KR20180026455A

KR20180026455A - 눈의 바이러스 감염의 치료를 위한 의약

Info

Publication number: KR20180026455A
Application number: KR1020187001163A
Authority: KR
Inventors: 루이스 스퀴퀘라; 제이미 슐리
Original assignee: 타미르 바이오테크놀로지 인코포레이티드
Priority date: 2015-06-15
Filing date: 2016-06-13
Publication date: 2018-03-12
Also published as: US10293032B2; IL256327B; IL256327A; US20190216904A1; WO2016205109A1; AU2016277827B2; JP6862366B2; AU2016277827A1; EP3307238A1; SG10201911292SA; RU2018101139A; US20160361392A1; AU2021204520B2; CN117159694A; CA2989611A1; CN107920990A; MX2017016368A; JP2018517423A; RU2739392C2; CA2989611C

Abstract

눈의 바이러스 감염, 특히 헤르페스비리데 및 아데노비리데 과의 바이러스 감염은 효소 활성인 리보뉴클레아제 및 비히클로 구성된 약학적 조성물의 투여에 의해 치료될 수 있다. 유리하게는, 효소 활성인 리보뉴클레아제는 린피르나제이고, 비히클은 수용액이다.

Description

눈의 바이러스 감염의 치료를 위한 의약

본 발명은 눈의 바이러스 감염에 관한 것이고, 특히 구체적으로 눈의 바이러스 감염을 치료하기 위한 방법 및 의약에 관한 것이다. 가장 직접적인 의미에서, 본 발명은 헤르페스비리데 바이러스(인간 사이토메갈로 바이러스, 대상포진 바이러스 및 수두 대상포진 바이러스를 포함하나 이에 제한되지 않음) 및 아데노비리데 바이러스 감염에 의해 야기된 사람 눈 감염의 치료에 관한 것이다.

눈의 바이러스성 질환은 중대한 결과를 초래할 수 있다. 1형 단순 포진 바이러스는 결막염과 각막염을 일으킬 수 있고, 인간 사이토메갈로 바이러스는 망막염을 일으킬 수 있고, 아데노바이러스 8, 19, 29 및 37형은 전염성 각결막염을 일으킬 수 있고, 아데노바이러스 3, 4 및 7형은 인후결막열을 일으킬 수 있다. 헤르페스비리데 과의 일원인 대상포진 바이러스(HZV)는 삼차 신경 영역에 영향을 줄 때 심한 눈 질환을 일으킬 수 있다. 급성 대상포진의 심각한 형태인 안부 대상포진은 삼차 신경(제 5 뇌)에서 수두 대상포진 바이러스(VZV)(헤르페스비리데 과의 다른 일원)의 재활성화에 기인한다. 삼차 신경의 첫 번째 부분 내의 전두 가지가 가장 일반적으로 관련되어 있지만 신경의 모든 가지가 영향을 받을 수 있다. 이 전두 가지는 거의 모든 안구 및 안구주위 구조를 자극한다. 이 특정 위치에서 안부 대상포진은 실명을 유발할 수 있으며 신속하고 효과적인 치료 방법이 필요하다.

인간 사이토메갈로 바이러스(CMV)는 헤르페스비리데 과의 다른 일원이다. 미국 인구의 적어도 60%가 CMV에 노출되었으며, 고위험군(예를 들어, 임신 중 CMV에 감염된 엄마의 미출생 아기, HIV 감염자 및 이식받는 사람)에서 90%의 발병률을 나타낸다.

CMV 망막염은 AIDS 또는 약리학적으로 유도된 면역억제 환자에서 가장 흔한 기회 감염 중 하나이다. CMV 망막염을 앓고 있는 사람들은 일반적으로 실명으로 진행될 수 있는 시력의 점진적인 감소를 보인다. 망막염 재발을 예방하기 위해 장기 CMV 치료가 필요하다.

면역 재구성 증후군(IRIS)은 HAART(Highly Active Antiretroviral Treatment(강력한 항레트로바이러스 치료))의 개시에 이후 CMV 망막염을 앓고 있는 HIV 감염 환자의 16%-63%에서 보고된다. CMV IRIS는 통증이 없는 비문증, 흐린 시력, 광순응, 시력 감소 또는 안구 통증으로 나타날 수 있다. 일부 환자는 시력 상실 또는 증식성 유리체 망막병증, 자발적인 유리체 출혈 및 망막 박리로 이어지는 황반부종을 일으킬 수 있다.

아시클로버로 바이러스성 눈 감염을 치료하는 것이 알려져 있지만, 이런 치료는 완전히 만족스럽지 않다. 국소 아시클로버는 자주 도포되어야 하며 눈의 자극을 유발한다. 경구 아시클로버는 심각한 부작용을 일으킨다. 간시클로버, 발아시클로버 및 발간시클로버와 같은 다른 항바이러스 의약이 바이러스성 눈 감염을 치료하는데 사용되며 이런 치료도 완전히 만족스럽지 않다. 간시클로버는 정맥 내로 투여되기 때문에, 외부, 예를 들어, 병원 환경에서 사용될 수 없다. 발아시클로버 및 발간시클로버와 경구 항바이러스 의약은 단점이 있다; 이들은 발열, 발진, 설사 및 혈액학적 영향(예를 들어, 호중구감소증, 빈혈, 혈소판감소증)을 유발하는 것으로 알려져 있다. 일부 경우 호중구감소증은 과립구 콜로니 자극 인자[G-CSF] 또는 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자[GM-CSF]와 같은 골수에 의한 호중구 생성을 자극하는 약물을 사용하거나 용량을 낮추는 것에 반응 할 수 있다. 이러한 독성 영향은 관리하기가 어려울 수 있다.

따라서, 인간의 바이러스성 눈 감염을 치료하기 위한보다 우수한 방법 및 보다 우수한 의약을 제공하는 것이 유리할 것이다.

란피르나제 및 및 이와 매우 상동성인 다른 단백질을 포함한 다양한 효소 활성 리보뉴클레아제는 헤르페스비리데 과(특히 단순 포진 바이러스 1 및 2형 및 인간 사이토메갈로바이러스를 포함하나 이에 제한되지 않음)에서 바이러스 및 2형 아데노바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 알려져 있다. 그러나, 단백질은 T 세포가 매개하는 강력한 염증 반응으로 인해 눈에 심한 자극을 주는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유로, 란피르나제 및 기타 관련 단백질이 다양한 바이러스 감염에 대한 사용에 대해 조사되었지만, 눈의 바이러스 감염에 대한 사용에 대해서는 조사되지 않았다.

단백질성 란피르나제가 눈에 염증을 일으킬 것이라는 예상에도 불구하고, 눈에 국소 도포된 란피르나제의 자극을 토끼 모델에서 연구하였다. 이 실험에서, 란프르나제는 분류 평가 기준의 세계 조화 시스템(Globally Harmonized System)과 유럽 경제 공동체 안과 평가 기준(European Economic Community Ocular Evaluation Criteria)을 사용하여 결정한 바와 같이 비 자극적임이 입증되었다. 눈에 외래 단백질을 투여하면 각막 자극이 생길 수 있기 때문에, 이것은 주목할만한 결과였다. 결과적으로, 란피르나제 및 이와 매우 상동성인 다른 단백질은 인간의 눈의 바이러스성 질환을 치료하는데 유용할 것으로 예상된다.

본 발명의 상기 문제를 해결하는 것을 목표로 한다.

란피르나제는 미국 특허 제5,559,212호에 개시되고 청구된 단백질성 효소적 활성 리보뉴클레아제이다. 미국 특허 제5,728,805호, 제6,239,257호, 제7,229,824호 및 제8,518,399호는 란피르나제와 매우 상동성인 3개의 다른 단백질성 효소적 활성 리보뉴클레아제를 개시한다:

a) 본 발명에서 "805 변이체"로 지칭되는 미국 특허 제5,728,805호의 SEQ ID NO: 2의 RNase;

b) 본 발명에서 "암피나제 2"로 지칭되는 미국 특허 제6,239,257호의 SEQ ID NO: 2의 RNase;

c) 본 발명에서 "r암피나제 2"라 지칭되는 미국 특허 제7,229,824호의 SEQ ID NO: 59의 RNase.

본 발명의 내용 중에 포함된다.

본 발명은 다음의 예시적이고 비 한정적인 도면들을 참조하여 더 잘 이해될 것이다:
도 1은 드레이즈(Draize) 테스트를 받은 토끼에서 관찰된 안구 병변 스코어링에 사용된 기준을 도시한다.
도 2는 3마리의 토끼의 우측 눈에 란피르나제 용액을 도포한 드라이즈 테스트의 결과를 도시한다.
도 3은 토끼의 좌측 눈을 치료하지 않은 도 2의 드레이즈 테스트의 결과를 도시한다.
도 4는 드레이즈 테스트에서 테스트 제품에 의한 안구 자극을 분류하기 위해 사용된 유럽 경제 공동체 안구 검사 기준을 도시한다.

미국 특허 제8,518,399호는 란피르나제, '805 변형체 및 r암피나제 2가 특히 단순 포진 1 및 2형 및 인간 사이토메갈로 바이러스를 포함하나 이에 제한되지 않는 헤르페스비리데 바이러스에 대하여 항바이러스 활성을 갖는다는 것을 개시한다. 이 3개의 효소 활성 리보뉴클레아제와의 유사성에 기초하여, 암피나제 2가 이러한 활성을 또한 가지고 있다고 믿는다.

또한, 국제 특허 출원 WO 2015/148768 A2는 란피르나제가 2형 아데노바이러스를 포함하는 다수의 바이러스에 항바이러스 활성을 갖는다는 것을 개시한다.

RNase A 슈퍼패밀리의 RNase는 특정 포유동물과 일부 파충류의 췌장에서 많이 발견되는 피리미딘 특이성 엔도뉴클레아제이다. 이들은 2',3'-사이클릭 포스페이트 중간체를 갖는 C-P 또는 U-P로 끝나는 3'-포스포모노뉴클레오타이드 및 3'- 포스포올리고뉴클레오타이드의 엔도뉴클레오리틱 절단에 관여한다. 이 슈퍼패밀리의 일원은 란피르나제 및 이의 변형체, 암피나제, r-암피나제-2, 소 정액 소포 및 뇌 리보뉴클레아제; 신장 비-분비성 리보뉴클레아제; 간-형 리보뉴클레아제, 안지오제닌; 호산구 양이온성 단백질 및 인간 및 소 췌장 리보뉴클레아제를 포함하는 다른 종으로부터의 췌장 리보뉴클레아제를 포함한다.

란피르나제는 미국 특허 제5,559,212호에 개시된 표범 개구리(Rana pipiens)의 난모세포로부터 분리된 RNase이며, ONCONASE®로 이전에 알려져 있다. 란피르나제의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 1에 제공된다. 란피르나제는 RNA에 대한 효소 활성 때문에 테스트되었고, 암세포에 세포 독성이 있는 것으로 밝혀졌다.

란피르나제의 변형체는 미국 특허 제5,728,805호에 개시된다(이하, "'805 변형체"). '805 변형체는 RNase이며, 특정 암세포에 세포 독성이 있는 것으로 밝혀졌다. '805 변형체는 란피르나제의 유사한 변형체이다; 이의 아미노산 서열은 란피르나제 아미노산 서열의 11 위치에서 이소류신 대신에 발린, 20 위치에서 아스파르트산 대신 아스파라긴, 및 103 위치에서 세린 대신 아르기닌을 갖는 것을 제외하고는 란피르나제의 아미노산 서열과 동일하다. 일부 실시태양에서, '805 변형체는 "Vall1, Asn20, Arg103-란피르나제"로 지칭된다. '805 변형체의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 2에 제공된다.

암피나제 2는 또한 RNase이다. 미국 특허 제6,239,257호에서 2325p4로 확인된 단백질이며, 암 세포에 세포 독성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 암피나제 2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 3에 제공된다.

재조합 암피나제 2("rAmphinase 2")는 암피나제 2와 유사하나, -1 위치에 Met 잔기를 갖고, 27 및 91 위치에 암피나제 2에 위치하는 글리칸 모이어티가 없다. r암피나제 2는 미국 특허 제7,229,824호에 개시된다. r암피나제 2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 4에 제공된다.

용어 "이의 기능적으로 동등한"은 하나 이상의 아미노산의 결실, 부가 또는 치환에 의해 임의의 자연 발생 RNase와 상이하지만 RNase 활성을 유지하는 단백질을 포함하는 것을 의도한다. 예를 들어, 상기 논의된 '805 변형체는 란피르나제의 기능적 유도체로 생각될 수 있는데, 이는 란피르나제 아미노산 서열과 비교하여 3개의 아미노산 치환을 포함하지만, 여전히 RNase 활성을 갖기 때문이다.

한 실시태양에서, 용어 "RNase A 슈퍼패밀리의 RNase"는 RNase, 특히 란피라나제의 항체 또는 항체 단편과 같은 또 다른 단백질과의 융합 단백질을 포함한다. 이런 융합 단백질은 WO 2005/080586 A1에 기술된다. 다른 실시태양에서, 용어 "RNase A 슈퍼패밀리의 RNase"는 이런 융합 단백질을 포함하지 않으며, 이는 RNase가 눈의 바이러스 감염의 치료에 사용되는 유일한 활성 단백질임을 의미한다.

미국 특허 제5,559,212호, 제5,728,805호, 제6,239,257호, 제7,229,824호, 제8,518,399호, 제8,663,964호 및 미국 특허 공보 제2012-0003266호 및 제2014-0037610호는 모든 목적을 위해 그 전체가 본 발명에 참고로 포함된다.

앞서 논의된 바와 같이, RNase A 슈퍼패밀리의 RNase, 특히 란피르나제가 눈의 바이러스성 질환의 치료에 사용될 수 있다는 것이 밝혀졌다. "눈의 바이러스성 질환"은 주로 환자의 눈에 증상을 나타내며 박테리아가 아닌 바이러스에 의해 유발되는 질환이다. 눈 질환의 증상은 결막의 가려움증, 과도한 눈물 분비, 적색 또는 분홍색의 결막, 통증, 건조한 눈, 광 민감성, 부은 눈, 안구 배출 및 흐린 시력을 포함한다. 눈의 바이러스성 질환은 결막염 및 각막염, 맥락 망막염, 망막염, 각결막염, 인후결막열 및 CMV 망막염을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

핑크색 눈이라고도 알려진 바이러스성 결막염은 눈의 흰 부분과 눈꺼풀의 안쪽 표면의 가장 바깥쪽 층의 염증을 특징으로 한다. 이것이 눈을 핑크색이나 붉은 색으로 보이게 한다. 통증, 작열감, 찰과상 또는 가려움증이 있을 수도 있다. 바이러스성 결막염은 일반적으로 아데노바이러스에 의해 유발된다. 결막 감염의 원인이 될 수있는 다른 바이러스는 단순 포진 바이러스(HSV), 수두 대상포진 바이러스(VZV), 장바이러스 70, 콕사키 바이러스 A24, 전염성 연속종 및 인간 면역결핍 바이러스(HIV)를 포함한다.

바이러스성 각막염은 주로 단순 포진 바이러스에 의해 유발되는 각막의 염증이다. 이 상태는 보통 중간 내지 강한 통증을 동반하며 통증, 시력 장애, 광시증 및 적목의 하나 이상을 수반한다.

맥락 망막염은 눈의 맥락막(눈의 얇은 색소 혈관 코트) 및 망막의 염증이다. 이것은 후천성 포도막염의 한 형태이다. 증상은 떠다니는 검은 반점, 흐린 시력, 눈의 통증이나 발적, 빛에 대한 민감성 또는 과도한 눈물의 존재를 포함할 수 있다. 맥락 망막염은 사이토메갈로바이러스(CMV), 수두종(HZV), 뎅기열, 웨스트 나일 바이러스 또는 림프성 흉막염 바이러스(LCMV) 감염을 포함할 수 있다.

특히, 눈의 바이러스성 질환은 바이러스의 헤르페스비리데 과로부터의 바이러스 또는 3, 4, 7, 8, 19, 29 및 37로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아데노바이러스에 의해 유발된다.

헤르페스비리데는 발티모어 부류 I로 분류되는 이중 가닥, 선형 DNA 게놈을 갖는 바이러스이다. 눈의 바이러스성 질환을 유발하는 헤르페스비리데 과로부터의 바이러스는 I형 단순 포진 바이러스, 인간 사이토메갈로 바이러스 및 대상포진 바이러스, 특히 안부 대상포진을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

아데노바이러스는 볼티모어 부류 I로 분류되는 이중 가닥 DNA 바이러스이다. 아데노바이러스 8, 19, 29 및 37형은 전염성 각결막염을 일으킬 수 있고, 아데노바이러스 3, 4 및 7형은 인후결막열을 일으킬 수 있다.

본 발명에 사용된 용어 "치료하는" 및 "치료"는 눈의 바이러스 감염을 갖는 대상에게 치료 유효량의 란피르나제, '805 변형체와 같은 란피르나제 변형체, 암피나제 2 또는 r암피나제 2와 같은 RNase를 투여하는 것을 포함한다. 본 발명에서 사용된 "치료하는"이란 용어는 질환의 퇴행을 초래하고, 개인의 한 세포에서 다른 세포로 바이러스의 퍼짐을 제한하고, 개인의 바이러스의 복제를 제한하고, 개인의 세포로 바이러스의 진입을 제한하고, 개인의 바이러스의 숫자 또는 이 개인의 조직의 숫자를 감소시키는 것을 포함하는 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 초래하는 눈의 바이러스성 감염의 임의의 치료를 포함한다.

용어 "치료적 유효량"은 본 발명에서 용어 "치료 유효 투여량"과 상호 교환 적으로 사용되며, 치료될 질환 또는 상태의 증상의 개선 또는 교정을 초래하는 RNase의 양을 지칭한다. 한 실시태양에서, '805 변형체, 암피나제 2 또는 r암피나제 2와 같은 치료적 유효량의 RNase는 대상에서 눈의 바이러스 감염의 개시를 지연 또는 최소화하거나 대상에서 눈의 바이러스 감염의 회복을 촉진 또는 증가시킨다. 한 실시태양에서, RNase는 감염된 대상의 눈에서 바이러스 역가를 감소시킨다. 다른 실시태양에서, RNase는 감염된 대상의 눈에서 바이러스 역가가 증가하는 것을 방지한다. 한 실시태양에서, 치료적 유효량의 RNase는 눈의 바이러스 감염의 치료 또는 관리에 치료 효과를 제공한다. 한 실시태양에서, 치료 유효량의 RNase는 한 세포에서 다른 세포로 바이러스의 퍼짐을 감소시킨다. 치료적 유효량은 또한 질환을 예방하고 및/또는 증상의 중증도를 감소시킬 수 있다.

치료적 유효량은 통상적인 실험으로서 당업자에 의해 결정될 수 있다. 약학 적 조성물의 치료적 유효량은 당업자에 의해, 예를 들어, 동물 연구로부터 용이하게 결정될 수 있다. 또한, 인간 임상 연구는 당업자에 의해 인간에 대한 바람직한 유효량을 결정하기 위해 수행될 수 있다. 이러한 임상 연구는 일상적이고 당업계에 잘 알려져 있다. 사용될 정확한 투여량은 또한 투여 경로에 의존할 것이다. 유효 투여량은 시험관 내 또는 동물 실험 시스템에서 유도된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다. RNase는 이를 필요로하는 대상에게 단일 투여량 또는 다중 투여량으로 투여될 수 있다. 한 실시태양에서, RNase는 일당 1회, 또는 일당 복수회 투여를 필요로 하는 대상에게 투여된다. 한 실시태양에서, RNase는 증상이 해소될 때까지 및/또는 환자가 더 이상 바이러스 감염의 위험이 없을 때까지 환자에게 투여된다.

일부 실시태양에서, RNase, 특히 란피르나제의 치료적 유효량의 투여는 RNase로 치료되지 않았고, 바이러스에 의해 감염된 대조군과 비교하여 눈의 바이러스 역가를 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 15%, 바람직하게는 적어도 20% 및 가장 바람직하게는 적어도 25% 만큼 감소시킨다.

일부 실시태양에서, 치료적 유효량의 RNase, 특히 란피르나제의 투여는 탐지 수준 이하로 바이러스 역가의 감소를 유도한다. 바이러스 역가의 결정은 예를 들어 Reischl(1996) Front Biosci. l : e 72-7, Application of molecular biology-based methods to the diagnosis of infectious diseases에서 논의된다.

일부 실시태양에서, RNase, 특히 란피르나제는 눈의 바이러스 감염의 첫 증상이 명백해진 후 6시간 이내에 투여될 수 있다. 다른 실시태양에서, RNase는 눈의 바이러스 감염의 첫 번째 증상이 명백해진 후 8, 10, 12, 15, 18 또는 24시간 이내에 또는 눈의 바이러스 감염의 첫 번째 증상이 명백해진 후 2, 3, 4 또는 5일 이내에 투여될 수 있다.

일부 실시태양에서, 다중 투여량의 RNase, 특히 란피르나제가 투여된다. 이런 다중 투여량의 투여 빈도는 증상의 중증도와 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, RNase는 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 격일, 하루에 한 번, 하루에 두 번 또는 하루에 세 번 투여될 수 있다.

RNase, 특히 란피르나제의 투여 지속, 즉 RNase가 투여되는 기간은 증상의 중증도, 환자 반응 등과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, RNase는 1일, 3일, 7일, 2주, 4주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이상 범위의 기간 동안 투여될 수 있다.

RNase, 특히 란피르나제 또는 RNase, 바람직하게는 란피르나제를 포함하는 약학적 조성물은 바람직하게는 눈에 국소적으로 투여되는데, 이는 RNase 또는 RNase를 포함하는 약학적 조성물이 신체의 다른 부위가 아닌 눈에 직접 투여됨을 의미한다. 국소 투여는 점안액, 현탁액, 에멀젼, 연고, 용액, 겔, 리포좀, 나노 입자, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 나노현탁액, 니오솜, 덴드리머 및 하이드로 겔에 의할 수 있다.

국소적으로 투여되는 란피르나제의 작용 위치는 각막, 결막, 공막 및 홍채와 섬모체(전방 포도막)와 같은 전안부의 다른 조직의 상이한 층일 수 있다.

대안적으로, RNase, 바람직하게는 란피르나제 또는 RNase, 바람직하게는 란피르나제를 포함하는 약학적 조성물은 유리체강내, 집막내, 결막하, 테논낭하, 눈뒤 또는 후방 공막옆 경로에 의해 투여 될 수 있다.

RNase, 바람직하게는 란피르나제를 포함하는 약학적 조성물은 눈에 투여하기 위해 무균이어야 한다.

안과용 약학적 조성물에 적합한 부형제는 염화 벤즈알코늄, 폴리 쿼터늄-1 (폴리쿼드), 과붕산나트륨, 옥시클로로-복합체(퓨라이트®), 클로로부탄올, 염화 벤제토늄, 염화 세틸 피리디늄, 브롬화 벤질, EDTA, 폴리아미노프로필 바이구아니드, 질산 페닐수은, 아세트산 페닐수은, 티메로살, 메르티올레이트, 아세트산염 및 붕산 페닐수은, 황산 폴리 믹신 B, 클로르헥시딘, 메틸 및 프로필 파라벤, 페닐에틸 알코올, 4급 염화 암모늄, 벤조산 나트륨, 프로피온산 나트륨, 소르브산 및 소프지아(SofZia)고 같은 방부제를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

눈에 투여되는 약학적 조성물에서 추가의 부형제는 조성물의 점도를 조절하는데 사용될 수 있으며, 포비돈, 폴리바이닐 알코올, 폴리바이닐 피롤리돈, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스 및 카복시메틸 셀룰로오스를 포함할 수 있다.

계면 활성제는 불용성 성분을 분산시키거나 가용화를 보조하기 위해 약학적 조성물에 첨가될 수 있다. 바람직하게는, 폴리소르베이트 80 또는 폴리소르베이트 20을 포함하는 폴리소르베이트와 같은 비이온성 계면활성제가 사용된다. 다른 적합한 계면활성제는 폴리옥실 40 스테아레이트 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

통상적으로, 약학적 조성물은 또한 조성물의 pH를 조절하고 특정 pH 범위 내에서 완충시키는 성분을 함유한다. 약학적 조성물은 5.0 내지 7.5의 pH를 가질 수있다. 붕산 비히클 또는 소렌센(Sorensen)의 변형된 인산 완충액이 완충액으로 사용될 수 있다.

또한, 조성물의 긴장도를 조정하는 긴장제(tonicity agent)가 사용될 수 있다. 적합한 긴장도 조절 성분은 염화나트륨, 질산나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 덱스트로스, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 만니톨을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

본 발명에서 사용된 용어 "약학적 조성물"은 포유류, 특히 인간과 같은 대상에 투여하기에 적합한 조성물을 포함한다. 일반적으로 "약학적 조성물"은 멸균되어 있고 대상 내에서 바람직하지 않은 반응을 유도할 수 있는 오염 물질이 없다

본 발명에 사용된 용어 "약학적으로 허용되는 담체"는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균 및 항진균제, 등장액 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약학 적 활성 물질에 대한 이러한 매질 및 제제의 용도는 당업계에 잘 알려져 있다. 이들 제제는 일반적으로 안전하고 비 독성이며 생물학적으로나 다른 상황에서 바람직하지 않은 것도 아니다.

보충 활성 성분 또한 약학적 조성물에 혼입될 수 있다. 본 발명에서 제공된 RNase, 특히 란피르나제 및 란피르나제 변형체는 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 대안적으로, RNase, 바람직하게는 란피르나제는 약학적 조성물에서 유일한 생물학적 활성제이다.

RNase가 분류 평가 기준의 세계적 조화 시스템(Globally Harmonized System of Classification Evaluation Criteria)과 유럽 경제 공동체 안구 평가 기준(European Economic Community Ocular Evaluation Criteria)을 사용하여 드레이즈 테스트에서 눈을 자극하지 않는지 여부를 결정할 수 있다. 드레이즈 테스트에서 RNase를 토끼 눈의 결막 주머니에 넣고 란피르나제 주입 후 1시간, 24시간, 48시간 및 72시간에 눈을 검사한다. 평가 기준은 각막 혼탁, 홍채 병변, 결막 충혈 및 결막 부종이다. 이 기준의 점수가 0일 경우, RNase는 눈을 자극하지 않는 것으로 간주된다. 평가에 대한 추가 정보는 도 1 내지 4까지 얻을 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명 전에, 당업자는 눈에 란피르나제 또는 상기 3 종의 상기 단백질성 효소 활성 리보뉴클레아제를 투여할 수 없을 것이다. 그러나, 란피르나제의 이런 투여는 드레이즈 테스트를 사용하여 모델링되었으며, 이 실험의 결과는 란피르나제가 2가지 허용 기준에 의해 정의된 바와 같이 자극적이지 않음을 입증한다.

실시예

비히클로 사용된 독점 수용액 속 0.1%의 란피르나제로 구성된 0.1% mL 용액을 테스트 제품으로 사용하였다. 3마리의 토끼를 사용했고; 각각은 실험 당시 대략 16주령이었던 수컷 뉴질랜드 흰 토끼이었고 무게는 3.3 내지 3.4kg이었다.

각 토끼의 양안 각막 표면에 사전 마취제 테트라케인 2방울을 투여한 후, 안구로부터 아래 눈까풀을 천천히 당김으로써 각 토끼의 우안의 결막에 테스트 제품을 넣었다. 눈까풀을 약 1초 동안 부드럽게 함께 잡고 테스트 재료의 손실을 제한했다. 각 토끼의 왼쪽 눈은 치료되지 않은 채로 남아 대조군 역할을 했다. 동물의 눈을 테스트 제품 설치 후 1시간(±15분), 24시간, 48시간 및 72시간(±1시간)에 검사하였다. 드레이드에 따른 안구 반응의 등급(도 1)은 각 검사에서 수동으로 기록되었다(도 2 및 3). 도 2에서 알 수 있듯이, 테스트 제품의 설치 1시간 후 각 동물에서 안구 반응이 있었지만, 모든 경우에 그 반응은 24시간 및 그 후에 완전히 해결되었다.

유럽 경제 공동체 안구 평가 기준(도 4)을 사용하여 테스트 제품에 의한 자극의 정도를 결정하기 위해, 24시간, 48시간 및 72시간의 시험 동안 총 안구 자극 점수를 개별적으로 각막 혼탁, 홍채 병변, 결막 충혈 및 결막 부종에 대해 추가하고 이들 점수 변수의 평균 점수를 유럽 경제 공동체 안과 검진 기준과 비교하였다. 이 모든 점수(및 계산된 평균 점수)가 0이기 때문에, 테스트 대상은 유럽 경제 공동체 안과 평가 기준에 정의된 바와 같이 자극적이지 않은 것으로 간주되었다.

분류 평가 기준의 세계적 조화 시스템을 사용하여 테스트 제품에 의해 야기 된 자극의 정도를 결정하기 위해 각 동물에 대해 24시간, 48시간 및 72시간 점수를 따로 추가하고 각각의 총합을 셋(3개의 시점)으로 나눠 각 동물에 대한 개별 평균 점수를 산출한다. 이 모든 점수(및 따라서 계산된 지수)가 0이기 때문에, 테스트 대상은 분류 평가 기준의 세계적 조화 시스템에 의해 정의된 바와 같이 자극적이지 않은 것으로 간주되었다.

따라서, 이 테스트 데이터는 새롭고 예기치 않은 결과를 나타낸다: 수용액에서 눈에 전달되는 란피르나제는 란피르나제가 단백질(눈에 자극적일 것으로 예상됨) 임에도 불구하고, 분류 평가 기준의 세계적 조화 시스템과 유럽 경제 공동체 안구 평가 기준에 의해 정의된 바와 같이 자극적이지 않다.

이 실험은 독점 수성 비히클에서 란피르나제의 용액을 사용하여 수행되었지만, 당업자는 상기 3종의 단백질성 효소 활성인 리보뉴클레아제의 용액이 이의 활동 및 상동성의 관점에서 란피르나제와의 유사성 때문에 동일한 방식으로 작용할 으로 생각할 수 있다.

본 발명의 적어도 하나의 바람직한 실시태양이 위에서 설명되었지만, 이 설명은 제한적이지 않고 단지 예시적인이다. 본 발명의 범위는 다음의 특허 청구범위에 의해서만 정의된다.

SEQUENCE LISTING <110> Tamir Biotechnology, Inc. Squiquera, Luis Sulley, Jamie <120> METHODS AND PHARMACEUTICALS FOR TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS OF THE EYE <130> TAMI-015/01US 316630-2036 <140> US 15/180,270 <141> 2016-06-13 <150> US 62/175,961 <151> 2015-06-15 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 104 <212> PRT <213> Rana pipiens <400> 1 Glu Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Ile Thr Asn Thr Arg Asp 1 5 10 15 Val Asp Cys Asp Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp 20 25 30 Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys 35 40 45 Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr 50 55 60 Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys 65 70 75 80 Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val 85 90 95 His Phe Val Gly Val Gly Ser Cys 100 <210> 2 <211> 104 <212> PRT <213> artificial <220> <223> variant '805 of ranpirnase <400> 2 Glu Asp Trp Leu Thr Phe Gln Lys Lys His Val Thr Asn Thr Arg Asp 1 5 10 15 Val Asp Cys Asn Asn Ile Met Ser Thr Asn Leu Phe His Cys Lys Asp 20 25 30 Lys Asn Thr Phe Ile Tyr Ser Arg Pro Glu Pro Val Lys Ala Ile Cys 35 40 45 Lys Gly Ile Ile Ala Ser Lys Asn Val Leu Thr Thr Ser Glu Phe Tyr 50 55 60 Leu Ser Asp Cys Asn Val Thr Ser Arg Pro Cys Lys Tyr Lys Leu Lys 65 70 75 80 Lys Ser Thr Asn Lys Phe Cys Val Thr Cys Glu Asn Gln Ala Pro Val 85 90 95 His Phe Val Gly Val Gly Arg Cys 100 <210> 3 <211> 114 <212> PRT <213> Rana pipiens <400> 3 Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His Ile 1 5 10 15 Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn Asp 20 25 30 Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe Ile 35 40 45 His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr Gly 50 55 60 Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys Lys 65 70 75 80 Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe Ile 85 90 95 Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr Gly 100 105 110 Lys Cys <210> 4 <211> 115 <212> PRT <213> artificial <220> <223> rAmphinase 2 <400> 4 Met Lys Pro Lys Glu Asp Arg Glu Trp Glu Lys Phe Lys Thr Lys His 1 5 10 15 Ile Thr Ser Gln Ser Val Ala Asp Phe Asn Cys Asn Arg Thr Met Asn 20 25 30 Asp Pro Ala Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Cys Lys Pro Ile Asn Thr Phe 35 40 45 Ile His Ser Thr Thr Gly Pro Val Lys Glu Ile Cys Arg Arg Ala Thr 50 55 60 Gly Arg Val Asn Lys Ser Ser Thr Gln Gln Phe Thr Leu Thr Thr Cys 65 70 75 80 Lys Asn Pro Ile Arg Cys Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Thr Thr Asn Phe 85 90 95 Ile Cys Ile Thr Cys Arg Asp Asn Tyr Pro Val His Phe Val Lys Thr 100 105 110 Gly Lys Cys 115

Claims

바이러스의 헤르페스비리데 과로부터의 바이러스, 3, 4, 7, 8, 19, 29 및 37로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아데노바이러스, 장바이러스 70 및 콕사키 A24로부터 선택된 피코나바이러스 또는 전염성 연속종, 인간 면역결핍 바이러스, 뎅기열, 웨스트 나일 바이러스 또는 림프구성 맥락수막염 바이러스에 의해 유발된 인간 눈의 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기 위한 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 1 항에 있어서,
바이러스의 헤르페스비리데 과로부터의 바이러스는
a. 인간 사이토메갈로 바이러스; 또는
b. 단순 포진 바이러스인 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
RNase는 SEQ ID Nos. 1, 2, 3 및 4로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
RNase는 SEQ ID No. 1에 따른 아미노산 서열을 갖는 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
RNase는
a. 분류 평가 기준의 세계적 조화 시스템
b. 유럽 경제 공동체 안구 평가 기준을 사용하여 눈에 비 자극적인 것으로 결정되는 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
RNase는 국소 투여되는 RNase A 슈퍼패밀리 또는 이의 기능적 유도체.
바이러스성 결막염 치료에 사용하기 위한 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 7 항에 있어서,
바이러스성 결막염은 아데노바이러스에 의해 유발되는 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
바이러스성 각막염의 치료에 사용하기 위한 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 9 항에 있어서,
바이러스성 각막염이 단순 포진 바이러스에 의해 유발되는 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
맥락 망막염 치료에 사용하기 위한 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 11 항에 있어서,
맥락 망막염은 사이토메갈로 바이러스(CMV), 수두 대상포진 바이러스(HZV), 뎅기열 바이러스, 치쿠간야 바이러스(Chikungunya virus), 웨스트 나일 바이러스 또는 림프구성 맥락 망막염 바이러스(LCMV)에 의해 유발되는 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
제 7 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
RNase는 SEQ ID No. 1에 따른 아미노산 서열을 갖는 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체.
a. 눈에 자극적이지 않은 RNase A 슈퍼패밀리의 RNase 또는 이의 기능적 유도체; 및
b. 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 바이러스의 헤르페스비리데 과로부터의 바이러스 또는 3, 4, 7, 8, 19, 29 및 37로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아데노바이러스에 의해 유발된 인간의 눈의 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기 위한 약학적 조성물.
제 14 항에 있어서,
RNase는 SEQ ID Nos. 1, 2, 3 및 4로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 약학적 조성물.
제 14 항에 있어서,
RNase는 SEQ ID Nos. 1에 따른 아미노산 서열을 갖는 약학적 조성물.
제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
바이러스는
a. 인간 사이토메갈로 바이러스; 또는
b. 단순 포진 바이러스인 약학적 조성물.
제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
약학적으로 허용가능한 부형제는 수용액인 약학적 조성물.
제 14 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
약학적으로 허용가능한 조성물은 국소 투여되는 약학적 조성물.