CN114410568A - 一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括：将葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、酵母提取物、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂粉加入至水中混合均匀，灭菌，分装，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面避光培养；将葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾加入至水中搅拌均匀，封口，灭菌，自然冷却得到预制培养基；无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，摇瓶培养得到液体培养基；将马铃薯粉、发酵构树粉、豆饼粉、α‑亚麻酸、酵母提取物、维生素B1、氨基酸螯合钴、醋酸铵加入水中混合均匀，灭菌，自然冷却，无菌条件下，按照5‑10％的接种量接入液体培养基，发酵培养。
Description
技术领域
本发明涉及虫草素积累技术领域，尤其涉及一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺。
背景技术
古尼虫草为真菌门，子囊菌亚门，核菌纲，球壳菌目，麦角科，目前研究表明古尼虫草在提高机体免疫力、促进睡眠、增强记忆力、镇痛、心血管疾病、预防神经衰退、抗衰老、降血压等方面有重要的作用，利用古尼虫草生产出的药品、保健食品已陆续上市，它以全面提高人体免疫力，抗癌、抗衰老、抗氧化等生理功能而备受消费者青睐。
从古尼虫草中提取的虫草素是一种天然药物，具有中医医理中冬虫夏草一样的阴阳同补和双向调节人体平衡的功能，研究表明，虫草素相对于古尼虫草成分更纯，使其在护肝、保肾、润肺方面效果更好，而且虫草素能够大补气血，消除现在不能治愈的痛经、偏头痛、颈椎增生等疾病。目前虫草素的研究现正成为药物化学、抗衰老、美容、保健品领域中一个极其活跃的领域，而如何有效提高虫草尤其是古尼虫草中虫草素的含量，具有积极的意义。
已经报道的提取虫草素的技术主要采用了较传统的离子交换、沉淀蛋白、有机溶剂脱脂、热提取、重结晶、醇沉淀等繁琐且低效的技术，不仅带来酸、碱、有机溶剂等污染物的排放，还增加了能源的消耗。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺。
目前现有技术中，古尼虫草菌丝体中合成虫草素的含量较低，虫草素的提取率低。本发明对菌丝体的发酵培养基进行改进，对发酵过程中虫草素进行诱导，提高虫草素含量，同时配合发酵过程中一定的光学等诱导，物理诱导与发酵原料诱导相结合，以增强虫草素菌丝体中虫草素的积累，提高虫草素的含量。
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、将葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、酵母提取物、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂粉加入至水中混合均匀，灭菌，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，10-15℃避光培养8-10天；
S2、将葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾加入至水中搅拌均匀，封口，灭菌，自然冷却至室温，得到预制培养基；无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，20-25℃摇瓶培养3-5天，得到液体培养基；
S3、将马铃薯粉、发酵构树粉、豆饼粉、α-亚麻酸、酵母提取物、维生素B1、氨基酸螯合钴、醋酸铵加入水中混合均匀，灭菌，自然冷却至室温；无菌条件下，按照5-10％的接种量接入液体培养基，在温度为20-25℃、相对湿度为60-65％的条件下发酵培养4-6天；升温至30-35℃，调节相对湿度为70-75％，继续发酵培养1-3天。
优选地，S1中，葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、酵母提取物、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂粉的质量比为20-30：10-20：5-15：2-10：1-2：1-2：30-50。
优选地，S2中，葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、七水合硫酸镁磷酸二氢钾的质量比为1-5：1-5：1-5：0.01-0.05：0.01-0.05。
优选地，S2中，摇瓶速度为100-150rpm。
优选地，S3中，马铃薯粉、发酵构树粉、豆饼粉、α-亚麻酸、酵母提取物、维生素B1、氨基酸螯合钴、醋酸铵的质量比为1-2：1-2：0.1-1：0.1-1：2-6：0.01-0.1：0.01-0.05：0.01-0.05。
优选地，S3的发酵过程中控制搅拌速度为100-150r/min，通风量为0.4-0.8m3/h。
优选地，S3的发酵过程中对发酵罐进行光照诱导培养。
优选地，当发酵培养温度为20-25℃时，控制光照强度为1000-2000lx，每天光照处理18-20h，其余时间段置于无光照环境中。
优选地，当发酵培养温度为30-35℃时，控制光照强度为4000-5000lx，每天光照处理21-23h，其余时间段置于无光环境中。
本发明的技术效果如下所示：
(1)本发明在菌丝体发酵培养过程中，先在低温区20-25℃培养，有利于菌丝体稳定生长，保证菌丝体的生长均匀度，同时降低杂菌的污染率，然后升高温度至30-35℃，促使优势菌丝体快速生长，本发明通过低温与高温发酵培养相结合，有效提高菌丝体的产量，同时培养方式简单，操作易行；
同时在低温与高温发酵培养阶段，严格控制不同阶段光照强度，不仅更利于虫草素的积累，而且控制避光时间与发酵温度相配合，在避光时间段，当温度超过35℃时，菌丝体出现不同程度的蔫萎，本发明经过大量试验发现，古尼虫草菌丝体的发酵阶段与发酵温度、光照强度、光照时间都具有敏感性，本发明可有效促使菌丝体生长，并快速累积虫草素的含量。
(2)本发明α-亚麻酸加入，可大幅度提高培养基中溶解氧浓度，配合酵母提取物、氨基酸螯合钴作用，可有效提高细胞膜的通透性，在不影响菌丝体的生产能力的前提下，增强了细胞与培养基内物质交换过程，促使菌丝体合成虫草素的合成，与高低温发酵培养相结合，大幅度提高虫草素的产率。
(3)本发明在固体培养基、液体培养基及菌丝体发酵培养基中，采用发酵构树粉对古尼虫草发酵过程中虫草素进行诱导，同时配合氨基酸螯合钴，可有效诱导并提高虫草素的含量，在菌丝体的发酵过程中辅以特定光照诱导培养，进一步利用物理诱导方式增强了菌丝体中虫草素的积累，有效提高了虫草素的含量。
(4)本发明采用马铃薯粉、发酵构树粉配合作为碳原，豆饼粉作为氮源，配合α-亚麻酸、酵母提取物、维生素B1、氨基酸螯合钴、醋酸铵作为菌丝体发酵培养基，培养菌丝体，同时控制发酵过程的温度等条件，采用高低温发酵过程相配合，不仅可大幅度提高菌丝体中虫草素的积累，而且工艺过程易于操作，可提高生产效率，有利于高产古尼虫草菌丝体中虫草素的工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、制备固体培养基
将20kg葡萄糖、10kg发酵构树粉、5kg蛋白胨、2kg酵母提取物、1kg七水合硫酸镁、1kg磷酸二氢钾、30kg琼脂粉加入至500kg水中混合均匀，110℃灭菌10min，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，10℃避光培养8天；
S2、制备液体培养基、接种培养
将1kg葡萄糖、1kg发酵构树粉、1kg蛋白胨、0.01kg七水合硫酸镁、0.01kg磷酸二氢钾加入至2000kg水中搅拌均匀，封口，110℃灭菌10min，自然冷却至室温，得到预制培养基；
无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，20℃摇瓶培养3天，摇瓶速度为100rpm，得到液体培养基；
S3、制备菌丝体发酵培养基
将1kg马铃薯粉、1kg发酵构树粉、0.1kg豆饼粉、0.1kgα-亚麻酸、2kg酵母提取物、0.01kg维生素B1、0.01kg氨基酸螯合钴、0.01kg醋酸铵加入2000kg水中混合均匀，110℃灭菌10min，自然冷却至室温，无菌条件下，按照5％的接种量接入液体培养基，在温度为20℃、相对湿度为60％的条件下发酵培养4天；升温至30℃，调节相对湿度为70％，继续发酵培养1天；
发酵过程中控制搅拌速度为100r/min，通风量为0.4m3/h；
在整个发酵培养过程中，对发酵罐进行光照诱导培养，首先在室温培养阶段，控制光照强度为1000lx，每天光照处理18h，其余时间段置于无光照环境中；在升温至30℃的培养阶段，控制光照强度为4000lx，每天光照处理21h，其余时间段置于无光环境中。
实施例2
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、制备固体培养基
将30kg葡萄糖、20kg发酵构树粉、15kg蛋白胨、10kg酵母提取物、2kg七水合硫酸镁、2kg磷酸二氢钾、50kg琼脂粉加入至700kg水中混合均匀，120℃灭菌20min，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，15℃避光培养10天；
S2、制备液体培养基、接种培养
将5kg葡萄糖、5kg发酵构树粉、5kg蛋白胨、0.05kg七水合硫酸镁、0.05kg磷酸二氢钾加入至3000kg水中搅拌均匀，封口，120℃灭菌20min，自然冷却至室温，得到预制培养基；
无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，25℃摇瓶培养5天，摇瓶速度为150rpm，得到液体培养基；
S3、制备菌丝体发酵培养基
将2kg马铃薯粉、2kg发酵构树粉、1kg豆饼粉、1kgα-亚麻酸、6kg酵母提取物、0.1kg维生素B1、0.05kg氨基酸螯合钴、0.05kg醋酸铵加入3000kg水中混合均匀，120℃灭菌20min，自然冷却至室温，无菌条件下，按照10％的接种量接入液体培养基，在温度为25℃、相对湿度为65％的条件下发酵培养6天；升温至35℃，调节相对湿度为75％，继续发酵培养3天；
发酵过程中控制搅拌速度为150r/min，通风量为0.8m3/h；
在整个发酵培养过程中，对发酵罐进行光照诱导培养，首先在室温培养阶段，控制光照强度为2000lx，每天光照处理20h，其余时间段置于无光照环境中；在升温至35℃的培养阶段，控制光照强度为5000lx，每天光照处理23h，其余时间段置于无光环境中。
实施例3
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、制备固体培养基
将22kg葡萄糖、17kg发酵构树粉、8kg蛋白胨、8kg酵母提取物、1.3kg七水合硫酸镁、1.8kg磷酸二氢钾、35kg琼脂粉加入至650kg水中混合均匀，112℃灭菌17min，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，12℃避光培养9.5天；
S2、制备液体培养基、接种培养
将2kg葡萄糖、4kg发酵构树粉、2kg蛋白胨、0.04kg七水合硫酸镁、0.02kg磷酸二氢钾加入至2700kg水中搅拌均匀，封口，112℃灭菌17min，自然冷却至室温，得到预制培养基；
无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，21℃摇瓶培养4.5天，摇瓶速度为120rpm，得到液体培养基；
S3、制备菌丝体发酵培养基
将1.7kg马铃薯粉、1.2kg发酵构树粉、0.8kg豆饼粉、0.3kgα-亚麻酸、5kg酵母提取物、0.02kg维生素B1、0.04kg氨基酸螯合钴、0.02kg醋酸铵加入2700kg水中混合均匀，113℃灭菌17min，自然冷却至室温，无菌条件下，按照6％的接种量接入液体培养基，在温度为24℃、相对湿度为61％的条件下发酵培养5.5天；升温至32℃，调节相对湿度为74％，继续发酵培养1.5天；
发酵过程中控制搅拌速度为140r/min，通风量为0.5m3/h；
在整个发酵培养过程中，对发酵罐进行光照诱导培养，首先在室温培养阶段，控制光照强度为1700lx，每天光照处理18.5h，其余时间段置于无光照环境中；在升温至34℃的培养阶段，控制光照强度为4300lx，每天光照处理22.5h，其余时间段置于无光环境中。
实施例4
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、制备固体培养基
将28kg葡萄糖、13kg发酵构树粉、12kg蛋白胨、6kg酵母提取物、1.7kg七水合硫酸镁、1.2kg磷酸二氢钾、45kg琼脂粉加入至550kg水中混合均匀，118℃灭菌13min，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，14℃避光培养8.5天；
S2、制备液体培养基、接种培养
将4kg葡萄糖、2kg发酵构树粉、4kg蛋白胨、0.02kg七水合硫酸镁、0.04kg磷酸二氢钾加入至2300kg水中搅拌均匀，封口，118℃灭菌13min，自然冷却至室温，得到预制培养基；
无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，23℃摇瓶培养3.5天，摇瓶速度为140rpm，得到液体培养基；
S3、制备菌丝体发酵培养基
将1.3kg马铃薯粉、1.8kg发酵构树粉、0.2kg豆饼粉、0.7kgα-亚麻酸、3kg酵母提取物、0.08kg维生素B1、0.02kg氨基酸螯合钴、0.04kg醋酸铵加入2300kg水中混合均匀，117℃灭菌13min，自然冷却至室温，无菌条件下，按照8％的接种量接入液体培养基，在温度为22℃、相对湿度为63％的条件下发酵培养4.5天；升温至34℃，调节相对湿度为72％，继续发酵培养2.5天；
发酵过程中控制搅拌速度为120r/min，通风量为0.7m3/h；
在整个发酵培养过程中，对发酵罐进行光照诱导培养，首先在室温培养阶段，控制光照强度为1300lx，每天光照处理19.5h，其余时间段置于无光照环境中；在升温至31℃的培养阶段，控制光照强度为4700lx，每天光照处理21.5h，其余时间段置于无光环境中。
实施例5
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、制备固体培养基
将25kg葡萄糖、15kg发酵构树粉、10kg蛋白胨、7kg酵母提取物、1.5kg七水合硫酸镁、1.5kg磷酸二氢钾、40kg琼脂粉加入至600kg水中混合均匀，115℃灭菌15min，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，16℃避光培养9天；
S2、制备液体培养基、接种培养
将3kg葡萄糖、3kg发酵构树粉、3kg蛋白胨、0.03kg七水合硫酸镁、0.03kg磷酸二氢钾加入至2500kg水中搅拌均匀，封口，115℃灭菌15min，自然冷却至室温，得到预制培养基；
无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，22℃摇瓶培养4天，摇瓶速度为130rpm，得到液体培养基；
S3、制备菌丝体发酵培养基
将1.5kg马铃薯粉、1.5kg发酵构树粉、0.5kg豆饼粉、0.5kgα-亚麻酸、4kg酵母提取物、0.05kg维生素B1、0.03kg氨基酸螯合钴、0.03kg醋酸铵加入2500kg水中混合均匀，115℃灭菌15min，自然冷却至室温，无菌条件下，按照7％的接种量接入液体培养基，在温度为23℃、相对湿度为62％的条件下发酵培养5天；升温至33℃，调节相对湿度为73％，继续发酵培养2天；
发酵过程中控制搅拌速度为130r/min，通风量为0.6m3/h；
在整个发酵培养过程中，对发酵罐进行光照诱导培养，首先在室温培养阶段，控制光照强度为1500lx，每天光照处理19h，其余时间段置于无光照环境中；在升温至32℃的培养阶段，控制光照强度为4500lx，每天光照处理22h，其余时间段置于无光环境中。
对比例1
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、制备固体培养基
将25kg葡萄糖、15kg构树粉、10kg蛋白胨、7kg酵母提取物、1.5kg七水合硫酸镁、1.5kg磷酸二氢钾、40kg琼脂粉加入至600kg水中混合均匀，115℃灭菌15min，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，16℃避光培养9天；
S2、制备液体培养基、接种培养
将3kg葡萄糖、3kg构树粉、3kg蛋白胨、0.03kg七水合硫酸镁、0.03kg磷酸二氢钾加入至2500kg水中搅拌均匀，封口，115℃灭菌15min，自然冷却至室温，得到预制培养基；
无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，22℃摇瓶培养4天，摇瓶速度为130rpm，得到液体培养基；
S3、制备菌丝体发酵培养基
将1.5kg马铃薯粉、1.5kg构树粉、0.5kg豆饼粉、0.5kgα-亚麻酸、4kg酵母提取物、0.05kg维生素B1、0.03kg氨基酸螯合钴、0.03kg醋酸铵加入2500kg水中混合均匀，115℃灭菌15min，自然冷却至室温，无菌条件下，按照7％的接种量接入液体培养基，在温度为23℃、相对湿度为62％的条件下发酵培养5天；升温至33℃，调节相对湿度为73％，继续发酵培养2天；
发酵过程中控制搅拌速度为130r/min，通风量为0.6m3/h；
在整个发酵培养过程中，对发酵罐进行光照诱导培养，首先在室温培养阶段，控制光照强度为1500lx，每天光照处理19h，其余时间段置于无光照环境中；在升温至32℃的培养阶段，控制光照强度为4500lx，每天光照处理22h，其余时间段置于无光环境中。
对比例2
一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，包括如下步骤：
S1、制备固体培养基
将25kg葡萄糖、15kg发酵构树粉、10kg蛋白胨、7kg酵母提取物、1.5kg七水合硫酸镁、1.5kg磷酸二氢钾、40kg琼脂粉加入至600kg水中混合均匀，115℃灭菌15min，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，16℃避光培养9天；
S2、制备液体培养基、接种培养
将3kg葡萄糖、3kg发酵构树粉、3kg蛋白胨、0.03kg七水合硫酸镁、0.03kg磷酸二氢钾加入至2500kg水中搅拌均匀，封口，115℃灭菌15min，自然冷却至室温，得到预制培养基；
无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，22℃摇瓶培养4天，摇瓶速度为130rpm，得到液体培养基；
S3、制备菌丝体发酵培养基
将1.5kg马铃薯粉、1.5kg发酵构树粉、0.5kg豆饼粉、0.5kgα-亚麻酸、4kg酵母提取物、0.05kg维生素B1、0.03kg氨基酸螯合钴、0.03kg醋酸铵加入2500kg水中混合均匀，115℃灭菌15min，自然冷却至室温，无菌条件下，按照7％的接种量接入液体培养基，在温度为23℃、相对湿度为62％的条件下发酵培养7天；发酵培养过程中搅拌速度为130r/min，通风量为0.6m3/h，并对发酵罐进行光照诱导培养，控制光照强度为1500lx，每天光照处理19h，其余时间段置于无光照环境中。
对实施例5和对比例1-2最终所得发酵罐中发酵液进行取样，进行虫草素含量的检测。
虫草素的检测采用HPLC进行检测，具体检测方法可采用现有技术中常规方法进行，HPLC采用Agilent1100型分析仪；色谱柱采用反相C18惠杰型高效液相色谱柱(填料hypersilODS5μm，柱长150mm，管径4.6mm)；流动相为10mmol/LKH2PO4溶于甲醇/双蒸水(体积比8：92)；检测波长为254nm，柱温50℃，流速为1mL/min，进样量为20μL。
| 虫草素含量，mg/g | |
| 实施例5 | 4.33 |
| 对比例1 | 2.17 |
| 对比例2 | 2.54 |
由上表可知：采用马铃薯粉、发酵构树粉配合作为碳原，豆饼粉作为氮源，采用发酵构树粉对古尼虫草发酵过程中虫草素进行诱导，同时配合氨基酸螯合钴，可有效诱导并提高虫草素的含量，在菌丝体的发酵过程中辅以特定光照诱导培养，进一步利用物理诱导方式增强了菌丝体中虫草素的积累，有效提高了虫草素的含量。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、酵母提取物、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂粉加入至水中混合均匀，灭菌，分装于试管中，将古尼虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，10-15℃避光培养8-10天；
S2、将葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾加入至水中搅拌均匀，封口，灭菌，自然冷却至室温，得到预制培养基；无菌条件下，将固体培养基中保存的菌种接种一环至预制培养基中，20-25℃摇瓶培养3-5天，得到液体培养基；
S3、将马铃薯粉、发酵构树粉、豆饼粉、α-亚麻酸、酵母提取物、维生素B1、氨基酸螯合钴、醋酸铵加入水中混合均匀，灭菌，自然冷却至室温；无菌条件下，按照5-10％的接种量接入液体培养基，在温度为20-25℃、相对湿度为60-65％的条件下发酵培养4-6天；升温至30-35℃，调节相对湿度为70-75％，继续发酵培养1-3天。
2.根据权利要求1所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，S1中，葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、酵母提取物、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂粉的质量比为20-30：10-20：5-15：2-10：1-2：1-2：30-50。
3.根据权利要求1所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，S2中，葡萄糖、发酵构树粉、蛋白胨、七水合硫酸镁磷酸二氢钾的质量比为1-5：1-5：1-5：0.01-0.05：0.01-0.05。
4.根据权利要求1所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，S2中，摇瓶速度为100-150rpm。
5.根据权利要求1所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，S3中，马铃薯粉、发酵构树粉、豆饼粉、α-亚麻酸、酵母提取物、维生素B1、氨基酸螯合钴、醋酸铵的质量比为1-2：1-2：0.1-1：0.1-1：2-6：0.01-0.1：0.01-0.05：0.01-0.05。
6.根据权利要求1所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，S3的发酵过程中控制搅拌速度为100-150r/min，通风量为0.4-0.8m3/h。
7.根据权利要求1所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，S3的发酵过程中对发酵罐进行光照诱导培养。
8.根据权利要求7所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，当发酵培养温度为20-25℃时，控制光照强度为1000-2000lx，每天光照处理18-20h，其余时间段置于无光照环境中。
9.根据权利要求7所述双重增强古尼虫草菌丝体中虫草素积累的工艺，其特征在于，当发酵培养温度为30-35℃时，控制光照强度为4000-5000lx，每天光照处理21-23h，其余时间段置于无光环境中。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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