KR20170132326A

KR20170132326A - 2-티오피리미딘온

Info

Publication number: KR20170132326A
Application number: KR1020177031838A
Authority: KR
Inventors: 로저 루게리
Original assignee: 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2015-05-05
Filing date: 2016-04-21
Publication date: 2017-12-01
Also published as: CA2928670C; EA034985B1; CA2928670A1; PH12017501897A1; SG11201708407TA; CR20170498A; CU20170134A7; BR112017022340A2; IL254978B; AU2016257179A1; MX2017014128A; TW201704218A; WO2016178113A1; US9771332B2; TN2017000461A1; CN107531647A; EP3292109A1; IL254978A0; TWI626235B; US20160326121A1

Abstract

골수세포형과산화효소 억제제, 상기 억제제를 함유하는 약학 조성물, 및 예를 들어, 심혈관 증상을 치료하기 위한 상기 억제제의 용도가 개시된다.

Description

2-티오피리미딘온

본 발명은 골수세포형과산화효소 억제제, 상기 억제제를 함유하는 약학 조성물, 및 예를 들어, 급성 관상동맥 증후군을 비롯한 심혈관 증상을 치료하기 위한 상기 억제제의 용도에 관한 것이다.

골수세포형과산화효소(MPO)는, 과산화효소 슈퍼패밀리에 속하는 헴(hem)-함유 효소이다. 동물 과산화효소의 예는 젖 과산화효소, 갑상선 과산화효소(TPO), 호산성물질 과산화효소 및 골수세포형과산화효소이다. 골수세포형과산화효소는 주로 호중구의 과립에 존재하고, 단핵구에서는 낮은 정도로 존재한다. 골수세포형과산화효소는 클로라이드 및 과산화수소로부터 차아염소산의 합성을 촉진한다. 형성된 차아염소산은, 헴 단백질, 포르피린, 티올, 황화철 중심, 뉴클레오타이드, DNA, 불포화된 지질, 아민 및 아미노산을 비롯한 다양한 세포 기질과 반응하는 강력한 산화제이다.

또한, MPO-촉진된 반응 및 이의 생성물은 죽상동맥경화증 및 심혈관계 질병의 발달 동안 전-죽종 형성 생물학적 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 골수세포형과산화효소 혈장 함량은 불안정 협심증을 앓고 있는 환자에서 심혈관계 질병의 출현과 관련되어 있다. 골수세포형과산화효소는 LDL 및 HDL 중 지질 및 단백질의 산화에 의해 죽상동맥경화증의 발달에 기여하는 것으로 보고되었다.

더욱이, MPO-생성된 산화제가, 중요한 혈관확장제인 산화 질소의 생물학적 이용가능성을 감소시키는 것을 관찰하였다. 따라서, 높은 MPO 혈장 수준은, 막힌 동맥의 재관류를 수립하기 위한 치료의 성공과 반비례한다. 높은 MPO 수준은 또한 울혈성 심부전으로부터의 생존의 감소와 관련된다. 추가적으로, MPO는, 플라크 파열 및 심근 경색을 야기하는 플라크 불안정화에서 역할을 하는 것으로 나타났다.

따라서, MPO는, 다음을 비롯한 심혈관계 질병을 야기하는 몇몇의 과정에서 역할을 하는 것으로 생각된다: 1) 불안정한 상태를 향한 죽상동맥경화성 플라크의 손상된 콜레스테롤 수송 및 진행, 2) 죽상동맥경화성 플라크의 불안정화 및 플라크 파열, 3) 손상된 내피 기능 및 혈류를 야기하는 산화 질소의 소비, 및 4) 심방 세동을 야기하는 병리학적 조직 손상 후 허혈, 및 울혈성 심부전, 대동맥류 및 뇌동맥류를 야기하는 좌심실 비대를 갖는 해로운 심장 리모델링. 상기와 같은 MPO 활성의 억제제는 심혈관계 질병의 예방 및 치료에 유의한 치료 이점을 제공하는 것으로 제안된다.

이와 관련하여, 통상적으로 양도되고 2013년 5월 16일자로 공개된 WO 2013/068875에는, 실시예 427의 억제제 화합물을 포함하는 MPO 억제제로서 유용한 일련의 2-티오피리미딘이 개시되어있다:

실시예 427

또한, 이와 관련하여, 통상적으로 양도되고 2014년 9월 16일자로 허여되고 먼저 2013년 5월 16일자로 공개된 미국 특허 출원 공개 제 2013/123230 호로 공개된 미국 특허 제 8,835,449 호에는 2-(6-(5-클로로-2-메톡시페닐)-4-옥소-2-티옥소-3,4-디하이드로피리미딘-1(2H)-일)아세트아마이드(실시예 1)가 개시되어 있으며, 2013년 5월 2일자로 허여되고 먼저 2013년 11월 7일자로 미국 특허 출원 공개 제 2013/13296351 호로 공개된 미국 특허 제 8,884,314 호에는 N-(2-아미노에틸)-2-[6-(2,4-다이메톡시페닐)-4-옥소-2-티옥소-3,4-다이하이드로피리미딘-1(2H)-일]아세트아마이드(실시예 241)가 개시되어 있다.

MPO가 심혈관 질환의 병인 및 진행에 광범위하게 연루되어 왔음에도 불구하고, 개선된 MPO 억제제에 대한 요구가 여전히 계속되고 있다. 따라서, 골수세포형과산화효소 억제 활성을 갖고, 본원에 기재된 질환의 증상의 치료, 예방 또는 감소시키기에 유용한 약제가 필요하다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:

[화학식 I]

.

본 발명의 특히 바람직한 양태는 화학식 I의 화합물의 하이드로 클로라이드 염이다.

본 발명의 또다른 바람직한 측면은 화합물 1- (2-아미노 에틸)-6-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-2-티옥소-2,3-다이하이드로피리미딘-4(1H)-온(화합물 A)이다.

본 발명은 또한 심혈관 질환 및 증상을 치료하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은, 상기 치료를 필요로 하는 포유 동물에게, 치료 효과량의 화학식 I의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 심혈관 질환 또는 증상은 심부전, 뇌 혈관염, 일차 또는 이차성 심근 경색, 허혈, 허혈 재관류 손상, 심방 세동, 불안정 협심증, 관상 동맥 질환, 또는 뇌졸중의 치료 또는 관상 동맥 우회로 이식 수술(CABG)에 유용하다.

본 발명은 또한, 치료를 필요로 하는 포유 동물에게 치료 효과량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여함을 포함하는 증상 치료 방법에 관한 것이며, 이때 상기 증상은 당뇨병, 신부전증, 투석증, 지연된 이식편 기능, 이식 장기 거부 반응 또는 조영제(contrasting agent)에 의해 유발된 신증이다.

또한, 본원에 기술된 화학식 I의 화합물의 약학적 효과량 및 약학적으로 허용가능한 담체, 비히클 또는 희석제를 포함하는 조성물이 제공된다.

또한, 본 발명은,

화학식 I의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염인 제 1 화합물;

HMG-CoA 환원 효소 억제제, 네프릴리신 억제제, 비-스테로이드계 항염증제, 인자 Xa 억제제 또는 와파린인 제 2 화합물; 및/또는, 선택적으로,

약학적 담체, 비히클 또는 희석제

를 포함하는 조성물을 치료 효과량 포함하는 약학적 복합 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에 언급된 모든 특허 및 특허 출원을 본원에 참고로 인용한다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 본 명세서 및 본 발명을 기술하는 하기 명세서 및 첨부된 청구범위로부터 명백해질 것이다.

도 1은, 실시예 1의 제조예 5(수직축 : 강도 (CPS), 수평축: 2θ (°))의 결정질 형태를 보여주는 특징적 X선 분말 회절 패턴이다.

바람직한 심혈관 증상은 심부전, 울혈성 심부전, 심방 세동, 말초 동맥 질환, 폐 고혈압, 관상 동맥 질환 또는 혈관염을 포함한다.

다른 바람직한 심혈관 증상은 불안정 협심증, 또는 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중뿐만 아니라 심근 경색을 경험한 환자를 포함한다.

본원에서 용어 "화학식 I의 화합물"은 하기 화학식 I의 화합물을 지칭하고, 또한 후술되는 바와 같은 이의 염, 다형체, 이성질체, 호변 이성질체, 양쪽성 이온, 복합체, 동위 원소 등을 포함한다.

화학식 I의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 산 부가염 및 이의 염기 염을 포함한다. 화학식 I의 화합물의 산 염이 바람직한다. 적합한 산 부가염은, 비독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 그 예는 아세테이트, 아디페이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 바이카보네이트/카보네이트, 바이설페이트/설페이트, 보레이트, 캄실레이트, 시트레이트, 사이클라메이트, 에디실레이트, 에실레이트, 포메이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 헥사플루오로포스페이트, 히벤제이트, 하이드로클로라이드/클로라이드, 하이드로브로마이드/브로마이드, 하이드로요오다이드/요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메실레이트, 메틸설페이트, 나프틸레이트, 2-나프실레이트, 니코티네이트, 나이트레이트, 오로테이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/수소 포스페이트/이수소 포스페이트, 파이로로글루타메이트, 사카레이트, 스테아레이트, 석시네이트, 탄네이트, 타르트레이트, 토실레이트, 트라이플루오로아세테이트 및 시노포에이트 염을 포함한다.

적합한 염기 염은, 비독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다. 염기 염이 바람직하지는 않지만, 예시적인 염기 염은 알루미늄, 아르기닌, 칼슘, 콜린, 다이에틸아민, 글리신, 리신, 마그네슘, 메글루민, 올라민, 칼륨, 나트륨, 트라이메틸아민 및 아연 염을 포함한다. 산 및 염기의 헤미염(hemisalt)은 또한, 예를 들어, 헤미설페이트 및 헤미칼슘 염을 형성할 수 있다. 적합한 염에 대하여 문헌[Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002)]을 참조한다.

화학식 I의 화합물은 비용매화된 및 용매화된 형태 둘 다로 존재할 수 있다. 용어 "용매화물"은, 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 용매 분자, 예를 들어, 에탄올 및/또는 물을 포함하는 분자 복합체를 설명하기 위해 본원에서 사용된다. 상기 용매 분자는, 약학 분야에서 통상적으로 사용되고 수용체에 무해한 것으로 공지된 것, 예를 들어, 물, 에탄올 등이다. 다른 용매, 예를 들어 메탄올, 메틸 3급-부틸 에터, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, (S)-프로필렌 글리콜, (R)-프로필렌 글리콜, 1,4-부틴-다이올 등이, 더 바람직한 용매화물의 제조에서의 중간체 용매로서 사용될 수 있다. 용어 "수화물"은, 상기 용매가 물인 경우에 사용된다. 약학적으로 허용가능한 용매화물은 수화물(예컨대, 다가-수화물; 1수화물), 및 다른 용매화물(결정화의 용매가 동위원소 치환될 수 있는 경우), 예를 들어 D₂O, d₆-아세톤, d₆-DMSO를 포함한다. 용매화물 및/또는 수화물은 바람직하게는 결정질 형태로 존재한다.

전술된 용매화물과 대조적으로, 약물 및 호스트가 화학량론적 또는 비-화학량론적 양으로 존재하는, 복합체(예컨대, 포접 화합물(clathrate), 약물-호스트 포함 복합체)가 화학식 I의 화합물의 범주 내에 포함된다. 또한, 화학량론적 또는 비화학량론적 양일 수 있는 2종 이상의 유기 및/또는 무기 성분을 함유하는 약물의 복합체가 포함된다. 생성된 복합체는 이온화될 수 있거나, 부분적으로 이온화될 수 있거나, 비이온화될 수 있다. 상기 복합체에 대한 논의는 문헌[J Pharm Sci, 64(8), 1269-1288 by Haleblian (August 1975)]을 참조한다.

상기 화합물이, 예를 들어 케토 또는 티오카보닐 기, 또는 방향족 잔기를 함유하는 경우, 호변 이성질성(호변 이성)이 발생할 수 있다. 결론적으로, 단일 화합물이, 하나보다 많은 유형의 호변 이성질성을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 하기는 화학식 I의 화합물의 호변 이성질체의 예시이다:

하나보다 많은 유형의 호변 이성질성을 나타내는 화합물을 비롯한 화학식 I의 화합물의 모든 호변 이성질체 형태, 및 하나 이상의 상기 화합물들의 혼합물이 화학식 I의 화합물의 범주 내에 포함된다. 또한, 대응-이온이 광학 활성인, 산 부가 또는 염기 염, 예를 들어 D-락테이트 또는 L-리신, 또는 라세미체, 예를 들어, DL-타르트레이트 또는 DL-아르기닌이 포함된다.

본 발명은, 모든 약학적으로 허용가능하고 동위원소-표지된 화학식 I의 화합물을 포함하고, 이때 하나 이상의 원자는 동일한 원자 번호를 갖는 원자에 의해 대체되지만, 원자 질량 또는 질량수는 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이하다.

본 발명의 화합물에 포함되기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소, 예컨대, ²H 및 ³H; 탄소의 동위원소, 예컨대, ¹¹C, ¹³C 및 ¹⁴C; 염소의 동위원소, 예컨대, ³⁶Cl; 불소의 동위원소, 예컨대, ¹⁸F; 요오드의 동위원소, 예컨대, ¹²³I 및 ¹²⁵I; 질소의 동위원소, 예컨대, ¹³N 및 ¹⁵N; 산소의 동위원소, 예컨대, ¹⁵O, ¹⁷O 및 ¹⁸O; 인의 동위원소, 예컨대, ³²P; 및 황의 동위원소, 예컨대, ³⁵S를 포함한다.

특정 동위원소-표지된 화학식 I의 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소를 포함하는 화합물은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 삼중수소(즉, ³H) 및 탄소-14(즉, ¹⁴C)는 특히 이의 혼입의 유용성 및 검출 방식의 준비에 비추어 이 목적에 유용하다.

더 무거운 동위원소, 예컨대, 중수소(즉, ²H)로 치환하면, 더 큰 대사성 안정성, 예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여 요건으로부터 기인하는 특정 치료 이점을 수득할 수 있고, 따라서 몇몇 경우 바람직할 수 있다.

양전자 방출 동위원소, 예컨대, ¹¹C, ¹⁸F,¹⁵O 및 ¹³N으로 치환하면, 기질 수용체 점유를 조사하기 위한 양전자 방출 단층촬영(Positron Emission Tomograohy: PET) 연구에 유용할 수 있다.

동위원소-표지된 화학식 I의 화합물은 일반적으로, 당업자에게 공지된 통상적인 기법에 의해, 또는 이전에 사용된 비표지된 시약 대신에 적절한 동위원소 표지된 시약을 사용하여, 기술된 실시예 및 제조예에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. "치료하다", "치료하는", "치료" 등에 대한 본원의 언급은 치료적, 완화적 및 예방적 치료를 포함한다.

본원에서 표현 "반응-비활성 용매" 및 "비활성 용매"는, 목적 생성물의 수율에 부정적인 영향을 주는 방식으로 출발 물질, 시약, 중간체 또는 생성물과 상호작용하지 않는 용매 또는 용매들의 혼합물을 지칭한다.

"약학적으로 허용가능한"은, 담체, 비히클 또는 희석제 및/또는 염이 제형의 다른 성분들과 혼용성이어야 하고 이의 수용체에 유해하지 않아야 함을 의미한다.

본원에서 용어 "약학적 효과량"은, 본원에 기재된 조짐의 증상 및 생리학적 징후를 치료하거나, 이의 개시를 방지하거나, 또는 이를 지연 또는 약화시키기에 충분한 화학식 I의 화합물(또는 병용제 또는 병용제와 조합된 화학식 I의 화합물)의 양을 지칭한다.

용어 "실온 또는 상온"은 18 내지 25℃의 온도를 의미하고, "HPLC"는 고압 액체 크로마토그래피를 지칭하고, "MPLC"는 중압 액체 크로마토그래피를 지칭하고, "TLC"는 박막 크로마토그래피를 지칭하고, "MS"는 질량 스펙트럼 또는 질량 분광법 또는 질량 분석법을 지칭하고, "NMR"은 핵 자기 공명 분광법을 지칭하고, "DCM"은 다이클로로메탄을 지칭하고, "DMSO"는 다이메틸 설폭사이드를 지칭하고, "DME"는 다이메톡시에탄을 지칭하고, "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 지칭하고, "MeOH"는 메탄올을 지칭하고, "Ph"는 페닐 기를 지칭하고, "Pr"은 프로필을 지칭하고, "트리틸"은 트라이페닐메틸 기를 지칭하고, "ACN"은 아세토나이트릴을 지칭하고, "DEAD"는 다이에틸아조다이카복실레이트를 지칭하고, "DIAD"는 다이이소프로필아조다이카복실레이트를 지칭한다.

또한, 전술된 화학식 I의 화합물에 대한 출발 물질 및 시약은 용이하게 입수가능하거나 유기 합성의 통상적인 방법을 사용하여 당업자가 용이하게 합성할 수 있다. 예를 들어, 본원에 사용된 많은 화합물은 큰 과학적 흥미 및 상업적 요구가 있는 화합물에 관한 것이거나 상기 화합물로부터 유도되고, 따라서 많은 이러한 화합물은 시판중이거나, 문헌에 보고되거나, 문헌에 보고된 방법에 의해 다른 통상적으로 입수가능한 물질로부터 용이하게 제조된다.

시스/트랜스 이성질체는 당업자에게 널리 공지된 통상적인 기법, 예를 들어, 크로마토그래피 및 분별 결정화에 의해 분리될 수 있다.

화학식 I의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 하기의 3가지 예시적인 방법 중 하나 이상에 의해 제조될 수 있다:

(i) 화학식 I의 화합물을 목적 산 또는 염기와 반응시키는 방법;

(ii) 화학식 I의 화합물의 적합한 전구체로부터 산- 또는 염기-반응성 보호기를 제거하거나(예를 들어, O-3급-부틸카바메이트를 산으로 처리함), 목적 산 또는 염기를 사용하여 적합한 환형 전구체(예를 들어, 락톤 또는 락탐)를 개환하는 방법; 또는

(iii) 화학식 I의 화합물의 하나의 염을 적절한 산 또는 염기와 반응시키거나 적합한 이온 교환 칼럼을 사용하여 또다른 염으로 전환하는 방법.

상기 3가지 반응은 모두 전형적으로 용액 중에서 수행된다. 생성된 염은 침전되어 여과에 의해 수집될 수 있거나 용매의 증발에 의해 회수될 수 있다. 생성된 염의 이온화 정도는 완전-이온화로부터 거의 비-이온화까지 변할 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조를 위한 특정 방법이 본 발명의 다른 특징으로서 제공되며, 실험 섹션에 기재된다.

또한, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 본원에 기재된 질환/증상의 치료를 위해 다른 약제(예를 들어, 항죽상경화 억제제 및 항혈전제)와 함께 사용될 수 있다.

병용제

본 발명의 화합물은 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 병용 투여될 수 있다. "병용으로 투여된" 또는 "병용 치료"는 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 추가의 치료제가 치료되는 포유동물에 동시에 투여됨을 의미한다. 병용으로 투여되는 경우, 각각의 성분은 적시에 상이한 지점에서 임의의 순서로 동시에 또는 연속하여 투여될 수 있다. 따라서, 목적 치료 효과를 제공하기 위해 각각의 성분은 개별적이지만 적시에 충분히 가깝게 투여될 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 예방 및 치료 방법은 병용제의 사용을 포함한다.

병용제는 치료 효과량으로 포유동물에 투여된다. "치료 효과량"은, 단독으로 또는 추가의 치료제와 병용으로 포유동물에게 투여되는 경우, 목적 질환/증상, 예를 들어 심혈관 상태, 예컨대, 급성 관상동맥 증후군 치료에 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 의미한다.

추가의 치료제는 항응고제 또는 응고 억제제, 항혈소판제 또는 혈소판 억제제, 트롬빈 억제제, 혈전용해제 또는 섬유소 용해제, 항부정맥제, 혈압강하제, 칼슘 채널 차단제(L-유형 및 T-유형), 강심제, 부적응증, 무기질코르티코이드 수용체 길항제, NO 공여제, 예컨대, 유기나이트레이트, NO 촉진제, 예컨대, 포스포다이에스터라아제 억제제, 콜레스테롤/지질 저하제 및 지질 프로필 치료제, 항당뇨병제, 항우울제, 항염증제(스테로이드성 및 비스테로이드성), 항골다공증제, 호르몬 대체 치료제, 경구 피임약, 항비만제, 항불안제, 항증식제, 항암제, 궤양 및 역류성식도염 치료제, 성장 호르몬 및/또는 성장 호르몬 분비 촉진제, 갑상선 모방제(예컨대, 갑상선 호르몬 수용체 길항제)(예컨대, 프로필티오우라실, 메티마졸, 및 카비마졸), 감염-방지제, 항바이러스제, 항세균제 및 항진균제를 포함한다.

ICU 설정에 사용된 약제는 예를 들어, 도부타민, 도파민, 에피네프린, 나이트로글리세린, 나이트로프루시드 등을 포함한다.

혈관염의 치료에 유용한 병용제는 예를 들어, 아자티오프린, 사이클로포스파마이드, 마이코페놀레이트, 모페틸, 리툭시맙 등을 포함한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은, 제 2 시약이 인자 Xa 억제제, 항응고제, 항혈소판제, 트롬빈 억제제, 혈전용해제 및 섬유소용해제로부터 선택된 하나 이상의 시약인 병용제를 제공한다.

인자 Xa 억제제의 예는 아픽사반 및 리바록사반을 포함한다.

본 발명의 화합물과 병용으로 사용하기에 적합한 항응고제의 예는 헤파린(예를 들어, 미분할된(unfractionated) 및 저분자량 헤파린, 예컨대, 에녹사파린 및 달테파린)을 포함한다.

또다른 바람직한 실시양태에서, 제 2 시약은 와파린, 미분할된 헤파린, 저분자량 헤파린, 합성 펜타사카라이드, 히루딘, 아르가트로바나스, 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 설린닥, 인도메타신, 메페나메이트, 드록시캄, 다이클로페낙, 설핀피라존, 피록시캄, 티클로피딘, 클로피도그렐, 티로피반, 에프티피바티드, 아브식시맙, 멜라가트란, 다이설파토히루딘, 조직 플라스미노겐 활성제, 개질된 조직 플라스미노겐 활성제, 아니스트레플라제, 우로키나아제 및 스트렙토키나아제로부터 선택된 하나 이상의 시약이다.

바람직한 제 2 시약은 하나 이상의 항혈소판제이다. 특히 바람직한 항혈소판제는 아스피린 및 클로피도그렐이다.

본원에서 용어 "항혈소판제(또는 혈소판 억제제)"는, 예를 들어 혈소판의 응집, 유착 또는 과립형 분비를 억제함으로써 혈소판 기능을 억제하는 약제를 나타낸다. 상기 약제는, 비제한적으로, 다양하게 공지된 비스테로이드성 항염증성 약물(NSAIDS), 예컨대, 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 설린닥, 인도메타신, 메페나메이트, 드록시캄, 다이클로파낙, 설핀피라존, 피록시캄, 및 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물을 포함한다. NSAIDS, 아스피린(아세틸살리실산 또는 ASA) 및 COX-2 억제제, 예컨대, 셀레브렉스(CELEBREX) 또는 피록시캄이 바람직하다. 다른 적합한 혈소판 억제제는 IIb/IIIa 길항제(예를 들어, 티로피반, 에프티피바티드 및 아브시시맙), 트롬복산-A2-수용체 길항제(예를 들어, 이페트로반), 트롬복산-A2-합성효소 억제제, PDE-III 억제제(예를 들어, 플레탈(Pletal), 다이피리다몰), 및 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물을 포함한다.

본원에서 용어 "항혈소판제(또는 혈소판 억제제)"는 또한, ADP(아데노신 다이포스페이트) 수용체 길항제, 바람직하게는 퓨린 수용체 P₂Y₁ 및 P₂Y₁₂의 길항제, 더욱 바람직하게는 P₂Y₁₂의 길항제를 포함하는 것으로 의도된다. 바람직한 P₂Y₁₂ 수용체 길항제는 티카그렐로르, 프라수그렐, 티클로피딘 및 클로피도그렐을 비롯한 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물을 포함한다. 클로피도그렐이 더욱 바람직한 시약이다. 또한, 티클로피딘 및 클로피도그렐이 위장관에 대해 순한 것으로 공지되었기 때문에 바람직한 화합물이다.

본원에서 용어 "트롬빈 억제제(또는 항트롬빈제)"는, 세린 단백질분해효소 트롬빈의 억제제를 나타낸다. 트롬빈을 억제함으로써, 다양한 트롬빈-매개된 과정, 예컨대, 트롬빈-매개된 혈소판 활성(즉, 예를 들어, 혈소판의 응집, 및/또는 플라스미노겐 활성제 억제제-1 및/또는 세로토닌의 과립형 분비) 및/또는 피브린 형성이 방해된다. 다수의 트롬빈 억제제는 당업자에게 공지되어 있고, 이러한 억제제는 본 발명의 화합물과 병용으로 사용되는 것으로 이해된다. 상기 억제제는 비제한적으로 보로아르기닌 유도체, 보로펩티드, 헤파린, 히루딘, 아르가트로반, 및 멜라가트란을 비롯한 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 전구약물을 포함한다. 보로아르기닌 유도체 및 보로펩티드는 보론산의 N-아세틸 및 펩티드 유도체, 예컨대, 리신, 오르니틴, 아르기닌, 호모아르기닌의 C-말단 알파-아미노보론산 유도체 및 이의 상응하는 이소티오우로늄 유사체를 포함한다. 본원에서 용어 "히루딘"은, 히룰로그, 예컨대, 다이설파토히루딘으로서 알려진 히루딘의 적합한 유도체 또는 유사체를 포함한다. 본원에서 용어 "혈전용해제 또는 섬유소용해제(또는 혈전용해성 또는 섬유소용해성)"는, 혈전(트롬비)을 용해하는 약제를 나타낸다. 상기 약제는 조직 플라스미노겐 활성제(천연 또는 재조합) 및 이의 개질된 형태, 아니스트레플라제, 우로키나아제, 스트렙토키나아제, 테넥테프라제(TNK), 라노테플라제(nPA), 인자 VIIa 억제제, PAI-1 억제제(즉, 조직 플라스미노겐 활성제 억제제의 비활성제), 알파2-항플라스민 억제제, 및 아니솔화된 플라스미노겐 스트렙토키나아제 활성제 복합체를 비롯한 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물을 포함한다. 본원에서 용어 "아니스트레플라제"는, 예를 들어, 유럽특허 제 028,489 호에 기재된 바와 같은 아니소일화된 플라스미노겐 스트렙토키나아제 활성제 복합체를 지칭하며, 상기 특허의 개시내용을 본원에 참고로 인용한다. 본원에서 용어 "우로키나아제"는, 이중 및 단일 쇄 우로키나아제 둘다를 나타내는 것으로 간주되고, 단일 쇄 우로키나아제는 또한 프로우로키나아제로서 본원에서 지칭된다.

적합한 항부정맥제의 예는 유형 I 약제(예컨대, 프로파페논); 유형 II 약제(예컨대, 메토프롤롤, 아테놀롤, 카바다이올 및 프로프라놀롤); 유형 III 약제(예컨대, 소탈롤, 도페틸리드, 아미노다론, 아지밀리드 및 이부틸리드); 유형 IV 약제(예컨대, 다이티아젬 및 베라파밀); K⁺ 채널 개방제, 예컨대, I_Ach 억제제 및 I_Kur 억제제(예를 들어, 국제특허출원공개 제 01/40231 호에 기재된 화합물)를 포함한다.

화학식 I의 화합물은 혈압강하제와 병용으로 사용될 수 있고, 상기 혈압강하 활성은 표준 분석(예를 들어, 혈압 측정)에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 적합한 혈압강하제의 예는 알파 아드레날린 차단제; 베타 아드레날린 차단제; 칼슘 채널 차단제(예를 들어, 딜티아젬, 베라파밀, 니페디핀 및 암로디핀); 혈관확장제(예를 들어, 하이드랄라진), 이뇨제(예를 들어, 클로로티아자이드, 하이드로클로로티아자이드, 플루메티아자이드, 하이드로플루메티아자이드, 벤드로플루메티아자이드, 메틸클로로티아자이드, 트라이클로로메티아자이드, 폴리티아자이드, 벤즈티아자이드, 에타크린산 트라이크리나펜, 클로르탈리돈, 토르세마이드, 푸로세마이드, 무솔리민, 부메타나이드, 트라이암트레넨, 아밀로리드, 스피로놀락톤); 레닌 억제제; ACE 억제제(예를 들어, 카프노프릴, 조페노프릴, 포시노프릴, 에날라프릴, 세라노프릴, 실라조프릴, 델라프릴, 펜토프릴, 퀴나프릴, 나미프릴, 리시노프릴); AT-1 수용체 길항제(예를 들어, 로사르탄, 이르베사르탄, 발사르탄); ET 수용체 길항제(예를 들어, 시탁센탄, 아트르센탄 및 미국 특허 제 5,612,359 호 및 제 6,043,265 호에 개시된 화합물); 이중 ET/AII 길항제(예를 들어, 국제특허출원공개 제 00/01389 호에 개시된 화합물); 중성 펩티드내부분해효소(NEP) 억제제; 바소펩티드분해효소 억제제(이중 NEP-ACE 억제제)(예를 들어, 게모파트릴라트 및 나이트레이트)를 포함한다. 예시적인 항협심증제는 이바브라딘이다.

적합한 칼슘 채널 차단제(L-유형 또는 T-유형)의 예는 딜티아젬, 베라파밀, 니페디핀 및 암로디핀 및 마이베프라딜을 포함한다.

적합한 강심제의 예는 디기탈리스 및 와베인을 포함한다.

하나의 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 하나 이상의 이뇨제와 동시-투여될 수 있다. 적합한 이뇨제의 예는 (a) 루프 이뇨제, 예컨대, 푸로세마이드(예컨대, 라식스(LASIX: 상표명)), 토르세마이드(예컨대, 데마덱스(DEMADEX: 상표명)), 베메타나이드(예컨대, 부멕스(BUMEX: 상표명)) 및 에타크린산(예컨대, 에데크린(EDECRIN: 상표명)); (b) 티아자이드-유형 이뇨제, 예컨대, 클로로티아자이드(예컨대, 디우릴(DIURIL: 상표명), 에시드릭스(ESIDRIX: 상표명) 또는 하이드로디우릴(HYDRODIURIL: 상표명)), 하이드로클로로티아자이드(예컨대, 마이크로지드(MICROZIDE: 상표명) 또는 오레틱(ORETIC: 상표명)), 벤즈티아자이드, 하이드로플루메티아자이드(예컨대, 살루론(SALURON: 상표명)), 벤드로플루메티아자이드, 메티클로르티아자이드, 폴리티아자이드, 트라이클로르메티아자이드, 및 인다파마이드(예컨대, 로졸(LOZOL: 상표명)); (c) 프탈리미딘-유형 이뇨제, 예컨대, 클로르탈리돈(예컨대, 하이그로톤(HYGROTON: 상표명)), 및 메톨라존(예컨대, 자록솔린(ZAROXOLYN: 상표명)); (d) 퀴나졸린-유형 이뇨제, 예컨대, 퀴네타존; 및 (e) 칼륨-보전(sparing) 이뇨제, 예컨대, 트라이암테렌(예컨대, 다이레늄(DYRENIUM: 상표명)), 및 아밀로리드(예컨대, 미다모르(MIDAMOR: 상표명) 또는 모두레틱(MODURETIC: 상표명))를 포함한다.

또다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 루프 이뇨제와 동시-투여될 수 있다. 또한, 또다른 실시양태에서, 루프 이뇨제는 푸로세마이드 및 토르세마이드로부터 선택된다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 푸로세마이드와 동시-투여될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 임의적으로 토르세마이드의 제어된 또는 개질된 방출 형태일 수 있는 토르세마이드와 동시-투여될 수 있다.

또다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 티아자이드-유형 이뇨제와 동시-투여될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 티아자이드-유형 이뇨제는 클로로티아자이드 및 하이드로클로로티아자이드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 클로로티아자이드와 동시-투여될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 하이드로클로로티아자이드와 동시-투여될 수 있다.

또다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 프탈리미딘-유형 이뇨제와 동시-투여될 수 있다. 또한, 또다른 실시양태에서, 프탈리미딘-유형 이뇨제는 클로르탈리돈이다.

적합한 병용 무기질코르티코이드 수용체 길항제의 예는 스프리오놀락톤 및 에플레레논을 포함한다.

적합한 병용 포스포다이에스터라아제 억제제의 예는 PDE III 억제제(예컨대, 실로스타졸) 및 PDE V 억제제(예컨대, 실데나필)를 포함한다.

본 발명의 화합물은 콜레스테롤 조절제(콜레스테롤 저하제 포함), 예컨대, 리파아제 억제제, HMG-CoA 환원효소 억제제, HMG-CoA 합성효소 억제제, HMG-CoA 환원효소 유전자 발현 억제제, HMG-CoA 합성효소 유전자 발현 억제제, MTP/Apo B 분비 억제제, CETP 억제제, 담즙산 흡수 억제제, 콜레스테롤 흡수 억제제, 콜레스테롤 합성 억제제, 스쿠알렌 합성효소 억제제, 스쿠알렌 에폭시다아제 억제제, 스쿠알렌 시클라아제 억제제, 혼합된 스쿠알렌 에폭시다아제/스쿠알렌 시클라아제 억제제, 피브레이트, 니아신, 이온 교환 수지, 산화방지제, ACAT 억제제 또는 담즙산 봉쇄제 또는 약제, 예컨대, 미포메르센과 병용으로 사용될 수 있다.

적합한 콜레스테롤/지질 저하제 및 지질 프로파일 치료의 예는 HMG-CoA 환원효소 억제제(예를 들어, 프라바스타틴, 로바스타틴, 아트르바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴, NK-104(이타바스타틴, 또는 니스바스타틴이라고도 알려짐) 및 ZD-4522(로수바스타틴, 또는 아타바스타틴 또는 비사스타틴이라고도 알려짐)); 스쿠알렌 합성효소 억제제; 피브레이트; 담즙산 봉쇄제(예컨대, 퀴에스트란); ACAT 억제제; MTP 억제제; 지질산소화효소 억제제; 콜레스테롤 흡수 억제제; 및 콜레스테릴 에스터 전달 단백질 억제제를 포함한다.

항염증제는 또한 sPLA2 및 lpPLA2 억제제(예컨대, 다라플라딥), 5 LO 억제제(예컨대, 아트레류톤), 및 IL-1 및 IL-1r 길항제(예컨대, 카나키누맙)를 포함한다.

다른 아테롬성동맥경화제는 PCSK9의 작용을 조절하는 약제를 포함한다.

유형 2 당뇨병의 심혈관계 합병증은 유해한 수준의 MPO와 연관되고, 따라서, 본 발명의 화합물은 항당뇨병제, 특히 유형 2 항당뇨병제와 병용으로 사용될 수 있다. 적합한 항당뇨병제의 예는, 예를 들어 인슐린, 메트포민, DPPIV 억제제, GLP-1 작용제, 유사제 및 모방제, SGLT1 및 SGLT2 억제제를 포함한다. 적합한 항당뇨병제는 아세틸-CoA 카복실라아제-(ACC) 억제제, 예컨대, 국제특허출원공개 제 2009144554 호, 국제특허출원공개 제 2003072197 호, 국제특허출원공개 제 2009144555 호 및 국제특허출원공개 제 2008065508 호에 기재된 것; 다이아실글리세롤 O-아실전이효소 1(DGAT-1) 억제제, 예컨대, 국제특허출원공개 제 09016462 호 또는 국제특허출원공개 제 2010086820 호에 기재된 것; AZD7687 또는 LCQ908, 다이아실글리세롤 O-아실전이효소 2(DGAT-2) 억제제, 모노아실글리세롤 O-아실전이효소 억제제, 포스포다이에스터라아제(PDE)-10 억제제, AMPK 활성제, 설폰일우레아(예를 들어, 아세토헥사마이드, 클로르프로파마이드, 다이아비나아제, 글리벤클라마이드, 글리피지드, 글리부리드, 글리메피리드, 글리클라지드, 글리펜티드, 글리퀴돈, 글리솔아마이드, 톨아자마이드 및 톨부타마이드), 메글리티나이드, α-아밀라아제 억제제(예를 들어, 텐다미스타트, 트레스타틴 및 AL-3688), α-글루코시드 가수분해효소 억제제(예를 들어, 아카르보스), α-글루코시다아제 억제제(예를 들어, 아디포신, 카미글리보스, 에미글리테이트, 미글리톨, 보글리보스, 프라디미신-Q, 및 살보스타틴), PPARγ 작용제(예를 들어, 발라글리타존, 시글리타존, 다르글리타존, 엔글리타존, 이사글리타존, 피오글리타존 및 로시글리타존), PPAR α/γ 작용제(예를 들어, CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 및 SB-219994), 비구아나이드(예를 들어, 메트포민), 글루카곤-유사 펩티드 1(GLP-1) 조절제, 예컨대, 작용제(예를 들어, 엑센딘-3 및 엑센딘-4), 리라글루티드, 알비글루티드, 엑세나티드(바이에타(Byetta: 등록상표)), 알비글루티드, 릭시세나티드, 둘라글루티드, 세마글루티드, NN-9924, TTP-054, 단백질 티로신 포스포타아제-1B(PTP-1B) 억제제(예를 들어, 트로두스퀴민, 하이르티오살 추출물, 및 문헌[Zhang, S., et al., Drug Discovery Today, 12(9/10), 373-381 (2007)]에 기재된 화합물), SIRT-1 억제제(예를 들어, 레스베라트롤, GSK2245840 또는 GSK184072), 다이펩티딜 펩티다아제 IV(DPP-IV) 억제제(예를 들어, 국제특허출원공개 제 2005116014 호에 기재된 것, 시타글립틴, 빌다글립틴, 알로글립틴, 듀토글립틴, 리나글립틴 및 삭사글립틴), 인슐린 분비촉진제, 지방산 산화 억제제, A2 길항제, c-jun 아미노-말단 키나아제(JNK) 억제제, 글루코키나아제 활성제(GKa), 예컨대, 국제특허출원공개 제 O2010103437 호, 국제특허출원공개 제 2010103438 호, 국제특허출원공개 제 2010013161 호, 국제특허출원공개 제 2007122482 호에 기재된 것; TTP-399, TTP-355, TTP-547, AZD1656, ARRY403, MK-0599, TAK-329, AZD5658 또는 GKM-001, 인슐린, 인슐린 모방제, 글리코겐 포스포릴라아제 억제제(예를 들어 GSK1362885), VPAC2 수용체 작용제, SGLT2 억제제, 예컨대, 문헌[E.C. Chao et al. Nature Reviews Drug Discovery 9, 551-559 (July 2010)]에 기재된 것을 비롯한 다파글리플로진, 카나글리플로진, 엠파글리플로진, 토포글리플로진(CSG452), ASP-1941, THR1474, TS-071, ISIS388626 및 LX4211 뿐만 아니라 국제특허출원공개 제 2010023594 호에 기재된 것; 글루카곤 수용체 조절제, 예컨대, 문헌[Demong, D.E. et al. Annual Reports in Medicinal Chemistry 2008, 43, 119-137]에 기재된 것; GPR119 조절제, 특히 작용제, 예컨대, 국제특허출원공개 제 2010140092 호, 국제특허출원공개 제 2010128425 호, 국제특허출원공개 제 2010128414 호, 국제특허출원공개 제 2010106457 호, 문헌[Jones, R.M. et al. in Medicinal Chemistry 2009, 44, 149-170]에 기재된 것(예를 들어 MBX-2982, GSK1292263, APD597 및 PSN821); FGF21 유도체 또는 유사체, 예컨대, 문헌[Kharitonenkov, A. et al., Current Opinion in Investigational Drugs 2009, 10(4)359-364]에 기재된 것; TGR5(GPBAR1로도 지칭됨) 수용체 조절제, 특히 작용제, 예컨대, 문헌[Zhong, M., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2010, 10(4), 386-396]에 기재된 것 및 INT777; 비제한적으로 TAK-875, GPR120 조절제, 특히 작용제, 고친화성 니코틴산 수용체(HM74A) 활성제를 포함하는 GPR40 작용제, 예컨대, 문헌[Medina, J.C., Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2008, 43, 75-85]에 기재된 것; 및 SGLT1 억제제, 예컨대, GSK1614235를 포함한다. 본 발명의 화합물과 병용될 수 있는 항당뇨병제의 추가 대표적인 목록은 예를 들어, 국제특허출원공개 제 2011005611 호의 28 쪽 35 행 내지 30 쪽 19 행에서 발견될 수 있다. 바람직한 항당뇨병제는 메트포민 및 DPP-IV 억제제(예를 들어, 시타글립틴, 빌다글립틴, 알로글립틴, 듀토글립틴, 리나글립틴 및 삭사글립틴)이다. 다른 항당뇨병제는 카르니틴 팔미토일 전이효소의 억제제 또는 조절제, 프록토즈의 억제제, 1,6-다이포스포타아제, 알도즈 환원효소의 억제제, 무기질코르티코이드 수용체 억제제, TORC2의 억제제, CCR2 및/또는 CCR5의 억제제, PKC 이소폼(예를 들어 PKCα, PKCβ, PKCγ)의 억제제, 지방산 합성효소의 억제제, 세린 팔미토일 전이효소의 억제제, GPR81, GPR39, GPR43, GPR41, GPR105, Kv1.3, 레티놀 결합 단백질 4, 글루코코르티코이드 수용체, 소마토스타틴 수용체(예를 들어, SSTR1, SSTR2, SSTR3 및 SSTR5)의 조절제, PDHK2 또는 PDHK4의 억제제 또는 조절제, MAP4K4의 억제제, IL-1베타를 포함하는 IL-1 패밀리의 조절제, RXR알파의 조절제를 포함할 수 있다. 또한, 적합한 항당뇨병제는 문헌[Carpino, P.A., Goodwin, B. Expert Opin. Ther. Pat, 2010, 20(12), 1627-51]에 나열된 메커니즘을 포함한다.

당업자는 본 발명의 화합물이 또한 다른 심혈관계 또는 뇌혈관 치료, 예컨대, PCI, CABG, 심장 이식, 신장 이식, 스텐팅(stenting), 약물 용리 스텐트(stent), 줄기 세포 치료 및 의료 장치, 예컨대, 이식된 심박 조율기, 제세동기, 또는 심장 재동기 치료와 함께 사용될 수 있음을 고려할 것이다.

골수세포형과산화효소 활성은 신경염증성 증상에서 설명되었고, 따라서, 본 발명의 화합물은 포유동물에서 신경염증성 및 신경병성 약제와 병용으로 사용될 수 있다.

다른 신경염증성 및 신경병성 약제의 예는 항우울제, 항정신병제, 진통제, 항알츠하이머제 및 항불안제를 포함한다. 본 발명의 화합물과 병용으로 사용될 수 있는 특정한 유형의 항우울제의 예는 노르에피네프린 재흡수 억제제, 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(SSRI), NK-1 수용체 길항제, 모노아민 산화효소 억제제(MAOI), 모노아민 산화효소(RIMA)의 가역적 억제제, 세로토닌 및 노르아드레날린 재흡수 억제제(SNRI), 코르티코트로핀 방출 인자(CRF) 길항제, 및 비정형 항우울제를 포함한다. 적합한 노르에피네프린 재흡수 억제제는 3급-아민 삼환형 및 2차 아민 삼환형을 포함한다. 적합한 3급-아민 삼환형 및 2차 아민 삼환형의 예는 아미트립틸린, 클로미프라민, 독세핀, 이미프라민, 트라이미프라민, 도티에핀, 부트립틸린, 노르트립틸린, 프로트립틸린, 아목사핀, 데시프라민 및 마프로틸린을 포함한다. 적합한 SSRI의 예는 플루옥세틴, 플루복사민, 파록세틴 및 세트랄린을 포함한다. 모노아민 산화효소 억제제의 예는 이소카복스아자이드, 페넬진 및 트란일사이클로프라민을 포함한다. 모노아민 산화효소의 적합한 가역적 억제제의 예는 모클로베마이드를 포함한다. 본 발명에서 사용하기에 적합한 SNRI의 예는 벤라팍신을 포함한다. 적합한 비정형 항우울제의 예는 부프로피온, 리튬, 트라조돈 및 빌록사진을 포함한다. 항알츠하이머제의 예는 NMDA 수용체 길항제, 예컨대, 메만틴, 및 콜린스테라아제 억제제, 예컨대, 도네페질 및 갈란타민을 포함한다. 본 발명의 화합물과 병용으로 사용될 수 있는 적합한 유형의 항불안제의 예는 벤조다이아제핀 및 세로토닌 1A 수용체(5-HT1A) 작용제, 및 CRF 길항제를 포함한다. 적합한 벤조다이아제핀은 알프라졸람, 클로르다이아제폭사이드, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 로라제팜, 옥사제팜 및 프라제팜을 포함한다. 적합한 5-HT1A 수용체 작용제는 부스피론 및 이프사피론을 포함한다. 적합한 CRF 길항제는 베루세르폰트를 포함한다. 적합한 비정형 항정신병제는 팔리페리돈, 지프라시돈, 리스페리돈, 아리피프라졸, 올란자핀 및 퀘티아핀을 포함한다. 적합한 니코틴 아세틸콜린 작용제는 CP-601927 및 바레니클린을 포함한다. 진통제는 프레가발린, 가바펜틴, 클로니딘, 네오스티그민, 바클로펜, 미다졸람, 케타민 및 지코노티드를 포함한다.

당업자는 본 발명의 화합물이 면역제어 요법(예컨대, 사이클로스포린 A (샌드이뮨(Sandimmune) 또는 네오랄(Neoral)), 타클로무스, 레플루노마이드, 데옥시 스페르구알린, 마이코페놀레이트(예: 셀셉트(Cellcept)), 아탐 (Atgam), 항염증성 스테로이드(예 : 프레드니손 또는 덱사메타손), 아자티오프린, 6-머캅토퓨린, 라파 마이신, JAK 억제제(예: 젤잔즈(Xeljanz)), TNF-알파 항체(예: 인플릭시맙(레미카드), 아달리무맙(휴미라(Humira)), 세르톨리주맙 페골(시미지아(Cimzia)), 골리무맙(심포니(Simponi)), 에타네르셉트(엔브렐(Enbrel)) 및 메토트렉세이트)와 조합으로 사용될 수 있음을 알 것이다.

특히 단일 투여량 단위로서 제공되는 경우, 혼합된 활성 성분 사이에 화학적 상호작용에 대한 가능성이 존재한다. 이 때문에, 화학식 I의 화합물 및 제 2 치료제가 단일 투여량 단위로 병용되는 경우, 활성 성분이 단일 투여량 단위로 병용될지라도, 활성 성분 사이에 물리적 접촉이 최소화되도록(즉, 감소되도록) 제형화된다. 예를 들어, 하나의 활성 성분은 장용성 코팅될 수 있다. 활성 성분중 하나를 장용성 코팅함으로써, 혼합된 활성 성분 사이에 접촉을 최소화할 수 있을 뿐만 아니라, 이러한 성분 중 하나가 위장에서 배출되지 않고 오히려 장에서 배출되도록 위장관에서 이러한 성분 중 하나의 배출을 조절할 수 있다. 또한, 활성 성분 중 하나는 위장관에 전체에 걸쳐 지효성 방출에 영향을 미치는 물질로 코팅될 수 있고, 또한 혼합된 활성 성분 사이에 물리적 접촉을 최소화하도록 작용할 수 있다. 더욱이, 지효성 방출 성분은 이 성분의 방출이 장에서만 발생하도록 추가적으로 장용성 코팅될 수 있다. 또한 활성 성분을 추가로 분리하기 위해, 또다른 접근은 하나의 성분이 지효성 및/또는 장용성 방출 중합체로 코팅되고, 다른 성분이 또한 중합체, 예컨대, 저점도 등급의 하이드록시프로필 메틸셀룰로스(HPMC) 또는 당해 분야에 공지된 다른 적절한 물질로 코팅된 조합 생성물의 제형을 수반할 수 있다. 중합체 코팅은 다른 성분과의 상호작용에 대한 추가적 장벽을 형성하도록 작용한다.

본 발명의 병용 제품의 성분들 간의 접촉을 최소화하는 상기 방법 뿐 아니라 다른 방법은, 본 개시내용과 관련될 때, 단일 투여 형태로 투여되든지 또는 개별 형태이지만 동시에 동일한 방식으로 투여되든지 간에, 당업자에게 용이하게 자명할 것이다.

병용 요법 치료에서, 본 발명의 화학식 I의 화합물 및 다른 약물 치료는 둘다 통상적인 방법에 의해 포유동물(예를 들어, 인간, 남성 또는 여성)에게 투여된다.

본 발명의 화학식 I의 화합물 및 이의 염은 모두 포유동물, 특히 인간에서 골수세포형과산화효소를 억제하는 약제로서 치료 용도로 채택되고, 따라서 상기 작용이 관련된 다양한 상태(예를 들어, 본원에 기재된 것)의 치료에 유용하다.

골수세포형과산화효소는 단백질, 지질 및 핵산의 병리학적 산화와 관련되고, 기능장애성 콜레스테롤 물질 대사, 조직 손상 및 장기 기능장애에 기여하고, 심혈관계 질환의 발달 및 관련된 해로운 결과를 유도할 수 있거나 이에 기여할 수 있는 것으로 생각된다.

본 발명에 따라 치료될 수 있는 질환/증상은 비제한적으로 심혈관 상태, 당뇨병(예를 들어, 유형 II) 및 당뇨병성 합병증, 혈관 상태, 신경염증성 상태, 신경병성 상태, 통증, 암, 패혈증, NASH(비알코올성 지방간염), 폐 손상 및 고혈압, 신장 질병, 및 ANCA(항호중구 세포질 항체)와 관련된 혈관염 증후군 등을 포함한다.

심혈관계의 발달을 갖는 골수세포형과산화효소의 활성 및 관련된 질환/증상 사이의 긍정적인 관련성을 고려해 볼 때, 화학식 I의 화합물은 이의 약리학적 작용에 의해서 죽상동맥경화증, 및 이의 관련된 질병 상태의 예방, 저지 및/또는 퇴행에 유용하다.

MPO는 심혈관계 질병의 진화 동안 전-죽종 형성 생물학적 활성을 나타내는 것으로 여겨진다. 더욱이, MPO-생성된 산화제는 중요한 혈관확장제인 산화 질소의 생물학적 이용가능성을 감소시키는 것으로 관찰되었다. 추가적으로, MPO는 플라크의 섬유 캡의 약화 및 이후의 플라크 불안정화 및 파열을 야기하는 금속단백질분해효소의 활성을 야기함으로써 플라크 불안정화에서 역할을 하는 것으로 나타났다. MPO의 이러한 광범위한 효과를 고려해 볼 때, 따라서 MPO는 광범위한 종류의 심혈관계 질병에 연루되어 있다.

심혈관 증상은 비제한적으로 관상 동맥성 심장병, 급성 관상동맥 증후군, 허혈성 심장병, 최초 및 재발성 심근 경색, 속발성 심근 경색, 비ST 분절 상승 심근 경색, 또는 ST 분절 상승 심근 경색, 허혈성 급사, 일과성 허혈 발작, 말초 동맥 질병, 협심증, 죽상동맥경화증, 고혈압, 심부전(예컨대, 울혈성 심부전), 이완기 장애(예컨대, 좌심실 이완기 장애, 확장기 심부전, 및 손상된 확장기 충만), 수축기 기능장애(예컨대, 감소된 박출 계수를 갖는 수축기 심부전), 심방 세동, 부정맥(심실성), 허혈, 비후형 심근증, 급성 심장사, 심근 및 혈관 섬유증, 손상된 동맥 순응성, 심근 괴사 병변, 혈관 손상, 좌심실 비대, 감소된 박출 계수, 심장 병변, 혈관 벽 비대, 내피 비후, 관상 동맥의 피브리노이드 괴사, 뇌졸중 등을 포함한다. 또한, 정맥 혈전증, 심부정맥 혈전증, 혈전성 정맥염, 동맥 색전증, 관상 동맥 혈전증, 대뇌 동맥 혈전증, 뇌 색전증, 신장 색전증, 폐 색전증, 및 (a) 인공 판막 또는 다른 이식, (b) 유치 도뇨관, (c) 스텐트, (d) 심폐 우회술, (e) 혈액투석, 또는 (f) 혈전증을 촉진하는 인공 표면에 혈액이 노출되는 다른 과정으로부터 야기하는 혈전증을 포함한다. 혈전증이 폐색(예를 들어, 우회술 후) 및 재폐색(예를 들어, 경피 경관 관상 동맥성 혈관형성술 동안 또는 후)을 포함함이 주목된다.

유형 2 당뇨병의 심혈관계 합병증은 유해한 수준의 MPO와 관련되어 있고, 따라서 본 발명의 화학식 I의 화합물은 당뇨병 및 당뇨병성 합병증, 예컨대, 대혈관 질병, 고혈당, 대사성 증후군, 손상된 글루코스 내성, 고요산혈증, 당뇨, 백내장, 당뇨병성 신경증, 당뇨병성 신증, 당뇨병성 망막증, 비만, 이상지질혈증, 고혈압, 고인슐린혈증, 및 인슐린 내성 증후군을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

또한, 질병에 대한 골수세포형과산화효소 활성의 연관성은 신경염증성 및 신경병성 증상에서 설명되고 있다. 따라서, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 특히, 포유동물, 바람직하게는 인간에게 화학식 I의 화합물의 치료 효과량을 투여함으로써, 인간을 비롯한 포유동물에서의 신경염증성 및 신경병성 증상(즉, 장애 또는 질환), 예컨대, 다발성 경화증, 편두통; 간질; 알츠하이머병; 파킨슨병; 다계통 위축증(Multiple-System Atrophy); 뇌 손상; 뇌졸중; 뇌혈관 질병(뇌동맥 경화증, 대뇌 아밀로이드 맥관병증, 유전성 뇌일혈 및 뇌 저산소혈-허혈 포함); 고려 장애(기억상실, 노인성 치매, HIV 관련된 치매, 알츠하이머 관련된 치매, 헌팅톤병 관련된 치매, 루이체 치매, 혈관 치매, 약물 관련된 치매, 망상 및 경도 고려 장애 포함); 정신 박약(다운 증후군 및 허약성 X 증후군 포함); 수면 장애(과면증, 일주기성 리듬 수면 장애, 불면증, 반응소실증 및 수면 박탈 포함) 및 정신 질환(예컨대, 불안(급성 스트레스 장애, 일반화된 불안 장애, 사회 불안 장애, 공황 장애, 외상 후 스트레스 장애 및 강박 신경증 포함); 인위적인 장애(급성 환각 조증 포함); 충동 조절 장애강박적인 도박 및 간헐적 폭발성 장애 포함); 기분 장애(이극성(bipolar) I 질환, 이극성 II 질환, 조증, 혼합된 정서 상태, 주우울증, 만성 우울증, 계절성 우울증, 정신병적 우울증 및 산후 우울증 포함); 정신운동 장애; 정신병적 장애(정신분열증, 정신분열 정동 장애, 정신분열형 및 망상 장애 포함); 약물 의존성(마약 의존성, 알코올 중독, 암페타민 의존성, 코카인 중독, 니코틴 의존성 및 마약 금단증상 증후군 포함); 식이 장애(식욕부진, 폭식증, 폭식 장애, 과식증 및 냉식증 포함); 및 소아 정신 질환(주의력 결핍 장애, 주의력 결핍/과활성 장애, 행위 장애 및 자폐증 포함)의 치료에 사용하기 위한 것으로 제시된다.

다른 염증성 질환 또는 장애는 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 낭포성 섬유증, 특발성 폐섬유증, 급성 호흡곤란 증후군, 축농증, 비염, 건선, 피부염, 포도막염, 치은염, 죽상동맥경화증, 염증성 장 질환, 신장 사구체 손상, 간 섬유증, 패혈증, 직장염, 류마티스성 관절염, 및 재관류 손상, 척수 외상 및 조직 손상/흉터/유착/거부와 관련된 염증을 포함한다.

용어 "조영제에 의해 야기된 신증"은, 심장 외과, 비심장 외과 및 이식 수술을 포함하는 이미징 약제를 이용하는 과정 후 대조적으로 유도된 신증을 포함한다. 조영제에 의해 야기된 신증은 또한 원발성 MI 또는 속발성 MI의 위험을 포함하는 환자에서 강화된 이미징 조영제의 사용에 의해 야기된 신증을 포함한다.

포유동물(예를 들어 인간, 남성 또는 여성)의 전술된 질환/증상의 치료에서 약제로서 화학식 I의 화합물의 유용성은, 후술되는 통상적인 생체 외 및 생체 내 분석에서 본 발명의 화합물의 활성에 의해 설명된다. (당업자가 적절히 변형한) 생체 내 분석은 다른 약제뿐만 아니라 본 발명의 화합물의 활성을 측정하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 분석은 또한 본 발명의 화학식 I의 화합물(또는 본원에 기재된 다른 약제)의 활성을 서로 및 다른 공지된 화합물의 활성과 함께 비교할 수 있는 방식을 제공한다. 이러한 비교 결과는 상기 질병의 치료를 위해 인간을 포함하는 포유동물에서 투여량 수준을 측정하는데 유용하다.

하기 프로토콜은 물론 당업자에 의해 달라질 수 있다.

MPO의 비가역적 억제를 위한 인간 전혈 검사

본 발명의 생물학적 시스템에서 MPO 활성의 억제를 측정하기 위해, 헤파린 처리된 튜브(에이피피 파마슈티칼스 엘엘씨(APP Pharmaceuticals, LLC), 카탈로그 번호 NDC#63323-047-10, #4710) 내의, 무-투약 인간 지원자로부터 수집된 인간 전혈을 사용하여 생물검정을 수행하였다. 혈액을 분주하고, MPO 억제제 또는 비히클 대조군의 상이한 농도로 처리하고, 세균 지질다당류(LPS, 인비보겐(InVivogen))의 존재 또는 부재 하에 혈액 백혈구를 자극하여, H₂0₂(요구되는 MPO 기질)를 생성하고 동시에 MPO를 방출시켰다. 실온에서 4시간 동안 배양한 후, 4℃에서 2000Xg 원심 분리하고, 혈장 분획을 수집하였다.

혈장 분획을 총 MPO와 활성 MPO 분석을 위해 2개로 나누었다. 총 MPO 함량은 표준 샌드위치 ELISA(포획 및 검출 항체: 셀 사이언시스(Cell Sciences), 카탈로그 번호 HP9048 및 셀 사이언시스 카탈로그 번호 HM2164, 클론 266-6K1)를 사용하여 결정하였고, 자가 공여자 혈장에 희석함으로써 제조된 정제된 MPO(골수세포형과산화효소, 칼바이오켐(Calbiochem), 카탈로그 번호 475911)의 표준 곡선에 대해 계산하였다. MPO 활성은, 상기 ELISA 방법에 대해 기술된 바와 같은 포획 단계를 사용하여 혈장으로부터 전체 MPO를 포획함으로써 결정된다. 미반응된 MPO 억제제를 포함하는 결합되지 않은 혈장 물질을 세척한 후, MPO 반응 기질에 [H₂O₂(2uM) 및 앰플렉스 레드(Amplex Red)(인비트로겐(Invitrogen), 카탈로그 번호 A12222)]를 첨가하고, 앰플렉스 레드 기질에서 레조루핀으로의 MPO-촉진된 전환율의 V_max를, 동적 분석에서 형광 플레이트 판독기를 사용하여 형광(여기 530 nM, 발광 580 nm) 증가를 측정함으로써 결정하였다. 포획된 물질의 MPO 활성을, 자가 공여자 혈장 중에 제조된 정제된 MPO(골수세포형과산화효소, 칼바이오켐(Calbiochem), 카탈로그 번호 475911)의 표준 곡선으로 수득한 것과 비교하였다. 각 시료에 대한 '활성' 골수세포형과산화효소의 %는 상기 앰플렉스 레드 분석에서의 활성 골수세포형과산화효소와 각 시료에 대한 ELISA로부터의 전체 골수세포형과산화효소의 비율로부터 계산되었다. 이어서, 화합물 농도 대 MPO 활성의 투여량 반응 곡선을 플로팅하여 IC₅₀ 값을 결정하였다.

hERG 분석

모든 시험은, 밀리포어(Millipore)로부터 구입한 hERG 유전자(프리시즌(Precision) HERG-CHO 재조합 세포주 CYL3038)로 형질 감염된 CHO 세포에서 수행하였다. 상기 세포주는 DMEM/F-12, 10% 소 태아 혈청, 1% 페니실린-스트렙토 마이신, 1% 제네티신(Geneticin) 및 1%의 1M HEPES 완충액을 포함하는 글루타맥스(GlutaMAX)(상표명)에서 성장시키고, 이를 5% 이산화탄소를 함유하는 가습 분위기에서 약 37℃로 유지하였다. 세포는 합치(confluency)에 기초하여 매 3 내지 5일마다 계대 배양하였다. 시험 당일, 데타신(Detachin)(상표명)을 사용하여 175cm²의 배양 플라스크로부터 50% 내지 80%의 합치 세포를 수확했다. 37℃에서 데타신(상표명)에 10분 동안 노출시킨 후, 세포를 1000 RPM으로 1분 동안 원심 분리하였다. 상청액을 제거하고, 세포 펠렛을, 2.5%의 1M HEPES를 함유하는 5 내지 8 mL의 무혈청 배지 내에 재구성하고, 큐스터러(Qstirrer)(상표명) 상에 놓고, 회복시켰다. 약 30 분의 회복 기간 후에 시험이 시작하였다.

hERG 전류는 자동화된 큐패치(Qpatch) HT(상표명) 시스템(문헌[Kutchinsky J, Friis S, Asmild M, et al. Characterization of potassium channel modulators with QPatch automated patch-clamp technology: system characteristics and performance. Assay Drug Dev Technol 2003;1(5):685-93]에 기술된 바와 같음)을 사용하여 유발하였다. 큐스터러(상표명)에서 부유된 세포를, 138 mM NaCl, 5.3 mM KCl, 1.3 mM CaCl₂, 0.5 mM MgCl₂, 5.6 mM 글루코스, 5 mM HEPES, 0.4 mM MgSO₄, 0.44 KH₂PO₄, 4.2 NaHCO₃, 0.34 Na₂HPO₄로 구성되고 NaOH로 pH 7.4 ± 0.1로 조절된 세포외 기록 생리 식염수를 함유하는 큐플레이트(Qplate) 48(상표명)의 48개의 개별적인 기록 챔버로 옮겼다. 세포 내 기록 생리 식염수는 130 mM KCl, 1 mM MgCl₂, 10 mM HEPES, 5 mM Mg-ATP 및 5 mM EGTA로 구성되었고, KOH로 pH 7.2 ± 0.1로 조절되었다. 막 전류를 실온에서 기록하였다.

hERG 전류는, 1초 동안 + 30 mV까지의 전압 스텝을 사용하여 포텐셜을 -80 mV의 유지하고 이어서 다시 0.55 mV/ms에서 -80 mV까지 램핑함으로써 유도하였다. 시험 펄스는 0.25 Hz의 주파수에 도달하였다. 각 세포에 대해 4개 이하의 상이한 농도를 조사하였으며, 각 노출은 5분 동안 지속하거나 정상-상태 효과가 관찰될 때까지 지속하였다. 별도의 시험 세트에서, 완전 농도-반응 관계 및 IC₅₀을, 양성 대조군인 시사프라이드(cisapride)(문헌[Jules C. Hancox, Mark J. McPate, Aziza El Harchi, Yi hong Zhang, The hERG potassium channel and hERG screening for drug-induced torsades de pointes, Pharmacology & Therapeutics, Volume 119, Issue 2, August 2008, Pages 118-132])에 대해 결정하였다.

소피온 큐패치(Sophion Qpatch) 분석 소프트웨어를 사용하여 재분극 램프시 hERG 전류 바깥쪽 피크의 진폭을 측정하였다. 전류 진폭은, 각 처리 조건 하에 마지막 5개의 전류 피크의 평균을 취함으로써 결정하였다. 억제%는, 시험 물질의 존재 하의 정상-상태에서 측정된 전류(I_{시험 물질}) 대 대조 전류(I_대조)의 비를 취함으로써 결정하였으며, 이를 다음과 같이 나타낸다:

[수학식 3]

% 억제 = 100 - (I_{시험 물질}/I_대조) * 100.

가능한 경우, 농도-반응 곡선을 플로팅하고, 큐패치 소프트웨어를 사용하여 데이터를 피팅하여, IC₅₀을 결정하였다.

하기 표 1은, 본 발명의 화합물(HCl 염으로서), 및 공동으로 양도되고 2013년 5월 16일에 공개된 국제특허출원공개 제 WO 2013/068875 호에 개시된 특정 실시예에 대한 인간 전혈에서의 골수세포형과산화효소의 억제 활성을 제공한다. 이는 또한, hERG 활성, 및 결과적으로 계산된 상기 화합물에 대한 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀의 치료 비율을 제공한다.

놀랍게도, 본원 실시예 1의 화합물은, 하기 더 자세히 기술되는 바와 같이, 화합물 C, D 및 E(국제특허출원공개 제 WO 2013/068875 호에 개시됨)에 비해 심혈관 안전성과 관련된 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀의 비에서 이점을 가진다.

하기 표 1에서, MPO IC₅₀(상기에서 제공된 MPO의 비가역적 억제에 대한 인간 전혈 분석에 따라 결정됨)은, 외인성으로 시험된 인간 혈액 시료에 존재하는 활성 MPO의 50%를 비가역적으로 억제하는데 필요한 화합물 농도를 반영한다. 화합물 A(본원 실시예 1)는 화합물 D 또는 E 중 어느 하나보다 낮은 농도의 인간 혈장에서 MPO를 효과적으로 억제하며, 주어진 치료 이점을 위해 요구되는 더 낮은 혈장 농도를 가능하게 하기에 보다 강력하다. 또한, 클로로페닐 치환기(화합물 F 및 C)의 메틸페닐 유사체(화합물 B 및 D)는 MPO IC₅₀이 증가되었음에 주목한다. 따라서, 메틸페닐 유사체(화합물 A)가 클로로 페닐 유사체(화합물 E)에 비해 감소된 MPO IC₅₀을 갖는 것은 놀랍다.

또한, 전신적으로 작용하는 임의의 치료제에 대한 중요하고 바람직하지 않은 목표외(off-target) 활성은 hERG 칼륨 채널의 억제이다. 상기 이온 채널의 억제의 부작용은, 환자의 심전도(ECG) 상의 QTc 간격의 연장 및 잠재적으로 "다형성 심실빈맥(torsades de pointes)" 및 심실성 빈맥의 유발과 관련이 있는 것으로 당업자에게 널리 공지되어 있다(문헌[Bernard Fermini, Anthony A. Fossa, Pre-Clinical Assessment of Drug-Induced QT Interval Prolongation. Current Issues and Impact on Drug Discovery, Annual Reports in Medicinal Chemistry, Academic Press, 2004, Volume 39, Pages 323-334]). hERG 및 골수세포형과산화효소 활성(이 경우, hERG IC₅₀/MPO IC₅₀)을 억제하는 데 필요한 농도들 사이의 비율이 높을수록, hERG-관련된 심혈관계 부작용이 발생하기 이전에 MPO를 더 안전하게 억제할 수 있으므로 유리하다. 상기 비율은 치료 지수(부작용이 관찰되는 혈장 농도를, 치료 효과가 실현되는 혈장 농도로 나눈 값)에 비례한다. 중요한 표적 집단은 최근에 심장 발작을 앓 았기 때문에 hERG 억제 활성과 관련된 치료 지수는 골수세포형과산화효소 억제제에 대해 특히 상당한 이점이 있으며, 그 이유는, 중요한 표적 집단이, 최근에 심장 발작을 경험하여 심장 부정맥 및 이로부터의 부정적인 결과에 훨씬 더 민감할 수 있는 환자로 예상되기 때문이다. 이러한 이유로, 심혈관 또는 관상동맥성 심장 질환을 앓고 있는 환자에게는 심혈관 안전 프로파일이 높은 약물을 투여하는 것이 특히 유리하다.

잠재적인 치료 이점과 안전성 비율을 최대화하기 위해서는, 골수세포형과산화효소 억제제 후보자가 hERG IC₅₀과 MPO IC₅₀ 사이의 더 큰 비율을 갖는 것이 중요한 이점이다. 표 1에서, 화합물 A(본원 실시예 1)는, 화합물 D(hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 비율 = 162, hERG IC₅₀ = 160 uM : 100 uM에서 40% 및 300 uM에서 63%를 포함하는 곡선으로 피팅됨) 및 화합물 E(hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 비율 = 260, 100 uM에서 23%로부터 외삽된 hERG IC₅₀ = 335 μM : [100 uM x ((100-23)/23)]) 대비, 5515의 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 비(hERG IC₅₀ = 3033 uM; 300 uM에서 9%로부터 외삽됨: [300 uM × (100-9)/9)를 가진다. (외삽 방법은 문헌["Optimizing Higher Throughput Methods to Assess Drug-Drug Interactions for CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, rCYP2D6, and CYP3A4 In Vitro Using a Single Point IC50" J Biomol Screen (2002) 7:373]을 참조한다). 유사한 분석에 의해, 화합물 F는 900의 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 비율(hERG IC₅₀ = 1700 uM; 300 uM에서 15%로부터 외삽됨: [300 uM x ((100-15)/15)]); 화합물 C는 41의 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 비율(hERG IC₅₀ = 33 uM; 30 uM에서 49% 및 100 uM에서 75%를 포함하는 곡선으로 피팅됨)을 갖고; 화합물 G는 1500의 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 비율(hERG IC50 = 900 uM; 300 uM에서 25%로부터 외삽됨 : [300 uM x ((100-25) / 25)])을 가진다. [화합물 B의 결과는 측정되지 않았다.]

따라서, 화합물 A(본원 실시예 1)는 화합물 D보다 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 안전성 비율이 약 34배(즉, 5515/162)이고, 화합물 D보다 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀이 21배(즉, 5515/260)이다. 화합물 A를 사용한, hERG 활성 대비 MPO 억제에 대한 이러한 예외적으로 높은 선택도는, 특히 심혈관계 증상을 갖는 환자에게 투여될 화합물에 대해 예기치 못한 상당한 심혈관 안전성 이점을 제공한다.

유사한 방식으로, 화합물 A(본원 실시예 1)는 화합물 C보다 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 안전성 비율이 약 135배(즉, 5515/41)이고, 화합물 F보다 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 안전성 비율이 6.1배(즉, 5515/900)이고, 화합물 G보다 hERG IC₅₀/MPO IC₅₀ 안전성 비율이 3.7배(즉, 5515/1500)이다.

표 1. MPO 활성/ hERG 치료 비율

MPO 암플렉스 레드 활성 분석

MPO 과산화효소 활성을, MPO에 의한 암플렉스 레드(10-아세틸-3,7-다이하이드록시페녹사진)(인비트로겐(Invitrogen), 미국 캘리포니아주 칼스배드 소재)의 산화로부터 생성된 레소루핀의 형성을 모니터링함으로써 측정하였다(문헌[Gomes, Fernandes et al. 2005]). 분석 혼합물(100 μL 총 부피)은 50 mM NaPi(pH 7.4), 150 mM NaCl, 1 mM DTPA(다이에틸렌트라이아민펜타아세트산), 2% DMSO, 2 μM H₂O₂, 30 μM 암플렉스 레드를 함유하였고, 100 pM MPO(인간 다핵 백혈구로부터 정제되고 칼바이오켐/이엠디 바이오사이언시스(Calbiochem/EMD Biosciences, 미국 뉴저지주 깁스타운 소재)로부터 구입됨)를 첨가하여 반응을 개시하였다. 모든 분석을 96-웰 반-면적 흑색 비결합 표면 폴리스티렌 플레이트(코닝(Corning))에서 수행하였고, 레소루핀의 생성물(여기 530 nm, 방출 580 nm)을 소프트맥스 프로(Softmax Pro) 소프트웨어(몰레큘라 디바이시스(Molecular Devices, 미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재))가 장착된 스펙트라맥스 M2 마이크로플레이트(Spectramax M2 Microplate) 분광 광도계(몰레큘라 디바이시스, 미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재) 상에서 20초 마다 모니터링하였다. 배경 반응 속도를 측정하기 위한 반응 생성물은, 모든 분석 성분 및 50 mM KPi(pH 7.0) 중의 소 카탈라아제(4 μL, 500 유닛/mL)(시그마(Sigma))로 이루어졌다. 배경 속도를 각각의 반응 진행 곡선으로부터 차감하였다. 모든 데이터를 마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel) 및 칼레이다그래프(Kaleidagraph; 시너지 소프트웨어(Synergy Software))에서 비선형 회귀 분석을 사용하여 분석하였다.

MPO에 대한 억제제 효능(k_inact/K_I)을 측정하기 위해, 반응 진행 기울기의 처음 600초를 하기 수학식 1에 적용하여 각각의 억제제 농도에서 효소 비활성화에 대한 1차 반응 속도 상수(k_obs)를 수득하였다:

[수학식 1]

상기 식에서,

V_o는 RFU/초의 초기 속도이고,

t는 초 단위의시간이다.

상기 수학식 1은 느린 결합 억제에 대한 표준 계산식의 편차이고, 이때 정상-상태 속도(V_s)는 0으로 설정하였다. 각각의 k_obs 값을, 억제되지 않은 반응에 대한 k_obs 값을 차감함으로써 효소의 자가-비활성화에 대해 보정하였다. 이어서, 보정된 k_obs 값을 억제제 농도([I])에 대하여 플로팅하고 하기 수학식 2에 적용하였다:

[수학식 2]

상기 식에서,

k_inact은 최대 비활성화 속도이고,

K_I은 최대 비활성화 속도의 절반을 수득하는 억제제 농도이다(문헌[Copeland 2005]).

갑상선 과산화효소( TPO ) 암플렉스 레드 활성 분석

MPO로서 2 μM H₂O₂ 및 30 μM 암플렉스 레드를 사용하고 동일한 분석을 사용하여 TPO 활성을 측정하고, 인간 TPO를 발현하는 HEK293 세포막으로부터의 단백질(1.3 ㎍)로 반응을 개시하였다. 전장 인간 TPO의 933개 아미노산을 암호화하는 cDNA를 유도성 발현 벡터 pcDNA5/frt/to(인비트로겐(InVitrogen)) 내로 복제하고, 안정한 293개 클론을 DMEM w/ 10% FBS 중 100 ㎍/ml 하이그로마이신 및 15 ㎍/ml 블라스티시딘을 사용하여 선택하였다. 세포가 50 내지 60% 합치에 도달했을 때, 전술된 모든 성분 및 추가로 10 ㎍/ml 독시사이클린 및 5 ㎍/ml 헤민(시그마)을 함유하는 배지에서 TPO 발현을 유도하였다. 상기 막을, PBS에서 세포를 수확함으로써 HEK293hTPO로부터 단리하였다. 상기 세포를 4℃에서 1000 x g로 5분 동안 펠렛화하고, 무-EDTA 단백질분해효소 억제제(로슈(Roche))를 함유하는 균질화 완충액(1 mM 중탄산 나트륨, pH 7.4)에 현탁하고, 얼음 상에서 10분 동안 배양한 후, 도운스(Dounce) 균질화시켰다. 핵 및 용해되지 않은 세포를 4℃에서 1000 x g로 10분 동안 펠렛화하여 제거하였다. 이어서, 상청액을 4℃에서 25,000 x g로 20분 동안 원심분리하였다. 펠렛을 균질화 완충액에 재현탁시키고, 4℃에서 25,000 x g로 20분 동안 다신 원심분리하였다. 최종 펠렛을, 전술된 단백질분해효소 억제제를 함유하는 저장 완충액(50 mM 트리스(pH 7), 150 mM NaCl)에 재현탁시켰다. 막 농도를 BCA 단백질 분석(피어스(Pierce))을 사용하여 측정하였다. TPO 활성을 전술된 바와 같이 암플렉스 레드 분석을 사용하여 측정하였다. 분취액을 상기 활성에 기초하여 제조하고, -80℃에서 저장하였다.

IC₅₀ 값은, 억제제 농도의 함수로서의 억제되지 않은 (DMSO) 반응 생성물에 대한 억제%로서 초기 속도(각각의 반응 진행 곡선의 처음 200초로부터)를 플로팅 함으로써 측정하였다. 데이터를 하기 수학식 3에 적용하였다:

[수학식 3]

상기 식에서,

IC₅₀은 50% 억제에서 억제제 농도이고,

z는 힐(Hill) 기울기이다(이의 변곡점에서 곡선의 기울기).

참고문헌

1. Copeland, R. A. (2005). Evaluation of Enzyme Inhibitors in Drug Discovery A Guide for Medicinal Chemists and Pharmacologists. Hoboken, Wiley.

2. Gomes, A., E. Fernandes, et al. (2005). "Fluorescence probes used for detection of reactive oxygen species." J Biochem Biophys Methods 65(2-3): 45-80.

화학식 I의 화합물(또는 이의 조합물)의 투여는, 상기 화합물(또는 이의 조합물)을 전신적으로 및/또는 국소적으로 전달하는 임의의 방법을 통할 수 있다. 이러한 방법은 경구 경로, 비경구, 십이지장내 경로, 구강내, 비강내, 국소 등을 포함한다. 일반적으로, 화학식 I의 화합물(또는 이의 조합물)은 경구로 투여되지만, 비경구 투여(예를 들어, 정맥, 근육내, 피하 또는 척수내)를 사용할 수도 있는데, 예를 들어, 경구 투여는 표적에 부적절하거나 환자는 약물을 섭취할 수 없다.

인간 환자에게 투여하는 경우, 화학식 I의 화합물의 일일 경구 투여량은, 물론, 투여 방식 및 투여 빈도, 질병 상태, 및 환자의 연령 및 상태 등에 따라 1 mg 내지 5000 mg 범위일 수 있다. 3 mg 내지 2000 mg 범위의 일일 경구 투여량이 사용될 수 있다. 추가로 일일 경구 투여량은 5 mg 내지 1000 mg 범위이다. 편의상, 화학식 I의 화합물은 단위 투여 형태로 투여될 수 있다. 필요에 따라, 단위 투여 형태의 하루 다중 투여량은 총 일일 투여량을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어 단위 투여 형태는 약 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 500 또는 1000 mg의 화학식 I의 화합물을 함유하는 정제 또는 캡슐일 수 있다. 총 일일 투여량은 단일 투여량 또는 분할된 투여량으로 투여될 수 있고, 의사의 판단에 따라 본원에 주어진 전형적인 범위를 벗어날 수 있다.

인간 환자에게 투여하는 경우, 화학식 I의 화합물의 일일 투여량은 물론 투여 방식 및 투여 빈도, 질병 상태, 환자의 연령 및 상태 등에 따라 1 mg 내지 2000 mg 범위일 수 있다. 다른 일일 투여량은 5 mg 내지 1000 mg 범위이다. 총 일일 투여량은 단일 투여량 또는 분할된 투여량으로 투여될 수 있고, 의사의 판단에 따라 본원에 주어진 전형적인 범위를 벗어날 수 있다.

또한, 화학식 I의 화합물은 인간을 제외한 동물에, 예를 들어, 전술된 처방에 대해 투여될 수 있다. 각각의 활성 성분이 투여된 정확한 투여량은 비제한적으로, 동물의 유형 및 치료될 질병 상태의 유형, 동물의 연령 및 투여 경로를 비롯한 임의의 개수의 인자에 따라 변할 것이다.

화학식 I의 화합물과 함께 사용될 수 있는 병용 약제의 투여량은 치료될 증상에 대해 효과적으로 사용된다. 상기 투여량은 표준 분석, 예컨대, 상기 참조되고 본원에 제공된 것으로 측정될 수 있다. 병용제는 동시에 또는 임의의 순서로 연속하여 투여될 수 있다.

이러한 투여량은 약 60 kg 내지 70 kg의 체중을 갖는 평균 인간 개체를 기준으로 한다. 의사는 이러한 범위를 벗어나는 체중을 갖는 개체, 예컨대 영유아 및 노인을 위한 투여량을 용이하게 결정할 수 있을 것이다.

투여 처방은 최적의 목적 반응을 제공하도록 이용될 수 있다. 예를 들어, 단일 볼루스(bolus)가 투여될 수 있거나, 여러 분할된 투여량이 시간에 걸쳐서 투여될 수 있거나, 투여량은 급박한 치료 상황에 의해 나타낸 바와 같이 비교적 감소되거나 증가될 수 있다. 이는, 투여 용이성 및 투여량 균일성을 위한 투여량 단위 형태로 비경구 조성물을 제형화하기에 특히 유리하다. 본원에서 "투여량 단위 형태"는, 치료될 포유류 개체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적인 별개의 단위를 지칭하고; 각각의 단위는 요구되는 약학적인 담체와 함께 목적 치료 효과를 생성하기 위해 측정된 활성 화합물의 예정된 양을 포함한다. 본 발명의 투여량 단위 형태에 대한 설명은 (a) 화학치료제의 독특한 특징 및 수행되는 특정한 치료적 또는 예방적 효과, 및 (b) 개인별 민감도의 치료를 위한 활성 화합물과 같은 제형화 분야에서 본질적인 한계에 의해 결정되고 이에 직접적으로 의존한다.

따라서, 당업자는 본원에 제공된 개시내용에 근거하여 투여량 및 투여 처방이 치료 분야에 널리 공지된 방법에 따라 적용됨을 고려할 것이다. 즉, 최대 허용되는 투여량은 용이하게 확립될 수 있고, 검출 가능한 치료 이점을 환자에게 제공하는 효과량이 또한 결정될 수 있고, 또한 검출가능한 치료 이점을 환자에게 제공하기 위해 각각의 약제를 투여하는 일시적인 요건이 결정될 수 있다. 따라서, 특정한 투여량 및 투여 처방이 본원에 예시되며, 이러한 예는, 본 발명을 실시하는 경우 환자에게 제공될 수 있는 투여량 및 투여 처방을 어떠한 방식으로도 제한하지 않는다.

투여량 값은 완화되는 상태의 유형 및 중증도에 의해 변할 수 있고, 단일 투여 또는 다중 투여을 포함할 수 있음에 주목하여야 한다. 임의의 특정 개체를 위해, 특정한 투여 처방이 개별적인 요구 및 조성물의 투여를 관리하거나 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라시간에 걸쳐 적용되어야 하고, 본원에 제시된 투여량 범위는 단지 예시적이고 청구된 조성물의 범주 및 실시를 제한하도록 의도되지 않음이 또한 이해되어야 한다. 예를 들어, 투여량은, 임상 효과(예컨대, 독성 효과 및/또는 실험실 값)을 포함할 수 있는 약동학적 또는 약역학적 매개변수에 기초하여 조절될 수 있다. 따라서, 본 발명은, 숙련자에 의해 결정된 바와 같이 환자-내부 선량 증가(intra-patient dose-escalation)를 포함한다. 화학치료제의 투여를 위한 적절한 투여량 및 처방을 결정하는 것은 당해 분야에 널리 공지되어 있으며, 이는 본원에 개시된 교시내용에 포함됨을 당업자가 이해할 것이다.

본 발명은 또한, 약제(예컨대, 단위 투여량 정제 또는 단위 투여량 캡슐)로서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물의 용도를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은, 치료 방법을 논의하는 상기 섹션에서 이미 확인된 하나 이상의 증상을 치료하는 약제(예컨대, 단위 투여량 정제 또는 단위 투여량 캡슐)의 제조를 위한 화학식 I의 화합물의 용도를 포함한다.

본 발명의 약학 조성물은 단일 단위 투여량으로서, 또는 다수의 단일 단위 투여량으로서 제조될 수 있거나, 포장될 수 있거나, 대량으로 판매될 수 있다. 본원에서 "단위 투여량"은, 사전결정된 양의 활성 성분을 포함하는 약학 조성물의 개별적인 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로, 개체에게 투여되는 활성 성분의 투여량, 또는 상기 투여량의 편리한 분획, 예컨대, 상기 투여량의 1/2 또는 1/3과 동일하다.

본원에 기재된 화합물은, 담체, 비히클 및 희석제를 포함하는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제와 함께, 화학식 I의 화합물의 약학적 효과량을 포함하는 제형으로서 투여될 수 있다. 본원에서 용어 "부형제"는, 그 자체가 치료제는 아니며, 개체에게 치료제를 전달하기 위한 희석제, 보조제 또는 비히클로서 사용되거나, 치료제의 취급 또는 저장 특성을 개선하기 위해 또는 경구, 비경구, 피내, 피하, 또는 국소 적용에 적합한 고체 투여 형태(예컨대, 정제, 캡슐, 또는 용액 또는 현탁액)의 형성을 허용하거나 용이하기 위해 약학 조성물에 첨가되는 임의의 물질을 의미한다. 부형제는, 예시적으로 및 비제한적으로, 희석제, 붕해제, 결합제, 접착제, 습윤제, 중합체, 윤활제, 활택제, 안정화제, 불쾌한 맛 또는 냄새를 차폐하거나 상쇄하기 위해 첨가된 물질, 향미제, 염료, 향수, 및 조성물의 외형을 개선하기 위해 첨가된 물질을 포함할 수 있다. 허용되는 부형제는 (비제한적으로) 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 마그네슘 옥사이드, 인산 및 황산의 나트륨 염 및 칼슘 염, 마그네슘 카보네이트, 활석, 젤라틴, 아카시아 검, 나트륨 알기네이트, 펙틴, 덱스트린, 만니톨, 소르비톨, 락토오스, 수크로스, 전분, 젤라틴, 셀룰로스계 물질, 예컨대, 알칸산의 셀룰로스 에스터 및 셀룰로스 알킬 에스터, 저융점 왁스, 코코아 버터 또는 분말, 중합체, 예컨대, 폴리비닐-피롤리돈, 폴리비닐 알코올, 및 폴리에틸렌 글리콜, 및 다른 약학적으로 허용가능한 물질을 포함한다. 부형제 및 이의 용도의 예는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition(Lippincott Williams & Wilkins, 2000)]에서 확일할 수 있다. 부형제의 선택은 인자(예컨대, 특정한 투여 방식, 용해성 및 안정성에 대한 부형제의 영향 및 투여 형태의 성질에 따라 매우 다를 것이다.

화학식 I의 화합물은 경구, 구강, 비강내, 비경구(예를 들어, 정맥내, 근육내 또는 피하) 또는 직장 투여를 위해, 또는 흡입에 의해 투여되기에 적합한 형태로 제형화될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 지속 방출을 위해 제형화될 수 있다.

특정한 양의 활성 성분을 갖는 다양한 약학 조성물의 제조 방법은 당업자에게 공지되어 있거나, 본원에 비추어 자명할 것이다. 예를 들어, 약학 조성물의 제조 방법은 문헌[Remington's Pharmaceurical Sciences, 20th Edition(Lippincott Williams & Wilkins, 2000)]을 참조한다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 0.1 내지 95%, 바람직하게는 1 내지 70%의 본 발명의 화합물을 함유할 수 있다. 어느 경우라도, 투여되는 조성물은, 치료할 개체의 질병/증상을 치료하기에 효과적인 양으로 본 발명에 따른 화합물을 함유할 것이다.

본 발명은, 개별적으로 투여될 수 있는 활성 성분들의 조합물을 사용하여, 본원에 기재된 질병/증상을 치료하는 것에 관한 양태를 가지므로, 본 발명은 또한 키트 형태의 개별적인 약학 조성물을 조합하는 것에 관한 것이다. 상기 키트는, 화학식 I의 화합물 및 전술된 제 2 화합물의 2개의 개별적인 약학 조성물을 포함한다. 상기 키트는, 개별적인 조성물을 함유하기 위한 수단, 예컨대, 용기, 분할된 병 또는 분할된 호일 통(packet)을 포함한다. 전형적으로, 상기 키트는 개별적인 성분의 투여에 대한 지시를 포함한다. 상기 키트 형태는, 개별적인 성분이 바람직하게는 상이한 투여 형태(예를 들어, 경구 및 비경구)로 투여되거나, 상이한 투여 간격으로 투여되거나, 또는 조합물의 개별적인 성분의 적정량을 처방 의사가 요구하는 경우 특히 유리하다.

상기 키트의 예는 소위 말하는 블리스터 팩(blister pack)이다. 블리스터 팩은 포장 산업에서 널리 공지되어 있고 약학 단위 투여 형태(정제, 캡슐 등)의 포장을 위해 광범위하게 사용되고 있다. 블리스터 팩은 일반적으로, 바람직하게는 투명한 플라스틱 물질의 호일로 피복된 비교적 강성 물질의 시트로 이루어진다. 포장 공정 동안 오목부(recesses)가 상기 플라스틱 호일 중에 형성된다. 오목부는 포장될 정제 또는 캡슐의 크기 및 형태를 갖는다. 이어서, 정제 또는 캡슐이 오목부에 위치되고, 상기 비교적 강성 물질의 시트는 오목부가 형성된 방향과 반대쪽 호일 면에 상기 플라스틱 호일에 붙여 밀봉된다. 결과적으로, 정제 또는 캡슐은 플라스틱 호일과 시트 사이의 오목부 내에 밀봉된다. 바람직하게는, 상기 시트의 강도는, 오목부 상에 손으로 압력을 적용하여 오목부 자리에서 시트에 개구를 형성시켜 정제 또는 캡슐이 블리스터 팩으로부터 제거될 수 있도록 하는 것이다. 이어서, 정제 또는 캡슐은 상기 개구를 통해 제거될 수 있다.

상기 키트 상에, 예를 들어, 정제 또는 캡슐 옆에 숫자의 형태로 기억 보조기구가 제공되는 것이 바람직할 수 있으며, 이때 상기 숫자는, 명시된 정제 또는 캡슐이 섭취되어야 하는 처방의 날에 해당한다. 상기 기억 보조기구의 또다른 예는, 하기와 같이 카드에 프린트된 일정표이다: "첫주의 월요일, 화요일, ... , 둘째주의 월요일, 화요일, ..." 등이다. 기억 보조기구의 다른 변형은 용이하게 자명할 것이다. "일일 투여량"은, 정해진 날에 섭취될 단일 정제 또는 캡슐 또는 여러 알약 또는 캡슐일 수 있다. 또한, 화학식 I의 화합물의 일일 투여량은 하나의 정제 또는 캡슐로 이루어질 수 있지만, 제 2 화합물의 일일 투여량은 여러 정제 또는 캡슐로 이루어질 수 있고, 그 반대도 마찬가지이다. 기억 보조기구는 이를 반영하여야 한다.

본 발명의 또다른 특정 실시양태에서, 의도된 사용 순서로 한번에 일일 투여량을 분배하도록 고안된 디스펜서가 제공된다. 바람직하게, 디스펜서에는 처방의 준수를 더욱 용이하게 하기 위해 기억 보조기구가 구비된다. 상기 기억 보조기구의 예는 분배된 일일 투여 횟수를 나타내는 기계적 계수기이다. 상기 기억 보조기구의 또다른 예는, 예를 들어 마지막 일일 투여량을 섭취한 날짜를 판독하고/하거나 다음 투여량을 섭취할 때를 상기시키는 음향식 상기(reminder) 신호 또는 액정 판독과 결합된 배터리-구동식 마이크로 칩 메모리이다.

또한, 본 발명은, 함께 투여될 수 있는 활성 성분들의 조합물을 사용하여, 본원에 기재된 질병/증상을 치료하는 것과 관련된 양태를 가지므로, 본 발명은 또한, 개별적인 약학 조성물들을 단일 투여 형태(예컨대, (비제한적으로) 단일 정제 또는 캡슐, 이층 또는 다중층 정제 또는 캡슐)로, 또는 정제 또는 캡슐 내의 분리된 성분 또는 구획의 사용을 통해 조합하는 것에 관한 것이다.

활성 성분은 추가의 용매, 공용매, 부형제, 또는 약학적으로 허용가능한 희석제, 부형제, 비히클 및 담체로부터 선택된 복합체형성제의 존재 또는 부재하에 수성 또는 비수성 비히클 중 용액으로서 전달될 수 있다.

예시적인 정맥내 제형을 다음과 같이 제조하였다:

제형: 정맥내 용액

상기 성분들의 용액을 약 1 mL/분의 속도로 환자에게 정맥내 투여하였다.

활성 성분은 약학적으로 허용가능한 부형제를 사용하여 고체 분산제로서 또는 자가-유화된 약물 전달 시스템(SEDDS)으로서 제형화될 수 있다.

활성 성분은 즉시 방출형 또는 개질된 방출형 정제 또는 캡슐로서 제형화될 수 있다. 다르게는, 활성 성분은 추가의 부형제 없이 캡슐 쉘 내 활성 성분 단독으로서 전달될 수 있다.

일반적인 실험 절차

모든 화학물질, 시약 및 용매는 입수가능한 경우 상업적 공급처로부터 구입하고 추가 정제 없이 사용하였다. 양성자 핵 자기 분광학(¹H NMR)을 400 및 500 MHz 버라이언(Varian) 분광계로 기록하였다. 화학 이동을 테트라메틸실란으로부터의 다운필드 ppm으로 나타내었다. 피크 형태는 다음과 같이 표시한다: s, 단일항; d, 이중항; t, 삼중항; q, 사중항; m, 다중항; br s, 넓은 단일항. 질량 분석법(MS)은 대기압 화학적 이온화(APCI) 또는 전자 산란(ES) 이온화 공급원을 통해 수행하였다. 달리 언급하지 않는 한, 표에 보고되는 관찰된 질량(Obs Mass)은, 모 분자 + 1의 정확한 질량에 대응한다. 실리카 겔 크로마토그래피는 주로, 바이오타지(Biotage) 및 이스코(ISCO)를 비롯한 다양한 상업적인 판매처에 의해 미리 포장된 칼럼을 사용하는 중압 바이오타지 또는 이스코 시스템을 사용하여 주로 수행하였다. 콴터테이티브 테크놀로지스 인코포레이티드(Quantitative Technologies Inc.)에 의해 마이크로분석을 수행하였고, 이는 계산된 값의 0.4% 이내였다. 용어 "농축된" 및 "증발된"은, 60℃ 미만의 욕 온도를 사용하여 회전 증발기 상에서 감압 하에 용매의 제거를 나타낸다. 약어 "min" 및 "h"는 각각 "분" 및 "시간"을 나타낸다.

분말 X선 회절

분말 X선 회절 분석은, Cu 방사선원이 장착된 브루커(Bruker) AXS D4 엔디보(Endeavor) 회절계를 사용하여 수행하였다. 발산 슬릿을 0.6 mm로 설정하고, 보조 광학 장치는 가변 슬릿을 사용하였다. 회절된 방사선은 PSD-링크스 아이(Lynx Eye) 검출기로 검출하였다. X선 관 전압 및 암페어를 각각 40 kV와 40 mA로 설정하였다. 데이터는, 0.020 도의 스텝 크기 및 0.3 초의 스텝 시간을 사용하여 Cu 파장 Kα1 = 1.54056A 및 3.0° 내지 40.0°의 2θ에서 θ-2θ 측각기로 수집하였다. 시료를 실리콘 저배경 시료 홀더에 놓고 수집 동안 회전시켜 제조하였다. 데이터는 브루커 디프랙트 플러스(Bruker DIFFRAC Plus) 소프트웨어를 사용하여 수집하고, 분석은 EVA 디프랙트 플러스(diffract plus) 소프트웨어로 수행하였다.

PXRD 데이터 파일은 피크 검색 전에 처리하지 않았다. EVA 소프트웨어의 피크 검색 알고리즘을 사용하여, 1 의 역치 값 및 0.3의 폭 값을 갖는 피크를 선택하고, 이를 사용하여 예비 피크 할당을 수행하였다. 필요한 경우, 타당성 및 수동 조절된 조절값을 보장하기 위해, 자동 할당의 출력을 시각적으로 확인하였다. 상대 강도가 3% 이상인 피크를 표 2에 요약한다. 분석되지 않았거나 노이즈와 일치하는 피크는 선택하지 않았다. 상기 미국 특허 및 일본 특허에서 언급된 PXRD의 피크 위치와 관련된 일반적인 오차는 최대 ± 0.2 ° 2-θ이다.

실시예 1

1-(2-아미노에틸)-6-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-2-티옥소-2,3-다이하이드로피리미딘-4(1H)-온 하이드로클로라이드

제조예 1

1-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)에탄온

자켓형 반응기에 1-(2-하이드록시-5-메틸페닐)에탄온(30.0 g, 0.200 mol, 1.0 당량) 및 다이메틸 설폭사이드(DMSO, 210 mL)를 투입하고, 생성 혼합물을 20℃에서 교반하였다. 여기에 세슘 카보네이트(200 g, 0.608 mol, 3 당량) 및 이어서 2-클로로에탄올(27.0 mL, 0.40 mol, 2 당량)을 가하고, 반응이 완료될 때까지, 생성 혼합물을 80℃에서 교반하였다. 이어서, 생성 혼합물을 15℃로 냉각한 후, 물(500 mL)을 가했다. 생성 혼합물을 에틸 아세테이트(500 mL 및 이어서 300 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(300 mL)로 세척하고, 이어서 다르코(Darco) G-60(10 g)으로 실온에서 1시간 동안 처리한 후, 셀라이트(Celite)를 통해 여과하고, 농축하여, 목적하는 생성물인 1-[2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸-페닐]에탄온(34.35 g, 89%)을 오렌지색 오일로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.53-7.48 (m, 1H), 7.29-7.22 (m, 1H), 6.91-6.85 (m, 1H), 4.21-4.15 (m, 2H), 4.02-3.94 (m, 2H), 2.83 (b, 1H), 2.62 (s, 3H), 2.31 (s, 3H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃): δ = 200.11, 159.91, 134.18, 130.64, 130.44, 128.26, 113.67, 70.69, 61.23, 31.27, 20.30.

제조예 2

메틸 3-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-3-옥소프로파노에이트

자켓형 반응기에 칼륨 3급-부톡사이드(48.9 g, 0.427 mol) 및 테트라하이드로퓨란(170 mL)을 투입하고, 생성 혼합물을 20℃에서 교반하고, 여기에 다이메틸 카보네이트(47.1 g, 0.523 mol, 3.0 당량)를 가하자, 온화한 발열이 발생하였으며, 백색 슬러리가 형성되었다. 이 혼합물에, 테트라하이드로퓨란(170 mL) 중의 1-[2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸-페닐]에탄온(33.84 g, 0.174 mol)의 혼합물을 가하고, 생성 혼합물을 30℃로 가온하였다. 3시간 후, 이 반응 혼합물을 물(338 mL) 중의 아세트산(57.5 mL, 1.00 mol)의 용액으로 처리하였다. 1시간 동안 교반한 후, 이 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(340 mL)로 처리하고, 유기 상을 다르코(Darco)(2.0 g)로 실온에서 1시간 동안 처리한 후, 이 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축하고, 이소프로필 알코올(160 mL)에 용해시키고, 이어서 농축하여, 적색 오일을 수득하였다. 이어서, 이 조질 생성물을 이소프로필 알코올(65 mL) 중에 취하고, 0℃로 냉각하고, 이어서 물(120 mL)을 15분에 걸쳐 천천히 가했다. 0 내지 5℃에서 1시간 동안 교반한 후, 추가의 물(240 mL)을 30분에 걸쳐 가하고, 이 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 생성 고체를 여과에 의해 수집하고, 물(200 mL)로 세척하고, 건조하여, 메틸 3-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-3-옥소프로파노에이트(37.2 g, 85%)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ7.69-7.65 (m, 1H), 7.33-7.27 (m, 1H), 6.89-6.83 (m, 1H), 4.16-4.11 (m, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.98-3.93 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.53-3.40 (b, 1H), 2.30 (s, 3H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 192.39, 169.63, 156.40, 135.46, 131.31, 130.46, 125.75, 112.39, 70.73, 60.85, 52.55, 50.26, 20.15 ppm. C₁₃H₁₆O₅에 대한 m/z (EI+): 253.1 (M+H)⁺.

제조예 3

(Z)-메틸 3-(2-(3급-부톡시카보닐아미노)에틸아미노)-3-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)아크릴레이트

자켓형 반응기에 이소프로필 알코올(250 mL), 메틸 3-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-3-옥소프로파노에이트(36.0 g, 0.143 mol), 3급-부틸 2-아미노에틸카바메이트(35.0 g, 0.218 mol) 및 아세트산(12.3 mL, 0.215 mol)을 가하고, 이 혼합물을 84℃에서 가열하였다. 8시간 후, 이 반응물을 15℃로 냉각하고, 용액이 부옇게 될 때까지 물(830 mL)을 천천히 가하고, 이어서 첨가를 중지하여 15분에 걸쳐 고체가 형성되도록 한 후, 물 첨가를 천천히 종료하였다. 생성 슬러리를 15℃에서 3시간 동안 교반한 후, 이어서 여과하고, 필터 케이크를 물(290 mL)로 세척하였다. 고체를 진공 오븐 내에서 50℃에서 16시간 동안 건조시켜, (Z)-메틸 3-(2-(3급-부톡시카보닐아미노)에틸아미노)-3-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)아크릴레이트(51.96g, 92%)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 8.69-8.52 (m, 1H), 7.18 (dd, J=8.6, 1.6 Hz, 1H), 7.01-6.91 (m, 2H), 6.83 및 6.45 (b, 총 적분 = 1H), 4.79 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.99 (b, 2H), 3.67 (q, J=5.3Hz, 2H), 3.53 (s, 3H), 3.17-2.80 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 1.36 (s, 9H). ¹³C-NMR (101 MHz, d₆-DMSO) δ 169.48, 162.05, 155.61, 152.99, 130.92, 129.80, 129.34, 124.32, 112.21, 82.80, 77.66, 69.84, 59.46, 49.58, 43.20, 40.53, 28.17, 19.91. C₂₀H₃₀N₂O₆에 대한 m/z (EI+): 395.3 (M+H)⁺.

제조예 4

3급-부틸 2-(6-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-4-옥소-2-티옥소-3,4-다이하이드로피리미딘-1(2H)-일)에틸카바메이트

자켓형 반응기에 부틸 아세테이트(70 mL), (Z)-메틸 3-(2-(3급-부톡시카보닐아미노)에틸아미노)-3-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)아크릴레이트(10.00 g, 25.35 mol) 및 이소티오시아네이토트라이메틸실란(10.0 mL, 70.98 mol)을 투입하였다. 생성 용액을 80℃로 가열하고, 8시간 동안 교반한 후, 이 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각하였다. 12시간 후, 이 반응 혼합물에 헵탄(100 mL)을 10분의 기간에 걸쳐 점진적으로 가했다. 생성 슬러리를 40℃로 가온하고, 3시간 동안 교반한 후, 20℃로 냉각하였다. 3시간 후, 고체를 여과에 의해 단리하고, 헵탄/부틸 아세테이트(50 mL)의 1:1 용액으로 세척하고, 밤새도록 건조하였다. 생성 고체(9.57 g)를 부틸 아세테이트(60 mL)와 혼합하고, 이 혼합물을 40℃에서 3시간 동안, 이어서 30분에 걸쳐 25℃로 냉각하고, 3시간 동안 교반하였다. 생성 고체를 여과에 의해 수집하고, 부틸 아세테이트(20 mL)로 세척하고, 진공 오븐 내에서 35℃에서 24시간 동안 건조하여, 3급-부틸 2-(6-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-4-옥소-2-티옥소-3,4-다이하이드로피리미딘-1(2H)-일)에틸카바메이트(7.75 g, 72.5%)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 12.52 (s, 1H), 7.21 (d, J=8.2Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.97 (d, J=8.6Hz, 1H), 6.51 (t, J=5.9Hz, 1H), 5.62 (d, J=2.0Hz, 1H), 4.51 (m, 1H), 3.96 (m, 2H), 3.56 (t, J=5.1Hz, 2H), 3.47 (m, 1H), 3.35 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 1.27 (s, 9H). ¹³C-NMR (101 MHz, d6-DMSO) δ 177.53, 159.93, 155.77, 154.89, 152.96, 132.54, 131.00, 130.08, 122.89, 112.76, 109.22, 78.10, 70.44, 59.92, 50.94, 37.75, 28.69, 20.59. C₂₀H₂₇N₃O₅S에 대한 m/z (EI+): 422.3 (M+H)⁺.

제조예 5

건조된 1 L 환저 플라스크에 에탄올(515 mL)을 투입하고, 0℃로 냉각한 후, 20분에 걸쳐 교반 하에 아세틸 클로라이드(160 mL, 2.25 mol)를 첨가 깔때기를 통해 가했다. 이어서, 생성 용액을 50℃에서 30분 동안 가열하고, 이어서 주위 온도로 냉각하였다. 기계적 교반기를 구비한 별도의 4 L 환저 플라스크에 3급-부틸 2-(6-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-4-옥소-2-티옥소-3,4-다이하이드로피리미딘-1(2H)-일)에틸카바메이트(95.0 g, 0.23 mol) 및 에탄올(515 mL)을 투입하여, 백색 현탁액을 수득하였다. 교반 하에, 상기 4 L 환저 플라스크 중의 현탁액에, 1 L 환저 플라스크 중의 미리 제조된 HCl 용액을 가했다. 생성 혼합물을 주위 온도에서 20분 동안 교반한 후, 50℃로 가온하였다. 1시간 동안 교반한 후, 이어서 이 반응 혼합물을 점진적으로 주위 온도로 냉각하고, 3시간 동안 교반한 후, 이 반응 혼합물에 에틸 아세테이트(550 mL)를 가했다. 생성 슬러리를 주위 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 고체를 여과에 의해 수집하고, 에틸 아세테이트/헵탄(2.5 L)의 1:1 혼합물로 세척하였다. 단리된 고체를 진공 오븐 내에서 50℃로 20시간 동안 건조하여, (1-(2-아미노에틸)-6-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-2-티옥소-2,3-다이하이드로피리미딘-4(1H)-온 하이드로클로라이드(78.78 g, 98%)를 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.82 (br. s., 1H), 7.95 (br. s., 3H), 7.32 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.17 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.76 (s, 1H), 4.88 (t, J=5.0 Hz, 1H), 4.52 (br. s., 1H), 4.06 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.98-4.04 (m, 1H), 3.64 (d, J=4.7 Hz, 2H), 2.93-3.01 (m, 1H), 2.86-2.93 (m, 1H), 2.28 (s, 3H); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ 177.2, 159.3, 153.9, 152.7, 132.4, 130.1, 129.8, 121.6, 112.9, 109.3, 70.1, 59.3, 47.0, 35.9, 20.0; C₁₅H₁₉N₃O₃S에 대한 m/z (EI+): 322.1 (M+H)⁺.

생성된 결정질 생성물에 대한 분말 X선 회절 패턴 PXRD가 도 1에 제공된다.

하기 표 2는 동일한 생성된 결정질 생성물에 대한 PXRD 피크 목록^*을 제공한다.

표 2: 결정질 물질에 대한 PXRD 피크 목록 ^*

^*(주): 특성 피크 위치는 피크 모양 및 강도의 시각적 관찰을 기준으로 선택되었다.

본원에 인용된 모든 공개 문헌, 예컨대, 비제한적으로, 허여된 특허, 특허 출원, 및 논문 전체를 본원에 참고로 인용한다.

개시된 실시양태를 참조하여 본 발명이 전술되었지만, 당업자는, 상술된 구체적인 실험이 단지 본 발명의 예시임을 쉽게 이해할 것이다. 본 발명의 진의로부터 벗어나지 않고, 다양한 변형이 수행될 수 있음을 이해해야 한다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
[화학식 I]

.
화학식 I의 화합물의 하이드로클로라이드 염.
1-(2-아미노에틸)-6-(2-(2-하이드록시에톡시)-5-메틸페닐)-2-티옥소-2,3-다이하이드로피리미딘-4(1H)-온 화합물.
심혈관 질환의 치료 방법으로서, 상기 치료를 필요로 하는 포유 동물에게, 치료 효과량의 제 1 항의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 심혈관 질환의 치료 방법.
제 4 항에 있어서,
상기 심혈관 질환이 심부전, 울혈성 심부전, 말초 동맥 질환, 폐 고혈압 또는 혈관염인, 방법.
제 4 항에 있어서,
상기 포유 동물이 불안정 협심증, 관상 동맥 질환, 뇌졸중, 또는 심방 세동을 갖거나, 심근 경색증을 경험한 것인, 방법.
치료 효과량의 제 1 항의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체, 비히클 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
제 1 항의 화합물 또는 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염인 제 1 화합물;
안지오텐신 전환 효소 억제제, HMG-CoA 환원 효소 억제제, 네프릴리신 억제제, 비-스테로이드계 항염증제, 인자 Xa 억제제 또는 와파린(warfarin)인 제 2 화합물; 및
약학적 담체, 비히클 또는 희석제
를 포함하는 조성물을 치료 효과량 포함하는 약학적 조합 조성물.