CN106661012B - 甲酰胺衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐；制备本发明化合物的方法和其治疗用途。本发明还提供药理学活性剂的组合和药物组合物。

Description

甲酰胺衍生物
技术领域
本发明描述了可用于治疗的有机化合物。所述化合物表现出作为选择性Smurf-1抑制剂的性质，因此可用于治疗一系列病症例如肺动脉高压、青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合以及COPD和哮喘。
背景技术
Smurf-1(Smad泛素化调节因子1)是E3泛素连接酶的HECT家族的成员，其标记用于通过泛素依赖性蛋白水解途径进行蛋白水解降解的特异性底物。Smurf-1的主要底物包括RhoA、骨形态发生蛋白(BMP)受体(BMPR)1和2、smad1和5、TNFα受体相关因子(TRAF)6和myD88(Andrews,P.S.等人.Assay Drug Dev.Technol.2010)。鉴于底物列表，Smurf-1在调节BMP信号传导(Chen,D等人.Growth Factors,2004)、神经元细胞极性(Stiess,M.和Bradke,F.Neuron,2011)、细胞迁移(Huang,C.Cell Adh.Migr.2010)、肿瘤细胞侵袭(Sahai,E.等人.JCB,2007)、线粒体自噬(Orvedahl,A.Nature,2011)、间质干细胞增殖(Zhao,L.等人.J.Bone Miner.Res.2010)和上皮-间质转化(EMT)(Ozdamar,B等人.Science2005)中起作用。
肺动脉高压(PAH)是多种病因的威胁生命的攻击性的和复杂的疾病，其特征在于导致右心室肥大/衰竭的进行性肺血管病变，并且在大多数情况下导致过早死亡。目前的药理疗法是姑息的。虽然已经观察到预期寿命的改善，但是目前的疗法重点在于改变疾病的血管收缩元件，其不会停止或逆转疾病的进展，并且移植(双肺或心肺)仍然是唯一的根治疗法。鉴于目前治疗类别的有限效果，需要靶向PAH的潜在进行性肺血管重塑的新型疗法。
转化生长因子β(TGF-β)超家族受体骨形态发生蛋白受体II(BMPR-II)基因中的种系突变在70％的可遗传形式的和一些散发形式的特发性PAH(IPAH)中是普遍的。骨形态发生蛋白是属于TGF-β超家族的信号分子。骨形态发生蛋白最初通过其诱导软骨和骨形成的能力来鉴定，并且随后被鉴定为调节广泛功能的多功能蛋白，所述功能例如多种细胞类型中的增殖、分化和凋亡，所述细胞类型包括成骨细胞、上皮细胞、神经元、免疫细胞和平滑肌细胞。到目前为止，已经鉴定了>20种哺乳动物BMP，但是在哺乳动物中仅克隆了能够与BMP结合的三种I型和三种II型受体(分别为BMPR-I和BMPR-II)。骨形态发生蛋白从多种细胞类型包括肺血管平滑肌细胞和内皮细胞合成和分泌。除了在BMPR-I和-II中的突变之外，来自患有非家族性PAH的患者的肺显示显着降低的血管BMPR-1和-II的水平，这意味着在许多形式的PAH中破坏的BMP信号传导的中心作用(Du,L等人.N.Eng.J.Med,2003)。因此，PAH患者的肺血管系统中BMP信号传导的恢复在用于治疗PAH的新型抗重塑治疗剂的开发中是特别令人感兴趣的。
已经显示Smurf-1介导多种细胞类型包括成骨细胞(Zhao,M等人.JBC,2003)、成肌细胞(Ying,SX等人.JBC,2003)、肺上皮(Shi W,等人.Am.J.Physiol.Cell.Mol.Physiol,2004)、神经元组织(Kallan,T等人.Mol.Cell.Biol,2009)和心内膜细胞(Towsend,TA,等人.Cells Tissues Organs,2011)中BMPR-I、-II以及smad1和5的降解。最近，支持Smurf-1在PAH中的作用的第一个证据出现，其中增强的Smurf-1水平在慢性缺氧和野百合碱临床前体内PAH模型中被观察到，并与BMPR1和2的下调相关(Murakami,K,等人.Exp.Biol.Med,2010和Yang,J.等人.Circ.Res,2010)。
发明内容
仍然需要用于肺动脉高压的新的治疗和疗法。本发明提供了化合物、其药学上可接受的盐或共晶体、其药物组合物及其组合产品，所述化合物是Smurf-1抑制剂。本发明还提供了治疗、预防或改善肺动脉高压的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的Smurf-1抑制剂。
根据本发明的第一方面，实施方案1提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐或共晶体，其中
R1是(C3-C6)烷基或(C3-C6)环烷基；
R2是甲基；
R3选自(C6-C10)支链烷基、(C6-C10)支链烯基、(C5-C8)环烯基、(C5-C8)环烷基或Het；其中(C5-C8)环烯基或(C5-C8)环烷基是未取代的或被1、2、3或4个取代基R4取代；且其中Het被1、2、3或4个取代基R4取代；
各R4独立地选自卤代、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基；或
两个R4基团当连接在相同的碳原子上时，可以与它们所连接的碳原子一起形成环戊基、四氢呋喃或二氧戊环环；且
Het是5或6元的完全饱和或部分饱和的杂环，其包含a)在2-或3-位的1个氧原子，或b)在2-和5-位或2-和6-位的2个氧原子，其中编号相对于连接点；且
(C5-C8)环烷基可以是含有5、6、7或8个碳原子的单环或桥环系统。
在另一个实施方案中，提供了如上定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其药学上可接受的盐或共结晶体或其亚式以及一种或多种药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其药学上可接受的盐或其亚式以及一种或多种药学上可接受的载体。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗选自以下的病症或疾病的方法：肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎、骨折愈合、青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合以及COPD和哮喘，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其药学上可接受的盐或共结晶体或其亚式或其药学上可接受的盐或共晶体。在一些实施方案中，向受试者施用治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，向受试者施用治疗有效量的根据式(I)亚式的化合物或其药学上可接受的盐。其他实施方案提供了治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的病症或疾病的方法。
在另一个实施方案中，本发明提供了组合产品特别是药物组合产品，其包含治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体或其亚式以及一种或多种治疗活性剂。
本文描述了本发明的各种实施方案。
详细说明
因此，本发明提供如上文作为实施方案1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或共晶体。
实施方案2.根据实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R1是异丙基、环丁基或环己基。
实施方案3.根据实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R1是环己基。
实施方案4.根据任何前述实施方案的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R3选自2,2-二甲基戊基、2,2-二甲基戊-2-烯基、环戊基、环己基、环己烯基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、二烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基和二环[2.2.2]辛基；其中所述环戊基、环己基、环己烯基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、二烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基或二环[2.2.2]辛基环是未取代的或被1、2、3或4个取代基R4取代；且
各R4独立地选自卤代、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基；或
两个R4基团当连接在相同的碳原子上时，可以与它们连接的碳原子一起形成四氢呋喃或二氧戊环环。
实施方案5.根据任何前述实施方案的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R3是
且m是1、2、3或4。
实施方案6.根据任何前述实施方案的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R3是
且m是1、2、3或4。
实施方案7.根据任何前述实施方案的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中各R4独立地选自甲基、异丙基、叔丁基和甲氧基。
实施方案8.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物选自
实施例1
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
实施例1.1
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6-乙基-4-甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例1.2
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6,6-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例1.3
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-乙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
实施例1.4
[5-(4-(叔丁基)环己-1-烯-1-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
实施例1.5
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-甲基环己-1-烯-1-基)异唑-3-甲酰胺]；
实施例1.6
5-(环庚-1-烯-1-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例1.7
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-(三氟甲基)环己-1-烯-1-基)异唑-3-甲酰胺]；
实施例2
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺；
实施例2.1
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]；
实施例2.2
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例3
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例4
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]；
实施例5
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
实施例6
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例6.1
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基环戊基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
实施例7
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例8
(Z)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例9
(E)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例10
5-环己基-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例11
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺；
实施例12
5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例13
5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例14
5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例15
5-(6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例16
5-(6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例17
5-(6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例18
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6-异丙基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例19
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺；
实施例20
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺；
实施例21.1
[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
实施例21.2
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺；
实施例22
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺；
实施例23
5-(4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例24
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例25
5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例26
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐或共晶体。
实施方案9.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物选自：
实施例20
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺；
实施例26
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例2.2
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
实施例2.1
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]；和
实施例11
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐或共晶体。
实施方案10.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是
实施例20
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体。
实施方案11.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是
实施例26
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体。
实施方案12.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是
实施例2.2
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体。
实施方案13.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是
实施例2.1
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]或其药学上可接受的盐或共晶体。
实施方案14.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物是
实施例11
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体。
本文所用的术语“卤代”(或卤素)是指氟、溴、氯或碘，特别是氟、氯。卤素取代的基团和部分例如被卤素取代的烷基(卤代烷基)可以是单-、多-或全卤化的。
如本文所用，术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，特别是氮或氧。
本文所用的术语“烷基”是指具有至多10个碳原子的完全饱和的支链或非支链烃部分。除非另有规定，烷基是指具有1至10个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的烃部分。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。支链烷基的代表性实例包括但不限于异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基等。取代的烷基是含有一个或多个例如一个、两个或三个选自卤素、羟基或烷氧基的取代基的烷基。
本文所用的术语“卤代烷基”是指如本文所定义的烷基，其被一个或多个如本文所定义的卤代基团取代。卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基或多卤代烷基，包括全卤代烷基。单卤代烷基可以在烷基内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基可以在烷基内具有两个或更多个相同的卤素原子或不同卤素基团的组合。通常，多卤代烷基含有至多12、或10、或8、或6、或4、或3、或2个卤代基团。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指所有氢原子被卤素原子替换的烷基。
如本文所用的术语“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上文所定义。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、环丙氧基-、环己氧基等。通常，烷氧基具有1-4个碳原子。
本文所用的术语“卤代烷氧基”是指如本文所定义的烷氧基，其被一个或多个如本文所定义的卤代基团取代。
除非另有规定，本文所用的术语“环烷基”是指3-8个碳原子的饱和单环、双环或螺环烃基。除非另外指出，环烷基是指具有3至6个或5至8个环碳原子的环状烃基。
如本文所用，术语“环烯基”是指3-8个碳原子的部分饱和的单环、双环或螺环烃基。除非另外指出，环烯基是指具有3至6个或5至8个环碳原子的环状烃基。
根据起始原料和方法的选择，化合物可以以可能异构体之一的形式或者作为其混合物存在，例如作为光学纯异构体或者作为异构体混合物诸如外消旋物和非对映异构体混合物存在，这取决于不对称碳原子的数目。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。可以用手性合成子或手性试剂制备或者用常规技术拆分光学活性的(R)-和(S)-异构体。如果化合物包含双键，取代基可以是E或Z构型。如果化合物包含二取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。还预期包括所有的互变异构形式。
如文中所用，术语“盐”指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和性质的盐，且其通常不是生物学或在其他方面不希望的。
含有能够充当氢键的供体和/或受体的基团的本发明化合物即式(I)化合物能够与适合的共晶体形成剂(co-crystal former)形成共晶体。这些共晶体可由式(I)化合物通过已知的共晶体形成方法制备。此类方法包括研磨、加热、共升华、共熔化或在结晶条件下在溶液中使式(I)化合物与共晶体形成剂接触以及分离由此形成的共晶体。适合的共晶体形成剂包括描述于WO 2004/078163中的那些。因此，本发明进一步提供了包含式(I)化合物的共晶体。
在许多情况下，本发明的化合物能够通过甲酰胺基团或其类似基团的存在而形成酸和/或碱盐和/或共晶体。
药学上可接受的酸加成盐或共晶体可与无机酸和有机酸形成。
可以由其衍生盐或共晶体的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以由其衍生盐或共晶体的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸等。
药学上可接受的碱加成盐或共晶体可以与无机和有机碱形成。
可以由其衍生盐或共晶体的无机碱包括例如铵盐和元素周期表第I至XII族的金属。在某些实施方案中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、银和锌；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可以由其衍生盐或共晶体的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨基丁三醇。
在另一方面，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的式I化合物。
在一个实施方案中，本发明提供乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺。
在另一实施方案中，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺。
在另一实施方案中，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺。
在另一实施方案中，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]。
在另一实施方案中，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺。
在另一方面，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的式I化合物。
在一个实施方案中，本发明提供钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺。
在一个实施方案中，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺。
在一个实施方案中，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺。
在一个实施方案中，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]。
在一个实施方案中，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺。
本文给出的任何式亦意欲表示未标记形式和同位素标记形式的化合物。同位素标记的化合物具有本文给出的式所描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换外。可引入至本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、123I、124I、125I。本发明包括各种同位素标记的本文定义的化合物，例如存在放射性同位素例如3H和14C的那些化合物或存在非放射性同位素例如2H和13C的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(采用14C)、反应动力学研究(采用例如2H或3H)、检测或成像技术如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)包括药物或底物组织分布分析，或用于患者的放射治疗。特别是，18F或标记化合物特别适合用于PET或SPECT研究。式(I)的同位素标记化合物可一般地通过本领域技术人员已知的常规技术或者通过所附的实施例和制备中描述的那些方法的类似方法，利用适当的同位素标记试剂替换先前所用的非同位素标记试剂进行制备。
此外，用较重同位素、特别是氘(即2H或D)取代可因更大的代谢稳定性而提供一些治疗优势，例如体内半衰期延长或所需剂量降低或治疗指数提高。应理解，在此情况下氘被视为式(I)化合物的取代基。该较重同位素特别是氘的浓度可通过同位素富集因子来界定。本文所用的术语“同位素富集因子”是指特定同位素的同位素丰度与天然丰度的比率。如果本发明化合物中的取代基表示为氘，则对于各指定氘原子，该化合物具有至少3500(在各指定氘原子处具有52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。
根据本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶的溶剂可以是同位素取代的那些例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
如本文使用的术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣剂、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗细菌剂、抗真菌剂)、等张剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等物质及其组合，如本领域普通技术人员已知的那样(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，Mack Printing Company,1990,第1289-1329页)。涵盖任意常规载体在治疗或药物组合物中的应用，除非其与活性成分不相容。
术语本发明化合物的“治疗有效量”是指将引发受试者的生物学或医学响应、例如降低或抑制酶或蛋白质活性、或改善症状、缓和病状、减缓或延缓疾病进展或预防疾病等的本发明化合物的量。在一非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于受试者时对以下各项有效的本发明化合物的量：(1)至少部分缓和、抑制、预防和/或改善(i)由Smurf-1介导的或(ii)与Smurf-1活性有关的或(iii)特征在于Smurf-1活性(正常或异常的)的病患或病症或疾病；或(2)减轻或抑制Smurf-1活性或(3)减轻或抑制Smurf-1的表达。在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于细胞或组织或非细胞生物学材料或介质时有效地至少部分减轻或抑制Smurf-1活性或者至少部分减轻或抑制Smurf-1的表达的本发明化合物的量。
如本文所用的术语“受试者”是指动物。典型地所述动物是哺乳动物。受试者也是指例如灵长类动物(例如人，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述受试者是灵长类动物。在其他实施方案中，所述受试者是人。
如本文所用的术语“抑制”是指特定的病况、症状或病症或疾病的减轻或遏抑，或者生物学活性或过程的基线活性的显著降低。
如本文所用的术语“治疗”任何疾病或病症在一个实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在又一个实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在又一个实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发展或恶化。
如本文所用，如果受试者在生物学上、医学上或生活质量上受益于此类治疗，则受试者是“需要”治疗的。
如本文所用，本发明的语境(尤其在权利要求的语境)中所用的术语“一个/种(“a”,“an”)”、“该(the)”和类似术语被解释为包括单数和复数，除非本文另有指明或与上下文明显矛盾。
本文所述的所有方法可以以任何适宜的顺序进行，除非本文另有指明或与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例和示例性语言(例如“如”)的使用仅仅旨在更好地说明本发明而不限制另外要求保护的本发明的范围。
本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集例如(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在。在一些实施方案中，每个不对称原子就(R)-或(S)-构型具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％对映体过量或至少99％对映体过量。具有不饱和双键的原子上的取代基可以(如有可能的话)以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用，本发明化合物可以为可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如作为基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映体、旋光异构体(对映体)、外消旋物或其混合物。
通过色谱和/或分步结晶，根据成分的物理化学差异，可将任何得到的异构体混合物拆分为纯或基本上纯的几何或光学异构体、非对映体、外消旋物。
任何所得到的终产物或中间体的外消旋物可通过已知方法例如通过分离与光学活性酸或碱获得的其非对映体盐并且释放该光学活性酸性或碱性化合物而拆分成旋光对映体。特别是，碱性部分由此可用于将本发明化合物拆分成它们的旋光对映体，例如通过对与光学活性酸如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O′-对甲苯酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐进行分步结晶来拆分。外消旋产物也可通过手性色谱法例如高压液相色谱法(HPLC)使用手性吸附剂来拆分。
此外，本发明化合物包括其盐还能够以其水合物的形式得到或者包含用于其结晶的其他溶剂。本发明化合物可固有地或经设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，预期本发明包括溶剂化的或未溶剂化的形式。术语“溶剂合物”指本发明化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子络合物。所述溶剂分子是药学领域常用的那些，已知其对于接受者是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”指溶剂分子是水的所述络合物。
本发明化合物包括其盐、共晶体、水合物和溶剂合物可以固有地或经设计形成多晶型物。
一般流程
通常，式(I)化合物可以根据下文提供的流程制备。
本发明的化合物可以通过以下流程或实施例中描述的路线制备。
所有缩写如下文实施例部分所定义。
流程1
其中X和Y独立地为H或–(C1-C6)烷基。
步骤1：钯催化的交叉偶联反应。
典型条件：钯(0)催化剂；合适的硼锡或锌化合物如硼酸、硼酸酯或锡烷；有机或无机碱；在水中；在合适的溶剂中，在80-110℃。
优选条件：双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)、乙烯基三氟硼酸盐、三乙胺，在乙醇中，在90℃
步骤2：二羟基化
典型条件：四氧化锇；合适的助氧化剂如N-甲基吗啉-N-氧化物；在合适的溶剂中
优选条件：四氧化锇(Admixα或Admixβ)可用于与合适的添加剂例如甲磺酰胺来接近手性二醇。优选的溶剂系统是叔丁醇/水。
步骤3：氧化裂解
典型条件：高碘酸钠，在THF/水溶剂系统中
流程2
当R2是甲基时，式(I)化合物可以根据流程2制备。
其中X2和Y2被如此定义：它们与它们所连接的碳原子一起形成R3取代基。
步骤1：形成硼酸乙烯酯
典型条件：a)在强碱例如LDA或LHMDS存在下烯醇化，然后用合适的卤代烷基磺酸酯或磺酰胺猝灭，得到稳定的烯醇形式。b)使用合适的钯(0)催化剂和双频哪醇合二硼(pinacolatodiboron)进行烯醇化物的钯(0)催化的硼基化
优选条件：a)LDA在THF中，在-78℃，然后用1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺猝灭。b)1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物和双频哪醇合二硼、乙酸钾，在二烷中，在80-100℃下进行4-16小时。
步骤2：钯催化的交叉偶联
典型条件：如流程1步骤1所述
优选条件：1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物、碳酸钾(2M水溶液)在MeCN中，在80℃，1.5小时
步骤3a皂化
典型条件：合适的碱水溶液，任选合适的共溶剂如THF，
优选条件：2M氢氧化钠(水溶液)与THF在室温下，30分钟
步骤3b酰胺偶联
典型条件：在合适的非质子溶剂中，在合适的碱例如三乙胺、DIPEA等的存在下，合适的偶联试剂例如HATU、T3P、EDCI等。
优选条件：HATU和DIPEA，在DMF中，在室温，约2h
步骤4氢化
其中R3含有C＝C双键的式(I)化合物可以通过氢化反应转化为其中R3是完全饱和的式(I)化合物。
典型条件：不溶性钯催化剂、氢气、在合适的溶剂如醇中
优选条件：10％钯/碳和氢气，在乙醇中
流程3
当X3是Br或I时，步骤3的产物也是式(I)化合物。
步骤1：Prins反应
典型条件：在氯化溶剂中的酸催化剂和合适的脱水剂。
优选条件：(i)三氟乙酸和分子筛，在DCM中；或(ii)InBr3和三甲基溴硅烷，在DCM中；或(iii)InOTf3和三氟甲磺酸三甲基硅基酯，在DCM中。
步骤2a：如流程2步骤3a中所述的皂化反应
步骤2b：Mitsunobu反转
典型条件：三芳基膦、偶氮二甲酸二烷基酯和苯甲酸，在合适的溶剂如THF中，在室温
优选条件：三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯和2,4-二硝基苯甲酸，在THF中，在室温
步骤2c：甲基化
典型条件：合适的强碱和烷基化剂，在合适的溶剂中
优选条件：氢化钠和甲基碘，在DMF中
步骤2d、步骤3a、步骤4a：如流程2步骤3a中所述的皂化反应
步骤2e、3b和4b：如流程2步骤3b中所述的酰胺偶联
步骤5：如流程2步骤4中所述的氢化
流程4
步骤1：如流程3步骤1中所述的Prins反应
步骤2a：如流程2步骤3a中所述的皂化反应
步骤2b：如流程2步骤3b中所述的酰胺偶联
步骤3：如流程2步骤4中所述的氢化
流程5
步骤1：缩醛形成
典型条件：强酸催化剂，在合适的溶剂中，在脱水条件下
优选条件：pTSOH和甲苯在Dean Stark条件下，在110℃下，2-16小时。
步骤2a：如流程2步骤3a中所述的皂化反应
步骤2b：如流程2步骤3b中所述的酰胺偶联
流程6
PG是合适的保护基，例如叔丁基二甲基甲硅烷基
X6和Y6各自独立地为H或–(C1-C6)烷基。
步骤1：保护
典型条件：合适的保护基团，例如三烷基氯硅烷，在合适的碱的存在下，在合适的溶剂中。
优选条件：叔丁基二甲基氯硅烷，在三乙胺和DMAP存在下，在DMF中。
步骤2：烷基化反应
典型条件：烯丙基溴，在合适的碱的存在下，在合适的溶剂中
优选条件：3-溴-2-甲基丙-1-烯和氢化钠，在THF中。
步骤3a：如流程2步骤3a中所述的皂化反应
步骤3b：如流程2步骤3b中所述的酰胺偶联
步骤4：脱保护
典型条件：氟化物源，在合适的溶剂中
优选条件：TBAF，在THF中
步骤5：环化反应
典型条件：三氟乙酸汞(II)和氧化汞(II)，在THF中，在室温下，然后在-78℃下加入三乙基硼烷和硼氢化钠。
本发明还包括本方法的任何变体，其中在其任何阶段可获得的中间体产物用作起始原料并且进行其余步骤，或其中起始原料在反应条件下原位形成或其中以它们的盐或光学纯物质的形式使用反应组分。
根据本领域技术人员普遍已知的方法，本发明化合物和中间体还可互相转化。
另一方面，本发明提供包含本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的药物组合物。在另一实施方案中，所述组合物包含至少两种药学上可接受的载体例如文中所述的那些。对本发明来说，除非另外指出，通常将溶剂合物和水合物用于组合物。优选地，药学上可接受的载体是无菌的。药物组合物可以被配制以用于特定的施用途径，例如口服施用、胃肠道外施用和直肠施用等。此外，本发明的药物组合物还可以被制备为固体形式(包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)，或者液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)。药物组合物可以经过常规的药物操作如灭菌，和/或可以含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅助剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
典型地，药物组合物是包含活性成分，以及一种或多种下述成分的片剂和明胶胶囊：
a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还包含
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还包含
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或者泡腾混合物；和
e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
可以按照本领域已知的方法对片剂进行薄膜包衣或肠溶包衣。
适合的口服施用的组合物包括片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或者糖浆剂或酏剂形式的有效量的本发明化合物。按照本领域已知的制备药物组合物的任意方法来制备用于口服使用的组合物，并且这类组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供药学上美观和可口的制剂。片剂可含有与适合制备片剂的无毒、药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂是例如：惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂是未被包衣的或者通过已知技术对其进行包衣，以延缓在胃肠道中的崩解和吸收并由此提供历经较长时间的持久作用。例如，可以采用时间延迟材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的制剂可以被制备成硬明胶胶囊剂，其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者被制备成软明胶胶囊剂，其中活性成分与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
某些可注射的组合物是水性等张溶液或混悬液，并且栓剂可由脂肪乳剂或混悬剂有利地制备。所述的组合物可以被灭菌和/或含有辅剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可以含有其它在治疗上有价值的物质。所述组合物可分别按照常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且含有约0.1-75％或包含约1-50％的活性成分。
适合透皮应用的组合物包含有效量的本发明化合物和适合的载体。适用于透皮递送的载体包括可吸收的药理学可接受的溶剂，以帮助穿过宿主的皮肤。例如，透皮装置是绷带形式的，该绷带包含背衬部分、含有化合物和任选的载体的贮库、任选的速率控制屏障(以便历经较长时间以受控和预定的速率递送化合物至宿主皮肤)和固定该装置于皮肤的器具。
适合的局部应用、例如应用于皮肤和眼的组合物包括水性溶液剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾的制剂，例如用于通过气雾剂等递送的那些制剂。这类局部递送系统将特别适于皮肤应用，例如用于治疗皮肤癌、例如在防晒霜、洗剂、喷雾剂中的预防性应用等。因此，它们特别适用于本领域众所周知的局部制剂，包括化妆品。这类制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
如本文所用，局部应用也可涉及吸入或鼻内应用。它们可方便地以干粉形式(单独地或作为混合物、例如与乳糖的干掺合物，或为混合的成分颗粒(例如与磷脂的))由干粉吸入器递送，或为气雾剂喷雾呈递形式由加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷射器递送，使用和不使用适宜的抛射剂。
本发明还提供了包含本发明化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可以促进某些化合物的降解。
本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水或低水分含量的成分和低水分或低湿度条件制备。无水药物组合物可以制备和储存，以保持其无水性质。因此，使用已知防止暴露于水的材料包装无水组合物，使得它们可包括在合适的制剂套盒中。合适的包装的实例包括但不限于密封箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条状包装。
本发明还提供了药物组合物和剂型，其包含一种或多种降低作为活性成分的本发明化合物分解速率的物质。这些物质在本文中称为“稳定剂”，包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
游离形式或药学上可接受盐形式的式I化合物显示有价值的药理性质例如Smurf-1调控性质，如同下面部分提供的体外和体内测试所显示的，并由此表明用于治疗或者作为研究化学品例如工具化合物。
本发明化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗各种适应症，包括：
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)
纤维化
类风湿性关节炎
骨折愈合
青光眼
遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)
蛋白尿
伤口愈合
COPD
哮喘
肺动脉高压(PAH)
肺动脉高压具有多因素病理生理学。血管收缩、肺血管壁的重塑和血栓形成促使PAH中肺血管阻力增加(Humbert等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2004.)。本文公开的本发明的化合物可用于治疗PAH及其症状。肺动脉高压应理解为包括以下形式的肺高血压：特发性PAH(IPAH)；可遗传的PAH(HPAH)；药物或毒素诱导的PAH、与其他病患相关的PAH(APAH)例如与结缔组织疾病相关的PAH、与HIV感染相关的PAH、与门静脉高压相关的PAH、与先天性心脏病相关的PAH、与血吸虫病相关的PAH、与慢性溶血性贫血相关的PAH或新生儿的持续性肺高血压(等人,ERJ,2009；Simonneau等人,JACC,2009)。
特发性PAH是指未确定原因的PAH。可遗传的PAH是指怀疑或记录遗传性传播的PAH，包括在BMP受体、BMPR2潜伏突变的那些或具有ALK1或内皮因子突变(具有或不具有遗传性出血性细血管扩张)的那些。
与药物或毒素相关的PAH应理解为包括与摄入下列物质相关的PAH:阿米雷司、芬氟拉明化合物(例如芬氟拉明或右芬氟拉明)、某些毒性油(例如油菜籽油)、吡咯里西定(pyrrolizidine)生物碱(例如灌木茶(bush tea))、野百合碱、苯丙胺类、L-色氨酸、甲基苯丙胺类、可卡因、苯丙醇胺、圣约翰草(St John’s Wort)、化学治疗剂或SSRI’s。
与结缔组织疾病相关的PAH应理解为包括与系统性硬化、肺纤维化、多发性肌炎、类风湿性关节炎、干燥综合征(Sjogren syndrome)相关的PAH或与系统性红斑狼疮相关的PAH。
与先天性心脏病相关的PAH应理解为包括具有全身性肺分流的患者、与艾森曼格(Eisenmenger)综合征、小室间隔或心房间隔缺损相关的PAH或与校正性心脏手术相关的PAH。
与慢性溶血性贫血相关的PAH应理解为包括患有慢性遗传性和获得性贫血的患者，包括患有镰状细胞病、地中海贫血、遗传性球形红细胞增多症、口形红细胞增多和微血管病性溶血性贫血的患者。
PAH的症状包括呼吸困难、心绞痛、晕厥和水肿(McLaughlin等人.,Circulation,2006,114:1417-1431)。本文公开的本发明的化合物可用于治疗PAH的症状。
肺高血压(PH)
肺高血压(PH)应理解为与根据Dana Point临床分类(Simonneau,G等人.JACCC,2009)分组的以下病症相关：
第1'组-PH应理解为与患有肺静脉闭塞性疾病(PVOD)和肺毛细血管血管瘤病(PCH)的患者相关。
第2组-与左心脏病相关的PH包括具有左侧心室或瓣膜疾病的那些患者。
第3组-由于肺部疾病和/或缺氧引起的PH。导致PH的肺疾病应理解为包括肺纤维化、肺气肿、肺纤维化和肺气肿联合、支气管扩张、囊性纤维化和慢性阻塞性肺病(COPD)的患者。
第4组-与慢性血栓栓塞(CTEPH)相关的PH。
第5组-与不清楚或多因素病因相关的PH。这类PH患者应理解为包括以下组之一的患者：1)慢性骨髓增殖性疾病，包括真性红细胞增多症、原发性血小板增多症或慢性髓性白血病；2)系统性疾病，包括结节病、导致肺毛细血管床破坏的病症例如纤维化、大肺动脉的外源性压迫、肺部朗格汉氏(Langerhan’s)细胞组织细胞增多症的患者、淋巴管平滑肌瘤病、1型神经纤维瘤病和抗中性粒细胞胞质抗体相关的血管炎；3)代谢性疾病，包括Ia型糖原贮积病、葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、戈谢(Gaucher)病和甲状腺疾病(甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进)；4)包括具有扩展到肺动脉内腔中的肿瘤、通过转移性肿瘤栓塞的肺微血管闭塞、纵隔纤维化的患者或具有接受长期血液透析的终末期肾病的患者。
纤维化
已经显示TGFβ/BMP信号传导途径的失调在包括肾、心脏、肺、皮肤、胰腺和肝脏的各种器官的纤维化中以及在全身性硬化症和相关病变中具有致病作用(由Leask和Abraham,FASEB,2004综述)。已经显示BMP7抵消TGFβ1-诱导的上皮-间质转化(EMT)(Zeisberg,M等人.Nat.Med,2003)和胶原诱导(Izumi,N等人.AJP.Lung,Cell,Mol.,Physiol.2005)，两者是纤维化发展的关键机制。在肾脏的进行性肾小管间质性纤维化的单侧输尿管阻塞(UUO)小鼠模型中证明了Smurf-1在纤维化病理中的作用的直接证据，其中在与降低水平的保护性Smurf-1底物Smad7相关的患病肾脏中存在增加水平的Smurf-1(Fukasawa，H等人，PNAS，2004)。最近，在肺部上皮细胞中产生的数据中提出了Smurf-1在肺纤维化中的作用，其确定了Smurf-1底物Smad7在限制EMT中的关键作用(Shukla,MA,等人.Am.J.Resp.Cell.Mol.Biol.2009)。本文公开的本发明的化合物可用于治疗纤维化及其症状。纤维化应理解为包括以下：具有肺纤维化、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肝硬化、心内膜心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化(progressivemassive fibrosis)、肾源性系统性纤维化、克罗恩病、瘢痕疙瘩、老年心肌梗塞、硬皮病(系统性硬化症)、关节纤维化或粘连性囊炎的患者。
类风湿性关节炎
促炎细胞因子例如肿瘤坏死因子α(TNFα)在慢性炎性病症例如类风湿性关节炎(RA)的发作和维持中起关键作用。骨密度的降低通常与RA相关，并且已经显示Smurf-1在介导RA诱导的骨丢失中起关键作用。显示TNFα引发Smurf-1底物Smad1和Runx2的蛋白水解降解，这两者对骨形成成骨细胞活性是必需的。在smurf-1KO小鼠中证明了支持这种联系的直接证据，其中TNFα不能影响来自Smurf-1KO小鼠(而不是相应野生型小鼠)的骨的破骨细胞活性(Guo,R等人.JBC,2008)。本文公开的本发明化合物可用于治疗类风湿性关节炎及其症状。RA应理解为包括具有滑膜细胞肿胀、滑膜关节液过多和关节内纤维组织形成继发的滑膜慢性炎症的患者。此外，RA还应包括具有由于坏死性肉芽肿、血管炎、坏疽性脓皮病、Sweet’s综合征、结节性红斑、小叶性脂膜炎、数字皮肤萎缩、掌红斑或皮肤扩散性变薄引起的RA的患者。RA还延伸到其他器官，并且本文将涵盖患有肺纤维化、肾淀粉样变性、作为RA结果的动脉粥样硬化、心包炎、心内膜炎、左心室衰竭、瓣膜炎和纤维化的患者。RA还将包括具有巩膜外层炎和干燥性角结膜炎的眼睛病症、温自身免疫性溶血性贫血(warmautoimmune hemolytic anemia)的血液病、嗜中性白细胞减少症和血小板增多症(thrmobocytosis)、周围神经病的神经病症、多发性单神经炎和腕管综合征、骨质疏松症和淋巴瘤的患者。
骨折愈合
BMP途径在此发挥作用，Smurf-1抑制剂增加BMP信号。本文公开的本发明的化合物可用于治疗骨折愈合。骨折愈合应当被理解为包括骨折修复技术，其中包含有成骨细胞和支持结缔组织可以迁移进入其中的孔的骨内膜移植物被手术植入骨折部位。在插入上述植入物之后施用Smurf-1抑制剂可以有助于植入物的整合，并通过增强分化成成骨细胞的间充质干细胞的增殖来加速恢复(Zhao,M等人.JBC,2004)。
青光眼
升高的眼内压(IOP)是原发性开角型青光眼(POAG)的主要危险因素之一。IOP在前房中通过在睫状体中产生并通过小梁网区域流出的房水维持。在青光眼患者中已观察到与小梁网区域中细胞外基质(ECM)沉积的积累相关的增加房水流出阻力。这种在POAG患者中的ECM病理学类似于在许多非眼系统中由TGFb蛋白诱导的纤维化。TGFb2诱导的IOP增加在临床前体内和离体模型中得到证实。在几个小规模的临床研究中，也已经报道，在房水中的TGFb2蛋白水平在POAG患者中升高。调节青光眼患者中的TGFb活性可潜在地降低IOP并导致新的青光眼疗法(Wordinger RJ JOURNAL OF OCULAR PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS，Volume 30,Number 2,2014)。考虑到Smurf1在通过其底物BMP9和SMAD7调节TGFb信号传导中的作用，本文所述的本发明化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗青光眼。
遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)
遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)，也称为Osler-Weber-Rendu综合征，是影响1:5000至1:40,000的血管遗传性疾病。患有HHT的人具有形成在动脉和静脉之间缺少正常毛细血管的血管的趋势，使得高压下的动脉血液直接流入静脉，其可能破裂和流血。HHT的症状可以表现为轻度至重度，其中90-95％的患者成年时出现流鼻血，90-95％的患者在中年时在脸部或手上发展为毛细管扩张，以及40％的患者出现肺动静脉畸形(AVM)，其构成重大风险。AVM还可以发生在脑、肝脏和肠中，具有不同的健康影响的严重性。HHT可以治疗，最常见的是采用凝血疗法、栓塞术或受影响的组织的手术切除治疗。HHT突变导致BMP信号传导中的单倍剂量不足(Ricard等人.Blood,2010)，导致血管成熟缺陷和脉管系统的过度分支，其部分归因于BMP9信号传导受损(Choi,等人.PlosOne,2013)。Smurf1下调BMP信号传导(Murakami Exp.Biol.Res.2010和Cao,等人.Sci.Rep.2014)，并且已经报道在内皮细胞中表达(Crose,等人.JBC,2009和Human Protein Atlas and GeneCards)，因此，Smurf1抑制剂可用于恢复BMP信号传导并校正血管生成异常。因此，本文所述的本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗HHT。
蛋白尿
尿中异常量的蛋白质是慢性肾脏疾病的最早的征兆之一，其可由高血压、糖尿病或与肾脏炎症相关的疾病引起。如果不治疗，慢性肾脏疾病可能进展为终末期肾脏疾病和肾衰竭。Smurf1涉及与肾功能和蛋白尿相关的多种机制。Smurf1底物Ras同源基因家族成员A(RhoA)在调节肾小球细胞的迁移中起关键作用。Synaptopodin通过阻断Smurf1结合并泛素化RhoA的能力而使得能够在肾足细胞内应激纤维形成，从而促进足细胞运动性和调节肾脏足细胞过滤屏障的筛选性质(Asanuma,等人.Nat.Cell Biol.2006)。此外，转化生长因子(TGF)β的细胞内拮抗剂Smad7在肾脏中起着关键的保护作用。已经显示Smurf1活性泛素化和降解导致肾小管间质性纤维化和肾功能障碍的Smad7(Fukasawa,等人.PNAS 2004)。这些报告一起表明Smurf1抑制剂除阻断与肾脏的促纤维化信号的传播外，可能允许足细胞迁移和维持足细胞过滤屏障，最终对于蛋白尿提供治疗益处。因此，本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗蛋白尿。
伤口愈合
慢性非愈合性伤口在60岁以上的人中最常见，导致显着量的身体疼痛，并且大致分为三组：静脉性溃疡、糖尿病性和压力性溃疡。转化生长因子(TGF)β和骨形态发生蛋白(BMP)信号通路的活性的精确时间在正常伤口愈合中是关键的，调节成纤维细胞迁移和细胞外基质沉积、炎症细胞流入、血管发生和再次上皮化的关键促愈合过程(Pakyari,M等人.Adv.Wound Care 2013)。TGFβ的延长的活化可导致延迟的伤口愈合，并且用抗TGFβ抗体建立的非愈合性伤口的治疗性干预导致改善的愈合和减少的瘢痕肥大(Lu等人.J.Am.Coll.Surg.2005)。Smurf1调节TGFβ和BMP信号传导的程度(MurakamiExp.Biol.Res.2010和Cao,等人.Sci.Rep.2014,Wang等人.J.Cell.Mol.Med.2012)，因此，预期Smurf1抑制剂将标准化过量的TGFβ信号，使得能够治愈慢性伤口。因此，本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗慢性非愈合性伤口和/或一般伤口愈合
COPD和哮喘
气道重塑在患有慢性阻塞性肺病(COPD)或哮喘的患者中是明显的。哮喘中气道重塑的主要特征是纤维化、基底膜增厚、杯状细胞数量增加和平滑肌细胞质量增加、收缩反应增强，这被认为是由负责气道高反应性和可逆性气道阻塞的慢性炎症诱导的(Carroll等人.Am.Rev Resp.Dis.1993,Metcalfe,等人.Physiol.Rev.1997和Roche,等人.Lancet1989)。在COPD中，肺重塑的特征在于在具有鳞状化生、杯状细胞增生和粘液分泌过多的大气道中的上皮的解体，以及在肺气肿发展中具有平滑肌膨胀、纤维化和肺泡破坏的小气道重塑，最终导致气流限制(De,Decramer,等人.Lancet,2012,Pain等人.Eur.Respir.Rev.2014和Chung,Proc.Am.Thorac.Soc.2005)。在这两种疾病中，有下调的BMP信号传导(Kariyawasam,等人.Am.J Resp.Crit.Care Med.2008)和升高的TGFβ(Mak.等人.Respir.Med.2009和Chakir等人.J.All.Clin.Immunol.2003)的证据，其与促重塑机制如成纤维细胞-间质转化(Araya,等人.J.Clin.Invest.2007)、细胞外基质沉积(Baarsma,等人.Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.PHysiol.2011)和炎症(Chakir等人.J.All.Clin.Immunol.2003)相关。Smurf1抑制剂可以使关键的促重塑细胞如平滑肌和成纤维细胞中的TGFβ信号传导正常化，并阻断重塑的进程，导致对COPD或哮喘患者的治疗益处。因此，本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗COPD和/或哮喘
因此，作为另一个实施方案，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在治疗中的用途。在另一个实施方案中，所述治疗选自可通过抑制Smurf-1治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；更适当地为肺动脉高压(PAH)。在另一个实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐在治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的疾病中的用途。
因此，作为另一个实施方案，本发明提供了用于治疗的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述治疗选自可以通过抑制Smurf-1治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自肺高血压包括
肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地为肺动脉高压(PAH)。在另一实施方案中，所述疾病选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗通过抑制Smurf-1治疗的疾病的方法，其包括施用治疗可接受量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地为肺动脉高压(PAH)。
在另一个实施方案中，本发明提供了通过抑制Smurf-1治疗疾病的方法，所述方法包括施用治疗可接受量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中所述疾病选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。
因此，作为另一个实施方案，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。在另一个实施方案中，所述药物用于治疗疾病，其可通过抑制Smurf-1来治疗。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地为肺动脉高压(PAH)。
在另一个实施方案中，所述药物用于治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的疾病。
在本发明的一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地肺动脉高压(PAH)。
在本发明的另一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。
在本发明的另一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地肺动脉高压(PAH)。
在本发明的又一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。
在本发明的另一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地肺动脉高压(PAH)。
在本发明的另一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。
在本发明的另一个实施方案中，提供了[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地肺动脉高压(PAH)。
在本发明的另一个实施方案中，提供了[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。
在本发明的另一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗
肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；
更适当地肺动脉高压(PAH)。
在本发明的进一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。
对于约50-70kg的受试者，本发明的药物组合物或组合可以是约1至1000mg活性成分的单位剂量，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg、或约1-50mg活性成分。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的种类、体重、年龄和个体状况、待被治疗的病症或疾病或其严重程度。普通技术的医师、临床医师或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制病症或疾病的进展所需的每种活性成分的有效量。
上述的剂量性质可有利地采用哺乳动物例如小鼠、大鼠、狗、猴或分离的器官、组织及其制备物在体外和体内试验中证实。本发明的化合物可以以溶液例如水溶液的形式体外施用，以及以肠内、胃肠外、有利地静脉内例如作为混悬液或水溶液在体内施用。体外剂量可以在为10-3-10-9摩尔浓度。体内的治疗有效量可以取决于施用途径，在约0.1-500mg/kg或约1-100mg/kg之间。
根据本发明的化合物的活性可以通过以下体外和体内方法评价。
药物测定
本发明的化合物及其药学上可接受的盐，以下也称为“本发明的活性剂”可用作药物。特别是，所述化合物是选择性Smurf-1抑制剂，并且可以在以下测定中测试。
为了测定化合物的HECT E3连接酶选择性，使用一组(panel)生物化学HECT E3连接酶自泛素化(autoubiquitinylation)测定(Smurf-1、Smurf-2、WWP1、WWP2、ITCH、Nedd4、Nedd4L和E6AP)。泛素与蛋白质底物的缀合是多步过程。在初始的需要ATP的步骤中，在泛素的羧基末端和泛素激活酶(E1)的内部半胱氨酸残基之间形成硫酯键。然后将活化的泛素转移至泛素缀合酶(E2)的特异的半胱氨酸残基。E2将泛素赋予HECT E3连接酶(E3)，从E3其被转移至底物蛋白。HECT E3连接酶可以自泛素化。在该组中使用的TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)测定中检测该事件。反应混合物含有在合适的缓冲液中的E1、E2、标记的-E3、生物素缀合的泛素、所述化合物和ATP，并孵育45分钟以允许E3连接酶的自泛素化。为了通过TR-FRET测量泛素化的E3连接酶的程度，在反应完成后加入与抗生蛋白链菌素(其随后与生物素化泛素结合)缀合的供体荧光团铕穴状化合物(Eu3+穴状化合物)和与标签-特异性的抗体(HA、His或GST)偶联的修饰的别藻蓝蛋白XL665(主要受体荧光团)，其识别各自的E3连接酶融合蛋白。当这两种荧光团通过生物分子相互作用(在该情况下，E3连接酶的泛素化)聚集在一起时，由穴状化合物在激发期间捕获的能量的一部分通过在620nm的荧光发射释放，而剩余的能量转移到XL665。该能量然后由XL665作为在665nm的特异性荧光释放。665nm处的光仅通过具有铕的FRET发射。由于铕穴状化合物存在于测定中，所以即使当生物分子相互作用不使XL665紧密接近时，也检测到620nm的光。
Smurf-1在细胞中的自泛素化导致Smurf-1的蛋白酶体降解。因此，抑制Smurf-1催化结构域消除Smurf-1自泛素化和降解，导致细胞中抑制的Smurf-1蛋白的积累。
使用DiscoverX PathHunter ProLabel检测试剂盒，通过测量在四环素诱导型启动子控制下稳定表达Prolabel-标记的Smurf-1的HEK293细胞中的Smurf-1蛋白积累来评估化合物在Smurf-1HECT结构域的细胞活性。该技术在细胞裂解物的酶互补测定中测量Prolabel-标记的Smurf-1的量。在该方法中，称为ProLabel的β-半乳糖苷酶的小的4kDa互补片段作为与人Smurf-1的N-末端融合物表达。该标签是酶供体(ED)并且能够在与β-半乳糖苷酶的较大部分(称为酶受体的EA)互补以形成功能性β-半乳糖苷酶之后检测靶蛋白水平。将EA外源地加入到细胞裂解物中。使用化学发光底物测量酶活性，并且酶活性与重构的酶的量和Smurf-1水平成比例。
在90％DMSO中以180x[最终]制备测试和参考化合物，并在90％DMSO中以1:3稀释。
对于该生化测定组，将50nl的测试化合物、参考化合物和缓冲液/DMSO对照转移到384孔白色GREINER"SMALL VOLUME"PS板的各个孔中。测定组在室温下在Biomek FX液体处理工作站上运行。向含有在90％DMSO中的50nl化合物或对照溶液的测定板中，每孔加入4.5ul E3连接酶溶液，随后加入4.5ul预孵育的E1/E2/Ub混合物或预稀释的泛素(LOW对照)。每次添加后剧烈摇动平板。在该测定中，化合物浓度在8点剂量-反应曲线中为3nM至10uM。
孵育45分钟后，通过加入4.5ul 2mM NEM，随后立即加入4.5ul包含XL665-标记的抗体和抗生蛋白链菌素偶联的铕的检测溶液，使总体积为18ul，停止泛素化反应。在黑暗中孵育45分钟后，将板转移到Pherastar荧光读数器中以测量TR-FRET信号。
对于细胞测定，然后将250nl的测试化合物、参考化合物和缓冲液/DMSO对照转移到无菌的120ul 384孔白色GREINER PS,CELLSTAR,uClear组织培养板的各个孔中。为了在加入细胞之前将化合物溶液均匀地分布在培养基中，使用MULTIDROP 384分配器将10ul细胞培养基加入含有化合物的板的每个孔中并剧烈振荡。在与胰蛋白酶-EDTA短暂温育后，将细胞从烧瓶中分离，计数并在培养基中稀释至1.5x106细胞/ml的浓度。通过加入多西环素至0.2ug/ml的终浓度诱导Smurf-1的表达。通过使用MULTIDROP 384分配器将10ul细胞悬浮液加入到含有化合物的平板的每个孔中。将板在37℃、5％CO2下温育过夜。在该测定中，化合物浓度在8点剂量-反应曲线中为6.75nM至22.5uM。
与化合物孵育过夜后，使用来自DiscoverX的PathHunter Prolabel检测试剂盒测定Smurf-1的水平。首先使用多通道步阶-移液器手动添加10ul裂解/CL检测工作溶液，然后加入5ul酶受体EA。将板在板振荡器上混合，并在室温下孵育2-3小时，然后在PherStar读板器中测量化学发光信号。
以下实施例的化合物具有如表A所示的在上述数据测量中的Smurf-1IC50值。
表A.
本发明的化合物可以与一种或多种其它治疗剂同时或在其之前或之后施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的施用途径单独施用，或者与其它治疗剂在相同的药物组合物中一起施用。治疗剂是当例如与本发明化合物联合施用至患者时具有治疗活性或增强治疗活性的化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸。
在一个实施方案中，本发明提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种其它治疗剂的产品，作为用于在治疗中同时、分别或顺序使用的组合制剂。在一个实施方案中，治疗是治疗由Smurf-1介导的疾病或病症。作为组合制剂提供的产品包括在相同的药物组合物中一起包含式(I)的化合物和其它治疗剂的组合物，或者包含单独形式例如药盒的形式的式(I)的化合物和其它治疗剂的组合物。
在一个实施方案中，本发明提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和另一种治疗剂的药物组合物。任选地，药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，本发明提供了包含两种或更多种分开的药物组合物的药盒，其中至少一种药物组合物含有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，药盒包含用于分开地容纳所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶或分开的箔包。这种药盒的一个实例是泡罩包装，通常用于包装片剂、胶囊等。
本发明的药盒可以用于施用不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型，用于以不同的剂量间隔施用分开的组合物，或用于彼此剂量调整(titrating)分开的组合物。为了辅助顺应性，本发明的药盒通常包括施用说明。
在本发明的组合治疗中，本发明的化合物和其它治疗剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，本发明的化合物和其它治疗剂可以如下一起进入组合疗法：(i)在将组合产品释放给医生之前(例如在包含本发明化合物和其它治疗剂的药盒的情况下)；(ii)由医生本人(或在医生的指导下)在给药前不久；(iii)在顺序施用本发明的化合物和其它治疗剂期间由患者自己。
因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的用途，其中所述药物被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的用途，其中所述药物与式(I)化合物或其药学上可接受的盐一起施用。
本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的另一种治疗剂，其中所述其它治疗剂被制备用于与式(I)化合物或其药学上可接受的盐一起施用。本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的式(I)化合物，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的另一种治疗剂，其中所述其它治疗剂与式(I)化合物或其药学上可接受的盐一起施用。
本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用另一种治疗剂治疗。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用式(I)化合物或其药学上可接受的盐治疗。
以下实施例旨在说明本发明，而不应解释为对其的限制。温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，所有蒸发在减压下进行，通常在约15mm Hg至100mm Hg(＝20-133mbar)之间。最终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析方法例如微量分析和波谱特征例如MS、IR、NMR确认。所使用的缩写是本领域中常规的那些。
用于合成本发明化合物的所有原料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂可商购或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。此外，本发明的化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备，如以下实施例所示。
一般条件：
由以下配置的一系列仪器采用电喷雾、化学和电子碰撞电离方法，在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系统上获得质谱：具有Agilent 6110质谱仪的Agilent 1100HPLC系统，[M+H]+是指化学物种的质子化分子离子。
NMR谱在Bruker AVANCE 400MHz或500MHz NMR波谱仪上使用ICON-NMR，在TopSpin程序控制下进行。除非另有说明，波谱在298K下测量，并相对参考溶剂共振。
仪器
MS方法：使用Agilent 1100HPLC系统和Agilent 6110质谱仪
LowpH_v002
2minLC_v003
8minLowpHv01:
2minLowpH:
2minLowpHv01:
2minLowpHv03:
2minHighpHv03:
10minLowpHv01:
LCMS(SRPb)
缩写：
aq 含水的
br 宽
d 双峰
dd 双二重峰
DBU 1,8-二氮杂二环十一-7-烯
DCM 二氯甲烷
DIBAL-H 二异丁基氢化铝
DIPEA 二乙基异丙胺
DME 二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
℃ 摄氏度
EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
Et2O 乙醚
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
Et3N 三乙胺
HATU (1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]
吡啶3-氧化物六氟磷酸盐
HCl 盐酸
hr(s) 小时
H2SO4 硫酸
K2CO3 碳酸钾
KHMDS 双(三甲基甲硅烷基)氨基钾
KOAc 乙酸钾
LCMS 液相色谱和质谱法
LDA 二异丙基氨基锂
M 摩尔的
MgSO4 硫酸镁
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MS 质谱法
Mult(s) 多重峰
mg 毫克
min 分钟
ml 毫升
mmol 毫摩尔
m/z 质荷比
NaBH4 硼氢化钠
NaH 氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaOH 氢氧化钠
Na2SO4 硫酸钠
n-BuLi 丁基锂
NH4Cl 氯化铵
NMP N-甲基吡咯烷酮
NMR 核磁共振
PdCl2(PPh3)2 (双三苯基膦)二氯化钯
PdCl2(dppf) 1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)
PdCl2(dppf)-CH2Cl2 1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲
烷络合物
Pd(Ph3P)4 四(三苯基膦)钯(0)
ppm 百万分之
pTsOH p-甲苯磺酸
q 四重峰
rac 外消旋的
Rt 保留时间
s 单峰
t 三重峰
TBAI 四丁基碘化铵
TBAF 四丁基氟化铵
TBME 甲基叔丁基醚
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TMSCl 三甲基氯硅烷
TMSOTf 三氟甲磺酸三甲基硅基酯
UV 紫外
最终化合物的制备
实施例1:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
步骤1:[三氟甲磺酸4-异丙基环己-1-烯-1-基酯]
在氮气气氛下，并冷却至-70℃，将4-异丙基环己酮(1g,7.13mmol)的干燥THF(3mL)溶液滴加2M LDA(在THF/庚烷/乙基苯)(4.28mL,8.56mmol)进行处理。加入完成后，使混合物在-70℃搅拌1.5小时。向混合物中，加入1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(2.81g,7.84mmol)的干燥THF(2mL)溶液。使反应保持在-70℃，搅拌3hrs，并用水小心地猝灭，并放置过夜。将得到的混合物用乙醚萃取并将合并的有机萃取物用10％NaOH(aq)洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到粗物质。将粗物质吸附到二氧化硅(silica)上，并通过色谱法纯化，采用100％异己烷洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.76(1H,t),2.45-2.30(2H,mults),2.22(1H,br d),1.99-1.90(2H,mults),1.61-1.52(1H,mult),1.48-1.36(2H,mults),0.93(6H,dd).
步骤2:[2-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷]
将搅拌的[三氟甲磺酸4-异丙基环己-1-烯-1-基酯](1.75g,6.43mmol)的二烷(30mL)溶液用双频哪醇合二硼(1.714g,6.75mmol)、乙酸钾(1.892g,19.28mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(0.157g,0.193mmol)处理，并将混合物在80℃搅拌6hrs。将得到的混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗物质。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤3:[5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯]
向2-5mL微波瓶中加入[2-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷](282mg,1.127mmol)、5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(264mg,1.127mmol)、PdCl2(dppf)(82mg,0.113mmol)、碳酸钾(467mg,3.38mmol)、MeCN(2mL)和水(0.667mL)。将瓶用氮气排空，密封并在80℃置于微波中1hr。将得到的混合物用EtOAc和水稀释并分离各层。将有机物用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到棕色油状物，为粗品。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-10％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.73mins；MS m/z[M+H]+278.5；方法2minLowpHv03
步骤4:[5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸]
向[5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯](92mg,0.332mmol)的THF(5mL)和MeOH(3mL)溶液中，加入2M氢氧化钠(aq)(0.166mL,0.332mmol)并将混合物在室温搅拌2hrs。将得到的混合物在减压下浓缩并用水稀释。将水层用EtOAc洗涤，用2M HCl(aq)酸化并用EtOAc萃取。将有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.70mins；MS m/z[M+H]+250.2；方法2minLowpHv03
步骤5:[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
在氮气气氛下向[5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸](42mg,0.168mmol)的干燥DCM(3mL)溶液中加入DMF(0.026mL,0.337mmol)，随后加入草酰氯(0.016mL,0.185mmol)并将混合物在室温搅拌30mins。加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(38.8mg,0.185mmol)，随后加入三乙胺(0.070mL,0.505mmol)并将混合物搅拌30mins。加入水并将混合物剧烈搅拌，然后通过相分离柱。收集有机洗脱液并在减压下浓缩，得到橙色油状物。将粗物质溶解在DMSO(0.9mL)中，并采用质量指导的自动化的反相色谱以9.5分钟的50-98％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分在减压下浓缩。将剩余的水混合物用饱和碳酸氢钠水溶液处理并用DCM萃取，使有机萃取物通过相分离柱。在空气流下除去溶剂并在减压下干燥，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝4.98mins；MS m/z[M+H]+441.4；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(1H,br s),6.33(1H,s),4.06(1H,tt),3.26(3H,s),2.62(1H,br d),2.48-2.35(2H,mults),2.31(3H,s),2.22(3H,s),2.05-1.86(8H,mults),1.71(1H,br d),1.60-1.52(1H,mults),1.43-1.17(5H,mults),0.96(3H,d),0.94(3H,d).
采用与实施例1的方法类似的方法通过用适当的酮衍生物(商业可获得的或下文描述的制备)替换4-异丙基环己酮(步骤1)来制备实施例1.1至1.2。
实施例1.1:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6-乙基-4-甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的非对映体混合物
LC-MS:Rt＝4.90mins；MS m/z[M+H]+441.1；方法8minLowpHv01
实施例1.2:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6,6-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
LC-MS:Rt＝4.60mins；MS m/z[M+H]+427.7；方法8minLowpHv01
采用与实施例1的方法类似的方法通过用适当的硼酸或二氧硼杂环戊烷衍生物(商业可获得的或下文描述的制备)替换2-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(步骤3)来制备实施例1.3至1.7。
实施例1.3:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-乙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
LC-MS:Rt＝4.77mins；MS m/z[M+H]+427.6；方法8minLowpHv01
实施例1.4:
[5-(4-(叔丁基)环己-1-烯-1-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
LC-MS:Rt＝5.16mins；MS m/z[M+H]+455.4；方法8minLowpHv01
实施例1.5:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-甲基环己-1-烯-1-基)异唑-3-甲酰胺]
LC-MS:Rt＝4.47mins；MS m/z[M+H]+414.5；方法8minLowpHv01
实施例1.6:
5-(环庚-1-烯-1-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
LC-MS:Rt＝4.42mins；MS m/z[M+H]+413.6；方法8minLowpHv01
实施例1.7:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-(三氟甲基)环己-1-烯-1-基)异唑-3-甲酰胺]
LC-MS:Rt＝1.36mins；MS m/z[M+H]+467.4；方法2minLowpHv03
实施例2:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺
步骤1:螺[4.5]癸-6-烯-8-酮
向环戊烷甲醛(Aldrich)(0.82g,8.36mmol)的干燥甲苯(10mL)溶液中，加入甲基乙烯基酮(Alfa Aesar)(0.684mL,8.36mmol)，随后加入催化量的浓H2SO4(0.045mL,0.836mmol)。将混合物在45℃加热1.5小时，然后采用Dean-Stark分水器回流1小时。将反应混合物冷却至室温，并再加入甲基乙烯基酮(Alfa Aesar)(0.684mL,8.36mmol)。将反应混合物加热回流1小时，冷却至室温并用1M NaHCO3(30mL)水溶液处理。将水混合物用甲苯萃取并将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-20％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.74(1H,d),5.86(1H,d),2.45(2H,t),1.92(2H,t),1.80-1.71(4H,br mults),1.71-1.61(4H,br mults).
步骤2:螺[4.5]癸-8-酮
将螺[4.5]癸-6-烯-8-酮(442mg,2.94mmol)的乙醇(15mL)溶液用氮气冲洗并用10％Pd-C,50％湿的(Alfa Aesar,38303)(313mg,2.94mmol)处理。在氢气气氛下将反应混合物搅拌16小时并通过过滤，用乙醇淋洗。将滤液在减压下浓缩，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.31–2.25(4H,t),1.72-1.66(4H,t),1.65-1.60(4H,brmults),1.53-1.47(4H,br mults).
步骤3:三氟甲磺酸螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯
在氮气气氛下、-78℃，将1.6M n-BuLi的己烷溶液(1.900mL,3.04mmol)加至搅拌的二异丙胺(0.454mL,3.19mmol)的干燥THF(20mL)溶液中。将溶液升温至0℃保持20分钟，然后再冷却至-78℃。历经5分钟，加入螺[4.5]癸-8-酮(0.440g,2.89mmol)的干燥THF(5mL)溶液，并将溶液在-78℃搅拌50分钟，然后加入2-[N,N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]吡啶(Alfa Aesar)(1.141g,3.19mmol)的干燥THF(5mL)溶液。将混合物搅拌并升温至室温过夜。将得到的混合物用饱和NaHCO3(4mL)水溶液猝灭。将水部分用TBME(x2)萃取并将合并的有机萃取物用10％NaOH水溶液、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤4:4,4,5,5-四甲基-2-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷
向搅拌的三氟甲磺酸螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯(635mg,2.234mmoL)的干燥1,4-二烷(15mL)溶液中，加入双(频哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(567mg,2.234mmol)，随后加入乙酸钾(Acros)(438mg,4.47mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(Alfa Aesar)(54.7mg,0.067mmoL)。将反应混合物用氮气冲洗，并加热至80℃反应16小时。将反应混合物冷却至室温并通过过滤，用TBME淋洗。将滤液在减压下浓缩，并将残留物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间分配。将有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤5:4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸乙酯
向含有4,4,5,5-四甲基-2-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(168mg,0.641mmol)的MeCN(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(150mg,0.641mmol)，随后加入K2CO3(266mg,1.923mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(Alfa Aesar)(52.3mg,0.064mmol)和水(1mL)。将瓶用氮气冲洗，密封并在微波中(Biotage Smith Initiator)在90℃处理1小时。将反应混合物在水(20mL)和EtOAc(20mL)之间分配，并将有机相用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到橙色油状物。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.75mins；MS m/z[M+H]+290.4；方法2minLowpHv03
步骤6:4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸
向搅拌的4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸乙酯(180mg,0.622mmol)的乙醇(10mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(0.311mL,0.622mmol)并将反应混合物在室温搅拌。将得到的混合物用水(30mL)稀释并通过加入2M HCl(aq)酸化至pH 5-6。将水混合物用EtOAc(2x 20mL)萃取并将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.61mins；MS m/z[M+H]+262.3；方法2minLowpHv03
步骤7:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺
向搅拌的4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸(95mg,0.364mmol)的干燥NMP(3ml)溶液中，加入HATU(152mg,0.400mmol)，随后加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(84mg,0.400mmol)和三乙胺(0.111mL,0.800mmol)，并将其在室温搅拌16小时。将反应混合物在EtOAc(30mL)和1M NaOH(aq)(30mL)之间分配，并将有机相用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到橙色油状物。将粗物质溶解在DMSO中，并采用UV-指导的自动化反相色谱法以9.5分钟的50-98％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分加至EtOAc(50mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.59mins；MS m/z[M+H]+453.7；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(1H,br s),6.19(1H,mult),4.00(1H,tt),3.25(3H,s),2.46-2.40(2H,br mults),2.23(3H,s),2.14(3H,s),2.10-2.05(2H,mults),1.99-1.88(2H,mults),1.84-1.74(4H,br mults),1.66-1.53(7H,br mults),1.41-1.35(4H,brmults),1.34-1.23(2H,br mults),1.21-1.10(1H,br mult).
实施例2.1:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]
采用与实施例2的方法类似的方法通过用[1-氧杂螺[4.5]癸-8-酮](Fluorochem)替换螺[4.5]癸-8-酮(步骤3)来制备标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.10mins；MS m/z[M+H]+455.5；方法2minLowpHv01
实施例2.2:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
采用与实施例2的方法类似的方法用4,4-二甲基环己烯-1-基硼酸、频哪醇酯(Combi Blocks)替换4,4,5,5-四甲基-2-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(步骤5)来制备标题化合物；
LC-MS:Rt＝5.52mins；MS m/z 427.6[M+H]+；方法10minLowpHv01
实施例3:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
步骤1:三氟甲磺酸4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基酯
在氮气气氛下、在-78℃，向搅拌的4,4-二甲基环戊-2-烯酮(Atlantic)(0.500g,4.54mmol)的干燥THF(25mL)溶液中，加入1M L-Selectride的THF(4.539mL,4.54mmol)溶液。将反应混合物在-78℃搅拌1小时并用1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(Alfa Aesar)(1.626g,4.54mmol)的干燥THF(5mL)溶液处理。将混合物搅拌并升温至室温过夜。将得到的混合物在己烷(60mL)和水(50mL)之间分配，分离各相并将水相用己烷(50mL)萃取。将合并的有机萃取物用10％NaOH水溶液(40mL)、盐水(40mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到浅黄色油状物。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用100％异己烷洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.54(1H,mult),2.42-2.39(2H,mult),2.23-2.20(2H,mult),1.17(3H,s),1.17(3H,s).
步骤2:2-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷
向搅拌的三氟甲磺酸4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基酯(367mg,1.503mmol)的干燥1,4-二烷(10mL)溶液中，加入双(频哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(382mg,1.503mmol)，随后加入乙酸钾(Acros)(295mg,3.01mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(Alfa Aesar)(36.8mg,0.045mmol)。将反应混合物在80℃加热并搅拌16小时。将得到的混合物冷却至室温并通过过滤，用TBME(100mL)洗涤。将有机滤液用水(50mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到棕色油状物。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用100％异己烷洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.34-6.31(1H,mult),2.21-2.18(2H,mult),2.17-2.14(2H,mult),1.20(12H,s)0.99(6H,s).
步骤3:5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
向含有2-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(214mg,0.966mmol)的乙腈(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(226mg,0.966mmol)，随后加入K2CO3(400mg,2.90mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(Alfa Aesar)(79mg,0.097mmol)和水(1mL)。将瓶用氮气冲洗，密封并在微波中(Biotage Smith Initiator)在90℃加热1小时。将得到的混合物通过过滤，用EtOAc(50mL)洗涤。将滤液用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到棕色油状物。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用100％异己烷洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.64mins；MS m/z[M+H]+250.9/251.5；方法2minLowpHv03
步骤4:5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸
向搅拌的5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(243mg,0.975mmol)的乙醇(5mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(0.975mL,1.949mmol)，并将溶液在室温搅拌。一旦完成后，将反应混合物用水(30mL)稀释并通过加入2M HCl(aq)酸化至pH 5-6。将水相用EtOAc萃取(2x 20mL)，并将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.46mins；MS m/z[M+H]+222.5；方法2minLowpHv03.
步骤5:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
向搅拌的5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(105mg,0.475mmol)的干燥NMP(3mL)溶液中，加入HATU(198mg,0.522mmol)，随后加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(109mg,0.522mmol)和三乙胺(0.146mL,1.044mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物在EtOAc(20mL)和1M NaOH(aq)(20mL)之间分配，并将有机相用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-60％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到粗物质。将粗物质溶解在DMSO中，并采用质量指导的自动化的反相色谱以9.5分钟的40-80％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分加至EtOAc(50mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.40mins；MS m/z[M+H]+413.1/414.6；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(1H,br s),6.27(1H,br t),4.06(1H,tt),3.27(3H,s),2.66(2H,mult),2.40(2H,mult),2.34(3H,s),2.22(3H,s),2.06-1.95(2H,br mults),1.92-1.83(4H,br mults),1.75-1.68(1H,br mult),1.44-1.31(2H,br mults),1.30-1.23(1H,br mult),1.19(6H,s).
实施例4:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]
步骤1:1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙酯
将4-氧代环己烷甲酸乙酯(11.7g,68.7mmol)、乙二醇(5.75mL,103mmol)和p-TsOH(0.620g,3.26mmol)的甲苯(60mL)混合物回流搅拌4hrs，采用Dean-Stark分水器以收集水。将得到的混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3水溶液(30mL)猝灭，并用EtOAc(100mL)稀释。将有机层用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到黄色油状物。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.14(2H,q),3.96(4H,s),2.38-2.31(1H,br mult),1.99-1.91(2H,br mults),1.87-1.76(4H,br mults),1.61-1.53(2H,br mults),1.26(3H,t).
步骤2:8-(2-(苄基氧基)乙基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙酯
在-78℃、氮气气氛下，将(8-烯丙基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)甲醇(6g,28.0mmol)的干燥THF(100mL)溶液加至预冷却的KHMDS(1M在THF中)(36.4mL,36.4mmol)的THF(100mL)溶液中。将得到的混合物在该温度搅拌2hrs，并加入((2-溴乙氧基)甲基)苯(5.31mL,33.6mmol)的THF(100mL)溶液。将反应混合物升温至室温并在室温搅拌过夜。将得到的混合物用饱和氯化铵水溶液猝灭，并加入EtOAc。将有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-40％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到粗物质。将粗物质再次吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-20％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.36-7.31(2H,mults),7.30-7.26(3H,mults),4.39(2H,s),4.01(2H,q),3.84(4H,s),3.40(2H,t),2.05-1.98(2H,br mults),1.78(2H,t),1.61-1.54(2H,br mults),1.49-1.41(4H,br mults),1.12(3H,t).
步骤3:[1,4,10-三氧杂二螺[4.2.4.2]十四烷-9-酮]
将[8-(2-(苄基氧基)乙基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-甲酸乙酯](1.6g,4.59mmol)的乙醇(5mL)溶液彻底脱气，再填充氮气。加入Pd-C(0.147g,1.378mmol)，并将混合物在氢气气氛下搅拌。一旦完成后，将反应混合物通过柱过滤，用EtOH洗脱。将滤液收集并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.29(2H,t),3.97(4H,mult),2.19(2H,t),2.08-1.99(2H,br mults),1.97-1.89(2H,br mults),1.71-1.56(4H,br mults).
步骤5:[1,4,10-三氧杂二螺[4.2.4.2]十四烷-9-醇]
在氮气气氛下，将1,4,10-三氧杂二螺[4.2.4.2]十四烷-9-酮(880mg,4.15mmol)的甲苯(30mL)溶液冷却至-78℃并用1M DIBAL-H(1M在甲苯中)(4.56mL,4.56mmol)处理。将反应混合物在-78℃搅拌2小时。将得到的混合物用10％乙酸水溶液(18mL)/冰60g)处理，并与氯仿(150mL)搅拌5mins。分离水相并用氯仿(x3)萃取并将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.13(1H,s),4.11(1H,mult),3.97(4H,mult),3.93(1H,mult),2.12(1H,s),1.95-1.77(3H,br mults),1.76-1.60(6H,br mults),1.58-1.49(1H,br mults).
步骤6:[1,4,10-三氧杂二螺[4.2.4.2]十四烷]
在氮气气氛下、-78℃，向搅拌的三乙基硅烷(1.965mL,12.30mmol)的DCM(40mL)溶液中，连续加入三氟乙酸(0.948mL,12.30mmol)和[1,4,10-三氧杂二螺[4.2.4.2]十四烷-9-醇](0.878g,4.1mmol)的DCM(40mL)溶液，在-78℃。将得到的混合物缓慢升温至0℃并搅拌2小时。加入饱和NaHCO3水溶液，并将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂，得到标题化合物。
步骤7:[2-氧杂螺[4.5]癸-8-酮]
将搅拌的1,4,10-三氧杂二螺[4.2.4.2]十四烷(813mg,4.1mmol)的丙酮(28mL)溶液在室温用10％HCl水溶液(12.46mL,41.0mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌1小时。将得到的混合物用盐水(40mL)稀释，并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和NaHCO3水溶液(2x30mL)和盐水(1x 30mL)洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.96(2H,t),3.70(2H,s),2.45-2.36(4H,br mults),1.95-1.89(6H,mults).
步骤8:[三氟甲磺酸2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯]
在氮气气氛下，将二异丙胺(0.407mL,2.85mmol)的THF(25mL)溶液冷却至-78℃并用n-BuLi(1.0M的己烷溶液)(1.702mL,2.72mmol)处理。历经30mins将反应混合物升温至0℃并冷却至-78℃，然后加入2-氧杂螺[4.5]癸-8-酮(400mg,2.59mmol)的THF(25mL)溶液。在-78℃1.5小时后，将反应混合物用1,1,1-三氟-N-(吡啶-2-基)-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(1208mg,3.37mmol)的THF(10mL)溶液处理并升温至室温过夜。加入饱和NaHCO3水溶液，随后用EtOAc稀释。将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-25％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.77(1H,t),3.92(2H,t),3.56(2H,mult),2.46-2.29(2H,br mult),2.25-2.22(2H,br mult),1.83-1.76(4H,br mults).
步骤9:[4,4,5,5-四甲基-2-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷]
将[三氟甲磺酸2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯](270mg,0.943mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(251mg,0.990mmol)的二烷(5mL)溶液用乙酸钾(185mg,1.886mmol)处理并将混合物彻底脱气，再填充氮气。加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(23.11mg,0.028mmol)，并将混合物加热至80℃反应16小时。将粗反应混合物吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-15％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.54(1H,mult),3.88(2H,t),3.52(2H,mult),2.24-2.18(2H,br mults),2.15-2.12(2H,br mults),1.76-1.68(2H,br mults),1.62-1.57(2H,brmults),1.28(12H,s).
步骤10:[4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸乙酯]
将[4,4,5,5-四甲基-2-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷](0.172g,0.651mmol)、5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(0.183g,0.781mmol)和Cs2CO3(0.849g,2.60mmol)混合在DME(3mL)和水(1.250mL)中。加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(0.016g,0.020mmol)，并将混合物彻底脱气，再填充氮气。将混合物在微波中在90℃搅拌1小时。分离双相反应混合物，并将有机相吸附到二氧化硅上。通过色谱法纯化，采用梯度的EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.27(1H,mult),4.42(2H,q),3.91(2H,t),3.56(2H,mult),2.56-2.51(2H,br mults),2.31-2.27(2H,br mults),2.28(3H,s),1.83-1.72(4H,br mults),1.41(3H,t).
步骤11:[4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸]
将[4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸乙酯](170mg,0.584mmol)的MeOH(3.60mL)和THF(6mL)溶液在室温用2M NaOH(aq)(0.584mL,1.167mmol)处理。将得到的混合物在室温搅拌并用2M HCl(aq)(0.2mL)和EtOAc处理。将合并的有机层用MgSO4干燥并过滤，并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝0.61mins；MS m/z[M+H]+264.4；方法2minHighpHv03
步骤12:[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]
将[4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸](40mg,0.152mmol)的DMF(3mL)溶液用4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(38.2mg,0.182mmol)、DIPEA(0.106mL,0.608mmol)和HATU(75mg,0.198mmol)处理。将得到的混合物在室温搅拌16小时。将水加至混合物中，并将水混合物用EtOAc萃取(x2)。将合并的有机萃取物用0.5M氯化锂(aq)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-5％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.19mins；MS m/z[M+H]+455.5；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(1H,s),6.23(1H,mult),4.01(1H,tt),3.88(2H,t),3.53(2H,s),3.26(3H,s),2.51-2.44(2H,br mults),2.28-2.25(2H,mults),2.23(3H,s),2.14(3H,s),1.98-1.87(2H,br mults),1.81-1.70(8H,mults),1.65-1.58(1H,br mult),1.38-1.33(1H,br mult),1.31-1.25(1H,br mult),1.18-1.05(1H br mult).
实施例5:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
步骤1:1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇
在0℃向搅拌的1,4-环己二酮单乙二缩酮(Aldrich)(2g,12.81mmol)的干燥MeOH(30mL)溶液，分次加入NaBH4(0.727g,19.21mmol)，保持温度低于5℃。将反应混合物在0℃搅拌15分钟，并在室温搅拌2小时。将得到的混合物在减压下浓缩，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.96(4H,s),3.86-3.78(1H,br mult),1.94-1.79(4H,brmults),1.73-1.76(4H,br mults),1.43(1H,br s).
步骤2:8-异丙氧基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷
向搅拌的1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(0.5g,3.16mmol)的2-碘丙烷(5.37g,31.6mmol)溶液中，加入氧化银(I)(1.392g,6.01mmol)，并将反应混合物在室温搅拌。一旦完成后，将得到的混悬液用EtOAc稀释并在减压下过滤混悬液。将滤液在减压下浓缩，得到浅黄色油状物。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.84(4H,s),3.63(1H,mult),3.44(1H,mult),1.72-1.62(4H,br mults),1.53-1.42(4H,br mults),1.06(3H,s),1.05(3H,s).
步骤3:4-异丙氧基环己酮
向搅拌的8-异丙氧基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷(0.464g,2.317mmol)的THF(2mL)和水(2mL)溶液中，加入p-TsOH(0.080g,0.463mmol)。将混合物加热至100℃过夜。将得到的混合物冷却至室温，并在EtOAc(30mL)和水(30mL)之间分配。将有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.78(1H,mult),3.73(1H,mult),2.40-2.31(2H,brmults),2.27-2.18(2H,br mults),1.96-1.87(2H,br mults),1.85-1.75(2H,br mults),1.12(3H,s),1.11(3H,s).
步骤4:[三氟甲磺酸4-异丙氧基环己-1-烯-1-基酯]
在氮气气氛下、在-78℃，将1.6M nBuLi的己烷溶液(Aldrich)(1.285mL,2.057mmol)加至二异丙胺(Acros)(0.307mL,2.155mmol)的干燥THF(30mL)溶液中。将溶液升温至0℃反应30分钟，然后再冷却至-78℃。历经5分钟加入4-异丙氧基环己酮(306mg,1.959mmol)的干燥THF(5mL)溶液，并将混合物在-78℃搅拌1小时，然后加入2-[N,N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]吡啶(Alfa Aesar)(772mg,2.155mmol)的干燥THF(5mL)溶液。将混合物搅拌并升温至室温过夜。将得到的混合物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)猝灭，并将水相用TBME(2x 20mL)萃取。将合并的有机萃取物用10％NaOH水溶液(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-10％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.76(1H,mult),3.72-3.63(2H,mults),2.44-2.30(3H,br mults),2.14-2.06(1H,mult),1.86-1.73(2H,br mults),1.09-1.04(6H,mults).
步骤5:[2-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷]
向搅拌的[三氟甲磺酸4-异丙氧基环己-1-烯-1-基酯](459mg,1.592mmol)的干燥二烷(15mL)溶液中，加入双(频哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(404mg,1.592mmol)，随后加入乙酸钾(Acros)(313mg,3.18mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(Alfa Aesar)(39.0mg,0.048mmol)。将烧瓶用氮气冲洗，并加热至80℃过夜。将得到的混合物冷却至室温并通过过滤，用TBME洗涤。将有机滤液在减压下浓缩，并将残留物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间分配。将有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤6:[5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯]
向含有[2-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷](375mg,1.410mmol)的乙腈(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(330mg,1.410mmol)，随后加入K2CO3(585mg,4.23mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(11.51mg,0.014mmol)和水(2mL)。将瓶用氮气冲洗并在微波(Biotage SmithInitiator)中在80℃处理90分钟。将反应混合物在水(30mL)和EtOAc(30mL)之间分配。将有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，通过垫层过滤，并将滤液在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-60％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.33分钟；MS m/z[M+H]+294.4；方法2minLowpHv01
步骤7:[5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸]
向搅拌的[5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯](393mg,1.340mmol)的THF(3mL)和乙醇(3mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(4.179ml,8.36mmol)。将反应混合物在室温搅拌。一旦完成后，将得到的混合物倒入水(20mL)中，并通过加入1M HCl(aq)将pH调节至pH 6。将水混合物用EtOAc(30mL)萃取，并将有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.13分钟；MS m/z[M+H]+266.1；方法2minLowpHv01
步骤8:[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
向搅拌的5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(174mg,0.656mmol)的干燥NMP(3mL)溶液中，加入HATU(274mg,0.721mmol)，随后加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(151mg,0.721mmol)和三乙胺(0.201mL,1.443mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物在EtOAc(20mL)和1M NaOH(aq)(20mL)之间分配，并将有机相用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质溶解在DMSO中，采用UV-指导的反相色谱法以9.5分钟的40-80％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分加至EtOAc(50mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机相用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.19分钟；MS m/z[M+H]+457.3；方法2minLowpHv01
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(1H,s),6.27(1H,mult),3.91(1H,mult),3.75(1H,mult),3.75-3.67(1H,br mult),3.22(3H,s),2.58-2.40(4H,br mults),2.19(3H,s),2.19-2.09(1H,br mults),2.06-2.01(4H,mults),1.99(1H,mult),1.96-1.86(1H,brmult),1.82-1.74(2H,br mults),1.72-1.58(4H,br mults),1.38-1.24(2H,br mults),1.11-1.07(6H,mults).
实施例6:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(实施例2.2)(40mg,0.094mmol)的乙醇(20mL)溶液用氮气冲洗并用10％Pd-C,50％湿的(Alfa Aesar,38303)(14.97mg,0.141mmol)处理。将反应混合物在室温在氢气气氛下搅拌3小时。将得到的混合物通过过滤，用乙醇洗涤，随后加入DCM。将滤液在减压下浓缩，并使残留物通过500mg二氧化硅-TMT柱，用乙醇:乙醚(1:1)洗脱。将滤液收集并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS；Rt＝1.33分钟；MS m/z[M+H]+429.5；方法2minLowpHv01
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(1H,s),3.92(1H,tt),3.21(3H,s),2.84(1H,mult),2.07(3H,s),2.02(3H,s),2.03-1.95(2H,mults),1.82-1.58(9H,mults),1.50-1.43(2H,mults),1.37-1.22(5H,mults),0.97(3H,s),0.95(3H,s).
实施例6.1:
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基环戊基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
采用与实施例6的方法类似的方法通过用N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(实施例3)替换N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(实施例2.2)(步骤1)来制备标题化合物。
LC-MS:Rt＝1.46mins；MS m/z[M+H]+415.1/416.4；方法2minLowpHv03
实施例7:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
步骤1:5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
将5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(100mg,0.427mmol)和3,3-二甲基丁-1-炔(0.058mL,0.470mmol)的乙腈(3mL)溶液彻底脱气，再填充氮气。加入二环己胺(0.085mL,0.427mmol)、CuI(2.85mg,0.015mmol)和PdCl2(PPh3)2(7.50mg,10.68μmol)。将混合物在微波中在100℃搅拌45mins。将得到的混合物吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-10％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.53mins；MS m/z[M+H]+236.4；方法2minLowpHv03
步骤2:5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸
5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(101mg,0.429mmol)的THF(3mL)和MeOH(1.800mL)溶液在室温用2M NaOH(aq)(0.429mL,0.859mmol)处理1小时。加入2M HCl(aq)(0.6mL)和水，并将水混合物用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.07(1H,br s),2.14(3H,s),1.33(9H,s).
步骤3:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(85mg,0.410mmol)和4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(86mg,0.410mmol)的DMF(2mL)溶液在室温用DIPEA(0.287mL,1.641mmol)和HATU(172mg,0.451mmol)处理，并搅拌16小时。将得到的混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用0.5M氯化锂(aq)溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.42mins；MS m/z[M+H]+399.7；方法2minLowpHv03
步骤4:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(30mg,0.075mmol)的乙醇(5mL)溶液彻底脱气，再填充氮气，并加入Pd-C(16.02mg,7.53μmol)。将混合物在氢气气氛下搅拌。一旦完成后，将反应混合物通过过滤，并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.37mins；MS m/z[M+H]+403.1/404.4；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(1H,br s),4.04(1H,tt),3.24(3H,s),2.72-2.66(2H,mult),2.19(3H,s),2.16(3H,s),2.04-1.92(2H,br mults),1.90-1.81(4H,brmults),1.70(1H,br mult),1.60-1.54(2H,mult),1.43-1.29(2H,br mults),1.27-1.18(1H,br mult),0.96(9H,s).
实施例8:
(Z)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
步骤1:(Z)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(实施例7,步骤3))(30mg,0.075mmol)的EtOAc(3mL)溶液用2,2'-(乙烷-1,2-二基双(硫烷二基))二乙醇(13.72mg,0.075mmol)和Pd-5％硫酸钡(16.02mg,7.53μmol)处理。将混合物脱气，完全再填充氮气，并将混合物在氢气气氛下在室温搅拌过夜。再加入Pd-5％硫酸钡(16.02mg,7.53μmol)，并将反应混合物在室温在氢气气氛下搅拌16小时。将得到的混合物通过过滤，用EtOAc洗脱，并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.35mins；MS m/z[M+H]+401.2；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(1H,br s),6.00(1H,d,J＝12.9Hz),5.91(1H,d,J＝12.9Hz),4.01-3.92(1H,tt),3.16(3H,s),2.13(3H,s),2.09(3H,s),1.96-1.84(2H,brmults),1.82-1.74(4H,br mults),1.62(1H,br mult),1.34-1.23(2H,mult),1.19-1.10(1H,br mult),1.05(9H,s).
实施例9:
(E)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
步骤1:(E)-三丁基(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)锡烷
在0℃、在暗处，将氢化三丁基锡(1.637mL,6.09mmol)滴加加至3,3-二甲基丁-1-炔(500mg,6.09mmol)和Pd(Ph3P)4(70mg,0.06mmol)的THF(4mL)溶液中。搅拌30分钟，将反应混合物升温至室温，并搅拌16小时。在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用100％异己烷洗脱，得到标题化合物。
步骤2:(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
将(E)-三丁基(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)锡烷(1194mg,0.8mmol)和5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(187mg,0.8mmol)溶解在二烷(6mL)中，并将混合物彻底脱气，再填充氮气。加入Pd(Ph3P)4(92mg,0.080mmol)并将混合物在100℃搅拌16小时。将粗反应混合物吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-10％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.64(1H,d,J＝17Hz),6.19(1H,d,J＝17Hz),2.23(3H,s),1.45(3H,t),1.16(9H,s).
步骤3:(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸
将(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(160mg,0.674mmol)的THF(3mL)和MeOH(1.8mL)溶液用2M NaOH(aq)(1.349mL,2.70mmol)处理，并在室温搅拌2小时。将得到的混合物用2M HCl(aq)处理并用乙酸乙酯(x3)萃取。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物。
步骤4:(E)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将(E)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(102mg,0.487mmol)和4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(112mg,0.536mmol)的DMF(2mL)溶液用DIPEA(0.341mL,1.950mmol)和HATU(222mg,0.585mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌2小时。将得到的混合物用水处理并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用0.5MLiCl(aq)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.41mins；MS m/z[M+H]+401.0/402.5；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,MeOD)δ6.64(1H,d,J＝17Hz),6.33(1H,d,J＝17Hz),4.16(1H,tt),3.36(3H,s),2.22(3H,s),2.20-2.09(2H,br mults),2.17(3H,s),1.95-1.82(4H,brmults),1.76-1.69(1H,br mult),1.50-1.38(2H,br mults),1.35-1.25(1H,br mult),1.18(9H,s).
实施例10:
5-环己基-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
步骤1:5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸
向5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(8.65g,37.0mmol)的MeOH(100mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(18.48mL,37.0mmol)。将反应混合物在室温搅拌10分钟，并采用1MHCl(aq)将得到的混合物酸化，并在减压下浓缩以除去MeOH。将水混合物用水稀释并用EtOAc萃取(x3)并将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝0.82mins；MS m/z[M+H]+206.0；方法2minLowpH
步骤2:5-溴-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将DMF(5.33mL,68.8mmol)的DCM(200mL)溶液冷却至0℃并用草酰氯(3.31ml,37.9mmol)处理。加入5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸(7.09g,34.4mmol)并在冰冷却下搅拌10mins。在0℃加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(7.92g,37.9mmol)和三乙胺(14.39ml,103mmol)，并将混合物在该温度搅拌30mins。将得到的混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO3(aq)溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用100％TBME洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝0.93mins；MS m/z[M+H]+397.2/400.2；方法2minLowpH
步骤3:5-环己基-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
向5-溴-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(75mg,0.189mmol)中加入环己基溴化锌(II)(0.5M在THF中)(1133μL,0.566mmol)和双(三-叔丁基膦)钯(0)(9.65mg,0.019mmol)并将混合物在100℃在微波中搅拌30分钟。将得到的混合物用EtOAc稀释并过滤，并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.12mins；MS m/z[M+H]+401.0/402.4；方法2minLowpH
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(1H,s),3.90(1H,m),3.20(3H,s),2.90(1H,m),2.05(3H,s),2.00(3H,s),2.80-1.00(20H,m).
实施例11:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺
步骤1:三氟甲磺酸1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯
在氮气气氛下，将搅拌的1,4-环己二酮单乙二缩酮(Aldrich)(2g,12.81mmol)的干燥THF(30mL)溶液冷却至-70℃，并滴加加入0.6M LDA(在庚烷/THF/乙基苯中)(25.6mL,15.37mmol)，保持温度低于-65℃。将反应混合物在-70℃搅拌20mins，然后历经30分钟滴加加入2-[N,N-双(三氟甲基磺酰基)氨基]吡啶(Alfa Aesar)(5.05g,14.09mmol)的干燥THF(10mL)溶液进行处理，确保温度不超过-65℃。将反应混合物在-70℃搅拌1小时，然后逐渐升温至室温并搅拌过夜。将得到的混合物用饱和NaHCO3水溶液(100mL)猝灭，并用TBME(2x150mL)萃取。将合并的有机萃取物用10％NaOH(aq)(100mL)、盐水(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-10％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.80(1H,mult),3.91(4H,mult),2.51-2.49(2H,mult),2.49-2.43(2H,br mults),2.37-2.34(2H,br mults),1.86-1.81(2H,mults).
步骤2:4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷
向搅拌的三氟甲磺酸1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯(1.19g,4.13mmol)的干燥二烷(15mL)溶液中，加入双(频哪醇合)二硼(Alfa Aesar)(1.048g,4.13mmol)，随后加入乙酸钾(Acros)(0.810g,8.26mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(Alfa Aesar)(0.101g,0.124mmol)。将反应混合物用氮气冲洗，并在80℃搅拌过夜。将得到的混合物冷却至室温并通过过滤，用TBME洗涤。将有机滤液在减压下浓缩，并在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间分配。将有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤3:4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸乙酯
向含有4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(586mg,2.200mmol)的乙腈(2mL)溶液的2-5mL微波瓶中，加入5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体D)(515mg,2.200mmol)，随后加入K2CO3(912mg,6.60mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(17.97mg,0.022mmol)和水(0.667mL)。将瓶用氮气冲洗，并在微波中(Biotage Smith Initiator)在80℃搅拌1小时，并在100℃搅拌30分钟。将得到的混合物在水(30mL)和EtOAc(30mL)之间分配。将有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到橙色油状物。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-40％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.26(1H,mult),4.37(2H,q),3.93(4H,s),2.62-2.56(2H,br mults),2.47-2.43(2H,mults),2.23(3H,s),1.82(2H,mult),1.23(3H,t).
步骤4:4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酸乙酯
将4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酸乙酯(556mg,1.896mmol)的乙醇(20mL)溶液用氮气冲洗，然后用10％Pd-C,50％湿的(Alfa Aesar,38303)(303mg,2.84mmol)处理。将反应混合物在氢气气氛下在室温搅拌过夜。将得到的混合物通过过滤，用乙醇和DCM洗涤。将滤液在减压下浓缩，并使残留物通过500mg二氧化硅-TMT柱，用乙醇:乙醚(1:1)洗脱。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.11mins；MS m/z[M+H]+296.2；方法2minLowpHv01
步骤5:4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酸
向搅拌的4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酸乙酯(558mg,1.889mmol)的THF(5mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(4.179ml,8.36mmol)，并将反应混合物在室温搅拌15分钟。将得到的混合物倒入水(20mL)中，并通过加入1M HCl将pH调节至pH 5-6。将水混合物用EtOAc(30mL)萃取并将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝0.89分钟；MS m/z[M+H]+268.2；方法2minLowpHv01
步骤6:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺
向搅拌的4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酸(239mg,0.894mmol)的干燥NMP(3mL)溶液中，加入HATU(374mg,0.984mmol)，随后加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(206mg,0.984mmol)和三乙胺(0.274mL,1.967mmol)。将混合物在室温搅拌16小时。将得到的混合物在EtOAc(20mL)和1M NaOH(20mL)之间分配。将有机相用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-2％MeOH的DCM溶液洗脱，得到粗物质。将分离的物质溶解在DMSO(2mL)中，并用水(30mL)研磨。将得到的混悬液在减压下过滤，并将固体用水(20mL)洗涤并在真空下干燥，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝0.96分钟；MS m/z[M+H]+459.5:方法2minLowpHv01
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(1H,s),3.96-3.86(5H,mults),3.21(3H,s),3.02(1H,mult),2.07(3H,s),2.05-1.92(2H,br mults),2.02(3H,s),1.84-1.72(8H,brmults),1.70-1.57(5H,br mults),1.38-1.23(2H,br mults),1.22-1.11(1H,br mult).
实施例12:
5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
步骤1:5-(1-羟基丁-3-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
向5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体C)(350mg,1.911mmol)的DCM(19mL)溶液中加入烯丙基三甲基硅烷(276μl,1.911mmol)并将混合物冷却至-78℃。将三氟化硼醚合物(278μl,2.198mmol)的DCM(5mL)溶液冷却至-78℃，并历经5min加至反应混合物中。将反应混合物搅拌15mins，加入三乙胺(266μl,1.911mmol)。将反应混合物在-78℃保持15分钟，并升温至室温。将得到的混合物通过加入饱和NaHCO3水溶液(10mL)猝灭，并用DCM(2x 10mL)萃取。使合并的有机萃取物通过相分离柱并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-40％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.06mins；MS m/z[M+H]+225.8/226.4；方法2minLowpHv03
步骤2:
2a:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物
和2b:5-((2S,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物
向5-(1-羟基丁-3-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(140mg,0.622mmol)的DCM(6.2mL)溶液中加入新戊醛(67.5μl,0.622mmol)。滴加加入TMSOTf(112μl,0.622mmol)并将反应混合物在室温搅拌1小时。加入MeOH(2mL)，并将得到的混合物在水(5mL)和DCM之间分配，分离各层并将水混合物用DCM萃取(2x 5mL)。将合并的有机萃取物用Na2SO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-50％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
2a:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物LC-MS:Rt＝1.64mins；MS m/z[M+H]+326.6；方法2minLowpHv03
2b:5-((2S,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的外消旋混合物。LC-MS:Rt＝1.54mins；MS m/z[M+H]+326.6；方法2minLowpHv03
步骤3:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的外消旋混合物
向2a的外消旋合物:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(9mg,0.028mmol)的MeOH(0.45mL)和THF(0.75mL)溶液中，加入2M NaOH(aq)(59.9μl,0.120mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。将得到的混合物在减压下浓缩，得到残留物，将其用2M NaOH(aq)(5mL)稀释，并用DCM(5mL)洗涤。将水层用2M HCl(aq)(8mL)酸化，并用DCM(3x 5mL)萃取。使合并的有机萃取物通过相分离柱并在减压下除去溶剂，得到5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的外消旋混合物；
LC-MS:Rt＝1.44mins；MS m/z[M+H]+298.5；方法2minLowpHv03
步骤4:5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的外消旋混合物
向5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(9mg,0.030mmol)的外消旋混合物的NMP(0.3mL)溶液中，加入HATU(12.66mg,0.033mmol)，随后加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(6.33mg,0.030mmol)和Et3N(8.39μl,0.061mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物在EtOAc(10mL)和饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间分配。将有机层用盐水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-10％MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝4.57mins；MS m/z[M+H]+489.3；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(1H,br s),4.98(1H,dd),4.06(1H,tt),3.82(1H,mult),3.50(1H,dd),3.40(3H,s),3.26(3H,s),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.14-2.07(1H,mults),2.05–1.82(8H,br mults),1.71(1H,br mult),1.51(1H,mult),1.43-1.29(2H,brmults),1.29-1.17(1H,br mult),0.92(9H,s).
实施例13:
5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
通过与实施例12的方法类似的方法通过在步骤3中用2b替换2a来制备实施例13；
LC-MS:Rt＝4.40mins；MS m/z[M+H]+489.4；方法8minLowpHv01
实施例13a:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和实施例13b:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
采用超临界流体色谱法手性分离实施例13，得到个体对映体:
方法细节:
实施例13a:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
SFC保留时间＝4.86mins
LCMS:Rt 1.42mins MS m/z[M+H]+489.5；方法2minLowpHv03
实施例13b:5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
SFC保留时间＝2.85mins
LCMS:Rt 1.42mins MS m/z[M+H]+489.5；方法2minLowpHv03
实施例14:
5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的非对映体混合物
步骤1:5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物
将5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(100mg,0.546mmol)和2,2-二甲基己-5-烯-3-醇(中间体F)(70.0mg,0.546mmol)合并在DCM(12mL)中，并用烘干的分子筛(100mg,0.546mmol)和TFA(3.15mL,40.9mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌2小时。加入新戊醛(0.059mL,0.546mmol)，并将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物用饱和NaHCO3水溶液猝灭并用DCM萃取(x3)。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物。
步骤2:5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物
将钠(45.7mg,1.988mmol)溶解在乙醇中，并在室温将得到的溶液加至5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-(2,2,2-三氟乙酰氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯混合物(270mg,0.663mmol)的EtOH(5mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌2hrs。加入0.1M HCl(aq)(50mL)，分离水相并用EtOAc萃取(x3)。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤4:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-氧代四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-氧代四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物
将5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物(35mg,0.112mmol)的DCM(20mL)溶液在室温用Dess-Martin试剂(47.7mg,0.112mmol)处理，并搅拌30mins。加入饱和偏亚硫酸氢钠水溶液并将混合物搅拌15mins。分离得到的各层，并将有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水部分用DCM萃取，并将合并的有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-40％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.78(1H,dd),4.38(2H,q),3.34(1H,dd),2.83(1H,mult),2.62-2.56(1H,mults),2.45-2.33(2H,br mults),2.21(3H,s),1.35(3H,t),0.90(9H,s).
步骤5:5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的非对映体混合物(1:1)
将5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-氧代四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-氧代四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物(420mg,1.358mmol)的THF(20mL)溶液冷却至-78℃并用1M L-Selectride的THF溶液(1.426mL,1.426mmol)处理并在-78℃搅拌3hrs。将得到的混合物用乙酸猝灭并用1M HCl(aq)洗涤。将水混合物用EtOAc萃取(x2)。合并所有有机层，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-50％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到粗物质。将粗物质溶解在THF中，用2M NaOH(aq)处理并在室温搅拌2小时。用1MHCl(aq)将得到的混合物酸化并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤，并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.10mins；MS m/z[M+H]+284.3；方法2minLowpHv03
步骤6:5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯(1:1)以及5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯(1:1)的非对映体混合物
在0℃将5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(1:1)的非对映体混合物(31mg,0.109mmol)的DMF(0.5mL)溶液加至氢化钠(10.94mg,0.274mmol)的DMF(2mL)溶液中。将混合物升温至室温，搅拌2小时，加入碘甲烷(0.068mL,1.094mmol)。将反应在室温搅拌过夜。将得到的混合物用2M HCl(aq)猝灭并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用0.5M LiCl(aq)、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤7:5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的非对映体混合物
将5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯(1:1)以及5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯化合物和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸甲酯(1:1)的非对映体混合物(14mg,0.045mmol)的THF(1mL)和MeOH(0.6mL)溶液在室温用2M NaOH(aq)(0.090mL,0.180mmol)处理1小时。将得到的混合物用2M HCl(aq)(4mL)处理，并用EtOAc(x2)萃取。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
步骤8:将5-((2R,4R,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2R,4S,6S)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸以及5-((2S,4R,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,4S,6R)-6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的非对映体混合物(20mg,0.067mmol)和4-氨基-2-环丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体E)(12.80mg,0.071mmol)的DMF(0.5mL)溶液用DIPEA(0.047mL,0.269mmol)和HATU(33.2mg,0.087mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物用水处理并用EtOAc萃取(x2)。将合并的有机萃取物用0.5M氯化锂(aq)、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.38mins；MS m/z[M+H]+461.6；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(1H,br s),4.99(1H,d),4.63(1H,mult),3.82(1H,mult),3.51(1H,d),3.41(3H,s),3.28(3H,s),2.88-2.75(2H,br mults),2.41-2.31(2H,brmults),2.28(3H,s),2.22(3H,s),2.14-2.06(1H,br mult),1.99-1.83(3H,br mults),1.83-1.72(1H,br mult),1.52(1H,mult),0.92(9H,s).
实施例15:
5-(6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
步骤1:5-((2R,6S)-4-溴-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-4-溴-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物
在氮气气氛下，向含有2,2-二甲基己-5-烯-3-醇(中间体F)(400mg,3.12mmol)和溴化铟(III)(55.4mg,0.156mmol)的干燥DCM(31mL)溶液的冰冷却的烧瓶中，加入溴代三甲基硅烷(0.405ml,3.12mmol)。将反应混合物在冰冷却下搅拌30mins。在另一烧瓶中，在氮气气氛下将5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体C)(572mg,3.12mmol)的干燥DCM(31mL)溶液在冰中冷却。在冰冷却下，历经30分钟将其滴加加至第一烧瓶中。将反应混合物在冰冷却下搅拌1.5hr，并在室温过夜。向反应混合物中加入新戊醛(0.085ml,0.781mmol)，并将其搅拌2小时。再加入新戊醛(0.085ml,0.781mmol)并将反应混合物在室温搅拌过夜。向得到的混合物中加入饱和NaHCO3(aq)水溶液并将混合物剧烈搅拌2mins。将得到的混合物通过相分离柱并收集有机洗脱液，并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS；Rt＝1.68mins；MS m/z[M+H]+376.4；方法2minLowpHv03
步骤2:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物
在氮气流下，向5-((2R,6S)-4-溴-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-4-溴-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物(1:1)(233mg,0.623mmol)的EtOH(7.1mL)和EtOAc(0.7mL)溶液中加入10％Pd/C(26.5mg,0.249mmol)并将混合物在氢气气氛下在室温搅拌7小时。加入硼氢化钠(209mg,2.490mmol)并将反应混合物在氢气气氛下搅拌过夜。再加入10％Pd/C(26.5mg,0.249mmol)并在氢气气氛下继续搅拌过夜。将得到的混合物通过柱过滤，用EtOAc洗脱并在减压下除去有机溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-50％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.72mins；MS m/z[M+H]+296.3；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.54(1H,d),4.66(2H,q),3.01(1H,d),2.19(3H,s),1.94(1H,mult),1.83-1.77(1H,mult),1.73-1.48(3H,mults),1.34(3H,t),1.35-1.26(1H,mults),0.84(9H,s).
步骤3:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(1:1)的混合物
在室温，向搅拌的5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(1:1)(112mg,0.379mmol)的THF(2mL)和MeOH(1.2mL)溶液加入2M NaOH(aq)(0.209mL,0.417mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂并将残留物用EtOAc和水稀释。分离各层并将水层用EtOAc(x2)洗涤。通过加入2M HCl(aq)使水层成酸性并用EtOAc萃取(x3)。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS；Rt 1.57mins；MS m/z[M+H]+268.3；方法2minLowpHv03
步骤4:5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
在氮气气氛下，向5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(1:1)的混合物(40mg,0.150mmol)的干燥DCM(3mL)溶液中加入草酰氯(0.014mL,0.165mmol)和DMF(0.023mL,0.299mmol)。将反应混合物在室温搅拌5分钟，并加入4-氨基-2-环丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体E)(27.1mg,0.150mmol)和三乙胺(0.063mL,0.449mmol)。将反应混合物在室温搅拌5分钟。向得到的混合物中加入水并将其剧烈搅拌，然后通过相分离柱。收集有机物并在减压下除去溶剂。然后将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到粗物质，为对映异构体的混合物。
采用超临界流体色谱法将所述物质手性分离，得到个体对映体:
方法细节:
实施例15a:5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
手性SFC:Rt＝14.26mins
LC-MS:Rt＝4.59mins；MS m/z[M+H]+431.5；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(1H,br s),4.69-4.59(2H,mults),3.32(3H,s),3.10(1H,d),2.83(2H,mults),2.41-2.34(2H,mults),2.29(3H,s),2.23(3H,s),2.03(1H,brd),1.96-1.60(6H,mults),1.45-1.33(1H,mults),0.93(9H,s).
实施例15b:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
手性SFC:Rt＝18.40mins
LC-MS:Rt＝4.58mins；MS m/z[M+H]+431.5；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(1H,br s),4.69-4.59(2H,mults),3.32(3H,s),3.10(1H,d),2.83(2H,mults),2.41-2.34(2H,mults),2.29(3H,s),2.23(3H,s),2.03(1H,br d),1.96-1.60(6H,mults),1.45-1.33(1H,mults),0.93(9H,s).
实施例16:
5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
通过与实施例15的方法类似的方法用4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)替换步骤4中的4-氨基-2-环丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体E)来制备标题化合物。采用超临界流体色谱法手性分离，得到个体对映异构体:
方法细节:
5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
手性SFC Rt＝8.19mins；
LC-MS:Rt＝4.87mins；MS m/z[M+H]+459.5；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(1H,s),4.53(1H,dd),3.97(1H,tt),3.18(3H,s),3.01(1H,dd),2.20(3H,s),2.12(3H,s),1.96-1.86(2H,mults),1.83-1.74(4H,mults),1.72-1.49(6H,mults),1.35-1.22(2H,mults),1.21-1.11(2H,mults),0.84(9H,s).
实施例17:
5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
步骤1:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-碘四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-碘四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物
在氮气气氛下、在室温，历经10秒向搅拌的5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(1g,5.46mmol)、2,2-二甲基己-5-烯-3-醇(中间体F)(0.700g,5.46mmol)和碘化钠(0.818g,5.46mmol)的干燥MeCN(20mL)溶液中滴加加入TMSCl(0.698mL,5.46mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。向得到的混合物中加入新戊醛(0.593mL,5.46mmol)并将反应混合物搅拌3小时。将得到的混合物用EtOAc稀释并用10％硫代硫酸钠(aq)溶液(x1)和水(x1)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。然后将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-50％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.76mins；MS m/z[M+H]+422.3；方法2minLowpHv03
步骤2:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(1:1)的混合物
向5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-4-碘四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-4-碘四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物(1:1)(794mg,1.885mmol)的甲苯(3.8mL)溶液中加入DBU(0.284ml,1.885mmol)，并将其在室温搅拌过夜。向得到的混合物中加入DBU(0.142ml,0.94mmol)并将其在室温搅拌4小时。将得到的混合物用EtOAc和水稀释并分离各层。水层用EtOAc萃取。合并的有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。然后将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-20％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.64mins；MS m/z[M+H]+294.5；方法2minLowpHv03
步骤3:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物
在氮气气氛下，向5-((2R,6S)-6-(叔丁基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物(1:1)(212mg,0.723mmol)的乙醇(14.5mL)溶液中加入10％Pd/C(769mg,0.723mmol)。将反应混合物在氢气气氛下在室温搅拌过夜。在氮气气氛下，将得到的混合物通过柱过滤，用EtOAc洗脱。在减压下除去有机溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.70mins；MS m/z[M+H]+296.4；方法2minLowpHv03
步骤4:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸(1:1)
向5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物(100mg,0.339mmol)的THF(3mL)和MeOH(1.8mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(0.186mL,0.372mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物在减压下浓缩并将残留物用EtOAc和水稀释。将有机层用0.1M NaOH(aq)萃取。将合并的水层用1M HCl(aq)酸化并用EtOAc萃取(x3)。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.52mins；MS m/z[M+H]+268.4；方法2minLowpHv03
步骤5:5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物(1:1)
在氮气气氛下，向5-((2R,6S)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,6R)-6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的混合物(1:1)(77mg,0.288mmol)的DCM(2mL)溶液中加入草酰氯(0.026mL,0.302mmol)和DMF(2.230μl,0.029mmol)。加入4-氨基-2-异丙基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体G)(48.7mg,0.288mmol)和三乙胺(0.161mL,1.152mmol)，并将反应混合物在室温搅拌过夜。向得到的混合物中加入1M NaOH和DCM，并使混合物通过相分离柱。将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。然后将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝4.50mins；MS m/z[M+H]+419.5；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(1H,s),4.72(1H,mult),4.36(1H,mult),3.22(3H,s),3.16(1H,d),2.14(3H,s),2.04(3H,s),1.99-1.90(1H,mult),1.84-1.78(1H,mult),1.70-1.59(3H,br mult),1.35(6H,d),1.38-1.23(1H,br mult),0.88(9H,s).
实施例18:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6R)-6-异丙基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6S)-6-异丙基-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6R)-6-异丙基-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6S)-6-异丙基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
步骤1:4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酸乙酯
类似于中间体C,步骤1那样制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.86(1H,dd),6.02(1H,d),5.69(1H,d),4.37(2H,q),2.19(3H,s),1.33(3H,t).
步骤2:4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酸
将4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酸乙酯(250mg,0.993mmol)溶解在THF(5.3mL)和MeOH(3.2mL)中，并向其中加入2M NaOH(aq)(497μl,0.993mmol)。将反应混合物在室温搅拌15分钟。将得到的混合物在减压下浓缩并用2M HCl(5mL)和水(5mL)处理。将DCM加至水混合物中，导致形成乳液。在减压下除去溶剂。将得到的残留物混悬在DCM(25mL)中并使其通过相分离柱。在减压下除去有机溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.04mins:MS m/z[M+H]+154.1:方法2minLowpHv03
步骤3:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酰胺
将4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酸(172mg,0.809mmol)的DCM(10mL)混悬液冷却至0℃，用草酰氯(0.142mL,1.617mmol)和DMF(4滴)处理。将反应混合物在0℃搅拌1小时，并在室温搅拌30分钟。在减压下除去溶剂，并将残留物溶解在DCM(8mL)中。加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(169mg,0.809mmol)(中间体D)和三乙胺(0.338mL,2.426mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物用水(15mL)稀释，并用DCM(x2)萃取。将有机萃取物合并并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用20-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt 1.11mins:MS m/z[M+H]+345.4:方法2minLowpHv03
步骤4:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酰胺
向N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酰胺(53mg,0.154mmol)的THF(1mL)和水(0.5mL)溶液中加入高碘酸钠(99mg,0.462mmol)和Os EnCatTM(微囊化的OsO4)(10.26mg,3.08μmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物通过棉花塞过滤，并在减压下浓缩洗脱液，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.09(1H,s),8.34(1H,br s),4.07(1H,mult),3.32(3H,s),2.57(3H,s),2.23(3H,s),2.08-1.95(2H,br mults),1.94-1.80(4H,br mults),1.71(1H,br mult),1.44-1.30(2H,br mults),1.30-1.16(1H,br mult).
步骤5:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(1-羟基丁-3-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酰胺(53mg,0.153mmol)的THF(1.5mL)溶液冷却至0℃，历经15mins滴加加入1M烯丙基溴化镁的Et2O溶液(337μl,0.337mmol)。将反应混合物升温至室温，并加入饱和NH4Cl(aq)。将水层用DCM萃取(x3)。使合并的有机萃取物通过相分离柱，并在减压下除去有机溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用50-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤6:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6R)-6-异丙基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,6S)-6-异丙基-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6R)-6-异丙基-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,6S)-6-异丙基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
将N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(1-羟基丁-3-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(26mg,0.054mmol)的DCM(0.5mL)溶液冷却至0℃，并加入异丁醛(5.38μl,0.059mmol)和TMSOTf(10.66μl,0.059mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，并在室温过夜。向得到的混合物中加入饱和NH4Cl(aq)溶液，并将其用DCM萃取(x3)。使合并的有机萃取物通过相分离柱，并在减压下除去有机溶剂。将粗物质溶解在DMSO中，并采用UV-指导的自动化反相色谱法以历经9.5分钟的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度采用Xselect CSH Prep C18柱纯化，得到标题化合物，为烯的混合物，NMR揭示产物的比例是3:24-烯:3-烯；提示立体化学是syn。
LC-MS:Rt＝1.40mins；MS m/z[M+H]+443.3:方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13-8.07(m,2H),6.08-6.03(m,1H),5.936-5.92(m,1H),5.80-5.73(m,2H),5.46-5.42(m,1H),4.85(dd,J＝10.37,3.3,1H),4.18-4.14(m,1H),4.10-4.04(m,3H),3.43-3.40(m,1H),3.32-3.24(m,7H),2.30(s,3H),2.27(s,3H),2.24-2.21(m,8H),2.02-1.50(m,16H),1.44-1.06(m,8H),1.01-0.94(m,12H).
实施例19:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2S,6S)-6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,6R)-6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺的混合物
步骤1:5-(1-羟基丁-3-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
将三氟化硼乙醚合物(54.1μl,0.427mmoL)的DCM(0.3mL)溶液冷却至-78℃。在另一分开的烧瓶中，将5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体C)(68mg,0.371mmol)和烯丙基三甲基硅烷(59.0μl,0.371mmol)的DCM溶液冷却至-78℃并将该溶液滴加加至所述三氟化硼乙醚合物溶液中。将反应混合物在-78℃搅拌1小时，并在室温过夜。向得到的混合物中加入NaHCO3(aq)饱和溶液(5mL)，并将其用DCM萃取(x3)。使合并的有机萃取物通过相分离柱并在减压下浓缩洗脱液。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-50％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.07mins；MS m/z[M+H]+226.1:方法2minLowpHv03
步骤2:4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酸乙酯
将5-(1-羟基丁-3-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(35mg,0.155mmol)的DCM(1mL)溶液用乙醛(8.72μl,0.155mmol)处理并将反应混合物冷却至0℃。加入冷却至0℃的TMSOTf(80.4μL,0.465mmol)的DCM(1.5mL)溶液，并将反应混合物在0℃搅拌30分钟，并在室温过夜。向得到的混合物中加入氯化铵(aq)饱和溶液(2mL)并将其用DCM萃取(x3)。使合并的有机萃取物通过相分离柱并在减压下浓缩洗脱液。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.32mins:MS m/z[M+H]+252.2:方法2minLowpHv03
步骤3:4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酸
向4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酸乙酯(14mg,0.056mmol)的MeOH(0.2mL)和THF(0.3mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(27.9μl,0.056mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。将得到的混合物在减压下浓缩，并加入2M NaOH(aq)(1mL)和水(1mL)。将水混合物用DCM萃取(x3)，并使合并的有机萃取物通过相分离柱。在减压下浓缩洗脱液，得到标题化合物。
步骤4:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2S,6S)-6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,6R)-6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺的外消旋混合物
向4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酸)(12.03mg,0.054mmoL)的NMP(0.5mL)溶液中加入HATU(20.49mg,0.054mmol)。加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(11.28mg,0.054mmol)和三乙胺(7.49μl,0.054mmoL)并将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物在饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和EtOAc(10mL)之间分配。将有机物用盐水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用40-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝3.65mins:MS m/z[M+H]+415.3:方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(s,1H),5.86-5.77(m,1H),5.68-5.60(m,1H),4.77(dd,J＝10.9,3.3Hz,1H),4.37(s,1H),4.04-3.93(m,1H),3.31(t,J＝7.0Hz,1H),3.26(s,3H),2.67-2.54(m,1H),2.31(t,J＝8.1Hz,1H),2.19-2.08(m,7H),2.02-1.87(m,2H),1.86-1.72(m,2H),1.64-1.59(m,1H),1.36-1.05(m,7H).
实施例20:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺
步骤1:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-羟基丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
在0℃，将叔丁基二甲基氯硅烷(6.3g,41.5mmol)分次加至5-((1R,2S)-1,2-二羟基丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体B)(8.65g,37.7mmol)、4-二甲基氨基吡啶(1.38g,11.32mmol)和三乙胺(5.80mL,)的DMF(100mL)溶液，并将反应升温至室温。18h后，将反应在EtOAc和盐水之间分配，用饱和氯化铵水溶液、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用15％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.59mins；MS m/z[M+H]+344.4；方法2minLowpHv03
步骤2:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸2-甲基烯丙基酯
在室温，将NaH(700mg 60wt％在矿物油中的分散体,17.47mmol)分次加至5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-羟基丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(3.0g,8.73mmol)的THF(75mL)溶液中，随后历经10分钟分次加入3-溴-2-甲基丙-1-烯(8.81ml,87mmol)。加入四丁基碘化铵(2.58g,6.99mmol)并将得到反应物在58℃加热2小时。将反应冷却至室温并连续用盐水(75mL)和EtOAc(75mL)猝灭，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗标题化合物，为大约9:1混合物；
LC-MS:Rt＝1.90mins；MS m/z[M+H]+398.5；方法2minLowpHv03
LC-MS:Rt＝1.95mins；MS m/z[M+H]+424.5；方法2minLowpHv03
步骤3:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸
将氢氧化锂一水合物(3.20g,76mmol)分次加至5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸2-甲基烯丙基酯的混合物[4.5g，为大约9:1混合物，含有残留的四丁基碘化铵(25％w/w)]的THF/水(300mL,1.5/1.0)溶液中，并将得到的混合物在70℃温和加热。冷却至室温后，分离各层，并将剩余的水混合物用1M盐酸水溶液酸化并用EtOAc萃取。将有机萃取物合并并用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.75mins；MS m/z[M+H]+370.5；方法2minLowpHv03
步骤4:5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(2.63g,12.55mmol)分次加至5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸(4.14g,～70％w/w)的DMF(100mL)溶液中，随后加入DIPEA(7.8ml,44.8mmol)和HATU(4.8g,12.55mmol)。在室温搅拌18h后，将反应混合物在EtOAc和盐水之间分配。将水相用EtOAc萃取，并将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用50-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.77mins；MS m/z[M+H]+561.8；方法2minLowpHv03
步骤5:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,2S)-2-羟基-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
将四丁基氟化铵(15.16ml,15.16mmol)滴加到5-((1R,2S)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(5.06g,7.58mmol(推定76％纯度))的THF(160mL)溶液中，并将得到的混合物在室温下搅拌18h。将得到的混合物通过连续地加入水(150mL)和EtOAc(200ml)淬灭。将有机物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用50-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.12mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法2minLowpHv03
步骤6:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺
在室温下，将三氟乙酸汞(3.92g,9.19mmol)分次加至N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((1R,2S)-2-羟基-1-((2-甲基烯丙基)氧基)丙基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(3.59g,8.03mmol)的THF(160mL)溶液中。加入红色氧化汞(1.99g,9.19mmol)并将得到的反应混合物在室温下搅拌。1h后，将反应冷却至-78℃并滴加三乙基硼烷(16.84ml,16.84mmol)，随后分次加入硼氢化钠(579mg,15.31mmol)。1h后，在-78℃下将反应逐渐地升温至室温。将得到的混合物通过加入盐水和EtOAc淬灭，分离，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。加入DCM(200mL)和Biotage Si-Thiol(17g,1.4mmol/g负载,～3eq)并将得到的混悬液在室温搅拌18h。将反应过滤，用DCM洗涤，并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用90-95％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物(>95％ee)；
LC-MS:Rt＝1.16mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法2minLowpHv03
1H NMR.([400MHz],[DMSO]9.55(1H,s),4.36(1H,d),4.09(1H,m),3.91(1H,m),3.65(1H,d),3.42(1H,d),3.21(3H,s),2.16(3H,s),2.03(3H,s),1.98(2H,m),1.78(2H,m),1.64(3H,m),1.37(3H,s),1.31(2H,m),1.17(1H,m),1.10(3H,s),0.87(3H,d).
实施例21.1
21.1[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]
和实施例21.2:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺
步骤1:[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯]
在氮气气氛下，向冰冷却的2-甲基丁-3-烯-1-醇(Aldrich)(0.171mL,1.638mmol)、溴化铟(III)(28.3mg,0.082mmol)和干燥DCM(10mL)的混合物中，加入溴三甲基硅烷(0.213mL,1.638mmol)。将反应混合物在冰冷却下搅拌30mins。将冰冷的5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体C)(300mg,1.638mmol)的干燥DCM(2mL)溶液历经5分钟加至反应混合物中。将反应混合物在冰冷却下搅拌并升温至室温历经周末。在0℃下，将得到的混合物在搅拌下用饱和NaHCO3水溶液(10ml)处理。使得到的混合物通过相分离柱，并将洗脱液在减压下除去溶剂。将粗物质溶解在DMSO中并通过UV-指导的自动化反相色谱法以9.5分钟的50-98％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分加入到EtOAc(50mL)中并用饱和NaHCO3水溶液(50ml)洗涤。将有机物用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.47mins；MS m/z[M+H]+332.2/334.2:方法2minLowpHv03
步骤2:[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸钾]和(R)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酸钾和(S)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酸钾
向[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯](211mg,0.635mmol)的干燥THF(5mL)溶液中，加入三甲基硅醇钾(Aldrich)(107mg,0.953mmol)。将反应混合物在室温搅拌并超声。进一步加入THF并将混合物搅拌3小时。将得到的混合物在减压下浓缩，得到标题化合物的混合物；
LC-MS:Rt＝1.07mins；MS m/z[M+H]+224.2；Rt＝1.20mins；MS m/z[M+H]+306.2:方法2minLowpHv03.
步骤3:[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]以及(R)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺化合物和(S)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺(1:1)的混合物
向搅拌的5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸钾和4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酸钾(粗混合物)(217mg,0.634mmol)的干燥NMP(4mL)溶液中加入HATU(Fluorochem)(265mg,0.697mmol)、4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(133mg,0.634mmol)和三乙胺(0.194mL,1.395mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，并在EtOAc(25mL)和1M NaOH(25mL)之间分配。将有机物用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质溶解在DMSO中，并通过UV-指导的自动化反相色谱法，以9.5分钟的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分加入到EtOAc(50mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂，得到标题化合物。
实施例21.1:[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]LC-MS:Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+497.5:方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(1H,s),4.47(1H,mult),4.03-3.87(2H,br mults),3.80-3.72(1H,mult),3.14(3H,s),2.43-2.36(1H,br mult),2.13(3H,s),2.08(3H,s),2.01(1H,br mult),1.91-1.80(3H,br mults),1.79-1.68(5H,br mults),1.58(1H,brmult),1.31-1.18(2H,br mults),1.16-1.05(1H,br mult),0.95(3H,d).
实施例21.2:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺LC-MS:Rt＝1.25mins；MS m/z[M+H]+415.4:方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(1H,s),5.63(1H,mult),4.78(1H,dd),4.26-4.00(3H,br mults),3.26(3H,s),2.72-2.61(1H,br mult),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.07-1.93(3H,br mults),1.92-1.81(5H,br mults),1.75-1.66(2H,br mults),1.67(3H,s),1.44-1.30(2H,br mults),1.30-1.18(1H,br mult).
实施例22:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,5R)-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺
在氮气流下，向(R)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺化合物和(S)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺(1:1)的混合物(实施例21.2)(35mg,0.084mmol)的EtOH(15mL)溶液中加入Pd-C(3.59mg,0.034mmol)。在氢气气氛、0.35bar下，将反应混合物在室温搅拌2小时。将得到的混合物通过过滤，用乙醇洗涤。将滤液在减压下浓缩并在重力下通过1g Biotage二氧化硅-TMT柱。将该柱用乙醇洗涤并在减压下浓缩洗脱液。将粗物质溶解在DMSO中，并通过UV-指导的自动化反相色谱法以9.5分钟的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分加入至EtOAc(30mL)中，并用饱和NaHCO3(30mL)水溶洗涤液。将有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物；
LC-MS:Rt 1.23mins；MS m/z[M+H]+417.4；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(1H,mult),4.77(1H,mult),4.17-3.99(2H,mults),3.72(1H,dd),3.50(1H,dd),3.34(3H,mult),2.29-2.22(6H,mults),2.08-1.97(4H,mults),1.86(3H,mults),1.75(1H,mult),1.63(1H mult),1.37(2H,mult),1.30-1.22(3H,mult),1.05(2H,mult),0.87(1H,mult).
采用超临界流体色谱法手性分离实施例22，得到顺式非对映体的两种个体对映异构体和反式非对映体的外消旋混合物：
方法细节:
实施例22.a N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺的单一立体异构体
SFC保留时间＝9.74mins
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(1H,br s),4.80-4.75(1H,br mult),4.05(1H,tt),3.76-3.70(1H,dd),3.55-3.48(1H,dd),3.25(3H,s),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.07-1.93(2H,br mults),1.93-1.75(8H,br mults),1.71(1H,br mult),1.67-1.58(1H,br mult),1.44-1.30(2H,br mults),1.30-1.18(1H,br mult),1.05(3H,d).
实施例22.b:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺的单一立体异构体
SFC保留时间＝8.12mins
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(1H,br s),4.79-4.76(1H,br mult),4.06(1H,tt),3.75-3.70(1H,dd),3.53-3.48(1H,dd),3.27(3H,s),2.28(3H,s),2.22(3H,s),2.03-1.95(2H,mult),1.92-1.77(8H,br mults),1.71(1H,br mult),1.66-1.59(1H,br mult),1.42-1.32(2H,br mults),1.27-1.20(1H,br mult),1.05(3H,d).
实施例22.c:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2S,5R)-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,5S)-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺的混合物
SFC保留时间＝5.84mins
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(1H,br s),4.50(1H,dd),4.10-3.98(2H,br mults),3.26(3H,s),3.17(1H,t),2.27(3H,s),2.21(3H,s),2.09-1.92(4H,br mults),1.93-.177(7H,br mults),1.71(1H,br d),1.42-1.17(3H,br mults),0.87(3H,d).
实施例23:
5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
步骤1:2,2-二甲基丁-3-烯-1-醇
向2,2-二甲基丁-3-炔-1-醇(PharmaBlocks)(3g,30.6mmol)的干燥乙醚(40mL)溶液加入2,2'-(乙烷-1,2-二基双(硫烷二基))二乙醇(5.57g,30.6mmol)，随后加入5％在硫酸钡上的Pd(Aldrich)(6.51g,3.06mmol)。将混合物彻底脱气，再填充氮气，并在氢气气氛下、在室温搅拌4小时。将得到的混合物在减压下过滤，用乙醚洗涤结晶。将滤液小心在减压下浓缩以除去大部分的溶剂。将得到的混悬液过滤并将滤液在减压下浓缩，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.71(1H,dd),5.05-4.97(2H,mults),3.27(2H,s),1.41(1H,br mult),0.95(6H,s).
步骤2:5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物
在氮气气氛下，向冰冷却的2,2-二甲基丁-3-烯-1-醇(328mg,3.28mmol)、溴化铟(III)(56.6mg,0.164mmol)和干燥DCM(20mL)的混合物中加入溴三甲基硅烷(0.425mL,3.28mmol)并将得到的混合物在冰冷却下搅拌30mins。历经15分钟将冰冷的5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体C)(600mg,3.28mmol)的干燥DCM(2mL)溶液加至反应混合物中，并将反应混合物在冰冷却下搅拌85分钟。在0℃，将得到的混合物在搅拌下用饱和NaHCO3水溶液(10mL)处理。将两相的混合物通过相分离柱，并将滤液在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-60％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.48mins；MS m/z[M+H]+346.2/348.2:方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.12(1H,dd),4.45(2H,q),4.10-4.01(2H,mult),2.73-2.65(1H,mult),2.46-2.39(1H,mult),2.27(3H,s),1.82(3H,s),1.80(3H,s),1.43(3H,t).
步骤3:5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的混合物
向搅拌的5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯的混合物(442mg,1.277mmol)的THF(10mL)和MeOH(1mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(1.277mL,2.55mmol)。将反应混合物在室温搅拌。一旦完成后，将反应加至水(20mL)中并通过加入1MHCl(aq)酸化至pH 5-6。将水混合物用EtOAc(40mL)萃取并将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.18mins；MS m/z[M+H]+318.4/320.5:方法2minLowpHv03
步骤4:5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
在氮气气氛、0℃下，向搅拌的DMF(0.073mL,0.943mmol)的干燥DCM(15mL)混合物中，加入草酰氯(0.045mL,0.519mmol)。5分钟后加入5-((2R,4S)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸和5-((2S,4R)-4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸的混合物(150mg,0.471mmol)的干燥DCM(3mL)溶液，并将反应混合物搅拌10分钟。加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(109mg,0.519mmol)的干燥DCM(2mL)和三乙胺(0.197mL,1.414mmol)的溶液并将反应混合物在0℃下搅拌40分钟。将得到的混合物在DCM(30mL)和饱和的NaHCO3水溶液(30mL)之间分配。将有机物通过相分离柱并在减压下浓缩洗脱液。将粗物质溶解在DMSO中，并通过UV-指导的自动化反相色谱法以9.5分钟的30-70％MeCN的水(0.1％甲酸)溶液梯度纯化。将产物流分加入至EtOAc(50mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC:Rt＝1.26mins:方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(1H,br s),5.19(1H,t),4.53(1H,mult),4.40(1H,mult),4.05(1H,tt),3.26(3H,s),2.92-2.77(2H,br mult),2.28(3H,s),2.21(3H,s),2.06-1.94(2H,br mults),1.92-1.83(4H,br mults),1.72(3H,s),1.72-1.63(1H,brmults),1.64(3H,s),1.44-1.30(2H,br mults),1.29-1.19(1H,br mult).
实施例24:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,4R)-4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,4S)-4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
在氮气流下，向5-(4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺(62mg,0.122mmol)的乙醇(10mL)中加入Pd-C(5.18mg,0.049mmol)。将混合物在氢气气氛下在0.35bar和室温搅拌过夜。向反应混合物中加入NaHCO3(40.9mg,0.487mmol)并将反应混合物在氢气气氛下在0.35bar和室温搅拌2.5小时。将得到的混合物通过过滤，用EtOH洗涤。将滤液通过Biotage 1g二氧化硅-TMT柱，并在减压下除去洗脱液。将粗物质通过制备HPLC-MS以9.5分钟的30-98％MeCN的水(0.1％TFA)溶液梯度纯化。将产物流分溶解在EtOAc(20mL)中并用饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗涤。将有机层用盐水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+431.5:方法2minLowpHv03.
采用超临界流体色谱法手性分离实施例24，得到个体对映异构体。
方法细节:
实施例24.a:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,4R)-4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,4S)-4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
SFC Rt＝3.99mins
LC-MS；Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+431.5；方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(1H,br s),5.09(1H,mult),4.09(1H,t),4.10-4.00(1H,tt),3.69(1H,t),3.24(3H,s),2.45-2.36(1H,mult),2.25(3H,s),2.21(3H,s),2.18-2.09(1H,br mult),2.06-1.93(2H,br mults),1.91-1.83(5H,br mults),1.71(1H,brmult),1.67-1.60(1H,br mult),1.44-1.30(2H,br mults),1.29-1.19(1H,br mult),1.00(3H,d),0.95(3H,d).
实施例24.b:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2R,4R)-4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-((2S,4S)-4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
SFC Rt＝5.42mins
LC-MS:Rt 1.30mins；MS m/z[M+H]+431.6:方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(1H,br s),5.12-5.06(1H,mult),4.12-4.01(2H,mults),3.69(1H,t),3.26(3H,s),2.44-2.36(1H,mult),2.26(3H,s),2.21(3H,s),2.18-2.08(1H,mult),2.05-1.95(2H,br mults),1.91-1.83(5H,br mults),1.71(1H,br mult),1.68-1.59(1H,mult),1.44-1.31(2H,br mults),1.30-1.19(1H,br mult),1.00(3H,s),0.95(3H,s).
实施例25:
5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
步骤1:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
向5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体C)(50mg,0.273mmol)的甲苯(0.5mL)溶液中加入3,3-二甲基丁烷-1,2-二醇(32.3mg,0.273mmol)并将混合物在110℃加热4.5小时。将得到的混合物在EtOAc和水之间分配，并将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.42mins；MS m/z[M+H]+284.3:方法2minHighpHv03
步骤2:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸钾
向5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(42mg,0.148mmol)的THF(4mL)溶液中加入三甲基硅醇钾(19.02mg,0.148mmol)并将混合物在室温搅拌1.5小时。将得到的混合物在减压下浓缩，得到标题化合物。
步骤3:5-((2R,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2R,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2S,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺和5-((2S,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的混合物
向5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酸钾(43.5mg,0.148mmol)的NMP(0.7mL)溶液中加入HATU(62.0mg,0.163mmol)、三乙胺(45.5μl,0.326mmol)和4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体D)(31.0mg,0.148mmol)并将反应混合物在室温搅拌过夜。向得到的混合物中加入水和EtOAc。将有机物用盐水洗涤(x2)，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
实施例25a-25d:
5-((2R,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2R,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2S,4R)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺或5-((2S,4S)-4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
采用超临界流体色谱法手性分离5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺，得到个体对映体。
方法细节:
实施例25a:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的个体立体异构体SFC:Rt＝3.36mins
LC-MS:Rt＝4.11mins；MS m/z[M+H]+447.6:方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(1H,br s),6.02(1H,s),4.14-4.00(2H,mults),3.97-3.87(2H,mults),3.36(3H,s),2.31(3H,s),2.23(3H,s),2.09-1.97(2H,mults),1.88(3H,br t),1.73(1H,br d),1.44-1.31(2H,mults),1.30-1.20(2H,mults),1.01(9H,s).
实施例25b:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的个体立体异构体手性SFC:Rt＝3.78mins
LC-MS:Rt＝4.12mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(1H,br s),6.19(1H,s),4.16-4.00(3H,mults),3.85(1H,t),3.30(3H,s),2.30(3H,s),2.22(3H,s),2.07-1.94(2H,mults),1.87(3H,br t),1.72(1H,br d),1.45-1.20(4H,mults),0.99(9H,s).
实施例25c:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的个体立体异构体手性SFC:Rt＝4.05mins
LC-MS:Rt＝4.09mins；MS m/z[M+H]+447.5；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(1H,br s),6.02(1H,s),4.10-4.01(2H,mults),3.97-3.87(2H,mults),3.25(3H,s),2.32(3H,s),2.21(3H,s),2.06-1.93(2H,mults),1.88(3H,br t),1.71(1H,br d),1.44-1.30(2H,mults),1.30-1.20(2H,mults),1.00(9H,s).
实施例25d:5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺的个体立体异构体手性SFC:Rt＝5.95mins
LC-MS:Rt＝4.15mins；MS m/z[M+H]+447.6；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.00(1H,br s),6.20(1H,s),4.16-4.09(2H,mults),4.07-4.00(2H,mults),3.27(3H,s),2.30(3H,s),2.21(3H,s),2.07-1.94(2H,mults),1.87(3H,br t),1.72(1H,br d),1.45-1.20(4H,mults),0.99(9H,s).
实施例26:
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺
通过与实施例25的方法类似的方法用2,2-二甲基丙烷-1,3-二醇替换3,3-二甲基丁烷-1,2-二醇(步骤1)来制备标题化合物；
LC-MS:Rt＝3.68mins；MS m/z[M+H]+433.4；方法8minLowpHv01
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(1H,s),5.58(1H,s),3.96(1H,tt),3.71(2H,d),3.55(2H,d),3.18(3H,s),2.26(3H,s),2.11(3H,s),1.97-1.86(2H,mults),1.80-1.74(3H,mults),1.62(1H,br d),1.33-1.11(4H,mults),1.23(3H,s),0.75(3H,s).
中间体A:
5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
步骤1:4-甲基-5-氧代-4,5-二氢异唑-3-甲酸乙酯
向草酰丙酸二乙酯(diethyl oxalyl propionate)(300g,1.48mol)的乙醇(2l)溶液中加入盐酸羟胺(124g,1.78mol)并将反应混合物在80℃加热3小时。将得到的混合物冷却至室温并在减压下除去溶剂。将残留物用水和DCM处理并将水混合物用DCM萃取。将合并的有机物干燥并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.40(2H,q),2.09(3H,s),1.38(3H,t).
步骤2:5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
将4-甲基-5-氧代-4,5-二氢异唑-3-甲酸乙酯(42.5g,248mmol)和三溴氧磷(199g,695mmol)一起搅拌，并加热至80℃。历经15mins，滴加加入三乙胺(34.6mL,248mmol)，并将反应混合物在80℃搅拌3小时。将得到的混合物冷却至室温。加入DCM(400mL)，并在搅拌下将混合物倒入冰(～400mL)中。加入2M NaOH(aq)(1250mL)，直到pH 7，并分离得到的层。将水层用DCM萃取(2x 300mL)，并合并得到的有机萃取物，用水(400mL)、硫代硫酸钠(5％w/v溶液,400mL)、水(400mL)和盐水(400mL)洗涤。将有机物用MgSO4和碳干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.02mins:MS m/z[M+H]+234.0:方法2minLowpH
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.47(2H,q),2.21(3H,s),1.44(3H,t).
中间体B:
5-((1R,2S)-1,2-二羟基丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
步骤1:(E)-4-甲基-5-(丙-1-烯-1-基)异唑-3-甲酸乙酯
将反式-1-丙烯基三氟硼酸钾(9.86g,66.7mmol)、PdCl2(dppf).DCM加合物(907mg,1.11mmol)、5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(13g)和三乙胺(7.7mL)的EtOH(250mL)混悬液在真空下脱气并用氮气回填，然后在90℃加热18h。冷却至室温后，将反应在EtOAc和盐水之间分配，分离，用MgSO4干燥，并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用5-10％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.30mins；MS m/z[M+H]+196.2；方法2minLowpHv03
步骤2:5-((1R,2S)-1,2-二羟基丙基)-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
将(E)-4-甲基-5-(丙-1-烯-1-基)异唑-3-甲酸乙酯(500mg,2.56mmol)的tert-BuOH-水(1mL)溶液分次加至在tert-BuOH-水(1:1,19mL)中的AD-mix-beta(3.59g,7.63mmol)、甲烷磺酰胺(731mg,7.68mmol)、修饰的AD-mix-β(DHQD)2PHAL(80mg,0.102mmol)和四氧化锇(0.836mL 2.5wt％tert-BuOH溶液,0.067mmol)的混合物中，并将得到的反应混合物在室温搅拌1.5hr。一次性加入亚硫酸钠(3.9g)，并将反应搅拌30mins。分离各相并将EtOAc相用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用65-75％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物(96％ee)；
LC-MS:Rt＝0.78mins；MS m/z[M+H]+230.2；方法2minLowpHv03
中间体C:
5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
步骤1:4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酸乙酯
将5-溴-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯(中间体A)(15g,64.1mmol)和三丁基(乙烯基)锡烷(22.48mL,77mmol)在干燥二烷(250mL)中搅拌，在室温用氮气冲洗90分钟。加入四(三苯基膦)钯(3.70g,3.20mmol)，并将反应混合物在100℃搅拌过夜。将反应混合物在乙酸乙酯(250mL)和水(250mL)之间分配并分离。向有机层中加入氟化钠溶液(～1M,250mL)，并将得到的混悬液通过过滤。分离各层和将有机物用水、盐水洗涤，用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-30％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.20mins:MS m/z[M+H]+182.5:方法2minLowpHv03
步骤2:5-甲酰基-4-甲基异唑-3-甲酸乙酯
在室温，向4-甲基-5-乙烯基异唑-3-甲酸乙酯(3g,16.56mmol)的THF(40mL)和水(20mL)溶液中，加入高碘酸钠(10.62g,49.7mmol)和锇ENCAT 40(828mg,0.248mmol)。将反应混合物在室温搅拌过周末。将得到的混合物通过(5g)过滤，用EtOAc洗涤。分离各层，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质混悬在DCM中，超声并通过相分离柱。收集洗脱液并在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.12(1H,s),4.50(2H,q),2.56(3H,s),1.46(3H,s).
中间体D:
4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
步骤1:2-环己基-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
将环己基肼盐酸盐(AK Scientific)(700g,4643mmol)加至搅拌的DCM(3000mL)和冰冷的2M氢氧化钠溶液(1778mL,3556mmol)的溶液中。将反应混合物在室温搅拌10分钟。分离得到的相并将水层用DCM萃取(4x 2000mL)。将合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将得到的固体溶解在水(1300mL)中，向其中加入乙酸(1300mL)和乙酰乙酸乙酯(Fluka)(450mL,3556mmol)并将反应混合物在85℃搅拌1小时。将得到的混合物在减压下浓缩至干，并将残留物溶解在DCM(3000mL)和水(1000mL)中。采用2M K2CO3(aq)将pH调节至pH 9，分离各相并将有机萃取物用盐水洗涤(1x 2L)。将第一水层用氯化钠饱和，并将合并的水相用DCM萃取(4x 2L)。将合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到固体。将粗固体粉碎，加入TBME(2000mL)并将混合物在50℃搅拌1小时，随后在室温搅拌1小时。将得到的混悬液过滤，用TBME(4x 500mL)洗涤固体。将分离的固体在真空下在45℃干燥16小时，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(1H,br s),5.06(1H,s),3.89(1H,mult),1.98(3H,s),1.81-1.55(7H,mults),1.36-1.22(2H,mults),1.18-1.05(1H,mult).
步骤2:2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
将2-环己基-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(525g,2834mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2200mL)混悬液加热至40℃，加入碘甲烷(532mL,8502mmol)。将反应混合物加热至70℃反应20小时。再加入碘甲烷(177mL,2834mmol)，并将混合物在75℃搅拌3.5小时，然后在80℃搅拌20小时。将得到的混合物在减压下浓缩，并将残留物用TBME(2000mL)研磨。通过过滤收集产物，用TBME(5x 500mL)洗涤，得到固体。将分离的固体混悬在DCM(2500mL)和水(500mL)中，并采用2M K2CO3水溶液(1700mL)将pH调节至pH 9。分离各相并将水层用DCM萃取(3x500mL)。将合并的有机萃取物用盐水(1000mL)洗涤，并在减压下浓缩。将得到的残留物溶解在乙酸乙酯(2000mL)中，用无水硫酸钠干燥并通过200g硅胶(40-63μm)过滤，用10％MeOH的EtOAc溶液(7x 300mL)洗脱。将滤液在减压下浓缩并在65℃干燥，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.02(1H,s),3.84(1H,tt),3.14(3H,s),2.06(3H,s),1.98-1.86(2H,mults),1.78-1.53(5H,mults),1.33-1.20(2H,mults),1.18-1.04(1H,mult).
步骤3:2-环己基-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮
向冷却至-15℃的三氟乙酸(1940mL)中，加入2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(535g,2231mmol)并将反应混合物冷却至0℃。历经90分钟滴加加入硝酸90％(211mL,4461mmol)，保持温度低于15℃并将反应混合物在10℃搅拌30分钟。将得到的混合物缓慢倒入冰水(8L)中并搅拌30分钟。通过过滤收集固体并用水(2x 2L)、饱和碳酸氢钠溶液(1x 2L)、水(2x 2L)、TBME(3x 2L)和庚烷(2x 2L)洗涤。将分离的固体在真空炉中干燥，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.06(1H,tt),3.61(3H,s),2.57(3H,t),2.15-2.03(2H,mults),1.81-1.65(4H,mults),1.64-1.55(1H,mult),1.38-1.24(2H,mults),1.19-1.06(1H,mult).
步骤4:4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
向2-环己基-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮(415g,1.73mol)的MeOH(4500mL)和THF(4500ml)溶液中，加入10％Pd/C(70g)并将反应混合物在0.1bar和RT氢化57.5h。将得到的混合物通过压力过滤器过滤，并用甲醇(1x1L)和THF(2x 1L)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到深红色油状物。将油状物立即溶解在TBME(4L)中，并在减压下浓缩至约2L，并接种(100mg)。将混悬液在RT搅拌2h并在冰浴中冷却1hr。通过过滤收集固体并用冰冷的TBME分次洗涤，直到滤液无色并在真空下干燥，得到标题化合物；
LC-MS:Rt 0.55mins；MS m/z 210.1[M+H]+；方法(SRPb)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.68(1H,tt),3.53(2H,br s),2.77(3H,s),1.96-1.83(2H,mults),1.92(3H,s),1.78-1.69(2H,mults),1.64-1.53(3H,mults),1.33-1.19(2H,mults),1.17-1.04(1H,mult).
中间体E:
4-氨基-2-环丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
步骤1:2-环丁亚基肼甲酸叔丁酯
将环丁酮(16.96ml,227mmol)和肼甲酸叔丁酯(30g,227mmol)的异己烷(378mL)混合物在氮气气氛下搅拌回流1小时。将反应混合物冷却至室温并搅拌1小时。将得到的混悬液过滤，用异己烷淋洗固体(x2)。将固体在30℃在真空下干燥，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.16(1H,br s),3.02(2H,mult),2,81(2H,mult),2.10-2.00(2H,mult),1.53(9H,s).
步骤2:2-环丁基肼甲酸叔丁酯
在氮气气氛下，历经1.5小时，将2-环丁亚基肼甲酸叔丁酯(5.0g,27.1mmol)的THF(50mL)溶液滴加加至硼烷四氢呋喃络合物溶液(33.9mL,33.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌2.5小时。滴加加入硼烷四氢呋喃(3mL,3mmol)并将混合物在室温搅拌过夜。通过加入水(50mL)将得到的混合物小心猝灭并将混合物在减压下浓缩。将残留物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(2x 200mL)萃取，采用盐水以助分离。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-10％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物。
步骤3:1-环丁基-2-甲基肼
在氮气气氛下，将2-环丁基肼甲酸叔丁酯(1.0g,5.37mmol)的THF(26.8mL)溶液滴加加至2.4M氢化铝锂的THF溶液(11.63mL,27.9mmol)中。一旦加入完成，将反应混合物回流搅拌20小时。采用冰浴将得到的混合物冷却，向其中加入水(1mL)、15％NaOH(1mL)和水(3mL)。将得到的混悬液搅拌15分钟，然后通过过滤。向滤液中加入HCl(4M的二烷溶液,1.4mL,5.6mmol)，并在减压下除去溶剂，与EtOH(x2)共沸。将混合物用乙醚研磨，并将得到的固体过滤并用乙醚洗涤。在减压下将固体干燥，得到标题化合物。
步骤4:(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯
在室温和在氮气气氛下，将戴斯-马丁试剂(Dess-Martin periodinan)(2.84g,6.69mmol)的DCM(50mL)溶液加至Boc-L-苏氨酸甲酯(1.3g,5.57mmol)的DCM(20mL)溶液中。将白色混悬液在室温搅拌3小时。将得到的混合物用DCM(50mL)稀释并通过加入含有0.5M亚硫酸钠(6.2g)的饱和NaHCO3(aq)(50mL)猝灭。分离各相，并将有机层用饱和NaHCO3(aq)(50mL)和水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用10-50％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.72(1H,br d),5.07(1H,d),3.84(3H,s),2.38(3H,s),1.46(9H,s).
步骤5:(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯(400mg,1.730mmol)的EtOAc(6.407mL)溶液用1-环丁基-2-甲基肼(284mg,2.076mmol)处理，随后加入乙酸钠(213mg,2.59mmol)。将混悬液在室温搅拌30分钟并在80℃搅拌4小时。将得到的混合物用水(10mL)稀释并加入EtOAc。分离各层，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将残留物溶解在EtOAc中，并加入异己烷。将得到的混悬液过滤并将固体用异己烷淋洗。将滤液在减压下浓缩。然后将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用50-100％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.19(1H,br s),4.61(1H,mult),3.23(3H,s),2.85-2.72(2H,mults),2.39-2.30(2H,mults),2.17(3H,s),1.93-1.83(1H,mult),1.81-1.71(1H,mult),1.48(9H,s).
步骤6:4-氨基-2-环丁基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
向(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸叔丁基酯的DCM(5mL)溶液中加入硫酸(0.034mL,0.634mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将另外的硫酸(0.068mL,1.268mmol)加至反应混合物中，并将其搅拌2小时。将得到的混合物用DCM和水稀释，并分离各层。通过滴加2M NaOH(aq)使水层成碱性。将水层用DCM萃取(x3)并使合并的有机萃取物通过相分离柱。在减压下浓缩洗脱液，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.54(1H,mult),2.94(3H,s),2.72(2H,mults),2.43(2H,br s),2.36-2.26(2H,mults),2.04(3H,s),1.90-1.78(1H,mult),1.78-1.67(1H,mult).
中间体F:
2,2-二甲基己-5-烯-3-醇
在0℃向三甲基乙醛(10.2mL,90.9mmol)的乙醚(200mL)溶液中加入烯丙基溴化镁(100mL,1M的醚溶液)。将反应混合物在0℃搅拌1小时。将得到的混合物用饱和氯化铵猝灭并用乙醚萃取。将有机萃取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并过滤。在减压下小心地除去溶剂，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.95-5.83(1H,mult),5.18(1H,mult),5.15(1H,mult),3.28(1H,mult),2.45-2.35(1H,mult),2.06-1.95(1H,mult),1.62(1H,s),0.95(9H,s).
中间体G:
4-氨基-2-异丙基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
步骤1:2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-羟基丁酸甲酯
向2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-羟基丁酸(5g,14.65mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入H2SO4(0.781mL,14.65mmol)。将反应混合物回流搅拌过夜。将得到的混合物冷却至室温并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并采用梯度的0-100％EtOAc的异己烷溶液通过色谱法纯化，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.27mins；MS m/z[M+H]+356.3:方法2minLowpHv03
步骤2:2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯
向2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-羟基丁酸甲酯(1.5g,4.22mmol)的DCM(25mL)溶液中分次加入戴斯-马丁试剂(1.790g,4.22mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将得到的混合物用DCM稀释，并加入1:12M碳酸钠(aq)和饱和亚硫酸钠溶液(aq)，并在室温搅拌15分钟。分离各层，并将有机层用MgSO4干燥并过滤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.36mins；MS m/z[M+H]+354.3:方法2minLowpHv03
步骤3:(2-异丙基-5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯
向在1.25M HCl的乙醇溶液(25mL)中的2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-氧代丁酸甲酯(2.766g,7.83mmol)溶液中，加入异丙基肼盐酸盐(1.298g,11.74mmol)。将反应混合物回流搅拌。一旦完成后，将反应混合物冷却至室温，并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并通过色谱法采用梯度的0-100％EtOAc的异己烷溶液和10％MeOH的EtOAc溶液纯化，得到粗物质。将粗物质溶解在IPA中，向其中加入水，得到混浊的混合物，将其超声并置于室温。将得到的混悬液过滤并将固体在减压下干燥，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.14mins；MS m/z[M+H]+378.3/379.3:方法2minLowpHv03
步骤4:(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯
向(2-异丙基-5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(2.109g,5.59mmol)的DMF(30mL)溶液中加入碘甲烷(2.80mL,44.7mmol)。将反应混合物在90℃搅拌过夜。将得到的混合物用IPA和水猝灭并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将粗物质吸附到二氧化硅上，并采用梯度的0-10％MeOH的EtOAc溶液通过色谱法纯化，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.20mins；MS m/z[M+H]+392.4:方法2minLowpHv03
步骤5:4-氨基-2-异丙基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮
在室温，向(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲基酯(2.047g,5.23mmol)的DMF(30mL)溶液中加入哌啶(2.59mL,26.1mmol)。一旦加入完成后，将反应混合物加至水(30mL)中。将得到的混悬液用水(100mL)稀释，并用EtOAc萃取。将合并的有机物用2M HCl(aq)萃取，将酸性水萃取物用饱和碳酸氢钠溶液中和，并上载到C18柱上。将柱用水洗脱，并将收集的水混合物与SCX-2浆化并过滤。将树脂用MeOH和7M氨的MeOH溶液淋洗。在减压下除去MeOH和水滤液溶剂。将MeOH(150mL)加至得到的混合物中，超声，过滤，并将滤液在减压下浓缩。将EtOH加至得到的混合物中，并过滤。将滤液在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上并采用梯度的0-10％MeOH的DCM溶液通过色谱法纯化，得到粗物质。将粗物质的MeOH溶液与SCX-2(30g)浆化。将混悬液过滤并用MeOH洗涤。然后将树脂用7M NH3的MeOH溶液洗脱。在减压下浓缩该氨的甲醇溶液，得到粗物质。然后将粗物质吸附到二氧化硅上，并采用梯度的0-10％MeOH的DCM溶液通过色谱法纯化，得到标题化合物；
LC-MS:Rt＝1.48mins；MS m/z[M+H]+170.2:8minHighpHv01
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(2H,br s),4.42(1H,mult),3.28(3H,s),2.25(3H,s),1.36(6H,d).

Claims (13)

1.式(I)化合物:
或其药学上可接受的盐，其中
R1是(C3-C6)烷基或(C3-C6)环烷基；
R2是甲基；
R3选自(C6-C10)支链烷基、(C6-C10)支链烯基、(C5-C8)环烯基、(C5-C8)环烷基或Het；其中所述(C5-C8)环烯基或(C5-C8)环烷基是未取代的或被1、2、3或4个取代基R4取代；且其中Het被1、2、3或4个取代基R4取代；
各R4独立地选自卤代、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基；或
两个R4基团当连接在相同的碳原子上时，可以与它们所连接的碳原子一起形成环戊基、四氢呋喃或二氧戊环环；其中Het是5或6元的完全饱和或部分饱和的杂环，其包含a)在2-或3-位的1个氧原子，或b)在2-和5-位或者2-和6-位的2个氧原子，其中编号相对于连接点；且
(C5-C8)环烷基是含有5、6、7或8个碳原子的单环或桥环系统。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是异丙基、环丁基或环己基；
其中R3选自2,2-二甲基戊基、2,2-二甲基戊-2-烯基、环戊基、环己基、环己烯基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、二烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基和二环[2.2.2]辛基；其中所述环戊基、环己基、环己烯基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、二烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基或二环[2.2.2]辛基环是未取代的或被1、2、3或4个取代基R4取代；且
各R4独立地选自卤代、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基或卤代(C1-C4)烷氧基；或
两个R4基团当连接在相同的碳原子上时，可以与它们所连接的碳原子一起形成四氢呋喃或二氧戊环环。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是
且m是1、2、3或4；且
其中各R4独立地选自甲基、异丙基、叔丁基和甲氧基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其选自：
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6-乙基-4-甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6,6-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-乙基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
[5-(4-(叔丁基)环己-1-烯-1-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-甲基环己-1-烯-1-基)异唑-3-甲酰胺]；
5-(环庚-1-烯-1-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(4-(三氟甲基)环己-1-烯-1-基)异唑-3-甲酰胺]；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺；
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环戊-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(2-氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)异唑-3-甲酰胺]；
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙氧基环己-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4,4-二甲基环己基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
[N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基环戊基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
(Z)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
(E)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(3,3-二甲基丁-1-烯-1-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
5-环己基-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)异唑-3-甲酰胺；
5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
5-(6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环丁基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
5-(6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
5-(6-(叔丁基)四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-异丙基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(6-异丙基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺；
[5-(4-溴-5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺]；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(5-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺；
5-(4-(2-溴丙-2-基)四氢呋喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(4-异丙基四氢呋喃-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
5-(4-(叔丁基)-1,3-二氧戊环-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
5.药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1-4中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体。
6.组合产品，其包含治疗有效量的根据权利要求1-4中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种治疗活性剂。
7.根据权利要求1-4中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自肺高血压、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合的病症或疾病的药物中的用途。
8.根据权利要求1-4中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗肺动脉高压(PAH)的药物中的用途。
9.根据权利要求1-4中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的病症或疾病的药物中的用途。
10.化合物，其为具有下式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-((2R,3S)-3,5,5-三甲基-1,4-二烷-2-基)异唑-3-甲酰胺：
11.化合物，其为具有下式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-(5,5-二甲基-1,3-二烷-2-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺：
12.化合物，其为具有下式的5-(6-(叔丁基)-4-甲氧基四氢-2H-吡喃-2-基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基异唑-3-甲酰胺：
13.化合物，其为具有下式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-4-甲基-5-(6-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)异唑-3-甲酰胺：
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