KR20190062321A - 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물 및 이의 이용 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다. 구체적으로 상기 조성물은 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있는 조성물에 대한 것이다.
본 발명에 따른 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물은 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있어서 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강 식품으로 이용할 수 있다.
본 발명에 따른 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물은 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있어서 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강 식품으로 이용할 수 있다.
Description
본 발명은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 대한 것이다. 구체적으로 상기 조성물은 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있는 조성물에 대한 것이다.
천연물로부터 생리활성 물질에 관한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 질병에 대한 치료 및 예방제 또는 건강보조제로서 식물 자원이 널리 이용되고 있다.
피부 노화는, 시간이 경과함에 따라 기관과 동반하여 피부의 구조와 기능이 지속적으로 감퇴되어지는 내인성 노화와 장기간에 걸친 태양 광선의 노출로 인한 피부 조직의 변화인 외인성 노화가 있다. 이러한 노화 과정으로 피부가 건조해지며, 주름이 생기고 피부는 탄력을 잃게 된다.
피부 노화에 관한 연구에서 가장 중요하게 다루어지는 것은 자유 라디칼(free radical)과 활성 산소종(reactive oxygen species)이다. 이들은 자연적으로 생체 내에서 만들어지기도 하지만 공해, 태양 자외선, 화학 산화제 및 미생물 등에 의해 발생된다. 이 때 발생된 자유 전자기나 활성 산소종은 피부 세포에 산화적 스트레스를 가하게 되고, 이러한 과정에서 생긴 물질은 멜라닌과 주름 생성의 원인물질로 여겨진다.
이때 발생되어진 자유 전자나 활성 산소종은 피부세포에 산화적 스트레스를 가하게 되고, 이러한 과정에서 생긴 물질은 멜라닌과 주름 생성의 원인 물질로 여겨진다.
이들 활성 산소종은 효소적, 비효소적 항산화제로 이루어진 피부 항산화 방어막을 붕괴시키고 생체 분자의 산화적 변형, 피부 장벽의 손상과 결합 조직인 콜라겐, 히아루론산 등의 사슬 절단 및 비정상적인 교차결합에 의한 주름생성 등 피부 노화를 가속시킨다.
결과적으로 피부 노화 방지를 위해서는 과잉의 활성 산소종 생성을 억제하고 또한 생성된 활성 산소를 효율적으로 제거할 수 있어야 한다. 또한 피부 주름을 일으키는 효소들의 억제와 색소 침착을 진행하는 효소 활성 억제 등에 관한 연구가 필요하다.
한편, 멜라닌 생성 혹은 멜라노사이트의 증식에 의해 야기되는 색소 침착은 다양한 방법으로 억제가 가능하다. 일반적으로는 멜라닌 합성의 중요한 효소인 티로시나제(Tyrosinase) 활성 억제, 멜라노사이트의 기능 감소, 자동산화 반응의 억제를 통한 멜라닌 생성의 감소, 홍반과 같은 염증반응 억제등 다양한 경로를 이용할 수 있다.
결과적으로 피부노화 방지를 위해서는 과잉의 활성 산소종 생성을 억제하고 또한 생성된 활성산소를 효율적으로 제거할 수 있어야 하며, 피부의 주름을 일으키는 효소들의 억제, 색소침착을 진행하는 효소의 활성억제 등에 관한 연구가 필요하다.
이에, 아래와 같이 피부노화 및 미백관련해서 식물을 이용한 연구가 시행되어 왔다.
복분자(Rubus coreauns)는 장미과(Rosaceae)에 속하는 복분자딸기의 열매를 일컫는 생약명으로, 복분자를 먹으면 요강이 소변 줄기에 뒤집어진다고 하여 붙은 이름이다.
복분자는 총당(17.3%), 환원당(8.6%), 조단백질(10.6%), 조회분(4.5%), 조지방(3.1%) 및 조섬유(3.9%)와 같은 성분을 함유하고 있으며, 아밀알코올을 포함하는 11종의 알코올류, 발레르산을 포함하는 산(acid)류, 헥산알을 포함하는 20종의 카보닐류, 2-헵타논을 포함하는 5종류의 하이드로카본, 및 메틸팔미트산염을 포함하는 3종류의 에스테르류의 향기성분을 함유하고 있다.
또한 폴리페놀(polyphenol)을 다량 함유하고 있어, 항암효과, 콜레스테롤의 저하, 고혈압이나 동맥경화의 억제, 과산화지질의 생성을 막아 노화의 예방, 혈청중 지질농도의 저하, 중성지질의 생성 억제에 의해 비만 방지 및 모세혈관의 저항력 증진 효과가 있는 것으로 보고되고 있다.
대두(soybean)는 건물량 중 약 40%가 단백질로 구성되어 있고, 필수 아미노산이 풍부하여 우리나라에서는 전통적으로 단백질의 급원으로 사용되어 왔다. 다른 곡류의 단백질량이 보통 8~12%이고, 다른 콩과 식품의 단백질량이 20~30% 정도인 것을 고려하면, 대두의 단백질 구성은 매우 높은 수준이다. 또한, 대두에는 최근 생리활성 기능이 보고된 이소플라본(isoflavones) 및 피트산(phytic acid) 등이 풍부하며, 전 세계적으로 가공식품의 원료로 널리 사용되고 있다.
이에 본 발명자들은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 이용한 연구를 수행하여 본 발명에 이르렀다.
본 발명의 목적은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있는 약학적 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있는 건강 식품을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장료 조성물은 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있을 수 있다.
본 발명에 따른 상기 유효성분은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.00001 내지 10 중량%로 포함될 수 있다. 상기 추출물, 분획물 또는 화합물의 함량이 0.0001 중량 % 미만인 경우에는 항산화 활성, 항노화 활성, 항염 활성 및 미백 효능이 나타나지 않을 수 있으며, 10 중량 % 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미할 수 있고 경제적이지도 못하다.
상기 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분으로서 복분자 추출물 0.1 내지 10중량% 및 대두 추출물 0.1 내지 10 중량%가 포함될 수 있고, 보다 바람직하게는 복분자 추출물 2 내지 5 중량% 및 대두 추출물 2 내지 5 중량%가 포함될 수 있는데, 0.1 중량 % 미만인 경우 미백, 항노화 활성 및 함염 활성이 나타나지 않을 수 있으며, 10 중량 % 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미할 수 있고 경제적이지도 못하다.
상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 파운데이션, 젤, 연고 또는 스프레이로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으나. 반드시 이로 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 병개암나무 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성 화합물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항노화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명은 복분자 추출물 또는 복분자 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항노화 효과 및 항염증 효과가 있는 약학적 조성물을 제공한다.
상기 복분자 추출물 또는 복분자 추출물의 유기용매 분획물에 대두 추출물 또는 대두 추출물의 유기용매 분획물을 추가 유효성분으로 더 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 기타 액제로 제형화될 수 있다. 구체적으로 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형, 예를 들면 정제, 트로치제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 또는 우성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀롤로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 센티페드그라스 추출물, 이의 분획물 또는 분획물로부터 분리한 활성분획을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.
본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적절히 선택되나, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 추출물을 0.0001 ~ 500 ㎎의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며, 0.001 ~ 100 ㎎의 양으로 투여하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 복분자 추출물 또는 복분자 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 피부 미백가 있는 건강 식품을 제공한다.
상기 복분자 추출물 또는 복분자 추출물의 유기용매 분획물에 대두 추출물 또는 대두 추출물의 유기용매 분획물을 추가 유효성분으로 함유할 수 있다.
본 발명의 복분자 추출물 또는 이의 분획물은 항노화 및 피부 미백 효과가 우수하므로 건강 식품으로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 건강식품은 복분자 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 복분자 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성 화합물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 복분자 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성 화합물; 그리고 대두 추출물 또는 이의 분획물 또는 이의 분획물로부터 분리한 활성화합물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
그 밖에 본 발명의 복분자 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물로부터 분리한 활성 화합물은 천연 과일주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명에 따른 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물은 항산화, 항노화, 항염 및 피부 미백 효과가 있어서 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강 식품으로 이용할 수 있다.
도 1은 복분자 추출물 및 대두 추출물의 제조 과정을 나타낸 것이다
도 2는 복분자 추출물 및 대두 추출물의 항산화 활성에 대한 세포 독성 평가 결과에 관한 것이다.
도 3는 복분자 추출물의 추출 조건(용매)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 4는 복분자 추출물의 추출 조건(추출 시간)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 5는 대두 추출물의 추출 조건(용매)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 6은 대두 추출물의 추출 조건(추출 시간)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 7은 복분자 추출물 및 대두 추출물의 주름개선(NO 생성 저해) 효능을 분석한 결과에 관한 것이다.
도 8은 복분자 추출물 및 대두 추출물의 미백 효능(티로시나아제 활성)을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 9는 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 10은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 미백 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 11은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 항염 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 15는 대두 추출물의 주름 개선 효능 평가를 나타낸 결과이다.
도 2는 복분자 추출물 및 대두 추출물의 항산화 활성에 대한 세포 독성 평가 결과에 관한 것이다.
도 3는 복분자 추출물의 추출 조건(용매)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 4는 복분자 추출물의 추출 조건(추출 시간)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 5는 대두 추출물의 추출 조건(용매)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 6은 대두 추출물의 추출 조건(추출 시간)에 따른 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 7은 복분자 추출물 및 대두 추출물의 주름개선(NO 생성 저해) 효능을 분석한 결과에 관한 것이다.
도 8은 복분자 추출물 및 대두 추출물의 미백 효능(티로시나아제 활성)을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 9는 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 항산화 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 10은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 미백 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 11은 복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 항염 활성을 측정한 결과에 관한 것이다.
도 15는 대두 추출물의 주름 개선 효능 평가를 나타낸 결과이다.
이하, 본 발명에 대하여 실시예 및 실험예를 통하여 보다 상세히 설명하나, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
실시예
1. 복분자 추출물 및 대두 추출물 제조
복분자 열매(대두)를 수확하여 세척하고, 동결 건조 후 150 mesh 이상으로 파쇄하였다. 상기 파쇄된 건조 복분자 분말을 20% 에탄올, 40% 에탄올 및 60% 에탄올을 사용하여 상온에서 5시간 동안 추출하였다. 추출한 후, 필터를 통해 고형물을 제거하고 추출액은 농축 후 동결건조하였다. 동결건조된 상기 추출액은 20000ppm의 추출물을 조성하였다(도 1 참조).
상기 제조된 복분자 추출물 및 대두 추출물을 각각 포함하는 또는 일정 중량비로 혼합한 혼합물을 포함하는 조성물의 활성을 측정하였다.
실시예
2. 추출물의 활성 측정
2.1 세포 독성 측정
세포독성을 확인하기 위해 MTT 방법을 수행하였다. B16F10 멜라노마 세포와 인간 섬유아세포(normal human fibroblaste, NHF), 인간 각질세포(human keratinocyte cell, HKC)를 24시간 배양 후 시료 추출물(실시예 1-1,1-2,1-3,1-4, 및 1-5)들을 여러 농도별로 처리한 후 2일간 배양한 후 500 μg/ml MTT (3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide)를 웰당 20 μL 첨가하였다. 37℃에서 4 시간 동안 반응시킨 후 MTT 용액을 제거하고 웰당 DMSO 200 μL 첨가하였다. 살아있는 세포와 반응하여 생긴 포르마잔(formazan) 침전물을 용해시킨 다음 마이크로플레이트 리더로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
본 발명에 따라 제조된 복분자 추출물 및 대두 추출물은 세포 독성이 없는 것으로 확인되었다(도 2 참조).
2.2 DPPH 소거 활성
자유라디칼은 노화, 특히 피부 노화의 원인 물질로 알려진 것이다. 자유 라디칼 소거 활성 측정을 위해 0.2 mM DPPH를 에탄올에 용해시키고, 각 시료를 농도별로 준비하였다. 96웰 플레이트에 0.2 mM DPPH 용액 0.18 mL와 시료 용액 0.02 mL를 넣고 상온에서 10분간 반응시킨 후, 스펙트로포토메터(spectrophotometer)로 515 nm에서 흡광도를 측정하였다.
DPPH 소거 능력은 다음과 같은 식에 의해 %로 계산되었고, 각 시료의 SC50(DPPH의 농도가 50% 감소되는데 필요한 시료의 농도, scavenging concentration) 값을 구하였다. 대조군은 Vitamic C(SC50 = 7.7 μg/mL)를 사용하였다.
DPPH 라디칼 소거능(radical scavenging activity, %)
= [ 1 - (Abssample - Absblank) / Abscontrol ] × 100
여기서 Abssample은 시료 반응액의 흡광도이고, Absblank는 시료만의 흡광도, Abscontrol은 DPPH 용액의 흡광도이다.
용매 종류에 따른 복분자 추출물 또는 대두 추출물의 DPPH 제거 활성을 측정한 결과, 추출 용매로서 20% 에탄올 및 40% 에탄올 보다는 60% 에탄올을 사용하는 경우에 DPPH 제거 활성이 가장 높음을 확인하였고, 대두 추출물의 경우 용매의 종류에 따른 DPPH 제거 활성의 차이가 크게 발생하였다(도 3-복분자 추출물, 도 5-대두 추출물).
복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 DPPH 제거 활성을 측정한 결과, 복분자 5중량% 및 대두 2 중량%를 포함하는 조성물의 DPPH 제거 활성이 가장 높은 것으로 측정되었다(도 9).
2.3 ABTS 제거 활성
3차 증류수를 사용하여 7 mM ABTS (2,2-Azino-bis- (3-ethylbenzothiazoline- 6-sulfonic acid))를 제조한 후 2.45 mM Potassium persulfate를 첨가하고, 이를 12시간 동안 상온조건의 암실에서 보관한 후 시료와 반응 전 UV-Vis spectrophotometer를 사용하여 734 nm 파장에서 흡광도를 1.0로 조정하여 실험에 사용하였다. 이렇게 준비된 ABTS용액과 시료를 혼합하여 7분간 상온에서 반응 시키고 혼합용액의 흡광도를 위와 같은 조건에서 분석하여 결과 값을 계산하였다
ABTS의 radical scavenging 활성을 계산한 식은 아래와 같다.
ABTS radical scavenging 활성(%) = [(AbsABTS - AbsSample)/AbsABTS] × 100
용매 종류에 따른 복분자 추출물 또는 대두 추출물의 ABTS 제거 활성을 측정한 결과, 추출 용매로서 20% 에탄올 및 40% 에탄올 보다는 60% 에탄올을 사용하는 경우에 DPPH 제거 활성이 높지만 큰 차이는 없는 것으로 확인하였다(도 3-복분자 추출물, 도 5-대두 추출물).
복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 ABTS 제거 활성을 측정한 결과, 복분자 5중량% 및 대두 2 중량%를 포함하는 조성물의 ABTS 제거 활성이 가장 높은 것으로 측정되었다(도 9).
2.4 폴리페놀 함량 측정
총 폴리페놀 함량 (total polyphenol content) 측정은 Folin-reagent가 페놀성 화합물에 의해 환원되어 몰리브덴 청색으로 발색되는 원리를 이용하여 함량을 정량하였다. 표준물질은 gallic acid (Sigma)를 사용하여 0-100 μg/mL 농도로 제조한 후 시료와 동일한 방법으로 분석하여 얻은 표준 검량선을 기준으로 시료의 폴리페놀 함량을 당량으로 계산하였다. 각 시료의 추출물은 60% 에탄올에 희석한 후 희석한 시료와 Folin-Ciocalteau’s phenol reagent 시약을 혼합하여 실온에서 차광된 상태로 1시간 동안 반응시켰다. 반응 후 96 well plate에 200 μL씩 분주한 후 765 nm에서 흡광도를 측정하고 건조 시료 1 g에서 용출되는 총 폴리페놀의 함량을 gallic acid 기준으로 폴리페놀 함량을 측정하였다.
용매 종류에 따른 복분자 추출물 또는 대두 추출물의 폴리페놀 함량을 측정한 결과, 추출 용매로서 20% 에탄올 및 40% 에탄올 보다는 60% 에탄올을 사용하는 경우에 폴리페놀 함량이 가장 높았는데, 대두 추출물에서는 용매 종류에 따른 추출물 내 폴리페놀 함량의 차이가 크지 않은 것으로 확인하였다(도 3-복분자 추출물, 도 5-대두 추출물).
추출 시간에 따른 복분자 추출물 또는 대두 추출물의 폴리페놀 함량을 측정한 결과, 추출 시간이 5시간인 경우가 1시간 내지 4시간에 비해 폴리페놀 함량이 높은 것으로 확인하였다(도 4-복분자 추출물, 도 6-대두 추출물).
복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 폴리페놀 함량을 측정한 결과, 복분자 5중량% 및 대두 2 중량%를 포함하는 조성물의 폴리페놀 함량이 가장 높은 것으로 측정되었다(도 9).
2.5 플라보노이드 함량 측정
각 농도별로 조성된 추출물과 메탄올을 1:9의 비율로 혼합하여 만들어진 혼합물 0.5 ml과 10% Al(NO3)3와 1 M KCH3CO2를 각각 0.1 ml 씩 첨가하였다. 이렇게 만들어진 혼합물에 메탄올을 4.3 ml을 첨가한 후 실온에서 40분간 반응한 후 반응이 끝난 시료는 UV-Vis spectrophotometer를 사용하여 415 nm 파장에서 흡광도를 측청하였다. 추출물 내 total flavonoid의 함량은 Quercetin을 사용해 위와 동일한 방법으로 그려진 표준곡선에 대조하여 그 함량을 확인하였다 이를 통해 얻어진 결과는 시료 g당 QE(Quercetin equivalent)로 나타내었다.
용매 종류에 따른 복분자 추출물 또는 대두 추출물의 플라보노이드 함량을 측정한 결과, 추출 용매로서 20% 에탄올 또는 40% 에탄올보다는 60% 에탄올을 사용하는 경우에 플라보노이드 함량이 높은 것으로 확인되었다(도 3-복분자 추출물, 도 5-대두 추출물).
복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 플라보노이드 함량을 측정한 결과, 복분자 5중량% 및 대두 2 중량%를 포함하는 조성물의 플라보노이드 함량이 가장 높은 것으로 측정되었다(도 9).
실시예 3. 항염증 측정
3.1 NO 저해 활성
염증 유발 인자인 NO(Nitric oxide)저해 효과를 RAW 264.7 세포배양 시스템을 이용하여 측정하였다. 24 웰 플레이트에 3 × 105 cells/mL이 되도록 세포를 분주하고, 37℃의 5% CO2 조건 하에서 18 시간 배양한 후 배지를 제거하고, D-PBS(D-phosphate buffered saline)으로 세척한 후 1μM LPS를 포함하는 배지로 교환 후 시료 추출물(실시예 1-1,1-2,1-3,1-4, 및 1-5)을 농도별로 각각 첨가하여 1일간 배양하였다. 1일 동안 배양 후 배지 100 μL에 그리스 시약(Griess reagent) 100 μL를 넣어 NO(Nitric oxide)를 측정하였다.
복분자 추출물 또는 대두 추출물의 항염증 활성을 측정하기 위해 NO 저해 활성을 측정한 결과, 사용량에 따라 NO 저해 활성이 증가하는 것으로 확인하였고, 동일한 양에서는 대두 추출물의 효과가 더 높은 것으로 나타났다(도 7).
복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 NO 저해 활성을 측정한 결과, 복분자 5중량% 및 대두 2 중량%를 포함하는 조성물의 NO 저해 활성(항염증 활성)이 가장 높은 것으로 측정되었다(도 11).
3.2 TNF-α 합성 저해
Raw 264.7 (2 × 105 cells) 100 uL와 시료 20 uL를 96-well plate에 넣어 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 동안 배양한 후 상징액을 취해 대식세포에서 분비하는 TNF-α을 ELISA를 이용하여 측정하였다. Microtiter plate에 표준 TNF-α 또는 배양한 시료액 및 biotinylated anti-TNF을 50 uL씩 well에 주입하고 상온에서 2시간 반응시켰다. 반응된 plate를 세척용 완충액으로 다시 5회 세척하고 HRP-conjugated anti-mTNF를 100 uL씩 넣어 상온에서 30분 반응한 다음 세척용 완충액으로 5회 세척하였다. 여기에 기질용액을 첨가하여 상온에서 30분간 발색반응을 시킨 후 1.0 N sulfuric acid를 100 uL씩 가해 반응을 정지시킨 다음 ELISA reader로 450 nm에서 흡광도를 측정하여 작성한 표준곡선에서 TNF-α 함량을 계산하였다.
복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 TNF-α 합성 저해 활성을 측정한 결과, 복분자 5중량% 및 대두 2 중량%를 포함하는 조성물의 TNF-α 합성 저해 활성(항염증 활성)이 가장 높은 것으로 측정되었다(도 11).
실시예 4. 미백 활성
4.1 티로시나아제 저해활성 측정
B16F10 melanoma를 이용하여 시료의 tyrosinase 저해 활성을 측정하였다. B16F10 melanoma을 6 well plate에 각 well 당 1 × 104 cells가 되도록 10% FBS가 포함된 각 cell의 배지를 사용하여 2 mL씩 분주하고 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다. 세포의 부착을 확인한 후, 시료를 농도별로 배지를 교환해주고, 1시간 후 100 nM α-MSH 자극제 처리 후, 37℃, 5% CO2 incubator에서 2일 간 배양하였다. 배지를 제거 한 후 Triton X-100, 100 mM PMSF를 첨가한 Lysis buffer를 처리하고 10분 동안 15,000 rpm에서 원심분리 하였다. 이 후, 2% N,N-dimethyl formamide와 5 mM L-DOPA를 혼합한 mix buffer를 원심분리한 세포 상등액과 혼합하여 반응시키고 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. tyrosinase의 저해 활성은 α-MSH만 처리한 군과 비교하여 백분율로 표시하였다.
4.2 멜라닌 생성 억제활성 측정
시료의 멜라닌 생합성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 B16F10 melanoma를 6 well plate에 1 × 104이 되도록 분주하고 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다. 세포의 부착을 확인한 후, 멜라닌 생성을 촉진하기 위하여 10% FBS를 포함된 배지에 농도별로 첨가하여 4시간 배양하고, 이후 100 nM α-MSH 자극제를 처리하여 2 일 간 배양하였다. 배양액을 제거하고 PBS로 세척하고 scrapping하였다. 15,000 rpm에서 20 분간 원심분리 한 후, 상층액을 제거하고 pellet에 10% DMSO가 포함된 1 N NaOH 용액을 첨가하여 80℃에서 1시간 동안 용해하였으며, microplate reader를 이용하여 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 외부자극에 대한 melanoma cell 내 과생성 melanin에 대해 알아보기 위해 자극제로 100 nM α-MSH을 사용하였으며, 실험은 3회 이상 반복 실험하여 시료 무첨가구와 대조하여 그래프로 나타내었다.
4.3 측정 결과
복분자 추출물 또는 대두 추출물의 미백 활성을 측정하기 위해 티로시나아제 저해 활성을 측정한 결과, 사용량에 따라 티로시나아제 저해 활성이 증가하는 것으로 확인하였고, 동일한 양에서는 대두 추출물의 효과가 더 높은 것으로 나타났다(도 8).
복분자 추출물 및 대두 추출물을 포함하는 조성물의 티로시나아제 저해 활성 및 멜라닌 합성 저해 활성을 측정한 결과, 복분자 5중량% 및 대두 2 중량%를 포함하는 조성물이 가장 높은 것으로 측정되었다(도 10).
실시예
5.
화장료
조성물의 제조
하기 표 1에 나타낸 조건(단위, 중량%)으로 화장료 조성물을 제조하였다.
| 원료명 | 함량(중량 %) |
| 정제수 | 잔량 |
| Glycerin | 5.000 |
| Sodium hyaluronate | 0.010 |
| hydrogel PFKC | 1.500 |
| Dissolvine NA2-S | 0.020 |
| Betaine | 1.500 |
| carbopol 980 | 0.250 |
| 1.3ㆍBG | 1.000 |
| Keltrol F | 0.060 |
| CS-165 | 1.200 |
| ARLACEL 60 | 0.800 |
| TWEEN 60 | 0.800 |
| M.C.T | 5.000 |
| Lanetto O | 1.500 |
| Lipex shea soft | 0.100 |
| Tocopheryl acetate | 0.100 |
| Bees wax | 0.500 |
| Dimethicone 6CS | 0.300 |
| TEA | 0.250 |
| SEPPIPLUS 400 | 0.150 |
| 향료 | 미량 |
| 복분자 추출물 | 5.000 |
| 대두 추출물 | 2.000 |
| Phenoxyethanol | 0.300 |
| 1,2-HEXANEDIOL | 0.400 |
실시예
6. 추출물이 함유된 약제 제조
하기 표 2에 나타낸 조건(단위, 중량%)으로 약제 조성물을 제조하였다.
| 구성 성분 | 함량 (중량 %) |
| 복분자 추출물의 분획물 | 1 |
| 대두 추출물의 분획물 | 1 |
| 사카린 | 0.8 |
| 당 | 25.4 |
| 글리세린 | 8 |
| 향미료 | 0.04 |
| 에탄올 | 4 |
| 소르브산 | 0.4 |
| 증류수 | 59.36 |
실시예
7. 추출물이 함유된
건강 식품
제조
복분자 추출물 5.0 중량부 및 대두 추출물 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 실시될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.
Claims (10)
- 복분자 추출물 및 대두 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
- 상기 추출물은 20% 내지 60% 에탄올을 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 용도인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 전체 조성물에 대하여 복분자 추출물 0.1 내지 10 중량%, 대두 추출물 0.1 내지 10 중량 %을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 유효성분은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.00001 내지 10 중량%로 포함되는 것인 화장료 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 파운데이션, 젤, 연고 또는 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 복분자 추출물 또는 복분자 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있는 약학적 조성물.
- 제 7항에 있어서,
상기 복분자 추출물 또는 복분자 추출물의 유기용매 분획물에 대두 추출물 또는 대두 추출물의 유기용매 분획물을 추가 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물.
- 복분자 추출물 또는 복분자 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항노화, 항염증 및 피부 미백 효과가 있는 건강 식품.
- 제 9항에 있어서,
상기 복분자 추출물 또는 복분자 추출물의 유기용매 분획물에 대두 추출물 또는 대두 추출물의 유기용매 분획물을 추가 유효성분으로 함유하는 건강 식품.
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2018
- 2018-11-28 KR KR1020180150121A patent/KR20190062321A/ko not_active Application Discontinuation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100642526B1 (ko) | 2004-09-16 | 2006-11-03 | 코스맥스 주식회사 | 항염증 및 항산화 활성을 갖는 겨우살이 추출물 및 이를함유한 화장료 조성물 |
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