KR20170003666A - 카르복스아미드 유도체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염;
<화학식 I>
Figure pct00072

본 발명의 화합물을 제조하는 방법, 및 그의 치료적 용도를 제공한다. 본 발명은 제약 조성물 및 약리 활성제의 조합물을 추가로 제공한다.

Description

카르복스아미드 유도체 {CARBOXAMIDE DERIVATIVES}
본 발명은 요법에서 유용한 유기 화합물을 기재한다. 화합물은 선택적 Smurf-1 억제제로서 특성을 나타내고 따라서 다양한 장애, 예를 들어, 폐동맥 고혈압, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, 뿐만 아니라 COPD 및 천식 등의 치료에서 유용할 수 있다.
Smurf-1 (스마드 유비퀴틴화 조절 인자(Smad ubiquitination regulatory factor) 1)은 유비퀴틴-의존성 단백질분해 경로(proteolytic pathway)를 통한 단백질분해적 분해(proteolytic degradation)를 위해 특정 기질을 마킹하는 E3 유비퀴틴 리가제의 HECT 패밀리의 구성원이다. Smurf-1의 주된 기질은 RhoA, 골 형성 단백질(bone morphogenetic protein) (BMP) 수용체 (BMPR) 1 및 2, smad1 및 5, TNFα 수용체 연관 인자 (TRAF) 6 및 myD88이다 (Andrews, P.S. et al. Assay Drug Dev. Technol. 2010). 기질의 목록을 고려해 볼 때, Smurf-1은 BMP 신호전달 (Chen, D et al. Growth Factors, 2004), 신경 세포 극성 (Stiess, M. and Bradke, F. Neuron, 2011), 세포 이동 (Huang, C. Cell Adh. Migr. 2010), 종양 세포 침습 (Sahai, E. et al. JCB, 2007), 미토콘드리아 자가포식 (Orvedahl, A. Nature, 2011), 중간엽 줄기 세포 증식 (Zhao, L. et al. J. Bone Miner. Res. 2010) 및 상피-중간엽 전이 (EMT) (Ozdamar, B et al. Science 2005)을 조절하는데 있어서 역할을 확립하였다.
폐동맥 고혈압 (PAH)은 우심실 비대/부전 및 대부분의 경우에 조기 사망에 이르는 진행성 폐 혈관병증을 특징으로 하는, 여러 병인학의 생명을 위협하는 공격적이고 복합적인 질환이다. 현재의 약리 요법은 고식적이다. 기대 수명에서의 향상이 관찰되었지만, 질환의 혈관 수축 요소를 변경하는데 주력하는 현재의 요법은 질환의 진행을 멈추거나 역전시키지 않으며, 이식 (이중 폐 또는 심장-폐)이 유일한 치유적 치료로 남아 있다. 현재 치료 클래스의 제한된 효과를 고려해 볼 때, PAH의 근본적인 진행성 폐 혈관 재형성(remodeling)을 표적으로 하는 신규 요법이 요구된다.
성장 인자 β (TGF-β) 슈퍼패밀리 수용체 골 형성 단백질 수용체 II (BMPR-II) 유전자를 형질전환하는데 있어서 생식 계열 돌연변이는 유전성 및 특발성 PAH (IPAH)의 일부 산발적 형태의 70%로 퍼져 있다. 골 형성 단백질은 TGF-β 슈퍼패밀리에 속하는 신호전달 분자이다. 골 형성 단백질은 원래 연골과 뼈의 형성을 유도하는 그의 능력에 의해 확인되었고, 그 후에 조골세포, 상피 세포, 뉴런, 면역 세포, 및 평활근 세포를 포함한 온갖 종류의 세포 유형에서 광범위한 기능, 예컨대 증식, 분화, 및 아폽토시스를 조절하는 다기능 단백질로 확인되었다. 지금까지, >20 포유동물 BMP가 확인되어 있으나, BMP와 결합할 수 있는 단지 세 개의 유형 I 및 세 개의 유형 II 수용체 (BMPR-I 및 BMPR-II, 각각)가 포유동물에서 클로닝되어 있다. 골 형성 단백질은 폐 혈관 평활근 세포 및 내피 세포를 포함한 여러 가지의 세포 유형으로부터 합성되고 분비된다. BMPR-I 및 -II의 돌연변이 외에도, 비가족성 PAH를 가진 환자로부터의 폐는 여러 형태의 PAH에서 붕괴된 BMP 신호전달의 중추적인 역할을 암시하는 혈관 BMPR-1 및 -II의 현저히 감소된 수준을 표시한다 (Du, L et al. N.Eng.J.Med, 2003). 따라서 PAH 환자의 폐 혈관계에서 BMP 신호전달의 복원은 PAH의 치료를 위한 신규한 항-재형성 치료제의 개발에서 상당한 관심이 된다.
Smurf-1은 조골세포 (Zhao, M et al. JBC, 2003), 근육모세포 (Ying, SX et al. JBC, 2003), 폐 상피 (Shi W, et al. Am.J.Physiol.Cell.Mol.Physiol, 2004), 신경세포 조직 (Kallan, T et al. Mol. Cell. Biol, 2009) 및 심내막 세포 (Towsend, TA, et al. Cells Tissues Organs, 2011)를 포함한 여러 가지의 세포 유형에서 BMPR-I, -II 및 smad1 및 5의 분해를 매개하는 것으로 나타났다. 최근에, 첫번째 증거는 PAH에서 Smurf-1에 대한 역할을 뒷받침하는 것으로 나타났으며, 여기서 Smurf-1의 증진된 수준은 PAH의 만성 저산소증 및 모노크로탈린 전-임상 생체내 모델에서 관찰되었고 BMPR1 및 2의 하향 조절과 연관되어 있다 ([Murakami, K, et al. Exp. Biol. Med, 2010] 및 [Yang, J. et al. Circ. Res, 2010]).
발명의 개요
폐동맥 고혈압에 대한 신규한 치료 및 요법에 대한 필요성이 남아 있다. 본 발명은 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정, 그의 제약 조성물 및 그의 조합물을 제공하며, 이 화합물은 Smurf-1 억제제이다. 본 발명은 폐동맥 고혈압의 치료, 예방, 또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 Smurf-1 억제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 폐동맥 고혈압을 치료, 예방, 또는 개선하는 방법을 추가로 제공한다.
본 발명의 제1 측면, 실시양태 1에 따르면, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정이 제공된다:
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식에서,
R1은 (C3-C6)알킬 또는 (C3-C6)시클로알킬이고;
R2는 메틸이고;
R3은 (C6-C10)분지형 알킬, (C6-C10)분지형 알케닐, (C5-C8)시클로알케닐, (C5-C8)시클로알킬, 또는 Het로부터 선택되고; 여기서 (C5-C8)시클로알케닐 또는 (C5-C8)시클로알킬은 비치환되거나 1, 2, 3 또는 4개의 치환기 R4에 의해 치환되고; 여기서 Het는 1, 2, 3 또는 4개의 치환기 R4에 의해 치환되고;
각각의 R4는 할로, (C1-C4)알킬, 할로(C1-C4)알킬, (C1-C4)알콕시, 또는 할로(C1-C4)알콕시로부터 독립적으로 선택되거나;
2개의 R4 기는, 동일한 탄소 원자에 부착시, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께 취해져서 시클로펜틸, 테트라히드로푸란 또는 디옥솔란 고리를 형성할 수 있고;
Het는 a) 2- 또는 3-위치에서 1개의 산소 원자, 또는 b) 2- 및 5-, 또는 2- 및 6-위치에서 2개의 산소 원자를 포함하는 5 또는 6원 전부 포화 또는 부분 포화 헤테로시클릭 고리 (여기서 번호 매기기는 부착점을 기준으로 한다)이고;
(C5-C8)시클로알킬은 5, 6, 7 또는 8개의 탄소 원자를 함유하는 모노시클릭 고리 또는 브릿지된 고리계일 수 있다.
또 다른 실시양태에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 I의 정의에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정, 또는 그의 하위화학식 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 I의 정의에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 하위화학식 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 정의에 따른 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정, 또는 그의 하위화학식 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정을 투여하는 것을 포함하는, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 골절 치유, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, 뿐만 아니라 COPD 및 천식으로부터 선택된 장애 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 정의에 따른 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염이 투여된다. 다른 실시양태에서, 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 아속에 따른 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염이 투여된다. 또 다른 실시양태는 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택된 장애 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 I의 정의에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정, 또는 그의 하위화학식 및 1종 이상의 치료 활성제를 포함하는, 조합물, 특히 제약 조합물을 제공한다.
본 발명의 다양한 실시양태가 본원에 기재되어 있다.
상세한 설명
따라서 본 발명은 실시양태 1로서 상기에 기재된 바와 같은, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정을 제공한다.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, R1이 이소-프로필, 시클로부틸 또는 시클로헥실인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 3. 실시양태 1에 있어서, R1이 시클로헥실인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 한 실시양태에 있어서, R3이 2,2-디메틸펜틸, 2,2-디메틸펜트-2-엔일, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥센일, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 디옥사닐, 테트라히드로푸라닐, 디옥솔라닐 및 비시클로[2.2.2]옥타닐로부터 선택되고; 여기서 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥센일, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 디옥사닐, 테트라히드로푸라닐, 디옥솔라닐 또는 비시클로[2.2.2]옥타닐 고리는 비치환되거나 1, 2, 3 또는 4개의 치환기 R4에 의해 치환되고;
각각의 R4가 할로, (C1-C4)알킬, 할로(C1-C4)알킬, (C1-C4)알콕시, 또는 할로(C1-C4)알콕시로부터 독립적으로 선택되거나;
2개의 R4 기가, 동일한 탄소 원자에 부착시, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께 취해져서 테트라히드로푸란 또는 디옥솔란 고리를 형성할 수 있는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, R3이
Figure pct00002
이고;
m이 1, 2, 3 또는 4인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 한 실시양태에 있어서, R3이
Figure pct00003
이고;
m이 1, 2, 3 또는 4인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 7. 실시양태 1 내지 6 중 어느 한 실시양태에 있어서, 각각의 R4가 메틸, 이소프로필, tert-부틸 및 메톡시로부터 독립적으로 선택되는 것인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 8. 실시양태 1에 있어서,
실시예 1
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 1.1
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(6-에틸-4-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 1.2
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(6,6-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 1.3
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-에틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 1.4
[5-(4-(tert-부틸)시클로헥스-1-엔-1-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 1.5
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(4-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 1.6
5-(시클로헵트-1-엔-1-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 1.7
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(4-(트리플루오로메틸)시클로헥스-1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 2
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 2.1
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 2.2
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 3
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 4
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 5
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 6
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥실)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 6.1
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸시클로펜틸)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 7
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부틸)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 8
(Z)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 9
(E)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 10
5-시클로헥실-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 11
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 12
5-(6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 13
5-(6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 14
5-(6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 15
5-(6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 16
5-(6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 17
5-(6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 18
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(6-이소프로필-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 19
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 20
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 21.1
[5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
실시예 21.2
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 22
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 23
5-(4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 24
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 25
5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 26
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
로부터 선택되는 화학식 I의 화합물;
또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 9. 실시양태 1에 있어서,
실시예 20
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 26
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 2.2
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
실시예 2.1
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]; 및
실시예 11
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드
로부터 선택되는 화학식 I의 화합물;
또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 10. 실시양태 1에 있어서,
실시예 20
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드인 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 11. 실시양태 1에 있어서,
실시예 26
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드인 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 12. 실시양태 1에 있어서,
실시예 2.2
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 13. 실시양태 1에 있어서,
실시예 2.1
[N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
실시양태 14. 실시양태 1에 있어서,
실시예 11
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "할로"(또는 할로겐)는 플루오린, 브로민, 염소 또는 아이오딘, 특히 플루오린, 염소를 지칭한다. 할로겐-치환 기 및 모이어티, 예컨대 할로겐에 의해 치환된 알킬 (할로알킬)은 모노-, 폴리- 또는 퍼-할로겐화될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로 원자"는 질소 (N), 산소 (O) 또는 황 (S) 원자, 특히 질소 또는 산소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 최대 10개의 탄소 원자를 갖는 전부 포화 분지형 또는 비분지형 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 달리 규정되지 않는 한, 알킬은 1 내지 10개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 알킬의 대표적 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 3-메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실 등을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 분지형 알킬의 대표적 예는 이소-프로필, sec-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 3-메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸 등을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 치환된 알킬은 할로겐, 히드록시 또는 알콕시 기로부터 선택된 1개 이상, 예컨대 1, 2 또는 3개의 치환기를 함유하는 알킬 기이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "할로알킬"은 본원에 정의된 바와 같은 1개 이상의 할로 기에 의해 치환된 본원에 정의된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 할로알킬은 모노할로알킬, 디할로알킬, 또는 퍼할로알킬을 포함한 폴리할로알킬일 수 있다. 모노할로알킬은 알킬 기 내에 1개의 아이오도, 브로모, 클로로 또는 플루오로를 가질 수 있다. 디할로알킬 및 폴리할로알킬 기는 알킬 내에 2개 이상의 동일한 할로 원자 또는 상이한 할로 기의 조합을 가질 수 있다. 전형적으로 폴리할로알킬은 최대 12개, 또는 10개, 또는 8개, 또는 6개, 또는 4개, 또는 3개, 또는 2개의 할로 기를 함유한다. 할로알킬의 비제한적 예는 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 클로로메틸, 디클로로메틸, 트리클로로메틸, 펜타플루오로에틸, 헵타플루오로프로필, 디플루오로클로로메틸, 디클로로플루오로메틸, 디플루오로에틸, 디플루오로프로필, 디클로로에틸 및 디클로로프로필을 포함한다. 퍼할로알킬은 모든 수소 원자가 할로 원자로 대체된 알킬을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알콕시"는 알킬-O-를 지칭하고, 여기서 알킬은 상기에서 본원에 정의되어 있다. 알콕시의 대표적 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 2-프로폭시, 부톡시, tert-부톡시, 펜틸옥시, 헥실옥시, 시클로프로필옥시-, 시클로헥실옥시- 등을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 전형적으로, 알콕시 기는 1-4개의 탄소 원자를 갖는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "할로알콕시"는 본원에 정의된 바와 같은 1개 이상의 할로 기에 의해 치환되는, 본원에 정의된 바와 같은 알콕시를 지칭한다.
달리 규정되지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "시클로알킬"은 3-8개의 탄소 원자의 포화 모노시클릭, 비시클릭, 또는 스피로시클릭 탄화수소 기를 지칭한다. 달리 규정되지 않는 한, 시클로알킬은 3 내지 6개 또는 5 내지 8개의 고리 탄소 원자를 갖는 시클릭 탄화수소 기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "시클로알케닐"은 3-8개의 탄소 원자의 부분 포화 모노시클릭, 비시클릭, 또는 스피로시클릭 탄화수소 기를 지칭한다. 달리 규정되지 않는 한, 시클로알케닐은 3 내지 6개 또는 5 내지 8개의 고리 탄소 원자를 갖는 시클릭 탄화수소 기를 지칭한다.
출발 물질 및 절차의 선택에 따라, 화합물은 비대칭 탄소 원자의 개수에 따라, 가능한 이성질체 중 하나의 형태로 또는 그의 혼합물로서, 예를 들어 순수한 광학 이성질체로서, 또는 이성질체 혼합물, 예컨대 라세미체 및 부분입체이성질체 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 발명은 라세미 혼합물, 부분입체이성질체 혼합물 및 광학적으로 순수한 형태를 포함한 모든 이러한 가능한 이성질체를 포함하는 것으로 의도된다. 광학 활성 (R)- 및 (S)- 이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조될 수 있거나, 통상의 기술을 사용하여 분할될 수 있다. 화합물이 이중 결합을 함유하는 경우, 치환기는 E 또는 Z 배위일 수 있다. 화합물이 이치환된 시클로알킬을 함유하는 경우, 시클로알킬 치환기는 시스- 또는 트랜스-배위를 가질 수 있다. 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "염" 또는 "염들"은 본 발명의 화합물의 산 부가 염 또는 염기 부가 염을 지칭한다. "염"은 특히 "제약상 허용되는 염"을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 염"은, 전형적으로 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 못하지 않은, 본 발명의 화합물의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하는 염을 지칭한다.
수소 결합을 위한 공여자 및/또는 수용자로서 작용할 수 있는 기를 함유하는 본 발명의 화합물, 즉 화학식 I의 화합물은 적합한 공-결정 형성제를 사용하여 공-결정을 형성할 수 있다. 이들 공-결정은 공지된 공-결정 형성 절차에 의해 화학식 I의 화합물로부터 제조될 수 있다. 이러한 절차는 분쇄, 가열, 공-승화, 공-용융, 또는 결정화 조건 하에 용액 중에서 화학식 I의 화합물을 공-결정 형성제와 접촉시키고, 그에 의해 형성된 공-결정을 단리하는 것을 포함한다. 적합한 공-결정 형성제는 WO 2004/078163에 기재된 것들을 포함한다. 따라서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 포함하는 공-결정을 추가로 제공한다.
다수의 경우에, 본 발명의 화합물은 카르복스아미드 기 또는 그와 유사한 기의 존재에 의해 산 및/또는 염기 염 또는 공-결정을 형성할 수 있다.
제약상 허용되는 산 부가 염 또는 공-결정은 무기 산 및 유기 산을 사용하여 형성될 수 있다.
염 또는 공-결정이 유래될 수 있는 무기 산은, 예를 들어, 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.
염 또는 공-결정이 유래될 수 있는 유기 산은, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산 등을 포함한다.
제약상 허용되는 염기 부가 염 또는 공-결정은 무기 및 유기 염기를 사용하여 형성될 수 있다.
염 또는 공-결정이 유래될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어 암모늄 염 및 주기율표의 I 내지 XII족으로부터의 금속을 포함한다. 특정 실시양태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 은 및 아연으로부터 유래되고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다.
염 또는 공-결정이 유래될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어 1급, 2급 및 3급 아민, 자연 발생의 치환된 아민을 포함한 치환된 아민, 시클릭 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 콜리네이트, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 카프레이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 무케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 또는 크시나포에이트 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드를 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 카프레이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 무케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 또는 크시나포에이트 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드를 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 카프레이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 무케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 또는 크시나포에이트 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드를 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 카프레이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 무케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 또는 크시나포에이트 염 또는 공-결정 형태로 제공한다
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]를 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 카프레이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 무케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 또는 크시나포에이트 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드를 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 카프레이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 무케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 또는 크시나포에이트 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 은, 아연, 콜리네이트, 리신, 메글루민, 피페라진 또는 트로메타민 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드를 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 은, 아연, 콜리네이트, 리신, 메글루민, 피페라진 또는 트로메타민 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드를 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 은, 아연, 콜리네이트, 리신, 메글루민, 피페라진 또는 트로메타민 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드를 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 은, 아연, 콜리네이트, 리신, 메글루민, 피페라진 또는 트로메타민 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]를 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 은, 아연, 콜리네이트, 리신, 메글루민, 피페라진 또는 트로메타민 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드를 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 은, 아연, 콜리네이트, 리신, 메글루민, 피페라진 또는 트로메타민 염 또는 공-결정 형태로 제공한다.
본원에 주어진 임의의 화학식은 또한 화합물의 비표지된 형태뿐만 아니라 동위원소 표지된 형태를 나타내도록 의도된다. 동위원소 표지된 화합물은 1개 이상의 원자가, 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된다는 것을 제외하고는 본원에 주어진 화학식에 의해 도시되는 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36Cl, 123I, 124I, 125I를 포함한다. 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 다양한 동위원소 표지된 화합물, 예를 들어 그 내부에 방사성 동위원소, 예컨대 3H 및 14C가 존재하는 화합물, 또는 그 내부에 비-방사성 동위원소, 예컨대 2H 및 13C가 존재하는 화합물을 포함한다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사 연구 (14C 사용), 반응 동역학적 연구 (예를 들어 2H 또는 3H 사용), 검출 또는 영상화 기술, 예컨대 약물 또는 기질 조직 분포 검정을 포함한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 또는 환자의 방사성 치료에서 유용하다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구를 위해 특히 바람직할 수 있다. 동위원소-표지된 화학식 I의 화합물은 일반적으로, 이전에 사용되었던 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여, 수반되는 실시예 및 제조예에 기재된 것들과 유사한 방법에 의해 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상의 기술에 의해 제조될 수 있다.
추가로, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소 (즉, 2H 또는 D)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건 또는 치료 지수에서의 개선으로부터 생기는 특정 치료 이점을 제공할 수 있다. 본 문맥에서 중수소가 화학식 I의 화합물의 치환기로서 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 보다 무거운 동위원소, 구체적으로 중수소의 농도는, 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "동위원소 농축 계수"는 특정된 동위원소의 동위원소 존재비와 천연 존재비 사이의 비율을 의미한다. 본 발명의 화합물 내의 치환기가 표시된 중수소인 경우에, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3500 (각각의 지정된 중수소 원자에서 52.5% 중수소 혼입), 적어도 4000 (60% 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5% 중수소 혼입), 적어도 5000 (75% 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5% 중수소 혼입), 적어도 6000 (90% 중수소 혼입), 적어도 6333.3 (95% 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97% 중수소 혼입), 적어도 6600 (99% 중수소 혼입), 또는 적어도 6633.3 (99.5% 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다.
본 발명에 따른 제약상 허용되는 용매화물은 결정화의 용매가 동위원소 치환될 수 있는 것들, 예를 들어 D2O, d6-아세톤, d6-DMSO를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "제약상 허용되는 담체"는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은, 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등 및 그의 조합을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329] 참조). 임의의 통상의 담체가 활성 성분과 상용적이지 않은 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 그의 용도가 고려된다.
본 발명의 화합물의 용어 "치료 유효량"은 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 또는 증상의 개선, 병태의 완화, 질환 진행의 둔화 또는 지연, 또는 질환의 예방 등을 도출할 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 한 비제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 대상체에게 투여되는 경우, (1) (i) Smurf-1에 의해 매개되거나, (ii) Smurf-1 활성과 연관되거나, (iii) Smurf-1의 활성 (정상 또는 비정상)을 특징으로 하는 병태, 또는 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 완화, 억제, 예방하고/거나, 개선하는데 효과적이거나; (2) Smurf-1의 활성을 감소시키거나 억제하는데 효과적이거나; (3) Smurf-1의 발현을 감소시키거나 억제하는데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 또 다른 비제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 세포, 또는 조직, 또는 비-세포 생물학적 물질, 또는 배지에 투여되는 경우, Smurf-1의 활성을 적어도 부분적으로 감소시키거나 억제하는데 효과적이거나; Smurf-1의 발현을 적어도 부분적으로 감소시키거나 억제하는데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로 동물은 포유동물이다. 대상체는 또한 예를 들어, 영장류 (예를 들어, 인간, 수컷 또는 암컷), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 주어진 병태, 증상, 또는 장애, 또는 질환의 감소 또는 억제, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기준선 활성의 유의한 감소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애에 대한 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는, 한 실시양태에서, 질환 또는 장애를 개선하는 것 (즉, 질환 또는 그의 임상 증상 중 적어도 하나의 진전을 둔화 또는 정지 또는 감소시키는 것)을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자에 의해 식별가능하지 않을 수 있는 것들을 포함한 적어도 하나의 물리적 파라미터를 완화 또는 개선하는 것을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애를, 물리적으로 (예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리학적으로 (예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화), 또는 이들 둘 다로 조정하는 것을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 발병 또는 진전 또는 진행을 예방 또는 지연시키는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상체가 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어서 유익할 경우에, 이러한 대상체는 이러한 치료를 "필요로 한다".
본원에 사용된 바와 같이, 본 발명의 문맥에서 (특히 청구범위의 문맥에서) 사용된 단수 형태 및 유사한 용어는 본원에서 달리 명시되지 않거나 문맥에 의해 분명히 모순되지 않는 한, 단수 및 복수 둘 다를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본원에 기재된 모든 방법은 본원에서 달리 명시되지 않거나 문맥에 의해 분명히 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 그리고 모든 예, 또는 예시적인 어휘 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 본 발명을 보다 잘 설명하기 위한 의도일 뿐이며, 달리 청구된 본 발명의 범주에 제한을 가하는 것은 아니다.
본 발명의 화합물(들)의 임의의 비대칭 원자 (예를 들어, 탄소 등)는 라세미 또는 거울상이성질체적으로 풍부한, 예를 들어 (R)-, (S)- 또는 (R,S)- 배위로 존재할 수 있다. 특정 실시양태에서, 각각의 비대칭 원자는 (R)- 또는 (S)- 배위에서 적어도 50%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 60%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 70%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 80%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 90%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 95%의 거울상이성질체 과잉률, 또는 적어도 99%의 거울상이성질체 과잉률을 갖는다. 불포화 이중 결합을 갖는 원자에서의 치환기는, 가능한 경우에, 시스-(Z)- 또는 트랜스-(E)- 형태로 존재할 수 있다.
따라서, 본원에 사용된 바와 같이 본 발명의 화합물은 가능한 이성질체, 회전이성질체, 회전장애이성질체(atropisomer), 호변이성질체 또는 그의 혼합물 중 하나의 형태로, 예를 들어 실질적으로 순수한 기하 (시스 또는 트랜스) 이성질체, 부분입체이성질체, 광학 이성질체 (대장체), 라세미체 또는 그의 혼합물로서 일 수 있다.
이성질체의 임의의 생성된 혼합물은 구성성분의 물리화학적 차이에 기초하여, 예를 들어 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 순수한 또는 실질적으로 순수한 기하 또는 광학 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체로 분리될 수 있다.
최종 생성물 또는 중간체의 임의의 생성된 라세미체는 공지된 방법에 의해, 예를 들어 광학 활성 산 또는 염기를 사용하여 수득된 그의 부분입체이성질체 염을 분리하고, 광학 활성 산성 또는 염기성 화합물을 유리시킴으로써 광학 대장체로 분할될 수 있다. 특히, 따라서 염기성 모이어티는, 예를 들어 광학 활성 산, 예를 들어 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O,O'-p-톨루오일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄포르-10-술폰산을 사용하여 형성된 염의 분별 결정화에 의해, 본 발명의 화합물을 그의 광학 대장체로 분할하는데 사용될 수 있다. 라세미 생성물은 또한 키랄 크로마토그래피, 예를 들어 키랄 흡착제를 사용하는 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 분할될 수 있다.
추가로, 본 발명의 화합물 (그의 염 포함)은 또한 그의 수화물 형태로 수득될 수 있거나, 그의 결정화에 사용되는 다른 용매를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 설계에 의해 제약상 허용되는 용매 (물 포함)와의 용매화물을 형성할 수 있으며; 따라서 본 발명은 용매화 및 비용매화 형태 둘 다를 포괄하는 것으로 의도된다. 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물 (그의 제약상 허용되는 염 포함)과 1종 이상의 용매 분자와의 분자 복합체를 지칭한다. 이러한 용매 분자는 수용자에게 무해한 것으로 공지되어 있는, 제약 기술분야에서 통상적으로 사용되는 것들, 예를 들어 물, 에탄올 등이다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 복합체를 지칭한다.
본 발명의 화합물의 염, 공-결정, 수화물 및 용매화물을 포함한 본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 설계에 의해 다형체를 형성할 수 있다.
일반 반응식
전형적으로, 화학식 I의 화합물은 아래에 제공된 반응식에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 하기 반응식 또는 실시예에서 기재된 경로에 의해 제조될 수 있다.
모든 약어는 이하에 실시예 섹션에서 정의된 바와 같다.
<반응식 1>
Figure pct00004
상기 식에서 X 및 Y는 독립적으로 H 또는 -(C1-C6)알킬이다.
단계 1: 팔라듐 촉매된 크로스 커플링 반응.
전형적인 조건: 팔라듐 (0) 촉매; 적합한 붕소 주석 또는 아연 화합물, 예컨대 보론산, 보로네이트 에스테르 또는 스타난; 유기 또는 무기 염기; 물 중; 80-110℃에서 적합한 용매 중
바람직한 조건: 비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드, 비닐 트리플루오로보레이트 염, 트리에틸아민, 90℃에서 에탄올 중
단계 2: 디히드록실화
전형적인 조건: 사산화오스뮴; 적합한 공-산화제, 예컨대 N-메틸모르폴린-N-옥시드; 적합한 용매 중
바람직한 조건: 사산화오스뮴 (애드믹스(Admix) 알파 또는 애드믹스 베타)을 적합한 첨가제, 예컨대 메탄 술폰아미드와 함께 사용하여 키랄 디올에 접근할 수 있다. 바람직한 용매 시스템은 t부탄올/물이다.
단계 3: 산화적 절단
전형적인 조건: THF/물 용매 시스템 중 과아이오딘산나트륨
<반응식 2>
R2가 메틸인 경우, 화학식 I의 화합물을 반응식 2에 따라 제조할 수 있다.
Figure pct00005
상기 식에서 X2 및 Y2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 이들이 R3 치환기를 형성하도록 정의된다.
단계 1: 비닐 보로네이트 형성
전형적인 조건: a) 강 염기, 예컨대 LDA 또는 LHMDS의 존재 하에 에놀화에 이어서, 적합한 할로알킬 술포네이트 또는 술폰아미드로 켄칭하여 안정화된 에놀 형태를 수득한다. b) 적합한 팔라듐 (0) 촉매 및 비스 피나콜라토디보론을 사용한 에놀레이트의 팔라듐 (0) 촉매된 보릴화
바람직한 조건: a) -78℃에서 THF 중 LDA에 이어서, 1,1,1-트리플루오로-N-(피리딘-2-일)-N-((트리플루오로메틸)술포닐)메탄술폰아미드로 켄칭. b) 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 착물 및 비스피나콜라토디보론, 아세트산칼륨, 4-16시간 동안, 80-100℃에서, 디옥산 중.
단계 2: 팔라듐 촉매된 크로스 커플링
전형적인 조건: 반응식 1, 단계 1에 기재된 바와 같음
바람직한 조건: 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐 (II) 디클로라이드 디클로로메탄 착물, 1.5시간 동안, 80℃에서 MeCN 중 탄산칼륨 (물 중 2M)
단계 3a 비누화
전형적인 조건: 임의로 적합한 공-용매, 예컨대 THF와 함께, 적합한 수성 염기
바람직한 조건: 30분 동안 실온에서 THF와 함께 2M 수산화나트륨 (수성)
단계 3b 아미드 커플링
전형적인 조건: 적합한 비양성자성 용매 중, 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민, DIPEA 등의 존재 하에, 적합한 커플링 시약, 예컨대 HATU, T3P, EDCI 등.
바람직한 조건: 약 2시간 동안 실온에서 DMF 중 HATU 및 DIPEA
단계 4 수소화
R3이 C=C 이중 결합을 함유하는 화학식 I의 화합물을 수소화 반응을 통해, R3이 전부 포화되어 있는 화학식 I의 화합물로 전화시킬 수 있다.
전형적인 조건: 적합한 용매, 예컨대 알콜 중 비-가용성 팔라듐 촉매, 수소 기체
바람직한 조건: 에탄올 중 탄소상 10% 팔라듐 및 수소 기체
<반응식 3>
Figure pct00006
X3이 Br 또는 I인 경우, 단계 3의 생성물은 또한 화학식 I의 화합물이다.
단계 1: 프린스(Prins) 반응
전형적인 조건: 염소화 용매 중 산 촉매 및 적합한 탈수제.
바람직한 조건: (i) DCM 중 트리플루오로아세트산 및 분자체; 또는 (ii) DCM 중 InBr3 및 트리메틸 실릴 브로마이드; 또는 (iii) DCM 중 InOTf3 및 트리메틸 실릴 트리플레이트.
단계 2a: 반응식 2, 단계 3a에 기재된 바와 같은 비누화 반응
단계 2b: 미츠노부 반전(inversion)
전형적인 조건: 실온에서 적합한 용매, 예컨대 THF 중, 트리아릴포스핀, 디알킬아조디카르복실레이트 및 벤조산
바람직한 조건: 실온에서 THF 중, 트리페닐포스핀, 디이소프로필아조디카르복실레이트, 및 2,4-디니트로벤조산
단계 2c: 메틸화
전형적인 조건: 적합한 용매 중 적합한 강 염기 및 알킬화제
바람직한 조건: DMF 중 수소화나트륨 및 메틸 아이오다이드
단계 2d, 단계 3a, 단계 4a: 반응식 2, 단계 3a에 기재된 바와 같은 비누화 반응
단계 2e, 3b 및 4b: 반응식 2, 단계 3b에 기재된 바와 같은 아미드 커플링
단계 5: 반응식 2, 단계 4에 기재된 바와 같은 수소화
<반응식 4>
Figure pct00007
단계 1: 반응식 3, 단계 1에 기재된 바와 같은 프린스 반응
단계 2a: 반응식 2, 단계 3a에 기재된 바와 같은 비누화 반응
단계 2b: 반응식 2, 단계 3b에 기재된 바와 같은 아미드 커플링
단계 3: 반응식 2, 단계 4에 기재된 바와 같은 수소화
<반응식 5>
Figure pct00008
단계 1: 아세탈 형성
전형적인 조건: 탈수 조건 하에 적합한 용매 중 강산 촉매
바람직한 조건: 2-16시간 동안 110℃에서 딘 스타크(Dean Stark) 조건 하에 pTSOH 및 톨루엔.
단계 2a: 반응식 2, 단계 3a에 기재된 바와 같은 비누화 반응
단계 2b: 반응식 2, 단계 3b에 기재된 바와 같은 아미드 커플링
<반응식 6>
Figure pct00009
PG는 적합한 보호기, 예컨대 t부틸디메틸실릴이고
X6 및 Y6은 각각 독립적으로 H 또는 -(C1-C6)알킬이다.
단계 1: 보호
전형적인 조건: 적합한 용매 중 적합한 염기의 존재 하에, 적합한 보호기, 예컨대 트리알킬실릴 클로라이드.
바람직한 조건: DMF 중 트리에틸아민 및 DMAP의 존재 하에 t부틸디메틸실릴 클로라이드.
단계 2: 알킬화 반응
전형적인 조건: 적합한 용매 중 적합한 염기의 존재 하에 알릴 브로마이드
바람직한 조건: THF 중 3-브로모-2-메틸프로프-1-엔 및 수소화나트륨.
단계 3a: 반응식 2, 단계 3a에 기재된 바와 같은 비누화 반응
단계 3b: 반응식 2, 단계 3b에 기재된 바와 같은 아미드 커플링
단계 4: 탈보호
전형적인 조건: 적합한 용매 중 플루오라이드 공급원
바람직한 조건: THF 중 TBAF
단계 5: 고리화 반응
전형적인 조건: 실온에서 THF 중 머큐리 (II) 트리플루오로아세테이트 및 산화수은(II)에 이어서 -78℃에서 트리에틸보란 및 수소화붕소나트륨의 첨가.
본 발명은 본 공정의 임의의 단계에서 수득가능한 중간 생성물을 출발 물질로서 사용하고 나머지 단계를 수행하거나, 출발 물질이 반응 조건 하에 계내에서 형성되거나, 반응 성분들을 그의 염 또는 임의로 순수한 물질의 형태로 사용하는, 본 공정의 임의의 변형을 추가로 포함한다.
본 발명의 화합물 및 중간체는 또한 관련 분야의 통상의 기술자에게 일반적으로 공지된 방법에 따라 서로 전환될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 조성물은 2종 이상의 제약상 허용되는 담체, 예컨대 본원에 기재된 것들을 포함한다. 본 발명의 목적을 위해, 달리 지정되지 않는 한, 용매화물 및 수화물이 일반적으로 조성물로 고려된다. 바람직하게는, 제약상 허용되는 담체는 멸균성이다. 제약 조성물은 특정한 투여 경로, 예컨대 경구 투여, 비경구 투여, 및 직장 등을 위해 제제화될 수 있다. 게다가, 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태 (비제한적으로 캡슐, 정제, 환제, 과립, 분말 또는 좌제 포함), 또는 액체 형태 (비제한적으로 용액, 현탁액 또는 에멀젼 포함)로 제조될 수 있다. 제약 조성물은 멸균과 같은 통상의 제약 작업에 적용될 수 있고/거나 통상의 불활성 희석제, 윤활제 또는 완충제, 뿐만 아니라 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다.
전형적으로, 제약 조성물은 활성 성분을 다음 중 하나 이상과 함께 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐이다:
a) 희석제, 예를 들어 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신;
b) 윤활제, 예를 들어 실리카, 활석, 스테아르산, 그의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 정제의 경우에 또한
c) 결합제, 예를 들어 규산알루미늄마그네슘, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 원하는 경우에
d) 붕해제, 예를 들어 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물; 및
e) 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제.
정제는 관련 기술분야에 공지된 방법에 따라 필름 코팅되거나 장용 코팅될 수 있다.
경구 투여에 적합한 조성물은 본 발명의 화합물의 유효량을 정제, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭시르의 형태로 포함한다. 경구 사용을 위해 의도된 조성물은 제약 조성물의 제조를 위해 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조되고, 이러한 조성물은 제약상 우아하고 맛이 우수한 제제를 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제는 활성 성분을 정제의 제조에 적합한 비독성 제약상 허용되는 부형제와 혼합하여 함유할 수 있다. 이들 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예를 들어 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석이다. 정제는 코팅되지 않거나 공지된 기술에 의해 코팅되어 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키고, 그에 의해 보다 오랜 기간에 걸쳐 지속되는 작용을 제공한다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 사용될 수 있다. 경구 사용을 위한 제제는 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합된 것인 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어 땅콩 오일, 액상 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합된 것인 연질 젤라틴 캡슐로서 존재할 수 있다.
특정 주사가능한 조성물은 수성 등장성 용액 또는 현탁액이고, 좌제는 지방 에멀젼 또는 현탁액으로부터 유리하게 제조된다. 상기 조성물은 멸균될 수 있고/거나, 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용해 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 게다가, 이들은 또한 다른 치료상 유익한 물질을 함유할 수 있다. 상기 조성물은 통상의 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 각각 제조되고, 활성 성분을 약 0.1-75% 함유하거나, 약 1-50% 함유한다.
경피 적용에 적합한 조성물은 본 발명의 화합물의 유효량을 적합한 담체와 함께 포함한다. 경피 전달에 적합한 담체는 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매를 포함하여 숙주의 피부를 통한 통과를 보조한다. 예를 들어, 경피 장치는 백킹 부재, 화합물을 임의로 담체와 함께 함유하는 저장소, 임의로 장기간에 걸쳐 제어되고 미리 결정된 속도로 숙주의 피부에 화합물을 전달하기 위한 속도 제어 장벽, 및 장치가 피부에 고정되도록 하는 수단을 포함하는 붕대의 형태이다.
예를 들어, 피부 및 눈에 대한 국소 적용에 적합한 조성물은 수용액, 현탁액, 연고, 크림, 겔, 또는 예를 들어 에어로졸 등에 의한 전달을 위한 분무가능한 제제를 포함한다. 이러한 국소 전달 시스템은, 예를 들어 피부암의 치료를 위해, 예를 들어 예방적 사용을 위해 선 크림, 로션, 스프레이 등으로의 피부 적용에 특히 적절할 것이다. 이들은 따라서 관련 기술분야에 널리 공지된 국소 (화장품 포함) 제제에 사용하기에 특히 적합하다. 이들은 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 국소 적용은 또한 흡입 또는 비강내 적용에 관한 것일 수 있다. 이들은 편리하게는 적합한 추진제를 사용하거나 사용하지 않고, 가압 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 또는 네뷸라이저로부터의 에어로졸 스프레이 제공물 또는 건조 분말 흡입기로부터의 건조 분말 (단독으로, 혼합물, 예를 들어 락토스와의 건조 블렌드, 또는 예를 들어 인지질과의 혼합 성분 입자로서)의 형태로 전달될 수 있다.
본 발명은 활성 성분으로서 본 발명의 화합물을 포함하는 무수 제약 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공하며, 이는 물이 특정 화합물의 분해를 용이하게 할 수 있기 때문이다.
본 발명의 무수 제약 조성물 및 투여 형태는 무수 또는 저수분 함유 성분, 및 저수분 또는 저습 조건을 사용하여 제조될 수 있다. 무수 제약 조성물은 그의 무수 특성이 유지되도록 제조되고 보관될 수 있다. 따라서, 무수 조성물은 이들이 적합한 규정 키트에 포함될 수 있도록, 물에 대한 노출을 방지하는 것으로 공지된 물질을 사용하여 포장된다. 적합한 포장의 예는 기밀 호일, 플라스틱, 단위 투여 용기 (예를 들어, 바이알), 블리스터 팩 및 스트립 팩을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
본 발명은 활성 성분으로서의 본 발명의 화합물이 분해되는 속도를 감소시키는 1종 이상의 작용제를 포함하는 제약 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공한다. 본원에 "안정화제"로서 지칭되는 이러한 작용제는 항산화제, 예컨대 아스코르브산, pH 완충제 또는 염 완충제 등을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
유리 형태로 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I의 화합물은, 유익한 약리학상 특성, 예를 들어 하기 섹션에서 제공된 바와 같은 시험관내 및 생체내 시험에서 나타낸 바와 같이, Smurf -1 조정 특성을 나타내고, 따라서 요법을 위해 또는 연구 화학 물질로서, 예를 들어 툴 화합물로서 사용하기 위해 나타내진다.
본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 다음을 포함한 다양한 적응증의 치료에서 유용하다:
폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압
섬유증
류마티스 관절염
골절 치유
녹내장
유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT)
단백뇨
상처 치유
COPD
천식
폐동맥 고혈압 ( PAH )
폐동맥 고혈압은 다인성의 병리 생물학을 갖는다. 혈관 수축, 폐 혈관 벽의 재형성 및 혈전증은 PAH에서 증가된 폐 혈관성 저항의 한 원인이 된다 (Humbert et al, J. Am. Coll. Cardiol., 2004.). 본원에 개시된 본 발명의 화합물은 PAH 및 그의 증상의 치료에서 유용하다. 폐동맥 고혈압은 하기 형태의 폐 고혈압을 포함하는 것으로 이해되어야 한다: 특발성 PAH (IPAH); 유전성 PAH (HPAH); 약물 또는 독소에 의해 유도된 PAH, 다른 병태와 연관된 PAH (APAH), 예컨대 결합 조직 질환과 연관된 PAH, HIV 감염과 연관된 PAH, 문맥 고혈압과 연관된 PAH, 선천성 심장 질환과 연관된 PAH, 주혈흡충증과 연관된 PAH, PAH 연관된 만성 용혈성 빈혈, 또는 신생아의 지속적인 폐 고혈압 (Galie et al, ERJ, 2009; Simonneau et al, JACC, 2009).
특발성 PAH는 원인 불명의 PAH를 지칭한다. 유전성 PAH는 BMP 수용체, BMPR2에서 돌연변이를 함유하는 것들 또는 ALK1 또는 엔도글린에서 돌연변이를 가진 것들 (유전성 출혈성 모세혈관확장증이 있거나 없는)을 포함하여 유전성 전염이 의심되거나 문서화된 PAH를 지칭한다.
약물 또는 독소와 연관된 PAH는 아미노렉스, 펜플루르아민 화합물 (예를 들어 펜플루르아민 또는 덱스펜플루르아민), 특정 독성 오일 (예를 들어 유채씨유), 피롤리지딘 알칼로이드 (예를 들어 부시 티(bush tea)), 모노크로탈린, 암페타민, L-트립토판, 메탐페타민, 코카인, 페닐프로판올아민, 세인트 존스 워트(St John's Wort), 화학요법제 또는 SSRI의 섭취와 연관된 PAH를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
결합 조직 질환과 연관된 PAH는 전신성 경화증, 폐 섬유증, 다발성근염, 류마티스 관절염, 쇼그렌(Sjogren) 증후군과 연관된 PAH 또는 전신 홍반성 루푸스와 연관된 PAH를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
선천성 심장 질환과 연관된 PAH는 전신 내지 폐 션트(systemic to pulmonary shunt)를 가진 환자, 아이젠멩거(Eisenmenger) 증후군, 소 심실-중격 또는 심방-중격 결손과 연관된 PAH 또는 교정 심장 수술과 연관된 PAH를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
만성 용혈성 빈혈과 연관된 PAH는 겸상 적혈구 질환, 지중해 빈혈, 유전성 구상 적혈구증, 유구적혈구증 및 미세혈관증 용혈성 빈혈을 가진 환자를 포함한 만성 유전성 및 후천성 빈혈을 가진 환자를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
PAH의 증상은 호흡 장애, 협심증, 실신 및 부종을 포함한다 (McLaughlin et al., Circulation, 2006, 114:1417-1431). 본원에 개시된 본 발명의 화합물은 PAH의 증상의 치료에서 유용하다.
폐 고혈압 ( PH )
폐 고혈압 (PH)은 다나 포인트(Dana Point) 임상 분류에 따라 분류된 하기 병태와 연관되는 것으로 이해되어야 한다 (Simonneau, G et al. JACCC, 2009):
군 1' - PH는 폐정맥 폐색성 질환 (PVOD) 및 폐 모세혈관 혈관종증 (PCH)을 함유하는 환자와 연관되는 것으로 이해되어야 한다.
군 2 - 좌심 질환과 연관된 PH는 좌측 심실 또는 판막 질환을 가진 그러한 환자를 포함한다.
군 3 - 폐 질환 및/또는 저산소증의 결과로서 PH. PH를 초래하는 폐 질환은 폐 섬유증, 폐기종, 조합된 폐 섬유증 및 폐기종, 기관지 확장증, 낭포성 섬유증 및 만성 폐색성 폐 질환 (COPD)을 가진 환자를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
군 4 - 만성 혈전색전증과 연관된 PH (CTEPH).
군 5 - 불명확하거나 다인성 병인과 연관된 PH. PH 환자의 이 범주는 하기 군 중 하나에 있는 환자를 포함하는 것으로 이해되어야 한다: 1) 진성 다혈구증, 본태성 혈소판 증가증 또는 만성 골수성 백혈병을 포함한 만성 골수 증식 장애; 2) 유육종증, 폐 모세혈관 상의 파괴를 초래하는 병태, 예컨대 섬유증, 대형 폐동맥의 외인성 압박, 폐 랑게르한스 세포 조직구증(Pulmonary Langerhan's cell histocytosis), 림프관 평활근종증, 신경 섬유종증 1형 및 항호중구 세포질 항체-연관 혈관염을 가진 환자를 포함한 전신 장애; 3) 유형 Ia 글리코겐 저장 질환, 글루코스-6-포스파타제의 결핍, 고셰병(Gaucher disease) 및 갑상선 질환 (갑상선 기능 저하증 및 갑상선 기능 항진증)을 포함한 대사 장애; 4) 폐동맥의 내강으로 확장되는 종양을 가진 환자, 전이성 종양 색전에 의한 폐 미세혈관의 폐색, 종격동 섬유증 또는 장기간의 혈액 투석을 받는 말기 신장 질환 환자를 포괄.
섬유증
TGFβ/BMP 신호전달 경로의 조절 장애는 신장, 심장, 폐, 피부, 췌장 및 간을 포함한 다양한 장기의 섬유증에서, 뿐만 아니라 전신성 경화증 및 연관된 병리학에서 원인이 되는 역할을 하는 것으로 나타났다 (문헌 [Leask and Abraham, FASEB, 2004]에 의해 검토된 바). BMP7은 섬유증의 발생에서 두 가지 중요한 기전인 TGFβ1-유도된 상피-중간엽 전이(epithelial-mesenchymal transition) (EMT) (Zeisberg, M et al. Nat. Med, 2003) 및 콜라겐 유도 (Izumi, N et al. AJP. Lung, Cell, Mol., Physiol. 2005)에 대항하는 것으로 나타났다. 섬유성 병리학에서 Smurf-1의 역할에 대한 직접적인 증거는 신장의 진행성 요세관간질 섬유증의 편측성 요관 폐쇄 (UUO) 마우스 모델에서 입증되었고, 여기서 Smurf-1의 증진된 수준은 보호적 Smurf-1 기질, Smad7의 감소된 수준과 연관된 병든 신장에서 존재하였다 (Fukasawa, H et al. PNAS, 2004). 보다 최근에, 폐 섬유증에서 Smurf-1의 역할은 EMT를 제한하는데 있어서 Smurf-1 기질 Smad7의 결정적인 역할을 확인하는 폐 상피 세포에서 생성된 데이터에서 시사되었다 (Shukla, MA, et al. Am. J. Resp. Cell. Mol. Biol. 2009). 본원에 개시된 본 발명의 화합물은 섬유증 및 그의 증상의 치료에서 유용하다. 섬유증은 다음을 포함하는 것으로 이해되어야 한다: 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 낭포성 섬유증, 간경변, 심근 섬유증, 종격동 섬유증, 골수 섬유증, 후 복막 섬유증, 진행성 다발성 섬유증, 신원성 전신 섬유증, 크론병(Crohn's Disease), 켈로이드, 진구성 심근 경색, 경피증 (전신성 경화증), 관절 섬유증 또는 유착성 관절낭염을 가진 환자.
류마티스 관절염
염증 유발성(Pro-inflammatory) 시토카인, 예컨대 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)는 만성 염증성 병태, 예컨대 류마티스 관절염 (RA)의 발병 및 유지에서 중요한 역할을 한다. 골밀도의 감소는 흔히 RA와 연관되어 있고 Smurf-1은 RA-유도된 골 손실을 매개하는데 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다. TNFα가 Smurf-1 기질 Smad1 및 Runx2 (이들 둘 다 골-형성 조골세포 활성에 필수적이다)의 단백질가수분해를 촉발하는 것으로 나타났다. 이 관련성을 뒷받침하는 직접적인 증거는 smurf-1 KO 마우스에서 입증되었고, 여기서 TNFα는 Smurf-1 KO 마우스로부터의 뼈에서 파골세포 활성에 영향을 주지는 못했지만, 상응하는 야생형 마우스의 뼈에서는 아니었다 (Guo, R et al. JBC, 2008). 본원에 개시된 본 발명의 화합물은 류마티스 관절염 및 그의 증상의 치료에서 유용하다. RA는 관절 내 섬유 조직 형성, 과도한 활액 및 활액 세포의 팽윤에 이차적인 활액의 만성 염증을 가진 환자를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 게다가, RA는 또한 괴사성 육아종, 혈관염, 괴저성 농지증, 스위트 증후군(Sweet's syndrome), 결절성 홍반, 소엽의 지방층염, 손가락 피부 위축증(atrophy of digital skin), 손바닥 홍반 또는 피부의 확산성 박화(diffuse thinning)로 인한 RA를 가진 환자를 포함하여야 한다. RA는 또한 다른 장기까지 미치고 본원에서는 폐의 섬유증, 신장 아밀로이드증, RA의 결과로서 죽상동맥경화증, 심낭염, 심내막염, 좌심실 부전, 판막염 및 섬유증을 가진 환자를 포함할 것이다. RA는 또한 상공막염 및 건성각결막염의 안구 병태, 온난 자가면역 용혈성 빈혈, 백혈구 감소증 및 혈소판 증가증의 혈액학적 장애, 말초 신경병증, 다발성 단신경염 및 수근관 증후군의 신경학적 병태, 골다공증 및 림프종을 가진 환자를 포함할 것이다.
골절 치유
BMP 경로는 여기에서 중요한 역할을 하고 Smurf-1 억제제는 BMP 신호전달을 증가시킨다. 본원에 개시된 본 발명의 화합물은 골절 치유의 치료에서 유용하다. 골절 치유는 뼈 골절 교정의 기술을 포함하는 것으로 이해되어야 하고 그에 의해 조골세포 및 지지 결합 조직이 이동할 수 있는 공극을 함유하는 골내막 임플란트가 뼈 골절 부위에 외과적으로 이식된다. 상기 기재된 임플란트의 삽입에 이은 Smurf-1의 억제제의 투여는 임플란트의 통합을 보조할 수 있고 조골세포로 분화하는 중간엽 줄기 세포의 증식을 증진시킴으로써 회복을 촉진할 수 있다 (Zhao, M et al. JBC, 2004).
녹내장
상승된 안압 (IOP)은 원발성 개방 우각 녹내장 (POAG)의 주요 위험 인자 중 하나이다. IOP는 섬모체에서 생성된 수양액에 의해 전방에서 유지되고 섬유주대 영역을 통해 유출된다. 섬유주대 영역에서 세포외 기질 (ECM) 침착의 축적과 연관된 증가된 수양액 유출 저항이 녹내장 환자에서 관찰되었다. POAG 환자의 이러한 ECM 병리학은 많은 비-안구계에서 TGFb 단백질에 의해 유도된 섬유증과 유사하다. TGFb2 유도된 IOP 증가는 전임상 생체내 및 생체외 모델에서 입증되었다. 몇몇 소규모 임상 연구에서, 수양액 중 TGFb2 단백질의 수준은 또한 POAG 환자에서 상승되는 것으로 보고되어 있다. 녹내장 환자에서 TGFb 활성을 조정하면 IOP를 잠재적으로 낮추고 신규한 녹내장 요법을 야기할 수 있을 것이다 (Wordinger RJ JOURNAL OF OCULAR PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS Volume 30, Number 2, 2014). TGFb 신호전달의 조절에서 그의 기질 BMP9 및 SMAD 7을 통한 Smurf1의 역할의 관점에서 본원에 기재된 본 발명의 화합물 (또는 그의 제약상 허용되는 염)은 녹내장의 치료에서 유용할 것이다.
유전성 출혈성 모세혈관확장증 ( HHT )
오슬러-웨버-량뒤 증후군(Osler-Weber-Rendu Syndrome)으로도 공지된, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT)은, 1:5000 내지 1:40,000에 영향을 미치는 혈관의 유전적 장애이다. HHT를 가진 사람은 동맥과 정맥 사이에 정상적인 모세혈관이 없는 혈관을 형성하는 경향이 있어, 고압 하에 동맥혈이 정맥 내로 직접 유입되고, 이는 파열되고 출혈될 수 있다. HHT의 증상은 경증에서 중증으로 나타날 수 있으며, 90-95%의 환자가 성인기에 코피를 경험하고, 90-95%는 중년에 얼굴 또는 손에 모세혈관확장증이 발생하고, 40%는 폐 동정맥 기형 (AVM)이 발생하여, 이는 상당한 위험을 야기할 수 있다. AVM은 또한 뇌, 간, 및 장에서 발생할 수 있으며, 건강에 미치는 영향의 심각도는 다양하다. HHT는 가장 자주, 병든 조직의 응고 요법, 색전술, 또는 수술적 제거로 치료될 수 있다. HHT 돌연변이는 BMP 신호전달에서 반수체기능부전(haploinsufficiency)을 유발하여 (Ricard et al. Blood, 2010) 혈관 성숙 결함 및 혈관계의 과도한 분지화를 초래하고, 이는 손상된 BMP9 신호전달에 부분적으로 기인한다 (Choi, et al. PlosOne, 2013). Smurf1은 BMP 신호전달을 하향-조절하고 ([Murakami Exp. Biol. Res. 2010] 및 [Cao, et al. Sci. Rep. 2014]) 내피 세포에서 발현되는 것으로 보고되어 있고 ([Crose, et al. JBC, 2009] 및 [Human Protein Atlas and GeneCards]) 따라서, Smurf1 억제제는 BMP 신호전달을 회복시키고 혈관 신생 이상을 교정하는 역할을 할 수 있다. 그와 같이 본원에 기재된 본 발명의 화합물 (또는 그의 제약상 허용되는 염)은 HHT의 치료에서 유용할 것이다.
단백뇨
소변에서 단백질의 비정상적인 양은 고혈압, 당뇨병 또는 신장 염증과 연관된 질환으로 인해 생길 수 있는 만성 신장 질환의 가장 초기 징후 중 하나이다. 치료하지 않은 상태로 방치하면, 만성 신장 질환이 말기 신장 질환 및 신부전으로 진행될 수 있다. Smurf1은 신장 기능 및 단백뇨와 연관된 여러 메커니즘에 관여된다. Smurf1 기질 Ras 동족체 유전자 패밀리, 구성원 A (RhoA)는, 신장 족세포(podocyte)의 이동을 조절하는데 중요한 역할을 한다. 시납토포딘(Synaptopodin)은 Smurf1이 RhoA에 결합하고 유비퀴틴화하는 능력을 차단함으로써 신장 족세포 내에서 스트레스 섬유 형성을 가능하게 하여, 신장의 족세포 여과 장벽의 거름(sieving) 특성의 조정 및 족세포 이동성을 촉진한다 (Asanuma, et al. Nat. Cell Biol. 2006). 게다가, 형질 전환 성장 인자 (TGF) β의 세포 내 길항제, Smad7은 신장에서 중요한 보호 역할을 한다. Smurf1 활성은 Smad7을 유비퀴틴화하고 분해하여 요세관간질 섬유증과 신장 기능 장애를 야기하는 것으로 나타났다 (Fukasawa, et al. PNAS 2004). 함께, 이들 보고서는 Smurf1 억제제가 섬유증 유발(pro-fibrotic) 신호전달의 전파 차단 이외에도 족세포 이동 및 족세포 여과 장벽의 유지를 가능하게 할 수 있고 신장이 궁극적으로는 단백뇨에 대한 치료 이익을 제공한다는 점을 제안한다. 따라서 본 발명의 화합물 (또는 그의 제약상 허용되는 염)은 단백뇨의 치료에서 유용할 것이다.
상처 치유
만성의 치유되지 않는 상처는 60세가 넘은 사람들에게 가장 흔하게 나타나 상당한 양의 육체적 통증을 초래하고 세 가지 군으로 넓게 분류된다: 정맥 궤양, 당뇨병 및 압박 궤양. 형질 전환 성장 인자 (TGF) β의 활성 및 골 형성 단백질 (BMP) 신호전달 경로의 정확한 타이밍은 섬유모세포 이동 및 세포외 기질 침착, 염증 세포 유입, 혈관 신생 및 재-상피화의 치유 촉진(pro-healing) 과정을 조절하는 정상적 상처 치유에서 필수적이다 (Pakyari, M et al. Adv. Wound Care 2013). TGF β의 장기간 활성화로 인해 상처 치유가 지연될 수 있고 확립된 치유되지 않는 상처의 항-TGF β 항체를 사용한 치료적 개입으로 인해 치유가 개선되고 흉터 비대가 감소된다 (Lu et al. J. Am. Coll. Surg. 2005). Smurf1은 TGF β 및 BMP 신호전달의 정도를 조절하고 ([Murakami Exp. Biol. Res. 2010] 및 [Cao, et al. Sci. Rep. 2014], [Wang et al. J. Cell. Mol. Med. 2012]) 따라서, Smurf1 억제제가 과잉의 TGFβ 신호전달을 정상화하여 만성 상처의 치유를 가능하게 할 것으로 예상된다. 따라서 본 발명의 화합물 (또는 그의 제약상 허용되는 염)은 만성의 치유되지 않는 상처의 치료 및/또는 상처 치유에서 일반적으로 유용할 것이다.
COPD 및 천식
기도 재형성은 만성 폐색성 폐 질환 (COPD) 또는 천식을 가진 환자에서 분명하다. 천식에서 기도 재형성의 주요 특징은 섬유증, 기저막의 비후, 증가된 배상 세포 수 및 증진된 수축 반응을 가진 증진된 평활근 세포 매스(mass)이며, 이들은 기도 과민증 및 가역성 기도 폐쇄에 한 원인이 되는 만성 염증에 의해 유도되는 것으로 생각된다 ([Carroll et al. Am.Rev Resp. Dis. 1993], [Metcalfe, et al. Physiol. Rev. 1997] 및 [Roche, et al. Lancet 1989]). COPD에서 폐 재형성은 편평상피화생, 배상 세포 과형성 및 점액 과다 분비와 함께 큰 기도에서 상피의 해체(disorganization), 및 폐기종의 발생에 있어서의 폐포 파괴, 섬유증 및 평활근의 확장과 함께 작은 기도 재형성을 특징으로 하며 궁극적으로 기류의 제한을 초래한다 ([De, Decramer, et al. Lancet, 2012], [Pain et al. Eur. Respir. Rev. 2014] 및 [Chung, Proc. Am. Thorac. Soc. 2005]). 두 질환에서, 재형성 유발(pro-remodelling) 메커니즘, 예컨대 섬유모세포-중간엽 전이 (Araya, et al. J. Clin. Invest. 2007), 세포외 기질 침착 (Baarsma, et al. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. PHysiol. 2011) 및 염증 (Chakir et al. J. All. Clin.Immunol. 2003)에 결부된 하향-조절된 BMP 신호전달 (Kariyawasam, et al. Am. J Resp. Crit. Care Med. 2008) 및 상승된 TGF β ([Mak. Et al. Respir. Med. 2009] 및 [Chakir et al. J. All. Clin. Immunol. 2003])의 증거가 있다. Smurf1 억제제는 중대한 재형성 유발 세포, 예컨대 평활근 및 섬유모세포에서 TGF β 신호전달을 정상화하고 재형성의 진행을 차단하여 COPD 또는 천식 환자에 치료 이익을 초래할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물 (또는 그의 제약상 허용되는 염)은 COPD 및/또는 천식의 치료에서 유용할 것이다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 요법에서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 요법은 Smurf-1의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 상기 언급된 목록, 적합하게는, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택된 질환의 치료에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 요법에서 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 추가 실시양태에서, 요법은 Smurf-1의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 상기 언급된 목록, 적합하게는, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 치료상 허용되는 양을 투여하는 것을 포함하는, Smurf-1의 억제에 의해 치료되는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 추가 실시양태에서, 질환은 상기 언급된 목록, 적합하게는, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 치료상 허용되는 양을 투여하는 것을 포함하는, Smurf-1의 억제를 통해 질환을 치료하는 방법으로서, 여기서 질환이 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택되는 것인 방법을 제공한다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 의약 은 Smurf-1의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환의 치료를 위한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 상기 언급된 목록, 적합하게는, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 의약은 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택되는 질환의 치료를 위한 것이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)의 치료에서 사용하기 위한 [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식의 치료에서 사용하기 위한 [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유; 보다 적합하게는 폐동맥 고혈압 (PAH)의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 공-결정이 제공된다.
본 발명의 추가 실시양태에서, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식의 치료에서 사용하기 위한 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 약 50-70 kg의 대상체에 대해 약 1-1000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 1-500 mg 또는 약 1-250 mg 또는 약 1-150 mg 또는 약 0.5-100 mg 또는 약 1-50 mg의 활성 성분의 단위 투여량으로 존재할 수 있다. 화합물, 그의 제약 조성물 또는 조합물의 치료 유효 투여량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별 상태, 치료할 장애 또는 질환 또는 그의 중증도에 따라 달라진다. 통상의 기술을 가진 의사, 임상의 또는 수의사는 장애 또는 질환의 진행을 예방, 치료 또는 억제하는데 필요한 각각의 활성 성분의 유효량을 용이하게 결정할 수 있다.
상기 인용된 투여량 특성은 유리하게는 포유동물, 예를 들어 마우스, 래트, 개, 원숭이, 또는 단리된 기관, 조직 및 그의 제제를 사용하는 시험관내 및 생체내 시험에서 입증가능하다. 본 발명의 화합물은 용액, 예를 들어 수용액의 형태로 시험관내 적용될 수 있고, 경장으로, 비경구로, 유리하게는 정맥내로, 예를 들어 현탁액으로서 또는 수용액으로 생체내 적용될 수 있다. 시험관내 투여량은 약 10-3 몰 내지 10-9 몰 농도의 범위일 수 있다. 생체내 치료 유효량은 투여 경로에 따라 약 0.1-500 mg/kg 또는 약 1-100 mg/kg의 범위일 수 있다.
본 발명에 따른 화합물의 활성은 하기 시험관내 및 생체내 방법에 의해 평가될 수 있다.
제약 검정
본 발명의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염 (이하에, "본 발명의 작용제"로 대안적으로 지칭됨)은 약제로서 유용하다. 특히, 화합물은 선택적 Smurf-1 억제제이고, 하기 검정에서 시험될 수 있다.
화합물의 HECT E3 리가제 선택성을 결정하기 위해, 생화학적 HECT E3 리가제 자가유비퀴티닐화(autoubiquitinylation) 검정의 패널을 사용하였다 (Smurf-1, Smurf-2, WWP1, WWP2, ITCH, Nedd4, Nedd4L 및 E6AP). 유비퀴틴의 단백질 기질로의 접합은 다단계 과정이다. 초기 ATP-필요 단계에서, 유비퀴틴-활성화 효소 (E1)의 내부 시스테인 잔기와 유비퀴틴의 카르복실 말단 사이에 티오에스테르 결합이 형성된다. 그 다음에 활성화 유비퀴틴이 유비퀴틴-접합 효소 (E2)의 특이적 시스테인 잔기에 옮겨진다. E2는 유비퀴틴을 HECT E3 리가제 (E3)에 공여하고 그로부터 이는 기질 단백질에 옮겨진다. HECT E3 리가제는 자가-유비퀴티닐화될 수 있다. 이 사건은 이 패널에서 사용된 TR-FRET (시-분해 형광 공명 에너지 전달(Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer)) 검정으로 검출된다. 반응 믹스는 E1, E2, 태그부착된-E3, 비오틴-접합 유비퀴틴, 화합물 및 ATP를 적합한 완충제 중에 함유하고 45분 동안 인큐베이션되어 E3 리가제의 자가-유비퀴티닐화를 가능하게 한다. TR-FRET에 의한 유비퀴티닐화 E3 리가제의 정도를 측정하기 위해, 비오티닐화된(biotinylated) 유비퀴틴에 후속적으로 결합하는 스트렙타비딘에 접합된 공여자 형광단 유로퓸 크립테이트 (Eu3+ 크립테이트), 및 각각의 E3 리가제 융합 단백질을 인식하는, 태그-특이적 항체 (HA, His 또는 GST)에 커플링된 변형된 알로피코시아닌 XL665 (HTRF® 1차 수용체 형광단)를, 반응이 완료된 후에 첨가한다. 이들 2개의 형광단이 생체분자 상호작용에 의해 합쳐지는 경우 (이 경우에 E3 리가제의 유비퀴티닐화), 여기 동안에 크립테이트에 의해 포획된 에너지의 일부는 620 nm에서의 형광 방출을 통해 방출되며, 한편 나머지 에너지는 XL665로 전달된다. 그 다음에 이 에너지는 XL665에 의해 665 nm에서 특정 형광으로서 방출된다. 665 nm에서의 빛은 유로퓸으로 FRET를 통해서만 방출된다. 유로퓸 크립테이트가 검정에 존재하기 때문에, 생체분자 상호작용으로 인해 XL665를 아주 근접하게 가져가지 않아도 620 nm에서의 빛이 검출된다.
세포에서 Smurf-1의 자가유비퀴티닐화는 Smurf-1의 프로테아좀 분해를 야기한다. 따라서, Smurf-1 촉매 영역의 억제는 Smurf-1 자가유비퀴티닐화 및 분해를 파괴하고, 이는 세포에서 억제된 Smurf-1 단백질의 축적을 야기한다.
Smurf-1 HECT 영역에서의 화합물의 세포 활성은 디스커버엑스 패스헌터 프로라벨 검출 키트(DiscoverX PathHunter ProLabel Detection Kit)를 사용하여, 테트라시클린-유도가능한 프로모터의 제어 하에 프로라벨(Prolabel)-태그부착된 Smurf-1을 안정하게 발현하는 HEK293 세포에서 Smurf-1 단백질의 축적을 측정함으로써 평가된다. 이 기술은 세포 용해물의 효소 상보성 검정에서 프로라벨-태그부착된 Smurf-1의 양을 측정한다. 이 접근법에서, 프로라벨이라 칭해지는 베타-갈락토시다제의 작은 4 kDa 상보작용하는 단편은 인간 Smurf-1과 N-말단 융합으로서 표기된다. 이 태그는 효소 공여자 (ED)이며 기능적 베타-갈락토시다제 효소를 형성시키기 위해, 효소 수용체에 대해 EA라고 칭해지는 베타-갈락토시다제의 더 많은 부분의 상보화 후에 표적 단백질 수준의 검출을 가능하게 한다. EA는 외인성으로 세포 용해물에 첨가된다. 효소 활성은 화학발광 기질을 사용하여 측정되며 재구성된 효소의 양 및 이런 이유로 Smurf-1 수준에 비례한다.
시험 및 참조 화합물은 90% DMSO에서 180x [최종]로 제조하고, 90% DMSO에서 1:3으로 희석하였다.
생화학 검정 패널의 경우, 50 nl의 시험 화합물, 참조 화합물 및 완충제/DMSO 대조군을 384-웰 백색 그라이너(GREINER) "스몰 볼륨(SMALL VOLUME)" PS 플레이트의 각각의 웰에 옮겼다. 검정 패널은 비오멕(Biomek) FX 액체 취급 워크스테이션에서 실온에서 시행되었다. 90% DMSO 중 50 nl 화합물 또는 대조군 용액을 함유하는 검정 플레이트에, 4.5 ul의 E3 리가제 용액을 웰 당 첨가한 후에, 4.5 ul의 미리 배양된 E1/E2/Ub 믹스 또는 미리 희석된 유비퀴틴 (LOW 대조군)을 첨가하였다. 각각의 첨가 후에 플레이트를 격렬하게 진탕하였다. 이 검정에서 화합물 농도는 8점 용량-반응 곡선에서 3 nM 내지 10 uM 범위이었다.
배양의 45분 후에, 유비퀴티닐화 반응을 4.5 ul 2 mM NEM을 첨가한 직후에, XL665-표지된 항체 및 스트렙타비딘-커플링된 유로퓸을 포함하는 4.5 ul의 검출 용액을 첨가하여 중단시켜 18 ul의 총 부피를 얻었다. 어둠 속에서 45분의 인큐베이션 시간 후에, 플레이트를 TR-FRET 신호를 측정하기 위해 페라스타(Pherastar) 형광 판독기에 옮겼다.
세포 검정을 위해 그 다음에 250 nl의 시험 화합물, 참조 화합물 및 완충제/DMSO 대조군을 멸균 120 ul 384-웰 백색 그라이너 PS, 셀스타(CELLSTAR), 유클리어(uClear) 조직 배양 플레이트에 옮겼다. 세포를 첨가하기 전에 배지에 화합물 용액을 고르게 분포시키기 위해서, 10 ul의 세포 배양 배지를 멀티드롭(MULTIDROP) 384 디스펜서를 사용하여 화합물 함유 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고 격렬하게 진탕시켰다. 세포를 트립신-EDTA와의 짧은 인큐베이션 후에 플라스크로부터 분리하고, 배양 배지에서 1.5x106개 세포/ml의 농도로 희석하였다. Smurf-1의 발현은 독시사이클린을 0.2 ug/ml의 최종 농도로 첨가함으로써 유도되었다. 10 ul의 세포 현탁액을 멀티드롭 384 디스펜서를 사용하여 화합물-함유 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 이 검정에서 화합물 농도는 8-점 용량-반응 곡선에서 6.75 nM 내지 22.5 uM 범위이었다.
화합물로 밤새 인큐베이션한 후에 Smurf-1의 수준을 디스커버엑스로부터의 패스헌터 프로라벨 검출 키트를 사용하여 측정하였다. 맨 먼저 10 ul의 용해/CL 검출 작업(working) 용액을 다-채널 단계-피펫터를 사용하여 수동으로 첨가한 후에, 5 ul 효소 수용체 EA를 첨가하였다. 플레이트는 플레이트 진탕기 상에서 혼합하고 실온에서 2-3시간 동안 인큐베이션한 후에 페라스타 플레이트 판독기에서 화학발광 신호를 측정하였다.
이하에 본원에, 실시예의 화합물은, 표 A에서 나타낸 바와 같이 상기 기재된 데이터 측정에서 Smurf-1 IC50 값을 갖는다.
<표 A>
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
본 발명의 화합물은 1종 이상의 다른 치료제와 동시에, 또는 그 전에 또는 후에 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 개별적으로, 또는 다른 작용제와 동일한 제약 조성물 내에서 함께 투여될 수 있다. 치료제는, 예를 들어, 화학적 화합물, 펩티드, 항체, 항체 단편 또는 핵산이고, 이는 본 발명의 화합물과 조합하여 환자에게 투여시 치료 활성을 증진시키거나 치료 활성이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 요법에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합된 제제로서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 1종 이상의 다른 치료제를 포함하는 생성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 요법은 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태의 치료이다. 조합 제제로서 제공되는 생성물은 동일한 제약 조성물에 화학식 I의 화합물 및 다른 치료제(들)를 함께 포함하는 조성물, 또는 개별 형태로, 예를 들어 키트 형태로 화학식 I의 화합물 및 다른 치료제(들)를 포함하는 조성물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 또 다른 치료제(들)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 임의로, 제약 조성물은 상기 기재된 바와 같은 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 2종 이상의 개별 제약 조성물을 포함하고, 그 중 적어도 1종이 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 함유하는 것인 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 키트는 상기 조성물을 개별적으로 보유하기 위한 수단, 예컨대 용기, 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다. 이러한 키트의 예는 정제, 캡슐 등의 포장에 전형적으로 사용되는 바와 같은 블리스터 팩이다.
본 발명의 키트는 상이한 투여 형태, 예를 들어 경구 및 비경구로 투여하기 위해, 개별 조성물을 상이한 투여 간격으로 투여하기 위해, 또는 개별 조성물을 서로에 대해 적정하기 위해 사용될 수 있다. 순응도를 보조하기 위해, 본 발명의 키트는 전형적으로 투여 지침서를 포함한다.
본 발명의 조합 요법에서, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 동일하거나 상이한 제조업체에 의해 제조되고/거나 제제화될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 (i) 의사에게 조합 제품으로 배포되기 전에 (예를 들어, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우에); (ii) 투여 직전에 의사 자신에 의해 (또는 의사 지시 하에서); (iii) 예를 들어 본 발명의 화합물 및 다른 치료제의 순차적 투여 동안에 환자 자신에서, 조합 요법으로 합해질 수 있다.
따라서, 본 발명은 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도로서, 여기서 의약은 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조되는 것인 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도로서, 여기서 의약은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 함께 투여되는 것인 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로서, 여기서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조되는 것인 상기 화합물 또는 염을 제공한다. 본 발명은 또한 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 또 다른 치료제로서, 여기서 다른 치료제는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 함께 투여하기 위해 제조되는 것인 또 다른 치료제를 제공한다. 본 발명은 또한 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물로서, 여기서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 또 다른 치료제와 함께 투여되는 것인 상기 화합물을 제공한다. 본 발명은 또한 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 또 다른 치료제로서, 여기서 다른 치료제는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 함께 투여되는 것인 또 다른 치료제를 제공한다.
본 발명은 또한 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도로서, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어 24시간 내에) 또 다른 치료제로 치료된 바 있는 것인 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 Smurf-1에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도로서, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어 24시간 내에) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 치료된 바 있는 것인 용도를 제공한다.
하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로 의도되고, 이에 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다. 온도는 섭씨 온도로 주어진다. 달리 언급되지 않는다면, 모든 증발을 감압 하에, 전형적으로는 약 15 mm Hg 내지 100 mm Hg (= 20 내지 133 mbar) 사이에서 수행한다. 최종 생성물, 중간체 및 출발 물질의 구조는 표준 분석 방법, 예를 들어 미량분석 및 분광학적 특성, 예를 들어 MS, IR, NMR에 의해 확인한다. 사용된 약어는 관련 기술 분야에 통상적인 것들이다.
본 발명의 화합물을 합성하는데 사용되는 모든 출발 물질, 빌딩 블록, 시약, 산, 염기, 탈수제, 용매, 및 촉매는 상업적으로 입수가능하거나, 관련 기술분야에서 통상의 기술자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물은 하기 실시예에 제시된 바와 같이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 제조될 수 있다.
일반적 조건:
질량 스펙트럼은 하기 구성의 다양한 기기로부터 전기분무, 화학 및 전자 충격 이온화 방법을 사용하여 LC-MS, SFC-MS 또는 GC-MS 시스템 상에서 획득하였다: 애질런트(Agilent) 6110 질량 분광계가 구비된 애질런트 1100 HPLC 시스템 ([M+H]+는 화학종의 양성자화 분자 이온을 지칭한다).
NMR 스펙트럼은 탑스핀(TopSpin) 프로그램 제어 하에, 아이콘(ICON)-NMR을 사용하여 브루커 아반스(Bruker AVANCE) 400MHz 또는 500MHz NMR 분광계 상에서 실행하였다. 스펙트럼은 달리 명시되지 않는 한 298K에서 측정하였고, 용매 공명에 관하여 참조되었다.
기기 장치
MS 방법: 애질런트 6110 질량 분광계가 구비된 애질런트 1100 HPLC 시스템 사용
LowpH _v002
칼럼 페노메넥스 제미니(Phenomenex Gemini) C18 50x4.6 mm, 3.0 ㎛
칼럼 온도 50℃
용리액 A: H2O, B: 메탄올, 둘 다 0.1% TFA 함유
유량 1.0 ml/분
구배 2.0분내 5%에서 95% B, 0.2분 95% B
2minLC _v003
칼럼 워터스 BEH C18 50x2.1 mm, 1.7 ㎛
칼럼 온도 50℃
용리액 A: H2O, B: 아세토니트릴, 둘 다 0.1% TFA 함유
유량 0.8 ml/분
구배 0.20분 5% B; 1.30분내 5%에서 95% B, 0.25분 95% B
8minLowpHv01 :
칼럼: 워터스 액쿼티 CSH 1.7 ㎛, 2.1 x 100 mm
온도: 50℃
이동상: A: 물 +0.1% 포름산 B: 아세토니트릴 +0.1% 포름산
유량: 0.7 mL/분
구배: 0.0분 2% B, 0.3-6.5분 2-98% B, 6.5-7.5분 98% B, 7.5-8.0분 5-98% B
2minLowpH :
칼럼: 워터스 액쿼티(Waters Acquity) CSH 1.7 ㎛, 2.1 x 50 mm
온도: 50℃
이동상: A: 물 +0.1% 포름산 B: 아세토니트릴 +0.1% 포름산
유량: 1.0 mL/분
구배: 0.0분 5% B, 0.2-1.3분 5-98% B, 1.3-1.55분 98% B, 1.55-1.6분 98-5% B
2minLowpHv01 :
칼럼: 워터스 액쿼티 CSH 1.7 ㎛, 2.1 x 50 mm
온도: 50℃
이동상: A: 물 +0.1% 포름산 B: 아세토니트릴 +0.1% 포름산
유량: 1.0 mL/분
구배: 0.0분 5% B, 0.2-1.55분 5-98% B, 1.55-1.75분 98% B, 1.75-1.8분 98-5% B
2minLowpHv03 :
칼럼: 워터스 액쿼티 CSH 1.7 ㎛, 2.1 x 50 mm
온도: 50℃
이동상: A: 물 +0.1% 포름산 B: 아세토니트릴 +0.1% 포름산
유량: 1.0 mL/분
구배: 0.0분 5% B, 0.2-1.8분 5-98% B, 1.8-2.1분 98% B, 2.1-2.3분 98% B
2minHighpHv03 :
칼럼: 워터스 액쿼티 CSH 1.7 ㎛, 2.1 x 50 mm
온도: 50℃
이동상: A: 물 +0.1% 암모니아 B: 아세토니트릴 +0.1% 암모니아
유량: 1.0 mL/분
구배: 0.0분 5% B, 0.2-1.8분 5-98% B, 1.8-2.1분 98% B, 2.1-2.3분 98-5% B
10minLowpHv01 :
칼럼: 워터스 액쿼티 CSH 1.7 ㎛, 2.1 x 100 mm
온도: 50℃
이동상: A: 물 +0.1% 포름산 B: 아세토니트릴 +0.1% 포름산
유량: 0.7 mL/분
구배: 0.0분 2% B, 0.5-8.0분 2-98% B, 8.0-9.0분 98% B, 9.0-9.1분 98-2% B
LCMS (SRPb)
칼럼: 액쿼티 HSS T3 2.1 x 50 mm, 1.8 마이크로미터
칼럼 온도: 60℃
용리액: A: H2O (0.05% 포름산, 3.75 mM 아세트산암모늄) B: 아세토니트릴 (0.05% 포름산)
유량: 1.0 ml/분
구배 1.4분내 5%에서 98%
약어:
aq 수성
br 넓은
d 이중선
dd 이중선의 이중선
DBU 1,8-디아자비시클로운데크-7-엔
DCM 디클로로메탄
DIBAL-H 디이소부틸알루미늄 히드리드
DIPEA 디에틸이소프로필아민
DME 디메톡시에탄
DMF N,N-디메틸포름아미드
DMSO 디메틸술폭시드
℃ 섭씨 온도
EDCI 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드
Et2O 디에틸에테르
EtOAc 에틸 아세테이트
EtOH 에탄올
Et3N 트리에틸아민
HATU (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트
HCl 염산
hr (s) 시간(들)
H2SO4 황산
K2CO3 탄산칼륨
KHMDS 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드
KOAc 아세트산칼륨
LCMS 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법
LDA 리튬 디이소프로필아미드
M 몰의
MgSO4 황산마그네슘
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
MS 질량 분석법
Mult(s) 다중선(들)
mg 밀리그램
min 분
ml 밀리리터
mmol 밀리몰
m/z 질량 대 전하 비
NaBH4 수소화붕소나트륨
NaH 수소화나트륨
NaHCO3 탄산수소나트륨
NaOH 수산화나트륨
Na2SO4 황산나트륨
n-BuLi 부틸리튬
NH4Cl 염화암모늄
NMP N-메틸피롤리돈
NMR 핵 자기 공명
PdCl2(PPh3)2 팔라듐(비스 트리페닐포스핀) 디클로라이드
PdCl2(dppf) 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드
PdCl2(dppf)-CH2Cl2 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 착물
Pd(Ph3P)4 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)
ppm 백만분율
pTsOH p-톨루엔술폰산
q 사중선
rac 라세미
Rt 체류 시간
s 단일선
t 삼중선
TBAI 테트라부틸암모늄 아이오다이드
TBAF 테트라부틸암모늄 플루오라이드
TBME 메틸 tert-부틸 에테르
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
TMSCl 트리메틸실릴 클로라이드
TMSOTf 트리메틸실릴 트리플레이트
UV 자외선
최종 화합물의 제조
실시예 1:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(4- 이소프로필시클로헥스 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00013
단계 1: [4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄술포네이트]
-70℃로 냉각된 질소 하에 무수 THF (3 mL) 중 4-이소프로필시클로헥사논 (1 g, 7.13 mmol)의 용액을 2M LDA (THF/헵탄/에틸벤젠 중) (4.28 mL, 8.56 mmol)로 적하 방식으로 처리하였다. 첨가를 완료한 후에 혼합물을 1.5시간 동안 -70℃에서 교반하였다. 혼합물에 무수 THF (2 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-N-(피리딘-2-일)-N-((트리플루오로메틸)술포닐)메탄술폰아미드 (2.81 g, 7.84 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 -70℃에서 유지시키고, 3시간 동안 교반하고 물로 조심스럽게 켄칭하고 밤새 방치하였다. 생성된 혼합물을 디에틸 에테르로 추출하고 합해진 유기 추출물을 10% NaOH (수성)로 세척하고 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 100% 이소-헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.76 (1H, t), 2.45-2.30 (2H, 다중선), 2.22 (1H, br d), 1.99-1.90 (2H, 다중선), 1.61-1.52 (1H, 다중선), 1.48-1.36 (2H, 다중선), 0.93 (6H, dd).
단계 2: [2-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란]
디옥산 (30 mL) 중 [4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄술포네이트] (1.75 g, 6.43 mmol)의 교반 용액을 비스피나콜라토디보론 (1.714 g, 6.75 mmol), 아세트산칼륨 (1.892 g, 19.28 mmol) 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (0.157 g, 0.193 mmol)로 처리하고 혼합물을 6시간 동안 80℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 3: [에틸 5-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트]
2-5 mL 마이크로웨이브 바이알에 [2-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란] (282 mg, 1.127 mmol), 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (264 mg, 1.127 mmol), PdCl2(dppf) (82 mg, 0.113 mmol), 탄산칼륨 (467 mg, 3.38 mmol), MeCN (2 mL) 및 물 (0.667 mL)을 첨가하였다. 바이알을 질소로 진공 배기하고, 밀봉하고 1시간 동안 80℃에서 마이크로웨이브에 배치하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하고 층을 분리하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 갈색의 조(crude) 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-10% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.73분; MS m/z [M+H]+ 278.5; 방법 2minLowpHv03
단계 4: [5-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산]
THF (5 mL) 및 MeOH (3 mL) 중 [에틸 5-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트] (92 mg, 0.332 mmol)의 용액에 2M 수산화나트륨 (수성) (0.166 mL, 0.332 mmol)을 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하고 물로 희석하였다. 수성 층을 EtOAc로 세척하고, 2M HCl (수성)로 산성화하고 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.70분; MS m/z [M+H]+ 250.2; 방법 2minLowpHv03
단계 5: [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
질소 하에 무수 DCM (3 mL) 중 [5-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산] (42 mg, 0.168 mmol)의 용액에 DMF (0.026 mL, 0.337 mmol)에 이어서 옥살릴 클로라이드 (0.016 mL, 0.185 mmol)를 첨가하고 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (38.8 mg, 0.185 mmol)에 이어서 트리에틸아민 (0.070 mL, 0.505 mmol)을 첨가하고 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 물을 첨가하고 혼합물을 격렬하게 교반한 후에 상 분리 카트리지에 통과시켰다. 유기 용리액을 수집하고 감압 하에 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 조 물질을 DMSO (0.9 mL)에 용해시키고 물 (0.1% 포름산) 중 50-98% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 질량-기반(mass-directed) 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축하였다. 잔류 수성물을 탄산수소나트륨의 포화 수용액으로 처리하고 DCM으로 추출하고, 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시켰다. 용매를 공기의 스트림 하에 제거하고 감압 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 4.98분; MS m/z [M+H]+ 441.4; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (1H, br s), 6.33 (1H, s), 4.06 (1H, tt), 3.26 (3H, s), 2.62 (1H, br d), 2.48-2.35 (2H, 다중선), 2.31 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.05-1.86 (8H, 다중선), 1.71 (1H, br d), 1.60-1.52 (1H, 다중선), 1.43-1.17 (5H, 다중선), 0.96 (3H, d), 0.94 (3H, d).
4-이소프로필시클로헥사논 (단계 1)을 적절한 케톤 유도체 (시판되거나 이하에 기재된 제법)로 대체함으로써 실시예 1의 방법과 유사한 방법에 의해 실시예 1.1 내지 1.2를 제조하였다.
실시예 1.1:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(6-에틸-4-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 부분입체이성 질체 혼합물
Figure pct00014
LC-MS: Rt = 4.90분; MS m/z [M+H]+ 441.1; 방법 8minLowpHv01
실시예 1.2:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(6,6- 디메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00015
LC-MS: Rt = 4.60분; MS m/z [M+H]+ 427.7; 방법 8minLowpHv01
2-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (단계 3)을 적절한 보론산 또는 디옥사보롤란 유도체 (시판되거나 이하에 기재된 제법)로 대체함으로써 실시예 1의 방법과 유사한 방법에 의해 실시예 1.3 내지 1.7을 제조하였다.
실시예 1.3:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(4- 에틸시클로헥스 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00016
LC-MS: Rt = 4.77분; MS m/z [M+H]+ 427.6; 방법 8minLowpHv01
실시예 1.4:
[5-(4-( tert -부틸) 시클로헥스 -1-엔-1-일)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00017
LC-MS: Rt = 5.16분; MS m/z [M+H]+ 455.4; 방법 8minLowpHv01
실시예 1.5:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4- 메틸 -5-(4- 메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00018
LC-MS: Rt = 4.47분; MS m/z [M+H]+ 414.5; 방법 8minLowpHv01
실시예 1.6:
5-( 시클로헵트 -1-엔-1-일)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00019
LC-MS: Rt = 4.42분; MS m/z [M+H]+ 413.6; 방법 8minLowpHv01
실시예 1.7:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4- 메틸 -5-(4-(트리플루오로메틸)시클로헥스-1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00020
LC-MS: Rt = 1.36분; MS m/z [M+H]+ 467.4; 방법 2minLowpHv03
실시예 2:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4- 메틸 -5-( 스피로[4.5]데크 -7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00021
단계 1: 스피로[4.5]데크-6-엔-8-온
무수 톨루엔 (10 mL) 중 시클로펜탄카르브알데히드 (알드리치(Aldrich)) (0.82 g, 8.36 mmol)의 용액에, 메틸 비닐 케톤 (알파 에사르(Alfa Aesar)) (0.684 mL, 8.36 mmol)에 이어서 촉매량의 진한 H2SO4 (0.045 mL, 0.836 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 1.5시간 동안 45℃에서 가열한 다음에, 딘-스타크(Dean-Stark) 트랩을 사용하여 1시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 추가로 메틸 비닐 케톤 (알파 에사르) (0.684 mL, 8.36 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류 하에 가열하고, 실온으로 냉각하고 1M NaHCO3 (30 mL) 수용액으로 처리하였다. 수성물을 톨루엔으로 추출하고 합해진 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-20% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.74 (1H, d), 5.86 (1H, d), 2.45 (2H, t), 1.92 (2H, t), 1.80-1.71 (4H, br 다중선), 1.71-1.61 (4H, br 다중선).
단계 2: 스피로[4.5]데칸-8-온
에탄올 (15 mL) 중 스피로[4.5]데크-6-엔-8-온 (442 mg, 2.94 mmol)의 용액을 질소로 플러싱하고 10% Pd-C, 50% 습윤 (알파 에사르, 38303) (313 mg, 2.94 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 수소의 분위기 하에 16시간 동안 교반하고 에탄올로 세정하면서 셀라이트 (Celite)®를 통해 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.31-2.25 (4H, t), 1.72-1.66 (4H, t), 1.65-1.60 (4H, br 다중선), 1.53-1.47 (4H, br 다중선).
단계 3: 스피로[4.5]데크-7-엔-8-일 트리플루오로메탄술포네이트
헥산 (1.900 mL, 3.04 mmol) 중 1.6M n-BuLi을 -78℃에서 질소 하에 무수 THF (20 mL) 중 디이소프로필아민 (0.454 mL, 3.19 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 용액을 20분 동안 0℃로 가온한 후에 -78℃로 재냉각하였다. 무수 THF (5 mL) 중 스피로[4.5]데칸-8-온 (0.440 g, 2.89 mmol)의 용액을 5분에 걸쳐 첨가하고 용액을 50분 동안 -78℃에서 교반한 후에 무수 THF (5 mL) 중 2-[N,N-비스(트리플루오로메틸술포닐)아미노]피리딘 (알파 에사르) (1.141 g, 3.19 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 교반하고 밤새 실온으로 가온하였다. 생성된 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (4 mL)로 켄칭하였다. 수성 부분을 TBME (x2)로 추출하고 합해진 유기 추출물을 10% 수성 NaOH, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 4: 4,4,5,5-테트라메틸-2-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)-1,3,2-디옥사보롤란
무수 1,4-디옥산 (15 mL) 중 스피로[4.5]데크-7-엔-8-일 트리플루오로메탄술포네이트 (635 mg, 2.234 mmol)의 교반 용액에, 비스(피나콜라토)디보론 (알파 에사르) (567 mg, 2.234 mmol)에 이어서 아세트산칼륨 (아크로스(Acros)) (438 mg, 4.47 mmoL) 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (알파 에사르) (54.7 mg, 0.067 mmoL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 플러싱하고 16시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 TBME로 세정하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 잔류물을 EtOAc (50 mL) 및 물 (50 mL)에 분배하였다. 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 5: 에틸 4-메틸-5-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트
MeCN (2 mL) 중 4,4,5,5-테트라메틸-2-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (168 mg, 0.641 mmol)의 용액을 함유하는 2-5 mL 마이크로웨이브 바이알에, 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (150 mg, 0.641 mmol)에 이어서 K2CO3 (266 mg, 1.923 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (알파 에사르) (52.3 mg, 0.064 mmol) 및 물 (1 mL)을 첨가하였다. 바이알을 질소로 플러싱하고, 밀봉하고 1시간 동안 90℃에서 마이크로웨이브 (비오티지 스미쓰 이니시에이터(Biotage Smith Initiator))에서 처리하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)과 EtOAc (20 mL)에 분배하고 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.75분; MS m/z [M+H]+ 290.4; 방법 2minLowpHv03
단계 6: 4-메틸-5-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실산
에탄올 (10 mL) 중 에틸 4-메틸-5-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트 (180 mg, 0.622 mmol)의 교반 용액에, 2M NaOH (수성) (0.311 mL, 0.622 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 2M HCl (수성)을 첨가하여 pH 5-6으로 산성화하였다. 수성물을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고 합해진 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.61분; MS m/z [M+H]+ 262.3; 방법 2minLowpHv03
단계 7: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드
무수 NMP (3 ml) 중 4-메틸-5-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실산 (95 mg, 0.364 mmol)의 교반 용액에, HATU (152 mg, 0.400 mmol)에 이어서 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (84 mg, 0.400 mmol) 및 트리에틸아민 (0.111 mL, 0.800 mmol)을 첨가하고 이를 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)와 1M NaOH (수성) (30 mL)에 분배하고 유기 상을 물 (30 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 물 (0.1% 포름산) 중 50 - 98% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 UV-기반(directed) 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (50 mL)에 첨가하고 포화 NaHCO3 수용액 (50 mL)으로 세척하였다. 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.59분; MS m/z [M+H]+ 453.7; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (1H, br s), 6.19 (1H, 다중선), 4.00 (1H, tt), 3.25 (3H, s), 2.46-2.40 (2H, br 다중선), 2.23 (3H, s), 2.14 (3H, s), 2.10-2.05 (2H, 다중선), 1.99-1.88 (2H, 다중선), 1.84-1.74 (4H, br 다중선), 1.66-1.53 (7H, br 다중선), 1.41-1.35 (4H, br 다중선), 1.34-1.23 (2H, br 다중선), 1.21-1.10 (1H, br 다중선).
실시예 2.1:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4- 메틸 -5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00022
스피로[4.5]데칸-8-온 (단계 3)을 [1-옥사스피로[4.5]데칸-8-온] (플루오로켐(Fluorochem))으로 대체함으로써 실시예 2의 방법과 유사한 방법에 의해 표제 화합물을 제조하였다;
LC-MS: Rt = 1.10분; MS m/z [M+H]+ 455.5; 방법 2minLowpHv01
실시예 2.2:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(4,4- 디메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00023
4,4,5,5-테트라메틸-2-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (단계 5)을 4,4-디메틸시클로헥센-1-일 보론산, 피나콜 에스테르 (콤비 블록스(Combi Blocks))로 대체함으로써 실시예 2의 방법과 유사한 방법에 의해 표제 화합물을 제조하였다;
LC-MS: Rt = 5.52분; MS m/z 427.6 [M+H]+; 방법 10minLowpHv01
실시예 3:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(4,4- 디메틸시클로펜트 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00024
단계 1: 4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄술포네이트
-78℃에서 질소 하에 무수 THF (25 mL) 중 4,4-디메틸시클로펜트-2-에논 (아틀란틱(Atlantic)) (0.500 g, 4.54 mmol)의 교반 용액에, THF (4.539 mL, 4.54 mmol) 중 1M L-셀렉트리드(Selectride)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 -78℃에서 교반하고 무수 THF (5 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-N-(피리딘-2-일)-N-((트리플루오로메틸)술포닐)메탄술폰아미드 (알파 에사르) (1.626 g, 4.54 mmol)의 용액으로 처리하였다. 혼합물을 교반하고 밤새 실온으로 가온하였다. 생성된 혼합물을 헥산 (60 mL)과 물 (50 mL)에 분배하고, 상을 분리하고 수성 상을 헥산 (50 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 10% 수성 NaOH (40 mL), 염수 (40 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 담황색 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 100% 이소-헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.54 (1H, 다중선), 2.42-2.39 (2H, 다중선), 2.23-2.20 (2H, 다중선), 1.17 (3H, s), 1.17 (3H, s).
단계 2: 2-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란
무수 1,4-디옥산 (10 mL) 중 4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일 트리플루오로메탄술포네이트 (367 mg, 1.503 mmol)의 교반 용액에 비스(피나콜라토)디보론 (알파 에사르) (382 mg, 1.503 mmol)에 이어서 아세트산칼륨 (아크로스) (295 mg, 3.01 mmol) 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (알파 에사르) (36.8 mg, 0.045 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고 TBME (100 mL)로 세척하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 유기 여액을 물 (50 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 100% 이소-헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.34-6.31 (1H, 다중선), 2.21-2.18 (2H, 다중선), 2.17-2.14 (2H, 다중선), 1.20 (12H, s) 0.99 (6H, s).
단계 3: 에틸 5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
아세토니트릴 (2 mL) 중 2-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (214 mg, 0.966 mmol)의 용액을 함유하는 2-5 mL 마이크로웨이브 바이알에, 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (226 mg, 0.966 mmol)에 이어서 K2CO3 (400 mg, 2.90 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (알파 에사르) (79 mg, 0.097 mmol) 및 물 (1 mL)을 첨가하였다. 바이알을 질소로 플러싱하고, 밀봉하고 1시간 동안 90℃에서 마이크로웨이브 (비오티지 스미쓰 이니시에이터)에서 가열하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 세척하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 여액을 물 (50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 100% 이소-헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.64분; MS m/z [M+H]+ 250.9/251.5; 방법 2minLowpHv03
단계 4: 5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산
에탄올 (5 mL) 중 에틸 5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (243 mg, 0.975 mmol)의 교반 용액에, 2M NaOH (수성) (0.975 mL, 1.949 mmol)를 첨가하고 용액을 실온에서 교반하였다. 완료 직후 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 2M HCl (수성)을 첨가하여 pH 5-6으로 산성화하였다. 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고 합해진 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.46분; MS m/z [M+H]+ 222.5; 방법 2minLowpHv03.
단계 5: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
무수 NMP (3 mL) 중 5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (105 mg, 0.475 mmol)의 교반 용액에, HATU (198 mg, 0.522 mmol)에 이어서 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (109 mg, 0.522 mmol) 및 트리에틸아민 (0.146 mL, 1.044 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (20 mL)와 1M NaOH (수성) (20 mL)에 분배하고 유기 상을 물 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-60% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 물 (0.1% 포름산) 중 40-80% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 질량-기반 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (50 mL)에 첨가하고 포화 NaHCO3 수용액 (50 mL)으로 세척하였다. 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.40분; MS m/z [M+H]+ 413.1/414.6; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (1H, br s), 6.27 (1H, br t), 4.06 (1H, tt), 3.27 (3H, s), 2.66 (2H, 다중선), 2.40 (2H, 다중선), 2.34 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.06-1.95 (2H, br 다중선), 1.92-1.83 (4H, br 다중선), 1.75-1.68 (1H, br 다중선), 1.44-1.31 (2H, br 다중선), 1.30-1.23 (1H, br 다중선), 1.19 (6H, s).
실시예 4:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4- 메틸 -5-(2- 옥사스피로[4.5]데크 -7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00025
단계 1: 에틸 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
톨루엔 (60 mL) 중 에틸 4-옥소시클로헥산카르복실레이트 (11.7 g, 68.7 mmol), 에틸렌 글리콜 (5.75 mL, 103 mmol) 및 p-TsOH (0.620 g, 3.26 mmol)의 혼합물을 딘-스타크 트랩을 사용하여 환류 하에 교반하여 4시간에 걸쳐 물을 수집하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고, 포화 NaHCO3 수용액 (30 mL)으로 켄칭하고 EtOAc (100 mL)로 희석하였다. 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 황색 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.14 (2H, q), 3.96 (4H, s), 2.38-2.31 (1H, br 다중선), 1.99-1.91 (2H, br 다중선), 1.87-1.76 (4H, br 다중선), 1.61-1.53 (2H, br 다중선), 1.26 (3H, t).
단계 2: 에틸 8-(2-(벤질옥시)에틸)-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
무수 THF (100 mL) 중 (8-알릴-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)메탄올 (6 g, 28.0 mmol)을 질소 하에 -78℃에서 THF (100 mL) 중 KHMDS (THF 중 1M) (36.4 mL, 36.4 mmol)의 미리 냉각된 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 이 온도에서 교반하고 THF (100 mL) 중 ((2-브로모에톡시)메틸)벤젠 (5.31 mL, 33.6 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액으로 켄칭하고 EtOAc를 첨가하였다. 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-40% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 다시 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-20% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.36-7.31 (2H, 다중선), 7.30-7.26 (3H, 다중선), 4.39 (2H, s), 4.01 (2H, q), 3.84 (4H, s), 3.40 (2H, t), 2.05-1.98 (2H, br 다중선), 1.78 (2H, t), 1.61-1.54 (2H, br 다중선), 1.49-1.41 (4H, br 다중선), 1.12 (3H, t).
단계 3: [1,4,10-트리옥사디스피로[4.2.4.2]테트라데칸-9-온]
에탄올 (5 mL) 중 [에틸 8-(2-(벤질옥시)에틸)-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트] (1.6 g, 4.59 mmol)를 질소로 재충전하면서 철저히 탈기하였다. Pd-C (0.147 g, 1.378 mmol)를 첨가하고 혼합물을 수소의 분위기 하에 교반하였다. 완료 직후 반응 혼합물을 EtOH로 용리시키면서 셀라이트® 카트리지를 통해 여과하였다. 여액을 수집하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.29 (2H, t), 3.97 (4H, 다중선), 2.19 (2H, t), 2.08-1.99 (2H, br 다중선), 1.97-1.89 (2H, br 다중선), 1.71-1.56 (4H, br 다중선).
단계 5: [1,4,10-트리옥사디스피로[4.2.4.2]테트라데칸-9-올]
질소 하에, 톨루엔 (30 mL) 중 1,4,10-트리옥사디스피로[4.2.4.2]테트라데칸-9-온 (880 mg, 4.15 mmol)을, -78℃로 냉각하고 1M DIBAL-H (톨루엔 중 1M) (4.56 mL, 4.56 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 -78℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 10% 아세트산 수용액 (18 mL)/ 얼음 60 g)으로 처리하고 클로로포름 (150 mL)으로 5분 동안 교반하였다. 수성물을 분리하고 클로로포름 (x3)으로 추출하고 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.13 (1H, s), 4.11 (1H, 다중선), 3.97 (4H, 다중선), 3.93 (1H, 다중선), 2.12 (1H, s), 1.95-1.77 (3H, br 다중선), 1.76-1.60 (6H, br 다중선), 1.58-1.49 (1H, br 다중선).
단계 6: [1,4,10-트리옥사디스피로[4.2.4.2]테트라데칸]
-78℃에서, 질소 하에, DCM (40 mL) 중 트리에틸실란 (1.965 mL, 12.30 mmol)의 교반 용액에, -78℃에서 DCM (40 mL) 중 트리플루오로아세트산 (0.948 mL, 12.30 mmol) 및 [1,4,10-트리옥사디스피로[4.2.4.2]테트라데칸-9-올] (0.878 g, 4.1 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃로 서서히 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3 수용액을 첨가하고 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 7: [2-옥사스피로[4.5]데칸-8-온]
실온에서 아세톤 (28 mL) 중 1,4,10-리옥사디스피로[4.2.4.2]테트라데칸 (813 mg, 4.1 mmol)의 교반 용액을 10% HCl 수용액 (12.46 mL, 41.0 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 염수 (40 mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 포화 수성 NaHCO3 (2 x 30 mL) 및 염수 (1 x 30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (2H, t), 3.70 (2H, s), 2.45-2.36 (4H, br 다중선), 1.95-1.89 (6H, 다중선).
단계 8: [2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일 트리플루오로메탄술포네이트]
질소 하에, THF (25 mL) 중 디이소프로필아민 (0.407 mL, 2.85 mmol)의 용액을, -78℃로 냉각하고 n-BuLi (헥산 중 1.0 M) (1.702 mL, 2.72 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 0℃로 가온하고 -78℃로 냉각한 후에 THF (25 mL) 중 2-옥사스피로[4.5]데칸-8-온 (400 mg, 2.59 mmol)을 첨가하였다. -78℃에서 1.5시간 후에 반응 혼합물을 THF (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-N-(피리딘-2-일)-N-((트리플루오로메틸)술포닐)메탄술폰아미드 (1208 mg, 3.37 mmol)로 처리하고 밤새 실온으로 가온하였다. 포화 NaHCO3 수용액을 첨가한 후에 EtOAc로 희석하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-25% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.77 (1H, t), 3.92 (2H, t), 3.56 (2H, 다중선), 2.46-2.29 (2H, br 다중선), 2.25-2.22 (2H, br 다중선), 1.83-1.76 (4H, br 다중선).
단계 9: [4,4,5,5-테트라메틸-2-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)-1,3,2-디옥사보롤란]
디옥산 (5 mL) 중 [2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일 트리플루오로메탄술포네이트] (270 mg, 0.943 mmol) 및 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (251 mg, 0.990 mmol)을 아세트산칼륨 (185 mg, 1.886 mmol)으로 처리하고 혼합물을 질소로 재충전하면서 철저히 탈기하였다. PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (23.11 mg, 0.028 mmol)을 첨가하고 혼합물을 16시간 동안 80℃로 가열하였다. 조 반응 혼합물을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-15% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.54 (1H, 다중선), 3.88 (2H, t), 3.52 (2H, 다중선), 2.24-2.18 (2H, br 다중선), 2.15-2.12 (2H, br 다중선), 1.76-1.68 (2H, br 다중선), 1.62-1.57 (2H, br 다중선), 1.28 (12H, s).
단계 10: [에틸 4-메틸-5-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트]
[4,4,5,5-테트라메틸-2-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)-1,3,2-디옥사보롤란] (0.172 g, 0.651 mmol), 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (0.183 g, 0.781 mmol) 및 Cs2CO3 (0.849 g, 2.60 mmol)을 DME (3 mL) 및 물 (1.250 mL)에서 합하였다. PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (0.016 g, 0.020 mmol)를 첨가하고 혼합물을 질소로 재충전하면서 철저히 탈기하였다. 혼합물을 1시간 동안 90℃에서 마이크로웨이브에서 교반하였다. 2상 반응 혼합물을 분리하고 유기 상을 실리카 상에 흡착시켰다. 이소-헥산 중 EtOAc의 구배로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.27 (1H, 다중선), 4.42 (2H, q), 3.91(2H, t), 3.56 (2H, 다중선), 2.56-2.51 (2H, br 다중선), 2.31-2.27 (2H, br 다중선), 2.28 (3H, s), 1.83-1.72 (4H, br 다중선), 1.41 (3H, t).
단계 11: [4-메틸-5-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실산]
MeOH (3.60 mL) 및 THF (6 mL) 중 [에틸 4-메틸-5-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트] (170 mg, 0.584 mmol)를 2M NaOH (수성) (0.584 mL, 1.167 mmol)로 실온에서 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 교반하고 2M HCl (수성) (0.2 mL) 및 EtOAc로 처리하였다. 합해진 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 0.61분; MS m/z [M+H]+ 264.4; 방법 2minHighpHv03
단계 12: [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드]
DMF (3 mL) 중 [4-메틸-5-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실산] (40 mg, 0.152 mmol)의 용액을 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (38.2 mg, 0.182 mmol), DIPEA (0.106 mL, 0.608 mmol) 및 HATU (75 mg, 0.198 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 물을 혼합물에 첨가하고 수성물을 EtOAc (x2)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 0.5M 염화리튬 (수성)으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 EtOAc 중 0-5% MeOH로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.19분; MS m/z [M+H]+ 455.5; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (1H, s), 6.23 (1H, 다중선), 4.01 (1H, tt), 3.88 (2H, t), 3.53 (2H, s), 3.26 (3H, s), 2.51-2.44 (2H, br 다중선), 2.28-2.25 (2H, 다중선), 2.23 (3H, s), 2.14 (3H, s), 1.98-1.87 (2H, br 다중선), 1.81-1.70 (8H, 다중선), 1.65-1.58 (1H, br 다중선), 1.38-1.33 (1H, br 다중선), 1.31-1.25 (1H, br 다중선), 1.18-1.05 (1H br 다중선).
실시예 5:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(4- 이소프로폭시시클로헥스 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00026
단계 1: 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올
0℃에서 무수 MeOH (30 mL) 중 1,4-시클로헥사디온 모노에틸렌 아세탈 (알드리치) (2 g, 12.81 mmol)의 교반 용액에, 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서, NaBH4 (0.727 g, 19.21 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 0℃에서 그리고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (4H, s), 3.86-3.78 (1H, br 다중선), 1.94-1.79 (4H, br 다중선), 1.73-1.76 (4H, br 다중선), 1.43 (1H, br s).
단계 2: 8-이소프로폭시-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸
2-아이오도프로판 (5.37 g, 31.6 mmol) 중 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-올 (0.5 g, 3.16 mmol)의 교반 용액에, 산화은(I) (1.392 g, 6.01 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 완료 직후 생성된 현탁액을 EtOAc로 희석하고 현탁액을 감압 하에 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 담황색 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.84 (4H, s), 3.63 (1H, 다중선), 3.44 (1H, 다중선), 1.72-1.62 (4H, br 다중선), 1.53-1.42 (4H, br 다중선), 1.06 (3H, s), 1.05 (3H, s).
단계 3: 4-이소프로폭시시클로헥사논
THF (2 mL) 및 물 (2 mL) 중 8-이소프로폭시-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸 (0.464 g, 2.317 mmol)의 교반 용액에, p-TsOH (0.080 g, 0.463 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 100℃로 가열하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고EtOAc (30 mL)와 물 (30 mL)에 분배하였다. 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.78 (1H, 다중선), 3.73 (1H, 다중선), 2.40-2.31 (2H, br 다중선), 2.27-2.18 (2H, br 다중선), 1.96-1.87 (2H, br 다중선), 1.85-1.75 (2H, br 다중선), 1.12 (3H, s), 1.11 (3H, s).
단계 4: [4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄술포네이트]
헥산 (알드리치) (1.285 mL, 2.057 mmol) 중 1.6M n-BuLi을 -78℃에서 질소 하에 무수 THF (30 mL) 중 디이소프로필아민 (아크로스) (0.307 mL, 2.155 mmol)의 용액에 첨가하였다. 용액을 30분 동안 0℃로 가온한 후에 -78℃로 재냉각하였다. 무수 THF (5 mL) 중 4-이소프로폭시시클로헥사논 (306 mg, 1.959 mmol)의 용액을 5분에 걸쳐 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 -78℃에서 교반한 후에 무수 THF (5 mL) 중 2-[N,N-비스(트리플루오로메틸술포닐)아미노]피리딘 (알파 에사르) (772 mg, 2.155 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 교반하고 밤새 실온으로 가온하였다. 생성된 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (30 mL)으로 켄칭하고 수성물을 TBME (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 10% 수성 NaOH (30 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-10% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 5.76 (1H, 다중선), 3.72-3.63 (2H, 다중선), 2.44-2.30 (3H, br 다중선), 2.14-2.06 (1H, 다중선), 1.86-1.73 (2H, br 다중선), 1.09-1.04 (6H, 다중선).
단계 5: [2-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란]
무수 디옥산 (15 mL) 중 [4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄술포네이트] (459 mg, 1.592 mmol)의 교반 용액에, 비스(피나콜라토)디보론 (알파 에사르) (404 mg, 1.592 mmol)에 이어서 아세트산칼륨 (아크로스) (313 mg, 3.18 mmol) 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (알파 에사르) (39.0 mg, 0.048 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 질소로 플러싱하고 밤새 80℃로 가열하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고 TBME로 세척하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 유기 여액을 감압 하에 농축하고 잔류물을 EtOAc (50 mL)와 물 (50 mL)에 분배하였다. 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 6: [에틸 5-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트]
아세토니트릴 (2 mL) 중 [2-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란] (375 mg, 1.410 mmol)의 용액을 함유하는 2-5 mL 마이크로웨이브 바이알에, 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (330 mg, 1.410 mmol)에 이어서 K2CO3 (585 mg, 4.23 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (11.51 mg, 0.014 mmol) 및 물 (2 mL)을 첨가하였다. 바이알을 질소로 플러싱하고 90분 동안 80℃에서 마이크로웨이브 (비오티지 스미쓰 이니시에이터)에서 처리하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)과 EtOAc (30 mL)에 분배하였다. 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 셀라이트® 패드를 통해 여과하고 여액을 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-60% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.33분; MS m/z [M+H]+ 294.4; 방법 2minLowpHv01
단계 7: [5-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산]
THF (3 mL) 및 에탄올 (3 mL) 중 [에틸 5-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트] (393 mg, 1.340 mmol)의 교반 용액에, 2M NaOH (수성) (4.179 ml, 8.36 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 완료 직후 생성된 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 1M HCl (수성)을 첨가하여 pH를 pH 6으로 조정하였다. 수성물을 EtOAc (30 mL)로 추출하고 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.13분; MS m/z [M+H]+ 266.1; 방법 2minLowpHv01
단계 8: [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
무수 NMP (3 ml) 중 5-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (174 mg, 0.656 mmol)의 교반 용액에, HATU (274 mg, 0.721 mmol)에 이어서 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (151 mg, 0.721 mmol) 및 트리에틸아민 (0.201 mL, 1.443 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (20 mL)와 1M NaOH (수성) (20 mL)에 분배하고 유기 상을 물 (30 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 9.5분에 걸쳐 물 (0.1% 포름산) 중 40-80% MeCN의 구배로 UV-기반 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (50 mL)에 첨가하고 포화 NaHCO3 수용액 (50 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.19분; MS m/z [M+H]+ 457.3; 방법 2minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.47 (1H, s), 6.27 (1H, 다중선), 3.91 (1H, 다중선), 3.75 (1H, 다중선), 3.75-3.67 (1H, br 다중선), 3.22 (3H, s), 2.58-2.40 (4H, br 다중선), 2.19 (3H, s), 2.19-2.09 (1H, br 다중선), 2.06-2.01 (4H, 다중선), 1.99 (1H, 다중선), 1.96-1.86 (1H, br 다중선), 1.82-1.74 (2H, br 다중선), 1.72-1.58 (4H, br 다중선), 1.38-1.24 (2H,　 br 다중선), 1.11-1.07 (6H, 다중선).
실시예 6:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(4,4- 디메틸시클로헥실 )-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00027
에탄올 (20 mL) 중 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (실시예 2.2) (40 mg, 0.094 mmol)의 용액을 질소로 플러싱하고 10% Pd-C, 50% 습윤 (알파 에사르, 38303) (14.97 mg, 0.141 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 수소의 분위기 하에 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 에탄올에 이어서 DCM으로 세척하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 잔류물을 에탄올: 에테르 (1:1)로 용리시키면서, 500 mg 실리카-TMT 카트리지에 통과시켰다. 여액을 수집하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS; Rt = 1.33분; MS m/z [M+H]+ 429.5; 방법 2minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (1H, s), 3.92 (1H, tt), 3.21 (3H, s), 2.84 (1H, 다중선), 2.07 (3H, s), 2.02 (3H, s), 2.03-1.95 (2H, 다중선), 1.82-1.58 (9H, 다중선), 1.50-1.43 (2H, 다중선), 1.37-1.22 (5H, 다중선), 0.97 (3H, s), 0.95 (3H, s).
실시예 6.1:
[N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(3,3- 디메틸시클로펜틸 )-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00028
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (실시예 2.2) (단계 1)를 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (실시예 3) 로 대체함으로써 실시예 6의 방법과 유사한 방법에 의해 표제 화합물을 제조하였다.
LC-MS: Rt = 1.46분; MS m/z [M+H]+ 415.1/416.4; 방법 2minLowpHv03
실시예 7:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(3,3- 디메틸부틸 )-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00029
단계 1: 에틸 5-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
아세토니트릴 (3 mL) 중 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (100 mg, 0.427 mmol) 및 3,3-디메틸부트-1-인 (0.058 mL, 0.470 mmol)을 질소로 재충전하면서 철저히 탈기하였다. 디시클로헥실아민 (0.085 mL, 0.427 mmol), CuI (2.85 mg, 0.015 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (7.50 mg, 10.68 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 45분 동안 100℃에서 마이크로웨이브에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-10% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.53분; MS m/z [M+H]+ 236.4; 방법 2minLowpHv03
단계 2: 5-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산
THF (3 mL) 및 MeOH (1.800 mL) 중 에틸 5-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (101 mg, 0.429 mmol)를 1시간 동안 2M NaOH (수성) (0.429 mL, 0.859 mmol)로 실온에서 처리하였다. 2M HCl (수성) (0.6 mL) 및 물을 첨가하고 수성물을 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.07 (1H, br s), 2.14 (3H, s), 1.33 (9H, s).
단계 3: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
DMF (2 mL) 중 5-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (85 mg, 0.410 mmol) 및 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (86 mg, 0.410 mmol)을 실온에서 DIPEA (0.287 mL, 1.641 mmol) 및 HATU (172 mg, 0.451 mmol)로 처리하고 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 0.5 M 염화리튬 (수성) 용액으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.42분; MS m/z [M+H]+ 399.7; 방법 2minLowpHv03
단계 4: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부틸)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
에탄올 (5 mL) 중 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (30 mg, 0.075 mmol)를 질소로 재충전하면서 철저히 탈기하고 Pd-C (16.02 mg, 7.53 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 수소의 분위기 하에 교반하였다. 완료 직후 반응 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.37분; MS m/z [M+H]+ 403.1/404.4; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.97 (1H, br s), 4.04 (1H, tt), 3.24 (3H, s), 2.72-2.66 (2H, 다중선), 2.19 (3H, s), 2.16 (3H, s), 2.04-1.92 (2H, br 다중선), 1.90-1.81 (4H, br 다중선), 1.70 (1H, br 다중선), 1.60-1.54 (2H, 다중선), 1.43-1.29 (2H, br 다중선), 1.27-1.18 (1H, br 다중선), 0.96 (9H, s).
실시예 8:
(Z)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(3,3- 디메틸부트 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00030
단계 1: (Z)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
EtOAc (3 mL) 중 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (실시예 7, 단계 3) (30 mg, 0.075 mmol)를 2,2'-(에탄-1,2-디일비스(술판디일))디에탄올 (13.72 mg, 0.075 mmol) 및 Pd-5% 황산바륨 (16.02 mg, 7.53 μmol)으로 처리하였다. 혼합물을 질소로 철저히 재충전하면서 탈기하고 혼합물을 밤새 실온에서 수소의 분위기 하에 교반하였다. 추가의 Pd-5% 황산바륨 (16.02 mg, 7.53 μmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 16시간 동안 수소의 분위기 하에 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 용리시키면서 셀라이트®를 통해 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt =1.35분; MS m/z [M+H]+ 401.2; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.94 (1H, br s), 6.00 (1H, d, J = 12.9 Hz), 5.91 (1H, d, J = 12.9 Hz), 4.01-3.92 (1H, tt), 3.16 (3H, s), 2.13 (3H, s), 2.09 (3H, s), 1.96-1.84 (2H, br 다중선), 1.82-1.74 (4H, br 다중선), 1.62 (1H, br 다중선), 1.34-1.23 (2H, 다중선), 1.19-1.10 (1H, br 다중선), 1.05 (9H, s).
실시예 9:
(E)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(3,3- 디메틸부트 -1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00031
단계 1: (E)-트리부틸(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)스타난
트리부틸주석 히드리드 (1.637 mL, 6.09 mmol)를 어두운 곳에서 0℃에서 THF (4 mL) 중 3,3-디메틸부트-1-인 (500 mg, 6.09 mmol) 및 Pd(Ph3P)4 (70 mg, 0.06 mmol)의 용액에 적가하였다. 교반의 30분 후에 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 100% 이소-헥산으로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 2: (E)-에틸 5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
(E)-트리부틸(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)스타난 (1194 mg, 0.8 mmoL) 및 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (187 mg, 0.8 mmol)를 디옥산 (6 mL)에 용해시키고 혼합물을 질소로 재충전하면서, 철저히 탈기하였다. Pd(Ph3P)4 (92 mg, 0.080 mmol)를 첨가하고 혼합물을 16시간 동안 100℃에서 교반하였다. 조 반응 혼합물을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-10% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.64 (1H, d, J = 17 Hz), 6.19 (1H, d, J = 17 Hz), 2.23 (3H, s), 1.45 (3H, t), 1.16 (9H, s).
단계 3: (E)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산
THF (3 mL) 및 MeOH (1.8 mL) 중 (E)-에틸 5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (160 mg, 0.674 mmol)를 2M NaOH (수성) (1.349 mL, 2.70 mmol)로 처리하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 2M HCl (수성)로 처리하고 에틸 아세테이트 (x3)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 4: (E)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
DMF (2 mL) 중 (E)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (102 mg, 0.487 mmol) 및 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (112 mg, 0.536 mmol)을 DIPEA (0.341 mL, 1.950 mmol) 및 HATU (222 mg, 0.585 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 처리하고 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 0.5 M LiCl (수성)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.41분; MS m/z [M+H]+ 401.0/402.5; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.64 (1H, d, J = 17 Hz), 6.33 (1H, d, J = 17 Hz), 4.16 (1H, tt), 3.36 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.20-2.09 (2H, br 다중선), 2.17 (3H, s), 1.95-1.82 (4H, br 다중선), 1.76-1.69 (1H, br 다중선), 1.50-1.38 (2H, br 다중선), 1.35-1.25 (1H, br 다중선), 1.18 (9H, s).
실시예 10:
5- 시클로헥실 -N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00032
단계 1: 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실산
MeOH (100 mL) 중 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (8.65 g, 37.0 mmol)의 용액에 2M NaOH (수성) (18.48 mL, 37.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반하고 생성된 혼합물을 1M HCl (수성)을 사용하여 산성화하고 감압 하에 농축하여 MeOH를 제거하였다. 수성물을 물로 희석하고 EtOAc (x3)로 추출하고 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 0.82분; MS m/z [M+H]+ 206.0; 방법 2minLowpH
단계 2: 5-브로모-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
DCM (200 mL) 중 DMF (5.33 mL, 68.8 mmol)의 용액을 0℃로 냉각하고 옥살릴 클로라이드 (3.31 ml, 37.9 mmol)로 처리하였다. 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (7.09 g, 34.4 mmol)을 첨가하고 10분 동안 빙냉 하에 교반하였다. 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (7.92 g, 37.9 mmol) 및 트리에틸아민 (14.39 ml, 103 mmol)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 30분 동안 이 온도에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 DCM으로 희석하고 포화 NaHCO3 (수성) 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 100% TBME로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 0.93분; MS m/z [M+H]+ 397.2/400.2; 방법 2minLowpH
단계 3: 5-시클로헥실-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
5-브로모-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (75 mg, 0.189 mmol)에 시클로헥실징크(II) 브로마이드 (THF 중 0.5M) (1133 μl, 0.566 mmol) 및 비스(트리-t-부틸포스핀)팔라듐(0) (9.65 mg, 0.019 mmol)을 첨가하고 혼합물을 30분 동안 마이크로웨이브에서 100℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 희석하고 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.12분; MS m/z [M+H]+ 401.0/402.4; 방법 2minLowpH
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (1H, s), 3.90 (1H, m), 3.20 (3H, s), 2.90 (1H, m), 2.05 (3H, s), 2.00 (3H, s), 2.80-1.00 (20H, m).
실시예 11:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4- 메틸 -5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00033
단계 1: 1,4-디옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일 트리플루오로메탄술포네이트
질소 하에 무수 THF (30 mL) 중 1,4-시클로헥사디온 모노에틸렌 아세탈 (알드리치) (2 g, 12.81 mmol)의 교반 용액을 -70℃로 냉각하고 온도를 -65℃ 미만으로 유지하면서 0.6M LDA (헵탄/THF/에틸벤젠 중) (25.6 mL, 15.37 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 20분 동안 교반한 후에, 온도가 -65℃를 넘지 않도록 보장하면서, 30분에 걸쳐 무수 THF (10 mL) 중 2-[N,N-비스(트리플루오로메틸술포닐)아미노]피리딘 (알파 에사르) (5.05 g, 14.09 mmol)의 용액으로 적하 방식으로 처리하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 -70℃에서 교반한 후에 점차적으로 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (100 mL)로 켄칭하고 TBME (2 x 150 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 10% NaOH (수성) (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-10% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 5.80 (1H, 다중선), 3.91 (4H, 다중선), 2.51-2.49 (2H, 다중선), 2.49-2.43 (2H, br 다중선), 2.37-2.34 (2H, br 다중선), 1.86-1.81 (2H, 다중선).
단계 2: 4,4,5,5-테트라메틸-2-(1,4-디옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)-1,3,2-디옥사보롤란
무수 디옥산 (15 mL) 중 1,4-디옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일 트리플루오로메탄술포네이트 (1.19 g, 4.13 mmol)의 교반 용액에, 비스(피나콜라토)디보론 (알파 에사르) (1.048 g, 4.13 mmol)에 이어서 아세트산칼륨 (아크로스) (0.810 g, 8.26 mmol) 및 PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (알파 에사르) (0.101 g, 0.124 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 플러싱하고 밤새 80℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고, TBME로 세척하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 유기 여액을 감압 하에 농축하고 EtOAc (50 mL)와 물 (50 mL)에 분배하였다. 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 3: 에틸 4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트
아세토니트릴 (2 mL) 중 4,4,5,5-테트라메틸-2-(1,4-디옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (586 mg, 2.200 mmol)의 용액을 함유하는 2-5 mL 마이크로웨이브 바이알에 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 D) (515 mg, 2.200 mmol)에 이어서 K2CO3 (912 mg, 6.60 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 부가물 (17.97 mg, 0.022 mmol), 및 물 (0.667 mL)을 첨가하였다. 바이알을 질소로 플러싱하고 1시간 동안 80℃ 및 30분 동안 100℃에서 마이크로웨이브 (비오티지 스미쓰 이니시에이터)에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (30 mL)과 EtOAc (30 mL)에 분배하였다. 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-40% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.26 (1H, 다중선), 4.37 (2H, q), 3.93 (4H, s), 2.62-2.56 (2H, br 다중선), 2.47-2.43 (2H, 다중선), 2.23 (3H, s), 1.82 (2H, 다중선), 1.23 (3H, t).
단계 4: 에틸 4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트
에탄올 (20 mL) 중 에틸 4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트 (556 mg, 1.896 mmol)의 용액을 질소로 플러싱한 다음에 10% Pd-C, 50% 습윤 (알파 에사르, 38303) (303 mg, 2.84 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 수소의 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 에탄올 및 DCM으로 세척하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 잔류물을 에탄올: 에테르 (1:1)로 용리시키면서, 500 mg 실리카-TMT 카트리지에 통과시켰다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.11분; MS m/z [M+H]+ 296.2; 방법 2minLowpHv01
단계 5: 4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복실산
THF (5 mL) 중 에틸 4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복실레이트 (558 mg, 1.889 mmol)의 교반 용액에, 2M NaOH (수성) (4.179 ml, 8.36 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 15분 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 1M HCl (수성)을 첨가하여 pH를 pH 5-6으로 조정하였다. 수성물을 EtOAc (30 mL)로 추출하고 합해진 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 0.89분; MS m/z [M+H]+ 268.2; 방법 2minLowpHv01
단계 6: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드
무수 NMP (3 ml) 중 4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복실산 (239 mg, 0.894 mmol)의 교반 용액에, HATU (374 mg, 0.984 mmol)에 이어서 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (206 mg, 0.984 mmol) 및 트리에틸아민 (0.274 mL, 1.967 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (20 mL) 및 1M NaOH (20 mL)에 분배하였다. 유기 상을 물 (30 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 DCM 중 0-2% MeOH로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 물질을 수득하였다. 단리된 물질을 DMSO (2 mL)에 용해시키고 물 (30 mL)로 연화처리하였다. 생성된 현탁액을 감압 하에 여과하고 고체를 물 (20 mL)로 세척하고 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 0.96 분; MS m/z [M+H]+ 459.5: 방법 2minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (1H, s), 3.96-3.86 (5H, 다중선), 3.21 (3H, s), 3.02 (1H, 다중선), 2.07 (3H, s), 2.05-1.92 (2H, br 다중선), 2.02 (3H, s), 1.84-1.72 (8H, br 다중선), 1.70-1.57 (5H, br 다중선), 1.38-1.23 (2H, br 다중선), 1.22-1.11 (1H, br 다중선).
실시예 12:
5-(( 2S,4S,6R )-6-( tert -부틸)-4- 메톡시테트라히드로 -2H-피란-2-일)-N-(2- 시 클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00034
단계 1: 에틸 5-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
Figure pct00035
DCM (19 mL) 중 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 C) (350 mg, 1.911 mmol)의 용액에 알릴트리메틸실란 (276 μl, 1.911 mmol)을 첨가하고 혼합물을 -78℃로 냉각하였다. DCM (5 mL) 중 보론 트리플루오라이드 에테레이트 (278 μl, 2.198 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각하고 5분에 걸쳐 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반하고 트리에틸아민 (266 μl, 1.911 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 -78℃에서 유지하고 실온으로 가온하였다. 생성된 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)을 첨가하여 켄칭하고 DCM (2 x 10 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-40% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.06분; MS m/z [M+H]+ 225.8/226.4; 방법 2minLowpHv03
단계 2:
2a: 에틸 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 라세미 혼합물
Figure pct00036
및 2b: 에틸 5-((2S,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2R,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 라세미 혼합물
Figure pct00037
DCM (6.2 mL) 중 에틸 5-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (140 mg, 0.622 mmol)의 용액에 피발알데히드 (67.5 μl, 0.622 mmol)를 첨가하였다. TMSOTf (112 μl, 0.622 mmol)를 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. MeOH (2 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 물 (5 mL)과 DCM에 분배하고, 층을 분리하고 수성물을 DCM (2 x 5 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
2a: 에틸 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 라세미 혼합물 LC-MS: Rt = 1.64분; MS m/z [M+H]+ 326.6; 방법 2minLowpHv03
2b: 에틸 5-((2S,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2R,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 라세미 혼합물 LC-MS: Rt = 1.54분; MS m/z [M+H]+ 326.6; 방법 2minLowpHv03
단계 3: 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산의 라세미 혼합물
Figure pct00038
MeOH (0.45 mL) 및 THF (0.75 mL) 중 2a의 라세미 혼합물: 에틸 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (9 mg, 0.028 mmol)의 용액에, 2M NaOH (수성) (59.9 μl, 0.120 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 수득하고 이를 2M NaOH (수성) (5 mL)로 희석하고 DCM (5 mL)으로 세척하였다. 수성 층을 2 M HCl (수성) (8 mL)로 산성화하고 DCM (3 x 5 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 용매를 감압 하에 제거하여 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산의 라세미 혼합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.44분; MS m/z [M+H]+ 298.5; 방법 2minLowpHv03
단계 4: 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 라세미 혼합물
NMP (0.3 mL) 중 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산의 라세미 혼합물 (9 mg, 0.030 mmol)의 용액에, HATU (12.66 mg, 0.033 mmol)에 이어서, 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (6.33 mg, 0.030 mmol) 및 Et3N (8.39 μl, 0.061 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (10 mL)와 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)에 분배하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 DCM 중 0-10% MeOH로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 4.57분; MS m/z [M+H]+ 489.3; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 4.98 (1H, dd), 4.06 (1H, tt), 3.82 (1H, 다중선), 3.50 (1H, dd), 3.40 (3H, s), 3.26 (3H, s), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.14-2.07 (1H, 다중선), 2.05-1.82 (8H, br 다중선), 1.71 (1H, br 다중선), 1.51 (1H, 다중선), 1.43-1.29 (2H, br 다중선), 1.29-1.17 (1H, br 다중선), 0.92 (9H, s).
실시예 13:
5-(( 2S,4R,6R )-6-( tert -부틸)-4- 메톡시테트라히드로 -2H-피란-2-일)-N-(2- 시 클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00039
단계 3에서 2a를 2b로 대체함으로써 실시예 12의 방법과 유사한 방법에 의해 실시예 13을 제조하였다;
LC-MS: Rt = 4.40분; MS m/z [M+H]+ 489.4; 방법 8minLowpHv01
실시예 13a: 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 실시예 13b: 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00040
초임계 유체 크로마토그래피를 사용하여 실시예 13을 키랄 분리하여 개별 거울상이성질체를 수득하였다.
방법 세부 사항:
칼럼: 키랄셀(Chiralcel) OD-H 250 x 10 mm, 35℃에서 5 um
이동상: 35% 이소프로판올 + 0.1% v/v DEA / 65% CO2
유량: 10 ml/분
검출: 220 nm에서 UV
기기: 버거 미니그램(Berger Minigram) SFC1
실시예 13a: 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
SFC 체류 시간 = 4.86분
LCMS: Rt 1.42분 MS m/z [M+H]+ 489.5; 방법 2minLowpHv03
실시예 13b: 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
SFC 체류 시간 = 2.85분
LCMS: Rt 1.42분 MS m/z [M+H]+ 489.5; 방법 2minLowpHv03
실시예 14:
5-(( 2R,4R,6S )-6-( tert -부틸)-4- 메톡시테트라히드로 -2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 부분입체이성질체 혼합물
Figure pct00041
단계 1: 에틸 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-(2,2,2-트리플루오로아세톡시)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-(2,2,2-트리플루오로아세톡시)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 혼합물
에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (100 mg, 0.546 mmol) 및 2,2-디메틸헥스-5-엔-3-올 (중간체 F) (70.0 mg, 0.546 mmol)을 DCM (12 mL)에서 합하고 오븐-건조된 분자체 (100 mg, 0.546 mmol) 및 TFA (3.15 mL, 40.9 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 피브알데히드 (0.059 mL, 0.546 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 켄칭하고 DCM (x3)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 2: 에틸 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 혼합물
나트륨 (45.7 mg, 1.988 mmol)을 에탄올에 용해시키고 생성된 용액을 EtOH (5 mL) 중 에틸 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-(2,2,2-트리플루오로아세톡시)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-(2,2,2-트리플루오로아세톡시)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (270 mg, 0.663 mmol)의 혼합물에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 0.1M HCl (수성) (50 mL)을 첨가하고 수성물을 분리하고 EtOAc (x3)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 4: 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)-4-옥소테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)-4-옥소테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 혼합물
DCM (20 mL) 중 에틸 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (35 mg, 0.112 mmol)의 혼합물을 데스-마틴(Dess-Martin) 시약 (47.7 mg, 0.112 mmol)으로 실온에서 처리하고 30분 동안 교반하였다. 포화 메타중아황산나트륨 수용액을 첨가하고 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 생성된 층을 분리하고 유기 층을 포화 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. 수성 부분을 DCM으로 추출하고 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-40% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.78 (1H, dd), 4.38 (2H, q), 3.34 (1H, dd), 2.83 (1H, 다중선), 2.62-2.56 (1H, 다중선), 2.45-2.33 (2H, br 다중선), 2.21 (3H, s), 1.35 (3H, t), 0.90 (9H, s).
단계 5: 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 화합물과 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (1:1)의 부분입체이성질체 혼합물
THF (20 mL) 중 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)-4-옥소테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)-4-옥소테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (420 mg, 1.358 mmol)의 혼합물을 -78℃로 냉각하고 THF (1.426 mL, 1.426 mmol) 중 1M L-셀렉트리드로 처리하고 3시간 동안 -78℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 아세트산으로 켄칭하고 1M HCl (수성)로 세척하였다. 수성물을 EtOAc (x2)로 추출하였다. 모든 유기 층을 합하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 THF에 용해시키고, 2M NaOH (수성)로 처리하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 1M HCl (수성)을 사용하여 산성화하고 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.10분; MS m/z [M+H]+ 284.3; 방법 2minLowpHv03
단계 6: 메틸 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 화합물과 메틸 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1) 및 메틸 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 화합물과 메틸 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 부분입체이성질체 혼합물
DMF (0.5 mL) 중 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 화합물과 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (1:1)의 부분입체이성질체 혼합물 (31 mg, 0.109 mmol)을 0℃에서 DMF (2 mL) 중 수소화나트륨 (10.94 mg, 0.274 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 2시간 동안 교반하고 아이오도메탄 (0.068 mL, 1.094 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 2M HCl (수성)로 켄칭하고 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 0.5M LiCl (수성), 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 7: 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산의 부분입체이성질체 혼합물
THF (1 mL) 및 MeOH (0.6 mL) 중 메틸 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 화합물과 메틸 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1) 및 메틸 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 화합물과 메틸 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 부분입체이성질체 혼합물 (14 mg, 0.045 mmol)을 1시간 동안 실온에서 2M NaOH (수성) (0.090 mL, 0.180 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 2M HCl (수성) (4 mL)로 처리하고 EtOAc (x2)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
단계 8: DMF (0.5 mL) 중 5-((2R,4R,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 및 5-((2R,4S,6S)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 및 5-((2S,4R,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 및 5-((2S,4S,6R)-6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산의 부분입체이성질체 혼합물 (20 mg, 0.067 mmol) 및 4-아미노-2-시클로부틸-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 E) (12.80 mg, 0.071 mmol)을 DIPEA (0.047 mL, 0.269 mmol) 및 HATU (33.2 mg, 0.087 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 처리하고 EtOAc (x2)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 0.5M 염화리튬 (수성), 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.38분; MS m/z [M+H]+ 461.6; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, br s), 4.99 (1H, d), 4.63 (1H, 다중선), 3.82 (1H, 다중선), 3.51 (1H, d), 3.41 (3H, s), 3.28 (3H, s), 2.88-2.75 (2H, br 다중선), 2.41-2.31 (2H, br 다중선), 2.28 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.14-2.06 (1H, br 다중선), 1.99-1.83 (3H, br 다중선), 1.83-1.72 (1H, br 다중선), 1.52 (1H, 다중선), 0.92 (9H, s).
실시예 15:
5-(6-( tert -부틸) 테트라히드로 -2H-피란-2-일)-N-(2- 시클로부틸 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00042
단계 1: 에틸 5-((2R,6S)-4-브로모-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-4-브로모-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 혼합물
무수 DCM (31 mL) 중 2,2-디메틸헥스-5-엔-3-올 (중간체 F) (400 mg, 3.12 mmol) 및 브로민화인듐(III) (55.4 mg, 0.156 mmol)을 함유하는 질소 하에 빙냉된 플라스크에 브로모트리메틸실란 (0.405 ml, 3.12 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 빙냉시키면서 교반하였다. 또 하나의 플라스크에 질소 하에 무수 DCM (31 mL) 중 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 C) (572 mg, 3.12 mmol)의 용액을 빙냉시켰다. 이를 빙냉시키면서 30분에 걸쳐 첫번째 플라스크에 적가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 빙냉시키면서 그리고 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물에 피발알데히드 (0.085 ml, 0.781 mmol)를 첨가하고 이를 2시간 동안 교반하였다. 추가의 피발알데히드 (0.085 ml, 0.781 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 포화 NaHCO3 (수성) 수용액을 첨가하고 혼합물을 2분 동안 격렬하게 교반하였다. 생성된 혼합물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 유기 용리액을 수집하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS; Rt = 1.68분; MS m/z [M+H]+ 376.4; 방법 2minLowpHv03
단계 2: 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 혼합물
질소의 흐름 하에 EtOH (7.1 ml) 및 EtOAc (0.7 mL) 중 에틸 5-((2R,6S)-4-브로모-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-4-브로모-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 혼합물 (233 mg, 0.623 mmol)에 10% Pd/C (26.5 mg, 0.249 mmol)를 첨가하고 혼합물을 수소의 분위기 하에 7시간 동안 실온에서 교반하였다. 중탄산나트륨 (209 mg, 2.490 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 수소의 분위기 하에 교반하였다. 추가의 10% Pd/C (26.5 mg, 0.249 mmol)를 첨가하고 밤새 수소의 분위기 하에 교반을 계속하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 용리시키면서 셀라이트® 카트리지를 통해 여과하고 유기 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.72분; MS m/z [M+H]+ 296.3; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.54 (1H, d), 4.66 (2H, q), 3.01 (1H, d), 2.19 (3H, s), 1.94 (1H, 다중선), 1.83-1.77 (1H, 다중선), 1.73-1.48 (3H, 다중선), 1.34 (3H, t), 1.35-1.26 (1H, 다중선), 0.84 (9H, s).
단계 3: 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (1:1)의 혼합물
실온에서 THF (2 mL) 및 MeOH (1.2 mL) 중 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1) (112 mg, 0.379 mmol)의 교반 용액에 2M NaOH (수성) (0.209 mL, 0.417 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 잔류물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (x2)로 세척하였다. 수성 층을 2M HCl (수성)을 첨가하여 산성으로 만들고 EtOAc (x3)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS; Rt 1.57분; MS m/z [M+H]+ 268.3; 방법 2minLowpHv03
단계 4: 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
질소 하에 무수 DCM (3 mL) 중 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (1:1)의 혼합물 (40 mg, 0.150 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (0.014 mL, 0.165 mmol) 및 DMF (0.023 mL, 0.299 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반하고 4-아미노-2-시클로부틸-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 E) (27.1 mg, 0.150 mmol) 및 트리에틸아민 (0.063 mL, 0.449 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 물을 첨가하고 이를 격렬하게 교반한 후에 상 분리 카트리지에 통과시켰다. 유기물을 수집하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 그 다음에 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 물질을 거울상이성질체의 혼합물로서 수득하였다.
초임계 유체 크로마토그래피를 사용하여 물질을 키랄 분리하여 개별 거울상이성질체를 수득하였다:
방법 세부 사항:
칼럼: 페노메넥스(Phenomenex) LUX C2 250 x 10 mm 칼럼, 35℃에서 5 um
이동상: 50% 메탄올 + 0.1% v/v DEA / 50% CO2
유량: 10 ml/분
검출: 220 nm에서 UV
기기: 버거 미니그램 SFC 시스템 2
실시예 15a: 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
키랄 SFC: Rt = 14.26분
LC-MS: Rt = 4.59분; MS m/z [M+H]+ 431.5; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (1H, br s), 4.69-4.59 (2H, 다중선), 3.32 (3H, s), 3.10 (1H, d), 2.83 (2H, 다중선), 2.41-2.34 (2H, 다중선), 2.29 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.03 (1H, br d), 1.96-1.60 (6H, 다중선), 1.45-1.33 (1H, 다중선), 0.93 (9H, s).
실시예 15b: 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
키랄 SFC: Rt = 18.40분
LC-MS　: Rt = 4.58분; MS m/z [M+H]+ 431.5; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (1H, br s), 4.69-4.59 (2H, 다중선), 3.32 (3H, s), 3.10 (1H, d), 2.83 (2H, 다중선), 2.41-2.34 (2H, 다중선), 2.29 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.03 (1H, br d), 1.96-1.60 (6H, 다중선), 1.45-1.33 (1H, 다중선), 0.93 (9H, s).
실시예 16:
5-(( 2S,6R )-6-( tert -부틸) 테트라히드로 -2H-피란-2-일)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00043
단계 4에서의 4-아미노-2-시클로부틸-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 E)을 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D)으로 대체함으로써 실시예 15의 방법과 유사한 방법에 의해 표제 화합물을 제조하였다. 초임계 유체 크로마토그래피를 사용하여 키랄 분리하여 개별 거울상이성질체를 수득하였다:
방법 세부 사항:
칼럼: 키랄팩 OD-H 250x10 mm, 35℃에서 5 ㎛
이동상: sc-CO2:이소프로판올 +0.1% DEA
유량: 10 ml/분
검출: 220 nm에서 UV
기기: 버거 미니그램 SFC1
5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
키랄 SFC Rt = 8.19분;
LC-MS: Rt = 4.87분; MS m/z [M+H]+ 459.5; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (1H, s), 4.53 (1H, dd), 3.97 (1H, tt), 3.18 (3H, s), 3.01 (1H, dd), 2.20 (3H, s), 2.12 (3H, s), 1.96-1.86 (2H, 다중선), 1.83-1.74 (4H, 다중선), 1.72-1.49 (6H, 다중선), 1.35-1.22 (2H, 다중선), 1.21-1.11 (2H, 다중선), 0.84 (9H, s).
실시예 17:
5-(( 2R,6S )-6-( tert -부틸) 테트라히드로 -2H-피란-2-일)-N-(2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00044
단계 1: 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)-4-아이오도테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)-4-아이오도테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 혼합물
실온에서 질소하에 무수 MeCN (20 mL) 중 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1 g, 5.46 mmol), 2,2-디메틸헥스-5-엔-3-올 (중간체 F) (0.700 g, 5.46 mmol) 및 아이오딘화나트륨 (0.818 g, 5.46 mmol)의 교반 용액에 TMSCl (0.698 mL, 5.46 mmol)을 10초에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 피발알데히드 (0.593 mL, 5.46 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 희석하고 10% 티오황산나트륨 (수성) 용액 (x1) 및 물 (x1)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 그 다음에 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.76분; MS m/z [M+H]+ 422.3; 방법 2minLowpHv03
단계 2: 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 혼합물
톨루엔 (3.8 mL) 중 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)-4-아이오도테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)-4-아이오도테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 혼합물 (794 mg, 1.885 mmol)의 용액에 DBU (0.284 ml, 1.885 mmol)를 첨가하고 이를 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 DBU (0.142 ml, 0.94 mmol)를 첨가하고 이를 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc 및 물로 희석하고 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 그 다음에 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-20% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.64분; MS m/z [M+H]+ 294.5; 방법 2minLowpHv03
단계 3: 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 혼합물
질소 하에 에탄올 (14.5 mL) 중 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (1:1)의 혼합물 (212 mg, 0.723 mmol)의 용액에 10% Pd/C (769 mg, 0.723 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 수소의 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 용리시키면서, 질소 하에 셀라이트® 카트리지를 통해 여과하였다. 유기 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.70분; MS m/z [M+H]+ 296.4; 방법 2minLowpHv03
단계 4: 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 및 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (1:1)
THF (3 mL) 및 MeOH (1.8 mL) 중 에틸 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 혼합물 (100 mg, 0.339 mmol)의 용액에 2M NaOH (수성) (0.186 mL, 0.372 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하고 잔류물을 EtOAc 및 물로 희석하였다. 유기 층을 0.1M NaOH (수성)로 추출하였다. 합해진 수성 층을 1M HCl (수성)로 산성화하고 EtOAc (x3)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.52분; MS m/z [M+H]+ 268.4; 방법 2minLowpHv03
단계 5: 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (1:1)의 혼합물
질소 하에 DCM (2 mL) 중 5-((2R,6S)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2S,6R)-6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (1:1)의 혼합물 (77 mg, 0.288 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (0.026 mL, 0.302 mmol) 및 DMF (2.230 μl, 0.029 mmol)를 첨가하였다. 4-아미노-2-이소프로필-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 G) (48.7 mg, 0.288 mmol) 및 트리에틸아민 (0.161 mL, 1.152 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 1M NaOH 및 DCM을 첨가하고 혼합물을 상 분리 칼럼에 통과시켰다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 그 다음에 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 4.50분; MS m/z [M+H]+ 419.5; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (1H, s), 4.72 (1H, 다중선), 4.36 (1H, 다중선), 3.22 (3H, s), 3.16 (1H, d), 2.14 (3H, s), 2.04 (3H, s), 1.99-1.90 (1H, 다중선), 1.84-1.78 (1H, 다중선), 1.70-1.59 (3H, br 다중선), 1.35 (6H, d), 1.38-1.23 (1H, br 다중선), 0.88 (9H, s).
실시예 18:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-((2R,6R)-6-이소프로필-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2R,6S)-6-이소프로필-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2S,6R)-6-이소프로필-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2S,6S)-6-이소프로필-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00045
단계 1: 에틸 4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복실레이트
중간체 C, 단계 1과 유사하게 표제 화합물을 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.86 (1H, dd), 6.02 (1H, d), 5.69 (1H, d), 4.37 (2H, q), 2.19 (3H, s), 1.33 (3H, t).
단계 2: 4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복실산
에틸 4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복실레이트 (250 mg, 0.993 mmol)를 THF (5.3 mL) 및 MeOH (3.2 mL)에 용해시키고 여기에 2M NaOH (수성) (497 μl, 0.993 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하고 2M HCl (5 mL) 및 물 (5 mL)로 처리하였다. DCM을 수성물에 첨가하고 그 결과 에멀젼이 형성되었다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM (25 mL)에 현탁시키고 상 분리 칼럼에 통과시켰다. 유기 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.04분: MS m/z [M+H]+ 154.1: 방법 2minLowpHv03
단계 3: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복스아미드
0℃로 냉각된 DCM (10 mL) 중 4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복실산 (172 mg, 0.809 mmol)의 현탁액을 옥살릴 클로라이드 (0.142 mL, 1.617 mmol) 및 DMF (4 방울)로 처리하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 그리고 30분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 잔류물을 DCM (8 mL)에 용해시켰다. 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (169 mg, 0.809 mmol) (중간체 D) 및 트리에틸아민 (0.338 mL, 2.426 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (15 mL)로 희석하고 DCM (x2)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 20-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt 1.11분: MS m/z [M+H]+ 345.4: 방법 2minLowpHv03
단계 4: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
THF (1 mL) 및 물 (0.5 mL) 중 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복스아미드 (53 mg, 0.154 mmol)의 용액에 과아이오딘산나트륨 (99 mg, 0.462 mmol) 및 Os 인캐트(EnCat)™ (미세캡슐화된 OsO4) (10.26 mg, 3.08 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 탈지면 플러그를 통해 여과하고 용리액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.09 (1H, s), 8.34 (1H, br s), 4.07 (1H, 다중선), 3.32 (3H, s), 2.57 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.08-1.95 (2H, br 다중선), 1.94-1.80 (4H, br 다중선), 1.71 (1H, br 다중선), 1.44-1.30 (2H, br 다중선), 1.30-1.16 (1H, br 다중선).
단계 5: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
THF (1.5 mL) 중 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (53 mg, 0.153 mmol)의 용액 0℃로 냉각하고 Et2O (337 μl, 0.337 mmol) 중 1M 알릴 마그네슘 브로마이드를 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 포화 NH4Cl (수성)을 첨가하였다. 수성 층을 DCM (x3)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 유기 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 50-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 6: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2R,6R)-6-이소프로필-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2R,6S)-6-이소프로필-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2S,6R)-6-이소프로필-5,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2S,6S)-6-이소프로필-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
DCM (0.5 mL) 중 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (26 mg, 0.054 mmol)의 용액을 0℃로 냉각하고 이소부티르알데히드 (5.38 μl, 0.059 mmol) 및 TMSOTf (10.66 μl, 0.059 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 그리고 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 포화 NH4Cl (수성) 용액을 첨가하고 이를 DCM (x3)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 유기 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 엑스셀렉트(Xselect) CSH Prep C18 칼럼을 사용하여 물 (0.1% 포름산) 중 30-70% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 UV-기반 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 알켄의 혼합물 (NMR에 의한 생성물의 제시된 비는 3:2 4-엔:3-엔이고; 제시된 입체화학은 syn이다)로서 수득하였다.
LC-MS: Rt = 1.40분; MS m/z [M+H]+ 443.3: 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 - 8.07 (m, 2H), 6.08 - 6.03 (m, 1H), 5.936 - 5.92 (m, 1H), 5.80 - 5.73 (m, 2H), 5.46 - 5.42 (m, 1H), 4.85 (dd, J = 10.37, 3.3, 1H), 4.18 - 4.14 (m, 1H), 4.10 - 4.04 (m, 3H), 3.43 - 3.40 (m, 1H), 3.32 - 3.24 (m, 7H), 2.30 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.24 - 2.21 (m, 8H), 2.02 - 1.50 (m, 16H), 1.44 - 1.06 (m, 8H), 1.01-0.94 (m, 12H).
실시예 19:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4-메틸-5-((2S,6S)-6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드와 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,6R)-6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00046
단계 1: 에틸 5-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
DCM (0.3 mL) 중 보론 트리플루오라이드 디에틸에테레이트 (54.1 μl, 0.427 mmoL)의 용액을 -78℃로 냉각하였다. 별개 플라스크에서 DCM 중 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 C) (68 mg, 0.371 mmol) 및 알릴트리메틸실란 (59.0 μl, 0.371 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각하고 이 용액을 보론 트리플루오라이드 디에틸에테레이트 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 -78℃에서 그리고 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 NaHCO3의 포화 용액 (수성) (5 mL)을 첨가하고 이를 DCM (x3)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 용리액을 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.07분; MS m/z [M+H]+ 226.1: 방법 2minLowpHv03
단계 2: 에틸 4-메틸-5-(6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복실레이트
DCM (1 mL) 중 에틸 5-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (35 mg, 0.155 mmol)의 용액을 아세트알데히드 (8.72 μl, 0.155 mmol)로 처리하고 반응 혼합물을 0℃로 냉각하였다. 0℃로 냉각된 DCM (1.5 mL) 중 TMSOTf (80.4 μL, 0.465 mmol)의 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 30분 동안 0℃에서 그리고 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 염화암모늄의 포화 용액 (수성) (2 mL)을 첨가하고 이를 DCM (x3)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 용리액을 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.32분: MS m/z [M+H]+ 252.2: 방법 2minLowpHv03
단계 3: 4-메틸-5-(6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복실산
MeOH (0.2 mL) 및 THF (0.3 mL) 중 에틸 4-메틸-5-(6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복실레이트 (14 mg, 0.056 mmol)의 용액에 2M NaOH (수성) (27.9 μl, 0.056 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하고 2M NaOH (수성) (1 mL) 및 물 (1 mL)을 첨가하였다. 수성물을 DCM (x3)으로 추출하고 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시켰다. 용리액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 4: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2S,6S)-6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드와 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,6R)-6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드의 라세미 혼합물
NMP (0.5 mL) 중 4-메틸-5-(6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복실산) (12.03 mg, 0.054 mmoL)의 용액을 HATU (20.49 mg, 0.054 mmol)에 첨가하였다. 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (11.28 mg, 0.054 mmol) 및 트리에틸아민 (7.49 μl, 0.054 mmoL)을 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 수성 탄산수소나트륨 (10 mL)과 EtOAc (10 mL)에 분배하였다. 유기물을 염수 (10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 40-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 3.65분: MS m/z [M+H]+ 415.3: 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 (s, 1H), 5.86 - 5.77 (m, 1H), 5.68 - 5.60 (m, 1H), 4.77 (dd, J = 10.9, 3.3 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.04 - 3.93 (m, 1H), 3.31 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.67 - 2.54 (m, 1H), 2.31 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 7H), 2.02 - 1.87 (m, 2H), 1.86 - 1.72 (m, 2H), 1.64 - 1.59 (m, 1H), 1.36 - 1.05 (m, 7H).
실시예 20:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4- 메틸 -5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00047
단계 1: 에틸 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-히드록시프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
tert부틸디메틸실릴 클로라이드 (6.3 g, 41.5 mmol)를 0℃에서 DMF (100 mL) 중 에틸 5-((1R,2S)-1,2-디히드록시프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 B) (8.65 g, 37.7 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (1.38 g, 11.32 mmol) 및 트리에틸아민 (5.80 mL, )에 조금씩 첨가하고 반응물을 실온으로 가온하였다. 18시간 후에 반응물을 EtOAc와 염수에 분배하고, 포화 수성 염화암모늄, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 15% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.59분; MS m/z [M+H]+ 344.4; 방법 2minLowpHv03
단계 2: 에틸 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 및 2-메틸알릴 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
NaH (광유 중 60 wt % 분산액 700 mg, 17.47 mmol)를 실온에서 THF (75 mL) 중 에틸 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-히드록시프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (3.0 g, 8.73 mmol)에 조금씩 첨가한 후에, 10분에 걸쳐 3-브로모-2-메틸프로프-1-엔 (8.81 ml, 87 mmol)을 적가하였다. 테트라부틸 암모늄 아이오다이드 (2.58 g, 6.99 mmol)를 첨가하고 생성된 반응물을 2시간 동안 58℃에서 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고 염수 (75 mL) 및 EtOAc (75 mL)로 순차적으로 켄칭하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하여 조 표제 화합물을 대략의 9:1 혼합물로서 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.90분; MS m/z [M+H]+ 398.5; 방법 2minLowpHv03
LC-MS: Rt = 1.95분; MS m/z [M+H]+ 424.5; 방법 2minLowpHv03
단계 3: 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산
수산화리튬 일수화물 (3.20 g, 76 mmol)을 THF/물 (300 mL, 1.5/1.0) 중 에틸 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 2-메틸알릴 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 혼합물 [잔존 테트라부틸 암모늄 아이오다이드 (25% w/w)를 함유하는 대략의 9:1 혼합물로서 4.5 g]에 조금씩 첨가하고 생성된 혼합물을 70℃에서 약하게 가열하였다. 실온으로 냉각한 후에 층을 분리하고 잔류 수성물을 1 M 수성 염산으로 산성화하고 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하여 조 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.75분; MS m/z [M+H]+ 370.5; 방법 2minLowpHv03
단계 4: 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (2.63 g, 12.55 mmol)을 DMF (100 mL) 중 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (4.14 g, ~70% w/w)에 이어서 DIPEA (7.8 ml, 44.8 mmol) 및 HATU (4.8 g, 12.55 mmol)에 조금씩 첨가하였다. 18시간 동안 실온에서 교반한 후에 반응 혼합물을 EtOAc와 염수에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고 합해진 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 50-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.77분; MS m/z [M+H]+ 561.8; 방법 2minLowpHv03
단계 5: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((1R,2S)-2-히드록시-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (15.16 ml, 15.16 mmol)를 THF (160 ml) 중 5-((1R,2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (5.06 g, 7.58 mmol (76% 순도로 가정))에 적가하고 생성된 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (150 ml) 및 EtOAc (200 ml)를 순차적으로 첨가하여 켄칭하였다. 유기물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 50-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.12분; MS m/z [M+H]+ 447.5; 방법 2minLowpHv03
단계 6: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드
머큐릭 트리플루오로아세테이트 (3.92 g, 9.19 mmol)를 실온에서 THF (160 mL) 중 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((1R,2S)-2-히드록시-1-((2-메틸알릴)옥시)프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (3.59 g, 8.03 mmol)에 조금씩 첨가하였다. 적색 산화제2수은 (1.99 g, 9.19 mmol)을 첨가하고 생성된 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 1시간 후에 반응물을 -78℃로 냉각하고 트리에틸보란 (16.84 ml, 16.84 mmol)에 이어서 수소화붕소나트륨 (579 mg, 15.31 mmol)을 적가하였다. 1시간 후에 -78℃에서 반응물을 실온으로 점차적으로 가온하였다. 생성된 혼합물을 염수 및 EtOAc를 첨가하여 켄칭하고, 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하였다. DCM (200 ml) 및 비오티지(Biotage) Si-티올 (17 g, 1.4 mmol/g 로드, ~3 당량)을 첨가하고 생성된 현탁액을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 여과하고, DCM으로 세척하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 90-95% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (>95% ee)을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.16분; MS m/z [M+H]+ 447.5; 방법 2minLowpHv03
1H NMR. ([400MHz], [DMSO] 9.55 (1H, s), 4.36 (1H, d), 4.09 (1H, m), 3.91 (1H, m), 3.65 (1H, d), 3.42 (1H, d), 3.21 (3H, s), 2.16 (3H, s), 2.03 (3H, s), 1.98 (2H, m), 1.78 (2H, m), 1.64 (3H, m), 1.37 (3H, s), 1.31 (2H, m), 1.17 (1H, m), 1.10 (3H, s), 0.87 (3H, d).
실시예 21.1
21.1 [5-(4- 브로모 -5- 메틸테트라히드로 -2H-피란-2-일)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드]
Figure pct00048
및 실시예 21.2: N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00049
단계 1: [에틸 5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트]
질소 하에 2-메틸부트-3-엔-1-올 (알드리치) (0.171 mL, 1.638 mmol), 브로민화인듐(III) (28.3 mg, 0.082 mmol) 및 무수 DCM (10 mL)의 빙냉된 혼합물에, 브로모트리메틸실란 (0.213 mL, 1.638 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 빙냉시키면서 교반하였다. 무수 DCM (2 mL) 중 빙냉 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 C) (300 mg, 1.638 mmol)의 용액을 5분 기간에 걸쳐 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 빙냉시키면서 교반하고 주말에 걸쳐 실온으로 가온하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 교반하면서 포화 수성 NaHCO3 (10 ml)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 용리액 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 물 (0.1% 포름산) 중 50 - 98% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 UV-기반 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (50 mL)에 첨가하고 포화 수성 NaHCO3 (50 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.47분; MS m/z [M+H]+332.2/334.2: 방법 2minLowpHv03
단계 2: [포타슘 5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트] 및 포타슘 (R)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복실레이트 및 포타슘 (S)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복실레이트
무수 THF (5 mL) 중 [에틸 5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트] (211 mg, 0.635 mmol)의 용액에, 포타슘 트리메틸실라놀레이트 (알드리치) (107 mg, 0.953 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하고 초음파처리하였다. 추가의 THF를 첨가하고 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하여 표제 화합물의 혼합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.07분; MS m/z [M+H]+ 224.2; Rt = 1.20분; MS m/z [M+H]+ 306.2: 방법 2minLowpHv03.
단계 3: [5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드] 및 (R)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드 화합물과 (S)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드 (1:1)의 혼합물
무수 NMP (4 mL) 중 포타슘 5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 및 포타슘 4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복실레이트 (조 혼합물) (217 mg, 0.634 mmol)의 교반 용액에 HATU (플루오로켐) (265 mg, 0.697 mmol), 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (133 mg, 0.634 mmol) 및 트리에틸아민 (0.194 mL, 1.395 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고 EtOAc (25 mL)와 1M NaOH (25 mL)에 분배하였다. 유기물을 물 (30 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 물 (0.1% 포름산) 중 30 - 70% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 UV-기반 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (50 mL)에 첨가하고 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다.
실시예 21.1: [5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드] LC-MS: Rt = 1.30분; MS m/z [M+H]+ 497.5: 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.88 (1H, s), 4.47 (1H, 다중선), 4.03-3.87 (2H, br 다중선), 3.80-3.72 (1H, 다중선), 3.14 (3H, s), 2.43-2.36 (1H, br 다중선), 2.13 (3H, s), 2.08 (3H, s), 2.01 (1H, br 다중선), 1.91-1.80 (3H, br 다중선), 1.79-1.68 (5H, br 다중선), 1.58 (1H, br 다중선), 1.31-1.18 (2H, br 다중선), 1.16-1.05 (1H, br 다중선), 0.95 (3H, d).
실시예 21.2: N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드 LC-MS: Rt = 1.25분; MS m/z [M+H]+ 415.4: 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (1H, s), 5.63 (1H, 다중선), 4.78 (1H, dd), 4.26-4.00 (3H, br 다중선), 3.26 (3H, s), 2.72-2.61 (1H, br 다중선), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.07-1.93 (3H, br 다중선), 1.92-1.81 (5H, br 다중선), 1.75-1.66 (2H, br 다중선), 1.67 (3H, s), 1.44-1.30 (2H, br 다중선), 1.30-1.18 (1H, br 다중선).
실시예 22:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-4-메틸-5-((2R,5R)-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00050
질소의 흐름 하에 EtOH (15 mL) 중 (R)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드 화합물과 (S)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드 (1:1)의 혼합물 (실시예 21.2) (35 mg, 0.084 mmol)에 Pd-C (3.59 mg, 0.034 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 0.35 bar에서 수소의 분위기 하에 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하고 에탄올로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 중력 하에 1 g 비오티지 실리카-TMT 카트리지에 통과시켰다. 카트리지를 에탄올로 세척하고 용리액을 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 물 (0.1% 포름산) 중 30 - 70% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 UV-기반 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (30 mL)에 첨가하고 포화 수성 NaHCO3 (30 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt 1.23분; MS m/z [M+H]+ 417.4; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.35 (1H, 다중선), 4.77 (1H, 다중선), 4.17-3.99 (2H, 다중선), 3.72 (1H, dd), 3.50 (1H, dd), 3.34 (3H, 다중선), 2.29-2.22 (6H, 다중선), 2.08-1.97 (4H, 다중선), 1.86 (3H, 다중선), 1.75 (1H, 다중선), 1.63 (1H 다중선), 1.37 (2H, 다중선), 1.30-1.22 (3H, 다중선), 1.05 (2H, 다중선), 0.87 (1H, 다중선).
초임계 유체 크로마토그래피를 사용하여 실시예 22를 키랄 분리하여 트랜스 부분입체이성질체의 라세미 혼합물 및 시스 부분입체이성질체의 2개의 개별 거울상이성질체를 수득하였다:
방법 세부 사항:
칼럼: 키랄팩(Chiralpak) AD-H 250 x 10 mm, 35℃에서 5 um
이동상: 30% 메탄올 / 70% CO2
유량: 10 ml/분
검출: 220 nm에서 UV
기기: 버거 미니그램 SFC2
실시예 22.a N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드의 단일 입체이성질체
Figure pct00051
SFC 체류 시간 = 9.74분
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (1H, br s), 4.80-4.75 (1H, br 다중선), 4.05 (1H, tt), 3.76-3.70 (1H, dd), 3.55-3.48 (1H, dd), 3.25 (3H, s), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.07-1.93 (2H, br 다중선), 1.93-1.75 (8H, br 다중선), 1.71 (1H, br 다중선), 1.67-1.58 (1H, br 다중선), 1.44-1.30 (2H, br 다중선), 1.30-1.18 (1H, br 다중선), 1.05 (3H, d).
실시예 22.b :
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드의 단일 입체이성질체
Figure pct00052
SFC 체류 시간 = 8.12분
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, br s), 4.79-4.76 (1H, br 다중선), 4.06 (1H, tt), 3.75-3.70 (1H, dd), 3.53-3.48 (1H, dd), 3.27 (3H, s), 2.28 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.03-1.95 (2H, 다중선), 1.92-1.77 (8H, br 다중선), 1.71 (1H, br 다중선), 1.66-1.59 (1H, br 다중선), 1.42-1.32 (2H, br 다중선), 1.27-1.20 (1H, br 다중선), 1.05 (3H, d).
실시예 22.c :
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2S,5R)-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드와 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,5S)-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00053
SFC 체류 시간 = 5.84분
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, br s), 4.50 (1H, dd), 4.10-3.98 (2H, br 다중선), 3.26 (3H, s), 3.17 (1H, t), 2.27 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.09-1.92 (4H, br 다중선), 1.93-.177 (7H, br 다중선), 1.71 (1H, br d), 1.42-1.17 (3H, br 다중선), 0.87 (3H, d).
실시예 23:
5-(( 2R,4S )-4-(2- 브로모프로판 -2-일)테트라히드로푸란-2-일)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2S,4R)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00054
단계 1: 2,2-디메틸부트-3-엔-1-올
무수 디에틸 에테르 (40 mL) 중 2,2-디메틸부트-3-인-1-올 (파르마블록스(PharmaBlocks)) (3 g, 30.6 mmol)의 용액에 2,2'-(에탄-1,2-디일비스(술판디일))디에탄올 (5.57 g, 30.6 mmol)에 이어서, 황산바륨 상 5% Pd (알드리치) (6.51 g, 3.06 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 질소로 재충전하면서 철저히 탈기하고 4시간 동안 실온에서 수소의 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을, 촉매를 디에틸 에테르로 세척하면서, 감압 하에 여과하였다. 여액을 감압 하에 조심스럽게 농축하여 용매의 대부분을 제거하였다. 생성된 현탁액을 여과하고 여액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.71 (1H, dd), 5.05-4.97 (2H, 다중선), 3.27 (2H, s), 1.41 (1H, br 다중선), 0.95 (6H, s).
단계 2: 에틸 5-((2R,4S)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,4R)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트의 혼합물
질소 하에 2,2-디메틸부트-3-엔-1-올 (328 mg, 3.28 mmol), 브로민화인듐(III) (56.6 mg, 0.164 mmol) 및 무수 DCM (20 mL)의 빙냉된 혼합물에 브로모트리메틸실란 (0.425 mL, 3.28 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 30분 동안 빙냉시키면서 교반하였다. 무수 DCM (2 mL) 중 빙냉 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 C) (600 mg, 3.28 mmol)의 용액을 15분 기간에 걸쳐 반응 혼합물에 첨가하고 반응 혼합물을 85분 동안 빙냉시키면서 교반하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 교반하면서 포화 수성 NaHCO3 (10 mL)로 처리하였다. 2상 혼합물을 상 분리 카트리지에 통과시키고 여액을 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-60% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.48분; MS m/z [M+H]+ 346.2/348.2: 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.12 (1H, dd), 4.45 (2H, q), 4.10-4.01 (2H, 다중선), 2.73-2.65 (1H, 다중선), 2.46-2.39 (1H, 다중선), 2.27 (3H, s), 1.82 (3H, s), 1.80 (3H, s), 1.43 (3H, t).
단계 3: 5-((2R,4S)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2S,4R)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산의 혼합물
THF (10 mL) 및 MeOH (1 mL) 중 에틸 5-((2R,4S)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트와 에틸 5-((2S,4R)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (442 mg, 1.277 mmol)의 혼합물의 교반 용액에 2M NaOH (수성) (1.277 mL, 2.55 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 완료 직후 반응물을 물 (20 mL)에 첨가하고 1M HCl (수성)을 첨가하여 pH 5-6으로 산성화하였다. 수성물을 EtOAc (40 mL)로 추출하고 합해진 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.18분; MS m/z [M+H]+ 318.4/320.5: 방법 2minLowpHv03
단계 4: 5-((2R,4S)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 5-((2S,4R)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
0℃에서 질소 하에 무수 DCM (15 mL) 중 DMF (0.073 mL, 0.943 mmol)의 교반 혼합물에, 옥살릴 클로라이드 (0.045 mL, 0.519 mmol)를 첨가하였다. 5분 후에 무수 DCM (3 mL) 중 5-((2R,4S)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산과 5-((2S,4R)-4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실산 (150 mg, 0.471 mmol)의 혼합물의 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 무수 DCM (2 mL) 및 트리에틸아민 (0.197 mL, 1.414 mmol) 중 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (109 mg, 0.519 mmol)의 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 40분 동안 0℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 DCM (30 mL)과 포화 수성 NaHCO3 (30 mL)에 분배하였다. 유기물을 상 분리 칼럼에 통과시키고 용리액을 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 DMSO에 용해시키고 물 (0.1% 포름산) 중 30 - 70% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 UV-기반 자동 역상 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (50 mL)에 첨가하고 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC: Rt = 1.26분: 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 5.19 (1H, t), 4.53 (1H, 다중선), 4.40 (1H, 다중선), 4.05 (1H, tt), 3.26 (3H, s), 2.92-2.77 (2H, br 다중선), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.06-1.94 (2H, br 다중선), 1.92-1.83 (4H, br 다중선), 1.72 (3H, s), 1.72-1.63 (1H, br 다중선), 1.64 (3H, s), 1.44-1.30 (2H, br 다중선), 1.29-1.19 (1H, br 다중선).
실시예 24:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-((2R,4R)-4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드와 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2S,4S)-4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
Figure pct00055
질소의 흐름 하에 에탄올 (10 mL) 중 5-(4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 (62 mg, 0.122 mmol)에 Pd-C (5.18 mg, 0.049 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온 및 0.35 bar에서 수소의 분위기 하에 교반하였다. 반응 혼합물에 NaHCO3 (40.9 mg, 0.487 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 2.5시간 동안 실온 및 0.35 bar에서 수소의 분위기 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOH로 세척하면서 셀라이트®를 통해 여과하였다. 여액을 비오티지 1 g 실리카-TMT 카트리지에 통과시키고 용리액을 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 물 (0.1% TFA) 중 30-98% MeCN의 9.5분 구배에 걸쳐 제조용 HPLC-MS에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 EtOAc (20 mL)에 용해시키고 포화 수성 NaHCO3 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.30분; MS m/z [M+H]+ 431.5: 방법 2minLowpHv03.
초임계 유체 크로마토그래피를 사용하여 실시예 24를 키랄 분리하여 단일 거울상이성질체를 수득하였다.
방법 세부 사항:
칼럼: 키랄팩 IB, 250 x 10 mm, 35℃에서 5 um
이동상: 40% 이소프로판올 + 0.1% v/v DEA / 60% CO2
유량: 10 ml/분
검출: 220 nm에서 UV
기기: 버거 미니그램 SFC1
실시예 24.a : N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2R,4R)-4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는
N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2S,4S)-4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
SFC Rt = 3.99분
LC-MS; Rt = 1.30분; MS m/z [M+H]+ 431.5; 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (1H, br s), 5.09 (1H, 다중선), 4.09 (1H, t), 4.10-4.00 (1H, tt), 3.69 (1H, t), 3.24 (3H, s), 2.45-2.36 (1H, 다중선), 2.25 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.18-2.09 (1H, br 다중선), 2.06-1.93 (2H, br 다중선), 1.91-1.83 (5H, br 다중선), 1.71 (1H, br 다중선), 1.67-1.60 (1H, br 다중선), 1.44-1.30 (2H, br 다중선), 1.29-1.19 (1H, br 다중선), 1.00 (3H, d), 0.95 (3H, d).
실시예 24.b : N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2R,4R)-4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-((2S,4S)-4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
SFC Rt = 5.42분
LC-MS: Rt 1.30분; MS m/z [M+H]+ 431.6: 방법 2minLowpHv03
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 5.12-5.06 (1H, 다중선), 4.12-4.01 (2H, 다중선), 3.69 (1H, t), 3.26 (3H, s), 2.44-2.36 (1H, 다중선), 2.26 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.18-2.08 (1H, 다중선), 2.05-1.95 (2H, br 다중선), 1.91-1.83 (5H, br 다중선), 1.71 (1H, br 다중선), 1.68-1.59 (1H, 다중선), 1.44-1.31 (2H, br 다중선), 1.30-1.19 (1H, br 다중선), 1.00 (3H, s), 0.95 (3H, s).
실시예 25:
5-(4-( tert -부틸)-1,3- 디옥솔란 -2-일)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00056
단계 1: 에틸 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
톨루엔 (0.5 mL) 중 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 C) (50 mg, 0.273 mmol)의 용액에 3,3-디메틸부탄-1,2-디올 (32.3 mg, 0.273 mmol)을 첨가하고 혼합물을 4.5시간 동안 110℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc와 물에 분배하고 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.42분; MS m/z [M+H]+ 284.3: 방법 2minHighpHv03
단계 2: 포타슘 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
THF (4 mL) 중 에틸 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (42 mg, 0.148 mmol)의 용액에 포타슘 트리메틸실라놀레이트 (19.02 mg, 0.148 mmol)를 첨가하고 혼합물을 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 3: 5-((2R,4R)-4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 5-((2R,4S)-4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 5-((2S,4R)-4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 및 5-((2S,4S)-4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 혼합물
NMP (0.7 mL) 중 포타슘 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (43.5 mg, 0.148 mmol)의 용액에 HATU (62.0 mg, 0.163 mmol), 트리에틸아민 (45.5 μl, 0.326 mmol) 및 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (중간체 D) (31.0 mg, 0.148 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물에 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 유기물을 염수 (x2)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다.
실시예 25a-25d:
5-(( 2R,4R )-4-( tert -부틸)-1,3- 디옥솔란 -2-일)-N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2R,4S)-4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2S,4R)-4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드 또는 5-((2S,4S)-4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00057
초임계 유체 크로마토그래피를 사용하여 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드를 키랄 분리하여 개별 거울상이성질체를 수득하였다.
방법 세부 사항:
칼럼: 키랄팩 IB, 250 x 10 mm, 35℃에서 5 um
이동상: 35% 이소프로판올 + 0.1% v/v DEA / 65% CO2
유량: 10 ml/분
검출: 220 nm에서 UV
기기: 버거 미니그램 SFC1
실시예 25a: 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 단일 입체이성질체 SFC: Rt = 3.36분
LC-MS　: Rt = 4.11분　; MS m/z [M+H]+ 447.6　: 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (1H, br s), 6.02 (1H, s), 4.14-4.00 (2H, 다중선), 3.97-3.87 (2H, 다중선), 3.36 (3H, s), 2.31 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.09-1.97 (2H, 다중선), 1.88 (3H, br t), 1.73 (1H, br d), 1.44-1.31 (2H, 다중선), 1.30-1.20 (2H, 다중선), 1.01 (9H, s).
실시예 25b: 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 단일 입체이성질체 키랄 SFC: Rt = 3.78분
LC-MS: Rt = 4.12분; MS m/z [M+H]+ 447.5; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 6.19 (1H, s), 4.16-4.00 (3H, 다중선), 3.85 (1H, t), 3.30 (3H, s), 2.30 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.07-1.94 (2H, 다중선), 1.87 (3H, br t), 1.72 (1H, br d), 1.45-1.20 (4H, 다중선), 0.99 (9H, s).
실시예 25c: 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 단일 입체이성질체 키랄 SFC: Rt = 4.05분
LC-MS: Rt = 4.09분; MS m/z [M+H]+ 447.5; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (1H, br s), 6.02 (1H, s), 4.10-4.01 (2H, 다중선), 3.97-3.87 (2H, 다중선), 3.25 (3H, s), 2.32 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.06-1.93 (2H, 다중선), 1.88 (3H, br t), 1.71 (1H, br d), 1.44-1.30 (2H, 다중선), 1.30-1.20 (2H, 다중선), 1.00 (9H, s).
실시예 25d: 5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드의 단일 입체이성질체 키랄 SFC: Rt = 5.95분
LC-MS: Rt = 4.15분; MS m/z [M+H]+ 447.6; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (1H, br s), 6.20 (1H, s), 4.16-4.09 (2H, 다중선), 4.07-4.00 (2H, 다중선), 3.27 (3H, s), 2.30 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.07-1.94 (2H, 다중선), 1.87 (3H, br t), 1.72 (1H, br d), 1.45-1.20 (4H, 다중선), 0.99 (9H, s).
실시예 26:
N-(2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-3-옥소-2,3- 디히드로 -1H- 피라졸 -4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
Figure pct00058
3,3-디메틸부탄-1,2-디올 (단계 1)을 2,2-디메틸프로판-1,3-디올로 대체함으로써 실시예 25의 방법과 유사한 방법에 의해 표제 화합물을 제조하였다;
LC-MS: Rt = 3.68분; MS m/z [M+H]+ 433.4; 방법 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 (1H, s), 5.58 (1H, s), 3.96 (1H, tt), 3.71 (2H, d), 3.55 (2H, d), 3.18 (3H, s), 2.26 (3H, s), 2.11 (3H, s), 1.97-1.86 (2H, 다중선), 1.80-1.74 (3H, 다중선), 1.62 (1H, br d), 1.33-1.11 (4H, 다중선), 1.23 (3H, s), 0.75 (3H, s).
중간체 A:
에틸 5- 브로모 -4- 메틸이속사졸 -3- 카르복실레이트
Figure pct00059
단계 1: 에틸 4-메틸-5-옥소-4,5-디히드로이속사졸-3-카르복실레이트
에탄올 (2 l) 중 디에틸 옥살릴 프로피오네이트 (300 g, 1.48 mol)에 히드록실아민 히드로클로라이드 (124 g, 1.78 mol)를 첨가하고 반응 혼합물을 3시간 동안 80℃에서 가열하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 물 및 DCM으로 처리하고 수성물을 DCM으로 추출하였다. 합해진 유기물을 건조시키고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.40 (2H, q), 2.09 (3H, s), 1.38 (3H, t).
단계 2: 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
에틸 4-메틸-5-옥소-4,5-디히드로이속사졸-3-카르복실레이트 (42.5 g, 248 mmol) 및 옥시브로민화인 (199 g, 695 mmol)을 함께 교반하고 80℃로 가열하였다. 트리에틸아민 (34.6 mL, 248 mmol)을 15분에 걸쳐 적가하고 반응 혼합물을 3시간 동안 80℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하였다. DCM (400 mL)을 첨가하고 혼합물을 교반하면서 얼음 (~400 mL)에 부었다. 2M NaOH (수성) (1250 mL)를 pH 7까지 첨가하고 생성된 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (2 x 300 mL)으로 추출하고 생성된 유기 추출물을 합하고, 물 (400 mL), 티오황산나트륨 (5% w/v 용액, 400 mL), 물 (400 mL) 및 염수 (400 mL)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 및 목탄 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.02분: MS m/z [M+H]+ 234.0: 방법 2minLowpH
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 4.47 (2H, q), 2.21 (3H, s), 1.44 (3H, t).
중간체 B:
에틸 5-(( 1R,2S )-1,2-디히드록시프로필)-4- 메틸이속사졸 -3- 카르복실레이트
Figure pct00060
단계 1: (E)-에틸 4-메틸-5-(프로프-1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복실레이트
EtOH (250 mL) 중 포타슘 트랜스-1-프로페닐트리플루오로보레이트 (9.86 g, 66.7 mmol), PdCl2(dppf).DCM 부가물 (907 mg, 1.11 mmol), 에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (13 g) 및 트리에틸아민 (7.7 mL)의 현탁액을 진공 하에 탈기하고 질소로 역-충전시킨 후에 18시간 동안 90℃에서 가열하였다. 실온으로 냉각한 후에, 반응물을 EtOAc와 염수에 분배하고, 분리하고, MgSO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 5-10% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.30분; MS m/z [M+H]+ 196.2; 방법 2minLowpHv03
단계 2: 에틸 5-((1R,2S)-1,2-디히드록시프로필)-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
tert-BuOH-물 (1 mL) 중 (E)-에틸 4-메틸-5-(프로프-1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복실레이트 (500 mg, 2.56 mmol)를 tert-BuOH-물 (1:1, 19 mL) 중 AD-믹스-베타 (3.59 g, 7.63 mmol), 메탄 술폰아미드 (731 mg, 7.68 mmol), 변형 AD-믹스-β (DHQD)2PHAL (80 mg, 0.102 mmol) 및 사산화오스뮴 (tert-BuOH 중 2.5 wt% 용액 0.836 mL, 0.067 mmol)의 혼합물에 조금씩 첨가하고 생성된 반응 혼합물을 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 아황산나트륨 (3.9 g)을 일 분량으로 첨가하고 반응물을 30분 동안 교반되도록 방치하였다. 상을 분리하고 EtOAc 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 65-75% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (96% ee)을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 0.78분; MS m/z [M+H]+ 230.2; 방법 2minLowpHv03
중간체 C:
에틸 5- 포르밀 -4- 메틸이속사졸 -3- 카르복실레이트
Figure pct00061
단계 1: 에틸 4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복실레이트
에틸 5-브로모-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트 (중간체 A) (15 g, 64.1 mmol) 및 트리부틸(비닐)스타난 (22.48 mL, 77 mmol)을 무수 디옥산 (250 mL)에서 교반하고 실온에서 90분 동안 질소로 퍼징하였다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (3.70 g, 3.20 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (250 mL)와 물 (250 mL)에 분배하고 분리하였다. 유기 층에 플루오린화나트륨 용액 (~1M, 250 ml)을 첨가하고 생성된 현탁액을 셀라이트®를 통해 여과하였다. 층을 분리하고 유기 물을 물, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-30% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.20분: MS m/z [M+H]+ 182.5: 방법 2minLowpHv03
단계 2: 에틸 5-포르밀-4-메틸이속사졸-3-카르복실레이트
실온에서 THF (40 mL) 및 물 (20 mL) 중 에틸 4-메틸-5-비닐이속사졸-3-카르복실레이트 (3 g, 16.56 mmol)에, 과아이오딘산나트륨 (10.62 g, 49.7 mmol) 및 오스뮴 인캐트 40 (828 mg, 0.248 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 주말에 걸쳐 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 세척하면서 셀라이트® (5 g) 상에서 여과하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 DCM에 현탁시키고, 초음파처리하고 상 분리 카트리지에 통과시켰다. 용리액을 수집하고 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.12 (1H, s), 4.50 (2H, q), 2.56 (3H, s), 1.46 (3H, s).
중간체 D:
4-아미노-2- 시클로헥실 -1,5-디메틸-1H- 피라졸 -3(2H)-온
Figure pct00062
단계 1: 2-시클로헥실-5-메틸-1H-피라졸-3(2H)-온
Figure pct00063
시클로헥실히드라진 히드로클로라이드 (AK 사이언티픽(Scientific)) (700 g, 4643 mmol)를 빙냉 2M 수산화나트륨 용액 (1778 mL, 3556 mmol) 및 DCM (3000 mL)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 생성된 상을 분리하고 수성 층을 DCM (4 x 2000 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 생성된 고체를 물 (1300 mL)에 용해시키고, 여기에 아세트산 (1300 mL) 및 에틸 아세토아세테이트 (플루카(Fluka)) (450 mL, 3556 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 1시간 동안 85℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축 건조시키고 잔류물을 DCM (3000 mL) 및 물 (1000 mL)에 용해시켰다. 2M K2CO3 (수성)를 사용하여 pH를 pH 9로 조정하고, 상을 분리하고 유기 추출물을 염수 (1 x 2 L)로 세척하였다. 제1 수성 층을 염화나트륨으로 포화시키고 합해진 수성 상을 DCM (4 x 2 L)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 고체를 수득하였다. 조 고체를 분쇄하고, TBME (2000 mL)를 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 50℃에 이어서, 실온에서 1시간 교반하였다. 생성된 현탁액을 고체를 TBME (4 x 500 mL)로 세척하면서 여과하였다. 단리된 고체를 16시간 동안 45℃에서 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.62 (1H, br s), 5.06 (1H, s), 3.89 (1H, 다중선), 1.98 (3H, s), 1.81-1.55 (7H, 다중선), 1.36-1.22 (2H, 다중선), 1.18-1.05 (1H, 다중선).
단계 2: 2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온
Figure pct00064
N,N-디메틸포름아미드 (2200 mL) 중 2-시클로헥실-5-메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (525 g, 2834 mmol)의 현탁액을 40℃로 가열하고 메틸 아이오다이드 (532 mL, 8502 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20시간 동안 70℃로 가열하였다. 추가의 메틸 아이오다이드 (177 mL, 2834 mmol)를 첨가하고 혼합물을 3.5시간 동안 75℃에서, 그 다음에 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하고 잔류물을 TBME (2000 mL)로 연화처리하였다. 생성물을 TBME (5x 500 mL)로 세척하면서 여과에 의해 수집하여 고체를 수득하였다. 단리된 고체를 DCM (2500 mL) 및 물 (500 mL)에 현탁시키고 2M K2CO3 수용액 (1700 mL)을 사용하여 pH를 pH 9로 조정하였다. 상을 분리하고 수성 층을 DCM (3 x 500 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 염수 (1000 mL)로 세척하고 감압 하에 농축하였다. 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트 (2000 mL)에 용해시키고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 EtOAc 중 10% MeOH (7 x 300 mL)로 용리시키면서, 200 g의 실리카 겔 (40-63 ㎛)을 통해 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하고 65℃에서 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 5.02 (1H, s), 3.84 (1H, tt), 3.14 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.98-1.86 (2H, 다중선), 1.78-1.53 (5H, 다중선), 1.33-1.20 (2H, 다중선), 1.18-1.04 (1H, 다중선).
단계 3: 2-시클로헥실-1,5-디메틸-4-니트로-1H-피라졸-3(2H)-온
Figure pct00065
-15℃로 냉각된 트리플루오로아세트산 (1940 mL)에 2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온 (535 g, 2231 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 0℃로 냉각하였다. 온도를 15℃ 미만으로 유지하면서 질산 90% (211 mL, 4461 mmol)를 90분에 걸쳐 적가하고 반응 혼합물을 10℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 빙수 (8 L)에 서서히 붓고 30분 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고 물 (2 x 2 L), 포화 중탄산나트륨 용액 (1 x 2 L), 물 (2 x 2 L), TBME (3 x 2 L) 및 헵탄 (2 x 2 L)으로 세척하였다. 단리된 고체를 진공 중에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 4.06 (1H, tt), 3.61 (3H, s), 2.57 (3H, t), 2.15-2.03 (2H, 다중선), 1.81-1.65 (4H, 다중선), 1.64-1.55 (1H, 다중선), 1.38-1.24 (2H, 다중선), 1.19-1.06 (1H, 다중선).
단계 4: 4-아미노-2-시클로헥실-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온
Figure pct00066
MeOH (4500 ml) 및 THF (4500 ml) 중 2-시클로헥실-1,5-디메틸-4-니트로-1H-피라졸-3(2H)-온 (415 g, 1.73 mol)에 10% Pd/C (70 g)를 첨가하고 반응 혼합물을 57.5시간 동안 실온 및 0.1 bar에서 수소화하였다. 생성된 혼합물을 압력 스트레이너(pressure strainer)를 통해 여과하고 메탄올 (1x1 L) 및 THF (2x 1 L)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 암적색 오일을 수득하였다. 오일을 TBME (4 L)에 즉시 용해시키고, 감압 하에 약 2 L로 농축하고 시딩하였다 (100 mg). 현탁액을 실온에서 2시간 동안 교반하고 1시간 동안 빙조에서 냉각하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고 여액이 무색이 될 때까지 빙냉 TBME로 조금씩 세척하고 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt 0.55분; MS m/z 210.1 [M+H]+; 방법 (SRPb)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 3.68 (1H, tt), 3.53 (2H, br s), 2.77 (3H, s), 1.96-1.83 (2H, 다중선), 1.92 (3H, s), 1.78-1.69 (2H, 다중선), 1.64-1.53 (3H, 다중선), 1.33-1.19 (2H, 다중선), 1.17-1.04 (1H, 다중선).
중간체 E:
4-아미노-2- 시클로부틸 -1,5-디메틸-1H- 피라졸 -3(2H)-온
Figure pct00067
단계 1: tert-부틸 2-시클로부틸리덴히드라진카르복실레이트
질소 하에, 이소헥산 (378 mL) 중 시클로부타논 (16.96 ml, 227 mmol)과 tert-부틸 히드라진카르복실레이트 (30 g, 227 mmol)의 혼합물을 1시간 동안 환류 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 1시간 동안 교반하였다. 생성된 현탁액을 고체를 이소-헥산 (x2)으로 세정하면서 여과하였다. 고체를 30℃에서 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.16 (1H, br s), 3.02 (2H, 다중선), 2,81 (2H, 다중선), 2.10-2.00 (2H, 다중선), 1.53 (9H, s).
단계 2: tert-부틸 2-시클로부틸히드라진카르복실레이트
THF (50 mL) 중 tert-부틸 2-시클로부틸리덴히드라진카르복실레이트 (5.0 g, 27.1 mmol)의 용액을 질소 분위기 하에 보란 테트라히드로푸란 착물 (33.9 mL, 33.9 mmol)의 용액에 1.5시간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 2.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 보란 테트라히드로푸란 (3 mL, 3 mmol)을 적가하고 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (50 mL)을 첨가하여 조심스럽게 켄칭하고 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 물 (30 mL)로 희석하고 분리를 돕기 위해 염수를 사용하여, EtOAc (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-10% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
단계 3: 1-시클로부틸-2-메틸히드라진
THF (26.8 mL) 중 tert-부틸 2-시클로부틸히드라진카르복실레이트 (1.0 g, 5.37 mmol)의 용액을 질소 분위기 하에 THF (11.63 mL, 27.9 mmol) 중 2.4 M 수소화알루미늄리튬의 용액에 적가하였다. 일단 첨가가 완료되면 반응 혼합물을 20시간 동안 환류 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 빙조를 사용하여 냉각하고 여기에 물 (1 mL), 15% NaOH (1 mL) 및 물 (3 mL)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 15분 동안 교반한 다음에 셀라이트®를 통해 여과하였다. 여액에 HCl (디옥산 중 4M, 1.4 mL, 5.6 mmol)을 첨가하고 용매를 EtOH (x2)로 공비시키면서 감압 하에 제거하였다. 혼합물을 에테르로 연화처리하고 생성된 고체를 여과하고 에테르로 세척하였다. 고체를 감압 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다.
단계 4: (S)-메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-옥소부타노에이트
DCM (50 mL) 중 데스-마틴 페리오디난 (2.84 g, 6.69 mmol)의 용액을 실온에서 및 질소 분위기 하에 DCM (20 mL) 중 Boc-L-트레오닌 메틸 에스테르 (1.3 g, 5.57 mmol)에 첨가하였다. 백색 현탁액을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 DCM (50 mL)으로 희석하고 0.5 M의 아황산나트륨 (6.2 g)을 함유하는 포화 NaHCO3 (수성) (50 mL)를 첨가하여 켄칭하였다. 상을 분리하고 유기 층을 포화 NaHCO3 (수성) (50 mL) 및 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 10-50% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.72 (1H, br d), 5.07 (1H, d), 3.84 (3H, s), 2.38 (3H, s), 1.46 (9H, s).
단계 5: tert-부틸 (2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)카르바메이트
EtOAc (6.407 mL) 중 (S)-메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-옥소부타노에이트 (400 mg, 1.730 mmol)의 용액을 1-시클로부틸-2-메틸히드라진 (284 mg, 2.076 mmol)에 이어서 아세트산나트륨 (213 mg, 2.59 mmol)으로 처리하였다. 현탁액을 30분 동안 실온에서 및 4시간 동안 80℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc를 첨가하였다. 층을 분리하고 수성물을 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 EtOAc에 용해시키고 이소-헥산을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 여과하고 고체를 이소-헥산으로 세정하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 그 다음에 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 50-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 6.19 (1H, br s), 4.61 (1H, 다중선), 3.23 (3H, s), 2.85-2.72 (2H, 다중선), 2.39-2.30 (2H, 다중선), 2.17 (3H, s), 1.93-1.83 (1H, 다중선), 1.81-1.71 (1H, 다중선), 1.48 (9H, s).
단계 6: 4-아미노-2-시클로부틸-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 (2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)카르바메이트의 용액에 황산 (0.034 mL, 0.634 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 추가의 황산 (0.068 mL, 1.268 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 이를 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 DCM 및 물로 희석하고 층을 분리하였다. 수성 층을 2M NaOH (수성)를 적가하여 염기성으로 만들었다. 수성 층을 DCM (x3)으로 추출하고 합해진 유기 추출물을 상 분리 카트리지에 통과시켰다. 용리액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.54 (1H, 다중선), 2.94 (3H, s), 2.72 (2H, 다중선), 2.43 (2H, br s), 2.36-2.26 (2H, 다중선), 2.04 (3H, s), 1.90-1.78 (1H, 다중선), 1.78-1.67 (1H, 다중선).
중간체 F:
2,2- 디메틸헥스- 5-엔-3- 올
Figure pct00068
0℃에서 디에틸 에테르 (200 mL) 중 트리메틸아세트알데히드 (10.2 mL, 90.9 mmol)의 용액에 알릴마그네슘 브로마이드 (100 mL, 에테르 중 1M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 염화암모늄으로 켄칭하고 디에틸 에테르로 추출하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 조심스럽게 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.95-5.83 (1H, 다중선), 5.18 (1H, 다중선), 5.15 (1H, 다중선), 3.28 (1H, 다중선), 2.45-2.35 (1H, 다중선), 2.06-1.95 (1H, 다중선), 1.62 (1H, s), 0.95 (9H, s).
중간체 G:
4-아미노-2-이소프로필-1,5-디메틸-1H- 피라졸 -3(2H)-온
Figure pct00069
단계 1: 메틸 2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-히드록시부타노에이트
MeOH (50 mL) 중 2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-히드록시부탄산 (5 g, 14.65 mmol)의 용액에 H2SO4 (0.781 mL, 14.65 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류 하에 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc의 구배를 사용하여 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.27분; MS m/z [M+H]+ 356.3: 방법 2minLowpHv03
단계 2: 메틸 2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-옥소부타노에이트
DCM (25 mL) 중 메틸 2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-히드록시부타노에이트 (1.5 g, 4.22 mmol)의 용액에 데스-마틴 페리오디난 (1.790 g, 4.22 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 DCM으로 희석하고 1:1 2M 탄산나트륨 (수성) 및 포화 아황산나트륨 용액 (수성)을 첨가하고 15분 동안 실온에서 교반하였다. 층을 분리하고 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.36분; MS m/z [M+H]+ 354.3: 방법 2minLowpHv03
단계 3: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-이소프로필-5-메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)카르바메이트
에탄올 (25 mL) 중 1.25M HCl 중 메틸 2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-옥소부타노에이트 (2.766 g, 7.83 mmol)의 용액에 이소프로필히드라진 히드로클로라이드 (1.298 g, 11.74 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 교반하였다. 완료 직후 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 이소-헥산 중 0-100% EtOAc 및 EtOAc 중 10% MeOH의 구배를 사용하여 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 IPA에 용해시키고 여기에 물을 첨가하여 탁한 혼합물을 수득하고 이를 초음파처리하고 실온에서 방치하였다. 생성된 현탁액을 여과하고 고체를 감압 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.14분; MS m/z [M+H]+ 378.3/379.3: 방법 2minLowpHv03
단계 4: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)카르바메이트
DMF (30 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-이소프로필-5-메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)카르바메이트 (2.109 g, 5.59 mmol)의 용액에 메틸 아이오다이드 (2.80 mL, 44.7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 90℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 IPA 및 물로 켄칭하고 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 EtOAc 중 0-10% MeOH의 구배를 사용하여 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.20분; MS m/z [M+H]+ 392.4: 방법 2minLowpHv03
단계 5: 4-아미노-2-이소프로필-1,5-디메틸-1H-피라졸-3(2H)-온
DMF (30 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)카르바메이트 (2.047 g, 5.23 mmol)의 용액에 실온에서 피페리딘 (2.59 mL, 26.1 mmol)을 첨가하였다. 첨가의 완료 직후 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기물을 2M HCl (수성)로 추출하고 산성 수성 추출물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 중화시키고 C18 카트리지 상에 로딩하였다. 칼럼을 물로 용리시키고 수집된 수성물을 SCX-2로 슬러리화하고 여과하였다. 수지를 MeOH 및 MeOH 중 7M 암모니아로 세정하였다. MeOH 및 수성 여액 용매를 감압 하에 제거하였다. MeOH (150 mL)를 생성된 혼합물에 첨가하고, 초음파처리하고, 여과하고 여액을 감압 하에 농축하였다. EtOH를 생성된 혼합물에 첨가하고 이를 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 DCM 중 0-10% MeOH의 구배를 사용하여 크로마토그래피에 의해 정제하고 조 물질을 수득하였다. MeOH 중 조 물질을 SCX-2 (30 g)로 슬러리화하였다. 현탁액을 여과하고 MeOH로 세척하였다. 그 다음에 수지를 MeOH 중 7M NH3으로 용리시켰다. 메탄올성 암모니아를 감압 하에 농축하여 조 물질을 수득하였다. 그 다음에 조 물질을 실리카 상에 흡착시키고 DCM 중 0-10% MeOH의 구배를 사용하여 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다;
LC-MS: Rt = 1.48분; MS m/z [M+H]+ 170.2: 8minHighpHv01
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.72 (2H, br s), 4.42 (1H, 다중선), 3.28 (3H, s), 2.25 (3H, s), 1.36 (6H, d).

Claims (16)

  1. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 I>
    Figure pct00070

    상기 식에서,
    R1은 (C3-C6)알킬 또는 (C3-C6)시클로알킬이고;
    R2는 메틸이고;
    R3은 (C6-C10)분지형 알킬, (C6-C10)분지형 알케닐, (C5-C8)시클로알케닐, (C5-C8)시클로알킬, 또는 Het로부터 선택되고; 여기서 (C5-C8)시클로알케닐 또는 (C5-C8)시클로알킬은 비치환되거나 1, 2, 3 또는 4개의 치환기 R4에 의해 치환되고; 여기서 Het는 1, 2, 3 또는 4개의 치환기 R4에 의해 치환되고;
    각각의 R4는 할로, (C1-C4)알킬, 할로(C1-C4)알킬, (C1-C4)알콕시, 또는 할로(C1-C4)알콕시로부터 독립적으로 선택되거나;
    2개의 R4 기는, 동일한 탄소 원자에 부착시, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께 취해져서 시클로펜틸, 테트라히드로푸란 또는 디옥솔란 고리를 형성할 수 있고;
    여기서 Het는 a) 2- 또는 3-위치에서 1개의 산소 원자, 또는 b) 2- 및 5-, 또는 2- 및 6-위치에서 2개의 산소 원자를 포함하는 5 또는 6원 전부 포화 또는 부분 포화 헤테로시클릭 고리 (여기서 번호 매기기는 부착점을 기준으로 한다)이고;
    (C5-C8)시클로알킬은 5, 6, 7 또는 8개의 탄소 원자를 함유하는 모노시클릭 고리 또는 브릿지된 고리계일 수 있다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 이소-프로필, 시클로부틸 또는 시클로헥실인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R3이 2,2-디메틸펜틸, 2,2-디메틸펜트-2-엔일, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥센일, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 디옥사닐, 테트라히드로푸라닐, 디옥솔라닐 및 비시클로[2.2.2]옥타닐로부터 선택되고; 여기서 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥센일, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 디옥사닐, 테트라히드로푸라닐, 디옥솔라닐 또는 비시클로[2.2.2]옥타닐 고리는 비치환되거나 1, 2, 3 또는 4개의 치환기 R4에 의해 치환되고;
    각각의 R4가 할로, (C1-C4)알킬, 할로(C1-C4)알킬, (C1-C4)알콕시, 또는 할로(C1-C4)알콕시로부터 독립적으로 선택되거나;
    2개의 R4 기가, 동일한 탄소 원자에 부착시, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께 취해져서 테트라히드로푸란 또는 디옥솔란 고리를 형성할 수 있는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R3이
    Figure pct00071
    이고,
    m이 1, 2, 3 또는 4인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R4가 메틸, 이소프로필, tert-부틸 및 메톡시로부터 독립적으로 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제1항에 있어서,
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로필시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(6-에틸-4-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(6,6-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-에틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
    [5-(4-(tert-부틸)시클로헥스-1-엔-1-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(4-메틸시클로헥스-1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
    5-(시클로헵트-1-엔-1-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(4-(트리플루오로메틸)시클로헥스-1-엔-1-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로펜트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(2-옥사스피로[4.5]데크-7-엔-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드];
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로폭시시클로헥스-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4,4-디메틸시클로헥실)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    [N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸시클로펜틸)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부틸)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    (Z)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    (E)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(3,3-디메틸부트-1-엔-1-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-시클로헥실-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
    실시예 12
    5-(6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-(6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-(6-(tert-부틸)-4-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-(6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로부틸-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-(6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-(6-(tert-부틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-이소프로필-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(6-이소프로필-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(6-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-((2R,3S)-3,5,5-트리메틸-1,4-디옥산-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
    [5-(4-브로모-5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드];
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸-5-(5-메틸테트라히드로-2H-피란-2-일)이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-(4-(2-브로모프로판-2-일)테트라히드로푸란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(4-이소프로필테트라히드로푸란-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    5-(4-(tert-부틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드;
    N-(2-시클로헥실-1,5-디메틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸-4-일)-5-(5,5-디메틸-1,3-디옥산-2-일)-4-메틸이속사졸-3-카르복스아미드
    로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물;
    또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. 치료 유효량의 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  8. 치료 유효량의 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 1종 이상의 치료 활성제를 포함하는 조합물.
  9. 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 Smurf-1 활성을 조정하는 방법.
  10. 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유로부터 선택된 장애 또는 질환의 치료의 필요성이 인정된 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 장애 또는 질환을 치료하는 방법.
  11. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  12. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유로부터 선택된 장애 또는 질환의 치료에서 사용하기 위한, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  13. 폐동맥 고혈압 (PAH)을 포함한, 폐 고혈압, 섬유증, 류마티스 관절염, 및 골절 치유로부터 선택된 장애 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
  14. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택된 장애 또는 질환의 치료에서 사용하기 위한, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  15. 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택된 질환 또는 장애의 치료의 필요성이 인정된 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 장애 또는 질환을 치료하는 방법.
  16. 녹내장, 유전성 출혈성 모세혈관확장증 (HHT), 단백뇨, 상처 치유, COPD 및 천식으로부터 선택된 장애 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
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