KR20160018595A - 다양한 피부 병태의 치료에 유용한 인간 c-x-c 케모카인으로부터 유래된 테트라펩타이드 - Google Patents

Abstract

(I 또는 V)-X1-K-X2로 이루어진 테트라펩타이드는 다양한 생활성을 나타내고, 여기서 X1은 E, Q 또는 K로부터 선택될 수 있으며, X2는 M, F, I, W 또는 V로부터 선택될 수 있다. 그들은 각질세포 이동을 자극하고; 그람-양성 스타필로코커스 아우레우스의 리포테이코산과 같은 박테리아 세포벽 성분의 전염증 효과를 중화시키며; 배양된 인간 제정맥 내피세포에서 혈관형성을 유도하기 위한 다기능성 효과기 분자이다. 전염증 병태의 하향조절은 또한 대표적인 펩타이드에 대한 SOR-300-FT 건선 피부 모델을 이용하여 입증되었다. 생활성은 또한 에피덤(상표명) 피부 대체물을 이용하는 정상 피부 조직 치료 시 유전자 프로파일링 연구에 의해 뒷받침되었다. 다양한 생활성을 지니는 본 발명의 펩타이드는 급성 또는 만성 상처, 튼살, 노화된 피부, 모발 제어, 염증성 피부, 예컨대 건선, 아토피 피부염 및 주사, 및 원치 않는 털의 제거 또는 쥐젖의 제거와 갖은 병태를 포함하는 다양한 피부 병태를 치료하는데 유용하다.

Description

다양한 피부 병태의 치료에 유용한 인간 C-X-C 케모카인으로부터 유래된 테트라펩타이드{TETRAPEPTIDES DERIVED FROM HUMAN C-X-C CHEMOKINES USEFUL FOR TREATMENT OF VARIOUS SKIN CONDITIONS}

본 출원은 2013년 6월 14일자로 출원된 미국 가출원 특허 제61/835,424호에 대한 우선권의 유익을 주장하며, 이 기초출원은 본 명세서에 그의 전문이 참고로 포함된다.

본 발명의 기술분야

본 발명은 생물학적, 미용적 및 치료적 활성을 갖는 치료적 활성을 갖는 테트라펩타이드에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 몇몇 C-X-C 케모카인의 보존 영역으로부터 유도된 테트라펩타이드에 관한 것이다. 이들 펩타이드는 세포 이동, 혈관형성을 촉진시키고, 이러한 LTA 유도 전염증 신호로 박테리아 세포 성분을 중화시키며, 정상 표피 피부 대체물을 자극하는 활성을 나타내었다. 본 발명은 추가로 상처 회복을 촉진시키고 피부 및 구강과 같은 다른 관련된 신체 표면에 영향을 미치는 다양한 발작을 치료하기 위해 이들 펩타이드를 이용하는 방법에 관한 것이다.

각질세포 및 진피 내피세포는 피부 상처 및 궤양의 치유를 조절하는 가용성 인자의 주된 공급원이다. 성장 인자 생성, 혈관 신생 반응, 대식세포 기능, 콜라겐 축적, 표피 장벽 기능, 및 각질세포 및 섬유아세포 이동 및 증식을 비롯한 감소된 활성에 기인하는 이상은, 모두 결함있는 상처 치유에 기여한다. 성장 인자 및 사이토카인은 상처를 치료하기 위한 임상 현장에서 사용되었다. 예는 하이드록시유레아-관련 다리 궤양(Stagno et al, 1999), 정맥성 다리 궤양(Da Costa et al, 1999), 이상혈색소증-관련 궤양(Voskaridou et al, 1999), 및 절단으로부터 초래된 상처(Gaches et al, 1998)를 비롯한 다양한 병인의 만성 피부 궤양 및 다양한 상처로 고통받는 환자에서 상처 치유에 대해 유리한 효과를 발휘하는 것으로 나타난 PDGF(혈소판-유래 성장 인자(Rees et al, 1999) 및 GM-CSF(과립구-대식세포증식자극인자)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 또한 피부 병변이 있는 한센병 환자에 대한 GM-CSF의 피내 투여는 향산된 상처 치유 및 증가된 수 및 층의 각질세포를 야기한다(Kaplan et al, 1992; Braunstein et al, 1994).

성장 인자와 사이토카인은 둘 다 단백질이다. 표피 상처를 치료하기 위한 단백질 치료제의 사용에 의한 어려움은 종종 수반된 단백질의 거대한 크기와 관련된다. 천연 단백질의 복잡한 구조 및 제조비용은 광범위 임상 용도에 대해 금지된다. 제형에서 이러한 천연 단백질의 안정성 및 양립성은 또한 주된 문제이다. 피부의 표적층에 도달하는데 천연 단백질의 거대한 크기에 기인하는 불량한 침투는 종종 효능을 감소시키며, 단백질 치료제의 유리한 효과를 설명하지 못한다. 이 문제들을 극복하기 위해, 거대 단백질의 활성을 보유하는 짧은 펩타이드는 덜 비싸고, 비용 효과적인 생산 및 단순한 조작 및 취급의 필요를 충족시켜야 한다. 추가로, 짧은 생활성 펩타이드는 프로테아제에 대한 더 적은 감수성에 기인하여 상처 조직에 의해 더 양호하게 흡수되고 보유된다. 짧은 생활성 펩타이드의 흡수 특징의 이점은 그들을 급성 및 만성 상처 관리 이상의 사용을 위한, 예컨대 노화 및 태양광 노출과 관련된 피부 문제의 치료를 위한 실행가능한 선택 사항으로 만든다.

케모카인은 구조적으로 관련되며 다양한 생물학적 활성을 갖는 8 내지 150kd 단백질의 거대 슈퍼패밀리를 나타낸다. 그들은 보통 항상성 동안뿐만 아니라 염증 동안 백혈구 수송을 제어하는 세포 자극 시 분비되고, 선천성 면역과 적응 면역 간의 관련에 필수적이다. 인테그린 및 셀렉틴과 같은 부착 분자와 마찬가지로, 케모카인 및 그들의 수용체는 표적화된 조직 미세환경 내로 그리고 밖으로의 구체적 세포 유형의 선택적 이동을 가능하게 하는 복잡한 분자 네트워크의 부분으로서 주로 작용한다(Key et al., 2003; Ono et al., 2003). 케모카인은 호중구, 대식세포 및 림프구의 영역 특이적 동원(recruitment)을 선택적으로 매개한다. 화학주성 인자에 더하여, 케모카인은 또한 항상성 유지, 혈관형성/지혈, 세포 분화 및 활성화, 상처 치유, 종양 성장 및 전이, 림프구 귀환(lymphocyte homing) 및 림프 조직의 발생에 중요한 역할을 하고, 면역 반응의 전반적인 1형/2형 균형에 영향을 미친다(Behm et al., 2012; Gillitzer et al., 2001; Raman et al., 2011; Romagnani et al., 2004; Rossi et al., 2000).

테트라 시스테인 모티프에 의해 정의되는 케모카인은 그들의 아미노 말단에서 시스테인 잔기의 배치에 따라 4가지의 별도의 패밀리로 나뉜다. 2가지의 큰 서브패밀리, 즉, CCL 서브패밀리(CCL1 내지 CCL28) 및 CXCL 서브패밀리(CXCL1 내지 CXCL16)뿐만 아니라 2가지의 작은 서브패밀리, 즉, XCL 서브패밀리(XCL1 내지 XCL2) 및 CX3CL1 서브패밀리(Bacon et al. 2003)가 있다. 케모카인의 CXC 서브패밀리는 염증, 상처 치유, 성장 조절, 혈관 형성 및 종양 형성을 비롯한 다양한 과정에서 중요한 역할을 한다(Keeley et al., 2008; 2011). 다수의 케모카인은 내피세포와 세포외 기질에 대한 프로테오글라이칸의 글라이코사미노글라이칸(GAG) 모이어티와 상호작용한다(Handel et al., 2005). 헤파린 황산염에 대한 모델 화합물로서 작용하는 헤파린은 사실상 신체 내 모든 세포에 대해 발현되는 GAG의 가장 흔한 부류의 GAG이다. 모든 케모카인은 헤파린 GAG와 상호작용한다.

본 발명자들의 연구에서, 본 발명자들은 C-X-C 케모카인이 고도로 보존된 2차 구조에도 불구하고 그들의 1차 아미노산 서열에서 일부 서열 유사성을 나타내었다는 것을 주목하였다. 9개의 인간 C-X-C 케모카인의 1차 아미노산 서열의 검토는 이하의 "본 발명의 상세한 설명의 첫 번째 단락"에 나타낸 각각의 케모카인의 NCBI 등록 번호를 이용하여 GAG 결합에 수반되는 C-말단 부분에 위치된 고도로 보존된 영역을 나타낸다. 본 발명자들은 GAG 결합 영역으로부터 테트라펩타이드를 생성하고, 생활성을 시험하였다. 놀랍게도, 테트라펩타이드는 각질세포 이동의 촉진, 인간 제정맥 내피세포에 대한 혈관형성 유도, LTA 유도 전염증 사이토카인의 중화 및 세포 성장 및 성장 인자 생성의 조절을 포함하는 다양한 생활성을 나타내었다. 테트라펩타이드는 다양한 피부 병태를 개선시키기 위한 약제학적 제품과 미용제품 둘 다로서 유용하다.

본 발명은 포유류에서 상처 치유를 촉진하는데 유용한 짧은 생활성 펩타이드에 관한 것이다. 단리된 펩타이드에 의해 바람직하게 표적화되는 상처는 피부 및 관련된 점막면에 영향을 미치는 것이다. 제한되지 않는 임의의 특정 메커니즘에도 불구하고, 본 발명의 펩타이드는 세포 이동 및 혈관형성을 자극함으로써 상처 치유에 영향을 미칠 수 있다. 본 발명의 펩타이드는 시험관내와 생체내 방식 둘 다에서 유용하며, 각질세포에서 앞서 언급한 활성을 유도할 수 있다.

본 발명의 일 실시형태는 화학식 (I 또는 V)-X₁-K-X₂의 단리된 테트라펩타이드에 대해 도출되며, X1은 E, Q 및 K로부터 선택될 수 있고; X2는 M, F, I, W, V 및 L로부터 선택될 수 있다. 단리된 펩타이드는 아미노산의 L- 또는 D-거울상이성질체 형태 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시형태에 따르면, 단리된 펩타이드는 담체 단백질에 컨쥬게이션되거나, 또는 지방산을 이용하여 C-말단 아미드화 또는 N-말단 아실화를 통해 변형될 수 있다(즉, 지질화). 이들 부가물은 피부 및 이의 상처에 적용될 때, 펩타이드의 생활성을 향상시킨다.

본 발명의 특정 바람직한 실시형태에 따르면, 단리된 펩타이드는 모두 위치 3에서 라이신을 포함한다. 단리된 펩타이드의 구체적 실시형태는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7을 포함하며, 이들 모두는 세포 이동에 대한 자극적 활성을 나타내고, 상처 회복을 달성한다.

이하에 나타내는 유래된 테트라펩타이드는 화학식 (I 또는 V)-X₁-K-X₂에 적합하며, X1은 E, Q 및 K로부터 선택될 수 있으며; X2는 M, F, I, W, V 및 L로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 다른 실시형태는 약제학적으로 또는 미용적으로 허용가능한 담체 및 앞서 언급한 펩타이드 중 하나 이상을 포함하는 치료적 또는 미용적 조성물에 관해 도출된다. 앞서 언급한 조성물은 포유류의 피부 상처를 치유하기 위한 적용에서 사용하기 위한 의약 또는 미용적 조성물의 제조에 유용하다. 이러한 조성물 중의 펩타이드는 바람직하게는 약 0.1㎍/㎖ 내지 약 500㎍/㎖, 또는 약 0.1㎍/㎖ 내지 약 20㎎/㎖ 농도의 범위에 있다. 조성물의 바람직한 형태는 에어로졸, 에멀전, 액체, 용액, 로션, 크림, 페이스트, 연구, 분말, 겔 및 폼(foam)이다.

추가적으로, 본 발명의 펩타이드 및 그들을 함유하는 조성물은 일반적 피부 관리 및 미용 제형, 예컨대 다양한 피부 미용품, 피부 크림, 로션, 선크림 및 치료용 로션 또는 크림, 예컨대 레이저 처리 후 여드름 방지 제형에 포함하는데 유용한 특징을 제공할 수 있다.

본 발명은 또한 포유류에서 상처를 치료하기 위해 앞서 언급한 조성물을 이용하는 방법에 관한 것이다. 전형적으로, 치료 방법은 특히 피부(표피) 및 관련된 점막 조직의 상처 및 또는 염증 병태에 유효량의 시간 동안 유효량의 펩타이드-함유 조성물을 투여하는 단계를 수반한다. 이러한 상처는 수술 상처, 찰과상, 물집, 화상, 열상, 궤양, 멍, 발진, 흉터, 튼 자국 및 주름, 피부 처짐 및 광손상을 비롯한 노화 및 환경적 노출의 내적 및 외적 영향에 기인하는 피부 손상을 포함한다. 염증성 피부 병태는 건선, 아토피 피부염 및 주사(rosacea) 및 제모로부터 생기는 염증을 포함한다.

케모카인은 상처 치유, 염증성/항염증성 및 혈관 생성/혈관생성억제 활성을 조절한다. 그들은 표적 조직에서 백혈구 및 세포 표면 글라이코사미노글라이칸(GAG)에 대한 수용체의 G-단백질 결합 수용체(GPCR) 부류에 결합함으로써 그들의 기능을 발휘한다. GAG에 대한 케모카인의 결합은 GAG 상의 음으로 하전된 쇄의 케모카인 내 염기성 잔기의 클러스터와의 상호작용에 의해 생성된 이온 힘을 통해 매개된다(Handel et al., 2005). 생체 내에서, 상황은 더 복잡하게 되며, 염증 부위에 세포의 이동을 지시하는 고정된 또는 접촉적 구배를 생성함으로써 케모카인이 작용하는 것을 제안하였다(Proudfoot, 2006). GAG-케모카인 상호작용은 세포외 기질에 따라 구배의 확립에 중추적 역할을 할 수 있으며, 케모카인의 G-단백질 결합 수용체에 대한 결합을 용이하게 할 수 있다. GAG 또는 헤파린 황산염(HS) 프로테오글라이칸은 또한 신호전달을 위해 기능성 케모카인 공수용체로서 거동하여, GAG/케모카인과 케모카인의 삼중 복합체 형성을 야기할 수 있다(Handel et al. 2005). 구체적 케모카인에 대한 연구는 케모카인에 대한 GAG의 결합 부위를 맵핑하였다. GRO-알파 전구체(CXCL-1), 케모카인 2 전구체(CXCL-2), 케모카인 3 전구체(CXCL-3), 케모카인 4 전구체(CXCL-4), 케모카인 5 전구체(CXCL-5), 케모카인 6 전구체(CXCL-6), IL-8 전구체(CXCL8), 케모카인 9 전구체(CXCL-9), 케모카인 11 전구체(CXCL-11)를 비롯한 9종의 인간 C-X-C 케모카인 전구체 단백질의 보존된 GAG 결합 부위의 1차 아미노산 서열의 밀접한 검토에서, 본 발명자들은 특정 관심 대상이 되는 보존된 테트라펩타이드 영역을 발견하였다. 본 연구에서 정해진 보존된 테트라펩타이드 신장은 부분적 GAG 결합 영역 내에 위치된다. 선택적 인간 C-X-C 케모카인 전구체의 C-말단 서열의 정렬 및 보존된 짧은 테트라펩타이드의 강조의 개략적 도시를 이하에 나타낸다. 정렬은 NCBI의 웹사이트(ncbi.nlm.nih.gov) 상의 다중 단백질 서열 정렬을 위한 COBALT 프로그램을 이용하여 생성된다. 정렬에서 각각의 케모카인의 C-말단 부분만이 나타나며, 숫자는 서열 내 잔기의 시작과 끝이다. A. GRO-알파 전구체(NCBI 등록 번호 P09341.1); B. 케모카인 2 전구체(NCBI 등록 번호 NP_002080.1); C. 케모카인 3 전구체(NCBI 등록 번호 NP_002081.2); D. 케모카인 4 전구체(NCBI 등록 번호 P80162.4); E. 케모카인 5 전구체(NCBI 등록 번호 NP_002985.1); F. 케모카인 6 전구체(NCBI 등록 번호 NP_002984.1); G. IL-8 전구체(NCBI 등록 번호); H. 케모카인 9 전구체(NCBI 등록 번호 NP_002407.1); I. 케모카인 11 전구체(NCBI 등록 번호 EAX05774.1).

CXC 케모카인 중에서 고도로 보존된 짧은 테트라펩타이드 모티프의 정렬을 나타낸다. *는 케모카인의 부분적 GAG 결합 부위를 표시한다. 테트라펩타이드는 I-K-의 보존된 백본을 나타낸다. 발린(V)을 갖는 IL-8을 제외하고, 모든 다른 것들은 테트라펩타이드 모티프의 위치 1에서 아이소류신(I) 및 위치 3에서 라이신(K)을 가진다. 따라서 (I 또는 V)-X₁-K-X₂ 식은 생성된 테트라펩타이드를 나타내고 표 1에 나타내기 위해 사용될 수 있다. 대부분의 CXC 케모카인이 단량체 및 이량체로서 가역적으로 존재하고, 따라서 동원 프로파일이 단량체-이량체 평형상수뿐만 아니라 호중구에 대한 수용체에 대한 단량체 및 이량체의 결합 상호작용 그리고 세포 표면 및 표적 조직 내 간질에 대한 GAG에 대한 단량체 및 이량체의 결합 상호작용에 의해 영향받기 때문에, 케모카인의 GAG 결합 영역이 또한 이량체 형성에 수반되는 것은 어렵다(Gangavarapu et al., 2012).

이하에 나타내는 유래된 테트라펩타이드는 화학식 I(V)-X₁-K-X₂에 적합하며, 여기서 X1은 E, Q 및 K로부터 선택될 수 있고; X2는 M, F, I, W, V 및 L로부터 선택될 수 있다.

C-X-C 케모카인은 다수의 세포 유형에 대해 그들의 화학주성 활성이 잘 공지되어 있다. 새로 유래된 테트라펩타이드가 각질세포 이동을 자극하는 활성을 소유하는지의 여부를 평가하기 위해, 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8에 시험관내 세포 이동 및 상처 봉합을 유도하기 위한 활성 화합물의 능력을 평가하기 위해 잘 허용되는 분석인 각질세포 스크래치 상처 시험을 실시하였다. 세포 증식을 저지하기 위해 보충물 없이 무혈청 각질세포 성장 배지에서 실험을 수행하였다. 표시 시간에 위상차 현미경에 의해 상처 면적을 시험하였다. 표 1에 나타내는 바와 같이, 테트라펩타이드는 스크래치 상처 폐쇄를 상당히 유도한다. 20㎍/㎖에서, 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7에 의해 유도되는 상처 폐쇄 백분율은 100%로 취해지는 처리된 PBS와 비교하여 165% 내지 240%의 범위에 있다(표 1). 무작위로 생성된 펩타이드 서열번호 8은 세포 이동 및 스크래치 상처 폐쇄를 유도하지 않는다. 펩타이드가 스크래치 상처 폐쇄에 대해 시험한 농도에서 각질세포에 대해 독성이 아닌지를 확인하기 위해, 모든 펩타이드에 MTT 세포독성 시험을 실시하였다. 500㎍/㎖까지의 농도에서 24시간 인큐베이션시킨 후에 펩타이드 중 어떤 것도 시험관내 정상 피부 각질세포에 대해 세포독성이 아니었다. 결론적으로, 테트라펩타이드 서열번호 1 내지 7을 이용한 처리는, PBS 처리 대조군 세포의 처리와 비교하여 7시간 후에 상처 면적 폐쇄 백분율로 나타낸 바와 같이 정상 인간 표피 각질세포의 스크래치 면적 내로의 이동을 상당히 유도하였다.

혈관형성, 이미 존재하는 혈관 연결망으로부터의 새로운 모세관의 형성은 상처 회복의 필수 단계이다. 본 발명에서 생성된 펩타이드, 서열번호 1 내지 7은 또한 모세관 형성을 자극한다. 시험관내 혈관형성 분석은 새로운 모세관 형성을 야기하는 일련의 사건을 측정하기 위해 인간 제정맥 내피세포(human umbilical vein endothelial cell: HUVEC)를 사용한다. 유도 시, HUVEC는 나란히 되도록 이동되고, 이어서, 개개 세포로부터 발아된다. 발아 사건은 새로운 모세관의 형성을 야기하는데, 이는 추가로 폐쇄 다각형을 형성하도록 진행된다. 종국적으로, 복잡한 메쉬 유사 구조가 전개된다. 인간 카텔리시딘 펩타이드인 LL-37은 혈관형성을 촉진하는 것으로 잘 연구된 예이다. 이는 평가에서 양성 대조군으로서 사용된다. 새로운 모세관의 발아는 LL-37을 이용한 처리 3시간 후에만 보이게 된다(표 2). LL-37을 이용한 처리 5시간 후에, 폐쇄 다각형이 형성된다. LL-37에 비해, 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7은 3시간 및 5시간 처리에서 새로운 모세관 형성 및 복잡한 다각형 구조를 초래하는 HUVEC에 대해 유사한 변화를 유도하였다(표 2). 대조적으로, 무작위 생성된 펩타이드 서열번호 8(KMG) 및 PBS는 혈관 생성 활성이 LL-37 및 본 발명의 펩타이드에 대해 관찰된 시간에 이러한 변화를 유도하지 않는다(표 2).

그람 양성 세포벽 성분 펩티도글리칸(PGN)은 전염증 사이토카인 발현을 자극하는 것으로 잘 알려져 있다. 리포테이코산(lipoteichoic acid: LTA)은 산화질소 신타제(iNOS), 사이클로옥시게나제-2(COX-2), IL-1 베타, TNF-알파 및 IL-6 상향조절을 비롯한 전염증 신호에서 농도 및 시간 의존적 증가를 야기하는 PGN에서 중요한 분자이다(Lin et al., 2010). 따라서 본 발명자들은 본 발명의 펩타이드를 이용하여 LTA를 전처리하였고, 이어서, 인간 피부 각질 세포와 접촉 시 IL-6 자극 활성을 평가하였다. 표 3에 나타내는 바와 같이, 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7을 이용한 LTA의 전처리는 인간 피부 각질세포 배양에서 LTA 자극 IL-6 발현 수준을 상당히 감소시키는데, 이는 펩타이드가 유리 LTA의 독성 효과를 중화시킬 수 있다는 것을 시사한다. 테트라펩타이드의 양으로 하전된 잔기는 음으로 하전된 LTA에 결합함으로써, LTA와 그의 수용체의 상호작용을 차단할 가능성이 크다. 이는 박테리아 세포벽 성분이 여드름, 주사, 아토피 피부염 등과 같은 염증성 피부 병태에 연루되었기 때문에, 중요하다.

세포 증식의 조절은 상처 회복에서 다른 중요한 단계이다. 본 발명자들은 인간 피부 각질세포에 대한 증식 활성을 위한 본 발명의 펩타이드를 시험하였다. 스크래치 시험에서 측정한 화학주성 활성에 비해, 본 발명의 펩타이드의 혈관형성 및 LTA 유도 IL-6 발현의 차단은 각질세포 증식의 조절에 대해 다양한 아직 중간 정도인 활성을 나타내었다. 서열번호 1(HB2233)은 각질세포 증식에 대해 저해 활성을 나타내었고, 이러한 저해 활성이 또한 서열번호 3(HB2270)에 대해 관찰되었다. 서열번호 6은 각질세포 증식을 자극하는 것으로 여겨지지만, 이러한 활성은 단지 미미하다. 세포 증식을 저해하기 위한 이런 성장 인자는 잘 공지되어 있기 때문에, 각질세포 증식에 대한 저해 활성은 본 발명자들이 TGF-β1 발현을 시험하도록 촉발한다. 표 4에 나타낸 바와 같이 서열번호 1과 3은 둘 다 배양 각질세포에서 TGF-β1 발현의 중간 정도 수준을 유도하였다.

매트텍 코포레이션(MatTek Corporation)(매사추세츠주 애슐랜드에 소재)에 의해 개발된 SOR-300-FT는 정상의 인간 유래 각질세포 및 건선성 섬유아세포를 포함하는 고도로 분화된 시험관내 건선 조직이다. 형태적으로, 조직은 균일한 두께를 가지며, 이는 증가된 수준의 과증식된 세포뿐만 아니라 전염증 마커, 예컨대 서라이어신, 엘라핀, 인간 베타-디펜신-2 및 LL-37 등을 발현시킨다(Ayehunie et al., 2012). 조직의 전염증 병태는 본 발명의 펩타이드가 염증 반응을 조절하는지 여부를 알기 위해 본 발명의 펩타이드를 시험하도록 촉발한다. 고비용의 조직 모델에 기인하여, 대표적인 펩타이드 서열번호 1, 즉, HB2233은 SOR-300-FT 조직 모델을 이용하는 개념 연구의 증거로서 선택되었다. SOR-300-FT 조직을 200㎍/㎖에서 2회 중복해서 HB2233으로 처리하였다. 건선 병태와 관련된 총 12개 유전자 마커가 연구된다. 칼시포트리올과 병행하여 연구를 실행하였다. qPCR 분석은 72시간 처리 후에 서열번호 1(HB2233)이 염증 건선 피부에서 과발현된 LL-37의 발현 수준을 하향조절한다는 것(3.7 배)을 나타내었다(표 5). 건선 약물 칼시포트리올은 HBD-2(9.0배) 및 서라이어신(2.3배)을 상당히 하향조절한다. HB2233과 칼시포트리올은 둘 다 건선 피부에서 각질세포의 과증식 및 조기 성숙을 초래하는 Ki67 발현을 하향조절한다. 추가로, 서열번호 1(HB2233)은 또한 CXCL1(GRO 알파) 및 CXCL5(ENA-78) 발현을 하향조절하는데, 이들 둘 다 정상의 건강한 피부에 비해 건선 피부에서 상당히 상향조절되지만(Ayehunie S., 2012), 칼시포트리올은 유전자 둘 다의 수준에 영향을 미치는 것으로 여겨지지 않는다. 이는 HB2233이 건선과 같은 염증성 피부의 치료를 위해 현재의 약물 칼시포트리올로부터 상이한 메커니즘을 통해 작용하는 신규한 치료제일 수 있다는 것을 명확하게 시사한다.

동일한 펩타이드가 정상의 건강한 피부 조직에 영향을 미치는 방법을 더 양호하게 이해하기 위해, 본 발명자들은 매트텍 코포레이션(MatTek Corporation)(매사추세츠주 애슐랜드에 소재)으로부터 구입한 에피덤(EPIDERM)(상표명) 정상 인간 피부 대체물을 이용하여 써니 바이오디스커버리(Sunny Biodiscovery)(캘리포니아주 산타 파울라에 소재)에 의해 수행된 유전자 프로파일링 연구에 서열번호 1, HB2233을 넣었다. 피부 대체물을 24시간 동안 2회 중복해서 펩타이드 또는 물조절을 이용한 처리 전에 밤새 평형상태로 만들었다. 처리의 마지막에, RNA를 추출하고 나서, PCR 어레이 분석을 실시하였다. 표 6에 나타낸 바와 같이, 서열번호 1, HB2233은 ECM 합성에 수반된 유전자를 자극한다(콜라겐 및 인테그린). 예상한 바와 같이, 이는 케모카인(CXCL11 및 MAPK3 등) 및 성장 인자(TGF-β1 및 VEGF 등)를 조절한다. 유전자 프로파일링 연구는 본 발명의 펩타이드가 세포 증식, 혈관형성 및 상처 치유 활성을 조절하는 시험관내에서 관찰한 활성을 뒷받침한다.

본 발명에 포함된 모든 펩타이드는 표준 Fmoc(9-플루오렌일메톡시카보닐) 고체상 화학을 이용하여 합성되었다. 펩타이드는 표준 아미노산을 이용하여 아미드화 또는 유리산 서열로서 준비될 수 있다. 카복시-말단의 아미드화는 프로테아제 분해에 덜 민감한 본 발명의 펩타이드를 제공하고 유리산 형태에 비해 그들의 용해도를 증가시킬 수 있으며, 따라서, 고조된 치료 효능을 제공한다. 펩타이드는 하나의 거울상이성질체 형태의 잔기 또는 형태 둘 다의 조합을 함유하는 L- 또는 D-아미노산 거울상이성질체를 포함할 수 있다. 펩타이드는 N-말단과 C-말단 둘 다에 대해 변형될 수 있다. 예를 들어, N-말단 지질화 또는 아세틸화는 펩타이드의 생활성 기능을 변용시키는 일 없이 피부를 가로지르는 펩타이드 침투를 개선시킬 수 있는 것으로 논의된다(Samah, 2011). 따라서 향상된 피부 침투를 제공할 수 있는 펩타이드는 또한 지질화될 수 있다. 본 발명의 화합물의 C12-18 지질-성분을 제공하기 위해 사용될 수 있는 포화 또는 불포화 지방산의 예는 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 미리스톨렌산, 팔미톨렌산, 올레산 및 리놀렌산을 포함한다. 펩타이드의 카복시-말단은 산성(-COOH) 또는 아미드화(예를 들어, -CONH2, -CONHR 또는 -CONR2)에 의해 변형될 수 있다. 카복시-말단의 아미드화는 프로테아제 분해에 덜 민감한 본 발명의 펩타이드를 제공하며 유리산 형태에 비해 그들의 극성을 증가시킴으로써, 고도의 치료적 효능을 제공할 수 있다. 또한 전형적으로 변형될 수 있는 펩타이드 작용기는 하이드록실, 아미노, 구아니디늄, 카복실, 아마이드, 페놀, 이미다졸 고리 또는 설프하이드릴을 포함한다.

펩타이드는 또한 필요한 그들의 가용성 특성을 변형시키고 표적화된 조직에서 펩타이드의 국소 농도를 증가시키기 위해 가용성 또는 불용성 담체 분자에 컨쥬게이션될 수 있다. 가용성 담체 분자의 예는 폴리에틸렌글라이콜(PEG) 및 폴리비닐피롤리돈의 중합체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며; 불용성 중합체의 예는 실리케이트, 폴리스타이렌 및 셀룰로스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 펩타이드는 그들의 안정성을 향상시키기 위해 그리고 제어된 방출을 위해 리포좀 기법을 이용하여 또는 나노 기법을 통해 마이크로캡슐화될 수 있다. 상기 프로토콜에 대해 일반적으로, 펩타이드는 메리필드(Merrifield)(J Am Chem Soc . 85:2149, 1963); 카르피노(Carpino) 등(J Org Chem . 51:3732, 1986); 메리필드 등(Anal Chem. 38: 1905, 1966); 또는 켄트(Kent) 등[High Yield Chemical Synthesis Of Biologically Active Peptides On An Automated Peptide Synthesizer Of Novel Design, IN: PEPTIDES 1984 (Ragnarsson, ed.) Almqvist and Wiksell Int., Stockholm (Sweden), pp. 185-188]에 개시된 것과 같은 당업자에게 공지된 임의의 방법을 이용하여 생성될 수 있으며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 포함된다.

본 발명은 상기 기재된 펩타이드를, 예컨대 제형에서 또는 치료제로서 이용하는 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 단일 펩타이드 또는 조합으로 다수 펩타이드의 사용을 수반할 수 있다. 특정 예에서, 본 조성물은 피부 상에, 피부 내에 또는 피부 하에 놓이는 장치 내에 배치될 수 있다. 이러한 장치는 수동 또는 능동 방출 메커니즘에 의해 피부 또는 모공과 접촉하기 위한 방식으로 물질을 방출시키는 경피 패치, 이식물 및 주사를 포함한다. 본 명세서에 기재된 방법에서 펩타이드를 전달하기 위해 사용되는 조성물은 에어로졸, 에멀전, 액체, 로션, 용액, 겔, 마이크로 캡슐화, 크림, 페이스트, 연고, 분말, 폼 또는 다른 약제학적으로 허용가능한 제형의 형태일 수 있다. 더 나아가, 펩타이드는 덜 관련된 제형, 예컨대 탈이온수/증류수, PBS 또는 표준 의학적 식염수 용액을 이용하여 전달될 수 있다.

제형은 선택적으로 미용적 매력을 가질 수 있고/있거나 본 발명의 펩타이드의 치료적 작용을 위한 애주번트로서 작용할 수 있는 다른 작용제, 예컨대 레티노이드, 비타민 C 또는 다른 펩타이드를 함유할 수 있다. 항생제는 또한 감염을 막기 위해 제형에 첨가됨으로써 최대 치유 공정이 일어나게 할 수 있다.

제형은 프로테아제 저해제를 함유할 수 있다. 프로테아제 저해제는 선택된 생활성 펩타이드를 분해하는 것으로 예상되는 프로테아제를 구체적으로 표적화하도록 선택될 수 있으며; 이러한 선택은 생활성 펩타이드의 길이 및/또는 서열에 기반하여 결정될 것이다. 그러나, 프로테아제 저해제가 반드시 임의의 구체적 방식으로 선택될 필요는 없으며; 예를 들어, 2 이상의 저해제를 함유하는 프로테아제 저해제가 본 발명에서 사용될 수 있다. 다음 유형의 프로테아제 저해제가 본 발명에 포함될 수 있다: 세린 프로테아제 저해제, 시스테인 프로테아제 저해제, 아스팔테이트 프로테아제 저해제, 메탈로프로테이나제 저해제, 티올 프로테아제 저해제 및 트레오닌 프로테아제 저해제. 본 발명에서 사용되는 프로테아제 저해제는 펩타이드 또는 단백질 또는 화학물질일 수 있다. 이러한 저해제의 비제한적 예는 세르핀인데, 이는 알파-1-항트립신, 상보체 1-저해제, 항트롬빈, 알파-1-항키모트립신, 플라스미노겐 활성제 저해제 1, 및 뉴로세르핀, 또는 본 발명의 펩타이드의 치료적 작용을 위한 애주번트로서 작용할 수 있는 우르솔산 및 트라넥삼산을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 화학물질을 포함한다.

일반적으로, 약제학적으로 허용가능한 제형은 인간 피부에 대해 사용에 적합한 임의의 담체를 포함할 것이다. 이러한 약제학적으로 그리고 미용적으로 허용가능한 담체는 에탄올, 다이메틸설폭시화물, 글라이세롤, 실리카, 알루미나, 녹말 및 동등한 담체 및 희석제를 포함한다. 제형은 선택적으로 미용적 매력을 가질 수 있고/있거나 본 발명의 펩타이드의 치료 작용을 위한 애주번트로서 작용할 수 있는 다른 작용제, 예컨대 레티노이드 또는 다른 펩타이드를 함유한다. 항생제는 또한 감염을 피하기 위해 제형에 첨가될 수 있고, 이에 의해 최대 치유 과정이 일어나게 한다. 조성물 중의 펩타이드 농도는 약 0.1㎍/㎖ 내지 약 500㎍/㎖ 또는 약 0.1㎍/㎖ 내지 약 10%일 수 있지만; 그러나, 사용되는 궁극의 농도는 상처/조직 병태의 특성, 본 발명의 펩타이드의 생활성 및 임의의 애주번트 또는 향상된 조성물 흡수를 얻기 위한 기법의 사용에 따라서 이들 범위 밖에서 변할 수 있다. 문헌[The CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992)]은 본 발명의 조성물에서의 사용에 적합한 매우 다양한 비제한적 미용적 및 약제학적 성분을 기재한다. 이들 성분 부류의 예는 연마제, 흡수제, 미적 성분, 예컨대 향료, 색소, 색조/착색제, 에센셜 오일, 피부 감각제(skin sensate), 수렴제 등(예를 들어, 정향유, 멘솔, 캠퍼, 유칼리툽스 오일, 유게놀, 멘틸 락테이트, 위치 하젤 증류수), 여드름방지제, 케이킹방지제, 소포제, 항균제(예를 들어, 요오도프로필 뷰틸카바메이트), 항산화제, 결합제, 생물학적 첨가제, 완충제, 증량제, 킬레이트제, 화학적 첨가제, 미용적 살생제, 변성제, 약물 수렴제, 외부 진통제, 막 형성제 또는 물질, 불투명화제, pH 조절제, 추진제, 환원제, 금속 이온 봉쇄제, 피부 표백제 및 경량화제(예를 들어, 하이드로퀴논, 누룩산, 아스코브산, 마그네슘 아스코빌 포스페이트, 아스코빌 글루코사민), 피부 컨디셔닝제(예를 들어, 습윤제), 피부 진정제 및/또는 치유제(예를 들어, 판테놀 및 그의 유도체, 알로에 베라, 판토텐산 및 그의 유도체, 알란토인, 비사볼롤 및 글라이실리진산이칼륨), 피부 치료제, 점증제 및 비타민 및 이들의 유도체를 포함한다.

본 발명의 펩타이드 및 관련 조성물의 투여는 인간 및 모든 포유류를 포함하는 동물로 이루어질 수 있다. 또한 조직 접합물, 피부 대체제, 조직 배양 산물 및 드레싱과 같은 전형적일 및/또는 실험적인 물질과 조합하여 적용될 수 있다. 예는 거즈(직물 및 부직포, 침윤, 비흡착, 패킹, 괴사조직제거); 압박 붕대 및 시스템; 상처 충전제 및 세정제; 접촉층; 콜라겐; 양막; 무세포 인간 진피; 무세포 기질 및 조합 생성물; 및 다양한 통상적으로 상요되는 드레싱을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

통상적으로 사용되는 드레싱의 목록

일반적으로, 조성물은 국소로, 경구로, 경피로, 전신으로 또는 표적 조직에 본 발명의 펩타이드를 전달하는데 유용한 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 투여될 수 있다. 조성물은 또한, 예를 들어 배양물 중에서 성장하는 세포 또는 환자 이식물에 시험관내 또는 생체밖 방식으로 적용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 피부관리 활성을 발휘하는 하나 이상의 추가적인 작용제를 함유할 수 있다. 생활성 펩타이드 성분 이외에, 본 발명은 다른 활성제, 예컨대 히알루론산, 니아신아마이드, 피탄트라이올, 파르네솔, 비사볼롤, 살리실산, 레티놀, 레티논산, 알파하이드록시산, 아스코브산 및 알그로닉산을 함유할 수 있다. 특정 추가적인 활성제는 생활성 펩타이드 성분과 함께 상승적으로 작용할 것이며, 또는 제형의 보관수명을 향상시킬 것으로 예상된다.

추가로, 아미노산의 약어는 통상적인 용법에 따른다:

약제의 제형화 및 투여를 위한 기법에 대한 상세한 설명은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co, Easton Pa.)]의 최신판에서 발견할 수 있다. 국소 국부 전달이 바람직하지만, 다른 전달 수단, 예를 들어, 경구, 비경구, 에어로졸, 근육내, 피하, 경피, 골수내, 수강내, 뇌실내, 정맥내, 복막내 또는 비강내 투여가 있다. 본 발명은 다수의 담체 비히클로, 예를 들어 스프레이; 에어로졸; 물 및 오일형 에멀전; 오일 및 물 유형의 에멀전; 페이스 크림 또는 바디 크림; 선로션 또는 애프터 선 로션에서; 또는 다른 국소 투여 비히클로 제형화될 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 펩타이드, 및 이들을 함유하는 조성물은 일반적 스킨 케어 및 미용 제형, 예컨대 다양한 피부 화장료, 피부 크림, 로션, 선크림 및 치료적 로션 또는 크림, 예컨대 여드름 방지 제형에 포함을 위한 유용한 특징을 제공할 수 있다.

적용 면적

본 발명의 펩타이드는 피부 상처를 치료하는데 유용할 수 있다. 표피 층이, 예컨대 열상, 화상 또는 물집으로부터 파괴될 때 피부 및 점막 조직 손상이 일어난다. 손상은 또한 크러싱 또는 타박상을 수반할 수 있는데, 이는 표피의 동시 균열이 없는 조직 손상을 수반한다. 피부 감염뿐만 아니라 특정 만성 질병, 예컨대 암 및 자가면역질환은 또한 표피 표면에 대한 피해를 일으킬 수 있다. 궤양, 예컨대 당뇨병에 영향을 미치는 것 또는 욕창과 관련된 것은 피부 손상의 다른 형태이며; 이들 상처는 종종 상당히 다루기 힘들고, 염증을 만들며, 감염되기 쉽고, 긴 치유 과정을 필요로 한다. 궤양 또는 다른 유형의 만성 상처의 지속은 혈관형성에 대한 손상된 능력에 기인하여 치유 및 새로운 혈관 생성에 연루된 세포 처리의 부전에 기인한다. 혈관형성은 저산소증 또는 다른 자극에 반응하는 새로운 모세혈관망(미세혈관)의 형성 과정이다(Folkman et al., 1992). 상기 과정은 신혈관의 내피성 증식 및 발아를 유도하는 혈중산소감소 내피세포와 지지 주피세포 둘 다로부터의 혈관 생성의 국소 분비를 수반한다. 불충분한 혈관형성은 손상된 상처 치유 및 피부 궤양에 기인한다(Galiano et al., 2004). 상처 치유의 부전은 또한 상처 경계에서 각질세포가 상처에 가깝게 이동하지 않거나 또는 상처를 뒤덮지 않는다는 사실에 부분적으로 기인하여 병변을 표피화하는 것의 불능의 결과일 수 있다(Enoch and Price, 2004). 피부 및 점막 상처의 치유는 부분적으로 기저 각질세포의 활성화를 통해 조직된다. 활성화 시, 상처 주위에 위치된 각질세포는 재표피화로서 지칭되는 처리에서 상처 위로 단일층을 형성하도록 이동된다. 만성 상처의 비치유적 가장자리에서 각질세포는 과증식성이지만 비이동성이며, 이동의 결여는 표피화하는 것의 불능을 야기하고, 만성 궤양의 발병에서 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다(Harsha et al., 2008). 본 발명은 또한 피부 및 점막 조직에서 각질세포와 관련된 손상을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "관련된 점막 조직"은 피부와 유사한 방식으로 조직화된 임의의 조직에 관한 것이며, 입, 코, 목, 귀, 항문, 생식기, 눈의 검결막(palpebral conjunctive)과 관련된 내부 내벽면을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 표피 세포/각질세포를 함유한다. 이들 조직에 영향을 미칠 수 있고 본 발명의 펩타이드에 의해 치료될 수 있는 상처 또는 병변/손상의 예는 찰과상, 물집, 화상, 열상, 자창, 궤양, 멍, 발진 및 흉터이다. 수술 후 외상이 또한 펩타이드에 의해 치료될 수 있다.

표피 손상의 다른 형태는 감지하기 힘들며, 장기간의 시간에 결처, 종국적으로 노화된 피부로 불리는 손상된 피부 기능을 초래한다. 피부 노화를 유도하는 2가지의 주된 과정이 있다; 태양광 보호된 피부에 고유(생활 노화) 및 태양광 노출 면적에서의 외인적(광노화). 고유한 노화는 유전자 배경을 반영하며, 시간에 의존한다. 그럼에도 불구하고, 노화 피부는 다음 중 하나를 공유한다: 주름, 잔주름, 과색소침착, 홍반, 광휘의 손실, 평활도, 경도, 피부톤 투명도 및 균등도, 및 모공 외관의 변질. 근본적인 이들 가시적 징후는 유전적 소인에 추가적으로 가시광선(UV) 및 오염물질과 같은 환경적 자극의 급성 또는 만성 노출에 의해 유도된 다양한 조직학적 및 세포학적 변화이다. 미용 문제, 예컨대 주름, 건조함, 피부 박화, 늘어짐 및 멍들기 쉬움은 노화에 추가적으로 가시광선 및 오염물질과 같은 손상제에 대한 장기간 노출에 기인하여 조기에 생길 수 있는 표피 손상의 보통의 외적 징후이다. 따라서 개시된 펩타이드는 손상을 방지하고 회복시킴으로써, 노화 효과를 반전시키기 위해 건강한 피부 조직을 재생시키는 내적 자극과 외적 자극 둘 다에 의해 야기되는 노화 피부와 관련된 문제에 대해 사용될 수 있다. 관련된 방식에서, 펩타이드는 태양광과 같은 다양한 외부 작용제에 대한 노출에 의해 손상된 조직에 적용될 수 있었다. 본 발명은 또한 더 젊은 외관과 질감을 제공하는 것에 관해서 화장료로서 사용될 수 있다. 짧은 펩타이드는 그 자체로 변용되지 않거나, 화학적 변형 및/또는 전문화된 전달을 통해, 피부 박화, 주름, 취성(fragility) 및 거칠어짐/경화를 야기하는 것에 대한 반대 처리에 영향을 미치도록 표피를 통해 침투될 수 있다. 각질세포는 표피 표면의 주된 성분이며 노화되고 손상된 피부에서 약화되었기 때문에, 펩타이드 자극에 의한 이의 보충은 앞서 언급한 문제를 반전시키는 것으로 예상된다.

피부는 상대적으로 탄성이 있지만, 그것의 신축 능력은 제한되어 있다. 튼 자국, 또는 선(striae)은 좋지 않은 색을 띄는 피부 상의 흉터 형성이다. 그들은 진피의 찢어짐에 의해 야기되는데, 시간에 따라 약해질 수 있지만 완전히 사라지지 않을 것이다. 그들은 처음에 불그스름하거나 또는 보라색의 선으로 나타나지만, 점진적으로 더 밝은 범위로 희미해지는 경향이 있다. 튼 자국은 종종 빠른 체중 증가 또는 빠른 체중 손실과 관련된 피부의 빠른 신장의 결과이다. 튼 자국은 주목할 만한 또는 과도한 신장 또는 팽창을 전혀 겪지 않은 신체 부위 어디에서나 일어날 수 있다. 가장 흔한 곳은 복부, 유방, 상박, 겨드랑이, 넓적다리, 둔부 및 궁둥이이다. 튼 자국은 종종 사춘기 및 임신과 같은 생애의 일부 중요한 단계의 호르몬 변화에 의해 야기되지만, 코르티코스테로이드 처리, 비만, 미용 수술 및 집중적 근육 발달 운동이 튼 자국을 야기할 수 있다. 코르티코스테로이드의 작용 하에서, 각질세포와 섬유아세포 둘 다의 성장은 심각하게 손상될 수 있으며, 결과적으로 콜라겐 I 및 III의 합성뿐만 아니라 피브로넥틴 합성은 또한 정상 피부에 비해 90% 초과까지 상당히 감소된다(Rogalski et al., 2002). 고용량 코르티코스테로이드와 혈관내피 성장인자 억제제(신생혈관억제) 요법의 조합은 선 병태를 악화시킬 수 있으며, 회피되어야 하는 것으로 나타났다(Wheeler et al., 2012). 진피/표피 부문에서 각질세포의 기능의 수선 및 회복은 튼 자국 교정을 위해 중요할 수 있었다. 따라서 스크래치 상처 폐쇄를 촉진하고 상처 치유에 필수적인 혈관형성을 자극하는 본 발명의 펩타이드는 튼 자국의 치료에 이상적이다.

각질세포는 내인성 항생제로서 그리고 피부 선천적 면역계 내에서 신호전달 분자로서 작용하는 항미생물 펩타이드(AMP)를 생성하고 분비한다. AMP는 숙주 선천적 면역 방어계의 중요한 성분이며, 병원성 미생물유기체의 방어 및 사멸의 첫 번째 선을 제공한다. 추가로, 그들은 또한 다양한 메커니즘에 의해 숙주 염증 반응을 조절하고 변형시킨다. 그러나, 이들 펩타이드의 비정상적 발현은 염증성 피부 질환의 발병과 관련되었다. 최근의 연구는 LL-37이 건선 및 주사의 발병에서 중요한 역할을 할 수 있음을 나타낸다.

건선은 일반적 집단의 대략 2%에 영향을 미치는 만성 염증성 피부 질환이다(Lowes et al, 2007). 건선은 Th1-형 T 세포 및 호중구의 축적, 각질세포 과증식 및 분화, 및 AMP의 향상된 표피 생성을 특징으로 한다. 건선성 병변에서, 다수의 AMP, 예컨대 카텔리시딘(LL-37), β-디펜신, S100 단백질, 케모카인, RNase 7, 라이소자임, 엘라핀, 호중구 젤라티나제-관련 리포칼린 등은 고도로 발현된다. 특히, 카텔리시딘 LL-37은 건선에서 염증 피부에서 과발현되며, 죽은 세포로부터 방출된 세포밖 자기-DNA(self-DNA)에 결합하고, 자기-DNA를 형질세포 모양 수지상 세포에 대한 강한 자극으로 전환시킨다(Dombrowski et al., 2012). 건선에서 LL-37의 역할에 관한 논란이 있지만, 이 펩타이드는 배양된 각질세포에서 각질세포 증식 및 전염증 사이토카인의 생산을 유도하는 것이 명백하다. 건선에 추가적으로, LL-37은 최근에 전신성 홍반성 낭창 및 류마티스 관절염(RA)의 발생에 연루되었다. LL-37은 전신성 홍반성 낭창 환자의 피부에서 고도로 발현된다(Sun et al., 2011). RA에서, 호중구 과립구는 세포독성제, AMP, 프로테아제 및 다른 염증성 매개체를 방출시킴으로써 관절 내 염증을 부채질하며 조직을 손상시킨다. 동물 모델에서 LL-37은 건강한 관절에 비해 관절염을 지니는 래트로부터의 RA 활막에서 그리고 관절에서 강하게 상향조절되는 것으로 나타났다(Hoffmann et al., 2012). HB2233이 LL-37의 발현뿐만 아니라 염증과 고도로 관련된 다른 인자를 상당히 하향조절한다는 관찰은 본 발명의 펩타이드가 건선, 전신성 홍반성 낭창 및 류마티스 관절염을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 염증성 병태에 대한 강력한 치료제일 수 있음을 시사한다.

주사는 성인의 가장 흔한 피부병 중 하나이다. 본 개념은 공지된 임상적 촉발 인자, 예컨대 UV 방사, 열, 추위, 스트레스, 매운 음식 및 미생물이 톨(Toll)-유사 수용체 신호전달을 조절하고, 반응성 산소 종을 유도할 뿐만 아니라 AMP 및 신경펩타이드 생성을 향상시키는 것을 제시한다(Kenshi et al., 2009; Yamasaki et al., 2009). LL-37의 형태로 과량의 카텔리시딘은 hCAP18을 처리하는 프로테아제, 및 TLR에 의한 선천성 면역 패턴 인식의 비정상적 작용으로부터 초래되는 것으로 나타난 주사에서 보고되었다(Yamasaki et al., 2007; 2011). 건선 및 전신성 홍반성 낭창과 유사하게, 주사에서 과량의 LL-37의 존재는 염증을 악화시킬 수 있는 형질세포 모양 수지상 세포와 각질세포 둘 다에 의해 자기-핵산의 인식을 가능하게 하고, 이에 의해 자기-염증 신호전달을 허용함으로써 질환에 기여하는 것으로 추측되었다(Gilliet et al., 2008; Ganguly et al., 2009). 본 발명의 펩타이드에 의한 SOR-300-FT 피부 조직에서 LL-37의 하향조절은 주사에서 LL-37 관련 염증 병태를 개선시키기 위한 촉망있고 잠재적으로 유용한 처리를 지지한다.

염증성 피부 병태에 추가로, 고수준의 LL-37은 또한 몇몇 공격적 고형 종양 유형과 관련된다. LL-37은 글리슨 점수(Gleason score)가 증가함에 따라 인간 전립선 종양에서 그리고 뼈 전이에서 계속해서 과발현되는 것으로 나타났다(Jonathan et al., 2011). 유사한 임상적 관찰은 난소암(Coffelt et al., 2008), 유방암(Heilborn et al., 2005) 및 폐암(von Haussen et al., 2008)의 암종에서 이루어졌다. LL-37은 그의 전구체인 인간 카텔리시딘 항균 단백질-18(hCAP-18)로부터 활성화될 호중구 프로테아제 3에 의해 정상적으로 절단되었지만, 증거는 암세포가 또한 호중구와 독립적으로 그들의 분비된 hCAP-18을 단백질 분해로 절단하는 효소를 생성한다는 것을 시사한다(S0rensen et al., 2001). 이는 암에서 상승된 수준의 LL-37을 설명할 수 있다. 암에서 LL-37의 연루는 명확하게 남아있음에도 불구하고, 증식, 혈관형성, 세포자멸사로부터의 보호 및 표피-간엽-이행(epithelial-mesenchymal transition)을 증가시키는 LL-37의 특성은 모두 암의 특징으로서 작용할 수 있으며, 종양 성장 및 전이를 촉진하기 위해 형질전환/악성 세포에 의해 이용될 수 있다. HB2233와 같은 본 발명의 펩타이드에 의한 LL-37의 하향조절은 LL-37의 수준을 감소시킴으로써 암성 세포 퍼짐을 감소시키는 효과적인 방법을 제공할 수 있다. 잠재적인 이점은 암 약물과 조합하여 추가로 향상될 수 있다.

박테리아에 의한 감염은 패혈증을 야기할 수 있고, 내화성 저혈압 및 종국적으로 다기관 기능부전 및 사망을 특징으로 하는 패혈성 쇼크를 유발할 수 있다(Ulevitvh et al., 1995). 그람-양성 패혈증은 중요한 임상적 병태로서 인식되었다(Ulevitvh et al., 1995). 그의 병인은 펩티도글라이칸(PGN) 및 리포테이코산(LTA)과 같은 그람-양성 박테리아의 세포벽 성분이다. 패혈성 쇼크에 추가로, LTA는 또한 다른 염증성 병태에 대한 병인이다. 아토피 피부염(AD)은 통상의 만성 염증성 피부 질환이다. AD의 발병은 완전히 이해되지 않으며, 카텔리시딘(LL-37) 발현 수준 및 습진의 질병 중증도와 그의 관련은 논란이 있었다. AD 환자는 그들의 피부 병태의 악화와 관련되는 스타필로코커스(staphylococcal) 피부 감염에 걸리기 쉽다. 스타필로코커스 박테리아가 AD를 악화시킬 수 있는 메커니즘은 아직 명확하지 않음에도 불구하고, 각질세포 또는 면역 세포에 의한 박테리아 성분 또는 파편에 의한 직접적 감염 또는 상호작용 후 사이토카인 생성은 중요한 역할을 하는 것으로 나타난다(Bieber et al., 2008). 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus) 감염은 피부 염증을 촉발시키는 것으로 공지되어 있으며, 박테리아에 의한 또는 박테리아 산물에 의한 직접 침입에 기인하는 면역 반응을 조절한다. 연구는 AD 피부 병변에 대한 고수준의 스타필로코커스 아우레우스 LTA를 나타낸다(Travers et al., 2010). AD 병변으로부터 유래된 세척액은 뮤린 골수 유래 DC에 의해 IL-1β, IL-6, IL-10 및 종양 괴사 인자-α의 생성을 유도하는 것이 발견된다(Travers JB et al., 2010). 본 발명의 펩타이드는 시험관내 스타필로코커스 LTA에 대한 고수준의 결합을 나타내며, 이러한 활성은 패혈성 쇼크 및 AD 피부와 관련된 병태를 개선시키기 위해 감염 또는 항생제 치료 동안 방출된 그람-음성 박테리아로부터 LTA 또는 LPS의 독성 효과를 중화시키는 촉망되는 치료를 제공할 수 있다.

각질세포에 대한 TGF-β(성장 인자 베타를 형질전환) 발현을 조절하기 위한 본 발명의 펩타이드의 가능성은 특히 관심 대상이다. TGF-β는 세포 증식, 분화, 세포자멸사, 기질 리모델링, 부착, 침입 및 이동을 조절하는 다면 발현성 사이토카인/성장 인자이다. 일반적으로, TGF-β1은 다수의 상이한 세포 유형에 의해 생성될 수 있다. 모든 TGF-β 동형(isoform)은 섬유아세포에 의한 세포외기질 단백질의 합성 및 전환(turnover)을 자극하는 것으로 발견되었다.

모공은 피부의 필수 성분이며, 각각의 털은 모낭의 각질화된 산물이다. 각각의 그리고 모든 모공은 활성 주기를 겪으며: 털은 최대 길이로 자라고, 이어서, 성장이 중단되며, 털은 없어지고 대체된다. 털 성장 주기 단계는 성장기(anagen), 즉, 장기간의 성장; 퇴화기(catagen), 즉, 성장으로부터 휴지까지 2 내지 4주 지속되는 이행 기간; 휴지기(telogen), 즉, 2 내지 4개월 지속되는 불활성 기간으로서 기재되었다. 인간에서 직접적 증거가 없음에도 불구하고, 마우스에서의 연구는 TGF-β1 생성의 각질세포 증식 및 유도의 저해가 퇴화기 억제와 직접적으로 관련된다는 것을 시사한다(Foitzik et al., 2000). 단리되고, 기관 배양된 래트 및 인간 성장기 모공이 TGF-β1에 의해 성장 저해된다는 시험관내 관찰은 몇몇 양태에서 퇴화기 유사 형질전환의 초기 단계와 비슷하다. 각질세포 성장 및 TGF-β1 발현의 조절을 저해하기 위한 서열번호 1인 HB2233의 활성은 본 발명의 펩타이드가 원치 않는 털의 제모에 유용한 치료제로서 가능성을 가진다는 것을 시사할 수 있다. 추가로, TGF-β의 상향조절은 또한 MITF의 하향 조절에 의한 멜라닌 세포 미성숙뿐만 아니라 회색털을 생성하는 멜라닌 유전자와 관련되었다(Nishimura et al., 2010). 따라서 본 발명의 펩타이드는 또한 다크 스팟의 탈색 또는 피부 미백과 같은 적용을 위한 큰 가능성을 가진다.

쥐젖(Skin tag: ST), 연성 섬유종, 섬유표피 폴립 또는 연성 섬유종은 모두 주위 피부로부터 돌출된 약간의 피부로 이루어진 공통의 양성 피부 병태를 설명하기 위한 모든 대안의 용어이다. 조직학적으로, ST는 약하게 놓여있는 가시세포증 표피, 약한 만성 염증을 나타내는 헐거운 부종의 섬유혈관성 중심부 및 힘이 없는 진피를 지니는 폴립성 병변이다.

쥐젖은 피부의 가장 흔한 섬유성 병변으로 고려된다. 정확한 병인은 완전히 이해되고 있지 않지만, 비만, 진성 당뇨병, 마찰, 말단 비대증, 장기 이식, 인유두종 바이러스 및 다른 병태와의 관련이 보고되었다(Zaher et al., 2007). 성장 인자 및 호르몬뿐만 아니라 그들의 수용체는 쥐젖 형성에서 중요한 역할을 하는 것으로 연루되었다(Safoury et al., 2010ab). 쥐젖이 진피의 각질세포 및 표피의 각질세포 및 진피의 섬유아세포 증식을 자극하는 인자, 세포 증식을 억제하는 본 발명의 펩타이드와 같은 화합물에 의해 야기된다는 사실은 하향 진행을 늦추며 쥐젖의 형성을 방지하는데 잠재적으로 유용할 수 있다.

다음의 실시예는 본 발명의 특정 바람직한 실시형태를 입증하기 위해 포함된다.

실시예

실시예 1: 세포 이동 및 스크래치 상처 봉합을 자극하는 펩타이드의 동정

인간 피부 각질세포(ATCC CRL-2404)를 5ng/㎖ 인간 재조합 표피 성장 인자(EGF)(뉴욕주 그랜드 아일랜드에 소재한 Life Technologies)로 보충한 무혈청 각질세포 성장 배지에서 성장시켰다. 세포를 12-웰 플레이트 상에 파중시키고 나서, 100% 합류에 도달시켰다. 24시간 동안 세포 단일층을 굶기고, 이어서, P200(200㎕) 피펫팁을 이용해서 스크래치 상처를 만든다. 스크래치 상처를 세척하고 나서, 시점 0에 촬영한다. 20㎍/㎖의 최종 농도로 펩타이드를 첨가하였다. 영상을 실온에서 단기간 동안 포착하는 것을 제외하고, 세포를 인큐베이터 내에서 90% 초과의 습도를 지니는 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 유지한다. 7 내지 8시간 처리 후에 스크래치 상처 봉합을 하며, 결과를 표 1에 나타낸다.

실시예 2: 정상 인간 피부 각질세포에 대한 세포독성

펩타이드가 세포에 대해 세포독성이 아니라는 것을 확실히 하기 위해, 정상 인간 표피의 각질세포를 96-웰 플레이트에 파종시켰다. 플레이트를 37℃에서 5% CO₂의 존재 하에 인큐베이션시켜 세포를 95% 초과의 합류로 성장시켰다. 펩타이드를 50, 100, 200 및 500㎍/㎖의 농도에서 저장액에 희석시켰다. 세포 배양 배지를 다양한 농도에서 펩타이드를 함유하는 새로운 배지로 대체하고, 이어서, 37℃ 및 5% CO₂에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 처리의 마지막에, ATCC(버지니아주 매너서스에 소재)로부터 구입한 MTT 분석 키트를 이용하여 세포 생존도를 측정하였다. 결과를 표 1에 나타낸다. 50 내지 500㎍/㎖의 농도에서, 펩타이드는 MTT 분석을 이용하여 측정한 바와 같이 세포 생존도를 변화시키지 않는다.

실시예 3: 혈관형성을 자극하는 펩타이드의 동정

밀리포어(Millipore)로부터 구입한 시험관내 혈관형성 분석을 수행하였다. 간략하게, 제조업자의 설명에 따라 에크매트릭스(ECMATRIX)(상표명) 용액을 이용하여 제조하였다. 인간 제정맥 내피세포(휴벡(HUVEC))(버지니아주 매너서스에 소재한 ATCC)를 0.1㎎/㎖의 헤파린(시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)), 30㎍/㎖의 ECGS(시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 및 10% 소태아 혈청(버지니아주 매너서스에 소재한 ATCC)로 보충한 완전 F12K 배지(버지니아주 매너서스에 소재한 ATCC)에서 배양시켰다. 세포를 채취하고 나서, 완전 배지에서 재현탁시켰다. 펩타이드를 에크매트릭스(상표명) 용액의 표면 상에 세포를 파종시키기 전에 96-웰 플레이트에서 웰 당 대략 5x10³ 내지 1x10⁴개 세포와 혼합하였다. 플레이트를 30℃, 5% CO2에서 9 내지 12시간 동안 인큐베이션시켰다. 도립 광현미경 하에서 주기적으로 관 형상을 조사하였고, 3 내지 5시간 간격으로 촬영하고 나서, 이하에 나타내는 각각의 패턴에 대한 수치값을 부여하였다.

표 2에 나타내는 바와 같이, 서열번호 1 내지 7은 인간 제정맥 내피세포에 대한 모세관 형상을 상당히 자극한다. 예상한 바와 같이, LL-37을 양성 대조군으로서 사용하며, 이는 또한 혈관형성을 자극한다. PBS를 음성 대조군으로서 사용하며, 세포는 그 자체가 이동 및 정렬하기 시작하지만, 5시간에 발아 또는 폐쇄 다각형은 형성되지 않는다.

실시예 4: LTA 유도 IL-6 발현을 차단하기 위한 펩타이드의 동정

스타필로코커스 아우레우스 LTA는 인간 표피 각질세포에 대한 IL-6 자극을 유도하였다. 인간 각질세포를 무혈청 각질세포 배양 배지에서 80% 초과 합류로 성장시켰다. 스타필로코커스 아우레우스 LTA 10㎍/㎖를 실온에서 30분 동안 각각의 펩타이드(50㎍/㎖)와 함께 사전 인큐베이션시키고, 이어서, 혼합물을 각질세포 배양물에 옮겼다. 24시간 동안 처리를 허용하였다. 상청액을 제거하였다. 가능한 세포 파편을 제거하기 위해 간단한 회전 후에, 제조업자의 설명서에 따라 셀사이언스(CellSciences)(매사추세츠주 캔톤에 소재)로부터 구입한 ELISA 키트를 이용하여 상청액에 IL-6 시험을 실시하였다. 표 3에 나타낸 바와 같이, 서열번호 1 내지 7은 인간 피부 각질세포 상에서 IL-6 발현을 자극하는 LTA의 효과를 명확하게 중화시키거나 또는 길항시켰다.

실시예 5: 인간 피부 각질세포에 대한 세포 증식 및 TGF-β 발현을 조절하는 펩타이드의 동정.

정상 인간 피부 각질세포(ATCC CRL-2404)를 5ng/㎖ 인간 재조합 표피 성장 인자(EGF)(뉴욕주 그랜드 아일랜드에 소재한 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))로 보충한 무혈청 각질세포 성장 배지에서 성장시켰다. 세포를 현미경으로 매일 시험한다. 배양물이 50 내지 75% 합류로 됨에 따라, 플레이트 내 배지를 흡입하고 나서, 0.25% 트립신/EDTA를 첨가한다. 세포를 둥글게 하고 분리시킬 때, 새로운 배양 배지의 첨가에 의해 트립신을 중화시킨다. 이어서, 세포를 원심분리하고 나서, 펠렛을 새로운 배양 배지에서 재현탁시킨다. 혈구계수기를 사용하여 세포 현탁액을 계수화하고, 100㎕의 세포 현탁액을 각각의 웰에 첨가함으로써 웰 당 약 500 내지 1000개 세포까지 세포의 총 수를 조절한다. 전형적으로, 중앙의 60개 웰을 사용하고, 외부 웰을 새로운 배지로 채워서 증발을 최소화시킨다. 6 내지 8시간의 인큐베이션 후에 세포를 각각의 웰에 부착하였을 때, PBS를 함유하는 100㎕의 새로운 배지 또는 목적으로 하는 펩타이드 농도의 2x를 3회 중복해서 첨가한다. 이어서, 마이크로플레이트를 37℃ 및 5% CO₂에서 48 내지 72시간 동안 인큐베이션시킨다.

인큐베이션의 마지막에, 세포에 제조업자의 설명서에 따라 사이토스칸(CYTOSCAN)(상표명) SRB 세포 세포독성 분석(미조리주 세인트 루이스에 소재한 G바이오사이언시스(GBiosciences))을 실시한다. 간략하게, 서포로다민 B(suforhodamine B: SRB) 염색 전에 세포를 고정시킨다. 집중적인 세척 후에, 용해 완충제를 이용하여 색을 가용화시킨다. 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 565㎚에서 흡광도를 측정하였다. 표 5에 나타낸 결과는 3회 중복 처리의 평균값이며, 대조군의 ±10%에 걸친 값을 유의한 것으로 고려한다.

TGF-β 자극을 써니 바이오디스커버리 랩(Sunny Biodiscovery Lab)(캘리포니아주 산타 파울라에 소재)에 의해 수행하였다. 간략하게, 정상 신생아 인간 표피의 각질세포를 셀렌텍(cellnTec) 각질세포 성장 배지(스위스에 소재)에서 성장시켰다. 배지는 배지 공급업자에 따라 TGF-β를 함유하지 않았다. 실험일에, 성장 배지를 새롭게 하고, 세포를 50㎍/㎖의 펩타이드로 3회 중복해서 72시간 동안 처리하였다. 처리의 마지막에, 상청액을 제거하고, 활성화시키고 나서, 총 TGF-β1 엘리사 키트(ELISA Kit)(캘리포니아주 샌디에이고에 소재한 바이오레전드(Biolegend))를 이용하여 정량화하였다.

실시예 6: SOR-300-FT 인간 건선 조직 작제물에 대한 대표적인 펩타이드의 효과.

SOR-300-FT(상표명) 조직을 0.9㎖의 사전 가온시킨 분석 배지를 포함하는 6-웰 플레이트에 옮기고 나서, 표준 배양 조건(37℃, 5% CO₂)으로 1시간 동안 평형상태로 만들었다. 1시간 평형상태 후에, 조직을 다음과 같은 새로운 배지를 이용하여 재공급하였다: 1) 24시간 시점 동안, 조직을 0.9㎖의 배지를 이용하여 공급하고 나서, 2) 24시간 초과 시점 동안, 워셔(Part # EPI- WSHR, 매트텍 코포레이션(MatTek Corporation))의 상부에서 세포 배양 삽입물을 위치시킴으로써 조직을 5㎖의 배양물을 이용하여 공급하였다. 다음에, 50㎕의 시험 항목을 건선성 조직(n=3)에 국소로 적용하고 나서, 시험 항목을 스폰서(Sponsor)에 의해 선택된 3가지 농도에서 배양 배지에 첨가하였다. 24시간 및 48시간 시점에: a) 조직을 300 내지 400㎕의 PBS를 이용하여 국소적으로 3X 린스하고, b) 조직을 함유하는 삽입물을 멸균 포셉을 이용하여 꽉 잡고, 시험 항목을 PBS 내로 삽입물을 담금으로써 부드럽게 린스하고, 삽입물로부터 배지를 디캔팅시키고 나서, c) 새로운 시험 항목을 린스 및 디캔팅 바로 후에 조직에 다시 적용한다(국소로 50㎕). t = 72 시간(3X 반복 적용)에서 분석을 수행하였다. 퀴아젠(Qiagen) RT2 포스트 스트랜드 키트(First Strand Kit)(카탈로그 번호 330401)를 이용하여 cDNA를 생성하였다. 퀴아젠 RT2 SYBR 그린 qPCR 마스터믹스(Mastermix)(카탈로그 번호 330502) 및 퀴아젠 RT2 프라이머를 이용하여 상대적 유전자 발현을 측정하였다. 바이오라드(Bio-Rad) CFX 소프트웨어를 이용하여 분석을 수행하였다.

실시예 7: 정상 인간 피부 대체물에 대한 유전자 프로파일링 분석.

써니 바이오디스커버리 인코포레이티드(Sunny Biodiscovery, Inc)(캘리포니아주 산타 파울라에 소재)에 의해 수행된 PCR 분석을 이용하여 세포외기질 및 부착 분자를 암호화하는 84개 유전자를 분석하였다. 간략하게, 에피덤(상표명) 피부 대체물(카탈로그 번호 EPI-212)을 매트텍(매사추세츠주 애슐랜드에 소재)으로부터 얻었고, 제조업자의 설명서에 따라 조작하였다. 밤새 평형상태로 한 후에, 배지를 바꾸고, HB2233(330㎍/㎖) 또는 물 대조군을 2회 중복해서 피부 조직의 상부에 적용하고 나서, 24시간 동안 처리를 허용하였다. 처리의 마지막에, 조직을 수집하고 나서, RNA레이터(RNAlater) 용액(텍사스주 오스틴에 소재한 앰비온) 중에서 보존하였다. RNA를 추출하고 나서, 일러스트라 미니 RNA 스핀 키트(Illustra mini RNAspin kit)(카탈로그 번호 95017-489, 뉴저지주 피츠카타웨이에 소재한 GE 헬스케어(GE Healthcare))를 이용하여 정제하였다. 정제한 총 RNA를 애질런트(Agilent) HP-8452A 다이오드 어레이 분광광도계를 이용하여 260㎚ 및 280㎚에서 평가하였다. RNA 농도를 샘플에 걸쳐 동등하게 하고 나서, 관심 대상의 유전자 발현을 첫 번째 가닥 합성 키트, SYBR 그린 마스터 믹스 및 퀴아젠으로부터의 PCR 실행 조건과 함께 PCR 어레이 PAHS-121A를 이용하는 바이오라드 아이사이클러(BioRad iCycler) iQ 검출 시스템을 이용하여 실시간 정량적 PCR에 의해 측정하였다. RT2 프로파일러 PCR 어레이 데이터 분석 버전 3.5 소프트웨어를 이용하여 운반한 5개의 하우스키핑 유전자에 대한 유전자 발현의 정규화 후에, 결과의 정량화를 위해 효율화 AACt 방법을 사용하였다. 발현 수준이 합리적으로 높고(검출을 위해 30주기 미만) 조절이 각각의 2회 중복 시리즈에서 1.5 이상이라면, 유전자는 차별적으로 발현되는 것으로 고려하였다.

본 명세서에 개시하고 청구하는 모든 조성물 또는 방법을 본 개시내용에 비추어 과도한 실험 없이 제조하고 실행할 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법을 바람직한 실시형태에 관해 기재하였지만, 본 발명의 개념, 정신 및 범주로부터 벗어나는 일 없이 본 명세서에 기재한 조성물 및/또는 방법 및 방법의 단계들 또는 단계의 순서들이 변형될 수 있다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 더 구체적으로는, 화학적으로 그리고 생리적으로 관련된 특정 작용제는 본 명세서에 기재된 작용제로 대체할 수 있는 반면, 동일 또는 유사한 결과를 달성 할 수 있다는 것은 명백할 것이다. 당업자에게 명확한 모든 이러한 유사한 대체물 및 변형은 본 발명의 범주 내인 것으로 여겨진다.

본 출원에서 동정하는 모든 특허 및 간행물은 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다.

참고문헌

Claims (19)

1. 단리된 테트라펩타이드로서, 상처 회복 및 재생 활성을 나타내며, 펩타이드 서열(I 또는 V)-X1-K-X2로 이루어지되, X1은 E, Q 또는 K이고, X2는 M, F, I, W 또는 V인, 단리된 테트라펩타이드.
2. 제1항에 있어서, 서열번호 1(IEKM), 서열번호 2(VEKF), 서열번호 3(IEKI), 서열번호 4(IQKI), 서열번호 5(IKKW), 서열번호 6(IKKV) 또는 서열번호 7(IKKL)인, 테트라펩타이드.
3. 제1항에 있어서, L-아미노산 거울상이성질체와 D-아미노산 거울상이성질체 중 하나 또는 둘 다를 포함하거나 또는 담체 분자에 컨쥬게이션되거나, 아미드화되거나, 또는 지질화된, 테트라펩타이드.
4. 제1항에 있어서, 유리산 형태인, 테트라펩타이드.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 테트라펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 테트라펩타이드는 약 0.1㎍/㎖ 내지 약 500㎍/㎖, 또는 약 0.1㎍/㎖ 내지 약 20㎎/㎖의 범위에 있는 농도로 존재하는, 조성물.
7. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 에어로졸, 에멀전, 액체, 로션, 용액, 겔, 마이크로-캡슐화, 크림, 페이스트, 연고, 분말 또는 폼(foam)의 형태이거나 또는 피부 표면에 또는 피부 조직 하에 도포하기에 적합한 장치 내에 혼입되는, 조성물.
8. 유효량의 시간 동안 치료적 유효량으로 도포될 때 포유류에서 상처를 치유하거나 염증성 피부 병태를 치료함에 있어서 사용하기 위한 조성물로서, 상기 의약은 약제학적으로 허용가능한 담체 및 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 테트라펩타이드를 포함하는, 조성물.
9. 제8항에 있어서, 상기 상처 또는 염증성 병태는 상기 포유류의 피부 또는 관련된 점막 조직에 영향을 미치는, 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 상처는 찰과상, 물집, 화상, 열상, 궤양, 멍, 발진, 튼살, 흉터, 튼 자국 또는 노화 혹은 환경적 노출의 영향에 기인하거나, 또는 상기 염증성 병태는 건선, 아토피 피부염 및 주사(rosacea), 또는 제모 또는 쥐젖 제거를 위한 사용에 기인하는, 조성물.
11. 피부관리 치료에 사용하기 위한 제5항 내지 제10항 중 어느 한 항의 조성물.
12. 화장료 제품에서 사용하기 위한 제5항 내지 제10항 중 어느 한 항의 조성물.
13. 피부 또는 관련된 점막 조직의 상처 또는 염증성 질환을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 테트라펩타이드 또는 조성물의 용도.
14. 제13항에 있어서, 상기 상처는 찰과상, 물집, 화상, 열상, 궤양, 멍, 발진, 튼살, 흉터, 튼자국 또는 노화 혹은 환경적 노출의 영향에 기인하거나, 또는 상기 염증성 병태는 건선, 아토피 피부염 및 주사, 또는 제모 또는 쥐젖 제거를 위한 사용에 기인하는, 용도.
15. 포유류에서 피부 상처를 치료하거나 또는 염증성 피부 병태를 치료하는 방법으로서, 약제학적으로 허용가능한 담체 및 제1항에 따른 적어도 하나의 테트라펩타이드를 포함하는 의약을 상기 피부 또는 관련된 점막 조직에 투여하는 단계를 포함하는, 치료방법.
16. 제15항에 있어서, 상기 테트라펩타이드는 서열번호 1(IEKM), 서열번호 2(VEKF), 서열번호 3(IEKI), 서열번호 4(IQKI), 서열번호 5(IKKW), 서열번호 6(IKKV), 또는 서열번호 7(IKKL)인, 치료방법.
17. 제15항에 있어서, 상기 테트라펩타이드는 L-아미노산 거울상이성질체와 D-아미노산 거울상이성질체 중 하나 또는 둘 다를 포함하거나 또는 담체 분자에 컨쥬게이션되거나, 아미드화되거나 또는 지질화된, 치료방법.
18. 제15항에 있어서, 상기 테트라펩타이드는 유리산 형태인, 치료방법.
19. 제15항에 있어서, 상기 상처는 찰과상, 물집, 화상, 열상, 궤양, 멍, 발진, 튼살, 흉터, 튼자국 또는 노화 혹은 환경적 노출의 영향에 기인하거나, 또는 상기 염증성 병태는 건선, 아토피 피부염 및 주사, 또는 제모 또는 쥐젖 제거를 위한 사용에 기인하는, 치료방법.