KR20180021864A - 장기 이식에서 사용하기 위한 유형 ii 항-cd20 항체 - Google Patents

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폴 브루네타
도미니크 보리
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 개시내용은, 특히, 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여함으로써, 장기 이식(예컨대, 신장 이식)이 필요한 개체를 치료하기 위한 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 동종이계항체, 패널 반응성 항체 (PRA), 및/또는 이식편 거부반응의 위험을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로 이식 이전 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 용량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

Description

장기 이식에서 사용하기 위한 유형 II 항-CD20 항체
관련 출원과의 상호 참조
본원은 2015년 6월 29일 월요일자로 출원된 미국 가출원 시리즈 번호 62/186,303의 우선권 이점을 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 편입되어 있다.
ASCII 텍스트 파일 상에서의 서열목록 제출
ASCII 텍스트 파일 상에서의 하기 제출된 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF) (파일명: 146392032340SeqList.txt, 기록된 날짜: 2016년 6월 22일 수요일, 크기: 36 KB).
기술 분야
본 개시내용은 장기 이식 (예를 들면, 신장 이식)의 분야에 관한 것이다. 특히, 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여함으로써 이식을 필요로 하는 개체를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다.
신장 이식은 말기 신장 질환 (ESRD)을 가진 환자가 선택하는 치료이다. 이식 수용자는 장기간 투석으로 ESRD 환자에 비교하여 평균적으로 크게 개선된 삶의 질, 장기적인 생존, 및 감소된 전체 비용을 누린다. 그러나, 이식편에서 기원하는 외래 항원 (예컨대 HLA 항원)에 대한 이식 수용자에서 동종이계항체는 즉각적인 및 치명적인 이식편 거부반응으로 이어질 수 있고, 이는 타가이식의 성공에 대한 주요 장애점을 제공한다. 따라서, 이식 공동체(transplant community)는 유망한 수용자에 대한 이용가능한 이식편의 배정에 대하여 교차-매칭 절차를 엄격히 채택하고 있다. 후보자에서 이식 부전의 위험 평가를 위한 통상 실시는 패널 반응성 항체 (PRA) 수준, 또는 후보자의 혈청(serume)이 반응하고 세포 사멸을 유도하는 공여자 림프구의 풀의 백분율을 계측하는 것이다.
20% 초과의 PRA를 가진 환자는 과잉감작된 이식 후보자로서 간주될 수 있고, 이들은 미국에서 대기 목록에 있는 모든 신장 이식 후보자의 대략 20%-30%를 나타낸다. 과잉감작된 환자에서 이식률은 비-감작된 환자에서 이식률의 단지 4분의 1이다. 이전의 장기 이식, 수혈, 및 임신은 모두 기존의 동종이계항체를 생기게 할 수 있고, 이식 후보자의 PRA 및 대기 시간을 증가시킬 수 있고, 이식후 이식편 생존의 기회를 감소시킬 수 있다. 과잉감작은 또한 다른 고형 장기 이식을 기다리는 환자 중에서 널리 퍼진 사안이다. 이런 취약 환자 집단에 미충족 의료 필요성이 분명히 존재한다.
다양한 탈감작 프로토콜은, 저용량 및 고용량 정맥내 면역글로불린 (IVIG), 혈장 교환 (PLEX), 및 B-세포-고갈 제제 (예컨대 리툭시맙) (Vo, A.A. and Jordan, S.C., Clinical and Experimental Immunology 178 (2014): 48-51)를 포함하는, 과잉감작된 신장 이식 환자 중에서 혼화성 공여자의 이용가능성을 최적화하기 위해 조사되고 있다. 이들 방법은 동종이계항체 및 동종특이적 B 세포 억제, 이로써 이용가능한 이식편에 적합의 더 높은 기회를 허용하기 위한 PRA 감소, 및 이식후 항체-매개된 거부반응 (AMR)의 발생빈도 감소를 목표로 한다.
고 PRA를 가진 이식 환자의 탈감작을 위하여 그리고 이식후 이식편 거부반응의 위험 감소를 위하여 유효하고 안전한 제제가 요구되고 있다.
본원에 개시된 모든 참고, 공보 및 특허 출원은 그 전체가 참고로써 본원에 통합되어 있다.
일부 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체를 치료하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서 장기 거부반응의 방지를 제공하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식을 수용하는 개체에서 장기 거부반응의 방지를 제공하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체의 생존을 연장하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서의 이식편 생존을 연장하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서의 이식편 기능을 개선하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서 동종이계항체의 수준을 감소시키기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서 패널 반응성 항체 (PRA)의 수준을 감소시키기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서 이식의 공산을 증가시키기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서 교차-매칭 혼화성을 증가시키기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 기타 양태에서, 장기 이식이 필요한 개체에서 이식편 거부반응의 공산을 감소시키기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 임의의 상기 구현예와 조합될 수 있는 일부 구현예에서, 장기 이식은 신장 이식이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 개체에서 동종이계항체의 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 개체에서의 패널 반응성 항체 (PRA)의 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 방법은 이식의 공산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 유형 II 항-CD20 항체의 투여 후 약 12개월 이내의 이식의 공산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 개체가 적합한 이식편 (예를 들면, 신장 이식편)을 수용하는 대기 시간을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 개체는 유형 II 항-CD20 항체의 수용의 부재 하에서 교차-매칭 비혼화성이었을 것인, 교차-매칭 혼화성 이식편 (예를 들면, 신장 이식편)을 수용한다. 일부 구현예에서, 동종이계항체의 수준을 감소시키는 것은, 장기 이식 후 개체 내 공여자-특이적 항체의 수준을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 동종이계항체의 수준 감소는 장기 이식 이후 이식편 거부반응의 위험을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 이식편 거부반응은 세포성 면역 반응, 체액성 면역 반응, 또는 둘 모두에 의한 급성 거부반응이다. 일부 구현예에서, 이식편 거부반응은 항체-매개된 거부반응 (AMR)이다. 일부 구현예에서, 방법은 이식편 생존을 연장시킨다. 일부 구현예에서, 방법은 이식편 기능을 개선시킨다. 일부 구현예에서, 방법은 개체의 전체 생존율을 연장시킨다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 용량이 장기 이식 이전에 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 약 1000mg이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 장기 이식 이전 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 제2 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 유형 II 항-CD20 항체의 제2 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 10 일 내지 약 18 일 또는 약 1 주 내지 약 3 주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 제2 용량은 약 1000mg이다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 제2 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 14 일 또는 약 2 주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 개체는, 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량의 투여로부터 약 6주 내지 약 52주 후 장기 이식을 수용한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 장기 이식 이전 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 제3 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 유형 II 항-CD20 항체의 제3 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 154 일 내지 약 182 일 또는 약 22 주 내지 약 26 주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 제3 용량은 약 1000mg이다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 제3 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 개체는, 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량의 투여로부터 약 28주 내지 약 52주 후 장기 이식을 수용한다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 제1 용량은 장기 이식 이전 개체에게 투여되고; 개체는 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량의 투여로부터 약 6 주 내지 약 52 주 후 장기 이식을 수용하고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 용량은 장기 이식과 동시에 개체에게 투여되고, 여기서 장기 이식과 동시에 개체에게 투여된 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식의 48 시간 이내 투여되고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 용량은 장기 이식 이후 개체에게 투여되고, 여기서 장기 이식 이후 개체에게 투여된 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 제1 용량은 장기 이식 이전 개체에게 투여되고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 제2 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 14 일 또는 약 2 주 후 개체에게 투여되고; 개체는 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량의 투여로부터 약 6 주 내지 약 52 주 후 장기 이식을 수용하고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 용량은 장기 이식과 동시에 개체에게 투여되고, 여기서 장기 이식과 동시에 개체에게 투여된 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식의 48 시간 이내 투여되고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 용량은 장기 이식 이후 개체에게 투여되고, 여기서 장기 이식 이후 개체에게 투여된 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 제1 용량은 장기 이식 이전 개체에게 투여되고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 제2 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 14 일 또는 약 2 주 후 개체에게 투여되고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 제3 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 개체에게 투여되고; 개체는 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량의 투여로부터 약 28 주 내지 약 52 주 후 장기 이식을 수용하고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 용량은 장기 이식과 동시에 개체에게 투여되고, 여기서 장기 이식과 동시에 개체에게 투여된 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식의 48 시간 이내 투여되고; 유형 II 항-CD20 항체의 약 1000 mg의 용량은 장기 이식 이후 개체에게 투여되고, 여기서 장기 이식 이후 개체에게 투여된 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 투여된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 추가로 장기 이식 이전 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 용량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, IVIG의 용량은 고용량이다. 일부 구현예에서, IVIG의 용량은 약 2g/kg이다. 일부 구현예에서, IVIG의 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 14 일 내지 약 28 일 또는 약 2 주 내지 약 4 주 후 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG의 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 21 일 또는 약 3 주 후 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 장기 이식 이전 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 제2 용량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, IVIG의 제2 용량은 고용량이다. 일부 구현예에서, IVIG의 제2 용량은 약 2g/kg이다. 일부 구현예에서, IVIG의 제2 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 35 일 내지 약 49 일 또는 약 5 주 내지 약 7 주 후 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG의 제2 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 42 일 또는 약 6 주 후 개체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 용량은 장기 이식과 동시에 개체에게 투여되며, 여기서 장기 이식과 동시에 개체에게 투여되는 유형 II 항-CD20 항체의 상기 용량은 장기 이식 48시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 장기 이식과 동시에 개체에게 투여되는 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 약 1000mg이다.
일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 용량이 장기 이식 이후에 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 이후에 개체에게 투여되는 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 약 1000mg이다. 일부 구현예에서, 장기 이식 후 개체에게 투여되는 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식으로부터 약 154 일 내지 약 182 일 또는 약 22 주 내지 약 26 주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 후 개체에게 투여되는 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 장기 이식으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 투여된다.
일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체는 인간의 것 또는 인간화된 것이다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체는 서열 번호: 1의 HVR-H1 서열, 서열 번호: 2의 HVR-H2 서열, 및 서열 번호: 3의 HVR-H3 서열을 포함하는 중쇄; 및/또는 서열 번호: 4의 HVR-L1 서열, 서열 번호: 5의 HVR-L2 서열, 및 서열 번호: 6의 HVR-L3 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체는 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체는 탈푸코실화된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다.
일부 구현예에서, 대상체는 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량 이전에 적어도 약 20%의 패널 반응성 항체 (PRA)를 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 말기 신장 질환을 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 사전에 장기 이식, 혈액 주입, 및 임신 중 하나 이상을 경험하였다.
본원에 기재된 다양한 구현예의 특성 중 하나, 일부 또는 전부가 조합될 수 있어 본 발명의 다른 구현예를 형성할 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명의 이들 및 다른 양태는 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 본 발명의 이들 및 다른 구현예는 후술하는 상세한 설명에 의해 추가로 기재된다.
도 1은 과잉감작된 신장 이식 환자에 있어서 정맥내 오비누투주맙 플러스 고 용량 정맥내 면역글로불린 (IVIG)을 조사하는 Ib 단계 임상 연구의 예시적인 연구 설계를 도시한다. 연구 설계는 실시예 1에 기재된다.
일 양태에서, 장기 이식(예컨대, 신장 이식)이 필요한 개체를 치료하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 개체에서의 동종이계항체 수준, 예컨대, 개체에서의 패널 반응성 항체 (PRA)의 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 1회 이상의 용량이 장기 이식 이전에 개체에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 장기 이식 이전 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 1회 이상의 용량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 용량이 장기 이식과 동시에 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 1회 이상의 용량이 장기 이식 이후에 개체에게 투여될 수 있다.
I. 일반적인 기술
본원에 기술 또는 참조된 기술 및 절차는, 본 분야의 숙련가에 의하여 기존의 방법, 예컨대 예를 들어, 하기 기술된 널리 이용되는 방법들을 사용하여 잘 이해되고, 통상적으로 채용될 것이다: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR : The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993).
II. 정의
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "이식편"은 수용자로의 이식을 위하여 공여자로부터 유래된 생물학적 물질을 지칭한다. 이식편은, 예를 들어, 단리된 세포 예컨대 소도 세포 및 신경-유래된 세포 (예를 들면 슈반(schwann) 세포), 조직 예컨대 신생의 양막, 골수, 조혈 전구체 세포, 및 장기 예컨대 피부, 심장, 간, 비장, 췌장, 갑상선 엽, 폐, 신장, 관형 장기 (예를 들면, 장, 혈관, 또는 식도), 등과 같은 상기 다양한 물질을 포함한다. 관형 장기는 식도, 혈관, 또는 담관의 손상된 부분을 대체하는데 사용될 수 있다. 피부 이식편은 화상을 위하여, 뿐만 아니라 손상된 장에 드레싱으로서 또는 특정 결함 예컨대 횡격막 탈장을 막기 위해 사용될 수 있다. 이식편은, 유래된 공여자가 죽었는지 살아있는지 간에, 인간을 포함하는, 임의의 포유동물 공급원으로부터 유래될 수 있다. 이식편은 고형 장기 예컨대 신장 또는 심장일 수 있다. 전형적인 장기 이식에서, 이식편의 공여자 및 이식편의 숙주 (즉 수용자)는 바람직하게는(preferrably) 이식 이전에 교차-매칭 혼화성이다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "공여자"는, 이식편이 유래되는, 죽은 또는 살아있는, 포유동물 종을 지칭한다. 바람직하게는, 공여자는 인간이다. 일반적으로, 인간 공여자는 물리적 시험에서 정상이고 동일한 주요 ABO 혈액형인 지원 혈액-관련된 공여자를 포함할 수 있다. 본 발명에서 고려된 인간 공여자는 또한, 비제한적으로, 수용자에 유전적으로 유사하지 않은 공여자, 및 치료 이전에 수용자와 교차-매칭 비혼화성 그러나 치료 또는 치료의 일부 이후 수용자(recipent)와 교차-매칭 혼화성 공여자를 포함할 수 있다.
용어 "이식" 및 이의 변형은, 이식이 동계 (공여자 및 수용체가 유전적으로 동일한 경우), 동종이계 (공여자 및 수용체가 상이한 유전적 기원이지만, 동일한 종인 경우), 또는 이종 (공여자 및 수용체가 상이한 종에서인 경우)이든, 숙주 (즉 수용자) 속에 이식편의 삽입을 지칭한다. 따라서, 전형적인 시나리오에서, 숙주는 인간이고 이식편은, 동일한 또는 상이한 유전적 기원의 인간으로부터 유래된, 동종이식편이다. 또 다른 시나리오에서, 이식편은 인간 수용자 숙주 속에 이식된 개코원숭이 심장처럼 이식되는 것과 상이한 종으로부터 유래되고, 계통발생적으로 널리 분리된 종으로부터 동물, 예를 들어, 돼지 심장판막, 또는 동물 베타 소도 세포 또는 인간 숙주 속에 이식된 신경 세포를 포함한다.
용어 "동종이계항체"는 동일한 종의 동종이계항원 또 다른 개체와 반응하는 1종의 개체에 의해 생산된 항체를 지칭한다. "동종이계항원"은 동일한 종의 상이한 개체내 동일한 유전자좌에서 암호화된 대립유전자 형태로 존재하는 항원이다. 면역 반응은 외래 물질에서 그리고 숙주에서 고도로 다형성된 유전자의 생성물 사이 차이 때문에 동종이계항원에 의해 유발될 수 있다. 동종이계항원의 주요 공급원은, 주조직 적합성 복합체 (MHC) 분자로서 또한 공지된, 인간 백혈구 항원 (HLA) 분자이다.
용어 "교차-매칭"은, 예를 들어, 공여자 세포에 대한 수용체의 혈청의 반응성에 의해 실증된 바와 같이, 공여자와 장기 이식내 유망한 수용자 사이 혼화성을 계측하는 시험을 지칭한다. 양성 교차-매칭은 공여자와 유망한 수용자 사이 비혼화성을 나타내고, 음성 교차-매칭은 공여자와 유망한 수용자 사이 혼화성을 나타낸다. 예시적인 교차-매칭 시험은, 비제한적으로, 공여자-특이적 유동-혈구산출 교차-매칭, 보체-의존적 세포독성 교차-매칭, 및 T-세포 보체-의존적 세포독성 패널-반응성 항체 검정을 포함할 수 있다. 교차-매칭 및 예시적인 교차-매칭 시험의 더욱 상세한 설명에 대하여, 다음을 참고한다: 예를 들면, Mulley, W.R. and Kanellis, J. (2011) Nephrology 16:125-33.
용어 "항체"는 단클론성 항체(면역글로불린 Fc 영역을 갖는 전장 항체를 포함하는), 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체, 디아바디, 및 단일-쇄 분자, 뿐만 아니라 항체 단편 (예컨대, Fab, F(ab')2, 및 Fv)를 포함한다. 달리 구체화되지 않는 한 (예컨대 용어 "정맥내 면역글로불린 (IVIG)"에서 사용될 때), 용어 "면역글로불린" (Ig)은 본원에서 "항체"와 상호교환적으로 사용된다.
기본적인 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 이루어진 이종사량체 당단백질이다. IgM 항체는 J 쇄로 불리우는 추가 폴리펩티드와 함께 염기성 이종사량체 단위 중 5개로 구성되고, 10개의 항원 결합 부위를 함유하며, 한편 IgA 항체는 중합하여 J 쇄와 조합된 다가 집합체를 형성할 수 있는 염기성 4-쇄 단위의 2 내지 5개를 포함한다. IgG의 경우에, 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 H 쇄에 연결되어 있고, 2개의 H 쇄는 H 쇄 이소형에 따라 하나 이상의 이황화 결합에 의해 서로 연결되어 있다. 각각의 H 및 L 쇄는 또한 일정하게 공간 배치된 내부쇄 이황화 가교를 갖는다. 각각의 H 쇄는 N 말단에서 가변 도메인(VH)에 이어서 α 및 γ 쇄의 각각에 대한 3개의 불변 도메인(CH) 및 μ 및 ε 이소형에 대한 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N 말단에서, 가변 도메인(VL)에 이어서 이의 다른 말단에 불변 도메인을 갖는다. VL 은 VH 와 함께 정렬되고 CL 은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 함께 정렬된다. 특정 아미노산 잔기들은 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 사료된다. VH 와 VL 이 함께 쌍형성되는 것은 단일 항원 결합 부위를 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 성질에 대해서는 예를 들어, 하기를 참고한다: Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 페이지 71 및 챕터 6. 임의의 척추동물 종 유래의 L 쇄는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파 및 람다로 불리우는 2개의 명백히 구분되는 유형 중 하나로 배정될 수 있다. 그들의 중쇄의 불변 도메인 (CH)의 아미노산 서열에 따라서, 면역글로불린은 상이한 "부류" 또는 이소형으로 지정될 수 있다. 5개 주요 부류의 면역글로불린이 있다: α, δ, ε, γ 및 μ, 각각으로 지정된 중쇄를 갖는, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM. γ 및 α 부류는 추가로, CH 서열 및 기능의 상대적으로 미세한 차이를 기준으로 하여, 하위부류, 예컨대, 하기 하위부류를 발현하는 인간으로 나눠진다: IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 "VH " 및 "VL ",각각으로 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 항체 (상동한 부류의 기타 항체와 비교하여) 의 가장 가변적인 부분이며, 항원-결합 부위를 함유한다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 분절에서 항체 간 서열이 항체 중 차례로 광범위하게 상이한 사실을 지칭한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고, 이의 특정 항원에 대해 특정 항체의 특이성을 정의한다. 그러나 가변성은 전체 가변 도메인에 걸쳐 고르게 분포되지는 않는다. 대신에, 이는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두에서 초가변 영역(HVR)으로 불리는 3 개 분절에 집중된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 대부분 베타-시트 배치구성을 채용하며, 베타-시트 구조를 연결하고 일부 경우에서 그 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3 개의 HVR에 의해 연결된 4 개의 FR 영역을 포함한다. 각 사슬에서 HVR은 FR 영역에 의해 가까운 부근에서 함께 유지되며, 다른 사슬로부터의 HVR과 함께 항체의 항원-결합 부위 형성에 기여한다 (Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991) 참고). 불변 도메인은 항원에 대한 항체 결합에 직접적으로 관여되지는 않지만, 다양한 효과기 기능, 예컨대 항체-의존적 세포성 독성에서의 항체 참여를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어진 항체를 지칭하고, 즉 집단을 포함하는 개별 항체가 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이 및/또는 번역-후 변형 (예컨대, 이성질화, 아미드화)를 제외하고 동일하다. 단클론성 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위에 대해 지향된다. 전형적으로 상이한 결정인자 (에피토프)에 대해 지향된 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제조와 대조되게, 각각의 단클론성 항체는 항원에서 단일 결정인자에 대해 지향된다. 이들의 특이성 이외에도, 단클론성 항체는 이들이 다른 면역글로불린에 의해서 오염되지 않고 하이브리도마 배양에 의하여 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "단클론성"은 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득되는 항체의 특징을 시사하며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 단클론성 항체는, 하기에 의하여 제조될 수 있다: 예를 들면 하이브리도마 방법을 포함하는 다양한 기술 (예컨대, Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma , 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), 재조합 DNA 방법 (참고: 예컨대, 미국 특허 번호 4,816,567), 파아지-디스플레이 기술 (참고: 예컨대 Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol . Biol . 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol . Biol . 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol . Biol . 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc . Natl . Acad . Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol . Methods 284(1-2): 119-132 (2004);및 Lee et al., J. Immunol . Methods 284(1-2): 119-132 (2004)), 및 인간 면역글로불린 유전자좌(locus) 또는 인간 면역글로불린 서열을 암호화하는 유전자의 일부 또는 모두를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하기 위한 기술 (참고: 예를 들면, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol . 7:33 (1993); 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016; Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol . 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol . 14: 826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)).
용어 "네이키드 항체(naked antibody)"는 세포독성 모이어티 또는 방사성 표지에 콘주게이트되지 않은 항체를 지칭한다.
용어 "전장 항체," "무손상 항체" 또는 "전체 항체"는 항체 단편이 아닌, 이의 실질적으로 무손상 형태의 항체를 지칭하기 위하여 상호교환적으로 사용된다. 특히, 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것들을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에서, 무손상 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 가질 수 있다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 부분, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 및/또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 하기를 포함한다: Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (참고: 미국 특허 5,641,870, 실시예 2; Zapata et al., Protein Eng . 8(10): 1057-1062 [1995]); 단일쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체. 항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편을 생산하고, 그리고 쉽게 결정화하는 능력을 반영하는 명칭인 잔여 "Fc" 단편을 생산하였다. Fab 단편은 하기에 따른 전체 L 쇄로 구성된다: H 쇄의 가변 도메인 (VH), 및 일 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1). 각 Fab 단편은, 항원 결합에 대하여 1가이며, 즉, 이는 단일 항원 결합 부위를 갖는다. 항체의 펩신 처리는 단일의 큰 F(ab')2 단편을 산출하고, 이는 일상적으로 상이한 항원-결합 활성을 갖는 2개의 이황화 연결된 Fab 단편에 상응하고, 여전히 항원과 가교결합할 수 있다. Fab' 단편은 항체-힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 추가의 소수 잔기를 가짐에 의하여 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 그룹을 갖는 Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 이들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
Fc 단편은 이황화물에 의하여 함께 보유된 둘 모두의 H 쇄의 카르복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 효과기 기능은 Fc 영역 내의 서열에 의하여 측정되며, 상기 영역은 특정 유형의 세포 상에서 발견되는 Fc 수용체 (FcR)에 의하여 또한 인식된다.
"Fv"는 완전한 항원 결합-인식 부위 및 -결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이러한 단편은 조밀한, 비-공유 연합으로의 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 영역의 이량체로 구성된다. 이러한 2개 도메인의 접힘으로부터, 항원 결합에 대하여 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여하는 6개 초가변 루프 (H 및 L 쇄로부터 각각 3개 루프)가 산출된다. 그러나, 전체 결합 부위에 비해 더 낮은 친화도에서지만, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 3 개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)도 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"단일쇄 Fv" (또한 "sFv" 또는 "scFv"로 간략화됨)는 단일 폴리펩티드 쇄로 연결되는 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 더욱 포함하는데, 이것은 sFv가 항원 결합을 위한 목적 구조를 형성할 수 있게 한다. sFv의 재고를 위해, 하기를 참고한다: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
본원의 항체의 "기능적 단편"은 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역 또는 변형된 FcR 결합 능력을 보유하거나 갖는 항체의 Fc 영역을 포함하는 무손상 항체 부분을 포함한다. 항체 단편의 예에는 선형 항체; 단일 쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함된다.
용어 "디아바디"는 VH 및 VL 도메인 사이에 짧은 링커 (약 5-10) 잔기)를 갖는 (선행 문단 참고) sFv를 작제하여 이로써 V 도메인의 쇄-내가 아닌 쇄-간 쌍형성이 달성되어, 2가 단편, 즉, 2개 항원-결합 부위를 갖는 단편을 유발함으로써 제조되는 소형 항체 단편을 지칭한다. 이중특이적 디아바디는 2개 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩티드 쇄 상에 존재하는, 2개의 "크로스오버(crossover)" sFv 항체 단편의 이종이량체이다. 디아바디는 예를 들면, 하기에서 더욱 자세히 기술된다: EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90: 6444-6448 (1993).
본원의 단클론성 항체는 구체적으로 "키메라" 항체(면역글로불린)을 포함하고, 여기서, 중쇄 및/또는 경쇄 부분은 특정 종으로부터 유래된 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 이에 상동성이거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하고, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래된 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이거나 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 상기 항체의 단편 뿐만 아니라 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속한다(미국 특허 번호 4,816,567; Morrison et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855 (1984)). 키메라성 항체에는 PRIMATIZED® 항체가 포함되며, 여기서 항체의 항원-결합 영역은, 예를 들면 관심 항원으로 마카크 원숭이를 면역화하여 생산된 항체로부터 유도된다. 본원에 사용된 바와 같이, "인간화된 항체"는 "키메라 항체"의 서브세트로 사용된다.
비인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화된" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래하는 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 일 구현예에서, 인간화 항체는 수용자의 HVR (이하 정의됨)로부터의 잔기가 목적 특이성, 친화도, 및/또는 수용력을 갖는 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 또는 비인간 영장류의 HVR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 프레임워크 ("FR") 잔기들은 상응하는 비-인간 잔기들에 의해 대체된다. 더욱이, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능, 예컨대 결합 친화도를 추가 정련하기 위해 제조될 수 있다. 일반적으로, FR 영역이 항체 성능, 예컨대 결합 친화도, 이성질화, 면역원성 등을 개선하는 하나 이상의 개별 FR 잔기 치환을 가질 수 있다고 하더라도, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함하고, 여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린 서열의 것들에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 서열의 영역들이다. FR 내의 이러한 아미노산 치환의 수는 전형적으로 H 쇄 중 6개 이하, L 쇄 중 3개 이하이다. 인간화 항체는 임의로 또한 전형적으로 인간 면역글로불린의, 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가 세부사항에 대해서는, 예를 들면 하기를 참고한다: Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); and Presta, Curr . Op. Struct . Biol . 2:593-596 (1992). 또한, 예를 들어 하기를 참고한다: Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem . Soc . Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr . Op. Biotech. 5:428-433 (1994); 및 미국 특허 번호 6,982,321 및 7,087,409.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체에 대응하고/하거나 본원에서 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 이용해서 제조된 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 특히 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다. 인간 항체는 파아지-디스플레이 라이브러리를 포함하는 당해기술에 공지된 다양한 기술을 이용해서 생성될 수 있다. Hoogenboom and Winter, J. Mol . Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol . Biol., 222:581 (1991). 또한 인간 단클론성 항체의 제조를 위해 하기에 기재된 방법이 이용 가능하다: Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol ., 147(1):86-95 (1991). 또한 하기를 참고한다: van Dijk and van de Winkel, Curr . Opin . Pharmacol ., 5: 368-74 (2001). 인간 항체는 항원 유발에 반응하여 그와 같은 항체를 생성하기 위해 변형되었지만, 그 내인성 유전자위가 불활성화된 형질전환(transgenic) 동물, 예를 들면 면역화된 제노마우스 (예를 들면, 참고: XENOMOUSE™ 기술에 관한 미국 특허 6,075,181 및 6,150,584)에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 또한 예를 들어, 참고: Li et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 103:3557-3562 (2006) (인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관함).
본원에서 사용되는 용어 "초가변 영역", "HVR" 또는 "HV"는 서열이 초가변성이고/이거나 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체-가변 도메인 영역을 나타낸다. 일반적으로, 항체는 6 개의 HVR; VH에 3 개(H1, H2, H3), 및 VL에 3 개(L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6 개 HVR의 가장 큰 다양성을 나타내며, H3은 특히 항체에 대해 미세한 특이성을 부여하는데 있어서 독특한 역할을 담당하는 것으로 여겨진다. 예를 들면, 다음을 참고한다: Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003). 사실상, 중쇄만으로 구성된 천연 발생 낙타과(camelid) 항체는 경쇄의 부재 하에서 기능적이고 안정하다. 예를 들면, 다음을 참고한다: Hamers - Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct . Biol . 3:733-736 (1996).
수많은 HVR 묘사가 사용되며, 본원에서 포괄된다. 카밧 상보성-결정 영역(CDR)은 서열 가변성에 기반하며, 가장 일반적으로 사용된다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). 초티아는 대신에, 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVR은 카밧 CDR 및 초티아 구조적 루프 간 절충을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체-모델링 소프트웨어에 의해 이용된다. "접촉" HVR은 이용 가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기반한다. 이들 HVR 각각으로부터의 잔기가 아래에 주지된다.
루프 카밧 AbM 초티아 접촉점
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (카밧 넘버링)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (초티아 넘버링)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
HVR은 하기와 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2) 및 89-97 또는 89-96 (L3) (VL 중) 및 26-35 (H1), 50-65 또는 49-65 (H2) 및 93-102, 94-102, 또는 95-102 (H3) (VH 중). 초가변 도메인 잔기들은 이들 정의의 각각에 대해 문헌(Kabat et al., 상기)에 따라 넘버링한다.
표현 "카밧에서의 가변-도메인 잔기-넘버링" 또는 "카밧에서의 아미노산-위치 넘버링" 및 이들의 변형은 [Kabat et al., 상기]에서 항체 편집의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대하여 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 상기 넘버링 시스템을 이용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 이것으로의 삽입에 대응하는 더 적거나 더 많은 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인에는 H2의 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입(카밧에 따른 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 뒤에 삽입된 잔기(예를 들면, 카밧에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)가 포함될 수 있다. 잔기의 카밧 넘버링은 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" 카밧 넘버링된 서열과의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 정의된 바와 같이 HVR 잔기 이외의 가변-도메인 잔기이다.
"인간 공통 프레임워크" 또는 "수용체 인간 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에 있어서 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위그룹 유래의 것이다. 일반적으로, 서열의 하위그룹은 하기와 같다: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). 예시는 하기를 포함한다: VL 에 대하여, 하위그룹은 하위그룹 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV 일 수 있다 (Kabat et al., 상기). 추가로, VH에 대하여, 하위그룹은 하위그룹 I, 하위그룹 II, 또는 하위그룹 III 일 수 있다 (Kabat et al., 상기). 대안적으로, 인간 공통 프레임워크는, 특정 잔기, 예컨대 인간 프레임워크 잔기가 다양한 인간 프레임워크 서열의 집합체를 갖는 공여자 프레임워크 서열을 정렬함으로써 공여자 프레임워크에 대한 이의 상동성을 기반으로 선택될 경우, 상기로부터 유도될 수 있다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크"로부터 유도된" 수용체 인간 프레임워크는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 이것은 기존 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 기존 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다.
"VH 하위그룹 III 공통 프레임워크"는 하기를 포함한다: 가변 중쇄 하위그룹 III (Kabat et al., 상기) 내의 아미노산 서열로부터 수득된 공통 서열. 일 구현예에서, VH 하위그룹 III 공통 프레임워크 아미노산 서열은 하기 서열 중 전체 또는 각각의 적어도 부분을 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (HC-FR1)(서열 번호:35), WVRQAPGKGLEWV (HC-FR2), (서열 번호:36), RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (HC-FR3, 서열 번호:37), WGQGTLVTVSA (HC-FR4), (서열 번호:38).
"VL 카파 I 공통 프레임워크"는 하기를 포함한다: 가변 경쇄 하위그룹 I (Kabat et al., 상기) 내의 아미노산 서열로부터 수득된 공통 서열. 일 구현예에서, VH 하위그룹 I 공통 프레임워크 아미노산 서열은 하기 서열 중 전체 또는 각각의 적어도 부분을 포함한다: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (LC-FR1) (서열 번호:39), WYQQKPGKAPKLLIY (LC-FR2) (서열 번호:40), GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (LC-FR3)(서열 번호:41), FGQGTKVEIKR (LC-FR4)(서열 번호:42).
예를 들면 Fc 영역의 명시된 위치에서의 "아미노산 변형"은 명시된 잔기의 치환 또는 결실, 또는 명시된 잔기에 인접한 적어도 하나의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 명시된 잔기에 "인접한" 삽입이란 이들의 1 내지 2개 잔기 내의 삽입을 의미한다. 삽입은 명시된 잔기에 대해 N-말단 또는 C-말단일 수 있다. 바람직한 본원의 아미노산 변형은 치환이다.
"친화도-성숙된" 항체는 변경(들)을 보유하지 않는 친계 항체에 비해, 항원에 대한 항체의 친화도 증진을 일으키는 이들의 하나 이상의 HVR에 하나 이상의 변경을 갖는 것이다. 일 구현예에서, 친화도-성숙된 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰 농도의 친화도를 갖는다. 친화도-성숙된 항체는 당해기술에서 공지된 절차에 의해 생성된다. 예를 들면, [Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH- 및 VL-도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이생성은, 예를 들면 하기에 기술된다: Barbas et al. Proc Nat. Acad . Sci . USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol . 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol . 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al, J. Mol . Biol. 226:889-896 (1992).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "이에 특이적으로 결합하는" 또는 "이에 특이적인"은, 표적 및 항체 간의 결합과 같은 측정가능하고 재생가능한 상호작용을 지칭하며, 이는 생물학적 분자를 포함하는 분자의 이종성 집단의 존재 하에서의 표적의 존재에 대한 결정요인이다. 예를 들면, 표적 (에피토프일 수 있음)에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 표적에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합 능력으로, 더욱 쉽게, 및/또는 더 긴 지속시간으로 상기 표적에 결합하는 항체이다. 일 구현예에서, 비관련 표적에 대한 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사면역검정법(RIA)으로 측정 시, 약 10% 미만의 표적에 대한 항체의 결합이다. 특정 구현예에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, 또는 ≤ 0.1 nM의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항체는 상이한 종으로부터의 단백질 중에서 보존된 단백질의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 또 다른 구현예에서, 특이적 결합은 필연적으로 (비록 포함할 수 있어도) 배타적인 결합을 요구하지 않는다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 천연-서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 비록 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 다양할지라도, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 보통 위치 Cys226에서 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 그 카르복실-말단까지 확장하기 위해 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)는, 예를 들어 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 재조합 가공함에 의하여, 또는 항체의 생산 또는 정제 동안, 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체 조성물은 하기를 포함할 수 있다: 전체 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 전혀 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 존재하는, 그리고 부재한 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단. 본 발명의 항체에서 사용되기 위한 적합한 천연-서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 (IgG2A, IgG2B), IgG3 및 IgG4를 포함한다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기술한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 게다가, 바람직한 FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)를 결합하는 것이고 그리고, 대립유전자 변이체 및 대안적으로 이들 수용체의 스플라이싱된 형태를 포함하여, FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 하위부류의 수용체를 포함하고, FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하고, 이는 이의 세포질 도메인 내에서 주로 상이한 유사 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRlIB는 그 세포질 도메인에 면역수용체 티로신계 억제 모티프(ITIM)를 함유한다. (참고: M.
Figure pct00001
, Annu. Rev. Immunol . 15:203-234 (1997)). FcR은 하기에 검토된다: Ravetch and Kinet, Annu . Rev. Immunol . 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin . Med . 126: 330-41 (1995). 향후 식별될 것들을 포함하는 다른 FcR이 본원에서 용어 "FcR"에 포괄된다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"에는 또한 신생아 수용체, FcRn이 포함되며, 이는 모계 IgG의 태아로의 전달에 관여한다. Guyer et al., J. Immunol . 117: 587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol . 24: 249 (1994). FcRn로의 결합을 측정하는 방법이 공지된다 (예를 들어, 참고: Ghetie and Ward, Immunol . Today 18: (12): 592-8 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology 15 (7): 637-40 (1997); Hinton et al., J. Biol . Chem. 279 (8): 6213-6 (2004); WO 2004/92219 (Hinton et al.). 생체내 FcRn로의 결합 및 인간 FcRn 고-친화도 결합 폴리펩티드의 혈청 반감기가 하기에서 검정될 수 있다: 예컨대, 인간 FcRn를 발현하는 형질전환 마우스 또는 형질감염 인간 세포주에서, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여되는 영장류에서. WO 2004/42072 (Presta)는 FcR로의 개선되거나 감소된 결합을 갖는 항체 변이체를 기술한다. 또한 참고: 예를 들면, Shields et al., J. Biol . Chem. 9(2): 6591-6604 (2001).
어구 "실질적으로 감소된", 또는 "실질적으로 상이한"은 본원에서 사용된 바와 같이, 당해분야의 숙련가가 두 값 간 차이를 상기 값(예를 들면, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락에서 생물학적 및/또는 통계적 유의도를 고려하도록 하는, 두 수치 값(일반적으로 분자와 관련된 것 및 참조/대조 분자와 관련된 다른 것) 간 충분히 높은 정도의 차이를 나타낸다. 상기 두 값의 차이는, 예를 들어, 기준/비교 분자에 대한 값의 함수로서 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과, 및/또는 약 50% 초과이다.
용어 "실질적으로 유사한", 또는 "실질적으로 동일한"은 본원에서 사용된 바와 같이, 당해분야의 숙련가가 두 값 간 차이를 상기 값(예를 들면, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락에서 생물학적 및/또는 통계적 유의도가 거의 또는 전혀 없는 것으로 고려하도록 하는, 두 수치 값(예를 들면, 본 발명의 항체와 관련된 것 및 참조/대조 항체와 관련된 다른 것) 간 충분히 높은 정도의 유사성을 나타낸다. 상기 두 값의 차이는, 예를 들어, 기준/비교 값의 함수로서 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 및/또는 약 10% 미만이다.
본원에 사용된 바와 같이, "담체"는 하기를 포함한다: 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제 (이용된 투여량 및 농도에서 이에 노출된 세포 또는 포유동물에 비독성임). 생리학적으로 허용가능한 담체는, 종종, 수성 pH 완충액이다. 생리학적으로 허용가능한 담체의 예는 완충제, 예를 들어, 포스페이트, 시트레이트, 및 기타 유기산; 아스코르브산을 포함하는 항산화제; 저분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어, 혈청 알부민, 겔라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어, 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류, 및 다른 탄수화물; 킬레이팅제, 예를 들어, EDTA; 당 알콜, 예를 들어, 만니톨 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예를 들어, 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 TWEEN™, 폴리에틸렌글리콜(PEG), 및 Pluronics™ 을 포함한다.
"패키지 삽입물"은 용법, 복용량, 투여, 금기사항, 포장된 생성물과 병용되는 기타 치료 생성물, 및/또는 이와 같은 치료 생성물의 사용과 관련된 경고문 등을 함유한 약제의 상업적 포장 내에 관례적으로 포함되는 지시사항에 관한 정보를 함유한 약제의 상업적 포장 내에 관례적으로 포함된 설명서를 지칭한다.
"개체" 또는 "대상체" 또는 "환자"는 포유동물이다. 포유동물은 가축(예컨대, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류(예컨대, 인간 및 비-인간 영장류, 예를 들면, 원숭이), 토끼, 및 설치류(예컨대, 마우스 및 랫트)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 개체 또는 대상체 또는 환자는 인간이다.
"유효량"은 특정 장애 또는 병태의 측정가능한 개선 또는 예방을 부여하는데 요구되는 최소한의 최소 농도이다. 본원의 유효량은 개체의 질환 단계, 연령, 성별 및 체중과 같은 요인, 및 환자에서의 목적 반응을 일으키는 항체의 능력에 따라 가변될 수 있다. 유효량은 또한, 치료의 임의의 독성 또는 유해 효과가 치료적 유익 효과를 능가하는 것이다. 예방 용도에 대하여, 유익한 또는 원하는 결과는 결과 예컨대 위험 제거 또는 감소, 중증도 약화, 또는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동 증상, 질환의 발달 동안 나타나는 그 합병증 및 중간체 병리적 표현형을 포함하는 질환의 개시 지연을 포함한다. 치료 용도에 대하여, 유익한 또는 원하는 결과는 임상 결과 예컨대 질환에서 비롯되는 하나 이상의 증상 감소, 질환을 앓는 군의 삶의 질 증가, 질환을 치료하는데 필요한 다른 약제의 용량 감소, 예컨대 질환의 표적화, 질환 진행의 지연을 통한 기타 약제의 효과 증강, 및/또는 생존 연장을 포함한다. 장기 이식을 기다리는 감작된 개체의 치료의 경우에서, 약물의 유효량은 개체에서 동종이계항체 및/또는 PRA의 수준에서 및/또는 상기의 어느 정도까지 감소하는 효과를 가질 수 있다. 장기 이식을 수용하는 개체 (예컨대 감작된 개체)를 치료하는 경우, 유효량의 약물은 장기 이식과 연관된 증상 또는 병태 (예컨대 이식편 거부반응) 중 하나 이상을 일정 정도로 경감시키거나 그리고/또는 이에 효과를 가질 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물, 또는 약제학적 조성물의 유효량은 직접적으로 또는 간접적으로 예방적 또는 치료용 처치를 달성하는데 충분한 양이다. 임상 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물, 또는 약제학적 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물, 또는 약제학적 조성물과 함께 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제 투여의 맥락에서 고려될 수 있고, 그리고 만일 하나 이상의 다른 제제와 함께 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성되면 단일 제제는 효과적인 양으로 제공되는 것으로 고려될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이 "CD20"은 인간 B-림프구 항원 CD20 (CD20, B-림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5, 및 LF5로서 또한 공지; 순서는 SwissProt 데이터베이스 기입 P11836을 특징으로 한다)이 사전-B 및 성숙한 B 림프구에 위치한 대략 35 kD의 분자량을 가진 소수성 막관통 단백질인 것을 지칭한다. (Valentine, M.A., et al., J. Biol . Chem . 264(19) (1989 11282-11287; Tedder, T.F., et al, Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 85 (1988) 208-12; Stamenkovic, I., et al., J. Exp . Med . 167 (1988) 1975-80; Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-7; Tedder, T.F., et al., J. Immunol . 142 (1989) 2560-8). 대응하는 인간 유전자는, MS4A1로서 또한 공지된, 막-스패닝 4-도메인, 서브패밀리 A, 구성원 1이다. 상기 유전자는 막-스패닝 4A 유전자 계열의 구성원을 암호화한다. 상기 신생 단백질 계열의 구성원은 통상 구조적 특징 및 유사한 인트론/엑손 스플라이스 경계를 특징으로 하고 조혈 세포 및 비림프양 조직 중에서 특유의 발현 패턴을 표시한다. 상기 유전자는 혈장 세포 속에 B-세포의 발생 및 분화에서 역할을 하는 B-림프구 표면 분자를 암호화한다. 상기 패밀리 구성원은 패밀리 구성원의 클러스터 중에서 11q12로 국소화된다. 상기 유전자의 대안적인 스플라이싱은 동일한 단백질을 암호화하는 2종의 전사체 변이체를 초래한다.
용어들 "CD20" 및 "CD20 항원"은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 세포에 의해 천연적으로 발현되거나 CD20 유전자로 형질감염된 세포에서 발현되는 인간 CD20의 임의의 변이체, 동형체 및 종 동족체를 포함한다. CD20 항원에 대한 본 발명의 항체의 결합은 불활성화 CD20에 의해 CD20을 발현하는 세포 (예를 들면, 종양 세포) 사멸을 매개한다. CD20을 발현하는 세포의 사멸은 하나 이상의 하기 기전에 의해 발생할 수 있다: 세포사/세포사멸 유도, ADCC 및 CDC.
당해 기술에서 기술적으로 인식된 바와 같이, CD20의 동의어는 B-림프구 항원 CD20, B-림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5, 및 LF5를 포함한다.
본 발명에 따른 용어 "항-CD20 항체"는 CD20 항원에 특이적으로 결합하는 항체이다. 항-CD20 항체의 CD20 항원에 대한 결합 특성 및 생물학적 활성에 의존하여, 2 유형의 항-CD20 항체 (유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체)는 하기에 따라 구별될 수 있다: Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; 및 Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052, 참고: 하기 표 1.
유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체의 특성
유형 I CD20 에피토프 유형 II CD20 에피토프
지질 뗏목에 CD20를 국소화함 지질 뗏목에 CD20를 국소화하지 않음
증가된 CDC (IgG1 이소형이면) 감소된 CDC (IgG1 이소형이면)
ADCC 활성 (IgG1 이소형이면) ADCC 활성 (IgG1 이소형이면)
전체 결합 능력 감소된 결합 능력
동형 응집 더 강력한 동형 응집
가교결합 상에서의 세포사멸 유도 가교결합의 부재 하의 강한 세포사 유도
유형 II 항-CD20 항체의 예는 예를 들면 인간화된 B-Ly1 항체 IgG1 (WO 2005/044859에 개시된 바와 같이 키메라성 인간화된 IgG1 항체), (WO 2004/035607에 개시된 바와 같이) 11B8 IgG1, 및 AT80 IgG1을 포함한다. 전형적으로 IgG1 이소형의 유형 II 항-CD20 항체는 특징적인 CDC 특성을 도시한다. 유형 II 항-CD20 항체는 IgG1 이소형의 유형 I 항체에 비교된 (IgG1 이소형이면) 감소된 CDC를 갖는다.
유형 I 항-CD20 항체의 예는 예를 들면 리툭시맙, HI47 IgG3 (ECACC, 하이브리도마), (WO 2005/103081에 개시된 바와 같이) 2C6 IgG1, (및 WO 2004/035607 및 WO 2005/103081에 개시된 바와 같이) 2F2 IgG1 및 (WO 2004/056312에 개시된 바와 같이) 2H7 IgG1을 포함한다.
본 발명에 따라 탈푸코실화된 항-CD20 항체는 바람직하게는 유형 II 항-CD20 항체, 더 바람직하게는 WO 2005/044859 및 WO 2007/031875에 기재된 바와 같이 탈푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체이다.
"리툭시맙" 항체 (참조 항체; 유형 I 항-CD20 항체의 예)는 인간 CD20 항원에 대하여 지향된 단클론성 항체를 함유하는 유전적으로 가공된 키메라성 인간 감마 1 뮤린 불변 도메인이다. 그러나 상기 항체는 글리코가공되지 않고 탈포쿠실화(afocusylate)하지 않고 따라서 적어도 85 %의 푸코스의 양을 갖는다. 상기 키메라성 항체는 인간 감마 1 불변 도메인을 함유하고 IDEC Pharmaceuticals Corporation에 양도된, 1998년 4월 17일 발행된 US 5,736,137 (Andersen, 등)에서 명칭 "C2B8"에 의해 식별된다. 리툭시맙은 재발한 또는 굴절하는 저-등급 또는 여포성, CD20 양성, B 세포 비-호지킨 림프종을 가진 환자의 치료를 위하여 승인된다. 시험관내 작용 기전 연구는 리툭시맙이 인간 보체-의존적 세포독성 (CDC) (Reff, M.E., et. al, Blood 83(2)(1994)435-445)을 나타낸다는 것을 보여주고 있다. 추가로, 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC)을 측정하는 검정에서 활성을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "GA101 항체"는 인간 CD20에 결합하는 하기 항체 중 임의의 것을 지칭한다: (1) 하기를 포함하는 항체: 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 서열 번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; (2) 하기를 포함하는 항체: 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인, (3) 하기를 포함하는 항체: 서열 번호: 9의 아미노산 서열 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열; (4) 오비누투주맙으로서 공지된 항체, 또는 (5) 하기를 포함하는 항체: 서열 번호: 9의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열. 일 구현예에서, GA101 항체는 IgG1 이소형 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 인간화 B-Ly1 항체이다.
용어 "인간화 B-Ly1 항체"는, WO 2005/044859 및 WO 2007/031875에 개시된 바와 같은, 하기로부터 수득된 인간화 B-Ly1 항체를 지칭한다: 뮤린 단클론성 항-CD20 항체 B-Ly1 (하기의 가변 영역: 뮤린 중쇄 (VH): 서열 번호: 11; 하기의 가변 영역: 뮤린 경쇄 (VL): 서열 번호: 12- 참고: Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139) (IgG1및 하기 인간화체 유래의 인간 불변 도메인으로의 키메라화에 의하여) (참고: WO 2005/044859 및 WO 2007/031875). 이들 "인간화된 B-Ly1 항체"는 WO 2005/ 044859 및 WO 2007/031875에 상세히 개시된다.
뮤린 단클론성 항-CD20 항체 B-Ly1 중쇄 (VH)의 가변 영역 (서열 번호: 11)
Figure pct00002
뮤린 단클론성 항-CD20 항체 B-Ly1 경쇄 (VL)의 가변 영역 (서열 번호: 12)
Figure pct00003
일 구현예에서, "인간화된 B-Ly1 항체"는 (WO 2005/044859 및 WO 2007/031875의, 특히, B-HH2 내지 B-HH9 및 B-HL8 내지 B-HL17에 대응하는) 서열 번호: 7, 8, 및 13 내지 33의 군으로부터 선택된 중쇄 (VH)의 가변 영역을 갖는다. 일 특정 구현예에서, 상기 가변 도메인은 (WO 2005/044859 및 WO 2007/031875의 B-HH2, BHH-3, B-HH6, B-HH8, B-HL8, B-HL11 및 B-HL13에 대응하는) 서열 번호: 14, 15, 7, 19, 25, 27 및 29로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 특정 구현예에서, "인간화된 B-Ly1 항체"는 (WO 2005/044859 및 WO 2007/031875의 B-KV1에 대응하는) 서열 번호:8의 경쇄 (VL)의 가변 영역을 갖는다. 일 특정 구현예에서, "인간화된 B-Ly1 항체"는 (WO 2005/044859 및 WO 2007/031875의 B-HH6에 대응하는) 서열 번호: 7의 중쇄 (VH)의 가변 영역 및 (WO 2005/044859 및 WO 2007/031875의 B-KV1에 대응하는) 서열 번호: 8의 경쇄 (VL)의 가변 영역을 갖는다. 더욱이 일 구현예에서, 인간화된 B-Ly1 항체는 IgG1 항체이다. 본 발명에 따르면 상기 탈포쿠실화된(afocusylated) 인간화된 B-Ly1 항체는 하기에 기재된 절차에 따라 Fc 영역에서 글리코가공 (GE)된다: WO 2005/044859, WO 2004/065540, WO 2007/031875, Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 및 WO 99/154342. 일 구현예에서, 탈푸코실화된 글리코-가공된 인간화된 B-Ly1은 B-HH6-B-KV1 GE이다. 일 구현예에서, 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다 (권고된 INN, WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453). 본원에서 사용된 바와 같이, 오비누투주맙은 GA101 또는 RO5072759에 대한 동의어이다. 이것은 모든 이전의 버전 (예를 들면 Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76)을 대체하고, 아푸투주맙(afutuzumab)으로서 이전에 공지되어 있다 (recommended INN, WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176;Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124). 일부 구현예에서, 인간화 B-Ly1 항체는 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체이다. 일부 구현예에서, 인간화 B-Ly1 항체는, 서열 번호: 9의 3개 중쇄 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10의 3개 경쇄 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
중쇄 (서열 번호: 9)
Figure pct00004
Figure pct00005
경쇄 (서열 번호: 10)
Figure pct00006
일부 구현예에서, 인간화된 B-Ly1 항체는 탈푸코실화된 글리코-가공된 인간화된 B-Ly1이다. 상기 글리코가공된 인간화된 B-Ly1 항체는, 바람직하게는 푸코스 잔기의 감소된 수준을 갖는, Fc 영역에서 글리코실화의 변경된 패턴을 갖는다. 바람직하게는 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고당의 총량의 60 % 이하이다 (일 구현예에서 푸코스의 양은 40 % 내지 60 %이고, 또 다른 구현예에서 푸코스의 양은 50 % 이하이고, 더욱 또 다른 구현예에서 푸코스의 양은 30 % 이하이다). 더욱이 Fc 영역의 올리고당은 바람직하게는 이등분된다. 이들 글리코가공된 인간화된 B-Ly1 항체는 증가된 ADCC를 갖는다.
"리툭시맙에 비교된 항-CD20 항체의 Raji 세포 (ATCC-No. CCL-86)에서 결합 능력 대 CD20의 비"는, 실시예 번호 2에 기재된 바와 같이, Raji 세포 (ATCC-번호 CCL-86)를 가진 FACSArray (Becton Dickinson)에서 Cy5와 접합된 리툭시맙 및 Cy5와 접합된 상기 항-CD20 항체를 이용하여 직접적인 면역형광 측정 (평균 형광 강도 (MFI)는 측정된다)에 의해 계측되고, 하기와 같이 산출된다:
Raji 세포 (ATCC-번호 CCL-86) 상에서의 결합 능력 대 CD20의 비율 =
Figure pct00007
MFI는 평균 형광 강도이다. 본원에서 사용된 바와 같이 "Cy5-표지화 비"는 분자 항체당 Cy5-표지 분자의 수를 의미한다.
전형적으로, 유형 II 항-CD20 항체는 0.3 내지 0.6의, 리툭시맙과 비교한, 제2 항-CD20 항체의 Raji 세포 (ATCC-번호 CCL-86) 상에서의 결합 능력 대 CD20의 비율을 가지며, 그리고 일 구현예에서, 이는 0.35 내지 0.55이며, 그리고 추가의 또 다른 구현예에서, 이는 0.4 내지 0.5이다.
일 구현예에서 상기 유형 II 항-CD20 항체, 예를 들면, GA101 항체는 증가된 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC)을 갖는다.
"증가된 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC)을 갖는 항체"는, 상기 용어가 본원에서 한정되는 경우, 당해 분야의 숙련가에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 결정된 바와 같이 증가된 ADCC를 갖는 항체를 의미한다. 하나의 허용된 시험관내 ADCC 검정은 아래와 같다:
1) 상기 검정은 항체의 항원-결합 영역에 의해 기술적으로 인식된 표적 항원을 발현시키기 위해 공지되는 표적 세포를 이용한다;
2) 상기 검정은, 효과기 세포로서, 무작위로 선택된 건강한 공여자의 혈액으로부터 단리된, 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 이용한다.
3) 상기 검정은 하기 프로토콜에 따라 수행된다:
i) PBMC는 표준 밀도 원심분리 절차를 이용하여 단리되고 RPMI 세포 배양 배지에서 5 x 106 세포/ml로 현탁된다;
ii) 표적 세포는 표준 조직 배양 방법에 의해 성장되고, 90% 초과 생존력으로 지수 성장기로부터 수거되고, RPMI 세포 배양 배지에서 세정되고, 51Cr의 100 마이크로-큐리로 표지되고, 세포 배양 배지로 2회 세정되고, 105 세포/ml의 밀도에서 세포 배양 배지에서 재현탁된다;
iii) 상기 최종 표적 세포 현탁액의 100 마이크로리터는 96-웰 미세적정 플레이트의 각각의 웰에 전달된다;
iv) 항체는 세포 배양 배지에서 4000 ng/ml 내지 0.04 ng/ml로 연속으로-희석되고 수득한 항체 용액의 50 마이크로리터는, 상기 전체의 농도 범위를 포함하는 다양한 항체 농도를 3중으로 시험하는, 96-웰 미세적정 플레이트에서 표적 세포에 첨가된다;
v) 최대 방출 (MR) 대조군을 위하여, 표지된 표적 세포를 함유하는 플레이트에서 3 추가의 웰은, 항체 용액 (항목 iv 상기) 대신에, 비-이온성 세제의 2% (VN) 수용액 (Nonidet, Sigma, St. Louis)의 50 마이크로리터를 수용한다;
vi) 자발적인 방출 (SR) 대조군을 위하여, 표지된 표적 세포를 함유하는 플레이트에서 3개의 추가 웰은 항체 용액 (항목 iv 상기) 대신에 RPMI 세포 배양 배지의 50 마이크로리터를 수용한다;
vii) 96-웰 미세적정 플레이트는 1 분 동안 50 x g로 원심분리되고 1 시간 4℃에서 항온처리된다;
viii) PBMC 현탁액 (항목 i 상기)의 50 마이크로리터는 각각의 웰에 첨가되어 25:1의 효과기:표적 세포 비를 수득하고 플레이트는 5% CO2 분위기하에 37℃에서 4 시간 동안 인큐베이터에서 배치된다;
ix) 각각의 웰로부터 무세포 상청액은 수거되고 실험적으로 방출된 방사능 (ER)은 감마 계수기를 이용하여 정량화된다;
x) 특이적 용균의 백분율은 각각의 항체 농도에 대하여 식 (ER-MR)/(MR-SR) x 100에 따라 산출되고, 여기에서 ER은 항체 농도에 대하여 정량화된 (참고 항목 ix 상기) 평균 방사능이고, MR은 MR 대조군 (참고 항목 V 상기)에 대하여 정량화된 (참고 항목 ix 상기) 평균 방사능이고, SR은 SR 대조군 (참고 항목 vi 상기)에 대하여 정량화된 (참고 항목 ix 상기) 평균 방사능이다;
4) "증가된 ADCC"는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에 관측된 특이적 용균의 최대 백분율에서 증가, 및/또는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에 관측된 특이적 용균의 최대 백분율의 이분의 일을 달성하기 위해 요구된 항체의 농도에서 감소로서 한정된다. 일 구현예에서, ADCC의 증가는 ADCC에 상대적이고, 상기 검정으로 측정되고, 동일한 항체에 의해 매개되고, 숙주 세포의 동일한 유형에 의해 생산되고, 당해 분야의 숙련가에 공지되는, 동일한 표준 생산, 정제, 제형 및 저장 방법을 이용하고, 단, (증가된 ADCC가 부재한) 비교측정기 항체는 GnTIII을 과발현하기 위해 가공된 및/또는 푸코실전달효소 8 (FUT8) 유전자로부터 감소된 발현을 갖기 위해 가공된 (예를 들면, FUT8 녹 아웃을 위하여 가공된 것을 포함하는) 숙주 세포에 의해 생산되지 않고 있다.
상기 "증가된 ADCC"는, 예를 들어, 상기 항체의 돌연변이 및/또는 글리코가공 기술에 의해 수득될 수 있다. 일 구현예에서, 항체는, 예를 들면, 하기에서 GlcNAc에 의해 이등분되는 항체의 Fc 영역에 부착된 2분지형 올리고당을 갖도록 글리코가공된다: WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); US 2005/0123546 (Umana et al.), Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180). 또 다른 구현예에서, 항체는 단백질 푸코실화에 있어서 결핍된 숙주 세포 (예를 들면, Lec13 CHO 세포 또는 결실된 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자 (FUT8) 또는 녹다운된 FUT 유전자 발현을 갖는 세포) 내 항체 발현에 의해 Fc 영역에 부착된 탄수화물에서 푸코스를 부재하게 하도록 글리코가공된다 (참고: 예를 들면, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107). 추가의 또 다른 구현예에서, 항체 서열은 ADCC를 증진시키기 위해 그것의 Fc 영역에서 가공되었다 (예를 들면, 일 구현예에서, 상기 가공된 항체 변이체는 Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서 하나 이상의 아미노산 치환을 가진 Fc 영역을 포함한다).
용어 "보체-의존적 세포독성 (CDC)"은 보체의 존재하에 본 발명에 따라 항체에 의한 인간 종양 표적 세포의 용균을 지칭한다. CDC는 보체의 존재하에 본 발명에 따라 항-CD20 항체를 가진 CD20 발현 세포의 제제의 치료에 의해 측정될 수 있다. CDC는 항체가 4 시간후 종양 세포의 20% 이상의 100 nM 용균 (세포사)의 농도에서 유도하는 경우 발견된다. 일 구현예에서, 검정은 51Cr 또는 Eu 표지된 종양 세포 및 방출된 51Cr 또는 Eu의 측정으로 수행된다. 대조군은 보체를 가진 그러나 항체 없는 종양 표적 세포의 항온처리를 포함한다.
용어 "CD20 항원의 발현"은 세포, 예를 들면, T- 또는 B-세포에서 CD20 항원의 발현의 상당한 수준을 나타내는 의도이다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 치료받는 환자는 B-세포에서 CD20의 상당한 수준을 발현시킨다. B-세포에서 CD20 발현은 당해 기술에 공지된 표준 검정에 의해 계측될 수 있다. 예를 들면, CD20 항원 발현은 면역조직화학 (IHC) 검출, FACS를 이용하여 또는 대응하는 mRNA의 PCR-기반 검출을 통해 측정된다.
본 명세서 및 첨부된 청구항들에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 ("a," "an," 및 "the")는, 그 내용이 다르게 명확히 지시되지 않으면, 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "분자"에 대한 지칭은 2개 또는 그 초과의 그와 같은 분자의 조합 등을 임의로 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "약"은 본 기술 분야의 숙련가에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본원에서 "약(about)" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 상기 값 또는 파라미터 그 자체에 관한 구현예를 포함한다 (그리고 기술한다).
본원에 기술된 본 발명의 양태 및 구현예는 "포함하는(comprising)", "구성되는(consisting) 및 "~로 본질적으로 구성되는"의 양태 및 구현예를 포함하는 것으로 이해된다.
III. 방법
일 양태에서, 장기 이식(예컨대, 신장 이식)이 필요한 개체를 치료하기 위한 방법이 본원에 제공되며, 이는 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, 개체, 예컨대, 장기 이식 (예컨대, 신장 이식)을 수용하였거나, 수용하는 중이거나, 또는 수용할 것인 개체에서 장기 거부반응의 방지를 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 생존 (예컨대, 숙주 및/또는 이식편 생존)을 연장시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 개체에서 동종이계항체의 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 개체의 패널 반응성 항체 (PRA)를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 이식의 공산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 이식 후 이식편 거부반응의 위험을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 적합한 신장 이식편을 수용하기 위한, 개체에 대한 대기 시간을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 개체로 하여금 유형 II 항-CD20 항체의 수용의 부재 하에서 교차-매칭 비혼화성이었을 것인, 교차-매칭 혼화성 신장 이식편을 수용하도록 한다. 일부 구현예에서, 방법은 이식편 생존을 연장시킨다. 일부 구현예에서, 방법은 이식편 기능을 개선시킨다. 일부 구현예에서, 방법은 이식편 거부반응의 공산을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 상기 개체는 치료 이전에 적어도 20%의 PRA를 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 말기 신장 질환을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 개체는 동종이계항원 노출 사건, 예컨대 이전의 장기 이식, 수혈, 이전의 임신, 또는 이들의 임의의 조합을 경험하였다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, 항-CD20 항체의, 적어도 제1 용량 (하기를 포함: 예를 들어, 제1 용량 단독, 및 제1 용량으로부터 약 10 일 내지 약 18 일 후 제2 용량), 이후 항-CD20 항체의 임의의 보충적 용량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 보충 용량은 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 23 주 내지 약 25 주 후까지는 제공되지 않는다. 일부 구현예에서, 개체는 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 6 주 내지 약 52 주 후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 개체가 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용하는 시간에 항-CD20 항체의 제1 추가 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 개체가 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한 시점으로부터 약 23 주 내지 약 25 주 후 항-CD20 항체의 제2 추가 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체의 (제1 용량, 제2 용량, 보충의 용량, 제1 추가의 용량, 및 제2 추가의 용량을 포함하는) 각각의 용량은 항-CD20 항체의 약 1800 mg 내지 약 2200 mg이다. 하기 기술된 바와 같이, 일부 구현예에서, 상기 항체는 서열 번호: 1의 HVR-H1 서열, 서열 번호: 2의 HVR-H2 서열 , 및 서열 번호: 3의 HVR-H3 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열 번호: 4의 HVR-L1 서열, 서열 번호: 5의 HVR-L2 서열, 및 서열 번호: 6의 HVR-L3 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 9의 아미노산 서열 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 9의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열.
항-CD20 항체
본 개시내용의 특정 양태는, 예를 들면, 동종이계항체의 수준을 감소시키기 위한 방법에서 사용하기 위한 항-CD20 항체에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 유형 II 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 인간의 것 또는 인간화된 것이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 탈푸코실화된 것이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 GA101 항체이다.
유형 II 항-CD20 항체의 예는 예를 들면 인간화된 B-Ly1 항체 IgG1 (WO 2005/044859에 개시된 바와 같이 키메라성 인간화된 IgG1 항체), (WO 2004/035607에 개시된 바와 같이) 11B8 IgG1, 및 AT80 IgG1을 포함한다. 전형적으로 IgG1 이소형의 유형 II 항-CD20 항체는 특징적인 CDC 특성을 도시한다. 유형 II 항-CD20 항체는 IgG1 이소형의 유형 I 항체에 비교된 (IgG1 이소형이면) 감소된 CDC를 갖는다.
유형 I 항-CD20 항체의 예는 예를 들면 리툭시맙, HI47 IgG3 (ECACC, 하이브리도마), (WO 2005/103081에 개시된 바와 같이) 2C6 IgG1, (및 WO 2004/035607 및 WO 2005/103081에 개시된 바와 같이) 2F2 IgG1 및 (WO 2004/056312에 개시된 바와 같이) 2H7 IgG1을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 본원에 기술된 GA101 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD20은 인간 CD20에 결합하는 하기 항체 중 임의의 것이다: (1) GYAFSY (서열 번호: 1)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, FPGDGDTD (서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, NVFDGYWLVY (서열 번호: 3)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, RSSKSLLHSNGITYLY (서열 번호: 4)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, QMSNLVS (서열 번호: 5)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 AQNLELPYT (서열 번호: 6)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체; (2) 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (3) 서열 번호: 9의 아미노산 서열 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 항체; (4) 오비누투주맙으로서 공지된 항체, 또는 (5) 서열 번호: 9의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체. 일 구현예에서, GA101 항체는 IgG1 이소형 항체이다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL).
Figure pct00008
(서열 번호:7)
Figure pct00009
Figure pct00010
(서열 번호: 8)
일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
Figure pct00012
(서열 번호: 9)
Figure pct00013
Figure pct00014
(서열 번호: 10)
일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 인간화 B-Ly1 항체이다. 일부 구현예에서, 인간화 B-Ly1 항체는, 서열 번호: 9의 3개 중쇄 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10의 3개 경쇄 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 인간화 B-Ly1 항체는 서열식별번호:9의 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열식별번호:10의 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 하기 표 2에 열거된 폴리펩티드 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
폴리펩티드 서열
작제물 펩티드 서열 번호
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B-HH2 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 14
B-HH3 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYLCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 15
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B-HH5 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSYSWMSWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 17
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B-HH7 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSYSWISWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 18
B-HH8 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 19
B-HH9 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 20
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B-HL2 EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTYSWMHWVQQAPGKGLEWMGRIFPGDGDTDYAEKFQGRVTITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 22
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B-HL4 QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGYTFTYSWMSWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 24
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B-HL13 EVQLVESGGGVVKPGGSLRLSCAASGFTFSYSWMNWVRQAPGKGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 29
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B-HL15 EVQLVESGGGLVKPGSSLRLSCAASGFTFSYSWMNWVRQAPGKGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 31
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B-HL17 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSYSWMNWVRQAPGKGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSS 33
VH 신호 서열 MDWTWRILFLVAAATGAHS
 34
B-KV1 DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLVSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKVEIKRTV 8
VL 신호 서열 MDMRVPAQLLGLLLLWFPGARC
 43
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예를 들면, 유형 II 항-CD20 항체)는 탈푸코실화된 글리코-가공된 항체이다. 상기 글리코가공된 항체는, 바람직하게는 푸코스 잔기의 감소된 수준을 갖는, Fc 영역에서 글리코실화의 변경된 패턴을 갖는다. 바람직하게는 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고당의 총량의 60 % 이하이다 (일 구현예에서 푸코스의 양은 40 % 내지 60 %이고, 또 다른 구현예에서 푸코스의 양은 50 % 이하이고, 더욱 또 다른 구현예에서 푸코스의 양은 30 % 이하이다). 더욱이 Fc 영역의 올리고당은 바람직하게는 이등분된다. 이들 글리코가공된 인간화 항-CD20 (예컨대, B-Ly1) 항체는 증가된 ADCC를 갖는다.
올리고당 성분은, 물리적 안정성, 프로테아제 공격에 대한 저항, 면역계와 상호작용, 약동학, 및 특이적인 생물학적 활성을 포함하는, 치료 당단백질의 효능에 관련된 특성에 상당히 영향을 줄 수 있다. 상기 특성은 올리고당의 존재 또는 부재, 뿐만 아니라 상기의 특이적인 구조에 의존할 수 있다. 올리고당 구조와 당단백질 기능 사이 일부 일반화가 실시될 수 있다. 예를 들어, 특정 올리고당 구조는 특이적 탄수화물 결합 단백질과 상호작용을 통해 혈류로부터 당단백질의 급속 청소율을 매개하고, 반면에 다른 것은 항체에 의해 결합될 수 있고 요망되지 않는 면역 반응을 유발시킬 수 있다. (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol . 14 (1996) 975-81).
포유동물 세포는 인간 적용을 위하여 가장 혼화성인 형태로 단백질을 글리코실화하는 그것의 능력 때문에, 치료 당단백질의 생산을 위한 바람직한 숙주이다. (Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-30; Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol . 14 (1996) 975-81). 박테리아는 매우 드물게 단백질을 글리코실화하고, 다른 유형의 통상 숙주, 예컨대 효모, 사상균, 곤충 및 식물 세포처럼, 혈류로부터 급속 청소율, 바람직하지 않은 면역 상호작용, 및 일부 특이적 사례에서, 감소된 생물학적 활성과 관련된 글리코실화 패턴을 수득한다. 포유동물 세포 중에서, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포는 지난 이십여년 동안 가장 통상적으로 사용되고 있다. 적합한 글리코실화 패턴 제공에 더하여, 이들 세포는 유전적으로 무변성인, 고도로 생산적인 클론 세포주의 일관된 생성을 허용한다. 이들은 무혈청배지를 이용하는 단순 생물반응기 내 고 밀도로 배양될 수 있고, 안전한 및 재생가능한 생물공정의 발생을 허용할 수 있다. 다른 통상적으로 사용된 동물 세포는 어린 햄스터 신장 (BHK) 세포, NSO- 및 SP2/0-마우스 골수종 세포를 포함한다. 더욱 최근에, 형질전환 동물로부터 생산이 또한 시험되고 있다. (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol . 14 (1996) 975-981).
모든 항체는, 단백질 조립체, 분비 또는 기능적 활성에 가변적으로 영향을 주는, N-연결된 탄수화물 구조의 상이한 어레이를 보유하는 각각의 이소형을 가진, 중쇄 불변 영역에서 보존된 위치에 탄수화물 구조를 함유한다. (Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). 부착된 N-연결된 탄수화물의 구조는, 공정의 정도에 따라, 상당히 다양하고, 고-만노스, 다중-분지형 게다가 2분지형 복합체 올리고당을 포함할 수 있다. (Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). 전형적으로, 심지어 단클론성 항체가 다중 글리코형으로서 존재하는 정도로 특정한 글리코실화 부위에 부착된 코어 올리고당 구조의 불균일 공정이 있다. 마찬가지로, 항체 글리코실화에서 주요 차이가 세포주 사이 발생하는 것으로 나타났고, 사소한 차이가 상이한 배양 조건하에 성장된 소정의 세포주에 대하여 보여진다. (Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5(8) (1995) 813-22).
단순 생산 공정을 유지하고 잠재적으로 상당한, 바람직하지 않은 부작용을 피하면서, 효력에서 큰 증가를 수득하는 한가지 방식은 하기에 기재된 바와 같이 그것의 올리고당 성분 가공에 의한 단클론성 항체의 천연, 세포-매개된 효과기 기능을 증진시키는 것이다: Umana, P., et al., Nature Biotechnol . 17 (1999) 176-180 및 US 6,602,684. 암 면역요법에서 가장 통상적으로 사용된 항체인, IgG1 유형 항체는 각각의 CH2 도메인에서 Asn297에 보존된 N-연결된 글리코실화 부위를 갖는 당단백질이다. Asn297에 부착된 2종의 복합체 2분지형 올리고당은, 폴리펩티드 골격과 광범위한 접촉을 형성하는, CH2 도메인 사이 매장되고, 그것의 존재는 효과기 기능 예컨대 항체 의존적 세포성 세포독성 (ADCC)을 매개하기 위해 항체에 필수적이다 (Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32).
이등분된 올리고당의 형성을 촉매화하는 글리코실전달효소인, ß(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐전달효소 I11 ("GnTII17y)의 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포내 과발현이 가공된 CHO 세포에 의해 생산된 항신경교세포종 키메라성 단클론성 항체 (chCE7)의 시험관내 ADCC 활성을 상당히 증가시키는 것이 이전에 보여졌다. (참고: Umana, P., et al., Nature Biotechnol . 17 (1999) 176-180; 및 WO 99/154342 (이의 전체 내용은 본원에 참조로 인용됨)). 항체 chCE7은 높은 종양 친화도 및 특이성을 갖는 비콘주게이트된 단클론성 항체의 큰 부류에 속하지만, GnTIII 효소가 부재한 표준 산업 세포주에서 생산된 경우 임상적으로 유용하기에 효력이 너무 약하다 (Umana, P., et al., Nature Biotechnol . 17 (1999) 176-180). 그 연구는 ADCC 활성의 큰 증가가 GnTIII을 발현하기 위해 항체 생산 세포 가공에 의해 수득될 수 있다는 것을 보여주는 최초이었고, 이는 또한, 천연 발생 항체에서 발견된 수준 초과로, 이등분된, 비-푸코실화된 올리고당을 포함하는, 불변 영역 (Fc)-관련된, 이등분된 올리고당의 증가로 이어졌다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예를 들면, 유형 II 항-CD20 항체)는 인간 Fc 영역 (예를 들면, 인간 IgG1 Fc 영역)을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 변형되고 있는 N-연결된 올리고당을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역의 N-연결된 올리고당은 비-변형된 N-연결된 올리고당을 가진 항체에 비교된 경우 감소된 푸코스 잔기를 갖는다. 일부 구현예에서, 이등분된 올리고당은 이등분된 복합체 올리고당이다. 일부 구현예에서, N-연결된 올리고당은 증가된 이등분된, 비푸코실화된 올리고당을 갖도록 변형되고 있다. 일부 구현예에서, 이등분된, 비푸코실화된 올리고당은 혼성 유형이다. 일부 구현예에서, 이등분된, 비푸코실화된 올리고당은 복합 유형이다. 더욱 자세한 기술로는, 하기를 참고한다: 예를 들면, WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.);미국 특허 번호 6,602,684 6,602,684 (Umana et al.); US 2005/0123546 (Umana et al.); 및 미국 특허 번호 8,883,980 (Umana et al.).
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예를 들면, 유형 II 항-CD20 항체)는 다중특이적 항체 또는 이중특이적 항체이다.
항체 제조
임의의 상기 구현예에 따른 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 유형 II 항-CD20 항체)는, 아래 부문 1-7에 기재된 바와 같이, 단독으로 또는 조합으로, 임의의 특징을 포함시킬 수 있다:
1. 항체 친화도
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예컨대, 10-8 M 이하, 예컨대, 10-8 M내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
일 구현예에서, Kd는 방사표지된 항원 결합 검정(RIA)에 의해 측정된다. 일 구현예에서, RIA는 관심의 대상인 항체의 Fab 버젼 및 이의 항원으로 수행된다. 예를 들어, 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화성은 일련의 적정된 비표지된 항원의 존재하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시키고 이어서 결합된 항원을 항-Fab 항체 코팅된 플레이트로 포획함에 의해 측정된다 (예를 들어, 참고: Chen et al., J. Mol . Biol . 293:865-881(1999)). 검정용 조건을 수립하기 위해, MICROTITER® 다중-웰 플레이트 (Thermo Scientific)는 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6)에서 포착 항-Fab 항체 (Cappel Labs)의 5 μg/ml로 밤새 코팅되고, 그리고 그 뒤에 2 내지 5 시간동안 실온 (대략 23℃)에서 PBS내 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 차단된다. 비-흡착제 플레이트 (Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원은 해당 Fab의 연속 희석으로 혼합된다 (예를 들면, 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치, Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). 그 다음 해당 Fab는 밤새 항온처리되지만; 그러나, 항온처리는 평형이 달성됨을 확인하기 위해 더 오랜 기간 (예를 들면, 약 65 시간)동안 계속할 수 있다. 그 후에, 혼합물은 실온에서 (예를 들면, 1 시간 동안) 항온처리를 위해 포획 플레이트로 이동된다. 이어서, 상기 용액을 제거하고 플레이트는 PBS 중에서 0.1% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20®)으로 8회 세정하였다. 플레이트를 건조시키는 경우, 150 μl/웰의 섬광제 (MICROSCINT-20TM;Packard)를 첨가하고 플레이트는 10분 동안 TOPCOUNTTM 감마 카운터 (Packard) 상에서 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각각의 Fab의 농도는 경쟁 결합 검정에 사용하기 위해 선택한다.
또 다른 구현예에 따르면, Kd는 BIACORE® 표면 플라스몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 예를 들면, BIACORE®-2000 또는 BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)을 사용한 검정은 25℃에서 고정화된 항원 CM5 칩으로 ~10 반응 단위(RU)로 수행한다. 일 구현예에서, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, BIACORE, Inc.)을 공급체의 설명서에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)로 활성화시킨다. 항원은 pH 4.8, 10 mM 아세트산나트륨으로 5 μg/ml (~0.2 μM)까지 희석되고, 그 다음 5 μl/분의 유속으로 주입되어 커플링된 단백질의 대략 10 반응 단위 (RU)를 달성한다. 항원 주사 후, 1 M 에탄올아민을 주사하여 미반응된 그룹을 차단시킨다. 역학적 측정을 위해, 2배 연속 희석된 Fab (0.78 nM 내지 500 nM)를 대략 25 μl/min의 유속으로 25°C 에서 PBS 중에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20TM) 계면활성제 (PBST)와 함께 사용한다. 결합율 (kon) 및 해리율 (koff)은 결합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅함에 의해 단순한 1 대 1 랑무이르 결합 모델 (BIACORE®Evaluation Software version 3.2)을 사용하여 산출한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 비율 koff/kon로서 산출한다. 참고: 예를 들면, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). 만일 가역속도(on-rate)가 상기 표면 플라스몬 공명 검정에 의해 106 M-1 s-1 를 초과하면, 분광기, 예컨대 정지-유동 구비된 분광광도계 (Aviv Instruments) 또는 교반된 큐벳을 갖춘 8000-시리즈 SLM-AMINCO TM 분광광도계 (ThermoSpectronic)에서 측정된 바와 같이 항원의 증가 농도의 존재하에 25 ℃에서 pH 7.2, PBS내 20 nM 항-항원 항체 (Fab 형태)의 형광 방출 세기 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역통과)에서의 증가 또는 감소를 측정하는 형광성 켄칭 기술을 이용함으로써 가역 속도는 측정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기된 다른 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 하기를 참고한다: Hudson et al. Nat. Med . 9:129-134 (2003). scFv 단편의 검토를 위하여, 예를 들면, 다음을 참고하며:
Figure pct00015
, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); 또한 다음을 참고한다: WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458. 구제 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 검토를 위해서는, 미국 특허 제5,869,046호를 참조한다.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 참고: 예를 들면, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90: 6444-6448 (1993). 트리아바디 및 테트라바디가 또한 하기에 기술된다: Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003).
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체 (Domantis, Inc., Waltham, MA; 참고: 예를 들면, 미국 특허 번호 6,248,516 B1)이다.
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 무손상 항체의 단백질 가수분해 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포(예컨대, 이. 콜라이 또는 파지)에 의한 생산을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 기술들로 제조될 수 있다.
3. 키메라 및 인간화 항체
특정 구현예에서, 본원에 제공되는 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라성 항체는, 예를 들면, 하기에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 4,816,567 및 Morrison et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855 (1984)). 일 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역(예컨대, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이에서 유도된 가변 영역)과 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 친계 항체의 부류로부터 변화된 "부류 스위칭된" 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라 항체는 인간화된 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 인간화되어 인간에 대한 면역원성이 감소되어 있고 친계 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 보유한다. 일반적으로, 인간화 항체는, HVR, 예를 들면, CDR, (또는 그 일부)가 비인간 항체로부터 유도되고, FR (또는 그 일부)가 인간 항체 서열로부터 유도되는 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체는 임의로 또한 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체에서 일부 FR 잔기는 비인간 항체 (예를 들면, HVR 잔기가 유도되는 항체)로부터 상응하는 잔기로 치환되어, 예를 들면, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선한다.
인간화 항체 및 이의 제조 방법은, 예를 들면, 하기에 고찰되고: Almagro and Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633 (2008), 그리고 추가로 하기에 기재된다: 예를 들면, Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad . Sci . USA 86:10029-10033 (1989); 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (특이성 결정 영역 (SDR) 그라프팅 기재); Padlan, Mol . Immunol . 28:489-498 (1991) ("재표면화" 기재); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) ("FR셔플링" 기재); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FR셔플링에 대한 "유도된 선택" 접근법을 기재함).
인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: "베스트-피트" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (문헌참조: 예를 들어, Sims et al. J. Immunol . 151:2296 (1993));특정 하위의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Carter et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J . Immunol ., 151:2623 (1993)); 인간 성숙 (체세포적으로 돌연변이화된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역 (예를 들면, 참고: Almagro and Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633 (2008)); 및 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Baca et al., J. Biol . Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol . Chem . 271:22611-22618 (1996)).
4. 인간 항체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당해기술에 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 다음 문헌에 기재되어 있다: van Dijk and van de Winkel, Curr . Opin . Pharmacol . 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).
인간 항체는 항원 유발(antigenic challenge)에 반응하여 무손상 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 무손상 항체를 제조하도록 변형된 형질전환 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 상기 동물은 전형적으로 내인성 면역글로불린 유전자좌를 대체하거나 염색체외적으로 존재하거나 동물의 염색체에 무작위로 통합된 인간 면역글로불린 유전자좌 모두 또는 일부를 함유한다. 상기 형질전환 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화되어 있다. 형질전환 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 하기를 참조한다: Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005). 또한 하기를 참고한다: 예를 들면, XENOMOUSETM기술을 기재하는 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; HUMAB® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 5,770,429; K-M MOUSE®기술을 기재하는 미국 특허 번호 7,041,870, 및 VELOCIMOUSE® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900). 상기 동물에 의해 발생된 무손상 항체로부터 인간 가변 영역은, 예를 들면, 상이한 인간 불변 영역과의 조합에 의해, 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마 기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단클론성 항체의 제조를 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되었다. (참고: 예를 들어, Kozbor J. Immunol ., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)). 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 제조된 인간 항체가 또한 다음 문헌에 기재되어 있다: Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006). 추가의 방법은, 예를 들면, 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터 단클론성 인간 IgM 항체의 생산 기재) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (Trioma technology)은 다음 문헌에 기재되어 있다: Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005).
인간 항체는 또한 인간 유래된 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인서열을 단리시킴에 의해 제조될 수 있다. 상기 가변 도메인 서열은 이어서 목적하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 하기에 기재되어 있다.
5. 라이브러리-유도된 항체
본 발명의 항체는 목적하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들면, 파아지 디스플레이 라이브러리를 생산하고 목적하는 결합 특징을 갖는 항체에 대해 이러한 라이브러리를 스크리닝하기 위한 각종 방법들이 당업계에 공지되어 있다. 그러한 방법은 하기에 검토되며: Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001), 그리고 추가로 하기에 검토된다: 예를 들어, the McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol . Biol . 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol . Biol . 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol . 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol . Methods 284(1-2): 119-132(2004).
일부 파아지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자 레퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 별도로 클로닝되고 파아지 라이브러리에서 무작위로 재조합되며, 이후 하기에 기술된 바와 같이 항원-결합 파아지에 대해 스크리닝될 수 있다: Winter et al., Ann. Rev. Immunol ., 12: 433-455 (1994). 파아지는 전형적으로 단일쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 작제할 필요 없이 면역원에 대한 고친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 단순 레퍼토리는 (예를 들면, 인간으로부터) 클로닝되어 하기에 기재된 바와 같이 임의의 면역화 없이 광범위한 비자가 및 또한 자가 항원에 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다: Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). 최종적으로, 비처리 라이브러리는 또한 줄기 세포로부터 비재배열된 V-유전자 분절을 클로닝하고 고도의 가변성 CDR3 영역을 암호화하고 시험관내 재배열을 성취하기 위해 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함에 의해 합성적으로 제조될 수 있고, 이는 다음 문헌에 기재된 바와 같다: Hoogenboom and Winter, J. Mol . Biol ., 227: 381-388 (1992). 인간 항체 파아지 라이브러리를 기재하는 특허 공보는 예를 들어, 다음의 문헌을 포함한다: 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360.
인간 항체 라이브러리에서 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원의 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
6. 다중특이적 항체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들면 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 최소한 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 단클론성 항체이다. 특정 구현예에서, 결합 특이성 중 하나는 CD20에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 CD20의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 CD20를 발현하는 세포에 세포독성제를 국소화하는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로 제조될 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술은 비제한적으로 하기를 포함한다: 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (참고: Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)), 및 "크놉-인-홀" 가공 (참고: 예를 들면, 미국 특허 번호 5,731,168). 다중 특이적 항체는 또한 다음과 같이 제조될 수 있다: 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기 스티어링 효과를 가공함에 의해 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교 결합시킴에 의해 (참고: 예를 들면, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 Brennan et al., Science, 229: 81 (1985));이중특이적 항체를 생산하기 위하여 류신 지퍼(leucine zipper)를 사용함으로써 (참고: 예를 들어, Kostelny et al., J. Immunol ., 148(5):1547-1553 (1992)); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술을 사용함으로써 (참고: 예를 들어, Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993)); 및 단일쇄 Fv(sFv) 이량체를 사용함에 의해 (참고: 예를 들어, Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); 및 다음 문헌에 기재된 바와 같이 3특이적 항체를 제조함에 의해: 예를 들어, Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).
"옥토퍼스 항체"를 포함하는, 3개 이상의 기능성 항원 결합 부위를 갖는 가공된 항체는 또한 본원에 포함된다 (참고: 예를 들어 US 2006/0025576A1).
본원에서 항체 또는 단편은 또한 CD20 및 또 다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이원 작용 Fab" 또는 "DAF"를 포함한다(참고: 예를 들어 US 2008/0069820).
7. 항체 변이체
특정 구현예에서, 본원에 제공되는 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 상기 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성들을 증진시키는 것이 바람직한 일일 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 적당한 변형을 도입하거나 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 상기 변형은 예를 들어, 항체의 아미노산 서열내 잔기들로부터의 결실 및/또는 이들로의 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합이 만들어져서 최종 작제물에 도달할 수 있다, 단, 최종 작제물은 원하는 특성, 예를 들면, 항원-결합을 보유한다.
a) 치환, 삽입, 및 결실 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환적 돌연변이 유발을 위한 목적하는 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "바람직한 치환."의 제목하에 표 3에서 보여준다. 보다 실질적 변화는 "예시적 치환"의 표제하에 표 A에 제공되고, 추가로 아미노산 측쇄 부류를 참조로 하기에 기재된 바와 같다. 아미노산 치환은 목적하는 활성, 예컨대, 보유된/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC를 위해 선별된 제품 및 관심 항체에 도입될 수 있다.
바람직한 치환
본래 잔기 예시적 치환 바람직한 치환
Ala (A) Val; Leu; Ile Val
Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; 노르류신 Leu
Leu (L) 노르류신; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val; Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; 노르류신 Leu
아미노산은 통상의 측쇄 성질에 따라 분류될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환형 변이체의 한 유형은 친계 항체 (예를 들면 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기의 치환을 포함한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택되는 수득한 변이체(들)은 친계 항체에 대하여 특정 생물학적 특성 (예를 들면, 증가된 친화성, 감소된 면역원성)에서 변형 (예를 들면, 개선)을 가질 것이고/이거나 친계 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화도 성숙 항체이며, 이것은, 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 파아지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 사용하여 통상적으로 생성될 수 있다. 간단히, 하나 이상의 HVR 잔기는 돌연변이화되고 파아지에서 변이체 항체 표시되고 특정한 생물학적 활성 (예를 들면, 결합 친화도)을 위해 스크리닝된다.
변경(예컨대, 치환)은 HVR에서, 예컨대, 항체 친화도를 개선시키기 위해 이루어질 수 있다. 상기 변경은 HVR "핫스팟," 즉, 체세포 성숙 공정 동안 높은 빈도로 돌연변이화하는 코돈에 의해 암호화된 잔기 (참고: 예를 들면, Chowdhury, Methods Mol . Biol . 207:179-196 (2008)), 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에서 이루어질 수 있으며, 이때 생성된 변이체 VH 또는 VL가 결합 친화도에 대하여 시험된다. 2차 라이브러리로부터 작제하고 재선택함에 의한 친화성 성숙화가 예를 들어, 다음 문헌에 기재되어 있다: Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). 친화도 성숙화의 일부 구현예에서, 다양성이 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류 발생 경향 PCR, 쇄 셔플링 또는 올리고뉴클레오티드 지시된 돌연변이생성)에 의한 성숙화를 위해 선택되는 가변 유전자에 도입된다. 이후 2차 라이브러리가 형성된다. 이후 라이브러리를 스크리닝하여 목적하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 식별한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 HVR-지시된 접근법을 포함하며, 여기서 몇몇 HVR 잔기(예컨대, 한번에 4-6개 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합에 관련된 HVR 잔기는 특히, 예컨대, 알라닌 주사 돌연변이생성(alanine scanning mutagenesis) 또는 모델링을 사용하여 식별할 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 흔히 표적화된다.
특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 이러한 변형이 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한 하나 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들면, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예컨대, 본원에 제공된 바와 같은 보존적 치환)은 HVR에서 이루어질 수 있다. 상기 변경은, 예를 들면, HVR에서 항원 접촉 잔기의 외부일 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 구현예에서, 각각의 HVR는 변경되지 않거나, 또는 하나 이상, 두 개 또는 세 개의 아미노산 치환을 함유하지 않는다.
돌연변이생성을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기들 또는 영역들의 식별을 위해 유용한 방법은 다음 문헌에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이생성"로 불리운다: Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. 이 방법에서는, 표적 잔기들(예컨대, arg, asp, his, lys, 및 glu와 같은 하전된 잔기)의 잔기 또는 그룹을 식별하고 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예컨대, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체하여 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지를 계측한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 감도를 입증하는 아미노산 위치에서 도입될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 항체와 항원 간의 접촉 지점을 식별하기 위한 항원-항체 복합체의 결정 구조. 상기 접촉 잔기 및 인접 잔기가 치환을 위한 후보물질로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체는 이들이 목적하는 특성을 함유하는지 계측하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1 잔기 내지 100 이상 잔기를 함유하는 폴리펩티드 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열간 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 또 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드 또는 효소(예컨대, ADEPT에 대한)에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 융합을 포함한다.
b) 글리코실화 변이체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변형된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 달성될 수 있어서 하나 이상의 글리코실화 부위는 제조 또는 제거된다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 여기에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결부에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 2분지형 올리고당을 포함한다. 예를 들면, 참고: Wright et al. TIBTECH 15:26-32(1997). 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들면, 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산, 뿐만 아니라 2분지형 올리고당 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체에서 올리고당의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 제조하기 위해 실시될 수 있다.
일 구현예에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 부재한 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들면, 상기 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은, 예를 들어, WO 2008/077546에 기술된 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분광계에 의하여 측정 시, Asn 297에 부착된 모든 당구조(glycostructure) (예를 들어, 복합체, 혼성체 및 고 만노스 구조)의 총합과 비교하여, Asn297에서의 당 쇄 내의 푸코스의 평균 양을 산출함으로써 계측될 수 있다. Asn297은 Fc 영역에서의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 배치된 아스파라긴 잔기를 언급하지만; 그러나, Asn297은, 항체내 작은 서열 변이로 인해, 위치 297의 약 ± 3 아미노산 업스트림 또는 다운스트림, 즉, 위치 294 와 300 사이에 또한 배치될 수 있다. 이와 같은 푸코실화 변이체는 ADCC 작용을 증진시킬 공산이 있다. 예를 들면, 미국 특허 공보 제US 2003/0157108호(Presta, L.); US 제2004/0093621호(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)를 참조한다. "탈푸코실화된" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 공보의 예는 다음을 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol . Biol . 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87: 614 (2004). 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 하기를 포함한다: 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem . Biophys . 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO　2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자, FUT8,녹아웃 CHO 세포 (참고: 예를 들면, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol . Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107).
항체 변이체는 이등분한 올리고당으로 추가 제공되고, 예를 들면, 여기에서 항체의 Fc 영역에 부착된 2분지형 올리고당은 GlcNAc에 의해 이등분된다. 상기 항체 변이체는 푸코실화를 감소시킬 수 있고/있거나 ADCC 기능을 개선시킬 수 있다. 상기 항체 변이체의 예는, 예를 들면, WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재된다. Fc 영역에 부착된 올리고당에서 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 상기 항체 변이체는 CDC 기능을 개선시킬 수 있다. 상기 항체 변이체는, 예를 들면, WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재된다.
c) Fc 영역 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 본원에 제공된 항체의 Fc 영역 내 도입될 수 있고, 그렇게 함으로써 Fc 영역 변이체를 발생시킨다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들면 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들면, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 생체내 항체의 반감기가 여전히 어떤 효과기 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)이 중요한 적용에 대해 바람직한 후보자에 불필요한 또는 유해하게 하는, 모든 효과기 기능은 아니지만 일부를 보유하는 항체 변이체를 고려한다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 경감/고갈을 식별하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체 (FcR) 결합 검정은 항체가 FcγR 결합이 부재하지만 (따라서 유사하게 ADCC 활성 부재), FcRn 결합 능력을 보유하는 것을 확보하기 위해 수행될 수 있다. ADCC, NK 세포 매개용 1차 세포는 Fc(RIII 만을 발현하고, 한편 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII 및 Fc(RIII을 발현한다. 조혈 세포상의 FcR 발현은 다음 문헌의 464 페이지 상의 표 3에 요약되어 있다: Ravetch and Kinet, Annu . Rev. Immunol . 9:457-492 (1991). 해당 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비-제한적인 예는 하기에 기재된다: 미국 특허 번호 5,500,362 (참고: 예를 들면 Hellstrom, I. et al. Proc . Nat'l Acad . Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) 및 Hellstrom, I et al., Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (참고: Bruggemann, M. et al., J. Exp . Med . 166:1351-1361 (1987). 대안적으로, 하기와 같은 비-방사능활성 검정 방법이 사용될 수 있다: 예를 들어, 유동 세포측정을 위한 ACTI™ 비-방사능활성 세포독성 검정 (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 CytoTox 96® 비-방사성 세포독성 검정 (Promega, Madison, WI). 그와 같은 검정을 위해 유용한 효과기 세포에는 말초 혈액 단핵구(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포가 포함된다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 하기에서 생체내 평가된다: 예를 들면, 하기에 기술된 바와 같은 동물 모델: Clynes et al. Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 95:652-656 (1998). C1q 결합 검정은 또한 항체가 C1q를 결합할 수 없음에 따라서 CDC 활성이 부재임을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 참고: 예를 들면, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정이 수행될 수 있다 (참고: 예를 들면, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol . Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). FcRn 결합 및 생체 내 청소율/반감기 계측은 또한 당해분야에서 공지된 방법을 이용하여 수행될 수 있다 (참고: 예를 들면, Petkova, S.B. et al., Int'l . Immunol . 18(12):1759-1769 (2006)).
감소된 효과기 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 상기 Fc 돌연변이체는, 알라닌에 대해 잔기 265 및 297의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하여, 2 이상의 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).
FcR로의 개선되거나 감쇠된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들어, 하기 참고: 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)).
특정 구현예에서, 항체 변이체는 ADCC를 증진시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예컨대, Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다 (잔기의 EU 넘버링).
일부 구현예에서, 변경은 예를 들어 하기에 기술된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선되거나 감쇠된) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 유발하는 Fc 영역 내에서 제조된다: 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
증가된 반감기 및 태아로의 모체 IgG의 이동에 원인으로 작용하는, 신생아 Fc 수용체 (FcRn)로의 개선된 결합을 갖는 항체 (Guyer et al., J. Immunol . 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol . 24:249 (1994))가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재된다. 상기 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 그안에 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 상기 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434의 하나 이상에서 치환, 예를 들면, Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 7,371,826).
Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 또한 하기를 참고한다: Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351.
d) 시스테인 가공된 항체 변이체
특정 구현예에서, 시스테인 가공된 항체, 예를 들면, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환되는 "thioMAb,"를 제조하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 상기 잔기를 시스테인으로 치환시킴으로써, 반응성 티올기는 그렇게 함으로써 항체의 접근가능한 부위에 배치되고, 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 중간체에 항체를 콘주게이트하는데 사용되어, 본원에서 추가로 기재된 바와 같이, 면역콘주게이트를 제조할 수 있다. 특정 구현예에서, 하기의 잔기들 중 임의의 하나 이상은 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카밧 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 가공된 항체는, 예를 들면, 미국 특허 제7,521,541호에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
e) 항체 유도체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 당업계에 공지되어 있고 쉽게 이용 가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 비제한적으로 수용성 폴리머를 포함한다. 수용성 폴리머의 비-제한적인 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 코폴리머, 폴리아미노산 (호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 비닐피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 호모폴리머, 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 코-폴리머, 폴리옥시에틸화된 폴리올 (예를 들면, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 물에서 그 안정성 때문에 제조시 이점을 가질 수 있다. 폴리머는 임의의 분자량일 수 있고, 그리고 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 폴리머의 수는 다양할 수 있고, 만일 1 초과 폴리머가 부착되면, 이들은 동일 또는 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용된 폴리머의 수 및/또는 유형은, 만일 항체 유도체가 한정된 조건하에서의 요법 등에서 사용된다면, 비제한적으로, 개선되는 항체의 특정한 특성 또는 기능을 포함하는 고려사항에 기반하여 결정될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 방사선에 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티 및 항체의 콘주게이트가 제공된다. 일 구현예에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (참고: Kam et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장일 수 있으며, 보통의 세포에는 유해하지 않지만 비단백질성 모이어티를 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포가 사멸하는 온도로 가열시키는 파장을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
A. 재조합 방법 및 조성물
항체는, 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 제조할 수 있다. 일 구현예에서, 본원에서 기재된 항-CD20 항체를 암호화하는 단리된 핵산이 제공된다. 상기 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열(예컨대, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)를 암호화할 수 있다. 추가 구현예에서, 상기 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 (예를 들면, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구현예에서, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 한 상기 구현예에서, 숙주 세포는 하기를 포함한다 (예를 들면, 하기로 변형된다): (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제2 벡터. 일 구현예에서, 숙주 세포는 진핵 세포, 예컨대, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프모양 세포(예컨대, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일 구현예에서, 항-CD20 항체를 제조하는 방법이 제공되고, 여기서, 상기 방법은 항체의 발현을 위해 적합한 조건 하에서 상기 제공된 바와 같이 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하고 임의로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
항-CD20 항체의 재조합 생산에 대하여, 예를 들면, 상기에서 기재된 바와 같이, 항체를 암호화하는 핵산은 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 단리 및 삽입된다. 이러한 핵산은 통상의 과정들(예컨대, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써)을 사용하여 쉽게 단리하고 서열분석할 수 있다.
항체-암호화 벡터의 클로닝 및 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 세포 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들면, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않은 경우, 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해, 참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523. (또한 참고: Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254,(이. 콜라이에서의 항체 단편의 발현을 기술)). 발현 이후, 항체는 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물 이외에, 글리코실화 경로가 "인간화"되어 일부 또는 전부 인간 글리코실화된 패턴을 갖는 항체를 생성할 수 있는 진균 및 효모 균주를 포함한 사상균 또는 효모균과 같은 진핵 미생물이 항체-암호화 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 참고: Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), and Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).
글리코실화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다중세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유도된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루지페르다 세포의 형질감염에 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 식별된다.
식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 참고: 예를 들면, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (형질전환 식물에서 항체 생산용 PLANTIBODIESTM기술 기재).
척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 현탁제에서 성장하도록 적응되는 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 하기이다: SV40 (COS-7)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통; 인간 배아 신장 계통 (예를 들면, Graham et al., J. Gen Virol . 36:59 (1977)에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 어린 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들면, Mather, Biol . Reprod . 23:243-251 (1980)에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 갯과 신장 세포 (MDCK; 버팔로 랫트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유선 종양 (MMT 060562); 예를 들면, Mather et al., Annals N.Y . Acad . Sci. 383:44-68 (1982)에 기재된 바와 같이 TRI 세포); MRC 5 세포; 및 FS4 세포. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포를 포함하고, 이는 하기를 포함한다: DHFR- CHO세포 (참고: Urlaub et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 하기를 참고한다: 예를 들면, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
B. 검정
본원에서 제공된 항-CD20 항체는 당해기술에서 공지된 다양한 검정에 의해 그 물리적/화학 특성 및/또는 생물학적 활성으로 확인, 스크리닝, 또는 특징화될 수 있다.
1. 결합 검정 및 기타 검정
일 양태에서, 본 발명의 항체는, 예를 들면, 공지된 방법 예컨대 ELISA, 웨스턴 블랏 등에 의해 그 항원 결합 활성에 대해 시험된다. CD20 결합은 당해 기술에서 공지된 방법을 이용하여 계측될 수 있고 예시적 방법은 본원에서 개시된다. 일 구현예에서, 결합은 방사면역검정을 이용하여 측정된다. 예시적인 방사면역검정은 아래에 제공된다. CD20 항체는 아이오딘화되고, 아이오딘화된 항체의 고정화된 농도 및 연속으로 희석된, 비표지된 CD20 항체의 감소 농도를 함유한 경쟁 반응 혼합물이 제조된다. CD20을 발현하는 세포 (예를 들면, 인간 CD20으로 안정되게 형질감염된 BT474 세포)는 반응 혼합물에 부가되었다. 항온처리 이후, 세포는 세정되어 세포에 결합된 CD20 항체로부터 유리 아이오딘화된 CD20 항체를 단리시켰다. 결합된 아이오딘화된 CD20 항체의 수준은, 예를 들면, 세포와 관련된 방사능, 및 표준 방법을 이용하여 측정된 결합 친화도 계수에 의해 계측된다. 또 다른 구현예에서, (예를 들면, B 세포 서브세트 상에서) 표면-발현된 CD20에 결합하는 CD20 항체의 능력은 유세포측정을 이용하여 평가된다. 말초 백혈구 세포는 (예를 들면, 인간, 시노몰구스 원숭이, 랫트 또는 마우스로부터) 수득되고 세포는 혈청으로 차단된다. 표지된 CD20 항체는 연속 희석으로 부가되고, T 세포는 (당해 기술에서 공지된 방법을 이용한) T 세포 서브세트를 식별하기 위해 또한 염색된다. 샘플의 항온처리 및 세정 이후, 세포는 흐름 세포측정기를 이용하여 분류되고, 당해 기술에서 잘 알려진 방법을 이용하여 데이터 분석된다. 또 다른 구현예에서, CD20 결합은 표면 플라스몬 공명을 이용하여 분석될 수 있다. 예시적 표면 플라스몬 공명 방법은 실시예에서 예시된다.
또 다른 양태에서, 경쟁 검정은 본원에서 기재된 CD20에의 결합을 위해 본원에 기술된 임의의 항-CD20 항체와 경쟁하는 항체를 식별하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 경쟁 항체는 CD20 항체 중 임의의 것에 의해 결합된 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 형태적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하기 위한 세부적인 예시적 방법은 다음 문헌에 제공되어 있다: Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ). 경쟁 검정은 실시예에서 예시된다.
예시적인 경쟁 검정에서, 고정화된 CD20은, CD20 (예컨대, 리툭시맙, GA101 항체, 등)에 결합하는 제1 표지된 항체 및 CD20으로의 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 그 능력에 대해 시험되는 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액에서 항온처리된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정화된 CD20은 제2 비표지된 항체가 아닌 제1 표지된 항체를 포함하는 용액에서 항온처리된다. CD20으로의 제1 항체의 결합에 허용된 조건 하에서 항온처리 이후, 과잉의 미결합된 항체는 제거되고, 고정화된 CD20에 관련된 표지의 양이 측정된다. 만일 고정화된 CD20에 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비하여 시험 샘플에서 실질적으로 감소되면, 그러면 그것은 제2 항체가 CD20에 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 것을 나타낸다. 참고: Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
활성 검정
본 개시내용의 항-CD20 항체 (예를 들면, 유형 II 항체)는 당해 기술에 공지된 하나 이상의 활성 검정에 의해 식별될 수 있고/있거나 상기를 특징으로 할 수 있다. 예를 들어, 보체-의존적 세포독성 (CDC) 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC)는, 본원에서 기재된 바와 같이, 사용될 수 있다.
임의의 검정이 항-CD20 항체 대신 또는 그 이외에 본 발명의 면역콘주게이트를 이용하여 수행될 수 있음이 이해된다.
임의의 상기 검정이 항-CD20 항체 및 추가 치료제를 이용하여 수행될 수 있음이 이해된다.
2. 면역콘주게이트
본 발명은 또한 하나 이상의 세포독성제, 예컨대 화학치료제 또는 약물, 성장 억제성 제제, 독소 (예를 들면, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 그 단편), 또는 방사성 동위원소에 콘주게이트되는 본원에서 항-CD20 항체를 포함하는 면역콘주게이트를 제공한다.
일 구현예에서, 면역콘주게이트는 항체가 비제한적으로 하기를 포함하는 하나 이상 상의 약물에 콘주게이트되는 항체-약물 콘주게이트 (ADC)이다: 메이탄시노이드(미국 특허 제5,208,020호, 제5,416,064호 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1); 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(미국 특허 제5,635,483호 및 제5,780,588호, 및 제7,498,298호 참조); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 이것의 유도체(미국 특허 제5,712,374호, 제5,714,586호, 제5,739,116호, 제5,767,285호, 제5,770,701호, 제5,770,710호, 제5,773,001호, 및 제5,877,296호 (참조: Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)); 안트라사이클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신 (참고: Kratz et al., Current Med . Chem . 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med . Chem . Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj . Chem . 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg . & Med . Chem . Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med . Chem . 45:4336-4343 (2002); 및 미국 특허 번호 6,630,579); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065.
또 다른 구현예에서, 면역콘주게이트는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, (슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터의) 외독소 A 쇄, 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 유동(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 미국 자리공(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 젤로닌, 미토젤린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센을 포함하지만 이에 제한되지 않는 효소 활성 독소 또는 이의 단편에 콘주게이트된 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 면역콘주게이트는 본원에 기술된 바와 같이, 방사선 활성 원자에 콘주게이트되어 방사콘주게이트를 형성하는 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사콘주게이트의 생산을 위해 사용가능하다. 예시는 하기를 포함한다: At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소. 방사콘주게이트가 검출을 위해 사용되는 경우, 이것은 신티그래프 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들면 tc99m 또는 I123, 또는 핵 자기 공명(NMR) 영상화(자기 공명 영상화, mri로도 공지됨)를 위한 스핀 표지, 예를 들면, 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
항체 및 세포독성제의 콘주게이트는 다양한 이중작용적 단백질 커플링제, 예를 들면, N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이중작용적 유도체(예를 들면, 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르(예를 들면, 디석신이미딜 수베레이트), 알데히드(예를 들면, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물(예를 들면, 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예를 들면, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예를 들면, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예를 들면, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)이 항체에의 방사성 뉴클레오티드의 콘주게이션을 위한 예시적인 킬레이트제이다. 참고: WO94/11026. 상기 링커는 상기 세포에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "쪼개질 수 있는 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정 링커, 펩티다제-민감성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸 링커 또는 이황화물-함유 링커 (Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); 미국 특허 제5,208,020호)가 사용될 수 있다.
본원의 면역콘주게이트가 명백히 고려되지만, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB를 포함하지만 이에 제한되지 않는 가교결합제 시약, 및 (예컨대, U.S.A 일리노이주 록퍼드에 소재하는 Pierce Biotechnology, Inc.로부터) 상업적으로 이용 가능한 SVSB(석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)로 제조된 이러한 콘주게이트에 제한되지 않는다.
장기 이식이 필요한 개체의 치료 방법
본 개시내용의 특정 양태는 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체의 치료 방법에 관한 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 장애 또는 병태를 "치료한다" 또는 "치료하는"은, 두 치료적 처치 및 예방적 또는 예방용 조치 (예를 들면, 양호한 치료 결과, 예컨대 이식편 생존, 이식편 기능의 공산의 증가, 또는 불량한 결과, 예컨대 치료에 불량한 반응의 공산의 감소, 또는 발생으로부터, 양호한 치료 공산, 예컨대 이식을 감소시키는 병태)를 포함하는, 약효 또는 다른 요법에 의한 장애 또는 병태의 관리를 지칭한다. 본원에서 지칭된 "장애 또는 병태"는 장애 또는 병태와 관련된 상태 및 증상, 그리고 장애 또는 병태, 예컨대 감작, 과잉감작, 고 PRA 수준 및/또는 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 기다리는 개체에 이식편의 이용가능성을 제한하는 기존의 동종이계항체의 존재의 치료 옵션에 개체의 접근을 방해하거나 제한하는 문제 또는 상태를 포함한다. 치료를 필요로 하는 자들은 이미 장애 또는 병태를 가진 자들 뿐만 아니라 이러한 장애 또는 병태를 예방하고자 하는 자들이 포함된다. 장애 또는 병태의 치료는 장애 또는 병태와 관련된 면역-매개된 사건을 억제, 장애 또는 병태의 증상을 완화, 장애 또는 병태의 중증도를 감소, 장애 또는 병태 진행의 과정을 변경, 및/또는 근본적 장애 또는 병태를 완화 또는 치유할 수 있다.
예를 들어, 장기 이식을 기다리는 개체의 성공적인 치료는, 비제한적으로, 동종이계항체의 수준 감소, 패널 반응성 항체 (PRA) 감소, 개체가 더 많은 교차-매칭 혼화성 공여자를 갖게 함, 이식편을 수용하기 위해 개체의 공산 또는 확률 증가, 이식편에 대한 개체의 예상된 대기 기간 단축, 개체의 탈감작(densensitizing), 이식-관련된 증상 또는 병태 (예컨대 아래에 기재된 바와 같이 면역-매개된 사건)의 위험 저하, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
예를 들어, 장기 이식을 수용하는 개체의 성공적인 치료는, 비제한적으로, 장기 이식과 관련된 하나 이상의 증상 또는 바람직하지 않은 상태, 예컨대, 비제한적으로, 증상 또는 상태의 작용성 또는 조직학적 징후에 의해 측정된 경우, 공여자-특이적 동종이계항체 (DSA)의 생산, 항체-매개된 거부반응 (AMR), 초급성 이식편 거부반응, 만성 이식편 거부반응, 이식편 실패, 및 이식편 손실을 포함하는, 면역-매개된 사건의 제어, 역전, 경감, 지연, 또는 예방을 포함하는, 장기간 동안 이식된 장기 또는 조직의 보호 및 유지를 포함한다. 장애 또는 병태 (예를 들면, 이식편 거부반응)를 제어할 수 있는 치료는, 장애 또는 병태 (예를 들면, 이식편 거부반응)의 작용성 또는 조직학적 징후가 관측된 이후 개시된 경우, 질환 과정의 진행을 느리게 하는 치료를 포함할 수 있다. 추가로, 장애 또는 병태 (예컨대, 이식편 거부반응)을 역행시킬 수 있는 치료는, 하기인 치료를 포함한다: 장애 또는 병태 (예컨대, 이식편 거부반응)의 기능적 또는 조직학적 징후가 나타날 때, 질환 진행을 역행시키고, 정상에 보다 가까운 기능적이고 조직학적 발견으로 회귀시키는 치료. 장애 또는 병태 (예를 들면, 이식편 거부반응)의 "진행을 지연" 시킬 수 있는 치료는 장애 또는 병태 (예를 들면, 이식편 거부반응) 발생의 지연, 저해, 둔화, 지체, 안정화, 및/또는 연기를 포함할 수 있다. 상기 지연은 질환의 이력 및/또는 치료받는 개체에 따라 다양한 시간의 길이일 수 있다. 당해 분야의 숙련가에 명백한 바와 같이, 충분한 또는 상당한 지연은, 사실상, 개체, 예를 들면, 장애 또는 병태의 발생 위험에 처한 개체가 장애 또는 병태를 발생시킨다는 점에서 예방을 포함한다.
본 발명에 의해 고려된 장기 이식은, 비제한적으로, 골수, 신장, 심장, 간, 뉴런의 조직, 폐, 췌장, 및 기타 동종의 것의 적합한 이식편의 이식을 포함한다.
일부 구현예에서, 개체는 신장 이식이 필요하다. 일부 구현예에서, 개체는 만성 신장 질환을 지닌다. 일부 구현예에서, 개체는 미국의 국립 신장 재단의 설명서에 의해 지정된 바와 같이 만성 신장 질환의 임의의 단계 1, 2, 3A, 3B, 4, 또는 5를 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 약 임의의 >90 mL/min, 약 60-90 mL/min, 약 45-60 mL/min, 약 30-40 mL/min, 약 15-29 mL/min, 및 15 mL/min 미만의 GFR 수준을 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 5기 만성 신장 질환 또는 말기 신부전을 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는, 말기 신장 질환 (ESRD), 신장이 일일 생활에 필요한 수준으로 더이상 작동할 수 없을 경우 발생하는 병태를 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 15 mL/min 미만의 사구체 여과율 (GFR)을 갖는다. 일부 구현예에서, ESRD는 당뇨병, 높은 혈압, 신장에 대한 손상 또는 트라우마, 만성 신장 질환 (예를 들면 단계 V 만성 신장 질환), 주요 혈액 손실, 또는 신장의 기능을 손상시키는 다른 상태에 의해 야기된다. 일부 구현예에서, 개체는 약 임의의 1 개월, 3 개월, 6 개월, 12 개월, 2 년, 3 년, 4 년, 5 년 또는 초과 동안 투석 중이다.
일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대, 신장 이식)을 필요로 하는 개체는 장기 이식을 위하여 대기 중이다. 일부 구현예에서, 개체는 살아있는 공여자로부터 이식편 장기를 대기중이다. 일부 구현예에서, 개체는 죽은 공여자로부터 이식편 장기를 대기중이다. 일부 구현예에서, 개체는, 적어도 약 6 개월, 9 개월, 1 년, 2 년, 3 년, 5 년 이상 중 임의의 것, 또는 이식을 금지시킨 양성 교차-매칭으로의 적어도 하나의 죽은 공여자 공급을 수용하기에 충분한 시간 동안 장기 배정 프로그램 (예컨대 UNOS)의 대기 목록 상에 있었다.
일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체는, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 이상 중 임의의 것의 PRA (예컨대 cPRA)를 갖는다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체는 약 5% 내지 약 99%, 약 2% 내지 약 50%, 약 50% 내지 약 99%, 약 5% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 30%, 약 30% 내지 약 40%, 약 40% 내지 약 50%, 약 50% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 80%, 또는 약 40% 내지 약 70% 중 임의의 하나의 PRA (예컨대 cPRA)를 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 감작된다. 일부 구현예에서, 개체는 과잉감작된다 (예를 들면, 약 20% 초과 또는 약 30% 초과의 PRA를 갖는다). 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여함으로써, 적어도 20% (예컨대 적어도 30%)의 PRA (예컨대 cPRA)를 갖는 개체에서 동종이계항체의 수준을 감소시키기 위한 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 개체는 외래 동종이계항원에 개체를 노출시키는 이전의 노출 사건을 경험하고 있다. 일부 구현예에서, 개체는 이전의 장기 이식, 수혈, 이전의 임신, 또는 이들의 임의의 조합을 경험하고 있다. 일부 구현예에서, 개체가 항-CD20 항체 치료를 수용하는 시간 이전에 개체는 약 임의의 5 년, 4 년, 3 년, 2 년, 1 년 또는 미만 이내(withint) 노출 사건을 경험하고 있다. 일부 구현예에서, 개체는 1 초과 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 또는 초과) 노출 사건을 경험하고 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법은, 예컨대, 이식 이전에, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 예컨대, 이식 이전에, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 예컨대, 이식 이전에, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 본원에서 기재된 임의의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 및/또는 상기 항체의 용량, 예를 들면, GA101 항체 예컨대 오비누투주맙은 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 7일 내지 약 21일 후 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량 이후 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 또는 약 21 일 중 약 임의의 하나 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 미만 후 투여된다: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21일. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 초과 후 투여된다: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20일. 즉, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 일의 상한선 및 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 일의 독립적으로 선택된 하한선을 가진 제1 용량으로부터 수일 후 투여되고, 여기에서 하한선은 상한선 미만이다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 1주 내지 약 3주 후 투여된다. 특정 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 2주 후에 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, 예컨대, 이식 이전에, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 154일 내지 약 182일 후 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은, 상기 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 중 임의의 것 후 투여된다: 약 154, 약 155, 약 156, 약 157, 약 158, 약 159, 약 160, 약 161, 약 162, 약 163, 약 164, 약 165, 약 166, 약 167, 약 168, 약 169, 약 170, 약 171, 약 172, 약 173, 약 174, 약 175, 약 176, 약 177, 약 178, 약 179, 약 180, 약 181, 또는 약 182 일. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 미만 후 투여된다: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 또는 182일. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 초과 후 투여된다: 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 또는 181일. 즉, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 또는 182일의 상한선을 갖고, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 또는 181일 중 독립적으로 선택된 하한선을 갖는, 제1 용량으로부터 수일 후 투여되며, 여기서 하한선은 상한선 미만이다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 22주 내지 약 26주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 또는 약 26 주 중 약 임의의 것 후 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 주수 중 임의의 것 미만 후 투여된다: 26, 25, 24, 또는 23주. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 주수 중 임의의 것 초과 후 투여된다: 22, 23, 24, 또는 25주. 즉, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은, 26, 25, 24, 또는 23 주의 상한선을 갖고, 22, 23, 24, 또는 25 주로부터 독립적으로 선택된 하한선을 갖는, 제1 용량으로부터 수주 후 투여되며, 여기서 하한선은 상한선 미만이다. 특정 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 유형 II 항-CD20 항체의 제1 용량으로부터 약 24주 후에 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은, 만약 개체의 PRA 값이, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량 및/또는 제2 용량 후 약 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 또는 50% 중 임의의 것 미만의 PRA 값으로 감소되지 않을 경우 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은, 만약 개체의 PRA 값이, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량 및/또는 제2 용량 후 약 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 또는 50% 중 임의의 것 미만의 PRA 값으로 감소될 경우 투여되지 않는다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은, 개체가 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 20 주 내지 약 28 주 (예컨대 약 23 주 및 약 25 주, 또는 약 24 주) 후 적어도 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 이상 중 임의의 것의 PRA을 가질 경우, 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은, 만약 개체가 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 및/또는 제2 용량 후 이식편 거부반응의 높은 위험 (예컨대, 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 이상의 확률 중 임의의 것)을 가질 경우 투여된다.
일부 구현예에서, 개체는 항-CD20 항체의 제1 용량 및/또는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량 이후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다. 일부 구현예에서, 개체는, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 6 주, 8 주, 10 주, 12 주, 14 주, 16 주, 18 주, 20 주, 22 주, 24 주, 26 주, 28 주, 30 주, 32 주, 34 주, 36 주, 38 주, 40 주, 42 주, 44 주, 46 주, 48 주, 50 주, 또는 52 주 중 임의의 것 후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다. 일부 구현예에서, 개체는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기의 주수 중 임의의 것 미만의 주수 후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다: 52, 50, 48, 46, 44, 42, 40, 38, 36, 34, 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 또는 8주. 일부 구현예에서, 개체는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기의 주수 중 임의의 것 초과의 주수 후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 또는 50주. 즉, 개체는 52, 50, 48, 46, 44, 42, 40, 38, 36, 34, 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 또는 8 주의 상한선 및 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 또는 50 주 중 독립적으로 선택된 하한선을 갖는 범위를 갖는 임의의 주수 내에 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용할 수 있고, 여기서 하한선은 상한선 미만이다. 일부 구현예에서, 개체는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 6 주 내지 약 52 주 후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다. 특정 구현예에서, 예컨대, 만약 개체가 유형 II 항-CD20 항체의 제3 용량을 수용할 경우, 개체는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 28 주 내지 약 52 주 후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다. 일부 구현예에서, 개체는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 가장 최근 용량으로부터 적어도 약 4주 (포함) 후 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용한다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식 (예컨대, 신장 이식) 이전에 개체에게 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 이식 "이전"은 이식 이전 임의의 시간 적어도 1 주, 적어도 2 주, 적어도 3 주, 또는 적어도 4 주를 지칭할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식 (예컨대, 신장 이식)과 동시에 개체에게 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 이식"과 동시"는 이식의 2 일 또는 48 시간 이내 임의의 시간을 지칭할 수 있고 비제한적으로 이식 절차의 정확한 시간이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 이식과 동시에 개체에게 투여된 유형 II 항-CD20 항체의 용량은 이식의 6 시간 이내, 12 시간 이내, 18 시간 이내, 24 시간 이내, 30 시간 이내, 36 시간 이내, 42 시간 이내, 또는 48 시간 이내 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식 (예컨대, 신장 이식) 이후에 개체에게 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 이식 "이후"는 이식 이후 임의의 시간 적어도 1 주, 적어도 2 주, 적어도 3 주, 또는 적어도 4 주를 지칭할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식 (예컨대, 신장 이식) 이후에 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 예컨대, 이식 이후에, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 154일 내지 약 182일 후 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은, 이식으로부터 약 하기 중 임의의 것 후 투여된다: 약 154, 약 155, 약 156, 약 157, 약 158, 약 159, 약 160, 약 161, 약 162, 약 163, 약 164, 약 165, 약 166, 약 167, 약 168, 약 169, 약 170, 약 171, 약 172, 약 173, 약 174, 약 175, 약 176, 약 177, 약 178, 약 179, 약 180, 약 181, 또는 약 182 일. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 미만 후 투여된다: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 또는 182일. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 초과 후 투여된다: 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 또는 181일. 즉, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 또는 182일의 상한선을 갖고, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 또는 181일 중 독립적으로 선택된 하한선을 갖는, 이식으로부터 수일 후 투여되며, 여기서 하한선은 상한선 미만이다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식 (예컨대, 신장 이식) 이후에 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 예컨대, 이식 이후에, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 22주 내지 약 26주 후 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 또는 약 26 주 중 임의의 것 후 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 하기 주수 중 임의의 것 미만 후 투여된다: 26, 25, 24, 또는 23주. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 하기 주수 중 임의의 것 초과 후 투여된다: 22, 23, 24, 또는 25주. 즉, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은, 26, 25, 24, 또는 23 주의 상한선을 갖고, 22, 23, 24, 또는 25 주로부터 독립적으로 선택된 하한선을 갖는, 이식으로부터 수주 후 투여되며, 여기서 하한선은 상한선 미만이다. 특정 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 이식으로부터 약 24주 후 투여된다.
본원에서 기재된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 임의의 또는 모든 용량에서 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 양은, 예를 들어, 장기 이식의 유형, 이용된 항-CD20 항체의 유형, 제2 약제의 유형이 이용되는지 여부 및 이용되는 것, 그리고 투여의 방법 및 빈도에 의존적일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 800 mg, 850 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg, 1050 mg, 1100 mg, 1050 mg 또는 1200 mg 중 임의의 것을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 하기 범위를 함유할 수 있으며, 여기서 상기 범위는 하기 하기를 가지며: 약 850 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg, 1050 mg, 1100 mg, 1050 mg 또는 1200 mg 중 임의의 것의 상한선, 및 임의의 800 mg, 850 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg, 1050 mg, 1100 mg, 또는 1150 mg의 독립적으로 선택된 하한, 여기서 하한은 상한 미만이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 약 900 mg 내지 약 1100 mg (예컨대, 약 1000 mg)이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 약 900 mg 내지 약 1100 mg (예컨대, 약 1000 mg)이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제3 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 약 900 mg 내지 약 1100 mg (예컨대, 약 1000 mg)이다. 일부 구현예에서, 이식과 동시에 투여되는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 약 900 mg 내지 약 1100 mg (예컨대, 약 1000 mg)이다. 일부 구현예에서, 이식 후 투여되는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 약 900 mg 내지 약 1100 mg (예컨대, 약 1000 mg)이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 유형 II 항-CD20 항체는 정맥내로 (예컨대, IV 주입으로) 투여된다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 유형 II 항-CD20 항체는 피하로 투여된다.
본원에서 기재된 임의의 투여 프로토콜 및 레지멘은 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체의 치료를 위하여 아래 기재된 약제의 제조에서 임의의 방법, 조성물, 및 용도에 적용될 수 있다.
항-CD20 항체가 본원에서 기재된 임의의 방법으로 개체에게 투여된 유일한 약물일 수 있는 한편, 일부 구현예에서, 방법은 추가로 제2 약제를 개체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기에서 항-CD20 항체는 제1 약제이다. 일부 구현예에서, 제1 약제 및 제2 약제는, 동시에 투여되거나, 단일 조성물로서, 또는 개별 조성물로 (상동하거나 상이한 경로를 통하는 것을 포함) 개체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 약제 및 제2 약제는 개체에 순차적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제2 약제는 개체에 항-CD20 항체의 투여 이전에 (예를 들면, 적어도 약 임의의 6 시간, 12 시간, 1 일, 2 일, 3 일, 7 일, 또는 그 이상 이전에) 투여된다. 일부 구현예에서, 제2 약제는 개체에 항-CD20 항체의 투여 이후 (예를 들면, 적어도 약 임의의 6 시간, 12 시간, 1 일, 2 일, 3 일, 7 일, 또는 그 이상 이후) 투여된다.
일부 구현예에서, 본 방법은, 예컨대, 이식 (예컨대 신장 이식) 이전에, 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 용량을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. IVIG는, 정맥내로 투여될 수 있는, 다양한 형태의 제형으로 1,000 이상 혈액 공여자로부터 혈장 풀에서 수득된 정상 다중특이적 IgG의 치료 제제로서 당해 기술에 공지되어 있다. IVIG 레지멘은 HLA-감작된 이식 수용자에서 면역조절제로서 사용되고 있다 (참고 예를 들어, 미국 특허 번호 6,171,585). 고 용량 IVIG는 고 복용량, 예컨대 약 2g/kg으로 투여된 IVIG를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 고 용량 IVIG는 매월 투여된다.
일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 14일 내지 약 28일 후 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량 이후 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 또는 약 28 일 중 약 임의의 하나 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 미만 후 투여된다: 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 또는 15일. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 초과 후 투여된다: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27일. 즉, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 또는 15 일의 상한 및 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 일의 독립적으로 선택된 하한을 가진 제1 용량으로부터 수일 후 투여되고, 여기서 하한은 상한 미만이다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 21일 후 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 2주 내지 약 4주 후 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 후 투여된다.
일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량 후 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 약 40, 약 41, 약 42, 약 43, 약 44, 약 45, 약 46, 약 47, 약 48, 또는 약 49 일 중 약 임의의 것 후 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 미만 후 투여된다: 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 또는 36일. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 하기 일수 중 임의의 것 초과 후 투여된다: 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48일. 즉, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 또는 36 일의 상한 및 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48 일의 독립적으로 선택된 하한을 가진 제1 용량으로부터 수주 후 투여되고, 여기서 하한은 상한 미만이다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 42일 후 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 5주 내지 약 7주 후 투여된다. 일부 구현예에서, IVIG (예컨대 고용량)의 제2 용량은 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 제1 용량으로부터 약 5주, 약 6주, 또는 약 7주 후 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD20 치료는, 장기 이식의 특정한 유형, 및 장기 이식을 수용하는 개체의 특이적 상태에 기반된 당해 기술에서 숙련된 사람에 의해 선택될 수 있는, 돌봄표준 요법에 더하여 개체에게 투여된다. 돌봄표준 요법의 투여, 투여 경로 및 스케줄은 당해 기술에서 공지된 것들에 기반하여 선택될 수 있다. 예를 들어, 신장 이식을 위한 예시적인 돌봄표준 요법은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 이식 직후, 생물학적 유도 제제, 예컨대 알렘투주맙 및/또는 다른 면역억제성 또는 면역조절 항체; 표준 면역억제제, 예컨대 마이코페놀레이트 모페틸 (예를 들면 2 분할 용량으로 제공된 1200 mg/m2/일), 타크롤리무스 (예를 들면 매일 2회 분할된 0.2-0.3 mg/kg), 프레드니손 (예컨대 부하 용량 및 테이퍼), 및 이들의 조합; 및 감염-예방적 제제, 예컨대 강시클로비르, 발강시클로비르, 나이스타틴, 트리메토프림, 설파메톡사졸, 다른 바이러스성, 진균, 및 박테리아 예방적 제제, 및 이들의 조합. 본원에서 사용된 바와 같이 "면역억제제"는 이식편이 이식되고 있는 숙주의 면역계를 억제 또는 저지하는 제제를 지칭한다. 이것은, 예를 들면, 시토카인 생산을 억제하고, 자기-항원 발현을 하향조절하거나 억제하고, 또는 MHC 항원을 마스킹하는 물질을 포함할 것이다. 본 개시내용에 의해 고려된 예시적인 면역억제제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 2-아미노-6-아릴-5-치환된 피리미딘 (참고 미국 특허 번호 4,665,077), 아자티오프린 (또는 사이클로포스파마이드, 아자티오프린에 대한 역반응이 있는 경우); 브로모크립틴; (미국 특허 번호 4,120,649에 기재된 바와 같이, MHC 항원을 저지하는) 글루타르알데하이드; MHC 항원 및 MHC 단편에 대한 항-이디오타입 항체; 사이클로스포린 A; 스테로이드 예컨대 글루코코르티코스테로이드, 예를 들면, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 및 덱사메타손; 항-인터페론-γ, -β, 또는 -α 항체를 포함하는 사이토카인 또는 사이토카인 수용체 길항제; 항-종양 괴사 인자-α 항체; 항-종양 괴사 인자-β 항체; 항-인터류킨-2 항체 및 항-IL-2 수용체 항체; 항-L3T4 항체; 이종성 항-림프구 글로불린; 팬-T 항체, 바람직하게는 항-CD3 또는 항-CD4/CD4a 항체; LFA-3 결합 도메인을 함유하는 가용성 펩티드 (1990년 7월 26일 공개된 WO 90/08187); 스트렙토키나제; TGF-β; 스트렙토도마제; 숙주로부터 RNA 또는 DNA; FK506; RS-61443; 데옥시스페르구알린; 약물 표적화 이뮤노필린 (예를 들면, 타크롤리무스, 시롤리무스, 라파마이신 및 그것의 유사체, 사이클로스포린, 및 기타 동종); mTOR 활성 부위 억제제; T-세포 수용체 (미국 특허 번호 5,114,721); T-세포 수용체 단편 (Offner et al., Science 251: 430-432 (1991); WO 90/11294; 및 WO 91/01133); 및 T-세포 수용체 항체 (EP 340,109) 예컨대 T10B9. 이들 제제들은 항-CD20 항체로부터 동일한 시간 또는 별개의 시간에 투여되고, 당해 기술에 제시된 것과 동일한 또는 제시된 것보다 더 적은 복용량으로 사용된다.
본 발명의 일 양태에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 동종이계항체의 수준을 감소시키기 위한 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 중 동종이계항체의 수준은 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 이상 중 임의의 것 만큼 감소된다. 본원에서 사용된 "감소한다" 또는 "감소하는"은 치료 이전에 동일한 개체의 수준 또는 값에 관한 감소, 및 치료 없이 비교가능한 개체의 그룹의 평균 또는 중앙 수준 또는 값에 관한 감소를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "비교가능한 개체"는 유사한 장애 또는 병태 (중증도, 지속기간, 유전적 소인, PRA, 증상, 및/또는 돌봄표준 레지멘, 등 포함), 및 임의로 유사한 인구통계 인자 (예컨대 연령, 성별, 인종, 등)을 가진 개체를 지칭할 수 있다. 감소는 일시적 감소, 특정한 시점에서 (예컨대 치료 직후, 교차-매칭의 시간에, 또는 장기 이식을 수용하기 이전에) 측정된 감소, 또는 연장된 기간에 걸쳐 (예컨대 약 임의의 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 12 개월, 18 개월, 2 년, 3 년, 5 년 또는 초과)의 지속된 감소를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식) 이전에 개체에서 동종이계항체의 수준을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 동종이계항체의 수준의 지속된 감소를 제공하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 동종이계항체의 수준의 반등을 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 반등은 특정 기간 (예컨대 약 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 12 개월 이상 중 임의의 것) 내에 개체에서의 치료 이전에 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 중 임의의 것의 동종이계항체의 초기 수준으로의, 동종이계항체의 수준의 증가이다.
일부 구현예에서, 본원에서 고려된 동종이계항체의 수준은 개체에서 모든 동종이계항체의 양, 동종이계항체 (예컨대 동종이계항원의 특이적 부류에 대한 동종이계항체, 특이적 면역글로불린 이소형의 동종이계항체, 등)의 특이적 부류의 양, 또는 동종이계항체의 대표적인 종 또는 종의 대표적인 풀의 양을 포함한다. 항체 (예컨대 동종이계항체 또는 동종이계항체의 하위유형)의 수준은 또한 항체의 "역가"로서 지칭될 수 있다. 동종이계항체의 수준은, 비제한적으로, 유세포측정, 면역검정, 보체 의존적 세포독성 (CDCs) 검정, 및 다른 표준 교차-매칭 기술을 포함하는, 당해 기술에 공지된 임의의 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 새롭게 채집된 혈청 샘플은 동종이계항체의 수준을 측정하는데 사용된다. 다른 적합한 샘플, 예컨대 체액, 림프양 생검, 비장 생검, 또는 기타 동종의 것은 또한 동종이계항체의 수준을 측정하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 동종이계항체는 항-HLA (항-HLA 부류 I 및 항-HLA 부류 II 포함) 동종이계항체이다. 일부 구현예에서, 동종이계항체는 A, B, Bw4, Bw6, 및 DR, HLA-Cw, DRw51, DRw52, DRw53, 또는 DQ 항원을 포함하는 항원에 특이적이다. 일부 구현예에서, 동종이계항체는 IgG 및/또는 IgM 이소형을 갖는다. 일부 구현예에서, 동종이계항체는 패널 반응성 항체, 또는 당해 기술에 공지된 표준 패널 반응성 항체 (PRA) 시험에서 사용된 공여자 세포 (예컨대 공여자 B 및/또는 T 림프구)의 풀에 대해 반응성인 동종이계항체를 포함한다.
일부 구현예에서, 동종이계항체는 기존의 동종이계항체, 예컨대 외래 동종이계항원에 개체의 이전의 노출 때문에 발생되고 있는 동종이계항체이다. 외래 동종이계 항원으로 개체를 노출시키는 예시적인 노출 사건은 비제한적으로, 사전의 장기 또는 조직 이식, 수혈, 임신, 및 이의 임의의 조합을 포함한다. 노출 사건은 최근 사건, 또는 먼 과거 (예를 들면, 1 년 초과 이전)에서 발생된 사건, 단수 사건, 또는 반복된 사건일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, (예컨대 사전의 노출 사건에 의하여) 감작되지 않은 개체에서 발견된, 정상 수준으로 개체에서의 사전-존재 동종이계항체 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, (예컨대 사전의 노출 사건에 의하여) 감작되지 않은 개체에서 발견된, 수준의 약 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2, 1.5, 또는 1 배 중 임의의 것으로 개체에서의 사전-존재 동종이계항체 수준을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체의 패널 반응성 항체 (또한 "PRA"로 지칭됨) (패널 반응성 항체의 수준, 또는 하기 기술된 PRA 값 포함)를 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 개체의 PRA (예컨대 cPRA)는, 유사 시험 조건 하에서 측정된, 그리고 치료 이전의 PRA (예컨대 cPRA)와 비교하여, 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 이상 중 임의의 것 만큼 감소된다. 용어 "PRA" 또는 "패널 반응성 항체"는 개체의 혈청이 반응하고 세포 사멸을 유도하는 공여자 림프구의 풀의 백분율의 측정을 지칭한다. PRA는, 시험되고 있는 개체가 기존 동종이계항체 (예컨대 HLA 항원에 대한 동종이계항체)와 반응할 공여자 집단의 예상된 분율을 나타낼 수 있는, 0% 내지 99% 백분율(percetage)로서 표현될 수 있다. X%의 PRA는 개체가 공여자의 X%와 교차-매칭 비혼화성 것으로 예상되는 것을 나타낼 수 있다. PRA 값은, 이식편 장기에 대한 대기(wariting) 목록에서 개체를 위한 이용가능한 이식편 장기의 배정 우선순위를 정하기 위해, 이식 배정 시스템, 예컨대 미국 장기기증 네트워크 (UNOS)에서 전형적으로 사용된다. 더 높은 PRA를 가진 개체는 더 낮은 PRA를 가진 개체보다 적합한 장기를 제공받기 이전 대기 목록에서 장기간 동안 대기하는 것이 예상된다. PRA의 결정된 값은 PRA 시험의 감수성, 뿐만 아니라 풀에서 공여자 항원의 선택에 의존할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, PRA는 PRA의 변형, 예컨대 산출된 PRA (cPRA)를 또한 지칭할 수 있다. 예를 들어, 2009년에 UNOS에 의해 도입된 cPRA는 허용될 수 없는 HLA 항원 (또는 개체의 기존 동종이계항체에 의해 기술적으로 인식된 HLA 항원)의 빈도, 뿐만 아니라 허용될 수 없는 HLA 항원의 하나 이상을 발현하는 실제(acutal) 장기 공여자의 백분율을 나타내기 위해 2003년부터 2005년까지 미국에서 대략 12,000 신장 공여자 중에서 HLA 항원의 빈도에 기반하여 산출된다. 고 PRA (예컨대 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 초과)를 가진 개체는 "감작된" 또는 "과잉감작된" 것으로 간주될 수 있다. (예컨대 낮은 빈도 HLA 대립유전자 또는 혈청형을 갖는) 유전적 소인에 더하여, 개체는 동종이계항체의 발생을 초래할 수 있는 외래 인간 항원에 노출에 의해 감작되어질 수 있다. 외래 인간 항원에 개체를 노출시키는 예시적인 노출 사건은, 비제한적으로, 이전의 이식, 수혈, 임신 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. "감작된" 개체는 고 PRA를 가질 수 있고/있거나, 이전의 하나 이상의 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 초과 포함) 노출 사건을 경험하고 있을 수 있다.
일부 구현예에서, PRA의 감소는 잠재적인, 교차-매칭 혼화성 공여자로부터 이식편을 이용하는 차후의 성공적인 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 교차-매칭 혼화성 공여자는 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 수용하는 수용체 이전에 수용체로 교차-매칭 비혼화성일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 유망한 장기 이식 (예컨대 신장 이식) 수용자에 투여함으로써 교차-매칭 비혼화성 공여자를 교차-매칭 혼화성 공여자로 전환시키는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)에 대해 대기중인 감작된 개체 (예컨대 과잉감작된 개체)를 탈감작시키기 위한 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 탈감작된 개체는 치료 이후 초기 교차-매칭(corssmatch) 비혼화성 공여자로부터 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용하는 것이 가능해진다.
일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)에 대해 대기중인 개체의 대기 시간을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 개체의 대기 시간은, 동일한 장기 이식을 기다리는 (예를 들면 치료 이전에 개체로서 유사한 PRA를 갖는) 비교가능한 개체의 그룹의 대기 시간의 평균값 또는 중앙값과 비교된, 약 임의의 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 9 개월, 12 개월, 18 개월, 24 개월, 36 개월, 48 개월, 60 개월(monhts), 또는 초과만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 개체의 대기 시간은, 동일한 장기 이식을 기다리는 (예를 들면 치료 이전에 개체로서 유사한 PRA를 갖는) 비교가능한 개체의 그룹의 대기 시간의 평균값 또는 중앙값과 비교하여, 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 중 임의의 것 만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 살아있는 장기 공여자 유래의 이식편 장기에 대한 개체의 대기 시간을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 방법은 죽은 장기 공여자로부터 이식편 장기에 대하여 개체의 대기 시간을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 적합한 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용할 공산을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 적합한 장기 이식을 수용할 공산은 약 임의의 하나의 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 초과만큼 증가된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 투여 후 약 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 12 개월, 또는 그 이상 중 임의의 것 내에 적합한 장기 이식을 수용할 공산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 투여 후 약 6 개월 내지 12 개월, 6 개월 내지 10 개월, 6 개월 내지 9 개월, 4 개월 내지 8 개월, 및 5 개월 내지 7 개월 중 임의의 것 내에 적합한 장기 이식을 수용할 공산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 투여 후 36주 또는 9개월 이내의 적합한 장기 이식을 수용할 공산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 살아있는 장기 공여자 유래의 이식편 장기를 수용하기 위한 개체의 공산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 죽은 장기 공여자 유래의 이식편 장기를 수용하기 위한 개체의 공산을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식) 후 개체 (예컨대 감작된 개체)에서의 이식편 거부반응의 위험을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 이식편 거부반응은, 동종이계항체 (예컨대 DSA) 또는 T 세포에 의해 매개된, 체액성 또는 세포 면역 반응에 의해 매개된, 급성 (예컨대 약 임의의 1 주, 2 주, 4 주, 6 주, 8 주, 12 주, 16 주, 24 주, 36 주 또는 초과 이내) 또는 만성 (예컨대 약 임의의 3 개월, 0.5 년, 1 년, 1.5 년, 2 년, 2.5 년, 3 년, 3.5 년, 4 년, 4.5 년, 5 년, 6 년, 10 년, 또는 초과)일 수 있다. 이식편 거부반응은, 비제한적으로, 초급성 반응(rection), 급성 항체-매개된 거부반응, 및 만성 공여자-특이적 항체 거부반응을 포함한다. 이식편 거부반응의 위험은 특정 기간 (예컨대 약 임의의 1 주, 2 주, 4 주, 8 주, 12 주, 24 주, 36 주, 52 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 0.5 년, 1 년, 1.5 년, 2 년, 2.5 년, 3 년, 3.5 년, 4 년, 4.5 년, 5 년, 6 년, 10 년, 또는 초과) 동안 전체 이식편 거부반응 발작의 발생빈도, 또는 이식편 거부반응 발작의 특이적 유형에 의해 계측될 수 있다. 이식편 거부반응 발작은 임의의 정도 또는 수준의 증상 발작, 및 이식편에 대한 손상 또는 면역 반응의 조직학적 징후를 가진 무증상 사건을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 이식편 거부반응의 위험은 항-CD20 항체 치료 없이 유사한 개체의 그룹 중에서 이식편 거부반응의 전형적인 위험 (예를 들면 위험의 평균값 또는 중앙값)에 대하여 약 임의의 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 초과만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 이식편 거부반응의 위험은 약 1 년 또는 12 개월 이내 평가된다. 일부 구현예에서, 이식편 거부반응은 세포성 면역 반응, 체액성 면역 반응, 또는 둘 모두에 의한 급성 (예컨대 장기 이식 후 약 12주 내의) 거부반응이다. 일부 구현예에서, 이식편 거부반응은, 급성 (예컨대 장기 이식 이후 약 24 주 이내) AMR 및 만성 (예컨대 장기 이식 이후 약 52 주 이내) AMR을 포함하는, 항체-매개된 거부반응 (AMR)이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식을 경험한 개체에서 이식편 거부반응을 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식을 경험한 개체에서 이식편 거부반응을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식) 후 통상적 면역억제제로의 치료에 대한 개체의 내성 전개를 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식을 경험한 개체에서 이식편 (예컨대 동종이계이식편) 내성을 개선시키는 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 공여자-특이적 항체 (DSA)를 감소시킴으로써 이식편 거부반응의 위험을 감소시킨다. DSA는 공여자 세포, 예컨대 이식편에서 세포를 구체적으로 인식할 수 있는 항-HLA 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, DSA는 기존 동종이계항체이다. 일부 구현예에서, DSA는 장기 이식 이후 이식편에 반응하여 개체에서 새롭게 생성된다. 일부 구현예에서, DSA는 이식편에 대한 세포독성 면역 반응으로 이어진다. 일부 구현예에서, DSA의 존재는 이식편 거부반응의 위험을 증가시킨다. 일부 구현예에서, DSA는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)으로부터 약 12 주, 24 주, 36 주, 48 주, 52 주, 또는 그 이상 중 임의의 것 후에 측정된다. 일부 구현예에서, DSA는 장기 이식 (예컨대 신장 이식) 이전에 상기의 시간에 측정된다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 DSA를 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 DSA의 낮은 수준을 유지하는 방법이 본원에 제공된다. DSA의 낮은 수준은 낮은 PRA (예컨대 30%, 20%, 5%, 또는 미만의 어느 하나의 미만)을 가진 개체에서 전형적으로 검출된 DSA의 수준, 또는 DSA가 작용성 또는 조직학적 징후 또는 증상에 의해 측정된 경우 이식편 장기에 대해 DSA의 부정적인 면역 반응으로 이어지는 DSA의 충분히 낮은 수준을 지칭한다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 경험한 개체에서 동종이계항체 (예컨대 DSA) 수준의 지속된 감소를 제공하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체로의 지속된 치료는, 장기 이식에 대해 대기중이거나 신장 이식 후 개체에서 동종이계항체 (예컨대 DSA)의 수준을 안정화시킨다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 경험한 개체에서 새로운 DSA의 생성을 억제하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 동종면역력의 억제 방법이 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 동종이계항원에 대한 내성을 유도하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 동종이계이식편 수용자에서 동종이계항체의 생성을 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 이식편 손실을 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 이식편 손실의 위험을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 이식편 손실은 이식편 거부반응, 예컨대 항체-매개 거부반응에 의하여 야기된다. 일부 구현예에서, 이식편 손실은 (예를 들면 공여자-특이적 항체에 의해 매개된) 만성 이식편 거부반응에 의해 야기된다. 일부 구현예에서, 이식편 손실의 위험은 항-CD20 항체 치료 없이 유사한 개체의 그룹 중에서 이식편 손실의 전형적인 위험 (예를 들면 위험의 평균값 또는 중앙값)에 대하여 약 임의의 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 초과만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 이식편 손실의 위험은, 장기 이식 (예컨대 신장 이식) 후 약 12 주, 24 주, 36 주, 52 주, 2 년, 3 년, 5 년, 또는 그 이상 중 임의의 것 내에 계측된다.
일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 이식편 생존을 연장하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 이식편 생존은, 유사한 장기 이식을 경험하고 있는 비교가능한 개체의 그룹 중에서 이식편 생존 시간의 평균값 또는 중앙값에 비교된, 약 임의의 3 개월, 6 개월, 9 개월, 12 개월, 18 개월, 24 개월, 36 개월, 48 개월, 60 개월(monhts), 또는 초과만큼 장기적이다. 일부 구현예에서, 이식편 생존은 유사한 장기 이식을 경험하고 있는 비교가능한 개체의 그룹 중에서 이식편 생존 시간의 평균값 또는 중앙값에 비교된 약 임의의 10%, 20%, 30%, 50%,75%, 100%, 200%, 500%, 또는 초과만큼 장기적이다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 이식편 기능을 개선하는 방법이 본원에서 제공된다. 이식편 기능은 당해 기술에 공지된 표준 검정 및 시험 방법을 이용하여 측정된다. 예를 들어, 신장 이식편 기능은 개체의 혈청 크레아티닌 값 측정에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 이식편 기능은, 장기 이식 (예컨대 신장 이식) 후 약 4 주, 12 주, 24 주, 36 주, 52 주, 2 년, 3 년, 5 년, 또는 그 이상 중 임의의 것 내에 측정된다. 일부 구현예에서, 이식편 기능은, 유사한 조건 하에서 측정된 유사한 장기 이식을 경험한 비교가능한 개체의 군의 이식편 기능의 평균값 또는 중앙값에 대하여, 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 이상 중 임의의 것 만큼 개선된다. 일부 구현예에서, 정상 또는 허용가능한 이식편 기능 (예컨대 상응하는 건강한 장기의 기능의 약 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 이상 중 임의의 것)은, 유사한 장기 이식을 경험한 비교가능한 개체의 군의 것과 비교하여 보다 더 긴 기간 (예컨대, 약 10%, 20%, 30%, 50%,75%, 100%, 200%, 500%, 또는 그 이상) 동안 개체에서 유지된다.
일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 삶의 질을 개선시키는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 항-CD20 항체의 투여는 상기 개체로 하여금 적합한 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용하는 것을 가능케한다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체의 장기적인 의료 비용을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 항-CD20 항체의 투여는 상기 개체로 하여금 적합한 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용하는 것을 가능케한다. 일부 구현예에서, 유효량의 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체의 전체 생존을 연장하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 항-CD20 항체의 투여는 상기 개체로 하여금 적합한 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 수용하는 것을 가능케한다. 일부 구현예에서, 개체의 전체 생존율은, 항-CD20 치료받음 없이, 및/또는 장기 이식받음 없이 비교가능한 개체의 그룹 중에서 전체 생존 평균값 또는 중앙값에 비교된, 약 임의의 3 개월, 6 개월, 9 개월, 12 개월, 18 개월, 24 개월, 3 년, 4 년, 6 년, 10 년 또는 초과만큼 장기적이다.
본 발명은 추가로 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체 치료에서 사용하기 위하여 본원에서 기재된 바와 같이 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 어느 하나를 제공한다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 동종이계항체 (예컨대 DSA)의 수준을 감소시키는데 사용하기 위한, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 PRA의 수준을 감소시키는데 사용하기 위한, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 이식편 거부반응 (예컨대 AMR)의 위험을 감소시키는데 사용하기 위한, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 이식편 생존을 연장시키는데 사용하기 위한, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 개체는 신장 이식이 필요하다. 일부 구현예에서, 개체는 감작된다. 일부 구현예에서, 개체는 적어도 20% (예컨대 적어도 30%)의 PRA를 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 말기 신장 질환을 갖는다.
본 발명은 추가로 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체를 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것의 용도가 본 발명에 의하여 제공된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 동종이계항체 (예컨대 DSA)의 수준을 감소시키기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 PRA를 감소시키기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 이식편 거부반응 (예컨대 AMR)의 위험을 감소시키기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체에서 이식편 생존을 연장시키기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에 기술된 항-CD20 항체 (예컨대 유형 II 항-CD20 항체) 또는 이의 조성물 중 임의의 것의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 개체는 신장 이식이 필요하다. 일부 구현예에서, 개체는 감작된다. 일부 구현예에서, 개체는 적어도 약 20% (예컨대 적어도 약 30%)의 PRA를 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 말기 신장 질환을 갖는다.
IV. 제조 물품 또는 키트
본 발명의 또 다른 양태에서, 상기 기재된 바와 같이 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품 또는 키트가 제공된다. 제조 물품 또는 키트는 용기 및 그 용기에 또는 연관된 표지 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적절한 용기에는 예로서, 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등이 포함된다. 상기 용기는 다양한 재료, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 그것만으로 있거나 또는 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 또 다른 조성물과 조합되고 그리고 멸균된 접근 포트를 가질 수 있는 조성물을 수용한다 (예를 들면 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖춘 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물에서 적어도 하나의 활성제는 본 발명의 항체 (예를 들면, 본 개시내용의 항-CD20 항체, 예컨대 유형 II 항-CD20 항체)이다. 표지 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택되는 병태의 치료에 사용됨을 나타낸다. 게다가, 제조물품 또는 키트는 (a) 그 내부에 함유된 조성물을 갖는 제1 용기 (여기서 상기 조성물은 본 발명의 항체를 포함한다); 및 (b) 그 내부에 함유된 조성물을 갖는 제2 용기 (여기서 상기 조성물은 추가 세포독성 또는 달리 치료제를 포함한다)를 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 구현예에서 제조물품은 조성물이 특정 병태를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 제조 물품 또는 키트는 추가로, 약제학적으로-허용가능한 완충제, 예컨대 정균 주사용 물 (BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 포함할 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 및 주사기를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대, 유형 II 항-CD20 항체)를 포함하는 약제 및 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 및, 임의로, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 동종이계항체 (예컨대 DSA)의 수준을 감소시키기 위한 약제의 투여를 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대, 유형 II 항-CD20 항체)를 포함하는 약제 및 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 및, 임의로, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 PRA를 감소시키기 위한 약제의 투여를 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대, 유형 II 항-CD20 항체)를 포함하는 약제 및 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 및, 임의로, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 이식편 거부반응 (예컨대 AMR)의 위험을 감소시키기 위한 약제의 투여를 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체 (예컨대, 유형 II 항-CD20 항체)를 포함하는 약제 및 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 및, 임의로, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)을 필요로 하는 개체에서 이식편 생존을 연장시키기 위한 약제의 투여를 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 키트는 추가로, 제2 약제 (예컨대 고 용량 IVIG) 및 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 및, 임의로, 장기 이식 (예컨대 신장 이식)이 필요한 개체 치료를 위하여 제2 약제의 투여용 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함한다.
상기 임의의 제조물품은 항-CD20 항체 대신에 또는 이에 추가로 본 발명의 면역콘주게이트를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
명세서는 당업계의 숙련자가 본 발명을 실시하기에 충분한 것으로 간주된다. 본원에 도시되고 설명된 것들 이외에 본 발명의 다양한 변형들이 상기 설명으로부터 당업계의 숙련자들에게 명백하고, 첨부된 청구항의 범위 내에 속할 것이다. 본원에 인용된 모든 공보, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다.
실시예
본 발명은 예시의 방식으로 제공되며 제한적으로 의도되지 않는 하기의 실시예를 참고하여 더 잘 이해될 수 있다.
실시예 1: 신장 이식을 기다리는 과잉감작 및 말기 신장 질환을 가진 환자내 고 용량 IVIG 로 투여된 정맥내 오비누투주맙의 Ib 기 임상 연구
연구 설계
1000 mg 정맥내 주입으로서 투여된 오비누투주맙의 단일 및 반복 용량의 Ib 기, 개방-표지 연구는 이식용 후보자이고 50% 이상(≥)의 cPRA로 과잉감작의 증거를 갖는 ESRD를 가진 성인에서 수행된다. 환자는 1 (코호트 1) 또는 2 이상 (코호트 2) 오비누투주맙 주입을 수용하는 2 집단으로 등록될 수 있다. IRR의 위험을 감소시키기 위해, 상기 둘 모두의 코호트는 오비누투주맙 주입 이전에 항히스타민제, 항-발열제 및 80 mg 메틸프레드니솔론으로 표준 사전치료를 수용한다.
연구 설계는 도 1에서 예시된다. 탈감작 치료를 수용하는 연구에서 개체의 2개 코호트가 있다. 코호트 1 (1000 mg 단일 용량 오비누투주맙)은, 제1일에 오비누투주맙 주입, 이후 제22일 및 제43일에 고용량 IVIG (2 g/kg)를 수용하는 5명의 환자를 포함한다. 중증 주입-관련된 반응 (IRR)이 없다면; 오비누투주맙 치료)의 24 시간 이내 발생하는 이상반응 표준 용어기준 [CTCAE] 등급 4 또는 더 높은 주입 반응 또는 주요 예기치 못한 안전성 사건으로서 한정되는 경우, 일단 코호트 1 내 환자 번호 5가 그의 또는 그녀의 오비누투주맙 주입을 완료하였고 투여-후 4 주의 기간 동안 모니터링되었다면 코호트 2는 진행이 허용될 수 있다. 코호트 2 (1000 mg 오비누투주맙 2)는 제1일 및 제15일에서 오비누투주맙 1000 mg 주입, 이후 제22일 및 제43일에서 고용량 IVIG (2g/kg)를 수용한 20명의 환자를 포함한다. HLA 동종이계항체에서 이때 관측된 감소가 항체-매개된 거부반응의 저위험으로 신장 이식에 잠재적으로 진전하는데 상당히 충분하지 않다는 조사자의 의견이 있다면 추가의 1000 mg 오비누투주맙 주입은 제24주에 코호트 2에서 투여될 수 있다. 제24주 투여 진행 이전에 연구 의료 모니터와 협의는 권고된다.
이식에 적격이고 코호트 1 또는 코호트 2에서의 포함 이후 혼화성 신장 제공을 수용하는 것으로 밝혀지는 환자는 1000 mg 오비누투주맙의 2회의 추가 주입을 수용한다. 일 주입은 이식의 시간에 발생한다 (탈감작 단계 동안 선행 오비누투주맙 주입은 이식 날자 이전에 4 주 이상(≥) 투여되었던 경우에만). 이식의 최초 48 시간 이내 오비누투주맙 주입의 정확한 타이밍은 1차 조사자의 최상의 의료 판단의 몫이다.
1000 mg 오비누투주맙의 제2 추가의 주입은 이식후 제24주에 투여된다. 연구의 1차 종료점은 탈감작 단계의 제24주에 오비누투주맙/IVIG 유도 레지멘의 안전성 및 내성을 평가한다. 후속적으로 이식된 환자의 집단에서 안전성 및 내성을 추가로 특성규명하기 위해, 안전성 데이터의 검토는 이식후 제28주에 실시될 수 있다. 모든 환자는 마지막 오비누투주맙 주입 이후 최소의 12 개월 동안 모니터링된다.
하기 더 상세히 기재된 바와 같이, 연구 중 환자는 ESRD를 갖고 감작 사건의 이력 및 50% 이상(≥)의 문서화된 cPRA를 가진 18 내지 65 년령이다. 임신하거나 수유하는, 또는 활성 또는 만성 감염, 또는 상당한 바이러스성 감염의 이력, (자궁경부의 적절하게 치료된 제자리 암종, 비-흑색종 피부 암종, 또는 스테이지 I 자궁암 제외한) 악성종양의 이력, 중증 빈혈, 혈소판감소증 또는 백혈구감소증의 증거, 간염, 또는 주요 심폐 질환을 가진 환자는, 이전의 4 주에서 살아있는 백신을 수용하고 있는 이들과 함께, 제외된다. 선택된 집단은, 제안된 III 기 연구에 진입하기 위해 결정하는, cPRA 수준으로 오비누투주맙의 영향 및 안전성에 대한 결정을 가능하게 하기 위해 이식을 기다리는 감작된 환자의 다수를 나타내도록 의도된다. 선형 이식을 수용하고 있는 제한된 수의 환자 (n ≤ 6)는 연구에서 등록될 수 있다.
연구를 위하여 포함 기준은 하기를 포함한다:
(a) 감작 사건의 이력 (예를 들면, 주입(transfusion), 임신, 또는 선행 이식)을 가진 ESRD;
(b) 지난 해 동안 죽은 공여자 신장에 대하여 적어도 하나의 적합성(match run)으로 열거된-미국 장기기증 네트워크 (UNOS);
(c) 스크리닝에서 문서화된 50% 이상(≥)의 cPRA. cPRA 산출은 국부 이식팀으로부터 입력에 기반되고, 특히, 부위-생성된 데이터 (예를 들면, HLA특이적 동종이계항체 평가)를 편입시킨다;
(d) 스크리닝의 시기에서의 연령 18-65 년;
(e) 출산 잠재력의 여성에 대하여: 연구 약물의 마지막 용량 이후 적어도 18 개월 동안 및 치료 기간 동안, 1% 미만(<) / 년의 실패율을 가진 적어도 하나의 방법을 포함하는, 피임의 2종의 적절한 방법의 이용 또는 금욕 유지 (이성 관계 삼가)에 동의. 여성은 비월경이고, 폐경후 상태 (폐경 이외의 확인된 원인 없이 무월경의 12 이상(≥)의 연속 개월)에 도달하지 않고, 외과용 멸균 (난소 및/또는 자궁의 제거)를 경험하지 않으면 출산 잠재력이 있는 것으로 간주된다. 1% 미만(<) / 년의 실패율을 가진 피임 방법의 예는 양측성 난관 결찰, 남성 멸균, 호르몬 임플란트, 조합된 경구 또는 주사된 호르몬 피임약의 확립된, 적절한 사용, 및 특정 자궁내 디바이스를 포함한다. 성적 금욕의 신뢰성은 임상 연구의 지속기간 및 환자의 바람직한 및 일반 생활방식에 관련하여 평가되어야 한다. 주기적 금욕 (예를 들면, 달력, 배란, 증상체온, 또는 배란후 방법) 및 회수는 피임의 허용가능한 방법이 아니다. 차단 피임법은 살정제의 사용으로 항상 보충되어야 한다; 및
(f) 남성에 대하여: 아래에 정의된 바와 같이, 금욕 유지 (이성 관계 삼가) 또는 피임약 조치 사용에 동의 및 정자 공여 자제에 동의:
(i) 출산 잠재력의 여성 파트너 또는 임신한 여성 파트너와, 남성은 연구 약물의 마지막 용량 이후 적어도 12 개월 동안 및 치료 기간 동안 금욕을 유지해야 하거나 콘돔을 사용해야 한다. 성적 금욕의 신뢰성은 임상 연구의 지속기간 및 환자의 바람직한 및 일반 생활방식에 관련하여 평가되어야 한다. 주기적 금욕 (예를 들면, 달력, 배란, 증상체온, 또는 배란후 방법) 및 회수는 피임의 허용가능한 방법이 아니며; 그리고
(ii) 남성은 연구 약물의 마지막 용량 이후 적어도 12 개월 동안 및 치료 기간 동안 정자 공여를 삼가해야 한다.
핵심 제외 기준은 하기를 포함한다:
(a) 기준선 이전에 최근 주요 수술로부터 또는 주요 수술 이래 12 주 미만(<)의 불완전한 회복; 신장 이식을 제외한 기준선의 24 주 이내 계획된 수술. 최소 침습 과정 (예를 들면, 누공 탈응고 및 혈액투석라인(Permacath) 배치)가 허용된다;
(b) 임신 또는 모유영양;
(c) 제1 오비누투주맙 주입 이전에 측정된 양성 혈청 hCG;
(d) HIV 감염의 공지된 이력을 포함하는, 1차 또는 2차 면역결핍 (또는 현재 활성의 이력);
(e) B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 또는 코어 항체 (HBcAb)에 대한 혈청반응양성 또는 C형 간염에 대한 혈청반응양성;
(f) 하기 스크리닝 시험 중 하나에 의해 확인된 활성 또는 잠재적 결핵 (TB)의 이력:
(i) 양성 투베르쿨린 (정제된 단백질 유도체 [PPD]) 피부 시험; 또는
(ii) 양성 QuantiFERON®TB 골드(Gold) 시험. 바실리 칼메트-구에린 (BCG) 예방접종의 문서화된 이력을 가진 대상체는 적격이도록 음성 QuantiFERON 시험 결과 및 음성 흉부 방사선 사진을 가져야 한다;
(g) 무작위화의 3 개월 (투여의 제1일) 이내 실시된 흉부 방사선 사진 (X-선, 후전측 및 측면)에서 활성 TB의 의심;
(h) (손톱밑바닥의 진균 감염을 배제한) 임의의 종류의 공지된 활성 감염, 또는 기준선의 4 주 이내 IV 항-감염제로 치료 또는 입원 또는 기준선 이전에 2 주 이내 경구 항-감염제의 완료를 요구하는 감염의 임의의 주요 발작;
(i) 기준선 이전에 24 주 이내 깊은 공간/조직 감염 (예를 들면, 근막염, 농양, 골수염)의 이력;
(j) 심각한 재발성 또는 만성 감염의 이력;
(k) 현재 활성 알코올 또는 약물 남용 또는 알코올 또는 약물 남용의 이력;
(l) 1 초과 장기 이식을 수용하고 있는 환자. 선형 단일 신장 이식을 수용하고 있는 환자 (최대 6 환자 총계)는 연구에 진입이 허용될 수 있고 어느 한 코호트에 등록될 수 있다;
(m) 동시 장기 이식 (예를 들면, 신장-췌장, 신장-간)을 위한 후보자;
(n) 스크리닝 방문의 1 개월 이내 임의의 약독화 생백신(들)의 수용자;
(o) 하기를 포함하는 비정상 스크리닝 실험실 결과: WBC 3.0 103/mL; 혈소판 수 100 103/mL; Hgb ≤ 7.0 g/dL; AST/SGOT 또는 ALT/SGPT ≥ 5 정상 상한선 (ULN);
(p) 주요 심혈관 또는 폐 질환 (예를 들면, 선별 이전에 6 개월 이내 심근경색증; 뉴욕 심장 협회 [NYHA] 부류 III/IV 심부전; 조절되지 않는 협심증, 부정맥, 및 허혈 또는 활성 전도 비정상용 ECG 증거)의 이력을 가진 환자;
(q) 어느 것이 더 크든, 무작위화의 12 주 또는 5 반감기 이내 조사 제제의 사용;
(r) 과거 12 개월 이내 항-CD20 요법의 사용;
(s) IVIG 또는 오비누투주맙에 대한 공지된 사용금지사유;
(t) 고형 종양, 혈액 악성종양, 및 제자리 암종을 포함하는 (치료되거나 절제되고 해결된 피부의 기저 세포 암종 제외), 암의 이력;
(u) 오비누투주맙 주입의 단클론성 항체 또는 성분에 중증 알러지성 또는 과민성 반응의 이력; 및
(v) 복막 투석에서 ESRD를 가진 환자.
투여 및 비-조사 의약품
상기 연구용 시험 생성물은 오비누투주맙이고 코호트 1의 제1일에서 그리고 코호트 2의 제1일 및 제15일에서 1000 mg의 용량으로 IV 주입에 의해 투여된다. 추가의 선택적인 1000 mg 주입은 코호트 2 환자의 제169일에서 투여될 수 있다.
이식에 적합하고, 그리고 혼화성 신장 제공을 수용한 것으로 발견된 환자는, 이식 (탈감작 단계 동안의 사전 오비누투주맙 주입이 이식 날짜로부터 4주 이상(≥) 이전에 투여될 경우에만)에, 그리고 이식-후 제24주에, 2회의 추가의 1000 mg의 오비누투주맙 주입을 수용한다.
오비누투주맙의 각각의 주입 이전에, 환자는 80 mg IV 메틸프레드니솔론, 경구 아세트아미노펜 (650-1000 mg) 및 경구 디펜히드라민 (50 mg; 또는 항히스타민제의 동등 용량)으로 예방적 치료를, 주입 기간의 시작 이전 30-60 분 수용하아야 한다.
오비누투주맙에 더하여, 모든 환자는 제22일 및 제43일에서 투여된 고 용량 IVIG (2 g/kg)을 수용한다. 환자는 기저 조건 (예를 들면, 혈압강하 약물, 콜레스테롤 저하 약물, 골다공증용 치료) 및 절차 예컨대 혈액투석을 위한 표준 중심-지향된 요법을 계속해야 한다. 연구 동안, 환자는 이식전 및 이식후 셋팅에서 ESRD 및 그것의 합병증의 관리를 위하여 조사자에 의해 의료적으로 필요한 것으로 간주된 임의의 치료를 받도록 허용될 수 있다.
연구의 과정 동안 이식된 환자에 대하여, 이식-지향된 요법은 표준 면역억제성 레지멘 예컨대 마이코페놀레이트 모페틸 (예를 들면, 2 분할 용량으로 제공된 1200 mg/m2/일로), 타크롤리무스 (예를 들면, 매일 2회 분할된 0.2-0.3 mg/kg으로 제공), 및 프레드니손 부하 용량 및 중심 프로토콜에 다른 테이퍼를 포함할 수 있다. 림프구-고갈 레지멘 (예를 들면, 알렘투주맙)을 포함하는, 유도 레지멘은 주요한 조사자에 의해 적절하게 판단되는 경우 사용될 수 있다.
수반되는 요법 및 임상 실시
수반되는 요법은 연구 약물의 개시 이전에 30 일부터 연구 완료/중단 방문까지 환자에 의해 사용된 임의의 약물 (예를 들면, 처방전 약물, 일반의약품 약물, 약초의 또는 동종 요법, 영양 보충물)을 포함한다. 상기 전체 약물은 조사자에 보고되어야 하고 기록되어야 한다.
환자는 기저 조건 (예를 들면, 혈압강하 약물, 콜레스테롤 저하 약물, 골다공증용 치료) 및 절차 예컨대 혈액투석을 위한 표준 중심-지향된 요법을 계속하고 연구 내 등록하도록 허용될 수 있다. 연구 동안, 환자는 이식전 및 이식후 셋팅에서 ESRD 및 그것의 합병증의 관리를 위하여 조사자에 의해 의료적으로 필요한 것으로 간주된 임의의 치료를 받도록 허용될 수 있다.
IVIG의 모든 용량은 혈액투석 기간 이전에 또는 그 동안 즉시 주입된다.
환자가 매칭된 공여자로 이식을 위한 적절한 후보자로 간주되면, 이식-지향된 요법은 표준 면역억제성 레지멘 예컨대 2 분할 용량으로 제공된 1200 mg/m2/일로 마이코페놀레이트 모페틸, 매일 2회 분할된 0.2-0.3 mg/kg으로 제공된 타크롤리무스, 및 프레드니손 부하 용량 및 중심 프로토콜에 따른 테이퍼를 포함할 수 있다. 림프구-고갈 레지멘을 포함하는, 유도 레지멘은 주요한 조사자에 의해 적절하게 판단되는 경우 사용될 수 있다. 신장 이식 환자의 대략 64%는 이식의 시간에 T-세포 고갈 제제를 수용한다 (OPTN/SRTR 2012 Annual Data Report). 또한, 감작된 환자가 이식후 급성 이식편 거부반응의 더 높은 위험에 처한다는 것 및 센터가 리툭시맙으로 탈감작 이후 림프구 고갈 제제 (예를 들면, 알렘투주맙)을 사용하고 있다는 것이 기술적으로 인식된다 (Vo, A.A. et al. (2008) N. Engl . J. Med . 359:242-251; Vo, A.A. et al. (2014) Transplantation 98:312-319). 상기 이유로, 이식을 달성할 수 있는 현행 연구의 환자를 위하여 T-세포 고갈 제제의 사용에 대해 추천하는 것이 어려워 보인다. 이식 이후 감염성 합병증의 잠재력의 인식이 제공되면 참여하는 센터는 박테리아, 바이러스성, 및 진균 감염에 대한 국부 감염 예방 프로토콜을 엄격하게 시행하도록 지시수용한다.
연구 목적 및 결과 측정
상기 연구에 대한 1차 목표는 상승된 산출된 패널 반응성 항체 (cPRA)에 의해 측정된 경우 과잉감작의 증거 및 말기 신장 질환 (ESRD)의 이식을 기다리는 성인 환자내 오비누투주맙의 단일 및 반복 정맥내 (IV) 용량의 안전성 및 내성을 평가하는 것이다. 또한, 안전성 및 내성은 후속적으로 이식된 환자에서 평가될 수 있다. 안전성, cPRA, 약동학 (PK), 및 다른 결과 측정에 대한 서술적인 통계는 경시적으로 각각의 용량 집단에 대하여 제공될 수 있다.
상기 연구의 2차 목적은 오비누투주맙의 단일 및 반복 용량의 PK 및 약동학적 (PD) 프로파일을 특성규명하는 것이다. PK 프로파일의 특성규명은 아래 추가로 기재되고, PD 프로파일은 말초 혈액 및 인간 백혈구 항원 (HLA) 동종이계항체에서 CD19+ B세포에서 주로 기반된다.
본 연구에 대한 안정성 목적은 아래와 같다:
(a) 하기 종료점을 기준으로 하여 이식을 기다리는 ESRD을 가진 과잉감작된 환자내 오비누투주맙의 안전성을 평가하기 위해:
(i) 심각한 및 비심각한 부정적 사건의 성질, 빈도, 및 중증도;
(ii) 실험실 값, 활력 징후, 및 규칙적 물리적 시험, 활력 징후, 혈액성 및 화학 실험실 시험, 뇨검사, ECG, 및 부정적 사건의 발생빈도 및 중증도의 사용을 통한 다른 안전성 바이오마커에 관한 효과;
(iii) 또한, 하기가 검사될 수 있다: B 세포, T 세포, 및 자연 살해 (NK) 세포 순환; 혈청 면역글로불린 (총 Ig, IgG, IgM, 및 IgA); 임신; 및 볼거리, 풍진, 수두(Varicella), 테타누스독소증, 인플루엔자, 및 연쇄상구균 폐렴(Streptococcus pneumonia)에 대한 항체 역가;
(b) 심각한 및 비심각한 부정적 사건의 성질, 빈도, 및 중증도의 평가 그리고 백혈구 계수, Ig 계수, 및 항체 역가의 모니터링에 의한 신장 이식 및 추가의 면역억제성 요법을 수용하는 환자내 오비누투주맙의 안전성을 평가하기 위해; 및
(c) 항-약물 항체의 측정 및 다른 결과 측정기준과 그의 관계 평가에 의한 오비누투주맙의 면역원성 잠재력의 특성규명.
본 연구에 대한 약동학적 (PK) 목적은 아래와 같다:
(a) 오비누투주맙의 용량농도-시간 데이터의 (소프트웨어 NONMEM으로) 비선형 혼합효과 모델링의 사용을 통해 ESRD 집단에서 오비누투주맙의 약동학을 특성규명하기 위해. PK 프로파일 데이터는, 주요 파라미터 (예를 들면, 청소율)에서 주요 공변량 (예를 들면, 성별, 인종/민족, 중량, 기준선에서 생화학적 및 혈액 파라미터, 기저 질환의 정도)의 효과를 포함하는, PK 모델을 추가로 개발하는데 사용될 수 있다. 노출, 예컨대 AUC0 - τ,최대 혈청 농도 (Cmax)의 개체 측정의 유도는 상기 분석에 사용된 최종 PK 모델에 의존할 수 있다. 상기 분석의 결과는 개별적으로 보고될 수 있다. 혈청 오비누투주맙은 요약될 수 있고 (평균, 최소, 최대, SD, 기하 평균) 상기 연구 내에 보고될 수 있다;
(b) 정맥내 면역글로불린 (IVIG), 및 이식의 시간에 사용된 잠재적으로 다른 약물을 포함하는, 오비누투주맙과 수반되는 약물 사이 잠재적인 PK 상호작용을 식별 및 기재하기 위해. 탐구의 그래픽 분석은 오비누투주맙으로 치료된 환자의 안전성 실험실 파라미터에서 심각한 부정적 사건 및 비정상의 발생이 오비누투주맙 노출에 기인될 수 있는지를 평가하기 위해 수행될 수 있다. 또한, 탐구의 그래픽 분석은 반응 (예를 들면, PD 및/또는 탐구의 임상 측정을 포함하는, 약리학적 반응)의 가변성이 오비누투주맙 노출의 가변성에 기인될 수 있는지를 평가하기 위해 수행될 수 있다. 노출과 안전성 파라미터 사이 관련한 관측된 관계는 상이한 접근법 예컨대 로지스틱 퇴행 분석 및 간접적인 반응 모델링을 이용하여 추가로 특성규명될 수 있다; 그리고
(c) 추가의 PK 분석은 적절하다면 또한 착수될 수 있다.
상기 연구를 위한 약동학적 (PD) 및 바이오마커 목적은 아래와 같다:
(a) 제1, 22, 169, 365, 532일에서, 이식에서, 및 이식후 제169, 365, 및 532일에서 CD19+ B세포 순환의 수준 평가에 의해 오비누투주맙으로 치료 이후 말초 혈액에서 CD19+ B세포 및 다른 면역 세포의 변화를 특성규명하기 위해; 그리고
(b) 하기에 관한 오비누투주맙의 효과를 기재하기 위해: 오비누투주맙으로 치료전 및 치료후 수집된 샘플에서 SAB Luminex 검정을 이용하는 HLA 동종이계항체 메트릭스; 오비누투주맙으로 치료전 및 치료후 수집된 혈청에서 측정된 경우 비제한적으로 B-세포 활성 인자 (BAFF) 수준을 포함하는 면역 상태의 탐구의 바이오마커; 및 (이식 생검에서 및 차후의 생검으로부터 B 세포의 존재 및 고갈에 대하여) 림프절 조직병리 및 신장 생검으로부터 탐구의 바이오마커.
본 연구에 대한 탐구적 임상 목적은 아래와 같다:
(a) 다중 시점에서 동종감작 포스트오비누투주맙 및 고 용량 IVIG를 나타내는 다른 매트릭스 및 단일 항원 비드 Luminex 플랫폼에 의해 측정된 경우 동종이계항체 상태에 관한 영향을 평가하기 위해; 및
(b) 임상 효능 예컨대 이식률의 측정에 관한 오비누투주맙의 효과를 평가하기 위해.
본 연구에 대한 탐구 결과 측정은 하기를 포함한다: 연구 기간 동안 이식을 수용하는 환자의 분율; 및 신장 기능, 예컨대 혈청 크레아티닌 및 추정된 사구체 여과율의 이식전 및 이식후 측정.
상기 연구의 종료는 오비누투주맙의 마지막 주입 이후 12 개월로서 한정된다. 최초 환자의 스크리닝으로부터 연구의 종료까지, 연구의 총 기간은 대략 30 개월인 것으로 예상된다.
실험실, 바이오마커 , 및 다른 생물학적 샘플
혈액 샘플은 혈청내 오비누투주맙의 약동학을 평가하기 위해 수집된다. 오비누투주맙의 혈청 농도로부터 유래된 PK 파라미터는 하기에 의해 산출될 수 있다:
(a) 최대 혈청 농도:
(i) 전체 연구 동안 (Cmax);
(ii) 연구 약물의 제1 과정 이후 (Cmax1);
(iii) 연구 약물의 제2 과정 이후 (Cmax2);
(b) 농도-시간 곡선하 면적 (AUC);
(c) 전신 청소율;
(d) 정상상태 조건하 분포의 용적 (Vss);및
(e) 혈청 농도-시간 곡선의 말단부에 대한 반감기 (t1/2).
PK 파라미터는 집단 PK 분석에 의한 혈청 농도 데이터로 모든 환자에 대하여 결정될 수 있다. PK 파라미터는, 투여 및/또는 샘플링 스케줄에 비순응한 환자에 대하여, 또는 이의 샘플이 (데이터 주입을 방해하는) ADA에 의하여 간섭을 가질 수 있는 환자 (이들 환자는 상기 분석에서 제외될 수 있음)을 제외하고, 혈청 농도 데이터를 갖는 모든 환자에 대해 산출될 수 있다.
PK 분석은 상기 환자 집단에서 오비누투주맙의 약동학에 영향을 주는 기준선 공변량을 식별하기 위해 탐구의 분석을 포함할 수 있다. 검사될 수 있는 기준선 공변량은 인구통계, 다른 환자 특징 (예컨대 질환 중증도 및 체중), 및 선택된 실험실 측정을 포함한다.
IVIG로 수반되는 치료가 오비누투주맙 PK에 영향을 주는지를 평가하기 위해, 집단 PK 모델링은 코호트 2에서 제24주에서의 오비누투주맙 주입과 제1 치료 주입 이후 오비누투주맙 PK를 비교하는데 사용될 수 있다.
PK 데이터는, 평균, 표준 편차, 기하 평균, 변동 계수, 중앙, 및 범위를 포함하는, 서술적인 통계를 이용하여 요약될 수 있다.
혈액 샘플로부터 탐구의 PD 마커 및 신장 생검 및 림프절에서 염증/침윤물의 탐구의 바이오마커 측정은 집단에 의해 경시적으로 그래프로 및 서술적으로 요약될 수 있고; 이들 마커는 비제한적으로 말초 CD19+ B-세포 계수, B-세포 서브세트, HLA-특이적 동종이계항체, 및 조직 B 세포를 포함할 수 있다.
적격성을 계측하기 위한 구체적 실험실 평가는 아래와 같다:
(a) 혈액학: 헤모글로빈, WBC (절대계수 및 감별계수), 및 정량적 혈소판 수;
(b) 생화학: 크레아티닌, 아밀라아제, 리파제, AST, ALT;
(c) 요검사 (비- 무뇨 환자): 단백질, 크레아티닌, 현미경적 및 뇨 딥스틱 시험 (국부 판독);
(d) 임신 시험: 혈청 hCG;
(e) B형 간염: HBsAg 및 HBcAb;
(f) C형 간염: C형 간염 혈청학;
(g) 오비누투주맙 PK 및 항-약물 항체 (ADA); 및
(h) cPRA 산출을 뒷받침하는 HLA-특이적 동종이계항체 평가. 이들 평가는 국소적으로 수행된다. 혈청 샘플은 중앙 실험실에서 가공되도록 또한 수집된다.
평가의 연구 스케줄에 따라 평가될 수 있는 전체 실험실 평가는 아래에 기재되어 있다:
(a) 혈액학: 헤모글로빈, 적혈구용적률, RBC, MCV, MCH, WBC (절대계수 및 감별계수), 및 정량적 혈소판 수를 포함하기 위해. 시험이 용혈성 빈혈을 평가하도록 요구되면, 국소적으로 수행될 수 있다;
(b) 혈액 화학성질: AST/SGOT, ALT/SGPT, 알칼리 포스파타제, 총 단백질, 알부민, 콜레스테롤, 총 빌리루빈, BUN, 요산, 크레아티닌, 랜덤 글루코스, 락테이트 탈수소효소, 칼륨, 나트륨, 염화물, 칼슘, 마그네슘, 및 인. 스크리닝 및 미계획된 방문에서, 아밀라아제 및 리파제는 또한 포함될 수 있다;
(c) 요검사 (비- 무뇨 환자): 뇨 단백질, 크레아티닌;
(d) 유동 세포계측: B 세포 (CD19, CD27, CD38, IgD 포함), T 세포 (CD3, 4, 8) 및 NK 세포 (CD16, CD56);
(e) HLA -특이적 동종이계항체 평가: Luminex 플랫폼에서 단일 항원비드를 이용하는 고체상 검정;
(f) 정량적 면역글로불린: IgG, IgM, 및 IgA 이소형을 포함하는 총 Ig 수준;
(g) 항체 역가: 통상 항원 (볼거리, 풍진, 수두(Varicella), 테타누스독소증, 인플루엔자, 및 S. 뉴모니아에.(S. pneumoniae.))에 대한 항체 역가의 측정은 평가의 스케줄에 따라 수행될 수 있다. 상기 정보는 박테리아 및 바이러스성 항원에 특이적인 체액성 면역에 관한 오비누투주맙의 효과를 평가하는데 사용된다;
(h) 임신 시험: 출산 잠재력의 모든 여성은 규칙적 임신 시험을 한다. 이들 시험은 비-무뇨 환자에서 소변으로 또는 무뇨인 경우 혈청으로 수행될 수 있다. 혈청 임신 시험은, 각각의 연구 약물 주입 이전에, 스크리닝에서, 및 연구 끝/조기 종료에서 수행될 수 있다. 주입은 임신 시험 결과가 음성이지 않는 한 투여되지 않아야 한다. 모든 다른 시점에서 뇨 임신 시험은 생리 이력 및 임신 위험을 기준으로 수행될 수 있다. 뇨 임신 시험 결과가 양성이면, 차후의 음성 혈청 시험은 투여 전에 요구된다; 및
(i) 하기 샘플은 또한 분석을 위하여 후원자 또는 피지명자에 보내질 수 있다: B 세포용 혈청 및 다른 자가면역 질환/염증성 마커는 비제한적으로 BAFF를 포함할 수 있다.
주입
오비누투주맙은 제1일 (양쪽 집단), 제15일 (코호트 2)에서 주입을 위하여 1000 mg의 절대적인 (일률) 용량으로서, 및 제169일 (코호트 2)에서 선택적인 주입으로서 IV 주입에 의해 투여된다. 이식된 환자는 이식 이후 제169일에서 주변-이식 주입 (제1-2일) 및 또 다른 주입을 수용한다.
오비누투주맙은 전체 비상 소생 설비가 즉시 이용가능하고 환자가 항상 조사자의 밀착 감독하에 있어야 하는 임상 셋팅으로 환자 (입원환자 또는 외래환자)에 투여된다. 오비누투주맙은 IV 밀어넣기 또는 볼러스로서 투여되지 않는다. 제1 주입의 마지막 이후, IV 라인은 필요하면 IV 약물을 투여할 수 있기 위해 2 시간 이상(≥) 동안 원위치에 남아있다. 부정적 사건이 2 시간 이후 발생하지 않는다면, IV 라인은 제거될 수 있다. 후속 주입에 대하여, IV 라인을 통한 접근은 주입의 종료로부터 적어도 30분 동안 제자리에 남아있어야 하며, 만약 30분 후 유해 사건이 발생하지 않는다면, IV 접근은 제거될 수 있다.
대상체는 연구 약물 주입 이전에 30-60 분 입(mouth)에 의해 아세트아미노펜 (650-1000 mg) 및 디펜히드라민 (50 mg 또는 유사한 제제의 동등 용량)으로 예방적 치료를 받아야 한다. 메틸프레드니솔론 80 mg IV는 매 오비누투주맙 주입의 시작으로부터 30-60 분 이전에 제공되어야 한다.
주입 속도는 하기 표 4에 기재된다.
오비누투주맙 주입 속도.
제1 주입(제1일) 후속 주입
50 mg/hr의 초기 속도로 주입을 시작한다.
주입 반응이 발생하지 않으면, 주입 속도를 매 30 분 50-mg/hr 증분으로 최대 400 mg/hr로 증가시킨다.
주입 반응이 발생하면, 주입을 멈추거나 느리게 한다. 기관 프로토콜에 따라 주입-반응 약물 및 지지 요법을 투여한다. 반응이 해결되고 있다면 속도 (속도는 과민증 또는 주입관련된 반응이 발생한 시간에서 사용된다)에서 50% 감소하여 주입을 재개한다.
 환자가 선행 주입 동안 주입 반응을 경험하였다면, 제1 주입과 동일한 속도 (50 mg/hr)로 시작하고 언급된 대로 그 지시를 따른다.
환자가 선행 주입을 양호하게 용인하였다면, 주입을 100 mg/hr의 속도로 시작한다.
주입 반응이 발생하지 않으면, 주입 속도를 매 30 분 100-mg/hr 증분으로 최대 400 mg/hr로 증가시킨다.
주입 반응이 발생하면, 주입을 멈추거나 느리게 한다. 기관 프로토콜에 따라 주입반응 약물 및 지지 요법을 투여한다. 반응이 해결되고 있다면 속도 (속도는 과민증 또는 주입관련된 반응이 발생한 시간에서 사용된다)에서 50% 감소하여 주입을 재개한다.
주입-관련된 반응의 관리는 하기 표 5에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다.
주입-관련된 반응의 관리.
주입-관련된 증상a
등급 		안내사항
1-2 주입을 느리게 하거나 유지.
지지적 치료 제공b.
증상 해결시, 조사자의 재량으로 주입 속도 단계적 확대를 재개할 수 있음c.
3 주입을 중단시킨다.
지지적 치료 제공b.
증상 해결시, 조사자의 재량으로 주입 속도 단계적 확대를 재개할 수 있음c.
주석: 동일한 부정적 사건이 동일한 중증도로 반복하면, 치료는 영구적으로 중단되어야 한다.
4 즉시 주입을 중단시키고, 공격적으로 증상을 치료하고, 약물을 재시작하지 않는다.
주석: 이들 권고는, (전체 소생 약물 및 설비를 포함하는) 모든 적절한 표준 측정이 이용가능해야 하고 임상적으로 표시된 대로 사용될 수 있는, 과민증을 포함하는, 생명 위협 사건을 다루지 않는다.
a 증상의 등급화를 위하여, 국립 암 협회 이상반응 표준 용어기준, 버전 4.0을 지칭함. 상기 표는 면역글로불린 E매개된 알러지성 반응의 관리를 지칭하지 않는다.
b 지지적 치료: 환자는 마지막 4 시간 지나서 수용되지 않는다면 아세트아미노펜/파라세타몰 및 항히스타민제 예컨대 디펜히드라민으로 치료되어야 한다. 정맥내 염수는 표시될 수 있다. 기관지경련, 두드러기, 또는 호흡곤란에 대하여, 환자는 항히스타민제, 산소, 코르티코스테로이드 (예를 들면, 100 mg의 IV 프레드니솔론 또는 동등물), 및/또는 기관지확장제가 필요할 수 있다. 저혈압에 대하여, 환자는 혈관승압제가 필요할 수 있다.
c 재-개시 이후 주입 속도 단계적 확대: 증상의 완전한 해결시, 주입은 중단 이전에 달성된 속도의 50%에서 재개될 수 있다. 주입관련된 증상의 부재하에, 주입의 속도는 매 30 분 50 mg/hr의 증분으로 400 mg/hr의 최대 속도로 확대될 수 있다.
오비누투주맙에 더하여, 모든 환자는 제22일 및 제43일에서 투여된 고 용량 IVIG (2 g/kg)을 수용한다. 리툭시맙 및 IVIG를 통한 B-세포 고갈의 탈감작 효과를 평가하는 선행 연구는 IVIG의 제1 주입 이후 단클론성 항체를 전형적으로 투여하고 있다 (Vo, A.A. et al. N. Engl . J. Med . 359 (2008): 242-252). 상기 제안된 연구에서, 제1 IVIG 주입은 오비누투주맙 주입(들)이 투여된 후 발생할 수 있다. 상기 서열은 제1일 이후 첫 3 주 동안 오비누투주맙 단일요법에 관한 데이터의 생성을 가능하게 한다. 이는, 하기 상의 선행 IVIG 주입의 잠재적인 심오한 효과에 관한 이론적 근심을 또한 경감시킬 수 있다: (FcRn 포화를 통한) 오비누투주맙 약동학 (Hansen, R.J. and Balthasar, J.P. (2002) Thromb . Haemost . 88:898-899) 및/또는 (ADCC로의 Fcγ 수용체 포화 및 간섭을 통한) 약력학 (Nagelkerke, S.Q. and Kuijpers, T.W. (2015) Front. Immunol . 5:674).
주입되고 있는 큰 용적 때문에, IVIG 주입은 혈액투석 기간 이전에 또는 그 동안 즉시 발생한다.
각각의 오비누투주맙 주입 이전에, 80 mg IV 메틸프레드니솔론, 650-1000 mg 경구 아세트아미노펜, 및 50 mg 경구 디펜히드라민 (또는 다른 항히스타민제)는 주입으로부터 30-60 분 이전에 투여될 수 있다.
본원에서 지칭된 모든 특허, 특허 출원, 문서, 및 논문은 그 전체가 참고로써 본원에 통합되어 있다.
SEQUENCE LISTING <110> BRUNETTA, Paul BORIE, Dominique <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR USE IN ORGAN TRANSPLANTATION <130> 146392032340 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/186,303 <151> 2015-06-29 <160> 43 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp 1 5 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Gln Met Ser Asn Leu Val Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence 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<212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 20 25 30 Trp Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 23 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 24 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 25 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 26 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 27 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 29 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 29 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 30 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 30 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 31 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 31 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 32 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 33 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 34 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 34 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser <210> 35 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 35 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 36 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 1 5 10 <210> 37 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 37 Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 1 5 10 <210> 39 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 39 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 40 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 41 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 41 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 42 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 43 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 43 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys 20

Claims (51)

  1. 장기 이식이 필요한 개체를 치료하기 위한 방법으로서,
    장기 이식 이전에, 이와 동시에, 그리고/또는 이후에 유형 II 항-CD20 항체의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 장기 이식은 신장 이식인, 방법.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 방법은 상기 개체에서 동종이계항체의 수준을 감소시키는, 방법.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 개체에서 패널 반응성 항체 (Panel Reactive Antibodies; PRA)의 수준을 감소시키는, 방법.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 이식의 공산을 증가시키는, 방법.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 방법은, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 투여 후 약 12개월 이내의 이식의 공산을 증가시키는, 방법.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은, 상기 개체가 적합한 이식편을 수용하기 위한 대기 시간을 감소시키는, 방법.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체가 상기 유형 II 항-CD20 항체의 수용의 부재 하에서 교차-매칭 비혼화성이었을 것인, 교차-매칭 혼화성 이식편을 수용하는, 방법.
  9. 청구항 3 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동종이계항체의 수준을 감소시키는 것은, 상기 장기 이식 후 상기 개체 내 공여자-특이적 항체의 수준을 감소시키는 것을 포함하는, 방법.
  10. 청구항 3 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동종이계항체의 수준을 감소시키는 것은, 상기 장기 이식 후 이식편 거부반응의 위험을 감소시키는, 방법.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 이식편 거부반응은 세포성 면역 반응, 체액성 면역 반응, 또는 둘 모두에 의한 급성 거부반응인, 방법.
  12. 청구항 10 또는 청구항 11에 있어서, 상기 이식편 거부반응이 항체-매개된 거부반응 (AMR)인, 방법.
  13. 청구항 9 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 이식편 생존을 연장시키는, 방법.
  14. 청구항 9 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 이식편 기능을 개선시키는, 방법.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 개체의 전체 생존율을 연장시키는, 방법.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD20 항체는 정맥내 투여되는, 방법.
  17. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 용량이 상기 장기 이식 이전에 상기 개체에게 투여되는, 방법.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 용량이 약 1000mg인, 방법.
  19. 청구항 17 또는 18에 있어서, 상기 장기 이식 이전 상기 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 제2 용량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하되,
    상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제2 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량으로부터 약 10 일 내지 약 18 일 또는 약 1 주 내지 약 3 주 후 투여되는, 방법.
  20. 청구항 19에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제2 용량이 약 1000mg인, 방법.
  21. 청구항 19 또는 20에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항의 상기 제2 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량으로부터 약 14 일 또는 약 2 주 후 투여되는, 방법.
  22. 청구항 17 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량의 상기 투여로부터 약 6주 내지 약 52주 후 상기 장기 이식을 수용하는, 방법.
  23. 청구항 17 또는 21에 있어서, 상기 장기 이식 이전 상기 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 제3 용량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하되,
    상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제3 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량으로부터 약 154 일 내지 약 182 일 또는 약 22 주 내지 약 26 주 후 투여되는, 방법.
  24. 청구항 23에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제3 용량이 약 1000mg인, 방법.
  25. 청구항 23 또는 24에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제3 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 투여되는, 방법.
  26. 청구항 23 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량의 상기 투여로부터 약 28주 내지 약 52주 후 상기 장기 이식을 수용하는, 방법.
  27. 청구항 17 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장기 이식 이전 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 용량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  28. 청구항 27에 있어서, 상기 IVIG의 용량이 고용량인, 방법.
  29. 청구항 28에 있어서, 상기 IVIG의 용량이 약 2g/kg인, 방법.
  30. 청구항 27 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IVIG의 상기 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량의 상기 투여로부터 약 14 일 내지 약 28 일 또는 약 2 주 내지 약 4 주 후 상기 개체에게 투여되는, 방법.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 IVIG의 상기 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량의 상기 투여로부터 약 21 일 또는 약 3 주 후 상기 개체에게 투여되는, 방법.
  32. 청구항 27 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장기 이식 이전 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 제2 용량을 상기 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  33. 청구항 32에 있어서, 상기 IVIG의 제2 용량이 고용량인, 방법.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 IVIG의 상기 제2 용량이 약 2g/kg인, 방법.
  35. 청구항 32 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IVIG의 상기 제2 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량의 투여로부터 약 35 일 내지 약 49 일 또는 약 5 주 내지 약 7 주 후 상기 개체에게 투여되는, 방법.
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 IVIG의 상기 제2 용량은 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량의 상기 투여로부터 약 42 일 또는 약 6 주 후 상기 개체에게 투여되는, 방법.
  37. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 용량은 상기 장기 이식과 동시에 상기 개체에게 투여되되, 상기 장기 이식과 동시에 상기 개체에게 투여되는 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 용량은 상기 장기 이식의 48시간 이내에 투여되는, 방법.
  38. 청구항 37에 있어서, 상기 장기 이식과 동시에 상기 개체에게 투여되는 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 용량은 약 1000mg인, 방법.
  39. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체의 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 용량이 상기 장기 이식 이후에 상기 개체에게 투여되는, 방법.
  40. 청구항 39에 있어서, 상기 장기 이식 이후 상기 개체에게 투여되는 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 용량은 약 1000mg인, 방법.
  41. 청구항 39 또는 40에 있어서, 상기 장기 이식 후 상기 개체에게 투여되는 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 용량은, 상기 장기 이식으로부터 약 154 일 내지 약 182 일 또는 약 22 주 내지 약 26 주 후 투여되는, 방법.
  42. 청구항 41에 있어서, 상기 장기 이식 후 상기 개체에게 투여되는 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 용량은, 상기 장기 이식으로부터 약 168 일 또는 약 24 주 후 투여되는, 방법.
  43. 청구항 1 내지 42 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체가 인간의 것 또는 인간화된 것인, 방법.
  44. 청구항 1 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체는 서열 번호: 1의 HVR-H1 서열, 서열 번호: 2의 HVR-H2 서열, 및 서열 번호: 3의 HVR-H3 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열 번호: 4의 HVR-L1 서열, 서열 번호: 5의 HVR-L2 서열, 및 서열 번호: 6의 HVR-L3 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  45. 청구항 44에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체가 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  46. 청구항 44 또는 청구항 45에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체가 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  47. 청구항 1 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유형 II 항-CD20 항체가 탈푸코실화된 것인, 방법.
  48. 청구항 1 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD20 항체는 오비누투주맙인, 방법.
  49. 청구항 1 내지 48 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 상기 유형 II 항-CD20 항체의 상기 제1 용량 이전에 적어도 약 20%의 패널 반응성 항체 (PRA)를 갖는, 방법.
  50. 청구항 2 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 말기 신장 질환을 갖는, 방법.
  51. 청구항 1 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 사전에 장기 이식, 혈액 주입, 및 임신 중 하나 이상을 경험한, 방법.
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