KR20160029019A - 펜토시딘 생성 저해제 - Google Patents
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Abstract
펜토시딘의 생성을 저해하는 작용을 갖는 성분으로서 보다 강한 작용을 가지며, 안전성이 높고, 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 펜토시딘 생성 저해제.
Description
본 발명은 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 펜토시딘 생성 저해제에 관한 것이다.
펜토시딘은 라이신 잔기와 아르기닌 잔기가 오탄당에 의해 가교된 구조를 갖는 종말당화산물(Advanced Glycation End products: AGEs)이다.
이 펜토시딘은 인간 경막이나 피부 콜라겐에 축적된다. 또한, 펜토시딘은 류머티즘이나 중증의 아토피성 피부염의 환자에서도 높은 값으로 검출되는 경우가 있어 이들 질환과의 관련도 시사되어 있다.
그 때문에 펜토시딘의 생성을 저해함으로써 펜토시딘이 관련된 질환의 예방이나 치료를 행할 수 있다.
그러나, 지금까지 펜토시딘의 생성을 저해하는 작용을 갖는 성분으로서는 에다라본(특허문헌 1) 등이 알려져 있지만, 효과나 안전성 등이 충분히 만족할 만한 것은 아니었다.
따라서, 본 발명은 펜토시딘의 생성을 저해하는 작용을 갖는 성분으로서 보다 강한 작용을 갖고, 안전성이 높은 것을 제공하는 것을 그 과제로 했다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해서 예의 연구한 결과, 유산균 발효물이 의외로 펜토시딘의 생성을 저해하는 작용을 갖는 것을 발견했다. 또한, 본 발명자들은 유산균 발효물 중에서도 유성분이나 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시켜서 얻어지는 유산균 발효물을 유효 성분으로 했을 경우에 펜토시딘의 생성을 저해하는 작용이 높은 것을 발견하여 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 펜토시딘 생성 저해제이다.
또한, 본 발명은 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시켜서 얻어지는 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 펜토시딘 생성 저해제이다.
또한, 본 발명은 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시켜서 얻어지는 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 펜토시딘 생성 저해제이다.
또한, 본 발명은 상기 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 펜토시딘 생성 저해제를 인간에게 투여하는 것을 특징으로 하는 인간에 있어서의 펜토시딘 생성의 저해 방법이다.
(발명의 효과)
본 발명의 펜토시딘 생성 저해제는 저농도에서도 작용이 강하고, 게다가 천연물 유래이기 때문에 안전성이 높은 것이며, 펜토시딘이 관련된 질환의 예방, 치료를 행할 수 있다.
본 발명의 펜토시딘 생성 저해제(이하, 「본 발명 저해제」라고 한다)는 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 것이다. 본 명세서에 있어서, 유산균 발효물은 유산균으로 발효 가능한 원료를 유산균으로 발효시켜서 얻어지는 것을 말한다. 또한, 유산균 발효물은 유산균을 함유하고 있어도, 하고 있지 않아도 좋고, 유산균의 배양물로부터 여과 등에 의해 유산균을 제거한 상청액 등도 포함한다.
또한, 본 명세서에 있어서, 펜토시딘 생성 저해란 생성되는 펜토시딘의 양을 감소시키는 것을 말하고, 펜토시딘 생성 저해율이란 논문(D. R. Sell and V. M. Monnier, J. Biol. Chem 264, 21597-21602, (1989))에 기재된 방법에 준하여 리보오스, 라이신염산염, 아르기닌염산염을 등량으로 혼합한 기질 용액에 있어서 피검 물질의 존재 하 또는 비존재 하에서 생성되는 펜토시딘의 양을 측정, 비교함으로써 산출하는 값이다. 보다 구체적으로는 리보오스, 라이신염산염, 아르기닌염산염을 등량으로 혼합한 기질 용액에 피검물질을 혼합하여 60℃에서 24시간 반응시킨 후, 330㎚의 여기광을 조사해서 발생하는 390㎚의 형광 강도를 측정하고, 실시예에 기재된 수 1의 식으로부터 산출되는 값이다.
유산균 발효물의 원료로서는 유산균으로 발효 가능한 것이면 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 알로에, 두유 등의 식물 유래의 원료나, 우유, 인유, 산양유 등의 짐승유, 크림, 탈지 분유 등의 동물 유래의 원료를 함유하는 배지, MRS(Man, Rogosa and Sharpe) 배지나 M-17 배지 등의 유산균용 배지 등을 들 수 있다. 이들의 원료 중에서도 우유, 인유, 산양유 등의 짐승유, 크림, 탈지 분유 등의 유성분을 함유하는 배지 또는 알로에를 함유하는 배지를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 또한, 이들 원료로서는 여과나 원심분리 처리, 용매에 의한 용해나 희석 처리, 믹서 등에 의한 분쇄 처리, 아밀라아제, 셀룰라아제, 펙티나아제, 프로테아제 등에 의한 효소 처리, 용매에 의한 추출 처리를 행해도 좋다.
또한, 발효에 사용되는 유산균도 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 아밀로보러스, 락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 부크네리, 락토바실러스 퍼멘텀, 락토바실러스 말리, 락토바실러스 파라부크네리, 락토바실러스 파라카제이, 락토바실러스 펜토서스, 락토바실러스 람노서스, 락토바실러스 비툴리누스, 락토바실러스 지에 등의 락토바실러스속, 락토코커스 락티스 등의 락토코커스속, 류코노스톡 메센테로이데스, 류코노스톡 카르노숨, 류코노스톡 시트레움, 류코노스톡 겔리둠, 류코노스톡 락티스 등의 류코노스톡속, 페디오코커스 펜토사세우스 등의 페디오코커스속, 엔테로코커스 패칼리스, 엔테로코커스 패시움 등의 엔테로코커스속, 웨이셀라 콘푸사, 웨이셀라 파라메센테로이데스, 웨이셀라 비리데센스 등의 웨이셀라속, 스트렙토코커스 써모필러스 등의 스트렙토코커스속 등의 유산균을 들 수 있다. 이들 유산균은 1종 또는 2종 이상을 사용해도 좋다.
상기 원료를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시키는 조건도 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 상기 배지에 대하여 유산균을 0.01~10질량%, 바람직하게는 0.1~5질량% 접종하여 이것을 20~45℃, 바람직하게는 25~42℃에서 1~96시간, 바람직하게는 3~96시간 배양하면 좋다.
또한, 상기 발효 시에는 배지에, 예를 들면 효모 엑기스, 클로렐라 엑기스, 비타민류, 단백질 분해물, 아미노산류, 미네랄류, 염류, 계면활성제, 지방산, 금속류 등을 첨가해도 좋다.
상기와 같이 해서 얻어지는 유산균 발효물에 대해서는 그대로 본 발명 저해제로서 사용할 수도 있지만, 공지의 여과, 투석, 침전, 원심분리 등의 정제, 분리 처리나, 또한 용매 등에 의한 추출 처리, 가열 처리를 한 것을 더 사용해도 좋다. 또한, 동결 건조나 농축 건고를 실시할 수도 있다.
이렇게 해서 얻어지는 유산균 발효물은 펜토시딘 생성 저해 활성이 높고, 유산균 발효물의 농도가 건조 고형분으로서 0.05질량%일 때 펜토시딘 생성 저해율이 25% 이상, 바람직하게는 26~60%이다.
본 발명에서 사용되는 유산균 발효물의 바람직한 실시형태로서는 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것 또는 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것을 들 수 있다. 또한, 여기에서 말하는 알로에란 알로에 자체뿐만 아니라 알로에 유래 성분도 포함한다. 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것 중에서도 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액이 바람직하고, 특히 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 저분자 획분, 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 고분자 획분이 바람직하다. 또한, 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것은 특히 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액이 바람직하다.
이하, 본 발명에서 사용되는 유산균 발효물의 바람직한 실시형태인 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것 및 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것에 대하여 설명한다.
유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것(이하, 「유산균 발효물(유성분)」이라고 하는 경우가 있다)에 사용되는 유산균으로서는, 예를 들면 스트렙토코커스 써모필러스 등의 스트렙토코커스속, 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 플란타룸 등의 락토바실러스속 등의 유산균이 바람직하다. 이들 유산균 중에서도 스트렙토코커스속의 유산균이 바람직하고, 스트렙토코커스 써모필러스가 보다 바람직하다. 또한, 그 중에서도 스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2084주(FERM BP-10879, 기탁일: 2006년 8월 18일), 스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2085주(FERM BP-10880, 기탁일: 2006년 8월 18일), 스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2021주(FERM BP-7537, 기탁일: 평성 8년(1996년) 11월 1일), 스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2059주(FERM BP-10878, 기탁일: 2006년 8월 18일), 스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2001주(FERM BP-7538, 기탁일: 평성 13년(2001년) 1월 31일) 등이 바람직하고, 스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2084주(FERM BP-10879, 기탁일: 2006년 8월 18일)가 특히 바람직하다. 또한, 이들 유산균은 1종 또는 2종 이상을 사용해도 좋다. 또한, 상기 기탁 번호의 유산균주는 독립행정법인 산업기술종합연구소 특허생물기탁센터(일본국 이바라키켄 츠쿠바시 히가시 1쵸메 1-1 츄오 다이 6(우편번호 305-8566))에 기탁되어 있었지만, 평성 25년(2013년) 4월 1일부터 독립행정법인 제품평가기술기반기구 특허생물기탁센터(일본국 치바켄 키사라즈시 카즈사카마타리 2쵸메 5-8 120고시츠(우편번호 292-0818))에 승계되어 있다.
유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시키기 위해서는 공지의 배양 조건에 따르면 좋고, 예를 들면 유성분이 1~20질량%가 되도록 물로 조정한 것을 배지로 하고, 이것에 유산균을 0.01질량%~10질량%, 바람직하게는 0.1질량%~5질량%로 접종하여 20℃~45℃, 바람직하게는 37℃~42℃에서 1시간~48시간, 바람직하게는 4시간~30시간 배양하면 좋다. 또한, 이때의 다른 배양 조건으로서는 정치, 교반, 진탕, 통기 등을 들 수 있고, 이들로부터 배양에 적합한 방법을 적당히 선택해서 행하면 좋다.
또한, 유성분을 함유하는 배지에는 유산균의 배양에 있어서 영양원을 보충할 목적으로 일반적으로 사용되는 성분을 별도 배합해도 좋다. 이러한 성분으로서는 효모 엑기스, 클로렐라 엑기스, 비타민 A, 비타민 B류, 비타민 C, 비타민 E 등의 비타민류나, 각종 펩티드류를 포함하는 단백질 분해물, 아미노산류, 칼슘, 마그네슘 등의 염류, 폴리소르베이트 80 등의 계면활성제, 올레산 등의 지방산, 칼슘, 마그네슘, 망간 등의 금속류를 들 수 있다.
이렇게 해서 얻어지는 유산균 발효물(유성분)은 공지의 여과, 투석, 침전, 원심분리 등의 정제, 분리 처리나, 또한 용매 등에 의한 추출 처리, 가열 처리, 동결 건조나 농축 건고를 실시할 수도 있다.
본 발명 저해제는 유산균 발효물(유성분) 중에서도 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액이 바람직하고, 특히 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 저분자 획분또는 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 고분자 획분이 바람직하다.
유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액(이하, 「유산균 발효물(유성분) 상청액」이라고 하는 경우가 있다)은 상기와 같이 해서 얻어지는 유산균 발효물(유성분)로부터 원심분리, 여과 등의 상법에 따라 고형물을 제거함으로써 제조할 수 있다.
또한, 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 저분자 획분(이하, 「유산균 발효물(유성분) 상청액의 저분자 획분」이라고 하는 경우가 있다)은 상기 유산균 발효물(유성분) 상청액의 분자량 20,000Da 이하의 획분을 가리킨다. 분자량 20,000Da 이하의 획분은 유산균 발효물(유성분) 상청액에 한외 여과, 겔 여과, 투석 등의 처리를 행함으로써 채취할 수 있다.
이렇게 해서 얻어지는 유산균 발효물(유성분) 상청액의 저분자 획분은 그 농도가 건조 고형분으로서 0.05질량%일 때 펜토시딘 생성 저해율이 25% 이상, 바람직하게는 26~40%이다.
또한, 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 고분자 획분(이하, 「유산균 발효물(유성분) 상청액의 고분자 획분」이라고 하는 경우가 있다)은 상기 유산균 발효물(유성분) 상청액의 분자량이 3,500Da 이상의 획분을 가리킨다. 분자량이 3,500Da 이상인 획분은 유산균 발효물(유성분) 상청액에 한외 여과, 겔 여과, 투석 등의 처리를 행함으로써 채취할 수 있다. 또한, 이 경우에는 고형물의 제거 시에 유산균 발효물에 포함되는 카제인 등의 단백질을 미리 트리클로로아세트산, 에탄올 등으로 침전시켜 두는 것이 바람직하다. 이렇게 해 둠으로써 유산균 발효물의 상청액의 고분자 획분에는 다당류가 많이 포함되게 된다. 또한, 다당류를 보다 많이 포함하는 고분자 획분을 사용하고 싶을 경우에는 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킬 때에 pH 6~8의 조건 하에서 37~40℃에서 배양하는 것이 특히 바람직하다. 배지의 pH의 조정에는 수산화나트륨 등을 사용할 수 있다.
이렇게 해서 얻어지는 유산균 발효물(유성분) 상청액의 고분자 획분은 그 농도가 건조 고형분으로서 0.05질량%일 때 펜토시딘 생성 저해율이 25% 이상, 바람직하게는 35~60%이다.
한편, 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것(이하, 「유산균 발효물(알로에)」이라고 하는 경우가 있다)은 상기와 같이, 예를 들면 유산균을 알로에를 함유하는 배지로 배양함으로써 얻어진다.
배지에 함유되는 알로에는 아프리카 원산의 백합과 식물의 총칭이며, 알로에 아보레센스나 알로에베라 등 300종 이상의 품종을 갖는다. 이 알로에는 뮤신이나 알로에만난 등의 다당류를 많이 포함하는 이외에 알로인이나 알로에닌, 알로에신, 알로미신, 알로류신 등의 성분을 함유하는 것이 알려져 있다. 본 발명에서 사용하는 알로에는 알로에과이면 특별히 한정되는 것은 아니지만, 특히 입수의 용이성이나 비용의 점 등으로부터 알로에 아보레센스 또는 알로에베라를 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알로에의 사용 부위로서는 특별히 한정되지 않지만, 잎, 잎살, 싹, 뿌리 이외에 섬유 성분이 없으므로 후의 제조 공정이 간편해지는 상기 부위의 즙액, 드립액, 거기서 얻어지는 각종 성분 등도 사용할 수 있다.
그런데, 유산균은 상기 알로에 중의 섬유 성분이나 단백질 성분 등을 자화할 수 없으므로 상법에 따라 알로에에는 발효 처리 전에 셀룰라아제 처리, 프로테아제 처리 등의 분해 처리 등을 행하는 것이 바람직하다. 셀룰라아제 처리를 행함으로써 자화성이 향상되어서 발효가 진행되고, 유산균 발효물 중에 자화할 수 없었던 셀룰로오스 등이 잔존하지 않아 후의 제조 공정이 간편해진다. 또한, 프로테아제 처리를 행함으로써 유산균 발효물에 단백질 성분 등이 잔류하지 않기 때문에 혼탁이 발생하지 않아 발효 후에 청징화 공정을 행할 필요가 없어진다. 또한, 아밀라아제 처리를 병용함으로써 보다 유산균의 자화성이 향상된다. 효소 분해 처리에는 셀룰라아제, 펙티나아제 등의 섬유질 분해 효소(셀룰라아제류)나, 산성 프로테아제, 중성 프로테아제, 알칼리성 프로테아제, 파파인, 피신, 브로멜라인 등의 프로테이나아제, 펩티다아제, 만나아제 등의 단백질 분해 효소 등(프로테아제류), α-아밀라아제, 글루코아밀라아제 등의 전분 분해 효소(아밀라아제류)로부터 1종 또는 2종 이상을 적당히 선택해서 사용하면 좋다. 또한, 유산균 발효물의 기호성을 손상하지 않기 위해서 및 알로에를 충분하게 자화시키기 위해서 알로에에는 당류를 첨가하지 않는 것이 바람직하다.
상기 발효에 사용되는 유산균으로서는 락토바실러스속의 유산균이 바람직하고, 락토바실러스 플란타룸이 보다 바람직하다. 또한, 이들 유산균은 1종 또는 2종 이상을 사용해도 좋다.
알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시키기 위해서는 공지의 배양 조건에 따르면 좋고, 예를 들면 Brix를 3.0 이상, pH를 4.2 이하로 조정한 알로에의 추출물에 유산균을 0.01질량%~10질량%, 바람직하게는 0.1질량%~5질량%로 접종하여 이것을 20℃~40℃, 바람직하게는 25℃~40℃에서 6시간~96시간, 바람직하게는 24시간~96시간 배양하면 좋다. 또한, 이때의 다른 배양 조건으로서는 정치, 교반, 진탕, 통기 등을 들 수 있고, 이들로부터 배양에 적합한 방법을 적당히 선택해서 행하면 좋다.
또한, 알로에를 함유하는 배지에는 유산균의 배양에 있어서 영양원을 보충할 목적으로 당류 이외의 일반적으로 사용되는 성분을 별도 배합해도 좋다. 이러한 성분으로서는 효모 엑기스, 클로렐라 엑기스, 비타민 A, 비타민 B류, 비타민 C, 비타민 E 등의 비타민류나, 각종 펩티드류를 포함하는 단백질 분해물, 아미노산류, 칼슘, 마그네슘 등의 염류, 폴리소르베이트 80 등의 계면활성제, 올레산 등의 지방산, 칼슘, 마그네슘, 망간 등의 금속류를 들 수 있다.
이렇게 해서 얻어지는 유산균 발효물(알로에)은 공지의 여과, 투석, 침전, 원심분리 등의 정제, 분리 처리나, 또한 용매 등으로 추출 처리, 가열 처리, 동결건조나 농축 건고를 실시할 수도 있다.
본 발명 저해제는 유산균 발효물(알로에) 중에서도 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액이 특히 바람직하다.
알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액(이하, 「유산균 발효물(알로에) 상청액」이라고 하는 경우가 있다)은 상기와 같이 해서 얻어지는 유산균 발효물(알로에)로부터 원심분리, 여과 등의 상법에 따라 고형물을 제거함으로써 제조할 수 있다.
이렇게 해서 얻어지는 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액은 그 농도가 건조 고형분으로서 0.05질량%일 때 펜토시딘 생성 저해율이 25% 이상, 바람직하게는 28~50%이다.
이상 설명한 본 발명 저해제는 화장품, 의약품, 의약부외품 등의 피부 외용제 조성물에 배합할 수 있고, 예를 들면 화장수, 유액, 각종 크림, 팩, 미용액 등의 기초 화장료, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 헤어 토닉, 헤어 리퀴드, 헤어 크림, 헤어 밀크 등의 두발용 제품, 입욕제 등의 목욕용 화장품, 파운데이션, 립스틱, 마스카라, 아이섀도 등의 메이크업 화장품, 자외선 차단제 등의 특수 화장품 등으로 할 수 있다. 본 발명의 펜토시딘 생성 저해제로서의 유산균 배양 상청액의 배합량은 특별히 한정되는 것은 아니고, 피부외용제 조성물의 형태 등에 따라 적당히 설정하면 좋고, 바람직하게는 건조 고형분 환산으로 0.003질량%~1질량%, 바람직하게는 0.015질량%~0.6질량%, 특히 바람직하게는 0.03질량%~0.3질량%이다.
상기 피부외용제 조성물은 화장품, 의약품, 의약부외품 등의 분야에서 사용되는 공지 성분을 본 발명의 효과를 방해하지 않는 범위에서 배합할 수 있다. 이들 공지 성분으로서는, 예를 들면 물, 알코올류, 오일 성분, 계면활성제, 방부제, 향료, 색소, 보습제, 증점제, 산화 방지제, 킬레이트제, pH 조정제, 발포제, 자외선 흡수·산란제, 분체, 비타민류, 아미노산류, 항균제, 식물 추출물, 해초 추출물, 각종 약제 등을 들 수 있다.
본 발명 저해제는 상기 유산균 발효물을 그대로 또는 공지의 의약품 담체와 조합하여 제제화함으로써 조제할 수 있다.
또한, 본 발명 저해제는 식경험이 있는 유산균 발효물을 유효 성분으로 하고 있는 점에서 각종 음식품에도 배합할 수 있다. 예를 들면, 유산균 발효물에 적당한 조제를 첨가한 후, 관용의 수단을 사용하여 식용에 적합한 형태, 예를 들면 과립상, 입상, 정제, 캡슐, 페이스트 등으로 성형해서 식용에 제공해도 좋고, 또한 각종의 식품, 예를 들면 햄, 소세지 등의 식육 가공 식품, 어묵, 오뎅 등의 수산 가공식품, 빵, 과자 등에 첨가해서 사용하거나, 물, 과즙, 우유, 청량 음료 등의 음료에 첨가해서 사용해도 좋다.
이상 설명한 본 발명 저해제는 인간에게 투여함으로써 인간에 있어서의 펜토시딘 생성의 저해를 할 수 있기 때문에 펜토시딘이 관련된 질환의 예방이나 치료를 할 수 있다. 본 발명 저해제의 인간으로의 투여 방법은 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 인간에 있어서 펜토시딘이 생성되는 부위에 그에 적합한 투여 경로로 상기 예방이나 치료를 할 수 있는 양을 투여하면 좋다. 펜토시딘이 생성되는 부위로서는, 예를 들면 피부, 경막 등을 들 수 있다. 또한, 상기 부위에 적합한 투여경로로서는, 예를 들면 상기 부위에의 도포, 경구 투여, 주사 등을 들 수 있다.
(실시예)
이하, 실시예를 들어 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 조금도 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
유산균 발효물(유성분) 상청액의 저분자 획분의 펜토시딘 생성 저해 활성:
스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2084주(FERM BP-10879)의 -80℃ 보존균주를 2mL 시험관 중의 10g/L의 락토오스를 포함하는 M-17 배지(Difco사제) 중에 1백금이 식균하고, 40℃에서 밤새 정치 배양했다. 이어서, 이 배양물을 2mL의 10질량% 탈지 분유 수용액(Difco사제) 중에 1질량%가 되도록 식균한 후, 40℃에서 밤새 정치 배양을 행하여 전(前) 배양으로 했다. 전 배양물을 본 배양 배지(3질량% 탈지 분유 수용액) 100mL에 1질량%로 식균하고, 40℃에서 24시간 정치 배양했다. 배양 후의 균액을 4℃, 8,000×g으로 15분간 원심분리하여 침전물을 제거했다. 얻어진 침전물 제거액(상청액)을 분획 분자량 20,000Da의 원심분리 방식 한외 여과 필터(센트리컷 미니 V-20: Kurabo Industries제)를 사용하여 4℃, 3,000×g으로 1시간 한외 여과를 행하여 저분자 획분을 10mL 얻었다. 이 저분자 획분 중에는 건조 고형분이 2%(20,000㎍/mL) 포함되어 있었다. 또한, 이 유산균 발효물(유성분) 상청액의 저분자 획분의 평균 분자량은 300Da 정도이었다.
또한, 평균 분자량은 상기 저분자 획분을 50mM 염화나트륨 용액에 용해 후, 하기 조건에서 HPLC를 행함으로써 측정된 값이다.
［HPLC 조건]
장치: Waters-600E
검출기: ISI RI-980
컬럼: ShodexSUGARKS-804
컬럼 온도: 80℃
이동상: 50mM NaCl
플로우 레이트: 1mL/분
주입량: 10㎕
상기에서 얻어진 저분자 획분의 펜토시딘 생성 저해율(%)을 펜토시딘의 생성량으로부터 산출했다. 우선, 기질 용액으로서 50mM 리보오스, 50mM 라이신염산염, 50mM 아르기닌염산염 및 100mM 인산나트륨 완충액(pH 7.4)을 각 등량으로 혼합한 것을 준비했다. 이어서, 이 기질 용액에 상기에서 얻어진 저분자 획분을 100mM 인산나트륨 완충액(pH 7.4)으로 희석한 피검 시료 용액을 기질 용액:피검 시료 용액이 5:1이 되도록 혼합하고, 60℃의 항온조 중에서 24시간 반응시켰다. 대조군으로서는 저분자 획분 대신에 물을 사용하여 마찬가지로 반응을 행했다. 또한, 블랭크로서는 리보오스, 라이신, 아르기닌을 포함하지 않는 완충액을 사용했다. 가열 종료 후 각 검체에 330㎚의 여기광을 조사해서 발생하는 390㎚의 형광 강도를 측정하고, 펜토시딘의 생성량을 형광량으로서 산출했다. 이 형광 강도로부터 이하의 식에 의해 펜토시딘 생성 저해율을 계산했다. 이들의 결과를 표 1에 나타냈다.
펜토시딘 생성 저해율(%)=((Ec-Eb)-(Es-Eb))/(Ec-Eb)×100
Es: 시료의 형광 강도
Ec: 대조군의 형광 강도
Eb: 블랭크의 형광 강도
이상의 결과로부터 유산균 발효물(유성분) 상청액의 저분자 획분에 대해서는 0.05질량%라는 낮은 농도에서 높은 펜토시딘 생성 저해율인 것을 알 수 있었다. 또한, 농도 의존적으로 펜토시딘 생성 저해율이 오르는 것도 확인되었다.
실시예 2
유산균 발효물(유성분) 상청액의 고분자 획분의 펜토시딘 생성 저해 활성:
스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2084주(FERM BP-10879)의 -80℃ 보존균주를 2mL 시험관 중의 10g/L의 락토오스를 포함하는 M-17배지(Difco사제) 중에 1백금이 식균하고, 40℃에서 밤새 정치 배양했다. 이어서, 이 배양물을 2mL의 10질량% 탈지 분유 수용액(Difco사제) 중에 1질량%가 되도록 식균한 후 40℃에서 밤새 정치 배양을 행하여 전 배양으로 했다. 이 전 배양물을 자 퍼멘터에 준비한 본 배양 배지(1%의 대두 펩티드를 포함하는 10질량% 탈지 분유 수용액) 1L에 0.1질량%로 식균하고, 40℃에서 24시간, 배지를 8N의 수산화나트륨 용액을 사용하여 pH 7로 유지하면서 회전수 100rpm의 조건 하에서 배양했다. 이어서, 얼음 중에서 냉각 후, 최종 농도가 10% w/v가 되도록 트리클로로아세트산(TCA)을 첨가하여 4℃에서 2시간 정치했다. 이것을 18,300×g으로 30분 원심해서 상청액에 등량의 99질량% 냉에탄올을 첨가하고, 4℃ 밤새 더 정치했다. 이것을 투석 튜브(Spectra/Por Membrane(MW 3,500): Spectrum Medical사제)로 투석하고, 얻어진 고분자 획분을 상법에 따라 동결 건조했다. 또한, 이 유산균 발효물(유성분) 상청액의 고분자 획분의 평균 분자량은 90만Da 정도이었다. 평균 분자량의 측정 방법은 유산균 발효물(유성분) 상청액의 저분자 획분과 마찬가지이다.
상기에서 얻어진 유산균 발효물(유성분) 상청액의 고분자 획분에 대해서 실시예 1과 마찬가지로 해서 펜토시딘 생성 저해율(%)을 산출했다. 그 결과를 표 2에 나타냈다.
이상의 결과로부터 유산균 발효물(유성분) 상청액의 고분자 획분에 대해서도 0.05질량%이라는 낮은 농도에서 높은 펜토시딘 생성 저해율인 것을 알 수 있었다. 또한, 농도 의존적으로 펜토시딘 생성 저해율이 오르는 것도 확인되었다.
실시예 3
유산균 발효물(알로에) 상청액의 펜토시딘 생성 저해 활성:
알로에베라(학명: Aloe barbadensis Miller)의 동결잎을 해동 후 파쇄하고, 2배량의 물 및 시트르산 0.05질량%를 첨가하여 40℃에서 셀룰라아제(셀룰라아제 "Onozuka" 3S: Yakult Pharmaceutical Industry제)를 3시간 작용시켰다. 그 후에 일단 90℃까지 가열한 후, 실온까지 냉각해서 여과하고, Brix 3.5가 될 때까지 감압 농축을 행하여 알로에베라 추출액을 얻었다. 얻어진 알로에베라 추출액(pH 3.7)을 100℃에서 100분간 가열 멸균했다. 이것에 락토바실러스 플란타룸의 표준주(ATCC14917) 전 배양균액을 1% 접종한 후, 30℃에서 72시간 정치 배양했다. 배양 후 여과에 의해 여과액을 채취해서 유산균 발효물(알로에) 상청액을 얻었다. 이 유산균 발효물(알로에) 상청액에는 건조 고형분이 2.9%(29,000㎍/mL) 포함되어 있었다.
상기에서 얻어진 유산균 발효물(알로에) 상청액에 대해서 실시예 1과 마찬가지로 해서 펜토시딘 생성 저해율(%)을 산출했다. 또한, 락토바실러스 플란타룸으로 발효시키지 않는 알로에베라 추출액에 대해서도 마찬가지로 펜토시딘 생성 저해율(%)을 산출했다. 그들의 결과를 표 3 및 표 4에 나타냈다.
이상의 결과로부터 유산균 발효물(알로에) 상청액은 유산균으로 발효시키지 않는 알로에베라 추출액과 비교해서 0.05질량%이라는 낮은 농도에서 1.4배 이상의 높은 펜토시딘 생성 저해율을 갖는 것을 알 수 있었다. 또한, 농도 의존적으로 펜토시딘 생성 저해율이 오르는 것도 확인되었다.
실시예 4
화장수의 조제:
이하의 표 5에 기재된 조성의 화장수를 조제했다. 또한, 화장수는 성분 7에 성분 1~6을 첨가해서 충분히 교반함으로써 조제했다.
실시예 5
유액의 조제:
이하의 표 6에 기재된 조성의 유액을 조제했다. 또한, 유액은 성분 11에 성분 7, 8 및 10을 첨가해서 가온하고, 80℃에서 성분 1~6을 첨가해서 유화하고, 그 후에 성분 9를 첨가해서 교반하고, 실온까지 냉각함으로써 조제했다.
실시예 6
크림의 조제:
이하의 표 7에 기재된 조성의 크림을 조제했다. 또한, 크림은 성분 13에 성분 9, 10, 12를 첨가해서 가온하고, 80℃에서 성분 1~8을 첨가해서 유화하고, 그 후에 성분 11을 첨가해서 교반하고, 실온까지 냉각함으로써 조제했다.
본 발명의 펜토시딘 생성 저해제는 펜토시딘이 관련된 질환의 예방이나 치료에 이용할 수 있다.
Claims (10)
- 유산균 발효물을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제.
- 제 1 항에 있어서,
유산균 발효물의 농도가 건조 고형분으로서 0.05질량%일 때 펜토시딘 생성 저해율이 25% 이상인 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
유산균 발효물로서 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것을 사용하는 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
유산균 발효물로서 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액을 사용하는 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
유산균 발효물로서 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 저분자 획분을 사용하는 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
유산균 발효물로서 유성분을 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것으로부터 얻어지는 상청액의 고분자 획분을 사용하는 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
유산균은 스트렙토코커스 써모필러스인 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
유산균은 스트렙토코커스 써모필러스 YIT 2084주(FERM BP-10879)인 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
유산균 발효물로서 알로에를 함유하는 배지를 유산균으로 발효시킨 것을 사용하는 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제. - 제 9 항에 있어서,
유산균은 락토바실러스 플란타룸인 것을 특징으로 하는 펜토시딘 생성 저해제.
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