KR102293782B1 - 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 하는 조성물 - Google Patents

땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 하는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로 땅콩의 종실을 제거한 땅콩 겉껍질만을 추출한 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 항산화 효과가 우수하며, 피부 미백 및 피부 재생에 효과가 있다.

Description

땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 하는 조성물{Compositions containing peanut shell extract}
본 발명은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
피부는 신체 중 가장 큰 기관으로 항상 외부환경과 직접 접하고 있으면서 여러가지 자극이나 건조한 환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 역할을 하고 있으며, 다른 기관에 비하여 새로운 세포의 생성과 소멸이 활발히 일어난다.
또한, 물리적인 찰과상으로부터 신체를 보호하고, 신체 내부의 수분 손실을 막아주며 태양에서 발생되는 자외선으로부터 보호해줄 뿐만 아니라, 몸의 체온을 조절해주는 매우 중요한 역할을 담당하고 있다.
이러한 피부는 여러 가지 물리적 요인, 외부환경적 요인, 감염 등으로 인해 피부의 오염과 건조, 트러블, 피부 면역체계 이상 등의 문제가 발생한다.
특히, 현대의 급격한 산업발전에 따라, 대기공해, 수질공해 등의 공해문제가 심각해지고, 주거환경의 개선에 따른 거주공간의 강한 냉난방에 의해 피부의 거칠어짐, 건조, 노화 등과 같이 피부가 외부환경으로부터 큰 영향을 받고 있다.
노화는 우리 몸의 모든 구성기관에서 일어나며, 특히 피부 노화는 내인성 노화와 외부 요인으로 인한 광노화인 외인성 노화로 구분할 수 있다. 이중에서 내인성 노화는 나이를 먹어감에 따라 나타나는 자연적인 현상으로서, 피부의 표피와 진피 사이의 결합이 약해져 피부 탄력이 약해지면서 주름 증가가 관찰된다. 반면, 외인성 노화는 미세먼지, 추위, 바람, 자외선 노출 또는 스트레스의 영향을 받아 피부 조직이 손상되어 노화 과정이 촉진되는 것으로서, 특히 자외선에 의한 광노화의 경우 자외선이 피부에 노출되어 superoxide anion와 peroxide 등의 활성산소종을 생성한다. 이러한 활성산소종의 과다한 생성은 피부, 뼈, 근육 등의 결합 세포 간의 중요한 결합을 위한 가교역할을 하는 collagen을 변성시켜 피부가 얇아지면서 점차 탄력을 잃어 주름이 증가하게 된다.
이러한 외인성 노화의 원인 제거를 위해 항산화제를 이용하여 활성산소를 적절하게 유지하고 신체 산화 및 손상을 막으려는 노력이 필요하다. 이에 합성 항산화제인 tert-butylhydroxytoluene(BHT)과 tert-butylhydroxyanisol(BHA)이 식품과 화장품 산업 등의 여러 분야에서 사용되고 있으나 발암성과 안전성이 문제가 되어 사용을 제한받고 있다.
합성 항산화제에 비해 안전성이 높은 천연물 유래 항산화제는 효과가 낮고 가격이 상대적으로 비싸 극히 일부만이 상업적으로 사용되고 있는 실정이다.
한편, 땅콩(Penut, Arachis hypogaea)은 콩과의 일년초이며 100 g 중에 단백질 25%, 지질 47%, 탄수화물 16%가 함유되어 있고 무기질, 비타민, 나이아신, 불포화지방산과 올레인산 등이 풍부한 영양식품이다. 이러한 땅콩을 보호하고 저장성을 높여주며 외부 여러 요인들로부터 종실을 보호하는 땅콩 겉껍질은 땅콩 전체 무게의 35-40%를 차지하는데 매년 3,750톤 정도가 버려지는 것으로 추정된다.
이러한 땅콩 겉껍질은 사용 용도가 제한되어 일부만 사료로 이용되고 대부분 부산물로 버려지므로 환경오염의 문제를 일으키고 있어 이에 대한 해결책이 필요한 실정이다.
따라서, 버려지는 땅콩 겉껍질을 이용하여 항산화 효과가 우수하고, 피부 미백 및 피부 재생에 효과적인 조성물이 요구되고 있다.
대한민국 공개특허 제10-2019-0008509호 대한민국 공개특허 제10-2019-0094326호
본 발명의 목적은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품을 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 땅콩 겉껍질 추출물을 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 화장료 조성물은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 땅콩 겉껍질 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것일 수 있다.
상기 혼합용매는 20 내지 99 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올 수용액일 수 있다.
상기 땅콩 겉껍질 추출물은 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 5 내지 60분 동안 처리된 것일 수 있다.
상기 초음파 처리 시 추출온도는 25 내지 80 ℃일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 피부 미백 및 피부 재생 효과를 가질 수 있다.
또한, 상기한 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 건강기능식품은 상기 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
또한, 상기한 또 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 땅콩 겉껍질 추출물을 제조하는 방법은 (A) 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매인 추출용매, 25 내지 80 ℃의 추출온도, 5 내지 60분의 추출시간의 추출조건 하에서 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 추출한 후 원심분리하여 수득한 상등액의 DPPH 라디칼 소거능에 대한 실험값을 획득하는 단계; (B) 상기 (A)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 1]로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계; (C) 상기 (B)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계; (D) 상기 (A)단계에서 수득한 상등액의 티로시나제 억제능에 대한 실험값을 획득하는 단계; (E) 상기 (D)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 2]로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계; (F) 상기 (E)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계; (G) 상기 (A)단계에서 수득한 상등액의 콜라게나제 억제능에 대한 실험값을 획득하는 단계; (H) 상기 (G)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 3]으로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계; (I) 상기 (H)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계; 및 (J) 상기 (C), (F) 및 (I)단계에서 수득된 반응표면곡선을 겹치기기법(superimposing)으로 DPPH 라디칼 소거능, 티로시나제 억제능 및 콜라게나제 억제능에 대한 공통의 최적화 조건을 예측하는 단계;를 포함할 수 있다;
[수학식 1]
YDPPH=-93.85411+0.88251X1+1.62214X2+3.70693X3-0.010569X1 2-5.07511X1X2-8.90542X2 2-2.40222X1X3-6.57227X2X3-0.024412X3 2
[수학식 2]
YTI=-9.34253+0.46766X1-9.54387X2+0.55800X3-3.19295X1 2-1.35612X1X2+6.13252X22-2.66703X1X3-2.94955X2X3+1.76988X3 2
[수학식 3]
YCI=-118.02907+1.78059X1+2.80277X2+3.09895X3-0.051048X1 2+0.031083X1X2-0.017564X2 2-0.010883X1X3-0.024017X2X3-0.010465X3 2
상기 수학식 1 내지 3에서, YDPPH는 DPPH 라디칼 소거능 예측값(%), YTI는 티로시나제 억제능 예측값(%), YCI는 콜라게나제 억제능 예측값(%), X1은 추출시간, X2는 추출온도, X3는 추출용매의 농도이다.
상기 DPPH 라디칼 소거능, 티로시나제 억제능 및 콜라게나제 억제능에 대한 공통의 최적화 조건에 따른 추출조건은 추출 시간 20.9분, 추출 온도 34.5 및 에탄올 농도 50 부피%일 수 있다.
본 발명의 땅콩 겉껍질 추출물을 포함하는 조성물은 독성이 없으며, 항산화 효과가 우수하고, 피부 미백 및 피부 재생에 효과적이다.
또한, DPPH 라디칼 소거능, 티로시나제 억제능 및 콜라게나제 억제능이 증가된 땅콩 겉껍질 추출물을 수득할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따라 제조된 땅콩 겉껍질 추출물을 이용 시 DPPH 소거능에 영향을 미치는 조건을 나타낸 일변수 곡선이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따라 제조된 땅콩 겉껍질의 추출 조건에 따른 DPPH 소거능의 3차원 반응표면곡선이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따라 제조된 땅콩 겉껍질 추출물을 이용 시 티로시나제 억제능(TIA)에 영향을 미치는 조건을 나타낸 일변수 곡선이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따라 제조된 땅콩 겉껍질의 추출 조건에 따른 티로시나제 억제능(TIA)의 3차원 반응표면곡선이다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따라 제조된 땅콩 겉껍질 추출물을 이용 시 콜라게나제 억제능(CIA)에 영향을 미치는 조건을 나타낸 일변수 곡선이다.
도 6은 본 발명의 실시예에 따라 제조된 땅콩 겉껍질의 추출 조건에 따른 콜라게나제 억제능(CIA)의 3차원 반응표면곡선이다.
도 7은 본 발명의 실시예에 따라 제조된 마늘 부산물의 최적 추출조건을 찾기 위하여 상기 도 2, 도 4 및 도 6의 반응표면곡선을 겹치기기법으로 나타낸 그래프이다.
본 발명은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 화장료 조성물은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 포함한다.
땅콩(Penut, Arachis hypogaea)에서 발생되는 부산물인 땅콩 겉껍질은 종실을 보호하는 것으로서, 땅콩 겉껍질에는 염증질환이나 암과 같은 여러 질병에 효과가 있는 루테올린과 함께 플라보노이드 계열 화합물로서 강력한 항산화 효능이 있는 에리오딕티올을 함유되어 있다.
본 발명은 폐기되는 땅콩 겉껍질을 이용하는 것으로서, 종실을 제거한 땅콩 겉껍질만을 이용한다.
상기 땅콩 겉껍질은 추출용매 하에서 초음파처리를 통해 추출되는 것으로서, 구체적으로 땅콩 겉껍질과 추출용매가 1 : 5 내지 25, 바람직하게는 1 : 8 내지 15의 중량비로 혼합되어 20 내지 50 kHz, 바람직하게는 30 내지 40 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W, 바람직하게는 150 내지 400 W 파워의 초음파기로 25 내지 80 ℃, 바람직하게는 30 내지 45 ℃ 하에서 5 내지 60분, 바람직하게는 15 내지 30분 동안 처리된다.
땅콩 겉껍질을 추출 시 초음파 추출이 아니라 열수 추출인 경우에는 고온과 긴 추출시간으로 인한 폴리페놀의 파괴로 유효성분의 파괴에 따른 추출효율 감소로항산화, 피부미백 및 피부재생 효과가 낮을 수 있다.
상기 땅콩 겉껍질과 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 땅콩 겉껍질의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.
또한, 초음파기의 진동수 및 파워가 상기 하한치 미만인 경우에는 땅콩 겉껍질의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 유효성분의 추출이 평형을 이루어 생산량의 증가가 없는 반면 목적물질 이외의 다른 물질이 다량으로 추출되어 추출효과가 저하될 수 있다.
또한, 추출온도 및 추출시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 땅콩 겉껍질의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 세포벽의 셀룰로오스와 헤미셀룰로오스의 분해 산물인 단당류 (글루코오스와 자일로오스)의 과분해에 따른 하이드로메틸푸르루럴과 푸르프럴과 같은 독성물질이 발생할 수 있다.
상기 추출물을 추출하는 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에틸렌글리콜, 에틸에테르 또는 이들의 혼합용매이다. 상기 저급알코올로는 20 내지 99 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올 수용액을 들 수 있으며, 바람직하게는 우수한 항산화, 피부미백 및 피부재생 효과를 위하여 30 내지 60 부피%의 에탄올 수용액을 들 수 있다.
본 발명의 땅콩 겉껍질물 추출물은 화장료 조성물 외에 건강기능식품에도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 반응표면분석법을 이용하여 땅콩 겉껍질을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 반응표면분석법을 이용한 땅콩 겉껍질의 제조방법은 (A) 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매인 추출용매, 25 내지 80 ℃의 추출온도, 5 내지 60분의 추출시간의 추출조건 하에서 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 추출한 후 원심분리하여 수득한 상등액의 DPPH 라디칼 소거능에 대한 실험값을 획득하는 단계; (B) 상기 (A)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 1]로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계; (C) 상기 (B)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계; (D) 상기 (A)단계에서 수득한 상등액의 티로시나제 억제능에 대한 실험값을 획득하는 단계; (E) 상기 (D)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 2]로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계; (F) 상기 (E)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계; (G) 상기 (A)단계에서 수득한 상등액의 콜라게나제 억제능에 대한 실험값을 획득하는 단계; (H) 상기 (G)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 3]으로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계; (I) 상기 (H)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계; 및 (J) 상기 (C), (F) 및 (I)단계에서 수득된 반응표면곡선을 겹치기기법(superimposing)으로 DPPH 라디칼 소거능, 티로시나제 억제능 및 콜라게나제 억제능에 대한 공통의 최적화 조건을 예측하는 단계;를 포함한다.
[수학식 1]
YDPPH=-93.85411+0.88251X1+1.62214X2+3.70693X3-0.010569X1 2-5.07511X1X2-8.90542X2 2-2.40222X1X3-6.57227X2X3-0.024412X3 2
[수학식 2]
YTI=-9.34253+0.46766X1-9.54387X2+0.55800X3-3.19295X1 2-1.35612X1X2+6.13252X22-2.66703X1X3-2.94955X2X3+1.76988X3 2
[수학식 3]
YCI=-118.02907+1.78059X1+2.80277X2+3.09895X3-0.051048X1 2+0.031083X1X2-0.017564X2 2-0.010883X1X3-0.024017X2X3-0.010465X3 2
상기 수학식 1 내지 3에서, YDPPH는 DPPH 라디칼 소거능 예측값(%), YTI는 티로시나제 억제능 예측값(%), YCI는 콜라게나제 억제능 예측값(%), X1은 추출시간, X2는 추출온도, X3는 추출용매의 농도이다.
본 명세서에서 땅콩 겉껍질을 언급하면서 사용되는 용어 '추출물'은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 땅콩 겉껍질 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 땅콩 겉껍질 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 함유하는'이란 땅콩 겉껍질 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 일예로, 상기 땅콩 겉껍질 추출물은 10 내지 1500 ㎍/㎖, 바람직하게는 100 내지 1000 ㎍/㎖의 농도로 사용된다. 땅콩 겉껍질 추출물은 천연물로서 과량 사용하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 땅콩 겉껍질 추출물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 상기의 화장료 조성물과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있으며, 이러한 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수, 수용성 비타민, 지용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스 등을 들 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상 사용되는 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 안료 및 천연향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 미스트, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 자외선 차단크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 마스크팩, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도우 등과 같은 화장품류와 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저 등이 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 땅콩 겉껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품 조성물을 제공한다.
건강기능식품이란, 땅콩 겉껍질 추출물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 땅콩 겉껍질 추출물의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.
실시예 1 내지 17.
국내산 피땅콩을 수세하여 종실을 제거한 후 얻은 땅콩 겉껍질을 60 ℃ 건조오븐(FC 49, Lab house, Korea)에서 36시간 건조하여 더 이상의 중량이 낮아지지 않는 것을 확인하고 건조한 시료를 분쇄기(HMF-3000S, Hanil, Korea)로 분쇄한 후 25 mesh로 여과하였다. 상기 분쇄된 땅콩 겉껍질과 농도가 상이한 에탄올 수용액을 1 : 10의 중량비로 혼합하여 초음파기(JAC Ultrasinic, Hwaseng, Korea)에 투입 후 초음파(40 kHz, 200 W)를 이용하여 추출하였다.
이때 추출 공정의 추출시간, 추출온도 및 에탄올 농도를 다르게 하여 각각의 추출물을 수득하였다.
<시험예>
실시예 1 내지 17에 따라 제조된 추출물을 이용하여 항산화, 미백과 피부재생의 지표인 DPPH, tyrosinase inhibition activity (TIA)와 collagenase inhibition activity (CIA)를 측정하였다.
상기 DPPH는 안정화된 수용성 자유 라디칼로서 유기용매에서 안정한 화합물이며, 항산화 물질들은 자유 라디칼을 소거할 수 있어 있어 DPPH를 노란색으로 탈색시킨다. 따라서 DPPH의 보라색이 노란색으로 변하는 정도를 측정하여 시료의 항산화 효능을 평가할 수 있다.
또한, 상기 Tyrosinase는 기질인 L-tyrosine을 3,4-dihydroxy-L-phenylananine (DOPA)로 합성하고, L-DOPA를 phenylanine-3,4-quinone으로 산화하여 최종적으로 멜라닌을 합성하는 효소로서, 피부색이나 색소 침착 여부를 좌우하는 데 주요한 역할을 하여 피부 미백에 있어서 tyrosinase를 저해하는 활성이 중요시 되고 있다.
또한, 상기 피부 진피조직 속에서는 collagen과 elastin이 그물망 구조를 형성하고 있으며 특히 collagen은 피부 전체 건조 중량의 약 70-80%를 차지하여 분해될 시에는 그물망 구조가 처지게 되고 피부의 탄력 감소 및 주름 생성의 원인이 된다. 따라서 주름 생성을 억제하기 위해서는 collagen의 분해와 손실을 최소화해야 하며, 피부의 주름개선 기능성 분석에 있어서도 collagen을 분해하는 효소인 collagenase를 저해하는 활성이 중요시 되고 있다.
시험예 1. DPPH 라디칼 소거능, 티로시나제(Tyrosinase) 억제 효과 및 콜라게나제(Collagenase) 억제 효과 측정
1-1. DPPH 라디칼 소거능(%): 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl(DPPH) 라디칼 소거 활성 측정을 통해 항산화능을 측정하였다. DPPH는 비교적 안정한 프리 라디칼로써 ascorbic acid, tocopherol등에 의해 환원되어 짙은 자색이 탈색되는 원리를 이용하여 항산화 활성을 간단히 측정할 수 있다. 시료를 희석하고 희석한 시료 0.25 mL와 0.1 M DPPH 1.25 mL를 혼합한 후 실온에서 20분간 암실 보관한 다음 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 ascorbic acid(CAS 50-81-7, Sigma, USA)를 이용하였고, 시료와 동일한 조건으로 진행하였다. 라디칼 소거능은 하기 [수학식 4]에 따라 계산하였다.
[수학식 4]
라디칼 소거활성(%)=[1-(A/B)100]
A : DPPH activity with sample, B : DPPH activity without sample
1-2. 티로시나제 저해능(%): Tyrosinase는 피부의 표피 기저층에서 tyrosine을 산화시켜 멜라닌의 생성을 촉진시키는 효소로서 피부 미백과 노화 방지를 위해서는 tyrosinase의 활성 억제가 요구된다. 실험을 위해 sodium phosphate monobasic anhydrous와 sodium phosphate dibasic anhydrous을 이용하여 PH 6.8의 67 mM sodium phosphate buffer를 제조하였고 10 mM 3,4-dihydroxy phenylanin(I-dopa)과 mushroom tyrosinase(125 unit)는 buffer에 녹여 제조하였다. 최종 용액의 양이 1 mL가 되도록 시료용액 0.2 mL에 67 mM sodium phosphate buffer와 10 mM 3,4-dihydroxy phenylanin(I-dopa), mushroom tyrosinase를 혼합하여 water bath에 25 ℃에서 30분간 반응시켰다. 반응 후에는 dopachrome를 475 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 kojic acid를 사용하였다. Tyrosinase의 저해 활성은 하기 [수학식 5]에 따라 계산하였다.
[수학식 5]
저해활성(%)=[1-(A/B)100]
A : Tyrosinase activity with sample, B : Tyrosinase activity without sample
1-3. 콜라게나제 저해능(%): Collagenase는 체내 collagen을 분해하여 주름생성과 탄력저하를 일으키는 효소로서 피부 노화의 원인이 되는 주름 생성을 억제하기 위해서는 collagenase의 저해가 요구된다. 실험에 필요한 buffer는 1 M Tris (hydroxylmetyl)Aminomethane와 4 mM CaCl2 (Calcium chloride), 1 M HCl을 이용하여 PH 7.5로 제조하였고 buffer로 4-phenyl azobenzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-d-arg와 collagenase를 제조하였다. 이어서 시료 0.05 mL에 4-phenyl azobenzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-d-arg를 첨가한 후 collagenase와 혼합하여 water bath에서 37 ℃로 20분간 반응시켰다. 반응 후에는 20% citric acid 0.25 mL을 넣어 collagenase 반응을 정지시킨 후, ethyl acetate 1.2 mL을 첨가하여 shaker에 10분간 교반하였다. 교반 후에는 상등액만 320 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 ascorbic acid를 이용하였다. Collagenase 저해 활성은 하기 [수학식 6]에 따라 계산하였다.
[수학식 6]
저해활성(%)=[1-(A/B)100]
A : Collagenase activity with sample, B : Collagenase activity without sample
구분 추출시간
(min)		 추출온도
(℃)		 에탄올 농도
(부피%)		 DPPH 소거능(%) 티로시나제 억제능 (%) 콜라게나제 억제능 (%)
실시예 1 15 40 20 14.4 7.4 25.2
실시예 4 45 40 20 20.7 10.6 33.8
실시예 5 15 80 20 33.4 6.4 68.4
실시예 6 45 80 20 42.1 4.6 84.1
실시예 7 15 40 80 82.0 42.3 91.4
실시예 8 45 40 80 86.5 37.3 50.4
실시예 9 15 80 80 87.7 30.8 46.9
실시예 10 45 80 80 89.7 27.6 73.2
실시예 11 5 60 50 87.5 13.7 64.0
실시예 12 55 60 50 89.9 25.3 62.9
실시예 13 30 26 50 81.9 23.9 62.7
실시예 14 30 94 50 88.8 20.5 89.3
실시예 15 30 60 0 7.6 0.3 50.1
실시예 16 30 60 100 0.8 51.8 89.0
실시예 17 30 60 50 88.7 20.8 90.5
위 표 1에 나타낸 바와 같이, DPPH 라디칼 소거능은 실시예 8 및 실시예 10에 따라 제조된 추출물이 다른 군에 비하여 우수한 것을 확인하였으며, 티로시나제 저해능은 실시예 14에 따라 제조된 추출물이 다른 군에 비하여 우수한 것을 확인하였고, 콜라게나제 저해능은 실시예 16에 따라 제조된 추출물이 다른 군에 비하여 우수한 것을 확인하였다.
특히, 정제수를 사용한 실시예 15는 DPPH 라디칼 소거능 및 티로시나제 억제능 수치가 가장 낮게 나타나는 것을 확인하였다.
시험예 2. 최적 조건 탐색
구분 Second order polynomials * R 2 p
DPPH 소거능(%) [수학식 1]
YDPPH=-93.85411+0.88251X1+1.62214X2+3.70693X3-0.010569X1 2-5.07511X1X2-8.90542X2 2-2.40222X1X3-6.57227X2X3-0.024412X3 2 		0.9308 0.0027
티로시나제 억제능 (%) [수학식 2]
YTI=-9.34253+0.46766X1-9.54387X2+0.55800X3-3.19295X1 2-1.35612X1X2+6.13252X22-2.66703X1X3-2.94955X2X3+1.76988X3 2 		0.9622 0.0004
콜라게나제 억제능 (%) [수학식 3]
YCI=-118.02907+1.78059X1+2.80277X2+3.09895X3-0.051048X1 2+0.031083X1X2-0.017564X2 2-0.010883X1X3-0.024017X2X3-0.010465X3 2 		0.8862 0.0134
X1 : 추출시간(min); X2 : 추출온도(℃); X3 : 에탄올 농도(%); R 2 : Coefficient of Determination; p : probability value
DPPH 소거능(%) 티로시나제 억제능 (%) 콜라게나제 억제능 (%)
Sum of Squares F
value		 p
value		 Sum of squares F
value		 p
value		 Sum of squares F
value		 p
value
Model 13775.91 10.46 0.0027 2982.57 19.82 0.0004 6525.54 6.06 0.0134
X1 48.20 0.33 0.5839 11.57 0.69 0.4329 4.58 0.038 0.8505
X2 272.52 1.86 0.2145 84.15 5.03 0.0598 994.50 8.31 0.0236
X3 7823.52 53.49 0.0002 2797.79 167.37 <0.0001 993.96 8.31 0.0236
X1X2 1.854E-003 1.268E-005 0.9973 1.32 0.079 0.7865 695.64 5.81 0.0467
X1X3 9.35 0.064 0.8077 11.52 0.69 0.4338 191.86 1.60 0.2459
X2X3 124.4 0.85 0.3871 25.06 1.50 0.2604 1661.26 13.88 0.0074
X1 2 63.82 0.44 0.5300 5.83 0.35 0.5735 1488.97 12.44 0.0096
X2 2 143.22 0.98 0.3554 0.68 0.041 0.8460 557.13 4.66 0.0678
X3 2 5366.62 36.69 0.0005 28.21 1.69 0.2351 986.28 8.24 0.0240
X1 : 추출시간(min); X2 : 추출온도(℃); X3 : 에탄올 농도(%)
2-1. DPPH 라디칼 소거능에 미치는 조건 탐색
항산화 활성에 대한 2차 회귀식은 상기 [표 2]에 나타내었다. 항산화 활성은 측정값으로부터 얻어진 값을 기반으로 분산분석(Analysis of variance, ANOVA)을 통하여 결과의 유의성을 평가하였을 때, R 2 값은 0.9308이며 p 값은 0.0027로 유의성이 인정되었다. 각각의 추출 조건에 따른 추출물의 활성 변화를 반응표면 곡선으로 나타낸 결과는 도 1의 일변수 곡선과 같다. 종속변수 YDPPH(DPPH scavenging activity, %)의 분산분석(ANOVA) 결과 일차항은 X3에서 p-value가 0.0002로 매우 유의적인 수준을 보였으나, 상호항은 통계적으로 유의하지 않음을 확인하였다 ([표 3]). 반응표면 회귀식에 대한 계수는 [표 2]에 나타내었으며 회귀식의 결정계수 R2는 0.9308로 반응모형이 적합하였다. 또한 p<0.05 수준에서 유의성이 인정되었다.
땅콩 겉껍질의 에탄올 추출물에서는 독립변수인 추출 시간 및 추출 온도와 에탄올 농도 모두 실험 범위 내에서 증가하다 감소하는 이차적 변화를 보였으며 라디칼 소거능은 추출 시간(p<0.5839)과 온도(p<0.2145)에 비해 에탄올 농도(p<0.0002)에 보다 크게 영향을 받음을 확인할 수 있었다([표 3]). 특히 에탄올 농도는 61 부피%에서 DPPH 라디칼 소거능이 가장 높고 그 이후부터는 감소하는 것으로 나타났다.
2-2. 티로시나제 억제능에 미치는 조건 탐색
반응표면 분석법 중 하나인 중심합성계획법(central composite design, CCD)을 이용하여 계산된 티로시나제 억제능(TIA)에 대한 2차 회귀식을 상기 [표 2]에 나타냈다. 분산분석(ANOVA)에 따르면 회귀식의 적합도를 측정하는 척도인 결정계수인 R 2 은 0.9622이며 p 값이 0.0004로 유의성이 인정되었다.
각각의 추출 조건에 따른 추출물의 활성 변화를 반응표면 곡선으로 나타낸 결과는 도 4와 같다. 종속변수 YTI(Tyosinase inhibition activity, %)의 분산분석(ANOVA) 결과([표 3]), 일차항에서 X3항이 유의적인 영향을 나타내었다(p<0.05). 반응표면 회귀식에 대한 계수는 R2값이 0.9622로 1에 가까운 값을 나타내어 반응모형이 신뢰할 수 있음을 알 수 있으며([표 2]), 전체 모델의 유의 확률은 0.0004로 유의성이 인정되었다. 땅콩 겉껍질 추출물의 tyrosinase 저해 활성에 미치는 영향은 에탄올 농도(p<0.0001) > 추출 온도(p 0.0598) > 추출 시간(p 0.4329) 순이며, 특히 에탄올 농도 의존적으로 저해활성이 증가하였다.
추출 온도의 경우에는 온도가 낮아짐에 따라 tyrosinase 저해 활성이 증가하였다. 이는 온도에 민감한 활성 성분을 저온으로 추출함으로서 유효성분의 파괴를 감소시켰기 때문이라고 판단된다. 추출 시간의 경우는 시간이 증가할수록 tyrosinase 저해 활성이 증가하다가 30.3분에서 가장 높은 값을 나타내었고, 그 이후부터는 감소하였지만 유의적으로 큰 차이가 없으므로 추출에서 시간의 영향이 미미함을 알 수 있었다.
2-3. 콜라게나제 억제능에 미치는 조건 탐색
반응표면 분석법 중 하나인 중심합성계획법(central composite design, CCD)을 이용하여 구한 콜라게나제 억제능(CIA)에 대한 2차 회귀식은 [표 2]에 나타내었으며, 측정값으로부터 얻어진 분산분석(ANOVA)에 따르면 회귀식의 적합도를 측정하는 척도인 결정계수인 R 2 은 0.8862이며 p 값이 0.0134로 유의성이 인정되었다.
각각의 추출 조건에 따른 추출물의 활성 변화를 반응표면 곡선으로 나타낸 결과는 도 6과 같다. 종속변수 YCI(Collagenase inhibition activity, %)의 분산분석(ANOVA) 결과([표 3]) 일차항 중에서는 X2항과 X3항이 유의적인 영향을 나타내었고 이차항은 X1X2항과 X2X3항에서 유의성이 인정되었다(p<0.05). 땅콩 겉껍질 추출물의 collagenase 저해 활성에 따른 추출물의 회귀식 R2는 0.8862이고 전체 모델의 유의확률은 0.0134로 나타나 통계적으로 반응모형이 신뢰할 수 있음이 인정되었다([표 2]). 추출물의 collagenase 저해 활성에 미치는 영향은 추출 온도(p 0.0236) = 에탄올 농도(p 0.0236) > 추출 시간(p 0.8505) 순으로 나타났다. 에탄올 농도의 경우, 농도가 증가할수록 collagenase 저해 활성이 증가하다가 64.3%에서 가장 높은 값을 나타내었고 이후 점차 감소하는 경향을 보여 물이나 단일 용매보다 64.3% 에탄올이 추출 용매로 적합함을 알 수 있었다. 이는 땅콩 겉껍질에서 생리활성을 나타내는 비타민 C등의 물질은 물에 추출되는 반면 극성이 낮은 물질들은 에탄올에서 추출되어 나타난 결과로 사료된다.
추출 온도는 76.8 ℃까지 활성이 증가하였지만 그 이후에서는 감소하는 경향을 보였다.
우수한 collagenase 저해 활성을 보이는 땅콩 겉껍질 추출물은 피부 내에서 collagenase의 활성을 억제하여 주름개선을 위한 기능성 화장품 소재로 활용 가능할 것으로 사료된다.
2-4. 최적조건 탐색
땅콩 겉껍질 추출에 있어 주요 3 조건인 항산화, TIA, CIA의 개별 최적화 결과를 바탕으로 Design Expert를 이용하여 반응표면곡선을 겹치기기법(superimposing)으로 3개 변수의 공통 최적화 조건을 예측하여 도 7(X1: 추출시간, X2: 추출온도)에 나타내었다. 독립변수의 범위는 추출 시간 5-60분, 추출 온도 25-80 ℃, 에탄올 농도 0-100 부피%로 하였고 종속변수인 항산화 활성, TIA와 CIA를 동시에 최대화하는 추출 조건을 예측하였다. 이때 반응표면이 중복된 부분은 노란색으로 표시되었으며 예측된 최적 조건 범위 내에서 임의의 조건으로 추출 시간 20.9분, 추출 온도 34.5 ℃, 추출물의 에탄올 농도 50%를 설정하였고 실제 추출 및 실험을 수행하여 예측값과 실제 실험값을 비교하였다. 그 결과 DPPH 라디칼 소거능, tyrosinase 저해 활성, collagenase 저해 활성이 각각 84.56%, 40.25%, 88.40%로 실제 실험값이 예측값과 유사한 수준으로 나타나 본 실험에서 최적 추출 모델의 적합도가 적절하였음을 검증하였다.
하기에 본 발명의 분말을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 과립제의 제조
실시예 1에서 얻은 추출물 분말 1,000 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2
비타민 C 10 mg
비오틴 10
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 과립제에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 과립제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 2. 기능성 음료의 제조
실시예 1에서 얻은 추출물 분말 1,000 mg
구연산 1,000 mg
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 mL
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
본 발명을 적용하기에 적합한 화장료 조성물의 제조예를 제시하기로 한다.
제조예 3: 화장수
실시예 1의 땅콩 겉껍질 추출물을 포함하는 화장료 중 화장수의 제조예는 하기 표 4와 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 추출물 5.0
글리세린 6.0
1,3-부틸렌글라이콜 3.0
피이지1500 1.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.04
소듐하이알루로네이트 5.0
에탄올 10.0
폴리소르베이트20 0.2
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 4: 로션
실시예 1의 땅콩 겉껍질 추출물을 포함하는 화장료 중 로션의 제조예는 하기 표 5와 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 추출물 3.0
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 1.2
토코페릴아세테이트 3.0
유동 파라핀 5.0
스쿠알란 3.0
마카다미너트오일 2.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 1.0
카르복시비닐폴리머 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 5: 영양 크림
실시예 1의 땅콩 겉껍질 추출물을 포함하는 화장료 중 영양 크림의 제조예는 하기 표 6과 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 추출물 1.0
친유형 모노스테아린산글리세린 1.5
세테아릴 알코올 1.5
스테아린산 1.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.6
이소스테아릴이소스테아레이트 5.0
스쿠알란 5.0
광물유 35.0
디메치콘 0.5
하이드록시에칠셀룰로오스 0.12
글리세린 6.0
트리에탄올아민 0.7
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 6: 에센스
실시예 1의 땅콩 겉껍질 추출물을 포함하는 화장료 중 에센스의 제조예는 하기 표 7과 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 추출물 1.5
글리세린 10.0
베타인 5.0
PEG 1500 2.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.04
하이드록시에칠셀룰로오스 0.1
소듐하이알루로네이트 8.0
카르복시비닐폴리머 0.2
트리에탄올아민 0.18
옥틸도데칸올 0.3
옥틸도데세스-16 0.4
에탄올 6.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
제조예 7: 마스크 팩용 유액
실시예 1의 땅콩 겉껍질 추출물을 포함하는 화장료 중 마스크 팩용 유액의 제조예는 하기 표 8과 같다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 추출물 1.0
폴리비닐알코올 15.0
셀룰로오스 검 0.15
글리세린 3.0
PEG 1500 2.0
사이클로덱스트린 0.15
DL-판테놀 0.4
알란토인 0.1
글리시리진산모노암모늄 0.3
니코틴아마이드 0.5
에탄올 6.0
PEG 40 경화 피마자유 0.3
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100

Claims (9)

  1. 땅콩 겉껍질 초음파 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백 및 피부 재생용 화장료 조성물로서,
    상기 땅콩 겉껍질 초음파 추출물은 땅콩 겉껍질과 30 내지 60 부피%의 에탄올 수용액을 혼합한 혼합물을 25 내지 80 ℃ 하에서 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 15 내지 30분 동안 처리시켜 수득된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 땅콩 겉껍질 초음파 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백 및 피부 재생용 건강기능식품으로서,
    상기 땅콩 겉껍질 초음파 추출물은 땅콩 겉껍질과 30 내지 60 부피%의 에탄올 수용액을 혼합한 혼합물을 25 내지 80 ℃ 하에서 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 15 내지 30분 동안 처리시켜 수득된 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
  8. (A) 땅콩 겉껍질을 30 내지 60 부피%의 에탄올 수용액, 25 내지 80 ℃의 추출온도, 15 내지 30분의 추출시간의 추출조건 하에서 20 내지 50 kHz의 진동수 및 50 내지 700 W의 파워의 초음파기로 15 내지 30분 동안 추출한 후 원심분리하여 수득한 상등액인 땅콩 겉껍질 초음파 추출물의 DPPH 라디칼 소거능에 대한 실험값을 획득하는 단계;
    (B) 상기 (A)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 1]로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계;
    (C) 상기 (B)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계;
    (D) 상기 (A)단계에서 수득한 상등액의 티로시나제 억제능에 대한 실험값을 획득하는 단계;
    (E) 상기 (D)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 2]로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계;
    (F) 상기 (E)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계;
    (G) 상기 (A)단계에서 수득한 상등액의 콜라게나제 억제능에 대한 실험값을 획득하는 단계;
    (H) 상기 (G)단계의 실험값을 이용하여 하기 [수학식 3]으로 표시되는 2차 회귀식 모델을 도출하는 단계;
    (I) 상기 (H)단계에서 도출된 2차 회귀식 모델을 변량분석(ANOVA)하여 신뢰도를 입증하고 상기 추출조건에 대한 반응표면곡선을 수득하는 단계; 및
    (J) 상기 (C), (F) 및 (I)단계에서 수득된 반응표면곡선을 겹치기기법(superimposing)으로 DPPH 라디칼 소거능, 티로시나제 억제능 및 콜라게나제 억제능에 대한 공통의 최적화 조건을 예측하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 반응표면분석법을 이용한 땅콩 겉껍질 초음파 추출물의 제조방법;
    [수학식 1]
    YDPPH=-93.85411+0.88251X1+1.62214X2+3.70693X3-0.010569X1 2-5.07511X1X2-8.90542X2 2-2.40222X1X3-6.57227X2X3-0.024412X3 2
    [수학식 2]
    YTI=-9.34253+0.46766X1-9.54387X2+0.55800X3-3.19295X1 2-1.35612X1X2+6.13252X22-2.66703X1X3-2.94955X2X3+1.76988X3 2
    [수학식 3]
    YCI=-118.02907+1.78059X1+2.80277X2+3.09895X3-0.051048X1 2+0.031083X1X2-0.017564X2 2-0.010883X1X3-0.024017X2X3-0.010465X3 2
    상기 수학식 1 내지 3에서, YDPPH는 DPPH 라디칼 소거능 예측값(%), YTI는 티로시나제 억제능 예측값(%), YCI는 콜라게나제 억제능 예측값(%), X1은 추출시간, X2는 추출온도, X3는 추출용매의 농도임.
  9. 제8항에 있어서, 상기 DPPH 라디칼 소거능, 티로시나제 억제능 및 콜라게나제 억제능에 대한 공통의 최적화 조건에 따른 추출조건은 추출 시간 20.9분, 추출 온도 34.5 ℃ 및 에탄올 농도 50 부피%인 것을 특징으로 하는 반응표면분석법을 이용한 땅콩 겉껍질 초음파 추출물의 제조방법.
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