KR20170055327A - 사카로미세스속 효모 추출물을 포함하는 천연 리포좀, 그 제조방법 및 이를 포함하는 식품 또는 약학 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 1종 이상의 천연 유화제를 천연 유래 용매와 혼합하고 초음파 처리하는 제1단계, 상기 제1단계의 생성물에 포집물질로서 사카로미세스속 효모 추출물을 첨가하고 초음파 처리하는 제2단계를 포함하는 방법에 의하여 형성되는 천연 리포좀으로서, 1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질 및 포집물질로서 사카로미세스속 효모 추출물을 포함하는 천연 리포좀, 그 제조방법 및 이를 포함하는 식품 또는 약학 조성물을 제공한다.
Description
본 발명은 사카로미세스(Saccharomyces)속 효모 추출물을 포함하는 천연 리포좀, 그 제조방법, 및 이를 포함하는 식품 또는 약학 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 항산화, 피로회복 활성을 제공하는 천연 리포좀, 그 제조방법, 및 이를 포함하는 식품 또는 약학 조성물에 관한 것이다.
현대인의 식습관이 점차 서구화되고, 스트레스가 늘어감에 따라 인체의 산화적 스트레스를 방지할 수 있는 항산화 물질에 대한 관심이 높아지고 있다. 신체활동이 증가함에 따라 체내 산소소비량이 많아지면 산화적 스트레스로 인한 자유 라디칼(free radical) 생성이 증가함으로써 인체에 유해한 영향을 줄 수 있다[1].
체내에는 생리적인 조건하에서 활성산소를 처리할 수 있는 적절한 항산화 체계가 있다. 항산화 체계는 크게 세포내 항산화 효소인 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(superoxide dismutase; SOD), 글루타치온 과산화효소(glutathione peroxidase; GPx), 그리고 카탈라아제(catalase; CAT)를 포함하는 효소적 항산화 그룹과 글루타치온(glutathione), 비타민 C, 비타민 E, 카로티노이드(carotenoids), 요산(uric acid) 등을 포함하는 비효소적 항산화 그룹으로 구분된다[2].
글루타치온(Glutathione: γ-glutamyl-cysteinyl-glycine (GSH))은 다양한 효소적 혹은 비효소적 해독기전(detoxification mechanisms)에 작용할 뿐 아니라 자유 라디칼(free radical) 소거능이 있어서 활성산소종(reactive oxygen species)과 생체이물(xenobiotics)로부터 세포를 보호할 수 있다. 또한, 신장, 간, 폐, 소장 등 생체이물에 자주 노출될 수 있는 여러 기관들을 보호할 수 있다.
그런데, 글루타치온(GSH)은 세포 흡수(cellular uptake)율이 낮고, 중성이나 알칼리성 환경에서 불안정하여 생체이용률이 낮기 때문에 기능성 식품으로서 활용도가 떨어지는 문제가 있다. 산화적 스트레스 하에서 글루타치온(GSH)의 티올(thiol)기가 GSSG로 쉽게 산화되기 때문이다. 따라서, 글루타치온(GSH)의 산화를 막기 위한 기술의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.
이러한 문제점을 해결하기 위해, 효소적 손상으로부터 글루타치온을 보호하고자 하는 많은 연구가 이루어지고 있다. 예를 들면, 글루타치온을 포함한 나노소포체, 캡슐화, 키토산 코팅, 포장필름 등의 기술이 개발되고 있다. 특허공개공보 제2013-0137561호에는 글루타치온의 안정성이 향상된 식품 포장용 필름의 제조방법이 개시되어 있다. 그러나, 천연 물질로 이루어진 리포좀이나, 이를 포함하는 식품 또는 약학 조성물은 전혀 알려져 있지 않다.
특히, 리포좀(liposome)은 생체 세포막의 주요 성분인 인지질로 구성되어 생체 친화적이며, 이중층 구조 내에 원하는 물질(약물, 영양물 등)을 저장할 수 있어, 불안정하고 취급이 어려운 물질을 세포내로 운반할 수 있다는 장점이 있다. 그러나, 리포좀은 이러한 장점에도 불구하고 제형이 불안정하고, 포집 효율이 매우 낮을 뿐 아니라 리포좀 제조에 사용되는 용매, 방부제 등이 피부 자극을 유발한다는 등의 문제가 있다.
1. Alessio, H. M., & Goldfarb, A. H. (1998). Lipid peroxidation and scavenger enzymes during exercise: adaptive response to training. Journal of Applied.
2. Jeong, C. H., Choi, S. G., & Heo, H. J. (2008). Analysis of nutritional compositions and antioxidative activities of korean commercial blueberry and raspberry. Journal of the Korean Society Food Science and Nutrition, 37(11), 1375-1381. Physiology, 64, 1333-1336.
본 발명은 상기 종래기술의 문제점을 해결하여 산화적 스트레스를 완화하면서도 체내에서 흡수가 용이한 천연 리포좀 및 이를 포함하는 항산화용 식품 또는 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 실시예는 1종 이상의 천연 유화제를 천연 유래 용매와 혼합하고 초음파 처리하는 제1단계, 상기 제1단계의 생성물에 포집물질로서 사카로미세스(Saccharomyces)속 효모 추출물을 첨가하고 초음파 처리하는 제2단계를 포함하는 방법에 의하여 형성되는 천연 리포좀으로서, 1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질 및 포집물질로서 사카로미세스속 효모 추출물을 포함하는 천연 리포좀을 제공한다.
본 발명의 다른 일 실시예는 상기 천연 리포좀을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물 또는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 또다른 일 실시예는 1종 이상의 천연 유화제를 천연 용매와 혼합한 다음 50~80℃에서 초음파 처리하는 제1단계, 상기 제1단계의 생성물에 사카로미세스속 효모 추출물을 첨가한 후 초음파 처리하여 혼합하는 제2단계, 상기 제2단계의 생성물에 40~60℃로 가온된 증류수와 천연 방부제를 첨가하고 초음파 처리하여 리포좀을 형성하는 제3단계를 포함하는 상기 천연 리포좀의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 사카로미세스속 효모 추출물을 포함하는 천연 리포좀은 경구섭취시 장내의 글루타치온 흡수력을 높일 수 있다. 또한 본 발명에 따른 천연 리포좀을 포함하는 식품 또는 약학 조성물은 우수한 항산화 효과, 피로회복 효과 등을 나타낼 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 천연 리포좀의 제조공정을 나타낸다.
도 2는 효모의 종류, 처리방법에 따른 글루타치온 함량 분석 결과를 나타낸다.
도 3a, 3b, 3c는 각각 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀, 비교예 2의 리포좀의 전자주사현미경 사진이다.
도 4a, 4b, 4c는 각각 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀, 비교예 2의 리포좀의 레이저 입도 분석기에 의한 입자 분포도를 나타낸다.
도 5는 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀, 비교예 2의 리포좀의 피부 흡수력 테스트 결과를 나타낸다.
도 6은 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀의 세포독성 시험 결과를 나타낸다.
도 7은 각 샘플의 산화적 손상시 세포 생존율을 나타낸다.
도 8은 각 샘플의 세포내 SOD 활성을 나타낸다.
도 9는 각 샘플의 Rat 비장지수를 나타낸다.
도 10은 각 샘플의 Rat 에 대한 적혈구 SOD 활성을 나타낸다.
도 11은 각 샘플의 Rat에 대한 적혈구 카탈라아제 활성을 나타낸다.
도 12는 각 샘플의 Rat에 대한 간내 글루타치온 함량을 나타낸다.
도 13은 각 샘플의 Rat에 대한 간 글루타치온 가수분해 효소 함량을 나타낸다.
도 14는 각 샘플의 Rat에 대한 간내 과산화지질 함량을 나타낸다.
도 15는 각 샘플의 Rat에 대한 간 조직 사진을 나타낸다.
도 16은 각 샘플의 Rat 혈청내 AST 함량을 나타낸다.
도 17은 각 샘플의 Rat 혈청내 ALT 함량을 나타낸다.
도 18은 각 샘플의 Rat 혈청내 CPK 함량을 나타낸다.
도 19는 각 샘플의 Rat 혈청내 LDH 함량을 나타낸다.
도 20은 각 샘플의 Rat 혈청내 항산화물질 함량을 나타낸다.
도 21은 각 샘플의 Rat 혈청내 항산화효과를 나타낸다.
도 2는 효모의 종류, 처리방법에 따른 글루타치온 함량 분석 결과를 나타낸다.
도 3a, 3b, 3c는 각각 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀, 비교예 2의 리포좀의 전자주사현미경 사진이다.
도 4a, 4b, 4c는 각각 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀, 비교예 2의 리포좀의 레이저 입도 분석기에 의한 입자 분포도를 나타낸다.
도 5는 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀, 비교예 2의 리포좀의 피부 흡수력 테스트 결과를 나타낸다.
도 6은 비교예 1의 추출물, 실시예 1의 리포좀의 세포독성 시험 결과를 나타낸다.
도 7은 각 샘플의 산화적 손상시 세포 생존율을 나타낸다.
도 8은 각 샘플의 세포내 SOD 활성을 나타낸다.
도 9는 각 샘플의 Rat 비장지수를 나타낸다.
도 10은 각 샘플의 Rat 에 대한 적혈구 SOD 활성을 나타낸다.
도 11은 각 샘플의 Rat에 대한 적혈구 카탈라아제 활성을 나타낸다.
도 12는 각 샘플의 Rat에 대한 간내 글루타치온 함량을 나타낸다.
도 13은 각 샘플의 Rat에 대한 간 글루타치온 가수분해 효소 함량을 나타낸다.
도 14는 각 샘플의 Rat에 대한 간내 과산화지질 함량을 나타낸다.
도 15는 각 샘플의 Rat에 대한 간 조직 사진을 나타낸다.
도 16은 각 샘플의 Rat 혈청내 AST 함량을 나타낸다.
도 17은 각 샘플의 Rat 혈청내 ALT 함량을 나타낸다.
도 18은 각 샘플의 Rat 혈청내 CPK 함량을 나타낸다.
도 19는 각 샘플의 Rat 혈청내 LDH 함량을 나타낸다.
도 20은 각 샘플의 Rat 혈청내 항산화물질 함량을 나타낸다.
도 21은 각 샘플의 Rat 혈청내 항산화효과를 나타낸다.
이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 사카로미세스속 효모 추출물을 포함하는 천연 리포좀을 보다 상세하게 설명한다.
그러나 이러한 설명은 본 발명의 이해를 돕기 위하여 예시적으로 제시된 것일 뿐 본 발명의 범위가 이러한 예시적인 설명에 의하여 제한되는 것은 아니다.
1. 천연 유화제
천연 유화제는 지질 이중층을 구성하는 물질로서, 천연 물질에서 유래된 유화제이다. 상기 천연 유화제는 인지질과 지방산을 포함한다. 천연 유화제에 포함된 인지질은 천연에서 유래한 천연 인지질이며, 지방산 또한 천연에서 유래한 천연지방산이다.
상기 인지질로는 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine), 리소포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine), 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine), 포스파티딜세린(phosphatidylserine), 포스파티딜글리세롤(phosphatidylglycerol), 포스파티딜이노시톨(phosphatidylinositol), 또는 이들의 수소첨가생성물(예를 들면, 하이드로지네이티드 포스파티딜콜린(hydrogenated phophatidylcholine - 콩유래))로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 천연 인지질이 사용될 수 있다. 바람직하게는 산화안정성이 우수한 하이드로지네이티드 포스파티딜콜린이 사용될 수 있다.
상기 지방산으로는 팔미트산(palmitic acid), 스테아르산(stearic acid), 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid), 리놀렌산(linolenic acid - 콩유래)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 천연 지방산이 사용될 수 있다.
상기 천연 유화제는 전체 천연 유화제의 중량을 기준으로 천연 인지질 70 내지 90 중량% 및 천연 지방산 1 내지 5 중량%를 포함할 수 있다. 기타 용매를 잔량 포함할 수 있다. 용매로는 천연 유래 용매를 사용하는 것이 바람직하고, 증류수를 사용하는 것이 더 바람직하다.
또한 천연 유화제는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 일례로는 2종의 천연 유화제 또는 3종의 천연 유화제를 혼합하여 사용할 수 있다. 2종의 천연 유화제를 혼합하여 사용할 경우, 예를 들면, 제1 천연 유화제로는 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine), 리소포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine), 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine), 팔미트산(palmitic acid), 스테아르산(stearic acid), 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid), 리놀렌산(linolenic acid - 콩유래)이 사용될 수 있고, 제2 천연 유화제로는 하이드로지네이티드포스파티딜콜린(hydrogenated phosphatidylcholine - 콩 유래)이 사용될 수 있다. 또한, 3종의 천연 유화제를 혼합하여 사용할 경우, 예를 들면, 상기 제1 천연 유화제, 제2 천연 유화제 외에, 제3 천연 유화제로서 세테아릴올리베이트(Cetearylolivate), 소르비탄올리베이트(sorbitanolivate - 올리브유래)가 사용될 수 있다.
2. 포집물질
리포좀의 인지질층 내부에 포집될 수 있는 포집물질로는 사카로미세스속 효모가 사용될 수 있으며, 예를 들면, 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 엘렙소이데우스(Saccharomyces ellipsoideus), 사카로미세스 칼스버게니스(Saccharomyces carlsbergenis)등의 효모가 사용될 수 있다. 바람직하게는 사카로미세스 세레비지에가 사용될 수 있으며, 가장 바람직하게는 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) MAB Y1(KCTC 11386BP)이 사용될 수 있다.
포집물질로는 상기 효모의 추출물을 사용하는 것이 바람직하다. 특히 초음파 처리된 효모 추출물을 사용하는 것이 더 바람직하다.
일반적으로 효모 추출물은 정미성분인 핵산과 단백질이 다량 함유되어 천연 풍미소재로 많이 사용된다. 효모 추출물의 정미성분 중 트리펩타이드인 글루타치온(L-glutamyl-L-cysteinylglycine)은 맛의 지속성을 제공한다. 효모에 존재하는 글루타치온은 환원형(reduced form)으로 미생물과 동식물의 세포 내에 존재하면서 산화적 스트레스(oxidative damage)에 대하여 항산화 작용을 하며 간질환 개선, 당뇨병 치료, 항암활성 등 다양한 약리효과를 제공하는 것도 알려져 있다.
효모 추출물로는 균체 또는 균체를 초음파로 파쇄한 상등액을 사용할 수 있으며, 이를 일정한 비율로 혼합한 혼합물도 사용할 수 있다. 상등액을 사용하는 것이 더 바람직하다. 초음파 파쇄를 통하여 효모 추출물을 제조할 경우 항산화 성분의 파괴를 방지하고 단시간에 추출물을 얻을 수 있을 뿐 아니라 공정이 비교적 간단하다는 점에서 바람직하다. 상기 포집물질의 함량은 천연 리포좀 전체의 중량을 기준으로 1 내지 50 중량%이다.
3. 용매
용매로는 천연 용매, 예를 들면 증류수, 천연 유래의 글리세린, 천연 에탄올, 천연 프로판디올, 천연 글리세린, 발효 주정이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 증류수, 천연 유래의 글리세린, 천연 에탄올이, 더 바람직하게는 증류수가 사용될 수 있다. 용매의 함량은 유화제, 포집물질, 방부제의 함량의 잔량이다.
4. 방부제
방부제로는 식품 방부제로 사용될 수 있는 천연 유래 방부제라면 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들면 천연 추출물이 사용될 수 있다. 바람직하게는 자몽 추출물, 감귤 추출물이 사용될 수 있다. 천연추출물이라는 점에서 통상적으로 사용되는 방부제인 안식향산류, 소르빈산류, 프로피온산류, 데히드로초산 류, 파라옥시 안식향산류 등과는 구별된다. 방부제는 천연 리포좀 전체의 중량을 기준으로 0.1 내지 5 중량% 포함될 수 있다.
5. 리포좀의 제조
본 발명에 따른 리포좀은 초음파를 이용하여 제조될 수 있다. 구체적인 제조방법은 다음과 같다.
1종 이상의 천연 유화제를 천연 용매 일부와 혼합한 후 초음파 파쇄기(Ultrasonic Liquid Processor)를 이용하여 섭씨 50~80도에서 초음파 파쇄하여 상기 혼합물을 균질화한다. 천연 유화제가 균질화되면 포집물질을 첨가한 후 초음파 파쇄하여 혼합한다. 호모게나이저 등을 사용하던 종래기술과 달리, 천연 유화제 균질화 단계와 포집물질 첨가 단계에 초음파 파쇄 처리를 함으로써 유화제와 포집물질의 균질화도를 높이고 입자 크기를 조절할 수 있다. 유화제와 포집물질이 완전히 균질화되면 섭씨 40~60도로 가온된 나머지 증류수와 천연추출물(방부제)을 넣고 초음파 파쇄를 통하여 혼합하여 리포좀 형태의 입자를 형성한다. 이후 온도를 서서히 낮추면서 최종적으로 5분간 초음파 파쇄를 하여 상기 입자를 보다 작고 균일하게 만들어 최종적으로 천연 리포좀을 제조한다. 그 제조공정을 도 1에 도시하였다.
본 발명의 일례에 따른 천연 리포좀은 천연 유화제, 천연 용매, 천연 방부제, 천연 유래 포집물질을 포함하여 합성 성분을 포함하고 있지 않다는 점에서 종래의 합성 리포좀과 구별된다.
또한, 본 발명에 의한 리포좀은 체내투과율을 높여 흡수율을 개선할 수 있어 식품 조성물 또는 약학 조성물로서 효과적으로 작용할 수 있다. 본 발명에 의한 리포좀은 음료, 건강기능식품 등의 형태로 사용될 수 있다.
<원료 효모의 선택 - 처리방법에 따른 글루타치온 함량분석>
미생물 내 글루타치온 함량을 확인하여 적절한 원료를 선택하기 위하여 처리방법에 따른 글루타치온 함량을 분석하였다. 이를 위하여 먼저 막걸리 유래 효모인 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) MAB Y1(KCTC 11386BP)를 30℃에서 글루코스 3%, 효모추출물 2%, NaCl 0.06%, 타우린 0.06%를 혼합한 배지에서 배양하였다. 배양이 완료된 Y1 배양액을 12000rpm에서 15분동안 원심분리하여 상층액을 제거하고 균체를 회수하였다. 회수된 균체에 동량의 증류수를 가한 후 초음파 파쇄기로 10 Amp 에서 1분간 처리하였다. 이를 12000rpm에서 15분 동안 원심 분리하여 pellet과 상등액으로 분리하였고 이중 pellet을 제거하고 상등액을 회수하였다.
상기 미생물 파쇄 상등액 0.5ml에 동량의 증류수를 넣어 희석시킨 후 0.6mM의 DTNB(5'5-dithiobis(2-nitrobenzoic aicd))발색시약을 첨가하고 15분 동안 반응시킨 후 412nm에서 흡광도를 측정하였다. 글루타치온의 표준검량곡선에 의해 글루타치온 함량을 산출하였다.
적절한 효모 추출물을 선정하기 위하여 상기 미생물 파쇄 상등액의 글루타치온 함량 외에, 균체의 글루타치온 함량, 초음파 파쇄 하층액(pellet)의 글루타치온 함량, 초음파 파쇄 대신 에탄올을 이용하여 파쇄하였을 경우의 하층액(pellet)/상등액의 글루타치온 함량, 균체 + 배양 상태의 글루타치온 함량, 배양액의 글루타치온 함량, 효모발효분말의 글루타치온 함량을 각각 측정하고 그 결과를 도 2에 나타내었다.
실험결과, 도 2에 도시된 바와 같이 초음파 파쇄 상등액의 글루타치온 함량이 1.29mg/ml로 가장 높은 것으로 나타났다. 이에 따라 Y1 추출물의 제조에 초음파 파쇄 상등액을 사용하였다.
<
실시예
1>
<Y1 추출물 제조>
사카로미세스 세레비지에( Saccharomyces cerevisiae ) MAB Y1(막걸리 유래 효모)을, 글루코스(Glucose), 염(NaCl), 타우린이 포함된 배지에 아래 표 1의 배양조건에 따라 72시간 동안 배양하였다.
| 외부조건 | ||||
| Time(Hr) | rpm | pH | 온도(°C) | |
| 조건 | 72 | 100 | 6.00 | 30 |
| 영양조건 | ||||
| 탄소원 | 질소원 | 염 | 아미노산 | |
| 공급원 | 글루코스 | 효모 추출물 | NaCl | 타우린 |
| 농도 | 3% | 2% | 0.06% | 0.06% |
배양이 완료된 상기 미생물 배양액(Y1 배양액)을 원심분리하여 균체를 회수하고, 회수한 균체 3g에 증류수 30g을 가하여 초음파 처리하였다. 그런 다음 3,000rpm에서 10분 동안 원심 분리하여, 파쇄된 pellet과 상등액을 얻었다. 여기서, pellet을 제거하고 상등액을 회수하여 이 상등액을 포집물질인 사카로미세스 세레비지에 MAB Y1 추출물(Y1 추출물)로 사용하였다. 초음파 처리는 10 Amp에서 10분 동안 진행되었다.
<사카로미세스 세레비지에 ( Saccharomyces cerevisiae ) MAB Y1이 함유된 천연 리포좀 제조>
천연 유화제(전체 100중량%를 기준으로, 포스파티딜콜린 67중량%, 리소포스파티딜콜린 8중량%, 포스파티딜에탄올아민 8 중량%, 팔미트산 3 중량%, 스테아르산 1 중량%, 올레산 3 중량%, 리놀레산 7 중량%, 리놀렌산 3 중량%로 이루어짐)과 증류수를 혼합한 후 초음파 파쇄기(Ultrasonic Liquid Processor, QSONICA, USA)를 이용하여 65℃에서 초음파 파쇄시켜 균질화하였다. 그런 다음, 균질화된 천연 유화제에 포집물질인 Y1 추출물을 첨가한 후 초음파 파쇄하여 혼합하였다. 천연 유화제과 포집물질이 완전히 균질화되면 50℃로 가열한 증류수와 천연 방부제를 넣고 초음파 파쇄하여 혼합, 리포좀 형태의 예비 입자를 형성하였다. 이후 온도를 서서히 낮추면서 최종적으로 5분동안 초음파 파쇄하여 상기 입자를 보다 작고 균일하게 만들어 Y1 추출물이 함유된 천연 리포좀(Y1 CPS)을 제조하였다. 상기 제조공정을 도 1에 도시하였다.
<실시예 2>
포집물질로서 Y1 추출물의 함량을 20중량%, 증류수를 그 잔량만큼 사용한 것을 제외하고는 실시예1과 동일한 방법으로 천연 리포좀을 제조하였다.
<실시예 3>
포집물질로서 Y1 추출물의 함량을 10중량%, 증류수를 그 잔량만큼 사용한 것을 제외하고는 실시예1과 동일한 방법으로 천연 리포좀을 제조하였다. 하기 표 2에 상기 실시예 1~3에서 사용된 원료 및 그 함량을 나타내었다.
| 원료명 | 함량(중량%) | |||
| 실시예 1 | 실시예 2 | 실시예 3 | ||
| 천연 유화제 | 1 | 1 | 1 | |
| 자몽 추출물 | 1 | 1 | 1 | |
| 용매 (유화공정) |
증류수 (D. I. WATER) | 30 | 30 | 30 |
| 용매(균질화 공정) | 증류수 (D. I. WATER) | 잔량 | 잔량 | 잔량 |
| 포집물질 | 사카로미세스 세레비지에 ( Saccharomyces cerevisiae ) MAB Y1 |
30 | 20 | 10 |
<비교예 1>
비교예 1에서는 실시예 1의 천연 리포좀 대신 포집물질로 사용된 Y1 추출물 30중량%와 잔량의 증류수를 혼합하여 사용하였다.
<비교예 2>
비교예 2에서는 Y1 추출물, 레시틴, 콜레스테롤, 글리세린, 포타슘소르베이트가 포함된 종래의 합성 리포좀을 제조하였다.
용매로서 증류수(30 중량%)를 사용하고 여기에 인지질(레시틴-1%)과 합성콜레스테롤(0.2 중량%), 합성 글리세린(1 중량%)을 혼합하여 65℃까지 가열하였다. 인지질이 완전히 용해되면 실시예 1과 동일한 양의 Y1 추출물을 넣고 호모게나이저(homogenizer)로 균질화하였다. 잔량의 물과 방부제(포타슘소르베이트 0.1%)를 혼합하여 리포좀 입자를 형성하고 초음파 처리를 통해 입자를 균질화시켰다.
<실험예 1> 전자주사현미경에 의한 리포좀의 형태 및 크기 분석
전자주사현미경(Scanning Electron microscope S-1700, Hitachi)을 이용하여 비교예 1인 Y1 추출물, 실시예 1인 Y1 천연 리포좀(Y1 CPS), 비교예 2인 Y1 합성 리포좀의 입자형태와 크기를 분석하였다. 그 결과를 각각 도 3a, 도 3b, 도 3c에 도시하였다.
<실험예 2> 레이저 입도분석기에 의한 리포좀의 크기 분석
레이저 입도분석기(Electrophoretic Light Scattering Spectrophotometer ELS-8000, Otsuka)를 이용하여 샘플의 입자 크기를 측정하고 입도 분포를 분석하였다. 비교예 1의 Y1 추출물, 실시예 1의 Y1 천연 리포좀(Y1 CPS), 비교예 2의 Y1 합성 리포좀의 평균 입자크기를 하기 표 3에 나타내었다.
| 샘플 | 평균입자크기(nm) |
| 비교예 1 | 125.0 |
| 실시예 1 | 116.5 |
| 비교예 2 | 601.9 |
또한, 비교예 1의 Y1 추출물, 실시예 1의 Y1 천연 리포좀(Y1 CPS), 비교예 2의 Y1 합성 리포좀의 입자 분포도를 각각 도 4a, 4b, 4c에 나타내었다.
<실험예 3> 포집율 측정
완성된 Y1 천연 리포좀 현탁액의 2ml을 취하고 10ml syringe에 0.45㎛ ~ 25mm syringe filter(GVS, USA)를 결합하여 리포좀 내 포집되지 않은 물질을 제거하였다. 제거된 부분을 증류수로 보충하고, Y1 추출물의 최대 흡수파장에서 흡광도를 측정하였다. 포집된 Y1 추출물의 포집율은 아래 식에 대입하여 확인하였다.
Entrapment efficiency (%) = Ye/Yi x 100 (%)
Ye : 포집된 물질의 농도(encapsulated concentration)
Yi : 포집 전 물질의 초기 농도(Initial concentration)
포집율을 하기 표 4에 나타내었다.
| 샘플 | 포집율(%) |
| 실시예 1 | 98.11 |
| 비교예 2 | 89.02 |
실시예1의 천연 리포좀과 비교예2의 합성리포좀의 포집율을 측정한 결과, 상기 표 4에서와 같이 실시예 1의 Y1 천연 리포좀의 포집율(98.11%이 종래기술인 비교예 2의 합성리포좀의 포집율(89.02%)보다 우수한 것으로 나타났다.
<실험예 4> Franz Diffusion cell을 이용한 피부 흡수력
제조된 Y1 천연 리포좀이 피부 투과 증진에 어떠한 효과를 주는지 확인하기 위해 생체외 투과실험(Franz Diffusion cell)을 이용하여 피부 투과 실험을 진행하였다. 실험에는 닭의 피부 조직을 털을 제거하여 사용하였다. 같은 양의 Y1추출물과 Y1 천연 리포좀, Y1 합성리포좀의 흡수력을 비교하였다. donor와 receptor phase 사이에 닭의 피부를 고정하고, 준비된 Franz diffusion cell의 donor에 1ml의 시료를 투여한 다음, 항온수조를 이용해 온도를 약 36.5℃로 유지하였다. 0시간, 1시간, 3시간, 6시간이 될 때 각각 매 회 0.25ml의 receptor phase을 회수한 후 동일한 양의 증류수를 공급하였다.
비교예 1의 Y1 추출물, 실시예 1의 Y1 천연 리포좀, 비교예 2의 Y1 합성 리포좀의 피부 흡수력 테스트를 비교한 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 도시된 바와 같이 비교예 1의 Y1추출물(Y1)의 흡수력이 가장 낮고, 실시예 1의 Y1천연 리포좀(Y1 CPS)의 흡수력이 가장 높은 것으로 나타났다.
[세포실험]
<실험예 5> MTT를 이용한 세포독성
48 well에 Fibroblast 세포 1 × 105개를 분주하고, 24시간 뒤에 새 배지로 교체한 후 0.05 내지 1% 농도의 시료를 24시간 동안 처리하였다. 이후, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-ly)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (0.1 mg/ml)을 각 well에 처리하여 3시간동안 배양한 후 형성된 insoluble formazan을 0.04N HCl/이소프로판올에 녹이고 ELISA reader를 통해 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 6에 도시된 바와 같이 진피세포에서의 세포독성을 확인한 결과 0.25%까지 세포독성이 없고, 0.25%이상의 농도에서는 비교예 1의 Y1 추출물보다 실시예 1의 Y1 천연 리포좀(Y1 CPS)의 세포생존율이 더 높은 것으로 나타났다.
<실험예 6> 산화적 손상 회복 효과
48 well에 keratinocyte HaCaT 세포 1 × 105개를 분주하고, 24시간 뒤에 새 배지로 교체한 후 샘플을 24시간 동안 처리하였다. 산화 스트레스를 유발하기 위하여 500uM의 H2O2를 4시간 동안 처리하였으며, 이후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-ly)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (0.1 mg/ml)을 각 well에 처리하여 3시간 배양한 후 형성된 insoluble formazan을 0.04N HCl/이소프로판올에 녹이고 ELISA reader를 통해 570 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
각질세포에 과산화수소를 처리하여 산화적 스트레스를 유발하고 시험물질을 처리하여 세포생존율을 확인하고 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 도시된 바와 같이 과산화수소만을 처리한 군의 세포생존율은 과산화수소를 처리하지 않은 군의 세포생존율의 77.9%에 불과한 것으로 나타났다. 반면 실시예 1의 Y1 천연 리포좀을 처리한 경우에는 세포생존율이 85.7%까지 증가한 것으로 나타났다.
<실험예 7> 세포내 SOD 활성
과산화물제거효소(SOD)는 초과산화이온을 산소와 과산화수소로 전환하는 반응에 촉매작용을 하는 효소이다. 상기 과산화물제거효소는 산소에 노출되는 거의 모든 세포에서 항산화 방어기작을 하는 것으로 알려져 있으며, 활성산소를 억제하는 대표적인 항산화 물질이다.
48 well에 진피세포 Human dermal fibroblast(HDF) 세포 1x105개를 분주하고, 24시간 뒤 새 배지로 교체한 후 샘플을 24시간 동안 처리하였다. 이후, 세포를 수거하여 cell lysate를 실험에 사용하였다.
SOD활성은 피로갈롤(pyrogallol)의 자동 산화율이 억제되는 양을 측정하는 방법으로, UV/VIS 스펙트로포토메터(UV-2401PC, Shimadzu)를 이용해 420 nm에서 흡광도를 측정하였다. 효소의 활성은 H2O2를 처리하지 않은 정상세포를 기준으로 하여 피로갈롤의 발색 반응을 SOD활성%로 환산하여 나타내었다. 그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8에 도시된 바와 같이 피부 진피세포에서 과산화 수소를 처리하면 SOD 활성이 20%까지 낮아지는 것을 확인하였다. 세포에 항산화제(Ascorbic acid(AA), BHT)를 처리했을 경우 SOD 활성이 증가하는데, 실시예 1의 Y1 천연 리포좀 처리에 의해 SOD 활성이 51.652%로 증가한 것으로 나타났다.
[동물실험]
<실험예 8> t-BHT로 유도된 Rat에 대한 산화적 스트레스 개선효과
실험동물 및 산화 유발
실험에는 SD Rat를 사용하였으며, 체중 130g 내외의 4주령 수컷 Rat를 대한 바이오링크(대한민국 충청북도 음성군)로부터 제공 받아, 1주일의 적응기간을 거친 후 군별로 4주간의 처리기간을 거쳤다. 시험기간 중 사료와 물은 자유로이 섭취시켰으며, 사육실의 온도(22±2), 상대습도(55±5%)와 명암은 12시간 주기를 유지하였다. 산화적 스트레스의 유발은 t-BHT(tert-butyl hydroperoxide)를 Rat의 실험 마지막 날 복강에 0.5mmol/kg 주입하여 수행하였다.
<실험예 9> 산화적 스트레스를 유발한 Rat의 비장지수 비교
면역학적 평가를 위하여 실험 종료일에 Rat를 희생시켜 비장을 적출하고 무게를 측정한 다음 그 결과를 도 9의 그래프로 나타냈다. 비장지수는 마우스의 몸무게(g)에 대한 비장무게(mg)의 비율로 나타냈다.
도 9에 도시된 바와 같이 산화적 스트레스를 유발시키지 않은 정상군(normal)은 비장지수가 2.54mg/g이었으나, 산화적 스트레스를 유발시킨 군(control)은 비장지수가 2.74mg/g로 증가하는 것으로 나타났다. 실시예 1의 천연 리포좀(Y1 CPS)을 처리한 경우 2.35mg/g으로 정상군과 가장 유사한 수치를 나타내었으며, 정상군을 제외한 다른 군에 비해 가장 낮은 수치를 나타내었다. 이 결과를 통해 실시예 1의 천연 리포좀이 비장 내의 T 림프구의 증가를 현저하게 억제한 것으로 볼 수 있다.
<실험예 10> 산화적 스트레스를 유발한 Rat의 적혈구 SOD 활성비교
산화적 스트레스를 유발한 Rat의 혈액을 채취한 후 적혈구를 회수하여 실험에 사용하였다. 전처리는 적혈구 현탁액 100ul에 0.9ml의 10mM Tris-1mM EDTA buffer를 넣은 후 0.4ml의 Chloroform-Ethanol 용액을 넣고 2분간 혼합한 다음후 140ul의 3차증류수를 넣고 20,000g, 4℃, 30분간 원심분리하여 상층액을 실험에 사용하였다.
적혈구내의 SOD 활성은 산화적 스트레스를 유발시키지 않은 정상군의 적혈구를 통한 SOD활성을 기준으로 설정하였다. 그 결과를 도 10에 나타내었다.
도 10에 도시된 바와 같이 t-BHT만을 투여한 Control군의 적혈구 SDO 활성이 43.7%로 감소하였다. 반면, 실시예 1의 Y1 천연리포좀을 투여한 군에서는 77.8%의 SOD 활성을 나타내 산화적 스트레스를 유발하지 않은 Normal군과 가장 가까운 활성을 보였다.
<실험예 11> 산화적 스트레스를 유발한 Rat의 적혈구 Catalase 활성비교
산화적 스트레스를 유발한 Rat의 혈액에서 회수한 적혈구의 Catalase 활성을 측정하였다. 전처리는 적혈구 현탁액 150ul에 1.35ml의 10mM Tris-1mM EDTA buffer를 넣은 후 0.01M phosphate buffer(pH 7.4)를 넣어 1000배 희석하였다. 그 후 15ml tube에 250mM KH2PO4-NaOH buffer(pH 7.0) 300ul, 100% methanol 300ul, 0.27% H2O2 60ul를 넣고 시료를 600ul 첨가한 후 20℃에서 20분간 반응시켰다. 7.8M KOH를 300ul 넣어 반응을 종결한 후 34.2mM Pulpald 용액 600ul를 넣고 혼합하여 20℃에서 10분간 반응시켰다. 마지막으로 65.2mM Potassium periodate를 300ul 가하여 발색하고 10분간 실온에 방치한 뒤 550nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 11에 나타내었다.
Catalase 활성을 비교한 결과, 산화적 스트레스를 유발하지 않은 정상군(Normal)에서 122.77nmol의 활성을 보였으며, t-BHT로 산화적 스트레스를 유발한 대조군(Control)서는 119.18nmol로 활성이 감소하는 것으로 나타났다.
반면 산화적 스트레스를 유발했음에도 불구하고 실시예 1의 천연 리포좀(Y1 CPS)을 처리한 적혈구 내 Catalase 활성은 123.16nmol로 정상군과 비슷한 수치를 나타내었다. 즉, 산화적 스트레스로 인한 Catalase 활성 저하가 일어나지 않은 것으로 나타났다.
<실험예 12> 산화적 스트레스를 유발한 Rat의 간 내 글루타치온 함량비교
간 조직의 homogenate 분획 0.2ml에 3차 증류수 0.3ml과 0.4% sulfosalicylic acid 0.5ml을 가하여 혼합하고 원심분리시킨 뒤 상등액 0.3ml에 5'5-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)(DTNB) 발색 시약을 첨가하고 412nm에서의 흡광도를 측정하였다. 글루타치온의 표준검량곡선에 의해 글루타치온 함량을 산출하고 간 조직 mg당 ml으로 표시하였다. 그 결과를 도 12에 나타내었다.
글루타치온 함량을 비교한 결과 도 12에 도시된 바와 같이 정상군(Normal)에서는 0.746mg/ml이었으나, 대조군(Control)에서는 0.737mg/ml로 측정되어 산화적 스트레스를 유발한 경우 글루타치온의 함량이 떨어지는 것을 확인할 수 있었다. 그에 반해 비교예 1의 추출물(Y1) 및 실시예 1의 천연 리포좀(Y1 CPS), 비교예 2의 합성 리포좀(Y1 합성리포좀)에서 글루타치온이 증가하는 경향을 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 1의 천연 리포좀(Y1 CPS)에서의 글루타치온 함량이 0.772mg/ml로 가장 높은 것으로 나타났다.
<
실험예
13>
산화적
스트레스를 유발한 Rat의 간 내
글루타치온
가수분해효소 함량비교
글루타치온(GSH)-Px는 selenium을 가진 항산화계 효소로서 체내에 존재하는 글루타치온(글루타치온(GSH))을 기질로 하여 과산화지질과 H2O2의 무독화에 관여하며, 철분, 비타민 E, 필수지방산의 결핍시 그 활성이 감소되고, 산화적 스트레스에 의해 활성이 증가하는 것으로 보고되어 있다.
간조직 내 GSH-Px의 양을 측정하기 위하여 96well에 조직액 100ul를 가하고 100ul의 GPX buffer Mix(2mM NADPH, 4mM reduced glutathione, 25.6mU/ml glutathione reductase, 5mM EDTA, 50mM Tris, pH7.6)을 가하였다. 50ul의 GPx Substrate Mic(16mM hydrogen peroxide)를 가하고 1분 간격으로 10분 동안 340nm에서 흡광도를 측정하였고 그 결과를 도 13에 나타내었다.
측정결과, 산화적 스트레스를 유발하지 않은 정상군(Normal)에서 13.73 Unit/ml의 GSH-px가 측정되었으며, t-BHT를 이용하여 산화를 유발한 군에서는 26.47Unit/ml의 GSH-px함량을 보여 산화적 스트레스 유발시 GSH-px의 함량이 증가한 것으로 나타났다. 한편, 실시예 1의 Y1 천연 리포좀의 경우 15.13Unit/ml의 GSH-px를 나타내어 정상군과 비슷한 수치를 보였다.
<
실험예
14>
산화적
스트레스를 유발한 Rat의 간 내 과산화지질(
MDA
) 함량비교
과산화지질(MDA)은 간 조직으로부터 얻은 homogenate 분획의 과산화지질 함량은 TBARS 방법에 준하여 측정하였다. 단백질 1 mg을 함유한 분획 용액 1 ml에 각각 TBA (thiobarbituric acid) 시약 2 ml을 가하여 잘 혼합하고, 끓는 물에서 30분간 반응 시킨 뒤 실온에서 방냉하여 3,000 rpm으로 10분간 원심분리 한 후 상등액을 535 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 14에 나타내었다.
실험결과 정상군의 경우 과산화지질의 함량이 75.87nmol/ml로 측정되었고, 산화적 스트레스를 유발시킨 Control의 경우 77.16nmol/ml로 과산화지질 함량이 높아진 것을 확인할 수 있었다. 이와 비교하였을 때 실시예 1의 Y1 천연 리포좀의 경우 과산화지질 함량이 현저하게 낮은 것을 확인할 수 있었다.
<실험예 15> 산화적 스트레스를 유발한 Rat 간의 조직학적 평가
산화적 스트레스 유발이 Rat의 간 조직에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해 간조직을 검사하였다. 간조직의 일부를 10% 포르말린에 고정한 후 파라핀에 포매하여 4㎛ 두께로 박절하여 hematoxylin-eosi(H&E)로 염색하였다. 그 결과를 도 15에 나타내었다. 조직학적 관찰 결과 산화적 스트레스를 유발하지 않은 정상군에서는 간 세포의 조직이 일정한데 반해 t-BHT를 주입한 control군에서는 세포조직이 손상되어 공극이 발생한 것으로 관찰되었다. 실시예 1의 천연리포좀(Y1 CPS)을 처리한 군의 경우, Normal군과 비슷하게 세포의 배열이 일정하게 회복된 것을 확인할 수 있었다.
<실험예 16> 산화적 스트레스를 유발한 Rat 혈청 내 생화학적 지표분석
혈청 중의 AST, ALT, CPK total(S), LDH 함량을 분석하고 그 결과를 각각 도 16~19에 나타내었다.
간 손상에 의해 분비되는 효소인 AST 및 ALT의 함량을 측정한 결과 산화적 스트레스를 유발하지 않은 정상군에서는 AST, ALT 수치 모두 가장 낮은 경향을 보였다. 반면, t-BHT를 처리한 군에서는 수치가 높아짐을 확인할 수 있었다. 실시예 1의 천연리포좀(Y1 CPS)을 처리한 군에서는 효소의 함량이 감소하는 것으로 확인되었다(도 16, 17).
혈청 내 피로물질을 분석하기 위하여 Creatine kinase(CPK)함량 및 Lactate dehydroxygenase(LDH) 함량을 분석하였다. 분석 결과 CPK의 경우 정상군과 비교하였을 때 산화적 스트레스를 유발한 Control군에서 CPK의 수치가 높아진 것을 확인할 수 있었으며, 실시예 1의 천연리포좀(Y1 CPS)의 경우 정상군보다 더욱 낮은 수치인 308U/L인 것을 확인하였다. 또한, LDH함량을 확인한 결과 역시 정상군에서는 245U/L의 수치를 보였으며, 산화를 유발한 Control 군에서 393U/L의 함량을 나타내 LDL값이 증가함을 확인했고, 실시예 1의 천연리포좀(Y1 CPS)을 처리한 군에서는 산화적 스트레스를 유발하였음에도 불구하고, 정상군과 비슷한 수치인 228.33U/L의 LDH 함량을 나타내었다(도 18, 19).
<실험예 17> 산화적 스트레스를 유발한 Rat의 혈청 내 항산화물질 분석
혈청내 항산화물질을 확인하기 위하여 혈액에서 분리한 혈청의 VitaminC 함량을 분석하였다. VitaminC의 함량은 시료 0.5ml에 5% TCA(Trichloroacetic acid)를 2ml 넣은 후 단백질을 침전시키고 원심분리하여 상등액에 발색시약(85%orthophosphotic acid 0.05ml + 8% a,a'-Bipyridyl 0.05ml + 3% aqueous ferric chloride 0.05ml)을 넣은 후 25℃에서 1시간동안 방치하여 Ferrous dipyridyl chromophore의 생성을 확인하였다. UV spectrophotometer를 이용하여 525nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 20에 나타내었다.
정상군에서는 34.66ug/ml의 함량이 측정되었으며, control군에서는 22.23ug/ml로 낮아지는 경향을 보였다. 반면, 실시예 1의 천연리포좀(Y1 CPS)에서는 31.98ug/ml로 정상군과 비슷한 수준으로 회복하는 양상을 확인할 수 있었다.
<실험예 18> 산화적 스트레스를 유발한 Rat의 혈청 내 항산화능 분석
혈청 내 항산화능을 확인하기 위하여 DPPH 소거능을 확인하였다. DPPH 용액은 100ml 에탄올에 DPPH 16mg을 녹인 후 증류수 100ml를 혼합하여 여과지로 여과시켜 만들었다. DPPH용액 2.5ml에 시료 용액 0.5ml을 혼합하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 spectrophotometer (HITACHIU-2990) 528mm에서 흡광도를 측정하였다. DPPH free radical scavenging activity는 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도차를 백분율(%)로 표시하였다. 그 결과를 도 21에 나타내었다.
혈청 내 Free radical scavenging activity를 확인한 결과 정상군에서 71.32%의 라디컬소거능을 보였으며, 산화적 스트레스를 유발한 Control군에서는 67.55%까지 소거능이 감소하는 것으로 나타났다. 실시예 1의 천연리포좀(Y1 CPS)을 제외한 다른 시료를 처리한 군에서도 control과 비슷한 수치를 보여 라디컬 소거능을 회복하지 못하였다. 반면, 실시예 1의 천연리포좀(Y1 CPS)을 처리한 군의 경우 70.21%까지 라디칼 소거능이 증가하였고 정상군과 비슷한 수준으로 산화적 스트레스를 회복했음을 확인했다.
이상에서 설명한 본 발명은, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 있어 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능하므로 전술한 실시예 및 첨부된 도면에 한정되는 것이 아니다.
Claims (19)
1종 이상의 천연 유화제를 천연 유래 용매와 혼합하고 초음파 처리하는 제1단계, 상기 제1단계의 생성물에 포집물질로서 사카로미세스속 효모 추출물을 첨가하고 초음파 처리하는 제2단계를 포함하는 방법에 의하여 형성되는 천연 리포좀으로서,
1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질 및
포집물질로서 사카로미세스속 효모 추출물을 포함하는
천연 리포좀.
1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질 및
포집물질로서 사카로미세스속 효모 추출물을 포함하는
천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 사카로미세스속 효모 추출물은 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 효모 추출물인 천연 리포좀.
상기 사카로미세스속 효모 추출물은 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 효모 추출물인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 사카로미세스속 효모 추출물은 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)MAB Y1(KCTC 11386BP) 효모 추출물인 천연 리포좀.
상기 사카로미세스속 효모 추출물은 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)MAB Y1(KCTC 11386BP) 효모 추출물인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 사카로미세스속 효모 추출물은 초음파 파쇄된 효모 추출물인 천연 리포좀.
상기 사카로미세스속 효모 추출물은 초음파 파쇄된 효모 추출물인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 유화제는 포스파티딜콜린, 리소포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 대두 포스파티딜콜린, 포스파티딜산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시롤, 및 이들의 수소첨가 생성물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 천연 인지질을 포함하는 천연 리포좀.
상기 천연 유화제는 포스파티딜콜린, 리소포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 대두 포스파티딜콜린, 포스파티딜산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시롤, 및 이들의 수소첨가 생성물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 천연 인지질을 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 유화제는 팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산(콩유래)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 천연 유래 지방산을 포함하는 천연 리포좀.
상기 천연 유화제는 팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산(콩유래)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 천연 유래 지방산을 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 용매는 증류수, 부틸렌 글리콜, 프로필렌글리콜, 프로판디올, 글리세린, 에탄올, 발효주정으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 천연유래용매인 천연 리포좀.
상기 용매는 증류수, 부틸렌 글리콜, 프로필렌글리콜, 프로판디올, 글리세린, 에탄올, 발효주정으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 천연유래용매인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 방부제는 자몽 추출물 또는 감귤 추출물을 포함하는 천연 유래 추출물인 천연 리포좀.
상기 천연 방부제는 자몽 추출물 또는 감귤 추출물을 포함하는 천연 유래 추출물인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 용매는 증류수인 천연 리포좀.
상기 용매는 증류수인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 유화제는 1종 이상의 지방산과 1종 이상의 인지질을 함유하는 제1 천연 유화제와 1종 이상의 인지질을 함유하는 제2 천연 유화제를 포함하는 천연 리포좀.
상기 천연 유화제는 1종 이상의 지방산과 1종 이상의 인지질을 함유하는 제1 천연 유화제와 1종 이상의 인지질을 함유하는 제2 천연 유화제를 포함하는 천연 리포좀.
제9항에 있어서,
상기 제2 천연 유화제는 소르비탄 올리베이트 및 세테아릴 올리베이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 유화제인 천연 리포좀.
상기 제2 천연 유화제는 소르비탄 올리베이트 및 세테아릴 올리베이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 유화제인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 리포좀 전체 중량을 기준으로 천연 유화제 2 내지 9 중량%, 천연 방부제 1 내지 5 중량%, 사카로미세스속 효모 추출물 0.01 내지 5 중량% 및 용매 잔량을 포함하는 천연 리포좀.
상기 천연 리포좀 전체 중량을 기준으로 천연 유화제 2 내지 9 중량%, 천연 방부제 1 내지 5 중량%, 사카로미세스속 효모 추출물 0.01 내지 5 중량% 및 용매 잔량을 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
항산화제용 천연 리포좀.
항산화제용 천연 리포좀.
제1항의 천연 리포좀을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물.
제1항의 천연 리포좀을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물.
1종 이상의 천연 유화제를 천연 용매와 혼합한 다음 50~80℃에서 초음파 처리하는 제1단계,
상기 제1단계의 생성물에 사카로미세스속 효모 추출물을 첨가한 후 초음파 처리하여 혼합하는 제2단계,
상기 제2단계의 생성물에 40~60℃로 가온된 증류수와 천연 방부제를 첨가하고 초음파 처리하여 리포좀을 형성하는 제3단계
를 포함하는 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 천연 리포좀의 제조방법.
상기 제1단계의 생성물에 사카로미세스속 효모 추출물을 첨가한 후 초음파 처리하여 혼합하는 제2단계,
상기 제2단계의 생성물에 40~60℃로 가온된 증류수와 천연 방부제를 첨가하고 초음파 처리하여 리포좀을 형성하는 제3단계
를 포함하는 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 천연 리포좀의 제조방법.
제16항에 있어서,
상기 제3단계 이후에 온도를 서서히 낮추면서 초음파 처리하는 제4단계
를 추가로 포함하는 천연 리포좀의 제조방법.
상기 제3단계 이후에 온도를 서서히 낮추면서 초음파 처리하는 제4단계
를 추가로 포함하는 천연 리포좀의 제조방법.
제16항에 있어서,
제2단계 이전에,
막걸리 유래 효모인 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) MAB Y1를 배양하는 단계,
상기 배양액을 원심분리하여 균체를 회수하고 초음파 처리하여 사카로미세스 효모 추출물을 얻는 단계
를 추가로 포함하는 천연 리포좀의 제조방법.
제2단계 이전에,
막걸리 유래 효모인 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) MAB Y1를 배양하는 단계,
상기 배양액을 원심분리하여 균체를 회수하고 초음파 처리하여 사카로미세스 효모 추출물을 얻는 단계
를 추가로 포함하는 천연 리포좀의 제조방법.
제18항에 있어서,
상기 초음파 처리 이후에, 초음파 처리된 균체를 다시 원심분리하고, pellet을 제거한 다음 상등액을 회수하는 단계
를 추가로 포함하는 천연 리포좀의 제조방법.
상기 초음파 처리 이후에, 초음파 처리된 균체를 다시 원심분리하고, pellet을 제거한 다음 상등액을 회수하는 단계
를 추가로 포함하는 천연 리포좀의 제조방법.
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