KR20190134588A - 다중 키나아제 억제제 및 안구 섬유증에의 사용 - Google Patents

Abstract

눈 관련 질환 또는 장애와 관련된 섬유증을 예방 및/또는 치료하기 위한 본 방법은 다중 키나아제 억제제의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 상기 다중 키나아제 억제제는 닌테다닙, 렌바티닙, 이들의 조합 또는 이들의 염이다. 상기 눈 관련 질환 또는 장애는 각막 투명성, 각막 반흔 형성, 이차성 백내장 형성, 녹내장 여과 수술, 눈의 외과적 처치 및 임플란트, 굴절교정 레이저각막절제술, 레이저 각막절삭가공성형술, 망막앞 및 망막바깥 막의 형성 및 수축, 증식성 유리체망막병증, 망막하 섬유증/반흔, 망막 신경아교증 또는 맥락막 형성이다.

Description

다중 키나아제 억제제 및 안구 섬유증에의 사용

관련 출원에 대한 상호 참조

본원은 2017년 5월 1일자로 출원된 미국 가특허출원 제 62/492,936호 및 2016년 7월 22일자로 출원된 미국 가특허출원 제 62/365,429호에 대해 우선권을 주장한다.

본 발명은 특정 범위의 다중 키나아제 억제 활성을 갖는 화합물에 관한 것이다. 이러한 다중 키나아제 억제제는 특정 성장 인자, 사이토카인 신호 전달 경로 및/또는 섬유성 반응 단계에 작용한다. 본 발명은 또한, 각막 상처, 및 녹내장 여과 수술 및 처치, 안과 수술, 연령 관련 황반 변성 및 증식성 유리체망막병증으로 인한 섬유증을 포함한 질환 상태, 장애 및/또는 외과적 처치와 관련된 안구 섬유증의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이다.

안구 섬유증은 세계적으로 수백만 명의 사람들에게 시각 장애와 실명을 초래하고 있다(Friedlander M, J. Clin. Invest. 117: 576-586, 2007; Yu-Wai-Man C 및 Tee Khaw P, Expert Rev. Ophthalmol. 10: 65-76, 2014). 이는 주요 실명성 질환 모두의 발병 기전 또는 치료 실패와 관련되어 있다. 섬유증은 수복 또는 반응 과정의 결과로 장기 또는 조직에 과량의 세포외 기질이 형성되는 현상이다. 이들 반응의 복잡성은, 항-섬유성 치료제 개발에 있어 중대한 과제, 따라서 이러한 환자 집단에서 큰 충족되지 않는 의학적 필요성을 야기하였다.

이러한 질환 상태에는, 세포 증식, 세포 이동 및 형질 전환, 그리고 세포외 기질 침착 및 재형성을 조절하는 무수한 내인성 인자가 존재한다. 이들 인자에는 FGF, VEGF, PDGF 등이 포함된다. 이들 인자 각각은 안질환의 예방 및/또는 치료의 표적으로 작용해 왔다. 예를 들어, VEGF와 같은 단일 성장 인자 신호 전달 경로의 억제는, 연령 관련 황반 변성 및 당뇨병성 망막증과 같은 안질환 환자에서 개선을 달성하였다. 그러나, 하나의 인자만을 목표로 삼은 경우 만족스러운 장기적 결과를 얻지 못하였다(Ebenezer D et al., Ophthalmology 121: 656-666, 2014; Maguire MG et al., Ophthalmology 123: 1751-1761, 2016).

섬유성 반응의 여러 단계에서 다수의 성장 인자 신호 전달 경로를 억제하는 것이 훨씬 더 나은 전략일 수 있다. 다중 키나아제 억제제를 사용하는 경우, 장기적인 결과가 개선될 수 있다. 그러나, 몇몇 다중 키나아제 억제제 및/또는 병용 요법은 황반 변성 질환(Kudelka M et al., Expert Rev Ophthalmol. 8: 475-484, 2013) 및 특발성 폐섬유증(Grimminger F et al., Eur. Respir. J. ERJ Express, March 5, 2015; Richeldi L et al., The Lancet, March 29, 2017)을 포함한 섬유증 질환에서 효능을 나타내지 않았다.

선행 기술의 키나아제 억제제가 일부 안질환의 치료에서 어느 정도의 성공을 보이고 있지만, 안구 섬유증을 치료하기 위한 치료제가 여전히 필요한 실정이다.

본 발명의 구현예는 특정 범위의 다중 키나아제 억제제 활성을 갖는 제제를 제공한다. 이러한 다중 키나아제 억제제는 동물 및 인간의 질환 상태, 장애 및/또는 외과적 처치와 관련될 수 있는 안구 섬유증의 치료에 유용하다. 본 발명의 구현예는 또한 이러한 화합물 또는 조성물의 치료적 또는 예방적 용도, 및 질환 상태, 장애 및 외과적 처치와 관련될 수 있는 안구 섬유증을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.

일 측면에서, 본 발명은 다중 키나아제 억제제의 치료적 유효량을 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간 대상 또는 동물에게 투여함으로써 안구 섬유증을 치료 및/또는 예방하기 위한 방법을 제공하며, 여기에서 상기 다중 키나아제 억제제는 닌테다닙 및/또는 렌바티닙을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 구현예는 섬유증과 관련된 질환 상태, 장애 및 외과적 처치를 예방 및/또는 치료하는 것에 관한 것이다.

본 발명은 특히 인간 및 동물에서의 안구 섬유증과 관련된 질환의 생성을 예방 또는 치료하는 것에 관한 것이다.

본 발명의 구현예에 따르면, 본 발명의 방법은 섬유증과 관련된 질환 상태, 장애 및 외과적 처치를 치료 또는 예방하기 위한 다중 키나아제 억제제를 투여하는 것을 포함하며, 여기에서 상기 다중 키나아제 억제제는 닌테다닙 및/또는 렌바티닙을 포함할 수도 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일부 구현예에 따르면, 본 발명의 화합물/분자는 질환을 치료하기 위해 비경구 주사, 근육내 주사, 피하 주사, 안구 주사, 국소 주사, 안구내 주사, 유리체내 주사, 병변내 주사, 결막하 주사 및 테논낭하(sub-tenon) 주사, 그리고 점안액, 스프레이, 접착제 및 임플란트를 통한 약물 전달 및 소관내 전달(intra-canalicular delivery)에 의해 투여될 수 있다.

액상 조성물은 용액, 현탁액 및 유화액을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 투여에 적합한 액상 제제의 예는 활성 화합물/분자의 멸균수 또는 프로필렌 글리콜 수용액이다.

상기 표적은, 손상된 각막 투명성, 각막 반흔 형성, 이차성 백내장 형성, 녹내장 여과 수술, 눈의 외과적 처치 및 임플란트, 굴절교정 레이저각막절제술, 레이저 각막절삭가공성형술, 망막앞 및 망막바깥 막의 형성 및 수축, 증식성 유리체망막병증, 증식성 당뇨망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 망막하 섬유증/반흔, 망막 신경아교증, 맥락막 형성, 연령 관련 황반 변성 및 망막 정맥 폐색증과 관련된 눈 관련 질환/장애 및 안구 수복/상처 치유를 위한 상기 방법으로 치료할 수 있다.

도 1은 토끼 각막 봉합사 모델에서의 본 발명의 구현예에 따른 닌테다닙, 소라페닙 및 렌바티닙에 의한 각막 혈관 신생의 억제를 나타낸다.
도 2는 토끼의 각막 봉합사-유도된 섬유증 모델에서의 닌테다닙 및 렌바티닙에 의한, 그러나 소라페닙에 의한 것은 아닌 섬유 증식증, 콜라겐 밀도 및 알파 SMA(평활근 액틴)의 억제를 나타낸다.
도 3은 녹내장 여과 수술 토끼 모델에서의 대표적인 결막 여과포 형성을 나타낸다.
도 4는 녹내장 여과 수술 토끼 모델에서 다중 키나아제 억제제가 여과포 생존에 미치는 치료 효과를 나타낸다.
도 5는 토끼 피부 상처 모델에서 다중 키나아제 억제제가 TGF 베타1 mRNA 발현에 미치는 효과를 나타낸다.
도 6은 레이저 치료 2주 후 눈의 대표 이미지를 나타낸다. 도 6(A): 형광 안저 조영술; 도 6(B): 이소렉틴 B4; 도 6(C): 이소렉틴 B4/DAPI.

본 발명의 구현예는 눈에서 발생하는 섬유증(즉, 안구 섬유증)을 예방 및/또는 치료하는 것에 관한 것이다. 상기 섬유증은 다양한 눈 질환 또는 장애와 연관될 수 있다. 이러한 장애에는 외과적 처치의 바람직하지 않은 결과로 인한 장애가 포함된다. 본 발명의 구현예에 따르면, 눈 질환 또는 장애와 연관될 수 있는 안구 섬유증을 치료하기 위한 방법은, 선택된 키나아제, 예를 들어 VEGF 및 TGF 베타를 억제하는 데 선택된 범위의 활성을 갖는 다중 키나아제 억제제를 포함하는 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 대상에게 제공하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다중 키나아제 억제제 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 본 명세서에서, 용어 "다중 키나아제 억제제"는 다수의 키나아제를 억제할 수 있는 억제제를 의미한다. 본 명세서에서, 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 모 화합물의 산 또는 염기 염을 제조함으로써 모 화합물이 개질된, 개시된 화합물의 유도체를 의미한다.

약학적으로 허용 가능한 염의 예에는 아민과 같은 염기성 잔기의 무기 또는 유기산염; 카르복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기염 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 약학적으로 허용가능한 염은 예를 들어 비독성 무기 또는 유기산으로부터 형성된, 모 화합물/분자의 통상적인 무독성염 또는 4급 암모늄염을 포함한다. 예를 들어, 이러한 통상적인 무독성염은 무기산, 예를 들어 염산으로부터 유도된 염을 포함할 수 있다.

일부 구현예에 따르면, 본 발명은 또한 활성 성분으로서 본 발명의 화합물/분자 중 하나 이상 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 함유하는 약학적 조성물을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 발명의 화합물/분자는 비경구, 근육내, 피하, 안구, 국소, 안구내, 유리체내, 병변내, 결막하 및 테논낭하 주사 경로로 투여될 수 있다.

특정 환자에게 가장 적합한 개별 섭생법 및 투여량을 결정할 때, 투여량은 투여 경로, 질환의 중증도, 환자의 연령 및 체중 및 주치의가 일반적으로 고려하는 다른 요인에 따라 결정된다. 즉, 치료적 유효량은 환자(연령, 성별, 체중 등), 질환 상태, 투여 경로 등에 기초한다. 당업자는 독창적인 노력 없이 치료적으로 유효한 투여량을 결정할 수 있을 것이다.

본 발명의 구현예에 따르면, 투여 섭생법은 (유도) 수술 전, 수술 후(외상/급성 염증, 증식, 성숙을 통한 재형성시 또는 그 이전)일 수 있다.

본 발명의 구현예에 따르면, 본 발명의 화합물/분자로부터 약학적 조성물을 제조하기 위한 불활성의 약학적으로 허용가능한 담체는 고체 또는 액체일 수 있다.

조성물이라는 용어는 활성 성분 또는 약학적으로 허용가능한 염과 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제의 제형을 포함하는 것으로 의도된다.

액상 조성물은 용액, 현탁액 및 유화액을 포함한다. 비경구 투여에 적합한 액상 제제의 예로서, 활성 화합물/분자의 멸균수 또는 프로필렌 글리콜 수용액을 들 수 있다. 액상 조성물은 또한 폴리에틸렌 글리콜 수용액 중의 용액으로 제형화될 수 있다. 경구 투여용 수용액은, 활성 성분을 물에 용해시키고, 적절한 착색제, 향미제, 안정화제 및 증점제를 필요한 만큼 첨가함으로써 제조할 수 있다. 경구용 수성 현탁액은, 미분된 활성 성분을 천연 합성 고무, 수지, 메틸 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스 및 제약 제제 분야에 공지된 다른 현탁제와 같은 점성 물질과 함께 물에 분산시킴으로써 제조할 수 있다.

상기 약학적 조성물은 단위 투여 형태(unit dosage form)일 수 있다. 이러한 형태에서, 상기 조성물은 적절한 양의 활성 성분을 함유하는 단위 투여량으로 나누어진다. 상기 단위 투여 형태는 분리된 양의 제제를 함유하는 패키지로 패키징된 제제일 수 있다.

조성물은 임의의 적합한 경로 및 투여 수단을 위해 제형화될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는 비경구 투여에 적합한 제형에 사용되는 것들을 포함한다. 상기 제형은 단위 투약 형태로 편리하게 제공될 수 있으며, 약학 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.

하기 실시예를 통해 본 발명의 구현예를 예시하고자 한다. 당업자는 이들 실시예가 단지 예시를 위한 것이며, 본 발명의 범위에서 벗어나지 않으면서 기타 개량 및 변경이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다.

실시예 1

눈에 상처를 입힌 후의 시험 화합물의 항-섬유화 효과를 조사하기 위해, 봉합사-유발된 안구 섬유증 모델을 사용하였다. 현미경을 사용하여 토끼의 각막 기질내로 봉합사를 삽입하였다. 각 눈에서, 각막 중심에 대해 이측에 수직으로 한 개의 9-0 실크 봉합사를 삽입하고, 각막 중심에 대해 비측에 제2 봉합사를 삽입하였다. 각 봉합사는 가장자리로부터 약 2 mm 떨어진 두 곳에서 기질을 침습하였다. 특정 범위의 다중 키나아제 억제 활성을 갖는 시험 화합물 및/또는 담체를 수술 다음날부터 10일 동안 매일 3회씩 각 눈에 35 ㎕씩 국소 점적하였다. 처리군에는 담체(대조군), 닌테다닙(0.3%, w/w), 피르페니돈(1%, w/w), 리오시구아트(0.3%, w/w), 소라페닙(0.3%, w/w) 및 렌바티닙(0.3%, w/w)이 포함된다. 처리군 당 6개의 왼쪽 눈을 사용하였다.

전체적인 눈 관찰 결과, 살아 있는 동안 모든 처리군(대조군 포함)에서 매우 경미한 수준 내지 보통 수준의 결막 충혈 및 부종이 유사하게 나타났으며, 예외적으로 리오시구아트 처리군에서는 10일 관찰 기간 동안 약간 더 중증의 반응이 발생하는 경향이 있었다. 동물을 11일째에 희생시키고 눈을 적출하여 조직 병리학적 평가를 위해 해부하였다.

결과는, 렌바티닙, 닌테다닙 및 소라페닙이 각막 표면의 혈관 신생 영역을 감소시키는 데 효과적임을 나타낸다(도 1). 또한, 조직학적 염색, 예를 들어 주변의 결합 조직, 특히 섬유성 반응의 콜라겐 형성으로부터 세포를 구별하는 데 사용되는 H&E 및 마손 트리크롬 프로토콜(Masson's trichrome protocol)에서 입증된 바와 같이, 닌테다닙 및 렌바티닙은 섬유 증식증 및/또는 콜라겐 밀도를 현저히 감소시켰다(도 2). 반면, 소라페닙은 섬유 증식증 또는 콜라겐 형성에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않았다. 또한, 닌테다닙과 렌바티닙은 면역 조직 화학 분석에서 알파 SMA(평활근 액틴) 염색을 현저하게 감소시켰다. 알파 SMA는 근섬유 아세포의 주요 마커이며, 상처 치유 및 세포외 기질 형성에서의 근섬유 아세포의 기능은 섬유성 질환과 연관되어 있다. 한편, 소라페닙은 담체 처리에 비해 알파 SMA에 영향을 미치지 않았다(도 2).

연구 결과는, 닌테다닙과 렌바티닙에 의한 혈관 신생, 섬유 증식증, 콜라겐 관련 물질 및 SMA에서의 조직학적 감소를 나타낸다. 또한, 이 연구로부터의 결과는 모든 다중 키나아제 억제제가 섬유성 조직 반응을 치료하는데 효과적이지는 않다는 것을 보여준다. 특히, 닌테다닙과 렌바티닙은 효과적이지만, 소라페닙은 효과적이지 못하다.

실시예 2

안과 수술 후 국소 적용된 시험 화합물의 항-반흔 효과를 조사하기 위해 토끼 눈에 녹내장 여과 수술을 수행하였다. 수술 후 결막하 상처 치유는 인간에서의 녹내장 여과 수술 후 후기 여과포 부전의 주요 원인이다. 선택된 다중 키나아제 억제제에 대해 시간 경과에 따른 여과포 생존에 대한 효과를 시험하였다. 수술 후 결막하 섬유증의 억제는 여과포 생존율을 향상시킨다. 담체를 음성 대조군으로 사용하고 피르페니돈을 양성 대조군으로 사용하였다.

윤부 뒤쪽에서 시작하여 전방에서 캐뉼라가 보일 때까지 계속해서 공막을 통해 비스듬한 22-게이지 정맥 캐뉼라를 삽입하여 왼쪽 눈 상측에 공막관을 형성하였다. 배치 전에 캐뉼라를 소듐 헤파린(1000 단위)으로 플러싱하였다. 캐뉼라 바늘을 빼내고 캐뉼라를 동공연을 지나 전진시켜 튜브로 인한 홍채 막힘을 방지하였다. 캐뉼라를 약 2 mm 잘라내고 봉합사를 사용하여 공막에 고정시켰다. 테논과 결막 모두 9-0 프롤렌(Prolene)으로 봉합하였다. 군당 6 마리의 토끼를 사용하였고, 각 토끼의 왼쪽 눈에 녹내장 여과 수술을 실시하였다. 처리군에는 음성 대조군으로 담체, 양성 대조군으로 피르페니돈(1%, w/w), 소라페닙(0.3%, w/w) 및 렌바티닙(0.3%, w/w)이 포함된다. 수술 후 30일 동안 하루 3회 점안액(35 μL)을 눈에 국소 적용하였다. 모든 동물은 30일째에 희생시켰다.

안과 검사는, 수술된 눈에서 높은 전체 안구 검사 점수(수정된 Hackett and McDonald 안구 등급 체계를 기준으로 함)를 나타내었다. 연구 기간 동안 여과포를 모니터링하였다. 보정된 캘리퍼를 사용하여 여과포 체적을 측정하였다. 전체 여과포 체적은 2일째에 균일하게 증가하였고, 4일째에는 체적이 크게 감소하였다. 7일째에 각 군간에 현저한 차이가 확인되었고, 여과포의 대부분은 14일째 내지 30일째까지 사라졌으며, 이는 결막하 반흔으로 인한 여과포 부전을 나타낸다. 담체 및 피르페니돈 군의 결과는 문헌에서 보고된 바와 유사하였다(Zhong H et al., Invest Ophthalmol Vis Sci, 52: 3136-3142, 2011). 도 3은 1일 3회 0.3% 소라페닙으로 처리한 눈에서의 4일째의 대표적인 여과포를 나타낸다.

시간의 경과에 따라 여과포를 모니터링하였을 때, 담체 및 소라페닙 군과 비교하여, 피르페니돈(양성 대조군) 및 렌바티닙 처리는 7일째에 여과포 생존을 유지했다(도 4).

14일째에, 소라페닙으로 처리된 모든 눈에서 여과포 부전이 나타났다. 30일째에, 담체 및 피르페니돈으로 처리된 모든 눈은 여과포 부전을 보였으나 렌바티닙 처리군에서는 여전히 여과포가 존재하였다(6마리 중 1마리).

이러한 결과들은, 특정 다중 키나아제 억제제, 예를 들어 소라페닙이 아닌 렌바티닙을 사용한 치료가 안과 수술과 관련된 결막하 반흔 모델에서 안구 섬유증을 억제할 수 있음을 나타낸다.

실시예 3

모든 다중 키나아제 억제제가 안구 섬유증의 치료 또는 예방에 효과적이지는 않다는 사실은, 유효 화합물이 섬유증의 다수의 단계를 저해해야 함을 시사한다. 본 발명자들은 TGF 베타가 관련되어 있을 수 있다고 추측한다. 섬유증은 질환, 외상, 유전 장애 또는 감염과 관련된 조직에서 후기 반응성 및/또는 수복 반응이다. 관련된 장기 또는 조직과 상관없이, 섬유증의 병태 생리학에는 강하게 중복되는 부분이 존재한다. 따라서 TGF 베타 억제가 필요한지 여부를 시험하기 위해, 보다 편리한 피부 상처 모델을 사용하였다.

토끼의 전층 피부 상처에서 시험 화합물을 검사하였다. 이 연구에서는 체중이 3.03 kg 내지 3.40 kg인 수컷 뉴질랜드 흰 토끼 7마리를 사용하였다. 8 mm 피부 펀치 생검을 사용하여 두 귀의 앞면에 4개의 상처를 입혔다. 수술 후 15일째 및 29일째에 닌테다닙(1.0%, w/w), 렌바티닙(1.0%, w/w) 및 소라페닙(1.0%, w/w)을 0.05 ㎖ 피내 또는 병변내 주사로 투여했다. 시험 제제의 최종 투여 후 14일째에 동물을 안락사시켰다. 외상 부위를 수집하고 반으로 나누었다. 절반은 조직학 검사를 위해 포르말린에 보존하고, 나머지 절반은 TGF 베타 분석을 위해 동결하였다.

조직 H&E 염색은 염증 및 혈관 신생에 대해 반정량적으로(semi-quantitatively) 평가하였다. 조직 섬유증 및 콜라겐 조직을 마손 트리크롬 염색으로 평가하였다. 시험 물품이 투여된 4곳의 피내 부위의 점수를 평균하였다. 대부분의 반흔 조직은 혈관 신생, 섬유 아세포 증식증, 콜라겐 붕괴 및 재상피화로 구성되었다.

시험 화합물 닌테다닙(표 1)은 미처리된 상처에 비해 훨씬 적은 혈관 신생 및 거의 동일한 섬유증을 나타내었다. 실험군 상처의 총 평균 점수는 미처리된 상처보다 1.5 낮았다. 전반적으로, 실험군 부위는 대조군 부위와 비교하여 반흔 형성이 적었다.

시험 화합물 소라페닙(표 2)의 경우, 대조군 부위에 비해 혈관 신생이 약간 증가하였으며 섬유증은 유사하거나 더 증가하였다. 전반적으로, 상기 시험 화합물은 미처리 상처 부위에 비해 반흔 형성을 감소시키지 않은 것으로 나타났다.

시험 화합물 렌바티닙(표 3)은 대조군 상처 부위에 비해 섬유증을 감소시킨 것으로 나타났다. 처리 부위의 총 점수는 대조군 상처보다 0.5 낮았다.

처리된 외상 시료에서의 TGF-β mRNA 발현을 미처리 시료에서의 발현과 비교하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다. 일반적으로, 닌테다닙 및 렌바티닙 처리된 시료의 TGF-β mRNA 발현의 평균 집단은 처리되지 않은 외상 시료에서의 발현 수준보다 낮다. 반면, 다중 키나아제 억제제인 소라페닙으로 처리된 동물로부터의 시료는 처리되지 않은 외상 시료와 유의하게 상이한 평균 TGF-β 발현 수준을 나타내지 않았다. 이러한 결과는 효과적인 안구 섬유증 억제제가 TGF-β의 발현을 억제할 것이라는 본 발명자들의 예측을 뒷받침한다.

이러한 데이터는 닌테다닙과 렌바티닙이 질환 상태, 장애 및 외과적 처치와 관련된 안구 섬유증을 치료하는데 필요한 특정 범위의 다중 키나아제 억제 활성을 갖고 있다는 사실을 뒷받침한다. 특히, 상기 특정 범위의 다중 키나아제 억제는 TGF-β의 신호 전달 경로의 억제를 포함한다.

실시예 4

또한, C57BL/6 마우스의 망막하 섬유증 모델에서 시험 화합물의 항-섬유화 효과를 평가하였다. 레이저 광응고술(응고점 크기 75 ㎛, 지속 시간 0.1초, 90 ㎽, OcuLight TX 532 nm)을 사용하여 연구되는 눈의 부르크막(Bruch's membrane)에 3 내지 5개의 병변을 생성하였다. 레이저 적용 후 5 내지 7일째에 망막하 섬유증이 형성되기 시작하였다. 특정 범위의 다중 키나아제 억제 활성을 갖는 시험 화합물 또는 담체를 레이저 적용 당일에 유리체 내로 주사하였다. 시험 화합물의 투여 농도는 1%(w/w)의 닌테다닙 및 렌바티닙이었다. 대조군은 담체 및 마우스 VEGF164 항체였다. 처리군 당 12마리의 마우스가 사용되었다. 대략 1 ㎕의 각 시험 화합물, 담체 또는 양성 대조군을 각 동물의 오른쪽 눈에 유리체 내로 주사하였다. 15일째 및 35일째에 형광 조영술로 눈을 검사한 후 안구 적출술을 시행하였다. 해부된 맥락막에 대한 면역 염색법을 이용하여 망막하 섬유증을 평가하였다(예를 들어, 콜라겐 1, 이소렉틴 B4 및/또는 DAPI). 사용된 일차 항체는 형광 접합된 이소렉틴 B4(FITC-접합된 이소렉틴 B4) 및 항-콜라겐 유형 I 항체였다. 형광 안저 조영술, 이소렉틴 B4 및 DAPI의 대표적인 이미지를 도 6에 도시하였다. 항-VEGF 처리는 담체 처리군에 비해 망막하 섬유증에 현저한 영향을 미치지 않았다. 닌테다닙과 렌바티닙은 모두 신생 혈관 병변 크기에 있어 현저한 감소를 나타내었다. 연구 결과는, 렌바티닙과 닌테다닙은 망막하 섬유증의 치료에 치료 효과가 있음을 나타내었다. 따라서, 이들 화합물은 증식성 망막 질환과 관련된 망막하 섬유증을 치료하는 데 사용될 수 있다.

실시예 5.

10일간의 본 연구의 목적은 눈에 국소 점적하여 닌테다닙과 렌바티닙(0.3% w/w)을 투여한 경우의 국소 내성과 안구 분포를 평가하는 것이었다. 처리군 당 5 내지 7마리의 수컷 뉴질랜드 흰 토끼를 사용하였다. 각 눈에 담체, 닌테다닙(0.3% w/w) 또는 렌바티닙(0.3 %)의 점안액 35 ㎕를 매일 3회 10일간 투여하였다. 11일째에 마지막 투여 후, 동물을 희생시키고 눈을 적출하여 혈장 및 안구 조직을 수집하였다. 이들 화합물의 조직 및 혈장 농도를 LC-MS/MS로 측정하였다.

다양한 조직에서의 이들 화합물의 안구 조직 농도를 표 4 및 표 5에 나타내었다. 0.3% w/w의 닌테다닙과 렌바티닙을 국소 점적한 경우, 토끼의 결막과 각막의 전방 조직에 높은 약물 농도를 전달하였으며 맥락막과 망막에서 유의한 농도를 나타내었다. 이러한 수준의 약물 노출이 눈에 유지되었을 때, 매우 경미한 수준 내지 보통 수준의 결막 충혈 및 부종이 관찰되었다. 이러한 충혈 및 부종의 범위는 10일 간의 관찰 기간 동안 실험군(담체 대조군 포함) 간에 유사했다.

닌테다닙의 11일째 혈장 농도 평균(±SD)은 측정 가능한 한계치 미만이었으며, 이의 대사 산물의 경우 1.09(±0.14) ng/㎖이었고, 렌바티닙의 경우 98.5(±11) ng/㎖이었다.

실시예 7. 토끼 눈에 안과용 점안액으로서의 소라페닙 및 렌바티닙을 국소 점적한 후의 안구 조직 내의 분포.

본 연구의 목적은 눈에 국소 점적하여 소라페닙과 렌바티닙(0.3% w/w)을 투여한 경우의 국소 내성과 안구 분포를 평가하는 것이었다. 처리군 당 5 내지 6마리의 수컷 뉴질랜드 흰 토끼를 사용하였다. 오른쪽 눈 각각에 담체, 소라페닙(0.3% w/w) 또는 렌바티닙(0.3% w/w)의 점안액 35 ㎕를 매일 3회 5일간 투여하였다. 투여 5일째에, 동물을 희생시키고 눈을 적출하여 혈장 및 안구 조직을 수집하였다. 화합물의 조직 및 혈장 농도를 LC-MS/MS로 측정하였다.

연구 과정 동안 연구군의 동물은 정상적인 체중 증가를 보였다. 오른쪽 눈의 안구 검사에서는 유의한 발견이 나타나지 않았다. 모든 군의 모든 동물에서의 전체적인 평균 검사 점수는 연구 기간 동안 기준치와 가까웠다. 토노베트 프로브(Tonovet probe)를 사용하여 안압(IOP)을 측정하였다. 6회 연속적으로 측정하였고, 디스플레이 상에 나타난 평균 안압을 기록하였다. 실험 기간 동안 모든 군에서 오른쪽 눈의 안압이 기준치보다 약간 높게 유지되었다.

이들 약물에 대한 안구 조직 농도를 표 6 및 표 7에 나타내었다. 0.3% w/w의 소라페닙과 렌바티닙을 국소 점적한 경우, 토끼의 결막, 공막 및 각막의 전방 조직에 높은 약물 농도를 전달했으며 맥락막과 망막에서 유의한 농도를 나타냈다.

투약 5일째의 혈장 농도 평균(±SD)은 소라페닙의 경우 5.09(±1.27) ng/mL이었고 렌바티닙의 경우 131(±24) ng/㎖이었다.

결막 및 각막을 포함한 전안부 조직에서의 소라페닙과 렌바티닙의 농도는 높았으며 기본적으로 동일했다. 이 결과들은, 동물 효능 모델에서 눈에 대한 국소 투여에 의한 차이점이 약동학 프로파일 때문이 아니라 약리학적 활성의 차이 때문이라는 결론을 뒷받침한다.

상기 실시예는 본 발명의 화합물의 안과적 적용이 치료적 효과를 나타내기에 충분한 농도를 달성할 수 있음을 보여준다.

본 발명의 구현예를 제한된 수의 실시예로 예시하였지만, 당업자는 본 발명의 범위에서 일탈함이 없이 기타 개량 및 변경이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 따라서, 본 발명의 보호 범위는 첨부된 청구 범위에 의해서만 한정되어야 한다.

Claims (9)

1. 눈 관련 질환 또는 장애와 관련된 섬유증을 예방 및/또는 치료하기 위한 방법으로서, 다중 키나아제 억제제의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 눈 관련 질환 또는 장애와 관련된 섬유증을 예방 및/또는 치료하기 위한 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 다중 키나아제 억제제는 닌테다닙, 렌바티닙 및 이들의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인, 방법.
3. 제1항에 있어서, 상기 다중 키나아제 억제제가 닌테다닙 또는 그의 염인, 방법.
4. 제1항에 있어서, 상기 다중 키나아제 억제제가 렌바티닙 또는 그의 염인, 방법.
5. 제1항에 있어서, 상기 눈 관련 질환 또는 장애는 손상된 각막 투명성, 각막 반흔 형성, 이차성 백내장 형성, 녹내장 여과 수술, 눈의 외과적 처치 및 임플란트, 굴절교정 레이저각막절제술, 레이저 각막절삭가공성형술, 망막앞 및 망막바깥 막의 형성 및 수축, 증식성 유리체망막병증, 증식성 당뇨망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 망막하 섬유증/반흔, 망막 신경아교증, 맥락막 형성, 연령 관련 황반 변성 및 망막 정맥 폐색증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
6. 제1항에 있어서, 상기 눈 관련 질환 또는 장애는 손상된 각막 투명성, 각막 반흔 형성, 이차성 백내장 형성, 녹내장 여과 수술, 눈의 외과적 처치 및 임플란트, 굴절교정 레이저각막절제술, 레이저 각막절삭가공성형술, 망막앞 및 망막바깥 막의 형성 및 수축, 증식성 유리체망막병증, 망막하 섬유증/반흔, 망막 신경아교증 및 맥락막 형성으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
7. 제1항에 있어서, 상기 눈 관련 질환 또는 장애는 손상된 각막 투명성, 각막 반흔 형성, 굴절교정 레이저각막절제술 및 레이저 각막절삭가공성형술로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
8. 제1항에 있어서, 상기 눈 관련 질환 또는 장애는 이차성 백내장 형성, 녹내장 여과 수술 및 눈의 외과적 처치 및 임플란트로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
9. 제1항에 있어서, 상기 눈 관련 질환 또는 장애는 망막앞 및 망막바깥 막의 형성 및 수축, 증식성 유리체망막병증, 망막하 섬유증/반흔, 망막 신경아교증 및 맥락막 형성으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.

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