초 추출물 : 캐모마일 추출물이 7 : 4 : 1 : 2 중량비로 혼합된 경우 피부 개선 효과가 가장 탁월하였는데, 이에 따라 본 발명의 복합물은 일 예로 어성초 추출물 49~51 중량%, 황금 추출물 27~29 중량%, 어성초 추출물 6~8 중량%, 캐모마일 추출물 13~15 중량%인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 동물용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 동물용 사료 조성물을 제공한다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현 예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허 청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(Terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 "추출물"은 적절한 용매를 이용하여 추출한 것이며, 예를 들어, 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 당 업계에서 통상적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(Methanol), 에탄올(Ethanol), 프로판올(Propanol), 이소프로판올(Isopropanol), 부탄올(Butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane) 및 시클로헥산(Cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.
본 발명의 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(High performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 따라서, 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
본 발명의 “화장료 조성물”은 상술한 본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일에서 추출한 추출물의 화장품학적 유효량(Cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.
본 명세서에서 “화장품학적 유효량”은 상술한 본 발명의 조성물의 표피 각질형성세포의 증식을 통한 피부 재생 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(Foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장품으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알콜 설페이트, 지방족 알콜 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알콜, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 투웨이케이크, 페이스파우더, 콤팩트, 메이크업베이스, 스킨커버, 아이쉐도우, 립스틱, 립글로스, 립픽스, 아이브로우 펜슬, 화장수 등의 화장품 및 샴푸, 비누 등의 세정제에 적용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일에서 추출한 추출물 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 유효성분을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 하기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화 되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알콜 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강 기능성 식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강 기능성 식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강 기능성 식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀 기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학 조성물에는 유효성분 이외에 보조제(Adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(Witepsol), 트윈(TweenW) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.
상기 약학 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화 될 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수 있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물에는 상기 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 이외에 필요에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제는 본 발명의 효과를 달성할 수 있는한 제한되지 않으며, 예를 들어 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 윤활제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.
상기 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제의 대표적인 예로는, 락토즈, 덱스트로스, 슈크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 글리세린, 아카시아 고무, 알지네이트, 칼슘포스페이트, 칼슘카보네이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 식물성 오일, 주사가능한 에스테르, 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우리지 등이 있으며, 이에 특별히 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 조성물을 의약외품으로 사용하는 경우, 상기 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물과 동일 또는 유사한 기능을나타내는 유효성분을 1종 이상 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 공지의 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 효과를 갖는 성분을 추가로 포함할 수 있으며, 이 경우 본 발명 조성물의 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선은 더욱 증가될 수 있다. 상기 유효성분의 추가시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 상기 추가적인 유효성분은 전체 의약외품 조성물 중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량 %(w/w)로 포함될 수 있으며, 상기 함량 범위는 피부 안전성, 제형화의 용이성 등을 고려하여 당업자에 의해 적절히 조절될 수 있다. 또한, 본 발명의 의약외품 조성물은 상기 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 이외에 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 효과를 증진시키는 다른 성분 또는 물질을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물은 외용제, 산제, 살균소독제, 치약제, 연고제, 로션제, 내복용 제제(비타민·미네랄제제, 자양강장변질제), 물티슈, 스프레이 파스, 밴드 또는 패취(patch) 등을 예시할 수 있으나 이에 특별히 제한되는 것은 아니며, 의약외품의 제제화 방법, 용량, 이용방법, 구성성분 등은 당해 기술분야에 공지된 통상의 기술로부터 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.
또한, 본 발명의 동물용 사료 첨가제는, 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 등 다양한 효과를 목적으로 사료에 첨가하는 물질을 말한다.
또한, 상기 사료 첨가제는 원형 그대로 사용하거나 또는 추가적으로 동물에 허용되는 곡류 및 그 부산물 등의 공지된 담체, 안정제 등을 가할 수 있으며, 필요에 따라 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성 피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나, 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제, 탄산수소나트륨(중조), 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 E, 비타민 A, D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 리이산 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제, 항생물질, 항균제 및 기타의 첨가제 등을 가할 수도 있으며, 그 형상으로서는 분체, 과립, 펠릿, 현탁액 등 의 적당한 상태일 수 있으며, 상기 사료첨가제를 공급하는 경우는 동물 등에 대하여 단독으로 또는 사료에 혼합하여 공급할 수 있다.
또한, 상기 동물용 사료 첨가제는 배합사료의 총 중량 대비 5 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 15 중량%, 더욱 바람직하게는 10 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 배합사료는 통상적으로 시판중이고 동물에게 사료로 급여 가능한 일반 사료와, 본 발명의 사료 첨가제를 혼합한 것을 의미하고, 때때로 조사료, 농후사료, 특수사료 등을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 동물용 사료 첨가제를 포함하는 사료 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 사료 첨가제를 포함하는 사료는 당업계에서 공지된 다양한 형태의 사료로 제조 가능하며, 바람직하게는 농후사료, 조사료 또는 특수사료가 포함될 수 있다.
상기 농후사료에는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자 열매류, 곡물을 정제하고 남은 부산물로서 쌀겨, 밀기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻은 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말찌꺼기의 주성분인 잔존녹말질류 등의 찌꺼기류, 어분, 물고기 찌꺼기, 어류에서 얻은 신선한 액상물(液狀物)을 농축시킨 것인 피시솔루블(fish soluble), 육분(肉粉), 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카제인을 제조할 때의 잔액인 훼이(whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질사료, 효모, 클로렐라, 해조류 등이 있다.
상기 조사료에는 야초, 목초, 풋베기 등의 생초(生草)사료, 사료용 순무, 사료용 비트, 순무의 일종인 루터베어거 등의 뿌리채소류, 생초, 풋베기작물, 곡실(穀實) 등을 사일로에 채워 놓고 젖산 발효시킨 저장사료인 사일리지(silage), 야초, 목초를 베어 건조시킨 건초, 종축용(種畜用) 작물의 짚, 콩과 식물의 나뭇잎 등이 있다.
특수사료에는 패각, 암염 등의 미네랄 사료, 요소나 그 유도체인 디우레이드이소부탄 등의 요소사료, 천연사료 원료만을 배합했을 때 부족하기 쉬운 성분을 보충하거나, 사료의 저장성을 높이기 위해서 일반 사료에 미량으로 첨가하는 물질인 사료첨가물, 식이보조제 등이 있다.
본 발명에 따른 사료 조성물은 름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선을 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용 가능하다. 상기 개체는 동물, 예를 들어 비-영장류(예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 및 마우스) 및 영장류(예를 들면, 원숭이, 예를 들어 사이노몰구스(cynomolgous) 원숭이 및 침팬지)를 비롯한 포유동물을 나타낸다. 또 다른 구체예에서, 상기 개체는 축산용 동물(예를 들면, 말, 소, 돼지 등) 또는 애완용 동물(예를 들면, 개 또는 고양이)이다. 또한, 어류, 예를 들어, 넙치, 가자미, 뱀장어, 민물장어, 바다장어, 우럭 등 이다. 또 다른 구체예에서 상개 개체는 곤충, 예를 들면, 등에, 꽃무지, 풍뎅이, 거저리, 귀뚜라미, 누에, 반모, 백강잠, 굼벵이, 지렁이, 거머리, 지네, 전갈, 거미 등 이다.
본 발명에 따른 사료 조성물의 복용량은 개체의 종(species), 크기(size), 무게(weight), 나이(age)와 같은 다수의 요인들에 좌우될 수 있다. 원칙적으로, 전형적인 복용량은 개체/일 당 0.001 내지 1000 kg의 범위일 수 있다. 다만, 이에 한정되지 않는다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 자세히 설명한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
<실시예 1> 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 제조
1-1. 와송 추출물의 제조
건조된 와송 100g과 90%(v/v) 주정에탄올 1L를 혼합하고 40℃에서 0.04 Mpa로 감압하여 4시간 추출한 뒤 동결건조하여 와송 추출물을 제조하였다.
1-2. 황금 추출물의 제조
건조된 황금 100g과 50%(v/v) 주정에탄올 1L를 혼합하고 40℃에서 0.05 Mpa로 감압하여 4시간 추출한 뒤 동결건조하여 황금 추출물을 제조하였다.
1-3. 어성초 추출물의 제조
건조된 어성초 100g과 50%(v/v) 주정에탄올 1L를 혼합하고 40℃에서 0.06 Mpa로 감압하여 4시간 추출한 뒤 동결건조하여 어성초 추출물을 제조하였다.
1-4. 캐모마일 추출물의 제조
건조된 캐모마일 100g과 90%(v/v) 주정에탄올 1L를 혼합하고 40℃에서 0.04 Mpa로 감압하여 4시간 추출한 뒤 동결건조하여 황금 추출물을 제조하였다.
1-5. 추출수율
상기에서 제조한 각 추출물의 수율을 하기 표 1에 기재하였다.
추출물 와송 황금 어성초 캐모마일
수득량/g 10.85 11.685 7.1586 15.1585
수율/% 10.85 11.685 7.1586 15.1585
1-6. 복합물의 제조
상기에서 제조한 각 추출물을 아래 표와 같이 혼합하여 복합물을 제조하였다. 이는 본 발명의 효과를 가장 증대시킬 수 있는 최적 혼합비이다.
배합비 와송 황금 어성초 캐모마일
중량(g) 7 4 1 2
<실험예 1> 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 복합물의 세포독성시험
세포독성시험은 MTS 분석법을 사용하여 수정된 Mosmann 방법으로 수행하였다. 각질형성세포(HaCaT human keratinocyte cell)을 1 × 105 cell/well 농도로 96-well plate에 접종 후 CO2 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 또는 이들의 복합물을 포함하는 새로운 배지로 교환하고 24시간 배양하였다. MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3- carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) 20mg/ml를 처리하고 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 2시간 반응시켰다. formazan을 DMSO에 용해시키고 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 595nm에서 흡광도를 측정하였다. 도 1에 실험 결과를 나타내었다.
본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 각각과 이들을 혼합한 복합물은 모두 세포독성이 없음을 확인하였다.
<실험예 2> 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 복합물의 항산화 효과 확인
2-1. DPPH assay
DPPH를 0.2mM 농도로 에탄올에 용해한 DPPH 용액 100μL와 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 또는 이들의 복합물 100μL를 20분간 반응시킨 후 마이크로플레이트 리더로 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid를 사용하였다. 도 2에 실험 결과를 나타내었다.
[수학식 1]
DPPH inhibition(%) = [1-(Abssample/Abscontrol)] × 100
본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 복합물은 이들을 각각 단독으로 처리한 경우에 비해 DPPH 자유라디칼 소거능이 현저하게 높아 항산화 효과가 우수한 것으로 나타났다.
2-2. ABTS assay
7mM ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6- sulfonic acid))와 2.45mM potassium persulfate를 1:1로 혼합하고 암소에 16시간 보관하여 ABTS 용액을 제조하였다. ABTS 용액을 50%(v/v) 메탄올에 희석하여 745nm에서 흡광도 0.7±0.02로 제조하였다. ABTS 용액 180μL와 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 또는 이들의 복합물 20μL를 10분간 반응 시킨 후 흡광도를 마이크로플레이트 리더로 745nm에서 측정하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid를 사용하였다. 도 3에 실험 결과를 나타내었다.
[수학식 2]
ABTS inhibition(%) = [1-(Abssample/Abscontrol)] × 100
본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 복합물은 이들을 각각 단독으로 처리한 경우에 비해 ABTS 자유라디칼 소거능이 현저하게 높아 항산화 효과가 우수하였으며, 각 추출물 또는 복합물의 항산화 효능은 DPPH assay 실험 결과와 유사하게 확인되었다.
<실험예 3> 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 복합물의 주름개선 효과
3-1. 콜라게나아제(collageanase) 활성 억제
콜라겐은 피부의 주요 구성성분으로, 콜라겐의 감소에 따라 피부에 주름이 유발되며 콜라게나아제는 콜라겐을 분해하는 효소 중 하나이다. 본 실험에서는 본 발명의 복합물이 콜라게나아제 활성을 저해함에 따른 주름 개선 효과를 발휘하는지 확인하였다.
0.4 U/ml 콜라게나아제와 2mM FALGPA(N-[3-(2-Furyl) acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala)를 각각 50mM tricine buffer에 용해하여 사용하였다. 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 또는 이들의 복합물 30μL와 20μL 콜라게나아제를 혼합하여 20분간 반응시킨 뒤, 60μL FALGPA를 첨가하고 20분 후 345nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군은 EGCG를 사용하였다.
도 4에서 보듯이, 본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 복합물은 이들을 각각 단독으로 처리한 경우에 비해 콜라게나아제 활성 억제 효과가 우수하여 주름 개선 효과가 탁월한 것으로 확인되었다.
3-2. 엘라스타아제(elastase) 활성 억제
엘라스타아제는 피부 탄력을 유지해주는 단백질인 엘라스틴(elastin)을 분해하는 효소이다. 본 실험에서는 본 발명의 복합물이 엘라스타아제 활성을 저해함에 따라 피부 탄력을 증진시키고 이에 따른 주름 개선 효과를 발휘하는지 확인하였다.
0.5 U/ml 엘라스타아제와 2mM N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide를 각각 50mM tris-HCl buffer에 용해하여 사용하였다. 80μL tris-HCl buffer에 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 또는 이들의 복합물 20μL, 30μL 엘라스타아제 및 30μL N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide를 혼합하고 10분간 반응시킨 뒤, 410nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군은 EGCG를 사용하였다.
[수학식 3]
Elastase inhibition (%) = [1-(Abssample/Abscontrol)] × 100
도 5에서 보듯이, 본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 복합물은 이들을 각각 단독으로 처리한 경우에 비해 엘라스타아제 활성 억제 효과가 우수하여, 피부 탄력 증진 효과와 이에 따른 주름 개선 효과가 우수한 것으로 나타났다.
<실험예 4> 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 복합물의 아토피 피부염 완화 효과
아토피 피부염 발생에 따라 케모카인(chemokine)인과 사이토카인(cytokine)이 증가한다. 본 실험에서는 측정지표로 RANTES, TARC 및 IL-8을 사용하여 본 발명의 복합물이 아토피 피부염 개선 효과를 발휘하는지 확인하였다.
각질형성세포(HaCaT human keratinocyte cell)를 6-well plate에 1 × 106 cell/ml로 분주하고 24시간 배양하였다. 각각의 well에 serum-free DMEM에 농도별로 희석한 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 또는 이들의 복합물 200 μL/ml, TNF-α 10 ng/ml 및 IFN-γ 10 ng/ml를 24시간 처리하였다. Trizol을 이용하여 세포를 파괴하고 클로로포름(chloroform)을 첨가한 뒤 원심분리하였다. 상등액을 회수하고 동량의 이소프로필알코올(isopropyl alcohol)을 첨가하고 원심분리하였다. 형성된 펠렛(pellet)을 70%(v/v) 에탄올로 세척하였다. RNA로부터 cDNA 합성 키트를 사용하여 얻은 cDNA를 이용하여 RT-PCR을 수행하였다. 사용한 프라이머를 하기 표 3에 기재하였다.
RANTES
(CCL-5)		 forward 5’-CTCGCTGTCATCCTCATTGC-3’
reverse 5’-GGTTGGAGCACTTGCCAC-3’
TARC
(CCL-17)		 forward 5’-CCCACTGAAGATGCTGGC-3’
reverse 5’-AACTGCATTCTTCACTCTCTTG-3’
IL-8 forward 5’-GCTCTCTTGGCAGCCTTC-3’
reverse 5-‘AACTTCTCCACAACCCTCTG-3’
GAPDH forward 5’-ATCATCAGCAATGCCTCCTG-3’
reverse 5’-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3’
도 6 내지 8에 RT-PCR 결과를 나타내었다. 본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 복합물은 이들을 각각 단독으로 처리한 경우에 비해 케모카인과 사이토카인 모두 발현량을 대폭 감소시켰으며, 이에 따른 아토피 피부염 개선 효과가 우수함을 확인하였다.
<실험예 5> 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 복합물의 피부 장벽 개선 효과
피부 각질층은 중요한 물리적 피부장벽으로서 각질세포와 그 사이를 채우는세라마이드, 천연보습인자, 세포간 지질로 구성되어 있다. 세라마이드는 세포간 지질에 포함되어 각질세포를 연결 및 수분의 증발을 억제하고, 천연보습인자는 각질세포와 어우러져 수분을 붙잡아두는 역할을 한다. 본 실험에서는 본 발명의 복합물이 피부장벽 구성의 주요 인자(Claudin-1, Filaggrin)와 피부 보습 주요 인자(HAS-3, Aquaporin-3)에 미치는 영향을 확인하였다.
각질형성세포(HaCaT human keratinocyte cell)를 6-well plate에 1 × 106 cell/ml로 분주하고 24시간 배양하였다. 각각의 well에 serum-free DMEM에 농도별로 희석한 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물 또는 이들의 복합물 200 μL/ml, TNF-α 10 ng/ml 및 IFN-γ 10 ng/ml를 24시간 처리하였다. 상기 실시예 3과 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행하여 Claudin-1, Filaggrin, HAS-3 및 Aquaporin-3의 mRNA 발현량을 확인하였다. PCR 산물은 1.2% agarose gel에 전기영동하여 결과를 확인하였다. 사용한 프라이머를 하기 표 4에 기재하였다.
Claudin-1 forward 5’-GGCAGATCCAGTGCAAAGTC-3’
reverse 5’-CAAAGTAGGGCACCTCCCAG-3’
Filaggrin forward 5’-TCGGCAAATCCTGAAGAATCC-3’
reverse 5-‘CTGTTTCTCTTGGGCTCTTGG-3’
HAS-3 forward 5’-ACCAGGAGGACCCTGACTAC-3’
reverse 5-‘CCAGGACTCGAAGCATCTCG-3’
Aquaporin-3 forward 5’-AGATGCTCCACATCCGCTAC-3’
reverse 5’-ATTCCAGCACCCAAGAAGGC-3’
GAPDH forward 5’-ATCATCAGCAATGCCTCCTG-3’
reverse 5’-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3’
도 9에서 보듯이, 본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 복합물은 이들을 각각 단독으로 처리한 경우에 비해 Claudin-1, Filaggrin, HAS-3 및 Aquaporin-3 발현량이 모두 증가하였는바, 본 발명의 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물의 복합물은 피부 장벽 개선 효과와 피부 보습 효과가 탁월한 것으로 나타났다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 구체적인 실시예를 상세하게 설명되었으나, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서 다른 구성요소를 추가, 변경, 삭제 등을 통하여, 퇴보적인 다른 발명이나 본 발명 사상의 범위 내에 포함되는 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

  1. 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 기능성 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물은,
    추출용매로 에탄올을 사용한 것인, 기능성 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 에탄올은 주정에탄올인 것인, 기능성 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은,
    와송 추출물 40~60 중량%, 황금 추출물 20~40 중량%, 어성초 추출물 1~10 중량% 및 캐모마일 추출물 10~20 중량%인 것인, 기능성 화장료 조성물.
  5. 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 건강기능식품.
  6. 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 의약외품 조성물.
  8. 와송, 황금, 어성초 및 캐모마일 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화, 피부 장벽 개선, 피부 보습 및 아토피 피부염 개선 용도의 동물용 사료 첨가제.
  9. 제8항의 사료 첨가제를 포함하는 동물용 사료 조성물.
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