KR20160122469A - 조류 또는 단백질 첨가를 통한 코디세핀 생산 방법 - Google Patents
조류 또는 단백질 첨가를 통한 코디세핀 생산 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20160122469A KR20160122469A KR1020150052395A KR20150052395A KR20160122469A KR 20160122469 A KR20160122469 A KR 20160122469A KR 1020150052395 A KR1020150052395 A KR 1020150052395A KR 20150052395 A KR20150052395 A KR 20150052395A KR 20160122469 A KR20160122469 A KR 20160122469A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cordyceps
- algae
- group
- medium
- proteins
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 코디셉스가 접종된 배지에 조류 또는 단백질을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 코디세핀 생산방법에 관한 것이다. 본 발명의 코디세핀 생산 방법은 조류 또는 단백질을 배지에 첨가하여 코디셉스를 배양함으로써 고가의 물질인 코디세핀을 높은 함량으로 생산할 수 있는 것이 특징이다. 따라서, 기능성은 입증되었지만 가격으로 인해 활용에 제한을 받고 있는 코디세핀의 생산 단가를 낮출 수 있다.
Description
본 발명은 코디셉스가 접종된 배지에 조류 또는 단백질을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 코디세핀 생산방법에 관한 것이다.
동충하초는 (cordyceps; 코디셉스)는 예로부터 불로장생의 묘약으로 알려져 있었으며, 중국의 진시황과 양귀비도 동충하초를 복용하였다는 등 역사적으로 귀인만 쓰는 약초로 알려져 있다. 동충하초란 겨울에는 벌레상태로 있다가 여름에는 버섯이 된다는 뜻에서 유래된 말로 원래 나방의 유충에서 유래한 버섯을 지칭하였으나 현재는 곤충, 균류 등에서 나오는 버섯을 모두 총칭하여 동충하초(코디셉스)라고 부른다. 발생조건이 까다롭기 때문에 자연에서 발견되는 동충하초는 극히 드물고 희귀성 때문에 매우 고가로 거래되어 일반인이 접하기는 어려워었다. 2000년대 이후 인공재배 방법이 국내 농가에 보급되면서 점차 일반화되고 있지만, 대한민국 식품의약안전처에는 아직 밀리타리스 동충하초 (Cordyceps militaris) 한 종만이 식품으로 등재되었고, 기능성과 안전성에 대한 과학적인 자료가 부족하여 현재도 많은 연구가 진행중이다.
한편, 상기 동충하초의 유용성분으로 가장 주목받고 있는 코디세핀(cordycepin)은, 1950년 쿠닝햄(Cunningham) 등에 의해 밝혀진 이후, 약리 활성에 관해 많은 연구가 이루어졌다. 코디세핀은 m-RNA의 합성을 저해하고 항세균, 항진균, 면역증강 및 항암효과가 있는 것으로 주로 알려져 있다. 또한, 최근에는 코디세핀의 혈소판 응집억제 작용에 대한 연구가 많이 진행되고 있는데, 이에 대한 예로, 한국등록특허 제464876호에서는 동충하초의 코디세핀을 함유하는 항혈전제 조성물이 개시되어 있다.
이에, 버섯 형태인 인공 자실체 배양방법에 대한 연구는 오래 전부터 진행되어왔으나, 일반적으로 자실체 배양은 약 60 ~ 90일 정도가 소요되기 때문에 코디세핀을 유효성분으로 하는 기능성 식품, 화장품, 의약품 등의 분야에 높은 함량을 사용하기 어려운 단점이 있다.
본 발명은 코디셉스 유래 코디세핀의 생산량을 향싱시키기 위해 코디세핀 생산 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 코디셉스(Cordyceps)가 접종된 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하며, 상기 단백질은 유청(Whey), 분유(Milk powder) 또는 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein)인 것을 특징으로 하는, 코디세핀(Cordycepin) 생산 방법을 제공한다.
일 구현예는 코디셉스가 코디셉스 시넨시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris), 코디셉스 오피오글로쏘이데스(Cordyceps ophioglossoides), 코디셉스 시카데(Cordyceps cicadae), 코디셉스 소보리페라(Cordyceps sobolifera), 코디셉스 베아우베리아(Cordyceps beauveria) 및 코디셉스 바씨아나(Cordyceps bassiana)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있다.
다른 일 구현예는 코디셉스 균사체가 접종된 액체 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 코디셉스 자실체가 접종된 고체 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 조류가 클로렐라 피레노이도사(chlorella), 난노클로롭시스(Nannochloropsis) 및 겔리디움(Geldium)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상은 배지에 대하여 10 내지 30 g/L로 첨가되는 것일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 배지에 탄소원 및 질소원이 포함되어 있는 것일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가한 후 12 내지 36시간동안 배양하는 것일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein), 난노클로롭시스(Nannochloropsis), 클로렐라 피레노이도사(chlorella pyrenoidosa) 및 클로렐라 불가리스(chlorella vulgaris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가한 후 12 내지 72시간동안 배양하는 것일 수 있다.
본 발명의 코디세핀 생산 방법은 조류 또는 단백질을 배지에 첨가하여 코디셉스를 배양함으로써 고가의 물질인 코디세핀을 높은 함량으로 생산할 수 있는 것이 특징이다. 따라서, 기능성은 입증되었지만 가격으로 인해 활용에 제한을 받고 있는 코디세핀의 생산 단가를 낮출 수 있다.
또한, 조류 또는 조류 추출물 등 폐자원을 활용하는 측면에서 공정비 감소와 함께 환경문제 해결에도 기여할 수 있다.
도 1은 본 발명의 코디세핀 생산 방법 및 이의 활용을 개략적으로 보여주는 순서도이다.
도 2는 본 발명의 실시예 2-1 내지 2-7 및 비교예 1의 조류 또는 단백질 첨가 유무에 따른 코디세핀 함량을 배양시간에 따라 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 실시예 2-1 내지 2-7 및 비교예 1의 조류 또는 단백질 첨가 유무에 따른 코디세핀 함량을 배양시간에 따라 나타낸 것이다.
본 발명은 코디셉스가 접종된 배지에 조류 또는 단백질을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 코디세핀 생산방법에 관한 것이다. 본 발명의 생산 방법은 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 배지에 첨가하여 코디셉스를 배양함에 따라 코디셉스의 생산량이 향상된 것이 특징이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 코디셉스(Cordyceps)가 접종된 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하며, 상기 단백질은 유청(Whey), 분유(Milk powder) 또는 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein)인 것을 특징으로 하는 코디세핀(Cordycepin) 생산 방법을 제공한다.
상기 조류는 코디세핀의 생산량을 증가시키는 것이라면 제한 없이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 클로렐라 피레노이도사(chlorella), 난노클로롭시스(Nannochloropsis) 및 겔리디움(Geldium)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있다.
상기 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상은 배지에 대하여 10 내지 30 g/L로 첨가되는 것이 바람직하며, 상기 범위 내로 첨가되는 경우 코디세핀의 생산량이 상대적으로 더 향상될 수 있다.
상기 조류 및/또는 단백질을 제외한 배지의 성분들은 상업적으로 실시가능한 수준으로 코디세틴의 생산 및 상기 코디셉스 균주의 성장을 촉진하는 것으로 알려진 성분들을 추가적으로 더 포함할 수 있다. 예컨대, 탄소원으로 글루코오스, 만노오스, 수크로오스, 프럭토오스 등이 포함될 수 있으며, 질소 공급원으로 질산염, 우레아, 암모늄염, 및 아미노산 등이 포함될 수 있다.
상기 코디셉스는 코디셉스 시넨시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris), 코디셉스 오피오글로쏘이데스(Cordyceps ophioglossoides), 코디셉스 시카데(Cordyceps cicadae), 코디셉스 소보리페라(Cordyceps sobolifera), 코디셉스 베아우베리아(Cordyceps beauveria) 및 코디셉스 바씨아나(Cordyceps bassiana)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있으며, 바람직하게는 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)일 수 있다.
상기 배양은 상기 균주의 특정한 생명-지속 온도에서 수행될 수 있으며, pH 조건 또한 균주의 바람직한 조건에서 수행될 수 있다. 상기 생산방법은 조류 및/또는 단백질을 첨가한 후 적절한 시간 또한 배양을 진행할 수 있으며, 상기 배양 후 적절한 시기에 코디세핀을 회수할 수 있다. 상기 코디세핀의 회수는 원심분리, 응집 또는 여과와 같이 당해 기술분야에 알려진 통상적인 수단으로 회수될 수 있다.
상기 생산 방법은 코디셉스 균사체가 접종된 액체 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 생산 방법은 균사체를 멸균수 또는 계면활성제가 첨가된 멸균수 10 내지 20ml에 첨가하여 포자를 액체로 회수한 후 포자 농도를 헤모사이토미터로 계수하여 배지 내 총 포자 수를 0.8 × 108 내지 1.6 × 108로 맞추어 20 내지 28℃, pH 5 내지 7, 150 내지 250 rpm의 교반 속도 조건하에서 2 내지 8일동안 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 상기 단계 후에 코디세핀 농도가 가장 높은 시기에 코디세핀을 회수하여는 단계를 포함할 수 있다.
상기 액체 배지는 당해 기술분야에서 통상적으로 사용되는 곰팡이 배양용 액체 배지 (예컨대, 글루코오스, 효모 추출물, 펩톤 등이 포함된 배지)에 단백질 및/또는 조류가 첨가된 배지일 수 있다.
또한, 상기 생산 방법은 코디셉스 자실체가 접종된 고체 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 것일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 생산 방법은 균사체를 멸균수 또는 계면활성제가 첨가된 멸균수 10 내지 20ml에 첨가하여 포자를 액체로 회수한 후 포자 농도를 헤모사이토미터로 계수하여 배지 내 총 포자 수를 0.8 × 108 내지 1.6 × 108로 되도록 희석한 후 고체배지에 접종하고, 암실에서 20 내지 25℃ 온도 하에 7 내지 20일간 배양 후, 광조건에서 15 내지 20℃ 온도 하에 30 내지 60일동안 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 상기 단계 후에 버섯 형태로 자란 자실체는 건조기에서 수분을 충분히 제거한 후 분쇄하여 일반적으로 사용하는 유기용매(예컨대, 에탄올, 메탄올 등)를 이용하여 코디세핀을 추출하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 고체 배지는 당해 기술분야에서 통상적으로 사용되는 곰팡이 배양용 고체 배지를 의미하며, 예컨대 PDA(Potato Dextrose Agar)에 단백질 및/또는 조류가 첨가된 배지일 수 있다. 보다 구체적으로, 1 L 배양병을 기준으로 곡물 가루 (쌀, 현미 등) 30 ~ 50 g/L, 단백질류 (번데기, 우유, 계란, 조류 등) 5 ~ 20 g/L, 기타 공극률 조절을 위한 첨가물 (소나무톱밥, 커피 가루 찌꺼기, 왕겨가루 등) 5 ~ 10 g/L 등과 단백질 및/또는 조류가 첨가된 배지일 수 있다.
상기 생산 방법은 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가한 후 12 내지 36시간동안 배양하는 것일 수 있다. 배지에 적정량의 조류 및/또는 단백질을 첨가하여 배양함에 따라 단시간 내에 많은 양의 코디세핀을 생산할 수 있다.
또한, 상기 생산 방법은 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein), 난노클로롭시스(Nannochloropsis), 클로렐라 피레노이도사(chlorella pyrenoidosa) 및 클로렐라 불가리스(chlorella vulgaris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가한 후 12 내지 72시간동안 배양하는 것일 수 있다. 특정 단백질 및/또는 조류를 첨가하여 12 내지 72시간 동안 배양하는 경우 코디세핀의 생산량을 극대화시킬 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예를 이용하여 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되지 않고 다양하게 수정 및 변경될 수 있다.
실시예
1. 코디세핀 함량 분석
코디세핀 함량분석은 UV Detector (SPD- 20A, Shimadzu, Japan)가 탑재된 HPLC (high performance liquid chromatography)를 이용하였고, 컬럼 (column)은 μBondapak C18 (300 × 3.9 mm, Waters)를 사용하였다. 컬럼의 이동상 (mobile phase)은 Acetonitrile 40% 를 사용하였으며, 유속은 0.6 mL/min 이였다.
실시예
2. 조류 또는 단백질이 첨가된 액체 배지에서의
코디셉스
밀리타리스
배양 및 코디세핀 함량 분석
PDA(Potato Dextrose Agar) 평판 배지에 보관중인 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris) 균주를 멸균된 루프를 이용하여 YPD (Yeast extract, Peptone, Glucose, Agar) 사면배지에 접종한 후 24℃ 에서 1 내지 2주 동안 배양하였다. 사면배지 내 균사체는 멸균수 또는 계면활성제 0.1%가 첨가된 멸균수 10 내지 20 ml를 첨가하여 포자를 액체로 회수하였으며, 포자 농도를 Haemocytometer로 계수하고 배양 배지 내 총 포자 수가 약 0.8 × 108 내지 1.6 × 108로 되도록 희석하여 접종하였다.
배양 온도는 20 ~ 28℃, pH는 5 ~ 7, 교반 속도는 150 ~ 250 rpm의 조건에서 24시간 간격으로 72시간 동안 코디세핀 함량을 분석하였다. 구체적으로, 코디세핀의 함량 분석 방법은 상기 실시예 1에 기재된 방법으로 실시하였으며, 72시간 후 배양액을 원심분리 (8,000 × g, 40분) 하였으며, 0.2 μm 필터로 여과하여 코디세핀이 과량 함유된 배양여액을 완성할 수 있었다.
2-1.
유청이
첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 유청(Whey)을 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량(ppm) 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
구분 | 배양시간(h) | |||
초기 | 24시간 후 | 48시간 후 | 72시간 후 | |
실시예 2-1 | 180 | 350 | 60 | 40 |
실시예 2-2 | 160 | 330 | 70 | 40 |
실시예 2-3 | 190 | 260 | 410 | 180 |
실시예 2-4 | 190 | 270 | 480 | 200 |
실시예 2-5 | 160 | 250 | 140 | 50 |
실시예 2-6 | 180 | 310 | 345 | 135 |
실시예 2-7 | 180 | 320 | 385 | 170 |
실시예 2-8 | 160 | 300 | 170 | 45 |
비교예 1 | 120 | 150 | 80 | 30 |
2-2. 분유가 첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 분유(Milk powder)를 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
2-3. 가수분해된
카제인이
첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein)을 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
2-4. 클로렐라
불가리스가
첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 클로렐라 불가리스(chlorella vulgaris)를 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
2-5. 클로렐라
불가리스
분해물이
첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 클로렐라 불가리스(chlorella vulgaris)를 산가수분해 후 나온 찌꺼기를 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
2-6. 클로렐라
피레노이도사가
첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 클로렐라 피레노이도사(chlorella pyrenoidosa)를 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
2-7.
난노클로롭시스가
첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 난노클로롭시스(Nannochloropsis)를 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
2-8.
겔리디움이
첨가된 액체 배지
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 겔리디움(Geldium)을 15 g/L씩 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
도 2는 상기 실시예 2-1 내지 2-8 및 비교예 1의 조류 또는 단백질 첨가 유무에 따른 코디세핀 함량을 배양시간에 따라 나타낸 것이다.
표 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, 조류 또는 단백질이 첨가된 배지에서는 조류 또는 단백질이 첨가되지 않은 배지에서 보다 코디세핀 함량이 훨씬 많았음을 확인하였다. 특히, 단시간 내인 배양 24시간 후의 결과를 보면 조류 또는 단백질이 첨가되지 않는 배지보다 조류 또는 단백질이 첨가된 배지에서의 코디세핀 함량은 약 2 배 이상 많았으며, 배양 48시간 후의 결과를 보면 특정 조류 또는 단백질 첨가된 배지는 조류 또는 단백질 첨가되지 않는 배지보다 약 4 ~ 6 배 이상 코디세핀 함량이 많음을 확인하였다.
비교예
1. 조류 또는 단백질이 첨가되지 않은 액체 배지에서의
코디셉스
밀리타리스
배양 및 코디세핀 함량 분석
상기 실시예 2에서 조류 또는 단백질이 첨가하지 않고 일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)를 사용한 것 이외에는 동일한 방법으로 실시하였으며, 코디세핀 함량 분석 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
실시예
3. 조류 및 단백질이 첨가된 액체 배지에서의
코디셉스
밀리타리스
배양 및 코디세핀 함량 분석
PDA(Potato Dextrose Agar) 평판 배지에 보관중인 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris) 균주를 멸균된 루프를 이용하여 YPD (Yeast extract, Peptone, Glucose, Agar) 사면배지에 접종한 후 24? 에서 1 내지 2주 동안 배양하였다. 사면배지 내 균사체는 멸균수 또는 계면활성제 0.1%가 첨가된 멸균수 10 내지 20 ml를 첨가하여 포자를 액체로 회수하였으며, 포자 농도를 Haemocytometer로 계수하고 배양 배지 내 총 포자 수가 약 0.8 × 108 내지 1.6 × 108로 되도록 희석하여 접종하였다.
배양 온도는 20 ~ 28℃, pH는 5 ~ 7, 교반 속도는 150 ~ 250 rpm의 조건에서 24시간 간격으로 72시간 동안 코디세핀 함량을 분석하였다. 구체적으로, 코디세핀의 함량 분석 방법은 상기 실시예 1에 기재된 방법으로 실시하였으며, 72시간 후 배양액을 원심분리 (8,000 × g, 40분) 하였으며, 0.2 μm 필터로 여과하여 코디세핀이 과량 함유된 배양여액을 완성할 수 있었다.
일반적으로 사용하는 곰팡이 배양용 액체배지 (Glucose 20 g/L, Yeast extract 10 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4 7H2O 1 g/L, KH2PO4 2 g/L)에 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein) 7.5 g/L 와 클로렐라 불가리스(chlorella vulgaris) 7.5 g/L 를 첨가하였으며, 상기 방법에 따른 코디세핀 함량(ppm) 분석 결과를 표 2 에 나타내었다.
구분 | 배양시간(h) | |||
초기 | 24시간 후 | 48시간 후 | 72시간 후 | |
실시예 3 (클로렐라 불가리스 및 가수분해된 카제인 첨가) |
160 | 315 | 580 | 185 |
실시예 2-3 (가수분해된 카제인 첨가) |
190 | 260 | 410 | 180 |
실시예 2-4 (클로렐라 불가리스 첨가) |
190 | 270 | 480 | 200 |
비교예 1 | 120 | 150 | 80 | 30 |
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 조류 및 단백질을 함께 첨가하여 배양하였을 때가 상대적으로 더 코디세핀의 함량이 더 높음을 확인하였다.
Claims (9)
- 코디셉스(Cordyceps)가 접종된 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하며,
상기 단백질은 유청(Whey), 분유(Milk powder) 또는 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein)인 것을 특징으로 하는, 코디세핀(Cordycepin) 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 코디셉스는 코디셉스 시넨시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris), 코디셉스 오피오글로쏘이데스(Cordyceps ophioglossoides), 코디셉스 시카데(Cordyceps cicadae), 코디셉스 소보리페라(Cordyceps sobolifera), 코디셉스 베아우베리아(Cordyceps beauveria) 및 코디셉스 바씨아나(Cordyceps bassiana)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 코디세핀 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 생산 방법은 코디셉스 균사체가 접종된 액체 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 코디세핀 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 생산 방법은 코디셉스 자실체가 접종된 고체 배지에 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가하여 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 코디세핀 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 조류는 클로렐라 피레노이도사(chlorella), 난노클로롭시스(Nannochloropsis) 및 겔리디움(Geldium)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 코디세핀 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상은 배지에 대하여 10 내지 30 g/L로 첨가되는 것을 특징으로 하는, 코디세핀 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 배지는 탄소원 및 질소원이 포함되어 있는 것인, 코디세핀 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 생산 방법은 조류 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가한 후 12 내지 36시간동안 배양하는 것을 특징으로 하는, 코디세핀 생산 방법. - 제1항에 있어서,
상기 생산 방법은 가수분해된 카제인(Hydrolyzed casein), 난노클로롭시스(Nannochloropsis), 클로렐라 피레노이도사(chlorella pyrenoidosa) 및 클로렐라 불가리스(chlorella vulgaris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 첨가한 후 12 내지 72시간동안 배양하는 것을 특징으로 하는, 코디세핀 생산 방법.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020150052395A KR101833099B1 (ko) | 2015-04-14 | 2015-04-14 | 조류 또는 단백질 첨가를 통한 코디세핀 생산 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020150052395A KR101833099B1 (ko) | 2015-04-14 | 2015-04-14 | 조류 또는 단백질 첨가를 통한 코디세핀 생산 방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20160122469A true KR20160122469A (ko) | 2016-10-24 |
KR101833099B1 KR101833099B1 (ko) | 2018-04-13 |
Family
ID=57256894
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020150052395A KR101833099B1 (ko) | 2015-04-14 | 2015-04-14 | 조류 또는 단백질 첨가를 통한 코디세핀 생산 방법 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR101833099B1 (ko) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106309466A (zh) * | 2016-08-18 | 2017-01-11 | 湖州新驰医药科技有限公司 | 一种金蝉花虫草素制剂及提取工艺 |
CN107604026A (zh) * | 2017-10-18 | 2018-01-19 | 甘肃省科学院生物研究所 | 一种提高蛹虫草菌液体发酵虫草素产量的方法 |
KR102233304B1 (ko) * | 2020-07-13 | 2021-03-26 | 초록봄농장 농업회사법인 유한회사 | 안정적인 배양이 가능하고 인체면역증강 및 생리활성물질을 다량 함유하는 밀리타리스 동충하초의 재배 배지조성물 및 이를 이용한 밀리타리스 동충하초 재배방법과 이에 따라 재배된 밀리타리스 동충하초 |
CN114410568A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-04-29 | 浙江汇能生物股份有限公司 | 一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100464876B1 (ko) | 2001-11-15 | 2005-01-06 | 학교법인 인제학원 | 동충하초의 코르디세핀을 함유하는 항혈전제 조성물 |
-
2015
- 2015-04-14 KR KR1020150052395A patent/KR101833099B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100464876B1 (ko) | 2001-11-15 | 2005-01-06 | 학교법인 인제학원 | 동충하초의 코르디세핀을 함유하는 항혈전제 조성물 |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106309466A (zh) * | 2016-08-18 | 2017-01-11 | 湖州新驰医药科技有限公司 | 一种金蝉花虫草素制剂及提取工艺 |
CN107604026A (zh) * | 2017-10-18 | 2018-01-19 | 甘肃省科学院生物研究所 | 一种提高蛹虫草菌液体发酵虫草素产量的方法 |
CN107604026B (zh) * | 2017-10-18 | 2020-12-01 | 甘肃省科学院生物研究所 | 一种提高蛹虫草菌液体发酵虫草素产量的方法 |
KR102233304B1 (ko) * | 2020-07-13 | 2021-03-26 | 초록봄농장 농업회사법인 유한회사 | 안정적인 배양이 가능하고 인체면역증강 및 생리활성물질을 다량 함유하는 밀리타리스 동충하초의 재배 배지조성물 및 이를 이용한 밀리타리스 동충하초 재배방법과 이에 따라 재배된 밀리타리스 동충하초 |
CN114410568A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-04-29 | 浙江汇能生物股份有限公司 | 一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺 |
CN114410568B (zh) * | 2022-03-18 | 2024-05-28 | 浙江汇能生物股份有限公司 | 一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR101833099B1 (ko) | 2018-04-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101833099B1 (ko) | 조류 또는 단백질 첨가를 통한 코디세핀 생산 방법 | |
US20220056494A1 (en) | Strain producing ergothioneine and method for screening the same | |
KR102123594B1 (ko) | 배암차즈기 추출액을 이용한 기능성 동충하초 자실체의 재배방법 | |
Attaran Dowom et al. | Agronomic and environmental factors affecting cultivation of the winter mushroom or Enokitake: Achievements and prospects | |
CN104350942A (zh) | 一种用桑枝蚕蛹粉制备虫草菌丝体的方法 | |
JP2012060974A (ja) | キノコの人工栽培方法、及びガノデリン酸類の製造方法 | |
JP5850497B2 (ja) | コルジセピンの製造および精製方法 | |
KR101908393B1 (ko) | 버섯 균사체를 함유한 건강보조식품의 제조방법 및 그 방법에 의한 식품 | |
KR101580107B1 (ko) | 버섯균사체 발효 제비집 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
KR101223464B1 (ko) | 비타민나무를 이용한 버섯의 배양방법 및 그 방법으로 배양한 배양물 | |
Aswini et al. | Strain improvement of Pleurotus species by protoplast fusion | |
KR101760184B1 (ko) | 곰팡이 균사체 접종에 의해 글리세올린 함량이 증가된 콩의 제조 방법 | |
KR20160149696A (ko) | 우루시올 제거 및 기능성 성분 보전을 위한 발효옻의 속성 제조방법 | |
KR100778943B1 (ko) | 귤피 또는 녹차추출물을 이용한 소나무잔나비버섯 균사체의배양방법 및 그 버섯균사체 | |
JPH10117770A (ja) | 冬虫夏草菌糸体の培養方法 | |
KR20140128056A (ko) | 무독화 발효 옻을 이용한 천연 발효식초의 제조 방법 및 이에 의한 천연 발효식초 | |
KR20220081457A (ko) | 고소애 동충하초로부터 코디세핀을 추출하는 방법 | |
KR20210006158A (ko) | 고농도 코디세핀을 함유하는 동충하초 배양방법 | |
CN109161484A (zh) | 一种极细链格孢在防控外来入侵杂草意大利苍耳中的应用 | |
KR100361165B1 (ko) | 장수풍뎅이 유충을 기주로 한 동충하초 및 그 생산방법 | |
Agrawal et al. | Antibacterial and fibrinolytic potential of Himalayan soft gold mushroom Cordyceps sinensis. | |
KR20200063375A (ko) | 곤충으로부터 재배한 동충하초를 이용하여 코디세핀을 추출하는 방법 | |
RU2788417C1 (ru) | Штамм, продуцирующий эрготионеин, и способ его скрининга | |
RU2656143C1 (ru) | Штамм базидиомицета laetiporus sulphureus вкпм f-1286 - продуцент липидов | |
Sultan | The antifungal activity of aqueous and alcoholic extract of mushroom (Agaricus Bisporus) against Aspergillus flavus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |