KR20150132093A

KR20150132093A - 면역손상된 인구들에서의 사용을 위한 백신 조성물

Info

Publication number: KR20150132093A
Application number: KR1020157019562A
Authority: KR
Inventors: 한스 아르비손; 안나-카린 말타이스
Original assignee: 유로씨네 백신즈 에이비
Priority date: 2012-12-17
Filing date: 2013-12-17
Publication date: 2015-11-25
Also published as: AU2013360889C1; BR112015014243A2; EP2742952A1; CN104870010A; RU2661408C2; EP2931308B1; KR20150132092A; US20150306205A1; JP2019112448A; RU2015129077A; RU2015129028A; HK1212611A1; CN112826929A; AU2013360890A1; WO2014095944A1; AU2013360889B2; AU2013360889A1; RU2661407C2; US11065325B2; EP3431101A1

Abstract

본 발명은 면역손상된(immuno-compromised) 인구들에서 감염에 대한 효과적인 코로 투여되는 백신 조성물들에 대한 것이다. 본 발명의 한 측면은 계절성 인플루엔자 바이러스 균주들에 대하여 어린이들에서 효과적인 백신을 포함하는 본 발명이 백신의 소아과적(paediatric) 용도에 대한 것이다. 본 발명의 나아간 측면은 상기 조성물이 전세계적 전염병(pandemic) 용도로 사용될 때 모든 연령군들의 대상들에 대한 것이다.

Description

면역손상된 인구들에서의 사용을 위한 백신 조성물{VACCINE COMPOSITION FOR USE IN IMMUNO-COMPROMISED POPULATIONS}

본 발명은 면역손상된(immuno-compromised) 인구들에서 감염에 대하여 효과적인, 코로(nasally)-투여되는 백신 조성물들에 대한 것이다.

본 발명의 배경

현재 널리 쓰이는 인플루엔자 백신들은 살아있는 바이러스 또는 불활성화된 바이러스에 기초하며, 불활성화된 바이러스 백신들은 전체(whole) 바이러스, "분할(split)" 바이러스, 소단위체(subunit) 단백질들 또는 (혈구응집소(haemagglutinin) 및 뉴라미니다제(neuraminidase)를 포함하는) 정제된 표면 항원들 상에 기초할 수 있다.

노인들을 포함하는 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에서 인플루엔자(influenza) 및 그것의 의학적 부담(burden)의 사회경제적 영향은 점점더 인식되어 왔다. 게다가, 면역손상된(immuno-compromised) 개인들의 예를 들어 ≥ 65 살인 노인들은 다른 연령 그룹들과 비교하여, 계절성 인플루엔자로 인한(form) 사망 및 입원의 위험이 매우 크다. 게다가, 면역손상된(immuno-compromised) 개인들은 유행병(epidemic) 기간들 동안 인플루엔자의 높은 공격률을 갖는다. 불행히도, 면역손상된 사람들은 백신접종에 잘 반응하지 못한다. 이들 대상들은 더 젊은 성인들과 비교하여 인플루엔자 적혈구응집소(hemagglutinin)에 대하여 더 낮은 항체 역가들(titers)을 생산함으로써 인플루엔자 백신접종에 반응하는 것이 발견되었다.

면역손상된(immuno-compromised) 개인들의 수는 화학요법들(chemotherapy regimen)의 증가된 강도 및 복잡성, 치유력 있고 목숨을 구할 조혈(hematopoietic) 줄기 세포 이식 및 고형 장기 이식에 이어 면역억제요법을 겪은 개인들의 수, 인간(human) 면역결핍(immunodeficiency) 바이러스 (HIV)로 감염된 개인들의 생활의 개선된 질 및 사망(mortality) 및 사망율(morbidity)의 극적인 감소 때문에, 특정 악성종양들(malignancies)에서 생존률들에서 극적인 개선의 결과로서 과거 30년 동안 꾸준히 증가해왔다.

질병 또는 요법(therapy) 때문에 차선의(sub-optimal) 면역기능을 갖는 개인들이 인플루엔자 관련된 합병증들의(form) 위험이 높다는 것일 인식되었다. 면역손상된(immuno-compromised) 인구들 내 인플루엔자에 대한 우려들은 백신접종에 대한 손상된(impaired) 반응 및 증가된 사망(mortality)을 갖는 복잡한 감염의 더 높은 위험, 전염 통제에 영향을 갖는 더 크고 오래 지속되는 바이러스 쉐딩(shedding) 및 백신접종의 가능한 부작용들을 포함한다.

면역손상된 대상들은 또한 ≥ 65살인 사람들, 임신한 여성들, 화학요법 받는 환자들, 장기이식 환자들과 같은 면역억제 약물들 복용 중인 환자들, HIV 감염된 개인들을 포함한다. 면역손상된(immuno-compromised) 대상들로 고려되는 제한되지 않는 리스트가 표 1에 나타나 있다.

종래의 비경구(parenteral) 백신들이 보통 면역능력있는(immuno-competent) 인구에 비교할 때 면역손상된 개인들에서 충분한 방어면역ㅇ르 유도할 수 있는 능력을 저하시킨다는 것이 연구에서 보여졌다. 이런 이유로, 인플루엔자 A(H1N1) 전세계적 전염병(pandemic)과 같은 "온화한" 인플루엔자 전세계적 전염병(pandemics)조차도 노인들 및 면역-손상된 사람들에서 상당한 사망(mortality)과 관련되었다.

임신은 면역-손상된 상태이다;임신 동안 면역 시스템은 완전한 능력으로 작동하지 않는다. 이 때문에, 임신 중 인체의 면역 세스템은 인플루엔자 바이러스와 싸워 물리치는데 더 힘든 시기를 갖고, 그러므로 독감(flu)은 더욱 심각한 경향을 갖는다. 사실, 임신한 여성들은 과거 세기 동안 모든 인플루엔자 세계적 전염병들(pandemics)에서 심각한 질병에 의하여 불균형적으로 영향 받아왔다. 1918년 독감 세계적 유행(pandemic) 시, 예를 들어, 독감에 걸린 모든 임신한 여성들 중 반이 폐렴을 경험했다. 이들 중 반이 죽었다-독감에 걸린 임신한 여성들 중 25% 의 경악스럽고 비극적인 사망률을 야기하였다. 1957년 세계적 유행(pandemic) 시, 생식가능연령의 여성들 중, 사망으로 기록된 모든 이들 중 반이 임신한 여성들에게서 일어났다.

대유행기 사이의(inter-pandemic) 기간들 동안, 돌고 있는 인플루엔자 바이러스들은 이전의 전염병(epidemics)으로부터의 그것들과 관련있다. 그 바이러스들은 젊은 시절 감염으로부터의 면역력이 다른 레벨들인 사람들 사이에 퍼진다. 보통 2-3 년의 기간 동안, 항원소변이(antigenic drift)로 알려진 현상에서, 이렇게 도는 것은 일반대중에서 다시 유행병(epidemic)을 일으키기에 충분히 변화된 신규 균주들(strains)의 선택을 촉진한다. 소변이(drift) 변종들(variants)은 비록 몇 년 간 그것들의 전반적인 영향이 자주 유사함에도 불구하고, 임의의 한 해 동안 다른 사회들, 지역들, 국가들 또는 대륙들에서 다른 영향들을 가질 수 있다. 보통 인플루엔자 전염병(epidemics)은 증가된 비율의 입원 또는 사망(mortality)으로 목격되듯이, 하부 호흡기(lower respiratory) 질병 및 폐렴의 발생률의 증가를 야기한다. 면역손상된(immuno-compromised) 사람들, 특히 노인들 또는 만성질환이 있는 사람들은 이러한 합병증들을 경험할 가능성이 제일 높지만, 어린 유아들 또한 심각한 질병으로 고통받을 수 있다. 어떤 의미에서, 어린이들 또한 그들의 면역 시스템이 완전히 발달하지 않고, 성인의 면역 시스템과 마찬가지로 잘 받응하지 않기 때문에, 면역손상된(immune-compromised) 것으로 고려될 수 있다. 유아들은 그들의 인생의 처음 3달에서, 감염들에 만감한데, 그것은 더 나이 많은 개인들에서는 흔하지 않은 것으로(스트렙토코커스(Streptococcus) 아갈락티애(agalactiae)와 같은), 유아들은 인생의 처음 몇 달 동안 모계의 항체에 의존한다. 유아들은 성인들과 동일한 방식으로 특정 백신들에 반응하지 않고, 약 5 살이 될 때까지 다당류 항원들에 대한 효과적인 항체들을 생산할 수 없다. 면역 시스템은 어린이와 함께 자라고 발달하며, 성호르몬들이 어린이의 면역 시스템의 완전한 성숙을 책임질 수 있는 때인 사춘기까지는 성인의 그것과 완전히 비슷하지 않다.

예측 불가능한 간격들로, 신규 인플루엔자 바이러스들은 "항원대변이(antigenic shift)"로 알려진 과정을 통하여 모습을 드러내며, 세계적 전염병들(pandemics)을 일으킬 수 있다. 항원대변이(antigenic shift)는 바이러스의 둘 또는 그 이상의 다른 균주들이 결합하여 둘 또는 그 이상의 원래 균주들(strains)의 표면 항원들의 혼합물을 갖는 신규 서브타입(subtype)을 형성하는 공정이다. 항원대변이(antigenic shift)는 표현형의 변화를 주는 바이러스 대변이(shift) 또는 재배열(reassortment)의 특정 케이스이다. 그러므로 인간 인구가 기존의 면역력이 없는 신규 인플루엔자 바이러스가 나타날 때, 인플루엔자 전세계적 전염병(pandemic) 발생한다.

항원변이(antigenic shift)는 항원소변이(antigenic drift)와 대조되는데, 이는 면역력 상실 또는 백신 미스매치(mismatch)를 이끌 수 있는 공지의 균주들인 인플루엔자의 시간이 지남에 따른 자연적 돌연변이이다. 항원소변이(antigenic drift)는 인플루엔자 바이러스 A, 인플루엔자 B 및 인플루엔자 C를 포함하는 모든 타입들의 인플루엔자에서 발생한다. 항원소변이(antigenic drift)는 그러나, 인플루엔자 바이러스 A에서만 발생하는데, 이는 그것이 인간들만에 그치지 않고 그보다 더 감염시키기 때문이다.

세계적 전염(pandemic) 동안, 항바이러스제들은 잠재적으로 생명을 위험하는 인플루엔자 질병의 위험이 있는 개인들의 수 및 수요들을 커버하기에 충분히 효과적이거나 충분하지 않을 것이다. 적절한 백신들의 개발은 면역학적으로 나이브한(naive) 대상들에서 방어(protective) 항체 레벨들을 달성하기 위하여 필수적이다.

이러한 문제들은 항원 함량(content)을 감소시켜, 이에 의하여 이용가능한 백신의 수를 증가시킬 수 있도록 백신의 면역원성(immunogenicity)을 증가시키려는 목적으로 최적의 백신 전달 및/또는 아쥬반트화(adjuvantation)에 의하여 대항된다. 아쥬반트(adjuvant)의 사용은 특정 인플루엔자 균주에 대하여 기존의 면역력이 없는 인구에게서 항원에 대한 면역 시스템을 준비시키는 것을 도울 수 있다. 아쥬반트(adjuvant)는 또한 백신의 전달을 증강시켜, 이로써 면역 반응을 유도하는데 필요한 항원의 양을 감소시킬 수 있다. 백신 전달(delivery) 및/또는 백신접종의 루트(route)는 매우 중요할 수 있다. 대부분의 인플루엔자 백신들은 비경구적으로 전달되며, 그러므로 주로 혈중 인플루엔자에 대한 면역력을 유도한다. 그러나 인플루엔자 바이러스들은 우리의 코 또는 입, 즉, 점막의(mucosal) 막들(membranes)을 통하여 우리 신체로 들어온다. 인플루엔자 백신을 코로 전달함으로써, 점막(mucosa) 및 혈액 모두에서 인플루엔자-특이적 면역력을 유도할 수 있다. 이는 인플루엔자에 대한 방어면역을 유도하는 것을 목표로 할 때, 특히, 인플루엔자 백신 균주 또는 임의의 인플루엔자에 대하여 전에 면역력이 없는 개인들에게, 이득일 수 있다.

백신 항원에 대한 기존의 면역력이 없는 개인들에게서 인플루엔자 질병에 대한 방어면역을 유도할 수 있는, 신규의 전체(whole) 불활성화된 바이러스 또는 불활성화된 바이러스로부터의 부분에 기초한 백신과 같은 신규의 살아있지 않은(non-live) 백신들이 필요하다. 인플루엔자에 대한 충분한 기존의 면역력이 없고/없거나 약해진 면역 상태를 갖는 개인들은 면역손상된(immuno-compromised) 개인들, 어린이들 및 세계적 전염병(pandemic)의 경우 전세계 인구의 대부분 (또는 모두). 본 발명은 특히 면역손상된(immuno-compromised) 사람들, 예를 들어 노인들에 대한 것이다. 이 그룹은 인플루엔자에 대한 면역학적 반응을 북돋을 수(boost) 있는 안전하고, 살아있지 않은 백신을 필요로 한다. 전세계적 전염병(pandemic)의 선포 시 또는 이전에 전세계적 전염병(pandemic) 균주에 대하여 면역학적으로 나이브한(naive) 인구를 준비시키기 위하여 페리-판데믹(peri-pandemic) 백신들로서 사용될 수 있는 신규 백신들 또한 필요하다. 본 발명은 특히 면역손상된(immuno-compromised) 개인들에 대한 것이고, 코의(nasal) 투여를 위하여 제형화되고, 그리고 병원체들(pathogens) 예를 들어 바이러스 또는 바이러스들의 부분으로부터의 불활성화된 항원들만을 포함하기 때문에 특히 쉽게 투여될 수 있다. 강한(potent) 아쥬반트들을 갖는 백신 항원들의 제제(formulation)들은 면역 반응들을 증강시키게 한다.

백신 항원에 대한 기존의 면역력이 없는 개인들에게서 인플루엔자 질병에 대한 방어면역을 유도할 수 있는, 신규의 전체(whole) 불활성화된 바이러스 또는 불활성화된 바이러스로부터의 부분에 기초한 백신과 같은 신규의 살아있지 않은(non-live) 백신들이 필요하다.

도 1: H1N1 A/Ned/602/09 (A)에 대한 HI 항체 역가들의 발달. 그룹 1, 3-6 의 페럿들은 0, 21 및 42 일에 점비액들(nasal drop)에 의하여 비강내로 접종되었고, 그리고 그룹 2의 페럿들은 21 및 42 일에 피하로 주사되었다. 0, 21 및 42 일에 면역조치들 전 및 64 및 70 일에 마지막 면역조치(immunization) 후 수집된 혈청들에서 HI 항체 역가들이 결정되었다. 그룹 1 (대조군, 비강내(i.n.) 식염수(saline)), 그룹 2 (피하(s.c.) TIV), 그룹 3 (5 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ ™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 4 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ ™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 5 (30 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ ™ 아쥬반트된 분할 항원) 및 그룹 6 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ ™ 아쥬반트된 불활성된 전체(whole) 바이러스 항원). 막대기들(bars)은 95% CI (GMT +/- CI95)로 그룹 당 6 마리 동물들의 기하 평균을 나타낸다.
도 2: 먼(distant) 바이러스들에 대한 HI 역가들.
그룹 1, 3-6의 페럿들은 0, 21 및 42 일에 점비액들에 의하여 비강내로 접종되었고, 그룹 2의 페럿들은 21 및 42 일에 피하로 주사되었다. HI 항체 역가들은 0, 21 및 42 일에 면역조치들 전 및 64 및 70 일에 마지막 면역조치 후 수집된 혈청들에서 결정되었다. 그룹 1 (대조군, 비강내(i.n.) 식염수(saline)), 그룹 2 (피하(s.c.) TIV), 그룹 3 (5 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 4 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 5 (30 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원) 및 그룹 6 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 불활성 전체(whole) 바이러스 항원). 막대들은 95% CI (GMT +/- CI95)으로 그룹 당 6 마리 동물들의 기하 평균을 나타낸다. GMT 계산들을 위하여, ≤ 5 값은 절대값 5로 대체되었다. A: H1N1 A/Swine/Ned/25/80에 대한 항체 역가들. B: H1N1 A/Swine/Italy/14432/76에 대한 항체 역가들. C: H1N1 A/New Jersey/08/76에 대한 항체 역가들.
도 3: H1N1 A/Ned/602/09에 대한 VN 항체 역가들의 발달.
그룹 1, 3-6의 페럿들은 0, 21 및 42 일에 점비액들에 의하여 접종되었고, 그룹 2의 페럿들은 21 및 42 일에 피하로 주사되었다. VN 항체 역가들은 0, 21 및 42 일에 면역조치들 전 및 64 및 70 일에 마지막 면역조치 후에 수집된 혈청들에서 결정되었다. 그룹 1 (대조군, 비강내(i.n.) 식염수(saline)), 그룹 2 (피하(s.c.) TIV), 그룹 3 (5 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 4 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 5 (30 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원) 및 그룹 6 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ adjuvanted inactivated 전체(whole) 바이러스 항원). 막대들은 95% CI (GMT +/- CI95)로 그룹 당 6 마리 동물들의 기하 평균을 나타낸다.
도 4: 나이브한 페럿들에서 본 발명의 백신(20 mg/ml (2 %) 엔도신(Endocine)TM과 15 ug HA 분할 인플루엔자 항원을 포함하는 이뮤노스(Immunose)TM FLU)의 다른 아쥬반트된 백신 제품들, 플루미스트(FluMist) (살아있는 약독화 백신) 및 주사가능한 백신들.
도 5a: 이뮤노스(Immunose)™ Flu로 면역조치된 나이많은 마우스들(원), 아쥬반트 없이 면역조치된 나이많은 마우스들(정사각형), 비강내 식염수(saline) 용액을 받은 나이많은 마우스들(플러스 사인) 및 이뮤노스(Immunose)™ Flu를 받은 어린 마우스들(삼각형)에서 시간에 따른 인플루엔자 특정 IgG1 역가 반응을 보여준다.

도 5b: 이뮤노스(Immunose)™ Flu 로 면역조치된 나이많은 마우스들(원), 아쥬반트 없이 면역조치된 나이많은 마우스들(정사각형), 비강내 식염수(saline) 용액으로 받은 나이많은 마우스들(플러스 사인) 및 이뮤노스(Immunose)™ Flu를 받은 어린 마우스들(삼각형)에서 시간에 따른 인플루엔자 특정 IgG2a 역가 반응을 보여준다.

도 5c: 이뮤노스(Immunose)™ Flu로 면역조치된 나이많은 마우스들(원), 아쥬반트 없이 면역조치된 나이많은 마우스들(정사각형), 비강내 식염수(saline) 용액을 받은 나이많은 마우스들(플러스 사인) 및 이뮤노스(Immunose)™ Flu를 받은 어린 마우스들(삼각형)에서 시간에 따른 인플루엔자 특정 IgA 역가 반응을 보여준다.
표 5: 임상의, 바이러스학 및 육안병리학(gross-pathology)의 파라미터들에 의하여 입증된 페럿들에서의 엔도신(Endocine)™ 제조된(formulated) 2009 H1N1 백신들의 효험.
: 그룹 1 (대조군, 비강내(i.n.) 식염수(saline)), 그룹 2 (피하(s.c.) TIV), 그룹 3 (5 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 4 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 5 (30 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원) 및 그룹 6 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 불활성 전체(whole) 바이러스 항원).
임상적( clinical ) 점수들( Scores ). 생존, 4 dpi까지 생존한 동물들의 수; 열(fever)(⁰C), 표준 편차를 갖는 평균으로 나타낸 최대 온도 증가, 괄호에 넣어서 열이 관찰된 동물들의 수, (*), 기록기의 기능불량 때문에 그룹 4의 1 동물의 체온은 이용가능하지 않았다; 표준 편차를 갖는 평균으로 나타낸 0 및 4 사이의 % 체중 손실, 괄호에 넣어서 체중 손실을 갖는 동물들의 수.
바이러스학. 코 및 인후 표본(swab) 샘플들에서의 바이러스 쉐딩(shedding), 적정 결과들 1-4 dpi을 위한 곡선하(under the curve) (AUC) 영역, 괄호에 넣어서 1 또는 그 이상의 바이러스 positive 표본(swab)을 보이는 동물들의 수; 표준편차를 갖는 평균으로서 나타낸 4 dpi 상 (log₁₀TCID₅₀ /g) 폐 및 비갑개들(turbinates)에서의 바이러스 로드(load), 또는 그룹 내 모든 동물들이 음성인 경우 검출의 더 낮은 한계, 괄호에 넣어서 폐 / 비갑개(turbinate) 바이러스를 갖는 동물들의 수.
육안병리학 ( Gross pathology ). 표준편차를 갖는 평균으로서 나타낸 4 dpi 상 부검 동안 외관(visual) 검사에 의하여 추정된 영향받은 폐 실질(parenchyma)의 %.괄호에 넣어서 영향받은 폐를 가진 동물들의 수; 표준편차를 갖는 평균으로서 나타낸 4 dpi 상 폐/체중 비율 (x10²)
표 6: 4 dpi 상 조직병리학적(histopathological) 파라미터들에 대하여 반정량적 점수.
a: 그룹 1 (대조군, 비강내(i.n.) 식염수(saline)), 그룹 2 (피하(s.c.) TIV), 그룹 3 (5 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 4 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원), 그룹 5 (30 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원) 및 그룹 6 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 불활성화 전체(whole) 바이러스 항원).
조직병리학( Histopathology ). 4 dpi 상 조직병리학적(histopathological) 파라미터들에 대한 반정량적 점수. 폐포염(alveolitis)/폐포(alveolar) 손상의 정도, 점수:0, 0%; 1, 25%; 2, 25-50%; 3, > 50 %; 폐포염의 심각도, 점수: 염증성 세포들 없음 (0); 몇몇 염증성 세포들 (1); 염증성 세포들이 보통의 수 (2); 많은 염증성 세포들 (3); 폐포(alveolar) 부종(oedema), 폐포(alveolar) 출혈(haemorrhage) 및 타입 Ⅱ 폐포세포 과형성(hyperplasia)이 양성 슬라이드들(slides)로서 점수화되었다(no=0, yes=1); 모든 조직병리학(histopathology) 결과들은 표준편차를 갖는 평균들로 나타낸다.

본 발명의 개요

본 발명의 목적은 손상된(impaired) 면역 시스템을 가진 대상들에서 계절성 및 전세계적 전염병(pandemic) 바이러스 균주들 모두 및 다른 병원체 생물들에 대한 방어면역을 제공하고 면역 반응을 유도하는 것이다. 본 발명의 한 측면은 계절성 인플루엔자 바이러스 균주들에 대하여 어린이들에게서 효과적인 백신을 포함하는 본 발명의 백신의 소아과적(paediatric) 용도에 대한 것이다. 본 발명의 더 나아간 측면은 본 조성물이 전세계적 전염병(pandemic) 사용을 위한 것일 때, 모든 연령 그룹들의 대상들에 대한 것이다.

본 발명의 첫 번째 측면은 비강내(intranasally) 투여되는 백신으로서 사용되기 위한, 하기를 포함하는 조성물에 대한 것으로, 상기 백신은 면역손상된(immuno-compromised) 대상들의 면역조치(immunization)을 위한 것이다:

i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 항원들, 및

ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들,

수성(aqueous) 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들(mono-glycerides).

상기 조성물은 비강내(intranasal) 투여를 위한 인플루엔자 백신으로서 용도를 위하여 제형화된다. 본 발명은 면역손상된(immune-compromised) 대상들 내 인플루엔자의 비강내 면역조치(immunization)을 위한 백신으로서의 용도를 위하여 개발되었다.

본 발명의 두 번째 측면은, 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에 비강내(intranasally) 투여되는 백신으로서의 사용을 위한, 하기를 포함하는 조성물에 대한 것이다:

하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들, 및

하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들(carboxylic acids),

수성(aqueous) 매질(medium), 및

본 발명의 세 번째 측면은, 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)로의 감염과 관련된 증상들의 심각도를 감소시키거나 또는 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)로의 감염의 예방을 위하여, 면역손상된(immune-compromised) 대상들에서의 사용을 위한, 비강내 투여되는 백신으로서의 사용을 위한, 하기를 포함하는 조성물에 대한 것이다:

i) 하나 또는 그 이상의 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae) 항원들, 및

ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들(carboxylic acids),

수성(aqueous) 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들.

본 발명의 네 번째 측면은 하기를 포함하는 조성물의 비강내 투여에 의하여 면역손상된(immuno-compromised) 대상들의 면역조치(immunization) 방법에 대한 것이다:

i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들, 및

ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들,

수성 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들.

본 발명의 자세한 설명

본 발명의 예들을 설명할 때, 특정 용어들은 명확성을 위하여 의존될 것이다. 그러나 본 발명은 특정 용어들에 한정되어 선택되는 것으로 의도되는 것은 아니며, 그것은 각각의 특정 용어가 유사한 목적을 달성하기 위하여 유사한 방식으로 작동하는 기능적 등가물들(equivalents)을 포함하는 것으로 이해된다.

용어 "면역손상된(immuno-compromised)"은 임신한 여성들 및 ≥ 65 살의 대상들을 의미한다. 상기 용어는 또한 유전적 결함, 면역 시스템의 병원체 유도된 억제 또는 면역 시스템의 약물 유도된 억제의 결과로서, 손상된(impaired) 면역 시스템을 갖는 모든 연령 그룹들의 사람들을 포함한다.

그러므로 면역손상된 환자들은 하기 환자 종류들을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다; 암 환자들, 화학요법을 받는 사람들, 방사선(radiation) 요법(therapy)을 받는 사람들, 장기이식 환자들, 고형(solid) 장기 이식들을 겪는 사람들, 줄기세포 이식 환자들, 조혈의(hematopietic) 동종이형(allogenic) 줄기세포 이식을 겪는 사람들, 조혈의(hematopoietic) 자가조직의(autologous) 줄기세포 이식을 겪는 사람들. HIV 감염된 환자들, AIDS를 갖는 사람들, 이식편대숙주(graft-versus-host) 질병을 가진 환자들, 면역억제제들 예를 들어 글루코코르티코이드(glucocorticoid) 요법(therapy) 및 스테로이드 요법(therapy)을 받는 환자들, 만성 질환들 예를 들어 말기(end stage) 신장(renal) 질환, 당뇨, 간경화(cirrhosis)..를 갖는 사람들.

용어 “페리-판데믹(peri-pandemic) 기간”은 세계적 전염병(pandemic) 주위의 시간 기간을 가리킨다. 정해진 세계적 전염병들(pandemics)은 WHO에 의하여 공식적으로 확인된 시간 기간들로, 본 발명은 전세계적 전염병(pandemic)의 공식적인 인식(recognition) 직전 및 바로 직후의 세계적 전염병(pandemic)의 시간 기간에 대한 것으로, 이 기간 동안 백신접종이 권고된다.

본 발명의 조성물의 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들은 하나 또는 그 이상의 인플루엔자 균주, A, B 및/또는 C 균주일 수 있다. 전세계적 전염병(pandemic) 인플루엔자 균주들에 대한 방어면역을 제공하고 면역 반응을 준비시킬 수 있는 백신 조성물은 보통 하나의 인플루엔자 A 균주 (1가의(monovalent)) 유래의 항원들만을 포함하는 반면, 계절성 인플루엔자 균주들에 대한 방어면역을 제공하고 면역 반응을 준비시킬 수 있는 백신 조성물은 보통 셋 또는 그 이상의 다른 균주들 (3가(trivalent) 또는 4가(quadrivalent))을 포함한다. 대부분의 보통의 두 개의 다른 인플루엔자 A 균주들 및 하나 또는 그 이상의 인플루엔자 B 균주들.

본 발명은 나아가 본 발명의 조성물을 포함하는 백신 조성물을 비강내로 투여하는 단계를 포함하는, 유행병(epidemic) 또는 전세계적 전염병(pandemic) 기간 동안 또는 그 전의 면역조치(immunization) 방법에 더하여, 본 발명의 조성물을 포함하는 백신 조성물을 비강내로 투여하는 단계를 포함하는, 소아과적(paediatric) 복종(subjection)의 면역조치 방법, 그리고 더 나아가 본 발명의 조성물을 포함하는 백신 조성물을 비강내로 투여하는 단계를 포함하는, 나이브한 대상들의 면역조치 방법에 대한 것이다.

본 발명은 면역손상된(immuno-compromised) 사람들 예를 들어 노인들에 대한 것인데, 이는 이들 인구가 보통의 백신 전략들(strategies)에 관한 한 이 인구가 도전되기(challenged) 때문이다. 사람들이 나이를 먹으면서, 많은 변화들이 면역 시스템에서 일어난다. 면역 시스템이 늙어감에 따라 그것의 작용들의 일부를 상실하기 시작하고, 일반적으로 면역능력이 있는(immune-competent) 성인 인구에서 자극하도록 효율적으로 또는 빨리 반응할 수 없게 된다는 것이 잘 확립되었다. 진입(advancing) 연령과 발생하는 변화들은 전염성 질병들 (예를 들어 폐렴 및 인플루엔자)의 더 높은 발생 정도들과 같은 중요한 임상적 징후들과 관련이 있다. 체액의 그리고 세포의 면역 반응 모두에서의 변화들은 진입 연령과 함께 일어나고, 노인 인구에서 보이는 면역 민감성(responsiveness)의 감소의 많은 정도가 T 세포 반응들에서의 변화들과 관련이 있다. 효과적인 면역 활성의 상실은 대부분 부분적으로는, 흉선(thymic) 퇴화(involution)의 결과로서 발생하는, T 세포 구획(compartment) 내 변화들(alteration) 때문이다. 나이가 들면서 사람들은 면역노쇠(immunosenescence)의 결과로, 면역손상(immuno-compromised)된다. 면역노쇠(immunosenescence)는 ≥ 65 살의 노인들에서 면역 작용들의 감소를 설명하는데 사용되는 용어이다. 그러므로 증가하는 나이는 백신접종들(vaccinations)에 대한 좋지못한 반응 및 감염들에 대한 증가된 민감성과 관련이 있다. 이들 이유들 때문에, 본 발명과 같은 노인 인구를 위한 더욱 효율적인 백신들의 수요가 있다.

면역손상된(immuno-compromised) 인구들은 약해진 면역 시스템을 갖는다. 임신 및 연령과 같은 자연적인 코스의 결과로써 또는 치료적 처치 또는 질병의 결과로써 면역손상(immuno-compromised)될 수 있다. 연령 관련된 면역노쇠(immunosenescence)에 더하여, 치료적 처치와 더불어 면역 시스템에 영향을 미치는 질병들의 결과로써 면역손상(immuno-compromised)될 수 있다. 면역 시스템의 CD4 T 세포들를 직접적으로 타겟들로 하는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)과 같은 만성적인 바이러스 감염들을 갖는 개인들은 낮은 바이러스 수(count)를 유지하기 위하여 평생동안 항바이러스 및 면역억제 약물들을 복용하고, 이는 결과적으로 약해진 면역 시스템을 이끈다. 장기적인 치료들을 요구하는 B형 간염(hepatitis B) 바이러스 (HBV) 및 C형 간염(hepatitis) C 바이러스 (HCV)와 같은 다른 만성적인 바이러스 감염들은 박테리아, 진균, 또는 다른 바이러스 병원체들에 증가된 민감성을 야기하는 면역손상된(immuno-compromised) 상태와도 또한 관련된다. 장기 이식 환자들은 면역손상(immuno-compromised)으로 분류되는 또다른 환자 그룹인데, 이는 그들이 면역억제제들을 복용하여 그들의 면역 시스템이 이식된 기관을 거부하는 것을 예방하기 때문이다. 나아가, 몇몇 악성종양 치료들은 또한 면역손상된(immuno-compromised) 상태을 이끌 수 있는데, 이는 치료에 더하여, 암 성장을 방지하고 죽이는 것이 면역 시스템을 심각하게 손상시키기 때문이다.

면역손상된(immuno-compromised) 개인들에 대한 수집된 문제는 그들이 비경구(parenteral) 백신들에 작 반응하지 않고, 그러므로 이 인구에서의 백신 성공률을 증가시키기 위한 새로운 접근들에 대한 필요가 있다는 것이다. 본 발명은 이러한 새로운 접근을 제공한다.

임신한 여성들과 더불어 ≥ 65 살의 노인들 및 면역억제 질환들(conditions)을 갖는 성인들 및 어린이들에 적합한, 계절성 인플루엔자 및 다른 기회감염성(opportunistic) 병원체들에 대한 안전하고 효과적인 백신들에 대한 수요가 있다. 상기 면역손상된(immuno-compromised) 대상들은 예를 들어 인플루엔자로 인한 심각하거나 또는 복잡한 감염들에 취약하다. 예를 들어, USA 에서는, 1년에 추정된 평균 225,000 입원들 및 36,000 사망들이 계절성 인플루엔자가 원인이다.

살아있는 약독화된 바이러스 백신들은 안전 우려와 관련된다. 플루미스트(Flumist)®/플루엔즈(Fluenz)는 승인되지 않았는데, 2 살 미만의 작은 어린이들, 노인들 또는 그렇지 않으면 면역손상된 사람들에서의 사용을 위할 때, 이들 안전성 이슈들 때문이다. 역설적으로, 인플루엔자에 특히 높은 위험군은 상기 면역손상된(immuno-compromised) 대상들이다. 플루미스트(Flumist)®는 나이가 더 많은 어린이들에 대하여 승인되었는데, 그러나 이는 살아 있는 약독화된 바이러스 백신이다. 나아가, 플루엔즈(Fluenz)는 활성 물질들 또는 임의의 다른 성분들에, 젠타마이신(gentamicin)에, 또는 달걀들에 또는 달걀 단백질들에 과민한(알레르기(allergic)) 사람들에게는 사용해서는 안된다. 그것은 혈액 질환들(disorders), 증상을 보이는 HIV 감염 및 암과 같은 질환들(conditions) 때문에 또는 특정 의학적 처치들의 결과로서 약해진 면역 시스템들을 갖는 사람들에 주어져서는 안된다. (예를 들어 아스피린과 같은 진통제들) 살리실산염들(salicylates)을 갖는 치료를 받는 어린이들에게도 또한 주어져서는 안된다.

아쥬반트된 살아있지 않은 인플루엔자 백신들의 비강내 투여가 높은 면역 반응들 및, 그 다음 백신 항원에 대한 기존의 면역력이 없는 페럿들(ferrets)에서 인플루엔자 질병에 대한 완전한 보호를 유도한다는 것이 놀랍게도 발견되었다. 전체 및 분할 살아있지 않은 항원 백신들 모두가 실시예 1에 설명된 바와 같이, 주입된 상업적으로 이용가능한 인플루엔자 백신, 플루아릭스(Fluarix)® 이상의 우수한 결과들을 주었다.

본 발명의 조성물은 살아 있는 약독화된 바이러스가 아닌 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들을 이용한다. 게다가, 그것은 비강내로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물의 비강내 투여는 자가-투여에 의하여 페리-판데믹(peri-pandemic) 및 전세계적 전염병(pandemic) 기간들 동안 인구들에 걸쳐, 그것의 특별한 훈련 없는 투여 및 일반화된 사용을 허용한다. 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들의 사용은 살아 있는 약독화된 바이러스 백신들과 관련된 안전성 우려든 없이 작은 어린이들에서 그것의 이용을 허용한다. 본 발명자들은 비강내로 투여될 수 있는 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에서 효과적인 백신을 개발해왔고, 이로써 상기 언급한 이익들을 갖고, 환자들의 종류들 및 취약한 인구들에 대한 중요한 수요를 충족시킬 수 있게 된다.

첫 번째 측면에서, 본 발명은, 비강내 투여되는 백신으로서의 사용을 위한 것으로, 상기 백신은 면역손상된(immuno-compromised) 대상들의 면역조치(immunization)을 위한, 하기를 포함하는 조성물에 대한 것이다:

i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 항원들, 및

ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들,

수성 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들

본 발명의 조성물은 비강내 투여를 위한 인플루엔자 백신으로서의 용도에 적합하다. 본 발명의 조성물은 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에서 인플루엔자에 대한 비강내 면역조치(immunization)를 위한 백신으로서의 사용에 대한 것이다. 한 예에서, 본 조성물은 ≥ 65 살의 사람들의 면역조치(immunization)을 위한 백신으로서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 조성물은 임신한 여성들의 면역조치(immunization)을 위한 백신으로서의 사용을 위한 것이다.

인플루엔자 바이러스들은 세 가지 타입들 A, B, 및 C로 구성된다. 인플루엔자 A 바이러스들은 인간들, 말들, 돼지들, 페럿들 및 닭들을 포함하는 많은 종류의 포유동물들 및 새들을 감염시킨다. 인플루엔자 인플루엔자는 인간들, 페럿들 및 바다표범(seal)들에 존재하고, C는 인간들, 개들 및 돼지들에 존재한다. 인플루엔자 A로 감염된 동물들은, 인간 인구에 전염되는 유전적으로 그리고 항원과 관련하여 다양한 바이러스들의 풀(pool)들을 만듬으로써, 인플루엔자 바이러스를 위한 저장소(reservoir)로서 자주 작용한다. 전염(transmission)은 예를 들어, 가축을 다룸으로써, 감염된 동물들 및 사람들 간의 밀접한 접촉을 통하여 발생할 수 있다. 인간에서 인간으로의 전염은 밀접한 접촉을 통하여, 또는 기침 또는 재채기에 의하여 생산되는 비말들(droplets)의 흡입을 통하여 발생할 수 있다.

인플루엔자 A 바이러스 입자의 외부 표면은 지질 외피(envelope)로 구성되는데, 이는 당단백질들 적혈구응집소(hemagglutinin) (HA) 및 뉴라미니다제(neuraminidase) (NA)를 포함한다. HA 당단백질은 2 개의 서브유닛들(subunits)을 포함하는데, 이는 HA1 및 HA2로 명칭된다. HA는 시알산(sialic acid) 결합 부위을 포함하는데, 이는 상기도 및 하기도(lower respiratory tract)의 상피 세포들의 외막 상에서 발견되는 시알산(sialic acid)에 결합되고, 수용체 매개 엔도사이토시스(endocytosis)를 통하여 세포 내로 흡수된다. 일단 세포 내로 들어가면, 인플루엔자 바이러스 입자는 그것의 게놈을 방출시키는데, 이는 핵으로 들어가, 새로운 인플루엔자 바이러스 입자들의 생산을 시작한다. NA 또한 생산되는데, 이는 세포 표면으로부터 시알산(sialic acid)을 절단하여, 방출된 인플루엔자 바이러스 입자들의 재포획(recapture)을 방지한다. 바이러스는, 비록 배양 기간이 매우 다양할 수 있지만, 보통의 경우 대략 5일인, 짧은 기간 동안 배양된다. 바이러스는 질병의 시작 거의 하루 전에 분비되고, 보통 3 내지 5 일까지 지속된다. 보통의 증상들은 열, 피로, 불쾌감(malaise), 두통, 쑤시고(aches) 아픔(pains), 기침 및 인후염을 포함한다. 몇몇 증상들은 감염 후 몇 주간 지속될 수 있다.

인플루엔자 바이러스의 다른 균주들은 HA 및 NA 당단백질들에서 돌연변이들에 의하여 주로 특징되며, 이와 같이 HA 및 NA 가 바이러스 서브타입들을 확인하는데 사용된다(즉, H5N1는 HA 서브타입 5 및 NA 서브타입 1을 가리킨다). 보통 말하는 인플루엔자 백신들은 종종 HA 및 NA 분자들을 타겟으로 한다. 종래의 인플루엔자 바이러스 백신들은 전체 불활성화된 바이러스들을 자주 이용하는데, 이는 적절한 HA 및/또는 NA 분자를 갖는다. 대체하여, HA 및 NA 단백질들의 재조합 형태들 또는 그것들의 서브유닛들이 백신들로서 이용될 수 있다. 백신 조성물 내 항원은 예를 들어 전체 불활성화된 바이러스들, 분할 항원들, 소단위체(subunit) 항원들, 재조합 항원들 또는 펩타이드들과 같은 불활성화된 항원들일 수 있다. 용어 "항원" 또는 "면역원(immunogen)"은 면역 반응의 타겟으로서 작용할 수 있는 임의의 것으로 정의된다. 상기 용어는 또한 단백질 항원들, 재조합 단백질 구성요소들(components), 바이러스 유사(like) 입자들 (VLPs)과 더불어 유전적으로 조작된(engineered) RNA 또는 DNA를 포함하는데, 이는 - 신체의 세포들에 주입될 때- 숙주 세포들의 "내부(inner) 기계(machinery)"가 DNA를 "읽어(reads)", 그것을 병원체의 단백질들을 합성하는데 이용한다. 왜냐하면, 이들 단백질들이 이물질(foreign)로 인식되기 때문에, 그것들은 숙주 세포들에 의하여 공정화되고, 그것들의 표면 상에 개시되며(display), 면역 시스템이 경계되어, 그 다음 다양한 면역 반응들을 촉발시킨다. 상기 용어는 또한, 불활성화된 박테리아 또는 바이러스들 또는 그것들의 부분들을 모방하는(mimic) 물질들을 포함한다. 상기 면역 반응은 세포성 또는 체액성일 수 있고, 그리고 전신성(systemic)및/또는 점막의(mucosal) 구획들(compartments)에서 감지될 수 있다.

그러나 인플루엔자는 RNA 바이러스이고, 따라서 잦은 돌연변이가 될 수 있어, 바이러스의 항원성 조성물에 끊임없고 영구적인 변화들을 야기한다. 항원성 조성물은 항체 결합 에피토프들(epitopes)과 같은 면역 시스템에 의하여 인식되는 폴리펩타이드의 부분들을 가리킨다. 항원성 조성물에 대한 작고, 마이너한(minor) 변화들은 자주 항원소변이(antigenic drift)로 가리켜진다. 인플루엔자 A 바이러스들은 또한 재배열이라 불리는 과정에서 다른 서브타입들로부터 유전적 물질들을 "교환하기(swapping)"하는 것이 가능한데, 이는 항원대변이(antigenic shift)로 가리켜지는 항원성 조성물에 대한 큰(major) 변화를 야기한다. 바이러스(viral) 입자들에 대한 면역 반응이 HA 및 NA 당단백질들에 대한 항체들의 결합에 의존하기 때문에, 당단백질들에 대한 잦은 변화들은 시간이 지나면서 인플루엔자 바이러스들에 대하여 수득되는 면역 반응의 효과를 감소시키고, 결국 면역력의 부족을 이끈다. 급한 항원소변이(antigenic drift) 및 대변이(shift)를 겪는 인플루엔자 A의 능력은 신규 균주에 대한 기존의 면역력의 부족 때문에 인플루엔자 전염병(epidemics)을 자주 촉발시킨다.

인플루엔자를 예방하기 위한 백신 접종은 특히 인플루엔자로부터 심각한 합병증들의 위험이 높거나, 또는 인플루엔자-관련 외래환자(outpatient), ED 또는 병원 방문들에 대하여 위험이 높은 사람들에게 중요하다. 질병통제센터(Centre for Disease Control) (CDC)는 제한된 백신 공급의 경우, 백신접종 활동들은 인플루엔자가 원인인 심각한 합병증을 발달시킬 위험이 있는 사람들에게 백신접종을 전달하는 것에 포커스를 두어야 할 것을 권고한다. 위험이 높은 사람들은 하기를 포함하나 이에 제한되지 않는다: 6 내지 59 개월들의 연령의 모든 어린이들;

≥ 50 살의 연령의 모든 사람들;

만성적인 폐의(pulmonary) (천식 포함) 또는 심혈관의 (고립된 고혈압 제외), 신장의(renal), 간의(hepatic), 신경계의(neurologic), 혈액의(hematologic), 또는 (당뇨병(diabetes mellitus)을 포함하는)대사 질환들을 갖는 어린이들 및 성인들;

(약들에 의한 또는 HIV 감염에 의한 면역억제를 포함하는) 면역억제(immunosuppression)를 갖는 사람들;

인플루엔자 시즌 동안 임신 중이거나 임신하려는 여성들;

장기간 아스피린 요법을 받거나 인플루엔자 바이러스 감염 후 라이(Reye) 증후군을 경험할 위험이 있을 수 있는 청소년들 및 어린이들(6 개월 내지 18 살의 연령);

양로원들 및 다른 장기 돌봄(care) 시설들의 거주자들.

전세계적 전염병(pandemic) 발발을 야기할 잠재성을 주는 인플루엔자 바이러스 균주의 특징들은: 그것은 최근 돈(circulating) 균주들의 혈구응집소(haemagglutinin)에 비교할 때 새로운 혈구응집소(haemagglutinin)를 포함하며, 이는 뉴라미니다제(neuraminidase) 서브타입에 변화를 수반하거나 수반하지 않을 수 있고; 그것은 인간 인구에게 수평적으로 전염될 수 있고; 그리고 그것이 인간들에게 병원성이라는 것이다. 신규 혈구응집소(haemagglutinin)은 H2와 같이 아마 수십년 동안의 연장된 시간 기간 동안 인간 인구에서 분명하지 않았던 것일 수 있다. 또는 그것은 전에 인간 인구에서 돌지 않았던 혈구응집소(haemagglutinin), 조류들에서 발견되는 예를 들어 H5, H9, H7 또는 H6일 수 있다. 어떠한 경우든, 다수 또는 적어도 대부분 또는 심지어 전체 인구가 항원을 전에 맞닥뜨린 적 없고, 그것에 대하여 면역학적으로 나이브(naive)하다.

본 발명의 백신은 특히 면역손상된(immuno-compromised) 대상들, 예를 들어 ≥ 65 살의 연령의 노인들에 대한 것이다. 본 발명은 또한 질병 또는 요법(therapy) 유도된 면역손상된(immuno-compromised) 상태인 대상들에 대하여 의도된다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 암 환자들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 임신한 여성들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 화학요법을 받는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 방사선(radiation) 요법(therapy)을 받는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 장기이식 환자들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 고형(solid) 장기이식들을 겪는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 줄기세포 이식 환자들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 조혈의(hematopietic) 동종이형(allogenic) 줄기세포 이식을 겪는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 조혈의(hematopoietic) 자가조직의(autologous) 줄기세포 이식을 겪는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 HIV 감염된 환자들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 AIDS가 있는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 이식편대숙주 질병이 있는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 면역억제제들 예를 들어 글루코코르티코이드 요법(therapy)을 받는 환자들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서, 본 발명의 조성물은 스테로이드 요법(therapy)을 받는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 나아가, 본 발명의 조성물은 전세계적 전염병(pandemic) 또는 페리-판데믹 기간들 동안 모든 연령군들의 면역손상된(immuno-compromised) 개인들을 위한 백신으로서 의도된다. 한 예에서, 본 발명은 소아과적으로(pediatic) 면역손상된(immuno-compromised) 대상들을 위하여 의도된다.

그러므로 본 조성물은 특히 세계적 전염(pandemic) 동안 소아과의(pediatric) 면역손상된(immuno-compromised) 대상에 대한 것이다. 상기 소아과의(pediatic) 면역손상된(immune-compromised) 대상들은 0 내지 18 살의 어린이들, 특히 12 살 및 그 미만(under)의 어린이들과 같은 18 살 미만(under)의 어린이들일 수 있다. 보통 어린이들은 6 살 또는 그 미만(less)와 같은 8살의 연령보다 미만인(less) 어린이들이다. 본 발명의 백신을 위한 중요하게 의도되는 환자들의 종류는, 특히 2 개월 내지 9 살 미만(less)의 면역손상된(immuno-compromised) 어린이들, 보통 3 개월 내지 9 살 미만(less)의, 6 개월 내지 8살 미만(less)의 가장 보통으로는 6 개월 내지 7 살 미만(less)의, 6개월 내지 72 개월 미만(less)와 같은, 또는 6 개월 내지 60 개월 또는 6 개월 내지 24 개월의 면역손상된(immuno-compromised) 어린이들이다. 본 발명의 조성물은 적어도 부분적으로는 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에서의 소아과의(pediatric) 이용을 위한 백신으로서 의도된다.

면역손상된(immuno-compromised) 대상들은 상기 조성물이 특히 전세계적 전염병(pandemic) 또는 페리-판데믹 기간들 동안 사용을 위한 백신에 대한 것일 때, 모든 연령군들의 그것일 수 있다.

비강내 투여는 상기 백신을 비강(nasal cavity) 내로 분무하는 것과 같은, 또는 피펫을 이용하여 비강(nasal cavity) 내 또는 코의 점막(mucosal)의 벽(wall) 상으로 백신을 방울방울 떨어뜨림으로써(dripping) 백신을 투여함으로써와 같은, 임의의 모드의 투여로 코로 투여하는 것을 의미한다.

상기 조성물은 유리하게는 살아 있는 약독화된 바이러스보다는 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들을 포함한다. 전술한 바와 같이, 이는 환자 종류의 선택에서 뿐 아니라 생산, 분배 및 처리(disposal)의 면에서도 안전성 우려를 피한다. 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원은 전체 불활성화된 바이러스, 분할 바이러스, 소단위체(subunit) 인플루엔자 항원 및 재조합 항원들로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 재조합 단백질들의 이용은 바이러스로 하는 시험감염(challenge)에 대하여 생산되는 항체들을 중화시키는(neutralizing) 역가를 증가시키는데 이용될 수 있다. HA의 글리코실화(glycosylation)는 면역 시스템을 피하기 위한 바이러스 능력 및 항체 반응을 끌어내기(elict) 위한 면역 반응의 능력에 중요한 역할을 산다. 이런 이유로, 재조합 HA 단백질들은 증가된 면역원성으로 비-글리코실화되거나 또는 모노글리코실화된(monoglycosylated) 재조합 단백질들과 더불어 이종의(heterogeneous) 복합체-타입 글리칸들(glycans)을 포함하는 것으로 만들어진다.

바람직하게는, 상기 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원은 분할 항원 또는 소단위체(subunit) 인플루엔자 항원이고, 더욱 바람직하게는 분할 항원이다.

인플루엔자 A 게놈은 8 개 조각들의 RNA 들 상에 11 개 유전자들을 포함하는데, 이는 11 개 단백질들을 코드한다:적혈구응집소(hemagglutinin) (HA), 뉴라미니다제(neuraminidase) (NA), 핵산단백질(nucleoprotein) (NP), M1, M2, NS1, NS2(NEP: nuclear export protein), PA, PB1 (폴리머라제(polymerase) 베이직(basic) 1), PB1-F2 및 PB. 살아 있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들은 임의의 단백질 또는 바이러스 유래의 단백질들의 조합으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 조성물은 임의의 불활성화된 인플루엔자 바이러스를 포함할 수 있다. 당업자에게 이해되듯이, 인플루엔자 바이러스는 계절마다 그리고 그것들이 감염되는 인구들 및 지리적 지역에 의하여도 또한 다르다. 본 발명은 본 발명의 아쥬반트(adjuvant) 및 하나 또는 그 이상의 인플루엔자 바이러스로부터의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들을 포함하는 백신들에 대한 것이다. 본 발명의 백신 조성물에서 사용된 살아있지 않은 인플루엔자 항원은 불활성화된 인플루엔자 바이러스로부터 유래한 임의의 항원성 물질일 것이다. 예를 들어, 그것은 불활성화된 전체(whole) 바이러스 입자들을 포함할 수 있다. 대체하여 그것은, 파괴된(disrupted) 바이러스 (분할(split) 바이러스)를 포함할 수 있는데, 이 때, 예를 들어 면역원성의(immunogenic) 단백질, 예를 들어 M2 이온 채널 단백질, 또는 당단백질들이 보유된다. 인플루엔자 막 당단백질들, 혈구응집소(haemagglutinin) (HA) 및/또는 뉴라미니다제(neuraminidase) (NA)의 정제된 조제용 물질들(preparations)은 백신 조성물의 항원성 물질로서 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 백신 조성물은 하나 또는 그 이상의 타입들의 항원성 물질들을 포함할 수 있다. 본 백신 조성물을 준비하는데 사용되는 인플루엔자 타입 바이러스는, 물론 백신을 받는 사람이 보호되려는 인플루엔자에 의존할 것이다.

예를 들어, 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원은 예를 들어, 하기 인플루엔자 바이러스들의 하나 또는 그 이상의 유전적 백본(backbone)의 하나 또는 그 이상의 항원들을 포함한다:A/Ann Arbor/6/60 (A/AA/6/60) B/Ann Arbor/1/66 바이러스, FluMist MDV-A (ca A/Ann Arbor/6/60), FluMist MDV-B (ca B/Ann Arbor/1/66), A/Leningrad/17 도너(donor) 균주 백본, 및 PR8.

또다른 특정 예들에서, 본 발명의 백신 조성물들은 하기의 하나 또는 그 이상으로부터의 예를 들어, HA 또는 NA 폴리펩타이드 서열의 (또는 이러한 서열들에 적어도 90% 상동의(identical) 또는 적어도 95% 상도의(identical)) 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원을 포함한다: B/Yamanashi; A/New Caledonia; A/Sydney; A/Panama; B/Johannesburg; B/Victoria; B/Hong Kong; A/Shandong/9/93; A/Johannesburg/33/94; A/Wuhan/395/95; A/Sydney/05/97; A/Panama/2007/99; A/Wyoming/03/2003; A/Texas/36/91; A/Shenzhen/227/95; A/Beijing/262/95; A/New Caledonia/20/99; B/Ann Arbor/1/94; B/Yamanashi/166/98; B_Johannesburg.sub.--5.sub.--99; BVictoria/504/2000; B/Hong Kong/330/01; B_Brisbane.sub.--32.sub.--2002; B/Jilin/20/03; H1N1 인플루엔자 A 바이러스, H3N2 인플루엔자 A 바이러스, H9N2 인플루엔자 A 바이러스, H5N1 인플루엔자 A 바이러스; H7N9 인플루엔자 A 바이러스; 인플루엔자 B 바이러스; 및 (WHO에 의하여 지정되거나 또는 인간 인구에서 돌지 않은) 전세계적 전염병(pandemic) 인플루엔자 균주.

한 예에서, 인플루엔자 바이러스 균주는 인플루엔자 백신에의 사용을 위하여 WHO에서 전에 권고했던 균주들 중 하나 또는 그 이상의 것일 수 있다.

본 발명의 조성물의 아쥬반트는 비강내 투여를 위한 그것의 적합성 및 그것의 효험에 매우 중요하다. 비강내 투여에 적합한 아쥬반트는 지방산과 결합한 글리세롤의 모노에스터를 선택적으로 포함하는 아쥬반트일 수 있으며, 또는 그것은 지방산들의 조합일 수 있다. 이러한 아쥬반트들에 사용되는 카르복실산들은 긴사슬(C4-C30) 알킬(alkyl), 알케닐(alkenyl) 또는 알키닐(alkynyl) 카르복실산들을 포함할 수 있으며, 이는 선택적으로 가지달리거나 또는 가지달리지 않거나, 고리형이거나(cyclic) 또는 고리형이지 않거나(acyclic), 선택적으로 단일, 이중 또는 다중 불포화(이중 또는 삼중 결합)일 수 있으며, 이는 나아가 선택적으로 다른 종류일 수 있다.

이러한 아쥬반트들에 사용되는 모노글리세라이드들(monoglycerides)은 글리세린의 카르복실산 에스터들일 수 있고, 이때 카르복실산들은 긴 사슬(C4-C30) 알킬(alkyl), 알케닐(alkenyl) 또는 알키닐(alkynyl) 카르복실산들일 수 있고, 이는 선택적으로 가지달리거나 또는 가지달리지 않을 수 있고, 선택적으로 단일, 이중 또는 다중 불포화(이중 또는 삼중 결합)일 수 있고, 이는 나아가 선택저긍로 다른 종류일 수 있다.

백신 조성물 내 모노글리세라이드의 농도는 예를 들어 약 1 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 1 mg/ml 부터 약 25 mg/ml까지 , 약 5 mg/ml부터 약 15 mg/ml가지 또는 약 10 mg/ml 과 같은 범위일 수 있다.

백신 조성물의 지방산의 농도는 예를 들어 약 0.5 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 1 mg/ml 부터 약 25 mg/ml 까지, 약 1 mg/ml 부터 약 15 mg/ml 까지, 약 1 mg/ml 부터 약 10 mg/ml 까지, 약 2 mg/ml 부터 약 8 mg/ml 까지 또는 약 6-7 mg/ml과 같은 범위일 수 있다. 한 예에서, 몰 기준(molar basis)으로 백신 조성물 내 지방산의 농도는 모노글리세라이드의 (몰 기준으로) 농도에 해당한다.

모노글리세라이드 및 지방산의 상기 언급한 농도 범위들의 임의의 조합은 본 출원의 문맥 내에 있다. 게다가, 언급한 가장 넓은 범위는 바람직한 범위를 주고, 그 다음, 상기 범위는 가장 바람직한 범위로 좁아진다.

본 발명의 발명자들은 상기 기재하고, (여기에 참조로서 그 전체가 포함되는) WO 2012/042003에 개시된 아쥬반트들이, 백신접종이, 예를 들어 비강(nasal cavity)의 점막(mucosa)에의 투여인, 코 루트를 통하여 수행될 때, 특히 유용하다는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 코 루트를 통한 백신접농에서 이러한 아쥬반트들의 사용이 백신접종으로 인한 면역 반응을 개선시키는 것을 발견했다. 본 발명자들은 인간들을 포함한 몇몇 종들에서 이러한 아쥬반트들의 사용이 안전하며 용인될만하다는 것을 발견했다.

따라서, 상기 조성물은 라우르산(lauric acid) (C12), 미리스트산(myristic acid) (C14), 팔미트산(palmitic acid) (C16), 팔미톨레산(palmitoleic acid) (C16:1), 올레산(oleic acid) (C18:1), 리놀레산(linoleic acid) (C18:2), 스테아르산(stearic acid), 헥사노익산(hexanoic acid), 카프릴산(caprylic acid), 데칸산(decanoic acid) (카프르산(capric acid)), 아라키드산(arachidic acid), 베헨산(behenic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 알파-리놀렌산(alpha-linolenic acid), 스테아리돈산(stearidonic acid), 아이코사펜타에노익산(eicosapentaenoic acid), 도코사헥사노익산(docosahexaenoic acid), 감마-리놀렌산(gamma-linolenic acid), 다이호모(dihomo)- 감마-리놀렌산(gamma-linolenic acid), 아라키돈산(arachidonic acid), 에루크산(erucic acid), 네르본산(nervonic acid)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 카르복실산들로 모노-에스테르화된(mono-esterified) 글리세라이드들인 모노글리세라이드들을 포함할 수 있다.

더 나아간 예에서, 상기 모노글리세라이드들은 팔미톨레산(palmitoleic acid) (C16:1), 올레산(oleic acid) (C18:1) 및 리놀레산(linoleic acid) (C18:2)로 구성되는 군으로부터 선택되는 카르복실산들로 모노-에스테르화된(mono-esterified) 글리세라이드들일 수 있다.

바람직하게는 상기 모노글리세라이드는 올레산(oleic acid) (글리세릴 올리에이트(glyceryl oleate))로 모노-에스테르화된 글리세라이드이다.

상기 아쥬반트는 바람직하게는 라우르산(lauric acid), 미리스트산(myristic acid), 팔미트산(palmitic acid), 팔미톨레산(palmitoleic acid), 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid) 스테아르산(stearic acid), 헥사노익산(hexanoic acid), 카프릴산(caprylic acid), 데칸산(decanoic acid) (카프르산(capric acid)), 아라키드산(arachidic acid), 베헨산(behenic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 알파-리놀렌산(alpha-linolenic acid), 스테아리돈산(stearidonic acid), 아이코사펜타에노익산(eicosapentaenoic acid), 도코사헥사노익산(docosahexaenoic acid), 감마-리놀렌산(gamma-linolenic acid), 다이호모(dihomo)-감마-리놀렌산(gamma-linolenic acid), 아라키돈산(arachidonic acid), 에루크산(erucic acid) 및 네르본산(nervonic acid)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 또는 그 이상의 카르복실산들을 포함한다. 바람직하게는 상기 하나 또는 그 이상의 카르복실산들은 올레산(oleic acid) 및 라우르산(lauric acid)로 구성되는 군으로부터 선택된다.

적합한 예들의 조합에서, 상기 아쥬반트는 글리세릴 올리에이트(glyceryl oleate), 올레산(oleic acid) 및 수성 매질(medium)을 포함한다. 본 발명의 백신 조성물은 또한 추가의 약학적 첨가제들을 포함할 수 있다. 이러한 약학적 첨가제들은 하기일 수 있다:

1. 본 백신의 긴장성(tonicity)/삼투성(osmolarity)을 통제하기 위한 제제들. 이러한 제제들은 예를 들어 염화나트륨 같은 생리학적 염들이다. 다른 생리학적 염들은 염화칼륨(potassium chloride), 인산이수소칼륨( potassium dihydrogen phosphate), 인산이나트륨(disodium phosphate), 염화마그네슘(magnesium chloride) 등이다. 이러한 제제는 또한 다른 이온성 물질들일 수 있는데, 이는 이온 강도(strength) 및 안정성에 영향을 미친다. 백신의 삼투질농도(osmolality)는 약 200 mOsm/kg 부터 약 400 mOsm/kg 까지의 범위의, 바람직하게는 약 240 mOsm/kg 부터 약 360 mOsm/kg 까지의 범위의 값으로 조정될 수 있고, 또는 삼투질농도(osmolality)는 생리학적 레벨 예를 들어 약 290 mOsm/kg 부터 약 310 mOsm/kg 까지의 생리학적 범위에 근접해야 한다.

2. 백신 조성물을 완충하거나 그 pH를 조정하기 위한 제제들(agents). 보통, 백신 조성물의 pH는 약 5 부터 약 8.5 까지의 범위에 있다. 적절한 pH 조절제들 또는 버퍼(buffer) 물질들은 (pH를 조정하기 위하여) 염산(hydrochloric acid), 수산화나트륨(sodium hydroxide)과 더불어 (백신을 완충하기 위하여) 인산완충액, Tris 버퍼(buffer), 시트레이트(citrate) 버퍼, 아세테이트(acetate) 버퍼, 히스티딘(histidine) 버퍼 등을 포함한다.

3. 예를 들어 계면활성제(surface-active agents), 항산화제들(antioxidants), 킬레이트제들(chelating agents), 항박테리아제들(antibacterial agents), 바이러스(viral) 불활성화물질들(inactivators), 보존제들(preservatives), 염료들, 소포제들(anti-foaming agents), 안정화제들(stabilizers) 또는 계면 활정제들(surface active agents), 또는 이들의 조합과 같은 다른 첨가물들.

상기 계면활성제는 예를 들어 플루로닉(Pluronic) F68 또는 플루로닉(Pluronic) 127과 같은 예컨대 폴록사머들(poloxamers)과 같이 친수성, 비활성(inert)이며 생체적합성(biocompatible)일 수 있다.

상기 항박테리아제들은 예를 들어 암포테리신(amphotericin) 또는 그것의 임의의 유도체, 클로로테트라사이클린(chlorotetracyclin), 포름알데히드(formaldehyde) 또는 포르말린(formalin), 젠타마이신(gentamicin), 네오마이신(neomycin), 폴리믹신(polymyxin) B 또는 그것의 임의의 유도체, 스트렙토마이신(streptomycin) 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다.

상기 항산화제들은 예를 들어 아스코르브산 또는 토코페롤 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다.

상기 바이러스(viral) 불활성화물질은 예를 들어 포르말린, 베타(beta)-프로피오락톤(propiolactone), UV-조사(radiation), 가열 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다.

상기 보존제들은 예를 들어 염화벤젠토늄(benzethonium chloride), EDTA, 페놀, 2-페녹시에탄올(phenoxyethanol) 또는 티메로살(thimerosal) 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다. EDTA는 또한 킬레이트제, 항산화제 및 안정화제로 나타나왔다.

상기 염료들은 예를 들어 (예를 들어 페놀(phenol) 레드(red)와 같은) 임의의 지시약들(indicators) 또는 브리리언트(brilliant) 그린(green) 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다.

상기 소포제들은 예를 들어 폴리디메틸실로존(polydimethylsilozone)일 수 있다.

계면활성제(surfactants)는 예를 들어 폴리옥시에틸렌(polyoxyethylene) 및 그것의 유도체들, (예를 들어 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80 과 같이) 폴리소르베이트들(polysorbates), Tween 80, (예컨대 플루로닉(Pluronic) F68과 같이) 폴록사머들 또는 그것의 임의의 조합과 같이, 예를 들어 음이온성, 양이온성, 또는 비이온성(non-ionic) 또는 쌍성이온성(zwitterionic)일 수 있다.

보통, 백신 조성물 내 모노글리세라이드의 농도는 백신 조성물의 100 mL 당 약 0.1 g 내지 약 5.0 g 의 범위 내, 또는 100 mL 당 약 0.1 g 약 2.0 g 의 범위 내, 또는 100 mL 당 0.5 g 내지 약 1.5 g 와 같은, 약 0.5 g 내지 약 2.0 g의 양이다.

게다가, 하나 또는 그 이상의 카르복실산들의 농도는 백신 조성물의 100 mL 당 약 0.1 g 부터 약 5.0 g 까지의 범위 내, 또는 100 mL 당 약 0.1 g 내지 약 2.0 g의 범위 내 또는 100 mL 당 0.5 g 내지 약 1.5 g 과 같은 약 0.5 g 내지 약 2.0 g의 양이다.

백신 조성물 내 하나 또는 그 이상의 카르복실산들과 함께 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들(monoglycerides)은 많아 봐야 10% w/v, 또는 많아 봐야 5% w/v, 또는 많아 봐야 4% w/v, 또는 많아 봐야 3% w/v, 또는 많아 봐야 2% w/v, 또는 많아 봐야 1 % w/v, 또는 많아 봐야 0.5 % w/v, 또는 많아 봐야 0.1 % w/v, 또는 많아 봐야 0.05 % w/v의 양일 수 있다.

상기 아쥬반트는 모노올레인(mono-olein), 올레산(oleic acid), 라우르산(lauric acid) 및 대두유로 구성되는 군으로부터 선택되는 지질들(lipids)의 조합을 포함할 수 있다. 한 적합한 예에서, 상기 아쥬반트는 Tris 버퍼에 올레산(oleic acid), 라우르산(lauric acid)을 포함한다. 적절하게, 이 예는 Tris 버퍼 (pH 7-9) 7-15 mL 내에 0.25 g 내지 0.75 g 의 올레산(oleic acid), 0.25 g 내지 0.75 g 의 라우르산(lauric acid)을 포함한다. 특정 실시예는 0.1 M의 Tris 버퍼 (pH 7-9) 8-10 mL 내에 0.4 g 내지 0.5 g 의 올레산(oleic acid), 0.3 g 내지 0.4 g 의 라우르산(lauric acid)을 포함한다. 더 나아간 적합한 예에서, 상기 아쥬반트는 Tris 버퍼에 올레산(oleic acid) 및 모노-올레인(mono-olein)을 포함한다. 적합하게, 이 예는 7-15 mL 의 Tris 버퍼 내에 0.25 g 내지 0.75 g 의 올레산(oleic acid), 0.25 g 내지 0.75 g 의 모노-올레인(mono-olein)을 포함한다. 특정 실시예는 0.1 M Tris 버퍼 (pH 7-9) 8-10 mL 내에 0.3 g 내지 0.4 g 의 올레산(oleic acid), 04 g 내지 0.5 g 의 모노-올레인(mono-olein)을 포함한다. 더 나아간 예는 7-15 mL의 Tris 버퍼에 0.5 g 내지 0.25 g 의 모노-올레인(mono-olein), 0.5 g 내지 0.25 g 의 올레산(oleic acid), 및 0.25 g 내지 0.75 g 의 대두유를 포함한다. 이 예의 특정 실시예는 8-12 mL 의 Tris 버퍼 (pH 7-9) 내에 0.1 g 내지 0.2 g 의 모노-올레인(mono-olein), 0.8 g 내지 1.5 g 의 올레산(oleic acid), 및 0.5 g 내지 0.6 g 의 대두유(soybean oil)를 포함한다.

3 가지 타입들의 아쥬반트들이 하기 실시예들에서 성공적으로 사용되었다: 0.1 M Tris 버퍼 (pH 7-9) 8-10 mL에 0.4 g 내지 0.5 g 의 올레산(oleic acid), 0.3 g 내지 0.4 g 의 라우르산(lauric acid)을 포함하는 실시예 아쥬반트 A ; 0.1 M Tris 버퍼 (pH 7-9) 8-10 mL 내에 0.3 g 내지 0.4 g 의 올레산(oleic acid), 0.4 g 내지 0.5 g 의 모노-올레인(mono-olein)을 포함하는 실시예 아쥬반트 B ; 및 Tris 버퍼 (pH 7-9) 8-12 mL 내에 0.1 g 내지 0.2 g 의 모노-올레인(mono-olein), 0.8 g 내지 1.5 g 의 올레산(oleic acid), 및 0.5 g 내지 0.6 g 의 대두유를 포함하는 실시예 아쥬반트 C. 이들 아쥬반트들은 보통 2-12% 지질(lipid) 함량(content) (100 mL 당 6 g - 12 g), 가장 보통으로는 4%, 5%, 6%, 7, 8%, 또는 9%와 같은 3-10% 부터의 w/v 농도로 준비된다. 이들 농도들은 아쥬반트 혼합(mix) 자체의 그것들이다. 이 아쥬반트는 그 다음에, 예를 들어, 1:1 비율로 되어, 8% 지질 농도로 아쥬반트로부터 시작될 때, 4% 지질 함량(content) 백신 조성물을 제공할 수 있도록 2:1 내지 1:8 비율들의 조성물을 포함하는 항원과 혼합된다. 보통 본 발명의 백신 조성물의 지질 함량은 0.5% 내지 6% w/v이고, 보통 1% 내지 6% w/v이며, 더욱 보통으로는 1% 내지 4% 이다.

실시예 B 조성물은 (0.1 M Tris 버퍼 (pH 7-9) 8-10 mL에서 (0.3 g 내지 0.4 g의 올레산(oleic acid), 0.4 g 내지 0.5 g의 모노-올레인(mono-olein)) 등몰(equimolar) 량의 글리세롤(glycerol) 모노올리에이트(monooleate) 및 올레산(oleic acid)을 포함하는 엔도신(Endocine)™ 제제(formulation)이고, 항원에 대하여 기존의 면역력이 없는 나이브한(naive) 대상들에서 유난히 효과적인 것으로 발견되었다. 매우 선호되는 예에서, 8% 지질 제제(formulation)는 지질 농도 1-4% w/v의 백신 조성물을 제공하기 위하여, 조성물들을 포함하는 항원으로 희석된다.

기재한 바와 같이, 상기 조성물은 본 발명의 백신 조성물을 비강내로 투여하는 단계를 포함하는, 페리-판데믹 또는 전세계적 전염병(pandemic) 기간 동안 면역조치(immunization)을 위한 방법에 이용하기에 적합하다. 페리-판데믹 또는 전세계적 전염병(pandemic) 기간 동안의 면역조치 방법은 모든 연령의 대상들에게 이용될 수 있다. 본 발명은 나아가 설명한 백신 조성물을 비강내로 투여하는 단계를 포함하는 면역손상된(immuno-compromised) 대상들의 계절성 전염병(epidemics) 동안 면역조치 방법에 대한 것이다.

기재한 대로, 본 발명은 백신 조성물을 비강내로 투여하는 단계를 포함하는 면역손상된(immuno-compromised) 대상들의 면역조치(immunization) 방법에 대한 것이다.

하기의 실시예들은 노인들과 같은 면역손상(immuno-compromised)되고 인플루엔자에 나이브한 대상들에서의 이 백신 조성물의 약효를 보인다.

나이브한 개인들에서 면역 반응을 끌어내는 놀라운 약효는 본 발명의 백신이 이미 강한 면역보호(immunoprotection)를 갖지 않는, 침습성의(invasive) 비라(vira)에 반응할 수 있는 면에서 약해진 면역 시스템을 가진 개인들에서 면역 반응을 끌어낼 수 있다는 것을 시사한다. 면역손상된(immuno-compromised) 개인들은 본 발명의 백신 조성물로부터 이익을 크게 얻을 것이다. 따라서, 본 발명의 더 나아간 측면은 면역노쇠(immunosenescence)된 사람들; HIV 환자들; 면역억제제들 투여하는 대상들, 최근에 장기 받은 사람들; 조산된 아기들, 및 수술-후 환자들을 포함하는, 면역손상된(immune-compromised) 환자들에의 비강내로 투여되는, 인플루엔자에 대하여 아쥬반트된 살아있지 않은 항원들에 대한 것이다. 이 측면은 비강내 투여되는 백신으로서 사용되기 위한, 하기를 포함하는 조성물에 대한 것으로, 이 때, 상기 백신은 면역손상된(immuno-compromised) 대상들의 면역조치(immunization)을 위한 것이다.

i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 항원들, 및

ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들,

수성 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들.

실시예 2에 나타난 대로 본 발명의 놀라운 효과는 본 발명의 조성물이 바이러스 쉐딩(shedding)을 감소시킬 수 있다는 것이다. 면역손상된(immuno-compromised) 대상들은 면역능력이 있는(immune-competent) 건강한 성인들보다 더 많은 바이러스를 쉐드(shed)한다. 그러므로 면역손상된 대상들은 간호인(care taker)들, 가족, 양로원 거주자들과 같은 근접한 사람들에게 더 많은 바이러스를 퍼뜨릴 수 있다. 본 발명은 ≥ 65 살의 연령의 개인들, 임신한 여성들, 암 환자들, 화학요법을 받는 환자들, 방사선(radiation) 요법, HIV 감염된 개인들과 같은 면역손상된(immuno-compromised) 대상들을 치료하기에 적합할 수 있다. 본 발명은 표 1에서 확인된 바와 같이 면역손상된 대상들에 의하여 바이러사 퍼지는 것을 방지하는데 적합할 수 있다. 한 예에서 본 발명의 조성물은 바이러스 쉐딩(shedding)을 감소시키기 위하여 ≥ 65 살의 연령의 면역손상된 개인들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서 본 발명의 조성물은 바이러스 쉐딩(shedding)를 감소시키기 위하여 임신한 여성들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서 본 발명의 조성물은 바이러스 쉐딩(shedding)을 감소시키기 위하여 HIV 감염된 대상들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서 본 발명의 조성물은 바이러스 쉐딩(shedding)을 감소시키기 위하여 예를 들어 글루코코르티코이드 요법인 면역억제 약물(medication)을 투여하는 사람들에서의 사용을 위한 것이다. 나아가, 본 발명의 조성물은 바이러스가 퍼지는 것을 감소시킴으로써 전세계적 전염병(pandemic)을 억제하는데 특히 적합할 수 있다. 한 예에서 본 발명의 조성물은 전세계적 전염병(pandemic) 지역(zone)에서 바이러스 쉐딩(shedding)을 감소시키기 위하여 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서 본 발명의 조성물은 페리-판데믹 기간 동안 바이러스 쉐딩(shedding)을 감소시키기 위하여 면역손상된 대상들에서의 사용을 위한 것이다. 한 예에서 본 발명의 조성물은 페리-판데믹 기간 동안 바이러스 쉐딩(shedding)을 감소시키기 위하여 면역손상된 대상들에서의 사용을 위한 것이다.

앞서 기재한 바와 같이, 조성물의 비강내 투여에 의하여 면역손상된(immuno-compromised) 환자들에서 인플루엔자에 대한 면역조치 방법이 놀라운 결과의 흥미로운 측면이다.

USA에서 연간 30.000 건이 넘는 인플루엔자 관련 사망들 중 대략 90%가 65 살 또는 그보다 나이 많은 사람들 중에서 일어나는데, 이는 이 인구의 높은 취약성을 보여준다. 종래 인플루엔자 백신들은 젊은 성인들(70-90%)에 비교하여 노인들에서는 감소된 효과를 가졌다(17-53%). 노인들 인구 사이에서 백신접종의 감소된 약효 및 바이러스 감염에 대한 증가된 민감성은 면역노쇠(immunosenescence)때문이다. 면역노쇠는 타고나고(innate) 그리고 적응되는(adaptive) 면역력 모두에 영향을 미치는 면역 시스템의 기능에서의 진행성인 연령-의존적 하락이다. 타고나는 면역 시스템의 필수적인 부분은 패턴(pattern) 인식(recognition) 수용체들(receptors) (PRR)인데, 이는 광범위한 병원체들의 보존된 구조들을 인식한다. 톨(toll)-유사(like) 수용체들(receptors)(TLR)로 알려진 PRR들의 종류는 인플루엔자 바이러스를 인식하는 것에 관계된다. 수지상(dendritic) 세포들(DCs)은 TLR들을 발현시키고 항원을 붙잡음으로써 타고나고 적응되는 면역 시스템 사이의 필수적인 다리를 형성한다. 몇몇의 연구들은 예를 들어 감소된 항원 포획 능력, 감소된 PLR-발현 및 기능, 손상된(impaired) 이동(migration) 능력 및 감소된 T 세포 활성화 능력인 DC 작용에서의 연령-관계된 변화들을 입증했다.

나이먹는 것은 또한 항체 반응의 더 낮은 친화력(affinity) 및 감소된 다양성(diversity)을 이끄는 작동자(effector) B 세포들의 증가 및 나이브한(naive) B 세포들의 점진적인 감소가 수반된다. 두 개의 주요(major) 서브세트들(subsets)이 CD4 및 CD8 T 세포들인 T 세포 구획(compartment) 또한 나이먹는 것에 의하여 많이 영향을 받는다. 흉선(thymus)의 퇴화(involution)인 가장 극적인 변화는 나이먹은 개인들의 주변부(periphery)에서 나이브한 T 세포들의 감소를 야기한다. 감소된 흉선의 생산량은 T 세포군 상에 엄청난 영향을 미치며, 이는 T 세포 수용체 (TCR) 레퍼토리(repertoire)에서 감소된 다양성을 야기한다. TCR 레퍼토리의 감소는 인플루엔자 바이러스에 대한 손상된(impaired) 면역력 및 좋지 못한 백신접종 반응과 관련되어 왔다. 병원체들에 대하여 효율적인 반응을 끌어 내는 면역 시스템의 능력의 연령-관련된 하락은 다른 세포 타입들의 많은 변화들에 의하여 야기되는 복잡한 현상이다.

이러한 이유들로, 노인들은 특히 취약한 군이며, 실시예 4에 나타낸 바와 같이 본 발명으로서, 이 환자 종류를 위한 더욱 효율적인 백신들에 대한 수요가 있다.

기재한 바와 같이, 본 발명의 흥미로운 측면은 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에게 비강내 투여되는 백신으롱서 사용되기 위한, 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들 및 하기를 포함하는 조성물에 대한 것이다:

하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들,

수성 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들.

상기 조성물은 보통 인플루엔자와 같은 전염성 병원체들에 대하여 면역손상된 대상들에 비강내(intranasally)로 투여되는 백신으로서 이용되기 위한 것이다. 면역손상된(immune-compromised) 대상들은 ≥ 65 살의 대상들, 임신한 여성들, 조산된 아기들 및 하기 환자 종류들로 구성되는 군으로부터 적절히 선택되나 이에 제한되는 것은 아니다: 암 환자들, 화학요법을 받는 사람들, 방사선(radiation) 요법(therapy)을 받는 사람들, 장기 이식 환자들, 고형 장기 이식을 받는 사람들, 줄기세포 이식 환자들, 조혈의(hematopietic) 동종이형(allogenic) 줄기세포 이식을 겪는 사람들, 조혈의(hematopoietic) 자가조직의(autologous) 줄기세포 이식을 겪는 사람들. HIV 감염된 환자들, AIDS를 가진 사람들, 이식편대숙주 질병인 환자들, 예를 들어 글루코코르티코이드 요법(therapy) 및 스테로이드 요법(therapy)인 면역억제제들을 투여하는 환자들.

설명한 바와 같이, 면역노쇠(immunosenescence)는 보통 노인들에게서 발견된다. 따라서, 본 발명의 흥미로운 예는, 55 또는 그 이상과 같은, 보통 60 또는 그 이상의 나이의, 가장 보통으로는 65 또는 그 이상의 나이의, 75 또는 그 이상의 나이와 같은, 80 또는 그 이상의 나이와 같은, 85 또는 그 이상의 나이와 같은, 90 또는 그 이상의 나이와 같은, 나이먹은 대상들에서 비강내 투여되는 백신으로서의 사용을 위한 조성물에 대한 것으로, 상기 조성물은 여기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 더 나아간 측면은 또한 면역손상된(immuno-compromised) 환자들인 소아과의(pediatric) 대상들과 같은 나이브한 대상들에서의 사용을 위한 백신에 대한 것이다. 본 발명의 아쥬반트는 인플루엔자에서 나이브한 대상들에서 그것의 약효를 입증하였다. 이는 일반적으로 면역손상된 환자들 및 나이브한 환자 종류들 모두에서 그것이 적합하다는 것을 제시한다.

따라서, 본 발명의 또다른 측면은 소아과의(pediatric) 면역손상된 환자들에서의 사용을 위한 비강내 투여되는 백신으로서의 사용을 위한 조성물에 대한 것이고, 상기 조성물은 하기를 포함한다:

i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 항원들, 및

ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들,

수성 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들.

본 발명에 따른 나이브한 대상들 및 소아과의(pediatric) 면역손상된 환자들을 위한 백신들의 적합한 타입들은 백신으로 치료하거나 또는 면역력을 갖게 하려고 의도된 각각 관련된 병원체의 항원을 포함한다. 이는 B형 간염(hepatitis), A형 간염(hepatitis), C형 간염(hepatitis), D & E 형 (hepatitis) 바이러스, 비-A/비-B 간염(Hepatitis) 바이러스, 매독(pox) 및 천연두(smallpox) 바이러스들, 폴리오(polio) 바이러스, 홍역(measles) 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 엔테로바이러스들(enteroviruses), 레트로바이러스들(retroviruses), 호흡기(respiratory) 세포융합(syncytial) 바이러스, 로타바이러스(rotavirus), 인유두종(human papilloma) 바이러스, 수두대상포진(varicella-zoster) 바이러스, 황열병(yellow fever) 바이러스, SARS 바이러스, 동물 바이러스들, 헤르페스(herpes) 바이러스들, 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus), 수두대상포진(varicella zoster), 엡스타인(Epstein) 바(Barr) 바이러스, 파라(para)-인플루엔자(influenza) 바이러스들, 아데노바이러스들(adenoviruses), 콕사키(coxsakie) 바이러스들, 피코르나(picorna) 바이러스들, 리노바이러스들(rhinoviruses), 풍진(rubella) 바이러스, 파보바이러스(papovirus), 및 볼거리(mumps) 바이러스로 구성되는 군으로부터 선택되는 바이러스들 유래의 면역원들을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 언급한 인플루엔자 바이러스 항원들 외 알려진 바이러스 항원들의 제한되지 않는 몇몇 예들은 하기를 포함할 수 있다: tat, nef, gpl20 또는 gpl[beta]O, gp40, p24, gag, env, vif, vpr, vpu, rev 또는 그것의 부분 및/또는 조합들과 같은 HIV-I로부터 유래한 항원들; HSV2 또는 HSVI로부터 ICP27, ICP47, ICP4, ICP36 와 같은 조기발현(Immediate Early) 단백질 또는 gH, gL gM gB gC gK gE 또는 gD 또는 그것의 부분 및/또는 조합들과 같은 인간 헤르페스 바이러스들 유래의 항원들; 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus), 특히 gB 또는 그것의 유도체들과 같은 인간 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus) 유래의 항원들; gp350 또는 그것의 유도체들과 같은 엡스타인(Epstein) (Barr) 바이러스 유래의 항원들; gp I, 11, 111 및 IE63와 같은 수두대상포진(Varicella Zoster) 바이러스 유래의 항원들; B형 간염, C형 간염 또는 E형 간염 바이러스 항원(예를 들어 외피(env) 단백질 EI 또는 E2, 코어(core) 단백질, NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b, p7, 또는HCV의 부분 및/또는 조합들) 과 같은 간염(hepatitis) 바이러스 유래의 항원들; (예를 들어 HPV6, 11, 16, 18, 예를 들어 LI, L2, EI, E2, E3, E4, E5, E6, E7, 또는 그것의 부분 및/또는 조합들) 인간 파필로마(papilloma) 바이러스들 유래의 항원들; 호흡기세포융합(Respiratory Syncytial) 바이러스 (예를 들어 F 및 G 단백질들 또는 그것의 유도체들), 파라인플루엔자(parainfluenza) 바이러스, 홍역(measles) 바이러스, 볼거리(mumps) 바이러스, 플라비바이러스들(flaviviruses) (예를 들어 황열병(Yellow Fever) 바이러스, 뎅기(Dengue) 바이러스, 진드기-매개(Tick-borne) 뇌염(encephalitis) 바이러스, 일본뇌염(Japanese Encephalitis) 바이러스) 또는 그것의 부분 및/또는 조합들과 같은 다른 바이러스 병원체들 유래의 항원들.

상기 항원들은 예를 들어 전체 불활성화된 바이러스들과 같은 예를 들어 전체 살아있지 않은 항원들일 수 있다. 상기 항원은 또한 예를 들어 불활성화된 바이러스의 부분과 같은 병원체의 부분일 수 있다. 사용될 수 있는 상기 항원 구성요소들(components)은 예를 들어, 바이러스, 박테리아, 마이코박테리아(mycobaterial) 또는 기생충(parasitic)의 항원들일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 박테리아 병원체들은 예를 들어 한센병(leprosy) 및 결핵(tuberculosis)을 야기하는 마이코박테리아(Mycobacteria), 폐렴구균(pneumocci), 호기성 그람(gram) 음성 또는 그람-양성 바실러스들(bacilli), 마이코플라스마(mycoplasma), 포도상구균(staphyloccocal) 감염들, 연쇄상구균(streptococcal) 감염들, 헬리코박터(Helicobacter) 파일로리(pylori), 살모넬라(salmonellae) 및 클라미디아(chlamydiae) 일 수 있다. 상기 질병들은 또한 한센병(leprosy) 및 결핵(tuberculosis)을 야기하는 마이코박테리아(Mycobacteria), 폐렴구균(pneumocci), 호기성 그람(gram) 음성 바실러스들(bacilli), 마이코플라스마(mycoplasma), 포도상구균(staphyloccocal) 감염들, 연쇄상구균(streptococcal) 감염들, 헬리코박터(Helicobacter) 파일로리(pylori), 살모넬라(salmonellae), 디프테리아(diphtheria) 및 클라미디아(chlamydiae)와 같은 박테리아 감염들일 수 있다.

면역손상된(immuno-compromised) 환자들의 면역조치을 위한 백신들의 바람직한 타입들은 폐렴구균(pneumococcal) 백신, A-E 형 간염(Hepatitis) 백신, 뇌척수막염균(Meningococci) 백신, 해모필루스(Haemophilus) 인플루엔자(influenzae) b (Hib) 백신, 디프테리아(Diphtheria) 백신으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

상기 질병들은 또한 기생충에 의한(parasitic) 말라리아(malaria), 레슈마니아증(leishmaniasis), 트리파노소마증(trypanosomiasis), 톡소플라스마증(toxoplasmosis), 주혈흡충병(schistosomiasis), 필라리아병(filariasis) 또는 예를 들어 유방암, 위암, 대장암, 직장암, 두경부(head and neck)암, 신장암, 악성 흑색종, 후두암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암과 같은 다른 타입들의 암일 수 있다.

상기 질병들은 또한 집먼지 진드기, 꽃가루 및 다른 환경적 알러겐들로 인한 알레르기들 및 예를 들어 전신 홍반성 루프스(systemic lupus erythematosis)와 같은 자가면역 질병들일 수 있다.

상기 백신 조성물의 항원은 예를 들어 전체 불활성화된 바이러스들, 분할 살아있지 않은 항원들 또는 소단위체(subunit) 살아있지 않은 항원들과 같은 전체(whole) 살아있지 않은 항원들일 수 있다. 열 불활성화, UV-광에 의한 방사선(irradiation) 불활성화 또는 포르말린 불활성화 또는 베타-프로피오락톤(propiolactone) 처리에 의한 불활성화와 같은 불활성화 과정들은 당업계에 잘 알려져 있다.

본 발명의 조성물은 면역손상된(immuno-compromised) 환자들의 면역조치을 위한 백신들로서의 사용을 위한 것이다. 상기 면역손상된 환자들은 면역노쇠(immunosenescence)된 사람들; HIV 감염된 대상들; 최근에 장기 받은 사람들과 같은 면역억제제들 투여하는 대상들; 조산된 아기들, 및 수술-후 환자들로 구성되는 군으로부터 적절하게 선택될 수 있다. 기재한 바와 같이, 면역노쇠(immunosenescence)는 노인들에게서 흔히 발견된다. 따라서, 본 발명의 하나의 흥미로운 예는 55 또는 그 이상의 나이의, 보통 60 또는 그 이상의 나이의, 가장 보통 65 또는 그 이상의 나이와 같은 노인인 대상들에서, 비강내 투여되는 백신으로서의 이용을 위한 조성물에 대한 것이고, 상기 조성물은 전술한 바와 같다. 상기 면역손상된(immuno-compromised) 소아과의(pediatric) 대상들은 0 내지 18 살의 어린이들, 특히 12 살 및 그 이하의 어린이들과 같은, 18살 이하의 어린이들일 수 있다. 본 발명은 특히 6 살 또는 그 미만(less)과 같은, 8살 미만(less)의 면역손상된(immuno-compromised) 어린이들에게 의도된다. 본 발명의 백신에 대한 중요하게 의도된 종류의 환자들은 특히 2 개월 내지 9살 미만(less)의 나이의, 6 개월 내지 8살 미만(less)의 나이와 같은, 보통 3 개월 내지 9 살 미만(less)의 어린이들, 6 개월 내지 72 개월 미만(less)과 같은, 가장 보통으로는 6 개월 내지 7 살 미만(less)의 나이의, 또는 6 개월 내지 60 개월 또는 6 개월 내지 24 개월의 면역손상된(immuno-compromised) 어린이들이다. 본 발명의 조성물은 면역손상된(immune-compromised) 대상들에서의 소아과의(pediatric) 사용을 위한 백신으로서, 적어도 부분적으로는 의도된다.

상기 면역손상된(immuno-compromised) 대상들은 상기 조성물이 특히 전세계적 전염병(pandemic) 또는 페리-판데믹 기간 동안 사용을 위한 백신에 대한 것일 때, 모든 연령군들일 수 있다.

스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)는 매년 침습성(invasive) 폐렴구균성(pneumococcal) 질병 (IPD)의 추정되는 1백 6십만 명의 사망자와 관련된 전세계적 사망자(mortality) 및 사망률(morbidity)의 주된 원인이다(WHO, 2002). IPD는 매우 어린 사람들(< 24 개월) 및 노인들(> 65 살) 중에서 가장 흔하게 발생하며; 노인들은 가장 높은 IPD 사망자(mortality) 비율을 갖는다. 현재, 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)의 감염의 예방을 위하여 4 개의 백신들이 이용가능하다. 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애에 이용가능한 비강내 백신들은 없다.

본 발명의 흥미로운 예는 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애의 감염을 예방하기 위한 비강내 대체제에 대한 것이고, 특히 어린이들 및 나이브한 대상들 및 노인들에 대한 것인데, 이는 이 후자인 그룹이 면역손상으로 알려져 있기 때문이다. 본 발명의 조성물은 살아 있는 약독화된 박테리아가 아니라 스트렙토코커스(streptococcus) 뉴모니아(pneumonia) 항원들을 이용한다. 본 발명의 백신의 놀라운 약효는 사용되는 아쥬반트의 결과이고, 놀라운 결과는 나이브한 대상들에 특이적이다. 유사한 결과들이 또한 면역손상된(immuno-compromised) 대상들에 예상된다.

따라서, 본 발명의 나아간 측면은 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)의 감염과 관련된 증상들의 심각도를 감소시키거나 또는 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)의 감염을 예방하기 위하여 면역손상된 대상들에서 사용되기 위한 비강내 투여되는 백신으로서의 사용을 위한, 하기를 포함하는 조성물에 대하 것이다:

i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae) 항원들, 및

ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:

하나 또는 그 이상의 카르복실산들(carboxylic acids),

수성 매질(medium), 및

선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들.

면역손상된(immuno-compromised) 환자들은 면역노쇠(immunosenescence)된 사람들; HIV 감염된 대상들; 최근에 장기 받은 사람들과 같은 면역억제제들 투여하는 대상들; 조산된 아기들, 및 수술-후 환자들로 구성되는 군으로부터 적절하게 선택된다. 기재한 바와 같이, 면역노쇠는 노인들에게서 흔하게 발견된다. 따라서 본 발명의 흥미로운 예는 55 또는 그 이상의 나이의, 보통 60 또는 그 이상의 나이의, 가장 보통 65 또는 그 이상의 나이와 같은 노인 대상들에게 비강내 투여되는 백신으로서 사용되기 위한 조성물에 대한 것이며, 상기 조성물은 여기에서 기재한 바와 같다.

본 발명의 중요한 예는 기관지염(bronchitis), 폐렴(pneumonia), 패혈증(septicemia), 심낭염(pericarditis), 수막염(meningitis) 및 복막염(peritonitis)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 질병 상태들의 증상들을 감소 및/또는 예방하기 위한 폐렴구균(pneumococcal)의 감염에 대한 백신에 대한 것이다.

한 예는 면역손상된(immuno-compromised) 대상들, 특히 60 또는 65 살을 넘는 나이의 노인들 및/또는 전에 폐렴구균의(pneumococcal) 감염 이력이 있는 성인들 또는 (예를 들어 해부적(anatomic) 또는 기능적(functional) 무비증(asplenia), 면역손상된(immuno-compromising) 질환(condition), 또는 심장, 간, 폐, 또는 신장의(renal) 만성 질환들, 또는 장기 이식받은 사람(recipients), 골수, 또는 달팽이관(cochlear) 이식(transplants))의 증가된 위험이 있는 성인들에서, 폐렴구균의(pneumococcal) 다당류 백신 (PPV)으로서와 같은, 폐렴구균의(pneumococcal) 백신의 용도에 대한 것이다.

더 나아간 예에서, 본 발명의 폐렴구균의(pneumococcal) 백신 조성물은 4 주의 나이부터 6 살의 나이까지의 대상들 (예를 들어 완전히 발달되지 않은 "면역손상된(immuno-compromised)" 면역 시스템들을 갖고, 나이브한 대상들) 및 50 살이 넘는, 보통 60 살 또는 그 이상, 더욱 보통으로는 65 살 또는 그 이상과 같은 노인들에서 사용된다.

본 발명에 따른 백신 조성물은 예를 들어 수성 매질(medium)일 수 있는, 친수성이며 비활성(inert)이고 생체적합할 수 있는, 예컨대, 플루로닉(Pluronic) F68 또는 플루로닉(Pluronic) 127와 같은 폴록사머들인, 계면 활성제를 더 포함하는 매질(medium)과 같은 약학적으로 허용가능한 첨가제들을 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 폐렴구균의(pneumococcal) 백신은 항박테리아제들, 항산화제들, 바이러스(viral) 불활성화물질, 보존제들, 염료들, 안정화제들, 소포제들, 여기에 기재된 (비이온성, 음이온성 또는 양이온성) 계면활성제들 또는 그것의 임의의 조합을 더 포함할 수 있다. 상기 항박테리아제들은 예를 들어 암포테리신 또는 그것의 임의의 유도체, 클로로테트라사이클린, 포름알데히드 또는 포르말린, 젠타마이신(gentamicin), 네오마이신, 폴리믹신 B 또는 그것의 임의의 유도체, 스트렙토마이신 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다. 상기 항산화제들은 예를 들어 아스코르브산 또는 토코페롤 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다. 상기 바이러스 불활성화물질은 예를 들어 포르말린, 베타-프로피오락톤(propiolactone), UV-조사(radiation), 가열 또는 그것의 임의의 조합일 수 있다.

본 발명의 예들을 설명할 때, 모든 가능한 예들의 치환들 및 조합들은 분명하게 기재되지 않다. 그럼에도 불구하고, 특정 수치들이 서로 다른 인용하는 청구항들에 다시 인용되어 있거나 또는 다른 예들에서 기재되어 있다는 단순한 사실은 이들 수치들의 조합이 유리하게 사용될 수 없다는 것을 가리키지 않는다. 본 발명은 기재된 예들의 모든 가능한 조합들 및 치환들을 예상한다.

실시예들

실시예 1

목적

본 연구의 목적은 페럿(ferret) 모델에서 본 발명에 따른 비강내로 투여되는 아쥬반트-만들어진(formulated) 아쥬반트-만들어진(formulated) 및 아쥬반트-만들어진(formulated) 사(killed) 전체(whole) 인플루엔자 바이러스 항원의 방어 효험 및 면역원성을 조사하는 것이다.

H1N1/California/2009 분할 항원에 기초한 백신 (백신 A)은 5, 15, 또는 30 μg HA의 항원 투여량으로 연구되었고, H1N1/California/2009 killed 전체(whole) 바이러스 항원에 기초한 백신 (백신 B)은 15 μg HA의 항원 투여량으로 연구되었다. 백신 효험은 시험감염(challenge)으로 야생형 H1N1 A/The Netherlands/602/2009 바이러스을 이용하여 연구되었다.

백신 조성물에 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트는 20mg/ml (2 %)의 최종 농도로 등몰(equimolar)량의 글리세롤 모노올리에이트(monooleate) 올레산(oleic acid) 및 글리세롤 모노올리에이트(monooleate)를 포함하였다. 이 실험에서, 이뮤노스(Immunose)™ FLU는 엔도신(Endocine)™과 혼합된 살아있지 않은 인플루엔자 항원들을 의미한다.

실험군들 면역조치 국면

백신 준비 및 투여

식염수(Saline): 0.9% 식염수(saline) pH 5-5.5.

플루아릭스(Fluarix)® : (각각의 백신 균주(strain) 15 μg HA에서 A/California/7/2009(H1N1)-like, A/Perth/16/2009(H3N2)-like 및 B/Brisbane/60/2008-유사 백신 균주들을 포함하는) 비경구(Parenteral) 백신. 그룹 2의 동물들은 0.5ml 플루아릭스(Fluarix) (GlaxoSmithKline Biologicals)로 21일 및 42일에 피하로 백신접종되었다.

백신 A: 인플루엔자 백신 점비액들(nasal drops), 5, 15 및 30 μg HA /0.2 ml, 백신 조성물 내에 최종 농도 20mg/ml으로, 등몰(equimolar) 량의 글리세롤 모노올리에이트(monooleate) 및 올레산(oleic acid)을 포함하는 엔도신(Endocine)™ 제제(formulation)를 포함하는, 아쥬반트 제제(formulation); H1N1/California/2009 분할 항원.

백신 B: 인플루엔자 백신 점비액들(nasal drops),15 μg HA /0.2 ml, 백신 조성물 내 20mg/ml 의 최종 농도로 등몰(equimolar) 량의 글리세롤 모노올리에이트(monooleate) 및 올레산(oleic acid)을 포함하는 엔도신(Endocine)™ 제제(formulation)를 포함하는 아쥬반트 (formulation) 제제 (pH 8, in Tris 0.1M), H1N1/California/2009 사(killed) 전체(whole) 바이러스 항원.

페럿들( ferrets )

거의 12 개월의 연령, 760-1210 g의 체중 및 적혈구응집(hemagglutination) 억제(inhibition) (HI)에 의하여 입증된 대로 도는(circulating) 인플루엔자 바이러스들 B, A/H1N1, A/H3N2 및 A/pH1N1에 대한 항체들에 혈청반응음성(seronegative)인 건강한 암컷 페럿들(ferrets)(무스텔라(Mustela) 푸토리우스(putorius) 푸로(furo): 이계교배(outbred))가 사용되었다. 동물들은, 면역조치(immunization) 시기 동안 6 마리 동물들의 연구 그룹들로, 그리고 면역-전(pre-immunization) 시기 동안 최대 8 마리 동물들의 그룹들로 정상 우리들에서 수용되었다. 상기 연구 그룹들은 시험감염(challenge) 날에 음압(negatively pressurized) 글러브박스(glovebox) 분리기(isolator) 우리들로 이동되었다. 전체 연구 동안 동물들은 임의로(ad libitum) 물 및 상업적 식품 펠렛들(pellets)을 제공받았다.

면역조치( Immunization )

6 마리 페럿들의 5 개 그룹들이 0, 21 및 42 일에 케타민(ketamine) 및 도미터(domitor)로 마취 하 (작은 방울들(droplets): 필터팁(filtertip) 있는 피펫을 이용하여 각 콧구멍에 100 μl)로 3 비강내 면역조치되었다. 그룹 1의 동물들은 살균된(steril) 생리학적 식염수(saline) (0,9% 식염수(saline) pH5-5,5) 200 μl를 받았다. 그룹들 3, 4 및 5는 각각 5, 15 및 30 μg HA을 포함하는 200 μl 엔도신(Endocine)™ 만들어진(formulated) H1N1/California/2009 분할 항원으로 비강내로 면역화되었다. 그룹 6은 15 μg HA를 포함하는 200 μl 엔도신(Endocine)™ formulated H1N1/California/2009 전체(whole) 바이러스 항원으로 비강내로 면역화되었다. 대조군 1은 비강내로 200 μl의 식염수(saline)를 받았다. 6 마리 페럿들의 1 개 그룹(그룹 2)은, 각각의 백신 균주의 15 μg HA을 포함하는 비-아쥬반트된 3가(trivalent) 인플루엔자 백신 (TIV)인, 2010/2011 시즌, 0.5 ml 플루아릭스(Fluarix)® (GlaxoSmithKline Biologicals)로 21 일 및 42 일에 피하로 백신접종되었다. 64 및 70 연구일에 시험감염(challenge) 전 및 0, 21 및 42 일에 면역조치(immunization) 전에 혈청을 위해 혈액 샘플들이 수집되었다.

시험감염 바이러스 준비 및 투여

연구일 70 일에, 모든 동물들은 기관내(intratracheal) 루트에 의하여 인플루엔자 바이러스 (H1N1 균주 A/The Netherlands/602/2009)의 필드(field) 분리물(isolate)로 시험감염되었다. 시험감염(challenge) 바이러스를 준비하기 위하여, H1N1 A/The Netherlands/602/2009 시험감염 스톡(stock) (7.8 log10 TCID50/ml)이 아주 찬(ice-cold) PBS에서 3.3 x 105 TCID50/ml의 농도로 희석되었다. 모든 동물들이 106 TCID50를 포함하는 3 ml의 시험감염 바이러스 조제용물질(preparation)로 기관내로 시험감염되었고, 기관경(tracheoscope)을 이용하여 작은 카테터로 기관 내로 투여되었고, 분기(bifurcation) 바로 위에서 방출되었다. 시험감염 바이러스의 준비 및 투여는 BSL3 조건들 하에서 수행되었다. 시험감염 하루 후, 남아있는 시험감염 바이러스 희석물을 포함하는 샘플이 상기 바이러스의 전염성(infectivity)을 확정하기 위하여 마딘(Madin)-다바이(Darby) 개(canine) 신장(kidney) (MDCK) 세포들 상에 적정되었다. 접종 하루 후 시험감염 희석물의 역적정(Back titration)은 상기 물질이 여전히 4.8 log10 TCID50을 함유하고 있다는 것을 보여 주었다.

시술들( procedures ) 및 샘플 수집

실험 코스들 동안 페럿들 상에 몇몇 시술들이 수행되었다. 온도 센서들의 이식, 면역조치들, 바이러스 시험감염 및 컴퓨터(computed) 단층촬영(tomography) (CT) 이미징(imaging)을 위하여, 동물들은 케타민(ketamine) (4-8 mg/kg: i.m.; Alfasan, Woerden, The Netherlands) 및 도미터(domitor) (0.1 mg/kg: i.m.; Orion Pharma, Espoo, Finland)의 칵테일로 마취되었다. (혈액, 표본들(swabs) 및 세비액들(nasal washes))의 샘플링 및 채혈(exsanguination)에 의한 안락사를 위하여, 동물들은 케타민으로 마취되었다. 실험의 시작 2 주 전, 온도(temperature) 로거(logger)(DST micro-T ultrasmall temperature logger; Star-Oddi, Reykjavik, Iceland)가 페럿들의 복강(peritoneal cavity)에 위치되었다. 이 장치는 매 10 분 마다 동물들의 체온을 기록하였다. 페럿들은 각각의 면역조치(0, 21 및 42 일), 시험감염일 및 안락사(70 및 74일) 전에 체중을 쟀다. 그룹들 1, 2 및 4의 동물들은 64, 71, 72, 73 및 74 일에 CT 이미징으로 모니터되었다. 혈액 샘플들은 0, 21 및 42 일에 면역조치(immunization) 전, 64 일에 및 70 일에 시험감염 전에 수집되었다. 코 및 인후(throat) 표본들(swabs)은 70 일에 시험감염 전 및 시험감염(challenge) 후 날마다 수집되었다.

혈액 샘플들 및 혈청의 수집

혈액 샘플들이 수집되고 2 개의 동일한 용량(volume)으로 나뉘었다. PBMC를 분리하는데 사용된 하나의 용량은 EDTA 항응고제(anti-coagulant)를 포함하는 튜브로 즉시 이동되었다. 혈청을 수집하는데 사용된 또다른 용량은 혈전(clot) 활성화제(activator)를 포함하는 혈청 튜브로 이동되었다. 모든 혈청 튜브들은 실온에서 10 분 동안 약 2000 xg에서 원심분리되었다. 혈청은 0.1ml 샘플들로 앨리쿼트(aliquote)되고, 약 -80 ℃에서 보관되었다.

PBMC 및 혈장( plasma )의 분리

PBMC를 분리하는데 사용되는 혈액 샘플들은 즉시 EDTA 항응고제(anti-coagulant)를 포함하는 튜브로 이동되었고, 5 분 동안 880x G에서 원심분리되었고, 상기 혈장은 약 -80 ℃에서 보관되었다. 세포 펠렛(pellet)는 3.5 ml 세척(wash) 버퍼 (D-PBS: lot#: RNBB7791, V-CMS: 10700395 및 EDTA:lot#: 079K8712, V-CMS: 10700037)에서 재현탁되었고(resuspend), 3ml 림포프렙(lymphoprep)에서 겹겹이 되고(layered) 그리고 30 분 동안 800x G에서 원심분리되었다. 원심분리 후 인터페이스(interface)를 포함하는 세포가 수집되었고, 새로운 튜브로 이동되었고, 세척 버퍼에서 4 회 세척되었다. 10 분 동안 600 xg, 465 xg 및 350 xg 에서의 그리고 15 분 동안 250 xg에서의 원심분리가 그 후의 세척 단계들에 수반되었다. 마지막 세척 단계 후, 세포 펠렛이 재현탁되었고, 적어도 10분 동안 정지시키고(put on ice), 1 ml 아주 찬(ice cold) 프리즈(freeze) 매질(medium) (RPMI lot# 1MB078, 20 % FCS VC# 201110194, 10% DMSO VC # 10700203)에서 재현탁하고, 앰플(ampoule)로 이동시키고, -80 ℃에서 보관하였다.

혈청반응테스트( Serology )

H1N1 A/The Netherlands/602/2009 및 2 먼(distant) 바이러스들 H1N1 A/Swine/Ned/25/80 및 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76에 대한 항체 역가들이 적혈구응집(hemagglutination) 억제(inhibition) 분석 (HI) 및 바이러스 중화(neutralization) 분석(assay) (VN)에 의하여 결정되었다. 먼(distant) 바이러스 H1N1 A/New Jersey/08/76에 대한 항체 역가들이 적혈구응집(hemagglutination) 억제(inhibition) 분석에 의하여 결정되었다.

HI 분석

HI 분석은 적혈구들의 인플루엔자 유도된 응집(agglutination)을 막기 위한 인플루엔자 바이러스 적혈구응집소(hemagglutinin) 특정 항체들의 능력에 기초한 표준 결합 분석이다. 상기 샘플들은 비-특이적 항-적혈구응집소(hemagglutinin) 활성을 제거하기 위하여 (비브리오(Vibrio) 콜레라(cholerae) 배양물들로부터 수득되는) 콜레라 여과물로 전처리되었다. 37 ℃에서의 16 시간의 배양 후에 상기 콜레라 여과물은 56 ℃에서 1 시간 동안 샘플들의 배양에 의하여 불활성화되었다. 샘플들의 연속적 2 배(two-fold) 희석액들(dilutions)이 (1:20의 희석으로 시작하는 96-웰 플레이트들에서 2 개로(in duplicate)) 인산(phosphate) 버퍼드(buffered) 설페이트(sulphate) (PBS)에서 만들어졌고, 상기 샘플들이 a-특이적 적혈구응집반응(hemagglutination)을 보였을 때, 그것들은 칠면조 적혈구들(erythrocytes)로 전처리되었다. 이들 적혈구들의 제거 후 상기 샘플들은 4 ℃에서 1 시간 동안 관련된 인플루엔자 바이러스의 4 개의 적혈구응집반응(hemagglutination) 단위들(units) (HAU)의 고정된(fixed) 농도로 배양되었다. 마지막으로, 상기 플레이트들은 상기 적혈구들의 침강(sedimentation)에 의하여 나타난 바와 같이, 적혈구응집(hemagglutination)의 억제를 위한 2 테크니션들(technicians)에 의하여 독립적으로 점수화되었다. 페럿 대조군 혈청들 경향(trending)이 모든 실행들(runs)에 포함되었다.

VN 분석

VN 분석은 바이러스를 중화시켜(neutralize) 세포 배양에서 바이러스 복제가 일어나지 않도록 하는, 인플루엔자 바이러스-특이적 항체들의 서브세트(subset)의 능력에 기초한 표준 분석이다. 상기 샘플들은 56 ℃에서 30 분 동안 열-불활성화되었고, 샘플들의 순차적 2-배 희석물들이 감염 매질(medium)(20 mM 헤페스(Hepes), 0.075% 중탄산나트륨(sodium bicarbonate), 2 mM L-글루타민(Glutamine), 100 IU/ml의 페니실린(penicillin) 및 스트렙토마이신, 17.5 μg/ml 트립신(trypsin) 및 2.3 ng/ml 암포테리신 B로 보충된 이글스(Eagles) 최소 필수 배지(medium))에서 1:8 의 희석으로 시작하는 96-웰 플레이트들에서 3개로(in triplicate) 만들어졌다. 샘플 희석물들은 그 다음에 37 ℃, 5% CO2에서 1 시간 동안 관련된 바이러스의 25-400 TCID50과 배양되었다. 1 시간의 배양 기간의 완료 후 상기 바이러스-항체 혼합물들은 95-100% 융합성(confluent)인 마딘(Madine) 다비(Darby) 개(Canine) 신장(Kidney) (MDCK) 세포 배양 단층세포들(monolayers)로 플레이트들로 이동되었다. 이들 플레이트들은 그 다음에 37 ℃, 5% CO2에서 1 시간 동안 배양되었고, 그 바이러스-항체 혼합물들은 그 후에 제거되었고, 감염 배지(medium)에 의하여 대체되었다. 37 ℃, 5% CO2에서 6 일의 배양 기간 후, 상기 플레이트들은 인플루엔자 바이러스 적혈구응집소(hemagglutinin)의 존재를 검출하기 위하여 칠면조 적혈구들을 이용하여 읽혀졌다. 상기 VN 역가들은 Reed and Muench (Reed, L.J.; Muench, H. (1938). "A simple method of estimating fifty percent endpoints". The American Journal of Hygiene 27: 493-497)에 의하여 기재된 방법에 따라 계산되었다.

상기도 및 하기도에서 바이러스 복제

시험감염(challenge) 후 0, 1, 2, 3 및 4 일에, 코 및 인후 표본들(swabs)이 마취 하 동물들로부터 채취되었다. 시험감염(challenge) 4일 후, 상기 페럿들은 마취 하 채혈(exsanguination)에 의하여 안락사되었고, 그 후 전신 육안병리학(gross-pathology)이 수행되었고, 조직들이 수집되었다. 오른쪽 코 비갑개(turbinate) 및 오른쪽 폐의 모든 엽(lobes)들의 샘플들 및 부폐엽(accessory lobe)이 수집되었고, 그 다음의 공정들까지 -80 ℃에서 보관되었다. 비갑개(turbinate) 및 폐 샘플들의 중량을 재고, 그 후에 0.5% 락트알부민(lactalbumin), 10% 글리세롤, 200 U/ml 페니실린, 200 μg/ml 스트렙토마이신, 100 U/ml 폴리믹신 B 설페이트(sulfate), 250 μg/ml 젠타마이신(gentamycin), 및 50 U/ml 니스타틴(nystatin) (ICN Pharmaceuticals, Zoetermeer, The Netherlands)을 포함하는 Hank's 균형 염 용액(Hank's balanced salt solution)에서 FastPrep-24 (MP Biomedicals, Eindhoven, The Netherlands)으로 균질화되었고, 희석 전 잠시 원심분리되었다.

수집 후 코 및 인후 표본들(swabs)은 조직 샘플들의 가공을 위해 사용되는 동일한 매질(medium)에서 -80 ℃에서 보관되었다. 폐 및 표본(swab) 상청액들(supernatants)의 4 개의 10-배(fold) 순차적 희석액들은 전에 기재된 바와 같이(Rimmelzwaan GF et al.,J Virol Methods 1998 Sep;74(1)57-66) MDCK 세포들의 융합성(confluent) 층들에서 바이러스 역가들을 결정하는데 사용되었다.

항체 역가 ( titer ) 결과들

항체들의 혈청 레벨들은 각각의 면역조치 0, 21, 42, 64, 및 70 일 전 결정되었다. H1N1 A/The Netherlands/602/2009 및 2 먼(distant) 바이러스들 (H1N1 A/Swine/Ned/25/80 및 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76에 대한 역가들(titers)은 적혈구응집(hemagglutination) 억제(inhibition) 분석 (HI) 및 바이러스 중화(neutralization) 분석 (VNT)에 의하여 결정되었다. 먼(distant) 바이러스 H1N1 A/New Jersey/08/76)에 대한 항체 역가들은 적혈구응집(hemagglutination) 억제(inhibition) 분석 (HI)에 의하여 결정되었다.

HI 항체 역가들 - 상동(Homologous): H1N1 A/The Netherlands/602/2009

기하(geometric) 평균(mean) HI 역가들은 도 1에 나타나 있다. ≤ 5 값은 기하 평균의 계산을 위하여 해당하는 절대값 5로 대체되었다.모든 전-혈청들(pre-sera)(0 일)은 HI 항체 음성 (역가: ≤5)였다.

그룹에 의한 HI 역가들 분석은 하기 결과들을 밝혔다:

그룹 1 (식염수(식염수); 감염 대조군)

모든 혈청 샘플들은 HI 항체 음성이었다.

그룹 2 (플루아릭스(Fluarix)®; 비경구 대조군)

첫 번째 첫 번째 면역조치(immunization) (42일) 후 수집된 하나의 혈청 샘플은 낮은 HI 항체 양성이었다 (역가: 13). 낮은 HI 역가들 (범위 13-70)은 6마리 동물들 중 5마리의 혈청들에서 두 번째 면역조치(immunization) 후 검출되었다.

그룹 3 (백신 A, 5 μg HA; 비강내(intranasal))

첫 번째 면역조치(immunization) 후 수집된 모든 샘플들은 HI 항체 양성이었다 (21 일; GMT: 477, 범위 160-1120). HI 항체 역가들은 두 번째 면역조치 후 상당히 증가하였고(42 일; GMT: 1669, 범위 1120-2560), 그리고 6 마리 중 4 마리 동물들 또한 세 번째 면역조치(immunization) 후 그러했다(64 일; GMT: 2158, 범위 1280-3840). 70 일(시험감염(challenge)일)에 수집된 샘플들은 64 일에 측정된 그것들에 필적할만한 HI 역가들을 보였다(70 일; GMT: 2103, 범위 1120-3840).

그룹 4 (백신 A, 15 μg HA; 비강내)

첫 번째 면역조치(immunization) 후 수집된 6 개 중 5개 샘플들이 HI 항체 양성이었다 (21 일; GMT: 1130 범위, 5-5760). 두 번째 면역조치 후 수집된 모든 샘플들은 HI 항체 양성이었고; HI 항체 역가들은 5마리 동물들에서 상당히 증가하였다(42 일; GMT: 3673, 범위, 1120-5760). 세 번째 면역조치은 증가된 HI 항체 역가들을 야기하지 않았다 (64 일; GMT: 2386, 범위 1920-4480). 70 일(시험감염(challenge) 일(day))에 수집된 샘플들은 64 일에 측정된 그것들에 필적할만한 HI 역가들을 보였다 (70 일; GMT: 2281, 범위 1280-2560).

그룹 5 (백신 A, 30 μg HA; 비강내)

첫 번째 면역조치 후 수집된 모든 샘플들은 HI 항체 양성이었다 (21 일; GMT: 1249, 범위 400-3200). HI 항체 역가들은 두 번째 면역조치 후 6 마리 중 5 마리 동물들에서 증가하였고(42 일; GMT: 1874, 범위 640-3840) 그리고 세 번째 면역조치 후 2 마리 동물들에서 또한 그러하였다(64 일; GMT: 1837 범위 1280-3200). 70 일(시험감염(challenge) 일(day))에 수집된 샘플들은 64 일에 필적할만한(comparable) HI 역가들을 보였다(70 일; GMT: 1699, 범위 640-3200).

그룹 6 (백신 B, 15 μg HA; 비강내)

첫 번째 면역조치 후 수집된 6 개 샘플들 중 5 개 샘플들이 HI 항체 양성이었다 (21 일; GMT: 87, 범위 5-1280). HI 항체 역가들은 두 번째 면역조치 후 모든 동물들에서 상당히 증가하였고 (42 일;GMT: 577, 범위 100-2880), 그리고 세 번째 면역조치 후 두 마리 동물들에서 또한 그러하였다(64 일; GMT: 626, 범위 160-2560). 70 일에 수집된 샘플들 (시험감염(challenge) 일(day))은 64 일에 측정된 그것들에 필적하는 HI 역가들을 보였다 (70 일; GMT: 583, 범위 160-2240).

이종기원(Heterologous): H1N1 A/Swine/Ned/25/80, H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 및 H1N1 A/New Jersey/08/76

먼(distant) 바이러스들 H1N1 A/Swine/Ned/25/80, H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 및 H1N1 A/New Jersey/08/76 에 대한 HI 항체 역가들이 감지되었다. 상기 먼(distant) 바이러스들에 대한 기하 평균 HI 역가들은 도 2에 기재되었다. ≤ 5 값은 기하 평균의 계산을 위하여 해당하는 절대값 5로 대체되었다. 모든 전-혈청들(pre-sera)(0 일)은 HI 항체 음성이었다(역가: ≤5). 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체 역가들은 상동적인(homologous) H1N1 A/The Netherlands/602/2009 HI 항체 역가들보다 상당히 더 낮았다.

그룹에 따른 HI 역가들의 분석은 하기 결과들을 보였다:

그룹 1 (식염수; 감염 대조군)

모든 혈청 샘플들은 하나를 제외하고 HI 항체 음성이었다. 64 일에 수집된 하나의 샘플이 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76에 대하여 매우 낮은 HI 항체 역가인 7.5 를 보였다.

그룹 2 (플루아릭스(Fluarix)®; 비경구 대조군)

모든 샘플들은 H1N1 A/Swine/Ned/25/80 및 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 HI 항체 음성이었다. H1N1 A/New Jersey/08/76에 대한 낮은 HI 역가들은 42일에 수집된 혈청들에서 첫 번째 면역조치 후 6 마리 중 3 마리 동물들에서 감지되었다.

그룹 3 (백신 A, 5 μg HA; 비강내)

모든 동물들은 3 가지 먼(distant) 바이러스들에 대하여 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체들을 발달시켰다. 가장 높은 역가들은 두 번째 및/또는 세 번째 면역화 후 측정되었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Ned/25/80 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 6 (범위 5-7.5), 24 (범위 5-60), 32 (범위 20-80) 및 19 (범위 5-70)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 16 (범위 5-50), 38 (범위 10-80), 63 (범위 40-160) 및 42 (범위 20-120)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/New Jersey/08/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 5, 26 (범위 7.5-70), 39 (범위 5-80) 및 29 (범위 20-50)였다.

그룹 4 (백신 A, 15 μg HA; 비강내)

모든 동물들은 두 번째 면역조치 후 3 가지 먼(distant) 바이러스들에 대하여 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체들을 발달시켰다. 세 번째 면역조치은 증가된 HI 역가들을 야기하지 않았다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Ned/25/80 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 42 (범위 5-90), 239 (범위 20-1120), 88 (범위 50-160) 및 75 (범위 40-160)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 78 (범위 5-280), 327 (범위 35-1280), 153 (범위 80-320) 및 105 (범위 70-160)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/New Jersey/08/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 25 (범위 5-80), 176 (범위 60-400), 64 (범위 40-140) 및 63 (범위 40-160)이었다.

그룹 5 (백신 A, 30 μg HA; 비강내)

하나를 제외한 모든 동물들은 H1N1 A/Swine/Ned/25/80에 대하여 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체들을 발달시켰다. 모든 동물들은 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 및 H1N1 A/New Jersey/08/76에 대하여 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체들을 발달시켰다. 가장 높은 역가들은 두 번째 및/또는 세 번째 면역조치 후 측정되었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Ned/25/80 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 23 (범위 5-80), 41 (범위 5-320), 42 (범위 5-320) 및 34 (범위 5-320)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 39 (범위 5-160), 54 (범위 5-640), 78 (범위 20-720) 50 (범위 5-480)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/New Jersey/08/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 9 (범위 5-30), 40 (범위 5-400), 35 (범위 5-160) 및 27 (범위 5-160)이었다.

그룹 6 (백신 B, 15 μg HA; 비강내)

모든 동물들이 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76에 대하여 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체들을 발달시켰다. 하나를 제외한 모든 동물들이 H1N1 A/Swine/Ned/25/80에 대하여 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체들을 발달시켰고, 하나를 제외한 모든 동물들이 H1N1 A/New Jersey/08/76에 대하여 교차반응을 일으킬 수 있는 HI 항체들을 발달시켰다. 가장 높은 역가들은 두 번째 및/또는 세 번째 면역조치 후에 측정되었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Ned/25/80 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 7 (범위 5-40), 19 (범위 5-80), 15 (범위 5-80) 및 9 (범위 5-40)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 9 (범위 5-160), 32 (범위 5-160), 27 (범위 5-160), 15 (범위 5-80)이었다. 21, 42, 64 및 70 일에 H1N1 A/New Jersey/08/76 HI 항체 역가들 (GMT)은 각각 8 (범위 5-80), 47 (범위 10-240), 19 (범위 5-140) 및 13 (범위 5-80)이었다.

VN 항체 역가들:

상동(Homologous): H1N1 A/The Netherlands/602/2009

VN 항체 역가들은 모든 실험 동물들로부터의 혈청 샘플들에서 측정되었다. 기하 평균 VN 역가들은 도 3에 기재되어 있다. 모든 전-혈청들(pre-sera)(0 일)은 VN 항체 음성 (역가: ≤ 8)이었다.

그룹에 의한 VN 역가들의 분석은 하기 결과들을 보였다:

그룹 1 (식염수; 감염 대조군)

≤ 64로 측정된 42 일에 수집된 하나를 제외하고, 모든 혈청 샘플들은 VN 항체 음성이었다.

그룹 2 (플루아릭스(Fluarix)®; 비경구 대조군)

모든 혈청 샘플들은 VN 항체 음성이었다.

그룹 3 (백신 A, 5 μg HA; 비강내)

첫 번째 면역조치 후 수집된 6 개 중 4 개 샘플들은 낮은 VN 항체 양성이었다 (21 일; GMT: 19 범위, 8-64). 두 번째 면역조치 후 수집된 모든 샘플들은 VN 항체 양성이었다. 두 번째 면역조치 후 5 마리 동물들에서 (42 일; GMT: 242, 범위, 64-859) 그리고 세 번째 면역조치 후 (64 일; GMT: 995, 범위 362-2436) VN 항체 역가들이 상당히 증가하였다. 70 일(시험감염(challenge) 일(day))에 수집된 샘플들은 64 일에 측정된 그것들에 필적하는 또는 더 낮은 VN 역가들을 보였다(70 일; GMT: 535, 범위 304-859).

그룹 4 (백신 A, 15 μg HA; 비강내)

첫 번째 면역조치(immunization) 후 수집된 6 개 중 5 개 샘플들은 VN 항체 양성이었다 (21 일; GMT: 147 범위, 8-724). 두 번째 면역조치 후 수집된 모든 샘플들은 VN 항체 양성이었다. 두 번째 면역조치 후 5 마리 동물들에서(42 일; GMT: 2376, 범위, 64-8192) 그리고 세 번째 면역조치 후 2 마리 동물들에서(64 일; GMT: 1688, 범위 662-4871) VN 항체 역가들이 상당히 증가하였다. 70 일(시험감염(challenge) 일(day))에 수집된 샘플들은 64 일에 측정된 그것들에 필적하는 VN 역가들을 보였다(70 일; GMT: 1581, 범위 351-3444).

그룹 5 (백신 A, 30 μg HA; 비강내)

첫 번째 면역조치 후 수집된 모든 샘플들은 VN 항체 양성이다 (21 일; GMT: 74, 범위 11-627). 두 번째 면역조치 후 6 마리 중 5마리 동물들에서(day 42; GMT: 504, 범위 41-3435), 그리고 세 번째 면역조치 후 6 마리 중 3 마리 동물들에서(day 64; GMT: 1673 범위 724-4884), VN 항체 역가들이 상당히 증가했다. 70일 (시험감염(challenge) 일(day))에 수집된 샘플들은 64 일에 수집된 그것들에 필적하는 VN 역가들을 보였다(70 일; GMT: 1699, 범위 304-5793).

그룹 6 (백신 B, 15 μg HA; 비강내)

첫 번째 면역조치 후 수집된 6 개 중 2 개 샘플들이 낮은 VN 항체 양성이었다 (21 일; GMT: 12, 범위 8-64). 두 번째 면역조치 후 수집된 모든 샘플들이 VN 항체 양성이었다 (42 일;GMT: 78, 범위 32-304). 세 번째 면역조치 후 VN 항체 역가들은 증가하였다(64 일; GMT: 242, 범위 113-747). 70 일(시험감염(challenge)일)에 수집된 샘플들은 64 일에 측정된 그것들에 필적하거나, 또는 더 낮은 VN 역가들을 보였다(70 일; GMT: 177, 범위 91-362).

이종기원(Heterologous): H1N1 A/Swine/Ned/25/80, H1N1 A/Swine/Italy/14432/76. 먼(distant) 바이러스들 H1N1 A/Swine/Ned/25/80 및 H1N1 A/Swine/Italy/14432/76에 대한 VN 항체 역가들이 시험되었다(데이터는 나타내지 않음). 42, 64 및 70 일에 모든 그룹들 3, 4, 5, 및 6 이 그룹들 1 및 2보다 더 나은 결과를 냈다.

실시예 2

모든 실험 동물들에 대하여 특정 임상적 및 병리학적(pathological) 파라미터들이 결정되었는데, 즉, 사망(mortality), 체온, 체중, 공기가 공급된(aerated) 폐 용량, 폐들 및 비갑개들(turbinates)의 바이러스 로드, 상기도의 바이러스(viral) 쉐딩(shedding), 폐 중량의 사후(post mortem) 육안으로 보는(Macroscopic) 병리학적(pathologic) 검사(examination), 병변 영향받은 폐 조직의 평균 퍼센트. 코 비갑개들(turbinates) 및 폐들의 염증 파라미터들의 현미경을 이용한(microscopic) 검사. 동물 그룹들 3, 4 및 5 은 시험된 모든 육안(macroscopic) 및 대부분의 현미경을 이용한(microscopic) 파라미터들에서 그룹들 1 및 2 보다 더 나은 결과를 냈다.

상기도( upper ) 및 하기도(lower respiratory tract)에서 바이러스 복제

시험감염(challenge) 0, 1, 2, 3 및 4 일 후 코 및 인후 표본들(swabs)이 마취 하 동물들로부터 채취되었다. 시험감염(challenge) 4 일 후, 페럿들은 마취 하 채혈(exsanguination)에 의하여 안락사되었고, 그 후 전신 육안병리학(gross-pathology)이 수행되었고, 조직들이 수집되었다. 오른쪽 코 비갑개(turbinate) 및 오른쪽 폐의 모든 엽들(lobes) 및 부폐엽(accessory lobe)의 샘플들이 수집되었고, 추가 공정 때까지 - 80 ℃에서 보관되었다. 비갑개(turbinate) 및 폐 샘플들의 중량을 재고, 그 후에 0.5% 락트알부민(lactalbumin), 10% 글리세롤, 200 U/ml 페니실린, 200 μg/ml 스트렙토마이신, 100 U/ml 폴리믹신 B 설페이트, 250 μg/ml 젠타마이신, 및 50 U/ml 니스타틴(nystatin) (ICN Pharmaceuticals, Zoetermeer, The Netherlands)을 포함하는 Hank's 균형 염 용액에서 FastPrep-24 (MP Biomedicals, Eindhoven, The Netherlands)으로 균질화되고, 희석 전 잠깐 원심분리되었다.

수집 후, 코 및 인후 표본들(swabs)은 조직 샘플들의 공정에 사용되는 것과 동일한 매질(medium)에서 -80 ℃에서 보관되었다. 폐 및 표본(swab) 상청액들의 4 개(quadruplicate)의 10-배(fold) 순차적 희석액들은 전에 설명된 바와 같이(Rimmelzwaan GF et al.,J Virol Methods 1998 Sep;74(1)57-66), MDCK 세포들의 융합성(confluent) 층에서 바이러스 역가들을 결정하는데 사용되었다.

육안병리학 ( gross - pathology ) 및 조직병리학( histopathology )

동물들은 전에 설명된 바와 같이(van den Brand JM et al.,PLoS One 2012;7(8)e42343) 표준 프로토콜에 따라 부검되었다. 요컨대, 기관(trachea)은 죄어져(clamped off) 폐들은 흉강(pleural cavity)을 열자마자(upon opening) 오므라들지 않아, 영향받은 폐 실질(parenchyma)의 영역의 정확한 시각적(visual) 정량화(quantification)를 허용한다. 왼쪽 폐의 조직학적 검사를 위한 샘플들은 채취되었고, (포르말린에 천천히 우려낸(infusion) 후) 10% 중성(neutral)-완충된(buffered) 포르말린에서 보관되었고, 파라핀에 기워넣고, 4 μm로 절단되고, 광학현미경을 이용한 검사를 위하여 헤마톡실린(haematoxylin) 및 에오신(eosin) (HE)으로 염색되었다. 샘플들은 표준화된 방식으로 채취되었고, 육안병리학(gross pathology)에서 관찰되는 변화들에 의하여 가이드되지 않았다. 폐에서의 인플루엔자 바이러스-관련된 염증의 반정량적(semi-quantitative) 평가는 전에 설명한 바와 같이 수행되었다(표 6)(Munster VJ et al.,Science 2009 Jul 24;325(5939):481-3). 모든 슬라이드들은 동물들의 처치 또는 정체의 지식 없이 검사되었다.

폐 및 상기도에서의 바이러스 로드( load ) 결과들

대조군 그룹들 1 (비강내(i.n.) 식염수(saline)) 및 2 (비경구 TIV)의 모든 페럿들은 폐 (평균(mean) 역가들(titers); 각각 5.7 및 5.5 log10TCID50/ 그램(gram) 조직) 및 코(nasal) 비갑개들(turbinates) (평균 역가들: 각각 7.2 및 6.9 log10TCID50/그램(gram) 조직) 에서 복제(replication) 능숙한(competent) 바이러스의 높은 역가들을 보여주었다(표 5). 그룹들 3, 4 및 5 (비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원 pH1N1/09 백신들)의 페럿들은 그것들의 폐들 및 코 비갑개들에 감지가능한 전염성 바이러스가 없었다. 그룹 6 (15 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ adjuvanted 전체(whole) 바이러스)의 페럿들은 그것들의 폐들에서 감지가능한 전염성 바이러스가 없었고 대조군 그룹 1 (p=0.02)과 비교하여 4.1 log10TCID50/ 그램(gram) 조직의 평균 역가로 코 비갑개들(turbinates)에서 뚜렷하게 더 낮은 바이러스 역가를 가졌다.

엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 pH1N1/09 백신들로 하는 비강내 면역조치은 식염수(saline) 또는 TIV 투여에 비교하여 코 및 인후로부터 채취되는 표본들(swabs)에서 바이러스 역가들을 감소시켰다. 코 및 인후 표본들(swabs)에서 1-4 dpi의 시간 간격으로, 곡선하(under the curve) (AUC) 영역으로서 표현된 바이러스 로드들(loads)이 표 5에 나타나 있다. 그룹들 2 및 6의 것이 아닌, 그룹들 3, 4 및 5 (각각 5, 15 및 30 μg HA에서 비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 분할 항원)의 코 표본들(swabs)에서 바이러스 로드들(loads)은, 그룹 1보다 뚜렷하게 더 낮았다(그룹 1 대(versus) 그룹들 3-5; p ≤0.03). 그룹 1 및 2의 인후 표본들(swabs)에서 바이러스 로드들(loads)은 그룹들 3, 4, 5 및 6 에서 보다 뚜렷하게 더 높고 필적할만했다(p≤0.03).

육안병리학 ( gross - pathology ) 및 조직병리학( histopathology ) 결과들

엔도신(Endocine)™ adjuvanted pH1N1/09 백신들로 한 비강내 면역조치된 그룹들에서 감속된 바이러스 복제는 폐들에서의 육안병리학적 변화들에서의 감소에 상응하였다(표 5).

육안으로 보이는(macroscopic) 사후의(post-mortem) 폐 병변들(lesions)은 초점의(focal) 또는 다초점의(multifocal) 폐의 경화(consolidation)를 포함하고, 실질(parenchyma)의 기술된 적색화로 잘 특징되었다. 대조군 그룹 1 (비강내(i.n.) 식염수(saline)) 및 그룹 2 (비경구 TIV)의 모든 페럿들은 각각 평균 퍼센트 of 50% 및 37%으로 영향받은 폐 조직을 보였으며, 각각 1.5 및 1.3의 평균의 상대적인(relative) 폐(lung) 중량(weight) (RLW)에 상응하였다(표 5). 반면, 그룹들 3, 4, 5 및 6 (비강내(i.n.) 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트된 pH1N1/09 백신들)의 폐들은 영향받은 폐 조직 of 7-8%의 평균 퍼센트들로 훨씬 덜 영향받았다. 이들 4 개의 엔도신(Endocine)™-백신화된(vaccinated) 그룹들에서의 RLW들은 (0.8 내지 0.9의 밀접한 범위에서) 이들 관찰들과 비슷했다.

폐의 경화는 현미경을 이용한(microscopic) 검사에서 급성 기관지-사이(broncho-interstitial) 폐렴에 상응한다. 늘어선(lining) 폐포세포들(pneumocytes)의 상실 또는 팽창 및 폐포(alveoli)의 벽들 및 루멘들(lumina) 내 (대부분 대식세포들 및 호중성 백혈구들(neutrophils)) 염증성 세포들의 존재로 특징된다. 게다가 단백질이 풍부한 부종(oedema) 체액(fluid), 피브린 가닥 및 폐포(alveolar) 공간들에서 관외로 흘러나온(extravasated) 적혈구들 및 타입 Ⅱ 폐포세포 과형성(hyperplasia)이 폐포염(alveolitis)의 더욱 심각한 케이스들에서 일반적으로 관찰되었다. 점수화된 조직학적 파라미터들은 표 5에 정리되어 있다. 가장 심각한 폐포(alveolar) 병변들은 대조군 그룹들 1 (비강내(i.n.) 식염수(saline)) 및 2 (비경구 TIV)에서 발견되었다. 폐포(alveolar) 병변들의 모든 파라미터들은 그룹 5에서 가장 낮게 점수화되었으나, 사실 그룹들 3, 4, 5 및 6 사이의 차이들은 크지 않았다.

결정적으로, 폐들에서 - 이 페럿 모델에서 H1N1 인플루엔자 A/Netherlands/602/2009 바이러스로 한 기관내 시험감염은 가벼운 것을(slight) 심각한 폐렴으로 야기하였다. 그러나 모두 백신접종된 그룹들로부터인 몇몇 동물들은 육안으로 보이게 인식 가능한 폐병변에 의하여 전혀 영향받지 않았다. 폐 병변들의 육안으로 보는(macroscopic) 사후(post-mortem) 형가(영향 받은 폐의 추정되는 %)에 기초하여, 백신접종된(백신-A 15 μg HA) 그룹 4 및 백신접종된 (백신-A 30 μg HA) 그룹 5가 둘다 매우 낮은 점수인 7 %로 가장 적은 폐 병변들로 동일하게 고통받았고, 바로 뒤이어 모두 8% 인 백신화된(백신-A 5 μg HA) 그룹 3 및 백신화된 (백신-B 15 μg HA) 그룹 6 이었다. 플라시보-PBS-처리된 그룹 1 동물들은 50%의 뚜렷한 평균 점수로 제일 폐 병변들로 고통받았다. 비경구적으로(Parenterally) 백신화(vaccinated) 대조군 그룹 2는 약간 덜이긴 하나, 여전히 평균 37%로 현저한 폐 병변들로 고통받았다. 평균(mean) 상대적인(relative) 폐 중량들(weights) (RLW)은 영향받은 폐 조직의 이들의 추정되는 퍼센트들에 분명하게 부합하여, 영향받은 폐 조직의 이들의 추정되는 퍼센트의 타당성(validity)을 입증하였다.

폐들의 현미경을 이용한(microscopic) 검사의 결과들은, 폐 병변들의 평가된 파라미터들의 대부분에 대해, 가장 높은 투여량으로 백신화된 (백신-A 30 μg HA) 그룹 5에 대한 최고의 점수들, 및 호흡기 병변들의 점진적인 진전이 백신-A 의 HA 투여량의 감소와 연관성이 있다는 것을 확인해주었다(각각 그룹들 3 및 2). 백신-B 15 μg HA 으로의 백신접종(vaccination)은 실제로 가장 낮은 투여량 백신-A 5 μg HA (그룹 3)의 결과들과 같았다. 플라시보-PBS-처리 (그룹 1)은 모든 평가된 조직병리학적(histopathological) 파라미터들 중 가장 나쁜 점수를 받았으며, 바로 뒤이어 비경구적으로 백신화된 대조군 그룹 2이었다. 두드러지게, 모든 비강내로 백신접종된 동물들 (그룹들 3, 4, 5, 및 6)은 폐포(alveolar) 출혈(haemorrhage)로부터 보호되었다.

종합적인 결론들 - 그러므로 결론적으로, 이 페럿 바이러스 시험감염 모델에서의 평균된 병리학 점수들에 기초하여, 백신-A 30 μg HA로 한 백신접종 (그룹 5)이 가장 좋게 수행되었고 가장 적은 호흡기 병변들을 야기한 반면, 플라시보-PBS-처는 가장 나쁘게 수행되었고, 가장 큰 호흡기 병변들을 야기하였다. 백신-A 15 μg HA로 한 백신접종 (그룹 4)은 그룹 5에 비교하여 아주 약간 덜 수행되었고, 뒤이어 백신-A 5 μg HA로 한 백신접종 (그룹 3)이었는데, 이는 백신-B 15 μg HA로 한 백신접종(그룹 6)에 비교하여 실질적으로 유사하게 수행되었다. 모든 비강내로 백신접종된 동물들은 백신의 타입 및 투여량에 관계없이, 폐포(alveolar) 출혈로부터 보호되었다. 비경구(parenteral) 대조군 백신접종 (그룹 2)은 뚜렷한 호흡기 병변들로 좋지 못하게 수행되었고, 플라시보-PBS-처리 (그룹 1)에 비교하여 아주 조금 나았다.

실시예 3

하기 표 3 및 도 4는 나이브한 페럿들에서 본 발명의 백신을 다른 제품들, 플루미스트(FluMis) 및 주사가능한 백신들과 비교한다.

* Baras et al. Vaccine 29 (2011) 2120-2126

# Chen et al. JID 2011:203

¤유로신(Eurocine) 백신들(Vaccines): 본 연구

GSK 1가(monovalent) 전세계적 전염병(pandemic) 백신 (GSK H1N1), Novartis 3가(trivalent) 불활성 백신 (Novartis TIV), GSK 3가(trivalent) 불활성 백신 (GSK TIV) 그룹들은 15 미만(below)의 중화(neutralization) 역가(titer) (NT) 역가를 갖는다.

그 결과들은, 여기에서 15 μg HA 분할 인플루엔자 항원을 20 mg/ml (2 %) 엔도신(Endocine)™과 포함하는 것을 의미하는 (그룹 4, 표 2), 본 발명의 백신 조성물, 이뮤노스(Immunose)TM FLU가 Medimmune의 전세계적 전염병(pandemic) LAIV 백신 플루미스트(FluMist) (도 5 참조)와 유사한 중화(neutralizing) 역가들 및 주사된 백신들보다 우수한 역가들을 보인 반면, 비-아쥬반트된 TIV는 좋지 못한 반응을 준다는 것을 보여준다.

실시예 4

엔도신(Endocine)™으로, 또는 그것 없이 인플루엔자 백신접종한 후 15 개월 나이의 마우스들에서의 체액 면역반응의 평가

목적

본 연구의 목적은 엔도신(Endocine)™ 아쥬반트와 조합되고(combine), (15 개월) 나이먹은 마우스들로 비강내로 전달될 때 인플루엔자 항원들에 대한 인플루엔자-특이적 항체 반응을 평가하는 것이다.

엔도신(Endocine)™ 아쥬반트는 백신 조성물 내 20mg/ml (2 %)의 최종 농도로 등몰(equimolar) 량의 글리세롤 모노올리에이트(monooleate) 및 올레산(oleic acid)를 포함하였다. 이 실험에서 이뮤노스(Immunose)™ FLU는 엔도신(Endocine)™과 혼합된 살아있지 않은 인플루엔자 항원들을 의미한다.

인플루엔자-특이적 항체 반응은 엔도신(Endocine)™과 함께 또는 그것 없이 H1N1/California/2009/split 항원을 포함하는 제제들로 백신접종된 암컷 마우스들에서 연구되었고, 식염수(saline)를 받은 그룹이 대조군으로서 포함되었다. 마우스들은 세 경우들(occasions)로 비강내로 백신접종되었고, 3 주간 분리되었다. 항체 반응 평가를 위한 혈액 샘플들은 1(day-1), 20, 41 및 63 일에 수집되었다. 실섬 그룹들 및 백신 조성물들은 표 4에서 제시되어 있다.

백신 조제용 물질들(preparations) 및 투여

이 실험에서 이뮤노스(Immunose)™ Flu 는 하기를 포함한다:비강내 방울들(drops), 300 μg HA (H1N1/California/2009)/mL + 엔도신(Endocine)™ 20mg/mL (2%). 비-아쥬반트된 백신: 300 μg HA (H1N1/California/2009)/mL을 포함하는 비강내 방울들(drops). NaCl: 식염수(saline) 0.9 wt%를 포함하는 비강내 방울들(drops).

암컷 Balb/c 마우스들의 4개 그룹들이 본 연구에서 사용되었다. 3개 그룹들은 연구 초기 15 개월의 나이의 마우스들을 포함하였다(나이많음). 1개 그룹은 연구 초기 2 개월의 나이의 마우스들을 포함하였다(어림). 마우스들은 각각의 콧구멍에 본 조성물을 5μl 투여함으로써 비강내 백신접종되었다. 각각의 면역조치에서 인플루엔자 바이러스 입자들의 투여량은 2x5ul 조성물에서 3μg HA, 3 μg 의 적혈구응집소(hemagglutin) (HA)와 등가(equivalent)였다. 마우스들은 3 가지 경우들로 비강내 백신접종들을 받고, 0, 21 및 42 일에 3 주 분리되었다.

샘플 수집 및 분석

혈청 샘플들은 1(day-1), 20, 41 및 63 일에 수집되었다. 샘플들은 ELISA에 의하여 불활성화된 분할 인플루엔자 항원들에 대한(A/California/07/2009(H1N1)를 포함하는, WHO에 의하여 출판된 시즌 2012/2013) 특정 항체 반응, IgG, IgG1, IgG2a 및 IgA에 대하여 분석되었다.

데이터들은 나이많은 마우스들에게의 이뮤노스(Immunose)™ Flu의 비강내 투여가 비-아쥬반트된 백신을 받은 마우스들에 비교하여 IgG1 역가들을 증가시켰다는 것을 보여주었다. 나아가, 이뮤노스(Immunose)™ Flu로 백신접종한 나이많은 마우스들에서, 비-아쥬반트된 백신을 받은 나이많은 마우스들에서 41 일에 비교하여, 인플루엔자 특정 IgG1 반응이 20일에 감지되었다 도 6a. 41 일에, IgG2a 인플루엔자 특정 항체들은, 이뮤노스(Immunose)™ Flu를 받은 어린 마우스들에 필적할만한(comparable) 레벨로, 이뮤노스(Immunose)™ Flu를 받은 나이많은 마우스들로부터의 혈청에서 검출되었고, 반면, 비-아쥬반트된 백신을 받은 나이많은 마우스들에서 IgG2a 인플루엔자 특정 항체들은 검출되지 않았다 도 6b. Influenza 특정 IgA 역가들은 이뮤노스(Immunose)™ Flu로 배깃ㄴ접종된 마우스들에서만 검출되었다, 도 6c.

총괄하여, 본 연구로부터의 데이터들은, 엔도신(Endocine)™ 없는 인플루엔자 백신의 코의(nasal) 전달에 의하여 유도되는 역가들과 비교할 때, 코의 인플루엔자 백신에 엔도신(Endocine)™의 추가가 나이많은 마우스들의 혈청에서 인플루엔자-특이적 IgG 및 IgG1 역가들를 증가시켰다는 것을 보여준다. 게다가, 엔도신(Endocine)™의 첨가는 나이많은 마우스들에서 2 및 3 투여량 후 더 높은 IgG2a 역가들 및 더 많은 IgG2a 응답자들(responders)을 유도할 수 있다(응답자들의 수는 도시하지 않음). IgG2a 역가의 증가는 이뮤노스(Immunose)™ Flu가 Th1 타입 항체 반응을 유도할 수 있다는 것을 보여준다. 나아가, 엔도신(Endocine)™의 첨가에 의하여, 나이많은 마우스들은 IgA 반응을 유도할 수 있다. IgG 및 IgG1의 종료(end) 역가(titer)들의 종합적 분석은 이뮤노스(Immunose)™ Flu 로 백신접종된 나이많은 마우스들과 어린 마우스들 사이의 중요한 k이들을 보여주었는데, 이는 나이많은 마우스들(연구 시작 시 15 개월 나이)가 방해된 면역 용량을 갖는다는 것, 즉 어린 마우스에 비교하여 백신접종에 덜 잘 반응한다는 것을 입증하였다.

실시예들에서 사용된 약어들:

HA 인플루엔자 바이러스 적혈구응집소(hemagglutinin) 단백질

TCID50 조직(Tissue) 배양(culture) 전염성(infectious) dose 50 %

PBMC 말초(Peripheral) 혈액(blood) 단핵(mononuclear) 세포들(cells)

HI 인플루엔자 적혈구응집(hemagglutination) 억제(inhibition) 분석

SOP 표준(Standard) 시술(Operation) 절차(Procedure_

PBS 파스페이트(Phosphate) 버퍼드(buffered) 살린(saline)

EDTA 에틸렌(Ethylene) 디아민(diamine) 테트라아세트산(tetraacetic acid)

GMT 기하(Geometric) 평균(mean) 역가들(titers)(혈청학 데이터들을 표현하는데 사용됨)

FCS 태아(Fetal) 송아지(Calf) 혈청(Serum) (배양 배지(medium) 보충물)

VN 바이러스(Virus) 중화(neutralization) 분석

DMSO 디메틸(Dimethyl) 설폭사이드(Sulfoxide)

Claims

비강내 투여되는 백신으로서의 용도를 위한 조성물로, 상기 백신은 면역손상된 대상들에서의 면역조치을 위한 것인, 하기를 포함하는 조성물:
i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은(non-live) 항원들,및
ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:
하나 또는 그 이상의 카르복실산들,
수성 매질(medium),및
선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노-글리세라이드들.
제 1항에 있어서,
상기 백신은 인플루엔자에 대한 면역조치을 위한 것인 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 백신은 ≥ 65 살의 나이인 사람들의 면역조치을 위한 것인 조성물.
상기 백신은 전세계적 유행인(pandemic) 지역의 임의의 나이의 면역손상된 사람들에서의 사용을 위한 것인 조성물.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 백신은 페리-판데믹 또는 전세계적 유행인 감염성 병원체에 대한 면역조치을 위한 것인 조성물.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
페리-판데믹 또는 전세계적 유행인 감염성 병원체에 대한, 상기 백신은 예컨대 유아들, 어린이들, 성인들 및 노인들
제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원은 전체 불활성화된 바이러스, 분할 바이러스 및 서브유닛 인플루엔자 항원으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 바이러스 쉐딩을 감소시키기 위하여 ≥ 65 살의 나이의 면역손상된 개인들에서의 사용을 위한 것인 조성물.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원은 불할 항원인 조성물.
제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 또는 그 이상의 모노-글리세라이드들은 라우르산(lauric acid) (C12), 미리스트산(myristic acid)(C14), 팔미트산(palmitic acid) (C16), 팔미톨레산(palmitoleic acid) (C16: 1), 올레산(oleic acid) (C18: 1), 리놀레산(linoleic acid) (C18:2), 스테아르산(stearic acid), 헥사노익산(hexanoic acid), 카프릴산(caprylic acid), 데칸산(decanoic acid)(카프르산(capric acid)), 아라키드산(arachidic acid), 베헨산(behenic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 알파-리놀레산(linolenic acid), 스테아리돈산(stearidonic acid), 에이코사펜타에노익산(eicosapentaenoic acid), 도코사헥사노익산(docosahexaenoic acid), 감마-리놀렌산(linolenic acid), 다이호모(dihomo)-감마-리놀렌산(linolenic acid), 아라키드산(arachidonic acid), 에루크산(erucic acid), 네르본산(nervonic acid)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 카르복실산들로 모노에스테르화되는 글리세라이드들인 조성물.
제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 또는 그 이상의 모노-글리세라이드들은 팔미톨레산(palmitoleic acid_ (C16: 1), 올레산(oleic acid) (C18: 1 ) 및 리놀레산(linoleic acid) (C18:2)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 카르복실산들로 모노에스테르화된 글리세라이드들인 조성물.
제 1항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 또는 그 이상의 모노-글리세라이드들은 올레산(oleic acid)(글리세릴(glyceryl) 올리에이트(oleate))로 모노에스테르화된 글리세라이드인 조성물.
제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 또는 그 이상의 카르복실산들은 라우르산(lauric acid), 미리스트산(myristic acid), 팔미트산(palmitic acid), 팔미톨레산(palmitoleic acid), 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid) 스테아르산(stearic acid), 헥사노익산(hexanoic acid), 카프릴산(caprylic acid), 데칸산(decanoic acid) 카프르산((capric acid)), 아라키드산(arachidic acid), 베헨산(behenic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 알파-리놀렌산(linolenic acid), 스테아리돈산(stearidonic acid), 에이코사펜타에노익산(eicosapentaenoic acid), 도코사헥사에노익산(docosahexaenoic acid), 감마-리놀렌산(linolenic acid), 다이호모(dihomo)-감마-리놀렌산(linolenic acid), 아라키돈산(arachidonic acid), 에루크산(erucic acid) 및 네르본산(nervonic acid)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 또는 그 이상의 카르복실산들은 올레산 및 라우르산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 조성물.
제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 카르복실산은 올레산인 조성물.
제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 아쥬반트는 글리세롤 올리에이트, 올레산 및 수성 매질을 포함하는 것인 조성물.
제 1항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 백신 조성물은 상기 백신 조성물의 100 mL 당 약 0.1 g 내지 약 5.0 g의 범위의, 또는 100 mL 당 약 0.1 g 약 2.0 g의 범위의, 또는 100 mL 당 0.5 g 내지 약 1.5 g와 같은 약 0.5 g 내지 약 2.0 g의 양의 모노글리세라이드들을 포함하는 것인 조성물.
제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 백신 조성물은 백신 조성물의 100 mL 당 약 0.1 g 부터 약 5.0 g 까지의 범위의, 또는 100 mL 당 약 0.1 g 내지 약 2.0 g 까지의 범위의 또는 100 mL 당 0.5 g 내지 약 1.5 g과 같은 약 0.5 g 내지 약 2.0 g의 양의 카르복실산들은 포함하는 것인 조성물.
제 1항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 있어서,
아쥬반트 혼합(mix) 내 하나 또는 그 이상의 카르복실 산들과 함께 하나 또는 그 이상의 모노글리세라이드들은 상기 백신의 많아봤자 10% w/v, 또는 많아봤자 5% w/v, 또는 많아봤자 4% w/v, 또는 많아봤자 3% w/v, 또는 많아봤자 2% w/v 또는 많아봤자 1 % w/v 인 조성물.
면역손상된 대상들에 비강내로 투여되는 백신으로서 사용되기 위한, 하기를 포함하는 조성물:
하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들,및
하기를 포함하는 아쥬반트:
하나 또는 그 이상의 카르복실 산들,
수성 매질(medium), 및
선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노-글리세라이드들.
제 20항에 있어서,
인플루엔자에 대한 ≥ 65 살의 나이의 사람들에 대한 비강내로 투여되는 백신으로서 사용되기 위한 조성물.
제 1항 내지 제 21항에 있어서,
상기 면역손상된 대상들은 ≥ 65살의 나이의 사람들, 임신한 여성들, 조산된 아기들 및 하기 환자 종류들; 암환자들, 화학요법을 받는 사람들, 방사선 요법을 받는 사람들, 장기 이식 환자들, 고형 장기 이식ㅇ르 겪는 사람들, 줄기세포 이식 환자들, 조혈 동종이형 줄기세포 이식을 겪는 사람들, 조혈 자가조직 줄기세포 이식을 겪는 사람들, HIV 감염된 환자들, AIDS인 사람들, 이식편대숙주 질환인 환자들, 예컨대 글루코코르티코이드 요법 및 스테로이드 요법인 면역억제제를 투여하는 환자들, 예컨대 말기 말기 신장 질환들, 당뇨, 간경화인 만성 질환들인 사람들로 구성되는 군으로부터 선택되는 조성물.
스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)로의 감염과 관련된 증상들의 심각도를 경감시키거나 또는 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae)의 감염을 예방하기 위한, 면역손상된 대상들을 위한 비강내로 투여되는 백신으로서 사용되기 위한 조성물로, 하기를 포함하는 조성물:
i) 하나 또는 그 이상의 스트렙토코커스(Streptococcus) 뉴모니애(pneumoniae) 항원들, 및 ii) 하기를 포함하는 아쥬반트들:
하나 또는 그 이상의 카르복실산들,
수성 매질(medium),및
선택적으로 하나 또는 그 이상의 모노-글리세라이드들.
제 23항에 있어서,
상기 백신은 ≥ 65 살의 나이의 사람들의 면역조치을 위한 것인 조성물.
하기를 포함하는 조성물의 비강내 투여에 의한, 면역손상된 대상들의 면역조치 방법:
i) 하나 또는 그 이상의 살아있지 않은 인플루엔자 바이러스 항원들,및
ii) 하기를 포함하는 아쥬반트:
하나 또는 그 이상의 카르복실산들,
수성 매질(medium),및
선택적으로 하나 또는 그 이사의 모노-글리세라이드들.
제 1항 내지 제 25항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 백신 조성물의 약학적으로 효과적인 양을 그것을 필요로 하는 사람에게 비강내로 투여하는 단계를 포함하는, 페리-판데믹 또는 세계적 유행병(pandemic) 기간 동안의 면역조치 방법.
제 1항 내지 제 26항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 백신 조성물의 약학적으로 허용가능한 양을 그것을 필요로 하는 사람에게 비강내로 투여하는 단계를 포함하는 면역손상된 대상의 면역조치 방법.
제 1항 내지 제 26항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 백신 조성물의 약학적으로 허용되는 양을 그것을 필요로 하는 사람에게 비강내로 투여하는 단계를 포함하는 ≥ 65 살의 나이인 사람들의 면역조치 방법.