KR20180089438A - 항 호흡기 세포융합 바이러스의 완전 인간화 항체 - Google Patents

항 호흡기 세포융합 바이러스의 완전 인간화 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR20180089438A
KR20180089438A KR1020187017477A KR20187017477A KR20180089438A KR 20180089438 A KR20180089438 A KR 20180089438A KR 1020187017477 A KR1020187017477 A KR 1020187017477A KR 20187017477 A KR20187017477 A KR 20187017477A KR 20180089438 A KR20180089438 A KR 20180089438A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
seq
rsv
antigen
binding fragment
Prior art date
Application number
KR1020187017477A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102184151B1 (ko
Inventor
쉬에리엔 자오
궈화 리우
취엔잉 왕
Original Assignee
엘리트이뮨 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 엘리트이뮨 인코포레이티드 filed Critical 엘리트이뮨 인코포레이티드
Publication of KR20180089438A publication Critical patent/KR20180089438A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102184151B1 publication Critical patent/KR102184151B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1027—Paramyxoviridae, e.g. respiratory syncytial virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6075—Viral proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/115—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • G01N2333/135—Respiratory syncytial virus

Abstract

본 발명은 RSV의 항체(바람직하게는 완전 인간화 항체 R66), 그의 코딩 핵산, 그를 포함하는 벡터와 숙주세포 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 RSV 관련 질환 예방과 치료, 및 RSV 검출에서 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항체 R66)를 응용하는 것에 관한 것이다. 본 발명에서 RSV의 항체는 바람직하게는 완전 인간화 단일 클론 항체이며, 이는 다른 동물 유래(예를 들어 쥐 유래)의 항 RSV 항체와 비교할 때 종간차(species difference)로 인한 면역원성이 크게 감소하며 특이성이 우수하고 친화력이 높기 때문에 임상에 사용할 경우 부작용이 크게 줄어든다.

Description

항 호흡기 세포융합 바이러스의 완전 인간화 항체
본 발명은 항 호흡기 세포융합 바이러스 또는 그 항원 결합 단편에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 완전 인간화된 항 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 단일 클론 항체에 관한 것이다.
인간화 항체는 인간화 항체의 상응하는 부분을 통하여 쥐 항체의 항원 특이성이 중요하지 않은 구역을 치환하여 제조한 것이다. 여기에서 얻은 재조합 항체는 잔여 쥐류 서열을 포함하기 때문에 환자에게 투여했을 때 종종 면역 응답 반응(사람 항뮤린(antimurine) 반응)을 일으킬 수 있다. 따라서 비(非)인간 서열을 포함하지 않는 완전 인간화 항체 제조가 필요하다. 인간화 항체는 이미 공개된 바 있다. 예를 들어 파지 디스플레이 기법(Phage display technology)으로 인간 항체 라이브러리(human antibody library)를 구축 및 선별하여 인간화 항체를 얻거나, 면역 인간 공여체에서 유래한 림프구를 중증 복합성 면역결핍 장애(SCID)의 쥐에 이식하여 인간화 항체를 얻거나, 또는 유전공학 기술을 이용하여 인간 면역글로불린유전자가 발현된 유전자 변이 쥐를 구축하여 인간화 항체를 얻는다. 병원성 항원(pathogenic antigen)의 완전 인간화 항체의 경우, 제대혈의 대량 선별을 통하여 IgM 자연 전 성분을 포함하는 제대혈을 분리하여 얻을 수도 있다(예를 들어 미국 특허 No. 6,391,635). 그러나 상기와 같은 방법은 친화력이 낮은 항체를 얻게 되거나, 또는 특정 면역 응답을 가진 인간 공여자에 의존해야 한다.
호흡기 세포융합 바이러스(RSV, 세포융합 바이러스라고도 하며 파라믹소 바이러스(Paramyxoviridae)과에 속하기도 함)는 소아 바이러스성 폐렴을 유발하는 가장 통상적으로 접할 수 있는 병원체로서 간질성 폐렴, 및 모세기관지염을 일으킬 수 있다. 중국 베이징(北京)에서 48%의 바이러스성 폐렴과 58%의 모세기관지염이 세포융합 바이러스로 인한 것이었다(1980~1984). 중국 광저우(廣州)에서는 소아 폐렴 및 모세기관지염의 31.4%가 세포융합 바이러스로 인한 것이었으며(1973~1986), 미국에서는 20~25%의 영유아 폐렴과 50~75%의 모세기관지염이 세포융합 바이러스에 의한 것이었다.
RSV 감염의 잠복기는 2 내지 8일(많게는 4 내지 6일)이다. 세포융합 바이러스 폐렴은 전형적으로 단핵 세포의 간질 침윤(interstitial infiltration)으로 나타난다. 주로 폐포 간격 확장과 단핵 세포 위주의 간질 침윤으로 나타나며, 여기에는 림프구, 형질 세포, 대식 세포가 포함된다. 그 외 폐포강에 수종액이 차고 초자막(hyaline membrane)이 형성될 수 있다. 일부 병례에서는 세기관지벽의 림프구 침윤이 보이기도 한다. 폐 유조직에 괴사를 수반하는 수종(edema)이 출현해 폐포 충만, 경결(consolidation), 무기폐가 나타난다. 소수의 병례에서는 폐포강 내에 다핵 융합 세포가 보이며 형태는 홍역 거대 세포와 유사하나 핵내봉입체를 찾을 수 없다.
RSV에는 2개의 주요 표면당단백질인 F와 G가 있다. 2개의 당단백질(90KDa와 68KDa)은 바이러스 입자 표면에 노출된다. 90KDa의 고도 당화된 G 단백질은 바이러스 입자를 표적 세포에 결합하는 역할을 한다. 68KDa의 F 단백질은 바이러스 외피와 세포 융합 및 합포체 형성을 매개한다. 상기 F와 G 표면당단백질은 주요한 방어 항원이며, 핵단백질 N과 피막 단백질 M2는 비교적 작은 방어 활성을 가진다. 항 G 당단백질의 단일 클론 항체는 항 F 당단백질의 단일 클론 항체보다 바이러스를 그다지 중화시킬 수 없으며 융합 억제 활성을 가지지 않는다. F 당단백질의 아미노산 서열 사람 감염과 관련 있는 RSV 서브 그룹 사이에서 대략 90%의 보수성을 가진다.
현재 유일하게 시판되는 항 RSV 단일 클론 항체는 미숙아 RSV 감염 예방에 사용하는 것만 승인되어 있는 항 F 단백질 항체이며, 상기 항체의 명칭은 팔리비주맙(palivizumab) Synagis(MedImmune 제조)로 인간화된 쥐 단일 클론 항체이고, 상기 약은 호흡기 세포융합 바이러스 융합 단백질을 통하여 바이러스가 호흡기로 확장되는 것을 막는다.
본 발명의 목적은 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편, 바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체 또는 그 항원 결합 단편을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 일측면에서 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편에 관한 것으로서, 여기에서 상기 항체는,
SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10으로 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 적어도 하나의 중쇄 CDR; 및/또는
SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16으로 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함한다.
더 나아가, 상기 항체 또는 그 항원 결합 단편에 있어서 상기 항체는,
SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10과 같이 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 3개의 중쇄 CDR; 및/또는
SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16과 같이 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
바람직하게는, 상기 항체 또는 그 항원 결합 단편은,
SEQ ID NO:3과 같이 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:4와 같이 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 항체는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체 R66이다.
임의 선택적으로, 본 발명의 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab)2, 단쇄 Fv(scFv), Fv, dsFv, 이중 항체, Fd 및 Fd’ 단편으로 이루어진 군에서 선택된다.
본 발명은 다른 일측면에서 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체 R66에 관한 것이다. 단일 클론 항체 R66의 중쇄, 경쇄(KAPPA)의 핵산 서열은 각각 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2와 같이 표시되며, 그 상응하는 중쇄, 경쇄(KAPPA)의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4와 같이 표시된다.
또한 본 발명은 상기 R66 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대한 삽입, 치환 및/또는 결실을 통해 형성한 동일한 기능을 보유하는 항체에 관한 것이다.
또한 본 발명은 상기 R66 항체의 항원 결합 단편에 관한 것이며, 특히 Fab, Fab’, F(ab)2, 단쇄 Fv(scFv), Fv, dsFv, 이중 항체, Fd 및 Fd’ 단편으로 이루어진 군에서 선택되는 항원 결합 단편에 관한 것이다.
또한 본 발명은 상기 항체(바람직하게는 R66)의 단일 중쇄 및/또는 단일 경쇄를 보유하는 단일 도메인 항체, 키메라 항체, 항체 융합 단백질 항체, 항체/항체 단편-유전자 융합 단백질 또는 항체/항체 단편-화학 컨쥬게이트에 관한 것이다.
본 발명은 상기 항체를 인코딩하는 핵산에 관한 것으로서, 여기에는
SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 중쇄 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 및/또는
SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 포함된다.
바람직하게는, 본 발명의 핵산은,
SEQ ID NO:1과 같이 표시되는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 및/또는 SEQ ID NO:2와 같이 표시되는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 포함한다.
본 발명은 다른 일측면에서 항 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체)의 제조 방법에 관한 것으로서, 여기에는 이하의 단계가 포함된다.
(1) 발현 벡터를 제공하고, 상기 발현 벡터는 본 발명의 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체)를 코딩하는 DNA 분자, 및 상기 DNA 분자와 조작 연결 가능한 발현 조절 서열을 포함한다.
(2) 상기 발현 벡터를 이용하여 숙주 세포를 도입한다.
(3) 상기 항 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체) 발현에 적합한 조건에서 상기 숙주 세포를 배양한다.
(4) 분리 정제하여 상기 항 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체)를 얻는다.
본 발명은 다른 일측면에서 본 발명의 항 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체)의 핵산 서열을 포함하는 항체 및 상기 핵산 서열 또는 항체를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
상기 벡터는 재조합 발현 벡터일 수 있다.
상기 숙주 세포는 293T 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NS0, SP2 세포, HeLa 세포, 유햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 사람 간암 세포, 549A 세포, 3T3 세포, 및 수많은 기타 세포계일 수 있다.
본 발명은 다른 일측면에서 본 발명의 항 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체), 핵산, 벡터 또는 숙주 세포를 RSV 관련 질환을 예방 또는 치료하는 치료제 제조에 응용하는 것을 제공한다.
본 발명은 다른 일측면에서 RSV 관련 질환을 치료하는 약학 조성물을 제공하며, 약학 조성물에는 치료 유효량의 본 발명 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체), 핵산, 벡터 또는 숙주 세포; 및 하나 또는 복수 종류의 약학적으로 허용 가능한 벡터 또는 부형제가 포함된다. 약학적으로 허용 가능한 벡터 또는 부형제는 본 발명이 속한 기술분야의 당업자가 익히 알고 있는 것으로서, 생체 적합성을 가진 수성과 비수성 매개체, 안정제, 방부제, 용해보조제, 항산화제, 용매, 분산매, 코팅층, 완충액, 혈청 단백질 등이 포함된다.
상기 RSV 관련 질환은 바이러스성 폐렴, 간질성 폐렴, 모세기관지염으로 구성된 군에서 선택된다.
본 발명은 다른 일측면에서 본 발명의 항 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체), 핵산, 벡터 또는 숙주 세포를 RSV 검출용 검출 시약 제조에 응용하는 것에 관한 것이다.
본 발명에서 제공하는 항 RSV 항체(바람직하게는 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체)는 바람직하게는 완전 인간화된 것으로서, 기타 동물 유래(예를 들어 쥐 유래)의 항 RSV 항체와 비교할 때 종간차(species difference)로 인한 면역원성이 크게 감소하며 특이성이 우수하고 친화력이 높기 때문에 임상에 사용할 경우 부작용이 크게 줄어든다. 그 외, 본 발명 중의 항 RSV 항체(바람직하게는 단일 클론 항체)는 RSV F 항원 특이성과 결합할 수 있으며, RSV의 진단과 검출에 있어서도 아주 우수한 응용이 가능하다. 사람에 응용할 경우 쥐 항체로 인한 것과 유사한 부작용이 발생하지 않는다.
도 1은 R66 정제 후의 전기영동도이고;
도 2는 ELISA 실험으로 단일 클론 항체 R66와 RSV-F(Strain A2)의 결합을 검출한 도면이고;
도 3은 ELISA 실험으로 단일 클론 항체 R66와 RSV-F(Strain RSS-2)의 결합을 검출한 도면이고; 및
도 4는 단일 클론 항체 R66의 CDR의 분석 결과도이며, 여기에서 R66_HC는 R66의 중쇄이고, R66_KC는 R66의 경쇄이다.
이하에서는, 본 발명의 목적, 기술방안 및 장점을 더욱 명확하게 하기 위하여 본 발명의 예시적인 실시형태들을 도면을 통해 보다 상세히 설명한다. 이하의 설명은 예시적인 것으로서 본 발명의 보호범위를 제한하지 않는다. 그 외, 이하에서는 공지된 구조와 기술에 대한 설명을 생략함으로써 본 발명의 개념이 불필요하게 혼동되는 것을 방지한다.
실시예 1 완전 인간화 항 RSV 항체 R66의 제조
1. 인공 합성 R66의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역
SEQ ID NO:1과 같이 표시되는 단일 클론 항체 R66의 중쇄 가변 영역, SEQ ID NO:2와 같이 표시되는 단일 클론 항체 R66의 경쇄(KAPPA) 가변 영역의 핵산 서열을 GENEWIZ 회사에 송부하여 인공 합성한다.
인공 합성한 R66 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역을 템플릿으로 삼고 각각 Taq 효소와 dNTPs, 및 프라이머를 첨가하며 PCR을 진행하여 PCR 산물을 수득한다.
2. 재조합 항체의 발현 벡터의 구축
신속 DNA 산물 정제 키트(CWbiotech에서 구매)를 이용하여 PCR 산물을 회수하고 40㎕ PCR 산물을 수득하여 대기한다.
각각 R66의 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 목표 단편에 대하여 이중 효소 절단을 진행하며, 이중 효소 절단 시스템은 Nhe I/Not I 각 0.5㎕, 10*FastDigest Green Reaction Buffer 3㎕ 및 PCR 산물 26㎕이고, 37℃에서 5시간 동안 온도를 유지한다.
개조한 발현 벡터(발현 벡터는 pcDNA3.1-Zeo(+)(Invitrogen 회사)이며, GENEWIZ 회사에서 사전에 인간 항체 중쇄/경쇄의 불변 영역을 이 발현 벡터 내로 개조함)에 대하여 이중 효소 절단을 진행하며, 이중 효소 절단 시스템은 Nhe I/Not I 각 0.5㎕, 10*FastDigest Green Reaction Buffer 3㎕, 벡터 1㎍이고, H2O를 이용해 30㎕를 보충하고 37℃에서 30분간 온도를 유지한다. 그 후 2㎕ 염기성 포스파타아제(phosphatase)와 3.5㎕ 10*buffer(NEB)를 균일하게 혼합하고 37℃ 항온 수욕(water bath)에 2시간 동안 정치시킨다.
상기 목표 단편과 벡터의 이중 효소 절단 시스템 중 사용되는 Nhe I, Not I, 10*FastDigest Green Reaction Buffer는 모두 Thermo Scientific에서 구매한다.
효소 절단 후 R66의 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 목표 단편에 대하여 각각 1% 아가로스 겔 전기영동을 진행하고, 자외선 기기를 통해 결과를 관찰한다. 소형 칼을 이용해 목표 슬라이스를 절단하여 무게를 측정한 Ep관에 놓고, 신속 아가로스 겔 DNA 회수 키트(CWbiotech에서 구매)를 이용하여 각 목표 단편을 회수한다.
각 목표 단편을 각각 벡터와 연결하고, 벡터 시스템은 벡터 2㎕, 목표 단편 15㎕, T4 DNA Ligase(NEB에서 구매) 1㎕, 완충액 2㎕이고, 혼합 후 16℃ 항온 수조에서 2시간 동안 유지시킨다.
각 목표 단편의 모든 연결 산물을 E. coli DH5α 수용성 세포에 첨가한 후 가볍게 균일하게 혼합하고 30분간 얼음욕을 진행한다. 42℃에서 90초간 열충격을 가한 후 신속하게 5분간 얼음욕을 진행한다. 그 후 800㎕ 배지에 첨가하고, 37℃에서 진동시켜(100r/min) 1시간 동안 인큐베이팅한다. 배양균액을 10000rpm으로 15초간 원심분리하여 800㎕ 상청액을 제거하고 다시 부유시켜 침전시키고, 전부 암피실린나트륨(ampicillin sodium)(100㎍/mL)의 LB 고체 배지 상에 도포하고, 순방향으로 37℃ 배양 상자에 넣어 1시간 동안 배양한 후, 다시 군체가 선명해질 때까지 도치시켜 하룻밤 동안 배양한다. 단일 군체를 골라 5ml의 암피실린나트륨(100㎍/mL)를 함유한 LB 액체 배지에 접종하여 37℃에서 진동시켜 15시간 동안 배양한다. 고순도 플라스미드 추출 키트(CWbiotech에서 구매)를 이용하여 플라스미드를 추출하여 각각 R66의 중쇄(RH66), R66의 경쇄(RK66)을 함유하는 플라스미드를 수득하고 샘플을 보내 서열 분석을 진행한다.
서열 분석 결과는 단일 클론 항체 R66의 중쇄 가변 영역, 경쇄(KAPPA) 가변 영역의 핵산 서열이 각각 SEQ ID NO:1과 SEQ ID NO:2와 같이 표시되고, 그 상응하는 중쇄 가변 영역, 경쇄(KAPPA) 가변 영역의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:3과 SEQ ID NO:4로 표시된다는 것을 나타낸다.
실시예 2: 단일 클론 항체 R66의 발현과 정제
실시예 1에서 수득한 R66의 중쇄(RH66)를 함유한 플라스미드와 R66의 경쇄(RK66)를 함유한 플라스미드를 이용하여 293T 세포를 형질주입한다. 먼저 Opti-MeM(1X)buffer를 이용하여 각각 플라스미드와 PEI를 희석한 후, PEI-Opti-MeM 혼합물을 천천히 플라스미드-Opti-MeM 혼합물 관에 첨가하고, 실온에서 20분간 정치한 후, 다시 PEI와 플라스미드 혼합물을 세포 현탁액에 첨가한다. 형질주입 시 세포 농도는 0.25 내지 0.5x106개 세포/ml이고, 각 세포의 형질주입에 2.5㎍의 R66 중쇄를 함유하는 플라스미드+2.5㎍의 R66 경쇄를 함유한 플라스미드+10㎍ PEI를 사용한다. 형질주입 완료 후 37℃에서 48시간 배양한 후 상청액을 수득하고, ELISA를 이용하여 상청액을 검출한다.
rProtein A Sepharose Fast Flow(GE)를 사용해 발현한 항체 단백질을 정제한다. 각각 R66 발현의 293T 세포 배양물 상청액을 수집하고, 10000rpm, 4℃에서 10분간 원심분리하여 상청액을 취하고, 상기 상청액을 이미 평형 완충액(20mM 인산염 완충액, 150mM 염화나트륨, pH 7.4)으로 평형하게 만든 rProtein A Sepharose Fast Flow 칼럼 상에 첨가하고, 동일한 평형 완충액을 사용해 10BV(Bed Volume)를 세정하고, 다시 용리 완충액(0.1M Gly-HCI 완충액, pH 2.5)으로 5BV를 흐르도록 세정하고, 앞 3BV를 수집하고, 수집한 용리액에 언급한 중화액(1M Tris-HCI 완충액, pH 9.0)의 1/10을 첨가해 균일하게 혼합하고, Amicon Ultra-15 Centrifugal Filters(Merck Millipore)에 첨가하고, 5000G, 4℃에서 20분간 원심분리하여 단백질을 농축시키고, 다시 Amicon Ultra-15 Centrifugal Filters에 상기 평형 완충액을 첨가하고, 5000G, 4℃에서 20분간 원심분리하여 새로운 평형 완충액을 교체하고, 3회 반복하여 각각 농축한 R66 항체 단백질을 수득하며, 이를 각각 1.5ml 원심분리관에 넣고 샘플을 취하여 단백질 함량을 측정한 후 4℃에서 보존한다.
실시예 3 R66 항체의 ELISA 검출
사용하는 시약에는 이하가 포함된다.
PBS(1X): PBS(10X)와 탈이온수를 사용하여 배치한다.
PBST: PBS(1X)에 Tween-20를 첨가하여 최종 농도를 0.05%로 만든다.
차단액: PBS(1X)+2%BSA+2% 신생송아지혈청으로, 사용할 때 바로 배합한다.
희석액: PBST+1%BSA으로, 항체 희석용이다.
정지액: 6ml 95 내지 98%의 진한 황산을 180ml 물에 첨가하고 냉각한 후 사용 대기한다.
1항체: 본 발명에서 제조하여 수득하는 R66 항체이며, 작업 농도를 10㎍/ml로 희석한다.
2항체: Peroxidase-conjugated AffiniPure Goat Anti-Human IgG(H+L)(Jackson Immuno Research에서 구매)이며, 1.5ml의 RNase 물을 취하여 완전히 용해시킨 후 사용 대기한다.
PBS(1X)(pH 7.4) 완충액을 사용하여 RSV-F(Strain A2)와 RSV-F(Strain RSS-2)(Sino Biological Inc.)를 희석시켜 코팅 항원으로 삼고, 코팅 항원 용액의 최종 농도를 2ng/㎕로 만들고, 100㎕ 코팅 항원 용액을 흡수하여 96 오리피스 플레이트의 각 구멍 내에 첨가하고, 2 내지 8℃에서 하룻밤 동안 코팅하고, PBST를 이용하여 5회 세정한 후 각 구멍에 200㎕ 차단액을 첨가하고, 37℃에서 2시간 차단하고, 차단 종료 후 PBST를 이용하여 5회 세정하며 매회 1분가량 정지한다.
항체 희석액(PBST+1%BSA)을 이용하여 1항체를 10배 희석한다. 즉, 7개 고압 멸균의 1.5ml 원심분리관을 취하고, 각 관에 270㎕의 항균 희석액을 첨가하고, 작업 용액에서 30㎕ 1항체 용액을 취하고, 와류 진동시켜 균일하게 혼합한 후 1:10으로 표기하여 희석하고, 1:10으로 희석한 용액에서 30㎕를 취하여 다음 관에 넣는다. 여기에서 유추되는 바와 같이, 각각 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000, 1:1000000, 1:10000000이고, 각각 상응하는 구멍에 첨가하며 각 구멍은 100㎕이고 2개를 평행하게 하며, 2개 공백 구멍을 설립하여 PBST를 이용해 1항체를 대체하고, 37℃에서 90분간 인큐베이팅한 후 PBST를 이용하여 5회 세정한다.
항체 희석액(PBST+1%BSA)을 이용하여 2항체를 5000배 희석하고, 각 구멍에 100㎕를 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이팅한 후 PBST를 이용하여 5회 세정하고, TMB 발색액을 첨가하고, 100㎕/구멍이고, 실온에서 15분간 인큐베이팅하고, 인큐베이팅 종료 후 H2SO4 정지액을 첨가하여 반응을 종료시킨다. 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader) 상에서 OD450 도수를 판독한다.
GraphPad Prism 소프트웨어를 통하여 상기 ELISA 결과를 분석하여, R66 항체 및 Synagis 항체의 EC50값을 획득한다.
결과에 따르면, 발현하고 정제한 R66 항체는 RSV-F(Strain A2)와 RSV-F(Strain RSS-2)와의 결합에 용량 의존성이 있는데, 이는 R66 항체가 RSV-F(Strain A2)와 RSV-F(Strain RSS-2)와의 결합에 특이성이 있다는 것을 설명해 준다.
도 2에서 알 수 있듯이, R66 항체와 RSV-F(Strain A2) 결합의 EC50값은 0.001791㎍/mL로 Synagis의 EC50값(0.004881㎍/mL, Synagis를 사용해 동일 조건에서 ELISA를 진행하고 GraphPad Prism 소프트웨어로 분석하여 획득함)보다 낮다. 도 3에서 알 수 있듯이, R66 항체와 RSV-F(Strain RSS-2) 결합의 EC50값은 각각 0.001463㎍/mL로 Synagis의 EC50값(0.001878㎍/mL, Synagis를 사용해 동일 조건에서 ELISA를 진행하고 GraphPad Prism 소프트웨어로 분석하여 획득함)보다 역시 낮다. 여기에서 본 발명의 R66 항체가 Synagis보다 더욱 높은 민감도를 갖고 있다는 것을 설명해 준다.
실시예 4 단일 클론 항체 R66의 CDR 측정: 단일 클론 항체 R66의 중쇄 CDR과 경쇄 CDR
항체 가변 영역 서열 정보를 IgBLAST 프로그램(version 1.6.1) 내와 인간 가변 영역 원시 서열 라이브러리에 도입해 비교 분석을 진행하고, 항체의 가변 구역을 3개의 프레임워크 영역(FRs)과 2개의 상보성 결정 영역(CDRs)으로 더 나눈다. 그 후 항체 서열을 IMGT High V-Quest 시스템 중 사용 전 동일한 라이브러리에 도입하여 비교를 진행하고 CDR3와 FR4를 확정한다. 모든 항체 서열의 숫자 측정은 모두 KABAT 시스템에 기반을 둔다. 비교 분석 결과는 도 4에서 도시하는 바와 같다.
결과에 따르면, 상기 단일 클론 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10이고, 이에 대응하는 뉴클레오티드 서열은 각각 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9이고, 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16이고, 이에 대응하는 뉴클레오티드 서열은 각각 SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15이다.
본 발명의 상기 구체적인 실시방식은 예시적 설명이거나 본 발명의 원리를 해석하기 위한 것이므로 본 발명을 제한하지 않는다. 따라서 본 발명의 정신과 범위를 벗어나지 않는 상황에서 진행한 모든 수정, 동등한 치환, 개선 등은 모두 본 발명의 보호범위 내에 속한다. 또한, 본 발명에 첨부한 청구범위는 첨부한 청구범위와 경계, 또는 이러한 범위와 결계의 동등한 형식 내에 있는 모든 변화와 수식의 예를 포함한다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
SEQUENCE LISTING <110> ELITEIMMUNE INC. <120> FULL HUMAN ANTIBODY AGAINST RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS <130> 1 <160> 16 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 378 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 1 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cttctggatt cacctttgct gattattcta tgacttgggt ccgccaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtaggtctc attaaaagga atgcttatgg tgggaccaca 180 gaatacgccg cgtctgtgag aggcagattc accatctcaa gagatgattc cagaagcatc 240 gcctatctac aaatgcacag cctgaaaagt gaggatacag ccgtctattt ctgtcttcga 300 ggatatagtg gctatgattg ggaaggtctt gatgcttttg aagtctgggg ccaagggaca 360 atggtcaccg tctcttca 378 <210> 2 <211> 321 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 2 gacatccaga tgacccagtc tccatctgcc atgtctgcat ctgtaggaga cagggtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggcagtagc acttatttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagtcc ctaagcgcct gatctatgct gtatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattctg caacttatta ctgtctacaa cataatagtt tcccgttgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 3 <211> 126 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Asp Tyr 20 25 30 Ser Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Leu Ile Lys Arg Asn Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Arg Ser Ile 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met His Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Phe Cys Leu Arg Gly Tyr Ser Gly Tyr Asp Trp Glu Gly Leu Asp Ala 100 105 110 Phe Glu Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 4 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ser Ser Thr Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Val Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 5 <211> 15 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 5 gattattcta tgact 15 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 6 Asp Tyr Ser Met Thr 1 5 <210> 7 <211> 57 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 7 ctcattaaaa ggaatgctta tggtgggacc acagaatacg ccgcgtctgt gagaggc 57 <210> 8 <211> 19 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 8 Leu Ile Lys Arg Asn Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Arg Gly <210> 9 <211> 45 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 9 ggatatagtg gctatgattg ggaaggtctt gatgcttttg aagtc 45 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 10 Gly Tyr Ser Gly Tyr Asp Trp Glu Gly Leu Asp Ala Phe Glu Val 1 5 10 15 <210> 11 <211> 33 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 11 cgggcgagtc agggcagtag cacttattta gcc 33 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 12 Arg Ala Ser Gln Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 13 gctgtatcca gtttgcaaag t 21 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 14 Ala Val Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 15 <211> 27 <212> DNA <213> Human(Homo sapiens) <400> 15 ctacaacata atagtttccc gttgacg 27 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Human(Homo sapiens) <400> 16 Leu Gln His Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5

Claims (17)

  1. 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체는,
    SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10으로 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 적어도 하나의 중쇄 CDR; 및/또는
    SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16으로 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함하는 것을 특징으로 하는 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항체는,
    SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10과 같이 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 3개의 중쇄 CDR; 및/또는
    SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16과 같이 이루어진 군으로부터 선택되어 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 것을 특징으로 하는 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 항체는,
    SEQ ID NO:3과 같이 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:4와 같이 표시되는 아미노산 서열을 보유하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab)2, scFv, Fv, dsFv, 이중 항체, Fd 및 Fd’ 단편으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 상기 항체의 단일 중쇄, 단일 경쇄 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 단일 도메인 항체, 키메라 항체, 항체 융합 단백질 항체, 항체/항체 단편-유전자 융합 단백질 또는 항체/항체 단편-화학 컨쥬게이트.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항체 또는 그 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산.
  7. 제6항에 있어서,
    SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 중쇄 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 및/또는
    SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 핵산.
  8. 제7항에 있어서,
    SEQ ID NO:1과 같이 표시되는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 및/또는 SEQ ID NO:2와 같이 표시되는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 핵산.
  9. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는 벡터.
  10. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항의 핵산 또는 제9항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  11. 제10항에 있어서,
    제9항의 벡터를 이용하여 도입한 숙주 세포.
  12. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 상기 항체 또는 그 항원 결합 단편, 제5항의 상기 항체 또는 융합 단백질 또는 컨쥬게이트, 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항의 상기 핵산, 제9항의 상기 벡터 또는 제10 내지 제11항 중 어느 한 항의 상기 숙주 세포를 RSV 관련 질환을 예방 또는 치료하는 치료제 제조에 응용.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 RSV 관련 질환은 바이러스성 폐렴, 간질성 폐렴, 모세기관지염으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 응용.
  14. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 상기 항체 또는 그 항원 결합 단편, 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항의 상기 핵산, 제9항의 상기 벡터 또는 제10 내지 제11항 중 어느 한 항의 상기 숙주 세포를 RSV 검출용 검출 시약 제조에 응용,
  15. RSV 관련 질환 치료용 약학 조성물에 있어서,
    치료 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 상기 항체 또는 그 항원 결합 단편, 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항의 상기 핵산, 제9항의 상기 벡터 또는 제10 내지 제11항 중 어느 한 항의 상기 숙주 세포, 및 하나 또는 복수 종류의 약학적으로 허용 가능한 벡터 또는 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 RSV 관련 질환 치료용 약학 조성물.
  16. 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편의 제조 방법에 있어서,
    (1) 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 상기 항체 또는 그 항원 결합 단편을 코딩하는 DNA 분자, 및 상기 DNA 분자와 조작 연결 가능한 발현 조절 서열을 포함하는 발현 벡터를 제공하는 단계;
    (2) 상기 발현 벡터를 이용하여 숙주 세포를 도입하는 단계;
    (3) 상기 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편 발현에 적합한 조건에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계;
    (4) 분리 정제하여 상기 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편을 얻는 단계
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편의 제조 방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 항 RSV 항체가 완전 인간화 항 RSV 단일 클론 항체인 것을 특징으로 하는 항 RSV 항체 또는 그 항원 결합 단편의 제조 방법.
KR1020187017477A 2015-11-30 2016-11-29 항 호흡기 세포융합 바이러스의 완전 인간화 항체 KR102184151B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510867051.9 2015-11-30
CN201510867051 2015-11-30
CN201611036424.9A CN106496324B (zh) 2015-11-30 2016-11-23 一种抗呼吸道合胞病毒的全人源抗体
CN201611036424.9 2016-11-23
PCT/CN2016/107658 WO2017092645A1 (zh) 2015-11-30 2016-11-29 一种抗呼吸道合胞病毒的全人源抗体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20180089438A true KR20180089438A (ko) 2018-08-08
KR102184151B1 KR102184151B1 (ko) 2020-11-30

Family

ID=58327667

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187017477A KR102184151B1 (ko) 2015-11-30 2016-11-29 항 호흡기 세포융합 바이러스의 완전 인간화 항체

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10149903B2 (ko)
EP (1) EP3385278A1 (ko)
JP (1) JP6925336B2 (ko)
KR (1) KR102184151B1 (ko)
CN (1) CN106496324B (ko)
AU (1) AU2016363455B2 (ko)
WO (1) WO2017092645A1 (ko)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106496324B (zh) * 2015-11-30 2020-01-14 天津昊免生物技术有限公司 一种抗呼吸道合胞病毒的全人源抗体
CN111606992B (zh) * 2019-02-25 2022-08-19 天津昊免生物技术有限公司 一种抗呼吸道合胞病毒的全人源抗体
CN111606993B (zh) * 2019-02-26 2022-06-28 中国科学院上海生命科学研究院 抗呼吸道合胞病毒的全人广谱中和抗体4f1及其应用
CN112239498B (zh) * 2019-07-16 2022-08-19 天津昊免生物技术有限公司 一种抗丙型肝炎病毒抗体
CN112239497B (zh) * 2019-07-16 2022-09-13 天津昊免生物技术有限公司 一种抗丙型肝炎病毒抗体
CN114805561B (zh) * 2019-08-02 2023-07-18 苏州高泓利康生物科技有限公司 针对呼吸道合胞病毒的蛋白结合分子
CN112225803B (zh) * 2020-10-20 2022-08-05 长春百克生物科技股份公司 纳米抗体及其应用
CN116785427B (zh) * 2020-12-18 2024-04-12 珠海泰诺麦博制药股份有限公司 呼吸道合胞病毒特异性结合分子的用途
CN115466326A (zh) * 2021-06-11 2022-12-13 中国科学院微生物研究所 一种呼吸道合胞病毒的人源单克隆抗体及其应用
CN114456264B (zh) * 2022-03-24 2023-02-03 中国科学院微生物研究所 一种新型冠状病毒稀有广谱表位的人源抗体及其应用
CN116987183A (zh) * 2022-07-22 2023-11-03 北京智仁美博生物科技有限公司 抗呼吸道合胞病毒中和性抗体及其用途
CN116063468A (zh) * 2022-08-30 2023-05-05 武汉班科生物技术有限公司 中和呼吸道合胞病毒的c-型单域抗体及应用
CN117310163B (zh) * 2023-11-23 2024-02-13 北京贝思泰生物科技有限公司 一种基于重组抗体的呼吸道合胞病毒检测方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140271653A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to respiratory syncytial virus f protein and methods of use thereof

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050175986A1 (en) * 2000-05-09 2005-08-11 Smit Kline Beecham Corporation Human monoclonal antibody
CN1986569A (zh) * 2005-12-23 2007-06-27 首都儿科研究所 人源抗呼吸道合胞病毒中和性基因工程Fab抗体
BRPI0819210A2 (pt) * 2007-10-25 2015-06-23 Trellis Bioscience Inc Anticorpos de proteína g anti-rsv
JP5762408B2 (ja) * 2009-08-13 2015-08-12 クルセル ホランド ベー ヴェー ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ｒｓｖ）に対する抗体および使用方法
NZ599148A (en) * 2009-10-06 2014-08-29 Medimmune Ltd Rsv-specific binding molecule
CN106188284B (zh) * 2010-07-09 2020-05-08 扬森疫苗与预防公司 抗人呼吸道合胞病毒(rsv)抗体以及使用方法
EP2780366A2 (en) * 2011-11-17 2014-09-24 AIMM Therapeutics B.V. Rsv g protein specific antibodies
CA2906960C (en) * 2013-03-15 2021-07-20 Xiamen University Epitope of rsv fusion protein and antibody recognizing the epitope
EP2986638A1 (en) * 2013-04-15 2016-02-24 Crucell Holland B.V. Human antibodies binding to rsv g proteins
US9655609B2 (en) 2013-07-10 2017-05-23 Tepha, Inc. Soft suture anchor
CN106496324B (zh) * 2015-11-30 2020-01-14 天津昊免生物技术有限公司 一种抗呼吸道合胞病毒的全人源抗体
CN109232737A (zh) * 2016-03-01 2019-01-18 苏州博泰神州生物技术有限公司 一种针对rsv粘附g蛋白表面抗原的全人源单克隆抗体

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140271653A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to respiratory syncytial virus f protein and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016363455B2 (en) 2019-07-11
US10149903B2 (en) 2018-12-11
US20180264103A1 (en) 2018-09-20
CN106496324B (zh) 2020-01-14
JP6925336B2 (ja) 2021-08-25
CN106496324A (zh) 2017-03-15
KR102184151B1 (ko) 2020-11-30
EP3385278A4 (en) 2018-10-10
JP2019507103A (ja) 2019-03-14
AU2016363455A1 (en) 2018-07-19
EP3385278A1 (en) 2018-10-10
WO2017092645A1 (zh) 2017-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102184151B1 (ko) 항 호흡기 세포융합 바이러스의 완전 인간화 항체
CN111690058B (zh) 针对冠状病毒的具有中和活性的抗体及其用途
US11254746B2 (en) Anti-PD-1 monoclonal antibody, and preparation method therefor and application thereof
AU2016426507A1 (en) PD-1 antibodies
WO2021031716A1 (zh) 抗pd-l1单域抗体
CN113508139B (zh) 结合人lag-3的抗体、其制备方法和用途
CN114729033B (zh) 抗α-溶血素的抗体及其应用
BR112019022702A2 (pt) gama de anticorpos anti-interferon e utilizações dos mesmos.
US20240067747A1 (en) Cd73-binding protein and use thereof
TWI788788B (zh) 標靶EpCAM的抗體及其製備和應用
CN107400165A (zh) 一种il‑13抗体及其制备方法和应用
WO2021216876A2 (en) Antibodies to coronavirus spike protein and methods of use thereof
CN104861068B (zh) 一种全人源抗her3抗体及其治疗相关疾病的用途
CN111606992B (zh) 一种抗呼吸道合胞病毒的全人源抗体
WO2021238854A1 (zh) 抗SARS-CoV-2刺突蛋白的单克隆抗体及其制备方法和用途
CN109776677B (zh) 一种人源化抗il-13抗体及其制备方法和应用
WO2018101425A1 (ja) 抗ｔｌｒ９抗体、医薬組成物及びキット
CN112062848B (zh) 抗cd47单克隆抗体及其应用
CN112574297B (zh) 抗神经氨酸酶的单克隆抗体及其应用
CN116606373A (zh) 新型冠状病毒中和抗体及其用途
KR20230147616A (ko) 황색포도상구균 α-독소를 표적으로 하는 항원 결합단백질 및 이의 응용
AU2022229993A9 (en) Pharmaceutical composition containing anti-tslp antibody
TW202313685A (zh) 抗人血清白蛋白的抗原結合蛋白
CN117624360A (zh) 一种抗trem2的单域抗体及其用途
CN117843805A (zh) 抗体分子、核酸分子、药物组合物以及应用

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
X091 Application refused [patent]
AMND Amendment
E90F Notification of reason for final refusal
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant