KR20200068575A - 백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 및 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용, 피부 미백용, 항염증용, 또는 프리바이오틱스 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물은 콜라겐 분해효소인 MMP-1, MMP-3, 및 MMP-9의 유전자 발현을 억제하여 주름 개선 효과를 나타내고, 멜라닌의 분비 및 생성을 억제하여 피부 미백 효과를 나타낸다. 또한, 일산화질소(NO) 생성 및 염증 관련 사이토카인인 iNOS 및 IL-1β의 발현을 억제함으로써 항염증 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 유해균의 성장은 억제하고 유익균의 생장은 증진시키는 프리바이오틱스로서의 역할도 수행하는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물은 천연 소재 유래의 주름 개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물, 항염증용 약학적 조성물, 또는 프리바이오틱스 조성물 등으로 유용하게 이용될 것으로 기대된다.

Description

백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 및 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition for anti-wrinkle and whitening comprising Lilium longiflorum extract and Allium hookeri extract as active ingredients}

본 발명은 백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용, 피부 미백용, 항염증용, 또는 프리바이오틱스 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물, 프리바이오틱스 조성물, 또는 항염증용 약학적 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 각질층을 포함하는 표피와 진피, 그리고 결합조직으로 구성되어 있는데, 그 중 각질층은 표피(epidermis)의 기저세포인 케라티노사이트(keratinocyte)의 분화과정을 통해 형성되는 죽은 세포층으로 구성되어 있고 인체를 외부환경의 영향으로부터 보호해주는 역할을 담당하고 있다. 이러한 피부에서의 노화의 원인에 대해서는 크게 두 가지로 연구되고 있는데, 하나는 "내적 노화"로서 연령의 증가에 따른 피부의 구성단위인 세포의 기능변화에 기인한 것이고, 다른 하나는 "외적 노화"로서 외부 환경 즉 자외선, 공해, 스트레스 등에 의한 것으로 나눌 수 있다.

피부 진피층 기질을 이루는 중요한 성분의 하나인 콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로써 세포 외 간질에 존재하고, 중요한 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱 등이 알려져 있다. 이러한 콜라겐은 연령 및 자외선과 같은 외부 자극에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다. 노화가 되면 콜라겐 자체의 합성이 줄어들 뿐 아니라 콜라겐을 포함한 결합조직을 분해하는 MMPs(세포외기질분해효소, matrix metalloproteinases)의 활성이 증가하여 피부조직 내의 콜라겐 분해를 촉진시켜 콜라겐의 함량이 저하되는 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 이러한 MMPs를 억제하는 내재성 억제제인 TIMP(Tissue Inhibitors of Matrix Metalloproteinase)가 존재하는데 MMPs와 TIMP의 활성이 균형을 이루어 적절히 조절이 될 때에 생리적인 조직의 재구성과 항상성이 잘 유지되게 된다.

사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(melanin) 농도와 분포에 따라 결정되는데, 유전적인 요인 외에도, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 피부 표피층에 있는 멜라노사이트에서 합성되는데, 멜라노사이트 내 소기관인 멜라노좀(melanosome)에서 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같은 멜라닌의 합성이 피부 내에서 과도하게 일어나면, 피부 톤을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 등을 발생시킨다. 따라서, 피부 내의 티로시나제 활성을 저해하여 멜라닌 색소의 합성을 저해시키면, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 및 유전적인 원인에 기인하여 발생하는 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선시킬 수 있다.

한편, 백합(Lilium longiflorum)은 백합과(Liliaceae) 나리속(Lilium)에 속하는 다년생초로 흔히 백합이라 하며 높이는 30~100 cm정도이다. 백합은 크게 꽃, 잎, 줄기 및 구근 등으로 구분되며 관상용으로 많이 사용하고 있다. 백합의 주요 분포지는 온대, 열대 및 산지이다. 백합은 그 종류가 다양하며, 북반구의 온대지방에 130여 종, 아시아에 70여 종, 북아메리카에 30여 종, 유럽에 10여 종 및 유라시아 대륙에 10여 종 이상의 품종이 분포되어 있는 것으로 보고된다. 백합의 주요 성분으로는, 구근은 수분(67%), 탄수화물(27%), 단백질(3.7%) 및 지방으로 구성되어 있고, 이외에도 무기질, 비타민(B1, B2, C), 카로틴, 인(0.07%) 및 칼슘(0.01%) 등이 포함되어 있다.

또한, 삼채(Allium hookeri)는 미얀마 북쪽 히말라야 산백의 고산지가 원산지인 백합과의 여러해살이풀 식물로, 미얀마 현지어로는 쥬밋(jumyint)이라고도 불리운다. 상기 삼채는 동아시아의 중국 남부, 인도, 부탄, 스리랑카 등에서 서식하며, 주로, 해발 1,400 m 내지 4,200 m의 고산지에서 자라며, 그늘에서는 잘 자라지 못하고, 습윤한 도랑 주변과 같은 축축한 토양에서 잘 자란다. 상기 삼채는 8월 내지 9월경에 백황색의 구형의 꽃이 피고, 잎은 근생하고 선형이며, 가운데 잎맥이 뚜렷하고, 굵고 단단한 뿌리를 가진다. 상기 삼채는 매운 맛이 강하지만, 쓴맛과 단맛이 있어, 세가지 맛을 갖는다 하여 삼채라고 하며, 뿌리의 모양과 맛이 인삼의 잔뿌리와 흡사하다고 하여 삼채라고도 한다. 상기 삼채는 유황화합물(sulphur compounds), 비타민 A, 철분, 칼슘 등의 성분들이 함유되어 있고, 특히 식이 유황화합물의 함량이 높아, 식용과 약용으로 사용되고 있다.

상기 백합 및 삼채에 대하여, 종래에 상기 백합 및 삼채 각각의 단독 추출물에 대해서는 기능성 화장품 소재 등으로의 연구 결과가 보고된 바 있으나, 이들이 복합물로서 작용할 때의 약리작용 및 메커니즘에 관한 연구는 미비한 실정이었다.

이에, 본 발명자들은 상기 백합 추출물 및 삼채 추출물 복합물의 주름 개선, 피부 미백, 및 항염증 효과와 프리바이오틱스로서의 역할 등을 분석하여 천연물 유래 기능성 소재로서의 개발을 시도하였다.

한국등록특허 제1922637호

본 발명자들은 부작용을 유발하지 않는 천연물로부터 기능성 화장료 조성물, 약학적 조성물 등을 개발하기 위하여 연구한 결과, 백합 추출물 및 삼채 추출물이 복합물로 작용할 때 주름 개선, 피부 미백, 및 항염증 효과를 나타낼 뿐만 아니라 프리바이오틱스로서의 역할도 수행하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명의 목적은 백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 또는 피부 미백용 조성물, 프리바이오틱스 조성물, 피부 색소 침착 질환 치료용 약학적 조성물 또는 항염증용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선 또는 피부 미백용 화장료 또는 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 색소 침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로서, 상기 피부 색소 침착 질환은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소침착 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 조성물은 백합 추출물 5~30 중량% 및 삼채 추출물 5~30 중량%를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 규산염 0.1~10 중량%, 치커리 초산 발효물 5~10 중량%, 민들레 초산 발효물 5~10 중량%, 베타글루칸(β-glucan) 2~5 중량%, 프락토 올리고당(fructooligosaccharides) 5~15 중량%, 갈락토 올리고당(galactooligosaccharides) 5~15 중량%, 키토산 올리고 사카라이드(chitosan oligosaccharides) 1~20 중량%, 및 자일로 올리고 사카라이드(xylo oligosaccharides) 5~30 중량%로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 규산염을 0.1~10 중량%, 0.5~8 중량%, 0.5~6 중량%, 0.5~5 중량%, 1~ 5 중량% 또는 1~3 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 치커리 초산 발효물을 5~10 중량%, 5.5~9.5 중량%, 6~9 중량%, 7~9 중량%, 또는 8~9 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 민들레 초산 발효물을 5~10 중량%, 5.5~9.5 중량%, 6~9 중량%, 7~9 중량%, 또는 8~9 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 베타글루칸(β-glucan)을 2~5 중량%, 2~4 중량% 또는 2.5~3.5 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 프락토 올리고당(fructooligosaccharides)을 5~15 중량%, 6~14 중량%, 7~13 중량%, 8~12 중량%, 또는 9~11 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 갈락토 올리고당(galactooligosaccharides)을 5~15 중량%, 6~14 중량%, 7~13 중량%, 8~12 중량%, 또는 9~11 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 키토산 올리고 사카라이드(chitosan oligosaccharides)을 1~20 중량%, 1~15 중량%, 1~10 중량%, 2~9 중량%, 3~8 중량%, 3~7 중량%, 3~6 중량 %, 4~6 중량% 또는 4.5~5.5 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 자일로 올리고 사카라이드(xylo oligosaccharides)을 5~30 중량%, 5~25 중량%, 5~23 중량%, 8~23 중량%, 10~20 중량%, 12~18 중량%, 13~17 중량 %, 14~16 중량% 또는 14.5~15.5 중량%로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 백합 추출물 및 삼채 추출물은 물, 탄소 수 1 내지 4의 저급 알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 세포외기질분해효소-1(matrix metalloproteinase-1; MMP-1), 세포외기질분해효소-3(matrix metalloproteinase-3; MMP-3), 및 세포외기질분해효소-9(matrix metalloproteinase-9; MMP-9)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 멜라닌 분비 또는 생성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 일산화질소(Nitric oxide; NO)의 생성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 염증 관련 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 염증 관련 사이토카인은 유도형 일산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 또는 인터루킨 1 베타(Interleukin 1 beta; IL-1β)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 프리바이오틱스 조성물을 제공한다.

본 발명의 일구현예로서, 상기 프리바이오틱스 조성물은 대장균(Escherichia coli; E. coli)의 생장을 억제하고 락토바실러스 스포로게네스(Lactobacillus sporogenes; L. sporogenes)의 생장을 증진시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일구현예로서, 상기 약학적 조성물은 염증 관련 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 염증 관련 사이토카인은 유도형 일산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 또는 인터루킨 1 베타(Interleukin 1 beta; IL-1β)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증 억제 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 염증 억제 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물의 피부 색소 침착 질환의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 피부 색소 침착 질환을 위한 약제를 생산하기 위한 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물은 콜라겐 분해효소인 MMP-1, MMP-3, 및 MMP-9의 유전자 발현을 억제하여 주름 개선 효과를 나타내고, 멜라닌의 분비 및 생성을 억제하여 피부 미백 효과를 나타낸다. 또한, 일산화질소(NO) 생성 및 염증 관련 사이토카인인 iNOS 및 IL-1β의 발현을 억제함으로써 항염증 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 유해균의 성장은 억제하고 유익균의 생장은 증진시키는 프리바이오틱스로서의 역할도 수행하는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물은 천연 소재 유래의 주름 개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물, 항염증용 약학적 조성물, 또는 프리바이오틱스 조성물 등으로 유용하게 이용될 것으로 기대된다.

도 1은 본 발명의 일구현예에 따른 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 식물 추출 복합물(L&A complex)의 제조 과정을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일구현예에 따른 L&A complex가 HaCaT 세포에 독성이 없음을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일구현예에 따른 HaCaT 세포에서 L&A complex의 세포외기질분해효소(MMPs) 유전자 발현 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 일구현예에 따른 L&A complex가 B16F10 세포에 독성이 없음을 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일구현예에 따른 L&A complex의 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명의 일구현예에 따른 B16F10 세포에서 L&A complex의 멜라닌 분비 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명의 일구현예에 따른 B16F10 세포에서 L&A complex의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 본 발명의 일구현예에 따른 L&A complex가 RAW264.7 세포에 독성이 없음을 나타낸 도면이다.
도 9는 본 발명의 일구현예에 따른 RAW264.7 세포에서 일산화질소(nitric oxide; NO) 생성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 10은 본 발명의 일구현예에 따른 RAW264.7 세포에서 염증 관련 사이토카인 발현 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 11은 본 발명의 일구현예에 따른 L&A complex의 유해균 성장 억제 효과를 나타낸 도면이다.
도 12는 본 발명의 일구현예에 따른 L&A complex의 유익균 성장 촉진 효과를 나타낸 도면이다.
도 13은 본 발명의 일구현예에 따른 L&A complex의 주름 개선, 피부 미백, 및 항염증 효과에 대한 작용 기전을 도식화한 것이다.
도 14는 본 발명의 일구현예에 따른 HaCaT 세포에서 백합 단독 추출물, 삼채 단독 추출물의 세포외기질분해효소(MMPs) 유전자 발현 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 15는 본 발명의 일구현예에 따른 백합 단독 추출물, 삼채 단독 추출물 및 복합물(L&A complex)이 B16F10 세포에 독성이 없음을 나타낸 도면이다.
도 16은 본 발명의 일구현예에 따른 B16F10 세포에서 백합 단독 추출물, 삼채 단독 추출물 및 복합물(L&A complex)의 멜라닌 분비 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 17은 본 발명의 일구현예에 따른 B16F10 세포에서 백합 단독 추출물, 삼채 단독 추출물 및 복합물(L&A complex)의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 18은 본 발명의 일구현예에 따른 백합 단독 추출물, 삼채 단독 추출물 및 복합물(L&A complex)의 RAW264.7 세포에서 일산화질소(nitric oxide; NO) 생성 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 19는 본 발명의 일구현예에 따른 백합 단독 추출물, 삼채 단독 추출물 및 복합물(L&A complex)가 RAW264.7 세포에 독성이 없음을 나타낸 도면이다.
도 20은 본 발명의 일구현예에 따른 백합 단독 추출물의 유해균(Escherichia coli) 생장 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 21은 본 발명의 일구현예에 따른 백합 단독 추출물의 유익균(Lactobacilus Sporogenes) 생장 증진 효과를 확인한 도면이다.
도 22는 본 발명의 일구현예에 따른 삼채 단독 추출물의 유해균(Escherichia coli) 생장 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 23은 본 발명의 일구현예에 따른 삼채 단독 추출물의 유익균(Lactobacilus Sporogenes) 생장 증진 효과를 확인한 도면이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물과 피부 색소 침착 질환 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 "추출물"은 상기 백합 또는 삼채의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

본 발명의 상기 백합 또는 삼채의 추출물에 있어서, 상기 백합 또는 삼채를 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

본 발명에서 상기 백합 또는 삼채를 추출하는 데에 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 본 발명에서 백합 또는 삼채 추출물은 물, 탄소 수 1 내지 4의 저급 알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 본 발명에 있어서, 상기 백합 또는 삼채 추출물은 균의 먹이가 되기 때문에 다른 화학 용매는 사용하지 않고 물을 사용하여 추출하는 것이 바람직할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 백합 추출물 5~30중량% 및 삼채 추출물 5~30중량%를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 조성물은 상기 백합 추출물을 5~30 중량%, 7~30 중량%, 10~27 중량%, 12~25 중량%, 14~25 중량%, 15~23 중량%, 17~23 중량%, 18~22 중량%, 18~21 중량%, 19~21 중량%, 또는 19~20 중량%를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 조성물은 상기 삼채 추출물을 5~30 중량%, 7~30 중량%, 10~27 중량%, 12~25 중량%, 14~25 중량%, 15~23 중량%, 16~23 중량%, 17~22 중량%, 17~21 중량%, 17~20 중량%, 또는 18~19 중량%를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 규산염 0.1~10 중량%, 치커리 초산 발효물 5~10 중량%, 민들레 초산 발효물 5~10 중량%, 베타글루칸(β-glucan) 2~5 중량%, 프락토 올리고당(fructooligosaccharides) 5~15 중량%, 갈락토 올리고당(galactooligosaccharides) 5~15 중량%, 키토산 올리고 사카라이드(chitosan oligosaccharides) 1~20 중량%, 및 자일로 올리고 사카라이드(xylo oligosaccharides) 5~30 중량%로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 상기 조성물은 다음 단계를 포함하는 방법으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:

a) 치커리 및 민들레를 초산 발효하여 치커리 및 민들레 초산 발효물을 준비하는 단계;

b) 상기 발효물에 규산염, 삼채 추출물 및 백합 추출물을 첨가하는 단계; 및

c) 프락토 올리고당, 갈락토 올리고당, 키토산 올리고 사카라이드 및 자일로 올리고 사카라이드를 첨가하는 단계.

상기 발효물은 구체적으로 액체 배양된 것일 수 있다. 상기 배양 온도는 30℃ 내지 40℃일 수 있으며, 배양 시간은 10시간 내지 30시간일 수 있다.

상기 ‘발효’는 배양방법이 크게 한정되지 않지만, 예를 들어 액상 배양 탱크, 회전 드럼식 발효기(rotarydrum fermentor) 또는 트레이 발효기 (tray fermentor)를 사용하여 배양할 수 있다. 상기 발효기 이외에도 혼합물의 발효에 유용한 것이라면 그 형식에 제한 없이 본 출원의 방법에 사용될 수 있고, 생산 규모에 따라 적절한 장치를 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, '주름 개선 효과'라 함은 콜라겐 분해효소를 억제하고 콜라겐 생성을 촉진하여 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.

본 발명에 있어서, '미백'이라 함은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 말한다.

본 발명에 따른 조성물은 과도한 멜라닌 색소 침착의 병리 상태, 예를 들어 노화/광노화, 임신 등 급격한 호르몬의 변화, 상처, 염증, 화상 등으로 인한 피부 손상과 재생 등을 원인으로 한 색소 침착, 기미, 주근깨, 잡티, 점, 반점, 오타모반, 검버섯, 노인성 흑자, 멜라닌피부증 등을 개선하고 완화하기 위하여 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 색소 침착 질환은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소침착 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

아울러, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다.

또한, 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물은 피부 색소 침착 질환을 개선하거나, 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 목적으로 식품에 첨가될 수 있다.

본 발명에 있어서 식품은 기능성 식품 및 건강기능성 식품을 포함한다.

바람직하게는, 상기 건강기능성 식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty) 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티(inner beauty)는 '먹는 화장품 또는 뷰티 푸드'로 일컬어지는 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너 뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품과 본 발명의 추출물을 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품 또는 약제만 사용하는 것에 비해 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적인 피부 미백 효과를 볼 수 있는 장점을 가진다.

본 발명의 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시 본 발명의 리카니아 매크로카르파 추출물은 원료에 대하여 30 중량% 이하, 바람직하게는 20 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 바람직하게는 약 0.04-0.10g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 백합 추출물 및 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 피부의 주름 개선 또는 미백 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클렌저의 형태일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명의 화장료 조성물은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "세포외기질분해효소(matrix metalloproteinase; MMPs)는 포유동물들 내의 세포 외 기질과 결합조직의 거의 모든 성분의 단백질 분해 파괴의 역할을 갖는 것으로 알려진 단백질 분해 효소의 슈퍼패밀리(superfamily) 중 하나로, 구조 및 기능적 고려사항들을 기초로 하여, MMPs는 콜라게나아제들(collagenases, MMP-1, -8, 및 -13), 겔라티나아제들(gelatinases, MMP-2 및 -9), 메탈로엘라스타아제들(mettaloelastases, MMP-12), MT(막 형태, membrane type)-MMPs(MMP-14, -15, -16, -17, -24, 및 -25), 마트릴리신들(matrilysins, MMP-7 및 -26), 스트로멜리신들(stromelysins, MMP-3, -10, 및 -11) 및 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor, TNF-전환 효소들(TACE 및 ACE)과 같은, 쉐다아제(sheddase)들과 같은 상이한 패밀리들 및 서브패밀리들로 분류되어왔다. 특히, MMP-1은 피부 내의 콜라겐의 가장 흔한 형태인, Ι-형 콜라겐의 저하에 책임이 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 세포외기질분해효소 중에서 세포외기질분해효소-1(matrix metalloproteinase-1; MMP-1), 세포외기질분해효소-3(matrix metalloproteinase-3; MMP-3), 및 세포외기질분해효소-9(matrix metalloproteinase-9; MMP-9)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 멜라닌 분비 또는 생성을 억제할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "멜라닌(melanin)"은 여러 동물들의 피부나 눈 등의 조직에 존재하는 흑색 또는 갈색 색소를 총칭한다. 특히 멜라닌은 사람의 피부색을 결정하는 중요한 요소로써 인종에 따라서 멜라닌 발현 유전자가 다르고, 이에 따라 멜라닌 세포의 양이 조절되어 피부색이 결정된다. 피부에서 멜라닌의 기능은 자외선 차단 기능으로서 피부의 체온을 유지시켜주고 자외선으로부터 피부를 보호해 주지만, 과도한 멜라닌 생성은 기미, 주근깨, 피부 반점 형성에 원인이 되며, 더 나아가 피부암 유발에 기여한다. 현재 화장품 분야에는 이러한 멜라닌 형성과정의 불균형으로 인한 색소침착을 막기 위하여 tyrosinase 억제를 target으로 하는 물질들을 개발 중이며 대표적으로 kojic acid를 들 수 있다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 프리바이오틱스 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "프리바이오틱스(prebiotics)"는 장내 유용한 미생물인 프로바이오틱스(probiotics)의 먹이가 되는 양분을 의미하는 것으로, 대장 내 유용 미생물에 의해 이용되어 미생물의 생육이나 활성을 촉진함으로써 숙주 건강에 좋은 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 프리바이오틱스 조성물은 대장균(Escherichia coli; E.coli)의 생장을 억제하고 락토바실러스 스포로게네스(Lactobacillus sporogenes; L.sporogenes)의 생장을 증진시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 염증반응을 억제함으로써, 아토피 피부염, 건선, 부비동염, 비염, 결막염, 천식, 피부염, 염증성 콜라겐 혈관질환, 사구체신염, 뇌염, 염증성 장염, 만성 폐쇄성 폐질환, 패혈증, 패혈성 쇼크증, 폐섬유증, 미분화 척추관절증, 미분화 관절병증, 관절염, 염증성 골용해, 바이러스 또는 박테리아 감염에 의한 만성 염증질환, 대장염, 궤양성 대장염, 염증성 장질환, 타입 1 당뇨병, 타입 2 당뇨병, 관절염, 류마티스 관절염, 반응성 관절염, 골관절염, 건선, 공피증, 골다공증, 아테롬성 동맥경화증, 심근염, 심내막염, 심낭염, 낭성 섬유증, 하시모토 갑상선염, 그레이브스병, 나병, 매독, 라임병(Lyme disease), 보렐리아증(Borreliosis), 신경성-보렐리아증, 결핵, 사르코이드증(Sarcoidosis), 루프스, 동창성 루프스, 결핵성 루프스, 루프스 신염, 전신성 홍반성 루프스, 황반변성, 포도막염, 과민대장 증후군, 크론씨병, 쇼그랜 증후군, 섬유근통, 만성피로 증후군, 만성피로 면역부전 증후군, 근육통성 뇌척수염, 근위축성 측삭경화증, 파키슨병, 및 다발성경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염증성 질환을 억제할 수 있으나, 상기 염증성 질환의 종류에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 사용되는 용어 "약학적 조성물"은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 피부 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다.

본 발명의 백합 추출물 및 삼채 추출물은 조성물에 1 pg 내지 30g w/v%로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 예컨대, 상기 조성물이 약학 제형으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 추출물을 포함할 수 있을 것이다. 따라서, 일일 투여량은 상기 추출물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 내지 6 회 투여될 수 있다.

본 발명에서 약학적 조성물(pharmaceutical composition)은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제, 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에서 "담체(carrier)"란 비이클(vehicle)이라고도 불리며, 세포 또는 조직 내로의 단백질 또는 펩타이드의 부가를 용이하게 하는 화합물을 의미하는 것으로서, 예를 들어 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기물의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.

본 발명에서 "희석제(diluent)"란 대상 단백질 또는 펩타이드의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 단백질 또는 펩타이드를 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 체액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다. 여기에 사용된 아젤라산을 함유하는 화합물들은 인간 환자에게 그 자체로서, 또는 결합 요법에서와 같이 다른 성분들과 함께 또는 적당한 담체나 부형제와 함께 혼합된 약학적 조성물로서, 투여될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 분해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구, 바람직하게는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 근육 주입, 정맥내 주입, 피하 주입, 복강 주입, 국소 투여, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 대용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 일산화질소(Nitric oxide; NO)의 생성을 억제할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "일산화질소(Nitric oxide; NO)"는 NO 합성효소(nitric oxide synthase, 이하 NOS)에 의해 L-알지닌(L-arginine)이 산화된 후 L-시트룰린(L-citrulline)과 함께 생성된다. NO는 혈관계에 작용하여 혈관확장, 혈소판 부착 및 응집, 신경전달, 소화기관 운동 등에 관여하는 매개물질이며, 염증세포 뿐만 아니라 비면역 세포에서도 생성되어 미생물 감염에 대한 방어작용을 한다. 대식세포에서 NO의 생성은 선택적으로 iNOS의 발현에 의해서 유발되며, 그 결과 역시 다른 염증반응의 활성화를 유발하기 때문에 NO는 염증 질환의 중요한 인자라고 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 염증 관련 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제할 수 있으며, 상기 염증 관련 사이토카인은 유도형 일산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 또는 인터루킨 1 베타(Interleukin 1 beta; IL-1β)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이 때, 상기 iNOS는 칼슘이나 칼모듈린(calmodulin)에 비의존성으로서 지방다당질(lipopolysaccharide, 이하 LPS), 싸이토카인류(IFN- γ, TNF 등)의 자극으로 발현되는데, 이러한 자극에 의하여 싸이클로옥시게네이즈-2(cyclooxygenase-2, 이하 COX-2)도 함께 활성화되어 염증매개물질인 프로스타글란딘류(prostaglandins, 이하 PGs)가 생성되기 때문에 iNOS 발현과 COX-2의 발현은 매우 밀접한 관련이 있으며, 생성된 NO는 COX-2 발현에 영향을 주기도 한다.

또한, 상기 IL-1β는 손상 후 신체에 초기 경고 신호를 제공하는 백혈구 세포인 단핵구(손상된 상피 및 내피 세포에서도 소량 분비하지만)에서 주로 생산되는 단백질이다. Toll-유사 수용체와 같이 단핵구상의 여러가지 수용체들은 자극 후 IL-1β 생산을 유도하는 신호를 핵에 전송한다. 그러면, IL-1β가 주변 환경으로 분비되어, 국소 및 원거리 타겟 모두에게 신체 방어 경계를 취하도록 작용한다. 이러한 스트레스 신호의 잘 알려진 결과는 열(fever)이다. 류마티스 관절염 및 루푸스를 포함하여 패혈성 쇼크 및 자가면역 질환과 같은 특정 조건에서는, IL-1β는 관절, 골 및 그외 조직에 심각한 손상을 초래하는 염증에 기여한다.

또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증 억제 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물의 염증 억제 용도를 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는, 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명의 일 실험예에서는 HaCaT 세포에서 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)이 주름 형성 및 노화를 일으키는 유전자인 MMP-1, MMP-3, 및 MMP-9의 발현을 농도 의존적으로 감소시킴을 확인함으로써 L&A complex의 주름 개선 효과를 확인하였다(실험예 1 참조).

본 발명의 다른 실험예에서는, L&A complex가 티로시나아제(tyrosinase) 활성을 유의적으로 억제하지는 않았으나, B16F10 세포에서 농도 의존적으로 멜라닌 분비 및 생성을 억제함을 확인함으로써 L&A complex의 피부 미백 효과를 확인하였다(실험예 2 참조).

본 발명의 또 다른 실험예에서는, RAW264.7 세포에서 L&A complex가 염증반응의 생성물인 일산화질소(NO)의 생성을 억제하고, NO를 생성하는 유도형 일산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 및 인터루킨 1 베타(Interleukin 1 beta; IL-1β)의 발현을 억제함을 확인함으로써 L&A complex의 항염증 효과를 확인하였다(실험예 3 참조).

본 발명의 또 다른 실험예에서는, L&A complex가 유해균(Escherichia coli)의 생장을 저해시키고 유익균(Lactobacilus Sporogenes)의 생장은 증진시킴을 확인함으로써 L&A complex의 프리바이오틱스로서의 역할을 확인하였다(실험예 4 참조).

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 백합 추출물, 삼채 추출물, 및 이들의 복합물의 제조

먼저, 백합 및 삼채는 용매로 물을 이용하여 각각 80℃ 이상의 온도에서 열수추출하였다.

그 후, 추출된 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 식물 추출 복합물(L&A complex)을 도 1에 나타낸 제조 단계에 따라 제조하였다.

이 때, 도 1에 나타낸 L&A complex의 제조 단계에서 사용된 성분들의 중량비는 다음과 같다:

규산염 2중량%

치커리 초산 발효물(이눌린 다량 함유) 8.5중량%

민들레 초산 발효물(이눌린 다량 함유) 8.5중량%

베타글루칸 3중량%

프락토 올리고당(Fructooligosaccharides; FOS) 10중량%

갈락토 올리고당(Galactooligosaccharides; GOS) 10중량%

키토산 올리고 사카라이드(Chitosan oligosaccharides) 5중량%

자일로 올리고 사카라이드(Xylo oligosaccharides) 15중량%

백합 추출물 19.5중량%

삼채 추출물 18.5중량%

실시예 2. 세포 배양

인간 각질형성세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포 및 흑색종 세포주인 B16F10 세포는 penicillin(100 IU/ml) 및 streptomycin(100 ㎍/ml)과 10%의 FBS를 함유하는 DMEM 배지를 이용하여 100 mm cell culture dish에 70-80%의 밀도로 배양하였다. 또한, 마우스 대식세포주인 RAW264.7 세포는 penicillin(100 IU/ml) 및 streptomycin (100 ㎍/ml)과 10%의 FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지를 이용하여 100 mm cell culture dish에 70-80%의 밀도로 배양하였다.

실험예 1. 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물의 주름 개선 효과 확인

1-1. 인간 각질형성세포인 HaCaT 세포에서 세포 생존률 확인

상기 실시예 2에서 배양한 HaCaT 세포에서 세포 생존률을 확인하기 위해 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphinyltetrazolium bromide) assay 방법을 이용하여 분석하였다.

구체적으로, 96-well plate에 1 × 10⁶ cells/ml의 세포를 플레이팅하고 상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex를 농도별(0.125%(w/v), 0.25%(w/v), 0.5%(w/v), 1%(w/v), 2%(w/v))로 처리한 후, 37℃로 24시간 동안 CO₂ incubator에서 배양하였다. 이후 10 ㎕ MTT 용액(stock concentration : 5 mg/ml)을 첨가하고 3시간 동안 추가반응을 유도하였으며, 반응 종료 및 formazan crystal 용해를 위해 각 well에 100 ㎕ MTT stopping solution(10% Sodium dodecyl sulfate in 0.01M HCl)을 첨가하였다. 세포 생존율은 MTT가 formazan으로 환원된 양을 570 nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 O.D값을 통해 산출하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)이 타겟 농도인 0.5%에서 HaCaT 세포에 대해 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

1-2. 세포외기질분해효소(MMPs) 유전자 발현 억제 효과 확인

상기 실시예 2에서 배양한 HaCaT 세포를 96 well plate에 1×10⁴ cells/well로 플레이팅한 후, 18시간 동안 배양하였다. 그 후, 80% 이상의 confluence가 되면 배지를 제거한 다음, 50 μM의 H₂O₂를 처리하여 주름을 유도한 후, FBS를 포함하지 않는 배지로 교체하고 상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex를 처리하였다. 그런 다음, 24시간 세포 배양 조건에서 추가 배양하여 H₂O₂로 유도된 주름 생성 관련 유전자인 MMPs의 발현에 어떠한 영향이 있는지 평가하였다.

상기 MMPs의 발현을 분석하기 위해 RT-PCR analysis를 수행하였다. 구체적으로, 먼저 Trizol reagent를 사용하여 total RNA를 추출하였으며, 추출한 total RNA를 cDNA synthesis kit (Thermo scientific)를 사용하여 cDNA로 합성한 다음, 동량의 cDNA를 PCR로 증폭시켰다. 이때 사용한 표적단백질의 sense 및 anti-sense primer 염기서열은 기존 문헌을 참조하여 제조하고(표 1 참조), 대조군 유전자로는 GAPDH를 사용하였다. PCR은 95℃에서 15초간 denaturation, 55℃에서 15초간 annealing, 그리고 72℃에서 1분간 extension하는 조건으로 시행하였으며, 총 30회 수행하였다. PCR로 증폭된 DNA는 1.2% agarose gel에서 전기영동을 진행하였고, 분획된 DNA band의 intensity를 측정하였다.

GENE	Primer sequences	서열번호
MMP-1	F 5'-TCTGACGTTGATCCCAGAGAGCAG-3'	1
	R 5'-CAGGGTGACACCAGTGACTGCAC-3'	2
MMP-2	F 5'-AAAACGGACAAAGAGTTGGCA-3'	3
	R 5'-CTGGGGCAGTCCAAAGAAC-3'	4
MMP-3	F 5'-TGTTAGGAGAAAGGACAGTGGTC-3'	5
	R 5'-CGTCACCTCCAATCCAAGGA-3'	6
MMP-9	F 5'-GCCACTTGTCGGCGATAAGG-3'	7
	R 5'-CACTGTCCACCCCTCAGAGC-3'	8
Sirt-1	F 5'- TCGCAACTATACCCAGAACATAGACA-3'	9
	R 5'-CTGTTGCAAAGGAACCATGACA-3'	10
GAPDH	F 5'-CACTCACGGCAAATTCAACGGCAC-3'	11
	R 5'-GACTCCACGACATACTCAGCAC-3'	12

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, L&A complex를 처리한 HaCaT 세포에서 MMP-1, MMP-3, 및 MMP-9 유전자의 발현이 억제되는 것을 확인하였다.

따라서, 상기 결과로부터 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)이 주름 개선 효과를 나타내는 것을 확인하였다.

실험예 2. 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물의 피부 미백 효과 확인

2-1. 흑색종 세포주인 B16F10 세포에서 세포 생존률 확인

상기 실시예 2에서 배양한 B16F10 세포에서 세포 생존률을 확인하기 위해 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphinyltetrazolium bromide) assay 방법을 이용하여 분석하였다.

구체적으로, 96-well plate에 1 × 10⁵ cells/ml의 세포를 플레이팅하고 상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex를 농도별(0.125%(w/v), 0.25%(w/v), 0.5%(w/v), 1%(w/v), 2%(w/v))로 처리한 후, 37℃로 48시간 동안 CO₂ incubator에서 배양하였다. 이후 10 ㎕ MTT 용액(stock concentration : 5 mg/ml)을 첨가하고 3시간 동안 추가반응을 유도하였으며, 반응 종료 및 formazan crystal 용해를 위해 각 well에 100 ㎕ MTT stopping solution(10% Sodium dodecyl sulfate in 0.01M HCl)을 첨가하였다. 세포 생존율은 MTT가 formazan으로 환원된 양을 570 nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 O.D값을 통해 산출하였다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)이 타겟 농도인 0.5%에서 B16F10 세포에 대해 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

2-2. 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제 효과 확인

96 well plate에 tyrosinase의 기질물질인 1 mg/ml L-DOPA 50㎕와 0.125, 0.25, 0.5%의 L&A complex 50㎕를 혼합하고, 양성대조군으로는 300 μM Kojic acid를 사용하였다. 혼합액에 100 unit/㎖ mushroom tyrosinase (Sigma, USA) 50 ㎕를 첨가하고, 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 반응액을 475 ㎚에서 흡광도를 측정하고, L&A complex를 처리하지 않은 시료의 흡광도를 100% 기준으로 하여, tyrosinase 활성을 계산하여 분석하였다.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, mushroom tyrosinase에 대한 활성 평가에서는 L&A complex가 tyrosinase에 대해 유의한 억제 효과를 나타내지 않는 것을 확인하였다.

2-3. 멜라닌(melanin) 분비 및 생성 억제 효과 확인

상기 실시예 2에서 배양한 B16F10 세포를 6 well plate에 well당 3×10⁵개의 세포가 되도록 분주하여 24시간 동안 배양한 후, 각 well에 L&A complex를 0.125, 0.25, 0.5%(w/v) 처리하고, 모든 well에 α-MSH를 100 nM이 되도록 처리하였다. 양성대조군으로는 멜라닌 형성을 억제한다고 잘 알려진 알부틴(arbutin) 1mM을 처리하였다. 시료를 처리한 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기에서 48시간 동안 배양하고, 48시간 후에 세포 배양액 800 ㎕를 새 튜브에 옮기고 4℃에서 12,000 rpm으로 5분간 원심분리하여 상층액을 확보하였다. 확보한 상층액 중 100 ㎕를 96 well plate에 분주하고 475 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, α-MSH만을 처리한 세포 배양액에서의 멜라닌 형성 양을 100% 기준으로 하여, 멜라닌 양을 계산하였다.

그 결과, 도 6 및 7에 나타낸 바와 같이, L&A complex를 처리한 B16F10 세포에서 멜라닌의 분비(도 6)및 멜라닌의 생성(도 7)이 억제되는 것을 확인하였다.

따라서, 상기 결과로부터 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)은 멜라닌의 분비 및 생성을 억제시킴으로써 피부 미백 효과를 나타내는 것을 확인하였으며, 상기 L&A complex는 tyrosinase에 대해서는 유의한 억제 효과를 나타내지 않는 것을 확인함으로써 tyrosinase와의 상관관계는 없을 것으로 예상되고, 그 외 다른 신호전달 경로를 억제하여 멜라닌 형성을 저해시킬 것으로 예상되었다.

실험예 3. 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물의 항염증 효과 확인

3-1. 대식세포주인 RAW264.7 세포에서 세포 생존률 확인

상기 실시예 2에서 배양한 RAW264.7 세포에서 세포 생존률을 확인하기 위해 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphinyltetrazolium bromide) assay 방법을 이용하여 분석하였다.

구체적으로, 96-well plate에 1 × 10⁶ cells/ml의 세포를 플레이팅하고 상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex를 농도별(0.125%(w/v), 0.25%(w/v), 0.5%(w/v), 1%(w/v), 1.5%(w/v), 2%(w/v))로 처리한 후, 37℃로 24시간 동안 CO₂ incubator에서 배양하였다. 이후 10 ㎕ MTT 용액(stock concentration : 5 mg/ml)을 첨가하고 3시간 동안 추가반응을 유도하였으며, 반응 종료 및 formazan crystal 용해를 위해 각 well에 100 ㎕ MTT stopping solution(10% Sodium dodecyl sulfate in 0.01M HCl)을 첨가하였다. 세포 생존율은 MTT가 formazan으로 환원된 양을 570 nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 O.D값을 통해 산출하였다.

그 결과, 도 8에 나타낸 바와 같이, 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)은 RAW264.7 세포에 대해 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

3-2. 일산화질소(nitric oxide; NO) 생성 억제 효과 확인

면역은 체내에 존재하는 자기 방어 체계로서 인체가 외부로부터 침입해오는 각종 물질을 제거하고 대사시키는 과정이다. 우리 몸의 면역체계가 인식하는 대표적인 항원은 박테리아(그람 음성균)의 표면에 존재하며 방출되는 염증 유발 물질, LPS(Lipopolysaccharide)이다. LPS를 인위적인 염증을 유발시키는 자극제로 사용하여 L&A complex의 항염 효능을 확인하였다.

구체적으로, 마우스 대식세포주인 RAW264.7 세포를 penicillin (100 IU/ml) 및 streptomycin (100 μg/ml)과 10%의 FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 배양한 후 1×10⁶ cells/ml의 농도로 96 well plate에 플레이팅 하고, 5% CO₂ 및 37℃의 조건에서 18시간 동안 전배양하였다. 이후 배지를 제거하고 4배 농도로 조제된 L&A complex 50㎕와 염증 유발 물질인 lipopolysaccharide(LPS) 50㎕ (최종농도 1㎍/ml) 함유 배지를 동시에 처리하여 배양하고, 24시간 후 상층액을 100 ㎕씩 또 다른 96 well plate에 옮기고, NO 정량은 Griess 용액(0.5% naphthylethylenediamine dihydrochloride, 5% sulfanilamide, 25% H₃PO₄)을 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 sodium nitrite(0 에서 100 μM)를 사용하여 검량선을 작성하였다.

그 결과, 도 9에 나타낸 바와 같이, L&A complex를 처리한 RAW264.7 세포에서 LPS에 의한 NO 생성이 억제되는 것을 확인하였다.

3-3. 염증 관련 사이토카인 발현 억제 효과 확인

사이토카인(cytokine)의 발현 정도를 전사수준에서 조사하기 위해 L&A complex 등 각 시료를 상기 실시예 2에서 배양한 RAW264.7 세포에 6시간 동안 처리하고, Trizol reagent를 사용하여 total RNA를 추출하였다. 상기 추출한 total RNA를 cDNA synthesis kit(Thermo scientific)를 사용하여 cDNA로 합성한 다음, 동량의 cDNA를 PCR로 증폭시켰다. 이때 사용한 표적단백질의 sense 및 anti-sense primer 염기서열은 기존 문헌을 참조하여 제조하고(표 2 참조), 대조군 유전자로는 GAPDH을 사용하였다. PCR은 95℃에서 15초간 denaturation, 55℃에서 15초간 annealing 그리고 72℃에서 1분간 extension하는 조건으로 시행하였으며, 총 30회 수행하였다. PCR로 증폭된 DNA는 1% agarose gel에서 전기영동을 진행하였고, 분획된 DNA band의 intensity를 측정하였다.

GENE	Primer sequences	서열번호
iNOS	F 5 '- GTGAAGAAAACCCCTTGTGCTG -3'	13
	R 5 '- AGTTCCGAGCGTCAAAGACC -3'	14
COX-2	F 5 '- TGAGTACCGCAAACGCTTCT -3'	15
	R 5 '- TGGGAGGCACTTGCATTGAT -3'	16
TNF -α	F 5 '- TAGCCCACGTCGTAGCAAAC -3'	17
	R 5 '- ACCCTGAGCCATAATCCCCT -3'	18
IL- 1β	F 5 '- CAGGATGAGGACATGAGCACC -3'	19
	R 5 '- CTCTGCAGACTCAAACTCCAC -3'	20
IL-6	F 5 '- GCCTTCTTGGGACTGATGCT -3'	21
	R 5 '- TGGAAATTGGGGTAGGAAGGAC -3'	22
GAPDH	F 5 '- CACTCACGGCAAATTCAACGGCAC -3'	11
	R 5 '- GACTCCACGACATACTCAGCAC -3'	12

그 결과, 도 10에 나타낸 바와 같이, L&A complex가 처리된 RAW264.7 세포에서 염증 관련 사이토카인인 유도형 일산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 및 인터루킨 1 베타(Interleukin 1 beta; IL-1β)의 mRNA 발현이 억제되는 것을 확인하였다.

따라서, 상기 결과로부터 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)이 일산화 질소의 생성 및 염증 관련 사이토카인의 발현을 억제함으로써 항염증 효과를 나타내는 것을 확인하였다.

상기 실험예 1 내지 3으로부터 확인한 본원발명의 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)의 주름 개선, 피부 미백, 및 항염증 효과에 대한 작용 기전은 도 13에 간략하게 나타내었다.

실험예 4. 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물의 프리바이오틱스로서의 역할 확인

상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex가 프로바이오틱스 (Probiotics)의 영양원이 되어 해로운 균을 없애주고, 유익한 균을 증가시켜 피부 환경을 근본적으로 개선하여 피부 고유 면역력과 흡수, 해독 기능을 강화시켜 주는 물질인 프리바이오틱스(Prebiotics)로서의 역할을 수행하는지 확인하기 위해, 유해균 및 유익균으로 잘 알려진 Escherichia coli와 Lactobacilus sporogenes에 L&A complex를 농도별로 처리하여 흡광도를 측정하였다.

이 때, 상기 유해균(Escherichia coli)과 유익균(Lactobacilus Sporogenes)의 생장곡선을 조사하기 위하여 LB broth 배지(Difco™ LB broth, Miller (Luria-Bertani), BD)에 각각 5 × 10⁸개의 균을 넣고, 상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex를 농도별(0.25%, 0.5%, 1%, 2%)로 처리한 후(Lactobacilus Sporogenes에는 2%의 L&A complex만 처리) 24시간 동안 배양하고, 배양 중 2시간 간격으로 600 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 O.D값을 기존에 알려진 생장곡선을 표준으로 균의 양을 계산하고, 측정된 12개의 값을 연결하여 결과를 분석하였다.

그 결과, 도 11에 나타낸 바와 같이, 2%의 L&A complex의 처리에 의해 유해균인 Escherichia coli의 생장이 억제되었으며, 도 12에 나타낸 바와 같이, 유익균인 Lactobacilus Sporogenes의 생장은 증진되는 것을 확인하였다.

따라서, 상기 결과로부터 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)은 유해균의 생장을 억제하고 유익균의 생장은 증진시키는 프리바이오틱스로서의 역할을 수행하는 것으로 확인되었다.

비교예 1. 백합 및 삼채 단독 추출물과의 효과 비교

1-1. 세포외기질분해효소 ( MMPs ) 유전자 발현 억제 효과 확인

상기 실시예 2에서 배양한 HaCaT 세포를 96 well plate에 1×10⁴ cells/well로 플레이팅한 후, 18시간 동안 배양하였다. 그 후, 80% 이상의 confluence가 되면 배지를 제거한 다음, 50 μM의 H₂O₂를 처리하여 주름을 유도한 후, FBS를 포함하지 않는 배지로 교체하고 상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex를 처리하였다. 그런 다음, 24시간 세포 배양 조건에서 추가 배양하여 H₂O₂로 유도된 주름 생성 관련 유전자인 MMPs의 발현에 어떠한 영향이 있는지 평가하였다.

상기 MMPs의 발현을 분석하기 위해 RT-PCR analysis를 수행하였다. 구체적으로, 먼저 Trizol reagent를 사용하여 total RNA를 추출하였으며, 추출한 total RNA를 cDNA synthesis kit (Thermo scientific)를 사용하여 cDNA로 합성한 다음, 동량의 cDNA를 PCR로 증폭시켰다. 이때 사용한 표적단백질의 sense 및 anti-sense primer 염기서열은 기존 문헌을 참조하여 제조하고(표 1 참조), 대조군 유전자로는 GAPDH를 사용하였다. PCR은 95℃에서 15초간 denaturation, 55℃에서 15초간 annealing, 그리고 72℃에서 1분간 extension하는 조건으로 시행하였으며, 총 30회 수행하였다. PCR로 증폭된 DNA는 1.2% agarose gel에서 전기영동을 진행하였고, 분획된 DNA band의 intensity를 측정하였다.

그 결과, 도 14에 나타낸 바와 같이, 백합 추출물 및 삼채 추출물 각각을 처리한 경우 HaCaT 세포에서 콜라겐 분해효소인 MMP (MMP-1, MMP-3, MMP-9)의 활성을 저해하는 효과 (주름 개선 효과)가 나타났지만 실험예 1-2에서 확인한 L&A complex의 효과가 현저히 우수한 것으로 나타났다.

1-2. 흑색종 세포주인 B16F10 세포에서 세포 생존률 확인

상기 실시예 2에서 배양한 B16F10 세포에서 세포 생존률을 확인하기 위해 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphinyltetrazolium bromide) assay 방법을 이용하여 분석하였다.

구체적으로, 96-well plate에 1 × 10⁵ cells/ml의 세포를 플레이팅하고 백합 단독 추출물 및 삼채 단독 추출물을 농도별(0.125%, 0.25%, 0.5%, 1%, 1.5%)로 처리한 후, 37℃로 48시간 동안 CO₂ incubator에서 배양하였다. 이후 10 ㎕ MTT 용액(stock concentration : 5 mg/ml)을 첨가하고 3시간 동안 추가반응을 유도하였으며, 반응 종료 및 formazan crystal 용해를 위해 각 well에 100 ㎕ MTT stopping solution(10% Sodium dodecyl sulfate in 0.01M HCl)을 첨가하였다. 세포 생존율은 MTT가 formazan으로 환원된 양을 570 nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 O.D값을 통해 산출하였다.

그 결과, 도 15에 나타낸 바와 같이, 백합 단독 추출물 및 삼채 단독 추출물 모두 B16F10 세포에 대해 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

1-3. 멜라닌(melanin) 분비 및 생성 억제 효과 확인

상기 실시예 2에서 배양한 B16F10 세포를 6 well plate에 well당 3×10⁵개의 세포가 되도록 분주하여 24시간 동안 배양한 후, 각 well에 백합 단독 추출물, 삼채 단독 추출물 및 복합 추출물을 각각 0.3, 0.45%(w/v)로 처리하고, 모든 well에 α-MSH를 100 nM이 되도록 처리하였다. 양성대조군으로는 멜라닌 형성을 억제한다고 잘 알려진 알부틴(arbutin) 1mM을 처리하였다. 시료를 처리한 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기에서 48시간 동안 배양하고, 48시간 후에 세포 배양액 800 ㎕를 새 튜브에 옮기고 4℃에서 12,000 rpm으로 5분간 원심분리하여 상층액을 확보하였다. 확보한 상층액 중 100 ㎕를 96 well plate에 분주하고 475 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, α-MSH만을 처리한 세포 배양액에서의 멜라닌 형성 양을 100% 기준으로 하여, 멜라닌 양을 계산하였다.

그 결과, 도 16 및 17에 나타낸 바와 같이, 백합 및 삼채 단독 추출물를 처리한 B16F10 세포와 비교하여 복합 추출물의 멜라닌의 분비 억제 효과 및 멜라닌의 생성 억제 효과가 현저히 우수함을 확인하였다.

따라서, 상기 결과로부터 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)은 단독 추출물과 비교하여 멜라닌의 분비 및 생성을 억제시키는 효과가 매우 뛰어나, 피부 미백 효과가 우수함을 확인하였다.

1-4. 일산화질소(nitric oxide; NO) 생성 억제 효과 확인

마우스 대식세포주인 RAW264.7 세포를 penicillin (100 IU/ml) 및 streptomycin (100 μg/ml)과 10%의 FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 배양한 후 1×10⁶ cells/ml의 농도로 96 well plate에 플레이팅 하고, 5% CO₂ 및 37℃의 조건에서 18시간 동안 전배양하였다. 이후 배지를 제거하고 4배 농도로 조제된 L&A complex 50㎕, 백합 단독 추출물, 및 삼채 단독 추출물과 염증 유발 물질인 lipopolysaccharide(LPS) 50㎕ (최종농도 1㎍/ml) 함유 배지를 동시에 처리하여 배양하고, 24시간 후 상층액을 100 ㎕씩 또 다른 96 well plate에 옮기고, NO 정량은 Griess 용액(0.5% naphthylethylenediamine dihydrochloride, 5% sulfanilamide, 25% H₃PO₄)을 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 sodium nitrite(0 에서 100 μM)를 사용하여 검량선을 작성하였다.

그 결과, 도 18에 나타낸 바와 같이, 백합 단독 추출물 및 삼채 단독 추출물의 NO 생성 억제 효과가 거의 없는 반면, L&A complex를 처리한 RAW264.7 세포에서 LPS에 의한 NO 생성 억제 효과가 현저히 우수한 것을 확인하였다.

1-5. 대식세포주인 RAW264 .7 세포에서 세포 생존률 확인

상기 실시예 2에서 배양한 RAW264.7 세포에서 세포 생존률을 확인하기 위해 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphinyltetrazolium bromide) assay 방법을 이용하여 분석하였다.

구체적으로, 96-well plate에 1 × 10⁶ cells/ml의 세포를 플레이팅하고 상기 실시예 1에서 제조한 L&A complex(1%, 1.5%), 백합 단독 추출물(0.3%, 0.45%) 및 삼채 단독 추출물(0.3%, 0.45%)을 처리한 후, 37℃로 24시간 동안 CO₂ incubator에서 배양하였다. 이후 10 ㎕ MTT 용액(stock concentration : 5 mg/ml)을 첨가하고 3시간 동안 추가반응을 유도하였으며, 반응 종료 및 formazan crystal 용해를 위해 각 well에 100 ㎕ MTT stopping solution(10% Sodium dodecyl sulfate in 0.01M HCl)을 첨가하였다. 세포 생존율은 MTT가 formazan으로 환원된 양을 570 nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 O.D값을 통해 산출하였다.

그 결과, 도 19에 나타낸 바와 같이, 백합 추출물 및 삼채 추출물을 포함하는 복합물(L&A complex)은 RAW264.7 세포에 대해 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

1-6. 백합 단독 추출물 및 삼채 단독 추출물의 프리바이오틱스로서의 역할 확인

유해균(Escherichia coli)과 유익균(Lactobacilus Sporogenes)의 생장곡선을 조사하기 위하여 LB broth 배지(Difco™ LB broth, Miller (Luria-Bertani), BD)에 각각 5 × 10⁸개의 균을 넣고, 백합 단독 추출물 또는 삼채 단독 추출물 (0.3% 또는 0.45%)로 처리한 후(Lactobacilus Sporogenes에는 0.45%의 추출물만 처리) 24시간 동안 배양하고, 배양 중 2시간 간격으로 600 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 O.D값을 기존에 알려진 생장곡선을 표준으로 균의 양을 계산하고, 측정된 12개의 값을 연결하여 결과를 분석하였다.

그 결과, 도 20에 나타낸 바와 같이, 백합 단독 추출물의 처리에 따른 유해균인 Escherichia coli의 생장 억제 효과가 미미하였으며, 도 21에 나타낸 바와 같이, 유익균인 Lactobacilus Sporogenes의 생장 또한 증진 효과가 거의 없는 것을 확인하였다.

또한, 도 22 (도 21)에 나타난 바와 같이, 삼채 단독 추출물의 처리에 따른 유해균인 Escherichia coli의 생장 억제 효과가 미미하였으며, 도 23에 나타낸 바와 같이, 유익균인 Lactobacilus Sporogenes의 생장 또한 증진 효과가 거의 없는 것을 확인하였다.

따라서, 상기 결과로부터 백합 단독 추출물 및 삼채 단독 추출물은 프리바이오틱스로서 그 효과가 없으나, 복합물(L&A complex)은 유해균의 생장을 억제하고 유익균의 생장은 증진시키는 프리바이오틱스로서 유용하게 사용될 수 있는 것으로 확인되었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예 및 실험예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.

<110> RESEARCH & BUSINESS FOUNDATION SUNGKYUNKWAN UNIVERSITY <120> Cosmetic composition for anti-wrinkle and whitening comprising Lilium longiflorum extract and Allium hookeri extract as active ingredients <130> MP19-297 <150> KR 10-2018-0155217 <151> 2018-12-05 <160> 22 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 forward primer <400> 1 tctgacgttg atcccagaga gcag 24 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 reverse primer <400> 2 cagggtgaca ccagtgactg cac 23 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 forward primer <400> 3 aaaacggaca aagagttggc a 21 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 reverse primer <400> 4 ctggggcagt ccaaagaac 19 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-3 forward primer <400> 5 tgttaggaga aaggacagtg gtc 23 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-3 reverse primer <400> 6 cgtcacctcc aatccaagga 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-9 forward primer <400> 7 gccacttgtc ggcgataagg 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-9 reverse primer <400> 8 cactgtccac ccctcagagc 20 <210> 9 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sirt-1 forward primer <400> 9 tcgcaactat acccagaaca tagaca 26 <210> 10 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sirt-1 reverse primer <400> 10 ctgttgcaaa ggaaccatga ca 22 <210> 11 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH forward primer <400> 11 cactcacggc aaattcaacg gcac 24 <210> 12 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH reverse primer <400> 12 gactccacga catactcagc ac 22 <210> 13 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS forward primer <400> 13 gtgaagaaaa ccccttgtgc tg 22 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS reverse primer <400> 14 agttccgagc gtcaaagacc 20 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2 forward primer <400> 15 tgagtaccgc aaacgcttct 20 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2 reverse primer <400> 16 tgggaggcac ttgcattgat 20 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-a forward primer <400> 17 tagcccacgt cgtagcaaac 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-a reverse primer <400> 18 accctgagcc ataatcccct 20 <210> 19 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1b forward primer <400> 19 caggatgagg acatgagcac c 21 <210> 20 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1b reverse primer <400> 20 ctctgcagac tcaaactcca c 21 <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6 forward primer <400> 21 gccttcttgg gactgatgct 20 <210> 22 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6 reverse primer <400> 22 tggaaattgg ggtaggaagg ac 22

Claims (19)

1. 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선 또는 피부 미백용 화장료 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 백합 추출물 5~30중량% 및 삼채 추출물 5~30중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 규산염 0.1~10 중량%, 치커리 초산 발효물 5~10 중량%, 민들레 초산 발효물 5~10 중량%, 베타글루칸(β-glucan) 2~5 중량%, 프락토 올리고당(fructooligosaccharides) 5~15 중량%, 갈락토 올리고당(galactooligosaccharides) 5~15 중량%, 키토산 올리고 사카라이드(chitosan oligosaccharides) 1~20 중량%, 및 자일로 올리고 사카라이드(xylo oligosaccharides) 5~30 중량%로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   상기 백합 추출물 및 삼채 추출물은 물, 탄소 수 1 내지 4의 저급 알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 세포외기질분해효소-1(matrix metalloproteinase-1; MMP-1), 세포외기질분해효소-3(matrix metalloproteinase-3; MMP-3), 및 세포외기질분해효소-9(matrix metalloproteinase-9; MMP-9)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 멜라닌 분비 또는 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
7. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 일산화질소(Nitric oxide; NO)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
8. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 염증 관련 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
9. 제8항에 있어서,
   상기 염증 관련 사이토카인은 유도형 일산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 또는 인터루킨 1 베타(Interleukin 1 beta; IL-1β)인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
10. 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선 또는 피부 미백용 식품 조성물.
    
11. 제10항에 있어서,
    상기 조성물은 백합 추출물 5~30중량% 및 삼채 추출물 5~30중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
    
12. 제10항에 있어서,
    상기 조성물은 규산염 0.1~10 중량%, 치커리 초산 발효물 5~10 중량%, 민들레 초산 발효물 5~10 중량%, 베타글루칸(β-glucan) 2~5 중량%, 프락토 올리고당(fructooligosaccharides) 5~15 중량%, 갈락토 올리고당(galactooligosaccharides) 5~15 중량%, 키토산 올리고 사카라이드(chitosan oligosaccharides) 1~20 중량%, 및 자일로 올리고 사카라이드(xylo oligosaccharides) 5~30 중량%로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
    
13. 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 색소 침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
    
14. 제13항에 있어서,
    상기 피부 색소 침착 질환은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소침착 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
    
15. 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 프리바이오틱스 조성물.
    
16. 제15항에 있어서,
    상기 프리바이오틱스 조성물은 대장균(Escherichia coli; E.coli)의 생장을 억제하고 락토바실러스 스포로게네스(Lactobacillus sporogenes; L.sporogenes)의 생장을 증진시키는 것을 특징으로 하는, 프리바이오틱스 조성물.
    
17. 백합(Lilium longiflorum) 추출물 및 삼채(Allium hookeri) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학적 조성물.
    
18. 제17항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 염증 관련 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
    
19. 제18항에 있어서,
    상기 염증 관련 사이토카인은 유도형 일산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 또는 인터루킨 1 베타(Interleukin 1 beta; IL-1β)인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.

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