KR20170115071A - 병용 요법을 위한 약제학적 조성물 - Google Patents

병용 요법을 위한 약제학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20170115071A
KR20170115071A KR1020177024607A KR20177024607A KR20170115071A KR 20170115071 A KR20170115071 A KR 20170115071A KR 1020177024607 A KR1020177024607 A KR 1020177024607A KR 20177024607 A KR20177024607 A KR 20177024607A KR 20170115071 A KR20170115071 A KR 20170115071A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ppar
compound
agonist
alpha
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
KR1020177024607A
Other languages
English (en)
Inventor
마크 프루잔스키
루치아노 아도리니
Original Assignee
인터셉트 파마슈티컬즈, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=56564878&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20170115071(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 인터셉트 파마슈티컬즈, 인크. filed Critical 인터셉트 파마슈티컬즈, 인크.
Publication of KR20170115071A publication Critical patent/KR20170115071A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/451—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. glutethimide, meperidine, loperamide, phencyclidine, piminodine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Abstract

본 발명은 FXR 효능제와 적어도 하나의 지질 저하제(예를 들어, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, 및/또는 스타틴)의 병용물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 또한, FXR 매개 질병 또는 질환, 예컨대 원발성 담즙성 간경변(PBC), 원발성 경화성 담관염(PSC), 문맥 고혈압, 담즙산 설사, NAFLD(비알코올성 지방간 질병), NASH(비알코올성-유발 지방성 간염), 및 다른 만성 간 질병의 치료 또는 예방을 위한 병용물의 용도가 개시된다. 본 발명의 병용물은 상승된 지질 및 간 효소 수준과 관련된 질환의 치료 또는 예방에 유용하다. 본 발명은 또한 약제학적 병용물을 포함하는 팩 또는 키트에 관한 것이다.

Description

병용 요법을 위한 약제학적 조성물
혈액 중의 순환 지질 화합물, 예컨대 콜레스테롤 및 트리글리세리드의 상승된 농도는 다수의 질환을 동반한다. 이들은 II형 당뇨병, 원발성 담즙성 간경변(PBC), 원발성 경화성 담관염(PSC), 다양한 만성 간염 상태(B형 및 C형 간염), NASH(비알코올성 지방성 간염), 및 동맥 질병(이에는 관상 동맥 질병, 뇌혈관 동맥 질병, 말초 혈관 질병, 대동맥 동맥류 및 경동맥 죽상경화성 질환이 포함됨)을 포함한다. 고지질혈증 상태를 동반하는 혈관 사건(예컨대, 심부전, 색전증, 심장 발작 및 뇌졸중)을 치료 및 예방하기 위해 과거에 다양한 지질-저하 기법이 사용되어 왔다. 그러한 치료는 식이 변경, 및 혈액 중에서 순환하는 고 트리글리세리드 및 콜레스테롤 수준의 제어를 포함하였다. 후자는 일반적으로 약리학적으로 그리고 최근에는 다양한 "스타틴(statin)"으로 치료해 왔다. 상승된 지질 수준으로 인한 질환의 치료에 사용되는 치료제 중에는 다양한 피브루산 유도체가 포함된다. 클로피브레이트를 포함한 일부 오래된 피브르산 유도체가 상승된 지질과 연관된 질환의 치료에 사용되어 왔지만, 더 최근에는, 페노피브레이트, 겜피브로질, 시프로피브레이트를 포함한 새로운 피브레이트, 그리고 더욱 더 최근에는 피페리딘, 4-하이드록시피페리딘, 피페리딘-3-엔, 및 피페라진을 함유하는 피브레이트가 항지질 치료제의 대열에 합류하게 되었다. 이들 더 새로운 분자는 콜레스테롤 및 트리글리세리드 둘 모두를 감소시키는 데 있어서 유망한 특성을 갖는다. 그러나, 일부 상황에서는, 피브르산 유도체만으로는 많은 환자에서 존재하는 중도 수준의 고지질혈증을 제어하는 데 불충분하다. 피브르산 유도체의 부작용(side effect) 프로파일은 또한, 이를 테면 병용 요법의 존재 하에서와 같이, 용량의 감소로부터 개선될 수 있다.
따라서, 콜레스테롤 및 트리글리세리드와 같은, 혈액 중의 순환 지질 화합물의 상승된 농도를 수반하는 질환의 치료를 위한 개선된 요법에 대한 필요성이 있다.
도 1a는 가성(sham) BDL 마우스로부터의 시리우스-레드(Sirius-red) 염색 간 절편(liver section)의 대표적인 현미경 사진이다.
도 1b는 BDL-비히클 처리된 마우스로부터의 시리우스-레드 염색 간 절편의 대표적인 현미경 사진이다.
도 1c는 BDL-OCA 처리된 마우스로부터의 시리우스-레드 염색 간 절편의 대표적인 현미경 사진이다.
도 1d는 BDL-아토르바스타틴 처리된 마우스로부터의 시리우스-레드 염색 간 절편의 대표적인 현미경 사진이다.
도 1e는 BDL-OCA-아토르바스타틴 처리된 마우스로부터의 시리우스-레드 염색 간 절편의 대표적인 현미경 사진이다.
도 2는 OCA 및 아토르바스타틴을 단독으로 또는 병용하여 처리한 BDL 마우스에서의 시리우스-레드 양성 면적(%)을 나타낸 막대 그래프이다.
도 3a는 APOE*3Leiden.CETP 마우스에서 OCA, 저용량 페노피브레이트 단독으로의 그리고 병용으로의 처리로부터의 염증 세포 병소의 수를 나타낸 막대 그래프이다.
도 3b는 APOE*3Leiden.CETP 마우스에서 OCA, 고용량 페노피브레이트 단독으로의 그리고 병용으로의 처리로부터의 염증 세포 병소의 수를 나타낸 막대 그래프이다.
도 4는 렙틴-ob/ob 마우스에서의 섬유증 단계에 대한 OCA 및 아토르바스타틴 단독으로의 그리고 병용 시의 효과를 나타낸 막대 그래프이다.
도 5a는 OCA 및 아토르바스타틴을 단독으로 또는 병용하여 처리한 렙틴-ob/ob 마우스에서의 혈장 트리글리세리드의 수준을 나타낸 막대 그래프이다.
도 5b는 OCA 및 아토르바스타틴을 단독으로 또는 병용하여 처리한 렙틴-ob/ob 마우스에서의 기저선으로부터의 혈장 트리글리세리드의 수준의 변화를 나타낸 막대 그래프이다.
도 6a는 HFC 지속 APOE*3Leiden.CETP 마우스와 대비하여 HFC + OCA의 표준 경로의 부화(enrichment) 분석을 나타낸 막대 그래프이다.
도 6b는 HFC 지속 APOE*3Leiden.CETP 마우스와 대비하여 HFC + OCA + 저용량 페노피브레이트의 표준 경로의 부화 분석을 나타낸 막대 그래프이다.
도 7a는 APOE*3Leiden.CETP 마우스에서의 단제요법 대비 OCA + 저용량 페노피브레이트의 병용물에 의해 조절된 신규한 차별적으로 발현된 유전자의 수를 나타낸 벤(Venn) 다이어그램이다.
도 7b는 APOE*3Leiden.CETP 마우스에서의 단제요법 대비 OCA + 저용량 페노피브레이트의 병용물에 의해 조절된 유전자의 경로 부화를 나타낸 막대 그래프이다.
도 8은 인간에서 LDL 콜레스테롤에 대한 OCA, 및 스타틴(들) 병용물의 효과를 나타낸 그래프이다.
발명의 개요
본 출원은 (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, 및 (iii) 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 피브레이트, 및 선택적으로 (iii) 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 지질 저하제, 및 선택적으로 (iii) 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 (iii) 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, (iii) 적어도 하나의 지질 저하제, 및 선택적으로 (iv) 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 피브레이트, (iii) 적어도 하나의 지질 저하제, 및 선택적으로 (iv) 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, (iii) 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 (iv) 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (i) 제1 화합물, (ii) 적어도 하나의 피브레이트, (iii) 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 (iv) 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 용도에 관한 것이다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이다:
[화학식 A]
Figure pct00001
(상기 식에서, R1, R2, R4, R7, 및 X는 본 명세서에 정의된 바와 같음).
본 발명은 또한 FXR 매개 질병 또는 질환, 또는 혈액 중의 순환 지질 화합물의 상승된 농도가 관여하는 질병 또는 질환을 치료 또는 예방하거나, 간 효소의 수준을 감소시키거나, 섬유증을 억제 또는 역전시키는 방법에 관한 것으로, 본 방법은 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 FXR 매개 질병 또는 질환, 또는 혈액 중의 순환 지질 화합물의 상승된 농도가 관여하는 질병 또는 질환을 치료 또는 예방하거나, 간 효소의 수준을 감소시키거나, 섬유증을 억제 또는 역전시키기 위한 본 발명의 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 FXR 매개 질병 또는 질환, 또는 혈액 중의 순환 지질 화합물의 상승된 농도가 관여하는 질병 또는 질환을 치료 또는 예방하거나, 간 효소의 수준을 감소시키거나, 섬유증을 억제 또는 역전시키기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 조성물 및 방법은 콜레스테롤 및 트리글리세리드와 같은, 혈액 중의 순환 지질 화합물의 상승된 농도가 관여하는 질병 또는 장애의 치료 또는 예방에 있어서 충족되지 않은 요구를 해결한다.
발명의 상세한 설명
본 출원은 제1 화합물, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-델타 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제 및 적어도 하나의 PPAR-델타 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제 및 적어도 하나의 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-델타 효능제 및 적어도 하나의 PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, 적어도 하나의 PPAR-델타 효능제, 및 적어도 하나의 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제를 포함한다. 하나의 예에서, PPAR-알파 효능제는 피브레이트, 예컨대 본 명세서에 기재된 피브레이트이다. 하나의 예에서, PPAR-델타 효능제는 {4-[({4-메틸-2-[4-(트리플루오로메틸)페닐]-1,3-티아졸-5-일}메틸)설파닐]-2-메틸페녹시}아세트산(GW501516, GW1516 및 "엔두라볼(Endurabol)"로도 알려짐), {2-메틸-4-[5-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-2H-[1,2,3]트리아졸-4-일메틸실파닐]-페녹시}-아세트산, 또는 [4-[[[2-[3-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐]-4-메틸-5-티아졸릴]메틸]티오]-2-메틸 페녹시]-아세트산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산(GFT505로도 알려짐)이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 및 감마 이중 효능제는 알레글리타자르(aleglitazar) ((2S)-2-메톡시-3-[4-[2-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸릴)에톡시]-7-벤조티오페닐]프로판산), 무라글리타자르(muraglitazar)(N-[(4-메톡시페녹시)카르보닐]-N-{4-[2-(5-메틸-2-페닐-1,3-옥사졸-4-일)에톡시]벤질}글리신), 테사글리타자르(tesaglitazar)((2S)-2-에톡시-3-[4-[2-(4-메틸설포닐옥시페닐)에톡시]페닐]프로판산), 또는 사로글리타자르(saroglitazar)((2S)-2-에톡시-3-[4-(2-{2-메틸-5-[4-(메틸설파닐)페닐]-1H-피롤-1-일}에톡시)페닐]프로판산), 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다.
본 출원은 또한, 제1 화합물, 적어도 하나의 피브레이트, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다. FXR 효능제는 임의의 FXR 효능제일 수 있다. 피브레이트는 임의의 피브레이트일 수 있다. 하나의 예에서, 피브레이트는 본 명세서에 기재된 임의의 피브레이트로부터 선택된다.
본 출원은 또한, 제1 화합물, 적어도 하나의 지질 저하제, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다. FXR 효능제는 임의의 FXR 효능제일 수 있다. 지질 저하제는 임의의 지질 저하제일 수 있다. 하나의 예에서, 지질 저하제는 본 명세서에 기재된 임의의 지질 저하제로부터 선택된다.
본 출원은 또한, 제1 화합물, 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다. FXR 효능제는 임의의 FXR 효능제일 수 있다. 스타틴은 임의의 스타틴일 수 있다. 하나의 예에서, 스타틴은 본 명세서에 기재된 임의의 스타틴으로부터 선택된다.
본 출원은 또한, 제1 화합물, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 적어도 하나의 지질 저하제, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 출원은 또한, 제1 화합물, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 제1 화합물은 FXR 효능제인, 약제학적 조성물에 관한 것이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 효능제는 피브레이트, 예컨대 본 명세서에 기재된 피브레이트이다. 하나의 예에서, PPAR-델타 효능제는 {4-[({4-메틸-2-[4-(트리플루오로메틸)페닐]-1,3-티아졸-5-일}메틸)설파닐]-2-메틸페녹시}아세트산, {2-메틸-4-[5-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-2H-[1,2,3]트리아졸-4-일메틸실파닐]-페녹시}-아세트산, 또는 [4-[[[2-[3-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐]-4-메틸-5-티아졸릴]메틸]티오]-2-메틸 페녹시]-아세트산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 및 감마 이중 효능제는 알레글리타자르, 무라글리타자르, 테사글리타자르, 또는 사로글리타자르, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다. 하나의 예에서, 지질 저하제는 본 명세서에 기재된 임의의 지질 저하제로부터 선택된다. 하나의 예에서, 스타틴은 본 명세서에 기재된 임의의 스타틴으로부터 선택된다.
하나의 예에서, 약제학적 조성물의 제1 화합물은 화학식 A의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이다:
[화학식 A]
Figure pct00002
(상기 식에서,
R1은 수소 또는 비치환된 C1-C6 알킬이고;
R2는 수소 또는 α-하이드록실이고;
X는 C(O)OH, C(O)NH(CH2)mSO3H, C(O)NH(CH2)nCO2H 또는 OSO3H이고;
R4는 하이드록실 또는 수소이고;
R7은 하이드록실 또는 수소이고;
m은 1, 2, 또는 3이고;
n은 1, 2, 또는 3임).
추가의 예에서, 약제학적 조성물의 제1 화합물은 화학식 I 및 화학식 IA, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체로부터 선택된다:
[화학식 I]
Figure pct00003
및
[화학식 IA]
Figure pct00004
(상기 식에서,
R1A는 수소 또는 비치환된 C1-C6 알킬이고;
R2는 수소 또는 α-하이드록실이고;
R4는 하이드록실 또는 수소이고;
R7은 하이드록실 또는 수소임).
일 양태에서, 제1 화합물은 약제학적으로 허용되는 염이다. 일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 I 또는 화학식 IA의 나트륨 염이다. 또 다른 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 I 또는 화학식 IA의 화합물의 암모늄 염이다. 또 다른 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 I 또는 화학식 IA의 화합물의 트리에틸암모늄 염이다.
또 다른 예에서, 약제학적 조성물의 제1 화합물은 화학식 II 및 화학식 IIA, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체부터 선택된다:
[화학식 II]
Figure pct00005
및
[화학식 IIA]
Figure pct00006
(상기 식에서,
R1A는 수소 또는 비치환된 C1-C6 알킬이고;
R2는 수소 또는 α-하이드록실이고;
R3은 하이드록실, NH(CH2)mSO3H, 또는 NH(CH2)nCO2H이고;
R4는 하이드록실 또는 수소이고;
R7은 하이드록실 또는 수소이고;
m은 1, 2, 또는 3이고;
n은 1, 2, 또는 3임).
하나의 예에서, 조성물은 R2가 수소인 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 R1이 비치환된 C1-C6 알킬인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 R1이 비치환된 C1-C3 알킬인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 R1이 메틸, 에틸, 및 프로필로부터 선택되는 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 R1이 에틸인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 R1A가 비치환된 C1-C6 알킬인 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 R1A가 비치환된 C1-C3 알킬인 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 R1A가 메틸, 에틸, 및 프로필로부터 선택되는 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 R1A가 에틸인 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 X가 C(O)OH, C(O)NH(CH2)mSO3H, 및 C(O)NH(CH2)nCO2H로부터 선택되는 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 X가 C(O)OH, C(O)NH(CH2)SO3H, C(O)NH(CH2)CO2H, C(O)NH(CH2)2SO3H, C(O)NH(CH2)2CO2H로부터 선택되는 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 X가 C(O)OH인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 X가 OSC3H인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 제1 화합물이 약제학적으로 허용되는 염인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 염은 임의의 염일 수 있다. 일 양태에서, 조성물은 X가 OSO3 -Na+인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 X가 OSO3 -NHEt3 +인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 아미노산 접합체는 글리신 접합체이다. 일 양태에서, 아미노산 접합체는 타우린 접합체이다.
또 다른 예에서, 조성물은 R3이 OH, H(CH2)SO3H, H(CH2)CO2H, H(CH2)2SO3H, 및 H(CH2)2CO2H로부터 선택되는 화학식 II 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다. 일 양태에서, 조성물은 R3이 OH인 화학식 II 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 R4가 하이드록실이고, R7이 수소인 화학식 A, 화학식 I, 또는 화학식 II의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 R1이 메틸, 에틸 및 프로필로부터 선택되고, R4가 OH이고, R7이 H이고, R2가 H인 화학식 A의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 R1A가 메틸, 에틸 및 프로필로부터 선택되고, R4가 OH이고, R7이 H이고, R2가 H인 화학식 I 또는 화학식 II의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 R1A가 메틸, 에틸 및 프로필로부터 선택되고, R2가 H인 화학식 IA 또는 화학식 IIA의 제1 화합물을 포함한다.
추가의 예에서, 조성물은 하기로부터 선택되는 제1 화합물:
[화학식 1]
Figure pct00007
및
[화학식 2]
Figure pct00008
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체를 포함한다.
또 다른 추가의 예에서, 조성물은 하기로부터 선택되는 약제학적으로 허용되는 염인 제1 화합물을 포함한다:
[화학식 3]
Figure pct00009
및
[화학식 4]
Figure pct00010
화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 및 화학식 IIA의 화합물은 화학식 A의 화합물의 하위세트이다. 화학식 A의 화합물에 대해 본 명세서에 기재된 특징은 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 및 화학식 IIA의 화합물에도 동일하게 적용된다. 본 출원은 또한 약제학적 조성물, 팩 또는 키트, 및 조합물의 치료적 용도를 기재한다.
본 발명에 의해 해결하고자 하는 문제들 중 하나는 콜레스테롤 및 트리글리세리드와 같은, 혈액 중의 순환 지질 화합물의 상승된 농도와 관련된 질환, 예를 들어 담즙정체성 간 질환, 예컨대 PBC의 치료 또는 예방을 위하는 것뿐만 아니라, 혈액 중의 순환 지질 화합물(예를 들어, 콜레스테롤, LDL, 및 트리글리세리드)을 감소시키기 위한, 그리고 빌리루빈 및/또는 간 효소, 예컨대 알칼리성 포스파타제(ALP, AP, 또는 Alk Phos), 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST), 감마-글루타밀 트랜스펩티다제(GGT), 락테이트 데하이드로게나제(LDH), 및 5' 뉴클레오티다제를 감소시키기 위한 병용 요법의 확인이다. 상승된 지질 수준 및/또는 간 효소 수준과 관련된 질환을 위한 약물이 입수가능하기는 하지만, 이들 약물은 다양한 이유로 종종 많은 환자에 대해 적합하지 않다. 예를 들어, 특정의 약물은, 예를 들어 우르소데옥시콜산에 대해 약물 저항성을 발생시킨 환자에게 효과적이지 않다. 또 다른 예로서, 많은 스타틴 약물은 근육 문제, 인지 손실, 신경병증, 췌장 및 간 기능이상, 및 성 기능이상과 같은 유해 효과를 갖는다. 일부 약물은 단독으로 투여되는 경우 치료에 불충분할 수 있다. 예를 들어, 일부 상황에서, 한 가지 지질 저하제 단독으로는 많은 환자에 존재하는 중증 수준의 고지질혈증을 제어하는 데 있어서 불충분하다. 일부 약물은, 불활성이거나 덜 강력한 대사물로의 광범위한 대사로 인해, 고용량의 투여, 또는 더 빈번한 투여를 필요로 할 수 있다. 본 명세서에 기재된 병용 요법은 상기에 언급된 문제를 해결할 수 있고, 예를 들어 상승효과, 약물의 효능 손실 없이 일일 투여 횟수의 감소, 상승된 지질 수준이 PBC에서의 요법에 저항성을 나타내는 환자에서 지질(콜레스테롤 및 트리글리세리드 둘 모두) 저하, 개선된 효력, 선택성, 조직 침투, 반감기, 및/또는 대사 안정성 중 한 가지 이상의 이점을 가질 수 있다.
본 발명의 조성물, 팩 또는 키트, 방법 및 용도에서, 제1 화합물은 유리산일 수 있거나 약제학적으로 허용되는 염 아미노산 접합체(예를 들어, 글리신 또는 타우린 접합체)일 수 있다. 일 양태에서, 제1 화합물은 임의의 FXR 효능제이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 화학식 I 또는 화학식 IA의 화합물이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 화학식 IA의 화합물이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 화학식 II 또는 화학식 IIA의 화합물이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 화학식 IIA의 화합물이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 오베티콜산(화합물 1)이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 화합물 2이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 약제학적으로 허용되는 염인 화합물 3이다. 일 양태에서, 제1 화합물은 약제학적으로 허용되는 염인 화합물 4이다.
본 발명의 조성물, 팩 또는 키트, 방법 및 용도에서, 피브레이트는 임의의 피브레이트일 수 있다. 일 양태에서, 피브레이트는 페노피브레이트, 베자피브레이트, 베클로브레이트, 비니피브레이트, 시프로피브레이트, 클리노피브레이트, 클로피브레이트, 클로피브르산, 에토피브레이트, 겜피브로질, 니코피브레이트, 피리피브레이트, 로니피브레이트, 심피브레이트, 테오피브레이트, 토코피브레이트, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 에스테르, 및 유럽 특허 출원 공개 EP0607536에 개시된 바와 같은 2-페녹시-2-메틸프로판산의 유도체(여기서는, 페녹시 모이어티가, 피페리딘, 4-하이드록시피페리딘, 피페리드-3-엔 또는 피페라진의 선택적으로 치환된 잔기로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 양태에서, 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 페노피브레이트, 겜피브로질, 비니피브레이트, 클리노피브레이트, 클로피브르산, 니코피브레이트, 피리피브레이트, 플라피브라이드, 로니피브레이트, 테오피브레이트, 토코피브레이트, 플라피브라이드, 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 에스테르, 및 유럽 특허 출원 공개 EP0607536에 개시된 바와 같은 2-페녹시-2-메틸프로판산의 유도체(여기서는, 페녹시 모이어티가, 피페리딘, 4-하이드록시피페리딘, 피페리드-3-엔 또는 피페라진의 선택적으로 치환된 잔기로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 후자의 물질 그룹의 예는 2-[3-[1-(4-플루오로벤조일)피페리딘-4-일]페녹시-2-메틸-프로판산이다. 예를 들어, 피브레이트는 베자피브레이트, 페노피브레이트, 겜피브로질, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 클로피브르산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르이다. 예를 들어, 피브레이트는 페노피브레이트, 또는 하기로부터 선택되는 약제학적으로 허용되는 염이다: 콜린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 칼슘, 및 트로메타민. 예를 들어, 피브레이트는 클로피브레이트 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르, 예컨대 에토피브레이트 또는 알루미늄 클로피브레이트이다. 예를 들어, 피브레이트는 베자피브레이트이다. 예를 들어, 피브레이트는 2-페녹시-2-메틸프로판산의 유도체, 예컨대 2-[3-[1-(4-플루오로벤조일)-피페리딘-4-일]페녹실-2-메틸프로판산이다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 유리산이고, 적어도 하나의 피브레이트는 베자피브레이트, 페노피브레이트, 겜피브로질, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염이고, 적어도 하나의 피브레이트는 베자피브레이트, 페노피브레이트, 겜피브로질, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 글리신 접합체이고, 적어도 하나의 피브레이트는 베자피브레이트, 페노피브레이트, 겜피브로질, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 타우린 접합체이고, 적어도 하나의 피브레이트는 베자피브레이트, 페노피브레이트, 겜피브로질, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이고, 적어도 하나의 피브레이트는 2-[3-[1-(4-플루오로벤조일)-피페리딘-4-일]페녹실-2-메틸프로판산이다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이고, 적어도 하나의 PPAR-델타 효능제는 {4-[({4-메틸-2-[4-(트리플루오로메틸)페닐]-1,3-티아졸-5-일}메틸)설파닐]-2-메틸페녹시} 아세트산, {2-메틸-4-[5-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-2H-[1,2,3]트리아졸-4-일메틸실파닐]-페녹시}-아세트산, 또는 [4-[[[2-[3-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐]-4-메틸-5-티아졸릴]메틸]티오]-2-메틸 페녹시]-아세트산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이고, 적어도 하나의 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산이다. 일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이고, 적어도 하나의 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제는 알레글리타자르, 무라글리타자르, 테사글리타자르, 또는 사로글리타자르, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다. 하나의 예에서, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다.
본 발명의 조성물, 팩 또는 키트, 방법 및 용도에서, 스타틴은 임의의 스타틴일 수 있다. 일 양태에서, 스타틴은 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바스타틴, 리바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 플루인도스타틴, 벨로스타틴, 달바스타틴, 로수바스타틴, 디하이드로컴팩틴, 및 컴팩틴으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 유리산이고, 적어도 하나의 스타틴은 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바스타틴, 리바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 플루인도스타틴, 벨로스타틴, 달바스타틴, 로수바스타틴, 디하이드로컴팩틴, 및 컴팩틴으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염이고, 적어도 하나의 스타틴은 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바스타틴, 리바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 플루인도스타틴, 벨로스타틴, 달바스타틴, 로수바스타틴, 디하이드로컴팩틴, 및 컴팩틴으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 글리신 접합체이고, 적어도 하나의 스타틴은 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바스타틴, 리바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 플루인도스타틴, 벨로스타틴, 달바스타틴, 로수바스타틴, 디하이드로컴팩틴, 및 컴팩틴으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 화학식 A의 화합물의 타우린 접합체이고, 적어도 하나의 스타틴은 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바스타틴, 리바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 플루인도스타틴, 벨로스타틴, 달바스타틴, 로수바스타틴, 디하이드로컴팩틴, 및 컴팩틴으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 동위원소 표지 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체를 포함하는데, 이는, 하나 이상의 원자가 자연 상태에서 가장 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된다는 사실을 제외하고는, 본 발명의 제1 화합물(예를 들어, 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 화합물)의 구조와 동일한 구조를 갖는다. 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예에는 수소, 탄소, 질소, 불소의 동위원소, 예컨대 3H, 11C, 14C 및 18F가 포함된다.
상기 언급된 동위원소 및/또는 기타 다른 원자의 기타 다른 동위원소를 함유하는 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체는 본 발명의 범주 내에 속한다. 동위원소 표지 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체, 예를 들어 방사성 동위원소, 예컨대 3H 및/또는 14C가 혼입된 제1 화합물이 약물 및/또는 기질 조직 분포 검정에 유용하다. 삼중수소, 즉 3H, 및 탄소-14, 즉 14C 동위원소가 그들의 제조 용이성 및 검출능(detectability)으로 인해 사용된다. 또한, 중수소, 즉 2H와 같은 더 무거운 동위원소로의 치환은, 더 큰 대사 안정성에서 생기는 소정의 치료적 이점, 예를 들어 증가된 생체내(in vivo) 반감기 또는 감소된 투여량 요건을 제공할 수 있으며, 이에 따라 일부 상황에서 사용될 수 있다. 동위원소 표지 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체는, 본 발명의 반응식에 그리고/또는 실시예에 개시된 절차를 수행하여, 동위원소 비표지 시약 대신에, 용이하게 이용가능한 동위원소 표지 시약을 사용함으로써 일반적으로 제조될 수 있다. 일 구현예에서, 오베티콜산, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체는 동위원소 비표지된다.
본 발명은 또한 질병 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공하며, 본 방법은 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 질병 또는 질환은 FXR 매개 질병 또는 질환이다. FXR 매개 질병 또는 질환의 예에는 간 질병(담즙정체성 및 비담즙정체성 간 질병을 포함함), 예컨대 원발성 담즙성 간경변(PBC), 원발성 경화성 담관염(PSC), 담관 폐쇄증, 문맥 고혈압, 담즙산 설사, 만성 간 질병, 비알코올성 지방간 질병(NAFLD), 비알코올성 지방성 간염(NASH), C형 간염 감염, 알코올성 간 질병, 진행성 섬유증으로 인한 간 손상, 및 간 섬유증이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. FXR 매개 질병의 예에는 또한 고지질혈증, 고 LDL-콜레스테롤, 고 HDL-콜레스테롤, 고 트리글리세리드, 및 심혈관 질병이 포함된다.
NAFLD는 간에서의 지방의 축적(지방 침윤으로 불림)을 특징으로 하는 의학적 질환이다. NAFLD는 만성 간 질병의 가장 일반적인 원인들 중 하나이고, 간세포에서의 지질 침착과 연관된 광범위한 질환을 포함한다. 이는 지방증(단순 지방 간)으로부터 비알코올성 지방성 간염(NASH)에 이어, 진행된(advanced) 섬유증 및 경변증에까지 이른다. 이러한 질병은 대개 조용히 진행되며, 우연히 상승된 간 효소 수준을 통해 종종 발견된다. NAFLD는 비만 및 인슐린 저항성과 강하게 연관되어 있으며, 현재 대사 증후군의 간성 성분(hepatic component)으로서 주로 여겨진다.
비알코올성 지방성 간염(NASH)은 간에서 지방 및 섬유질(반흔) 조직의 염증 및 축적을 야기하는 질환이다. 혈액 중에서의 간 효소 수준은 비알코올성 지방 간(NAFL)에서 관찰되는 경미한 상승보다 더 상승될 수 있다. 유사한 질환이 알코올을 남용하는 사람들에서 발생될 수 있기는 하지만, NASH는 알코올을 거의 또는 전혀 마시지 않는 사람들에서 발생된다. NASH는 미국인의 2% 내지 5%가 이환되어 있으며, 가장 빈번하게는 하기 질환들 중 하나 이상을 갖는 사람들에게서 보여진다: 비만, 당뇨병, 고지질혈증, 인슐린 저항성, 소정의 의약의 사용, 및 독소에 대한 노출. NASH는 전세계적으로 만성 간 질병의 일반적인 원인으로서 점점 더 증가하고 있으며, 심지어 경변증의 부재 하에서도, 증가된 간-관련 사망률 및 간세포 암종과 연관되어 있다. NASH는 이환된 개인들 중 15% 내지 20%가 경변증으로 진행되고 있으며, 이제 미국에서 간 이식을 위한 선두 적응증들 중 하나이다. 현재, NASH에 대한 승인된 요법은 없다.
일 구현예에서, 질병 또는 질환은 고지질혈증이다. 일 구현예에서, 질병 또는 질환은 담즙정체성 간 질병이다. 일 구현예에서, 질병 또는 질환은 PBC이다. 또 다른 구현예에서, 질병 또는 질환은 심혈관 질병이다. 또 다른 구현예에서, 심혈관 질병은 죽상경화증, 고콜레스테롤혈증, 또는 고트리글리세리드혈증이다.
본 발명은 또한 NAFLD 또는 NASH를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 고지질혈증과 연관된 NAFLD 또는 NASH를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 NASH를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 고지질혈증과 연관된 NASH를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 섬유증을 억제 또는 역전시키는 방법을 제공하며, 본 방법은 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 대상체는 담즙정체성 질환을 앓고 있지 않다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 담즙정체성 질환을 앓고 있다.
일 구현예에서, 대상체는 원발성 간 및 담관 암(간세포 암종을 포함함), 결직장 암, 전이성 암, 패혈증, 만성 완전 비경구 영양(chronic total parenteral nutrition), 낭포성 섬유증, 및 육아종 간 질병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질병 또는 질환과 연관된 담즙정체성 질환을 앓고 있지 않다. 구현예에서, 억제 또는 역전시키고자 하는 섬유증은 FXR이 발현되는 기관에서 발생한다.
일 구현예에서, 담즙정체성 질환은 비정상적으로 상승된 혈청 수준의 알칼리성 포스파타제, γ-글루타밀 트랜스펩티다제(GGT), 및/또는 5' 뉴클레오티다제를 갖는 것으로 정의된다. 또 다른 구현예에서, 담즙정체성 질환은 적어도 하나의 임상 증상을 제시하는 것으로 추가로 정의된다. 일 구현예에서, 증상은 가려움증(소양증)이다. 또 다른 구현예에서, 담즙정체성 질환은 원발성 담즙성 간경변(PBC), 원발성 경화성 담관염(PBS), 약물-유도 담즙정체, 유전성 담즙정체, 담관 폐쇄증, 및 임신의 간내 담즙정체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 섬유증은 간 섬유증, 신장 섬유증, 및 장 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 대상체는 B형 간염; C형 간염; 기생 간 질병; 이식 후 세균, 바이러스 및 진균 감염; 알코올성 간 질병(ALD); 비알코올성 지방 간 질병(NAFLD); 비알코올성 지방성 간염(NASH); 메토트렉세이트, 이소니아지드, 옥시페니 스타틴, 메틸도파, 클로르프로마진, 톨부타미드, 또는 아미오다론에 의해 유발된 간 질병; 자가면역 간염; 유육종증; 윌슨병(Wilson's disease); 혈색소증; 고셰병(Gaucher's disease); III, IV, VI, IX 및 X형 글리코겐 축적 질병; α1-안티트립신 결핍; 젤베거(Zellweger) 증후군; 티로신혈증; 과당혈증; 갈락토스혈증; 버드-키아리(Budd-Chiari) 증후군과 연관된 혈관성 장애(vascular derangement), 정맥-폐색성 질병(veno-occlusive disease), 또는 문맥 혈전증; 및 선천성 간성 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환과 연관된 간 섬유증을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 대상체는 크론병(Crohn's disease), 궤양성 결장염, 방사선 조사 후 결장염, 및 현미경적 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질병과 연관된 장 섬유증을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 대상체는 당뇨병성 신경병증, 고혈압 신경화증, 만성 사구체신염, 만성 이식 사구체병증, 만성 간질 신장염, 및 다낭성 신장 질병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질병과 연관된 신장 섬유증을 갖는다.
본 발명은 또한 상승된 지질 수준과 관련된 모든 형태의 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 질환은 저항성 원발성 담즙성 간경변; 간 기능 시험치 상승(liver function test elevation) 및 고지질혈증이 관련되어 있는 원발성 담즙성 간경변; 원발성 경화성 담관염; 비알코올성-유발 지방성 간염; 및 B형 간염, C형 간염 또는 알코올과 연관된 만성 간 질병으로부터 선택되는 질환과 연관된 고지질혈증이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 유전자 성분을 갖거나 갖지 않는 원발성 고지질혈증인 고지질혈증; 또는 관상 동맥 질병, 뇌혈관 동맥 질병, 말초 혈관 질병, 대동맥 동맥류, 또는 경동맥 죽상경화증과 연관된 고지질혈증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 유사한 생화학적 비정상으로 인한 원발성 경화성 담관염뿐만 아니라, B형 간염, C형 간염에 의해 또는 알코올에 의해 야기된 만성 간염을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 고지질혈증과 연관된 기타 다른 동맥 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일 양태에서, 본 발명은 고트리글리세리드혈증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 예컨대 혈액 중의, 지질 수준(즉, 지질의 양)을 감소시키는 방법을 제공하며, 본 방법은 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 지질 수준을 대조군 대상체(예를 들어, 본 발명의 조성물을 투여하지 않은 대상체)에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%만큼 감소시킨다. 일 구현예에서, 대상체는 건강한 대상체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인)에 비하여, 상승된 수준의 지질을 갖는다. 일 구현예에서, 본 출원의 방법은 지질의 수준을 정상 수준으로(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인에서의 지질 수준과 유사한 수준으로) 감소시킨다.
일 구현예에서, 지질은 콜레스테롤이다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 콜레스테롤 수준을 대조군 대상체(예를 들어, 본 발명의 조성물을 투여하지 않은 대상체)에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%만큼 감소시킨다. 일 구현예에서, 대상체는 건강한 대상체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인)에 비하여, 상승된 수준의 콜레스테롤을 갖는다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 콜레스테롤 수준을 400 mg/L, 350 mg/L, 300 mg/L, 250 mg/L, 240 mg/L, 230 mg/L, 220 mg/L, 210 mg/L, 200 mg/L, 190 mg/L, 180 mg/L, 170 mg/L, 160 mg/L, 또는 150 mg/L 미만으로 감소시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 콜레스테롤 수준을 200 mg/L, 190 mg/L, 180 mg/L, 170 mg/L, 160 mg/L, 또는 150 mg/L 미만으로 감소시킨다.
일 구현예에서, 콜레스테롤은 LDL이다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 LDL 수준을 대조군 대상체(예를 들어, 본 발명의 조성물을 투여하지 않은 대상체)에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%만큼 감소시킨다. 일 구현예에서, 대상체는 건강한 대상체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인)에 비하여, 상승된 수준의 LDL을 갖는다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 LDL 수준을 300 mg/L, 200 mg/L, 190 mg/L, 180 mg/L, 170 mg/L, 160 mg/L, 150 mg/L, 140 mg/L, 130 mg/L, 120 mg/L, 110 mg/L, 100 mg/L, 90 mg/L, 80 mg/L, 70 mg/L, 60 mg/L, 또는 50 mg/L 미만으로 감소시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 LDL 수준을 160 mg/L, 150 mg/L, 140 mg/L, 130 mg/L, 120 mg/L, 110 mg/L, 100 mg/L, 90 mg/L, 80 mg/L, 70 mg/L, 60 mg/L, 또는 50 mg/L 미만으로 감소시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 LDL 수준을 130 mg/L, 120 mg/L, 110 mg/L, 100 mg/L, 90 mg/L, 80 mg/L, 70 mg/L, 60 mg/L, 또는 50 mg/L 미만으로 감소시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 LDL 수준을 100 mg/L, 90 mg/L, 80 mg/L, 70 mg/L, 60 mg/L, 또는 50 mg/L 미만으로 감소시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 LDL 수준을 70 mg/L, 60 mg/L, 또는 50 mg/L 미만으로 감소시킨다.
일 구현예에서, 지질은 트리글리세리드이다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 트리글리세리드 수준을 대조군 대상체(예를 들어, 본 발명의 조성물을 투여하지 않은 대상체)에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%만큼 감소시킨다. 일 구현예에서, 대상체는 건강한 대상체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인)에 비하여, 상승된 수준의 트리글리세리드를 갖는다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 트리글리세리드 수준을 800 mg/L, 700 mg/L, 600 mg/L, 500 mg/L, 400 mg/L, 300 mg/L, 200 mg/L, 190 mg/L, 180 mg/L, 170 mg/L, 160 mg/L, 150 mg/L, 140 mg/L, 130 mg/L, 120 mg/L, 110 mg/L, 또는 100 mg/L 미만으로 감소시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 트리글리세리드 수준을 200 mg/L, 190 mg/L, 180 mg/L, 170 mg/L, 160 mg/L, 150 mg/L, 140 mg/L, 130 mg/L, 120 mg/L, 110 mg/L, 또는 100 mg/L 미만으로 감소시킨다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법은 트리글리세리드 수준을 150 mg/L, 140 mg/L, 130 mg/L, 120 mg/L, 110 mg/L, 또는 100 mg/L 미만으로 감소시킨다.
본 발명은 또한, 빌리루빈, 및/또는 하나 이상의 간 효소의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 본 방법은 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본 출원의 방법은 빌리루빈의 양을 대조군 대상체(예를 들어, 본 발명의 조성물을 투여하지 않은 대상체)에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%만큼 감소시킨다. 일 구현예에서, 대상체는 건강한 대상체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인)에 비하여, 상승된 수준의 빌리루빈을 갖는다. 일 구현예에서, 본 출원의 방법은 빌리루빈의 수준을 정상 수준으로(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인에서의 빌리루빈의 수준과 유사한 수준으로) 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 빌리루빈의 수준을 10 mg/L, 9 mg/L, 8 mg/L, 7 mg/L, 6 mg/L, 5 mg/L, 4 mg/L, 3 mg/L, 2 mg/L, 1.5 mg/L, 1.2 mg/L, 또는 1 mg/L 미만으로 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 빌리루빈의 수준을 2 mg/L, 1.5 mg/L, 1.2 mg/L, 또는 1 mg/L 미만으로 감소시킨다.
일 구현예에서, 간 효소는 알칼리성 포스파타제(ALP, AP, 또는 Alk Phos), 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST), 감마-글루타밀 트랜스펩티다제(GGT), 락테이트 데하이드로게나제(LDH), 및 5' 뉴클레오티다제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 본 출원의 방법은 하나 이상의 간 효소의 양을 대조군 대상체(예를 들어, 본 발명의 조성물을 투여하지 않은 대상체)에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%만큼 감소시킨다. 일 구현예에서, 대상체는 건강한 대상체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인)에 비하여, 상승된 수준의 하나 이상의 간 효소를 갖는다. 일 구현예에서, 본 출원의 방법은 하나 이상의 간 효소(예를 들어, ALP, ALT, AST, GGT, LDH, 및 5' 뉴클레오티다제)의 수준을 정상 수준으로(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들과 같은 질병 또는 질환을 갖지 않는 개인에서의 간 효소의 수준과 유사한 수준으로) 감소시킨다.
추가의 구현예에서, 본 출원은 방법은 ALP의 수준을 500 IU/L(국제 단위/리터), 400 IU/L, 300 IU/L, 200 IU/L, 180 IU/L, 160 IU/L, 또는 150 IU/L 미만으로 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 ALP의 수준을 약 40 IU/L 내지 약 150 IU/L로 감소시킨다.
추가의 구현예에서, 본 출원은 방법은 ALT의 수준을 200 IU/L(국제 단위/리터), 150 IU/L, 100 IU/L, 80 IU/L, 60 IU/L, 또는 50 IU/L 미만으로 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 ALT의 수준을 약 5 IU/L 내지 약 50 IU/L로 감소시킨다.
추가의 구현예에서, 본 출원은 방법은 AST의 수준을 200 IU/L(국제 단위/리터), 150 IU/L, 100 IU/L, 80 IU/L, 60 IU/L, 50 IU/L, 또는 40 IU/L 미만으로 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 AST의 수준을 약 10 IU/L 내지 약 50 IU/L로 감소시킨다.
추가의 구현예에서, 본 출원은 방법은 GGT의 수준을 200 IU/L(국제 단위/리터), 150 IU/L, 100 IU/L, 90 IU/L, 80 IU/L, 70 IU/L, 또는 60 IU/L 미만으로 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 GGT의 수준을 약 15 IU/L 내지 약 50 IU/L 또는 약 5 IU/L 내지 약 30 IU/L로 감소시킨다.
추가의 구현예에서, 본 출원은 방법은 LDH의 수준을 500 IU/L(국제 단위/리터), 400 IU/L, 300 IU/L, 200 IU/L, 180 IU/L, 160 IU/L, 150 IU/L, 140 IU/L, 또는 130 IU/L 미만으로 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 LDH의 수준을 약 120 IU/L 내지 약 220 IU/L로 감소시킨다.
추가의 구현예에서, 본 출원은 방법은 5' 뉴클레오티다제의 수준을 50 IU/L(국제 단위/리터), 40 IU/L, 30 IU/L, 20 IU/L, 18 IU/L, 17 IU/L, 16 IU/L, 15 IU/L, 14 IU/L, 13 IU/L, 12 IU/L, 11 IU/L, 10 IU/L, 9 IU/L, 8 IU/L, 7 IU/L, 6 IU/L, 또는 5 IU/L 미만으로 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본 출원의 방법은 5' 뉴클레오티다제의 수준을 약 2 IU/L 내지 약 15 IU/L로 감소시킨다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 FXR 효능제인 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 추가의 구현예에서, 본 방법은 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제와 병용하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제1 화합물은 본 명세서에 기재된 화합물(예를 들어, 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 화합물, 또는 화합물 1, 2, 3, 또는 4), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 FXR 효능제인 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 피브레이트, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 추가의 구현예에서, 본 방법은 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 피브레이트와 병용하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제1 화합물은 본 명세서에 기재된 화합물(예를 들어, 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 화합물, 또는 화합물 1, 2, 3, 또는 4), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 FXR 효능제인 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 추가의 구현예에서, 본 방법은 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 스타틴과 병용하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제1 화합물은 본 명세서에 기재된 화합물(예를 들어, 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 화합물, 또는 화합물 1, 2, 3, 또는 4), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 FXR 효능제인 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 추가의 구현예에서, 본 방법은 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, 적어도 하나의 스타틴과 병용하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제1 화합물은 본 명세서에 기재된 화합물(예를 들어, 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 화합물, 또는 화합물 1, 2, 3, 또는 4), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 FXR 효능제인 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 피브레이트, 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 추가의 구현예에서, 본 방법은 제1 화합물의 유효량을, 적어도 하나의 피브레이트, 적어도 하나의 스타틴과 병용하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제1 화합물은 본 명세서에 기재된 화합물(예를 들어, 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 화합물, 또는 화합물 1, 2, 3, 또는 4), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체이다.
일 구현예에서, 대상체는 포유동물이다. 일 구현예에서, 포유동물은 인간이다.
일 구현예에서, 제1 화합물과 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 피브레이트(들), 또는 스타틴(들)은 2-성분 병용물(two-way combination)로, 즉 제1 화합물 및 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 피브레이트(들), 또는 스타틴(들) 이외의 어떠한 치료제도 없이 투여된다. 추가의 구현예에서, 제1 화합물과 피브레이트(들)가 2-성분 병용물로, 즉 제1 화합물 및 피브레이트(들) 이외의 어떠한 치료제도 없이 투여된다. 또 다른 구현예에서, 제1 화합물과 스타틴(들)이 2-성분 병용물로, 즉 제1 화합물 및 스타틴(들) 이외의 어떠한 치료제도 없이 투여된다.
또 다른 구현예에서, 제1 화합물과 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)가 스타틴과 함께 3-성분 병용물(three-way combination)로 투여된다. 추가의 구현예에서, 제1 화합물과 피브레이트(들)는 스타틴과 함께 3-성분 병용물로 투여된다.
제1 화합물은, PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)과 함께, 현저한 상승 효과, 예컨대 중도의 복합된 고지질혈증 상태 및 개인 요법에 대해 저항성을 나타내는 것들에 있어서 그리고 하나 이상의 간 효소의 수준에 있어서의 상승적 감소를 달성할 수 있다. 따라서, 고지질혈증을 제어하는 것이 매우 어렵기 때문에, 제1 화합물, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR- 알파 및 감마 이중 효능제, 또는 피브레이트, 및/또는 스타틴의 병용물이 유리하다. 제1 화합물, 피브레이트, 및/또는 스타틴의 그러한 병용물은 순응도 및 이에 따른 유효성을 증가시키도록 설계된, 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 단회 약제학적 조성물로(예컨대, 단회 캡슐 형태로) 제공되는 것이 특히 유리할 수 있다. 따라서, 본 발명은 제1 화합물의 유효량, 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 또는 PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제의 유효량, 및 적어도 하나의 스타틴의 유효량을, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 애쥬번트(adjuvant) 또는 부형제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 따라서, 본 발명은 제1 화합물의 유효량, 적어도 하나의 피브레이트의 유효량, 및 적어도 하나의 스타틴의 유효량을, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 애쥬번트 또는 부형제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다.
일 구현예에서, 제1 화합물과 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)가 동시에 투여된다. 예를 들어, 제1 화합물과 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)는 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 단회 약제학적 조성물로 함께 투여된다. 또 다른 구현예에서, 제1 화합물과 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)는 순차적으로 투여된다. 예를 들어, 제1 화합물은 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)에 앞서 또는 이에 후속하여 투여된다.
일 구현예에서, 제1 화합물과 스타틴은 동시에 투여된다. 예를 들어, 제1 화합물과 스타틴은 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 단회 약제학적 조성물로 함께 투여된다. 또 다른 구현예에서, 제1 화합물과 스타틴은 순차적으로 투여된다. 예를 들어, 제1 화합물은 스타틴에 앞서 또는 이에 후속하여 투여된다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 제1 기간 동안 제1 용량으로 투여된 후, 제2 기간 동안 제2 용량으로 제1 화합물의 투여가 행해진다. 일 구현예에서, 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체는 제1 기간 동안 0.1 mg 내지 1500 mg, 0.2 mg 내지 1200 mg, 0.3 mg 내지 1000 mg, 0.4 mg 내지 800 mg, 0.5 mg 내지 600 mg, 0.6 mg 내지 500 mg, 0.7 mg 내지 400 mg, 0.8 mg 내지 300 mg, 1 mg 내지 200 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 30 mg, 4 mg 내지 26 mg, 또는 5 mg 내지 25 mg의 일일 총량으로 투여된 후, 0.1 mg 내지 1500 mg, 0.2 mg 내지 1200 mg, 0.3 mg 내지 1000 mg, 0.4 mg 내지 800 mg, 0.5 mg 내지 600 mg, 0.6 mg 내지 500 mg, 0.7 mg 내지 400 mg, 0.8 mg 내지 300 mg, 1 mg 내지 200 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 30 mg, 4 mg 내지 26 mg, 또는 5 mg 내지 25 mg의 일일 총량으로의 제1 화합물의 투여가 행해진다. 일 구현예에서, 총량은 일일 1 회 경구 투여된다. 일 구현예에서, 제1 용량은 제2 용량과 상이하다. 추가의 구현예에서, 제1 용량은 제2 용량보다 더 낮다. 또 다른 구현예에서, 제1 용량은 제2 용량보다 더 높다. 일 구현예에서, 제1 용량은 약 5 mg(예를 들어, 4.8 mg 내지 5.2 mg)이고, 제2 용량은 약 10 mg(예를 들어, 9.8 mg 내지 10.2 mg)이다. 일 구현예에서, 제1 기간은 약 6 개월이다. 일 구현예에서, 제2 기간은 약 6 개월이다.
일 구현예에서, 약제학적 조성물은 경구, 비경구, 또는 국소 투여된다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 경구 투여된다.
본 발명에 따른 조성물은 통상적으로, 각각의 원하는 일일 용량이 단회 단위 투여형, 예컨대 정제 또는 캡슐로, 또는 동시에 또는 하루 동안 간격을 두고서 투여되는 2 회 이상의 단위 투여형으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있게 하기에 충분한 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체, PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)을 함유할 것이다.
본 발명은 또한, 제1 화합물과 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)가 UDCA와 병용하여 투여되는 약제학적 조성물을 제공한다. 일 양태에서, UDCA는 3-성분 병용물로 투여된다. 또 다른 양태에서, 제1 화합물과 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)의 2-성분 병용물은 UDCA 단독인 경우에 대해서는 불충분한 치료 반응을 갖는 대상체에게, UDCA 대신에, 질병 또는 질환의 치료 또는 예방을 위하여 투여된다.
본 발명의 방법에서, 활성 물질은 단회 일일 용량으로, 또는 하루당 2 회, 3 회, 4 회 또는 그 이상의 동일하거나 상이한 분할 용량으로 투여될 수 있고, 이들은 동시에 또는 하루 동안 상이한 시간에 투여될 수 있다. 통상, 활성 물질은 동시에, 더 통상적으로는 단회 병용 투여형으로 투여될 것이다.
일 양태에서, 제1 화합물, PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)은 이들이 각각의 단제요법에서 투여되는 투여량과 동일한 투여량으로 순차적으로 투여된다. 일 양태에서, 제1 화합물은 그의 단제요법 투여량보다 적은(예를 들어, 그의 단제요법 투여량의 90% 미만, 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만의) 투여량으로 투여된다. 일 양태에서, PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들)는 그의 단제요법 투여량보다 적은(예를 들어, 그의 단제요법 투여량의 90% 미만, 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만의) 투여량으로 투여된다. 일 양태에서, 제1 화합물 및 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들) 둘 모두는 그들 각각의 단제요법 투여량보다 적은(예를 들어, 그의 단제요법 투여량의 90% 미만, 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만의) 투여량으로 투여된다. 일 양태에서, 스타틴(들)은 그의 단제요법 투여량보다 적은(예를 들어, 그의 단제요법 투여량의 90% 미만, 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만의) 투여량으로 투여된다. 일 양태에서, 제1 화합물 및 스타틴(들) 둘 모두는 그들 각각의 단제요법 투여량보다 적은(예를 들어, 그의 단제요법 투여량의 90% 미만, 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만의) 투여량으로 투여된다. 일 양태에서, 제1 화합물, PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)은 그들 각각의 단제요법 투여량보다 적은(예를 들어, 그의 단제요법 투여량의 90% 미만, 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만의) 투여량으로 투여된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 투여를 위한 임의의 편리한 형태일 수 있으며, 예컨대 정제, 캡슐, 분말, 로젠지(lozenge), 환제, 트로키(troche), 엘릭서, 동결건조된 분말, 용액, 과립, 현탁액, 에멀젼, 시럽 또는 팅크제(tincture)일 수 있다. 느린 방출, 조절 방출, 또는 지연 방출 형태가 또한, 예를 들어 코팅된 입자, 다층 정제, 캡슐 내의 캡슐, 캡슐 내의 정제, 또는 미세과립의 형태로 제조될 수 있다.
경구 투여를 위한 고체 형태는 약제학적으로 허용되는 결합제, 감미제, 붕해제, 희석제, 향미제, 코팅제, 보존제, 윤활제 및/또는 시간 지연제를 함유할 수 있다. 적합한 결합제는 아카시아검, 젤라틴, 옥수수 전분, 트래거캔스검, 알긴산나트륨, 카르복시메틸엘룰로스 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 적합한 감미제는 수크로스, 락토스, 글루코스, 아스파르탐 또는 사카린을 포함한다. 적합한 붕해제는 옥수수 전분, 메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 잔탄검, 벤토나이트, 알긴산 또는 한천을 포함한다. 적합한 희석제는 락토스, 소르비톨, 만니톨, 덱스트로스, 카올린, 셀룰로스, 탄산칼슘, 규산칼슘 또는 인산이칼슘을 포함한다. 적합한 향미제는 페퍼민트 오일, 동록유, 체리, 오렌지 또는 라즈베리 향미료가 포함한다. 적합한 코팅제는 중합체 또는 공중합체 또는 아크릴산 및/또는 메타크릴산 및/또는 이들의 에스테르, 왁스, 지방 알코올, 제인(zein), 셸락 또는 글루텐을 포함한다. 적합한 보존제는 벤조산나트륨, 비타민 E, 알파-토코페롤, 아스코르브산, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤 또는 중아황산나트륨을 포함한다. 적합한 윤활제는 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 올레산나트륨, 염화나트륨 또는 활석을 포함한다. 적합한 시간 지연제는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 포함한다.
경구 투여를 위한 액체 형태는 상기 작용제에 더하여 액체 담체를 함유할 수 있다. 적합한 액체 담체는 물, 오일, 예컨대 올리브유, 땅콩유, 참깨유, 해바라기유, 홍화유, 낙화생유(arachis oil), 코코넛유, 액체 파라핀, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 글리세롤, 지방 알코올, 트리글리세리드 또는 이들의 혼합물을 포함한다.
경구 투여를 위한 현탁액은 분산제 및/또는 현탁화제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 현탁화제는 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 알긴산나트륨 또는 세틸 알코올을 포함한다. 적합한 분산제는 레시틴, 지방산, 예컨대 스테아르산의 폴리옥시에틸렌 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노- 또는 디-올레에이트, -스테아레이트 또는 -라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노- 또는 디-올레에이트, -스테아레이트 또는 -라우레이트 등을 포함한다.
경구 투여를 위한 에멀젼은 하나 이상의 유화제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 유화제는 상기에 예시된 바와 같은 분산제 또는 천연 검, 예컨대 아카시아검 또는 트래거캔스검을 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 제1 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체 및 적어도 하나의 지질 저하제, 예를 들어 피브레이트, 및 선택적으로 스타틴(들)을, 선택된 부형제(들), 담체(들), 애쥬번트(들) 및/또는 희석제(들)와 함께 블렌딩, 그라인딩, 균질화, 현탁, 용해, 유화, 분산 및/또는 혼합함으로써 제조될 수 있다. 정제 또는 캡슐 형태의 본 발명의 약제학적 조성물의 한 가지 유형은 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체 및 적어도 하나의 지질 저하제로부터 선택되는 활성 물질들 중 적어도 하나를 임의의 원하는 부형제(들), 담체(들), 애쥬번트(들) 및/또는 희석제(들)와 함께 포함하는 제1 정제를 제조하는 단계, 및 (b) 나머지 활성 물질(들) 및 제1 정제를 포함하는 제2 정제 또는 캡슐을 제조하는 단계에 의해 제조될 수 있다. 캡슐 형태의 본 발명의 약제학적 조성물의 또 다른 유형은 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체, 및 지질 저하제(들)로부터 선택되는 활성 물질들 중 적어도 하나를 임의의 원하는 부형제(들), 담체(들), 애쥬번트(들) 및/또는 희석제(들)와 함께 포함하는 제1 캡슐을 제조하는 단계, 및 (b) 나머지 활성 물질(들) 및 제1 캡슐을 포함하는 제2 캡슐을 제조하는 단계에 의해 제조될 수 있다. 정제 형태의 본 발명의 약제학적 조성물의 추가의 유형은 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체, 및 적어도 하나의 지질 저하제로부터 선택되는 활성 물질들 중 적어도 하나를 임의의 원하는 부형제(들), 담체(들), 애쥬번트(들) 및/또는 희석제(들)와 함께 포함하는 캡슐을 제조하는 단계, 및 (b) 나머지 활성 물질(들) 및 캡슐을 포함하는 정제를 제조하는 단계에 의해 제조될 수 있다.
구현예에서, PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)은 즉시 방출 정제로서 또는 지속 방출 정제로서 사용된다. 이는 지속 방출 정제로 제공되는 경우 특히 효과적이다. 다양한 지질 저하제의 지속 방출 정제가 구매가능하다. 연장된 작용을 위하여, 정제가 지속 방출형인 것이 바람직하다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체를 함유하는 캡슐 내에 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)을 함유하는 캡슐을 포함한다. 통상적으로, 이러한 형태에서, PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)은 즉시 방출형으로 제시된다. 그러한 경우에, 조성물을 일일 3 회 투여하는 것이 통상적이다. 또 다른 투여 방식은 전술된 바와 같은 지속 방출 또는 비지속 방출 형태의 PPAR-알파 효능제(들), PPAR-델타 효능제(들), PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제(들), 또는 피브레이트(들), 및/또는 스타틴(들)을 함유하는 조성물을 일일 2 회 제공하는 것인데, 여기서, 투여되는 조성물의 일일량은 환자에게 원하는 일일 투여량을 제공하기에 충분한 양의 활성 물질을 함유한다.
일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 0.1 mg 내지 1500 mg, 0.2 mg 내지 1200 mg, 0.3 mg 내지 1000 mg, 0.4 mg 내지 800 mg, 0.5 mg 내지 600 mg, 0.6 mg 내지 500 mg, 0.7 mg 내지 400 mg, 0.8 mg 내지 300 mg, 1 mg 내지 200 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 30 mg, 4 mg 내지 26 mg, 또는 5 mg 내지 25 mg의 일일 총량의 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체를 포함하는 투여형이다. 일 구현예에서, 총량은 일일 1 회 경구 투여된다.
일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 10 mg 내지 1000 mg, 20 mg 내지 800 mg, 50 mg 내지 500 mg, 80 mg 내지 400 mg, 또는 100 mg 내지 300 mg, 더 통상적으로 약 200 mg의 일일 총량의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 또는 피브레이트, 및/또는 스타틴를 포함하는 투여형이다. 일 구현예에서, 총량은 일일 1 회 경구 투여된다. 일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 5 mg 내지 1000 mg, 10 mg 내지 800 mg, 20 mg 내지 500 mg, 30 mg 내지 400 mg, 또는 40 mg 내지 200 mg의 양의 스타틴을 포함하는 투여형이다.
구현예에서, 본 발명의 조성물은 0.1 mg 내지 1500 mg, 0.2 mg 내지 1200 mg, 0.3 mg 내지 1000 mg, 0.4 mg 내지 800 mg, 0.5 mg 내지 600 mg, 0.6 mg 내지 500 mg, 0.7 mg 내지 400 mg, 0.8 mg 내지 300 mg, 1 mg 내지 200 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 30 mg, 4 mg 내지 26 mg, 또는 5 mg 내지 25 mg의 양의 제1 화합물을 함유하는 캡슐 내에 함유된, 10 mg 내지 1000 mg, 20 mg 내지 800 mg, 50 mg 내지 500 mg, 80 mg 내지 400 mg, 또는 100 mg 내지 300 mg, 더 통상적으로는 약 200 mg의 양의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 또는 피브레이트, 및/또는 스타틴을 포함하는 투여형이다. 일 구현예에서, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 또는 피브레이트, 및/또는 스타틴은 지속 방출 형태이다.
구현예에서, 본 발명의 조성물은 0.1 mg 내지 1500 mg, 0.2 mg 내지 1200 mg, 0.3 mg 내지 1000 mg, 0.4 mg 내지 800 mg, 0.5 mg 내지 600 mg, 0.6 mg 내지 500 mg, 0.7 mg 내지 400 mg, 0.8 mg 내지 300 mg, 1 mg 내지 200 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 30 mg, 4 mg 내지 26 mg, 또는 5 mg 내지 25 mg의 양의 제1 화합물을 함유하는 캡슐 내에 함유된, 10 mg 내지 1000 mg, 20 mg 내지 800 mg, 50 mg 내지 500 mg, 80 mg 내지 400 mg, 또는 100 mg 내지 300 mg, 더 통상적으로는 약 200 mg의 양의 베자피브레이트의 지속 방출 정제를 포함하는 투여형이다. 이러한 방식으로, 이러한 투여형을 투여받는 환자는, 캡슐이 붕괴되어 열려서 제1 화합물을 방출함에 따라 원위 공동(distal antrum)에 전달되는 베자피브레이트의 지속 방출 정제를 제공받는다.
본 발명의 약제학적 조성물은 환자에 의해 평생 사용되어, 생존을 연장시키고 간 이식을 지연시킬 수 있다. 고지질혈증 및 간 효소의 감소는 관련된 혈관 질병의 발생의 감소를 보장한다. 제1 화합물 및 지질 저하제, 예컨대 피브레이트 및/또는 스타틴 둘 모두는 (베자피브레이트에 대해서는 약간의 예외가 있지만) 극히 최소한의 장기적인 부작용 프로파일을 가지며, 이에 따라, 이 병용물은 고지질혈증을 갖는 원발성 담즙성 간경변(PBC)에 대한 그리고 저항성 원발성 담즙성 간경변(PBC)에 대한 선택 요법이 될 가능성이 높다. 본 발명에 의해 제공되는 간소화된 투여로 인해, 본 발명의 병용 요법은, 환자의 체중 및 임상 반응에 따라, 용량 횟수를 증가시키는 데 사용될 수 있다.
제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 또는 피브레이트, 및/또는 스타틴을 포함하는 본 발명의 조성물은 단일 캡슐 내의 3 가지 활성 물질로서 제공될 수 있다. 그러한 조성물의 한 가지 형태에서는, 스타틴이 내부 캡슐에서 제1 화합물과 혼합될 수 있고, 내부 캡슐은 외부 캡슐 내에 함유된 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 또는 피브레이트에 위해 둘러싸인다. 캡슐들 내의 위치는 역전될 수 있다. 즉, 스타틴 및 제1 화합물의 혼합물이 외부 캡슐 내에 함유될 수 있고, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제, 또는 피브레이트가 내부 캡슐 내에 함유될 수 있다. 이러한 배열은, 투여되는 스타틴의 양이 비교적 큰 경우에 특히 바람직하다. 3 가지 활성 물질의 병용물의 투여를 위한 기타 다른 조합이 가능하다.
본 명세서에 개시된 제1 화합물은 통상적인 방법(예를 들어, 미국 공개 2009/0062526, 미국 특허 7,138,390, 및 WO 2006/122977에 기재된 것들)에 의해, 예컨대 6-단계 합성 및 후속된 하나의 정제 단계를 수행하여 제조되어, 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이 고순수 화합물 1(오베티콜산, 또는 OCA)을 생성할 수 있다.
[반응식 1]
Figure pct00011
상기 공정은 WO 2013/192097에 기재되어 있으며, 이의 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 이 공정은 6-단계 합성 및 후속된 하나의 정제 단계이다. 단계 1은 7-케토 리토콜산(KLCA)의 C-24 카르복실산의 에스테르화를 수행하여 메틸 에스테르 화합물 a를 생성하는 단계이다. 단계 2는 화합물 1로부터 실릴렌올 에테르를 형성하여 화합물 c를 생성하는 단계이다. 단계 3은 실릴렌올 에테르 화합물 c 및 아세트알데하이드의 알돌 축합 반응을 수행하여 화합물 d를 생성하는 단계이다. 단계 4는 화합물 d의 비누화를 수행하여 화합물 e를 생성하는 단계이다. 단계 5는 화합물 e의 수소화를 수행하여 화합물 f를 생성하는 단계이다. 단계 6은 화합물 f의 7-케토 기의 선택적 환원을 수행하여 결정질 화합물 1을 생성하는 단계이다. 단계 7은 결정질 화합물의 비정질 화합물 1(오베티콜산 형태 1, 또는 OCA 형태 1)로의 전환을 수행하는 단계이다.
대안적으로, 본 명세서에 개시된 제1 화합물은 통상적인 방법(예를 들어, 미국 특허 7,932,244에 기재된 것들)에 의해, 또는 반응식 2에 제시된(그리고 WO 2014/066819에 개시된) 것과 같은 공정을 통해 제조될 수 있다. 반응식 2를 사용하여 본 명세서에 개시된 화합물 2, 화합물 3, 또는 화합물 4를 제조할 수 있다.
Figure pct00012
단계 1은 화학식 II의 화합물의 에스테르화를 수행하여 화학식 III의 화합물을 수득하는 단계이다. 단계 2는 화학식 III의 화합물로부터 화학식 IV의 화합물을 형성하는 반응이다. 단계 3은 화학식 IV의 화합물의 C3 위치의 하이드록시 기의 보호를 수행하여 화학식 V의 화합물을 수득하는 단계이다. 단계 4는 화학식 V의 화합물의 산화적 절단을 수행하여 화학식 VI의 화합물을 수득한다. 단계 5는 화학식 VI의 화합물의 환원을 수행하여 화학식 VII의 화합물을 수득하는 단계이다. 단계 6은 화학식 VII의 화합물의 설폰화를 수행하여 화학식 I-Na의 염을 수득하는 단계이다. 화학식 I-Na의 염은 그의 유리 염기 형태(즉, 화학식 I의 화합물) 또는 기타 다른 염 형태(예를 들어, 화학식 I-(Et)3NH의 염)로 전환될 수 있다.
정의
편의상, 본 명세서, 실시예 및 첨부된 청구범위에 사용되는 소정의 용어를 여기에 모아둔다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "피브레이트"는 본 명세서에 기재된 방법에 유용한 피브르산 유도체 및 2-페녹시-2-메틸프로판산의 약제학적으로 활성인 유도체 중 임의의 것을 의미한다. 피브레이트의 예에는 페노피브레이트, 베자피브레이트, 베클로브레이트, 비니피브레이트, 시프로피브레이트, 클리노피브레이트, 클로피브레이트, 클로피브르산, 에토피브레이트, 겜피브로질, 니코피브레이트, 피리피브레이트, 로니피브레이트, 심피브레이트, 테오피브레이트, 토코피브레이트, 플라피브라이드 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 피브레이트의 예는 또한 미국 특허 3,781,328, 3,948,973, 3,869,477, 3,716,583, 3,262,580, 3,723,446, 4,058,552, 3,674,836, 3,369,025, 3,984,413, 3,971,798, 6,384,062, 7, 119,198 및 7,259,186; 미국 공개 20090131395; WO2008/039829; 벨기에 특허 884722; 영국 특허 860303; 및 유럽 특허 출원 공개 EP0607536에 기재되어 있으며, 이들 각각의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
퍼옥시좀 증식인자-활성화 수용체 알파(Peroxisome proliferator-activated receptor alpha)(PPAR-알파)(이는 NR1C1(nuclear receptor subfamily 1, group C, member 1, 핵 수용체 하위패밀리 1, 그룹 C, 구성원1)로도 알려짐)는 핵 수용체 단백질이다. PPAR-알파 효능제는 PPAR-알파에 결합하여 이를 활성화시킨다. PPAR-알파 효능제의 예에는 피브레이트, 예컨대 본 명세서에 기재된 피브레이트가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
퍼옥시좀 증식인자-활성화 수용체 델타(PPAR-델타)(이는 NR1C2(nuclear receptor subfamily 1, group C, member 2, 핵 수용체 하위패밀리 1, 그룹 C, 구성원 2)로도 알려짐)는 핵 수용체 단백질이다. PPAR-델타 효능제는 PPAR-델타에 결합하여 이를 활성화시킨다. PPAR-델타 효능제의 예에는 {4-[({4-메틸-2-[4-(트리플루오로메틸)페닐]-1,3-티아졸-5-일}메틸)설파닐]-2-메틸페녹시}아세트산(당업계에서 GW501516, GW1516, 및 엔두라볼로도 알려짐), {2-메틸-4-[5-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-2H-[1,2,3]트리아졸-4-일메틸실파닐]-페녹시}-아세트산, 또는 [4-[[[2-[3-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐]-4-메틸-5-티아졸릴]메틸]티오]-2-메틸 페녹시]-아세트산이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
PPAR-알파 및 델타 또는 PPAR-알파 및 감마 이중 효능제는 PPAR-알파 및 PPAR-델타 둘 모두, 또는 PPAR-알파 및 PPAR-감마 둘 모두에 결합하여 이들을 활성화시킨다. PPAR-알파 및 델타 이중 효능제의 예에는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산(GFT505로도 알려짐)이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. PPAR 알파 및 감마 이중 효능제의 예에는 알레글리타자르((2S)-2-메톡시-3-[4-[2-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸릴)에톡시]-7-벤조티오페닐]프로판산, CAS 번호 475479-34-6), 무라글리타자르(N-[(4-메톡시페녹시)카르보닐]-N-{4-[2-(5-메틸-2-페닐-1,3-옥사졸-4-일)에톡시]벤질}글리신, CAS 번호 331741-94-7), 테사글리타자르((2S)-2-에톡시-3-[4-[2-(4-메틸설포닐옥시페닐)에톡시]페닐]프로판산, CAS 번호 251565-85-2) 및 사로글리타자르((2S)-2-에톡시-3-[4-(2-{2-메틸-5-[4-(메틸설파닐)페닐]-1H-피롤-1-일}에톡시)페닐]프로판산, CAS 번호 495399-09-2)가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "FXR 효능제"는 FXR을 활성화시키는 임의의 화합물을 지칭한다. 일 양태에서, FXR 효능제는 WO 2000/037077에 기재된 검정 방법에서 적절한 양성 대조군인 CDCA와 대비하여 FXR의 적어도 50% 활성화를 달성한다. 또 다른 양태에서, FXR 효능제는 WO2000/037077에 기재된 바와 같은 섬광 근접 검정(scintillation proximity assay) 또는 HTRF 검정에서 FXR의 100% 활성화를 달성한다. FXR 효능제의 예에는 미국 특허 7,138,390; 7,932,244; 20120283234; 20120232116; 20120053163; 20110105475; 20100210660; 20100184809; 20100172870; 20100152166; 20100069367; 20100063018; 20100022498; 20090270460; 20090215748; 20090163474; 20090093524; 20080300235; 20080299118; 20080182832; 20080039435; 20070142340; 20060069070; 20050080064; 20040176426; 20030130296; 20030109467; 20030003520; 20020132223; 및 20020120137에 기재된 것들이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "오베티콜산" 또는 "OCA"는 하기 화학 구조를 갖는 화합물을 지칭한다:
Figure pct00013
오베티콜산은 오베티콜산 형태 1, INT-747, 3α,7α-디하이드록시-6α-에틸-5β-콜란-24-산, 6α-에틸-케노데옥시콜산, 6-에틸-CDCA, 6ECDCA, 콜란-24-산, 6-에틸-3,7-디하이드록시-(3α, 5β, 6α,7α)로도 지칭되며, 미국 공개 2009/0062526 A1, 미국 특허 7,138,390, 및 WO2006/122977에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. 오베티콜산의 CAS 등록 번호는 459789-99-2이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "결정질 오베티콜산"은 하기 화학 구조를 갖는 화합물의 임의의 결정질 형태를 지칭한다:
Figure pct00014
결정질 오베티콜산은, 이 화합물이 3차원 공간에서 특정 결정 패킹 배열(crystal packing arrangement)로 결정화되거나, 이 화합물이 외부 면 평면들을 가짐을 의미한다. 오베티콜산(또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염)의 결정질 형태는 상이한 결정 패킹 배열들로 결정화될 수 있으며, 이들 모두는 오베티콜산의 동일한 원소 조성을 갖는다. 상이한 결정 형태들은 통상 상이한 X선 회절 패턴, 적외선 스펙트럼, 융점, 밀도 경도, 결정 형상, 광학 및 전기적 특성, 안정성 및 용해성을 갖는다. 재결정화 용매, 결정화 속도, 저장 온도, 및 기타 다른 인자들이 하나의 결정 형태가 우세하게 되게 할 수 있다. 오베티콜산의 결정은 상이한 조건 하에서, 예를 들어 상이한 용매, 온도 등에서 결정화에 의해 제조될 수 있다. OCA의 결정질 형태의 예는 미국 특허 9,238,673에 기재되어 있다.
용어 "제1 화합물"은 화학식 A, 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 또는 화학식 IIA의 화합물, 또는 화합물 1, 2, 3, 또는 4, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체를 의미한다. 이 용어가 본 발명과 관련하여 사용되는 경우에는 언제든지, 유리 염기, 동위원소 표지 화합물, 결정질 화합물, 또는 이들의 상응하는 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체를 참조한다는 것이 이해되어야 하되 단, 그러한 것은 해당 상황 하에서 가능하고/가능하거나 적절하다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "아미노산 접합체"는 임의의 적합한 아미노산을 갖는 본 발명의 제1 화합물(예를 들어, 화학식 A의 화합물)의 접합체를 지칭한다. 예를 들어, 화학식 A의 화합물의 그러한 적합한 아미노산 접합체는 담즙액 또는 장액에서의 향상된 완전성(integrity)이라는 추가된 이점을 가질 것이다. 적합한 아미노산은 글리신 및 타우린을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 제1 화합물(예를 들어 화합물 1)의 글리신 및 타우린 접합체를 포함한다.
용어 "스타틴"은 용어 "3-하이드록시-3-메틸글루타릴-조효소 A 리덕타제 억제제" 및 "HMG-CoA 리덕타제 억제제"와 동의어이다. 이들 용어는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용된다. 동의어들이 시사하는 바와 같이, 스타틴은 3-하이드록시-3-메틸글루타릴-조효소 A 리덕타제의 억제제이며, 그 자체로서, 혈장 콜레스테롤의 수준을 저하시키는 데 그리고 이에 따라 심혈관 질병을 치료 또는 예방하는 데 효과적이다. 스타틴 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 포유동물에서, 특히 인간에서 저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C) 수준을 저하시키는 데 특히 유용하다. 구조적으로, 스타틴 또는 이의 유도체는 일반적으로 4-하이드록시-6-옥소-2H-피란 시스템(이는 또한, HMG-CoA 리덕타제의 활성 부위와 상호작용하는 디하이드록시산의 형태일 수 있음), 및 친유성 부분(이는 특히, 다치환된 헥사하이드로나프탈렌 시스템으로 존재하지만, 이는 또한, 아토르바스타틴 또는 플루바스타틴에서와 같이 다치환된 헤테로방향족 시스템으로 대체될 수 있음)을 갖는다. 본 발명에 사용하기에 적합한 스타틴은 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바스타틴, 리바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 플루인도스타틴, 벨로스타틴, 달바스타틴, 로수바스타틴, 디하이드로컴팩틴, 및 컴팩틴, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
용어 "지질 저하제"는 순환 중인(예를 들어, 혈액 중의) 지질(예를 들어, 콜레스테롤, LDL, 및 트리글리세리드)의 농도를 저하시킬 수 있는 임의의 작용제를 지칭한다. 지질 저하제는 하기를 포함하지만 이로 한정되지 않는다: (i) 담즙산 봉쇄제, 예컨대 수지(예를 들어, 콜레스티라민, 콜레스티폴, 콜레세벨람), (ii) (예를 들어, 소장으로부터 순환계 내로의) 콜레스테롤의 흡수를 방지하는 콜레스테롤 흡수 억제제, 예컨대 에제티미브(즉, (3R,4S)-1-(4-플루오로페닐)-3-[(3S)-3-(4-플루오로페닐)-3-하이드록시프로필]-4-(4-하이드록시페닐)아제티딘-2-온) 및 (3R,4S)-1,4-비스(4-메톡시페닐)-3-(3-페닐프로필)-2-아제티디논, (iii) 오메가-3 지방산 에틸 에스테르(유리 지방산 유도체를 포함함)(예를 들어, Omacor®, Lovaza®, Vascepa™, 에파델, Epanova™), 또는 해양-유래 오메가-3 다가불포화 지방산(PUFA), (iv) PCSK9 억제제, (v) 니코틴산, (vi) 피토스테롤(예를 들어, 식물 스테롤 및 스타놀), 예컨대 β-시토스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 에르고스테롤, β-시토스타놀, 캄페스타놀, 스티그마스타놀, 사이클로아르테놀, 및 루페올, (vii) CETP(콜레스테릴 에스테르 수송 단백질)의 억제제, 예컨대 아나세트라핍, 에바세트라핍, 토르세트라핍, 및 탈세트라핍, (viii) 스쿠알렌 합성 억제제, (ix) 지질의 합성, 분해, 흡수, 및 대사에 영향을 주는 안티센스 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 아포지질단백질 B 또는 PCSK9를 인코딩하는 mRNA에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드)(예를 들어, 미포메르센(Kynamro)), (x) 아포단백질-B 억제제, (xi) 마이크로솜 트리글리세리드 수송 단백질의 억제제(예를 들어, 로미타피드(Juxtapid)), 및 (xii) 기타 다른 화합물, 예컨대 콜레세벨람, 아바시미브, 및 임플리타피드.
"치료하는"은 질환, 질병, 장애 등의 개선을 가져오는 임의의 효과, 예를 들어 완화하거나, 감소시키거나, 조절하거나, 제거하는 것을 포함한다. 질병 상태를 "치료하는" 또는 이의 "치료"는 질병 상태를 억제하는 것, 즉 질병 상태 또는 그의 임상 증상의 발생을 정지시키는 것, 또는 질병 상태를 완화시키는 것, 즉 질병 상태 또는 그의 임상 증상의 일시적 또는 영구적인 퇴행을 야기하는 것을 포함한다.
질병 상태를 "예방하는"은 질병 상태의 임상 증상이 질병 상태에 노출되거나 취약할 수 있는 대상체에서 발생되지 않게 하고, 여전히 그러한 질병 상태의 증상을 겪거나 나타내지 않는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "억제하는" 또는 "억제"는 질병 또는 질환의 발생 또는 진행에 대한 임의의 검출가능한 양성 효과를 지칭한다. 그러한 양성 효과는 질병 또는 질환의 적어도 하나의 증상 또는 징후의 개시의 지연 또는 예방, 증상(들) 또는 징후(들)의 경감 또는 역전, 및 증상(들) 또는 징후(들)의 추가 악화의 감속 또는 예방을 포함할 수 있다.
"질병 상태"는 임의의 질병, 장애, 질환, 증상, 또는 적응증을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 병용으로 적절한 용량 투여 시에 급성 또는 만성 치료적 효과를 생성하는 제1 화합물(예를 들어, FXR-활성화 리간드(FXR-activating ligand)), 또는 피브레이트, 또는 지질 저하제, 또는 스타틴의 양을 지칭한다. 일 구현예에서, 제1 화합물(예를 들어, FXR-활성화 리간드)의 유효량 또는 치료적 유효량은 적어도 하나의 피브레이트와 병용하는 경우 적절한 용량 투여 시에 급성 또는 만성 치료적 효과를 생성한다. 이 효과는 질병/질환(예를 들어, 간, 신장, 또는 장의 섬유증) 및 관련된 합병증의 증상, 징후 및 기초 병리의 임의의 검출가능한 정도로의 예방, 교정, 억제, 또는 역전을 포함한다. "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 제1 화합물, 피브레이트, 지질 저하제, 스타틴, 치료하고자 하는 대상체의 질병 및 그의 중증도, 및 연령, 체중 등에 따라 변동될 것이다.
인간 또는 비인간 동물에 투여하기 위하여, 치료적 유효량의 제1 화합물이 하나 이상의 피브레이트, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화될 수 있다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 제1 화합물 및 피브레이트(들)의 유효량을 제공하기 위해, 예를 들어 경구, 비경구, 또는 국소 경로를 통해 투여될 수 있다. 대안적인 구현예에서, 본 발명의 조성물은 의료 장치, 예를 들어 스텐트를 코팅 또는 함침시키는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약리학적 효과"는 요법의 의도된 목적을 달성하는 대상체에서 생성되는 효과를 포함한다. 일 구현예에서, 약리학적 효과는 치료되는 대상체의 1차 적응증이 예방, 경감, 또는 감소된다는 것을 의미한다. 예를 들어, 약리학적 효과는 치료되는 대상체의 1차 적응증의 예방, 경감 또는 감소를 가져오는 것일 것이다. 또 다른 구현예에서, 약리학적 효과는 치료되는 대상체의 1차 적응증의 장애 또는 증상이 예방, 경감, 또는 감소된다는 것을 의미한다. 예를 들어, 약리학적 효과는 치료되는 대상체의 장애 또는 증상의 예방, 경감 또는 감소를 가져오는 것일 것이다.
달리 나타내지 않는다면, 비대칭 탄소 원자로부터 발생되는 이성질체(예를 들어, 모든 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체)가 본 발명의 범주 내에 포함됨이 이해되어야 한다. 그러한 이성질체는 고전적 분리 기법에 의해 그리고 입체화학적으로 제어된 합성에 의해 실질적으로 순수한 형태로 수득될 수 있다.
"약제학적 조성물"은 대상체에게 투여하기에 적합한 형태의, 제1 화합물 및 지질 저하제, 예컨대 피브레이트와 같은 치료제를 함유하는 제형이다. 일 구현예에서, 약제학적 조성물은 벌크 형태 또는 단위 투여형이다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위하여 투여 단위형으로 조성물을 제형화하는 것이 유리할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 투여 단위형은 치료하고자 하는 대상체에게 단일 투여량(unitary dosage)으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위들을 지칭하며; 각각의 단위는 필요한 약제학적 담체와 회합하여 원하는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 시약을 함유한다. 본 발명의 투여 단위형에 대한 사양은 활성제의 고유의 특성 및 달성하고자 하는 특정 치료적 효과, 및 개인의 치료를 위한 그러한 활성제의 배합 기술에 내재되어 있는 제한에 의해 좌우되고 그에 직접 의존한다.
용어 "단위 투여형"은 인간 및 기타 다른 포유동물에게 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위들을 지칭하며, 각각의 단위는 본 명세서에 기재된 바와 같은 적합한 약제학적 부형제와 회합하여 원하는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 물질을 함유한다.
단위 투여형은, 예를 들어 캡슐, IV 백, 정제, 에어로졸 흡입기 상의 단일 펌프, 또는 바이알을 포함한 다양한 형태들 중 임의의 것이다. 조성물의 단위 용량 중의 제1 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체의 양은 유효량이고, 관여된 특정 치료 및/또는 치료에 사용된 지질 저하제(들)에 따라 변동된다. 당업자는 때로는 환자의 연령 및 상태에 따라 투여량에 대해 일상적 변동을 가하는 것이 필요하다는 것을 이해할 것이다. 투여량은 또한 투여 경로에 의존할 것이다. 다양한 경로가 고려되는데, 이에는 경구, 폐, 직장, 비경구, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 복막내, 흡입, 협측, 설하, 흉막내, 경막내(intrathecal), 비강내 등이 포함된다. 본 발명의 화합물의 국소 또는 경피 투여를 위한 투여형은 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 일 구현예에서, 제1 화합물 및/또는 지질 저하제가 약제학적으로 허용되는 담체와, 그리고 필요한 임의의 보존제, 완충액, 또는 추진제와 멸균 조건 하에서 혼합된다.
용어 "급속 용량(flash dose)"은 신속하게 분산되는 투여형인 제형을 지칭한다.
용어 "즉시 방출"은 비교적 짧은 기간에, 일반적으로 최대 약 60분 이내에 투여형으로부터의 치료제(예컨대, 제1 화합물 또는 지질 저하제)의 방출로서 정의된다. 용어 "조절 방출"은 지연 방출, 연장 방출, 및 펄스형 방출을 포함하는 것으로 정의된다. 용어 "펄스형 방출"은 투여형으로부터의 약물의 일련의 방출로서 정의된다. 용어 "지속 방출" 또는 "연장 방출"은 장기간에 걸친 투여형으로부터의 치료제의 연속 방출로서 정의된다.
"대상체"는 포유동물, 예를 들어 인간, 반려 동물(예를 들어, 개, 고양이, 새 등), 농장 동물(예를 들어, 소, 양, 피그, 말, 가금류 등), 및 실험실 동물(예를 들어, 래트, 마우스, 기니 피그, 조류 등)을 포함한다. 일 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일 양태에서, 대상체는 여성이다. 일 양태에서, 대상체는 남성이다.
어구 "약제학적으로 허용되는"은, 올바른 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이득/위험 비에 부합하면서, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응, 또는 기타 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 담체, 및/또는 투여형을 지칭한다.
"약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비독성이고, 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않거나 하지 않는, 약제학적 조성물을 제조하는 데 유용한 담체 또는 부형제를 의미하고, 인간의 약제학적 용도뿐만 아니라 수의용 용도에 허용되는 부형제를 포함한다. 본 명세서 및 청구범위에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 부형제"는 하나의 그러한 부형제 및 하나 초과의 그러한 부형제 둘 모두를 포함한다.
어떠한 제형 없이 직접 제1 화합물을 투여하는 것도 가능하지만, 제1 화합물은 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 제형의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 제형은 경구, 협측, 직장, 비강내, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 및 비강내를 포함한 다양한 경로에 의해 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 제1 화합물은 경피 투여될 수 있다. 경피 투여하기 위하여, 경피 전달 장치("패치)가 필요하다. 그러한 경피 패치는 제어된 양으로 본 발명의 화합물의 연속 또는 불연속 주입을 제공하는 데 사용될 수 있다. 약제학적 작용제의 전달을 위한 경피 패치의 구성 및 용도는 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 5,023,252를 참조한다. 그러한 패치는 약제학적 작용제의 연속적, 펄스형, 또는 주문형 전달에 맞게 구성될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 협측 및/또는 설하, 또는 비강 투여에 맞게 구성된다. 이러한 구현예는 위 합병증, 예컨대 위 시스템에 의한 그리고/또는 간을 통한 초회 통과 대사를 피하는 방식으로 제1 화합물의 투여를 제공한다. 이러한 투여 경로는 또한 흡착 시간을 감소시켜, 치료적 이득의 더 신속한 개시를 제공할 수 있다.
제1 화합물은 넓은 투여량 범위에 걸쳐 투여될 수 있다. 예를 들어, 하루당 투여량은 통상 약 0.0001 mg/kg 내지 약 30 mg/kg 체중의 범위 내에 있다. 성인의 치료에서, 단회 용량 또는 분할 용량으로 약 0.1 mg/kg/일 내지 약 15 mg/kg/일의 범위가 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 제형은 약 0.1 mg 내지 약 1500 mg의 제1 화합물을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 제형은 약 1 mg 내지 약 100 mg의 제1 화합물을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 제형은 약 1 mg 내지 약 50 mg의 제1 화합물을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 제형은 약 1 mg 내지 약 30 mg의 제1 화합물을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 제형은 약 4 mg 내지 약 26 mg의 제1 화합물을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 제형은 약 5 mg 내지 약 25 mg의 제1 화합물을 포함한다. 그러나, 실제로 투여되는 제1 화합물의 양은, 치료하고자 하는 질환, 선택된 투여 경로, 투여되는 제1 화합물의 형태, 투여되는 지질 저하제(들), 개별 환자의 연령, 체중, 및 반응, 및 환자의 증상의 중증도를 포함한 관련 상황을 감안하여 의사에 의해 결정될 것임이 이해될 것이다. 따라서, 상기 투여량 범위는 본 발명의 범주를 결코 제한하고자 하지 않는다. 일부 경우에, 상기 언급된 범위의 하한보다 낮은 투여량 수준은 충분한 수준을 초과할 수 있으며, 한편 다른 경우에는, 더 큰 용량이 먼저 하루 종일에 걸친 투여를 위해 여러 개의 더 작은 용량으로 분할된다고 한다면, 어떠한 유해한 부작용도 야기하지 않고서 여전히 그러한 더 큰 용량이 사용될 수 있다.
"섬유증"은 조직 또는 기관에서 과도한 섬유성 결합 조직, 예를 들어 반흔 조직의 발생을 수반하는 질환을 지칭한다. 반흔 조직의 그러한 발생은 질병, 외상, 화학적 독성 등으로 인한 기관의 감염, 염증, 또는 손상에 따라 일어날 수 있다. 섬유증은, 간, 신장, 장, 폐, 심장 등을 포함한 다양한 상이한 조직 및 기관에서 발생될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "담즙정체성 질환"은 간으로부터의 답즙 배설이 손상되거나 차단된 임의의 질병 또는 질환을 지칭하며, 이때 이러한 손상 또는 차단은 간에서 또는 담관에서 일어날 수 있다. 간내 담즙정체 및 간외 담즙정체가 담즙정체성 질환의 2 가지 유형이다. 간내 담즙정체(이는 간 내부에서 일어남)는 원발성 담즙성 간경변, 원발성 경화성 담관염, 패혈증(전신성 감염), 급성 알코올성 간염, 약물 독성, 완전 비경구 영양(정맥내 공급됨), 악성종양, 낭포성 섬유증, 담관 폐쇄증, 및 임신에서 가장 일반적으로 발견된다. 간외 담즙정체(이는 간 외부에서 일어남)는 담관 종양, 협착, 낭종, 게실, 총담관(common bile duct)에서의 담석 형성, 췌장염, 췌장 종양 또는 가성 낭종, 및 주변 기관에서의 종괴 또는 종양으로 인한 압박에 의해 야기될 수 있다.
담즙정체성 질환의 임상 증상 및 징후는 가려움증(소양증), 피로, 황달 피부 또는 눈, 소정 식품의 소화 불능, 구역, 구토, 옅은색 대변(pale stool), 진한색 소변(dark urine), 및 우상 복부 통증을 포함한다. 담즙정체성 질환을 갖는 환자는, 환자 혈청 중의 알칼리성 포스파타제, γ-글루타밀 트랜스펩티다제(GGT), 5' 뉴클레오티다제, 빌리루빈, 담즙산, 및 콜레스테롤의 수준의 측정을 포함한 표준 임상 실험실 시험 세트에 기초하여 진단되고 임상적으로 추적될 수 있다. 일반적으로, 환자는 알칼리성 포스파타제, GGT, 및 5' 뉴클레오티다제의 3 가지 모든 진단 마커의 혈청 수준이 비정상적으로 상승된 것으로 여겨진다면 담즙정체성 질환을 갖는 것으로 진단된다. 이들 마커의 정상 혈청 수준은 시험 프로토콜에 따라 실험실마다 그리고 절차마다 어느 정도 다를 수 있다. 따라서, 의사는, 특정 실험실 및 시험 절차에 기초하여, 마커들 각각에 대해 비정상적으로 상승된 혈액 수준이 어느 정도인지를 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어, 담즙정체성 질환을 앓고 있는 환자는 일반적으로 혈액 중에 약 125 IU/L 초과의 알칼리성 포스파타제, 약 65 IU/L 초과의 GGT, 및 약 17 NIL 초과의 5' 뉴클레오티다제를 갖는다. 혈청 마커들 수준의 변동성으로 인해, 담즙정체성 질환은 상기 언급된 증상들 중 적어도 하나, 예컨대 가려움증(소양증)에 더하여 이들 3 가지 마커의 비정상 수준에 기초하여 진단될 수 있다.
용어 "원발성 담즙성 간경변"(종종 PBC로 약기됨)은 간의 소담관의 느린 진행성 파괴를 특징으로 하는 간의 자가면역 질병이며, 이때 소엽내관(헤링관(Canal of Hering))이 이 질병에서 초기에 영향을 받는다. 이들 관이 손상될 때, 담즙이 간에 축적되고(담즙정체), 시간이 지남에 따라 조직을 손상시킨다. 이것은 반흔형성(scarring), 섬유증 및 경변증으로 이어질 수 있다. 원발성 담즙성 경변증은 소엽내 담관 파괴를 특징으로 한다. 원발성 담즙성 간경변의 조직병리학적 검사결과는 상피내 림프구를 특징으로 하는 담관의 염증, 및 관주위 상피양 육아종을 포함한다. 4 단계의 PBC가 있다.
1기 ― 문맥 단계: 정상 크기의 삼조(triad); 문맥 염증, 미세한 담관 손상. 육아종이 이 단계에서 종종 검출된다.
2기 ― 문맥 주위 단계: 종대된 삼조: 문맥 주위 섬유증 및/또는 염증. 통상적으로, 이 단계는 소담관의 증식이라는 검사결과를 특징으로 한다.
3기 ― 중격 단계: 능동 및/또는 수동 섬유성 중격.
4기 ― 담즙성 간경변: 결절이 존재함; 갈런드(garland)
용어 "원발성 경화성 담관염"(PSC)은 간내(간 내부) 및 간외(간 외부) 수준 둘 모두에서 담관의 염증 및 후속 폐색을 야기하는 담관의 질병이다. 염증은 장으로의 담즙의 유동을 방해하며, 이는 궁극적으로 간의 경변증, 간부전 및 간암으로 이어질 수 있다.
용어 "비알코올성 지방성 간염"(NASH)은 간 내의 지방의 축적에 의해 야기된 간 염증이다. 일부 사람에서, 지방의 축적은 간의 염증을 야기한다. 염증으로 인해, 간은 그것이 기능해야 하는 만큼 잘 기능하지 않는다. NASH는 악화되어 간의 반흔형성을 야기할 수 있으며, 이는 경변증으로 이어진다. NASH는 장기간 심한 음주에 의해 야기되는 간 질병의 종류와 유사하다. 그러나, NASH는 알코올을 남용하지 않는 사람에서 발생된다.
용어 "기관"은, 세포 및 조직으로 이루어지고 유기체에서 어떠한 특정 기능을 수행하는 (심장, 폐, 신장, 간 등에서와 같이) 분화된 구조를 지칭한다. 이 용어는 또한 기능을 수행하거나 활동 시에 협력하는 신체 부분들(예를 들어, 시각적 기관을 구성하는 눈 및 관련된 구조)을 포함한다. 용어 "기관"은, 잠재적으로 완전 구조(예를 들어, 간의 엽(lobe) 또는 분절(section))로 발달될 수 있는 분화된 세포 및 조직의 임의의 부분 구조를 추가로 포함한다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물 및 특허 문헌은 마치 각각의 그러한 간행물 또는 문헌이 구체적으로 그리고 개별적으로 본 명세서에 참고로 포함되는 것처럼 본 명세서에 참고로 포함된다. 간행물 및 특허 문헌의 인용은 어떠한 것도 관련 선행 기술임을 인정하는 것으로서 의도되지 않으며, 또한 그것은 관련 종래 기술의 내용 또는 날짜에 대한 어떠한 인정도 포함하지 않는다. 지금 서면 기재 방식으로 설명된 본 발명에 대하여, 당업자는 본 발명이 다양한 구현예로 실시될 수 있고 본 명세서에 제공된 설명 및 실시예가 예시 목적이고 하기의 청구범위의 제한이 아님을 인식할 것이다.
본 명세서에서, 문맥에 명확히 달리 나타나 있지 않는 한, 단수형은 또한 복수형을 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 충돌되는 경우에, 본 명세서가 우선될 것이다. 본 명세서에 사용된 모든 백분율 및 비는, 달리 나타내지 않는 한, 중량 기준이다.
실시예
실시예 1: 담관 결찰(BDL) 모델
마우스에서의 총담관 결찰에 의해 유도된 섬유증에 대한 OCA 및 아토르바스타틴의 단독으로의 그리고 병용 시의 효과를 평가하기 위하여 이 실험을 수행하였다.
동물, 수용 및 식이
수컷 C57BL/6 마리의 마우스(6주령)를 Japan SLC사로부터 입수하였다. 동물들을 온도(23 ± 2℃), 습도(45 ± 10%), 조명(12 시간 인공 명암 주기; 8:00부터 20:00까지 명 상태), 및 공기 교환(공기 교환 속도: 시간당 40 회 초과)의 제어된 조건 하에서 특수 무병원체 시설에 유지하였다. 고압(20 ± 4 Pa)을 실험실에서 유지하여, 시설의 오염을 방지하였다. 동물들을 케이지당 최대 6 마리의 마우스로 KN-600(일본 소재의 Natsume Seisakusho사)에 수용하였다. 멸균 페이퍼-클린(Sterilized Paper-Clean)(Japan SLC사)을 잠자리로 사용하고, 주 1 회 교체하였다. 멸균 고형물 고지방 식이(HFD) 및 물을 수술 전날까지 3 주 동안 자유식(ad libitum)으로 제공하였다.
처리군
그룹 1: 가성
가성-수술 마우스(n=8)에 BDL 수술 후 일수 0부터 일수 6까지 일일 1 회 5 mL/kg의 부피로 비히클(0.5% CMC)을 경구 투여하였다.
그룹 2: BDL-비히클
BDL-수술 마우스(n=12)에 BDL 수술 후 일수 0부터 일수 6까지 일일 1 회 5 mL/kg의 부피로 비히클(0.5% CMC)을 경구 투여하였다.
그룹 3: BDL-OCA
BDL-수술 마우스(n=12)에 BDL 수술 후 일수 0부터 일수 6까지 일일 1 회 5 mg/kg의 용량으로 OCA가 보충된 비히클을 경구 투여하였다.
그룹 4: BDL-아토르바스타틴
BDL-수술 마우스(n=12)에 BDL 수술 후 일수 0부터 일수 6까지 일일 1 회 10 mg/kg의 용량으로 아토르바스타틴이 보충된 비히클을 경구 투여하였다.
그룹 5: OCA-BDL-아토르바스타틴
BDL-수술 마우스(n=12)에 BDL 수술 후 일수 0부터 일수 6까지 일일 1 회 5 mg/kg의 용량으로 OCA가 그리고 10 mg/kg의 용량으로 아토르바스타틴이 보충된 비히클을 경구 투여하였다.
담관 결찰 수술
담관 결찰 수술을 일수 0에서 수행하였다. 펜토바르비탈 마취 하에서 총담관의 결찰에 의해 마우스에서 담즙정체(이는 시간 경과에 따라 간의 섬유증으로 이어짐)를 확립하였다. 마우스를 수술 전날에 그들의 체중에 기초하여 2 개의 수술 코호트로 나누었다. 모발을 면도한 후, 복강을 개복하고, 총담관을 5-0 수술용 실크로 2 회 결찰하고, 결찰부들 사이에서 총담관을 잘랐다. 복막 및 피부를 봉합사로 봉하였다. 마우스를 마취로부터의 회복을 위하여 클린 케이지(휴식 케이지)에 옮겼다. 가성 마우스는 기타 다른 집단과 유사한 방식으로 수술하였지만 담관은 결찰하지 않았다.
동물 모니터링 및 희생
생존력, 임상 징후 및 거동을 매일 모니터링하였다. 처리 기간 동안 체중을 매일 기록하였다. 처리 기간 동안 케이지당 매주 2 회 먹이 소비량을 측정하였다. 일수 6에서, 에테르 마취(Wako Pure Chemical Industries사) 하에서 직접 심장 천자를 통한 방혈에 의해 동물들을 희생시켰다.
조직학적 분석
콜라겐 침착을 시각화하기 위하여, 피크로-시리우스 레드(picro-Sirius red) 용액(독일 소재의 Waldeck사)을 사용하여 보우인-고정 좌외 간 분절(Bouin's-fixed left lateral liver section)을 염색하였다. 섬유증 영역의 정량적 분석을 위하여, 100배 배율로 디지털 카메라(DFC295; Leica, Germany)를 사용하여 시리우스 레드-염색 분절의 명시야 이미지를 중심 정맥 주위에서 포착하고, 분절당 5 군데 시야의 양성 영역을 ImageJ 소프트웨어(미국 국립보건원(National Institute of Health, USA))를 사용하여 측정하였다. Prism Software 6(미국 GraphPad Software, Inc사)을 사용하여 통계학적 분석을 수행하였다.
결과
시리우스-레드 염색에 의해 (일상적인 방법에 따라) 간 분절에 대해 조직병리학적 분석을 수행하여 섬유증 영역의 백분율을 평가하였다. 시리우스 레드-염색 간 분절의 대표적인 현미경 사진이 도 1a 내지 도 1e에 나타나 있다. BDL-비히클군은 BDL-가성군과 비교하여 시리우스 레드-양성 영역의 유의한 증가를 나타내었다. 표 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, BDL-OCA+아토르바스타틴군은 BDL-비히클군과 비교하여 시리우스 레드-양성 영역의 유의한 감소를 나타내었다.
Figure pct00015
표 1에서의 결과는 OCA 및 아토르바스타틴의 병용물이 섬유증을 유의하게 감소시켰음을 나타낸다.
실시예 2: APOE*3Leiden.CETP 마우스에서의 식이 유도 NASH
APOE*3Leiden.CETP 유전자도입 마우스에서의 식이 유도 NASH 및 간 섬유증의 발생에 대한 OCA 및 페노피브레이트의 단독으로의 또는 병용 시의 효과를 평가하기 위하여 이 실험을 수행하였다. 간 유전자 발현 프로파일링 및 후속 경로 분석을 수행하여, 이러한 병용물이 단제요법 치료에 의해 조절되지 않는 신규한 유전자를 조절하고/조절하거나, 단제요법에 의해 또한 영향을 받은 유전자를 더 강력하게 조절하는지의 여부를 결정하였다.
동물, 수용 및 식이
수컷 APOE*3Leiden.CETP 유전자도입 마우스(9 주령 내지 21주령)를 입수하고, 케이지당 2 마리 내지 5 마리의 마우스를 수용하였다. 마우스에 24% 라드 및 1%(w/w) 콜레스테롤을 함유하는 고지방 식이를 급식하였다. 실시 기간은 고지방 식이로 15 주였다. 주수 16에서, 마우스를 4 시간 절식 후에 연령, 체중, 혈장 콜레스테롤 및 트리글리세리드에 기초하여 매칭시켰다.
처리군
그룹 1: HFC 참조군(reference group) 시작 처리
마우스(n=15)에 이 실시 동안 주수 0 내지 주수 14에서 고지방 식이를 급식하였다.
그룹 2: HFC 대조군
마우스(n=15)에 주수 0부터 주수 24까지 고지방 식이를 급식하였다.
그룹 3: HFC + OCA
마우스(n=15)에 주수 16부터 주수 24까지 일일 1 회 10 mg/kg의 용량으로 OCA가 보충된 고지방 식이를 급식하였다.
그룹 4: HFC + 저용량 페노피브레이트
마우스(n=15)에 주수 16부터 주수 24까지 일일 1 회 10 mg/kg의 용량으로 페노피브레이트가 보충된 고지방 식이를 급식하였다.
그룹 5: HFC + 고용량 페노피브레이트
마우스(n=15)에 주수 16부터 주수 24까지 일일 1 회 40 mg/kg의 용량으로 페노피브레이트가 보충된 고지방 식이를 급식하였다.
그룹 6: HFC + OCA + 저용량 페노피브레이트
마우스(n=15)에 주수 16부터 주수 24까지 일일 1 회 10 mg/kg의 용량으로 OCA가 그리고 10 mg/kg의 용량으로 페노피브레이트가 보충된 고지방 식이를 급식하였다.
그룹 7: HFC + OCA + 고용량 페노피브레이트
마우스(n=15)에 주수 16부터 주수 24까지 일일 1 회 10 mg/kg의 용량으로 OCA가 그리고 40 mg/kg의 용량으로 페노피브레이트가 보충된 고지방 식이를 급식하였다.
그룹 8: 사료(chow) 대조군
마우스(n=8)에 주수 0부터 주수 24까지 사료를 공급하였다.
연구 설계
마우스에 14 주 동안 고지방 사료(high fat chow, HFC) 식이를 공급하였다. HFC 식이로 15 주째 후에, HFC 마우스를 4 시간 절식 후에 연령, 체중, 혈장 콜레스테롤 및 트리글리세리드에 기초하여 7 개의 그룹으로 매칭시켰다. 마우스를 주수 15에서 OCA 및 페노피브레이트로 단독으로 또는 병용하여 처리하고, 비절식 상태로 주수 25에서 희생시켰다. 희생 1주 전에, D2O의 볼루스를 i.p. 주사하고 후속으로 4% D2O를 음용수에 첨가함으로써 마우스에 D2O를 표지화하였다. 심장 천자에 의해 혈장(EDTA)을 수득하고 -70℃에서 저장하였다. 간의 중량을 측정하고, 4 개의 조각의 간을 단리하였다: 1 개의 조각(중엽)은 10% 포르말린에 고정시키고(NASH 및 섬유증 조직학적 분석을 위함), 3 개의 조각(좌엽)은 액체 N2 중에서 급속-동결시켜 개별적으로 -70℃에서 저장하였다.
간 염증 점수
염증은 NASH의 핵심 특징이다. 문헌[Liang et al., PlosOne 2014 Dec, 9(12)]에 의한 절차에 따라 염증을 분류하고, 염증성 세포 응집체의 수를 정량적으로 분석함으로써 점수를 매겼다. 특히, 100× 배율을 사용하여 시야당 염증성 병소의 수를 계수함으로써(화면 크기 3.1 mm2; 평균 5 군데의 상이한 시야), 염증의 수준을 평가하였다.
결과: APOE *3- Leiden . CETP 마우스에서의 염증에 대한 OCA +/- 페노피브레이트의 효과의 요약
NASH 식이 중인 APOE*3-Leiden.CETP 마우스에서의 염증에 대한 OCA 10 mg/kg의 효과를 단독으로 그리고 페노피브레이트(10 mg/kg 및 40 mg/kg)와 병용하여 조사하였다. 저용량으로의 약물 투여 10 주 후에, OCA(10 mg/kg) 또는 페노피브레이트(10 mg/kg) 어느 것도 염증성 세포 병소의 수를 감소시키지 않았다(도 3a 및 도 3b 및 표 2). 대조적으로, 병용물은 비히클 대조군뿐만 아니라 각각의 단제요법군(monotherapy arm)에 비하여 염증을 유의하게 감소시켰다. 고용량의 페노피브레이트(40 mg/kg/d)가 또한 비히클 대조군에 비하여 염증을 유의하게 감소시켰다. OCA와 병용되었을 때, 추가의 항염증 효과는 분명하지 않았는데, 이는 고용량의 페노피브레이트가 단독으로 최대에 가까운 효과를 나타내었기 때문이다. 요약하면, OCA + 저용량 페노피브레이트 병용물에 의한 염증의 유의한 감소(-63%)가 관찰되었다. 더욱이, 고용량의 페노피브레이트에 의한 유의한 감소(-74%) 및 OCA와의 병용 시의 유의한 감소(-79%)가 관찰되었다. 표 2 및 도 3a 및 도 3b를 참조한다.
Figure pct00016
표 2에서의 결과는 OCA 및 고용량의 페노피브레이트의 병용물의 효능이 유도되고 고용량의 페노피브레이트에 의한 상한에 도달함을 시사한다.
RNA 단리 및 서열분석
앞서 상세히 설명한 바와 같이 핵산 추출을 수행하였다(문헌[Verschuren et al., 2014]). 간략하게 말하면, 유리 비드 및 RNAzol(네덜란드 비넨달 소재의 Campro Scientific사)을 사용하여 개별 간 샘플들로부터 총 RNA를 추출하였다. Fragment Analyzer(미국 소재의 Advanced Analytical Technologies사) 및 RNA 6000 Nano Lab-on-a-Chip 키트 및 Bioanalyzer 2100(네덜란드 암스텔베인 소재의 Agilent Technologies사)을 사용하여 RNA 농도 및 품질을 결정하였다. 모든 샘플은 품질 요건을 충족시켰으며, 이들을 RNA 서열분석 절차에 사용하였다.
Illumina를 위한 NEBNext Ultra Directional RNA 라이브러리 프렙 키트(Prep Kit)를 사용하여 샘플들을 처리하였다. 프로토콜 "NEBNext Ultra Directional RNA Library Prep Kit for Illumina"(NEB#E7420S/L)에 따라 샘플 제조를 수행하였다. 간략하게 말하면, 올리고-dT 자성 비드를 사용하여 총 RNA로부터 mRNA를 단리하였다. mRNA의 단편화 후에, cDNA 합성을 수행하였다. 이것을 서열분석 어댑터들의 연결 및 생성된 산물의 PCR 증폭에 사용하였다. 샘플 제조 후의 품질 및 수율을 Fragment Analyzer(미국 소재의 Advanced Analytical Technologies사)를 사용하여 측정하였다. 생성된 산물의 크기는 예측된 크기 분포와 일치하였다(300 bp 내지 500 bp의 폭넓은 피크).
Illumina NextSeq 2500을 사용한 클러스터링 및 DNA 서열분석을 제조자의 프로토콜에 따라 수행하였다. 샘플당 대략 1500만 개의 리드(read) 및 리드당 75 bp를 획득하는 싱글-엔드 리드(single-end read) 서열분석 프로토콜을 사용하여 데이터를 생성하였다. Illumina 데이터 분석 파이프라인 RTA v2.4.11을 사용하여 이미지 분석, 염기 결정(base calling), 및 품질 검사를 수행하여 원시 데이터(raw data)(*.fastq 파일)를 생성하였다.
버로우즈-휠러 변환(Burrows-Wheeler Transform)에 기초하여 짧은 리드 얼라이너(short read aligner)를 사용하여, 리드를 기준 서열 Mus musculus GRCm38.p3에 맵핑하였다. 2%의 디폴트 불일치율(150 개 염기의 리드에서 3 개의 불일치)을 사용하였다. 정렬 파일(*.bam 파일)에서의 매핑된 리드 위치에 기초하여, 얼마나 종종 리드가 전사체 상에 매핑되는지 그 빈도를 결정하였다. 이 카운트를 count 파일에 저장하였으며, 이것을 하류 mRNA-seq 차별적 발현 분석을 위한 입력치로서 제공하였다. 리드 카운트를 R 플랫폼 내의 통계학적 패키지인 DESeq 패키지 내로 로딩하였다. 상이한 샘플들에 대한 RNA-seq 데이터를 정규화하고, RNA-seq 데이터에 대한 2 가지 조건 사이에 차별적으로 발현된 유전자를 찾아내어, 각각의 유전자의 평균과 분산 사이의 관계를 평가하기 위하여 DESeq를 특별히 개발하였다(문헌[Anders et al., 2013]). 더욱이, 이것은 축척 계수(scaling factor)가 통계학적 검사에 용이하게 포함될 수 있게 한다. P<0.01의 유의성에 대한 역치를 사용하여 차별적으로 발현된 유전자를 확인하였으며, 유전자를 IPA(Ingenuity Pathway Analysis) 제품군(2016년 입수)을 통한 경로 분석을 위한 입력치로서 사용하였다.
IPA 소프트웨어를 사용하여 상류 조절인자 분석을 수행하였다(문헌[Kramer et al., 2014]). 이 분석은 관찰된 차별적 유전자 발현에 기초하여 전사 인자의 활성화 상태를 결정한다. 그 결과, IPA 지식 베이스에서 각각의 전사 인자에 대한 중첩 P-값 및 활성화 z-점수를 얻게 된다. 중첩 P-값은 전사 인자의 기지의 표적 유전자와 실험에서 측정된 차별적으로 발현된 유전자 사이의 중첩의 유의성을 나타낸다. 활성화 z-점수는 특정 전사 인자의 활성화(양의 z-점수) 또는 억제(음의 z-점수)를 나타낸다. -2 미만 또는 2 초과의 활성화 z-점수는 경로 또는 과정의 유의한 억제 또는 활성화를 나타낸다.
오믹스 ( Omics ) 결과
처리된 마우스로부터의 간 mRNA 샘플에 대해 차세대 서열분석을 수행하여, 기저가 되는 기전 및 경로에 대한 통찰을 얻었다. 기저가 되는 기전 및 경로에 대한 통찰을 얻기 위해 2 가지 분석을 수행하였다.
먼저, 표준 경로 분석의 부화 분석은 OCA가 몇몇 염증성 과정을 조절하였음을 보여주었다(도 6a). 이 도면은 -log p-값의 함수로서 각각의 경로를 도표로 나타낸다(참조를 위하여, p<0.05에 대한 변환값은 1.3이고, p<0.0001에 대한 변환값은 4이고, p<0.000005에 대한 변환값은 5.3이고 등등이다). OCA 단제요법에 의해 조절된 경로는 T- 및 B-세포 신호전달, 백혈구 혈관외유출 신호전달, 자연 살해 세포 신호전달 등과 관련되었다. 저용량의 페노피브레이트는 이들 경로에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다. OCA를 저용량의 페노피브레이트와 병용하였을 때, 동일한 경로들 중 일부를 강하게 조절하였다(T-헬퍼 세포에서의 iCOS-iCOSL 신호전달, 백혈구 혈관외유출 신호전달, 패턴 인식 수용체, 대식세포에서의 FC 수용체-매개 식세포작용, 및 식포(phagosome) 형성의 경우에). 추가적으로, 어느 작용제든 단독으로는 유의하게 조절되지 않은 기타 다른 경로(예를 들어, 콜레스테롤 생합성 I 및 II, 지방산 b-산화)가 병용물에 의해 조절되었다(도 6b). 조직학적 데이터와 마찬가지로, 고용량의 페노피브레이트는 이들 경로에 대해 확실한 효과를 가졌지만, OCA 병용-투여에 의해 향상되지는 않았다.
백혈구 혈관외유출 신호전달에 관여하는 경로에 대해 더 상세한 분석을 수행하였다. 백혈구의 혈관외유출은 NASH(및 기타 다른 질병)에서의 병태생리학적 과정에 있어서 본질적이다. 이들 과정은 면역 감시를 위한 T-림프구의 이동, 급성 및 만성 염증 반응 동안 활성화된 림프구 및 과립구의 동원, 및 조혈 선조 세포의 호밍(homing) 및 동원을 포함한다. 이 연구로부터 고지방 식이로 마우스를 유지하는 효과는 이들 과정이 유전자를 유의하게 상향조절 및 하향조절하였음을 예시한다. 표 3은 표준 사료로 유지된 마우스에 비하여 고지방 식이로 유지된 마우스에서 백혈구 혈관외유출 신호전달에 대한 고지방 식이의 효과, 및 또한 고지방 식이에 대한 병용 치료의 효과를 기재한다.
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
내피를 가로지르는 백혈구의 이행(transmigration) 및 혈관외유출이 몇몇 별개의 단계에서 일어나는데, 이러한 단계에는 접착 분자들 사이의 일시적으로 약한 상호작용에 의해 매개된, 내피 세포 위로의 백혈구의 롤링 단계가 포함된다. 후속으로, 느슨하게 부착된 백혈구가 내피에 근접해 있어서, 내피의 정점 표면 상에 제시된 주화성 사이토카인에 의해 활성화되게 된다. 다음으로, 활성화된 백혈구는 확산되고 내피에 단단히 접착되어 도킹 구조를 형성하고, 궁극적으로 내피 세포들 사이의 세포간 클레프트(intercellular cleft)를 통해 그 아래에 놓인 조직으로 이동한다.
OCA의 투여는 백혈구 내의 그리고 이뿐만 아니라 내피 세포 내의 이러한 염증 캐스케이드 과정에 관여하는 다수의 유전자(백혈구 내(WAP, Rac2, RASGRP1, Vav, PKC, PI3K, ERM, ITGAL 및 PSGL-1), 및 내피 세포 내(VCAM1, PI3K, ERM, NOX, CYBA, PKC, NCFl 및 2))를 하향조절한다. 이들 경로 내의 유전자 조절은 저용량의 페노피브레이트 단독으로의 투여 후에는 분명하지 않았다.
OCA를 이들 경로를 조절하는 데 효과적이지 않은 페노피브레이트의 용량과 병용하였을 때, 다수의 추가 유전자가 이제 상승 효과를 나타내면서 조절된다. 백혈구 내에서, 이들 추가의 유전자는 CD43, PSGL-1, CXCR4, ITGAM, ITGB2, Rap1, ITGA4를 포함하였다. 내피 세포 내에서, 이들 추가의 유전자는 ICAM1, RhoGAP, VASP, NCF4, ITGAM, ITGB2, ITGA4 및 ICAM-1을 포함하였다.
상기에 기재된 바와 같이, 고용량의 페노피브레이트는 OCA 병용-투여에 의해 향상되지 않은 이러한 경로에 대해 다수의 효과를 가졌다. 모든 후속 분석은 저용량 단제요법 및 병용물(OCA 10 mg/kg +/- 페노피브레이트 10 mg/kg)에 초점을 맞추었다.
두 번째 분석에서, 저용량 병용물과 각각의 개별 단제요법 사이에서 차별적으로 조절된 유전자를 비교하였다. 이는 비히클군과의 비교에 초점을 맞춘 (전술된) 제1 유전자 발현 분석과 상이하며; 하기의 분석은 각각의 단제요법을 병용물과 비교한다. 벤 다이어그램(도 7a)은, OCA가 109개의 고유하게 조절된 유전자를 갖고, 페노피브레이트가 92 개의 고유하게 조절된 유전자 및 6 개의 공통으로 조절된 유전자를 가짐을 나타낸다. 병용물은 OCA와 517 개의 중첩 유전자를, 페노피브레이트와 75 개의 중첩 유전자를 조절하였으며, 5 개의 유전자는 모두에게 공통이었다. 주목할 것은, 병용물은 총 912 개의 고유 유전자를 조절하였다는 것이다. 후속 경로 부화는 병용물 유전자가 관여하는 생물학적 과정을 강조한다(도 7b).
백혈구 혈관외유출에 대해 후속 경로 분석 둘 모두를 수행하였는데, 예를 들어 상기에서와 같지만, 이번 비교는 병용물과 각각의 단제요법 사이에서 이루어진다. 백혈구 혈관외유출의 경우, 병용물 vs. 각각의 단제요법의 비교는 다수의 고유하게 조절된 유전자가 존재함을 나타내었는데, 이는 병용물-처리된 마우스에서 조직학적으로 나타내어지는, 관찰된 향상된 항염증 변화와 일치한다(표 4).
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
NASH에서 염증으로부터 섬유증으로의 진행, 및 병용물에서 유의하게 조절된 바와 같이 간 섬유증/HSC 경로가 출현하였다는 관찰을 고려하여, 본 발명자들은 또한 HSC에서의 경로를 조사하였다. 단제요법과 비교하였을 때, 페노피브레이트 단독과 대비하여 병용물에서 더 많은 유전자가 조절되고, OCA와 대비하여 병용물에서 더 적은 유전자가 조절됨이 명백하다. 다시 말하면, 이들 섬유증 경로에 관하여, 두 작용제 사이에 상호작용이 명백히 존재하지만, 병용물의 OCA 부분이 이들 효과를 더 강력하게 유도할 수 있다.
해석 및 관련성
섬유증 및 염증을 예방하는 데 있어서의 FXR 활성화의 중요성은, 진행성 연령-관련 손상 및 염증(문헌[Yang 2007])과 함께, 염증 유전자의 상승된 발현(문헌[Kim 2007])을 나타내는 FXR 녹아웃(knockout) 마우스로부터 유래된 간에서 입증되어 있다. 이들 보고와 일치되게, OCA는 HepG2 세포 및 마우스 초대 간세포(primary hepatocyte)에서 항염증 특성을 발휘하였다. OCA로 사전처리되고, 이어서 전염증성 자극에 노출된 HepG2 세포는 TNF-α mRNA 수준, 사이클로옥시게나제-2(COX-2) 유도 및 TNF-α-자극된 유도성 산화질소 신타제(iNOS) 발현에 있어서 50% 내지 60% 감소를 나타내었다. 유사하게, OCA-처리된 초대 간세포는 iNOS의 (40% 내지 50%만큼) 약화된 유도, 및 전염증성 자극에 따른 단핵구 화학유인성 단백질-1(MCP-1) 유전자 발현을 나타내었다(문헌[Wang 2008]). 세포 이동의 기전에 대한 OCA의 효과는 직접적으로 연구되어 있지는 않지만, OCA는 IL-1β에 의해 유도되는 iNOS 또는 COX-2의 생성을 억제하고, 약리학적으로 유도된 래트 대동맥 평활근 세포 이동을 소멸시켰다(문헌[Li 2007]). OCA에 의한 염증성 침윤의 유사한 억제가 염증성 장 질병의 2 가지 동물 모델(DSS 및 트리니트로벤젠 설폰산)의 장 조직(문헌[Gadaleta 2011]), 및 1형 당뇨병의 래트 모델의 신장에서 입증되었다(문헌[Wang 2010]). 따라서, OCA에 의해 향상된 항염증 효과의 관찰은, 페노피브레이트와 병용 시의 OCA에 의한 유전자 발현에 있어서의 변화가 다수의 질병 상태에서 염증 및 염증 세포 이동의 억제를 향상시킬 수 있었음을 시사한다.
실시예 3: 렙틴-결핍 ob/ob 마우스에서의 식이 유도 NASH
수컷 렙틴-결핍 ob/ob-NASH 마우스에서의 섬유증 단계(생검전 vs. 생검후)에 대한 단독으로의 그리고 병용으로의 OCA 및 아토르바스타틴에 의한 8 주의 처리의 효과를 평가하기 위하여 이 실험을 수행하였다.
동물, 수용 및 식이
수컷 Lep ob / Lep ob 마우스(5 주령)를 프랑스 소재의 JanVier사로부터 구매하였다. 순응화 및 식이-유도 기간 동안, 제어된 온도 조건(22±1℃; 50 ± 10% 상대 습도)에서 12:12 명암 주기(3 AM부터 3 PM까지 명 상태) 하에서 주문제작 캐비닛 내에서 케이지당 5 마리씩 마우스를 집단 수용하였다. 식이 유도 및 연구 기간 전체에 걸쳐, 마우스는 주문제작 NASH 식이(S8189, 독일 소재의 Ssniff사)(40% 지방, 40% 탄수화물(20% 프룩토스) 및 2% 콜레스테롤) 또는 통상의 설치류 사료(ob/ob-CHOW)(Altromin 1324, 덴마크 소재의 Brogaarden사), 및 수돗물에 자유식으로 접근하였다. 동물들을 개입 전 총 18 주 동안 이 식이로 유지하였으며, 연구 기간 전체에 걸쳐 이 식이로 유지하였다. 동물들을 수술후 회복 동안 그리고 연구 기간 전체에 걸쳐 개별적으로 수용하였다.
처리군
그룹 1: Lep ob / Lep ob -NASH 비히클
마우스(n=10)에 주수 0부터 주수 8까지 일일 1 회 5 mL/kg의 부피로 비히클(0.5% CMC)을 경구 투여하였다.
그룹 2: Lep ob / Lep ob -NASH OCA
마우스(n=10)에 주수 0부터 주수 8까지 일일 1 회 30 mg/kg의 용량으로 OCA가 보충된 비히클을 경구 투여하였다.
그룹 3: Lep ob / Lep ob -NASH
마우스(n=11)에 주수 0부터 주수 8까지 일일 1 회 10 mg/kg의 용량으로 아토르바스타틴이 보충된 비히클을 경구 투여하였다.
그룹 4: Lep ob / Lep ob -NASH OCA + 아토르바스타틴
마우스(n=9)에 일일 1 회 30 mg/kg의 용량으로의 OCA 및 30 mg/kg의 용량으로의 아토르바스타틴과의 병용물이 보충된 비히클을 경구 투여하였다.
연구로의 배정, 층별 무작위화 및 기저선 모니터링
15 주의 식이 유도 후에(연구 시작 3 주 전에), 섬유증 및 지방증의 간 진행의 평가를 위하여, 그리고 간 섬유증 단계의 평가를 위하여 간 생검을 얻었다. 주수 -1에서, 간 섬유증 단계, 지방증 점수, 및 체중에 따라 처리군으로의 계층 무작위화를 수행하였다.
생검전 절차
수술 당일에, 마우스를 100% 산소 중 이소플루란(2% 내지 3%)으로 마취시켰다. 정중선에 작은 복부 절개부를 만들고 간의 좌외엽(left lateral lobe)을 노출시켰다. 간 조직을 원추형 쐐기 형상(약 100 mg)으로 엽의 원위부로부터 절제하고, 중량을 측정하고, 조직학적 검사를 위하여 4% 파라포름알데하이드(PFA) 중에 고정시켰다. 간의 절단 표면을 쌍극 응고(ERBE VIO 100 전기수술기)를 사용하여 즉시 전기응고시켰다. 간을 복강에 되돌려 넣고, 복부를 봉합하고, 피부를 스테이플러로 봉하였다. 수술 당일에, 마우스는 수분보급(rehydration)을 위하여 따뜻한 식염수(0.5 ml)를 제공받았다. 수술후 회복 동안, 카르프로펜(5 mg/ml 내지 0.01 ml/10 g) 및 엔로플록사진(5 mg/ml 내지 1 ml/kg)을 수술 당일 및 수술 후 일수 1 및 일수 2에서 피하 투여하였다.
지방증 및 섬유증의 간 수준의 평가를 위한 사전-스크리닝
조직학적 평가를 위한 간 생검 제조: 4% PFA 중에서의 밤새 저장 후에, 간 생검을 자동화 Miles Scientific Tissue-TEK VIP 조직 처리기(Tissue Processor) 내에서 파라핀 중에 밤새 침윤시키고, 후속으로 파라핀 블록 중에 포매시켰다. 5 마리의 상이한 동물로부터의 생검을 하나의 블록 상에 포매시켰다. 이어서, 블록들을 트리밍하고, 2 개의 3 μm 절편을 Microm HM340E 마이크로톰(Thermo Scientific사) 상에서 잘라내었다(1 개는 시리우스 레드를 위한 것이고, 1 개는 H&E 염색을 위한 것임). 2 개의 블록을 하나의 슬라이드 상에 놓아서, 슬라이드당 총 10 개의 생검을 제공하였는데, 이때 총 10 개의 생검은 10 마리의 상이한 동물을 나타낸다. 절편들을 밤새 건조되게 두었다. 처리군으로의 층별화 및 무작위화를 위한 섬유증 단계의 평가를 문헌[Kleiner et al. (2005)]에 개략적으로 설명된 바와 같이 수행하였다(하기 참조).
기저선 및 최종 혈장 바이오마커
트리글리세리드의 비절식(급식) 혈장 수준을 측정하기 위한 혈액 샘플을 기저선으로 아침(7 AM 내지 8 AM)에 그리고 처리 주수 8에서 얻었다. 의식 상태에서 (스닙핑(snipping)함으로써) 꼬리 정맥으로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 혈액 샘플링 약 18 시간 전에 마지막 약물 용량을 투여하였다. 혈액 샘플링 후, 마우스에 재급식하였다.
종결 및 부검
동물들을 비절식 상태에서 주수 8에서 종결시켰다. 종결 약 18 시간 전에 마지막 약물 용량을 투여하였으며, 동물들은 종결 전에 약물 투여를 공급받지 않을 것이다. 동물들을 CO2/O2에 의해 유도하고, 마취(이소플루란) 동안 복강을 개복하고, 종점 혈장의 수집을 위하여 심장 혈액을 얻었다. 부검 시에, 전간(whole liver)을 수집하고 중량을 측정하였다. 좌외엽으로부터 생검을 절제하고, 조직학적 검사 및 생화학적 분석을 위하여 4% PFA 중에 고정시켰다. 중엽을 조각들로 분할하고, 생화학적 분석(TG)을 위하여 액체 질소 중에서 급속 동결시켰다. 후속으로, 나머지 간 조직을 차후의 선택적인 조직학적 분석을 위하여 4% PFA 중에 고정시켰다.
간 조직 처리
연구전 생검: 연구 시작 대략 3 주 전에, 간 조직을 원추형 쐐기 형상(약 100 mg)으로 좌외엽의 원위부로부터 절제하고, 중량을 측정하고, 4% PFA 중에 즉시 넣었다.
종점 간 조직: 8 주의 처리 후에, 전간을 수집하고, 중량을 측정하고, 좌외엽으로부터 간 생검을 절제하고, 4% PFA 중에 즉시 넣었다(약 150 mg 내지 200 mg). 중엽의 조각들을 동결튜브(cryotube)(RNAseq)(약 100 mg) 내에서 그리고 TG(약 100 mg)를 위하여 그리고 TC(약 50 mg)를 위하여 FastPrep 튜브 내에서 급속 동결시킬 것이다.
조직학적 분석을 위한 고정, 포매 및 절편: 4% PFA 중에서의 밤새 고정 후에, 간 생검을 자동화 Miles Scientific Tissue-TEK VIP 조직 처리기 내에서 파라핀 중에 밤새 침윤시키고, 후속으로 파라핀 블록 중에 포매시켰다. 5 마리의 상이한 동물로부터의 생검을 하나의 블록 내에 포매시켰다. 블록들을 트리밍하고, 블록당 2 개의 3 μm 절편을 Microm FDVI340E 마이크로톰(Thermo Scientific사) 상에서 잘라내었다. 2 개의 상이한 블록으로부터의 하나의 절편을 하나의 대물렌즈 슬라이드 상에 놓아서, 상기에 개략적으로 설명된 바와 같이 슬라이드당 총 10 개의 생검을 제공하였다.
섬유증 단계
좌외엽으로부터의 생검전 및 생검후의 간 조직을 Kleiner 및 동료들에 의해 개략적으로 설명된 임상 기준(문헌[Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease, Kleiner et al, Hepatology 41; 2005])을 사용함으로써 섬유증 단계의 평가를 위해 수집하고, 하기 표 5에 재편집하였다. 도 4는 섬유증 점수화에 대한 OCA 및 아토르바스타틴의 단독으로의 그리고 병용 시의 효과를 나타낸다. OCA 및 아토르바스타틴의 병용물은 섬유증 점수를 저하시키는 경향을 나타내지만, 비히클로부터 유의한 방식으로 행해지지는 않는다(p 값 = 0.09).
Figure pct00023
혈장 트리글리세리드
트리글리세리드 수준: 100 μl의 혈액을 리튬-헤파린 튜브 내에 수집한다. 혈장을 분리하고, 샘플을 분석 시까지 섭씨 -80도에서 저장하였다. 제조자의 설명서에 따라 시판 키트와 함께 자동분석기 Cobas C-111(독일 소재의 Roche Diagnostics사)을 사용하여 단회 결정으로 트리글리세리드 수준을 측정하였다. 도 5a 및 도 5b에 나타낸 바와 같이, OCA 및 아토르바스타틴의 병용물은 통계학적으로 유의한 방식으로 트리글리세리드 수준을 감소시켰다.
실시예 4: 간세포의 샌드위치 배양
PPAR 효능제 또는 스타틴과의 병용 시의 OCA의 효과를 평가하여 인간 간세포에서 콜라겐 합성을 변경시키는 그의 능력을 결정하기 위해 이 실험을 수행할 것이다.
시약 및 용액
적합한 세포 배양 배지는 웨이마우스(Waymouth) MB-752/1, 햄(Ham) F12, RPMI 1640, 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium), 윌리암스(Williams) 배지 E, 라이보비츠(Leibovitz) L15 및 변형된 치(Chee) 배지를 포함한다. IV형 콜라게나제, I형 콜라겐, Percoll, 배양 배지 및 보충물을 배양 배지에 첨가하고(예를 들어, 혈청, 항생제, 아미노산, 호르몬, 예컨대 DEX, 인슐린, 및 성장 인자), 관류 완충액, 및 기타 다른 용액은 구매가능하거나, 구매가능한 재료로부터 제조하였다. 기타 다른 유형의 콜라겐(II형 내지 IV형), 라미닌, 피브로넥틴, 및 헤파린 설페이트 프로테오글리칸이 샌드위치 간세포 배양에 사용될 수 있다. 그러나, I형 및 IV형 콜라겐이 피브로넥틴 및 라미닌보다 월등한 것으로 밝혀졌다.
간세포의 단리
2-단계 원위치(in situ) 콜라게나제 관류 방법을 이용하여 간 세포를 단리할 것이다. 간략하게 말하면, 암컷 루이스(Lewis) 래트로부터 간세포를 단리할 것이다. 동물을 마취시킬 것이다. 간을 먼저 관류 완충액을 사용하여 원위치에서 문맥을 통해 관류시킬 것이다. 간에 넣기 전에 관류액을 평형화시킬 것이다. 후속으로, 간을 관류 완충액 중 콜라게나제를 사용하여 관류시킬 것이다. 이어서, 간을 절개하고 빙랭 관류 완충액에 옮길 것이다. 간 캡슐을 찢어서 해체시키고, 생성된 세포 현탁액을 여과할 것이다. 세포 펠릿을 원심분리에 의해 수집하고 재현탁시킬 것이다. Percoll을 현탁액에 첨가하고, Percoll 밀도 원심분리 기법을 사용하여 간세포를 분리할 것이다. 혼합물을 원심분리하고, 세포 펠릿을 배지로 2 회 세척할 것이다. 트립판 블루 배제에 의해 간세포 생존력을 결정할 것이다. 대안적으로, 동결보존된 간세포가 신선하게 단리된 간세포 대신 사용될 수 있다.
간세포의 샌드위치 배양
단리된 간세포를 콜라겐-코팅된 조직 배양 플레이트 상에서 배양하고, 혈청, 페니실린, 스트렙토마이신, 표피 성장 인자, 인슐린, 글루카곤 및 하이드로코티손이 보충된 배양 배지 중에서 유지할 것이다. I형 콜라겐 용액 및 배양 배지를 혼합함으로써 콜라겐 겔화 용액을 제조할 것이다. 조직 배양 플레이트를 겔화 용액으로 코팅하고, 37℃에서 인큐베이션하여 겔 형성을 촉진시킬 것이다. 간세포를 적절한 밀도로 시딩하고 37℃에서 유지할 것이다. 배양 배지를 매 24 시간마다 교체할 것이다.
샌드위치 시스템을 위하여, 추가 콜라겐 겔 용액을 1일의 배양 후에 세포 위로 분포시킬 것이다. 배양 배지를 조심스럽게 제거하여, 콜라겐 겔의 제2 층이 전체 플레이트 위로 균일하게 확산됨을 보장한다. 배양 플레이트를 37℃에서 인큐베이션하여, 제2 겔 층의 겔화 및 부착을 가능하게 한 후, 배지를 교체하였다. 배양 배지를 매일 교체할 것이다. 배지 샘플을 추가의 분석을 위하여 -20℃에서 저장할 것이다.
겔화된 콜라겐의 층들 사이에서 배양된 간세포는 3차원 입방 형상, 및 생체내에서 관찰되는 것과 유사한 세포골격 단백질의 분포를 유지한다.
담세관 네트워크(bile canalicular network) 형성의 최적화
타우로콜레이트 축적 및 담즙 배설을 최적화하기 위하여, 특정 배양 배지, 예컨대 윌리암스 배지 E 및 둘베코 변형 이글 배지가 샌드위치 간세포 배양에 사용될 수 있다.
시험 대상물
연구를 위해 의도된 FXR 효능제는 오베티콜산으로, 이는 "OCA" 및 6-에틸 케노데옥시콜산(6-ECDCA)으로도 알려져 있다.
연구를 위해 의도된 PPAR-알파 효능제는 클로피브레이트, 겜피브로질, 시프로피브레이트, 베자피브레이트, 및 페노피브레이트 중 하나 이상을 포함한다.
이중 PPAR-알파/델타 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산이다.
연구를 위해 의도된 PPARδ(델타) 효능제는 GW501516이다.
연구를 위해 의도된 스타틴(HMG-CoA 리덕타제 억제제)은 아토르바스타틴(Lipitor), 로수바스타틴(Crestor) 및 심바스타틴(Zocor)을 포함한다.
실시예 5: 지질 프로파일에 대한 시험 대상물의 개별 투여의 효과를 평가한다.
5가지 시험 대상물, 즉 FXR 효능제, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 이중 PPAR-알파/델타 효능제(또는 대안적으로, PPAR-알파 효능제와 PPAR-델타 효능제를 함께 사용함), 및 스타틴의 잠재성을 평가하여, 인간 간세포에서 콜레스테롤 합성 및 지질 프로파일을 변경시키는 능력을 결정할 것이다. 샌드위치-배양된 인간 간세포(SCHH)를 3 개의 상이한 농도의 시험 대상물에 대한 72 시간의 노출 후에, SCHH의 변화를 평가할 것이다. 투여 용액을 배양 배지에서 매일 신선하게 제조할 것이며, SCHH의 투여는 3 일 동안 매일 일어날 것이다. 이 실험은 1 로트(lot)의 Transporter Certified™ 인간 간세포(N=1)를 사용하여 24 웰 포맷으로 수행할 것이다. 각각의 시험 조건을 3 개의 웰에서 수행하여 3 개의 반복시험된 데이터(평균 ± 표준 편차로 표현됨)를 제공할 것이다. 용매 대조군 처리된 플레이트를 대조군으로서 사용하고 기저선 함수를 위해 평가할 것이다. 시험 기간의 종료 시점에서, 내부 표준물을 개별 웰들에 첨가한 후, 전반적인 지질 프로파일링을 위한 추출 시약을 첨가할 것이다. 샘플을 실온에서 1 시간 동안 진탕하고, 원심분리할 것이다. 상층액을 질소 하에서 증발 건조시키고, 재현탁시키고, 분석한다.
초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC) 및 고분해능 MS를 사용하여, 전반적인 지질 프로파일링을 수행할 것이다. 메틸-t-부틸 샘플 추출물을, 광범위한 지질 극성 및 화학 조성을 포괄하기 위하여, ESI+ 및 ESI-모드에서 UPLC-MS(Synapt G2 이온-이동성 QToF) 기기 상에서 분석할 것이다. 초기에, UPLC를 적용하여, 콜레스테롤의 다수의 에스테르를 포함한, 많은(5000 개 내지 8000 개의) 지질에 대한 화합물 효과를 평가할 것이다. 비색분석을 수행하여 총 콜레스테롤을 측정할 것이다. 풍부도(abundance)에 기초하여, 대부분은 글리세로인지질이겠지만, 다수의 부류를 평가할 것이다. 프로파일을 평가하여 개별 지질에 대한 잠재적 효과를 확인할 것이다. 특정 지질의 확인은 검정 체류 시간, 정확한 질량 및 단편화를 사용하여 표준물에 대비하여 수행될 수 있다. 결과에 따라, 특정 지질 또는 지질 부류가 실시예 6 및 실시예 7에서의 평가를 위해 확인될 수 있다. 확인 연구를 2 개의 추가 로트의 Transporter Certified™ 인간 간세포(N=2)에서 반복할 것이다(N=2).
실시예 6: 지질 프로파일에 대한 시험 대상물의 이중 병용물의 효과를 평가한다.
FXR 효능제와, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제(또는, 대안으로서, FXR 효능제와, PPAR 알파 효능제 및 PPAR 델타 효능제), 및/또는 스타틴 각각의 병용물을 인간 간세포에서 콜레스테롤 합성 및 지질 프로파일을 변경시키는 그들의 잠재성에 대해 평가할 것이다. 평가된 구체적인 병용물은 하기와 같을 것이다:
· FXR 효능제와 PPAR-알파 효능제
· FXR 효능제와 PPAR-델타 효능제
· FXR 효능제와 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제 및/또는 FXR 효능제와 PPAR-알파 효능제 및 PPAR-델타 효능제
· FXR 효능제와 스타틴
샌드위치-배양된 인간 간세포(SCHH)를 3 개의 상이한 농도의 시험 대상물에 대한 72 시간의 노출 후에, SCHH의 변화를 평가할 것이다. 투여 용액을 배양 배지에서 매일 신선하게 제조할 것이며, SCHH의 투여는 3일 동안 매일 일어날 것이다. 이 실험은 1 로트의 Transporter Certified™ 인간 간세포(N=1)를 사용하여 24웰 포맷으로 수행할 것이다. 각각의 시험 조건을 3 개의 웰에서 수행하여 3 개의 반복시험된 데이터(평균 ± 표준 편차로 표현됨)를 제공할 것이다. 샘플을 제조하고, 실시예 5에 상세히 기재된 바와 같이 전반적인 지질 프로파일링에 대해 분석할 것이다. 지질 프로파일 및 콜레스테롤 합성에 있어서의 변경을 실시예 2에서의 개별 투여로부터의 효과와 비교할 것이다.
실시예 7: 지질 프로파일에 대한 시험 대상물의 삼중 병용물의 효과를 평가한다.
FXR 효능제, PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, PPAR-알파 및 델타 이중 효능제(또는 PPAR-델타 효능제와 병용된 PPAR-알파 효능제), 및/또는 스타틴의 삼중 병용물을 인간 간세포에서 콜레스테롤 합성 및 지질 프로파일을 변경시키는 잠재성에 대해 평가할 것이다. 샌드위치-배양된 인간 간세포(SCHH)를 3 개의 상이한 농도의 시험 대상물에 대한 72 시간의 노출 후에, SCHH의 변화를 평가할 것이다. 투여 용액을 배양 배지에서 매일 신선하게 제조할 것이며, SCHH의 투여는 3일 동안 매일 일어날 것이다. 이 실험은 1 로트의 Transporter Certified™ 인간 간세포(N=1)를 사용하여 24 웰 포맷으로 수행할 것이다. 각각의 시험 조건을 3 개의 웰에서 수행하여 3 개의 반복시험된 데이터(평균 ± 표준 편차로 표현됨)를 제공할 것이다. 샘플을 제조하고, 실시예 2에 상세히 기재된 바와 같이 전반적인 지질 프로파일링에 대해 분석할 것이다. 지질 프로파일 및 콜레스테롤 합성에 있어서의 변경을 실시예 2에서 투여된 병용물로부터의 효과와 비교할 것이다. 평가된 구체적인 병용물은 하기와 같을 것이다:
· FXR 효능제와 PPAR-알파 효능제, 및 스타틴
· FXR 효능제와 PPAR-델타 효능제, 및 스타틴
· FXR 효능제와 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제(또는, 대안으로서, PPAR-알파 효능제 및 PPAR-델타 효능제), 및 스타틴
샘플을 제조하고, 실시예 4에 상세히 기재된 바와 같이 전반적인 지질 프로파일링에 대해 분석할 것이다. 지질 프로파일 및 콜레스테롤 합성에 있어서의 변경을 실시예 4 및 실시예 5에서 투여된 병용물로부터의 효과와 비교할 것이다.
실시예 8: 동물 연구
동물
동물들을 12:12 시간 명암 주기로 22℃에서 표준 케이지 내에 개별적으로 수용할 것이다. 수컷 C57BL/6 마우스(미국 메인주 바 하버 소재의 Jackson Laboratories사)를 지방(40% kcal, Primex 부분 수소화 식물성 오일 쇼트닝), 프룩토스(22 중량%), 및 콜레스테롤(2 중량%)이 풍부한 식이(미국 뉴저지주 뉴 브런즈윅 소재의 Research Diets사, 카탈로그 번호 D09100301)에 자유식으로 접근할 수 있게 할 것이다. 프룩토스 또는 콜레스테롤을 함유하지 않는 저지방 식이(10% kcal; 이하, LFD로 지칭됨)를 대조군 식이(Research Diets사, 카탈로그 번호 D09100304)로서 사용할 것이다. 이러한 검증된 LFD의 사용은 실험 식이가 급식된 동물과의 비교를 위한 "정상" 간 표현형을 유지하는 대조 마우스군을 확립한다.
처리군
대조 HFD:
대조 LFD:
HFD + FXR 효능제:
HFD + PPARα(즉, 페노피브레이트, 겜피브로질, 베조피브레이트, 또는 시프로피브레이트):
HFD + PPARδ(즉, GW501516):
HFD + PPARα + PPARδ:
HFD + 이중 PPARα/δ(즉, GFT505):
HFD + 스타틴(즉, 아토르바스타틴, 심바스타틴, 로수바스타틴)
HFD + FXR 효능제 + PPARα:
HFD + FXR 효능제 + PPARδ:
HFD + FXR 효능제 + PPARα + PPARδ:
HFD + FXR 효능제 + 이중 PPARα/δ:
HFD + FXR 효능제 + 스타틴:
조직학적 분석 및 디지털 이미지 분석
종결 시점에서, 간의 우내엽(right medial lobe) 및/또는 좌외엽(각각의 엽의 50% 이상이 수거됨)을 절제하고, 10% 중성-완충 포르말린 중에 고정시킬 것이다(실온에서 적어도 7 일). 조직 가장자리 및 중심부 둘 모두를 대표하는 유사한 크기의 절편들을 선택하도록 간 조직을 조심스럽게 절제할 것이다. 간 조직을 파라핀 포매하고, 절편화하고(5 μm), 마운팅할 것이다. 형태학적 분석을 위하여 헤마톡실린 및 에오신 염색제를 사용할 것이고, 간 섬유증의 평가를 위하여 마손 트리크롬(Masson's trichrome) 및 시리우스 레드 염색제를 사용할 것이다. 이 연구에 대해 맹검 상태인 병리학자에 의해 조직병리학적 분석을 수행할 것이다. Kleiner 및 동료들에 의해 개략적으로 설명된 기준의 사용에 의해 NAFLD 및 NASH를 점수화할 것이다. 섬유증의 정량적인 평가를 위하여, ScanScope CS 전체 슬라이드 스캐닝 시스템(whole slide scanning system)(미국 캘리포니아주 비스타 소재의 Aperio사)을 ×20 배율로 사용함으로써 전체 시리우스 레드-염색된 절편을 스캐닝할 것이다. 이미지를 추출할 것이고, 전체 조직으로부터의 시리우스 레드-염색된 콜라겐 프로파일을 Image-Pro Analyzer 소프트웨어(미국 매릴랜드주 베데스다 소재의 MediaCybernetics v.6.2)를 사용하여 컬러 큐브-기반 방법(color cube-based method)에 의해 측정할 것이다. 총 콜라겐 염색(총 면적의 %로 기록됨)을 (종합적인 간 섬유증 평가 실험(여기서는, 추가 절편들을 평가할 것임)을 제외하고는) 각각의 동물로부터의 3 개 또는 4 개의 대표적인 절편들로부터 평가할 것이다. 모든 조직학적 분석은 맹검 상태로 수행할 것이다.
간 생검
마우스를 100% 산소 중 이소플루란(2% 내지 3%)으로 마취시킬 것이다. 정중선의 약 0.5 cm 좌측에 작은 복부 절개부를 만들 것이고, 간의 좌외엽을 노출시킬 것이다. 간 조직을 쐐기 형상(약 50 mg)으로 엽의 원위부로부터 절제하고, 즉시 바이알 내에 넣고, 액체 질소 중에서 급속 동결시켰다. 쐐기 형상의 흡수성 젤라틴 스폰지(GelFoam, 미국 뉴욕주 소재의 Pfizer사)를 간의 절단된 가장자리 내로 삽입할 것이다. 일단 항상성이 달성되고(통상적으로, 1 분 이내), 젤라틴 스폰지가 생검 부위에 잘 접착되면, 간을 복강에 되돌려 놓고, 복벽을 봉합하고, 피부를 스테이플링할 것이다. 마우스에 수술 시에 부프레노르핀(0.05 mg/kg, 피하)의 단회 주사를 투여하여 수술후 통증을 제어할 것이다. 가성 수술 마우스는 간에 절개부를 만들지 않는 것을 제외하고는 동일한 절차를 거칠 것이다.
혈장 및 혈청 분석
혈장 글루코스, 트리글리세리드, 총 콜레스테롤, 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 및 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 수준을 Olympus AU400e 바이오분석기(Bioanalyzer)(미국 펜실베이니아주 센터 밸리 소재의 Olympus America Diagnostics사)를 사용함으로써 측정할 것이다. ALT 및 AST의 측정을 위하여, 혈장 샘플을 PBS를 사용하여 1:10으로 희석시킬 것이다. 총 혈장 아디포넥틴 및 공복 시 혈청 인슐린을, 구매가능한 전기화학발광 키트(미국 메릴랜드주 게이더스버그 소재의 Meso Scale Discovery사)를 사용하여 제조자의 설명서에 따라 측정할 것이다.
총 간 지질 및 콜라겐 함량의 정량화
Folch et al.로부터 변형된 프로토콜을 사용하여, 총 간 지질을 간으로부터 추출할 것이다. 동결된 간 조직(약 0.3 g)을 10 ml의 2:1 클로로포름-메탄올 용액 중에 균질화할 것이다. 균질화물(homogenate)을 무지방 여과지를 사용하여 여과하고, 사전 칭량된 15 ml 유리 바이알 내로 깔때기로 옮길 것이다. 추가 5 ml의 2:1 클로로포름-메탄올을 첨가한 후, 2.5 ml의 0.9% NaCl을 첨가할 것이다. 지질을 1,800 g, 10℃에서 5 분 동안 원심분리에 의해 분리할 것이고, 수성 층을 폐기할 것이고, 지질 펠릿이 건조될 때까지 튜브를 질소로 플러싱할 것이다. 지질 펠릿이 담긴 튜브를 재칭량할 것이고, 총 간 1 그램당 추출된 총 지질을 계산할 것이다. 콜라겐의 산 가수분해에 의한 하이드록시프롤린 잔기의 비색분석 결정(네덜란드 라이덴 소재의 Quickzyme사)에 의해, 간 내의 총 콜라겐 함량을 측정할 것이다.
단백질 블롯에 의한 추출가능한 콜라겐- 1α1 단백질의 결정
조직 코어(50 mg 내지 100 mg)를 간의 좌외엽으로부터 수집하고, 액체 질소 중에서 급속 동결시키고, 처리될 때까지 -80℃에서 저장할 것이다. 조직을 프로테아제 억제제를 함유하는 용해 완충액 중에서 균질화할 것이다. 회수된 상층액의 단백질 농도를 BCA 단백질 검정 키트(미국 일리노이주 록포드 소재의 Pierce사)를 사용하여 측정할 것이다. 간 조직 용해물(약 50 μg)을 환원성 4% 내지 12% Nupage 겔(미국 캘리포니아주 칼스배드 소재의 Life Technologies사) 상에서 분리하고 니트로셀룰로스 막에 옮길 것이다. 막을 50 kDa 내지 60 kDa 마커에서 잘라내고 5% Blotto로 블로킹할 것이다. 상부 절반을 안티-콜라겐-1%1(1:1,000; 카탈로그 번호 NBP1-30054; 미국 콜로라도주 리틀톤 소재의 Novus Biologicals사)로 프로빙할 것인데, 이는 콜라겐-1%1 단백질의 COOH-말단 텔로펩티드(telopeptide) 부분을 검출한다. 정규화를 위하여, 하부 절반을 안티-글리세르알데하이드 3-포스페이트 데하이드로게나제(GAPDH, 1:7,500; 카탈로그 번호 3683; 미국 매사추세츠주 댄버스 소재의 Cell Signaling Technologies사)로 프로빙할 것이다. 서양고추냉이 퍼옥시다제 항-토끼 항체와 함께 인큐베이션한 후에, 향상된 화학발광(미국 일리노이주 록포드 소재의 Thermo Scientific사)으로 단백질 발현을 검출할 것이고, FluorChem 시스템(미국 캘리포니아주 산타 클라라 소재의 Cell Biosciences사)으로 밀도측정을 수행할 것이다. 콜라겐-1α1의 밀도측정 분석은 140 kDa 성숙 단백질뿐만 아니라 글리코실화 형태에 상응하는 약간 더 큰 밴드 또는 부분 처리된 콜라겐-1α1 단백질 둘 모두를 포함할 것이다.
간 유전자 발현 변화
간의 좌외엽으로부터의 조직 샘플을 6 mm 조직 코어링 툴(tissue coring tool)을 사용하여 또는 생검 방법에 의해 수거하고, 액체 질소 중에서 급속 동결시키고, 처리할 때까지 -80℃에서 저장할 것이다. 간 샘플(약 50 mg 내지 150 mg)로부터의 총 RNA를 TRI 시약(Life Technologies사)의 사용에 의해 추출하고, 이어서 Qiagen RNeasy 플러스 미니 키트(Plus Mini kit)(미국 캘리포니아주 발렌시아 소재의 Qiagen사)로 추가로 정제할 것이다. Bioanalyzer 2100 상에서 Agilent 6000 나노 키트(미국 캘리포니아주 산타 클라라 소재의 Agilent Technologies사)를 사용함으로써 RNA 완전성을 결정할 것이다. 고성능 cDNA 역전사 키트(Life Technologies사)를 사용함으로써 cDNA를 제조할 것이다. ABI Prism 7900HT 기기(미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재의 Applied Biosystems사) 상에서 TaqMan gene expression assays-on-demand 및 Universal Master Mix(Life Technologies사)에 의해 유전자 발현의 변화를 확인할 것이다. 정규화를 위하여 Gapdh 및 펩티딜프롤릴 이소머라제 A(Ppia)를 사용하여 비교 역치 주기(CT) 방법에 의해 유전자 발현의 변화를 계산할 것이다. 유전자 어레이를 위하여, ABI Prism 7900HT 고속 실시간 PCR 시스템(Fast Real-Time PCR System)(Applied Biosystems사)을 사용함으로써, 마우스 섬유증 RT2 프로파일러 PCR 어레이(Mouse Fibrosis RT2 Profiler PCR Array)(PAMM-120C, RT2 SYBR Green/ROX qPCR Master Mix; SABiosciences사) 상에서 cDNA 샘플을 이동시킬 것이다. DataAssist v3.0 소프트웨어(Applied Biosystems/Life Technologies사)를 사용하여 비교 CT 방법에 의해, 어레이 상에서의 유전자 발현의 변화를 계산할 것이다. 마우스 섬유증 RT2 프로파일러 PCR 어레이 내에 포함된 5 개의 항존(housekeeping) 유전자 중에서, 하이포잔틴 포스포리보실트랜스퍼라제 1(Hprt) 및 Gapdh가 DataAssist v3.0 소프트웨어에 의해 계산된 안정성 점수에 따라 가장 안정한 발현을 갖는다. 선택된 내인성 대조 유전자들의 평균이, 각각의 유전자의 상대 발현을 계산하기 위한 정규화 인자로 사용될 것이다. 섬유증 어레이를 사용함으로써 획득된 결과를 확인하기 위하여, 상향조절되거나, 하향조절되거나, 변화가 없는 것으로 어레이에 의해 결정된 유전자의 선택에 대하여 TaqMan 유전자 발현 검정을 수행할 것이다.
실시예 9: 임상 시험
다시설, 이중-맹검, 플라세보-대조, 평행군, 무작위화 임상 시험(multicenter, double-blind, placebo-controlled, parallel group, randomized clinical trial)을 비경변의 비알코올성 지방성 간염을 갖는 환자에서 수행하여, 72 주 동안 경구 제공된(일일 25 mg) 오베티콜산 또는 플라세보에 의한 치료를 평가하였다. 환자를, 임상 센터 및 당뇨병 상태에 따라 층별화된, 컴퓨터-생성 중앙 관리 절차를 사용하여 1:1로 무작위로 배정하였다. 1차 결과 측정은, 기저선으로부터 치료 종점까지 섬유증을 악화시키지 않고서, 비알코올성 지방 간 질병 활성 점수에 있어서의 적어도 2점까지의 감소로서 규정된, 중앙 점수화 간 조직구조(centrally scored liver histology)에 있어서의 개선이었다. 24 주째에 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 변화를 측정하였다: 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 상대 변화 -24%, 95% CI -45 내지 -3.
연구 설계 및 참가자
하기 선정 기준에 따라 환자들을 이 연구에 등록시켰다: 스크리닝 시에, 무작위화 90 일 이전에 획득된 간 생검에 기초하여 유한 또는 경계선 비알코올성 지방성 간염의 조직학적 증거를 갖고, 4 이상의 조직학적 비알코올성 지방 간 질병(NAFLD) 활성 점수 및 또한 그 점수의 각각의 구성요소(지방증 점수 0 내지 3, 풍선화(ballooning) 0 내지 2, 및 엽 염증 0 내지 3)에서 1 이상의 점수를 갖는 18세 이상의 환자. 등록 목적을 위한 생검의 등급화 및 단계화를 등록 현장에서 수행하였다. 제외 기준은 경변증의 존재, 간 질병의 기타 다른 원인, 상당량의 알코올 소비(여성의 경우 20 g/일 초과 또는 남성의 경우 30 g/일 초과), 또는 기타 다른 교란 조건들(하기 참조)을 포함한다.
무작위화 및 마스킹 (masking)
적격 기준을 만족시키는 환자들을 경구 오베티콜산(일일 1 회 25 mg), 또는 플라세보에 무작위 배정하였다(1:1). 오베티콜산 및 플라세보를 코드 번호가 표시된 동일한 용기 내에 동일한 정제로서 제공하였다. 환자, 연구원, 임상 현장 스태프, 및 병리학자는 처리 배정에 대해 마스킹될 것이다.
절차
무작위화 후에, 환자들은 주수 2, 주수 4, 및 주수 12에서, 그리고 이어서 주수 72에서의 치료의 완료 시까지 매 12 주마다, 그리고 이어서 24 주 후에 연구 방문을 위하여 다시 왔다. 일상적인 생화학적 검사 및 지질, 글루코스, 및 인슐린의 공복 시 농도의 평가를 위하여 혈액 샘플을 이들 방문일에 획득하였다. 초기 평가 및 지정된 중간 시점에서 체중, 신장, 및 허리 및 엉덩이 둘레를 측정하였다. 모든 환자는, 건강한 식습관, 체중 감량, 운동, 및 적응이 있으면, 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 및 당뇨병의 관리에 대한 표준 권고사항을 제공받았다.
기준선 및 치료 종점의 간 생검을 NAFLD 활성 점수의 각각의 구성요소의 공통 점수화(consensus scoring)를 위한 그룹으로서 중앙 평가하고, 섬유증 단계를 결정하고, 비알코올성 지방성 간염, 경계선 비알코올성 지방성 간염, 또는 비알코올성 지방성 간염이 아님이라는 진단을 할당하였다.
선정 및 제외 기준
하기 제외 기준들 중 어느 하나라도 만족시키는 환자는 등록에 적합하지 않은 것으로 고려하였다: 1) 스크리닝 전 1 년 이내에 연속 3 개월을 넘는 기간 동안 과거 또는 현재의 상당량의 알코올 소비(상당량의 알코올 소비는 평균적으로 여성의 경우 20 g/일 초과 그리고 남성의 경우 30 g/일 초과로 규정됨); 2) 현장 연구원의 판단에 기초하여 알코올 소비를 신뢰성 있게 정량화하는 것이 불가능함; 3) 무작위화 전 1년 이내에 2 주 초과 동안 NAFLD와 조직학적으로 연관된 약물의 사용; 4) 이전의 또는 계획된 비만대사(bariatric) 수술 또는 시술; 5) 등록 전 60 일 이내에 80.3 mmol/mol 이상의 HbA1c로서 규정된 비제어성 당뇨병; 6) 간 생검에서의 경변증의 존재; 7) 혈소판 카운트 100 × 109/L 미만; 8) 하기 임의의 비정상의 존재로서 규정된 바와 같은 간 대상부전(hepatic decompensation)의 임상 증거: 32 g/L 미만의 혈청 알부민, 1.3 초과의 INR, 22.2 μmol/L 초과의 직접 빌리루빈, 또는 식도 정맥류, 복수(ascites), 또는 간 뇌병증의 병력; 9) 하기의 기타 다른 형태의 만성 간 질병의 증거: B형 간염 표면 항원(HBsAg)의 존재로 규정된 바와 같은 B형 간염, C형 간염 바이러스(HCV) RNA 또는 양성 C형 간염 항체(항-HCV)의 존재로 규정된 바와 같은 C형 간염, 적합한 간 조직구조로 규정된 바와 같은 진행 중인 자가면역 간 질병의 증거, 적어도 2 가지 기준의 존재로 규정된 바와 같은 원발성 담즙성 간경변(알칼리성 포스파타제 상승에 주로 기초한 담즙정체의 생화학적 증거, 항-미토콘드리아 항체[AMA]의 존재, 및 비화농성 파괴성 담관염 및 엽간 담관의 파괴의 조직학적 증거), 원발성 경화성 담관염, 정상 및 적합한 간 조직구조 한계 미만의 세룰로플라스민으로 규정된 바와 같은 윌슨병(Wilson's disease), 간 조직구조에서 진단 특징으로 규정된 바와 같은 알파-1-안티트립신(A1AT) 결핍(정상 미만의 알파-1 안티트립신 수준에 의해 확인됨, 현장 연구원의 재량으로 제외시킴), 간 생검에서의 3+ 또는 4+ 가염 철의 존재로 규정된 바와 같은 혈색소증 또는 철 과부하의 병력, 통상적인 노출 및 병력에 기초하여 규정된 바와 같은 약물-유도 간 질병, 알려진 담관 폐색, 의심되거나 입증된 간암, 또는 NASH 이외의 임의의 기타 다른 유형의 간 질병; 10) 300 U/L 초과의 혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT); 11) 176.8 μmol/L 이상의 혈청 크레아티닌; 12) 간 생검의 안전한 입수가 불가능함; 13) 담즙 분류(biliary diversion)의 병력; 14) 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염에 대해 알려진 양성; 15) 평균 수명(life expectancy)이 5 년 미만일 가능성이 높은 활동성 중증 의학적 질병; 16) 스크리닝 전 1 년 이내에 흡입 또는 주사 약물을 포함한 활성 물질 남용; 17) 임신, 계획된 임신, 임신 가능성, 및 시험 동안 효과적인 출산 조절을 사용하기를 원치 않음, 또는 모유 수유; 18) 무작위화 전 30 일 이내에 IND 시험에의 참가; 19) 현장 연구원의 견해에서 순응도를 저해하거나 연구의 완료를 방해할 임의의 기타 다른 상태; 또는 20) 사전 동의(informed consent)를 제공하지 않음.
통계학적 분석
맨텔-헨젤(Mantel-Haenszel) 검정을 사용하여 1차 결과 및 바이너리 2차 결과를 분석하였으며; 결과의 기저선 값에 대하여 그리고 처리군에 대하여 기저선으로부터 72 주까지의 연속 결과의 변화를 관련시키는 ANCOVA 모델을 사용하여 연속 2차 결과를 분석하였다. SAS(SAS Institute 2011, Base SAS 9.3 Procedures Guide) 및 Stata(StataCorp 2013, Stata Statistical Software: release 13)를 사용하여 통계학적 분석을 수행하였다.
결과
1차 결과 측정은, 기저선으로부터 치료 종점까지 섬유증을 악화시키지 않고서, NAFLD 활성 점수에 있어서의 적어도 2점까지의 감소로서 규정된, 중앙 점수화 간 조직구조에 있어서의 개선이었다. 섬유증의 악화는 그 단계에 있어서의 임의의 수치 증가로서 규정하였다. 2차 조직학적 결과는 비알코올성 지방성 간염의 해소, NAFLD 활성 점수의 변화, 및 간세포 풍선화, 지방증, 엽 및 문맥 염증, 및 섬유증에 대한 개별 점수의 변화를 포함한다. 섬유증의 개선은 그 단계에 있어서의 임의의 수치 감소로서 규정하였다. 섬유증 단계 1a, 1b, 및 1c는 분석 목적을 위하여 단계 1로 간주하였다. 기타 다른 2차 결과는 혈청 아미노트랜스퍼라제 및 γ-글루타밀 트랜스펩티다제 농도, 인슐린 저항성의 평가의 공복 시 항성성 모델(fasting homoeostasis model of assessment of insulin resistance, HOMA-IR), 인체계측 측정치(체중, 체질량 지수, 허리 대 엉덩이 비, 허리 둘레), 및 건강 관련 삶의 질 점수에 있어서의 기저선으로부터 72 주까지의 변화를 포함한다.
실시예 10: 데이터 분석
저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C) 수준에 대한 스타틴의 효과를 평가하기 위하여, 실시예 9에서 획득된 데이터의 하위분석을 수행하였다. 이들 2차 분석의 목적은 더 중증의 NASH를 갖는 환자들의 하위군에서의 플라세보 대비 OCA의 효과를 결정하는 것과 혈청 LDL 콜레스테롤에 대한 스타틴 병용의 효과를 평가하는 것이었다. 대상체 데이터를 하기와 같이 3 개의 그룹에서 평가하였다:
· 그룹 A(n=64, 스타틴 없음)는 오베티콜산(OCA) 치료군 내의 대상체를 포함하였는데, 이들은 기저선(일수 0)에서 스타틴에 노출되지 않았고, 주수 72(종점 포함)까지 연구 과정 전체에 걸쳐 스타틴을 개시하지 않는다.
· 그룹 B(n=47, 기저선 스타틴)는 OCA 치료군 내의 대상체를 포함하였는데, 이들은 기저선에서 스타틴에 노출되었고, 주수 72(종점 포함)까지 연구 동안 스타틴에 계속 노출되었다.
· 그룹 C(n=23, 새로운 스타틴)는 OCA 치료군 내의 대상체를 포함하였는데, 이들은 기저선에서는 스타틴에 노출되지 않았지만, 주수 72(종점 포함)까지 기저선 이후 시점에서 스타틴 치료를 개시하였다.
그룹 A, 그룹 B, 및 그룹 C에서 OCA 치료된 대상체에 대해 하기의 계산을 수행하였다.
· 하기에 열거된 평균 및 중위(median) 특성을 기저선에서 그리고 주수 72에서 평가할 것이다.
o 실험실 값: LDL-C, 고밀도 지질단백질 콜레스테롤(HDL-C), 알라닌 및 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제, 감마 글루타밀 트랜스퍼라제
o 연령
o 성별: 남성 백분율, 여성 백분율
o 당뇨병 백분율
o 조직구조: 지방증, 풍선화, 염증, 섬유증
· 상기 특성의 기저선으로부터 주수 72에서의 평균 및 중위 백분율 변화를 평가할 것이다.
결과
LDL 콜레스테롤은 기저선에서 스타틴에 노출된 환자에서 OCA 치료 동안 증가하였지만, 수준이 스타틴에 노출되지 않은 플라세보-치료된 환자의 것을 초과하지는 않았다. OCA 치료 동안의 스타틴 개시는 LDL을 OCA 전 기저선 수준 미만으로 역전시켰다. 도 8에 나타낸 바와 같이, OCA-관련 LDL 증가는 OCA 치료 동안 스타틴 요법을 개시함으로써 역전되는 것으로 나타났다.

Claims (34)

  1. FXR 효능제(agonist), 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제, PPAR-델타 효능제, 및/또는 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 PPAR-알파 효능제는 피브레이트인, 약제학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 피브레이트는 베자피브레이트, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 페노피브레이트, 겜피브로질, 비니피브레이트, 클리노피브레이트, 클로피브르산, 니코피브레이트, 피리피브레이트, 플라피브라이드, 로니피브레이트, 테오피브레이트, 및 토코피브레이트, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르, 및 2-페녹시-2-메틸프로판산의 유도체(여기서는, 페녹시 모이어티가, 선택적으로 치환된 피페리딘, 4-하이드록시피페리딘, 피페리드-3-엔 또는 피페라진으로 치환됨)로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 피브레이트는 베자피브레이트, 페노피브레이트, 및 클로피브레이트, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 피브레이트는 페노피브레이트인, 약제학적 조성물.
  6. 제3항에 있어서, 상기 피브레이트는 2-[3-[1-(4-플루오로벤조일)-피페리딘-4-일]페녹실-2-메틸프로판산인, 약제학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 PPAR-델타 효능제는 {4-[({4-메틸-2-[4-(트리플루오로메틸)페닐]-1,3-티아졸-5-일}메틸)설파닐]-2-메틸페녹시} 아세트산, {2-메틸-4-[5-메틸-2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-2H-[1,2,3]트리아졸-4-일메틸실파닐]-페녹시}-아세트산, 또는 [4-[[[2-[3-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐]-4-메틸-5-티아졸릴] 메틸] 티오]-2-메틸 페녹시]-아세트산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염인, 약제학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 PPAR-알파 및 델타 이중 효능제는 2-[2,6 디메틸-4-[3-[4-(메틸티오)페닐]-3-옥소-1(E)-프로페닐]페녹실]-2-메틸프로판산, (2S)-2-메톡시-3-[4-[2-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸릴)에톡시]-7-벤조티오페닐]프로판산, N-[(4-메톡시페녹시)카르보닐]-N-{4-[2-(5-메틸-2-페닐-1,3-옥사졸-4-일)에톡시]벤질}글리신, (2S)-2-에톡시-3-[4-[2-(4-메틸설포닐옥시페닐)에톡시]페닐]프로판산, 또는 (2S)-2-에톡시-3-[4-(2-{2-메틸-5-[4-(메틸설파닐)페닐]-1H-피롤-1-일} 에톡시)페닐]프로판산, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염인, 약제학적 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 스타틴(statin)을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 스타틴은 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바스타틴, 리바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 플루인도스타틴, 벨로스타틴, 달바스타틴, 로수바스타틴, 디하이드로컴팩틴, 및 컴팩틴으로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  11. FXR 효능제, 적어도 하나의 스타틴, 및 선택적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  12. 제1항, 제9항, 또는 제11항에 있어서, 상기 FXR 효능제는 화학식 A의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체인, 약제학적 조성물:
    [화학식 A]
    Figure pct00024

    (상기 식에서,
    R1은 수소 또는 비치환된 C1-C6 알킬이고;
    R2는 수소 또는 α-하이드록실이고;
    X는 C(O)OH, C(O)NH(CH2)mSO3H, C(O)NH(CH2)nCO2H 또는 OSO3H이고;
    R4는 하이드록실 또는 수소이고;
    R7은 하이드록실 또는 수소이고;
    m은 1, 2, 또는 3이고;
    n은 1, 2, 또는 3임).
  13. 제12항에 있어서, R1은 비치환된 C1-C6 알킬인, 약제학적 조성물.
  14. 제13항에 있어서, R1은 메틸, 에틸, 또는 프로필인, 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, R1은 에틸인, 약제학적 조성물.
  16. 제12항에 있어서, X는 C(O)OH, C(O)NH(CH2)SO3H, C(O)NH(CH2)CO2H, C(O)NH(CH2)2SO3H, 및 C(O)NH(CH2)2CO2H로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서, X는 C(O)OH인, 약제학적 조성물.
  18. 제12항에 있어서, X는 OSO3H인, 약제학적 조성물.
  19. 제12항에 있어서, R4는 하이드록실이고, R7은 수소인, 약제학적 조성물.
  20. 제12항에 있어서, 상기 FXR 효능제는 화학식 I 또는 화학식 IA의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체인, 약제학적 조성물:
    [화학식 I]
    Figure pct00025
    또는
    [화학식 IA]
    Figure pct00026

    (상기 식에서,
    R1A는 수소 또는 비치환된 C1-C6 알킬이고;
    R2는 수소 또는 α-하이드록실이고;
    R4는 하이드록실 또는 수소이고;
    R7은 하이드록실 또는 수소임).
  21. 제20항에 있어서, R1A는 비치환된 C1-C6 알킬인, 약제학적 조성물.
  22. 제21항에 있어서, R1A는 메틸, 에틸, 또는 프로필인, 약제학적 조성물.
  23. 제22항에 있어서, R1A는 에틸인, 약제학적 조성물.
  24. 제12항에 있어서, 상기 FXR 효능제는 화학식 II 또는 화학식 IIA의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체인, 약제학적 조성물:
    [화학식 II]
    Figure pct00027
    또는
    [화학식 IIA]
    Figure pct00028

    (상기 식에서,
    R1A는 수소 또는 비치환된 C1-C6 알킬이고;
    R2는 수소 또는 α-하이드록실이고;
    R3은 하이드록실, NH(CH2)mSO3H, 또는 NH(CH2)nCO2H이고;
    R4는 하이드록실 또는 수소이고;
    R7은 하이드록실 또는 수소이고;
    m은 1, 2, 또는 3이고;
    n은 1, 2, 또는 3임).
  25. 제24항에 있어서, R1A는 비치환된 C1-C6 알킬인, 약제학적 조성물.
  26. 제25항에 있어서, R1A는 메틸, 에틸, 또는 프로필인, 약제학적 조성물.
  27. 제26항에 있어서, R1A는 에틸인, 약제학적 조성물.
  28. 제12항에 있어서, 상기 FXR 효능제는
    [화학식 1]
    Figure pct00029
    또는
    [화학식 2]
    Figure pct00030

    또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 아미노산 접합체인, 약제학적 조성물.
  29. 제12항에 있어서, 상기 FXR 효능제는
    [화학식 3]
    Figure pct00031
    또는
    [화학식 4]
    Figure pct00032

    인, 약제학적 조성물.
  30. FXR 매개 질병 또는 질환, 또는 상승된 지질 수준과 관련된 질환을 치료 또는 예방하는 방법으로서,
    제1항, 제9항, 또는 제11항의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 질병 또는 질환은 원발성 담즙성 간경변(PBC), 원발성 경화성 담관염(PSC), 문맥 고혈압, 담즙산 설사, 만성 간 질병, 비알코올성 지방간 질병(NAFLD), 비알코올성 지방성 간염(NASH), C형 간염 감염, 알코올성 간 질병, 진행성 섬유증으로 인한 간 손상, 간 섬유증, 심혈관 질병, 및 고지질혈증으로부터 선택되는 것인, 방법.
  32. 제30항에 있어서, 상기 질환은 저항성 원발성 담즙성 간경변; 간 기능 검사치 상승(liver function test elevation) 및 고지질혈증이 관련되어 있는 원발성 담즙성 간경변; 원발성 경화성 담관염; 비알코올성-유발 지방성 간염; B형 간염, C형 간염 또는 알코올과 연관된 만성 간 질병; 유전자 성분을 갖거나 갖지 않는 원발성 고지질혈증인 고지질혈증; 및 관상 동맥 질병, 뇌혈관 동맥 질병, 말초 혈관 질병, 대동맥 동맥류, 또는 경동맥 죽상경화증과 연관된 고지질혈증으로부터 선택되는 것인, 방법.
  33. 섬유증을 억제 또는 역전시키는 방법으로서,
    제1항, 제9항, 또는 제11항의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 섬유증은 간 섬유증, 신장 섬유증, 및 장 섬유증으로부터 선택되는 것인, 방법.
KR1020177024607A 2015-02-06 2016-02-05 병용 요법을 위한 약제학적 조성물 KR20170115071A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562113134P 2015-02-06 2015-02-06
US62/113,134 2015-02-06
PCT/US2016/016694 WO2016127019A2 (en) 2015-02-06 2016-02-05 Pharmaceutical compositions for combination therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20170115071A true KR20170115071A (ko) 2017-10-16

Family

ID=56564878

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177024607A KR20170115071A (ko) 2015-02-06 2016-02-05 병용 요법을 위한 약제학적 조성물

Country Status (31)

Country Link
US (3) US11311557B2 (ko)
EP (2) EP4035665A1 (ko)
JP (2) JP7306791B2 (ko)
KR (1) KR20170115071A (ko)
CN (1) CN107405325B (ko)
AR (1) AR103624A1 (ko)
AU (2) AU2016215179B2 (ko)
BR (1) BR112017016766B1 (ko)
CA (1) CA2976056C (ko)
CL (3) CL2017001983A1 (ko)
CO (1) CO2017007959A2 (ko)
CR (1) CR20170356A (ko)
DK (1) DK3253382T3 (ko)
EA (1) EA036404B1 (ko)
EC (1) ECSP17057848A (ko)
ES (1) ES2905872T3 (ko)
GT (1) GT201700174A (ko)
HK (1) HK1246191A1 (ko)
IL (2) IL253719B (ko)
MA (1) MA40814A1 (ko)
MX (1) MX2017010131A (ko)
NI (1) NI201700100A (ko)
PE (1) PE20180027A1 (ko)
PH (1) PH12017501384A1 (ko)
SG (1) SG11201706347SA (ko)
SV (1) SV2017005512A (ko)
TN (1) TN2017000344A1 (ko)
TW (1) TW201628625A (ko)
UA (1) UA125744C2 (ko)
WO (1) WO2016127019A2 (ko)
ZA (1) ZA201706007B (ko)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7306791B2 (ja) 2015-02-06 2023-07-11 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 併用療法のための医薬組成物
CR20170456A (es) * 2015-04-07 2018-06-13 Intercept Pharmaceuticals Inc Composiciones farmacéuticas para terapias combinadas
CA2999302A1 (en) * 2015-09-24 2017-03-30 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Methods and intermediates for the preparation bile acid derivatives
US11331292B2 (en) 2016-03-31 2022-05-17 Genfit Methods of treatment of cholestatic diseases
US20220133666A1 (en) 2016-03-31 2022-05-05 Genfit Methods of treatment of cholestatic diseases
EA038386B1 (ru) * 2016-03-31 2021-08-19 Женфит Способы лечения холестатических заболеваний
US20180243263A1 (en) 2016-12-09 2018-08-30 Cadila Healthcare Ltd. Treatment for primary biliary cholangitis
MX2019009908A (es) * 2017-02-21 2019-10-14 Genfit Combinacion de un agonista de ppar con un agonista de fxr.
CN111093705A (zh) * 2017-09-13 2020-05-01 诺华股份有限公司 包含fxr激动剂的组合
GB201812382D0 (en) 2018-07-30 2018-09-12 Nzp Uk Ltd Compounds
WO2020243590A1 (en) * 2019-05-30 2020-12-03 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a fxr agonist and a fibrate for use in the treatment of cholestatic liver disease
CN110287493B (zh) * 2019-06-28 2023-04-18 中国科学技术信息研究所 风险短语识别方法、装置、电子设备及存储介质
AU2020312735A1 (en) * 2019-07-18 2021-12-16 Enyo Pharma Method for decreasing adverse-effects of interferon
WO2021055725A1 (en) * 2019-09-20 2021-03-25 Reneo Pharmaceuticals, Inc. Use of a ppar-delta agonist in the treatment of kidney disease
WO2021102251A1 (en) * 2019-11-22 2021-05-27 Avolynt Use of sglt2 inhibitors to treat primary billiary cholangitis
CN111690731B (zh) * 2020-05-22 2021-09-28 河南大学 Fxr激动剂在治疗肝性脑病中的应用
CN112885471B (zh) * 2021-03-12 2023-01-24 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 基于贝叶斯网络最大熵自学习扩展集对分析的银屑病疗效评价系统
WO2023147141A1 (en) * 2022-01-28 2023-08-03 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB860303A (en) 1958-06-20 1961-02-01 Ici Ltd Pharmaceutical compositions comprising ª‡-aryloxy-aliphatic carboxylic acids and/or ª
US3262580A (en) 1964-06-23 1966-07-26 Mcdowell Wellman Eng Co Slewable gantry crane
FR1498459A (ko) 1965-07-30 1968-01-08
US3674836A (en) 1968-05-21 1972-07-04 Parke Davis & Co 2,2-dimethyl-{11 -aryloxy-alkanoic acids and salts and esters thereof
US4058552A (en) 1969-01-31 1977-11-15 Orchimed Sa Esters of p-carbonylphenoxy-isobutyric acids
FI52570C (fi) 1969-04-16 1977-10-10 Sumitomo Chemical Co Menetelmä veren kolesteroli- tai lipoidipitoisuutta alentavien fenoxia lifaattisten karboksyylihappoyhdisteiden ja -esteriyhdisteiden valmist amiseksi.
AT296986B (de) 1969-08-13 1972-03-10 Merz & Co Verfahren zur Herstellung von neuen α-Halogenphenoxy-isobutyroyl-β-nicotinoyl-glykolen
DE2230383C3 (de) 1971-10-01 1981-12-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Phenoxyalkylcarbonsäurederivate und Verfahren zur Herstellung derselben
JPS5118954B2 (ko) 1972-02-04 1976-06-14
US3948973A (en) 1972-08-29 1976-04-06 Sterling Drug Inc. Halocyclopropyl substituted phenoxyalkanoic acids
DE2308826C3 (de) 1973-02-22 1980-03-27 Ludwig Merckle Kg Chem. Pharm. Fabrik, 7902 Blaubeuren Phenoxyalkancarbonsäureester von Oxyalkyltheophyllinen, Verfahren zu ihrer Herstellung und Arzneimittel
FR2244511B1 (ko) 1973-07-05 1977-07-15 Roussel Uclaf
ES8101585A1 (es) 1980-02-15 1980-12-16 Especialidades Farmaco Terape Procedimiento de obtencion de un nuevo compuesto antiateros-clerotico
US5023252A (en) 1985-12-04 1991-06-11 Conrex Pharmaceutical Corporation Transdermal and trans-membrane delivery of drugs
DE69329894T2 (de) 1992-12-08 2001-05-03 Ss Pharmaceutical Co Arylamidderivate
TW438587B (en) 1995-06-20 2001-06-07 Takeda Chemical Industries Ltd A pharmaceutical composition for prophylaxis and treatment of diabetes
CN1248916A (zh) * 1997-01-24 2000-03-29 加利福尼亚大学董事会 FXR、PPARα和LXRα激活剂恢复屏障功能、促进表皮分化和抑制增生的用途
EP1003507A1 (en) * 1997-08-29 2000-05-31 Pfizer Products Inc. Combination therapy comprising amlodipine and a statin compound
CN100376560C (zh) 1997-10-27 2008-03-26 雷迪实验室有限公司 新型三环化合物和其作为药物的用途;其制备方法和包含该化合物的药物组合物
US20030109467A1 (en) 2001-11-15 2003-06-12 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of human FXR expression
WO2000037057A2 (en) 1998-12-18 2000-06-29 Abbott Laboratories Novel formulations comprising lipid-regulating agents
DE69940958D1 (de) 1998-12-23 2009-07-16 Glaxo Group Ltd Bestimmungsmethode fur liganden der nuklearen rezeptoren
US6465258B1 (en) 1999-01-07 2002-10-15 Tularik, Inc. FXR receptor-mediated modulation cholesterol metabolism
US6071955A (en) * 1999-02-25 2000-06-06 The Regents Of The University Of California FXR, PPARA and LXRA activators to treat acne/acneiform conditions
US20020132223A1 (en) 1999-03-26 2002-09-19 City Of Hope Methods for modulating activity of the FXR nuclear receptor
PL357674A1 (en) 2000-04-19 2004-07-26 Thomas Julius Borody Compositions and therapies for hyperlipidaemia-associated disorders
WO2002020463A2 (en) 2000-09-05 2002-03-14 Tularik Inc. Fxr modulators
ATE283253T1 (de) 2000-09-18 2004-12-15 Glaxo Group Ltd Substituierte aminopropoxyarylderivate als lxr agonisten
EP1392714B1 (en) 2001-03-12 2005-08-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Steroids as agonists for fxr
ATE381542T1 (de) 2001-08-13 2008-01-15 Phenex Pharmaceuticals Ag Nr1h4-kern-rezeptor-bindende verbindungen
US7259186B2 (en) 2002-12-17 2007-08-21 Abbott Laboratories Salts of fenofibric acid and pharmaceutical formulations thereof
EP1568706A1 (en) 2004-02-26 2005-08-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Novel steroid agonist for FXR
GB0405349D0 (en) * 2004-03-10 2004-04-21 Univ Birmingham Cancer therapy and medicaments therefor
EP2712617B2 (en) 2004-03-12 2020-11-18 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Treatment of fibrosis using Fxr ligands
PE20060315A1 (es) * 2004-05-24 2006-05-15 Irm Llc Compuestos de tiazol como moduladores de ppar
US20060252670A1 (en) * 2004-10-14 2006-11-09 Intercept Pharmaceuticals Inc. Method of reducing drug-induced adverse side effects in a patient
EP1877373A2 (en) 2005-05-05 2008-01-16 Microbia, Inc. Biphenylazetidinone cholesterol absorption inhibitors
ITMI20050912A1 (it) 2005-05-19 2006-11-20 Erregierre Spa Processo di preparazione di acidi 3-a-ya(b)-diidrossi-6-a(b)-alchil-5b-colanici
EP1987051A2 (en) 2006-02-14 2008-11-05 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as fxr ligands for the prevention or treatment of fxr-mediated diseases or conditions
US20070197606A1 (en) 2006-02-22 2007-08-23 Burczynski Frank J Use of ppar agonists as anti-oxidants
JP2009530398A (ja) * 2006-03-22 2009-08-27 プレジデント アンド フェロウズ オブ ハーバード カレッジ 高コレステロール血症及びアテローム性動脈硬化症を治療するための方法及び組成物
EP2029558B1 (en) 2006-05-24 2010-03-10 Eli Lilly And Company Compounds and methods for modulating fxr
CA2651378C (en) 2006-05-24 2012-08-28 Eli Lilly And Company Fxr agonists
PL2040713T3 (pl) 2006-06-27 2014-11-28 Intercept Pharmaceuticals Inc Pochodne kwasów żółciowych jako ligandy FXR do zapobiegania lub leczenia chorób lub stanów, w których pośredniczy FXR
WO2008015763A1 (fr) 2006-08-04 2008-02-07 Aska Pharmaceutical Co., Ltd. Formulation médicamenteuse contenant un médicament fibrate et procédé pour la produire
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
EP1894924A1 (en) 2006-08-29 2008-03-05 Phenex Pharmaceuticals AG Heterocyclic FXR binding compounds
EP1894928A1 (en) 2006-08-29 2008-03-05 PheneX Pharmaceuticals AG Heterocyclic fxr binding compounds
WO2008039829A2 (en) 2006-09-26 2008-04-03 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Diphenylheterocycle cholesterol absorption inhibitors
CL2007003035A1 (es) * 2006-10-24 2008-05-16 Smithkline Beechman Corp Compuestos derivados de isoxazol sustituidos, agonistas de receptores farnesoid x; procedimiento de preparacion; composicion farmaceutica que lo comprende; y uso del compuesto en el tratamiento de la obesidad, diabetes mellitus, fibrosis en organos,
JP5399262B2 (ja) 2006-12-08 2014-01-29 エグゼリクシス パテント カンパニー エルエルシー Ｌｘｒおよびｆｘｒのモジュレーター
US20080299118A1 (en) 2007-06-01 2008-12-04 Wyeth FXR Agonists for the Treatment of Malignancies
US20080300235A1 (en) 2007-06-01 2008-12-04 Wyeth FXR Agonists for Reducing LOX-1 Expression
TW200906823A (en) 2007-07-16 2009-02-16 Lilly Co Eli Compounds and methods for modulating FXR
US8338628B2 (en) 2007-08-28 2012-12-25 City Of Hope Method of synthesizing alkylated bile acid derivatives
US20090163474A1 (en) 2007-10-19 2009-06-25 Wyeth FXR Agonists for the Treatment of Nonalcoholic Fatty Liver and Cholesterol Gallstone Diseases
US20090215748A1 (en) 2007-12-20 2009-08-27 Wyeth FXR agonists for treating vitamin D associated diseases
EP2110374A1 (en) 2008-04-18 2009-10-21 Merck Sante Benzofurane, benzothiophene, benzothiazol derivatives as FXR modulators
EP2289883A1 (en) 2009-08-19 2011-03-02 Phenex Pharmaceuticals AG Novel FXR (NR1H4) binding and activity modulating compounds
CN102647982B (zh) * 2009-11-26 2014-10-15 基恩菲特公司 使用1,3-二苯基丙-2-烯-1-酮衍生物治疗肝脏疾患
SG11201408501UA (en) 2012-06-19 2015-01-29 Intercept Pharmaceuticals Inc Preparation, uses and solid forms of obeticholic acid
DK2912013T3 (en) 2012-10-26 2018-01-15 Intercept Pharmaceuticals Inc Process for the preparation of bile acid derivatives
DK3848038T3 (da) * 2013-05-14 2023-02-06 Intercept Pharmaceuticals Inc 11-Hydroxyl-6substituerede-derivater af galdesyrer og aminosyrerkonjugater heraf som farnesoid X receptor modulerer.
US10077268B2 (en) * 2014-03-13 2018-09-18 Salk Institute For Biological Studies FXR agonists and methods for making and using
JP7306791B2 (ja) 2015-02-06 2023-07-11 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 併用療法のための医薬組成物

Also Published As

Publication number Publication date
CL2018001006A1 (es) 2018-06-15
EA036404B1 (ru) 2020-11-06
ES2905872T3 (es) 2022-04-12
EP4035665A1 (en) 2022-08-03
CN107405325A (zh) 2017-11-28
EP3253382A4 (en) 2018-10-31
BR112017016766A2 (pt) 2018-04-10
IL290823A (en) 2022-04-01
WO2016127019A2 (en) 2016-08-11
IL253719A0 (en) 2017-09-28
SG11201706347SA (en) 2017-09-28
US11311557B2 (en) 2022-04-26
DK3253382T3 (da) 2022-02-14
CN107405325B (zh) 2021-11-12
CL2017001983A1 (es) 2018-04-20
CO2017007959A2 (es) 2017-10-31
NI201700100A (es) 2018-09-06
PE20180027A1 (es) 2018-01-09
CL2018003604A1 (es) 2019-02-22
AR103624A1 (es) 2017-05-24
JP2018504438A (ja) 2018-02-15
JP2022000483A (ja) 2022-01-04
MA40814A1 (fr) 2019-08-30
JP7306791B2 (ja) 2023-07-11
US20220280533A1 (en) 2022-09-08
AU2021201015A1 (en) 2021-03-11
ECSP17057848A (es) 2017-10-31
HK1246191A1 (zh) 2018-09-07
PH12017501384A1 (en) 2018-01-08
TN2017000344A1 (en) 2019-01-16
CA2976056A1 (en) 2016-08-11
CA2976056C (en) 2024-02-06
UA125744C2 (uk) 2022-06-01
AU2016215179B2 (en) 2021-02-25
US20220280534A1 (en) 2022-09-08
US20180008616A1 (en) 2018-01-11
ZA201706007B (en) 2019-01-30
EP3253382A2 (en) 2017-12-13
IL253719B (en) 2022-04-01
TW201628625A (zh) 2016-08-16
AU2016215179A1 (en) 2017-08-24
GT201700174A (es) 2018-11-13
EP3253382B1 (en) 2021-11-17
BR112017016766B1 (pt) 2023-11-07
EA201791770A1 (ru) 2017-12-29
SV2017005512A (es) 2018-06-12
WO2016127019A3 (en) 2016-11-03
MX2017010131A (es) 2017-11-01
CR20170356A (es) 2018-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220280533A1 (en) Pharmaceutical compositions for combination therapy
Wang et al. Sodium butyrate suppresses angiotensin II-induced hypertension by inhibition of renal (pro) renin receptor and intrarenal renin–angiotensin system
US10449154B2 (en) Treatment of NASH with Gemcabene
JP6879931B2 (ja) 併用療法用の医薬組成物
EA020849B1 (ru) Применение 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-оновых производных для лечения заболеваний печени
TW201733582A (zh) Fxr促效劑及arb之組合醫藥
Bakhai Adipokines—targeting a root cause of cardiometabolic risk
CN113166195A (zh) 在正在治疗高胆固醇相关疾病的患者中降低糖尿病风险的方法
US11331292B2 (en) Methods of treatment of cholestatic diseases
Xiang et al. The anti-fibrotic efficacy of adelmidrol depends on hepatic PPARγ levels
US20240082186A1 (en) Methods of treatment of cholestatic diseases
US20210379003A1 (en) Treatment of diseases associated with biliary system destruction
EP3952855A1 (en) Combination therapy comprising compounds of formula (i) and glp-1 receptor agonists

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application