CN114269344A

CN114269344A - 用费洛西洛韦治疗或预防眼部感染的组合物和方法

Info

Publication number: CN114269344A
Application number: CN202080059364.0A
Authority: CN
Inventors: I·侯赛因; T·L·鲍林; R·高蒂尔
Original assignee: Microbion Corp
Current assignee: Microbion Corp
Priority date: 2019-06-25
Filing date: 2020-06-24
Publication date: 2022-04-01
Also published as: KR20220044725A; EP3989974A4; AU2020307560A1; BR112021026193A2; JP2022539330A; AU2020307560B2; CA3145062A1; WO2020263904A1; MX2022000232A; EP3989974A1; TW202114690A; US20220370464A1

Abstract

本发明涉及用于治疗和/或预防人类及其他哺乳动物的眼部病毒感染的治疗剂及预防剂。公开了通过施用有效量的费洛西洛韦(FCV)治疗或预防哺乳动物的具体地由腺病毒感染引起的眼部病毒感染的方法。

Description

用费洛西洛韦治疗或预防眼部感染的组合物和方法

优先权申请的交叉参考

本申请要求2019年6月25日提交的美国临时申请号62/866,006的优先权，其内容整体并入本文。

关于联邦资助研究的声明

本发明是在美国国立卫生研究院授予的基金R44 AI054135的政府支持下进行的。美国政府对本发明拥有某些权利。

技术领域

本发明是在治疗或预防眼部(ocular)感染及眼睛疾病的治疗性药物的领域。具体地，本发明涉及费洛西洛韦(filociclovir)(FCV)在治疗或预防哺乳动物的眼部感染中的用途，和具体地在治疗或预防人类的腺病毒眼部感染中的用途。费洛西洛韦可有利地单独地或与抗炎剂、和/或抗菌剂、和/或免疫调节剂、和/或抗病毒剂组合使用。

背景技术

具有超过50种已知血清型，腺病毒(AdV)是感染身体的各种黏膜上皮细胞(包括眼睛的黏膜)的普遍存在的病毒。AdV的其他主要靶标包括生殖泌尿道、呼吸道及胃肠道(

等人,"Adenovirus:from foe to friend,"Rev.Med.Virol..16(3):167–186(2006))。急性结膜炎为常见状况，估计在美国每年影响6百万人(Udeh等人,"Costeffectiveness of a point-of-care test for adenoviral conjunctivitis,"Am.J.Med.Sci.,336(3):254–264(2008))。AdV为传染性结膜炎的最常见原因，影响所有年龄及人口统计学的人，且占所有结膜炎病例的上至75％(Jhanji等人,"Adenoviralkeratoconjunctivitis,"Surv.Ophthalmol.,60(5):435–443(2015))。腺病毒结膜炎可引起显著不适及失去生产力。虽然大部分自限性，但是在一些情况下其可导致来自长期免疫介导的后遗症的并发症(Ford等人,"Epidemiology of epidemickeratoconjunctivitis,"Epidemiol.Rev.,9:244–261(1987))。

流行性角膜结膜炎的爆发通常由AdV8、19、37及54型引起，然而咽结膜热爆发是主要由于AdV3、4及7型(Chigbu等人,'Pathogenesis and management of adenoviralkeratoconjunctivitis,"Infection and Drug Resistance,11:981-993(2018))。

眼部AdV感染的临床管理目前为治标的，目标为提供症状的缓解。目前没有批准用于腺病毒眼部感染的治疗。已测试抗病毒药物，如更昔洛韦(ganciclovir)及西多福韦(cidofovir)对抗眼部AdV感染，未取得很大成功。西多福韦研究未展示出疾病的症状或进程在统计上的显著改善，且显示其引起实质眼部毒性，即使在低剂量下，使得其临床价值很小(Jhanji等人,supra(2015)；Martinez-Aguado等人,"Antiadenovirus drug discovery:potential targets and evaluation methodologies,"Drug Discov.Today,20(10):1235–1242(2015)；Clement等人,"Clinical and antiviral efficacy of an ophthalmicformulation of dexamethasone povidone-iodine in a rabbit model of adenoviralkeratoconjunctivitis,"Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,52(1):339-344(2011)；Hillenkamp等人,"The effects of cidofovir 1％with and without cyclosporin A1％as a topical treatment of acute adenoviral keratoconjunctivitis:acontrolled clinical pilot study,"Ophthalmology,109(5):845–850(2002))。局部更昔洛韦在实验上减少AdV负荷，但是在临床试验中缺少治疗AdV结膜炎的功效(Yabiku等人,"Ganciclovir 0.15％ophthalmic gel in the treatment of adenoviruskeratoconjunctivitis,"Arq.Bras.OftalmolI.,74:417e21(2011))。

在没有用于治疗眼部AdV感染的经批准的抗病毒药物的情况下，在眼部AdV感染后的重大全球经济负担(Stenson等人,"Laboratory studies in acute conjunctivitis,"Arch.Ophthalmol.,100(8):1275–1277(1982))及存在威胁视力的并发症的情况下，对于对抗眼部感染的安全且有效的抗AdV药物具有急切且未满足的医疗需求。

发明内容

本发明涉及用于治疗或预防哺乳动物的眼部病毒感染的新颖方法，其包括向眼局部施用有效量的包含费洛西洛韦或其药学上可接受的盐的组合物。本发明的组合物及方法有效用于治疗或预防眼睛病毒感染，例如，由与眼睛疾病相关的腺病毒(AdV)的多个株引起的结膜炎。在优选的实施方式中，哺乳动物为人类。

此外，本发明的组合物及方法也有效用于治疗或预防由许多其他病毒株引起的病毒眼部感染——包括但不限于，由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒、BK病毒及其组合引起的病毒眼部感染，其通过向眼睛局部施用包含药学上可接受的载体或费洛西洛韦或其药学上可接受的盐的组合物来达成。

在优选的实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦在用于治疗或预防由腺病毒株引起的眼部病毒感染的方法中的用途，该方法包括向眼睛局部施用包含费洛西洛韦或其药学上可接受的盐的组合物，其被配制为眼用(ophthalmically)可接受的组合物。本发明的方法适用于治疗由任何数量的已知引起眼睛感染的腺病毒株引起的眼睛的腺病毒感染，腺病毒株包括腺病毒1、2、3、4、5、6、7、7a、8、9、10、11、13、14、15、16、17、19/64(下文中为腺病毒64)、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、36、37、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、53、54、56及64。在特别优选的实施方式中，本发明有效治疗由腺病毒株3、4、5、6、7、7a、8、37、54和/或64引起的眼睛的腺病毒感染。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦在用于治疗或预防由与眼睛疾病相关的多个病毒株引起的眼部病毒感染的方法中的用途，眼部病毒感染包括但不限于，由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、腺病毒(AdV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒、BK病毒及其组合引起的病毒眼部感染。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦在制造用于局部施用以治疗或预防哺乳动物中由腺病毒引起的眼部病毒感染的药物中的用途。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦在制造用于局部施用以治疗或预防哺乳动物中由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、腺病毒(AdV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒及BK病毒引起的的眼部病毒感染的药物中的用途。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦治疗或预防由腺病毒引起的眼部感染的用途，其包括向眼睛局部施用有效量的费洛西洛韦。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦治疗或预防由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、腺病毒(AdV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒及BK病毒引起的眼部感染(ocular infection)的用途，其包括向眼睛局部施用有效量的费洛西洛韦。

也公开了适用于局部施用以治疗或预防眼睛感染的眼用药学组合物(ophthalmicpharmaceutical composition)，组合物包含治疗上有效量的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐，和适合于眼用施用的药学上可接受的载体。药学组合物适合用于所公开的治疗或预防哺乳动物(具体地人类)的眼部腺病毒感染及其他眼部病毒感染的方法中。

针对本文中所述方法，考虑用于治疗或预防眼部病毒感染的局部施用的多种模式。药学组合物被配制用于向需要其的受试者或患者眼部施用，如例如，眼用软膏、眼用凝胶、眼用溶液、眼用悬浮液。

在另一实施方式中，包含费洛西洛韦的组合物可以任选地与一或多种已知的抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂和/或抗菌剂组合施用于需要其的受试者。这些附加剂(一种或多种)可在施用费洛西洛韦之前、同时或之后被施用。

在优选的实施方式中，本发明的费洛西洛韦组合物展示对抗由腺病毒引起的眼感染的≤10μM的抑制浓度及≥100μM的细胞毒性(CC₅₀)。

在优选的实施方式中，本发明的费洛西洛韦组合物展示对抗由CMV、HHV-6A、HHV-6B、EBV、HHV-8、VZV引起的眼睛感染的≤10μM的抑制浓度及≥100μM的细胞毒性(CC₅₀)，及对抗由BK病毒及JC病毒引起的眼感染的≤50μM的抑制浓度及≥100μM的细胞毒性(CC₅₀)。

定义

如本文所用，术语“眼部的(ocular)”及”眼用的(ophthalmic)”是指现有技术中提及眼睛或眼睛相关事物的标准术语。

如本文所用，术语“眼用可接受的(ophthalmically acceptable)”是指对经治疗的眼睛或其功能，或对正在经受治疗的受试者的一般健康不具有持久有害影响的本文的制剂、组合物或成分。应知晓，短暂效应，如轻微剌激或”剌痛”感对于药物的局部眼施用是常见的，以及这种短暂效应的存在不违反所讨论的制剂、组合物或成分为如本文中所定义的”眼用可接受的”。

如本文所用，术语“局部施用”是指以适用于此程序的任何形式，例如，以凝胶、液体或糊剂的形式，将物质(如药物、化合物、组合物等)施加到哺乳动物的皮肤或黏膜。在本发明上下文中，局部施用包括以适合治疗或预防眼睛病毒感染的任何方式将药物、化合物、组合物等施加到眼睛的表面。

如本文所用，术语“治疗(treat)”及其变型，例如，”治疗(treating，treatment)”是指向患有不利状况、障碍或疾病的临床上有症状的个体施用试剂或制剂，以便实现症状的严重度和/或频率的减少，消除症状和/或其潜在原因，和/或促进损伤的改善或补救。

如本文所用，关于状况或障碍的术语“预防”是指延迟或预防本文中所述的这种眼障碍或状况的发作，例如，处在具有该状况的风险中的受试者的发作。在一些实施方式中，“预防”状况也可涵盖抑制、减少或减慢状况的进展或严重度，例如，在诊断具有该状况的受试者中。这种障碍或状况的发作、进展或严重度可通过检测与该状况相关的至少一种症状的增加或由该状况影响的器官(一个或多个)的功能的降低来确定。

如本文所用，短语“有效量”或“治疗上有效量”是指本文所述化合物或包含该化合物的组合物的量，其有效用于至少在受试者中的细胞亚群体中以适用于任何医学治疗的合理效益/风险比率产生一些期望的治疗效应。例如，化合物或包含该化合物的组合物的治疗上有效量可为足以产生如本文中所述结膜炎的至少一种症状的统计上显著可测量改变的量。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指从药学上可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物是酸性时，其对应盐可自药学上可接受的无毒碱——包括无机碱及有机碱——方便地制备。衍生自这种无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜(铜及亚铜(-ic和-ous))、铁(ferric)、亚铁(ferrous)、锂、镁、锰(锰及亚锰)、钾、钠、锌及类似盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括一级、二级及三级胺，以及环胺及经取代的胺(如天然存在及合成的经取代的胺)的盐。可自其形成盐的其他药学上可接受的有机无毒碱包括离子交换树脂，如例如，精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基伸乙二胺(N,N’-dibenzylethylenediamine)、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、伸乙二胺(ethylenediamine)、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖(glucosamine)、组氨酸、肼胺(hydrabamin)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇及类似物。

如本文所用，术语“药学上可接受的无毒酸”包括无机酸、有机酸、和从其制备的盐，例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、酒石酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸及类似物。优选为柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸及酒石酸。

本文中描述为“包含(comprising或comprises)”一或多个指定的元素或步骤的组合物或方法是开放性的，意指指定的元素或步骤是必需的，但是可在组合物或方法的范围内添加其他元素或步骤。为避免冗长，也应了解，描述为“包含”一或多个指定的元素或步骤的任何组合物或方法也描述“基本上由(consisting essentially of或consistsessentially of)相同指定的元素或步骤组成”的对应更受限组合物或方法，意指该组合物或方法包括指定的基本元素且也可包括不在物质上影响该组合物或方法的基本且新颖特征(一个或多个)的其他元素或步骤。也应了解，本文中描述为“包含”一个或多个指定的元素或步骤或“基本上由一个或多个元素或步骤组成”的任何组合物或方法也描述“由(consisting of或consists of)排除任何其他元素或步骤的指定的元素或步骤组成”的对应更受限且封闭性组合物或方法。在本文中所公开的任何组合物或方法中，任何指定的必需元素或步骤的已知或公开等效物可分别取代该元素或步骤。

费洛西洛韦(也被称作环丙韦(cyclopropavir)，2-胺基-9-{(Z)-[2,2-双(羟甲基)环丙亚基]甲基}-3,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(2-amino-9-{(Z)-[2,2-bis(hydroxymethyl)cyclopropylidene]methyl}-3,9-dihydro-6H-purin-6-one))及其盐为由以下结构表示的亚甲基环丙烷核苷类似物：

如本文所用，术语“受试者”可为人类、非人类灵长类动物、马、猪、兔、狗、绵羊、山羊、牛、猫、豚鼠或啮齿动物。“患者”或“需要其的受试者”是指患有疾病或障碍的哺乳动物。术语“患者”包括人类及兽医受试者。

附图说明

图1为显示费洛西洛韦对抗腺病毒5(AdV5)的抗病毒活性(实心符号)及细胞毒性(空心符号)的剂量反应曲线。

图2为显示费洛西洛韦对抗腺病毒6(AdV6)的抗病毒活性及细胞毒性的剂量反应曲线。

图3为被腺病毒5感染及用费洛西洛韦治疗的A549细胞的免疫荧光分析。

图4为被腺病毒6感染及用费洛西洛韦治疗的A549细胞的免疫荧光分析。

图5显示向仓鼠口腔(PO)或静脉内(IV)施用的费洛西洛韦的生物利用度。

图6A及6B显示经AdV6感染及用10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg或100mg/kg费洛西洛韦治疗的叙利亚仓鼠的生存％(6A)及平均体重变化(6B)。6A：生存。AdV6+运载体(载体，vehicle)v.AdV6+费洛西洛韦10mg/kg或30mg/kg p＝0.0124(对数秩)。6B：平均体重变化。显示组平均值及平均值的标准误差。来自一个组的濒死动物被处死后，不存在针对该组计算的平均值。AdV6+运载体vs.AdV6+费洛西洛韦10mg/kg或30mg/kg p<0.0001(双因素ANOVA)；AdV6+费洛西洛韦10mg/kg vs.运载体+运载体或AdV6+费洛西洛韦30mg/kg p＝0.0286。

图7显示在攻击后5天叙利亚仓鼠的转氨酶(ALT)水平。费洛西洛韦治疗减轻肝病理。符号指示来自个体动物的值；水平条表示几何平均值。AdV6+运载体组的空符号表示自濒死动物收集的样品。

图8显示攻击后5天的叙利亚仓鼠肝中的AdV负荷的水平。费洛西洛韦治疗抑制肝中的AdV6复制。符号指示来自个体动物的值；水平条表示几何平均值。NQ：不可定量；ND：不可检测。

图9显示在14天周期内来自用1％费洛西洛韦(1A)、0.5％费洛西洛韦(1B)、0.5％西多福韦(1C)及运载体(对照)(1D)治疗的兔的腺病毒阳性培养物的比较。

图10显示在14天周期内来自用1％费洛西洛韦(1A)、0.5％费洛西洛韦(1B)、0.5％西多福韦(1C)及运载体(对照)(1D)治疗的兔的腺病毒脱落(shedding)的持续时间。

图11显示在14天周期内来自用1％费洛西洛韦(1A)、0.5％费洛西洛韦(1B)、0.5％西多福韦(1C)及运载体(对照)(1D)治疗的兔的腺病毒眼部滴度中位数。

具体实施方式

人类腺病毒属于腺病毒科，其不同于疱疹病毒科。例如，腺病毒为双股DNA病毒，但是不像疱疹病毒，其未经二十面体核衣壳包膜，且在其外表面携带拉长的纤维蛋白。腺病毒被分成7种，指定为人类腺病毒A至G。这种病毒主要感染结膜，即，覆盖眼睛前面及内衬在眼睑内侧、上或下呼吸道或胃肠道的黏膜，从而引起不同于由疱疹病毒引起的临床表现的一系列临床表现。不知道腺病毒编码病毒编码的激酶，其暗示费洛西洛韦活化的新颖机制。

急性结膜炎为常见病状，估计在美国每年影响6百万人(Udeh等人,2008,见上)，其中腺病毒为最常见原因。腺病毒结膜炎可引起显著不适及失去生产力。虽然大部分自限性，但是在一些情况下其可导致来自长期免疫介导的后遗症的并发症(Ford等人,1987,见上)。尚无批准抗病毒药物用于治疗腺病毒相关的结膜炎。

除腺病毒科外，已知为结膜炎原因的其他病毒株包括但不限于，巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒及BK病毒。个体也可由于暴露于这种病毒的组合而感染结膜炎。

因此，目前存在对于结膜炎，及具体地已知由腺病毒的多种株系引起的结膜炎的安全且有效治疗存在需求。

利用体外测定及体内技术公认的兔结膜炎模型二者的本文中所述数据证实，当被局部施用到感染区域时，即，当被施用到眼睛时，费洛西洛韦提供了用于治疗及预防眼睛的病毒相关疾病的安全且有效的治疗。在优选的实施方式中，该病毒感染是由腺病毒株引起。

如本文中所述，已证实费洛西洛韦展示了腺病毒感染的剂量依赖性抑制，其中IC₅₀值为≤5μM且最小哺乳动物细胞毒性(CC₅₀)优选为≥100μM。

因此，在一个方面中，本发明涉及发现用于治疗和/或预防哺乳动物的眼部腺病毒感染的新方法，其包括局部施用配制在适合眼部施用的药学上可接受的载体或赋形剂中的小分子抑制剂费洛西洛韦(FCV)。本文中所述数据证实费洛西洛韦是与结膜炎相关的广泛各种腺病毒株(包括腺病毒3、4、5、6、7、7a、8、37、54及64)的安全且有效的抑制剂。

有利地，病毒的腺病毒科是非常紧密相关的，且费洛西洛韦对抗许多这种株系的经证实的抗病毒活性是费洛西洛韦将具有对抗与眼睛疾病相关的腺病毒科内全部病毒的相同抑制效应的强有力证据。因此，在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦在用于治疗或预防哺乳动物的由腺病毒株1、2、3、4、5、6、7、7a、8、9、10、11、13、14、15、16、17、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、36、37、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、53、54、56和/或64引起的眼部感染的方法中的用途。在具体优选的实施方式中，本发明有效治疗由腺病毒株3、4、5、6、7、7a、8、37、54和/或64引起的眼睛腺病毒感染。本文中所述方法包括局部施用配制在眼用药学上可接受的载体或赋形剂中的包含费洛西洛韦或其药学上可接受的盐的组合物。

因此，在一个实施方式中，本发明方法涉及治疗合预防由腺病毒3引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中的或配制在眼科(ophthamalogically)可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒4引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中的或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒5引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中的或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒6引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中的或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒7引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中的或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒7a引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒8引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒37引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒54引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明方法涉及治疗和预防由腺病毒64引起的结膜炎，其包括局部施用配制在药学上可接受的载体或赋形剂中或配制在眼科可接受的组合物或载体中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明涉及发现治疗和/或预防哺乳动物的由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒及BK病毒引起的眼部感染的新方法，其包括局部施用配制在适用于眼施用的药学上可接受的载体或赋形剂中的费洛西洛韦。如下表中所述，已显示费洛西洛韦是对抗许多腺病毒及与眼睛疾病相关的其他病毒株的有效抑制剂，其中对抗由CMV、HHV-6A、HHV-6B、EBV、HHV-8、VZV的感染的EC₅₀值为≤10μM而对抗由BK病毒及JC病毒的感染的EC₅₀值为≤50μM。

*Pritchard等人.抗微生物剂和化疗(Antimicrobial Agents andChemotherapy),2013,57:3518-3527

等人.抗病毒研究(Antiviral Research),2018,159:104-112

等人.抗病毒研究(Antiviral Research),2018,159:122-129

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦在制备用于治疗或预防由腺病毒引起的眼部感染的方法的药物中的用途，该方法包括向眼睛局部施用配制在眼用药学上可接受的载体或赋形剂中的包含费洛西洛韦或其药学上可接受的盐的组合物。在优选的实施方式中，该方法有效治疗由腺病毒株1、2、3、4、5、6、7、7a、8、9、10、11、13、14、15、16、17、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、36、37、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、53、54、56和/或64引起的眼部感染。在特别优选实施方式中，该方法有效治疗由腺病毒株3、4、5、6、7、7a、8、37、54和/或64引起的眼睛的腺病毒感染。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦在制造用于治疗或预防哺乳动物中由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒及BK病毒引起的眼部感染的方法的药物中的用途，该方法包括局部施用配制在适用于眼用施加的药学上可接受的载体或赋形剂中的费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦治疗哺乳动物中的腺病毒相关眼部感染的用途，其包括局部施用配制在适用于眼用施加的药学上可接受的载体或赋形剂中的包含费洛西洛韦或其药学上可接受的盐的组合物。

考虑了适用于施加至眼睛的多种施用模式用于向受感染个体递送本发明的眼用组合物。活性成分可作为眼药水、软膏、乳膏、凝胶、持续释放的载体、放置在结膜囊中的缓慢溶解胶囊，经由自隐形眼镜施用或释放、通过注射经结膜下，或通过注射经玻璃体内，通过制备活性成分的适合配制物及利用本领域技术人员公知的程序被施用在结膜囊中。在一个实施方式中，制剂是用合适无毒的药学上可接受的成分制备。这些成分对制备眼药水、眼软膏、结膜下及玻璃体内注射液的技术人员为已知的。这些成分中的一些可见于Remington's Pharmaceutical Sciences,17th edition,1985，此领域中的标准参考文献。合适载体的选择可取决于期望的眼药水、眼软膏，结膜下、玻璃体内剂型(例如，溶液、喷雾、滴液、凝胶、糊剂、贴片)的精确性质。

“适用于施加至眼睛”意指制剂的任何组分不引起对眼睛或正在治疗的受试者的长期不利影响。在施加后的短暂影响，如轻度剌激或”剌痛”可能发生而无长期不利影响。本发明的费洛西洛韦组合物对患有病毒结膜炎的受试者的眼睛的施用模式包括下列：

A.局部眼用药物形式：

·液体眼用药物形式

ο眼药水

ο眼用溶液

ο悬浮液/纳米悬浮液

ο乳液/微乳液

·半固体眼用药物形式

ο原位凝胶

ο眼软膏

·固体眼用药物形式

ο涂覆有药物的隐形眼镜

ο眼部插入物

ο可溶性眼用药物插入物(自丙烯酰胺、N-乙烯基吡咯烷酮及丙烯酸乙酯生产的呈小椭圆形薄镜片形式的可溶性眼插入物。)

ο小型圆盘/眼部治疗系统(预型的(profiled)、外凸、从与眼睛表面接触侧凹的剂型，类似于具有4至5mm直径的隐形眼镜。)

ο人工眼泪插入物

ο胶原罩

ο小型片剂(可生物降解的固体药物形式，其在施加至结膜囊后，转化成凝胶，其延长活性成分与眼球表面间接触的时间段)

·多室药物递送系统

ο纳米粒子及微粒子

ο胶束/纳米胶束

ο脂质体

ο非离子性囊泡(类脂质体，niosome)(化学稳定的，可生物降解的，生物相容性的，非免疫原性的，由非离子表面活性剂构建，用于亲水性及疏水性粒子二者的双层载体)及盘状非离子性囊泡(Discosome)(非离子性囊泡的修饰形式)

ο树突状聚合物

·其他眼用药物形式

ο滤纸条

ο喷雾

ο眼部离子导入(iontophoresis)

B.注射(玻璃体内、结膜下、眼球后、眼球周、眼球筋膜下(sub-tenon)、前房内(intracameral))

C.植入物

D.微针

本文中所述的药学组合物中的费洛西洛韦的浓度是在总组合物的约0.001重量％至30重量％，或约0.001重量％至20重量％或约0.001重量至10重量％的范围内。在另一实施方式中，费洛西洛韦的量是在总的药学组合物的约0.001至5重量％的范围内。

用于本文中所述的费洛西洛韦制剂的药学上可接受的盐包括葡糖酸盐、乳酸盐、乙酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、马来酸盐、硼酸盐、硝酸盐、硫酸盐及盐酸盐。本文中所述化合物的盐可例如通过使碱化合物与所期望的酸在溶液中反应来制备。在反应完成后，通过添加适合量的溶剂将盐从溶液结晶，该盐在该溶剂中是不可溶。在一些实施方式中，盐酸盐是通过使氯化氢气体通过游离碱的乙醇溶液来制备。

用于眼用施用的本发明的水性悬浮液或溶液/悬浮液可含有一或多种聚合物作为悬浮剂。示例性聚合物包括但不限于，水溶性聚合物，如纤维素聚合物，例如，羟丙基甲基纤维素，和水不溶聚合物，如交联的含羧基聚合物。在一些实施方式中，聚合物可包括羟丙基甲基纤维素、瓜尔胶、羧乙烯基聚合物(丙烯酸聚合物)、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波菲、聚环氧乙烷、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、藻酸钠及葡聚糖。

本领域技术人员已知的任何赋形剂都可被包括在本发明的眼用制剂中以增加组合物在眼睛中的滞留。优选地，在局部施加至眼睛后，包含费洛西洛韦的组合物将在施加表面滞留一段时间，允许化合物扩散进入眼部环境中，允许费洛西洛韦的抗病毒活性有效而不被眼部液体快速洗掉。示例性赋形剂包括但不限于，单体多元醇，如甘油、丙二醇、乙二醇；聚合多元醇，如聚乙二醇、羟丙基甲基纤维素(“HPMC”)、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素(“HPC”)、葡聚糖，如葡聚糖70；水溶性蛋白质，如明胶；以及乙烯基聚合物，如聚乙烯醇、聚乙烯基/吡咯烷酮聚维酮及卡波姆，如卡波姆934P、卡波姆941、卡波姆940、卡波姆974；羟乙基纤维素；甲基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮；聚糖，如透明质酸及其盐；硫酸软骨素及其盐；葡聚糖；纤维素家族的各种聚合物；乙烯基聚合物；及丙烯酸聚合物。

眼用组合物可包括胶凝剂或黏度控制剂，包括胶凝剂，当眼用组合物与泪液(例如，由眨眼引起的流泪或眼泪)接触时，胶凝剂增加黏度。这种胶凝剂可用于减少组合物由泪液排泄的损失，以及允许组合物具有增加的停留时间及因此在眼睛或眼睑的上皮层中的吸收。合适的胶凝剂包括胞外多糖胶(结冷胶，gellan gum)(尤其低乙酰化的胞外多糖胶)、海藻酸胶或壳聚糖。黏度控制剂包括能增加黏度及眼用可接受的天然多糖、天然胶、改性的天然聚合物、合成聚合物、蛋白质及合成多肽。在一些实施方式中，至少一种黏度控制剂是黏液拟似物(mucomimetic)。在另一实施方式中，至少一种黏度控制剂为羧乙烯基聚合物。

费洛西洛韦组合物可在简单水溶液或载体中配制或被配制以具有生理上相容的重量克分子渗透浓度(渗透压，osmolality)及pH，例如，通过在适用于局部施用到眼睛的溶液、凝胶、乳液或软膏中包括眼用可接受的盐及缓冲剂，及其他组分，如防腐剂、胶凝剂、黏度控制剂、眼用润滑剂、黏膜黏附聚合物、表面活性剂、抗氧化剂及类似物。

眼用可接受的组合物或载体包括水溶液、非水溶液或乳剂等(例如，水、油、蜡、油脂或矿脂或其组合)。示例性水性载体包括但不限于水、缓冲水、0.8％盐水、0.3％甘氨酸、透明质酸、磷脂载体或人工眼泪载体、或这种载体的混合物及类似物。如本文所用，术语“磷脂”是指磷脂载体的磷脂。示例性磷脂载体及人工眼泪载体包括但不限于并入本文中的美国专利号6,645,978中所述的那些。

在一些实施方式中，眼用载体可为药膏或软膏载体。这种药膏(油膏，salve)或软膏通常包含溶解或悬浮在无菌药学上可接受的药膏或软膏基(如矿物油-白色矿脂基)中的一或多种4-胺基喹啉化合物。在药膏或软膏组合物中，无水羊毛脂也可被包括在制剂中。也可将硫柳汞或氯丁醇添加至这种软膏组合物中作为抗微生物剂。

在本发明的又一实施方式中，眼用载体可为橄榄油、花生油、蓖麻油、聚氧乙基化蓖麻油、矿物油、凡士林、二甲亚砜、醇、脂质体、硅油及其混合物，如美国专利号6,254,860中所公开。在一个实施方式中，眼用载体为结膜插入物，如美国专利号6,217,896中所述。

在一些实施方式中，本文中所述的组合物可包含眼用可接受的黄嘌呤衍生物，如咖啡因、可可碱或茶碱，如美国专利号4,559,343中所公开，其通过引用并入本文。

本文中所述的组合物可任选地包含张度(张力，tonicity)增强剂如氯化钠及浓缩甘油和增黏剂如羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇。

在一些实施方式中，本文中所述的组合物可包含合适的吸收增强剂，如表面活性剂、胆汁酸；稳定剂，例如抗氧化剂，如亚硫酸氢盐及抗坏血酸盐；和/或金属螯合剂，如依地酸钠；及药物溶解度增强剂，如聚乙二醇。

在本发明的另一实施方式中，本文中所述的眼用组合物可包含表面活性剂如聚氧乙烯脂肪酸甘油酯、植物油例如，聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚及烯丙基苯基醚例如，辛苯昔醇(octoxynol)10、辛苯昔醇40、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚及聚氧乙烯烷基醚，或其混合物或增稠剂如羧乙烯基聚合物、聚乙烯基聚合物及聚乙烯吡咯烷酮，如美国专利号5,951,971中所述。

本文中所述的组合物可包含具有至少两个可分离氢基团的至少一种眼用可接受的酸，该酸可包括在含聚合物的组合物中作为相互作用剂，以通过抑制聚合物的腐蚀延迟药物释放，如国际专利公开号WO95/03784中所公开的，该专利通过引用并入本文中。其他示例性相互作用剂包括但不限于，硼酸、乳酸、正磷酸、柠檬酸、草酸、琥珀酸、酒石酸及甲酸甘油磷酸。

眼用溶液可使用以下制备：蒸馏水、水性基或任何其他可接受的基；张度剂；缓冲剂，如磷酸钠及乙酸钠；表面活性剂，如聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯、硬脂酸聚氧基40和聚氧乙烯氢化蓖麻油；稳定剂，如柠檬酸钠及依地酸钠；防腐剂，如苯扎氯铵、硫柳汞、氯丁醇、氯化钠、硼酸、对羟基苯甲酸酯(山梨酸酯、苯甲酸酯、丙酸酯)、氯丁醇、苄醇、汞、对羟基苯甲酸酯(如4-羟基苯甲酸丙酯(或对羟基苯甲酸丙酯)、对羟基苯甲酸甲酯(methy-P-Hydroxybenzoate)(或对羟基苯甲酸甲酯))、及其混合物。在一些实施方式中，防腐剂包括苯扎氯铵或硫柳汞。

可用作重量克分子渗透浓度剂(osmolality agent)的合适的眼用可接受的盐包括具有钠、钾、或铵阳离子及氯酸根、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根离子的盐。适合的盐的实例包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。适用于调节重量克分子渗透浓度的赋形剂包括糖，例如，右旋糖、乳糖、木糖醇、甘露醇及甘油。

合适的眼用可接受的pH调节剂和/或缓冲剂包括酸(如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸及盐酸)、碱(如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠及三羟基甲基胺基甲烷)，和缓冲剂(如柠檬酸盐-右旋糖、碳酸氢钠及氯化铵)或氨基酸。这种酸、碱和/或缓冲剂可以维持组合物的pH在眼用可接受的范围内需要的量被包括。

合适的防腐剂包括稳定的铵化合物(如苯扎氯铵、氯化十六烷基三甲基铵及西吡氯铵)、汞化合物如苯基乙酸汞、咪唑烷基脲、对羟基苯甲酸酯类(如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸丁酯)；苯氧乙醇、氯苯氧乙醇、苯氧丙醇、氯丁醇、氯甲酚、苯乙醇、乙二胺四乙酸、山梨酸及其盐。

促进流泪的适合的润滑剂包括聚乙烯醇、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素及聚乙烯吡咯烷酮。适合的黏膜黏附聚合物包括羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波菲、聚氧化乙烯(聚乙醚，polyethyl oxide)、藻酸钠及糊精。合适的眼用可接受的表面活性剂包括非离子表面活性剂如聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油(包括聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油)、聚氧乙基烷基醚及烷基苯基醚如辛苯昔醇10及辛苯昔醇40。

在一些实施方式中，眼用组合物进一步包含渗透增强剂，优选地以约0.001重量％至约5重量％的范围的量存在。

在一些实施方式中，本文中所述的组合物可包括至少一种抗氧化剂以增强化学稳定性。示例性抗氧化剂包括但不限于，抗坏血酸及衍生物、焦亚硫酸钠、维生素E及其类似物及丁基羟基茴香醚(BHA)。

在一些实施方式中，本文中所述的组合物进一步包含血管收缩剂。示例性血管收缩剂包括但不限于，四氢唑啉、麻黄碱、萘甲唑啉、苯福林和/或其混合物。

在一些实施方式中，本文中所述的眼用组合物包含眼用润湿剂和/或眼用稀释剂。通常用于眼用溶液的润湿剂包括羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甘油、甘露醇、聚乙烯醇或羟乙基纤维素。稀释剂包括水、蒸馏水、盐水溶液、无菌水、人工眼泪等，其中润湿剂是以约0.001％至约30％的量存在。

在另一实施方式中，眼用药学组合物进一步包含一或多种其他活性眼用药学剂，如抗炎剂、抗生素、抗病毒剂、降眼压剂、局部麻醉剂、睫状肌麻痹剂或瞳孔扩张剂，其是用于治疗眼睛疾病。

本文中所述的包含费洛西洛韦的本发明组合物也可通过直接添加包含费洛西洛韦的眼用适合制剂至隐形眼镜或至包括用于隐形眼镜的洗涤、冲洗、储存、消毒、再润湿及润滑溶液的隐形眼镜溶液，经由隐形眼镜而被施用。这允许费洛西洛韦组合物自隐形眼镜扩散出去并且直接至眼睛上以释放至眼部环境中，并且允许组合物历时较没有隐形眼镜更长时间段递送。因此，在另一方面，本发明提供隐形眼镜溶液，其包含费洛西洛韦或其药学上可接受的盐。应调整溶液的pH以与眼睛及隐形眼镜相容，例如，溶液的pH应在6.0与8.0之间，优选地在6.8与7.9之间，及最优选地在7.0与7.6之间。

本文中所述的组合物也可经由如美国专利号6,331,313中所教导的生物相容性且可植入控释药物递送装置施用。本文中所述的组合物也可以持续释放形式或从持续释放药物递送系统施用，该药物递送条统在Remington's Pharmaceutical Sciences,17thedition,1985,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,and International Program onChemical Safety(IPCS)中描述。

费洛西洛韦组合物的眼用给药(dosing)将取决于状况的严重度。例如，制剂可每天1至6次，每天1至4次、每天1至3次或每天至少一次被施用至眼睛。预防性给药可每天一或多次发生历时1至30天、1至20天、1至10天等的时间，只要患结膜炎的风险持续。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦与一种或多种已知的抗病毒剂组合用于治疗或预防结膜炎的用途。附加的抗病毒剂(一种或多种)可在施用费洛西洛韦之前、同时或之后施用。用于本发明方法的合适抗病毒剂包括但不限于，西多福韦、阿昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦、更昔洛韦、扎西他宾、阿洛夫定、司他匹定(stampidine)、利巴韦林、环孢菌素、2’,3’-二脱氧胞苷(ddC)、6-氮杂胞苷、(S)-HPMPC、(S)-HPMPA及2-降-环状GMP。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦与一种或多种已知的抗炎剂组合用于治疗或预防结膜炎的用途。附加的抗炎剂(一种或多种)可在施用费洛西洛韦之前、同时或之后施用。适用于本发明方法的合适抗炎剂包括水杨酸酯，如阿司匹林、二氧苯水杨酸(diflunisil)及双水杨酸酯；丙酸衍生物，如布洛芬、右布洛芬、非诺洛芬、克他洛芬(ketaprofen)、右酮洛芬、氧比洛芬(flubiprofen)、

丙嗪及拉索洛芬(laxoprofen)；乙酸衍生物，如吲哚美辛、托美丁、舒林酸、依托度酸、科罗拉克(keorolac)、双氯芬酸及萘丁美酮；烯醇酸衍生物，如吡罗昔康、马洛昔康(maloxicam)、替诺昔康、屈

昔康、洛莫昔康(lomoxican)及伊索昔康；芬那酸(fenamicacid)衍生物，如甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸和托芬那酸；COX-2抑制剂，如塞来考昔(celecoxib)、罗非考昔(rofecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、鲁米考昔(lumiracoxib)、依托考昔(etoricoxib)及非罗考昔(firocoxib)。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦与一种或多种已知的免疫调节剂的用途。附加免疫调节剂(一种或多种)可在施用费洛西洛韦之前、同时或之后施用。适用于本发明方法的免疫调节剂包括环孢菌素A、吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil)、他克莫司(tacrolimus)、雷帕霉素和来氟米特(leflunomide)。

在另一实施方式中，本发明涉及费洛西洛韦与一或多种已知的抗菌剂组合在用于治疗或预防结膜炎的方法中的用途。附加的抗菌剂(一种或多种)可在施用费洛西洛韦之前、同时或之后施用。适用于本发明方法的抗菌剂包括环丙沙星、诺氟沙星、甲氧苄氨嘧啶-多粘菌素(trimethoprim-polymyxin)B、左氧氟沙星(levofloxacin)、游霉素、妥布霉素、杆菌肽、三氟尿苷、加替沙星(gatifloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、贝西沙星(besifloxacin)、氮红霉素(azithromycin)、氯霉素、杆菌肽-多粘菌素B、聚维酮碘、磺胺醋酰钠、红霉素、庆大霉素、杆菌肽-新霉素-多粘菌素B、短杆菌肽-新霉素-多粘菌素B、氧氟沙星和土霉素-多粘菌素B。

本文中所述化合物的不同浓度可实现相似结果，其中本文中所述化合物通常且不限于每日一次至十次——包括每日2、3、4、5、6、7、8、9及10次——施用。施用给患者(当使用点滴器时，通常每只眼睛1或2滴/剂量)的药物产品的量(例如，药物产品的滴数)也可取决于用于施用药物产品的眼部分配器和结合试剂以及在适合情况下药物产品中的抗炎剂的浓度而变化。药学和医学领域的普通技术人员将了解，其将成为一个简单设计选择及优化，以确认用于治疗任何给定眼部感染或预防眼部感染的合适剂量方案的问题。

在一个方面中，本发明涉及试剂盒，其包含根据本发明的至少一种费洛西洛韦，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物；及下列中的一或多者：

a)任选的已知具有下列中的一或多者的至少一种附加剂：抗病毒活性、抗炎活性、免疫调节活性、抗菌活性；

b)治疗腺病毒相关疾病的说明；

c)与治疗腺病毒感染相关的施用化合物的说明；或

d)施用化合物与已知治疗腺病毒相关疾病的至少一种剂的说明。

试剂盒也可包含与其他组分共包装、共配制和/或共递送的化合物和/或产品。例如，药物制造商、药物分销商、医生、混合商店或药剂师可提供包含本发明的所公开化合物和/或产品及用于递送给患者的另一种组分的试剂盒。

在进一步的方面中，该试剂盒进一步包含多个剂型，多个剂型包含一或多个剂量；其中各个剂量包含化合物及已知具有抗病毒活性的剂的量。在另一方面中，该试剂盒进一步包含多个剂型，多个剂型包含一或多个剂量；其中各剂量包含化合物及已知具有抗病毒活性的剂的有效量。

在进一步的方面中，有效量为治疗有效量。在仍进一步的方面中，有效量为预防有效量。

使用结膜炎的体外及体内模型二者的下述数据证实费洛西洛韦有效治疗或预防与结膜炎相关的腺病毒感染。

本文中所述数据也指示费洛西洛韦为泛腺病毒治疗剂，具有针对疱疹病毒以及多瘤病毒的增加的广谱活性；因此，费洛西洛韦的治疗性施用有效治疗或预防由腺病毒的多个株以及许多其他病毒的感染。如下所述，使用包括细胞病变效应(cytopathic effect)(CPE)减少测定、中性红生存测定及免疫荧光测定的一些测定，证实费洛西洛韦在预防由腺病毒的多个株以及其他病毒引起的感染方面是有效的。

实施例

已包括下列实施例以说明目前公开的主题的模式。根据本公开及本领域技术人员的一般水平，本领域技术人员将了解，下列实施例意图仅是示例性的，并且可在不背离如目前公开的发明的情况下采用许多变化、修改及更改。

实施例1.细胞病变效应(CPE)减少测定以测量腺病毒5(AdV5)被费洛西洛韦的抑制。

人类包皮纤维母细胞(HFF)的制备及培养

人类包皮组织由Institutional Review Board批准获自阿拉巴马大学(University of Alabama)的伯明翰组织采购设施处。将组织储存在4℃下在由补充有10％胎牛血清(FBS；HyClone,Inc.,Logan,UT)及标准浓度的L-谷氨酰胺、两性霉素B(Fungizone)及万古霉素的具有厄尔氏(Earle's)盐的极限必需培养基(MEM)组成的细胞培养基中。然后将组织放置在磷酸盐缓冲盐水溶液中，切碎，并冲洗以移除红细胞。然后将组织片段重新悬浮在胰蛋白酶-EDTA溶液中并在37℃下温育以分散细胞，然后将其通过离心收集。然后将细胞沉淀重新悬浮在4ml培养基中，放置在25cm²组织培养瓶中，并在37℃下温育24小时。然后将培养基用新鲜培养基更换并每日监测细胞的状况直至形成汇合的细胞单层。然后将HFF细胞在补充有10％FBS、L-谷氨酰胺、青霉素G及庆大霉素的具有厄尔氏盐的MEM的标准生长培养基中通过连续传代扩增。确认了各批次细胞无支原体感染并常规传代或在第10代时或之前用于测定。

抗病毒测定

抗病毒及细胞毒性数据是在针对各病毒的一系列3至5个分开实验中获得，以提供抗病毒活性的精确评估及统计数据。各测定包括阳性及阴性对照化合物以及被感染及未被感染的对照以确保实验的完整性。在各测定板中使用相同数量的细胞及相等水平的化合物暴露进行了细胞毒性的同时评估从而可获得精确选择指数(SI)值。所有液体操作步骤是在BioMek4000上进行并且显著增加测定效率及减少分析员的动手时间。

CPE减少测定是在384孔板中在由具有厄尔氏盐的MEM、2％FBS及标准浓度的L-谷氨酰胺、青霉素G及庆大霉素组成的测定培养基中在人类包皮纤维母细胞(HFF)(5000个/孔)的单层中进行。将5000个细胞接种在384孔微量滴定板中并在37℃下在加湿的5％CO₂温育箱中温育24小时以允许形成汇合的单层。抗病毒测试化合物(包括费洛西洛韦)的稀释是在板中在一系列5倍稀释液中在一式两份的孔中直接制备，以产生范围自300至0.1μM或自10至0.003μM的最终浓度，其允许化合物浓度的大的动态范围以促进具有弱或强效抗病毒活性的未知化合物的抗病毒活性的检测。

将细胞单层在大约0.005PFU/细胞的感染复数(MOI)下用包括AdV5的病毒株感染。将被感染细胞在37℃下温育直至在病毒对照孔中观察到100％CPE。通过添加

试剂(Promega,Madison,WI)确定细胞病理学。自实验数据使用标准方法将足以减少CPE50％的抗病毒测试化合物的浓度(EC₅₀)插入在

Excel中。也利用

发光细胞活力测定(Promega,Madison,WI)确定细胞毒性并且自该数据计算了降低细胞活力50％的测试化合物的浓度(CC₅₀)并且选择指数(SI)值被计算为以CC₅₀/EC₅₀，作为抗病毒活性的量度。结果示于下表1及图1中。

表1.各种抗病毒化合物对抗腺病毒5的细胞毒性

^a所示值表示来自5个独立实验的平均EC₅₀及CC₅₀值(μM)及SD。

缩略语：

CDX-西多福韦；PFA-膦甲酸；GCV-更昔洛韦；ACV-阿昔洛韦；PCV-喷昔洛韦；FIAU-氟碘阿糖腺苷；IDU-碘苷；BDCRB-溴二氯核糖苯并咪唑；CMX001-布罗福韦(brincidofovir)；AZT-齐多夫定(azidothymidine)；FCV-费洛西洛韦；4-硫代-IDU—4-硫代碘苷；N-MCT-N-甲醇卡巴胸苷(methanocarbathymidine)；L-BHDU一L-溴乙烯基-羟甲基-二氧戊环尿嘧啶；PMEA-阿德福韦(adefovir)

表1中所示的结果证实，费洛西洛韦(FCV)展示超过所有其他测试化合物的显著改善的对抗腺病毒5的抑制活性(SI＝43)以及效力为第二最有效抗病毒剂西多福韦(CDV)的至少两倍(SI＝24)并且显著优于更昔洛韦(GCV)(SI≥1.5)。

AdV5复制减少％作为范围自0.01至100μM的费洛西洛韦浓度的函数示在图1中。图1中的结果证实，低至0.2μM的费洛西洛韦的浓度有效减少AdV复制。

利用费洛西洛韦对抗腺病毒6、腺病毒7及腺病毒8进行相似实验。结果示在下表2中。费洛西洛韦展示腺病毒8的强效抑制(SI≥61)。

表2.费洛西洛韦的细胞毒性

病毒	EC<sub>50</sub>	CC<sub>50</sub>	CC50/EC50
				AdV6	3.67	>100	27
AdV8	2.45	>150	61
				AdV7	1.04	>150	>144

实施例2.中性红生存测定以测量腺病毒6(AdV6)被费洛西洛韦的抑制。

中性红细胞细胞毒性测定被用于检测细胞活力或药物细胞毒性。此测定的原理是基于经由染料中性红的摄取检测活细胞。中性红为二氨吖嗪染料，其染色活细胞中的溶酶体。活细胞可经由主动运输摄取中性红并将染料并入其溶酶体中，但是非活细胞不可摄取此发色团。因此，在洗涤后，活细胞可在酸化萃取条件下释放并入的染料。释放染料的量可用于测定活细胞的总数量或药物细胞毒性。因而，将细胞毒性表示为在暴露于所研究的化合物后，中性红的摄入的浓度依赖性减少。

中性红生存测定是以96孔形式进行。简言之，在感染前一天，将A549腺癌人类肺泡基底上皮细胞以6×10³个细胞/孔的浓度平板接种。以5×10³PFU/孔(在感染时估计为0.5PFU/细胞)进行AdV6感染。将费洛西洛韦在单独的96孔板上1:3连续稀释，其中最后一排无药物作为对照。针对各药物浓度以9个复制孔进行AdV6感染并且针对各药物浓度有3个未被感染的药物对照孔。将费洛西洛韦稀释液添加至细胞板，之后立即用AdV6感染。在感染后6天时(当针对病毒感染的无药物孔，病毒细胞病变效应已达到70至90％时)，添加中性红1小时，然后将板用PBS洗涤3次以移除未附着的细胞，并且使用50％乙醇/1％冰醋酸从剩余细胞萃取中性红。读取费洛西洛韦板并且使用GraphPad Prism绘图及统计软件(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)将结果作图。

结果示于图2及表2中。如图2中所示，低至10^-1μM的费洛西洛韦浓度有效提高AdV6感染细胞的活力。

实施例3.费洛西洛韦治疗的人A549细胞的AdV5或AdV6感染的免疫荧光测定

用AdV5或AdV6以5PFU/细胞的MOI感染或模拟感染6孔板中盖玻片上的人A549细胞。在1小时后，添加费洛西洛韦至40、10、4或0μM的最终浓度。在感染后27小时，将A549细胞在多聚甲醛(在PBS中3.7％)中固定并用甲醇透化。针对腺病毒DNA结合蛋白(DBP；图中染绿色)及腺病毒六邻体(图中染红色)将细胞染色。在早期AdV感染期间(在AdV DNA复制之前)，DBP染色将是抗核且均匀的。随着感染进展，DBP与复制中心缔合。复制中心最初为小“点”(各点因一个进入AdV基因组产生)。随着DNA复制发生，复制中心将扩增并”倍增”。随着感染进展，核变得扩大及畸形。AdV六邻体(AdV病毒壳体的最丰富组分)直到DNA复制发生后才表达，且因此被认为“晚”AdV蛋白。结果示在图3及4中。

如图3及4中所示，针对AdV5及AdV6感染，费洛西洛韦治疗的结果是相同。费洛西洛韦在预防晚期感染中极其有效(如由六邻体染色所指示)。针对40μM费洛西洛韦孔未见六邻体阳性细胞而针对10μM费洛西洛韦孔见到极少六邻体阳性细胞。对于4μM费洛西洛韦孔，见到一些六邻体阳性细胞，但是4μM孔与对照(无药物)孔相比时显示实质上较少晚期感染(如由DBP染色模式及核的大小/形状所指示)。

结果显示，费洛西洛韦是人类腺病毒5(AdV5)、AdV6及AdV8的强效抑制剂。此活性水平是类似于西多福韦(CDV)的活性水平并且远优于更昔洛韦(GCV)的活性水平，其具有对抗AdV5的66μM的IC₅₀值。(参见，表1)迄今为止测试的AdV血清型的范围表明，FCV可被潜在开发作为泛腺病毒抑制剂。

实施例4.费洛西洛韦的药物动力学

为测试费洛西洛韦的药物动力学，叙利亚仓鼠被给予口服(p.o.50mg/kg)或静脉内(i.v.10mg/kg)剂量的费洛西洛韦。结果示于图5中并证实费洛西洛韦在PO或IV施用6小时后仍是可检测的。

叙利亚仓鼠AdV模型

仓鼠模型是特别有利的，因为其再现由人类患者可见的病理，且其可用于测试抗病毒化合物的功效(在Wold,W.S.M.and Toth,K.,Advances in Cancer Research,115:69-92(2012)中综述)。叙利亚仓鼠为两个啮齿动物物种中的一种(另一为棉鼠)，其容许AdV物种C感染(1、2、5、6型)。使用此模型，可以进行受控体内实验以测试抗腺病毒化合物的功效(Ying等人.,Antimicrobial Agents and Chemotherapy,58(12):7171–7181(2014)；Toth等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,105(20):7293–7297(2008)；Tollefson等人2014；Toth等人,Viruses,7(3):1409–1428(2015))。在这些实验中，将年幼仓鼠用环磷酰胺(CP)(经常用作人类移植接受者的调理方案的一部分的药剂)进行免疫抑制。在达成期望程度的免疫抑制后，将仓鼠用AdV5静脉内(iv)感染，导致AdV5在大多数器官中，最主要在肝中复制(Toth等人2008见上)。

药物配制

针对p.o.施用，将费洛西洛韦以5mg/ml悬浮在0.4％羧甲基纤维素(Sigma C5678)中并超声波处理至视觉均匀。针对i.v.施用，将费洛西洛韦溶解在DMSO(Sigma D2650)中，然后用水稀释至费洛西洛韦的5mg/ml和75％DMSO的最终浓度。在使用前一天制备给药溶液并储存在4℃下。

实验设计

约100g体重的雄性仓鼠购自Envigo(Harlan)。使用于140mg/kg的剂量下经腹膜内施用的环磷酰胺(CP)使所有仓鼠免疫抑制，然后在100mg/kg的剂量下每周两次。动物接受三次CP注射，之后施用费洛西洛韦。针对两种施用途径，使用两组动物(12只仓鼠/组)。此外，三只未被治疗的动物(针对两种途径相同的三只仓鼠)用作模拟对照。在两个连续日进行p.o.及i.v.实验。因为仓鼠称重大约100g(+/-10％)，分别针对p.o.及i.v.途径对其施用1ml及0.2ml以达成期望剂量。针对两种途径，在给药后0.5、1.3及6小时处死3只仓鼠。

从所有动物收集血浆及肝样品并储存在-80℃下直至如下通过LC MS分析：

·将所有样品及标准物在冰上处理；

·利用真实化合物(新鲜粉末DMSO重建，加入“空白”仓鼠血浆)和加有500ng/mL卡巴西平(carbamezapine)(内部标准)的所有样品构建标准曲线；

·将早期时间点样品在”空白”仓鼠血浆中稀释(尽力达到标准曲线的浓度)；

·将样品用2X样品体积的0.1％甲酸铵的甲醇萃取(即，30μL样品+60μL 0.1％甲酸铵的甲醇)；

·将经萃取的样品在微量离心(microfuge)中在最大设置下离心；

·将上清液通过LC/MS/MS动态多重反应监测(DMRM)利用常规方法分析。

实施例5.确定费洛西洛韦对抗经免疫抑制的雄性叙利亚仓鼠中静脉内施用的人类AdV6的治疗功效

如上所述，已确立费洛西洛韦是对抗腺病毒的若干株系在体外复制的有效抑制剂并且证实在仓鼠中具有良好口服生物利用度。

接下来，我们评估费洛西洛韦是否在用AdV6经静脉内(i.v.)感染的免疫抑制叙利亚仓鼠中展示抗腺病毒功效。测试四个剂量水平：10、30、60及100mg/kg p.o.q.d.。基于大鼠毒理学数据确定最高剂量。

实验设计

使用环磷酰胺(CP)使所有仓鼠免疫抑制。CP以140mg/kg的剂量经腹膜内施用，及然后以100mg/kg的剂量每周两次施用。

将呈粉末形式的费洛西洛韦以1、3、6及10mg/ml悬浮在0.4％羧甲基纤维素(SigmaC5678，批号SLBS7273)中并超声波处理至视觉均匀，将等分试样储存在4℃下。允许将等分试样平衡至室温，之后给药。针对10、30、60及100mg/kg剂量水平，将称重大约100g的仓鼠用1ml体积的合适悬浮液给药。

将仓鼠分成8组，15只仓鼠/组(除了组2外，组2仅具有5只仓鼠；参见表3)，经免疫抑制，及然后用运载体(组1至2)或2×10¹⁰PFU/kg的AdV6(组5至9)i.v.注射。组1及3接受药物运载体(p.o.q.d.)，组4接受10mg/kg费洛西洛韦(p.o.q.d.)，组5接受30mg/kg费洛西洛韦(p.o.q.d.)，组6接受60mg/kg费洛西洛韦(p.o.q.d.)，组2及7接受100mg/kg费洛西洛韦(p.o.q.d.)，并且组8接受西多福韦(20mg/kg，每周3次)。针对所有组，药物施用在攻击前1天开始，根据以上针对研究的持续时间的时程表继续。

每日记录动物的体重及发病的任何征兆。在攻击后5天，将来自各组(除了组2)的5只仓鼠(在实验开始时指定)处死，进行大体病理观察。收集血清及肝样品并通过TCID50测定确定肝中的病毒负荷，并且分析血清的转氨酶含量。在攻击后14天，将剩余10只仓鼠处死。根据需要在第14天之前将视觉上变得濒死的仓鼠处死。除了观察为将濒死的仓鼠外，也将损失超过其原始体重的20％的所有仓鼠处死。针对在实验结束时处死的仓鼠及因濒死处死的那些，收集血清及肝组织并且库存以供血清转氨酶水平及肝中的病毒负荷的可能确定。将肝组织保存在福尔马林中用于可能组织病理学检查。

因而，存在两个研究终点：一个终点，从10只动物收集，是生存及体重增加/损失(具有测定肝中的病毒负荷及血清转氨酶水平的选项)。另一终点，针对第5天时间点从5只动物收集，是肝中的病毒负荷及血清转氨酶水平。

表3.费洛西洛韦-AdV6感染的雄性动物的治疗窗研究

¹自研究移除

结果

一生观察

在实验中存在5个治疗相关的死亡，所有都在AdV6+运载体组(图6A)中。在10或30mg/kg下的费洛西洛韦防止死亡率(图6A)。最初，在AdV6感染组中的所有动物损失体重；这通过用10mg/kg或30mg/kg费洛西洛韦治疗逆转(图6B)。AdV6+10mg/kg费洛西洛韦中的动物的体重增加稍微低于未被感染的动物及AdV6+30mg/kg费洛西洛韦组的动物的体重增加。更高剂量的费洛西洛韦，具体地100mg/kg剂量对AdV6感染的动物是有毒(未显示)；这些组从该研究移除。

尸体剖检

在处死第5天(D5)时，针对AdV6+60mg/kg及100mg/kg费洛西洛韦组中的动物观察了广泛肾病理。

血清转氨酶水平

在攻击后5天，从各组的5只动物收集了血清并分析了转氨酶水平。AdV6+运载体组中的两只仓鼠具有高转氨酶水平，然而经费洛西洛韦或经CDV治疗的动物中没有一个具有升高的血清转氨酶水平(图7；显示丙胺酸胺基转移酶[ALT])。

肝中的病毒负荷

在攻击后5天，未被治疗的经AdV6感染的仓鼠在其肝中具有高的病毒负荷(图8)。经30mg/kg费洛西洛韦治疗抑制AdV6复制至不可检测水平(图8)。在AdV6+10mg/kg费洛西洛韦组中存在一只动物具有非常低的肝病毒负荷，同时我们不能检测到此组中的任一其他动物的肝中的AdV6(图8)。CDV治疗减少病毒复制至非常低至不可定量水平(图8)。

结论

费洛西洛韦的两个较低剂量(10mg/kg及30mg/kg)的数据是有前景的。利用这两个剂量中的任一者进行的治疗抑制病毒复制(图8)，减轻肝损伤(图7)，并且防止发病率及死亡率(图6)。10mg/kg费洛西洛韦剂量较30mg/kg剂量是稍微较不有效(参见图6中的稍微较低体重增加及图8中的稍微较高病毒负荷)。60mg/kg及100mg/kg费洛西洛韦剂量对AdV6感染的仓鼠是有毒的；这两组和运载体+100mg/kg组从该研究移除。

实施例6.费洛西洛韦对眼部相关的腺病毒株被的体外抑制

在体外测定中测试了费洛西洛韦抑制与结膜炎相关的许多腺病毒株的有效性。为确定体外IC₅₀浓度，即，抑制腺病毒空斑形成50％的费洛西洛韦的浓度，测试了费洛西洛韦与西多福韦(CDV)对抗一组7种眼部类型的腺病毒小组。

空斑减少抗病毒IC₅₀测定

制备了42个A549 24孔多孔板(1个每种药物和每个病毒株)。一次测试了7种腺病毒血清型。利用AdV3L、AdV4H、AdV5M、AdV7aJ、AdV8E、AdV19/64K及AdV37ATCC制备了来自已知滴度的储备病毒(大约100PFU/0.1ml)的病毒稀释液。将7种病毒中的每个的0.1ml(含有大约100PFU)平板接种在A549多孔板的所有24孔上并在37℃下在5％CO₂水-蒸气氛围中温育3小时。

在2×营养素组织培养基中按照以下稀释方案制备了400、40、4.0、0.4、0.04及0.004μM的费洛西洛韦和西多福韦的稀释液：将7.5ml的费洛西洛韦及西多福韦稀释液中的每种添加至管并且然后将22.5ml的含甲基纤维素的外生长培养基(OG)添加至各管。将1ml的各费洛西洛韦和西多福韦稀释液添加至另外15ml管并且将3ml的OG添加至各管。此为用于AdV8板的覆盖。不含任何药物的正常甲基纤维素覆盖培养基是用于各板的对照孔。

针对各病毒板，将3个孔用6个最终费洛西洛韦及西多福韦浓度(100、10、1.0、0.1、0.01及0.001μM)中的每个覆盖并将6个孔用对照培养基覆盖。将板在37℃下在5％CO₂水-蒸气氛围中温育直至空斑可见。当空斑变得可见时，将板用龙胆紫染色及使用解剖显微镜在25X下计数空斑。使用Minitab从拟合线图回归分析确定IC₅₀浓度。一式三份进行所有测定。

结果

费洛西洛韦跨一组眼部腺病毒类型(Ad3、Ad4、Ad5、Ad7a、Ad8、Ad19/64及Ad37)产生<5μM的平均IC₅₀浓度(范围0.496至4.684μM)，该组腺病毒类型代表腺病毒种类B、C、D及E的病毒类型。西多福韦跨相同组眼部腺病毒类型及种类产生<31μM的平均IC₅₀浓度(范围0.487至30.304μM)。费洛西洛韦及西多福韦的平均值及中位数IC₅₀(μM)分别示于表4及5中。

表4.费洛西洛韦和西多福韦的平均IC₅₀[μM]

表5.费洛西洛韦和西多福韦的中位数IC₅₀[μM]

结论

费洛西洛韦证明为所测试的所有眼部相关腺病毒株的有效抑制剂。在许多情况下，费洛西洛韦证明为比西多福韦显著更强效的腺病毒抑制剂。这是费洛西洛韦为腺病毒相关结膜炎的安全且有效治疗的强烈指示。

实施例7.费洛西洛韦在兔眼部腺病毒模型中的体内分析

在纽西兰白(NZW)兔眼部模型中测试了费洛西洛韦抑制腺病毒相关结膜炎的能力。

利用克他命及赛拉嗪给予20只NZW兔(1.1至1.4kg)全身麻醉，利用丙美卡因的局部麻醉及角膜划破(25号针的12条交叉划线)，接着在双眼中接种50μl的3.0×10⁷PFU/ml的AdV5M(6.0×10⁸PFU/ml)。闭上眼睛及轻轻摩擦5秒以确保所有眼部表面上接触病毒。将所有兔用镇痛剂以酮洛芬的肌肉内注射的形式(1.5mg/kg)处理。

在接种后2小时开始，对所有眼睛进行病毒培养。在用丙美卡因局部麻醉后，将单个棉签拭子放置在各眼睛的下穹隆，在角膜上滚动至上穹隆以回收来自泪膜和角膜及结膜表面的腺病毒。将来自各眼睛的拭子各自放入含有1ml外生长培养基的管中并在-80℃下冷冻直至空斑测定。

在第1天，将兔分成4个治疗组用于如下表中所述的药物施用。四个治疗组为0.5％费洛西洛韦；0.1％费洛西洛韦；0.5％西多福韦；及阴性运载体对照(10％2-羟丙基-β-环糊精，0.2％聚氧乙烯蓖麻油(cremophore))。

在第1天开始治疗及以滴间间隔至少2小时施加滴。在接种后(PI)第1、3、4、5、7、9、11及14天在最终滴至少1小时后对各兔的眼睛进行病毒培养。在实验过程期间在各时间，使用标准空斑测定，在A549细胞单层上确定AdV5滴度。将待滴定的眼部培养物解冻，稀释(1:10)并接种在A549单层上。使病毒被吸附3小时。在吸附后，将1ml的培养基加上0.5％甲基纤维素添加至各孔，将板在37℃下在5％CO₂-水蒸气氛围中温育。在温育7天后，将细胞用0.5％龙胆紫染色，并在解剖显微镜(25X)下计数空斑的数量。然后计算病毒滴度并表示为空斑形成单位/毫升(PFU/ml)。使用True Epistat和/或Minitab统计软件统计分析了数据。结果量度包括按总数计每日AdV5-阳性培养物(图9)、脱落持续时间(图10)及每日病毒滴度(图11)。在P≤0.05置信水平下建立显著性。

结果

用0.5％费洛西洛韦的治疗证实了与运载体对照相比显著更佳的抗病毒功效。具体地，费洛西洛韦证实了在第4、5、7、9及11天更少的按总数计腺病毒阳性培养物的数量(参见，图9)，更短的腺病毒脱落的持续时间(参见，图10)，在第1、3、4、5、7、9及11天的显著更低的腺病毒滴度(参见，图11)。用0.5％费洛西洛韦的治疗也证实与阳性抗病毒对照0.5％西多福韦相比，显著更佳的抗病毒功效，其中费洛西洛韦显示在第1、3、4及5天的显著更低的腺病毒滴度，及在第4天的更少的按总数计腺病毒阳性培养物的数量。

用0.5％费洛西洛韦的治疗也证实与0.1％费洛西洛韦组相比显著更佳的抗病毒功效，其中0.5％费洛西洛韦展示在第3、4及5天的显著更低的腺病毒效价(参见，图11)，及在第4天的更少的按总数计腺病毒阳性培养物的数量(参见，图9)。

用0.1％费洛西洛韦的治疗的确证实与运载体对照相比显著更佳的抗病毒功效，其中在第1、3、4、5、7、9及11天的显著更低的腺病毒滴度(参见，图11)、在第7、9及11天的更少的按总数计腺病毒阳性培养物的数量(参见，图9)及更短的脱落持续时间(参见，图10)。

用0.1％费洛西洛韦的治疗也证实与阳性抗病毒对照0.5％西多福韦相比相似的抗病毒功效，除第1天外，其中在第1天中0.1％费洛西洛韦效价较低。

用0.5％西多福韦的治疗证实了与运载体对照相比显著更佳的抗病毒功效，具体地，0.5％西多福韦展示在第3、4、5、7、9及11天的显著更低的腺病毒滴度(参见，图11)，在第7、9及11天的更少的按总数计腺病毒阳性培养物的数量(参见，图9)及更短的脱落持续时间(参见，图10)。

结论

0.5％及0.1％费洛西洛韦在腺病毒/NZW兔眼部模型中证实与运载体对照相比显著的抗病毒功效。在感染的早期期间(第1至5天)，0.5％费洛西洛韦较阳性抗病毒对照(即，0.5％西多福韦)更有效。0.1％费洛西洛韦在腺病毒/NZW兔眼部模型中证实与阳性抗病毒对照0.5％西多福韦相似的抗病毒功效。

0.5％西多福韦在腺病毒/NZW兔眼部模型中证实了显著的抗病毒功效，因此验证该研究。

因此，来自标准体内腺病毒/NZW兔眼部模型的以上呈现的数据证实，费洛西洛韦提供用于治疗和预防与眼睛的腺病毒感染相关的眼部疾病的安全且有效的方法。

上述数据的考虑指示，费洛西洛韦是用于结膜炎的安全且有效的治疗，以及证实费洛西洛韦为用于抑制一系列腺病毒类型的有效抗病毒剂，从而导致费洛西洛韦可用作眼睛的病毒感染的泛腺病毒治疗剂的结论。

本文中所引用的所有公开、专利申请、专利及其他文件以其全文通过引用并入本文。上述实例仅是说明性且不意在限制。鉴在上述公开内容，所公开方法的明显变型及本发明的替代实施方式将对本领域技术人员是显而易见的。认为所有这种明显变型及替代例是在如本文中所述的本发明的范围内。

Claims

1.治疗或预防哺乳动物的眼睛的病毒感染的方法，其包括向所述眼睛局部施用有效量的包含费洛西洛韦或其药学上可接受的盐的组合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒感染由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、腺病毒(AdV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒和BK病毒或其组合引起。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒感染由腺病毒引起。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述腺病毒选自腺病毒1、2、3、4、5、6、7、7a、8、9、10、11、13、14、15、16、17、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、36、37、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、53、54、56、和64。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒选自腺病毒3、4、5、6、7、7a、8、37、54及64。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒3。

7.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒4。

8.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒5。

9.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒6。

10.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒7。

11.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒7a。

12.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒8。

13.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒37。

14.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒54。

15.根据权利要求4所述的方法，其中所述腺病毒为腺病毒64。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物被局部施用到所述眼睛的角膜和/或结膜。

17.根据权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物为人类。

18.费洛西洛韦在制备用于局部施用的药物中的用途，所述药物用于治疗或预防哺乳动物的眼睛的病毒感染的方法中。

19.根据权利要求18所述的用途，其中所述病毒感染由巨细胞症病毒(CMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、腺病毒(AdV)、HHV-6A病毒、HHV-6B病毒、HHV-8病毒、JC病毒、和BK病毒、及其组合引起。

20.根据权利要求19所述的用途，其中所述病毒感染由腺病毒引起。

21.根据权利要求20所述的用途，其中所述腺病毒选自腺病毒1、2、3、4、5、6、7、7a、8、9、10、11、13、14、15、16、17、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、36、37、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、53、54、56、和64。

22.根据权利要求21所述的用途，其中所述腺病毒选自腺病毒3、4、5、6、7、7a、8、37、54和64。

23.根据权利要求18所述的用途，其中所述组合物被局部施用到所述眼睛的角膜和/或结膜。

24.根据权利要求18所述的用途，其中所述哺乳动物为人类。

25.眼用组合物，其包含眼用可接受的载体和以有效治疗眼睛的病毒感染的量的费洛西洛韦。

26.根据权利要求25所述的组合物，其中所述组合物包含用于向所述眼睛施用的局部眼用可接受载体。

27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述局部眼用可接受载体包括水溶液、非水溶液、油、蜡、油脂、矿脂或其组合。

28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述眼用组合物选自水溶液、非水溶液、悬浮液、溶液/悬浮液、凝胶、乳膏、软膏及乳液。

29.根据权利要求25所述的组合物，其进一步包含选自以下的至少一种赋形剂：稳定剂、渗透增强剂、pH调节剂、抗微生物防腐剂、润滑剂、增黏剂及润湿剂。

30.根据权利要求25所述的组合物，其进一步包含卡波姆、三乙醇胺、对羟基苯甲酸酯、丙二醇和/或甘油。

31.根据权利要求25所述的组合物，其中所述化合物的量是在按重量计约0.001％至30％的范围内。

32.根据权利要求25所述的组合物，其中所述组合物被局部施用到所述眼睛的角膜和/或结膜。