TW201520228A

TW201520228A - Ｉｌ－１７ａ結合物及其用途

Info

Publication number: TW201520228A
Application number: TW103139516A
Authority: TW
Inventors: lian-shan Zhang; jia-jian Liu; guo-qing Cao; piao-yang Sun
Original assignee: Shanghai Hengrui Pharm Co Ltd; Jiangsu Hengrui Medicine Co
Priority date: 2013-11-18
Filing date: 2014-11-14
Publication date: 2015-06-01
Also published as: RS61034B1; RU2682046C1; HRP20201432T1; MX2016006101A; RU2016122340A; KR102278487B1; AU2014350758A1; WO2015070697A1; BR112016009948A2; SI3072905T1; CN104936981A; CA2929662A1; EP3670533A1; TWI674273B; HK1212993A1; PT3072905T; CY1123493T1; CN104936981B; JP6513657B2; EP3072905A1

Abstract

本發明涉及IL-17A結合物及其用途。尤其涉及一種特異性識別IL-17A並能與IL-17A結合的人源化抗體。可用於治療因介白素-17A高表達引起的炎症和自身免疫疾病，包括銀屑癬，銀屑病關節炎，僵直性脊椎炎，多發性硬化症，炎性關節炎等。

Description

IL-17A結合物及其用途

本發明涉及一種IL-17A結合物，以及其作為治療劑特別是作為各種炎症或自身免疫疾病治療劑的用途。

介白素-17家族的細胞因子被分別命名為介白素-17A到介白素-17F。同時，人們還找到了它們的受體家族：介白素-17受體A到介白素-17受體E。這些介白素-17細胞因子可以結合到相對應的受體成員上，從而介導不同的炎症反應。

該家族中最具代表性的成員是介白素-17A。遷移到機體受感染或損傷處的淋巴細胞會分泌介白素-17A。介白素-17A一方面會誘導炎症因子以及趨化因子的表達，從而招募更多的免疫細胞到達炎症部位加劇炎症反應；另一方面，介白素-17A還會誘導一些組織修復相關因子的表達，從而加速機體的恢復。雖然介白素-17A在宿主抗感染和組織修復過程中起到擴大免疫防禦反應和保護機體的作用，但是在很多自身免疫病病人和腫瘤病人當中，介白素-17A是高表達的，過高的介白素-17A水準對於病理發展起到惡化作用，因為它可以誘導很多炎症因子的表達。很多動物實驗也證明，介白素-17A的缺失或者介白素-17A被抗體中和，可以有效抑制多種自身免疫病病理程度。有證據證明以IL-17信號為靶點治療自身免疫病，包括風濕性關節炎(RA)、銀屑病、克羅恩氏病、多發性硬化症(MS)、牛皮癬疾病、哮喘和紅斑狼瘡，均有一定的療效(參見例如Aggarwal等人，J.Leukoc.Biol.,71(1)：1-8(2002)；Lubberts等人)。

人源IL-17基因編碼是一條長達155個胺基酸的多肽。該多肽包含一個19個胺基酸的信號序列和一個132個胺基酸的成熟區域。人IL-17A是一個相對分子量為17,000Da的糖蛋白(Spriggs等人，J.Clin.Immunol.,17：366-369(1997))，以同源二聚體或異源二聚體的形式存在。同系物IL-17F可與IL-17A複合形成IL-17A/F異二聚體。IL-17F(IL-24,ML-1)與IL-17A的胺基酸順序相似性高達55%，其受體同是IL-17R。IL-17R在各種細胞，包括血管內皮細胞、外週T細胞、B細胞、成纖維細胞、髓單核細胞和骨髓基質肌細胞中普遍表達(Kolls等人，Immunity,21：467-476(2004)；Kawaguchi等人，J.Allergy Clin.Immunol.,114(6)：1267-1273(2004)；Moseley等人，Cytokine Growth Factor Rev.,14(2)：155-174(2003))。

自介白素-17A的發現至今，發現了各種抗IL-17A抗體，如CN101001645A，CN101326195A， CN101646690A，然而仍需要開發各種在炎症反應和自身免疫疾病中有效降低或抵消IL-17活性的改良的抗體。

本發明提供一種親和力更高，半衰期更長的抗IL-17A抗體。

本發明提供如下的一種IL-17A結合物，其包含：抗體輕鏈可變區，該抗體輕鏈可變區包含0-3個選自如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15所示的LCDR區；和抗體重鏈可變區，該抗體重鏈可變區包含0-3個選自如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示的HCDR區；其中抗體輕鏈可變區和重鏈可變區的CDR區數目不能同時為0。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含SEQ ID NO：13。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含SEQ ID NO：14。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含SEQ ID NO：15。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含SEQ ID NO：10。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A 結合物，其包含SEQ ID NO：11。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含SEQ ID NO：12。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含1個選自如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：15所示的LCDR區。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含1個選自如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12所示的HCDR區。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含2個選自如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：15所示的LCDR區。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含2個選自如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12所示的HCDR區。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含3個LCDR區，其中LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：13所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：14所示，LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：15所示。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其包含3個HCDR區，其中HCDR1的胺基酸序列是如SEQ ID NO：10所示者，HCDR2的胺基酸序列是如SEQ ID NO：11所示者，HCDR3的胺基酸序列是如SEQ ID NO：12所示者。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其抗體輕鏈可變區進一步包含鼠源κ、λ鏈或其變體的輕鏈FR區。在一些實施方式中，該抗體輕鏈可變區序列為：SEQ ID NO：2。進一步地，該IL-17A結合物包含鼠源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恒定區。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其抗體重鏈可變區進一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈FR區。在一些實施方式中，該抗體重鏈可變區序列為：SEQ ID NO：1。進一步地，該IL-17A結合物包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈恒定區。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A結合物，其抗體輕鏈可變區進一步包含人源κ、λ鏈或其變體的輕鏈FR區；在一些實施方式中，該抗體輕鏈可變區的輕鏈FR區是如SEQ ID NO：4所示的人種系輕鏈A10的FR區或其變體之胺基酸序列。在一些實施方式中，該抗體輕鏈可變區上的FR區序列變體指在人種系輕鏈A10的輕鏈FR區有0-10的胺基酸變化。在一些實施方式中，該抗體輕鏈可變區上的FR區序列變體的胺基酸變化選自以下的一種或多種：F71Y、K49Y、Y36F、L47W。在一些實施方式中，該抗體輕鏈選自：SEQ ID NO：9及其變體。進一步地，所述的IL-17A結合物包含人源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恒定區。

根據本發明的一些實施方式，一種IL-17A 結合物，其體重鏈可變區進一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈FR區；在一些實施方式中，所述抗體重鏈可變區上的重鏈FR區是如SEQ ID NO：3所示的人種系重鏈VH1-18的FR區或其變體之胺基酸序列；在一些實施方式中，該抗體重鏈可變區上的FR區序列變體指在VH1-18的重鏈FR區有0-10的胺基酸變化；在一些實施方式中，其中該抗體重鏈可變區上的FR序列變體的胺基酸變化選自以下的一種或多種：A93T、T71A、M48I、V67A、M69L、T73D、S76N；在一些實施方式中，其中該抗體重鏈序列選自：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8。進一步地，該IL-17A結合物包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈恒定區。

進一步地，根據本發明的一些實施方式，提供一種表達上述IL-17A結合物的載體。用載體轉染宿主細胞後，宿主細胞表達分泌IL-17A結合物。

根據本發明的一些實施方式，該載體含有編碼本發明IL-17A結合物的核苷酸。

進一步地，根據本發明的一些實施方式，還提供一種藥物組成物，其含有如上所述的IL-17A結合物和可藥用的賦形劑、稀釋或載體。

進一步地，根據本發明的一些實施方式，還提供一種如上所述的IL-17A結合物，或包含其的藥物組成物，在製備用於治療IL-17介導的疾病或病症的藥物中的用途。該疾病為炎症或自身免疫疾病；選自銀屑癬，銀屑病關節炎，僵直性脊椎炎，多發性硬化症，炎性關節炎；該炎症較佳為炎性關節炎。該炎性關節炎選自骨關節炎、類風濕性關節炎、風濕性關節炎或骨質疏鬆症，較佳風濕性關節炎。

根據本發明的一些實施方式，還提供一種如上所述的IL-17A抗體或人源化IL-17A抗體及包含其的藥物組成物，在製備用於治療IL-17介導的疾病或病症的藥物中的用途。該疾病為炎症和自身免疫疾病。其中該炎症較佳為炎性關節炎。該炎性關節炎選自：骨關節炎、類風濕性關節炎或骨質疏鬆症。

根據本發明的一些實施方式，還提供一種治療IL-17介導的疾病或病症的方法，包括向患者施用有效量的如上所述的IL-17A結合物或人源化IL-17A抗體或包含其的藥物組成物。

為了更容易理解本發明，以下具體定義了某些技術和科學術語。除顯而易見在本檔中的它處另有明確定義，否則本文使用的所有其他技術和科學術語都具有本發明所屬領域的一般技術人員通常理解的含義。

一、術語

本發明所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。

本文所述的“結合物”是指能夠與靶結合的可溶性受體或其片段或其類似物，或抗體或其片段或其類似物。本發明所述的“IL-17A結合物”，是指能特異性識別IL-17A並與IL-17A結合的抗體或其片段或其類似物。

術語“IL-17A”一般是指天然的或重組的人IL-17A，以及人IL-17A的非人同源物。除非另有指示，否則使用IL-17A的同源二聚體的分子量(例如對於人IL-17A為30KDa)計算IL-17A的莫耳濃度。

本發明所述的抗體指免疫球蛋白，是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈藉由鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。免疫球蛋白重鏈恒定區的胺基酸組成和排列順序不同，故其抗原性也不同。據此，可將免疫球蛋白分為五類，或稱為免疫球蛋白的同種型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。同一類Ig根據其鉸鏈區胺基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別，又可分為不同的亞類，如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈藉由恒定區的不同分為κ或λ鏈。

抗體重鏈和輕鏈靠近N端的約110個胺基酸的序列變化很大，為可變區(V區)；靠近C端的其餘胺基酸序列相對穩定，為恒定區(C區)。可變區包括3個高變區(HVR)和4個序列相對保守的FR區(FR)。3個高變區決定抗體的特異性，又稱為互補性決定區(CDR)。每條輕鏈可變區(LCVR)和重鏈可變區(HCVR)由3個CDR區和4個FR區組成，從胺基端到羧基端依次排列的順序為：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。輕鏈的3個CDR區，即輕鏈高變區(LCDR)，指LCDR1，LCDR2，和LCDR3；重鏈的3個CDR區，即輕鏈高變區(LCDR)，指HCDR1，HCDR2和HCDR3。發明所述的抗體或抗原結合片段的LCVR區和HCVR區的CDR胺基酸殘基在數量和位置符合已知的Kabat編號規則(LCDR1-3，HCDE2-3)，或者符合kabat和chothia的編號規則(HCDR1)。

本發明中所述的“抗原結合片段”，指具有抗原結合活性的Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2片段，或單一Fv片段。Fv抗體是含有抗體重鏈可變區、輕鏈可變區，但沒有恒定區，並具有全部抗原結合位元點的最小抗體片段。一般地，Fv抗體還包含在VH和VL結構域之間的多肽接頭，且能夠形成抗原結合所需的結構。

本發明的術語“抗原決定簇”指抗原上不連續的，由本發明抗體或抗原結合片段識別的三維空間位點。

“給予”和“處理”當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中所述流體與細胞接觸。“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組成物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。“處理”在應用於人、獸醫學或研究受試都有或者細胞、組織或器官時，包括IL-17A激動劑或IL-17A拮抗劑與人或動物受試者、細胞、組織、生理區室或生理流體的接觸。“細胞的處理”還包括其中IL-17A激動劑或IL-17A拮抗劑例如在流體相或膠體相中接觸IL-17A受體的情況，而且包括其中激動劑或拮抗劑不接觸細胞或受體的情況。

“治療”意指給予患者內用或外用治療劑，諸如包含本發明的任一種結合物的組成物，該患者具有一種或多種疾病症狀，而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，無論是藉由誘導這類症狀退化還是抑制這類症狀發展到任何臨床測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”)可根據多種因素變化，例如患者的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者產生需要療效的能力。

本文指出了人IL-17A蛋白的4種變體：

1)本文使用的術語“人IL-17A(huIL-17A)”和“天然人IL-17A”是指人IL-17A蛋白登錄號NP-002181和AAT22064的成熟形式(即殘基24-155)，及其天然變體和多態性。

2)本文使用的術語“rhIL-17A”是指重組人IL-17A為方便起見，採用該命名法指示多種形式的IL-17A，可能與文獻中的用法不匹配。

3)本文使用的術語“His-huIL-17A”是指在N-末端附加His標籤的重組人IL-17A。FLAG-huIL-17A是指在N-末端附加Flag標籤的重組人IL-17A。在某些實驗中，FLAG-huIL-17A被生物素化。

4)在本文中指出的R&D Systerms人IL-17A指從R&D Systerms購買的重組人IL-17A。

本文使用的術語“單純株抗體”是指得自單個細胞來源的純株分泌的抗體。單純株抗體是高度特異性的，針對單個抗原表位。該細胞不限於真核的，原核的或噬菌體的純株細胞株。

本文的單純株抗體具體包括“嵌合”抗體，其中重鏈和/或輕鏈的部分與源於特定物種或屬於特定抗體類或亞類的抗體的相應序列相同或同源，而一條或多條鏈的其餘部分與源於另一物種或屬於另一抗體類或亞類的抗體的相應在序列相同或同源，以及此種類抗體的片段，只要它們具有所需生物學活性。

本文使用的術語“人源化抗體”是本發明鼠抗的一種可變區改造形式，具有源自(或基本上源自)非人類抗體(較佳小鼠單純株抗體)的CDR區，和基本源自人源抗體序列的FR區和恒定區；即將鼠抗的CDR區序列嫁接到不同類型的人種系抗體構架序列上。此類構架序列可以從包括種系抗體基因序列的公共DNA資料庫或公開的參考文獻獲得。如人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在“VBase”人種系序列資料庫(在網際網路www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可獲得)，以及在Kabat，E.A. 等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。因為CDR序列負責大部分的抗體-抗原相互作用，所以可以藉由構建表達載體來表達模擬特定天然存在的抗體的性質的重組抗體。

“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“視需要包含1-3個抗體重鏈可變區”意味著特定序列的抗體重鏈可變區可以但不必須存在，存在時可以是1個，2個或3個。

本發明中所述的用重組DNA轉化宿主細胞的步驟可用本領域技術人員熟知的常規技術進行。獲得的轉化子可以用常規方法培養，轉化子表達本發明的基因所編碼的多肽。根據所用的宿主細胞，培養中所用的培養基可選自各種常規培養基。在適於宿主細胞生長的條件下進行培養。

二、人IL-17特異性抗體

本發明提供的抗IL-17A抗體及其治療炎症疾病、自身免疫疾病的用途。該疾病包括類風濕性關節炎(RA)、骨關節炎、類風濕性關節炎骨質疏鬆症、炎性纖維化(例如硬皮病、肺纖維化和硬化)、炎性腸病(例如克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎和炎性腸病)、哮喘(包括變應性哮喘)、變態反應、COPD、多發性硬化、銀屑病和癌症。

任何適於產生單純株抗體的方法都可用於產生本發明的抗IL-17A抗體。例如，可以用連接或例如天然存在的IL-17A同二聚體或其片段免疫受體動物。可以使用合適的免疫接種方法。這類方法可以包括佐劑。其他免疫刺激劑、重複加強免疫接種以及使用一種或多種免疫接種途徑。

任何合適形式的IL-17A都可以用作免疫原(抗原)，用於產生對IL-17A特異性的非人抗體，可篩選該抗體的生物學活性。激發免疫原可以為全長的成熟人IL-17A，包括連接的天然同二聚體，或其含單個表位或多個表位的肽。免疫原可以單獨使用，或者與本領域已知的一種或多種免疫原性增強劑組合使用。免疫原可以由天然來源純化，或者在遺傳修飾的細胞中產生。編碼免疫原的DNA在來源上可以是基因組的或非基因組的(例如cDNA)。可以使用適合的遺傳載體表達編碼免疫原的DNA，該載體包括但不限於腺病毒載體、腺相關病毒載體、桿狀病毒載體、質體和非病毒載體。

生產本發明的抗人IL-17A抗體的示例性方法描述於實施例1。

三、IL-17A特異性抗體的人源化

人源化抗體可以選自任何種類的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE。在一個實施方案中，抗體是IgG抗體。可以使用IgG的任何同種型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。還設想了IgG同種型的變體。人源化抗體可以包含來自一個以上的種類或同種型的序列。藉由用下文實施例中描述的生物學測定篩選抗體易於實現必需恒定結構域序列的最適化，以產生所需生物學活性。

同樣，任一類輕鏈都可以在本文的化合物和方法中使用。具體地說，κ、λ或其變體在本發明的化合物和方法中是有用的。

人源化本發明的抗人IL-17A抗體的示例性方法描述於實施例2。

以下結合實施例進一步描述本發明，但這些實施例並非限制本發明的範圍。

本發明實施例或測試例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。參見Sambrook等，分子選殖，實驗室手冊，冷泉港實驗室；當代分子生物學方法，Ausubel等著，Greene出版協會，Wiley Interscience，NY。未注明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。

實施例1 抗人IL-17A的小鼠單純株抗體

如下獲得人IL-17A(hIL-17A)的單純株抗體。將6-8週齡的雌性BALB/c小鼠(上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生產許可證號：SCXK(滬)2008-0016)和6-8週齡的雌性SJL小鼠(北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許可證號：SCXK(京)2012-0001)分成高低劑量兩組，每組各10隻BALB/c小鼠和10隻SJL小鼠。

高低劑量組分別免疫接種一系列已由HEK293E(293-EBNA,Invitrogen,Lot Num：493985)表達系統生產的N-末端附加His標籤的天然hIL-17A的變體(His-hIL-17A，其中hIL-17A的胺基酸序列可參見Genbank人IL-17A蛋白登錄號NP-002181，表達得到的蛋白用Ni親和管柱(Superdex)75 SEC sequentially純化)。接種時間為第0、14、35、56天。

第0天高劑量組給予皮下(sc)注射500μg/鼠His-huIL-17A，同時腹膜內(IP)注射弗氏完全佐劑(CFA)。第14和35天sc注射25μg/鼠His-hIL-17A，同時IP注射弗氏不完全佐劑(IFA)。第56天在進行脾細胞融合前加強免疫，IP注射25μg/鼠His-hIL-17A的生理鹽水溶液。低劑量組的免疫注射時間及方法與高劑量組相同，不同的是第0天給予的His-hIL-17A劑量為10μg/鼠，第14、35和56天給予的His-hIL-17A劑量為5μg/鼠。

於第22和43天進行血檢，用測試例1的ELISA方法檢測小鼠血清，確定小鼠血清中的抗體效價。於第56天選擇血清中抗體效價高的小鼠進行脾細胞融合，採用最適化的PEG介導的融合步驟將脾淋巴細胞與骨髓瘤細胞Sp2/0細胞(ATCC® CRL-8287^TM)進行融合得到融合瘤細胞。

免疫方案步驟如下：

方案1，高劑量，10隻BALB/c和10隻SJL小鼠，步驟如下：

方案2，低劑量，步驟如下：

用測試例1抗原抗體間接ELSIA實驗進行融合瘤細胞的初次篩選。檢測陽性的細胞株藉由有限稀釋得到單純株細胞株。

對獲得的單純株細胞株進行進一步篩選，包括：1、受體封閉試驗，見測試例2，結果見表5，篩選得到活性優於陽性對照的單純株細胞株IL17-mAb049；2、親和性檢測：見測試例3，結果見表6，顯示本發明篩選得到的單純株細胞株IL17-mAb049活性相當或優於陽性對照；3、細胞水準生物測定(GRO α分析)：見測試例4，結果見表8，顯示本發明篩選得到的單純株細胞株IL17-mAb049活性相當或優於陽性對照。

本發明在第一次和第二次篩選後進一步研究了12個單純株，並藉由表位元分組、生物學活性檢測挑選了1個先導單純株(lead mAb)IL17-mAb049。以下為IL-17A鼠抗體mAb049的(IL-17 mAb)重鏈(VH)和輕鏈(LH)的具體序列：

IL-17 mAb049 VH SEQ ID NO：1

IL-17mAb049 VL SEQ ID NO：2

實施例2 鼠源抗人IL-17A抗體的人源化

鼠源抗人IL-17A單純株抗體mAb049的人源化基本上如本領域許多文獻公示的方法進行。簡言之，使用人恒定結構域替代親代(鼠源抗體)恒定結構域，根據鼠源抗體和人抗體的同源性選擇人種抗體序列，進行人源化。

1、鼠源抗IL-17A抗體的CDR區

VH/VL CDR的胺基酸殘基由Kabat編號系統確定並注釋。本發明中鼠源mAb049的CDR序列如下表所述：

2、選擇人種系FR區序列

在所獲得的鼠源抗體VH/VL CDR典型結構的基礎上，將重、輕鏈可變區序列與抗體資料庫比較，獲得同源性高的人種系重鏈為VH1-18(SEQ ID NO：3)，輕鏈為A10 (SEQ ID NO：4)作為人源化FR區序列。具體序列如下：

VH1-18 SEQ ID NO：3

A10 SEQ ID NO：4

3、人源化的抗體的設計：

確定形成環構象和VH介面的胺基酸殘基，考慮到如下等因素，Q1E突變以消除N-末端焦谷胺酸的形成，突變也包括那些保持所選VH家族內一致性的突變，以維持CDR的典型結構和VH/VL介面，可避免N-糖基化模式(N-{P}-S/T)在人源化結構中出現等。

對鼠抗mAb049的可變區進行人源化突變設計總結如下：

4、人源化抗體的表達和純化

用基因重組方法分別選殖、表達、純化上述抗體，經ELISA、受體結合抑制實驗、Biacore、細胞活性檢測等，最終選出的性能好的人源化抗體。具體抗體如下表：

mAb049人源化序列具體序列列舉如下：

Hu049-17.VH SEQ ID NO：5

Hu049-18.VH SEQ ID NO：6

Hu049-19.VH SEQ ID NO：7

Hu049-20.VH SEQ ID NO：8

Hu049VL SEQ ID NO：9

實施例3 人源化抗IL-17抗體的體內藥效藥物代謝檢測

人IL-17能結合並刺激小鼠IL-17受體，導致雄性小鼠KC(CXCL1)趨化因子的提高和隨後的分泌。進行時間和劑量變化實驗來鑒定人IL-17的最佳劑量和小鼠KC誘導的最佳時機(參見測試例5)。這些實驗表明人IL-17的150mg/kg劑量和IL-17給藥後2小時的時間引起小鼠血清中KC的最高水準。本發明的全長抗體以3、30、300、3000μg/kg，在人IL-17的皮下注射前20小時對小鼠靜脈內施用。在人IL-17給藥2小時後，處死小鼠並使用市售試劑盒，根據製造商的說明書(Mouse CXCL1/KC Quantikine ELISA Kit,R&D SYSTEM,#SMKC00B)藉由ELISA來測定KC的水準。同種型匹配的抗體用作陰性對照。抗體阻斷了人IL-17刺激小鼠IL-17受體的能力，以導致劑量依賴的方式抑制小鼠KC的升高。與無效應的對照抗體相比，本發明抗體Hu049-18在描述的條件下以3000μg/小鼠的劑量降低平均 KC水準至約1/6。

在大鼠和獼猴中經靜脈內或皮下給藥後確定本發明抗體Hu049-18的血清藥物動力學(參見測試例6)。大鼠經5mg/kg靜脈給藥後，半衰期為9.91天，經5mg/kg皮下注射給藥後，半衰期為11.5天。獼猴經1mg/kg靜脈給藥後，半衰期24.4天。

測試例

測試例1 間接ELSIA

實驗目的：

選擇間接ELISA方法，用於確保識別構象型表位的抗體的選擇，篩選本發明實施例1中小鼠融合瘤細胞。

實驗材料：

人IL-17A(hIL-17A)：根據本領域已知的方法利用Genbank人IL-17A蛋白登錄號NP-002181進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

人IL-17A/F(異二聚體，hIL-17A/F)：根據本領域已知的方法利用Genbank人IL-17A蛋白登錄號NP-002181和人IL-17F蛋白登錄號NP_443104進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

作為陽性對照的Lilly及Novartis的鼠源anti-IL-17抗體(Lilly mAb,Novartis mAb)分別根據US 7,838,638 B2(LY 2439821)和US 7,807,155 B2(AIN 457)提供的鼠源序列進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

本發明實施例1中小鼠融合瘤細胞的鼠源抗體mAbs。

實驗方法：

1、直接包覆1μg/ml的鏈黴素親和素，4℃過夜；

2、用300μl含2% BSA(v/v)的PBST封閉微量滴定板條，37℃恒溫封閉1h，同時封閉無包覆的空白孔作對照；

3、PBST洗滌3次，所有的洗滌在Biotek(Elx 405)自動洗板機上操作；

4、每孔加入100μl含hIL-17A或hIL-17A/F(1μg/ml)的PBS，37℃恒溫孵育1h；

5、PBST洗滌3次；

6、陽性對照Lilly mAb和Novartis mAb或本發明中本發明的鼠源抗體mAbs滴定：按照1：5倍比稀釋，初始濃度為1μg/ml，每孔加入100μl稀釋的陽性對照或本發明鼠源抗體，37℃恒溫孵育1h。每個滴定濃度設重複孔；

7、PBST洗滌3次；

8、每孔加入100μl HRP抗鼠二抗(Santa Cruz Cat.No.sc-2005)(1：5000)，37℃恒溫孵育1h；

9、PBST洗滌3次。每孔加入100μl TMB基質，37℃恒溫孵育5min，隨後每孔加入100μl 2M H₂SO₄中止反應；

10、ELISA酶標儀(Molecular Devices,Spectra Max)讀取450nm波長處的OD值。

11、將鼠源抗體mAbs測得的OD值與陽性對照比較，篩選得到比值大於1的單純株細胞株，其中包括 IL17-mAb049。

測試例2 IL-17受體封閉試驗(RBA)

實驗目的：

進行受體封閉試驗的目的是為了挑選可封閉IL-17結合到IL-17受體(如hIL-17 RA)上的抗體。該試驗以功能測試為基礎，可用於融合瘤細胞高通量篩選。

實驗材料與儀器：

抗人Fc抗體(羊抗人IgG-Fc片段特異性抗體(購自Jackson Immunoresearch,109-005-008))

本發明中使用的人IL-17 RA-Fc是根據本領域已知的方法利用Genbank ID號ADY18334.1提供的人IL-17受體胺基酸序列進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達得到的，其Fc片段取自人IgG1。

mIgG：鼠源IgG(Millipore Cat.No.PP54)，作為空白對照

ELISA酶標儀：Molecular Devices,Spectra Max

本發明實施例1中得到的鼠源單純株細胞株。

實驗方法：

1、直接包覆10μg/ml抗人Fc抗體孵育，4℃過夜；

2、用300μl含2% BSA的PBST封閉微量滴定板條，37℃恒溫封閉1小時，同時封閉無包覆的空白孔作對照；

4、每孔加入100μl含IL-17 RA-Fc(60ng/ml)的PBS，37℃恒溫下孵育2h；

5、PBST洗滌3次；

6、陽性對照Lilly mAb和Novartis mAb或本發明中抗體，按照1：5倍比稀釋，初始濃度為40μg/ml，mIgG用相同方法稀釋，每孔加入50μl稀釋的陽性對照或本發明中抗體或mIgG，同時在稀釋的陽性對照或本發明抗體中加入50μl 0.2nM生物素標記的IL-17A，輕輕混勻，37℃恒溫孵育1h。

7、PBST洗滌3次；

8、每孔加入100μl HRP標記的鏈黴素親和素複合物(1：5000)，37℃恒溫孵育1h；

10、ELISA酶標儀讀取450nm波長處的OD值。

11、計算待測抗體對封閉IL-17結合到IL-17受體的IC₅₀值。

根據OD值對抗體濃度梯度曲線，求得IC50 值(OD值減少50%時的抗體濃度(nM)，即RBA)。

實驗結果：

按以上方法，對實施例1中得到的融合瘤細胞進行篩選，得到鼠源單純株抗體，命名為IL17-mAb049，結果如下：結論：融合瘤篩選得到的鼠源抗體IL17-mAb 049活性比陽性抗體Lilly mAb和Novartis mAb均要好。

測試例3 親和性檢測

實驗目的：

本實驗使用BIACORE方法測定抗原-抗體結合動力學及親和力。

實驗材料與儀器：

1.1 蛋白：

人IL-17A/F(異二聚體，hIL-17A/F)：根據本領域已知的方法利用Genbank人IL-17A蛋白登錄號 NP_002181和人IL-17F蛋白登錄號NP_443104進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

小鼠IL-17A(Mu IL-17A)、大鼠IL-17A(Rat IL-17A)：分別根據本領域已知的方法利用Genbank小鼠IL-17A蛋白登錄號NP_034682和大鼠IL-17A蛋白登錄號NP_001100367進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

作為陽性對照的Lilly人源化anti-IL-17抗體(Lilly mAb(hu)，)根據US 7,838,638 B2(LY 2439821)提供的人源化序列進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

本發明實施例1中得到的鼠源單純株細胞株。

本發明實施例2中得到的人源化IL-17抗體。

1.2 BIACORE型號：BIACORE X 100，GE；

1.3 BIACORE晶片和試劑(以下為商品名，無公認的中譯文)：

實驗方法：

1、本發明抗體在CM5晶片的固定：現配1：1 50mM NHS：200mM EDC，以10μl/min速率注射入FC2(Flow cell 2)通道，注射時間7min，啟動CM5感測器晶片。本發明抗體溶於10mM乙酸鈉緩衝液中，濃度為30μg/ml，PH 5.0，以5μl/min注入啟動的晶片中(HBS-EP流動相緩衝液：10mM HEPES,150mM NaCl,3.4mM EDTA,0.005% surfactant P20,pH 7.4)。用1M ethanolamine以10μl/min速率注射 7min，以封閉殘留的主動耦合位置。大約8000RU產生。

2、結合動力學測定：以FC1(Flow cell 1)為參照通道，FC2(Flow cell 2)為樣品通道，300RU時在FC2通道分別捕獲鼠源或人源化的對照抗體或本發明抗體，隨後注射不同濃度的IL-17(包括hIL-17A，MuIL-17，Rat IL-17)。循環條件為：在FCs所有通道中以30μl/min注射3min分析物，解離時間為20min，10mM Glycine,pH 1.5注射60s(速率為10μl/min)進行表面再生。藉由Biacore X100 evaluation software ver 2.0(Biacore)計算捕獲抗體的信號和無捕獲抗體的信號差值，運行緩衝液(running buffer)為10mM Hepes,650mM NaCl,3mM EDTA,0.05% Tween-20。

實驗結果：

1、按以上方法，對實施例1中得到的融合瘤細胞進行篩選，結果如下：結論：融合瘤篩選得到的鼠源抗體IL17-mAb049同人IL-17A的親和力和陽性抗體Lilly mAb相當，比Novartis mAb要好。

2、按以上方法，對實施例2中得到對人源化IL-17抗體進行檢測，結果如下：結論：人源化後抗體的親和力比Lilly’s的陽性抗體(1.48E-11M)，提高了10倍。

測試例4 細胞水準生物測定(GRO α assay)

實驗目的：

下面實驗用抗-IL-17A抗體抑制IL-17刺激Hs27細胞分泌GRO α來檢測抗-IL-17A抗體的細胞生物學活性。

實驗材料與儀器：

Hs27細胞：ATCC Cat.No.CRL-1634(備註：細胞培養超過6週則不推薦用於bioassay實驗)；Hs27細胞培養基：DMEM+10%FBS

DMEM：ATCC Cat.No.30-2002；FBS：GIBCO Cat.No.10099,lot 8122818；重組人IL-17A(rhIL-17A)：R&D Systems Cat.No.317-ILB,lot SOA161109B；重組人IL-17A/F(rhIL-17A/F)：R&D System Cat No.5194-IL/CF,lot RXT101109A；人CXCL1/GRO alpha Quantikine PharmPak kit：R&D system Cat.No.PDGR00

設備：Biotek ELx808酶標儀。

本發明實施例1中得到的鼠源單純株細胞株。

本發明實施例2中得到的人源化IL-17抗體。

實驗方法：

1、Hs 27細胞培養：

Hs27細胞用50ml DMEM+10%FBS培養基在T175培養瓶中培養；每隔3天細胞(密度約90%)按1：3比例稀釋培養；培養的細胞在一個月之內進行bioassay實驗，或從液氮中重新凍融；新凍融的細胞需培養近一週之後方可用於進行bioassay實驗。

2、Bioassay(IL-17A)實驗步驟

2.1 950rpm離心4min(完全去除trypsin-EDTA)，收集Hs27細胞。用台盼藍染色分析細胞活力，活力>80%方可用於實驗；2.2 培養基按50μl/孔加入96孔板中；2.3 Hs27用DMEM+10%FBS稀釋，按10000細胞/50μl/孔加入96孔板中；2.4 在重複孔中加入25μl IL-17人源抗體，抗體按1：3倍比稀釋，初始濃度為10nM； 2.5 每孔加入25μl重組人源IL-17A。IL-17A的最終濃度為0.3nM。96孔板按500rpm離心1min；2.6 細胞在37℃恒溫孵育17h；2.7 收集細胞培養基上清液，用人CACL1/GRO alpha Quantikine kit(按廠家說明書操作)檢測上清液中GRO α的濃度；

3、Bioassay(IL-17A/F)實驗步驟：

IL-17A/F bioassay的操作步驟類似於IL-17A bioassay。不同之處為用IL-17A/F替代IL-17A。

實驗結果：

1、按以上方法，對實施例1中得到的融合瘤細胞進行篩選，結果如下：結論：融合瘤篩選得到的抗體IL17-mAb049生物學活性和陽性抗體Lilly mAb相當，比Novartis mAb要好。

2、按以上方法，對實施例2中得到的人源化抗體進行檢測，結果如下：結論：上述結果表明，人源化以後的抗體，都具有細胞生物學活性。Hu049-17、18、19、20的IC50(0.04nM-0.066nM)和陽性抗體(0.04nM)一樣。此外，這些抗體和cynomolgus IL-17A有交叉反應(IC50為0.03nM-0.039nM)。對人IL-17A/F的活性比IL-17A弱大約10倍。

測試例5 人IL-17的體內中和實驗

實驗目的：

進行體內中和試驗的目的是為了驗證本發明的抗體在體內可封閉IL-17結合到IL-17受體(如hIL-17 RA)，從而抑制IL-17誘導的CXCR1表達。

實驗材料與儀器：

蛋白：人IL-17A(hIL-17A)：根據本領域已知的方法利用Genbank人IL-17A蛋白登錄號NP-002181進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

作為陽性對照的Lilly的人源化anti-IL-17抗體(Lilly mAb(hu))分別根據US 7,838,638 B2(LY 2439821)提供的人源化序列進行選殖，並瞬時轉染HEK293E細胞進行表達。

人IgG(HuIgG)：(Millipore Cat.No.AG711)。

動物：7週齡雄鼠C57/B6(上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生產許可證號：SCXK(滬)2008-0016)，每組6隻。

試劑：Ab稀釋溶液：檸檬酸鹽緩衝液(pH 5.0)：10mM檸檬酸鈉鹽，50mM NaCl

hIL-17A稀釋溶液：PBS(磷酸鈉鹽緩衝液，pH 7.2)。

小鼠CXCL1/KC Quantikine ELISA Kit，6孔板，R&D SYSTEM,#SMKC00B。

實驗方法：

1)小鼠隨機分為15組，每組6隻。

2)每隻小鼠腹膜內給藥(I.P.)100uL Hu049-18或對照抗體(HuIgG或Lilly mAb(hu))或稀釋溶液，給藥濃度分別為3000μg/kg,300μg/kg,30ug/kg和3μg/kg。

3)20小時後，皮下注射(S.C.)150μg/kg hIL-17A，每隻小鼠注射100uL。

4)2小時後，收集血樣，室溫下置放2小時至凝集，或2-8℃過夜至凝集，然後2000 x g離心20分鐘。棄上清，立即進行實驗或樣品等分放置-20℃貯存。避免反複凍融。

5)用小鼠CXCL1/KC Quantikine ELISA Kit對步驟4得到的樣品進行測定。

實驗結果：

按以上方法對實施例2得到的人源化抗體Hu049-18進行檢測，結果如下：結論：與無效應的對照抗體相比，本發明抗體Hu-049-18在描述的條件下以3000μg/小鼠的劑量降低平均KC水準至約1/6。與對照抗體相比，本發明抗體Hu049-18在描述的條件下以3000μg/小鼠的劑量對小鼠KC水準的抑制能力相當。

測試例6 體內抗體的半衰期(T1/2)檢測

實驗目的：

為了檢測本發明抗體Hu049-18在大鼠或獼猴體內藥物代謝動力學參數。

實驗材料與試劑：

人IgG(HuIgG)：Human IgG,Polyclonal,Millipore Cat.No.AG711

動物：230-250g SD雄性大鼠(上海斯萊克實驗動物有限責任公司，動物生產許可證號：SCXK(滬)2007-0005)，分足背靜脈注射(IV)組和皮下注射(SC)組兩組，每組5隻

獼猴：2-3kg食蟹猴(海南金港生物技術股份有限公司，動物生產許可證號：SCXK(HN)2010-0001,0000152.)

試劑：抗體稀釋溶液：檸檬酸鹽緩衝液(pH 5.0)：10mM檸檬酸鈉鹽，50mM NaCl

hIL-17A稀釋溶液：PBS(磷酸鈉鹽緩衝液，pH 7.2)

羊抗人IgG(Fab特異性)過氧化物酶偶聯抗體，Sigma Cat.No.121M4811

實驗方法：

1、大鼠體內檢測步驟：

(1)體內給藥

SD大鼠隨機分為2組(分足背靜脈注射(IV)組和皮下注射(SC)組)，每組5隻；無菌條件下，Hu049-18溶於檸檬酸鹽緩衝液(pH 5.0)中，終濃度為2.5mg/mL；每隻大鼠IV或SC給藥，給藥劑量為5mg/kg；IV組按時間點0、5、15、30min、1、2、4、8、24hr、2、4、7、10、14、21、28d尾靜脈取血，每次200uL(相當於取血清80uL)；SC組按時間點0、30min、1、2、4、8、12、24hr、2、4、7、10、14、21、28d尾靜脈取血，每次200uL(相當於取血清80uL)；收集的血樣在室溫下置放半小時至凝集，然後4℃下10000×g離心5分鐘。收集上清，立即進行實驗或樣品等分放置-80℃貯存。避免反複凍融。

(2)用步驟(1)中得到是血清樣品進行ELISA檢測

1)標準曲線

a)直接包覆1μg/ml的鏈黴素親和素，4℃過夜；

b)用300μl含2% BSA的PBST封閉微量滴定板條，37℃恒溫封閉1h，同時封閉無包覆的空白孔作對照；

c)PBST洗滌3次，所有的洗滌在Biotek(Elx 405)自動洗板機上操作；

d)每孔加入100ul含hIL-17A(0.2μg/mL)的PBS，37℃恒溫孵育1h；

e)PBST洗滌3次；

f)Hu049-18滴定：用抗體稀釋液按照1：2倍比稀釋，初始濃度為0.8μg/ml，每孔加入100μl稀釋的Hu049-18，用於繪製標準曲線。37℃恒溫孵育1h。

g)PBST洗滌3次；

h)每孔加入100μl羊抗人IgG(Fab特異性)過氧化物酶偶聯抗體(Sigma Cat.No.121M4811)(1：5000)，37℃恒溫孵育1h；

i)PBST洗滌3次。每孔加入100μl TMB基質，37℃恒溫孵育5min，隨後每孔加入100μl 1M HCl中止反應；

j)ELISA酶標儀(Molecular Devices,Spectra Max)讀取450nm/630nm波長處的OD值。

2)樣品測定

a)直接包覆1μg/ml的鏈黴素親和素，4℃過夜；b)用300μl含2% BSA的PBST封閉微量滴定板條，37℃恒溫封閉1h(1小時)，同時封閉無包覆的空白孔作control對照；c)PBST洗滌3次，所有的洗滌在Biotek(Elx 405)自動洗板機上操作；d)每孔加入100μl含hIL-17A(0.2μg/mL)的PBS，37℃恒溫孵育1h；e)PBST洗滌3次；f)血清樣品滴定：實驗前取一個大鼠血清樣品，按照不同比例稀釋，得到一個血清中抗體濃度正好在標準曲線中間位置的最佳稀釋比例，將血清樣品按照最佳稀釋比例進行稀釋，同時Hu049-18稀釋至25ng/mL。每孔加入100μl稀釋的樣品血清和Hu049-18，37℃恒溫孵育1h。每個滴定濃度設重複孔；g)PBST洗滌3次；h)每孔加入100μl羊抗人IgG(Fab特異性)過氧化物酶偶聯抗體(Sigma Cat.No.121M4811)(1：5000)，37℃恒溫孵育1h；i)PBST洗滌3次。每孔加入100μl TMB基質，37℃恒溫孵育5min，隨後每孔加入100μl 1M HCl中止反應；j)ELISA酶標儀(Molecular Devices,Spectra Max)讀取450nm/630nm波長處的OD值。

2、獼猴體內檢測步驟：

獼猴(食蟹猴)的體內檢測步驟類似於大鼠的體內檢測步驟，不同的是，食蟹猴的給藥方式僅為靜脈注射(IV)給藥，劑量為1mg/kg，靜脈取血時間為0、5、15、30min、1、2、4、8、24、32hr、3、4、5、6、9、12、14、17、21、28、35d，每次采血500μL，離心得到的血清樣品分成3份(確保2份的血清樣品含量為60μL)，-80℃凍存待測。

實驗結果：

按以上方法，對實施例2中得到的人源化抗體Hu049-18進行檢測，結果如下：結論：以上結果表明，與Lilly的對照抗體相比(陽性抗體在食蟹猴體內T1/2報導值為6.5天(iv)和10.3天(sc)，本發明抗體Hu049-18在描述的條件下其體內半衰期顯著延長。

<110> 上海恆瑞醫藥有限公司、江蘇恆瑞醫藥股份有限公司

<120> IL-17A結合物及其用途

<130> 330271CG

<160> 15

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 123

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 1

<210> 2

<211> 106

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 2

<210> 3

<211> 98

<212> PRT

<213> 人VH1-18

<400> 3

<210> 4

<211> 95

<212> PRT

<213> 人A10

<400> 4

<210> 5

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mAb049人源化序列Hu049-17.VH

<400> 5

<210> 6

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mAb049人源化序列Hu049-18.VH

<400> 6

<210> 7

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mAb049人源化序列Hu049-19.VH

<400> 7

<210> 8

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mAb049人源化序列Hu049-20.VH

<400> 8

<210> 9

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mAb049人源化序列Hu049VL

<400> 9

<210> 10

<211> 5

<212> PRT

<213> 小鼠VH CDR1

<400> 10

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠VH CDR2

<400> 11

<210> 12

<211> 14

<212> PRT

<213> 小鼠VH CDR3

<400> 12

<210> 13

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠VL CDR1

<400> 13

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠VL CDR2

<400> 14

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 小鼠VL CDR3

<400> 15

Claims

一種IL-17A結合物，其包含：抗體輕鏈可變區，該抗體輕鏈可變區包含0-3個選自如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15所示的LCDR區；和抗體重鏈可變區，該抗體重鏈可變區包含0-3個選自如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示的HCDR區；其中該抗體輕鏈可變區和重鏈可變區的CDR區的數目不能同時為0。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其包含1個選自如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15所示的LCDR區。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其包含1個選自如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示的HCDR區。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其包含2個選自如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15所示的LCDR區。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其包含2個選自如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示的HCDR區。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其包含3個LCDR區，其中LCDR1的胺基酸序列是如SEQ ID NO：13所示者，LCDR2的胺基酸序列是如SEQ ID NO：14所示者，LCDR3的胺基酸序列是如SEQ ID NO：15所示者。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其包含3個HCDR區，其中HCDR1的胺基酸序列是如SEQ ID NO：10所示者，HCDR2的胺基酸序列是如SEQ ID NO：11所示者，HCDR3的胺基酸序列是如SEQ ID NO：12所示者。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其抗體輕鏈可變區進一步包含鼠源κ鏈或鼠源κ鏈變體的輕鏈FR區、或者鼠源λ鏈或鼠源λ鏈變體的輕鏈FR區。
如申請專利範圍第8項所述的IL-17A結合物，其中該抗體輕鏈可變區胺基酸序列是如SEQ ID NO：2所示者。
如申請專利範圍第8項所述的IL-17A結合物，其進一步包含鼠源κ鏈或其變體的輕鏈恒定區、或者λ鏈或其變體的輕鏈恒定區。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其抗體重鏈可變區進一步包含鼠源IgG1或其變體的重鏈FR區、IgG2或其變體的重鏈FR區、IgG3或其變體的重鏈FR區、IgG4或其變體的重鏈FR區。
如申請專利範圍第11項所述的IL-17A結合物，其中該抗體重鏈可變區胺基酸序列是如SEQ ID NO：1所示者。
如申請專利範圍第11項所述的IL-17A結合物，其進一步包含鼠源IgG1或其變體的重鏈恒定區、IgG2或其變體的重鏈恒定區、IgG3或其變體的重鏈恒定區、IgG4或其變體的重鏈恒定區。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其抗體輕鏈可變區進一步包含人源κ鏈或其變體的輕鏈FR區、或者λ鏈或其變體的輕鏈FR區。
如申請專利範圍第14項所述的IL-17A結合物，其中該輕鏈FR區是胺基酸序列是如SEQ ID NO：4所示的人種系輕鏈A10的FR區或其變體。
如申請專利範圍第15所述的IL-17A結合物，其中該人種系輕鏈A10的FR區變體是指在人種系輕鏈A10的FR區有0-10的胺基酸變化。
如申請專利範圍第16項所述的IL-17A結合物，其中該胺基酸變化選自如下的一種或多種：F71Y、K49Y、Y36F、L47W。
如申請專利範圍第14項所述的IL-17A結合物，其中該抗體輕鏈選自如SEQ ID NO：9所示的輕鏈及其變體。
如申請專利範圍第14所述的IL-17A結合物，其進一步包含人源κ鏈或其變體的輕鏈恒定區、或者λ鏈或其變體的輕鏈恒定區。
如申請專利範圍第1項所述的IL-17A結合物，其中該重鏈可變區進一步包含人源IgG1或其變體的重鏈FR區、IgG2或其變體的重鏈FR區、IgG3或其變體的重鏈FR區、IgG4或其變體的重鏈FR區。
如申請專利範圍第20項所述的IL-17A結合物，其中該重鏈FR區是胺基酸序列是如SEQ ID NO：3所示的人種系重鏈VH1-18的FR區或其變體。
如申請專利範圍第21項所述的IL-17A結合物，其中該變體指在VH1-18的重鏈FR區有0-10的胺基酸變化。
如申請專利範圍第22項所述的IL-17A結合物，其中該胺基酸變化選自如下的一種或多種：A93T、T71A、M48I、V67A、M69L、T73D和S76N。
如申請專利範圍第21項所述的IL-17A結合物，其中該抗體重鏈選自：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示重鏈或其變體。
如申請專利範圍第20項所述的IL-17A結合物，其進一步包含人源IgG1或其變體的重鏈恒定區、IgG2或其變體的重鏈恒定區、IgG3或其變體的重鏈恒定區、IgG4或其變體的重鏈恒定區。
一種表達上述申請專利範圍第1至25項中任一項所述IL-17A結合物的載體。
如申請專利範圍第26項所述的載體，其含有編碼如申請專利範圍第1至25項中任一項所述IL-17A結合物的核苷酸。
一種藥物組成物，其含有：如申請專利範圍第1至25項中任一項所述的IL-17A結合物；和可藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
一種如申請專利範圍第1至25項中任一項所述的 IL-17A結合物、或如申請專利範圍第28所述的藥物組成物，在製備用於治療IL-17介導的疾病或病症的藥物中的用途。
如申請專利範圍第29所述的用途，其中該疾病選自：炎症或自身免疫疾病。
如申請專利範圍第30項所述的用途，其中該疾病為銀屑病關節炎、僵直性脊椎炎、多發性硬化症或炎性關節炎。
一種治療IL-17介導的疾病或病症的方法，該方法包括向患者施用有效量的如申請專利範圍第1至25項中任一項所述的IL-17A結合物、或如申請專利範圍第28項所述的藥物組成物。
如申請專利範圍第32項所述的治療IL-17介導的疾病或病症的方法，其中該疾病選自：炎症或自身免疫疾病。
如申請專利範圍第33項所述的方法，其中該疾病為銀屑病關節炎、僵直性脊椎炎、多發性硬化症或炎性關節炎。