JP2001131133A - 新規ミエロペルオキシダーゼ阻害物質およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】強いミエロペルオキシダーゼ阻害活性を有する
抗動脈硬化剤を提供する。 【解決手段】式I、II、III の化合物およびペニシリウム属に属する式(I)の化合物
の生産菌を培養し、培養物より一般式Iの化合物を採取
する製造方法等。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、動脈硬化の成因と
考えられる低比重リポ蛋白質（Low Density Lipoprotei
n:以下、「LDL」という。）の酸化変性に関わるミエロ
ペルオキシダーゼを阻害する活性を有する、新規化合物
群、その製造方法、該化合物群の生産菌及び該化合物群
を有効成分として含有する医薬等に関する。

【０００２】

【従来の技術】動脈硬化症は狭心症、心筋梗塞、脳卒中
などの虚血性心疾患の主因となる疾患である。動脈硬化
症の原因のひとつとして古くから血漿中のLDLコレステ
ロールの上昇が挙げられ、現在ではプラバスタチンなど
のLDLコレステロールを低下させる薬剤が絶大な治療効
果を示している。

【０００３】近年、スタインバーグ(Steinberg)らによ
り酸化LDLと粥状動脈硬化病変の進展との関連性が指摘
されて以来、動脈硬化の進展における酸化変性LDLの問
題が注目されるようになって来た。(Steinberg, D., et
al, N. Engl. J. Med., 1989年320巻915項 参照) LDLは主にコレステロールエステル、リン脂質、アポB−
１００蛋白より構成される。高脂血症などで代謝の遅れ
たLDLは内皮下間隙に入り込み、ここで内皮細胞やマク
ロファージに由来する様々な酸化因子により酸化変性を
受ける。その脂質成分は過酸化脂質となり、アポB−１
００蛋白は断片化され、LDL粒子全体としては陰性の荷
電を帯びるようになる。このような酸化修飾を受けたLD
L、すなわち酸化変性LDLは、主にスカベンジャー受容体
を介してマクロファージに無制限に取りこまれ、マクロ
ファージは取り込んだ脂質を処理しきれなくなって泡沫
細胞と化し、そのまま内皮下間隙に泡沫細胞が蓄積して
粥状動脈硬化層が形成される。

【０００４】従って、LDL低下剤ではないLDLの酸化的変
性を抑制する化合物によっても、動脈硬化病変の発生・
進展を阻止することができ、動脈硬化症の治療薬に成り
得ると考えられる。

【０００５】ミエロペルオキシダーゼはヘム蛋白の一種
で、過酸化水素より、次亜塩素酸を産生する。次亜塩素
酸は脂質やLDLを酸化する。また本酵素はチロシンと過
酸化水素より、チロシルラジカルを産生する。チロシル
ラジカルもまた、LDLを酸化変性する。さらに血管壁の
動脈硬化病変部には本酵素が高発現しており、in vivo
において本酵素がLDLの酸化変性に関与していることが
強く示唆されている(Daugherty, A., et al, J. Clin.
invest., 1994年94巻437頁 参照)。

【０００６】従って、LDLの酸化変性の一部を担うミエ
ロペルオキシダーゼを阻害する化合物は、LDLの酸化変
性を抑制し、動脈硬化病変の発生・進展を阻止すること
ができ、動脈硬化症の治療薬に成り得ると考えられる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ペニシ
リウム（Penicillium）属に属する菌の培養液中よりミ
エロペルオキシダーゼを阻害する新規化合物群を採取
し、本発明を完成した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１） 下記
式（I）で表される化合物又はその薬理上許容される誘
導体又はその薬理上許容される塩、

【０００９】

【化４】 （２） 下記式（II）で表される化合物又はその薬理上
許容される誘導体又はその薬理上許容される塩、

【００１０】

【化５】 （３） 下記式（III）で表される化合物又はその薬理
上許容される誘導体又はその薬理上許容される塩、

【００１１】

【化６】 （４） ペニシリウム（Penicillium）属に属する、
（１）に記載の化合物の生産菌を培養する工程を含むこ
とを特徴とする（１）に記載の化合物の製造方法、
（５） ペニシリウム・レイストリッキ（Penicillium
raistrickii）ＳＡＮＫ１０９９９株を培養する工程を
含むことを特徴とする（１）に記載の化合物の製造方
法、（６） ペニシリウム・レイストリッキ（Penicill
ium raistrickii）ＳＡＮＫ１０９９９株（ＦＥＲＭ-
ＢＰ６７４２）、（７） ペニシリウム（Penicilliu
m）属に属する、（２）又は（３）記載の化合物の生産
菌を培養する工程を含むことを特徴とする、（２）又は
（３）に記載の化合物の製造方法、（８） ペニシリウ
ム・トーミ（Penicillium thomii）ＳＡＮＫ１０８９９
株を培養する工程を含むことを特徴とする、（２）又は
（３）に記載の化合物の製造方法、（９） ペニシリウ
ム・トーミ（Penicillium thomii）ＳＡＮＫ１０８９９
株（ＦＥＲＭ-ＢＰ６７４１）、（１０） （１）乃至
（３）のいずれか１項に記載の化合物を有効成分として
含有する医薬、及び、（１１） （１）乃至（３）のい
ずれか１項に記載の化合物を有効成分として含有する抗
動脈硬化剤に関する。

【００１２】本発明の式（I）で表される化合物（以下
「化合物I」という。）は、下記の物理化学的性状を有
する。 1)性質；白色粉末。 2）溶解性；ジメチルスルホキシド（以下、「ＤＭＳ
Ｏ」という。）、メタノール、アセトン、酢酸エチルに
可溶。ヘキサンに不溶。 3）分子式；Ｃ₁₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₅（高分解能マススペクトル
により決定） 4）分子量；２６８（FAB-MSスペクトルにより決定） 5）紫外線吸収スペクトル；λmax nm （ε）メタノール
溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、２０６（３
４１７５）、２３８（１１７４９）、２９４（３９６
６）nmに吸収極大を示す。 6）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）；νmax（cm^-1）Ｋ
Ｂｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは、次の
通りである。 ３２９０、２９４２、１７１５、１６６６、１５０９、
１４５７、１２０７、１１５７、１０３４、９２０、８
３２ 7）¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm) 重メタノール溶液中［テトラメチルシラン(以下「ＴＭ
Ｓ」という。）内部基準］で測定した核磁気共鳴スペク
トル（３６０MHz）は、次の通りである。 2.52(2H,m)，2.63(2H,m)，3.72(3H,ｓ)，3.83(3H,s)，
6.39(１H,dd,8.6,2.5 Hz)，6.5(1H,d,2.5 Hz)，6.75(1
H,d,8.6 Hz), 8）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm) 重メタノール溶液中（ＴＭＳ内部基準）で測定した核磁
気共鳴スペクトル（90MHz）は、次の通りである。 30.2(t),30.6(t),56.2(q),56.3(q),100.2(d),105.8
(ｄ),115.0(d),132.9(s),150.0(s),156.6(s),174.5(s),
176.7(s) 9）高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；ウォーターズ シンメトリー ODS（φ4.6×
150mm） 移動相；25%アセトニトリル−0.3%トリエチルアミン燐
酸緩衝液（ｐH3.1） 流速；1.0ml／分 検出波長；210nm 温度 ；25℃ 保持時間；3.7分。

【００１３】本発明の式（II）で表される化合物（以下
「化合物II」という。）は下記の物理化学的性状を有す
る。 １）性質；白色粉末。 ２）［α］^D ₂₀ +1.8° （ｃ0.55、H₂O ） ３）溶解性；水、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、
メタノールに可溶。アセトン、酢酸エチルに不溶。 ４）分子式；Ｃ₁₃Ｈ₁₉Ｎ₃Ｏ₅（高分解能マススペクトル
により決定） ５）分子量； ２９７（FAB-MSスペクトルにより決定） ６）紫外線吸収スペクトル；λmax nm（ε） メタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、
２０２（３１０５４）、２３５（８２９２）、２９０
（２８７５）nmに吸収極大を示す。 ７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）；νmax （cm^-1） ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは、次
の通りである。３２３６、２９４０、１６４７、１６０
４、１５０８、１４５６、１４１０、１２０７、１１５
６、１０３４、９２０、８３０ ８）¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm) 重DMSO溶液中（ＴＭＳ内部基準 ）で測定した核磁気共
鳴スペクトル（３６０MHz）は、次の通りである。 1.87(2H,ｍ)，2.29(2H,t)，3.15(1H,t)，3.65(3H,ｓ)，
3.77(3H,s)，6.36(１H,dd,8.6,2.5 Hz)，6.50(1H,d,2.5
Hz)，6.57(1H, S),6.58(1H,d,8.6 Hz) ９）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm) 重DMSO溶液中（ＴＭＳ内部基準）で測定した核磁気共鳴
スペクトル（９０MHz）は、次の通りである。 27.2(t)，30.0(t)，53.5(d)，55.2(q)，55.3(q), 99.0
(d), 104.0(ｄ), 112.4(d), 132.2(s), 147.5(s), 153.
5(s), 169.2(s), 171.5(s) １０）高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；ウォーターズ シンメトリー ODS（φ4.6×
150mm） 移動相；20%メタノール-水 流速；1.0ml／分 検出波長；210nm 温度 ；25℃ 保持時間；5.5分。

【００１４】本発明の式（III）で表される化合物（以
下「化合物III」という。）は下記の物理化学的性状を
有する。 １）性質；白色粉末。 ２）［α］^D ₂₀ −16.4° （ｃ0.55、H₂O ） ３）溶解性；水、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、
メタノールに可溶。アセトン、酢酸エチルに不溶。 ４）分子式；Ｃ₁₃Ｈ₁₉Ｎ₃Ｏ₆（高分解能マススペクトル
により決定） ５）分子量；313（FAB-MSスペクトルにより決定） ６）紫外線吸収スペクトル；λmax nm（ε） メタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、
２０２（３３３５３）、２３５（８７１４）、２８８
（３３０５）nmに吸収極大を示す。 ７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）；νmax （cm^-1） ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは、次
の通りである。 ３２４４、２９４０、１６３３、１５０８、１４６７、
１４０３、１２０８、１１５６、１０３８、９２０、８
３１ ８）¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル； δ(ppm) 重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（３６０MH
z）は、次の通りである。 2.25(2H,ｍ), 3.72(3H,ｓ), 3.80(3H,s)、3.89（1H,dd,
3.82,7.1 Hz）,4.38（1H,dd,3.96、9.0 Hz） 6.48(１H,
dd,8.6,2.2 Hz), 6.60(1H,d,2.2 Hz), 6.73(1H,d,8.6 H
z), ９）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm) 重水溶液中（ジオキサン内部基準）で測定した核磁気共
鳴スペクトル（９０MHz）は、次の通りである。 33.9(t)，52.8(d)，55.9(q)，56.1(q)，68.9(d)，99.8
(d)，105.3(ｄ),114.5(d)，130.3(s)，148.9(s)，154.7
(s)，173.5（s)，174.9(s) １０）高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；ウォーターズ シンメトリー ODS（φ4.6×
150mm） 移動相；20%メタノール-水 流速；1.0ml／分 検出波長；210nm 温度 ；25℃ 保持時間；4.9分。 化合物I、化合物II又は化合物IIIの「薬学上許容される
誘導体」とは、ヒトまたは動物体内で加水分解等の化学
的若しくは生物学的方法により開裂し化合物I、化合物I
I又は化合物IIIを生成するように化合物I、化合物II又
は化合物IIIの水酸基、アミノ基またはカルボキシル基
が保護された誘導体（いわゆる「プロドラッグ」）をい
い、そのような誘導体か否かは、ラットやマウスのよう
な実験動物に経口、点鼻、経鼻、経肺、静脈注射等によ
り投与し、その後の動物の体液を調べ、化合物I、化合
物II又は化合物IIIを検出できることにより決定でき
る。化合物I、化合物II又は化合物IIIはカルボキシル基
を有し、また、水酸基又はアミノ基を有することがある
ので、このような誘導体に導くことができる。

【００１５】そのような薬理上許容される誘導体として
は、水酸基又は／及びアミノ基が脂肪族又は芳香族アシ
ル基のようなアシル基で修飾された誘導体及びカルボキ
シル基が保護されたエステル誘導体を挙げることができ
る。

【００１６】脂肪族アシル基としては、例えば、アセチ
ル、プロピオニル、ブタノイル、２-メチルプロピオニ
ル、２，２−ジメチルプロピオニル（ピバロイル）、ペ
ンタノイル、イソペンタノイル、２−メチルブタノイ
ル、ネオペンタノイル、ヘキサノイル、イソヘキサノイ
ル、４−メチルペンタノイル、３−メチルペンタノイ
ル、２−メチルペンタノイル、３，３−ジメチルブタノ
イル、２，２−ジメチルブタノイル、２，３−ジメチル
ブタノイル、２−エチルブタノイル、ヘプタノイル、２
−メチルヘキサノイル、３−メチルヘキサノイル、４−
メチルヘキサノイル、５−メチルヘキサノイル、４，４
−ジメチルペンタノイル、オクタノイル、２−メチルヘ
プタノイル、３−メチルヘプタノイル、４−メチルヘプ
タノイル、５−メチルヘプタノイル、６−メチルヘプタ
ノイル、２−エチルヘキサノイル、５，５−ジメチルヘ
キサノイル、ノナノイル、３−メチルオクタノイル、４
−メチルオクタノイル、５−メチルオクタノイル、６−
メチルオクタノイル、２−エチルヘプタノイル、６，６
−ジメチルヘプタノイル、デカノイル、３−メチルノナ
ノイル、８−メチルノナノイル、３−エチルオクタノイ
ル、３，７−ジメチルオクタノイル、７，７−ジメチル
オクタノイル、ウンデカノイル、４，８−ジメチルノナ
ノイル、ドデカノイル、トリデカノイル、テトラデカノ
イル、ペンタデカノイル、３，７，１１−トリメチルド
デカノイル、ヘキサデカノイル、４，８，１２−トリメ
チルトリデカノイル、１−メチルペンタデカノイル、１
４−メチルペンタデカノイル、１３，１３−ジメチルテ
トラデカノイル、ヘプタデカノイル、１５−メチルヘキ
サデカノイル、オクタデカノイル、１−メチルヘプタデ
カノイル、ノナデカノイルまたはエイコサノイル基のよ
うな炭素数２乃至２０個のアルカノイル基；メトキシカ
ルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニ
ル、イソプロポキシカルボニル、ブチルオキシカルボニ
ル、イソブチルオキシカルボニル、ｓ−ブチルオキシカ
ルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ペンチルオキ
シカルボニル、ヘキシルオキシカルボニル、ヘプチルオ
キシカルボニル、オクチルオキシカルボニル、ノニルオ
キシカルボニル、デシルオキシカルボニル、ウンデシル
オキシカルボニル、ドデシルオキシカルボニル、トリデ
シルオキシカルボニル、テトラデシルオキシカルボニ
ル、ペンタデシルオキシカルボニル、ヘキサデシルオキ
シカルボニル、ヘプタデシルオキシカルボニル、オクタ
デシルオキシカルボニルまたはノナデシルオキシカルボ
ニル基のような炭素数２乃至２０個のアルコキシカルボ
ニル基を挙げることができる。これら脂肪族アシル基の
アルキル部分は、アミノ基で置換されていてもよく、３
乃至７員環状構造及び２又は３重結合を有していてもよ
い。

【００１７】芳香族アシル基としては、例えば、ベンゾ
イル、α−ナフトイル、β−ナフトイルのような炭素数
７乃至１１個のアリールカルボニル基；２−フェニルア
セチル、３−フェニルプロピオニル、４−フェニルブチ
リル、５−フェニルペンタノイル、６−フェニルヘキサ
ノイル、７−フェニルヘプタノイル、８−フェニルオク
タノイル、９−フェニルノナノイル、１０−フェニルデ
カノイル、１０−ナフチルデカノイル基のような炭素数
８乃至２０個のアラルキルカルボニル基を挙げることが
できる。これら芳香族アシル基のアリ−ル部分は、炭素
数１乃至４個のアルキル基、ハロゲン原子または炭素数
１乃至４個のアルコキシ基で置換されていてもよい。

【００１８】カルボキシル基が保護されたエステル誘導
体のエステル残基としては、例えば、メチル、エチル、
プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブ
チル、t−ブチル、ペンチル、イソペンチル、２−メチ
ルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ヘキシ
ル、イソヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペ
ンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、
３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、
１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、
１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２
−エチルブチル、ヘプチル、１−メチルヘキシル、２−
メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキ
シル、５−メチルヘキシル、１−プロピルブチル、４，
４−ジメチルペンチル、オクチル、１−メチルヘプチ
ル、２−メチルヘプチル、３−メチルヘプチル、４−メ
チルヘプチル、５−メチルヘプチル、６−メチルヘプチ
ル、１−プロピルペンチル、２−エチルヘキシル、５，
５−ジメチルヘキシル、ノニル、３−メチルオクチル、
４−メチルオクチル、５−メチルオクチル、６−メチル
オクチル、１−プロピルヘキシル、２−エチルヘプチ
ル、６，６−ジメチルヘプチル、デシル、１−メチルノ
ニル、３−メチルノニル、８−メチルノニル、３−エチ
ルオクチル、３，７−ジメチルオクチル、７，７−ジメ
チルオクチル、ウンデシル、４，８−ジメチルノニル、
ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、
３，７，１１−トリメチルドデシル、ヘキサデシル、
４，８，１２−トリメチルトリデシル、１−メチルペン
タデシル、１４−メチルペンタデシル、１３，１３−ジ
メチルテトラデシル、ヘプタデシル、１５−メチルヘキ
サデシル、オクタデシル、１−メチルヘプタデシル、ノ
ナデシルまたはアイコシル基のような炭素数１乃至２０
個のアルキル基；前記のアルキル基において１又は２個
の２重結合を有する炭素数２乃至２０個のアルケニル
基；前記のアルキル基において１又は２個の３重結合を
有する炭素数２乃至２０個のアルキニル基；ベンジル、
フェネチル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチ
ル、５−フェニルペンチル、６−フェニルヘキシル、８
−フェニルオクチル、１０−フェニルデシルまたは１０
−ナフチルデシル基のような炭素数７乃至２０個のアラ
ルキル基；アセチルオキシメチル、プロピオニルオキシ
メチル、ブチリルオキシメチル、ペンタノイルオキシメ
チル、ヘキサノイルオキシメチル、オクタノイルオキシ
メチル、デカノイルオキシメチル、ドデカノイルオキシ
メチル、テトラデカノイルオキシメチル、ヘキサデカノ
イルオキシメチル、オクタデカノイルオキシメチル、１
−（アセチルオキシ）エチル、１−（プロピオニルオキ
シ）エチル、１−（ブチリルオキシ）エチル、１−（ペ
ンタノイルオキシ）エチル、１−（ヘキサノイルオキ
シ）エチル、１−（オクタノイルオキシ）エチル、１−
（デカノイルオキシ）エチル、１−（ドデカノイルオキ
シ）エチル、１−（テトラデカノイルオキシ）エチル、
１−（ヘキサデカノイルオキシ）エチル、１−（オクタ
デカノイルオキシ）エチル基のような１−（炭素数２乃
至２０個のアルカノイルオキシ）炭素数１乃至３個のア
ルキル基；メトキシカルボニルオキシメチル、エトキシ
カルボニルオキシメチル、プロピルオキシカルボニルオ
キシメチル、イソプロピルオキシカルボニルオキシメチ
ル、ブチルオキシカルボニルオキシメチル、イソブチル
オキシカルボニルオキシメチル、ｓ−ブチルオキシカル
ボニルオキシメチル、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキ
シメチル、ペンチルオキシカルボニルオキシメチル、２
−ペンチルオキシカルボニルオキシメチル、３−ペンチ
ルオキシカルボニルオキシメチル、イソペンチルオキシ
カルボニルオキシメチル、ネオペンチルオキシカルボニ
ルオキシメチル、シクロペンチルオキシカルボニルオキ
シメチル、ヘキシルオキシカルボニルオキシメチル、２
−ヘキシルオキシカルボニルオキシメチル、３−ヘキシ
ルオキシカルボニルオキシメチル、イソヘキシルオキシ
カルボニルオキシメチル、シクロヘキシルオキシカルボ
ニルオキシメチル、ヘプチルオキシカルボニルオキシメ
チル、オクチルオキシカルボニルオキシメチル、デシル
オキシカルボニルオキシメチル、ドデシルオキシカルボ
ニルオキシメチル、テトラデシルオキシカルボニルオキ
シメチル、ヘキサデシルオキシカルボニルオキシメチ
ル、オクタデシルオキシカルボニルオキシメチル、１−
（メトキシカルボニルオキシ）エチル、１−（エトキシ
カルボニルオキシ）エチル、１−（プロピルオキシカル
ボニルオキシ）エチル、１−（イソプロピルオキシカル
ボニルオキシ）エチル、１−（ブチルオキシカルボニル
オキシ）エチル、１−（イソブチルオキシカルボニルオ
キシ）エチル、１−（ｓ−ブチルオキシカルボニルオキ
シ）エチル、１−（ｔ−ブチルオキシカルボニルオキ
シ）エチル、１−（ペンチルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（２−ペンチルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（３−ペンチルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（イソペンチルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（ネオペンチルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（シクロペンチルオキシカルボニルオキ
シ）エチル、１−（ヘキシルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（２−ヘキシルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（３−ヘキシルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（イソヘキシルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（シクロヘキシルオキシカルボニルオキ
シ）エチル、１−（ヘプチルオキシカルボニルオキシ）
エチル、１−（オクチルオキシカルボニルオキシ）エチ
ル、１−（デシルオキシカルボニルオキシ）エチル、１
−（ドデシルオキシカルボニルオキシ）エチル、１−
（テトラデシルオキシカルボニルオキシ）エチル、１−
（ヘキサデシルオキシカルボニルオキシ）エチル、１−
（オクタデシルオキシカルボニルオキシ）エチル基のよ
うな１−（炭素数１乃至２０個のアルコキシカルボニル
オキシ）炭素数１乃至３個のアルキル基；５−メチル−
２−オキソ−１、３−ジオキソレン−４−イルメチル基
を挙げることができる。

【００１９】化合物I、化合物II又は化合物IIIの薬理上
許容される誘導体として好適には、カルボキシル基が炭
素数１乃至６個のアルキル基若しくは炭素数７乃至１０
個のアラルキル基によって保護されたエステル誘導体で
あり、更に好適には、カルボキシル基がエチル、メチル
又はベンジル基によって保護されたエステル誘導体であ
る。化合物I、化合物II又は化合物IIIはカルボキシル基
を有するため、塩基と結合して塩を形成する場合があ
る。また、化合物II又は化合物IIIは塩基性のアミノ基
を有するため、酸と結合して塩を形成する場合がある。
化合物I、化合物II又は化合物IIIの「薬理上許容される
塩」とはそのように形成された塩のうち薬理上許容され
るものを示す。

【００２０】塩基との塩としては、たとえばリチウム
塩、ナトリウム塩、カリウム塩のようなアルカリ金属の
塩；カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土
類金属の塩；アンモニウム塩、トリエチルアミン塩、ジ
イソプロピルアミン塩、シクロヘキシルアミン塩のよう
な有機塩基の塩等が挙げられ、好適にはアルカリ金属の
塩であり、更に好適にはナトリウム塩である。

【００２１】酸との塩としては、たとえば塩酸塩、臭化
水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの無機酸の
塩；酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩、
マロン酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩など
のカルボン酸の塩；メタンスルホン酸塩、エタンスルホ
ン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩
などのスルホン酸の塩；グルタミン酸塩、アスパラギン
酸塩などのアミノ酸の塩等が挙げられ、好適には無機酸
の塩又はカルボン酸の塩であり、更に好適には塩酸塩、
硝酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩又はシュウ酸塩であ
る。

【００２２】また、化合物I、化合物II若しくは化合物I
II又はそれらの薬理上許容される誘導体あるいはそれら
の薬理上許容される塩は、大気中に放置しておくことに
より、水分を吸収し吸着水が付いたり水和物となる場合
があり、または他のある種の溶媒を吸収し溶媒和物とな
る場合があるが、そのような塩も本発明に包含される。
本発明の化合物II及び化合物IIIは分子内に不斉炭素原
子を１又は２個有するため、各々がＲ配置又はＳ配置で
ある光学異性体が存在する。式（II）及び式(III)にお
いては、これらの異性体及びこれらの異性体の混合物が
すべて単一の式で示されている。本発明はこれらの各々
の異性体及びこれらの二以上の異性体の混合物をすべて
包含する。

【００２３】

【発明の実施の形態】本発明の化合物Iの製造方法にお
いて用いられる、ペニシリウム（Penicillium）属に属
する菌株としては、例えばペニシリウム・レイストリッ
キ（Penicillium raistrickii）ＳＡＮＫ １０９９９
株を挙げることができる。ＳＡＮＫ １０９９９株は茨
城県つくば市において採集された落葉より分離したもの
である。

【００２４】本発明の化合物II又は化合物IIIの製造方
法において用いられる、ペニシリウム（Penicillium）
属に属する菌株としては、例えばペニシリウム・トーミ
（Penicillium thomii）ＳＡＮＫ１０８９９株を挙げ
ることができる。ＳＡＮＫ１０８９９株は、京都府北桑
田郡美山町の落葉広葉樹の樹皮より分離された菌株であ
る。

【００２５】ＳＡＮＫ１０８９９株とＳＡＮＫ１０９９
９株をピット等の方法(Pitt, J. I.The genus Penicill
ium and its teleomorphic states Eupenicillium and
Talaromyces. Academic Press, London.1979年； Pitt,
J. I. A laboratory guideto common Penicillium spe
cies (2nd edition). CSIRO, Division of Food Proces
sing, North Ryde NSW, Austraria 1988年.)に従い、3
種類の培地（CYA, MEA, G25N）に接種して、菌学的性状
を観察した。色調の表示は「メチューン・ハンドブック
・オブ・カラー」 (Kornerup, A. and Wanscher, J. H.
Methuen handbook of colour(3rd. edition). Erye Me
thuen, London.1978年)に従った。

【００２６】3種類の培地（CYA, MEA, G25N）の組成は
以下の通りである。ＣＹＡ培地 ｛ザペックイーストエキスアガー（Czapek Yeast Extract Agar）培 地｝ リン酸水素2カリウム 1.0g ザペック濃縮液 10ml イーストエキス 5g シュークロース 30g 寒天 15g 蒸留水 1000mlＭＥＡ培地 ｛モルトエキスアガー（Malt Extract Agar）培地｝ モルトエキス 20g ペプトン 1g グルコース 20g 寒天 20g 蒸留水 1000mlＧ２５Ｎ培地 ｛25%グリセロール硝酸（25% Glycerol Nitrate Agar）培地｝ リン酸水素2カリウム 0.75g ザペック濃縮液 7.5ml イーストエキス 3.7g グリセロール 250g 寒天 12g 蒸留水 750ml 上記において、ザペック濃縮液とは、以下の組成の溶液
を示す。

【００２７】 硝酸ナトリウム 30g 塩化カリウム 5g 硫酸マグネシウム7水和物 5g 硫酸鉄(I)7水和物 0.1g 硫酸亜鉛7水和物 0.1g硫酸銅5水和物 0.05g 蒸留水 100ml １．菌学的性状 ＳＡＮＫ１０９９９株の菌学的性状は以下の通りであ
る。

【００２８】ＣＹＡ培地上での成長は、25℃、1週間の
培養で22乃至28mmである。コロニーは放射状のしわを有
し、厚い羊毛状である。菌核は多数形成され、菌糸で覆
われている。菌糸は白色である。分生子形成は中程度で
中心部に限られる。裏面はイエロー(3A8)乃至ペールイ
エロー(3A3)である。ＭＥＡ培地上での成長は、25℃、1
週間の培養で15乃至20mmである。コロニーは平坦、羊毛
状である。菌糸は白色、時々中心部でライトイエロー(4
A5)である。分生子形成は中程度である。裏面はライト
イエロー(3A4)乃至ペールイエロー(3A3)である。Ｇ２５
Ｎ培地上での成長は、25℃、1週間の培養で8乃至13mmで
ある。コロニーは羊毛状である。菌糸は白色である。裏
面はイエロシュホワイト(3A2)である。5℃又は37℃では
発芽しない。

【００２９】菌核は直径50乃至100μm、白色である。分
生子柄は長さ200乃至350μmで粗面である。ペニシリは
二輪生で、頂生する。メトレは長さ14乃至20μm、2乃至
5本で、先端は頂のう状にふくらみ、粗面である。フィ
アライドは長さ10乃至13μm、多数で、とっくり型であ
る。分生子は直径2.5乃至3.1μm、長い胞子連鎖を形成
し、球形又は亜球形で、滑面である。

【００３０】以上の菌学的性状より、本菌に該当する菌
を検索したところ、ピットの文献(Pitt, J. I. The gen
us Penicillium and its teleomorphic states Eupenic
illium and Talaromyces. Academic Press, London.197
9年； Pitt, J. I. A laboratory guide to common Pen
icillium species (2nd edition)1988年. CSIRO, Divis
ion of Food Processing, North Ryde NSW, Austrari
a.)に記載されているペニシリウム レイストリッキ
ジスミス（Penicillium raistrickii G. Smith）の性状
とほぼ一致した。よって本菌株をペニシリウム レイス
トリッキ ジスミス（Penicillium raistrickii G. Smi
th）と同定した。

【００３１】尚、ＳＡＮＫ１０９９９株は、ペニシリウ
ム・レイストリッキ ＳＡＮＫ１０９９９株として、平
成１１年６月３日に通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所に寄託され、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６７
４２が付された。

【００３２】ＳＡＮＫ１０８９９株の菌学的性状は以下
の通りである。

【００３３】ＣＹＡ培地上での成長は、25℃、1週間の
培養で直径40乃至46mmである。コロニーは、深い放射状
のしわを有し、ビロード状である。菌糸は白色である。
菌核は多数形成され、菌糸やペニシリで覆われている。
分生子形成は非常におう盛で、その色はグレイッシュグ
リーン(26E6)である。無色透明な浸出液を生成する。裏
面はペールイエロー(3A3)またはライトイエロー(3A4)で
ある。ＭＥＡ培地上での成長は、25℃、1週間の培養で
直径42乃至46mmである。コロニーは薄い平坦で、細粉状
である。菌糸は白色である。菌核は多数形成される。分
生子形成は少ないかまたは中程度である。裏面はペール
イエロー(4A3)である。Ｇ２５Ｎ培地上での成長は、25
℃、1週間の培養で直径18乃至21mmである。コロニーは
中央部で凸状で、放射状のしわを有し、羊毛状である。
菌糸は白色である。裏面はペールイエロー(4A3)または
ライトイエロー(4A5)である。5℃又は37℃では発芽しな
い。

【００３４】菌核は直径200乃至350μm、濃黄色で、後
にオレンジ色となり、堅い。分生子柄は長さ300乃至500
μm、粗面で、先端は頂のう状にふくらむ。ペニシリは
単輪生である。フィアライドは長さ9.5乃至11.5μm、多
数で、とっくり型である。分生子は直径3乃至3.8μm、
長い胞子連鎖を形成し、球形又は亜球形、滑面またはわ
ずかに粗面である。

【００３５】以上の菌学的性状より、本菌に該当する菌
を検索したところ、ピットの文献(Pitt, J. I. The gen
us Penicillium and its teleomorphic states Eupenic
illium and Talaromyces. Academic Press, London.197
9年； Pitt, J. I. A laboratory guide to common Pen
icillium species (2nd edition)1988年. CSIRO, Divis
ion of Food Processing, North Ryde NSW, Austrari
a.)に記載されているペニシリウム トーミ メーレ（P
enicillium thomii Maire）の性状とほぼ一致した。
よって本菌株をペニシリウム トーミ メーレ（Penici
llium thomii Maire）と同定した。

【００３６】尚、ＳＡＮＫ １０８９９株は、ペニシリ
ウム トーミＳＡＮＫ １０８９９株として、平成11年6
月3日に通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託され、受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ-６７４１が付
された。糸状菌は、一般に、自然界において又は人工的
な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処
理等）により、変異を起こす場合があり、また、遺伝的
方法、例えば、組み換え、形質導入又は形質転換等によ
り人工的に変異させる場合がある。本発明のＳＡＮＫ１
０９９９株及びＳＡＮＫ１０８９９株も糸状菌であるた
め、このような変異を起こし変異株となる場合がある。
本発明のＳＡＮＫ１０９９９株は、化合物Iを生産する
限り、これらの変異株及びそれと明確に区別されない全
ての菌株を包含し、また、本発明のＳＡＮＫ１０８９９
株は、化合物II又は化合物IIIを生産する限り、これら
の変異株及びそれと明確に区別されない全ての菌株を包
含する。 2．培養について 化合物I、II又はIIIを生産させるために、ＳＡＮＫ１０
８９９株及びＳＡＮＫ１０９９９株の培養に使用される
培地は、醗酵生成物を生産するために通常使用される培
地であれば特に限定はなく、通常、微生物が同化できる
炭素源、窒素源及び無機塩を含有する。

【００３７】炭素源としては、例えば、グルコース、フ
ルクトース、マルトース、シュークロース、マンニトー
ル、グリセリン、デキストリン、オート麦、ライ麦、デ
ンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、綿実油、糖蜜、
クエン酸、酒石酸等が挙げられ、これらは単独又は併用
して使用することができる。炭素源の添加量は、通常、
培地量の１乃至１０重量％の範囲である。

【００３８】窒素源としては、通常、蛋白質およびその
加水分解物を含有する物質または無機塩が使用される。
このような窒素源としては、例えば、大豆粉、フスマ、
落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、ファーマミ
ン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキ
ス、イースト、イーストエキス、マルトエキス、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等が挙
げられ、これらは単独または併用して使用することがで
きる。窒素源の添加量は、通常、培地量の０．２乃至１
０重量％の範囲である。

【００３９】栄養無機塩としては、例えば、ナトリウム
イオン、アンモニウムイオン、カルシウムイオン、リン
酸イオン、硫酸イオン、塩化物イオン、炭酸イオン等の
イオンを得ることのできる塩類が使用される。また、カ
リウム、カルシウム、コバルト、マンガン、マグネシウ
ム等の金属を微量含む塩類も使用することができる。

【００４０】液体培養を行う場合には、必要に応じて、
消泡剤を用いることができ、このような消泡剤として
は、例えば、シリコン油、植物油、界面活性剤等が使用
される。

【００４１】培地のｐＨは、通常、5.0乃至8.0である。

【００４２】培養温度は、通常、１５℃乃至３０℃であ
り、好適には２０℃乃至２６℃である。

【００４３】化合物IはＳＡＮＫ１０９９９株を、化合
物II又は化合物IIIはＳＡＮＫ１０８９９株を、好気的
培養法で好気的に培養することにより得られる。このよ
うな培養法としては、例えば、固体培養法、振盪培養法
又は通気撹拌培養法等が用いられる。

【００４４】小規模な培養は、２３℃で数日間振盪培養
を行うのが良好である。培養は、三角フラスコ中で一段
階または複数段階の種の発育工程により開始する。種培
養は、フラスコに滅菌した種培養用培地を加え、ＳＡＮ
Ｋ１０８９９株又はＳＡＮＫ１０９９９株を接種した
後、定温インキュベーター中で数日間または充分に成長
するまで振盪することによりを行う。得られた種培養液
の一部または全部は、次段階の種培養用培地または生産
培養用培地に接種するのに使用される。培養は、滅菌し
た生産培養用培地を含むフラスコに、種培養液を接種
し、一定温度で数日間振盪することにより行う。

【００４５】大量培養は、撹拌機、通気装置を備えた適
当なタンクで培養するのが好ましい。培地は、タンクの
中で作製することができ、１２１℃に加熱して滅菌後、
冷却して使用する。培養は、タンク内の生産培養用培地
に種培養液を接種し、２３℃で通気撹拌して行う。この
方法は多量の化合物を得るのに適している。

【００４６】培養時間は、通常、１５０時間乃至２００
時間で化合物I、化合物II又は化合物IIIの生産量は最高
値に達する。 3．抽出精製について 培養終了後、培養液中の液体部分に存在する化合物I、
化合物II及び化合物IIIは、菌体、その他の固形部分を
珪藻土をろ過助剤とするろ過操作又は遠心分離等によっ
て分別し、そのろ液から、化合物I、化合物II又は化合
物IIIの物理化学的性質を利用して抽出し、精製するこ
とにより採取される。また、化合物I、化合物II又は化
合物IIIは、菌体、その他の固形部分から、メタノール
水又はアセトン水等により抽出することができる。

【００４７】化合物I、化合物II又は化合物IIIは、化合
物I、化合物II又は化合物IIIを含む溶液に、水と混和し
ない有機溶剤、たとえば、ブチルアルコール、酢酸エチ
ル等を単独または組み合わて加えることにより抽出する
ことができる。

【００４８】また、活性炭、吸着用樹脂又はイオン交換
樹脂を用いて精製することもできる。活性炭又は吸着用
樹脂としては、例えば、アンバーライト XAD−2 、XAD
−4（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオン HP
−10、HP−20、HP−50、CHP20P（三菱化成（株）社製）
等を使用することができる。化合物I、化合物II又は化
合物IIIは、該化合物を含む溶液を上述の吸着剤の層を
通過させて不純物を吸着させて取り除き、あるいは、化
合物I、化合物II又は化合物IIIを吸着させた後、メタノ
ール水又はアセトン水等の水と有機溶剤との混合溶剤を
用いて溶出させて精製することができる。イオン交換樹
脂としては、例えば、ダウエックス５０Ｗ×４、ダウエ
ックス１×２、ダウエックスSBR-P（ダウ・ケミカル社
製）等を使用することができる。化合物I、化合物II又
は化合物IIIは該化合物を含む液を上述のイオン交換樹
脂の層を通過させて不純物を吸着させて取り除き、又
は、化合物I、化合物II又は化合物IIIを吸着させた後、
塩酸又はアンモニア水を用いて溶出させて精製すること
ができる。

【００４９】このようにして得られた化合物I、化合物I
I又は化合物IIIは、更に、シリカゲル、フロリジルのよ
うな担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；アビ
セル（旭化成工業（株）社製）、セファデックス LH−2
0（ファルマシア社製）等を用いた分配カラムクロマト
グラフィー；コスモシル１４０ Ｃ１８カラム（ナカラ
イテスク社製）、セップパックカートリッジ プラスＣ
１８（ウォーターズ社製）等を用いた逆相カラムクロマ
トグラフィー；順相、逆相カラム等を用いた高速液体ク
ロマトグラフィー等で精製することができる。

【００５０】本発明の化合物I、化合物II又は化合物III
の精製における挙動は次に挙げる各々の測定方法によっ
て確認することができる。

【００５１】1)ミエロペルオキシダーゼ阻害活性 ミエロペルオキシダーゼ活性は以下の方法により測定し
た。

【００５２】ヒト・ミエロペルオキシダーゼをリン酸ナ
トリウム緩衝液中で過酸化水素、グアイアコールと反応
させるとグアイアコールラジカルが生じ、直ちに重合し
てテトラグアイアコールが生成する。生成したテトラグ
アイアコールは470nm付近に吸収極大を示すので、470nm
の吸光度をマイクロプレートリーダーで測定することに
よりミエロペルオキシダーゼ活性を測定した（Klebanof
fら、Methods in Enzymology、105巻、399頁、1984
年）。

【００５３】 2)高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；ウォーターズ シンメトリー ODS（φ4.6×150mm） 移動相；化合物I：25%アセトニトリル−0.3%トリエチルアミン燐酸緩衝液 （ｐＨ3.1） 化合物II：20%メタノール−水 化合物III：20%メタノール−水 流速；1.0ml／分 検出波長；210nm 温度；25℃ 保持時間； 化合物I：3.7分 化合物II：5.0分 化合物III：4.9分 化合物I、化合物II又は化合物IIIの薬理上許容される誘
導体は、医薬品製造化学の分野において通常使用される
方法により製造することができる。

【００５４】また、化合物I、化合物II又は化合物III
は、溶媒中、薬理上許容される酸又は塩基を加えること
によって薬理上許容される塩に変換することができる。

【００５５】使用される溶媒は特に限定はないが、例え
ば、ベンゼンのような芳香族炭化水素類；ジクロロメタ
ン、クロロホルムのようなハロゲン化炭化水素類；エー
テル、テトラヒドロフラン、ジオキサンのようなエーテ
ル類；酢酸エチルのようなエステル類；メタノール、エ
タノールのようなアルコール類；アセトンのようなケト
ン類；アセトニトリルのようなニトリル類；ヘキサン、
シクロヘキサンのような炭化水素類又はこれらの混合溶
媒を挙げることができる。

【００５６】使用される酸は、薬理上許容されるもので
あればよく、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸の
ような無機酸類；酢酸、フマル酸、マレイン酸、シュウ
酸、マロン酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸のような
カルボン酸類；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、
ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸のようなスル
ホン酸類；グルタミン酸、アスパラギン酸のようなアミ
ノ酸類を挙げることができる。

【００５７】使用される塩基は、薬理上許容されるもの
であればよく、たとえばリチウム、ナトリウム、カリウ
ムのようなアルカリ金属の水酸化物若しくは炭酸塩；カ
ルシウム、マグネシウムのようなアルカリ土類金属の水
酸化物若しくは炭酸塩；アンモニウム、トリエチルアミ
ン、ジイソプロピルアミン、シクロヘキシルアミンのよ
うな有機塩基等を挙げることができる。

【００５８】目的の塩は、化合物I、化合物II又は化合
物IIIに酸又は塩基の溶液を加えることにより通常結晶
又は粉末として得られる。また、塩を含む溶液に塩を溶
かさない溶媒を加えることにより沈殿物として得ること
もでき、塩を含む溶液から溶媒を留去することによって
も得ることができる。

【００５９】また、本発明の化合物I、化合物II若しく
は化合物III又はそれらの薬理上許容される誘導体又は
その薬理上許容される塩を抗動脈硬化薬として用いる場
合には、その使用目的に応じて単体でも使用できるが、
薬学的効果を助長または安定化するために、医薬製剤技
術分野において通常使用しうる既知の補助剤や担体を用
いて製剤化することができる。例えば、錠剤、カプセル
剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等または注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）などをあげることができる。これら
の各種製剤は常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊
剤、潤沢剤、溶解剤、矯味矯臭、コーティング剤既知の
医薬製剤分野において通常使用しうる既知の補助剤を用
いて製剤化することができる。その使用量は症状、年
齢、体重、投与方法および剤形等によって異なるが、例
えば、１回当り、下限1mg（好ましくは10mg）、上限200
0mg（好ましくは1000mg）を１日当り１乃至数回症状に
応じて投与することが望ましい。

【００６０】本発明の化合物I、化合物II又は化合物III
は、文献未記載の新規化合物であり、LDL酸化変性に関
わっているミエロペルオキシダーゼに対する強い阻害活
性を有する。従って、本化合物は抗動脈硬化剤として有
用である。

【００６１】

【実施例】次に、実施例、試験例及び製剤例を挙げて本
発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれに限定され
ない。 実施例１.化合物Iの製造方法

【００６２】

【化７】 （Ａ）ＳＡＮＫ１０９９９株の培養 下記の培地組成−１で示される培地を８０mlずつ５００
ｍｌ容三角フラスコ２本に入れ、12１℃で20分間加熱滅
菌した。それぞれのフラスコの培地にペニシリウム・レ
イストリッキ（Penicillium raistrickii）ＳＡＮＫ１
０９９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６７４２）をスラントよ
り１白金耳接種し、回転振盪培養機で、210rpm、23℃で
96時間培養し種培養液とした。

【００６３】培地組成-1 可溶性デンプン ２% グリセリン ３% グルコース ３% ゼラチン 2.5% 大豆粉 １% イースト エキス 0.25% 硝酸アンモニウム 0.25% 寒天末 0.3%CB-442(消泡剤) 0.01% 水道水 滅菌前 pH6.5 培地組成−１(除く寒天末)で示される培地を８０mlずつ
５００ｍｌ容三角フラスコ13本に入れ12１℃で20分間加
熱滅菌した。この培地を室温で23℃に冷却した後、上記
のペニシリウム・レイストリッキ（Penicillium raistr
ickii）ＳＡＮＫ１０９９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６７４
２）種培養液5mlを接種し、回転振盪培養機で、210rp
m、23℃で7日間培養した。 （Ｂ）化合物Iの単離 得られた培養液１Lにろ過助剤としてセライト５４５
（ジョンズ マンビルプロダクト コーポレーション
製）５０ｇを加えてろ紙ろ過をしてろ液850ｍｌを得
た。ろ液のｐHを１Ｎ塩酸で3.0に調整して１Lの酢酸エ
チルを加えて1回抽出をした。抽出液を１Ｌの飽和塩化
ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水
後、減圧下濃縮乾固して化合物Iを含む抽出油状物234ｍ
ｇを得た。

【００６４】次いでこの油状物を逆相カラムクロマトグ
ラフィーで精製した。すなわち、あらかじめ10％メタノ
ール-0.3%トリエチルアミン燐酸緩衝液(pH3.1)で平衡化
した40mlのコスモシル１４０ Ｃ１８カラム（ナカライ
テスク社製）に、40ｍｌの同緩衝液で溶解した、上記油
状物234ｍｇを供与した。同緩衝液で展開溶出して17ml
ずつ分画した。すべての画分について、分析用ＨＰＬＣ
カラム［分離カラム；ウォーターズ シンメトリーODS
（φ4.6×150mm）、移動相；25％アセトニトリル−0.3%
トリエチルアミン燐酸緩衝液(pH3.1)、流速；1.0ml/
分、温度；25℃、検出波長；210nm］に注入し、保持時
間3.7分に化合物Iが溶出されるか否かを観察したとこ
ろ、画分No.4-8に該化合物が存在することが確認され
た。そこで、画分No.4-8を集めた(85ml)。集めた画分の
アセトニトリルを留去後、20mlのダイヤイオン HP-20カ
ラムに供与した。１００ｍｌの蒸留水でカラムを洗浄
後、８０ｍｌの50％アセトン水で吸着画分を溶出し、減
圧下濃縮乾固して化合物Iを含む粗粉末60mgを得た。

【００６５】次に、この粗粉末を４mlの25％アセトニト
リル-水で溶解した。この溶液を1mlずつ4回に分けて以
下の操作を行った。あらかじめ25％アセトニトリル−0.
3%トリエチルアミン燐酸緩衝液(pH3.1)で平衡化したＨ
ＰＬＣカラム（センシュウパックODS ペガシル 20φ×1
50mm）に該溶液(1ml)を注入し、25％アセトニトリル−
0.3%トリエチルアミン燐酸緩衝液(pH3.1)を移動相とし
て、流速６ml/分で溶出し、保持時間11.1〜12.6分の溶
出液を集めた。４回のＨＰＬＣ分取により得た溶出液を
合わせて３ｍｌに減圧下濃縮し、濃縮液を、２個直列に
つないだ逆相セップパックカートリッジ プラスＣ１８
（ウオーターズ社製）に供与し、１０ｍｌの蒸留水でカ
ラムを洗浄後、１０ｍｌの40％アセトニトリル-水で吸
着画分を溶出した。溶出液を減圧下濃縮乾固して化合物
Iの白色粉末２８．９ｍｇを得た。 実施例２.化合物IIの製造方法

【００６６】

【化８】 （Ａ）ＳＡＮＫ１０８９９株の培養 培地組成−1で示される培地を８０mlずつ５００ｍｌ容
三角フラスコ２本に入れ12１℃で20分間加熱滅菌した。
それぞれのフラスコの培地にペニシリウム トーミ（Pen
icillium thomii）ＳＡＮＫ１０８９９株（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−６７４１）をスラントより１白金耳接種し、回転振
盪培養機で、210rpm、23℃で96時間培養し種培養液とし
た。

【００６７】培地組成−1（除く寒天末）で示される培
地を８０ｍｌずつ５００ｍｌ容三角フラスコ13本に入
れ、12１℃で20分間加熱滅菌した。この培地を室温で23
℃に冷却した後、上記のペニシリウム トーミ（Penicil
lium thomii）ＳＡＮＫ１０８９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−
６７４１）種培養液5mlを接種し、回転振盪培養で、210
rpm、23℃で７日間培養した。 （Ｂ）化合物IIの単離 得られた培養液0.5Lにろ過助剤としてセライト５４５
（ジョンズ マンビルプロダクト コーポレーション
製）２５ｇを加えてろ紙ろ過をして得た菌体を、80%ア
セトン水３００ｍｌに懸濁し、30分間攪拌後、ろ紙ろ過
を行ないアセトン抽出液を得た。減圧下濃縮後、蒸留水
を加え１００ｍｌとし、50mlのダイヤイオン HP-20カラ
ムに供与した。２００ｍｌの蒸留水でカラムを洗浄後、
２００ｍｌの50%アセトン水で溶出して、５０ｍｌづつ
分画をした。画分No.１〜２を集め、これを合わせて、
減圧下濃縮して５０ｍｌとし、20mlのダウエックス50Ｗ
×4（H ⁺）のカラムに供与した。１００ｍｌの蒸留水で
カラムを洗浄後、0.5規定アンモニア水で吸着画分を溶
出し、１０ｍｌづつ分画を行なった。画分No.2〜6を集
め、これを合わせて減圧下濃縮乾固して化合物IIを含む
粗粉末160mgを得た。

【００６８】次に、この粗粉末を４mlの25％メタノール
-水で溶解した。この溶液を1mlずつ4回に分けて以下の
操作を行った。あらかじめ20％メタノール-水で平衡化
したＨＰＬＣカラム（センシュウパックODS ペガシル 2
0φ×150mm）に該溶液(1ml)を注入した。20％メタノー
ル-水を移動相として流速６ml/分で溶出し、保持時間1
2.6〜14.1分の溶出液を集めた。４回のＨＰＬＣ分取に
より得た溶出液を合わせて減圧下濃縮凍結乾燥して化合
物IIの白色粉末２１．３ｍｇを得た。 実施例３.化合物IIIの製造方法

【００６９】

【化９】 （Ａ）ＳＡＮＫ１０８９９株の培養 培地組成−1で示される培地を８０mlずつ５００ｍｌ容
三角フラスコ２本に入れ12１℃で20分間加熱滅菌した。
この培地にペニシリウム トーミ（Penicilliumthomii）
ＳＡＮＫ１０８９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６７４１）を
スラントより１白金耳接種し、回転振盪培養機で、210r
pm、23℃で96時間培養し種培養液とした。

【００７０】培地組成−１(除く寒天末)で示される培地
を８０ｍｌずつ５００ｍｌ容三角フラスコ13本に入れ、
12１℃で20分間加熱滅菌した。この培地を室温で23℃に
冷却した後、上記のペニシリウム トーミ（Penicillium
thomii）ＳＡＮＫ１０８９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６７
４１）種培養液5mlを接種し、回転振盪培養機で、210rp
m、23℃で７日間培養した。

【００７１】（Ｂ）化合物IIIの単離 得られた培養液0.5Lにろ過助剤としてセライト５４５
（ジョンズ マンビル プロダクト コーポレーション
製）２５ｇを加えてろ紙ろ過をして得た菌体を、80%ア
セトン水３００ｍｌに懸濁し、30分間攪拌後、ろ紙ろ過
を行ないアセトン抽出液を得た。減圧下濃縮後、蒸留水
を加え１００ｍｌとし、50mlのダイヤイオンHP-20カラ
ムに供与した。２００ｍｌの蒸留水でカラムを洗浄後、
２００ｍｌの50%アセトン水で溶出して、５０ｍｌづつ
分画をした。画分No.１〜２を集めてを減圧下濃縮して
５０ｍｌとして、20mlのダウエックス50Ｗ×4（H⁺）の
カラムに供与した。１００ｍｌの蒸留水でカラムを洗浄
後、0.5規定アンモニア水で吸着画分を溶出した。活性
画分50mlを減圧下濃縮乾固して化合物IIIを含む粗粉末1
60mgを得た。

【００７２】次に、この粗粉末を４mlの25％メタノール
-水で溶解した。この溶液を1mlずつ4回に分けて以下の
操作を行った。あらかじめ20％メタノール-水で平衡化
したＨＰＬＣカラム（センシュウパックODS ペガシル 2
0φ×150mm）に該溶液(1ml)を注入した。20％メタノー
ル-水を移動相として、流速６ml/分で溶出し、保持時間
10.8〜12分の溶出液を集めた。４回のＨＰＬＣ分取によ
り得た溶出液を合わせて減圧下濃縮後、凍結乾燥して化
合物IIIの白色粉末３.７ｍｇを得た。 試験例1.ミエロペルオキシダーゼ活性測定。

【００７３】ミエロペルオキシダーゼ活性は以下の方法
により測定した。

【００７４】ヒト・ミエロペルオキシダーゼをリン酸ナ
トリウムバッファー中で過酸化水素、グアイアコールと
反応させるとグアイアコールラジカルが生じ、直ちに重
合してテトラグアイアコールが生成する。生成したテト
ラグアイアコールは470nm付近に吸収極大を示すので、4
70nmの吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定する
ことによりミエロペルオキシダーゼ活性を測定した（Kl
ebanoffら、Methodsin Enzymology、105巻、399頁、198
4年）。

【００７５】反応は96穴マイクロプレートを用いて行な
った。

【００７６】1アッセイの反応液の組成は以下に示すと
おりであり、ヒト・ミエロペルオキシダーゼを最後に添
加し、添加後よく攪拌して反応を開始した。１アッセイの反応液の組成 100mM リン酸ナトリウムバッファー(pH 7.0) 10μl 3mM 過酸化水素溶液 10μl 300μM グアイアコール(シグマ社製) 10μl 被検物質のメタノール溶液 5μl 蒸留水 60μl 2.5μg/ml ヒト・ミエロペルオキシダーゼ 5μl (コスモ・バイオ社製) 総容量 100μl 反応は室温で行ない、マイクロプレートリーダーで470n
mの吸光度を5分間、連続測定し、１分あたりの吸光度の
平均増加を算出して、これをミエロペルオキシダーゼ活
性とした。

【００７７】化合物I、化合物IIおよび化合物IIIの阻害
活性は、反応液にメタノールに溶解した各種濃度の化合
物I、化合物IIおよび化合物IIIを共存させて反応を行な
い、阻害剤を含まないメタノールのみを添加した対照の
酵素活性を100％として阻害率を求め、さらに、５０％
阻害濃度(IC₅₀値)を算出して求めた。

【００７８】その結果、前記アッセイ法における化合物
I、化合物IIおよび化合物IIIのヒト・ミエロペルオキシ
ダーゼに対するIC₅₀値は、それぞれ99ng/ml、60ng/mlお
よび97ng/mlであった。 上記処方の粉末を混合し、60メッシュのふるいを通した
後、この粉末を250mgの3号ゼラチンカプセルに入れ、カ
プセル剤とする。 上記処方の粉末を混合し、トウモロコシデンプン糊を用
いて湿式造粒、乾燥した後、打錠機により打錠して、1
錠200mgの錠剤とする。この錠剤は必要に応じて糖衣を
施すことができる。

【００７９】

【発明の効果】本発明の化合物I、化合物IIおよび化合
物IIIはミエロペルオキシダーゼに対し強い阻害活性を
有していることから、優れた抗動脈硬化剤等として有用
である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ Ｃ１２Ｐ 13/02 Ｃ１２Ｐ 13/02 13/04 13/04 // Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 (Ｃ１２Ｎ 1/14 (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:80） Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｐ 13/02 (Ｃ１２Ｐ 13/02 Ｃ１２Ｒ 1:80） Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｐ 13/04 (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:80） Ｃ１２Ｒ 1:80）

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式（I）で表される化合物又はその薬
   理上許容される誘導体又はその薬理上許容される塩。 【化１】
2. 【請求項２】下記式（II）で表される化合物又はその薬
   理上許容される誘導体又はその薬理上許容される塩。 【化２】
3. 【請求項３】下記式（III）で表される化合物又はその
   薬理上許容される誘導体又はその薬理上許容される塩。 【化３】
4. 【請求項４】ペニシリウム（Penicillium）属に属す
   る、請求項１に記載の化合物の生産菌を培養する工程を
   含むことを特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方
   法。
5. 【請求項５】ペニシリウム・レイストリッキ（Penicill
   ium raistrickii）ＳＡＮＫ １０９９９株を培養する
   工程を含むことを特徴とする請求項１に記載の化合物の
   製造方法。
6. 【請求項６】ペニシリウム・レイストリッキ（Penicill
   ium raistrickii）ＳＡＮＫ １０９９９株（ＦＥＲＭ-
   ＢＰ６７４２）。
7. 【請求項７】ペニシリウム（Penicillium）属に属す
   る、請求項２又は請求項３記載の化合物の生産菌を培養
   する工程を含むことを特徴とする、請求項２又は請求項
   ３に記載の化合物の製造方法。
8. 【請求項８】ペニシリウム・トーミ（Penicillium thom
   ii）ＳＡＮＫ１０８９９株を培養する工程を含むことを
   特徴とする、請求項２又は請求項３に記載の化合物の製
   造方法。
9. 【請求項９】ペニシリウム・トーミ（Penicillium thom
   ii）ＳＡＮＫ１０８９９株（ＦＥＲＭ-ＢＰ６７４
   １）。
10. 【請求項１０】請求項１乃至３のいずれか１項に記載の
    化合物を有効成分として含有する医薬。
11. 【請求項１１】請求項１乃至３のいずれか１項に記載の
    化合物を有効成分として含有する抗動脈硬化剤。