KR20160085793A - Ｉｌ-17ａ 접합체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

IL-17A를 특이적으로 인식하여 IL-17A와 결합할 수 있는 항체가 제공된다. 상기 항체는 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 다발성 경화증, 염증성 관절염과 같은 인터류킨-17A의 고 수준에 의해 유발되는 염증 및 자가면역 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

Description

ＩＬ-17Ａ 접합체 및 이의 용도{IL-17A CONJUGATE AND USES THEREOF}
본 발명은 IL-17A 결합제, 및 치료제, 특히 다양한 염증성 또는 자가면역 질환용 치료제로서의 이의 용도에 관한 것이다.
인터류킨-17 계열의 사이토킨은 각각 IL-17A 내지 IL-17F로서 명명된다. 동시에, 이들의 수용체 IL-17 수용체 A 내지 IL-17 수용체 E의 계열도 발견되었다. 이들 IL-17 사이토킨은 상응하는 수용체에 결합함으로써 상이한 염증 반응을 매개한다.
이 계열의 가장 전형적인 구성원은 IL-17A이다.　감염 또는 손상 부위로 이동하는 림프구는 IL-17A를 분비할 수 있다. 한편으로 IL-17A는 염증성 사이토킨 및 케모킨의 발현을 유도함으로써 보다 많은 면역 세포들을 염증 부위로 동원해 염증 반응을 악화시키고, 다른 한편으로 IL-17A는 조직 복구와 관련된 일부 인자들의 발현을 유도하여 유기체의 회복을 가속한다. 인터류킨-17A는 숙주에서 면역 방어 반응을 증폭시키고 항-감염 및 조직 복구의 과정 동안 유기체를 보호하는 데 있어 효과가 있지만, 자가면역 질환 및 암을 앓는 많은 환자에서 인터류킨-17A는 고도로 발현되고, 인터류킨-17A의 과도한 발현은 이것이 다양한 염증 인자들의 발현을 유도할 수 있으므로 병리기전을 악화시키는 역할을 한다. 많은 동물 실험들은 인터류킨-17A 결핍 또는 항체에 의한 인터류킨-17A의 중화를 효과적으로 다양한 자가면역 질환의 병리기전을 억제할 수 있음을 입증하였다. IL-17 시그널이 류마티스성 관절염(RA), 건선, 크론병, 다발성 경화증(MS), 건선 질환, 천식 및 루푸스를 포함한 자가면역 질환 치료를 위한 표적으로서 특정 효과를 나타냈다는 증거가 있다(예를 들면, 문헌[Aggarwal et al., J.Leukoc.Biol, 71 (1): 1-8 (2002); Lubberts et al.]을 참조).
인간 IL-17은 최대 155개의 아미노산을 갖는 폴리펩타이드를 암호화하는 유전자이다. 폴리펩타이드는 19-아미노산 시그널 서열 및 132-아미노산 성숙 영역을 포함한다. 인간 IL-17A는 동종이량체 또는 이종이량체의 형태로 존재하는 17,000Da의 상대적 분자량을 갖는 당단백질이다(Spriggs et al, J.Clin.Immunol, 17: 366-369 (1997)).　상동체인 IL-17F는 IL-17A와 결합하여 IL-17A/F 이종이량체를 형성할 수 있다. IL-17F(IL-24, ML-1)의 아미노산 서열은 IL-17A의 아미노산 서열과 최대 55%의 유사성을 갖고, 이들 둘 다의 수용체는 IL-17R로서 동일하다.　IL-17R은 혈관 내피세포, 말초 T 세포, B 세포, 섬유아세포, 골수성 단핵구 및 골수 간질세포를 포함한 다양한 세포 내 어디에서나 발현된다(Kolls et al, Immunity, 21: 467-476 (2004); Kawaguchi et al, J.Allergy Clin.Immunol, 114 (6): 1267-1273 (2004); Moseley et al, Cytokine Growth Factor Rev, 14 (2): 155-174 (2003)).
인터류킨-17A의 발견 이래로 현재까지, CN101001645A, CN101326195A, CN101646690A와 같은 다양한 항-IL-17A 항체들이 발견되었지만, 염증 반응 및 자가면역 질환에서 IL-17 활성을 효과적으로 감소 또는 제거하는 다양한 종류의 개선된 항체를 개발할 필요가 여전히 있다.
본 발명은 높은 친화성과보다 긴 반감기를 갖는 항-IL-17A 항체를 제공한다.
본 발명은 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15에 제시된 LCDR 영역들로부터 선택된 0 내지 3개의 LCDR 영역들을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역 및 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12에 제시된 HCDR 영역들로부터 선택된 0 내지 3개의 HCDR 영역들을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 IL-17A 결합제로서, 항체 경쇄 가변영역 및 중쇄 가변영역의 CDR 영역의 수가 동시에 O이 아닌 IL-17A 결합제를 제공한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 13을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 14를 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 15를 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 10을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 11을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 12를 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15로부터 선택된 1개의 LCDR 영역을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12로부터 선택된 1개의 HCDR 영역을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15로부터 선택된 2개의 LCDR 영역을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12로부터 선택된 2개의 HCDR 영역을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 3개의 LCDR 영역을 포함하며, 여기서 LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 13에 제시되어 있고, LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시되어 있고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 15에 제시되어 있다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제는 3개의 HCDR 영역을 포함하고, 여기서 HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시되어 있고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 11에 제시되어 있고, HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시되어 있다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제에서 항체 경쇄 가변영역은 뮤린(murine) κ, λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 FR 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체 경쇄 가변영역의 아미노산 서열은 서열번호 2이다. 또한, IL-17A 결합제는 뮤린 κ, λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변영역을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제에서 항체 중쇄 가변영역은 뮤린 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체 중쇄 가변영역의 아미노산 서열은 서열번호 1이다. 또한, IL-17A 결합제는 뮤린 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제에서, 이의 항체 경쇄 가변영역은 인간 κ, λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 FR 영역을 추가로 포함하고 일부 실시태양에서, 항체 경쇄 가변영역의 경쇄 FR 영역은 아미노산이 서열번호 4에 제시된 인간 생식선(germline) 경쇄 A10 FR 영역 또는 이의 변이체이다.　일부 실시태양에서, 항체 경쇄 가변영역 FR 영역의 변이체는 0 내지 10개의 아미노산 돌연변이를 갖는 인간 생식선 경쇄 A10 FR 영역을 의미한다.　일부 실시태양에서, 경쇄 가변영역의 FR 영역 내의 아미노산 돌연변이는 F71Y, K49Y, Y36F 및 L47W로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상이다.　일부 실시태양에서, 항체 경쇄는 서열번호 9 및 이의 변이체로부터 선택된다. 추가로, IL-17A 결합제는 인간 κ, λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변영역을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, IL-17A 결합제에서 이의 항체 중쇄 가변영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역을 포함하고 일부 실시태양에서, 항체 중쇄 가변영역의 중쇄 FR 영역은, 아미노산 서열이 서열번호 3으로서 제시된 인간 생식선 중쇄 VH1-18의 FR 영역 또는 이의 변이체 이고, 일부 실시태양에서, 항체 중쇄 가변영역의 FR 영역 변이체는 0 내지 10개의 아미노산 돌연변이를 갖는 인간 생식선 중쇄 VH1-18을 의미하고 일부 실시태양에서, 중쇄 가변영역의 FR 영역 변이체 내의 아미노산 돌연변이는 A93T, T71A, M48I, V67A, M69L, T73D 및 S76N으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상이고 일부 실시태양에서, 항체 중쇄는 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7 및 서열번호 8로부터 선태된다. 추가로, IL-17A 결합제는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 이들의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역을 포함한다.
또한, 본 발명의 일부 실시태양에 따라서, 앞서 언급한 IL-17A를 발현하는 벡터가 제공된다. 숙주 세포는 벡터로 형질전환된 후 IL-17A 결합제를 발현 및 분비한다.
본 발명의 일부 실시태양에 따라서, 벡터는 본 발명의 IL-17A 결합제를 코딩하는 뉴클레오타이드를 포함한다.
추가로, 본 발명의 일부 실시태양에 따라서, 전술한 IL-17A 결합제 및 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 함유하는 약제학적 조성물이 제공된다.
추가로, 본 발명의 일부 실시태양에 따라서, L-17 매개 질환 또는 장애 치료용 의약의 제조에 있어서 상기 IL-17A 결합제 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물의 용도가 제공된다. 상기 질환은 염증성 또는 자가면역 질환이며; 상기 질환은 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 다발성 경화증, 염증성 관절염으로부터 선택되고 염증성 질환은 바람직하게는 염증성 관절염이다.　염증성 관절염은 골관절염, 류마티스성 관절염, 류마티스성 관절염 또는 골다공증으로부터 선택되고, 바람직하게는 류마티스성 관절염이다.
일부 실시태양에 따라서, 본 발명은 또한 L-17 매개 질환 또는 장애 치료용 의약의 제조에 있어서 상기 IL-17A 항체 또는 이를 함유하는 약제학적 조성물의 용도를 제공한다. 상기 질환은 염증성 또는 자가면역 질환이다. 염증성 질환은 바람직하게는 염증성 관절염이다. 염증성 관절염은 골관절염, 류마티스성 관절염 또는 골다공증으로부터 선택된다.
일부 실시태양에 따라서, 본 발명은 또한 IL-17에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 치료가 필요한 대상체에게 치료학적 유효량의 전술한 바와 같은 IL-17A 결합제 또는 인간화된 IL-17A 항체 또는 이를 함유하는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하는, IL-17에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 치료 방법을 제공한다.
본 발명을 더욱 용이하게 이해할 수 있도록, 특정 기술 및 과학 용어들이 하기에서 구체적으로 정의된다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기타 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 분야의 당업자들이 일반적으로 이해하는 의미가 있다.
I. 용어들
본원에서 사용되는 바와 같이, 아미노산에 대한 단일문자 코드 및 삼문자 코드는 문헌[J. Biol. Chem, 243, (1968) p3558] 에 기재된 바와 같다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "결합제"는 표적에 결합할 수 있는, 가용성 수용체 또는 이의 단편 또는 유사체, 또는 항체 또는 이의 단편 또는 이의 유사체를 의미한다. 본 발명에 따르는 "IL-17A 결합제"는 IL-17A를 특이적으로 인식하고 IL-17A에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 단편 또는 유사체를 의미한다.
"IL-17A"란 용어는 일반적으로 천연 또는 재조합 인간 IL-17A, 및 인간 IL-17A의 비-인간 상동체를 의미한다. 달리 언급하지 않는 한, IL-17A의 몰 농도를 계산하기 위해 IL-17A 동종이량체의 분자량(예를 들면, 인간 IL-17A의 경우 30KDa)이 이용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "항체"는 면역글로불린, 이황화 결합을 통해 연결된 2개의 동일한 중쇄와 2개의 동일한 경쇄로 이루어진 4-펩타이드 쇄 구조를 의미한다. 면역글로불린 중쇄 불변영역은 상이한 아미노산 성분 및 순서를 나타내고, 이에 따라 상이한 항원성을 제시한다. 따라서, 면역글로불린은 5가지 카테고리로 나눠질 수 있거나 면역글로불린 이소형(isoform), 즉 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 지칭될 수 있다. 이의 힌지 영역의 아미노산 성분 및 중쇄 이황화 결합의 수와 위치에 따라서, 동일한 카테고리의 Ig는 상이한 아형으로 추가로 나뉠 수 있으며, 예를 들면, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 나뉠 수 있다.　경쇄는 상이한 불변영역에 의해 κ 또는 λ 쇄로 나뉠 수 있다.
항체 중쇄 및 경쇄의 N-말단에 가까운 약 110개 아미노산 서열의 영역은 크게 변화하며, 가변영역(V 영역)으로서 공지되어 있고 C-말단에 가까운 나머지 아미노산 서열의 영역은 비교적 안정하고 불변영역(C 영역)으로서 공지되어 있다. 가변영역은 3개의 초가변영역(HVR) 및 4개의 비교적 보존된 FR 영역(FR)을 포함한다. 3개의 초가변 영역은 항체의 특이성을 결정하며, 상보성 결정 영역(CDR)으로서도 공지되어 있다. 각 경쇄 가변영역(LCVR) 및 각 중쇄 가변영역(HCVR)은 3개의 CDR 영역과 4개의 FR 영역으로 이루어지며, 아미노 말단부터 카복실 말단까지의 순차적 순서는 다음과 같다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4.　3개의 경쇄 CDR 영역, 즉 경쇄 초가변 영역(LCDR)은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 의미하고 3개의 중쇄 CDR 영역, 즉 중쇄 초가변 영역(LCDR)은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 의미한다. 본원의 항체 또는 항원 결합 단편의 LCVR 및 HCVR 영역 내의 CDR 영역 아미노산 잔기의 수 및 위치는 공지된 카벳(Kabat) 번호매김 기준(LCDR1-3, HCDE2-3)에 따르거나 카뱃 및 초티아(chothia) 번호매김 기준(HCDR1)에 따른다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "항원-결합 단편"은 항원-결합 활성을 갖는, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편 또는 단일 Fv 단편을 의미한다. Fv 항체는 불변영역을 함유하지 않는, 중쇄 가변영역, 경쇄 가변영역 및 모든 항원-결합 부위를 포함하는 최소의 항체 단편이다. 일반적으로, Fv 항체는, VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함하고, 항원 결합을 위해 필요한 구조를 형성할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본 발명의 "항원 결정기"는 항원상에 산재되어 있고 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 인식되는 3차원 부위를 의미한다.
"투여" 및 "치료"는 동물, 인간, 실험 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 적용될 때, 외인성 약제, 치료제, 진단제 또는 조성물을 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체와 접촉시키는 것을 의미한다. "투여" 및 "치료"는, 예를 들면, 치료학적, 약동학적, 진단학적, 연구 및 실험 방법을 의미할 수 있다. 세포의 치료는 제제를 세포에 접촉시키는 것뿐만 아니라, 제제를 세포와 접촉되어 있는 유체와 접촉시키는 것을 포함한다. "투여" 및 "치료"는 또한 제제 또는 진단 또는 결합 조성물에 의한 또는 다른 세포에 의한, 예를 들면, 세포의 시험관내 및 생체외 치료를 의미한다. "치료"는 인간, 동물 또는 연구 대상 체에 적용될 때, 치료학적 처치, 예방학적 또는 예방 조치, 연구 및 진단 응용을 의미한다. "치료"는 인간, 동물 또는 연구 대상체에게 적용될 때, 인간 또는 동물 대상체, 세포, 조직, 생리학적 구획 또는 생리학적 유체를 IL-17A 효능제 또는 IL-17A 길항제와 접촉시키는 것을 포괄한다. "세포의 치료"는 또한 IL-17A 효능제 또는 IL-17A 길항제가 예를 들면 유체 상 또는 콜로이드 상에서 IL-17A 수용체와 접촉되어 있는 상황을 포괄하고 또한 상기 효능제 또는 길항제가 세포 또는 수용체와 접촉되지 않은 상황을 포괄한다.
"치료"는 본 발명의 임의의 결합 화합물을 함유하는 조성물과 같은 치료제를 이 치료제가 치료 활성이 있다고 공지된 하나 이상의 질환 증상을 갖는 환자에게 내부적으로 또는 외부적으로 투여하는 것을 의미한다. 일반적으로, 치료제는, 치료될 환자 또는 집단에서의 하나 이상의 질환 증상을 이러한 질환 증상(들)의 퇴행을 유도하거나 이러한 질환 증상(들)의 진행을 어떠한 임상적으로 측정가능한 정도로 억제함으로써 완화시키는데 유효한 양으로 투여된다. 임의의 특정 질환 증상을 완화시키는데 유효한 치료제의 양("치료학적 유효량"으로도 지칭됨)은 환자의 질환 상태, 연령 및 체중 및 환자에서 원하는 반응을 유발하는 약물의 능력과 같은 다양한 요인에 따라서 달라질 수 있다.
인간 IL-17A 단백질의 4종의 변이체가 본원에서 언급된다:
1) 본원에서 사용되는 바와 같이, "인간 IL-17A(huIL-17A)" 및 "천연 인간 IL-17A"란 용어는 수탁번호 NP_002181 및 AAT22064를 갖는 인간 IL-17A 단백질의 성숙한 형태(즉, 잔기 24-155) 및 이의 천연 발생 변이체 및 다형성을 의미한다.
2) 본원에서 사용되는 바와 같이, "rhIL-17A"란 용어는 재조합 인간 IL-17A를 의미하고, 이러한 명명법은 IL-17A의 다양한 형태를 지칭하는데 있어 편의를 위해서 채택되며 문헌에서의 용법과 일치하지 않을 수 있다.
3) 본원에서 사용되는 바와 같이, "His-huIL-17A"란 용어는 N-말단 His 태그가 첨부된 재조합 인간 IL-17A를 의미하고, "FLAG-huIL-17A"는 N-말단 FLAG 태그가 첨부된 재조합 인간 IL-17A를 의미한다. 일부 실시태양에서, FLAG-huIL-17A는 바이오티닐화된다.
4) 본원에서 언급되는 R&D 시스템스(R&D Systems) 인간 IL-17A는 R&D 시스템스로부터 구입한 재조합 인간 IL-17A이다. 　
본원에서 사용되는 바와 같이, "모노클로날 항체"란 용어는 단일 세포로부터 유래된 한 클론에 의해 분비된 항체를 의미한다. 모노클로날 항체는 매우 특이적며 단일 에피토프에 대해 작용한다. 세포는 진핵, 원핵 또는 파아지 클론 세포주로 제한되지 않는다.
본원에서 모노클로날 항체는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특정 종으로부터 유래된 또는 특정 항체 유형 또는 아형에 속하는 항체의 상응 서열과 동일하거나 이에 상동성인 한편 쇄(들)의 나머지가 다른 종으로부터 유래된 또는 다른 항체 유형 또는 아형에 속하는 항체의 상응 서열과 동일하거나 이에 상동성인 "키메릭" 항체뿐만 아니라, 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 이러한 항체의 단편을 포함한다
본원에서 사용되는 바와 같이, "인간화된 항체"란 용어는 비-인간 항체(바람직하게는 마우스 모노클로날 항체)로부터 유래된(또는 실질적으로 유래된) CDR 영역, 및 인간 항체로부터 실질적으로 유래된 FR 영역과 불변영역을 갖는, 본 발명에 따르는 뮤린 항체의 가변영역-변형된 형태이며, 즉 뮤린 항체의 CDR 영역 서열이 상이한 유형의 인간 생식선 항체 골격 서열에 이식된다. 이러한 골격 서열은 생식선 항체 유전자 서열을 포함하는 공개 DNA 데이터베이스 또는 공개된 문헌들로부터 입수될 수 있다. 예를 들면, 인간 중쇄 가변영역 유전자 및 경쇄 가변영역 유전자의 생식선 DNA 서열은 인간 생식선 서열 데이터베이스 "VBase"(인터넷　www.mrccpe.com.ac.uk/vbase에서 이용 가능함)뿐만 아니라 문헌[Kabat, EA, etc. 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed]에서 찾아볼 수 있다. CDR 서열이 대부분의 항체-항원 상호작용을 책임지고 있기 때문에, 천연 발생 항체의 특정한 특징을 모사할 수 있는 재조합 항체를 발현하는 발현 벡터를 작제하는 것이 실현 가능하다.
"임의적" 또는 "임의로"는 뒤따르는 사건 또는 상황이 일어날 수 있지만 반드시 일어나는 것은 아님을 의미하고, 이 표현은 사건 또는 상황이 일어나거나 일어나지 않는 경우를 포함한다. 예를 들면, "임의로 1 내지 3개 항체 중쇄 가변영역을 함유한다"는 것은 특정 서열을 갖는 항체 중쇄 가변영역이 존재할 수 있지만 반드시 존재하는 것은 아니고, 존재하는 경우 1, 2 또는 3개일 수 있다는 것을 의미한다.
숙주 세포의 재조합 DNA로의 형질전환은 당업자들에게 익히 공지된 통상의 기술에 의해 수행할 수 있다. 수득된 형질전환체를 통상의 방법을 사용하여 배양하여, 본 발명의 유전자에 의해 코딩된 폴리펩타이드를 발현시킬 수 있다. 배양 배지는 사용되는 숙주 세포에 기초하여 각종 통상의 배양배지로부터 선택될 수 있다. 숙주 세포는 적절한 조건 하에 성장한다.
II . 인간 IL -17A에 특이적인 항체　
본 발명은 조작된 항-IL-17A 항체, 및 류마티스 관절염(RA), 골관절염, 류마티스 관절염 골다공증, 염증성 섬유증(예: 피부경화증, 폐 섬유증 및 간경화증), 염증성 장 장애(예: 크론병, 궤양성 대장염 및 염증성 장 질환), 천식(알레르기 천식), 알레르기, COPD, 다발성 경화증, 건선 및 암을 포함한 각종 염증성, 면역 및 증식성 장애를 치료하기 위한 이의 용도를 제공한다.
본 발명의 항-IL-17 항체를 생성하기 위해, 어떠한 적합한 모노클로날 항체 생성 방법이라도 사용할 수 있다. 예를 들면, 동물 수용자는 연결된 또는 예를 들면 천연 발생 IL-17A 동종이량체 또는 이의 단편으로 면역화시킬 수 있다. 어떠한 적합한 면역화 방법이라도 사용할 수 있다. 이러한 방법은 애주번트, 기타 면역자극제, 반복 부스터 면역화 및 하나 이상의 면역화 경로의 사용을 포함할 수 있다.
IL-17A의 어떠한 적합한 형태라도 IL-17A에 특이적인 비-인간 항체의 생성을 위한 면역원(항원)으로서 사용될 수 있으며, 항체는 이의 생물학적 활성에 대해 스크리닝할 수 있다. 유발 면역원은 연결된 천연 발생 동종이량체를 포함하는 전체길이 성숙한 인간 IL-17A, 또는 단일 에피토프 또는 다수의 에피토프를 포괄하는 이의 펩타이드일 수 있다. 면역원은 단독으로 또는 당업계에 공지된 하나 이상의 면역원성 증진제와 조합하여 사용될 수 있다. 면역원은 천연 공급원으로부터 정제될 수 있거나 유전적으로 변형된 세포에서 생산될 수 있다. 면역원을 코딩하는 DNA는 게놈 또는 비-게놈(예: cDNA) DNA로부터 유래될 수 있다. 적합한 유전자 벡터를 면역원을 코딩하는 DNA를 발현하기 위해 사용할 수 있으며, 상기 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관(adenoassociated) 바이러스 벡터, 배큘로바이러스 벡터, 플라스미드 및 비-바이러스 벡터를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 항-인간 IL-17A 항체의 예시적 생산 방법은 실시예 1에 기재되어 있다.
III . IL -17A 특이적 항체의 인간화
인간화된 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 면역글로불린의 임의의 유형으로부터 선택될 수 있다. 하나의 실시태양에서, 항체는 IgG 항체이다. IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 IgG의 임의의 이소형이 사용될 수 있다. IgG 이소형의 변이체도 또한 고려된다. 인간화된 항체는 한가지 이상의 유형 또는 이소형으로부터 유래된 서열을 포함할 수 있다. 목적하는 생물학적 활성을 생성하기 위해 필수적인 불변 도메인 서열의 최적화는 항체를 하기 실시예에서 설명하는 생물검정으로 스크리닝함으로써 용이하게 달성된다.
마찬가지로, 어떠한 유형의 경쇄라도 본원의 화합물 및 방법에서 사용할 수 있다. 구체적으로, 카파(κ), 람다(λ) 또는 이들의 변이체가 본 화합물 및 방법에서 유용하다.
본 발명의 항-인간 IL-17A 항체의 예시적인 인간화 방법은 실시예 2에 설명되어 있다.
이하, 본 발명은 실시예를 참조로 하여 추가로 설명되지만, 본 발명의 범주는 실시예로 제한되지 않는다.
본 발명의 실시예에서, 구체적 조건이 기재되지 않는 경우, 실험은 통상의 조건 하에 또는 재료 또는 제품 제조업자에 의해 제시된 조건 하에 일반적으로 수행한다. 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory; Current 프로토콜s in Molecular Biology, Ausubel et al, Greene Publishing Associates, Wiley Interscience, NY]을 참조한다. 시약의 공급원이 구체적으로 기재되지 않을 경우, 시약은 시판되는 통상의 시약이다.
실시예 1 항-인간 IL -17A의 마우스 모노클로날 항체
인간 IL-17A에 대한 모노클로날 항체를 다음과 같이 수득하였다. 6 내지 8주령 암컷 BALB/c 마우스(Shanghai Super B&K Laboratory Animal Corp. Ltd, 실험 동물 생산 자격증 번호: SCXK(HU) 2008-0016) 및 6 내지 8주령 암컷 SJL 마우스(Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co. Ltd, 실험 동물 생산 자격증 번호: SCXK(베이징) 2012-0001)를 두 그룹, 즉 고 용량 그룹 및 저 용량 그룹으로 나누었다. 각 그룹마다 10마리 BALB/c 마우스 및 10마리 SJL 마우스가 있었다.
고 용량 그룹 및 저 용량 그룹을 N-말단에서 His-태그되고 HEK293E(293-EBNA, Invitrogen, 로트 번호: 493985) 발현 시스템에 의해 생성된 천연 hIL-17A 변이체(His-hIL-17A, hIL-17A의 아미노산 서열은 인간 IL-17A 단백질 Genbank 수탁번호 NP-002181를 의미하며, 생성된 단백질은 Ni 친화성 컬럼(Superdex) 75SEC에 의해 순차적으로 정제되었다)로 연속적으로 면화시켰다. 접종은 0일째, 14일째, 35일째 및 56일째에 수행하였다.
0일째에, 고 용량 그룹에게 His-huIL-17A, 500㎍/마우스를 피하(s.c.) 주사를 통해 투여하고 완전 프로인트 애쥬번트(Complete Freund's Adjuvant)(CFA)를 복강내(i.p.) 주사를 통해 동시에 투여하였다. 14일째 및 35일째에, 25㎍/마우스 His-hIL-17A를 s.c. 주사를 통해 동시에 투여하고, 불완전 프로인트 애쥬번트(IFA)를 i.p. 주사를 통해 투여하였다. 56일째에, 비장세포를 융합시키기 전에, 식염수에 용해된 25㎍/마우스 His-hIL-17A를 i.p. 주사하여 부스터 면역화를 수행하였다. 저 용량 그룹의 면역화를 위한 시간 스케줄 및 방법은, 0일째에 투여된 His-hIL-17A 용량이 10㎍/마우스였고 14일째, 35일째 및 56일째에 투여된 His-hIL-17A 용량이 5㎍/마우스였다는 점을 제외하고는 고 용량 그룹에 대한 시간 스케줄 및 방법과 동일하였다.
22일째 및 43일째에 혈액시험을 수행하였다. 마우스 혈청을 실시예 1에 설명된 ELISA 시험으로 시험하여 혈청 중 항체 역가를 측정하였다. 56일째에, 혈청중 항체 역가가 보다 높은 마우스를 비장세포 융합용으로 선택하였다. 최적화된 PEG-매개 융합 절차를 이용하여 비장 림프구를 골수종 세포 Sp2/0 세포(ATCC® CRL-8287TM)와 융합시켜 하이브리도마를 수득하였다.
면역화 절차는 다음과 같았다:
계획 1, 고 용량, 10마리 Balb/c 마우스 및 10마리 SJL 마우스, 절차는 다음과 같았다.
Figure pct00001
계획 2, 저 용량, 절차는 다음과 같았다
Figure pct00002
생성된 하이브리도마의 1차 스크리닝을 시험 실시예 1에서의 항원-항체 간접 ELISA 시험에 의해 수행하였다. 모노클로날 세포 스트레인(strain)을 양성 세포 스트레인의 제한 희석을 통해 수득하였다.
다음을 포함하여 수득된 모노클로날 세포주를 추가 스크리닝하였다:
1. 수용체 차단 시험: 시험 실시예 2를 참조, 본 결과는 하기 표 5에 제시하였고, 양성 대조군보다 우수한 활성을 갖는 모노클로날 세포주가 스크리닝되고 수득되었다;
2. 친화성 시험: 시험 실시예 3을 참조, 본 결과는 하기 표 6에 제시하였고, 이는 본 발명에서 스크리닝되고 수득된 모노클로날 세포주 IL17-mAb049가 양성 대조군과 비교해 유사하거나 보다 우수한 활성을 나타냈음을 보여주었다;
3. 세포 수준에서의 생물검정(GROα 분석): 시험 실시예 4를 참조, 본 결과는 하기 표 8에 제시하였고, 이는 본 발명에서 스크리닝되고 수득된 모노클로날 세포주 IL17-mAb049가 양성 대조군과 비교해 유사하거나 보다 우수한 활성을 나타냈음을 보여주었다.
1차 및 2차 스크린 후 12개의 모노클론을 연구하였다. IL17-mAb049의 1개의 선도(lead) 모노클론(선도 mAb)을 에피토프 그룹화(epitope grouping), 생물학적 활성 시험에 의해 선택하였다. 뮤린 IL-17A 마우스 항체 mAb049(IL-17mAb)의 중쇄(VH) 및 경쇄(LH)는 다음과 같았다:
IL-17 mAb049 VH 서열번호 1
HVQLQQSGADLVRPGASVTLSCKASGYIFTDYEVHWVKQTPVHGLEWIGVIDPGTGGVAYNQKFEGKATLTADDSSNTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRYSLFYGSSPYAMDYWGQGTSVTVSS
IL-17mAb049 VL 서열번호 2
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVNYMHWFQQKPGTSPKLWIYRTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPWTFGGGTNLEIK
실시예 2 뮤린 -항-인간 IL -17A 항체의 인간화
뮤린-항-인간 IL-17A 모노클로날 항체 mAb049의 인간화는 당해 분야에 널리 공지된 수많은 문헌들에 본질적으로 기재된 바와 같이 수행하였다. 간략하게 언급하면, 인간 불변 도메인을 사용하여 모체(뮤린 항체) 불변 도메인을 대체시켰다. 인간화를 위해 사용된 인간 생식선 서열을 뮤린 항체와 인간 항체 간의 상동성에 따라서 선택하였다.
1. 뮤린 항-IL-17A 항체의 CDR 영역
VH/VL CDR 아미노산 잔기를 동정하고 카뱃 번호매김 시스템에 의해 주석을 달았다(annotate). 본 발명의 뮤린 mAb049의 CDR 서열은 하기 표에 열거되어 있다
마우스 항-IL-17A 항체의 CDR 서열
도메인 mAb049
서열 서열번호
VH CDR1 DYEVH 10
CDR2 VIDPGTGGVAYNQKFEG 11
CDR3 YSLFYGSSPYAMDY 12
VL CDR1 SASSSVNYMH 13
CDR2 RTSNLAS 14
CDR3 QQRSSYPWT 15
2. 인간 생식선 FR 서열의 선택
수득된 뮤린 항체 VH/VL CDR의 전형적 구조에 기초하여, 중쇄 및 경쇄 가변영역의 서열을 항체 데이터베이스와 비교하였다. 높은 상동성을 갖는 인간 생식선 중쇄 VH1-18(서열번호 3) 및 경쇄 A10(서열번호 4)을 수득하고 인간화된 FR 서열로서 사용하였다. 구체적 서열은 다음과 같다:\
VH1-18 서열번호 3
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR
A10 서열번호 4
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCHQSSSLP
3. 인간화된 항체의 설계
환 입체형태 및 VH 계면을 형성하는 아미노산 잔기를 결정하였다. 다음 요인들을 고려하면, Q1E 돌연변이는 N-말단 피로글루탐산 형성을 제거하는 것이었다. 돌연변이는 또한, CDR 전형적 구조 및 VH/VL 계면을 유지하고 인간화된 구조에 존재하는 N-글리코실화 패턴(N-{P}-S/ T)을 피하기 위해, 선택된 VH 계열 내에서 일관성을 유지하는 것들을 포함한다.
뮤린 항체 mAb049의 가변영역 내의 인간화된 돌연변이의 설계는 다음과 같이 요약되었다:
뮤린 항체 mAb049 내의 설계된 인간화된 부위
중쇄 내의 설계된 인간화된 부위 경쇄 내의 설계된 인간화된 부위
VH (VH1-18) + JH4/FW4 Vk(A10) + JK2/FW4
돌연변이 유형 인간화된 역 돌연변이 부위 돌연변이 유형 인간화된 역 돌연변이 부위
Hu049 VH.1 CDR-이식* Hu049 Vk.1 CDR-이식*
Hu049 VH.1A A93T Hu049 Vk.1A F71Y
Hu049 VH.1B A93T, T71A Hu049 Vk.1B F71Y, K49Y
Hu049 VH.1C A93T, T71A, M48I Hu049 Vk.1C F71Y, K49Y, Y36F, L47W
Hu049 VH.1D A93T, T71A
M48I, V67A, M69L, T73D, S76N
주: 예를 들면, A93T는 카뱃 번호매김 시스템에 따라서 93A부터 T까지의 역 돌연변이를 나타낸다.
* 뮤린 항체 CDR이 인간 생식선 FR 서열 내로 이식되었음을 나타낸다.
뮤린 항체 mAb049 인간화된 서열
Hu049 VH.1 Hu049 VH.1A Hu049 VH.1B Hu049 VH.1C Hu049 VH.1D
Hu049 VK.1 Hu049-1 Hu049-2 Hu049-3 Hu049-4 Hu049-5
Hu049 VK.1A Hu049-6 Hu049-7 Hu049-8 Hu049-9 Hu049-10
Hu049 VK.1B Hu049-11 Hu049-12 Hu049-13 Hu049-14 Hu049-15
Hu049 VK.1C Hu049-16 Hu049-17 Hu049-18 Hu049-19 Hu049-20
주: 상기 표는 상이한 돌연변이들의 다양한 서열 조합을 나타낸다. 예를 들면, Hu049-8은 인간화된 뮤린 항체 mAb049에 존재하는 2개의 돌연변이(Hu049VK. 1A 및 Hu049VH.1B) 등을 나타낸다.
4. 인간화된 항체의 발현 및 정제
전술한 항체들을 유전자 재조합 방법에 의해 클로닝하고 발현시키고 정제하였다. ELISA, 수용체 결합 억제 검정, 비아코어(Biacore), 세포 생존력 시험 등에 의해 우수한 성능을 갖는 인간화된 항체를 최종적으로 선택하였다. 구체적인 항체들은 하기 표에 명시되어 있다.
인간화된 IL-17A 항체의 성분
항체 중쇄 서열번호 경쇄 서열번호
Hu049-17 Hu049-17.VH 서열번호 5 Hu049 VL 서열번호 9
Hu049-18 Hu049-18.VH 서열번호 6
Hu049-19 Hu049-19.VH 서열번호 7
Hu049-20 Hu049-20.VH 서열번호 8
인간화된 항체 mAb049의 구체적 서열은 하기에 열거되어 있다:
Hu049-17.VH 서열번호 5
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEVHWVRQAPGQGLEWMGVIDPGTGGVAYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCTRYS LFYGSSPYAMDYWGQGTLVTVSS
Hu049-18.VH 서열번호 6
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEVHWVRQAPGQGLEWMGVIDPGTGGVAYNQKFEGRVTMTADTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCTRYS LFYGSSPYAMDYWGQGTLVTVSS
Hu049-19.VH 서열번호 7
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEVHWVRQAPGQGLEWIGVIDPGTGGVAYNQKFEGRVTMTADTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCTRYSLFYGSSPYAMDYWGQGTLVTVSS
Hu049-20.VH 서열번호 8
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Hu049VL 서열번호 9
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCSASSSVNYMHWFQQKPDQSPKLWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQRSSYPWTFGQGTKLEIKR
실시예 3 인간화된 항- IL -17 항체의 생체 내 약동학 및 약력학 시험
인간 IL-17은 수컷 마우스 KC(CXCL1)에서 마우스 IL-17 수용체에 결합하여 이를 자극함으로써 케모킨의 증가 및 후속적 분비를 유도하였다. 다양한 시간 및 다양한 용량을 이용한 실험을 수행하여 인간 IL-17의 최적 용량 및 마우스 KC 유도에 최적인 시간을 확인하였다(시험 실시예 5 참조).　이러한 실험들은 150mg/kg의 인간 IL-17 및 IL-17 투여 후 2시간이 마우스 혈청 중 최고 수준의 KC를 유도함을 보여준다. 본 발명의 전체길이 항체는 인간 IL-17를 피하 주사하기 20시간 전에 3, 30, 300, 3000㎍/kg의 농도로 마우스에게 정맥 내 투여하였다. 인간 IL-17을 투여한지 2시간 후, 마우스를 희생시키고 KC 수준을 제조업자의 설명서(마우스 CXCL1/KC Quantikine ELISA 키트, R&D 시스템, # SMKC00B)에 따라서 ELASA에 의해 시판되는 키트를 사용하여 측정하였다. 이소타입-매치된 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다. 항체는 마우스 IL-17 수용체를 자극하는 인간 IL-17의 능력을 차단하여, 마우스에서의 KC 증가를 용량-의존적 방식으로 억제한다. 비효과적 대조군 항체와 비교하여, 본 발명의 항체 Hu049-18은 기재한 조건 하에 3000㎍/마우스의 용량에서 평균 KC 수준을 약 1/6로 감소시켰다.
래트 및 레수스 원숭이에서의 혈청 약동학을 본 발명의 항체 Hu049-18의 정맥내 또는 피하 투여 후에 측정하였다(시험 실시예 6 참조). 래트에서 반감기는 5mg/kg의 정맥 내 투여 후에 9.91일이었고, 반감기는 5mg/kg의 피하 투여 후에 11.5일이었다. 마카크에서, 반감기는 1mg/kg의 정맥내 투여 후에 24.4일이었다.
시험 실시예
시험 실시예 1 간접 ELSIA
목적
입체형태적 에피토프를 인식할 수 있는 항체의 선택을 보장하기 위해 그리고 본 발명의 실시예 1로부터 마우스 하이브리도마를 스크리닝하기 위해 간접 ELISA 방법을 선택하였다.
재료
인간 IL-17A (hIL-17A)을 Genbank 수탁번호 NP-002181을 갖는 인간 IL-17A 단백질 서열을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
인간 IL-17A/F(이종이량체, hIL-17A/F)를 Genbank 수탁번호 NP-002181을 갖는 인간 IL-17A 단백질 서열 및 Genbank 수탁번호 NP_443104를 갖는 인간 IL-17F 단백질 서열을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
양성 대조군으로서, 릴리(Lilly) 및 노바티스(Novartis) 뮤린 항-IL-17 항체(릴리 mAb, 노바티스 mAb)를 각각 미국 특허 제7,838,638B2호(LY 2439821) 및 제7,807,155B2호(AIN 457)에 개시된 뮤린 서열에 의해 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
본 발명의 실시예 1에 개시된 마우스 하이브리도마로부터 유래된 뮤린 항체 mAb.
프로토콜
1. 미세역가 플레이트를 4℃에서 밤새 1㎍/ml의 스트렙타비딘으로 직접 피복시켰다.
2. 미세역가 플레이트를 2% BSA(v/v)를 함유하는 300㎕의 PBST로 차단시키고, 미피복된 웰을 대조군으로서 차단하면서, 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온배양하였다.
3. PBST로 3회 세척하는데, 모든 세척 조작은 Biotek(Elx 405) 자동 세척기에서 수행하였다.
4. hIL-17A 또는 hIL-17A/F(1㎍/ ml)을 함유하는 100㎕의 PBS를 각 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
5. PBST로 3회 세척한다.
6. 양성 대조군 릴리 mAb 및 노바티스 mAb 또는 본 발명의 뮤린 항체 mAb를 1:5 희석 하에 역가측정하였고, 초기 농도는 1㎍/ml이다. 100㎕의 희석된 양성 대조군 또는 본 발명의 뮤린 항체를 각 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다. 각 농도를 이중 웰에서 역가측정하였다.
7. PBST로 3회 세척한다.
8. 100㎕의 HRP 항-뮤린 2차 항체(산타 크루즈(Santa Cruz) 카탈로그 번호 sc-2005)(1:5000)를 각 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
9. PBST로 3회 세척한다.　100㎕의 TMB 기질을 각 웰에 부가하고 37℃에서 5분 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다. 이어서, 100㎕ 2M H2SO4를 각 웰에 부가하여 반응을 종결시켰다.
10. 450nm 파장에서의 OD 값을 ELISA 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Spectra Max)에서 판독하였다.
11. 뮤린 항체 mAb의 OD 값을 양성 대조군의 OD 값과 비교하였다. 비가 1을 초과하는 모노클로날 세포주를 스크리닝하였고, 이때 IL17-mAb049가 포함되었다.
시험 실시예 2 IL -17 수용체 차단 검정( RBA )
목적
수용체 차단 검정의 목적은 IL-17 내지 IL-17 수용체(예: hIL-17RA)의 결합을 차단할 수 있는 항체를 선택하는 것이다. 시험은 기능적 시험에 기초하고, 이는 하이브리도마 고처리량 스크리닝을 위해 사용될 수 있다.
재료 및 장비
항-인간 Fc 항체(염소 항-인간 IgG-Fc 단편 특이적 항체(잭슨 이뮤노서치(Jackson Immunoresearch)로부터 입수 가능함, 109-005-008))
본원에서 사용된 인간 IL-17RA-Fc를 Genbank ID 번호 ADY18334.1을 갖는 인간 IL-17A 수용체 아미노산 서열을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰고, 여기서 상기 Fc 단편은 인간 IgG1로부터 수득되었다.
양성 대조군으로서, 릴리 및 노바티스 뮤린 항-IL-17 항체(릴리 mAb, 노바티스 mAb)를 미국 특허 제7,838,638B2호(LY 2439821) 및 제7,807,155B2호(AIN 457)에 개시된 뮤린 서열에 따라서 클로닝하고 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
mIgG: 뮤린 IgG(밀리포어(Millipore) 카탈로그 번호 PP54)를 블랭크 대조군으로서 사용하였다.
ELISA 플레이트 리더: Molecular Devices, Spectra Max
본 발명의 실시예 1로부터 수득된 뮤린 모노클로날 세포 스트레인
프로토콜
1. 미세역가 플레이트를 4℃에서 밤새 10㎍/ml의 항-인간 Fc 항체로 직접 피복시켰다.
2. 미세역가 플레이트를 2% BSA(v/v)를 함유하는 300㎕의 PBST로 차단시키고, 미피복된 웰을 대조군으로서 차단하면서, 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
3. PBST로 3회 세척하는데, 모든 세척 조작은 Biotek(Elx 405) 자동 세척기에서 수행하였다.
4. IL-17 RA-Fc(60ng/ml)를 함유하는 100㎕의 PBS를 각 웰에 부가하고 37℃에서 2시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
5. PBST로 3회 세척한다.
6. 양성 대조군 릴리 mAb 및 노바티스 mAb 또는 본 발명의 항체를 1:5의 비로 희석시켰고, 초기 농도는 40㎍/ml였다. mIgG를 동일한 방법을 사용하여 희석시켰다. 50㎕의 희석된 양성 대조군 또는 본 발명의 뮤린 항체 또는 mIgG를 각 웰에 부가하였고, 그 동안에 50㎕의 0.2nM 바이오틴-표지된 IL-17A를 희석된 양성 대조군 또는 본 발명의 항체에 부가하고, 약하게 혼합하고, 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
7. PBST로 3회 세척한다.
8. 100㎕의 HRP-표지된 스트렙타비딘 복합체(1:5000)를 각 웰에 부가하고, 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
9. PBST로 3회 세척한다. 100㎕의 TMB 기질을 각 웰에 부가하고 37℃에서 5분 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다. 이어서, 100㎕ 2M H2SO4를 각 웰에 부가하여 반응을 종결시켰다.
10. 450nm 파장에서의 OD 값을 ELISA 마이크로플레이트 리더에서 판독하였다.
11. 시험될 항체의 IC50 값을 IL-17 수용체에 대한 IL-17 결합의 차단에 대해 계산하였다.
IC50 값(OD 값이 50%으로 감소하였을 때의 항체 농도, 즉 RBA)을 OD 값 대 항체 농도의 구배 곡선에 따라서 수득하였다.
실험 결과:
상기 방법에 따라서, 실시예 1에서 수득된 하이브리도마를 스크리닝하여, 뮤린 모노클로날 항체를 수득하였고 이를 IL17-mAb049로서 지정하였으며, 그 결과는 다음과 같다:
항체 huIL -17 RBA( nM )
릴리 mAb 0.17
노바티스 mAb 1.56
IL17-mAb049 0.07
결론: 하이브리도마로부터 스크리닝된 뮤린 항체 IL17-mAb 049는 양성 항체 릴리 mAb 및 노바티스 mAb보다 우수한 활성을 보여주었다.
시험 실시예 3 친화성 시험
목적
비아코어(BIACORE) 방법을 항원-항체 결합 반응속도 및 친화성을 측정하기 위한 실험에서 사용하였다.
재료 및 장비
1.1 단백질
인간 IL-17A(hIL-17A)를 Genbank 수탁번호 NP-002181을 갖는 인간 IL-17A 단백질 서열을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
인간 IL-17A/F(이종이량체, hIL-17A/F)를 Genbank 수탁번호 NP-002181을 갖는 인간 IL-17A 단백질 서열 및 Genbank 수탁번호 NP_443104를 갖는 인간 IL-17F 단백질 서열을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
마우스 IL-17A(Mu IL-17A) 및 래트 IL-17A(래트 IL-17A)를 각각 Genbank 수탁번호 NP_034682를 갖는 마우스 IL-17A 단백질 및 Genbank 수탁번호 NP_001100367을 갖는 래트 IL-17A 단백질을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
양성 대조군으로서, 릴리 및 노바티스 뮤린 항-IL-17 항체(릴리 mAb, 노바티스 mAb)를 각각 미국 특허 제7,838,638B2호(LY 2439821) 및 제7,807,155B2호(AIN 457)에 개시된 뮤린 서열에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
양성 대조군으로서, 릴리 인간화된 항-IL-17 항체(릴리 mAb(hu),)를 미국 특허 제7,838,638B2호(LY 2439821)에 개시된 인간화된 서열에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
본 발명의 실시예 1로부터 수득된 뮤린 모노클로날 세포 스트레인.
본 발명의 실시예 2로부터 수득된 인간화된 IL-17 항체.
1.2 BIACORE 모델: BIACORE X 100, GE
1.3 BIACORE 칩 및 시약(상표명은 하기에 기재되어 있다. 인정된 중문 번역이 없음)
Figure pct00003
프로토콜
1. 본 발명의 항체를 CM5 칩상에 고정시켰다: 1:1 50mM NHS:200mM EDC를 제조하고 FC2(플로 셀 2) 채널에 10㎕/분의 속도로 7분 동안 주입하여 CM5 센서 칩을 활성화시켰다. 본 발명의 항체를 10mM 나트륨 아세테이트 완충제에 30㎍/ml의 농도, PH 5.0으로 용해시키고 활성화된 칩(HBS-EP 이동상 완충제: 10mM HEPES, 150 mM NaCl, 3.4mM EDTA, 0.005% 계면활성제 P20, pH 7.4)에 5㎕/분의 속도로 주입하였다. 1M 에탄올아민을 7분 동안 10㎕/분의 속도로 주입하여 나머지의 활성화된 커플링 위치를 밀봉한다. 약 8000RU가 생성되었다.
2. 결합 동력학 시험: FC1(플로 셀 1)을 기준 채널로서 사용하였고, FC2(플로 셀 2)를 샘플 채널로서 사용하였고, 뮤린 또는 인간화된 대조 항체 또는 본 발명의 항체를 300RU에서 FC2 채널에 포획한 다음, 상이한 농도의 IL-17(hIL-17A, MuIL-17, 래트 IL-17을 포함)를 주입하였다.　사이클 조건은 다음과 같았다: 표면 재생을 위해, 분석물을 30㎕/분에서 3분 동안 모든 FC 채널로 주입, 20분 동안 해리, 10mM 글리신을 pH 1.5에서 60초 동안(10㎕/분의 속도에서) 주입. 포획된 항체를 갖는 시그널과 포획된 항체가 없는 시그널 간의 차이를 비아코어 X100 평가 소프웨어 ver 2.0(Biacore)에 의해 계산하였고, 러닝 완충제(running buffer)는 10mM Hepes, 650mM NaCl, 3mM EDTA, 0.05% Tween-20이었다.
실험 결과
1. 상기 방법에 따라서, 실시예 1에서 수득된 하이브리도마를 스크리닝하였고, 그 결과는 다음과 같다.
항체 人IL-17A KD (M)
릴리 mAb 2.18E-11
노바티스 mAb 4.24E-10
IL17-mAb049 2.62E-11
결론: 하이브리도마로부터 스크리닝된 뮤린 항체 IL17-mAb 049의 친화성은 양성 항체 릴리 mAb의 친화성과 동등하고 노바티스 mAb의 친화성보다 우수하다.
2. 상기 방법에 따라서, 실시예 2로부터 수득된 인간화된 IL-17을 시험하였고, 그 결과는 다음과 같다.
인간화된 항체 인간 IL-17A KD (M) 뮤린 IL-17 KD(M) 래트 IL-17 KD (M)
릴리 mAb (hu) 1.48E-11
Hu049-17 <1pM 1.37E-10 1.06E-09
Hu049-18 <1pM 6.81E-11 4.77E-10
Hu049-19 2.68E-12 7.71E-11 6.00E-11
결론: 인간화된 항체의 친화성은 릴리의 양성 항체(1.48E-11M)의 친화성보다 10배 증가하였다.
시험 실시예 4 세포 수준에서의 생물검정( GRO α 검정)
목적
다음 실험은 항-IL-17A 항체를 이용하여 Hs27 세포로부터의 GRO의 IL-17-자극된 분비를 억제함으로써 항-IL-17A 항체의 세포 생물학적 활성을 검출하기 위한 것이었다.
재료 및 장비
Hs27 세포: ATCC 카탈로그 번호 CRL-1634(주: 6주 이상 배양된 세포는 생물검정용으로 권장되지 않는다)
Hs27 세포 배양 배지: DMEM + 10% FBS
DMEM: ATCC 카탈로그 번호 30-2002
FBS: GIBCO 카탈로그 번호 10099, 로트 8122818
재조합 인간 IL-17A(rhIL-17A): R&D 시스템스 카탈로그 번호 317-ILB, 로트 SOA161109B
재조합 인간 IL-17A/F (rhIL-17A/F): R&D 시스템스 카탈로그 번호 5194-IL/CF, 로트 RXT101109A
인간 CXCL1/GROα Quantikine PharmPak 키트: R&D 시스템스 카탈로그 번호 PDGR00
장비: Biotek ELx808 마이크로플레이트 리더
본 발명의 실시예 1로부터 수득된 뮤린 모노클로날 세포 스트레인
본 발명의 실시예 2로부터 수득된 인간화된 IL-17 항체
프로토콜
1. Hs27 세포 배양:
Hs27 세포를 T175 플라스크 내의 50ml의 DMEM +10%FBS 배지에서 배양하였다. 세포(약 90%의 밀도)를 3일마다 1:3의 비로 희석 배양하였다; 세포를 생물검정을 위해 1개월 내에 사용하거나 액체 질소로부터 재 해동시켰다. 재 해동된 세포는 생물검정 전에 거의 1주일 동안 배양해야만 한다.
2. 생물검정(IL-17A) 실험 절차
2.1 Hs27 세포를 4분 동안 950rpm에서 원심분리하고(트립신-EDTA를 완전히 제거) 수거하였다. 세포 생존성을 트리판 블루 염색에 의해 분석하였고, 생존성이 80% 초과인 세포만을 실험을 위해 사용하였다.
2.2 배지를 96웰 플레이트에 50㎕/웰로 부가하였다.
2.3 Hs27 세포를 DMEM+10% FBS로 희석시키고 96웰 플레이트에 부가하였다.
2.4 25㎕의 IL-17 인간 항체를 각 이중 웰에 부가하고 초기 농도를 10nM로 하여 항체를 1:3의 비로 희석하였다.
2.5 25㎕의 재조합 인간 IL-17A를 최종 농도가 0.3nM가 되도록 각 웰에 부가하였다.　96웰 플레이트를 1분 동안 500rpm로 원심분리하였다.
2.6 세포를 37℃에서 17시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
2.7 세포 배양 상청액을 수거하였고, GROα의 농도를 인간 CACL1/GROα Quantikine 키트를 (제조업자의 지시에 따라서) 사용하여 상청액 중에서 검출하였다.
3. 생물검정(IL-17A/F)의 실험 절차
IL-17A/F 생물검정의 절차는 IL-17A를 IL-17A/F로 대체시켰다는 점을 제외하고는 IL-17A 생물검정의 절차와 유사하다.
실험 결과
1. 상기 방법에 따라서, 실시예 1에서 수득된 하이브리도마를 스크리닝하였고, 그 결과는 다음과 같다:
항체 huIL-17 생물검정
(IC50, nM)		 huIL-17A/F 생물검정
(IC50, nM)
릴리 mAb 0.04 0.69
노바티스 mAb 0.22 1.15
IL17-mAb049 0.04 0.46
결론: 하이브리도마로부터 수득된 항체 IL17-mAb049의 생물학적 활성은 양성 항체 릴리 mAb의 생물학적 활성과 동등하고 노바티스 mAb의 생물학적 활성보다 우수하다.
2. 상기 방법에 따라서, 실시예 2로부터 수득된 인간화된 항체를 검출하였고, 그 결과는 다음과 같다.
항체 huIL-17 생물검정
(IC50, nM)		 huIL-17A/F 생물검정
(IC50, nM)		 시노몰구스 IL-17A
릴리 mAb (hu) 0.033 0.83
Hu049-17 0.061 0.406 0.03
Hu049-18 0.04 0.684 0.033
Hu049-19 0.066 0.411 0.039
Hu049-20 0.065 0.674 0.028
결론
상기 결과들은 모든 인간화된 항체들이 세포 생물학적 활성을 나타냄을 보여준다. Hu049-17, Hu049-18, Hu049-19 및 Hu049-20은 양성 항체의 IC50(0.04nM)과 유사한 IC50(0.04nM 내지 0.066nM)을 갖는다. 또한, 이러한 항체들은 시노몰구스 IL-17A과의 교차반응을 나타낸다(IC50은 0.03nM 내지 0.039nM이다). 인간 IL-17A/F에 대한 활성은 IL-17A에 대한 활성보다 약 10배 약하다.
시험 실시예 5 생체내 인간 IL -17의 중화 시험
목적
생체내 중화 시험의 목적은, 본 발명의 항체가 IL-17 수용체(예: hIL-17RA)에의 IL-17 결합을 생체내에서 억제하여, IL-17에 의해 유도된 CXCR1 발현을 억제할 수 있는 가를 검증하는 것이다.
재료 및 장비
단백질: 인간 IL-17A(hIL-17A)를 Genbank 수탁번호 NP-002181을 갖는 인간 IL-17A 단백질 서열을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
양성 대조군으로서, 릴리 인간화된 항-IL-17 항체(릴리 mAb (hu),)를 미국 특허 제7,838,638B2(LY 2439821)호에 개시된 인간화된 서열에 따라서 클로닝시키고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
인간 IgG (HuIgG): (밀리포어 카탈로그 번호 AG711).
동물: 7주령 C57/B6 수컷 마우스(SINO-BRITSH SIPPR/BK LAB. ANIMAL LTD., CO로부터 구입. 자격증 번호: SCXK(상하이) 2008-0016), 각 그룹마다 6마리 마우스.
시약: Ab 희석 용액: 시트레이트 완충제(pH 5.0): 10mM 나트륨 시트레이트, 50mM NaCl
hIL-17A 희석 용액: PBS(인산나트륨 완충제, pH 7.2)
마우스 CXCL1/KC Quantikine ELISA 키트, 6웰 플레이트, R&D 시스템, #SMKC00B.
프로토콜
1) 마우스를 각 그룹마다 6마리씩 15개 그룹으로 나누었다.
2) 100㎕의 Hu049-18 또는 대조군 항체(HuIgG 또는 릴리 mAb(hu)) 또는 희석된 용액을 각 마우스에게 복강내(I.P.) 투여하였고, 약물의 투여 용량은 각각 3000㎍/kg, 300㎍/kg, 30㎍/kg 및 3㎍/kg이었다.
3) 20시간 후, hIL-17A를 150㎍/kg로 피하(SC) 주사하였고, 각 마우스에게 100㎕를 주사하였다.
4) 2시간 후, 혈액 샘플을 수거하고, 응집할 때까지 2시간 동안 실온에 두거나, 응집할 때까지 2 내지 8℃에서 밤새 두었고, 이어서 20분 동안 2000x g로 원심분리하였다. 상청액을 폐기하였고, 즉시 검출을 수행하거나 샘플의 분취량을 -20℃에서 저장하였다. 반복된 냉동 및 해동을 피한다.
5) 단계 4로부터 수득된 샘플을 마우스 CXCL1/KC Quantikine ELISA 키트로 측정하였다.
실험 결과
상기 방법에 따라서, 실시예 2로부터 수득된 인간화된 항체 Hu049-18를 시험하였고, 그 결과는 다음과 같다.
항체(주사 용량 3000㎍/마우스) KC 평균값(pg/mll)
HuIgG 937
릴리 mAb(hu) 158
Hu049-18 145
결론
비효과적 대조 항체와 비교해, 본 발명의 Hu-049-18 항체는 기재된 조건 하에 3000㎍/마우스의 용량에서 평균 KC 수준을 약 1/6로 감소시킨다. 대조 항체와 비교해, 본 발명의 Hu-049-18 항체는 기재된 조건 하에 3000㎍/마우스의 용량에서 KC를 억제하는 동등한 능력을 나타낸다.
시험 실시예 6 생체내 항체의 반감기(T1/2) 측정
목적
생체내에서 래트 또는 시노몰구스 원숭이에서의 본 발명의 항체 Hu049-18의 약동학 파라메터를 측정하는 것.
재료 및 시약
단백질: 인간 IL-17A(hIL-17A)를 Genbank 수탁번호 NP-002181을 갖는 인간 IL-17A 단백질 서열을 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
양성 대조군으로서, 릴리 인간화된 항-IL-17 항체(릴리 mAb (hu),)를 미국 특허 제7,838,638B2호(LY 2439821)에 개시된 인간화된 서열에 따라서 클로닝하고, 발현을 위해 HEK293E 세포 내로 일시적으로 형질 감염시켰다.
인간 IgG (HuIgG): 인간 IgG, 폴리클로날, 밀리포어 카탈로그 번호 AG711
동물: 230 내지 250g SD 수컷 래트(Shanghai SLAC laboratory Animal Co., Ltd.로부터 구입, 자격증 번호: SCXK(상하이) 2007-0005)를 각 그룹마다 5마리 래트씩 정맥내 주사(IV) 그룹(발등) 및 피하 주사(SC) 그룹의 두 그룹으로 나누었다.
마카크: 2 내지 3kg 시노몰구스 원숭이(Hainan Jingang Biotechnology Co., Ltd. 자격증 번호: SCXK (HN) 2010-0001, 0000152.)
시약: 항체 희석 용액: 시트레이트 완충제(pH 5.0): 10mM 나트륨 시트레이트, 50mM NaCl
hIL-17A 희석 용액: PBS(인산나트륨 완충제, pH 7.2)
염소 항-인간 IgG(Fab-특이적) 퍼옥시다제 접합된 항체, 시그마(Sigma) 카탈로그 번호 121M4811
프로토콜
1. 래트에서의 검출 절차
(1) 생체내 투여
SD 래트를 각 그룹마다 5마리 래트씩 두 그룹(정맥내 주사(IV)(발등) 그룹 및 피하 주사(SC) 그룹)으로 무작위적으로 나누었다.
멸균 조건 하에, Hu049-18을 2.5mg/mL의 최종 농도로 시트레이트 완충용액(pH 5.0)에 용해시켰다.
각 래트에게 5mg/kg의 용량을 IV 또는 SC 투여하였다.
IV 그룹의 경우, 혈액 샘플을 투여 후 0분째, 5분째, 15분째, 30분째, 1시간째, 2시간째, 4시간째, 8시간째, 24시간째, 2일째, 4일째, 7일째, 10일째, 14일째, 21일째, 28일째에 매회 200㎕(80㎕ 혈청에 상당)씩 꼬리 정맥을 통해 채취하였다. SC 그룹의 경우, 혈액 샘플을 투여 후 0분째, 30분째, 1시간째, 2시간째, 4시간째, 8시간째, 12시간째, 24시간째, 2일째, 4일째, 7일째, 10일째, 14일째, 21일째, 28일째에 매회 200㎕(80㎕ 혈청에 상당)씩 꼬리 정맥을 통해 채취하였다.
혈액 샘플을 수거하고 응집할 때까지 30분 동안 실온에 두었고, 이어서 4℃에서 5분 동안 10000x g로 원심분리하였다. 상청액을 즉각적 시험을 위해 수거하거나, 샘플의 분취량을 -80℃에서 저장하였다. 반복된 냉동 및 해동을 피한다.
(2) 단계 (1)에서 수득한 혈청 샘플을 ELISA로 검출하였다.
1) 표준 곡선
a) 미세역가 플레이트를 4℃에서 밤새 1㎍/ml의 스트렙타비딘으로 직접 피복시켰다.
b) 미세역가 플레이트를 2% BSA(v/v)를 함유하는 300㎕의 PBST로 차단시키고, 미피복된 웰을 대조군으로서 차단하면서, 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
c) PBST로 3회 세척하는데, 모든 세척 단계는 Biotek(Elx 405) 자동 세척기에서 수행하였다.
d) hIL-17A(0.2㎍/ ml)을 함유하는 100㎕의 PBS를 각 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
e) PBST로 3회 세척한다.
f) Hu049-18 역가측정: 항체 희석에 의해 1:2의 비로 희석하였고, 초기 농도는 0.8㎍/ml이었다. 100㎕의 희석된 Hu049-18을 각 웰에 부가하고, 표준 곡선을 플롯팅하였다. 96웰 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
g) PBST로 3회 세척한다.
h) 100㎕의 염소 항-인간 IgG(Fab-특이적) 퍼옥시다제 접합된 항체(시그마 카탈로그 번호 121M4811)(1:5000)를 각 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
i) PBST로 3회 세척한다.　100㎕의 TMB 기질을 각 웰에 부가하고 37℃에서 5분 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다. 이어서, 100㎕ 1M HCl을 각 웰에 부가하여 반응을 종결시켰다.
j) 450nm/630nm 파장에서의 OD 값을 ELISA 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Spectra Max)에서 판독하였다.
2) 샘플 시험
a) 미세역가 플레이트를 4℃에서 밤새 1㎍/ml의 스트렙타비딘으로 직접 피복시켰다.
b) 미세역가 플레이트를 2% BSA(v/v)를 함유하는 300㎕의 PBST로 차단시키고, 미피복된 웰을 대조군으로서 차단하면서, 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
c) PBST로 3회 세척하는데, 모든 세척 단계는 Biotek(Elx 405) 자동 세척기에서 수행하였다.
d) hIL-17A(0.2㎍/ ml)을 함유하는 100㎕의 PBS를 각 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다.
e) PBST로 3회 세척한다.
f) 혈청 샘플 역가측정: 실험 전, 래트 혈청 샘플을 상이한 비에서 희석시켜, 혈청 중 항체 농도가 표준 곡선의 바로 중간에 있게 되는 최적의 희석 비를 수득하였다. Hu049-18를 25ng/mL까지 희석시키면서 혈청 샘플을 최적의 희석 비에 따라서 희석시켰다. 100㎕의 희석된 혈청 샘플 및 Hu049-18을 각 웰에 부가하고, 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다. 각 농도를 이중 웰에서 역가측정하였다.
g) PBST로 3회 세척한다.
h) 100㎕의 염소 항-인간 IgG(Fab-특이적) 퍼옥시다제 접합된 항체(시그마 카탈로그 번호 121M4811)(1:5000)를 각 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 자동온도조절기로 항온배양하였다.
i) PBST로 3회 세척한다.　100㎕의 TMB 기질을 각 웰에 부가하고 37℃에서 5분 동안 자동온도조절기로 항온 배양하였다. 이어서, 100㎕ 1M HCl을 각 웰에 부가하여 반응을 종결시켰다.
j) 450nm/630nm 파장에서의 OD 값을 ELISA 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Spectra Max)에서 판독하였다2. 마카크에 대한 검출 절차:
마카크(마카카 파사이쿨라리스(Macaca fascicularis))에 대한 생체내 검출 절차는 래트에 대한 검출 절차와 유사하였고, 차이점은 다음과 같았다: 시노몰구스 원숭이에 대한 투여는 1mg/kg의 용량에서 오로지 정맥내(IV) 주사를 통한 것이었고, 혈액 샘플은 투여 후 0분째, 5분째, 15분째, 30분째, 1시간째, 2시간째, 4시간째, 8시간째, 24시간째, 32시간째, 3일째, 4일째, 5일째, 6일째, 9일째, 12일째, 14일째, 17일째, 21일째, 28일째, 35일째에 매회 500㎕씩 꼬리 정맥을 통해 채취하였다. 원심분리 후 혈청 샘플을 3부분으로 나누고 시험을 위해 -80℃에서 냉동시켰다.
실험 결과
상기 방법에 따라서, 실시예 2로부터 수득된 인간화된 항체 Hu049-18이 검출되었고, 그 결과는 다음과 같다.
동물 투여 경로 T1/2(Hu049-18)
(일)		 T1/2(릴리 mAb(hu))
(일)
SD 래트 IV (5 mg/kg ) 9.91 5.05
SC (5 mg/kg ) 11.5 5.53
마카카 파사이쿨라리스(Macaca fascicularis) IV (1 mg/kg ) 24.4
결론
이러한 결과들은, 릴리의 대조 항체(시노몰구스 원숭이에서 양성 항체의 T1/2 값은 6.5일(iv) 및 10.3일(sc)로서 보고되었다)와 비교해, 본 발명의 항체 Hu049-18이 기재된 조건 하에 생체내 반감기를 현저하게 연장시켰음을 보여준다.

Claims (32)

  1. 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15에 제시된 LCDR 영역들로부터 선택된 0 내지 3개의 LCDR 영역을 포함하는 항체 경쇄 가변영역 및
    서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12에 제시된 HCDR 영역들로부터 선택된 0 내지 3개의 HCDR 영역을 포함하는 항체 중쇄 가변영역
    을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변영역 및 중쇄 가변영역의 CDR 영역의 수가 동시에 0이 아닌 IL-17A 결합제.
  2. 제1항에 있어서, 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15로부터 선택된 1개의 LCDR 영역을 포함하는 IL-17A 결합제.
  3. 제1항에 있어서, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12로부터 선택된 1개의 HCDR 영역을 포함하는 IL-17A 결합제.
  4. 제1항에 있어서, 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15로부터 선택된 2개의 LCDR 영역을 포함하는 IL-17A 결합제.
  5. 제1항에 있어서, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12로부터 선택된 2개의 HCDR 영역을 포함하는 IL-17A 결합제.
  6. 제1항에 있어서, 3개의 LCDR 영역을 포함하고, 여기서 LCDR1의 아미노산 서열이 서열번호 13에 제시되어 있고, LCDR2의 아미노산 서열이 서열번호 14에 제시되어 있고, LCDR3의 아미노산 서열이 서열번호 15에 제시되어 있는 IL-17A 결합제.
  7. 제1항에 있어서, 3개의 HCDR 영역을 포함하고, 여기서 HCDR1의 아미노산 서열이 서열번호 10에 제시되어 있고, HCDR2의 아미노산 서열이 서열번호 11에 제시되어 있고, HCDR3의 아미노산 서열이 서열번호 12에 제시되어 있는 IL-17A 결합제.
  8. 제1항에 있어서, 항체 경쇄 가변영역이 뮤린 κ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 FR 영역 또는 뮤린 λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 FR 영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  9. 제8항에 있어서, 항체 경쇄 가변영역의 아미노산 서열이 서열번호 2에 제시되어 있는 IL-17A 결합제.
  10. 제8항에 있어서, 뮤린 κ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변영역 또는 뮤린 λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  11. 제1항에 있어서, 항체 중쇄 가변영역이 뮤린 IgG1 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역, 뮤린 IgG2 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역, 뮤린 IgG3 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역, 뮤린 IgG4 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  12. 제11항에 있어서, 항체 중쇄 가변영역의 아미노산 서열이 서열번호 1에 제시되어 있는 IL-17A 결합제.
  13. 제11항에 있어서, 뮤린 IgG1 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역, 뮤린 IgG2 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역, 뮤린 IgG3 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역, 뮤린 IgG4 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  14. 제1항에 있어서, 항체 경쇄 가변영역이 인간 κ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 FR 영역 또는 인간 λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 FR 영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  15. 제14항에 있어서, 경쇄 FR 영역이, 아미노산 서열이 서열번호 4에 제시되어 있는 인간 생식선(germline) 경쇄 A10 FR 영역 또는 이의 변이체인 IL-17A 결합제.
  16. 제15항에 있어서, 인간 생식선 경쇄 A10 FR 영역의 변이체가 0 내지 10개의 아미노산 돌연변이를 갖는 인간 생식선 경쇄 A10 FR 영역을 의미하는 IL-17A 결합제.
  17. 제16항에 있어서, 아미노산 돌연변이가 F71Y, K49Y, Y36F 및 L47W로부터 선택된 하나 이상인 IL-17A 결합제.
  18. 제14항에 있어서, 항체 경쇄가 서열번호 9의 경쇄 또는 이의 변이체로부터 선택되는 IL-17A 결합제.
  19. 제14항에 있어서, 인간 κ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변영역 또는 인간 λ 쇄 또는 이의 변이체로부터 유래된 경쇄 불변영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  20. 제1항에 있어서, 중쇄 가변영역이 인간 IgG1 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역, 인간 IgG2 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역, 인간 IgG3 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역, IgG4 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 FR 영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  21. 제20항에 있어서, 중쇄 FR 영역이, 아미노산 서열이 서열번호 3에 제시되어 있는 인간 생식선 중쇄 VH1-18 FR 영역 또는 이의 변이체인 IL-17A 결합제.
  22. 제21항에 있어서, 변이체가 0 내지 10개의 아미노산 돌연변이를 갖는 중쇄 VH1-18 FR 영역인 IL-17A 결합제.
  23. 제22항에 있어서, 아미노산 돌연변이가 A93T, T71A, M48I, V67A, M69L, T73D 및 S76N로부터 선택된 하나 이상인 IL-17A 결합제.
  24. 제21항에 있어서, 중쇄가 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7 및 서열번호 8에 제시된 중쇄들 또는 이들의 변이체로부터 선택되는 IL-17A 결합제.
  25. 제20항에 있어서, 인간 IgG1 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역, 인간 IgG2 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역, 인간 IgG3 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역, 인간 IgG4 또는 이의 변이체로부터 유래된 중쇄 불변영역을 추가로 포함하는 IL-17A 결합제.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 IL-17A 결합제를 발현하는 벡터.
  27. 제26항에 있어서, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 IL-17A 결합제를 코딩하는 뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
  28. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 IL-17A 결합제 및 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  29. IL-17 매개 질환 또는 장애 치료용 의약의 제조에 있어서 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 IL-17A 결합제 또는 제28항에 따른 약제학적 조성물의 용도.
  30. 제29항에 있어서, 질환이 염증성 및 자가면역 질환으로부터 선택되고, 질환이 바람직하게는 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 다발성 경화증, 염증성 관절염인 용도.
  31. 치료학적 유효량의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 IL-17A 결합제 또는 제28항에 따른 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는, IL-17에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 치료 방법.
  32. 제31항에 있어서, 질환이 염증성 및 자가면역 질환으로부터 선택되고, 질환이 바람직하게는 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 다발성 경화증, 염증성 관절염인, IL-17에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 치료 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190053464A (ko) * 2017-11-10 2019-05-20 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A (Interleukin-17A)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 용도

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106336459B (zh) * 2015-07-13 2020-12-08 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗人白细胞介素-17a单克隆抗体、其制备方法和应用
CN106474470B (zh) * 2015-08-28 2020-05-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗il-17a抗体的组合物
CN107236041B (zh) * 2016-03-29 2020-07-24 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 Il-17抗体
CN107488227A (zh) * 2016-06-12 2017-12-19 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗人白细胞介素‑17a单克隆抗体、其制备方法和应用
BR112019004990A2 (pt) 2016-09-14 2019-06-04 Beijing hanmi pharm co ltd anticorpo que se liga especificamente a il-17a e fragmento funcional do mesmo
CN108359011B (zh) * 2017-07-21 2019-06-25 华博生物医药技术（上海）有限公司 靶向于白介素17a的抗体、其制备方法和应用
CN107522783B (zh) * 2017-09-30 2020-07-07 华博生物医药技术（上海）有限公司 一种抗白介素17a的抗体、其制备方法和应用
JP2022523908A (ja) 2019-01-31 2022-04-27 ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａに対する特異性を有する多重特異性抗体、ＩＬ－１７Ａを標的とする抗体、及びそれらの使用方法
EP3689907A1 (en) 2019-01-31 2020-08-05 Numab Therapeutics AG Antibodies targeting il-17a and methods of use thereof
CN114127108A (zh) * 2019-07-30 2022-03-01 江苏恒瑞医药股份有限公司 Il-17拮抗剂治疗自身免疫疾病的方法
WO2022144023A1 (zh) * 2021-01-04 2022-07-07 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗il-17抗体治疗自身免疫性疾病和炎症的方法
WO2022184114A1 (zh) * 2021-03-03 2022-09-09 苏州盛迪亚生物医药有限公司 抗il-17抗体治疗自身免疫性疾病和炎症的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080068122A (ko) * 2005-12-13 2008-07-22 일라이 릴리 앤드 캄파니 항-ｉｌ-17 항체
KR20090052347A (ko) * 2006-08-11 2009-05-25 쉐링 코포레이션 Ｉｌ-17ａ에 대한 항체
KR20110128909A (ko) * 2009-03-05 2011-11-30 아보트 러보러터리즈 Ｉｌ-17 결합 단백질

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6309636B1 (en) * 1995-09-14 2001-10-30 Cancer Research Institute Of Contra Costa Recombinant peptides derived from the Mc3 anti-BA46 antibody, methods of use thereof, and methods of humanizing antibody peptides
GB0417487D0 (en) * 2004-08-05 2004-09-08 Novartis Ag Organic compound
GB0620729D0 (en) * 2006-10-18 2006-11-29 Ucb Sa Biological products
CA2682889C (en) * 2007-04-27 2016-04-05 Zymogenetics, Inc. Antibodies that bind both il-17a and il-17f and methods of using the same
AU2008266948B2 (en) * 2007-06-13 2012-08-23 Kirin-Amgen, Inc. IL-17 heteromeric receptor complex
WO2009082624A2 (en) * 2007-12-10 2009-07-02 Zymogenetics, Inc. Antagonists of il-17a, il-17f, and il-23 and methods of using the same
NZ600584A (en) * 2008-05-05 2014-05-30 Novimmune Sa Anti-il 17a/il-17f cross-reactive antibodies and methods of use thereof
BRPI0919531A2 (pt) * 2008-09-29 2015-12-08 Roche Glycart Ag anticorpos contra il17 humana e usos dos mesmos
CA2779257C (en) * 2009-10-30 2019-03-12 Janssen Biotech, Inc. Il-17a antagonists
EA037071B1 (ru) * 2011-01-14 2021-02-02 Юсб Байофарма Срл Молекулы антител, которые связываются с il-17a и il-17f
US9655964B2 (en) * 2011-10-24 2017-05-23 Abbvie Inc. Bispecific antibodies directed against TNF-α and IL-17

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080068122A (ko) * 2005-12-13 2008-07-22 일라이 릴리 앤드 캄파니 항-ｉｌ-17 항체
KR20090052347A (ko) * 2006-08-11 2009-05-25 쉐링 코포레이션 Ｉｌ-17ａ에 대한 항체
KR20110128909A (ko) * 2009-03-05 2011-11-30 아보트 러보러터리즈 Ｉｌ-17 결합 단백질

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190053464A (ko) * 2017-11-10 2019-05-20 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A (Interleukin-17A)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 용도
WO2019093807A3 (ko) * 2017-11-10 2019-06-27 주식회사 와이바이오로직스 Il-17a 에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 용도

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