[과제를 해결하기위한 수단]
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 지정, 와송 및 신곡 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되어진 1 종 이상의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 피부 미백용 화장료 조성물은 지정, 와송 및 신곡 추출물을 건조 중량으로 0.0001 - 10.0 중량함유하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 지정, 와송 및 신곡 추출물은 지정, 와송 및 신곡을 물, 탄소수 1 - 4의 저급 알콜, 에틸아세테이트 또는 아세톤으로 1 회 이상 추출하여 추출액을 얻고, 상기 추출액을 감압 증류한 후 동결 건조하거나 분사 건조하여 얻는 것이 바람직하다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명하면 다음과 같다.
지정은 다년생 초본으로 제비꽃과 식물인 Viola yedoensis Mak.과 Vmandshurica W. Becker, 콩과 식물인 Gueldenstaedtia multiflora와 Gueldenstaedtia pauciflora, 용담과 식물인 Gentiana loureiri를 포함하며(중약대사전) 뿌리를 포함하는 전초가 청열이습, 해독소종 등의 한방 약재로 사용되어 왔다(동의보감). 또한 지정 추출물을 포함하는 가려움증 치료용 냅킨(napkin)에 관한 특허(중국특허 1101956)가 있으나 본 발명과는 무관하다. 와송은 경천과 (Crassulaceae)에 속하며 라틴명은 Herba Orostachydis이고 학명은 Orostachys fimbriatus, Orostachys japonicus로서 전초를 사용하여 토혈, 비출혈, 혈이, 간염, 말라리아, 치질, 습진, 화상을 치료하는데 사용되어 왔다(중약대사전). 기존의 와송 성분 동정 연구에 의하면 β-Amyrin, Friedelin, epi-Friedelinol, Glutinone 등의 화합물이 와송의 성분으로서 보고 되어 있다. 신곡은 행인, 개똥쑥, 도꼬마리 등의 생약을 밀가루 또는 밀기울과 섞어 발효시켜 만든 누룩으로 라틴명은 Massa Medicata Fermentat이며 소화불량, 산후 어혈에 의한 복통을 치료하는데 사용되어 왔다(중약대사전).
지정, 와송 및 신곡 추출물을 얻기 위하여 생약재로 시판되는 지정, 와송 및 신곡을 구입하여 잘게 분쇄하고 분쇄물 건조 중량에 대하여 5 - 20 부피의 물이나 탄소수 1 - 4 개의 무수 또는 함수 저급 알콜, 에틸아세테이트 또는 아세톤과 혼합한 후, 환류 냉각기가 달린 추출기에서 50 - 100℃로 1 - 5 시간 가열하여 추출한다. 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1 회 이상씩 더 추출한다. 추출액을 합하여 감압 농축한 후 동결 건조나 분무 건조하여 건조 추출물을 얻는다.
건조된 지정, 와송 및 신곡 추출물을 쥐의 멜라노마 세포(B-16 melanoma cell)에 처리하였을 때, 매우 강력한 멜라닌 합성 저해 효과를 나타내었다.
상기와 같이 얻어진 지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유한 피부 외용 연고나 로션 같은 여러 화장료를 제조한다. 지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유한 피부 외용 연고나 로션 등의 화장료를 제조하여 사람의 피부에 도포하였을 때 피부 미백 효과가 매우 우수하였다. 또한 어떤 부작용도 발생하지 않아 지정, 와송 및 신곡 추출물이 안전하고 효과가 매우 뛰어난 기미나 주근깨 개선 및 피부 미백제임을 알 수 있다.
피부 외용 연고나 화장료 제조시에 함유되는 지정, 와송 및 신곡 추출물의 함량은 건조 중량으로 0.0001 - 10.0 중량, 바람직하게는 0.0005 - 10.0 중량가 적당하다. 0.0001 중량이하의 농도에서는 뚜렸한 효과를 기대할 수 없었고, 10 중량이상의 농도에서는 함유량의 증가에 따라 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않았다.
다음으로 실시예에 의거하여 본 발명을 자세히 설명하고자 하며, 본 발명이 실시예에만 한정되는 것이 아님을 밝혀둔다.
실시예 1 - 18
시판되는 지정, 와송 및 신곡을 구입하여 분쇄한 분쇄물 100 g을 물이나 탄소수 1 - 4 개의 무수 또는 함수 저급 알콜, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 용매 3 ℓ에 넣고, 냉각 콘덴서가 달린 환류 추출기에서 3 시간 끓여 추출한 다음, 100 메쉬 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1 회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온에서 화트만(Whatman) 2 번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후, 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치에서 60℃로 감압 농축한 후 동결 건조하여 [표 1]과 같이 각각의 건조 중량을 얻었다.
[표 1] 추출 용매 및 추출물의 건조 중량
추출용매 |
추출물의 건조중량 |
지정 |
와송 |
신곡 |
80메탄올 |
13 g (실시예 1) |
7 g (실시예 7) |
22 g (실시예 13) |
정제수 |
12 g (실시예 2) |
7 g (실시예 8) |
20 g (실시예 14) |
85에탄올 |
12 g (실시예 3) |
8 g (실시예 9) |
23 g (실시예 15) |
70아세톤 |
8 g (실시예 4) |
5 g (실시예 10) |
14 g (실시예 16) |
에틸아세테이트 |
7 g (실시예 5) |
5 g (실시예 11) |
11 g (실시예 17) |
포화노말부탄올 |
10 g (실시예 6) |
7 g (실시예 12) |
18 g (실시예 18) |
실험예 1
상기 실시예 1 - 18에 따라 얻어진 각 추출물들을 쥐의 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)의 배양액에 첨가하여 세포 수준에서의 미백 효과를 실험하였다(Lotan R., Lotan D. Cancer Res. 40:3345-3350, 1980). 실시예 1 - 18에 따라 얻어진 각 추출물들을 최종 농도가 0.005가 되도록 하여 하이드로퀴논 수용액과 함께 각각 B-16 멜라노마 세포의 배양 배지에 첨가하여 3 일간 배양한 후 세포들을 트립신(trypsin) 처리하여 배양 용기로부터 떼어내 원심 분리한 후 멜라닌을 추출하였다. 이것에 수산화 나트륨 용액(1N 농도) 1 ㎖를 가하여 10 분간 끓여 멜라닌을 녹이고 분광 광도계를 이용, 400 나노미터(nm)에서 흡광도를 측정하여 생성된 멜라닌의 양을 단위 세포수(106cells)당 흡광도로 나타내는 방법으로 수행하였으 며, 대조군에 대한 상대적인 멜라닌 생성량을 저해율()로 계산하고 결과를 [표 2]에 정리하였다.
[표 2]의 결과에서 볼 수 있듯이, 실시예 1 - 18에 따라 얻어진 각 시료들은 전혀 정제되지 않은 추출물임을 감안하면 기존에 알려진 미백 물질인 하이드로퀴논과 비교할때 배양된 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 매우 강력한 멜라닌 생성 억제능이 있음을 알 수 있다.
[표 2]
지정, 와송 및 신곡 추출물의 세포 수준에서의 멜라닌 생성 저해 효과
시료 |
멜라닌 생성 |
저해율 () |
대조군 (무첨가) |
0.045 ± 0.004 |
- |
실시예 1 (최종농도 0.005) |
0.028 ± 0.003 |
38 |
실시예 2 (최종농도 0.005) |
0.030 ± 0.003 |
33 |
실시예 3 (최종농도 0.005) |
0.028 ± 0.002 |
38 |
실시예 4 (최종농도 0.005) |
0.025 ± 0.002 |
44 |
실시예 5 (최종농도 0.005) |
0.025 ± 0.003 |
44 |
실시예 6 (최종농도 0.005) |
0.024 ± 0.003 |
47 |
실시예 7 (최종농도 0.005) |
0.033 ± 0.004 |
27 |
실시예 8 (최종농도 0.005) |
0.035 ± 0.002 |
22 |
실시예 9 (최종농도 0.005) |
0.032 ± 0.002 |
29 |
실시예 10 (최종농도 0.005) |
0.028 ± 0.002 |
38 |
실시예 11 (최종농도 0.005) |
0.026 ± 0.002 |
42 |
실시예 12 (최종농도 0.005) |
0.021 ± 0.002 |
53 |
실시예 13 (최종농도 0.005) |
0.028 ± 0.003 |
38 |
실시예 14 (최종농도 0.005) |
0.029 ± 0.004 |
35 |
실시예 15 (최종농도 0.005) |
0.026 ± 0.002 |
42 |
실시예 16 (최종농도 0.005) |
0.024 ± 0.002 |
47 |
실시예 17 (최종농도 0.005) |
0.024 ± 0.002 |
47 |
실시예 18 (최종농도 0.005) |
0.023 ± 0.002 |
49 |
하이드로퀴논 (최종농도 0.0001) |
0.025 ± 0.002 |
44 |
* 반복수 = 3
실험예 2
실험예 1과 같은 방법으로 배양된 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 실시예 1, 7, 13의 추출물에 대하여 농도에 따른 멜라닌 생성 억제능을 조사하였으며 결과는 [표 3]과 같다.
[표 3] 농도에 따른 세포 수준에서의 멜라닌 생성 저해 효과
시료 |
적용 농도 () |
멜라닌 생성량 |
저해율 () |
대조군 (무첨가) |
- |
0.045 ± 0.004 |
- |
실시예 1 |
최종농도 (0.0005) |
0.039 ± 0.002 |
13 |
최종농도 (0.005) |
0.028 ± 0.003 |
38 |
최종농도 (0.05) |
0.024 ± 0.002 |
47 |
최종농도 (0.5) |
0.020 ± 0.001 |
56 |
실시예 7 |
최종농도 (0.0005) |
0.042 ± 0.002 |
7 |
최종농도 (0.005) |
0.033 ± 0.004 |
27 |
최종농도 (0.05) |
0.022 ± 0.002 |
51 |
최종농도 (0.5) |
0.017 ± 0.001 |
62 |
실시예 13 |
최종농도 (0.0005) |
0.038 ± 0.002 |
16 |
최종농도 (0.005) |
0.028 ± 0.003 |
38 |
최종농도 (0.05) |
0.017 ± 0.002 |
62 |
최종농도 (0.5) |
0.014 ± 0.001 |
69 |
하이드로퀴논 |
(0.0001) |
0.025 ± 0.002 |
44 |
* 반복수 = 3
[표 3]의 결과에서 볼 수 있듯이 지정, 와송 및 신곡 추출물은 배양된 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 매우 강력한 멜라닌 생성 억제능을 가지고 있음을 알 수 있다. 하이드로퀴논은 저농도에서 강력한 멜라닌 생성 억제능을 가지지만 세포 독성이 심해 0.0001이상에서는 실험을 할 수 없는 것에 반하여, 본 발명에서의 추출물들은 0.05농도 이상에서도 세포 독성을 나타내지 않으면서 사용 가능한 최대량의 하이드로퀴논보다 높은 멜라닌 생성 억제 효과를 갖는다. 또한 지정, 와송 및 신곡 추출물이 단일 물질이 아니고 혼합 물질이라는 것을 고려할 때 매우 높은 멜라닌 생성 억제능을 가지고 있으므로, 기미나 주근깨 개선 또는 피부 미백에 매우 유용하게 사용될 수 있다.
이하 지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유하는 화장료의 처방예를 제조예에 의해 나타내었다.
제조예 1 - 3 및 비교예 1
지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유하는 피부 외용 연고 처방예는 다음과 같다.
지정, 와송 및 신곡 추출물은 각각 실시예 5, 11, 17의 것을 말한다.
조성물 |
제조예 (중량) |
비교예 1 |
1 |
2 |
3 |
- 추출물지정 추출물와송 추출물신곡 추출물- 디에틸 세바케이트- 경납- 폴리옥시에틸렌올레일에테르포스페이트- 벤조산 나트륨- 바셀린 |
10--856적량나머지 |
-10-856적량나머지 |
--10856적량나머지 |
---856적량나머지 |
제조예 4 - 6 및 비교예 2
지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유하는 화장료 중 크림의 처방예는 다음과 같다.
여기서 지정, 와송 및 신곡 추출물은 각각 실시예 5, 11, 17의 것을 말한다.
조성물 |
제조예 (중량) |
비교예 2 |
4 |
5 |
6 |
- 추출물지정 추출물와송 추출물신곡 추출물- 스테아린산- 세탄올- 수산화칼륨- 글리세린- 프로필렌글리콜- 방부제- 향- 정제수 |
1.0--15.01.00.75.03.0적량적량나머지 |
-1.0-15.01.00.75.03.0적량적량나머지 |
--1.015.01.00.75.03.0적량적량나머지 |
---15.01.00.75.03.0적량적량나머지 |
제조예 7 - 9 및 비교예 3
지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유하는 화장료 중 유연 화장수의 처방예는 다음과 같다.
여기서 지정, 와송 및 신곡 추출물은 각각 실시예 5, 11, 17의 것을 말한다.
조성물 |
제조예 (중량) |
비교예 3 |
7 |
8 |
9 |
- 추출물지정 추출물와송 추출물신곡 추출물- 에탄올- 폴리라우린산폴리옥시에틸렌소르비탄- 파라옥시안식향산메칠- 글리세린- 1,3-부틸렌글리콜- 향- 색소- 정제수 |
0.2--10.01.00.25.06.0적량적량나머지 |
-0.2-10.01.00.25.06.0적량적량나머지 |
--0.210.01.00.25.06.0적량적량나머지 |
---10.01.00.25.06.0적량적량나머지 |
제조예 10 - 12 및 비교예 4
지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유하는 화장료 중 영양 화장수의 처방예는 다음과 같다.
여기서 지정, 와송 및 신곡 추출물은 각각 실시예 5, 11, 17의 것을 말한다.
조성물 |
제조예 (중량) |
비교예 4 |
10 |
11 |
12 |
- 추출물지정 추출물와송 추출물신곡 추출물- 와셀린- 세스퀴올레인산소르비탄- 폴리옥시에틸렌올레일에틸- 파라옥시안식향산메칠- 프로필렌글리콜- 에탄올- 카르복시비닐폴리머- 수산화칼륨- 색소- 향- 정제수 |
0.1--2.00.81.2적량5.03.218.00.1적량적량나머지 |
-0.1-2.00.81.2적량5.03.218.00.1적량적량나머지 |
--0.12.00.81.2적량5.03.218.00.1적량적량나머지 |
---2.00.81.2적량5.03.218.00.1적량적량나머지 |
제조예 13 - 15 및 비교예 5
지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유하는 화장료 중 팩의 처방예는 다음과 같다.
여기서 지정, 와송 및 신곡 추출물은 각각 실시예 5, 11, 17의 것을 말한다.
조성물 |
제조예 (중량) |
비교예 5 |
13 |
14 |
15 |
- 추출물지정 추출물와송 추출물신곡 추출물- 글리세린- 프로필렌글리콜- 폴리비닐알콜- 에탄올- 폴리옥시에틸렌올레일에칠- 파라옥시안식향산메칠- 향- 색소- 정제수 |
0.5--5.04.015.08.01.00.2적량적량나머지 |
-0.5-5.04.015.08.01.00.2적량적량나머지 |
--0.55.04.015.08.01.00.2적량적량나머지 |
---5.04.015.08.01.00.2적량적량나머지 |
제조예 16 - 18 및 비교예 6
지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유하는 화장료 중 에센스의 처방예는 다음과 같다.
여기서 지정, 와송 및 신곡 추출물은 각각 실시예 5, 11,17의 것을 말한다.
조성물 |
제조예 (중량) |
비교예 6 |
16 |
17 |
18 |
- 추출물지정 추출물와송 추출물신곡 추출물- 프로필렌글리콜- 글리세린- 히아루론산나트륨수용액 (1)- 에탄올- 폴리옥시에틸렌겨와피마자유- 파라옥시안식향산메칠- 향- 정제수 |
5--10.010.05.05.01.00.1적량나머지 |
-5-10.010.05.05.01.00.1적량나머지 |
--510.010.05.05.01.00.1적량나머지 |
---10.010.05.05.01.00.1적량나머지 |
실험예 3
건강한 남녀 20 명씩을 선정하여 양팔의 하박부에 직경 7 mm 크기의 구멍이 6 개씩 2 줄로 파인 알루미늄 호일을 붙이고, 팔에서 10 cm 떨어진 거리에서 ORIEL solar simulator 1000W를 사용하여 60 mJ/cm2의 광량을 조사하였다. 조사 전에 70에탄올 수용액으로 조사 부위를 잘 세척하였다. 조사하기 3 일 전부터 조사후 3 주째까지 1 일 2 회씩 제조예 1 - 18 및 비교예 1 - 6에 따라 제조된 지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유한 시료와 각각의 추출물이 함유되지 않은 기제를 한 쌍으로 같은 줄에 도포하였다(제조예 13, 14, 15 및 비교예 5의 팩 처방의 경우 도포한 다음 15 분 후에 떼어내었다). 각각에 대하여 제조예와 비교예의 색소 침착도를 육안으로 판정하고, 제조예가 비교예에 비해 색소 침착을 억제한 정도를 뚜렷한 효과, 효과 있음, 차이없음의 3 단계로 평가하였으며, 그 결과는 [표 4]와 같다.
[표 4]
지정, 와송 및 신곡 추출물을 함유한 연고 및 화장료의 색소 침착 저해 효과
실험 물질 |
뚜렷한 효과 (명) |
효과있음 (명) |
차이없음 (명) |
제조예 1 |
4 |
10 |
6 |
제조예 2 |
5 |
9 |
6 |
제조예 3 |
5 |
10 |
5 |
제조예 4 |
3 |
8 |
9 |
제조예 5 |
2 |
11 |
7 |
제조예 6 |
2 |
10 |
8 |
제조예 7 |
2 |
8 |
10 |
제조예 8 |
2 |
9 |
9 |
제조예 9 |
2 |
10 |
8 |
제조예 10 |
2 |
8 |
10 |
제조예 11 |
3 |
7 |
10 |
제조예 12 |
2 |
9 |
9 |
제조예 13 |
2 |
9 |
9 |
제조예 14 |
3 |
7 |
10 |
제조예 15 |
2 |
7 |
11 |
제조예 16 |
3 |
7 |
10 |
제조예 17 |
3 |
8 |
9 |
제조예 18 |
4 |
8 |
8 |
위의 [표 4]의 결과에서 볼 수 있듯이, 제조예 1 - 18에 따라 제조된 지정, 와송 및 신곡 추출물 함유 미백 연고 및 화장료는 피시험자 20 명 중에서 최소 10 명 이상에 대하여 미백 효과를 나타내었으며, 특히 많은 양의 지정, 와송 및 신곡 추출물이 적용된 제조예 1, 2, 3과 비교예 1의 비교 실험에서는 70가 색소 침착 저해 효과를 보이고, 피부내에서 어떤 부작용도 나타내지 않아 지정, 와송 및 신곡 추출물이 안전하고 효과가 매우 뛰어난 기미나 주근깨 개선 또는 피부 미백용 화장료 임을 알 수 있다.