KR101238649B1

KR101238649B1 - 항산화 활성을 가지는 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물, 이의 제조방법 및 이를 이용한 화장료

Info

Publication number: KR101238649B1
Application number: KR1020100117656A
Authority: KR
Inventors: 고두진; 최종완; 서봉석; 김상범
Original assignee: 주식회사 한국화장품제조
Priority date: 2010-11-24
Filing date: 2010-11-24
Publication date: 2013-02-28
Also published as: KR20120056108A

Abstract

본 발명은 항산화 활성을 가지는 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물, 이의 제조방법 및 이를 이용한 화장료에 관한 것으로, 보다 상세하게는 항산화 활성 및 지질 과산화 억제 효과를 가지는 신국 추출물을 유효성분으로 함유하여 피부 노화 완화, 주름 완화 등의 우수한 효과를 제공하는 화장료 조성물, 이의 제조방법 및 이를 이용한 화장료에 관한 것이다.

Description

항산화 활성을 가지는 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물, 이의 제조방법 및 이를 이용한 화장료{A cosmetic composition comprising Massa Medicata Fermentata Extracthaving effect of anti-oxident, a preparing method thereof and a cosmetic using the same}

본 발명은 항산화 활성을 가지는 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물, 이의 제조방법 및 이를 이용한 화장료에 관한 것이다.

우리 신체는 자외선 및 유해한 외부물질에 노출되어 있어 그에 대항하기 위해 자연치유 능력을 가지고 있다. 그런 능력의 일종으로 세포의 중요한 치유시스템인 엔도시토시스 프로세스, 인체를 수호하는 면역활동의 주역인 백혈구, 유해 라디칼로부터 피부를 보호하는 멜라닌 생성, 수퍼옥사이드를 제거하는 수퍼옥사이드 디스뮤타제 등이 있다.

그러나, 이러한 자연 치유능력 중에서 발생하는 과잉 반응으로 인해 신체에 해를 입히기도 한다. 그 중 하나가 면역기구의 과잉반응인데, 우리 신체에서 동물의 털이나 먼지, 꽃가루 같이 번식하지 않는 이물질들에 대해 지나친 면역반응을 보이도록 판단을 내리면, 과민성질환(알레르기)을 초래하기도 하고, 지나친 염증반응에 의해 발생하는 싸이토카인이나 호르몬, 활성 산소종에 의해 피부의 색소침착이 과도하게 생성되기도 한다. 그 중에서도 특히 활성산소종들은 피부 세포 및 조직 손상을 주도하여 노화, 특히 피부노화의 원인 물질로 작용하고 있다. 이들은 항산화 효소와 비효소적 항산화제들로 구성된 항산화 방어망을 파괴함으로써 산화제/항산화제 균형을 산화상태 쪽으로 기울게 한다. 그렇게 계속된 산화적 스트레스는 피부 과잉 색소침착, 지질 과산화, 단백질 산화, 간질 성분을 파괴시키는 단백질 분해효소의 활성화, 탄력 섬유인 콜라겐과 엘라스틴의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합, 히아루론산 사슬의 절단, 멜라닌 생성반응 촉진, DNA 산화와 같은 생체구성성분들의 손상을 야기시킨다. 그러다가 결국에는 탄력감소, 주름살 및 기미, 주근깨 등으로 특징 지워지는 피부노화가 가속화된다.

따라서, 피부과잉 색소 침착 및 노화 방지를 위해서는 과잉의 활성 산소종 생성을 억제하고, 생성된 활성산소를 효율적으로 제거할 수 있는 시스템이 화장품의 처방에 반드시 포함될 필요가 있다. 즉, 산화제/항산화제 밸런스가 유지되는 피부의 항산화 방어 시스템 구축이 필요하다.

생체 내에서 산화제 공격과 항산화제 방어는 밀접하게 조화를 이루고 있으나, 사실상 공격에 비하여 방어체제가 완벽하지 못하다. 따라서, 생체 구성성분인 지질, 단백질, 핵산 등의 생체분자들은 산화제인 자유 라디칼(freeradical)에 의해 계속적인 산화적 손상을 받으며, 이들 산화반응의 산물들은 나이가 들어감에 따라 점차적으로 체내에 축적된다. 강한 산화제인 자유 라디칼은 짝이 없는 전자이다. 자유 라디칼은 다양한 생물체의 산화 환원 반응에서 생성되는데, 이러한 자유 라디칼은 식용유지의 변질 또는 여러 생체물질(지질, 단백질, 핵산, 탄수화물)에 산화적인 손상을 유발할 수 있고, 여러 단계를 거치게 되면서 결과적으로 돌연변이를 발생하게 할 수 있다 (Yen GC et al., J. Agric. Food Chem., 43, pp.27-32, 1995). 생체막 구성성분인 인지질의 불포화 지방산은 활성산소종과 같은 자유라디칼에 의해 과산화 반응이 개시되며, 또한 연쇄적으로 진행된다. 따라서, 자유라디칼에 의한 과산화 반응은 세포막의 투과성을 항진시킬 뿐 아니라 전반적인 세포독성을 초래하여 노화현상의 원인이 되거나, 이에 따른 여러 가지 질환의 병리현상을 유도하여 발암과정에도 관여한다.

라디칼 작용은 기미, 주근깨를 비롯하여 산화적 스트레스와 관련된 질환인 아토피성 질환, 암, 고혈압, 심근경색, 동맥경화, 류머티스, 백내장, 파킨슨씨 병 등 여러 가지 만성질환의 진행에 많은 영향을 주며 (De Souza LC et al., Bioorg. Med. Cehm. Lett., 14, pp5859-5861, 2004), 면역계 기능을 약화시키는 요인으로 작용될 수 있다 (Pike J et al., Int. J. Vitam. Nutr. Res., 65, pp117-120, 1995).

DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)는 여러 가지 자연적 화합물의 항산화 활성의 측정에 많이 이용되는 안정적인 자유 라디칼이다 (Yokozawa T et al., Biochem. Pharmacol., 56, pp213-222, 1998). DPPH에 전자나 수소이온을 전달하는 작용, 즉 DPPH와의 상호작용으로 자유 라디칼의 성질을 중화시킬 수 있다.

자유 라디칼로부터 인체를 보호하는 협동적인 방어시스템은 산화를 저해시키는 영양소와 효소를 가지고 있다(Halliwell B, Annu. Rev. Nutr., 16, pp33-50, 1996). 산화적인 스트레스로부터 인체를 보호하는 효과적인 방법 중 하나는 항산화 수준을 증가시키는 것이다 (De Souza LC et al., Bioorg. Med. Cehm. Lett., 14, pp 5859-5861, 2004). 따라서, 산화적 손상으로부터 예방하기 위한 대체 물질의 항산화적인 평가는 매우 활발하게 연구되고 있다.

일반 화장품, 의약품, 식품의 원료로서 사용되는 항산화 효과가 있는 물질이 많이 알려져 있으나, 합성품을 장기간 인간의 피부에 적용할 경우에는 안전성이 문제화되므로 사용이 제한된다. 반면, 일반적으로 천연물은 색소침착 억제와 활성산소 소거 효과가 약한 것이 대부분이지만, 사람의 피부에 대해서는 안전성이 보증된다.

상기 문제점을 해결하고자, 인간의 피부에 대하여 안정성이 보증될 뿐만 아니라 우수한 활성산소 소거 효과를 나타내어 피부 노화 완화, 주름 완화 효과 등을 제공하는 화장품 재료에 관한 연구가 있어 왔다.

본 발명의 하나의 목적은 사람의 피부에 대하여 안정성을 가질 뿐만 아니라 항산화 효과를 가져 피부 노화 방지 효과가 우수한 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화장료 조성물을 이용한 화장료를 제공하는 것이다.

본 발명은 항산화 효과를 가지는 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 ⅰ) 신국을 추출 용매를 사용하여 추출하는 단계; ⅱ) 상기 i)의 추출물을 숙성시킨 후 여과하여 그 여액을 얻는 단계; 및 ⅲ) 상기 여액 및 화장료 성분을 포함하는 화장료 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 화장료 조성물의 제조 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물로부터 제조되는 화장료를 제공한다.

본 발명에 따른 신국 추출물을 함유하는 조성물은 우수한 자유 라디칼 소거 효과, 지질 과산화 억제 효과 등을 나타내어 피부 노화 완화 및 주름 완화 효과를 제공하는 바, 화장료 조성물로서 매우 유용하게 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.

본 발명은 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에서 유효성분으로 함유되는 '신국'은 밀가루와 밀기울, 적소두 가루, 행인 가루, 청호즙, 창이자즙, 야료즙을 반죽하여 누룩과 같이 만들거나 짚이나 마대 등으로 싸서 온실에서 발효시킨 것을 말한다. 생약명은 'Massa Medicata Fermentata'이다. 신국은 모양이 일정치 않고, 황갈색 또는 갈색의 덩어리이며, 분말을 뭉쳐 놓은 것처럼 가볍고 엉성하여 부스러지기 쉽고, 갈색을 띤 섬유상의 물질이 섞여 있다는 특징을 가진다. 양질의 상품은 불쾌한 냄새가 없고 벌레 먹지 않았으며 다른 곰팡이가 피지 않고 황색인 것이어야 한다.

신국은 6가지 약재(밀가루와 밀기울, 적소두 가루, 행인 가루, 청호즙, 창이자즙, 야료즙)를 혼합하여 만든 것으로, 육신곡 이라고도 한다. 발효 중에 곰팡이 효모에 의하여 분해되어 균의 영양분으로 이용되고 일부는 그대로 남으며, 발효가 잘되어 균이 잘 자랄 경우에는 이들이 분비하는 효소인 아밀라제, 프로테아제, 리파제, 세룰라제 등을 생산하여 자체 원료의 성분들을 분해하고 남아있다.

신국은 예로부터 혈행을 개선시키는 한약재, 산후 어혈 해소제 등으로 사용되었다. 또한, 신국은 약성이 완화하고 독성이 없으며 소화불량과 설사를 다스리는데 유용하며 혈액순환을 촉진하고 소화기능을 튼튼하게 하는 효과를 가질 뿐만 아니라, 피를 잘 돌게 하고 음식이 소화되게 하며 이질을 멎게 하는 효과 등을 가진다.

본 발명에서는 신국 추출물의 자유라디칼 소거, 지질과산화 억제 효과를 분석하여, 상기 추출물이 피부 보호와 노화 방지에 도움이 된다는 것을 확인하고 본　발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 신국 추출물을 함유하는 화장료 조성물은,

ⅰ)신국을 추출 용매를 사용하여 추출하는 단계;

ⅱ)상기 i)의 추출물을 숙성시킨 후 여과하여 그 여액을 얻는 단계; 및

ⅲ)상기 여액 및 화장료 성분을 혼합하여 화장료 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조 방법에 의해 제조된다.

본 발명의 신국 추출물은 하기와 같은 방법으로 제조될 수 있으나, 반드시 이에 한정되지는 않는다.

상기 신국을, 추출 용매로서 극성 용매 또는 비극성 용매를 사용하여 추출물을 추출한다. 이 때, 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 30℃ 내지 100℃, 바람직하게는 50℃ 내지 95℃의 추출 온도에서 1시간 내지 30시간, 바람직하게는 2시간 내지 20시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열추출 등의 추출방법으로, 바람직하게는 열수추출법으로 1 내지 7회, 바람직하게는 1 내지 3회 추출한 후 여과하고 감압 농축하여 본 발명의 신국 추출물을 수득할 수 있다.

상기 추출 용매로서 정제수, 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 극성용매; 및 헥산, 글리세린, 부틸렌글리콜, 클로로포름, 에틸아세테이트, 프로필렌글리콜 등의 비극성 용매로 이루어진 군으로 선택되는 하나 또는 2 이상의 용매를 사용할 수 있다.

상기 추출 용매는 상기 신국의 건조 중량에 대하여 바람직하게는 1 내지 30배 부피량, 보다 바람직하게는 10 내지 20 배 부피량을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 신국 추출물을 함유하는 화장료 조성물에서 상기 신국 추출물은 액상 중량으로서는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.1중량% 내지 30중량%, 보다 바람직하게는 0.1중량% 내지 20중량%로 포함될 수 있다.

또한, 본 발명의 신국 추출물을 함유하는 화장료 조성물에서 상기 신국 추출물은 농축 중량으로서는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01중량% 내지 10중량%, 보다 바람직하게는 0.01중량% 내지 5중량%, 가장 바람직하게는 0.01중량% 내지 3중량%로 포함될 수 있다. 농축하는 경우에는 분말 형태로 신국 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명은 상기에서 얻어진 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 상기 신국 추출물은 피부 노화 완화 효과를 가지며, 화장품, 세안제 등에 다양하게 사용될 수 있다. 구체적으로는, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품 및 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등에 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 추가 배합 성분으로서 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 2이상을 포함할 수 있다. 그러나, 본 발명의 화장료 조성물에 추가로 포함될 수 있는 배합 성분은 이에 한정되지는 않는다.

상기 추가로 포함되는 배합 성분은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하며, 화장료 조성물의 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01중량% 내지 5중량%, 보다 바람직하게는 0.01중량% 내지 3 중량%로 배합될 수 있다. 추가 배합 성분이 상기 범위 내에서 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 경우에는 보습 및 피부 유연 효과를 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로서 상기 추가 배합 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 이러한 성분의 구체적인 예로는 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체 등이 있으나, 반드시 이에 한정되지는 않는다. 상기 성분은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하며, 화장료 조성물의 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01중량% 내지 5중량%, 보다 바람직하게는 0.01중량% 내지 3중량%로 배합될 수 있다. 상기 성분이 상기 범위 내에서 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 경우에는 피부 보호 및 탄력 효과를 얻을 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 이용하여 제조되는 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있는데, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다. 구체적으로는, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크 로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클린저 등의 제형으로 제조될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이며, 이에 의하여 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.

< 제조예 > 신국 추출물의 제조

제조예 1

건조된 신국 1kg에 70% 에탄올 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침척추출한 후 250 메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후, 와트만 여과지로 여과하였다. 상기 추출물을 50℃의 수욕상에서 회전 감압 증발기로 농축하여 분말 형태의 추출물을 얻었다.

제조예 2

건조된 신국 1kg에 정제수 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침적추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 4일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과한다. 상기 추출물을 50℃의 수욕상에서 회전 감압 증발기로 농축하여 분말 형태의 추출물을 얻었다.

제조예 3

건조된 신국 1kg에 30% 에탄올 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침적추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과시켰다. 상기 추출물을 50℃ 수욕상에서 회전 감압 증발기로 농축하여 분말 형태의 추출물을 얻었다.

제조예 4

건조된 신국 1kg에 30% 함수 부틸렌글리콜 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침적추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과하여 추출액을 얻었다.

제조예 5

건조된 신국 1kg에 80% 함수 글리세린 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침적추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과하여 추출액을 얻었다.

제조예 6

건조된 신국 1kg에 부틸렌글리콜 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침적추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과시켜 추출액을 얻었다.

제조예 7

건조된 신국 1kg에 95% 에탄올 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침적추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과시켰다. 상기 추출물을 50℃ 수욕상에서 회전 감압 증발기로 농축하여 분말 형태의 추출물을 얻었다.

제조예 8

건조된 신국 1 kg에 30% 함수 프로필렌글리콜 5kg을 첨가하였다. 상온에서 5일간 침적추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과시켜 추출액을 얻었다.

<실험예>

실험예 1. 세포 배양

하기 실험예에 사용한 세포로는, ATCC(America Type Culture Collect, USA)로부터 구입한 human fibroblast cell line인 CCD-1064SK (CRL-2076), mouse macrophage cell line인 RAW 264.7 (TIB-71) 및 rat mast cell line인 RBL-2H3 (CRL-2256)을 사용하였다.

CCD-1064SK, RAW 264.7과 RBL-2H3의 배양 배지로는 각각 IMDM (iscove's modified dulbecco's medium), DMEM (dulbecco's modified eagle's medium)과 MEM (minimum essential medium)을 Gibco (USA)로부터 구입하여 사용하였고, 각각의 배지에 FBS (fetal bovine serum, Gibco, USA)(CCD-1064SK, RAW 264.7은 FBS 10%, RBL-2H3는 FBS 15%를 배지에 첨가)와 antibiotic-antimycotic solution (Giboco, USA) 1%를 첨가하여 세포배양에 사용하였다.

하기 실험예에서 사용한 모든 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기 (ELITE II, Revco, USA)에서 배양하였다.

실험예 2. 신국 추출물의 피부 세포에서의 세포 독성 측정

상기 제조예에서 제조된 신국 추출물의 세포 독성을 측정하기 위하여 문헌에 기재된 MTT(thiazolyl blue tetrazolium bromide, Sigma, USA) 방법(J. Immunol . Methods, 141(1), 15 (1991))을 이용하여 하기와 같이 진행하였다. MTT 방법은 세포 증식이나 독성 측정에 사용되는 방법으로, 살아있는 세포의 미토콘드리아에서 숙신산 탈수소효소(succinate dehydrogenase)에 의해 황색 수용성 염인 MTT가 불수용성인 자주색의 MTT formazandm로 환원되는 원리를 이용한 방법이다.

상기 실험예 1의 방법으로 배양한 CCK-1064SK fibroblast를 1×10⁵ cells/well의 밀도로 24 well plate(Nunc, USA)에 접종하여 1일 배양한 후 serum-free IMDM으로 교체하고, 상기 제조예 1 내지 8에서 제조된 추출물을 농도별로 첨가하여 24시간 배양하였다. 2.5 mg/ml의 농도로 제조한 MTT 용액을 0.1ml/well로 첨가하여 37℃에서 4시간 반응 후 MTT 용액을 제거하고, DMSO(dimethylsufoxid)를 0.5 ml/well로 첨가하였다. 실온에서 MTT formazan을 녹인 후, 570nm에서 흡광도를 측정하고 음성대조군과 흡광도 차이를 비교하여 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

시 료	농도 (μg/ml)	세포생존률 (% of control)
Control	-	100.00±2.77
제조예 1	10	99.37±2.39
	100	98.70±3.01
	1000	101.72±2.93
제조예 2	10	103.72±2.65
	100	100.73±2.19
	1000	99.37±1.90
제조예 3	10	98.69±2.07
	100	96.73±2.41
	1000	98.32±1.97
제조예 4	10	95.39±1.79
	100	97.38±2.01
	1000	99.31±2.97
제조예 5	10	96.20±1.89
	100	99.48±2.04
	1000	96.05±2.53
제조예 6	10	101.87±2.67
	100	104.30±3.01
	1000	103.03±2.89
제조예 7	10	99.79±2.53
	100	101.27±1.67
	1000	104.23±2.42
제조예 8	10	97.68±1.59
	100	99.28±1.30
	1000	101.38±2.04

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 제조예 1 내지 8에 따른 신국 추출물은 피부세포인 CCK-1064SK 세포에서 세포독성이 없음을 확인하였다.

실험예 3. 자유라디칼 소거 효능 측정

상기 제조예 1 내지 8에서 제조된 신국 추출물의 자유라디칼 소거 효과를 측정하기 위하여 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험하였다(Y. Fugita et al., Yakugak Zasshi, 108, p129, 1988).

0.2 mM의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액 0.5mL에 상기 제조예 1 내지 8의 신국 추출물을 각 농도별로 1mL을 첨가하였고, 상온에서 10분간 반응시킨 액 A를 520nm에서 최대 흡광도를 측정하였다. 실험군 색보정인 A'는 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 대신 95% 에탄올을 동량 사용하였고, 대조군인 B는 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 대신에 에탄올을 사용하였으며, 대조군의 색보정인 B'는 시료 대신에 용매, DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 대신에 95% 에탄올을 동량 첨가하였다. 각 추출물의 자유라디칼 소거 효과는 하기 계산식 1로 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

계산식 1

자유라디칼 소거 효과(%) = [1-(A-A')/(B-B')] x 100

추출물	SC50 (μg/ml)
제조예 1	10.12
제조예 2	39.78
제조예 3	37.86
제조예 4	70.27
제조예 5	85.28
제조예 6	80.78
제조예 7	39.42
제조예 8	70.27

상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 추출물은 자유 라디칼 소거 효과가 우수함을 확인하였으며, 그 중에서도 특히 제조예 1에 따른 추출물이 가장 효과가 우수하였다.

실험예 4. 지질 과산화 억제 효과 측정

상기 제조예 1 내지 8에서 제조된 신국 추출물의 지질 과산화 억제 효과를 측정하기 위하여 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험하였다(Ohkawa et al., Anal. Biochem. 95, pp.351, 1979).

2% 리놀렌산 20μL, 0.5M 글리신-염산(glycine-HCl)버퍼(pH 3.6) 160μL, 에탄올 640μL, 제조예 1 내지 8의 신국 추출물 80μL, 정제수 588μL, 30mM 염화제이철(FeCl₃) 32μL 및 1.5% TBA(t-butyl alcohol) 80μL를 넣어 잘 혼합한 후 끓는 물에서 1시간 동안 가열하였다.

얼음물에서 냉각한 후 증류된 액만큼 정제수로 보충하고 혼합하였다. n-부탄올을 1,600μL를 넣어 잘 혼합한 후 3,500rpm, 5분간 원심분리하고 상층부인 n-부탄올층을 취한 A를 534nm에서 흡광도를 측정하였다.

위와 동일한 방법으로 리놀렌산 대신 정제수를 20μL를 넣은 색보정액을 A'라 한다. 그리고, 대조군인 B는 신국 추출물 대신에 용매를 80μL 첨가하여 위와 동일한 방법으로 실험하였다. 대조군의 색 보정액인 B'는 시료와 리놀렌산 대신에 시료의 용매와 정제수를 동일한 양을 첨가하여 동일한 방법으로 실험하였다.

각 추출물의 지질 과산화 억제 효과는 하기 계산식 2로 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다

계산식 2

지질 과산화 억제 효과(%) = [1-(A-A')/(B-B')] x 100

추출물	IC50 (μg/ml)
제조예 1	49.12
제조예 2	208.24
제조예 3	94.58
제조예 4	106.48
제조예 5	128.64
제조예 6	110.21
제조예 7	100.47
제조예 8	129.48

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 추출물의 지질 과산화 억제 효과가 우수함을 확인하였다. 그 중에서도 특히 제조예 1에 따른 추출물의 피부 노화 완화 효과가 가장 우수할 것으로 판단되어, 상기 제조예 1에 따른 추출물을 사용하여 하기 제형예 1 내지 2를 수행하였다.

제형예 Ⅰ. 로션의 제조

본 발명에 따른 신국 추출물을 함유한 화장료 중 로션의 제형예는 다음과 같다.

제형예 1

하기 표 4의 번호 2, 3, 4 및 5에 기재된 원료물질을 일정한 온도(95℃ 내지 100℃)에서 완전히 혼합용해시킨다. 상기 혼합물을 이하 "비이온계 양친매성 지질"이라고 칭한다.

하기 표 4의 원료물질 1, 6 및 7을 혼합 용해한 후, 상기 비이온계 양친매성 지질에 첨가하여 100℃에서 1시간 습윤하여 75℃로 냉각한 후 마이크로플루다이져를 통과시키고, 이어서 원료물질 8을 일정한 온도(40℃ 내지 50℃)에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루다이져에 2회 통과시켰다. 그리고 하기 표 4의 원료물질 9, 10, 11 및 12를 투입하고 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다.

비교제형예 1

하기 표 4의 원료물질 1 대신에 13을 첨가하는 것을 제외하고는, 상기 제형예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.

번호	원 료	제형예 1 (중량%)	비교제형예 1 (중량%)
1	제조예 1의 추출물	10.0	-
2	시토 스테롤	1.7	1.7
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.5	1.5
4	세테아레스-4	1.2	1.2
5	콜레스테롤	1.5	1.5
6	디세틸포스페이트	0.4	0.4
7	농글리세린	5.0	5.0
8	선플라우어오일	10.0	10.0
9	카르복시비닐폴리머	0.2	0.2
10	산탄검	0.3	0.3
11	방부제	미량	미량
12	향료	미량	미량
13	정제수	잔량	잔량

제형예 Ⅱ. 크림의 제조

본 발명에 따른 신국 추출물을 함유한 화장료 중 크림의 제형예는 다음과 같다.

제형예 2

하기 표 5의 번호 2, 3, 4 및 5에 기재된 원료물질을 일정한 온도(95℃ 내지 100℃)에서 완전히 혼합용해시킨다. 상기 혼합물을 이하 "비이온계 양친매성 지질"이라고 칭한다.

하기 표 5의 원료 물질 1, 6 및 7을 혼합 용해한 후, 상기 비이온계 양친매성 지질에 첨가하여 100℃에서 1시간 습윤하여 75℃로 냉각한 후 마이크로플루다이져를 통과시키고, 이어 원료물질 8을 일정한 온도(40 ℃내지 50℃)에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루다이져에 2회 통과시켰다. 그리고 하기 표 5의 원료물질9, 10, 11 및 12를 투입하고 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다.

비교제형예 2

하기 표 5의 원료물질 1 대신에 13을 첨가하는 것을 제외하고는, 상기 제형예 2와 동일한 방법으로 제조하였다.

번호	원 료	제형예 2 (중량%)	비교제형예 2 (중량%)
1	제조예 1의 추출물	10.0	-
2	시토 스테롤	4.0	4.0
3	폴리글리세릴 2-올레이트	3.0	3.0
4	세테아레스-4	2.0	2.0
5	콜레스테롤	3.0	3.0
6	디세틸포스페이트	0.4	0.4
7	농글리세린	5.0	5.0
8	선플라우어오일	22.0	22.0
9	카르복시비닐폴리머	0.5	0.5
10	트리에탄올아민	0.5	0.5
11	방부제	미량	미량
12	향료	미량	미량
13	정제수	잔량	잔량

임상실험예 1. 본 발명에 따른 로션, 크림의 피부 안정성 확인 시험 (폐쇄 첩포 실험)

건강한 성인 여성 20명의 전박부에 상기 제형예 1과 2에서 제조한 로션 및 크림에 대한 인체 첩포 시험을 실시하였다.

시험대상자의 전박부를 70% 에탄올로 잘 닦은 다음 그 부위에, 통상의 화장료 기제에 상기 제형예 1와 2에서 제조한 로션 및 크림을 20μL씩 담은 핀 챔버를 점착 테이프를 이용하여 24시간 폐쇄 부착시켰다. 24시간 후에 점착 테이프와 핀 챔버를 제거하고, 가제로 피부에 잔존된 시료를 가볍게 닦아 제거한 뒤에 피부 상태를 관찰하고, 다시 24시간 후에 한번 더 관찰하였다. 그 실험 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

시료	24시간 후(n=20)	48시간 후(n=20)	비고
로션	0/20	0/20	반응양성자수/총대상자수
크림	0/20	0/20	반응양성자수/총대상자수

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 로션 및 크림은 피부 자극성을 확인하기 위한 인체 첩포 시험에서 양성반응을 보이지 않아, 인체 피부에 자극성이 전혀 없는 것으로 확인되었다.

Claims

항산화 활성 및 지질 과산화 억제 효과를 가지는 신국 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로,
상기 신국 추출물은 추출 용매로서 정제수, 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올로 이루어진 군으로 선택된 하나 또는 2 이상의 극성 용매 또는 헥산, 글리세린, 부틸렌글리콜, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 프로필렌글리콜로 이루어진 군으로 선택된 하나 또는 2 이상인 비극성 용매를 사용하여 3일 내지 7일 침적하여 추출된 후,
0℃ 내지 10℃에서, 5일 내지 10일간 방치하여 수득된 여액인 것인, 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 신국 추출물은 액상 중량으로서는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 중량% 내지 30 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 신국 추출물은 농축 중량으로서는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.01 중량% 내지 10 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 따른 신국 추출물을 함유하는 화장료 조성물로부터 제조되는 화장료.
청구항 7에 있어서, 상기 화장료는 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료.