KR20150108372A - 단백질 키나아제의 억제제로서의 아자인돌 유도체 - Google Patents

단백질 키나아제의 억제제로서의 아자인돌 유도체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 식 (I) 의 화합물:
Figure pct00143

(I)
및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 부가 염, 용매 화합물, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 이들의 혼합물에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 주제는 또한 식 (I) 의 화합물의 제조, 이의 용도, 특히, 예를 들면, 암 또는 면역계 장애와 같은 수많은 질환에 연루되어 있는 단백질 키나아제의 억제에서의 이의 용도를 포함한다.

Description

단백질 키나아제의 억제제로서의 아자인돌 유도체{AZAINDOLE DERIVATIVES AS INHIBITORS OF PROTEIN KINASES}
본 발명은 단백질 키나아제의 억제제인 화합물, 이의 제조 방법 및 이의 치료 용도에 관한 것이다.
단백질 키나아제 (PK) 의 기능장애/조절상실은 종양학적, 면역학적, 신경학적, 대사적 및 감염성 질환을 포함한 다수의 병리(pathologies)의 원인이다. 이것은 이들 장애의 치료를 위한 소분자 및 생물학적 키나아제 억제제의 개발에서 상당한 관심을 불러일으켰다.
수많은 PK 는 특히 종양형성의 과정 동안 조절상실을 가진다. 그 결과, 단백질 키나아제는 일반적으로 수용체 타이로신 키나아제 (receptor tyrosine kinase: RTK) 및 이의 리간드를 특이적으로 표적화하는 단일클론 항체 및 타이로신 키나아제의 촉매 도메인에 대한 ATP 또는 기질의 결합을 차단하는 역할을 하는 소분자 억제제를 포함한 항암제에 대한 매력적인 표적이다. 고형 악성종양에서, 단일 키나아제 비정상이 질병의 유일한 원인인 것은 이례적이며, 종양이 하나의 비정상적으로 활성화된 신호전달 경로에만 의존적인 것 같지는 않다. 복수의 신호전달 경로가 조절장애를 가진다. 또한, 심지어 단일 분자 비정상은 복수의 하향 효과를 가질 수 있다. 동시에 수개의 신호전달 경로를 표적화하는 단일 분자 (MTKI = "Multi-Targeted Kinase Inhibitor (다중 표적화 키나아제 억제제)") 를 사용하는 다중 표적화 치료는, 단일 표적화 치료 보다 더 효과적이다. 단일 표적화 치료는 소수의 징후에 대해서만 활성을 나타냈으며, 대부분의 고형 종양은 다중 신호전달 경로의 조절상실을 나타낸다. 예를 들면, 혈관 내피 성장 인자 수용체 (vascular endothelial growth factor receptor: VEGFR) 억제제와 혈소판 유래 성장 인자 수용체 (platelet derived growth factor receptor: PDGFR) 억제제의 조합은 누적 항종양 효능을 초래한다 [Potapova et al., Mol Cancer Ther 5, 1280-1289, 2006].
종양은 종양 세포로만 되어 있지 않다. 중요한 부분은 스트로마 세포로 구성된 결합 조직 또는 스트로마, 및 이들 세포에 의해 생성된 세포외 기질로 이루어진다. 스트로마 세포의 예는 섬유아세포, 내피 세포 및 대식세포이다. 스트로마 세포는 또한 발암에서 중요한 역할을 하며, 여기서, 이들은 성장 인자 및 이의 수용체, 부착 분자, 사이토카인, 케모카인 및 단백질분해 효소의 상향조절 및 유도를 특징으로 한다 [Hofmeister et al., Immunotherapy 57, 1-17, 2007; Raman et al., Cancer Letters 256, 137-165, 2007; Fox et al., The Lancet Oncology 2, 278-289, 2001].
내피 세포 및 종양 세포 상의 수용체 관련 타이로신 키나아제 VEGFR 은 혈관신생에서의 이들의 관여에 의해 암의 촉진에서 중추적인 역할을 한다 [Cebe-Suarez et al., Cell Mol Life Sci 63, 601-615, 2006]. 추가로, 암 세포에 의해 분비된 성장 인자 TGF-베타, PDGF 및 FGF2 는 정상 섬유아세포를 종양 관련 섬유아세포로 변형시키고, 이것은 이의 수용체를 키나아제 억제제에 의한 억제에 적합한 표적으로 만든다 [Raman et al., 2007].
더욱이, 증가하는 증거는 EGF 수용체 (EGFR) 및 HER2 경로와 VEGF-의존성 혈관신생 사이의 관계 및 임상전 연구가 EGFR 신호전달의 직접적 혈관신생 효과와 간접적 혈관신생 효과 둘 다를 나타내는 것을 제시한다 [Pennell and Lynch, The Oncologist 14, 399-411, 2009]. 종양 혈관신생유발 인자 및 EGFR-의존성 종양-유발 혈관신생의 상향조절은 종양 세포가 EGFR 억제를 극복할 수 있는 잠재적 기전으로서 제안되었다.
EGFR 활성화에 의해 조절된 주요 신호전달 경로는 세포 증식, 혈관신생, 아폽토시스 억제 및 세포 주기 진행의 증가를 초래하는 PI3K, MAPK 및 Stat 경로이다. EGFR 은 폐암, 유방암, 대장암 및 두경부암과 같은 다양한 고형 종양에서 과발현된다 [Cook and Figg, CA Cancer J Clin 60, 222-243 2010]. 또한, EGFR 의 높은 발현은 전이, 생존 감소 및 예후 불량과 관련되는 것으로 보였다.
막 관련 비수용체 타이로신 키나아제인 c-Src 는 다수의 중요한 신호 전달 경로에 연루되어 있으며, 세포 기능에 대한 다면발현 효과를 가진다. c-Src 는 EGFR, PDGFR, IGF1R, VEGFR, HER2 와 같은 복수의 막관통 수용체 관련 타이로신 키나아제로부터 신호전달을 통합하고 조절한다. 함께, 이들 작용은 세포 생존, 증식, 분화, 혈관신생, 세포 운동성, 부착 및 침입을 조절한다 [Brunton and Frame, Curr Opin Pharmacol 8, 427-432, 2008]. 단백질 c-Src 의 과발현 및 이의 활성에서의 증가는 대장, 위장 (간, 췌장, 위 및 식도), 유방, 난소 및 폐를 포함한 몇몇 유형의 암에서 관찰되었다 [Yeatman, Nat Rev Cancer 4, 470-480, 2004].
암에서의 EGFR 또는 KRAS 의 활성화는 크게 증가된 Ras-의존성 Raf 활성화를 초래한다. 따라서, Raf 기능의 제거는 EGFR 및 KRAS 병변으로 개시된 수많은 암에 대한 효과적인 치료일 것으로 예상된다 [Khazak et al., Expert Opin. Ther. Targets 11, 1587-1609, 2007].
종양에서의 Raf 신호전달의 활성화 이외에도, 다수의 연구는 혈관형성 및 혈관신생에서 중요한 단계로서의 Ras-Raf-MAPK 신호전달 경로의 활성화에 연루되었음을 보여준다. 이러한 활성화는 VEGFR2, FGFR2 와 같은 성장 인자 수용체에 의해 유발되고, 따라서 Raf 활성화의 억제는 종양 혈관신생 및 혈관형성의 조절에 대한 적당한 표적을 나타낸다.
비록 VEGFR, PDGFR, EGFR, c-Src 및 Raf 가 종양 세포와 종양 스트로마 세포 둘 다에 대해 중요한 표적이지만, FGFR 과 같은 다른 키나아제는 스트로마 세포에서만 작용하고, 다른 암유전자는 종종 종양 세포에서만 작용한다.
면역 세포를 포함한 단백질 키나아제는 다양한 신호전달 경로의 기본적인 구성요소이다. 이들의 필수 기능은 이들을 효과적인 치료 표적으로 만들었다. 초기에, 기대는 높은 정도의 선택성이 중요한 것이었고; 그러나, 시간이 지남에 따라, "멀티키나아제" 억제제의 사용은 확대되었다. 더욱이, 키나아제 억제제가 사용되는 질환의 범위도 또한 악성종양 뿐만 아니라 면역-매개된 질환/염증성 질환을 포함하는 것으로 확대되었다. 다연쇄 면역 인지 수용체에 의한 신호전달에서의 제 1 단계는 초기에 Src 계열 단백질 타이로신 키나아제에 의해 매개된다. 면역 기능에 관련된 MTKI 표적화 키나아제는 류마티스 관절염, 건선 및 염증성 장 질환과 같은 자가면역 질환에 대한 잠재적 약물이다 [Kontzias et al., F1000 Medicine Reports 4, 2012].
이전에 언급된 단백질 키나아제는 또한 신경퇴행 및 신경보호 [Chico et al., Nature Reviews Drug Discovery 8, 892-909, 2009], 죽상동맥경화증, 골다공증 및 골 흡수, 황반 변성, 병리학적 섬유증, 낭종생성 (인간 상염색체 우성 다낭성 신종...) 과 같은 다수의 다른 생리학적 및 병리학적 기전의 중요 구성요소이다.
WO 2010/092489 및 관련 특허/특허 출원에서, 본 발명자들은 이러한 용도에 대해 흥미 있는 특성을 나타낸 수개의 화합물을 확인하였다. 그러나, 본 발명자들은 이들 화합물의 일부가 이들의 구조의 특정 영역에 대해 선택적으로 작동함으로써 이들의 특성이 향상될 수 있는 것을 밝혀냈다. 그러나, 키나아제에 대한 이들 구조의 작용 기전은 WO 2010/092489 의 출원 당시에 정확히 밝혀지지 않았고, 따라서 본 발명자들이 본 출원에서 개시된 구조의 높은 활성을 밝혀낸 것은 예상치 못한 것이었다.
본 발명의 주제는 종양발생, 인간 면역 장애, 염증성 질환, 혈전성 질환, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 황반 변성, 섬유증, 낭종생성을 포함한 단백질 키나아제의 조절상실과 관련된 병리학의 치료에서 치료적으로 사용될 수 있는, 원래의 백본을 가지는 신규한 다중 표적화 키나아제 억제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 억제제는 특히 수많은 암의 치료에서, 보다 특히 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 위암, 췌장암, 글리알 세포 종양, 예를 들면, 교모세포종 및 신경섬유종증, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 흑색종, 대장암, 자궁내막암, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 육종, 성상세포종, 및 각종 유형의 과증식성 질환을 포함하지만 이들에 한정되는 것이 아닌 고형 종양 또는 액체 종양, 예를 들면, 혈액암 (백혈병) 의 경우에서 사용될 수 있다.
본 발명은 하기 식 (I) 의 화합물:
Figure pct00001
(I)
로서, 여기서,
- R1 은 C1-C6 알킬기, 바람직하게는 메틸, 에틸 또는 n-프로필이고, 다르게는 R1 은 수소 원자이고,
- X 는 CH2 또는 C =O 이고,
- R2 는 수소, C1-C6 알킬 또는 할로겐이고,
- Y 는 HNC(O), HNC(S), HNSO2, HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NH, C(O)NHCH2, CH2NHC(O) 및 CH2NHC(S) 로 이루어진 군으로부터 선택되고,
- R3 은
- 하기로 일치환 또는 다중치환된 페닐기:
- 하이드록실,
- 할로겐,
- C1-C6 알킬-아민, 바람직하게는 2차 C1-C6 알킬-아민,
- C1-C6 알콕시,
- C1-C6 트리플루오로알콕시, 바람직하게는 트리플루오로메톡시,
- C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸, 이소프로필,
- C1-C6 트리플루오로알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸,
- C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴 단편으로서, 여기서, 상기 헤테로아릴 단편은 바람직하게는 메틸로 일치환된 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘 및 티아졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 헤테로아릴 단편,
- Y 가 HNC(S), HNSO2, HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NHCH2, CH2NHC(O), CH2NHC(S) 또는 C(O)NH 이고, 바람직하게는 Y 가 HNC(S), HNSO2, HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NHCH2, CH2NHC(O) 또는 CH2NHC(S) 이고, 보다 바람직하게는 Y 가 HNC(S) 이고, 여기서, NH 는 R3 에 직접 연결되어 있는 경우의 이미다졸,
- C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된, 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘으로 이루어진 군으로부터 바람직하게 선택된 헤테로아릴기,
- 비방향족의 일치환된 사이클릭기, 바람직하게는 하이드록실, 할로겐, C1-C6 알킬-아민, C1-C6 알콕시, C1-C6 트리플루오로알콕시, C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬로 일치환된 사이클릭 C3-C10 알킬, 및
- 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 단편:
Figure pct00002
로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식 (I) 의 화합물
및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 부가 염, 용매 화합물, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 이들의 혼합물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 측면은 본 명세서에서 정의된 화합물의 제조 방법에 관한 것으로서, 상기 제조 방법은 하기 단계 중의 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 한다:
a) X 가 CO 인 경우, NH-CO 결합은 NO2 기로 치환된 방향족 카복실산과 펩타이드 커플링 기술에 의해, 바람직하게는 카보디이미드 또는 우로늄(uronium) 커플링제의 사용에 의해 형성되거나, X 가 CH2 인 경우, NH-CH2 결합은 NO2 기로 치환된 방향족 알데하이드와의 환원성 아미노화에 의해, 바람직하게는 붕소 무수물의 존재 하에 형성되는 단계,
b) 바람직하게는 촉매적 수소화와 같은 수소화에 의해, 예를 들면, 목탄(charcoal) 상 팔라듐의 존재 하에 수소 분위기에서 NO2 기를 NH2 로 환원시키는 단계.
본 발명의 다른 측면은 본 명세서에서 정의된 화합물의 제조 방법에 관한 것으로서, 상기 제조 방법은 바람직하게는 상기 제조 방법의 단계 (a) 및/또는 단계 (b) 이후에 하기 단계 중의 하나를 포함하는 것을 특징으로 한다:
c1) Y 가 HNC(O)NH 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 이소시아네이트와 반응시켜 우레아를 형성하는 단계,
c2) Y 가 HNC(S)NH 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 이소티오시아네이트와 반응시켜 티오우레아를 형성하는 단계,
c3) Y 가 HNSO2 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 설포닐 클로라이드와 같은 할로겐 설포닐과 반응시켜 설폰아미드를 형성하는 단계,
c4) Y 가 HNCO 또는 HNC(O)CH2 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 펩타이드 커플링 기술을 사용하여 카복실산 또는 아실 클로라이드와 반응시켜 아미드를 형성하는 단계, 또는
c5) Y 가 HNCS 인 경우, 단계 c4) 이후 수득된 화합물을 로손 시약과 반응시켜 티오아미드를 형성하는 단계.
본 발명은 또한 상기 화합물이 약물인 것을 특징으로 하는 본 명세서에서 정의된 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 암, 보다 특히 액체 종양, 예를 들면, 혈액암, 예를 들면, 백혈병, 만성 또는 급성 골수증식성 장애 또는 고형 종양, 예를 들면, 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 글리알 세포 종양, 예를 들면, 교모세포종 및 신경섬유종증, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 흑색종, 대장암, 자궁내막암, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 육종 및/또는 성상세포종과 같은 질환 및 기타 키나아제 관련 질환, 바람직하게는 면역 장애, 염증성 질환, 혈전성 질환, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 황반 변성, 섬유증, 낭종생성, 과증식성 질환에서 단백질 키나아제의 억제제로서 사용되는 본 명세서에서 정의된 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 유효 성분으로서, 본 명세서에서 정의된 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 함유하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
정의
일반적으로, 하기 정의를 사용한다:
본 발명에서의 표현 "펩타이드 커플링" 이란, 아미드 -NH-C(O)- 를 형성할 수 있는 반응을 의미한다. 그러나, 이 반응에서 사용되는 기술, 즉, 아민을 카복실산에 반응할 수 있도록 카복실산을 활성화시키는 것은 펩타이드 합성에서 일반적이다. 그러므로, 비록 어떠한 펩타이드도 본 발명에서 형성되지 않지만, 커플링 반응은 펩타이드 합성으로부터 유도되고, 본 발명의 물질에 직접 적용가능하다.
커플링 반응은 축합 시약, 예를 들면, N,N'-디사이클로헥실카보디이미드 (DCC) 또는 1-에틸-3-(3'-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (EDC), 즉, 수용성 카보디이미드, O-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU), 벤조트리아졸-1-일-옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,2,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU), O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), O-벤조트리아졸-1-일-테트라메틸테트라플루오로보레이트 (TBTU), N-하이드록시-5-노보넨-2,3-디카보디이미드 또는 임의의 기타 커플링제를 사용하여 에테르, 아세톤, 클로로포름, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트, DMF, 테트라하이드로푸란 (THF), 아세토니트릴, 디메틸설폭사이드 (DMSO), N-메틸 피롤리디논 (NMP) 과 같은 용매 중에서, 빙냉 또는 실온 하에, 바람직하게는 디메틸아미노피리딘 (DMAP), 피리딘, N-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt), 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸 (HOAt), N-하이드록시석신이미드 등과 같은 아실화 촉매의 존재하에서 수행될 수 있다.
본 발명에서의 표현 "알킬기" 란, 명시되지 않는 다면, 1개 내지 6개의 탄소 원자를 가지는 선형 또는 분지형 포화 지방족 기를 의미한다. 본 발명의 범위에 포함되는 알킬기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 3차-부틸, 이소프로필 기 등이다.
본 발명에서의 표현 "사이클로알킬기" 란, 3개 내지 10개의 탄소 원자를 가지는 사이클릭 알킬기를 의미한다. 본 발명의 범위에 포함되는 사이클로알킬기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 메틸사이클로헥실 등이다.
본 발명에서의 표현 "아릴기" 란, 5개와 10개 사이의 탄소 원자를 포함하는 사이클릭 (모노사이클릭 또는 폴리사이클릭) 방향족 기를 의미한다. 본 발명의 범위에 포함되는 아릴기의 예는 페닐, 나프틸 등이다.
본 발명에서의 표현 "헤테로아릴기" 란, 5개와 10개 사이의 탄소 원자 및 1개와 3개 사이의 헤테로 원자, 예를 들면, 질소, 산소 또는 황을 포함하는 사이클릭 (모노사이클릭 또는 폴리사이클릭) 방향족 기를 의미한다. 본 발명의 범위에 포함되는 헤테로아릴기의 예는 피리딘, 티오펜, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 피롤, 퀴놀린, 인돌, 피리다진, 퀴녹살린, 디하이드로벤조푸란 등이다.
본 발명에서의 표현 "비방향족의 일치환된 사이클릭기" 란, 사이클로알킬기 및/또는 헤테로사이클릭기를 의미한다.
본 발명에서의 표현 "헤테로사이클릭기" 란, 5개와 10개 사이, 바람직하게는 2개 내지 10개의 탄소 원자, 및 1개와 3개 사이의 헤테로 원자, 예를 들면, 질소, 산소 및 황을 포함하는 포화 사이클릭기를 의미한다. 본 발명의 범위에 포함되는 헤테로사이클릭기의 예는 모르폴린, 테트라하이드로푸란 등이다.
본 발명에서의 표현 "할로겐 원자" 란, 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다.
본 발명에서의 표현 "알콕시기" 란, 산소에 결합된 알킬기를 의미한다. 본 발명의 범위에 포함되는 알콕시기의 예는 메톡시기, 에톡시기 등이다.
본 발명에서의 표현 "아릴옥시기" 란, 산소 원자에 결합된 아릴기를 의미한다. 본 발명의 범위에 포함되는 아릴옥시기의 예는 페닐옥시 등이다.
본 발명에서의 표현 "설폰아미드기" 란, 하기를 의미한다:
Figure pct00003
본 발명에서의 표현 "N-메틸 설폰아미드기" 란, 하기를 의미한다:
Figure pct00004
본 발명에서의 표현 "메탄설폰아미드기" 란, 하기를 의미한다:
Figure pct00005
본 발명에서의 표현 "아랄킬기" 란, 하기와 같은 아릴기로 치환된 알킬기를 의미한다:
Figure pct00006
본 발명에서의 표현 "C1-C6 알킬 아민기" 란, 하기와 같은 아민기로 치환된 C1-C6 알킬기를 의미한다:
Figure pct00007
본 발명에서의 표현 "2차 C1-C6 알킬 아민기" 란, 2차 아민, 즉, 2개의 C1-C6 알킬기로 치환될 수 있는 아민기를 의미한다.
본 발명에서의 표현 "하이드록실기" 란, OH 를 의미한다.
본 발명에서의 표현 "알콕시알킬기" 란, 하기와 같은 알킬기, 바람직하게는 알콕시기로 치환된 알킬기를 의미한다:
Figure pct00008
본 발명에서의 표현 "설파닐기" 란, 하기를 의미한다:
Figure pct00009
본 발명에서의 표현 "우레이도" 란, 우레아 또는 티오우레아에 대한 일반 용어로서 사용된다.
본 발명에서의 표현 "치환된 페닐" 이란, 하기로 일치환 또는 다중치환된 페닐을 의미한다:
- 할로겐 원자,
- 니트로기 -(NO2),
- 시아노기 (CN),
-메틸티아질기,
Figure pct00010
- 알콕시기,
- 아릴옥시기,
- 알킬기,
- 설폰아미드기,
- N-메틸 설폰아미드기,
- 메탄설폰아미드기,
- 헤테로아릴기,
- 하이드록실기,
- 3차 아민기,
- -CONH알킬기,
- -NHCO알킬기.
본 발명에서의 용어 "피리딜" 이란, 하기와 같은 피리딘으로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00011
본 발명에서의 용어 "티오페닐" 이란, 하기와 같은 티오펜으로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00012
본 발명에서의 용어 "티아질" 이란, 하기와 같은 티아졸로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00013
본 발명에서의 용어 "이미다질" 이란, 하기와 같은 이미다졸로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00014
본 발명에서의 용어 "피라질" 이란, 피라졸로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00015
본 발명에서의 용어 "퀴녹살린" 이란, 하기를 의미한다:
Figure pct00016
본 발명에서의 용어 "디하이드로벤조푸라닐" 이란, 하기와 같은 디하이드로벤조푸란으로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00017
본 발명에서의 용어 "피릴" 이란, 하기와 같은 피롤로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00018
본 발명에서의 용어 "인딜" 이란, 하기와 같은 인돌로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00019
본 발명에서의 용어 "피리다지닐" 이란, 하기와 같은 피리다진으로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00020
본 발명에서의 용어 "N-모르폴릴" 이란, 하기와 같은 모르폴린으로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00021
본 발명에서의 용어 "벤즈이미다질" 이란, 하기와 같은 벤즈이미다졸로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00022
본 발명에서의 용어 "피리미디닐" 이란, 하기와 같은 피리미딘으로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00023
본 발명에서의 표현 "1H-피롤로[2,3-b]피리딜" 이란, 하기와 같은 1H-피롤로[2,3-b]피리딘으로부터 유도된 라디칼을 의미한다:
Figure pct00024
본 발명에서의 표현 "약제학적 조성물" 이란, 유효 용량의 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 임의의 조성물을 의미한다. 상기 부형제는, 약제학적 형태 및 목적가는 투여 방법에 따라, 당업자에게 공지된 통상의 부형제로부터 선택된다.
본 발명에서의 표현 "약제학적으로 허용가능한 부가 염" 이란, 본 발명에 따른 화합물의 모든 약제학적으로 허용가능한 염을 의미하며, 특히 약산의 염 및 약염기의 염, 예를 들면, 하이드로클로라이드 염, 하이드로브로마이드 염, 트리플루오아세테이트 염 등이 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명에서의 표현 "거울상 이성질체의 혼합물" 이란, 거울상 이성질체의 임의의 혼합물을 의미한다. 상기 혼합물은 라세미체, 즉, 각각의 거울상 이성질체의 50/50 중량% (w/w), 또는 비-라세미체, 즉, 다른 거울상 이성질체에 대한 하나의 거울상 이성질체의 중량(w/w) 비가 50/50 중량% 와 75/25 중량% 사이, 75/25 중량% 와 90/10 중량% 사이, 또는 95 중량% 초과로 되도록 하나의 거울상 이성질체 또는 다른 거울상 이성질체가 풍부한 것일 수 있다.
본 발명에서의 표현 "부분입체 이성질체의 혼합물" 이란, 임의의 비율의 임의의 부분입체 이성질체의 혼합물을 의미한다.
표현 "치료" 란, 모든 유형의 동물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간에 관한 것으로 의도된다. 인간이 아닌 동물의 치료의 경우, 이것은 수의학적 치료를 의미할 것이다.
도 1 은 A549 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 2 는 HepG2 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 3 은 HuCCT1 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 4 는 HuH6 Clone 5 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 5 는 HuH7 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 6 은 PC-3 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 7 은 Caki-2 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 8 은 MDA-MB-231 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 9 는 HT29 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 10 은 BxPC-3 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 11 은 H1975 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 12 는 BaF3 BCR-ABL WT 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 13 은 BaF3 BCR-ABL T315I 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 14 는 BaF3 BCR-ABL G250A 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 15 는 BaF3 BCR-ABL G250E 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 16 은 BaF3 BCR-ABL G250A+E279N 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 17 은 BaF3 BCR-ABL E255K+M351T 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 18 은 HUVEC 세포에 대한 일부 화합물의 증식억제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 19 는 종양 (BaF3 BCR-ABLT315l) 체적 (mm3), 시간 경과 (이식 후 일수) 에 따른 마우스 체중, 및 실험 종료시의 종양 중량 (mg) 의 감소를 나타내는 그래프이다.
도 20 은 종양 (HepG2) 체적 (mm3), 시간 경과 (이식 후 일수) 에 따른 마우스 체중, 및 실험 종료시의 종양 중량 (mg) 의 감소를 나타내는 그래프이다.
도 21 은 종양 (H1975) 체적 (mm3), 시간 경과 (이식 후 일수) 에 따른 마우스 체중, 및 실험 종료시의 종양 중량 (mg) 의 감소를 나타내는 그래프이다.
도 22 는 종양 (BxPC-3) 체적 (mm3), 시간 경과 (이식 후 일수) 에 따른 마우스 체중, 및 실험 종료시의 종양 중량 (mg) 의 감소를 나타내는 그래프이다.
도 23 은 결정 구조 (PDB id = 1UWH) 에 따른 B-Raf 의 키나아제 도메인의 활성 부위 아미노산과 화합물 OR0512 사이의 상호작용 (소수성 접촉, 수소 한도(hydrogen bounds) 및 방향족 줄치기(aromatic staking)) 의 개략도이다.
도 24 는 결정 구조 (PDB id = 4ASD) 에 따른 VEGFR2 의 키나아제 도메인의 활성 부위 아미노산과 화합물 OR0512 사이의 상호작용 (소수성 접촉, 수소 한도 및 방향족 줄치기) 의 개략도이다.
도 25 는 본 키나아제의 상동성 모델에 따른 EGFR 의 키나아제 도메인의 활성 부위 아미노산과 화합물 OR0512 사이의 상호작용 (소수성 접촉, 수소 한도 및 방향족 줄치기) 의 개략도이다.
도 26 은 본 키나아제의 상동성 모델에 따른 FGFR2 의 키나아제 도메인의 활성 부위 아미노산과 화합물 OR0512 사이의 상호작용 (소수성 접촉, 수소 한도 및 방향족 줄치기) 의 개략도이다.
생성물
하나의 실시형태에 따르면, 본 발명의 화합물 (I) 은,
- R3 이
- 하기로 일치환 또는 다중치환된 페닐기:
- 하이드록실,
- 할로겐,
- C1-C6 알킬-아민, 바람직하게는 2차 C1-C6 알킬-아민,
- C1-C6 알콕시,
- C1-C6 트리플루오로알콕시, 바람직하게는 트리플루오로메톡시,
- C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸, 이소프로필,
- C1-C6 트리플루오로알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸,
- C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴 단편으로서, 여기서, 상기 헤테로아릴 단편은 바람직하게는 메틸로 일치환된 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘 또는 티아졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 헤테로아릴 단편,
- Y 가 HNC(S) 인 경우의 이미다졸,
- C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된, 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘으로 이루어진 군으로부터 바람직하게 선택된 헤테로아릴기,
- 비방향족의 일치환된 사이클릭기, 바람직하게는 하이드록실, 할로겐, C1-C6 알킬-아민, C1-C6 알콕시, C1-C6 트리플루오로알콕시, C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬로 일치환된 사이클릭 C3-C10 알킬, 및
- 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 단편:
Figure pct00025
로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
유리하게는, 본 발명의 화합물 (I) 은,
- X 는 CH2 이고,
- R2 는 C1-C6 알킬 또는 할로겐이고,
R1, Y 및 R3 은 상기에서 정의된 바와 같은 것을 특징으로 한다.
하나의 실시형태에 따르면, 본 발명의 화합물 (I) 은,
- X 는 CH2 이고,
- R2 는 C1-C6 알킬 또는 할로겐이고,
- R3 은
- 하기로 일치환 또는 다중치환된 페닐기:
- 하이드록실,
- 할로겐,
- C1-C6 알킬-아민, 바람직하게는 2차 C1-C6 알킬-아민,
- C1-C6 알콕시,
- C1-C6 트리플루오로알콕시, 바람직하게는 트리플루오로메톡시,
- C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸, 이소프로필,
- C1-C6 트리플루오로알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸,
- C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴 단편으로서, 여기서, 상기 헤테로아릴 단편은 바람직하게는 메틸로 일치환된 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘 또는 티아졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 헤테로아릴 단편,
- Y 가 HNC(S) 인 경우의 이미다졸,
- 바람직하게는 C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴기, 보다 바람직하게는 메틸에 의해 임의로 일치환된 티아졸,
- 비방향족의 일치환된 사이클릭기, 바람직하게는 하이드록실, 할로겐, C1-C6 알킬-아민, C1-C6 알콕시, C1-C6 트리플루오로알콕시, C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬로 일치환된 사이클릭 C3-C10 알킬, 및
- 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 단편:
Figure pct00026
로 이루어진 군으로부터 선택되고,
R1 및 Y 는 상기에서 정의된 바와 같은 것을 특징으로 한다.
유리하게는, 본 발명의 화합물 (I) 은,
- R1 은 C1-C6 알킬기, 바람직하게는 메틸 또는 n-프로필이고, 다르게는 R1 은 수소이고,
- X 는 CH2 이고,
- R2 는 메틸, 불소 또는 클로라이드 원자, 바람직하게는 메틸 또는 클로라이드 원자이고,
- Y 는 HNC(O), HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NH, C(O)NHCH2, 및 CH2NHC(O) 로 이루어진 군으로부터 선택되고,
- R3 은
- C1-C6 트리플루오로알킬기, C1-C6 트리플루오로알콕시기, C1-C6 알킬기, 할로겐, 또는 티아졸기로 일치환된, 임의로 CF3 및/또는 메틸기로 일치환된 페닐기,
- C1-C6 트리플루오로알킬, C1-C6 알킬-아민 및/또는 하이드록실기로 다중치환된 페닐기,
- C1-C6 알킬 또는 C1-C6 트리플루오로알킬, 바람직하게는 메틸 및/또는 트리플루오로메틸에 의해 임의로 치환된 피리딘기,
- C1-C6 알킬 및/또는 C1-C6 트리플루오로알킬로 일치환된 사이클릭 C3-C10 알킬 사이에서 선택된 비방향족 사이클릭기, 및
- 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 단편:
Figure pct00027
.
로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
훨씬 보다 유리하게는, 본 발명의 화합물 (I) 은,
- R1 은 C1-C6 알킬기, 바람직하게는 메틸, 에틸 또는 n-프로필이고, 다르게는 R1 은 수소 원자이고,
- X 는 CH2 이고,
- R2 는 메틸이고,
- Y 는 HNC*(O) 이고, 여기서, C* 는 R3 에 연결되어 있고,
- R3 은
Figure pct00028
Figure pct00029
로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 바람직한 실시형태에 따르면, 식 (I) 의 화합물은 하기 식 (II) 의 화합물:
Figure pct00030
(II)
로서, 여기서,
- R1 은 C1-C6 알킬이고,
다르게는 R1 은 수소 원자이고,
- X 는 CH2 또는 C=O 이고,
- R2 는 수소, C1-C6 알킬 또는 할로겐이고,
- Y 는 HNC(O), HNC(S), HNSO2, HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NH, C(O)NHCH2, CH2NHC(O) 및 CH2NHC(S) 로 이루어진 군으로부터 선택되고,
- R3 은
- 하기로 일치환 또는 다중치환된 페닐기:
- 하이드록실,
- 할로겐,
- C1-C6 알킬-아민, 바람직하게는 2차 C1-C6 알킬-아민,
- C1-C6 알콕시,
- C1-C6 트리플루오로알콕시, 바람직하게는 트리플루오로메톡시,
- C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸, 이소프로필,
- C1-C6 트리플루오로알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸,
- C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴 단편으로서, 여기서, 상기 헤테로아릴 단편은 바람직하게는 메틸로 일치환된 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘 또는 티아졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 헤테로아릴 단편,
- Y 가 HNC(S) 인 경우의 이미다졸,
- 바람직하게는 C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴기, 보다 바람직하게는 메틸에 의해 임의로 일치환된 티아졸,
- 비방향족의 일치환된 사이클릭기, 바람직하게는 하이드록실, 할로겐, C1-C6 알킬-아민, C1-C6 알콕시, C1-C6 트리플루오로알콕시, C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬로 일치환된 사이클릭 C3-C10 알킬, 및
- 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 단편:
Figure pct00031
로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식 (II) 의 화합물
및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 부가 염, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 이들의 혼합물로 구체적으로 정의된다.
본 발명의 바람직한 실시형태에 따르면, 하기 일반식 (II) 의 화합물:
Figure pct00032
(II)
은,
- R1 은 메틸이고, 다르게는 R1 은 수소 원자이고,
- X 는 CH2 이고,
- R2 는 메틸이고,
- Y 는 HNC*(O) 이고, 여기서, C* 는 R3 에 연결되어 있고,
- R3 은
Figure pct00033
Figure pct00034
로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 R3 은
Figure pct00035
인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 다른 실시형태에서, 상기에서 상세히 설명된 모든 특정 실시형태는 또한 X 가 CH2 대신에 C=O 인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 명세서에서 개시된 식 (I) 또는 식 (II) 의 모든 화합물은 이의 약제학적으로 허용가능한 부가 염, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 이들의 혼합물일 수 있다.
본 발명에 따른 모든 화합물은 용매화된 형태 및 비-용매화된 형태일 수 있다.
생성물 합성
본 발명은 또한 5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르를 출발 물질로 사용하는 상기 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
제 1 실시형태에서, 본 발명에 따른 제조 방법은 반응식 1 에 제시된다.
주요 중간체 아민 화합물의 일반적 합성은 실제로 하기 반응식 1 에 제시된다:
Figure pct00036
반응식 1
a) 상기 제조 방법은 디이소프로필에틸아민 (DIEA) 과 같은 염기, 디사이클로헥실카보디이미드 (DCC) 와 같은 카보디이미드의 존재하에 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 와 같은 활성화제를 하나 이상 포함한다.
이들 커플링 반응은 당업자에게 잘 공지되어 있다.
b) 수소화붕소의 존재 하에 각종 방향족 알데하이드에 의해 5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르를 환원성 아미노화시켜 상응하는 벤질성 아민을 제공하는 단계 [Wang, Dong Mei et al Journal of Combinatorial Chemistry, 2009, 11(4), 556-575],
c) 목탄 상 팔라듐의 존재 하에 수소 분위기에서, 생성된 니트로 화합물을 촉매적으로 수소화하는 단계 [Seela, F., Gumbiowski, R. Heterocycles , 1989, 29 (4), 795-805].
바람직하게는, 상기 제조 방법은 하기 반응식 2 에서의 보다 구체적인 단계 a), 단계 b), 단계 c) 의 하나 이상을 포함한다:
Figure pct00037
반응식 2
상기 반응식 2 에서, R2 는 상기에서 정의된 바와 같다.
바람직한 제조 방법은 하기 단계의 하나 이상을 포함한다:
a) 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 디이소프로필에틸아민 (DIEA) 으로 펩타이드 커플링시키는 단계,
b) 수소화붕소의 존재 하에 각종 방향족 알데하이드에 의해 5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르를 환원성 아미노화시켜 상응하는 벤질성 아민을 제공하는 단계 [Wang, Dong Mei et al Journal of Combinatorial Chemistry, 2009, 11(4), 556-575],
c) 목탄 상 팔라듐의 존재 하에 수소 분위기에서, 생성된 니트로 화합물을 촉매적으로 수소화하는 단계 [Seela, F., Gumbiowski, R. Heterocycles , 1989, 29 (4), 795-805].
당업자는 이들 유형의 화합물을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이다.
다른 실시형태에서, 상기 제조 방법은 반응식 3 으로 제시된다.
상기에서 개시된 우레아 또는 티오우레아 화합물의 합성 방법과 관련하여, 다른 방법 중에서 하나의 방법이 하기 반응식 3 에서 제시된다:
Figure pct00038
반응식 3
상기 반응식 3 에서, R2, R3 및 X 는 상기에서 정의된 바와 같고, Y 는 O 또는 S 이다.
따라서, 우레아 또는 티오우레아 화합물의 바람직한 합성 방법은 적어도 하기 단계를 포함한다:
d) 주요 중간체 아민 화합물을 각종 이소시아네이트 또는 티오이소시아네이트와 반응시키는 단계.
당업자는 이들 유형의 (티오)우레아 화합물을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이다.
다른 실시형태에서, 제조 방법은 반응식 4 로 제시된다.
설폰아미드 화합물의 합성 방법과 관련하여, 다른 방법 중에서 하나의 방법이 하기 반응식 4 에서 제시된다:
Figure pct00039
반응식 4
상기 반응식 4 에서, R2, R3 및 X 는 상기에서 정의된 바와 같다.
본 설폰아미드 화합물의 합성 방법 적어도 하기 단계를 포함한다:
e) 주요 중간체 아민 화합물을 각종 설포닐 클로라이드와 반응시키는 단계.
당업자는 이들 유형의 설폰아미드 화합물을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이다.
다른 실시형태에서, 제조 방법은 반응식 5 로 제시된다.
아미드 화합물의 합성 방법과 관련하여, 다른 방법 중에서 두 가지 방법이 하기 반응식 5 에서 제시된다:
Figure pct00040
반응식 5
상기 반응식 5 에서, R2, R3 및 X 는 상기에서 정의된 바와 같다.
반응식 5 의 방법은 적어도 하기 단계를 포함한다:
f) 주요 중간체 아민 화합물을 각종 아실 클로라이드 또는 카복실산과 반응시키는 단계 [Mouaddib, A., Joseph, B. et al., Synthesis , 2000, (4), 549-556].
당업자는 이들 유형의 아미드 화합물을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이다.
다른 실시형태에서, 제조 방법은 반응식 6 으로 제시된다.
상기에서 개시된 티오우레아 화합물의 합성 방법과 관련하여, 다른 방법 중에서 하나의 방법이 하기 반응식 6 에서 제시된다:
Figure pct00041
반응식 6
따라서, 티오아미드 화합물의 바람직한 합성 방법은 적어도 하기 단계를 포함한다:
g) 주요 중간체 아미드 화합물을 로손 시약과 반응시키는 단계.
제 6 실시형태는 하기 반응식 7, 반응식 8, 반응식 9 및/또는 반응식 10 에 따라 수득된, 상업적으로 이용가능하지 않은 카복실산의 합성 방법에 관한 것이다.
4- 아미노메틸 -3- 트리플루오로메틸 -벤조산 또는 4- 아미노메틸 -3- 플루오로벤조산
4-아미노메틸-3-트리플루오로메틸-벤조산 또는 4-아미노메틸-3-플루오로벤조산을 합성하기 위해 본 발명에서 사용되는 방법은 하기 반응식 7 로 제시된다:
Figure pct00042
반응식 7
상기 반응식 7 에서, NR4R5 는 하기를 나타낸다:
Figure pct00043
또는
Figure pct00044
따라서, 4-아미노메틸-3-트리플루오로메틸-벤조산 및 4-아미노메틸-3-플루오로벤조산의 바람직한 합성 방법은 하기 단계의 하나 이상을 포함한다:
h) 바람직하게는 메탄올, 유리하게는 산성 매질 중에서 주요 4-메틸-벤조산을 에스테르화시켜 메틸산 에스테르를 제공하는 단계,
i) 유리하게는 라디칼 개시제로서의 아조비스이소부티로니트릴 (AIBN) 의 존재 하에 바람직하게는 N-브로모석신이미드 (NBS) 에 의해 메틸기를 라디칼 브롬화하는 단계 [Sun, Yewei et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2008, 16(19), 8868-8874],
j) 각종 1차 아민 및 2차 아민으로 브롬 치환시키는 단계,
k) 에스테르, 바람직하게는 메틸산 에스테르를 비누화하는 단계.
그러나, 당업자는 4-아미노메틸-3-트리플루오로메틸-벤조산 또는 4-아미노메틸-3-플루오로-벤조산을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이며, 단계 g), 단계 h), 단계 i) 및 단계 j) 중의 몇 개 또는 모두는 바람직하게는 상기 방법에 포함된다.
3-아미노-5- 트리플루오로메틸 -벤조산
3-아미노-5-트리플루오로메틸-벤조산의 합성 방법은 하기 반응식 8 에 제시된다:
Figure pct00045
반응식 8
상기 반응식 8 에서, NR6R7 은
Figure pct00046
또는
Figure pct00047
를 나타낸다.
3-아미노-5-트리플루오로메틸-벤조산의 바람직한 합성 방법은 하기 단계의 하나 이상을 포함한다:
l) 1차 아민 및 2 차 아민으로 불소 치환시키는 단계,
m) 니트릴 작용기를 상응하는 카복실산으로 가수분해시키는 단계.
그러나, 당업자는 3-아미노-5-트리플루오로메틸-벤조산을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이며, 단계 l) 와 단계 m) 둘 다는 바람직하게는 상기 방법에 포함된다.
5-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸벤조산
본 발명에서 사용된 5-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸벤조산을 합성하기 위해 따를 수 있는 방법은 하기 반응식 9 에 제시된다:
Figure pct00048
반응식 9
상기 방법은 하기 단계의 하나 이상을 포함한다:
n) 라디칼 개시제로서의 아조비스이소부티로니트릴 (AIBN) 의 존재 하에 N-브로모석신이미드 (NBS) 에 의해 메틸기를 라디칼 브롬화하는 단계 [Sun, Yewei et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2008, 16(19), 8868-8874],
o) N-메틸피페라진으로 브롬 치환시키는 단계,
p) 니트릴 작용기를 상응하는 카복실산으로 가수분해시키는 단계.
그러나, 당업자는 5-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸벤조산을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이며, 단계 n), 단계 o) 및 단계 p) 의 몇 개 또는 모두는 바람직하게는 상기 방법에 포함된다.
3-디메틸아미노-5- 트리플루오로메틸 -벤조산
본 발명에서 사용된 3-디메틸아미노-5-메틸-벤조산을 합성하기 위해 따를 수 있는 방법은 하기 반응식 10 에 제시된다:
Figure pct00049
반응식 10
상기 방법은 하기 단계의 하나 이상을 포함한다:
q) 바람직하게는 요오드화 메틸에 의해 산 및 아민 작용기를 전부 메틸화하는 단계,
r) 생성된 에스테르를 비누화하여 상응하는 카복실산을 제공하는 단계.
그러나, 당업자는 3-디메틸아미노-5-트리플루오로메틸-벤조산을 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이며, 단계 q) 와 단계 r) 의 하나 또는 둘 다는 바람직하게는 상기 방법에 포함된다.
다른 실시형태는 하기 반응식 11 에 따라 수득된 5-{2-메틸-5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 알킬 에스테르의 합성 방법에 관한 것이다:
Figure pct00050
반응식 11
바람직하게는, 상기 방법은 적어도 하기 단계를 포함한다:
s) 5-{2-메틸-5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르를 비누화하여 이의 카복실산 유도체를 제공하는 단계,
t) 생성된 카복실산을 알킬-알코올 중의 티오닐 클로라이드 또는 황산에 의해 에스테르화하는 단계.
그러나, 당업자는 5-{2-메틸-5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 알킬 에스테르를 수득하기 위해 모든 다른 잘 공지된 합성 기술을 자연스럽게 적용할 것이며, 단계 s) 와 단계 t) 의 하나 또는 둘 다는 바람직하게는 상기 방법에 포함된다.
다른 실시형태는 하기 반응식 12 에 따라 수득된 5-(3-{[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조일아미노]-메틸}-벤조일아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르 또는 5-{3-[(3-트리플루오로메틸-티오벤조일아미노)-메틸]-벤조일아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르의 합성 방법에 관한 것이다:
Figure pct00051
반응식 12
상기 반응식 12 에서, R3 은
Figure pct00052
또는
Figure pct00053
을 나타낸다.
바람직하게는, 상기 방법은 적어도 하기 단계를 포함한다:
u) 3-아미노메틸-벤조산 메틸 에스테르 및 카복실산과 펩타이드 커플링 반응시키는 단계,
v) 주요 중간체 아미드 화합물을 로손 시약과 반응시키는 단계,
w) 생성된 에스테르를 비누화하여 상응하는 카복실산을 제공하는 단계,
x) 주요 카복실산 화합물 및 5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르와 펩타이드 커플링 반응시키는 단계.
다른 실시형태는 하기 반응식 13 에 따라 수득된 5-[3-(3-트리플루오로메틸-벤질카바모일)-벤질아미노]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르 또는 5-{3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐카바모일]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르의 합성 방법에 관한 것이다:
Figure pct00054
반응식 13
상기 반응식 13 에서, R4 는 문헌 [Weijun Shen and al. (J. Am. Chem . Soc., 2013 , 135 (5), pp 1669-1672)] 에 기재된 절차에 따라 제조된
Figure pct00055
또는
Figure pct00056
을 나타낸다.
바람직하게는, 상기 방법은 적어도 하기 단계를 포함한다:
y) 3-시아노-벤조산 및 아민 화합물과 펩타이드 커플링 반응시키는 단계,
z) 생성된 니트릴을 상응하는 알데하이드로 환원시키는 단계,
aa) 주요 알데하이드 화합물을 5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르에 의해 환원성 아미노화시키는 단계.
용도
본 발명은 또한 단백질 키나아제의 억제제로서의 본 발명에 따른 화합물의 용도에 관한 것이다. 암의 유형에 따라, 하나 또는 수개의 키나아제 단백질이 대상으로 될 것이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 BRAF 의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 EGFR (ErbB1) 의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 EGFR (ErbB1) T790M L858R의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FGFR2의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 KDR (VEGFR2)의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 PDGFRA (PDGFR alpha)의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 SRC의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ABL의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ABL T315I의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FGFR1의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 VEGFR1의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 PDGFRB (PDGFR beta)의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ABL E255K의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ABL G250E의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ABL Y253F의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ABL2의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 BLK의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 BMX의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 BRAF V600E의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 BTK의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 CSK의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 EPHA1의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 EPHA2의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 EPHA4의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 EPHB2의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 EPHB4의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 HER2의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ERBB4의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FES의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FGR의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FLT3의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FMS의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FRK의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 FYN의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 HCK의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 LCK의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 LYN의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 MAPK14의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 ERK2의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 PKC 쎄타(theta)의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 RET의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 VEGFR3의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 단백질 키나아제 YES의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 A549 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HepG2 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HuCCT1 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HuH6 Clone 5 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HuH7 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 PC-3 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 Caki-2 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 MDA-MB-231 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HT29 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 BxPC-3 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 H1975 암 세포주의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 BaF3 WT의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 BaF3 T315I의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 BaF3 G250A의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 BaF3 G250E의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 BaF3 G250A+E279N의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 BaF3 E255K+M351T의 증식 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HUVEC 1차 세포들의 증식 및 이동의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HRMEC 1차 세포들의 증식 및 이동의 억제제로서 사용된다.
다른 실시형태에서, 본 발명에 따른 화합물은 HeLa 암 세포주의 증식 및 이동의 억제제로서 사용된다.
본 발명의 화합물, 및 물론 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 하기의 경우에서 단백질 키나아제의 조절상실과 관련된 병리학의 치료에서 사용될 수 있다:
- 면역 장애, 염증성 질환, 혈전성 질환, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 황반 변성, 섬유증, 낭종생성, 과증식성 질환의 경우,
- 모든 암, 보다 특히 액체 종양, 예를 들면, 혈액암, 예를 들면, 백혈병, 만성 또는 급성 골수증식성 장애, 또는 고형 종양, 예를 들면, 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 글리알 세포 종양, 예를 들면, 교모세포종 및 신경섬유종증, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 흑색종, 대장암, 자궁내막암, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 육종 및/또는 성상세포종의 경우,
- 만성 또는 급성 골수증식성 장애, 예를 들면, 특정 백혈병의 경우,
- 간암, 폐암, 전립선암, 신장암, 유방암, 췌장암 및 대장 위장암의 경우.
유리하게는, 본 발명의 화합물, 및 물론 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 질환의 경우에서 단백질 키나아제의 조절상실과 관련된 병리학의 치료에서 사용될 수 있고, 여기서, 상기 질환은 간암, 췌장암, 폐암, 유방암, 전립선암, 백혈병, 신장암, 자궁내막암, 대장암, 화학내성 암 및 황반 변성으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에 따르면, 본 발명은 유효 성분으로서 본 발명에 따른 화합물을 포함하는 약물에 관한 것이다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 하기의 경우에서 단백질 키나아제의 조절상실과 관련된 병리학의 치료에서 약물으로서 사용될 수 있다:
- 면역 장애, 염증성 질환, 혈전성 질환, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 황반 변성, 섬유증, 낭종생성, 과증식성 질환의 경우,
- 모든 암, 보다 특히 액체 종양, 예를 들면, 혈액암, 예를 들면, 백혈병, 만성 또는 급성 골수증식성 장애 또는 고형 종양, 예를 들면, 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 글리알 세포 종양, 예를 들면, 교모세포종 및 신경섬유종증, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 흑색종, 대장암, 자궁내막암, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 육종 및/또는 성상세포종의 경우,
- 만성 또는 급성 골수증식성 장애, 예를 들면, 특정 백혈병의 경우,
- 간암, 폐암, 전립선암, 신장암, 유방암, 췌장암 및 대장 위장암의 경우.
본 발명에 따른 조성물은 하기의 경우에서 단백질 키나아제의 조절상실과 관련된 병리학의 치료에서 사용될 수 있다:
- 면역 장애, 염증성 질환, 혈전성 질환, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 황반 변성, 섬유증, 낭종생성, 과증식성 질환의 경우,
- 모든 암, 보다 특히 액체 종양, 예를 들면, 혈액암, 예를 들면, 백혈병, 만성 또는 급성 골수증식성 장애 또는 고형 종양, 예를 들면, 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 글리알 세포 종양, 예를 들면, 교모세포종 및 신경섬유종증, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 흑색종, 대장암, 자궁내막암, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 육종 및/또는 성상세포종의 경우.
- 만성 또는 급성 골수증식성 장애, 예를 들면, 특정 백혈병의 경우,
- 간암, 폐암, 전립선암, 신장암, 유방암, 췌장암 및 대장 위장암의 경우.
더욱이, 유리한 방식으로, 본 발명에 따른 화합물은 인간 질환 또는 동물 질환에 관련된 세포 증식 및/또는 혈관신생을 억제하기 위해 사용될 수 있다.
동일한 방식으로, 본 발명에 따른 조성물은 인간 질환 또는 동물 질환에 관련된 세포 증식 및/또는 혈관신생을 억제하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 본 발명에 따른 화합물의 안전하고 효과적인 사용에 필수적인 정보를 제공하기 위한 생체 외 방법 (시험관내 진단 장치 또는 영상화 도구) 에 관한 것이다. 한 예로서, 상기 방법은 예측을 필요로 하는 환자, 예를 들면, 암을 나타내는 환자가, 본 발명에 따른 화합물의 하나 이상에 반응할 것 같은지를 예측하는 것을 가능하게 할 것이며, 상기 방법은 상기 환자의 샘플에서 하나 이상이 단백질 키나아제의 단백질의 발현 수준, 유전자 변형 (증폭, 돌연변이), 활성화 상태 또는 돌연변이 형태의 모양을 측정하는 단계를 포함하고, 상기 단백질 키나아제는 키나아제 BRAF, EGFR, FGFR2, KDR, PDGFRA, SRC, ABL, FGFR1, VEGFR1, PDGFRB (PDGFR 베타), ABL2, BLK, BMX, BTK, CSK, EPHA1, EPHA2, EPHA4, EPHB2, EPHB4, HER2, ERBB4, FES, FGR, FLT3, FMS, FRK, FYN, HCK, LCK, LYN, MAPK14, ERK2, PKC 쎄타, RET, VEGFR3 및 YES 의 목록으로부터 선택된다.
단백질 키나아제의 발현 수준, 유전자 변형 (증폭, 돌연변이), 활성화 상태 또는 돌연변이 형태의 모양은 실시간 PCR, 면역조직화학, ELISA, 형광 동소 보합법 (fluorescence in situ hybridization: FISH), 발색성 동소 보합법 (chromogenic in situ hybridization: CISH) 과 같은 통상적으로 공지된 방법 (예를 들면, FDA 에 의해 승인된 의료 장치의 시험관내 및 영상화 도구 참조: http://www.fda.gov/MedicalDevices/ProductsandMedicalProcedures/InVitroDiagnostics/ucm301431.htm) 에 의해 고전적으로 측정된다.
본 발명의 다른 측면은 본 발명에 따른 화합물의 하나 이상을 필요로 하는 환자, 예를 들면, 암을 나타내는 환자에게 투여될 상기 화합물의 하나 이상을 예측하기 위한 생체 외 방법으로서, 상기 생체 외 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다:
a) 상기 화합물(들)을 인간 조직 또는 세포의 샘플과 접촉시키는 단계,
b) 예를 들면, 키나아제 BRAF, EGFR, EGFR T790M L858R, FGFR2, KDR, PDGFRA, SRC, ABL, ABL T315I, FGFR1, VEGFR1, PDGFRB, ABL E255K, ABL G250E, ABL Y253F, ABL2, BLK, BMX, BRAF V600E, BTK, CSK, EPHA1, EPHA2, EPHA4, EPHB2, EPHB4, HER2, ERBB4, FES, FGR, FLT3, FMS, FRK, FYN, HCK, LCK, LYN, MAPK14, ERK2, PKC 쎄타, RET, VEGFR3 및 YES 의 목록으로부터 선택될 수 있는, 예를 들면, 존재하는 단백질 키나아제의 비교 활성을 통해 및/또는 IC50 을 통해 상기 샘플에 대한 상기 화합물(들)의 활성을 측정하는 단계;
c) 임의로, 단계 a) 와 동일한 테스트를 상기 환자의 혈액 세포 또는 줄기 세포 또는 간 세포와 같은 건강한 세포 (즉, 어떠한 병리학적 양상/특성도 나타내지 않는 세포) 에 대해 수행하여 건강한 세포에 대한 본 발명에 따른 화합물의 독성을 측정하는 단계;
d) 가장 양호한 활성 및/또는 결국 가장 낮은 독성을 나타내는 본 발명에 따른 화합물을 필요로 하는 환자에게 투여될 상기 화합물을 선택하는 단계.
단백질 키나아제의 활성 측정 방법은 고전적으로 알려져 있다 (문헌 [Rosen et al., J Biol Chem., 15;261(29), 13754-9. 1986; Ma et al., Expert Opin Drug Discov., 3(6), 607-621, 2008] 에서 보고된 바와 같음).
실시예
본 발명은 하기 실시예를 정독하면 보다 잘 이해될 것이다.
본 발명의 화합물은 5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르 (OriBase Pharma 사에서 시판됨) 로부터 다단계 합성으로 수득하였으며, 필요에 따라, 병렬 합성 장치 ("합성 1", Heidolph) 를 이용하였다. 여러 합성 프로토콜은 수득된 7-아자인돌 유형의 화합물의 물리화학 특성과 함께 하기에 상세하게 설명한다.
합성 및 분석은 하기 조건으로 수행하였다:
- 1H 및 13C 핵 자기 공명:
장비 : Bruker Avance 400 (400 MHz); Bruker Avance 300 (300 MHz); Bruker DPX 200 (200MHz)
사용 조건 : 실온 (Room temperature: RT), 백만분율 (ppm) 로 표현된 화학적 이동, Hertz 로 표현된 결합 상수 (J), 내부 기준 트리메틸실란 (TMS), 소문자로 표시되는 신호의 다중도 (단일선 s, 넓은 단일선 bs, 이중선 d, 삼중선 t, 사중선 q, 다중선 m), 중수소화 용매로서의 디메틸설폭사이드 d6, 메탄올 d4, 클로로포름 d1.
- 고성능 액체 크로마토그래피 (High-performance liquid chromatography: HPLC)
장비 : Agilent Technology 1260 Infinity
사용 조건 : Zorbax SB-C18, 2.1 x 50 mm, 1.8 μm; 온도: 30℃, 물/아세토니트릴/포름산 용리 구배 (90%/10%/0.1% 내지 0%/100%/0.1%)
- 질량 분광법 (Mass spectrometry: MS)
장비 : Quadripole Agilent Technologies 6120
사용 조건 : 양성 및/또는 음성 모드의 ElectroSpray (ESI)
- 칭량:
장비 : Denver Instrument TP214 (정밀도 0.1　mg)
사용 조건 : 가장 가까운 밀리그램으로 칭량 실시
- 병렬 합성:
장비 : Heidolph Synthesis 1 (16개의 반응기)
사용 조건 : 16개의 병렬 반응, 실온, 다중 증발
- 압력 하의 반응
장비 : Parr 300　mL 오토클레이브
사용 조건 : 20 bar 또는 30 bar 의 수소 하에서의 수소화
합성
실시예 A: OriBase Pharma 사로부터의 시판 시약을 출발 물질로 사용하여 3개의 단계에서의 5-{2- 메틸 -5-[3- 우레이도 ]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카복실산 메 틸 에스테르의 합성
하기 반응식 14 는 5-{2-메틸-5-[3-우레이도]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르의 일반적 합성 방법을 나타낸다.
Figure pct00057
반응식 14 - 실시예 A 의 일반적 합성 반응식
단계 1: 5-(2- 메틸 -5-니트로- 벤질아미노 )-1 H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카복실산 메틸 에스테르의 제조에 대한 일반적 프로토콜
5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르 (12.16 g, 63.7 mol) 및 2-메틸-5-니트로벤즈알데하이드 (10.5 g, 63.7 mol) 를 MeOH 중의 10% AcOH 에서 2 시간 동안 교반한다. 이어서, NaBH3CN (7.9 g, 127.3 mol) 을 서서히 첨가하고, 혼합물을 아르곤 하에서 48 시간 동안 교반한다. 용매를 증발시키고, 중성이 될 때까지 NaHCO3 포화 용액을 첨가한다. 형성된 고체를 여과하고, 석유 에테르/EtOAc 5/5 로 세척한다. 갈색을 띤 고체인 메틸 5-(5-아미노-2-메틸벤질니트로)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실레이트를 수득한다 (17.9 g, 53.9 mmol). 수율 = 82%. ESI-MS: m/z 341 ([M+H]+). HPLC 순도: 80%
단계 2: 5-(5-아미노-2- 메틸 - 벤질아미노 )-1 H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카복실산 메틸 에스테르의 제조에 대한 일반적 프로토콜
5-(2-메틸-5-니트로-벤질아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산 메틸 에스테르 (17.8 g, 53.9 mmol), 메탄올 (300 mL), 12N HCl 7.2 mL 및 목탄 상 10% 팔라듐 (1.7 g, 10% w/w) 을 30 bar 의 이수소 (dihydrogen) 로 충전된 오토클레이브에 넣고, 48 시간 동안 교반한다. 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 메탄올로 세척한다. 용매를 증발시키고, 이어서 NaHCO3 (aq) 를 첨가한다. 수득된 고체를 여과하고, 물로 세척하여, 갈색을 띤 고체를 수득한다 (14.4 g, 46.4 mmol). 수율 = 96%. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ12.03 (s, 1H), 8.08 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.36 (dd, J = 2.3 Hz, 1H), 5.94 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 4.07 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.83 (s, 4H). ESI-MS: m/z 311 ([M+H]+). HPLC 순도: 95%.
단계 3: 5-{2- 메틸 -5-[3- 우레이도 ]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2-카르복실산 메틸 에스테르의 제조에 대한 일반적 프로토콜
5-(5-아미노-2-메틸-벤질아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르의 용액에 이소시아네이트 또는 이소티오시아네이트 유도체 (1 당량)를 첨가하였다. 상기 화합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하도록 하였다. 용매는 제거되었고 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
표 1은 상기 반응식 14에서 기재된 합성에 따라 합성된 다양한 화합물을 나타내었다.
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
표 1 - 실시예 A에 의해 얻어진 화합물
실시예 B: 1단계에서 5-[2- 메틸 -5-( 술포닐아미노 )- 벤질아미노 ]- 1H - 피롤 로[ 2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르의 합성
반응식 15에서는 실시예 A에서 이미 개시된 아미노 유도체를 출발 물질로 사용하여 5-[2-메틸-5-(술포닐아미노)-벤질아미노]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르의 합성의 일반적 방법을 나타내었다.
Figure pct00061
반응식 15 - 실시예 B의 일반적 합성 반응식
단계 1: 5-[2- 메틸 -5-( 술포닐아미노 )- 벤질아미노 ]- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2-카 르복실 산 메틸 에스테르의 합성
20 μL의 트리메틸아민 (1.1 당량)을 2 mL 의 무수 DMF 중의 5-(5-아미노-2-메틸-벤질아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (40 mg, 0.13 mmol)의 냉각 용액에 첨가하였다. 그 후 2 mL 의 무수 DMF 중의 술포닐 클로라이드 유도체 (1.2 당량)의 냉각 용액을 적가하였다. 그 반응 혼합물을 0℃에서 30분 및 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. DMF를 증발시켰고 그 후 포화된 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 얻어진 고체를 여과하였고, 물로 세척하고 황색 고체를 얻었다.
표 2는 상기 반응식 15에서 기재된 합성에 따라 합성된 화합물을 나타내었다.
Figure pct00062
표 2 - 실시예 B에 의해 얻어진 화합물
실시예 C: 1단계에서 5-{2- 메틸 -5-[3-아미도]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실 메틸 에스테르의 합성
반응식 16은 1 단계에서 5-{2-메틸-5-[3-아미도]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실 메틸 에스테르의 합성의 일반적 방법을 나타내었다. 이 단계는 5-(5-아미노-2-메틸-벤질아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르가 아실 클로라이드 또는 카르복실산 중 어느 하나와 반응하는 것으로 이루어졌다.
Figure pct00063
반응식 16 -실시예 C의 일반적 합성 반응식
옵션 1: 아실 클로라이드의 반응에 의한 5-{2- 메틸 -5-[3-아미도]- 벤질아미 노}- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실 메틸 에스테르의 합성
55 μL의 트리메틸아민 (3 당량) 및 1.5 당량의 아실 클로라이드를 무수 DMF 중의 5-(5-아미노-2-메틸-벤질아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (40 mg, 0.13 mmol)용액에 첨가하였다. 그 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. DMF를 증발시키고; 그 고체를 에틸 아세테이트로 제거하였다. 유기층을 포화된 NaHCO3 용액으로 세척하였고, Na2SO4로 건조하였고 감압 하에 증발시켜 황색 고체를 얻었다.
표 3은 옵션 1로 상기 반응식 16에서 기재된 합성에 따라 합성된 화합물을 나타내었다. (즉, 아실 클로라이드의 반응).
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
표 3 - 아실 클로라이드로 실시예 C에 의해 얻어진 화합물
옵션 2: 카르복실산의 반응에 의한 5-{2- 메틸 -5-[3-아미도]- 벤질아미노 }- 1H -피롤로[ 2,3-b]피리딘 -2- 카르복실 메틸 에스테르의 합성
이 합성과 관련된 모든 카르복실산은 상업적으로 입수 가능하지 않다. 첫번째로 이 필요한 카르복실산의 합성을 개시하였다:
4-아미노메틸-3-치환된-벤조산의 합성
반응식 17은 4-아미노메틸-3-치환된-벤조산을 합성하기 위한 일반적 방법을 나타내었다.
Figure pct00067
반응식 17
에스테르화의 일반적 절차:
메탄올(50 mL) 중의 4-메틸-3-치환된 벤조산 (24 mmol)을 H2SO4 (0.260 mL, 4.8 mmol)와 함께 교반 및 가열하여 하룻밤 동안 환류시켰다. 메탄올을 증발시켰고 생성물은 EtOAc과 함께 pH = 7에서 추출하였다.
4- 메틸 -3- 트리플루오로메틸 -벤조산 메틸 에스테르.
수율 = 95%. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.25 (s, 1H), 8.04 (dd, J = 1.2, 8.0, 1H), 7.33 (d, J = 8.0, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.51 (d, J = 1.5, 3H).
4- 메틸 -3- 플루오로 -벤조산 메틸 에스테르.
수율 = 83% (4.0 g), HPLC: 98%, ESI-MS: [M+H]+= 169 Da.
브롬화의 일반적 절차:
CCl4 (40 mL)중의 4-메틸-3-치환된 벤조산 메틸 에스테르 (18.3 mmol)를 NBS (3.9 g, 22 mmol)와 함께 그리고 벤조일퍼옥시드를 25% 의 물 (0.55 g, 1.7 mmole)과 함께 교반 및 가열하여 6시간 동안 환류시켰다. 용매를 증발시켰고 K2CO3의 수용액을 첨가하였고 생성물을 EtOAc로 추출하여 옅은 황색 고체를 얻었다.
4-( 브로모메틸 )-3-( 트리플루오로메틸 ) 벤조산 메틸 에스테르
수율 = 140% (조).
4-( 브로모메틸 )-3- 플루오로 벤조산 메틸 에스테르
수율 = 정량(quant) (5.9g), ESI-MS: [M+H]+= 247 Da.
브로모메틸의 친핵성 치환에 대한 일반적 절차:
아세토니트릴 (5 mL) 중의 4-(브로모메틸)-3-치환된 벤조산 메틸 에스테르 (200 mg)를 K2CO3 (1.5 당량) 및 아민 유도체 (1.05 당량)와 함께 아르곤 하에서 교반 및 가열하여 하룻밤동안 환류시켰다. 아세토니트릴을 증발시켰고, 물(30 mL) 을 첨가하였고 생성물을 AcOEt 로 추출하였다. 유기층을 물로 세척하였고 건조하고 여과 및 농축하였다. 추가의 정제는 실리카 겔 크로마토그래피로 수행되었고 원하는 생성물을 얻었다.
4-(4- 메틸피페라진 -1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 -벤조산 메틸 에스테르:
수율 = 54% (1.75 g). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.28 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.1, 1H), 7.91 (d, J = 8.1, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.70 (s, 2H), 2.53 (s, 8H), 2.32 (s, 3H). ESI-MS: [M+H]+= 317 Da.
3- 플루오로 -4-(4- 메틸피페라진 -1- 일메틸 )-벤조산 메틸 에스테르:
수율 = 49% (1.48 g). HPLC: 88%, ESI-MS: [M+H]+= 267 Da.
4-(4- 메톡시카보닐 -2- 트리플루오로메틸 -벤질)-피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르
수율: 56% (1.89 g). HPLC: 97 %. ESI-MS: [M+H]+= 403 Da.
4-모르폴린-4- 일메틸 -3- 트리플루오로메틸 -벤조산 메틸 에스테르
수율: 23% (343 mg). HPLC: 95 %. ESI-MS: [M+H]+= 305 Da.
4-(4-히드록시-피페리딘-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 -벤조산 메틸 에스테 르
수율: 39% (84 mg).ESI-MS: [M+H]+= 318.1 Da.
4-{[2-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 에틸아미노 ]- 메틸 }-3- 트리플루오로메틸 -벤조산 메틸 에스테르
수율: 20% (50 mg). ESI-MS: [M+H]+= 360.1 Da.
4-(4- 메틸 - 이미다졸 -1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 -벤조산 메틸 에스테르
수율: 44 % (90 mg). HPLC: 87 % ESI-MS: [M+H]+= 299 Da.
4-(3-디메틸아미노- 피롤리딘 -1- 일메틸 )-3- 플루오로 -벤조산 메틸 에스테르
수율: 60% (2 g). HPLC: 85% ESI-MS: [M+H]+= 281 Da.
비누화에 대한 일반적 절차:
에스테르 유도체를 THF (0.8 mol/L)중에 용해시키고 LiOH (3 당량) 수용액을 첨가하였다. 혼합물을 4시간동안 환류시키도록 가열하였다. THF를 증발시켰고 불순물을 EtOAc로 pH = 12에서 추출하였다. 수용성 층을 NaCl(s)로 포화시키고, HCl 6 N으로 pH = 3까지 산성화시켰다. 생성물은 부탄-1-올로 추출하였다. 부탄-1-올을 증발시키고 얻어진 고체를 EtOAc로 염 및 불순물을 제거하기 위해 세척하였다. 백색 고체를 얻었다.
4-(4-메틸피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조산:
수율 = 100% (1.21 g). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.44 (m, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.18 (m, 1H), 7.93 (m, 1H), 3.79 (s, 2H), 2.75 (s, 3H). ESI-MS: [M+H]+= 303 Da.
3- 플루오로 -4-(4- 메틸피페라진 -1- 일메틸 )-벤조산:
수율 = 65% (0.91 g). HPLC: > 99%, ESI-MS: [M+H]+= 253 Da.
4-(4- 카르복시 -2- 트리플루오로메틸 -벤질)-피페라진-1- 카르복실산
수율: 57% (265 mg). HPLC: 97 % ESI-MS: [M+H]+= 389 Da.
4-모르폴린-4- 일메틸 -3- 트리플루오로메틸 -벤조산
수율: 35% (114 mg). ESI-MS: [M+H]+= 290 Da.
4-(4-히드록시-피페리딘-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 -벤조산
수율: 94 % (128 mg). ESI-MS: [M+H]+= 304.1 Da.
4-{[2-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 에틸아미노 ]- 메틸 }-3- 트리플루오로메틸 - 벤조 산
수율: 95 % (176 mg). ESI-MS: [M+H]+= 346.1 Da.
4-(4- 메틸 - 이미다졸 -1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 -벤조산
수율: 99 % (224 mg). ESI-MS: [M+H]+= 285 Da.
4-(3-디메틸아미노- 피롤리딘 -1- 일메틸 )-3- 플루오로 -벤조산
수율: 36 % (687 mg). ESI-MS: [M+H]+= 267 Da.
3- 아미노메틸 -5- 트리플루오로메틸 -벤조산의 합성
반응식 18은 [3-아미노]-5-트리플루오로메틸-벤조산의 합성을 위한 일반적 방법을 나타낸다.
Figure pct00068
반응식 18
친핵성 치환의 일반적 절차:
3-플루오로-5-트리플루오로메틸-벤조니트릴(1 당량) 용액 및 DMA 중의 상응하는 아민 (3당량)을 145℃ 에서 3시간 동안 교반하였다. NaCl(aq) 를 첨가하였다. 생성물을 에틸 아세테이트로 제거하였다. 유기 층을 물로 2회 세척하였고 Na2SO4로 건조하고 감압하에 증발시켜 황색 고체를 얻었다.
3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)-5- 트리플루오로메틸 - 벤조니트릴
수율: 정량. HPLC: 94% ESI-MS: [M+H]+= 270 Da.
3-( 1H - 피라졸 -3- 일아미노 )-5- 트리플루오로메틸 - 벤조니트릴
수율: 83%. HPLC: 92% ESI-MS: [M+H]+= 253 Da.
니트릴의 가수분해를 위한 일반적 절차:
디옥산 (0,13M) 중의 니트릴 유도체 용액에 H2O중의 NaOH (10 당량, 1g/L)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 동안 환류하여 가열하였다. 디옥산을 증발시킨 후, 수용성 층을 AcOEt으로 세척하였고, 그 후 HCl 2N로 산성화하였고 AcOEt로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조하였고 여과하여 농축시켰다.
3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)-5- 트리플루오로메틸 -벤조산
수율: 60%. HPLC: 100%. ESI-MS: [M+H]+= 289 Da.
3-( 1H - 피라졸 -3- 일아미노 )-5- 트리플루오로메틸 -벤조산
황색 고체. 수율: 76% (85 mg). HPLC: 100%. ESI-MS: [M+H]+= 272 Da.
3-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-5- 트리플루오로메틸 -벤조산의 합성
반응식 19는 3-메틸-5-트리플루오로메틸-벤조니트릴을 출발물질로 사용하여 3단계의 3-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-벤조산을 합성하기 위한 일반적 방법을 나타낸다.
Figure pct00069
반응식 19
3- 브로모메틸 -5- 트리플루오로메틸 - 벤조니트릴
MeCN (0,42mol/L, 1 당량)중의 3-메틸-5-트리플루오로메틸-벤조니트릴을 AIBN (0,017당량)와 함께 85℃에서 아르곤 하에서 교반 및 가열하였다. 6회, 매 15분, 0,25 당량의 NBS 및 0,005당량의 AIBN를 첨가하였다(각각의 첨가는 50℃에서 수행되었고 그 후 혼합물은 85℃에서 다시 가열됨). 첨가 후에, 그 혼합물을 교반하였고 85℃에서 2시간동안 유지하였다. MeCN을 감압하에 증발시켰고 그 고체를 Et2O으로 세척하였고 브로마이드 유도체를 여과하였다. Et2O을 감압 하에 증발시켰고 분홍색 고체를 얻었다. 조 생성물(crude)은 바로 다음 단계에서 사용되었다.
수율: 확인되지 않음. HPLC 순도: 확인되지 않음. ESI-MS: [M+H]+= 264 Da.
3-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-5- 트리플루오로메틸 - 벤조니트릴
MeCN (0,17mol/L, 1 당량) 중의 3-브로모메틸-5-트리플루오로메틸-벤조니트릴에 K2CO3 (2,5당량) 및 메틸피페라진(1,5당량)을 함께 교반하였고, 아르곤 하의 환류에서 하룻밤동안 가열하였다. 물을 첨가하였다. 생성물을 에틸 아세테이트로 제거하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조하였고 감압하에 증발시켰다. 조 생성물은 바로 다음 단계에서 사용되었다. 조 수율: 21%.
3-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-5- 트리플루오로메틸 -벤조산
디옥산 (0,13M)중의 3-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-5-트리플루오로메틸-벤조니트릴용액에 H2O중의 NaOH (10당량, 1g/L)를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤동안 환류에서 가열하였다. 디옥산을 감압하에서 증발시켰고 H2O중의 침전물을 여과하였고 물로 세척하였다. 여과물을 회수하였고 물을 제거하여 흰색 고체를 얻었다. 그것을 MeOH로 세척하였고 여과물을 회수하였고, 감압하에서 농축시켰다. 조 생성물은 40g의 실리카겔 상에서 1% 의 NEt3에서의 CH2Cl2 내지 1% 의 NEt3에서의 MeOH로 정제되었다. 회수된 분획을 감압 하에서 농축시켰고 얻어진 고체를 석유에테르 / AcOEt (1/1)의 혼합물로 세척하였다. 수율: 83%. HPLC 순도: 100%. ESI-MS: [M+H]+= 303 Da.
3-디메틸아미노-5- 트리플루오로메틸 -벤조산의 합성
3-디메틸아미노-5-메틸-벤조산을 합성하기 위한 일반적 방법은 반응식 20에 의한 2단계에서 나타내었다:
Figure pct00070
반응식 20
3-디메틸아미노-5- 트리플루오로메틸 -벤조산 메틸 에스테르
K2CO3 (400 mg, 3 당량) 및 요오드화메틸(0.6 mL, 7 당량)을 아세토니트릴 (8 mL) 중의 3-아미노-5-트리플루오로메틸-벤조산 (200 mg, 0.96 mmol) 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2일 동안 환류에서 가열하였다. 용매의 증발로 추가의 정제 없이 사용되는 230 mg 의 조 3-디메틸아미노-5-트리플루오로메틸-벤조산 메틸 에스테르를 얻었다.
LC/MS: 97%, [M+H]+= 248.1 Da.
3-디메틸아미노-5- 트리플루오로메틸 -벤조산
THF (2 mL) 중의 3-디메틸아미노-5-트리플루오로메틸-벤조산 메틸 에스테르 (240 mg)용액에 물(2 mL) 중의 LiOH (3 당량) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 환류에서 교반하였다. THF를 그 후 증발하였다; 물을 더 첨가하였고 HCl 2N로 산성화하였다. 생성물을 AcOEt로 추출하였고 Na2SO4로 건조하였고, 농축하여 백색 고체를 얻었다.
수율: 82% (183 mg), LC/MS: 90%, [M+H]+= 234 Da.
5-{2- 메틸 -5-[3-아미도]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실 메 틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
산성 유도체를 무수 DMF (0.06 mol/L)에 DIEA (5 당량) 및 HATU (2 당량)와 함께 용해시켰다. 15분 후에 5-{2-메틸-5-[3-아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실 메틸 에스테르를 천천히 첨가하였고 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. DMF를 증발시켰고 포화된 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 생성물은 EtOAc로 추출하였고, 건조하였고, 여과 및 증발하여 짙은 혼합물을 얻었다. MeOH 또는 EtOAc으로의 세척에 의한 또는 실리카 컬럼에 의한 정제 후에, 원하는 생성물을 약간 황색 또는 오렌지색 분말로 얻었다.
표 4는 옵션 2로 상기 반응식 16에서 기재된 합성에 따라 합성된 화합물을 나타내었다. (즉, 카르복실산의 반응)
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
Figure pct00085
표 4 - 카르복실산을 갖는 실시예 C에 의해 얻어진 화합물
실시예 D: OriBase Pharma 사의 시판 시약을 출발물질로 사용하여 3 단계의 5-{5-[4-(4-메틸-피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 벤조일아미노 ]- 벤질아미노 }- 1H -피 롤로 [2,3-b] 피리딘 -2- 카르복 실산 메틸 에스테르의 합성
반응식 21은 5-{5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 의 3 단계 합성의 일반적 방법을 나타낸다.
Figure pct00086
반응식 21 - 실시예 D 의 일반적 합성 반응식
단계 1: 5-(3-니트로- 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메 틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (100 mg) 및 니트로벤즈알데하이드 유도체 (1 당량)를 MeOH 및 AcOH (10%)의 혼합물에서 2시간동안 교반하였다. 그 후 NaBH3CN (2당량)를 천천히 첨가하였고 그 혼합물을 아르곤 하의 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰고 NaHCO3 의 포화 용액을 중성이 될 때 까지 첨가하였다 수용성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시켰고 여과하고 농축하여 원하는 생성물을 얻었다.
5-(2- 클로로 -5-니트로- 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메 틸 에스테르
황색 분말. 수율: 85% (158 mg). HPLC: 80%. MS: 361 (M+1).
5-(2- 플루오로 -5-니트로- 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르
황색 고체. 수율: 74% (800 mg). HPLC: >99%. MS: 345 (M+1).
5-(3-니트로-4- 메틸 - 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르
황색 고체. 수율: 86% (152 mg). HPLC: 85%. MS: 341 (M+1).
5-(3-니트로- 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테 르
갈색 분말. 수율: 87% (443 mg). HPLC: 94%. MS: 327 (M+1).
단계 2: 5-(3-아미노- 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메 틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
5-(니트로-벤질아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 유도체 (200 mg), 메탄올 (150 mL) 및 목탄 (10% w/w) 상의 팔라듐 10%를 30 바의 이수소로 채운 오토클레이브에 넣고 48시간동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하였고 메탄올로 세척하였다. 용매를 증발시켜 원하는 생성물을 얻었다.
5-(5-아미노-3- 클로로 - 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메 틸 에스테르
황색 분말. 수율: 99% (183 mg). HPLC: 77%. MS: 331 (M+1).
5-(5-아미노-3- 플루오로 - 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르
갈색 분말. 수율: 43% (311 mg). HPLC: 93%. MS: 315 (M+1).
5-(3-아미노-4- 메틸 - 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르
황색 분말. 수율: 90% (240 mg). HPLC: 85%. MS: 311 (M+1).
5-(3-아미노- 벤질아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테 르
황백색 분말. 수율: 87% (351 mg). HPLC: 99%. MS: 297 (M+1).
단계 3: 5-{5-[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 벤조일아미노 ]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르 제조를 위한 일반적 프로토콜
4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조산을 무수 DMF (0.06 mol/L)에 DIEA (5 당량) 및 HATU (2 당량)와 함께 용해시켰다. 15분 후에 아민 유도체를 천천히 첨가하였고 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. DMF를 증발시켰고, NaHCO3 (aq)를 첨가하였다. 생성물을 EtOAc로 추출하였고, 건조하고 여과 및 증발하여 짙은 혼합물을 얻었다. MeOH 또는 EtOAc으로의 세척에 의한 또는 실리카 컬럼에 의한 정제 후에, 원하는 생성물을 약간 황색 또는 오렌지색 분말로 얻었다.
표 5는 상기 반응식 21에서 기재된 합성에 따라 합성된 화합물을 나타내었다.
Figure pct00087
Figure pct00088
표 5 - 실시예 D에 의해 얻어진 화합물
실시예 E: OriBase Pharma 사의 시판 시약을 출발물질로 사용하여 3 단계의 5-{2-메틸-5-[3-아미도]- 벤조일아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실 메틸 에스테르의 합성
반응식 22는 5-{2-메틸-5-[3-아미도]-벤조일아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실 메틸 에스테르의 합성의 일반적 방법을 나타내었다.
Figure pct00089
반응식 22 - 실시예 E 의 일반적 합성 반응식
단계 1: 5-(2- 메틸 -5-니트로- 벤조일아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르 복실산 메틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (5.74 g, 30 mmol), 2-메틸-5-니트로벤질산 (5.44 g, 30 mmol), HATU (11.42 g, 30 mmol), DIEA (26 mL, 150 mmol)을 무수 DMF (300 mL)중에 용해시켰고 실온에서 48시간 교반하였다. DMF를 증발시켰고 NaHCO3(aq)를 첨가하였고, 침전물이 발생하였고 여과하여 물 및 석유에테르/Et2O로 세척하였다. 원하는 생성물을 얻었다. (9.94 g, 28 mmol). 수율 = 93%. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.53 (s, 2H), 8.37 (d, J = 2.5, 1H), 8.26 (dd, J = 2.5, 8.4, 1H), 7.63 (d, J = 8.5, 1H), 7.16 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.17 (s, 1H), 2.54 (s, 3H). ESI-MS: m/z 355 ([M+H]+). HPLC 순도: 95%.
단계 2: 5-(5-아미노-2- 메틸 - 벤조일아미노 )- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르 복실산 메틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
5-(2-메틸-5-니트로-벤질아미노)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (9.8 g, 27.7 mmol), 메탄올 (300 mL) 및 목탄 (0.95 g, 10% w/w) 상의 팔라듐 10% 를 30바의 이수소로 채운 오토클레이브에 넣고 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하였고 메탄올로 세척하였다. 용매를 증발시켜 원하는 갈색 고체를 얻었다(7.35 g, 22.7 mmoles). 수율 = 81%. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.29 (s, 1H), 8.55 (s, 2H), 7.15 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.2, 1H), 6.71 (d, J = 2.3, 1H), 6.60 (m, 1H), 5.08 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 2.21 (s, 3H). ESI-MS: m/z 325 ([M+H]+). HPLC 순도: 95%.
단계 3: 5-{2-메틸-5-[3-아미도]-벤조일아미노}- 1H -피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실 메틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
산성 유도체를 무수 DMF (0.06 mol/L)에 DIEA (5 당량) 및 HATU (2 당량)와 함께 용해시켰다. 15분 후에 5-{2-메틸-5-[3-아미노]-벤조일아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실 메틸 에스테르를 천천히 첨가하였고 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. DMF를 증발시켰고 NaHCO3(aq)를 첨가하였다. 생성물은 EtOAc로 추출하였고, 건조하였고, 여과 및 증발하여 짙은 혼합물을 얻었다. MeOH 또는 EtOAc으로의 세척에 의한 또는 실리카 컬럼에 의한 정제 후에, 원하는 생성물을 약간 황색 또는 오렌지색 분말로 얻었다.
표 6은 상기 반응식 20에서 기재된 합성에 따라 합성된 화합물을 나타내었다.
Figure pct00090
표 6 - 실시예 E에 의해 얻어진 화합물
실시예 F: 5-{2- 메틸 -5-[5- 티오벤조일아미노 ]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b] 피리딘-2- 카르복실산 메틸 에스테르의 합성
5-{2-메틸-5-[5-티오벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르를 합성하기 위한 일반적 방법은 반응식 23에 나타내었다.
Figure pct00091
반응식 23 - 실시예 F의 일반적 합성 반응식
아미드 유도체를 출발물질로 사용하는 티오아미드의 합성을 위한 일반적 절차:
5 mL 의 클로로벤젠 중의 5-{2-메틸-5-[5-벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (100 mg) 및 로손 시약(반응식 23에서 "LR") (1.8 당량) 현탁액을 130℃에서 2 시간동안 가열하였다. 용매를 증발하였고 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (물+1%TFA / 아세토니트릴+1% TFA)로 정제하였다. 용매의 증발 이후, 잔류물을 물로 용해시켰고, NaHCO3로 pH 7-8까지 염기성화 하였고 AcOEt로 추출하였다. 그 후 유기층을 Na2SO4 건조하였고 황색 고체를 얻도록 용매를 제거하였다.
Figure pct00092
Figure pct00093
표 7 - 실시예 F 에 의해 얻어진 화합물
실시예 G: 5-{2- 메틸 -5-[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 -벤조일아미노]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 프로필 에스테르의 합 성
5-{2-메틸-5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 프로필 또는 에틸 에스테르의 합성을 위한 일반적 방법이 반응식 24 에서 2 단계로 나타내었다.
Figure pct00094
반응식 24 - 실시예 G 의 일반적 합성 반응식
단계 1: 5-{2- 메틸 -5-[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 벤 조일아미노]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 ( OR0623 )의 합성
물 (3 mL) 및 메탄올 (3 mL) 중의 5-{2-메틸-5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (580 mg) 및 수산화칼륨(5 당량) 의 현탁액을 65℃ 에서 18 시간 가열하였다. 메탄올을 증발시켰고 pH를 HCl 6N에 의해 pH 7까지 중성화하였다. 용매의 증발 후에 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (물 / 아세토니트릴)에 의해 정제하여 갈색 고체를 얻었다.
수율: 54% (305 mg)
1 H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.24 (s, 1H), 10.39 (s, 1H), 8.22-8.15 (m, 2H), 7.94 (d, J = 2.5, 1H), 7.87 (d, J = 8.0, 1H), 7.71-7.64 (m, 2H), 7.18 (d, J = 8.8, 1H), 6.95 (d, J = 2.3, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.94 - 5.73 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.65 (s, 2H), 2.46-2.24 (m, 11H), 2.16 (s, 3H).
HPLC: 100%; MS: 581 (M+1)
단계 2 (옵션 1): 5-{2- 메틸 -5-[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 벤조일아미노 ]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 프로필 에스테르 ( OR0697 )의 합성
3.5 mL 의 프로판올 중의 5-{2-메틸-5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (80 mg) 현탁액에, 티오닐 클로라이드 (3 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 하룻밤 동안 가열하였다. 용매의 증발 후에, 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (아세토니트릴+1% TFA)에 의해 정제하였다. 용매의 증발 이후에, 잔류물을 물로 용해시켰고 NaHCO3으로 pH 9까지 염기성화하였고 AcOEt로 추출하였다. 유기층을 그 후 Na2SO4로 건조하였고 용매를 제거하여 갈색 고체를 얻었다.
수율: 44% (32 mg)
1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ(ppm) 11.98 (s, 1H), 10.33 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8. 15 (d, J = 8.1, 1H), 8.10 (d, J = 2.5, 1H), 7.88 (d, J = 8.1, 1H), 7.71 - 7.63 (m, 2H), 7.01 (d, J = 2.5, 1H), 6.90 (d, J = 2.1,1H), 6.03 (t, J = 5.4, 1H), 4.26 - 4.18 (m, 4H), 3.66 (s, 2H), 2.48 - 2.38 (m, 8H), 2.34 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 0.97 (t, 3H)
HPLC: 96%; MS: 623.3 (M+1)
단계 2 (옵션 2): 5-{2- 메틸 -5-[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 -벤 조일아미노 ]- 벤질아미노 }- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 에틸 에스테르 (OR1082)의 합성
4 mL 의 에탄올 중의 5-{2-메틸-5-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤조일아미노]-벤질아미노}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (90 mg) 현탁액에 황산 95% (0.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 6시간동안 가열하였다. 용매의 증발 후에 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (아세토니트릴+1% TFA) 에 의해 정제하였다. 용매의 증발 이후에, 잔류물을 물로 용해시켰고 NaHCO3으로 pH 9까지 염기성화하였고 AcOEt로 추출하였다. 유기층을 그 후 Na2SO4로 건조하였고 용매를 제거하여 황색 고체를 얻었다.
수율: 37% (35 mg)
1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ(ppm) 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.99 (s, 1H), 10.34 (s, 1H), 8.20 - 8.14 (m, 2H), 8.09 (d, J = 2.6, 1H), 7.87 (d, J = 8.1, 1H), 7.66 (d, J = 9.5, 2H), 7.19 (d, J = 8.1, 1H), 6.99 (d, J = 2.5, 1H), 6.88 (d, J = 2.0, 1H), 6.05 (t, J = 5.4, 1H), 4.29 (q, J = 7.1, 2H), 4.23 (d, J = 5.4, 2H), 3.65 (s, 2H), 2.46 - 2.33 (m, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.30 (t, J = 7.1, 3H).
HPLC: 96%; MS: 609 (M+1)
실시예 H: 5-[3-( 벤조일아미노 - 메틸 )- 벤질아미노 ]- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2-카 르복실 산 메틸 에스테르 및 5-[3-( 티오벤조일아미노 - 메틸 )- 벤질아미노 ]- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르의 합성
5-[3-( 벤조일아미노 - 메틸 )- 벤질아미노 ]- 1H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르 및 5-[3-( 티오벤조일아미노 - 메틸 )- 벤질아미노 ]- 1H - 피롤로 [2,3-b] 피리딘 -2-카 르복실 산 메틸 에스테르 합성을 위한 일반적 방법은 반응식 25 에서 3 또는 4 단계로 나타내었다.
Figure pct00095
반응식 25 - 실시예 H의 일반적 합성 반응식
단계 1. 3-(벤조일아미노-메틸)-벤조산 메틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
건조 DMF (0.17 M) 에 3-아미노메틸-벤조산 메틸 에스테르 하이드로클로라이드 (1당량), HOBt (1.2당량), DIEA (1.2당량) 및 EDCI.HCl (1.2당량)을 용해시켰고, 30분 동안 실온에서 아르곤 하에 교반시켰다. 아민 유도체 (1 당량)를 첨가하였고 혼합물을 실온에서 하룻밤동안 교반하였다. DMF를 증발시켰고 포화 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 생성물을 EtOAc로 추출하였고, Na2SO4 로 건조하였고, 여과 및 증발하였다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피 상에서 정제하여 용매의 증발 후에 원하는 생성물을 얻었다.
3-[(3- 트리플루오로메틸 - 벤조일아미노 )- 메틸 ]-벤조산 메틸 에스테르
백색 분말. 수율: 45% (528 mg). HPLC: 93%. MS: 338 (M+1).
3-{[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 벤조일아미노 ]- 메틸 }-벤조산 메틸 에스테르
검정색 분말. 수율: 정량 (1.55 g). HPLC: 91%. MS: 450 (M+1).
단계 2. 3-[(3- 트리플루오로메틸 - 티오벤조일아미노 )- 메틸 ]-벤조산 메틸 에스테르의 합성
26 mL 의 톨루엔 중의 3-[(3-트리플루오로메틸-벤조일아미노)-메틸]-벤조산 메틸 에스테르 (528 mg) 및 로손 시약 (반응식 23에서 "LR") (1.8 당량) 현탁액을 110℃ 에서 3 시간동안 가열하였다. 용매를 증발하였고 포화 NaHCO3 용액을 조 생성물에 첨가하였다. 생성물을 EtOAc로 추출하였고, Na2SO4 로 건조하였고, 여과 및 증발하였다. 조 오일을 실리카겔 크로마토그래피 상에서 정제하여 용매의 증발 후에 원하는 생성물을 얻었다.
황색 오일. 수율: 94% (518 mg). HPLC: >99%. MS: 354 (M+1).
단계 3. 메틸 에스테르의 비누화를 위한 일반적 프로토콜
메틸 에스테르 (1 당량)를 용매의 혼합물 (THF/물 또는 MeOH/물_1/1)로 현탁시켰다. 알카라인 염기(LiOH 또는 KOH, 3 당량)를 첨가하였고 혼합물을 반응 완료(TLC control)까지 환류에서 가열하였다. 유기 용매를 증발하였고 혼합물을 중성화시켰고 생성물을 유기 용매로 추출하였다.
3-[(3- 트리플루오로메틸 - 티오벤조일아미노 )- 메틸 ]-벤조산
황색 분말. 수율: 88% (438 mg). HPLC: 98%. MS: 340 (M+1).
3-{[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 벤조일아미노 ]- 메틸 }-벤조산
수율: 54% (792 mg). HPLC: 93%. MS: 436 (M+1).
단계 4.커플링 반응 같은 펩타이드에 대한 일반적 프로토콜
산성 유도체 및 HATU (2 당량) 을 무수 DMF (0.1-0.2 mol/L)에 용해시켰다. 30분 후에 5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (1 당량) 및 DIEA (3-4 당량)를 첨가하였고 혼합물을 하룻밤동안 실온에서 교반하였다. DMF를 증발시켰고 포화된 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 생성물은 EtOAc로 추출하였고, Na2SO4로 건조하였고, 여과 및 증발하였다. 조 생성물을 역상 (H2O 1%TFA/MeCN 1%TFA 100/0, 0/100)에서 정제하였다. MeCN을 증발시켰다. 생성물을 H2O로 현탁시키고 포화 NaHCO3용액으로 pH=8-9까지 염기성화 하였다. 수성층을 AcOEt로 3회 추출하였다. 유기층을 증발시켰고 최종 화합물을 얻었다.
Figure pct00096
표 8 - 실시예 H에 의해 얻어진 화합물
실시예 I: 3- 시아노 -벤조산을 출발물질로 사용하여 3 단계에서 5-{3-( 페닐카바모일 )- 벤질아미노 }-1 H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카르복실산 메틸 에스테르의 합성.
반응식 26은 5-{3-( 페닐카바모일 )- 벤질아미노 }-1 H - 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카 르복실산 메틸 에스테르의 합성의 일반적 방법을 나타내었다.
Figure pct00097
반응식 26 - 실시예 I 의 일반적 합성 반응식
단계 1: 3- 시아노 - 벤즈 아미드 화합물의 제조를 위한 일반적 프로토콜
3-시아노-벤조산 (1.2 당량), 아민 유도체 (1 당량), HOBt (1.2당량), DIEA (1.2당량) 및 EDCI.HCl (1.2당량)를 무수 DMF (0.15 M) 에 아르곤 하에 용해시켰다. 혼합물을 하룻밤 동안 실온에서 교반하였다. DMF를 증발시켰고 포화된 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 생성물은 EtOAc로 추출하였고, Na2SO4로 건조하였고, 여과 및 증발하였다. 조 생성물을 역상 (H2O 1%TFA/MeCN 1%TFA 100/0, 0/100) 에서 정제하였다. MeCN을 증발시켰다. 생성물을 H2O로 현탁시키고 포화 NaHCO3용액으로 pH=8-9까지 염기성화 하였다. 수성 층을 AcOEt로 3회 추출하였다. 유기층을 증발시켰고 최종 화합물을 얻었다.
3- 시아노 -N-(3- 트리플루오로메틸 -벤질)- 벤즈아미드
백색 분말. 수율: 76% (334 mg). HPLC: >99%.MS: 305 (M+1).
3- 시아노 -N-피리딘-3-일- 벤즈아미드
갈색 분말. 수율: 47% (563 mg). HPLC: >99%.MS: 224 (M+1).
3- 시아노 -N-[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 페닐 ]- 벤즈아미드
황색 오일. 수율: 22% (52 mg). HPLC: 92%.MS: 403 (M+1).
단계 2: 3- 포밀 - 벤즈 아미드 화합물의 제조를 위한 일반적 프로토콜
아르곤 하에, 3- 시아노 - 벤즈아미드 중간체(1 당량)를 피리딘/물/아세트산(2/1/1; 0.01M)의 혼합물에 용해시켰다. 물 (~0.03 vol) 중의 레이니 니켈(Ni Raney)을 첨가하였고 혼합물을 수소 하에 대기압에서 하룻밤동안 실온에서 교반하였다. 그 후, 그 혼합물을 셀라이트 베드로 여과 하였고 메탄올로 세척하였다. 용매를 증발하였다. 포화 NaHCO3용액을 첨가하였다. 생성물을 EtOAc로 추출하였고, Na2SO4로 건조하였고 여과 및 증발하여 최종 화합물을 얻었다.
3- 포밀 -N-(3- 트리플루오로메틸 -벤질)- 벤즈아미드
황색 오일. 수율: 79% (40 mg). HPLC: 89%.MS: 308 (M+1).
3- 포밀 -N-피리딘-3-일- 벤즈아미드
황색 오일. 수율: 66% (166 mg). HPLC: >99%.MS: 227 (M+1).
3- 포밀 -N-[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-3- 트리플루오로메틸 - 페닐 ]- 벤즈아 미드
황색 오일. 수율: 57% (30 mg). HPLC: 75%.MS: 406 (M+1).
단계 3: 5-{3-(페닐카바모일)-벤질아미노}-1 H -피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르의 제조를 위한 일반적 프로토콜
5-아미노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (1 당량) 및 3-포밀-벤즈아미드 화합물 (1.1 당량)을 MeOH/AcOH (10/1; 0.06M)혼합물에서 2시간동안 교반하였다. 그 후 NaBH3CN (1.2당량)를 천천히 첨가하였고 혼합물을 아르곤 하의 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3용액의 첨가에 의해 중성이 될 때 까지 퀀치(quenched)하였다. MeOH 및 아세트산을 증발시켰다. 조 생성물을 여과하였고 물 및 Et2O로 역상(H2O 1%TFA/MeCN 1%TFA 100/0, 0/100)에서 정제하기 전에 세척하였다. MeCN를 증발시켰다. 생성물을 H2O로 현탁시켰고 포화 NaHCO3용액으로 pH = 8-9까지 염기성화 하였다. 수성 층을 AcOEt로 3회 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조하였고, 여과 및 농축하여 원하는 생성물을 얻었다.
Figure pct00098
Figure pct00099
표 9 - 실시예 I 에 의해 얻어진 화합물
생물학적 테스트
재료 및 방법:
1) 시험관내 키나아제 어세이 (표 B1 내지 표 B13)
BRAF, EGFR (ErbB1), EGFR (ErbB1) T790M L858R, FGFR2, KDR (VEGFR2), PDGFRA (PDGFR 알파), SRC 등을 포함한 몇 개의 키나아제에 대한 화합물의 억제 활성은, Z'-LYTE® 기술을 사용하여 Invitrogen 으로 평가하였다. 간단히, Z'-LYTE® 생화학적 어세이는 형광-기반의 커플링된-효소 형식을 사용하고, 단백질 분해 절단에 대한 인산화 및 비-인산화 펩타이드의 차등 감도에 기초한다. FRET 쌍을 이루는 2개의 형광단으로 펩타이드 기질을 각각의 말단에서 하나씩 라벨링한다. 400 nm 에서 공여체 형광단의 여기 이후 수용체 방출에 대한 공여체 방출의 비율 (방출비) 을 계산하는 비율계량 방법을 사용하여 반응 진행을 정량화한다.
화합물을 웰 중의 1% DMSO (최종) 로 스크리닝한다. 10 점 적정 동안, 출발 농도로부터 3번의 계열 희석을 수행한다. 모든 펩타이드/키나아제 혼합물을 적절한 키나아제 버퍼에서 2X 사용 농도 (working concentration) 까지 희석한다. 모든 ATP 용액을 키나아제 버퍼 (50 mM HEPES, pH 7.5, 0.01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA) 에서 4X 사용 농도까지 희석한다. 추정 ATP Km 은 Z'-LYTE® 어세이를 사용하여 미리 측정한다.
각각의 화합물을 100 nM 의 농도로 항온처리하였고 (화합물을 10 μM 의 농도로 항온처리한 ABL 및 ABL T315I 에 대해 활성을 테스트하는 것은 제외됨), 표 B1 내지 표 B12 는 화합물의 억제력을 나타내는 수득된 결과를 요약한다. 동일한 어세이를 사용하여 OR0512 의 억제 활성을 또한 조사하고, OR0512 의 100 nM 의 농도에서 활성을 50% 초과로 억제한 키나아제를 표 B13 에 열거한다.
2) 시험관내 세포 증식 어세이 (표 B14 내지 표 B33)
암 세포주 (웰 당 5x103 개의 세포) 또는 HUVEC (웰 당 1x104 개의 세포) 또는 HRMEC (웰 당 1x104 개의 세포) 를 96-웰 플레이트에 분배하고, 증가하는 농도 (10 nM 내지 3 μM) 의 화합물을 72 시간 동안 2반복으로 항온처리하였다. MTT (3[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 를 사용하여 세포 증식을 측정하였다. Graph-Pad Software 사 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) 로부터의 Prism 5.0 을 이용하여, S자형 용량-반응 곡선으로부터 EC50 값을 계산하였는데, 값들은 DMSO-처리 대조군 웰 (0%) 및 1% SDS 대조군 웰 (100%) 의 것들로 정규화되어 있다.
3) 생체내 연구 (표 B34)
몇 개의 이종이식 마우스 모델을 제조하였다:
1) 무흉선 누드 수컷 마우스 (HSD, 6-7 주령) 의 우측 옆구리에 Ba/F3 T315I 세포 (멸균 PBS 중의 1x108 세포/mL) 를 피하 이식함으로써 제조된 이매티닙 내성 백혈병. 종양 체적이 대략 50 mm3 에 도달하였을 때, 마우스를 비히클 단독 처리군 또는 OR0512 처리군 (군 당 5 마리의 마우스) 에 무작위 배정하였다. 마우스를 비히클 (DMSO) 또는 OR0512 (40 mg/kg q.d.; 11 일 연속 동안 구강으로(per os)) 로 처리하였다.
2) 무흉선 누드 수컷 마우스 (HSD, 6-7 주령) 의 우측 옆구리에 BxPC-3 세포 (멸균 PBS 중의 1x107 세포/mL) 를 피하 이식함으로써 제조된 인간 췌장 선암종 모델. 종양 체적이 대략 100 mm3 에 도달하였을 때, 마우스를 비히클 단독 처리군 또는 OR0512 처리군 (군 당 5 마리의 마우스) 에 무작위 배정하였다. 마우스를 비히클 (DMSO) 또는 OR0512 (20 mg/kg q.d.; 32일 연속 동안 구강으로) 로 처리하였다.
3) 무흉선 누드 수컷 마우스 (HSD, 6-7 주령) 의 우측 옆구리에 HepG2 세포 (멸균 PBS 중의 1x107 세포/mL) 를 피하 이식함으로써 제조된 인간 간세포 암종 모델. 종양 체적이 대략 100 mm3 에 도달하였을 때, 마우스를 비히클 단독 처리군 또는 OR0512 처리군 (군 당 5 마리의 마우스) 에 무작위 배정하였다. 마우스를 비히클 (DMSO) 또는 OR0512 (20 mg/kg q.d.; 15 일 연속 동안 구강으로) 로 처리하였다.
4) 무흉선 누드 수컷 마우스 (HSD, 6-7 주령) 의 우측 옆구리에 H1975 세포 (멸균 PBS 중의 1x107 세포/mL) 를 피하 이식함으로써 제조된 EGFR 돌연변이를 가진 인간 NSCLC. 종양 체적이 대략 100 mm3 에 도달하였을 때, 마우스를 비히클 단독 처리군 또는 OR0512 처리군 (군 당 5 마리의 마우스) 에 무작위 배정하였다. 마우스를 비히클 (DMSO) 또는 OR0512 (20 mg/kg q.d.; 22 일 연속 동안 구강으로) 로 처리하였다.
종양 체적(mm3)을 디지털 캘리퍼로 1주일에 3회 측정하고, 다음 식을 사용하여 계산하였다: 종양 체적 (mm3) = 길이 (mm) x 폭 (mm) x 폭 (mm) x 1/2. 체중을 1주일에 3회 측정하고, 가능한 독성을 검출하기 위한 스트레스의 징후를 모니터링하기 위해 마우스를 매일 관찰하였다. 통계적 비교를 위해 일원 분산분석 (one-way ANOVA) 을 사용하였다. Bonferroni 사후검정과 일원 분산분석에 의해 Prism 5.0b (GraphPad Software) 로 데이터를 분석하였다. 비히클 단독 처리군과 비교할 때 OR0512 처리군에서의 연구의 말기에 종양 성장 억제 (TGI) 를 종양 성장의 퍼센트 감소로서 계산한다.
생물학적 결과:
시험관내 키나아제 어세이는 몇 개의 키나아제 억제성 분자 구조를 보여준다. 20개 이상의 화합물은 테스트된 키나아제의 4개 이상을 억제할 수 있다 (억제 퍼센트가 100 nM 의 농도에서 50% 초과이기 때문에, IC50 은 이들 키나아제의 각각에 대해 100 nM 미만일 것으로 예상되고, IC50 이 10 μM 미만일 것으로 예상되는 ABL 및 ABL T315I 를 제외한다). 이들 화합물은 도입 부분에서 발전된 종양 진행 (혈관신생, 이동, 전이, 종양 성장...) 에서 다중 경로와 관련된 상이하고 동떨어진 키나아제 계열을 나타내는 키나아제 (세린/트레오닌 또는 타이로신 키나아제) 에 대해 억제 활성을 나타내는 것을 주목해야 한다. 이들 화합물은 광범위한 다중 표적화 키나아제 억제제이다.
혈관신생 과정을 모방하는 일차 내피 세포 또는 악성 암 세포주에 대해 화합물의 증식억제 효능을 평가하였다. 세포 성장을 50% 의 수준으로 억제하는 화합물의 농도에 상응하는 EC50 을 결정하였다. 수득된 결과는 표 B14 내지 표 B233 에 제시된다.
본 발명자들은, 상기 실험에서, 3 μM 초과의 EC50 을 나타내는 화합물은 테스트된 세포 유형에 대해 불활성인 것으로 간주한다. 1 μM 와 3 μM 사이의 EC50 을 가진 화합물은 활성인 것으로 간주되는데, 이는 간세포 암종을 치료하기 위해 현재 판매되는 Sorafenib 이 본 명세서에서 4개의 간암 세포주 (HepG2, HuH7, HuCCT1 및 HuH6 Clone 5) 에 대해 1 μM 과 3 μM 사이의 EC50 을 나타내기 때문이다.
몇 개의 화합물은 테스트된 각각의 세포 유형에서 세포 성장의 매우 강력한 억제제이다. OR0616 을 제외하고 테스트된 모든 화합물은 HUVEC 에 대해 항-혈관신생 특성을 나타낸다. 간모세포종 및 담관암종 암 세포주 (HuCCT1 및 HuH6 clone 5) 의 성장은 화합물로 처리될 때 모든 다른 세포 유형 보다 덜 감소된다. 모든 다른 암 세포주에 대해 몇 개의 화합물은 세포 성장을 크게 억제한다. 종합하면, 이들 결과는 본 발명의 화합물이 2개 이상의 종양 성장 경로 (상피 세포 증식 및 혈관신생) 를 차단할 수 있는 것을 나타낸다.
생체내에서, 종양을 가진 이종이식 마우스에서, OR0512 는 인간 췌장 선암종, 인간 NSCLC (EGFR 의 돌연변이 형태를 가짐), 인간 간세포 암종 모델에서 종양 성장의 감소를 현저하게 유발하고, 돌연변이된 Bcr-Abl T315I 단백질을 발현하는 이매티닙 내성 CML 모델에서 종양 성장의 약간의 감소를 유발한다.
Figure pct00100
표 B1 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP 100μM 농도를 사용하여 100 nM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00101
표 B2 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00102
표 B3 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00103
표 B4 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00104
표 B5 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00105
표 B6 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00106
표 B7 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00107
표 B8 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 10 μM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00108
표 B9 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 10 μM에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00109
표 B10 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM 에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00110
표 B11 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM 에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00111
표 B12 - 인 비트로 키나아제 분석. 각각의 화합물은 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM 에서 배양되었다. 활성은 대조군과 비교하여 키나아제의 %저해에 의해 나타내었다.
Figure pct00112
표 B13 - 인 비트로 키나아제 분석에 의해 수득한 OR0512에 의한 억제된 키나아제 리스트. OR0512는 ATP Km 추정 농도를 사용하여 100 nM 에서 배양되었다. 표에서 나열된 키나아제는 OR0512에 의해 저해된 키나아제이다(키나아제의 %억제> 50% 대조군과 비교함).
Figure pct00113
표 B14 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00114
표 B15 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00115
표 B16 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00116
표 B17 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00117
표 B18 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00118
표 B19 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00119
표 B20 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00120
표 B21 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00121
표 B22 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00122
표 B23 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00123
표 B24 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00124
표 B25 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00125
표 B26 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00126
표 B27 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00127
표 B28 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00128
표 B29 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00129
표 B30 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00130
표 B31 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00131
표 B32 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00132
표 B33 - 다양한 암 세포주 및 1차 내피 세포에 대한 본 발명의 화합물의 항-증식 활성.
Figure pct00133
표 B34 - 암의 4가지 마우스 모델에서 OR0512의 항-종양 활성(종양 성장 억제-TGI). 마우스 그룹(n=5)은 비히클 단독(DMSO) 또는 화합물 OR0512중 하나를 경구로 일일 복용하였다. 비히클-처리군에 비해 **P<0.05.

Claims (17)

  1. 하기 식 (I) 의 화합물:
    Figure pct00134

    (I)
    로서, 여기서,
    - R1 은 C1-C6 알킬기, 바람직하게는 메틸, 에틸 또는 n-프로필이고,
    - X 는 CH2 또는 C =O 이고,
    - R2 는 수소 원자, 알킬기 또는 할로겐 원자이고,
    - Y 는 HNC(O), HNC(S), HNSO2, HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NH, C(O)NHCH2, CH2NHC(O) 및 CH2NHC(S) 로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    - R3 은
    - 하기로 일치환 또는 다중치환된 페닐기:
    - 하이드록실,
    - 할로겐,
    - C1-C6 알킬-아민, 바람직하게는 2차 C1-C6 알킬-아민,
    - C1-C6 알콕시,
    - C1-C6 트리플루오로알콕시, 바람직하게는 트리플루오로메톡시,
    - C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸, 이소프로필,
    - C1-C6 트리플루오로알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸,
    - C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴 단편으로서, 여기서, 상기 헤테로아릴 단편은 바람직하게는 메틸로 일치환된 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘 또는 티아졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 헤테로아릴 단편,
    - Y 가 HNC(S), HNSO2, HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NHCH2, CH2NHC(O), CH2NHC(S) 또는 C(O)NH 이고, 바람직하게는 Y 가 HNC(S) 이고, 여기서, NH 는 R3 에 직접 연결되어 있는 경우의 이미다졸,
    - C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬, 할로겐 및/또는 하이드록실에 의해 임의로 치환된, 디하이드로벤조푸란, 인돌, 벤조디옥솔, 벤조트리아졸, 피리딘으로 이루어진 군으로부터 바람직하게 선택된 헤테로아릴기,
    - 비방향족의 일치환된 사이클릭기, 바람직하게는 하이드록실, 할로겐, C1-C6 알킬-아민, C1-C6 알콕시, C1-C6 트리플루오로알콕시, C1-C6 알킬, C1-C6 트리플루오로알킬로 일치환된 사이클릭 C3-C10 알킬, 및
    - 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 단편:
    Figure pct00135

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식 (I) 의 화합물
    및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 부가 염, 용매 화합물, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 이들의 혼합물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    - X 는 CH2 이고,
    - R2 는 알킬 또는 할로겐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    - R1 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸, 에틸 또는 n-프로필이고,
    - X 는 CH2 이고,
    - R2 는 메틸 또는 클로라이드(chloride) 원자이고,
    - Y 는 HNC(O), HNC(O)CH2, HNC(O)NH, HNC(S)NH, C(O)NH, C(O)NHCH2 및 CH2NHC(O) 로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    - R3 은
    - C1-C6 트리플루오로알킬기, C1-C6 트리플루오로알콕시기, C1-C6 알킬기, 할로겐, 또는 티아졸기로 일치환된, 임의로 CF3 및/또는 메틸기로 일치환된 페닐기,
    - C1-C6 트리플루오로알킬, C1-C6 알킬-아민 및/또는 하이드록실기로 다중치환된 페닐기,
    - C1-C6 알킬 또는 C1-C6 트리플루오로알킬, 바람직하게는 메틸 및/또는 트리플루오로메틸에 의해 임의로 치환된 피리딘기,
    - C1-C6 알킬 및/또는 C1-C6 트리플루오로알킬로 일치환된 사이클릭 C3-C10 알킬 사이에서 선택된 비방향족 사이클릭기, 및
    - 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 단편:
    Figure pct00136

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서,
    - R1 은 C1-C6 알킬기, 바람직하게는 메틸, 에틸 또는 n-프로필이고,
    - X 는 CH2 이고,
    - R2 는 메틸이고,
    - Y 는 HNC*(O) 이고, 여기서, C* 는 R3 에 연결되어 있고,
    - R3 은
    Figure pct00137

    Figure pct00138

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 하기 일반식 (II) 의 화합물:

    Figure pct00139

    (II)
    로서, 여기서,
    - R1 은 메틸이고,
    - X 는 CH2 이고,
    - R2 는 메틸이고,
    - Y 는 HNC*(O) 이고, 여기서, C* 는 R3 에 연결되어 있고,
    - R3 은
    Figure pct00140

    Figure pct00141

    로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 R3 은
    Figure pct00142

    인 것을 특징으로 하는 화합물.
  6. 청구항 2 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서, X 는 CH2 대신에 C=O 인 것을 특징으로 하는 화합물.
  7. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 제조 방법으로서, 상기 제조 방법은 하기 단계 중의 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 제조 방법:
    a. X 가 CO 인 경우, NH-CO 결합은 NO2 기로 치환된 방향족 카복실산과 펩타이드 커플링 기술에 의해, 바람직하게는 카보디이미드 또는 우로늄 커플링제의 사용에 의해 형성되거나, X 가 CH2 인 경우, NH-CH2 결합은 NO2 기로 치환된 방향족 알데하이드와의 환원성 아미노화에 의해, 바람직하게는 붕소 무수물의 존재 하에 형성되는 단계,
    b. 바람직하게는 촉매적 수소화와 같은 수소화에 의해, 예를 들면, 목탄 상 팔라듐의 존재 하에 수소 분위기에서 NO2 기를 NH2 로 환원시키는 단계.
  8. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 제조 방법으로서, 상기 제조 방법은 바람직하게는 청구항 7의 제조 방법의 단계 (a) 및/또는 단계 (b) 이후에 하기 단계 중의 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조 방법:
    c1) Y 가 HNC(O)NH 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 이소시아네이트와 반응시켜 우레아를 형성하는 단계,
    c2) Y 가 HNC(S)NH 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 이소티오시아네이트와 반응시켜 티오우레아를 형성하는 단계,
    c3) Y 가 HNSO2 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 설포닐 클로라이드와 같은 할로겐 설포닐과 반응시켜 설폰아미드를 형성하는 단계,
    c4) Y 가 HNCO 인 경우, 단계 b) 이후 수득된 화합물을 아실 클로라이드와 같은 활성화된 카복실산과 반응시켜 아미드를 형성하는 단계, 또는
    c5) Y 가 HNCS 인 경우, 단계 c4) 이후 수득된 화합물을 로손 시약(Lawesson’s reagent)과 반응시켜 티오아미드를 형성하는 단계, 및
    d) 임의로, 수득된 생성물을 바람직하게는 KOH 의 사용에 의해 비누화시키는 단계.
  9. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 약물인 것을 특징으로 하는 화합물.
  10. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 인간 또는 동물 질환과 관련된 세포 증식 및/또는 혈관신생을 억제하기 위해 사용되는 것인 화합물.
  11. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서, 암, 보다 특히 액체 종양, 예를 들면, 혈액암, 예를 들면, 백혈병, 만성 또는 급성 골수증식성 장애 또는 고형 종양, 예를 들면, 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 글리알 세포 종양, 예를 들면, 교모세포종 및 신경섬유종증, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 흑색종, 대장암, 자궁내막암, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 육종 및/또는 성상세포종과 같은 질환 및 기타 키나아제 관련 질환, 바람직하게는 면역 장애, 염증성 질환, 혈전성 질환, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 황반 변성, 섬유증, 낭종생성, 과증식성 질환에서 단백질 키나아제의 억제제로서 사용되는 것인 화합물.
  12. 청구항 11 에 있어서, 상기 질환은 간암, 췌장암, 폐암, 유방암, 전립선암, 백혈병, 신장암, 자궁내막암, 대장암, 화학내성 암(chemoresistant cancers), 황반 변성으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
  13. 유효 성분(active principle)으로서, 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 기재된 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 함유하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  14. 청구항 13 에 있어서, 암, 보다 특히 액체 종양, 예를 들면, 혈액암, 예를 들면, 백혈병, 만성 또는 급성 골수증식성 장애 또는 고형 종양, 예를 들면, 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 글리알 세포 종양, 예를 들면, 교모세포종 및 신경섬유종증, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 흑색종, 대장암, 자궁내막암, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 육종 및/또는 성상세포종과 같은 질환 및 기타 키나아제 관련 질환 바람직하게는 면역 장애, 염증성 질환, 혈전성 질환, 신경퇴행성 질환, 골 질환, 황반 변성, 섬유증, 낭종생성, 과증식성 질환에서 단백질 키나아제의 억제제로서 사용하기 위한 것인, 약제학적 조성물.
  15. 청구항 14 에 있어서, 상기 질환은 간암, 췌장암, 폐암, 유방암, 전립선암, 백혈병, 신장암, 자궁내막암, 대장암, 화학내성 암, 황반 변성으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  16. 필요로 하는 환자, 예를 들면, 암을 나타내는 환자가, 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 하나 이상에 반응할 것 같은지를 예측하는 생체 외 (in vitro) 방법으로서, 상기 생체 외 방법은 상기 환자의 샘플에서 단백질 키나아제의 발현 수준, 유전자 변형, 활성화 상태 또는 돌연변이 형태의 모양을 측정하는 단계를 포함하고, 상기 단백질 키나아제는 키나아제 BRAF, EGFR, FGFR2, KDR, PDGFRA, SRC, ABL, FGFR1, VEGFR1, PDGFRB, ABL2, BLK, BMX, BTK, CSK, EPHA1, EPHA2, EPHA4, EPHB2, EPHB4, HER2, ERBB4, FES, FGR, FLT3, FMS, FRK, FYN, HCK, LCK, LYN, MAPK14, ERK2, PKC 쎄타(theta), RET, VEGFR3 및 YES 의 목록으로부터 선택되는 것인 생체 외 방법.
  17. 필요로 하는 환자, 예를 들면, 암을 나타내는 환자에게 투여될 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 기재된 화합물의 하나 이상을 예측하기 위한 생체 외 방법으로서, 상기 생체 외 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 생체 외 방법:
    e) 상기 화합물(들)을 인간 조직 또는 세포의 샘플과 접촉시키는 단계,
    f) 예를 들면, 키나아제 BRAF, EGFR, EGFR T790M L858R, FGFR2, KDR PDGFRA, SRC, ABL, ABL T315I, FGFR1, VEGFR1, PDGFRB, ABL E255K, ABL G250E, ABL Y253F, ABL2, BLK, BMX, BRAF V600E, BTK, CSK, EPHA1, EPHA2, EPHA4, EPHB2, EPHB4, HER2, ERBB4, FES, FGR, FLT3, FMS, FRK, FYN, HCK, LCK, LYN, MAPK14, ERK2, PKC 쎄타, RET, VEGFR3 및 YES 의 목록으로부터 선택될 수 있는, 예를 들면, 존재하는 단백질 키나아제의 비교 활성을 통해 및/또는 IC50 을 통해 상기 샘플에 대한 상기 화합물(들)의 활성을 측정하는 단계;
    g) 임의로, 단계 e) 와 동일한 테스트를 상기 환자의 혈액 세포 또는 줄기 세포 또는 간 세포와 같은 건강한 세포에 대해 수행하여 건강한 세포에 대한 청구항 1 내지 청구항 6 에 기재된 화합물의 독성을 측정하는 단계;
    h) 최고 활성 및/또는 결국 최저 독성을 나타내는 청구항 1 내지 청구항 6 에 기재된 화합물을 필요로 하는 환자에게 투여되도록 선택하는 단계.
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